AR126089A1 - Uso de fucosidasa para controlar el nivel de afucosilación de proteínas glucosiladas - Google Patents

Abstract

Reivindicación 1: Un método para obtener una proteína glucosilada recombinante que tiene niveles aumentados de glucoformas afucosiladas, comprendiendo el método 1) incubar una proteína glucosilada recombinante purificada con una fucosidasa humana de amplia especificidad en un tampón adecuado para la actividad fucosidasa durante un tiempo y en condiciones adecuadas para aumentar la afucosilación de la proteína glucosilada recombinante; y 2) separar la proteína glucosilada recombinante que tiene niveles aumentados de glucoformas afucosiladas de la fucosidasa; en donde la proteína glucosilada recombinante no reacciona con una glucosiltransferasa o sialiltransferasa. Reivindicación 3: El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la fucosidasa está presente a un nivel entre 1000 U/mmol y 100,000 U/mmol de proteína glucosilada recombinante. Reivindicación 5: El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicha incubación es durante entre 1 hora y 24 horas. Reivindicación 6: El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el tampón tiene un pH de aproximadamente 4.0 a aproximadamente 5.0. Reivindicación 7: El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la temperatura se selecciona de una temperatura entre 30ºC y 40ºC. Reivindicación 10: El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde la proteína glucosilada recombinante purificada está en una cantidad de al menos 10 g/l. Reivindicación 11: El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde dicha fucosidasa se inmoviliza en una fase sólida. Reivindicación 12: El método de la reivindicación 11, en donde la fase sólida es una resina de cromatografía de proteína A.