NL8000139A - Farmaceutische preparaten bestaande uit liposomen en hun bereiding. - Google Patents

Description

« 'v, VO 8885

Titel: Farmaceutische preparaten "bestaande uit liposcmen en hun "bereiding.

De uitvinding betreft farmaceutische preparaten (lyofiele . liposcmen), hun "bereiding en zuivering. Meer in het bijzonder betreft de uitvinding een nieuve methode voor het zuiveren van liposcme suspensies, verkregen volgens bekende methoden, en voor 5 het stabiliseren daarvan door een lyofilisatie.

Liposcmen zijn farmaceutische preparaten, waarbij het geneesmiddel is gedispergeerd of anderszins aanwezig is in waterige concentrische lagen naast lipide lagen (hydrofoob); het geneesmiddel kan zowel in de waterlaag als in de lipidelaag (binnen of 10 buiten) aanwezig zijn of op een andere wijze in het niet homogene systeem, dat gewoonlijk bekend staat als lino sane susnensie'.kijn vervat maar

De hydrofobe laag bestaat over het algemeen, /niet exclusief uit fosfolipiden, zoals lecithine en sfynganyeline, steroïden, zoals cholesterol, meer of minder ionogene oppervlakte actieve 15 stoffen, zoals dicetylfosfaat, stearylamine of fosfatidinezuur, en/of andere i iterialen van hydrofobe aard; de diameters van de liposcmen liggen gewoonlijk tussen 15 nm en 5 p··

Dit soort preparaten wordt gewoonlijk op een op zichzelf bekende wijze bereid en wel in hoöfdzaak door twee trappen: 20 Dé bereiding van liposcmen en zuivering van niet opgesloten geneesmiddel.

1) Bereiding van liposcmen; de lipide of lipofiele componenten worden opgelost in een passend oplosmiddel, dat vervolgens gewoonlijk onder vacuum wordt drooggedampt. De waterlaag met het 25 geneesmiddel wordt toegevoegd aan het flesje met het residu daarin als een dunne laag^waarna het geheel mechanisch of ultrasoon gedurende 10 seconden tot enkele uren wordt geschud. De aldus verkregen niet hcmogene laag wordt gewoonlijk aangeduid als liposcme suspensie, en moet nog worden gezuiverd van niet opge-30 sloten geneesmiddel.

2) Scheiding van de liposcmen van het niet opgesloten geneesmiddel; deze procedure wordt gewoonlijk uitgevoerd door elueren over 890 0 1 39 -2- s' '«» een chrcmotagrafiekolcm onder toepassing van harsen met exclusieve molecuulzeeffunctie, zoals Sepharose 2B, ^B of 6B of overeenkomstigen.

Liposamen worden het eerst gewonnen, terwijl het vrije geneesmiddel op de hars achterblijft.

5 Een andere gevolgde methode is ultracentrifugeren bij 100.000 g en vervolgens wassen, steeds onder ultracentrifugeren met een gebufferde oplossing. Een verdere methode bestaat uit dialyse.

De onderhavige uitvinding betreft een nieuw zuiveringspro-cédé van d§ niet haaogene laag die bekend staat als liposcme sus-10 pensie net zowel vloeibare als vaste polymeren, gewoonlijk van een synthetische of organische natuur met chemische functies, die als ionenuitwisselaars kunnen worden gebruikt, b.v. van styreen, divinylbenzeen, acrylzuur of methacrylzuur, gewoonlijk bekend staande als ionenuitwisselende harsen.

15 De nauwkeurige hoeveelheid van een of meer van deze harsen wordt direct in de kolf met de liposcme suspensie gebracht, waarna 10 tot 60 minuten wordt geschud. Na het filtreren door een gesinterd glasfilter dat de ionenuitwisselaar, waarop het niet gevangen geneesmiddel is geadsorbeerd, kan tegenhouden, wordt een zuivere 20 liposoansuspensie verkregen, die vervolgens wordt gelyofiliseerd.

Deze zuiveringsprocedure van de liposocmsuspensies met ionenuitwisselende harsen heeft het grote voordeel , dat hoog geconcentreer-de liposocmsuspensies behouden blijven (tot 5 mg/cm doxorubicine HCl) die niet behouden kunnen blijven bij chrcmatografie over een o 25 molecuulzeefkolcm (maximaal 0,3 mg/cm' ). De aldus verkregen li-posoamsuspensie is bijzonder stabiel en neigt niet tot uitzakken, en verschilt daarin van suspensies verkregen door ultracentrifugeren .

Hetzelfde resultaat wordt bereikt door in plaats van ionen-30 uitwisselende harsen polymeren en copolymeren toe te passen zonder specifieke chemische functies maar die gewoonlijk , maar niet exclusief, reageren volgens Van der Waals' krachten; deze staan algemeen bekend als adsorberende harsen. Deze harsen kunnen bij het zuiveren van liposocmsuspensies worden gebruikt dankzij het 35 verschil in polariteit tussen de hydrofobe stoffen die de liposcmen- 8000139 Μ -3- schil vormenden de eigenlijke geneesmiddelen met hun min of meer hydrofiel karakter.

De uiteindelijke chemische stabilisatie wordt bereikt door lyofiliserenvan.de liposocm-suspensie.

5 Voorbeeld I:

In een verzepingskolf werden in chloroform de volgende hoeveelheden lipiden opgelost, waarna onder vacuum werd drooggedampt: 1,5 g eilecithine, Q,b g cholesterol en 0,2 g dicetylfosfaat.

Een oplossing van doxorubicinehydrochloride (met een concentratie 10 van 10 mg/cm ) werd vervolgens in deze kolf uitgegoten en wel in een fosfaat buff er van 0,007 N waarna de suspensie 1 minuut ultrasoon werd geschud. Na 30 min staan bij kamertemperatuur onder stikstof werd 2 g van een hars, die tevoren in.de natriumvorm was gebracht en was verkregen door een polymerisatie van metbylmetha-15 crylaat, passend verknoopt met een specifiek chemisch middel als divinylbenzeen, met een carbaxylfunctionaliteit en een macroreti-culaire structuur die het gebruik daarvan ook in hydrofobe oplossingen mogelijk maakt, verkocht onder de merknaam IRC-50, en geproduceerd door Rohm en Haas, . vervolgens toegevoegd (het gewicht 20 betreft het droge gewicht en is equivalent met 5 cm hars).

De kolf werd vervolgens 30 min goed geschud, waarna de suspensie werd gefiltreerd door een glasfilter G 1. Liposamen met een grootte variërende van 0,5 tot 2^-u en met daarin ca. 60% van de oorspronkelijke hoeveelheid daxorubicine werden aldus verkregen 25 en gestabiliseerd door lyofiliseren.

Voorbeeld II;

Voorbeeld I werd herhaald met dezelfde hoeveelheden lipiden en doxorubicine, maar de ultrasone schudtijd werd verlengd tot 10 min cm liposcmen te verkrijgen die kleiner waren dan 1/U.

30 Aangezien de liposcmen niét volledig hcmogeen van grootte waren, werd een niet granulaire hars toegepast die tevens als zeef fungeerde .

O

10 cm van een hars van het type D0WEX 50-X U 100-200 mesh, tevoren geactiveerd tot de natriumvorm, werd daartoe toegevoegd.

35 Na filtreren werd een. suspensie verkregen met liposcmen met een .-¾ ' 800 0 1 39 -u grootte van 0,2-0,8 p die ca. 75$ van alle uitgangsdoxorubicine:. bevatten. Deze liposomen werden door lyofiliseren gestabiliseerd. Voorbeeld III:

Een oplossing van 5-fluoruracil met een concentratie van 10 5 mg/cm in een fosfaatbuffer van 0,007 IT met pH 8 werd uitgegoten in een verzepingskolf met daarin een lipidefase bereid als bovenbeschreven. De suspensie werd vervolgens behandeld als weergegeven in voorbeeld I onder toepassing van 10 cm van de filterhars Amberlite IRA-ii00 (Cl) tevoren geactiveerd als hydrochloride.

10 De verkregen liposcmen werden vervolgens door lyofiliseren gestabiliseerd.

Voorbeeld IV:

De liposomen van 5-fluoruracil werden verkregen als bovenbeschreven onder toepassing van de volgende hoeveelheden lipiden: 15 1,5 g eilecithine, 0,U g cholesterol, 0,2 g stearylamine.

. . 3

Als zuiveringssysteem werd 10 cm van de hars DOWEX 1 (50-100 mesh) tevoren geactiveerd, toegepast. De aldus verkregen liposcmen werden door lyofiliseren gestabiliseerd.

Voorbeeld V: 20 Voorbeeld II werd herhaald met dit verschil, dat de DOWEX 50 W-X hars werd vervangen door 15 g van de adsorberende hars van Rohm en Haas XAD 7 en de schudtijd werd verlengd tot Uo minuten.

Na filtreren door een sinterglas G 1 werd een suspensie aan liposomen met daarin ca. 50% van de uitgangshoeveelheid daxoru-25 bicine verkregen. Deze liposomen werden door lyofiliseren gestabiliseerd.

Voorbeeld VI:

1,5 g sojalecithine, 0,^ g cholesterol en 0,3 g dicetyl-fosfaat werden opgelost in CHgClg en aan deze oplossing een verdere 30 oplossing van aminosidinesulfaat in 0,02 M fosfaatbuffer met pH

O

6,5 in een concentratie van 3 mg/cnr toegevoegd.

De twee fasen werden geëmulgeerd en in de geschudde emulsie stikstof bij kamertemperatuur binnengeblazen, tot alle methyl-eenchloride was verdampt.

35 De suspensie werd bij kamertemperatuur gedurende U uren be- 80 0 0 1 39 -5- waard, vervolgens in de kolf een hoeveelheid hars gegoten, die bekend staat onder de naam IRC-50 van Rohm en Haas, en equivalent is met 5 g droge hars.

Na nog 1 uur schudden werd de liposoaasuspensie over een 5 gesinterd glasfilter gefiltreerd cm de hars te verwijderen, welke laatste niet opgesloten geneesmiddel tegenhield. Deze liposoamsuspensie werd vervolgens gestabiliseerd.door te lyo-filiseren..

8000139

Claims (10)

1. Werkwijze voor het zuiveren van niet homogene systemen, bekend als liposocmsuspensies, van onopgesloten geneesmiddel, met het kenmerk, dat deze suspensies met vloeibare of vaste polymeren, gewoonlijk van synthetische of organische aard, gewoonlijk 5 maar niet noodzakelijkerwijze verknoopt met een passend chemisch middel, en met een chemische functionaliteit, die als ionenuit-wisselaars worden toegepast, zoals van styreen, divinylbenzeen, acrylzuur, methacrylzuur en andere, gewoonlijk bekend als ionenui twisselende harsen, worden behandeld.

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de ge- . noemde ionenuitwisselende harsen van het kationtype zijn met een lage-.', gemiddelde of hoge ionensterkte, gewoonlijk bepaald, maar niet noodzakelijkerwijze beperkt tot carboxyl-, fosfon- en sulfon-functies van verschillende matrices, b.v. van fenolformaldehyde, 15 styreen-divinylbenzeen, acrylaten, methacrylaten, diverse koolwaterstoffen en verschillende condensatieharsen in een vloeibare of vaste vorm.

3. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de * ionenuitwisselaars van het sterk anion- type zijn, eerste en 20 tweede type, van zwakke of middelmatige sterkte, gewoonlijk cmschreven als, maar niet noodzakelijkerwijs beperkt tot diverse zoutvormen van quaternaire ammonium, primaire, secundaire of tertiaire aminen, fosfinefuncties of andere functies met verschillende matrices, b.v. van het type f enolf oimaldehyde, sty-25 reendivinylbenzeen, acrylaten, methacrylaten, diverse koolwaterstoffen en diverse condensatieharsen in een vloeibare of vaste vorm. k. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de harsen worden tóegepast in een zoutvorm of een geactiveerde vorm. 30 5· Werkwijze voor het totaal of gedeeltelijk extraheren van de opgeloste geneesmiddelen, na destructié van de lipide structuur, uit liposomen volgens de procedure beschreven in de bovenweergegeven conclusies. 800 0 1 39 «k , - ' '........... * s \ -7-

6. Werkwijze voor het zuiveren van niet hcmogene systemen bekend als liposome suspensies van niet-opgesloten geneesmiddel, met het kenmerk, dat deze suspensies worden behandeld met polymeren en/of copolymeren zonder specifieke chemische functie welke 5 gewoonlijk maar niet exclusief reageren volgens Van der Waals’ krachten, en gewoonlijk bekend staan als adsorbentia.

7· Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat deze adsorbentia alifatisch, aromatisch of anorganisch van oorsprong zijn.

8. Werkwijze voor het totaal of partieel extraheren van het geneesmiddel al of niet opgesloten door liposcmen volgens de procedure weergegeven in de conclusies 6 en 7·

9. Werkwijze voor het bereiden van liposocmsuspensies, met het kenmerk, dat deze suspensies worden verkregen door inblazen 15 van inert gas (b.v. stikstof of andere) in een tweefasensysteem van het emulsietype, of door een eenvoudige co-aanwezigheid van niet mengbare oplosmiddelen.

10. Werkwijze voor het stabiliseren van liposocmsuspensies, met het kenmerk, dat de gezuiverde liposocmsuspensies vervolgens 20 worden gelyofiliseerd.

11. Farmaceutisch preparaat bestaande uit lyofiele liposcmen van doxorubicinehydrochloride.

12. Farmaceutisch preparaat bestaande uit lyofide liposomen van aminosidinesulfaat. 25 13· Farmaceutisch preparaat bestaande uit lyofieüe liposomen 5-fluoruracil. 8000?"' • · ->