MXPA04011384A

MXPA04011384A - Uso de agentes de union del receptor edg en cancer.

Info

Publication number: MXPA04011384A
Application number: MXPA04011384A
Authority: MX
Inventors: Mechtcheriakova Diana
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2002-05-16
Filing date: 2003-05-15
Publication date: 2005-02-14
Also published as: EP1955696A2; JP5227492B2; NO334074B1; AU2003240655A1; DK1505959T3; IL229550A0; NZ536513A; ES2316758T3; WO2003097028A1; CN1652757B; DE60324416D1; EP1505959B1; EP1955696A3; US20140303257A1; NO20130106L; JP2013136584A; KR20120125398A; PT1505959E; US20090209495A1; EP1955696B1

Abstract

Se proporciona un metodo para tratar tumores solidos, por ejemplo, invasion de tumor, y particularmente para inhibir o controlar angiogenesis desregulada, utilizando un agonista de receptor de esfingosina-1-fosfato, opcionalmente en combinacion con un agente quimioterapeutico. La invencion tambien comprende una combinacion de un agonista de receptor de esfingosina-1-fosfato con un agente quimioterapeutico.

Description

USO DE AGENTES DE UNION DEL RECEPTOR EDG EN CANCER La presente invención se refiere a un nuevo uso de un agonista de receptor de esfingosina- 1 -fosfato (S1P), particularmente en tratamiento de cáncer. Los agonistas del receptor de S1P son agentes que buscan linfocitos de aceleración (LH), los cuales producen una linfopenia que resulta de una re-distribución, preferiblemente reversible, de linfocitos de la circulación hacia el tejido linfático secundario, sin evocar una inmunosupresión generalizada. Las células naturales son secuestradas; las células T, CD4 y CD8, y las células B de la sangre son estimuladas para emigrar hacia los nodos linfáticos (LN) y parches de Peyer (PP), y de esta manera, por ejemplo, se inhibe la infiltración de células hacia órganos trasplantados. Los agonistas del receptor de S1P son típicamente análogos de esfingosina, tales como derivados de 2-amino-propan-1 ,3-diol o 2-amino-propanol , 2-substituidos, por ejemplo, un compuesto que comprende un grupo de la fórmula X: en donde Z es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono; alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono; fenilo; fenilo sustituido por OH; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste a de halógeno, cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, fenilo y fenilo sustituido por OH; o CH2-R4Z, en donde R4z es OH, aciloxi o un residuo de la fórmula (a): en donde Z\ es un enlace directo u O, preferiblemente O; cada uno de R5z y R6z, independientemente, es H, o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 átomos de halógeno; R1z es OH, aciloxi o un residuo de la fórmula (a); y cada uno de R?z y R3z. independientemente, es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o acilo. El grupo de la fórmula X es un grupo funcional unido como un grupo terminal a una porción que puede ser hidrofilica o lipofílica y comprende uno o más residuos alifáticos, alicíclicos, aromáticos y/o heterocíclicos, al grado que la molécula resultante, en donde por lo menos uno de Z y R1z es o comprende un residuo de la fórmula (a), señala como un agonista a uno del receptor de esfingosina-1 -fosfato. Los agonistas del receptor de S1P son compuestos que señalan como agonistas en uno o más receptores de esfingosina-1 -fosfato, por ejemplo, S1P1 a S1P8. La unión del agonista a un receptor de S1P puede, por ejemplo, dar como resultado la disociación de proteínas G heterotriméricas intracelulares a Ga-GTP y ?ß?-???, y/o fosforilación incrementada del receptor ocupado por el agonista y la activación de trayectorias de señalización corriente abajo/cinasas. La afinidad de unión de agonistas del receptor de S1P puede ser medida como se describe en el párrafo I más adelante. Los ejemplos de agonistas de receptor de S1P apropiados son, por ejemplo: compuestos como se describe en EP 627406A1, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I: en donde es una cadena de carbono (C12-22) recta o ramificada, la cual puede tener en la cadena un enlace o un átomo heterogéneo seleccionado de un doble enlace, un triple enlace, O, S, NR6, en donde R6 es H, alquilo, aralquilo, acilo o alcoxicarbonilo, y carbonilo, y/o el cual puede tener como un sustituyente alcoxi, alqueniloxi, alquiniloxi, aralquiloxi, acilo, alquilamino, alquiltio, acilamino, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, aciloxi, alquilcarbamoilo, nitro, halógeno, amino, hidroxiimino, hidroxi o carboxi; o es: un fenilalquilo, en donde el alquilo es una cadena de carbono (C6.2o) recta o ramificada; o un fenilalquilo, en donde el alquilo es una cadena de carbono (CT^O) recta o ramificada, en donde dicho fenilalquilo está sustituido por: una cadena de carbono (C6-2o) recta o ramificada, opcionalmente sustituida por halógeno, una cadena alcoxi (C6-2o) recta o ramificada, opcionalmente sustituida por halógeno, - un alqueniloxi (C6-2o) recto o ramificado, fenilalcoxi, halofenilalcoxi, fenilalcoxialquilo, fenoxialcoxi o fenoxialquilo, cicloalquilalq uilo sustituido por alquilo de Ce heteroarilalquilo sustituido por alquilo de C6-2o, - alquilo de C6-2o heterocíclico, o alquilo heterocíclico sustituido por alquilo de C2-20, y en donde: la porción alquilo puede tener: en la cadena de carbono, un enlace o un átomo heterogéneo seleccionado de un doble enlace, un triple enlace, O, S, sulfinilo, sulfonilo, o NR6, en donde R6 es como se definió anteriormente, y un sustituyente, alcoxi, alqueniloxi, alquiniloxi, aralquiloxi, acilo, alquilamino, alquiltio, acilamino, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, aciloxi, alquilcarbamoilo, nitro, halógeno, amino, hidroxi o carboxi, y cada uno de R2, R3, y R5, es independientemente H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o acilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; compuestos como se describe en EP 1002792A1, por ejemplo, un compuesto de la fórmula II: en donde m es de 1 a 9 y cada uno de R'2, R'3l R'4 y R'5, independientemente, es H, alquilo o acilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; compuestos como sé describe en EP 0778263 A1, por ejemplo un compuesto de la fórmula III: III en donde W es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono o alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono; fenilo no sustituido o sustituido por OH; R"40(CH2)n; o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de halógeno, cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, fenilo y fenilo sustituido por OH; X es H o alquilo de cadena recta no sustituido o sustituido que tiene un número p de átomos de carbono o alcoxi de cadena recta no sustituido o sustituido que tiene un número (p-1) de átomos de carbono, por ejemplo, sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, OH, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, aciloxi, amino, alquilamino de 1 a 6 átomos de carbono, acilamino, oxo, haloalquilo de 1 a 6 átomos de carbono, halógeno, fenilo no sustituido y fenilo sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquiló de 1 a 6 átomos de carbono, OH, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, acilo, aciloxi, amino, alquilamino de 1 a 6 átomos de carbono, acilamino, haloalquilo de 1 a 6 átomos de carbono y halógeno; Y es H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, OH, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, acilo, aciloxi, amino, alquilamino de 1 a 6 átomos de carbono, acilamino, haloalquilo de 1 a 6 átomos de carbono o halógeno, Z2 es un enlace individual o un alquileno de cadena recta que tiene un número de átomos de carbono de q, cada uno de p y q, independientemente, es un entero de 1 a 20, siempre que 6<p + q<23, m' sea 1 , 2 o 3, n es 2 o 3, cada uno de R"i, R"2, R '3 y R' independientemente, es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o acilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, compuestos como se describe en WO 02/18395, por ejemplo, un compuesto de la fórmula IVa o IVb: en donde Xa es O, S, NR1s o un grupo -(CH2)na-, dicho grupo está no sustituido o sustituido por 1 a 4 halógenos; na es 1 o 2, R s es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, dicho alquilo está no sustituido o sustituido por halógeno; R a es H, OH, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o, O-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, en donde el alquilo está no sustituido o sustituido por 1 a 3 halógenos; R1b es H, OH o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, en donde el alquilo está no sustituido o sustituido por halógeno; cada R2a independientemente se selecciona de H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, dicho alquilo está no sustituido o sustituido por halógeno; R3a es H, OH, halógeno, o, O-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, en donde el alquilo está no sustituido o sustituido por halógeno; y R3b es H, OH, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, en donde el alquilo está no sustituido o sustituido por hidroxi, o, O-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, en donde el alquilo está no sustituido o sustituido por halógeno; Ya es -CH2-, -C(O)-, -CH(OH)-, -C( = NOH)-, O o S, y R4a es alquilo de 4 a 14 átomos de carbono o alquenilo de 4 a 14 átomos de carbono; o una sal farmacéuticamente aceptable o hidrato del mismo; compuestos como se describe en WO 02/076995, por ejemplo, un compuesto de la fórmula V: en donde mc es 1 , Xc es O, o un enlace directo; R c es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono opcionalmente sustituido por OH, acilo, halógeno, cicloalquilo de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo o h ¡droxi-feni leño; alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono; alquilo de 2 a 6 átomos de carbono; o fenilo opcionalmente sustituido por OH; R2c es OR, II 6c o en donde Rsc es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 átomos de halógeno, y R6c es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido por halógeno; cada uno de R3c y R4c, independientemente es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido por halógeno, o acilo, y, Rc es alquilo de 13 a 20 átomos de carbono, el cual opcionalmente puede tener en la cadena un átomo de oxígeno y el cual opcionalmente puede estar sustituido por nitro, halógeno, amino, hidroxi o carboxi; o un residuo de la fórmula (a): en donde R7c es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, y R8c es alcanoilo de 1 a 20 átomos de carbono sustituido, fenilalquilo de 1 a 14 átomos de carbono, en donde el alquilo de 1 a 14 átomos de carbono está opcionalmente sustituido por halógeno o OH, cicloalquilalcoxi de 1 a 14 átomos de carbono o fenilalcoxi de 1 a 14 átomos de carbono, en donde el anillo cicloalquilo o fenilo está opcionalmente sustituido por halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y/o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, fenilalcoxi de 1 a 14 átomos de carbono-alquilo de 1 a 14 átomos de carbono, fenoxialcoxi de 1 a 14 átomos de carbono o fenoxialq uilo de 1 a 14 átomos de carbono, Rc siendo también un residuo de la fórmula (a), en donde R8c es alcoxi de 1 a 14 átomos de carbono cuando Ric es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono o alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono, o un compuesto de la fórmula VI: VI en donde: nx es 2, 3 o 4, R1x es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono opcionalmente sustituido por OH, acilo, halógeno, cicloalquilo, fenilo o hidroxi-fenileno; alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono; alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono; o fenilo opcionalmente sustituido por OH; R2x es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o acilo; cada uno de R3x y R4x, independientemente, es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido por halógeno o acilo, R5x es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono; y R6x es alcanoilo de 1 a 20 átomos de carbono sustituido por cicloalquilo; cicloalquilalcoxi de 1 a 14 átomos de carbono, en donde el anillo cicloalquilo está opcionalmente sustituido por halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y/o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono; fenilalcoxi de 1 a 14 átomos de carbono, en donde el anillo fenilo está opcionalmente sustituido por halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y/o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, R6x siendo también alcoxi de 4 a 14 átomos de carbono, en donde R1x es alquilo de 2 a 4 átomos de carbono sustituido por OH, o pentiloxi o hexiloxi, en donde R1x es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, Siempre que R6x sea diferente de fenil-butilenoxi cuando R5x sea H o R1x sea metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; compuestos como se describe en WO 02/06268A1, por ejemplo, un compuesto de la fórmula VII: en donde cada uno de Rid y R2o. independientemente, es H o un grupo amino-protector; R3d es hidrógeno o un grupo hidroxi-protector; R4d es alquilo inferior; nd es un entero de 1 a 6; Xd es etileno, vinileno, etinileno, un grupo que tiene una fórmula -D-CH2- (en donde D es carbonilo, -CH(OH)-, O, S o N), arilo o arilo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de un grupo como se define más adelante; Yd es un enlace individual, alquileno de 1 a 10 átomos de carbono, alquileno de 1 a 10 átomos de carbono que está sustituido por hasta 3 sustituyentes seleccionados de los grupos a y b, alquileno de 1 a 10 átomos de carbono que tiene O u S a la mitad o al final de la cadena de carbono, o alquileno de 1 a 10 átomos de carbono que tiene O u S a la mitad o al final de la cadena de carbono, que está sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b; R5d es hidrógeno, cicloalquilo, arilo, heterociclo, cicloalquilo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b, arilo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b, o heterociclo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b; y cada uno Reá y R7d, independientemente, es H o un sustituyente seleccionado del grupo a; <grupo a> es halógeno, alquilo inferior, halógeno-alquilo inferior, alcoxi inferior, alquiltio inferior, carboxilo, alcoxicabonilo inferior, hidroxi, acilo inferior alifático, amino, monoalquilamino inferior, dialquilamino inferior, acilamíno alifático inferior, ciano o nitro; <grupo b> es cicloalquilo, arilo, heterocíclo, cada uno estando opcionalmente sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados del grupo a; siempre que cuando R5d sea hidrógeno, Yd sea ya sea un enlace individual o alquileno lineal de 1 a 10 átomos de carbono, o una sal o éster farmacológicamente aceptable del mismo. Compuestos como se describe en JP-14316985 (JP2002316985), por ejemplo, un compuesto de la fórmula VIII: en donde Rle, R2e. R3e, R e. se, Ree. R7e. ne, Xe e Ye son como se describe en JP-14316985; o una sal o éster farmacológicamente aceptable del mismo. compuestos como se describe en WO 03/29184 y WO 03/29205, por ejemplo, compuestos de la fórmula IX: en donde Xf es O u S, y Rif, R2f, Raí y nf son como se describe en WO 03/29184 y WO 03/29205, por ejemplo, 2-amino-2-[4-(3-benciloxifenoxi)-2-clorofenil]propil-1 ,3-propan-diol o 2-amino-2-[4-(benciloxifeniltio)-2-clorofenil]propil-1 ,3- ropan-diol.

En cada caso, en donde se proporcionen citas de solicitudes de patente, la material objeto con relación a los compuestos se incorpora aquí en la presente solicitud por referencia. Acilo puede ser un residuo Ry-CO-, en donde Ry es alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono, fenilo o fenilalquilo de 1 a 4 átomos de carbono. A menos que se indique otra cosa, el alquilo, alcoxi, alquenilo o alquinilo puede ser recto o ramificado. Cuando en los compuestos de la fórmula I la cadena carbono como F?! está sustituida, preferiblemente está sustituida por halógeno, nitro, amino, hidroxi o carboxi. Cuando la cadena de carbono está interrumpida por un fenileno opcionalmente sustituido, la cadena de carbono preferiblemente no está sustituida. Cuando la porción fenileno está sustituida, preferiblemente está sustituida por halógeno, nitro, amino, metoxi, hidroxi o carboxi. Los compuestos preferidos de la fórmula I son aquellos en donde es alquilo de 13 a 20 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por nitro, alógeno, amino, hidroxi o carboxi y, muy preferiblemente, aquellos en donde es fenilalquilo sustituido por una cadena alquilo de 6 a 14 átomos de carbono, opcionalmente sustituida por halógeno y la porción alquilo es un alquilo de 1 a 6 átomos de carbono opcionalmente sustituido por hidroxi. Muy preferiblemente, Ri es fenilalquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido en el fenilo por una cadena alquilo de 6 a 14 átomos de carbono recta o ramificada, preferiblemente recta. La cadena alquilo de 6 a 14 átomos de carbono puede estar en la posición orto, meta o para, preferiblemente en la posición para. Preferiblemente, cada uno de R2 a R5 es H. Un compuesto preferido de la fórmula I es 2-amino-2-tetradecil-1 ,3-propanodiol. Un agonista de receptor de S1P particularmente preferido de la fórmula I es FTY720, es decir, 2-amino-2-[2-(4-octilfenil)etil]propan-1 ,3-diol en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable (denominado de aquí en adelante como compuesto A), por ejemplo, el clorhidrato como se muestra: Un compuesto preferido de la fórmula II es uno en donde cada uno de R'2 a R'5 es H y m es 4, es decir, 2-amino-2-{2-[4-(1 -oxo-5-fenilpentil)fenil]etil}propan-1 ,3-diol, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable (de aquí en adelante denominado como compuesto B), por ejemplo, el clorhidrato. Un compuesto preferido de la fórmula III es uno en donde W es CH3, cada uno de R", a R"3 es H, Z2 es etileno, X es heptiloxi e Y es H, es decir, 2-amino-4-(4-heptiloxifenil)-2-metil-butanol, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable (denominado de aquí en adelante como compuesto C), por ejemplo, el clorhidrato. El enantiómero R es particularmente preferido. Un compuesto preferido de la fórmula IVa es el FTY720-fosfato (R2a es H, R3a es OH, Xa es O, R1a y R1b son OH). Un compuesto preferido de la fórmula IVb es el fosfato de compuesto C (R2a es H, R3a es OH, Xa es O, R1a y R1b son OH, Ya es O y R4a es heptilo). Un compuesto preferido de la fórmula V es fosfato del compuesto B. Un compuesto preferido de la fórmula V es mono-[(R)-2-amino-2-metil-4-(4-pentiloxi-fenil)-butil]éster de ácido fosfórico. Un compuesto preferido de la fórmula VIII es (2R)-2-amino-4-[3-(4-ciclohexiloxibutil)benzo[b]tien-6-il]-2-metilbutan-1-ol. Cuando los compuestos de las fórmulas I a IX tienen uno o más centros asimétricos en la molécula, la presente invención se debe entender que abarca los varios isómeros ópticos, así como racematos, diastereoisómeros y sus mezclas. Los compuestos de la fórmula III o IVb, cuando el átomo de carbono que lleva el grupo amino es asimétrico, preferiblemente tienen la configuración R en este átomo de carbono. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las fórmula I a IX incluyen sales con ácidos inorgánicos, tales como sales de clorhidrato, bromhidrato y sulfato, sales con ácidos orgánicos tales como sales de acetato, fumarato, maleato, benzoato, citrato, malato, metansulfonato y bencensulfonato, o, cuando es apropiado, sales con metales tales como sodio, potasio, calcio y aluminio, sales con aminas, tales como trietilamina y sales con aminácidos dibásicos, tales como Usina, los compuestos y las sales de los métodos de la presente invención abarcan las formas de hidrato y solvato. Los agonistas del receptor de S1P tienen, con base en la actividad observada, por ejemplo, alojando linfocitos, por ejemplo, como se describe en EP627406A1 o USP 6,004,565, que se encuentran útiles, por ejemplo, como inmunosupresores en el tratamiento de, por ejemplo, rechazo agudo de haloinjerto. Ahora se ha encontrado que los agonistas del receptor de S1P tienen propiedades interesantes que los hacen útiles para quimioterapia de cáncer, particularmente tumores sólidos, en especial tumores sólidos avanzados. Aún sigue existiendo la necesidad de expandir el armamento del . tratamiento de cáncer de tumores sólidos, especialmente en casos en donde el tratamiento con compuestos anticáncer no está asociado con regresión o estabilización de enfermedad . De acuerdo con hallazgos particulares de la presente invención, se proporciona: 1.1 Un método para tratar tumores sólidos en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 1.2 Un método para inhibir el crecimiento de tumores sólidos en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 1.3 Un método para inducir regresión de tumor, por ejemplo, reducción de masa de tumor, en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptables del mismo. Un método para tratar invasión o síntomas de tumor sólidos asociados con dicho crecimiento de tumor en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Un método para prevenir la expansión metastática de tumores o para prevenir o inhibir el crecimiento de micrometástasis en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende a.dministrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Un método para inhibir o controla angiogénesis desregulada, por ejemplo, angiogénesis mediada por esf i ngos i na- 1 -fosf ato (S1P), en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Un método para prevenir o tratar enfermedades mediadas por un proceso neo-angiogénesis o asociadas con angiogénesis desregulada en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Por "tumores sólidos" se quiere dar a entender tumores y/o metástasis (en donde se ubiquen) distinto al cáncer linfático, por ejemplo, tumores del cerebro y otros tumores del sistema nervioso central (por ejemplo, tumores de meninges, cerebro, médula espinal, nervios craneales y otras partes del sistema nervioso central, por ejemplo, glioblastomas o blastomas medulares); cáncer de cabeza y/o cuello; tumores de mama; tumores del sistema circulatorio (por ejemplo, corazón, mediastino y pleura, y otros órganos intratoráxicos tumores vasculares y tejido vascular asociado con tumores); tumores de sistema de excreción (por ejemplo, riñon, pelvis renal, uréter, vejiga, otros órganos urinarios no especificados); tumores del tracto gastrointestinal (por ejemplo, esófago, estómago, intestino delgado, colon, colorectal, unión rectosig moide , recto, ano y canal anal), tumores que involucran el ligado y los ductos biliares intrahepáticos, vesícula biliar, otras partes no especificadas del tracto biliar, páncreas, y otros órganos digestivos; cavidad oral (labios, lengua, encías, piso de la boca, paladar, y otras partes de la boca, glándula paratiorides y otras partes de las glándulas salivales, fosas nasales, orofaringe, nasofaringe, senos pariformes, hipofaringe, y otros sitios en los labios, cavidad oral y faringe); tumores del sistema reproductivo (por ejemplo, vulva, vagina, útero cerviz, útero cavernoso, útero, ovario, y otros sitios asociados con los órganos genitales femeninos, placenta, pene, próstata, testículos, y otros sitios asociados con órganos genitales masculinos); tumores del tracto respiratorio (por ejemplo, cavidad nasal y oído medio, senos accesorios, laringe, traquea, bronquios y pulmones, por ejemplo, cáncer de pulmón de célula pequeña y cáncer de pulmón de célula no pequeña); tumores del sistema esquelético (por ejemplo, huesos y cartílagos articulares de extremidades, cartílagos articulares óseos y otros sitios; tumores de piel (por ejemplo, melanoma maligno de la piel, cáncer de piel sin melanoma, carcinoma de célula basal de piel, carcinoma de célula escamosa de piel, mesotelioma, sarcoma de caposis); y tumores que involucran otros tejidos que incluyen nervios periféricos y sistema nervioso autónomo, tejido conectivo y blando, retroperitoneo y peritoneo, ojos y adnexa, tiroides, glándula adrenal, y otras glándulas endocrinas y estructuras relacionadas, neoplasma maligno secundario y no especificado de nodos linfáticos, neoplasma maligno secundario de sistemas respiratorio y digestivo y neoplasma maligno secundario de otros sitios. Cuando se mencione más adelante o subsecuentemente un tumor, una enfermedad de tumor, un carcinoma o un cáncer, también está implicada la metástasis en el órgano tejido original y/o en cualquier otro sitio, alternativamente o además, en cualquier sitio en donde se encuentre el tumor y/o metástasis.

Cuando el agonista del receptor de S1P es un compuesto de la fórmula I, por ejemplo, el compuesto A, o un compuesto de la fórmula IVa o IVb, en una modalidad, se utiliza en el tratamiento de los métodos 1.1, 1.2, 1.3 o 1.4 para un tumor sólido distinto a un tumor de mama, de próstata, de vejiga, de riñon o de pulmón. En una serie de otras modalidades específicas o alternativas, la presente invención también proporciona: 1.8 Un método para mejorar la actividad de un agente quimioterapéutico o para superar la resistencia a un agente quimioterapéutico en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, ya sea concomitante o secuencialmente con dicho agente quimioterapéutico. 1.9 Un método de acuerdo con 1.8, en donde el agente quimioterapéutico es un inhibidor de trayectorias de transducción de señal dirigidas ya sea contra células huésped o procesos involucrados en la formación de tumor y/o formación de metástasis o utilizadas por células de tumor para la proliferación, supervivencia, diferenciación o desarrollo de resistencia al fármaco. 1.10 Un método como se indicó anteriormente, en donde el agonista de receptor de S1P se administra intermitentemente.

En una serie de otras modalidades específicas o alternativas, presente invención también proporciona: un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usarse en cualquier método definido de acuerdo con 1.1.a 1.4 anteriores, preferiblemente para un tumor sólido distinto a un tumor de mama, próstata, vejiga, riñon o pulmón, cuando el agonista del receptor de S1P es un compuesto de la fórmula I, por ejemplo, el compuesto A, o un compuesto de la fórmula IVa o IVb. Un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista de receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse en cualquier método definido de acuerdo con 1.5 a 1.10 anteriores, o 7 más adelante. Un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usarse en la preparación de una composición farmacéutica para uso en cualquier método definido de acuerdo con 1.1 a 1.4 anteriores, preferiblemente para un tumor sólido distinto al tumor de mama, próstata, vejiga, riñon o pulmón, cuando el agonista del receptor de S1P es un compuesto de la fórmula I, por ejemplo, el compuesto A, o un compuesto de la fórmula IVa o IVb. Un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de A1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse en la preparación de una composición farmacéutica para uso en cualquier método definido de acuerdo con 1.5 a 1.10 anteriores, o 7 más adelante: Una composición farmacéutica para utilizarse en cualquier método definido de acuerdo con 1.1 a 1.4 anteriores, que comprende un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptables o sus portadores, de preferencia para un tumor sólido distinto a un tumor de mama, próstata, vejiga, riñon o pulmón, cuando el agonista del receptor de S1P es un compuesto de la fórmula I, por ejemplo, el compuesto A, o un compuesto de la fórmula IVa o IVb. Una composición farmacéutica para utilizarse en cualquier método de acuerdo con 1.5 a 1.10 anteriores, o 7 más adelante, que comprende un agonista del receptor de S1P, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptables o sus vehículos. Una combinación farmacéutica que comprende, a) un primer agente el cual es un agonista de receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y b) un co-agente, el cual es un agente quimioterapéutico, por ejemplo, como se define más adelante. Una combinación farmacéutica que comprende una cantidad de a) un primer agente, el cual es un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y b) un co-agente, el cual es un agente quimioterapéutico seleccionado de los compuestos definidos de acuerdo con la sección XI más adelante, para producir un efecto terapéutico sinergístico. Un método como se definió anteriormente, que comprende la co-administración, por ejemplo, concomitantemente o en secuencia, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y una segunda sustancia de fármaco, la segunda sustancia de fármaco siendo un agente quimioterapéutico, por ejemplo, como se indica más adelante. Un método para tratar trastorno linfoprolif erativos o mieloproliferativos, por ejemplo, para tratar la invasión de tumor o síntomas asociados con el crecimiento de tumor en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende la coadministración a dicho sujeto, por ejemplo, concomitantemente o secuencia, de un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y una segunda sustancia, la segunda sustancia siendo un agente quimioterapéutico, por ejemplo, como se indica más adelante. Por "cáncer linfático" se quiere dar a entender, por ejemplo, tumores del sistema sanguíneo y linfático (por ejemplo, enfermedad de Hodgkin, linfoma que no es de Hodgkin, llnfoma de Burkitt, linfomas relacionados son SIDA, enfermedades inmunoproliferativas malignas, mieloma múltiple y neoplasmas de célula de plasma malignos, leucemia linfoide, leucemia mieloide aguda o crónica, leucemia llnfocitlca aguda o crónica, leucemia monocítica, otras leucemias de tipo de célula especificado, leucemia de tipo de célula no especificado, otros neuoplasmas malignos no especificados de linfoide, tejidos hematopoyéticos y tejidos relacionados, por ejemplo, linfoma de célula grande difuso, linfoma de célula T, o linfoma de célula T cutánea). El cáncer mieloide incluye, por ejemplo, leucemia mieloide aguda o crónica. Por el término "agente quimioterapéutico" se quiere dar a entender especialmente cualquier agente quimioterapéutico distinto al agonista del receptor de S1P. Este incluye, pero no se limita a: i. un inhibidor de aromatasa, i¡. un antiestrógeno, un ati-andrógeno (especialmente en el caso de cáncer de próstata), o un agonista de gonadorelina, iii. un inhibidor de topoisomerasa I o un inhibidor de topoisomerasa II, iv. un agente activo de microtubu lo, un agente de alquilación, un antimetabolito antineoplástico o un compuesto de platina, v. un compuesto que activa/reduce la actividad de una proteína o cinasa de lípido o una actividad de proteína o proteasa de lípido, además un compuesto anti-angiogénico o un compuesto que induce procesos de diferenciación de célula, vi. un receptor de bradicinina 1 o un antagonista de a ngiotens i na 11 , vii. un inhibidor de ciclooxigenasa, un inhibidor de bisfosfonato, de desacetilasa de histona, un inhibidor de heparanasa (evita la degradación de sulfato de heparan), por ejemplo, PI-88, un modificador de respuesta biológica, preferiblemente una linfocina o interferones, -por ejemplo, interferón ?, un inhibidor de ubiquitinación, o un inhibidor que bloquea las trayectorias anti-apoptóticas, viii. un inhibidor de isoformas oncogénlcas de Ras, por ejemplo, H-Ras, K-Ras o Ras, o un inhibidor de farnesil transferasa, por ejemplo, L-744,832 o DK8G557, ix. un inhibidor de telomerasa, por ejemplo, telumestatina, x. un inhibidor de proteasa, un inhibidor de metaloproteinasa de matriz, un inhibidor de metionina-aminopeptidasa, por ejemplo, bengamida o un derivado de la misma, o un inhibidor de proteosoma, por ejemplo, PS-341, y/o xi. un inhibidor de mTOR.

El término "inhibidor de aromatasa" como se utiliza aquí, se refiere a un compuesto que inhibe la producción de estrógeno, es decir, la conversión de los sustratos, androestenodiona y testosterona a estrona y estradiol, respectivamente. El término incluye, pero no se limita a, esferoides, especialmente atamestano, exemestano y furmestano y, en particular, no esferoides, en especial aminogluterimida, rogletimida, piridoglutetimida, trilostano, testolactona, cetosonazol, vorosol, fadrozol, anastrozoi y letrosol. El exemestano puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de AROMASIN™. El formestano puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo, bajo el nombre comercial de LENTARON™. El fradozol puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de AFEMA™. El anastrozoi puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ARIMIDEX™. El Letrozol puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de FEMARA™ o FEMAR™. La aminoglutetimida puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ORIMETEN™. Una combinación de la invención que comprende un agente q uimioterapéutico, el cual es un inhibidor de aromatasa, es particularmente útil para el tratamiento de tumores positivos de receptor de hormona, por ejemplo, tumores de mama. El término "antiestrógeno", como se utiliza aquí, se refiere a un compuesto que antagonisa el efecto de estrógenos al nivel del receptor de estrógeno. El término incluye, pero no se limita a, tamoxifen, fulvestrant, raloxifeno y clorhidrato de raloxifeno. El tamoxifen puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo en nombre comercial de NOLVADEX™. El clorhidrato de raloxifeno puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de EVISTA™, El fulventrant puede ser'formulado como se describe en la patente de E. U. A. 4,659,516 o puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de FASLODEX™. Una combinación de la invención que comprende un agente quimioterapéutico, el cual es un antiestrógeno, es particularmente útil para el tratamiento de tumores positivos de receptor de estrógeno, por ejemplo, tumores de mama. El término "anti-andrógeno" como se utiliza aquí, se refiere a cualquier sustancia que sea capaz de inhibir los efectos biológicos de hormonas androgénicas e incluye, pero no se limita a, bicalutamida (CASODEX™), la cual puede ser formulada, como se describe en, por ejemplo, patente de E. U. A. 4,636,505. El término "agonista de gonadorelina" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a abarelix, goserelina y acetato de goserelina. La goserelina se describe en la patente de E. U. A. 4,100,274 y se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo la marca comercial de ZOLADEX™. El abarelix puede ser formulado, por ejemplo, como se describe en la patente de E. U. A. 5,843,901. El término "inhibidor de topoisomerasa I" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a topotecan, irinotecan, 9-nitrocamptotesina y el conjuntado de camptotesina macromolecular PNU-166148 (compuesto A1 en WO 99/17804). El irinotecan pueden ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de CAMPTOSAR™ . El topotecan puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de HYCAMTIN™. El término "inhibidor de topoisomerasa II" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a antraciclinas tales como doxorubicina (incluyendo la formulación liposómica, por ejemplo, CAELYX™), daunorubicina, epirubicina, idarubicina y nemorubicina, el mitoxantrona losoxantrona de antraquinonas, y el etoposida y teniposida de podofilotoxinas. El etoposida puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ETOPOPHOS™. El teniposida puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de VM 26-BRISTOL™. La doxorubicina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ADRIBLASTIN™. La epirubicina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de FAR ORUBICIN™ . La idarubicina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ZAVEDOS™. La mitoxantrona puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de NOVANTRON™. El término "agente activo de microtúbulo" se refiere a agentes de estabilización de microtúbulo y desestabilización de microtúbulo que incluyen, pero no se limitan a taxano, por ejemplo, paclitaxel y docetaxel, vinca alcaloides, por ejemplo, vinblastina, especialmente sulfato de vinblastina, vincristina especialmente sulfato de vincristina, y vinorelbina, discodermolidas, y epotilonas y sus derivados, por ejemplo, etpotilona B o un derivado de la misma. El paclitaxel puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo TAXOL™. El docetaxel puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de TAXOTERE™. El sulfato de vinblastina puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de VINBLASTIN R. P.™. El sulfato de vincristina puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de FARMISTIN™ . La discodermolida puede ser administrada, por ejemplo, como se describe en la patente de E. U. A. 5,010,099. El término "agente de alquilación" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a, busulfan, clorambucil, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan o nitrosourea (BCNU o Gliadel™). La ciclofosfamida puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de CYCLOSTIN™. La ifosfamida puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de HOLOXAN™. El término "antimetabolito antineoplástico" incluye, pero no se limita a 5-f luorouracilo, capecitabina, gemcitabina, citarabina, fludarabina, tioguanina, metotrexato y edatrexato. La capecitabina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de XELODA™. La gemcitabina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de GEMZAR™. El término "compuesto de patina" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a carboplatina , cisplatina y oxaliplatina. La carboplatina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de CARBOPLAT™. La oxaliplatina puede ser administrada, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ELOXATIN ™ . El término "compuestos que activan/reducen una actividad de proteína o cinasa de lípido o además compuestos anti-angiogénicos", como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a, inhibidores de cinasa de tirosina de proteína y/o de cinasa de cerina y/o treonina o inhibidores de cinasa de lípido, por ejemplo, los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad del factor de crecimiento epidérmico de la familia de cinasas de tirosina de receptor (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 como homo- o heterodímero), la familia de factor de crecimiento endotelial vascular de cinasas de tirosina de receptor (VEGFR), los receptores de factor de crecimiento derivados de plaquetas (PDGFR), los receptores del factor de crecimiento de fibroblasto (FGFR), el receptor de factor de crecimiento 1 de tipo insulina (IGF-1R), la familia de cinasa de tirosina del receptor Trk, la familia de cinasa de tirosina del receptor AxI, la cinasa de tirosina del receptor Ret, la cinasa de torisina del receptor de Kit/SCFR, miembros de la familia de c-Arbl y sus productos de fusión de gen (por ejemplo, BCR-Abl), miembros de la familia de cinasa C de proteína (PKC) y de Raf de cinasas de cerina/treonina, miembros de la familia de cinasa de MEK, SRC, JAK, FAK, PDK o Pl(3), o de la familia de cinasa relacionada con Pl(3)-cinasa, y/o miembros de la familia de cinasa dependiente de ciclina (CDK) y compuestos anti-angiogénicos que tienen otro mecanismo para su actividad, por ejemplo, no relacionados con la inhibición de cinasa de proteína o el lípido. Los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de VEGFR son especialmente compuestos, proteínas o anticuerpos que inhiben la cinasa de tirosina del receptor de VEGF, inhiben un receptor de VEGF o se unen a VEGF, y son en particular aquellos compuestos, proteínas o anticuerpos monoclonales genérica y específicamente descritos en WO 98/35958, por ejemplo, 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)naftalazina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por ejemplo, el succinato, en WO 00/27820, por ejemplo, un derivado de amida de ácido N-aril(tio) antranílico por ejemplo, 2-[(-piridil)metil]amino-N-[3-metoxi-5-(trifluorometil)fenil]benzamida o 2-[( 1 -óxido-4-piridil)metil]amino-N- [3-trifluorometilfenil]benzamida, o en WO 00/09495, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 y EP 0 769 947; aquellos como se describe por M. Prewett y otros, en Cáncer Research 59 (1999) 5209-5218, por F. Yuan y otros, en Proc. Nati. Acad. Sci. USA, vol. 93, pág. 14765-14770, diciembre 1996, por Z. Zhu y otros, en Cáncer Res. 58, 1998, 3209-3214, y por J. Mordenti y otros en Toxicologic Patology, Vol. 27, No. 1, pág. 14-21, 1999; en WO 00/37502 y WO 94/10202; Angiostatin ™ , descrita por M. S. O'Reilly y otros, Ce 11. 79, 1994, 315-328; Endostatin™, descrita por M. S. O'Reilly y otros, Cell 88, 1997, 2/7-285; amidas de ácido antranílico; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; o anticuerpos anti-VEGF o anticuerpos del receptor de anti-VEGF, por ejemplo, RhuMab. Por anticuerpos se quiere dar a entender anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multíespecíf icos formados a partir de por lo menos dos anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos siempre que exhiban la actividad biológica deseada. Los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de la familia del receptor de factor de crecimiento epidérmico son especialmente compuestos, proteínas o anticuerpos que inhiben miembros de la familia de cinasa de tirosina del receptor de EGF, por ejemplo, el receptor de EGF, ErbB2, ErbB3 y ErbB4 o se unen a EGF o ligandos relacionados con EGF, o los cuales tienen un efecto inhibidor doble sobre la cinasa del receptor de ErbB y VEGF y son en particular aquellos . compuestos, proteínas o anticuerpos monoclonales genérica y específicamente descritos en WO 97/02266, por ejemplo, en el compuesto del Ejemplo 39, o en EP 0 564,409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 722, EP 0 837 063, US 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 y, especialmente WO 96/30347 (por ejemplo, el compuesto conocido como CP 358774), WO 96/33980 (por ejemplo, el compuesto ZD 1839) y WO 95/03283 (por ejemplo, compuesto ZM105180) o PCT/EP02/08780; por ejemplo, trastuzumab (ErpetinR), cetyximab, Iressa, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 o E7.6.3. Los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de PDGFR son especialmente compuestos que inhiben el receptor de PDGF, por ejemplo, un derivado dé N-fenil-2-pirimidin-amina, por ejemplo, imatinib. Los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de los miembros de la familia c-Abl y sus productos de fusión de gen, por ejemplo, un derivado de N-fenil-2-pirimidin-amina, por ejemplo, imatinib; PD180970; AG957; o NSC 680410. Los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de cinasa de proteína C, miembros de la familia C, Raf, MEK, SRC, JAK, FAK y PDK, o cinasa P I (3 ) o miembros de la familia relacionada con cinasa Pl(3), y/o los miembros de la familia de cinasa dependiente de ciclina (CDK) son especialmente aquellos derivados de estaurosporina descritos en EP 0296110, por ejemplo, midostaurina; ejemplos de otros compuestos incluyen, por ejemplo, UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Bryostatin 1, Perifosina; U0126, limofosina; RO 318220 y RO 320432; GO 6976; Isis 3521; o LY333531 /LY379196. Otros compuestos anti-angiogénicos son, por ejemplo, talidomida (THALOMID) y TNP-470. Los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de una fosfatasa de proteína o lípido, son, por ejemplo, inhibidores de fosfatasa 1, fosfatasa 2A, PTEN o CDC25, por ejemplo, ácido ocadaico o un derivado del mismo. Los compuestos que inducen procedimientos de diferenciación de célula son, por ejemplo, ácido retinoico, a-, ?- o d- tocoferol o a-, ?- o d- tocotrienol. El término inhibidor de ciclooxigenasa como- se utiliza aquí incluye, pero no se limita a, por ejemplo, celecoxib (CelebrexR), rofecoxib (VioxxR), etoricoxib, valdecoxib o un ácido 5-alquil-2-arilaminofenilacético, por ejemplo, ácido 5-metil-2-(2'-cloro-6'-fluoroanilino)fenilacético. El término "inhibidor de desacetilasa de histona" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a MS-27-275, SAHA, puroxamida, FR-901228 o ácido valproico. El término "bisfosfonato" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a ácido etridónico, clodrónico, tiludrónico, pamidrónico, alendrónico, ibandrónico, risedrónico y zoledrónico. El "ácido etidrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de DIDRONEL™. El "ácido clordrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de BONEFOS™. El "ácido tiludrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de SKELID™. El "ácido pamidrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de AREDIA™. El "ácido alendrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de FOSAMAX™. El "ácido ibandrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de BONDANAT™. El "ácido risedrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo el nombre comercial de ACTONEL™. El "ácido zoledrónico" puede ser administrado, por ejemplo, en la forma como se vende, por ejemplo bajo nombre comercial de ZOMETA™. El término "inhibidor de metaloproteinasa de matriz" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a inhibidores peptidomiméticos o no peptidomiméticos de colágeno, derivados de tetraciclina, por ejemplo, el inhibidor peptidomimético hidroxamato, batimastat y su análogo oralmente biodisponible marimastat, prinomastat, BMS- 279251, BAY 12-9566, TAA211 o AAJ996. El término "inhibidor de mTOR" como se utiliza aquí, incluye, pero no se limita a rapamicina (sirolimus) o un derivado de la misma. La rapamicina es un antibiótico de macrólida conocido producido por Streptomyces Hygroscopicus. Los derivados adecuados de rapamicina incluyen, por ejemplo los compuestos de la fórmula A: en donde: Riaa es CH3 o alquinilo de 3 a 6 átomos de carbono, R2aa es H o -CH2-CH2-OH, 3-h¡droxi-2-(hidroximetil)-2-metil-propano¡l o tetrazolilo, y Xaa es =0, (H,H) o (,OH), siempre que R2aa sea diferente de H cuando Xaa sea =0 y R1aa sea CH3, o un profármaco del mismo cuando R2aa es -CH2-CH2-OH, por ejemplo, un éter fisiológicamente hidrolisable del mismo. Los compuestos de la fórmula A se describen en, por ejemplo, WO 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, USP 5, 362,718 o WO 99/15530 las cuales se incorporan aquí por referencia. Estos pueden ser preparados como se describe o por analogía a los procedimientos descritos en esas referencias. Los derivados de rapamicina preferidos son 32-desoxirapamicina, y 16-pent-2-iniloxi-32-desoxiramapicina, 16-pent-2-iniloxi-32(S)-dihidro- rapamicina, 16-pent-2-iniloxi-32(S)-dihidro-40- 0-(2-h¡droxietil)-rapam¡cina y, muy preferiblemente, 40-0-(2-hidroxietil)rapamicina. Otros ejemplos de derivados de rapamicina incluyen, por ejemplo, CCI779 o 40-[3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoatoj-rapamicina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, como se describe en la patente de E. U. A. 5,362,718, ABT578 o 40-(tetrazolil)-rapam¡cina, particularmente 40-epi-(tetrazolil)-rapamicina, por ejemplo, como se describe en WO 99/15530, o rapálogos como se describen, por ejemplo, WO 98/02441 y WO 01/14387, por ejemplo, AP23573. En cada caso cuando se proporcionan citas de publicaciones de patente o publicaciones científicas, la materia objeto con relación a los compuestos se incorpora aquí en la presente solicitud por referencia. Asimismo están comprendidas las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, los racematos, diaestereoisómeros, enantiómeros, tautómeros correspondientes así como las modificaciones de cristal correspondientes de los compuestos descritos anteriormente cuando están presentes, por ejemplo, solvatos, hidratos y polimorfos, los cuales se describen ahí. Los compuestos utilizados como ingredientes activos en las combinaciones de la invención pueden ser preparados y administrados como se describe en los documentos citados, respectivamente. También dentro del alcance de esta invención se encuentra la combinación de más de dos ingredientes activos separados como se estableció anteriormente, es decir, una combinación farmacéutica dentro del alcance de esta invención puede incluir tres ingredientes activos o más. Además, tanto el primer agente como el co-agente no son el ingrediente idéntico. La utilidad de los agonistas de S1P, por ejemplo, los agonistas de S1P que comprenden un grupo de la fórmula X, para tratar tumores sólidos como se especificó anteriormente, puede ser demostrada en modelos de prueba con animales así como en métodos clínicos, por ejemplo, de acuerdo con los métodos descritos más adelante. A. In Vitro A.1 Actividad Antitumoral Se utilizó una línea de célula de cáncer de mama de ratón originalmente aislada de carcinomas mamarios, por ejemplo, JygMC(A). El número de células se ajustó a 5 x 105 para colocarse en placas en un medio fresco antes del procedimiento. Las células se incubaron con medio fresco conteniendo 2.5 mM de timidina sin FCS durante 12 horas y después se lavaron dos veces con PBS, seguido por la adición de un medio fresco con FCS al 10% y adicionalmente incubado durante otras 12 horas. Después, las células se incubaron con un medio fresco conteniendo 2.5 mM de timidina sin FCS durante 12 horas. Para liberar las células del bloque, las células se lavaron dos veces con PBS y se volvieron a colocar en placas en un medio fresco con FCS al 10%. Después de sincronización, las células se incubaron con o sin varias concentraciones de un compuesto de la fórmula I durante 3, 6, 9, 12, 18 o 24 horas. Las células se cosecharon después del tratamiento con EDTA al 0.2%, se fijaron con una solución de etanol al 70% enfriada con hielo, se hidrolizaron con 250 Mg/ml de RnaseA (tipo 1-A: Sigma Chem. Co.) a 37°C durante 30 minutos y se tiñeron con yoduro de propidio a 10 mg/ml durante 20 minutos. Después del periodo de incubación, el número de células se determinó tanto contando las células en un contador de Coulter como a través del ensayo col irimétrico de SRB. Bajo estas condiciones, un agonista de S1P, por ejemplo, el compuesto B en forma de sal de clorhidrato, inhibe la proliferación de células tumorales a cocentraciones que varían de 10"2 a 10"6 M.

A.2 Ensayo de formación de tubo de HUVEC mediado por A1P Para en ensayo de formación de tubo, se utilizaron HUVEC del pasaje 2-8 y nunca fueron a un confluente mayor que 70% antes de la cosecha. Las células se prepararon para en ensayo lavando con Solución Salina Equilibrada de Herpes (HBSS de Clonetics) y después se tripsinizaron con tripsina/EDTA (0.25 mg/ml, de Clonetics). Después de que aproximadamente el 90% de las células se elevó en la placa, se agregó un volumen igual de Solución Neutralizante con Tripsina (TNS de Clonetics) y las células se recogieron en un tubo cónico conteniendo por lo menos 10 mi de EBM-2 (Clonetics) +BSA al 0.1% (Sigma). Las células se centrifugaron a 1000 rpm durante 5 minutos y el sobrenadante se removió y se volvió a colocar con 5 mi de EBM-2 +BSA al 0.1% fresco. Las células se contaron utilizando un hematocitómetro y el volumen de la suspensión de célula se ajustó para lograr una concentración de 500,000 células/ml. Se prepararon tubo cónicos con compuestos de prueba a 100 nM, y toxina de pertusina (PTx) a 10 ng/ml en cada uno, después se agregó 1 mi de la suspensión de célula a cada tubo. Los tubos después se incubaron durante media hora a 37°C, C02 al 5%. El ensayo de migración se realizó utilizando placas de inserto de cavidades múltiples Fluoro-Blok 24-mu Itiwel I Insert Plates cubiertas con fibronectina (tamaño de poro 8 µ??, Falcon #351147) en lugar de insertos individuales en una placa de 24 cavidades. Las células y los compuestos de prueba se prepararon y se pre-incubaron como se describió anteriormente, después se agregaron 100 µ? a cada cavidad apropiada en la placa Insert Píate. Se agregaron 300 µ? del medio de EBM-2 + carbón al 2% sin S1P a los fondos de las cavidades marcadas sin estimulación (-), y se agregaron 300 µ? del medio conteniendo S1P (500 nM) a los fondos de las cavidades marcadas para estimulación ( + ). La placa después se incubó durante 4 horas a 37°C, C02 al 5%. Se preparó Calcein AM 50 pg/frasco, (Molecular Probes #C3100) agregando primero 20 µ? de DMSO al frasco. Después se agregaron 12.5 mi de HBSS (por placa) que se calentó a 37°C y 150 µ? al frasco. Los contenidos del frasco después se transfirieron de regreso a la solución de HBSS restante para hacer una concentración final de 4 pg/ml de Calcein AM. La placa Fluoro-Blok se removió del incubador y la placa de inserto superior se separó y se "agitó" para remover el exceso de medio de los insertos. La placa de inserto después se transfirió a una placa de 24 cavidades fresca conteniendo 500 µ?/cavidad de 4 pg/ml de Calcein A . La placa después se incubó durante 1 Vz horas a 37°C, C02 al 5%. Después de la incubación la placa se leyó en un aparato Cytofluor II a una excitación de 485 nm y a una ignición de 530 nm. El recubrimiento de Fluoro-Blok en los insertos permitió que solo las células que emigraron al fondo fueran contadas. Los datos fueron transmitidos al programa Excel para cálculos, se crearon gráficas utilizando SigmaPlot, y se utilizó SigmaStat para pruebas de importancia (prueba t). (Figura 7). La formación de tubos se cuantificó contando el número de puntos de ramificación (2 cordones independientes de conexión) en 3 campos independientes a una amplificación de 4x. Los resultados de reportan como sigue.

Tratamiento Puntos de Ramificación PBS 8 + 5 S1 P 42 + 13 FTY720-fosfato 48 + 15 FTY720-fosfato + S1P 14 + 7 Fosfato de compuesto C 44 + 16 Fosfato de compuesto C + S1P 18 + 6 Estos resultados demuestran la única habilidad del fosfato de FTY720 o el fosfato de compuesto C para actuar como un agonista de angiogénesis como tal, pero después sorprendentemente como un antagonista de angiogénesis mediada por S1P. El fosfato del compuesto C preferiblemente es el racemato o el enantiómero R. Se utilizó PTx como un control para inhibir la actividad mediada por Gia (EDG-1 ).

B. In Vivo B.1 Actividad Antitumoral La actividad antitumoral se expresó como % de T/C (incremento medio en volúmenes de tumor de animales tratados dividido entre el incremento medio de volúmenes de tumor de animales de control multiplicado por 100). Se transplantaron alícuotas de células cancerosas (1 x 107), por ejemplo, células de melanoma A375 humanas, a ratones BALB/c-un/un. Cuando los tumores alcanzaron un tamaño de aproximadamente 10 x 10 mm, los animales se asignaron aleatoriamente a 4 sub-grupos y se inició el tratamiento con un compuesto de la fórmula I. Los animales fueron sacrificados después de dos semanas de tratamiento, en ese momento se cosecharon y se prepararon tumores y tejidos para análisis morfológico y molecular. El tamaño de los tumores se determinó como un calibrador. En este ensayo, un agonista de S1P, por ejemplo el compuesto B o C, (en la forma de sal de clorhidrato) disminuyó el crecimiento de tumor cuando se administró a una dosis de 0.5 a 5 mg/kg contra el control de salina: por ejemplo, clorhidrato del compuesto C cuando se administró a una dosis de 2.5 mg/kg 5 veces a la semana dio como resultado un valor final de T/C del 30%.

B.2 Combinación con un inhibidor de cinasa de tirosina de proteína de VEGF-R Se trataron ratones pelones transplantados con tumores de mama MDA-MB-435 humanos durante 2 semanas con un inhibidor de cinasa de tirosina de proteína VEGF-R, por ejemplo, succinato de 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalacina, a una dosis de 100 mg/kg, p.o., 5 veces a la semana, un agonista de receptor S1P, por ejemplo, el compuesto C (sal de clorhidrato) a una dosis de 2.5 mg/kg, i.v., 5 veces a la semana, o una combinación de ambos. El antitumor se expresó como porcentaje de T/C como se indicó anteriormente. Una combinación del clorhidrato del compuesto C con succinato de 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalacina produjo un efecto antitumoral mayor (% de T/C del 27%) según comparado con cualquier agente solo (clorhidrato del compuesto C, T/C 66%; succinato de 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazina, T/C 91%). También se obtuvieron buenas respuestas antitumorales cuando ratones sin pelo fueron trasplantados con células de melanoma A 375 humanas y se trataron en una forma similar con la misma combinación: el tratamiento combinado dio como resultado T/C de 15%, mientras el tratamiento cada agente solo dio como resultado T/C de 35 y 44%, respectivamente.

B.3 Actividad Antiangiogénica Se implantaron, subcutáneamente en el flanco de ratones, cámaras porosas conteniendo (i) esfingosina-1 -fosfato (5 µ /cámara) o (i¡) VEGF humano (1 pg/cámara) en 0.5 mi de agar al 0.8% p/v (conteniendo heparina, 20 µ/ml). El S1P o VEGF indujo el crecimiento de tejido vascularizado alrededor de la cámara. Esta respuesta es dependiente de dosis y puede ser cuantificada midiendo el peso y el contenido del tejido en sangre. Los ratones se trataron una vez al día, (i) oralmente con el compuesto A (0.3, 3, 30 o 50 mg/kg) o (¡i) intravenosamente con el enantiómero R del compuesto C (2.5 mg(kg) o (iii) intravenosamente con el enantiómero S del compuesto C (2.5 mg/kg) o (iv) oral o intravenosamente con vehículo (glucosa al 5%, 10 ml/kg), empezando 4-6 horas antes del implante de las cámaras y continuando durante 4 días. Los animales fueron sacrificados para medir los tejidos vascularizados 24 horas después de la última dosis. Se determinó el peso y el contenido de sangre de tejidos vascularizados alrededor de la cámara. Los animales tratados con el compuesto A o con el enantiómero R o S del compuesto C mostraron un contenido reducido de peso y/o sangre de los tejidos vascularizados comparado con animales tratados solo con vehículo.

C. Ensayo Clínico C.1 Investigación del beneficio clínico de un agosta del receptor de S1P, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I, II, o III, por ejemplo el compuesto A, B o C.

Veinte pacientes con tumores sólidos en etapa avanzada, en progresión, resistentes o refractarios a terapias estándares, recibieron el compuesto a una dosis según determinada por un estudio de escala de dosis. El estado clínico general del paciente se investigó semanalmente a través de examen físico y de laboratorio. Se analizaron los cambios . en tumor y metástasis cada dos meses a través de examen radiológico. Inicialmente, los pacientes recibieron un tratamiento durante 2 meses. Después, permanecieron en tratamiento hasta que su enfermedad no progresó y el fármaco fue tolerado satisfactoriamente. Variables principales para la evaluación: seguridad (eventos adversos), bioquímica de suero estándar y hematología, dimensiones de tumor a través de exploración tomográfica computarizada (CT) o formación de imagen de resonancia magnética (MRI).

C.2 Tratamiento Combinado Los estudios clínicos adecuados son, por ejemplo, estudios de escala de dosis, no aleatorios de etiqueta abierta en pacientes con tumores sólidos avanzados. Dichos estudios probaron, en particular, el sinergismo de los ingredientes activos de la combinación de la invención. Los efectos benéficos sobre enfermedades proliferativas pueden ser determinados directamente a través de los resultados de estos estudios o a través de los cambios en el diseño de estudio que son conocidos por aquellos expertos en la técnica. Dichos estudios, en particular, son adecuados para comparar los efectos de una monoterapia utilizando los ingredientes activos y una combinación de la invención. Preferiblemente, la dosis de un agente (a) se escaló hasta que se obtuvo una Dosis Tolerada Máxima, y el co-agente (b) se administró con una dosis fija. Alternativamente, el agente (a) se administró en una dosis fija y la dosis del co-agente (b) fue escalada. Cada paciente recibió dosis del agente (a) ya sea diariamente o en forma intermitente. La eficacia del tratamiento pudo ser determinada en tales estudios, por ejemplo, después de 12, 18 o 24 horas a través de evaluación lógica de los tumores cada 6 semanas. Alternativamente, se puede utilizar un estudio doblemente ciego, controlado con placebo con el fin de probar los beneficios de la combinación de la invención aquí mencionada. Las dosis diarias requeridas para practicar el método de la presente invención cuando se utiliza solamente un agonista del receptor de S1P variarán dependiendo de, por ejemplo, el compuesto utilizado, el huésped, el modo de administración y la severidad de la condición que será tratada. Una escala de dosis diaria preferida es de aproximadamente 0.1 a 100 mg como una dosis individual o en dosis divididas. Las dosis diarias adecuadas para pacientes están en el orden de, por ejemplo, 0.1 a 50 mg, p.o. El agonista del receptor de S1P puede ser administrado a través de cualquier ruta convencional, en particular en forma enteral, por ejemplo, oralmente, por ejemplo, en la forma de tabletas, cápsulas, soluciones para beber, nasalmente, pulmonar (a través de inhalación) o parenteralmente, por ejemplo en la forma de soluciones o suspensiones inyectables. Las formas de dosis unitarias adecuadas para administración oral comprenden de aproximadamente 0.1 a 30 mg, usualmente de 0.25 a 30 mg del agonista de receptor de S1P, junto con uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptables o sus vehículos. Con el fin de inhibir la angiogénesis, es importante seleccionar una dosis del agonista del receptor de S1P suficientemente alta, ya que las bajas concentraciones de agonista de receptor de S1P promueven angiogénesis. Una dosis adecuada para proporcionar un efecto anti-angiogénico cuando se administra un agonista de S1P a un paciente puede ser seleccionada a través de estudios de escala de concentración y de dosis como se describe en A, B y C anteriores. La combinación de la invención también puede ser aplicada en combinación con intervención quirúrgica, hipertermia de cuerpo entero prolongada media y/o terapia de irradiación. La administración de una composición farmacéutica de la invención da como resultado un efecto benéfico, por ejemplo, un efecto terapéutico si nerg ístico, es decir, con respecto a la reducción, detención e inversión de la formación de neoplasma, metástasis o crecimiento o una duración más larga de respuesta de tumor o inhibición de angiogénesis; también puede dar como resultados otros efectos benéficos, por ejemplo, menos efectos laterales, una calidad mejorada de vida o una mortalidad y morbidez reducidas, comparado con una monoterapia que aplica solamente uno de los ingredientes farmacéuticamente activos utilizados en la combinación de la invención, en particular, en el tratamiento de un tumor que es refractario a otros quimioterapéuticos conocidos como agentes anticáncer. Un beneficio adicional es que se puede utilizar dosis más bajas de los ingredientes activos de la combinación de la invención, por ejemplo, que la dosis no solamente necesitan ser lo suficientemente pequeñas pero también son aplicadas con menos frecuencia, o pueden ser utilizadas con el fin de disminuir la incidencia de efectos laterales, mientras se controla el crecimiento de la formación de neoplasma. Esto está de acuerdo con los deseos y requerimientos de los pacientes que se están tratando. De acuerdo con una modalidad de la invención, una combinación farmacéutica preferida comprende: a) un compuesto de la fórmula I, II, III, IVa, IVb, V o VI, por ejemplo, el compuesto A, B o C, y b) co-agente, uno o más compuestos como se indica en los párrafos (ii), (iii), (iv), (v), (vii) o (xi) anteriores, por ejemplo, carboplatina, cisplatino, paclitaxel, docetaxel, gemcitabina, doxorubicina, un compuesto que activa, reduce o inhibe la actividad de la familia de factor de crecimiento endotelial vascular de cinasas de tirosina de receptor (VEGFR) o los receptores de factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGFR), un bisfosfonato o un inhibidor de mTOR. Una modalidad más de la invención se refiere al uso del agonista del receptor de S1P, (a) en combinación con un agente terapéutico, (b) en el tratamiento de un cáncer linfático o mieloide, por ejemplo, como se describe anteriormente. La combinación puede comprender como un co-agente adicional (b) por ejemplo de sulfan, citarabina, 6-tioguanina, fludarabina, hidroxiurea, procarbazina, bleomicina o metotrexato. Los inhibidores de topoisomeraza II, por ejemplo, daunorubicina o, en particular, los compuestos que activan, reducen o inhiben la actividad de PDGFR o miembros de la familia c-Abl y sus productos de fusión de gen, por ejemplo, imatinib, son preferidos como el co-agente (b), por ejemplo para usarse en el tratamiento de cáncer linfático. Los términos "co-administrac¡ón" o "administración combinada" o similares como se utilizan aquí, abarcan la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y pretenden incluir regiones de tratamiento en donde los agentes ^necesariamente no son administrados por la misma ruta de administración o al mismo tiempo. Es un objeto de esta invención proporcionar una composición farmacéutica que comprende una cantidad, la cual conjunta y terapéuticamente es efectiva contra una enfermedad maligna proliferativa que comprende una combinación de la invención. En esta composición, el primer agente (a) y el co-agente (b) pueden ser administrados conjuntamente, uno después del otro o en forma separada en una forma de dosis unitaria combinada o en dos formas de dosis unitarias separadas. La forma de dosis unitaria también puede ser una combinación fija. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden ser preparadas en una forma conocida per se y son aquellas adecuadas para administración enteral, tal como oral y rectal y parenteraí ha mamíferos (animales de sangre caliente), incluyendo seres humanos, que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos un patrón de combinación farmacológicamente activo solo, por ejemplo, como se indicó anteriormente, o en combinación con uno o más vehículos o diluyente farmacéuticamente aceptables, especialmente adecuados para aplicación enteral o parenteraí. Las composiciones farmacéuticas adecuadas contienen, por ejemplo, de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 99.9%, de preferencia de aproximadamente 1% a aproximadamente 60% de los ingredientes activos. Las preparaciones farmacéuticas para la terapia de combinación para administración enteral o parenteraí son, por ejemplo, aquellas en formas de dosis unitaria, tales como tabletas cubiertas con azúcar, tabletas, cápsulas o supositorios, o ampolletas. Si no se indica de otra manera, se preparan en una forma conocida per se, por ejemplo, a través de procedimientos convencionales de mezclado, granulación, recubrimiento con azúcar, disolución o liofilización. Se apreciará que el contenido unitario de un patrón de combinación contenido en una dosis individual de cada forma de dosis no necesita por si mismo constituir una cantidad efectiva, ya que la cantidad efectiva necesaria puede ser lograda a través de la administración de una pluralidad de unidades de dosis. En particular, una cantidad terapéuticamente efectiva de cada uno del patrón de combinación de la combinación de la invención puede ser administrado simultánea o secuencialmente y en cualquier orden, y los componentes pueden ser administrados en forma separa o como una combinación fija. Por ejemplo, el método de retrazo de la progresión o tratamiento de una enfermedad maligna proliferativa de acuerdo con la invención puede comprender, (i) la administración de un primer agente (a) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, y (ii) la administración de un coagente (b) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, simultánea o secuencialmente en cualquier orden, y cantidades conjunta y terapéuticamente efectivas, de preferencia en cantidad sinerg ísticamente efectivas, por ejemplo, en dosis diarias o intermitentes que corresponden a las cantidades descritas aquí. Los patrones de combinación individuales de la combinación de la invención pueden ser administrados en forma separada a diferentes tiempos durante el curso de la terapia o concurrente en formas de combinación divididas o individuales. Además, el término administrar también abarca el uso de un pro-fármaco de un patrón de combinación que convierte, in vivo, al patrón de combinación como tal. La presente invención, por lo tanto, se debe entender que abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alterno y el término "administrar" debe ser interpretado por consiguiente. La dosis efectiva de cada uno de los patrones de combinación empleados en la combinación de la invención puede variar dependiendo del compuesto particular o la composición farmacéutica empleada, el modo de administración, la condición que va a ser tratada, la severidad de la condición que va a ser tratada, de esta manera, el régimen de dosis de la combinación de la invención se selecciona de acuerdo con una variedad de factores, incluyendo la ruta de administración y la función renal y hepática del paciente. Un médico, clínico o veterinario de experiencia ordinaria fácilmente puede determinar y prescribir la cantidad efectiva de los ingredientes activos individuales requeridos para prevenir, contrarrestar o evitar el progreso de la condición. La precisión óptima para lograr la concentración de los ingredientes activos dentro de la escala que produce eficacia sin toxicidad, requiere de un régimen a base de la cinética de la disponibilidad de los ingredientes activos a los sitios objetivo. Las dosis diarias para el primer agente o componente (a) por supuesto, variarán dependiendo de una variedad de factores, por ejemplo, el compuesto seleccionado, la condición particular que será tratada y el efecto deseado. En general, sin embargo, se obtienen resultados satisfactorios en la administración de un agonista del receptor de S1P, por ejemplo, el compuesto A, B o C, a regímenes de dosis diaria del orden de aproximadamente 0.1 a 100 mg como una sola dosis o en dosis individuales. El agonista del receptor de S1P puede ser administrado a través de cualquier ruta convencional, en particular enteralmente, por ejemplo, en forma oral, por ejemplo, forma de tabletas, cápsulas, soluciones para beber o parenteralmente, por ejemplo, en la forma de soluciones o suspensiones inyectables. Las formas de dosis unitaria adecuadas para administración oral comprenden de aproximadamente 0.1 a 30 mg del componente (a) por ejemplo de 0.1 a 25 mg, junto con uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptables o sus vehículos. El fadrazol puede ser administrado oralmente a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 10 mg/día, de preferencia de aproximadamente 1 a aproximadamente 2.5 mg/día. El exemestano puede ser administrado oralmente a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 5 a aproximadamente 200 mg/día, de preferencia de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 mg/día, o parenteralmente de aproximadamente 50 a 500 mg/día, de preferencia de aproximadamente 100 a aproximadamente 250 mg/día. Si el fármaco debe ser administrado en una composición farmacéutica separada, este puede ser administrado en la forma descrita en GB 2,177,700. El formestano puede ser administrado parenteralmente a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 100 a 500 mg/día, de preferencia de aproximadamente 250 a aproximadamente 300 mg/día. El anastrozol puede ser administrado oralmente a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 0.25 a 20 mg/día. De preferencia de aproximadamente 0.5 a 2.5 mg/día. La aminoglutemida puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 200 a 500 mg/día. El citrato de tamoxifen puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 10 a aproximadamente 40 mg/día. La vinblastina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 1.5 a 10 mg/m2 día. El sulfato de vincristina puede ser administrado parenteralmente a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 0.025 a 0.05 mg/kg del peso del cuerpo'semana. La vinorelbina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 10 a 50 mg/m2 día. El fosfato etoposida puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 25 a 115 mg/m2 día, por ejemplo 56.8 o 113.6 mg/m2 día. El teniposida puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 75 a 150 mg aproximadamente cada 2 semanas. La doxorubicina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 10 a 100 mg/m2 día, por ejemplo, 25 a 50 mg/m2 día. La epirubicina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 10 a 200 mg/m2 día. La idarubicina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de 0.5 a 50 mg/m2 día. La mitoxantrona puede ser administrada, a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 2.5 a 25 mg/m2 día.

El paclitaxel puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 50 a 300 mg/m2 día. El docetaxel puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 25 a 100 mg/m2 día. La ciclofosfamida puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 50 a 1500 mg/m2 día. La melfalan puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 0.5 a 10 mg/m2 día. El 5-fluorouracilo puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 50 a 1000 mg/m2 día, por ejemplo, 500 mg/m2 día. La capecitabina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varia de aproximadamente 10 a 1000 mg/m2 día. El clorhidrato de gemcitabina puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 1000 mg/m2 semana. El metrotrexato puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 5 a 500 mg/m2 día. El topotecan puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 1 a 5 mg/m2 día. El irinotecan puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 50 a 350 mg/m2 día. La carboplatina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 200 a 400 mg/m2 durante aproximadamente cada 4 semanas. La cisplatina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 25 a 75 mg/m2 durante aproximadamente cada 3 semanas. La oxaliplatina puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 50 a 85 mg/m2 cada 2 semanas. La imatinib puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis de aproximadamente 2.5 a 850 mg/dia, preferiblemente de 5 a 600 mg/día y muy preferiblemente de 20 a 300 mg/d ía. El ácido alendrónico puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 5 a 10 mg/día. El ácido clodrónico puede ser administrado a un ser humano, por ejemplo, en una escala de dosis que varía de aproximadamente 750 a 1500 mg/día. El ácido etridónico puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 200 o 400 mg/dia. El ácido ibandrónico puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 1 a 4 mg cada 3 o 4 semanas. El ácido risedrónico puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 20 a 30 mg/día. El ácido pamidrónico puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 15 a 90 mg cada 3 a 4 semanas. El ácido tiludrónico puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 200 a 400 mg/día. El trastuzumab puede ser administrado a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 1 a 4 mg/m2/semana .

La bicalutamida puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis que varía de aproximadamente 25 a 50 mg/m2 día. La 1 -(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalaz¡na o una sal de la misma, por ejemplo, el succinato, puede ser administrada a un ser humano en una escala de dosis de aproximadamente 50 a 1500, muy preferiblemente alrededor de 100 a 750, y de preferencia de 250 a 500 mg/día. La rapamicina o un derivado de la misma, por ejemplo, 40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina puede ser administrada en una escala de dosis que varía de aproximadamente 0.1 a 25 mg.

Ejemplo de Formulación Cápsulas Suaves Compuesto de la fórmula I, Por ejemplo, HCI del Compuesto A 30 mg Glicol polietilénico 300 300 mg Polisorbato 80 20 mg T o t a l 350 mg Los agonistas del receptor de S1P, por ejemplo, un agonista del receptor de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, son bien tolerados a dosis requeridas para uso de acuerdo con la presente invención. Por ejemplo, la LD50 aguda para el compuesto A es de >10 mg/kg p.o. en ratas y monos.

En un aspecto más, la presente invención se refiere al uso de agonistas de S1P como fármacos pro-angiogénicos. La inducción de neo-ang iogénesis ha sido finalmente reconocida como un excelente objetivo en un número de condiciones (por ejemplo, angiogénesis al miocardio, curación de heridas o disfunción vascular diabética/vasculopatía). Como se describió anteriormente, las altas concentraciones de agonistas del receptor de S1P (2 µ? o más, por ejemplo, 2-5 µ M o alrededor de 5 µ?) exhiben efectos anti-angiogénicos, y los agonistas del receptor de S1P pueden inhibir angiogénesis inducida por VEGF. En contraste, las bajas concentraciones (0.1 - 1 µ?, por ejemplo, 0.1 - 0.5 µ? o 0.5 - 1 µ?) de agonistas de S1P tienen un efecto mejorador sobre el angiogénesis y son capaces de potenciar angiogénesis mediada por VEGF. De esta manera, los agonistas de S1P pueden tener efectos bifásicos en angiogénesis. Por consiguiente, la presente invención además proporciona: 8. El uso de un agonista de S1P, por ejemplo, un agonista de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, por ejemplo, el compuesto A o fosfato de compuesto A, en la inducción del proceso de neo-angiogénesis, por ejemplo, como agente pro-angiogénico, por ejemplo, en indicadores en donde está indicada una promoción de angiogénesis; 9. Un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de enfermedades mediadas por la inhibición del procedimiento de neo-angiogénesis, por ejemplo, mediada por factores anti-angiogénicos, por ejemplo, en indicadores en donde se indica una promoción de angiogénesis, por ejemplo, en la curación de heridas o en tratamiento de infarto al miocardio o disfunción vascular diabética/vasculopatía, que comprende utilizar un agonista de receptor de S1P, por ejemplo, un agonista de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, por ejemplo, el compuesto A o fosfato de compuesto A, como un ingrediente activo; 10. Un método para tratar o prevenir enfermedades mediadas por la inhibición del proceso neo-angiogénesis, por ejemplo, mediado por factores anti-angiogénicos, por ejemplo en indicaciones en donde se indica una promoción de angiogénesis, tal como, por ejemplo, en curación de heridas o en el tratamiento de infarto al miocardio o disfunción vascular diabética/vasculopatía, que comprende administrar una cantidad efectiva de una agonista de receptor de S1P, por ejemplo, un agonista de S1P que comprende un grupo de la fórmula X, por ejemplo, el compuesto A o fosfato de compuesto A, a un sujeto con la necesidad de dicho tratamiento. Los agonistas de S1P adecuados para promover angiogénesis incluyen aquellos definidos anteriormente con relación al tratamiento de cáncer, por ejemplo, agonista de S1P que comprenden un grupo de la fórmula X o compuestos de acuerdo con las fórmulas I a IX, o sales o ésteres farmacéuticamente aceptables de los mismos. Preferiblemente, el agonista de S1P es el fosfato de compuesto A. El agonista de S1P puede ser utilizado solo en combinación con uno o más agentes adicionales que promueven angiogénesis, por ejemplo, VEGF. Con el fin de promover angiogénesis, es importante seleccionar una dosis suficientemente baja del agonista de receptor de S1P, ya que las altas concentraciones de los agonistas de receptor de S1P inhiben angiogénesis. Una dosis adecuada para proveer un efecto pro-angiogénico cuando se administra a un agonista de S1P a un paciente puede ser seleccionada a través de estudios de escala de concentración y de dosis como se describió en A, B, C anteriores.

Descripción de las Figuras Figura 1 Esta figura muestra que el fosfato de compuesto A fuertemente promueve una formación de red de tipo capilar en una forma dependiente de dosis con forma de campana mostrando una actividad máxima alrededor de 0.5 µ?.

Figura 2 Estas muestra que tanto el fosfato de compuesto A como el compuesto A a 0.5 - 1 µ? no atenúan la remodelación mediada por VEGF, sino más bien coopera con el factor de crecimiento de polipéptido.

Figura 3 Esta muestra que el fosfato de compuesto A así como la formación de tubo estimulada por S1P es práctica y completamente inhibida a través de toxina de tos ferina(PTX, 50 ng/ml), un inhibidor de proteínas G heterotriméricas del tipo a¡/0. Esto puede ser interpretado como una posible invol ucración de eventos de señalización mediados por el receptor de EDG-1 (S1P-,) en biorespuestas estimuladas por fosfato de compuesto A.

Figura 4 Esta muestra que la esfingosina a 1 µ?, la cual por sí misma parece ser menos potente que S1P, atenúa la habilidad tanto de S1P como de fosfato de compuesto A para inducir estructuras de tipo capilar, sin tener el efecto inhibidor en la formación de tubo inducida por VEGF. En este aspecto, la esfingosina se comporta diferente al compuesto A. Los datos indican que el equilibrio entre esfingosina y S1 P parece ser críticamente importante para activación de célula endotelial/angiogénesis muy probablemente a través de la familia del receptor de EDG. En forma importante, las altas concentraciones de esfingosina y del compuesto A (2-5 µ?) inhibe la formación de tubo activada por VEGF.

Figura 5 Esta muestra que el tratamiento de HUVEC con fosfato de compuesto A a 0.5 µ?t? puede dar como resultado la activación pasajera de ERK ½ con un pico de fosforilación/activación a 10 minutos y regresando a la línea de base en 20 minutos.

Figura 6 Esta fue probada si el compuesto A, fosfato de compuesto A, esfingosina o S1P también inducen factor de tejido sobre HUVEC. Los datos encontrados demuestran que ninguno de estos compuestos solo en combinaciones puede elevar la actividad del factor de tejido como se muestra en la Figura 6. El compuesto A y el fosfato de compuesto A ligeramente pueden mejorar el factor de tejido inducido por VEGF pero no por TNF-ot.

Figura 7 Esta muestra el efecto del compuesto C en un ensayo formación de tubo de HUVEC mediado por S1P.

Se utilizaron las siguientes abreviaturas: BSA: albúmina de suero de bovino. ECGS: factor de crecimiento de célula endotelial fijado. S: esfingosina. JNK ½: cinasa de N-terminal ½ c-jun. Equivalentes de TF: equivalentes de factor de tejido. EGR.1/NFAT: proteína de respuesta de crecimiento anterior 1/factor nuclear de células T activadas. F1P: fosfato de compuesto A (fosfato de FTY720). ECL: quimioluminiscencia mejorada. PBS: salina regulada en su pH con fosfato. RT: temperatura ambiente.

La utilidad de los agonistas del receptor de S1P, por ejemplo, los agonistas de S1P que comprenden un grupo de la fórmula X, en la promoción de angiógénesis puede ser demostrada, por ejemplo, de acuerdo con los métodos descritos a continuación.

D. Cultivo de Célula y Materiales Se cultivaron células endoteliales de vena umbilical humanas (HUVEC) a 37°C y C02 al 5% en un medio, M199, suplementado con SCS al 20% (HyClone, Logan, UT), 1 U/ml de heparina, 50 pg/ml de ECGS, 2 mM de glutamina, 100 U/ml de penicilina y 0.1 mg/ml de estreptomicina. Las células se utilizaron para experimentos hasta el pasaje número 5. Se obtuvieron HUVEC cortas congeladas, congelando con SCS al 1% conteniendo M199 durante 5 horas. Se obtuvo VEGF165 humano recombinante de PromoCell (Heidelberg, Alemania). El ERK1/2 fosfo-específ ico, anticuerpos policlonales de cinasa p38, anticuerpos de ERK1/2 sin fósforo y el reactivo q uimiolumi niscente LumiGLO se obtuvieron de New England BioLabs (Beverly, MA), los anticuerpos de ??? policlonales son de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, California). La inmunoglobulina G de anti-conejo de burro de peroxidasa conjugada (IgG) y la IgG de antiratón de cabra se compraron en Amersham LIFE SCIENCE (Amersham Place, Inglaterra). Las membranas de transferencia Immobilon-P son productos de Millipore (Bedford, MA). S se obtuvo de Sigma Chemical Co.; S1P es de Biomol. La solución de abastecimiento de fosfato del compuesto A se preparó a través del siguiente protocolo. El fosfato de compuesto A se disolvió en metanol con el clorhidrato concentrado (0.5 mg de fosfato de compuesto A en 500 µ? de metal más 2 pl de HCI). El solvente de la solución resultante se evaporó bajo vacio y el residuo obtenido se volvió a disolver (variante 1) en 0.1% de una solución de BSA desgrasada en agua desionizada estéril (500 µ?) o (variante2) en 0.5% de Tritón X-100 en agua desionizada. La soluciones de abastecimiento resultantes (2.5 mM) se les aplicó sonido y se almacenaron a 4°C.

Ensayo de Coagulación Se sembraron células en placas de 6 cavidades a 80-90% de confluencia y se desarrollaron durante la noche. Las células se rasparon de las placas y se analizaron para la actividad de factor de tejido de acuerdo con el método como se describió por Clauss, M., J. Biol. Chem. 271,17629-17634 (1996), Mechtcheriakiva, D., Blood 93,3811-3823 (1999). En resumen, después de la inducción durante 4 horas con VEGF (1.5 nM), TNF-a (100 U/ml), S (0.05-2 µ?), S1P (0.5-2 µ?), compuesto A (0.5-2 µ?), y fosfato del compuesto A (0.5-2 µ?), las células se lavaron dos veces y después se rasparon en 1 mi de regulador de pH de coagulación (12 mM de acetato de sodio, 7 mM de dietilbarbitato y 130 mM de cloruro de sodio; pH 7.4). Se mezclaron 50 µ? de células resuspendidas con 50 µ? de plasma citratado, y se determinaron los tiempos de coagulación después de la recalcificación con 50 µ de 20 mM de una solución de CaCI2 a 37°C. Se determinaron los equivalentes de TF utilizando una curva estándar obtenida de tromboplastina de cerebro de conejo.

E. Análisis de Tinción Western D.espués de varios tratamientos, las células se lavaron dos veces con PBS frío, se lizaron en 100 µ? de regulador de pH de Laemmii, se rasparon y se calentaron durante 5 minutos a 95°C. Los lisatos totales de célula se separaron a través de SDS-PAGE y se transfirieron a una membrana de Immobilon-P. La membrana se bloqueo durante 30 minutos con PBS conteniendo 0.1% de Tween-20 y 3% de leche descremada y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente con un anticuerpo primario diluido en regulador de pH de bloqueo. La membrana obtenida se lavó tres veces durante 5 minutos con PBS conteniendo 0.1% de Tween-20 y se incubaron con un anticuerpo secundario de peroxidasa conjugada durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de un paso de lavado, la membrana se incubó durante 1 minuto con el reactivo ECL y se expuso a la película según fue requerido. Para volver a probar con otro anticuerpo, la membrana se lavó dos veces con PBS, se marcó durante 30 minutos a 55°C con reguladores de pH de marcación (62.5 mM Tris-HCL, pH 6.8, 2% SDS, 100 mM 2-mercaptoetanol) y se lavó tres veces durante 5 minutos con PBS a temperatura ambiente. La membrana almacenada se envolvió en húmedo en una envoltura de Sarán Wrap a 4°C después de cada inmunodetección.

Ensayo de anqioqénesis in vitro sobre Matriqel Se realizó morfogénesis de células endoteliales en estructuras de tipo capilar en una matriz de matrigel de factor de crecimiento reducido (BD Bioscience) de acuerdo con el procedimiento del fabricante. En resumen, las HUVEC fueron tripsinizadas, se volvieron a suspender en un medio de M199 libre de suero conteniendo un inhibidor de tripsina de soya (1 mg/ml, Sigma), Después de la centrifugación, las células se volvieron a suspender en un medio libre de suero a una densidad de 0.5 x 10s células/ml, y la suspensión de célula se cosechó en placas de cultivo de célula de 96 cavidades (Costar, Corning Incorporated) precubierta con 50 µ? de Matrigel en ausencia o presencia de varios estímulos: VEGF a 1.5 nM, S1P a 0.1-2 µ?, S a 0.5 - 2 µ?, compuesto A 0.5 - 2 µ?, y fosfato de compuesto A a 0.1 - 2 µ?. Después de 8 horas, las células Matrigel se fijaron con formaldehído al 3% en PBS y se mantuvieron a 4°C. Los resultados se cuantif icaron a partir de imágenes hechas con un microscopio de Nikon Diaphot equipado con una cámara CCD enfriada (Kappa GMBH, Gleichen, Alemania) a través de conteo directo de puntos de ramificación en dos campos microscópicos de cada cavidad realizada por duplicado.

F. El fosfato de compuesto A induce morfogénesis de células endoteliales en el ensayo de formación de tubo in vitro sobre Matrigel y un posible involucramiento de trayectorias de señalización mediadas por G¡ El efecto del compuesto A y de fosfato de compuesto A sobre la diferenciación morfogonénica de células endoteliales se determinó utilizando un ensayo de angiogénesis in vitro sobre Matrigel. La morfogénesis de célula endotelial es un proceso complejo que requiere de interacciones de matriz extracelular-célula, seguido por remodelación de matriz, migración estimulada, interacción de célula-célula y proteólisis perivascular. Como se muestra en la Figura 1, el fosfato de compuesto A fuertemente puede promover formación de red de tipo capilar en una forma dependiente de dosis con forma de campana mostrando actividad máxima alrededor de 05 µ?. El número de puntos de ramificación por campo microscópico, que refleja la potencia de inducción del estímulo, es comparable para el fosfato de compuesto A y SIP, y puede exceder significativamente los efectos activados por VEGF. El compuesto A por sí mismo a 0.5 - 1 µ? tiene un efecto mejorador débil, en comparación con el fosfato de compuesto A, pero consistente. Tanto como el fosfato de compuesto A como el compuesto A a una escala de 0.5 - 1 pm no atenúa la remodelación mediada por VEGF, sino que más bien coopera con el factor de crecimiento de polipéptido (ver, por ejemplo, Figura 2). Además, el fosfato de compuesto A así como la formación de tubo estimulada por S1P es práctica y completamente inhibida a través de toxina de tos ferina (PTX, 50 ng/ml), un inhibidor de proteínas G heterotriméricas del tipo a¡/0- Esto puede ser interpretado como una posible involucro de eventos de señalización mediados por el receptor de EDG-1 (S1Pi) en biorespuestas estimuladas por fosfato de compuesto A (ver, por ejemplo, Figura 3). S a 1 µ?, que por sí misma parece ser menos potente que S1P, atenúa la habilidad tanto de S1P como de fosfato de compuesto A para inducir estructuras de tipo capilar, sin tener un efecto de inhibidor sobre la formación de tubo inducida por VEGF (ver, por ejemplo, Figura 4). A este respecto, S se comporta en forma diferente del compuesto A. Los datos indican que el equilibrio entre S y S1P parece ser críticamente importante para activación de célula endotelial/angiogénesis muy probablemente a través del la familia del receptor de EDG. De manera importante, las altas concentraciones de S y del compuesto A (2 - 5 µ??) inhiben la formación de tubo activada por VEGF. Esos datos sugieren efectos dependiente de dosis difásicos del compuesto A y de fosfato de compuesto A sobre angiogénesis in vitro.

G. Activación de cinasas de ERK1/2 MAP a través de fosfato de compuesto A La transducción de señal a través de cinasas MAP juega un papel importante en una variedad de funciones de célula endotelial. El tratamiento de HUVEC con fosfato de compuesto A a 0.5 pm puede dar como resultado la activación pasajera de ERK1/2 con un pico de fosforilación/activación a 10 minutos y regresando a la línea de base en 20 minutos (ver, por ejemplo, Figura 5). Ninguna activación de cinasa P38 y de JNK1/2 a través de fosfato de compuesto A es detectable en HUVEC. Además, el fosfato de compuesto A puede activar la activación de ERK1/2 en una forma dependiente de dosis, mostrando una actividad más fuerte a 2 µ?t?. Esto está en contraste con los resultados del ensayo de formación de tubo, en donde el fosfato de compuesto A a 2 pm puede ser menos potente que a 0.5 µ?. Ni el compuesto A ni S son capaces de inducir activación de cinasa MAP en células endoteliales en una cinética que varía de 5 minutos a 60 minutos de tratamiento. Para valorar el posible papel del programa inflamatorio/dependiente de NFKB en biorespuestas estimuladas cori fosfato de compuesto A de células endoteliales, las membranas se volvieron a probar con anticuerpos anti-???. Los niveles de ??? tampoco fueron afectados por el tratamiento fosfato de compuesto A. Además, el tratamiento de células endoteliales con fosfato de compuesto A puede fallar para inducir expresión de E-selectina como un gen de respuesta secundaria dependiente de NFKB. De esta manera los datos fuertemente indican que la señalización de fosfato de compuesto A no involucra la activación de NFKB la cascada principal en la respuesta inflamatoria aguda en células endoteliales.

H. Compuesto A y fosfato de compuesto A no inducen expresión de factor de tejido en células endoteliales. Una característica importante tanto de TNF-a de estímulo inflamatorio clásico como del factor de crecimiento angiogénico principal VEGF sobre células endoteliales es su potencia para sobre-regular el factor de tejido. El compuesto A, el fosfato de compuesto A, S o S1P fueron probados sin también inducen factor de tejido en HUVEC. Los datos encontrados demuestran que ninguno de estos compuestos solos o en combinaciones pueden elevar la actividad de factor de tejido (ver, por ejemplo, Figura 6). El compuesto A y el fosfato de compuesto A ligeramente pueden mejorar el factor de tejido inducido por VEGF, pero no por TNF-a. Los datos obtenidos en conjunto indican que el compuesto A, el fosfato de compuesto A, S y S1P mecánicamente trabajan en forma distinta al VEGF angiogénico y al TNF-a inflamatorio.

I. Afinidad de unión de agonistas del receptor de S1P a receptores de S1P humanos individuales puede ser determinada en los siguientes ensayos Transfección pasajera de receptores de S1P humanos a células HEK293 Se clonaron receptores de EDG y proteínas G¡, y cantidades ¡guales de 4 ADNcs para el receptor de EDG, se mezclaron G,-a, G¡-ß y G¡-y y se utilizaron para transfectar monocapas de células HEK293 utilizando el método de precipitado de fosfato de calcio (M.

Wigler y otros, Ce 11. 1977. 1977; 11; 223 y DS. Im y otros, Mol.

Pharmacol. 2000; 57; 753). En resumen, una mezcla de ADN conteniendo 25 pg de ADN y 0.25 M de CaCI, se agregó a 2 mM de Na2HP04 regulado en su pH con HEPES. Las monocapas sub-confluentes de células HEK293 se envenenaron con 25 mM de cloroquina, y después se aplicó el precipitado de ADN a las células. Después de 4 horas, las monocapas se lavaron con salina regulada en su pH con fosfato y medio de realimentación (90% 1:1 de medio esencial modificado con Dulbecco (DMEM): F-12 + suero de bovino fetal al 10%). Las células se cosecharon 48-72 horas después de la adición del ADN raspando en regulador de pH de HME (en mM: 20 HEPES, 5 MgCI2, 1 EDTA, pH 7.4) conteniendo sacarosa al 10% sobre hielo, y se interrumpió utilizando un homogenizador de Dounce. Después de centrifugación a 800 xg, el sobrenadante se diluyó con HME sin sacarosa y se centrífugo a 100,000 xg durante 1 hora. La pella resultante se volvió a homogeneizar y se centrífugo una segunda hora 100,000 xg. Esta pella de membrana cruda se volvió a suspender en HME con sacarosa, se hizo en alícuotas, y se congeló por salto a través de la inmersión en nitrógeno líquido. Las membranas se almacenaron a 70°C. Se determinó la concentración de proteína en forma espectroscópica a través de una ensayo de proteína de Bradford.

Ensayo de unión de GTPyS utilizando preparaciones de receptor de S1P/HEK 293 Se realizaron experimentos de unión de GTPyS como se describió por DS. Im y otros, Mol. Pharmacol. 2000; 57:753. Se midió la unión de GTPyS mediada por ligando a proteínas G en regulador de pH de unión de GTP (en mM: 50 HEPES, 100 NaCI, 10 MgCI2, pH 7.5) utilizando 25 pg de una preparación de membrana de células HEK293 pasajeramente transfectadas. Se agregó el ligando a las membranas en presencia de 10 pm de GDP y 0.1 nM de [35S] GTPyS (1200 C¡/mmoles) y se incubó a 30°C durante 30 minutos. El GTPyS se separó del no unido utilizando el cosechador de Brandel (Gaithersburg, MD) y se contó con un contador de cintilación de líquido.

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un método para tratar tumores sólidos o inhibir el crecimiento de tumores sólidos en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de receptor de S1P, siempre que cuando el agonista de receptor de S1P sea de FTY720 o fosfato de FTY720, el tumor sea diferente de un tumor de mama, de próstata, de vejiga, de riñon o de pulmón.

2.- Un método para el tratamiento de invasión de tumor o síntomas asociados con dicho crecimiento de tumor, para prevenir extensión metastática de tumores o para prevenir o inhibir el crecimiento de micrometástasis en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de S1P.

3. - Un método para inhibir o controlar angiogénesis desregulada, por ejemplo, angiogénesis mediada por esfingosina-1 -fosfato (S1P), en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de receptor de S1P.

4. - Un método para prevenir o tratar enfermedades mediadas por un proceso de neo-angiogénesis o asociadas con angiogénesis desregulada en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de receptor de S1P.

5. - Un método para mejorar la actividad de un agente quimioterapéutico o para superar la resistencia a un agente quimioterapéutico en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de receptor de S1P, ya sea concomitante o secuencialmente con dicho agente terapéutico.

6. - Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el agonista de receptor de S1P se administra intermitentemente.

7.- Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende la co-administración, concomitante o en secuencia, de una cantidad terapéuticamente efectiva de una agonista de receptor de S1P y una segunda sustancia de fármaco, la segunda sustancia de fármaco siendo un agente quimioterapéutico.

8. - Un método para tratar trastornos li nfoproliferati vos o mieloproliferativos que comprende la co-administración a dicho sujeto, concomitante o en secuencia, de un agonista de receptor de S1P, y una segunda sustancia de fármaco, la segunda sustancia de fármaco siendo un agente quimioterapéutico.

9. - Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el agonista de receptor de S1P comprende un grupo de la fórmula X: R3zR2zN- -CH2R1Z en donde: Z es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono; alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono; fenilo; fenilo sustituido por OH; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste a de halógeno, cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, fenilo y fenilo sustituido por OH; o CH2-R z, en donde R4z es OH, aciloxi o un residuo de la fórmula (a): en donde es un enlace directo u O, preferiblemente O; cada uno de R5z y R6z, independientemente, es H, o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 átomos de halógeno; R1z es OH, aciloxi o un residuo de la fórmula (a); y cada uno de R2z y R3z, independientemente, es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o acilo.

10.- Una combinación farmacéutica que comprende (a) un primer agente que es un agonista de receptor de S1P y (b) un coagente, el cual es un agente quimioterapéutico.

11.- Una combinación de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el co-agente se selecciona de: i. un inhibidor de aromatasa, ii. un antiestrogeno, un ati-andrógeno, o un agonista de gonadorelina, iii. un , inhibidor de topoisomerasa I o un inhibidor de topoisomerasa II, ¡v. un agente activo de microtúbulo, un agente de alquilación, un antimetabolito antineoplástico o un compuesto de platina, v. un compuesto que activa/reduce la actividad de una proteína o cinasa de lípido o una actividad de proteína o proteasa de lípido, además un compuesto anti-angiogénico o un compuesto que induce procesos de diferenciación de célula, vi. un receptor de bradicinina 1 o un antagonista de angiotensina II, v i i . un inhibidor de ciclooxigenasa, un inhibidor de bisfosfonato, de desacetilasa de histona, un inhibidor de heparanasa, un modificador de respuesta biológica, un inhibidor de ubiquitinación, o un inhibidor que bloquea las trayectorias anti-apoptóticas, viii. un inhibidor de isoformas oncogénicas de Ras, ix. un inhibidor de telomerasa, x. un inhibidor de proteasa, un inhibidor de metaloproteinasa de matriz, un inhibidor de metionina-aminopeptidasa, o un inhibidor de proteosoma, y/o xi. un inhibidor de mTOR.

12. - Un método para tratar o prevenir enfermedades mediadas por la inhibición del proceso de neo-angiogénesis, que comprende administrar una cantidad efectiva de un agonista de receptor de S1P a un sujeto con la necesidad de dicho tratamiento.

13. - Un método de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el agonista de receptor de S1P comprende un grupo de la fórmula X como se definió en la reivindicación 9.