MXPA04008278A

MXPA04008278A - Inhibidores de dipeptidil peptidasa iv a base de glutaminil.

Info

Publication number: MXPA04008278A
Application number: MXPA04008278A
Authority: MX
Inventors: Heiser Ulrich
Original assignee: Prosidion Ltd
Priority date: 2002-02-28
Filing date: 2002-06-27
Publication date: 2005-09-20
Also published as: DE60217186D1; EA200401062A1; CA2479812A1; BR0215622A; ZA200406813B; UA76309C2; SK3622004A3; NZ534877A; ES2278944T3; ATE349435T1; CZ2004973A3; NO20044038L; EP1480961A1; US20030162820A1; DE20220238U1; IL163629A0; KR20040095241A; HK1067120A1; US6946480B2; DE60217186T2

Abstract

La presente invencion provee un compuesto de la formula (I):(ver formula I),en donde X =CH2 o S o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. Esos compuestos y sus formas de sal acida de adicion farmaceuticamente aceptables son utiles en el tratamiento de condiciones mediadas por DPIV o enzimas similares a DPIV, tales como artritis, obesidad, trastornos inmunes y autoinmunes, trasplante de aloinjerto, cancer, trastornos neuronales y enfermedades dermicas.

Description

INHIBIDORES DE DIPEPTIDIL PEPTIDASA IV A BASE DE GLUTA INIL CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere al área de dipeptidil peptidasa IV y muy particularmente se refiere a glutaminil pirrolidina y glutaminil tiazolidina, composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y el uso de estos compuestos para inhibir la actividad de la dipeptidil peptidasa IV y la enzima similar a la dipeptidil peptidasa IV. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La dipeptidil peptidasa IV (DPIV) es una serina proteasa que digiere los dipeptidos N-terminales de una cadena peptídica que contiene un residuo de prolina en la posición penúltima. Aunque la función principal de la DPIV en sistemas de mamíferos no se ha establecido por completo, se cree que juega un papel importante en el metabolismo de neuropéptidos , activación de células T, fijación de células cancerosas al endotelio y la entrada de VIH a células linfoides. Asimismo, se descubrió que DPIV es responsable de la inactivación de péptido-1 similar a glucagon (GLP-1) y péptido insulinotrópico dependiente de glucosa también conocido como péptido inhibidor gástrico (GIP) . Puesto que GLP-1 es un estimulante importante de la secreción de insulina pancreática y tiene efectos directos benéficos sobre el desecho de la glucosa, en los documentos WO 97/40832 y US 6,303,661 la Ref. 158123 inhibición de la actividad de DPIV y la actividad de enzima similar a DPIV se mostró que representa un enfoque atractivo v.gr. , para tratar diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM) . Un aspecto de la presente invención es proveer inhibidores de DPIV novedosos que son efectivos v.gr. , en el tratamiento de condiciones mediadas por la inhibición de DPIV y enzimas similares a DPIV, composiciones farmacéuticas v.gr., útiles en la inhibición de DPIV y enzimas similares a DPIV y un método para inhibir esa actividad de enzima. Otro aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento, en particular a un método para el tratamiento de diabetes mellitus, especialmente diabetes no dependiente de insulina (NIDDM) o diabetes de tipo 2 y condiciones asociadas con diabetes mellitus y a composiciones para usarse en ese método. La dipeptidil peptidasa IV (DPIV) es una serina proteasa de digestión de post-prolina (a un menor grado de post-alanina, post-serina o post-gliciria) encontrada en varios tejidos del cuerpo incluyendo riñon, hígado e intestino. Se sabe que los inhibidores de DPIV pueden ser útiles para el tratamiento de tolerancia a la glucosa alterada y diabetes mellitus (solicitud de patente internacional, número de publicación WO 99/1431, Pederson RA et al, Diabetes. 1998. Agosto; 47(8):1253-8 y Pauty RP et al, Metabolism 1999 Marzo; 48 (3) : 385-9) . En particular WO 99/61431 describe inhibidores de DPIV que comprenden un residuo de aminoácido y un grupo tiazolidina o pirrolidina, y sales de los mismos, especialmente L- treo-isoleucil tiazolidina, L-alo-isoleucil tiazolidina, L- reo-isoleucil pirrolidina, L-alo-isoleucil tiazolidina, L-alo-isoleucil pirrolidina, y sales de los mismos. Ejemplos adicionales para inhibidores de dipeptidil peptidasa IV de peso molecular bajo son agentes tales como derivados de tetrahidoisoquinolin-3 -carboxamida, 2-cianopiroles y -pirrolidinas N-sustituidas , N- (N' -glicilo sustituido) -2-cianopirrolidinas, N- (glicilo sustituido) -tiazolidinas, N- (glicilo sustituido) -4-cianotiazolidinas, inhibidores de boronilo y pirrolidinas fusionadas a ciclopropilo. Los inhibidores de dipeptidil peptidasa IV se describen en los documentos US 6,011,155; US 6,107,317; US 6,110,949; US 5,124,305; US 5,172,081; WO 99/61431, WO 99/67278, WO 99/67279, DE 198 34 591, WO 97/40832, DE 196 16 486 C2, WO 98/1998, WO 00/07617, WO 99/38501, WO 99/46282, WO 99/38501, WO 01/68603, WO 01/40180, WO Ol/81337, WO 01/81304, WO 01/55105 y WO 01/02560, cuyas enseñanzas se incorporan aquí por referencia en su totalidad en lo relacionado con los inhibidores, su producción y su uso. SUMARIO DE LA INVENCION La presente invención provee un compuesto de la fórmula: en donde X =CH2 o S o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Esos compuestos y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, son útiles en el tratamiento de condiciones mediadas por DPIV o enzimas similares a DPIV, tales como artritis, obesidad, trastornos inmunes o autoinmunes, trasplante de aloinjerto, cáncer, trastornos neuronales y enfermedades dérmicas. En una modalidad más preferida, los compuestos de la presente invención mejoran la tolerancia a la glucosa al reducir los niveles de glucosa en la sangre elevados en respuesta un desafio de glucosa oral y por lo tanto son útiles en el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina . BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Una comprensión adicional de la invención se puede tener por referencia a las figuras en donde: La figura 1 muestra la actividad de DPIV en el plasma en suero de rata Wistar después de la administración oral e intra-vasal de 100 mg/kg en peso de glutaminil pirrolidina; La figura 2 muestra la actividad de DPIV en el plasma en suero de rata Wistar después de la administración oral e intra-vasal de 100 mg/kg en peso de glutaminil tiazolidina; La figura 3 muestra la disminución dependiente de la dosis de niveles de glucosa en la sangre en ratas Zucker diabéticas después de la administración oral de 5 mg/kg, 50 mg/kg en peso, de glutaminil pirrolidina y placebo respectivamente ; La figura 4 muestra la disminución dependiente de la dosis de niveles de glucosa en la sangre en ratas Zucker diabéticas después de la administración oral de 5 mg/kg, 50 mg/kg en peso, de glutaminil tiazolidina y placebo respectivamente ; La figura 5 muestra la estructura química de piroglutaminil tiazolidina, el producto de degradación, encontrado después de administración oral de glutaminil tiazolidina a ratas Wistar; y La figura 6 muestra el cromatograma de un extracto de plasma de rata obtenido después de la administración oral de glutaminil tiazolidina a ratas Zucker obesas. El pico a 2^95 min representa glutaminil tiazolidina y el pico a 6.57 min representa piroglutaminil tiazolidina. DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención se refiere al área de inhibición de dipeptidil peptidasa IV (DPIV) y muy particularmente se refiere a glutaminil pirrollidina y glutaminil tiazolidina, composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y al uso de estos compuestos en la inhibición de la actividad de DPIV y de la enzima similar a DPIV. La presente invención provee inhibidores de DPIV novedosos que son efectivos v.gr., en el tratamiento de condiciones mediadas por inhibición de DPIV, composiciones farmacéuticas v.gr., útiles en la inhibición de la actividad de DPIV y de la enzima similar a DPIV y a un método para inhibir DPIV y enzima similar a DPIV. La presente invención provee un compuesto de la fórmula : y especialmente un compuesto de la fórmula (I) (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Un compuesto adicional de la presente invención es el compuesto de la fórmula II: (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los compuestos de la presente invención se pueden convertir a sales ácidas de adición, especialmente sales ácidas de adición farmacéuticamente aceptables. La sal farmacéuticamente aceptable generalmente adopta una forma en la cual una cadena lateral básica de aminoácidos es protonada con un ácido inorgánico u orgánico. Los ácidos orgánicos o inorgánicos representativos incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, perclórico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, acético, propiónico, glicólico, láctico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, mandélico, metansulfónico, hidroxietansulfónico, bencensulfónico, oxálico, pamoico, 2-naftalensulfónico, p-toluensulfónico, ciclohexansulfámico, salicílico, sacarínico o trifluoroacético . Todas las formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención se pretende que sean abarcadas por el alcance de esta invención. En vista de la relación estrecha entre los compuestos libres y los compuestos en forma de sus sales, siempre que un compuesto es referido en este contexto, también se pretende una sal correspondiente, siempre que eso sea posible o apropiado bajo las circunstancias. La presente invención incluye además dentro de su alcance profármacos de los compuestos de esta invención. En general, estos profármacos serán derivados funcionales de los compuestos que son fácilmente convertibles in vivo al compuesto terapéuticamente activo deseado. En estos casos por lo tanto, los métodos de tratamiento de la presente invención, el término "administrar" abarcará el tratamiento de los diversos trastornos descritos con versiones de profármaco de uno o más de los compuestos reivindicados, pero que se convierten al compuesto especificado anterior in vivo después de la administración al sujeto. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de derivados de profármaco adecuados se describen, por ejemplo, en "Design of Prodrugs" , ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985 y las solicitudes de patente DE 198 28 113, DE 198 28 114, WO 99/67228 y WO 99/67279 que se incorporan completamente aquí por referencia. En donde los compuestos de conformidad con esta invención tienen por lo menos un centro quiral, pueden existir por consiguiente como enantiómeros . En donde los compuestos poseen dos o más centros quirales, pueden existir además como diastereómeros . Se entenderá que todos estos isómeros y mezclas de los mismos son abarcados dentro del alcance de la presente invención. Además, algunas de las formas cristalinas de los compuestos pueden existir como polimorfos y como tales se pretende que sean incluidos en la presente invención. Además, algunos de los compuestos pueden formar solvatos con agua (es decir, hidratos) o solventes orgánicos comunes, y se pretende que esos solvatos sean abarcados dentro del alcance de esta invención. Los compuestos, inclusive sus sales, también se pueden obtener en forma de sus hidratos, o incluyen otros solventes usados para su cristalización. Como se indicó anteriormente, los compuestos de la presente invención y especialmente los compuestos de las fórmulas I y II, y sus formas de sal ácidas de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, son útiles en la inhibición de DPIV y actividad de enzima similar a DPIV. La capacidad de los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes para inhibir DPIV y actividad de enzima similar a DPIV se puede demostrar al emplear la prueba de actividad de DPIV para la determinación de los valores de Ki in vitro y en plasma humano, como se describe en los ejemplos 4 y 5. Los valores de Ki de los compuestos de la presente invención se determinaron para glutaminil tiazolidina como Ki = 3.12*10~7 M ±5.11*10~10 M y para glutaminil pirrolidina como K± = 1.30*10~6 M ±8.49*10~8 M contra DPIV de riñon de porcino. Los valores de K¡. de la presente invención se determinaron para glutaminil tiazolidina como Ki = 4.03+10"7M ±2.19*10~10M después de 5 minutos 5.13*10~7 M ±1.26*10~8 M después de 22 horas de preincubacion, y para glutaminil pirrolidina como Ki = 1.30*10" 6 M ±4.89*10~8 después de 5 minutos y 1.36*10"6 M ±3.21*10"8 M después de 22 horas de preincubacion en plasma humano. La capacidad de los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes para inhibir DPIV in vivo se puede demostrar mediante la administración oral o intranasal a ratas istar, como se describe en el ejemplo 9. Los compuestos de la presente invención inhiben la actividad de DPIV in vivo después de administración oral e intra-vasal a ratas Wistar. DPIV está presente en una amplia variedad de órganos y tejidos de mamíferos v.gr. , el borde de cepillo intestinal (Gutschmidt S. et al., "In si tu" , measurements of protein contents in the brush border región along rat jejunal villi and their correlations with four enzyme activities. Histochemistry 1981, 72(3), 467-79), epitelio exócrino, hepatocitos, túbulos renales, endotelio, miofibroblastos (Feller A.C. et al., A monoclonal antibody detecting dipeptidylpeptidase IV in human tissue. Virchows Arch. A. Pathol. Anat. Histopathol. 1986; 409 (2) : 263 -73 ) , células nerviosas, membranas laterales de ciertos epitelios de superficie, v.gr., trompas de falopio, útero y glándula vesicular en citoplasma luminal de v.gr., epitelio de glándula vesicular, y en células de mucosa de la glándula de Brunner (Hartel S. et al., Dipeptidyl peptidase (DPP) IV in rat organs . Comparison of immunohistochemistry and activity histochemistry. Histochemistry 1988; 89 (2): 151-61), órganos reproductores, v.gr., epididimo de cauda y ámpula, vesículas seminales y sus secreciones (Agrawal y Vanha-Perttula, Dipeptidyl peptidases in bovine reproductive organs and secretions. Int. J. Androl . 1986, 9 (6) : 435-52) . En suero humano, dos formas moleculares de dipeptidil peptidasa están presentes (Krepela E. et al., Demostration of t o molecular forms of dipeptidyl peptidase IV in normal human serum. Physiol . Bohemoslov. 1983, 32 (6): 486-96). La forma de peso molecular alto en el suero de DPIV se expresa sobre la superficie de células T activadas (Duke-Cohan J.S. et al., Serum High molecular weight dipeptidyl peptidase IV (CD26) is similar to a novel antigen DPPT-L released from activated T cells. J. Immunol. 1996, 156(5): 1714-21). Los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes son incapaces de inhibir DPIV in vivo. En una modalidad de la presente invención, todas las formas moleculares, homólogos y epítopes de DPIV de todos los tejidos y órganos de mamífero, también de aquellos que aun no se han descubierto, se pretende que sean abarcados por el alcance de esta invención. Entre el grupo raro de proteasas específicas de prolina, originalmente se creía que DPIV era la única enzima ligada a membrana específica para prolina como el residuo penúltimo en el amino-terminal de la cadena de polipéptido. Sin embargo, otras moléculas incluso estructuralmente no homologas con DPIV pero que tienen actividad de enzima correspondiente, se han identificado recientemente. Enzimas similares a DPIV, que se identifican hasta ahora, son v.gr. , proteína a de activación de fibroblastos, dipeptidil peptidasa IV ß , proteína similar a la dipeptidil aminopeptidasa, dipeptidasa ácida a-ligada N-acetilada, prolina dipeptidasa de células quiescentes, dipeptidil peptidasa II, atractina y proteína relacionada con dipeptidil peptidasa IV (DPP 8) , y se describen en el artículo revisado de Sedo y Malik (Sedo y Malik, Dipeptidyl peptidase IV-like molecules: homologous proteins or homologous activities; Biochimica et Biophysica Acta 2001, 3650S: 1-10). Enzimas similares a DPIV adicionales se describen en los documentos WO 01/19866, WO 02/04610, WO 02/34900 y WO 02/31134. El documento WO 01/19866 describe dipeptidil aminopeptidasas (DPP8) humanas novedosas con similitudes estructurales y funcionales a DPIV y proteína de activación de fibroblastos (FAB) . El documento WO 02/04610 provee reactivos que regulan la enzima similar a la dipeptidil peptidasa IV humana y reactivos que se unen a un producto de gen de enzima similar a la dipeptidil peptidasa IV humana. Estos reactivos pueden jugar un papel en la prevención, alivio o corrección de disfunciones o enfermedades que incluyen pero no se limitan a tumores y trastornos del sistema nervioso periférico y central inclusive dolor y trastornos degenerativos. La enzima similar a la dipeptidil peptidasa IV del documento WO 02/04610 es bien conocida en la técnica. En la base de datos de Gene Bank, esta enzima está registrada como KIAA1492 (con registro de febrero de 2001, presentada el 4 de abril de 2000, AB040925) . El documento WO 02/34900 describe dipeptidil peptidasa 9 (DPP9) con homología significativa con las secuencias de aminoácidos de DPIV y DPP8. El documento WO 02/31134 describe tres enzimas similares a DPIV, DPRP1, DPRP2 y DPRP3. El análisis de secuencia reveló que DPRP1 es idéntico a DPP8, como se describe en el documento WO 01/19866, que DPRP2 es idéntico a DPP9 y que DPRP3 es idéntico a KIAA1492 como se describe en WO 02/04610. En otra modalidad preferida de la presente invención, todas las formas moleculares, homólogos y epítopes de proteínas que comprenden actividad de enzimas similar a DPIV, de tejidos y órganos de mamíferos, también de aquellos que aún no se han descubierto, se pretende que sean abarcadas por el alcance de esta invención. La capacidad de los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes para inhibir enzimas similares a DPIV se pueden demostrar al emplear una prueba de actividad de enzima para la determinación de los valores de ¾ in vi tro como se describe en el ejemplo 6. Los valores de K¿ de los compuestos de la presente invención contra dipeptidil peptidasa II de porcino se determinaron como ¾ = 8.52*10"5 M ± 6.33*10"s M para glutaminil pirrolidina y K± = 1.07*10"5 M ± 3.81*10~7 M para glutaminil tiazolidina. Todos los compuestos inhiben la dipeptidil peptidasa II de porcino. En otra modalidad de la presente invención, los compuestos de la presente invención, y sus formas de sal ácidas de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes tienen sólo actividad inhibidora baja, si no es que nula, contra no DPIV y enzimas específicas de prolina no similares a DPIV. Como se describe en el ejemplo 7, con la glutaminil tiazollidina y glutaminil pirrolidina no se encontró inhibición de dipeptidil peptidasa I y prolil oligopeptidasa . Contra prolidasa, ambos compuestos mostraron una eficacia inferior marcada en comparación con DPIV. Los valores de IC50 contra prolidasa se determinaron como IC50 > 3mM para glutaminil tiazolidina y como IC50 = 3.4*1CT4M ± 5.63*10"5 para glutaminil pirrolidina. En vista de su capacidad para inhibir DPIV y actividad de enzima similar a DPIV los compuestos de la presente invención, especialmente los compuestos de las fórmulas I y II, y sus formas de sal ácidas de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, son útiles en el tratamiento de condiciones mediadas por estas actividades de enzima. Por lo tanto, los compuestos que aquí se describen son útiles para el tratamiento de condiciones tales como diabetes mellitus no dependiente de insulina, artritis, obesidad, trastornos inmunes y autoinmunes, trasplante de aloinjerto, cáncer, trastornos neuronales como esclerosis múltiple y enfermedades dérmicas . En una modalidad más preferida de esta invención, los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes mejoran la tolerancia a la glucosa al reducir los niveles de glucosa en la sangre elevados en respuesta a un desafío de glucosa y, por lo tanto, son útiles en el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina. La capacidad de los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes para mejorar la tolerancia a la glucosa en respuesta a un desafío de glucosa oral, se puede medir en ratas Zucker diabéticas. El método se describe en los ejemplos 10 y 11. La administración oral de 5 mg/kg en peso, 15 mg/kg y 50 mg/kg en peso de glutaminil tiazolidina o glutaminil pirrolidina dieron por resultado una reducción dependiente de la dosis de los niveles de glucosa en la sangre elevados y de esta manera una mejora en la tolerancia de la glucosa en ratas Zucker diabéticas . Los compuestos de la presente invención, de conformidad con el ejemplo 5, son estables en el plasma humano. De manera sorprendente, y como una modalidad preferida adicional de la presente invención, los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, se pueden degradar in vivo después de la administración a un mamífero. La capacidad de los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, que han de ser degradadas in vivo se pueden determinar mediante el uso de modelos de rata Wistar, y análisis de LC/MS subsecuente. Se encontró que la glutaminil tiazolidina es degradada después de la administración oral a ratas Wistar, a la piroglutaminil tiazolidina respectiva. Por lo tanto, la presente invención provee un método de tratamiento de una condición mediada por modulación de la actividad de DPIV o actividad de enzima similar a DPIV en un sujeto que necesita la misma que comprende administrar cualquiera de los compuestos de la presente invención o composiciones farmacéuticas de los mismos en una cantidad y régimen de dosis terapéuticamente efectivo para tratar la condición. Además, la presente invención incluye el uso de los compuestos de la presente invención, y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, para la preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una condición mediada por modulación de la actividad de DPIV en un sujeto. El compuesto se puede administrar a un paciente por cualquier vía de administración convencional, inclusive pero sin limitarse a intravenosa, oral, subcutánea, intramuscular, intradérmica y parenteral . En una modalidad adicional, la presente invención provee formulaciones para los compuestos de la presente invención y sus formas de sal ácida de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, en composiciones farmacéuticas. El término "sujeto", como se usa aquí, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, muy preferiblemente un humano, que ha sido el objeto de tratamiento, observación o experimentación . El término "cantidad terapéuticamente efectiva" , como se usa aquí, significa aquella cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que induce la respuesta biológica o médica en un sistema de tejido, animal o humano, que es buscado por un investigador, veterinario, médico u otro médico de clínica, que incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que es tratado. Como se usa aquí, el término "composición" se pretende que abarque un producto que comprende los compuestos reivindicados en las cantidades terapéuticamente aceptables, así como cualquier producto que resulte, directamente o indirectamente, de combinaciones de los compuestos reivindicados . Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, uno o más compuestos de la presente invención, especialmente los compuestos de las fórmulas I ó II, y sus formas de sal ácidas de adición farmacéuticamente aceptables correspondientes, como el ingrediente activo, se mezclan en forma íntima con un vehículo farmacéutico de conformidad con técnicas de combinación farmacéutica convencionales, el vehículo puede adoptar una amplia variedad de formas según la forma de preparación deseada para la administración, v.gr. , oral o parenteral tal como intramuscular. Al preparar las composiciones en forma de dosis oral, se pueden emplear cualquiera de los medios farmacéuticos usuales. Por lo tanto, para preparaciones orales líquidas, tales como por ejemplo, suspensiones, elíxires y soluciones, vehículos y aditivos adecuados pueden incluir ventajosamente agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservadores, agentes colorantes y similares; para preparaciones orales sólidas tales como, por ejemplo, polvos, cápsulas, cápsulas de gelatina y tabletas, los vehículos y aditivos adecuados incluyen almidones, azúcares, diluyentes, agentes granuladores , lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan la forma de unidad de dosis oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean vehículos farmacéuticos sólidos. Sí se desea, las tabletas pueden ser revestidas con azúcar o revestidas con capa entérica mediante técnicas estándares. Para administración parenteral, el vehículo generalmente comprenderá agua estéril, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para propósitos tales como ayudar a la solubilidad o para conservación. Las suspensiones inyectables también se pueden preparar, en cuyo caso se pueden emplear vehículos líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. Las composiciones farmacéuticas aquí contendrán, por unidad de dosis, v.gr., tableta, cápsula, polvo, inyección, cucharadita y similares, una cantidad del ingrediente activo necesaria para suministrar una dosis efectiva como se describió antes. Las composiciones farmacéuticas aquí contendrán, por unidad de dosis, v.gr. , tableta, cápsula, polvo, inyección, supositorio, cucharadita y similares, de aproximadamente 0.01 mg a aproximadamente 1000 mg (preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg) y se puede dar a una dosis de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 300 mg/kg de peso corporal por día (preferiblemente 1 a 50 mg/kg por día) . Sin embargo, las dosis se pueden variar según el requerimiento de los pacientes, la severidad de la condición que se trate y el compuesto que se plantee. El uso ya sea de administración diaria o dosificación postperiódica se puede emplear. Típicamente, la dosis será regulada por el médico con base en las características del paciente, su condición y el efecto terapéutico deseado. Preferiblemente, estas composiciones están en formas de dosis unitarias tales como tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, aspersiones en aerosol o líquidas dosificadas, gotas, ampolletas, dispositivos de autoinyector o supositorios; para administración oral, parenteral, intranasal, sublingual o rectal, o para administración por inhalación o insuflación. Alternativamente, la composición puede ser presentada en una forma adecuada para administración una vez a la semana o una vez al mes, por ejemplo, una sal insoluble del compuesto activo, tal como la sal de decanoato, se puede adaptar para proveer una preparación de deposición para inyección intramuscular. Para preparar composiciones sólidas tales como tabletas, el principal ingrediente activo se mezcla idealmente con un vehículo farmacéutico, v.gr., ingredientes de tableteado convencionales tales como almidón de maíz, lactosa, sacarosa, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, fosfato dicalcio o gomas, y otros diluyentes f rmacéuticos, v.gr. , agua, para formar una composición de preformulacion sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Cuando se refiere a estas composiciones de preformulacion como homogéneas, se entiende que el ingrediente activo es idealmente disperso incluso en toda la composición por lo que la composición se puede subdividir fácilmente en formas de dosis igualmente efectivas tales como tabletas, pildoras y cápsulas. Esta composición de preformulacion sólida entonces se puede subdividir en formas de dosis unitaria del tipo anteriormente descrito que contiene de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1000 mg, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo de la presente invención . Las tabletas o pildoras de la composición novedosa pueden ser ventajosamente revestidas o de otra manera combinadas para proveer una forma de dosis que de la ventaja de acción prolongada. Por ejemplo, la tableta o pildora puede comprender una dosis interna y un componente de dosis externo, este último está en forma de una envoltura sobre el primero.

Los dos componentes pueden ser separados por una capa entérica que sirve para resistir la desintegración en el estómago y permite que el componente interno pase intacto hacia el duodeno o sea retardado en la liberación. Una variedad de materiales se pueden usar para esas capas entéricas o revestimientos entéricos, los materiales incluyen un número de ácidos poliméricos con materiales tales como laca, alcohol cetílico y acetato de celulosa. Las formas líquidas en las cuales las composiciones novedosas de la presente invención se pueden incorporar ventajosamente para la administración oral o por inyección incluyen soluciones acuosas, jarabes saborizados adecuadamente, suspensiones acuosas u oleosas, y emulsiones saborizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, aceite de coco o aceite de cacahuate, así como elíxires y vehículos farmacéuticos similares. Los agentes de dispersión o suspensión adecuados para suspensiones acuosas incluyen gomas sintéticas y naturales tales como tragacanto, acacia, alginato, dextrano, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, polivinilpirrolidona o gelatina. En donde los procedimientos para la preparación de los compuestos de conformidad con la invención dan origen a una mezcla de estereoisómeros, estos isómeros pueden ser separados mediante técnicas convencionales tales como cromatografía preparativa. Los compuestos se pueden preparar en forma racémica, o los enantiómeros individuales se pueden preparar ya sea mediante síntesis enantioespecífica o por resolución. Los compuestos, por ejemplo, se pueden resolver en esos enantiómeros componentes mediante técnicas estándares, tales como la formación de pares diastereoméricos por formación de sal con un ácido opcionalmente activo, tal como ácido (-)-di-p-toluoil-d-tarárico y/o ácido (+) -di-p-toluoil-1 -tartárico seguido por cristalización fraccionada y regeneración de la base libre. Los compuestos también se pueden resolver mediante la formación de esteres o amidas diastereoméricos, seguido por separación cromatográfica y remoción del auxiliar quiral . Alternativamente, los compuestos se pueden resolver mediante el uso de una columna de HPLC quiral. Durante cualquiera de los procedimientos mediante preparación los compuestos de la presente invención, puede ser necesario y/o deseable proteger grupos sensibles o reactivos sobre cualquiera de las moléculas en cuestión. Esto se puede lograr por medio de grupos protectores convencionales, tales como aquellos descritos en Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; y T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991, incorporado completamente aquí por referencia. Los grupos protectores pueden ser removidos en una etapa subsecuente conveniente mediante métodos conocidos en la técnica. El método de tratamiento de condiciones moduladas por dipeptidil peptidasa IV y enzimas similares a DPIV descritas en la presente invención también se puede llevar a cabo mediante el uso de una composición farmacéutica que comprende uno o más de los compuestos como se define aquí y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede contener entre aproximadamente 0.01 mg y 1000 mg, preferiblemente aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, de los compuestos, y puede estar constituida en cualquier forma adecuada para el modo de administración seleccionada. Los vehículos incluyen excipientes farmacéuticos necesarios e inertes que incluyen pero no se limitan a aglutinantes, agentes de suspensión, lubricantes, saborizantes, edulcorantes, conservadores, colorantes y revestimientos. Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen formas sólidas tales como pildoras, tabletas, capletas, cápsulas (cada una incluye formulaciones de liberación inmediata, liberación regulada con el tiempo y liberación sostenida) , gránulos y polvos, y formas líquidas, tales como soluciones, jarabes, elíxires, emulsiones y suspensiones. Las formas útiles para administración parenteral incluyen soluciones, emulsiones y suspensiones estériles. Ventajosamente, los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una sola dosis diaria, o la dosis diaria total se puede administrar en dosis dividida en dos, tres o cuatro veces al día. Además, los compuestos para la presente invención se pueden administrar en forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o mediante parches de la piel transdérmicos bien conocidos por los expertos en la técnica. Para administrarse en forma de sistema de suministro transdérmico, la administración de dosis desde luego se da continua más que intermitente en todo el régimen de dosis y la concentración de dosis necesitará ser modificada de acuerdo con ello para obtener los efectos terapéuticos deseados. Muy preferiblemente, para administración oral en una tableta o cápsula, el componente de fármaco activo se puede combinar con un vehículo inerte farmacéuticamente aceptable no tóxico, oral, tal como etanol, glicerol, agua y similar. Además, cuando se desee o sea necesario, los aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados también se pueden incorporar en la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen sin limitación, almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, tragacanto u oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen sin limitación almidón, metil-celulosa, agar, bentonita, goma de xantano y similares. Las formas líquidas son adecuadas en agentes de suspensión o dispersión saborizados tales como las gomas sintéticas y naturales, por ejemplo, tragacanto, acacia, metilcelulosa y similares. Para administración parenteral, las suspensiones y soluciones estériles son deseadas. Las preparaciones isotónicas que generalmente contienen conservadores adecuados se emplean cuando se desea administración intravenosa. El compuesto de la presente invención también se puede administrar en forma de sistemas de suministro de liposoma, tales como vesículas unilaminares pequeñas, vesículas unilaminares grandes y vesículas multilaminares . Los liposomas se pueden formar a partir de una variedad de fosfolípidos , tales como colesterol, esterilamina o fosfatidil colinas mediante el uso de procedimientos se describen bien en la técnica . Los compuestos de la presente invención también se pueden acoplar con polímeros solubles tales como vehículos de fármaco dirigidos a un objetivo. Esos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol , polihidroxietilaspart-amidofenol, o polietilenoxidepolilisina sustituido con residuo de palmitoilo. Además, los compuestos de la presente invención se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables útiles para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, poliepsilon caproalactona, ácido polihidroxibutiérico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloque entrelazados o anfifáticos de hidrogeles. Los compuestos de esta invención se pueden administrar en cualquiera de las composiciones anteriores y de conformidad con regímenes de dosis establecidos en la técnica siempre que el tratamiento de los trastornos enfrentados se requiera. La dosis diaria de los productos se puede variar en un intervalo amplio de 0.01 a 1.000 mg por adulto humano por día. Para administración oral, las composiciones preferiblemente se proveen en forma de tabletas que contienen, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 25.0, 50.0, 100, 150, 200, 250, 500 y 1000 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosis al paciente que se ha de tratar. Una cantidad efectiva del fármaco es suministrada ordinariamente a un nivel de dosis de aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 300 mg/kg de peso corporal por día. Preferiblemente, el intervalo es de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día. Los compuestos se pueden administrar a un régimen de 1 a 4 veces al día. Las dosis óptimas para ser administradas pueden ser fácilmente determinadas por los expertos en la técnica, y variarán con el compuesto particular usado, el modo de administración, la concentración de la preparación, la biodisponibilidad debida al modo de administración y el avance de la condición de la enfermedad. Además, factores asociados con el paciente en particular que se trate, incluyen la edad del paciente, peso, dieta y tiempo de administración, generalmente se deben considerar en el ajuste de dosis. Los compuestos o composiciones de la presente invención se pueden tomar antes de una comida, mientras se toma una comida o después de una comida. Cuando se toman antes de una comida, los compuestos o composiciones de la presente invención puede tomarse 1 hora, preferiblemente 30 ó 15 ó 5 minutos antes de la comida. Cuando se toman con la comida, los compuestos o composiciones de la presente invención se pueden mezclar en la comida o tomarse en una forma de dosis separada como se describió antes. Cuando se toman después de una comida, los compuestos y composiciones de la presente invención se pueden tomar 5, 15 ó 30 minutos o incluso 1 hora después de acabar una comida. EJEMPLOS EJEMPLO 1 Síntesis de base libre de glutaminil pirrolidina Acilación: N-Bencil -oxicarbonilglutamina (2.02 g, 7.21 mmoles) se disolvió en 35 mi de THF y se llevó a -15°C. A esa mezcla se añadieron CAIBE (cloroformiato de isobutilo) (0.937 mi, 7.21 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.795 mi, 7.21 mmoles) y la solución se agitó durante 15 minutos. La formación del anhídrido mixto se verificó por CCD (eluyente: CHCl3/MeOH: 9/1) . Después de calentar a -10°C, se añadió pirrolidina (0.596 mi, 7.21 mmoles) . La mezcla se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Tratamiento : El sedimento formado se filtró y el solvente se evaporó. El aceite resultante se recogió en acetato de etilo (20 mi) y se lavó con una solución saturada de sulfato ácido de sodio seguido por una solución saturada de bicarbonato de sodio, agua y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó y se evaporó. El producto resultante se verificó para pureza por TLC (eluyente :CHC13/ME0H: 9/1) Rendimiento: 1.18 g, sólido ceroso. Digestión 1.18 g del compuesto Z-protegido sólido resultante se disolvió en 40 mi de etanol absoluto. A la solución se añadió aprox. 20 mg de Pd sobre carbón vegetal (10%, FLUKA) y la suspensión se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 3 hr. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (eluyente :CHC13/ME0H: 9/1 ) . Después de completarse la reacción, el solvente se removió para dar la base libre.

Rendimiento: 99% La pureza se verificó por medio de CCD: N-butanol/AcOH/agua/acetato de etilo : l/l/l/l, Rf = 0.4. La identidad del producto de reacción se verificó por análisis de RMN. EJEMPLO 2 Síntesis de clorhidrato de glutaminil tiazolidina Acilación: N-t-Butil-oxicarbonilglutamina (2.0 g, 8.12 mmoles) se disolvió en 5 mi de THF y se llevó a -15°C. A esa mezcla se añadió CAIBE (cloroformiato de isobutilo) (1.06 mi, 8.12 mmoles) and 4-metilmorfolina (0.895 mi, 8.12 mmoles) y la solución se agitó durante 15 minutos. La formación del anhídrido mixto se verificó por TLC (eluyente : CHCIS/MEOH : 9/1) . Después de calentar a -10°C, se añadió otra 4-metilmorfolina equivalente (0.895 mi, 8.12 mmoles) y clorhidrato de tiazolidina (1.02 g, 8.12 mmoles). La mezcla se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Tratamiento : El sedimento formado se filtró y el solvente se evaporó. El aceite resultante se recogió en cloroformo (20 ML) y se lavó con una solución saturada de sulfato ácido de sodio seguido por una solución saturada de bicarbonato de sodio, agua y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó y se evaporó. El producto resultante se verificó para pureza por TLC (eluyente:CHCl3/MEOH:9/l) Rendimiento: 1.64 g, sólido Digestión; 640 mg del compuesto protegido con Boc sólido resultante se disolvió en 3.1 mi de HCl enfriado con hielo en dioxano (12.98 M, 20 equivalentes) y se dejó sobre hielo. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (eluyente:CHCl3/MEOH: 9/1) . Después de completarse la reacción, el solvente se removió y el aceite resultante se recogió en metanol y se evaporó nuevamente. Después de eso, el aceite resultante se secó sobre óxido de fósforo-V y se trituró dos veces con éter dietílico. La pureza se verificó por HPLC. Rendimiento: 0.265 g La pureza se verificó por HPLC. La identidad del producto de reacción se verificó por análisis de R . EJEMPLO 3 Síntesis de clorhidrato de glutaminil pirrolidina Acilación : N-t-Butil-oxicarbonilglutamina (3.0 g, 12.18 mmoles) se disolvió en 7 mi de THF y se llevó a -15°C. A esa mezcla se añadieron CAIBE (cloroformiato de isobutilo) (1.6 mi,. 12.18 mmoles) y 4-metilmorfolina (1.3 mi, 12.18 mmoles) y la solución se agitó durante 15 min La formación del anhídrido mixto se verificó por TLC (eluyente :CHC13/ MEOH:9/l). Después de calentar a -10°C, se añadió 1 equivalente de pirrolidina (1.0 mi, 12.18 mmoles) . La mezcla se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Tratamiento : • El sedimento formado se filtró y el solvente se evaporó. El aceite resultante se recogió en cloroformo (20 mi) y se lavó con una solución saturada de sulfato ácido de sodio seguido por' una solución saturada de bicarbonato de sodio, agua y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó y se evaporó. El producto resultante se verificó para pureza por TLC (eluyente :CHC13/ME0H: 9/1) Rendimiento: 2.7 g sólido Digestión : 2.7 g del sólido resultante se disolvió en 13.0 mi HC1 enfriado con hielo en dioxano (12.98 M, 20 equivalentes) y se dejó sobre hielo. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (eluyente :CHCl3/MEOH: 9/1 ) . Después de completarse la reacción, el solvente se removió y el aceite resultante se recogió en metanol y se evaporó nuevamente. Después de eso, el aceite resultante se secó sobre óxido de fósforo-V y se trituró dos veces con éter dietílico. Rendimiento: 980 mg La pureza se verificó por HPLC. La identidad del producto de reacción se verificó por análisis de RMN.

EJEMPLO 4 Determinación de Kj Para determinación de Ki de glutaminil pirrolidina y glutaminil tiazolidina, se usó dipeptidil peptidasa IV de riñon de porcino con una actividad específica contra glicilprolil-4-nitroanilina de 37.5 U/mg y una concentración de enzima de 1.41 mg/ml en la solución de abastecimiento. Mezcla de prueba: 100 µ? de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en un intervalo de concentración de 1*10"5 M -1*10"7 M (glutaminil pirrolidina) y 1*10"6 M-l*10"8 M (glutaminil tiazolidina) respectivamente se mezclaron con 50 µ? glicilpropil-4-nitroanilina en diferentes concentraciones (0.4 mM, 0.2 mM, 0.1 mM, 0.05 mM) y 100 µ? de HEPES (40 m , pH 7.6; concentración de iones = 0.125) . La mezcla de prueba se pre-incubó a 30°C durante 30 minutos. Después de la pre-incubación, se añadieron 20 µ? de DPIV (1: 600 diluido) y la medición de desarrollo de color amarillo debido a liberación de 4-nitroanilina se realizó a 30°C y ? = 405 nm durante 10 minutos con el uso de un lector de placa (HTS7000 plus, Applied Biosystems, eiterstadt, Alemania) . Los valores de ¡. se calcularon con el uso de Graphit 4.0.15 (Erithacus Software, Ltd, R.U.) basados en la inhibición competitiva de DPIV por glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina. Se determinaron para glutaminil tiazolidina como K± = 3.12*10~7 ? ±5.11*10-10 y para glutaminil pirrolidina como i = 1.30*10*6 M +8.49*10~8 M. EJEMPLO 5 Determinación de Kj en plasma humano El plasma humano contiene actividad de liberación Xaa- Pro N-terminal. 70 µ? de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en un intervalo de concentración de 1 *10"5 M-l *10"7 M (glutaminil pirrolidina) y 1 *10"6 M - l *10~8 M (glutaminil tiazolidina) respectivamente se mezclaron con 50 µ? de glicilpropil-4-nitroanilina en diferentes concentraciones (0.4 mM, 0.2 mM, 0.1 mM, 0,05 mM) y 100 µ? de HEPES (40 mM, pH7.6). La mezcla de prueba se pre-incubó a 30°C durante 5 minutos y 22 horas respectivamente. Después de la pre- incubación, se añadieron 50 µ? de plasma humano y la medición de desarrollo de color amarillo debido a liberación de 4-nitroanilina se realizó a 30°C y = 405 nm durante 10 minutos con el uso de un lector de placa (HTS7000 plus, Applied Biosystems, Weiterstadt, Alemania). Los valores de K± se calcularon con el uso de Graphit 4.0.15 (Erithacus Software, Ltd, R.U.) basados en la inhibición competitiva de DPIV por glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina. Se determinaron para glutaminil tiazolidina como Ki = 4.03*10~7 M 2.19*10~10 M después de 5 min 5.13*10~7 M 1.26*10"8 M después de 22 horas de pre-incubación, y para glutaminil pirrolidina como ¾ = 1.30*10"6 M 4,89*10~8 M después de 5 minutos y 1.36*10"6 M 3.21 *10~8 M después de 22 horas de pre-incubación. EJEMPLO 6 Inhibición de enzimas similares a DPTV - dipeptidil peptidasa II DP II (3.4.14.2) libera N-terminal dipéptidos a partir de oligopéptidos si el N-terminal no es protonado (McDonald, J. K., Ellis, S. y Reilly, T. J. , 1966, J. Biol . Chem. , 241,1494- 1501). Pro y Ala en posición Pi son residuos preferidos. La actividad de enzima se describe como actividad similar a DPIV, pero DP II tiene un óptimo de pH ácido. La enzima usada se purificó de riñon de porcino. Prueba : 100 µ? de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en un intervalo de concentración de 1*10"4 M -5*10"8 M se mezclaron con 100 µ? de solución reguladora de pH (40 mM HEPES, pH 7.6,. O.Brij al 0.15%, 1 M DTT) , 50 µ? de solución de lisilalanilaminometilcumarina (5 mM) y 20 µ? de DP II de porcino (diluido 250 veces en solución reguladora de pH) . La medición de fluorescencia se realizó a 30°C y ? exctación = 380 nm, emísi6n = 465 nm durante 25 minutos con el uso de un lector de placa (HTS7000plus , Applied Biosystems, Weiterstadt, Alemania) . Los valores de Ki se calcularon con el uso de Graphit 4.0.15 (Erithacus Software, Ltd, R. U . ) y se determinaron como Ki = 8.52*10~5 M ±6.33*10~6 para glutaminil pirrolidina y ¾ = 1.07*10~5 M ±3.81*10~7 M para glutaminil tiazolidina. EJEMPLO 7 Enzimas de reacción cruzada Se probaron glutaminyl pirrolidina o glutaminil tiazolidina para su potencia de reacción cruzada contra dipeptidil peptidasa 1, prolil oligopeptidasa y prolidasa. Dipeptidil peptidasa I (DP I, catepsina C) DP I o catepsina C es una cisteína protease lisosomal que digiere los dipéptidos a partir del N-terminal de sus sustratos (Gutman, H.R. y Fruton, J.S., 1948, J. Biol: Chem. , 174,851-858). Se clasificó como una cisteína proteasa. La enzima usada se compró de Qiagen (Qiagen GmbH, Hilden, Alemania) . Para obtener una enzima completamente activa, la enzima se diluyó 1000 veces en regulador de pH MES a pH de 5.6 (40 mM MES, 4 mM DTT, 4 mM KCI, 2 mM EDTA, O.Brij al 0.15%) y se pre-incubó durante 30 minutos a 30 °C. Prueba : 50 µ? de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en un intervalo de concentración de 1*10"5 M -1*10"7 M se mezclaron con 110 µ? de una mezcla de regulador de pH-enzima. La mezcla de prueba se pre-incubó a 30 °C durante 15 minutos. Después de la pre-incubación, se añadieron 100 µ? de histidilseril-p-nitroanilina (2*10"5M) y la medición de desarrollo de color amarillo debido a liberación de ß-nitroanilina se realizó a 30°C y ?e???aa??? = 380 nm, ?epa3??? = 465 nm durante 10 min, con el uso de un lector de placa (HTS7000 plus, Applied Biosystems, Weiterstadt, Alemania) . Los valores de IC50 se calcularon con el uso de Graphit 4.0.15 (Erithacus Software, Ltd, R.U.). No se encontró inhibición de la actividad de enzima de DP I por glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina. Prolil oligopeptidasa (POP) La prolil oligopeptidasa (EC 3.4.21.26) es una endoproteasa de tipo serina que digiere péptidos en la parte N-terminal del enlace de Xaa-Pro bond ( alter, R. , Shlank, H., Glass, J.D., Schwartz, I.L. y Kerenyi , T.D., 1971, Science, 173,827-829). Los sustratos son péptidos con un peso molecular de hasta 3000 Da. La enzima usada era una prolil oligopeptidasa humana recombinante . La expresión recombinante se realizó en E. coli bajo condiciones estándares como se describe en otra parte en la técnica más avanzada. Prueba : 100 µ? de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en un intervalo de concentración de 1*10"4 M -5*10"8 M se mezclaron con 100 µ? de solución reguladora de pH (40 mM HEPES, pH 7.6, O.Brij al 0.15%, 1 itiM DTT) y 20 µ? de solución de POP. La mezcla de prueba se pre-incubó a 30°C durante 15 minutos. Después de la pre-incubación, 50 µ? de solución de glicilprolilprolil-4-nitroanilina (0.29 mM) se añadieron y la medición de desarrollo de color amarillo debido a liberación de 4 -n troanilina se realizó a 30°C y = 405 nm durante 10 minutos con el uso de un lector de placa (sunrise, Tecan, Crailsheim, Alemania) . Los valores de IC50 se calcularon con el uso de Graphit 4.0.15 (Erithacus Software, Ltd, R.U.). No se encontró inhibición de la actividad de POP por glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina. Prolidasa (X-Pro dipeptidasa) La prolidasa (EC 3.4.13.9) fue descrita primero por Bergmann y Fruton (Bergmann, M. y Fruton, JS, 1937, J. Biol . Chem. 189-202) . La prolidasa libera el aminoácido N-terminal de Xaa-Pro dipéptidos y tiene un pH óptimo entre 6 y 9. La prolidasa de riñon de porcino (ICN Biomedicals, Eschwege, Alemania) se disolvió (1 mg/ml) en regulador de pH de prueba (20 mM NH4 (CH3COO) 2.3 mM MnCl2, pH 7.6). Para obtener una enzima completamente active, la solución se incubó durante 60 minutos a temperatura ambiente. Prueba : 450 µ? de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en un intervalo de concentración de 5*10~3 M-5*10~7 M se mezclaron con 500 µ? de solución reguladora de pH (20 mM NH4 (CH3COO)2, pH 7.6) y 250 µ? de ILE-Pro-OH (0.5 mM en la mezcla de prueba) . La mezcla de prueba se pre- incubó a 30°C durante 5 minutos. Después de la pre-incubación, se añadieron 75 µ? de prolidasa (diluido 1:10 en regulador de pH de prueba) y la medición se realizó a 30°C y ? = 220 nm durante 20 minutos con el uso de un fotómetro UV/Vis, UV1 (Thermo Spectronic, Cambridge, R.U.). Los valores de IC50 se calcularon con el uso de Graphit 4.0.15 (Erithacus Software, Ltd, R.U.). Se determinaron como IC50 > 3 mM para glutaminil tiazolidina y como IC50 = 3.4*10"4 M ±5.63*10"s para glutaminil pirrolidina. EJEMPLO 8 Estabilidad en el plasma Para investigar la estabilidad de glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en el plasma humano, la actividad de DPIV en el plasma se determinó en un tiempo definido. La actividad de DPIV promedio en el plasma humano se determinó como. 43.69 U/ml . En la solución de trabajo, el plasma se diluyó en NaCl al 0.9% para fijar el nivel de actividad de DPIV a 25 U/ml. Plasma y glutaminil pirrolidina o glutaminil tiazolidina en diferentes concentraciones (5*10~5, 2.5*10"5, 1.25*10"5 en plasma) se incubaron a 37°C. En puntos de tiempo definidos, se tomaron muestras mediante una pipeta roboter (Gilson 215, Liquid handler, Gilson) y se transf rieron a una placa de microtitulación que contenía 5*10"5 M ' de glicilproliíaminometilcumarina en NaCl al 0.9% + Brij al 0.15% por pozo. Después de 6 minutos, la reacción fue interrumpida mediante la adición de isoleuciltiazolidina (5*10~5 M en una solución de NaCl al 0.9%) . Se realizó medición de fluorescencia contra NaCl al 0.9% en el plasma (estándar de referencia) con el uso de un lector de placa (HTS7000plus, Applied Biosystems, Weiterstadt, Alemania) . La vida media de la potencia inhibidora de glutaminil pirrolidina o glutaminyl tiazolidina se calculó al graficar la actividad de la enzima versus el tiempo de reacción . Para ambos compuestos, no se pudo determinar la vida media. Se considera que la sustancia es estable en plasma humano durante 22 horas. EJEMPLO 9 Determinación de actividad inhibidora de DPIV de la glutaminil pirrolidina y glutaminil tiazolidina después de administración intra-vasal y oral a ratas Wistar Animales Ratas Wistar machos (Shoe: Wist (Sho) ) con un peso corporal que variaba entre 250 y 350 g se compraron de Tierzucht Schónwald (SCHONWALDE, Alemania) . Condiciones de alojamiento Los animales se alojaron en jaulas individuales bajo condiciones convencionales con temperatura controlada (22±2°C) en un ciclo de luz/oscuridad de 12/12 horas (la luz a las 06:00 A ) . Alimento en comprimidos estándar (sniffs Soest, Alemania) y agua corriente acidificada con HC1 se dejaron ad liJi tum. Inserción de catéter en arteria carótida Después de > una semana de adaptación a las condiciones de alojamiento, se implantaron catéteres en la arteria carótida de ratas Wistar bajo anestesia general (inyección i.p. de 0.25 ml/kg en peso de Rompun® [2%] , BayerVital, Alemania y 0.5 ml/kg en peso de Ketamin 10, Atarost GmbH & Co., Twistringen, Alemania). Se dejó que los animales se recuperaran durante una semana. Los catéteres se lavaron a chorro con heparina-solución salina (100 IU/ml) tres veces por semana. En el caso de disfunción del catéter, se insertó un segundo catéter en la arteria carótida contralateral de la rata respectiva. Después de una semana de recuperación de cirugía, se reintegró este animal al estudio. En el caso de disfunción del segundo catéter, se retiró al animal del estudio. Se reclutó un nuevo animal y los experimentos se continuaron en la secuencia planeada, empezando por lo menos 7 días después del implante del catéter. Diseño experimental A las ratas con función de catéter intacto se administró placebo (1 mi de solución salina, 0.154 moles/1) o 100 mg/kg en peso de glutaminil pirrolidina o 100 mg/kg en peso de glutaminil tiazolidina por la vía oral e intra-vasal (intra-arterial) . Después de ayuno durante la noche, se obtuvieron muestras de 100 µ? de sangre arterial heparinizada a -30, -5, y 0 minutos. La sustancia de prueba se disolvió en 1.0 mi de solución salina (0.154 moles/1) y se administró a 0 minutos ya sea por vía oral mediante un tubo de alimentación (75 mm; Fine Science Tools, Heidelberg, Alemania) o por vía intra-vasal. En el caso de administración oral, se inyectó un volumen adicional de 1 mi de solución salina en el catéter arterial. En el caso de administración intra-arterial, el catéter se lavó a chorro inmediatamente con 30 µ? de solución salina y 1 mi adicional de solución salina se dio oralmente mediante el tubo de alimentación. Después de la aplicación de placebo o las sustancias de prueba, se tomaron muestras de sangre arterial a 2.5, 5, 7.5, 10, 15, 20, 40, 60 y 120 minutos del catéter carótido de las ratas no restringidas conscientes. Todas las muestras de sangre se recogieron en tubos de Eppendorf enfriados con hielo (Eppendorf-Netheler-Hinz , Hamburg, Alemania) llenados con 10 UT de regulador de pH de citrato de sodio 1 M (pH 3.0) para medición de actividad de DPIV en el plasma. Los tubos de Eppendorf se centrifugaron inmediatamente (12000 rpm durante 2 min, HETTICH Zentrifuge EBA 12, TUTTLINGEN; Alemania) : las fracciones de plasma se almacenaron en hielo hasta analizarse o se congelaron a -20°C hasta analizarse. Todas las muestras de plasma se marcaron con los siguientes datos: • Número de código • Número de animal · Fecha de muestreo • Tiempo de muestreo Métodos analíticos La mezcla de prueba para determinación de actividad de DPIV en el plasma consistió de 80 µ? de reactivo y 20 µ? de muestra de plasma. La medición cinética de la formación del producto amarillo 4-nitroanilina a partir del sustrato glicilprolil-4-nitroanilina se realizó a 390 nm durante 1 minuto a 30°C después de 2 minutos de pre-incubación a la misma temperatura. La actividad de DPIV se expresó en mU/ml. . Métodos estadísticos Se realizaron evaluaciones estadísticas y gráficas con ¦ PRISM® 3.02 (GraphPad Software, INC.). Todos los parámetros se analizaron de una manera descriptiva con la inclusión de la media y la desviación estándar. Resultados Los compuestos glutaminil pirrolidina y glutaminil tiazolidina en una dosis de 100 mg/kg en peso vs. actividad de DPIV en el plasma inhibida por placebo después de administración oral e intra-vasal (véase las figuras 1 y 2) .

EJEMPLO 10 Estudio de escalamiento de dosis en ratas Zucker obesas después de administración oral de glutaminil pirrolidina Animales N=30 Ratas Zucker machos (fa/fa) , con edad promedio de 11 semanas (5-12 semanas) , peso corporal promedio de 350 g (150-400 g) , se compraron de Charles River (Sulzfeld, Alemania) . Después del suministro se mantuvieron durante >12 semanas hasta que casi todas las ratas Zucker obesas tenían la característica de diabetes mellitus manifiesta. Un grupo de N=8 animales se reclutaron para probar tres dosis de escalamiento de glutaminil pirrolidina vs . placebo (solución salina) . Condiciones de alojamiento Los animales se alojaron en jaulas individuales bajo condiciones convencionales con temperatura controlada (22±2°C) en un ciclo de luz/oscuridad de 12/12 horas (la luz a las 06:00 AM) . Alimento en comprimidos estándar estéril (sniff® Soest, Alemania) y agua corriente acidificada con HCl se dejaron ad libituw. Cateterización de arteria carótida Ratas Zucker obesas de 24-31 semanas (media: 25 semanas) de edad, adaptadas a las condiciones de alojamiento, se prepararon bien para el estudio.

Los catéteres se implantaron en la arteria carótida de las ratas Zucker obesas bajo anestesia general (inyección i.p. de 0.25 tnl/kg en peso de Rompun® [2%] , BayerVital, Alemania y 0.5 ml/kg en peso de Ketamin 10, Atarost GmbH & Co . , Twistringen, Alemania) . Se dejó que los animales se recuperaran durante una semana. Los catéteres se lavaron a chorro con heparina-solución salina (100 IU/ml) tres veces por semana . Diseño experimental Placebo (1 mi de solución salina, 0.154 moles/1) o dosis de escalamiento de glutaminil pirrolidina (5, 15 y 50 mg/kg en peso) se administraron a grupos de N=8 ratas Zucker obesas. 375 mg de glutaminil pirrolidina se disolvieron en 1000 µ? de DMSO (E. Merck, Darmstadt; Alemania (sulfóxido de dimetilo p.a.]). Se añadieron 10 mi de solución salina y alícuotas de 1 mi, cada una conteniendo 34.09 mg de glutaminil pirrolidina, se almacenaron a -20°C. Para la preparación de la sustancia de prueba, alícuotas dependientes de la dosis se diluyeron en solución salina. Después de ayuno durante la noche, se adimistró placebo o sustancia de prueba a las ratas Zucker obesas por vía oral mediante un tubo de alimentación (15 G, 75 mm; Fine Science Tools, Heidelberg, Alemania) a - 10 minutos. Una prueba de tolerancia a la glucosa oral (OGTT) con 2 g/kg en peso de glucosa (solución al 40%, B. Braun Melsungen, Melsungen, Alemania) se administró a ±0 minutos mediante un segundo tubo de alimentación. Muestras de sangre venosa de la vena de la cola se recolectaron a -30 min, -15 min, ±0 min y a 5, 10, 15, 20, 30, 40, 60, 90 y 120 min en capilares de vidrio de 20 µ? , que se colocaron en tubos estándares llenados con 1 mi de solución para medición de glucosa en la sangre . Todas las muestras de sangre se marcaron con los siguientes datos: • Número de código · Número de animal • Fecha de muestreo • Tiempo de muestreo Métodos analíticos Los niveles de glucosa se midieron con el uso del procedimiento de glucosa oxidasa (analizador de glucosa Super G Glucose; Dr. Müller Gerátebau, Freital, Alemania). Métodos estadísticos Se realizaron evaluaciones estadísticas y gráficas con PRISM® 3.02 (GraphPad Software, INC.). Todos los parámetros se analizaron de una manera descriptiva con la inclusión de la media y la desviación estándar. Efecto del medicamento sobre la tolerancia a la glucosa Las ratas Zucker diabéticas tratadas con placebo mostraron una excursión de glucosa en la sangre fuertemente elevada que indicó intolerancia a la glucosa de diabetes mellitas manifiesta. La administración de 5 mg/kg en peso de glutaminil pirrolidina dio por resultado una mejora limitada de tolerancia a la glucosa en ratas Zucker diabéticas. La reducción significativa de niveles de glucosa en la sangre y mejora de tolerancia a la glucosa se logró después de la administración de 15 mg/kg y 50 mg/kg en peso de glutaminil pirrolidina (véase figura 3) . EJEMPLO 11 Estudio de escalamiento de dosis en ratas Zucker obesas después de administración oral de glutaminil tiazolidina Animales N=30 Ratas Zucker machos (fa/fa) , con edad promedio de 11 semanas (5-12 semanas) , peso corporal promedio de 350 g (150-400 g) , se compraron de Charles River (Sulzfeld, Alemania) . Después del suministro se mantuvieron durante >12 semanas hasta que casi todas las ratas Zucker obesas tenían la característica de diabetes mellitus manifiesta. Un grupo de N=8 animales se reclutaron para probar tres dosis de escalamiento de glutaminil tiazolidina vs . placebo (solución salina) . Condiciones de alojamiento Los animales se alojaron en jaulas individuales bajo condiciones estandarizadas con temperatura controlada (22±2°C) en un ciclo de luz/oscuridad de 12/12 horas (la luz a las 06:00 A ) . Alimento en comprimidos estándar estéril (sniff® Soest, Alemania) y agua corriente acidificada con HCl se dejaron ad libitum. Cateterización de arteria carótida Ratas Zucker obesas de 24-31 semanas (media: 25 semanas) de edad, adaptadas a las condiciones de alojamiento, se prepararon bien para el estudio. Los catéteres se implantaron en la arteria carótida de las ratas Zucker obesas bajo anestesia general (inyección i.p. de 0.25 ml/kg en peso de Rompun® [2%] , BayerVital, Alemania y 0.5 ml/kg en peso de Ketamin 10, Atarost GmbH & Co., Twistringen, Alemania) . Se dejó que los animales se recuperaran durante una semana. Los catéteres se lavaron a chorro con heparina-solución salina (100 IU/ml) tres veces por semana. Diseño experimental Placebo (1 mi de solución salina, 0.154 moles/1) o dosis de escalamiento de glutaminil tiazolidina (5, 15 y 50 mg/kg en peso) se administraron a grupos de N=8 ratas Zucker obesas. Las cantidades respectivas de glutaminil tiazolidina se disolvieron en 1000 µ? de solución salina. Después de ayuno durante la noche, se adiministró placebo o sustancia de prueba a las ratas Zucker obesas por vía oral mediante un tubo de alimentación (15 G, 75 mm; Fine Science Tools, Heidelberg, Alemania) a - 10 minutos. Una prueba de tolerancia a la glucosa oral (OGTT) con 2 g/kg en peso de glucosa (solución al 40%, B. Braun Melsungen, Melsungen, Alemania) se administró a ±0 minutos mediante un segundo tubo de alimentación. Muestras de sangre venosa de la vena de la cola se recolectaron a -30 min, -15 min, ±0 min y a 5, 10, 15, 20, 30, 40, 60, 90 y 120 min en capilares de vidrio de 20 µ?, que se colocaron en tubos estándares llenados con 1 mi de solución para medición de glucosa en la sangre. Todas las muestras de sangre se marcaron con los siguientes datos: • Número de código • Número de animal • Fecha de muestreo • Tiempo de muestreo Métodos analíticos Los niveles de glucosa se midieron con el uso del procedimiento de glucosa oxidasa (analizador de glucosa Super G Glucose; Dr. Müller Gerátebau, Freital, Alemania) . Métodos estadísticos Se realizaron evaluaciones estadísticas y gráficas con PRISM® 3.02 (GraphPad Software, INC.). Todos los parámetros se analizaron de una manera descriptiva con la inclusión de la media y la desviación estándar. Efecto del medicamento sobre la tolerancia a la glucosa Las ratas Zucker diabéticas tratadas con placebo mostraron una excursión de glucosa en la sangre fuertemente elevada que indicó intolerancia a la glucosa de diabetes mellitas manifiesta. La administración de 5 mg/kg en peso, 15 mg/kg y 50 mg/kg en peso de glutaminil tiazolidina dio por resultado una reducción dependiente de la dosis de los niveles de glucosa en la sangre elevados y mejora de la tolerancia a la glucosa en ratas Zucker diabéticas (véase figura 4) . EJEMPLO 12 Inactivación in vivo de glutaminil tiazolidina después de administración oral a ratas Wistar Animales/ Diseño experimental Se administró glutaminil tiazolidina a ratas Wistar oralmente como se describe en el ejemplo 9. Métodos analíticos Después de la aplicación de placebo o glutaminil tiazolidina, se tomaron muestras de sangre arterial a 2.5, 5, 7.5, 10, 15, 20, 40, 60 y 120 minutos del catéter de la carótida de las ratas no restringidas conscientes para determinar la formación de los productos de degradación de glutaminil tiazolidina. Para análisis, se usó un procedimiento de extracción de fase sólida simple en cartuchos de C18 para aislar los compuestos de interés del plasma. Los extractos se analizaron mediante el uso de cromatografía de líquidos de fase inversa en una columna Lichrospher 60 RP Select B hifenada con espectroscopia de masa en tándem que opera en el modo positivo de APCI . Se usó un método estándar interno para cuantificación. Resultados Después de la administración oral de glutaminil tiazolidina a ratas Wistar, se encontró una degradación del compuesto. Al usar LC/MS, el producto de degradación se pudo definir como piroglutaminil tiazolidina. Véase figuras 5 y 6. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un compuesto de la fórmula: caracterizado porque X =CH2 o S o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la sal ácida de adición se selecciona del grupo que consiste de sales de ácido clorhídrico, bromhídrico, perclórico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, acético, propiónico, glicólico, láctico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, mandélico, metansulfónico,- hidroxietansulfónico, bencensulfónico, oxálico, pamoico, 2-naftalensulfónico, p-toluensulfónico, ciclohexansulfámico, salicílico, sacarínico o trifluoroacético .
3. Una sal ácida de adición de un compuesto de la fórmula : en donde X =CH2 o S; y en donde la sal ácida de adición se selecciona del grupo que consiste de sales de ácido clorhídrico, bromhídrico, perclórico, nítrico, propiónico, glicólico, láctico, maleico, málico, cítrico, benzoico, mandélico, metansulfónico, hidroxietansulfónico, bencensulfónico, oxálico, pamoico, 2-naftalensulfónico, p-toluensulfónico, ciclohexansulfámico, salicílico, sacarínico o trifluoroacético .
4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque se selecciona de clorhidrato de glutaminil tiazolidina y clorhidrato de glutaminil pirrolidina .
5. Clorhidrato de glutaminil tiazolidina.
6. Clorhidrato de glutaminil pirrolidina.
7. Un polimorfo de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
8. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un vehículo/diluyente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
9. El uso de un compuesto o composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores para la preparación de un medicamento para inhibir la actividad de la dipeptidil peptidasa IV o de una enzima similar a la dipeptidil peptidasa IV para la prevención o el tratamiento de enfermedades o condiciones relacionadas con la dipeptidil peptidasa IV o enzimas similares a la dipeptidil peptidasa IV.
10. El uso de conformidad con la reivindicación 9 para reducir los niveles de glucosa en la sangre elevados en mamíferos que resulta de la ingesta de alimentos.
11. El uso de conformidad con la reivindicación 9 o 10 para la prevención o el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina., artritis, obesidad, trastornos inmunes y autoinmunes, trasplante de aloinjerto, cáncer, trastornos neuronales y enfermedades dérmicas.
12. El uso de conformidad con la reivindicación 11 para la prevención o el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina.
13. Un método de inhibición de la actividad de la dipeptidil peptidasa IV o de una enzima similar a la dipeptidil peptidasa IV para prevenir o tratar enfermedades o condiciones asociadas con la dipeptidil peptidasa IV o enzimas similares a la dipeptidil peptidasa IV, . caracterizado porque comprende administrar a un mamífero que necesita ese tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o una composición farmacéutica de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 8.
14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque es para reducir los niveles de glucosa en la sangre elevados en mamíferos que resulta de la ingesta de alimentos .
15. El método de conformidad con la reivindicación 13 o 14, caracterizado porque es para prevenir o tratar enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de diabetes mellitus no dependiente de insulina, artritis, obesidad, trastornos inmunes y autoinmunes, trasplante de aloinjerto, cáncer, trastornos neuronales y enfermedades dérmicas.
16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque es para la prevención o el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina.
17. - El producto de degradación de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 3 o 5 caracterizado porque tiene la fórmula: