MXPA03005941A

MXPA03005941A - Analogos tacrolimus neurotroficos.

Info

Publication number: MXPA03005941A
Application number: MXPA03005941A
Authority: MX
Inventors: Goldberg Bruce
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co
Priority date: 2000-12-29
Filing date: 2001-12-31
Publication date: 2005-02-14
Also published as: AR035411A1; BR0116762A; EP1353671A4; CA2433384A1; KR20070030331A; JP2004527472A; RU2288716C2; CN1538843A; PL366301A1; CZ20032060A3; CN1293877C; NZ527209A; RU2003123493A; AU2002231277B2; EP1353671A1; WO2002053159A1; IL156664A0; NO20032913D0; HUP0302521A2; KR100794204B1

Abstract

Derivados de tacrolimus con elevados niveles de actividad neurotrofica y bajos niveles de actividad inmunosupresora. Estos compuestos son utiles como agentes neurotroficos, en particular para prevenir o tratar la disfuncion o el dano neuronal.

Description

ANÁLOGOS TACROLIMUS NEUROTROFICOS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la Invención La presente invención se relaciona con un derivado de tacrolimus que posee un nivel alto de actividad neu'rotrófica y un nivel reducido de actividad inmunosupresora .

Análisis de los Antecedentes Se conoce que ciertos compuestos macrólidos, por ejemplo los compuestos de tacrolimus y relacionados con el mismo, ayudan a prevenir o tratar la isquemia cerebral (WO 94/14443) . Unos derivados particulares del ácido pipecólico, que poseen afinidad hacia las inmunofilinas de tipo FKBP, tales como los tacrolimus, se conoce que estimulan el crecimiento de los nervios periféricos dañados o promueven la regeneración neuronal (WO 96/40140). Ciertos compuestos no inmunosupresores , es decir la geldanamicina y sus análogos, se sabe que alteran el complejo receptor esferoide y promoven el crecimiento del nervio (WO 99/21552) .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se ha descubierto que un análogo tacrolimus particular, es decir el Compuesto (I) que se menciona a continuación, posee una excelente actividad neurotrófica pero, a diferencia del tacrolimus, tiene poca o ninguna actividad inmunosupresora . Como se muestra más adelante, el Compuesto (I) ejerce niveles superiores de actividad neurotrópica en comparación con el tacrolimus, por ejemplo, medida según . su capacidad de aumentar la longitud de la neurita. De manera similar, la administración del Compuesto (I) ha demostrado inducir la regeneración axonal y acelerar la recuperación luego de una compresión del nervio o lesiones de la médula, espinal . Además, el Compuesto (I) ejerce estos ventajosos efectos neurotrópicos causando poca o ninguna de actividad inmunosupresora en comparación con el tacrolimus. De acuerdo con lo cual, la presente invención proporciona nuevos usos para el Compuesto (I) como agente néurotrófico superior, asi como agente neurotrópico que causa poca o ninguna actividad inmunosupresora. Además, la invención ofrece un agente néurotrófico o composición que comprende el Compuesto (I) También, la presente invención brinda un método para prevenir o tratar la lesión o disfunción" neuronal, que comprende administrar el Compuesto (I) a un mamífero.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN De modo inesperado, se ha descubierto que el Compuesto (I) resulta útil para mejorar, prevenir o tratar la lesión o disfunción neurológica provocada por daño o lesión, a deterioro de o enfermedad del sistema nervioso, mientras que, de modo ventajoso, posee poco o ningún efecto inmunosupresor. El Compuesto (I) resulta útil para tratar el daño, deterioro o disfunción causado por daño físico, desórdenes de nutrición, isquemia, enfermedades degenerativas, enfermedades malignas, enfermedades infecciosas y por interacciones con fármacos, toxinas o venenos. Por ejemplo, el Compuesto (I) es útil para tratar el daño y la disfunción neurológica causados por neurocírugía, lesión de nervios periféricos, quemaduras, encefalomielitis , VIH, herpes, cáncer, tratamiento por radiación, interacción con fármacos, deficiencia de ácido fólico o vitamina B12, y por exposición a neurotoxinas o químicos tales como el plomo. De acuerdo con lo cual, el Compuesto (I) es útil para prevenir o tratar el daño y la disfunción neuronales, como la polimiositis (miositis múltiple) , síndrome de Guillan Barre, enfermedad de Meniere, polineuritis (neuritis múltiple) , mononeuritís (neuritis solitaria) , mal de Alzheimer, mal de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , enfermedad de Huntington, radiculopatía, neuropatía (como por ejemplo la neuropatía diabética, neuropatía inducida por quimioterapia, etc.), lesión de la médula espinal, demencia senil, demencia vascular, esclerosis múltiple, parálisis física, etc. El Compuesto (I), el análogo de . tacrolimus utilizado en la presente invención, posee la siguiente fórmula química: Este compuesto puede producirse según se describe en la Patente Estadounidense No. 5.376.663 ejemplo 29. Con respecto al Compuesto (I)- usado en la presente invención, debe comprenderse que puede haber confórmeros y uno o más estereoisómeros , como por ejemplo isómeros ópticos y geométricos debidos a un átomo o átomos de carbono asimétricos o ' doble enlace o enlaces, y dichos confórmeros e isómeros también quedan comprendidos dentro del alcance del compuesto de la presente invención. El Compuesto (I) también puede presentarse en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, derivado, solvato o pro-farmáco, todos los cuales quedan comprendidos dentro del alcance de la presente invención. De preferencia, el solvato incluye un hidrato y un etanolato.

Una forma preferida del Compuesto (I) es la siguiente : El Compuesto (I) de la presente invención puede administrarse como un compuesto puro o como una mezcla con otro compuesto u otros ingredientes, de preferencia,, en un portador o vehículo farmacéutico. Cuando el Compuesto (I) se emplea bajo la forma de una composición o preparado farmacéutico, puede mezclarse con un portador orgánico o inorgánico, vehículo o excipiente adecuado para' la aplicación externa (tópica) , oral, enteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular o parenteral Por ejemplo, puede estar presente en una composición sólida, semi sólida o liquida que contenga el Compuesto (I) en forma de un ingrediente activo y uno o más portadores, vehículos o excipientes. Los portadores, vehículos o excipientes típicos incluyen, pero no limitada a, los portadores farmacéuticos convencionales, agentes medicinales o farmacéuticos, reguladores, dispersantes, agentes emulsificantes y adyuvantes. El Compuesto (I) también- puede componerse con los usuales portadores no tóxicos y farmacéuticamente aceptables para tabletas, comprimidos, cápsulas, gotas para el ojo, supositorios, soluciones (salina, por ejemplo), emulsiones, suspensiones (aceite de oliva, por ejemplo), ungüentos, s'prays en aerosol, cremas, emplastos para la piel, parches y cualquier otra forma adecuada para el uso. •Los portadores apropiados incluyen agüa, soluciones de dextrosa y salina acuosa, aceites, incluso los aceites animales, vegetales y sintéticos, y productos del petróleo. Otros portadores útiles incluyen la glucosa, lactosa, goma de acacia, gelatina, manitol, pasta de almidón, trisilicato de magnesio, talco, almidón de maíz, keratina, sílice coloide, almidón de papa, urea y otros portadores adecuados para su uso en preparaciones de fabricación, en forma sólida, semisólida o liquida. De modo adicional, también pueden- usarse agentes auxiliares, estabilizadores, emulsificantes , espesantes, colorantes, saborizantes y perfumes. El Compuesto (I) se incluye en la composición farmacéutica en una cantidad efectiva para producir el efecto deseado ante una condición o proceso de enfermedad en particular. De preferencia, el Compuesto (I) se incluye en una cantidad suficiente para brindar un efecto neurotrópico o estimular el crecimiento de las células nerviosas. Los mamíferos que pueden ser tratados a través del método de la presente invención incluyen los mamíferos de ganado tales como vacas, caballos, cerdos, etc., animales domésticos tales come perros, gatos, ratas, ratones, conejos, hamsters, etc., primates y humanos .- Las vías preferidas de administración o aplicación de los. productos o composiciones que contienen el Compuesto I en humanos, incluyen la inyección o administración oral. . Aunque la cantidad terapéuticamente efectiva o dosis del Compuesto (I) puede variar según el paciente individual, y también . dependerá de la edad y condición de cada paciente individual a ser tratado, por lo general se da una dosis diaria que oscila entre alrededor de 0.0001 y 1000 mg, de preferencia de 0.001 a 500 mg y más preferentemente aún de 0.01 a 100 mg del ingrediente activo, para el tratamiento de enfermedades, y por lo general se administra una única dosis promedio de alrededor de 0.001 a 0.01 mg, 0.2 a 0.5 mg, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg y 500 mg . Las dosis diarias para la administración crónica en humanos estarán en el rango de alrededor de 0.1 a 30 mg/kg/día. El Compuesto (I) también puede administrarse o aplicarse de manera simultánea, separada o secuencialmente con otros agentes que poseen actividad neurotrófica o estimuladora del crecimiento de la célula nerviosa .

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden ser administradas periódicamente a un sujeto mamífero (por ejemplo un paciente humano) con necesidad de dicho tratamiento, para promover la regeneración neuronal y la recuperación funcional, y para estimular el re-crecimiento de neuritas y, asi, tratar varios estados neuropatológicos , incluyendo el daño en nervios periféricos y en el sistema nervioso central causado por daño físico (por ejemplo lesión y traumatismo en la médula espinal, lesión o daño en nervio facial o ciático, transplante de una extremidad luego de amputación); enfermedades (por ejemplo la neuropatía diabética) ; quimioterapia de cáncer (por ejemplo la neuropatía inducida por acrilamida, taxol, alcaloides vinca y doxorubicina) ; secuelas, por ejemplo alofasis (como por ejemplo los desórdenes de articulación)., enturbiamiento de la conciencia, disquinesia, etc. asociados con infarto cerebral, infarto hemorrágico, etc; y desórdenes neurológicos incluyendo, pero no limitados a, varios desórdenes neurológicos y neuropáticos periféricos que incluyendo pero no limitados a: neuralgia del trigémino, neuralgia del glosofaríngeo, parálisis de Bell, miastenia grave, distrofia muscular, esclerosis lateral amiotrófica , · atrofia muscular progresiva, atrofia muscular congénita bulbar progresiva, síndromes de disco vertebral herniado, alterado o prolapsado, espondilosis cervical, desórdenes plexorales, síndromes de destrucción de la salida torácica, neuropatías periféricas tales como las provocadas por plomo, acrilamidas, gama-dicetonas (neuropatía por aspirado de pegamento), disulfuro de- carbono, dapsone, tics, porfiria, síndrome de Gullain Barre, mal de Alzheimer, mal de Parkinson y corea de Huntington. Una transección de un nervio periférico o lesión en la médula espinal puede ser tratada administrando al mamífero una cantidad del agente que sea estimuladora del crecimiento del nervio, y— transplantando en el nervio periférico o médula espinal un injerto de nervio tal como un aloinjerto (Osawa y colaboradores, J. Neurocytol . 19: 833-849, 1990; Buttenmeyer y colaboradores, Ann . Plástic Surgery 35: 396-401, 1995) o un injerto de nervio artificial (Madison y Archibald, Exp. Neurol. 128: 266-275, 1994 Wells y colaboradores, Exp. Neurol. 146: 395-402, 1997). El espacio entre los extremos transectados del nervio periférico o médula espinal se rellenan de preferencia con un material no celular para rellenar huecos, tal como colágeno, metilcelulosa, etc., o suspensiones celulares que promuevan el crecimiento de la célula nerviosa, tal como células de Schwann (Xu y colaboradores, J. Neurocytol. 26: 1-16, 1997), células olfativas y células envolventes (Li y colaboradores, Science 277: 2000-2002, 1997). El agente promotor del crecimiento nervioso puede incluirse junto con dichos materiales celulares o no celulares para rellenar huecos, o bien administrarse sistémicamente antes, durante o después del procedimiento de injerto de nervio.- En particular, el Compuesto (I) resulta útil para tratar o prevenir la polimiositis por disfunción o daño neuronal (miositis múltiple) , síndrome de Gullain Barre, enfermedad de Meniere, polineuritis (neuritis múltiple) , mononeuritis (neuritis solitaria) , mal de Alzheimer, mal de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , enfermedad de Huntington, radiculopatía , neuropatía diabética, neuropatía inducida por quimioterapia, demencia senil, demencia vascular, esclerosis múltiple, parálisis física o lesión en la médula espinal . Los 'siguientes ejemplos ilustran la presente invención en detalles adicionales. Debe comprenderse que estos ejemplos describen ciertos aspectos o formas de realización de la invención pero no pretenden limitar el alcance de la misma.

Ejemplo 1: El tratamiento con el Compuesto (I) aumenta significativamente las longitudes de neurita en las neuronas del hipocampo Preparación de cultivos celulares: Se obtuvieron neuronas de hipocampo embrionales de cría de rata en el día embrional 18.5 ("E 18.5"), de acuerdo con Banker y Cowan (Brain Research, 1917, 126: 397-425) . En breve, las regiones del hipocampo se retiraron, trituraron e incubaron .en papaina 100 I.U. a 37 °C durante 45 minutos, y las células se resuspendieron en un medio neuronal completo: medio esencial mínimo sin L-glutamina (GIBCO, Grand Island, NY) , un medio 1.-5 ml/100 mi del medio esencial mínimo de glucosa alta (GIBCO), un medio 0.1ml/100 mi de extensor del suero (Hito + Tm; Collaborative Research Inc., Lexington, MA) , glutamina (GIBCO), suero bovino fetal al 5% (GIBCO).' Las células se sembraron sobre cubreobjetos (500 células por cubreobjeto) recubiertos con poli-L-lisina . Los cubreobjetos se invirtieron sobre platos que- habían sido previamente recubiertos con una capa única de astrocitos corticales .

Análisis de longitudes axonales en neuronas del hipocampo: Se examinaron neuronas del hipocampo (identificadas por sus dendritas y polaridad características) diariamente y se fotografiaron al azar (9-12 cuadros por cubreobjetos) a las 72 horas. Las longitudes de axón (definidas como el proceso más extenso) se midieron sobre impresiones fotográficas empleando una tableta digitalizadora HI-PAD de Houston Instrument conectada a una computadora IBM XT equipada con software adecuado (Bioquant IV, R & M Biometrics, Nashville, TN) ; sólo se midieron los procesos de más de tres veces la longitud del cuerpo celular. La información proveniente de cubreobjetos tratados de idéntica manera (tres o cuatro por grupo) no resultó diferente, y por lo tanto se combino." Se calcularon los valores promedio y se les comparó por medio de A-NOVA de sentido único (grupos tratados con el Compuesto (la) o tacrolimus contra un grupo de control no tratado) , seguido por un test de múltiples comparaciones de Newman Kuels ( ENKS 4.62, edición profesional ) .

Resultados: A las 72 horas, no hubo diferencia significativa entre el grupo de control no tratado y el grupo tratado con ???? del tacrolimus. Sin embargo, el grupo tratado con una concentración de ???? del Compuesto (la) ' provocó un aumento estadísticamente significativo en las longitudes de las neuritas. Véanse los resultados en la Tabla I a continuación: Tabla 1: Efectos del Compuesto (la) y tacrolimus sobre las longitudes de neurita promedio en cultivo de células de hipocampo primario en ratas a las 72 horas.

*-= P < 0,05 contra Sin Tratamiento (ANOVA de sentido único seguido por test de múltiples comparaciones Newman-Kuels) Ejemplo 2: El tratamiento con el Compuesto (I) aumenta las longitudes de neurita promedio en células de neuroblastoma humano SH-SYSY Preparación de cultivos de células de neuroblastoma SH-SY5Y: Se mantuvieron células de neuroblastoma humano SH-SYSY en un medio DME (GIBCO) , complementado con suero bovino fetal al 10% ( SIGMA) , 50 I . U . /mi de penicilina y 50 ug/ml de estreptomicina (GIBCO) a 37 °C en 7% C02. Las células se colocaron en placas de seis cavidades a una razón de 15.000 células por cavidad, y se trataron con 0.4 uM de afidicolina (SIGMA) . A los 5 dias, las células se lavaron y trataron 'con factor de crecimiento nervioso (NGF) a 10 ng/ml (para inducir la regeneración del proceso) en presencia o ausencia de tacrolimus (10 nM) o Compuesto (la) (1 nM) . El medio se cambio a las 96 horas y se le reemplazó con un medio fresco durante 72 horas adicionales (tiempo total: 168 hs) . Se efectuaron cavidades duplicadas en todos los experimentos, y la información se promedió para cada grupo de tratamiento.

Análisis de longitudes de neurita en células de neuroblastoma SH-SY5Y: Para el análisis de la longitud del proceso, se fotografiaron células (20 campos por cavidad) al azar a las 168 hs. Las longitudes de neurita se midieron sobre impresiones fotográficas por medio de una tableta digitalizadora HI-PAD de Houston Instrument conectada a una computadora IBM X . Equipada con el software apropiado (Bioquant IV, R & M Biometrics, Nas ville, TN) ; se midieron sólo los procesos de mas de dos veces la longitud del cuerpo celular. La información proveniente de cavidades tratadas de idéntica manera no resultó diferente, y por lo tanto se combinó. Se calcularon los valores-promedio y se los comparó a través de un ANOVA de sentido único (muestras tratadas con el Compuesto (la) o tacrolimus contra muestras tratadas con NGF solamente), seguido por un test de múltiples comparaciones de Newman-Kuels (WINKS 4.62, edición profesional) .

Resultados : La medición de las longitudes de los procesos de neurita demostró que tanto el Compuesto (la) (1 nM) como el tacrolimus (10 nM) aumentó de manera significativa la longitud de los procesos de neurita a las 168 horas en comparación con NGF (10 ng/ml) solo. Sin embargo, los efectos de 1 nM de Compuesto (la) en combinación con NGF fueron superiores a los efectos de 10 nM de tacrolimus en combinación con NGF. Tabla 2: Efecto del Compuesto (la) y tacrolimus sobre las longitudes promedio de neurita en células de neuroblastoma humano SH-SY5Y a las 168 horas.

Longitudes de neurita (µ??) Sin tratamiento 94,75 ± 3,734 NGF (lO ng/mJ) 198,8 ± 8,991 Tacrolimus (10 nM) + NGF (10 ng/ml) 227,6 1 9,130 * Compuesto (la) (1 nM) + NGF (10 ng.ml) 256,0 ± 9,067 * * = P < 0.05 contra NGF (ANOVA de sentido único seguido por test de múltiples comparaciones Newman-Kuels) .

Ejemplo 3: El tratamiento con el Compuesto (I) promueve la recuperación funcional en el modelo de compresión de nervio ciático en la rata.

Animales y procedimiento quirúrgico: Se anestesiaron nueve ratas Sprague-Dawley macho de seis semanas de edad con halotano al 2%, se expuso el nervio ciático derecho y el mismo se comprimió dos veces (por un total de 60 s empleando fórceps de joyero Dumont nro.7), al nivel de la cadera El lugar de compresión se marcó atando una sutura 9-0 estéril a través de la envoltura epineural.

Preparación- del Compuesto (la) y administración: Se disolvió Compuesto (la) en un vehículo que comprendía 30% de dimetilsulfóxido (DMSO) y 70% de solución salina. Tres ratas axotomizadas recibieron inyecciones subcutáneas diarias del Compuesto (la) (1 o 5 mg/kg) o un volumen equivalente de vehículo (30% DMSO en solución salina) (5 ml/kg) .

Evaluación de la conducta: Los animales se examinaron a diario hasta el día de la perfusión (18 días) . Se usó la siguiente . escala semi cuantitativa para evaluar la recuperación funcional de los animales : 0 rparálisis, con el pie rotado hacia fuera al caminar y los dedos curvados 1: capacidad de enderezar el pie y mover los dedos 2 : capacidad de caminar constantemente sobre el pie 3: demuestra separación de los dedos al caminar 4 : camina levantando el talón y exhibe una separación de los dedos casi normal. Los animales que demostraron capacidades intermedias fueron asignados " punta es parciales: + = 0.25; ++ = 0.5; +++ = 0.75.

Fijación de tejido y preparación: 18 días luego de la compresión del nervio, las ratas se anestesiaron profundamente con halotano 4%, se heparinizaron y perfundieron con para formaldehído al 4% en 0.1 de regulador de fosfato sódico (pH 7.4) durante 10 s, seguido por glutaraldehido al 5% (IL) en 0.1 M de regulador de fosfato sódico (pH 7.4), y se fijó a 4°C durante 24 hs. Se tomaron muestra de tejido del nervio ciático a una distancia conocida (5 mm) del lugar de compresión. En el presente estudio, sólo se reporta la información de la ramificación del nervio tibial posterior que provee al músculo soleo. Los tejidos se colocaron en 01 M de regulador de fosfato sódico (pH 7.4), se fijaron posteriormente con tetraóxido de osmio al 1% (en 0.1 M de regulador de fosfato) durante 2.5 horas, se deshidrataron en etanol y se hundieron en plástico. Las secciones semi delgadas se mancharon con uranil acetato y citrato de plomo, se montaron sobre grillas de malla 75 sostenidas sobre film, y se examinaron en un microscopio JEOL 100 CX de electrones.

Análisis orfométrico : El análisis de los calibres axonales se llevó a' cabo en el nervio soleo Las cantidades de axones mielinados regenerantes se contaron por medio de microscopía por electrones. Se calcularon los valores promedio y los errores estándar para el grupo tratado con vehículo, el grupo tratado con Compuesto (la) (1 mg/kg) y el grupo tratado con Compuesto (la) (5 mg/kg) .

Análisis estadístico: Para el análisis de la conducta, los valores promedio para la recuperación de la función se compararon empleando ANOVA de sentido único seguido por el test de múltiples comparaciones Newman Keuls, para comparar valores individuales. Para el análisis morfométrico, los valores promedio para la cantidad de axones se compararon empleando "ANOVA de sentido •único seguido por el test de múltiples comparaciones Newman Keuls, para comparar valores individuales. ' Resultados : Recupe-ración funcional La recuperación funcional se observó en los días 15-17 y tuvo lugar mas temprano en las' ratas tratadas con 1 mg/kg y con 5 mg/kg que en ratas tratadas con vehículo. Véase la tabla 3 a continuación.

Tabla Efecto del Compuesto (la) sobre la recuperación funcional del daño' en nervio ciático en ratas P < 0,05 contra Vehículo (ANOVA de sentido único seguido por test de múltiples comparaciones Newman Kuels.

Microscopía por electrones La examinación morfológica de los animales se llevó a cabo 18 días luego de la axotomía. Las ¡cantidades de axones mielinados regenerantes por área ' de nervio (5.000 µp?2) aumentaron ' de manera radical desde 5.5 ± 2.7' (promedio ± SE ) en las ratas tratadas con vehículo? a 19 ± 2.4 -y 20 ± 2.9 en las ratas tratadas con 1 y 5 mg/kg respectivamente (P < 0.05) . Véase la Tabla 4 a continuación.

Tabla 4: Efecto del compuesto (la) sobre las. cantidades de axones mielinados regenerantes por área de nervio (5.000 um2} en el nervio soleo 18 días desp'ués'füe la compresión del nervio ciático en ratas *:P < 0.05 contra Vehículo (ANOVA de sentido único seguido por test de múltiples comparaciones Newman Kuels.

Ejemplo 4: El tratamiento con el compuesto (I) promueve la recuperación funcional en el modelo de daño en médula espinal en ratas. (1) Métodos - - ' " ' - · Animales y procedimiento quirúrgico - _ Se anestesiaron 28 ratas Sprague Dawley. macho de seis semanas de edad con halotano al. 2%, se les efectuó una laminectomia en T10/T11 y un daño hemiseccional en la médula espinal al nivel de. la médula espinal T10/T11.

Preparación del compuesto (la) y administración El compuesto (la) se disolvió en un vehículo que comprendía 30% de dimetilsulfóxido (D SO): 70% de solución salina. Las ratas lesionadas en la médula espinal recibieron inyecciones diarias subcutáneas del compuesto (la) (2 mg/kg) o un volumen equivalente de vehículo (30% de DMSO en solución salina) (5 ml/kg) durante siete semanas luego de la cirugía.

Evaluación de 'la recuperación funcional Se evaluó la recuperación funcional por medio de una escala Tarlov/Klinger , test de barras angostas y prueba de huellas a las 2 semanas posteriores a la lesión.

?. Escala Tarlov Klinger modificada Se permitió a las ratas moverse libremente en un campo abierto durante un minuto y se clasificaron de 0 a 6 de acuerdo con la escala que.se presenta a continuación. 0: sin movimiento de la extremidad -posterior lesionada . " * . . .1:' movimiento _ apenas perceptible".en - la extremidad posterior lesionada -.' ' 2: movimientos ' breves en las. " articulaciones de la extremidad posterior lesionada (cadera, rodilla o- tobillo) pero ausencia de coordinación y soporte del peso 3: pasos y movimientos de propulsión alternados de la extremidad posterior lesionada ausencia de soporte del peso 4: puede soportar el peso sobre la extremidad posterior lesionada 5: camina con u déficit apenas leve 6: camina normalmente B. Prueba sobre barras angostas Se realizó una prueba con las ratas sobre barras angostas (de 1.5 m de longitud) de anchó decreciente: 7.7 cm, 4.7 cm, 2.7 cm y 1.7 cm. Se permitió a las ratas caminar sobre las barras y se registró la barra más angosta sobre la cual pudiesen caminar sin caerse en al menos dos recorridos . 0: no puede caminar sobre ninguna barra"- 1 : puede caminar sobre la barra de 7.7 cm 2: puede caminar sobre la barra de 4.7 cm 3: puede caminar sobre la barra de 2.7 cm 4: puede caminar sobre la barra de 1.7 cm C. Prueba de huellas Se mancharon con tinta las extremidades posteriores de las ratas y se marcó la huella sobre papel, cubriendo una pasarela estrecha de 60 cm de longitud y 7.5 cm de ancho. Se usó una serie de al menos seis pasos secuenciales para determinar el puntaje de huellas sobre 5 puntos. 0: constante paso dorsal o arrastre de la extremidad posterior, es decir no se distingue huella 1: hay huellas visibles de al menos tres dedos en al menos tres huellas de pisada 2 : muestra exo- o endo- rotación de los pies de un valor más del doble en comparación con sus propios valores de linea base 3: no muestra signos de arrastre de los dedos, pero si rotación del pie 4 : no muestra signos de exo- o endo- rotación (menos de dos veces el ángulo de los valores de linea base) , pero se ve más de una huella de talón. 5: no hay huellas de talón visibles .

Análisis estadístico Para el análisis de conducta, se compararon los valores promedio para el puntaje de cada test funcional, empleando ANOVA de sentido único seguido por el test de múltiples comparaciones de Newman Keuls para comparar los valores individuales . (2) Resultados Recuperación funcional En las tres mediciones de la recuperación funcional llevadas a cabo por medio de una escala Tarlov Klinger modificada (Tabla 5) , prueba sobre barras angostas (Tabla 6) y prueba de huellas (Tabla 7), el compuesto (la) mejoró la discapacidad funcional motriz en una escala Tarlov Klinger modificada (Tabla 5), prueba sobre barras angostas (Tabla 6) y prueba de huellas (Tabla 7) .

Tabla 5: Efecto del compuesto (la) sobre el puntaje Tarlov Klinger modificado de daño en médula espinal en ratas *: P < 0.05 contra Vehículo (ANOVA de senticfo único seguido por test de múltiples comparaciones Newman Kuels) . Tabla 6: Efecto del compuesto (la) sobre el puntaje sobre barras angostas de daño en médula espinal en ratas *: P < 0.05 contra Vehículo (ANÓVA de sentido - único seguido por test de múltiples comparaciones Newman Kuels) .

Tabla 7: Efecto del compuesto (la) sobre el puntaje de huellas de daño -en médula espinal en rata-s * : P < 0.05 contra Vehículo (ANOVA de sentido único seguido por test de múltiples comparaciones Newman Kuels).

Ejemplo 5: El Compuesto (la) se enlaza con FIBP12 pero, a direrencia del tacrolimus, ejerce poco o ningún efecto inmunosunresor (1) Ensayo de enlace con FKBP12 El ensayo de enlace se llevó a cabo de manera similar a la que se explica en Tamura, K y colaboradores (Biochemical arid Biophysical Research Communications, Vol 202, No. 1, 437-499, 1994) . Los resultados se muestran en la Tabla 8. (2) Reacción de linfocito mixta (MLR) El test de MLR se llevó a cabo de manera similar a la que se explica en la Patente Estadounidense No. 4.929.611. Los resultados se exhiben en la Tabla 8. Tabla 8: Perfiles farmacológicos del compuesto (la) y tacrolimus in vitro Estos resultados indican que el compuesto (la) no posee actividad inmunosupresora a pesar de que puede enlazarse con FKBP12. Los resultados exhibidos más arriba ilustran los potentes efectos neurotróficos del Compuesto (I) empleando modelos tanto in vitro como in vivo. En dos modelos de cultivo celular, el Compuesto (I) incluso en bajas concentraciones, aumentó el crecimiento de neuritas. Además, la administración sistémica del Compuesto (I) en bajas dosis aceleró la recuperación funcional luego de una lesión por compresión de nervio, al aumenta-r la velocidad de regeneración axonal en el nervio ciático, y promovió la recuperación funcional del daño en la 'médula espinal. Además, como ya se mostró más arriba., el compuesto (I) brinda una potente actividad neurotrófica o estimuladora del crecimiento celular en el nervio, a pesar de que no posee actividad inmunosupresora . De acuerdo con lo cual, la, presente invención brinda un agente neurotrófico útil para estimular o promover el crecimiento o regeneración neuronal, en particular cuando no se desea un efecto inmunosupresivo o el mismo ' no resulta ventajoso. Otros aspectos de la presente invención incluyen: Un articulo- de fabricación que comprende material de envasado y Compuesto (I) identificado en el mismo, dentro de dicho material de envasado, en el cual dicho Compuesto (I) resulta terapéuticamente efectivo para prevenir o tratar disfunciones neuronales, y en el cual dicho material de envasado comprende una etiqueta o material escrito que indique que el Compuesto (I) puede o debe usarse para prevenir o tratar la disfunción o el daño neuronal. Un envasado comercial que comprende la composición farmacéutica que contiene el Compuesto (I) identificado en el mismo, y un material escrito ¦ relacionado con ello, en el cual el material escrito enuncia que el Compuesto (I) puede o debe usarse para prevenir o tratar la disfunción o el daño neuronal.

Una composición, tal como un injerto,—- tejido o suspensión celular que comprende una célula tratada con el Compuesto (I) . Tales composiciones son útiles para reparar el daño al sistema ner\^ioso. Esas composiciones también pueden incluir otros agentes estimuladores del crecimiento de la célula nerviosa, como por ejemplo otros tipos de suspensiones celulares que promueven o colaboran con el crecimiento de la célula nerviosa, tales como las células productoras de mielina como las células Sch ann u oligodendrocitos, células gliales y células envolventes; material de matriz ex~racelular , como el colágeno; u _ otros neurorreguladores específicos como las citoquinas, factores mitogénicos, inmunofilinas y neurotrofinas, como NGF-1 , BDNF, CNTF, NT-3, NT-4 y NT-5. Los injertos, como los homoinj ertos , aloinjertos o xenoinjertos también pueden tratarse con el Compuesto (I) a fin de facilitar el crecimiento neuronal y su uso como transplantes o en otras aplicaciones .

Incorporación por Referencia El contenido de cada documento, solicitud de Patente o publicación de Patente citado o a que se haya hecho referencia en esta descripción, se incorpora por referencia en su totalidad. El contenido de cualquier documento de Patente ante el cual esta solicitud reclame prioridad, también se incorpora por referencia en su totalidad. Específicamente, el contenido de la Solicitud Provisional Estadounidense No. 60/258.500 se incorpora por referencia.

Modificaciones y otras formas de realización Resultará evidente que son posibles numeros.as modificaciones y variantes de la presente invención a la luz de las enseñanzas explicadas. Por lo tanto, debe comprenderse que dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, la invención puede ponerse en práctica de manera diferente a laque se describe específicamente en la presente. Varias modificaciones y variantes de las composiciones y métodos descritos, asi como el concepto de la invención, resultarán evidentes para aquellos con experiencia en la técnica, sin apartarse del alcance y espíritu de la invención. Si bien la invención ha sido descrita en relación con formas de realización especificas preferidas, debe comprenderse que la invención, tal como se reivindica, no pretende limitarse a dichas formas de realización especificas. Varias modificaciones de los modos descritos para llevar a cabo la invención, que resultan obvios para aquellos con experiencia en las artes médicas, biológicas, químicas o farmacológicas o sus campos relacionados, también quedan comprendidas dentro del alcance de la presente invención.

Claims

REIVINDICACIONES
Uso de un compuesto con la siguiente fórmula para la fabricación de un agente neurotrófico . 2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el agente neurotrófico es para prevenir o tratar la disfunción o el daño neuronal
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el agente neurotrópico es para estimular o promover la regeneración o crecimiento de la célula nerviosa.
4. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el agente neurotrópico es para promover la recuperación funcional del daño en un nervio.
5. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual la disfunción o daño neuronal es poliiaiositis (miositis múltiple), síndrome de Guillan Barré, enfermedad de Meniere, polineuritis (neuritis múltiple) , mononeuritis (neuritis solitaria) , mal de Alzheimer, mal de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , enfermedad de Huntington, radiculopatia, neuropatía diabética, neuropatía inducida por quimioterapia, demencia senil, demencia vascular, esclerosis múltiple, parálisis física o daño en la médula espinal.
6. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual la disfunción o el daño neuronal son mal de Alzheimer, mal de' Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, neuropatía diabética, neuropatía inducida por quimioterapia o daño en la médula espinal.
7. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el compuesto (I) se presenta en forma de su sal farmacéuticamente aceptable, derivado, pro-droga o solvato.
8. Composición que comprende el compuesto (I) y posee la siguiente fórmula:
9. Composición de acuerdo con la reivindicación 8, en la cual el compuesto (I) se presenta en forma de su sal farmacéuticamente aceptable, derivado, pro-droga o solvato.
10. Composición de acuerdo con la reivindicación 8, en la cual el compuesto (I) se presenta en forma del compuesto da) .
11. Composición de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende además al menos otro agente neurotrófico .
12. Artículo de fabricación o un kit, que comprende material de envasado y compuesto (I) contenido dentro de dicho material de envasado, en el cual dicho material de envasado comprende una etiqueta o material escrito que indica que dicho compuesto (I) puede o debe usarse para prevenir, mejorar o tratar la disfunción o el daño neuronal.
13. Envasado comercial o kit que comprende: una composición farmacéutica que comprende el compuesto (I) y material escrito' asociado con la misma, en el cual el material escrito enuncia que el compuesto (I) puede o debe usarse para prevenir, mejorar o tratar la disfunción o el daño neuronal.
14. Método para realizar o fabricar un agente neurotrófico que comprende mezclar el compuesto (I) con un portador, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptables.
15. Método para estimular o promover la regeneración o el crecimiento de la célula nerviosa, que comprende poner en contacto una célula nerviosa con el compuesto (I) .
16. Método para aumentar la velocidad de regeneración o crecimiento axonal, o longitud de la célula nerviosa, que comprende poner en contacto una célula nerviosa con el compuesto ( I ) .
17. Método para aumentar el crecimiento de la célula nerviosa en un tejido con necesidad del mismo, que comprende administrar el compuesto (I) a dicho tejido.
18. Método de acuerdo con la reivindicación 17, en el cual dicho tejido se selecciona entre el grupo que consiste en tejido cerebral, tejido de la médula espinal o tejido de nervio periférico.
19. Método para reparar un nervio periférico o médula espinal transectados , que comprende poner en contacto los extremos transectados de dicho nervio periférico o médula espinal con una cantidad efectiva del compuesto (I)
20. Método para reparar un nervio periférico o médula espinal transectados en un sujeto, que comprende: administrar una cantidad estimuladora del crecimiento del nervio, del compuesto (I) a dicho sujeto, e injertar en el nervio periférico o médula espinal.
21. Método de acuerdo con la reivindicación 20, en el cual dicho injerto es un aloinjerto.
22. Método de acuerdo con la reivindicación 20, en el cual dicho injerto es un injerto de nervio artificial.
23. Método de acuerdo con la reivindicación 20, que comprende además rellenar el espacio entre los extremos transectados del nervio periférico o médula espinal, con un material no celular para rellenar huecos
24. Método de acuerdo con la reivindicación 20, que comprende además rellenar el espacio entre los extremos transectados del nervio periférico o médula espinal, con una suspensión celular.
25. Composición que comprende una célula nerviosa tratada con el compuesto (I).
26. Tejido que comprende una célula nerviosa tratada con el compuesto (I) .
27. Injerto que comprende una célula nerviosa tratada con el compuesto (I) .
28. Injerto de acuerdo con la reivindicación 27, en el cual dicho injerto es un homoinjerto, aloinjerto o xenoinjerto.
29. Método para reparar un nervio periférico o médula espinal transectados que comprende poner en contacto los extremos transectados de dicho nervio periférico o médula espinal con una cantidad efectiva de una composición que comprende una célula tratada con el compuesto (I) .
30. Composición que comprende una célula, tejido o injerto tratados con el compuesto (I) y, al menos, un agente promotor del crecimiento de la célula nerviosa.
31. Composición de acuerdo con la reivindicación 30, en la cual dicho agente promotor del crecimiento de la célula nerviosa se selecciona entre el grupo que consiste en una suspensión celular que promueve el crecimiento neuronal, un material no celular para rellenar huecos, o un factor de crecimiento del nervio.
32. Composición de acuerdo con la reivindicación 30, que comprende colágeno o metil celulosa como un agente promotor del crecimiento del nervio.
33. Composición de acuerdo con la reivindicación 30, que comprende una suspensión celular como un agente promotor del crecimiento del nervio.