TW201601724A

TW201601724A - 肺性高血壓之治療劑或預防劑

Info

Publication number: TW201601724A
Application number: TW103132905A
Authority: TW
Inventors: Yutaka Nishimura; Yuko Kato; Shinnosuke Hayashi; Aiko Yamazaki; Masashi Yamamoto; Yoshiji Asaoka; Masateru Yamada; Naohiro Yamada
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2013-09-26
Filing date: 2014-09-24
Publication date: 2016-01-16
Also published as: JPWO2015046404A1; WO2015046404A1

Abstract

本發明之目的係提供基於肺血管擴張作用及sEH抑制作用兩者之作用機制而治療肺性高血壓的肺性高血壓之治療劑或預防劑，以及提供與肺血管擴張藥併用而使用的肺性高血壓之治療劑或預防劑。本發明係提供含有下式所代表的六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥作為有效成分的肺性高血壓之治療劑或預防劑。 □

Description

肺性高血壓之治療劑或預防劑

本發明係關於肺性高血壓之治療劑或預防劑。

肺性高血壓係指判斷為肺動脈壓上升的病態的總稱，已知會顯著使運動耐受力降低，其大部分為漸進性而預後亦差。在健康人中，肺動脈壓被保持較全身血壓為低，但於肺性高血壓患者中，平均之肺動脈壓即使於安靜時亦為25mmHg以上(運動時為30mmHg以上)，一般認為由於此狀態為長時間持續，故右心室肥大、右心衰竭會被誘發，最差的情形係造成死亡。

就肺性高血壓之發病原因之一而言，認為有肺血管痙攣參與，肺性高血壓之治療上已使用前列腺環素(prostacyclin)衍生物、磷酸二酯酶抑制劑及內皮素(endothelin)受體拮抗劑等之呈現肺血管擴張作用的藥劑(肺血管擴張藥)(專利文獻1~4及非專利文獻1)，於單劑投予無法獲得充分降壓作用的情形，併用2劑或3劑之肺血管擴張藥而投予的治療被施用(專利文獻4及5以及非專利文獻2及3)。

近年來，來自內皮細胞的超極化因子(hyperpolarizing factor)之一者的環氧化二十碳三烯酸 (Epoxyeicosatrienoic acids；以下，稱為EETs)已被報告具有血壓上升抑制作用及血管內皮保護作用，於肺疾病顯示臓器保護作用(非專利文獻4及5)。又，EETs係藉由可溶性環氧化物水解酵素(soluble epoxide hydrolase；以下，sEH)之作用而被代謝為二羥基二十碳三烯酸(dihydroxyeicosatrienoic acids；以下，DHETs)而失活，但可溶性環氧化物水解酵素抑制劑(以下，sEH抑制劑)因抑制EETs之分解而使EETs之量增加，sEH抑制劑被暗示有用於作為肺性高血壓之治療藥(專利文獻6以及非專利文獻6及7)。

已發現具有sEH抑制活性的化合物，作為肺性高血壓之治療藥之利用雖被暗示(專利文獻6及非專利文獻6)，但亦已報告即使具有sEH抑制活性，亦有對自發性高血壓大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat)未顯示治療效果的例子(非專利文獻8~10)。

另一方面，就具有六氫菸鹼酸二醯胺(nipecotic acid diamide)結構的化合物而言，已有報告六氫菸鹼酸與雜芳基胺縮合的雜芳基醯胺衍生物(專利文獻7)、脒衍生物(專利文獻8)及羥胺酸(hydroxamic acid)衍生物(專利文獻9)，但關於sEH抑制活性則既未被揭示亦未被暗示。

先前技術文獻專利文獻

專利文獻1 國際公開第96/26721號

專利文獻2 國際公開第95/19978號

專利文獻3 公開編號EP1097711

專利文獻4 國際公開第2005/30187號

專利文獻5 國際公開第2004/17993號

專利文獻6 國際公開第2007/106525號

專利文獻7 國際公開第2010/096371號

專利文獻8 國際公開第2000/017158號

專利文獻9 國際公開第2002/028829號

非專利文獻

非專利文獻1 佐藤徹、最新醫學、2010年、第65卷、第8號、p.1698-1702

非專利文獻2 中西宣文等人、肺性高血壓治療指引(2012年改訂版)

非專利文獻3 Benza等人、The Journal of Heart and Lung Transplantation，2007年、第26卷、p.437-446

非專利文獻4 Lee等人、The Journal of the Federation of America Societies for Experimantal Biology、2010年、第24卷、p.3770-3781

非專利文獻5 Dhanasekaran等人、AJP-Heart and Circulatory Physiology、2006年、第291卷、H517-H531

非專利文獻6 Spector等人、Progress in Lipid Research、2004年、第43卷、p.55-90

非專利文獻7 Larsen等人、Trends in Pharmacological Science、2006年、第28卷、第1號、p.32-38

非專利文獻8 Shen等人、Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters、2009年、第19卷、p.3398-3404

非專利文獻9 Shen等人、Journal of Medicinal Chemistry、2009年、第52卷、p.5009-5012

非專利文獻10 Shen等人、Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters、2009年、第19卷、p.5314-5320

[發明概要]

然而，即使肺性高血壓之治療所使用的肺血管擴張藥，現狀是於有效果地抑制肺動脈壓上升及其後續引起的右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚及心肌肥大上有其極限，在肺高血壓的治療上，兼具與肺血管擴張作用不同的機制而可治療肺血壓症的強藥效的藥劑或併用藥的創造可謂為當務之急。

又，即使呈現sEH抑制活性的已知化合物，因未必然於活體內發揮降壓作用等之藥理作用，所以要發現對肺性高血壓發揮治療效果的sEH抑制劑係困難的。然而，由於迄今尚未創造出具有六氫菸鹼酸二醯胺結構的sEH抑制劑，基於sEH抑制活性若可發現抑制肺動脈壓上升的六氫菸鹼酸衍生物，被認為有可利用作為用以治療肺性高血壓的新穎藥劑或併用藥的可能性。

因此本發明之目的係提供基於肺血管擴張作用與sEH抑制作用兩者之作用機制的治療肺性高血壓的肺性高血壓之治療劑或預防劑、以及與肺血管擴張藥併用而被使用的肺性高血壓之治療劑或預防劑。

本發明者們為了解決上述課題而不斷專心研究的結果，發現新穎的六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽係呈現強的sEH抑制活性，以及基於其作用而對肺性高血壓發揮優異的治療效果及預防效果，再者，亦發現藉由組合上述新穎六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥，對肺性高血壓發揮優異治療效果及預防效果，遂而完成本發明。

即，本發明係提供一種肺性高血壓之治療劑或預防劑，其含有下述之通式(I)所示的六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥作為有效成分：

[式中，R¹表示羥基、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基、碳數2~7之烷氧基烷基、碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、烷氧基、環烷基、環烷基氧基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基、氰基、-SR⁶、-S(=O)-R⁶或-S(=O)₂R⁶取代)、-N(R⁶)C(=O)R⁷、-N(R⁶)S(=O)₂R⁷、 -C(=O)N(R⁶)R⁷或環構成原子數5之雜芳基；R²及R³係各自獨而表示氫原子、碳數1~6之烷基或碳數2~7之烷氧基烷基(該烷基及烷氧基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)，或R²及R³一起表示-(CH₂)_l-或-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-，但不同時表示氫原子；R⁴及R⁵係各自獨立表示氫原子、鹵素原子、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基(該烷基、烷氧基、環烷基及環烷基氧基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子取代)或-C(=O)NH₂，但不同時表示烷氧基；R⁶表示氫原子或碳數1~6之烷基；R⁷表示碳數1~6之烷基、碳數3~6之環烷基、碳數2~7之烷氧基烷基或碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、環烷基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)；l表示2~5之整數；m及n係各自獨立表示1或2]。

上述之六氫菸鹼酸衍生物係R²及R³各自獨立表示氫原子或碳數1~6之烷基、或一起表示-(CH₂)_l-，但不同時表示氫原子；R⁴表示苯環上之2位取代基；R⁵表示苯環上之4位取代基者為較佳。

於此情形，因可期待六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽呈現較強的sEH抑制活性，肺性高血壓之治療劑或預防劑對肺性高血壓可發揮更優異的治療效果及預防效果。

上述之六氫菸鹼酸衍生物中，R¹表示-N(R⁶)C(=O)R⁷或-N(R⁶)S(=O)₂R⁷，R⁴表示鹵素原子或碳數1~6之烷基或烷氧基，R⁵表示鹵素原子、氰基或碳數1~6之烷基或烷氧基，R⁶表示氫原子為更佳；R¹表示-N(H)C(=O)CH₂CH₃，R²及R³一起表示-(CH₂)₃-，R⁴表示-OCF₃，R⁵表示氰基為特佳。

於此情形，可期待六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽呈現較強sEH抑制活性，除此之外，因其藥物動態亦優異，肺性高血壓之治療劑或預防劑對肺性高血壓可進一步發揮優異的治療效果及預防效果。

上述之肺血管擴張藥係前列腺環素(prostacyclin)衍生物、磷酸二酯酶抑制劑及/或內皮素受體拮抗劑較佳，磷酸二酯酶抑制劑及/或內皮素受體拮抗劑為更佳。

又，上述之磷酸二酯酶抑制劑係西地那非(sildenafil)或其藥理學上可容許的鹽、或他達拉非(tadalafil)為較佳，他達拉非為更佳，上述之內皮素受體拮抗劑係安倍生坦(ambrisentan)或其藥理學上可容許的鹽、或波生坦(bosentan)或其水合物為較佳，安倍生坦或其藥理學上可容許的鹽為更佳。

又本發明係提供一種肺性高血壓之治療劑或預防劑，其係含有與肺血管擴張藥併用而使用之上述之六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽作為有效成分。

本發明之肺性高血壓之治療劑或預防劑係基於肺血管擴張作用及sEH抑制作用，而可治療或預防肺性高血壓。又本發明之肺性高血壓之治療劑或預防劑係藉由增強肺血管擴張藥之藥理作用，可治療或預防肺性高血壓。

第1圖呈示實施例化合物1對大鼠野百合鹼(monocrotalin)投予肺性高血壓模式中的右心室收縮期壓的作用的圖。

第2圖呈示實施例化合物1對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比的作用的圖。

第3圖呈示實施例化合物1對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的肺重量的作用的圖。

第4圖呈示實施例化合物1對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比的作用的圖。

第5圖呈示實施例化合物2對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室收縮期壓的作用的圖。

第6圖呈示實施例化合物2對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比的作用的圖。

第7圖呈示實施例化合物2對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的肺重量比的作用的圖。

第8圖呈示實施例化合物31對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比的作用的圖。

第9圖呈示實施例化合物1與他達拉非之併用投予對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比的作用的圖。

第10圖呈示對投予他達拉非的病態進行期之大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比之追加實施例化合物1而併用投予所致的作用的圖。

第11圖呈示對投予安倍生坦的病態進行期之大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比之追加實施例化合物1而併用投予所致的作用的圖。

第12圖呈示對投予他達拉非的病態進行期之大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的右心室重量比之追加實施例化合物31而併用投予所致的作用的圖。

[用以實施發明之形態]

本發明之肺性高血壓之治療劑或預防劑之特徵為含有下述之通式(I)所示的六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥作為有效成分：

[式中，R¹表示羥基、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基、碳數2~7之烷氧基烷基、碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、烷氧基、環烷基、環烷基氧基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個之氫原子各自獨立表示可經鹵素原子、羥基、氰基、-SR⁶、-S(=O)-R⁶或-S(=O)₂R⁶取代)、-N(R⁶)C(=O)R⁷、-N(R⁶)S(=O)₂R⁷、-C(=O)N(R⁶)R⁷或環構成原子數5之雜芳基；R²及R³係各自獨立表示氫原子、碳數1~6之烷基或碳數2~7之烷氧基烷基(該烷基及烷氧基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)，或一起表示-(CH₂)_l-或-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-，但不同時表示氫原子；R⁴及R⁵係各自獨立表示氫原子、鹵素原子、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基(該烷基、烷氧基、環烷基及環烷基氧基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子取代)或-C(=O)NH₂，但不同時表示烷氧基；R⁶表示氫原子或碳數1~6之烷基；R⁷表示碳數1~6之烷基、碳數3~6之環烷基、碳數2~7之烷氧基烷基或碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、環烷基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)；l表示2~5之整數；m及n係各自獨立表示1或2]。

「碳數1~6之烷基」係意指具有1~6個碳原子的直鏈狀或具有3~6個碳原子的分枝鏈狀之飽和烴基，例如，可列舉甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基(三級丁基)、2-甲基-1-丙基、2,2-二甲基-1-丙基、1-戊基、2-戊基或3-戊基。

「碳數1~6之烷氧基」係意指上述之碳數1~6之烷基與氧原子鍵結的基，例如，可列舉甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基或2-丁氧基。

「碳數3~6之環烷基」係意指環丙基、環丁基、環戊基或環己基。

「碳數3~6之環烷氧基」係意指環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基或環己氧基。

「碳數2~7之烷氧基烷基」係意指具有2~7個碳原子，且烷基之1個氫原子經烷氧基取代的基，例如，可列舉甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基甲基、丙氧基甲基或異丙氧基甲基。

「碳數4~7之環烷基烷基」係意指具有4~7個碳原子，且烷基之1個氫原子經環烷基取代的基，例如，可列舉環丙基甲基、環丙基乙基、環丙基丙基、環丁基甲基、環戊基甲基或環己基甲基。

「鹵素原子」係意指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。

「環構成原子數5之雜芳基」係意指含有1~4個選自包含氮原子、氧原子及硫原子之群組的相同或相異的原子作為環構成原子，且環構成原子數為5之雜芳香族基，例如，可列舉吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、唑基、異唑基、呋喃基或噻唑基。

上述之六氫菸鹼酸衍生物係於通式(I)中，R¹係-N(R⁶)C(=O)R⁷或-N(R⁶)S(=O)₂R⁷為較佳，乙醯胺基、丙醯胺基或甲磺醯胺基為更佳。

R²及R³係各自獨立表示氫原子或碳數1~6之烷基，或一起成為-(CH₂)_l-為較佳，各自獨立為氫原子或碳數1~3之烷基(該烷基係1個氫原子可經羥基取代)，或一起成為-(CH₂)₂-或-(CH₂)₃-為更佳，各自獨立為氫原子、甲基或2-羥基-2-丙基，或一起成為-(CH₂)₂-或-(CH₂)₃-為更佳，但不同時成為氫原子。

R⁴係苯環上之2位取代基為較佳。又，R⁴係鹵素原子或碳數1~6之烷基或烷氧基為較佳，鹵素原子或烷氧基為更佳，烷氧基為又更佳。

R⁵係苯環上之4位取代基為較佳。又，R⁵係鹵素原子、氰基或碳數1~6之烷基或碳數1~6之烷氧基為較佳，鹵素原子或氰基為更佳。

R⁶係氫原子為較佳，R⁷係甲基或乙基為較佳。

又，l係2或3為較佳，m係2為較佳，n係2為較佳。

上述之通式(I)所示的六氫菸鹼酸衍生物(以下，六氫菸鹼酸衍生物(I))係具有至少1個之不對稱碳原子，存有旋光異構物或非對映異構物，但六氫菸鹼酸衍生物(I)不僅為單一異構物，亦包含外消旋體及非對映異構物混合物。又，旋轉異構體(rotamer)存在的情形，包含全部之旋轉異構體。

就六氫菸鹼酸衍生物(I)之藥理學上可容許的鹽而言，例如，可列舉鹽酸鹽、三氟乙酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽或甲磺酸鹽作為酸加成鹽，但鹽酸鹽、硫酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽或甲磺酸鹽為較佳。

又，本發明之肺性高血壓之治療劑或預防劑之特徵為含有肺血管擴張藥及併用而使用的六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽作為有效成分。

六氫菸鹼酸衍生物(I)之製造所使用的起始物質及試藥係可直接利用市售品，或藉由周知方法而合成亦無妨。

六氫菸鹼酸衍生物(I-a)係例如，如以下之流程圖1所示，鹼及縮合劑存在下，可藉由胺衍生物(II)與羧酸衍生物(III)之縮合反應而製造。

[式中，R^1’表示羥基、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基、碳數2~7之烷氧基烷基、碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、烷氧基、環烷基、環烷基氧基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基、氰基、-SR⁶、-S(=O)-R⁶或-S(=O)₂R⁶取代)；R²~R⁶與上述定義相同]。

就縮合反應所使用的縮合劑而言，例如，可列舉環己基碳二亞胺、N-乙基-N‘-3-二甲基胺基丙基碳二亞胺鹽酸鹽、苯并三唑-1-基氧基-參二甲基胺基鏻鹽(BOP試藥)、1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-苯并三唑鎓-3-氧化物六氟磷酸鹽(HBTU)或O-(7-吖苯并三唑-1-基)四甲基脲六氟磷酸鹽(以下，HATU)，但HATU為較佳。該縮合劑之當量係1~10當量為較佳，1~3當量為更佳。

就縮合反應所使用的溶劑而言，例如，可列舉N,N-二甲基甲醯胺(以下，DMF)、四氫呋喃(以下，THF)、二氯甲烷、氯仿、二乙基醚或二甲基醚，但DMF或THF為較佳，DMF為更佳。

就縮合反應所使用的鹼而言，例如，可列舉二異丙基乙基胺(以下，DIPEA)、三乙基胺(以下，TEA)、吡啶或N-甲基嗎啉等之有機鹼或碳酸鉀、碳酸鈉或碳酸氫鈉等之有機酸鹽，但DIPEA或TEA為較佳。該鹼之當量係相對於胺衍生物(II)，1~100當量為較佳，1~10當量為更佳。

縮合反應所使用的羧酸衍生物(III)之當量係相對於胺衍生物(II)，0.1~100當量為較佳，0.1~10當量為更佳，0.8~2當量為又更佳。

縮合反應之反應溫度係-50~100℃為較佳，0~50℃為更佳，0~30℃為又更佳。又，縮合反應之反應時間係1分鐘~48小時為較佳，1分鐘~24小時為更佳，10分鐘~24小時為又更佳。

縮合反應中的胺衍生物(II)之反應開始時之濃度係0.01~100M為較佳，0.01~10M為更佳，0.1~10M為又更佳。

又，R¹為-N(H)C(=O)R⁷的六氫菸鹼酸衍生物(I-b)係例如，如以下之流程圖2所示，於鹼存在下，藉由胺衍生物(IV)與醯氯衍生物(V)之縮合反應、或鹼及縮合劑存在下，胺衍生物(IV)與羧酸衍生物(VI)之縮合反應而可加以製造。

[式中，R²~R⁵及R⁷係與上述定義相同]。

就與醯氯衍生物(V)之縮合反應所使用的溶劑而言，例如，可列舉二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、DMF、THF、二烷、二乙基醚或1,2-二甲氧基乙烷，但二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈或THF為較佳，二氯甲烷或1,2-二氯乙烷為更佳。

與醯氯衍生物(V)之縮合反應所使用的醯氯(V)之當量係相對於胺衍生物(IV)，0.1~10當量為較佳，1~3當量為更佳，1~1.5當量為又更佳。

就與醯氯衍生物(V)之縮合反應所使用的鹼而言，例如，可列舉DIPEA、TEA、吡啶或N-甲基嗎啉等之有機鹼，但DIPEA或TEA為較佳。該鹼之當量係相對於胺衍生物(IV)，1~100當量為較佳，1~10當量為更佳。

與醯氯衍生物(V)之縮合反應之反應溫度係-50~100℃為較佳，-20~60℃為更佳，0~40℃為又更佳。又，與醯氯(V)之縮合反應之反應時間係30分鐘~24小時為較佳，30分鐘~12小時為更佳，30分鐘~8小時為又更佳。

與醯氯衍生物(V)之縮合反應中的胺衍生物(IV)之反應開始時之濃度係0.01~100M為較佳，0.01~10M為更佳，0.1~10M為又更佳。

另一方面，胺衍生物(IV)與羧酸衍生物(VI)之縮合反應係可藉由與流程圖1相同之條件進行。

R¹為-N(H)S(=O)₂R⁷的六氫菸鹼酸衍生物(I-c)係，例如，如以下之流程圖3所示，於鹼存在下，藉由胺衍生物(IV)與磺醯氯衍生物(VII)之磺醯胺化反應可加以製造。

[式中，R²~R⁵及R⁷係如與上述定義相同]。

就磺醯胺化反應所使用的溶劑而言，例如，可列舉二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、DMF、THF、二烷、二乙基醚或1,2-二甲氧基乙烷，但二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈或THF為較佳，二氯甲烷或1,2-二氯乙烷為更佳。

磺醯胺化反應所使用的磺醯氯衍生物(VII)之當量係相對於胺衍生物(IV)，0.1~10當量為較佳，1~3當量為更佳，1~1.5當量為又更佳。

就磺醯胺化反應所使用的鹼而言，例如，可列舉DIPEA、TEA、吡啶或N-甲基嗎啉等之有機鹼，但DIPEA或TEA為較佳。該鹼之當量係相對於胺衍生物(IV)，1~100當量為較佳，1~10當量為更佳。

磺醯胺化反應之反應溫度係-50~50℃為較佳，-30~30℃為更佳，-20~20℃為又更佳。又，磺醯胺化反應之反應時間係30分鐘~24小時為較佳，30分鐘~12小時為更佳，30分鐘~8小時為又更佳。

磺醯胺化反應中的胺衍生物(IV)之反應開始時之濃度係0.01~100M為較佳，0.01~10M為更佳，0.1~10M為又更佳。

上述之流程圖2及3中的起始物質之胺衍生物(IV)係例如，如以下之流程圖4所示，於鹼存在下、胺衍生物(II)與羧酸衍生物(VIII)之縮合反應後，藉由去除保護基的脫保護反應而可加以製造。

[式中，R²~R⁵係與上述定義相同，R⁸表示保護基]。

胺衍生物(II)與羧酸衍生物(VIII)之縮合反應係可藉由與流程圖1相同之條件進行。

接續縮合反應的脫保護反應係可藉由例如，Protective Groups in Organic Synthesis第3版(Green等人著，1999年，John Wiley & Sons，Inc.)記載的周知方法進行。例如，保護基為三級丁氧基羰基的情形，藉由以三氟乙酸等之強酸處理，可去除保護基。

上述之流程圖4中的羧酸衍生物(VIII)係可直接利用市售品，或藉由周知方法來製造亦無妨。

上述之流程圖1及4中的起始物質的胺衍生物(II)係例如，如以下之流程圖5所示，於鹼及縮合劑存在下，藉由苄基胺衍生物(IX)與六氫菸鹼酸衍生物(X)之縮合反應後，去除保護基的脫保護反應可加以製造。

[式中，R⁴、R⁵及R⁸係與上述定義相同]。

苄基胺衍生物(IX)與六氫菸鹼酸衍生物(X)之縮合反應係可藉由與流程圖1相同條件進行。

脫保護反應係可與流程圖4記載之方法相同的條件進行。

流程圖5之縮合反應亦可將六氫菸鹼酸衍生物(X)變換為酸氯化物(acid chloride)，並於鹼存在下進行。

就將六氫菸鹼酸衍生物(X)變換為酸氯化物的試藥而言，可列舉草醯氯或亞硫醯氯，但草醯氯為較佳。該試藥之當量係相對於六氫菸鹼酸衍生物(X)，1~10當量為較佳，1~1.5當量為更佳。

就將六氫菸鹼酸衍生物(X)變換為酸氯化物之際所使用的溶劑而言，可列舉二氯甲烷、氯仿、THF、 1,2-二氯乙烷、乙腈、1,4-二烷或DMF，但二氯甲烷、THF或DMF、或彼等之混合溶劑為較佳，二氯甲烷與DMF之混合溶劑或THF與DMF之混合溶劑為更佳。就混合溶劑之比率而言，例如，二氯甲烷與DMF之混合溶劑的情形，二氯甲烷：DMF=1~1000：1為較佳，1~100：1為更佳。

將六氫菸鹼酸衍生物(X)變換為酸氯化物之際之反應溫度係-50~100℃為較佳，-30~30℃為較佳，-20~0℃為又更佳。又，將六氫菸鹼酸衍生物(X)變換為酸氯化物之際之反應時間係30分鐘~24小時為較佳，30分鐘~12小時為更佳，30分鐘~2小時為又更佳。

將六氫菸鹼酸衍生物(X)變換為酸氯化物之際之反應開始時之六氫菸鹼酸衍生物(X)之濃度係0.01~100M為較佳，0.01~10M為更佳，0.1~3M為又更佳。

如以上獲得的上述之六氫菸鹼酸衍生物(I)、其藥理學上可容許的鹽、或上述之六氫菸鹼酸衍生物(I)之製造所使用的中間體、原料化合物或試藥係因應必要，可藉由提取、蒸餾、層析或再結晶等之方法加以單離純化。

就與上述之六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽併用所使用的肺血管擴張藥而言，可列舉前列腺環素衍生物、磷酸二酯酶抑制劑、內皮素受體拮抗劑等，亦可包含此等之複數種類。又，肺血管擴張藥係指藉由使肺動脈擴張而使肺動脈壓降低作為主要作用機制的藥劑。

就前列腺環素衍生物而言，例如，可列舉依前列醇鈉(epoprostenol sodium)((Z)-(3aR,4R,5R,6aS)-3,3a,4,5,6,6a-六氫-5-羥基-4-[(E)-(3S)-3-羥基-1-辛烯基]-2H-環戊并[b]呋喃-△2，σ吉草酸鈉)、貝前列素鈉(beraprost sodium)((1RS,2RS,3aSR,8bSR)-2,3,3a,8b-四氫-2-羥基-1-[(1E,3SR,4RS)-3-羥基-4-甲基辛-1-烯-6-炔-1-基]-1H-環戊并[b]苯并呋喃-5-丁酸鈉)、依洛前列素(iloprost)((E)-(3aS，4R,5R,6aR)-六氫-5-羥基-4-[(E)-(3S,4RS)-3-羥基-4-甲基-1-辛烯-6-炔基]-△(2(1H)，△-戊搭烯吉草酸(△-pentalene valeric acid))、曲前列環素鈉(treprostinil sodium)((1R,2R,3aS,9aS)-[[2,3,3a,4,9,9a-六氫-2-羥基-1-[(3S)-3-羥基辛基]-1H苯并[f]茚-5-基]氧基]乙酸鈉)，但依前列醇鈉為較佳。

就磷酸二酯酶抑制劑而言，例如，可列舉西地那非(1-[[3-(6,7-二氫-1-甲基-7-側氧基-3-丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺醯基]-4-甲基哌)或其藥理學上可容許的鹽、或他達拉非((6R,12aR)-6-(1,3-苯并二氧雜環戊烷-5-基)-2-甲基-2,3,6,7,12,12a-六氫吡并[1’,2’：1,6]吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮)，但西地那非或其藥理學上可容許的鹽、或他達拉非為較佳，他達拉非為更佳。

就內皮素受體拮抗劑而言，例如，可列舉安倍生坦((2S)-2[(4,6-二甲基嘧啶-2-基)氧基]-3-甲氧基 -3,3-二苯基丙酸)或其藥理學上可容許的鹽、或波生坦(4-(1,1-二甲基乙基)-N-[6-(2-羥基乙氧基)-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]苯磺醯胺)或其水合物，但安倍生坦或其藥理學上可容許的鹽、或波生坦或其水合物為較佳，安倍生坦或其藥理學上可容許的鹽為更佳。

西地那非或安倍生坦之藥理學上可容許的鹽係可列舉例如，鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、氫溴酸鹽或氫碘酸鹽等之無機酸鹽；或草酸鹽、丙二酸鹽、檸檬酸鹽、反丁烯二酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來酸鹽、葡萄糖酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、甲磺酸鹽、p-甲苯磺酸鹽或肉桂酸鹽等之有機酸鹽；或鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽或銨鹽等之無機鹼鹽；或甲基胺鹽、二乙基胺鹽、三甲基胺鹽、三乙基胺鹽、吡啶鎓鹽、三乙醇胺鹽、乙二胺鹽或胍鹽等之有機鹼鹽。西地那非之藥理學上可容許的鹽係檸檬酸鹽為較佳。

前列腺環素衍生物係可呈市售品取得之外，例如，亦可依據周知文獻(特公平1-53672)記載之方法加以合成。

磷酸二酯酶抑制劑係可呈市售品取得之外，例如，亦可依據周知文獻(國際公開第95/19978號)記載之方法加以合成。

內皮素受體拮抗劑係可呈市售品取得之外，例如，亦可依據周知文獻(國際公開第96/11914號)記載之方法加以合成。

上述之肺性高血壓之治療劑或預防劑的有效成分的六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽係顯示強的sEH抑制活性，又，基於其作用，對肺性高血壓發揮優異的治療效果及預防效果。

「sEH」係可溶性環氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase)的縮寫，催化環氧化物的水解，變換為對應此之二醇的代謝酵素。sEH之最被知悉的基質係來自內皮細胞的超極化因子之一的EETs，sEH係具有將EETs代謝為DHETs而使失活的作用。「EETs」係環氧化二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids)之縮寫，「DHETs」係二羥基二十碳三烯酸(Dihydroxyeicosatrienoic acids)之縮寫。就EETs而言，例如，可列舉14,15-環氧化二十碳三烯酸(14,15-Epoxyeicosatrienoic acid；以下，14,15-EET)。就DHETs而言，例如，可列舉14,15-二羥基二十碳三烯酸(14,15-Dihydroxyeicosatrienoic acid；以下，14,15-DHET)。

「sEH抑制活性」係意指抑制sEH之作用的活性。據此，sEH抑制活性係包含抑制催化sEH之基質之一的EETs水解的sEH之酵素反應的活性。

「sEH抑制劑」係意指含有呈現sEH抑制活性的化合物或該化合物作為有效成分的組成物。

sEH抑制活性係可藉由例如，使人類sEH與其基質EETs，於sEH抑制劑之存在下反應，將產生的DHETs之量，與sEH抑制劑不存在下的DHETs產生量作比較而加以測量。又，使用市售之測量套組(可溶性環氧化物水解酶抑制劑篩選試驗套組(Soluble Epoxide Hydrolase Inhibitor Screening Assay Kit)；Cayman公司)，亦或使用周知文獻(Analytical Biochemistry、2005年、第343卷、p.66-75等)記載之方法，可測量sEH抑制劑之sEH抑制活性。

又，sEH抑制劑存在下及不存在下，使用外消旋性4-硝基苯基-反-2,3-環氧基-3-苯基丙基碳酸酯作為sEH之基質，測量4-硝基酚化物陰離子之出現，或使用氰基(6-甲氧基萘-2-基)甲基2-(3-苯基氧基矽烷-2-基)乙酸酯作為sEH之基質，藉由測量6-甲氧基-2-萘醛之出現，亦可測量sEH抑制劑之sEH抑制活性。

sEH抑制劑抑制由EETs至DHETs的代謝或使EETs之量增加，可測量EETs濃度、DHETs濃度或EETs/DHETs比而加以確認。EETs濃度、DHETs濃度及EETs/DHETs比係可使用例如，市售之測量套組(14,15-EET/DHET ELISA Kit；Detroit R & D公司)而測量。

「肺性高血壓」係意指認為有血液自心臓送到肺臟的肺動脈壓的上升的病態中，於安靜臥位之平均肺動脈壓為25mmHg以上之狀態，或肺疾病、睡眠時無呼吸症候群及肺胞低換氣症候群中，平均肺動脈壓於安靜時為20mmHg以上(運動時為30mmHg以上)之狀態(簡略版，肺性高血壓治療指引(2006年改訂版)、P2-P3.)。肺性高血壓係觀察到右心室收縮期壓上升、右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚、肺中的細胞增殖或心肌肥大。

上述之肺性高血壓之治療劑或預防劑之對肺性高血壓的治療效果可使用人為性地使誘發肺性高血壓的動物模式而加以評價。就如此動物模式而言，例如，可列舉使用大鼠的野百合鹼投予肺性高血壓模式(Journal of Pharmacological Sciences、2009年、第111卷、p.235-243)。又，病態之進行係可測量右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))而確認。又，伴隨肺性高血壓之右心室肥大及肺肥大的病態係各自可測量右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))而確認。

肺性高血壓之肺的病變部位中的sEH發現係可使用抗sEH抗體將肺組織作免疫組織染色而加以確認。肺性高血壓之肺動脈肥厚係可將肺組織作彈性纖維染色(Elastica van Gieson staining)，藉由染色像之觀察或測量肺動脈中膜厚比((肺動脈中膜厚×2/肺動脈直徑)×100)而加以確認。肺性高血壓之肺中的細胞增殖係可使用抗增殖性細胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen；以下，PCNA)抗體將肺組織作免疫染色而加以確認。肺性高血壓之心肌肥大係可藉由將右心室作HE染色而加以確認。肺性高血壓中的全身血壓係可以實施例記載的方法加以確認。藉由確認此等，可評價對於肺動脈性肺性高血壓、肺靜脈阻塞性疾病、肺毛細血管腫症、左心疾病所致的肺性高血壓、肺疾病及低氧所致的肺性高血壓、慢性血栓塞栓症肺性高血壓以及原因不明之複合式要因所致的肺性高血壓的治療效果。

上述之肺性高血壓之治療劑或預防劑於對人類投予的情形顯示優異的肺性高血壓之治療效果或預防效果。又，對人類以外之哺乳類投予的情形亦顯示優異的肺性高血壓之治療效果或預防效果。其中，就人類以外之哺乳類而言，例如，可列舉小鼠、大鼠、倉鼠、兔、貓、犬、牛、羊或猴。

就上述之肺性高血壓之治療劑或預防劑之投予形態而言，可將六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥(例如，前列腺環素衍生物、磷酸二酯酶抑制劑及/或內皮素受體拮抗劑)兩者之混合物，即配合劑，直接或進一步摻合作為醫藥之可容許的載劑，經口或非經口地投予。或者，亦可兩者不作成配合劑，而是各自單獨，即作為單劑而準備，將此等直接或進一步各自摻合作為醫藥之可容許的載劑，同時地投予。再者，亦可將各自之單劑以適當間隔而相前後加以投予。此等情形，並無各自單劑之劑型及投予路徑要相同的必要，各自相異亦無妨。又，上述之「適當間隔」可藉由臨床上或動物實驗而確認。

就單劑或作為配合劑而經口投予的情形之劑型而言，例如，可列舉錠劑(包含糖衣錠、膜衣錠)、丸劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑(包含軟膠囊劑、微膠囊劑)、糖漿劑、乳劑或懸浮劑，又，就非經口投予的情形之劑型而言，例如，可列舉注射劑、注入劑、點滴劑或栓劑。再者，與適當基劑(例如，酪酸之聚合物、羥基乙酸之聚合物、酪酸-羥基乙酸之共聚合物、酪酸之聚合物與羥基乙酸之聚合物之混合物或聚甘油脂肪酸酯等)組合，作成緩釋性製劑亦為有效的。

上述劑型之單劑或配合劑之調製係可依據製劑領域中一般使用的周知製造方法而進行。此情形，因應必要，使含有於製劑領域通常使用的賦形劑、結合劑、潤滑劑、崩解劑、甘味劑、界面活性劑、懸浮化劑或乳化劑等而可加以製造。

作為單劑或配合劑之錠劑之調製係可使含有賦形劑、結合劑、崩解劑或潤滑劑等而進行，作為丸劑及顆粒劑之調製，係可使含有賦形劑、結合劑或崩解劑等而進行。又，可各自使含有下列物而進行：作為散劑及膠囊劑之調製係含有賦形劑等，作為糖漿劑之調製係含有甘味劑等，作為乳劑及懸浮劑之調製係含有界面活性劑、懸浮化劑或乳化劑等。

就上述之賦形劑而言，例如，可列舉乳糖、葡萄糖、澱粉、蔗糖、微結晶纖維素、甘草末、甘露糖醇、碳酸氫鈉、磷酸鈣或硫酸鈣。

就上述之結合劑而言，例如，可列舉澱粉糊液、阿拉伯膠液、明膠液、黃蓍膠液、羧基甲基纖維素液、褐藻酸鈉液或甘油。

就上述之崩解劑而言，例如，可列舉澱粉或碳酸鈣。

就上述之潤滑劑而言，例如，可列舉硬脂酸鎂、硬脂酸、硬脂酸鈣或純化滑石等。

就上述之甘味劑而言，例如，可列舉葡萄糖、果糖、轉化糖、山梨糖醇、木糖醇、甘油或單糖漿。

就上述之界面活性劑而言，例如，可列舉月桂基硫酸鈉、聚山梨糖醇酯80、山梨醇酐單脂肪酸酯或聚氧乙烯硬脂酸酯40(polyoxyl stearate 40)。

就上述之懸浮化劑而言，例如，可列舉阿拉伯膠、褐藻酸鈉、羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素或膨土。

就上述之乳化劑而言，例如，可列舉阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠或聚山梨糖醇酯80。

再者，上述劑型之單劑或配合劑之調製係可添加製劑領域中一般所使用的著色劑、保存劑、芳香劑、矯味劑、安定劑或黏稠劑等。

六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥(例如，前列腺環素衍生物、磷酸二酯酶抑制劑及/或內皮素受體拮抗劑)之投予量比或摻合比係可依投予對象、投予路徑、對象疾病、症狀或摻合的組合等加以適宜選擇。

含有前列腺環素衍生物的製劑之每1日的投予量係依患者的狀態或體重、前列腺環素衍生物之種類、投予路徑等而異，但例如，經口投予貝前列腺鈉的情形，若成人(體重約60kg)係0.1μg/kg~100mg/kg，較佳為1μg/kg~50mg/kg之範圍，1日分成1~4次投予為較佳。

含有磷酸二酯酶抑制劑的製劑之每1日之投予量係依患者之狀態或體重、磷酸二酯酶抑制劑之種類、投予路徑等而異，但例如，經口投予他達拉非的情形，若為成人(體重約60kg)，係5~80mg之範圍分成1~3次投予為較佳，經口投予西地那非或其藥理學上可容許的鹽的情形，若為成人(體重約60kg)，係5~90mg之範圍分成1~3次投予為較佳。

含有內皮素受體拮抗劑的製劑之每1日之投予量係例如，經口投予安倍生坦的情形，若為成人(體重約60kg)，於1~20mg之範圍分成1~3次投予為較佳，經口投予波生坦或其水合物的情形，若為成人(體重約60kg)，於10~400mg之範圍分成1~3次投予為較佳。

含有六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽的製劑之每1日之投予量，例如，經口投予的情形，若為成人(體重約60kg)，於1~1000mg之範圍分成1~3次投予為較佳，非經口投予的情形，若為注射劑，最好為體重每1kg於0.01~100mg之範圍藉由靜脈注射投予。

[實施例]

以下，基於實施例以具體地說明本發明，但本發明並未限定於此等例。藉由矽膠管柱層析法的純化，於未特別記述的情形，使用「HI-FLASH」管柱(山善社)及Purif-α2(Shoko Scientific Co.,Ltd.)來進行。

(實施例1)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-丙醯胺基環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(carboxamide)之合成：

[步驟1]

4-溴-2-(三氟甲氧基)苯甲醛之合成：

-78℃下，於4-溴-1-碘-2-(三氟甲氧基)苯(25g、68mmol)之THF(0.40L)溶液中，歷經1.5小時滴加n-丁基鋰己烷溶液(1.6N，86mL、0.14mol)。-78℃下，攪拌1小時後，歷經10分鐘滴加DMF(11mL、0.14mmol)於反應溶液。-78℃下，攪拌2小時後，於反應溶液中添加檸檬酸水溶液(0.25M、0.25L、63mmol)，並以二乙基醚提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得4-溴-2-(三氟甲氧基)苯甲醛(以下，參考例化合物1)16g(87%)。

[步驟2]

(4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)甲醇之合成：

-10℃下，於參考例化合物1(16g、59mmol)之甲醇(0.23L)溶液中，添加氫化硼鈉(2.4g、63mmol)。-10℃下，攪拌10分鐘後，於反應溶液中添加丙酮(10mL)、1N鹽酸(10mL)。減壓濃縮反應溶液，於獲得的粗生成物中，添加水，並以乙酸乙基提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=50：1→1：1)純化，獲得(4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)甲醇(以下，參考例化合物2)15g(91%)。

[步驟3]

4-溴-2-(三氟甲氧基)苄基甲烷磺酸酯之合成：

冰冷下，於參考例化合物2(2.0g、7.4mmol)、TEA(1.2mL、8.9mmol)之二氯甲烷(20mL)溶液中，添加甲磺醯氯(0.93g、8.1mmol)。室溫下攪拌3小時後，於反應溶液中添加水，並以二氯甲烷提取。有機層以飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得4-溴-2-(三氟甲氧基)苄基甲烷磺酸酯(以下，參考例化合物3)2.6g(定量的)。

[步驟4]

2-(4-溴-2-(三氟甲氧基)苄基)異吲哚啉-1,3-二酮之合成：

冰冷下，於參考例化合物3(2.6g、7.4mmol)之DMF(20mL)溶液中，添加酞醯亞胺鉀(2.1g、11mmol)。室溫下攪拌14小時後，於反應溶液中添加水。濾取析出的固體，以水洗淨，乾燥，獲得2-(4-溴-2-(三氟甲氧基)苄基)異吲哚啉-1,3-二酮(以下，參考例化合物4)2.7g(91%)。

[步驟5]

(4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)甲胺之合成：

室溫下，於參考例化合物4(2.6g、6.5mmol)之甲醇(40mL)溶液中，添加肼一水合物(0.98g、19mmol)。60℃下，攪拌2小時後，室溫下濾除析出的固體。將濾液減壓濃縮，使獲得的粗生成物溶解於乙酸乙酯，以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)甲胺(以下，參考例化合物5)1.5g(85%)。

[步驟6]

(R)-三級丁基3-((4-溴-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯之合成：

室溫下，於參考例化合物5(0.50g、1.9mmol)、(R)-1-(三級丁氧基羰基)哌啶-3-羧酸(0.43g、1.9mmol)、DIPEA(0.53g、4.1mmol)之DMF(3.0mL)溶液中，添加HATU(0.77g、2.0mmol)。室溫下攪拌15小時後，於反應溶液中添加乙酸乙酯，有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液、水、飽和氯化鈉水溶液洗淨。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=9：1→1：1)純化，獲得(R)-三級丁基3-((4-溴-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯(以下，參考例化合物6)0.89g(定量的)。

[步驟7]

(R)-三級丁基3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯之合成：

室溫下，於參考例化合物6(0.050g、0.10mmol)、氰化鋅(0.012g、0.10mmol)之DMF(2.0mL)溶液中添加肆三苯基膦鈀(0)(0.030g、0.026mmol)。150℃下，攪拌30分鐘後，室溫下於反應溶液中添加水，以二乙基醚提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=20：1→1：2)純化，獲得(R)-三級丁基3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯(以下，參考例化合物7)0.017g(39%)。

[步驟8]

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物7(6.9g、16mmol)之二氯甲烷(0.16L)溶液中添加三氟乙酸(以下，TFA)(35mL、0.45mol)。室溫下攪拌1小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷，以飽和碳酸鈉水溶液中和，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物8)5.2g(98%)。

[步驟9]

(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)環丁基)胺甲酸酯之合成：

冰冷下，於參考例化合物8(0.20g、0.67mmol)、1-((三級丁氧基羰基)胺基)環丁烷羧酸(0.15g、0.67mmol)、DIPEA(0.24mL、1.3mmol)之DMF(0.70mL)溶液中，添加HATU(0.28g、0.73mmol)。室溫下攪拌86小時後，於反應溶液中添加1N鹽酸，以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=7：3→4：6)純化，獲得(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)環丁基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物9)0.25g(78%)。

[步驟10]

(R)-1-(1-胺基環丁烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物9(0.25g、0.47mmol)之二氯甲烷(1.4mL)溶液中，添加TFA(0.70mL、9.1mmol)。室溫下攪拌3小時後，減壓濃縮反應溶液。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷，以飽和碳酸鈉水溶液中和，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-1-(1-胺基環丁烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物10)0.18g(90%)。

[步驟11]

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-丙醯胺基環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物10(7.6g、18mmol)、TEA(5.5mL、40mmol)之二氯甲烷(54mL)溶液中，添加丙醯氯(1.8g、20mmol)。冰冷下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-丙醯胺基環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物1)6.2g(71%)。

(實施例2)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)胺甲酸酯之合成：

冰冷下，於參考例化合物8(3.5g、11mmol)、2-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-甲基丙酸(2.6g、13mmol)、DIPEA(4.1mL、24mmol)之DMF(40mL)溶液中添加HATU(4.9g、13mmol)，並於室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=9：1→4：6)純化，獲得(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物11)5.2g(95%)。

[步驟2]

(R)-1-(2-胺基-2-甲基丙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物11(5.2g、10mmol)之二氯甲烷(0.10L)溶液中添加TFA(25mL、0.32mol)。室溫下攪拌1.5小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷，以飽和碳酸鈉水溶液中和，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-1-(2-胺基-2-甲基丙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物12)3.4g(82%)。

[步驟3]

冰冷下，於參考例化合物12(2.3g、5.6mmol)、TEA(1.6mL、11mmol)之二氯甲烷(15mL)溶液中添加甲磺醯氯(0.97g、8.5mmol)。冰冷下，攪拌5分鐘後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物2)2.4g(87%)。

(實施例3)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(甲基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)環丙基)胺甲酸酯之合成：

冰冷下，於參考例化合物8(0.67g、2.0mmol)、1-((三級丁氧基羰基)胺基)環丙烷甲酸(0.49g、2.4mmol)、DIPEA(1.1mL、6.1mmol)之DMF(5.0mL)溶液中，添加HATU(1.1g、2.5mmol)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=9：1→4：6)純化，獲得(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)環丙基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物13)0.92g(88%)。

[步驟2]

(R)-1-(1-胺基環丙烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物13(0.92g、1.8mmol)之二氯甲烷(20mL)溶液中添加TFA(4.7mL、61mmol)。室溫下攪拌1.5小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷，以飽和碳酸氫鈉水溶液中和，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-1-(1-胺基環丙烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物14)0.63g(87%)。

[步驟3]

冰冷下，於參考例化合物14(0.63g、1.5mmol)、TEA(1.1mL、7.7mmol)之二氯甲烷(5.0mL)溶液中，添加甲磺醯氯(0.27g、2.3mmol)。冰冷下攪拌1.5小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(甲基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物3)0.56g(74%)。

(實施例4)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(三氟甲基)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

使用1-(三氟甲基)環丙烷甲酸(0.054g、0.17mmol)，藉由進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(三氟甲基)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物4)0.044g(58%)。

(實施例5)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(甲基磺醯胺)環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

使用參考例化合物10(0.020g、0.047mmol)，藉由進行與實施例2[步驟3]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(甲基磺醯胺)環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物5)0.017g(71%)。

(實施例6)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-異丁基醯胺環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

使用異丁醯氯(0.0055g、0.052mmol)藉由進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-異丁基醯胺環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物6)0.022g(95%)。

(實施例7)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-三甲基乙醯胺環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用三甲基乙醯氯(0.0063g、0.052mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-三甲基乙醯胺環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物7)0.017g(72%)。

(實施例8)

(R)-1-(1-乙醯胺基環戊烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)環戊基)胺甲酸酯之合成：

藉由使用1-((三級丁氧基羰基)胺基)環戊烷羧酸(0.078g、0.34mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-三級丁基(1-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)環戊基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物15)0.13g(77%)。

[步驟2]

(R)-1-(1-胺基環戊烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物15(0.13g、0.24mmol)進行與實施例1[步驟10]相同之反應，獲得(R)-1-(1-胺基環戊烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物16)0.051g(49%)。

[步驟3]

冰冷下，於參考例化合物16(0.020g、0.046mmol)、TEA(0.019mL、0.14mmol)之二氯甲烷(0.20mL)溶液中，添加乙酸酐(0.0070g、0.068mmol)。冰冷下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得(R)-1-(1-乙醯胺基環戊烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物8)0.014g(62%)。

(實施例9)

(R)-1-(1-乙醯胺基環丁烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物10(0.020g、0.047mmol)進行與實施例8[步驟3]相同之反應，獲得(R)-1-(1-乙醯胺基環丁烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物9)0.013g(60%)。

(實施例10)

(R)-N-(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄腈之合成：

冰冷下，於2,2,2-三氟乙醇(1.5g、15mmol)之THF(50mL)溶液中添加氫化鈉(55重量%、0.67g、15mmol)。冰冷下攪拌10分鐘後，室溫下攪拌30分鐘。冰冷下，於反應溶液中添加4-氯-2-氟苄腈(2.0g、 13mmol)。室溫下攪拌1小時後，冰冷下，於反應溶液中添加0.1N鹽酸，並以乙酸乙酯提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=10：0→3：1)純化，獲得4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄腈(以下，參考例化合物17)2.6g(86%)。

[步驟2]

(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)甲胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物17(2.5g、11mmol)之二乙基醚(30mL)溶液中添加氫化鋁鋰(1.0g、27mmol)。室溫下攪拌4小時後，冰冷下，於反應溶液中添加THF(20mL)、水(1.0mL)、1N氫氧化鈉水溶液(1.0mL)、水(3.0mL)。過濾反應溶液後，將濾液減壓濃縮，獲得(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)甲胺(以下，參考例化合物18)2.4g(94%)。

[步驟3]

(R)-三級丁基3-((4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯之合成：

藉由使用參考例化合物18(2.4g、10mmol)進行與實施例1[步驟6]相同之反應，獲得(R)-三級丁基3-((4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯(以下，參考例化合物19)4.5g(定量的)。

[步驟4]

(R)-N-(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物19(2.0g、4.4mmol)中添加濃鹽酸(10mL、0.12mol)。室溫下攪拌3小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷(10mL)，並添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)。室溫下攪拌30分鐘後，於反應溶液中添加水，並以二氯甲烷提取。有機層以水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-N-(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物20)1.4g(87%)。

[步驟5]

(R)-三級丁基(1-3-((4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)胺甲酸酯之合成：

藉由使用參考例化合物20(0.60g、1.7mmol)進行與實施例2[步驟1]相同之反應，獲得(R)-三級丁基(1-3-((4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物21)0.77g(84%)。

[步驟6]

(R)-1-(2-胺基-2-甲基丙醯基)-N-(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物21(0.83g、1.5mmol)中添加TFA(10mL)。室溫下攪拌3小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷(10mL)，並添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)。室溫下攪拌30分鐘後，於反應溶液中添加水，並以二氯甲烷提取。有機層以水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-1-(2-胺基-2-甲基丙醯基)-N-(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物22)0.65g(96%)。

[步驟7]

冰冷下，於參考例化合物22(0.080g、0.18mmol)、吡啶(0.030mL、0.37mmol)之二氯甲烷(2.0mL)溶液中，添加甲磺醯氯(0.023g、0.20mmol)。室溫下攪拌10小時後，於反應溶液中添加水，並以二氯甲烷提取。有機層以0.1N鹽酸、水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=100：1→10：1)純化，獲得(R)-N-(4-氯-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物10)0.030g(32%)。

(實施例11)

(R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-1-((R)-2-胺基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物8(0.21g、0.65mmol)、(R)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁酸(0.24g、0.72mmol)、DIPEA(0.14mL、0.78mmol)之 DMF(3.5mL)溶液中，添加HATU(0.30g、0.78mmol)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=9：1→1：9)純化，獲得粗生成物0.30g。冰冷下，於獲得的粗生成物(0.30g)之DMF(2.0mL)溶液中添加嗎啉(0.20mL、2.3mmol)。室溫下攪拌2.5小時後，於反應溶液中添加水，並以乙酸乙酯提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→90：10)純化，獲得(R)-1-((R)-2-胺基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物23)0.18g(2階段產率65%)。

[步驟2]

藉由使用參考例化合物23(0.020g、0.047mmol)進行與實施例8[步驟3]相同之反應，獲得(R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物11)0.018g(83%)。

(實施例12)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-3-甲基-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物23(0.020g、0.047mmol)進行與實施例2[步驟3]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基 -2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-3-甲基-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物12)0.020g(83%)。

(實施例13)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(乙基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物14(0.050g、0.12mmol)、DIPEA(0.043mL、0.24mmol)之二氯甲烷(3.0mL)溶液中，添加乙磺醯氯(ethane sulfonyl chloride)(0.017g、0.13mmol)。室溫下攪拌3小時後，添加吡啶(0.30mL、3.7mmol)。室溫下攪拌3小時後，於反應溶液中添加水，並以二氯甲烷提取。有機層以0.1N鹽酸、水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=100：1→10：1)純化，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(乙基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物13)0.0080g(13%)。

(實施例14)

(R)-N-(4-胺甲醯基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於實施例化合物2(0.020g、0.041mmol)、碳酸鉀(0.0028g、0.020mmol)之DMF(0.38mL)溶液中，添加過氧化氫水(30重量%、0.021mL)。室溫下攪拌18小時後，於反應溶液中添加水，並以乙酸乙酯提取。有機層以硫代硫酸鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→85：15)純化，獲得(R)-N-(4-胺甲醯基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物14)0.013g(63%)。

(實施例15)

(R)-N-(4-胺甲醯基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用實施例化合物3(0.025g、0.051mmol)進行與實施例14相同反應，獲得(R)-N-(4-胺甲醯基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(甲基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物15)0.020g(77%)。

(實施例16)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-羥基-2-甲基丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用2-羥基-2-甲基丙酸(0.15g、0.46mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-羥基-2-甲基丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物16)0.12g(62%)。

(實施例17)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-三甲基乙醯基哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物8(0.15g、0.46mmol)、三甲基乙醯氯(0.066g、0.55mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-三甲基乙醯基哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物17)0.19g(定量的)。

(實施例18)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(N-甲基甲基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

1-(甲基磺醯胺)環丙烷羧酸酯之合成：

冰冷下，於1-胺基環丙烷羧酸酯鹽酸鹽(2.0g、12mmol)、DIPEA(6.3mL、36mmol)之二氯甲烷(35mL)溶液中添加甲磺醯氯(1.4g、12mmol)。冰冷下，攪拌3小時後，於反應溶液中添加1N鹽酸，做成酸性後，以乙酸乙酯提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=10：1→1：2)純化，獲得1-(甲基磺醯胺)環丙烷羧酸酯(以下，參考例化合物24)2.3g(60%)。

[步驟2]

1-(N-甲基甲基磺醯胺)環丙烷羧酸酯之合成：

冰冷下，於參考例化合物24(2.0g、9.7mmol)之DMF(10mL)溶液中，添加氫化鈉(55重量%、0.51g、12mmol)。冰冷下攪拌10分鐘後，於室溫下攪拌30分鐘。冰冷下，於反應溶液中添加碘甲烷(0.78mL、13mmol)。室溫下攪拌14小時後，冰冷下，於反應溶液中添加0.1N鹽酸，並以己烷：乙酸乙酯混合溶劑(己烷：乙酸乙酯=1：2)提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=10：1→1：1)純化，獲得1-(N-甲基甲基磺醯胺)環丙烷羧酸酯(以下，參考例化合物25)1.8g(84%)。

[步驟3]

1-(N-甲基甲基磺醯胺)環丙烷甲酸之合成：

室溫下，於參考例化合物25(1.8g、7.9mmol)之甲醇(20mL)溶液中，添加1N氫氧化鈉水溶液(12mL、12mmol)。50℃下，攪拌3小時後，室溫下、於反應溶液中添加1N鹽酸，並以氯仿提取。有機層以飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得1-(N-甲基甲基磺醯胺)環丙烷甲酸(以下，參考例化合物26)0.88g(58%)。

[步驟4]

藉由使用參考例化合物26(0.13g、0.67mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(N-甲基甲基磺醯胺)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物18)0.17g(60%)。

(實施例19)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(3-羥基-2,2-二甲基丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

室溫下，於3-羥基-2,2-二甲基丙酸甲酯(1.0g、7.6mmol)之甲醇(7.5mL)溶液中，添加1N氫氧化鈉水溶液(9.1mL)。室溫下攪拌4小時後，將反應溶液減壓濃縮。於獲得的粗生成物中添加1N鹽酸，並減壓濃縮。冰冷下，於獲得的粗生成物(0.10g)、DIPEA(0.30mL、1.7mmol)之DMF(1.6mL)溶液中，添加HATU(0.35g、0.93mmol)。冰冷下攪拌15分鐘後，於反應溶液中添加參考例化合物8(0.28g、0.85mmol)。室溫下攪拌一晚後，於反應溶液中添加水，並以二乙基醚提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=8：2→僅乙酸乙酯)純化，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(3-羥基-2,2-二甲基丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物19)0.24g(2階段產率65%)。

(實施例20)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-羥基環己烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於環己酮(3.0g、31mmol)、氰化鉀(2.2g、34mmol)之水(5.6mL)溶液中，添加硫酸水溶液(40重量%、5.6mL)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水，並以二乙基醚提取。有機層以飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。於獲得的粗生成物中添加濃鹽酸(60mL)。80℃下，攪拌16小時後，減壓濃縮反應溶液，獲得粗生成物4.0g。冰冷下，於獲得的粗生成物(0.16g)、參考例化合物8(0.15g、0.46mmol)、DIPEA(0.24mL、1.4mmol)之DMF(1.0mL)溶液中，添加HATU(0.45g、0.60mmol)。室溫下攪拌2小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=7：3→4：6)純化，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-羥基環己烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物20)0.061g(2階段產率29%)。

(實施例21)

(R)-1-((R)-2-乙醯胺基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)丁酸之合成：

冰冷下，於(R)-2-胺基丁酸(2.0g、19mmol)、碳酸氫鈉(1.6g、19mmol)之1,4-二烷：水(1,4-二烷：水=3：10、26mL)混合溶液中，添加二-三級丁基二碳酸酯(4.7g、21mmol)。室溫下攪拌120小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於氯仿，添加1N鹽酸，並以氯仿提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)丁酸(以下，參考例化合物27)2.0g(定量的)。

[步驟2]

三級丁基((R)-1-((R)-3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯之合成：

藉由使用參考例化合物27(0.20g、1.0mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得三級丁基 ((R)-1-((R)-3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物28)0.47g(定量的)。

[步驟3]

(R)-1-((R)-2-胺基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物28(0.47g、0.91mmol)進行與實施例1[步驟10]相同之反應，獲得(R)-1-((R)-2-胺基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物29)0.38g(定量的)。

[步驟4]

藉由使用參考例化合物29(0.091g、0.22mmol)進行與實施例8[步驟3]相同之反應，獲得(R)-1-((R)-2-乙醯胺基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物21)0.085g(85%)。

(實施例22)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物29(0.096g、0.23mmol)進行與實施例2[步驟3]相同的反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物22)0.090g(79%)。

(實施例23)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-氰基環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用1-氰基環丙烷甲酸(0.034g、0.31mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-氰基環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物23)0.081g(63%)。

(實施例24)

(R)-1-((R)-2-乙醯胺基丙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-1-((R)-2-胺基丙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

室溫下，於參考例化合物8(0.35g、1.1mmol)、(R)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸(0.37g、1.2mmol)、DIPEA(0.56mL、3.2mmol)之DMF(2.0mL)溶液中，添加HATU(0.53g、1.4mmol)。室溫下攪拌30分鐘後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=9：1→1：9)純化，獲得粗生成物0.53g。室溫下，於獲得的粗生成物(0.53g)之DMF(4.0mL)溶液中添加嗎啉(0.36mL、4.1mmol)。室溫下攪拌6小時後，於反應溶液中添加水，並以乙酸乙酯提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得(R)-1-((R)-2-胺基丙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物30)0.29g(2階段產率67%)。

[步驟2]

冰冷下，於參考例化合物30(0.10g、0.25mmol)、TEA(0.11mL、0.14mmol)之二氯甲烷(1.0mL)溶液中，添加乙酸酐(0.032g、0.32mmol)。冰冷下，攪拌5分鐘後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→90：10)純化，獲得(R)-1-((R)-2-乙醯胺基丙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物24)0.11g(定量的)。

(實施例25)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物30(0.10g、0.25mmol)進行與實施例2[步驟3]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-(甲基磺醯胺)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物25)0.099g(83%)。

(實施例26)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-異丁基醯胺環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物14(0.020g、0.049mmol)、異丁醯氯(0.0062g、0.058mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-異丁基醯胺環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物26)0.017g(71%)。

(實施例27)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-三甲基乙醯胺環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物14(0.020g、0.049mmol)、三甲基乙醯氯(0.0064g、0.058mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-三甲基乙醯胺環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物27)0.018g(73%)。

(實施例28)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(4-(甲基磺醯胺)四氫-2H-哌喃-4-羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

8-氧-1,3-二吖螺[4.5]癸-2,4-二酮之合成：

室溫下，於二氫-2H-哌喃4(3H)-酮(2.0g、20mmol)、碳酸銨(9.6g、0.10mol)、TEA(2.8mL、20mmol)之水：甲醇(水：甲醇=1：1、60mL)混合溶液中，添加氰化鉀(3.9g、60mmol)。加熱環流下攪拌48小時後，減壓濃縮反應溶液，將溶劑餾除一半左右，濾取析出的固體，以水洗淨後，乾燥，獲得8-氧-1,3-二吖螺[4.5]癸-2,4-二酮(以下，參考例化合物31)1.4g(41%)。又，於濾液中，添加濃鹽酸至成為酸性，濾取析出的固體，以水洗淨後，乾燥，獲得0.80g(24%)之參考例化合物31。

[步驟2]

4-((三級丁氧基羰基)胺基)四氫-2H-哌喃-4-羧酸之合成：

室溫下，於參考例化合物31(2.2g、13mmol)之水(30mL)溶液中添加氫氧化鈣(3.0g、41mmol)。加熱環流下攪拌48小時後，反應溶液以矽藻土過濾，濾物以熱水洗淨。將濾液減壓濃縮，使獲得的粗生成物溶解於水：1,4-二烷：甲醇(水：1,4-二烷：甲醇=10：10：3、23mL)混合溶液。室溫下，於反應溶液中添加二-三級丁基二碳酸酯(3.4g、16mmol)、氫氧化鈉(0.50g、13mmol)。室溫下，攪拌15小時後，將反應溶液減壓濃縮。於獲得的粗生成物中添加稀鹽酸(15mL)，並以氯仿：甲醇(氯仿：甲醇=10：1)混合溶液提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得4-((三級丁氧基羰基)胺基)四氫-2H-哌喃-4-羧酸(以下，參考例化合物32)2.6g(82%)。

[步驟3]

(R)-三級丁基(4-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)四氫-2H-哌喃-4-基)胺甲酸酯之合成：

藉由使用參考例化合物32(0.082g、0.34mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-三級丁基(4-(3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羰基)四氫-2H-哌喃-4-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物33)0.10g(62%)。

[步驟4]

(R)-1-(4-胺基四氫-2H-哌喃羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物33(0.10g、0.19mmol)進行與實施例1[步驟10]相同之反應，獲得(R)-1-(4-胺基四氫-2H-哌喃羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物34)0.050g(58%)。

[步驟5]

冰冷下，藉由使用參考例化合物34(0.040g、0.088mmol)進行與實施例2[步驟3]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(4-(甲基磺醯胺)四氫-2H-哌喃-4-羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物28)0.024g(5.1%)。

(實施例29)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(環丙烷羧醯胺(基))環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用環丙烷甲醯氯(cyclopropane carbonyl chloride)(0.0059g、0.057mmol)進行與實施例1[步驟11] 相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(環丙烷羧醯胺)環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物29)0.012g(52%)。

(實施例30)

(R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-羥基丙酸甲酯之合成：

冰冷下，於(R)-2-胺基-3-羥基丙酸甲酯(3.0g、19mmol)、TEA(8.1mL、58mmol)之甲醇(50mL)溶液中，添加二-三級丁基二碳酸酯(4.6g、21mmol)。室溫下攪拌14小時後，於反應溶液中添加稀鹽酸。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水，並以乙酸乙酯提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液、水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=20：1→2：1)純化，獲得(R)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-羥基丙酸甲酯(以下，參考例化合物35)4.1g(97%)。

[步驟2]

(S)-三級丁基(1,3-二羥基-3-甲基丁-2-基)胺甲酸酯之合成：

-78℃下，於參考例化合物35(4.0g、18mmol)之二乙基醚(0.12L)溶液中，添加溴化甲基鎂二乙基醚溶液 (3N，30mL，91mmol)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中，冰冷下，添加飽和氯化銨水溶液、水，並以乙酸乙酯提取。有機層以0.1N稀鹽酸、水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=10：1→3：1)純化，獲得(S)-三級丁基(1,3-二羥基-3-甲基丁-2-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物36)2.8g(84%)。

[步驟3]

(R)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-羥基-3-甲基丁酸之合成：

35℃下，於參考例化合物36(2.8g、13mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧化物(0.40g、2.6mmol)、標準中性磷酸緩衝液(45mL)之乙腈(50mL)溶液中，同時地分別緩緩添加次氯酸鈉(0.8g、0.64mmol)之水(5.0mL)溶液、亞氯酸(2.4g、27mmol)之水(10mL)溶液。35℃下，攪拌3小時後，於反應溶液中添加乙酸(1.0mL)。35℃下，攪拌3小時後，於反應溶液中添加水，並以乙酸乙酯提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於飽和碳酸氫鈉水溶液，並以乙酸乙酯洗淨。於水層中添加3N鹽酸，作成酸性，並以乙酸乙酯提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-羥基-3-甲基丁酸(以下，參考例化合物37)2.5g(84%)。

[步驟4]

三級丁基((R)-1-((R)-3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-3-羥基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯之合成：

室溫下，於參考例化合物8(0.30g、0.92mmol)、參考例化合物37(0.24g、1.0mmol)、DIPEA(0.35mL、2.0mmol)之DMF(2.0mL)溶液中，添加HATU(0.42g、1.1mmol)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加1N鹽酸，並以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=7：3→4：6)純化，獲得三級丁基((R)-1-((R)-3-((4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-3-羥基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物38)0.44g(89%)。

[步驟5]

(R)-1-((R)-2-胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物38(0.44g、0.82mmol)之二氯甲烷(8.0mL)溶液中，添加TFA(1.8mL、23mmol)。室溫下攪拌2小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷，以飽和碳酸鈉水溶液中和，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-1-((R)-2-胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(4- 氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物39)0.20g(58%)。

[步驟6]

((R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物39(0.040g、0.090mmol)、DIPEA(0.035mL、0.20mmol)之二氯甲烷(0.30mL)溶液中，添加乙酸酐(0.010g、0.10mmol)。冰冷下攪拌10分鐘後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得((R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物30)0.029g(66%)。

(實施例31)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-丙醯胺基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物39(0.0083g、0.019mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-丙醯胺基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物31)0.0065g(70%)。

(實施例32)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物39(0.040g、0.090mmol)進行與實施例2[步驟3]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物32)0.038g(81%)。

(實施例33)

(R)-1-(1-丁基醯胺環丁烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用丁醯氯(0.0060g、0.057mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-1-(1-丁基醯胺環丁烷羰基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物33)0.018g(79%)。

(實施例34)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(2-環丙基乙醯胺基)環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物10(0.021g、0.049mmol)、2-環丙基乙酸(0.0059g、0.058mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(2-環丙基乙醯胺基)環丁烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物34)0.0065g(26%)。

(實施例35)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(2-環丙基乙醯胺基)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物14(0.020g、0.049mmol)、2-環丙基乙酸(0.0059g、0.058mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(1-(2-環丙基乙醯胺基)環丙烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物35)0.0083g(35%)。

(實施例36)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

2-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙酸乙酯之合成：

室溫下，於2-溴-2-甲基丙酸乙酯(1.0g、5.1mmol)之DMF(25mL)溶液中，添加碳酸銫(5.0g、15mmol)、1,2,4-三唑鈉(1,2,4-triazol-1-ide sodium)(0.58g、6.2mmol)。50℃下，攪拌24小時後，將反應溶液減壓濃縮。於獲得的粗生成物中添加水，以氯仿提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=7：3→4：6)純化，獲得2-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙酸乙酯(以下，參考例化合物40)0.84g(89%)。

[步驟2]

2-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙酸鈉之合成：

冰冷下，於參考例化合物40(0.65g、3.6mmol)之乙醇(18mL)溶液中，添加1N氫氧化鈉水溶液(3.9mL、 3.9mmol)。室溫下攪拌1小時後，減壓濃縮反應溶液，獲得2-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙酸鈉(以下，參考例化合物41)0.67g(定量的)。

[步驟3]

藉由使用參考例化合物41(0.090g、0.51mmol)進行與實施例1[步驟6]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙醯基)哌啶-3(以下，實施例化合物36)0.12g(54%)。

(實施例37)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯之合成：

藉由使用1H-吡唑(0.42g、6.2mmol)進行與實施例36[步驟1]相同之反應，獲得2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯(以下，參考例化合物42)0.81g(87%)。

[步驟2]

2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸鈉之合成：

藉由使用參考例化合物42(0.81g、4.5mmol)進行與實施例36[步驟2]相同之反應，獲得2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸鈉(以下，參考例化合物43)0.80g。

[步驟3]

藉由使用參考例化合物43(0.090g、0.51mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-(2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物37)0.16g(68%)。

(實施例38)

(R)-N-(2,4-二氯苄基)-1-(1-羥基環己烷羰基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-三級丁基3-((2,4-二氯苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯之合成：

藉由使用2,4-二氯苄基胺(1.5g、8.5mmol)進行與實施例1[步驟6]相同之反應，獲得(R)-三級丁基3-((2,4-二氯苄基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯(以下，參考例化合物44)2.6g(定量的)。

[步驟2]

(R)-N-(2,4-二氯苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物44(2.6g、6.7mmol)進行與實施例1[步驟8]相同之反應，獲得(R)-N-(2,4-二氯苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物45)1.8g(95%)。

[步驟3]

藉由使用參考例化合物45(0.10g、0.35mmol)進行與實施例20相同之反應，獲得(R)-N-(2,4-二氯苄基)-1-(1-羥基環己烷羰基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物38)0.030g(24%)。

(實施例39)

((R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(2,4-二氯苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

三級丁基((R)-1-((R)-3-(2,4-二氯苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-3-羥基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯之合成：

冰冷下，於參考例化合物37(0.089g、0.38mmol)、參考例化合物45(0.10g、0.35mmol)、DIPEA(0.20mL、1.1mmol)之DMF(0.70mL)溶液中，添加HATU(0.16g、0.42mmol)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加1N鹽酸，並以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；己烷：乙酸乙酯=7：3→4：6)純化，獲得三級丁基((R)-1-((R)-3-(2,4-二氯苄基)胺甲醯基)哌啶-1-基)-3-羥基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺甲酸酯(以下，參考例化合物46)0.15g(82%)。

[步驟2]

冰冷下，於參考例化合物46(0.70g、1.7mmol)之二氯甲烷(2.0mL)溶液中，添加TFA(1.0mL、13mmol)。室溫下攪拌2.5小時後，於反應溶液中添加TFA(1.0mL、 13mmol)。室溫下攪拌1小時後，將反應溶液減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二氯甲烷，以飽和碳酸鈉水溶液中和，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-1-((R)-2-胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(2,4-二氯苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物47)0.47g(84%)。

[步驟3]

冰冷下，於參考例化合物47(0.020g、0.050mmol)、TEA(0.014mL、0.099mmol)之二氯甲烷(0.15mL)溶液中，添加乙酸酐(0.0056g、0.055mmol)。冰冷下攪拌10分鐘後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，並以二氯甲烷提取。有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(溶離液；氯仿：甲醇=99：1→95：5)純化，獲得((R)-1-((R)-2-乙醯胺基-3-羥基-3-甲基丁醯基)-N-(2,4-二氯苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物39)0.021g(96%)。

(實施例40)

(R)-N-(2,4-二氯苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-丙醯胺基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物47(0.020g、0.050mmol)進行與實施例1[步驟11]相同之反應，獲得(R)-N-(2,4-二氯苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-丙醯胺基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物40)0.018g(77%)。

(實施例41)

(R)-N-(2,4-二氯苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用參考例化合物47(0.020g、0.050mmol)進行與實施例2[步驟3]相同之反應，獲得(R)-N-(2,4-二氯苄基)-1-((R)-3-羥基-3-甲基-2-(甲基磺醯胺)丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物41)0.020g(85%)。

(實施例42)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-羥基丙醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用(R)-2-羥基丙酸鈉(0.019g、0.17mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-羥基丙醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物42)0.045g(74%)。

(實施例43)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-羥基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用(R)-2-羥基丁酸(0.017g、0.17mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-羥基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物43)0.056g(89%)。

(實施例44)

(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-羥基-3-甲基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

藉由使用(R)-2-羥基-3-甲基丁酸(0.018g、0.15mmol)進行與實施例1[步驟9]相同之反應，獲得(R)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)-1-((R)-2-羥基-3-甲基丁醯基)哌啶-3-羧醯胺(以下，實施例化合物44)0.042g(64%)。

(比較例1)(R)-1-(1-羥基環己烷羰基)-N-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

[步驟1]

(R)-三級丁基3-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯之合成：

冰冷下，於(R)-1-(三級丁氧基羰基)哌啶-3-羧酸(20g、87mmol)之THF(1.0L)溶液中，使內溫不超過5℃的方式添加DMF(0.68mL、8.7mmol)、草醯氯(8.0mL、92mmol)。冰冷下攪拌30分鐘後，-25℃下，使內溫不超過-20℃的方式於反應溶液中添加2-胺基-5-(三氟甲基)吡啶(15g、92mmol)、吡啶(15mL、0.18mmol)之THF(0.10L)溶液。冰冷下攪拌3小時後，使內溫不超過5℃的方式於反應溶液中添加飽和氯化鈉水溶液，並以二氯甲烷提取。有機層以飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。於獲得的粗生成物中添加己烷。濾取析出的固體，減壓濃縮濾液。重複相同的純化操作2次。合併獲得的固體，獲得(R)-三級丁基3-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺甲醯基)哌啶-1-羧酸酯(以下，參考例化合物48)26g(80%)。

[步驟2]

(R)-N-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物48(1.5g、4.0mmol)之二氯甲烷(10mL)溶液中，添加TFA(2.2mL、28mmol)，並於室溫下攪拌。2小時後，於反應溶液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液、水，並以二氯甲烷提取。有機層以飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，獲得(R)-N-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-3-羧醯胺(以下，參考例化合物49)0.95g(87%)。

[步驟3]

(R)-1-(1-羥基環己烷羰基)-N-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

冰冷下，於參考例化合物49(0.13g、0.46mmol)、1-羥基環己烷羧酸(0.079g、0.55mmol)、DIPEA(0.24mL、1.4mmol)之DMF(1.0mL)溶液中，添加HATU(0.23g、0.60mmol)。室溫下攪拌1小時後，於反應溶液中添加水、1N鹽酸，以二乙基醚提取。有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。獲得的粗生成物以矽膠管柱層析法(FUJI SILYSIA CHEMICAL CO.,LTD製胺矽膠DM1020、溶離液；己烷：乙酸乙酯=9：1→3：7)純化，獲得(R)-1-(1-羥基環己烷羰基)-N-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-3-羧醯胺(以下，比較例化合物1)0.058g(32%)。

(比較例2)(R)-1-(2-乙醯胺基乙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺之合成：

室溫下，於參考例化合物8(0.10g、0.31mmol)、N-乙醯基甘胺酸(0.036g、0.31mmol)、DIPEA(0.16mL、0.92mmol)之DMF(5mL)溶液中添加HATU(0.14g、0.37mmol)。室溫下攪拌14小時後，冰冷下，於反應溶液中添加1N稀鹽酸，以己烷：乙酸乙酯(己烷：乙酸乙酯=1：2)混合溶劑提取。有機層以水、飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮。使獲得的粗生成物溶解於二乙基醚(1.0mL)，並添加己烷(4.0mL)。濾取析出的膠狀物質，獲得(R)-1-(2-乙醯胺基乙醯基)-N-(4-氰基-2-(三氟甲氧基)苄基)哌啶-3-羧醯胺(以下，比較例化合物2)0.040g(31%)。

表1-1~表1-6呈示實施例化合物1~44之物性資料，表2呈示比較例化合物1~2之物性資料，表3-1~表3-5呈示參考例化合物1~49之物性資料。又，表中之N.D.表示「無資料」。

於1H-NMR資料，質子積分值非整數者係由於旋轉異構體的存在等所致。

1H-NMR資料中之溶劑名係表示測量所使用的溶劑。又，400MHzNMR質譜係使用JNM-AL400型核磁共振裝置(日本電子公司)而測量。化學位移係以四甲基矽烷作為基準而以δ(單位：ppm)表示，訊號各自以s(單線)、d(二重線)、t(三重線)、q(四重線)、m(多重線)、brs(寬峰)、dd(二重二重線)、dt(二重三重線)、ddd(二重二重二重線)、dq(二重四重線)、td(三重二重線)或tt(三重三重線)表示。溶劑係全部使用市售者。ESI-MS質譜係使用Agilent Technologies 1200 Series、G6130A(AgilentTechnology公司)而測量。

(實施例45)六氫菸鹼酸衍生物(I)之活體外的sEH抑制活性：

基於周知文獻(Analytical Biochemistry、2005年、第343卷、p.66-75)記載之方法，使用人類sEH，而評價六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽之sEH抑制活性。

將重組人類sEH(最終濃度0.026μg/mL；Cayman公司)，與被驗化合物同時，於含0.1mg/mL BSA的25mM Bis-Tris-HCl緩衝液(pH7.0)中，於室溫培育30分鐘。之後，添加氰基(6-甲氧基萘-2-基)甲基2-(3-苯基氧-2-基)乙酸酯(最終濃度6.25μmol/L；Cayman公司)作為螢光基質，再於室溫培育20分鐘，添加ZnSO₄(最終濃度0.2mol/L)使反應停止，測量螢光強度(Fusionα(Packard公司)；激發：330nm、放射：485nm)。

將sEH非添加且被驗化合物非添加之螢光強度作為0%sEH酵素反應率，將sEH添加且被驗化合物非添加之螢光強度作為100%sEH酵素反應率，由獲得的螢光強度，算出各被驗化合物之各sEH酵素反應率，而求得IC₅₀。其結果示於表4。

其結果，實施例化合物1~44係與比較例化合物1及2比較，對人類sEH之酵素反應呈現非常強的抑制活性。

據此可知，六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽對人類sEH之酵素反應呈現非常強的抑制活性。

(實施例46)大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的六氫菸鹼酸衍生物(I)之效果：

於大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式(Journal of Pharmacological Sciences、2009年、第111卷、p.235-243)中，投予實施例化合物1、2或31，評價六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽之對肺性高血壓的治療效果。

1)實施例化合物1之對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式之心肺機能、右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚、肺中的細胞增殖及心肌肥大的效果：

於大鼠(Wistar系、雄性、5週齡；日本SLC股份有限公司)之背部皮下，投予野百合鹼(Sigma公司)水溶液(60mg/kg)，將使肺性高血壓誘發的組作為「肺性高血壓誘發組」。另一方面，將同樣地投予注射用水的投予組作為「正常組」。

於肺性高血壓誘發組之大鼠，自野百合鹼投予日後24日間，1日1次經口投予實施例化合物1(3、10及30mg/kg)或陽性對照化合物他達拉非(10mg/kg)。實施例化合物1及他達拉非係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。將實施例化合物1以3、10及30mg/kg之投予量所投予的組，各自作為「實施例化合物1(3mg/kg)投予組」、「實施例化合物1(10mg/kg)投予組」及「實施例化合物1(30mg/kg)投予組」。又，將他達拉非以10mg/kg之投予量的投予組，作為「他達拉非投予組」。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，正常組亦同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予的翌日，測量右心室收縮期壓、全身收縮期血壓及心搏數。右心室收縮期壓及全身收縮期血壓係使用血壓測量用增幅器(日本光電工業股份有限公司)而測量，心搏數係使用瞬時心搏計單元(日本光電工業股份有限公司)而測量。又，於同日，測量體重、肺濕重量、以及右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))及肺重量比(肺重量/體重)。

又，肺於濕重量測量後浸漬於福馬林液並保存。將以福馬林液固定的肺包埋於石蠟後，製作切片，使用抗sEH抗體而製作免疫染色組織標本，並檢討sEH表現。又，製作彈性纖維染色的病理組織標本，檢討肺動脈肥厚。又，使用抗PCNA抗體而製作免疫染色組織標本，並檢討細胞增殖。又，右心室於濕重量測量後浸漬於福馬林液並保存。將以福馬林液固定的右心室包埋於石蠟後，製作切片，製作HE染色的病理組織標本，並檢討心肌肥大。

再者，將摘出的肺於緩衝液中破碎後，提取14,15-EET及14,15-DHET。將提取的14,15-EET水解，變換為14,15-DHET，使用ELISA法而測量14,15-DHET濃度。將水解反應之前後所增加的14,15-DHET濃度作為14,15-EET濃度，求得14,15-EET/14,15-DHET比。

檢討肺性高血壓中的sEH表現的結果，肺性高血壓誘發組的肺，與正常組的肺相比，於病變部位觀察到sEH的表現。據此，sEH的表現係於肺性高血壓之肺之病變部位呈現亢進。

於被驗化合物最終投予的翌日之右心室收縮期壓、右心室重量比及肺重量比，結果示於第1~3圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示各測量值(平均值±標準誤差、n=10)。圖中之＊標記表示與肺性高血壓對照組之比較上為統計學上有意義的(Dunnett’s檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室收縮期壓與正常組之右心室收縮期壓比較，呈現統計學上有意義地高值(Aspin-Welch之t檢定、p<0.05)，表示有呈現肺性高血壓之病態。又，實施例化合物1(10mg/kg)投予組及實施例化合物1(30mg/kg)投予組之右心室收縮期壓與肺性高血壓對照組之右心室收縮期壓比較，呈現統計學上有意義地低值(Dunnett’s檢定、p<0.05)(第1圖)。據此可知，實施例化合物1呈現對觀察到肺動脈壓上升的肺性高血壓之病態具有治療效果。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比比較，呈現統計學上有意義地高值(Aspin-Welch之t檢定、p<0.05)，表示呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物1(10mg/kg)投予組及實施例化合物1(30mg/kg)投予組之右心室重量比與肺性高血壓對照組之右心室重量比比較，呈現統計學上有意義地低值(Dunnett’s檢定、p<0.05)(第2圖)。據此可知，實施例化合物1對觀察到右心室肥大的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

肺性高血壓對照組之肺重量比與正常組之肺重量比比較，呈現統計學上有意義地高值(Aspin-Welch之t檢定、p<0.05)，表示呈現肺肥大之病態。又，實施例化合物1(10mg/kg)投予組之肺重量比與肺性高血壓對照組之肺重量比作比較，呈現統計學上有意義地低值(Dunnett’s檢定、p<0.05)(第3圖)。據此可知，實施例化合物1對觀察到肺肥大的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

另一方面，於實施例化合物1(3mg/kg)投予組、實施例化合物1(10mg/kg)投予組及實施例化合物1(30mg/kg)投予組之心搏數及全身收縮期血壓，與肺性高血壓對照組之心搏數及全身收縮期血壓作比較，任一者皆未觀察到有意義的差(Dunnett’s檢定、p<0.05)。據此可知，實施例化合物1於肺性高血壓對心搏數及全身血壓無作用。

檢討肺性高血壓中的肺動脈肥厚的結果，肺性高血壓對照組之肺與正常組之肺相比，觀察到肺動脈肥厚。另一方面，實施例化合物1(3mg/kg)投予組之肺，與肺性高血壓對照組之肺相比，未觀察到肺動脈肥厚。據此可知，實施例化合物1對觀察到肺動脈肥厚的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

檢討肺性高血壓中的細胞增殖的結果，肺性高血壓對照組之肺，與正常組之肺相比，觀察到細胞增殖。另一方面，實施例化合物1(3mg/kg)投予組之肺，與肺性高血壓對照組之肺相比，未觀察到細胞增殖。據此可知，實施例化合物1對觀察到肺中的細胞增殖的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

檢討肺性高血壓中的心肌肥大的結果，肺性高血壓對照組之右心室與正常組之右心室相比，觀察到心肌肥大。另一方面，於實施例化合物1(3mg/kg)投予組之右心室，與肺性高血壓對照組之右心室相比，未觀察到心肌肥大。據此可知，實施例化合物1對觀察到心肌肥大的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

檢討肺性高血壓中的14,15-EET/14,15-DHET比的結果，肺性高血壓對照組之肺中的14,15-EET/14,15-DHET比與正常組之肺中的14,15-EET/14,15-DHET比作比較，呈現低值。具此可知，肺性高血壓之肺中，呈現14,15-EET/14,15-DHET比為降低。另一方面，實施例化合物1(10mg/kg)投予組之肺中的14,15-EET/14,15-DHET比，與肺性高血壓對照組之肺中的14,15-EET/14,15-DHET比作比較，呈現高值。據此可知，實施例化合物1呈現使於肺性高血壓之肺中的14,15-EET/14,15-DHET比增加。

2)實施例化合物1對自大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式之病態進行期的投予所致的右心室肥大的效果：

於大鼠(Wistar系、雄性、5週齡；日本SLC股份有限公司)之背部皮下，投予野百合鹼(Sigma公司)水溶液 (60mg/kg)，將使肺性高血壓誘發的組作為「肺性高血壓誘發組」。另一方面，將同樣地投予注射用水的組作為「正常組」。

於肺性高血壓誘發組之大鼠，1日1次經口投予實施例化合物1(3及10mg/kg)或陽性對照化合物他達拉非(10mg/kg)。實施例化合物1(3及10mg/kg)係自野百合鹼投予日之10日後至18日或19日投予。他達拉非(10mg/kg)係自野百合鹼投予日至28日或29日投予。實施例化合物1及他達拉非係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。將實施例化合物1以3及10mg/kg之投予量所投予的組各自作為「實施例化合物1(3mg/kg)投予組」及「實施例化合物1(10mg/kg)投予組」。又，將他達拉非以10mg/kg之投予量所投予的組作為「他達拉非投予組」。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，於正常組亦同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予日，大鼠於麻醉下自腹大靜脈採血，接著使安樂死後，摘取心臓，測量右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))。又，使用ELISA法測量採取的血液中之14,15-DHET濃度。又，於採取的血液中添加一定量之14,15-EET，並於37℃使反應30分鐘，藉由使用ELISA法測量產生的14,15-DHET量，求得血液中之sEH活性。

肺性高血壓對照組之血液中之14,15-DHET濃度及sEH活性與正常組之血液中之14,15-DHET濃度及sEH活性相比呈現高值。據此可知，肺性高血壓呈現14,15-DHET濃度上升及sEH活性亢進。

於被驗化合物最終投予日之右心室重量比，結果示於第4圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示右心室重量比(平均值±標準誤差、n=10)。圖中之＊標記係表示與肺性高血壓對照組之比較下呈現統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比相比較，呈現統計學上有意義的高值(t檢定、p<0.05)。據此可知，肺性高血壓對照組呈現右心室肥大之病態。另一方面，實施例化合物1(10mg/kg)投予組之右心室重量比與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的低值(t檢定、p<0.05)(第4圖)。據此可知，實施例化合物1即使自肺性高血壓之病態進行期投予，亦對觀察的右心室肥大的肺性高血壓之病態具有治療效果。

3)實施例化合物1之對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式之全身血壓的作用：

對野百合鹼投予肺性高血壓模式大鼠，單次投予實施例化合物1，評價自六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽之投予後即刻的全身血壓的作用。

於大鼠(SD系、雄性、11週齡；日本Charles River股份有限公司)之背部皮下投予野百合鹼(Sigma公司)水溶液(60mg/kg)，使肺性高血壓誘發。

野百合鹼投予7日後，將使肺性高血壓觸發的大鼠麻醉，將股部及背頸部除毛，使用聚烯吡酮碘(Isodine)液將術部消毒。切開股部及背頸部皮膚後，使用小鉗子，鈍性地切開股部之肌層，將大腿動脈剝離露出後，作小切開並插入留置聚乙烯管。野百合鹼投予9日後，於插入大腿動脈的管連接血壓轉換器，血壓以血壓增幅器(Blood Pressure Amplifier)增幅，心搏數係誘發脈波形，藉由心率測速器(Heart Rate Counter)，以任一Power Lab系統獲得波形。確認全身血壓及心搏數為安定。確認全身血壓為安定後，實施例化合物1以10mg/kg之投予量單次經口投予。又，實施例化合物1係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。將投予實施例化合物1的組作為「實施例化合物1投予組」。另一方面，作為比較對照，將於使肺性高血壓誘發的大鼠，同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。測量實施例化合物1或含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液之投予後即刻至投予後1、2、3、4、5及6小時後之全身平均血壓。

其結果，實施例化合物1投予組之全身平均血壓與肺性高血壓對照組之全身平均血壓作比較，未觀察到有意義的差。據此可知，實施例化合物1顯示於肺性高血壓投予後即刻後對全身血壓並無作用。

4)實施例化合物2之對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式之心肺機能及右心室肥大的效果：

除了被驗化合物不同的點之外，以與實施例46之1)相同的方法，評價對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式的實施例化合物2之效果。

對以與實施例46之1)相同方法所製作的「肺性高血壓誘發組」之大鼠，野百合鹼投予日後24日，1日1次經口投予實施例化合物2(10mg/kg)或陽性對照化合物他達拉非(10mg/kg)。實施例化合物2及他達拉非係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。將實施例化合物2以10mg/kg之投予量投予的組作為「實施例化合物2投予組」，將他達拉非以10mg/kg之投予量投予的組作為「他達拉非投予組」。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液同樣地投予的組作為「肺性高血壓對照組」。又，於野百合鹼未投予的「正常組」亦同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

與實施例46之1)同樣地，於被驗化合物最終投予之翌日，測量右心室收縮期壓、全身收縮期血壓及心搏數。又，於同日測量體重、肺濕重量、以及右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))及肺重量比(肺重量/體重)。

其結果示於第5~7圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示各測量值(平均值±標準誤差、n=10)。圖中之＊標記係表示於與肺性高血壓對照組之比較下為統計學上有意義的(Dunnett’s檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室收縮期壓與正常組之右心室收縮期壓作比較，呈現統計學上有意義的高值(Aspin-Welch之t檢定、p<0.05)，呈現顯示肺性高血壓之病態。又，實施例化合物2投予組之右心室收縮期壓與肺性高血壓對照組之右心室收縮期壓作比較，呈現統計學上有意義的低值(Dunnett’s檢定、p<0.05)(第5圖)。據此可知，實施例化合物2對觀察到肺動脈壓上升的肺性高血壓之病態具有治療效果。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的高值(Aspin-Welch之t檢定、p<0.05)，呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物2投予組之右心室重量比與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的低值(Dunnett’s檢定、p<0.05)(第6圖)。據此可知，實施例化合物2對觀察到右心室肥大的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

肺性高血壓對照組之肺重量比與正常組之肺重量比作比較，呈現統計學上有意義的高值(Aspin-Welch之t檢定、p<0.05)，顯示呈現肺肥大之病態。又，實施例化合物2投予組之肺重量比與肺性高血壓對照組之肺重量比作比較，呈現低值(第7圖)。據此可知，實施例化合物2對觀察到肺肥大的肺性高血壓之病態亦具有治療效果。

另一方面，於實施例化合物2投予組之心搏數及全身收縮期血壓，與肺性高血壓對照組之心搏數及全身收縮期血壓作比較，任一者皆未觀察到有意義的差(Dunnett’s檢定、p<0.05)。據此可知，實施例化合物2對肺性高血壓的心搏數及全身血壓並無作用。

5)實施例化合物31之對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式之右心室肥大的效果：

於大鼠(Wistar系、雄性、6週齡；日本SLC股份有限公司)之背部皮下投予野百合鹼(Sigma公司)水溶液(60mg/kg)，將使肺性高血壓誘發的組作為「肺性高血壓誘發組」。另一方面，將同樣地投予注射用水的組作為「正常組」。

於肺性高血壓誘發組之大鼠，自野百合鹼投予日後29日間或30日間，1日1次經口投予實施例化合物31(3mg/kg及10mg/kg)。實施例化合物31係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。將實施例化合物31以3mg/kg及10mg/kg之投予量投予的組各自作為「實施例化合物31(3mg/kg)投予組」及「實施例化合物31(10mg/kg)投予組」。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，於正常組亦同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予日，測量右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))。

將於被驗化合物最終投予日之右心室重量比調查的結果示於第8圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示右心室重量比(平均值±標準誤差、n=7~18)。圖中之#標記表示與正常組之比較下為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的高值(t檢定、p<0.05)，顯示呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物31(3mg/kg)投予組及實施例化合物31(10mg/kg)投予組之右心室重量比與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，顯示低值(第8圖)。據此可知，實施例化合物31呈現對觀察到右心室肥大的肺性高血壓之病態具有治療效果。

由實施例46之1)、2)、3)、4)及5)之結果可知，六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽對肺性高血壓顯示治療效果。

(實施例47)大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的六氫菸鹼酸衍生物(I)與肺血管擴張藥之磷酸二酯酶抑制劑或內皮素受體拮抗劑之併用效果：

於大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式(Journal of Pharmacological Sciences、2009年、第111卷、p.235-243)，評價併用投予六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽及肺血管擴張藥之磷酸二酯酶抑制劑或內皮素受體拮抗劑之對肺性高血壓的治療效果。

就六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽而言，選擇實施例化合物1及實施例化合物31。又，就磷酸二酯酶抑制劑而言，選擇他達拉非。就內皮素受體拮抗劑而言，選擇安倍生坦。

1)實施例化合物1與他達拉非對大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式之右心室肥大的併用投予(同時投予)之效果：

於大鼠(Wistar系、雄性、5週齡；日本SLC股份有限公司)之背部皮下投予野百合鹼(Sigma公司)水溶液(60mg/kg)，將使肺性高血壓誘發的組作為「肺性高血壓誘發組」。另一方面，將同樣投予注射用水的組作為「正常組」。

於肺性高血壓誘發組之大鼠，將實施例化合物1(10mg/kg)或他達拉非(10mg/kg)單獨或將實施例化合物1(10mg/kg)與他達拉非(10mg/kg)併用，自野百合鹼投予日後24日間，1日1次經口投予。實施例化合物1或他達拉非之單獨投予用之投予液係各自懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而調製。又，併用投予用之投予液係將實施例化合物1及他達拉非混合懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而調製。

將實施例化合物1以10mg/kg之投予量投予的組作為「實施例化合物1(10mg/kg)投予組」。將他達拉非以10mg/kg之投予量的投予組作為「他達拉非(10mg/kg)投予組」。將併用10mg/kg之實施例化合物1 及10mg/kg之他達拉非而投予的組作為「實施例化合物1(10mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組」。另一方面，作為比較對照，將於肺性高血壓誘發組之大鼠同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，對正常組亦同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予日，將大鼠以異氟烷(isoflurane)麻醉下放血致死而使安樂死後，將心臓摘出，測量右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))。

於被驗化合物最終投予日之右心室重量比，結果示於第9圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示右心室重量比(平均值±標準誤差、n=5~6)。圖中之#標記顯示與正常組之比較下為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)，＊標記表示與肺性高血壓對照組之比較下為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的高值(t檢定、P<0.05)，顯示呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物1(10mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組之右心室重量比與實施例化合物1(10mg/kg)投予組及他達拉非(10mg/kg)投予組作比較為呈現低值，再者，與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的低值(t檢定、p<0.05)(第9圖)。據此可知，藉由組合實施例化合物1與他達拉非而投予，顯示對肺性高血壓之病態有獲得優異的治療效果。

2)投予他達拉非的大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的實施例化合物1之自病態進行期的併用投予(追加投予)的效果：

於大鼠(Wistar系、雄性、6週齡；日本SLC股份有限公司)之背部皮下，投予野百合鹼(Sigma公司)水溶液(60mg/kg)，將使肺性高血壓誘發的組作為「肺性高血壓誘發組」。另一方面，將同樣投予注射用水的組作為「正常組」。

於肺性高血壓誘發組之大鼠，將實施例化合物1(3mg/kg)或他達拉非(10mg/kg)單獨、或將實施例化合物1(3mg/kg)與他達拉非(10mg/kg)併用(將他達拉非先行投予開始，並將實施例化合物1追加投予)投予。實施例化合物1(3mg/kg)單獨投予係自野百合鹼投予日之10日後至18日間或19日間，1日1次經口投予。他達拉非(10mg/kg)單獨投予係自野百合鹼投予日至28日間或29日間，1日1次經口投予。實施例化合物1(3mg/kg)與他達拉非(10mg/kg)之併用投予係將實施例化合物1(3mg/kg)自野百合鹼投予日之10日後至18日間或19日間，1日1次經口投予，將他達拉非(10mg/kg)自野百合鹼投予日至28日間或29日間，1日1次經口投予。將單獨投予實施例化合物1(3mg/kg)或他達拉非(10mg/kg)的組各自作為「實施例化合物1(3mg/kg)投予組」及「他達拉非(10mg/kg)投予組」。又，將實施例化合物1(3mg/kg)與他達拉非(10mg/kg)之併用投予組作為「實施例化合物1(3mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組」。又，實施例化合物1及他達拉非係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，於實施例化合物1(3mg/kg)投予組，至實施例化合物1之投予開始的期間、及於正常組亦同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予日，將大鼠以異氟烷麻醉下藉由放血致死而使安樂死後，將心臓摘出，測量右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))。

又，被驗化合物最終投予日亦將肺摘出，測量肺濕重量後浸漬於福馬林液並保存。將以福馬林液固定的肺包埋於石蠟後，製作彈性纖維染色的病理組織標本，測量肺動脈中膜厚，並求得肺動脈中膜厚比((肺動脈中膜厚×2/肺動脈直徑)×100)。

於被驗化合物最終投予日之右心室重量比，將結果示於第10圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示右心室重量比(平均值±標準誤差、n=6~12)。圖中之#標記表示與正常組之比較下為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)，＊標記表示與肺性高血壓對照組之比較為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比作比較，顯示統計學上有意義的高值(t 檢定、P<0.05)，顯示呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物1(3mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組之右心室重量比，與實施例化合物1(3mg/kg)投予組之右心室重量比及他達拉非(10mg/kg)投予組之右心室重量比作比較，呈現低值，再者，與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，顯示統計學上有意義的低值(t檢定、p<0.05)(第10圖)。

於被驗化合物最終投予日之肺動脈中膜厚比，結果示於表5。表之值表示肺動脈中膜厚比(%)(平均值±標準偏差、n=6~12)。圖中之# #標記表示與正常組之比較為統計學上有意義的(t檢定、p<0.01)，＊＊標記表示與肺性高血壓對照組之比較為統計學上有意義的(steel檢定、p<0.01)。

肺性高血壓對照組之肺動脈中膜厚比係於與正常組之肺動脈中膜厚比相比，顯示統計學上有意義的高值(t檢定、p<0.01)，觀察到呈現肺動脈肥厚之病態。又，實施例化合物1(3mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組之肺動脈中膜厚比，與實施例化合物1(3mg/kg)投予組之肺動脈中膜厚比及他達拉非(10mg/kg)投予組之肺動脈中膜厚比作比較，呈現低值，再者，與肺性高血壓對照組之肺動脈中膜厚比作比較，顯示統計學上有意義的低值(steel檢定、p<0.01)(表5)。

據此可知，藉由將他達拉非先行投予，並將實施例化合物1自肺性高血壓之病態進行期與他達拉非併用投予，對肺性高血壓之病態獲得優異的治療效果。

3)投予安倍生坦的大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的實施例化合物1之自病態進行期的併用投予(追加投予)的效果：

於肺性高血壓誘發組之大鼠，將實施例化合物1(3mg/kg)或安倍生坦(35mg/kg)單獨，或將實施例化合物1(3mg/kg)與安倍生坦(35mg/kg)併用(安倍生坦先行投予開始，並將實施例化合物1追加投予)投予。實施例化合物1(3mg/kg)單獨投予係於野百合鹼投予日之10日後至18日間或19日間，1日1次經口投予。安倍生坦(35mg/kg)單獨投予係自野百合鹼投予日至28日間或29日間，1日1次經口投予。實施例化合物1(3mg/kg)與安倍生坦(35mg/kg)之併用投予係將實施例化合物1(3mg/kg)自野百合鹼投予日之10日後至18日間或19日間，1日1次經口投予，將安倍生坦自野百合鹼投予日後28日間或29日間，1日1次經口投予。將實施例化合物1(3mg/kg)或安倍生坦(35mg/kg)單獨投予的組各自作為「實施例化合物1(3mg/kg)投予組」及「安倍生坦(35mg/kg)投予組」。又，將實施例化合物1(3mg/kg)與安倍生坦(35mg/kg)之併用投予組作為「實施例化合物1(3mg/kg)+安倍生坦(35mg/kg)投予組」。又，實施例化合物1及安倍生坦係懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，於實施例化合物1(3mg/kg)投予組，至實施例化合物1之投予開始之期間、及於正常組，亦同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予日之右心室重量比，結果示於第11圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示右心室重量比(平均值±標準誤差、n=6~12)。圖中之#標記表示與正常組之比較為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)，＊標記及＊＊標記表示與肺性高血壓對照組之比較為統計學上有意義的(t檢定、＊標記：p<0.05、＊＊標記：p<0.01)。

肺性高血壓對照組之右心室重量比係與正常組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的高值(t檢定、P<0.05)，表示呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物1(3mg/kg)+安倍生坦(35mg/kg)投予組之右心室重量比，與實施例化合物1(3mg/kg)投予組之右心室重量比及安倍生坦(35mg/kg)投予組之右心室重量比作比較，顯示低值，再者，與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，顯示統計學上有意義的低值(t檢定、p<0.01)(第11圖)。據此可知，藉由先行投予安倍生坦，將實施例化合物1自病態進行期，與安倍生坦併用投予，對肺性高血壓之病態獲得優異的治療效果。

4)投予他達拉非的大鼠野百合鹼投予肺性高血壓模式中的實施例化合物31之自病態進行期的併用投予(追加投予)的效果：

於肺性高血壓誘發組之大鼠，將他達拉非(10mg/kg)單獨、或將實施例化合物31(10mg/kg)與他達拉非(10mg/kg)併用(將他達拉非先行投予開始，並追加實施例化合物31而投予)投予。他達拉非(10mg/kg)單獨投予係自野百合鹼投予日至28日間或29日間，1日1次經口投予。實施例化合物31(10mg/kg)與他達拉非 (10mg/kg)之併用投予係將實施例化合物31(10mg/kg)自野百合鹼投予日之10日後至18日間或19日間，1日1次經口投予，將他達拉非(10mg/kg)自野百合鹼投予日至28日間或29日間，1日1次經口投予。將他達拉非(10mg/kg)單獨投予的組作為「他達拉非(10mg/kg)投予組」。又，將實施例化合物31(10mg/kg)與他達拉非(10mg/kg)之併用投予組作為「實施例化合物31(10mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組」。又，實施例化合物31及他達拉非係各自懸浮於含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液而使用。另一方面，作為比較對照，於肺性高血壓誘發組之大鼠，將同樣投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液的組作為「肺性高血壓對照組」。又，於正常組亦同樣地投予含有0.5%Tween80的0.5%甲基纖維素水溶液。

於被驗化合物最終投予之翌日，將大鼠以異氟烷麻醉下藉由放血致死而使安樂死後，將心臓摘出，測量右心室、左心室及中隔之濕重量，求得右心室重量比(右心室重量/(中隔重量+左心室重量))。

於被驗化合物最終投予日之右心室重量比，結果示於第12圖。圖之橫軸表示各組，縱軸表示右心室重量比(平均值±標準誤差、n=9~18)。圖中之#標記表示與正常組之比較為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)，＊標記表示與肺性高血壓對照組之比較係為統計學上有意義的(t檢定、p<0.05)。

肺性高血壓對照組之右心室重量比與正常組之右心室重量比作比較，呈現統計學上有意義的高值(t檢定、P<0.05)，顯示呈現右心室肥大之病態。又，實施例化合物31(10mg/kg)+他達拉非(10mg/kg)投予組之右心室重量比，與他達拉非(10mg/kg)投予組之右心室重量比作比較，呈現低值，再者，與肺性高血壓對照組之右心室重量比作比較，顯示統計學上有意義的低值(t檢定、p<0.05)(第12圖)。

據此可知，先行投予他達拉非，將實施例化合物31自肺性高血壓之病態進行期與他達拉非併用投予，顯示對肺性高血壓之病態獲得優異的治療效果。

由實施例47之1)、2)、3)及4)之結果可知，藉由將六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽、與肺血管擴張藥磷酸二酯酶抑制劑或內皮素受體拮抗劑併用投予，顯示對肺性高血壓的優異治療效果。

[產業上之利用可能性]

本發明係可利用作為含有六氫菸鹼酸衍生物(I)或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥作為有效成分之肺性高血壓之治療劑或預防劑。

Claims

一種肺性高血壓之治療劑或預防劑，其含有以下之通式(I)所示的六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽、及肺血管擴張藥作為有效成分，式中，R¹表示羥基、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基、碳數2~7之烷氧基烷基、碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、烷氧基、環烷基、環烷基氧基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基、氰基、-SR⁶、-S(=O)-R⁶或-S(=O)₂R⁶取代)、-N(R⁶)C(=O)R⁷、-N(R⁶)S(=O)₂R⁷、-C(=O)N(R⁶)R⁷或環構成原子數5之雜芳基；R²及R³係各自獨立表示氫原子、碳數1~6之烷基或碳數2~7之烷氧基烷基(該烷基及烷氧基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)，或一起表示-(CH₂)_l-或-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-，但不同時表示氫原子；R⁴及R⁵係各自獨立表示氫原子、鹵素原子、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基(該烷基、烷氧基、環烷基及環烷基氧基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子取代)或-C(=O)NH₂，但不同時表示烷氧基；R⁶表示氫原子或碳數1~6之烷基；R⁷表示碳數1~6之烷基、碳數3~6之環烷基、碳數2~7之烷氧基烷基或碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、環烷基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)；l表示2~5之整數；m及n係各自獨立表示1或2。
如請求項1之治療劑或預防劑，其中R²及R³係各自獨立表示氫原子或碳數1~6之烷基，或一起表示-(CH₂)_l-，但不同時表示氫原子；R⁴表示苯環上之2位之取代基；R⁵表示苯環上之4位之取代基。
如請求項1或2之治療劑或預防劑，其中R¹表示-N(R⁶)C(=O)R⁷或-N(R⁶)S(=O)₂R⁷；R⁴表示鹵素原子或碳數1~6之烷基或烷氧基；R⁵表示鹵素原子、氰基或碳數1~6之烷基或烷氧基；R⁶表示氫原子。
一種肺性高血壓之治療劑或預防劑，其與肺血管擴張藥併用而使用，含有以下通式(I)所示的六氫菸鹼酸衍生物或其藥理學上可容許的鹽作為有效成分，式中，R¹表示羥基、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基、碳數2~7之烷氧基烷基、碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、烷氧基、環烷基、環烷基氧基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基、氰基、-SR⁶、 -S(=O)-R⁶或-S(=O)₂R⁶取代)、-N(R⁶)C(=O)R⁷、-N(R⁶)S(=O)₂R⁷、-C(=O)N(R⁶)R⁷或環構成原子數5之雜芳基；R²及R³係各自獨立表示氫原子、碳數1~6之烷基或碳數2~7之烷氧基烷基(該烷基及烷氧基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)，或一起表示-(CH₂)_l-或-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-，但不同時表示氫原子；R⁴及R⁵係各自獨立表示氫原子、鹵素原子、氰基、碳數1~6之烷基或烷氧基、碳數3~6之環烷基或環烷基氧基(該烷基、烷氧基、環烷基及環烷基氧基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子取代)或-C(=O)NH₂，但不同時表示烷氧基；R⁶表示氫原子或碳數1~6之烷基；R⁷表示碳數1~6之烷基、碳數3~6之環烷基、碳數2~7之烷氧基烷基或碳數4~7之環烷基烷基(該烷基、環烷基、烷氧基烷基及環烷基烷基係1~3個氫原子各自獨立可經鹵素原子、羥基或氰基取代)，l表示2~5之整數，m及n係各自獨立表示1或2。
如請求項4之治療劑或預防劑，其中R²及R³係各自獨立表示氫原子或碳數1~6之烷基，或一起表示-(CH₂)_l-，但不同時表示氫原子；R⁴表示苯環上之2位之取代基；R⁵表示苯環上之4位之取代基。
如請求項4或5之治療劑或預防劑，其中R¹表示-N(R⁶)C(=O)R⁷或-N(R⁶)S(=O)₂R⁷；R⁴表示鹵素原子或碳數1~6之烷基或烷氧基； R⁵表示鹵素原子、氰基或碳數1~6之烷基或烷氧基；R⁶表示氫原子。
如請求項1至6項中任一項之治療劑或預防劑，其中該肺血管擴張藥係前列腺環素(prostacyclin)衍生物、磷酸二酯酶抑制劑及/或內皮素受體拮抗劑。