MXPA02010701A

MXPA02010701A - Proceso de sintesis para la fabricacion de un compuesto de ecteinasquidina.

Info

Publication number: MXPA02010701A
Application number: MXPA02010701A
Authority: MX
Inventors: Carmen Cuevas
Original assignee: Pharma Mar Sa
Priority date: 2000-05-15
Filing date: 2001-05-15
Publication date: 2003-05-14
Also published as: KR20030005308A; KR100777464B1; PT1496060E; HUP0300648A2; HK1050193A1; AU783563B2; EA200201210A1; DE60112286T2; AU5649301A; DE60107241D1; EA006369B1; DK1287004T3; ATE300547T1; DE60129753T2; ES2290583T3; DK1289999T3; KR20030031481A; DK1496060T3; PL358258A1; GB9918178D0

Abstract

Se provee procesos para preparar compuestos con una estructura de anillo fundido de la formula (XIV): (ver formula) Dichos productos incluyen las ecteinascidinas y tienen un puente de espiroamina-1.4. El proceso comprende formar un puente en 1,4, usando un compuesto de anillo fundido 1-labil, 10-hidrosol, 18-hidroxi- protegido, di-6,8-en-5-ona. Despues de la formacion del puente 1.4, se elimina la proteccion en C-18 antes de la introduccion de la espiroamina.

Description

PROCESO DE SÍNTESIS PARA LA FABRICACIÓN DE UN COMPUESTO DE ECTEINASQUIDINA La presente invención se refiere a procesos de síntesis y, en particular, se refiere a procesos de síntesis para producir compuestos de ecteinascidina.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La patente europea 309,477 se refiere a ecteinascidinas 729, 743, 745, 759A, 759B y 770- Se describe que los compuestos de ecteinascidina tienen propiedades antibacterianas y otras propiedades útiles. La ecteinascidina 743 está ahora bajo ensayos clínicos como un agente antitumoral. La ecteinascidina 743 tiene una estructura compleja de tris(tetrahidroisoquinolinfenol) de la fórmula (I): Se prepara actualmente mediante aislamiento a partir de los extractos del tunicado marino Ecteinascidin turbinata. El rendimiento es bajo y se ha estado buscando procesos alternos de preparación. Un proceso de síntesis para producir compuestos de ecteinascidina está descrito en la patente_esiadounidense 5,721,362; véase también WO 9812198, la cual queda incorporada aquí en su totalidad por medio de esta referencia. El método reivindicado es largo y complicado, haciendo 38 ejemplos, cada uno de los cuales describe uno o más pasos en la secuencia de síntesis para llegar a la ecteinascidina 743. En el procedimiento de síntesis conocido se forma un puente 1,4 usando un compuesto de anillo fundido 1 -lábil, 10-hidroxi, 18-hidroxi protegido, di-6,8-en-5-ona. Como se muestra en el ejemplo 33, se convierte un compuesto (13) al compuesto (14): De acuerdo con el proceso de síntesis conocido, se forma entonces una espiroquinolina en el puente 1,4 mediante los pasos de los ejemplos 34 a 36, y se elimina el grupo protector 8-MON para dar la ecteinascidina 770, que puede ser convertida entonces a ecteinascidina 743. La reivindicación 25 de US 5,721,362 está dirigida a un compuesto fenólico intermediario de una fórmula dada (11), al que se hará referencia aquí también como el intermediario 11, o lnt-11. Tiene la siguiente estructura de bis(tetrahidroisoquinolinofenol) (II): en la que MOM es un sustituyente metoximetilo y TBDPS es un sustituyente terbutildi fe ni Isi lilo. Es posible, a partir del intermediario 11, sintetizar otro agente antitumoral interesante, la ftalascidina; véase Proc. Natl.

Acad. Sci USA, 96, 3496-3501, 1999. La ftalascidina es un derivado de bis(tetrahidroisoquinolinofenol) de la fórmula (lll): En las ecteinascidinas 743 y 770, el puente 1,4 tiene la estructura de la fórmula (IV): Otras ecteinascidinas conocidas incluyen compuestos con diferente sistema anular cíclico con puente, tal como ocurre con las ecteinascidinas 722 y 736, donde el puente tiene la estructura de la fórmula (V): y con las ecteaniscidinas 583 y 597, en las que el puente tiene la estructura de la fórmula (VI): y con las ecteinascidinas 594 y 596, en las que el puente tiene la estructura de la fórmula (Vil): La estructura completa para estos compuestos y otros relacionados está dada en J. Am. Chem. Soc. (1966) 118, 9017-9023.

Ese artículo queda incorporado aquí por medio de esta referencia. Otras citas en la literatura acerca de los compuestos de ecteinascidina incluyen: Corey, E. J., J. Am. Chem. Soc, 1996, 118 páginas 9292-9203; Rinehart y coautores, Journal of Natural Products, 1990, "Bioactive Compounds from Aquatic and Terrestrial Sources", tomo 53, páginas 771-792; Rinehart y coautores, Puré and Appl. Chem., 1990, "Biologically active natural products", tomo 62, páginas 1277-1280; Rinehart y coautores, J. Org. Chem., 1990, "Ecteinascidins 729, 743, 745, 759A, 759B and 770: potent Antitumour Agents from the Caribean Tunicate Ecteinascidia turbinata", tomo 55, páginas 4512-4515; Wright y coautores, J. Org. Chem., 1990, "Antitumour Tetrahydroisoquinoline Alkaloids from the Colonial ascidian Ecteinascidia turbinata", tomo 55, páginas 4508-4512; Sakai y coautores, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, "Additional antitumor ecteinascidins from a Caribean tunicate: Crystal structures and activities in vivo", tomo 89, 11456-11460; Science 1994, "Chemical Prospectors Scour the Seas for Promising Drugs", tomo 266, página 1324; Koenig, K. E. "Asymmetric Synthesis", ed. Morrison, Academic Press, Inc., Orlando, FL, tomo 5, 1985, página 71; Barton y coautores, J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1, 1982, "Synthesis and Properties of a Series of Sterically Hindered Guanidine bases", páginas 2085; Fukuyama y coautores, J. Am. Chem. Soc, 1982, "Stereocontrolled Total Synthesis of (+)-Saframycin B", tomo 104, páginas 4957; Fukuyama y coautores, J. Am. Chem. Soc, 1990, "Total Synthesis of (+)-Saframycin A", tomo 112, página 3712; Saito y coautores, J. Org. Chem., 1989, "Synthesis of Saframycins. Preparation of a Key tricyclic Lactam Intermedíate to Saframycin A", tomo 54, 5391; Still y coautores, J. Org. Chem., 1978, "Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Modérate Resolution", tomo 43, página 2923; Kofron, W. G.; Baclawski, L. M., J. Org. Chem., 1976, tomo 41, 1879; Guan y coautores, J. Biomolec. Struc. & Dynam., tomo 10, páginas 793-817 (1993); Shamma y coautores, "Carbon-13 NMR Shift Assignments of Amines and Alkaloids", página 206 (1979); Lown y coautores, Biochemistsry, 21, 419-428 (1982); Zmijewski y coautores, Chem. Biol. Interactions, 52, 361-375 (1985); Ito, CRC Crit Rev. Anal. Chem., 17, 65-143 (1986); Rinehart y coautores, "Topics in Pharmaceutical Sciences 1989", páginas 613-626; D. D. Breimer, D. J. A. Cromwelin, K. K. Midha, Eds., Amsterdam Medical Press B. V., Noordwijk, Países Bajos (1989); Rinehart y coautores, "Biological Mass Spectrometry", 233-258 eds. Burlingame y otros, Elsevier Amsterdam (1990); Guan y coautores, Jour. Biomolec. Struct. & Dynam., tomo 10, páginas 793-817 (1993); Nakagawa y coautores, J. Am. Chem. Soc, 111: 2721-2722 (1989); Lichter y coautores, "Food and Drugs from the Sea Proceedings" (1972), Marine Technology Society, Washington, D. C. 1973, 117-127; Sakai y coautores, J. Am. Chem. Soc, 1996, 118, 9017; García-Rocha y coautores, Brit. J. Cáncer, 1996, 73:875-883; y Pommier y coautores, Biochemistry, 1996, 35: 13303-13309. Se conoce otros compuestos que carecen de un sistema cíclico con puente. Incluyen los antibióticos antitumorales-antimicrobianos de bis(tetrahidroisoquinolinoquinona) safracinas y saframicinas, y las renieramicinas y xestomicina, productos naturales marinos, aislados de microbios cultivados o esponjas. Todos ellos tienen una estructura de carbono tetrahidroisoquinolínico dimérico, común. Estos compuestos pueden ser clasificados en cuatro tipos, los tipos I a IV, con respecto al patrón de oxidación de los anillos aromáticos. El tipo I, las isoquinolinoquinonas diméricas, es un sistema de la fórmula (VIII), que ocurre muy comúnmente en esta clase de compuestos; véase la siguiente tabla I.

TABLA I ESTRUCTURA DE ANTIBIÓTICOS DE SAFRAMICINA TIPO I Sustituyentes Compuesto " R T4B~ R 7T R 25a R _5_~ R ^55-Safr amicina A H CN O O CH3 Saframicina B H H H O O CH3 Saframicina C H OCH3 H O O CH3 Saframicina G H OH CN O O CH3 Saframicina H H H CN OH CH2COCH I3 CH3 Saframicina S H H OH O O CH3 Saframicina Y3 W H CN NH2 H CH3 Saframicina Yd! H H CN NH2 H C2Hd Saframicina Adi H H CN O O C2H5 Saframicina Yd2 H H CN NH2 H H Saframicina Y2b H Qb CN NH2 H CH2 Saframicina Y2 -d H Qb CN NH2 H C2Hs Saframicina AH2 H H CN Ha OHa CH3 Saframicina AH2Ac H H CN H OAc CH3 Saframicina ?H? H H CN OHa Ha CH3 Saframicina A^Ac H H CN OAc H CH3 Saframicina AR3 H H H H OH CH3 3 Las asig naciones son i ntercambia bles . donde e l g ru po Q tiene la fórmu la ( IX): Se ve anillos aromáticos tipo I en las saframicinas A, B y C; G y H; y S aisladas de Streptomyces lavendulae, como componentes menores. Se conoce un derivado ciano de saframicina A, denominado cianoquinonamina, de los documentos japoneses Kokai JP-A2 59/225189 y 60/084288. Se produjo saframicinas Y3, Ydi, di e Yd2 mediante S. lavendulae, por biosíntesis dirigida, con suplementación apropiada del medio de cultivo. Los dímeros saframicinas Y2b e Y2_-d, formados enlazando el nitrógeno en el átomo de carbono 25 de una unidad con el átomo de carbono 14 de la otra, también han sido producidos en medios de cultivo suplementados de S. lavendulae. Las saframicinas ARt ( = AH2), un producto de reducción microbiana de saframicina A, en el átomo de carbono 25, producido por Rhodococcus amidophilus, también son preparadas mediante reducción química no estereoselectiva de saframicina A, mediante borohidruro de sodio, como una mezcla 1:1 de epímeros, seguida por separación cromatográfica (el otro isómero, AHT es menos polar). El producto de la reducción ulterior de saframicina AR3, 21-deciano-25-dihidro-saframicina A, ( = 25-dihidrosaframicina B), fue producido por la misma conversión microbiana. Otro tipo de conversión microbiana de saframicina A, que utiliza una especie Nocardia produjo saframicina B, y la reducción ulterior mediante una especie de Mycobacterium, produjo la saframicina AHtAc. También se ha preparado químicamente 25-O-acetatos de saframicina AH2 y AHi, para estudios biológicos. Los compuestos del tipo I de la fórmula (X) también han sido aislados de esponjas marinas; véase la tabla II.

TABLA II ESTRUCTURAS DE COMPUESTOS DEL TIPO I, PROCEDENTES DE ESPONJAS MARINAS Compuestos Sustituyentes R 14a ,14b .21 R Renieramicina A OH H H -C(CH3)=CH-CH3 Renieramicina B OC2H5 H H -C(CH3)=CH-CH3 Renieramicina C OH O O -C(CH3)=CH-CH3 Renieramicina D OC2H5 O O -C(CH3)=CH-CH3 Renieramicina E H H OH -C(CH3)=CH-CH3 Renieramicina F OCH3 H OH -C(CH3)=CH-CH3 xestomicina OCH3H H H -CH3 Las renieramicinas A-D fueron aisladas del extracto antimicrobiano de una esponja, una especie Reniera recolectada en México, junto con las isoquinolinas monoméricas bíogenéticamente relacionadas renierona y compuestos relacionados. La estructura de la renieramicina A fue asignada inicialmente con estereoquímica invertida en C-3, C-11 y C-13. Sin embargo, un examen cuidadoso de los datos de RMN con 1H para los nuevos compuestos relacionados renieramicinas E y F, aisladas de la misma esponja recolectada -.ea Palau, reveló que la junta anular de las renieramicinas era idéntica a la de las saframicinas. Este resultado condujo a la conclusión de que la estereoquímica anteriormente asignada a las renieramicinas A y D debe ser igual a la de las saframicinas. Se encontró la xestomicina en una esponja, una especie Xestospongia recolectada en aguas de Sri Lanka. Los compuestos del tipo II, de la fórmula (XI), con un anillo de hidroquinona reducido, incluyen las saframicinas D y F, aisladas de S. lavendulae, y las saframicinas Mx-1 y Mx-2, aisladas de Myxococcus xanthus. Véase la tabla lll. TABLA III COMPUESTOS TIPO II Compuesto Sustituventes Rl4a R14b R21 R25a R25b R25C Saframicina D O O H O O CH3 Saframicina F O O CN O O CH3 Saframicina Mx-1 H OCH3 OH H CH3 NH2 Saframicina Mx-2 H OCH3 H H CH3 NH2 Se encontró la estructura del tipo lll en los antibióticos safracinas A y B, aisladas de Pseudomonas fluorescens cultivado.

Estos antibióticos de la fórmula (XII) consisten de una subunidad tetrahidroisoquinolinoquinona, y de una subunidad tetrah id roisoqu inol inof enol. donde R21 es -H en la safracina A y -OH en la safracina B. La saframicina R, el único compuesto clasificado como estructura del tipo IV, también fue aislada de S. lavendulae. Este compuesto de la fórmula (XIII), que consiste de un anillo hidroquinona con una cadena lateral éster glicólico en uno de los oxígenos fenólicos, concebiblemente es un profármaco de saframicina A, debido a su toxicidad moderada.

Todos estos compuestos conocidos tienen un sistema fundido de cinco anillos (A) a (E), como se muestra en la siguiente estructura de la fórmula (XIV): 17 Los anillos A y E son fenólicos en las ecteinascidinas, y en algunos otros compuestos; mientras que en otros compuestos, principalmente en las saframicinas, los anillos A y E son quinólicos.

En los compuestos conocidos, los anillos B y D son tetrahidro, mientras que el anillo C es perhidro.

OBJETIVO DE LA INVENCIÓN Sigue habiendo necesidad de rutas alternativas de síntesis para los compuestos de ecteinascidina y compuestos relacionados. Dichas rutas de síntesis pueden proveer trayectorias más económicas para los agentes antitumor-ales conocidos, y también permiten la preparación de nuevos compuestos activos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a procesos de síntesis para la formación de intermediarios, derivados y estructuras relacionadas, de ecteinascidina o de otros compuestos de tetrahidroisoquinolinofenol. En un aspecto, la presente invención provee un proceso para preparar un producto de ecteinascidina, con un puente de espiroamina-1 ,4. El proceso comprende formar un puente 1,4-usando un compuesto de anillo fundido 1 -l bil, 10-hidroxi, 18-hidroxi protegido, di-6,8-en-5-ona; donde el anillo fundido tiene la fórmula (XIV). En la presente invención, se elimina la protección en C-18 antes de la introducción de la espiroamina. Los materiales de partida adecuados para los nuevos procesos de síntesis incluyen los compuestos relacionados con los alcaloides naturales de bis(tetrahidroisoquinolina). Dichos materiales de partida pueden ser preparados ya sea de las diferentes clases de antibióticos saframicina y safracina, obtenibles de diferentes caldos de cultivo, como se detalla en WO 0069862, o bien por otros procesos sintéticos o bioquímicos. Con respecto a ello, WO 0069862 queda incorporada aquí por completo, mediante esta referencia. La presente solicitud del TCP reclama la prioridad de la solicitud PCT/GB00/01852, que_íue publicada como WO 0069862. Se incorpora ese texto, por medio de esta referencia, en la medida en que haya descripción en él, que no se encuentre en la presente memoria descriptiva.

MODALIDADES PREFERIDAS DE LA INVENCIÓN En un aspecto particular, la presente invención está dirigida al uso del compuesto intermediario 21, en varios nuevos procesos de síntesis para la preparación de ecteinascidina 743, y compuestos relacionados: 21 El intermediario 21 tiene un grupo 5-aliloxi, donde el grupo alilo sirve para proteger el grupo 5-hidroxi. Se entenderá que se puede emplear fácilmente otros grupos protectores, y que la presente invención se extiende generalmente al uso de otros compuestos hidroxi 5-protegidos. FORMACIÓN DE ECTEINASCIDINA 743 Y COMPUESTOS RELACIONADOS En general, la conversión del intermediario 21, o un compuesto relacionado, al producto ecteinascidina, implica las siguientes transformaciones claves: (a) Conversión del NH2 a OH mediante reacción, por ejemplo, con nitrito de sodio en ácido acético. (b) Protección con fenol del anillo E. (c) Esterificación, protegiendo la función primaria 1-hidroxi, con una cadena lateral de cisteína protegida. (d) Desprotección del grupo alilo y oxidación. (e) Creación del anillo con puente, mediante reacción de ciclización. (f) Desprotección del fenol del anillo E y la porción cisteína. (9) Introducción de quinolina por transminación y reacciones de Petter Spengler. La elevada funcionalidad de los compuestos intermediarios hace necesario el uso de grupos protectores para el fenol del anillo E, y para la cadena lateral de cisteína, a fin de prevenir reacciones laterales indeseables. De tal manera, se puede generar muchos intermediarios alternativos, dependiendo de la selección particular de los grupos protectores. Son posibles diferentes secuencias posibles para combinar esas transformaciones, dependiendo primariamente de los grupos protectores seleccionados para el anillo fenol y para la amina dé la cadena lateral de cisteína. El número total de transforma.ci.on es sintéticas también es una función de los grupos protectores seleccionados. A manera de ilustración se describe a continuación el uso de diferentes combinaciones de grupos protectores, para seis rutas típicas para la preparación de ET-743 a partir del intermediario 21, también denominado aquí SF21. Ruta Protección Protección No. de de fenol. de cisteína pasos 1 MOM Boc 12 2 M MEEMM Boc 10 3 MEM Cbz 11 4 MOM Alloc 13 5 MEM Alloc 13 6 MOM Cbz 15 Como lo apreciará fácilmente quien sea experto en la materia, los esquemas de reacción descritos aquí pueden ser modificados y/o combinados de diversas maneras, y las secuencias alternativas de pasos y los compuestos generados a partir de ellas, son parte de la presente invención. Adicionalmente, el uso de otras estrategias de grupo protector, no detalladas, también es parte de la presente invención.

DETALLES DE PROCESO DE SEIS RUTAS TÍPICAS DE SÍNTESIS Los esquemas de reacción completos para cada ruta aparecen en los siguientes esquemas 1 a 6. ESQUEMA 1 - ET-743 : RUTA ALTERNATIVA 1 SEMISINTÉTICA ESQUEMA 2 - ET-743: RUTA ALTERNATIVA 2 SEMISINTÉTICA * ESQUEMA 3 - ET-743: RUTA ALTERNATIVA 3 SEMISINTETICA ESQUEMA 4 - ET-743: RUTA ALTERNATIVA 4 SEMISINTÉTICA ESQUEMA 5 - ET-743: RUTA ALTERNATIVA 5 SEMISINTÉTICA ESQUEMA 6 - ET-743: RUTA ALTERNATIVA 6 SEMISINTÉTICA En la ruta 1, se obtiene la protección del fenol del anillo E en tres pasos que implican protección/desprotección de la amina de SF21 con Troc. Para las rutas 1 y 2, la protección de la cadena lateral de cisteína con Boc permite que se desproteja el fenol y los grupos cisteína en u_n solo paso,^ enjugar _de como dos pasos separados.

Para el resto de las rutas, se requiere de un paso de desprotección adicional. Para la ruta 2, se evita el intermediario 25, mediante el uso de la metodología de esterificación directa y la protección subsiguiente del fenol con el grupo MEM. En las rutas 2 y 3, se retarda la protección del fenol del anillo E hasta después de los pasos de diazotación y esterificación, permitiendo de esa manera que se proteja el fenol en un solo paso, en lugar de mediante la secuencia de tres pasos de la ruta 1. Para las rutas 1, 2 y 3, la esterificación directa del alcohol primario con el derivado de cisteína elimina los pasos improductivos de protección/desprotección del alcohol primario con un grupo sililo (rutas 4 y 5), acortando de esa manera la secuencia en dos pasos. La ruta 6 solamente contempla aquí los pasos finales desde el intermediario 161, que puede ser obtenido fácilmente a partir del intermediario 21. En las rutas 4 y 5, el alcohol primario producido por el paso inicial de diazotación es protegido con silicio para permitir la protección selectiva del fenol del anillo E y evitar el intermediario 25. Después de la modificación del anillo A (desprotección/oxidación), se elimina el grupo silicio y se esterifica el alcohol primario con el derivado de cisteína. Estos cambios son una consecuencia directa de los — problemas que fueron encontrados en la escalada ascendente de la ruta dada en WO 0069862. Como resultado de estos cambios, toda la ruta 2 es tres pasos más corta y, por lo tanto, potencialmente más adecuada y/o más barata para la fabricación rutinaria.

RECAPITULACIÓN DEL PROCESO De esa manera, en vista de las rutas 1 a 6, la presente invención se extiende a un proceso para preparar un producto de ecteinascidina con un puente espiroamina-1 ,4; comprendiendo el proceso formar un puente 1,4 utilizando un compuesto de anillo fundido 1 -lá il, 10-hidroxi, 18-hidroxi-protegido, di-6,8-en-5-ona; donde se elimina la protección de C-18 antes de la introducción de la espiroamina. En una versión del proceso, el producto de ecteinascidina tiene un grupo 21-hidroxi, y el proceso incluye convertir un grupo 21- ciano al grupo 21-hidroxi. Típicamente la espiroamina es espiroquinolina, especialmente la espiroquinolina de ecteinascidina 743. En un proceso preferido, el grupo 8-protegido del compuesto de anillo fundido 1 -l bil, 10-hidroxi, 18-hidroxi-protegido, di-6,8-en-5-ona está protegido con el grupo MOM, metoximetilo; o con el grupo MEM, metoxietoximetilo. Adecuadamente, el grupo 1 -lábil es un grupo cisteiniloximetileno N-protegido de la fórmula: -CH2 -CO-CNHProt1-CH2-S-H En esta fórmula Prot1 es típicamente: Boc, terbutoxicarbonilo, Troc, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo, Cbz, benciloxicarbonilo o Alloc, aliloxicarbonilo. Con algunas modalidades del proceso, se elimina Prot1 en el mismo paso que la protección de C-18. Se puede generar el grupo 1 -lá il a partir de un 1-sustituyente de la fórmula: -CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2. En esta fórmula, Prot2 es típicamente Fm, 9-fluorenilmeti-lo. Se puede formar un 1-sustituyente de la fórmula: -CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2 mediante esterificación de un sustituyente -CH2-O-H. Se puede llevar a cabo la esterificación antes o después de la formación de la estructura 10-hidroxi, di-6,8-en-5-ona. En una versión, el proceso reivindicado se inicia a partir de un compuesto de anillo fundido 1-aminometileno, 5-hidroxi-protegido, 7,8-dioximetileno, 18-hidroxi, 21-ciano. El grupo 1-aminometileno puede ser protegido temporalmente para permitir la protección en el grupo 18-hidroxi, y se elimina la protección temporal. Alternativamente se puede proteger el grupo hidroxi en C- 18, después de la formación de una función 1-éster. En otra variación se convierte el grupo 1-aminometileno a un grupo 1-hidroximetileno, y se protege temporalmente el grupo 1-hidroximetileno, para permitir la protección en el grupo 18-hidroxi, y se elimina la protección temporal. La estructura de anillo fundido tiene adecuadamente la fórmula: especialmente cuando R15 es H. Uno o más, o la totalidad, de los sustituyentes restantes pueden ser como en la ecteinascidina 743.

SEMISINTESIS La invención permite el uso de un compuesto conocido, la safracina B, también denominada quinonamina, en la síntesis semisintética. Más generalmente, la invención se refiere a un proceso semisintético para la formación de intermediarios, derivados y estructuras relacionadas, de ecteinascidina u otros compuestos tetrahidroisoquinolinofenólicos, partiendo de alcaloides bis(tetrahidroisoquinolina) naturales. Los materiales de partida adecuados para el proceso semisintético incluyen las clases de antibióticos saframicina y safracina, obtenibles de diferentes caldos de cultivo, y también las clases de compuestos reineramicina y xestomicina, obtenibles de esponjas marinas. Una fórmula general (XV) para los compuestos de partida es la siguiente: en la que: R1 es un grupo amidometileno, tal como -CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c, donde R25a y R25b forman un grupo ceto, o uno es -OH, -NH2 ó -OCOCH3 y el otro es -CH2COCH3, -H, -OH ó -COCH3, a condición de que, cuando R25a es -OH o -NH2, entonces R25b no sea -OH; y R25c es -H, -CH3 ó -CH2CH3, o R1 es un grupo aciloximetileno, tal como -CH2-O-CO-R, donde R es -C(CH3) = CH-CH3 ó -CH3; R5 y R8 están seleccionados independientemente de -H, -OH ó -OCOCH2OH, o R5 y R8 son ambos ceto y el anillo A es un anillo de p-benzoquinona; R?4a y R? .b son ambos -H, o uno es -H y el otro es -OH, -OCH3 o -OCH2CH3, o R14a y R14b juntos forman un grupo ceto; R15 y R18 están seleccionados independientemente de -H ó -OH, o R5 y R8 son ambos ceto, y el anillo A es un anillo de p-benzoquinona; y R21 es -OH ó -CN. Una fórmula más general para estas clases de compuestos está dada a continuación: donde cada uno de los grupos sustituyentes definidos por RL R2, R3, R4, Rs, Re. R7. Rß, R9. R10 está seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, OH, OCH3, CN, =O, CH3; donde X son las diferentes funcionalidades amida o éster contenidas en los productos naturales mencionados; donde cada círculo de puntos representa una, dos o tres dobles ligaduras opcionales. De esa manera, de acuerdo con la presente invención, se provee ahora rutas semisintéticas para la producción de intermediarios que incluyen los intermediarios 11 o 21 y, de tal manera, para la producción de los compuestos de ecteinascidina, así como los compuestos ftalascidina y compuestos adicionales. Las rutas semisintéticas de la invención comprenden, cada una, varios pasos de transformación para llegar al producto deseado. Cada paso, por sí mismo, es un proceso de acuerdo con la presente invención. La invención no está limitada ? -Xas rutas que están-ejemplificadas, y se puede proveer rutas alternas, por ejemplo, cambiando el orden de los pasos de transformación cuando sea apropiado, o mediante un cambio en los grupos protectores usados. En particular, esta invención comprende la provisión de un material de partida 21-ciano de la fórmula general (XVI): en la que R1, R5, R8, R14a, R14b, R15 y R18 son como se definió anteriormente. Otros compuestos de la fórmula (XVI) con diferentes sustituyentes en la posición 21 también pueden representar los materiales de partida posibles. En general, cualquier derivado capaz de ser producido mediante desplazamiento nucleófilo del grupo 21-hidroxi, de los compuestos de la fórmula (XV), en la que R21 es un grupo hidroxi en cis, es un candidato. Los ejemplos de los 21- sustituyentes incluyen, pero sin limitación a ellos: un grupo mercapto; un grupo alquiltio (teniendo el grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono); un grupo ariltio (teniendo el grupo arilo de 6 a 10 átomos de carbono y estando no sustituido o susütuido con 1 a_ _5 -sustituyentes, seleccionados, por ejemplo, de un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos mercapto y grupos nitro); un grupo amino; un mono- o dialquilamino (teniendo el grupo alquilo, o cada uno de los grupos alquilo, de 1 a 6 átomos de carbono); un grupo mono- o diarilamino (siendo el grupo arilo, o cada uno de los grupos arilo, como se definió más arriba, en relación con los grupos ariltio); un grupo alfa-carbonilalquilo de la fórmula -C(Ra)(Rb)-C( = O)Rc, en la que Ra y Rb están seleccionados de átomos de hidrógeno, grupos alquilo que tienen de 1 a 20 átomos de carbono, grupos arilo (como se los definió anteriormente con relación a los grupos ariltio), y grupos aralquilo (en los que un grupo alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono está sustituido con un grupo arilo, como se definió más atrás en relación con los grupos ariltio), a condición de que uno de Ra y Rb sea un átomo de hidrógeno; Rc está seleccionado de un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono, grupos arilo (como se los definió con anterioridad en relación a los grupos ariltio), un grupo aralquilo (en el que un grupo alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono está sustituido con un grupo arilo, tal como se lo definió anteriormente en relación con los grupos ariltio), un grupo alcoxi que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo amino o un grupo mono-o dialquilamino, tal como se lo definió más atrás. _-. Así pues, en un aspecto más general, la presente invención se refiere a procesos en los que el primer paso es formar un 21-derivado utilizando un reactivo nucleofílico. Se hace referencia aquí a dichos compuestos como compuestos 21-Nuc. Es necesaria la presencia del grupo 21-ciano para algunos de los productos finales, principalmente la ecteinascidina 770 y la ftalascidina; mientras que para otros productos finales actúa como un grupo protector, que puede ser convertido fácilmente a otro sustituyente, tal como el grupo 21-hidroxi de la ecteinascidina 743 o de la 21-hidroxiftalascidina. La adopción del compuesto 21-ciano como material de partida estabiliza efectivamente la molécula durante los pasos de síntesis que siguen, hasta que se elimine opcionalmente. Otros compuestos 21-Nuc pueden ofrecer esta ventaja y otras. En un aspecto importante, la presente invención consiste del uso de un compuesto 21-ciano de la fórmula general (XVI) en la preparación de un compuesto bis- o tris-(tetrahidroisoquinolinofenol). Los productos que pueden ser preparados incluyen intermediarios, tales como el intermediario 11 o el intermediario 21, y las ecteinascidinas, así como compuestos nuevos y compuestos conocidos de estructura relacionada. Los materiales de partida preferidos incluyen aquellos compuestos de la fórmula (XV) o (XVI), en los que tanto R14a como R14b son hidrógeno. Los materiales de partida preferidos incluyen también compuestos de la fórmula (XV) o -(XVLL)-, en los que R15 es hidrógeno. Adicionalmente, los materiales de partida preferidos incluyen compuestos de la fórmula (XV) o (XVI), en los que el anillo E es un anillo fenólico. Los materiales de partida preferidos incluyen adicionalmente compuestos de la fórmula (XV) o (XVI) en los que por lo menos uno, mejor por lo menos dos o tres de R5, R8, R15 y R18 no son hidrógeno. Los ejemplos de materiales de partida adecuados para la presente invención incluyen: saframicina A, saframicina B, saframicina C, saframicina G, saframicina H, saframicina S, saframicina Y3, saframicina Yd1p saframicina Adi, saframicina Yd2, saframicina AH2, saframicina AH2Ac, saframicina AHL saframicina AHiAc, saframicina AR3, renieramicina A, renieramicina B, renieramicina C, renieramicina D, renieramicina E, renieramicina F, xestomicina, saframicina D, saframicina F, saframicina Mx-1, saframicina Mx-2, safracina A, safracina B y saframicina R. Los materiales de partida preferidos tienen un grupo ciano en la posición 21 , para el grupo R21. En un aspecto particularmente preferido, la invención comprende un proceso en el que se aplica pasos de transformación a la safracina B: Safracina B La safracina B presenta un sistema anular íntimamente relacionado con las ecteinascidinas. Este compuesto tiene la misma estructura pentacíclica y el mismo patrón de sustitución en el anillo aromático de la derecha, el anillo E. Además, la safracina B presenta similitudes muy íntimas con algunos de los intermediarios de síntesis en la síntesis total de ET-743, particularmente con los intermediarios 11 o 21. Dicho intermediario puede ser transformado a Et-743, usando un método bien establecido. La conversión sintética de safracina B a los intermediarios 11 o 21, por lo tanto, proveerá un método semisintético para obtener ET-743. De tal manera, se provee los intermediarios 11 o 21, hechos a partir de este compuesto safracina B, y los compuestos derivados del intermediario 11 o 21, particularmente los compuestos de ecteinascidina. Se provee adicionalmente la ftalascidina hecha a partir de safracina B. La invención se refiere también al uso de safracina B en la producción de los intermediarios 11 o 21, los compuestos de ecteinascidina y los demás intermediarios de la invención. La invención se refiere también a compuestos descritos aquí, derivados de los demás materiales de partida sugeridos, y al uso de esos compuestos en la producción de los compuestos mencionados. Los materiales de partida más preferidos de la presente invención tienen un grupo 21-ciano. El compuesto actualmente muy preferido de la presente invención es el compuesto de la fórmula 2.

Este compuesto es obtenido directamente de safracina B y se lo considera un intermediario clave en el proceso semisintético.

Compuesto 2 En un aspecto relacionado, se provee la cianosafracina B mediante fermentación de una cepa de Pseudomonas fluorescens productora de safracina B, y trabajando el caldo cultivado utilizando ion cianuro. La cepa preferida de Pseudomonas fluorescens es la cepa A2-2, FERM BP-14, que es empleada en el procedimiento de EP 055,299. Una fuente adecuada de ion cianuro es el cianuro de potasio. En un tratamiento típico, se filtra el caldo y se añade exceso de ion cianuro. Después de un intervalo de agitación apropiado, tal como una hora, se vuelve alcalino el pH, por ejemplo, a pH 9.5, y la extracción orgánica da un extracto crudo que puede ser purificado adicionalmente para dar la cianosafracina B. Para evitar dudas, las estereoquímicas indicadas en esta memoria descriptiva de patente están basadas en la comprensión propia de los inventores, de la estereoquímica de los productos naturales. En la medida en que se descubra un error en la estereoquímica asignada, será necesario efectuar la corrección apropiada en las fórmulas dadas en toda esta memoria descriptiva de patente. Adicionalmente, en la medida en que las síntesis sean capaces de modificación, esta invención se extiende a los estereoisómeros. Los productos de esta invención tienen típicamente la fórmula (XVIIb): en la que: R1 y R4 juntos forman un grupo de la fórmula (IV), (V), (VI) ó (Vil): R5 es -H ó -OH; R7 y R8 juntos forman un grupo -O-CH2-O-; R14a y R14b son ambos -H o uno es -H y el otro es -OH, -OCH3 ó -OCH2CH3, o R1 a y R14b juntos forman un grupo ceto; y R15 es -H ó -OH; R21 es -H, -OH ó -CN; y los derivados, incluyendo sus derivados acilo, especialmente cuando R5 es acetiloxi u otro grupo aciloxi de hasta 4 átomos de carbono. En la fórmula (XVIIb), R1 típicamente con R4 forma un grupo (IV) o (V). Habitualmente el grupo R18 está protegido.

Habitualmente R21 es ciano. De preferencia R1 a y R14b son hidrógeno. Es preferible que R15 sea hidrógeno. Los derivados O-acilo son adecuadamente derivados de O-acilo alifáticos, especialmente derivados acilo de 1 a 4 átomos de carbono, y típicamente, un grupo O-acetilo, principalmente en la posición 5. Los grupos protectores adecuados para los fenoles y los grupos hidroxi incluyen los éteres y los esteres, tales como los éteres de alquilo, alcoxialquilo, ariloxialquilo, alcoxialcoxialquilo, alquilsililalcoxialquilo, alquiltioalquilo, ariltioalquilo, azidoalquilo, cianoalquilo, cloroalquilo, heterocíclico, arilacilo, haloarilacilo, cicloalquialquilo, alquenilo, cicloalquilo, alq uilarilalq uilo, alcoxiarilalquilo, n itroarilalq uilo, haloarilalquilo, alquilamino-carbonilarilalquilo, alquilsulfinilarilalquilo, a Iq u i I si li lo y otros éteres; y carbonato de arilacilo, de arilalquilo, carbonato alifático, carbonato de alquilsulfinilarilalquilo, carbonato de alquilo, carbonato de arilhaloalquilo, carbonato de arilalquenilo, carbamato de arilo, alquilfosf inilo, alquilfosfinotioílo, arilfosfinotioílo, sulfonato de alquilarilo y otros esteres. Dichos grupos pueden estar sustituidos opcionalmente con los grupos previamente mencionados en R1. Los grupos protectores adecuados para las aminas incluyen los carbamatos, las amidas y otros grupos protectores, tales como carbamatos de alquilo, arilalquilo, sulfo- o halo-arilalquilo, haloalquilo, alquilsililalquilo, arilalquiio, cicloalquilalquilo, alquilarilalquilo, heterociclilalquilo, n itroa ri lalq u i lo , acilaminoalquilo, nitroarilditioarilalquilo, dicicloalquilcarboxamidoalquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilalquenilo, nitroarilalquenilo, heterociclilalquenilo, heterociclilo, hidroxiheterociclilo, alquilditio, alcoxi- o halo- o alquilsulfinilarilalquilo, heterociclilacilo y otros carbamatos; y alcanoilamidas, haloalcanoilamidas, arilalcanoilamidas, alquenoilamidas, heterociclilacilamidas, aroilamidas, arilaroilamidas, haioaroilamidas, nitroaroilamidas y otras amidas, así como grupos alquilo, alquenilo, alquilsililalcoxialquilo, alcoxialquilo, cianoalquilo, heterociclilo, alcoxiarilalquilo, cicloalquilo, nitroarilo, arilalquilo, alcoxi- o hidroxi-arilalquilo, y otros muchos grupos. Dichos grupos pueden estar sustituidos opcionalmente con los grupos previamente mencionados en R1. En las siguientes tablas están dados ejemplos de dichos grupos protectores.

PROTECCIÓN PARA EL GRUPO -OH Éteres Abreviatura Metilo Metoximetilo MOM Benciloximetilo BOM Metoxietoximetilo MEM 2-(trimetilsilil)etoximetilo SEM Metiltiometilo MTM Feniltiometilo PTM Azidometilo Cianometilo 2,2-dicloro-1,2-difluoroetilo 2-cloroetilo 2-bromoetilo tetrahidropiranilo THP 1 -etoxietilo EE fenacilo 4-bromofenacilo ciclopropilmetilo}alilo propargilo isopropilo ciciohexilo terbutilo bencilo 2,6-dimetilbencilo 4-metoxibencilo MPM ó PMB o-nitrobencilo 2,6-diclorobencilo 3,4-diclorobencilo 4-(dimetilamino)carbonilbencilo 4-metilsulfinilbencilo Msib 9-antrilmetilo 4-picolilo heptafluoro-p- tolilo tetrafluoro-4-piridilo Trimetils ililo TMS terbutildimetilsililo TBDMS terbutildifenilsililo TBDPS triisopropilsililo TIPS Esteres: formiato de arilo acetato de arilo levulinato de arilo pivaloato de arilo ArOPv benzoato de arilo 9-fluorocarboxilato de arilo carbonato de arilmetilo carbonato de 1-adamantilo carbonato de terbutilo BOC-OAr carbonato de 4-metilsulfinilbencilo Msz-Oar carbonato de 2,4-dimetilpent-3-ilo Doc-Oar 2,2,2-tricloroetilcarbonato de arilo vinilcarbonato de arilo bencilcarbonato de arilo carbamato de arilo dimetilfosfinilo Dmp-OAr dimetilfosfinotioílo Mpt-OAr difenilfosfinotioílo Dpt-Oar Metansulfonato de arilo Toluensulfonato de arilo 2-formilbencensulfonato de arilo PROTECCIÓN PARA EL GRUPO -NH. Carbamatos Abreviatura Metilo etilo 9-fluorenilmetilo Fmoc 9-(2-sulfo)fluorenilmetilo 9-(2,7-dibromo)fluorenilmetilo 17-tetrabenzo[a,c,g,i]f luoren i I metilo Tbfmoc 2-cloro-3-indenilmetilo Climoc benz[f]inden-3-ilmetilo Bimoc 2, 7-di-terbutil[9-( 10,10-dioxo-10,10,10,10-te trahidrotioxanti I)] me tilo DBD-Tmoc 2,2,2-tricloroetilo Troc 2-trimetilsililetilo Teoc 2-feniletilo hZ 1-(1-adamantil)-1-metiletilo Adpoc 2-cloroetilo 1,1-dimetil-2-cloroetilo 1,1-dimetil-2-bromoetilo 1 ,1-dimetil-2,2-dibromoetilo DB-t-BOC 1 ,1 -di met i 1-2,2, 2-tri cloroetilo TCBOC 1-metil-1-(4-bifenil)etilo Bpoc 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-1 -metiletilo t-Burmeoc 2-[2'- y 4'-piridil)etilo Pyoc 2,2-bis(4'-nitrofenil)etilo Bnpeoc n-(2-pivaloilamino)-1,1 -dimetiletilo 2-[(2-nitrofenil)ditio]-1 -feniletilo NpSSPeoc 2-(n,n-diciclohexilcarboxiamido)etilo terbutilo BOC 1-adamantilo 1-Adoc 2-adamantilo 2-Adoc vinilo Voc alilo Aloe ó All oc 1-isopropilalilo Ipaoc cinnamilo Coc 4-nitrocinnamilo Noc 3-(3'-piridil)prop-2-enilo Paloc 8-quinolilo n-hidroxipiperidinilo alquilditio bencilo Cbz ó Z p-metoxibencilo Moz p-nitrobencilo PNZ p-bromobencilo p-clorobencilo 2,4-diclorobencilo} 4-metilsulfinilbencilo Msz 9-antrilmetilo difenilmetilo fenotiazinil-(10)-carbonilo n'-p-toluensulfonilaminocarbonilo n'-fenilaminotio carbonilo Amidas Formamida acetamida cloroacetamida trifluoroacetamida * TFA fenilacetamida 3-fenilpropanamida pent-enamida picolinamida 3-piridilcarboxiamida benzamida p-fenilbenzamida n-ftalimida n-tetracloroftalimida TCP 4-nitro-n-ftalimida n-ditiasuccinimida Dts n-2,3-difenilmaleimida n-2,5-dimetilpirrol n-2,5-bis(triisopropilsiloxi)pirrol BIPSOP Aducto de n-1 ,1 ,4,4-tetrametildisiliaza-ciclopentano STABASE 1 ,1,3, 3-tetra metil- 1, 3-d isila isoindol BSB GRUPOS PROTECTORES ESPECIALES DE -NH n-metilamina n-t-butilamina n-alilamina n-[2-trimetilsilil)etoxi]metilamina SEM n-3-acetoxipropilamina n-cianometilamina n-(1-isopropil-4-nitro-2-oxo-3-pirrolin- 3-il)amina n-2,4-dimetoxibencilamina Dmb 2-azanorbornenos n-2,4-dinitrofenilamina n-bencilamina Bn n-4-metoxibencilamina MPM n-2,4-dimetoxibencilamina DMPM n-2-hidroxibencilamina Hbn n-(difenilmetil)amino DPM n-bis(4-metoxifenil)metilamina n-5-dibenzosuberilamina DBS n-trifenilmetilamina Tr n-[(4-metoxifenil)difenilmetil]amino MMTr n-9-fenilflurenilamina Fcm n'-óxido de n-2-picolilamina n-1,1-dimetiltiometilenamina n-bencilidenamina n-p-metoxibencilidenamina n-difenilmetilenamina n-(5,5-dimetil-3-oxo-1-ciclohexenil)amina n-nitroamina n-nitrosoamina difenilfosfinamida Dpp dimetiltiofosfinamida Mpt difeniltiofosfinamida Ppt fosforamidato de dibencilo 2-nitrobencensulfenamida Nps n-1 -(2, 2, 2-trif luoro- 1,1 -difenil Jetilsulfenamida TDE 3-nitro-2-piridinsulfenamida 3-nitro-2-piridinsulfenamida Npys p-toluensulfonamida Ts bencensulfonamida Los productos de ecteinascidina particulares, de la presente invención, incluyen compuestos de la fórmula (XVlll): en la que R1 y R4 forman un grupo de la fórmula (IV), (V), (VI) ó (Vil): más particularmente, un grupo (IV) ó (V); R21 es -H, -OH ó -CN, más particularmente, -OH ó -CN; y sus derivados acilo, más particularmente, sus derivados de 5-acilo, incluyendo el derivado 5-acetilo. En general, la conversión del compuesto 21-ciano de partida al producto ecteinascidina, por ejemplo, de la fórmula (XVlll), implica: (a) la conversión, de ser necesario, de un sistema quinona para el anillo E, al sistema fenol; (b) la conversión, de ser necesario, de un sistema quinona para el anillo A, al sistema fenol; (c) la conversión del sistema fenol para el anillo A, al anillo de metilendioxi fe nol; (d) la formación del sistema de anillo espiro con puente, de la fórmula (IV, (VI) O (Vil), a través de la posición 1 y la posición 4, en el anillo B; y (e) formación de derivado, cuando sea apropiado, por ejemplo, acilación.

Si es necesaria la conversión del paso (a) de un sistema quinona para el anillo E al sistema fenol, se puede efectuar mediante procedimientos convencionales de reducción. Un sistema reactivo adecuado es hidrógeno con un catalizador de paladio-carbono, aun cuando puede emplearse otros sistemas reductores. De ser necesaria la conversión del paso (b) de. un-sistema quinona para el anillo A al sistema fenol, se efectúa de manera análoga al paso (a), y no son necesarios más detalles. La conversión en el paso (c) del sistema fenol para el anillo A al anillo metilendioxifenol se puede efectuar de diversas maneras, posiblemente junto con el paso (b). Por ejemplo, se puede desmetilar un anillo A de quinona en el sustituyente metoxi, en la posición 7, y se puede reducir a una dihidroquinona y se puede atrapar con un reactivo electrofílico adecuado, tal como CH2Br2, BrCH2CI, o un reactivo divalente similar, lo que produce directamente el sistema de anillo metilendioxi, o con un reactivo divalente, tal como tiocarbonildiimidazol, que produce un sistema de anillo metilendioxi sustituido, que puede ser convertido al anillo deseado. Se efectúa típicamente el paso (d) mediante sustitución apropiada en la posición 1, con un reactivo formador de puente, que pueda ayudar a la formación del puente deseado, formando un meturo de quinona exendo en la posición 4, y permitiendo que reaccione el meturo con el 1 -sustituyente para llevar a cabo la estructura con puente. Los reactivos formadores de puente preferidos tienen la fórmula (XIX): donde Fu indica un grupo funcional protegido, tal como un grupo -NHProt4a, Prot3 es un grupo protector, y la línea punteada muestra una doble ligadura opcional. Adecuadamente está formado el meturo introduciendo primeramente un grupo hidroxi en la posición 10, en la unión de los anillos A y B, para dar una estructura parcial de la fórmula (XX): o, más preferible, una estructura parcial de la fórmula (XXII): donde el grupo R" está seleccionado del grupo de las fórmulas (IV), (V), (VI) ó (Vil). Para los dos primeros de dichos grupos, el grupo R" adopta típicamente la forma -CHFu-CH2-SProt3. Luego se puede eliminar los grupos protectores y se los modifica, como sea apropiado, para dar el compuesto deseado. Se provee un procedimiento típico para el paso (d) en la patente estadounidense 5,721,362, incorporada aquí por medio de esta referencia. Se hace referencia particular al pasaje de la columna 8, paso (1), y al ejemplo 33 de esa patente estadounidense y a otros pasajes relacionados. La formación de derivado en el paso (e) puede incluir la acilación, por ejemplo, con un grupo Ra-CO-, donde Ra puede ser diversos grupos, tales como alquilo, alcoxi, alquileno, arilalquilo, arilalquileno, aminoácido-acilo o heterociclilo; cada uno de ellos opcionalmente sustituido con halo, ciano, nitro, carboxialquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, heterociclilo, heterocicliloxi, alquilo, amino o amino sustituido. Otros agentes acilantes incluyen isotiocianatos, tales como isotiocianatos de arilo, principalmente isocianato de fenilo. Los grupos alquilo, alcoxi o alquileno de Ra tienen adecuadamente 1 a 6 o 12 átomos de carbono, y pueden ser lineales, ramificados o cíclicos. Los grupos arilo son típicamente fenilo, bifenilo o naftilo. Los grupos heterociclilo pueden ser aromáticos o parcial o completamente insaturados, y adecuadamente tienen de 4 a 8 átomos de carbono, más preferible, 5 o 6 átomos de anillo, con uno o más heteroátomos seleccionados de nitrógeno, azufre y oxígeno. Sin ser exhaustivos, los grupos Ra típicos incluyen: 5 alquilo, haloalquilo, alcoxialquilo, haloalcoxialquilo, arilalquileno, haloalquilarilalquileno, acilo, haloacilo, arilalquilo, alquenilo y aminoácido. Por ejemplo, Ra-CO- puede ser: acetilo, trifluoroacetilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, isovalerilcarbonilo, trans-3-(trifluorometil)cinnamoil carbonilo, heptafluoro butiri I carbonilo, decanoilcarbonilo, trans-cinnamoilcarbonilo, butirilcarbonilo, 3-cloropropionilcarbonilo, cinnamoilcarbonilo, 4-metilcinnamoilcarbonilo, hidrocinnamoilcarbonilo o trans-hexanoilcarbonilo, o alanilo, arginilo, aspartilo, asparagilo, cistilo, glutamilo, glutaminilo, glicilo, histidilo, hidroxiprolilo, isoleucilo, leucilo, lisilo, metionilo, fenilalanilo, prolilo, serilo, treonilo, tironilo, triptofilo, tirosilo, valilo, así como otros grupos aminoácidoacilo menos comunes, así como ftalimido y otras amidas cíclicas. Se puede encontrar otros ejemplos entre los grupos protectores dados en las listas. Los compuestos en los que -CO-Ra se deriva de un aminoácido e incluyen un grupo amino, pueden formar, por sí mismos, derivados acilo. Los comandos N-acilo adecuados incluyen dipéptidos que, a su vez, pueden formar derivados de N-acilo. A manera de ilustración, es posible ahora transformar el compuesto cianosafracina B de la fórmula 2 a ET-743, lo que da por resultado una manera más corta y más directa de formar ET-743, que los métodos previamente descritos. El análisis retrosintético para formar ET-743 utilizando el compuesto 29, está ilustrado en el esquema I: ESQUEMA I SAFRACINA-B Siguiendo el esquema anterior I es posible obtener ET-743 en 21 pasos lineales. Este método transforma la cianosafracina B al intermediario 25, a través de una secuencia de reacciones que involucra esencialmente: (1) eliminación del grupo metoxi colocado en el anillo A; (2) reducción del anillo A y formación del grupo metilendioxi en un recipiente; (3) hidrólisis de la función amida colocada sobre el carbono 1; (4) transformación del grupo amina resultante, al grupo hidroxilo. Adicionalmente, el método evita la protección y la desprotección de la función alcohol primario en la posición 1 en el anillo B del compuesto 25, utilizando directamente un residuo cisteína 29, para formar el intermediario 27. El derivado de cisteína 29 es protegido en el grupo amino con el grupo protector ß,ß,ß-tricloroetoxicarbonilo, a fin de obtener compatibilidad con los grupos alilo y MOM existentes. Se oxida directamente el intermediario 27 y se cicliza. Estas circunstancias, junto con una diferente estrategia de desprotección en las últimas etapas de la síntesis, hace novedosa la ruta y más susceptible de desarrollo industrial, que el proceso de US 5,721,362. La conversión del compuesto 2-ciano al intermediario 25, usualmente involucra los siguientes pasos (véase el esquema II): formación del compuesto protegido de la fórmula 14, haciendo reaccionar 2 con anhidrido de terbutoxicarbonilo; conversión de 14 al compuesto diprotegido de la fórmula 15, haciendo reaccionar con éter bromometilmetílico y diisopropiletilamina en acetonitrilo; eliminación selectivamente del grupo metoxi del sistema quinona en 15, para obtener el compuesto de la fórmula 16, haciendo reaccionar con una solución metanólica de hidróxido de sodio; transformación de 16 al compuesto metilendioxi de la fórmula 18, empleando la siguiente secuencia preferida: (1) se reduce el grupo quinona del compuesto 16, con Pd al 10% sobre C, bajo atmósfera de hidrógeno; (2) se convierte el intermediario de hidroquinona al compuesto metilendioxi de la fórmula 17, haciendo reaccionar con bromoclorometano y carbonato de cesio, bajo atmósfera de hidrógeno; (3) se transforma 17 al compuesto de la fórmula 18, protegiendo el grupo hidroxilo libre como un grupo OCH2R. Se lleva a cabo esta reacción con BrCH2R y carbonato de cesio, donde R puede ser arilo, CH = CH2, OR', etc. eliminación de los grupos protectores terbutoxicarbonilo y metiloximetilo de 18, para producir el compuesto de la fórmula 19 haciendo reaccionar con una solución de HCl en dioxano. También se obtiene esta reacción mezclando 18 con una solución de ácido trifluoroacético en diclorometano; formación del compuesto de tiourea de la fórmula 20, haciendo reaccionar 19 con isotiocianato de fenilo; convertir el compuesto de la fórmula 20 al compuesto amina de la fórmula 21, haciendo reaccionar con una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano; transformar el compuesto de la fórmula 21 al derivado N-Troc 22, haciendo reaccionar con cloroformiato de tricloroetilo y piridina; formación del compuesto hidroxi protegido de la fórmula 23, por reacción de 22 con éter bromometilmetílico y diisopropil-etilamina; transformar el compuesto de la fórmula 23 al derivado N-H 24, haciendo reaccionar con ácido acético y zinc; conversión del compuesto de la fórmula 24 al compuesto hidroxi de la fórmula 25, por reacción con nitrito de sodio en ácido acético. Alternativamente se puede usar tetróxido de nitrógeno en una mezcla de ácido acético y acetonitrilo, seguido por tratamiento con hidróxido de sodio. También se puede usar nitrito de sodio en una mezcla de anhidrido acético-ácido acético, seguido por tratamiento con hidróxido de sodio. o n Oí 25 La conversión del compuesto intermediario 25 a ET-743, usando el derivado de cisteína 29, habitualmente comprende los siguientes pasos (véase el esquema l l l): ESQUEMA lll transformación del compuesto de la fórmula 24 al derivado 30, 6 protegiendo la función hidroxilo primario con (S)-N-2,2,2-tricloro etoxi carbonil-S-(9H -fluo re n-9-ilmetil)cis teína 29; conversión del compuesto protegido de la fórmula 30 al derivado fenol 31, por división del grupo alilo con hidruro de tributilestaño y dicloropaladio-bis(trifenilfosfina); transformación del compuesto fenólico de la fórmula 31 al compuesto de la fórmula 32, mediante oxidación con anhidrido bencenselenínico a baja temperatura; transformación del compuesto hidroxi de la fórmula 32 a la lactona 33, mediante la secuencia siguiente: (1) reacción del compuesto de la fórmula 32 con dos equivalentes de anhidrido tríflico y 5 equivalentes de DMSO; (2) seguida por la reacción con 8 equivalentes de diisopropiletilamina (3), seguida por la reacción con 4 equivalentes de alcohol terbutílico (4), seguida por la reacción con 7 equivalentes de 2-terbutil-1 ,1 ,3,3-tetrametilguanidina (5), seguida por reacción con 10 equivalentes de anhidrido acético; transformación del compuesto lactona 33 al compuesto hidroxilo 34, mediante eliminación del grupo protector MOM con TMSI; división del grupo N-tricloroetoxicarbonilo del compuesto de la fórmula 34, al compuesto 35, mediante reacción con Zn/AcOH; transformación del compuesto amino 35 al compuesto alfa-cetolactona correspondiente, mediante reacción con cloruro de N-metilpiridinio-carboxialdehído, seguido por DBU; formación de ET-770, haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula 36 con 3-hidroxi-4-metoxifeniletilamina; transformación de ET-770 a ET-743, mediante reacción con nitrato de plata en una mezcla de AcN/H2O.

FORMACIÓN DEL INTERMEDIARIO 11 Y DE INTERMEDIARIOS RELACIONADOS Se describe el análisis retrosintético en la siguiente secuencia: Safracina B En la presente invención, una clase clave de intermediarios incluye el intermediario 11, y tiene la fórmula general (XXI): en la que Prot1 y Prot2 son grupos protectores de hidroxi, de preferencia, diferentes. Para el propio intermediario 11, el grupo Prot1 es un grupo metoximetilo, y Prot2 es un grupo terbutildifenil-sililo. La conversión del compuesto 21-ciano al intermediario 11, o a un intermediario relacionado, de la fórmula (XXI), usualmente comprende los siguientes pasos: (a) conversión, de ser necesario, de un sistema quinona para el anillo E, al sistema fenol; (b) formación del grupo -OProt1 en la posición 18, en el anillo E; (c) formación del grupo -CH2-OProt2 en la posición 1, en el anillo B; y (d) conversión, de ser necesario, de un sistema quinona para el anillo A, al sistema fenol; (e) conversión del sistema fenol para el anillo A, al sistema metilendioxifenol. El paso (b), la formación del grupo -OProt1 en la posición 18 del anillo E, es una reacción típica de protección para un grupo fenol, y no es necesario hacer comentarios especiales. Se selecciona las condiciones apropiadas dependiendo de la naturaleza del grupo protector. Otros pasos son similares a las demás reacciones. El paso (b), la formación del grupo -CH2-OProt2 en la posición 1 del anillo B normalmente se lleva a cabo formando un grupo -CH2NH2 en la posición 1, y luego convirtiendo la función amina a una función hidroxi y protegiendo. Así, cuando el material de partida tiene un grupo R1, que es -CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c, es cuestión de eliminar el grupo N-acilo. Cuando el material de partida tiene un grupo R1 que es -CH2-O-CO-R, entonces puede no ser necesario cambio alguno para un producto de ecteinascidina, donde el sustituyente R1 es el mismo. Para otros productos es cuestión de eliminar el grupo O-acilo. Están disponibles diversos procedimientos para dichas desacilaciones. En una variación, se lleva a cabo en un paso la desacilación y la conversión a una función hidroxi. Posteriormente se puede acilar el grupo hidroxi o se puede convertir de otra manera para dar el grupo R1 apropiado. La patente estadounidense No. 5,721,362 describe métodos de síntesis para formar ET-743, a través de una síntesis larga de muchos pasos. Uno de los intermediarios de esta síntesis es el intermediario 11. Usando cianosafracina B como material de partida, es posible alcanzar el intermediario 11, proveyendo una vía mucho más corta para formar dicho intermediario y mejorando de esa manera el método para preparar ET-743.

Se puede convertir la cianosafracina B al intermediario 25 mediante los métodos descritos anteriormente. A partir del intermediario 25 es posible llegar al intermediario 11 utilizando los siguientes pasos; véase el esquema Vil: formación del compuesto hidroxi protegido, de la fórmula 26, haciendo reaccionar 25 con cloruro de terbutildifenilsililo, en presencia de una base; desprendimiento final del grupo alilo con hidruro de tributilestaño y dicloropaladio-bis(trifenilfosfina) en 26, lo que lleva a la formación del intermediario 11. ESQUEMA Vil Una modalidad del proceso de síntesis de la presente invención para transformar safracina B al intermediario 11, es una modificación y una extensión del esquema VIII, y comprende los pasos secuenciales de: convertir estereoespecíficamente el compuesto Safracina B al compuesto de la fórmula 2, mediante reemplazo selectivo de OH por CN, haciendo reaccionar con KCN en un medio ácido; formación del compuesto de tiourea de la fórmula 3, haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula 2 con isotiocianato de fenilo; convertir el compuesto de tiourea de la fórmula 3 a la acetamida de la fórmula 5, mediante un hidrólisis en un medio ácido, seguida por la adición de anhidrido acético. Se puede aislar el compuesto amina intermediario de la fórmula 4 apagando la hidrólisis en un medio ácido, con bicarbonato de sodio; pero este intermediario es sumamente inestable y se transforma rápidamente a una imina cíclica de cinco miembros, es decir, el compuesto 6; formación del compuesto protegido de la fórmula 7, haciendo reaccionar con éter bromometilmetílico y diisopropiletilamina en diclorometano; desmetilación selectiva del grupo metoxi del sistema quinona del compuesto de la fórmula 7, al compuesto de la fórmula 8, haciendo reaccionar con una solución metanólica de hidróxido de sodio; transformación del compuesto de la fórmula 8 al compuesto metilendioxi de la fórmula 9, mediante la siguiente secuencia preferida: (1) se reduce el grupo quinona del compuesto 8 con Pd/C al 10 por ciento, bajo atmósfera de hidrógeno; (2) se convierte el intermediario hidroquinona al compuesto metilendioxi de la fórmula 9, haciendo reaccionar con bromoclorometano y carbonato de cesio, bajo atmósfera de hidrógeno; 83) se transforma el compuesto de la fórmula 9 al compuesto de la fórmula 10, protegiendo el grupo hidroxilo libre como un grupo OCH2R, haciendo reaccionar con BrCH2R y carbonato de cesio, donde R puede ser arilo, CH = CH2, OR', etc.; conversión del grupo acetamida del compuesto de la fórmula 10 al grupo hidroxilo correspondiente de la fórmula 25, mediante reacción con tetróxido de nitrógeno, en una mezcla de ácido acético y acetato acético, seguido por tratamiento con hidróxido de sodio; alternativamente se puede usar nitrito de sodio en una mezcla de anhidrido acético/ácido acético, seguido por tratamiento con hidróxido de sodio; alternativamente se puede convertir el grupo acetamida del compuesto de la fórmula 10 al grupo amina primaria, haciendo reaccionar con hidrazina o con Boc2O, DMAP, seguida por hidrazina; se puede convertir dicha amina primaria al grupo hidroxilo correspondiente (compuesto de la fórmula 25), mediante una conversión oxidante de la amina primaria al aldehido correspondiente, con bencensulfonato de 4-formil-1-metilpiridinio u otro ion piridinio, seguido por DBU u otro tratamiento con base, e hidrolización adicional, y luego reducción del aldehido al grupo hidroxilo correspondiente con hidruro de litio y aluminio u otro agente reductor; formación del compuesto protegido de la fórmula 26, haciendo reaccionar con cloruro de terbutildifenilsililo y dimetilaminopiridina en diclorometano (esquema Vil); transformación del compuesto sililado de la fórmula 26 al intermediario 11, mediante desprotección del grupo protector OCH2R, haciendo reaccionar bajo condiciones reductoras o condiciones acidas. Los procedimientos típicos son con negro de paladio bajo atmósfera de hidrógeno, o con TFA acuosa, o con hidruro de tributilestaño y diclorobis(trifenilfosfina-paladio).

ESQUEMA 8 En otra modificación preferida adicional, se puede transformar el compuesto ciano de la fórmula 2 al intermediario 11, usando una extensión del esquema II, que comprende los pasos adicionales de: formación del compuesto hidroxi protegido de la fórmula 26, haciendo reaccionar 25 con cloruro de terbutildifenilsililo, en presencia de una base; desprendimiento final del grupo alilo con hidruro de tributilestaño y dicloropaladio-bis(trifenilfosfina) en 26, lo que lleva a la formación del intermediario 11. De esa manera, mediante estas rutas y otras, es posible transformar la cianosafracina B a muchos intermediarios y derivados con actividad terapéutica antitumoral potencial. Estos intermediarios pueden ser preparados partiendo con los compuestos ya descritos, o utilizando rutas alternas.

COMPUESTOS INTERMEDIARIOS NOVEDOSOS A la luz de las explicaciones precedentes, se puede ver que la presente invención provee compuestos intermediarios novedosos. Dependiendo del anillo A, los intermediarios son de la fórmula (XXIIa): o de la fórmula (XXIIb): donde: R1 es -CH2NH2 ó -CH2OH, o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo, y R4 es -H; ó R1a y R4 forman juntos un grupo de la fórmula (IV), (V), (VI) ó (Vil): R5 es -OH o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo; R 4a y R14b son ambos -H o uno es -H y el otro es -OH; o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo, -OCH3 ó -OCH2CH3; o R14a y R14b forman juntos un grupo ceto; R12 es -H_, -CH3- ó -CH2CH3-; R15 es -H, -OH o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo; y R es -OH o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo. En una modalidad, de preferencia por lo menos uno de R1, R5, R14a, R14b, R15 o R18 es un grupo protegido o derivatizado. En una variación de la presente invención, el grupo R1 no es un sustituyente terbutildifenilsililo y/o el grupo R18 no es un grupo metoximetilo. Es preferible que R1 sea -CH2NH2 ó -CH2OH, o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo, y R4 es -H; ó R1a y R4 forman juntos un grupo: De preferencia tanto R14a como R14b son -H. Una clase preferida de intermediarios incluye el compuesto que se identifica como el compuesto 25, de la fórmula: 25 La clase preferida, de tal manera, tiene la fórmula general en la que el grupo MOM está reemplazado por cualquier otro grupo protector. Otros intermediarios preferidos incluyen los compuestos que han sido identificados como los compuestos 45 y 43 (esquema IX): Otros derivados de N-acilo pueden ser preparados fácilmente a partir del compuesto 45 y son parte importante de la presente invención. Los compuestos 21-hidroxi correspondientes también son útiles y están entre los compuestos activos que han sido descubiertos.

COMPUESTOS ACTIVOS NOVEDOSOS Se ha descubierto adicionalmente que algunos de los compuestos de la presente invención, que fueron preparados inicialmente como intermediarios, tienen actividad excepcional en el tratamiento de cánceres, tales como leucemias, cáncer pulmonar, cáncer colónico, cáncer renal y melanoma. De tal manera, la presente invención provee un método para tratar cualquier mamífero, principalmente un humano, afectado por cáncer; que comprende administrar al individuo afectado, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención, o una composición farmacéutica del mismo. La presente invención está relacionada también con preparaciones farmacéuticas que contienen, como ingrediente activo, un compuesto o varios compuestos de la invención, así como con los procesos para su preparación. Los ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier sólido (tabletas, pildoras, cápsulas, granulos, etc.) o líquido (soluciones, suspensiones o emulsiones) con composición adecuada para administración oral, tópica o parenteral, y pueden contener el compuesto puro o en combinación con cualquier portador u otros compuestos farmacológicamente activos. Estas composiciones pueden necesitar de esterilización, cuando son para administrar parenteralmente. La administración de los compuestos o las composiciones de la presente invención puede hacerse por cualquier método adecuado, tal como por infusión intravenosa, preparaciones orales, administración intraperitoneal o intravenosa. Se prefiere usar tiempos de infusión hasta de 24 horas, más preferible, de 2 a 12 horas, siendo lo más preferido de 2 a 6 horas. Son especialmente convenientes los tiempos de infusión breves, que permitan que el tratamiento sea llevado a cabo sin permanencia nocturna en un hospital. Sin embargo, si se requiere, la infusión puede durar de 12 a 24 horas, o incluso más. Se puede llevar a cabo la infusión a intervalos apropiados de, por ejemplo, 2 a 4 semanas. Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la presente invención pueden ser suministradas por medio de liposomas o por encapsulación en nanoesferas, en formulaciones de liberación sostenida o por otros medios normales de suministro. La dosis correcta de los compuestos variará de acuerdo con la formulación particular, el modo de aplicación y el sitio particular, el anfitrión y los tumores que están siendo tratados. Se debe tener en cuenta otros factores, como la edad, el peso del cuerpo, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la condición del anfitrión, las combinaciones de fármaco, las sensibilidades a la reacción y la severidad de la enfermedad. Se puede llevar a cabo la administración de manera continua o periódica, dentro de la dosis máxima tolerada. Se puede usar los compuestos y las composiciones de la presente invención junto con otros fármacos, para_ proveer una terapia de combinación. Los otros fármacos pueden formar parte de la misma composición, o pueden ser provistos como una composición separada, para administración al mismo tiempo, o en un tiempo diferente. La identidad del otro fármaco no está limitada particularmente, y los candidatos adecuados incluyen: (a) fármacos con efectos antimitóticos, especialmente aquellos que se dirigen a elementos citoesqueletales, incluyendo moduladores de microtúbulos, tales como fármacos de taxano (tales como taxol, paclitaxel, taxotero, docetaxel), podofilotoxinas o vincaalcaloides (vincristina, vinblastina); (b) fármacos antimetabolitos, tales como 4-fluorouracilo, citarabina, gemcitabina, análogos de purina, tales como pentostatin, metotrexato); (c) agentes alquilantes, tales como mostazas de nitrógeno (tales como ciclofosfamida o ifosfamida); (d) fármacos con destino al ADN, tales como los fármacos de antraciclina, adriamicina, doxorrubicina, farmorrubicina o epirrubicina; (e) fármacos destinados a las topoisomerasas, tales como etoposide; (f) hormonas y agonistas o antagonistas de hormonas, tales como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifen y compuestos relacionados) y andrógenos, flutamida, leuprorelin, goserelin, ciprotrona u octreotide; (g) fármacos que están dirigidos a la transducción de señal en células tumorales, incluyendo los derivados de anticuerpos, tales como herceptina; (h) fármacos alquilantes, como los fármacos de platino (cis-platin, carbonplatin, oxaliplatin, paraplatin) o nitrosoureas; (i) fármacos que afecten potencialmente la metástasis de los tumores, tales como los inhibidores de la metaloproteinasa de la matriz; (j) agentes de terapia de genes y agentes de sentido contrario; (k) terapéuticos de anticuerpo; (I) otros compuestos bioactivos de origen marino, principalmente las didemninas, tales como aplidina; (m) análogos esteroidales, en particular dexametasona; (n) fármacos antiinflamatorios, en particular dexametasona; y (o) fármacos antieméticos, en particular dexametasona. La presente invención se extiende también a los compuestos de la presente invención para uso en un método de tratamiento, y al uso de los compuestos en la preparación de una composición para el tratamiento del cáncer.

ACTIVIDAD CITOTOXICA Cu ltivos de células.- Se mantuvo las cél ulas en fase logarítmica de desarrollo en medio esencial mínimo de Eagle, con sales equilibradas de Earle, con 2.0 mM de L-glutamina, con aminoácidos no esenciales, sin bicarbonato de sodio (EMEM/neaa); suplementado con 10 por ciento de suero de ternera fetal (FCS), 10"2 M de bicarbonato de sodio y 0.1 g/L de penicilina-G + sulfato de estreptomicina . Se ha llevado a cabo un procedimiento de discriminación simple para determinar y comparar la actividad antitumoral de estos compuestos, usando u na forma adaptada del método descrito por Bergeron y coautores (1 984). La línea de células tumorales empleada había sido P-388 (cultivo en suspensión de un neoplasma linfoide, procedente de ratón DBA/2), A-549 (cultivo en monocapa de carcinoma de pulmón humano), HT-29 (cultivo en monocapa de un carcinoma de colon humano) y MEL-28 (cultivo en monocapa de melanoma humano). Se sembró células P-388 en concavidades de 16 mm, a 1 x 104 células por concavidad, en alícuotas de 1 mL de MEM 5FCS que contenía la concentración indicada de fármaco. Se sembró una serie separada de cultivos sin fármaco, como desarrollo de control, para garantizar que las células permanecieran en la fase exponencial de desarrollo. Se llevó a cabo todas las determinaciones por duplicado. Después de tres días de incubación a 37°C, 10% de CO2, en una atmósfera con 98 por ciento de humedad, se determinó la Cl50 aproximada, comparando el desarrollo en las concavidades sin fármaco, con el desarrollo en el control de las concavidades. Se sembró A-549, HT-29 y MEL-28 en concavidades de 16 mm a 2 x 104 células por concavidad en alícuotas de 1 mL de MEM 10FCS que contenía la concentración indicada de fármaco. Se sembró una serie separada de cultivos sin fármaco, como desarrollo de control, para garantizar que las células permanecieran en la fase exponencial de desarrollo. Se llevó a cabo todas las determinaciones por duplicado. Después de incubar durante tres días a 37°C, 10% de CO2 en una atmósfera con 98 por ciento de humedad, se tiñó las concavidades con 0.1% de violeta cristal. Se determinó una Cl50 aproximada comparando el desarrollo en las concavidades con fármaco, con el desarrollo en el control de las concavidades. 1.- Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline, Robert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot y Cari W. Porter. "Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamíde iron chelators". Biochem. Bioph. Res. Comm., 1984, 121(3), 848-854. 2.- Alan C. Schroeder, Robert G. Hughes, Jr. y Alexander Bloch. "Effects of Acyclic Pyrimidine Nucleoside Analogues". J. Med. Chem., 1981, 24, 1078-1083.

ACTIVIDAD CITOTOXICA De tal manera, los compuestos activos de la presente invención incluyen los compuestos con el grupo 10-hidroxi y el grupo 1 -lábil. Un método importante de esta invención incluye la siguiente reacción: Otro método importante de la presente invención incluye la reacción: Otro método importante de la presente invención incluye la reacción en la que un grupo R1 aminometileno es convertido a un grupo hidroximetileno. Otro método importante de la presente invención incluye la reacción en la que un grupo R1, que es hidroximetileno, es reaccionado con un reactivo de la fórmula (XIX): Prot donde Fu indica un grupo funcional protegido; Prot3 es un grupo protector y la línea punteada muestra una doble ligadura opcional. Otro método importante de esta invención incluye la reacción para preparar un compuesto 21-ciano de la fórmula (XVI) que comprende hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (XV) en la que R1, R5, R8, R14a, R14b, R15 y R18 son como se definió, y R21 es un grupo hidroxi, con una fuente de ion cianuro, para dar el compuesto 21-ciano deseado. Adicionalmente también están contemplados procesos que utilizan otros compuestos que contienen nucleófilo, para producir compuestos similares de la fórmula (XVI), donde se protege la posición 21 mediante otro grupo nucleófilo, un grupo 21 -Nuc. Por ejemplo, se puede producir un compuesto 21 -Nuc de la fórmula (XVI) con un sustituyente alquilamino en la posición 21 , haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula (XV), en el que R21 es un grupo hidroxi, con una alquilamina adecuada . También se puede prod ucir un compuesto 21 -Nuc de la fórmula (XVI) con un sustituyente alquiltio en la posición 21 , haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula (XV) en el que R21 es un grupo hidroxi , con un alcanotiol adecuado. Alternativamente se puede producir un compuesto 21 -Nuc de la fórmula (XVI) con un sustituyente carbonilalq uilo en la posición 21 , haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula (XV) en el que R21 es un grupo hidroxi, con un compuesto carbonilo adecuado, típicamente en presencia de una base. Está n disponibles otras rutas de síntesis, para otros compuestos 21 -N uc. Otra reacción importante de la presente invención comprende el tratamiento de un producto 21 -ciano de la presente invención para formar un compuesto 21 -hidroxi . Dichos compuestos pueden tener propiedades in vivo interesantes.

EJ EMPLOS La presente invención está ilustrada por med io de los siguientes ejemplos.

EJEMPLO 1 14 A una solución de 21.53 g (39.17 mmoles) de 2 en 200 mL de etanol, se añadió 7.7 g (35.25 mmoles) de anhidrido de terbutoxicarbonilo, y se agitó la mezcla durante siete horas a 23°C. Luego se concentró al vacío la reacción y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 6:4), para dar 20.6 g (81 por ciento) de 14, como un sólido amarillo. Rf: 0.52 (acetato de etilo:CHCI3, 5:2). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.49 (s, 1H), 6.32 (bs, 1H), 5.26 (bs, 1H), 4.60 (bs, 1H), 4.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.81 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.7 (s, 3H), 3.34 (d ancha, J = 7.2 Hz, 1H), 3.18-3.00 (m, 5H), 2.44 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.80-1.65 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 0.86 (d, J = 5.7 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 185.5, 180.8, 172.7, 155.9, 154.5, 147.3, 143.3, 141.5, 135.3, 130.4, 129.2, 127.5, 120.2, 117.4, 116.9, 80,2, 60.7, 60.3, 58.5, 55.9, 55.8, 54.9, 54.4, 50.0, 41.6, 40.3, 28.0, 25.3, 24.0, 18.1, 15.6, 8.5. ESI-MS m/z: Calculado para C34H43N5O8: 649.7. Encontrado (M + H) + : 650.3.

EJEMPLO 2 14 15 A una solución agitada de 20.6 g (31.75 mmoles) de 14 en 159 mL de CH3CN, se añadió a 0°C 82.096 mL (476.2 mmoles) de diisopropiletilamina, 25.9 mL (317.5 mmoles) de bromuro de metoximetileno y 155 mg (1.27 mmoles) de dimetilaminopiridina. Se agitó la mezcla a 23°C durante 24 horas. Se inactivo la reacción a 0°C con 750 mL de HCl 0.1N acuoso (pH = 5), y se extrajo con 2 x 400 mL de CH2CI2. Se secó la fase orgánica (sulfato de sodio) y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de hexano:acetato de etilo 4:1 a hexano:acetato de etilo 3:2) para dar 17.6 (83 por ciento) de 15, como un sólido amarillo.

Rf: 0.38 (hexano:acetato de etilo 3:7). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3: d 6.73 (s, 1H), 5.35 (bs 1H), 5.13 (s, 2H), 4.50 (bs, 1H), 4.25 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.84 (bs, 1H), 3.82-3.65 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.39-3.37 (m, 1H), 3.20-3.00 (m, 5H), 2.46 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.29 (s, 9H), 0.93 (d, J = 5.1 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 185.4, 180.9, 172,4, 155.9, 154.5, 149.0, 148.4, 141.6, 135.1, 131.0, 129.9, 127.6, 124.4, 123.7, 117.3, 99.1, 79.3, 60.7, 59.7, 58.4, 57.5, 56.2, 55.9, 55.0, 54.2, 50.0, 41.5, 39.9, 28.0, 25.2, 24.0, 18.1, 15.6, 8.5. ESI-MS m/z: Calculado para C36H47N5O9: 693.8. Encontrado (M + H)+: 694.3.

EJEMPLO 3 15 16 A un matraz que contenía 8 g (1.5 mL) de 15 en 1.6 L de metanol, se añadió 3.2 L de una solución acuosa de hidróxido de sodio 1M a 0°C. Se agitó la reacción durante dos horas a esta temperatura y luego se inactivo con HCl 6M a pH = 5. Se extrajo la mezcla con 3 x 1 L de acetato de etilo y se secó las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de CHCI3 a CHCI3:acetato de etilo, 2:1) para producir 5.3 mg (68 por ciento) de 16. Rf: 0.48 (CH3CN:H2O, 7:3, RP-C18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.73 (s, 1H), 5.43 (bs, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.54 (bs, 1H), 4.26 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.84 (bs, 1H), 3.80-3.64 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.41-3.39 (m, 1H), 3.22-3.06 (m, 5H), 2.49 (d, J = 18.6 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.30-2.25 (m, 1H), 2.4 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.45-1.33 (m, 1H), 1.19 (s, 9H), 1.00 (br d, J = 6.6 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 184.9, 180.9, 172.6, 154.7, 151.3, 149.1, 148.6, 144.7, 132.9, 131.3, 129.8, 124.5, 123.7, 117.3, 116.8, 99.1, 79.4, 59.8, 58.6, 57.7, 56.2, 55.6, 54.9, 54.5, 50.1, 41.6, 40.1, 28.0, 25.3, 24.4, 18.1, 15.7, 8.0. ESI-MS m/z: Calculado para C35 H45N5O9: 679.7. Encontrado (M + H)+: 680.3.

EJEMPLO 4 16 17 A una solución desgasificada de 1.8 g (2.64 mmoles) del compuesto 16 en 221 mL de DMF, se añadió 360 mg de Pd/C al 10 por ciento, y se agitó bajo H2 (presión atmosférica) durante 45 minutos. Se filtró la reacción a través de Celite bajo argón, a un matraz que contenía 2.58 g (7.92 mmoles) de Cs2CO3 anhidro. Luego se añadió 3.40 mL (52.8 mmoles) de bromoclorometano y se selló el tubo y se agitó a 100°C durante dos horas. Se enfrió la reacción, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con cloruro de metileno. Se concentró la capa orgánica y se secó (sobre sulfato de sodio) para dar 17 como un aceite pardo que fue usado en el siguiente paso sin purificación ulterior. Rf: 0.36 (hexano:acetato de etilo 1:5, SiO2). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.68 (s, 1H), 6.05 (bs, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.40 (bs, 1H), 5.31-5.24 (m, 2H), 4.67 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.19 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.07 (bs, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.64-2.96 (m, 5H), 2.65 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.28 (s, 9H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 3H).

RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 172.1, 162.6, 154.9, 149.1, 145.7, 135.9, 130.8, 130.7, 125.1, 123.1, 117.8, 100.8, 99.8, 76.6, 59.8, 59.2, 57.7, 57.0, 56.7, 55.8, 55.2, 49.5, 41.6, 40.1, 36.5, 31.9, 31.6, 29.7, 28.2, 26.3, 25.0, 22.6, 18.2, 15.8, 14.1, 8.8. ESI-MS m/z: Calculado para C36H47N5O9: 693.34. Encontrado (M + H) + : 694.3.

EJEMPLO 5 A un matraz que contiene una solución de 1.83 g (2.65 mmoles) de 17 en 13 mL de DMF, se añadió a 0°C 2.6 g (7.97 mmoles) de Cs2CO3 y 1.15 mL (13.28 milimoles) de bromuro de alilo. Se agitó la mezcla resultante a 23°C durante una hora. Se filtró la reacción a través de una almohadilla de Celite y se lavó con cloruro de metileno. Se secó la capa orgánica y se concentró (sulfato de sodio). Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, cloroformo:acetato de etilo 1:4), para producir 1.08 mg (56 por ciento de 18, como un sólido blanco.

Rf: 0.36 (cloroformo:acetato de etilo 1:3). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.70 (s, 1H), 6.27-6.02 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.83 (s, 1H), 5.37 (dd, J, = 1.01 Hz. J2 = 16.8 Hz, 1H), 5.40 (bs, 1H). 5.25 (dd, J, = 1.0 Hz, J2 = 10.5 Hz. 1H). 5.10 (s, 2H), 4.91 (bs, 1H), 4.25-4.22 (m, 1H), 4.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.14-4.10 (m, 1H), 4.08 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.00 (bs, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.56-3.35 (m, 2H), 3.26-3.20 (m, 2H), 3.05-2.96 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.24 (s, 9H), 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 172.0, 154.8, 148.8, 148.6, 148.4, 144.4, 138.8, 133.7, 130.9, 130.3, 125.1, 124.0, 120.9, 117.8, 117.4, 112.8, 112.6, 101.1, 99.2, 73.9, 59.7, 59.3, 57.7. 56.9, 56.8, 56.2, 55.2, 40.1, 34.6, 31.5, 28.1, 26.4, 25.1, 22.6, 18.5, 15.7, 14.0, 9.2. ESI-MS m/z: Calculado para C3gH51N5?9: 733.4. Calculado (M + H)+ 734.4.

EJEMPLO 6 A una solución de 0.1 g (0.137 mmoles) de 18 en 2 mL de dioxano se añadió 1.46 mL de HCl 4.2 M/dioxano y se agitó la mezcla durante 1.2 horas a 23°C. Se inactivo la reacción con 60 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado, a 0°C, y se extrajo con 2 x 70 mL de acetato de etilo. Se secó las capas orgánicas (sobre sulfato de sodio) y se concentró al vacío para dar 267 mg (95 por ciento) de 19, como un sólido blanco, que fue usado en reacciones subsiguientes sin purificación ulterior. Rf: 0.17 (acetato de etilo:metanol 10:1, SiO2) RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.49 (s, 1H), 6.12-6.00 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.34 (dd, J = 1.0 Hz, J = 17.4 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 1.0 Hz, J = 10.2 Hz, 1H), 4.18-3.76 (m, 5H), 3.74 (s, 3H), 3.71-3.59 (m, 1H), 3.36-3.20 (m, 4H), 3.01-2.90 (m, 1H), 2.60 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.97-1.86 (m, 1H), 0.93 (d, J = 8.7 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 175.5, 148.4, 146.7, 144.4, 142.4, 138.9, 133.7, 131.3, 128.3, 120.8, 117.9, 117.4, 113.8, 112.4, 101.1, 74.2, 60.5, 59.1, 56.5, 56.1,56.3. 56.0, 55.0, 50.5, 41.6, 39.5, 29.5, 26.4.24.9.21.1, 15.5. 9.3. ESI-MS m/z: Calculado para C32H39N5O6: 589. Encontrado (M + H) + : 590.

EJEMPLO 7 A una solución de 250 mg (0.42 mmoles) de 19 en 1.5 mmoles de cloruro de metileno, se añadió 0.3 mL (2.51 mmoles) de isotiocianato de fenilo, y se agitó la mezcla a 23°C durante una hora. Se concentró al vacío la reacción y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de hexano a 5:1 de hexano:acetato de etilo) para dar 270 mg (87 por ciento) de 20, como un sólido blanco. Rf: 0.56 (cloroformo:acetato de etilo, 1:4). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 8.00 (bs, 1H), 7.45-6.97 (m, 4H), 6.10 (s, 1H), 6.08-6.00 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.82 (s, 1H), 5.40 (dd, J = 1.5 Hz, J = 17.1 Hz, 1H), 3.38 (bs, 1H), 5.23 (dd, J = 1.5 Hz, J = 10.5 Hz, 1H). 4.42-4.36 (m, 1H). 4.19-4.03 (m, 5H), 3.71 (s, 3H), 3.68-3.17 (m, 4H). 2.90 (dd. J = 7.8 Hz, J = 18.3 Hz, 1H), 2.57 (d. J = 18.3 Hz. 1H), 2.25 (s, 3H), 2.12 (s, 3H). 2.10 (s, 3H). 1.90 (dd, J = 12.3 Hz, J = 16.5 Hz. 1H), 0.81 (d. J = 6.9 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 178.4, 171.6. 148.6, 146.8. 144.3, 142.7. 138.7. 136.2, 133.6. 130.7. 129.8, 126.6. 124.2, 124.1, 120.9, 120.5, 117.7, 117.4, 116.7, 112.6, 112.5, 101.0. 74.0. 60.6, 59,0. 57.0, 56.2, 56.1, 55.0. 53.3. 41.4, 39.7, 26,3. 24.8. 18.3. 15.5, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C3gH44N5?5S: 724.8; encontrado (M + H) + : 725.3.

EJEMPLO 8 20 21 A una solución de 270 mg (0.37 mmoles) de 20 en 1 mL de dioxano, se añadió 3.5 mL de HCl 4.2N/dioxano y se agitó la reacción a 23°C durante 30 minutos. Luego se añadió 20 mL de acetato de etilo y 20 mL de H2O, y se decantó la capa orgánica. Se hizo básica la fase acuosa con 60 mL de bicarbonato de sodio acuoso, saturado (pH = 8) a 0°C, y a continuación se extrajo con 2 x 50 ml de cloruro de metileno. Se secó los extractos orgánicos combinados (sulfato de sodio) y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, acetato de etilo:metanol, 5:1) para producir 158 mg (82 por ciento) del compuesto 21 como un sólido blanco. Rf: 0.3 (acetato de etilo:metanol 1:1) RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.45 (s, 1H), 6.12-6.03 (m. 1H), 5.91 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.38 (dd, J, = 1.2 Hz. J2 = 17.1 Hz, 1H). 5.24 (dd. J, = 1.2 Hz, J2 = 10.5 Hz, 1H), 4.23-4.09 (m, 4H), 3.98 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.90 (bs, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.36-3.02 (m, 5H), 2.72-2.71 (m, 2H), 2.48 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85 (dd, J, = 11.7 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.4, 146.7, 144.4, 142.8, 138.8, 133.8, 130.5, 128.8, 121.5, 120.8, 118.0, 117.5, 116.9, 113.6, 112.2, 101.1, 74.3, 60.7, 59.9, 58.8, 56.6, 56.5, 55.3, 44.2, 41.8, 29.7, 26.5, 25.7, 15.7, 9.4. ESI-MS m/z: calculado para C29H34N4O5: 418.3.

Encontrado (M + H) + : 519.2.

EJEMPLO 9 A una solución de 0.64 g (1.22 mmoles) de 21 en 6.13 mL de cloruro de metileno, se añadió a -10°C 0.104 mL (1.28 mmoles) de piridina y 0.177 mL (1.28 mmoles) de cloroformiato de 2,2,2-tricloroetilo. Se agitó la mezcla a esa temperatura durante una hora y luego se inactivo la reacción añadiendo 10 mL de HCl 0.1N y se extrajo con 2 x 10 mL de cloruro de metileno. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2; (hexano:acetato de etilo 1:2) para producir 0.84 g (98 por ciento) de 22, como un sólido en forma de espuma blanca. Rf: 0.57 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.50 (s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 6.94 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.37 (dq, J, = 1.5 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.26 (dq, J = 1.8 Hz, J2 = 10.2 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 12 Hz, 1H); 4.22-4.10 (m, 4H), 4.19 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.37-3.18 (m, 5H), 3.04 (dd, Jt = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85 (dd, J, = 12.3 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H).

RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) d 154.3, 148.5, 146.7, 144.5, 142.8, 139.0, 133.8, 130.7, 128.7, 121.3, 120.8, 117.8, 117.7, 116.8, 112.7, 101.2, 77.2, 74.3, 60.7, 59.9, 57.0, 56.4, 55.3, 43.3, 41,7, 31.6, 26.4, 25.3, 22.6, 15.9, 14.1, 9.4. ESI-MS m/z: calculado para C32H35CI3N4O7: 694.17. Encontrado (M + H)+: 695.2.

EJEMPLO 10 23 A una solución de 0.32 g (0.46 mmol) de 22 en 2.33 mL de CH3CN, se añadió a 0°C 1.62 mL (0.34 mmoles) de diisopropiletilamina, 0.57 mL (7.0 mmoles) de éter metílico de bromometilo y 6 mg (0.046 mmoles) de dimetilaminopiridina. Se calentó la mezcla a 30°C durante diez horas. Luego se diluyó la reacción con 30 mL de diclorometano y se vertió en 10 mL de una solución acuosa de HCl a pH = 5. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio y se eliminó el solvente a presión reducida para dar un residuo que fue purificado mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 2:1) para dar 0.304 g (88 por ciento) de 23, como un sólido en forma de espuma blanca. Rf: 0.62 (hexano:acetato de etilo, 1:3). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.73 (s, 1H), 6.10 (m, 1H), 5.94 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.39 (dq, J¡ = 1.5 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.26 (dq, Jt = 1.8 Hz, J2 = 10.2 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.61 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 6.6 Hz, 1H); 4.25 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.22-4.11 (m, 4H), 4.03 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.38-3.21 (m, 5H), 3.05 (dd, J^ = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.65 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.79 (dd, Ji = 12.3 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) d 154.3, 148.6. 148.4, 144.5. 139.0. 133.6. 130.6, 130.1, 125.07. 124.7. 124.0, 121.1, 117.7, 112.6, 101.2, 99.2, 77.2, 74.4, 74.1, 59.8, 59.8, 57.7, 57.0, 56.8, 56.68, 55.3, 43.2, 41.5, 26.4, 25.2, 15.9, 9.3. ESI-MS m/z: Calculado para C34H39CI3N4O8: 738.20.

Encontrado (M-H) + : 739.0. EJEMPLO 11 A una suspensión de 0.304 g (0.41 mmol) de 23 en 4 mL de ácido acético acuoso al 90 por ciento, se añadió 0.2 g (6.17 mmoles) de zinc en polvo y se agitó la reacción durante siete horas a 23°C. Se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celite, que se lavó con cloruro de metileno. Se lavó la capa orgánica con 15 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato- de sodio (pH 9), y se secó sobre sulfato de sodio. Se eliminó el solvente a presión reducida para dar 0.191 g (83 por ciento) de 24, como un sólido blanco. Rf: 0.3 (acetato de etilo:metanol, 5:1). RMN con 1H (300 MHz. CDCI3): d 6.68 (s, 1H), 6.09 (m, 1H), 5.90 (d. J = 1.5 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.39 (dq, Jt = 1.5 Hz, J2 =17.1 Hz, 1H), 5.25 (dq. J, = 1.5 Hz. J2 = 10.2 Hz. 1H), 5.10 (s, 2H), 4.22-4.09 (m. 3H), 3.98 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.89 (m, 1H); 3.69 (s, 3H); 3.57 (s, 3H), 3.37-3.17 (m, 3H), 3.07 (dd, J1 = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.71 (m, 2H), 2.48 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s, 3H). 2.17 (s, 3H), 1.80 (dd. J, = 12.3 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.5, 148.2, 144.3, 138.7, 133.7, 130.7, 129.9, 125.0, 123.9, 121.3, 117.9, 117.5, 113.6, 112.0, 101.0, 99.2, 74.0, 59.8, 59.7, 58.8, 57.6, 57.0, 56.2, 55.2, 44.2, 41.5, 31.5, 26.4, 25.6, 22.5, 16.7, 14.0, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C31H38N4O6: 562.66. Encontrado (M + H) + : 563.1.

EJEMPLO 12 A una solución de 20 mg (0.035 mmol) de 24 en 0.7 mmol de H2O y 0.7 mmol de THF, se añadió a 0°C 12 mg (0.17 mmol) de NaNO2 y 0.06 mL de AcOH acuoso al 90 por ciento, y se agitó la mezcla a 0°C durante tres horas. Después de diluir con 5 mL de cloruro de metileno, se lavó la capa orgánica con 1 mL de agua, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 2:1) para dar 9.8 mg (50 por ciento) de 25, como un sólido blanco. Rf: 0.34 (hexano:acetato de etilo, 1:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.71 (s, 1H), 6.11 (m, 1H), 5.92 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 1.5 Hz, 1H); 5.42 (dq, J, = 1.5 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.28 (dq, J, = 1.5 Hz, J2 = 10.2 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.26-4.09 (m, 3H). 4.05 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 3.0 Hz, 1H); 3.70 (s, 3H), 3.67-3.32 (m, 4H), 3.58 (s, 3H), 3.24 (dd, Ji = 2.7 Hz, H2 = 15.9 Hz, 1H), 3.12 (dd, Ji = 8.1 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H); 2.51 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.83 (dd, Ji = 12.3 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.7, 148.4, 138.9, 133.7, 131.1, 129.4, 125.1, 123.9, 120.7, 117.6, 117.5, 113.2, 112.3, 101.1, 99,2, 74.0.63.2, 59.8, 59.7, 57.9. 57.7, 57.0.56.5, 55.2, 41.6, 29.6, 26.1, 25.6, 22.6. 15.7, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C31H37N3O7: 563.64. Encontrado: (M + H)+ 564.1.

EJEMPLO 13 29 Se añadió 2.0 g (4.90 mmoles) del material de partida a una suspensión de 354 mg (8.86 mmoles) de hidruro de sodio en 40 mL de THF, a 23°C, después de lo cual se trató la suspensión con 1.135 mL (8.25 mmoles) de cloroformiato de alilo, a 23°C, y luego se dejó al reflujo durante tres horas. Se enfrió la suspensión, se filtró, se lavó el sólido con 100 mL de acetato de etilo y se concentró el filtrado. Se molió el crudo oleoso con 100 mL de hexano y se mantuvo a 4°C durante la noche. Después se decantó el solvente y se trató la suspensión amarilla clara con 20 mL de cloruro de metileno y se precipitó con 100 mL de hexano. Después de 10 minutos se volvió a decantar el solvente. Se repitió la operación hasta que apareció un sólido blanco. Se separó por filtración el sólido blanco y se secó para dar 1.80 g (65 por ciento) del compuesto 29, como un sólido blanco. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 5.71 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.59 (m, 1H), 4.11 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.17 (dd, J = 6.0 Hz, J = 2.7 Hz, 2H). 3.20 (dd, J = 5.4 Hz, J = 2.1 Hz, 2H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 173.16, 152.7, 144.0, 139.7, 137.8, 126.0. 125.6, 123.4, 118.3, 73.4, 52.4, 45.5, 35.8, 33.7. ESI-MS m/z: Calculado para C2oH18CI3NO4S: 474.8. Encontrado (M + Na)+: 497.8. EJEMPLO 14 Se formó un azeótropo con una mezcla de 585 mg (1.03 mmoles) del compuesto 25 y 1.47 mg (3.11 mmoles) del compuesto 29, con 3 x 10 mL de tolueno anhidro. Se añadió a una solución de 25 y 29 en 40 ml de cloruro de metileno 633 mg (5.18 mmoles) de DMAP y 994 mg (5.18 mmoles) de EDC-HCI, a 23°C. Se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante tres horas. Se dividió la mezcla con 50 mL de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se separó las capas. Se lavó la capa acuosa con 50 mL de cloruro de metileno. Se secó las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna rápida (acetato de etilo/hexano, 1:3) para obtener 1.00 g (95 por ciento) de 30, como un sólido amarillo crema pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72 (m, 2H), 7.52 (m, 2H), 7.38 (m. 2H). 7.28 (m, 2H), .6.65 (s, 1H), 6.03 (m, 1H), 5.92 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.39 (m, 1H), 5.29 (dq, J = 10.3 Hz, J = 1.5 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.73 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.36-3.96 (m, 9H), 3.89 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.55 (s, 3H). 3.33 (m, 1H), 3.20 (m, 2H), 2.94 (m, 3H), 2.59 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.02 (s, 3H). 1.83 (dd, J = 16.0 Hz, J = 11.9 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 169.7, 154.0, 148.8, 148.4, 145.7, 144.5, 140.9, 139.0, 133.7, 130.9, 130.6, 127.6, 127.0, 124.8, 14.6, 124.1, 10.8, 119.9, 118.2, 117.7, 117.3, 112.7, 112.1, 101.3, 99.2, 74.7, 73.9, 64.4, 59.8, 57.7, 57.0, 56.8, 55.4, 53.3, 46.7, 41.4, 36.5, 34.7, 31.5, 26.4, 24.9, 22.6, 15.7, 14.0, 9.1.

ESI-MS m/z: Calculado para C51H53CI3N4?10: 1020.4. Encontrado (M + H) + : 1021.2.

EJEMPLO 15 30 31 A una solución de 845 mg (0.82 mmol) de 30, 500 mg (8.28 mmoles) de ácido acético y 29 mg (0.04 mmol) de (PPh3)2PdCI2 en 20 mL de cloruro de metileno anhidro, a 23°C, se añadió a gotas 650 mg (2.23 mmoles) de Bu3SnH. Se agitó la mezcla de reacción a esta temperatura durante 15 minutos. Se inactivo el crudo con 50 mL de agua y se extrajo con 3 x 50 mL de cloruro de metileno. Se secó las capas orgánicas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna rápida (acetato de etilo/hexano en gradiente de 1:5 a 1:3), para obtener 730 mg (90 por ciento) del compuesto 31, como un sólido amarillo crema pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72 (m, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.30 (m. 2H), 6.65 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.74 (s. 1H); 5.36 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.32 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 9.0, 1H), 4.75 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.73 (m, 1H). 4.48 (d, J = 11.9 Hz. 1H). 4.08 (m, 4H), 3.89 (m, 1H), 3.86 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.38 (m, 1H), 3.25 (m, 1H).3.02-2.89 (m, 4H), 2.67 (s, 1H), 2.61 (s, 1H), 2.51 (dd, J = 14.3 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.83 (m, 1H). RMN con 13C (75 MHz. CDCI3): d 168.2, 152.5. 148.1, 146.2, 144.4, 144.3, 143.3, 139.6. 134.6, 129.7. 129.6, 126.2, 125.6, 123.4, 123.3, 121.6, 118.5, 116.3, 110.7, 110.2 105.1, 99.4, 98,5, 75.2, 73.3, 61.7, 58.4, 57.9, 56.3, 56.1, 55.1, 54.7, 53.9, 51.9, 45.2, 40.1, 35.6, 33.3, 24.8, 23.3, 14.5, 7.3. ESI-MS m/z: Calculado para C48H49CI3N4O10S: 980.3. Encontrado (M + H) + : 981.2.

EJEMPLO 16 31 32 A una solución de 310 mg (0.32 mmol) de 31 en 15 mL de cloruro de metileno anhidro, a -10°C, se añadió una solución de 165 mg (0.32 mmol) de anhidrido bencenselenínico al 70 por ciento en 7 mL de cloruro de metileno anhidro, a través de una cánula, manteniendo la temperatura a -10°C. Se agitó la mezcla de reacción a -10°C durante cinco minutos. Se añadió a esa temperatura 30 mL de una solución saturada de bicarbonato de sodio. Se lavó la capa acuosa con otros 40 mL de cloruro de metileno. Se secó las capas orgánicas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna rápida (acetato de etilo/hexano en gradiente de 1:5 a 1:1), para obtener 287 mg (91 por ciento, por HPLC 91.3 por ciento) de 32, como un sólido amarillo crema pálido, como una mezcla de dos isómeros (65:35) que fueron usados en el siguiente paso. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d (mezcla de isómeros) 7.76 (m, 4H), 7.65 (m, 4H), 7.39 (m, 4H); 7.29 (m, 4H); 6.62 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.79-5.63 (m, 6H), 5.09 (s, 1H), 5.02 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.80-4.63 (m, 6H), 4.60 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.38 (d, J = 12.8 Hz, J = 7.5 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 12.8 Hz, J = 7.5 Hz, 1H), 4.16-3.90 (m, 10H), 3.84 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.33-2.83 (m, 14H), 2.45-2.18 (m, 2H), 2.21 (s, 6H), 2.17 (s, 6H), 1.77 (s, 6H), 1.67 (m, 2H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d (mezcla de isómeros) 168.6, 168.4, 158.6, 154.8, 152.8, 142.5, 147.3, 147.2, 146.8, 144.1, 144.0, 140.8, 139.7, 137.1, 129.8, 129.3, 128.4, 128.7, 126.5, 125.5, 123.7, 123.6, 123.5, 123.4, 122.2, 121.3, 118.3, 115.8, 115.5, 110.2, 106.9, 103.5, 103.2, 100.1, 99.6, 97.9, 97.7, 93.8, 73.4, 70.9, 69.2, 64.9, 62.5, 59.3, 58.9, 58.4, 56.7, 56.3, 56.2, 55.4, 55.2, 55.1, 54.9, 54.7, 54.3, 54.1, 53.8, 52.8, 45.5, 40.5, 40.0, 39.8, 35.8, 35.5, 33.9, 33.7, 30.1, 28.8, 24.2, 24.1, 21.2, 14.5, 14.4, 12.7, 6.0, 5.7. ESI-MS m/z: calculado para C^H^CIa^OnS: 996.3. Encontrado (M + H)+: 997.2.

EJEMPLO 17 32 33 Se flameó dos veces el matraz de reacción; se purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de 39.1 mL, (0.55 mmol, 5 equivalentes) de DMSO en 4.5 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió a gotas 37.3 mL (0.22 mmol, 2 equivalentes) de anhidrido tríflico a -78°C. Se agitó la mezcla de reacción a 78°C durante veinte minutos, luego se añadió, por medio de una cánula, una solución de 110 mg (0.11 mmol, por HPLC 91.3 por ciento) de 32 en 1 mL de cloruro de metileno anhidro (para la adición principal y 0.5 mL para el lavado), a -78°C. Durante la adición se mantuvo la temperatura a -78°C en ambos matraces y cambió el color de amarillo a pardo. Se agitó la mezcla de reacción a -40°C durante 35 minutos. Durante ese periodo de tiempo se volvió la solución de amarilla a verde oscura. Después de ese tiempo se añadió a gotas 153 mL (0.88 mmol, 8 equivalentes) de 'Pr2NEt, y se mantuvo la mezcla de reacción a 0°C durante 45 minutos, cambiando el color de la solución a pardo durante ese tiempo. Después se añadió a gotas 41.6 mL (0.44 mmol, 4 equivalentes) de terbutanol y 132.8 mL (0.77 mmol, 7 equivalentes) de 2-terbutil-1 ,1 ,3,3-tetrametilguanidina, y se agitó a 23°C la mezcla de reacción durante 40 minutos. Después de ese tiempo se añadió a gotas 104.3 mL (1.10 mmoles, 10 equivalentes) de anhidrido acético, y se mantuvo la mezcla de reacción a 23°C durante una hora más. Luego se diluyó la mezcla de reacción con 20 mL de cloruro de metileno y se lavó con 50 mL de solución acuosa saturada de NH4CI. 50 mL de bicarbonato de sodio y 50 mL de cloruro de sodio. Se secó las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (eluyente: acetato de etilo/hexano, gradiente de 1:3 a 1:2), para dar 54 mg (58 por ciento) del compuesto 33, como un sólido amarillo pálido. RMN con H (300 MHz, CDCI3): d 6.85 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.20 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.14 (d. J = 5.3 Hz, 1H), 5.03 (m, 1H), 4.82 (d, J = 12.2, 1H), 4.63 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.35-4.17 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.45 (m, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 2.03 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 168.5, 167.2, 152.7, 148.1, 147.1, 144.5, 139.6, 139.1, 130.5, 129.0, 123.7, 123.5, 123.3, 118.8, 116.5, 112.1, 100.6, 97.8, 73.3, 60.5, 59.4, 59.2, 58.3, 57.6, 57.4, 56.1, 53.3, 53.1, 40.6, 40.0, 31.0, 22.2, 18.9, 14.4, 8.1. ESI-MS m/z: calculado para CaeHa.CI.N^nS: 842.1. Encontrado (M + H)+: 843.1.

EJEMPLO 18 33 34 A una solución de 12 mg (0.014 mmol) de 33 en 1.2 mL de diclorometano seco y 1.2 mL de acetonitrilo de calidad HPLC, se añadió, a 23°C, 21 mg (0.14 mmol) de yoduro de sodio y 15.4 mg (0.14 mmol) de cloruro de trimetilsililo recién destilado (sobre hidruro de calcio, a la presión atmosférica). La mezcla de reacción cambió a un color naranja. Después de 15 minutos se diluyó la solución con 10 mL de diclorometano y se lavó con 3 x 10 ml de una solución acuosa saturada, recién preparada, de Na2S2O4. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se obtuvo 13 mg (rendimiento cuantitativo) del compuesto 34, como un sólido amarillo pálido, que fue usado sin purificación ulterior. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.85 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.27 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.14 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 12.2, 1H), 4.63 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.27 (bs, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.44 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 2.91 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.03 (s, 3H). ESI-MS m/z: Calculado para C34H35N4O?0S: 798.1. Encontrado (M + H) + : 799.1.

EJEMPLO 19 34 35 A una solución de 13 mg (0.016 mmol) de 34, en 1 mL de una mezcla 90:10 de ácido acético/H2O, se añadió a 23°C 5.3 mg (0.081 mmol) de polvo de zinc. Se calentó la mezcla de reacción a 70°C durante seis horas. Después de ese tiempo se enfrió a 23°C, se diluyó con 20 mL de cloruro de metileno y se lavó con 15 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y 15 mL de una solución acuosa de trietilamina. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida con sílice-NH2 (eluyente: acetato de etilo/hexano en gradiente de 0:100 a 50:50), para dar 6.8 mg (77 por ciento para los dos pasos) del compuesto 35, como un sólido amarillo pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.51 (s, 1H), 6.03 (dd, J = 1.3 Hz, J = 26.5 Hz, 2H), 5.75 (bs, 1H); 5.02 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.18 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 1.9 Hz, J = 11.5 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.26 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 2.88 (m, 2H), 2.30-2.10 (m, 2H); 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.02 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 174.1, 168.4, 147.8, 145.4, 142.9, 140.8, 140.1, 131.7, 130.2, 129.1, 128.3, 120.4, 118.3, 117.9, 113.8, 111.7, 101.7, 61.2, 59.8, 59.2, 58.9, 54.4, 53.8, 54.4, 41.3, 41.5, 34.1, 23.6, 20.3, 15.5, 9.4. ESI-MS m/z: calculado para C31H34N4O8S: 622.7. Encontrado (M + H) + : 523.2.

EJEMPLO 20 Se trató una solución de 378 mg (1.5 mmoles) de yoduro de N-metilpiridin-4-carboxialdehído en 5.8 mL de DMF anhidra con 2 x 10 mL de tolueno anhidro, para separar la cantidad de agua, azeotrópicamente del tolueno. Se añadió una solución de 134 mg (0.21 mmol) de 35, previamente tratado con 2 x 10 mL de tolueno anhidro, en 7.2 mL de CH2CI2 anhidro (destilado sobre CaH2), por medio de una cánula, a 23°C, a esta solución naranja. Se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 4 horas. Después de este tiempo se añadió a gotas 32.2 mL (0.21 mmol) de DBU, a 23°C, y se agitó durante 15 minutos a 23°C. Se añadió a la mezcla de reacción 5.8 mL de una solución acuosa saturada, recién preparada, de ácido oxálico, y se agitó durante 30 minutos a 23°C. A continuación se enfrió la mezcla de reacción a 0°C y se añadió en porciones NaHCO3, seguido por la adición de solución acuosa saturada de NaHCO3. Se extrajo la mezcla con éter. Se añadió K2CO3 a la capa acuosa y se extrajo con éter. Se secó las capas orgánicas combinadas sobre MgSO4, y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna rápida (AcOEt/hexano de 1/3 a 1/1) para producir 77 mg (57 por ciento) del compuesto 36, como un sólido amarillo pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.48 (s, 1H), 6.11 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.02 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 5.70 (bs, 1H), 5.09 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.66 (bs, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.27 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.21 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.54 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 2.88-2.54 (m, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.04 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 186.7, 168.5, 160.5, 147.1, 146.4, 142.9, 141.6, 140.7, 130.4, 129.8, 121.7 (2C), 120.0, 117.8, 117.1, 113.5, 102.2, 61.7, 61.4, 60.3, 59.8, 58.9, 54.6, 41.6, 36.9, 29.7, 24.1, 20.3, 15.8, 14.1, 9.6. ESI-MS m/z: calculado para C31H31N3O9S: 621.7. Encontrado (M + H)+: 622.2.

EJEMPLO 21 36 Et-770 A una solución de 49 mg (0.08 mmol) de 36 y 46.2 mg (0.27 mmol) de 2-[3-hidroxi-4-metoxifenil]etilamina en 2.5 mL de etanol, se añadió 105 mg de gel de sílice (sílicagel) a 23°C. Se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 14 horas. Se diluyó con hexano y se vertió en una columna de cromatografía (acetato de etilo/hexano de 1/3 a 1/1) para dar 55 mg (90 por ciento) de Et-770, como un sólido amarillo pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.60 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.02 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.57 (bs, 1H), 4.32 (bs, 1H), 4.28 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 2.1 Hz, J = 11.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.10 (ddd, J, = 4.0 Hz, J2 = 10.0 Hz, J3 =11.0 Hz, 1H), 2.94 (m, 2H), 2.79 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.47 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.09 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). ESI-MS m/z: calculado para C40H42N4O10S: 770.7.

Encontrado (M + H) + : 771.2. EJEMPLO 22 A una solución de 22 mg (0.042 mmol) de 21 en 0.8 mL de cloruro de metileno se añadió 6.44 mg (0.042 mmol) de anhidrido ftálico, y se agitó la mezcla de reacción durante dos horas a 23°C. Luego se añadió 1 mg (0.006 mmol) de carbonildiimidazol y se agitó la mezcla a 23°C durante 7 horas. Luego se añadió 5.86 mg (0.035 mmol) de carbonildiimidazol y se agitó la reacción a 23°C durante 17 horas más. Se diluyó la solución con 15 mL de cloruro de metileno y se lavó con 15 ml de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 2:1) para dar 26.4 mg (96 por ciento) de 27, como un sólido blanco. Rf: 0.58 (acetato de etilo). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.73-7.64 (m, 4H), 6.40 (s, 1H), 6.12-6.01 (m, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.58 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.37 (dd, J, = 1.8 Hz, J2 = 17.4 Hz), 5.23 (dd, JT = 1.8 Hz, J2 = 10.5 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.22-4.15 (m, 3H), 4.08 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.59-3.55 (m, 2H), 3.35 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.27-3.16 (m, 2H), 3.05 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18.3 Hz, 1H), 2.64 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.80 (dd, J^ = 11.4 Hz, J2 = 15 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 167.7, 148.9, 146.4, 144.2, 142.6, 139.5, 134.0, 133.5, 132.0, 131.0, 128.3, 123.0, 121.3, 120.9, 118.1, 117.5, 116.8, 113.6, 112.4, 100.8, 74.5, 60.6, 60.5, 57.7, 56.6, 55.5, 42.3, 41.7, 26.6, 25.5, 15.9, 9.46.

ESI-MS m/z: calculado para C37H35N4O7: 648.79. Encontrado (M + H)+: 649.3.

EJEMPLO 23 A una solución de 26 mg (0.041 mmol) de 27 en 11 mL de cloruro de metileno, se añadió 11 mL de ácido acético, 2.36 mg de (PPh3)2PdCI2 y 28 mL (OJO mmol) de Bu3SnH a 23°C. Después de agitar a esa temperatura durante dos horas se vertió la reacción en una almohadilla de columna rápida (SiO2, gradiente de hexano a hexano:acetato de etilo 2:1), para dar 24.7 mg (99 por ciento) de 28, como un sólido blanco. Rf: 0.33 (hexano.acetato de etilo 2:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.75-7.70 (m, 2H), 7.69-7.65 (m, 2H), 6.39 (s, 1H), 5.82 (bs, 1H), 5.50 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.0 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.45 (bs, 1H), 4.23-4.19 (m, 2H), 4.10-4.09 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.60-3.48 (m, 2H), 3.36-3.33 (m, 1H), 3.26-3.20 (m, 1H), 3.14-3.08 (m, 1H), 3.98 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.61 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.85 (dd, J, = 12 Hz, J2 = 15.3 Hz). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 167.8, 146.4, 145.1, 143.9, 142.7, 137.1, 133.5, 131.9, 130.8, 128.4, 122.9, 120.8, 118.0, 116.8, 114.0, 113.4, 106.4, 100.4, 60.6, 60.5, 57.8, 56.6, 55.5, 55.2, 42.6, 41.5, 25.6, 25.5, 15.8, 8.9. ESI-MS m/z: calculado para C34H32N4O7: 608.6. Encontrado (M + H) + : 609.2.

EJEMPLO 24 ina A una solución de 357 mg (0.058 mmol) de 28 en 3 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 41.58 mL (0.58 mmol) de cloruro de acetilo y 47.3 mL (0.58 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y a continuación se diluyó la solución con 15 mL de cloruro de metileno y se lavó con 15 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (RP-18, CH3CN:H2O 60:40) para producir 354 mg (94 por ciento) de ftalascidina, como un sólido blanco. Rf: 0.37 (CH3CN:H2O 7:3, RP-18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72-7.68 (m, 2H), 7.67- 7.63 (m, 2H), 6.38 (s, 1H), 5.69 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.30 (bs, 1H), 4.25-4.21 (m, 2H), 4.02 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.64-3.62 (m, 5H), 3.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 3.02 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 1.8 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.73 (dd, J1 = 12.0 Hz, J2 = 15.3 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 168.5, 167.6, 146.2, 144.2, 142.5, 141.0, 140.5, 133.4, 131.8, 130.7, 128.2, 120.9, 120.8, 117.9, 116.4, 113.6, 101.1, 60.4, 60.0, 57.0, 56.3, 55.6, 55.4, 41.6, 41.5, 26.5, 25.2, 20.2, 15.7, 9.4. ESI-MS m/z: calculado para C36H34N4O8: 650. Encontrado (M + H) + : 651.2. EJEMPLO 25 17 42 A una solución de 300 mg (0.432 mmol) de 17 en 2 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 30.7 mL (0.432 mmol) de cloruro de acetilo y 34.9 mL (0.432 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante dos horas a esa temperatura y luego se diluyó la solución con 15 mL de cloruro de metileno y se lavó con 15 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida, para dar 318 mg (100 por ciento) de 42, como un sólido blanco que fue usado en reacciones subsiguientes sin purificación ulterior. Rf: 0.5 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.66 (s, 1H), 5.93 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.42 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.98 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.11 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.98 (bs. 1H); 3.73-3.61 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.52-3.48 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.33 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H), 2.97-2.87 (m, 1H), 2.75-2.70 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.26 (s, 6H), 2.16 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.70 (dd, J = 11.7 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 1.33 (s, 9H), 0.59 (d, J = 6.0 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 172.0, 168.3, 152.3, 148.2, 144.4, 140.4, 140.2, 130.9, 130.5, 125.3. 123.4, 120.8, 117.6, 112.7, 111.7, 101.4, 99.1, 79.2, 59.5, 58.8, 57.5, 57.4, 56.4, 55.5, 55.0, 41.3, 39.0, 28.2, 26.4, 24.6, 19.9, 18.4, 15.4, 9.1. ESI-MS m/z: calculado para C38H49NO10: 735.82. Encontrado (M + H) + : 736.3.

EJEMPLO 26 A una solución de 318 mg (0.432 mmol) de 42 en 2.16 mL de cloruro de metileno se añadió 1.33 mL (17.30 mmoles) de ácido trifluoroacético, y se agitó la mezcla de reacción durante 3.5 horas a 23°C. Se inactivo la reacción a 0°C con 60 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado, y se extrajo con 2 x 70 mL de cloruro de metileno. Se secó las capas orgánicas combinadas (sobre sulfato de sodio) y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, acetato de etilo:metanol 20:1) para dar 154 mg (60 por ciento) de 43, como un sólido blanco. Rf: 0.22 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.47 (s, 1H), 6.22 (bs, 1H), 5.95 (d. J = 1.2 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.08-4.06 (m, 2H), 4.01 (bs, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.33 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.26-3.22 (m, 1H), 2.95 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.80-2.76 (m, 2H), 2.58 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.77 (dd, J^ = 12.3 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 0.90 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 174.8, 169.0, 146.8, 144.4, 142.8, 140.5, 140.2, 131.1, 128.8, 120.8, 120.5, 117.1. 112.9, 111.6, 101.5, 60.3, 59.0, 56.5, 56.3, 55.6, 55.1, 50.2, 41.6, 39.5, 26.8, 26.3, 24.9, 20.2, 15.4, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C31H37N5O7: 591.65. Encontrado (M + H) + : 592.3.

EJEMPLO 27 43 44 A una solución de 154 mg (0.26 mmol) de 43 en 1.3 mL de cloruro de metileno, se añadió 186 mL (1.56 mmol) de isotiocianato de fenilo, y se agitó la mezcla a 23°C durante dos horas. Se concentró la reacción al vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de hexano a hexano:acetato de etilo 1:1) para dar 120 mg (63 por ciento) de 44, como un sólido blanco. Rf: 0.41 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 8.17 (s, 1H), 7.49-7.44 (m, 3H), 7.31-7.24 (m, 3H), 7.05 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.52 (bs, 1H), 4.54 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 3.80 (bs, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.40 (bs, 1H), 3.32 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.16 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.82-2.61 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.80 (dd, J = 12.0 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 0.62 (d, J = 6.0 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) d 178.5, 171.9, 168.7, 146.7, 144.5, 142.6, 140.6, 140.3, 136.3, 131.0, 129.9, 128.9, 126.7, 124.4, 120.9, 120.6, 117.7, 116.6, 112.7, 111.9, 101.4, 60.4, 58.7, 57.5, 56.1, 55.7, 55.1, 53.3, 41.4, 38.8, 26.3, 24.4, 20.2, 18.1, 15.3. 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C38H42N6O7S: 726.3. Encontrado (M + H) + : 727.3.

EJEMPLO 28 44 45 A una solución de 120 mg (0.165 mmol) de 44 en 0.9 mL de dioxano, se añadió 1.8 mL de HCl 5.3 N/dioxano y se agitó la reacción a 23°C durante 2.5 horas. Luego se añadió 10 mL de cloruro de metileno y 5 mL de agua a esta reacción, y se decantó la capa orgánica. Se hizo básica la fase acuosa con 20 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado (pH = 8) a 0°C y luego se extrajo con 2 x 15 mL de cloruro de metileno. Se secó los extractos orgánicos combinados (sobre sulfato de sodio) y se concentró al vacío para dar 75 mg (87 por ciento) de 45 como un sólido blanco, que fue usado en reacciones subsiguientes sin purificación ulterior. Rf: 0.23 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3: d 6.43 (s, 1H), 5.94 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.98 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 3.91 (bs, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.34-3.25 (m, 2H), 3.05 (dd, J = 1.8 Hz, J2 = 8.1 Hz, 1H), 2.80-2.73 (m, 3H), 2.46 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 1.98 (s. 3H). 1.79 (dd, JT = 12.6 Hz, J2 = 16.2 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 168.7, 146.7, 144.4, 142.9, 140.4, 130.4, 128.9, 121.1, 120.8, 117.8, 116.8, 113.6, 111.5, 101.4, 67.6, 60.5, 59.8, 58.4, 56.6, 55.8, 55.3, 43.6, 41.8, 31.3, 25.6, 20.2, 15.6, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C28H32N4O6: 520.58. Encontrado (M + H) + : 521.3.

EJEMPLO 29 45 Ptalasci ipa A una solución de 10 mg (0.02 mmol) de 45 en 0.4 mL de cloruro de metileno, se añadió 2.84 mg (0.02 mmol) de anhidrido ftálico y se agitó la reacción durante dos horas a 23°C. Luego se añadió 0.5 mg (0.003 mmol) de carbonildiimidazol y se agitó la mezcla a 23°C durante 7 horas. Luego se añadió 2.61 mg (0.016 mmol) de carbonildiimidazol y se agitó la reacción a 23°C durante otras 17 horas. Se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (RP-18, CH3CN:H2O 60:40), para producir 11.7 mg (93 por ciento) de ftalascidina, como un sólido blanco. Rf: 0.37 (CH3CN:H2O 7:3, RP-18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72-7.68 (m, 2H), 7.67-7.63 (m, 2H); 6.38 (s, 1H), 5.69 (d, J = 12 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.30 (bs, 1H), 4.25-4.21 (m, 2H), 4.02 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.64-3.62 (m, 5H), 3.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 3.02 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 1.8 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.73 (dd, J = 12.0 Hz, J2 = 15.3 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 168.5, 167.6, 146.2, 144.2, 142.5, 141.0, 140.5, 133.4, 131.8, 130.7, 128.2, 120.9, 120.8, 117.9, 116.4, 113.6, 101.1, 60.4, 60.0, 47.0, 56.3, 55.6, 55.4, 41.6, 41.5, 26.5, 25.2, 20.2, 15.7, 9.4 ESI-MS m/z: calculado para C36H34N O8: 650. Encontrado (M + H)+: 651.2.

EJEMPLO 30 25 A una solución de 18 mg (0.032 mmol) de 25 en 0.05 mL de DMF, se añadió a 0°C 0.5 mg (0.004 mmol) de DMAP, 5 mg (0.08 mmol) de imidazol y 12.5 mL (0.048 mmol) de cloruro de terbutildifenilsililo, y se agitó la mezcla de reacción durante seis horas a 23°C. Se añadió 10 mL de agua a 0°C y se extrajo la fase acuosa con 2 x 10 mL de hexano:acetato de etilo 1:10. Se secó la capa orgánica (sobre sulfato de sodio), se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 3:1) para dar 27 mg (88 por ciento) de 26, como un sólido blanco. Rf: 0.39 (hexano:acetato de etilo 3:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.61-7.58 (m, 2H), 7.42- 7.28 (m, 8H); 6.71 (s, 1H), 6.19-6.02 (m, 1H), 5.78 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.40 (dd, JT = 1.2 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.27 (dd, JT = 1.2 Hz, J2 = 10.2 Hz, 1H); 5.13 (s, 2H), 4.45 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.17-4.06 (m, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.64 (dd, J, = 2.4 Hz, J2 = 9.9 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.42-3.21 (m, 4H), 3.10 (dd, JT = 8.1 Hz, J2 = 17.7 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.08-1.89 (m, 1H), 0.87 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.5, 148.3, 148.1, 144.0, 139.0, 135.6, 135.4, 133.8, 133.1, 132.6, 130.5, 130.3, 129.6, 129.4, 127.5, 127.4, 125.1, 124.3, 121.6, 118.5, 117.5, 112.9, 111.7, 100.8, 99.2, 74.0, 67.7, 61.5, 59.6, 59.0, 57.7, 57.1, 55.4, 41.6, 29.6, 26.6, 25.5, 18.8, 15.8, 92. ESI-MS m/z: calculado para C47H55N3O7Si: 801.3. Encontrado (M + H) + : 802.3.

EJEMPLO 31 2fi ET-11 A una solución de 7 mg (0.0087 mmol) de 26 en 0.15 mL de cloruro de metileno, se añadió, a 23°C, 2.5 mL ( = .044 mmol) de ácido acético, 0.5 mg (6.06 x 10"4 mmol) de (PPh3)2PdCI2 y 3.5 mL (0.013 mmol) de Bu3SnH. Se agitó a esa temperatura la mezcla de reacción durante una hora. Se diluyó la solución con 0.5 mL de una mezcla de hexano:acetato de etilo 5:1 y se vertió en una almohadilla de columna rápida (SiO2, gradiente 5:1 a 1:1 de hexano:acetato de etilo), lo que produjo 5 mg (75 por ciento) de ET-11, como un sólido blanco. Rf: 0.36 (hexano:acetato de etilo 1:5, sílice). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.56 (m, 2H), 7.41-7.25 (m, 8H); 6.67 (s, 1H), 5.72 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.38 (d, J = 5.75 Hz, 1H), 5.16 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.68 (dd, JT = 2.1 Hz, J2 = 10.4 Hz, 1H); 3.38-3.26 (m, 3H), 3.11 (dd, JT = 2.5 Hz, J2 = 15.7 Hz, 1H), 3.01 (dd, Jn = 8.9 Hz, J2 = 17.9 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.89 (dd, J, = 12.1 Hz, J2 = 15.7 Hz, 1H), 0.9 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 149.0, 147.4, 145.3. 144.3, 136.3, 135.7, 135.4, 133.2, 130.9, 130.5, 129.6. 129.5, 127.5, 125.0, 118.6, 112.5, 112.1, 105.7, 100.5, 99.8, 68.5. 61.5, 59.7, 58.8, 57.7, 56.9. 56.5. 55.4, 41.7, 26.6, 256.2, 25.5, 18.9, 15.8, 14.2, 8.7. ESI-MS m/z: calculado para C44H5tN3O7Si: 761.

Encontrado (M + H) + : 762.

EJEMPLO 32 Se agitó a 23°C durante 1.5 horas una solución de 3.0 g (5.46 mmol) de 2 y 3.92 mL, 32.76 mmol) de isotiocianato de fenilo en 27 mL de cloruro de metileno. Se dividió la mezcla de reacción entre 10 mL de cloruro de metileno y 5 mL de agua. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de hexano a 2:3 de hexano:acetato de etilo) para dar 3.29 g (88%) de 3, como un sólido amarillo.

Rf: 0.27 (ACN:H2O 3:2, RP-C18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.77 (bs, 1H), 7.42-7.11 (m, 5H), 6.65 (d, 1H). 6.29 (s. 1H), 5.6-5.5 (m, 1H), 4.19-4.14 (m, 2H), 4.08 (d. 1H), 3.92 (s, 3H). 3.87-3.65 (m, 6H). 3.77 (s, 3H), 3.37-2.98 (m, 8H), 2.50 (d, 1H), 2.31 (s. 3H), 2.20 (s, 3H), 1.96 (d, 1H). 1.87 (s, 3H), 1.81-1.75 (m. 1H), 0.96 (d, 3H). RMN con 13C (75 MHz. CDCI3): d 185.7, 180.9, 178.9, 172.0, 155.7, 147.1, 143.2, 142.4. 136.0, 135.1, 130.5, 129.9, 129.3, 128.5, 126.9, 124.4, 120.2, 117.4, 116.3, 77.1, 60.9, 58.6, 56.2, 55.8, 55.0, 54.6, 53.5, 41.7, 40.3, 25.1, 24.5, 18.4, 15.8, 8.7. ESI-MS m/z: calculado para C36H40N6O6S: 684.8. Encontrado (M + H)+: 685.2.

EJEMPLO 33 Se agitó a 23°C durante seis horas una solución de 0.143 g (0.208 mmol) de 3 en 150 ml de HCl 6.5 M /dioxano. Luego se añadió 3 mL de tolueno a esta mezcla de reacción y se decantó la capa orgánica. Se dividió el residuo entre 3 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado y 3 x 3 mL de cloroformo. Se secó las capas orgánicas y se concentró para dar el compuesto del título como una mezcla de 4 y 6 (4:6, 90:10), que cicliza lentamente a 6, por reposo. Rf: 0.4 (acetato de etilo:metanol 5:1, sílice). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.45 (s, 1H), 4.16 (m, 1H), 4.02 (d, 1H), 3.96 (s, 3H). 3.79 (m, 2H), 3.75 (s, 3H). 3.35 (m. 1H). 3.20-3.00 (m, 3H), 2.87 (d, 1H). 2.75 (d, 1H), 2.43 (d, 1H). 2.34 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.72-1.5 (m, 3H). ESI-MS m/z: calculado para C26H3oN4O5: 478.5. Encontrado (M + H) + : 479.2.

EJEMPLO 34 Se agitó a 23°C durante una hora una solución de 0.143 g )(0.208 mmol) de 3 en 150 mL de HCl 6.5 M /dioxano. La evaporación del solvente dio un residuo que fue purificado mediante cromatografía en columna rápida (acetato de etilo/metanol/trietilamina 100:25:0.1) para dar 80 mg (83 por ciento) de 6, como un sólido amarillo.

Rf: 0.26 (ACN:H2O 3:2, RP-C18). RMN con 1H (500 MHz, CDCI3): d 6.46 (s, 1H), 5.9 (bs. 1H), 4.67 (dd, J = 18.3 Hz, J = 7.8 Hz, 1H), 4.24 (d, 1H), 4.16 (s, 3H), 3.93 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.8 (m, 2H); 3.77 (s, 3H), 3.45 (m, 2H), 3.08 (dd, J = 17.9 Hz, J = 3.6 Hz, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.55 (d, 1H), 2.3 (m, 1H), 2.3 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.90 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 186.2, 162.1, 154.9, 146.9, 145.3, 143.0, 130.1, 129.4, 128.1, 125.0, 121.4. 116.4, 116.2, 66.6, 60.7, 60.7, 60.1, 59.6, 58.8, 55.6, 54.9, 25.3, 24.7, 15.7, 8.9. ESI-MS m/z: calculado para C25H28N4O : 460.5. Encontrado (M + H) + : 461.1.

EJEMPLO 35 A una solución de 2.38 g (3.47 mmol) de 3 en 5 mL de dioxano, se añadió 34 mL de HCl 5.3 M en dioxano, y se llevó a cabo la reacción a 23°C durante 45 minutos. Luego se añadió 51 mL (539.5 mmoles) de Ac2O y se agitó la mezcla durante cuatro horas. Se enfrió la reacción a 0°C y se dividió entre 300 mL de carbonato de sodio acuoso saturado y 300 mL de acetato de etilo, a esa temperatura. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de cloruro de metileno a cloruro de metileno:acetato de etilo, 1:2), para dar 1.75 g (97 por ciento) de 5, como un sólido amarillo. Rf: 0.53 (ACN:H2O 3:2, RP-C18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.51 (s, 1H); 5.98 (bs, 1H), 4.84 (dd, 1H), 4.17 (d, 1H), 4.00 (d, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.85 (bs, 1H), 3.81 (m, 1H). 3.74 (s, 3H), 3.70 (d, 1H), 3.23 (m, 1H). 3.11 (dd, 1H), 3.09 (m, 1H), 2.93 (m, 2H), 2.44 (d, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.29 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 185.9, 180.8, 169.9, 160.2. 156.2, 147.0, 143.1, 140.4, 136.1, 130.6, 129.6, 127.9, 120.4, 117.2, 61.0, 60.7, 58.6, 56.1, 55.7, 55.1, 54.3, 41.8, 41.1, 25.7, 23.9, 22.2, 15.7, 8.7. ESI-MS m/z: Calculado para C28H32N4O6: 520.6.

Encontrado (M + H) + : 521.1.

EJEMPLO 36 A una solución de 1.75 g (3.36 mmoles) de 5 en 17 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 11.71 mL (67.23 mmoles) de diisopropiletilamina, 20 mg (0.17 mmoles de DMAP y 4.11 mL (50.42 mmoles) de éter metílico de bromometilo. Después de seis horas a 23°C se dividió la reacción entre 50 mL de cloruro de metileno y 25 mL de bicarbonato de sodio acuoso, saturado. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna (RP-18, CH3CN/H2O 1/1) para dar 1.32 g (70 por ciento) de 7, como un sólido amarillo. Rf: 0.34 (ACN:H2O, 2:3, RP-C18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.74 (s, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.82 (m, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.00 (s, 3H), 4.0 (m, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.7 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.4 (m, 1H), 3.2-2.95 (m, 6H), 2.43 (d, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.5-1.4 (m, 2H), 1.31 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 185.9, 180.7, 169.6, 156.2, 148.9, 148.5, 140.3, 136.2, 131.3, 130.1, 127.7, 124.6, 123.7, 117.3, 99.5, 99.2, 60.9, 59.7, 58.8, 57.7, 56.4, 55.7, 55.0, 54.2, 51.0, 41.6, 41.0, 40.5, 25.5, 23.9, 22.3, 19.3, 15.6, 14.6, 8.6. ESI-MS m/z: calculado para C30H36N4O7: 564.6. Encontrado (M + H) + : 565.3.

EJEMPLO 37 A una solución de 0.37 g (0.65 mmol) de 7 en 74 mL de metanol a 0CC, se añadió 130 mL de hidróxido de sodio 1 M. Se agitó la reacción durante 15 minutos y luego se inactivo a 0°C con HCl 6 M hasta pH = 5. Se extrajo la mezcla con 3 x 50 mL de acetato de etilo y se secó sobre sulfato de sodio las capas orgánicas combinadas y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (RP-C18 CH3CN:H2O 1/1), para dar 232 mg (65 por ciento) de 8, como un aceite amarillo. Rf: 0.5 (ACN:H2O 3:2, RP-C18). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.75 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.86 (m, 1H), 4.26 (d, 1H), 4.01 (d, 1H), 3.88-3.81 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.39 (m, 1H), 3.27-3.21 (m, 1H), 3.18-3.08 (m, H), 3.03-2.97 (m, 1H), 2.47 (d, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.57-1.46 (m, 2H), 1.33 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 185.3, 180.6, 175.9, 170.1, 151.5, 148.9, 148.6, 143.3, 133.7, 131.5, 129.9, 124.7. 123.5, 117.1, 117.0, 99.2, 59.8, 58.7, 57.8, 56.3, 55.3, 54.9, 54.3, 41.5, 40.7, 29.6, 25.5, 24.4, 22.2, 20.7, 15.7, 8.0. ESI-MS m/z: calculado para C29H34N4O7: 550.6.

Encontrado (M + H) + : 551.2.

EJEMPLO 38 A una solución desgasificada de 240 mg (0.435 mmol) del compuesto 8 en 30 mL de DMF, se añadió 48 mg de Pd al 10 por ciento / C (y se agitó la reacción bajo H2 (a la presión atmosférica) durante 1 hora. Se filtró la reacción a través de una almohadilla de Celite, bajo argón, a un tubo de Schlenk, como una solución incolora que contenía 240 mg (0.739 mmol) de Cs2CO3. Luego se añadió 0.566 mL (8.71 mmoles) de bromoclorometano. Se selló el tubo y se agitó a 90°C durante tres horas. Se enfrió la reacción y se filtró a través de Celite, y se lavó con cloruro de metileno. Se concentró la capa orgánica y se secó (sobre sulfato de sodio) para dar 9 como un aceite pardo que se usó en el siguiente paso sin purificación ulterior. Rf: 0.36 (SiO2. hexano:acetato de etilo 1:5). RMN con 1H (300 MHz. CDCI3) d 6.71 (s, 3H). 5.89 (d, 1H); 5.81 (d, 1H), 5.63 (bs, 1H); 5.33 (d, 1H), 5.17 (d, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.20 (d. 1H), 4.09 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.68 (m, 1H). 3.65 (s. 6H), 3.59-3.47 (m, 4H), 3.37-3.27 (m. 2H), 3.14-2.97 (m, 2H), 2.62 (d, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.72 (m, 1H), 1.36 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 169.8, 149.1, 147.4, 145.5, 136.2, 130.9, 130.8, 125.0, 122.9, 117.7, 112.6, 111.8, 106.4, 100.8, 99.8, 59.8, 58.9, 57.7, 56.6, 56.4, 55.5, 55.2, 41.6, 40.1, 29.6, 25.9, 25.0, 22.6, 15.6, 8.8. ESI-MS m/z: Calculado para C30H36SiN4O7: 564.6.

Encontrado (M + H) + : 565.3.

EJEMPLO 39 Se añadió a 0°C, a un matraz que contenía 245 mg (0.435 mmol) de 9 en 4 mL de DMF, 425 mg (1.30 mmol) de carbonato de cesio y 376 mL (4.35 mmol) de bromuro de alilo, a 0°C, y se agitó la mezcla a 23°C durante una hora. Se filtró la reacción a través de una almohadilla de Celite y se dividió entre 25 mL de cloruro de metileno y 10 mL de agua. Se secó la fase orgánica (sulfato de sodio y se concentró a presión reducida, para dar un residuo que fue purificado mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, cloroformo:acetato de etilo 1:2) para dar 113 mg (43 por ciento) de 10, como un aceite amarillo. Rf: 0.36 (hexano:acetato de etilo 1:5). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.74 (s, 1H), 6.3-6.0 (m, 1H), 5.94 (d, 1H), 5.87 (d, 1H), 5.43-5.36 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.17-4.01 (m, 1H), 3.98 (m, 2H), 3.71-3.67 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.62-3.51 (m, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.39-3.37 (m, 1H), 3.31-3.26 (m, 3H), 3.09 (dd, 1H), 2.56 (d, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.24-2.10 (m, 1H). 1.82-1.73 (m, 1H). 1.24 (bs. 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 169.4, 148.8, 148.3, 139.1, 133.7, 130.9, 130.3, 125.2, 120.2, 117.7, 113.1, 112.6, 101.3, 99.3, 74.1, 59.7, 59.3, 57.8, 57.0, 56.1, 56.1, 55.2, 41.6, 41.0, 40.9, 29.7, 26.3, 22.5, 15.6, 9.3. ESI-MS m/z: calculado para C33H40N4O7: 604.7. Encontrado (M + H) + : 605.3.

EJEMPLO 40 9 46 A una solución de 22 mg (0.039 mmol) de 9 en 0.2 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 2.79 mL (0.039 mmol) de cloruro de acetilo y 3.2 mL (0.039 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y luego se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida para producir 22 mg (93 por ciento) de 46, como un sólido blanco. Rf: 0.4 (hexano:acetato de etilo, 1:5). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.74 (s, 1H), 5.97 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 5.04 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.90 (t, J = 6 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.01 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.50-3.44 (m, 2H), 3.38-.36 (m, 1H), 3.30-3.26 (m, 1H), 3.00 (dd, J, = 7.8 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 12.9 Hz, 1H); 2.60 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.68 (dd, JT = 11.7 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H). ESI-MS m/z: calculado para C32H38N4O8: 606.67. Encontrado (M + H)+: 607.3.

EJEMPLO 41 $ 47 A una solución de 8 mg (0.013 mmol) de 46 en 0.1 mL de dioxano, se añadió 0.5 mL de HCl 5.3 N /dioxano y se agitó la reacción a 23°C durante una hora. Luego se diluyó la solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida para producir 5 mg (70 por ciento) de 47, como un sólido blanco. Rf: 0.4 (hexano:acetato de etilo 1:5). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.51 (s, 1H), 5.97 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.97 (bs, 1H), 4.11 (bs, 1H), 4.04-4.02 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.65 (d, J = 2.1 Hz, 2H), 356-3.30 (m, 2H); 3.04 (dd, J, = 7.5 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.80 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.59 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, H), 1.76 (dd, J, = 12.0 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.25 (s, 3H). ESI-MS m/z: calculado para C30H34N4O7: 562.61. Encontrado (M + H) + : 563.3.

EJEMPLO 42 A una solución de 10 mg (0.0192 mmol) de 45 en 0.3 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 2.34 mL (0.0192 mmol) de cloruro de isovalerilo y 1.55 mL (0.0192 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y luego se diluyó la solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 1:2), para dar 11 mg (95 por ciento) de 48, como un sólido blanco. Rf: 0.12 (Hexano:acetato de etilo, 1:2). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.50 (s, 1H), 5.98 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.02 (t, 1H), 5.02 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.06 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.76-3.71 (m, 1H), 3.86-3.28 (m, 3H), 3.04 (dd, JT = 8.1 Hz, J2 = 18.3 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.32 (s, 6H), 2.26 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.84-1.68 (m, 2H), 1.36 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 0.69 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.62 (d, J = 6.6 Hz, 3H). ESI-MS m/z: calculado para C33H40N4O7: 604.69.

Encontrado (M + H)+: 605.3.

EJEMPLO 43 45 9 A una solución de 10 mg (0.0192 mmol) de 45 en 0.3 mL de cloruro de metileno, se añadió 3.98 mL (0.0192 mmol) de cloruro de isovalerilo y 1.55 mL (0.102 mmol) de piridina, a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora, y luego se diluyó la solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 1:2) para dar 12.4 mg (96 por ciento) de 49, como un sólido blanco. Rf: 0.7 (acetato de etilo:metanol 10:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.50 (s, 1H), 5.98 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H); 5.73 (s, 1H), 5.08 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.05 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.65-3.61 (m, 1H), 3.40-3.27 (m, 3H), 3.03 (dd. JT = 8.1 Hz, J2 = 18.6 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.79 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 16.5 Hz, 1H), 1.73-1.42 (m, 4H), 1.33-1.18 (m. 10H), 1.03 (m, 2H), 0.87 (t, J = 6.6 Hz. 3H). ESI-MS m/z: calculado para C38H50N4O7: 674.83. Encontrado (M + H) + : 675.5.

EJEMPLO 44 A una solución de 14.5 mg (0.0278 mmol) de 45 en 0.3 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 4.76 mL (0.0278 mmol) de cloruro de trans-3-trifluorometilcinnamoílo y 2.25 mL (0.0278 mmol) de piridina. Se agitó durante una hora la mezcla de reacción y luego se diluyó la solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna (S¡O2, hexano:acetato de etilo 1:1), para producir 18.7 mg (94 por ciento) de 50 como un sólido blanco. Rf: 0.64 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CH3OD): d 7.74.-7.55 (m, 4H), 7.23 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.12 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.07-4.05 (m, 1H), 3.81 (bs, 1H), 3.46, 3.51 (m, 3H), 3.42 (s, 3H), 3.09 (d ancha. J = 12.0 Hz. 1H), 2.94-2.85 (m, 2H), 2.74 (d. J = 18.3 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.23 (s, 3H). 2.02 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.84-1.75 (m, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 168.7, 165.3, 146.5, 144.7, 142.6, 140.6, 138.0, 135.9, 131.0. 130.9, 129.1. 128.6, 125.8, 125.7, 124.5, 124.4, 122.7, 121.2, 117.8, 116.5, 113.0, 112.0, 101.7, 60.4, 59.1, 56.5, 56.4, 55.6, 55.3, 41.8, 40.3, 26.6, 25.1, 20.3, 15.4, 9.3. ESI-MS m/z: Calculado para C38H37F3N4O7: 718.72. Encontrado (M + H) + : 719.3. r EJEMPLO 45 0 A una solución de 33 mg (0.0557 mmol) de 43 en 0.4 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 6.79 mL (0.0557 mmol) de cloruro de isovalerilo y 4.5 mL (0.0557 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y luego se diluyó la solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. 5 Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 1:2), para dar 34 mg (91 por ciento) de 51, como un sólido blanco. 0 Rf: 0.09 (hexano:acetato de etilo 1:2). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) d 6.46 (s, 1H), 6.10 (bs, 1H); 5.99 (d, J = 0.9 Hz, 1H); 5.90 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.30 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.10, 4.05 (m, 3H); 3.81 (bs, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.54 (bs, 1H), 3.38-3.36 (m, 1H), 3.29-3.21 (m, 1H), 3.00 (dd, JT = 8.0 Hz, J2 = 5 18.0 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.95-1.90 (m, 3H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 0.76 (d, J = 6.0 Hz, 3H). ESI-MS m/z: calculado para C36H45N5O8: 675.77.

Encontrado (M + H) + : 676.3.

EJEMPLO 46 A una solución de 33 mg (0.0557 mmol) de 43 en 0.4 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0°C 9.52 mL (0.0557 mmol) de cloruro de trans-3-trifluorometilcinnamoílo y 4.5 mL (0.0557 mmol) de piridina. Se agitó durante una hora la mezcla de reacción y luego se diluyó la solución con 5 ML de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 1:2) para dar 40 mg (92 por ciento) de 52, como un sólido blanco. Rf: 0.21 (hexano:acetato de etilo 1:2). RMN con 1H (300 MHz, CD3OD): d 7.74-7.47 (m, 4H), 6.49 (s, 1H), 6.40 (d, J = 15.6 Hz, 1H),-6.00 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.47 (t, J = 6 Hz, 1H), 4.12-4.09 (m, 3H), 3.93 (bs, 1H); 3.71 (s, 3H), 3.59-3.58 (m, 1H), 3.38 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, JT = 8.1 Hz, J2 = 18.3 Hz, 1H), 2.79-2.78 (m, 1H), 2.65 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 6H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.84-1.80 (m, 1H), 0.85-0.84 (m, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 171.9, 168.8, 164.4, 146.9, 144.6, 143.0, 140.5, 140.5, 139.3, 135.7, 131.1, 131.0, 129.4, 129.1, 126.0, 124.1, 124.0, 122.4, 121.1, 120.7, 120.6, 117.7, 116.9, 112.8, 112.0 101.6, 60.6, 59.3, 57.1, 56.3, 55.9, 55.2, 409.0, 41.7, 49.9, 26.5, 25.1, 20.2, 18.4, 15.7, 9.3. ESI-MS m/z: calculado para C4?H42F3N5O8: 789.8. Encontrado (M + H)+: 790.3.

EJEMPLO 47 A una solución de 10 mg (0.0169 mmol) de 43 en 0.2 mL de cloruro de metileno, se añadió a 23°C 2.38 µL (0.0169 mmol) de anhidrido trifluoroacético. Se agitó durante cinco horas la mezcla de reacción y luego se diluyó I solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo 3:2) para dar 10.7 mg (93 por ciento) de 53 como un sólido blanco. Rf: 0.57 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d (6.45 (s, 1H), 6.00 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.87 (bs, 1H), 5.32 (bs, 1H), 4.12 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.08 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.78-3.56 (m, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.25 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 3.00 (dd, JT = 8.4 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H), 2.77 (dd, JT = 2.1 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 2.68 (d, J = 18.6 Hz, 1H), 2.30 (s. 3H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.75 (dd, JT = 11.4 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 0.69 (d, J = 6.3 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) d 170.1, 168.6, 156.0. 147.0, 144.6, 143.0, 140.6, 140.4, 131.0, 129.4, 120.9, 120.7, 117.6, 116.8, 112.4, 112.1, 101.6, 60.5, 59.0, 57.1, 56.3, 55.6, 55.2, 48.7, 41.6, 39.4, 26.5, 24.9, 20.2, 17.8, 15.4, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C33H36F3N5O8: 687.63. Encontrado (M + H) + : 688.66.

EJEMPLO 48 A una solución de 11 mg (0.0169 mmol) de 19 en 0.2 mL de cloruro de metileno se añadió, a 23°C, 2.38 mL (0.0169 mmol) de anhidrido trifluoroacético. Se agitó la mezcla de reacción durante cinco horas y a continuación se diluyó la solución con 5 mL de cloruro de metileno y se lavó con 3 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, hexano:acetato de etilo, 3:2), para producir 10.7 mg (93 por ciento) de 54, como un sólido blanco. Rf: 0.6 (acetato de etilo:metanol 15:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.33 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.04 (m, 1H), 5.95 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.32 (m, 2H), 5.21 (m, 1H), 4.11 (m, 4H), 3.73 (s, 3H), 3.64 (m, 2H), 3.51 (m, 1H), 3.37 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.22 (m, 2H), 3.03 (dd, 1H, J, = 8.1 Hz, J2 = 18.3 Hz, 1H), 2.60 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.86 (dd, JT = 12 Hz, J2 = 16.2 Hz, 1H), 0.82 (d, J = 7.2 Hz, 3H).

RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) d 170.0, 156.0, 148.4, 147.1, 144.3, 143.0, 138.7, 133.8, 130.5, 129.4, 120.6, 120.4, 117.6, 117.5, 117.0, 113.5, 112.5, 112.4, 101.1, 74.1, 66.8, 60.4, 59.3, 56.9, 56.6, 56.3, 55.4, 48.7, 41.6, 40.1, 26.2, 25.0, 17.6, 15.4, 9.1. ESI-MS m/z: calculado para C35H39F3N5O7: 685.69. Encontrado (M + H) + : 686.3.

EJEMPLO 49 $4 55 A una solución de 100 mg (0.415 mmol) de 54 en 4 mL de cloruro de metileno, se añadió 40 mL de ácido acético, 8.4 mg (0.012 mmol) de (PPh3)2PdCI2 y 157 mL (0.56 mmol) Bu3SnH, a 23°C. Después de agitar a esa temperatura durante dos horas, se vertió la reacción en una almohadilla de columna rápida (SiO2, gradiente de hexano a hexano:acetato de etilo 2:1), para producir 90 mg (96 por ciento) de 55, como un sólido blanco. Rf. 0.6 (hexano:acetato de etilo 1:2). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3 d (7.55 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.90 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.66-3.53 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 2H), 3.19-3.15 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.08-3.00 (m, 2H), 2.56 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.91 (dd, J2 = 12.0 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H); 0.84 (d, J = 6.9 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) d 170.1, 156.3, 147.3, 144.9, 144.4, 143.3, 136.7, 130.7, 129.3, 120.6, 117.6, 117.4. 114.4, 112.1, 107.7, 101.9, 85.8, 60.5, 49.3, 56.5, 56.4, 56.2, 55.2, 48.9, 41.6, 40.9, 25.7, 25.3, 18.0, 15.6, 8.7. ESI-MS m/z: calculado para C32H35F3N5O7: 645.63. Encontrado (M + H) + : 646.2.

EJEMPLO 50 A una solución de 200 mg (0.288 mmol) de 17 en 1.44 mL de cloruro de metileno, se añadió 888 mL (11.53 mmoles) de ácido trifluoroacético y se agitó la mezcla de reacción durante cuatro horas a 23°C. Se inactivo la reacción a 0°C con 60 ml de bicarbonato de sodio acuoso saturado, y se extrajo con 2 x 70 mL de acetato de etilo. Se secó las capas orgánicas combinadas (sobre sulfato de sodio) y se concentró al vacío para dar 147 mg (93 por ciento) de 56, como un sólido blanco que se usó en reacciones subsiguientes sin purificación ulterior. Rf: 0.19 (acetato de etilo:metanol 5:1) RMN con 1H (300 MHz, CD3OD): d 6.48 (s, 1H), 5.88, d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.99-3.98 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.52-2.96 (m, 7H), 2.68 (d, J = 18.3 Hz. 1H). 2.24 (s. 3H), 2.23 (s. 3H), 2.06 (s, 3H). 1.85 (dd. JT = 11.7 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CD3OD): d 173.2, 149.1, 145.6, 144.9, 138.0, 132.2, 130.6, 121.4, 119.6, 117.4, 114.3, 109.2, 102.5, 82.3, 60.4, 58.4, 58.3, 57.8, 56.6, 50.1, 42.3, 41.6, 27.8, 26.2, 19.5, 15.5, 9.8. ESI-MS m/z: calculado para C29H35N5?6: 549.62. Encontrado (M + H) + : 550.3.

EJEMPLO 51 A una solución de 10 mg (0.018 mmol) de 56 en 0.4 mL de cloruro de metileno, se añadió 13 mL (0.109 mmol) de isotiocianato de fenilo, y se agitó la reacción a 23°C durante 1.5 horas. Se concentró al vacío la mezcla y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente de hexano a hexano:acetato de etilo, 1:1), para dar 8 mg (65 por ciento de 57, como un sólido blanco. Rf: 0.57 (acetato de etilo:metanol 10:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.88 (bs, 1H), 7.41-7.36 (m, 2H), 7.27-7.22 (m, 1H), 7.02-7.00 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 6.17 (bs, 1H), 5.93 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.55 (bs, 1H), 5.20-5.17 (m, 1H), 4.16 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.05 (bs, 1H), 4.02 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.70 (s. 3H), 3.75-3.71 (m, 1H), 3.35 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.28-3.19 (m, 2H), 3.12-2.97 (m, 2H), 2.50 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.15-2.09 (dd, J, = 11.4 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 1.95 (s, 3H), 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 178.5, 171.7, 147.2, 145.0, 144.3, 143.3, 137.0, 135.7, 130.6, 130.4, 129.6, 127.5, 124.3, 120.6, 117.7, 117.2. 115.3, 112.1, 108.3, 100.9, 60.9, 59.5, 56.7, 56.5, 56.2, 55.2, 54.1, 41.7, 41.1, 26.3, 25.4, 18.5, 15.8, 9.0. ESI-MS m/z: Calculado para C36H4oN6O6S: 684.81. Encontrado (M + H) + : 685.3.

EJEMPLO 52 57 56 A una solución de 45 mg (0.065 mmol) de 57 en 0.5 mL de cloruro de metileno, se añadió a 0CC 4.67 mL (0.065 mmol) de cloruro de acetilo y 5.3 mL (0.065 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante tres horas y luego se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (RP-18, acetonitrilo:agua 40:60) para dar 14 mg (28 por ciento) de 58, como un sólido blanco. Rf: 0.34 (acetonitrilo.agua 7:15). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 11.90 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 3H), 7.18-7.15 (m, 2H), 6.58 (s, 1H), 6.00 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.37 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48 (m, 1H), 4.23 (bs, 1H), 4.07 (bs, 2H), 3.85-3.75 (m. 1H), 3.70 (s, 3H), 3.46-3.41 (m, 2H), 3.24-3.20 (m, 1H). 3.00-2.95 (m, 1H), 2.87-2.75 (m, 1H), 2.31 (s. 3H), 2.28 (s. 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.85 (dd, J, = 11.4 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H); 1.66 (s, 3H), 0.82 (d, J = 6.0 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 182.6. 174.3, 171.0, 146.6, 144.6, 142.7, 142.3, 140.7, 140.2, 131.3, 129.8. 129.3, 128.9, 128.8, 121.5, 120.4, 117.3, 116.6, 112.8, 112.0, 111.3, 101.5 60.5, 59.0, 57.6, 56.2, 55.9, 55.3, 55.1, 41.6, 39.4, 27.8, 26.5, 24.8, 20.2, 17.1, 15.5, 9.3. ESI-MS m/z: calculado para C40H44N6O8S: 768.88. Encontrado (M + H)+: 769.2.

EJEMPLO 53 Se añadió a una solución de 130 mg (0.189 mmol) de 57 en 1 mL de dioxano, 1.87 mL de HCl 5.3 N / dioxano, y se agitó la reacción a 23°C durante cuatro horas. A continuación se añadió a esta reacción 15 mL de cloruro de metileno y 10 mL de agua, y se decantó la capa orgánica. Se hizo básica la fase acuosa con 60 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado (pH = 8) a 0°C, y a continuación se extrajo con 2 x 50 mL de acetato de etilo. Se secó los extractos orgánicos combinados (sobre sulfato de sodio) y se concentró al vacío para dar 63 mg (70 por ciento) de 59 como un sólido blanco. Rf: 0.15 (acetato de etilo:metanol 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.67 (s, 1H), 5.99 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.2 Hz. 1H), 5.10 (bs, 1H), 4.32 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.25 (dd, JT = 3.6 Hz, J2 = 9.3 Hz, 1H), 3.7 (s, 3H), 3.71-3.64 (m, 2H), 3.50 (dd, J, = 2.4 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 3.42-3.37 (m, 2H), 3.16 (dd, J, = 3.6 Hz, J2 = 12.9 Hz, 1H), 2.57 (dd, JT = 9.3 Hz, J2 = 12.9 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.91 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). ESI-MS m/z: calculado para C26H30N4O5: 478.15. Encontrado (M + H) + : 479.3.

EJEMPLO 54 eo Se añadió a 0°C a una solución de 20 mg (0.0338 mmol) de 43 en 0.3 mL de cloruro de metileno, 5.63 mg (0.0338 mmol) de cloruro de cinnamoílo y 2.73 mL (0.0338 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y a continuación se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1), para dar 22 mg (90 por ciento) de 60, como un sólido blanco. Rf: 0.56 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.51 (s, 1H), 7.50-7.47 (m, 2H), 7.36-7.35 (m, 2H), 6.43 (s, 1H), 6.36. (brd, J = 15.9 Hz, 2H), 6.01 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.90 (brd J = 1.5 Hz, 2H), 5.42 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.12-4.07 (m, 3H), 3.96-3.95 (m, 1H), 3.73 (bs, 3H), 3.58 (bs, 2H), 3.39 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.25 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.0 (dd, JT = 7.5 Hz, J2 = 17.7 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.67 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.29 (s, 6H), 2.23 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.82 (dd, JT = 11.4 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 0.83 (d, J = 6.0 Hz, 3H).

RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 172.0, 165.0, 146.9, 144.6, 143.1, 141.0, 140.5, 134.8, 131.0, 129.7, 129.1, 128.8, 127.8, 125.5, 123.8, 123.0, 121.1, 120.5, 117.7, 116.9, 112.8, 112.0, 101.9, 60.6, 59.2, 57.1, 56.4, 55.9, 55.3, 48.8, 41.7, 40.0.26.5, 25.1, 20.3, 18.5, 15.7, 9.3. ESI-MS M/Z: Calculado para C40H43N5O8: 721.8. Encontrado (M + H)+: 722.3.

EJEMPLO 55 Se añadió a 0°C a una solución de 19 mg (0.0365 mmol) de 45 en 0.3 mL de cloruro de metileno, 5.44 mL (0.0364 mmol) de cloruro de heptafluorobutirilo y 2.95 mL (0.0364 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y luego se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de HCl 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc.MeOH 20:1) para dar 11.7 mg (45 por ciento) de 61, como un sólido blanco. Rf: 0.76 (EtOAc:MeOH 5:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) d 6.46 (s. 1H), 6.12 (bs, 1H), 5.98 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.93 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.72 (bs, 1H), 4.13-4.11 (m, 2H), 4.0 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.98-3.096 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.39 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.39-3.28 (m, 2H), 3.09 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H), 2.80 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.46 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 6H), 2.21 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.80 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 16.2 Hz, 1H). ESI-MS m/z: calculado para C32H3tF7N4O7: 716.6. Encontrado (M + H) + : 717.2.

EJEMPLO 56 62 Se añadió a 0°C a una solución de 24 mg (0.04 mmol) de 43 en 0.3 mL de cloruro de metileno, 4.15 mL (0.04 mmol) de cloruro de butirilo y 3.28 mL (0.04 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y luego se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de ácido clorhídrico 0.1 N.

Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) para dar 24 mg (90 por ciento) de 62, como un sólido blanco. Rf: 0.35 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.47 (s, 1H), 6.10 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 6.0 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.86 (bs, 1H), 5.31 (d, J = 6.9 Hz, 1H). 4.11-4.06 (m, 3H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.59-3.53 (m, 2H), 3.38 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.27-3.22 (m, 1H), 3.0 (dd, JT = 7.8 Hz, J2 = 17.4 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 15.3, Hz, 1H), 2.63 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.80 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 1.58 (q, J = 7.2 Hz, 2H); 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.76 (d, J = 6.6 Hz, 3H). ESI-MS m/z: Calculado para C35H43N5O8: 661.64. Encontrado (M + H)+: 662.3.

EJEMPLO 57 Se añadió a 0°C a una solución de 19 mg (0..0364 mmol) de 43 en 0.3 mL de cloruro de metileno, 6.06 mg (0.0364 mmol) de cloruro de cinnamoílo y 2.95 mL (0.0364 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y a continuación se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de ácido clorhídrico 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) para dar 20.1 mg (85 por ciento) de 63, como un sólido blanco. Rf: 0.65 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.39-7.29 (m, 5H), 6.42 (s, 1H), 6.01 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.24 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.12-4.08 (m, 3H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.58 (bs, 3H), 3.36 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.98 (dd, JT = 8.1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2.33 (s, 6H), 2.29 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.84 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). ESI-MS m/z: Calculado para C37H38N4O7: 650.72. Encontrado (M + H) + : 651.2.

EJEMPLO 58 64 A una solución de 20 mg (0.0338 mmol) de 43 en 0.3 mL de cloruro de metileno se añadió a 0°C 3.22 mL (0.0338 mmol) de cloruro de 3-cloropropionilo y 2.73 mL (0.0338 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y a continuación se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de ácido clorhídrico 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) para dar 20.5 mg (89 por ciento) de 64 como un sólido blanco. Rf: 0.32 (EtOAc:hexano 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.48 (s, 3H), 6.28 (m, 1H), 5.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.86 (bs, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.08-4.07 (m, 3H); 3.75 (s, 3H), 3.72-3.53 (m, 5H), 3.39 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.24 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.50 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.79 (dd, J, = 12.3 Hz, J2 = 14.8 Hz, 1H), 0.81 (d, J = 6.3 Hz, 3H).

EJEMPLO 59 65 A una solución de 19 mg (0.0364 mmol) de 43 en 0.3 mL de cloruro de metilen se añadió a 0°C 3.78 mL (0.0364 mmol) de cloruro de butirilo y 2.95 mL (0.0364 mmol) de piridina. Se agitó la mezcla de reacción durante una hora y a continuación se diluyó la solución con 10 mL de cloruro de metileno y se lavó con 5 mL de ácido clorhídrico 0.1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) para dar 19 mg (87 por ciento) de 64, como un sólido blanco. Rf: 0.60 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCl.) d 6.50 (s, 1H), 5.98 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.01 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.10-4.09 (m, 1H), 4.06 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.03-4.02 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.67-3.60 (m, 1H), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.29 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.02 (dd, JT = 7.8 Hz, J2 = 17.7 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.78 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 1.63 (s, 3H), 1.53-1.46 (m, 2H), 1.28-1.16 (m, 2H), 0.68 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z: calculado para C32H38N4O7: 590.67. Encontrado (M + H) + : 591.2.

EJEMPLO 60 66 A una solución de 31.7 mg (0.044 mmol) en 1.5 mL/0.5 mL de acetonitrilo, se añadió 225 mg (1.32 mmol) de AgNO3 y se agitó la reacción a 23°C durante 17 horas. Luego se añadió 10 mL de salmuera y 10 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado a 0°C y se agitó la mezcla durante 15 minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con 20 mL de cloruro de metileno. Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 16 mg (51 por ciento) de 66 como un sólido blanco.

Rf: 0.26 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.66-7.42 (m, 4H), 7.20 (bs, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.97 (b, J = 1.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.76 (bs, 1H), 5.28 (bs, 1H), 4.54 (bs, 1H), 4.43 (bs, 1H), 4.00 (bs, 1H), 3.68-3.57 (m, 4H), 3.47 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 3.40 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.17 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.92 (dd, JT = 8.1 Hz, J2 = 17.7 Hz, 1H), 2.74 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 2.48 (d, J = 18.6 Hz, 1H), 2.32 (s, 6H), 2.28 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.76 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 16.2 Hz, 1H). ESI-MS m/z: calculado para C37H38F3N3O8: 709. Encontrado (M + -17): 692.3.

EJEMPLO 61 53 67 A una solución de 57 mg (0.0828 mmol) de 53 en 1.5 mL/0.5 mL de acetonitrilo/agua, se añadió 650 mg (3.81 mmoles) de AgNO3 y se agitó la reacción a 23°C durante 24 horas. A continuación se añadió 10 mL de salmuera y 10 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado, a 0°C, y se agitó la mezcla durante 15 minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con 20 mL de cloruro de metileno. Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 28 mg (50 por ciento) de 67, como un sólido blanco. Rf: 0.28 (EtOAc:MeOH 10:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) d 6.47 (s, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 5.35 (bs, 1H), 4.51 (bs, 1H), 4.41 (bs, 1H); 4.12-4.05 (m, 1H), 4.00 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.64 (bs, 1H), 3.46 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 3.34 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.18 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 2.95 (dd, JT = 8.4 Hz, J2 = 18.3 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.48 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.68 (dd, J, = 12 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H); 0.86 (d, J = 6.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z: Calculado para C32H37F3N4O9: 678.66. Encontrado (M+-17): 661.2. EJEMPLO 62 A 66 A una solución de 32 mg (0.0529 mmol) de 48 en 1.5 mL/0.5 mL de acetonitrilo/agua, se añadió 270 mg (1.58 mmoles) de AgNO3, y se agitó la reacción a 23°C durante 24 horas. Luego se añadió 10 mL de salmuera y 10 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado a 0°C, y se agitó la mezcla durante 15 minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con 20 mL de cloruro de metileno. Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1), para dar 18 mg (56 por ciento) de 68 como un sólido blanco. Rf: 0.40 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.50 (s, 1H), 5.95 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.01 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.78 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.41-3.37 (m, 1H), 3.17-3.15 (m, 1H). 2.96 (dd, JT = 7.8 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 2.40 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.30 (s, 6H), 2.27 (s, 3H), 1.76-1.65 (m, 1H), 1.35-1.25 (m, 2H), 0.89-0.82 (m, 1H), 0.69 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.58 (d, J = 6.6 Hz, 3H).

EJEMPLO 63 61 6» A una solución de 27 mg (0.04 mmol) de 51 en 1.5 mL/0.5 mL de acetonitrilo/agua, se añadió 204 mg (1.19 mmol) de AgNO3 y se agitó la reacción a 23°C durante 24 horas. Luego se añadió 10 mL de salmuera y 10 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado, a 0°C, y se agitó la mezcla durante 15 minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con 20 mL de cloruro de metileno. Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) para dar 10 mg (38 por ciento) de 69, como un sólido blanco. Rf: 0.38 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.48 (s, 1H), 6.16 (bs, 1H), 5.98 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.33 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.11-4.09 (m, 1H), 4.00 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.41-3.32 (m, 3H), 3.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.94 (dd, Jt = 8.4 Hz, J2=18.3 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.04 s, 3H), 2.00-1.86 (m, 3H), 1.73 (m, 1H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 6H).

EJEMPLO 64 __- 70 A una solución de 15 mg (0.023 mmol) de 63 en 1.5 mL/0.5 mL de acetonitrilo/agua, se añadió 118 mg (0.691 mmol) de nitrato de plata, y se agitó la reacción a 23°C durante 24 horas. Luego se añadió 10 mL de salmuera y 10 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado a 0°C y se agitó la mezcla durante 15 minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con 20 mL de cloruro de metileno. Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2 EtOAc:MeOH 5:1) para dar 20.1 mg (85 por ciento) de 70, como un sólido blanco. Rf: 0.43 (EtOAc:MeOH 5:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.38-7.28 (m, 5H), 6.48 (s, 1H), 5.98 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.75 (bs, 1H), 5.38 (brd, 1H), 5.30 (bs, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.02 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.78-3.65 (m, 5H), 3.46-3.40 (m, 2H), 3.17 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 2.94 (dd, JT = 7.8 Hz, J2 = 17.7 Hz, 1H) 2.73 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.45 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 6H), 2.28 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.77 (dd, JT = 12.0 Hz, J2 = 15.3 Hz, 1H).

EJEMPLO 65 66 71 A una solución de 25 mg (0.042 mmol) de 65 en 1.5 mL/0.5 mL de acetonitrilo/agua, se añadió 215.56 mg (1.269 mmoles) de nitrato de plata, y se agitó la reacción a 23°C durante 24 horas. A continuación se añadió 10 mL de salmuera y 10 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado, a 0°C, y se agitó la mezcla durante 15 minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con 20 mL de cloruro de metileno. Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:MeOH 5:2) para dar 16 mg (65 por ciento) de 71, como un sólido blanco. Rf: 0.5 (EtOAc:MeOH 5:2). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) d 6.50 (s, 1H), 5.95 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.19 (bs, 1H), 4.45 (d, J = 3.3 Hz, 1H), .37 (bs 1H), 4.11 (brd, J = 4.8 Hz, 1H), 4.01 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.71-3.69 (m, 1H), 3.49-3.35 (m, 1H), 3.24 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.15 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.95 (dd, J, = 8.1 Hz, J2 = 17.7 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.40 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.75-1.66 (m, 1H), 1.52-1.17 (m, 2H), 0.66 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

PROCEDIMIENTOS DE FERMENTACIÓN EJEMPLO A Se inoculó medio YMP3 de siembra que contenía 1% de glucosa, 0.25% de extracto de res, 0.5% de bactopeptona, 0.25% de NaCI, 0.8% de CaCO3, con 0.1 por ciento de un material vegetativo congelado del microorganismo, cepa A2-2 de Pseudomonas fluorescens, y se incubó en un sacudidor rotatorio (250 rpm) a 27°C. Después de 30 horas de incubación, se añadió el cultivo sembrado a un fermentador con recipiente agitado, con un medio de producción compuesto por 2 por ciento de dextrosa, 4 por ciento de mannitol, 2 por ciento de levadura de cerveza seca {Vitalevor®, Biolux, Bélgica); 1 por ciento de (NH4)2SO4, 0.04 por ciento de K2HPO4, 0.8 por ciento de KCl, 0.001 por ciento de FeCI3, 0.1 por ciento de L-Tyr; 0.8 por ciento de CO3Ca; 0.05 por ciento de PPG-2000, 0.2 por ciento de antiespumante de silicón (ASSAF-100, Rhodia, Reino Unido). Se llevó a cabo la esterilización a 122°C durante 30 minutos. El volumen inoculado fue de 2 por ciento (en volumen/volumen). La temperatura fue 27°C (de las 0 a las 16 horas) y 24°C desde las 16 horas hasta el final del proceso (41 horas). La presión de oxígeno disuelto fue superior a 25 por ciento. Se controló el pH a 6.0 con ácido sulfúrico diluido desde las 28 horas hasta el final del proceso. El exceso de presión fue de 0.5 barias. Se añadió 1 por ciento de mannitol o sorbitol desde las 16 horas hasta el final del proceso (para la operación de dos días) y 2 por ciento para el proceso de fermentación de tres días. Después de 41 o 64 horas se debe extraer el caldo de fermentación para recuperar la safracina B o el tratamiento con KCN en el caldo clarificado, para recuperar la safracina B-ciano.

EJEMPLO B OBTENCIÓN DE SAFRACINA B-CIANO A PARTIR DEL EXTRACTO CRUDO Una clarificación o filtración del caldo de fermentación a pH 6, separa los sólidos. Se ajustó el caldo clarificado a pH 9.5 con hidróxido de sodio diluido, y se extrajo dos veces con 2:1 (en volumen/volumen) de acetato de etilo, cloruro de metileno o acetato de butilo. Se llevó a cabo la extracción en un recipiente agitado durante 20 minutos; manteniéndose la temperatura de la mezcla a 8- 10°C. Se separó las dos fases por medio de una centrífuga para líquido-líquido. Se secó la fase orgánica con sulfato de sodio anhidro o se congeló y luego se filtró para eliminar el hielo. Se evaporó esta fase orgánica (capa de acetato de etilo) hasta que se obtuvo un extracto oleoso crudo.

EJEMPLO C OBTENCIÓN DE SAFRACINA B-CIANO DEL CALDO CLARIFICADO La clarificación o filtración del caldo de fermentación a pH 6 elimina los sólidos. Se ajustó el caldo clarificado a pH 3.9 con ácido acético concentrado. Se añadió 0.5 g por litro de KCN al caldo clarificado y se incubó a 20°C durante una hora con agitación. Luego se disminuyó la temperatura a 15°C y se ajustó el pH a 9.5 con hidróxido de sodio diluido y se extrajo con 2:1.5 (volumen/volumen) de acetato de etilo. Se llevó a cabo la extracción en un recipiente agitado durante 20 minutos. Se mantuvo la temperatura de la mezcla a 8-10°C. Se separó las dos fases mediante una centrífuga para líquido-líquido. Se secó la fase orgánica con sulfato de sodio anhidro. Se evaporó esta fase orgánica (capa de acetato de etilo) hasta que se obtuvo un extracto de aceite crudo. Se purificó este extracto mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, gradiente 20:1 a 1=: a 5:1 de acetato de etilo:metanol) para producir cuantitativamente el compuesto 2, como un sólido amarillo claro. Rf: 0.55 (acetato de etilo:metanol 5:1); tR = 19.9 min (HPLC, Delta Pack C4, 5 µm, 300 A, 150x3 mm, ? = 215 nm; flujo = 0.7 ml/min, temperatura = 50°C, gradiente: CH3CN-NaOAc acuoso (10 mM) 85 por ciento a 70 por ciento (20 minutos)). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.54 (dd, JT = 4.4 Hz. J2 = 8.4 Hz. 1H), 6.44 (s, 1H), 4.12 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.87 (bs, 1H), 3.65 (ddd, JT = 1.5 Hz, J2 = 8.7 Hz, J3 = 9.9 Hz, 1H), 3.35 (br, D, J = 8.4 Hz. 1H). 3.15-2.96 (m, 4H), 2.92 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 2.47 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.18 (s, 3H). 1.83 (s, 3H), 1.64 (ddd, JT = 2.7 Hz, J2 = 11.1 Hz, J3 = 14.1 Hz, 1H), 0.79 (d, J = 7.2 Hz, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 186.0 (q), 175.9 (q). 156.2 (q). 146.8 (q), 142.8 (q). 140.7 (q), 136.6 (q), 130.5 (q). 128.8 (q), 127.0 (q), 120.5 (s), 117.4 (q), 116.5 (q), 60.8 (t), 60.4 (s). 58.7 (t), 56.2 (s), 55.7 (s), 54.8 (s), 54.8 (s), 54.4 (s), 41.6 (t), 39.8 (d), 25.2 (d), 24.4 (d), 21.2 (t), 15.5 (t), 8.4 (t). ESI-MS m/z: Calculado para C29H35N5O6: 549.6. Encontrado (M + Na) + : 572.3.

EJEMPLO D Se vertió 50 L de un medio compuesto por 2 por ciento de dextrosa, 4 por ciento de mannitol, 2 por ciento de levadura de cerveza seca, 1 por ciento de sulfato de amonio, 0.04 por ciento de fosfato secundario de potasio, 0.8 por ciento de cloruro de potasio, 0.001 por ciento de 6-hidrato de cloruro de hierro(lll), 0.1 por ciento de L-tirosina, 0.8 por ciento de carbonato de calcio, 0.05 por ciento de poli(propilenglicol) 2000, y 0.2 por ciento del antiespumante ASSAF 1000, a un fermentador de cuba con capacidad total de 75 L y, después de esterilizar, se inoculó con un cultivo sembrado (2 por ciento) de la cepa A2-2 (FERM BP-14) y se llevó a cabo el cultivo por aireación bajo agitación, a 27°C hasta 24°C durante 64 horas (aireación de 75 L por minuto, y con agitación de 350 a 500 rpm). Se controló el pH alimentando automáticamente ácido sulfúrico diluido desde las 27 horas hasta el proceso final. Se añadió 2 por ciento de mannitol desde las 16 horas hasta el proceso final. Los 45 L de medio de cultivo así obtenidos, después de eliminar las células por centrifugación, fueron ajustados a pH 9.5 con hidróxido de sodio diluido, se extrajo dos veces con 25 litros de acetato de etilo. Se llevó a cabo la mezcla en un recipiente agitado a 8°C durante 20 minutos. Se separó las dos fases mediante una centrífuga para líquido/líquido. Se congeló las fases orgánicas a -20°C y se filtró para eliminar el hielo y se evaporó hasta que se obtuvo 40 g de un extracto crudo oleoso, oscuro. Después de introducir el grupo cianuro y de purificar, se obtuvo 3.0 g de safracina B-ciano.

EJEMPLO 3 Se vertió 50 L de un medio compuesto por 2 por ciento de dextrosa, 4 por ciento de mannitol, 2 por ciento de levadura de cerveza seca, 1 por ciento de sulfato de amonio, 0.02 por ciento de fosfato secundario de potasio, 0.2 por ciento de cloruro de potasio, 0.001 por ciento de 6-hidrato de cloruro de hierro(lll), 0.1 por ciento de L-tirosina, 0.8 por ciento de carbonato de calcio, 0.05 por ciento de poli(propilenglicol) 2000 y 0.2 por ciento del antiespumante ASSAF 1000, en un fermentador de cuba con capacidad total de 75 L y, después de esterilizar, se inoculó con 2 por ciento de un cultivo sembrado de la cepa A2-2 (FERM BP-14) y se llevó a cabo el cultivo con aireación, bajo agitación, a 27°C hasta 24°C durante 41 horas (aireación de 75 L por minuto y agitación de 350 a 500 rpm). Se controló el pH mediante alimentación automática de ácido sulfúrico diluido desde las 28 horas hasta el final del proceso. Se añadió 1 por ciento de mannitol desde las 16 horas hasta el final del proceso. Los 45 L de medio de cultivo así obtenidos, después de eliminar las células por centrifugación, fueron ajustados a pH 3.9 con 200 mL de ácido acético concentrado. Se añadió 25 g de cianuro de potasio al 97 por ciento y, después de agitar durante una hora a 20°C, se ajustó el pH a 9.5 con 1500 mL de una solución de hidróxido de sodio al 10 por ciento. A continuación se extrajo con 35 litros de acetato de etilo. Se llevó a cabo la mezcla en un recipiente agitado a 8°C durante 20 minutos. Se separó las dos fases mediante una centrífuga para líquido-líquido. Se secó la fase orgánica mediante sulfato de sodio anhidro y se evaporó hasta obtener 60 g de un extracto crudo oleoso, oscuro. Después de cromatografiar, se obtuvo 4.9 g de safracina B-ciano.

EJEMPLO 66 A una solución agitada de 7.83 g (0.0139 mol) de 25 y 8.33 g (35.04 mmoles) del derivado de Boc-Cys (Fm) obtenible en el comercio (Bachem), en 535 mL de diclorometano, bajo argón, se añadió a 23°C 4.28 g (35.04 mmoles) de dimetilpiridina y 6.66 g (35.04 mmoles) de clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida. Luego se agitó la mezcla a 23°C durante 2.5 horas. Se inactivo la reacción añadiendo 500 mL de solución de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, se separó la fase orgánica y se extrajo de nuevo la capa acuosa con 250 mL de diclorometano. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó hasta sequedad a presión reducida. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía en columna rápida, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de un gradiente, desde 1:4 hasta 2:1, para producir 12.21 g (93 por ciento) de 142, como un sólido amarillo claro.

Rf: 0.35 (Hex:EtOAc 1:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72 (d, J = 7.3, 2.7 Hz, 2H), 7.55 (dd, JT = 14.6, J2 = 7.6 2H), 7.40-7.34 (m, 2H), 7.30-7.24 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.08-5.99 (m, 1H), 5.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.39 (dd, JT = 17.3, J2 = 1.7 Hz, 1H), 5.24 (dd, JT = 10.5, J2 = 1.7 Hz, 1H), 5.09 (AB, J = 4.48 Hz, 2H), 5.07 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.34-4.29 (m, 2H), 4.17 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.16-4.04 (m, 4H), 4.02-3.96 (m, 2H), 3.93 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.32 (d, J = 8.0, 1H), 3.23-3.17 (m, 2H), 3.0-2.89 (m, 3H), 2.65-2.57 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.03 (s, 3H); 1.76 (dd, JT = 16.3, J2 = 12.7 Hz, 1H), 1.45, 144 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.9, 155.3, 148.9, 148.6, 146.1, 146.0, 144.7, 141.2, 141.1, 139.4, 134.0, 131.0, 130.1, 127.8, 127.2, 125.2, 125.0, 124.3, 121.3, 121.2, 120.1, 118.1, 117.6, 112.9, 101.4, 99.5, 80.3, 74.2, 65.6, 60.4, 60.1, 57.9, 57.4, 57.2, 57.1, 56.9, 55.6, 53.2, 47.0, 41.8, 41.7, 36.7, 35.3, 28.5, 26.6, 25.3, 15.9, 9.4. ESI-MS m/z: calculado para C53H6oN4O?oS: 945.13. Encontrado (M + 1) + : 946.3.

EJEMPLO 67 142 143 A una solución agitada de 12.01 g (0.0127 mol) de 142 en 318 mL de diclorometano, se añadió, bajo argón y a 23°C, 0.71 g (1.015 mmoles) de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(ll) y 3.6 mL (0.176 mol) de ácido acético. Luego se añadió 10.27 mL (0.037 mol) de hidruro de tributil-estaño, a gotas. Se agitó la mezcla a 23°C durante 10 minutos. Luego se filtró la mezcla de reacción a través de una columna de gel de sílice, compactada con hexano. Se obtuvo 10.89 g (95 por ciento) de 143, como un sólido amarillo, mediante elución subsiguiente con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde 1:4 a 7.3. Rf = 0.25 Hex:EtOAc 2:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.28 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 5.87 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.58 (bs, 1H), 5.31 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.17-4.06 (m, 4-6H), 3.85 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.34 (brd, J = 6.6 Hz, 1H), 3.23 (brd, J = 11.2 Hz, 1H), 3.06 (brd, J = 12.9 Hz, 1H), 3.04-2.86 (m, 3H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.80 (dd, JT = 11.5 Hz, J2 = 15.8 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 175.3, 170.5, 154.9, 149.1, 147.6, 145.9, 145.8, 145.7, 144.5, 140.9, 140.8, 136.1, 130.9, 127.4, 126.4, 126.9, 124.3, 124.7, 122.9, 119.7, 117.6, 112.3, 111.4, 106.6, 100.7, 99.7, 80.0, 64.2, 60.3, 59.8, 57.6, 57.0, 56.5, 56.4, 55.2, 52.7, 46.7, 46.5, 41.4, 41.3, 36.9, 36.6, 34.9, 28.2, 26.0, 24.9, 20.9, 20.7, 15.7, 14.1, 8.5. ESI-MS m/z: Calculado para C5oH56N4O?os: 905.5. Encontrado (M + 1) + : 906.3.

EJEMPLO 68 A una solución de 10 g (0.011 mol) de 143 en 185 mL de diclorometano anhidro, a -10°C (temperatura del baño -15°C), se añadió 5.7 g (0.011 mol) de una solución de anhidrido bencenselenínico en 185 mL de diclorometano anhidro, desechando cualquier sólido presente en la solución. Se agitó la mezcla durante 10 minutos a la misma temperatura. Se diluyó la reacción con diclorometano (200 mL) y se añadió 500 mL de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio a -10°C. Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta sequedad a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde 1:1 , 3:2, 7:3 hasta 4:1, para obtener 9.34 g (92 por ciento) de 144, como un sólido amarillo. Se disolvió el sólido purificado procedente de la cromatografía, en 250 mL de diclorometano, se añadió 3.3 g de carbón y se agitó la suspensión a 23°C durante una hora. Se filtró la mezcla a través de Celite y se lavó la Celite con 80 mL de diclorometano. Se evaporó el solvente a presión reducida, manteniendo la temperatura a 25-30°C para producir 8.96 g (88 por ciento) de 144, como un sólido amarillo. Rf = 0.30 y 0.25 (mezcla de isómeros) Hex:EtOAc 1:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3 (mezcla de isómeros) d 7.73-7.61 (m, 4H), 7.37-7.30 (m, 4H), 6.62 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 5.55 (bs, 1H), 5.34 (m, 2H), 5.08 (AB sist., JAB = 6.7 Hz, 1H), 5.00 (AB sist., JAB = 5.9 Hz, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.38 (dd, JT = 4.9 Hz, J2 = 12.9 Hz, 1H), 4.21 (dd, JT = 6.3 Hz, J2 = 12.9 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 4.02 (m, 3H), 3.87 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.72 (m, 1H), 3.61 (s. 3H), 3.49 (s, 3H), 3.27 (m, 1H), 3.15 (dd, JT = 1.8 Hz, J2 = 6.2 Hz, 2H), 3.07 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 2.94 (m, 4H), 2.86 (m, 2H); 2.42 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.08 (dd, JT = 2.4 Hz, J2 = 13.9 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.43 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3 (mezcla de isómeros): d 200.6, 171.2, 160.4, 155.6, 148.9, 148.8, 148.3, 145.9. 145.8, 141.2, 141.2, 138.7, 130.9, 127.9, 127.4, 127.3, 127.3, 125.3, 125.1. 124.2, 120.1, 117.1, 111.9, 108.5, 105.0, 104.7, 101.7, 101.3, 99.5, 99.4,. 80.5, 72.5, 70.8, 60.5, 60.1, 58.4, 58.0, 57.9, 56.9, 56.8, 56.3, 55.9, 55.5, 55.4, 53.8. 53.7, 47.1, 42.0, 41.8, 41.5, 37.4, 37.3, 35.6, 35.5, 28.5, 25.8, 25.7, 16.1, 16.0, 7.7, 7.3. ESI-MS m/z: Calculado para C5oH56N4O??S: 921.3. Encontrado (M + 1) + : 922.3.

EJEMPLO 69 A una solución de 3.44 mL de DMSO en 396 mL de diclorometano anhidro, se añadió, bajo argón y a -78°C, 3.27 mL (19.45 mmol) de anhidrido tríflico y se agitó la mezcla a esa temperatura durante 20 minutos. Luego se añadió una solución de 8.92 g (9.6 mmoles) de 144 en 124 mL de diclorometano anhidro a -78°C, y se agitó la mezcla bajo argón a -40°C durante 35 minutos. Se añadió 13.5 mL (73.43 mmoles) de diisopropiletilamina, y se agitó la mezcla bajo argón durante 45 minutos a 0°C. Se añadió 3.65 mL (38.6 mmoles) de terbutanol y 11.6 mL (67.46 mmoles) de terbutil-tetrametilguanidina, y se agitó la mezcla bajo argón durante 40 minutos a 23°C. Se añadió entonces 9.15 mL (96.78 mmoles) de anhidrido acético y se agitó la reacción durante una hora más a 23°C. Se diluyó la reacción con 250 mL de diclorometano y se añadió 500 mL de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio. Se separó la capa orgánica y se lavó secuencialmente con 500 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y con 500 mL de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Se separó la capa orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta sequedad a presión reducida, manteniendo la temperatura a 25-30°C. Luego se purificó el sólido crudo mediante cromatografía en columna rápida, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde 1:4 a 2:3, para dar 4.99 g (68 por ciento) de 145, como un sólido amarillo. Rf = 0.44 Hex:EtOAc 3:2. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) (mezcla de isómeros) d 6.79 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.20 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.14 (d. J = 5.6 Hz, 1H), 5.02 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.33 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.25 (bs, 1H), 4.18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.17 (dd, JT = 1.3 Hz, J2 = 11-7 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.42 (m, 2H), 2.93 (m. 2H), 2.35 (m. 1H), 2.31 (s, 3H). 2.29 (s. 3H), 2.22 (s, 3H), 2.09 (m. 1H). 2.05 (s, 3H), 1.45 (s. 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 207.3, 170.9, 168.8, 155.4, 149.8, 148.6, 146.0, 141.1, 140.7, 131.7, 130.6, 125.1, 120.6, 118.3. 113.7, 102.2, 99.4, 80.0, 61.6, 60.4, 59.8, 59.4, 59.2, 57.7, 55.0, 54.7, 54.0, 41.9, 41.6, 33.1, 31.8, 28.7, 23.9, 20.6, 16.1, 14.3, 9.8. ESI-MS m/z: Calculado para C38H46N4O11S: 766.86. Encontrado (M + 1) + : 767.3.

EJEMPLO 70 145 35 A una solución de 1.0 g (1.3 mmol) de 145 en 50 mL de acetonitrilo y 25 mL de diclorometano, se añadió a 23°C 1.52 g (10.01 mmol) de yoduro de sodio. Luego se enfrió la mezcla a 0°C y se añad ió en porciones 1 .33 g ( 10.01 mmoles) de tricloruro de aluminio, manteniendo la temperatura a 0°C. Luego se agitó la mezcla durante 2.5 horas a 0°C. Se diluyó la reacción con 25 mL de d iclorometano y se añad ió 100 mL de una solución acuosa saturada de tartrato de sodio y potasio. Se separó la fase acuosa y se extrajo con 2 x 75 mL de diclorometano. Se añad ió a la fase acuosa a continuación 50 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y después se extrajo con 2 x 50 mL de diclorometano. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó hasta sequedad bajo presión reducida, manteniendo la temperatura por debajo de 25°C. Se purificó entonces el sólido crudo por medio de cromatografía en columna sobre ami no-gel de sílice y eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de g radiente. Se obtuvo 487 mg (60 por ciento) de 35, como un sólido amarillo. Los datos experimentales de 35 fueron descritos previamente en PCT/GB00/01852. Se preparó 36, ET-770 y ET-743 siguiendo los mismos procedimientos q ue fueron descritos previamente en PCT/G B00/ 01 852.

RUTA 2 EJ EM P LO 71 Se enfrió a 0°C con un baño de hielo, una solución de 9.84 g (18.97 mmol) de 21 en 569 mL de THF y 285 mL de H2O. Luego se añadió a 0°C 1.96 g (28.45 mmoles) de NaNO2 y 18.97 mL (0.33 mol) de AcOH a 0°C, y se agitó la mezcla a 23°C durante 18 horas. Después de enfriar la reacción hasta 0°C, se añadió 300 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (pH básico) y 500 mL de diclorometano. Después de la extracción se extrajo adicionalmente la fase acuosa con 2 x 300 mL de diclorometano. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio y se evaporó hasta sequedad, a presión reducida. Después se disolvió el sólido crudo en 379 mL de MeOH y se añadió 38 mL de NaOH 1 M a 0°C. Se agitó a 23°C durante cuatro horas. Después de diluir con 600 mL de EtOAc, a 0°C, se lavó la capa orgánica con una mezcla de 400 mL de agua y 100 mL (pH básico) de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de extraer, se extrajo adicionalmente la fase acuosa con 3 x 300 mL de EtOAc. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, Hex:EtOAc, gradiente de 3:1 a 2:1), para dar 4.55 g (46 por ciento) de 146, como un sólido blanco. Rf: 0.33 (Hex:AtOAc,.1:1). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.48 (s, 1H), 6.15-6.02 (m, 1H). 5.92 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.39 (dd, y¡^ = 1.5 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.26 (dd, J, = 1.5 Hz, J2 = 10.5 Hz, 1H), 4.24-4.15 (m, 3H), 4.04 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 3.3 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.64 (dt, J, = 3.3 Hz, J2 = 11.1 Hz, 1H), 3.43 (dd, J, = 3.3 Hz, J2 = 10.5 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.31 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 3.22 (dd, J1 = 2.4 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 3.10 (dd, JT = 8.1 Hz, J2 = 18.3 Hz, 1H), 2.49 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.88 (dd, J, = 12 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.6, 146.7, 144.4, 143.0, 138.9, 133.9, 130.2, 129.1, 121.1, 120.9, 117.7, 117.4, 116.8, 113.3, 112.3, 101.1, 74.3, 63.7, 60.6, 60.1, 58.1, 56.9, 56.7, 55.4, 41.7, 26.2, 25.7, 15.7, 9.3. ESI-MS m/z: calculado para C29H33N3O6: 519.59. Encontrado (M + 1) + : 520.5.

EJEMPLO 72 A una solución agitada de 146 (47.35 g (0.091 mol) y 54.6 g (0.137 mol) del derivado de Boc-Cys (Fm) obtenible en el comercio, en 2.8 L de diclorometano, bajo argón, se añadió a gotas, durante 1.5 horas, a 23°C, 5.6 g (0.046 mol) de dimetilaminopiridina y 43.6 g (0.227 mol) de clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida. Luego se agitó la mezcla a 23°C durante una hora más. Se inactivo la reacción añadiendo un litro de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se separó la fase orgánica. Se volvió a extraer la capa acuosa con 2 x 500 mL de diclorometano. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio y se evaporó hasta sequedad, a presión reducida. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía en columna rápida, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente, desde 1:4 hasta 3:1, para producir 74.3 g (93 por ciento) de 147, como un sólido blanco. Rf = 0.5 Hex:AtOAc 1:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.73 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.63-7.55 (m, 2H), 7.39-7.35 (m, 2H), 7.29-7.25 (m, 2H), 6.41 (s, 1H), 6.07-5.97 (m, 1H), 5.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 5.34 (dd, J^ = 1.8 Hz, J2 = 17.4 Hz, 1H), 5.23 (dd, JT = 1.8 Hz, J2 = 10.5 Hz, 1H), 5.04 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.32-4.29 (m, 1H), 4.13-3.91 (m, 9H), 3.72 (s, 3H), 3.31 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.26-3.17 (m, 2H), 2.96-2.87 (m, 3H), 2.68-2.54 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.83 (dd. JT = 12.6 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.9, 155.4, 149.0, 147.1, 146.2, 146.0, 144.7, 143.0, 141.1, 139.4, 134.1, 131.5, 129.1, 127.8, 127.2, 125.0, 121.3, 120.9, 120.1, 118.2, 117.6, 117.2, 112.9, 112.4, 101.4, 80.3, 76.6, 74.4, 65.3, 61.0, 60.4, 57.4, 56.9, 56.7, 55.6, 53.0, 46.9, 41.8, 36.7, 35.3, 31.8, 28.5, 26.6, 25.2, 22.9, 16.0, 14.4, 9.5. ESI-MS m/z: Calculado para C5?H56N4O9S: 900.3.

Encontrado (M + 1) + : 901.3.

EJEMPLO 73 A una solución de 0.562 g (0.624 mol) de 147 en 3.12 mL de acetonitrilo, se añadió a 0°C 1.07 mL (9.35 mmoles) de MEMC1, 2.17 mL (12.48 mmoles) de DIPEA y 0.0076 g (0.06 mmol) de DMAP. Se agitó la mezcla durante 5.5 horas a 23°C. Se diluyó la reacción con 50 mL de cloruro de metileno y se extrajo con 50 mL de ácido clorhídrico 0.1 N. Se extrajo nuevamente la fase acuosa con 50 mL de cloruro de metileno. Se secó las fases orgánicas sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró al vacío, para dar un residuo que fue purificado mediante cromatografía en columna rápida (cloruro de metileno:acetato de etilo 10:1, 5:1) para dar 539 mg (87 por ciento) de 148, como un sólido blanco. Rf = 0.50, cloruro de metileno:acetato de etilo 6:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.73-7.71 (m. 2H), 7.57 (dd, JT = 7.2 Hz, J2 = 15.3 Hz, 2H), 7.40-7.34 (m, 2H), 7.29-7.26 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.08-5.99 (m, 1H), 5.91 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.35 (dd, JT = 1.2 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 5.21 (bs, 1H), 5.13 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 5.04 (brd, J = 9 Hz, 1H), 4.33-4.29 (m, 2H), 4.16-3.90 (m, 8H), 3.85-3.78 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.60-3.35 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.31 (brd, J = 8.1 Hz, 1H), 3.21-3.17 (m, 2H), 2.98-2.88 (m, 3H), 2.64-2.56 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.75 (dd, JT = 11.7 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.5, 155.0, 148.6, 148.5, 148.2, 145.77, 145.6, 144.4, 140.8, 140.7, 139.0, 133.6, 130.7, 130.5, 127.4, 126.9, 124.8, 124.6, 123.8, 120.8, 119.7, 117.8, 117.2, 122.5, 111.9, 101.0, 98.1, 80.0, 77.4, 77.0, 76.6, 73.8, 71.6, 69.2, 65.0, 60.2, 60.0, 59.8, 59.0, 56.8, 56.7, 55.2, 52.7. 46.6. 41.3, 36.2, 34.9, 29.6, 28.2, 26.3, 24.9, 15.6, 14.1, 9.0. ESI-MS m/z: Calculado para C55H64N4OnS: 988.4. Encontrado: (M + 1) + : 989.3.

EJEMPLO 74 A una solución agitada de 38.32 g (0.039 mol) de 148 en 1 litro de diclorometano, se añadió, bajo argón y a 23°C, 2.17 g (0.0031 mol) de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(ll) y 11.1 mL (0.195 mol) de ácido acético. Luego se añadió a gotas 36.5 mL (0.136 mol) de hidruro de tributilestaño. Se agitó la mezcla a 23°C durante 15 minutos. Después se filtró la reacción a través de una columna de gel de sílice, compactada con hexano. Se obtuvo 35.07 g (95 por ciento) de 149, como un sólido blanco, mediante elución subsiguiente con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde OJ00, 1:4, 1:3, 2:5, 2:3, 1:1, 2:1, 3:1 hasta 100:0.

Rf = 0.25 Hex. EtOAc, 2:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.74 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.63-7.53 (m, 2H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.30-7.27 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 5.87 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.69 (bs, 1H), 5.37 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.44 (brd, J = 8.7 Hz. 1H), 4.18-3.70 (m, 11H), 3.69 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.34-3.18 (m. 3H), 2.99-2.88 (m, 3H). 2.63-2.58 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s. 3H). 2.05 (s, 3H), 1.78 (dd, JT = 12.9 Hz, J2 = 15.6.3 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H). RMN 13C (75 MHz, CDCI3) d 170.8, 155.2, 149.0, 148.0, 146.2, 146.0, 144.8, 141.1, 136.4, 131.3, 131.2, 127.8, 127.2, 125.1, 125.0, 123.2, 120.0, 118.1, 112.6, 111.6, 107.2, 101.0, 98.9, 98.8, 80.3, 71.8, 69.8, 64.9, 60.6, 60.2, 59.2, 57.1, 56.9, 55.5, 53.0, 47.0, 46.9, 41.8, 37.0, 35.3, 28.5, 26.2, 25.2, 21.9, 21.3, 16.1, 14.4, 9.0. ESI-MS m/z: calculado para C52H60N4O11S: 948.4. Encontrado (M + 1) + : 949.3.

EJEMPLO 75 A una solución de 15 g (0.0158 mol) de 149 en 265 mL de diclorometano anhidro a -10°C (temperatura de baño -15°C), se añadió a gotas, durante 30 minutos, una solución de 7.4 g (0.0143 mol) de anhidrido bencenselenínico en 265 mL de diclorometano anhidro, desechando cualquier sólido blanco presente en la solución. Se agitó la mezcla durante otros 10 minutos a la misma temperatura. Se diluyó la reacción con 200 mL de diclorometano y se añadió a -10°C 500 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta sequedad a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde 1:2 hasta 100:0, para obtener 14.20 g (89 por ciento) de 150, como un sólido amarillo. Se disuelve el sólido purificado procedente de la cromatografía en 250 mL de diclorometano y se añadió 4.95 g de carbón. Luego se agitó la suspensión a 23°C durante una hora. Se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celite y se lavó la Celite con 80 mL de diclorometano. Se evaporó el solvente a presión reducida para dar 13.72 g (86 por ciento) de 150, como un sólido blanco. Rf = 0.37 Hex:EtOAc 1:2. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) (mezcla de isómeros): d 7.73 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 7.63 (m, 2H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.40-7.34 (m, 4H), 7.31-7.27 (m, 4H), 6.62 (s, 2H), 5.86 (s, 1H), 5.81 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.35 (d, J = 5.9 Hz, 1H), .30 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.43 (m, 2H), .20-4.01 (m, 8H), 3.97-3.86 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 3.80-3.74 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.66-3.64 (m, 4H), 3.54 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.34-2.90 (m, 8H); 2.60-2.31 (m, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.94-1.81 (m, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.41 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3) (mezcla de isómeros) d 200.2, 198.3, 170.7, 150.5, 160.0, 155.2, 154.9, 148.5, 148.4, 145.5, 142.1, 140.9, 138.3, 130.9, 130.5, 130.0, 129.8, 127.5, 126.9, 125.0, 124.9, 124.7, 123.8, 122.5, 119.8, 117.2, 116.7, 111.5, 108.1, 104.6, 104.3, 101.3, 100.9, 98.0, 80.1, 72.1, 71.5, 70.5, 69.2, 69.0, 66.4, 63.5, 60.7, 60.1, 59.6, 58.9, 58.8, 58.0, 56.7, 56.4, 56.2, 55.9, 55.5. 55.0, 53.5, 46.7, 41.7, 41.3, 41.1, 36.9, 35.2, 35.1, 31.4, 28.1, 25.4, 25.3, 22.5, 15.7, 15.6, 14.0, 7.2. ESI-MS m/z: Calculado para C52H6oN4O12S: 964.4. Encontrado: 965.3 (M + 1) + , 987.3 (M + 23)+. EJEMPLO 76 01 Se flameó dos veces el matraz de reacción, se purgó varias veces con vacío/argón y se mantuvo bajo atmósfera de argón durante la reacción. Se añadió a gotas a una solución de 385.0 µL de DMSO en 42 mL de cloruro de metileno anhidro, 366.5 µL (2.16 mmoles) de anhidrido tríflico, a -78°C. Se agitó la mezcla de reacción a -78°C durante 20 minutos. Luego se añadió mediante una cánula una solución de 1 g (1.03 mmol) de 150 en 10 mL de cloruro de metileno anhidro, para la adición principal, y 5 mL de cloruro de metileno anhidro para el lavado; (tiempo de adición: 5 minutos) a -78°C. Durante la adición se mantuvo la temperatura a -78°C en ambos matraces y el color cambió de amarillo a pardo. Se agitó la mezcla de reacción a -40°C durante 35 minutos. Durante ese periodo de tiempo la solución cambió de amarillo a verde oscuro. Después de ese tiempo se añadió a gotas 1.51 mL (9.55 mmoles) de iPr2NEt, y se mantuvo la mezcla de reacción a 0°C durante 45 minutos; el color de la solución cambió a pardo durante ese tiempo. Luego se añadió a gotas 409.5 mL (4.33 mmoles) de tBuOH y 1.31 mL (7.61 mmoles) de terbutil-tetrametilguanidina, y se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 40 minutos. Después de ese tiempo se añadió a gotas 1.03 mL (10.89 mmoles) de anhidrido acético y se mantuvo la mezcla de reacción a 23CC durante una hora más. A continuación se diluyó la mezcla de reacción con 25 mL de cloruro de metileno y se lavó con 50 mL de solución acuosa saturada de NH4CI, 50 mL de NaHCO3 y 50 mL de NaCl. Se secó las capas orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtró y concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (diámetro interno 2.0 cm, altura de sílice, 9 cm; eluyente, acetato de etilo/hexano, en forma de gradiente, de 20:80, 30:70 hasta 40:60), para dar 832.6 mg (99 por ciento) de 151, como un sólido blanco. Rf = 0.48 Hex: EtOAc, 3:2. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.78 (s, 1H), 6.09 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.32 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.19 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.62 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.50 (bs, 1H), 4.34 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 2.4 Hz, J2 = 6.8 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.17 (m, 2H), 3.90 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.58 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.42 (3.37 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.91 (m, 2H), 2.36-2.08 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H). 2.21 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.44 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.9, 168.9, 168.0, 155.4, 149.8, 148.6, 146.0, 141.1, 140.6, 131.6, 131.1, 130.6, 129.0, 125.1, 120.6, 118.3, 102.2, 98.4, 79.9, 71.9, 69.4, 61.6, 60.4, 59.8, 59.4, 59.2, 54.9, 54.7, 54.0, 41.6, 30.6, 29.1, 28.7, 23.9, 23.2, 20.6, 16.1, 14.2, 11.2, 9.8. ESI-MS m/z: calculado para C40H5oH4O12S: 810.91. Encontrado (M + 1) + : 811.3.

EJEMPLO 77 15. 35 A una solución de 2.9 g (3.57 mmol) de 151 en 120 mL de cloruro de metileno, se añadió a 23°C 1.4 mL (21.46 mmoles) de MeSO3H. Después de agitar la reacción durante 30 minutos a 23°C, se añadió 200 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, a 0°C. Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró hasta sequedad a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde 0:1 a 1:0, para obtener 1.43 g (64 por ciento) de 35, como un sólido amarillo pálido. Los datos experimentales de 35 fueron descritos previamente en PCT/GB00/01852. Se preparó 36, ET-770 y ET-743 siguiendo los mismos procedimientos que fueron descritos previamente en PCT/GB00/ 01852.

RUTA 3 El primer paso de esta ruta (transformación de 21 a 146) fue descrito anteriormente en el ejemplo 71.

EJEMPLO 78 HQ.Cys(Frrí)+ HCI 52 A una solución de 40 g (0.119 mol) de HO.Cys(Fm)-H.HCI obtenible comercialmente de Bachem, en 500 mL de acetona y 500 mL de agua, se añadió a 0°C 238 mL de una solución 1 M de carbonato de sodio y 18.7 mL (0.131 mol) de BnCO2CI. Después de agitar la reacción a 60°C durante 30 minutos se inactivo la mezcla con HCl 1N (pH 0 1) y se extrajo con 3 x 400 mL de éter. Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró hasta sequedad, a presión reducida. Se disolvió el sólido crudo en una mezcla de EtOAc/CH2CI2 1:1, se precipitó con hexano y se mantuvo a 4°C durante la noche. Luego se separó por filtración la suspensión, se lavó el sólido con 200 mL de hexano y se secó el filtrado al vacío, para dar 50.16 g (97 por ciento) de 152, como un sólido blanco. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 10.66 (bs, 1H), 7.74 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.69-7.64 (m, 2H); 7.62-7.29 (m, 9H), 5.67 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.14 (bs, 2H), 4.70-4.64 (m, 1H), 4.09-4.05 (m, 1H), 3.12-3.09 (m, 2H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 175.2, 155.9, 145.5, 141.0, 135.8, 128.5, 128.2, 128.1, 127.5, 127.0, 124.7, 119.8, 84.8, 67.3, 46.8, 37.0 ESI-MS m/z: Calculado para C25H23NO4S: 433.52 (encontrado (M + 1) + : 434.4.

EJEMPLO 79 A una solución agitada de 10 g (19.2 mmoles) de 146 y 12.5 g (28.8 mmoles) de 152 en 800 mL de diclorometano, bajo argón, se añadió a gotas, durante una hora, a 0°C, 705 mg (5.77 mmoles) de dimetilaminopiridina, 9.2 g (48.1 mmoles) de clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida y 7.4 mL (42.3 mmoles) de diisopropiletilamina. Luego se agitó la mezcla a 23°C durante 1.5 horas más. Se inactivo la reacción añadiendo 600 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se separó la fase orgánica y se lavó de nuevo con 500 mL de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y 500 mL de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Se secó el extracto orgánico sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó hasta sequedad a presión reducida. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía en columna rápida (RP18, CH3CN:H2O 4:1) para dar 13.89 g (77 por ciento) de 153, como un sólido amarillo pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.74-7.72 (m, 2H), 7.61-7.53 (m, 2H), 7.37-7.24 (m, 9H), 6.39 (s, 1H). 6.09-5.96 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.84 (s, 1H). 5.78 (s. 1H), 5.34 (dd, J, = 1.5 Hz, J2 = 17.4 Hz, 1H), 5.32 (bs, 1H), 5.24 (dd, J, = 1.5 Hz, J2 = 10.2 Hz, 1H), 5.17-5.07 (m, 2H), 4.40 (dd, Ji = 3.6, J2 = 10.8 Hz, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.18-4.01 (m, 6H), 3.92 (brt J = 6.3 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.30-3.19 (m, 3H), 2.99-2.85 (m, 3H), 2.65 (dd, J, = 4.5 Hz, J2 = 14.4 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.86 (dd, J, = 11.7 Hz, J2 = 15.9 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.2, 155.6, 148.6, 146.8, 145.7, 145.6, 144.3, 142.6, 140.7, 139.0, 133.7, 131.1, 128.8, 128.4, 128.1, 128.0, 127.4. 126.9, 124.7, 124.6, 12.0, 120.5, 119.7, 117.8, 117.3, 116.8, 112.5, 112.0, 101.0, 74.1, 67.0, 64.7, 60.7, 59.9, 57.0, 56.6, 56.3, 55.2, 53.1, 46.5, 41.4, 36.4, 34.8, 26.2, 24.8, 15.6, 9.2. ESI-MS m/z: calculado para C54H5 N4O9S: 934.36. Encontrado (M + 1) + : 935.4.

EJEMPLO 80 A una solución de 13.89 g (14.85 mmoles) de 153 en 74.3 mL de acetonitrilo, se añadió a 0°C 25.4 mL (223 mmoles) de MEMC1, 52 mL (2.97 mmoles) de DIPEA y 0.181 g (0.15 mmol) de DMAP. Se agitó la mezcla durante 5 horas a 23°C. Se diluyó la reacción con 400 mL de cloruro de metileno y se extrajo con 300 mL de HCl 0.1 N y HCl 3 N (pH = 3). Se extrajo la fase acuosa nuevamente con 2 x 50 mL de cloruro de metileno. Se secó las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para dar un residuo que fue purificado mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, CH2CI2:EtOAc 10:1, 5:1), para dar 13.47 g (88 por ciento) de 154, como un sólido blanco. Rf = 0.27 cloruro de metileno:acetato de etilo 6:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.73-7.70 (m, 2H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.38-7.22 (m, 9H), 6.59 (s, 1H); 6.08-5.98 (m, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.35 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 5.31-5.28 (m, 1H), 5.23 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.12-5.05 (m, 2H), 4.37-4.29 (m, 2H), 4.15-3.77 (m, 9H), 3.68 (s, 3H), 3.58-3.55 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.30-3.27 (m, 1H), 3.21-3.16 (m, 2H), 2.96-2.84 (m, 4H), 2.64-2.58 (m, 1H), 2.55 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.75 (dd, JT = 12.3 Hz, J2 = 16.2 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 171.9, 170.2, 155.5, 148.7, 148.6, 148.3, 145.8, 145.7, 144.5, 142.1, 140.9, 139.1, 136.1, 133.8, 130.8, 130.5, 128.5, 128.3, 128.1. 127.6, 127.0, 124.9, 124.7, 123.9, 122.2, 120.9, 119.8, 117.8, 117.3, 112.6, 112.0, 101.1, 98.2, 74.0, 71.7, 69.3, 67.1, 65.1, 60.1, 59.8, 59.0, 56.9, 56.8, 56.7, 55.3, 43.3, 46.7, 41.4, 36.5, 35.0, 31.6, 29.7, 26.4, 25.0, 22.6, 15.7, 14.1, 9.2. ESI-MS m/z: Calculado para C58H62N4O11S: 1023.2. Encontrado (M + 23)+: 1046.3.

EJEMPLO 81 A una solución agitada de 20.84 g (0.02 mol) de 154 en 530 mL de diclorometano, se añadió bajo argón, a 23°C, 1.14 g (1.63 mmol) de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(l I), y 11.64 mL (0.2 mol) de ácido acético. Luego se añadió a gotas 27.44 mL (OJ mol) de hidruro de tributilestaño. Se agitó la mezcla a 23°C durante 15 minutos. A continuación se filtró la reacción a través de una columna de gel de sílice, compactada con hexano. Se obtuvo 18.78 g (94 por ciento) de 155, como un sólido amarillo pálido, mediante elución subsiguiente con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente, de 1:4, 1:1, 3:2 a 7.3. RMN con 1H (300 MHz. CDCI3): d 7.71 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.41-7.23 (m, 9H), 6.60 (s, 1H), 5.87 (bs, 2H), 5.74 (s, 1H), 5.40 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.18 (d, J = 9 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.56 (dd, J, = 3 Hz, J2 = 11.1 Hz, 1H), 4.19 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.16-3.87 (m, 9H), 3.66 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.32-3.20 (m, 3H), 2.96-2.87 (m, 3H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.82 (dd, J = 13.2 Hz, J2 = 15.6 Hz, 1H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.0, 155.4, 149.0, 147.5, 145.7, 145.6, 144.4, 140.8, 135.9, 130.9, 128.4, 128.1, 128.0, 127.4, 126.9, 124.7, 124.6, 122.7, 119.7, 117.7, 112.4, 111.4, 100.6, 98.7, 71.5, 69.4, 67.0, 64.9, 63.9, 59.7, 59.6, 58.8, 57.0, 56.5, 56.4, 55.1, 54.9, 53.1, 52.5, 46.5, 41.4, 36.8, 34.9, 25.8, 24.7, 15.7, 8.7.

EJEMPLO 82 A una solución de 18.5 g (18.82 mmoles) de 155 en 530 mL de diclorometano anhidro a -10°C (temperatura de baño -15°C), se añadió a gotas una solución de 9.68 g (18.82 mmoles) de anhidrido bencenselenínico en 290 mL de diclorometano anhidro, desechando cualquier sólido blanco presente en la solución. Se agitó la mezcla durante 10 minutos a la misma temperatura. Después se inactivo la reacción con 600 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se separó la fase orgánica y se extrajo la fase acuosa con 2 x 300 mL de cloruro de metileno. Se secó sobre sulfato de sodio los extractos orgánicos combinados, se los filtró y concentró hasta sequedad, bajo presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna, eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano en forma de gradiente, de 1:1, 3:2, 7:3 a 4:1, para obtener 17.62 g (88 por ciento) de 156 (como un sólido amarillo pálido. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) (mezcla de isómeros) d 7.73 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.40-7.29 (m, 9H), 6.59 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.66 (s, 1H), 5.58 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.23 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.15-5.05 (m, 4H), 4.76-4.68 (m, 1H), 4.64-4.55 (m, 1H), 4.40-4.37 (m, 1H), 4.15-3.68 (m, 8H), 3.60 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.25-2.78 (m, 7H), 2.38-2.24 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (m, 1H), 2.04 (w, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.58 (s, 3H). ESI-MS m/z: Calculado para C55H58N4O12S: 999.13. Encontrado (M + 1) + : 1000.0.

EJEMPLO 83 Se flameó dos veces el matraz de reacción, se purgó con vacío/argón varias veces, y se mantuvo bajo atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de 178 µL de DMSO en 20 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió a gotas 169 µL (1 mmol) de anhidrido tríflico. Se agitó la mezcla de reacción a -78°C durante 20 minutos. Luego se añadió, por medio de una cánula, 0.5 g (0.5 mmol) de 156 en 4 mL (para la adición principal, y 1.5 mL para lavado) de cloruro de metileno anhidro (tiempo de la adición, 5 minutos) a -78°C. Durante la adición se mantuvo la temperatura a -78°C en ambos matraces y se cambió el color de amarillo a pardo. Se agitó la mezcla de reacción a -40°C durante 35 minutos. Durante ese periodo de tiempo la solución cambió de amarilla a verde oscuro. Después de ese tiempo se añadió a gotas 0.7 mL (4.42 mmoles) de iPr2NEt, y se mantuvo la mezcla de reacción a 0°C durante 45 minutos; el color de la solución cambió a pardo durante ese tiempo. Luego se añadió a gotas 189 µL (2 mmoles) de tBuOH y 0.6 mL (3.49 mmoles) de terbutil-tetrametilguanidina, y se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 40 minutos. Después de ese tiempo se añadió a gotas 0.47 mL (4.97 mmoles) de anhidrido acético y se mantuvo la mezcla de reacción a 23°C durante una hora más. A continuación se diluyó la mezcla de reacción con 15 mL de cloruro de metileno y se lavó con solución acuosa saturada de 25 mL de NH4CI, 25 mL de bicarbonato de sodio y 25 mL de cloruro de sodio. Se secó sobre sulfato de sodio las capas orgánicas combinadas, se las filtró y concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (diámetro interno, 2.0 cm; altura de sílice, 9 cm; eluyente, acetato de etilo/hexano, en forma de gradiente, de 1:4, 1:3, 1:2 a 1:1) para producir 128 mg (30 por ciento) de 157, como un sólido amarillo claro. Rf = 0.37 Hex:EtOAc 3:2. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.37 (bs, 5H), 6.66 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.30 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.83 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.34-4.17 (m, 7H), 3.90-3.87 (m, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.65-3.56 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.89-2.90 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 2.15-2.04 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H). ESI-MS m/z: Calculado para C43H48N4O12S: 844.93. Encontrado (M + 1) + : 845.8.

EJEMPLO 84 A una solución de 100 mg (0.118 mmol) de 157 en 2 mL de cloruro de metileno y 2 mL de acetonitrilo, se añadió a 0°C 71 mg (0.472 mmol) de Nal y 60 µl, 0.472 mmol) de TMSCI. Después de agitar la reacción a 23°C durante 50 minutos, se inactivo la mezcla con 30 mL de agua y se extrajo con 2 x 20 mL de cloruro de metileno. Se lavó sucesivamente las fases orgánicas combinadas con una solución saturada de 20 mL de NaCI y 20 mL de una solución saturada de ditionito de sodio, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (eluyente: acetato de etilo/hexano en gradiente de 1:4, 1:2 a 1:1, para dar 62 mg (70 por ciento) de 158, como un sólido blanco.

Rf = 0.21 Hex:EtOAc 1:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.36 (bs, 5H), 6.44 (s, 1H), 6.07, d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.81 (bs, 1H), 5.10-5.00 (m, 3H), 4.82 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.49 (bs, 1H), 4.35.4.30 (m, 1H), 4.21-4.17 (m, 2H), 4.16-4.14 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.88-2.85 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.24-2.03 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.00 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.5, 168.8, 155.9, 148.3, 146.0, 143.1, 141.2, 140.6, 136.6, 130.6, 130.0, 128.8, 128.7, 128.5, 121.0, 120.3, 118.3, 118.2, 113.7, 113.6, 102.2, 67.2, 61.5, 60.8, 60.3, 59.6, 59.5, 54.8, 54.7, 54.1, 41.9, 41.6, 32.9, 23.9, 20.8, 15.5, 9.8. ESI-MS m/z: Calculado para C39H40N4O10S: 756.82. Encontrado (M + 1) + : 757.3.

EJEMPLO 85 158 35 A una solución de 100 mg (0.132 mmol) de 158 en 6.8 mL de MeOH, se añadió a 23°C 360 µL de HCO2H y 140 mg (0.132 mmol) de Pd/C al 10%; y se agitó la mezcla durante 15 minutos. Luego se añadió 7 mL de tolueno a la reacción y se evaporó el solvente a presión reducida. Se repitió tres veces la destilación azeotrópica con tolueno. Se diluyó entonces el residuo con 15 mL de diclorometano y se añadió 15 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se separó la fase acuosa y se extrajo con 2 x 10 mL de diclorometano. Se secó sobre sulfato de sodio los extractos orgánicos combinados, se filtró y se evaporó hasta sequedad a presión reducida. Luego se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida sobre amino-gel de sílice, y eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, desde 1:2, 1:1 hasta 2:1, para dar 57 mg (70 por ciento) de 35, como un sólido amarillo. Los datos experimentales de 35 fueron descritos previamente en PCT/GB00/01852. Se preparó 36, ET-770 y ET-743 siguiendo los mismos procedimientos previamente descritos en PCT/GB00/01852.

RUTA 4 El primer paso de esta ruta (la transformación de 2 a 146) fue descrito anteriormente en el ejemplo 71.

EJEMPLO 86 146 159 A una solución de 18 mg (0.032 mmol) de 146, cat DMAP y 5 mg (0.08 mmol) de ¡midazol en 0.05 mL de DMF a 0°C, se añadió 12.5 µL (0.048 mmol) de cloruro de terbutildifenilsililo, y se agitó la reacción durante cuatro horas a 23°C. A continuación se añadió 30 mL de agua a 0°C y se extrajo la mezcla con 2 x 40 mL de Hex:EtOAc. Se secó sobre sulfato de sodio las fases orgánicas combinadas, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, Hex:EtOAc, 3:1) para dar 27 mg (88 por ciento) de 159, como un sólido blanco. Rf = 0.29 Hex:EtOAc, 3:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 7.72-7.41 (m, 2H), 7.40-7.20 (m, 8H), 6.46 (s, 1H), 6.16-6.00 (m, 1H), 5.77 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.63 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.24 (dd, J, = 1.2 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.23 (dd, J, = 1.2 Hz, J2 = 10.2 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.13-4.00 (m, 4H), 3.77 (s, 3H), 3.63 (dd, y¡^ = 2.4 Hz, J2 = 7.5 Hz, 1H), 3.39-3.19 (m, 4H), 2.99 (dd, J = 8.1 Hz, J2 = 18.0 Hz, 1H), 2.68 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.08 (s, H), 1.99 (dd, J, = 12.6 Hz. J2 = 16.3 Hz, 1H), 0.89 (s, 9H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.3, 146.6, 144.0, 142.5, 139.0, 135.7, 135.4, 133.9, 133.6, 132.2, 131.2, 129.5, 129.4, 128.3, 127.5, 127.4, 121.8, 120.9, 118.7, 117.3, 117.2, 112.9, 111.7, 100.8, 74.2, 68.0, 61.6, 60.6, 60.3, 59.0, 57.4, 56.7, 55.4, 41.7, 29.6, 26.6, 26.5, 25.5, 18.9, 15.8, 9.3. ESI-MS m/z: calculado para C45H51N3O6Si: 757.9. Encontrado (M + 1+: 758.4.

EJEMPLO 87 159 26 A una solución de 2.4 g (3.17 mmoles) de 159 en 16 mL de acetonitrilo, se añadió a 0°C 2.6 mL (31.75 mmol) de MOMBr, 8.3 mL (47.6 mmol) de DIPEA y 16 mg (0.127 mmol) de DMAP. Se agitó la mezcla durante seis horas a 23°C. Se diluyó la reacción con 50 mL de cloruro de metileno y se extrajo con 50 mL de HCl OJ N. Se extrajo la fase acuosa nuevamente con 50 mL de cloruro de metileno. Se secó sobre sulfato de sodio las fases orgánicas combinadas, se filtró y concentró al vacío, para dar un residuo que fue purificado mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, cloruro de metileno:acetato de etilo 15:1, 5:1) para dar 1.78 g (70 por ciento de 26, como un sólido blanco. Los datos experimentales de 26 fueron descritos previamente en PCT/GB00/01852. Los procedimientos experimentales para Int. 11, 160, 161, 162 y 163 fueron descritos previamente en la patente estadounidense No. 5,721,362.

EJEMPLO 88 163 164 A una solución de 15.8 g (0.02 mol) de 163 en 250 mL de cloruro de metileno anhidro y 300 mL de acetonitrilo, se añadió bajo atmósfera de argón, a 23°C, 31.5 g (0.21 mol) de Nal y 26.7 mL (0.21 mol) de C1TMS (recién destilado sobre CaH2. Se agitó durante 40 minutos la mezcla de reacción. Luego se dividió la reacción entre 200 mL de cloruro de metileno y 300 mL de agua. Se lavó la capa orgánica con 2 x 300 mL de una solución acuosa saturada de NaCl. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el crudo mediante cromatografía en columna rápida usando acetato de etilo/hexano 2:3 como eluyente, para dar 10.74 g (76 por ciento) de 164, como un sólido amarillo pálido. Rf = 0.25 Hex:EtOAc 3:2. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3: d 6.57 (s, 1H); 6.08 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.96-5.85 (m, 1H), 5.76 (bs, 1H), 5.30 (dd, J = 1.5, J2 = 17.3 Hz, 1H), 5.23 (dd, J, = 1.5, J2 = 10.2 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.58-4.45 (m, 3H), 4.34-4.28 (m, 1H), 4.23 (m, 2H), 4.17-4.00 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.40-3.38 (m, 2H), 2.91-2.85 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.24-2.23 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.02 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 170.1, 168.4, 155.2, 148.0, 145.5, 142.8, 140.7, 140.1, 132.7, 130.2, 129.6, 120.7, 119.9. 117.8, 113.3, 101.9, 65.6, 61.0, 60.4, 59.9, 59.2, 59.0, 54.3, 53.6, 41.5, 41.2, 32.6, 29.5, 23.5, 20.4, 15.6, 9.4. ESI-MS m/z: calculado para C35H38N4O10S: 706.76. Encontrado (M + 1)+: 707.2. EJEMPLO 89 35 A una solución agitada de 2 g (2.85 mmoles) de 164 en 142 mL de diclorometano, se añadió bajo argón, a 23°C, 0.2 g (0.28 mmol) de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(ll) y 0.65 mL (11.4 mmoles) de ácido acético. Luego se añadió 4.51 mL (17.02 mmoles) de hidruro de tributilestaño, a gotas, durante 25 minutos. Después de añadir HSnBu3 se agitó la mezcla a 23°C durante otros veinte minutos. Se filtró la reacción a través de una columna de gel de sílice, compactada con hexano. Se obtuvo 1.38 g (78 por ciento) de 35, con mezclas de acetato de etilo y hexano, en forma de gradiente, de 1:2 a 15:1. Los datos experimentales de 35 fueron descritos previamente en PCT/GB00/01852. Se preparó 36, ET-770 y ET-743 siguiendo los mismos procedimientos que fueron descritos previamente en PCT/GB00/ 01852.

RUTA 5 El primer paso de esta ruta (la transformación de 21 a 146) fue descrito anteriormente en el ejemplo 71.

EJEMPLO 90 146 165 A una solución de 8.72 g (16.78 mmoles) de 146 en 20.1 mL de DMF, se añadió a 0°C 3.43 g (50.34 mmoles) de imidazol, 7.58 mL (50.34 mmoles) de terbutil-dimetilclorosilano, y 0.2 g (1.7 mmol) de DMAP. Después de agitar a 23°C durante 3.5 horas, se inactivo la mezcla de reacción con 100 mL de agua y se extrajo con 2 x 75 mL de EtOAc/Hex 1:3. Se lavó las fases orgánicas combinadas con 50 mL de HCl 0.1 M y se extrajo nuevamente la fase acuosa con 40 mL de EtOAc/Hex 1:3. Se secó sobre sulfato de sodio las fases orgánicas combinadas, se las filtró y concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (Hex:AtOAc, 10:1, 3:1), para obtener 9.85 g (93 por ciento) de 165, como un sólido blanco. Rf = 0.39 en Hex:AcOEt 2:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.43 (s 1H), 6.15-6.03 (m, 1H), 5.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 5.41 (dd, J, = 1.5, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.26 (dd, J, = 1.5, J2 = 10.5 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.20-4.08 (m, 3H), 3.97 (dd, J, = 2.7, J2 = 8.1 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.61 (dd, J, = 2.71, J2 9.9 Hz, 1H), 3.18 (brd, J = 8.7 Hz, 1H), 3.22-3.16 (m, 2H); 2.99 (dd, JT = 8.1, J2 = 17.4 Hz, 1H); 2.65 (d, J =? 17.4 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H); 2.11 (s, 3H). 1.89 (dd, J = 12, J2 = 15.6 Hz, 1H), 0.8 (s, 9H), -0.05 (s, 3H), -0.09 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.2, 146.5, 143.8, 142.4, 138.9, 133.8, 131.0, 128.0, 121.5, 120.4, 118.4, 117.1, 112.8, 111.6, 100.7, 74.0, 68.2, 61.5, 60.2, 58.6, 57.1, 56.5, 55.2, 41.3, 26.2, 25.4, 25.2, 20.6, 17.8, 15.3, 13.8, 9.0, -3.9, -6.0. ESI-MS m/z: calculado para C35H47N3?6Si: 633.85. Encontrado (M + 1) + : 634.2.

EJEMPLO 91 16S 166 A una solución de 7.62 g (12.02 mmoles) de 165 en 87.64 mL de THF y 0.24 mL de agua, se añadió a -6°C, 2.33 mL (20.43 mmoles) de MEMCl. Después de añadir 0.72 g (18.03 mmoles) de NaH al 60 por ciento, en porciones, durante 45 minutos, se agitó la mezcla durante 1.5 horas a esa temperatura. Se inactivo con 150 mL de agua la reacción y se extrajo con 2 x 100 mL de cloruro de metileno. Se secó las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se las filtró y concentró al vacío, para dar 8.69 g (100 por ciento) de 166, como un sólido blanco que se usó en los siguientes pasos sin purificación ulterior. Rf = 0.24 Hex:AcOEt 2:1. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) d 6.64 (s, 1H), 6.16-6.05 (m, 1H), 5.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.41 (dd, Ji = 1.51, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.29-5.24 (m, 2H), 5.14 (d, J = 6 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.21-4.06 (m, 3H), 4.01-3.95 (m, 2H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.64-3.57 (m. 3H), 3.39 (s, 3H). 3.29 (brd J = 7.5 Hz, 1H), 3.25-3.15 (m, 2H), 3.00 (dd, J = 8.1, J2 = 17.4 Hz, 1H), 2.65 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.82 (dd, J, = 12, J2 = 15.6 Hz, 1H), 0.79 (s, 9H), -0.06 (s, 3H), -0.11 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.4, 148.1, 144.1, 139.2, 133.9, 130.9, 130.8, 130.2, 128.8, 125.1, 124.2, 121.5, 118.8, 117.45, 113.0, 111.9, 101.0, 98.2, 74.1, 71.7, 69.3, 68.3, 61.7, 59.6, 59.0, 58.9, 57.3, 57.1, 55.5, 41.6, 29.7, 26.4, 25.8, 25.5, 25.4, 15.7, 9.2, -5.6, -5.6. ESI-MS m/z: Calculado para C39H55N3O8Si: 721.3.

Encontrado (M + 1) + : 722.3.

EJEMPLO 92 A una solución de 10.76 g (14.90 mmoles) de 166 en 275 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió, bajo atmósfera de argón y a 23°C, 837 mg (1.19 mmol) de Pd(PPh3P)2CI2. 4.26 mL (74.5 mmoles) de ácido acético y 11.85 mL (44.7 mmoles) de hidruro de tributilestaño. Se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 15 minutos (la TLC AcOEt/hexano 1:1, no mostró material de partida). Se añadió 100 mL de hexano y se vertió la mezcla en una columna de cromatografía rápida (SiO2, EtOAc:hexano, en forma de gradiente, de 0:100, 1:4, 2:3 a 1:1), para dar 9.95 g (98 por ciento) de 167, como un sólido amarillo. Rf = 0.42 Hex:EtOAc 3:7. RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): d 6.63 (s, 1H), 5.89 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.76 (m, 1H), 5.38 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.17 (dd, J, = 1.95 Hz, J2 = 6.05 Hz, 1H), 4.11 (dd, J^ = 7.0 Hz, J2 = 12.5 Hz, 1H), 4.01-3.92 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.67 (m, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.29 (m, 1H), 3.24-3.13 (m, 3H), 2.99 (dd, J, = 8.0 Hz, J2 = 17.5 Hz, 1H), 2.67 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.09 (s. 3H), 2.05 (s, 3H), 1.80 (dd, J = 11.2 Hz, J2 = 14.9 Hz, 1H), 0.82 (s. 9H), -0.03 (s, 3H), -0.07 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 148.4, 147.3, 145.5, 144.1, 136.2, 134.9, 134.8, 130.9, 130.2, 124.8, 123.1, 118.6, 112.8, 112.1, 106.2, 100.4, 98.4, 71.5, 69.2, 68.9, 61.7, 59.6, 58.7, 58.6, 56.9, 56.6, 55.3, 41.5, 29.5, 25.7, 25.3, 17.9, 15.5, 8.7, -5.7, -5.8. ESI-MS m/z: Calculado para C36H51N3O8Si: 681.89. Encontrado (M + 1) + : 682.3. HPLC: Condiciones: columna: Simetría C18; fase móvil AcN - regulador fosfato 25 mM, pH = 5; ¡socrático de AcN (65 por ciento) en 5 minutos y gradiente en AcN de 65-92 por ciento en 31 minutos; 00.6 mL/min, temperatura: 40°C. Tiempo de retención 27.89 minutos. Pureza por HPLC en el área: 89.62 por ciento.

EJEMPLO 93 167 168 A una solución de 9.95 g (14.6 mmoles) de 167 en 300 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió a gotas 7.51 g (14.6 mmoles) de anhidrido bencenselenínico (pureza de reactivo 70 por ciento) en 120 mL de cloruro de metileno anhidro, baj*o atmósfera de argón, a -15°C (se desechó el sólido blanco restante). Luego se agitó la solución a -15°C durante 15 minutos (La TLC, EtOAc/hexano 2:3 no mostró material de partida). Se añadió 500 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio a la mezcla de reacción, a esta temperatura. Se separó la fase orgánica y se extrajo la fase acuosa con 500 mL de cloruro de metileno. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el crudo de la reacción mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc: hexano en forma de gradiente, de 2:3 a 3:1) para producir 9.86 g (97 por ciento) de 168, como un sólido amarillo. Rf = 0.33 Hex:EtOAc 3:7). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3) (razón de isómeros alrededor de 3:2): d 6.59 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.19 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 2.44 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 3.86-3.75 (m, 2H); 3.81 (s, 3H), 3.72-3.68 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.50 (m, 3H), 3.31 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.24 (m, 1H), 3.09 (dt, J = 3.2 Hz, J = 7.6 Hz, 1H); 3.02 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.92 (m, 2H), 2.48 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.43 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.03 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.71 (s, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.77 (s, 9H), 0.04 (s, 3H), 0.02 (s, 3H).

RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 200.5, 197.2, 159.8, 157.7, 148.4, 148.2, 147.7, 140.0, 137.6, 130.5, 130.2, 129.9, 129.4, 124.9, 124.7, 124.0, 122.7, 117.1, 116.9, 113.4, 110.8. 103.9, 103.8, 101.0, 100.4, 97.8, 72.8, 71.3, 69.7, 68.9, 68.8, 65.4, 64.1, 60.2, 59.9, 59.3, 59.1, 59.0, 58.6, 58.5, 56.8, 56.5, 56.2, 55.5, 54.9, 54.8, 42.5, 41.1,40.9, 35.8, 25.6, 25.5, 25.4, 25.3, 20.6, 17.9, 17.8, 15.5, 15.3, 13.8, 7.0, 6.7, -5.7, -6.0, -6.1. ESI-MS m/z: Calculado para C36H51N3O9Si: 697.89. Encontrado (M + 1) + : 698.8. HPLC: Condiciones: Columna: simetría C18; fase móvil: AcN, regulador fosfato 25 mM, pH = 5, gradiente en AcN de 30 a 100 por ciento en 50 minutos. 0: 1.2 mL/min, temperatura 40°C. Tiempo de retención: 30.70 minutos y 30.95 minutos (los dos isómeros). Pureza por HPLC en el área: 60.77 por ciento y 31.99 por ciento.

EJEMPLO 94 A una solución de 16.38 g (23.47 mmoles) de 168 en 727 mL (0.03 M) de THF anhidro, se añadió a gotas, a 23°C, 59 mL (59 mmoles) de una solución de TBAF en THF 1 M. Se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 45 minutos. Luego se dividió la mezcla entre 850 mL de una solución acuosa saturada de NaCI y 950 mL de cloruro de metileno. Se separó ambas capas y se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtro y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:hexano en forma de gradiente, de 40:60, 50:50, 70:30, 90:10 a 100:0), para dar 12.17 g (89 por ciento) de 169, como un sólido amarillo claro. Rf = OJ Hex:EtOAc 3:7. RMN con H (300 MHz, CDCI3) (razón de isómeros 3:2): d 6.63 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.62 (s, 1H), 5.23 (s, 1H), 5.18 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.08 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.22 )(d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.00 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 3.87-3.64 (m, 6H), 3.55 (s, 3H), 3.51-3.44 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.26 (m, 1H), 3.18 (dt, JT = 2.9 Hz, J2 = 7.3 Hz, 1H), 2.94 (m, 4H), 2.50 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.02 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): 200.2, 200.1, 159.6, 158.5, 148.5, 148.4, 148.1, 147.9, 140.5, 137.4, 130.9, 130.4, 130.1, 130.0, 125.1, 124.9, 123.8, 122.7, 116.9, 116.6, 113.3, 110.7, 104.5, 103.9, 101.4, 100.7, 98.1, 97.9, 71.9, 71.5, 71.4, 70.1, 69.0, 69.0, 62.0, 60.1, 59.5, 58.7, 58.5, 58.1, 57.4, 56.9, 56.8, 56.4, 55.9, 55.1, 55.0, 41.3, 41.0, 36.1, 31.3, 25.3, 25.2, 22.4, 15.6, 15.5, 13.8, 7.0, .8. ESI-MS m/z: Calculado para C30H37N3O9: 583.63. Encontrado (M + 1) + : 584.2.

EJEMPLO 95 A una solución de 11.49 g (19.69 mmoles) de 169 y 11.32 g (29.53 mmoles) de Alloc-Cys-(Fm) (para su preparación, véase Kruse, C. J.; Holden, K. G., J. Org. Chem., 1985, 50, páginas 2792- 2794) en 688 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió 2.4 g (19.69 mmoles) de DMAP y 9.44 g (49.22 mmoles) de EDC. HCl, a 23°C. Luego se añadió a 0°C 5.14 mL (29.53 mmoles) de DIPEA y se agitó la reacción a 23°C durante tres horas. Se lavó la mezcla sucesivamente con 500 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, 400 mL de NaCI y 2 x 300 mL de NH4CI. Se secó sobre sulfato de sodio la capa orgánica, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, AcOEt:Hex en forma de gradiente, de 1:1 a 6:4 a 7:3), para dar 14.76 g (79 por ciento) de 170, como un sólido amarillo pálido. Rf = 0.31 y 0.40 Hex:EtOAc 3:7 (mezcla de isómeros). RMN con 1H (300 MHz, CDCI3): 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 4H), 7.63 (dd, J = 7.0 Hz, J = 15.3 Hz, 4H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 4H), 7.29 (m, 4H), 6.61 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.89 (m, 2H), 5.73 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.62 (s, 1H), 5.55 (m, 1H), 5.32 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 5.14 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.68 (m, 1H), 4.56 (m, 4H), 4.51 (m, 2H), 4.38 (dd, J, = 4.5 Hz, J2 = 12.6 Hz, 1H), 4.22 (dd, J, = 6.2 Hz, J2 = 11.1 Hz, 1H), 4.14-3.88 (m, 12H), 3.83 (s, 3H), 3.79-3.69 (m, 4H), 3.61 (s, 3H), 3.56 (m, 4H), 3.39 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 3.16 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.07 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.00-2.81 (m, 6H), 2.46-2.34 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (m, 1H), 1.83 (dd, J, = 9.5 Hz, J2 = 15.1 Hz, 1H), 1.78 (s, 3H), 1.77 (s, 3H). RMN con 13C (75 MHz, CDCI3): d 200.3, 198.4, 170.3, 160.0, 158.1, 148.7, 148.7, 148.5, 148.2, 145.6, 145.6, 145.5, 142.2, 141.1, 141.0, 141.0, 138.5, 132.4, 132.3, 131.1, 130.6, 130.1, 129.8, 128.8, 127.6, 127.1, 127.1, 125.1, 125.0, 124.8, 124.7, 124.7, 14.0, 122.7, 119.9, 118.1, 118.0, 117.2, 116.8, 111.6, 108.3, 104.8, 104.5, 101.5, 101.0, 98.2, 98.2, 72.3, 71.7, 71.7, 70.6, 69.3, 69.2, 66.4,66.0, 66.0, 65.5, 63.8, 60.8, 60.2, 59.8, 59.0, 58.9, 58.1, 56.8, 56.6, 56.5, 56.3, 56.1, 55.7, 55.3, 55.2, 53.9, 46.9, 41.9, 41.4, 41.2, 37.2, 26.9, 35.4, 31.5, 29.6, 25.6, 25.4, 22.6, 15.8, 15.7, 14.1, 7.3, 7.0. ESI-MS m/z: Calculado para C51H56N4O?2S: 948.36. Encontrado (M + 1) + : 949.3.

EJEMPLO 96 170 171 Se flameó dos veces el matraz de reacción; se purgó varias veces con vacío/argón, y se mantuvo bajo atmósfera de argón durante la reacción. A una solución de 5.4 mL de DMSO en 554 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió a gotas 5.11 mL (30.4 mmoles) de anhidrido tríflico a -78°C. Se agitó la mezcla de reacción a -78°C durante 20 minutos. Luego se añadió, mediante una cánula, una solución de 14.43 g (15.2 mmoles) de 170 en 188 mL de cloruro de metileno, a -78°C. Durante la adición se mantuvo la temperatura a -78°C en ambos matraces, y el color de la reacción era amarillo. Se agitó la mezcla de reacción a -40°C durante 35 minutos. Durante ese periodo de tiempo la solución se volvió de amarilla a verde oscuro. Después de ese tiempo se añadió a gotas 21.2 mL (121.6 mmoles) de iPr2NEt, y se mantuvo a 0°C durante 45 minutos la mezcla de reacción. El color de la solución cambió a pardo pálido durante ese tiempo. Luego se añadió a gotas 5.8 mL (60.8 mmoles) de tBuOH y 18.3 mL (106.4 mmoles) de terbutil-tetrametilguanidina, y se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 40 minutos. Después de ese tiempo se añadió a gotas 14.34 mL (152 mmoles) de anhidrido acético y se mantuvo la mezcla de reacción a 23°C durante una hora más. Luego se diluyó la mezcla de reacción con 38 mL de cloruro de metileno y se lavó con 500 mL de una solución acuosa saturada de NH4CI, 500 mL de bicarbonato de sodio y 500 mL de NaCl. Se secó las capas orgánicas combinadas, sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:Hex en forma de gradiente, de 3:7 a 4:6) para dar 6.24 g (52 por ciento) de 171, como un sólido amarillo pálido. Rf = 0.38 Hex:EtOAc 1:1. RMN con 1H (CDCI3): 6.78 (s, 1H), 6.07 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.32 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.31 (dd, J, = 1.5 Hz, J2 = 17.1 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 1.5 Hz, J2 = 10.4 Hz, 1H), 5.19 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.53-4.51 (m, 3H), 4.35-4.27 (m, 2H), 4.24 (s, 1H), 4.18-4.13 (m, 2H), 3.94-3.84 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.58 (t, J = 4.7 Hz, 2H), 3.43-3.37 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.91 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.36-2.06 (m, 2H), 2.02 (s, 3H). RMN con 13C (CDCI3): 170.23, 168.49, 155.26, 149.62, 148.26, 145.63, 140.85, 140.24, 132.74, 131.60, 130.11, 124.89, 14.70, 120.14, 117.89, 117.84, 113.21, 101.89, 98.03, 92.67, 71.60, 60.94, 65.70, 61.20, 60.35, 49.36, 59.01, 58.89, 54.71, 54.42, 53.79, 41.53, 41.19, 32.68, 29.53, 23.57, 20.26, 15.62, 9.45. ESI-MS m/z: Calculado para C39H46N4O12S: 794.87.

Encontrado: 796 (M + 1) + , 817 (M + 23) + . HPLC: Condiciones: Columna: simetría C18, fase móvil: AcN/regulador fosfato (pH 5) en gradiente de 45 a 65 por ciento en 15 minutos, y de 65 a 90 por ciento en 36 minutos. 0 = 0.8 mL/min, temperatura = 40°C. Tiempo de retención: 19.734 minutos. Pureza por HPLC en el área: 83.17 por ciento.

EJEMPLO 97 A una solución de 2.26 g (2.85 mmoles) de 171 en 74 mL de cloruro de metileno anhidro y 74 mL de acetonitrilo, se añadió a 0°C 3.42 g (22.8 mmoles) de Nal y 2.6 mL (22.8 mmoles) de TMSCI (recién destilado sobre CaH), y se agitó la reacción durante 35 minutos. Se añadió a la mezcla de reacción 150 mL de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, a esa temperatura. Se separó la fase orgánica y se extrajo la fase acuosa con 2 x 100 mL de cloruro de metileno. Se secó los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida para dar 2.4 g (100 por ciento) de 164, como un sólido amarillo pálido, que fue usado en las reacciones subsiguientes, sin purificación ulterior. Los datos experimentales de 164 fueron descritos anteriormente en el ejemplo 88. La transformación de 164 a 35 fue descrita previamente más atrás, en el ejemplo 89. Se preparó los intermediarios 35, 36, ET-770 y ET-743, siguiendo los mismos procedimientos descritos previamente en PCT/ GB00/01852.

RUTA 6 EJEMPLO 98 161 A una solución de 7 g (7.6 mmoles) de 144 en 140 mL de MeOH, se añadió 15.1 mL de NaOH 1 M y se agitó la reacción durante 10 minutos a 23°C. Se añadió 100 mL de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, a la mezcla de reacción. Se separó la fase orgánica y se lavó con HCl al 5 por ciento, hasta que el color volvió a ser amarillo. Se secó el extracto orgánico sobre sulfato de sodio, se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:hexano en forma de gradiente, de 0:1, 1:3, 1:2, 1:1, 1:1 a 3:1), para producir 3.76 g (85 por ciento) de 161. Los datos experimentales de 161 fueron descritos previamente en la patente estadounidense No. 5,721,362.

EJEMPLO 99 A una solución de 200 mg (0.37 mmol) de 161 y 240 mg (0.55 mmol) de la cisteína 152, en 20 mL de cloruro de metileno anhidro, se añadió a 23°C 110 mg (0.925 mmol) de DMAP y 170 mg (0.925 mmol) de EDC. HCl, y se agitó la reacción a esa temperatura durante 1.5 horas. Luego se lavó sucesivamente la mezcla con una solución acuosa saturada de 15 mL de bicarbonato de sodio, 15 mL de cloruro de sodio y 2 x 10 mL de cloruro de amonio. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida con gel de sílice (SiO2, AcOEt/hexano en forma de gradiente, de 1:4 a 1:2), para producir 285 mg (80 por ciento) de 172, como un sólido blanco. RMN con 1H (CDCI3): d 7.73 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.59- 7.57 (m, 2H), 7.40-7.28 (m, 9H), 6.60 (s, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.54 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.11-5.08 (m, 4H), 4.52-4.49 (m, 1H), 4.21-3.90 (m, 6H), 3.83 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.21 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 3.09-2.90 (m, 6H), 2.41 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.34-2.31 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.88-1.83 (m, 1H), 1.77 (s, 3H). RMN con 13C (CDCI3): d 198.7, 170.5, 158.4, 155.9, 148.9, 148.8, 145.8, 142.5, 141.3, 136.2, 131.4, 130.0, 128.8, 128.6, 128.4, 127.9, 127.3, 125.3, 125.0, 124.9, 123.0, 120.1, 117.5, 108.5, 104.8, 101.7, 99.5, 70.8, 67.4, 60.5, 57.8, 57.0, 56.5, 56.0, 55.5, 47.1, 41.6, 37.4, 37.1, 31.8, 25.8, 22.8, 15.9, 14.3, 7.6. ESI-MS m/z: Calculado para C5.H54 4OHS: 954.35. Encontrado (M + 23) + : 977.8 EJEMPLO 100 Se flameó dos veces el matraz de reacción, se purgó varias veces con vacío/argón, y se mantuvo bajo atmósfera de argón durante la reacción. Se añadió a gotas a una solución de 977 µL de DMSO en 118 mL de cloruro de metileno anhidro, 930 µL (5.5 mmoles) de anhidrido tríflico a -78°C. Se agitó la mezcla de reacción a -78°C durante 20 minutos. Luego se añadió mediante una cánula, una solución de 2.63 g (2.75 mmoles) de 172 en 26 mL de cloruro de metileno anhidro (para la adición principal, y 13 mL para el lavado); (tiempo de adición: 5 minutos) a -78°C. Durante la adición se mantuvo la temperatura a -78°C en ambos matraces y el color cambió de amarillo a pardo. Se agitó la mezcla de reacción a -40°C durante 35 minutos. Durante ese periodo de tiempo la solución cambió de amarilla a verde oscuro. Después de ese tiempo se añadió a gotas 3.48 mL (22 mmoles) de iPr2NEt, y se mantuvo la mezcla de reacción a 0°C durante 45 minutos; el color de la solución se volvió café durante ese tiempo. Luego se añadió a gotas 1.04 mL (11 mmoles) de tBuOH y 3.31 mL (19.25 mmol) de terbutil- tetrametilguanidina y se agitó la mezcla de reacción a 23°C durante 40 minutos. Después de ese tiempo se añadió a gotas 2.6 mL (27.5 mmoles) de anhidrido acético y se mantuvo la mezcla de reacción a 23°C durante una hora más. Luego se diluyó la mezcla de reacción con 70 mL de cloruro de metileno y se lavó sucesivamente con una solución acuosa saturada de 80 mL de cloruro de amonio, 180 mL de bicarbonato de sodio y 180 mL de cloruro de sodio. Se secó las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, Hex:EtOAc, en forma de gradiente, de 4:1, 3:1 a 2:1) para dar 1.145 g (52 por ciento) de 173, como un sólido blanco. Rf = 0.31 Hex:EtOAc 3:2. RMN con 1H (CDCI3): d 7.37 (bs, 5H), 6.67 (s, 1H), 6.08 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.19-5.00 (m, 4H), 4.82 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.49 (bs, 1H), 4.32-4.15 (m, 5H), 3.67 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.44 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.39 (d, J = 6 Hz, 1H), 2.90-2.87 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.15-2.07 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H). RMN con 13C (CDCI3): d 170.6, 168.8, 155.8, 149.9, 148.5, 146.0, 141.2, 140.6, 136.6, 132.0, 130.4, 128.8, 128.7, 128.5, 125.2, 124.9, 120.5, 118.2, 113.7, 113.6, 102.2, 99.4, 67.2, 61.6, 60.7, 59.7, 59.3, 57.6, 55.1, 54.8, 54.2, 41.9, 41.6, 33.0, 29.9, 23.9, 20.6, 15.6, 9.8. ESI-MS m/z: Calculado para C41H44N4OHS: 800.87. Encontrado (M + 23) + : 823.7.

EJEMPLO 101 A una solución de 100 mg (0.125 mmol) de 173 en 2 mL de cloruro de metileno y 2 mL de acetonitrilo se añadió, a 0°C, 75 mg (0.5 mmol) de Nal y 63 µL (0.5 mmol) de TMSCI. Después de agitar la reacción a 23°C durante 50 minutos se inactivo la mezcla con 30 mL de agua y se extrajo con 2 x 20 mL de cloruro de metileno. Se lavó sucesivamente las fases orgánicas combinadas, con 200 mL de una solución acuosa saturada de NaCI y 20 mL de ditionito de sodio; se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna rápida (SiO2, EtOAc:Hexano en forma de gradiente, de 1:4, 1:2 a 1:1) para dar 66 mg (70 por ciento) de 158, como un sólido blanco. Rf = 0.21 hex:EtOAc 1:1. Los datos experimentales de 158 fueron descritos antes, en el ejemplo 19. La transformación de 158 a 35 fue descrita antes en el ejemplo 85. Se preparó los intermediarios 36, ET-770 y ET-743, siguiendo los mismos procedimientos que habían sido descritos previamente en PCT/GB00/01852.

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Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un proceso para preparar un producto de ecteinascidina con un puente de espiroamina en 1,4, caracterizado el proceso porque comprende formar un puente en 1,4 usando un compuesto de anillo fundido 1 -lábil, 10-hidroxi, 18-hidroxi protegido, di-6,8-en-5-ona, donde se elimina la protección en C-18 antes de la introducción de la espiroamina.

2.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque el producto de ecteinascidina tiene un grupo 21-hidroxi, incluyendo el proceso convertir un grupo 21-ciano al grupo 21-hidroxi.

3.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado además porque la espiroamina es una espiroquinolina.

4.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque el grupo 18-protegido del compuesto de anillo fundido 1-lábil, 10-hidroxi, 18-hidroxi protegido, di-6,8-en-5-ona está protegido con un grupo MOM, metoximetilo; o con un grupo MEM, metoxietoximetilo.

5.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque el grupo 1-lábil es un grupo cisteiniloximetileno N-protegido de la fórmula: -CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-H.

6.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque Prot1 es: Boc, terbutiloxicarbonilo; Troc, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo; Cbz, benciloxicarbonilo; o Alloc, aliloxicarbonilo.

7.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 5 o 6, caracterizado además porque se elimina Prot1 en el mismo paso que la protección de C-18.

8.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 5, 6 o 7, caracterizado además porque se genera el grupo 1-lábil a partir de un 1-sustituyente de la fórmula: -CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2.

9.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque Prot2 s Fm, 9-fluorenilmetilo.

10.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 8 o 9, caracterizado además porque se forma el 1-sustituyente de la fórmula: -CH2O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2 mediante esterificación de un sustituyente -CH2-O-CH.

11.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque se lleva a cabo la esterificación antes de la formación de la estructura 10 hidroxi, di-6,8-en-5-ona.

12.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque se lleva a cabo la esterificación después de introducir la estructura 10-hidroxi, di-6,8-en-5-ona.

13.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque se parte de un compuesto de anillo fundido 1-aminometileno, 5-hidroxi- protegido, 7,8-dioximetileno, 18-hidroxi, 21-ciano.

14.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque se protege temporalmente el grupo 1-aminometileno para permitir la protección en el grupo 18-hidroxi, y se elimina la protección temporal.

15.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque se protege el grupo hidroxi en C-18 después de la formación de una función 1-éster.

16.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque se convierte el grupo 1-aminometileno a un grupo 1-hidroximetileno y se protege temporalmente el grupo 1-hidroximetileno para permite la protección en el grupo 18-hidroxi, y se elimina la protección temporal.

17.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque se prepara el compuesto de anillo fundido 1-lábil, 10-hidroxi, 18-hidroxi-protegido, di-6,8-en-5-ona por pasos, partiendo de un compuesto 21-Nuc, con una estructura de la fórmula (XIV): donde por lo menos un anillo A o E es quinólico; y donde Nuc indica el residuo de un agente nucleofílico.

18.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque el compuesto de la fórmula (XIV) es cianosafracina B.

19.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque el producto tiene la fórmula (XXIIb): donde: R1 y R4 juntos forman un grupo de la fórmula (IV), (V), (VI) ó (Vil): R5 es -OH o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo; R14a y R14b son ambos -H, o uno es -H y el otro es -OH, o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo, -OCH3 ó -OCH2CH3, o R14a y R14b forman juntos un grupo ceto; R12 es -NCH3-; R15 es -OH o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo; y R18 es -OH o una versión protegida o derivatizada de dicho grupo.

20.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque R5 es alcanoiloxi de 1 a 5 átomos de carbono.

21.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque R5 es acetiloxi.

22.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 19, 20 o 21, caracterizado además porque R14a y R14b son hidrógeno.

23.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, caracterizado además porque R15 es hidrógeno.

24.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 23, caracterizado además porque R21 es -OH ó -CN.

25.- Un proceso de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado además porque R7 y R8 forman juntos un grupo -O-CH2-O-.

26.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 25, caracterizado además porque R1 y R4 forman juntos un grupo de la fórmula (IV):

27.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque el producto de ecteinascidina es ecteinascidina 743.

28.- Un paso de proceso en la fabricación de un compuesto de ecteinascidina, caracterizado el paso porque comprende retirar ambos grupos protectores en un solo paso, de acuerdo con el siguiente esquema: donde ProtNH es un grupo protector de amino y ProtOH es un grupo protector de hidroxi.

29.- Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, caracterizado además porque incluye el paso de proceso de conformidad con la reivindicación 28.