MX2008014948A

MX2008014948A - Composicion farmaceutica estable que contiene docetaxel, y un metodo para fabricarla.

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Publication number: MX2008014948A
Application number: MX2008014948A
Authority: MX
Inventors: Jae-Sun Kim; Nam Kyu Lee; Key An Um; Jin Young Lee; Kim Nam Ho; Woo Jae Jang; Joon Gyo Oh; Yoon-Jung Lee; Woong Sik Kim; Sung Jin-Heung
Original assignee: Sk Chemicals Co Ltd
Priority date: 2006-05-22
Filing date: 2007-05-22
Publication date: 2009-02-03
Also published as: MA30501B1; IL195459A0; EA200870559A1; AU2007252371A1; KR100917809B1; EA014071B1; US8791152B2; TNSN08475A1; NZ573202A; JP2009538294A; HK1128874A1; NO20084932L; WO2007136219A1; EP2019664B1; GT200800257A; ZA200809998B; KR20090101145A; CN101484137B; US20090163574A1; CR10485A

Abstract

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica estable para inyección, que contiene docetaxel y a un método para prepararla. Más en particular, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para inyección que contiene docetaxel que tiene mejor estabilidad durante el almacenamiento, que las medicaciones convencionales; que se prepara disolviendo el docetaxel, un compuesto insoluble en agua, en agua destilada, después de mezclarlo con ciclodextrina (CD) y un polímero soluble en agua, tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG) o polovinilpirrolidona (PVP), y liofilizando la mezcla, y a un método para prepararla.

Description

COM POSICIÓN FARMACÉUTICA ESTABLE QU E CONTIEN E DOCETAXEL, Y U N M ÉTODO PARA FABRICARLA Cam po técn ico La presente invención se refiere a una composición farmacéutica estable para inyección , que contiene docetaxel ; y a un método para prepararla . Más en particular, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para inyección que contiene docetaxel , con estabilidad mejorada durante el al macenamiento, en comparación con las medicaciones convencionales, preparadas disolviendo docetaxel , un compuesto insoluble en agua , en agua destilada , después de mezclarlo con ciclodextrina (CD) y un pol ímero soluble en agua , tal como hidroxipropilmetilcel ulosa (H PMC), polietilenglicol (PEG) o polivinilpirrolidona (PVP) y liofilizar la mezcla, y un método para prepararla. La técn ica de antecedentes El docetaxel es un agente anticanceroso, efectivo para tratar cánceres de células no pequeñas de pulmón , mama , ovarios, cabeza y cuello. Se lo puede obtener comercialmente bajo el nombre Taxotere® de Sanofi-Aventis. El docetaxel es un taxoide semisintético altamente lipófilo , pero es casi insoluble en agua . El docetaxel es distribuido actualmente en u n em paque de cartón con ampollas que consiste en una sola dosis de Taxotere que contiene docetaxel disuelto en una ampolleta de polisorbato 80 y una sola dosis de solvente para el Taxotere, que contiene 1 3 por ciento (en peso/peso) de etanol , en una ampolleta ; donde los dos ingredientes anteriores se mezclan entre sí para preparar una premezcla con una solubilidad de 1 0 mg/ml , y se añade luego a una bolsa de infusión que contiene solución salina fisiológica . La solución final para infusión debe tener una concentración de docetaxel q ue va desde 0.3 a 0.9 mg/m L. Si la concentración es superior a 0.9 mg/mL, puede presentarse una precipitación . Adicionalmente, puede ocurrir una reacción hipersensible debido al uso del polisorbato 80 y la presencia de etanol puede provocar reacciones colaterales. WO 98/30205 describe un método para utilizar vitamina E polietilenglicolada (PEGada) como un agente tensioactivo, y US 2004/01 27551 describe un método para usar vitamina E con TPGS (succinato de D-a-tocoferil-polietilengl icol 1 000). Si n embargo , no se obtiene una composición estable que contenga una concentración elevada de docetaxel . La patente coreana No. 31 0839 describe un método para preparar una matriz de polivinilpi rrolidona y mezclarla con etanol anhidro y un solvente, tal como ricinoleato de polioxieti lenglicerol , polisorbato 80, etanol anhidro y polietilenglicol , para obtener una inyección . Sin embargo, esa invención tampoco es ventajosa , ya que están incluidas sustancias que pueden inducir alcoholismo o una reacción de hipersensibilidad (etanol y polisorbato 80). WO 99/24073, presentada en 1 997, describe un método para incrementar la solubilidad del docetaxel en ag ua , usando ciclodextrina en lugar de un agente tensioactivo. Más en particular, se disuelve docetaxel en una cantidad pequeña de etanol , y se añade la solución resultante a una solución al 5 por ciento en dextrosa de acetil-y-ciclodextrina (Ac-y-CD) o hidroxipropilmetil-ß-ciclodextrina (? ?-ß-CD). Luego se eli mina el etanol todo lo que sea posible, mediante evaporación u otro método que sea apropiado. A continuación se lleva a cabo la liofilización para obtener u na composición liofilizada buscada . Una proporción mixta adecuada de docetaxel a ciclodextrina es de 1 :25 a 1 :400, con base en el peso. Una inyección , obtenida diluyendo ulteriormente la composición liofilizada resultante en una solución al 5 por ciento de dextrosa , tiene una concentración de 0.3 a 1 .2 mg/m L, y permite mantener la estabilidad física durante más de 72 horas. Sin embargo, esa invención también tiene el problema de que el etanol usado para disolver el docetaxel puede no ser el iminado, y puede ocurrir precipitación , si la composición l íquida resultante tiene baja concentración de docetaxel . Adicionalmente, puesto que se lleva a cabo la liofilización después de ajustar la concentración de docetaxel de la composición l íq uida a 0.5-1 .25 mg/mL , la sustancia seca tiene un volumen grande, lo que conduce a una producción menor para una sola carga del mismo liofilizador. Además, cuando se disuelve o dil uye para uso la composición liofilizada resultante, su estabilidad física tiende a disminuir y la composición liofilizada resultante no tiene la solubilidad de 1 0 mg/mL, q ue es la solubilidad de la solución de premezcla de Taxotere. En caso de que se prepare una inyección para administración cl ínica como se describió en la patente, disolviéndola a u na concentración de docetaxel de 0.5-1 .25 mg/mL, usando dextrosa al 5 por ciento o solución salina al 0.9 por ciento , se deberá usar aproximadamente 1 50-200 mg de la sustancia , considerando la dosis cl ínica de 1 00 mg/m2. Consecuentemente , se req uiere aproximadamente 1 50 a 200 mL de diluyente, y es muy difícil preparar la inyección requerida . Consecuentemente, sigue habiendo necesidad de desarrollar una nueva preparación farmacéutica , que pueda ofrecer estabilidad durante el almacenamiento y solubilidad mejoradas, en comparación con las de una formulación convencional , y que no requiera de agente solubilizador peligroso , tal como polisorbato o etanol . Descri pción de la invención El problema técn ico Los inventores de la presente completaron la presente invención desarrollando una composición farmacéutica para inyección q ue contenía docetaxel , con solu bilidad y estabilidad mejoradas, en comparación con las de agentes convencionales, combinando docetaxel insoluble en agua con hidroxipropil-ß-ciclodextrina y un pol ímero solu ble en ag ua , tal como hidroxipropil-metilcelulosa (H PMC), polietilenglicol (PEG ) o polivi nilpirrolidona (PVP) en agua destilada , para mejorar la estabilidad del docetaxel en una solución acuosa. Consecuentemente, es un objetivo de la presente invención proveer una composición farmacéutica estable para inyección que contiene docetaxel , y un método para prepararla .

La solución técnica La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para inyección, que contiene docetaxel, con superior estabilidad durante el almacenamiento, que comprende docetaxel, ciclodextrina y un polímero soluble en agua, tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG) o polivinilpirrolidona (PVP). La presente invención se refiere también a un método para preparar una composición farmacéutica para inyección, que contiene docetaxel, con estabilidad superior durante el almacenamiento, que comprende: 1) Mezclar y disolver docetaxel con ciclodextrina y un polímero soluble en agua, seleccionado de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG) o polivinilpirrolidona (PVP) en agua destilada; 2) esterilizar y liofilizar la mezcla resultante para obtener una composición liofilizada; y 3) diluir la composición liofilizada en agua destilada, solución de dextrosa o en una solución salina fisiológica. En lo que sigue se da una descripción detallada de la presente invención. La presente invención se refiere a la preparación de una composición farmacéutica estable para inyección, que comprende docetaxel en alta concentración, disolviendo docetaxel en agua destilada que contiene un polímero soluble en agua, seleccionado de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG) o polivinilpirrolidona (PVP), sin usar aditivos que provoq uen efectos adversos, tales como etanol o polisorbato. El proceso de preparar una composición farmacéutica para inyección que contenga docetaxel , de acuerdo con la presente invención , está descrito detalladamente aqu í, en lo q ue viene a contin uación . En el paso 1 se mezcla el docetaxel con ciclodextrina y un pol ímero solu ble en agua, en agua destilada . De preferencia el docetaxel usado en la presente invención está en forma anhidra o en la forma de un hidrato. Las ciclodextrinas tienen una cavidad hid rófoba de tamaño regular y protegen los compuestos hidrófobos contra el ambiente eterno, alojándolos en la cavidad . Típicamente, las ciclodextrinas están clasificadas en a-ciclodextrina , ß-ciclodextrina y ?-ciclodextrina , dependiendo de la propiedad y del tamaño. Además de las tres clases mencionadas arriba , se pueden usar en la presente invención otros derivados de ciclodextrina . De preferencia se usan las ß-ciclodextrinas que tienen un diámetro de cavidad que varía de 6.0 a 6.5 Á o sus derivados. Se prefiere más el uso de hidroxi propil-ß-ciclodextrina (H PBCD), que se puede obtener comercialmente como inyección y que está en las listas de la Farmacopea Europea . De preferencia , se usa la ciclodextrina a 5-400 partes en peso; más preferible, de 50 a 1 00 partes en peso, por 1 parte en peso de docetaxel . Si se usa exclusivamente ciclodextrina , la composición l íquida se vuelve tan viscosa que no puede pasar bien a través de un papel filtro de 0.22 µ?t?. Si se usa demasiado poca ciclodextrina, es imposible obtener solubilidad y estabilidad adecuadas. En cuanto a la hidroxipropil- -ciclodextrina (HPBCD) es adecuada una que tenga un grado de sustitución molecular (MS) de 0.2-1.0; más preferible, de 0.4-0.8. Si el grado de sustitución molecular es demasiado bajo, la solubilidad será deficiente. En contraste, si es demasiado alta, la composición se vuelve excesivamente viscosa, lo que hace difícil su manejo. Se usa el polímero soluble en agua, en la presente invención, para mejorar la solubilidad y la estabilidad en la solución y para incrementar la solubilidad de la ciclodextrina. Típicamente se usa para ese propósito polietilenglicol (PEG), polivinilpirrolidona (PVP), carboximetilcelulosa (CMC), hidroxipropilcelulosa (HPC), hidroximetilcelulosa (HMC), hidroxietilcelulosa (HEC), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropiletilcelulosa (HPEC), etc. De preferencia se usa en la presente invención hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG) o polivinilpirrolidona (PVP). En cuanto a la hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) se prefiere una que tenga una viscosidad de 5 a 100,000 cps; más preferible, una que tenga una viscosidad de 100 a 4,000 cps. Si la viscosidad de la hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) es demasiado baja, su solubilidad y su estabilidad disminuirán de manera significativa. En contraste, si la viscosidad es demasiado elevada, se vuelve difícil su manejo y la preparación de una inyección. En cuanto al polietilenglicol (PEG), están disponibles muchos productos que tienen un peso molecular promedio que varía de 300 a 1 50 ,000. De preferencia se usa para inyección uno que tenga un peso molecular promedio que varía de 300 a 600. En particular se usan los productos cuyo uso está permitido, que tengan un peso molecular promedio de 300 , 400 y 600. Y en cuanto a la polivinilpirrolidona , se prefiere una que tenga u n valor K que varíe de 1 0 a 20. Si el valor K de la polivinilpirrolidona es menor que 1 0 , la solubilidad y la estabilidad dismi nuirán de manera significativa y, si sobrepasa 20, se volverá difícil su preparación en una inyección . El pol ímero soluble en agua de preferencia constituye de 0.1 a 1 00 partes en peso; más preferible, de 1 .0 a 1 0.0 partes en peso, por parte en peso de docetaxel . Si se usa el pol ímero soluble en agua en menos de 1 .0 parte en peso, la mejora en la solubilidad y en la estabilidad es m ínima . En contraste, si se usa en más de 1 0.0 partes en peso, la composición se vuelve demasiado viscosa , lo que dificulta la filtración y el lavado. El agua para inyección usada en la presente invención puede ser cualquiera q ue se pueda usar como inyección . De preferencia se usa agua destilada para inyección . Se prepara la solución resultante a una concentración de docetaxel de 1 .5 a 20 mg/mL . Si la concentración es menor de 1 .5 mg/mL, la producción o rendimiento de una sola carga del mismo liofilizador disminuye, lo que da por resultado un incremento en el costo de producción . Por el contrario , si la concentración es de más de 20 mg/mL, aumenta la viscosidad sin mejorar adicionalmente la solubilidad del docetaxel , lo que vuelve complicado el proceso de esterilización siguiente. En el paso 2 se calienta la solución de mezcla y se agita para su estabilización , y se seca por congelación después de la esterilización , para preparar una composición liofilizada . Se lleva a cabo la agitación en la escala de temperaturas de 5 a 50 °C , de preferencia de 1 5 a 30 °C. Se congela la solución de mezcla resultante a baja temperatura y se baja la presión a los -50 hasta -80 °C para la liofilización . La composición liofilizada resultante tiene un color blanco a amarillo pálido. La composición liofilizada resultante tiene estabilidad sobresaliente contra la temperatura y la humedad . De tal manera , puede ser almacenada durante un periodo prolongado, y puede ser preparada fácilmente a una inyección , y puede soportar la temperatu ra y la humedad de los procesos de producción , sin descomponerse. Adicionalmente, debido a que no están presentes etanol ni otros aditivos q ue pueden provocar reacciones hipersensibles, la composición de la presente no es dañina para el cuerpo humano en absoluto. En el paso 3 se diluye la composición liofilizada . El diluyente puede ser cualquier solución que se puede usara en inyecciones y, de preferencia, ag ua para inyección , solución de dextrosa o una solución salina fisiológica para inyección . Se lleva a cabo la dilución en dos etapas. En la primara etapa se diluye la composición Mofilizada con u na variedad de diluyentes, antes de ser preparada a la inyección final . Una concentración de dilución adecuada del docetaxel es de 2 a 20.0 mg/mL, más preferible , de 2.5 a 1 0 mg/mL. Si la concentración es menor que 2 mg/m L se tiene que usar una ampollleta de tamaño grande, lo que aumenta el costo y dificulta su manejo. Si la concentración es de más de 20.0 mg/mL, la solución se vuelve demasiado viscosa, lo que dificulta la dilución subsiguiente . En la segunda etapa se prepara la composición liofilizada a una concentración cl ínicamente disponible de 0.2 a 2.0 mg/mL. Se diluye la composición liofilizada en una ampolleta , nuevamente, con el diluyente usado en la primera etapa. Si la concentración es menor que 0.2 mg/mL, se debe i nyectar u na cantidad grande al paciente. Efectos ventajosos Puesto que la composición l íquida y la composición liofilizada que contienen docetaxel de acuerdo con la presente invención tienen excelente estabilidad , se puede almacenar durante un periodo de tiempo considerablemente prolongado; se puede preparar fácilmente como inyección , y también puede soportar la temperatu ra y la humedad de los procesos de producción , sin descomponerse. Adicionalmente, debido a la ausencia de etanol y de polisorbato, las composiciones no son dañinas para los humanos . Manera de poner en práctica la i nvención Se ilustran modalidades prácticas y actualmente preferidas de la presente invención , tal como se muestra en los siguientes ejemplos. Sin embargo, se apreciará que quienes tengan experiencia en la materia, en consideración de esta descripción, pueden efectuar modificaciones y mejoras dentro del espíritu y del alcance de la presente invención. Ejemplos 1 a 12 Se pesaron 32 mg de trihidrato de docetaxel, hidroxipropil-metilcelulosa (HPMC) o polivinilpirrolidona (PVP) e hidroxipropil-ß-ciclodextrina (HPBCD) y se disolvieron en agua destinada para inyección, a la temperatura ambiente, tal como se muestra en la tabla 1. Se filtró la solución a través de papel filtro de 0.22 pm y se esterilizó. Después de medir la solubilidad, se congeló el filtrado a aproximadamente -40 °C y se secó por congelación para obtener una composición liofilizada. Se midió la solubilidad mediante cromatografía en líquido, usando un detector UV (230 nm). Tabla 1 oceaxe mg Tabla 1 (continuación) Ejemplos 13 a 24 Se pesaron 30 miligramos de docetaxel anhidro, polivinilpirrolidona (PVP), HPMC o polietilenglicol (PEG) e hidroxipropil-p-ciclodextrina (HPBCD) y se disolvieron en agua destilada para inyección a la temperatura ambiente, tal como se muestra en la tabla 2. Se filtró la solución a través de papel filtro de 0.22 micrómetros y se esterilizó. Después de medir la solubilidad, se congeló el filtrado a aproximadamente -40 °C y se secó por congelación, para obtener una composición liofilizada. Se midió su solubilidad mediante cromatografía en líquido, usando un detector UV (230 nm).

Tabla 2 Ejemplo comparativo 1 Se preparó una composición blanca liofilizada, igual que en el ejemplo 19, excepto porque no se usó el polímero soluble en agua. Ejemplo comparativo 2 Se preparó una composición liofilizada usando docetaxel y HPBCD como en el ejemplo 1.10 de WO 99/24073. Se disolvieron 60 mg de docetaxel en 3 mL de etanol y se añadieron 3000 mg de HPBCD. Se añadió a la mezcla 60 mL de agua purificada para inyección . Se ajustó la concentración de la solución transparente resultante a 1 mg/mL. Se congeló rápidamente la solución resultante en hielo seco y se secó por congelación para obtener u na composición liofilizada en forma de polvo. El contenido de docetaxel del polvo fue de 2 por ciento en peso/peso. Ejem plo com parativo 3 Se preparó una composición liofilizada de acuerdo con el método descrito en la patente coreana No. 01 36722. Se disolvieron 96 mg de trihidrato de docetaxel en 1 020 µ?_ de etanol anhid ro y se añadió 2490 mg de polisorbato 80. Se evaporó el etanol a presión red ucida , a 30 °C durante dos horas, en un evaporador rotatorio. Ejemplo experimental 1 : Prueba de estabil idad (en estado l íq uido) Se formaron a una solución las composiciones liofilizadas preparadas en los ejemplos 1 a 24 y en los ejemplos comparativos 1 y 3, añadiendo agua destilada para inyección . Se vigiló el cambio de estabilidad a la temperatura ambiente midiendo la concentración mediante H PLC. Tabla 3 Clasificación Concentración Concentración 48 Concentración 96 Estado de la inicial (mg/mL) horas después horas después solución 96 horas (mg/mL) (mg/mL) después Ejemplo 1 3.8 3.8 3.8 Solución clara Ejemplo 3 5.1 5.1 5.0 Solución clara Ejemplo 5 3.1 3.0 3.0 Solución clara Ejemplo 7 6.7 6.6 6.5 Solución clara Ejemplo 9 5.3 5.3 5.3 Solución clara Tabla 3 (conti n uación) Se disolvieron las composiciones liofilizadas preparadas en el ejemplo 24 y en el ejemplo comparativo 3, en solución salina al 0.9 por ciento, y se diluyeron a 2.0 mg/mL y se probaron . Tabla 4 Como se muestra en la tabla 3 , las composiciones liofilizadas de acuerdo con la presente invención (ejemplos 1 -24) mostraron mejor estabilidad durante el almacenamiento , que la del ejemplo comparativo 1 . Adicionalmente, las composiciones liofi lizadas de acuerdo con la presente invención mostraron mejor estabilidad incluso en estado d iluido, que la del ejemplo comparativo 3, como se muestra en la tabla 4. Ejemplo experimental 2 : Prueba de estabilidad (en estado seco) Se monitoreó la estabilidad de las composiciones liofilizadas preparadas en los ejemplos 1 3 y 23 y en los ejemplos comparativos 2 y 3, mientras se los manten ía bajo condición de refrigeración (4 °C), en condición de almacenamiento a largo plazo (25 °C , 60 por ciento de humedad relativa) y en condiciones aceleradas (40 °C, 75 por ciento de h umedad relativa ; 50 °C, 60 por ciento de humedad relativa ). Se evaluó la estabilidad con base en la cantidad total de impurezas. Como se muestra en la tabla 5, las composiciones liofilizadas de la presente invención mostraron mejor estabilidad que las de los ejemplos comparativos 2 y 3. Tabla 5 Clasificación Inicial 2 semanas 4 semanas 4 °C 0.13 0.17 0.31 25 °C, 60% de 0.13 0.33 0.41 Ejemplo 13 HR 40 °C, 75% de 0.13 0.71 1.74 HR 50°C, 60% de 0.13 1.21 3.30 HR 4 °C 0.09 0.13 0.16 25 °C, 60% de 0.09 0.17 0.20 Ejemplo 23 HR 40 °C, 75% de 0.09 0.35 0.30 HR 50 °C, 60% de 0.09 0.43 0.53 HR 4 °C 0.32 0.48 0.49 Ejemplo comparativo 2 25 °C, 60% de 0.32 0.79 0.82 HR Tabla 5 (conti n uación) Aun cuando se han descrito las modalidades preferidas de la presente invención con fines ilustrativos, quienes tengan experiencia en la materia apreciarán que son posibles varias mod ificaciones , adiciones y sustituciones, sin salirse del alcance ni del espíritu de la presente invención , tal como se describe en las reivindicaciones que vienen a contin uación .

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica estable para inyección, que contiene docetaxel, que comprende docetaxel y ciclodextrina; donde está añadido por lo menos un polímero soluble en agua, seleccionado de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG) o polivinilpirrolidona (PVP).

2. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que el docetaxel está en forma anhidra o en forma del trihidrato.

3. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que la ciclodextrina está contenida en 5 a 400 partes en peso por una parte en peso de docetaxel.

4. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que el polímero soluble en agua está contenido en 0.1 a 100 partes en peso por una parte en peso de docetaxel.

5. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que la ciclodextrina es ß-ciclodextrina, o un derivado de ella.

6. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que la ciclodextrina es hidroxipropil-p-ciclodextrina.

7. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 6, en la que la hidroxipropil-ß-ciclodextrina tiene un grado de sustitución molecular (MS) de 0.2 a 1.0.

8. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que la hidroxipropilmetil-celulosa (HPMC) tiene una viscosidad que varía desde 5 hasta 100,000 cps.

9. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que el polietilenglicol (PEG) tiene un peso molecular promedio que varía desde 300 hasta 600.

10. La composición farmacéutica para inyección de conformidad con la reivindicación 1, en la que la polivinilpirrolidona tiene un valor K que varía de 10 a 20.

11. Un método para preparar una composición farmacéutica estable para inyección, que contiene docetaxel, que comprende: 1) mezclar docetaxel con ciclodextrina y un polímero soluble en agua, seleccionado de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), polietilenglicol (PEG y polivinilpirrolidona (PVP) en agua destilada; 2) esterilizar y liofilizar la mezcla resultante para preparar una composición liofilizada; y 3) diluir la composición liofilizada con agua destilada, solución de dextrosa o una solución salina fisiológica.