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MX2013012162A - Plantas resistentes a plagas de insectos. - Google Patents

Plantas resistentes a plagas de insectos.

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Publication number
MX2013012162A
MX2013012162A MX2013012162A MX2013012162A MX2013012162A MX 2013012162 A MX2013012162 A MX 2013012162A MX 2013012162 A MX2013012162 A MX 2013012162A MX 2013012162 A MX2013012162 A MX 2013012162A MX 2013012162 A MX2013012162 A MX 2013012162A
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MX
Mexico
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seq
nos
protein
nucleotide sequence
insect
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MX2013012162A
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MX349997B (es
Inventor
Romaan Raemaekers
Pascale Feldmann
Myriam Beghyn
Thierry Bogaert
Original Assignee
Devgen Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Devgen Nv filed Critical Devgen Nv
Publication of MX2013012162A publication Critical patent/MX2013012162A/es
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Abstract

La presente invención se refiere al control genético de infestación por parte de especies de plagas de insectos, particularmente a la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de plantas, utilizando moléculas de ácido ribonucleico (ARN) interferente. La invención proporciona plantas transgénicas que (i) expresan o son capaces de expresar ARN interferentes de la invención y (ii) son resistentes a la infestación por parte de especies de plagas de insectos.

Description

PLANTAS RESISTENTES A PLAGAS DE INSECTOS Campo de la invención La presente invención se refiere, en general, al control genético de infestación por parte de especies de plagas de insectos, particularmente a la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de plantas. Más específicamente, la invención se refiere a la regulación hacia abajo de la expresión de genes objetivo en especies de plagas de insectos por parte de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) ¡nterferente. También se proporcionan plantas transgénicas que (i) expresan o son capaces de expresar ARN interferentes de la invención y (¡í) son resistentes a la infestación por parte de especies de plagas de insectos.
Antecedentes de la invención Existe abundancia de especies de plagas de insectos que pueden infectar o infestar una amplia variedad de ambientes y organismos huéspedes. Plagas de insectos incluyen una variedad de especies de los órdenes de insectos Hemiptera (chinches de campo), Coleóptera (escarabajos), Siphonaptera (pulgas), Dichyoptera (cucarachas y mantis), Lepidoptera (polillas y mariposas), Orthoptera (por ejemplo, langostas) y Díptera (moscas). La infestación por parte de plagas puede resultar en daños significativos. Las plagas de insectos que infestan especies de plantas son particularmente problemáticas en la agricultura, ya que pueden causar daños serios a cultivos y reducir significativamente los rendimientos de las plantas. Una amplia gama de diferentes tipos de plantas son susceptibles a la infestación por parte de plagas, incluyendo cultivos comerciales tales como arroz, algodón, soja, papa y maíz.
Tradicionalmente, la infestación con plagas de insectos se ha prevenido o controlado mediante el uso de plaguicidas químicos. Sin embargo, estos químicos no siempre son adecuados para su uso en el tratamiento de cultivos, ya que pueden ser tóxicos para otras especies y pueden provocar daño, significativo al medio ambiente. En las décadas más recientes, los investigadores han desarrollado métodos más ecológicos para controlar la infestación por parte de plagas. Por ejemplo, se han utilizado microorganismos tales como las bacterias Bacillus thuríngiensis que expresan naturalmente proteínas tóxicas para plagas de insectos. Los científicos han aislado los genes que codifican estas proteínas insecticidas y las han utilizado para generar cultivos transgénicos resistentes a plagas de insectos, por ejemplo, plantas de maíz y algodón manipuladas genéticamente para producir proteínas de la familia Cry.
Si bien las toxinas bacterianas han sido sumamente exitosas para controlar ciertos tipos de plagas, no son efectivas contra todas las especies de plagas. Por lo tanto, los investigadores han buscado otros abordajes dirigidos para controlar las plagas y en particular para lograr una interferencia de ARN o 'silenciamiento de genes' como medio para controlar plagas a nivel genético.
La interferencia de ARN "¡ARN" es un proceso mediante el cual la expresión de genes en el contexto de una célula o todo un organismo se regula hacia abajo con especificidad de secuencia. La ¡ARN actualmente es una técnica bien establecida en la técnica de inhibición o regulación hacia abajo de la expresión de genes en una amplia gama de organismos, incluyendo organismos de plagas tales como hongos, nemátodos e insectos. Más aun, estudios previos han demostrado que la regulación hacia abajo de genes objetivo en especies de plagas de insectos puede utilizarse como medio para controlar la infestación por parte de plagas.
El documento WO2007/074405 describe métodos para inhibir la expresión de genes objetivo en plagas invertebradas, incluyendo el escarabajo de la papa de Colorado. Más aun, el documento WO2009/091864 describe composiciones y métodos para la supresión de genes objetivo de especies de plagas de insectos, incluyendo plagas del género Lygus.
Si bien el uso de la ¡ARN para regular hacia abajo la expresión de genes en especies de plagas es bien conocido en la técnica, el éxito de esta técnica como medida para controlar las plagas depende de la selección de los genes objetivo más apropiados, a saber, aquellos en los cuales la pérdida de función provoca una alteración significativa en un proceso biológico esencial y/o la muerte del organismo. La presente invención se dirige así a la regulación hacia abajo de genes objetivo particulares en plagas de insectos como medio para alcanzar una prevención y/o control más efectivos de infestación por parte de plagas de insectos, particularmente de plantas.
Compendio de la invención Los inventores de la presente buscaron identificar medios mejorados para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos utilizando abordajes genéticos. En particular, investigaron el uso de la iARN para regular hacia abajo genes de tal forma que se altere la capacidad de la plaga de insectos de sobrevivir, crecer, perdurar a lo largo de las diferentes etapas del ciclo vital de los insectos (por ejemplo, mediante la metamorfosis de crisálida a adulto), colonizar ambientes específicos y/o infestar organismos huéspedes y así limitar el daño causado por la plaga.
Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona una planta transgénica, o material de reproducción o propagación para una planta transgenica o una célula de una planta transgénica cultivada, que expresa o es capaz de expresar al menos un ácido ribonucleico interferente (ARN o ARN de doble hebra) que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 58, 159, 258 a 26 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que consiste en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 50, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 87, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 24 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 89, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 30, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 55, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 37, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 53, 246 a 249, 154, 55, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (vi) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70%, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
En un aspecto particular de la invención, las moléculas de ARN interferente expresadas por las plantas de la presente invención comprenden al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador del ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta transgénica, o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar una molécula de ARN interferente que comprende al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador de la molécula de ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de al menos 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% o 100% complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN de un gen objetivo del complejo troponina/miofilamentos.
En una realización, el gen objetivo codifica una proteína de insecto alas arriba (wings up) A (troponina I) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 1 y 2. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 79. En una realización, el gen objetivo codifica una proteína sostenida (upheld) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 21 y 30. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 330. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), o la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 123 y 132. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 332. En una realización, el gen objetivo codifica la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 122 y 131. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 331. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 124 y 133. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 333. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 125 y 134. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 334. En una realización, el gen objetivo codifica la proteina cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 126 y 35. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 335. En una realización, el gen objetivo codifica la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 127 y 136. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 336 y 337.
De acuerdo con otra realización, la presente invención se refiere a una planta transgénica, o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar una molécula de ARN interferente que comprende al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador de la molécula de ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de al menos 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% o 100% complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN de un gen objetivo que codifica una proteína ribosómica de insecto. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2 68 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 11 y 12. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 84. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 3 y 4. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.80. En una realización, el gen objetivo codifica la proteina ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 7 y 8. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm) representada mediante las SEQ ID NOs 9 y 10. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 83. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S 8 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 13 y 14. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.85. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 5 y 6. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.81. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 15 y 16. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG11522 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 17 y 18. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 87. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 19 y 20. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 88. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 21 y 22. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.89. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 158 y 159. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 343. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG 12775 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 165, 166 y 167. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a las SEQ ID NOs 347 y 348. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1271 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 156 y 157. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 342. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CCG2998 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 160 y 161 . En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 344. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L 3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 154 y 155. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 341 . En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 163 y 164. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 345. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 152 y 153. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 340. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 150 y 151 . En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 339. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm) o la proteína ribosómica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm). En una realización, el gen objetivo codifica la subunidad II de la proteína citocromo c oxidasa mitocondrial (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG34069 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 25 y 26. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 91. En una realización, el gen objetivo codifica la cadena ? de ATP sintasa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7610 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 129 y 138. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 338. En una realización, el gen objetivo codifica la ubiquitina-5E (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG32744 Dm). En una realización, el gen objetivo codifica la subunidad tipo beta de proteasoma (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17331 Dm), la proteína que es un ortólogo de insecto de la proteína CG 13704 Dm; y la proteína Rpn 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4157 Dm).
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un polinucleótido aislado que se selecciona del grupo que consiste en: (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a, 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (ü) un polinucleótido que consiste en al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 00, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 1 78, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 53, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 58, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 12 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 20 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 31 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (v) un polinucleótido que consiste en un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 53, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 54, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (vi) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70 % preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 y en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
Las secuencias de aminoácidos codificadas por los genes objetivo de la invención se representan mediante las SEQ ID NOs 79, 349, 352, 356, 80, 326, 8 , 327, 82, 83, 328, 84, 329, 85, 86, 359, 87 a 91 , 330, 350, 353, 331 , 351 , 332 a 336, 337, 354, 338 a 344, 346, 345, 347, 348, 357, 355, 358, 390 a 393.
En un aspecto particular de la invención, el polinucleótido aislado es parte de una molécula de ARN ¡nterferente, típicamente parte del elemento silenciador, que comprende al menos una región de doble hebra que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo. Más particularmente, el polinucleótido aislado se clona en un constructo de ADN en una orientación sentido y antisentido de forma tal que al transcribirse el polinucleótido sentido y antisentido se forma una molécula de ARNdh, que funciona tras la captación por parte de una plaga para inhibir o regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga.
En una realización, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que se clona en un constructo de ADN en una orientación sentido y antisentido de forma tal que al transcribirse el polinucleótido sentido y antisentido se forma una molécula de ARNdh, que funciona tras la captación por parte de un insecto para inhibir o regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro del complejo troponina/miofilamentos.
En una realización, el gen objetivo codifica una proteína de insecto alas arriba (wings up) A (troponina I) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 1 y 2. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 79. En una realización, el gen objetivo codifica una proteína sostenida (upheld) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 121 y 130. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 330. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), o la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 123 y 132. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 332. En una realización, el gen objetivo codifica la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG 17927 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 122 y 131. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 331. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 124 y 133. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 333. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 125 y 134. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 334. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 126 y 135. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 335. En una realización, el gen objetivo codifica la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 127 y 136. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 336 y 337.
De acuerdo con otras realizaciones, la presente invención se refiere a un polinucleotido aislado que se clona en un constructo de ADN en una orientación sentido y antisentido de forma tal que al transcribirse el polinucleotido sentido y antisentido se forma una molécula de ARNdh, que funciona tras la captación por parte de un insecto para inhibir o regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo que codifica una proteína ribosómica de insecto.
En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 1 1 y 12. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 84. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 3 y 4. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.80. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 7 y 8. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm) representada mediante las SEQ ID NOs 9 y 10. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 83. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S 8 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 13 y 14. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.85. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 5 y 6. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.81. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 15 y 16. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1522 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 17 y 18. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 87. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 19 y 20. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 88. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 21 y 22. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO.89. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 158 y 159. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 343. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG12775 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 165, 166 y 167. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a las SEQ ID NOs 347 y 348. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG11271 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 156 y 157. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 342. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CCG2998 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 160 y 161. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 344. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica L 3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 154 y 155. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 341. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 163 y 164. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 345. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 152 y 153. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 340. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 150 y 151. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99%, 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 339. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica L 9 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm) o la proteína ribosómica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm).
Preferiblemente, los métodos de la invención tienen aplicación práctica en la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de insectos, en particular, control de infestación por parte de plagas de plantas de cultivo tales como, a modo no taxativo, algodón, papa, arroz, fresas, alfalfa, soja, tomate, cañóla, girasol, sorgo, mijo, maíz, berenjena, pimiento y tabaco. Adicionalmente, el ARN interferente de la invención puede introducirse en las plantas a proteger mediante técnicas de ingeniería genética de rutina.
Por lo tanto, de acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona un método para generar una planta transgénica resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos que comprende: (a) transformar una célula de planta con un constructo de ADN que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga de insectos, en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 22, 44, 78, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 2 7, 24, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que consiste en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 27, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (¡ü) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o que tienen una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 38, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 21 7, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 67, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 1 73, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 5, 204, 6, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 38, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 55, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (vi) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70%, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 74, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 72, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389; (b) regenerar una planta a partir de la célula de planta transformada; y (c) cultivar la planta transformada en condiciones adecuadas para la expresión del ARN interferente a partir del constructo de ADN recombinante, siendo así dicha planta resistente a dicha plaga en comparación con una planta sin transformar.
En un aspecto adicional, en la presente se proporciona un método para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos en un campo de plantas de cultivo, comprendiendo dicho método expresar en dichas plantas una cantidad efectiva de un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación'por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 5, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 56, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (¡ü) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 ,. 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 32 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 59, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309. 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
En todos los aspectos de la invención, en realizaciones preferidas, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 30, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 47, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
En una realización preferida, el gen objetivo codifica una proteína de insecto que se selecciona del complejo troponina/miofilamentos que se selecciona del grupo que comprende la troponina I (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), la proteína sostenida (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), la proteína tropomíosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), la proteína tropomíosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm).
En todos los aspectos de la invención, en realizaciones preferidas, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidús que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 1 9, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 51 , 242 a 245, 52, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 39, 5, 6, 35 a 38, 40, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 1 5, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273.
En una realización preferida, el gen objetivo codifica una proteína ribosómica de insecto que se selecciona del grupo que comprende la proteína ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm), la proteína ribosómica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG 10423 Dm), la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG11522 Dm), la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), y la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG12775 Dm), la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 271 Dm), la proteína ribosómica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2998 Dm), la proteína ribosómica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), la proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), la proteína ribosómica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm) En todos los aspectos de la invención, en realizaciones preferidas, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (¡i) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188,. 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401.
Breve descripción de las Tablas y las Figuras Tabla 1 Novedosos objetivos de Lygus hesperus identificados de la primera detección.
Tabla 1 B Novedosos objetivos de Lygus hesperus en la vía de Lh594.
Tabla 1C Novedosos objetivos de Lygus hesperus identificados en la segunda ronda de detección.
Tabla 2 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en Lygus hesperus.
Tabla 3 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en Lygus hesperus.
Tabla 4 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponden a genes objetivo de Lygus hesperus y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 5 Clasificación de objetivos de Lygus hesperus de acuerdo con curvas de respuesta a la dosis (DCR) y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh105.
Tabla 6 Objetivos de Lygus hesperus de la clasificación de la segunda ronda de detección de acuerdo con las DRC y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh594.
Tabla 7 Presentación de las pruebas de papa transgénica que tiene horquillas de Lygus hesperus.
Tabla 8 Secuencia de amplicones para gen objetivo y los dos genes de mantenimiento para qRT-PCR.
Tabla 9 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en el escarabajo de la papa de Colorado (CPB).
Tabla 10 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en CPB.
Tabla 11 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponde a genes objetivo de CPB y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 12 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en el saltamontes marrón de las plantas (BPH).
Tabla 13 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en BPH.
Tabla 14 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponde a genes objetivo de BPH y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 15 Cebadores utilizados para amplificación de ADNc de áfido, en base a la secuencia genómica de áfido de guisante.
Tabla 16 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en áfidos.
Tabla 17 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en áfidos.
Tabla 18 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponden a genes objetivo de áfidos y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 19 Cebadores degenerados utilizados para amplificación de ADNc de Ld594 de CPB Tabla 20 Cebadores degenerados utilizados para amplificación de ADNc de BPH Tabla 21 : Novedosos objetivos de Leptinotarsa decemlineata de la detección.
Tabla 22: Novedoso objetivo identificado de Nilaparvata lugens.
Tabla 23: Novedosos objetivos identificados de Acyrthosiphon pisum.
Figura 1 : Segundo ensayo de confirmación de las placas Lh001_009. Barras oscuras: mortalidad el día 3 a 6, barras claras: mortalidad el día 6 a 8. Los clones candidatos se nombran usando los códigos de detección "Lygxxx" y los códigos de nomenclatura objetivo "Lhxxx".
Figura 2: Segundo ensayo de confirmación de las placas Lh010_020. Barras oscuras: mortalidad el día 3 a 6, barras claras: mortalidad el día 6 a 8. Los clones candidatos se nombran usando los códigos de detección "Lygxxx" y los códigos de nomenclatura objetivo "Lhxxx".
Figura 3: Análisis de mortalidad de novedosos objetivos de Lygus de las placas Lh001 a Lh009, expresado como % de mortalidad en un período de 10 días. Los testigos se indican con líneas punteadas. Testigo positivo: ARNdh de Lh423 (RpL19). Testigos negativos: ARNdh de GFP y sólo dieta (Testigo).
Figura 4: . Análisis de mortalidad de novedosos objetivos de Lygus de las placas Lh010 to Lh020, expresado como % de mortalidad en un período de 10 días. Los testigos se indican con líneas punteadas. Testigo positivo: Lh423 (RpL19). Testigos negativos: GFP y sólo dieta (Testigo).
Figura 5 Representación esquemática del vector de expresión vegetal que aloja el cassette de ARNh de Lygus hesperus. BD: borde derecho; Bl: borde izquierdo; P35S: Promotor 35S del Virus del Mosaico de la Coliflor; T35S: Terminador 35S del Virus del Mosaico de la Coliflor; TNOS: terminador de la sintasa de nopalina; GFP: gen reportero fluorescente verde; NPT II: secuencia de codificación del gen de fosfotransferasa de neomicina II; KmR: gen de resistencia a la Kanamicina; pBR322 orí: origen de replicación de pBR322; pBR322 bom: movilización de pBR322; pVS1 rep: replicón de pVS1 ; pVS1 sta: elemento de estabilidad de pVS1.
Figura 6 Montaje del ensayo de Potato-Lygus in planta. Las flechas blancas indican daño de insectos.
Figuras 7 a 11 Novedosos objetivos de Lygus hesperus - curvas de respuesta a la dosis a concentraciones de ARNdh sintético purificado en el rango de 0.4 a 0.025 pg/µ? (en la figura, la unidad "pg/pl" no se muestra). ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos. El ARNdh de los objetivos se produjo usando los cebadores tal como se describe en la sección de ejemplos 1 .1 .
Figura 12 Curva de respuesta a la dosis de Lh594, a concentraciones de ARNdh en el rango de 0.05 a 0.001 pg/µ?. ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos.
Figura 13 A Actividad de ARNdh en bioensayo de Lygus hesperus en ausencia de ARNt. Lh594 (5pg/pl); testigo positivo: Lh423 (5pg/pl); testigos negativos: ARNdh de GFP (5pg/pl) y agua milliQ; B Identificación del límite de actividad de Lh594 usando una concentración cada vez más baja de ARNdh (de 5 pg a 0.25 pg). Testigos negativos: ARNdh de GFP (5pg/pl) y agua milliQ.
Figura 14 Segundo ensayo de confirmación de placas Lh010 a Lh020 de los segundos objetivos de detección. Barras oscuras: mortalidad el día 4 a 8, barras claras: mortalidad el día 4 a 6. Los clones candidatos se nombran usando los códigos de detección "Lygxxx" y los códigos de nomenclatura objetivo "Lhxxx".
Figura 15 Resultados del ensayo para los objetivos de la vía de troponina de Lygus, evaluados a 0.5 pg/µ? fijos.
Figuras 16 A-B Novedosos objetivos de Lygus hesperus de la vía de troponina - curvas de respuesta a la dosis a concentraciones de ARNdh sintético purificado en el rango de 0.4 a 0.025 pg/µ? (en la figura, la unidad "pg/pl" no se muestra siempre). ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos.
Figuras 17 A-D Novedosos objetivos de Lygus hesperus de los objetivos de la segunda detección - curvas de respuesta a la dosis a concentraciones de ARNdh sintético purificado en el rango de 0.5 a 0.05 pg/µ?. ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos.
Figuras 18 A-B Pruebas y selección de eventos transgénicos de GUS. Se evaluaron ocho eventos independientes de la línea transgénica de horquilla de GUS (P001 ) en el ensayo de una sola maceta de Lygus hesperus y se compararon con plántulas de WT. Todas las plántulas se sometieron al mismo tratamiento. Se agregaron a cada maceta ninfas de Lygus hesperus de un día de vida y se verificó la supervivencia a los 9 días.
Figura 9 Pruebas de los eventos transgénicos de Lh423: Se evaluaron 28 eventos transgénicos independientes (línea P006) en el ensayo de una sola maceta de Lygus hesperus. Las plántulas transgénicas de Lh423 se compararon con las plántulas de WT y con los eventos transgénicos de GUS (línea P001 ). Se agregaron a cada maceta ninfas de Lygus hesperus de un solo día de edad y se verificó la supervivencia a los 9 días.
Figura 20 Pruebas de los eventos transgénicos de Lh423: se muestran 6 eventos transgénicos independientes (P006) que provocaron > 60% de supervivencia. Las plántulas transgénicas de Lh423 se compararon con las plántulas de WT y con las líneas transgénicas de GUS (línea P001 ). Se agregaron a cada maceta ninfas de Lygus hesperus de un solo día de edad y se verificó la supervivencia a los 9 días.
Figura 21 Pruebas de los eventos transgénicos de Lh594: se evaluaron 25 eventos transgénicos independientes (P007) en el ensayo de una sola maceta de Lygus hesperus. Las plántulas transgénicas de Lh594 se compararon con las plántulas de WT y con los eventos transgénicos de GUS (línea P001 ). Se agregaron a cada maceta ninfas de Lygus hesperus de un solo día de edad y se verificó la supervivencia a los 1 1 días.
Figura 22 Pruebas de los eventos transgénicos de Lh594: se muestran 6 eventos transgénicos independientes (P007) que provocaron 60% de supervivencia. Las plántulas transgénicas de Lh594 se compararon con las plántulas de WT y con las líneas transgénicas de GUS (línea P001 ). Se agregaron a cada maceta ninfas de Lygus hesperus de un solo día de edad y se verificó la supervivencia a los 1 1 días.
Figura 23 Valor relativo de los niveles de ARNm de Lh423 en los insectos después de alimentarse durante 5 días en plantas transgénicas que contenían una horquilla de GUS o una horquilla de Lh423. Se analizaron las muestras con cebadores que amplifican Lh423. Los datos se normalizaron usando GeNorm, con 2 genes de mantenimiento, Lh425 y Lh427.
Figura 24 Análisis de supervivencia de larvas de CPB tratadas con 1 pg de Ld594, Ld619 y Ld620 de ARNdh. Los testigos positivos incluyeron 1 pg de ARNdh de los objetivos de referencia Ld513 y Ld049. Los testigos negativos incluyeron agua milliQ y FP.
Figura 25 Efectos de ARNdh de Ld594, Ld619 y Ld620 tras pupación de larvas de 4o estadio, en comparación con testigo sin tratar (UTC). Se alimentaron chinches con 1 pg de ARNdh dispensado en discos de hojas de papa, luego se dejaron alimentarse con hojas de papa sin tratar (A) durante 4 días antes de colocarse sobre vermiculita. Para evaluar el efecto del ARNdh, los insectos muertos se excavaron de la vermiculita (debido a los efectos fuertes inducidos por ARNdh de Ld594, no se recuperaron pupas de la vermiculita y, por lo tanto, no hay ninguna imagen disponible para este ARNdh objetivo) (B).
Figura 26 Efecto de ARNdh de Ld594, 619 y 620 de CPB en la supervivencia y estado físico de adultos de CPB. Las evaluaciones se realizaron los días 4, 6, 7, 8, 11 y 13. MQ testigo: agua milliQ.
Figura 27 Actividad de ARNdh de la vía de NI594 en saltamontes marrón de las plantas. Los ARNdh se evaluaron a 0.5 pg/µ? en presencia de 0.1 % de CHAPSO. Testigo positivo: ARNdh de NI537 (0.5 pg/pl), testigos negativos: ARNdh de GFP (0.5 pg/pl) y solo dieta.
Figura 28 Actividad de ARNdh de Ap594, Ap423, Ap537 y Ap560 en A pisum. Los ARNdh se evaluaron a 0.5 pg/µ? en presencia de 5 pg/µ? de ARNt. Testigo negativo: ARNdh de GFP (0.5 pg/µ?).
Figura 29 Porcentajes de mortalidad de larvas de L. decemlineata con dieta artificial tratadas con ARNdh. Ld583, Ld584, Ld586 y Ld588 representan clones objetivos. Testigo positivo: Ld513; testigo negativo: FP.
Descripción detallada de la invención Los inventores de la presente han descubierto que la regulación hacia abajo de la expresión de genes objetivo particulares en especies de plagas de insectos mediante iARN puede utilizarse para prevenir y/o controlar de modo efectivo la infestación por parte de dichas plagas de insectos. El uso de la iARN para regular hacia abajo la expresión de genes objetivo en especies de plagas de insectos se aplica en la presente a la generación de plantas resistentes a la infestación por parte de plagas de insectos.
Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente invención proporciona plantas transgénicas resistentes a la infestación por parte de especies de plagas de insectos. En particular, en la presente se proporcionan plantas transgénicas que expresan o son capaces de expresar al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo tal como se describe en otras partes de la presente dentro de dicha plaga. El ARN interferente puede ser cualquiera de los divulgados más adelante en la presente. Preferiblemente, el ARN interferente comprende o consiste en al menos un elemento silenciador y dicho elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra (la hebra sentido) comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo. La regulación hacia abajo de un gen objetivo de plaga puede utilizarse para alterar un proceso o función biológicos esenciales en la plaga, en donde "esencial" se refiere al hecho de que el proceso o la función son necesarios para iniciar o mantener la infestación por parte de plagas.
Tal como se utiliza en la presente, el término "planta" puede incluir cualquier material de reproducción o propagación para una planta. Las referencias a una planta también pueden incluir células vegetales, protoplastos vegetales, cultivos de tejidos vegetales, callos vegetales, acúmulos vegetales y células vegetales que están intactas en plantas o partes de plantas, tales como embriones, polen, óvulos, semillas, hojas, flores, ramas, frutos, granos, espigas, mazorcas, cáscaras, tallos, raíces, puntas de raíces y similares. Progenie, variantes y mutantes de cualquiera de las plantas transgénicas descritas en la presente se encuentran dentro del alcance de la presente invención. También se incluyen las semillas de cualquiera de dichas plantas transgénicas.
Tal como se utiliza en la presente, el término "control" de infestación por parte de plagas se refiere a cualquier efecto en una plaga que sirve para limitar y/o reducir las cantidades de organismos de plagas y/o el daño causado por dicha plaga. Los genes objetivo preferidos son, por lo tanto, genes esenciales que controlan o regulan una o más funciones biológicas esenciales dentro de la plaga de insectos, por ejemplo, división celular, reproducción, metabolismo energético, digestión, función neurológica y similares. La regulación hacia abajo de estos genes esenciales mediante técnicas de iARN puede resultar en la muerte del insecto o de otra forma, retardar de modo significativo el crecimiento y desarrollo o deteriorar la capacidad de la plaga de colonizar un ambiente o infestar organismos huéspedes.
Los inventores de la presente han identificado ahora genes objetivo superiores de especies de plagas de insectos que pertenecen a los géneros Lygus, Leptinotarsa, Nilaparvata y Acyrthosiphum, y se prevé que dichos objetivos pueden utilizarse solos o en combinación como un medio efectivo para el control mediado por iARN de infestación por parte de insectos de cultivos agrícolamente importantes. Los ortólogos de estos genes objetivo recientemente identificados pueden utilizarse en otras especies de insectos para controlar la infestación por parte de plagas de los cultivos relevantes correspondientes.
Más específicamente, los inventores de la presente describen aquí que los genes que codifican las proteínas del complejo troponina/miofilamentos forman excelentes genes objetivo para la supresión por parte de la maquinaria de inhibición de ARN. Uno de estos genes objetivo codificó la proteína troponina I de insecto (alas arriba A) que es un ortólogo de la proteína de Drosophila CG7178. Esta proteína está implicada en la contracción muscular y pertenece a una vía fisiológica que aún no había sido totalmente explorada para el control de plagas (insectos) mediante la inhibición de ARN. Más aun, dado que este complejo proteico es específico para animales, no se conocen homólogos u ortólogos de genes vegetales, lo que reduce el riesgo de fenotipos vegetales fuera de tipo al expresar ARNdh objetivo en plantas. Adicionalmente, en Drosophila, la troponina I se describe como un gen haploinsuficiente que exhibe un fenotipo muíante en estado heterocigoto. Estos genes son particularmente susceptibles a los niveles de expresión de ARNm reducidos y, como tales, pueden considerarse objetivos de la iARN ideales.
A continuación se enumeran genes objetivo adicionales interesantes en este complejo troponina/miofilamentos y están siendo adicionalmente evaluados para el control mediante iARN en Lygus hesperus y otras especies de plagas de insectos: En un aspecto, la invención proporciona una planta transgénica, material de reproducción o propagación derivado de la misma o una célula vegetal cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136.
En una realización preferida, el gen objetivo codifica una proteína de insecto que se selecciona del complejo troponina/miofilamentos que se selecciona del grupo que comprende la troponina I (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), la proteína sostenida (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), la proteína tropomíosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), la proteína tropomiosína 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), la míosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG 2408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm).
En otras realizaciones, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) ¡nterferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de . insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 16 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 11 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 1 54, 155, 163, 64, 152, 153, 150, 151 , o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15. 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 15 , o su complemento, o (¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 , o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 1 , 12, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 5, 6, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 158, 159, 165, 166, 167, 156, 157, 160, 161 , 154, 155, 163, 164, 152, 153, 150, 151 .
En una realización preferida, el gen objetivo codifica una proteína ribosómica de insecto que se selecciona del grupo que comprende la proteina ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm), la proteína ribosómica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteina CG8900 Dm), la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG11522 Dm), la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), y la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG12775 Dm), la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG11271 Dm), la proteína ribosómica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2998 Dm), la proteína ribosómica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), la proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), la proteína ribosómica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm).
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, o (¡i) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 80, 88, 2, 75, 8 , 89, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 12, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 12, o su complemento, o (i¡) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 12, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 12, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 12, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 12, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 12, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 12, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 12, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 141 , 11 12, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 12.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 17, 18, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) ¡nterferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 19, 20, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 30, 177, 183, o su complemento, o (¡i) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 0 (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, O (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179.
En una realización, la presente invención se refiere a una planta o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de planta transgénica cultivada que expresa o es capaz de expresar un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 84, 37, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o (ni) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137.
Tal como se utiliza en la presente, un "gen objetivo" comprende cualquier gen en la plaga de insectos que se pretende regular hacia abajo. En una realización preferida, el gen objetivo se regula hacia abajo de forma tal de controlar la infestación por parte de plagas, por ejemplo alterando un proceso biológico esencial de la plaga, o disminuyendo la patogenicidad de la plaga. Los genes objetivo preferidos incluyen, por lo tanto, a modo no taxativo, aquellos que tienen papeles clave en la regulación de la alimentación, supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción, infestación e infectividad. De acuerdo con una realización, el gen objetivo es tal que cuando su expresión se regula hacia abajo o inhibe, la plaga de insectos muere. De acuerdo con otra realización, el gen objetivo es tal que cuando su expresión se regula hacia abajo o inhibe, se previene o retarda o atrofia o retrasa o impide el crecimiento de la plaga, se previene la reproducción de la plaga, o se previene la transición a través de ciclos vitales de la plaga. De acuerdo con otra realización de la invención, el gen objetivo es tal que cuando su expresión se regula hacia abajo o inhibe, se reduce el daño causado por la plaga y/o la capacidad de la plaga de infectar o infestar ambientes, superficies y/o especies de plantas o cultivos; o la plaga deja de alimentarse de sus recursos alimenticios naturales tales como plantas y productos de plantas. En general los términos "infestar" e "infectar" o "infestación" e "infección" se utilizan indistintamente en la presente.
Los genes objetivo pueden expresarse en todas o algunas de las células de la plaga de insectos. Más aun, los genes objetivo pueden ser expresados solamente por la plaga de insectos en una etapa particular de su ciclo vital, por ejemplo, la fase de adulto maduro, la fase de ninfa o larva inmadura o la etapa de huevos.
Tal como se utiliza en la presente, especies de "plaga" son preferiblemente especies de insectos que causan infección o infestación, preferiblemente de plantas.
Insectos patogénicos de plantas preferidos de acuerdo con la invención son plagas de plantas que se seleccionan del grupo que consiste en Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Laodelphax spp. (por ejemplo, L. striatellus (saltamontes marrón pequeño)); Nephotettix spp. (por ejemplo, N. virescens o N. cincticeps (saltahojas verde), o N.nigropictus (saltahojas del arroz)); Sogatella spp. (por ejemplo, S. furcifera (saltamontes blanco y negro)); Chilo spp. (por ejemplo, C. suppressalis (barrenador rayado del arroz), C. auricilius (polilla dorada), o C. polychrysus (barrenador de cabeza negra)); Sesamia spp. (por ejemplo, S. inferens (barrenador del arroz rosado)); Tryporyza spp. (por ejemplo, 7*. innotata (barrenador del arroz blanco), o T. incertulas (barrenador del arroz amarillo)); Anthonomus spp. (por ejemplo, A. grandis (gorgojo)); Phaedon spp. (por ejemplo, P. cochleariae (escarabajo de la hoja de la mostaza)); Epilachna spp. (por ejemplo, E. varivetis (escarabajo del frijol mexicano)); Tribolium spp. (por ejemplo, T. castaneum (escarabajo rojo)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur), D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano); Ostrinia spp. (por ejemplo, O. nubilalis (gusano barrenador del maíz europeo)); Anaphothrips spp. (por ejemplo, A. obscrurus (trips de hierba)); Pectinophora spp. (por ejemplo, P. gossypiella (gusano bellotero rosado)); Heliothis spp. (por ejemplo, H. virescens (gusano de la yema del tabaco)); Trialeurodes spp. (por ejemplo, T. abutiloneus (mosca blanca de alas con bandas) T. vaporariorum (mosca blanca de invernadero)); Bemisia spp. (por ejemplo, B. argentifolii (mosca blanca de la hojaplata)); Aphis spp. (por ejemplo, A. gossypii (áfido del algodón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Euschistus spp. (por ejemplo, E. conspersus (chinche hedionda moteada)); Chlorochroa spp. (por ejemplo, C. sayi (Chinche del algodonero)); Nezara spp. (por ejemplo, N. viridula (chinche verde del sur)); Thrips spp. (por ejemplo, T. tabaci (trips de la cebolla)); Frankliniella spp. (por ejemplo, F. fusca (trips del tabaco), o F. occidentalis (trips de las flores occidental)); Acheta spp. (por ejemplo, A. domesticus (grillo doméstico)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Macrosiphum spp. (por ejemplo, M. euphorbiae (áfido de la papa)); Blissus spp. (por ejemplo, B. Leucopterus leucopterus (chinche de prado)); Acrosternum spp. (por ejemplo, A. hilare (chinche verde)); Chilotraea spp. (por ejemplo, C. polychrysa (barrenador del tallo del arroz)); Lissorhoptrus spp. (por ejemplo, L. oryzophilus (gorgojo de agua de arroz:)); Rhopalosiphum spp. (por ejemplo, R. maidis (áfido de la hoja del maíz)); y Anuraphis spp. (por ejemplo, A. maidiradicis (áfido de la raíz del maíz)).
De acuerdo con realizaciones más específicas, la invención es aplicable a especies que pertenecen a la familia de Chrysomelidae o galerucas. Escarabajos crisomélidos, tales como escarabajos de la papa de Colorado, pulguillas, gusanos de la raíz del maíz y curculiónidos tales como los gorgojos del arroz son plagas particularmente importantes. Especies Leptinotarsa específicas para controlar de acuerdo con la invención incluyen el escarabajo de la papa de Colorado {Leptinotarsa decemlineata (Say) y falso escarabajo de la papa {Leptinotarsa juncta (Say). El CPB es una plaga (grave) para nuestras papas domésticas, otras especies de papas con y sin tubérculos cultivadas y silvestres y otras especies de plantas solanáceas incluyendo las especies de cultivo de tomate, berenjena, pimientos, tabaco (especie Nicotiana, incluyendo ornamentales), alquequenjes, arroz, maíz o algodón; y las especies de maleza/hierba ortiga caballo, hierba mora común, espino, beleño negro y hierba sosa. Los gusanos de la raíz del maíz incluyen especies encontradas en el género Diabrotica (por ejemplo, D. undecimpunctata undecimpunctata, D. undecimpunctata howardii, D. Longicornis, D. virgifera y D. balteata). Los gusanos de la raíz del maíz provocar grandes daños al maíz y las cucurbitáceas.
De acuerdo con una realización más específica, la invención es aplicable a especies que pertenecen al orden de Hemipterans (familia de Aphidoidea), tales como Myzus persicae (áfido verde del durazno, Aphis fabae (áfido del frijol negro), Acyrthosiphum pisum (áfido del guisante), Brevicoryne brassicae (áfido del repollo), Sitobion avenae (áfido del grano), Cavaríella aegopodii (áfido de la Zanahoria), Aphis craccivora (áfido del cacahuate,), Aphis gossypii (áfido del algodón,), Toxoptera aurantii (áfido de los cítricos negro), Cavaríella spp (áfido del sauce), Chaitophorus spp (áfidos de las hojas del sauce), Cinara spp. (áfidos del pino negro), Drepanosiphum platanoides (áfidos del sicómoro) Elatobium spp (áfidos del abeto) que causan daño a plantas tales como árboles Prunus, particularmente durazno, damasco y ciruela; árboles que son principalmente cultivados para producción de madera tales como sauces y álamos, a cultivos en hileras tales como maíz, algodón, soja, trigo y arroz, a cultivos de vegetales de las familias Solanaceae, Chenopodiaceae, Compositae, Cruciferae y Cucurbitaceae, incluyendo a modo no taxativo, alcachofa, espárrago, frijoles, remolachas, brócoli, repollitos de Bruselas, repollo, zanahoria, coliflor, cantalupo, apio, maíz, pepino, hinojo, col rizada, colirrábano, nabo, berenjena, lechuga, mostaza, quingombó, perejil, chirivía, chícharo, pimiento, papa, rabanito, espinaca, zapallito, tomate, nabo, berro, y melón; o cultivos de campo tales como, a modo no taxativo, tabaco, remolacha azucarera, y girasol; un cultivo de flores u otras plantas ornamentales tales como pinos y coniferas. Otros Hemipterans pertenecen a Nilaparvata ssp (por ejemplo, N. Lugens, Sogatella furcifera) y causan daño a plantas de arroz. Otros Hemipterans pertenecen a Lygus ssp (por ejemplo, Lygus hesperus, Lygus rugulipennis, Lygus lineolaris, Lygus sully) y otras especies de insectos que se alimentan de plantas en la familia de los Miridae, y causan daño a plantas de algodón, papas, fresas, algodón, alfalfa, cañóla, durazno, ciruelas, uva, lechuga, berenjena, cebolla y frijoles verdes. También varios árboles mediterráneos y varios árboles ornamentales tales como el olmo (Ulmus spp.), pino piñonero (Pinus Pinea), plátano de Londres (Platanus Acerifolia), pomera blanca (Malus alba). Otros Hemipterans pertenecen a la familia de los Pentatomoidea y son comúnmente conocidos como chinche de escudo y chinches hediondas (por ejemplo, la chinche hedionda marmórea marrón (Halyomorpha halys), la chinche hedionda moteada {Euschistus conspersus), chinche verde del sur (Nezara viridula), chinche del bosque (Pentatoma rufipes), chinche Arlequín (Murgantia histrionica) y chinche del arroz {Oebalus pugnax)) y causan daño a frutas, incluyendo manzanas, duraznos, higos, moras, frutas cítricas y caquíes, mora, y vegetales, incluyendo maíz dulce, tomates, frijoles de soja, frijoles de lima y pimientos verdes, repollo, coliflor, nabos, rábano picante, coles, mostaza, repollitos de Bruselas, papa, berenjena, quingombó, frijoles, espárrago, remolachas, malezas, árboles frutales y cultivos de campo tales como campos de maíz y soja frijoles. Las chinches también son una plaga de céspedes, sorgo y arroz.
Una planta a ser utilizada en los métodos de la invención, o una planta transgénica de acuerdo con la invención, abarca cualquier planta pero es preferiblemente una planta que es susceptible a ser infestada por parte de un insecto patogénico de planta.
Por lo tanto, la presente invención abarca plantas y métodos tal como se describen en la presente en donde la planta se selecciona del siguiente grupo de plantas (o cultivos): alfalfa, manzana, damasco, alcachofa, espárrago, palta, banana, cebada, frijoles, remolacha, mora, arándano, brócoli, repollitos de Bruselas, repollo, cañóla, zanahoria, mandioca, coliflor, un cereal, apio, cereza, cítrico, clementina, café, maíz, algodón, pepino, berenjena, endivia, eucalipto, higos, uva, pomelo, cacahuetes, alquequenje, kiwi, lechuga, puerro, limón, lima, pino, maíz, mango, melón, mijo, hongo, frutos secos, avena, quingombó, cebolla, naranja, un árbol o flor o planta ornamental, papaya, perejil, chícharo, durazno, cacahuete, turba, pimiento, caqui, piña, plátano, ciruela, granada, papa, calabaza, radicha, rabanito, semilla de colza, frambuesa, arroz, centeno, sorgo, soja, soja, espinaca, fresa, remolacha azucarera, caña de azúcar, girasol, boniato, tangerina, té, tabaco, tomate, una vid, melón, trigo, ñame y zucchini.
En realizaciones específicas, la presente invención proporciona genes objetivo que codifican las proteínas implicadas en la función de una alas arriba A (troponina I), una subunidad II de la proteína citocromo c oxidasa mitocondrial o una de las proteínas ribosómicas que se especifican en la Tabla 1.
En realizaciones preferidas, la presente invención proporciona genes objetivo que se seleccionan del grupo de genes (i) que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) que tienen una secuencia de nucleótidos que consiste en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (¡i¡) que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000, o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 42, 176, 182, 13Q, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 1 70, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230· a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000, o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 83, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (v) que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70%, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 62, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o (vi) cuyo gen es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 85, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 77, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389; y en donde la secuencia de nucleótidos de dicho gen no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
Las secuencias de aminoácidos codificadas por los genes objetivo de la presente invención se representan mediante las SEQ ID NOs 79, 349, 352, 356, 80, 326, 81 , 327, 82, 83, 328, 84, 329, 85, 86, 359, 87 a 91 , 330, 350, 353, 331 , 351 , 332 a 336, 337, 354, 338 a 344, 346, 345, 347, 348, 357, 355, 358, 390 a 393.
Tal como se utiliza en la presente, la expresión "que tiene" tiene el mismo significado que "que comprende".
Tal como se utiliza en la presente, la expresión "identidad de secuencia" se utiliza para describir la relación de secuencia entre dos o más nucleótidos o secuencias de aminoácidos. El porcentaje de "identidad de secuencia" entre dos secuencias se determina comparando dos secuencias óptimamente alineadas en una ventana de comparación (un número definido de posiciones), en donde la porción de la secuencia en la ventana de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, brechas) en comparación con la secuencia de referencia para lograr una alineación óptima. La identidad de secuencia porcentual se calcula determinando el número de posiciones en las cuales la base de nucleótidos o residuo de aminoácidos idénticos se encuentran en ambas secuencias para obtener el número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes entre el total de posiciones en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por 100. Los métodos y el software para determinar la identidad de secuencia se encuentran disponibles en la técnica e incluyen el software Blast y el análisis GAP. Para ácidos nucleicos, la identidad porcentual se calcula preferiblemente mediante la herramienta de alineación BlastN, con la cual se calcula la identidad porcentual en la totalidad de la longitud de la secuencia de nucleótidos de consulta.
Un experto en la técnica reconocerá que los homólogos u ortólogos (homólogos que existen en diferentes especies) de los genes objetivo representados mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229,. 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 pueden identificarse. Estos homólogos y/u ortólogos de plagas también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Homólogos y/u ortólogos preferidos son genes similares en secuencia de nucleótidos al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el homólogo y/u ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80% o 85%, más preferiblemente al menos 90% o 95%, y aun más preferiblemente al menos aproximadamente 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 44, 78, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 28 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento. De forma similar, homólogos y/u ortólogos preferidos también son proteínas que son similares en secuencia de aminoácidos al punto de que cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, el homólogo y/u ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80% o 85%, más preferiblemente al menos 90% o 95%, y aun más preferiblemente al menos aproximadamente 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 79 a 9 , 326-359, 390-395.
Otros homólogos son genes que son alelos de un gen que comprende una secuencia tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 42, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389. Homólogos más preferidos son genes que comprenden al menos un polimorfismo de nucleótido único (SNP) en comparación con un gen que comprende una secuencia tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
El "ácido ribonucleico (ARN) interferente" de la presente invención abarca cualquier tipo de molécula de ARN capaz de regular hacia abajo o "silenciar" la expresión de un gen objetivo, incluyendo, a modo no taxativo, ARN sentido, ARN antisentido, ARN interferente pequeño (ARNip), microARN (miARN), ARN de doble hebra (ARNdh), ARN en horquilla (ARN) y similares. Los métodos para evaluar moléculas funcionales de ARN interferente son bien conocidos en la técnica y se describen en otras partes de la presente.
Las moléculas de ARN interferente de la presente invención producen la regulación hacia abajo específica de las secuencias de expresión de un gen objetivo mediante la unión a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo. La unión se produce como resultado de un apareamiento de bases entre regiones complementarias del ARN interferente y la secuencia de nucleótidos objetivo. Tal como se utiliza en la presente, la expresión 'elemento silenciador' se refiere a la porción o región del ARN interferente que comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria, o al menos parcialmente complementaria, a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y que funciona como la porción activa del ARN interferente para dirigir la regulación hacia abajo de la expresión de dicho gen objetivo. En una realización de la invención, el elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de al menos 17 nucleótidos contiguos, preferiblemente al menos 18 o 19 nucleótidos contiguos, más preferiblemente al menos 21 nucleótidos contiguos, aun más preferiblemente al menos 22, 23, 24 o 25 nucleótidos contiguos complementarios a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo.
Tal como se utiliza en la presente, "expresión de un gen objetivo" se refiere a la transcripción y acumulación del transcripto de ARN codificado por un gen objetivo y/o traducción del ARNm en proteína. La expresión "regular hacia abajo" pretende hacer referencia a cualquiera de los métodos conocidos en la técnica mediante los cuales las moléculas de ARN interferente reducen el nivel del transcriptos primarios de ARN, ARNm o proteína producida a partir de un gen objetivo. En ciertas realizaciones, la regulación hacia abajo se refiere a una situación en la cual el nivel de ARN o proteína producida a partir de un gen se reduce al menos 10%, preferiblemente al menos 33%, más preferiblemente al menos 50%, aun más preferiblemente al menos 80%. En realizaciones particularmente preferidas, la regulación hacia abajo se refiere a una reducción en el nivel de ARN o proteína producida a partir de un gen al menos 80%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95%, y aun más preferiblemente al menos 99% dentro de las células de la plaga de insectos en comparación con una plaga de insectos testigo apropiada que, por ejemplo, no se ha expuesto a un ARN interferente o se ha expuesto a una molécula de ARN interferente testigo. En la técnica se conocen bien los métodos para detectar reducciones en los niveles de ARN o proteína e incluyen hibridación de solución de ARN, hibridación tipo Northern, transcripción inversa (por ejemplo, análisis por RT-PCR cuantitativa), análisis de micromatrices, unión de anticuerpos, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y prueba de Western blot. En otra realización de la invención, la regulación hacia abajo se refiere a una reducción en el ARN o niveles de proteína suficiente como para provocar un cambio detectable en un fenotipo de la plaga en comparación con un testigo de plaga apropiado, por ejemplo, muerte celular, detención del crecimiento, o similares. La regulación hacia abajo puede así medirse mediante análisis fenotípico de la plaga de insectos utilizando técnicas de rutina en la técnica.
En una realización preferida de la invención, el ARN interferente regula hacia abajo la expresión de genes mediante interferencia de ARN o iARN. La iARN es un proceso de regulación genética con especificidad de secuencia mediado típicamente por moléculas de ARN de doble hebra tales como ARN interferentes pequeños (ARNip). Los ARNip comprenden una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antísentido. La hebra sentido o "hebra guía" de la molécula de los ARNip comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo. La hebra sentido de los ARNip es así capaz de aparearse con el transcripto de ARN mediante apareamiento de bases Watson-Crick y dirigirse al ARN para degradarse dentro de un complejo celular conocido como el complejo del silenciamiento inducido por iARN o RISC. De esta forma, en el contexto de las moléculas preferidas de ARN interferente de la presente invención, el elemento silenciador tal como se menciona en la presente puede ser una región de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales al menos una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria o al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo. En una realización la región de doble hebra tiene una longitud de al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 pares de bases.
También se contemplan dentro del alcance de la presente invención moléculas de ARN de doble hebra (ARNdh) más largas que comprenden uno o más elementos silenciadores de doble hebra funcionales tal como se describen en otras partes de la presente y capaces de lograr el silenciamiento de genes mediado por ¡ARN. Dichas moléculas de ARNdh más largas comprenden al menos 80, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 pares de bases. Estas moléculas de ARNdh pueden oficiar de precursores para las moléculas de ARNip activas que dirigen el transcripto de ARN al complejo RISC para su subsiguiente degradación. Las moléculas de ARNdh presentes en el ambiente que rodea a un organismo o a las células del mismo pueden ser captadas por el organismo y procesadas por una enzima denominada Dicer para proporcionar moléculas de ARNip. De forma alternativa, el ARNdh puede producirse in vivo, es decir, transcribirse de un polinucleótido o polinucleótidos que codifican el mismo presente dentro de una célula, por ejemplo, una célula de bacteria o célula de planta, y a continuación procesarse mediante Dicer dentro de la célula huésped o preferiblemente dentro de las células de la plaga de insectos tras la captación del precursor de ARNdh más largo. El ARNdh puede estar formado por dos hebras de ARN (sentido y antisentido) separadas que se aparean en virtud de apareamiento de bases complementario. De forma alternativa, el ARNdh puede ser de una sola hebra que es capaz de plegarse sobre sí misma para formar un ARN en horquilla (ARN) o estructura de tallo-bucle. En el caso de un ARN, la región de doble hebra o 'tallo' se forma a partir de dos regiones o segmentos del ARN que son esencialmente repeticiones invertidas del otro y presentan complementariedad suficiente como para permitir la formación de una región de doble hebra. Uno o más elementos silenciadores de doble hebra funcionales pueden estar presentes en esta región 'tallo' de la molécula. Las regiones de repeticiones invertidas están típicamente separadas mediante una región o segmento del ARN conocido como la región 'bucle'. Esta región puede comprender cualquier secuencia de nucleotidos que confiera flexibilidad suficiente como para permitir que ocurra el auto-apareamiento entre las regiones complementarias flanqueadoras del ARN. En general, la región bucle es básicamente de una sola hebra y actúa como un elemento separador entre las repeticiones invertidas.
Todas las moléculas de ARN ¡nterferente de la invención producen la regulación hacia abajo específica de las secuencias de expresión de un gen objetivo mediante la unión a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo. La unión se produce como resultado de un apareamiento de bases complementario entre el elemento silenciador del ARN ¡nterferente y la secuencia de nucleotidos objetivo. Las moléculas de ARN ¡nterferente de la invención comprenden al menos uno o al menos dos elementos silenciadores. En una realización de la presente invención, la secuencia de nucleotidos objetivo comprende una secuencia de nucleotidos tal como se representa mediante el transcripto de ARN del gen objetivo, o un fragmento de la misma en donde el fragmento es preferiblemente de al menos 17 nucleotidos, más preferiblemente al menos 18, 19 o 20 nucleotidos, o aun más preferiblemente al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleotidos. En una realización preferida de la presente invención, la secuencia de nucleotidos objetivo comprende una secuencia de nucleotidos equivalente al transcripto de ARN codificado por cualquiera de los polinucleótidos que se seleccionan del grupo que consiste en (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100 o 1 115 nucleotidos contiguos de una secuencia de nucleotidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (i¡) un polinucleótido que consiste en al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 9, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 58, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 56, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 1 58, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 58, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (v) un polinucleótido que consiste en un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho correspondiente fragmento de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (vi) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70 % preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs I , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389. En una realización más preferida de lo precedente, dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
Preferiblemente, las moléculas de ARN interferente de la presente invención comprenden al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador del ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo.
El elemento silenciador, o al menos una hebra del mismo en donde el elemento silenciador es de doble hebra, puede ser totalmente complementario o parcialmente complementario a la secuencia de nucleótidos objetivo del gen objetivo. Tal como se utiliza en la presente, la expresión "totalmente complementario" significa que todas las bases de la secuencia de nucleótidos del elemento silenciador son complementarias o 'coinciden' con las bases de la secuencia de nucleótidos objetivo. La expresión "al menos parcialmente complementario" significa que hay una coincidencia menor a 100% entre las bases del elemento silenciador y las bases de la secuencia de nucleótidos objetivo. El experto en la técnica comprenderá que el elemento silenciador necesita ser solo al menos parcialmente complementario a la secuencia de nucleótidos objetivo para mediar la regulación hacia abajo de la expresión del gen objetivo. Es bien conocido en la técnica que las secuencias de ARN con inserciones, eliminaciones y no coincidencias con relación a la secuencia objetivo igualmente pueden ser efectivas en la ¡ARN. De acuerdo con la presente invención, se prefiere que el elemento silenciador y la secuencia de nucleótidos objetivo del gen objetivo compartan al menos 80% o 85% de identidad de secuencia, preferiblemente al menos 90% o 95% de identidad de secuencia, o más preferiblemente al menos 97% o 98% de identidad de secuencia y aun más preferiblemente al menos 99% de identidad de secuencia. De forma alternativa, el elemento silenciador puede comprender 1 , 2 o 3 no coincidencias en comparación con la secuencia de nucleótidos objetivo en cada extensión de 24 nucleótidos parcialmente complementarios.
El experto en la técnica apreciará que el grado de complementariedad compartido entre el elemento silenciador y la secuencia de nucleótidos objetivo puede variar dependiendo del gen objetivo a ser regulado hacia abajo o dependiendo de la especie de plaga de insectos cuya expresión de genes ha de ser controlada.
En otra realización de la presente invención, el elemento silenciador comprende una secuencia de nucleótidos que es el ARN equivalente de cualquiera de los polinucleótidos que se seleccionan del grupo que consiste en un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 o 1115 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1-26, 121-205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (ii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleotidos contiguos de una secuencia de nucleotidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121-205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 400, 1500, 2000 o 3000 nucleotidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 1-26, 121 -205, 386-389, 394, 400, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 - 26, 121 -205, 386-389, 394, 400 o su complemento, en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 500 nucleotidos de longitud. Se apreciará que en dichas realizaciones el elemento silenciador puede comprender o consistir en una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra, la hebra sentido, comprende una secuencia de nucleotidos al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro de un gen objetivo.
La secuencia de nucleotidos objetivo puede seleccionarse de cualquier región o secuencia de nucleotidos adecuada del gen objetivo o transcripto de ARN del mismo. Por ejemplo, la secuencia de nucleotidos objetivo puede ubicarse dentro de 5'UTR o 3'UTR del gen objetivo o transcripto de ARN o dentro de regiones exónicas o intrónicas del gen.
El experto en la técnica sabrá qué métodos utilizar para identificar la secuencia de nucleotidos objetivo más adecuada dentro del contexto del gen objetivo de longitud completa. Por ejemplo, pueden sintetizarse y evaluarse múltiples elementos silenciadores que se dirigen a diferentes regiones del gen objetivo. De forma alternativa, puede utilizarse la digestión del transcripto de ARN con enzimas tales como RNAse H para determinar sitios en el ARN que se encuentran en una conformación susceptible del silenciamiento de genes. Los sitios objetivo también pueden identificarse utilizando abordajes in silico, por ejemplo, el uso de algoritmos informáticos diseñados para predecir la eficacia del silenciamiento de genes en base al direccionamiento a diferentes sitios dentro del gen de longitud completa.
Los ARN interferentes de la presente invención pueden comprender un elemento silenciador o múltiples elementos silenciadores, en donde cada elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro de un gen objetivo y que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de dicho gen objetivo. En el documento WO2006/046148 se describen constructos de ARN concateméricos de este tipo tal como se incorpora a la presente a modo de referencia. En el contexto de la presente invención, el término "múltiple" significa al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, etc. y más hasta al menos 10, 15, 20 o al menos 30. En una realización, el ARN interferente comprende múltiples copias de un solo elemento silenciador, es decir, repeticiones de un elemento silenciador que se une a una secuencia de nucleotidos objetivo particular dentro de un gen objetivo específico. En otra realización, los elementos silenciadores dentro del ARN interferente comprenden o consisten en diferentes secuencias de nucleotidos complementarias a diferentes secuencias de nucleotidos objetivo. Debería ser claro que las combinaciones de múltiples copias del mismo elemento silenciador combinadas con elementos silenciadores que se unen a una secuencia de nucleótidos objetivo diferentes se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo pueden originarse a partir de un solo gen objetivo en una especie de plaga de insectos para alcanzar una regulación hacia abajo mejorada de un gen objetivo específico en una especie de plaga de insectos. En ese caso, los elementos silenciadores pueden combinarse en el ARN interferente en el orden original en el cual las secuencias de nucleótidos objetivo se encuentra en el gen objetivo, o los elementos silenciadores pueden mezclarse y combinarse aleatoriamente en cualquier orden de rango en el contexto del ARN interferente en comparación con el orden de las secuencias de nucleótidos objetivo en el gen objetivo.
De forma alternativa, las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo representan un solo gen objetivo pero se originan de diferentes especies de plagas de insectos.
De forma alternativa, las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo pueden originarse de diferentes genes objetivo. Si el ARN interferente es para ser utilizado en la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas, se prefiere que los diferentes genes objetivo se seleccionen del grupo de genes que regulan las funciones biológicas esenciales de las especies de plagas de insectos, incluyendo, a modo no taxativo, supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción y patogenicidad. Los genes objetivo pueden regular vías biológicas o procesos iguales o diferentes. En una realización, al menos uno de los elementos silenciadores comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo en donde el gen objetivo se selecciona del grupo de genes tal como se describió anteriormente.
En una realización adicional de la invención, los diferentes genes objetivo de los diferentes elementos silenciadores se originan de la misma especie de plaga de insectos. Este abordaje está diseñado para lograr un ataque mejorado contra una sola especie de plaga de insectos. En particular, los diferentes genes objetivo pueden expresarse diferencialmente en las diferentes etapas del ciclo de vida del insecto, por ejemplo, las etapas de adulto maduro, larva inmadura y huevos. El ARN interferente de la invención puede así utilizarse para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas de insectos en más de una etapa del ciclo de vida del insecto.
En una realización alternativa de la invención, los diferentes genes objetivo de los diferentes elementos silenciadores se originan de diferentes especies de plagas de insectos. El ARN interferente de la invención puede así utilizarse en la prevención y/o el control de infestación por parte de más de una especie de plaga de insectos simultáneamente.
Los elementos silenciadores pueden disponerse como una región contigua del ARN interferente o pueden separarse mediante la presencia de secuencias enlazantes. La secuencia enlazante puede comprender una secuencia de nucleótidos aleatoria corta que no es complementaria a ninguna secuencia de nucleótidos objetivo o genes objetivo. En una realización, el enlazante es una secuencia de ARN que se auto-escinde condicionalmente, preferiblemente un enlazante sensible al pH o a enlazante sensible a la hidrofobicidad. En una realización, el enlazante comprende una secuencia de nucleótidos equivalente a una secuencia intrónica. Las secuencias enlazantes de la presente invención pueden tener una longitud que puede variar de aproximadamente 1 par de bases a aproximadamente 10000 pares de bases, siempre que el enlazante no altere la habilidad del ARN interferente de regular hacia abajo la expresión del o los genes objetivo.
Además del o los elementos silenciadores y cualquier secuencia enlazante, el ARN interferente de la invención puede comprender al menos una secuencia de polinucleótidos adicional. En diferentes realizaciones de la invención, la secuencia adicional se selecciona de (i) una secuencia capaz de proteger el ARN interferente del procesamiento del ARN, (ii) una secuencia que afecta la estabilidad del ARN interferente, (iii) una secuencia que permita la unión de proteína, por ejemplo para facilitar la captación del ARN interferente mediante las células de la especie de plaga de insectos, (iv) una secuencia que facilita la producción a gran escala del ARN interferente, (v) una secuencia que es un aptámero que se une a un receptor o a una molécula en la superficie de las células de la plaga de insectos para facilitar la captación, o (v) una secuencia que cataliza el procesamiento del ARN interferente dentro de las células de la plaga de insectos y mejora de esta forma la eficacia del ARN interferente. Las estructuras para mejorar la estabilidad de las moléculas de ARN se conocen bien en la técnica y se describen adicionalmente en el documento WO2006/046148, que se incorpora a la presente a modo de referencia.
La longitud del ARN interferente de la invención necesita ser suficiente para la captación por parte de las células de una especie de plaga de insectos y la regulación hacia abajo de genes objetivo dentro de la plaga tal como se describe en otras partes de la presente. Sin embargo, el límite superior de longitud puede depender de (i) el requerimiento de ARN interferente a ser captado por las células de la plaga y (ii) el requerimiento de ARN interferente a ser procesado en las células de la plaga para mediar el silenciamiento de genes mediante la vía de iARN. La longitud también puede determinarse por el método de producción y la formulación para la liberación del ARN interferente a células. Preferiblemente, el ARN interferente de la presente invención será de entre 21 y 10000 nucleótidos de longitud, preferiblemente entre 50 y 5000 nucleótidos o entre 100 y 2500 nucleótidos, más preferiblemente entre 80 y 2000 nucleótidos de longitud.
El ARN interferente puede contener bases de ADN, bases no naturales o uniones de estructura principal o modificaciones de la estructura principal de azúcar-fosfato no naturales, por ejemplo para mejorar la estabilidad durante el almacenamiento o mejorar la resistencia a la degradación por parte de nucleasas. Más aun, el experto en la técnica puede producir el ARN interferente químicamente o enzimáticamente mediante reacciones manuales o automatizadas. De forma alternativa, el ARN interferente puede transcribirse a partir de un polinucleótido que lo codifica. De esta forma, en la presente se proporciona un polinucleótido aislado que codifica cualquiera de los ARN interferentes de la presente invención.
En la presente también se proporciona un polinucleótido aislado que se selecciona del grupo que consiste en (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (i¡) un polinucleótido que consiste en al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 1 75, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 o 1 1 15 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 00, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o (iv) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 1-26, 121 -205, 386-389, 394, 400, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400 o su complemento, o (v) un polinucleótido que consiste en un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 1-26, 121 -205, 386-389, 394, 400, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99 % idéntica a dicho correspondiente fragmento de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 - 26, 121 -205, 386-389, 394, 400 o su complemento, o (vi) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70 % preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, y en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
En realizaciones preferidas, el polinucleótido aislado es parte de una molécula de ARN interferente, típicamente parte del elemento silenciador, que comprende al menos una región de doble hebra que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo. La hebra sentido del ARNdh es, por lo tanto, capaz de aparearse con el transcripto de ARN y dirigirse al ARN para degradarse dentro del complejo del silenciamiento inducido por ¡ARN o RISC.
Los polinucleótidos de la invención pueden insertarse mediante técnicas de clonación molecular de rutina en vectores o constructos de ADN conocidos en la técnica. Por lo tanto, de acuerdo con una realización, se proporciona un constructo de ADN que comprende cualquiera de los polinucleótidos de la presente invención. Preferiblemente, en la presente se proporciona un constructo de ADN que comprende un polinucleotido que codifica al menos uno de los ARN ¡nterferentes de la presente invención. El constructo de ADN puede ser un vector de ADN recombinante, por ejemplo un vector bacteriano o de levadura o un vector de planta. En una realización preferida de la invención, el constructo de ADN es un constructo de expresión y el polinucleotido se encuentra unido de forma operativa a al menos una secuencia reguladora capaz de dirigir la expresión de la secuencia de polinucleótidos. La expresión 'secuencia reguladora' debe considerarse en un contexto amplio y pretende hacer referencia a cualquier secuencia de nucleótidos capaz de efectuar la expresión de los polinucleótidos a los cuales está unido de forma operativa incluyendo, a modo no taxativo, promotores, mejoradores y otros elementos activadores transcripcionales sintéticos o naturales. La secuencia reguladora puede ubicarse en el extremo 5' o 3' de la secuencia de polinucleótidos. La expresión 'unido de forma operativa' se refiere a una unión funcional entre la secuencia reguladora y la secuencia de polinucleótidos de forma tal que la secuencia reguladora dirige la expresión del polinucleotido. Los elementos unidos de forma operativa pueden ser contiguos o no contiguos.
Preferiblemente, la secuencia reguladora es un promotor que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, promotores constitutivos, promotores inducibles, promotores específicos de tejido y promotores específicos de etapa de crecimiento/desarrollo. En una realización, el polinucleótido se coloca bajo el control de un promotor constitutivo fuerte cualquiera que se seleccione del grupo que comprende el promotor CaMV35S, promotor CaMV35S doble, promotor de ubiquitina, promotor de actina, promotor de rubisco, promotor GOS2, promotor 34S del virus del mosaico de la escrofularia. En otra realización, la secuencia reguladora es un promotor de planta para uso en la regulación de la expresión del polinucleótido en plantas. Los promotores de planta, en particular, promotores específicos de tejido vegetal abarcados por el alcance de la presente invención se describen más detalladamente en otras partes de la presente.
Opcionalmente, una o más secuencias de terminación de transcripción pueden incorporarse en el constructo de expresión de la invención. La expresión 'secuencia de terminación de la transcripción' abarca una secuencia de control al final de una unidad de transcripción, que señala la terminación de la transcripción, el procesamiento en 3' y la poliadenilación de un transcripto primario. Secuencias reguladoras adicionales incluyendo, a modo no taxativo, mejoradores translacionales o transcripcionales, pueden incorporarse en el constructo de expresión, por ejemplo, como con el promotor CaMV35S doble mejorado.
La presente invención también abarca un método para generar cualquiera de los ARN interferentes de la invención que comprende las etapas de (i) poner en contacto un polinucleótido que codifica dicho ARN interferente o un constructo de ADN que lo comprende con componentes sin células; o (ii) introducir (por ejemplo, mediante transformación, transfección o inyección) un polinucleótido que codifica dicho ARN interferente o un constructo de ADN que lo comprende dentro de una célula.
La invención también se refiere así a cualquier ribonucleótido de doble hebra producido a partir de la expresión de un polinucleótido descrito en la presente.
Por lo tanto, en la presente también se proporciona una célula huésped transformada con cualquiera de los polinucleótidos descritos en la presente. También abarcados por las presentes células huésped que comprenden cualquiera de los ARN interferentes de la presente invención, cualquiera de los polinucleótidos de la presente invención o un constructo de ADN que los comprende. La célula huésped puede ser una célula procariota incluyendo, a modo no taxativo, células bacterianas gram-positivas y gram-negativas, o una célula eucariota incluyendo, a modo no taxativo, células de levadura o células vegetales. Preferiblemente, dicha célula huésped es una célula bacteriana o una célula vegetal. La célula bacteriana puede seleccionarse del grupo que comprende, a modo no taxativo, células Gram positivas y Gram negativas que comprenden Escherichia spp. (por ejemplo, E. coli), Bacillus spp. (por ejemplo, B. thuringiensis), Rhizobium spp., Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Pseudomonas spp. y Agrobacterium spp. El polinucleótido o constructo de ADN de la invención puede existir o mantenerse en la célula huésped como un elemento extra-cromosómico o puede incorporarse de forma estable en el genoma de la célula huésped. Características de interés particular al seleccionar una célula huésped para los propósitos de la presente invención incluyen la facilidad con la cual el polinucleótido o constructo de ADN que codifica el ARN interferente puede introducirse en el huésped, la disponibilidad de los sistemas de expresión compatibles, la eficiencia de la expresión, y la estabilidad del ARN interferente en el huésped.
Preferiblemente, los ARN interferentes de la invención se expresan en una célula huésped de una planta. Las plantas de interés preferidas incluyen, a modo no taxativo, algodón, papa, arroz, tomate, cañóla, soja, girasol, sorgo, mijo perla, maíz, alfalfa, fresas, berenjena, pimiento y tabaco.
En situaciones en las cuales el ARN interferente se expresa dentro de una célula huésped y/o se utiliza para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas de un organismo huésped, se prefiere que el ARN interferente no exhiba efectos inesperados significativos, es decir, el ARN interferente no afecte la expresión de genes dentro del huésped. Preferiblemente, el elemento silenciador no exhibe complementariedad significativa con secuencias de nucleótidos que no sean la secuencia de nucleótidos objetivo del gen objetivo pretendida. En una realización de la invención, el elemento silenciador muestra menos del 30%, más preferiblemente menos del 20%, más preferiblemente menos del 10% y aun más preferiblemente menos del 5% de identidad de secuencia con cualquier gen de la célula u organismo huésped. Si los datos de la secuencia genómica están disponibles para el organismo huésped, es posible verificar de forma cruzada la identidad con el elemento silenciador utilizando herramientas bioinformáticas convencionales. En una realización, no hay identidad de secuencia entre el elemento silenciador y un gen de la célula huésped u organismo huésped en una región de 17, más preferiblemente en una región de 18 o 19 y aun más preferiblemente en una región de 20 o 21 nucleótidos contiguos.
En la aplicación práctica de la invención, los ARN interferentes de la invención pueden utilizarse para prevenir y/o controlar cualquier plaga de insectos pertenecientes a los órdenes Coleóptera, Lepidoptera, Díptera, Dichyoptera, Orthoptera, Hemiptera y Siphonaptera.
En la presente también se proporciona un método para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas, que comprende poner en contacto una especie de plaga de insectos con una cantidad efectiva de al menos un ARN interferente en donde el ARN funciona al ser captado por dicha plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo de plaga esencial. El gen objetivo esencial puede ser cualquier gen de plaga implicado en la regulación de un proceso biológico esencial necesario para que la plaga inicie o mantenga la infestación incluyendo, a modo no taxativo, supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción y patogenicidad. En particular, el gen objetivo puede ser cualquier gen de plaga tal como se describe en otras partes de la presente.
Más aun, en la presente se proporciona un método para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos en un campo de plantas de cultivo, comprendiendo dicho método expresar en dichas plantas una cantidad efectiva de un ARN interferente tal como se describe en la presente.
Cuando el método es para el control de infestación por parte de plagas, la frase "cantidad efectiva" abarca la cantidad o concentración de ARN interferente que se necesita para producir un efecto fenotípico en la plaga de forma tal que se reducen las cantidades de organismos plaga que infestan un organismo huésped y/o se reduce el daño causado por la plaga. En una realización, el efecto fenotípico es la muerte de la plaga y el ARN ¡nterferente se utiliza para alcanzar al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% de mortalidad de la plaga en comparación con plagas de insectos testigo. En una realización adicional, los efectos fenotípicos incluyen, a modo no taxativo, atrofia en el crecimiento de la plaga, cese de la alimentación y puesta de huevos reducida. Las cantidades totales de organismos plaga que infestan un organismo huésped pueden, de esta forma, reducirse al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% en comparación con plagas testigo. De forma alternativa, el daño causado por la plaga de insectos pude reducirse al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% en comparación con plagas de insectos testigo. Por lo tanto, el método de la invención puede utilizarse para alcanzar al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% de control de la plaga.
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297 o 310 a 313, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L.
Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297 o 310 a 313, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncia (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 79, 349, 352 o 356 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 , 12, 47 a 50, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 328 o 84 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, 59 a 62, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidoptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecímpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del niaíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 7, 18, 59 a 62, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidoptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en las SEQ ID NOs 87 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, 63 a 66, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, 63 a 66, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en la SEQ ID NO 88 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. vírgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano). En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 347 o 348 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 30, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 330, 350 o 353 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidoptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidoptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 331 o 351 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 337 o 354 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En una realización, la planta a ser tratada se manipula para expresar el ARN interferente ¡ntracelularmente mediante transcripción de un polinucleótido allí, incorporado. Dado que las plagas se alimentan de los tejidos de la planta, las células que contienen el ARN interferente se desintegrarán dentro del tracto digestivo del insecto y el ARN interferente se distribuirá de esta forma dentro del cuerpo del insecto lo que resulta en la regulación hacia abajo de los genes objetivo.
De esta forma, de acuerdo con otro aspecto de la presente invención se proporciona un método para generar una planta transgénica resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos que comprende las etapas de (a) transformar una célula de planta con un constructo de ADN que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga de insectos, (b) regenerar una planta a partir de la célula de planta transformada; y (c) cultivar la planta transformada en condiciones adecuadas para la expresión del ARN ¡nterferente a partir del constructo de ADN recombinante, siendo así dicha planta resistente a dicha plaga en comparación con una planta sin transformar.
El ARN interferente expresado por la planta o parte de la misma puede ser cualquiera de los descritos en otras partes de la presente. Preferiblemente, el ARN interferente comprende o consiste en al menos un elemento silenciador y dicho elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra (la hebra sentido) comprende una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro de un gen objetivo. Cuando parte del ARN ¡nterferente es de doble hebra, las dos hebras de la molécula pueden expresarse a partir de al menos dos polinucleótidos separados o pueden codificarse mediante un solo polinucleótido que codifica un ARN interferente con por ejemplo, una estructura de tallo-bucle o una estructura denominada de horquilla tal como se describe en otras partes de la presente.
El ARN interferente expresado por la planta o parte de la misma puede dirigirse a cualquiera de los genes de la plaga tal como se describe en otras partes de la presente. En particular, el gen objetivo puede seleccionarse del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 1-26, 121-205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que consiste en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, .172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 2 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 -26, 121 -205, 386-389, 394, 400, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25,. 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 29, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento. El gen objetivo puede ser un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 66, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277,. 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
En una realización, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 2, 121 , 130, 123, 132, 122, 131 , 124, 133, 125, 134, 126, 135, 127, 136 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 1 74, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 77, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 1 78, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a .289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189/27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 30, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 30 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 1 78, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 30Í, 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
En una realización, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 39, 5, 6, 35 a 38, 40, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 39, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a.50, 1.3, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 54, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273 o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 51 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 2.1 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273.
En una realización, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a.297, 310 a 313, 40 , dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos qüe comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401.
Preferiblemente la secuencia de nucleótidos de dicho gen objetivo no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud. Más aun, es importante que el ARN interferente no altere la expresión de ningún gen del huésped vegetal.
Tal como se utiliza en la presente, la expresión "planta transgénica" o "célula de planta transgénica" se refiere a cualquier planta o célula de planta que ha sido manipulada genéticamente o que desciende de una planta que ha sido genéticamente manipulada como para presentar una secuencia de polinucleotidos exógenos. 'Exógeno' se refiere al hecho de que el polinucleotido se origina fuera de la célula vegetal. Típicamente, el polinucleotido exógeno no es nativo de la planta transgénica, es decir, no se encuentra de forma natural dentro del genoma de la planta.
Tal como se utiliza en la presente, la expresión 'transformación' se refiere a la introducción de moléculas de polinucleotido exógeno en una planta o célula de la misma. En la técnica se conocen técnicas para introducir polinucleotidos en plantas. En una realización de la presente invención, las plantas se "transforman de forma estable" con un polinucleotido o constructo de ADN que lo comprende, es decir, el polinucleotido o constructo de ADN introducido en la célula de planta se integra en el genoma de la planta y es capaz de ser heredado por la progenie de la misma. Los protocolos de transformación para introducir polinucleotidos o constructos de ADN en las células de plantas pueden variar dependiendo del tipo de planta en cuestión. Métodos de transformación adecuados incluyen, a modo no taxativo, una microinyección, electroporación, transformación mediada por Agrobacterium y aceleración de partículas balística. En la técnica también se conocen métodos para la inserción dirigida de un polinucleotido o constructo de ADN en una ubicación específica en el genoma de la planta utilizando sistemas de recombinación específica de sitio.
El constructo de ADN que comprende el polinucleótido que codifica la molécula activa de ARN interferente puede ser cualquier vector adecuado para la transformación de células vegetales. Vectores adecuados incluyen, a modo no taxativo, plásmidos bacterianos, por ejemplo el plásmido he Ti de Agrobacterium tumefaciens, y sistemas de vectores virales. El constructo de ADN introducido en las células de una planta no deben ser dañinos ni tóxicos para la planta y/o no deben ser dañinos ni tóxicos para ningún organismo más alto en la cadena alimenticia que se alimente de dichas plantas.
En una realización, el constructo de ADN es un constructo de expresión que comprende un polinucleótido que codifica un ARN interferente unido de forma operativa a una secuencia reguladora capaz de dirigir la expresión de la secuencia de polinucleótidos en plantas cualquiera que se seleccione del grupo que comprende el promotor CaMV35S, promotor CaMV35S doble, promotor de ubiquitina, promotor de actina, promotor de rubisco, promotor GOS2, promotor 34S del virus del mosaico de la escrofularia y el promotor CaMV35S doble mejorado. Preferiblemente, la secuencia reguladora es un promotor de planta que se selecciona de los conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, puede preferirse que la planta produzca moléculas de ARN interferente solamente en las partes de la planta que entrarán en contacto con y/o serán dañadas por la especie de plaga de insectos, por ejemplo, las partes aéreas de la planta, las raíces, etc. Este efecto puede alcanzarse mediante el uso de promotores específicos de tejido vegetal incluyendo, a modo no taxativo, promotores específicos de hoja, promotores específicos de raíz, promotores específicos de tallo, promotores específicos de flor y promotores específicos de fruta conocidos en la técnica. Ejemplos adecuados de un promotor específico de raíz son los promotores PsMTA y de la quitinasa de clase III. Ejemplos de promotores específicos de tejido fotosintético o específicos de hoja y tallo que también son fotoactivados son promotores de dos proteínas de unión a clorofila (cab1 y cab2) de remolacha azucarera, ribulosa-bisfosfato carboxilasa (Rubisco), codificada por rbcS, las subunidades A (gapA) y B (gapB) de gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa de cloroplastos, promotor del gen Solanum tuberosum que codifica la proteína específica para hojas y tallos (ST-LS1 ), genes inducibles por defensa y regulados por el tallo, tales como los promotores JAS, promotores específicos de flor tales como el promotor de chalcona sintasa y promotores específicos de fruta tales como el RJ39 de la fresa.
En otras realizaciones, puede preferirse que la planta produzca moléculas de ARN interferente solamente en una etapa particular de su crecimiento. Este efecto puede alcanzarse mediante el uso de promotores específicos del desarrollo de plantas que dirigen la expresión solamente durante ciertos períodos del desarrollo de la planta. En particular, es importante proteger a las plantas de la infestación por parte de plagas durante las etapas más tempranas del crecimiento de las plantas o durante la floración (por ejemplo, en el caso del arroz) o durante la fructificación o maduración de la fruta o el llenado de la semilla, ya que estos son los momentos en los que la planta puede verse más severamente dañada.
El constructo de ADN para su uso en transformación de una planta de acuerdo con el método de la presente puede comprender más de un polinucleótido que codifica una molécula de ARN interferente de la presente invención. En una realización, los diferentes polinucleótidos pueden codificar moléculas de ARN interferente que se dirigen a diferentes secuencias de nucleótidos dentro del mismo gen objetivo. En una realización adicional, los diferentes polinucleótidos pueden codificar moléculas de ARN interferente que se dirigen a diferentes secuencias de nucleótidos dentro de diferentes genes objetivo, en donde los diferentes genes objetivo se originan de la misma o diferentes especies de plaga de insectos. Cuando el constructo de ADN codifica más de un ARN interferente, estos ARN pueden expresarse de forma diferencial dentro de diferentes tejidos de la planta, ya que se encuentran bajo el control de diferentes secuencias promotoras específicas de tejido, tal como se describe en otras partes de la presente. En una realización, la planta se manipula para expresar un ARN ¡nterferente en las hojas que regula hacia abajo la expresión de un gen objetivo en un insecto que se alimenta de las hojas, y para expresar adicionalmente un ARN ¡nterferente en las raíces que regula hacia abajo la expresión de un gen objetivo en un insecto que coloniza el suelo y se alimenta de las raíces de la planta.
El constructo de ADN también puede comprender al menos otro polinucleótido de interés, por ejemplo un polinucleótido que codifica una molécula reguladora de ARN adicional, un polinucleótido que codifica una proteína tóxica para especies de plagas de insectos y/o un polinucleótido que codifica una proteína que confiere resistencia o tolerancia a herbicidas.
De acuerdo con el método de la presente, una planta se regenera a partir de una célula de planta transformada utilizando técnicas conocidas en la técnica. Una de dichas técnicas comprende la digestión enzimática de la pared celular vegetal para producir un protoplasto vegetal, que subsiguientemente puede sufrir múltiples rondas de división y diferenciación celular para producir una planta adulta. Las plantas adultas generadas de esa forma pueden evaluarse subsiguientemente para determinar su resistencia a la infestación por parte de plagas. 'Resistente' tal como se utiliza en la presente debe interpretarse ampliamente y se refiere a la habilidad de la planta para defenderse contra el ataque de una plaga que típicamente es capaz de infringir daño o pérdida a la planta. Resistente puede significar que la planta no es más susceptible a la infestación por parte de plagas o que cualquier síntoma que resulte de la infestación por parte de plagas se reduce al menos aproximadamente 20%, preferiblemente al menos 30%, 40% o 50%, más preferiblemente al menos 60%, 70% o 80% y aun más preferiblemente al menos 90%. En la técnica son comúnmente conocidas técnicas para medir la resistencia de una planta a especies de plagas de insectos e incluyen, a modo no taxativo, medir con el transcurso del tiempo el diámetro de lesión promedio, el peso o biomasa de la plaga, la supervivencia y/o mortalidad de la plaga y/o el porcentaje general de tejidos vegetales descompuestos.
En una realización, el método de la presente para producir una planta transgénica también incluye el paso de generar descendencia o progenie de la planta transgénica y evaluar la resistencia de la progenie a la plaga de insectos. Pueden producirse dos o más generaciones para asegurarse de que la expresión del rasgo de resistencia se mantiene y hereda de forma estable. Las semillas también pueden cosecharse de la planta transgénica progenitora y/o su progenie para evaluar la resistencia a una plaga de insectos.
La presente invención también abarca un método para generar plantas transgénicas resistentes a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos que comprende las etapas de cruzar una primera planta transgénica que porta un constructo de ADN que codifica un ARN interferente que funciona para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo de plaga, con una segunda planta que carezca de dicho constructo de ADN, y seleccionar progenie resistente a dicha plaga. El cruzamiento puede llevarse a cabo mediante cualquier método utilizado de forma rutinaria en el contexto de la reproducción de plantas. La progenie seleccionada para resistencia a las plagas adicionalmente puede autopolinizarse para producir una subsiguiente generación de progenie resistente a las plagas. En una realización, pueden llevarse a cabo múltiples rondas de autopolinización para generar 2, 3, 4, 5 o más generaciones de progenie. La progenie resultante puede evaluarse para determinar su resistencia a plagas para asegurarse de que la expresión del rasgo de resistencia se mantiene y hereda de forma estable.
En una realización adicional, cualquier planta de progenie resistente a las plagas derivada de un cruzamiento entre una primera planta transgénica progenitora que porta un constructo de ADN de interés y una segunda planta progenitora que carezca de dicho constructo de ADN puede cruzarse nuevamente con la segunda planta progenitora y evaluarse la subsiguiente progenie para determinar su resistencia a la infestación por parte de plagas. Las plantas o su progenie pueden evaluarse para determinar su resistencia a la infestación por parte de plagas mediante análisis fenotípicos tal como se describe en otras partes de la presente o mediante técnicas moleculares convencionales. Por ejemplo, las plantas resistentes a plagas pueden identificarse mediante la detección de la presencia de una secuencia de polinucleotidos que codifica un ARN interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo. En la técnica se conocen técnicas para detectar la presencia de secuencias de polinucleotidos específicas dentro de células e incluyen PCR, digestión enzimática y análisis por SNP.
Los métodos de la invención pueden utilizarse para generar plantas 'transgénicas apiladas' que son resistentes a especies de plaga de insectos y que opcionalmente tienen al menos otro rasgo de planta deseado. Tal como se utiliza en la presente, una planta transgénica 'apilada' se refiere a una planta que porta más de una secuencia de polinucleotidos exógenos. La frase 'más de una' se refiere a la posibilidad de una planta de portar al menos 2, al menos 3, al menos 4 polinucleotidos exógenos. En una realización, la célula de planta transformada con el constructo de ADN que codifica el ARN interferente que se dirige a un gen de plaga puede haber sido previamente manipulada genéticamente para portar un polinucleotido exógeno separado. De forma alternativa, el método para generar una planta transgénica a partir de una célula vegetal tal como se describe en la presente puede comprender un protocolo de transformación conjunta cuando el constructo de ADN que codifica un ARN interferente de la invención es proporcionado a una célula de planta simultáneamente o secuencialmente con un polinucleotido exógeno separado.
Las plantas transgénicas apiladas que muestran resistencia a plagas también pueden generarse mediante técnicas de reproducción de plantas convencionales. En una realización, una primera planta transgénica resistente a las plagas se cruza con una segunda planta manipulada genéticamente para expresar un polinucleotido exógeno o gen heterólogo que confiere un rasgo de planta deseado. Cualquier progenie producida puede evaluarse para determinar su resistencia a plagas y adquisición del rasgo deseable adicional. De forma alternativa o adicionalmente, cualquier progenie resistente a las plagas producida a partir del cruzamiento puede cruzarse nuevamente con la segunda progenitora para generar más progenie que pueda seleccionarse para heredar el gen heterólogo portado por la segunda progenitora y así el rasgo de planta deseado adicional. Los polinucleótidos exógenos que portan una planta transgénica apilada de la invención pueden expresarse en las mismas partes de la planta o pueden expresarse de forma diferencial en virtud del hecho de que la expresión de cada una es controlada por un promotor específico de tejido diferente.
En una realización, el polinucleótido exógeno o gen heterólogo que confiere un rasgo deseable adicional codifica otro ARN interferente que tiene como objetivo la misma o diferentes especies de plaga de insectos. En una realización adicional, el gen heterólogo codifica una proteína dañina o tóxica para una especie de plaga de insectos de planta, por ejemplo una proteína insecticida que se selecciona del grupo que incluye, a modo no taxativo, proteínas insecticidas Bacillus thuringiensis, proteínas insecticidas Xenorhabdus, proteínas insecticidas Photorhabdus, proteínas insecticidas Bacillus laterosporous, proteínas insecticidas Bacillus sphaericus, y proteínas insecticidas VIP, tales como una proteína que se selecciona del grupo que incluye, a modo no taxativo, proteínas insecticidas CryIAb, CryI C, Cry2Aa, Cry3, CryET70, Cry22, CryET33, CryET34, CryET80, CryET76, TIC100, TIC101 , TIC851 , TIC900, TIC901 , TIC1201 , TIC407, TIC417 y PS149B1. En otra realización adicional, el gen heterólogo codifica una proteina que confiere resistencia o tolerancia a herbicidas. Ejemplos de genes que confieren resistencia o tolerancia a herbicidas incluyen Bar, EPSPS que confiere resistencia al glifosato, ALS que confiere resistencia a la imidazolinona y sulfonilurea y bxn que confiere resistencia al bromoxinilo.
En la presente también se proporciona un método para producir semillas híbridas a partir de cualquiera de las plantas transgénicas generadas mediante los métodos de la presente invención, comprendiendo dicho método las etapas de (i) plantar la semilla obtenida de una primera planta endogamica y la semilla obtenida de una segunda planta endogámica, en donde al menos una de las plantas endogámicas es una planta transgénica resistente a la infestación por parte de plagas (ii) cultivar las semillas en plantas que dan flores, (iii) prevenir la autopolinización de al menos una de la primera o segunda plantas adultas, (iv) permitir que ocurra la polinización cruzada entre la primera y la segunda planta; y (v) cosechar las semillas que resultan de la polinización cruzada. La semilla híbrida producida mediante este método y las plantas híbridas producidas mediante el cultivo de dicha semilla se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Las plantas híbridas producidas mediante este método típicamente serán genéticamente uniformes y probablemente exhiban heterosis o vigor híbrido. De esta forma, pueden generarse cultivos con el potencial de aumentar el rendimiento mediante dicho método.
Incluidas en el grupo de plantas transgénicas de la presente invención se encuentran las plantas transgénicas producidas por cualquiera de los métodos descritos en la presente. De esta forma, en una realización de la invención las plantas transgénicas comprenden rasgos transgénicos apilados que portan un primer polinucleótido exógeno que confiere resistencia a plagas y al menos otro polinucleótido exógeno o gen heterólogo que confiere un rasgo de planta deseable adicional. Los genes heterólogos adicionales pueden comprender genes que codifican agentes plaguicidas adicionales, genes que codifican proteínas tóxicas o dañinas para especies de plagas de insectos y/o genes que codifican proteínas que confieren resistencia a herbicidas tal como se describe en otras partes de la presente.
Plantas transgénicas preferidas de acuerdo con la invención incluyen, a modo no taxativo, algodón, papa, arroz, tomate, cañóla, soja, girasol, sorgo, mijo, maíz, alfalfa, fresas, berenjena, pimiento y tabaco.
En la presente también se proporciona el uso de ácido ribonucleico (ARN) interferente tal como se describe en la presente o el constructo de ADN tal como se describe en la presente para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos, preferiblemente infestación por parte de plagas de insectos de plantas.
La invención se comprenderá además con referencia a los siguientes ejemplos no taxativos.
Ejemplos Ejemplo 1 Identificación de genes objetivo en especies de plagas de insectos 1.1. Biblioteca de ADNc normalizado de Lygus hesperus y preparación de ARNdh en placas de múltiples pocilios para ensayos de detección Se aislaron ácidos nucleicos de ninfas de Lygus hesperus de diferentes etapas de vida, incluidas ninfas recién eclosionadas de 2, 4, 6 y 9 días de edad y adultas. Se preparó una biblioteca de ADNc usando el Kit de Síntesis de ADNc de PCR SMARTer™, siguiendo las instrucciones del fabricante (Clontech Cat. No 634925). La biblioteca de ADNc se normalizó usando el kit Trimmer (Evrogen Cat No NK001 ) y se clonó en el vector PCR4-TOPO (Invitrogen). La normalización de los clones introdujo adaptadores de M2 (Trimmer Kit, Evrogen, SEQ ID NO 92: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) orientados en dirección opuesta a cada extremo de los clones. Los constructos del vector recombinante se transformaron en células de la cepa TOP10 de Escherichia coli (Invitrogen). Posteriormente se diluyeron las células transformadas y se colocaron en placas para obtener colonias individuales o clones. Los clones se revisaron para asegurarse de que la redundancia de clones para la biblioteca no excediera el 5%. Se recogieron clones únicos en medios de LB (caldo Luria) líquido, en placas de 96 pocilios profundos y se cultivaron a 37°C. Las placas también incluyeron clones testigo positivos (Lh423) y negativos (FP).
Para generar el ARNdh, se generaron mediante PCR fragmentos de ADN sentido y antisentido que contenían la secuencia promotora T7. En resumen, por clon, se dispensó 1 µ? de suspensión bacteriana en placas de PCR de múltiples pocilios que contenían REDTaq® (Sigma Cat No D4309) y los cebadores OGCC2738 (SEQ ID NO 93: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) y oGCC2739 (SEQ ID NO 94: GCGTAATACGACTCACTATAGGAAGCAGTGGTATCAACGCAG) en base a las secuencias de M2 y T7-M2 respectivamente. Luego de la reacción de PCR se realizó una transcripción in vitro, donde por clon se agregaron 6µ? del producto de PCR a 9µ? del Sistema de Producción de ARN a Gran Escala RiboMAX™— T7 (Promega Cat No P1300) y se incubó durante toda la noche a 37°C. La solución de ARNdh final se diluyó 2 veces en dieta de sacarosa de L. hesperus, que contenía 15% de sacarosa y 5pg/pl de ARNt de levadura (Invitrogen Cat No 15401-029) y se utilizó para detección. El ARNdh que corresponde al clon testigo de Lh423 positivo es SEQ ID NO 101 y al clon testigo de FP negativo es SEQ ID NO 104 (ver la Tabla 4). 1.2. Detección de genes objetivo de Lygus hesperus novedosos y potentes usando una biblioteca de ADNc de expresión de ARNdh Se ha desarrollado un nuevo ensayo de detección de objetivos de Lygus hesperus. El montaje del ensayo fue el siguiente: cada pocilio de una placa de 96 pocilios aloja una ninfa de L. hesperus de un día de vida expuesta a un sachet de Parafilm que contiene dieta de sacarosa que incluye ARNdh de prueba o ARNdh testigo en presencia de ARNt. Cada placa contenía ARNdh de 90 clones diferentes, 3 x Lh423 (testigo positivo) y 3 x FP (proteína fluorescente; testigo negativo). Cada clon (ARNdh de prueba) se replicó en tres placas. Después de tres días de exposición, se registró el número de supervivencia de las ninfas y la dieta se reemplazó con una dieta (compleja) de cultivos frescos en ausencia de ARNdh. La mortalidad se ensayó los días 4, 6 y 8. Se utilizó un montaje idéntico para la primera y la segunda ronda de ensayos de confirmación, con 8 y 20 insectos respectivamente, con una ninfa por pocilio.
El sistema del ensayo fue validado usando ARNdh que corresponde al objetivo de Lh423 como el testigo positivo y un ARNdh de proteína fluorescente como el testigo negativo: más de 90% fueron verdaderos positivos y menos del 5% fueron falsos positivos, respectivamente.
Se evaluaron veinte placas de 96 pocilios, denominadas Lh001 a Lh020 (ver la línea inferior en las Figuras 1 y 2), que contenían 1800 clones individuales. Se identificaron 205 candidatos y se evaluaron en un primer ensayo de confirmación. Al fijar el umbral para que muestre > 50% de mortalidad, se identificaron 41 clones independientes y evolucionaron hasta una segunda ronda de confirmación. En el ensayo, los clones se compararon con los testigos positivos Lh423 (RpL19) y Lh105.2 (Sec23) y el testigo negativo Pt (que codifica una proteína fluorescente de coral). El ARNdh que corresponde al clon testigo positivo (Lh423) es SEQ ID NO 101 , al clon testigo Lh105.2 positivo es SEQ ID NO 102 y al clon testigo negativo (Pt) es SEQ ID NO 104 (ver la Tabla 4).
La segunda ronda de ensayos de confirmación, que evaluó 20 insectos / ARNdh de prueba, se inició para todos los ARNdh de prueba que exhibieron= 50% de mortalidad en la primera confirmación (Figuras 1 y 2). Los objetivos candidatos que correspondían a los ARNdh de prueba confirmados se nombraron con un "número Lhxxx" (ver la Tabla 1 ). Usando el mismo corte en 50% de mortalidad, se confirmaron 15 objetivos en la primera detección.
Se realizó una segunda detección para identificar más objetivos de Lygus hesperus. Los resultados de la segunda ronda de ensayos de confirmación están representados en la Figura 14. Usando el mismo corte en 50% de mortalidad, se confirmaron varios objetivos en la segunda detección (ver la Tabla 1 C). 1.3. Identificación de objetivos de Lygus En paralelo a los ensayos de confirmación de insectos, se secuenciaron los insertos que correspondían a los clones positivos y se utilizaron búsquedas de BlastX en bases de datos de proteínas de Drosophila y Tribolium para confirmar la identidad de los objetivos. La Tabla 1 proporciona un resumen del análisis de bioinformática y las anotaciones actuales de las secuencias objetivo de L. hesperus novedosas identificadas.
Se identificaron quince novedosos objetivos de L. hesperus en la primera detección y se identificaron 11 novedosos objetivos de L. hesperus en la segunda detección. Todos los objetivos exhiben alta potencia contra ninfas de L. hésperas, lo que indica que los ADNc que codifican ARN de doble hebra contenidos en los mismos son esenciales para la supervivencia de las plagas y representan de esa forma genes objetivo de interés a los efectos del control de plagas. Por lo tanto, se determinaron las secuencias de ADN y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 2 y 3, respectivamente.
Lh594, el ortólogo de Lygus hesperus de troponina I de Drosophila, que participa en la contracción muscular y, por lo tanto, está ausente en las plantas, representa una novedosa clase de objetivo que pertenece a una vía fisiológica específica de animales en la que aún no se ha explorado el GM-iARN. En la mosca de la fruta, la troponina I se describe como un gen haploinsuficiente que exhibe un fenotipo muíante en estado heterocigoto. Dichos genes pueden ser particularmente susceptibles a niveles de expresión de ARNm reducidos y de esa forma pueden considerarse objetivos de ¡ARN ideales.
En esta vía de Lh594 se seleccionaron ocho objetivos (ver la Tabla 1 B).
Para cada objetivo, se diseñaron hasta 4 pares de cebadores de PCR degenerados en base a las alineaciones de las secuencias de varios insectos, incluidos abeja, Tríbolium y áfido. Los cebadores se utilizan para amplificar los segmentos de objelivos de Lygus hesperus. Se deíerminaron las secuencias de ADN y las secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 2 y 3, respectivamente.
Tabla 1 : Los novedosos objetivos de Lygus hesperus se clasificaron en % de mortalidad de acuerdo con los resultados del segundo ensayo de confirmación (primera detección).
Tabla 1B: Novedosos objetivos de Lygus hesperus en la vía de Lh594 *no claro : múltiples coincidencias en la familia - clasificadas de acuerdo con el valor e Tabla 1 C: Los novedosos objetivos de Lygus hesperus se clasificaron en % de mortalidad de acuerdo con los resultados del segundo ensayo de confirmación (segunda detección). 1.4. Clonación de ADNc de longitud completa por RACE (amplificación rápida de los extremos de ADNc) Para clonar el ADNc de longitud completa, comenzando con un clon conocido de fragmento interno desde los objetivos más potentes, se utilizó el kit de RACE de 573' (Roche, Cat. No. 1 734 792; basado en Sambrook, J. & Russell, D.M). Se siguió el protocolo estándar, descrito en el Manual de Instrucciones. En resumen, para una RACE de 5', se diseñó un cebador antisentido específico de secuencia objetivo en la secuencia conocida y se utilizó para una primera síntesis de ADNc de primera hebra, usando ARN de Lygus como plantilla. Se agregó una cola al ADNc de primera hebra y se utilizó como ancla para la síntesis de la segunda hebra y amplificación de una porción del extremo desconocida del transcripto. Para una RACE de 3', se utilizó un cebador de ancla oligo dT para la síntesis de ADNc de primera hebra. Para las RACE de 5' y 3', se utilizaron cebadores anidados, específicos para la secuencia objetivo en una segunda reacción de PCR. Los fragmentos de PCR se analizaron sobre gel de agarosa, se purificaron, se clonaron y se secuenciaron para confirmación.
Las secuencias de ADNc de longitud completa que corresponden a los objetivos se ensamblaron en VectorNTi, un paquete de software de análisis de secuencias completamente integrado para análisis de secuencia de ADN (Invitrogen).
Ejemplo 2 producción in vitro de ARN de doble hebra para silenciamiento de genes 2.2. Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de Lygus hesperus Se sintetizó ARN de doble hebra en cantidades de miligramos. Primero se generaron mediante PCR dos plantillas de promotor de polimerasa de ARN 5' T7 (una plantilla sentido y una platilla antisentido). Se diseñaron y se llevaron a cabo PCR para producir polinucleótidos de plantilla sentido y antisentido, que tenía cada uno el promotor T7 en una orientación diferente con respecto a la secuencia objetivo a transcribir.
Para cada uno de los genes objetivo, la plantilla sentido se generó usando un cebador directo T7 específico de objetivo y un cebador inverso específico de objetivo. Las plantillas antisentido se generaron usando los cebadores directos específicos de objetivos y los cebadores inversos T7 específicos de objetivos. Las secuencias de los cebadores respectivos para amplificar las plantillas sentido y antisentido mediante PCR para cada uno de los genes objetivo se proporcionan en la Tabla 4. Los productos de PCR se analizaron mediante electrofóresis de gel de agarosa y se purificaron. Las plantillas T7 sentido y antisentido resultantes se mezclaron y se transcribieron mediante la adición de polimerasa de ARN T7. Los ARN de una sola hebra producidos mediante transcripción a partir de las plantillas se dejaron aparear, se trataron con DNasa y RNasa y se purificaron mediante precipitación. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de cada uno de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 4. 2.2. Ensayos de análisis de supervivencia para novedosos objetivos de Lygus hesperus Para permitir la clasificación de acuerdo con la potencia, se sintetizaron ARNdh in vitro correspondientes a los novedosos objetivos y se aplicaron a L. hesperus en bioensayos de análisis de supervivencia de 10 días. En resumen, las ninfas de L. hesperus de un día de vida se colocaron en placas de 96 pocilios con sellos de sacarosa que contenían 0.5µ?/µ? de ARNdh objetivo, complementados con 5pg/pl de ARNt de levadura. Las placas se incubaron durante 3 días en condiciones de cultivo de Lygus estándar. El día 3, 6 y 8, los sellos de dieta se renovaron con sellos que contenían dieta de Lygus únicamente. Se utilizó Lh423 (RpL19) como testigo positivo y se utilizó ARNdh de GFP y dieta de sacarosa como testigos negativos.
Los resultados de los análisis de supervivencia confirmaron los datos del primer y el segundo ensayo de confirmación. Se estableció Lh594 como un objetivo muy potente, con actividad y velocidad hasta destrucción más fuerte que el testigo fuerte Lh423.
Hasta ahora, la detección de Lygus en busca de novedosos objetivos identificó nuevos objetivos con actividades mayores o en el rango del testigo positivo Lh423; estos incluyen Lh429, Lh594, Lh609, Lh610, Lh611 , Lh617 y Lh618. La mortalidad inducida por estos objetivos se muestra en las Figuras 3 y 4.
Para obtener una clasificación más precisa de los objetivos de acuerdo con su actividad, se realizaron análisis de concentración de respuesta a la dosis. Los novedosos objetivos se evaluaron en ensayos in vitro, con concentraciones en el rango de 0.4 a 0.025 pg/µ?. Por condición, se evaluaron ninfas de 24 horas de vida en el montaje de placas de 96 pocilios, en dieta de sacarosa complementada con portador de ARNdh y ARNt. Los resultados se presentan como % de supervivencia en un experimento de 10 días (Figuras 7 a 11 ) y se resumen en la Tabla 5.
En base a los análisis de la curva de concentración, los objetivos se clasificaron por comparación con los testigos de referencia Lh423 y Lh105 (Tabla 5).
Tabla 5: Clasificación de novedosos objetivos de Lygus de acuerdo con DRC y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh105.
La potencia de Lh594 se confirmó adicionalmente. El efecto de este objetivo se observa claramente al menos un día antes que los otros objetivos y el testigo positivo de referencia Lh105 y Lh423. Dado que Lh594 fue muy potente, la DL50 no se alcanzó en el experimento de DRC estándar, con una concentración en el rango de 0.4 a 0.025µ?/µ? de ARNdh (Figura 8), el experimento de Lh594 por lo tanto se repitió, incluidas concentraciones más bajas en el rango de 0.05 a 0.001 pg/µ? de ARNdh (Figura 12). En conclusión, la actividad de Lh594 se observó a una concentración de 0.0025 pg/µ? y aproximadamente 90% de destrucción (correspondiente a aproximadamente 10 % de supervivencia) se obtuvo el día 6 con 0.025 pg de ARNdh.
Para explorar más la potencia de Lh594 y el rol del portador de ARNt en la respuesta de la iARN en Lygus hesperus, se montaron ensayos de alimentación in vitro adicionales en ausencia del ARNt portador. Se produjeron ARNdh de Lh594, Lh423 (testigo de referencia) y GFP (testigo negativo) in vitro, usando el método estándar. Los ARNdh se purificaron y se evaluaron a 5pg/pl en ausencia de ARNt (Figura 13 A).
En ausencia de ARNt, los objetivos Lh594 y Lh423 indujeron una letalidad alta en ninfas de Lygus. Los resultados de este experimento se han reproducido desde entonces. El ARNdh objetivo fue capaz de inducir efectos de iARN por alimentación en ninfas de Lygus en ausencia de ARNt.
Para investigar la actividad de ARNdh en concentraciones más bajas en ausencia del ARNt portador, se montaron experimentos adicionales, usando cantidades cada vez más bajas de ARNdh (Figura 13 B).
Un abordaje similar se siguió para los objetivos de lygus que se identificaron en la segunda detección. Para obtener una clasificación de los objetivos de acuerdo con su actividad, se realizaron análisis de concentración de respuesta a la dosis. Los novedosos objetivos se evaluaron en ensayos in vitro, con concentraciones en el rango de 0.5 a 0.05 pg/µ?. Por condición, se evaluaron ninfas de 24 horas de vida en el montaje de placas de 96 pocilios, en dieta de sacarosa complementada con portador de ARNdh y ARNt. Los resultados se presentan como % de supervivencia en un experimento de 9 días (Figuras 17 A-D). Lh594 y Lh423 se han incluido en el ensayo como objetivos de referencia. Los resultados se resumen en la Tabla 6. En base a los análisis de la curva de concentración, los objetivos se clasificaron por comparación con el testigo referencia Lh423.
Tabla 6: Novedosos objetivos de Lygus de la clasificación de la segunda detección de acuerdo con DRC y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh594.
Ejemplo 3 Detección de la vía de troponina Para permitir las pruebas de los objetivos de la vía de Troponina, los ARNdh producidos en vivo que correspondían a Lh619, Lh620, Lh621 , Lh622, Lh622, Lh623, Lh624, Lh625 y Lh626 se sintetizaron y se aplicaron a L. hesperus en bioensayos de análisis de supervivencia de 10 días. En resumen, las ninfas de L. hesperus de un día de vida se colocaron en placas de 96 pocilios con sellos de sacarosa que contenían 0.5pg/pl de ARNdh objetivo, complementados con 5 pg/µ? de ARN de levadura. Las placas se incubaron durante 3 días en condiciones de cultivo de Lygus estándar. El día 3, 6 y 8, los sellos de dieta se renovaron con sellos que contenían dieta de Lygus únicamente. Se utilizó Lh594 (Troponina I) como testigo positivo y se utilizó ARNdh de GFP y dieta de sacarosa como testigos negativos (Figura 15). Luego se incluyeron cuatro objetivos en análisis de curvas de respuesta a la dosis en un ensayo ¡n vitro, con concentraciones en el rango de 0.4 a 0.025 pg/µ?. Por condición, se evaluaron ninfas de 24 horas de vida en el montaje de placas de 96 pocilios, en dieta de sacarosa complementada con portador de ARNdh y ARNt. Los resultados se presentan como % de supervivencia en un experimento de 10 días (Figuras 16 A-B).
Ejemplo 4 Generación de plantas resistentes a especies de plagas de insectos 4.1. Montaje de vectores de expresión vegetales que comprenden una secuencia de horquilla de Lygus hesperus para la transformación de papa o algodón Dado que el mecanismo de interferencia de ARN opera a través de los fragmentos de ARNdh, las secuencias de polinucleótidos objetivo se clonaron en una orientación antisentido y sentido, separadas por un separador (SEQ ID NO 98: CTCGAGCCTGAGAGAAAAGCATGAAGTATACCCATAACTAACCCATTAGTTAT GCATTTATGTTATATCTATTCATGCTTCTACTTTAGATAATCAATCACCAAACAA TGAGAATCTCAACGGTCGCAATAATGTTCATGAAAATGTAGTGTGTACACTTA CCTTCTAGA, o SEQ ID NO 385: TCTAGAAGGTAAGTGTACACACTACATTTTCATGAACATTATTGCGACC GTTGAGATTCTCATTGTTTGGTGATTGATTATCTAAAGTAGAAGCATGAATAGA TATAACATAAACTAGT CTAATGGGTTAGTTATGGGTATACTTCATGCTTTTCT CTCAGGCTCGAG), para formar un constructo de horquilla de ARNdh. Los constructos de horquilla de ARNdh que codifican las moléculas de ARNdh de L. hesperus derivados de los genes objetivo tal como se menciona en la presente se subclonaron en un vector de expresión vegetal. De manera similar, un constructo testigo de horquilla de ARNdh de GUS, en donde la secuencia de polinucleótidos sentido que codifica GUS (SEQ ID NO 97 : CCAG CGTATCGTG CTG CGTTTCG ATG CGGTCACTC ATTACG GCAAAGTGTG A TGGAGCATCAGGGCGGCTATACGCCATTTGAAGCCGATGTCACGCCGTATGT TATTGCCGGGAAAAGTGTACGTATCTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGG GCATTCAGTCTGGATCGCGAAAACTGTGGAATTGATCCAGCGCCGTCGTCGG TGMCAGGTATGG TTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTCGGGT GAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACAGCCAAAAGCCAGACAGAGT) se clonó en orientación antisentido y sentido, separada por el mismo intrón (SEQ ID NO 98 o SEQ ID NO 385), se subclonó en un vector de expresión vegetal.
El vector de expresión vegetal comprende también elementos necesarios para el mantenimiento del plásmido en una célula bacteriana. El constructo de la horquilla de ARNdh se ubica entre el borde izquierdo (Bl) y el borde derecho (BD), 3' corriente abajo del promotor 35s del Virus del Mosaico de la Coliflor (P35S) y 5' corriente arriba del terminador de TNOS. Un cassette de expresión reportero de GFP que comprende la secuencia de GFP flanqueada por el promotor de P35S y el terminador se subclonó en el vector de transformación vegetal que aloja el cassette de horquilla de L. hesperus. Un cassette de expresión de NPT II que comprende la secuencia de NPT II flanqueada por el promotor P35S y terminador se utiliza para seleccionar las plantas que se han transformado efectivamente. Un montaje correcto de los fragmentos genéticos en el vector de expresión vegetal se confirmó mediante secuenciamiento (Figura 5).
Los vectores de expresión vegetal que comprenden las horquillas objetivo de L. hesperus se transformaron posteriormente en Agrobacterium tumefaciens. Para todos los genes objetivo de L. hesperus mencionados en la presente, los fragmentos pueden seleccionarse y clonarse como horquillas de manera similar. 4.2. Transformación de papa con un vector de expresión vegetal que comprende una secuencia de horquilla de Lygus hesperus y pruebas de las plantas de papa transformadas para resistencia contra L. hesperus El ejemplo que se proporciona a continuación es una ejemplificación del hallazgo de que las plantas de papa transgénica que expresan los ARN de horquilla específicos de genes objetivo afectan adversamente la supervivencia y/o el desarrollo de las especies de plagas de insectos.
¡ARN por alimentación de Lyqus hesperus in planta Siguiendo los resultados positivos obtenidos en los experimentos de alimentación de ARNdh en L. hesperus, se realizaron experimentos de prueba preliminar in planta.
El ensayo in planta se desarrolló con plántulas de papa in vitro que pueden soportar la supervivencia de los insectos al menos 8 días, manteniendo la mortalidad de fondo baja. Las ninfas de L. hesperus sobreviven y se alimentan de plántulas de papa de tipo salvaje. Esto es respaldado por el daño visual causado por insectos que puede observarse en las hojas y yemas (Figura 6).
En el ensayo, L. hesperus se alimenta con papa transgénica, que expresa ARNdh de horquilla que se dirige a objetivos de L. hesperus identificados en la presente. Se generaron plásmidos que contienen constructos de horquilla y un testigo de GUS.
Las plántulas se analizaron mediante PCR para confirmar la integración del ADN-T y la presencia de la horquilla, antes de que se propagara. Se produjeron explantas en exceso con el fin de obtener al menos 30 eventos independientes para cada constructo.
Transformación de papa Plantas de papa transformadas de forma estable se obtuvieron usando un protocolo adaptado recibido por Julie Gilbert en el Proyecto de Genoma de Patata NSF (http://www.potatogenome.org/nsf5). Las explantas de internudo de tallo de la 'Línea V de papa (obtenidas originalmente del Laboratorio de Reproducción Vegetal en PRI Wageningen, Países Bajos) que deriva del diploide susceptible Solanum tuberosum 6487-9 se utilizaron como material de partida para la transformación. Las explantas derivadas in vitro se inocularon con CSSC-iRi de Agrobacteríum tumefaciens que contenía los constructos de horquilla. Después de tres días de co-cultivo, las explantas se colocaron en un medio selectivo que contenía 100 mg/L de Kanamicina y 300 mg/L de Timentina. Después de 6 semanas post-transformación, los primeros brotes putativos se retiraron y se arraigaron en un medio selectivo. Los brotes que se originaron de diferentes explantas se trataron como eventos independientes, los brotes que se originaron del mismo callo se denominaron 'hermanos' hasta que su estado clonal pudiera verificarse mediante Southern blotting, y los cortes nodales de un brote se denominaron 'clones'.
El estado transgénico de los brotes de enraizamiento se revisó mediante fluorescencia de GFP o mediante PCR más/menos para la secuencia objetivo insertada. Los brotes positivos luego se propagaron por clonación en cultivo tisular para asegurar que estuvieran disponibles suficientes repeticiones para los ensayos de Lygus hesperus. Estos brotes se mantuvieron en medio de cultivo tisular o se transfirieron al suelo permitiendo una mayor flexibilidad para evaluar la resistencia contra ninfas/adultos de L. hesperus. Las primeras plantas estuvieron disponibles para pruebas catorce semanas post transformación.
Bioensayo Las plantas de papa transgénica jóvenes se mantuvieron en medio de cultivo tisular o se cultivaron en suelo en una cámara de cuarto de crecimiento de plantas con las siguientes condiciones: 25 ± 1 °C, 50 ± 5% de humedad relativa, fotoperíodo de 16:8 horas de luz:oscuridad. Por constructo, varios eventos (por ejemplo, veinte) se generaron con una cantidad adecuada de clones (por ejemplo, diez) por evento. Se colocaron varias ninfas/adultos de Lygus jóvenes en plantas de papa jóvenes (por ejemplo, en la etapa de hojas sin plegar 4 - 5) enjauladas individualmente y se dejaron durante al menos siete días antes de evaluar la resistencia contra Lygus hesperus en términos de supervivencia de ninfas/larvas/adultos, desarrollo retrasado y crecimiento atrofiado y/o daño de alimentación de plantas reducido.
La viabilidad de ¡ARN in planta para protección de cultivos contra Lygus se evaluó en un ensayo usando papas transgénicas que expresaban horquillas que correspondían a genes objetivo de Lygus. La Tabla 7 resume los números de papas transgénicas generadas y evaluadas. Los eventos transgénicos se generaron con horquillas que correspondían a objetivos Lh423 de Lygus (la secuencia de horquilla para Lh423 es representada en SEQ ID NO 402; la secuencia sentido del objetivo Lh423 es representada en SEQ ID NO 101 ) y Lh594 (la secuencia de horquilla para Lh594 es representada en SEQ ID NO 401 ; la secuencia sentido del objetivo Lh594 es representada en SEQ ID NO 2), y GUS como testigo (la secuencia de horquilla para GUS es representada en SEQ ID NO 403; la secuencia sentido de GUS es representada en SEQ ID NO 97). En este ensayo se utilizó como intrón la SEQ ID NO 385.
Tabla 7 Gen Constructo No. de No. de Línea de eventos plántulas transformación GU5 pGCC121 ~46 ~~ 20x2 ' ?00? Lh423 pGCC133 " 28 20x30 P006 Las plántulas se propagaron primero en cajas, luego en macetas individuales, que contenían medio de enraizamiento de MS (4.4 g/L de sales de MS y vitaminas, 30 g/L de sacarosa, 10 g/L de Gelrite, pH 5.7), en preparación para los ensayos de alimentación de Lygus. Dos eventos independientes de GUS se seleccionaron de 8 eventos independientes evaluados en 2 experimentos independientes (Figura 18 A-B). En el ensayo, se evaluaron 20-30 plantas transgénicas del mismo evento, cada una plantada en una maseta separada, y se compararon con plántulas de WT. Para las líneas transgénicas que tienen las hebras Lh423 y Lh594, 28 y 25 eventos independientes se evaluaron respectivamente y para cada evento transgénico independiente se evaluaron 20 a 30 plántulas, cada una plantada en una maceta separada (Figura 6).
Como se esperaba en transformantes primarios, un rango de actividad se observó para los 28 eventos transgénicos de Lh423 independientes (Figura 19); 6 eventos de P006 independientes indujeron más de 60% de letalidad el día 9 y en un evento, la letalidad alcanzó un 80% el día 9 (Figura 20).
Como se esperaba en transformantes primarios y tal como se observa para los transformantes primarios de Lh423, un rango de actividad se observó también para los 25 eventos transgénicos de Lh594 (Figura 21 ); 6 eventos de P007 independientes indujeron más de 60% de letalidad el día 9 y en un evento, la letalidad alcanzó un 80% el día 9 (Figura 22). Además, se observaron claramente retrasos de crecimiento y atrofia en los insectos sobrevivientes.
Resultados de qRT-PCR en Lypus alimentados con plantas Para demostrar que la reducción observada en la supervivencia de Lygus alimentados con plántulas de papa transgénicas que expresan horquillas dirigidas contra genes endógenos fue una verdadera respuesta de ¡ARN, el nivel de regulación hacia abajo del ARNm objetivo (Lh423) se midió mediante PCR en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR). Los insectos se dejaron alimentarse con 3 eventos que tienen la horquilla de Lh423 (P006/59, /22 y /29) y en un evento que tiene el testigo de horquilla de GUS (P001/28) como testigo. Los insectos se recolectaron después de 5 días y se congelaron inmediatamente en nitrógeno líquido. El ARN total se extrajo de 5 grupos de 5 insectos usando reactivo de TRI y de acuerdo con las instrucciones del fabricante (SIGMA). Después del tratamiento con DNasel (Promega) para quitar el ADN genómico seguido por extracción de fenol-cloroformo y precipitación de etanol, los ARN precipitados se disolvieron en agua. Para cada muestra, se transcribió por inversión 1 pg de ARN con una mezcla de hexámeros aleatorios y cebadores oligo dT anclados. Se realizó una qRT-PCR en el Ciclador BioRad I, usando ¡Q SYBR Green Supermix (Biorad) y usando las condiciones recomendadas por el fabricante. Los cebadores de qRT-PCR (Tabla 8) se diseñaron usando BeaconDesign; para evitar accidentes de PCR previsibles en presencia del ARNdh expresado en plantas ingerido por los insectos, las secuencias de cebador se ubicaron en la posición 3' de la secuencia de ARNdh. Se utilizó el algoritmo GeNorm para normalizar el nivel de ARNm objetivo usando 2 genes de mantenimiento, Lh425 (SDHA) y Lh427 (rpl 1 1 ).
En el testigo, se observaron transgénicos de GUS y no se observó regulación hacia abajo del ARNm objetivo endógeno de Lh423. Pero los resultados claramente demostraron una regulación hacia abajo del ARNm de Lh423 de Lygus endógeno que corresponde al ARNdh ingerido por los animales alimentados con 3 eventos diferentes de plantas transgénicas de Lh423 (Figura 23). 4.3. Transformación de algodón con un vector de expresión vegetal que comprende una secuencia de horquilla de Lygus hesperus y pruebas del material de callo de algodón transformado para resistencia contra L. hesperus El ejemplo que se proporciona a continuación es una ejemplificación del hallazgo de que las plantas de algodón o callos transgénjcos que expresan los ARN de horquilla específicos de genes objetivo afectan adversamente la supervivencia y/o el desarrollo de las especies de plagas de insectos.
Transformación de algodón La superficie de la semilla de Coker 312 es esterilizada usando primero un lavado de 5 minutos en 70% de etanol y agitando luego en 20% de una solución blanqueadora (Clorox Co. Estados Unidos, 1 % disponible de cloro) más 10 gotas del detergente no iónico, Tween® 20, por litro. La semilla se enjuaga luego 3 veces en agua destilada estéril antes de secarse mediante transferencia por adsorción en papeles de filtro estériles. La semilla estéril es germinada sobre un medio de Germinación (SG) durante 4-6 días, y en este punto los hipocótilos se cosechan y se cortan en longitudes de 0.5cm listos para inoculación de Agrobacterium. Las secciones de corte se colocan en papeles de filtro estériles superponiendo un medio basado en Murashige y Skoog que no contiene fitohormonas. Las explantas se incuban en un ciclo de 16:8 horas de día:noche a 28°C +/- 2°C durante 3 días antes de la inoculación.
Para la inoculación, se cultiva durante toda la noche un cultivo de LB líquido de Agrobacterium tumefaciens (10 mi), cepa GV3101 (pMP90) GentR o cepa LBA4404 que contiene el objetivo de horquilla de ARN seleccionado y un cassette de selección de plantas que codifican una resistencia a la higromicina, y se utilizan 5 mi para inocular un cultivo de 100 mi la noche antes de la inoculación. El cultivo se centrifuga, se resuspende y se diluye hasta una OD600 de 0.15 en el medio de dilución bacteriano.
Los segmentos de hipocótilos se inoculan con la suspensión de Agrobacterium durante 5 minutos. Después de esto, las explantas se transfieren por adsorción a un papel de filtro estéril para quitar el exceso de suspensión bacteriana. Las explantas se inoculan en la oscuridad sobre Medio de Cocultivo de Algodón (CCM) durante 48 horas. Las explantas se colocan luego en un Medio de Inducción de Callos Selectivo (SCIM) que contiene 10mg/l de Higromicina y 500mg/l de Cefotaxima que incluye las fitohormonas ácido 2, 4-diclorofenoxiacético (0.1 pg/ml) y cinetina (0.1 pg/ml). Después de 4-6 semanas, se observan los primeros callos resistentes, y estos pueden transferirse a un SCMI nuevo y amplificarse adicionalmente para evaluación molecular y bioensayos de insectos. Las placas se renuevan cada 4-6 semanas para mantener los nutrientes y la selección de antibióticos.
Los callos que se muestra que proporcionan un resultado positivo en el bioensayo de alimentación de insectos se seleccionan para regeneración y el callo se transfiere a un medio no selectivo para la maduración de los embriones somáticos; la receta se basa en la publicación de Trolinder y Goodin, 1986. Una vez que los embriones han alcanzado los 4mm de longitud y tienen cotiledóneas y radículas diferenciadas (2-3 meses después de la transferencia a un medio de maduración), pueden transferirse a un Medio de Enraizamiento y Elongación. Este consiste en vermiculita esterilizado en grandes tubos de ensayo empapados con Stewart & Hsu (1977) en base a un medio líquido complementado con quinetina, ácido giberélico, agregados ambos a una concentración final de 0.1 mg/l. Los embriones se incuban a 28°C en un ciclo 16:8 de día/noche, y una vez que alcanzan la etapa de hojas 2-3 las plántulas pueden endurecerse en macetas de vermiculita contenidas en un propagador para mantener la humedad. Una vez que las plantas se hayan endurecido por completo (etapa de hojas verdadera 4-6), pueden colocarse en macetas en una mezcla 50:50 de turba:marga y se cultivaron en un ciclo de luz 14:10 a 30/20°C de día/noche.
Bioensayo Se colocan ninfas de L. hesperus en una placa de Petri que contiene tejido de callo de algodón no diferenciado que expresa ARN de horquilla objetivo. Por constructo, se generan varios callos de algodón transformados y se evalúan en un bioensayo de alimentación para supervivencia reducida de ninfas/adultos y/o desarrollo retrasado y crecimiento atrofiado. Los callos transgénicos que no expresan un fragmento génico de ARN de horquilla objetivo de L. hesperus sirven como testigo negativo. Asimismo, las plantas de algodón regeneradas jóvenes de callos transgénicos se cultivan en suelo en una cámara de cultivo de plantas con las siguientes condiciones: 30/20°C de día/noche, 50 ± 5% de humedad relativa, fotoperíodo de 14:10 horas de luz:oscuridad. Por constructo, se generan varios eventos (por ejemplo, veinte). Se colocan varias ninfas/adultos de L. hesperus jóvenes en plantas jóvenes (por ejemplo, en la etapa de hojas sin plegar 4 - 5) enjauladas individualmente y se dejaron durante al menos siete días antes de evaluar la resistencia contra L. hesperus en términos de supervivencia reducida de ninfas/adultos, desarrollo retrasado y crecimiento atrofiado y/o daño de alimentación de plantas reducido. Las plantas de algodón no transformadas con el fragmento génico de ARN de horquilla objetivo de L. hesperus sirven como testigo negativo.
Ejemplo 5 Identificación de genes objetivo en Leptinotarsa decemlineata 5.1. Biblioteca de ADNc normalizada de Leptinotarsa decemlineata y preparación de ARNdh en placas de múltiples pocilios para ensayos de detección Se aislaron ácidos nucleicos de larvas de Leptinotarsa decemlineata de diferentes etapas. Una biblioteca de ADNc se preparó usando el Kit de Síntesis de ADNc de PCR SMARTer™, siguiendo las instrucciones del fabricante (Clontech Cat. No 634925). La biblioteca de ADNc se normalizó usando el kit Trimmer (Evrogen Cat No NK001 ) y se clonó en el vector PCR®-BLUNTI l-TOPO® (Invitrogen). La normalización de los clones introdujo adaptadores M2 (Trimmer Kit, Evrogen, SEQ ID NO 92: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) orientados en dirección opuesta a cada extremo de los clones. Los constructos del vector recombinante se transformaron en células de la cepa TOP10 de Escherichia coli (Invitrogen). Las células transformadas se diluyeron posteriormente y se colocaron en placas para obtener colonias individuales o clones. Los clones se revisaron para asegurarse de que la redundancia de clones para la biblioteca no excediera el 5%. Se inocularon clones únicos en medios de LB (caldo Luria) líquido, placas de 96 pocilios, y se cultivaron a 37°C. Las placas también incluyeron clones testigo positivos (Ld513) y negativos (FP).
Para generar el ARNdh, se generaron mediante PCR fragmentos de ADN sentido y antisentido que contenían la secuencia promotora T7. En resumen, por clon, se dispensó 1 µ? de suspensión bacteriana en placas de PCR de múltiples pocilios que contenían REDTaq® (Sigma Cat No D4309) y los cebadores OGCC2738 (SEQ ID NO 93: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) y OGCC2739 (SEQ ID NO 94: GCGTAATACGACTCACTATAGGAAGCAGTGGTATCAACGCAG) en base a las secuencias de M2 y T7-M2 respectivamente. Luego de la reacción de PCR se realizó una transcripción in vitro, donde, por clon, se utilizó un producto de 6 µ? de PCR en un volumen de reacción de 20 µ? que conteníla los reactivos de transcripción proporcionados por el Sistema de Producción de ARN a Gran Escala RiboMAX™ - kit T7 (Promega Cat No P1300) y se incubaron durante toda la noche a 37°C. La solución de ARNdh final se diluyó en agua Milli-Q estéril y se utilizó para detección. El ARNdh que corresponde al clon testigo de Ld513 positivo es SEQ ID NO 400 (ver la Tabla 11 ) y al clon testigo de FP negativo es SEQ ID NO 104 (ver la Tabla 4). 5.2. Detección de genes objetivo de Leptinotarsa decemlineata novedosos y potentes usando una biblioteca de ADNc de expresión de ARNdh Cada pocilio de una placa de 48 pocilios contenía 0.5 ml_ de dieta artificial pretratada con una transparencia tópica de 25 µ? (o 1 pg) del ARNdh de prueba o testigo. Una larva L2 se colocó en cada pocilio y se evaluaron 3 larvas por clon. Los números de supervivencia de CPB se evaluaron los días 4, 7 y 10.
En un segundo bioensayo, las larvas de CPB se alimentaron con dieta y se trataron con un ARNdh de prueba aplicado tópicamente generado a partir de clones derivados de una biblioteca de ADNc normalizado. Una larva se colocó en un pocilio de una multiplaca de 48 pocilios que contenía una dieta de 0.5 mL pretratados con una transparencia de 25 pL de una solución de 40 ng/pL de ARNdh. Se evaluó un total de veinticuatro larvas por tratamiento (clon). El número de insectos sobrevivientes se evaluó los días 4, 5, 6, 7, 8 y 11. El porcentaje de mortalidad de las larvas se calculó con respecto al día 0 (comienzo del ensayo) (ver la Figura 29). 5.3. Identificación de objetivos de escarabajos L. decemlineata Las nuevas secuencias objetivo de la detección en 5.2. y las secuencias objetivo correspondientes a los objetivos de la vía de troponina, ortólogos a las secuencias Lh594, Lh619 y Lh620 de Lygus, se han identificado en L. decemlineata. Los cebadores que proporcionaron un fragmento de ADNc relevante para Ld594 se enumeran en la Tabla 19. Se determinaron las secuencias de ADNc y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 9 y 10, respectivamente. 5.4. Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de L. decemlineata El ARNdh se sintetizó usando los cebadores tal como se proporcionan en la Tabla 11. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 11. 5.5. Ensayos de análisis de supervivencia para objetivos de L. decemlineata novedosos Ensayo de larvas temprano Se produjeron ARNdh sintéticos para los 3 objetivos, Ld594, Ld619 y Ld620, y se evaluaron en un ensayo de alimentación con las larvas de CPB (ver la Figura 24). Se llevó a cabo un ensayo de 10 días en placas de 48 pocilios, con dieta artificial (basada en Gelman et al, J Ins Sc,1 :7, 1-10: Artificial diets for rearing the Colorado Potato Beetle), complementada con 1 pg de ARNdh/pocillo, con 12 larvas por condición.
Pudo observarse un claro efecto en el desarrollo de las larvas. Se montó un segundo ensayo para investigar el efecto de estos ARNdh durante el transcurso de la pupación y metamorfosis (ver el ensayo de pupación más abajo).
Ensayo de pupación Se montó un ensayo de pupación de CPB para investigar el efecto de la desactivación de ¡ARN de Ld594, Ld619 y Ld620 durante la pupación y la metamorfosis. Las larvas de cuarto estadio se alimentaron con 1 pg de ARNdh sintetizado in vitro dispensado en un disco de hoja de papa y luego se transfirieron a un caja que contenía hojas de papa frescas sin tratar. Cuatro días después los insectos que sobrevivieron se colocaron en vermiculita para permitir la pupación. Los insectos tratados con Lh594 fueron lentos, más pequeños y en mayor medida fueron incapaces de superar la pupación. La eclosión de la pupa se evaluó al final del experimento. Para el control sin tratar, puparon 24 larvas y todas eclosionaron en adultos saludables. Para Ld620, se observó una disminución del número de larvas que evolucionaron hasta pupación. Para los tres objetivos evaluados, ninguna larva evolucionó en pupas saludables y ninguna emergió como adulto. Los insectos muertos recuperados de la vermiculita mostraron varios grados de malformaciones (Figura 25).
Ld594, Ld619 y Ld620 primero aparecieron como objetivos no letales en el ensayos de larvas de CPB, a pesar de que la reducción de la vitalidad se observó claramente en los insectos tratados con ARNdh. Por otro lado, en el ensayo de pupación, los 3 objetivos indujeron efectos importantes e inhibieron la entrada en pupación y/o metamorfosis.
Ensayo de adultos Para evaluar la actividad de Ld594, Ld619 y Ld620 en adultos de CPB, se montó un ensayo de disco de hojas. Un disco de hoja de papa (1.7 cm de diámetro) se pintó con ARNdh o testigos y se colocó en una placa Petri de 3.5 cm con un escarabajo adulto. Al día siguiente se proporcionó un disco nuevo de hojas tratadas a los insectos. El tercer día, los adultos se transfirieron a una caja que contenía suficientes hojas de papa nuevas sin tratar para soportar la supervivencia de los testigos sin tratar. Por tratamiento, se evaluaron 6 adultos y los números de supervivientes e insectos moribundos se contó a intervalos regulares del día 6 al día 13. Los insectos se consideraron moribundos si fueron incapaces de enderezarse después de colocarse boca arriba.
A pesar del nivel relativamente alto de fondo en el testigo negativo en este ensayo particular, se observaron claros efectos para los insectos que se habían expuesto a ARNdh de Ld594 o Ld619 (Figura 26).
Ejemplo 6 Identificación de genes objetivo en Nilaparvata lugens 6.1. Identificación de objetivos de Nilaparvata lugens Se han identificado en saltamontes marrón de las plantas, Nilaparvata lugens, nuevas secuencias objetivo, que corresponden a los objetivos de la vía de Troponina y nombrados como NI594 (Troponina I), NI619 (Troponina T) y NI626 (Troponina C). Las secuencias ortólogas de los genes de Lygus, nombrados como NI594 (Troponina I), NI619 (Troponina T) y NI625/626 (Troponina C), se clonaron a través de PCR de cebador degenerado, usando ADNc de BPH como plantilla. Además, el ADNc de longitud completa se identificó para NI594, usando RACE (ver el método anteriormente). Se utilizó el sistema de PCR AmpliTaq Gold (Applied Biosystems) siguiendo las instrucciones del fabricante y con condiciones estándar para las reacciones de PCR de cebador degenerado, normalmente de la siguiente forma: 1 ciclo con 10 minutos a 95°C, posteriormente 40 ciclos con 30 segundos a 95°C, 1 minuto a 50°C y 1 minuto a 72°C y posteriormente 10 minutos a 72°C. Para aumentar la tasa de éxito, se diseñaron hasta 10 cebadores degenerados diferentes, directos e inversos, en base a alineaciones de secuencias ortólogas en otras especies, y se utilizaron en varias combinaciones. Los fragmentos de PCR obtenidos se purificaron a partir del gel mediante el kit de extracción de gel (Qiagen Cat. No 28706) y se clonaron en un vector TOPO TA (Invitrogen). Se secuenciaron los clones y se utilizaron las secuencias de consenso en búsquedas Blast en bases de datos de secuencias de insectos disponibles para confirmar la relevancia del inserto. Los cebadores degenerados que resultaron en una amplificación exitosa se enumeran en la Tabla 20.
Se determinaron las secuencias de ADN y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y otro gen objetivo (NI537) y se proporcionan en las Tablas 12 y 13, respectivamente. 6.2. Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de Nilaparvata lugens El ARNdh se sintetizó usando los cebadores tal como se proporcionan en la Tabla 14. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de cada uno de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 14. 6.3. Ensayos de análisis de supervivencia para objetivos de N ¡¡aparva ta lugens novedosos Los ARNdh se sintetizaron y se evaluaron en ensayos de iARN por alimentación de BPH previamente optimizados, en presencia del detergente zwitteriónico, CHAPSO, a 0.1 % de concentración final. Los ARNdh se evaluaron a 0.5 pg/µ? de concentración final. Se utilizó NI537, un objetivo potente en los ensayos de BPH como un objetivo de referencia en el ensayo. La supervivencia de los insectos se evaluó con el trascurso de 9 días.
Los resultados del bioensayo mostraron que en BPH, NI594, NI619 y NI626 también fueron objetivo de iARN potentes en BPH (Figura 27).
Ejemplo 7 Identificación de genes objetivo en Acyrthosiphon pisum 7.1. Identificación de objetivos de Acyrthosiphon pisum Se han identificado nuevas secuencias objetivo en áfidos y se nombraron como Ap423, Ap537, Ap560 y Ap594, siguiendo la misma nomenclatura: "Apxxx", donde "Ap" corresponde a Acyrthosiphon pisum y "xxx" a la ID del objetivo. Los cebadores se diseñaron en base a una predicción de genes de dominio público en AphidBase (ref: http://www.aphidbase.com/) (Tabla 15).
Se determinaron las secuencias de ADN y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 16 y 17, respectivamente. 7.2. Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de áfido El ARNdh se sintetizó usando los cebadores tal como se proporcionan en la Tabla 18. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de cada uno de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 18. 7.3. Ensayos de análisis de supervivencia para novedosos objetivos de áfidos Se evaluó la iARN por alimentación en Acyrthosiphon pisum (áfido del guisante) con 4 objetivos: Ap594, Ap423, Ap560, Ap537. Las secuencias se amplificaron mediante PCR usando cebadores, se diseñaron con información de secuencias de dominio público (http://www.aphidbase.com) y se preparó ADNc de áfido. Se prepararon y se evaluaron ARNdh sintéticos a una concentración final de 0.5 pg/µ? en presencia de 5 pg/µ? de ARNt de levadura en una dieta de sacarosa. Diez ninfas de áfido de guisante recién nacidas se colocaron en una placa de Petri (32 mm). Se colocaron en una pipeta cincuenta µ? de dieta (con ARNt y ARNdh) sobre la primera capa de parafilm. Una segunda capa de parafilm cubrió la dieta y creó un sachet de alimentación donde los áfidos pudieron alimentarse. Por objetivo se montaron cinco repeticiones objetivo de 10 ninfas recién nacidas. El ARNdh de GFP se utilizó como testigo negativo. La dieta se renovó el día 4 y 7 de los ensayos y se evaluó la supervivencia (Figura 28).
Tabla 2 Tabla 3 Tabla 4 Tabla 8 Tabla 9 ID Secuencia de ADNc (hebra sentido) Tabla 11 Tabla 12 Tabla 15 Tabla 16 Tabla 17 Tabla 18 Tabla 19 Tabla 20 Tabla 21 Tabla 22 *no claro : múltiples coincidencias en la familia Tabla 23 Los expertos en la técnica apreciarán que pueden realizarse numerosas variaciones y/o modificaciones a los ensayos mencionados anteriormente sin apartarse del espíritu o alcance de este ensayo tal como se describe de forma genérica. Los expertos en la técnica reconocerán, o podrán determinar utilizando no más que experimentos de rutina, numerosos equivalentes de ejemplos específicos, y se pretende que dichos equivalentes queden abarcados por la presente invención. El presente ejemplo, por lo tanto, debe considerarse en todos los aspectos como ilustrativo y no restrictivo.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (44)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:
1 . Una planta transgénica, o material de reproducción o propagación para una planta transgénica o una célula de una planta transgénica cultivada, que expresa o es capaz de expresar al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131, 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 29, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 55, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 73, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 37, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 54, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (¡i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 39, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125. 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 60, 61 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 50, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 53, 246 a 249, 154, 55, 250 a 253, 156, 57, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 29, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 72, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 45, 122, 44, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
2. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 1 en donde el elemento silenciador del ARN comprende o consiste en una secuencia de al menos 21 nucleótidos contiguos complementarios o al menos parcialmente complementarios a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo.
3. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 1 o reivindicación 2 en donde el ARN comprende al menos dos elementos silenciadores, en donde cada elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo.
4. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 3 en donde cada uno de los elementos silenciadores comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos diferente que es complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo diferente.
5. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 4 en donde las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo se originan de un solo gen objetivo o de diferentes genes objetivo.
6. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 5 en donde los diferentes genes objetivo se originan de la misma especie de plaga de insectos o de diferentes especies de plagas de insectos.
7. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en donde la especie de plaga de insectos se selecciona de las especies de insectos que pertenecen a los órdenes: Coleóptera, Hemiptera, Lepidoptera, Díptera, Dichyoptera, Orthoptera y Siphonaptera.
8. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 7 en donde la especie de plaga de insectos se selecciona del grupo que consiste en Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L juncta (falso escarabajo de la papa), o L texana (falso escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotíca spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur), D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano)).
9. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de cualquiera de las reivindicaciones 1 -10 en donde el gen objetivo codifica una proteína de insecto que se selecciona del grupo que comprende (i) una proteína del complejo troponína/miofilamentos que se selecciona del grupo que comprende la troponina I (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), la proteína sostenida (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de Insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm); (ii) una proteína ribosómica de insecto que se selecciona del grupo que comprende la proteína ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm), la proteína ribosómica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG 0423 Dm), la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1522 Dm), la proteína ribosómica S 3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), y la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG12775 Dm), la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1271 Dm), la proteína ribosómica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2998 Dm), la proteína ribosómica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), la proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), la proteína ribosómica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm); (iii) la subunidad II de la proteína citocromo c oxidasa mitocondrial (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG34069 Dm); (iv) la cadena ? de ATP sintasa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7610 Dm); (v) la ubiquitina-5E (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG32744 Dm); (vi) la subunidad tipo beta de proteasoma (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17331 Dm), (vii) la proteína que es un ortólogo de insecto de la proteína CG13704 Dm; y (viii) la proteína Rpn12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4157 Dm).
10. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 9 en donde la regulación hacia abajo de la expresión del gen objetivo de la plaga provoca una reducción del crecimiento, desarrollo, reproducción o supervivencia de la plaga en comparación con especies de plagas expuestas a un ARN interferente dirigido a un gen no esencial o un ARN interferente que no regula hacia abajo ningún gen dentro de las especies de plagas.
1 1. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de cualquiera de las reivindicaciones 1 -10 en donde la planta transgénica, material de la misma o célula de planta adicionalmente comprende un gen heterólogo.
12. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 1 1 en donde el gen heterólogo codifica una proteína tóxica para una especie de plaga de plantas.
13. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 12 en donde la proteína se selecciona del grupo que consiste en una patatina, una proteína insecticida de Bacillus thuringiensis, una proteína insecticida de Xenorhabdus, una proteína insecticida de Photorhabdus, una proteína insecticida de Bacillus laterosporus y una proteína insecticida de Bacillus sphaericus.
14. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 13 en donde dicha proteína insecticida de Bacillus thuringiensis se selecciona del grupo que consiste en una Cry1 , una Cry3, una TIC851 , una CryET170, una Cry22, una TIC901 , una TIC201 , una TIC407, una TIC417, una proteína insecticida binaria CryET80 y CryET76, una proteína insecticida binaria TIC100 y TIC101 , una combinación de una proteína insecticida ET29 o ET37 con una proteína insecticida TIC810 o TIC812, y una proteína insecticida binaria PS149B1.
15. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 1 1 en donde el gen heterólogo codifica una proteína que confiere tolerancia a los herbicidas.
16. La planta transgénica, material de reproducción o propagación para una planta transgénica, o célula de una planta transgénica cultivada de la reivindicación 15 en donde la proteína se selecciona de una versión insensible al glifosato de una 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa (EPSPS), una enzima catabólica que es capaz de descomponer dicamba tal como dicamba monooxigenasa o un gen de fosfinotricina acetil transferasa que es capaz de catabolizar glufosinato amónico.
17. Una semilla producida de la planta transgénica de cualquiera de las reivindicaciones 1-16.
18. Un método para generar una planta transgénica resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos que comprende: (a) transformar una célula de planta con un constructo de ADN que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 1 72, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 70, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 29, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 21 , 142, 76, 82, 130, 77, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 67, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 20 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 63, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, 0 (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 32 , 386, 387, 388, 389; (b) regenerar una planta a partir de la célula de planta transformada; y (c) cultivar la planta transformada en condiciones adecuadas para la expresión del ARN interferente del constructo de ADN, siendo así dicha planta resistente a dicha plaga en comparación con una planta sin transformar.
19. El método de la reivindicación 18 en donde la planta transgénica es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 -16.
20. El método de la reivindicación 18 o reivindicación 19 en donde el método además comprende las etapas de generar una o más descendencias de la planta transformada y evaluar la resistencia de la progenie a la plaga de insectos.
21. Un método para generar una planta transgénica resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos que comprende: (i) cruzar una planta transgénica obtenida mediante el método de la reivindicación 18 o reivindicación 19 con una segunda planta, (ii) seleccionar progenie resistente a dicha plaga.
22. El método de la reivindicación 21 que además comprende la etapa de retrocruzar la planta de progenie que es resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos con la segunda planta y seleccionar adicionalmente progenie resistente a dicha plaga.
23. Un método para generar una planta transgénica resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos que comprende: (i) cruzar sexualmente una planta transgénica obtenida mediante el método de la reivindicación 18 o reivindicación 19 con una segunda planta que carece de resistencia a infestación por parte de insectos, produciendo así una pluralidad de plantas de progenie; (ii) seleccionar una primera planta de progenie que sea resistente a dicha especie de plaga de insectos; (iii) autopolinizar dicha primera planta de progenie, produciendo así una pluralidad de segundas plantas de progenie; (iv) autopolinizar repetidamente dicha progenie para 1 , 2, 3, 4, o 5 generaciones más; y (v) seleccionar de cualquiera de las plantas de la progenie una planta que sea resistente a la infestación por parte de una especie de plaga de insectos.
24. El método de cualquiera de las reivindicaciones 21-23 en donde las progenies resistentes a insectos se identifican mediante la detección de la presencia de una secuencia de polinucleótidos que codifica un ácido ribonucleico (ARN) interferente, o un ARN interferente, en donde el ARN interferente funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga de insectos, en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 59, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 72, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (¡i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 50, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 57, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 77, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 3 7, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 1 78, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
25. El método de cualquiera de las reivindicaciones 21 -24 en donde la segunda planta adicionalmente comprende un gen heterólogo.
26. El método de la reivindicación 25 en donde el gen heterólogo codifica una proteína tóxica para una especie de plaga de plantas.
27. El método de la reivindicación 26 en donde la proteína se selecciona del grupo que consiste en una patatina, una proteína insecticida de Bacillus thuringiensis, una proteína insecticida de Xenorhabdus, una proteína insecticida de Photorhabdus, una proteína insecticida de Bacillus laterosporus y una proteina insecticida de Bacillus sphaericus.
28. El método de la reivindicación 27 en donde la proteína insecticida Bacillus thuringiensis se selecciona del grupo que consiste en una Cry1 , una Cry3, una TIC851 , una CryET170, una Cry22, una TIC901 , una TIC201 , una TIC407, una TIC417, una proteína insecticida binaria CryET80 y CryET76, una proteína insecticida binaria TIC100 y TIC101 , una combinación de una proteína insecticida ET29 o ET37 con una proteína insecticida TIC810 o TIC812, y una proteína insecticida binaria PS149B1 .
29. El método de la reivindicación 25 en donde el gen heterólogo codifica una proteína que confiere tolerancia a los herbicidas.
30. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18-29 en donde la planta resistente a la infestación por una plaga de insectos se selecciona de algodón, papa, arroz, cañóla, girasol, sorgo, mijo perla, maíz, fresas, soja, alfalfa, tomate, berenjena, pimiento y tabaco.
31. Una planta transgénica producida mediante el método de cualquiera de las reivindicaciones 18-30.
32. Una semilla producida a partir de las plantas de la reivindicación 31.
33. Una semilla híbrida producida por el cruzamiento entre una primera planta endogámica y una segunda planta endogámica distinta en donde al menos una de las plantas endogámicas es una planta transgénica de la reivindicación 31 , y en donde la planta se selecciona de algodón, papa, arroz, cañóla, girasol, sorgo, mijo perla, maíz, fresas, soja, alfalfa, tomate, berenjena, pimiento y tabaco.
34. Un método para producir la semilla híbrida de la reivindicación 33, en donde el cruzamiento comprende las etapas de: (i) plantar las semillas de la primera y segunda plantas endogámicas; (ii) cultivar las semillas de dichas primera y segunda plantas endogámicas en plantas que dan flores; (iii) prevenir la autopolinización de al menos una de la primera o segunda planta endogámica; (iv) permitir que ocurra la polinización cruzada entre la primera y segunda plantas endogámicas; y (v) cosechar semillas en al menos una de la primera o segunda planta endogámica, resultando dichas semillas de dicha polinización cruzada.
35. Un método para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos en un campo de plantas de cultivo, comprendiendo dicho método expresar en dichas plantas una cantidad efectiva de un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 1 57, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 67, 66, 270 a 273, 68, 170, 169, 274 a 277, 72, 173, 278 a 28 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 75, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11, 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 21 7, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 87, 203, 306 a 309, 3 8 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, 0 (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
36. Un polinucleótido aislado que se selecciona del grupo que consiste en: (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) un polinucleótido que comprende al menos 21 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 50, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 68, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 84, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 1 7, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 12 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (¡v) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85 % idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 58, 59, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 402, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, y en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000 nucleótidos de longitud.
37. El polinucleótido de la reivindicación 36 que está comprendido en un constructo de ADN.
38. El constructo de ADN de la reivindicación 37 que es un constructo de expresión, en donde la secuencia de polinucleótidos se encuentra unida de forma operativa a al menos una secuencia reguladora capaz de dirigir la expresión de la secuencia de polinucleótidos.
39. Una célula huésped que comprende el polinucleótido de la reivindicación 36 o el constructo de ADN de la reivindicación 37 o 38.
40. La célula huésped de la reivindicación 39 en donde la célula huésped es una célula procariota o eucariota.
41. La célula huésped de la reivindicación 40 en donde la célula huésped es una célula bacteriana o una célula vegetal.
42. La planta transgénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 -16, la semilla de la reivindicación 17 o reivindicación 32, el método de cualquiera de las reivindicaciones 18-30 o 34-35, la semilla híbrida de la reivindicación 33, el polinucleótido aislado de la reivindicación 36 o reivindicación 37, el constructo de ADN de la reivindicación 38, o la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 39-41 , en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 45, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 . 174. 180, 188, 2. 175. 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 3 3, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 30 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 45, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 1 74, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 35, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 2 8 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
43. La planta transgénica de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, la semilla de la reivindicación 17 o reivindicación 32, el método de cualquiera de las reivindicaciones 18-30 o 34-35, la semilla híbrida de la reivindicación 33, el polinucleótido aislado de la reivindicación 36 o reivindicación 37, el constructo de ADN de la reivindicación 38, o la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 39-41 , en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 56, 57, 254 a 257, 58, 59, 258 a 26 , 60, 61 , 262 a 265, 63, 62, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 51 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273.
44. La planta transgénlca de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, la semilla de la reivindicación 17 o reivindicación 32, el método de cualquiera de las reivindicaciones 18-30 o 34-35, la semilla híbrida de la reivindicación 33, el polinucleótido aislado de la reivindicación 36 o reivindicación 37, el constructo de ADN de la reivindicación 38, o la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 39-41 , en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, o (iii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181, 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 89, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 3 3, 401 , o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 75, 181 , 89, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 , o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 1 , 174, 180, 188, 2, 75, 81 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 401 . RESUMEN La presente invención se refiere al control genético de infestación por parte de especies de plagas de insectos, particularmente a la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de plantas, utilizando moléculas de ácido ribonucleico (ARN) interferente. La invención proporciona plantas transgénicas que (i) expresan o son capaces de expresar ARN interferentes de la invención y (ii) son resistentes a la infestación por parte de especies de plagas de insectos.
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