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MX2011003346A - Anticuerpos humanos de alta afinidad para el receptor il-4 humano. - Google Patents

Anticuerpos humanos de alta afinidad para el receptor il-4 humano.

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Publication number
MX2011003346A
MX2011003346A MX2011003346A MX2011003346A MX2011003346A MX 2011003346 A MX2011003346 A MX 2011003346A MX 2011003346 A MX2011003346 A MX 2011003346A MX 2011003346 A MX2011003346 A MX 2011003346A MX 2011003346 A MX2011003346 A MX 2011003346A
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MX
Mexico
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seq
antibody
amino acid
acid sequence
hil
Prior art date
Application number
MX2011003346A
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English (en)
Inventor
Nicholas J Papadopoulos
Tammy T Huang
Joel H Martin
Jeanette L Fairhurst
Original Assignee
Regeneron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41600767&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2011003346(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Regeneron Pharma filed Critical Regeneron Pharma
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Abstract

Un anticuerpo humano aislado o fragmento de anticuerpo del mismo que se une a receptor alfa de interleucina-4 humano (hlL-4Ra) con alta afinidad (KD), capaz de bloquear la actividad de hlL-4 y hlL-13.

Description

ANTICUERPOS HUMANOS DE ALTA AFINIDAD PARA EL RECEPTOR IL-4 HUMANO FUNDAMENTO La inteiieucina-4 (IL-4, también conocida como factor de estimulación de células B o BSF-1) se caracterizó originariamente por su capacidad para estimular la proliferación de células B en respuesta a bajas concentraciones de anticuerpos dirigidos a inmunoglobulina superficial. La IL-4 ha demostrado que posee un amplio espectro de actividades biológicas, incluyendo la estimulación del crecimiento de células T, mastocitos, granulocitos, megacariocitos y eritrocitos. La IL-4 induce la expresión de las moléculas de complejo principal de histocompatibilidad de clase II en las células B restantes y aumenta la secreción de isotipos IgE e lgG1 por las células B estimuladas.
Las actividades biológicas de la IL-4 están mediadas por receptores superficiales de células, específicos, para IL-4. El receptor alfa de la IL-4 humano (ML-4R) (SEC ID N° 274) se describe, por ejemplo, en la patente de EE.UU. N° 5.599.905, 5.767.065 y 5.840.869. Los anticuerpos para la hlL-4R se describen en la patente de EE.UU. N° 5.717.072 y 7.186.809.
Los métodos para producir anticuerpos útiles como terapéutica humana incluyen generar anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados (véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. 6.949.245). Véase, por ejemplo, la patente internacional WO 94/02602 y la patente de EE.UU. N° 6.596.541 , que describen métodos para generar ratones transgénicos no humanos capaces de producir anticuerpos humanos.
Los métodos para usar anticuerpos para hlL-4R se describen en las patentes de EE.UU. Nos 5.714.146, 5.985.280 y 6.716.587.
Breve sumario de la invención En un primer aspecto, la invención proporciona anticuerpos humanos, preferiblemente anticuerpos humanos recombinantes que se unen específicamente a receptor de la interleucina-4 humano (hlL-4R). Los anticuerpos humanos se caracterizan por unirse a hlL-4R con alta afinidad y por la capacidad para neutralizar la actividad de la hlL-4. En realizaciones específicas, los anticuerpos humanos son capaces de bloquear complejo hlL-13/hlL-13R1 uniéndose a hlL-4R e inhibiendo así la señalización por hll_-13. Los anticuerpos pueden estar en toda su longitud (por ejemplo, un anticuerpo lgG1 o lgG4) o pueden comprender sólo una porción que se una a antígeno (por ejemplo, un fragmento Fab, F{ab')2 o scFv) y se puede modificar para lograr funcionalidad, por ej., para eliminar funciones efectoras residuales (Reddy et al., (2.000) J. Immunol. 164: 1.925-1.933).
En una realización general, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento del mismo que se une a antígeno, que se une específicamente a hlL-4R (SEC ID N° 274) con una KD de aproximadamente 300 pM o menos, cuando se mide por resonancia de plasmón de superficie en un ensayo monomérico o dimérico. En una realización más específica, el anticuerpo o porción del mismo que se une al antígeno presenta una KD de aproximadamente 200 pM o menos, aproximadamente 150 pM o menos, aproximadamente 100 pM o menos o aproximadamente 50 pM. En diversas realizaciones, el anticuerpo o fragmento que se une al antígeno bloquea la actividad de la hlL-4 con un IC50 de aproximadamente 100 pM o menos, cuando se mide por el bioensayo de luciferasa. En realizaciones más específicas, el anticuerpo o fragmento que se une al antígeno presenta un IC50 de aproximadamente 50 pM o menos, aproximadamente 30 pM o menos o aproximadamente 25 pM o menos, cuando se mide por bioensayo de luciferasa STAT6. En diversas realizaciones, el anticuerpo o fragmento que se une al antígeno bloquea la actividad de la hlL-13 con un IC50 de aproximadamente 100 pM o menos, aproximadamente 90 pM o menos, aproximadamente 50 pM o menos o aproximadamente 20 pM o menos, cuando se mide por el bioensayo de luciferasa STAT6.
En un segundo aspecto, el anticuerpo de la invención comprende una secuencia de región variable de la cadena pesada (HCVR, por sus siglas en inglés) seleccionada del grupo que consiste en la SEC ID N°: 2, 18, 22, 26, 42, 46, 50, 66, 70, 74, 90, 94, 98, 114, 118, 122, 138, 142, 146, 162, 166, 170, 186, 190, 194, 210, 214, 218, 234, 238, 242, 258 y 262 o una secuencia de la misma sustancialmente similar.
En un tercer aspecto, el anticuerpo de la invención comprende una secuencia de región variable de la cadena ligera (LCVR, por sus siglas en inglés) seleccionada del grupo que consiste en la SEC ID N°: 10, 20, 24, 34, 44, 48, 58, 68, 72, 82, 92, 96, 106, 116, 120, 130, 140, 144, 154, 164, 168, 178, 188, 192, 202, 212, 216, 226, 236, 240, 250, 260 y 264 o una secuencia de la misma sustancialmente similar.
En una realización, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la invención comprende pares de secuencias HCVR y LCVR (HCVR/LCVR) seleccionados del grupo que consiste en la SEC ID N°: 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260 y 262/264. En una realización preferida, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende pares de secuencias HCVR/LCVR SEC ID N°: 162/164, 210/212 y 18/20; anticuerpos ejemplares con estos pares de secuencias HCVR/LCVR incluyen los anticuerpos denominados H4H098P (SEC ID Nos. 162/164), H4H083P (SEC ID Nos. 210/212) y H4H095P (SEC ID Nos. 18/20).
En un cuarto aspecto, la invención proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican una HCVR, en la que la molécula de ácido nucleico es una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 1 , 17, 21, 25, 41 , 45, 49, 65, 69, 73, 89, 93, 97, 113, 117, 121 , 137, 141 , 145, 161 , 165, 169, 185, 189, 193, 209, 213, 217, 233, 237, 241, 257 y 261 o una secuencia sustancialmente idéntica con una homología de al menos 95%, de la misma.
En un quinto aspecto, la invención proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican una LCVR, en la que la molécula de ácido nucleico es una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 9, 19, 23, 33, 43, 47, 57, 67, 71 , 81 , 91 , 95, 105, 115, 119, 129, 139, 143, 153, 163, 167, 177, 187, 191 , 201, 211 , 215, 225, 235, 239, 249, 259 y 263 o una secuencia sustancialmente idéntica con una homología de al menos 95% de la misma.
En una realización, el anticuerpo de la invención comprende una HCVR y LCVR codificadas por una pareja de secuencias de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 1/9, 17/19, 21/22, 25/33, 41/43, 45/47, 49/57, 65/67, 69/71 , 73/81, 89/91 , 93/95, 97/105, 113/115, 117/119, 121/129, 137/139, 141/143, 145/153, 161/163, 165/167, 169/177, 185/187, 189/191, 193/201 , 209/211 , 213/215, 217/225, 233/235, 237/239, 241/249, 257/259 y 261/263. En una realización preferida, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende secuencias HCVR/LCVR codificadas por secuencias de ácidos nucleicos seleccionadas de SEC ID N°: 161/163, 209/211 y 17/19. En una realización incluso más preferida, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende HCVR/LCVR codificada por secuencias de ácidos nucleicos, SEC ID N° 161/163.
En un sexto aspecto, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento que se une al antígeno que comprende una HCDR3 y una LCDR3, en la que el dominio de HCDR3 es seleccionado del grupo que consiste en SEC ID N°: 8, 32, 56, 80, 104, 128, 152, 176, 200, 224 y 248 y el dominio de LCDR3 es seleccionado del grupo que consiste en SEC ID N°: 16, 40, 64, 88, 112, 136, 160, 184, 208, 232 y 256. En una realización preferida, las secuencias HCDR3/LCDR3 son SEC ID N°: 152/160, 8/16 ó 200/208. En una realización incluso más preferida, las secuencias HCDR3 y LCDR3 son SEC ID N° 152 y 160.
En una realización más, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende además una secuencia HCDR1 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 4, 28, 52, 76, 100, 124, 148, 172, 196, 220 y 244 o una secuencia sustancialmente similar de la misma; una secuencia HCDR2 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 6, 30, 54, 78, 102, 126, 150, 174, 198, 222 y 246 o una secuencia sustancialmente similar de la misma; una secuencia HCDR3 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 8, 32, 56, 80, 104, 128, 152, 176, 200, 224 y 248 o una secuencia sustancialmente similar de la misma; una secuencia LCDR1 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 12, 36, 60, 84, 108, 132, 156, 180, 204, 228 y 252 o una secuencia sustancialmente similar de la misma; una secuencia LCDR2 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 14, 38, 62, 86, 110, 134, 158, 182, 206, 230 y 252 o una secuencia sustancialmente similar de la misma y una secuencia LCDR3 seleccionada del grupo que consiste en la SEC ID N°: 16, 40, 64, 88, 112, 136, 160, 184, 208, 232 y 256 o una secuencia sustancialmente similar de la misma. En una realización preferida, el anticuerpo o fragmento que se une a antígeno comprende secuencias HCDR SEC ID N°: 148, 150 y 152 y secuencias LCDR SEC ID N°: 156, 158 y 160; secuencias HCDR SEC ID N°: 4, 6 y 8 y secuencias LCDR SEC ID N°: 12, 14 y 16 y secuencias HCDR SEC ID N°: 196, 198 y 200 y secuencias LCDR SEC ID N°: 204, 206 y 208.
Según ciertas realizaciones, la presente invención proporciona anticuerpos anti-hlL-4R o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que tienen secuencias HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 seleccionadas del grupo que consiste en: SED ID Nos. 148/150/152/156/158/160; 4/6/8/12/14/16 y 196/198/200/204/206/208. Anticuerpos ejemplares que tienen estas secuencias HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 incluyen los anticuerpos denominados H4H098P (SEC ID Nos.148/150/152/156/158/160), H4H083P (SEC ID Nos. 196/198/200/204/206/208) y H4H095P (SEC ID Nos. 4/6/8/12/14/16).
En un séptimo aspecto, la invención caracteriza un anticuerpo humano o fragmento de anticuerpo que comprende una HCDR3 y LCDR3, en la que la HCDR3 está codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 7, 31 , 55, 79, 103, 127, 151 , 175, 199, 223 y 247 o una secuencia sustancialmente idéntica con al menos una homología del 95% de la misma y la LCDR3 está codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 15, 39, 63, 87, 111 , 135, 159, 183, 207, 231 y 255 o una secuencia sustancialmente idéntica con una homología de al menos 95% de la misma.
En una realización más, la invención caracteriza un anticuerpo humano o fragmento de anticuerpo que comprende un dominio de HCDR1 codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 3, 27, 51 , 75, 99, 123, 147, 171 , 195, 219 y 243 o una secuencia sustancialmente idéntica con una homología de al menos 95% de la misma; un dominio de HCDR2 codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 5, 29, 53, 77, 101 , 125, 149, 173, 197, 221 y 245 o una secuencia sustancialmente idéntica con una homología de al menos 95% de la misma; un dominio de HCDR3 codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 7, 31 , 55, 79, 103, 127, 151 , 175, 199, 223 y 247 o una secuencia sustancialmente similar con una homología de al menos 95% de la misma; un dominio de LCDR1 codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 11 , 35, 59, 83, 107, 131 , 155, 179, 203, 227 y 251 o una secuencia sustancialmente similar con una homología de al menos 95% de la misma; un dominio de LCDR2 codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 13, 37, 61 , 85, 109, 133, 157, 181 , 205, 229 y 253 o una secuencia sustancialmente similar con una homología de al menos 95% de la misma y el dominio de LCDR3 codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 15, 39, 63, 87, 1 11 , 135, 159, 183, 207, 231 y 255 o una secuencia sustancialmente similar con una homología de al menos 95% de la misma. En una realización preferida, el anticuerpo o fragmento que se une al antígeno comprende secuencias HCDR y LCDR codificadas por las secuencias de nucleótidos SEC ID N°: 147, 149, 151 , 155, 157 y 159; 195, 197, 199, 203, 205 y 207 y 3, 5, 7, 11 , 13 y 15.
En una realización específica, el anticuerpo anti-hlL-4R o fragmento que se une a antígeno de la invención, comprende HCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 162 y LCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 164 y se caracteriza por una KD de aproximadamente 100 pM o menos (substrato monomérico) o 70 pM o menos (substrato dimérico); una KD de aproximadamente 160 pM o menos (substrato monomérico) o 40 pM o menos (substrato dimérico) a 25°C y 37°C, respectivamente y un IC5o de aproximadamente 10 pM o menos (substrato dímero de 25 pM) o aproximadamente 100 pM o menos (substrato monomérico de 200 pM), que es capaz de bloquear la actividad tanto de hlL-4 como de hlL-13 con un IC50 de aproximadamente 30 pM o menos (cuando se mide por bioensayo) y experimenta reacción cruzada con IL-4R de mono.
En una realización específica, el anticuerpo anti-hlL-4R o fragmento que se une a antígeno de la invención comprende HCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 18 y LCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 20 y se caracteriza por una KD de aproximadamente 450 pM o menos (substrato monomérico o dimérico) y un IC50 de aproximadamente 40 pM o menos (substrato dimérico 25 pM) o aproximadamente 100 pM o menos (substrato monomérico 200 pM), que es capaz de bloquear la actividad tanto de hlL-4 como de hlL-13 con un IC50 de aproximadamente 100 pM o menos (cuando se mide por bioensayo).
En una realización específica, el anticuerpo anti-hlL-4R o fragmento que se une a antígeno de la invención comprende HCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 210 y LCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 212 y se caracteriza por una KD de aproximadamente 50 pM o menos (substrato monomérico) o 30 pM o menos (substrato dimérico); una KD de aproximadamente 200 pM o menos (substrato monomérico) o 40 pM o menos (substrato dimérico) a 25°C y 37°C, respectivamente y un IC50 de aproximadamente 10 pM o menos (substrato dimérico 25 pM) o aproximadamente 90 pM o menos (substrato monomérico 200 pM), que es capaz de bloquear la actividad tanto de hlL-4 como de hlL-13 con un IC50 de aproximadamente 25 pM o menos (cuando se mide por bioensayo) y no experimenta reacción cruzada con IL-4R de mono.
En un octavo aspecto, la invención caracteriza un anticuerpo o fragmento que se une a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a hlL-4R, que comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de cadena pesada y tres de cadena ligera (HCDR1 , HCDR2, HCDR3, LCDR1 , LCDR2, LCDR3), en la que la HCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 265), en la que X1 = Gly; X2 = Phe, X3 =Thr, X4 = Phe; X5 = Asp o Arg; X6 = Asp o Ser; X7 = Tyr y X8 = Ala o Gly; el HCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 -X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 266), en la que X1 = lie o Leu; X2 = Ser, X3 = Gly, Tyr o Arg, X4 = Ser, Asp o Thr; X5 = Gly o Ser; X6 = Gly, Ser o Val; X7 = Ser o Asn y X8 = Thr, Lys o He; el HCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9- X10 - X11 - X12 - X13 - X14 - X15 - X16 - X17- X18 (SEC ID N° 267), en la que X1 = Ala; X2 = Lys, X3 = Asp, Glu o Trp, X4 = Gly o Arg; X5 = Leu, Thr o Arg; X6 = Gly, Arg o Ser; X7 = lie o Gly; X8 = Thr, Phe o Tyr; X9 = lie, Asp o Phe, X10 = Arg, Tyr o Asp, X11 = Pro, Tyr o ausente, X12 = Arg o ausente, X13 = Tyr o ausente, X14 = Tyr o ausente, X15 = Gly o ausente, X16 = Leu o ausente, X17 = Asp o ausente y X18 = Val o ausente; la LCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9- X10 - X11 (SEC ID N° 268), en la que X1 = Gln; X2 = Asp, Ser o Val, X3 = lie o Leu, X4 = Ser, Leu o Asn; X5 = Asn, Tyr o lie, X6 = Trp, Ser o Tyr; X7 = lie o ausente; X8 = Gly o ausente; X9 = Tyr o ausente; X10 = Asn o ausente y X11 = Tyr o ausente; la LCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 (SEC ID N° 269), en la que X1 = Leu, Ala o Val; X2 = Ala o Gly y X3 = Ser y la LCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 (SEC ID N° 270), en la que X1 = Gln o Met, X2 = Gln, X3 = Ala o Tyr, X4 = Leu o Asn; X5 = Gln o Ser, X6 = Thr, Phe o His; X7 = Pro; X8 = Tyr, lie o Trp y X9 = Thr.
En una realización más específica, la HCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 265), en la que X1 = Gly; X2 = Phe, X3 = Thr, X4 = Phe; X5 = Arg, X6 = Asp o Ser; X7 = Tyr y X8 = Ala o Gly; la HCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 266), en la que X1 = He, X2 = Ser, X3 = Gly o Tyr, X4 = Ser o Thr, X5 = Gly, X6 = Gly o Ser, X7 = Asn y X8 = Thr o Lys; la HCDR3, comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 _ ?3 _ ?4 _ ?5 _ ?6 _ ?7 _ ?8 _ ?9 _ ?10 _ ?11 _ ?12 _ ?13 _ ?14 _ ?15 _ ?16 _ ?17 _ X18 (SEC ID N° 267), en la que X1 = Ala, X2 = Lys, X3 = Asp o Glu, X4 = Gly o Arg, X5 = Leu o Arg, X6 = Gly o Ser, X7 = lie o Gly, X8 = Thr o Phe, X9 = lie o Asp, X10 = Arg o Tyr, X11 = Pro o ausente, X12 = Arg o ausente, X13 = Tyr o ausente, X14 = Tyr o ausente, X15 = Gly o ausente, X16 = Leu o ausente, X17 = Asp o ausente y X18 = Val o ausente; la LCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9- X10 - X11 (SEC ID N° 268), en la que X1 = Gln, X2 = Ser o Val, X3 = lie o Leu, X4 = Leu o Asn, X5 = Asn o Tyr, X6 = Ser o Tyr; X7 = lie o ausente; X8 = Gly o ausente; X9 = Tyr o ausente; X10 = Asn o ausente y X11 = Tyr o ausente; la LCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 (SEC ID N° 269), en la que X1 = Leu o Ala, X2 = Ala o Gly y X3 = Ser y la LCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 (SEC ID N° 270), en la que X1 = Gln o Met, X2 = Gln, X3 = Ala o Tyr, X4 = Leu o Asn, X5 = Gln o Ser, X6 = Thr o His; X7 = Pro, X8 = Tyr o Trp y X9 = Thr.
En otra realización más específica, la HCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 265), en la que X1 = Gly; X2 = Phe; X3 = Thr; X4 = Phe; X5 = Asp o Arg; X6 = Asp; X7 = Tyr y X8 = Ala; la HCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 266), en la que X1 = lie o Leu, X2 = Ser, X3 = Gly o Arg, X4 = Ser o Thr, X5 = Gly o Ser, X6 = Gly o Val, X7 = Ser o Asn y X8 = Thr o lie; el HCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula ?1 - ?2 - ?3 - ?4 - ?5 - ?6 - ?7 _ ?8 _ ?9- ?10 - ?1 - X12 - X 3 - X 4 - X15 - X16 - X17 - X18 (SEC ID N° 267), en la que X1 = Ala, X2 = Lys, X3 = Asp o Trp, X4 = Gly o Arg, X5 = Leu o.Thr, X6 = Arg o Ser, X7 = Me o Gly, X8 = Thr o Tyr, X9 = lie o Phe, X10 = Arg o Asp, X11 = Pro, Tyr o ausente, X12 = Arg o ausente, X13 = Tyr o ausente, X14 = Tyr o ausente, X15 = Gly o ausente, X16 = Leu o ausente, X17 = Asp o ausente y X18 = Val o ausente; la LCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 - X10 - X11 (SEC ID N° 268), en la que X1 = Gln, X2 = Asp o Ser, X3 = Me o Leu, X4 = Ser o Leu, X5 = Tyr o lie, X6 = Trp o Ser; X7 = lie o ausente; X8 = Gly o ausente; X9 = Tyr o ausente; X10 = Asn o ausente y X11 = Tyr o ausente; la LCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 (SEC ID N° 269), en la que X1 = Leu o Val, X2 = Ala o Gly y X3 = Ser y la LCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 (SEC ID N° 270), en la que X1 = Gln o Met, X2 = Gln, X3 = Ala, X4 = Leu o Asn, X5 = Gln o Ser, X6 = Thr o Phe, X7 = Pro, X8 = Tyr o lie y X9 = Thr.
En un noveno aspecto, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento que se une a antígeno que comprende las secuencias HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 a partir de un par de HCVR y LCVR, en el que las secuencias HCVR/LCVR se seleccionan del grupo que consiste en la SEC ID N°: 162/164, 210/212 y 18/20. En una realización más específica, las secuencias CDR de cadena pesada y ligera son las contenidas en la HCVR SEC ID N° 162 y LCVR SEC ID N° 164. En otra realización más específica, las secuencias CDR de cadena pesada y ligera son las contenidas en la HCVR SEC ID N° 18 y LCVR SEC ID N° 20. En otra realización más específica, las secuencias CDR de cadena pesada y ligera son las contenidas en la HCVR SEC ID N° 210 y LCVR SEC ID N° 212.
La invención incluye anticuerpos anti-hlL-4R con un patrón de glicosilación modificado. En algunas aplicaciones, puede ser útil la modificación para eliminar sitios de glicosilación no deseables o un anticuerpo carente de resto fucosa presente en la cadena de oligosacárido, por ejemplo, para aumentar la función de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC, por sus siglas en inglés) (véase Shield et al., (2.002) JBC 277: 26.733). En otras aplicaciones, la modificación de una galactosilación se puede hacer para modificar la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC).
En un décimo aspecto, la invención proporciona vectores de expresión recombinantes que soportan las moléculas de ácido nucleico de la invención y las células huésped en que se han incluido tales vectores, como son los métodos para preparar los anticuerpos o fragmentos que se unen a antígeno de la invención, obtenidos por cultivo de las células huésped de la invención. La célula huésped puede ser una célula procariota o eucariota, preferiblemente la célula huésped es una célula E. Coli o una célula de mamífero, tal como una célula CHO.
En un undécimo aspecto, la invención caracteriza una composición que comprende un anticuerpo humano recombinante que se une específicamente a hlL-4R y un portador aceptable.
En un duodécimo aspecto, la invención caracteriza métodos para inhibir la actividad de hlL-4 usando un anticuerpo o porción del mismo que se une a antígeno, de la invención. En realizaciones específicas, los anticuerpos de la invención también bloquean el complejo hlL-13/hlL-13R1 que se une a hlL-4R. En una realización, el método comprende poner en contacto hlL-4R con el anticuerpo de la invención o porción del mismo que se une a antígeno, de manera que se inhiba la actividad de hlL-4 o hlL-4/hlL-13. En otra realización, el método comprende administrar un anticuerpo de la invención o porción del mismo que se une a antígeno, a un individuo humano que padezca un trastorno que se alivie por inhibición de la actividad de hlL-4 o hll_-4/hll_-13. El trastorno tratado es cualquier enfermedad o afección que se mejore, se alivie, se inhiba o se evite por eliminación, inhibición o reducción de la actividad de hlL-4 o hlL-4/hlL-13.
Los trastornos relacionados con IL-4 que se tratan por los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo de la invención incluyen, por ejemplo, reumatismo articular (incluyendo artritis septicémica), dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, trastornos pulmonares tales como asma leve, moderada o grave, trastornos inflamatorios tales como enfermedad del intestino inflamado, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocítica, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Graves-Basedow, preeclampsia, síndrome de Sjogren, síndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolítica autoinmunitaria, esófago de Barrett, uveítis autoinmunitaria, tuberculosis y nefrosis.
Otros objetos y ventajas llegarán a ser evidentes a partir de la revisión de la consiguiente descripción detallada.
Descripción detallada Antes de que se describan los presentes métodos, se debe entender que esta invención no está limitada a métodos particulares y las condiciones experimentales descritas, ya que tales métodos y condiciones pueden variar. También se debe entender que la terminología usada en la presente memoria tiene por finalidad describir sólo realizaciones particulares y no se desea que sea limitante, puesto que el alcance de la presente invención sólo estará limitado por las reivindicaciones adjuntas.
A menos que se defina de otro modo, toda la terminología técnica y científica usada en la presente memoria tiene el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la materia al que pertenezca esta invención. Aunque se pueden usar en la práctica o en el ensayo de la presente invención, métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria, ahora se describen los métodos y materiales preferidos.
Definiciones Se desea que la terminología (IL4R humano" (hlL-4R), como se usa en la presente memoria, se refiera a un receptor de citocina humana que se una específicamente a interleucina-4 (IL-4), IL-4Ra (SEC ID N° 274). La terminología (interleucina-13 humana" (hlL-13) se refiere a una citocina que se une específicamente a receptor de IL-13 y "complejo hlL-13/hlL-13R1 " se refiere al complejo formado por hlL-13 que se une a complejo hlL-13R1 , complejo que se une a receptor de hlL-4 para iniciar actividad biológica.
Se desea que la terminología "anticuerpo", como se usa en la presente memoria, se refiera a moléculas de inmunoglobulina que comprendan cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por puentes disulfuro. Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (HCVR o VH) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios, CH1 , CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (LCVR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende un dominio (CL1). Las regiones VH y VL se pueden subdividir además en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones entramadas (FR, por sus siglas en inglés). Cada VH y VL consta de tres CDR y cuatro FR, dispuestas a partir de amino terminal a carboxi terminal en el orden siguiente: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
La terminología "porción que se une a antígeno" de un anticuerpo (o simplemente "porción de anticuerpo" o "fragmento de anticuerpo"), como se usa en la presente memoria, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad para unirse específicamente a un antígeno (por ej., hlL-4R). Se ha demostrado que la función de unión a antígeno de un anticuerpo se puede llevar a cabo por fragmentos de un anticuerpo de tamaño natural. Ejemplos de fragmentos que se unen, incluidos en la terminología "porción que se une a antígeno" de un anticuerpo, incluyen: (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consta de los dominios VL, VH, CL1 y CH1 ; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos F(ab)' unidos por un puente disulfuro en la región de bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1 ; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un único brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1.989) Nature 241 : 544-546), que consiste en un dominio VH y (vi) un CDR. Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, están codificados por genes independientes, pueden unirse, usando métodos recombinantes, por un ligador sintético que les permite que se haga como una única cadena contigua en que las regiones VL y VH se hacen pareja para formar moléculas monovalentes (conocidas como única cadena Fv (scFv, por sus siglas en inglés); véase por ej., Bird et al., (1.988) Science 242: 423-426 y Huston et al., (1.988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85: 5.879-5.883. También se desea que tales anticuerpos de única cadena estén incluidos en la terminología "porción que se une a antígeno" de un anticuerpo. También están incluidas otras formas de anticuerpos de única cadena, tales como diacuerpos, (véase por ej., Holliger et al., (1.993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6.444-6.448).
Se desea que un anticuerpo "neutralizante" o "bloqueante", como se usa en la presente memoria, se refiera a un anticuerpo cuya unión a hlL-4R dé como resultado la inhibición de la actividad biológica de hlL-4 y/o hll_-13. Esta inhibición de la actividad biológica de hlL-4 y/o IL-13 se puede evaluar midiendo uno o más indicadores de actividad biológica de hlL-4 y/o hlL-13 conocidos en la técnica, tal como la activación celular inducida por hlL-4 y/o IL-13 y hlL-4 que se une a hlL-4R (véanse ejemplos a continuación).
Una "CDR" o región que determina la complementariedad es una región de hipervariabilidad intercalada en regiones que están más conservadas, denominadas "regiones entramadas" (FR). En diferentes realizaciones del anticuerpo anti-hlL-4R o fragmento de la invención, las FR pueden ser idénticas a las secuencias germinales humanas o se pueden modificar de forma natural o de forma artificial.
La terminología "resonancia de plasmón de superficie", como se usa en la presente memoria, se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de interacciones en tiempo real por detección de modificaciones en las concentraciones de proteínas en una matriz biosensora, por ejemplo usando el sistema BIACORE™ (Pharmacia Biosensor AB).
La terminología "epítopo" es un determinante antigénico que interactúa con un sitio de unión a antígeno específico en la región variable de una molécula de anticuerpo conocida como un paratopo. Un único antígeno puede tener más de un epítopo. Los epítopos pueden ser o conformacionales o lineales. Un epítopo conformacional es producido por aminoácidos yuxtapuestos espacialmente a partir de diferentes segmentos de la cadena polipeptídica lineal. Un epítopo lineal es uno producido por restos aminoácido adyacentes en una cadena polipeptídica. En ciertas circunstancias, un epítopo puede incluir restos de sacáridos, grupos fosforilo o grupos sulfonilo en el antígeno.
La terminología "identidad sustancial" o "sustancialmente idéntico", cuando se refiere a un ácido nucleico o fragmento del mismo, indica que cuando se alinean óptimamente con inserciones o delecciones de nucleótidos apropiadas, con otro ácido nucleico (o su cadena complementaria), hay identidad de secuencias de nucleótidos en al menos aproximadamente 95% y más preferiblemente al menos aproximadamente 96%, 97%, 98% o 99% de las bases nucleótidas, cuando se mide por cualquier algoritmo conocido de identidad de secuencias, tales como FASTA, BLAST o Gap, como se discute a continuación.
Cuando se aplica a polipéptidos, la terminología "similitud sustancial" o "sustancialmente similar" significa que dos secuencias peptídicas, cuando se alinean óptimamente, tal como por los programas GAP o BESTFIT usando pesos de huecos por defecto, comparten una identidad de secuencias de al menos el 95%, incluso más preferiblemente una identidad de secuencias de al menos 98% o 99%. Preferiblemente, las posiciones de los restos que no son idénticos difieren por sustituciones de aminoácidos conservadoras. Una "sustitución de aminoácidos conservadora" es una en que un resto aminoácido es sustituido por otro resto aminoácido con una cadena lateral (grupo R) con propiedades químicas similares (por ej., carga o hidrofobicidad). En general, una sustitución de aminoácidos conservadora no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. En los casos en que dos o más secuencias de aminoácidos difieren entre sí por sustituciones conservadoras, se puede ajustar más el porcentaje de identidad de secuencias o grado de similitud, para corregir la naturaleza conservadora de la sustitución. Los medios para hacer este ajuste son conocidos para los expertos en la materia. Véase, por ej., Pearson (1.994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331. Los ejemplos de grupos de aminoácidos con cadenas laterales, con propiedades químicas similares incluyen: (1) cadenas laterales alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; (2) cadenas laterales hidroxilalifáticas: serina y treonina; (3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; (4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina y triptófano; (5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina e histidina; (6) cadenas laterales ácidas: aspartato y glutamato y (7) las cadenas laterales que contienen azufre son cisteína y metionina. Los grupos de sustitución conservadora de aminoácidos, preferidos, son: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato y asparagina-glutamina. Alternativamente, una sustitución conservadora es cualquier cambio con un valor positivo en la matriz de probabilidad logarítmica PAM250 descrita en Gonnet et al. (1.992) Science 256: 1.443-1.445. Una sustitución "moderadamente conservadora" es cualquier cambio que tenga un valor no negativo en la matriz de probabilidad logarítmica PAM250.
La similitud de secuencias para los polipéptidos, que también se refiere como identidad de secuencias, se mide típicamente usando programas informáticos de análisis de secuencias. Los programas informáticos de análisis de proteínas equiparan secuencias similares usando mediciones de similitud asignada a diversas sustituciones, delecciones y otras modificaciones, incluyendo sustituciones de aminoácidos conservadoras. Por ejemplo, los programas informáticos GCG contienen programas tales como Gap y Bestfit que se pueden usar con parámetros por defecto para determinar la homología de secuencias o identidad de secuencias entre polipéptidos estrechamente relacionados tales como polipéptidos homólogos a partir de diferentes especies de organismos o entre una proteína de cepa natural y una muteína de la misma. Véase, por ej., GCG Versión 6.1. También se pueden comparar secuencias polipeptídicas usando FASTA, usando parámetros por defecto o recomendados, un programa en GCG Versión 6.1 FASTA (por ej., FASTA2 y FASTA3), proporciona alineaciones y porcentaje de identidad de secuencias de las regiones del mejor solapamiento entre las secuencias de consulta y de búsqueda (Pearson (2.000) supra). Otro algoritmo preferido cuando se compara una secuencia de la invención con una base de datos que contiene un gran número de secuencias de diferentes organismos es el programa de ordenador BLAST, especialmente BLASTP o TBLASTN, usando parámetros por defecto. Véase, por ej., Altschul et al. (1.990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 y Altschul et al. (1.997) Nucleic Acids Res. 25: 3.389-402.
Preparación de Anticuerpos Humanos Los métodos para generar anticuerpos humanos incluyen los descritos, por ejemplo, en la patente de EE.UU. 6.596.541 , Green et al., (1.994) Nature Genetics 7: 13-21), la patente de EE.UU. 5.545.807, la patente de EE.UU. 6.787.637.
Los roedores pueden inmunizarse por cualquier método conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Harlow y Lañe (1.988) Antibodies: A Laboratory Manual 1.988 Cold Spring Harbor Laboratory; Malik y Lillehoj (1.994) Antibody Techniques, Academic Press, CA). Los anticuerpos de la invención se preparan preferiblemente con el uso de tecnología VELOCIMMUNE™ (patente de EE.UU. 6.596.541). Un ratón transgénico en que se reemplazan las regiones variables de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina endógena, con las correspondientes regiones variables humanas se estimula con el antígeno de interés y se recuperan células linfáticas (tales como células B) de los ratones que expresan anticuerpos. Las células linfáticas se pueden fusionar con una línea celular de mieloma para preparar líneas celulares de hibridoma inmortal y se identifican sistemáticamente tales líneas celulares de hibridomas y se seleccionan para identificar las líneas celulares de hibridomas que producen anticuerpos específicos para el antígeno de interés. Se puede aislar el ADN que codifica las regiones variables de la cadena pesada y de la cadena ligera y unir a regiones constantes isotípicas deseables de la cadena pesada y de la cadena ligera. Tal proteína anticuerpo se puede producir en una célula, tal como una célula CHO. Alternativamente, el ADN que codifica los anticuerpos quiméricos específicos del antígeno o las regiones variables de las cadenas ligera y pesada se puede aislar directamente de linfocitos específicos del antígeno.
Se aisla el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo y se une de manera operable al ADN que codifica las regiones constantes de cadena pesada y ligera, humanas. El ADN se expresa entonces en una célula capaz de expresar el anticuerpo completamente humano. En una realización específica, la célula es una célula CHO.
Los anticuerpos pueden ser terapéuticamente útiles para bloquear una interacción ligando-receptor o inhibir la interacción del componente receptor más bien que por destruir células por fijación de complemento (citotoxicidad dependiente de complemento) (CDC) y participación de la citotoxicidad mediada por células dependientes de los anticuerpos (ADCC, por sus siglas en inglés). La región constante de un anticuerpo es importante por la capacidad de un anticuerpo para fijar complemento e intervenir como mediadora de la citotoxicidad dependiente de las células. Así, el isotipo de un anticuerpo se puede seleccionar sobre la base de si es deseable que el anticuerpo intervenga como mediador de la citotoxicidad.
Las inmunoglobulinas humanas pueden existir en dos formas que están asociadas con la heterogeneidad de bisagra. En una forma, una molécula de inmunoglobulina comprende una construcción de cuatro cadenas, estable, de aproximadamente 150-160 kDa en que los dímeros se soportan entre sí por un puente disulfuro de cadena pesada, entre cadenas. En una segunda forma, los dímeros no están unidos mediante puentes disulfuro entre cadenas y se forma una molécula de aproximadamente 75-80 kDa compuesta por una cadena ligera y pesada acoplada de manera covalente (mitad anticuerpo). Estas formas son sumamente difíciles de separar, incluso después de purificación por afinidad. La frecuencia de presentación de la segunda forma en diversos isotipos IgG intactos se debe a, pero no está limitada a, diferencias estructurales asociadas con el isotipo de la región de bisagra del anticuerpo. De hecho, una única sustitución de aminoácidos en la región de bisagra de la bisagra de lgG4 humano puede reducir de manera significativa la aparición de la segunda forma (Angal et al., (1.993) Molecular Immunology 30: 105) a niveles observados típicamente usando una bisagra de lgG1 humano. La invención instantánea incluye anticuerpos con una o más mutaciones en la región CH2 o CH3, de bisagra, que pueden ser deseables, por ejemplo, en producción, para mejorar el rendimiento de la forma de anticuerpo deseada.
Inicialmente, los anticuerpos quiméricos de alta afinidad se aislan con una región variable humana y una región constante de ratón. Como se describe a continuación, los anticuerpos se caracterizan y se seleccionan para características deseables, incluyendo afinidad de unión a hlL-4R, capacidad para bloquear la unión de hlL-4 a hlL-4R y/o selectividad para la proteína humana. Las regiones constantes de ratón se reemplazan con regiones constantes humanas, deseadas, para generar los anticuerpos completamente humanos de la invención, por ejemplo lgG4 o lgG1 de cepa natural o modificados (por ejemplo, SEC ID N°: 271 , 272, 273). Aunque la región constante seleccionada puede variar de acuerdo con el uso específico, las características de unión a antígeno de alta afinidad y de especificidad del objetivo residen en la región variable.
Cartografía de Epítopos y Tecnologías Relacionadas Para identificar sistemáticamente a los anticuerpos que se unen a un epítopo particular, se puede llevar a cabo un ensayo de bloqueo cruzado de rutina tal como el descrito en Harlow and Lañe supra. Otros métodos incluyen transferencias peptídicas, mutantes, en la exploración con escáner de alanina (Reineke (2.004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63) o análisis de escisión peptídica. Además, se pueden emplear métodos tales como escisión de epítopos, extracción de epítopos y modificación química de antígenos (Tomer (2.000) Protein Science 9: 487-496).
Perfil Favorecido por Modificación (MAP), también conocido como Perfil de Anticuerpos basado en la Estructura del Antígeno (ASAP, por sus siglas en inglés) es un método que clasifica grandes números de anticuerpos monoclonales (los mAb) dirigidos contra el mismo antígeno según las similitudes del perfil de la unión de cada anticuerpo a superficies de antígenos modificadas químicamente o enzimáticamente (Publicación de Solicitud de Patente de EE.UU. N° 2.004/0101920. Cada categoría puede reflejar un único epítopo o claramente diferente de, o parcialmente superpuesto con, un epítopo representado por otra categoría. Esta tecnología permite el rápido filtrado de anticuerpos genéticamente idénticos, de manera que la caracterización se puede enfocar sobre anticuerpos genéticamente distintos. Cuando se aplica a identificación sistemática de hibridomas, MAP puede facilitar la identificación de clones de hibridomas raros con las características deseadas. Se puede usar MAP para separar los anticuerpos hlL-4R de la invención en grupos de anticuerpos que se unan a diferentes epítopos.
Los agentes útiles para modificar la estructura del antígeno inmovilizado son enzimas tales como, por ejemplo, enzimas proteolíticas y agentes químicos. La proteína antígeno se puede inmovilizar o en superficies de chip biosensor o en perlas de poliestireno. Lo último se puede tratar, por ejemplo, con un ensayo tal como un ensayo de detección LUMINEX™ múltiplex (Luminex Corp., TX). Debido a la capacidad de LUMINEX™ para manipular análisis múltiplex con hasta 100 tipos de perlas diferentes, LUMINEX™ proporciona superficies de antígenos casi ilimitadas con diversas modificaciones, dando como resultado una resolución mejorada en la perfilación de epítopos de anticuerpo durante un ensayo biosensor.
Biespecíficos Los anticuerpos de la presente invención pueden ser monoespecíficos, biespecíficos o multiespecíficos. Los anticuerpos multiespecíficos pueden ser específicos para diferentes epítopos de un polipéptido objetivo o pueden contener dominios de unión a antígeno, específicos, para más de un polipéptido objetivo. Véase, por ej., Tutt et al., (1.991) J. Immunol. 147: 60-69. Los anticuerpos anti-IL-4R humanos se pueden unir a o expresar conjuntamente con otra molécula funcional, por ej., otro péptido o proteína. Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento del mismo se puede unir funcionalmente (por ej., por acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otro modo) a otra u otras más entidades moleculares tales como otro anticuerpo o fragmento de anticuerpo, para producir un anticuerpo biespecífico o uno multiespecífico con una segunda especificidad de unión.
Administración Terapéutica y Formulaciones La invención proporciona composiciones terapéuticas que comprenden los anticuerpos anti-IL-4R o fragmentos de los mismos que se unen a antígeno de la presente invención. La administración de composiciones terapéuticas de acuerdo con la invención se administrará con portadores, excipientes y otros agentes, adecuados, que se incorporen en las formulaciones para proporcionar transferencia, distribución, tolerancia y similares, mejoradas. Se puede encontrar una multitud de formulaciones apropiadas en el formulario conocido por todos los químicos farmacéuticos: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Estas formulaciones incluyen, por ejemplo, polvos, pastas, ungüentos, gelatinas, ceras, aceites, lípidos, vesículas que contienen lípidos (catiónicos o aniónicos) (tales como LIPOFECTIN™), conjugados de ADN, pastas de absorción anhidras, emulsiones de aceite en agua y de agua en aceite, emulsiones carbowax (polietilenglicoles de diversos pesos moleculares), geles semisólidos y mezclas semisólidas que contienen carbowax. Véase también Powell et al., "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1.998) J Pharm Sci Technol 52: 238-311.
La dosis puede variar dependiendo de la edad y el tamaño de un individuo al que se administra, la enfermedad objetivo, afecciones, vía de administración y similares. Cuando se usa el anticuerpo de la presente invención para tratar diversas afecciones y enfermedades asociadas a IL-4R, en un paciente adulto, es ventajoso administrar de manera intravenosa el anticuerpo de la presente invención normalmente en una sola dosis de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente aproximadamente 0,02 a aproximadamente 7, aproximadamente 0,03 a aproximadamente 5 o aproximadamente 0,05 a aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal. Dependiendo de la importancia de la afección, se puede ajustar la frecuencia y la duración del tratamiento.
Se conocen diversos sistemas de distribución y se pueden usar para administrar la composición farmacéutica de la invención, por ej., encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capaces de expresar los virus mutantes, endocitosis mediada por receptores (véase por ej., Wu et al., (1.987) J. Biol. Chem. 262: 4.429-4.432). Los métodos de introducción incluyen, pero no se limitan a, vías intradérmicas, intramusculares, intraperitoneales, intravenosas, subcutáneas, intranasales, epidurales y orales. La composición se puede administrar por cualquier vía conveniente, por ejemplo por infusión intravenosa o inyección intravenosa rápida, por absorción por revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ej., mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.) y se puede administrar junto con otros agentes biológicamente activos. La administración puede ser sistémica o local.
La composición farmacéutica también se puede administrar en una vesícula, en particular un liposoma (véase Langer (1.990) Science 249: 1.527-1.533; Treat et al., (1.989) en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cáncer; López Berestein y Fidler (eds.), Liss, Nueva York, págs. 353-365; Lopez-Berestein, ibid., págs. 317-327; véase en general ibid.
En ciertas situaciones, se puede administrar la composición farmacéutica en un sistema de liberación controlada. En una realización, se puede usar una bomba (véase Langer, supra; Sefton (1.987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201). En otra realización, se pueden usar materiales poliméricos (véase Medical Applications of Controlled Reléase, Langer y Wise (eds.), CRC Pres., Boca Ratón, Florida (1.974). En otra realización más, se puede poner un sistema de liberación controlada cerca del objetivo de la composición, requiriéndose así sólo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ej., Goddson en Medical Applications of Controlled Reléase, supra, vol. 2, págs. 115-138, 1.984). Se discuten otros sistemas de liberación controlada en la revisión por Langer (1.990) Science 249: 1.527-1.533.
Las preparaciones inyectables pueden incluir formas farmacéuticas para inyecciones intravenosas, subcutáneas, intracutáneas e intramusculares, infusiones intravenosas gota a gota, etc. Estas preparaciones inyectables se pueden preparar por métodos conocidos públicamente. Por ejemplo, se pueden preparar preparaciones inyectables, por ej., por disolución, suspensión o emulsión del anticuerpo o su sal descrita anteriormente en un medio acuoso estéril o un medio oleoso usado convencionalmente para inyecciones. Como el medio acuoso para inyecciones, hay por ejemplo, solución salina fisiológica, una disolución isotónica que contiene glucosa y otros agentes auxiliares, etc., que se pueden usar junto con un agente de solubilización apropiado tal como un alcohol (por ej., etanol), un polialcohol (por ej., propilenglicol, polietilenglicol), un tensioactivo no iónico [por ej., polisorbato 80, HCO-50 (aducto de polioxietileno (50 moles) de aceite de ricino hidrogenado], etc. Como medio oleoso, se emplea, por ej., aceite de sésamo, aceite de soja, etc., que se puede usar junto con un agente solubilizante tal como benzoato de bencilo, alcohol bencílico, etc. La inyección así preparada se carga preferiblemente en una ampolla apropiada.
Ventajosamente, las composiciones farmacéuticas para uso oral o parenteral, descritas anteriormente, se preparan en formas farmacéuticas en una sola dosis apta para proveer una dosis de los ingredientes activos. Tales formas farmacéuticas en una sola dosis incluyen, por ejemplo, comprimidos, pildoras, cápsulas, inyecciones (ampollas), supositorios, etc. La cantidad del anticuerpo mencionado contenido es generalmente aproximadamente 5 a 500 mg por forma farmacéutica en una sola dosis; especialmente en la forma de inyección, se prefiere que el anticuerpo mencionado esté contenido en aproximadamente 5 a 100 mg y en aproximadamente 10 a 250 mg para las otras formas farmacéuticas.
Tratamientos simples y asociados. Los anticuerpos y los fragmentos de los anticuerpos de la invención son útiles para tratar enfermedades y trastornos que se mejoren, se inhiban o se alivien por reducción de la actividad de IL-4. Estos trastornos incluyen los caracterizados por la expresión anormal o en exceso de IL-4 o por una respuesta anormal del huésped a la producción de IL-4. Los trastornos relacionados con IL-4 que son tratados por los anticuerpos o fragmentos de los anticuerpos de la, incluyen, por ejemplo, reumatismo articular (incluyendo artritis septicémica), dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, trastornos pulmonares tales como asma (leve, moderada o grave), trastornos inflamatorios tales como enfermedad del intestino inflamado, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocítica, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Graves-Basedow, preeclampsia, síndrome de Sjógren, síndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolítica autoinmunitaria, esófago de Barrett, uveítis autoinmunitaria, tuberculosis, dermatitis atópica, colitis ulcerosa, fibrosis y nefrosis (véase la patente de EE.UU. 7.186.809).
La invención incluye tratamientos asociados en que el anticuerpo anti-IL-4R o fragmento de anticuerpo se administra junto con un segundo agente terapéutico. La administración conjunta y el tratamiento asociado no están limitados a la administración simultánea, sino que incluyen pautas terapéuticas de tratamiento en que se administra un anticuerpo anti-IL-4R o fragmento de anticuerpo al menos una vez durante el curso del tratamiento, que implica la administración de al menos otro agente terapéutico al paciente. Un segundo agente terapéutico puede ser otro antagonista de IL-4 tal como otro anticuerpo/fragmento de anticuerpo o un receptor de citocina soluble, un antagonista de IgE, una medicación antiasmática (corticosteroides, agentes no esteroideos, agonistas beta, antagonistas de leucotrieno, xantinas, fluticasona, salmeterol, albuterol) que se pueden administrar por inhalación u otros medios apropiados. En una realización específica, el anticuerpo IL-4R o fragmento de anticuerpo de la invención se puede administrar con un antagonista de IL-1 , tal como rilonacept o un antagonista de IL-13. El segundo agente puede incluir uno o más antagonistas de los receptores de leucotrieno para tratar trastornos tales como enfermedades inflamatorias alérgicas, por ej., asma y alergias. Los ejemplos de antagonistas de los receptores de leucotrieno incluyen, pero no se limitan a, montelukast, pranlukast y zafirlukast. El segundo agente puede incluir un inhibidor de citocina tal como uno o más de un TNF (etanercept, ENBREL™), antagonista de IL-9, IL-5 o IL-17.
La presente invención también incluye el uso de cualquier fragmento de unión a anticuerpo anti-IL-4R o a antígeno descrito en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno, en el que la enfermedad o trastorno mejora, se alivia o se inhibe por eliminación, inhibición o reducción de actividad de interleucina-4 humana (hlL-4). Ejemplos de tales enfermedades o trastornos incluyen, por ejemplo, reumatismo articular, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, trastornos pulmonares, asma, trastornos inflamatorios, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocítica, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Graves, preeclampsia, síndrome de Sjógren, síndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolítica autoinmunitaria, esófago de Barrett, uveítis autoinmunitaria, tuberculosis, nefrosis, dermatitis atópica y asma.
Ejemplos Se presentan los siguientes ejemplos para proporcionar a los expertos en la materia una exposición y descripción completa de cómo preparar y usar los métodos y las composiciones de la invención y no se desea que limiten el alcance de lo que los autores consideran como su invención. Se han hecho esfuerzos para asegurar la precisión con respecto a los números usados (por ej., cantidades, temperatura, etc.) pero se deberían justificar algunos errores experimentales y desviaciones. A menos que se indique de otro modo, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio, la temperatura es en grados centígrados y la presión es o está cerca de la atmosférica.
Ejemplo 1. Generación de Anticuerpos Humanos para Receptor de IL-4 Humano.
Se inmunizaron ratones VELOCIMMUNE™ (Regeneran Pharmaceuticals, Inc.; patente de EE.UU. 6.596.541 ) con IL-4R humano (hlL-4R, SEC ID N° 274) o una combinación de hlL-4R y proteína de IL-4R (mfll_-4R, SEC ID N° 275) o ADN, de mono {Macaca fascicularis). Para obtener una respuesta inmunitaria óptima, se estimularon con posterioridad los animales cada 3-4 semanas y se obtuvo sangre 10 días después de cada estimulación para valorar la progresión de la respuesta del anti-antígeno.
Cuando los ratones alcanzaron la respuesta inmunitaria máxima, se recogieron células B que expresan anticuerpos y se fusionaron con células de mieloma de ratón para formar hibridomas. Alternativamente, se aislaron directamente anticuerpos específicos de antígenos de las células B sin fusión a células de mieloma, como se describe en la Publicación de Patente de EE.UU. 2007/0280945A1 , incorporada específicamente en la presente memoria como referencia en su totalidad. Se establecieron líneas celulares CHO que expresan el anticuerpo recombinante, estables, a partir de los recombinantes apropiados aislados. Se seleccionaron anticuerpos monoclonales funcionalmente deseables por evaluación de medios condicionados de los hibridomas o células transinfectadas por especificidad, afinidad de unión a antígeno y potencia en el bloqueo de la unión de IL-4 a hlL-4R (descrito a continuación).
Se obtuvieron diversos anticuerpos anti-hlL-4R por los métodos anteriores incluyendo los anticuerpos ejemplares denominados H4H083P, H4H094P y H4H095P, H4H098P Y H4H099P. Estos anticuerpos anti-hlL-4R ejemplares y sus propiedades biológicas se describen con más detalle en los siguientes Ejemplos.
Ejemplo 2. Determinación de la Afinidad de la Unión a Antígeno.
La afinidad de unión (KD) de los anticuerpos seleccionados con respecto a hlL-4R o a 25°C o a 37°C, se determinó usando un ensayo de resonancia de plasmón de superficie de biosensor en tiempo real (BIACORE™ 2000). En pocas palabras, se capturó un anticuerpo en una superficie de anticuerpo policlonal anti-hFc de cabra, creado por acoplamiento directo a un chip BIACORE™ para formar una superficie de anticuerpo capturado. Se inyectaron diversas concentraciones (oscilando desde 50 nM a 12,5 nM) de hlL-4R monomérico (Sistemas R&D) o hlL-4R-mFc dimérico sobre la superficie del anticuerpo capturado a 10 µ?/min, durante 2,5 min o a 25°C o a 37°C. La unión de antígeno a anticuerpo y la disociación del complejo unido se siguieron en tiempo real. Las constantes de disociación de equilibrio (KD) y las constantes de velocidad de disociación se determinaron por los mejores análisis cinéticos usando programas informáticos de evaluación BIA. También se usaron programas informáticos de evaluación BIA para calcular la semivida de disociación de complejo antígeno/anticuerpo (T /2). Los resultados se muestran en la Tabla 1. NU: No se observó unión anticuerpo-antígeno en la condición experimental. Control: un anticuerpo anti-IL-4R completamente humano (Patente de EE.UU. N° 7.186.809; SEC ID N° 10 y 12).
Tabla 1 Anticuerpo 25°C 37°C Monomérico Dimérico Monomérico Dimérico KD (pM) T„2 (min) KD (pM) Ti,2 (min) KD (pM) T1B(mln) KD (pM) Ti 2 (m¡n) Control 1.100 18 94 186 3.970 4 114 158 H4H083P 48 361 28 245 183 87 38,1 163 H4H094P NU - NU - NU - NU - H4H095P 274 131 302 156 437 49 314 116 H4H098P 94,1 243 67,6 237 157 129 38,8 158 H4H099P NU - NU - NU - NU - La afinidad de la unión (KD) de los anticuerpos seleccionados con respecto a IL-4R de mono (Macaca fascicularís) (mflL-4R) o a 25°C o a 37°C, también se determinó usando un ensayo de resonancia de plasmón superficial de biosensor a tiempo real descrito anteriormente con diversas concentraciones (oscilando desde 100 nM a 25 nM) de mflL-4R-myc-myc-his monomérico (mfll_-4R-mmh) o mfll_-4R-mFc dimérico. Sólo el anticuerpo H4H098P fue capaz de unirse a mflL-4R tanto monomérico como dimérico, a 25°C, con KD de 552 nM y 9,08 nM, respectivamente. Además, el anticuerpo H4H098P también se une a mfll_-4R dimérico a 37°C, con un KD de 24,3 nM. H4H083P tuvo una unión muy débil a mfll_-4R dimérico.
También se evaluó la afinidad por la unión anticuerpo - antígeno usando un ensayo de competición de disoluciones basado en ELISA. En pocas palabras, primero se recubrió una placa MAXISORP™ de 96 pozos, con 5 µ9/?t?? de avidina durante la noche, seguido por bloqueo BSA durante 1 h. Después se incubó la placa recubierta de avidina con 250 ng/ml de biotina-hlL4 durante 2 h. Se usó la placa para medir o hlL-4R-mFc libre (hlL-4R dimérico) o hlL-4R-myc-myc-his libre (hlL4R-mmh, hlL4R monomérico) en las disoluciones de muestras de valoración de anticuerpos. Para preparar la muestra para valoración de anticuerpos, se mezcló previamente una cantidad constante o 25 pM de hlL-4R-mFc o 200 pM de hlL-4R-mmh, con cantidades variables de anticuerpo, oscilando desde 0 a aproximadamente 10 nM en diluciones en serie, seguido por 1 h de incubación a temperatura ambiente para permitir que la unión anticuerpo - antígeno alcanzara el equilibrio. Se transfirieron después las disoluciones de las muestras equilibradas a las placas recubiertas de hlL-4 para la medición de o hlL-4R-mFc libre o de hlL-4R-mmh libre. Después de la unión de 1 h, se lavó la placa y se detectó hlL-4R- mFc unido usando o un anticuerpo policlonal anti-mFc de ratón conjugado a HRP o un anticuerpo policlonal anti-myc de cabra conjugado a HRP. Se determinaron los valores IC5o (Tabla 2).
Tabla 2 También se usó el ensayo de competición de disoluciones basado en ELISA para determinar la reactividad cruzada de los anticuerpos para IL-4R de mono. El anticuerpo H4H098P presenta un IC50 para mflL-4R-mFc de 300 pM y un IC50 para mflL-4R-mmh de 20 nM.
Ejemplo 3. Neutralización de Efecto Biológico de hlL-4 y hlL-13 In Vitro Se desarrolló un bioensayo para determinar la capacidad de los anticuerpos de anti-hlL-4R purificados para neutralizar la función celular mediada por hlL-4R in vitro usando una línea celular de HK293 de ingeniería que contiene STAT6 humano y un indicador de luciferasa STAT6. Se determinó la inhibición de la actividad de la luciferasa inducible por hlL-4R como sigue: Se sembraron células en placas de 96 pozos a 1x104 células/pozo en medios y se incubaron durante la noche a 37°C, CO2 al 5%. Se añadieron las proteínas anticuerpo oscilando desde 0 a 20 nM en diluciones en serie, a las células junto con o hlL-4 de 10 pM o 40 pM de hlL-13. Después se incubaron las células a 37°C, C02 al 5% durante 6 h. Se midió la extensión de la respuesta celular en un ensayo de luciferasa (Promega Biotech). Los resultados se muestran en la Tabla 3. NU: no se bloqueó la actividad de la luciferasa en la condición experimental descrita anteriormente. Además, H4H098P fue capaz de bloquear la función celular mediada por mflL-4R en presencia de 360 fM de mflL-4 con un IC50 de 150 nM.
Tabla 3 Anticuerpo IC50 (pM) 10 pM hlL-4 40 pM hlL-13 Control 47 38 H4H083P 25 19 H4H094P NU NU H4H095P 98 86 H4H098P 27 25 H4H099P NU 11.000

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo o fragmento del mismo que se une a antígeno, que se une específicamente a receptor de interleucina-4 humano (hlL-4R) (SEC ID N° 274), que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) y una región variable de cadena ligera (LCVR), en el que el anticuerpo o fragmento que se une a antígeno comprende: (a) una HCVR con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 162 y una LCVR con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 164, caracterizada por una afinidad para hlL-4R (KD) de aproximadamente 100 pM o menos; (b) una HCVR con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 18 y una LCVR con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 20, caracterizada por una afinidad para hlL-4R (KD) de aproximadamente 300 pM o menos o (c) una HCVR con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 210 y una LCVR con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 212, caracterizada por una afinidad para hlL-4R (KD) de aproximadamente 50 pM o menos.
2. Un anticuerpo o fragmento del mismo que se une a antígeno, que se une específicamente a receptor de interleucina-4 humano (hlL-4R) (SEC ID N° 274), que comprende una región 3 que determina la complementariedad de cadena pesada (HCDR3) y una región 3 que determina la complementariedad de cadena ligera (LCDR3), en las que el anticuerpo o fragmento que se une a antígeno, comprende: (a) una HCDR3 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 152 y una LCDR3 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 160; (b) una HCDR3 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 8 y una LCDR3 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 16; o (c) una HCDR3 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 200 y una LCDR3 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N° 208;
3. Un anticuerpo o fragmento que se une a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a IL-4R humano, que comprende: región 1 (HCDR1), 2 (HCDR2), 3 (HCDR3) que determina la complementariedad de cadena pesada y región 1 (LCDR1), 2 (LCDR2), 3 (LCDR3) que determina la complementariedad de cadena ligera, en las que: HCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 -X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 265), en la que X1 = Gly; X2 = Phe, X3 = Thr, X4 = Phe; X5 = Asp o Arg; X6 = Asp o Ser; X7 = Tyr y X8 = Ala o Gly; HCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 -X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEC ID N° 266), en la que X1 = lie o Leu; X2 = Ser, X3 = Gly, Tyr o Arg, X4 = Ser, Asp o Thr; X5 = Gly o Ser; X6 = Gly, Ser o Val; X7 = Ser o Asn y X8 = Thr, Lys o Me; HCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - ?3 _ ?4 _ ?5 _ ?6 _ ?7 _ ?8 _ ?9 _ ?10 _ ?11 _ ?12 _ ?13 _ ?14 _ ?15 _ ?16 _ ?17 _ ?18 (SEC ID N° 267), en la que X1 = Ala; X2 = Lys, X3 = Asp, Glu o Trp, X4 = Gly o Arg; X5 = Leu, Thr o Arg; X6 = Gly, Arg o Ser; X7 = lie o Gly; X8 = Thr, Phe o Tyr; X9 = lie, Asp o Phe, X10 = Arg, Tyr o Asp, X11 = Pro, Tyr o ausente, X12 = Arg o ausente, X13 = Tyr o ausente, X14 = Tyr o ausente, X15 = Gly o ausente, X16 = Leu o ausente, X17 = Asp o ausente y X18 = Val o ausente; LCDR1 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9- X10 - X11 (SEC ID N° 268), en la que X1 = Gln; X2 = Asp, Ser o Val, X3 = lie o Leu, X4 = Ser, Leu o Asn; X5 = Asn, Tyr o lie, X6 = Trp, Ser o Tyr; X7 = He o ausente; X8 = Gly o ausente; X9 = Tyr o ausente; X10 = Asn o ausente y X11 = Tyr o ausente; LCDR2 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - X3 (SEC ID N° 269), en la que X1 = Leu, Ala o Val; X2 = Ala o Gly y X3 = Ser y LCDR3 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula X1 - X2 - ?3 _ ?4 _ ?5 _ ?6 _ ?7 _ ?8 _ ?9 (SEC ID N° 270), en la que X1 = Gln o Met, X2 = Gln, X3 = Ala o Tyr, X4 = Leu o Asn; X5 = Gln o Ser, X6 = Thr, Phe o His; X7 = Pro; X8 = Tyr, Me o Trp y X = Thr.
4. El anticuerpo o fragmento que se une a antígeno de la reivindicación 3, en el que las secuencias de aminoácidos CDR de cadena pesada y ligera (HCDR1 , HCDR2, HCDR3, LCDR1 , LCDR2, LCDR3), se seleccionan del grupo que consiste en: (a) SEC ID N°: 148, 150, 152, 156, 158, 160; (b) SEC ID N°: 4, 6, 8, 12, 14, 16 y (c) SEC ID N°: 196, 198, 200, 204, 206, 208.
5. Una secuencia de ácidos nucleicos que codifica las secuencias HCVR1 , HCVR2, HCVR3, LCVR1 , LCVR2 y LCVR3 de los fragmentos de unión a anticuerpos o antígenos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
6. Un vector que comprende la secuencia de ácidos nucleicos según la reivindicación 5.
7. Un sistema huésped-vector para la producción de un anticuerpo o fragmento que se une a antígeno de un anticuerpo, que comprende el vector según la reivindicación 6.
8. Un método para producir un anticuerpo o fragmento del mismo que se une a antígeno, que se une específicamente a receptor alfa de interleucina-4 humano (hlL-4R), que comprende cultivo de células del sistema huésped-vector según la reivindicación 7, en condiciones en que se expresa el anticuerpo o fragmento y que se recupera el anticuerpo anti-hlL-4 expresado.
9. El método según la reivindicación 8, en el que la célula huésped es una célula procariota o eucariota.
10. El método según la reivindicación 9, en el que la célula huésped es una célula E. Coli o una célula CHO.
11. Uso de un anticuerpo o fragmento que se une a antígeno como se define por las reivindicaciones 1 2, 3 ó 4, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno, en el que la enfermedad o trastorno, mejora, se alivia o se inhibe por eliminación, inhibición o reducción de actividad de la interleucina-4 humana (hlL-4).
12. El uso según se define en la reivindicación 11 , en el que la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en: reumatismo articular, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostética benigna, trastornos pulmonares, asma, trastornos inflamatorios, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocítica, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Graves, preeclampsia, síndrome de Sjógren, síndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolítica autoinmunitaria, esófago de Barrett, uveítis autoinmunitaria, tuberculosis y nefrosis.
13. El uso según se define en la reivindicación 11 , en el que la enfermedad o trastorno es asma o dermatitis atópica.
14. Un método para tratar una enfermedad o trastorno, en el que la enfermedad o trastorno se mejora, se alivia o se inhibe por eliminación, inhibición o reducción de la actividad de la interleucina-4 (hlL-4) humana, comprendiendo dicho método la administración del anticuerpo o fragmento que se une a antígeno, según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3 ó 4 a un paciente con necesidad del mismo.
15. El método según la reivindicación 14, en el que la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en: reumatismo articular, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, trastornos pulmonares, asma, trastornos inflamatorios, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocítica, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Graves-Basedow, preeclampsia, síndrome de Sjógren, síndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolítica autoinmunitaria, esófago de Barrett, uveítis autoinmunitaria, tuberculosis y nefrosis.
16. El método según la reivindicación 14, en el que la enfermedad o trastorno es asma o dermitis atópica. Resumen Un anticuerpo humano aislado o fragmento de anticuerpo del mismo que se une a receptor alfa de interleucina-4 humano (hlL-4Ra) con alta afinidad (KD), capaz de bloquear la actividad de hlL-4 y hlL-13.
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