MX2014011648A - Derivado de acido nipecotico y el uso del mismo para propositos medicos. - Google Patents

Abstract

La presente invención tiene como finalidad un compuesto que tiene actividad inhibitoria de sEH y proporcionar un producto farmacéutico que tiene efecto farmacéutico y efecto profiláctico en la enfermedad renal crónica o hipertensión pulmonar con base en la acción inhibitoria de sEH. La presente invención proporciona derivados de ácido nipecótico representados por la fórmula general posterior y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Description

DERIVADO DE ACIDO NIPECOTICO Y EL USO DEL MISMO PARA PROPOSITOS MEDICOS Campo de la Invención La presente invención se refiere a derivados de ácido nipecótico y sus usos farmacéuticos.

Antecedentes de la Invención Debido a un incremento en los pacientes con enfermedades renales, se están incrementando a nivel mundial los pacientes con diálisis, y el número de pacientes con enfermedades renales se ha incrementado no menos de 10 veces durante los últimos 30 años. Bajo estas circunstancias, se propuso en el 2002 un nuevo concepto de enfermedad, la enfermedad renal crónica, y una amplia variedad de enfermedades renales, que varían desde el estado donde está disminuida la función renal pero no se ha presentado falla renal hasta el estado donde la falla renal está en la etapa terminal, ahora se llaman enfermedades renales crónicas (Documento 1 no de patente) . Esto es debido a que ha llegado a ser claro que, aún en casos donde el síntoma es solo una disminución en la función renal, la persistencia de este hallazgo sin tratamiento del síntoma es más probable que provoque progreso del síntoma a la falla renal, en la cual se encuentran altos niveles de creatinina en suero (referida más adelante en la presente como sCre) y cistatina C en suero Ref. 250353 (referida más adelante en la presente como Cys-C) En la etapa terminal de la falla renal, los pacientes con enfermedad renal crónica no pueden sobrevivir sin diálisis artificial o trasplante renal. Por lo tanto, se deteriora notablemente la calidad de vida de los pacientes. Los ejemplos de enfermedades primarias que pueden provocar falla renal que requiere diálisis artificial incluyen glomerulonefritis y nefropatía diabética. Los pacientes con falla renal crónica desarrollan frecuentemente una enfermedad cardiovascular, lo que incrementa adicionalmente el riesgo de mortalidad. De esta manera, también desde el punto de vista de suprimir el desarrollo de enfermedades cardiovasculares como complicaciones, se ha considerado que es muy importante el tratamiento de la enfermedad renal crónica.

Sin embargo, puesto que no hay un agente terapéutico efectivo para la enfermedad renal crónica, a los pacientes con enfermedad renal crónica se les prescriben fármaco anti-hipertensivos de angiotensina tal como antagonistas del receptor de angiotensina II e inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina para el control estricto de la presión sanguínea, impidiendo de este modo el progreso de la enfermedad renal crónica el desarrollo y progreso de enfermedades cardiovasculares como complicaciones (Documento 2 no de patente) .

Por otra parte, la hipertensión pulmonar es un término general de los estados de enfermedad en los cuales se encuentra una presión incrementada de las arterias pulmonares. Se conoce que la hipertensión pulmonar deteriora notablemente la tolerancia a ejercicio y es progresiva en la mayoría de los casos, y que es pobre la prognosis de la hipertensión pulmonar. En individuos saludables, la presión de las arterias pulmonares se mantiene por abajo de la presión sanguínea sistémica. Sin embargo, los pacientes con hipertensión pulmonar, la presión arterial pulmonar, media no es menos de 25 mmHg (no menos de 30 de mmHg en el ejercicio) , y la persistencia de esta condición durante un largo tiempo puede inducir la hipertrofia ventricular derecha o insuficiencia cardíaca derecha, o puede dar por resultado la muerte en el peor de los casos.

Puesto que el vasoespasmo pulmonar se ha considerado que es una causa del desarrollo de la hipertensión pulmonar, se lleva a cabo el tratamiento de la hipertensión pulmonar usando un vasodilatador pulmonar de acción corta tal como un derivado de prostaciclina, un antagonista del receptor de endotelina o un inhibidor de fosfodiesterasa (Documento 3 no de patente) .

Recientemente, se reportó que los ácidos epoxieicosatrienoicos (referidos más adelante en la presente como EET) , que son factores hiperpolarizantes derivados de células endoteliales , tienen la acción de suprimir la elevación de la presión sanguínea y la acción de proteger el endotelio vascular, y tienen la acción de proteger a los órganos en las enfermedades renales y pulmonares (Documentos 4 y 5 no de patente) . Los EET se desactivan por el metabolismo subyacente mediante epóxido-hidrolasa soluble (referida más adelante en la presente como sEH) en ácidos dihidroxieicosatrienoicos (referidos más adelante en la presente como DHET) . Se ha mostrado que los inhibidores de epóxido-hidrolasa soluble (referidos más adelante en la presente como inhibidores de sEH) incrementan el nivel de EET para ejercer una acción para suprimir la elevación de la presión sanguínea y una acción para proteger el endotelio vascular (Documentos 6 a 8 no de patente y Documento 1 de Patente) .

Recientemente, se reportaron compuestos que tienen acción inhibitoria de sEH, y estos compuestos se sugirieron como útiles para el tratamiento de enfermedad renal crónica e hipertensión pulmonar en algunos casos (Documento 8 no de patente y Documentos 1 y 2 de Patente) . Sin embargo, también se reporta que también hay casos donde un compuesto que tiene actividad inhibitoria de sEH no muestra un efecto terapéutico en un modelo de rata espontáneamente hipertensa (Documentos 9 a 11 no de Patente) . Ninguno de los compuestos que tiene una actividad inhibitoria de sEH reportados hasta ahora tiene una estructura de diamina de ácido nipecótico.

Como compuestos que tienen una estructura de diamina de ácido nipecótico, se ha reportado un derivado de heteroaril-amida en el cual se condensa una heteroaril-amina con ácido nipecótico (Documento 3 de Patente) , un derivado de amidina (Documento 4 de Patente) y un derivado de ácido hidroxámico (Documento 5 de Patente) , pero su asociación con la actividad inhibitoria de sEH no se ha descrito ni sugerido .

Documentos de la Técnica Anterior Documentos de Patente Documento 1 de Patente.- WO 2007/106525 Documento 2 de Patente.- JP 2011-16742 A Documento 3 de Patente.- WO 2010/096371 Documento 4 de Patente.- WO 2000/017158 Documento 5 de Patente.- WO 2002/028829 Documentos no de Patente Documento 1 no de patente.- NKF-K/DOQI, American Journal of Kidney Disease, 2001, vol . 37 (suppl. 1), p. S182- S238 Documento 2 no de patente.- Yasuhiko lino et al., "CKD Practice Guidelines 2009", Japanese Society of Nephrology ed., 2009, p. 58-68 Documento 3 no de Patente.- Toru Sato, The Medical Frontline, 2010, vol. 65(8), p. 1698-1702 Documento 4 no de Patente.- Lee et al., The Journal of the Federation of America Societies for Experimantal Biology, 2010, vol . 24, p. 3770-3781 Documento 5 no de Patente] Dhanasekaran et al., AJP-Heart and Circulatory Physiology, 2006, vol. 291, H517-H531 Documento 6 no de Patente . - Spector et al . , Progress in Lipid Research, 2004, vol. 43, p.55-90 Documento 7 no de Patente . - Larsen et al . , Trends in Pharmacological Science, 2006, vol. 28(1), p. 32-38 Documento 8 no de Patente.- Imig et al., Pharmaceuticals, 2009, vol. 2, p. 217-227 Documento no de Patente 9.- Shen et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2009, vol. 19, p. 3398-3404 Documento 10 no de patente.- Shen et al., Journal of Medicinal Chemistry, 2009, vol. 52, p. 5009-5012 Documento 11 no de patente . - Shen et al . , Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2009, vol. 19, p. 5314-5320.

Breve Descripción de la Invención Problemas que se van a solucionar por la Invención Sin embargo, en el tratamiento de la enfermedad renal crónica, es insuficiente el control de la presión sanguínea solo mediante fármacos antihipertensivos de angiotensina , para prevenir el progreso de la enfermedad renal crónica y hay una cuestión ya que estos fármacos pueden provocar efectos secundarios tal como tos. Además, aún no se han establecido métodos terapéuticos y métodos profilácticos para la hipertensión pulmonar y los fármacos actuales prescritos para el tratamiento de hipertensión pulmonar (derivados de prostaciclina, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de fosfodiesterasa y similares) pueden provocar efectos secundarios tal como cefalea, enrojecimiento y hepatotoxicidad.

Puesto que la enfermedad renal crónica y la hipertensión pulmonar son enfermedades severas que pueden deteriorar de manera notable la calidad de vida de los pacientes, y puesto que los pacientes con estas enfermedades tienen un riesgo de mortalidad, se ha demandado la creación, tan pronto como sea posible, de fármacos que ejerzan sus efectos benéficos con base a los mecanismo patógenos de las enfermedades. Por otra parte, puesto que a un compuesto que tiene una actividad inhibitoria de sEH no muestra necesariamente un efecto terapéutico en la hipertensión (Documentos 10 a 12 no de Patente) , ha sido difícil encontrar inhibidores de sEH que tengan efectos terapéuticos en la deficiencia renal crónica y/o hipertensión pulmonar.

Sin embargo, los presentes inventores consideraron que, si se puede descubrir un compuesto que inhiba fuertemente sEH para suprimir una disminución en la función renal y/o elevación de la presión arterial pulmonar con base a su acción, se puede predecir que el compuesto no afecta los tejidos normales en los cuales no se incrementa la expresión de sEH, y por lo tanto se puede crear un producto farmacéutico seguro sin la cuestión de efectos secundarios .

En vista de esto, la presente invención tiene como finalidad proporcionar un compuesto que tiene una actividad inhibitoria de sEH y proporcionar un producto farmacéutico que tiene un efecto terapéutico y un efecto profiláctico en la enfermedad renal crónica e hipertensión pulmonar con base a la inhibición de sEH.

Medios para Solucionar los Problemas Como resultado del estudio intensivo para solucionar los problemas descritos anteriormente, los presentes inventores descubrieron que los nuevos derivados de ácido nipecótico y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos muestran fuerte actividad inhibitoria de sEH, y tienen un excelente efecto terapéutico y efecto profiláctico en la enfermedad renal crónica e hipertensión pulmonar con base a esta acción, completando de este modo la presente invención.

Es decir, la presente invención proporciona derivados de ácido nipecótico representados por la Fórmula General (I) posterior, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos: í i ) [en donde R1 representa hidroxi, ciano, C1-C6 alquilo o alquiloxi, C3-C6 cicloalquilo o cicloalquiloxi , C2-C7 alquiloxialquilo , C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en cada uno del alquilo, alquiloxi, cicloalquilo, cicloalquiloxi, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, de 1 a 3 átomos de hidrógeno se sustituyen cada uno independientemente por un átomo de halógeno, hidroxi, ciano, -SR6, -S(=0)-R6 o -S(=0)2R6), -N (R6) C ( =0) R7 , N (R6) S (=0) 2R7, - C(=0)N(R6)R7 o heteroarilo que tiene 5 átomos que constituyen el anillo; R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, Ci-C6 alquilo o C2-C7 alquiloxialquilo (en donde, en cada uno del alquilo y alquiloxialquilo, se sustituyen cada uno independientemente de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi o ciano) , o representan conjuntamente - (CH2)i- o - (CH2) m-0- (CH2) n- , con la condición que R2 y R3 no representan simultáneamente un átomo de hidrógeno; R4 y R5 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, átomo de halógeno, ciano, C1-C6 alquilo o alquiloxi, C3-C6 cicloalquilo o cicloalquiloxi (en donde, en cada uno del alquilo, alquiloxi, cicloalquilo y cicloalquiloxi, se reemplazan cada uno independientemente y de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno) o -C(=0)NH2, con la condición que R4 y R5 no representen simultáneamente alquiloxi; R6 representa un átomo de hidrógeno o Ci-C6 alquilo; R7 representa Ci-Cs alquilo, C3-C6 cicloalquilo, C2-C7 alquiloxialquilo o C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en cada uno del alquilo, cicloalquilo, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, se sustituyen cada uno independientemente y de forma opcional 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi o ciano) ; 1 representa un número entero de 2 a 5 ; y m y n representan cada uno independientemente 1 o 2] .

De manera preferente, en el derivado de ácido nipecótico, R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o C1-C6 alquilo, o representan conjuntamente -(CH2)i-, con la condición que R2 y R3 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno; R4 representa un sustituyente en la posición 2 en el anillo de benceno; y R5 representa un sustituyente en la posición 4 en el anillo de benceno.

Estos casos son excelentes puesto que se puede esperar una fuerte actividad inhibitoria de sEH.

De manera más preferente, en el derivado de ácido nipecótico, R1 representa -N (R6) C (=0) R7 o -N (R6) S (=0) 2R7; R4 representa a átomo de halógeno, o C1-C6 alquilo o alquiloxi; R5 representa a átomo de halógeno, ciano, o i-Ce alquilo o alquiloxi; y R6 representa un átomo de hidrógeno. De manera especialmente preferente, R1 representa - (H) C (=0) CH2CH3 ; R2 y R3 representan conjuntamente -(CH2) 3- ; R4 representa -0CF3; y R5 representa ciano.

En estos casos, se puede esperar una más fuerte actividad inhibitoria de sEH y se puede lograr excelente farmacocinéticas . Por lo tanto, se pueden esperar mejores efectos terapéuticos en la enfermedad renal crónica y en la hipertensión pulmonar.

La presente invención también proporciona un producto farmacéutico que comprende como un componente efectivo el derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Este producto farmacéutico es preferentemente un inhibidor de sEH, de manera más preferente un agente terapéutico o agente profiláctico para la enfermedad renal crónica o hipertensión pulmonar.

Efecto de la Invención El derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la presente invención, tiene una fuerte actividad inhibitoria de sEH y con base a esta acción, puede ejercer un excelente efecto terapéutico o efecto profiláctico en la enfermedad renal crónica e hipertensión pulmonar. Por lo tanto, a los pacientes se les puede proveer con una prescripción apropiada para sus síntomas y se pueden reducir de este modo los efectos secundarios en los pacientes.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 es un diagrama que ilustra la acción del Compuesto 1 de Ejemplo en el nivel de sCre en un modelo de nefritis administrado con un antisuero anti-membrana base glomerular de rata antisuero (anti-membrana base glomerular, referido más adelante en la presente como antisuero GBM) .

La Figura 2 es un diagrama que ilustra la acción del Compuesto 1 de Ejemplo en la relación de cada puntuación de área de lesión en un modelo de nefritis administrado con antisuero anti-GBM de rata.

La Figura 3 es un diagrama que ilustra la acción del Compuesto 2 de Ejemplo en el nivel de sCre en el modelo de nefritis administrado con antisuero anti-GBM de rata.

La Figura 4 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 1 de Ejemplo en la presión sistólica ventricular derecha en un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata.

La Figura 5 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 1 de Ejemplo en la relación del peso ventricular derecho en un modelo de hipertensión pulmonar 1 administrado con monocrotalina de rata.

La Figura 6 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 1 de Ejemplo en la relación de peso de pulmón en un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata.

La Figura 7 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 1 de Ejemplo en la relación de peso ventricular derecho en un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata.

La Figura 8 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 2 de Ejemplo en la presión sistólica ventricular derecha en un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata.

La Figura 9 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 2 de Ejemplo en la relación del peso ventricular derecho en un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata.

La Figura 10 es un diagrama que ilustra la acción del compuesto 2 de Ejemplo en la relación del peso de pulmón en un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata.

Descripción Detallada de la Invención El derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención se representa por la Fórmula General (I) a continuación: { i ) [en donde R1 representa hidroxi, ciano, C1-C6 alquilo o alquiloxi, C3-C6 cicloalquilo o cicloalquiloxi , C2-C7 alquiloxialquilo, C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en cada uno del alquil, alquiloxi, cicloalquilo, cicloalquiloxi, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, se sustituyen cada uno independientemente de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi, ciano, -SR6, S(=0)-R6 O -S(=0)2R6), -N(R6)C(=0)R7, -N (R6) S (=0) 2R7, C(=0)N(R6)R7 o heteroarilo que tiene 5 átomos que constituyen el anillo; R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, Ci-C6 alquilo o C2-C7 alquiloxialquilo (en donde, en cada uno del alquilo y alquiloxialquilo, se sustituyen cada uno independientemente y de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi o ciano), o conjuntamente representan -(CH2)].- o -(CH2)m-0-(CH2)n-, con la condición que R2 y R3 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno; R4 y R5 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, ciano, C1-C6 alquilo o alquiloxi, C3-C6 cicloalquilo o cicloalquiloxi (en donde, en cada uno del alquilo, alquiloxi, cicloalquilo y cicloalquiloxi, se sustituyen cada uno y de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno) o - C(=0) NH2 , con la condición que R4 y R5 no representen simultáneamente alquiloxi; R6 representa un átomo de hidrógeno o C1-C6 alquilo; R7 representa C1-C6 alquilo, C3-C6 cicloalquilo, C2-C7 alquiloxialquilo o C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en cada uno del alquilo, cicloalquilo, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, se sustituye cada uno independientemente y de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo 0 de halógeno, hidroxi o ciano) ; 1 representa un número entero de 2 o 5 ; y m y n representan cada uno independientemente 1 o 2] .

El " C1-C6 alquilo" significa un grupo de hidrocarburo C1-C6 lineal, o C3-C6 ramificado, saturado, los 5 ejemplos del "C1-C6 alquilo" incluyen metilo, etilo, 1- propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-2-propilo (tere-butilo), 2-metil-l-propilo, 2,2- dimetil-l-propilo, 1- pentilo, 2-pentilo y 3-pentilo.

El " C1-C6 alquiloxi" significa un grupo en el cual Q el Ci - C6 alquilo se une a un átomo de oxígeno, y los ejemplos del C1-C6 alquiloxi incluyen metoxi , etoxi, 1-propiloxi, 2- propiloxi, 1-butiloxi y 2-butiloxi.

El " C3-C6 cicloalquilo" significa ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. 5 El "C3-C6 cicloalquiloxi" significa ciclopropiloxi , ciclobutiloxi , ciclopentiloxi y ciclohexiloxi.

El "C2-C7 alquiloxialquilo" significa un grupo que tiene de 2 a 7 átomos de carbono, en el cual se reemplaza un átomo de hidrógeno en un grupo alquilo por un grupo alquiloxi. Los ejemplos de C2-C7 alquiloxialquilo incluyen y metoximetilo, metoxietilo, metoxipropilo, etoximetilo, propoximetilo y isopropoximetilo .

El "C4-C7 cicloalquilalquilo" significa un grupo que tiene de 4 a 7 átomos de carbono, en el cual se remplaza un átomo de hidrógeno en un grupo alquilo por un grupo cicloalquilo . Los ejemplos del C4-C7 cicloalquilalquilo incluyen ciclopropilmetilo, ciclopropiletilo, ciclopropilpropilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo y ciclohexilmetilo .

El "átomo de halógeno" significa un átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo o átomo de yodo.

El "heteroarilo que tiene 5 átomos que constituyen el anillo" significa un grupo heteroaromático que tiene 5 átomos que constituyen el anillo, que comprende de 1 a 4 átomos idénticos diferentes cada uno seleccionado del grupo que consiste de un átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno y átomo de azufre. Los ejemplos del heteroarilo que tiene 5 átomos que constituyen el anillo incluyen pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, furanilo y tiazolilo.

En el derivado de ácido nipecótico, R1 en la Fórmula General (I) es de manera preferente - N(R6)C(=0)R7 o -N (R6) S (=0) 2R7, de manera más preferente acetilamidilo, propionamidilo o metanosulfonilamidilo.

De manera preferente, R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o C1-C6 alquilo, o representan conjuntamente -(CH2)i-. De manera más preferente, R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o C1-3 alquilo (en donde, en el alquilo, un átomo de hidrógeno se puede sustituir por hidroxi) , o representan conjuntamente -(CH2)2- o -(CH2)3-. De manera aún más preferente, R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, metilo o 2- hidroxi-2-propilo, o representan conjuntamente - { E2) 2- o - (0.2)3-· Sin embargo, R2 y R3 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno.

R4 es de manera preferente un sustituyente en la posición 2 en el anillo de benceno. R4 es de manera preferente a átomo de halógeno, o C1-C6 alquil o alquiloxi; de manera más preferente a átomo de halógeno o alquiloxi; de manera aún más preferente alquiloxi.

R5 es preferentemente un sustituyente en la posición 4 en el anillo de benceno. R5 es de manera preferente a átomo de halógeno, ciano, C1-C6 alquilo o C1-C6 alquiloxi; de manera más preferente un átomo de halógeno o ciano.

R6 es de manera preferente a átomo de halógeno, y R7 es preferentemente metilo o etilo. 1 representa preferentemente 2 o 3 ; m representa preferentemente 2 ; y n representa preferentemente 2.

El derivado de ácido nipecótico representado por la Fórmula General (I) (referido más adelante en la presente como el derivado de ácido nipecótico (I)) comprende al menos un átomo de carbono asimétrico, y existen diastereómeros e isómeros ópticos. El derivado de ácido nipecótico (I) no se limita a un tipo individual de isómero, y los ejemplos del derivado de ácido nipecótico (I) también incluyen mezclas racémicas y mezclas diastereoméricas . En los casos donde existen isómeros rotacionales, los ejemplos de derivado de ácido nipecótico incluyen todos los isómeros rotacionales.

Los ejemplos de la sal farmacéuticamente aceptable del derivado de ácido nipecótico (I) incluyen sales de adición de ácido tal como clorhidrato, trifluoroacetato, sulfato, nitrato, bromhidrato, yodhidrato y metanosulfonato. Se prefieren clorhidrato, sulfato, bromhidrato y yodhidrato y metanosulfonato.

Como la materia prima y los reactivos que se van a usar para la producción del derivado de ácido nipecótico (I), se pueden usar productos comercialmente disponibles como están o la materia prima y los reactivos se pueden sintetizar por métodos conocidos.

Se puede producir un derivado de ácido nipecótico (I-a) , como se muestra en el esquema de reacción 1 posterior, por reacción de condensación entre un derivado de amina (II) y un derivado de ácido carboxílico (III) en la presencia de una base y un agente condensador.

Esquema de Reacción 1 Condensación ¡ i [ ) ( f - a ) [en donde R1 representa hidroxi , ciano, Ci-Ce alquilo o alquiloxi, C3- C6 cicloalquilo o cicloalquiloxi , C2-C7 alquiloxialquilo, C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en el alquilo, alquiloxi, cicloalquilo, cicloalquiloxi, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, se sustituyen cada uno independientemente de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi, ciano, -SR6, -S(=0)-R6 o -S(=0)2R6). R2 a Re son los mismos como se define anteriormente] .

Los ejemplos del agente condensador que se va a usar para la reacción de condensación incluyen ciclohexilcarbodiimida , clorhidrato de N-etil-N'-3-dimetilaminopropilocarbodiimida, sal de benzotriazol-1-iloxi- trisdimetilaminofosfonio (reactivo BOP) , hexafluorofosfato de 1- [bi s (dimetilamino) metilen] - 1H-benzotriazolio-3 -óxido (HBTU) y hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il) tetrametiluronio (referido más adelante en la presente como HATU) . Se prefiere HATU. La equivalencia del agente condensador es preferentemente de 1 a 10 equivalentes, de manera más preferente 1 a 3 equivalentes .

Los ejemplos del solvente usado para la reacción de condensación incluyen N,N- dimetilformamida (referido más adelante en la presente como DMF) , tetrahidrofurano (referido más adelante en la presente como THF) , diclorometano , cloroformo, éter dietílico y éter dimetílico. Se prefieren DMF y THF, y es más preferido DMF.

La base que se va a usar para la reacción de condensación incluye bases orgánicas tal como diisopropiletilamina (referido más adelante en la presente como DIPEA) , trietilamina (referido más adelante en la presente como TEA) , piridina y N-metilmorfolina ; y sales de ácido orgánicos tal como carbonato de potasio, carbonato de sodio y carbonato ácido de sodio. Se prefieren DIPEA y TEA. La equivalencia de la base es de manera de 1 a 100 equivalentes, de manera más preferente de 1 a 10 equivalentes con respecto al derivado de amina (II) .

La equivalencia del derivado de ácido carboxílico (III) que se va a usar para la reacción de condensación es de manera preferente de 0.1 a 100 equivalentes, de manera más preferente de 0.1 a 10 equivalentes, de manera aún más preferente de 0.8 a 2 equivalentes con respecto al derivado de amina (II) .

La temperatura de reacción durante la reacción de condensación es de manera preferente de -50°C a 100°C, de manera más preferente de 0 a 50°C, de manera aún más preferente de 0 a 30°C. El tiempo de reacción de la reacción de condensación es de manera preferente de 1 minuto a 48 horas, de manera más preferente 1 minuto a 24 horas, de manera aún más preferente de 10 minutos a 24 horas.

La concentración del derivado de amina (II) al comienzo de la reacción de condensación es de manera preferente de 0.01 a 100 M, de manera más preferente de 0.01 a 10 M, de manera aún más preferente de 0.1 a 10 M .

Se puede producir un derivado de ácido nipecótico (I-b) en el cual R1 es -N (H) C (=0) R7, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 2 de Reacción posterior, por la reacción de condensación entre un derivado de amina (IV) y un derivado de cloruro ácido (V) en la presencia de una base, o por reacción de condensación entre un derivado de amina (IV) y un derivado de ácido carboxílico (VI) en la presencia de una base y un agente condensador.

Esquema de Reacción 2 Condensación [en donde R2 a R5 y R7 son los mismos como se define anteriormente] .

Los ejemplos del solvente que se va a usar para la reacción de condensación con un derivado de cloruro ácido (V) incluyen diclorometano, 1 , 2-dicloroetano, acetonitrilo, DMF, THF, dioxano, éter dietilico y 1 , 2 -dimetoxietano . Se prefieren diclorometano, 1,2- dicloroetano, acetonitrilo y THF y son más preferidos diclorometano y 1,2- dicloroetano.

La equivalencia del cloruro ácido (V) que se va a usar para la reacción de condensación con el derivado de cloruro ácido (V) es de manera preferente de 0.1 a 10 equivalentes, de manera más preferente de 1 a 3 equivalentes, de manera aún más preferente de 1 a 1.5 equivalentes con respecto al derivado de amina (IV) .

Los ejemplos de la base que se va a usar para la reacción de condensación con el derivado de cloruro de ácido (V) incluyen bases orgánicas tal como DIPEA, TEA, piridina y N- metilmorfolina. Se prefieren DIPEA y TEA. La equivalencia de la base es preferentemente de 1 a 100 equivalentes, de manera más preferente de 1 a 10 equivalentes con respecto al derivado de amina (IV) .

La temperatura de reacción durante la reacción de condensación con el derivado de cloruro ácido (V) es de manera preferente de -50 a 100 °C, de manera más preferente de -20°C a 60°C, de manera aún más preferente de 0 a 40°C. El tiempo de reacción de la reacción de condensación con el cloruro ácido (V) es de manera preferente 30 minutos a 24 horas, de manera más preferente 30 minutos a 12 horas, de manera aún más preferente 30 minutos a 8 horas.

La concentración del derivado de amina (IV) al comienzo de la reacción de condensación con el derivado de cloruro de ácido (V) es de manera preferente de 0.01 a 100 M, de manera más preferente de 0.01 a 10 M, de manera aún más preferente de 0.1 a 10 M.

Por otra parte, la reacción de condensación entre el derivado de amina (IV) y el derivado de ácido carboxílico (VI) se puede llevar a cabo bajo las mismas condiciones como en el Esquema 1 de Reacción.

Se puede preparar un derivado de ácido nipecótico (I-c) en el cual R1 es -N (H) S (=0) 2R7, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 3 de Reacción posterior, por la reacción de sulfonamidación de un derivado de amina (IV) y un derivado de cloruro de ácido sulfónico (VII) en la presencia de una base.

Esquema de Reacción 3 SulfonamkJaciOn [en donde R2 a R5 y R7 son los mismos como se define anteriormente] .

Los ejemplos del solvente que se va a usar para la reacción de sulfonamidación incluyen diclorometano, 1,2-dicloroetano, acetonitrilo, DMF, THF, dioxano, éter dietílico y 1 , 2 -dimetoxietano . Se prefieren diclorometano, 1,2-dicloroetano, acetonitrilo y THF, y son más preferidos diclorometano y 1 , 2 -dicloroetano .

La equivalencia del derivado de cloruro de ácido sulfónico (VII) que se va a usar para la reacción de sulfonamidación es de manera preferente de 0.1 a 10 equivalentes, de manera más preferente de 1 a 3 equivalentes, de manera aún más preferente de 1 a 1.5 equivalentes con respecto al derivado de amina (IV) .

Los ejemplos de la base que se va a usar para la reacción de sulfonamidación incluyen bases orgánicas tal como DIPEA, TEA, piridina y N-metilmorfolina . Se prefieren DIPEA y TEA. La equivalencia de la base es de manera preferente de 1 a 100 equivalentes, de manera más preferente 1 a 10 equivalentes con respecto al derivado de amina (IV) .

La temperatura de reacción durante la reacción de sulfonamidación es de manera preferente de -50 a 50 °C, de manera más preferente de -30°C a 30°C, de manera aún más preferente de -20°C a 20°C. El tiempo de reacción de la reacción de sulfonamidación es de manera preferente de 30 minutos a 24 horas, de manera más preferente de 30 minutos a 12 horas, de manera aún más preferente de 30 minutos a 8 horas .

La concentración del derivado de amina (IV) al comienzo de la reacción de sulfonamidación es de manera preferente de 0.01 a 100 M, de manera más preferente de 0.01 a 10 M, de manera aún más preferente de 0.1 a 10 M.

El derivado de amina (IV) , que es la materia prima en los Esquemas 2 y 3 de Reacción mostrados anteriormente, se puede producir, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 4 de Reacción posterior, por la reacción de condensación entre un derivado de amina (II) y un derivado de ácido carboxílico (VIII) en la presencia de una base, seguido por reacción de desprotección para remoción de un grupo protector.

Esquema de Reacción 4 1 ) Condensación ( i i : < I V) [en donde R2 a R5 son los mismos como se definen anteriormente, y R8 representa un grupo protector] .

La reacción de condensación entre el derivado de amina (II) y el derivado de ácido carboxílico (VIII) se puede llevar a cabo bajo las mismas condiciones como en el Esquema 1 de Reacción.

La reacción de desprotección después de la reacción de condensación se puede llevar a cabo, por ejemplo, por el método conocido descrito en Protective Groups in Organic Synthesis 3ra Edición (Green et al., 1999, John Wiley & Sons, Inc.) . Por ejemplo, en los casos donde el grupo protector es ter-butoxicarbonilo, el grupo protector se puede remover por tratamiento con un ácido fuerte tal como ácido trifluoroacético .

Como el derivado de ácido carboxílico (VIII) en el Esquema 4 de Reacción, se puede usar un producto comercialmente disponible como está, o el derivado de ácido carboxílico (VIII) se puede producir por un método conocido.

El derivado de amina (II) , que es la materia prima en los Esquemas 1 y 4 de reacción mostrados anteriormente, se puede producir, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 5 de Reacción posterior, por la reacción de condensación entre un derivado de bencil-amina (IX) y un derivado de ácido nipecótico (X) en la presencia de una base y un agente condensador, seguido por reacción de desprotección para remoción de un grupo protector.

Esquema de Reacción 5 [en donde R4, R5 y R8 son los mismos como se define anteriormente] .

La reacción de condensación entre un derivado de bencil-amina (IX) y un derivado de ácido nipecótico (X) se puede llevar a cabo bajo las mismas condiciones como en el Esquema 1 de Reacción.

La reacción de desprotección se puede llevar a cabo bajo las mismas condiciones como en el Esquema 4 de Reacción.

La reacción de condensación en el Esquema 5 de Reacción también se puede llevar a cabo en la presencia de una base después de la conversión del derivado de ácido nipecótico (X) a un cloruro de ácido.

Los ejemplos del reactivo que se va a usar para convertir el derivado de ácido nipecótico (X) al cloruro de ácido incluyen cloruro de oxalilo y cloruro de tionilo. El reactivo es preferentemente cloruro de oxalilo. La equivalencia del reactivo es de manera preferente de 1 a 10 equivalentes, de manera más preferente de 1 a 1.5 equivalentes con respecto al derivado de ácido nipecótico (X) .

El solvente que se va a usar para convertir el derivado de ácido nipecótico (X) al cloruro de ácido incluye diclorometano, cloroformo, THF, 1 , 2 -dicloroetano, acetonitrilo, 1,4-dioxano y DMF. El solvente es de manera preferente diclorometano, THF o DMF, o una mezcla de estos solventes . El solvente es de manera más preferente una mezcla de diclorometano y DMF, o una mezcla de THF y DMF. La relación de los solventes en la mezcla es, por ejemplo, en casos de una mezcla de diclorometano y DMF, diclorometano: DMF = preferentemente de 1 a 1000:1, de manera más preferente de 1 a 100:1.

La temperatura de reacción durante la conversión del derivado de ácido nipecótico (X) al cloruro ácido es de manera preferente de -50 a 100°C, de manera más preferente de -30 a 30°C, de manera aún más preferente de -20 a 0°C. El tiempo de reacción de la conversión del derivado de ácido nipecótico (X) al cloruro de ácido es de manera preferente de 30 minutos a 24 horas, de manera más preferente de 30 minutos a 12 horas, de manera aún más preferente de 30 minutos a 2 horas.

La concentración del derivado de ácido nipecótico (X) al comienzo de la reacción para convertir el derivado de ácido nipecótico (X) al cloruro ácido es preferentemente de 0.01 a 100 M, de manera más preferente de 0.01 a 10 M, de manera aún más preferente de 0.1 a 3 M.

El derivado de ácido nipecótico (I) obtenido de esta manera y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y los compuestos intermedios, compuestos de materias primas y reactivos que se van a usar para la producción del derivado de ácido nipecótico (I) ; se pueden aislar/purificar como se requiera por métodos tal como extracción, destilación, cromatografía y/o recristalización.

El producto farmacéutico de la presente invención contiene como un componente efectivo el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y este producto farmacéutico es preferentemente un inhibidor de sEH, de manera más preferente un agente terapéutico o agente profiláctico para enfermedad renal crónica o hipertensión pulmonar. "sEH" es una abreviación de epoxido-hidrolasa soluble, que es una enzima metabólica que cataliza la hidrólisis de un epóxido para convertirlo al correspondiente diol . Los substratos mejor conocidos para sEH son EET, que son factores hiperpolarizantes derivados de células endoteliales . sEH tiene la acción de iniciar los EETs al metabolizarlos a DHET. Los "EET" son una abreviación para ácidos epoxieicosatrienoicos , y "DHET" es una abreviación para ácidos dihidroxieicosatrienoicos . Los ejemplos de los EET incluyen ácido 14 , 15-epoxieicosatrienoico (referido más adelante en la presente como 14,15-EET). Los ejemplos de los DHET incluyen ácido 14 , 15-dihidroxieicosatrienoico (referido más adelante en la presente como 14, 15-DHET).

La "actividad inhibitoria de sEH" significa una actividad para inhibir la acción de sEH. Por consiguiente, la actividad inhibitoria de sEH incluye una actividad que inhibe la reacción enzimática catalizada por sEH en la cual se hidrolizan los EETs, que son substratos de la sEH.

El "inhibidor de sEH" significa un compuesto que tiene actividad inhibitoria de sEH o una composición que contiene el compuesto como un componente efectivo.

Por ejemplo, la actividad inhibitoria de sEH se puede medir a hacer reaccionar sEH de humano con su substrato EET en la presencia de un inhibidor de sEH, seguido por la comparación de la cantidad de DHET producida de este modo con la cantidad de DHET producida en la ausencia del inhibidor de sEH. La actividad inhibitoria de sEH de un inhibidor de sEH también se puede medir al usar un equipo comercialmente disponible (Equipo de Ensayo de Examen de Inhibidor de Epóxido-Hidrolasa Soluble; Cayman) , o por el método descrito en un documento conocido (por ejemplo, Analytical Biochemistry, 2005, vol . 343, p. 66-75).

La actividad inhibitoria de sEH de un inhibidor de sEH también se puede medir al medir la presencia y ausencia del inhibidor de sEH, la producción de aniones de 4-nitrofenolato usando, como el substrato de sEH, 4 -nitro enil- trans-2 , 3 -epoxi -3 -fenilpropilocarbonato racémico, o al medir la producción de 6-metoxi-2-naftaldehído usando, como el substrato de sEH, ciano (6 -metoxinaftalen-2 - il) metil-2 - ( 3 -feniloxiran-2-il) acetato.

La inhibición del metabolismo de EET a DHET, o un incremento en la cantidad de EET, por el producto farmacéutico de la presente invención se puede confirmar al medir la concentración de EET, la concentración de DHET o la relación de EET/DHET . La concentración de EET, la concentración de DHET y la relación de EET/DHET se puede medir, por ejemplo, al usar un equipo de ensayo comercialmente disponible (1 , 15-EET/DHET ELISA it; Detroit R&D) .

"Enfermedad renal crónica" significa la enfermedad definida por The National Kidney Foundation—Kidney Disease Outcomes Quality Initiative (K/DOQI) . Es decir, la enfermedad renal crónica significa: (1) una enfermedad en la cual un trastorno renal definido por anormalidad estructural o funcional de un riñon continúa durante 3 o más meses a pesar de si se disminuye o no la velocidad de filtración glomerular (referido más adelante en la presente como GFR) ; o (2) un enfermedad en la cual la GFR continúa siendo menos de 60 mL/minuto/1.73 m2 durante 3 o más meses a pesar de si está o no dañado el riñon.

El trastorno renal se encuentra como hallazgos urinarios anormales tal como hematuria o proteinuria que incluyen microalbuminuria; hallazgos anormales en la formación de imágenes de un riñon tal como riñon quístico unilateral o riñon poliquístico; anormalidad de un marcador del trastorno renal detectada por una prueba sanguínea o urinalisis; y/o hallazgos anormales en el diagnóstico histopatológico de un riñon tal como biopsia renal.

Se recomienda la GFR como un índice de la función renal. Sin embargo, puesto que la medición directa de la GFR es laboriosa y difícil, se emplea la GFR, estimada, que se calcula con base al nivel de sCre tomando la edad y género en consideración. En años recientes, también se mide el nivel en suero de Cys-C para la evaluación de la función renal. También se usan la depuración de inulina y la depuración de creatinina para la evaluación de la función renal.

"Glomerulonefritis" es una de las enfermedades renales crónicas y los ejemplos de la glomerulonefritis incluyen nefropatía de IgA, síndrome nefrótico de cambio mínimo, glomerulosclerosis segmentaria focal, nefropatía membranosa, glomerulonefritis membranoproliferativa y nefritis semilunar. La "nefropatía diabética" también es una de las enfermedades renales crónicas, es un estado de enfermedad cuyo progreso se basa en la normalidad metabólica debido a la hiperglicemia . En la nefropatía diabética, se encuentran hallazgos urinarios anormales tal como proteinuria que incluyen microalbuminuria; hipertensión; y/o hiperglicemia .

"Deficiencia renal" significa un estado o síntoma en el cual se disminuye la función renal a menos de 30% de aquella en el estado normal. Un estado donde está disminuida la función glomerular a no más de 60% se llama deficiencia renal y un estado donde está disminuida la función glomerular a menos de 10% corresponde a deficiencia renal terminal, que requiere diálisis. La deficiencia renal se clasifica en deficiencia renal aguda y deficiencia renal crónica. La deficiencia renal crónica es una de las enfermedades renales crónicas, y considerada como enfermedad renal terminal, que es el estado terminal de la enfermedad renal crónica. El progreso de la glomerulonefritis o nefropatía diabética conduce a deficiencia renal crónica. La deficiencia renal crónica muestra un estado como una enfermedad a pesar de lo que fue la enfermedad primaria. Progresa mediante la ruta común final, dando por resultado deficiencia renal terminal. En la deficiencia renal, se encuentra un incremento en el nivel de sCre y/o un incremento en el nivel en suero de Cys-C.

Entre los estados de enfermedad donde se encuentra un incremento en la presión arterial pulmonar, que está asociado con el envío de sangre desde el corazón a los pulmones, la "hipertensión pulmonar" significa un estado 4 donde la presión arterial pulmonar media durante el reposo en cama no es más de 25 mmHg, o, en casos de enfermedad pulmonar, síndrome de apnea de sueño y síndrome de hipoventilación alveolar, la "hipertensión pulmonar" significa un estado donde la presión arterial pulmonar media en el descanso no es más de 20 mmHg (no menos de 30 mmHg durante el ejercicio) (Guidelines for Treatment of Hipertensión pulmonar (JCS 2006) : Abridged Versión, P2-P3) . En la hipertensión pulmonar, se encuentra presión sistólica ventricular derecha incrementada, hipertrofia ventricular derecha, hipertrofia pulmonar, arterias pulmonares ensanchadas, crecimiento de células pulmonares y/o hipertrofia de miocardio.

El efecto terapéutico del derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la enfermedad renal crónica se puede evaluar usando un modelo animal con enfermedad renal crónica artificialmente inducida. Los ejemplos de este modelo animal incluyen modelos de nefritis administrados con anti-suero anti-GBM que usan un ratón o rata (por ejemplo, Kidney Internatinal , 2003, vol . 64, p. 1241-1252), modelos de deficiencia renal por 5/6 nefrectomía (por ejemplo, Journal of the American Society of Nephrology, 2002, vol. 13, p. 2909-2915), y modelos de nefropatía diabética administrada con estreptozotocina (por ejemplo, International Journal of Molecular Medicine, 2007, vol. 19, p. 571-579; Hypertension, 1998, vol . 32, p. 778-785) . La anormalidad funcional renal se puede confirmar al medir el nivel de sCre, el nivel en suero de Cys-C o la excresión urinaria de albúmina. Se puede confirmar la alta presión sanguínea al medir la presión sistólica, sistémica. La hiperglicemia se puede confirmar al medir el nivel en plasma de glucosa.

En la enfermedad renal crónica con glomerulonefritis y deficiencia renal, se puede confirmar la expresión de sEH en lesiones en el riñon al inmunohistoteñir un tejido renal usando un anticuerpo anti-sEH. En la enfermedad renal crónica con glomerulonefritis y deficiencia renal, se pueden confirmar los cambios histopatológicos en el riñon al teñir un tejido renal con hematoxilina y eosina (referido más adelante en la presente como HE) y cambio ácido periódico (referido más adelante en la presente como PAS) .

El efecto terapéutico del derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la hipertensión pulmonar se puede evaluar usando un modelo animal con hipertensión pulmonar artificialmente inducida. Los ejemplos de este modelo animal incluyen un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina usando una rata (Journal of Pharmacological Sciences, 2009, vol. 111, p. 235-243). El incremento en la presión arterial pulmonar se puede confirmar al medir la presión sistólica ventricular derecha. Los estados de enfermedad de la hipertrofia ventricular derecha y la hipertrofia pulmonar debido a la hipertensión pulmonar se pueden confirmar al medir la relación de peso ventricular derecho (peso ventricular derecho / (peso de septo + peso ventricular izquierdo) y la relación de peso de pulmón (peso de pulmón / peso corporal), respectivamente.

En la hipertensión pulmonar, se puede confirmar la expresión de sEH en las lesiones en el pulmón al inmunohistoteñir un tejido de pulmón usando un anticuerpo anti-sEH. En la hipertensión pulmonar, las arterial pulmonares ensanchadas se pueden confirmar por tinción de Elastica-van Gieson de un tejido de pulmón. En la hipertensión pulmonar, se puede confirmar el crecimiento de células pulmonares al inmunoteñir un tejido de pulmón con un antígeno nuclear celular anti -proliferación (referido más adelante en la presente como PCNA) . En la hipertensión pulmonar, se puede confirmar la hipertrofia del miocardio por tinción con HE del ventrículo derecho. En la hipertensión pulmonar, se puede confirmar la presión sanguínea sistémica por el método descrito en los ejemplos. Por confirmación de estos, se pueden evaluar los efectos terapéuticos en la hipertensión y arterias pulmonares, en la enfermedad veno-oclusiva pulmonar, en la hemangiomatosis capilar pulmonar, en la hipertensión pulmonar debida a cardíaca izquierda, en la hipertensión pulmonar debida a hipoxia y enfermedad de pulmón, en la hipertensión pulmonar tromboembólica crónica y en la hipertensión pulmonar de causa desconocida debida a una combinación de factores.

En los casos donde el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa como un producto farmacéutico, se puede puede administrar como está, o como una composición farmacéutica que tiene una forma apropiada de dosis, a un mamífero (por ejemplo, ratón, rata, hámster, conejo, perro, mono, vaca, oveja o humano), de manera oral o parenteralmente (por, por ejemplo, por administración transdérmica, administración intravenosa, administración rectal, administración por inhalación, administración intransal o administración por instilación) .

Los ejemplos de la forma de dosis para la administración a un mamífero incluyen tabletas, polvos, pildoras, cápsulas, gránulos, jarabes, líquidos, soluciones de inyección, emulsiones, suspensiones y supositorios, y formulaciones conocidas de liberación sostenida. Estas formas de dosis se pueden producir por métodos conocidos, y contienen un portador comúnmente usado en el campo de las preparaciones farmacéuticas. Los ejemplos de portador incluyen vehículos, lubricantes, aglutinantes y desintegradores para formulaciones sólidas; disolventes, solubilizadores , agente de suspensión y agentes ablandadores para formulaciones líquidas. Además, si es necesario, se pueden usar aditivos tal como agentes isotónicos, amortiguadore, antisépticos, antioxidantes, a gentes colorantes, edulcorantes, agentes adsorbentes, agentes humectantes y similares.

Los ejemplos de los vehículos incluyen lactosa, D-manitol, almidón, sacarosa, almidón de maíz, celulosa cristalina y ácido silícico anhidro ligero.

Los ejemplos de los lubricantes incluyen estearato de magnesio, estearato de calcio, talco, y sílice coloidal.

Los ejemplos de los aglutinantes incluyen celulosa cristalina D-mannitol, dextrina, hidroxipropilo-celulosa, hidroxipropilometil -celulosa, polivinilpirrolidona, almidón, sacarosa, gelatina, metil-celulosa y carboximetil-celulosa sódica.

Los ejemplos de los desintegradores incluyen almidón, carboximetil-celulosa, carboximetil-celulosa cálcica, croscarmelosa sódica, carboximetil almidón sódico y L-hidroxipropil-celulosa .

Los ejemplos de los solventes incluyen agua para inyección, alcohol, propilenglicol , macrogol, aceite de ajonjolí y aceite de maíz.

Los ejemplos de los solubilizadores incluyen polietilenglicol , propilenglicol, D-manitol, benzoato de bencilo, etanol, colesterol, trietanolamina, carbonato de sodio y citrato de sodio.

Los ejemplos de los agentes de suspensión incluyen agentes tensioactivos tal como estearil-trietanolamina, lauril-sulfato de sodio, lauril-aminopropionato, lecitina, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio y monoestearato de glicerina; y macromoléculas hidrófilas tal como alcohol polivinílico, polivinil-pirrolidona, metil-celulosa, hidroximetil-celulosa, hidroxietil -celulosa e hidroxipropil-celulosa .

Los ejemplos de agentes ablandadores incluyen alcohol bencílico.

Los ejemplos de los agentes isotónicos incluyen glucosa, cloruro de sodio, D-sorbitol y D-manitol.

Los ejemplos de los amortiguadores incluyen sales de ácido fosfórico, sales de ácido acético, sales de ácido carbónico y sales de ácido cítrico.

Los ejemplos de los antisépticos incluyen ésteres de ácido paraoxi-benzoico, clorohutanol , alcohol bencílico, alcohol fenetílico, ácido dihidroacético y ácideo sórbico.

Los ejemplos de los antioxidantes incluyen sales de ácido sulfuroso y ácido ascórbico.

El producto farmacéutico descrito anteriormente contiene de manera preferente el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo preferentemente a 0.001 a 99% en peso, de manera más preferente de 0.01 a 99% en peso. La dosis efectiva y el número de dosis del derivado de ácido nipecótico (I) o una derivado farmacéuticamente aceptable del mismo varía dependiendo de la forma de dosis, de la edad y peso corporal del paciente; del estado y severidad de los síntomas que se tratan. El derivado de ácido nipecótico (I) o una sal f rmacéuticamente aceptable del mismo se puede administrar a una dosis diaria usualmente de 1 a 1000 mg, de manera preferente de 1 a 300 mg por adulto en una dosis individual o varias dosis divididas.

El producto farmacéutico descrito anteriormente se puede administrar solo, o a fin de complementar o incrementar el efecto profiláctico y/o el efecto terapéutico para la enfermedad, o a fin de incrementar la dosis, el producto farmacéutico se puede administrar como una mezcla con otros fármacos o en combinación con otros fármacos.

Los ejemplos de estos fármacos (referido más adelante en la presente como fármacos concomitantes) que se pueden mezclar o usar en combinación incluyen agentes terapéuticos para diabetes, agentes terapéuticos para complicaciones diabéticas, agentes terapéuticos para hiperlipidemia, antihipertensivos , agentes anti-obesidad, diuréticos, agentes quimioterapéuticos , agentes anti-trombóticos y agentes anti -caquexia.

En los casos donde el producto farmacéutico descrito anteriormente se usa en combinación con un fármaco concomitante, no se limita la sincronización de la administración del producto farmacéutico y el fármaco concomitante y esto se pueden administrar ya sea al mismo tiempo o en diferentes momentos, al sujeto al cual se van a administrar estos. El fármaco concomitante puede ser un compuesto de bajo peso molecular; una macromolécula tal como una proteína, polipéptido o anticuerpo; vacuna; o similar. La dosis del fármaco concomitante se puede seleccionar de manera arbitraria usando una norma, la dosis que se usa clínicamente. La relación de mezcla del producto farmacéutico y el fármaco concomitante se puede seleccionar de manera arbitraria con base a, por ejemplo, el sujeto al cual se van a administrar, la ruta de administración, la enfermedad que se va a tratar, los síntomas, la combinación del fármaco concomitante y el producto farmacéutico y/o similares. Por ejemplo, en casos donde el sujeto al cual se van a administrar estos es un humano, el fármaco concomitante se puede usar una relación de mezclado de 0.01 a 99.99 con respecto al derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Los ejemplos de los agentes para diabetes incluyen formulaciones de insulina animal extraída de páncreas bovino o porcino; formulaciones de insulina humana sintetizada usando E. coli o slevadura por ingeniería genética; formulaciones de insulina tal como insulina de zinc, insulina de protamina-zinc, y fragmentos y derivados de insulina; sensibilizadores de insulina tal como clorhidrato de pioglitazona, troglitazona y rosiglitazona, y sales de ácido maleico de estos; inhibidores de oc-glucosidasa tal como voglibosa, acarbosa, miglitol y emiglitato; biguanidas tal como fenformina, metformina y buformina; secretagogos de insulina tal como tolbutamida, glibenclamida, gliclazida, clorpropamida, tolazamida, acetohexamida, gliclopiramida, glimepirida, glipizida, glibuzol, repaglinida, nateglinida y mitiglinida, e hidratos de sales de calcio de estos; agonistas de amilina tal como pramlintida; inhibidores de fosfotirosina-fosfatasa tal como ácido banádico; inhibidores de DPP-IV tal como sitagliptina, vildagliptina y alogliptina; atentes tipo GLP-1 tal como exenatida y liraglutida; inhibidores de glicógeno-fosforilasa; inhibidores de glucosa-6 -fosfatasa; antagonistas de glucagon; e inhibidores de SGLUT .

Los ejemplos de los agentes terapéuticos para complicaciones diabéticas incluyen inhibidores de aldosa-reductasa tal como tolrestat, epalrestat, zenarestat, zopolrestat, minalrestat y fidarestat; factores neurotróficos tal como NGF, NT-3 y BDNF; promotores de producción/secreción de factores neurotróficos ; inhibidores de AGE; eliminadores de oxígeno activo tal como ácido tióctico; y vasodilatores cerebrales tal como tiaprida y mexiletina.

Los ejemplos de los agentes terapéuticos para hiperlipidemia incluyen inhibidores de HMG-CoA tal como pravastatina, simvastatina, lovastatina, atorvastatina, fluvastatina, lipantilo, cerivastatina e itavastatina; compuestos de fibrato tal como bezafibrato, beclobrato, binifibrato, ciprofibrato, clinofibrato, clofibrato, ácido clofíbrico, etofibrato, fenofibrato, gemfibrozil, nicofibrato, pirifibrato, ronifibrato, simfibrato y teofibrato; inhibidores de escaleno sintetasa; inhibidores de ACAT tal como avasimiba y eflucimiba; resinas de intercambio aniónico tal como colestiramina ; fármacos de ácido nicotínico tal como probucol, nicomol y niceritrol; y fitosteroles tal como icosapentato de etilo, soisterol y gamma-orizanol .

Los ejemplos de los antihipertensivos incluyen inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina tal como captopril, enalapril y delapril; antagonistas de angiotensina II tal como candesartan-cilexetil , losartan, eprosartan, valsartan, telmisartan, irbesartan y tasosartan; antagonistas de calcio tal como manidipina, nifedipina, nicardipina, amlodipina y efonidipina ; abridores del canal de potasio tal como levcromacalim; clonidina; y alisquiren.

Los ejemplos de los fármacos anti-obesidad incluyen fármacos centrales anti -obesidad tal como dexfenfluramina, fenfluramina, fentermina, sibutramina, amfepramona. dexamfetamina, mazindol, fenilpropanolamina y clobenzorex; inhibidores de lipasa pancreática tal como orlistat; supresores peptídicos de apetito tal como leptina y CNTF (factor neurotróf co ciliar) ; y agonistas de colecistocinina tal como lintitript.

Los ejemplos de los diuréticos incluyen derivados de xantina tal como salicilato sódico de teobromina y salicilato cálcico de teobromina; formulaciones de tiazida tal como etiazida, ciclopentiazida, triclormetiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, bencilhidroclorotiazida, penflutizida, politiazida y meticlotiazida; formulaciones de anti -aldosterona tal como espironolactona y triamterena; inhibidores de anhidrasa carbónica tal como acetazolamida ; formulaciones de clorobencenosulfonamida tal como clortalidona, mefrusida e indapamida; azosemida; isosorbide; ácido etacrínico; piretanida; bumetanida; y furosemida.

Los ejemplos de los agentes quimioterapéuticos incluyen agentes de alquilación tal como ciclofosfamida e ifosfamida; antimetabolitos tal como metotrexato y 5-fluorouracilo; antibióticos antitumorales tal como mitomicina y adriamicina ; agentes anticáncer derivados de plantas tal como vincristina, vindesina y taxol; cisplatina; oxaliplatina; carboplatina ,- y etopósido.

Los ejemplos de los agentes inmunoterapéuticos incluyen derivados de muramil-dipéptido, picibanil, lentinan, esqiizofillan, Krestina, interleucina (IL) , factor estimulador de colonia de granulocitos y eritropoyetina .

Los ejemplos de los agentes antitrombóticos incluyen heparina tal como, heparina sódica, heparina cálcica y dalteparina sódica; warfarina tal como warfarina potásica; agentes antitrombina tal como argatroban; agentes trombolíticos tal como urocinasa, tisocinasa, alteplasa, nateplasa, monteplasa y pamiteplasa; inhibidores de agregación de plaquetas tal como clorhidrato de ticlopidina, cilostazol, icosapentato de etilo y clorhidrato de sarpogrelato .

Los ejemplos de los agentes anti-caquexia incluyen derivados de progesterona tal como acetato de megestrol; glucocorticoides tal como dexametasona ; agentes mejoradores del metabolismo de las grasas tal como agentes de metoclopramida , agentes de tetrahidrocannabinol y ácido eicosapentaenoico ; hormona de crecimiento; IGF-1; antimebolitos al como TNF-a, LIF, IL-6 y oncostatina M, que son factores que inducen caquexia .

Ej emplos La presente invención se describe a continuación de forma más concreta a manera de ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a lo ejemplos. Se llevó a 4 cabo la purificación por cromatografía en columna usando una columna "HI-FLASH" (Yamazen Corporation) y Purif-a2 (Shoko Scientific Co., Ltd.) a menos que se especifique de otro modo .

Ej em lo 1 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (l-propionamidociclobutano-carbonil ) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de 4 -bromo-2 - (trifluorometoxi) benzaldehído : A -78°C, se adicionó gota a gota una solución de n-butil-litio-hexano (1.6 N, 86 mL, 0.14 mol) a una solución de 4 -bromo- 1 -yodo- 2 -( trifluorometoxi ) benceno (25g, 68 mmol) en THF (0.40 L) durante 1.5 horas. Después de la agitación de la solución resultante de reacción a -78°C durante 1 hora, a esto durante 10 minutos se adicionó gota a gota D F (11 mL, 0.14 mmol) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante -78°C durante 2 horas, a esto se adicionó una solución acuosa de ácido cítrico (0.25 M, 0.25 L, 63 mmol), seguido por extracción con éter dietílico. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, para obtener 16 g (87%) de 4-bromo-2- (trifluorometoxi) benzaldehído (referido más adelante en la presente como Compuesto 1 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 2 Síntesis de (4-bromo-2- (trifluorometoxi) fenil)metanol : A -10°C, se adicionó borohidruro de sodio (2.4 g, 63 mmol) a una solución del Compuesto 1 de Ejemplo de Referencia (16 g, 59 mmol) en metanol (0.23 L) . Después de la agitación de la reacción resultante de reacción a -10°C durante 10 minutos, a esto se adicionaron acetona (10 mL) y ácido clorhídrico 1 N (10 mL) . La solución de reacción entonces se concentró bajo presión reducida, y se adicionó agua al producto crudo obtenido, seguido por extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano ¡acetato de etilo = 50:1 -> 1:1) para obtener 15 g (91%) de (4-bromo-2-(trifluorometoxi) fenil) metanol (referido más adelante en la presente como Compuesto 2 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 3 Síntesis de metanosulfonato de 4-bromo-2-(trifluorometoxi) bencilo : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de metanosulfonilo (0.93 g, 8.1 mmol) a una solución del Compuesto 2 de Ejemplo de Referencia (2.0 g, 7.4 mmol) y TEA (1.2 mL, 8.9 mmol) en diclorometano (20 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 3 horas, a esto se adicionó agua, seguido por extracción con diclorometano . La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y luego se secó con sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida para obtener 2.6 g (cuantitativo) de metanosulfonato de 4-bromo-2- (trifluorometoxi) encilo (referido más adelante en la presente como Compuesto 3 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 4 Síntesis de 2 - (4 -bromo-2 - (trifluorometoxi ) bencil ) isoindolina-1, 3-diona: Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó ftalimida potásica (2.1 g, 11 mmol) a una solución del Compuesto 3 de Ejemplo de Referencia (2.6 g, 7.4 mmol) en DMF (20 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 14 horas, a esto se adicionó agua. Los sólidos precipitados se recolectaron por filtración y se lavaron con agua, seguido por secado de los sólidos, para obtener 2.7 g (91%) de 2- (4-bromo-2-(trifluorometoxi) bencil) isoindolina-1 , 3 -diona (referido más adelante en la presente como Compuesto 4 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 5 Síntesis de (4-bromo-2- (trifluorometoxi) fenil) metanamina : temperatura ambiente, se adicionó monohidrato 4 hidrazina (0.98 g, 19 mmol) a una solución del Compuesto 4 de Ejemplo de Referencia (2.6 g, 6.5 mmol) en metanol (40 mL) . Después de la agitación de la mezcla resultante a 60°C durante 2 horas, los sólidos precipitados se removieron por filtración a temperatura ambiente. El filtrado se concentró bajo presión reducida, y el producto crudo obtenido se disolvió en acetato de etilo, seguido por lavado con agua y soloución acuosa saturada de cloruro de sodio. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró bajo presión reducida, para obtener 1.5 g (85%) de (4-bromo-2- (trifluorometoxi) fenil ) metanamina (referido más adelante en la presente como Compuesto 5 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 6 Síntesis de 3- ( (4 -bromo-2- (trifluorometoxi) bencil) -carbamoil) piperidina-l-carboxilato de (R) -tere-butilo : A temperatura ambiente, se adicionó HATU (0.77 g, 2.0 mmol) a una solución del Compuesto 5 de Ejemplo de Referencia (0.50 g, 1.9 mmol), ácido (R)-l-(ter-butoxicarbonil ) piperidina- 3 -carboxílico (0.43 g, 1.9 mmol) y DIPEA (0.53 g, 4.1 mmol) en DMF (3.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 15 horas, a esto se adicionó acetato de etilo, y la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, agua y luego solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, seguido por purificación del producto crudo obtenido por cromatografía en colmna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo = 9:1 —> 1:1), para obtener 0.89 g (cuantitativa) de 3- ((4- bromo-2- ( tri flúorometoxi ) benci 1 ) carbamoyl ) piperidina- 1 -carboxilato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como Compuesto 6 de Ejemplo de Referencia) . Paso 7 Síntesis de 3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -carbamoil) piperidina-1 -carboxilato de (R) -tere-butilo : A temperatura ambiente, se adicionó tetraquistrifenilfosfina paladio (O) (0.030 g, 0.026 mmol) a una solución del Compuesto 6 de Ejemplo de Referencia (0.050 g, 0.10 mmol) y cianuro de zinc (0.012 g, 0.10 mmol) en D F (2.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a 150°C durante 30 minutos, a esto se adicionó agua a temperatura ambiente, y se realizó la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo = 20:1 -> 1:2), para obtener 0.017 g (39%) de 3- ( ( 4 - ciano- 2 - ( trifluorometoxi ) bencil ) carbamoi 1 ) iperidina- 1 -carboxilato de (R) - tere -butilo (referido más adelante en la presente como Compuesto 7 de Ejemplo de Referencia). Paso 8 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó ácido trifluoroacético (referido más adelante en la presente como TFA) (35 mL , 0.45 mol) a una solución del Compuesto 7 de Ejemplo de Referencia (6.9 g, 16 mmol) en diclorometano (0.16 L) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, la solución se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano, y neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, para obtener 5.2 g (98%) de (R) -N- (4-ciano-2- ( trifluorometoxi ) bencil ) piperidina- 3 -carboxamida (referido más adelante en la presente como Compuesto 8 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 9 Síntesis de (1- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi)bencil) -carbamoil) iperidina-l-carbonil) ciclobutilo) carbamato de (R) -tere-butilo : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (0.28 g, 0.73 mmol) a una solución del Compuesto 8 de Ejemplo de Referencia (0.20 g, 0.67 mmol), ácido 1- ( (ter-butoxicarbonil) amino) ciclobutanocarboxílico (0.15 g, 0.67 mmol) y DIPEA (0.24 mL, 1.3 mmol) en DMF (0.70 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 86 horas, a esto se adicionó ácido clorhídrico 1 N, y se realizó la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricado por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, hexano : acetato de etilo = 7:3 —> 4:6), para obtener 0.25 g (78%) de ( 1- (3 - ( (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi) bencil ) -carbamoil) piperidina-l-carbonil) ciclobutil) carbamato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como Compuesto 9 de Ejemplo de Referencia) .

Paso 10 Síntesis de (R) -1- (1-aminociclobutanocarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) iperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó TFA (0.70 mL, 9.1 mmol) a una solución del Compuesto 9 de Ejemplo de Referencia (0.25 g, 0.47 mmol) en diclorometano (1.4 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 3 horas, la solución se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano, y neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, para obtener 0.18 g (90%) de (R) -1- (1-aminociclobutanecarbonil) -N-(4 -ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida (referido más adelante en la presente como Compuesto de Ejemplo 10 de Referencia) .

Paso 11 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-propionamidociclobutanocarbonil ) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de propionilo (1.8 g, 20 mmol) a una solución del compuesto 10 de ejemplo de referencia (7.6 g, 18 mmol) y TEA (5.5 mL, 40 mmol) en diclorometano (54 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 1 hora, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo :metanol = 99:1 -> 95:5), para obtener 6.2 g (71%) de (R) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) -1- (1-propionamidociclobutano-carbonil) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 1 de ejemplo) .

Ejemplo 2.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) -1- (2-metil-2- (metilsulfonamido) ropanoil) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de (1- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -carbamoil)piperidin-l-il) -2-metil-l-oxopropan-2-il) -carbamato de (R) -tere-butilo : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (4.9 g, 13 mmol) a una solución del compuesto 8 de ejemplo de referencia (3.5 g, 11 mmol), ácido 2 - ( (ter-butoxicarbonil ) -amino) -2-metilpropanoico (2.6 g, 13 mmol) y DIPEA (4.1 mL, 24 mmol) en DMF (40 mL) . Después de la agitación la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1N, y se realiza la extracción éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y luego 5 se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, hexano : acetato de etilo = 9:1 -> 4:6), para obtener 5.2 g (95%) de ( 1- ( 3 - ( (4 -ciano-2 -(trifluorometoxi ) bencil) carbamoil) piperidin-l-il) -2-metil-l-oxopropan-2-il) carbamato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 11 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -1- (2-amino-2-metilpropanoil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) piperidina-3-carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó TFA (25 mL, 0.32 mol) a una solución del ejemplo 11 de referencia (5.2 g, 10 mmol) en diclorometano (0.10 L) . Después de la agitación la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1.5 horas, la solución se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano, y se neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, para obtener 3.4 g (82%) de (R) -1- (2-amino-2-metilpropanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 12 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (2-metil-2- (metilsulfonamido) propanoil) piperidina-3-carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de metanosulfonilo (0.97 g, 8.5 mmol) a una solución del compuesto 12 de ejemplo de referencia (2.3 g, 5.6 mmol) y TEA (1.6 mL, 11 mmol) en diclorometano (15 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 5 minutos, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo : metanol = 99:1 —? 95:5), para obtener 2.4 g (87%) de (R) -N- (4 -ciano-2-(trifluorometoxi) -bencil) -1- (2-metil-2- (metilsulfonamido) propanoil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 2 de ejemplo) .

Ejemplo 3.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (1- (metilsulfonamido) ciclopropanocarbonil) - piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de (1- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -carbamoil) piperidina-l-carbonil) ciclopropil) carbamato de (R) -tere-butilo : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (l.l g, 2.5 mmol) a una solución del compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.67 g, 2.0 mmol), ácido 1- ( (ter-butoxi -carbonil ) amino) ciclopropanocarboxí1 ico (0.49 g, 2.4 mmol) y DIPEA (1.1 mL, 6.1 mmol) en DMF (5.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, y se realizó la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, hexano : acetato de etilo = 9:1 ? 4:6), para obtener 0.92 g (88%) de (l-(3-((4-ciano- 2 - (trifluorometoxi ) -bencil ) carbamoil ) piperidina- 1-carbonil) ciclopropil) carbamato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 13 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -1- (1-aminociclopropanecarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó TFA (4.7 mL, 61 mmol) a una solución del compuesto 13 de ejemplo de referencia 13 (0.92 g, 1.8 mmol) en diclorometano (20 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1.5 horas, la solución se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano, y se neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, para obtener 0.63 g (87%) de (R)-l-(l-aminociclopropanecarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) iperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 14 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-(metilsulfonamido) ciclopropanecarbonil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de metanosulfonilo (0.27 g, 2.3 mmol) a una solución del compuesto 14 de ejemplo de referencia (0.63 g, 1.5 mmol) y TEA (1.1 mL, 7.7 mmol) en diclorometano (5.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 1.5 horas, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por extracción con diclorometano . La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo : metanol = 99:1 -> 95:5), para obtener 0.56 g (74%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) -1- (1- (metilsulfonamido) ciclópropanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 3 de ejemplo) .

Ejemplo 4.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi ) -bencil) -1- (1- (trifluorometil) ciclopropanocarbonil) -piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9 excepto que se usó ácido 1- (trifluorometil) -ciclopropanocarboxílico (0.054 g, 0.17 mmol) , se obtuvieron 0.044 g (58%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1-(1- (trifluorometil) ciclopropanocarbonil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 4 de ejemplo) .

Ejemplo 5.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) -1- (1- (metilsulfonamido) ciclobutanocarbonil) -piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, excepto que se usó el compuesto 10 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.047 mmol) , se obtuvieron 0.017 g (71%) de (R)-N-(4- ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1- (metilsulfonamido) ciclobutanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 5 de ejemplo) .

Ejemplo 6.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) -1- (1-isobutilamidociclobutanocarbonil) piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usó cloruro de isobutilo (0.0055 g, 0.052 mmol), se obtuvieron 0.022 g (95%) de (R) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) -1- (1-isobutilamidociclo-butano-carbonil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 6 de ejemplo) .

Ejemplo 7.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi ) -bencil) -1- (1-pivalamidociclobutanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usó cloruro de pivaloilo (0.0063 g, 0.052 mmol), se obtuvieron 0.017 g (72%) de (R) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) -1- (1-pivalamidociclobutano-carbonil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 7 de ejemplo) .

Ejemplo 8.- Síntesis de (R) -1- ( 1-acetamidociclopentano- carbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3-carboxamida : Paso 1 Síntesis de (1- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -carbamoil) piperidina-l-carbonil) ciclopentil) carbamato de (R) -tere-butilo : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó ácido 1- ( (ter-butoxicarbonil ) amino) ciclopentanocarboxílico (0.078 g, 0.34 mmol) , se obtuvieron 0.13 g (77%) de (1- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) carbamoil) piperidina-l-carbonil) -ciclopentil ) carbamato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 15 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -1- (1-aminociclopentanecarbonil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi ) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 10, excepto que se usó el compuesto 15 de ejemplo de referencia (0.13 g, 0.24 mmol), se obtuvieron 0.051 g (49%) de (R)-l-(l-aminociclopentanocarbonil ) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi ) bencil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 16 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -1- (1-acetamidociclopentanecarbonil) -N- (4-ciano-2 - (trifluorometoxi ) bencil ) iperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó anhídrido acético (0.0070 g, 0.068 mmol) a una solución del compuesto 16 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.046 mmol) y TEA (0.019 mL, 0.14 mmol) en diclorometano (0.20 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 1 hora, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo :metanol = 99:1 -> 95:5), para obtener 0.014 g (62%) de (R)-l-(l-acetamidociclopentanecarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 8 de ejemplo) .

Ejemplo 9. - Síntesis de (R) -1- ( 1-acetamidociclo-butanocarbonil ) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 8, paso 3, excepto que se usó el compuesto 10 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.047 mmol), se obtuvieron 0.013 g (60%) de (R) -1- (1-acetamidociclobutanocarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 9 de ejemplo) .

Ejemplo 10.- Síntesis de (R) -N- (4-cloro-2- (2,2, 2-trifluoro-etoxi) bencil) -1- (2-metil-2- (metilsulfonamido) propanoil ) -piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de 4 -cloro-2 - (2 , 2 , 2-trifluoroetoxi) benzonitrilo : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó hidruro de sodio (55% en peso, 0.67 g, 15 mmol) a una solución de 2,2,2-trifluoroetanol (1.5 g, 15 mmol) en THF (50 mL) . La mezcla resultante se agitó bajo enfriamiento con hielo durante 10 minutos, y luego se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Bajo enfriamiento con hielo, a la solución de reacción se adicionó 4 -cloro-2-fluorobenzo-nitrilo (2.0 g, 13 mmol) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y a esto se adicionó ácido clorhídrico 1 N bajo enfriamiento con hielo, seguido por realización de la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexane : acetato de etilo = 10:0 —> 3:1), para obtener 2.6 g (86%) de 4 -cloro-2- (2 , 2 , 2 -trifluoroetoxi) benzonitrilo (referido más adelante en la presente como compuesto 17 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (4-cloro-2- (2,2, 2 - trifluoroetoxi ) fenil) -metanamina : Bajo enfriamiento con hielo, se adiciono hidruro de aluminio-litio (1.0 g, 27 mmol) a una solución del compuesto 17 de ejemplo de referencia (2.5 g, 11 mmol) en éter dietílico (30 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 4 horas, a esto bajo enfriamiento con hielo se adicionaron THF (20 mL) , agua (1.0 mL) , solución de hidróxido de sodio acuoso 1 N (1.0 mL) y agua (3.0 mL) . Después de la filtración de la solución de reacción, el filtrado obtenido se concentró bajo presión reducida, para obtener 2.4 g (94%) de (4-cloro-2- (2, 2 , 2-trifluoroetoxi) -fenil) metanamina (referida más adelante en la presente como compuesto 18 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de 3- ( (4-cloro-2- (2, 2, 2- trifluoroetoxi ) bencil ) -carbamoil)piperidina-l-carboxilato de (R) -tere-butilo : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 6, excepto que se usó el compuesto 18 de ejemplo de referencia (2.4 g, 10 mmol) , se obtuvieron 4.5 g (cuantitativo) de 3 - ( (4 -cloro-2- (2 , 2 , 2 - trifluoroetoxi) -bencil) carbamoil) piperidina- 1-carboxilato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 19 de ejemplo de referencia) .

Paso 4 Síntesis de (R) -N- (4 -cloro-2- (2 , 2 , 2 -trifluoroetoxi ) bencil ) -piperidina-3-carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó ácido clorhídrico 1N concentrado (10 mL, 0.12 mol) al compuesto 19 de ejemplo de referencia (2.0 g, 4.4 mmol) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 3 horas, la solución se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano (10 mL) , y a la solución resultante se adicionó solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio (10 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y a esto se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida, para obtener 1.4 g (87%) de (R) -N- (4 - cloro- 2 -(2,2,2 -tri fluoroetoxi ) bencil ) - iperidina- 3 - carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 20 de ejemplo de referencia) .

Paso 5 Síntesis de ( 1-3 -( (4 -cloro-2- (2 , 2 , 2 -trifluoroetoxi) bencil ) -carbamoil)piperidin-l-il) -2-metil-l-oxopropan-2-il) -carbamato de (R) -tere-butilo: Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 1, excepto que se usó el compuesto 20 de ejemplo de referencia (0.60 g, 1.7 mmol), se obtuvieron 0.77 g (84%) de (1-3- ( (4-cloro-2- (2,2, 2-trifluoroetoxi) bencil) carbamoil) -piperidin-l-il) -2-metil-l-oxopropan-2-il) carbamato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 21 de ejemplo de referencia) .

Paso 6 Síntesis de (R) -1- (2-amino-2-metilpropanoil) -N- (4-cloro-2- (2,2, 2 -trifluoroetoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó TFA (10 mL) al compuesto 21 de ejemplo de referencia (0.83 g, 1.5 mmol) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano (10 mL) , y la solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio (10 mL) se adicionó a la solución resultante. La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y a esto se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida, para obtener 0.65 g (96%) de (R) -1- (2-amino-2 -metilpropanoil ) -N- ( -cloro-2 - (2,2,2- trifluoroetoxi) bencil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 22 de ejemplo de referencia) .

Paso 7 Síntesis de (R) -N- (4-cloro-2 - (2 , 2 , 2-trifluoroetoxi) bencil ) -1-(2-metil-2- (metilsulfonamido) propanoil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de metanosulfonilo (0.023 g, 0.20 mmol) a una solución del compuesto 22 de ejemplo de referencia (0.080 g, 0.18 mmol) y piridina (0.030 mL , 0.37 mmol) en diclorometano (2.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 10 horas, a esto se adicionó agua, y se llevó a cabo la extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 0.1 N, agua y luego solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo rmetanol = 100:1 —> 10:1), para obtener 0.030 g (32%) de (R) -N- (4 -cloro-2 -( 2 , 2 , 2 -trifluoroetoxi ) bencil ) -1- (2-metil-2- (met il - sul fonamido) propanoil ) iperidina- 3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 10 de ejemplo) .

Ejemplo 11.- Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-acetamida-3-metilbutanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-amino-3-metilbutanoil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (0.30 g, 0.78 mmol) a una solución del compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.21 g, 0.65 mmol), ácido (R) -2- ( ( ( (9H-fluoren-9-il) metoxi) carbonil) amino) -3-metilbutanoico (0.24 g, 0.72 mmol) y DIPEA (0.14 mL, 0.78 mmol) en DMF (3.5 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo = 9:1 —> 1:9), para obtener 0.30 g de un producto crudo. Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó morfolina (0.20 mL, 2.3 mmol) a una solución del producto crudo obtenido (0.30 g) en DMF (2.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 2.5 horas, a esto se adicionó agua, y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, clorofomo .-metanol = 99:1 —> 90:10), para obtener 0.18 g (2 -rendimiento de 2 pasos, 65%) de (R) -1- ( (R) -2-amino-3-metilbutanoil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) -piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 23 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-acetamido-3-metilbutanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 8, paso 3, excepto que se usó el compuesto 23 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.047 mmol) , se obtuvieron 0.018 g (83%) de (R) -1- ( (R) -2-acetamido-3-metilbutanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 11 de ejemplo) . Ejemplo 12.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -1- ( (R) -3-metil-2- (metilsulfonamido) butanoil ) -piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, excepto que se usó compuesto 23 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.047 mmol), se obtuvieron 0.020 g (83%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -1- ( (R) -3-metil-2 - (metilsulfonamido) butanoil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 12 de ejemplo) .

Ejemplo 13.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) -1- (1- (etilsulfonamido) ciclopropanocarbonil) -piperidina-3-carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de etanosulfonilo (0.017 g, 0.13 mmol) a una solución del compuesto 14 de ejemplo de referencia (0.050 g, 0.12 mmol) y DIPEA (0.043 mL, 0.24 mmol) en diclorometano (3.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 3 horas, a esto se adicionó piridina (0.30 mL, 3.7 mmol). La solución de reacción entonces se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, y a esto se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 0.1 N, agua y luego solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo :metanol = 100:1 —> 10:1), para obtener 0.0080 g (13%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-(etilsulfonamido) ciclopropanocarbonil) piperidina-3- carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 13 de ejemplo) .

Ejemplo 14.- Síntesis de (R) -N- (4-carbamoil-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (2-metil -2- (metilsulfonamido) propanoil ) -piperidina- 3 -carboxamida ; Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó una solución acuoso de peróxido de hidrógeno (30% en peso, 0.021 mL) a una solución del compuesto 2 de ejemplo (0.020 g, 0.041 mmol) y carbonato de potasio (0.0028 g, 0.020 mmol) en DMF (0.38 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 18 horas, a esto se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con una solución acuosa de tiosulfato de sodio, y luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo : metanol = 99:1 —> 85:15), para obtener 0.013 g (63%) de (R) -N- ( 4 - carbamoil - 2 - ( trifluoro-metoxi ) bencil ) -1- (2-metil-2-metilsulfonamido)propanoil) -piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 14 de ejemplo) .

Ejemplo 15.- Síntesis de (R) -N- (4-carbamoil-2 - (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (2 -metil-2- (metilsulfonamido) ciclopropano- carbonil) iperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 14 excepto que se usó el compuesto 3 de ejemplo (0.025 g, 0.051 mmol) , se obtuvieron 0.020 g (77%) de (R) -N- (4-carbamoil-2-(trifluorometoxi) encil) -1- (2-metil-2- (metil-sulfonamido) ciclopropanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto de ejemplo 15) .

Ejemplo 16.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-me oxi ) bencil ) -1- (2-hidroxi-2-metilpropanoil)piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó ácido 2-hidroxi-2-metilpropanoico (0.15 g, 0.46 mmol), se obtuvieron 0.12 g (62%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) -1- (2-hidroxi-2-metilpropanoil)piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 16 de ejemplo) .

Ejemplo 17.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi) bencil) -l-pivaloilpiperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usaron el compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.15 g, 0.46 mmol) y cloruro de pivaloilo (0.066 g, 0.55 mmol), se obtuvieron 0.19 g (cuantitativo) de (R) -N-(4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -l-pivaloil-piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 17 de ejemplo) .

Ejemplo 18.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (1- (N-metilmetilsulfonamido) ciclopropano-carbonil) piperidina-3-carboxamida : Paso 1 Síntesis de 1- (metilsulfonamido) ciclopropanecarboxilato de etilo: Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó cloruro de metanosulfonilo (1.4 g, 12 mmol) a una solución de clorhidrato de 1-aminociclopropanecarboxilato de etilo (2.0 g, 12 mmol) y DIPEA (6.3 mL, 36 mmol) en diclorometano (35 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 3 horas, a esto se adicionó ácido clorhídrico 1 N para hacer ácida a la solución, y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo =10:1 -> 1:2), para obtener 2.3 g (60%) de 1-(metilsulfonamido) ciclopropanocarboxilato de etilo (referido más adelante en la presente como compuesto 24 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de 1- (N-metilmetilsulfonamido) ciclopropanocarboxilato de etilo: Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó hidruro de sodio (55% en peso, 0.51 g, 12 mmol) a una solución del compuesto 24 de ejemplo de referencia (2.0 g, 9.7 mmol) en DMF (10 mL) . La mezcla resultante se agitó bajo enfriamiento con hielo durante 10 minutos, y luego a temperatura ambiente durante 30 minutos. Bajo enfriamiento con hielo, a la solución de reacción se adicionó yoduro de metilo (0.78 mL, 13 mmol) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, y a esto se adicionó ácido clorhídrico 0.1 N bajo enfriamiento con hielo, seguido por la realización de la extracción con un solvente mezclado de hexano y acetato de etilo (hexano : acetato de etilo= 1:2) . La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo =10:1 —> 1:1), para obtener 1.8 g (84%) de 1- (N-metilmetilsulfonamido) ciclopropanocarboxilato de etilo (referido más adelante en la presente como compuesto 25 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de ácido 1- (N-metilmetilsulfonamido) ciclopropano-carboxílico : A temperatura ambiente, se adicionó una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 N (12 mL, 12 mmol) a una solución del compuesto 25 de ejemplo de referencia (1.8 g, 7.9 mmol) en metanol (20 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a 50 °C durante 3 horas, y a esto se adicionó entonces ácido clorhídrico 1 N a temperatura ambiente, seguido por la realización de la extracción con cloroformo. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida, para obtener 0.88 g (58%) de ácido 1- (N-metil-metilsulfonamido) ciclopropanocarboxílico (referido más adelante en la presente como compuesto 26 de ejemplo de referencia) .

Paso 4 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-(N-metilmetilsulfonamido) ciclopropanocarbonil) piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó el compuesto 26 de ejemplo de referencia (0.13 g, 0.67 mmol), se obtuvieron 0.17 g (60%) de (R) -N- (4-ciano- 2-(trifluorometoxi) bencil )-1-( 1- (N- metilmetilsulfonamido) ciclopropanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 18 de ejemplo) .

Ejemplo 19.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (3 -hidroxi-2 , 2-dimetilpropanoil) piperidina-3 -carboxamida : A temperatura ambiente, se adicionó una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 N (9.1 mL) a una solución de 3 -hidroxi-2 , 2 -dimetilpropanoato de metilo (1.0 g, 7.6 mmol) en metanol (7.5 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 4 horas, la solución se concentró bajo presión reducida. Al producto crudo obtenido, se adicionó ácido clorhídrico 1 N, y la mezcla resultante se concentró bajo presión reducida. Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (0.35 g, 0.93 mmol) a una solución del producto crudo obtenido (0.10 g) y DIPEA (0.30 mL, 1.7 mmol) en DMF (1.6 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 15 minutos, a esto se adicionó el compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.28 g, 0.85 mmol) . La solución de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, y a esto entonces se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo = 8:2 —> solo acetato de etilo), para obtener 0.24 g (rendimiento de 2 pasos, 65%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (3 -hidroxi-2 , 2 - dimetilpropanoil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 19 de ejemplo) .

Ejemplo 20.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (1-hidroxiciclohexanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó una solución acuosa de ácido sulfúrico (40% en peso, 5.6 mL) a una solución acuosa (5.6 mL) de ciclohexanona (3.0 g, 31 mmol) y cianuro de potasio (2.2 g, 34 mmol) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. Al producto crudo obtenido, se adicionó ácido clorhídrico concentrado 1N (60 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a 80 °C durante 16 horas, y luego se concentró bajo presión reducida, para obtener 4.0 g de un producto crudo. Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (0.45 g, 0.60 mmol) a una solución del producto crudo obtenido (0.16 g) , compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.15 g, 0.46 mmol) y DIPEA (0.24 mL, 1.4 mmol) en DMF (1.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, y se realizó la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, hexano : acetato de etilo = 7:3 —> 4:6), para obtener 0.061 g (rendimiento de 2 pasos, 29%) de (R) -N- (4 -ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) -1- ( 1-hidroxiciclo-hexanecarbonil)piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 20 de ejemplo) .

Ejemplo 21.- Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-acetamidobutanoil) -N-(4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de ácido (R) -2- ( (ter-butoxicarbonil ) amino) butanoico Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó di-ter-butildicarbonato (4.7 g, 21 mmol) a una solución de ácido (R) -2 -aminobutanoico (2.0 g, 19 mmol) y carbonato ácido de sodio (1.6 g, 19 mmol) en una mezcla de 1,4-dioxano y agua ( 1 , 4-dioxano : agua = 3:10, 26 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 120 horas, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en cloroformo, y a la solución resultante se adiciono ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con cloroformo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y concentró bajo presión reducida, para obtener 2.0 g (cuantitativo) de ácido (R) -2- ( (ter-butoxicarbonil) amino) -butanoico (referido más adelante en la presente como compuesto 27 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de ( (R) - 1 - ( (R) - 3 - ( (4 -ciano-2 - ( trifluorometoxi ) -bencil) carbamoil) piperidin-l-il) -l-oxobutan-2-il) carbamato de tere-butilo : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó el compuesto 27 de ejemplo de referencia (0.20 g, 1.0 mmol) , se obtuvieron 0.47 g (cuantitativo) de ( (R) - 1 - ( (R) - 3 - ( ( 4 -c iano - 2 - ( tri fluoro-metoxi ) benc i 1 ) carbamoi 1 )piperidin-l-i 1 )- 1 - oxobutan- 2 - il )- carbamato de tere-butilo (referida más adelante en la presente como compuesto 28 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-aminobutanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) iperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 10, excepto que se usó el compuesto 28 de ejemplo de referencia (0.47 g, 0.91 mmol) , se obtuvieron 0.38 g (cuantitativo) de (R) -1- ( (R) -2-aminobutanoil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 29 de ejemplo de referencia) .

Paso 4 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-acetamidobutanoil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) benci1 ) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 8, paso 3, excepto que se usó el compuesto 29 de ejemplo de referencia (0.091 g, 0.22 mmol), se obtuvieron 0.085 g (85%) de (R) -1- ( (R) -2-acetamidobutanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi)bencil)piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 21 de ejemplo) .

Ejemplo 22.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -2- (metilsulfonamido) butanoil ) -piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, excepto que se usó el compuesto 29 de ejemplo de referencia (0.096 g, 0.23 mmol), se obtuvieron 0.090 g (79%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -2- (metilsulfonamido) butanoil) iperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 22 de ejemplo) . Ejemplo 23.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluoro-metoxi) bencil) -1- ( 1-cianociclopropanocarbonil ) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó ácido 1- cianociclopropano-carboxílico (0.034 g, 0.31 mmol) , se obtuvieron 0.081 g (63%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-cianociclopropanocarbonil) iperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 23 de ejemplo) . Ejemplo 24.- Síntesis de (R) -1- ( (R) -2 -acetamidopropanoil) -N-(4 -ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-aminopropanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) piperidina-3-carboxamida : A temperatura ambiente, se adicionó HATU (0.53 g, 1.4 mmol) a una solución del compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.35 g, 1.1 mmol), ácido ( R) - 2 - ( ( ( ( 9H-fluoren-9- il) metoxi) carbonil) amino) propanoico (0.37 g, 1.2 mmol) y DIPEA (0.56 mL, 3.2 mmol) en D F (2.0 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y entonces a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fu i Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020,-eluyente, hexano : acetato de etilo = 9:1 ? 1:9), para obtener 0.53 g de un producto crudo. A temperatura ambiente, se adicionó morfolina (0.36 mL, 4.1 mmol) a una solución del producto crudo obtenido (0.53 g) en DMF (4.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 6 horas, a esto se adicionó agua, y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, cloroformo : metanol = 99:1 ? 95:5), para obtener 0.29 g (rendimiento de 2 pasos, 67%) de (R) - 1 - ( (R) - 2 -aminopropanoil ) -N- (4-ciano-2- ( trifluorometoxi ) -bencil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 30 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2 -acetamidopropanoil ) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi ) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó anhídrido acético (0.032 g, 0.32 mmol) a una solución del compuesto 30 de ejemplo de referencia (0.10 g, 0.25 mmol) y TEA (0.11 mL, 0.14 mmol) en diclorometano (1.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante bajo enfriamiento con hielo durante 5 minutos, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo :metanol = 99:1 ? 90:10), para obtener 0.11 g (cuantitativo) de (R) -1- ( (R) -2-acetamidopropanoil) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi ) bencil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 24 de ejemplo) .

Ejemplo 25.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) -1- ( (R) -2 -metilsulfonamido) propanoil ) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, excepto que se usó el compuesto 30 de ejemplo de referencia (0.10 g, 0.25 mmol), se obtuvieron 0.099 g (83%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil ) -1- ( (R) -2- (metil -sulfonamido) ropanoil ) piperidina- 3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 25 de ejemplo 25) .

Ejemplo 26.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) -1- (l-isobutilamidociclopropanocarbonil)piperidina-3-carboxamid : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usaron el compuesto 14 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.049 mmol) y cloruro de isobutilo (0.0062 g, 0.058 mmol), se obtuvieron 0.017 g (71%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-isobutilamido-ciclopropanocarbonil) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 26 de ejemplo) .

Ejemplo 27.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi) bencil) -1- (1-pivalamidociclopropanocarbonil) -piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usaron el compuesto 14 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.049 mmol) y cloruro de pivaloilo (0.0064 g, 0.058 mmol), se obtuvieron 0.018 g (73%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -1- (1-pivalamidociclo-propanocarbonil ) piperidina- 3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 27 de ej emplo) .

Ejemplo 28.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (4- (metilsulfonamido) tetrahidro-2H-piran-4-carbonil ) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de 8 -oxa-1 , 3 -diazaspiro [4.5] decano-2 , 4 -diona : Se adicionó cianuro de potasio (3.9 g, 60 mmol) a una solución de dihidro- 2H-piran- 4 (3H) -ona (2.0 g, 20 mmol), carbonato de amonio (9.6 g, 0.10 mol) y TEA (2.8 mL, 20 mmol) en una mezcla de agua y metanol ( agua : metanol = 1:1, 60 mL) a temperatura ambiente. La solución de reacción resultante se calentó a reflujo durante 48 horas con agitación, y luego se concentró bajo presión reducida para remover aproximadamente la mitad del solvente mediante evaporación. Los sólidos precipitados se recolectaron por filtración, y se lavaron con agua, seguido por secado, para obtener 1.4 g (41%) de 8-oxa-l,3- diazaspiro [4.5] decano-2 , 4 -diona (referida más adelante en la presente como compuesto 31 de ejemplo de referencia) . Se adicionó ácido clorhídrico concentrado al filtrado para hacer ácido al filtrado. Los sólidos precipitados se recolectaron por filtración, y se lavaron con agua, seguido por secado, para obtener 0.80 g (24%) del compuesto 31 de ejemplo de referencia.

Paso 2 Síntesis de ácido 4- ( (ter-butoxicarbonil) amino) tetrahidro-2H- piran-4-carboxílico : Se adicionó hidróxido de calcio (3.0 g, 41 mmol) a una solución acuosa (30 mL) del compuesto 31 de ejemplo de referencia (2.2 g, 13 mmol) a temperatura ambiente. La solución de reacción resultante se calentó a reflujo durante 48 horas con agitación, y luego se filtró a través de Celita, seguido por lavado del producto filtrado con agua caliente. El filtrado se concentró bajo presión reducida, y el producto crudo obtenido se disolvió en una mezcla de agua, 1,4-dioxano y metanol (agua : 1 , 4 -dioxano :metanol = 10:10:3, 23 mL) . Se adicionaron di-ter-butildicarbonato (3.4 g, 16 mmol) e hidróxido de sodio (0.50 g, 13 mmol) a la solución de reacción a temperatura ambiente. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, y luego se concentró bajo presión reducida. Se adicionó ácido clorhídrico diluido (15 mL) al producto crudo obtenido, y la extracción se realizó con una mezcla de cloroformo y mehanol (cloroformo : metanol = 10:1). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y concentró bajo presión reducida, para obtener 2.6 g (82%) de ácido 4- ( (ter-butoxicarbonil) -amino) -tetrahidro-2H-piran-4-carboxílico (referido más adelante en la presente como compuesto 32 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (4- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) - carbamoil) piperidina-l-carbonil) tetrahidro-2H-piran-4 - il ) -carbamato de (R) -tere-butilo : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó el compuesto 32 de ejemplo de referencia (0.082 g, 0.34 mmol) , se obtuvieron 0.10 g (62%) de (4- (3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) carbamoil) -piperidina-l-carbonil) tetrahidro-2H-piran-4-il) carbamato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 33 de ejemplo de referencia) .

Paso 4 Síntesis de (R) -1- (4 -aminotetrahidro-2H-pirancarbonil ) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) piperidina-3 -carboxamida ; Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 10, excepto que se usó el compuesto 33 de ejemplo de referencia (0.10 g, 0.19 mmol), se obtuvieron 0.050 g (58%) de (R) -1- (4-aminotetrahidro-2H-pirancarbonil) -N- (4-ciano-2-(trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 34 de ejemplo de referencia) .

Paso 5 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (4-(metilsulfonamido) tetrahidro-2H-piran-4 -carbonil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, bajo enfriamiento con hielo excepto que se usó el compuesto 34 de ejemplo de referencia (0.040 g, 0.088 mmol) , se obtuvieron 0.024 g (5.1%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) encil) -1- (4- (metilsulfonamido) tetrahidro-2H-piran-4-carbonil)piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 28 de ejemplo) .

Ejemplo 29.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (1-ciclopropanocarboxamida) ciclobutanocarbonil ) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usó cloruro de ciclopropano-carbonilo (0.0059 g; 0.057 mmol), se obtuvieron 0.012 g (52%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1- (ciclopropanocarboxamida) ciclobutanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 29 de ejemplo) .

Ejemplo 30.- Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-acetamido-3-hidroxi-3-metilbutanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -piperidina-3 -carboxamida: Paso 1 Síntesis de (R) -2- ( (ter-butoxicarbonil ) amino) -3-hidroxi-propanoato de metilo: Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó di-ter-butildicarbonato (4.6 g, 21 mmol) a una solución de (R) -2-amino-3 -hidroxipropanoato de metilo (3.0 g, 19 mmol) y TEA (8.1 mL, 58 mmol) en metanol (50 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 14 horas, a esto se adicionó ácido clorhídrico diluido. La solución de reacción entonces se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y se adicionó agua a esto, seguido por la realización de la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y agua, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano: acetato de etilo = 20:1 ? 2:1), para obtener 4.1 g (97%) de (R)-2-((ter- butoxicarbonil) -amino) -3-hidroxipropanoato de metilo (referido más adelante en la presente como compuesto 35 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (1, 3-dihidroxi-3-metilbutan-2-il) carbamato de (S) -tere-butilo : A -78 °C, se adicionó una solución de bromuro de metil-magnesio en éter dietílico (3 N, 30 mL, 91 mmol) a una solución del compuesto 35 de ejemplo de referencia (4.0 g, 18 mmol) en éter dietílico (0.12 L) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionaron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y agua bajo enfriamiento con hielo, y se llevó a cabo la extracción con acetato de etilo.

La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico diluido 0.1 N y agua, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo = 10:1 ? 3:1), para obtener 2.8 g (84%) de (1, 3-dihidroxi-3-metilbutan-2-il)carbamato de (S) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 36 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de ácido (R) -2- ( (ter-butoxicarbonil) amino) -3 -hidroxi -3 -metilbutanoico : A -35 °C, se adicionaron simultáneamente una solución acuosa (5.0 mL) de hipoclorito de sodio (0.8 g, 0.64 mmol) y una solución acuosa (10 mL) de ácido cloroso (2.4 g, 27 mmol) , de manera separada y lentamente a una solución del compuesto 36 de ejemplo de referencia (2.8 g, 13 mmol), 2 , 2 , 6 , 6 , -tetrametilpiperidina 1-oxilo (0.40 g, 2.6 mmol) y amortiguador de fosfato neutral normal (45 mL) en acetonitrilo (50 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a 35 °C durante 3 horas, a esto se adicionó ácido acético (1.0 mL) . La solución de reacción entonces se agitó a 35 °C durante 3 horas, y a esto se adicionó agua, seguido por la realización de la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y se lavó con acetato de etilo. La capa acuosa, se adicionó ácido clorhídrico 3 N para hacer la capa ácida, y se llevó a cabo la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida, para obtener 2.5 g (84%) de ácido (R) -2- ( (ter-butoxicarbonil) -amino) -3-hidroxi-3-metilbutanoico (referido más adelante en la presente como compuesto 37 de ejemplo de referencia) .

Paso 4 Síntesis de ( (R) -1- ( (R) -3- ( (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -bencil) carbamoil) piperidin-l-il) -3-hidroxi-3 -metil-l-oxo-butan-2 -il) carbamato de terc-butilo: A temperatura ambiente, se adicionó HATU (0.42 g, 1.1 mmol) a una solución del compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.30 g, 0.92 mmol), el compuesto 37 de ejemplo de referencia (0.24 g, 1.0 mmol) y DIPEA (0.35 mL, 2.0 mmol) en DMF (2.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionó ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, hexano : acetato de etilo = 7:3 ? 4:6), para obtener 0.44 g (89%) de ( (R) -1- ( (R) -3 - ( (4 -ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) carbamoil) piperidin- 1- il ) -3-hidroxi-3-metil-l-oxobutan-2-il) carbamato de tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 38 de ejemplo de referencia) .

Paso 5 Síntesis de (R) -1- ( (R) -2-amino-3-hidroxi-3-metilbutanoil) -N-(4 -ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó TFA (1.8 mL, 23 mmol) a una solución del compuesto 38 de ejemplo de referencia (0.44 g, 0.82 mmol) en diclorometano (8.0 mL) . La solución de reacción resultante se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano, y se neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y concentró bajo presión reducida, para obtener 0.20 g (58%) de (R) -1- ( (R) -2-amino-3-hidroxi-3- metilbutanoil) -N- ( -ciano-2 -trifluorometoxi) bencil) -piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 39 de ejemplo de referencia) .

Paso 6 Síntesis de ( (R) -1- ( (R) -2-acetamido-3-hidroxi-3-metil-butanoil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó anhídrido acético (0.010 g, 0.10 mmol) a una solución del compuesto 39 de ejemplo de referencia (0.040 g, 0.090 mmol) y DIPEA (0.035 mL, 0.20 mmol) en diclorometano (0.30 mL) . La solución de reacción resultante se agitó bajo enfriamiento con hielo durante 10 minutos, y a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo : metanol = 99:1 —> 95:5), para obtener 0.029 g (66%) de ( (R) - 1 - ( (R) - 2 -acetamido- 3 -hidroxi - 3 -metilbutanoil ) -N- (4-ciano-2-( trifluorometoxi) bencil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 30 de ej emplo) .

Ejemplo 31.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluoro- metoxi) bencil) -1- ( (R) -3-hidroxi-3-metil-2-propionamido-butanoil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usó el compuesto 39 de ejemplo de referencia (0.0083 g, 0.019 mmol) , se obtuvieron 0.0065 g (70%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil) -1- ( (R) -3-hidroxi-3 -metil-2 -propionamidobutanoil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 31 de ejemplo) .

Ejemplo 32.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 -(trifluorometoxi ) bencil ) -1- ( (R) -3-hidroxi-3-metil-2- (metilsulfonamido) butanoil) iperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, excepto que se usó el compuesto 39 de ejemplo de referencia (0.040 g, 0.090 mmol), se obtuvieron 0.038 g (81%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -3-hidroxi-3-metil-2- (metilsulfonamido) butanoil) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 32 de ejemplo) .

Ejemplo 33.- Síntesis de (R) -1- (1-butilamidociclo-butanocarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usó cloruro de butirilo (0.0060 g, 0.057 mmol), se obtuvieron 0.018 g (79%) de (R)-l-(l- butilamidociclobutanocarbonil) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi)bencil)piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 33 de ejemplo) .

Ejemplo 34.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) -bencil) -1- (1- (2-ciclopropilacetamido) ciclobutanocarbonil) -piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usaron el compuesto 10 de ejemplo de referencia (0.021 g, 0.049 mmol) y ácido 2-ciclopropilacético (0.0059 g, 0.058 mmol), se obtuvieron 0.0065 g (26%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1- (2-ciclopropilacetamido) ciclobutanocarbonil) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 34 de ejemplo) .

Ejemplo 35.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi) bencil) -1- (1- (2-ciclopropilacetamido) ciclopropanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usaron el compuesto 14 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.049 mmol) y ácido 2-ciclopropilacético (0.0059 g, 0.058 mmol), se obtuvieron 0.0083 g (35%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (1- (2-ciclopropilacetamido) ciclopropanocarbonil) -piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 35 de ejemplo) .

Ejemplo 36.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (2-metil-2- (1H-1, 2 , 4-triazol-l-il) -propanoil) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de 2-metil-2- ( 1H-1 , 2 , 4-triazol- 1- il ) ropanoato de etilo : A temperatura ambiente, se adicionaron carbonato de cesio (5.0 g, 15 mmol) y 1, 2, 4-triazol-l-ida sódica (0.58 g, 6.2 mmol) a una solución de 2-bromo-2-metilpropanoato de etilo (1.0 g, 5.1 mmol) en DMF (25 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a 50 °C durante 24 horas, y luego se concentró bajo presión reducida. Al producto crudo obtenido se adicionó agua, y se llevó a cabo la extracción con cloroformo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y luego se concentró bajo presión reducida, seguido por la purificación del producto crudo obtenido mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano: acetato de etilo = 7:3 ? 4:6), para obtener 0.84 g (89%) de 2-metil-2- (1H-1 , 2 , 4 -triazol -1 -il ) ropanoato de etilo (referido más adelante en la presente como compuesto 40 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de 2-metil-2- (1H-1, 2 , 4-triazol-l-il) propanoato de sodio : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó solución acuosa de hidróxido de sodio 1 N (3.9 mL, 3.9 mmol) a una solución del compuesto 40 de ejemplo de referencia (0.65 g, 3.6 mmol) en etanol (18 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y luego se concentró bajo presión reducida, para obtener 0.67 g (cuantitativo) de 2-metil-2- (1H-1, 2 , 4-triazol-l-il) -propanoato de sodio (referido más adelante en la presente como compuesto 41 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2-(trifluorometoxi) bencil )-1-(2-metil-2 - (1H-1 , 2 , 4-triazol-l-il) propanoil) piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 6, excepto que se usó el compuesto 41 de ejemplo de referencia (0.090 g, 0.51 mmol), se obtuvieron 0.12 g (54%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi)bencil) -1- (2-metil-2- (1H- 1,2, 4-triazol-l-il) propanoil) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 36 de ejemplo) .

Ejemplo 37.- Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluoro-metoxi) bencil) -1- (2-metil-2- (lH-pirazol-l-il) ropanoil) -piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de 2-metil-2- (lH-pirazol-l-il) propanoato de etilo: Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 36, paso 1, excepto que se usó lH-pirazol (0.42 g, 6.2 mmol), se obtuvieron 0.81 g (87%) de 2-metil-2- (lH-pirazol-1-il) propanoato de etilo (referido más adelante en la presente como compuesto 42 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de 2-metil-2- (lH-pirazol-l-il) ropanoato de sodio: Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 36, paso 2, excepto que se usó el compuesto 42 de ejemplo de referencia (0.81 g, 4.5 mmol) , se obtuvieron 0.80 g de 2-metil-2- (lH-pirazol-l-il) ropanoato de sodio (referido más adelante en la presente como compuesto 43 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi ) bencil ) -1- (2-metil-2 - ( lH-pirazol- 1- il) propanoil) iperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó el compuesto 43 de ejemplo de referencia (0.090 g, 0.51 mmol), se obtuvieron 0.16 g (68%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- (2-metil-2- (??-pirazol-l-il) propanoil) piperidina- 3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 37 de ejemplo).

Ejemplo 38.- Síntesis de (R) -N- (2 , 4-diclorobencil) -1- (1-hidroxiciclohexanecarbonil) piperidina-3 -carboxamida : Paso 1 Síntesis de 3 -( (2 , 4 -diclorobencil) carbamoil ) iperidina-1- carboxilato de (R) -tere-butilo : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 6, excepto que se usó 2 , 4-diclorobencilamina (1.5 g, 8.5 mmol) , se obtuvieron 2.6 g (cuantitativo) de (R) -ter- 3-( (2 , 4-diclorobencil) carbamoil) iperidina- 1-carboxilato de butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 44 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -N- (2 , 4 -diclorobencil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 8, excepto que se usó el compuesto 44 de ejemplo de referencia (2.6 g, 6.7 mmol), se obtuvieron 1.8 g (95%) de (R) -N- (2, 4-diclorobencil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 45 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R) -N- (2, 4-diclorobencil) -1- (1-hidroxiciclo-hexanocarbonil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 20 excepto que se usó el compuesto 45 de ejemplo de referencia (0.10 g, 0.35 mmol), se obtuvieron 0.030 g (24%) de (R) -N- (2 , 4-diclorobencil) -1- (1-hidroxiciclohexano-carbonil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 38 de ejemplo) .

Ejemplo 39.- Síntesis de ( (R) -1- ( (R) -2-acetamido-3-hidroxi-3-metilbutanoil) -N- (2, 4-diclorobencil)piperidina-3-carboxamida: Paso 1 Síntesis de ( (R) -1- ( (R) -3- (2 , 4-diclorobencil) carbamoil) -piperidin-l-il) -3-hidroxi-3-metil-l-oxobutan-2-il) carbamato de tere-butilo : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (0.16 g, 0.42 mmol) a una solución del compuesto 37 de ejemplo de referencia (0.089 g, 0.38 mmol), del compuesto 45 de ejemplo de referencia (0.10 g, 0.35 mmol) y DIPEA (0.20 mL, 1.1 mmol) en DMF (0.70 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionó ácido clorhídrico 1 N, seguido por extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, hexano : acetato de etilo = 7:3 ? 4:6), para obtener 0.15 g (82%) de ( (R) -1- ( (R) -3- (2 , -diclorobencil) carbamoil) piperidin-l-il) -3-hidroxi-3-metil-l-oxobutan-2 -il) carbamato de tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 46 de ejemplo de referencia) . Paso 2 Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó TFA (1.0 mL, 13 mmol) a una solución del compuesto 46 de ejemplo de referencia (0.70 g, 1.7 mmol) en diclorometano (2.0 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas, y a esto se adicionó TFA (1.0 mL, 13 mmol) . La solución de reacción entonces se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en diclorometano, y neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio, seguido por extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró bajo presión reducida, para obtener 0.47 g (84%) de (R) -1- ( (R) -2-amino-3-hidroxi-3-metilbutanoil) -N- (2,4-diclorobencil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 47 de ejemplo de referencia) . Paso 3 Síntesis de ( (R) -1- ( (R) -2-acetamido-3-hidroxi-3-metil-butanoil) -N- (2 , 4 -diclorobencil) piperidina-3 -carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó anhídrido acético (0.0056 g, 0.055 mmol) a una solución del compuesto 47 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.050 mmol) y TEA (0.014 mL, 0.099 mmol) en diclorometano (0.15 mL) . La solución de reacción resultante se agitó bajo enfriamiento con hielo durante 10 minutos, y a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por la realización de la extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y luego se concentró bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente, cloroformo :metanol = 99:1 ? 95:5), para obtener 0.021 g (96%) de ( (R) -1- ( (R) -2 -acetamido-3 -hidroxi -3 -metilbutanoil ) -N- (2 , 4 -diclorobencil ) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 39 de ejemplo) .

Ejemplo 40.- Síntesis de (R) -N- (2 , 4 -diclorobencil) -1- ( (R) -3 -hidroxi -3 -metil-2 -propionamidobutanoil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 11, excepto que se usó el compuesto 47 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.050 mmol) , se obtuvieron 0.018 g (77%) de (R) -N- (2 , 4 -diclorobencil) -1- ( (R) -3 -hidroxi-3 -metil-2-propionamidobutanoil) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 40 de ejemplo) .

Ejemplo 41.- Síntesis de (R) -N- (2 , 4 -diclorobencil) -1- ( (R) -3 -hidroxi-3-metil-2- (metilsulfonamido) butanoil) piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 2, paso 3, excepto que se usó el compuesto 47 de ejemplo de referencia (0.020 g, 0.050 mmol), se obtuvieron 0.020 g (85%) de (R) -N- (2, 4 -diclorobencil) -1- ( (R) -3-hidroxi-3-metil-2- (metilsulfonamido) butanoil) iperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 41 de ejemplo) .

Ejemplo 42.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluoro-metoxi) bencil) -1- ( (R) -2-hidroxipropanoil) piperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó (R) -2 -hidroxipropanoato de sodio (0.019 g, 0.17 mmol) , se obtuvieron 0.045 g (74%) de (R) -N-(4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -2-hidroxipropanoil) piperidina-3-carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 42 de ejemplo) .

Ejemplo 43.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -2-hidroxibutanoil) iperidina-3-carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó ácido (R) -2-hidroxibutanoico (0.017 g, 0.17 mmol), se obtuvieron 0.056 g (89%) de (R) -N-(4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -2-hidroxibutanoil ) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 43 de ejemplo) .

Ejemplo 44.- Síntesis de (R) -N- (4 -ciano-2 - (trifluoro-metoxi) bencil) -1- ( (R) -2 -hidroxi-3 -metilbutanoil) piperidina-3 -carboxamida : Al realizar la misma reacción como en el ejemplo 1, paso 9, excepto que se usó ácido (R) -2-hidroxi-3-metilbutanoico (0.018 g, 0.15 mmol), se obtuvieron 0.042 g (64%) de (R) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) bencil) -1- ( (R) -2- hidroxi-3-metilbutanoil) piperidina-3 -carboxatnida (referida más adelante en la presente como compuesto 44 de ejemplo) .

Ejemplo comparativo 1. - Síntesis de (R) -1- (1-hidroxiciclohexanecarbonil) -N- (5- (trifluorometil) piridin-2-il) piperidina-3-carboxamida : Paso 1 Síntesis de 3- ( (5- (trifluorometil) piridin-2-il) carbamoil) -piperidina-l-carboxilato de (R) -tere-butilo: Bajo enfriamiento con hielo, se adicionaron D F (0.68 mL, 8.7 mmol) y cloruro de oxalilo (8.0 mL, 92 mmol) a una solución de ácido (R) -1- (ter-butoxicarbonil)piperidina-3-carboxílico (20 g, 87 mmol) en THF (1.0 L) tal que la temperatura interior no excedió 5°C. La solución de reacción resultante se agitó bajo enfriamiento con hielo durante 30 minutos, y a esto se adicionó una solución de 2-amino-5-(trifluorometil) piridina (15 g, 92 mmol) y piridina (15 mL, 0.18 mmol) en THF (0.10 L) a -25°C tal que la temperatura interior no excedió -20°C. Después de la agitación de la solución de reacción bajo enfriamiento con hielo durante 3 horas, a esto se adicionó solución acuosa saturada de cloruro de sodio tal que la temperatura interior no excedió 5°C, y se llevó a cabo la extracción con diclorometano . La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. Al producto crudo obtenido se adicionó hexano. Los sólidos precipitados se recolectaron por filtración, y el filtrado se concentró bajo presión reducida. Se repitió dos veces la misma operación de purificación. Los sólidos obtenidos se combinaron para obtener 26 g (80%) de 3 -( (5- (trifluoro-metil) piridin-2 -il) carbamoil)piperidina-l-carboxilato de (R) -tere-butilo (referido más adelante en la presente como compuesto 48 de ejemplo de referencia) .

Paso 2 Síntesis de (R) -N- (5- (trifluorometil) piridin-2 -il) -piperidina-3 -carboxamida : Se adicionó TFA (2.2 mL, 28 mmol) a una solución del compuesto 48 de ejemplo de referencia (1.5 g, 4.0 mmol) en diclorometano (10 mL) bajo enfriamiento con hielo, y la solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente. Dos horas después, se adicionaron solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y agua a la solución de reacción, y se llevó a cabo la extracción con diclorometano. La capa orgánica se lavó con solución salina saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida, para obtener 0.95 g (87%) de (R)-N-(5-( trifluorometil )piridin-2-il) piperidina-3 -carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 49 de ejemplo de referencia) .

Paso 3 Síntesis de (R)-l-(l- hidroxiciclohexanecarbonil) -N- (5- (trif luorometil) piridin-2- il) piperidina-3-carboxamida : Bajo enfriamiento con hielo, se adicionó HATU (0.23 g, 0.60 mmol) a una solución del compuesto 49 de ejemplo de referencia (0.13 g, 0.46 mmol), ácido 1 - hidroxic i c lohexanocarboxí 1 ico (0.079 g, 0.55 mmol) y DI PEA (0.24 mL , 1.4 mmol) en DMF (1.0 mL) . Después de la agitación de la solución de reacción resultante a temperatura ambiente durante 1 hora, a esto se adicionaron agua y ácido clorhídrico 1 N, seguido por extracción con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (fabricada por Fu i Silysia Chemical Ltd., gel de amina-sílice DM1020; eluyente, hexano : acetato de etilo = 9:1 ?> 3:7), para obtener 0.058 g (32%) de (R)-l-(l-hidroxiciclohexanecarbonil) -N- (5- ( tri f luoromet i 1 )piridin-2-il)piperidina-3 - carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto i de ejemplo comparativo) .

Ejemplo comparativo 2.- Síntesis de (R)-l-(2-acetamido- acet i 1 ) -N- (4-ciano-2- ( trifluorometoxi) bencil) piperidina-3 -carboxamida : A temperatura ambiente, se adicionó HATU (0.14 g, 0.37 mmol) a una solución del compuesto 8 de ejemplo de referencia (0.10 g, 0.31 mmol), N-acet ilglicina (0.036 g, 0.31 mmol) y DI PEA (0.16 mL , 0.92 mmol) en DMF (5 mL) . La solución de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, y a esto se adicionó ácido clorhídrico diluido 1N, seguido por la realización de la extracción con un solvente mezclado de hexano y acetato de etilo ( hexano : acetato de etilo = 1:2) . La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración bajo presión reducida. El producto crudo obtenido se disolvió en éter dietílico (1.0 mL) , y a esto se adicionó hexano (4.0 mL) . La sustancia tipo gel precipitada se recolectó por filtración, para obtener 0.040 g (31%) de (R)-l-(2-acetamidoacet i 1 ) -N- (4-ciano-2- (trifluorometoxi) -benc i 1 ) piperidina - 3 - carboxamida (referida más adelante en la presente como compuesto 2 de ejemplo comparativo) .

Las tablas 1A a 1F muestran los datos físicos de los compuestos 1 a 44 de ejemplo; la tabla 2 muestra los datos físicos de los compuestos 1 y 2 de ejemplo comparativo; y las tableas 3A a 3E muestran los datos físicos de los compuestos 1 a 49 de ejemplo de referencia. En las tablas, N.D. representa "ningún dato" .

En los datos de RMN-1H, los valores de integración del protón son no enteros en algunos casos debido a la presencia de un isómero a rotacional o similares.

Los nombres de los solventes en los datos de RMN-1H representan los solventes usados para la medición. Los espectros de RMN 400-MHz se midieron usando un aparato de resonancia magnética nuclear JNM-AL400 (JEOL Ltd.). Los desplazamientos químicos se representaron por 6 (unidad: ppm) usando tetrametilsilano como una norma, y cada señal se representó por s (singlete) , d (doblete) , t (triplete) , q (cuarteto) , m (multiplete) , brs (amplio) , dd (doble doblete) , dt (doble triplete) , ddd (doble doble doblete) , dq (doble cuartete) , td (triple doblete) o tt (triple triplete) . Todos los solventes usados fueron aquellos comercialmente disponibles. Los espectros de ES1-MS se midieron usando Agilent Technologies 1200 Series, G6130A (Agilent Technology) .

Tabla 1A Tabla IB Tabla 1C Tabla ID Tabla 1E 4 Tabla 1F Tabla 2 1 Tabla 3A Tabla 3B Tabla 3C Tabla 3D Tabla 3E Ejemplo 45.- Prueba de Evaluación In vitro de la Actividad inhibitoria de sEH.

De acuerdo al método descrito en un documento conocido (Analytical Biochemistry, 2005, vol . 343, p. 66-75), la actividad inhibitoria de sEH de cada derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se evaluó usando sEH de humano.

Se incubó sEH recombinante de humano (concentración final, 0.026 jug/mL; Cayman) con cada compuesto de prueba en amortiguador Bis-Tris-HCl 25 mM (pH 7.0) complementado con 0.1 mg/mL de BSA a temperatura ambiente durante 30 minutos. Posteriormente, a esto se adicionó ( 6 -metoxinaftalen-2 -il)metil 2- (3-fenilloxiran-2-il) acetato (concentración final, 6.25 pmol/L; Cayman) como un substrato fluorescente, y la mezcla resultante se incubó a temperatura ambiente durante 20 minutos. La reacción entonces se detuvo por la adición de ZnS04 (concentración final, 0.2 mol/L) , y se midió la intensidad de la fluorescencia (Fusión a (Packard) ; Excitación: 330 nm, Emisión: 485 nm) .

La intensidad de la fluorescencia observada sin la adición de sEH ni de un compuesto de prueba se consideró como la velocidad de reacción enzimática de sEH de 0%, y la intensidad de la fluorescencia observada con la adición de sEH pero sin la adición de un compuesto de prueba se consideró como la velocidad de reacción enzimática de sEH de 100%. De la intensidad de fluorescencia obtenida, se calculó la velocidad de reacción enzimática de sEH de cada compuesto de prueba para determinar IC50. Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4 Como resultado, los compuestos 1 a 44 de ejemplo mostraron actividades inhibitorias mucho más fuertes contra la reacción enzimática de sEH de humano en comparación a los Compuesto 1 y 2 de Ejemplo Comparativo.

De esta manera, se reveló que el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo exhibe una fuerte actividad inhibitoria contra la reacción enzimática de sEH de humano.

Ejemplo 46.- Prueba para estudiar la Expresión de sEH en Modelo de Nefritis Administrado con Anti-suero Anti-GBM de Rata : Se estudió la expresión de sEH en enfermedad renal crónica con glomerulonefritis y deficiencia renal usando ríñones de un modelo de nefritis administrado con antisuero anti-GBM de rata (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005, vol . 102, p. 7736-7741; European journal of pharmacology, 2002, vol. 449, p.167-176) .

Ratas (cepa Wistar-Kyoto, machos de 9 semanas de edad; Charles River Laboratories Japan, Inc.) con glomerulonefritis inducida mediante la administración de un antisuero anti-GBM de rata de conejo preparado por los métodos descritos en los documentos (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005, vol. 102, p. 7736-7741; European journal of 1 3 pharmacology, 2002, vol . 449, p. 167-176) en la vena de la cola se proporcionaron, "ratas con nefritis inducida" . Por otra parte, las ratas a la cuales no se administró el antisuero anti-GBM se proporcionaron como "ratas normales".

Siete semanas después de la administración del antisuero anti-GBM, las ratas normales y las ratas con nefritis inducidas se les aplicó la eutanasia bajo anestesia. Se removieron ríñones de las mismas y se sumergieron en formalina para almacenamiento. Los ríñones fijados en formalina se incrustaron en parafina y se prepararon las secciones. Las muestras de tejido inumunoteñidas se prepararon usando un anticuerpo anti-sEH (derivado de conejo; Cayman) , y se estudió la expresión de sEH.

En los ríñones de las ratas con nefritis inducida, en las lesiones se encontró la expresión de sEH por otra parte, en los ríñones de las ratas normales, se encontró fuertemente la expresión de sEH. De esta manera, se mostró que la expresión de sEH se promueve en las lesiones del riñon en la enfermedad renal crónica con glomerulonefritis y deficiencia renal.

Ejemplo 47.- Prueba para Evaluar el Efecto Farmacológico en Modelo de Nefritis Administrado con Antisuero Anti-GBM de Rata : El Compuesto 1 o 2 de Ejemplo se administró a un modelo de nefritis administrado con antisuero anti-GBM de rata (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005, vol . 102, p. 7736-7741; European journal of pharmacology, 2002, vol. 449, p. 167-176) , y se evaluó el efecto terapéutico del derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la enfermedad renal crónica con glomerulonefritis y falla renal . 1) Efecto del compuesto 1 de Ejemplo en el Modelo de Nefritis Administrado con Antisuero Anti-GBM de Rata: Ratas (cepa Wistar-Kyoto, machos, de 8 semanas de edad; Charles River Laboratories Japan, Inc.) con nefritis inducida mediante la administración de un antisuero anti-GBM de rata, de conejo preparado por los métodos descritos en los documentos (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005, vol. 102, p. 7736-7741; European journal of pharmacology, 2002, vol. 449, p.167-176) en la vena de la cola se proporcionaron como "grupo con nefritis inducida". Por otra parte, las ratas a las cuales no se administró el antisuero anti-GBM se proporcionaron como "grupo normal" .

Dos semanas después de la administración del antisuero anti-GBM se recolectó sangre de la vena de la cola o de la vena yugular de cada rata y se midió el nivel de sCre. La medición del nivel de sCre se llevó a cabo por el método enzimático. Dos semanas después de la administración 1 5 del antisuero anti-GBM, parte de las ratas se les aplicó eutanasia bajo anestesia y sus ríñones se removieron y sumergieron en formalina para almacenamiento. Los ríñones fijados en formalina se incrustaron en parafina y se prepararon a secciones. De estos se prepararon especímenes patológicos (teñidos con HE y PAS) y se llevó a cabo el examen histopatológico .

El nivel de sCre observado 2 semanas después de la administración del antisuero anti-GBM (media ± error estándar; n=12) fue 0.47+0.01 mg/dL en el grupo con nefritis inducida. Este valor fue estadísticamente mayor en forma significativa (prueba t, p<0.05) que el nivel de sCre en el grupo normal (0.27+0.01 mg/dL (media + error estándar; n=3)). En el examen histopatológico de los ríñones que se llevó a cabo 2 semanas después de la administración del antisuero anti-GBM, el grupo con nefritis inducida mostró esclerosis glomerular moderada severa, precipitados moderados de proteína en la médula exterior, dilatación moderada de los túbulos renales, túbulos basófilos moderados e infiltración moderada de células mononucleares en el estroma (Tabla 5) . Esto es, en el grupo con nefritis inducida, las condiciones patológicas de la glomerulonefritis y de la deficiencia renal se encontraron en la semana 2 después de la administración del antisuero anti-GBM.

Tabla 5 A las ratas que muestran condiciones patológicas de glomerulonefritis y deficiencia renal en el grupo con nefritis inducida, se administró oralmente una vez por día una suspensión del compuesto 1 de Ejemplo en solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%, a una dosis de 3 mg/kg desde la semana 2 después de la administración del antisuero anti-GBM hasta el final del experimento. Este grupo se proporcionó como "grupo administrado con Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg)". Además, para control comparativo, se administró de manera similar una solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% a ratas en el grupo con nefritis inducida, para proporcionar "grupo de control nefritis" . De manera similar, al grupo normal se administró solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%. Se midió el nivel de sCre de la misma manera como se describe anteriormente en la semana 2 y semana 3 después de la administración del antisuero anti-GBM. El nivel de suero de Cys-C también se midió en la semana 5 después de la administración del antisuero anti-GBM. La medición del nivel en suero de Cys-C se llevó a cabo usando la reacción antígeno-anticuerpo . Cinco semanas después de la administración del antisuero anti-GB , a las ratas se les practicó la eutanasia con anestesia. Se removieron los ríñones de las mismas y se sumergieron en formalina para almacenamiento. Los ríñones fijados en formalina se incrustaron en parafina y se prepararon a secciones. De esto se prepararon especímenes histopatológicos (teñidos con HE y PAS) y se llevó a cabo el examen histopatológico .

La Figura 1 muestra los resultados de la medición del nivel de sCre en la Semana 2 y Semana 3 después de la administración del antisuero anti-GBM. La abscisa en la figura representa el número de semanas después de la administración del antisuero anti-GBM, y la ordenada representa el nivel de sCre (media ± error estándar, n=6) . El símbolo "*" en la figura representa la diferencia estadísticamente significativa del grupo de control de nefritis (prueba t, p<0.05). Los resultados del examen histopatológico de los ríñones en la semana 5 después de la administración del antisuero anti-GBM se muestran en la Figura 2, donde las áreas dañadas en 30 a 40 glomerulos por individuos se clasificaron en una escala de 4 puntos con base a la relación (%) del área de lesión (puntuación del área de lesión: 1+, menos de 25%; 2+ , no menos de 25% y no más de 50%; 3+, no menos de 50% y menos de 75%; 4+, no menos de 75%) . Cada individuo corresponde a cada barra, en donde se muestra la distribución de las puntuaciones del área de lesión. La ordenada en la figura representa la relación de la puntuación del área de lesión en cada individuo.

En términos de los niveles de sCre a la semana 2 y semana 3 después de la administración del anti-GBM, el grupo de control de nefritis mostró continuamente altos niveles desde la Semana 2 después de la administración del antisuero anti-GBM. De esta manera, se mostró que el grupo de control de nefritis exhibió condiciones patológicas de glomerulonefritis crónica y falla renal.

El nivel de sCre en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) en la Semana 3 después de la administración del antisuero anti-GBM fue de manera significativamente estadística menor que el nivel de sCre en el grupo de control de nefritis (Figura 1) . De esta manera, el Compuesto 1 de Ejemplo 1 se mostró que tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la glomerulonefritis crónica y falla renal. También se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la enfermedad renal crónica con deficiencia renal en donde se encontró un nivel incrementado de sCre.

En el grupo de control de nefritis, el nivel en suero de Cys-C (media ± error estándar, n=5) en la Semana 5 después de la administración del antisuero anti-GBM fue 0.94+0.14 mg/L, que fue de manera estadísticamente significativa mayor (prueba t, p<0.05) que el nivel en suero Cys-C en el grupo normal (0.25±0.02 mg/L (media + error estándar, n=3)). Por otra parte, en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) , el nivel en suero de Cys-C (media ± error estándar, n=6) en la Semana 5 después de la administración del antisuero anti-GBM fue 0.63+0.08 mg/L, que fue menor que el nivel en suero de Cys-C en el grupo de control de nefritis. De esta manera, el Compuesto 1 de Ejemplo se mostró que tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de glomerulonefritis crónica y deficiencia renal. El Compuesto 1 de Ejemplo también se mostró que tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la enfermedad renal crónica en donde se encontró un nivel incrementado en suero de Cys-C.

En el examen histopatológico de los ríñones que se llevó a cabo 5 semanas después de la administración del antisuero anti-GBM, el grupo de control de nefritis mostró esclerosis glomerular moderada a severa, precipitados de proteína moderados a severos en la médula exterior, dilatación moderada de los túbulos renales, túbulos basófilos leves a moderados e infiltración leve de células mononucleares en el estroma. Por otra parte, en el examen histopatológico de los ríñones que se llevó a cabo 5 semanas después de la administración del antisuero anti-GBM, el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) mostró menores grados y frecuencias de estos cambios dañinos (Tabla 5) . Como resultado de la clasificación del área dañada en los glomerulos de cada individuo, se mostró la supresión de la lesión glomerular en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) (Figura 2) . De esta manera, el Compuesto 1 de Ejemplo se mostró que tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de glomerulonefritis crónica y deficiencia renal crónica. 2) Efecto del Compuesto 2 de Ejemplo eran el Modelo de Nefritis Administrado con Antisuero anti-GBM de Rata: Ratas (rasa Wistar-Kyoto, machos, de 10 semanas de edad; Charles River Laboratories Japan, Inc.) con glomerulonefritis inducida mediante la administración de un antisuero anti-GBM en la vena de la cola se proporcionaron como "grupo con nefritis inducida" .

Se midió el nivel de sCre por el mismo método como en 1) del Ejemplo 47 en las Semanas 2 y 5 después de la administración del antisuero anti-GBM.

El nivel de sCre observado 2 semanas después de la administración del antisuero anti-GBM (media ± error estándar; n=6) fue 0.46±0.01 mg/dL. Cuando se llevó a cabo el experimento con ratas normales por el mismo método como en el presente Ejemplo, el nivel de sCre fue 0.25 a 0.28 mg/dL (ver 1) de Ejemplo 47) . De esta manera, el nivel de sCre en la Semana 2 después de la administración del antisuero anti-GB se incrementó de manera notable en el grupo con nefritis inducida, en comparación al nivel de sCre en las ratas normales. Es decir, en el grupo con nefritis inducida, se encontraron condiciones patológicas de glomerulonefritis y deficiencia renal en la Semana 2 después de la administración del antisuero anti-GBM.

A las ratas que muestran condiciones patológicas de glomerulonefritis y deficiencia renal en el grupo con nefritis inducida, se administró oralmente una vez por día una suspensión del compuesto 2 de Ejemplo en solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% a una dosis de 10 mg/kg desde la Semana 2 después de la administración del antisuero anti-GBM hasta el final de experimento, para proporcionar "grupo administrado con Compuesto 2 de Ejemplo (10 mg/kg)". Además, para control comparativo, se administró de manera similar solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%, a ratas en el grupo con nefritis inducida, para proporcionar el "grupo de control de nefritis" .

La Figura 3 muestra los resultados de la medición del nivel de sCre en las Semanas 2 y 5 después de la administración del antisuero anti-GBM. La abscisa en la figura representa el número de semanas después de la administración del antisuero anti-GBM, y la ordenada representa el nivel de sCre (media ± error estándar, n=3) .

En términos del nivel de sCre en la Semana 5 después de la administración del antisuero anti-GBM, el grupo de control de nefritis mostró continuamente altos niveles desde la Semana 2 después de la administración del antisuero anti-GBM. De esta manera, se mostró que el grupo de control de nefritis exhibió condiciones patológicas de glomerulonefritis crónica y deficiencia renal.

El nivel de sCre en el grupo administrado con el Compuesto 2 de Ejemplo (10 mg/kg) en la Semana 5 después de la administración del antisuero anti-GBM fue notablemente menor que el nivel de sCre en el grupo de control de nefritis (Figura 3) . De esta manera, se mostró que el Compuesto 2 de Ejemplo 2 tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de glomerulonefritis crónica y deficiencia renal. También se mostró que el Compuesto 2 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de enfermedad renal crónica en donde se encontró un nivel incrementado de sCre .

Ejemplo 48.- Prueba para Evaluar el Efecto Farmacológico en Modelo de Nefropatía Diabética de Rata: Se administró el Compuesto 1 de Ejemplo a un modelo de nefropatía diabética de rata (International Journal of Molecular Medicine, 2007, vol . 19, p. 571-579; Hypertension, 1998, vol. 32, p. 778-785), y se evaluó el efecto terapéutico del derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la enfermedad renal crónica con nefropatía diabética.

Ratas (ratas espontáneamente hipertensas, machos, de 12 o 13 semanas de edad; Charles River Laboratories Japan, Inc.) con nefropatía diabética inducida mediante la administración de solución acuosa de estreptozotocina (Enzo Life Sciences, Inc.) (40 mg/kg) en la vena de la cola se proporcionaron como "grupo con nefropatía diabética inducida". Por otra parte, ratas a las cuales se administró similarmente agua para inyección se proporcionaron como el "grupo no tratado" .

Seis semanas después de la administración del estreptozotocina, se recolectó orina usando una jaula metabólica a temperatura ambiente durante 24 horas. La concentración de albúmina urinaria en la orina recolectada se midió por el método ELISA. De la concentración de albúmina urinaria y del peso de la orina, se calculó la cantidad de la excreción de albúmina urinaria.

En el grupo con nefropatía diabética inducida, la cantidad de excreción de albúmina urinaria (media ± error estándar; n=30) observada 6 días después de la administración de estreptozotocina fue 1.39+0.05 mg/día, que fue de manera estadísticamente significativa mayor (prueba t, p<0.05) que la cantidad de excreción de albúmina urinaria observada en el grupo no tratado 6 días después de la administración de agua para inyección (0.83±0.10 mg/día (media + error estándar; n=6) ) . Es decir, en el grupo con nefropatía diabética inducida, se encontraron condiciones patológicas de la nefropatía diabética en el día 6 después de la administración de estreptozotocina .

A ratas que muestran condiciones patológicas de nefropatía diabética en el grupo con nefropatía diabética inducida, se administró oralmente el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) o un compuesto de control positivo imidapril (2 mg/kg) una vez por día durante 20 días desde el Día 8 después de la administración de la estreptozotocina. El Compuesto 1 de Ejemplo e imidapril se usaron como suspensiones en solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%. El grupo en el cual se administró el Compuesto 1 de Ejemplo a una dosis de 10 mg/kg se proporcionó como "grupo administrado como el Compuesto 1 de Ejemplo". El grupo en el cual se administró imidapril a una dosis de 2 mg/kg se proporcionó como "grupo administrado con imidapril" . Además, para control comparativo, se administró de manera similar solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% a ratas en el grupo con nefropatía diabética inducida, para proporcionar "grupo de control de nefropatía diabética". De manera similar, en el grupo no tratado se administró solución acuosa de metil- celulosa de 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%.

Después de la última administración de la sustancia de prueba en el Día 27 después de la administración de estreptozotocina, se recolectó orina usando una jaula metabólica a temperatura ambiente durante 24 horas. Por el método de ELISA se midió la concentración de albúmina urinaria en la orina recolectada. De la concentración de la albúmina urinaria y del peso de la orina, se calculó la cantidad de excreción de albúmina urinaria. Además, en el Día 18 después de la administración de estreptozotocina, se midió la presión sistólica sistémica por el método de manguito en cola. En el Día 29 después de la administración de estreptozotocina, se recolectó sangre de la aorta abdominal de cada rata y se midió la concentración en plasma de glucosa. La medición de la concentración en plasma de glucosa se llevó a cabo por el método Glu-DHUV.

En el grupo de control de nefropatía diabética, la cantidad de excreción de albúmina urinaria (media ± error estándar, n=6) en el Día 27 después de la administración de estreptozotocina fue 8.17±2.66 mg/día, que fue notablemente mayor que la cantidad de excreción de albúmina urinaria en el grupo no tratado en el Día 27 después de la administración de agua para inyección (1.91±0.29 mg/día (media ± error estándar, n=6)). En términos de la cantidad de excreción de albúmina urinaria en el Día 27 después de la administración de estreptozotocina, el grupo de control de nefropatía diabética mostró continuamente altos niveles del Día 6 después de la administración de estreptozotocina. De esta manera, se mostró que el grupo de control de nefropatía diabética exhibió condiciones patológicas de nefropatía diabética crónica.

En el Día 27 después de la administración de estreptozotocina, las cantidades de excreción de albúmina urinaria (media ± error estándar; n=6) en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo y el grupo administrado con imidapril fueron 5.41±1.13 y 5.66±0.91 mg/día, respectivamente, que fue menor que la cantidad de excreción de albúmina urinaria en el grupo de control de nefropatía diabética. De esta manera, el Compuesto 1 de Ejemplo se mostró que tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la nefropatía diabética crónica. Además, se mostró que el compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la enfermedad renal crónica con nefropatía diabética en donde se encuentra una cantidad incrementada de excreción de albúmina urinaria .

En el grupo de control de nefropatía diabética, la presión sistólica sistémica en el Día 18 después de la administración de estreptozotocina (media ± error estándar, n=6) fue 223±3 mmHg, que fue de manera estadísticamente significativa mayor (prueba t, p<0.05) que la presión sistólica sistémica en el día 18 después de la administración de agua para inyección en el grupo no tratado (179±7 mmHg (media ± error estándar, n=4) ) . De esta manera, se mostró que el grupo de control de nefropatía diabética exhibió condiciones patológicas de hipertensión. En el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo, la presión sistólica sistémica en el día 18 después de la administración de estreptozotocina (media ± error estándar, n=6) fue 199±6 mmHg, que fue de manea estadísticamente significativa inferior que la presión sistólica sistémica en el grupo de control de nefropatía diabética (prueba t, p<0.05). De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la nefropatía diabética. También se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la nefropatía diabética en donde se encuentre la hipertensión.

En el grupo de control de nefropatía diabética, la concentración en plasma de glucosa (media ± error estándar; n=6) en el Día 29 después de la administración de estreptozotocina fue 690±35 mg/dL, que fue de manera estadísticamente significativa mayor (prueba t, p<0.05) que la concentración en plasma de glucosa en el Día 29 después de la administración de estreptozotocina en el grupo no tratado (210±5 mg/dL (media ± error estándar, n=6)). De esta manera, se mostró que el grupo de control de nefropatía diabética exhibió condiciones patológicas de hiperglicemia . En el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo, la concentración en plasma de glucosa (media + error estándar, n=6) en el Día 29 después de la administración de estreptozotocina fue 7004+35 mg/dL, que no fue diferente de la concentración en plasma de glucosa en el grupo de control de nefropatía diabética. De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo o actúa en la hiperglicemia en la nefropatía diabética .

De los resultados de Ejemplo 46, Ejemplo 47 1) y 2) , y Ejemplo 48, se mostró que el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de la enfermedad renal crónica con glomerulonefritis y deficiencia renal. También se mostró que el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de enfermedad renal crónica con nefropatía diabética.

Ejemplo 49.- Prueba para Evaluar Efecto Farmacológico en Modelo de Hipertensión Pulmonar Administrado con Monocrotaliña de Rata Se administró el Compuesto 1 o 2 de Ejemplo a un modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata (Journal of Pharmacological Sciences, 2009, vol. 111, p. 235-243), y se evaluó el efecto terapéutico del derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en hipertensión pulmonar . 1) Efecto de Compuesto 1 de Ejemplo en Función Cardiorrespiratoria, Hipertrofia Ventricular Derecha, Hipertrofia Pulmonar, Arterias Pulmonares Ensanchadas, Crecimiento Celular en Pulmón, Hipertrofia de Miocardio en Modelo de Hipertensión Pulmonar Administrado con Monocrotalina de Rata: Ratas (raza Wistar, machos, de 5 semanas de edad; JAPAN SLC, Inc.) con hipertensión pulmonar inducida por administración subcutánea de una solución de monocrotalina acuosa (Sigma Corporation) (60 mg/kg) a la espalda se proporcionaron cono "grupo con hipertensión pulmonar inducida". Por otra parte, las ratas a las cuales se administró similarmente agua para inyección se proporcionaron, "grupo de control" .

A las ratas en el grupo con hipertensión pulmonar inducida, se administró oralmente el Compuesto 1 de Ejemplo (3, 10 o 30 mg/kg) o un compuesto de control positivo tadalafilo (10 mg/kg) una vez por día durante 24 días desde el día de administración de monocrotalina. El Compuesto 1 de Ejemplo y tadalafilo se usaron como suspensiones en solución acuosa de metil -celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%. Los grupos en los cuales se administró el Compuesto 1 de Ejemplo a dosis de 3 , 10 y 30 mg/kg se proporcionaron como "grupo administrado con Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg)", "grupo administrado con Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg)" y "grupo administrado con Compuesto 1 de Ejemplo (30 mg/kg)", respectivamente. El grupo en el cual se administró tadalafilo a una dosis de 10 mg/kg se proporcionó, "grupo administrado con tadalafilo". Además, para control comparativo, se administró de manera similar una solución acusa de metil -celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% en ratas en el grupo con hipertensión pulmonar inducida, para proporcionar "grupo de control de hipertensión pulmonar" . De manera similar, al grupo normal se administró solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%.

El siguiente día de la última administración de la sustancia de prueba, se midieron la presión sistólica ventricular derecha, la presión sistólica sistema y la frecuencia cardíaca. La medición de la presión sistólica ventricular derecha y de la presión sistólica sistémica se llevó a cabo usando un amplificador para la medición de presión sanguínea (Nihon Kohden Corporation) . A la medición de la frecuencia cardíaca se llevó a cabo usando una unidad medidora instantánea de frecuencia cardíaca (Nihon Kohden Corporation) . En el mismo día, se midieron el peso corporal, peso húmedo de pulmón, y pesos húmedos del ventrículo derecho, ventrículo izquierdo y septo para determinar la relación de peso ventricular derecho (peso ventricular derecho/peso de septo + peso ventricular izquierdo) ) y la relación de peso de pulmón (peso de pulmón / peso corporal) .

Los pulmones se almacenaron por inmersión en formalina después de la medición de peso húmedo. Los pulmones fijados en formalina se incrustaron en parafina y se prepararon a secciones. Se prepararon muestras de tejido inmunoteñido usando un anticuerpo anti-sEH para estudiar la expresión de sEH. Se prepararon especímenes patológicos por tinción de Elastica-van Gieson para estudiar el ensanchamiento de las arterias pulmonares. Se prepararon muestras de tejido inmunoteñido usando un anticuerpo anti-PCNA para estudiar el crecimiento celular. El ventrículo derecho se almacenó por inmersión en formalina después de la medición del peso derecho. El ventrículo derecho fijado en formalina se incrustó en parafina y se prepararon las secciones. Se prepararon los especímenes patológicos por tinción de HE para estudiar la hipertrofia del miocardio.

Los pulmones removidos se removieron en un amortiguador y se extrajeron 14,15-EET y 14,15-DHET. El 14,15-EET extraído se hidrolizó para conversión a 14,15-DHET, y se midió la concentración de 14,15-DHET por el método de ELISA. El incremento en la concentración de 14,15-DHET debido a la hidrólisis se consideró como la concentración de 14,15-EET, y se determinó la relación 14 , 15-EET/14 , 15-DHET.

En el estudio de la expresión de sEH en hipertensión pulmonar, los pulmones del grupo con hipertensión pulmonar inducida mostraron mayor expresión de sEH en las lesiones en comparación a los pulmones del grupo normal. De esta manera, se mostró que la expresión de sEH se promueve en lesiones en el pulmón con hipertensión pulmona .

Las Figuras 4 a 6 muestran los resultados en la presión sistólica ventricular derecha, en la relación del peso ventricular derecho y en la relación del peso de pulmón, determinados al siguiente día de la última administración del compuesto de prueba. En estas figuras, la abscisa representa cada grupo, y la ordenada representa nivel medido (media + error estándar; n=10) . Los símbolos "*" en las figuras representan la diferencia estadísticamente significativa del grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba de Dunnett, p<0.05) .

Puesto que la presión sistólica ventricular derecha en el grupo de control de hipertensión pulmonar control fue de manera estadísticamente significativa mayor que la presión sistólica ventricular derecha en el grupo de control (prueba de Aspin-Welch, p<0.05), se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar control exhibió condiciones patológicas de hipertensión pulmonar. Las presiones sistólicas ventriculares derecha en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) y en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (30 mg/kg) fueron de manera estadísticamente significativa menores que la presión sistólica ventricular derecha en el grupo de control de hipertensión pulmonar control (prueba de Dunnett, p<0.05) (Figura 4) . De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones de enfermedad de hipertensión pulmonar en donde se encuentra una presión arterial pulmonar incrementada.

Puesto que la relación del peso ventricular derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar control fue de manera estadísticamente significativa mayor que la relación del peso ventricular derecho en el grupo normal (prueba de Aspin-Welch, p<0.05), se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar exhibió condiciones patológicas de hipertrofia ventricular derecha. Las relaciones del peso ventricular derecho en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) y en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (30 mg/kg) fueron de manera estadísticamente significativa menores que la relación del peso ventricular derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba de Dunnett, p<0.05) (Figura 5) . De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de la hipertensión pulmonar en donde se encuentra hipertrofia ventricular derecha.

Puesto que la relación de peso de pulmón en el grupo de control de hipertensión pulmonar fue de manera estadísticamente significativa mayor que la relación de peso de pulmón en el grupo normal (prueba de Aspin-Welch, p<0.05), se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar control exhibió condiciones patológicas de hipertrofia pulmonar. La relación del peso de pulmón en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) fue de manera estadísticamente significativa menor que la relación de peso de pulmón en el grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba de Dunnett, p<0.05) (Figura 6). De esta manera, se mostró el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de hipertensión pulmonar en donde se encuentra hipertrofia pulmonar.

Por otra parte, la frecuencia cardíaca y la presión sistólica sistémica en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) , en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) y en el grupo administrado con Compuesto 1 de Ejemplo (30 mg/kg) no fueron estadísticamente diferentes de la frecuencia cardíaca y de la presión sistólica sistémica en el grupo de control de hipertensión pulmonar control (prueba de Dunnett, p<0.05) .

De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo no actúa ni en la frecuencia cardíaca ni en la presión sanguínea sistémica en la hipertensión pulmonar .

En el estudio de ensanchamiento de las arterias pulmonares, los pulmones del grupo de control de hipertensión pulmonar mostraron arterias pulmonares más ensanchadas, en comparación a los pulmones del grupo normal. Por otra parte, los pulmones del grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) mostraron arterias pulmonares menos ensanchadas, en comparación a los pulmones del grupo de control de hipertensión pulmonar. De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de hipertensión pulmonar en donde se encuentra ensanchamiento de las arterias pulmonares.

En el estudio del crecimiento celular en la hipertensión pulmonar, los pulmones del grupo de control de hipertensión pulmonar mostraron más crecimiento celular en comparación a los pulmones del grupo normal. Por otra parte, los pulmones del grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) mostraron menos crecimiento celular, en comparación a los pulmones del grupo de control de hipertensión pulmonar. De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de hipertensión pulmonar en donde se encuentra crecimiento celular en el pulmón.

En el estudio de hipertrofia de miocardio en hipertensión pulmonar, el ventrículo derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar mostró más hipertrofia de miocardio, en comparación al ventrículo derecho en el grupo normal. Por otra parte, el ventrículo derecho en el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg) mostró menos hipertrofia de miocardio, en comparación al ventrículo derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar. De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de la hipertensión pulmonar en donde se encuentra hipertrofia de miocardio.

En el estudio de la relación 14 , 15-EET/14 , 15-DHET en la hipertensión pulmonar, los pulmones del grupo de control de hipertensión pulmonar mostraron una menor relación de 14 , 15-EET/14 , 15-DHET, en comparación a la relación de 14 , 15-EET/14 , 15-DHET en los pulmones del grupo normal. De esta manera, se mostró que la relación de 14 , 15-EET/14 , 15-DHET se disminuye en los pulmones con hipertensión pulmonar.

Por otra parte, los pulmones del grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) mostraron una mayor relación de 14 , 15-EET/14 , 15-DHET que la relación 14,15-EET/14 , 15 -DHET en los pulmones del grupo de control de hipertensión pulmonar. De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo incrementa la relación 14,15-EET/14 , 15-DHET en pulmones con hipertensión pulmonar. 2) Efecto del Compuesto 1 de Ejemplo En la Hipertrofia Ventricular Derecha en el Modelo de Hipertensión Pulmonar Administrado con Monocrotalina de Rata, como se Observa Mediante la Administración de la Etapa Avanzada de Condiciones Patológicas: Ratas (raza Wistar, machos, de 5 semanas de edad; JAPA SLC, Inc.) con hipertensión pulmonar inducida por administración subcutánea de una solución acuosa de monocrotalina (Sigma Corporation) (60 mg/kg) a la espalda se proporcionaron, "grupo con hipertensión pulmonar inducida" . Por otra parte, las ratas a las cuales se administró de manera similar agua para inyección se proporcionaron como el "grupo normal" .

Las ratas en el grupo con hipertensión pulmonar inducida, se administró oralmente una vez por día el Compuesto 1 de Ejemplo (3 o 10 mg/kg) o un compuesto de control positivo, tadalafilo (10 mg/kg) . La administración del Compuesto 1 de Ejemplo (3 o 10 mg/kg) se llevó a cabo durante 18 o 19 días desde el Día 10 después de la administración de monocrotalina . La administración de tadalafilo (10 mg/kg) se llevó a cabo durante 28 o 29 días desde el día de la administración de monocrotalina. El Compuesto 1 de Ejemplo y tadalafilo se usaron como suspensiones en solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% con Tween 80 al 0.5%. Los grupos en los cuales se administró el Compuesto 1 de Ejemplo a dosis de 3 y 10 mg/kg se proporcionaron como "grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (3 mg/kg)" y "grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) " ( respectivamente. El grupo del cual se administró tadalafilo a una dosis de 10 mg/kg se proporcionó como "grupo administrado con tadalafilo". Además, para control comparativo, se administró de manera similar solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% a ratas con el grupo con hipertensión pulmonar inducida, para proporcionar el "grupo de control de hipertensión pulmonar". De manera similar, se administró el grupo normal solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%.

En el último día de la administración en el compuesto de prueba, se recolectó sangre de la vena cava abdominal de cada rata bajo anestesia, y la rata entonces se sometió a eutanasia, seguido por remoción del corazón para medición de los pesos en húmedo del ventrículo derecho, ventrículo izquierdo y septo para determinar la relación del peso ventricular derecho (peso ventricular derecho / (peso de septo + peso ventricular izquierdo) ) . La concentración de 14,15-DHET en la sangre recolectada se midió por el método de ELISA. Se adicionó a la sangre recolectada una cantidad predeterminada de 14,15-EET y se dejó proseguir la reacción a 37 °C durante 30 minutos, seguido por la medición de la producción de 14,15-DHET por el método de ELISA para determinar la actividad de sEH en la sangre.

La concentración de 14,15-DHET y la actividad de sEH en la sangre del grupo de control de hipertensión pulmonar fueron mayores que la concentración de 14,15-DHET y la actividad de sEH en la sangre del grupo normal. De esta manera, se mostró que se logró hipertensión pulmonar por una concentración incrementada de 14,15-DHET y actividad incrementada de sEH.

La Figura 7 muestra los resultados en la relación del peso ventricular derecho determinada en el último día de la administración de la sustancia de prueba. En esta figura las abscisas representan en cada grupo, y las ordenadas representan la relación del peso ventricular derecho (media ± error estándar; n=10) . El símbolo "*" en la figura representa la diferencia estadísticamente significativa del grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba t, p<0.05) .

La relación del peso ventricular derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar fue de manera estadísticamente significativa mayor que la relación de peso ventricular derecho en el grupo de control (prueba t, p<0.05) . De esta manera, se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar control exhibió condiciones patológicas de hipertrofia ventricular derecha. Por otra parte, la relación de peso ventricular derecho en el grupo administrado por el Compuesto 1 de Ejemplo (10 mg/kg) -fue de manera estadísticamente significativa menor que la relación de peso ventricular derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar control (prueba t, p<0.05) (Figura 7). De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico en las condiciones patológicas de hipertensión pulmonar en donde se encuentre hipertrofia ventricular derecha, aún en casos donde el Compuesto 1 de Ejemplo se administra desde la etapa avanzada de hipertensión pulmonar . 3) Acción de Compuesto 1 de Ejemplo en la Presión Sanguínea Sistémica en el Modelo de Hipertensión Pulmonar administrado con monocrotalina de rata: Se administró el Compuesto 1 de Ejemplo a las ratas del modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina en una dosis única, y se evaluó la acción del derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la presión sanguínea sistémica inmediatamente después de la administración.

Se indujo hipertensión pulmonar en ratas (raza SD, machos, de 11 semanas de edad; Charles River Laboratories Japan, Inc.) Por administración subcutánea de una solución acuosa de monocrotalina (Sigma Corporation) (60 mg/kg) a la espalda .

En el día 7 después de la administración de la monocrotalina, se anestesiaron las ratas con hipertensión pulmonar inducida y se removió el pelo de la región femoral y la nuca, seguido por desinfección del campo operativo usando solución de isodina. Después de la inserción de la piel en la región femoral y la nuca, se extirpó con aspereza la capa muscular en la región femoral usando pinzas para desprender/exponer la arteria femoral y se insertó un tubo de polietileno y se dejó dentro del mismo después de la incisión pequeña. En el día 9 después de la administración de monocrotalina, se conectó un transductor de presión sanguínea el tubo insertado en la arteria femoral. Se analizó la presión sanguínea después de la aplicación por el amplificador de presión sanguínea y se analizó la frecuencia cardíaca mediante el contador de frecuencia cardíaca usando la forma de onda de impulso como un activador. Las formas de onda se obtuvieron por un sistema Power Lab. La presión sanguínea sistémica y la frecuencia sanguínea sistémica y la frecuencia cardíaca se confirmaron como que han llegado a ser estables. Después de la confirmación de la presión sanguínea sistémica estable, se administró oralmente el Compuesto 1 de Ejemplo a una dosis individual de 10 mg/kg. El Compuesto 1 de Ejemplo se usó como una suspensión en solución acuosa de metil-celulosa de 0.5% complementada con 10 Tween 80 al 0.5%. El grupo en el cual se administró el Compuesto 1 de Ejemplo se proporcionó como "grupo administrado con Compuesto 1 de Ejemplo". Además, para control comparativo, la solución de metil-celulosa acuosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% se administró de manera similar a ratas con hipertensión pulmonar inducida, para proporcionar "grupo de control de hipertensión pulmonar" . Inmediatamente después de la administración del Compuesto 1 de Ejemplo o de la solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%, se midió la presión sanguínea sistémica en la hora 1, 2, 3, 4, 5 y 6 después de la administración.

Como resultado, no se encontró diferencias significativa en la presión sanguínea sistémica media entre el grupo administrado con el Compuesto 1 de Ejemplo del grupo de control de hipertensión pulmonar. De esta manera, se mostró que el Compuesto 1 de Ejemplo no actúa en la presión sanguínea sistema en la hipertensión pulmonar inmediatamente después de la administración. 4) Efecto del Compuesto 2 de Ejemplo en la Función Cardiorrespiratoria y en la Hipertrofia Ventricular Derecha en el Modelo de Hipertensión pulmonar Administrado con Monocrotaliña de Rata: El efecto del Compuesto 2 de Ejemplo en el modelo de hipertensión pulmonar administrado con monocrotalina de rata se evaluó por el mismo método como en el Ejemplo 49 1) excepto que diferente el compuesto de prueba.

A ratas en el "grupo con hipertensión pulmonar inducida" preparadas por el mismo método como en el Ejemplo 49 1) , se administró oralmente una vez por día durante 24 días el Compuesto 2 de Ejemplo (10 mg/kg) o un compuesto de control positivo, tadalafilo (10 mg/kg) desde el día de la administración de la monocrotalina. El Compuesto 2 de Ejemplo y el tadalafilo se usaron como suspensiones en solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5%. El grupo en el cual se administró el Compuesto 2 de Ejemplo a una dosis de 10 mg/kg se proporcionó como el "grupo administrado con el Compuesto 2 de Ejemplo", y el grupo en el cual se administró tadalafilo a una dosis de 10 mg/kg se proporcionó como "grupo administrado con tadalafilo". Además, para control comparativo, se administró de manera similar solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 al 0.5% a ratas con el grupo con hipertensión pulmonar inducida, para proporcionar "grupo de control de hipertensión pulmonar" . De manera similar, la solución acuosa de metil-celulosa al 0.5% complementada con Tween 80 1 0.5% se administró en el grupo normal, en el cual no se administró monocrotalina .

De la misma manera como en el Ejemplo 49 1) , se midieron la presión sistólica ventricular derecha, la presión sistólica sistema y la frecuencia cardíaca al siguiente día de la última administración del compuesto de prueba en el mismo día, se midieron el peso corporal, el peso húmedo de pulmón y los pesos en húmedo del ventrículo derecho, del ventrículo izquierdo y el septo para determinar una relación del peso ventricular derecho (peso ventricular derecho / (peso de septo + peso ventricular izquierdo) ) y la relación de peso de pulmón (peso de pulmón / peso corporal) .

Los resultados se muestran en las Figuras 8 a 10. En estas figuras, la abscisa representa cada grupo la ordenada representa cada nivel medido (media + error estándar; n=10) . Los simboles "*" en las figuras representan la diferencia estadísticamente significativa del grupo de control hipertensión (prueba de Dunnett p<0.05).

Puesto que la presión sistólica ventricular derecha en el grupo de control de hipertensión pulmonar fue de manea estadísticamente significativa mayor que la presión sistólica ventricular derecha en el grupo de control (prueba de Aspin-Welch, p<0.05), se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar exhibió condiciones patológicas de hipertensión pulmonar. La presión sistólica ventricular derecha en el grupo administrado con el Compuesto 2 de Ejemplo fue de manera estadísticamente significativa menor que la presión sistólica ventricular derecha en el grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba de Dunnett, p<0.05) (Figura 8) . De esta manera, el compuesto 2 de Ejemplo se mostró que tiene u efecto terapéutico en las condiciones de enfermedad de hipertensión pulmonar en donde se encuentra una presión arterial pulmonar incrementada.

Puesto que la relación del peso ventricular derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar fue de manera estadísticamente significativa mayor que la relación del peso ventricular derecho en el grupo normal (prueba de Aspin-Welch, p<0.05), se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar exhibió condiciones patológicas de hipertrofia ventricular derecha. La relación del peso ventricular derecho en el grupo administrado con el Compuesto 2 de Ejemplo fue de manera significativa estadísticamente menor que la relación del peso ventricular derecho en el grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba de Dunnett, p<0.05) (Figura 9). De esta manera, el Compuesto 2 de Ejemplo se mostró que tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de hipertensión pulmonar en donde se encuentra hipertrofia ventricular.

Puesto que la relación del peso de pulmón en el grupo de control de hipertensión pulmonar fue de manera estadísticamente significativa mayor que la relación de peso de pulmón en el grupo normal (prueba de Aspin-Welch, p<0.05), se mostró que el grupo de control de hipertensión pulmonar exhibió condiciones patológicas de hipertrofia pulmonar. La relación en peso de pulmón en el grupo administrado con el Compuesto 2 de Ejemplo fue menor que la relación de peso de pulmón en el grupo de control de hipertensión pulmonar (Figura 10) . De esta manera, se mostró que el Compuesto 2 de Ejemplo tiene un efecto terapéutico también en las condiciones de enfermedad de la hipertensión pulmonar en donde se encuentra hipertrofia pulmonar.

Por otra parte, la frecuencia cardíaca y la presión sistólica sistémica en el grupo administrado en el Compuesto 2 de Ejemplo fue estadísticamente diferente de la frecuencia cardíaca y la presión sistólica sistémica en el grupo de control de hipertensión pulmonar (prueba de Dunnett, p<0.05). De esta manera, se mostró que el Compuesto 2 de Ejemplo no actúa ni en la frecuencia cardíaca ni en la presión sanguínea sistémica en la hipertensión pulmonar.

De los resultados del Ejemplo 49 1) , 2) , 3) y 4) , llega a ser claro que el derivado de ácido nipecótico (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo tiene un efecto terapéutico en la hipertensión pulmonar.

Aplicabilidad Industrial El derivado de derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención muestra fuerte actividad inhibitoria de sEH y se puede usar como un agente terapéutico o agente profiláctico para enfermedad renal crónica e hipertensión pulmonar en el campo médico .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (6)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un derivado de ácido nipecótico representado por la Fórmula General (I) posterior, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: caracterizado porque R1 representa hidroxi, ciano, C1-C6 alquilo o alquiloxi, C3-C6 cicloalquilo o cicloalquiloxi , C2-C7 alquiloxialquilo, C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en cada uno del alquilo, alquiloxi, cicloalquilo, cicloalquiloxi, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, de 1 a 3 átomos de hidrógeno se sustituyen cada uno independientemente por un átomo de halógeno, hidroxi, ciano, -SR6, -S(=0)-R6 o S(=0)2R6), -N (R6) C (=0) R7 , -N (R6) S (=0) 2R7, - C (=0) N (R6) R7 o heteroarilo que tiene 5 átomos que constituyen el anillo; R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, C1-C6 alquilo o C2-C7 alquiloxialquilo (en donde, en cada uno del alquilo y alquiloxialquilo, se sustituyen cada uno independientemente de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi o ciano) , o representan conjuntamente - (CH2)i- o - (CH2)m-0-(CH2)N-, con la condición que R2 y R3 no representan simultáneamente un átomo de hidrógeno; R4 y R5 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, átomo de halógeno, ciano, C1-C6 alquilo o alquiloxi, ^- É cicloalquilo o cicloalquiloxi (en donde, en cada uno del alquilo, alquiloxi, cicloalquilo y cicloalquiloxi, se reemplazan cada uno independientemente y de forma opcional de 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno) o - C(=0)NH2, con la condición que R4 y R5 no representen simultáneamente alquiloxi; R6 representa un átomo de hidrógeno o CI-CÉ alquilo; R7 representa C1-C6 alquilo, C3-C6 cicloalquilo, C2-Ci alquiloxialquilo o C4-C7 cicloalquilalquilo (en donde, en cada uno del alquilo, cicloalquilo, alquiloxialquilo y cicloalquilalquilo, se sustituyen cada uno independientemente y de forma opcional 1 a 3 átomos de hidrógeno por un átomo de halógeno, hidroxi o ciano) ; 1 representa un número entero de 2 a 5; y m y n representan cada uno independientemente 1 o 2.

2. El derivado de ácido nipecótico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 y R3 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o C1-C6 alquilo, o representan conjuntamente - {CH2) 1- , con la condición que R2 y R3 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno; R4 representa un sustituyente en la posición 2 en el anillo de benceno; y R5 representa un sustituyente en la posición 4 en el anillo de benceno.

3. El derivado de ácido nipecótico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque R1 representa -N (R6) C (=0) R7 o -N (R6) S (=0) 2R7 ; R4 representa a átomo de halógeno, o C1-C6 alquilo o alquiloxi ; R5 representa a átomo de halógeno, ciano, o C1-C6 alquilo o alquiloxi; y R6 representa un átomo de hidrógeno.

4. Un producto farmacéutico, caracterizado porque comprende como un componente efectivo el derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Un inhibidor de epóxido-hidrolasa soluble, caracterizado porque comprende como un componente efectivo el derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente efectiva del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

6. Un agente terapéutico o profiláctico para enfermedad renal crónica o hipertensión pulmonar, caracterizado porque comprende como un componente efectivo el derivado de ácido nipecótico o una sal farmacéuticamente efectiva del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.