MXPA02007091A

MXPA02007091A - Anticuerpos para il-1b humana.

Info

Publication number: MXPA02007091A
Application number: MXPA02007091A
Authority: MX
Inventors: Hermann Gram
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2000-01-21
Filing date: 2001-01-19
Publication date: 2002-12-13
Also published as: CN1395581A; KR20020073178A; CY1107989T1; RU2264413C2; DK1248804T4; AU3369701A; US20030124617A1; NO329816B1; JP2003520595A; ES2274865T3; DE60124863T3; DK1248804T3; EP1248804B2; EP1248804A2; HUP0204156A2; CO5261584A1; PT1248804E; PL356297A1; CZ20022531A3; SK10352002A3

Abstract

Se proporciona una molecula de enlace de IL-1beta, en particular un anticuerpo para IL- 1beta humana, especialmente un anticuerpo para IL-1beta humana, en donde las CDRs de las cadenas pesada y ligera tienen secuencias de aminoacidos como se definen, para utilizarse en el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1, por ejemplo osteoartritis, osteoporosis, y otros artritidos inflamatorios.

Description

ANTICUERPOS PARA IL-lß HUMANA Esta invención se refiere a anticuerpos para interleucina I beta humana (I -lß) , y al uso de estos anticuerpos para el tratamiento de enfermedades y desórdenes mediados por IL-1. La interleucina I (IL-1) es una actividad producida por las células del sistema inmune que actúa como una mediadora de la respuesta inflamatoria en fase aguda. La producción inapropiada o excesiva de IL-1, en particular de IL-lß, está asociada con la patología de diferentes enfermedades y desórdenes, tales como septicemia, choque séptico o endotóxico, alergias, asma, pérdida ósea, isquemia, embolia, artritis reumatoide, y otros desórdenes inflamatorios. Se han propuesto los anticuerpos para IL-lß con el fin de utilizarse en el tratamiento de enfermedades y desórdenes mediados por IL-1; ver, por ejemplo, la Publicación Internacional Número WO 95/01997 y la discusión en su introducción. Ahora hemos preparado anticuerpos mejorados para IL-lß humana, con el fin de utilizarse en el tratamiento de enfermedades y desórdenes mediados por IL-1. De acuerdo con lo anterior, la invención proporciona una molécula de enlace de IL-lß, la cual comprende un sitio de enlace de antígeno que comprende cuando menos un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) , que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3, teniendo la CDRl la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, teniendo la CDR2 la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y teniendo la CDR3 la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile; y sus equivalentes directos. En un primer aspecto, la invención proporciona una molécula de enlace de IL-lß de un solo dominio, que comprende una cadena pesada de inmunoglobulina aislada que comprende un dominio variable de cadena pesada (VH) , como se define anteriormente . En un segundo aspecto, la invención también proporciona una molécula de enlace de IL-lß que comprende dominios variables de cadena tanto pesada (VH) como ligera (VL) , en donde la molécula de enlace de IL-lß comprende cuando menos un sitio de enlace de antígeno que comprende: a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) , el cual comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3, teniendo la CDRl la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, teniendo la CDR2 la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y teniendo la CDR3 la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, y b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) , el cual comprende una región - ti? I - f it MiUrffir'-ii hipervariable CDR3' que tiene la secuencia de aminoácidos Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro; y sus equivalentes directos. En las modalidades particulares del segundo aspecto, la invención proporciona una molécula de enlace de IL-lß que comprende dominios variables de cadena tanto pesada (VH) como ligera (VL) , en donde la molécula de enlace de IL-lß comprende cuando menos un sitio de enlace de antígeno que comprende: a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) , el cual comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3, teniendo la CDRl la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, teniendo la CDR2 la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y teniendo la CDR3 la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, y b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) , el cual comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl', CDR2' , y CDR3' , teniendo la CDRl' la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, teniendo la CDR2' la secuencia de aminoácidos Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, y teniendo la CDR3' la secuencia de aminoácidos Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro; y sus equivalentes directos. A menos que se indique de otra manera, cualquier cadena de polipéptido se describe en la presente teniendo una secuencia de aminoácidos empezando en la extremidad N-terminal, y terminando en la extremidad C-terminal. Cuando el sitio de enlace de antígeno comprende ambos dominios VH y VL, éstos se pueden localizar sobre la misma molécula de polipéptido, o de preferencia, cada dominio puede estar en una cadena diferente, siendo el dominio VH parte de una cadena pesada de inmunoglobulina o fragmento de la misma, y siendo el VL parte de una cadena ligera de inmunoglobulina o fragmento de la misma . "Molécula de enlace de IL-lß" significa cualquier molécula capaz de enlazarse con el antígeno IL-lß, ya sea sola, o bien asociada con otras moléculas. La reacción de enlace se puede mostrar mediante métodos convencionales (ensayos cualitativos) incluyendo, por ejemplo, un bioensayo para determinar la inhibición del enlace de IL-lß con su receptor, o cualquier clase de ensayos de enlace, con referencia a una prueba de control negativo en donde se utiliza un anticuerpo de una especificidad no relacionada pero del mismo isotipo, por ejemplo un anticuerpo anti-CD25. De una manera conveniente, el enlace de las moléculas de enlace de IL-lß de la invención con IL-lß, se puede demostrar en un ensayo de enlace competitivo. Los ejemplos de las moléculas de enlace de antígeno incluyen anticuerpos como son producidos por las células B o hibridomas, y anticuerpos quiméricos, injertados con CDR, o humanos, o cualquier fragmento de los mismos, por ejemplo ..... ...- ?p*f*a -<• -*-J F(ab')2 y fragmentos Fab, así como anticuerpos de una sola cadena o de un solo dominio. Un anticuerpo de una sola cadena consiste en los dominios variables de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo covalentemente enlazado por un enlazador de péptido que normalmente consiste en 10 a 30 aminoácidos, de preferencia en 15 a 25 aminoácidos. Por consiguiente, esta estructura no incluye la parte constante de las cadenas pesada y ligera, y se cree que el separador de péptido pequeño debe ser menos antigénico que una parte constante entera. "Anticuerpo quimérico" significa un anticuerpo en donde las regiones constantes de las cadenas pesada o ligera, o ambas, son de origen humano, mientras que los dominios variables de ambas cadenas pesada y ligera son de origen no humano (por ejemplo de murino) , o de origen humano pero derivados de un anticuerpo humano diferente. "Anticuerpo injertado con CDR" significa un anticuerpo en donde las regiones hipervariables (CDRs) se derivan de un anticuerpo donador, tal como un anticuerpo no humano (por ejemplo de murino) , o un anticuerpo humano diferente, mientras que todas, o sustancialmente todas las demás partes de la inmunoglobulina, por ejemplo las regiones constantes y las partes altamente conservadas de los dominios variables, es decir, las regiones de estructura, se derivan de un anticuerpo aceptor, por ejemplo un anticuerpo de origen-humano. Sin embargo, un anticuerpo injertado con CDR puede ^?¿* .j ...^ contener unos pocos aminoácidos de la secuencia donadora en las regiones de estructura, por ejemplo en las partes de las regiones de estructura adyacentes • a las regiones hipervariables. "Anticuerpo humano" significa un anticuerpo en donde las regiones constantes y variables de ambas cadenas pesada y ligera son todas de origen humano, o sustancialmente idénticas a secuencias de origen humano, no necesariamente a partir del mismo anticuerpo, e incluye anticuerpos producidos por ratones en donde los genes de las partes variable y constante de inmunoglobulina de murino han sido reemplazados por sus contrapartes humanas, por ejemplo como se describe en términos generales en las Patentes Números EP 0546073 Bl, USP 5545806, USP 5569825, USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, EP 0 438474 Bl y EP 0 463151 Bl . Las moléculas de enlace de IL-lß particularmente preferidas de la invención son anticuerpos humanos, especialmente el anticuerpo AAL 160 como se describe posteriormente en la presente en los Ejemplos. Por consiguiente, en los anticuerpos quiméricos preferidos, los dominios variables de ambas cadenas pesada y ligera son de origen humano, por ejemplo aquellos del anticuerpo AAL 160, que se muestran en la SEQ ID N0:1 y en la SEQ ID NO:2. Los dominios de la región constante de preferencia también comprenden dominios humanos adecuados de la región constante, por ejemplo como se describen en "Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat E. A. y colaboradores, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of Health. Las regiones hipervariables se pueden asociar con cualquier clase de regiones de estructura, aunque de preferencia son de origen humano. Las regiones de estructura adecuadas se describen en Kabat E. A. y colaboradores, ibid. La estructura de cadena pesada preferida es una estructura de cadena pesada humana, por ejemplo, aquélla del anticuerpo AAL 160, que se muestra en la SEQ ID NO:l. Consiste en la secuencia de las regiones FRl, FR2, FR3, y FR4. De una manera similar, la SEQ ID NO: 2 muestra la estructura de cadena ligera AAL 160 preferida que consiste, en secuencia, en las regiones FRl' , FR2' , FR3' , y FR4' . De acuerdo con lo anterior, la invención también proporciona una molécula de enlace de IL-lß que comprende cuando menos un sitio de enlace de antígeno que comprende ya sea un primer dominio que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la mostrada en la SEQ ID NO:l, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 118, o bien un primer dominio como se describe anteriormente, y un segundo dominio que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la mostrada en la SEQ ID NO: 2, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 107.

Los anticuerpos monoclonales reproducidos contra una proteína que se encuentra naturalmente en todos los seres humanos, normalmente se desarrollan en un sistema no humano, por ejemplo en ratones. Como una consecuencia directa de esto, un anticuerpo xenogénico como es producido por un hibridoma, cuando se administra a seres humanos, provoca una respuesta inmune indeseable que es predominantemente mediada por la parte constante de la inmunoglobulina xenogénica. Esto limita claramente el uso de estos anticuerpos, debido a que no se pueden administrar durante un período de tiempo prolongado. Por consiguiente, se prefiere particularmente utilizar anticuerpos de una sola cadena, de un solo dominio, quiméricos, injertados con CDR, o especialmente humanos, que no tengan probabilidades de provocar una respuesta alogénica sustancial cuando se administren a seres humanos. En vista de lo anterior, una molécula de enlace de IL-lß más preferida de la invención se selecciona a partir de un anticuerpo humano anti-IL-lß, el cual comprende cuando menos : a) una cadena pesada de inmunoglobulina o fragmento de la misma que comprende: (i) un dominio variable que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3, y (ii) la parte o fragmento constante de la misma de una cadena pesada humana; teniendo la CDRl la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, teniendo .la CDR2 la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y teniendo la CDR3 la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, y b) una cadena ligera de inmunoglobulina o fragmento de la misma que comprende: (i) un dominio variable que comprende la región hipervariable CDR3 ' , y opcionalmente también las regiones hipervariables CDRl', CDR2 ' , y (ii) la parte o fragmento constante de la misma de una cadena ligera humana, teniendo la CDRl' la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu Ala, teniendo la CDR2 ' la secuencia de aminoácidos Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, y teniendo la CDR3 ' la secuencia de aminoácidos Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro; y sus equivalentes directos. De una manera alternativa, una molécula de enlace de IL-lß de la invención se puede seleccionar a partir de una molécula de enlace de una sola cadena que comprende un sitio de enlace de antígeno, el cual comprende: a) un primer dominio que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2 , y CDR3 , teniendo estas regiones hipervariables las secuencias de aminoácidos mostradas en la SEQ ID NO:l, b) un segundo dominio que comprende las regiones hipervariables CDR3 ' y opcionalmente CDRl' y CDR2' , teniendo estas regiones hipervariables las secuencias de aminoácidos < Al* -j: i t ? A»a«afa&ßi»UÉ mostradas en la SEQ ID NO : 2 , y c) un enlazador de péptido que se enlaza ya sea con la extremidad N-terminal del primer dominio y con la extremidad C-terminal del segundo dominio, o bien con la extremidad C-terminal del primer dominio y con la extremidad N-terminal del segundo dominio; y sus equivalentes directos. Como es bien conocido, los cambios menores en una secuencia de aminoácidos, tales como supresión, adición, o sustitución de uno, de unos cuantos, o inclusive de varios aminoácidos, pueden conducir a una forma alélica de la proteína original que tiene propiedades sustancialmente idénticas. Por consiguiente, el término "sus equivalentes directos", significa cualquier molécula de enlace de IL-lß de un solo dominio (molécula X) , (i) en donde las regiones hipervariables CDRl, CDR2 , y CDR3 tomadas como un todo, son cuando menos el 80 por ciento homologas, de preferencia cuando menos el 90 por ciento homologas, más preferiblemente cuando menos el 95 por ciento homologas a las regiones hipervariables mostradas en la SEQ ID NO:l, y (ii) que sea capaz de inhibir el enlace de IL-lß con sus receptores sustancialmente hasta el mismo grado que una molécula de referencia que tenga las regiones de estructura idénticas a las de las molécula X, pero que tenga las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3 idénticas a las mostradas en la SEQ ID N0:1, o cualquier molécula de enlace de IL-lß que tenga cuando menos dos dominios por cada sitio de enlace (molécula X'), (i) en donde las regiones hipervariables CDRl, CDR2, CDR3, CDR3', y opcionalmente CDRl' y CDR2' , tomadas como un todo, son cuando menos el 80 por ciento homologas, de preferencia cuando menos el 90 por ciento homologas, más preferiblemente cuando menos el 95 por ciento homologas a las regiones hipervariables mostradas en las SEQ ID NOs : 1 y 2, y (ii) que sea capaz de inhibir el enlace de IL-lß con sus receptores sustancialmente hasta el mismo grado que una molécula de referencia que tenga las regiones de estructura y las partes constantes idénticas a la molécula X' , pero que tenga las regiones hipervariables CDRl, CDR2, CDR3, y CDR3' , y opcionalmente CDRl' y CDR2' , idénticas a las mostradas en las SEQ ID NOs:l y 2. En la presente descripción, las secuencias de aminoácidos son cuando menos el 80 por ciento homologas unas a otras si tienen cuando menos el 80 por ciento de residuos de aminoácidos idénticos en una posición similar cuando la secuencia quede óptimamente alineada, contándose los huecos o inserciones en las secuencias de aminoácidos como residuos no idénticos.

La inhibición del enlace de IL-lß con su receptor se puede probar convenientemente en diferentes ensayos, incluyendo los ensayos descritos posteriormente en el texto. El receptor de IL-lß utilizado de preferencia es el receptor de IL-lß tipo 1. El término "hasta el mismo grado" significa que las moléculas de referencia y equivalentes exhiben, sobre una base estadística, curvas de inhibición de enlace de IL-lß esencialmente idénticas en uno de los ensayos referidos anteriormente . Por ejemplo, el ensayo utilizado puede ser un ensayo de inhibición competitiva de enlace de IL-lß por parte de los receptores de IL-1 solubles y las moléculas de enlace de IL-lß de la invención. De una manera más preferible, el anticuerpo humano IL-lß comprende cuando menos: a) una cadena pesada que comprende un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la mostrada en la SEQ ID NO:l, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 118, y la parte constante de una cadena pesada humana ; y b) una cadena ligera que comprende un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la mostrada en la SEQ ID NO: 2, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en *ma t*Ék?* * la posición 107, y la parte constante de una cadena ligera humana . La parte constante de una cadena pesada humana puede ser del tipo ?i, ?2, ?3, ?, µ, oti, a2, d, o e, de preferencia del tipo ?, más preferiblemente del tipo yl r mientras que la parte constante de una cadena ligera humana puede ser del tipo ?ó ? (que incluye los subtipos ?i, ?2, y ?3) , pero de preferencia es del tipo K. Las secuencias de aminoácidos de todas estas partes constantes se dan en Kabat y colaboradores, ibid. Una molécula de enlace de IL-lß de la invención se puede producir mediante técnicas de ADN recombinante. En vista de esto, una o más moléculas de ADN que codifiquen la molécula de enlace se deben construir, colocar bajo secuencias de control apropiadas, y transferir a un organismo huésped adecuado para su expresión. De una manera muy general, de acuerdo con lo anterior, se proporcionan: (i) moléculas de ADN que codifican una molécula de enlace de IL-lß de un solo dominio de la invención, una molécula de enlace de IL-lß de una sola cadena de la invención, una cadena pesada o ligera o fragmentos de las mismas de una molécula de enlace de IL-lß de la invención, y (ii) el uso de las moléculas de ADN de la invención para la producción de una molécula de enlace de IL-lß de la invención por medios recombinantes.

El presente estado de la técnica es tal que el trabajador experto en este campo puede sintetizar las moléculas de ADN de la invención, dada la información proporcionada en la presente, es decir, las secuencias de aminoácidos de las regiones hipervariables, y las secuencias de ADN que codifican para las mismas. Un método para construir un gen de dominio variable, por ejemplo, se describe en la Patente Número EPA 239 400, y se puede resumir brevemente como sigue: Se clona un gen que codifique un dominio variable de un MAb de cualquier especificidad. Se determinan los segmentos de ADN que codifiquen las regiones de estructura e hipervariable, y se remueven los segmentos de ADN que codifiquen las regiones hipervariables, de tal manera que los segmentos de ADN que codifiquen las regiones de estructura se fusionen entre sí con los sitios de restricción adecuados en las uniones. Los sitios de restricción se pueden generar en las posiciones apropiadas mediante mutagénesis de la molécula de ADN mediante procedimientos convencionales. Se preparan casetes de CDR sintéticos de doble cadena mediante síntesis del ADN de acuerdo con las secuencias dadas en las SEQ ID NOs : 1 ó 2. Estos casetes están provistos con extremos pegajosos, de tal manera que se puedan ligar en las uniones de la estructura. Además, no es necesario tener acceso al ARNm a partir de una línea celular de hibridoma de producción con el objeto de obtener una construcción de ADN que codifique para las ^jg^gug^^^g^ i moléculas de enlace de IL-lß de la invención. Por consiguiente, la solicitud del TCP Número WO 90/07861 da instrucciones completas para la producción de un anticuerpo mediante técnicas de ADN recombinante, dada solamente la información escrita con respecto a la secuencia de nucleótidos del gen. El método comprende la síntesis de un número de oligonucleótidos, su amplificación mediante el método de reacción en cadena de la polimerasa, y su empalme para dar la secuencia de ADN deseada. Los vectores de expresión que comprenden un promotor adecuado o genes que codifican las partes constantes de cadena pesada y ligera están públicamente disponibles. Por consiguiente, una vez que se prepara una molécula de ADN de la invención, convenientemente se puede transferir a un vector de expresión apropiado. También se pueden preparar moléculas de ADN que codifiquen anticuerpos de una sola cadena mediante métodos convencionales, por ejemplo, como se describe en la Publicación Internacional Número WO 88/1649. En vista de lo anterior, no es necesario ningún depósito de hibridoma o de línea celular para cumplir con los criterios de suficiencia de la descripción. En una modalidad particular, la invención incluye primera y segunda construcciones de ADN para la producción de una molécula de enlace de IL-lß como se describe en seguida: La primera construcción de ADN codifica una cadena pesada o fragmento de la misma, y comprende: a) una primera parte que codifica un dominio variable que comprende alternadamente regiones de estructura e hipervariables, siendo las regiones hipervariables en secuencia, CDRl, CDR2, y CDR3, cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la SEQ ID N0:1; empezando esta primera parte con un codón que codifica el primer aminoácido del dominio variable, y terminando con un codón que codifica el último aminoácido del dominio variable; y b) una segunda parte que codifica una parte constante de cadena pesada o fragmento de la misma, que empieza con un codón que codifica el primer aminoácido de la parte constante de la cadena pesada, y termina con un codón que codifica el último aminoácido de la parte constante o fragmento de la misma, seguido por un codón de paro. De preferencia, esta primera parte codifica un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID N0:1, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 118. De una manera más preferible, la primera parte tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en la SEQ ID NO:l, empezando con el nucleótido en la posición 1, y terminando con el nucleótido en la posición 354. También de preferencia, la segunda parte codifica la parte constante de una cadena pesada humana, más preferiblemente la parte constante de la cadena humana ?i . Esta segunda parte puede ser un fragmento de ADN de origen genómico (comprendiendo intrones), o un fragmento de ADNc (sin intrones) . La segunda construcción de ADN codifica una cadena ligera o fragmento de la misma, y comprende: a) una primera parte que codifica un dominio variable que comprende alternadamente regiones de estructura e hipervariables; siendo las regiones hipervariables CDR3' , y opcionalmente CDRl' y CDR2', cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la SEQ ID NO: 2; empezando esta primera parte con un codón que codifica el primer aminoácido del dominio variable, y terminando con un codón que codifica el último aminoácido del dominio variable, y b) una segunda parte que codifica una parte constante de cadena ligera o fragmento de la misma, que empieza con un codón que codifica el primer aminoácido de la parte constante de la cadena ligera, y termina con un codón que codifica el último aminoácido de la parte constante o fragmento de la misma, seguido por un codón de paro. De preferencia, esta primera parte codifica un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 2, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 107. De una manera más preferible, la primera parte tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en la SEQ ID NO: 2, empezando con el nucleótido en la posición 1, y terminando con el nucleótido en la posición 321. También de preferencia, la segunda parte codifica la parte constante de una cadena ligera humana, más preferiblemente la parte constante de la cadena humana K. La invención también incluye moléculas de enlace de IL-lß, en donde uno o más de los residuos de CDRl, CDR2, CDR3, CDRl' , CDR2' , ó CDR3' se cambian desde los residuos mostrados en las SEQ ID N0:1 y SEQ ID NO: 2; por ejemplo, mediante mutación, por ejemplo mutagénesis dirigida al sitio de las secuencias de ADN correspondientes. La invención incluye las secuencias de ADN que codifican para estas moléculas de enlace de IL-lß cambiadas. En particular, la invención incluye moléculas de enlace de IL-lß en donde uno o más residuos de CDRl' ó CDR2' se han cambiado desde los residuos mostrados en la SEQ ID NO: 2. En la primera y la segunda construcciones de ADN, la primera y la segunda partes pueden estar separadas por un intrón, y convenientemente se puede localizar un potenciador en el intrón entre la primera y la segunda partes. La presencia de este potenciador, el cual se transcribe pero no se traduce, puede ayudar a una transcripción eficiente. En las modalidades particulares, la primera y la segunda construcciones de ADN comprenden al potenciador de un gen de cadena pesada convenientemente de origen humano. iiMiiiiiliilÜiiÉlliiiim Cada una de las construcciones de ADN se coloca bajo el control de secuencias de control adecuadas, en particular bajo el control de un promotor adecuado. Se puede utilizar cualquier clase de promotor, en el entendido de que se adapte 5 al organismo huésped, en donde las construcciones de ADN se transferirán para su expresión. Sin embargo, si la expresión va a tener lugar en una célula de mamífero, se prefiere particularmente utilizar el promotor de un gen de inmunoglobulina, o un promotor de citomegalovirus (CMV) , por 10 ejemplo un promotor de CMV humano. El anticuerpo deseado se puede producir en un cultivo celular o en un animal transgénico. Un animal transgénico adecuado se puede obtener de acuerdo con los métodos convencionales, los cuales incluyen microinyección en huevos de 15 la primera y la segunda construcciones de ADN colocadas bajo secuencias de control adecuadas que transfieran los huevos así preparados a las hembras seudo-preñadas apropiadas, y seleccionando un descendiente que exprese el anticuerpo deseado. 20 Cuando se producen cadenas de anticuerpos en un cultivo celular, las construcciones de ADN primero se deben insertar en un solo vector de expresión, o en dos vectores de expresión separados pero compatibles, prefiriéndose la última posibilidad. 25 De acuerdo con lo anterior, la invención también proporciona un vector de expresión capaz de replicarse en una línea celular procariótica o eucariótica que comprenda cuando menos una de las construcciones de ADN descritas anteriormente. Luego se transfiere cada vector de expresión que contenga una construcción de ADN a un organismo huésped adecuado. Cuando las construcciones de ADN se insertan por separado en dos vectores de expresión, se pueden transferir por separado, es decir, un tipo de vector por célula, o se pueden co-transferir, prefiriéndose esta última posibilidad. Un organismo huésped adecuado puede ser una bacteria, una levadura, o una línea celular de mamífero, prefiriéndose esta última. De una manera más preferible, la línea celular de mamífero es de origen linfoide, por ejemplo un mieloma, hibridoma, o una célula B inmortalizada normal, que convenientemente no exprese ninguna cadena pesada o ligera de anticuerpo endógeno. Para la expresión en células de mamífero, se prefiere que la secuencia codificante de la molécula de enlace de IL-lß se integre en el ADN de la célula huésped adentro de un locus que permita o favorezca un alto nivel de expresión de la molécula de enlace de IL-lß. Las células en donde se integre la secuencia codificante de la molécula de enlace de IL-lß en estos loci favorables, se pueden identificar y seleccionar con base en los niveles de la molécula de enlace de IL-lß que expresen. Se puede utilizar cualquier marcador seleccionable **,**- ,.**..., !.*.- - _ „ .... _¿^¿_r - — '- ^majjugjatafcjit-i adecuado para la preparación de las células huéspedes que contengan la secuencia codificante de la molécula de enlace de IL-lß; por ejemplo, se puede utilizar un sistema de selección de gen dhfr/metotrexato o equivalente. Los sistemas preferidos para la expresión de las moléculas de enlace de IL-lß de la invención incluyen sistemas de amplificación/selección basados en GS, tales como los descritos en las Patentes Europeas Números EP 0256055 B, EP 0323997 B, y en la Solicitud de Patente Europea Número 89303964.4. De preferencia también el vector puede contener otras secuencias, según se desee, para facilitar la expresión, el procesamiento, y la exportación de la proteína expresada; por ejemplo, el vector puede contener normalmente una secuencia líder asociada con la secuencia codificante . En un aspecto adicional de la invención, se proporciona un proceso para la producción de una molécula de enlace de IL-lß, el cual comprende: (i) cultivar un organismo que se transforma con un vector de expresión como se define anteriormente, y (ii) recuperar la molécula de enlace de IL-lß a partir del cultivo. De acuerdo con la presente invención, se ha encontrado que el anticuerpo /AAL 160 tiene especificidad de enlace para el epítopo antigénico de IL-lß humana, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25 de la IL-lß humana madura. (Los residuos Gly 22, Pro 23, L^-L.-*-*' .*"** * .

Tyr 24, y Glu 25 de la IL-lß humana madura corresponden a los residuos 138, 139, 140, y 141, respectivamente, del precursor de IL-lß humano) . Este epítopo parece estar afuera del sitio de reconocimiento del receptor de IL-1, y por consiguiente, es más 5 sorprendente que los anticuerpos para este epítopo, por ejemplo, el anticuerpo AAL 160, sean capaces de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor. Los anticuerpos, en particular los anticuerpos quiméricos e insertados con CDR, y especialmente los anticuerpos humanos, que tienen especificidad 10 de enlace para el epítopo antigénico de la IL-lß humana madura que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que son capaces de inhibir el enlace de IL- lß con su receptor; y el uso de estos anticuerpos para el tratamiento de enfermedades y desórdenes mediados por IL-1, son 15 novedosos, y se incluyen dentro del alcance de la presente invención. Por consiguiente, en un aspecto adicional, la invención incluye un anticuerpo para IL-lß que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico 20 de IL-lß humana, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25 de la IL-lß humana madura, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor. En aspectos todavía adicionales, la invención 25 incluye: f-Hj|f |ÍMtWlÍlfyfl -#'-t"t - -* " *" •*— ' .***.- ..* .. .~^t?^**?*t?im*^a*,?*ÍA,ttr,??**t.*,,.A%.-.**J*?*r - - *-* .-- i) el uso de un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de la IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1; ii) un método para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1 en un paciente, el cual comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor; iii) una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, en combinación con un excipiente, diluyente, o vehículo farmacéuticamente aceptable; y iv) el uso de un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1. Para los propósitos de la presente descripción, un anticuerpo es "capaz de inhibir el enlace de IL-lß", si el anticuerpo es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor sustancialmente hasta el mismo grado que el anticuerpo AAL 160, en donde "hasta el mismo grado" tiene el significado definido anteriormente. En la presente descripción, la frase "enfermedad mediada por IL-1" abarca todas las enfermedades y condiciones médicas en donde tenga un papel la IL-1, ya sea directa o indirectamente, en la enfermedad o condición médica, incluyendo la causa, desarrollo, progreso, persistencia, o patología de la enfermedad o condición. En la presente descripción, los términos "tratamiento" o "tratar", se refieren tanto al tratamiento profiláctico o preventivo, como curativo o el tratamiento modificador de la enfermedad, incluyendo el tratamiento del paciente en riesgo de contraer la enfermedad, o del que se sospeche que ha contraído la enfermedad, así como en pacientes que estén enfermos o hayan sido diagnosticados por sufrir de una enfermedad o condición médica, e incluye la supresión de la reincidencia clínica. Los anticuerpos que tienen especificidad de enlace ^^¡*a*?*^^?^^^¡^^Á*?^? á para el epítopo antigénico de la IL-lß humana madura que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que son capaces de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, son referidos posteriormente en la presente como los Anticuerpos de la Invención. Los Anticuerpos de la Invención de preferencia son los anticuerpos que tienen especificidad de enlace para este epítopo de IL-lß humana cuando la IL-lß humana está bajo condiciones fisiológicas nativas, por ejemplo normales, y no bajo condiciones desnaturalizadas, por ejemplo no en la presencia de un agente desnaturalizante, tal como SDS. Los Anticuerpos de la Invención pueden reaccionar cruzadamente con las IL-lßs no humanas, que tengan epítopos antigénicos que incluyan Gly en el residuo 22, Pro en el residuo 23, Tyr en el residuo 24, y Glu en el residuo 25, y que sean muy similares al epítopo humano correspondiente. Por ejemplo, los Anticuerpos de la Invención pueden reaccionar cruzadamente con las IL-lßs de primate, tal como la IL-1 de mono Rhesus, de mono Cinomolgo, o la IL-1 de mono Tití. De preferencia, los Anticuerpos de la Invención son moléculas de enlace de IL-lß de acuerdo con el primero y el segundo aspectos de la invención. De una manera conveniente, los Anticuerpos de la Invención son anticuerpos humanos, más preferiblemente el anticuerpo AAL 160, o su equivalente directo. Los Anticuerpos de la Invención bloquean los efectos de la IL-lß sobre sus células blanco, y por lo tanto, se indican para utilizarse en el tratamiento de enfermedades y desórdenes mediados por IL-1. Estas y otras actividades farmacológicas de los Anticuerpos de la Invención, se pueden 5 demostrar en métodos de prueba convencionales, por ejemplo como se describen en seguida: 1. Neutralización de la activación mediada por IL-lß humana del promotor IL-8. 10 El potencial para neutralizar la señalización celular dependiente de IL-lß se determina en un ensayo de gen reportero . La línea celular de melanoma humano G361 se transfecta establemente con una construcción de un gen 15 reportero de luciferasa, basada en el promotor IL-8 humano. La expresión y actividad del gen reportero dependen de IL-lß ó TNFa en esta línea celular. Las células se estimulan con 300 picogramos/mililitro de IL-lß humana recombinante, o el equivalente de 100 picogramos/mililitro en un medio 20 acondicionado en la presencia de diferentes concentraciones del Anticuerpo de la Invención o del antagonista del receptor de IL-1, entre 6 y 18,000 pM. Se utiliza el anticuerpo quimérico Simulect® (basiliximab) como un control de isotipo apareado. La actividad de luciferasa se cuantifica en un ensayo de 25 quimiluminiscencia. Los Anticuerpos de la Invención normalmente tienen una IC50 de aproximadamente 1 nM (por ejemplo, de aproximadamente 0.2 a aproximadamente 5 nM) al probarse en este ensayo. 5 2. Neutralización de la producción dependiente de IL-lß de PGE2 e interleucina-6 mediante fibroblastos humanos primarios. La producción de PGE e IL-6 en fibroblastos dérmicos humanos primarios depende de la IL-lß. El TNF-a solo no puede inducir eficientemente estos mediadores inflamatorios, pero se 10 sinergiza con IL-1. Se utilizan fibroblastos dérmicos primarios como un modelo subrogado para la activación celular inducida por IL-1. Los fibroblastos humanos primarios se estimulan con IL-lß recombinante o un medio acondicionado obtenido de PBMCs 15 humanas estimuladas con LPS en la presencia de diferentes concentraciones del Anticuerpo de la Invención o IL-1RA, de 6 a 18,000 pM. El anticuerpo quimérico anti-CD25, Simulect® (basiliximab) , se utiliza como un control de isotipo apareado. El sobrenadante se toma después de 16 horas de estímulo, y se 20 ensaya para IL-6 mediante ELISA, o para PGE2 mediante RÍA. Los Anticuerpos de la Invención normalmente tienen IC50s para la inhibición de la producción de IL-6 de aproximadamente 1 nM o menos (por ejemplo, de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 nM) , y para la inhibición de la producción de PGE2 de 25 aproximadamente 1 nM (por ejemplo, de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 nM) cuando se prueban como anteriormente. Como se indica en los ensayos anteriores, los Anticuerpos de la Invención bloquean potentemente los efectos de la IL-lß. De acuerdo con lo anterior, los Anticuerpos de la Invención tienen utilidad farmacéutica como sigue: Los Anticuerpos de la Invención son útiles para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades o condiciones médicas mediadas por IL-1, por ejemplo condiciones inflamatorias, alergias y condiciones alérgicas, reacciones de hipersensibilidad, enfermedades autoinmunes, infecciones severas, y rechazo de trasplante de órganos o tejidos. Por ejemplo, los Anticuerpos de la Invención pueden utilizarse para el tratamiento de receptores de trasplantes de corazón, pulmón, corazón-pulmón combinados, hígado, riñon, páncreas, piel, o córnea, y para la prevención de la enfermedad del injerto contra el huésped, tal como en seguida de un trasplante de médula ósea. Los Anticuerpos de la Invención son particularmente útiles para el tratamiento, la prevención, o la aminoración de la enfermedad autoinmune y de condiciones inflamatorias, en particular condiciones inflamatorias con una etiología que incluya un componente autoinmune, tal como artritis (por ejemplo, artritis reumatoide, artritis crónica progrediente, y artritis deformans) , y enfermedades reumáticas, incluyendo condiciones inflamatorias y enfermedades reumáticas que .. -----fimn-irtit involucren pérdida ósea, dolor inflamatorio, hipersensibilidad (incluyendo tanto hipersensibilidad de las vías respiratorias como hipersensibilidad dérmica), y alergias. Las enfermedades autoinmunes específicas para las cuales se pueden emplear los Anticuerpos de la Invención incluyen desórdenes hematológicos autoinmunes (incluyendo, por ejemplo, anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia de glóbulos rojos puros, y trombocitopenia idiopática) , lupus eritematoso sistémico, policondritis, esclerodoma, granulomatosis de Wegener, dermatomiositis, hepatitis activa crónica, miastenia gravis, psoriasis, síndrome de Steven-Johnson, prurito idiopático, enfermedad inflamatoria autoinmune del intestino (incluyendo, por ejemplo, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, y Síndrome de Intestino Irritable) , oftalmopatía endocrina, enfermedad de Graves, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes melitus tipo I), uveitis (anterior y posterior) , queratoconjuntivitis sicca y queratoconjuntivitis vernal, fibrosis pulmonar intersticial, artritis psoriática y glomerulonefritis (con y sin síndrome nefrótico, por ejemplo incluyendo síndrome nefrótico idiopático o nefropatía de cambio mínimo) . Los Anticuerpos de la Invención también son útiles para el tratamiento, la prevención, o la aminoración de asma, bronquitis, neumoconiosis, enfisema pulmonar, y otras enfermedades obstructivas o inflamatorias de las vías respiratorias . Los Anticuerpos de la Invención son útiles para el tratamiento de reacciones inflamatorias agudas e hiperagudas indeseables que sean mediadas por IL-1, o que involucren la producción de IL-1, especialmente IL-lß, o la promoción de la liberación de TNF por parte de IL-1, por ejemplo infecciones agudas, por ejemplo choque séptico (por ejemplo choque endotóxico y síndrome de insuficiencia respiratoria de adultos), meningitis, neumonía; y quemaduras severas; y para el tratamiento de caquexia o síndrome de desecho asociado con liberación mórbida de TNF, a consecuencia de infección, cáncer, o disfunción de órganos, especialmente caquexia relacionada con SIDA, por ejemplo asociada con, o a consecuencia de, infección por VIH. Los Anticuerpos de la Invención son particularmente útiles para el tratamiento de enfermedades del metabolismo óseo, incluyendo osteoartritis, osteoporosis y otros artrítidos inflamatorios, y pérdida ósea en general, incluyendo pérdida ósea relacionada con la edad, y en particular enfermedad periodontal. Los Anticuerpos de la Invención se pueden utilizar para el tratamiento de cánceres, en particular tumores dependientes de IL-1. Para estas indicaciones, la dosificación apropiada, por supuesto, variará dependiendo, por ejemplo, del Anticuerpo de la Invención particular que se vaya a emplear, del huésped, del modo de administración, y de la naturaleza y severidad de la condición que se esté tratando. Sin embargo, en el uso profiláctico, en general se indica que se obtienen resultados satisfactorios en dosificaciones diarias de aproximadamente 0.1 miligramos a aproximadamente 5 miligramos por kilogramo del peso corporal. El Anticuerpo de la Invención convenientemente se administra parenteralmente, intravenosamente, por ejemplo en la vena antecubital u otra vena periférica, intramuscularmente, o subcutáneamente. Un tratamiento profiláctico normalmente comprende administrar la molécula de la invención una vez al día a una vez a la semana durante 2 a 4 semanas. Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden fabricar de una manera convencional. Una composición de acuerdo con la invención de preferencia se proporciona en una forma liofilizada. Para su administración inmediata, se disuelve en un vehículo acuoso adecuado, por ejemplo agua estéril para inyecciones o suero fisiológico regulado estéril. Si se considera deseable formar una solución de un volumen mayor para administrarse mediante infusión, por ejemplo infusión intravenosa, en lugar de hacerlo como una inyección de bolo, por ejemplo una inyección subcutánea de bolo, es conveniente incorporar albúmina de suero humana o la propia sangre heparinizada del paciente en el suero en el momento de la formulación. La presencia de un exceso de esta proteína ^^^^ri^^^UMMÉ^l iÜIÍÉiMlJ fisiológicamente inerte previene la pérdida del anticuerpo por adsorción sobre las paredes del recipiente y la tubería utilizados con la solución para infusión. Si se utiliza albúmina, una concentración adecuada es del 0.5 al 4.5 por ciento en peso de la solución salina. La invención se describe además, a manera de ilustración solamente, en los siguientes Ejemplos, los cuales se refieren a las Figuras acompañantes: La Figura 1 es una gráfica que muestra la inhibición competitiva del enlace de AAL 160 con IL-lß por los receptores de IL-1 solubles tipo I y tipo II; La Figura 2 es una gráfica que muestra la inhibición de la fiebre inducida por IL-lß en un modelo de rata por AAL 160, y La Figura 3 es una gráfica que muestra la duración de acción de AAL 160 en fiebre inducida por IL-lß de rata.

EJEMPLOS Se utilizan ratones transgénicos diseñados para expresar el repertorio humano IgG/? en lugar del repertorio de inmunoglobulina de murino (Fishwild y colaboradores, 1996, Nat Biotechnol., 14, 845-851), para generar anticuerpos para IL-lß humana. Las células B de estos ratones se inmortalizan mediante tecnología de hibridoma convencional, y se obtienen células de hibridoma de murino que secretan el anticuerpo AAL 160 de IgGl/? humano.

Ejemplo 1 : Generación del hibridoma y purificación del anticuerpo El ratón genéticamente diseñado 66 (Medarex Inc. Annadale, NJ) se inmuniza con IL-lß humana recombinante (50 microgramos) subcutáneamente en varios sitios en un adyuvante. El ratón se refuerza cinco veces adicionales con la última inyección tres días antes de la fusión. En el día de la fusión, el ratón 66 se sacrifica mediante inhalación de C02, y se fusionan células del bazo (4.1 x 107) mediante un método de rutina utilizando PEG 4000 con un número igual de células PAI-0, una línea celular de mieloma de ratón. Las células fusionadas se aplican a 624 pozos (1 mililitro/pozo) que contienen una capa alimentadora de células perifonéales de ratón (ratones Balb C) , en RPMI 1640 complementado con HAT, suero fetal de becerro inactivado por calor al 10 por ciento, 5 x 10~5 M, ß-mercaptoetanol. Los sobrenadantes se recolectan y se prueban en ELISA, y se rastrean para determinar los anticuerpos monoclonales reactivos con IL-lß. Se identifican cinco anticuerpos monoclonales de la subclase IgG/?. La clonación se hace utilizando 4 placas de microtitulación de 96 pozos, aplicando 0.5 células por pozo. Después de dos semanas se inspeccionan los pozos con un microscopio invertido. El iiÉÉiÉÉiÉiiiÉÉiiiii ni iiBiin *«**-*» ?* **.*.**-*>*** ^.*-<^^ - pr iii ^^ f' lltlhT'fl sobrenadante se recolecta de los pozos positivos para el crecimiento, y se evalúa la producción de anticuerpos monoclonales anti-IL-lß mediante ELISA. Se preparan 1-2 litros de sobrenadante acondicionado a partir de cuatro subclones del hibridoma originalmente identificado #476, y se purifican los anticuerpos mediante cromatografía por afinidad sobre una columna de proteína A.

Pureza y secuencias de aminoácidos parciales de cadena pesada y ligera Secuenciación de Aminoácidos Las cadenas ligera y pesada del anticuerpo purificado AAL 160 se separan mediante SDS-PAGE, y se determinan los aminoácidos amino-terminales mediante degradación de Edman. La pureza del anticuerpo utilizado en estos estudios es 90 por ciento mediante la secuenciación. Se obtienen secuencias de ADNc que codifican para los dominios variables de cadena pesada y ligera mediante amplificación con reacción en cadena de la polimerasa del ADNc obtenido a partir del ARNm de las células de hibridoma clonadas, y se secuencian completamente. Las secuencias amino-terminales de los dominios variables de cadena pesada y ligera y las secuencias de ADN correspondientes se dan en seguida, en donde las CDRs se muestran en tipo en negrillas.

SEQ ID NO: 1 30 60 GAG GTG CAG CTG GTG CAG TCT GGA GCA GAG GTG AAA AAG CCC GGG GAG TCT CTG AAG ATC Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys lie 10 20 90 CDRl 120 TCC TGT AAG GGT TCT GGA TAC AGC TTT ACC AGC TAC TGG ATC GGC TGG GTG CGC CAG ATG Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp lie Gly Trp Val Arg Gln Met 30 40 150 CDR2 180 CCC GGG AAA GGC CTG GAG TGG ATG GGG ATC ATC TAT CCT AGT GAC TCT GAT ACC AGA TAC Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly lie lie Tyr Pro Ser ?sp Ser ?sp Thr Arg Tyr 50 60 210 240 AGC CCG TCC TTC CAA GGC CAG GTC ACC ATC TCA GCC GAC AAG TCC ATC AGC ACC GCC TAC Ser Pro Ser Ph? Gln Gly Gln Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 70 80 270 300 CTG CAG TGG AGC AGC CTG AAG GCC TCG GAC ACC GCC ATG TAT TAC TGT GCG AGA TAT ACC Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Thr 90 100 CDR3 330 AAC TGG GAT GCT TTT GAT ATC TGG GGC CAA GGG ACÁ ATG GTC ACC GTC TCT TCA ?sn Trp ?sp ?la Phe ?sp lie Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser SEQ ID NO: 2 30 60 GAA ATT GTG TTG ACÁ CAG TCT CCA GCC ACC CTG TCT TTG TCT CCA GGG GAA AGA GCC ACC Glu He Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr 10 20 CDRl 90 120 CTC TCC TGC AGG GCC ?ßT CAG AßT GTT AGC AGC T?C TT? GCC TGG TAC CAÁ CAG AAA CCT Leu Ser Cys ?rg ?la Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu ?la Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 30 40 150 CDR2 180 GGC CAG GCT CCC AGG CTC CTC ATC TAT GAT GC? TCC ??C AGG GCC ?CT GGC ATC CCA GCC Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu He Tyr ?ßp ?la Ser ?sn ?rg ?la Thr Gly Xle Pro Ala 50 60 210 240 AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACÁ GAC TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTT GAG CCT Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 70 80 270 CDR3 300 GAA GAT TTT GCA GTT TAT TAC TGT CAG CAG CGT ?GC ??C TGG ?TQ TTC CCT TTT GGC CAG Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys ßln Gln Arg Ser Asn Trp Met Phe Pro Phe Gly Gln 90 100 GGG ACC AAG CTG GAG ATC AAA Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Las secuencias de ADN que codifican para los dominios variables de cadena pesada y ligera, y las secuencias de aminoácidos correspondientes de AAL 160, también se dan en el listado de secuencias acompañante como las SEQ ID N0s:l a 4.

Construcción de vectores de expresión para las cadenas pesada y 1Í^ßra Las secuencias codificantes VL y VH clonadas se amplificaron mediante reacción en cadena de la polimerasa, y se insertaron por medio de sitios de restricción apropiados en vectores de cásete, proporcionando el promotor de inmunoglobulina, las secuencias lider a partir del anticuerpo RFT2 (Heinrich y colaboradores (1989) J. Immunol. 143, 3589- 97), parte de los segmentos J, y un sitio donador de empalme.

El cásete de cadena ligera que contenia la región VL entera, el promotor, y la secuencia lider para la secreción, se transfirió a un vector de expresión que contenía el gen C humano, el potenciador de cadena pesada de inmunoglobulina, y el ADNc de dhfr de murino modificado para selección mediante metotrexato (MTX) . El cásete de cadena pesada se transfirió de acuerdo con lo anterior a un vector de expresión que codificaba el gen IgGl humano, el potenciador de cadena pesada de inmunoglobulina, y el gen de resistencia a la neomicina para la selección. Tanto la cadena pesada como ligera están en una configuración en los vectores de expresión que se parece a la configuración genómica de los genes de inmunoglobulina reconfigurados, que se piensa que son cruciales para un alto nivel de expresión. Para la producción del anticuerpo, los vectores anteriores se co-transfectan en una línea celular huésped apropiada, por ejemplo la línea celular SP2/0, se seleccionan las células que contienen las secuencias del vector mediante selección con metotrexato, y las líneas celulares seleccionadas se cultivan para expresar el anticuerpo AAL 160. De una manera alternativa, se puede utilizar un sistema de amplificación/ selección basado en GS, tal como el descrito en las Patentes Europeas Números EP 0256055 B, EP 0323997 B, o en la Solicitud de Patente Europea Número 89303964.4, en cuyo caso, el marcador seleccionable dhfr es reemplazado por una secuencia codificante GS. Ejemplo 2; Datos Bioquímicos y Biológicos Se encuentra que el anticuerpo monoclonal AAL 160 neutraliza la actividad de la interleucina-lß in vi tro . El anticuerpo monoclonal se caracteriza además por su enlace con la IL-lß humana recombinante en el análisis Biacore . El modo de neutralización se evalúa mediante estudios de enlace competitivo con receptores de IL-1 solubles. La actividad biológica del anticuerpo AAL 160 hacia la IL-lß recombinante y naturalmente producida, se determina en células humanas primarias (Ejemplo 3), en respuesta al estímulo por IL-lß. 2.1 Determinación de la constante de equilibrio de disociación La constante del índice de asociación y de disociación para el enlace de IL-lß humana recombinante con AAL 160, se determina mediante análisis BiAcore. Se inmoviliza AAL 160, y se mide el enlace de la IL-lß recombinante en un rango de concentración de 0.5 a 12 nM, mediante resonancia de plasmón superficial . El formato elegido permite tratar el evento de enlace de IL-lß con AAL 160 de acuerdo con una estequiometría de 1:1. El análisis de los datos se realiza utilizando el software BIAevaluation.

AAL 160 se enlaza con la IL-lß humana recombinante con una alta afinidad. 2.2 Inhibición competitiva del enlace con los receptores de IL-1 solubles Estudio de competencia de enlace con los receptores de IL-1 tipos I y II solubles La competencia entre AAL 160 y los receptores de IL-1 humanos tipo I y tipo II se mide mediante Biacore. Se inmoviliza AAL 160 sobre la superficie del chip, y se inyecta IL-lß humana recombinante (8 nM) para enlazarse con AAL 160 en ausencia o en la presencia de concentraciones crecientes de receptor I (0 - 10 nM) o receptor II (0 - 80 nM) soluble humano recombinante. Los resultados obtenidos se muestran en la Figura 1. El enlace de NVP AAL 160 NX-1 a IL-lß es competitivo tanto M*ÉM?*^?álá*m -*•— **~-********* * <^-*~-** . con el receptor de IL-1 tipo I como tipo II. 2.3. Perfil de reactividad a IL-la humana, IL-1RA humana, e IL-lß de especies de roedor y mono El perfil de reactividad de AAL 160 a la IL-la humana, IL-1RA, e IL-lß de murino, rata, conejo, y mono Cynomolgus, se determina mediante análisis Biacore. Se inmoviliza AAL 160, y se aplican las citocinas examinadas se aplican en una concentración de 8 nM (ó 20 nM en el caso de IL-lß).

Porcentaje de enlace total + SEM IL-lß humana 100 IL-la humana 0.7 ± 0.7 (n=3) IL-IRa humana 1.2 ± 1.2 (n=3) IL-lß de ratón 2.8 ± 1.5 (n=3) IL-lß de rata 3.0 ± 2.5 (n=3) IL-lß de 96.4 ± 6.8 (n=3) Cynomolgus IL-lß de conejo 12.1 ± 2.3 (n=4) AAL 160 no reacciona cruzadamente de una manera significativa con la IL-la humana, la IL-IRa humana, o la IL-lß de' murino, de rata, o de conejo. La reactividad hacia la IL-lß de mono Cynomolgus es virtualmente idéntica a la citocina humana. Í?- - .1 : .: '... *' í* ***-*i .

Ejemplo 3: Neutralización de la producción dependiente de IL-lß de PGE2 e interleucina-6 mediante fibroblastos humanos primarios La producción de PGE2 e IL-6 en fibroblastos dérmicos humanos primarios depende de IL-lß. El TNF-a no puede él solo inducir eficientemente estos mediadores inflamatorios, pero se sinergiza con la IL-1. Se utilizan fibroblastos dérmicos primarios como un modelo subrogado para la activación celular inducida por IL-1.

Se estimulan los fibroblastos humanos primarios con IL-lß recombinante o con un medio acondicionado obtenido a partir de PBMCs humanas estimuladas con LPS en la presencia de diferentes concentraciones de AAL 160 o IL-IRa, desde 6 hasta 18,000 pM. Se utiliza el anticuerpo quimérico anti-CD25 Simulect® (basiliximab) como un control de isotipo apareado. El sobrenadante se toma 16 horas después del estímulo, y se ensaya para determinar la IL-6 mediante ELISA, ó el PGE2 mediante RÍA. 10 AAL160 bloquea efectivamente la producción de IL-6 y PGE2 en fibroblastos dérmicos humanos con una IC50 similar a la IL-lß tanto recombinante como natural . 15 Ejemplo 4; Eficacia in vivo y duración de acción de AAL160 Eficacia; Se prueba la eficacia in vivo del anticuerpo anti- huIL-lß, AAL 160, en un modelo de rata, en donde se induce 20 fiebre mediante una inyección intravenosa de huIL-lß (100 nanogramos/rata) . El anticuerpo provoca una inhibición relacionada con la dosis de la respuesta de fiebre sobre el rango de dosificacdón de 1, 3, y 10 microgramos/kilogramo intravenosamente (n=6 ratas) - ver la Figura 2. Se utiliza CHI 25 621 (Simulect®, basiliximab) como el anticuerpo de control. ^^^^^^g gfa.... « ^.^.. ***** * *.**..,****. .*..». , a . j*&?* Duración de Acción : Se investiga la duración de acción de AAL 160 en fiebre inducida por IL-lß de rata como sigue: El anticuerpo se inyecta intravenosamente ya sea 24 horas o bien 30 minutos (protocolo estándar) antes de la inducción de la fiebre mediante una inyección intravenosa de IL-lß humana, y se mide la temperatura corporal 2 y 4 horas después. Se ve un grado similar de inhibición de la respuesta de fiebre en ambos tiempos (ver la Figura 3) . Como se espera, el anticuerpo de control CHI 621 (Simulect®, basiliximab) es inefectivo en ambos puntos del tiempo. Este descubrimiento indica que el anticuerpo AAL 160 está presente en una forma activa durante cuando menos 24 horas en la rata, y no se metaboliza, ni se excreta, ni se fija a los tejidos durante este tiempo.

Ejemplo 5 : Estudios de rayos X de Fab AAL160 y su complejo con IL-lß Determinación de la estructura del Fab AAL160 a una resolución de 2.0 Á: Se recopiló un conjunto de datos de una resolución de 2.0 A de muy buena calidad (Rs?m = 0.051, completitud = 99.9 por ciento, redundancia = 8.2) a partir de un cristal de Fab cultivado mediante la difusión de vapor en la técnica de goteo colgante, a un pH de 9.5 en PEG 200 al 50 por ciento, CHES a ?m i mma?i 0.1M. El cristal estaba en el grupo de espacio P2?2x2? con dimensiones de células unitarias a=62.17Á, b=89.83Á, c=123.73Á, y una molécula de Fab por unidad simétrica (coeficiente de Matthews : 3.6 Á3/Da, contenido de solvente estimado: 66 por ciento) . La estructura se determinó mediante reemplazo molecular, y se refino hasta un factor R cristalográfico final de 0.209 (factor R libre = 0.261). El modelo final incluye los residuos 1-213 de la cadena ligera, 1-131 y 138-218 de la cadena pesada, 387 moléculas de agua, y una molécula de PEG. La densidad de electrones final está bien definida para todos los residuos de CDR, salvo Trp 94 (CDR3) de la cadena ligera. La posición de la cadena lateral de este residuo está mal definida en las dos formas del cristal que se examinaron hasta la fecha, sugiriendo de esta manera que es altamente móvil en ausencia de un antígeno enlazado. Cristalización del complejo Fab con IL-lß y modelo experimental preliminar del complejo: se obtuvieron unos cuantos cristales de Fab AAL160 en complejo con el antígeno IL-lß a partir de una solución de suministro de 76 miligramos/ mililitro del complejo a 1:1 en sulfato de amonio 2.0 M, Tris 0.1 M, pH de 8.5. Los cristales crecieron muy lentamente durante un período de varias semanas. Se difractaron débilmente hasta aproximadamente 3.2 A sobre la fuente inicial. Se recopiló un conjunto de datos preliminar, y se intentó el reemplazo molecular utilizando las estructuras de alta ¡>ÉÜÍaÍ ÍÍ' il iMT- — .^.^^«^A^Jt ^^M»,***»*.^ resolución del Fab libre y de la IL-lß humana (J. P. Priestle y colaboradores, EMBO J. 7, 339 (1988)) como modelos de partida. Los cálculos produjeron una solución muy clara y sin ambigüedades cuando se utilizaron las partes Fv y Fc del Fab como módulos separados (correlación del 67.1 por ciento, factor R de 0.354 después del paso de AJUSTE AMORE, utilizando los datos entre 8.0 y 3.5 Á) . La siguiente comparación de las formas libre y enlazada del Fab mostró que el ángulo del codo es muy diferente en las dos estructuras. Los resultados de los cálculos de reemplazo molecular proporcionan un primer modelo molecular de las interacciones entre el antígeno IL-lß y el anticuerpo monoclonal AAL 160. Un análisis preliminar de estas interacciones indica que: 1) La IL-lß hace estrechas interacciones con las tres CDRs de la cadena pesada, y con la CDR3 de la cadena ligera. En contraste, pocas interacciones, en su caso, involucran las CDRl y CDR2 de la cadena ligera. 2) El ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25 de la IL-lß madura, se fija en el centro del sitio de combinación de antígeno, y por lo tanto, parece ser un componente clave del epítopo. Es suficientemente interesante que este ciclo no se localice en la región de la molécula que más difiere de la IL-lß de ratón. Pro 23, Tyr 24, y Glu 25 están conservados, pero el residuo 22 es un Gly en la IL-lß humana, y un Asp en la IL-lß de ratón. La comparación de las estructuras del cristal de la IL-lß humana (PDB anotación 2ilb) y de ratón (PDB anotación 8ilb) , muestra que esta mutación puntual da como resultado una conformación muy diferente de la cadena principal alrededor de Pro 23. Esta diferencia estructural local es consistente con la falta observada de reactividad cruzada del AAL 160 con respecto a la citocina de ratón. fc* - "A -»"—*"-—-• * ^***..***?? ^,^^.**- .. -*^-^«m»^" LISTADO DE SECUENCIAS <110> Novartis AG <120> ANTICUERPOS PARA IL-1 BETA HUMANA <130> 4-31289A <160> 4 <170> Patentln versión 3.0 <210> 1 <211> 354 <212> ADN <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(354) <400> 1 gag gtg cag ctg gtg cag tet gga gca gag gtg aaa aag ccc ggg gag 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 tet ctg aag ate tec tgt aag ggt tet gga tac age ttt acc age tac 96 Ser Leu Lys lie Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 tgg ate ggc tgg gtg cgc cag atg ccc ggg aaa ggc ctg gag tgg atg 144 Trp lie Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 ggg ate ate tat cct agt gac tet gat acc aga tac age ccg tec ttc 192 Gly lie lie Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 caa ggc cag gtc acc ate tea gcc gac aag tec ate age acc gcc tac 240 Gln Gly Gln Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag tgg age age ctg aag gcc tcg gac acc gcc atg tat tac tgt 288 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga tat acc aac tgg gat gct ttt gat ate tgg ggc caa ggg acá 336 Ala Arg Tyr Thr Asn Trp Asp Ala Phe Asp lie Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 atg gtc acc gtc tet tea 354 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys lie Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp lie Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly lie lie Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Thr Asn Trp Asp Ala Phe Asp He Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 321 <212> ADN 10 <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> ( 1 ) . . (321 ) 15 <400> 3 gaa att gtg ttg acá cag tet cca gcc acc ctg tet ttg tet cca ggg 48 Glu He Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc etc tec tgc agg gcc agt cag agt gtt age age tac 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 20 tta gcc tgg tac caa cag aaa cct ggc cag gct ccc agg etc etc ate 144 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45 tat gat gca tec aac agg gcc act ggc ate cca gcc agg ttc agt ggc 192 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 25 agt ggg tet ggg acá gac ttc act etc acc ate age age ctt gag cct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 gaa gat ttt gca gtt tat tac tgt cag cag cgt age aac tgg atg ttc 288 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Met Phe 85 90 95 cct ttt ggc cag ggg acc aag ctg gag ate aaa 321 Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Glu He Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Met Phe 85 90 95 Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105 -?Ci

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una molécula de enlace de IL-lß, la cual comprende un sitio de enlace de antígeno que comprende cuando menos un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina 5 (VH) , que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3, teniendo la CDRl la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, teniendo la CDR2 la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser- Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y teniendo la CDR3 la secuencia de 10 aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile; y sus equivalentes directos. 2. Una molécula de enlace de IL-lß que comprende dominios variables de cadena tanto pesada (VH) como ligera (VL) , en donde la molécula de enlace de IL-lß comprende cuando 15 menos un sitio de enlace de antígeno que comprende: a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) , el cual comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl, CDR2, y CDR3, teniendo la CDRl la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, teniendo la CDR2 20 la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp- Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y teniendo la CDR3 la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, y b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (V ) , el cual comprende una región 25 hipervariable CDR3' que tiene la secuencia de aminoácidos Gln- «ÜSS&fiMHMa. Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro; y sus equivalentes directos. 3. Una molécula de enlace de IL-lß de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el dominio variable de la cadena 5 ligera de inmunoglobulina (VL) comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDRl', CDR2' , y CDR3' , teniendo la CDRl' la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser- Ser-Tyr-Leu-Ala, teniendo la CDR2' la secuencia de aminoácidos Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, y teniendo la CDR3' la secuencia 10 de aminoácidos Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro; y sus equivalentes directos. 4. Una molécula de enlace de IL-lß de acuerdo con la reivindicación 1, 2, ó 3, que es un anticuerpo humano. 5. Una molécula de enlace de IL-lß que comprende 15 cuando menos un sitio de enlace de antígeno que comprende ya sea un primer dominio que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la mostrada en la SEQ ID NO:l, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 128, o bien un primer dominio como 20 se describe anteriormente, y un segundo dominio que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la mostrada en la SEQ ID NO: 2, empezando con el aminoácido en la posición 1, y terminando con el aminoácido en la posición 107. 6. Una molécula de enlace de IL-lß de acuerdo con 25 cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para utilizarse para ?? rrttmir*Jtr- -* * * - «*• - el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1. 7. Una primera construcción de ADN que codifica una cadena pesada o un fragmento de la misma, que comprende: a) una primera parte que codifica un dominio variable que comprende alternadamente regiones de estructura e hipervariables, siendo las regiones hipervariables, en secuencia, CDRl, CDR2, y CDR3, cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la SEQ ID N0:1; empezando esta primera parte con un codón que codifica el primer aminoácido del dominio variable, y terminando con un codón que codifica el último aminoácido del dominio variable; y b) una segunda parte que codifica una parte constante de cadena pesada o fragmento de la misma, que empieza con un codón que codifica el primer aminoácido de la parte constante de la cadena pesada, y termina con un codón que codifica el último aminoácido de la parte constante o fragmento de la misma, seguido por un codón de paro. 8. Una segunda construcción de ADN que codifica una cadena ligera o fragmento de la misma, que comprende: a) una primera parte que codifica un dominio variable que comprende alternadamente regiones de estructura e hipervariables; siendo las regiones hipervariables CDR3' , y opcionalmente CDRl' y CDR2' , cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la SEQ ID NO: 2; empezando esta primera parte con un codón que codifica el primer aminoácido del dominio variable, y * -t "«NWrnuí - ..... * ..*.*** , .,.. * *, ,.*. * -a^h-Afc., . , .-i. iMÉMÉiat ir 11 ifflMM>f- «-•*-•"* • terminando con un codón que codifica el último aminoácido del dominio variable, y b) una segunda parte que codifica una parte constante de cadena ligera o fragmento de la misma, que empieza 5 con un codón que codifica el primer aminoácido de la parte constante de la cadena ligera, y termina con un codón que codifica el último aminoácido de la parte constante o fragmento de la misma, seguido por un codón de paro. 9. Un vector de expresión capaz de replicarse en 10 una línea celular procariótica o eucariótica, el cual comprende cuando menos una construcción de ADN de acuerdo con la reivindicación 7 o con la reivindicación 8. 10. Un proceso para la producción de una molécula de enlace de IL-lß, el cual comprende: (i) cultivar un organismo 15 que se transforma con un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 9, y (ii) recuperar la molécula de enlace de IL- lß a partir del cultivo. 11. Un anticuerpo para IL-lß que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß 20 humana, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor. 12. i) El uso de un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo 25 antigénico de la IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que AkAsiHm comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1; ii) un método para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1 en un paciente, el cual comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor; iii) una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, en combinación con un excipiente, diluyente, o vehículo farmacéuticamente aceptable; y iv) el uso de un anticuerpo para IL-lß, que tiene especificidad de enlace de antígeno para un epítopo antigénico de IL-lß humana madura, que incluye el ciclo que comprende los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24, y Glu 25, y que es capaz de inhibir el enlace de IL-lß con su receptor, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1.