MXPA01010090A - Peptidos macrociclicos activos frente al virus de la hepatitis c. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos macrocilcicos de la formula (I) activos in- vitro y en ensayos celulares contra la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C en donde W es CH o N; R21 es H, halo alquilo con 1 a 6 atomos de carbono, cicloalquilo, haloalquilo, alcoxi con de 1 a 6 atomos de carbono, cicloalcoxi, hidroxi o N(R23)2, en donde R23 es independientemente H, alquilo con de 1 a 6 atomos de carbono o cicloalcoxi; y R22 es H, halo, alquilo con 1 a 6 atomos de carbono, cicloalquilo con de 3 a 6 atomos de C; haloalquilo con de 1 a 6 atomos de carbono, tioalquilo con de 1 a 6 atomos de carbono, alcoxi con 1 a 6 atomos de carbono, cicloalcoxi con de 3 a 6 atomos de carbono, alcoxialquilo con de 2 a 7 de carbono, cicloalquilo con de 3 a 6 atomos de carbono, arilo con de 6 a 10 atomos de carbono o Het, en donde Her es un heterocido saturado o insaturado con cinco, seis o siete miembros que contiene de uno a cuatro heteroatomos seleccionados de nitrogeno, oxigeno y azufre, el cicloalquilo, arilo o Het esta substituido con R24 en donde R24 es H, alquilo con 1 a 6 atomos de carbono, cicloalquilo con de 3 a 6 C; alcoxi con de 1 a 6 C, cicloalcoxi de 3 a 6 C, NO2, N(R25)2, NH-C(O)-R25 o NH-C(O)- NH-R25 en donde R 25 es independientemente, H, alquilo con de 1 a 6 atomos de carbono o ciloalquilo con de 3 a 6 atomos de carbono; o R24 es NH-C (O)-OR26 en donde R26 es alquilo con de 1 a 6 C; o cicloalquilo con de 3 a 6 C; R3 es hidroxi, NH2 o un grupo de la formula -NR-R31, en donde R31 es un arilo con de 6 a 10 C, heteroarilo, -C(O)-R32, - C(O)-OR32 o -C(O)-NHR32 en donde R32 es alquilo con 1 a 6 C o cicloalquilo con 3 a 6 C; D es una cadena de alquileno saturada o insaturada con de 5 a 10 atomos de carbono opcionalmente contiene de 1 a 3 heteroatomos independientemente seleccionados de: O, S o N-R41, en donde R41 es H, alquilo con de 1 a 6 atomos de carbono, cicloalquilo, o -C(O) ûR42, en donde R42 es alquilo con de 1 a 6 C; cicloalquilo o arilo con 6 o 10 C; R4 es H o uno de los tres substituyentes en cualquier atomo de carbono de la cadena D, seleccionandose el substituyente independientemente del grupo consistente de: alquilo con de 1 a 6 C; haloalquilo con de 1 a 6 C, alcoxi con de 1 a 6 C, hidroxi, halo, amino, oxo, tio o tioalquilo con 1 a 6 C, y A es una amida de la formula -C(O)-NH-R5, en donde R5 se selecciona del grupo consistente de alquilo con de 1 a 8 C, cicloalquilo con de 3 a 6 C; arilo con 6 o 10 C, aralquilo con de 7 a 16 C; o A es acido carboxilico o una sal farmaceuticamente aceptable o un ester.

Description

PÉPTIDOS MACROCÍCLICOS ACTIVOS FRENTE AL VIRUS DE LA HEPATITIS C CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos y composiciones, a la preparación de tales compuestos y a métodos para el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis C (HCV) . En particular, la presente invención proporciona nuevos análogos de péptidos, composiciones farmacéuticas que contienen tales análogos, y métodos para usar estos análogos en el tratamiento de una infección por HCV.

FUNDAMENTO DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (HCV) es el principal agente etiológico de la hepatitis no-A no-B, de adquisición post-transfusional y comunitaria en el mundo entero. Se estima que más de 170 millones de personas están infectadas por el virus en todo el mundo. Un elevado porcentaje de portadores llegan a estar infectados crónicamente y muchos prosiguen hasta una enfermedad hepática crónica, la llamada hepatitis C crónica. Este grupo es a su vez de alto riesgo para enfermedades hepáticas graves tales como cirrosis hepática, carcinoma hepatocelular y enfermedades hepáticas terminales que llevan a la muerte. El mecanismo por el cual el HCV establece persistencia viral y produce una elevada tasa de enfermedades hepáticas crónicas no ha sido aún dilucidado del todo. No se sabe cómo interacciona el HCV con el sistema inmunitario del hospedador y lo evade. Además, quedan aún por establecer los papeles de las respuestas inmunes celulares y humorales en la protección frente a la infección por HCV y la enfermedad. Se han publicado inmunoglobulinas para la profilaxis de la hepatitis viral asociada a transfusiones, pero el Centro para el Control de Enfermedades no recomienda actualmente el tratamiento con inmunoglobulinas con esta finalidad. La falta de una respuesta inmune protectora eficaz está estorbando el desarrollo REF: 133007 de una vacuna o de adecuadas medidas profilácticas post-exposición, por lo que a corto plazo las esperanzas están firmemente articuladas en intervenciones antivirales. Se han llevado a cabo diversos estudios clínicos con el objeto de identificar agentes farmacéuticos capaces de tratar eficazmente la infección por HCV en pacientes afectados de hepatitis C crónica. Estos estudios han implicado el uso de interferón-alfa, solo o en combinación con otros agentes antivirales. Tales estudios han indicado que un número sustan-cial de los participantes no responden a estas terapias, y, entre los que sí responden favorablemente, se encontró que una gran proporción recaía después de la terminación del tratamiento. Hasta hace pocos años, el interferón (IFN) era la única terapia disponible de provecho confirmado, aprobada clínicamente para pacientes con hepatitis C crónica. Sin embargo, la tasa de respuesta mantenida es baja y el tratamiento con interferón induce también graves efectos secundarios (p. ej . retinopatía, tiroiditis, pancreatitis aguda, depresión) que reducen la calidad de vida de los pacientes tratados. El interferón, en combinación con ribavirina, fue aprobado originalmente para pacientes que no responden al IFN solo. Ahora ha sido aprobado para pacientes simples y actualmente constituye el "patrón oro" en la terapia del HCV. Sin embargo, los efectos secundarios provocados por el IFN no se ven aliviados con esta terapia de combinación. Por consiguiente, existe la necesidad de desarrollar agentes antivirales eficaces para el tratamiento de la infección por HCV que superen las limitaciones de las terapias farmacéuticas existentes. El HCV es un virus de RNA de cadena positiva envuelto, de la familia de los Flaviviridae. El genoma de RNA del HCV de cadena simple tiene una longitud de aproximadamente 9500 nucleótidos y tiene un único marco de lectura abierto (ORF) que codifica una única y gran poliproteína de aproximadamente 3000 aminoácidos. En las células infectadas, esta poliproteí-na es segmentada en múltiples sitios por proteasas celulares y virales para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS) . En el caso del HCV, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) es realizada por dos proteasas virales. La primera, hasta ahora escasamente caracterizada, segmenta en el empalme NS2-NS3; la segunda es una proteasa de serina contenida dentro de la región N-terminal de NS3 (denominada por ello proteasa NS3) y media todas las segmentaciones subsiguientes corriente abajo de NS3, tanto en cis, en el sitio de segmentación NS3-NS4A, como en trans, para los sitios restantes NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. La proteína NS4A parece servir para múltiples funciones, actuando como cofactor para la proteasa NS3 y posiblemente asistiendo en la localización de la membrana de NS3 y otros componentes de la replicasa viral. La formación del complejo de la proteína NS3 con NS4A parece necesaria para los eventos de procesamiento, mejorando la eficiencia proteolítica en la totalidad de los sitios. La proteína NS3 muestra también actividades de nucleósido tri-fosfatasa y RNA helicasa. La NS5B es una RNA polimerasa dependiente del RNA que está implicada en la replicación del HCV. La solicitud de patente WO 97/06804 describe el enantiómero (-) del análogo de nucleósido citosina-1 , 3 -oxatiolano (también conocido como 3TC) como activo frente a HCV. Este compuesto, aunque calificado como seguro en ensayos clínicos previos frente al HIV y al HBV, ha de ser aún clínicamente probado como activo contra el HCV y su mecanismo de acción contra el virus no ha sido aún publicado. Una estrategia general para el desarrollo de agentes antivirales es desactivar enzimas codificadas viralmente que son esenciales para la replicación del virus. En esta disposición, los intensos esfuerzos para descubrir compuestos que inhiben la proteasa ?S3 o la R?A helicasa del HCV han llevado a las siguientes descripciones: La patente de EE.UU. 5.633.388 describe carboxamidas sustituidas con heterociclos y análogos como activas frente al HCV. Estos compuestos están dirigidos contra la actividad de helicasa de la proteína NS3 del virus, pero aún no se han publicado pruebas clínicas. Chu et al. (Tet. Lett. (1996), 7229-7232) han publicado que una fenantrenoquinona tiene actividad contra la proteasa NS3 de HCV in vi tro . No se ha publicado ningún desarrollo posterior acerca de este compuesto. Un trabajo publicado en la Novena Conferencia Intérnacional sobre Investigación Antiviral, Urabandai, Fukyshima, Japón (1996) (Antiviral Research (1996) 30, 1, A23 (resumen 19) ) informa acerca de derivados de tiazolidina que son inhibidores de la proteasa del HCV. Varios estudios han informado acerca de compuestos in-hibidores para otras proteasas de serina, tales como la elastasa leucocitaria humana. Una familia de estos compuestos se publica en el documento WO 95/33764 (Hoechst Marión Roussel, 1995) . Los péptidos descritos en esa solicitud son análogos del morfolinilcarbonil -benzoil -péptido que son estructural -mente diferentes de los péptidos de la presente invención.

El documento WO 98/17679 de Vértex Pharmaceuticals Inc. describe inhibidores de proteasa de serina, en particular la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C. Hoffman La Roche (documento WO 98/22496; patente de EE. UU. 5.866.684 y patente de EE.UU. 6.018.020) ha publicado también hexapéptidos que son inhibidores de proteinasa útiles como agentes antivirales para el tratamiento de la infección por HCV. Steinkühler et al . e Ingallinella et al. han publicado acerca de la inhibición de producto NS4A-4B (Biochemistry (1998) 37, 8899-8905 y 8906-8914) . El documento WO 97/43310 de Schering Corporation describe secuencias peptídicas de 20 y 21 aminoácidos activas contra la proteasa NS3 del HCV. El documento WO 98/46597 de Emory University describe péptidos y simulaciones de péptidos activos in vi tro contra proteasas de serina. El documento WO 98/46630 de Peptide Therapeutics Limited describe sustrato depsipeptídico que inhibe la proteasa NS3 del HCV. Finalmente, la patente de EE.UU. 5.869.253 describe moléculas de RNA enzimáticas que inhiben la proteasa NS3 del HCV. Ninguna de las anteriores solicitudes de patente descritas antes describe o sugiere péptidos cíclicos activos y selectivos contra la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C. Los documentos WO 99/07733, WO 99/07734, WO 00/09543 y WO 00/09558 describen de hexa- a tetra-péptidos y análogos de tripéptidos que inhiben la proteasa NS3. Sin embargo, estas descripciones no sugieren ni llevan al diseño de análogos macrocíclicos de la presente invención. El documento WO 99/38888, publicado el 5 de agosto de 1999 por el Institute de Richerche di Biología Moleculare (IRBM) , describe inhibidores de péptidos pequeños de la proteasa NS3 del HCV. No hay nada en esta descripción que sugiera o indique la naturaleza cíclica de los péptidos de la presente invención. Además, esta solicitud PCT fue publicada después de la fecha de prioridad de la presente solicitud.

El documento WO 99/64442 del IRBM, también publicado después de la fecha de prioridad de esta solicitud, describe oligopéptidos con cetoácidos en Pl . El documento WO 99/50230 de Vértex Pharmaceuticals (publicado el 7 de octubre de 1999) fue también publicado después de la fecha de prioridad de la presente solicitud. Incluso así, la publicación no sugiere ni remotamente ningunos de los péptidos cíclicos de la presente invención. Una ventaja de la presente invención es que proporciona péptidos macrocíclicos que son inhibidores para la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C. Una ventaja adicional de un aspecto de la invención reside en el hecho de que estos péptidos inhiben específica- mente la proteasa NS3 y no muestran una actividad inhibidora significativa contra otras proteasas de serina tales como la elastasa leucocitaria humana (HLE) , elastasa pancreática porcina (PPE) , o quimiotripsina pancreática bovina, o proteasas de cisteína tales como la catepsina B hepática humana (Cat B) . Una ventaja adicional de la presente invención es que proporciona péptidos pequeños de bajo peso molecular que son capaces de atravesar las membranas de las células e inhiben la actividad de la proteasa NS3 en cultivos de células. Todavía, una ventaja adicional de los compuestos de la presente invención reside en el hecho de que son activos en ambos genotipos principales encontrados en aislados clínicos (la y lb) , sugiriendo fuertemente que este compuesto será activo contra todos los genotipos del HCV conocidos actualmente .

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se incluyen en el alcance de la invención compuestos de fórmula (I) : en la que es CH o N, R21 es H, halo, alquilo C^, cicloalquilo C3_6 , haloalquilo C1_6 , alcoxi C1_6 , cicloalcoxi C3.6, hidroxi o N(R23)2, en donde cada R23 es idependientemente H, alquilo C1_6 o cicloalquilo ,22 es H, halo, alquilo Cl_6 , cicloalquilo C3.6, haloalquilo alcoxi C1_6 , cicloalcoxi C3_6, alcoxi C2.7-alquilo, cicloalquilo C3_6, arilo C6 ó 10 o Het, en donde Het es un heterociclo de cinco, seis o siete miembros, saturado o insaturado, que contiene de uno a cuatro heteroátomos elegidos entre nitrógeno, oxígeno y azufre; estando dichos cicloalquilo, arilo o Het sustituidos con R24, en donde R24 es H, halo, alquilo C1_6 , cicloalquilo C3.6, alcoxi Ci.g, cicloalcoxi C3.6/ N02, N(R25)2; NH-C(0)-R25, o NH-C (O) -NH-R25, en donde cada R25 es, independientemente: H, alquilo o cicloalquilo C3_6; o R 24 es NH-C(0)-OR26 en donde R2d es alquilo o cicloal-quilo C 3 3--66'' R3 es hidroxi, NH2, o un grupo de fórmula -NH-R31, en donde R31 es aarilo C 6 ó 10 ' heteroarilo, -C(0)-R: 32 C(O) -OR32 o -CÍO) -NHR32 , en donde R32 es alquilo o cicloalquilo C3_6; D es una cadena de alquileno de 5 a 10 átomos saturada o in-saturada, que opcionalmente contiene uno a tres heteroátomos independientemente elegidos entre: O, S o N-R41, en donde R41 es H, alquilo C1.6, cicloalquilo C3_6 o -C(0)-R42, en donde R42 es alquilo cicloalquilo C3.6 o arilo C6 d 10; R4 es H o de uno a tres sustituyentes en cualquier átomo de carbono de dicha cadena D, dicho sustituyente elegido independientemente entre el grupo formado por: alquilo haloalquilo C^g, alcoxi C^g, hidroxi, halo, amino, oxo, tio o tioalquilo y A es una amida de fórmula -C (O) -NH-R5, en donde R5 se elige entre el grupo formado por: alquilo C1_B , cicloalquilo C3.6, arilo C 6 6 10 o aralquilo C 7-16 ' o A es un ácido carboxílico o una sal o éster del mismo farmacéuticamente aceptable. Se incluye dentro del alcance de esta invención una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz como anti-virus de la hepatitis C de un compuesto de fórmula I, o una sal o éster del mismo aceptables terapéuticamente, mezclado con un medio vehículo o un agente auxiliar aceptables farmacéuticamente. Un aspecto importante de la invención implica un método para tratar una infección viral de hepatitis C en un mamífero administrándole una cantidad eficaz como anti-virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I, o una sal o éster del mismo aceptables terapéuticamente, o una composición como se describió antes. Otro aspecto importante implica un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C exponiendo el virus a una cantidad capaz de inhibir la proteasa NS3 de la hepatitis C, del compuesto de fórmula I, o una sal o éster del mismo aceptables terapéuticamente, o una composición como se describió antes. Todavía otro aspecto implica un método para tratar una infección viral de hepatitis C en un mamífero administrándole una cantidad eficaz como anti-virus de la hepatitis C de una combinación del compuesto de fórmula I, o una sal o éster del mismo aceptables terapéuticamente. De acuerdo con una realización, las composiciones farmacéuticas de esta invención comprenden un agente inmunomodulador adicional. Ejemplos de agentes inmunomoduladores adicionales incluyen, pero no se limitan a a- , ß- y d - interferones . De acuerdo con una realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden comprender adicionalmente un agente antiviral. Ejemplos de agentes antivirales incluyen ribavirina y amantadina. De acuerdo con otra realización alternativa, las compo-siciones farmacéuticas de esta invención pueden comprender adicionalmente otros inhibidores de la proteasa del HCV. De acuerdo con otra realización alternativa más, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden comprender adicionalmente un inhibidor de otras dianas en el ciclo vital del HCV tales como helicasa, polimerasa, metaloproteasa o IRES.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE REALIZACIONES PREFERIDAS Definiciones Como se usa en el presente texto, las definiciones que siguen son válidas a menos que se indique otra cosa: Con referencia a los casos en los que se usan (R) o (S) para designar la configuración absoluta de un sustituyente, p. ej . R4, del compuesto de fórmula I, la designación se hace en el contexto del compuesto completo y no en el contexto de solamente el sustituyente. La designación "Pl, P2 y P", como se usa en el presente texto, se refiere a la posición de los restos de aminoácidos partiendo del extremo del término C de los análogos de péptido y prolongándose hacia el término N (es decir, Pl se refiere a la posición 1 a partir del término C, P2 : segunda posición a partir del término C, etc.) (véase Berger A. y Schechter I., Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264 (1970) ) . Como se usa en el presente texto, la expresión "ácido 1-aminociclopropil-carboxílico" (ACCA) se refiere a un compuesto de fórmula: Como se usa en el presente texto, la expresión "vinil--ACCA" se refiere a un compuesto de fórmula: Como se usa en el presente texto, la expresión "homo-alil-ACCA" se refiere a un compuesto de fórmula: El término "halo", como se usa en el presente texto, significa un sustituyente de halógeno elegido entre bromo, cloro, flúor o yodo. La expresión "haloalquilo como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa sustituyentes de alquilo acíclico, de cadena lineal o ramificada, que contienen de 1 a seis átomos de carbono que tienen uno o más hidrógenos sustituidos con un halógeno elegido entre bromo, cloro, flúor o yodo. La expresión "tioalquilo como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa sustituyentes de alquilo acíclico, de cadena lineal o ramificada, que contienen un grupo tiol, tal como un tiopropilo. La expresión "alquilo C^g" o "alquilo inferior", como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa sustituyentes de alquilo acíclico, de cadena lineal o ramificada, que contienen de 1 a seis átomos de carbono, e incluye, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, hexilo, 1-metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1, 1-dimetiletilo. La expresión "cicloalquilo C3_6", como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustitu-yente, significa un sustituyente de cicloalquilo que contiene de tres a seis átomos de carbono, e incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. La expresión "ciclo-alquilo insaturado" incluye, por ejemplo, el sustituyente ciclohexenilo : La expresión "alquileno saturado o insaturado", como se usa en el presente texto, significa un sustituyente de alquilo divalente derivado de la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada extremo de un hidrocarburo alifático de cadena lineal o ramificada, saturado o insaturado, e incluye, por ejemplo: -CH2CH2C(CH3)2CH2CH2-, -CH2CH2CH=CHCH2CH2- o -CH2C=CCH2CH2- . Esta cadena de alquilo puede contener opcionalmente un heteroátomo tal como oxígeno (por ejemplo: CH3-CH2-0-CH2-) . La expresión "alcoxi C1_6 " , como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa el sustituyente -O-alquilo C1_6 , en donde alquilo es como se definió antes, que contiene hasta seis átomos de carbono. Alcoxi incluye metoxi, etoxi, propoxi, 1-metiletoxi , butoxi y 1 , 1-dimetiletoxi . Este último sustituyente es conocido comúnmente como terc-butoxi. La expresión "cicloalquilo C3.6", como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa el sustituyente -O-cicloalquilo C3_6 que contiene de tres a 6 átomos de carbono. La expresión "alcoxi , como se usa en el presente texto, significa el sustituyente alquil alquilo en la que alquilo es como se definió anteriormente, que contiene hasta seis átomos de carbono. Por ejemplo, metoximetilo significa -CH2-0-CH3. La expresión "acilo C2.7", como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa un grupo alquilo unido a través de un grupo carbonilo tal como -C (O) -alquilo La expresión "arilo C6 o C10", como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa un sistema monocíclico aromático que contiene 6 átomos de carbono o bien un sistema bicíclico aromático que contiene 10 átomos de carbono. Por ejemplo, arilo incluye un sistema de anillo de fenilo o de naftilo. La expresión "aralquilo C7.16", como se usa en el presen- te texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyen-te, significa un arilo como se definió anteriormente unido a través de un grupo alquilo, en donde el alquilo es como se definió anteriormente que contiene de 1 a 6 átomos de carbono. Aralquilo incluye, por ejemplo, bencilo y butilfe-nilo. El término "Het" como se usa en el presente texto, bien sea solo o en combinación con otro sustituyente, significa un sustituyente monovalente derivado por eliminación de un hidrógeno de un heterociclo de cinco, seis o siete miembros, saturado o insaturado (incluyendo aromático) , que contiene de uno a cuatro heteroátomos elegidos entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos de heterociclos adecuados incluyen: tetrahidrofurano, tiofeno, diazepina, isoxazol, píperidina, dioxano, morfolina, pirimidina o El término "Het" incluye también un heterociclo como se definió anteriormente fusionado con uno o más de otros ciclos, sea un heterociclo o cualquier otro ciclo. Un ejemplo de estos incluye tiazolo [4 , 5-b] -piridina. Aunque generalmente se encuentra bajo el término "Het", el término "heteroarilo", como se usa en el presente texto, define con precisión un heterociclo insaturado para el cual los dobles enlaces forman un sistema aromático. Ejemplos adecuados de sistema heteroaromático incluyen: quinolina, indol, piridina, VN La expresión "éster aceptable farmacéuticamente", como se usa en el presente texto, bien sea sola o en combinación con otro sustituyente, significa esteres del compuesto de fórmula I en los que cualquiera de las funciones carboxilo de la molécula, pero preferentemente el término carboxi, está reemplazado por una función alcoxicarbonilo: en la que el resto R del éster se elige entre alquilo (p. ej . metilo, etilo, n-propilo, t-butilo, n-butilo) ; alcoxialquilo (p. ej . metoximetilo); alcoxiacilo (p. ej . acetoximetilo) ; aralquilo (p. ej . bencilo); ariloxialquilo (p. ej . fenoxime-tilo) ; arilo (p. ej . fenilo), opcionalmente sustituido con halógeno, alquilo C1_i o alcoxi C1_i . Otros esteres profármacos adecuados se encuentran en Design of Prodrugs, Bundgaard, H. comp. Elsevier (1985) , que se incorpora al presente texto como referencia. Tales esteres aceptables farmacéuticamente se hidrolizan normalmente in vivo cuando son inyectados en un mamífero, y se transforman en la forma ácido del compuesto de fórmula . Con relación a los esteres descritos anteriormente, a menos que se especifique otra cosa, cualquier resto alquilo presente contendrá ventajosamente de 1 a 16 átomos de carbo-no, en particular de 1 a 6 átomos de carbono. Cualquier resto arilo presente en tales esteres comprende ventajosamente un grupo fenilo. En particular los esteres pueden ser un éster de alquilo c?-i6' ur? éster de bencilo no sustituido o un éster de bencilo sustituido con al menos un halógeno, alquilo alcoxi C1_6 , nitro o trifluorometilo. La expresión "sal aceptable farmacéuticamente", como se usa en el presente texto, incluye las sales derivadas de bases aceptables farmacéuticamente. Ejemplos de bases adecúa-das incluyen colina, etanolamina y etilendiamina. Las sales de Na+, K+ y Ca++ se consideran también dentro del alcance de la invención (véase también Pharmaceutical Salts, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sci. (1977), 66, 1-19, incorporada al presente texto como referencia) .

Realizaciones preferidas R1: Realizaciones preferidas de la presente invención incluyen compuestos de fórmula I como se describió anteriormente, en la que el resto R1 se elige entre los 2 distintos diaestereoisómeros, en donde el centro del carbono 1 tiene la configuración R representada por las estructuras (i) y (ii) : O syn respecto a la amida (i) o D syn respecto a A (ii) Más preferentemente, el enlazador D está unido a R1 en la configuración syn respecto a A como se representa por la estructura (ii) . R2: Las realizaciones preferidas de la presente invención incluyen compuestos de fórmula I como se describió anterior-mente, en la que el resto R2 es: en donde W es preferentemente N. Preferentemente, R21 es H, alquilo C^g, alcoxi C^g, hidroxi, cloro o N(R23)2, en donde R23 es preferentemente H o alquilo Lo más preferentemente R21 es metoxi . Preferentemente R22 es H, tioalquilo C1_6 , alcoxi C1_6, fenilo o Het elegido entre el grupo formado por: Preferentemente, R24 es H, alquilo NH-R25, NH-C(O)-R25; o NH-C(O) -NH-R25 o NH-C (O) -OR2í . Más preferentemente, R22 es alcoxi C1_i , fenilo o Het elegido entre el grupo formado por: Más preferentemente, R24 es H, alquilo NH-R25, NH-C(0)-R25; o NH-C (O) -OR26. Lo más preferentemente, R22 es etoxi, o Het elegido entre el grupo formado por: Lo más preferentemente, R2 es NH-R25, NH-C(0)-R25 o NH-C(0)-OR26. Lo más preferentemente, R24b es H o alquilo Cl_6 . Preferentemente, cada R25 es independientemente H, alquilo Cx_6 o cicloalquilo C3.6. Más preferentemente, R25 es alquilo C1_6 o cicloalquilo C3 6. Más preferentemente, R25 es alquilo C-L.g. Preferentemente, R26 es alquilo C^g.

RJ: Realizaciones preferidas de la presente invención incluyen compuestos de fórmula I como se describió anteriormente, en la que el resto R3 es preferentemente una amida de fórmula NH-C(0)-R32, una urea de fórmula NH-C (O) -NH-R32, o un carbamato de fórmula NH-C (O) -OR32. Más preferentemente, R3 es un carbamato o una urea. Lo más preferentemente, ] 3 es un carbamato . Preferentemente, R32 es alquil o cicloalquilo C3.6. Más preferentemente, R32 es alquilo cicloalquilo C4.6. Lo más preferentemente, R32 es terc-butilo, ciclobutilo o ciclo-pentilo.

Realizaciones preferidas de la presente invención incluyen compuestos de fórmula I, en la que el enlazador D es una cadena de alquileno de 6 a 8 átomos, saturada o insatura-da. Más preferentemente, el enlazador D es una cadena de 7 átomos . Preferentemente, la cadena D contiene uno o dos heteroátomos elegidos entre: O, S, NH, N-alquilo o N-acilo C2-7. Más preferentemente, la cadena D contiene opcionalmente un heteroátomo elegido entre: NH o N-acilo C2.7/ lo más prefe- rentemente N(Ac) , y está situado en el átomo 10 de la cadena. Lo más preferentemente, la cadena que contiene un átomo de nitrógeno está saturada. Alternativamente, D contiene un heteroátomo elegido en-tre O ó S. Preferentemente, cuando D tiene una longitud de 7 átomos, el átomo 0 ó S está en la posición 9 de la cadena. Preferentemente, esta cadena está sustituida con R4, en donde R4 es H o alquilo Cx.6. Más preferentemente, R4 es H o metilo. Lo más preferentemente, R4 es H u 8-(S)-Me. Aún más preférentemente, D está saturado. Alternativamente, D contiene un doble enlace en posición 11,12. Preferentemente, este doble enlace es trans. Alternativamente, D es una cadena todo carbono de alquileno saturada o insaturada. En este caso, D está preferente-mente saturado y es de una longitud de 7 átomos. Más preferentemente, D está sustituido con R4, en donde R4 es oxo, tio, hidroxi, tioalquilo, alcoxi o alquilo. Más preferentemente, R4 es H o alquilo Lo más preferentemente, R4 es H o metilo. Lo más preferentemente, R4 es H ó 10-(£?)-Me. Alternativamente, D es una cadena todo carbono de alquileno que contiene preferentemente un doble enlace y es de una longitud de 7 átomos. Más preferentemente, este doble enlace está en posición 13,14 de la cadena. Lo más preferentemente, este doble enlace es cis . Preferentemente, esta cadena D está sustituida con R4, en donde R4 es H, oxo, hidroxi, alcoxi o alquilo. Más preferentemente, R4 es H o alquilo C^g. Incluso más preferentemente, R4 es H o metilo. Lo más preferentemente, R4 es H ó 10- (S) -Me.

A: Realizaciones preferidas de la presente invención incluyen compuestos de fórmula I como se describió anteriormente, en la que A es un ácido carboxílico.

Realizaciones especificas: Realizaciones preferidas de la presente invención incluyen compuestos de fórmula I como se describió anteriormente, en la que R2 es un sustituyente de quinolina (es decir W es N) ; R3 es un grupo de fórmula -NH-C (0) -NHR32 o -NH-C (0) -OR32, en donde R32 es alquilo C1_i o cicloalquilo C4-6; D es una cadena de alquileno de 6 a 8 átomos saturada o in-saturada unida a R1 en configuración syn respecto a A, que opcionalmente contiene uno o dos heteroátomos independientemente elegidos entre: 0, S ó N-R41, en donde R41 es acilo C2.7; R4 es H, o de uno a tres sustituyentes elegidos independientemente entre hidroxi o alquilo y A es un ácido carboxílico, o una sal o éster del mismo aceptable farmacéuticamente. Más preferentemente son compuestos de fórmula I, en la que R1 es como se definió anteriormente; R21 es H o metoxi; R22 es alcoxi o Het elegido entre el grupo formado por: en donde R2 a es H, alquilo C^, NH-R25, -NH-C (0) -R25, -NH-C(0)-NH-R25, en donde R25 es H, alquilo o cicloalquilo C3.6; o R24a es -NH-C(0) -OR26, en donde R26 es alquilo Cx.6 o ciclo-alquilo C3.6; y R2b es H o alquilo C^g,-R3 es una urea de fórmula -NH-C (O) -NHR32 o un carbamato de fórmula -NH-C (0) -OR32, en la que R32 es alquilo C^g o ciclo-alquilo C3.6; D es una cadena de alquileno de 7 átomos de C saturada o insaturada, que opcionalmente contiene un doble enlace en posición 11,12 ó 13,14; conteniendo opcionalmente dicha cadena D un heteroátomo elegido independientemente entre: O, S, NH, N (Me) o ?(Ac) ; y R4 es H o alquilo Cj-g. Lo más preferentemente, son compuestos de fórmula I, en la que R21 es metoxi, y R22 es etoxi o: en donde R24a es NH- (alquilo C^ , NH-C (0) - (alquilo C^) o NH-C (O) -0- (alquilo C^ ; y D está saturado o contiene un doble enlace cis en posición 13, 14. Finalmente, están incluidos en el alcance de esta invención todos los compuestos de fórmula I que se presentan en las Tablas 1 a 9. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden ser administradas oralmente, parenteralmente o mediante un reservorio implantado. Se prefieren la administración oral o la administración mediante inyección. Las composiciones far-macéuticas de esta invención pueden contener cualesquiera soportes, coadyuvantes o vehículos convencionales, no tóxicos y farmacéuticamente aceptables. En algunos casos, el pH de la formulación puede ajustarse con ácidos, bases o tampones aceptables farmacéuticamente para mejorar la estabilidad del compuesto formulado o su forma de suministro. El término parenteral, como se usa en el presente texto, incluye las técnicas de infusión o inyección subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intrasinovial , intrasternal, intratecal e intralesional . Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de preparado inyectable estéril, por ejemplo como suspensión acuosa u oleosa inyectable estéril . Esta suspensión puede ser formulada de acuerdo con métodos conocidos en la técnica usando agentes dispersantes o humectantes adecuados (tales como, por ejemplo, Tween 80) y agentes de suspensión. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse oralmente en cualquier forma de dosificación aceptable oralmente incluyendo, pero sin limitarse a ellas, cápsulas, comprimidos y suspensiones y soluciones acuosas. En el caso de los comprimidos para uso oral, los soportes que se usan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz. También se añaden típicamente agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. Para administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran oralmente suspensiones acuosas, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, pueden añadirse ciertos agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o colorantes. Otros vehículos o soportes adecuados para las formulaciones y composiciones anteriormente indicadas pueden encon-trarse en textos farmacéuticos convencionales, p. ej . en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 19a ed., Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1995. Niveles de dosificación entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, preferentemente entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal por día, de los compuestos inhibidores de proteasa descritos en el presente texto, son útiles en una monoterapia para la prevención y el tratamiento de enfermedades mediadas por el HCV. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de esta invención serán administradas entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 veces al día o, alternativamente, como infusión continua. Tal administración puede usarse como terapia crónica o aguda. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales de soporte para producir un forma de dosificación individual variará dependiendo del hospedador tratado y del modo de administración particular. Un preparado típico contendrá de aproximadamente 5% a aproximadamente 95% de compuesto activo (p/p) . Preferentemente, tales preparados contienen de aproximadamente 20% a aproximadamente 80% de compuesto activo. Como apreciará el profesional experto, pueden requerirse dosis más bajas o más altas que las citadas antes. La dosificación específica y los regímenes de tratamiento para cualquier paciente particular dependen de diversos factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, el estado general de salud, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad y el curso de la infección, la disposición del paciente hacia la infección y el criterio del médico responsable del caso. En ge-neral, el tratamiento se inicia con pequeñas dosificaciones sustancialmente menores que la dosis de péptido óptima. A continuación, la dosificación se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo bajo las circunstancias dadas. En general, lo más deseable es adminis-trar el compuesto a un nivel de concentración que generalmente proporcione resultados eficaces antiviralmente sin provocar ningún efecto secundario nocivo ni perjudicial. Cuando las composiciones de esta invención comprenden una combinación de un compuesto de fórmula I y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deben estar presentes en un nivel de dosificación entre aproximadamente 10 y 100%, y más preferentemente entre aproximadamente 10 y 80% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia. Cuando estos compuestos o sus sales aceptables farmacéuticamente se formulan junto con un vehículo aceptable farmacéuticamente, la composición resultante puede ser administrada in vivo a mamíferos, tales como el hombre, para inhibir la NS3 proteasa del HCV o para tratar o prevenir la infección por el virus HCV. Tal tratamiento puede también conseguirse usando los compuestos de esta invención en combinación con agentes que incluyen, pero sin limitarse a ellos: agentes inmunomoduladores tales como - , ß- o ?-interferones; otros agentes antivirales tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de la proteasa NS3 del HCV; inhibidores de otras dianas del ciclo vital del HCV tales como helicasa, polimerasa, metaloproteasa o sitio de entrada al ribosoma interno (IRES); o combinaciones de los mismos. Los agentes adicionales pueden combinarse con los compuestos de esta invención para crear una forma de dosificación individual. Alternativamente, estos agentes adicionales pueden ser administrados separadamente a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple. En consecuencia, otra realización de esta invención proporciona métodos para inhibir la actividad de la proteasa NS3 del HCV en mamíferos administrando un compuesto de fórmula I, en la que los sustituyentes son como se definió anteriormente. En una realización preferida, estos métodos son útiles para reducir la actividad de la proteasa NS3 del HCV en un mamífero. Si la composición farmacéutica comprende solamente un compuesto de esta invención como componente activo, tales métodos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho mamífero un agente elegido entre un agente inmunomodulado , un agente antiviral, un inhibidor de la proteasa del HCV, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo vital del HCV tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa. Tal agente adicional puede ser administrado al mamífero antes de, o al mismo tiempo que la administración de las composiciones de esta invención. En una realización preferida alternativa, estos métodos son útiles para inhibir la replicación viral en un mamífero. Tales métodos son útiles para tratar o prevenir enfermedades por el HCV. Si la composición farmacéutica comprende solamente un compuesto de esta invención como componente activo, ta-les métodos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho mamífero un agente elegido entre un agente inmunomodulador, un agente antiviral, un inhibidor de la proteasa del HCV, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo vital del HCV. Tal agente adicional puede ser administrado al mamífero antes, al mismo tiempo, o después de la administración de la composición de acuerdo con esta invención.

Los compuestos expuestos en el presente texto pueden ser usados también como reactivos de laboratorio. La solicitante proporciona por primera vez compuestos con un bajo peso molecular, que soy muy activos y específicos frente a la proteasa NS3 del HCV. Algunos de los presentes compuesto pueden ser instrumentales para proporcionar herramientas de investigación para diseñar ensayos de replicación viral, validación de sistemas de ensayo con animales y estudios estructurales de biología para incrementar los conocimientos del mecanismo de las enfermedades por el HCV. Los compuestos de esta invención pueden usarse también para tratar o prevenir la contaminación viral de materiales, y por tanto para reducir el riesgo de infección viral del personal médico o de laboratorio, o de pacientes que entran en contacto con tales materiales (p. ej . sangre, tejidos, instrumentos e indumentaria quirúrgicos, instrumentos e indumentaria de laboratorio, y aparatos y materiales para obtención de sangre o para transfusiones) .

Metodología En los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558 se describen varias formas de llevar a cabo la síntesis de intermedios acíclicos de compuestos de fórmula I. Los compuestos de la presente invención se sintetizan de acuerdo con el procedimiento general ilustrado en los Esquemas de reaocim I, p, y m, (a los que PG es un grupo protector ap pda-do) . [En todos los esquemas presentados a continuación, D' tiene la misma definición que D, pero es de 2 a 5 átomos más corto] . Cuando la invención cubre compuestos de fórmula I, en la que A es una amida N-sustituida, vinil-ACCA o homo-alil-ACCA (R1) es acoplado a una amina apropiada antes del acoplamiento con P2. Tal acoplamiento será fácilmente reconocido por los expertos en la técnica. Como reconocerán los expertos en la técnica, tal amida (A) no está protegida, sino que lleva cualquier sustituyente relevante Rs como se definió antes.

La reacción de cierre de anillo ( acrociclización) se lleva a cabo por metátesis cte ?Lefira (Esjuaiß de reaarpón I), o cuando el enlazador contiene un átomo de nitrógeno , por aminación redüctcra (Eaguaia óe reacpicn H) o pac faptiac?i de enlace p=ptídiao (Efequaia efe reacrim m). Les detalles de estos pnocBdimiaitós se presentan a continuación : A. Macrociclización mediante metátesis de olefina Esquema de reacrá?i I D = saturado D = insaturado Esquema de reaco I: Hay varias formas por las que puede llevarse a cabo la secuencia de acoplamiento, que pueden ser fácilmente reconocidas por los expertos en la técnica. Partiendo de 4-(S)-hidroxiprolina, el sustituyente en el 4-hidroxi puede ser in-corporado mediante una reacción de Mitsunobu (como se describe en Mitsunobu, Synthesis 1981, enero, 1-28; Rano et al. Tet. Letü. 1994, 36, 3779-3792; Krchnak et al. Tet. Lett. 1995, 36, 6193-6196) antes o después de la macrociclización.

Alternativamente, el conjunto puede hacerse con la prolina 4- (R) -hidroxi-sustituida requerida, como se describe en los procedimientos generales de los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558 (véase más adelante para ejemplos específicos de estos fragmentos) . Etapas A, B, C: Brevemente, los restos Pl, P2 y P3 pueden ser unidos por técnicas de acoplamiento de péptidos bien conocidas y descritas de un modo general en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558. Etapa D: La formación del macrociclo puede llevarse a cabo mediante una metátesis de olefina usando un catalizador basado en Ru tal como el publicado por Miller, S.J.; Blackwell, H.E.; Grubbs, R.H. J". Am. Chem. Soc . 1996, 118, 9606-9614 (a); Kingsbury, J.S.; Harrity, J.P.A.; Bonitatebus, P.J.; Hoveyda, A.H.; J. Am. Chem. Soc . 1999, 121, 791-799 (b) y Huang, J. ; Stevens, E.D.; Nolan, S.P.; Petersen, J.L.; J. Am. Chem . Soc . 1999, 121, 2674-2678 (c) . Se reconocerá también que pueden usarse para esta reacción catalizadores que contienen otros metales de transición tales como Mo.

Catalizador de Grubb Catalizador de Horeday Catalizador de Nolan Etapa E : Opcionalmente , el doble enlace se reduce por métodos de hidrogenación estándar bien conocidos en la técnica . Cuan-do A' es un ácido carboxílico protegido , también se le desprotege apropiadamente . B . Macrociclización mediante aminación reductora (para enlazadores que contienen N) Cuando el enlazador contiene un átomo de nitrógeno, la macrociclización se logra por aminación reductora como se muestra :=n el Esguepa de reacción H paca cbbaier irhibidares de estruc- tura general II Esquema s reacción H II Etapa A: La hidroboración del doble enlace según el procedimiento de Brown (H.C. Brown y B.C. Subba Rao, J". Am. Chem . Soc . 1959, 81, 6434-6437) , seguida por la oxidación del alcohol resultante (por ejemplo mediante el peryodinato de Dess-Martin, J". Am. Chem. Soc. 1991, 113, 7277-7287) proporciona el correspondiente aldehido. Etapa B: La hidrogenación en presencia de ácido conduce a la eliminación del grupo protector de amino, seguida por macrociclización mediante aminación reductora. La unidad P3 usada en esta síntesis se obtiene fácilmente a partir de una variedad de aminoácidos tales como lisina, ornitina, glutamina (después de una reacción de Hofmann: Ber. 1881, 14, 2725) y otros; estas modificaciones de síntesis son métodos bien conocidos en la técnica. Etapa C: Opcionalmente, la amina secundaria en el enlazador D (formada después de la etapa D) es alquilada con haluros de alquilo o acetilada con cloruros de ácido de arilo o alquilo usando metodologías bien conocidas en la técnica para obtener inhibidores de estructura general II. Cuando A' es un ácido carboxílico protegido, también se le desprotege apropiadamente. C. Macrociclización mediante formación de lactama Alternativamente, se entiende que estos compuestos macrocíclicos con estructura general I y II pueden ser sintetizados por otros caminos. Por ejemplo, Pl y P3 pueden ser primero conectados al enlazador D, después acoplados a P2 , y la reacción de macrociclización puede ser una formación de lactama de dos formas posibles, como será reconocido por los expertos en la técnica, y cano se nuestra en Esquema de reax±cn m.

Esquema de reacción m Síntesis de Pl La síntesis de inhibidores con estructura general I y II requiere los mismos fragmentos Pl : a) vinil ACCA, cuya síntesis y resolución se describen en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558, o b) homoalil ACCA (Ejemplo 1, compuesto lf) . Síntesis de P2 Algunos de los fragmentos de P2 usados para la síntesis de compuestos de fórmula I se describen en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558. Otros fragmentos de P2 se sintetizan como sigue: a. Síntesis del derivado 2-"Het,,-4-hidroxi-7-metoxiquino- lina (i) Planteamiento a partir del correspondiente ácido "Het" carboxílico IVb Esquema de reacción IV La síntesis se lleva a cabo de acuerdo con un procedimiento modificado descrito en Li et al. J. Med. Chem. 1994, 34, 3400-3407. El producto intermedio IVa, en el que R21 = OMe (Ejemplo 7, compuesto 7b) se prepara como se describe en Brown et al. J. Med. Chem. 1989, 32, 807-826. Etapa A: El producto intermedio IVa es acoplado con ácidos carboxílicos heterocíclicos IVb bajo condiciones básicas con P0C13 para activar el grupo carboxilato. Se usan diversos ácidos carboxílicos con la estructura general IVb para la preparación de inhibidores; éstos están disponibles comer-cialmente o bien se sintetizan como se indica en los esquemas V, VI y VII, o se sintetizan individualmente usando métodos descritos en los ejemplos específicos. Etapa B: El cierre del anillo, seguido por deshidratación, se consigue bajo condiciones básicas para obtener quinolinas de estructura general IVd. (i.a) . Síntesis de ácidos "Het" carboxilicos de fórmula general IVb Síntesis de derivados 2- (sustituido) - amino-4 -carboxi -aminotiazol (Ve) Se usa el procedimiento modificado descrito por Berdik-hina et al. Chem. Heterocycl . Compd. (Traduc. inglesa) 1991, 4, 427-433.

Esquema de reacción V .HBr Va Vb Ve Se preparan diversos ácidos 2 -alquilaminotiazolil -4 -carboxílicos, compuestos de estructura general Ve, usando la metodología general de síntesis señalada en el Esquena de reacción V usando tioureas (Va) con diferentes sustituyentes de alquilo (R25: grupo alquilo) y ácido 3 -bromopirúvico . Este tipo de reacción de condensación en bien conocido en la técnica.

Alternativamente, el fragmento P2 que contiene los derivados de 2 -amino-sustituido-tiazol son sintetizados a partir del correspondiente derivado 2 -carboxilo como se muestra en el esquema VI de acuerdo con el procedimiento de: Unangst, P.C.; Connor, D.T. J. Heterocyc. Chem. 29, 5, 1992, 1097-1100.

Esquema de reacción VI (Via) (Vlb) Ej emplos de este procedimiento se describen en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558 .

Síntesis de derivados 2 -carboxi -4 -aminotiazol sustituido Vlld Se preparan diversos ácidos 4 -alquiltiazol -2 -carboxíli -cos , compuestos estructura general Vlld, usando la metodología de síntesis gereral que se señala en el Esquena de reacción VH.

Esquema de reacción VII El procedimiento descrito por Janusz et al. J. Med. Chem . 1998, 41, 3515-3529 se usa con modificaciones como se describen a continuación: se hace reaccionar tiooxamato de etilo (Vlla) con diferentes /3-bromocetonas de estructura general Vllb (R24 = grupo alquilo) para formar ácidos tiazolil-carboxílicos de estructura general Vlld. Este tipo de reacción de condensación es bien conocido en la técnica.

Síntesis de derivado 2 -carboxi- (sustituido) - imidazol (Vl IIb) Se preparan diversos ácidos alquilimidazolil -2 -carboxí licos , compuestos de estructura general VlIIb, usando la me- tafclogía general de síntesis señalada en el Esquema de reacción VHI.

Esquema de reacción VUC Villa Vlllb Se usó el procedimiento descrito por Baird et al. J". Amer. Chem . Soc . 1996, 118, 6141-6146: se desprotoniza un alquil-imidazol con una base fuerte (p. ej . n-BuLi) y después se hace reaccionar con C02 para formar el ácido carboxílico Vlllb. Este tipo de reacción de condensación es bien conocido en la técnica. b. Síntesis de 4-hidroxi-7 -metoxi-2- (imidazolil o pirazo-lil) quinolinas Las 4-hidroxi-7-R21-quinolinas que tienen un resto imidazolilo o pirazolilo en C2 se preparan generalmente usando la metodología señalada en el Esquema de reacción IX.

Esquema de rearci? IX IXa IXb R-2 = derivados de imidazol o pirazol B IXc La síntesis del producto intermedio clave (en el que R21 = OMe) 4-benciloxi-2-cloro-7-metoxiquinolina IXa, se describe con detalle en el Ejemplo 6 (compuesto 6e) . Etapa A: A temperaturas elevadas, pueden usarse diversos imidazoles, imidazoles sustituidos con alquilo, pirazoles o pirazoles sustituidos con alquilo para desplazar el resto 2 -cloro del compuesto IXa dando compuestos de estructura general IXb. Etapa B: Al eliminar el grupo protector de bencilo del resto 4 -hidroxi de la quinolina por métodos de hidrogenación estándar, se obtienen derivados de quinolina de estructura general IXc . Síntesis de P3 Se sintetizan diversos fragmentos P3 que contienen la prolongación del enlazador D apropiada para macrociclización por metátesis de olefina. En general, las unidades P3 que contienen una olefina terminal para metátesis se sintetizan siguiendo los esquemas generales que se muestran a continuación (Esquemas X, XI y XII) . Síntesis de enlazadores en la Clase A Esta síntesis general se usa para preparar enlazadores que están basados en todo carbono (sin heteroátomos) (Esquema de reacción X). Esq ema de reacción X La síntesis se realiza de acuerdo con el procedimiento de Evans et al. J. Am. Chem. Soc . 1990, 112, 4011-4030. Los ácidos carboxílicos de partida (Xa) están disponibles comercialmente o se preparan por procedimientos conocí-dos de la bibliografía, familiares para los expertos en la técnica. Etapa A: El ácido carboxílico Xa se activa con cloruro de pivaloílo y después se hace reaccionar con el anión del auxiliar quiral de Evans 4 (S) -4- (fenilmetil) -2-oxazolidinona si-guiendo una química bien conocida (revisión: D.J. Ager et al., Aldrichimica Acta 1997, 30, 3-11, y referencias contenidas en la misma) para obtener compuestos de estructura general Xb. Etapa B: La a-azidación estereoselectiva con triazilazida de un enolato de imida quiral tal como el que se formaría a partir de compuestos con estructura general Xb en presencia de una base como KHMDS, es también bien conocida en la técnica (revisión: D.J. Ager et al., Aldrichimica Acta 1997, 30, 3-11, y referencias contenidas en la misma) . Etapa C: La reducción de la a-azida, catalizada por SnCl2 es seguida por la protección de la amina formada como su carbamato de t-butilo da productos intermedios de estructura general Xc. Estas reacciones son también bien conocidas en la técnica. Etapa D: Finalmente, el auxiliar quiral es hidrolizado bajo condiciones básicas, tales como las de una mezcla de H202 con LiOH, para producir los enlazadores de tipo amionoácido de estructura general Xe . Alternativamente, se sintetizan restos P3 que tienen la misma estructura general Xe siguiendo el procedimiento descrito por M.J. Burk et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 657-663 ilustrado en el esquema XI. Estos compuestos variaban en el número de unidades de metileno (-CH2-) a lo largo del enlazador (m = 1 a 5) y la sustitución de grupos alquilo en R4, pero no contenían ningún heteroátomo.

Esquema de reacción XI COOEt COOEt EtOOC NHAc HOOC A.NHAc Xla ' '- Xlb Xlc Xld m=1-5, R4=Ho alquilo Xe Xle Etapa A: El compuesto monoácido Xlb se prepara a partir de 2-acetamidomalonato de dietílo disponible comercialmente por hidrólisis de esteres estándar bajo condiciones básicas.

Etapa B: La condensación del tipo de Knoevenagel entre un aldehido de estructura general XIc y compuesto Xlb en presencia de una base, tal como piridina, y anhídrido acético, conduce a la formación del producto intermedio de enamida Xld que tiene la estereoquímica Z alrededor del doble enlace recién formado, como se muestra. Etapa C: La hidrogenación catalítica regioselectiva y enantioselectiva del producto intermedio de enamida Xld para dar el producto intermedio de aminoácido Xle se realiza usando el método de Burk. Etapa D: El nitrógeno del derivado acetamido Xle es después di -protegido con la adición de un sustituyente de carbamato de t-butilo antes de que el grupo acetato así como el éster etílico, sean hidrolizados bajo condiciones básicas estándar para obtener restos P3 de la estructura general XIf .

Síntesis de enlazadores en la Clase B Estructura general de los enlazadores en la Clase B Esta síntesis general se usa para preparar enlazadores que contienen oxígeno o azufre.

Esquema de reacción XH Etapa A: Aminoácidos adecuadamente protegidos, tales como éster metílico de Boc- (L) -serina, éster metílico de Boc- (L) -treonina o éster metílico de Boc- (L) -alotreonina, son alqui-lados con yoduro de alilo en presencia de Ag20 para dar el éster metílico Xllb. Etapa B: La hidrólisis del éster metílico bajo condiciones básicas estándar da los enlazadores de tipo éter de estructu- ra general XIIc (X=0) . Etapa C: El análogo de azufre se prepara a partir del mismo aminoácido de partida XIla (apropiadamente protegido como antes) y su grupo hidroxílo es convertido en un buen grupo lábil (tal como el intermedio de tosilato Xlld) usando una metodología estándar bien conocida en la técnica. Etapa D: El resto tosilo fue subsiguientemente desplazado con el anión de tioacetato, lo que lleva a la formación del producto intermedio de tioéster Xlle por inversión del centro quiral en el carbono ß . Etapa E: La hidrólisis del resto tioéster bajo condiciones básicas suaves da el tiol libre Xllf . Etapa F: La alquilación del resto tiol se consigue fácilmente bajo condiciones básicas con yoduro de alilo. Etapa G: Finalmente, el análogo de sulfuro XIle (X=S) se obtiene después de la hidrólisis del éster metílico usando procedimientos estándar. Síntesis del fragmento R3 : Ejemplos de síntesis de fragmentos en los que R3 es NH-R31 se describen en el documento WO 00/09543.

EJEMPLOS La presente invención se ilustra con más detalle median-te los siguientes ejemplos no limitantes. Otras formas específicas de síntesis o resolución pueden encontrarse en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558. Las temperaturas se indican en grados Celsius. Los porcentajes de las soluciones expresan una relación de peso a volumen, y las relaciones de las soluciones expresan una relación de volumen a volumen, a menos que se indique otra cosa. Los espectros de resonancia nuclear magnética (NMR) fueron obtenidos en un espectrómetro Bruker de 400 MHz; los desplazamientos químicos (d) se expresan en partes por millón y se refieren al disolvente deuterado interno, a menos que se indique otra cosa. Los espectros de NMR de todos los compues- tos finales (inhibidores) se obtuvieron en DMSO-d6 de su sal de TFA a menos que se indique otra cosa. La cromatografía en columna de resolución rápida se llevó a cabo sobre gel de sílice (Si02) de acuerdo con la técnica de cromatografía de resolución rápida de Still (W.C. Still et al., J. Org. Chem., 1978, 43, 2923). Las abreviaturas usadas en los ejemplos incluyen Bn: bencilo; Boc: terc-butiloxicarbonilo [Me3COC(0)]; BSA: albúmina de suero bovino; Cbz: benciloxicarbonilo; CHAPS: 3- [ (3-colamidopropil) -dimetilamonio] -1-propanosulfonato; DBU: 1, 8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno; CH2CH2=DCM cloruro de metileno; DEAD: dietilazodicarboxilato; DIAD: diisopropilazodicarboxilato; DIPEA: diisopropiletilamina; DMAP: dimetilaminopiridina; DCC: 1 , 3 -diciciohexilcarbodiimida; DME: 1, 2 -dimetoxietano; DMF: dimetilformamida; DMSO: dimetiisulfóxido; DTT: titiotreitol o treo-1 , 4-dimercapto-2, 3-butanodiol; DPPA: difenilfosforil-azida; EDTA: ácido etilendiaminatetraacético; Et : etilo; EtOH: etanol; EtOAc: acetato de etilo; Et20: dietil-éter; ESMS: espectrometría de masas por electropulverización; HATU: hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il) -1, 1, 3, 3-tetrametiluronio; HPLC: cromatografía de líquidos de alto rendimiento; MS : espectrometría de masas; MALDI-TOF: tiempo de vuelo de ionización por láser asistida por matriz; FAB: bombardeo con átomos rápidos; LAH: hidruro de litio y aluminio; Me: metilo; MeOH: metanol; MES: ácido 2 - [N-morfolino] etanosulfónico; NaHDMS: bis (trimetilsilil) amida sódica; NMM: N-metilmorfolina; NMMO: óxido de N-metilmorfolina; NMP: N-metilpirrolidina; Pr: propilo; Succ : 3-carboxipropanoílo; PNA: 4-nitrofenilamino o p-nitroanilida; TBAF: fluoruro de tetra-n-butilamonio; TBME : terc-butil-metil-éter; tBuOK: terc-butóxido potásico; TBTU: tetrafluoroborato de 2- (lH-benzotriazol-1-il) -1,1,3, 3-tetrametiluronio; TCEP: hidrocloruro de tris (2-carboxietil) fosfina; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; TIS: triisopropilsi-lano; TLC: cromatografía en capa fina; TMSE: trimetilsilile-tilo; Tris/HCl: hidrocloruro de tris (hidroximetil) aminometa-no.

RESTOS Pl EJEMPLO 1 Síntesis de carboxilato de t-butil- (1R,2R)/ (1S,2S) -l-amino-2-homoalilciclopropilo (if) : A. A una suspensión de cloruro de benciltrietilamonio (5,08 g, 22,3 mmol) en solución acuosa de NaOH al 50% (50 mL) , se añadieron sucesivamente 1, 2-dibromo-5-hexeno (lb, 8,10 g, 33,46 mmol) y malonato de di-t-butilo (la, 4,82 g, 22,30 mmol) . La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente (TA) durante 16 h, después se diluyó con H20 y se extrajo con CH2C12 (3 x 50 mL) . La capa orgánica se siguió lavando con H20 (2 x 50 mL) y salmuera/H20 (2/1,2 x 50 mL) , se secó sobre MgS04 y se evaporó. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía de resolución rápida en columna sobre gel de sílice, usando EtOAc al 3 a 5% en hexano como eluyen- te, para obtener el compuesto le con un 38% de rendimiento (2,48 g) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,19 (bd, J = 7,9 Hz, 2H) ; 1,25- 1,33 (m, 1H) ; 1,46 (s, 9H) ; 1,48 (s, 9H) ; 1,47-1,60 (m, 1H) ; 1,75-1,82 (m, 1H) , 2,14-2,22 (m, 2H) ; 4,93-5,50 (m, 2H) ; 4,96 (dm, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,18 (dm, J = 17,2 Hz, 1H) . ES(+)MS m/z 297 (M+H) + . B. A una suspensión de t-butóxido potásico (5,75 g, 51,25 mmol) en dietil-éter anhidro (150 mL) a 0°C, se añadió H20 (203 µL, 11,27 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 0o durante 10 min. Se añadió una solución etérea de compuesto le (2,48 g en 10 mL de dietil-éter, 10,25 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 5 h. La mezcla se diluyó con H20 enfriada con hielo y se extrajo con dietil-éter (3 x 200 mL) . La capa acuosa se acidificó a pH 3,5-4 con ácido cítrico acuoso al 10% enfriado con hielo y se re-extrajo con EtOAc (3 x 200 mL) . La capa de EtOAc se lavó con H20 (2 x 100 mL) y con salmuera (100 mL) , se secó sobre MgS04 y se evaporó para dar el compuesto íd con un rendimiento del 85% basado en la cantidad de material de partida recuperado. XH NMR (CDCI3, 400 MHz): d 1,51 (s, 9H) ; 1,64-1,68 (m, 1H) ; 1,68-1,75 (m, 1H) ; 1,77-1,88 (m, 1H) ; 1,96-2,01 (m, 1H) ; 2,03-2,22 (m, 3H) ; 5,01 (dm, J = 6,4 Hz', 1H) ; 5,03 (dm, J = 14,9 Hz, 1H) ; 5,72-5,83 (m, 1H) . ES(+)MS m/z 241 (M+H)\ C. A una solución del ácido Id en benceno anhidro (1,14 g en 25 mL de benceno, 4,74 mmol) se añadió Et3N (800 µL, 5,68 mmol) , seguido por la adición de difenilfosforil-azida (1,13 mL, 5,21 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 3,5 h. Subsiguientemente se añadió trimetilsililetanol (1,36 mL, 9,48 mmol) y se siguió agitando a reflujo durante 4 h adicionales. Después se enfrió la mezcla a TA, se evaporó hasta la mitad de su volumen original, se diluyó con dietiléter (30 mL) y se lavó con solución acuosa de NaHC03 al 5% (2 x 30 mL) y salmuera (50 mL) , se secó sobre MgS04 y se evaporó. El aceite residual se cromatografió sobre gel de sílice usando EtOAc al 10% en hexano como eluyente para obtener el compuesto le puro con un rendimiento del 88% (1,49 g) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 0,03 (s, 9H) ; 0,91-0,99 (m, 2H) ; 1,18-1,29 (m, 2H) ; 1,45 (bs, 11H) ; 1,56-1,72 (m, 2H) ; 2,02-2,18 (m, 2H) ; 4,12 (t, J = 8,3 Hz, 2H) ; 4,93 (dm, J = 10,2 Hz, 1H) ; 4,98 (dm, J = 17,2 Hz, 1H) ; 5,07 (bs, 1H) , 5,71-5,83 (m, 1H) . D. A una solución del derivado de ciclopropilo le (1,19 g, 3,35 mmol, en 30 mL de THF), se añadió t-Bu4NF (6,7 mL de 1M en THF, 6,7 mmol) y la mezcla se agitó primero a TA durante 16 h y a continuación se calentó a reflujo durante 15 min. El disolvente fue evaporado cuidadosamente a baja presión (debido a la alta volatilidad de la amina libre lf , se ha de tener cuidado durante la evaporación del disolvente) . El residuo crudo se redisolvió en EtOAc (100 mL) y se lavó con H20 (2 x 50 mL) y con salmuera (50 mL) , se secó sobre MgS04 y el disolvente se evaporó de nuevo con cuidado. El producto crudo lf (como mezcla de dos enantiómeros lf y lf") se usó para acoplamiento con los derivados de prolina P2 sin más purificación. El aislamiento del fragmento P1P2 que tiene la estereoquímica deseada en Pl se logró fácilmente en esta etapa usando cromatografía de resolución rápida (ejemplo 21, fragmento 21b) .

RESTOS P2 EJEMPLO 2 Síntesis de Boc-4 (R) -[ (7 -metoxi-4-quinolinil) oxi] prolina (2c) : 2c Se preparó 4-hidroxi-7-metoxiquinolina (2b) de acuerdo con el método descrito por Chun, M.W. ; Olmstead, K.K.; Choi, Y.S.; Lee, C.O.; Lee, C.-K.; Kim, J.H. ; Lee, J. Bioorg . Med. Chem . Lett . 1997, 7, 789. Una solución de compuesto 2b (1,88 g, 10,73 mmol) y DEAD (3,4 ml , 21,46 mmol) en THF anhidro se añadió a una solución agitada de cis-hidroxiprolina protegida 2a (2,63 g, 10,73 mmol) y trifenilfosfina (5,63 g, 21,46 mmol) en THF anhidro (160 ml) a 0°C bajo N2. Se dejó calentar la mezcla de reacción a TA y se agitó durante 14 h. Después, el THF se evaporó y se aisló el producto puro 2c después de cromatografía en columna de resolución rápida usando MeOH al 5% en EtOAc como eluyente, con un rendimiento del 35% (1,5 g) • 'H NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,44 (s, 9H) ; 1,65 (bs, 1H) ; 2,34-2,43 (m, 1H) ; 2,63-2,76 (m, 1H) ; 3,78 (s, 3H) ; 3,75-3,85 y 3,89-3,99 (2m, 1H, 2 rotámeros); 3,95 (s, 3H) , 4,51 y 4,60 (2t, J = 8 Hz, 1H, 2 rotámeros), 5,15 (bs, 1H) ; 6,53-6,59 (m, 1H) ; 7,12-7,18 (dd, J = 8,9 y 2,2 Hz, 1H) ; 7,36 (d, J = 2,6 Hz, 1H) ; 8,03 '(bd, J = 9,2 Hz, 1H) ; 8,65 (bd, J = 5,1 Hz, 1H) .

EJEMPLO 3 Síntesis de 2-etoxi-4-hidroxi-7-metoxi-quinolina (3c) TX CO,OMe COOMe -T3 t 3a 3b 3c La síntesis de p-metoxiantranilato de metilo 3a se hizo como se describe en Katz et al. J. Org. Chem . 1953, 18, 1380- 1400. La síntesis general para el derivado de quinolina es una modificación del procedimiento de Baccar et al., Judian Journal of Chemistry, 1995, Sat. B, 330-332. A. Se disolvió p-metoxiantranilato de metilo 3a (3,069 g, 16,96 mmol) en ortoacetato de trietilo (4,7 ml , 25,4 mmol), y después se añadió una solución de HCl anhidro (4N/dioxano, 50 µl, 0,6 mmol) . La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 19 horas. Después se evaporaron las sustancias volá-tiles bajo vacío para dar el producto 3b (4,92 g, aceite ámbar, rendimiento cuantitativo) que se usó tal cual para la siguiente etapa. B. A una solución del sustrato 3b (supuestos 16,96 mmol) en THF (34 ml) a -78°C bajo nitrógeno, se añadió LiHMDS (1M/THF, 22 ml, 1,3 eq.) . Al poco de la adición, se retiró el baño a baja temperatura y la mezcla se dejó agitando a temperatura ambiente durante 1 hora, al cabo de la cual se añadió otra porción de LiHMDS (16 ml) . La mezcla resultante se agitó hasta la desaparición completa del material de partida (1 hora) por TLC (EtOAc al 100%, Rf imidato = 0,7; Rf producto = 0,2) . Después se añadió HCl (4N/dioxano, 10 ml) y la mezcla se concentró bajo vacío. La pasta resultante se trituró en una mezcla de EtOAc (10 ml) y solución acuosa de NaH2P04 (1M, 10 ml) y se sometió a ultrasonidos. Se formó un precipitado abundante, se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó para dar el producto deseado 3c en forma de un sólido color beige (3,177 g, 84% de rendimiento para las 2 etapas, > 99% de pureza por HPLC) . XH NMR (400 MHz, DMSO-d) : d (ppm): 7,88 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 6,98 (br s, 1H) , 6,89 (br d, J = 8,6 Hz, 1H) , 5,94 (br s, 1H) , 4,30 (br s, 2H) , 3,84 (s, 3H) , 1,34 (t, J = 7,0 Hz, 3H) .

EJEMPLO 4 Síntesis de 4-hidroxi-7-metoxi-2- (3-metil-l, 2, 4-oxadiazol-5-il) -quinolina (4d) A. A una solución de 2-carbometoxi-4-hidroxi-7-metoxiquino-lina 4a (cuya preparación se describe en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558 (1 g, 4,29 mmol) en DMF (10 ml) bajo nitrógeno, se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 190 mg, 4,98 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después se añadió gota a gota cloruro de MEM (455 µl, 4,98 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 19,5 horas más. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) , se lavó con H20 (50 ml) y con salmuera (50 ml) , se secó con MgS04 y se concentró bajo vacío para dar el material de reacción aislado crudo (1,37 g) . Éste fue purificado mediante cromatografía en columna de resolución rápida para dar el producto 4b (1,04 g, rendimiento 75%) en forma de un aceite incoloro. B. A una mezcla de tamiz molecular de 4 Á recién activado (500 mg) y acetamidoxima (248 mg, 3,35 mmol) se añadió THF (3 ml) . La mezcla resultante se agitó durante 15 min bajo nitrógeno a temperatura ambiente, y después se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 124 mg, 3,24 mmol) en porciones. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se añadió éster 4b (500 mg, 1,56 mmol) en solución en THF (5 ml) . La mezcla resultante se calentó a re-flujo durante 1 hora, después se filtró sobre celite, aclarando EtOAc (3 porciones de 20 ml) y se concentró bajo vacío. La mezcla cruda resultante se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida (100% EtOAc) para dar el producto 4c (352 mg, 65% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. C. Al éter MEM 4c (170 g, 0,493 mmol) en THF (4 ml) se añadió HCl acuoso (ÍN, 1 ml) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se diluyó con solución acuosa de NaH2P04 (1M, 50 ml) . El sólido formado se filtró, se trituró con EtOAc, se filtró y se secó para dar el producto deseado (4d) (90 mg, 71% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. MS (ES+) 258 (M+l), (ES-) 256 (M-l). ?E NMR (400 MHz, DMSO-d) : d (ppm): 8,03 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,38 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,06 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 6,85 (br s, 1H) , 3,88 (s, 3H) , 2,64 (s, 3H) .

EJEMPLO 5 Síntesis de 4-hidroxi-7-metoxi-2- (5-metil-1, 3 , 4-oxadiazol-2-il) -quinolina (5e) 5c R = MEM 5dR = H 5b A. Al sustrato 4b (465 mg, 1,45 mmol) en etanol (5 ml) se añadió hidrazina anhidra (57 µl, 1,8 mmol). La solución resultante se calentó a reflujo durante 4 h, después se concentró bajo vacío para dar el producto 5a (704 mg, rendimiento en crudo cuantitativo) en forma de un sólido amarillo, que se usó en la etapa siguiente tal cual. B. El compuesto 5a (supuestos 1,45 mmol) en ortoacetato de trietilo (5 ml) se calentó a 100-110°C bajo nitrógeno. La mezcla resultante se diluyó después con EtOAc (100 ml) , se lavó con solución acuosa saturada de NaHC03 (50 ml) y con salmuera (50 ml) , se secó con MgS04, se concentró bajo vacío y se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida (EtOAc al 100%) . El compuesto 5b (359 mg, 61% de rendimiento para las dos etapas) se obtuvo en forma de un aceite amarillo. MS (ES+) 392 (m+1), (ES-) 390 (m-l). C. El compuesto 5b (333 mg, 0,852 mmol) se calentó a 140°C en alto vacío durante 8,5 h, y se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida (100% de EtOAc) para dar una mezcla de 5b (116 mg, 35%, Rf 0,5) y compuesto 5c (138 mg, 72% de rendimiento corregido, Rf 0,3). A una solución en THF (4 ml) de compuesto 5c (138 mg, 0,4 mmol) se añadió solución acuosa de HCl (ÍN, 1 ml) y la mezcla resultante se agitó hasta la compleción (30 min) . El THF fue evaporado bajo vacío y se añadió NaH2P04 acuosa (1M, 2 ml) . La suspensión resultante se sometió a ultrasonidos y se filtró, y el sólido se secó en alto vacío para dar el producto deseado 5d (75 mg, 73% de rendimiento) en forma de un sólido beige. MS (ES+) 258 (m+1), (ES-) 256 (m-l). XH NMR (400 MHz, DMSO-d) : d 8,03 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,39 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,06 (br d, J = 8,6 Hz, 1H) , 6,85 (br s, 1H) , 3,88 (s, 3H) , 2,64 (s, 3H) .

EJEMPLO 6 Síntesis de 4-benciloxi-2- (cloro) -7-metoxiquinolina (6e) A. Meta-anisidina disponible comercialmente (25 g, 0,20 mol) en dioxano (80 ml) se enfrió a 0°C y se añadió HCl anhidro (4N/dioxano, 75 ml, 0,30 mol) . Después se añadió Et20 (500 ml) y se mantuvo la agitación durante 1 hora. Después se filtró el sólido beige y se secó bajo vacío para dar la sal 6a (31,88 g, 98% de rendimiento). B. A esta sal se añadió cianoacetato de etilo (21,3 ml, 0,20 mol) y la mezcla, en un matraz equipado con cabeza de destilación y un matraz colector, se calentó a 280-300°C. El etanol producido se recogió para controlar la evolución de la reacción. A los 9 ml de etanol recogido (cantidad teórica 11,7 ml) , se dejó de calentar, se enfrió la mezcla de reac-ción a TA, se diluyó con agua (200 ml) -EtOAc (200 ml) y después se agitó y se añadió solución acuosa de NaH2P04 (300 ml) . Después de una agitación adicional durante 1 h, filtración y secado, se obtuvo 6b (19,06 g, 84,5% de pureza, aprox. 50% de rendimiento) en forma de un sólido amarillo, y se usó tal cual en la siguiente reacción. C. El compuesto 6b (11,0 g, 57,8 mmol) en DMF (100 ml) a 0°C se añadió a NaH (60% en aceite mineral, 2,78 g, 115,6 mmol) . Después se retiró el baño de hielo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se añadió bromuro de bencilo (7,6 ml, 63,6 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas. Después se diluyó la solución con EtOAc (220 ml) -hexano (220 ml) y el sólido formado se filtró, se trituró con solución acuosa saturada de NaHC03 (110 ml) , se lavó con agua, hexano-EtOAc (relación 1:1, 100 ml) y se secó bajo vacío elevado. El producto 6c (5,6 g, 91% de pureza, 35% de rendimiento) se obtuvo entonces en forma de un sólido amarillo. Al compuesto 6c (2,67 g, 9,52 mmol) en ácido acético (21 ml) se añadió nitrito de iso-amilo (3,8 ml, 28,6 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente y se controló mediante HPLC. Se añadió más nitrito de iso-amilo (1,3 ml , 9,52 mmol) al cabo de 2 horas, y la mezcla se dejó agitando durante 90 horas (HPLC 81% de producto, 3% de sustrato) . Se añadió agua (100 ml) a la suspensión resultante, que después se filtró. El sólido pardo recogido se secó bajo vacío elevado dando el producto 6d (2,35 g, 92% de pureza, 72% de rendimiento). D. Al compuesto 6d (1,5 g, 4,39 mmol) se añadió oxicloruro de fósforo (13 ml, 141 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 1 hora y después se diluyó con EtOAc (150 ml) y se apagó a 0°C lentamente con solución acuo-sa de NaOH (ÍN, 150 ml) a pH 9. Las dos capas se separaron y la capa orgánica se secó con MgS04 y se concentró bajo vacío para dar un sólido de color pardo que se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida (15% EtOAc/hexano) . El producto 6e (819 mg, pureza > del 99%, 62% de rendimiento) fue obtenido en forma de un sólido amarillo.

*H NMR (400 MHz, CDC13) : d 8,07 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,50-7,40 (m, 5H) , 7,29 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , 7,12 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, 1H) , 6,73 (s, 1H) , 5,26 (s, 2H) , 3,92 (s, 3H) .

EJEMPLO 7 Síntesis de 4-hidroxi-2- (1-imidazolil) -7-metoxiquinolina (7b) ; 4-hidroxi-2- (4-metil-1-imidazolil) -7-metoxiquinolina (7d) ; 4-hidroxi-7-metoxi-2 - (1-pirazolil) quinolina (7f) ; y 4-hidroxi-2- (3-metil-l-pirazolil) -7-metoxiquinolina (7h) A. El compuesto 6e (423 mg, 1,41 mmol) e imidazol (400 mg, 5,88 mmol) se calentaron a 110 °C durante 20 h. Después se diluyó la mezcla con EtOAc y se lavó con agua y salmuera, se secó con MgS04, se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto 7a (422 mg, 96% de pureza, 90% de rendimiento) en forma de un sólido amarillo. El compuesto 7a (319 mg, 0,963 mmol) con Pd (5%/C, 64 mg) en una mezcla de etanol (5 ml) y THF (5 ml) fue purgado y puesto bajo una atmósfera de hidrógeno. Después de 7,5 h de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, se aclaró con una mezcla de cloroformo-metanol y se concentró para dar 7b (130 mg, 97,7% de pureza, 56% de rendimiento) en forma de un sólido amarillo. MS (ES+) 242 (m+1), (ES-) 240 (m-l). XH NMR (400 MHz, DMSO-d) : d 8,51 (s, 1H) , 8,03 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,93 (s, 1H) , 7,23 (d, J =» 1,9 Hz, 1H) , 7,15 (s, 1H) , 7,12 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H) , 6,92 (br s, 1H) , 3,91 (s, 3H) . B. El compuesto 6e (251 mg, 0,837 mmol) y 4-metilimidazol (344 mg, 4,19 mmol) se calentaron a 110°C durante 20 h.

Después se diluyó la mezcla con EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó con MgS04 y se concentró bajo presión redu-cida para dar un producto en crudo que contenía una mezcla 10:1 de isómero 4-metil y 5-metil-imidazolilo, respectivamente. El principal isómero deseado 11c, un sólido blanco (166 mg, 99% de pureza, 57% de rendimiento) fue separado de una segunda fracción más polar (76 mg, 23% de rendimiento) que contiene una mezcla' de isómero 4-metil y 5-metil-imidazolilo mediante cromatografía en columna de resolución rápida (100% de EtOAc) . El compuesto 7c (163 mg, 0,472 mmol) con Pd (5%/C, 33 mg) en una mezcla de etanol (2,4 ml) y THF (5 ml) fue purgado y puesto bajo una atmósfera de hidrógeno. Después de 18 h de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, se aclaró con una mezcla de cloroformo-metanol y se concentró para dar 7d (118 mg, 99% de pureza, 98% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d): d 8,42 (br s, 1H) , 8,01 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,64 (br s, 1H) , 7,21 (br s, 1H) , 7,10 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 6,89 (br s, 1H) , 3,90 (s, 3H) ; 2,20 (s, 3H) . C. El compuesto 6e (184 mg, 0,614 mmol) y pirazol (209 mg, 3,07 mmol) se calentaron a 110°C durante 17 h. Después se diluyó la mezcla con EtOAc, se lavó con solución acuosa de NaOH (ÍN) y salmuera, se secó con MgS04 y se concentró bajo presión reducida para dar un producto en crudo que fue puri- ficado mediante cromatografía en columna de rersolución rápida (2:1 hexano-EtOAc) para dar 7e (103 mg, 50% de rendimiento) en forma de sólido amarillo pálido. El compuesto 7e (103 mg, 0,311 mmol) con Pd (5%/C, 20 mg) en una mezcla de etanol (2 ml) y THF (2 ml) fue purgado y puesto bajo una atmósfera de hidrógeno! Después de 5,5 h de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, se aclaró con una mezcla de cloroformo-metanol y se concentró para dar 7f (77 mg, 99% de pureza, 99% de rendimiento) en forma de un sólido amarillo. MS (ES+) 242 (m+1), (ES-) 240 (m-l) . XH NMR (400 MHz, DMSO-d): d 8,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , 8,31 (s, 1H) , 8,00 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,83 (br s, 1H) , 7,43 (br s, 1H) , 7,24 (br s, 1H) , 7,10 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 6,59 (br s, 1H) , 3,90 (s, 3H) . D. Se calentaron compuesto 6e (217 mg, 0,724 mmol) y 4-metilpirazol (594 mg, 7,24 mmol) a 110°C durante 23 h. La mezcla, mostrando una mezcla 1:1 de compuesto desbencilado 7h y producto bencilado 7g, fue después diluida con EtOAc (2-3 ml) y filtrada para dar el producto desbencilado 7h puro (111 mg, 95% de pureza, 54% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. ?H NMR (400 MHz, DMSO-d): d 8,58 (d, J = 2,6 Hz , 1H) , 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,25 (br s, 1H) , 7,20 (s, 1H) , 7,04 (br d, J = 9,2 Hz, 1H) , 6,38 (s, 1H) , 3,89 (s, 3H) , 2,30 (s, 3H) .

EJEMPLO 8 Síntesis de 4-hidroxi-7-metoxi-2- [4- (2-isopropilaminotiazo-lil)] -quinolina (8f) Nota: [Se prepararon diversos sustituyentes de 2-alquilamino-tiazolilo usando el mismo esquema de síntesis en los que el compuesto 8b fue reemplazado por otras alquil -tioureas] . ßb 8C 8d A. El protocolo usado para la conversión de m-anisidina en 8a fue idéntico al descrito en la bibliografía: F.J. Brown et al. J. Med. Chem. 1989, 32, 807-826. Sin embargo, el procedimiento de purificación fue modificado para evitar la purifi- cación por cromatografía. La fase de EtOAc que contenía el producto deseado fue tratada con una mezcla de MgS04, carbón vegetal y 5% p/p (basado en la masa esperada) de gel de sílice. Después de filtrar por celite, el producto fue triturado con éter. El compuesto 8a se obtuvo como un sólido pardo pálido con una pureza > 99% (confirmada por HPLC) .

B. Una suspensión de isopropil-tiourea (8b, 3,55 g, 30 mmol) y ácido 3-bromopirúvico (8c, 5 g, 1 eq.) en dioxano (300 ml, 0,1 M) se calentó a 80°C. Al alcanzar los 80°C, la solución se volvió transparente y poco después el producto precipitó como un sólido blanco. Después de 2 horas de calentamiento, la solución se enfrió a temperatura ambiente y el precipitado blanco se filtró para obtener el compuesto 8d con alta pureza (pureza > 98%, confirmada por NMR) y 94% de rendimiento (7,51 g) . C. Una mezcla del ácido carboxílico 8d (4,85 g, 18,2 mmol) y el derivado de anilina 8a (3 g, 1 eq.) en piridina (150 ml, 0,12 M) fue enfriada a -30°C (al enfriar, la solución transparente se volvió parcialmente una suspensión) . Después se añadió lentamente oxicloruro de fósforo (3,56 ml, 2,1 eq.) durante un periodo de 5 min. La mezcla de reacción se agitó a -30°C durante 1 h, se retiró el baño y se dejó calentar la mezcla de reacción a TA. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se vertió en hielo, se ajustó el pH en 11 con solución acuosa de NaOH 3N, se extrajo con CH2C12, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró bajo vacío. El sólido de color beige se purificó después mediante cromatografía de resolución rápida (45% de EtOAc en hexano) para dar el compuesto 8e en forma de un sólido amarillo pálido con un 73% de rendimiento (6,07 g) . D. Se calentó a reflujo una solución de t-BuOK (2,42 g, 21,6 mmol) en t-BuOH anhidro (40 ml , 0,14 M, destilado en Mg metálico). Se añadió el compuesto 8e (1,8 g, 5,4 mmol) en porciones durante 5 min y la solución de color rojo oscuro formada se agitó a reflujo durante 20 min adicionales (la terminación de la reacción se controló mediante HPLC) . La mezcla se enfrió a TA y se añadió HCl (4 N en dioxano, 1,5 eq.) . Después se concentró la mezcla bajo vacío con el fin de asegurar que todo el HCl y el dioxano eran eliminados, el producto se redisolvió dos veces en CH2C12 y se secó bajo vacío para obtener finalmente la sal de HCl del compuesto 8f en forma de un sólido de color beige (1,62 g, 93% de pureza por HPLC) . Después se vertió el producto en un tampón fosfato (NaH2P04 ÍN, pH aprox. 4,5), y se trató con ultrasonidos. El sólido beige formado se filtró y se secó bajo vacío para dar el compuesto 8f (1,38 g, 81% de rendimiento) en forma de un sólido beige (91% de pureza por HPLC) . 'H NMR (400 MHz, DMSO): d 8,27 (s, 1H) , 8,12 (d, 1H, J = 9,2 Hz) , 7,97 (br s, 1H) , 7,94 (s, 1H) , 7,43 (s, 1H) , 7,24 (dd, 1H, J = 9,2, 2,2 Hz) , 3,97 (m, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 1,24 (d, 2H, J = 6,4 Hz) .

EJEMPLO 9 Síntesis de 4-hidroxi-7-metoxi-2- [2- (4-isopropiltiazolil) ] -quinolina (9f) Nota: Se prepararon diversos sustituyentes de 2- (4 -alquil) -tiazolilo usando el mismo esquema de síntesis en el que el compuesto 9b era reemplazado por otras - romocetonas .

A. A una solución de 3-metil-butan-2-ona (8 g, 93 mmol) en MeOH (100 ml) a -30°C se añadió gota a gota Br2 (4,79 ml, 93 mmol, 1 eq.) durante un periodo de 45 min. La mezcla resultante se agitó después a TA durante 90 min. Se añadió pentano y la solución se lavó con solución acuosa de NaHC03 al 5%, la capa orgánica se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró bajo vacío. El aceite amarillo crudo resultante, compuesto 9b, se usó sin más purificación. Una solución de tiooxamato de etilo (9a, 1,8 g, 13,5 mmol) y derivado de bromocetona 9b (13,5 mmol) se agitó a 70°C durante 15 h. La mezcla se concentró después bajo vacío y a continuación se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando EtOAc al 15% en hexano como eluyente, para obtener el compuesto 9c (740 mg, 28% de rendimiento) . B. Una solución de compuesto 9c (700 mg, 3,5 mmol) en THF/MeOH/H20 (relación 3:1:1, 13 ml) fue tratada con LiOH-H20 (148 mg, 3,5 mmol, 1 eq.) a TA durante 5 h. Después se ajustó el pH a 6 con HCl 0 , ÍN y la mezcla se concentró a sequedad bajo vacío para obtener el ácido 13d, que se usó directamente en la siguiente etapa sin más purificación. C. Una solución de 4 -metoxi-2-amino-acetofenona (intermedio 8a, 570 mg, 3,45 mmol) y derivado de ácido carboxílico 9d (590 mg, 3,45 mmol, 1 eq.) en piridina (30 ml) , se enfrió a -20°C. Después se añadió P0C13 (0,35 ml , 3,379 mmol, 1,1 eq.) gota a gota durante un periodo de 5 min. La solución resul-tante se agitó a -10°C durante 2 h. La reacción se apagó con la adición de H20 y la mezcla se concentró bajo vacío. El residuo se vertió en una solución acuosa saturada de NaHC03 y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró bajo vacío. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando EtOAc al 25% en hexano como eluyente, para dar el compuesto 9e en forma de un sólido blanco (740 mg, 67% de rendimiento) . D. Se añadió t-BuOK (518 mg, 2,1 eq.) a una suspensión de compuesto 9e (700 mg, 2,2 mmol) en t-BuOH anhidro (11 ml) . La mezcla resultante se calentó a 75°C durante 7,5 h, después se enfrió la solución a temperatura ambiente y se acidificó mediante la adición de HCl (HCl 4N en dioxano, 2,5 ml) . La mezcla se concentró bajo vacío y el residuo obtenido se ver-tió en una solución de NaH2P04 ÍN y se filtró. Después se trituró el material sólido con una pequeña cantidad de EtOAc, se filtró y se secó bajo vacío para obtener compuesto 9f como un sólido de color beige pálido (270 mg, 41% de rendimiento) . 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,00 (br s, 1H) , 7,60 (br s, 1H) , 7,51 (br s, 1H) , 7,43 (br s, 1H) , 7,29 (br s, 1H) , 7,14 (br s, 1H) , 6,95 (br a, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 3,15 (m, 1H) , 1,33 (d, J = 5,4 Hz, 6H) .

EJEMPLO 10 Síntesis de 4-hidroxi-2- (l-metil-2-imidazolil) -7-metoxiquino-lina (lOd) A. Una solución de N-metilimidazol 10a (5 g, 61 mmol) en 100 ml de THF se enfrió a -78°C. Se añadió solución de n-BuLi (24,4 ml de una solución 2,5M/Et20, 1 eq.) gota a gota durante 15 min. La mezcla resultante se agitó durante 90 min a -78°C y después se vertió en porciones sobre C02 sólido en exceso. La mezcla heterogénea se agitó durante 2 h y se dejó que alcanzase la TA. Se añadió HCl ÍN hasta pH 5 y la capa acuosa se separó y se liofilizó. El residuo así obtenido se extrajo con EtOAc (para eliminar las sales) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró bajo presión reducida. Se obtuvieron 6.2 g (80% de rendimiento) de un sólido blanco 10b. B. Una solución de 4 -metoxi-2 -amino-acetofenona 8a (394 mg, 2.39 mmol) y el derivado de ácido carboxílico 10b (301 mg, 1 eq.) en piridina (10 ml) se enfrió a -20°C. Después se añadió gota a gota P0C13 (244 µl, 1,1 eq.) durante 5 min. La solución resultante se agitó a -10°C durante 2,5 h. Después se añadió agua y la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se vertió en una solución saturada de NaHC03 y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró bajo presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía usando gel de sílice (25% de EtOAc/Hex) dando 530 mg (81% de rendimiento) de un sólido de color amarillo pálido 10c.

C. Se añadió t-BuOK (431 mg, 2,1 eq.) a una suspensión del sustrato 10c (500 mg, 1,8 mmol) en 8 ml de t-BuOH. Después se calentó la mezcla resultante a 75°C durante 7 h. Se dejó que la solución llegase a la temperatura ambiente durante la noche y se añadieron 2,5 ml de HCl (4N/dioxano) . La mezcla se concentró bajo presión reducida y el residuo obtenido se diluyó con EtOAc . Se añadió NaOH ÍN hasta que se obtuvo un pH de 7. La fase orgánica se separó y se secó (MgS04) , se filtró, y se concentró bajo presión reducida para dar 145 mg de lOd (31% de rendimiento) en forma de un sólido de color beige pálido. :H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 7,99 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,37 (s, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 6,92 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 6,31 (s, 1H) , 3,87 (s, 3H) , 3,84 (s, 3H) .

EJEMPLO 11 Síntesis de 4-hidroxi-2- (1-pirrolil) -7-metoxiquinolina (llb) A. Una solución del sustrato lia (obtenido a partir del compuesto 6c después de hidrogenolisis del grupo bencilo con Pd/C al 5% en etanol-THF) (1 g, 5,25 mmol) y 2 , 5-dimetoxite-trahidrofurano (0,68 ml, 1 eq.) en ácido acético glacial se calentó a reflujo durante 4,5 h y se dejó que alcanzase la TA. Después se concentró la mezcla bajo presión reducida. El residuo se diluyó con metanol y se añadió solución acuosa de NaOH ÍN hasta alcanzar el pH 7. El producto se purificó mediante cromatografía usando gel de sílice (3% de MeOH/ CH2C12, el residuo estaba pre-adsorbido sobre gel de sílice) .

Se obtuvieron 140 mg (13% de rendimiento) de llb en forma de un sólido blanco. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,64 (s, 2H) , 7,18 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , 7,50 (br d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,88 (br s, 1H) , 6,32 (s, 2H) , 3,90 (s, 3H) .

EJEMPLO 12 Síntesis de 4-hidroxi-7-metoxi-2- (6-metil-2-piridil) quinolina (12d) A. Se calentaron a reflujo ácido 6-metilpicolínico 12a (411 mg, 3,0 mmol) y SOCl2 (0,520 ml, 7,2 mmol, 2,4 eq.) en benceno (5 ml) durante 2 h. El disolvente y el S02 en exceso se eliminaron de la mezcla de reacción bajo vacío, y el resi-dúo se trituró con pentano. El material sólido formado se separó por filtración y el filtrado se concentró para dar el cloruro de ácido 12b (500 mg, 2,6 mmol). B. A una solución del cloruro de ácido 12b crudo en CH2C12 (5 ml) a 0°C se añadieron una solución de la anilina 8a (344 mg, 2,08 mmol), DIPEA (1,45 ml, 8,35 mmol) y DMAP (61 mg, 0,5 mmol) en CH2C12 (10 ml) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Los componentes volátiles se eliminaron bajo vacío, el residuo se disolvió en EtOAc y la solución se lavó con solución de NaHC03 al 5% (2x) , HzO y salmuera. La capa orgánica se secó después sobre MgS04 y se concentró bajo vacío. La mezcla se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando EtOAc/hexano (1:2) como eluyente para obtener la amida 12c (490 mg, 82%) . C. A una suspensión de amida 12c (490 mg, 1,71 mmol) en t-BuOH (10 ml) , se añadió t-BuOK (410 mg, 3,43 mmol) y la mezcla se agitó a 75 °C durante 6 h y después a TA durante 16 h. La mezcla se vertió entonces sobre tampón fosfato (175 ml, pH = 7) y se agitó durante 30 min. El sólido se trituró dos veces con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 y se concentró bajo vacío. El sólido obtenido fue triturado con EtOAc para dar el derivado de quinolina 12d (263 mg, 58%) . *H NMR (CDC13,400 MHz) : d 2,68 (s, 3H) , 3,94 (s, 3H) , 6,85-6,88 (2d, J = 8,68 y 9,5 Hz, 2H) , 6,94 (dd, J = 8,9 y 2,2 Hz, 1H) , 7,27 (dd, J = 6,7 y 1,9 Hz, 1H) , 7,73-7,79 (m, 2H) , 8,28 (d, J = 8, 9 Hz, 1H) , 10,3 (br s, 1H) .

EJEMPLO 13 Síntesis de 4-hidroxi-7-metoxi-2- (5-metoxi-2 -piridil) uino-lina (13d) A. A una solución de compuesto 13a (623 mg, 3,73 mmol) en MeOH, se añadió NaOH (2M, 4,70 ml) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 h. Después se acidificó la solución con HCl (6N, 2,2 ml) y se concentró para obtener el compuesto 13b, que se usó en la siguiente etapa sin purificar. B. A una solución del compuesto crudo 13b (aprox. 3,73 mmol) en piridina (25 ml) se añadió la anilina 8a (500 mg, 3,03 mmol) y la solución se enfrió a -25°C antes de añadir P0C13 (0,35 ml, 3,73 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a -10°C durante 1 h y después a 0°C durante 2 h. Después se vertió la mezcla sobre H20 y se extrajo con EtOAc (2-3x) . Las capas orgánicas reunidas se lavaron con NaHC03 al 5% y salmuera, se secaron sobre MgS04 y se concentraron bajo vacío. El material crudo fue purificado mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando EtOAc/hexano (1:2) como eluyente, para dar la amida 13c (617 mg, 55%) . C. A una suspensión de la amida 13c (617 mg, 2,05 mmol) en t-BuOH anhidro (10 ml), se añadió t-BuOK (490 mg, 4,11 mmol) y la mezcla se agitó a 75 °C durante 6 h y después a TA durante 16 h. La mezcla de reacción se vertió en tampón fosfato (175 ml, pH = 7) y se agitó durante 30 min. El material sólido formado se filtró y se trituró con EtOAc para dar el derivado de quinolina 13d (250 mg, 43%) . H NMR (DMSO, 400 MHz): d 3,86 (s, 3H) , 3,94 (s, 3H) , 6,72 (b s, 1H) , 6,91 (dd, J = 8,9 y 1,9 Hz, 1H) , 7,54 (d, J = 1,9, 1H) , 7,60 (dd, J = 8,9 y 2,9 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 8,21 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 8,48 (d, J = 1,9 Hz, 1H) .

EJEMPLO 14 Síntesis de 4-hidroxi-7 -metoxi-2- (oxazol-5-il) quinolina (14c) A. El derivado de quinolina protegido 4b del Ejemplo 4 (3,8 g, 11,8 mmol) se disolvió en CH2C12 (60 ml) y se enfrió a -78°C antes de añadir hidruro de diisobutil -aluminio (7,9 ml , 1 eq. , 1 , 5M en tolueno) muy lentamente a lo largo de 15 min. Después de agitar durante 80 min, se añadió una cantidad adicional de DIBAL (5,5 ml , 0,7 eq. , 1,5 M en tolueno). Después de agitar a -78°C durante 2 h más, la reacción fue apagada cuidadosamente con metanol (4 ml) a -78°C y después se vertió en una solución acuosa de sal de Rochelle (tartrato de Na-K ÍN) . La pasta espesa se agitó con CH2C12 (300 ml) durante 2 h hasta quedar transparente. Se separaron las fases y la fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró para dar un sólido blanco. La purificación mediante cromatografía de resolución rápida (Si02, malla 230-400) con EtOAc al 50%/ hexano dio el aldehido 14a en forma de un sólido blanco (2,5 g, 73%) . B. A una suspensión agitada de K2C03 (48 mg, 0,34 mmol) en MeOH (7 ml) se añadió isocianuro de toluenosulfonilmetilo (66 mg, 0,34 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 45°C y se añadió aldehido 14a (0,10 g, 0,34 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 16 h y después se concentró a sequedad bajo vacío. La purificación se realizó mediante cromatografía de resolución rápida (Si02, malla 230-400) para dar el oxazol deseado 14b (0,089 g, 80%) . MS : 331,0 (M+H)+. C. La hidroxiquinolina protegida MEM 14b se disolvió en THF (3 ml) y se trató con HCl acuoso (ÍN, 1 ml) . La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a TA antes de ser concentrada a sequedad bajo vacío. El residuo se trató con tampón fosfato (3 ml, solución ÍN, pH 4,5) y se agitó antes de filtrar el producto, se lavó con agua destilada y se secó durante la noche bajo vacío elevado (60°C, 16 h) . La hidroxiquinolina deseada 14c se obtuvo en forma de un sólido de color canela (0,065 g, 100%). MS : 242,9 (M+H)+. XH NMR (DMSO-d6) : d 8,65 (s, 1H) , 8,02 (bs, 1H) , 7,97 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 6,39 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,42 (b s, 1H) , 3,87 3H) ES (+) MS: m/z 242,9 (M+H) RESTOS ENLAZADORES DE PEPTIDOS (P3) EJEMPLO 15 Síntesis de ácido (2S) -N-Boc-amino-non- 8-enoico ( 15g) COOEt dioxano - NaOH (1N) COOß EtOOC X NHAc — 1¿2— H ..O„OC? NHAc (15a) (15b) THF A. A una solución de 2-acetamidomalonato de dietilo 15a disponible comercialmente (100 g, 0,46 mol) en dioxano (500 ml) se añadió solución acuosa de hidróxido sódico (1 M, 1 eq. 460 ml) gota a gota durante 30 a 45 min. La mezcla resultante se dejó agitando durante 16,5 h y luego se evaporó el dioxano bajo vacío, la solución acuosa se extrajo con tres porciones de 300 ml de acetato de etilo y se acidificó a pH 1 con HCl concentrado. Esta solución se dejó cristalizar en un baño de hielo fundente. Después de aparecer algunos cristales, la mezcla se sometió a ultrasonidos y apareció un abundante precipitado. La filtración y el secado bajo vacío dieron el compuesto 15b (62,52 g, 72% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. B. A una emulsión agitada magnéticamente de 7-octeno- 1 , 2-diol 15c (25 g, 0,173 mol) comercialmente disponible y H20 (100 ml) , en un matraz de fondo redondo de 1 1, se añadió una solución acuosa de peryodato sódico (40,7 g, 0,190 mol, 1,1 eq. , en 475 ml de H20) durante un periodo de 20 min (ligeramente exotérmica) . La mezcla resultante se agitó a temperatu-ra ambiente durante 1 h más (la terminación de la reacción se confirma mediante TLC) . Después se decantó la mezcla en un embudo de separación y la capa acuosa se separó de la capa orgánica. La solución acuosa se saturó con NaCl , se decantó y se separó de la fracción orgánica una vez más. Las dos fracciones orgánicas se reunieron, se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron sobre un tapón de algodón (en una pipeta Pasteur) para dar el compuesto 15d (15,135 g, aceite incoloro, 78% de rendimiento) . La solución acuosa se extrajo con CH2C12, se secó con MgS04 anhidro y se concentró bajo vacío (sin calentamiento, heptanal p. eb. 153°C) para obtener una cantidad adicional de compuesto 15d (1,957 g, aceite incoloro, 10% de rendimiento). Rendimiento total 88%. C. A 2-acetamidomalonato de etilo sólido 15b (7,57 g, 40 mmol) se añadió 6-heptenal 15d (4,48 g, 40 mmol) en solución en piridina (32 ml , 10 eq. ) durante 1 min. La solución resultante se enfrió en un baño a 10°C y se añadió anhídrido acético (12 ml, 3,2 eq.) durante 4 min. La solución de color naranja resultante se agitó durante 3 h a TA, y se añadió otra porción de 2 -acetamidomalonato de etilo 15b (2,27 g) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 11 h más. Después se añadió hielo (60 ml) y la solución se agitó durante 1,5 h, después la mezcla se diluyó con 250 ml de agua y se extrajo con dos porciones de éter. La solución etérea se lavó con HCl ÍN y solución saturada de NaHC03, se secó con Na2S04, se concentró y se purificó mediante cromatografía de resolución rápida (EtOAc 40%/hexano) para dar el compuesto 15e (4,8 g, 50% de rendimiento) en forma de un aceite amarillo pálido. D. A una solución desgasificada (burbujeo de argón durante 30 min) de 2-acetamido-2 , 8-nonadienoato de Z-etilo 15e (8,38 g, 35 mmol) en etanol seco (70 ml) se añadió (S, S) -Et-DUPHOS Rh(COD)OTf (51 mg, S/C=496) . La mezcla se puso bajo 2,1 atmósferas de hidrógeno (después de 4 ciclos de vacío-H2) y se agitó en un agitador Parr durante 2 h. La mezcla resultante se evaporó a sequedad para obtener el compuesto crudo 15f, que se usó en la subsiguiente etapa sin purificar. E. A una solución de 2 -acetamido-8-nonenoato de (S) -etilo crudo 15f (7,3 g, 30,3 mmol) en THF (100 ml), se añadieron Boc20 (13,2 g, 2 eq.) y DMAP (740 mg, 0,2 eq.), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2,5 h. Subsiguiente-mente, la mayoría del disolvente THF fue evaporado, se diluyó la mezcla cruda con CH2Cl2 y se lavó con HCl ÍN con el fin de eliminar el DMAP. La capa orgánica se extrajo más intensamente con solución acuosa saturada de NaHC03, se secó con Na2S04 anhidro y se concentró bajo vacío. El producto se diluyó des-pues con THF (50 ml ) y agua (30 ml) , se añadió LiOH*H20 (2,54 g, 2 eq.) y la mezcla resultante se agitó a TA durante 25 h (la terminación de la hidrólisis se confirmó mediante TLC) . La mezcla de reacción se concentró bajo vacío para eliminar la mayor parte del disolvente THF y se diluyó con CH2Cl2. La solución resultante se lavó con HCl ÍN, se secó con Na2S04 anhidro y se concentró bajo vacío. Para eliminar impurezas menores y el Boc20 en exceso, el producto crudo fue purificado mediante cromatografía de resolución rápida (usando un gradiente de disolvente de 100% de hexano - 100% de EtOAc co-mo eluyente) . El compuesto del título 15g se obtuvo con una elevada pureza en forma de un aceite amarillo pálido (5,82 g, 71% de rendimiento). *H NMR (DMSO, 400 MHz): d 7,01 (d, J = 8 Hz, 1H) , 5,79 (tdd, Jt = 6,7 Hz, Jd = 17,0, 10,2 Hz, 1H) , 5,00 (md, Jd = 17,0 Hz, 1H) , 4,93 (md, Jd = 10,2 Hz, 1H) , 3,83 (m, 1H) , 2,00 (q, J = 6,9 Hz, 2H) , 1,65-1,5 (m, 2H) , 1,38 (s, 9H) , 1,35-1,21 (m, 6H) .

EJEMPLO 15A Síntesis alternativa de ácido (2S) -N-Boc-amino-non-8-enoico (15g) : 15h 15i A. A una suspensión agitada de tiras de Mg cortadas finamente (0,55 g, 22,5 mmol) en THF seco (30 ml) que contiene dibromoetano (0,1 ml) , se añadió gota a gota 8 -bromo- 1-octeno (15 h, 2,52 ml, 15 mmol) a lo largo de un periodo de 15 min [la reacción es ligeramente exotérmica] . Después de 30 min, la mezcla se calentó a 38°C durante 1 h y después se enfrió a -78°C antes de añadirla mediante una cánula sobre una can-tidad en exceso de C02 sólido. La mezcla se diluyó con dietil-éter (100 ml) y la solución se lavó con salmuera (2 x 50 ml) , se secó sobre MgS04 y se evaporó. Se obtuvo un aceite crudo que se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando EtOAc al 15% en hexanos como eluyente para dar el com-puesto 15i con un 62% de rendimiento (1,44 g) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): dl, 31-1, 42 (m, 6H) , 1,60-1,69 (m, ee 2H) , 2,02-2,09 (m, 2H) , 2,35 (t, J = 8,3 Hz, 2H) , 4,99 (dm, J = 10,0 Hz, 1H) , 5,04 (dm, J = 17,0 Hz, 1H) , 5,75-5,86 (m, 1H) . B. A una solución vigorosamente agitada del ácido carboxí -lico 15i (1,36 g, 8,7 mmol) en THF anhidro (70 ml) a -78°C, se añadieron Et3N recién destilado (1,6 ml ; 11,3 mmol) y cloruro de pivaloílo (1,18 ml, 9,58 mmol) mediante una jeringa bajo condiciones anhidras. La mezcla se agitó a -78°C durante 15 min y después a 0°C durante 45 min. La mezcla se enfrió de nuevo a -78°C y después se transfirió mediante una cánula a una solución anhidra de sal de litio de 4(S)-4- (fenilmetil) -2 -oxazolidinona en THF a -78°C; la sal de litio del reactivo de oxazolidinona había sido preparada previamente mediante la adición lenta de n-BuLi (2,00 M en hexanos, 7,85 ml, 15,7 mmol) a una solución en THF (20 ml) de la oxazolidinona (2,78 g, 15,7 mmol) en THF a -78°C. La mezcla de reacción se agitó a -78°C durante 15 min y después a TA durante 1,5 h. Finalmente, fue apagada con una solución acuosa de bisulfato sódico (100 ml de 1M) y el THF se evaporó a los 3/4 de su volumen inicial. El residuo se extrajo con EtOAc (2 x 150 ml) y las capas orgánicas mezcladas se lavaron con solución de NaHC03 al 5% (3 x 50 ml) y salmuera (2 x 50 ml) , se secaron sobre MgS04 y se evaporaron. El aceite crudo resultante se cromatografió en gel de sílice usando EtOAc al 15% en hexanos para obtener el compuesto 15j con un 68% de rendimiento (1,88 g) . :H NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,35-1,47 (m, 6H) , 1,67-1,74 (m, 2H) , 2,02-2,09 (m, 2H) , 2,65 (dd, J = 13,4 y 9,9 Hz, 1H) , 2,84-3,02 (m, 2H) , 3,31 (dd, J = 13,4 y 3,2 Hz, 1H) , 4,13-4,22 (m, 2H) , 4,62-4,71 (m, 1H) , 4,93 (d, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,00 (dd, J = 17,2 y 1,6 Hz, 1H) , 5,75-5,84 (m, 1H) , 7,18-7,38 (m, 5H) . C. A una solución agitada de KHMDS (0,8 M THF, 22 ml, 17,5 mmol) en THF seco (50 ml) a -78°C se añadió por medio de una cánula una solución del derivado de ácido 15j (3,25 g, 10,30 mmol) en THF seco (40 ml) a -78°C. La mezcla se agitó a -78°C durante 45 min. A esta mezcla se añadió una solución de trizilazida (3,67 g, 11,85 mmol) en THF seco (40 ml) a -78°C. La mezcla se agitó a -78°C durante 3 min y después se apagó con ácido acético (5 ml) . Subsiguientemente, se agitó a TA durante 1 h y 45 min y finalmente a 40°C durante 15 min. La mayor parte del THF se evaporó. El residuo se recogió en EtOAc (100 ml) y la solución orgánica se lavó con H20 (50 ml) , NaHC03 al 5% (3 x 50 ml) y salmuera (50 ml) , se secó con MgS04 y se evaporó. El aceite obtenido se cromatografió sobre gel de sílice usando hexano/CH2Cl2 (1/1) como eluyente para dar el compuesto 15k (2,47 g, rendimiento 67%). :H NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,32-1,45 (m, 6H) , 1,45-1,6 (m, 1H) , 1,75-1,88 (2, 2H, rotámeros), 2,01-2,11 (m, 2H) , 2,82-2,87 (m, 1H) , 3,33 (dd, J = 13,4 y 3,2 Hz, 1H) , 4,10-4,28 (m, 2H) , 4,62-4,72 (m, 1H) , 4,90-5,05 (m, 3H) , 5,73-5,88 (m, 1H) , 7, 17-7,38 (m, 5H) . D. A una solución agitada de SnCl2 anhidro (2,61 g, 13,8 mmol) en MeOH anhidro (80 ml) se añadió mediante cánula una solución de la azida 15k (2,45 g, 6,9 mmol) a 0°C en MeOH anhidro (20 ml) . La mezcla se agitó a TA durante 4 h. El MeOH fue evaporado y el material espumoso obtenido se recogió en dioxano/H20 (100 µL/20 µL) y se trató con Boc20 (3,0 g, 13,8 mmol) y NaHC03 (2,89 g, 34,5 mmol) (el pH se ajusta en 8 con más NaHC03 si es necesario) y la mezcla se agitó a TA durante 16 h. Parte del dioxano se evaporó (aprox. 50%) y el residuo se extrajo dos veces con EtOAc. La solución orgánica se lavó con salmuera (2 x 50 ml) , se secó y se evaporó. El residuo obtenido fue cromatografiado sobre gel de sílice usando 20-25% de EtOAc en hexano como eluyente para dar el compuesto 151 (1,75 g, rendimiento 60%). 'H NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,27-1,53 (m, 6H) , 1,46 (s, 9H) , 1,80 (m, 1H) , 2,00-2,08 (m, 1H) , 2,80 (t, J = 12,1 Hz, 1H) , 3,34 (d, 14,3 Hz, 1H) , 4,17-4,23 (m, 2H) , 4,60-4,66 (m, 1H) , 4,93 (d, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,05 (dd, J = 17,2 y 1,9 Hz, 1H) , 5,13 (bs, 1H) , 5,38-5,43- (m, 1H) , 5,74-5,84 (m, 1H) , 7,22-7,36 (m, 5H) .

E. A una solución agitada a 90° del derivado N-Boc 151 (1,74 g, 4,04 mmol) en THF/H20 (75 ml/15 ml) se añadieron H202 (30% v/p, 2,05 ml, 16,2 mmol) y LiOH-H20 (0,34 g, 8,1 mmol) y la solución se agitó a 0o durante 1 h. La reacción fue apagada con Na2S03 (2,24 g en H20, 15 ml, 17,8 mmol) . El pH se ajustó en 4-5 con solución acuosa de ácido cítrico al 10% y la mezcla se diluyó con EtOAc. La fracción acuosa se extrajo una vez más con EtOAc y la solución orgánica se lavó dos veces con salmuera, se secó y se evaporó. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 20% de hexano en EtOAc como eluyente, para dar el ácido carboxílico libre 15g (0,76 g, rendimiento 70%). Este compuesto era idéntico en todos sus aspectos al obtenido en el Ejemplo 15.

EJEMPLO 16 Síntesis del éster metílico del ácido (2S) -N-Boc-amino-5-oxo-non-8-enoico (16d) : C02H 16a 16C B.

BocHN C02CH3 16d Esta síntesis se basa en la metodología de T. Tsuda et al., J. Am. Chem. Soc. , 1980, 102, 6381-6384. A. A una solución bien agitada del éster monoalílico del ácido malónico (1,50 g, 10,4 mmol) en THF seco bajo N2 (20 ml) a -78°C, se añadió gota a gota n-Bu2Mg (0 , 9M/hexano, 5,8 ml, 5,2 mmol) durante un periodo de 5 min. La suspensión pesada se agitó después a TA durante 1 h y se evaporó a sequedad (liberación de vacío bajo N2) . La sal sólida de Mg 16b fue secada bajo vacío durante 1 h. El derivado de ácido glutámico 16a se mezcló primero con 1, 1' -carbonil-diimidazol (1,65 g, 10,21 mmol) en THF anhidro, y la mezcla se agitó a TA durante 1 h para activar el resto ácido libre. Subsiguientemente, el derivado de ácido glutámico activado fue canulado en una solución de la sal de Mg 16b y la mezcla de reacción obtenida se agitó a TA durante 16 h. Después se diluyó con EtOAc y la solución orgánica fue lavada con HCl 0,5N enfriado en hielo, se trató con salmuera, se secó y se evaporó. El residuo obtenido fue cromatografiado sobre gel de sílice usando 35-40% de EtOAc en hexano como eluyente para dar el compuesto 16c (1,85 g, rendimiento 53%) . *H NMR (CDC13, 400 MHz) d 1,44 (s, 9H) , 1,85-1,95 (m, 1H) , 2,12-2,22 (m, 1H) , 2,58-2,74 (m, 2H) , 3,48 (s, 2H) , 3,74 (s, 3H) , 4,24-4,34 (m, 1H) , 4,52 (dm, J = 5,7 Hz, 2H) , 5,09 (m, 1H) , 5,25 (dm, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,34 (dm, J = 17,2 Hz, 1H) , 5,91 (m, 1H) . B. A una solución agitada de tetraquis (trifenilfosfina) Pd(0) (0,116 g, 5% en moles, 0,1 mmol) en DMF seca (7 ml) se añadió (mediante jeringuilla y bajo una atmósfera de N2) el diéster 16c (0,687 g, 2 mmol) en DMF seca (3 ml) . La mezcla se agitó a TA durante 3,5 h. La DMF fue evaporada bajo presión reducida y el residuo se diluyó con EtOAc (20 ml) . La solución en EtOAc se lavó con HCl 0 , 5N enfriado con hielo (5 ml) , y con salmuera (10 ml) , se secó y se evaporó. El residuo fue cromatografiado sobre gel de sílice usando 15-20% de EtOAc en hexano como eluyente para dar el compuesto 16d (0,253 g, rendimiento 42%). XH NMR (CDC13, 400 MHz) d 1,44 (s, 9H) , 1,84-1,94 (m, 1H) , 2,08-2,22 (m, 1H) , 2,33 (dd, J = 14,0 y 7,3 Hz, 2H) , 2,45-2,55 (m, 4H) , 3,74 (s, 3H) , 4,28 (bm, 1H) , 4,98 (dm, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,03 (dm, J= 17,2 Hz, 1H) , 5,00-5,10 (m, 1H) , 5,74-5,85 (m, 1H) .

EJEMPLO 17 Síntesis de ácido (2S, 5R) -N-Boc-2-amino-5-metil-non-8-enoico (17f) Nal04 THF H,0 A,B,C,D. (R) -(+) -citronelal 17a disponible comercialmente fue convertido primero en el derivado de aminoácido 17b siguiendo las mismas etapas de síntesis que las descritas anteriormente en el Ejemplo 15 para la conversión de aldehido 15d en el producto intermedio de aminoácido 15f. E. El compuesto 17b (0,675 g, 5,6 mmol) se disolvió en una mezcla de t-BuOH/acetona/H20 (1:1:1, 18 ml) y se puso en un baño de hielo (0°C) . Se añadieron consecutivamente NMMO (0,789 g, 6,74 mmol, 1,2 eq.) y Os04 (2,5% p/p en t-BuOH, 0,7 ml, 0,067 mmol, 0,012 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h. La mayor parte de la acetona se eliminó por evaporación bajo vacío y después se extrajo la mezcla con EtOAc. La capa orgánica se lavó más con H20 y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a sequedad. El diol 17c se obtuvo con alta pureza después de cromatografía en columna de resolución rápida usando 1% de EtOH en EtOAc como eluyente, con un 77% de rendimiento (0,575 g) . F. A una solución de diol 17c (0,575 g, 1,73 mmol) en THF/H20 (1:1, 20 ml) a 0°C se añadió NaI04 (0,48 g, 2,25 mmol, 1,3 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 3,5 h. La mayor parte del disolvente de THF fue subsiguientemente eliminado por evaporación bajo vacío y la mezcla restante se extrajo con EtOAc (2x100 ml) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron adicionalmente con solución acuosa de ácido cítrico al 5% (2x20 ml) , solución acuosa de NaHC03 al 5% (20 ml) y con salmuera (2x50 ml) , y después la solución en EtOAc se secó bajo MgS04 anhidro y se evaporó a sequedad bajo vacío. El producto intermedio de aldehido 17d (0,47 g de producto crudo) fue usado en la etapa siguiente sin más purificación. G. A una solución de Ph3PCH3Br (925 mg, 2,6 mmol) en tolueno anhidro (15 ml) , se añadió KHMDS (0,5 M en tolueno, 5,2 ml , 2,6 mmol) y la suspensión amarilla formada se agitó a TA durante 30 min bajo N2. Después de ese periodo, la suspensión fue primero enfriada a 0°C, se añadió una solución del aldehido 17d (0,47 g, 1,73 mmol, disuelto en 15 ml de THF anhidro) mediante una jeringa, y se dejó calentar la mezcla a TA. Después de agitar a TA durante 1 h, la mayor parte del THF se eliminó por evaporación bajo vacío, se añadió a la mezcla EtOAc (100 ml) , y la capa orgánica se lavó con H20 (30 ml), solución acuosa de NaHC03 al 5% (30 ml) y salmuera (30 ml) . La solución en EtOAc se secó después sobre MgS04 anhidro y se evaporó a sequedad bajo vacío. El compuesto puro 17e fue aislado después de purificación por cromatografía en columna de resolución rápida sobre gel de sílice usando hexano: EtOAc (3:2) como eluyente, con un rendimiento del 63% (0,29 g) para las dos últimas etapas. La hidrólisis del éster etílico y el intercambio simultáneo del grupo protector de N-acetilo por un Boc en el intermedio 17e para obtener el compuesto 17f se llevó a cabo usando el mismo procedimiento que se indicó para la conver-sión de compuesto 15f en 15g (17f, 310 mg, cuantitativo) .

XH NMR (CDC13, 400 MHz) d 0,88 (d, J = 6,4 Hz, 3H) , 1,18-1,28 (m, 2H) , 1,35-1,48 (m, 3H) , 1,45 (s, 9H) , 1,64-1,74 (m, 1H) , 1,81-1,89 (m, 1H) , 1,94-2,12 (m, 2H) , 4,28 (bd, J = -3,2 Hz, 1H) , 4,93 (dm, J = 11,1 Hz, 1H) , 5,00 (dm, J = 16,8 Hz, 1H) , 5,74-5,84 (m, 1H) .

EJEMPLO 18 Síntesis de N-Boc-O-alil- (L) -treonina (18d) A. Se disolvió parcialmente Boc- (L) -treonina 18a (500 mg, 2,28 mmol) en CH2Cl2/MeOH (8 ml/0,5 ml , respectivamente) a 0°C. Se añadió lentamente una solución de diazometano en dietil-éter hasta que persistió el color amarillo, indicando la presencia de diazometano en exceso. Al evaporar los disolventes, se obtuvo éster metílico 18b crudo en forma de un aceite blanco turbio (0,534 g) . B. El producto intermedio 18b (311 mg, 1,33 mmol) se disolvió después en dietil-éter anhidro (8 ml) , se añadió Ag20 (341 mg, 1,47 mmol) y tamices moleculares de 4Á recién activados (1 g) . Finalmente, se añadió yoduro de alilo (134 µl, 1,47 mmol) al matraz de reacción, y la mezcla se agitó a reflujo. Se añadieron dos porciones más de yoduro de alilo (45 µl, 0,50 mmol, cada vez) después de un periodo de 20 h y 30 h, y se siguió agitando durante un total de 36 horas. Después, la mezcla se filtró a través de celite y se purificó mediante cromatografía en columna rápida sobre gel de sílice, usando EtOAc/hexano (1:4) como eluyente, para dar 73 mg (27% de rendimiento) de compuesto 18c como un aceite transparente. XH NMR (CDC13, 400 MHz) d 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 1,45 (s, 9H) , 3,75 (s, 3H) , 3,82-3,87 (m, 1H) , 3,99-4,07 (m, 2H) , 4,29 (dd, J = 9,5 y 2,5 Hz, 1H) , 5,14 (dm, J = 10,5 Hz, 1H) , 5,21 (dm, J = 17,2 Hz, 1H) , 5,75-5,84 (m, 1H) . C. El compuesto éster 18c (99 mg, 0,362 mmol) se disolvió en una mezcla de THF/MeOH/H20 (2:1:1,4 ml) y se añadió LiOH-H20 (61 mg, 1,45 mmol). La solución se agitó a TA durante 2 h y después se acidificó con HCl ÍN a pH aprox. 3 antes de eliminar los disolventes bajo vacío. El aceite resultante, compuesto 18d, se usó tal cual para la síntesis de inhibidores macrocíclicos.

EJEMPLO 19 Síntesis de ácido (2S, 3S) -N-Boc-2-amino-3 (mercaptoalil)buta-noico (19e) M, 1,5 h alilo B?cHNv ^CO,H Na0H 0.2 M. 24 h BocHN^CO.CH, H3C "S" A. El compuesto 19a (9,1 mmol) se disolvió en piridina (5 ml) y la solución se enfrió a 0°C en un baño de hielo, se añadió cloruro de tosilo (2,3 g, 11,8 mmol, 1,3 eq. ) en pequeñas porciones, y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 24 h. Después de ese periodo, la mezcla de reacción se repartió entre dietil-éter (300 ml) y H20 (100 ml) . La capa etérea se siguió lavando con HCl 0,2 N (6x100 ml) y salmuera (100 ml) , se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró a sequedad bajo vacío. La purificación del material crudo mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando hexano/EtOAc (gradiente de relación 8:2 a 7:3) como eluyente, condujo al aislamiento de derivado de tosilo 19b con un 85% de rendimiento (3,05 g) .

B. A una solución de producto intermedio 19b (775 mg, 2 mmol) en DMF anhidra (2,5 ml) se añadió tioacetato potásico (365 mg, 3,2 mmol, 1,6 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 24 h. La mayor parte de la DMF fue después evaporada bajo vacío y la mezcla que quedaba se repartió entre EtOAc y H20. La capa acuosa se reextrajo con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 anhidro y se evaporaron a sequedad. La purificación del material crudo mediante cromatografía en columna de reoslución rápida usando hexano/EtOAc (relación 4:1) como eluyente, condujo al aislamiento del compuesto 19c con un rendimiento del 80% (465 mg) . C. A una solución de tioéster 19c (465 mg) en H20/EtOH (relación 3:5, 8 ml) , se añadió una solución acuosa de NaOH 0,2 M (2,4 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 1,5 h. Después se añadió yoduro de alilo (0,292 ml, 3,2 mmol, 2 eq.) y se siguió agitando a TA durante 30 min adicionales. La mezcla de reacción se concentró a la mitad de su volumen original y después se extrajo con EtOAc. La capa acuosa se acidificó a pH aprox. 3 con HCl acuoso 0,5N frío y se re-extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 anhidro y se evaporaron a sequedad bajo vacío. La mezcla de reacción en crudo contenía al menos cuatro productos; todos los productos fueron aislados después de cromatografía en columna de resolución rápida sobre gel de sílice, usando hexano/EtOAc (gradiente de relación 9:1 a 3:1) . La estructura del compuesto menos polar (TLC Rf = 0,68 en hex/EtOAc 4:1) correspondía a la del producto deseado 19d (83 mg, 18% de rendimiento) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,24 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,46 (s, 9H) , 3,13-3,19 (m, 2H) , 3,24-3,29 (m, 1H) , 3,77 (s, 3H) , 4,50 (dd, J = 8,6 y 3,8 Hz, 1H) , 5,12 (d, J = 12,4 Hz, 1H) , 5,15 (dd, J = 18,4 y 1,3 Hz, 1H) , 5,22 (bd, J = 7,6 Hz, 1H) , 5,75-5,85 (m, 1H) . D. Una solución del éster metílico 19d (83 mg, 0,287 mmol) en MeOH/H20 (3:1,4 ml) se mezcló con solución acuosa de NaOH (0,2N, 1,3 ml, 0,26 mmol) durante 24 h a TA y durante 1 h a 40°C. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl acuoso frío (HCl 0,5 N, a 0°C, pH = 4-5), el MeOH se eliminó bajo vacío y la mezcla acuosa restante se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó sobre MgS04 y se evaporó a sequedad para obtener el compuesto 19e. El compuesto 19e se usó para la síntesis final de inhibidores sin más purificación posterior.

EJEMPLO 20 Síntesis de ácido (S) -N-Boc-2-amino-3-metil-3- (l-mercapto-4-butenil)butanoico (20c) 2) Boc¡? A. Se disolvió N-penicilamina 20a (448 mg, 3 mmol) en DMF/DMSO (relación 5:1, 6 ml) , se añadieron 4-bromopenteno (0 , 46 ml , 4,5 mmol , 1 , 5 eq. ) y CsOH*H20 (1,0 g, 6 ml , 2 eq. ) , y la mezcla de reacción se agitó a TA. Después de 24 h, se añadió Boc20 (820 mg, 3,75 mmol, 1,25 eq.) a la mezcla y se siguió agitando durante 12 h adicionales. La DMF se eliminó posteriormente bajo vacío, la mezcla restante se diluyó con HCl acuoso 0,5N frío ajustando el pH en aprox. 4-5, y después se extrajo con EtOAc (2x50 ml) . La capa orgánica se lavó con salmuera (2x) , se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a sequedad para dar el ácido carboxílico crudo 20b. B. La purificación de 20b resultó ser difícil, por lo que el producto crudo se trató primero con diazometano para formar el correspondiente éster metílico 20c, y después se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando hexano/EtOAc (9:1) como eluyente, para obtener 190 mg (20% de rendimiento) del éster metílico 20c puro. *H NMR (400 MHz, CDCl3) : d 1,35 (s, 3H) , 1,37 (s, 3H) , 1,44 (s, 9H) , 1,59-1,67 (m, 2H) , 2,11-2,17 (m, 2H) , 2,51-2,60 (m, 2H) , 3,74 (s, 3H) , 4,29 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 4,98 (dm, J = 10,5 Hz, 1H) , 5,03 (dm, J = 19 Hz, 1H) , 5,35 (bd, J = 7 Hz, 1H) , 5,72-5,83 (m, 1H) . C. El éster se disolvió posteriormente en THF/MeOH/H20 (2:2:1,5 ml), se añadió LiOH»H20 (50 mg, 2,0 mmol, 2 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a 40°C durante 4 h para hidrolizar el éster 20c, para dar de nuevo el ácido 20b. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 0,5N a pH=4-5, el THF y el MeOH se evaporaron a sequedad y la solución acuosa restante se extrajo con EtOAc. La capa de EtOAc se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a sequedad para dar el compuesto 20b, que se usó en la subsiguente síntesis de inhibidores macrocíclicos sin más purificación.

PRODUCTOS INTERMEDIOS DE DIPEPTIDO Y TRIPEPTIDO ACICLICO El procedimiento general para reacciones de acoplamiento hechas en solución, y ejemplos específicos de las mismas, se describen en los documentos WO 00/09543 y WO 00/09558. Estos procedimientos han sido utilizados para la síntesis de los dipéptidos intermedios 26c, 30a y los tripéptidos 23a, 24a, 31a, 32a y 33a.

EJEMPLO 21 Síntesis del tripétido acíclico 21e A. A una solución del derivado de prolina 21a (preparado a partir de Boc-4 (R) -hidroxiprolina disponible comercialmente y 4-cloro-quinolina como se describe en los documentos WO 00/05543 y WO 00/09558) (1,38 g, 3,68 mmol) y el homoalil-ACCA lf crudo (aprox. 3,35 mmol) en CH2C12 (10 ml) , se añadieron sucesivamente NMM (1,21 ml, 10,05 mmol) y HATU (1,53 g, 4,02 mmol) y la suspensión se agitó a TA durante 18 h. Después de ese tiempo, el disolvente fue evaporado y la mezcla de reacción cruda se redisolvió en EtOAc (30 ml) . La solución se lavó con solución acuosa de NaHC03 al 5% (2 x 10 ml) y salmuera (10 ml) , y se secó sobre MgS04 y se evaporó. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía sobre gel de sílice usando dietil-éter al 8% en EtOAc como eluyente para obtener el diastereoisómero del compuesto 21b con un 20% de rendimiento (no se ha determinado la estereoquímica absoluta) . XH NMR (CDC13, 400 MHz) d 0,93 y 1,01 (t, J = 8,3 Hz, 1H, rotámeros en relación 3:7), 1,14-1,35 (m, 2H) , 1,44 (s, 9H) , 1,45 (s, 9H) , 1,50-1,82 (m, 4H) , 2,08-2,24 (m, 2H) , 2,32 (b s, 0,7H), 2,63 (b s, 0,75 H) , 2,93 (b s, 0,75H), 3,16 (m, 0,25H), 3,77 (b s, 1,5H), 3,88 (b s, 0,5H), 4,4-4,55 (m, 1H) , 4,98 (d, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,03 (dd, J = 17,2 y 1,6 Hz, 1H) , 5,24 (b s, 1H) , 5,75-5,88 (m, 1H) , 6,57 y 6,78 (2 b S, 1H, 2 rotámeros), 7,42-7,58 (m, 3H) , 7,63-7,73 (m, 2H) , 8,04 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , '8,11 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 8,74 (d, J = 5,1 Hz, 1H) . B. A una solución del dipéptido 21b (137 mg, 0,248 mmol) en CH2C12 seco se añadió una solución de HCl en dioxano (4M, 4 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 1,5 h. Después se evaporó el disolvente y el residuo se secó bajo vacío elevado para dar el aminoácido libre. La mezcla se disolvió en dietil-éter/MeOH (3 µl/2 µl) y se trató con un ligero exceso de diazometano disuelto en dietil-éter. Después de 30 min, el diazometano en exceso se destruyó con la adición de HCl (4M en dioxano) y la mezcla se evaporó a sequedad para obtener la sal HCl del compuesto 21c, que se usó en la siguiente etapa sin purificar. C. A una suspensión agitada del dipéptido crudo 21c (0,23 g, 0,48 mmol) en CH2C12 (25 ml) se añadió sucesivamente el ácido (2S) -N-Boc-amino-hept-6-enoico 21d (0,151 g, 0,62 mmol), NMM (210 µl, 1,91 mmol) y HATU (0,236 g, 0,62 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 16 h (el pH se ajustó aprox. en 8 con NNM después de 1 h en caso necesario) . El CH2C12 se evaporó, el residuo se recogió en EtOAc (50 ml) y la solución orgánica se lavó con solución de ?aHC03 al 5% (2 x 20 ml) y salmuera (2 x 20 ml) , se secó y se evaporó. El compuesto crudo obtenido fue cromatografiado en gel de sílice (50 ml , EtOH al 2%/EtOAc) para dar el compuesto 2le (0,319 g, rendimiento 46%) . H ?MR (CDC13, 400 MHz, rotámeros en relación 1:6) desplazamientos químicos del rotámero principal d 1,21-1,27 (m, 1H) , 1,36 (s, 9H) , 1,45-1,81 (4m, 7H) , 2,20-2,22 (m, 4H) , 2,28-2,37 (m, 1H) , 2,90-2,99 (m, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 3,94-3,98 (m, 1H) , 4,29 (b d, J = 9,9 Hz, 1H) , 4,46-4,50 (m, 1H) , 4,81 (dd, J = 8,3 y 5,4 Hz, 1H) , 4,92-5,06 (m, 4H) , 5,16 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 5,37 (m, 1H) , 5,70-5,84 (m, 2H) , 6,82 (d, J = 5,1 Hz, 1H) , 7,47-7,55 (m, 2H) , 7,71 (dt, J = 7,0 y 1,3 Hz, 1H) , 8,03 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 8,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 8,78 (d, J = 5,1 HZ, 1H) .

PEPTIDOS MACROCICLICOS EJEMPLO 22 Procedimiento general para la macrociclización mediante metátesis de olefina En todos los casos, el tri-péptido dieno se disolvió en CH2C12 a una concentración de 0,01 M, y la solución fue desoxigenada borboteando argón (aprox. 1 h para un volumen de 500 ml) . Se añade una solución de catalizador (5-30% en moles di-suelto en una pequeña cantidad de CH2C12 desgasificado) y la mezcla de reacción se somete a reflujo hasta que todo el material de partida se convirtió en el producto o los productos, según se indica por TLC y HPLC. Las mezclas de reacción crudas fueron concentradas a continuación casi a sequedad y se filtraron a través de una corta almohadilla de gel de sílice, eluyendo primero con CH2C12 para eliminar la mayor parte del catalizador, y después con EtOAc para eluir todos los productos macrocíclicos (la mayor parte del tiempo como un único diastereoisómero) . El producto o los productos crudos de cada reacción se analizan mediante HPLC quiral en una columna CHIRALCEL OJ-R (adquirida de Chiral Technologies Inc., 0,46 f x 15 cm) usando una mezcla de disolventes isocrática de 70% de H20 + 0,06% de TFA - 30% de CG3CN + 0,06% de TFA a 205 nm. El o los productos macrocíclicos principales fueron caracterizados totalmente por los datos de: ^?, COSY, TOCSY y ROESY NMR con el fin de confirmar su estructura y estereoquímica .

EJEMPLO 23 Síntesis del intermedio macrocíclico (23b) Una solución de dieno 23a (4,0 g, 7,88 mmol) en CH2C12 seco (800 ml, Aldrich, anhidro) fue desoxigenada burbujeando Ar durante 2 h. Después se añadió catalizador de Hoveyda (262 mg, 0,434 mmol, 5,5% en moles) en forma de un sólido, y la mezcla de reacción se calentó a reflujo bajo un balón de Ar. Después de 28 h, la solución de color rojo-naranja se evaporó para dar un sólido amorfo y después se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida sobre gel de sílice. El sistema inicial de disolventes fue 10% de EtOAc en CH2C12. Una vez eluido el catalizador de la columna, el disolvente se cambió por EtOAc puro. La elución del catalizador de la columna se evidenció por su color. El producto macrocíclico 23b fue aislado en forma de espuma incolora que se redisolvió en CH2Cl2/hexano (aprox. 1:2). La evaporación del disolvente proporcionó un polvo blanco (3,362 g, 89% de rendimiento) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,20-1,50 (m, 6H) , 1,43 (s, 9H) , 1,53 (dd, J = 9,5 y 5,4 Hz, 1H) , 1,61-1,70 (m, 1H) , 1,76-1,90 (m, 2H) , 2,05-2,26 (m, 4H) , 2,45 (d, J = 14,3 Hz, 1H) , 3,67 (s, 3H) , 3,71 (d, J = 11,1 Hz, 1H) , 3,90 (dd, J = 11,1 y 4,3 Hz, 1H) , 4,43-4,53 (m, 2H) , 4,76 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 4,86 (b d, J = 9,8 Hz, 1H) , 5,20-5,23 (m, 2H) , 5,57 (dt, J = 7,0 y 9,8 Hz, 1H) , 7,32 (b s, 1H) .

EJEMPLO 24 Síntesis del intermedio macrocíclico (24b) : Una solución de dieno 24a (2,76 g,' 3,82 mmol) en CH2C12 anhidro (600 ml , anhidro) fue desoxigenada burbujeando Ar durante 1,5 h. Se añadió mediante una cánula una solución de catalizador de Hoveyda (117 mg, 0,19 mmol, 0,05 eq.) en CH2C12 anhidro y desgasificado (8 ml) , y la mezcla de reacción se agitó a reflujo bajo un balón de Ar. Después de 20 h, la mezcla de reacción estaba completa aproximadamente al 50%, momento en el cual se añadió una segunda porción de catalizador (117 mg) , y se siguió agitando durante 16 h más. Después se concentró la solución a aproximadamente 100 ml, se aplicó a la parte superior de una almohadilla de gel de sílice (6 x 10 cm) y el catalizador se recuperó primero eluyendo con CH2C12. El compuesto 24b se retiró por lavado de la almohadilla de sílice con MeOH al 3% en EtOAc y se volvió a purificar mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando EtOAc/hexano (2:1) para obtener un 70% de rendimiento de un sólido blanco con un ligero tono oliva (1,85 g, 94% de pureza por HPLC) . *H NMR (CDC13, 400 MHz) : d 8,69 (s, 1H) , 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,50-7,44 (m, 2H) , 7,17 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H) , 7,04 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 5,60-5,56 (m, 1H) , 5,52 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 5,25 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,59 (d, J = 11 Hz, 1H) , 4,44 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,05-3,98 (m, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 3,92 (s, 3H) , 3,89-3,82 (m, 1H) , 3,55 (s, 3H) , 2,64-2,53 (m, 1H) , 2,46 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 2,40-2,31 (m, 1H) , 2,21 (dd, J = 8,9 Hz, 1H) , 1,78-1,65 (m, 2H) , 1,55 (dd, J = 4,8 Hz, 1H) , 1,485 (dd, J = 4,8 Hz, 1H) , 1,41-1,30 (m, 7H) , 1,16 (s, 9H) . MS; es*: 795,4 (M+H)+.

EJEMPLO 25 Síntesis de los compuestos 202 y 203 (Tabla 2) compuesto 20 compuesto 202 El compuesto de dieno 21e (0,130 g, 0,205 mmol) fue ciclizado usando cantidades catalíticas de dicloruro de bis- (triciclohexilfosfina) bencilideno-rutenio IV (catalizador de Grubb, supra) (52 mg, 0,064 mmol) en CH2C12 (60 ml) bajo reflujo durante 2 h, para dar, después de cromatografía en gel de sílice (50 ml , 3% de EtOH/EtOAc) , el compuesto 25a (60,1 mg, rendimiento 48%). XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,22-1,30 (m, 2H) , 1,35 (s, 9H) , 1,44-2,35 (m, 13H) , 3 , 07-3 , 14 y 3 , 16-3 , 24 (2m, 1H, rotámeros en relación 1:3) , 3,69 (s, 3H) , 3,96-4,04 (m, 1H) , 4,42-4,50 (m, 1H) , 4,95-5,04 (m, 1H) , 5,05-5,15 (m, 1H) , 5,20-5,30 (m, 1H) , 5,55-5,65 (m, 1H) , 6,75-6,79 (2d, J = 5,4 Hz, 1H, rotámeros en relación 1:3), 7,36 (s, 1H) , 7,46-7,50 (m, 1H) , 8,03 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 8,13 y 8,17 (2d, J = 8,0 Hz, 1H, rotámeros en relación 1:3), 8,77 (d, J = 5,1 Hz, 1H) . B. El resto éster del compuesto macrocíclico 25a (0,0156 g, 0,026 mmol) se hidrolizó con LiOH*H20 (8,7 mg, 0,206 mmol) en THF/MeOH/H20 (4 ml/2 ml/2 ml) . El producto crudo fue purificado mediante HPLC en fase inversa C18 en una columna Whatman (Partisil 10,0DS3) 50/2,4 cm usando un gradiente de disolven-te de 5% de CH3CN acuoso a 100% de CH3CN, para obtener el compuesto puro 202 en forma de sólido blanco amorfo (11,8 mg) . XH NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,12 (s, 9H) , 1,20-1,24 (m, 2H) , 1,32-1,40 (m, 3H) , 1,58-1,62 (m, 2H) , 1,68-1,78 (m, 3H) , 1,95-2,02 (m, 1H) , 2,08-2,18 (m, 2H) , 2,42-2,59 (m, 2H) , 3,97-4,00 (b d, J = 9,8 Hz, 2H) , 4,47 (t, J = 8,6 Hz, 1H) , 4,58 (d, J = 11,8 Hz, 1H) , 5,22-5,29 (m, 1H) , 5,46-5,54 (m, 1H) , 5,66 (s, 1H) , 7,12 (d, J = 6,0 Hz, 1H) , 7,49 (d, J = 3,5 Hz, 1H) , 7,68 (dd, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,98 (dd, J = 7,0 Hz, 1H) , 8,08 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 8,35 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 9,08 (d, J = 5 Hz, 1H) . C. El compuesto macrocíclico 25a (20 mg, 0,033 mmol) en CH2C12 seco (1 ml) se agitó en presencia de HCl 4M/dioxano (5 ml) durante 1 h. La mezcla se evaporó y se secó cuidadosamen-te. El residuo se redisolvió en CH2C12/DMF (3 ml/1 ml) y se trató con NMM (14,5 µl, 0,132 mmol) y anhídrido acético (7,0 µl, 0,073 mmol) y se agitó a TA durante 14 h. La mezcla se evaporó y se secó en alto vacío. El residuo se disolvió después en una mezcla de THF/MeOH/H20 (4 ml/2 ml/2 ml) y se agitó durante la noche con LiOH*2H20 (11 mg, 0,264 mmol) . El residuo aislado después de acidificar a pH = 3 con HCl ÍN enfriado en hielo fue purificado mediante HPLC en fase inversa C18 usando un gradiente de disolvente de 0-40% de CH3CN acuoso (0,06% de TFA) con el fin de aislar el compuesto puro 203 como un sólido blanco amorfo (12 mg) . XH NMR (tampón de Na2P04 50 mM, pH = 6,0, 600 MHz): d 1,22-1,27 (m, 2H) , 1,38-1,43 (m, 2H) , 1,58-1,64 (m, 2H) , 1,67-1,76 (m, 2H) , 1,77-1,84 (m, 1H) , 1,92-1,99 (m, 1H) , 2,22-2,08 (m, 1H) , 2,12-2,27 (m, 1H) , 2,22-2,27 (m, 1H) , 2,60-2,67 (m, 1H, Pro-/?'), 2,83-2,89 (m, 1H, Pro-?), 4,32 (dd, J = 12,1 y 3,5 Hz, 1H, Pro-d'), 4,41 (dd, J = 12,1 y 7,3 Hz, 1H) , 4,56 (b d, J = 8,0 Hz, 1H, Pro-d), 4,62 (dd, J = 8,9 Hz, 1H, Pro-a) , 5,40-5,46 (m, 1H) , 5,55-5,61 (m, 1H) , 5,73 (b s, 1H, Pro-?) , 7,41 (d, J = 6,3 Hz, 1H) , 7,64 (b s, 1H, Acca-NH) , 7,80 (dd, J = 7,9 Hz, 1H)', 8,03 (dd, J = 8,0 Hz, 1H) , 8,07 (d, J = 9,5 Hz, 1H) , 8,16 (d, J = 7 Hz, 1H, AcNH) , 8,36 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 8,90 (d, J = 6, 0 Hz, 1H) .

EJEMPLO 26 Síntesis del compuesto 508 (Tabla 5) A. Una solución de L-glutamina protegida con Boc 26a (4,93 g, 20 mmol) y diacetato de yodobenceno (7,73 g, 24 mmol, 1,2 eq.) en EtOAc/CH3CN/H20 (2:2:1, 60 ml) se agitó a 16°C durante l h y a 20°C durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó después con H20 (20 ml) , los disolventes EtOAc y CH3CN se eliminaron bajo vacío, y la mezcla acuosa restante se extrajo con dietil-éter (3 x 50 ml) y EtOAc (50 ml) con el fin de eliminar la mayor parte de las impurezas. La capa acuosa (que contenía el producto intermedio de amina) se concentró después a sequedad, el material restante se redisolvió en Na2C03 al 10% (30 ml) , se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se añadió lentamente una solución de cloroformiato de bencilo (3,3 ml, 20,4 mmol, 1,02 eq.), dioxano (40 ml) (aprox. 10 min) . La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h y a TA durante 2 h. Después se diluyó la mezcla con H20 (50 ml) , se extrajo con dietil-éter frío (aprox. 5°C) (3 x 50 ml) , se acidificó con HCl 4M a pH = 3-4 y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml) . Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre MgS04 anhidro y se evaporaron a sequedad bajo vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando EtOAc/hexano/AcOH (7:2,9:0,1) para obtener el compuesto 26b con un 43% de rendimiento global (3,04 g) . B. El producto intermedio de dipéptido 26c (250 mg, 0,41 mmol), el compuesto 26b (171 mg, 0,49 mmol, 1,2 eq.) y HATU (185 mg, 0,49 mmol, 1,2 eq. ) se disolvieron en CH2C12 (6 ml) y se añadió DIPEA (0,29 ml , 1,62 mmol, 4 eq.) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 h, después se evaporó bajo vacío el CH2C12 y el material crudo se redisolvió en EtOAc.

La solución en EtOAc se lavó con solución acuosa de NaHC03 al 5% y con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a sequedad. El compuesto 26d fue obtenido después de purificar el material crudo mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando EtOAc/hexano (4:1) como eluyente, con un 98% de rendimiento (338 mg) . C. Una solución de compuesto 26d (335 mg, 0,394 mmol) en THF (5 ml) se enfrió a 0°C y se añadió una solución de BH3 en sulfuro de dimetilo (0,12 ml de solución 10 M, 1,2 mmol, 3 eq.) . La mezcla de reacción se dejó calentar a TA y se agitó durante 1 h. Después se enfrió de nuevo a 0°C antes de añadir lentamente una solución acuosa de NaOH (0,8 ml de solución 2,5 M, 1,97 mmol, 5 eq.) a lo largo de un periodo de 15 min, seguido por la adición lenta (aprox. 15 min) de una solución acuosa de H202 (0,8 ml de una solución 8,8 M, 6,9 mmol, 17,5 eq.) . La mezcla de reacción se dejó calentar a TA y se agitó durante 1 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se acidificó a pH aprox. 4 con el fin de apagar el BH3 en exceso, después se añadió solución acuosa de NaHC03 para ajustar el pH en aprox. 9-10, se eliminó el THF bajo vacío, y el material crudo se repartió entre H20 y EtOAc. La capa acuopsa se volvió a extraer con EtOAc, las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 anhidro y se evaporaron a sequedad bajo vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando EtOAc/hexano/NH4OH (8:2:0,5) como eluyente, para obtener compuesto puro 26e con un rendimiento del 57% (192 mg) . D. A una solución de compuesto 26e en CH2C12 (8 ml) se añadió peryodinato de Dess-Martin (195 mg, 97%, 0,33 mmol, 1,5 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 1,5 h. La reacción se apagó añadiendo solución acuosa de Na2S203 (3 ml de solución al 5%) , después se añadió solución acuosa saturada de NaHC03 (5 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 15 min. Finalmente, la mezcla de reacción cruda se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con solución acuosa de NaHC03 al 5% y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó bajo vacío para dar 188 mg de aldehido 28f que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. E. Una solución de compuesto 26f (188 mg, 0,22 mmol), CH3C02H (38 µl) y Pd(0H)2 (25 mg) en etanol (5 ml) se agitó a TA bajo H2 a presión atmosférica durante 16 h. Después de ese periodo se añadieron al matraz más H2 gas, Pd(OH)2 (180 mg) y CH3C02H (154 µl) y se siguió agitando durante 24 h más. Después se filtró la mezcla y el disolvente se evaporó a sequedad, y el producto macrocíclico crudo se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando CHCl3/MeOH/AcOH (10:2:1) para obtener el compuesto 26g con un rendimiento de aprox. 30% (48 mg) . F. Una mezcla de compuesto 26g (22 mg, 0,031 mmol), DIPEA (27 µl, 0,155 mmol, 5 eq.) y anhídrido acético (8,7 µl, 0,093 mmol, 3 eq.) en CH2C12 (5 ml) se agitó a TA durante 16 h. El CH2C12 se eliminó después bajo vacío, se añadió una mezcla de THF/MeOH/H20 (2:2:1,5 ml) y LiOH«2H20 (13 mg, 0,31 mmol, 10 eq.), y se dejó que tuviese lugar la reacción de hidrólisis durante 68 h a TA y durante 2 h a 50 °C. Después se acidificó la mezcla de reacción (pH aprox. 4) y se purificó mediante HPLC en fase inversa para obtener el compuesto final 508 (aprox. 6 mg, aprox. 26% de rendimiento para las 2 últimas etapas) . XH NMR (DMSO, 400 MHz) de 508 (mezcla de rotámeros confirmada por datos de COSY, TOCSY y ROESY NMR) : d 1,18 (s, 9H) , 1,09-1,85 (m solap., 11H) , 1,95 (s, 3H) , 2,30 (m, 1H) , 2,63 (m, 1H) , 3,18-4,14 (m solap., 6H) , 3,96 (s, 3H) , 4,44 (m, 1H) , 4,62 y 4,69 (2d, J = 11,8 Hz, 1H, rotámeros), 5,82 (b s, 1H) , 7,20 (m, 2H) , 7,53 (b s, 1H) , 7,67 (b s, 4H) , 8,19 (b s, 3H) , 8,61 (s, 1H) . ' EJEMPLO 27 Síntesis del producto intermedio macrocíclico saturado (27a) A. El producto intermedio macrocíclico insaturado 23b (3,50 g, 7,30 mmol) se disolvió en EtOAc (30 ml) y se añadieron 700 mg (20% p/p) de Rh al 5% sobre alúmina. La mezcla se agitó bajo gas H2 a presión atmosférica y a TA durante 1,5 h. Después de ese tiempo, el análisis por HPLC confirmó la completa conversión del material de partida en dos productos, el producto deseado 27a y un producto minoritario (8% de la masa total) que fue identificado más tarde como el compuesto 27b, formado a partir de la apertura del anillo de ciclopro-paño. La mezcla de reacción se filtró y se concentró para dar un sólido de color verde claro (3,47 g) . El sólido se evaporó conjuntamente dos veces con EtOH para eliminar todo el EtOAc (la presencia de EtOAc interfiere en la etapa siguiente) . La separación de compuesto 27a del 27b por cromatografía mostró ser muy difícil, por lo que se ideó un método alternativo basado en las velocidades relativas de hidrólisis de sus correspondientes restos éster metílico. B. La mezcla cruda de compuestos 27a y 27b (3,47 g) se disolvió en THF: MeOH (1:1, 20 ml) , se añadió una solución acuosa de LiOH«OH (24 mg en 5 ml de H20, 8% eq.) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h (la hidrólisis completa del producto secundario 27b para dar su ácido correspondiente 27c fue confirmada por HPLC) . La mezcla de reacción se concentró bajo vacío para eliminar la mayor parte del THF y el MeOH y se repartió entre H20 (100 ml) y EtOAc (300 ml) . La capa orgánica se lavó con NaOH 0,5 N (3 x 100 ml) , salmuera (100 ml) , solución acuosa de ácido cítrico al 10% (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml) , se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró a sequedad. El producto deseado 27a se obtuvo con una pureza elevada (> 90% por HPLC) en forma de una espuma de color verde claro y con un 93% de rendimiento global (3,28 g) para las dos etapas. 'H NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,1-1,38 (m, 13H) , 1,42 (s, 9H) , 1,51-1,57 (m, 1H) , 1,63-1,67 (dd, J = 8,0 y 5,1 Hz, 1H) , 1,81-1,87 (m, 1H) , 1,92-1,99 (m, 1H) , 2,02-2,08 (m, 1H) , 2,62 (d, J = 14 Hz, 1H) , 3,4 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 3,65 (s, 3H) , 4,01 (dd, J = 10,8 y 4,1 Hz, 1H) , 4,42-4,48 (m, 1H) , 4,51-4,55 (m, 1H) , 4,87 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 5,14 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,97 (br s, 1H) .

EJEMPLO 28 Síntesis del compuesto n° 741 (Tabla 7) comp. n" 741 El derivado de quinolina 8f fue unido al compuesto macrocíclico pr'e'formado 23b mediante una reacción de Mitsuno-bu. El derivado de quinolina 8f (30 mg, 0,095 mmol) se disolvió en THF y después se añadieron el macrociclo 23b (45,6 mg, 1 eq.) y PPh3 (49,8 mg, 2 eq.) . La mezcla resultante se enfrió a 0°C. Después se añadió gota a gota DIAD (37,4 µl , 2 eq.) . La solución se agitó durante 1 hora a 0°C y después se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después se diluyó la mezcla con EtOAc (15 ml) , se lavó con una solución saturada de NaHC03 (15 ml) , seguido de salmuera. La solución se secó con MgS04, se filtró y se concentró bajo vacío. Se obtuvieron 202 mg de un aceite amarillo. El producto se purificó mediante cromatografía de resolución rápida sobre gel de sílice (100% de EtOAc) . El producto contenía aún subproductos de DIAD después de la purificación. El producto resultante que se obtuvo contenía 55% p/p del producto deseado, por lo que el rendimiento se declaró el 62%. El producto intermedio de éster (46 mg, 0,06 mmol) se disolvió en una mezcla de THF/MeOH/H20 (relación 2:1:1, 2 ml) , se añadió LiOH»H20 (20 mg, 0,48 mmol) y la solución se agitó a TA. Después de un periodo de 16 h, el análisis de la mezcla de reacción por HPLC indicó que la hidrólisis era completa. Los disolventes orgánicos se eliminaron bajo vacío y el material crudo resultante disuelto en DMSO se purificó mediante HPLC en fase inversa C18 para dar el inhibidor puro 741. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 8,67 (s, 1H) , 8,29-8,14 (m, 2H) , 8,08-7,97 (m, 1H) , 7,91-7,78 (m, 1H) , 7,74 (s, 1H) , 7,31-7,20 (m, 1H) , 7,10 (d, J = 5,7 Hz, 1H) , 5,82-5,71 (m, 1H) , 5,58-5,47 (m, 1H) , 5,32-5,23 (m, 1H) , 4,74-4,64 (m, 1H) , 4,55-4,47 (m, 1H) , 4,23-4,06 (m, 1H) , 4,04-3,94 (m, 1H) , 3,97 (s, 3H) , 3,92-3,85 (m, 1H) , 2,70-2,55 (m, 2H) , 2,53-2,36 (m, 2H) , 2,20-2,09 (m, 1H) , 1,80-1,62 (m, 2H) , 1,56-1,43 (m, 2H) , 1,42-1,29 (m, 6H) , 1,27 (d, J = 3,2 Hz, 3H) , 1,25 (d, J = 2,9 Hz, 3H) , 1,12 (s, 9H) . MS: 763,1 (M+l), 761,1 (M-l).

EJEMPLO 29 Síntesis de compuesto 205 (Tabla 2) (25a) compuestos 205 A una solución del compuesto macrocíclico 25a (21 mg, 0,035 mmol) en t-butanol/H20) (1,5 ml/1, 5 ml) a 0o, se añadió una solución de Os04 en t-butanol (0,36 ml de 35% p/v, 0,035 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (20 ml) y la solución orgánica se lavó con NaHC03 al 5% (2 x 10 ml) y salmuera (2 x 10 ml) , se secó y se evaporó a sequedad. El compuesto crudo se recogió en THF/MeOH/H20 (3 ml/1, 5 ml/1, 5 ml) y se agitó en presencia de LiOH*H20 (13 mg, 0,28 mmol) durante 16 h. La mezcla se acidificó a pH 4 con HCl 0 , 5N enfriado con hielo, se evaporó y se purificó mediante HPLC en fase inversa C18 usando un gradiente de disolvente de H20 (0,06% de TFA) a 40% de CH3CN acuoso (0,06% de TFA) . El diol syn 205 fue aislado con alta pureza en forma de un sólido blanco amorfo. Compuesto n° 205: XH NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,01 (s, 9H) , 1,06-1,30 (m, 9H) , 1,48-1,68 (m, 3H) , 1,78-1,88 (m, 1H) , 2,2-2,5 (2m, 2H) , 3,78-3,82 (m, 1H) , 3,86-3,90 (m, 1H) , 4,39 (t, J = 8,9 Hz, 1H) , 4,61 (d, J = 11,4 Hz, 1H) , 5,60 (b s, 1H, Pro-?) , 7,03 (d, J = 6,0 Hz, 1H) , 7,40 (b s, 1H) , 7,58-7,62 (m, 1H) , 7,87-7,91 (m, 1H) , 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 8,24 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 8,60 (s, 1H) , 8,99 (b s, 1H) . EMS (modo de ionización negativa): m/z 625 (M-H)".

EJEMPLO 30 Síntesis de los compuestos 214 y 218 (Tabla 2) compuesto 214:, A. Una solución del éster ceto-nonenoato 16d (0,180 g, 0,6 mmol) en MeOH/H20 (5 ml/2 ml) se agitó a TA en presencia de LiOH*H20 (50 mg, 1,2 mmol) durante 1 h. La solución se acidificó a pH 6 con HCl 0,5 N enfriado con hielo y se evaporó la mayor parte del MeOH. Después se disolvió el residuo en EtOAc (30 ml) y la solución se lavó con HCl 0,5 N enfriado con hielo (10 ml) , se trató con salmuera (10 ml) , se secó y se evaporó. Después se redisolvió el residuo crudo en CH2C12 (10 ml) y se hizo reaccionar con el fragmento P1-P2 30a (0,337 g, 0,6 mmol) en presencia de HATU (233 mg, 0,612 mmol) y DIPEA (420 µl, 2,4 mmol) durante un periodo de 16 h a TA. La mezcla de reacción se cromatografió sobre gel de sílice usando EtOAc/hexano (l/l) como eluyente para aislar el compuesto puro 30b (0,370 g, 83% de rendimiento, pureza > 95% por HPLC) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,41 (s, 9H) , 1,45-1,54 (m, 1H) , 1,58-1,62 (m, 1H) , 1,73-1,77 (m, 1H) , 1,86-1,91 (m, 1H) , 2,16 (dd, J = 17,8 y 8,6 Hz, 1H) , 2,26 - 2,43 (2m, 2H) , 2,46-2,58 (m, 2H) , 2,64-2,81 ( , 1H) , 2,85-2,92 y 2,95-3,03 (2m, 1H, rotámeros en relación 1 : 3) , 3,67 (s, 3H) , 3,95 (s, 3H) , 4,10-4,18 (m, 1H) , 4,20-4,30 (m, 1H) , 4,40-4,55 (m, 1H) , 4,80-4,88 (m, 1H) , 4,92-5,10 (m, 2H) , 5,14 (dd, J = 10,2 y 1,6 Hz, 1H) , 5,24-5,38 (m, 4H) , 5,42-5,54 (m, 1H) , 5,68-5,86 (m, 2H) , 7,04-7,14 (m, 2H) , 7,42-7,64 (m, 5H) , 7,92-8,12 (m, 3H) . B. El dieno 30b (0,370 g, 0,49 mmol) fue ciclizado en presencia del catalizador dicloruro de bis (triciclohexilfos-fina) bencilideno-rutenio IV (0,125 mg, 0,15 mmol) en CH2C12 (destilado en CaH2 y desgasificado con argón durante 30 min) durante un periodo de 2 h a reflujo. El compuesto se obtuvo en forma de una mezcla de estereoisómeros (30c y 30d en la relación 1:1) después de cromatografía en columna de resolución rápida en gel de sílice usando EtOAc/hexano (3/1) con un rendimiento del 35% (0,124 g) . XH NMR de la mezcla de 30c y 30d (CDC13, 400 MHz) : d 1,44 (s, 4H) , 1,37 (s, 4H) , 1,60 (m, 2H) , 1,83 (m, 0,5H), 2,01 (m, 1H) , 2,09 (m, 1H) , 2,42 (m, 5H) , 2,73 (m, 2H) , 3,26 (m, 0,5H), 3,69 (s,' l,5H), 3,76 (s, 1,5H), 3,96 (s, 3H) , 4,10 (m, 1H) , 4,24 (m, 0,5H), 4,10 (m, 0,5H), 4,58 (m, 1H) , 4,73 (m, 1H) , 4,89 (m, 0,5H), 4,97 (m, 05H) , 5,30 (m, 0,5H), 5,44 (m, 2H) , 5,64 (m, 1H) , 7,1-7,0 (m, 3H) , 7,47 (m, 4H) , 8,08-7,98 (m, 3H) . C,D. Se llevó a cabo la hidrólisis de los esteres metílicos 30c y 30d (24 mg, 0,033 mmol) en THF/MeOH/H20 (1 ml/0,5 ml/0,5 ml) con LiOH»H20 (11 mg, 0,246 mmol) durante un periodo de 16 h a TA. Al cabo de ese tiempo, la mezcla de reacción se acidificó a pH 4-5 y se cromatografió en una columna de HPLC de fase inversa C18 usando un gradiente de disolvente de H20 (0,06% de TFA) a solución acuosa al 50% de CH3CN (0,06% de TFA). Los compuestos deseados 214 y 218 fueron aislados de la mezcla de los dos compuestos con alta pureza (94% de pureza por HPLC) con un 15% de rendimiento (3 mg) . Compuesto 214: XH NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,15 (s, 9H) , 1,48-1,54 (m, 2H) , 1,65-1,74 (m, 1H) , 1,77-1,85 (m, 1H) , 2,12-2,25 (m, 4H) , 2,27-2,34 (m, 1H) , 2,61-2,68 (m, 1H) , 2,87 (b t, J = 11,5 Hz, 1H) , 3,92 (dd, J = 9,2 y 1,5 Hz, 1H, Pro-d), 3,97 (s, 3H, -OCH3) , 4,14-4,20 (m, 1H) , 4,52 (t, J = 7,8 Hz, 1H, Pro-a) , 4,66 (d, J = 11,8 Hz, 1H, Pro-d), 5,45 (t, J = 9,9 Hz, 1H) , 5,51-5,58 (m, 1H) , 5,82 (b s, 1H, Pro-?), 7,09 (d, J = 6,0 Hz, 1H, BocNH) , 7,26 (b s, 1H) , 7,53 (s, 1H) , 7,67 (b s, 3H) , 8,16 (d, J = 2 Hz, 1H) , 8,18 (s, 1H) , 8,83 (s, 1H, ACCA-NH) . Compuesto 218: 'H NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,06-1,10 (m, 1H) , 1,18 (s, 9H) , 1,52-1,55 (m, 1H) , 1,62-1,80 (m, 1H) , 2,10-2,68 (solapamiento, 9H) , 3,90 (b d, J = 8,3 Hz, 1H) , 3,96 (s, 3H, OCH3) , 4,20-4,27 (m, 1H) , 4,58-4,63 (m, 1H, Pro-d), 4,66 (dd, J = 8,3 Hz, 1H, Pro-a), 4,88 (dd, J = 10,2 Hz, 1H) , 5,18-5,26 (m, 1H) , 5,73-5,79 (m, 1H, Pro-?), 7,01 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 7,23 (b s, 1H) , 7,50 (b s, 1H) , 7,66 (b s, 3H) , 8,20 (b s, 2H) , 8,53 (s, 1H) .

EJEMPLO 31 Síntesis del compuesto 209 (Tabla 2) compuesto 209 31c A. El dieno 31a (249 mg, 0,330 mmol) se disolvió en 30 ml de CH2C12 anhidro y la solución fue desgasificada con argón durante 15 min. El catalizador dicloruro de bis (triciclohe-xilfosfina) bencilideno-rutenio IV (82 mg, 0,100 mmol) se disolvió en 3 ml de CH2C12 anhidro y desgasificado, y se añadió a la solución de dieno. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h bajo N2. La solución se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida para obtener el compuesto 31b en forma de un sólido de color pardo con un rendimiento del 71% (171 mg) . XH NMR (CDC13, 400 MHz): d 1,22-1,44 (m, 10H) , 1,42 (s, 9H) , 1,66-1,74 (m, 1H) , 1,87-1,97 (m, 2H) , 2,13-2,28 (m, 3H) , 2,32-2,39 (m, 1H) , 3,08-3,16 (m, 1H) , 3,41 (s, 3H) , 4,07-4,22 (m, 3H) , 4,28-4,34 (m, 1H) , 4,58-4,64 (m, 1H) , 4,95-4,99 (m, 1H) , 5,22-5,29 (m, 2H) , 5,38-5,43 (m, 1H) , 5,48-5,56 (m, 1H) , 7,00-7,12 (m, 3H) , 7,43-7,55 (m, 4H) , 7,97-8,11 (m, 3H) . ES(+) MS: m/z 727,4 (M+H)+. B. El compuesto 31b (0,117 mmol) se agitó en una solución de HCl (1 ml de solución 4N en dioxano) durante 30 min y se concentró a sequedad. El sólido se recogió en CH2C12 (2 ml) y se añadieron sucesivamente Et3N (82 µl, 0,585 mmol) e isotiocianato de t-butilo (35 mg, 0,351 mmol) . Después de agitar a TA durante 20 h, la mezcla se concentró a sequedad y el compuesto crudo 31c se usó en la etapa de hidrólisis final sin más purificación. D. El compuesto 31c (85 mg, 0,117 mmol) se disolvió en THF/MeOH/H20 (2 ml/1 ml/l ml) , se añadió LiOH«H20 (39 mg, 0,936 mmol), y la solución se agitó durante 20 h a TA. Después de ese tiempo, se añadió ácido acético (1 ml) y la solución se concentró para eliminar el MeOH y el THF. El compuesto puro 209 fue aislado después de purificar el producto crudo mediante HPLC en fase inversa C18 (25 mg, aprox. 31% de rendimiento) . XH NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,04 (s, 9H) , 1,15-1,24 (m, 2H) , 1,30-1,40 (m, 5H) , 1,44-1,51 (m, 2H) , 1,54-1,68 (m, 1H) , 1,75-1,88 (m, 1H) , 2,18 (dd, J = 17,2 y 8,5 Hz, 1H) , 2,32-2,45 (m, 1H, Pro-3) , 2,54-2,62 (m, 1H) , 2,65-2,68 (m, 1H, Pro-?) , 3,91 (dd, J = 11 , 1 y 3 , 5 Hz, 1H, Pro-d) , 3,96 (s, 3H, -OCH3) , 4,17-4,23 (m, 1H) , 4,47 (dd, J = 8,6 Hz, 1H, Pro-a) , 4,67 (b d, J = 7,9 Hz, 1H, Pro-d), 5,30 (dd, J = 9,5 Hz, 1H) , 5,52 (b dd, J = 19 y 8,3 Hz, 1H) , 5,68 (s, 1H) , 5,78 (b s, 1H, Pro-?), 5,94 (b s, 1H) , 7,21 (b s, 1H) , 7,51 (b s, 1H) , 7,66 (b s, 4H) , 8,19 (s, 2H) , 8,40 (d, J = 7 Hz, 1H) , 8,61 (s, 1H, ACCA-NH) . ES(+) MS: m/z 698,3 (M+H)+.

EJEMPLO 32 Síntesis de los compuestos n° 404 y n° 407 (Tabla 4) 32b comp. p° 407 comp. n° 404 A. El dieno 32a (84 mg, 0,11 mmol) se disolvió en CH2C12 anhidro (11 ml) y la solución se desgasificó durante un periodo de 15 min con un flujo de argón. El catalizador de dicloruro de bis (triciclohexilfosfina) bencilideno-rutenio IV (19 mg, 0,023 mmol) se disolvió primero en 1 ml de CH2C12 desgasificado y después se pasó al matraz de reacción mediante una cánula. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a reflujo. Después se eliminó el disolvente bajo vacío y la mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida en gel de sílice, usando EtOAc/hexano (1:1) como eluyente, para dar el compuesto macrocíclico 32b en forma de un aceite amarillo (33 mg, 41% de rendimiento) . B. El producto intermedio éster 32b (33 mg, 0,045 mmol) se disolvió en una mezcla de THF/MeOH/H20 (relación 2:1:1, 2 ml) , se añadió LiOH*H20 (8 mg, 0,18 mmol) y la solución se agitó a TA. Después de un periodo de 16 h, el análisis de la mezcla de reacción mediante HPLC indicó que la hidrólisis era incompleta. Así, se añadió una cantidad adicional de LiOH*H20 (4 mg, 0,09 mmol) y la solución se agitó a TA durante un total de 36 h. Finalmente, la solución se acidificó con una pequeña alícuota de ácido acético, los disolventes orgánicos se eliminaron bajo vacío y el material crudo que quedaba se purificó mediante HPLC en fase inversa C18 para dar inhibidor 404 puro. XH NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H, Me), 1,36 (s, 9H, Boc), 1,1-1,4 (3m, 3H) , 1,66 (m, 1H) , 1,80 (m, 1H) , 2,10 (m, 2H) , 2,57 (m, 2H) , 3,90 (m, 4H) , 4,47 (b d, J = 12,7 Hz, 1H) , 4,58 (b d, J = 7,3 Hz, 1H) , 4,66 (dd, J = 8,0 Hz, 1H) , 5,57 (m, 1H) , 5,66 (m, 1H) , 5,83 (b s, 1H) , 6,18 (bd, J = 6,9 Hz, 1H) , 7,25 (b d, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,56 (b s, 1H) , 7,70 (m, 4H) , 8,22 (b d, J = 2,9 Hz, 2H) , 8,29 (b s, J = 9,2 Hz, 1H) . C. Se disolvió inhibidor 404 (15 mg, 0,021 mmol) en etanol (2 ml) y se añadió Pd al 10%/C (2 mg) . La mezcla se agitó bajo hidrógeno a TA durante 16 h. Después de filtrar, la mezcla se purificó mediante HPLC en fase inversa C18 para dar el inhibidor 407 en forma de un sólido blanco (10 mg, e % de rendimiento) . 'H NMR (DMSO, 400 MHz): d 1,04 (m, 1H) , 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 1,35 (s, 9H) , 1,25-1,75 (m, 12H) , 2,32-2,45 (m, 1H) , 3,40-3,50 (m, 2H) , 3,74-3,83 (m, 1H) , 3,85-3,93 (m, 1H) , 3,97 (s, 3H) , 4,27-4,36 (dd, J = 21,1 y 8,6 Hz, 1H) , 4,54 (dd, J = 7,95 y 7,95 Hz, 1H) , 5,64 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 5,82 (br s, 1H) , 7,27-7,33 (m, 1H) , 7,53-7,57 (b s, 1H) , 7,60-7,74 (m, 4H) , 8,13-8,27 (m, 3H) , 8,30-8,35 (br s, 1H) .

EJEMPLO 33 Síntesis del compuesto n° 824 (Tabla 8) A. El compuesto 33a (aprox. 0,55 mmol) se disolvió en CH2C12 (100 ml) y la solución fue desgasificada cuidadosamente antes de añadir una muestra de catalizador de Hoveyda (17 mg, 0,028 mmol, 0,05 eq.) . Después se agitó la solución bajo reflujo durante 5 h. La mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando un gradiente de disolvente de CH2Cl2/EtOAc (relación de 3:2 a 2:3), para dar el compuesto 33b con un 72% de rendimiento (194 mg) . B. A una solución de compuesto 33b (70 mg, 0,142 mmol) se añadieron lentamente, a lo largo de un periodo de 20 min, 2--etoxi-4-hidroxi-7-metoxiquinolina 3c (63 mg, 0,284 mmol, 2 eq.) y Ph3P (186 mg, 0,71 mmol, 5 eq.) en THF anhidro (15 ml) a 0°C, y DIAD (140 µl, 0,71 mmol, 5 eq.). La mezcla de reacción se dejó calentar a TA y se agitó a TA durante 2,5 h. Subsiguientemente, el THF fue evaporado bajo vacío y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida, usando un gradiente de disolvente de hexano/EtOAc (relación de 7:3 a 1:1) . El compuesto puro 33c fue aislado con un rendimiento del 73% (72 mg) . C. El compuesto 33c (72 mg, 0,104 mmol) se mezcló con CH2C12 (5 ml) y HCl 4M en dioxano (5 ml) , y la mezcla se dejó agitando a TA durante 1,5 h para segmentar el grupo protector Boc y obtener la sal de HCl del compuesto intermedio 33d. La mezcla de reacción cruda se evaporó a sequedad bajo vacío, se secó bajo vacío para asegurar la eliminación de todo el HCl y se usó en la etapa siguiente sin purificar. D. A una solución de ciclopentanol (29 µl, 0,32 mmol) en THF (10 ml) , se añadió gota a gota una solución de fosgeno en tolueno (1,93 M, 274 µl, 0,528 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h para formar el reactivo cloroformiato de ciclopentilo. Después de ese periodo, se eliminó aproximadamente la mitad del disolvente por evaporación bajo vacío, la solución de color amarillo claro restante se diluyó mediante la adición de CH2C12 (5 ml) y se volvió a concentrar a la mitad de su volumen original, con el fin de asegurar la eliminación de todo el fosgeno en exceso. La anterior solución del reactivo de cloroformiato de ciclopentilo se diluyó adicionalmente con THF (10 ml) , se enfrió a 0°C y se añadió al compuesto sólido 33d (0,104 mmol) a 0°C. Se añadió Et3N (75 µl, 0,534 mmol, 5,2 eq.) a la mezcla de reacción y se siguió agitando a 0°C durante 1,5 h. Los disolventes se eliminaron bajo vacío y el material crudo se purificó mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando EtOAc/hexano (1:1) como eluyente, para obtener el compuesto 33e con rendimiento casi cuantitativo (75 mg) . E. La hidrólisis del éster metílico se logró haciendo reaccionar el compuesto 33e (75 mg, 0,11 mmol) con LiOH-H20 (35 mg, 0,84 mmol, 8 eq.) en una mezcla de disolventes de THF/MeOH/H20 (relación 2:2:1, 7,5 ml) a 50°C durante 2,5 h. Al terminar la hidrólisis, la mezcla se acidificó a pH = 4 , 5 y los disolventes se evaporaron a sequedad bajo vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa en fase inversa C18, usando un gradiente de disolvente de H20 a solución acuosa de CH3CN al 58% (con 0,06% de TFA), para obtener el inhibidor n° 824 en forma de un sólido amorfo de color blanco (45 mg, 65% de rendimiento) . XH NMR de la sal Na+ del n° 824 (DMSO, 400 MHz) : d 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,95-1,70 (resonancias solapantes, 17H) , 1.37 (t, J = 7 Hz, 3H) , 2,00-2,10 (m, 1H) , 2,10-2,33 (m, 3H) , 2,38-2,44 (m, 1H) , 3,80-3,85 (m, 1H) , 3,85 (s, 3H) , 4,02-4,08 (m, 1H) , 4,42 (q, J = 7 Hz, 2H) , 4,35-4,44 (m, 1H) , 4,50 (d, J = 10,8 Hz, 1H) , 4,63 (b s, 1H) , 5,28 (dd, J = 9,5 Hz, 1H) , 5.38 (b s, 1H) , 5,42-5,49 (m, 1H) , 6,37 (s, 1H) , 6,87 (dd, J = 8,9 y 2,2 Hz, 1H) , 7,07 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,28 (d, J = 7,0 Hz, 1H) , 7,90 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 8,57 (s, 1H) .

EJEMPLO 34 Síntesis del compuesto n° 812 (Tabla 8) A. A una solución del compuesto intermedio macrocíclico 23b (13,05 g, 27,2 mmol, 1,0 eq.), Ph3P (14,28 g, 54,4 mmol, 2,0 eq.) y 2-carboximetoxi-4-hidroxi-7-metoxiquinolina (documentos WO 00/09543 y WO 00/09558) (6,67 g, 28,6 mmol, 1,05 eq.) en THF (450 ml) a 0°C, se añadió DIAD (10,75 ml , 54,6 mmol, 2,0 eq.) gota a gota durante un periodo de 15 min. Después se retiró el baño de hielo y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 h. Después de la conversión completa del material de partida en los productos, el disolvente se evaporó bajo vacío, la mezcla restante se diluyó con EtOAc, se lavó con solución acuosa saturada de NaHC03 (2x) y salmuera (Ix) , y la capa orgánica se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad. Se obtuvo el compuesto puro 34a después de cromatografía de resolución rápida; la columna se eluyó primero con hexano/EtOAc (50:50), seguido por CHCl3/EtOAc (95:5) para eliminar los subproductos Ph3PO y DIAD, y la elución de la impurezas se controló mediante TLC. Finalmente, el producto 34a deseado se eluyó de la columna con CHC13/ EtOAc (70:30) . Normalmente, la etapa de cromatografía hubo de repetirse 2-3 veces antes de poder ser aislado el compuesto 34a con pureza elevada en forma de un sólido blanco con un rendimiento global del 68% (12,8 g, 99,5% de pureza por HPLC) . B. A una solución del producto intermedio 34a protegido con Boc (1,567 g) en CH2C12 (15 ml) , se añadió HCl 4N en dioxano (12 ml) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h.

[En caso de formarse un gel espeso en medio del periodo de reacción, se añaden 10 ml más de CH2C12] . Al terminar la desprotección, los disolventes se evaporaron a sequedad para obtener un sólido amarillo y un material similar a una pasta.

La mezcla se redisolvió en MeOH aproximadamente al 5% en CH2C12 y se volvió a evaporar a sequedad bajo vacío para obtener el compuesto 34b en forma de un sólido amarillo, que se usó en la etapa siguiente sin más purificación. C. A una solución de ciclopentanol (614 µl, 6,76 mmol) en THF (15 ml) , se añadió gota a gota una solución de fosgeno en tolueno (1,93 M, 5,96 ml, 11,502 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h para formar el reactivo cloroformiato de ciclopentilo (z) . Al cabo de ese tiempo, se eliminó aproximadamente la mitad del disolvente mediante evaporación bajo vacío, la solución de color amarillo claro restante se diluyó mediante la adición de CH2C12 (5 ml) y se concentró a la mitad de su volumen original para asegurar la eliminación de todo el fosgeno en exceso. La anterior solución de reactivo de cloroformiato de ciclopentilo se diluyó más con THF (15 ml) y se añadió a la sal amina-2HCl 34b. La mezcla se enfrió a 0°C en un baño de hielo, el pH se ajustó a aproximadamente 8,5-9 mediante la adición de Et3N (añadido gota a gota) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h. Después de ese periodo, la mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con agua (lx) , solución saturada de NaHC03 (2x) , H20 (2x) y salmuera (lx) . La capa orgánica se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se evaporó bajo vacío para obtener una espuma de color amarillo-ámbar. El compuesto 34c se obtuvo en forma de una espuma blanca después de purificar mediante cromatografía en columna de resolución rápida (usando un gradiente de disolvente de 30% de hexano a 20% hexano en EtOAc como eluyente) con 80% de rendimiento (1,27 g) y una pureza > 93%. D. El éster dimetílico 34c (1,17 g) se disolvió en una mezcla de THF/MeOH/H20 (20 ml ; relación 2:1:1) y se añadió una solución acuosa de NaOH (1,8 ml, ÍN, 1 eq.) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h antes de ser evaporada a sequedad, para obtener la sal sódica 34d en forma de un sólido blanco (aprox. 1,66 mmol) . El compuesto 34d fue usado en la etapa siguiente sin purificar. E. La sal sódica cruda 34d (1,66 mmol) se disolvió en THF (17 ml) , se añadió Et3N y la mezcla se enfrió a 0°C en un baño de hielo. Se añadió gota a gota cloroformiato de isobutilo (322 µl, 2,5 mmol) y la mezcla se agitó a 0°C durante 75 min. Después de ese periodo se añadió diazometano (15 ml) y se siguió agitando a 0°C durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 1 h más. La mayor parte del disolvente se evaporó a sequedad bajo vacío, la mezcla restante se diluyó con EtOAc, se lavó con solución saturada de NaHC03 (2x) , H20 (2x) y salmuera (lx) , se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad para obtener el compuesto 34e en forma de una espuma de color amarillo claro (1,2 g, aprox. 1,66 mmol) . El producto intermedio diazocetona 34e se usó en la etapa siguiente sin purificar. F. La diazocetona 34e (1,2 g, 1,66 mmol) disuelta en THF (17 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo. Se añadió gota a gota una solución acuosa de HBr (48%, 1,24 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante lh. Después se diluyó la mezcla con EtOAc, se lavó con solución saturada de NaHC03 (2x) , H20 (2x) y salmuera (lx) , la capa orgánica se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad para ob-tener el producto intermedio de ß-bromocetona 34f en forma de una espuma de color amarillo claro (aprox. 1,657 mmol) . G. A una solución de la bromocetona 34f (600 mg, 0,779 mmol) en isopropanol (5 ml) se añadió tiourea (118 mg, 1,55 mmol) y la mezcla de reacción se puso en un baño de aceite precalentado a 75°C en el que se dejó agitando durante 1 h.

Después se eliminó bajo vacío el isopropanol, y el producto se disolvió en EtOAc (100 ml) . La solución se lavó con solución saturada de NaHC03 y salmuera, la capa orgánica se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se evaporó para dar el producto crudo 34g (522 mg) en forma de un sólido de color pardo-rojizo. Este material se usó en la etapa final sin más purificación. H. El éster metílico crudo 34g (122 mg, 0,163 mmol) se disolvió en una solución de THF/MeOH/H20 (relación 2:1:1, 4 ml) y se saponificó usando LiOH-H20 (89 mg, 2,14 mmol) . La reacción de hidrólisis se llevó a cabo durante un periodo de 12-15 h a TA. Después se eliminaron los disolventes bajo vacío y el producto crudo se purificó mediante HPLC C18 de fase inversa usando un gradiente de disolvente de 10% de CH3CN en H20 a 100% de CH3CN, para dar el inhibidor de proteasa del HCV n° 812 en forma de un sólido de color amarillo (24 mg, 20% de rendimiento global para la conversión del producto intermedio 34f en el inhibidor n° 812) . !H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,63 (s, 1H) , 8,26-8,15 (m, 2H) , 7,79 (b s, 1H) , 7,72 (b s, 1H) , 7,50 (b s, 2H) , 7,33-7,25 (m, 2H) , 5,77 (b s, 1H) , 5,52 (dd, J = 8,3 Hz, 1H) , 5,27 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,64 (d, J = 10,8 Hz, 1H) , 4,50 (dd, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,39-4,31 (m, 1H) , 4,08-3,99 (m, 2H) , 3,94 (s, 3H) , 3,87 (d, J = 9,5 Hz, 2H) , 2,65-2,53 (m, 2H) , 2,46-2,36 (m, 2H) , 2,20-2,12 (dd, J = 8,6 Hz, 1H) , 1,80-1,64 (m, 2H) , 1,63-1,06 (m, 14H) . MS;es+: 733,2 (M+H)\ es": 731,2 (M-H)".

EJEMPLO 34A Usando el mismo procedimiento que se describe en el ejemplo 34, pero haciendo reaccionar la bromocetona 34f con N-metiltiourea disponible comercialmente se obtuvo el n° 811 (Tabla 8) .

XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,63 (s, 1H) , 8,20 (s, 1H) , 8,18 (s, 1H) , 8,12-7,93 (m, 1H) , 7,88-7,69 (m, 2H) , 7,32-7,24 (m, 2H) , 5,82-5,75 (m, 1H) , 5,52 (ddd, J = 8,1 Hz, 1H) , 5,28 (dd, J = 9,9 Hz, 1H) , 4,67-4,61 (m, 1H) , 4,51 (dd, J = 8,8 Hz, 1H) , 4,44-4,37 (m, 1H) , 4,08-4,00 (m, 1H) , 3,96 (s, 3H) , 3,89 (m, 1H) , 3,04 (d, J = 4,1 Hz, 3H) , 2,65-2,37 (m, 3H) , 2,16 (m, 1H) , 1,77-1,65 (m, 2H) , 1,63-1,11 (m, 17H) . MS; es+: 747,2 (M+H)+, es": 745,3 (M-H) " .

EJEMPLO 34B Usando el mismo procedimiento que se describe en el ejemplo 34, pero haciendo reaccionar la bromocetona 34f con N-etiltiourea disponible comercialmente se obtuvo el n" 810 (Tabla 8) .

H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,63 (b s, 1H) , 8,27 (b s, 1H) , 8,20 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 8,13-8,07 (m, 1H) , 7,86 (b s, 1H) , 7,78 (s, 1H) , 7,33-7,25 (m, 2H) , 5,81 (b s, 1H) , 5,54 (dd, J = 8,8 Hz, 1H) , '5,28 (dd, J = 9,7 Hz, 1H) , 4,65 (d, J = 12,4 Hz, 1H) , 4,51 (dd, J = 8,8 Hz, 1H) , 4,38 (b s, 1H) , 4,03 (m, 1H) , 3,97 (s, 3H) , 3,92-3,87 (m, 1H) , 3,54-3,46 (m, 2H) , 2,68-2,65 (m, 2H) , 2,47-2,38 (m, 1H) , 2,15 (dd, J = 8,6 Hz, 1H) , 1,78-1,65 (m, 2H) , 1,60-1,12 (m, 17H) , 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3H) . MS; es+ : 783,2 (M+Na)+, es": 761,2 (M+H) + .

EJEMPLO 34C Usando el mismo procedimiento que se describe en el ejemplo 34, pero haciendo reaccionar la bromocetona 34f con N-isopropiltiourea disponible comercialmente se obtuvo el n° 822.

XE NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,63 (s, 1H) , 8,33-8,23 (b s, 1H) , 8,21 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,04 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,86 (bs, 1H) , 7,77 (s, 1H) , 7,35-7,23 (m, 2H) , 5,81 (b s, 1H) , 5,52 (dd, J = 8,5 Hz, 1H) , 5,27 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,65 (d, J = 11,8 Hz, 1H) , 4,51 (dd, J = 7,6 Hz, 1H) , 4,37 (b s, 1H) , 4,15 (b s, 1H) , 4,07-3,98 (m, 2H) , 3,97 (s, 3H) , 3,88 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 2,60-2,53 (m, 2H) , 2,47-2,37 (m, 2H) , 2,19-2,10 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 1,80-1,64 (m, 2H) , 1,63-1,29 (m, 13H) , 1,27 y 1,25 (2 x d, J = 6,5 Hz, 6H) , 1,23-1,09 (m, 2H) . MS; es*: 775,0 (M+H)+, es": 772,9 (M-H)".

EJEMPLO 34D Usando el mismo procedimiento que se describe en el ejemplo 34, pero haciendo reaccionar la bromocetona 34f con N-acetiltiourea disponible comercialmente se obtuvo el n° 809.

?E NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,62 (s, 1H) , 8,30 (b S, 1H) , 8,17 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,62 (b s, 1H) , 7,52 (b s, 1H) , 7,28 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 7,21 (bs, 1H) , 5,63 (b s, 1H) , 5,54 (dd, J = 8,1 Hz, 1H) , 5,28 (dd, J = 9,5 Hz, 1H) , 4,62 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 4,56-4,46 (m, 2H) , 4,11-4,04 (m, 1H) , 3,95 (s, 3H) , 3,93-3,88 (m, 1H) , 2,62-2,54 (m, 1H) , 2,45-2,36 (m, 1H) , 2,22 (s, 3H) , 2,21-2,13 (m, 1H) , 1,79-1,69 (m, 2H) , 1,65-1,30 (m, 16H) , 1,26-1,12 (m, 2H) . MS; es*: 775,3 (M+Na)+, es": 773,3 (M-H)".

EJEMPLO 34E A una solución agitada del producto intermedio 2-amino-4-tiazolilo 34g (0,24 g, 0,32 mmol) en CH2Cl2 (5 ml) a TA se añadió DIPEA (0,55 ml, 3,18 mmol, 10 eq.) y cloroformiato de metilo (0,13 ml , 1,6 mmol, 5 eq.) . La mezcla de reacción se agitó durante 6,5 h antes de ser concentrada bajo vacío. El material aislado crudo se hidrolizó después para dar el ácido carboxílico deseado como se describe en el Ejemplo 34 para dar el compuesto n° 818.

XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,61 (s, 1H) , 8,21-8,07 (m, 2H) , 7,61-7,38 (m, 2H) , 7,26 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 7,19-7,10 (m, 1H) , 5,60-5,47 (m, 2H) , 5,27 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,63-4,53 (m, 1H) , 4,47 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 4,13-4,04 (m, 1H) , 3,93 (s, 3H) , 3,92-3,87 (m, 2H) , 3,79 (s, 3H) , 2,42-2,30 (m, 2H) , 2,17 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 1,81-1,68 (m, 2H) , 1,63-1,29 (m, 16H) , 1,23-1,10 (m, 2H) . MS ; es*: 791,1 (M+H) \ es": 789,1 (M-H)".

EJEMPLO 34F Siguiendo las condiciones descritas anteriormnete en el ejemplo 34E, pero usando cloroformiato de isobutilo, se obtuvo el producto intermedio análogo de carbamato sustituido. El material aislado crudo fue después hidrolizado para dar el compuesto deseado n° 819.

XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,62 (s, 1H) , 8,47-8,27 (b S, 1H) , 8,18 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,69-7,60 (m, 1H) , 7,60-7,51 (m, 1H) , 7,28 (d, J = 6,7 Hz, 1H) , 7,28-7,19 (m, 1H) , 5,70- 5,60 (m, 1H) , 5,52 (dd, J = 8,3 Hz, 1H) , 5,27 (dd, J = 9,8 Hz, 1H) , 4,63 (d, J = 11,8 Hz, 1H) , 4,53-4,44 (m, 2H) , 4,10- 3,99 (m, 1H) , 4,04 (d, J = 6,7 Hz, 2H) , 3,95 (s, 3H) , 3,94-3,87 (m, 1H) , 2,65-2.53 (m, 1H) , 2,46-2,34 (m, 1H) , 2,16 (dd, J = 8,1 Hz, 1H) , 2,03-1,91 (m, 1H) , 1,79-1,09 (m, 20H) , 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 6H) . MS; es*: 833,2 (M+H)+, es": 831,2 (M-H)".

EJEMPLO 35 Síntesis del compuesto n° 908 Partiendo del derivado 27a y usando la misma química que se describió en el ejemplo 34, se obtuvo el siguiente macrociclo saturado, compuesto n° 908 (Tabla 9) .

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,47 (s, 1H) , 8, 16 (d, J = 10 Hz, 1H) , 8,15-8,07 (m, 1H) , 7,82-7,63 (m, 2H) , 7,53-7,43 (m, 2H) , 7,33-7,22 (m, 1H) , 7,13 (d, J = 7 Hz, 1H) , 5,77-5,65 (m, 1H) , 4,62-4,52 (m, 2H) , 4,50-4,4 (m, 1H) , 4,20-4,10 (m, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 3,89-3,83 (m, 1H) , 2,59-2,53 (m, 1H) , 2,48-2,40 (m, 1H) , 1,79-1,0 (m, 25H) . MS ; es*: 735,2 (M+H)*, es": 733,2 (M-H)".

EJEMPLO 35A Síntesis del compuesto n° 909 Usando el mismo procedimiento que se describió en el ejemplo 35 pero usando N-acetiltiourea disponible comercialmente se obtuvo el compuesto n° 909 (Tabla 9) .

XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,53-8,41 (m, 2H) , 8,20 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,68 (b s, 1H) , 7,68 (b s, 1H) , 7,27 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,15 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 5,67 (b s, 1H) , 4,65-4,50 (m, 3H) , 4,44-4,37 (m, 1H) , 4,21-4,13 (m, 1H) , 3,96 (s, 3H) , 3,99-3,86 (m, 1H) , 2,62-2,39 (m, 2H) , 2,24 (s, 3H) , 1,78-1,67 (m, 3H) , 1,67-1,01 (m, 22H) . MS; es*: 798,0 (M+Na)*, es": 777,0 (M+H)*.

EJEMPLO 35B Síntesis del compuesto n° 910 Usando el mismo procedimiento que se describió en el ejemplo 35 pero usando N-etiltiourea disponible comercialmente se obtuvo el compuesto n° 910 (Tabla 9) .

?E NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,47 (s, 1H) , 8,29 (b s, 1H) , 8,20 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,09 (b s, 1H) , 7,87 (s, 1H) , 7,77 (s, 1H) , 7,32 (dd, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,14 (dd, J = 6,7 Hz, 1H) , 5,78 (b s, 1H) , 4,58 (dd, J = 8,1 Hz, 2H) , 4,43 (b s, 1H) , 3,97 (s, 3H) , 3,87 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 3,55-3,46 (m, 2H) , 2,63-2,53 (m, 1H) , 2,47-2,41 (m, 1H) , 1,78-1,00 (m, 25H) , 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3H) . MS; es*: 763,1 (M+H)*, es": 761,1 (M-H)-.

EJEMPLO 35c Síntesis del compuesto n° 911 Usando el mismo procedimiento que se describió en el ejemplo 35 pero usando N-isopropiltiourea disponible se obtuvo el compuesto n° 911 (Tabla 9) .

"H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 8,47 (s, 1H) , 8,29-8,19 (m, 1H) , 8,19 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,09-8,0 (m, 1H) , 7,83 (b s, 1H) , 7,74 (b s, 1H) , 7,31 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7,14 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 5,76 (b s, 1H) , 4,64-4,53 (m, 2H) , 4,44 (b s, 1H) , 4,22-4,09 (m, 3H) , 3,97 (s, 3H) , 3,87 (d, J = 8,6 Hz , 1H) , 2,63-2,58 (m, 1H) , 2,46-2,41 (m, 1H) , 1,79-1,10 (m, 24H) , 1,27 y 1,26 (2 x d, J = 6,5 Hz, 6H) . MS; es*: 777,0 (M+H)*, es": 775,0 (M-H)".

EJEMPLO 36 Síntesis del compuesto n° 716 XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm) 8,62 (s, 1H) , 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,64-7,54 (m, 2H) , 7,47 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,16 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H) , 7,03 (d, J = 6,0 Hz, 1H) , 5,63 (s, 1H) , 5,52 (q, J = 9,9 Hz, 1H) , 5,26 (t, J = 8,9 Hz, 1H) , 4,62 (d, J = 11,45 Hz, 1H) , 4,45 (dd, J = 9,2, 8,27 Hz, 1H) , 4,02 (m, 1H) , 3,93 (s, 3H) , 3,7 (dd, J = 7,6, 1,0 Hz, 1H) , 2,66 (s, 3H) , 2,55-2,65 (m, 1H) , 2,35-2,45 (m, 1H) , 2,17 (q, J = 8,6 Hz, 1H) , 1,65-1,75 (m, 2H) , 1,5-1,35 (m, 7H) , 1,15 (s, 9H) . MS: 705 (M+l) , 703 (M-l) EJEMPLO 37 Síntesis del compuesto n° 717 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm) : 8,62 (s, 1H) , 8,15 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,62 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,19 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 5,4 Hz, 1H) , 5,64 (s, 1H) , 5,52 (q, J = 9,9 Hz, 1H) , 5,26 (t, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,63 (d, J = 11,44 Hz, 1H) , 4,45 (t, J = 9,2 Hz, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 3,9-3,8 (m, 1H) , 2,7-2,55 (m, 1H) , 2,4-2,3 (m, 1H) , 2,18 (q, J = 8,9 Hz, 1H) , 1,75-1,65 (m, 2H) , 1,5-1,2 (m, 7H) , 1,14 (s, 9H) MS: 705 (M+l), 703 (M-l) EJEMPLO 38 Síntesis del compuesto n° 718 :H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 9,55 (s, 1H) , 8,63 (s, 1H) , 8,43 (s, 1H) , 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,66 (s, 1H) , 7,46 (s, 1H) , 7,32 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,10-7,07 (m, 2H) , 5,64-5,54 (m, 1H) , 5,59-5,48 (m, 1H) , 5,33-5,23 (m, 1H) , 4,73-4,61 (m, 1H) , 4,45 (dd, J = 7,5, 9,1 Hz, 1H) , 4,09-4,00 (m, 1H) , 3,92 (s, 3H) , 3,93-3,83 (m, 1H) , 2,67-2,55 (m, 2H) , 2,53-2,43 (m, 1H) , 2,42-2,31 (m, 1H) , 2,23-2,12 (m, 1H) , 1,81-1,66 (m, 2H) , 1,52-1,42 (m, 2H) , 1,42-1,25 (m, 6H) , 1,21 (s, 9H) . MS: 689,3 (M+l), 687,3 (M-l) EJEMPLO 39 Síntesis del compuesto n° 722 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 9,70 (s, 1H) , 8,64 (s, 1H) , 8,26 (s, 1H) , 8,14 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,45 (s, 1H) , 7,30 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , 7,14-7,06 (m, 2H) , 5,60-5,54 (m, 1H) , 5,58-5,48 (m, 1H) , 5,31-5,23 (m, 1H) , 4,71-4,62 (m, 1H) , 4,49-4,40 (m, 1H) , 4,08-3,99 (m, 1H) , 3,92-3,84 (m, 1H) , 2,69-2,54 (m, 2H) , 2,53-2,46 (m, 1H) , 2,42-2,31 (m, 1H) , 2,37 (s, 3H) , 2,22-2,13 (m, 1H) , 1,81-1,64 (m, 2H) , 1,54-1,42 (m, 2H) , 1,42-1,27 (m, 6H) , 1,22 (s, 9H) . MS: 703,3 (M+l), 701,3 (M-l) EJEMPLO 40 Síntesis del compuesto n° 733 :H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 8,75 (m, 1H) , 8,62 (s, 1H) , 8,06 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,88-7,87 (m, 1H) , 7,48 (s, 1H) , 7,28 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,05-7,00 (m, 2H) , 6,64-6,63 (m, 1H) , 5,62-5,58 (m, 1H) , 5,55-5,49 (m, 1H) , 5,28-5,24 (m, 1H) , 4,64-4,61 (m, 1H) , 4,48-4,44 (m, 1H) , 4,07-4,03 (m, 1H) , 3,91 (s, 3H) , 3,92-3,85 (m, 1H) , 2,67-2,54 (m, 2H) , 2,53-2,45 (m, 1H) , 2,41-2,34 (m, 1H) , 2,20-2,14 (m, 1H) , 1,75-1,69 (m, 2H) , 1,50-1,43 (m, 2H) , 1,41-1,32 (m, 6H) , 1,17 (s, 9H) . MS: 689,3 (M+l), 687,2 (M-l) EJEMPLO 41 Síntesis del compuesto n° 703 ?E NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d: 8,50 (s, 1H) , 8,19 (s, 1H) , 8,17 (s, 1H) , 8,11-8,00 (m, 1H) , 7,88-7,77 (m, 1H) , 7,73 (s, 1H) , 7,25 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 6,93 (d, J = 6 Hz, 1H) , 5,89-5,68 (m, 1H) , 4,62 (d, J = 11 Hz, 1H) , 4,53 (dd, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,16-4,07 (m, 1H) , 3,96 (s, 3H) , 3,88 (b d, J = 9,5 Hz, 1H) , 3,53-3,43 (m, 2H) , 2,63-2,51 (m, 1H) , 2,46-2,36 (m, 1H) , 1,81-1,62 (m, 2H) , 1,60-1,01 (m, 15H) , 1,24 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,17 (s, 9H) . MS; es*: 751,1 (M+H)*, es': 749,1 (M-H) " .

EJEMPLO 42 Síntesis del compuesto n° 734 XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm) : 8,62 (s, 1H) , 8,54 (s, 1H) , 8,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,70 (s, 1H) , 7,43 (s, 1H) , 7,24 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,05-6,98 (m, 2H) , 5,57-5,54 (m, 1H) , 5,55-5,48 (m, 1H) , 5,28-5,24 (m, 1H) , 4,63-4,59 (m, 1H) , 4,47-4,43 (m, 1H) , 4,13-3,99 (m, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 3,92-3,83 (m, 1H) , 2,67-2,55 (m, 2H) , 2,53-2,46 (m, 1H) , 2,43-2,31 (m, 1H) , 2,22-2,15 (m, 1H) , 2,15 (3H) , 1,75-1,70 (m, 2H) , 1,51- 1,42 (m, 2H) , 1,41-1,28 (m, 6H) , 1,17 (s, 9H) MS:703,2 (M+l), 701,3 (M-l).

EJEMPLO 43 Síntesis del compuesto n° 738 *H NMR (400 MHz, DMSO-ds) : d (ppm): 8,64 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , 8,62 (s, 1H) , 8,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,39 (s, 1H) , 7,24 (d, J = 2,5 Hz, 1H) , 7,04 (d, J = 6,0 Hz, 1H) , 6,99 (dd, J = 2,2, 9,2 Hz, 1H) , 6,43 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 5,62-5,57 (m, 1H) , 5,56-5,47 (m, 1H) , 5,31-5,22 (m, 1H) , 4,65-4,56 (m, 1H) , 4,45 (dd, J = 7,6, 8,9 Hz, 1H) , 4,07-4,00 (m, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 3,88-3,84 (m, 1H) , 2,68-2,56 (m, 2H) , 2,54-2,43 (m, 1H) , 2,42-2,31 (m, 1H) , 2,34 (s, 3H) , 2,24-2,14 (m, 1H) , 1,80-1,64 (m, 2H) , 1,52-1,43 (m, 2H) , 1,43-1,27 (m, 6H) , 1,18 (s, 9H) .

MS:703,2 (M+l), 701,2 (M-l).

EJEMPLO 44 Síntesis del compuesto n° 725 JH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 8,62 (s, 1H) , 8,10 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,57 (s, 1H) ; 7,49 (s, 1H) , 7,35 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,09-7,03 (m, 2H) , 5,65-5,61 (m, 1H) , 5,55-5,49 (m, 1H) , 5,28-5,24 (m, 1H) , 4,62-4,57 (m, 1H) , 4,49-4,45 (m, 1H) , 4,08-4,01 (m, 1H) , 3,93 (s, 3H) , 3,92-3,86 (m, 1H) , 3,20-3,14 (m, 1H) , 2,65-2,56 (s, 1H) , 2,53-2,47 (m, 1H) , 2,42-2,35 (m, 1H) , 2,22-2,15 (m, 1H) , 1,79-1,68 (m, 2H) , 1,50-1,43 (m, 2H) , 1,41-1,28 (m, 12H) , 1,18 (s, 9H) . MS:748,2 (M+l), 746,2 (M-l).

EJEMPLO 45 Síntesis del compuesto n° 726 'H NMR (400. MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 8,64 (s, 1H) , 8,10 (d, J = 9,5 Hz, 1H) , 7,83-7,76 (m, 2H) , 7,60 (s, 1H) , 7,44-7,42 (m, 1H) , 7,18-7,01 (m, 2H) , 5,56-5,49 (m, 2H) , 5,29-5,24 (m, 1H) , 4,66-4,63 (m, 1H) , 4,47-4,42 (m, 1H) , 4,28 (s, 3H) , 4,06-4,02 (m, 2H) , 3,94 (s, 3H) , 3,93-3,86 (m, 1H) , 2,66-2,55 (m, 2H) , 2,42-2,31 (m, 2H) , 2,22-2,14 (m, 1H) , 1,79-1,65 (m, 2H) , 1,52-1,27 (m, 7H) , 1,22 (s, 9H) . MS:703,2 (M+l), 701,3 (M-l).

EJEMPLO 46 Síntesis del compuesto H H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 8,46 (s, 1H) , 8,06 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,57 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,34 (m, 1H) , 7,14-7,05 (m, 2H) , 5,63-5,58 (m, 1H) , 4,66-4,61 (m, 1H) , 4,54-4,44 (m, 2H) , 4,23-4,18 (m, 1H) , 3,93 (s, 3H) , 3,92-3,88 (m, 1H) , 3,21-3,14 (m, 1H) , 2,44-2,33 (m, 1H) , 1,35 (d, J = 7 Hz, 6H) , 1,73-1,01 (m, 26H) . MS:762,0 (M+l), 759,9 (M-l).

EJEMPLO 47 Síntesis del compuesto n° 907 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d (ppm): 8,46 (s, 1H) , 7,98 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,91-7,89 (m, 2H) , 7,23-7,21 (m, 2H) , 7,07-7,00 (m, 2H) , 6,35-6,32 (m, 2H) , 5,64-5,58 (m, 1H) , 4,65-4,61 (m, 1H) , 4,53-4,47 (m, 2H) , 4,24-4,19 (m, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 3,86-3,84 (m, 1H) , 2,40-2,33 (m, 1H) , 1,73-1,01 (m, 26H) . MS:702,0 (M+l), 699,9 (M-l).

EJEMPLO 48 Ensayo fluorogénico de la proteína heterodímera NS3-NS4A de longitud completa La región no codificadora NS2-NS5B-3' fue clonada mediante RT-PCR en el vector pCR®3 (Invitrogen) usando RNA extraído de suero de un individuo infectado por el HCV genotipo lb (proporcionado por el Dr. Bernard Willems, Hópital St-Luc, Montreal, Quebec, Canadá) . La región NS3-NS4A (NS3-NS4AFL) fue después subclonada por PCR en el vector de expre- sión de baculovirus pFastBac™HTa (Gibco/BRL) . La secuencia del vector incluye una región que codifica una secuencia N- terminal de 28 restos que contiene una etiqueta de hexahisti-dina. Se usó el sistema de expresión de baculovirus Bac-to-3ac™ (Gibco/BRL) para producir el baculovirus recombinante. His-NS3-NS4AFL se expresó infectando 106 células Sf21/ml con el baculovirus recombinante a una multiplicidad de infección de 0,1-0,2 a 27°. Durante la expresión ocurre auténtica auto-proteolisis para producir un complejo de proteína NS3-NS4A no covalente y estable (denominado de longitud completa "FL" [Full Lenght] ) . El cultivo infectado se recolectó 48 a 64 h después mediante centrifugación a 4o. El sedimento celular fue homogeneizado en NaP04 50 mM, pH 7,5, 40% de glicerol (p/v) , /3-mercaptoetanol 2 mM, en presencia de un cóctel de inhibidores de proteasa. Después se extrajo la HÍS-NS3-NS4AFL del lisado celular con 1,5% de NP-40, 0,5% de Tritón X-100, NaCl 0,5 M y un tratamiento con DNasa. Después de ultracen-trifugación, el extracto soluble se diluyó 4 veces y se unió en una columna' quelante de Ni Hi-Trap Pharmacia. La His-NS3-NS4AFL se eluyó en forma pura en > 90% (según se juzgó por SDS-PAGE) , usando un gradiente de imidazol de 50 a 400 mM. La His-NS3-NS4AFL se almacenó a -80° en fosfato sódico 50 mM, pH 7,5, 10% (p/v) de glicerol, NaCl 0,5 M, imidazol 0,25 M, 0,1% de NP-40. Se descongeló en hielo y se diluyó justo antes de su uso. La actividad de proteasa de HÍS-NS3 -NS4AFL se ensayó en Tris-HCl 50 M, pH 8,0, citrato sódico 0,25 M, 0,01% (p/v) de n-dodecil-/3-D-maltósido, TCEP 1 mM. Cinco (5) µM del sustrato apagado internamente antranil-DDIVPAbu [C (O) -O] -AMY(3-N02) TW-OH en presencia de varias concentraciones de inhibidor fueron incubados con 1,5 nM de His-NS3-NS4AFL durante 45 min a 23°. La concentración final de DMSO no sobrepasó 5,25%. La reacción se terminó mediante la adición de MES 1M, pH 5,8. La fluorescencia del producto N-terminal se controló en un fluo-rómetro Perkin-Elmer LS-50B equipado con un lector de placas de 96 pocilios (longitud de onda de excitación: 325 nm; Ion- gitud de onda de emisión: 423 nm) . El % de inhibición se calculó con la ecuación siguiente: 100 - [ (fluo,nh-fluob:anco)/(fluoctl-fluoblanco)xl00] Se aplicó un ajuste no lineal con el modelo de Hill a los datos de inhibición-concentración, y se calculó la concentración eficaz al 50% (IC50) usando el software SAS (Sta-tistical Software Systems; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).

EJEMPLO 49 Ensayo radiométrico de la proteasa NS3 de HCV recombinante El sustrato usado para el ensayo radiométrico de la proteasa NS3 de HCV reco bmante, DDIVPC-SMSYTW, es segmentado entre los restos cisteína y serina por la enzima. La secuencia DDIVPC-SMSYTW corresponde al sitio de segmentación natural NS5A/NS5B en el que una prolina ha sido sustituida por el resto cisteína en P2. El sustrato peptídico DDIVPC-SMSYTW y el trazador biotina-DDIVPC-SMS [125I-Y] TW se incubaron con la proteasa NS3 recombinante en ausencia o en presencia de inhibidores. La separación del sustrato de los productos se llevó a cabo añadiendo a la mezcla de ensayo esferas de agarosa recubiertas con avidina, y filtrando a continuación. La cantidad de producto SMS [125I-Y] TW encontrado en el filtrado (con o sin inhibidor) permitió el cálculo del porcentaje de conversión del sustrato y del porcentaje de inhibición. A. Reactivos. El Tris y Tris-HCl (UltraPure) fueron obtenidos de Life Technologies. El glicerol (UltraPure), MES y BSA fueron adquiridos de Sigma®. El TCEP se obtuvo de Pierce, el DMSO de Aldrich® y el NaOH de Anachemia®. Tampón de ensayo: Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, glicerol al 30% (p/v) , CHAPS al 2% (p/v) , 1 mg/ml de BSA, TCEP 1 mM (TCEP se añade inmediatamente antes de usarlo a partir de una solución madre 1M en agua) . Sustrato: DDIVPC-SMSYTW, 25 µM de concentración final (desde una solución madre 2 mM en DMSO almacenada a -20°C para evitar la oxidación) . Trazador: sustrato monoyodado reducido (biotma-DDIVPC-SMS [12SI-Y]TW) (aprox. 1 nM de concentración final). Proteasa NS3 de HCV tipo lb, 25 nM de concentración final (desde una solución madre en fosfato sódico 50 mM, pH 7,5, 10% de glicerol, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, 0,01% de NP-40). B. Protocolo. El ensayo se realizó en una placa de polipropileno de 96 pocilios. Cada pocilio contenía: 20 µl de sustrato/trazador en tampón para ensayo; 10 µl ± de inhibidor en 20% de DMSO/tampón para ensáyelo µl de proteasa NS3 lb. El blanco (sin inhibidor y sin enzima) y el testigo (o control) (sin inhibidor) fueron también preparados en la misma placa de ensayo. La reacción enzimática se inició mediante la adición de la solución de enzima y la mezcla de ensayo se incubó durante 60 min a 23°C'con agitación suave. Se añadieron veinte (20) µl de NaOH 0,025 N para apagar la reacción enzimática. Se añadieron veinte (20) µl de esferas de agarosa recubiertas con avidina (adquiridas de Pierce®) en una placa de filtración Millipore® MADP N65. La mezcla de ensayo apagada se transfirió a la placa de filtración y se incubó durante 60 min a 23°C con agitación suave. Las placas se filtraron usando un aparato Millipore® MultiScreen Vaccuum Manifold Filtration, y 40 µl del filtrado se pasaron a una placa opaca de 96 pocilios que contenía 60 µl de fluido de centelleo por pocilio. Los filtrados se sometieron a recuento en un instrumento Packard® TopCount usando un protocolo de 125I durante 1 minuto. El % de inhibición se calculó con la ecuación siguiente: 100 - [ (cuentaslnh-cuentasblanco) / (cuentasctl-cuentasblanco)xl00] Se aplicó un ajuste no lineal con el modelo de Hill a los datos de inhibición-concentración, y se calculó la concentración eficaz al 50% (IC50) usando el software SAS (Statisti-cal Software Systems; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).

EJEMPLO 50 Ensayos de especificidad La especificidad de los compuestos se determinó frente a diversas proteasas de serina: elastasa leucocitaria humana, elastasa pancreática bovina y a-quimotripsina pancreática bovina y una proteasa de cisteína: catepsina B hepática humana. En todos los casos se utilizó un protocolo de formato de placa de 96 pocilios usando un sustrato cromogénico específico para cada enzima. Cada ensayo incluyó 1 h de preincubación de enzima-inhibidor a TA, seguida por la adición de sustrato e hidrólisis a aprox. 30% de conversión, determinada en un lector de microplacas UV Thermomax® o un lector de placas Perkin-Elmer® LS50B de fluorescencia. Las concentraciones de sustrato se mantuvieron lo más bajas posible en comparación con K„ para reducir la competición del sustrato. Las concentraciones de compuesto variaron de 300 a 0,06 µM, dependiendo de su potencia. Las condiciones finales para cada ensayo fueron las si-guientes: Tris-HCl 50 mM pH 8, Na2S04 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, 3% DMSO, 0,01% Tween-20 con [100 µM de Succ-AAPF-pNA y 250 pM de a-quimotripsina] , [133 µM de Succ-AAA-pNA y 8 nM de elastasa porcina] , [133 µM de Succ-AAV-pNA y 8 nM de elastasa leucocitaria] ; o [NaHP04 100 mM, pH 6 , EDTA 1 mM, DMSO al 3%, TCEP 1 mM, 0,01% de Tween-20, Z-FR-AMC (7-amino-4-metilcumarina) 4 µM y catepsina B 0,5 nM (la enzima de partida fue activada en tampón que contenía TCEP 20 mM antes de usarla) ] . Un ejemplo representativo se resume a continuación para elastasa pancreática porcina: a una placa de 96 pocilios de poliestireno de fondo plano (Cellwells, Corning) se añadió, usando un manipulador de líquidos Biomek (Beckman) : 40 µl de tampón para ensayo (Tris-HCl 50 mM pH 8, Na2S04 1 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM) ; 20 µl de solución de enzima (Tris HCl 50 mM pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, 0,02% Tween-20, elastasa pancreática porcina 40 nM) ; y 20 µl de solución de inhibidor (Tris HCl 50 mM pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, 0,02% Tween-20, inhibidor 1,5 mM-0,3 µM, 15% v/v DMSO) . Después de 60 minutos de preincubación a TA, se añadieron a cada pocilio 20 µl de solución de sustrato (Tris-HCl 50 mM pH 8, Na2S04 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 M, Succ-AAA-pNA 665 µM) , y la mezcla de reacción se siguió incubando a TA durante 60 min, al cabo de los cuales se leyó la absorbancia en el lector de placas UV Thermomax®. Filas de pocilios fueron asignadas para testigos o controles (sin inhibidor) y para blancos (sin inhibidor y sin enzima) . Las diluciones dobles secuenciales de la solución de inhibidor fueron realizadas por el manipulador de líquido en una placa separada, usando Tris-HCl 50 mM pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, 0,02 % Tween-20, 15% DMSO (v/v) . Todos los demás ensayos de especificidad se realizaron de manera similar. El porcentaje de inhibición se calculó usando la fórmula : [1 - ( (uv?ph-uvblanco) / (uvctl-uv ',blanco ) ) ] xl00 Se aplicó un ajuste no lineal con el modelo de Hill a los datos de inhibición-concentración, y se calculó la concentración eficaz al 50% (IC50) usando el software SAS (Sta-tistical Software Systems; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).

EJEMPLO 51 Ensayo de la proteasa NS3 basado en células Este ensayo se hace con células Huh-7, una línea celular humana derivada de un hepatoma, cotransfectadas con 2 construcciones de DNA: una (llamada NS3) que expresa parte de la poliproteína no estructural del HCV fusionada con la proteína tTA a través de un sitio de segmentación NS5A-NS5B por el orden siguiente: NS3-NS4A-NS4B-NS5A- (NS5B) tTA, en donde (NS5B) represénta los 6 primeros aminoácidos de NS5B. Esta poliproteína se expresa bajo el control del promotor CMV, la otra (llamada SEAP) que expresa la proteína informadora, fosfatasa alcalina secretada (SEAP) , bajo la regulación de un promotor respondedor a tTA. La primera construcción conduce a la expresión de una poliproteína a partir de la cual las diferentes proteínas maduras se liberan por segmentación por la proteasa NS3. Se cree que las proteínas virales maduras forman un complejo en la membrana del retículo endoplasmático. La tTA es una proteína de fusión, descrita por Gossen y Bujard (Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89 (1992) : 5547-5551) , que contiene un dominio de unión de DNA y un activador transcripcional. La liberación de la proteína tTA requiere una segmentación dependiente de NS3 en el sitio de segmentación NS5A-NS5B entre NS5A y ella misma. Esta última segmentación permite que la tTA migre al núcleo y transactive el gen de la SEAP. Por consiguiente, la reducción de la actividad proteolítica de NS3 conduce al confinamiento de tTA en el citoplasma y al concomitante descenso de la activdad de SEAP. Para controlar actividades celulares distintas de la in-hibición de la NS3 proteasa que son debidas al compuesto, se hace una co-transfección paralela con una construcción que expresa tTA sola y la misma construcción informadora, de forma que la actividad de SEAP es independiente de la proteasa NS3. Protocolo del ensayo: células Huh-7, desarrolladas en CHO-SFMII (Life Technologies) + 10% de FCS (suero de ternera fe- tal) fueron cs-transfectadas con las dos construcciones de DNA en las proporciones siguientes: 7 µg de NS3 + 500 ng de SEAP + 800 µl de FuGENE (Boehringer Mannheim) por 4 x 106 células Huh-7. Después de 5 horas a 37°C, las células se lavaron, se tripsinaron y se extendieron en placas (a razón de 80.000 células/pocilio) en placas de 96 pocilios que contenían una gama de concentraciones de los compuestos a ensayar. Después de un periodo de incubación de 24 h, se midió la actividad de SEAP en el medio con el ki t Phospha-Light (Tropix) . El análisis del porcentaje de inhibición de la actividad de SEAP con respecto a la concentración de compuesto se realizó con el software SAS para obtener el valor de ECS0.

TABLAS DE COMPUESTOS Las tablas que siguen recogen compuestos representativos de la invención. Se encontró que todos los compuestos expuestos en las Tablas 1 a 9 eran activos en el ensayo enzimático presentado en el Ejemplo 48. Un número acompañado por un asterisco (*) representa actividad enzimática obtenida con el ensayo radiométrico presentado en el Ejemplo 49 con valores de ICS0 por debajo de 50 µM. En estos ensayos enzimáticos, se usó la escala siguiente: A = 1 µM; 1 µM > B > 0 , 1 µM; y C = 0,1 µM. Se ensayaron varios compuestos en los ensayos de especificidad presentados en el Ejemplo 50, y se encontró que eran específicos para la proteasa NS3. En general, los resultados de los diferentes ensayos de especificidad son los siguien-tes: HLE > 300 µM; PPE > 300 µM; a-Chym. > 300 µM; Cat. B > 300 µM, lo que indica que estos compuestos son altamente específicos hacia la proteasa NS3 del CHV y no es de esperar que muestren efectos secundarios graves. Además, algunos de estos compuestos fueron analizados en el ensayo basado en células descrito en el Ejemplo 51, y se encontró que tenían actividad con un valor de EC50 inferior a 10 µM, lo cual es una firme indicación de que estos compuestos pueden atravesar la membrana de la célula. En particular, se han evaluado compuestos de las Tablas 7, 8 y 9 en el ensayo celular y el resultado se ha indicado en la última columna. En este ensayo celular, se usó la codificación siguiente: A > 1 µM; B = 1 µM. Las abreviaturas siguientes se usan en las tablas que siguen a continuación: MS : datos espectrales de masas por electroproyección; m/z MH*, excepto cuando se indique de otra forma mediante un asterisco* = m/z MH"; Ac: acetilo; Bn: bencilo; Boc: terc-butiloxicarbonilo; Ph: fenilo; Pr: propilo.

TABLA 1 estereoisómero simple en R TABLA 2 estereoisómero simple en R1 TABLA 3 estereoisómero simple en R1 TABLA 4 enlace D-R1 syn resp. al ácido TABLA 5 enlace D-R1 syn resp. al ácido TABLA 6 enlace D-R1 syn resp. al ácido enlace D-R1 syn resp. al ácido TABLA 8 enlace D-R1 syn resp. al ácido; doble enlace 13,14: cis TABLA 9 enlace D-R1 syn resp. al ácido Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (62)

REIVINDICACIONES Hs-tai rdcse descrito la ip?ercá cato antecede se reclama CX?D propiedad lo acntenido en las siguientes reivirdi can enes :

1. Un compuesto de fórmula (I) caracterizado porque W es CH o N, ,21 es H, halo, alquilo C1_6 , cicloalquilo C3.6, haloalquilo C1_6 , alcoxi C1_6 , cicloalcoxi C3.6, hidroxi o N(R23)2/ en donde cada R23 es, independientemente, H, alquilo C1_6 o cicloalquilo C3_6; R22 es H, halo, alquilo C1_6 , cicloalquilo C3_6, haloalquilo tioalquilo C1_6 , alcoxi C1_6 , cicloalcoxi C3_6, alcoxi C2_7- alquilo, cicloalquilo C3.s, arilo C6 ó 10 o Het, en donde Het es un heterociclo de cinco, seis o siete miembros, saturado o insaturado, que contiene de uno a cuatro heteroátomos elegidos entre nitrógeno, oxigeno y azufre; estando dichos cicloalquilo, arilo o Het sustituidos con R24, en donde R24 es H, halo, alquilo C1_6, cicloalquilo C3_6, alcoxi CLS, cicloalcoxi C3-6, N02, N(R25)2; NH-C(0)-R25; o NH-C(0)-NH- R25, en donde cada R25 es, independientemente: H, alquilo C^ o cicloalquilo C3.6; o R24 es NH-C (O) -OR26, en donde R26 es alquilo C1_6 o cicloalquilo C3.6; R3 es hidroxi, NH2, o un grupo de fórmula -NH-R31, en donde R31 es arilo Cs 610, heteroarilo, -C(0)-R32, -C(0)-NHR32, o -C(O)- OR32, en donde R32 es alquilo C1_6 o cicloalquilo C3.6; D es una cadena de alquileno de 5 a 10 átomos saturada o in-saturada, que contiene opcionalmente uno a tres heteroátomos independientemente elegidos entre O, S o N-R41, en donde R41 es H, alqui cicloalquilo C 3-6' •C(O) -R42, en donde R4 es alquilo cloalquilo C3_6 o arilo C66 10; R4 es H o de uno a tres sustituyentes en cualquier átomo de carbono de dicha cadena D, siendo dicho sustituyente elegido independientemente entre el grupo formado por: alquilo haloalquilo C1_6 I alcoxi C1_6 , hidroxi, halo, amino, oxo, tio o tioalquilo C1_6 , Y A es una amida de fórmula -C (O) -NH-R5, en donde R5 se elige entre el grupo formado por: alquilo cicloalquilo C3.6, arilo C6 ó 10 o aralquilo C7_16; o A es un ácido carboxílico o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto de fórmula I según la reivindicación lr catterizado parque elresto R1 se elige entre los 2 diastereoisó-meros distintos representados por las estructuras (i) y (ii) : D syn respecto a la amida (i) D syn respecto a A (ii)

3 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación , caracterizado porque D está unido Syn respecto a A corao se representa por la fórmula ( ii) .

4 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación 1, caracterizado parque W es N; ,21 es H, alquilo hidroxi, cloro o N(R23)2, en donde R23 es H o alquilo C^; R22 es H, tioalquilo alcoxi C1_6 , fenilo o Het elegido entre el grupo formado por: en donde R24 es H, alquilo C^ -g6,1 NH-R25, NH-C (O) -R25; NH-C(O)- -NH-R ,2"5, en donde cada R25 es, independientemente: H, alquilo C^g o cicloalquilo C3.6; o NH-C(O) -OR26, en donde R26 es alquilo C^g.

5. Un compuesto de fórmula I según la reivindicación 4, ca- racteriza±) perqué R21 es H o alcoxi C^g.

6. El compuesto de fórmula I según la reivirriiraci.cn 4, ca-racterizado parque R22 es alcoxi C^, fenilo o Het elegido entre el grupo formado por : en donde R24 es H , alquilo C^ , NH-R25 o NH- C (O) -R25 ; en donde cada R25 es alquilo C^g o cicloalquilo C3_6 ; o NH-C (O) -OR26 , en donde R26 es como se definió en la reivindicación 4 .

7 . Un compuesto de fórmula I según la reivindicaci? 6, caracterizado parque R21 es metoxi .

8 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación 7, caracterizado parque R22 es etoxi , o Het elegido entre el grupo formado por : en donde R24a es NH-R25 o NH-C (O) -R25 , en donde R25 es alquilo o R24a es NH-C (O) -OR26 , en donde R26 es alquilo C^ , y R2 b es H o alquilo C1_6 . '

9 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación 1, caracterizado parque R3 es una amida de fórmula NH-C (O) R32 o una urea de fórmula NH-C (O) -NH-R32 o un carbamato de fórmula NH-C (O) - ORJ en donde R32 es alquilo o cicloalquilo C3

10 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación 9, caracterizado porque R3 es una urea o un carbamato , en donde R32 es alquilo o cicloalquilo C4-6 .

11 . El compuesto de fórmula I según la ireivindicacácn 10, caracterizado parque R3 es un carbamato y R32 es terc-butilo , ciclo-butilo o ciclopentilo .

12 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación 1, caracterizado parque D es una cadena de alquileno saturada o insatu-rada , de 6 a 8 átomos de carbono , que contiene opcionalmente uno o dos heteroátomos elegidos independientemente entre : O , S o N-R41 , en donde R41 es H , alquilo Cx.6 o acilo C2_7 .

13 . El compuesto de fórmula I según la reivindicación 12, caracterizado parque D contiene opcionalmente un heteroátomo elegido entre NH ó N-acilo C2_7.

14. El compuesto según la reivindicación 13, caracterizado parque heteroátomo se elige entre NH ó N(Ac) .

15. El compuesto según la reivindicación 13, caracterizado porque cadena D contiene 7 átomos.

16. El compuesto según la reivindicación 15, caracterizado pesque heteroátomo está en la posición 10 de dicha cadena D.

17. El compuesto según la reivindicación 13, caracterizado perqué cadena D es saturada.

18. El compuesto de fórmula I según la reivindicación 12, caracterizad parque D es una cadena de alquileno saturada o insatu- rada, de 6 a 8 átomos, que contiene opcionalmente un heteroátomo elegido entre: O ó S.

19. El compuesto según la reivindicación 18, caracterizado parque cadena D contiene 7 átomos.

20. El compuesto según la reivindicación 19, caracterizado parque heteroátomo está en la posición 9 de dicha cadena D.

21. El compuesto según la reivindicación 20, caracterizada parque cadena D está sustituida en posición 8 con R4, en donde R4 es H o alquilo

22. El compuesto según la reivindicación 21 , caracterizado p_wqe R4 es H o metilo.

23. El compuesto según la reivindicación 22, caracterizado parque R4 es H u 8-(S)-Me.

24. El compuesto según la reivindicación 23, caracterizado parque cadena D es saturada.

25. El compuesto según la reivindicación 19, caracterizacb porque cadena D contiene un doble enlace en posición 11,12.

26. El compuesto según la reivindicación 25, caracterizado parque doble enlace es trans.

27. El compuesto de fórmula I según la reivirriieación 12, caracterizado porque D es una cadena de alquileno todo carbono de 6 a 8 átomos, saturada o insaturada.

28. El compuesto de fórmula I según la reivi dicaci? 27, ca-raetsrizado parque D es una cadena de 7 átqmos .

29. El compuesto de fórmula I según la reivindicación 28 , caracterizado perqu D es saturada.

30. El compuesto según la reivindicación 29, caracterizada porque cadena D está sustituida con R4, en donde R4 es H, oxo, hidroxi, alcoxi o alquilo.

31. El compuesto según la reivindicación 30, caracterizado perqué R4 es H o alquilo C-__6.

32. El compuesto según la reivindicación 31, caracterizada parque R4 es H o metilo.

33. El compuesto según la reivindicación 32, caracterizada parque R4 es H ó 10-(S)-Me.

34. El compuesto de fórmula I según la reivindicación 28, caracterizáis perqué contiene un doble enlace.

35. El compuesto de fórmula I según la reiviniLcaeión 34, caracterizado parque el doble enlace está en posición 13,14 de dicha cadena D.

36. El compuesto de fórmula I según la reivindicación 35, caracterizado perqué el doble enlace es cis.

37. El compuesto según la reivindicación 36, caracterizado porque cadena D está sustituida con R4, en donde R4 es H, oxo, hidroxi, alcoxi

38. El compuesto según la reivindicación 37, caracterizado porque R4 es H o alquilo

39. El compuesto según la reivindicación 38, caracterizado porque R4 es H o metilo.

40. El compuesto según la reivindicación 39, caracterizado parque R4 es H ó 10-(S)-Me.

41. El compuesto de fórmula I según la reivindicacicn 1, caracterizado perqué es un ácido carboxílico.

42. Un compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque W es N; R3 es un grupo de fórmula o -NH-C (O) -NHR32 ó -NH-C(0)-OR ,:32 en donde R32 es alquilo C1_4 o cicloalquilo C4.6; D es una cadena de alquileno de 6 a 8 átomos, saturada o insaturada, unida a R1 syn respecto a A, que contiene opcio-nalmente uno o dos heteroátomos elegidos independientemente entre: O, S ó N-R41, en donde R41 es H o acilo C2-7; R4 es H, o de uno a tres sustituyentes elegidos independientemente entre hidroxi, o alquilo C^; y A es un ácido carboxílico, o una sal o éster del mismo aceptable farmacéuticamente.

43. El compuesto de fórmula I según la reivindicación 42, caracterizado porque R21 es H o metoxi; R22 es alcoxi C1_6 o Het elegido entre el grupo formado por: en donde R2 a es H, alquilo C^ NH-R25, NH-C (O) -R25 O NH-C (O) NH-R25 , en donde R es: H, alquilo Cx_ o cicloalquilo C3_6; o R2 a es NH-C (O) -OR26, en donde R:26 es alquilo C1_6 o cicloal-quilo C3.6; y R24t> es H o alquilo R3 es urea de fórmula N-C(0)-NHR32 o un carbamato de fórmula N-C(0)-0R32, en donde R32 es alquilo o cicloalquilo C 3-6 ' D es una cadena de alquileno de 7 átomos que contiene opcionalmente un doble enlace en posición 11,12 ó 13,14; conteniendo dicha cadena D opcionalmente un heteroátomo ele-gido independientemente entre: O, S, NH, N(Me) o N(Ac); y R4 es H o alquilo C1_6 .

44. El compuesto de fórmula I según la reivindicación 43, caracterizado porque R es metoxi y R es etoxi o en donde R24a es NH- (alquilo C^) , NH-C (O) - (alquilo Cx.4) , NH-C (O) -O- (alquilo C ) ; o NH-C (O) -NH- (alquilo Cx.4) ; D es una cadena C7 todo carbono, saturada o que contiene un doble enlace cis en posición 13,14

45. Un compuesto de fórmula: caracterizado porque comprende un estereoisómero sencillo en R1, en donde el doble enlace, estereoquímica de enlace D-R1 y R22 se define como sigue: Comp. doble enlace: estereoquímica del -22 R , N° enlace D- R1 : 101 12,13-trans IR, D syn resp. a amida fenilo ' 102 ninguno IR, D syn resp. a ácido fenilo; • y 103 ninguno IR D syn resp. a amida fenilo

46. Un compuesto de fórmula: estereoquímica de enlace D-R1 , R21 y R22 se define como sigue : Comp. R3: R4: , doble estereoquímk :a del R : R22: N° i enlace enlace D-R1 202 NH-Boc H , 11,12- IR o ÍS, H H; trans D syn resp. a ácido 203 NH-acctilo , H 11,12- IR o ÍS, H H; ! trans D syn resp a ácido _-_ 205 " "ÑH-Boc ; n-OH mnguno IR o ÍS, H; , 12-OH 1 D syn resp. a ácido ' cis 206 "[ NH-Boc H 13,14- IR, D syn ~H a- cis resp. a acido 207 NH-Boc , H , 13,14- IR, D syn OMe H; ¡ cis resp a ácido 208 ; NH-Boc H 13,14- IR, D syn OMe fc lo; resp. a ácido , cis 209 NH-C(O)- ; H 13,14- IR, D syn ÓMe~ femlo; i resp. a ácido NH-íBu ' cis : 210 NH-Boc H < 13,14- ÍS, D syn OMe femlo; ! s resp. a ácido 1 211 Hj H 13,14- IR, D syn OMe femlo; resp a ácido cis 213 OH H 13,14- IR, D syn OMe H; (un isómero) resp. a acido cis ! 1 214 i NH-Boc 10-oxo 13,14- IR, D syn OMe fenilo; j cis resp a ácido — 215 NH-Boc H ¡ mnguno IR, D syn : ÓMe fenilo; , resp. a acido 217 NH-Boc 10-OH " 3,14-~" IR, D syn OMe fenilo; ' {diastéreo resp a ácido , mixto) , cis — 218 NH-Boc 10-oxo > 13,14- lR, D syp "OMe" fenilo; cis resp. a anuda 219 NH-Ac , H ninguno , IR, D syn OMe fenilo; resp. a acido Comp. 22 R doble estereoquímica del R2\ N° enlace enlace D-R' NH-Boc H 13,14- 2R, D syn OMe 220 resp a amida as 'JO

47. Un compuesto de fórmula: caracterizado porque comprende un estereoisómero sencillo en R1, en donde R3, D, estereoquímica de enlace D-R1, R21 y R22 e define como sigue: Comp. R D estereoquímica R21. ¡ R22. N° del enlace D-R 302 NH-Boc 2R, Dsyn ' OMe Ph; resp a amida 303 NH-Boc IR, Dsyn ' OMe Ph; ' resp a anuda 304 NH-Boc IR, D syn OMe Ph; resp a ácido ' 305 HO IR, D syn '?Me ?hT resp. a ácido

48. Un compuesto de fórmula caracterizado porque el enlace D-R1 está en syn respecto al e uox. e en a ce i, z se de fine como sigue Comp. R4: i ' ; doble N° enlace 11,12 401 H ¡CHj • trans; 402 H ÍCHj as; i 403 H ~To ' trans; 404 "To ~" trans; 1 i Me Comp. X,: doble N° enlace 11, 12 405 O trans; / Me 406 H o ninguno. 407 1 » o ninguno. , Me 408 mnguno. / Me 409 O as; / Me 410 trans; / Me 411 ' S os; Me y 8-(Me)2 ^S <**' 412

49. Un compuesto de fórmula: caracterizado porque el enlace D-R1 está en syn respecto al ácido, Xio, Xn, Xi2 se define como sigue: Comp. N° I** AJJ 501 ¡O CH2 CH,; 502 CH, ^CH, C^; 503 .a^ .CHj NH; 504 ¡CH, N(Me); 505 CHj ! N(CO)Me; 506 CH, ;CH2 N(CO)Ph; 507 ;NH ja^ ICH,; y N(CO)Me Hi CH,. 508

50. Un compuesto de fórmula: caracterizado porque el enlace D-R1 está en syn respecto al ácido, R21 y R22 se define como sigue: -21 22 Comp. N° R R : y OMe 603 ~a

51. Un compuesto de fórmula caracterizado porque el enlace D-R1 está en syn respecto al ácido, X9, X10, ?u, el enlace 13, 14 y R22 se define como sigue - 709 H CH, Ninguno -cp .Ti ' u :; ------- Ninguno -OEt; 715 ' H CH, Cis . : 718 : H cH, 1 Cis r . Comp. , R¡ X X„O doble enlace 13, 14 R22: N° 739 10-(R) Me CH, nmguno 'Ph; 740 10- (S) Me nmguno CH, ""ÍHi

52. caracteriz respecto al áácciiddoo,, eell ddoobbllee ee-nlace 13, 14 esta en cis, se define como sigue: 803 n-Pr H OÉt; " 806 y H OEt; Comp. .32 .22 R: R N°__ 807 ~H~ OEt; 35

53. Un compuesto de fórmula: H caracterizado porque el enlace D-R1 está en syn respecto al ácido, R32, R4, R22 se define como sigue: Comp. 4 32: R: R22: 35

54. Un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C, caracterizado porque se expone el virus a una cantidad inhibidora de proteasa NS3 viral de la hepatitis C del compuesto de fórmula según la reivindicación 1.

55. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad viralmente eficaz anti-hepatitis C de un compuesto de formula I según la reivindicación 1, o una sal o éster del mismo aceptable farmacéuticamente, mezclada con un medio vehículo o agente auxiliar aceptable farmacéuticamente.

56. La composición farmacéutica según la reivindicación 55, caracterizada porque comprende además un agente inmunomodulador adicional.

57. La composición farmacéutica según la reivindicación 56, caracterizada porque el agente inmunomodulador adicional se elige entre el grupo dormado por: interferones a, ß, d.

58. La composición farmacéutica según la reivindicación 55, caracterizada porque comprende además un agente antiviral.

59. La composición farmacéutica según la reivindicación 58, caracterizada porque el egente antiviral se elige entre el grupo formado por: pbavinna y amantadina.

60. La composición farmacéutica según la reivindicación 55, caracterizada porque comprende ademas otro inhibidor de proteasa del HCV.

61. La composición farmacéutica según la reivindicación 55, caracterizada porque comprende además un inhibidor de otras dianas en el ciclo vital HCV, tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa.

62. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 55 para la preparación de un medicamento para tratar una infección viral de hepatitis C en un mamífero . RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos macrocílcicos de la fórmula (I) activos in-vitro y en ensayos celulares contra la proteasa NS3 del virus de la hepatititis C en donde es CH o N; R21 es H, halo alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo, haloalquilo, alcoxi con de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalcoxi, hidroxi o N(R"3)2, en donde R23 es independientemente H, alquilo con de 1 a 6 átomos de carbono o cicloalcoxi; y R22 es H, halo, alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo con de 3 a 6 átomos de C; haloalquilo con de 1 a 6 átomos de carbono, tioalquilo con de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi con 1 a 6 átomos de carbono, cicloalcoxi con de 3 a 6 átomos de carbono, alcoxialquilo con de 2 a 7 de carbono, cicloalquilo con de 3 a 6 átomos de carbono, arilo con de 6 a 10 átomos de carbono o Het, en donde Her es un heterocido saturado o insaturado con cinco, seis o siete miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, el cicloalquilo, arilo o Het esta substituido con R24 en don R24 es H, alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo con de 3 a 6 C; alcoxi con de 1 a 6 C, cicloalcoxi de 3 a 6 C, N02, N(R25)2, NH-C (O) -R25 o NH-C(0)-NH-R2=, en donde R25 es independientemente, H, alquilo con de 1 a 6 átomos de carbono o ciloalquilo con de 3 a 6 átomos de carbono; o R24 es NH-C(0)-OR2d en donde R25 es alquilo con de 1 a 6 C; o cicloalquilo con de 3 a 6 C; R3 es hidroxi, NH2 o un grupo de la fórmula -NR-R31, en donde R31 es un arilo con de 6 a 10 C, heteroarilo, -C(0)-R32, -C(0)-OR37 o -C(0)-NHR32 en donde R32 es alquilo con 1 a 6 C o cicloalquilo con 3 a 6 C; D es una cadena de alquileno saturada o insaturada con de 5 a 10 átomos de carbono opcionalmente contiene de 1 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados de: O, S o N-R41, en donde R~ es H, alquilo con de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo, o -C(0)-R42, en donde R42 es alquilo con de 1 a 6 C; cicloalquilo o arilo con 6 o 10 C; R4 es H o uno de los tres substituyentes en cualquier átomo de carbono de la cadena D, seleccionándose el substituyente independientemente del grupo consistente de: alquilo con de 1 a 6 C; haloalquilo con de 1 a 6 C, alcoxi con de 1 a 6 C, hidroxi, halo, amino, oxo, tio o tioalquilo con 1 a 6 C, y A es una amida de la fórmula -C (O) -NH-R5, en donde R5 se selecciona del grupo consistente de alquilo con de 1 a 8 C, cicloalquilo con de 3 a 6 C; arilo con 6 o 10 C, aralquilo con de 7 a 16 C; o A es ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable o un ester.