[go: up one dir, main page]

MX2008012600A - Factor viii pegilado. - Google Patents

Factor viii pegilado.

Info

Publication number
MX2008012600A
MX2008012600A MX2008012600A MX2008012600A MX2008012600A MX 2008012600 A MX2008012600 A MX 2008012600A MX 2008012600 A MX2008012600 A MX 2008012600A MX 2008012600 A MX2008012600 A MX 2008012600A MX 2008012600 A MX2008012600 A MX 2008012600A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
fvi
factor
pegylated
molecule
polyethylene glycol
Prior art date
Application number
MX2008012600A
Other languages
English (en)
Inventor
Peter Turecek
Juergen Siekmann
Katalin Varadi
Herbert Gritsch
Original Assignee
Baxter Int
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baxter Int filed Critical Baxter Int
Publication of MX2008012600A publication Critical patent/MX2008012600A/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

La invención es una construcción proteinácea que comprende una molécula del Factor VIII teniendo por lo menos una porción del dominio B intacta, la cual se conjuga a un polímero soluble en agua tal como glicol polietilénico teniendo un peso molecular mayor que 10,000 Daltons. La construcción tiene una actividad biológica de por lo menos 80% de la actividad biológica del Factor VIII nativo, y la vida media in vivo de la construcción se incrementa por lo menos 1.5 veces según comparado con la vida media in vivo del factor FVIll nativo.

Description

FACTOR VIII PEGILADO CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a una construcción proteinácea que comprende factor VIII de coagulación (FVIII) que está unido a al menos un polímero soluble, tal como un óxido de (poli)alquileno, tal como polietilenglicol. Además, la presente invención se refiere a métodos para prolongar la vida media in vivo de FVIII en la sangre de un mamífero teniendo un desorden de flujo de sangre asociado con defectos funcionales o deficiencias de FVIII.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION El factor de coagulación VIII (FVIII) circula en el plasma a una concentración muy baja y está unido de manera no covalente al factor de von Willebrand (VWF). Durante la hemostasis, el FVIII es separado de VWF y actúa como un cofactor para activación de factor X (FX) mediado por factor IX activado (FlXa) al intensificar la velocidad de activación en la presencia de calcio y fosfolípidos o membranas celulares. FVIII es sintetizado como un precursor de cadena simple de aproximadamente 270-330 kD con la estructura de dominio A1-A2-B-A3-C1-C2. Cuando se purifica a partir de plasma, FVIII es compuesto por una cadena pesada (A1-A2-B) y una cadena ligera (A3-C1-C2). La masa molecular de la cadena ligera es 80 kD mientras que, debido a la proteólisis dentro del dominio B, la cadena pesada está en el rango de 90-220 kD. El FVII I también es sintetizado como una proteína recombinante para uso terapéutico en desórdenes de flujo de sangre. Varios ensayos in vitro han sido devisados para determinar la eficacia potencial de FVI I I recombinante (rFVIII) como una medicina terapéutica. Estos ensayos imitan los efectos in viv de FVIII endógeno el tratamiento de trombina in vitro de FVI I I resulta en un aumento rápido y disminución subsecuente en su actividad procoagulante, como se mide mediante ensayo in vitro. Esta activación e inactivación coincide con proteólisis limitada tanto en las cadenas pesadas como ligeras, lo cual altera la disponibilidad de diferentes epitopes de unión en FVI I I , por ejemplo, permitiendo que FVI I I se disocie de VWF y se una a una superficie de fosfolípido o altere la capacidad de unión a ciertos anticuerpos monoclonales. La carencia o difunción de FVI I I es asociada con el desorden de flujo de sangre más frecuente, hemofilia A. El tratamiento de elección para el manejo de hemofilia A es terapia de reemplazo con plasma derivado o concentrados de rFVI I I . Los pacientes con hemofilia A severa con niveles FVIII por debajo de 1 % generalmente están en terapia profiláctica con el objetivo de mantener FVII I por arriba de 1 % entre dosis. Considerando las vidas medias promedio de los diversos productos de FVI I I en la circulación, esto puede lograrse usualmente al administrar FVI II dos a tres veces por semana. Existen muchos concentrados en el mercado para el tratamiento de hemofilia A. Uno de estos concentrados es el producto recombinante Advate®, el cual es producido en células CHO y fabricado por Baxter Healthcare Corporation. Ninguna proteína o albúmina de plasma no humana o animal son adicionadas en el proceso de cultivo celular, purificación o formulación final de este producto. El objetivo de muchos fabricantes de concentrados de FVI I I y medicamentos de polipéptido terapéuticos es desarrollar un producto de siguiente generación con propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas intensificadas, al tiempo que se mantienen todas las demás características de producto. Los medicamentos de polipéptido terapéuticos son degradados rápidamente por enzimas proteolíticas y neutralizados por anticuerpos. Esto reduce su vida media y tierno de circulación, limitando por ello su efectividad terapéutica. La adición de un polímero soluble carbohidrato a un polipéptido ha mostrado prevenir degradación y aumentar la vida medida de polipéptidos. Por ejemplo, la PEGilación de medicamentos de polipétpidos los protege y mejora sus perfiles farmacodinámicos y farmacocinéticos (Harris JM et Chess RB, Nat Rev Drug Discov 2003; 2:214-21 ). El proceso de PEGilación une unidades de repetición de polietilenglicol (PEG) a un medicamento de polipéptido. La PEGilación de moléculas puede conducir a resistencia incrementada de medicamentos a degradación enzimática, vida media incrementada in vivo, frecuencia de dosifiación reducida, inmunogenicidad disminuida, estabilidad física y térmica incrementada, solubilidad incrementada, estabilidad líquida incrementada y agregación reducida. De esta manera, la adición de un polímero soluble, tal como a través de PEGilación es una aproximación para mejorar las propiedades de un producto de FVII I . El estado de la técnica es documentado por diferentes patentes y solicitudes de patente: US6037452 describe un conjugado de óxido de (poli)alquileno- F VI 11 o FIX, donde la proteína está unida covalentemente a un óxido de (poli)alquileno a través de grupos carbonilo de dicho FVI I I . EP1258497B1 describe un método para preparar conjugados de VI I I y un polímero biocompatible. Esta patente fue complementada por una publicación de Róstin et al . (Bioconj Chem 2000; 1 1 :387-96). Los conjugados comprenden un FVI I I recombinante de dominio B suprimido modificado con monometoxi polietilenglicol. El conjugado ha reducido la función de FVII I y la actividad coagulante disminuyó rápidamente con el grado de modificación. WO04075923A3 describe conjugado molecular de polímero-FVI I I comprendiendo una pluralidad de conjugados, en donde cada conjugado tiene uno a tres polímeros solubles en agua unidos covalentemente a una molécula de FVII I . La molécula de FVI I I es de dominio B suprimido. US4970300 describe un FVI II modificado, en donde un conjugado infusionable comprendiendo una proteína teniendo actividad de FVIII se enlazó convalentemente a un ligando no antigénico. US6048720 describe conjugados de un polipéptido y un polímero biocompatible. W094/15625 describe FIVII unido a polietilenglicol teniendo un peso molecular preferido de no más de 5,000 Daltones. Existe todavía la necesidad de un FVIII teniendo un polímero soluble unido para prolongar la vida media del FVIII in vivo, por ejemplo, un FVIII PEGilado, tal com un FVIII de longitud completa teniendo PEGmayor que 10,000 Daltones conjugados a ellos, el cual retenga actividad funcional mientras que proporcione una vida media in vivo prolongada, como se compara con FVIII no PEGilado.
FIGURAS La Figura 1 muestra el ensanchamiento y aumento de masa de rFVIII después de la conjugación con PEG medido con SDS-PAGE con inmunoblotting subsecuente. La Figura 2 muestra la farmacocinética de conjugado de PEG-rFVIII comparado con un FVIII no conjugado en ratones hemofílicos. Cuadrados vacíos: PEGrFVIII, dosis 200 IU FVIII/kg. Rombos rellenos: rFVIII nativo, dosis 200 IU FVIII/kg. La Figura 3 muestra el análisis detallado de sitios de PEGilación mediante SDS-PAGE usando varios anticuerpos anti FVIII. La Figura 4 muestra la inactivación y activación inducida por trombina de rFVIII nativo y PEGilado. La Figura 5 muestra las bandas que demuestran los dominios de rFVIII nativo y PEGilado. La Figura 6 muestra el grado de PEGilación de varios dominios de rFVIII nativo PEGilado. La Figura 7 muestra la velocidad de inactivación de trombina de rFVIII nativo y PEGilado.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La invención es una construcción proteinácea que comprende una molécula de FVI II teniendo al menos una porción del dominio B intacto, unido a un polímero soluble en agua, el cual es un óxido de polialquileno, polivinil pirrolidona, alcohol polivinílico, polioxazolina, una poli acriloilmorfolina o un carbohidrato, tal como ácido polisálico (PSA). En una modalidad de la invención, el polímero soluble en agua es una molécula de polietilenglicol teniendo un peso molecular de más de 10,000 Daltones. La construcción retiene la actividad funcional completa de productos de FVI I I terapéuticos estándares y proporciona una vida media in vivo extendida, como se compara con los productos de FVII I terapéuticos estándares. El material de inicio de la presente invención es FVIII , el cual puede ser derivado de plasma humano, o producido mediante técnicas de ingeniería recombinante, como se describe en las patentes US4757006; US5733873; US5198349; US525421 ; US5919766; P 306 968. En la presente, el término "Factor VIII" o "FVIII" se refiere a cualquier molécula de FVI II , la cual tiene al menos una porción del dominio B intacto y que exhibe actividad biológica que es asociada con FVII I nativo. En una modalidad de la invención, la molécula de FVI I I es Factor VII I de longitud completa la molécula de FVI I I es una proteína, la cual es codificada por secuencias de DNA capaces de hibridar a DNA que codifica Factor VI M : C . Tal proteína puede contener supresiones de aminoácidos en varios sitios entre o dentro de los dominios A1 -A2-B-A3-C1 -C2 (US48681 12) . La molécula de FVI I I también puede ser un análogo de FVI I I natural, en donde uno o más residuos de aminoácidos ha sido reemplazado por mutagénesis de sitio dirigido. Por ejemplo, una molécula de FVI I I puede ser PEGilada por una variedad de métodos químicos (Roberts JM et a. , Advan Drug Delivery Rev 2002; 54:459-76). Por ejemplo, FVIII puede ser PEGilada mediante la conjugación de PEG de grupos SH libres usando química de maleimida o el acoplamiento de hidrazidas de PEG o aminas de PEG a porciones de carbohidrato al FVIII después de oxidación previa. En una modalidad de la invención, el FVI I I fue modificado vía residuos de Usina mediante el uso de derivados de polietilenglicol conteniendo un éster de N-hidroxisuccinimida activo (NHS), tal como succinimidil succinato, succinimidil glutarato o succinimidil propionato. Estos derivados reaccionan con los residuos de Usina de FVI I I bajo condiciones suaves al formar un enlace de amida estable. En una modalidad de la invención, la longitud de cadena del derivado de PEG es 5,000 Da. Otros derivados de PEG con longitudes de cadena de 500 hasta 2,000 Da, 2,000 hasta 5,000 Da, mayores que 5,00 hasta 1 0,000 Da o mayores que 10,000 hasta 20,000 Da, o mayores que 20,000 hasta 1 50,000 Da pueden ser usados, incluyendo estructuras lineales y ramificadas. Métodos alternativos para la PEGilación de grupos amino son la conjugación química con carbonatos de PEG al formar enlaces de uretano o la reacción con aldehidos o cetonas mediante aminación reductora que forma enlaces de amida secundaria. En la presente invención, una molécula de VI I I es químicamente modificada usando derivados de PEG que están comercialmente disponibles. Estos derivados de PEG pueden tener estructuras lineales o ramificadas. Ejemplos de derivados de PEG conteniendo grupos NHS se listan a continuación. Los siguientes derivados de PEG son ejemplos de aquéllos comercialmente disponibles de Nektar Therapeutics (Huntsville, Al; ver www. nektar.com/PEG reagent catalog; Nektar Advanced PEGylation, lista de precios 2005-2006): mPEG-succinimidil propionato (mPEG-SPA) mPEG-succinimidil a-metilbutanoato (mPEG-SMB) mPEG-C -HBA-NHS (CM = carboximetil; HBA = ácido hidroxi butírico) Estructura de un derivado de PEG ramificado (Nektar Therapeutics): PEG N-hidroxisuccinimida ramificada (mPEG2-NHS) Este reactivo con estructura ramificada es descrito con más detalle por Kozlowski et al. (BioDrugs 2001 ; 5:419-29) Otros ejemplos de derivados de PEG están comercialmente disponibles de NOF Corporation (Tokio, Japón; ver www. nof.co.jp/english: Catalogue 2005) Estructura general de derivados de PEG lineales (NOF Corp.): X = carboximetilo X = carboxipentilo x = succinato mPEG succinimidil succinato x = glutarato mPEG succinimidil glutarato Estructuras de derivados de PEG ramificados (NOF Corp.): 2,3-bis(metilpoliolixietilen-oxi)-1 -(1 ,5-dioxo-5-succinimidiloxi, pentiloxi) propano 2, 3-bis(metilpolioxietilen-oxi)-1 -(succinimidil carboxipentiloxi) propano Estos derivados de propano muestran un esqueleto de glicerol con un patrón de substitución 1 ,2. En la presente invención los derivados de PEG ramificados basados en estructuras de glicerol con substitución 1 ,3 u otras estructuras ramificadas descritas en US203/0143596A1 también pueden usarse. Los derivados de PEG con degradables (por ejemplo, enlazadores hidrolizables) como se describe por Tsubery et al . (J Biol Chem 2004; 279: 381 1 8-24) y Shechter et al . (WO0408980A3) también pueden usarse en la presente invención. De manera sorprendente, el FVI I I PEGilado de esta invención exhibe actividad funcional completa, combinada con una vida media de FVI I I extendida in vivo. Además, el rFVI I I PEGilado parece ser más resistente contra inactivación de trombina. Esto fue mostrado por una variedad de métodos in vitro e in vivo y se ilustra mediante los siguientes ejemplos.
EJEMPLOS Ejemplo 1 PEGilación de residuos de lisina en rFVI I I con mPEG succinimil succinato Una solución de un volumen de rFVIII derivado del proceso de fabricación de Advate (3,400 U/ml) se filtró en gel mediante el uso de columnas Econo-Pac 10DG (BioRad) usando 20 mm amortiguador Hepes, 1 50 mM NaCI, pH 7.4, conteniendo 0.5% sacarosa y 0. 1 % Polysorbate 80. Entonces mPEG succinimdil succinato (Abuchowski et al . Cáncer Biochim Biophys 1 984; 7: 1 75-86) con una longitud de cadena de 5,000 Da (PEG-SS 5000) se adicionó a esta solución bajo agitación suave (5 mg PEG-SS/mg de proteína) y el valor de pH se ajustó a 7.4 mediante adición en forma de gotas de 0.5 NaOH . Entonces se realizó la PEGilación bajo agitación suave durante 1 hora a temperatura ambiente. Subsecuentemente, la mezcla de reacción se aplicó sobre una resina de cromatografía de intercambio iónico equilibrada (Fractogel 5 EMB TMAE 650M / Pharmacia XK-10 columna, altura de lecho: 15.0 cm) en 20 mM amortiguador Hepes, 1 150 mM NaCI, pH 7.4, conteniendo 0.5% sacarosa y 0.1 % Polysorbate 80. Entonces, la columna se lavó con 20 CV amortiguador de equilibrio para remover el exceso de reactivo y el rFVI I I PEGilado fue levigado con amortiguador de levigación (20 mM 10 Hepes, 1 .0 M NaCI, 0.5% sacarosa, 0.1 % Polysorbate 80, pH 7.4). El levigado fue concentrado mediante ultrafiltración/diafiltración con una membrana consistiendo de celulosa regenerada y con un corte de peso molecular de 30 kD usando un sistema amortiguador consistiendo de 20 mM Hepes, 150 mM NaCI, 0.5% sacarosa, pH 7.4. • 5 Ejemplo 2 Caracterización bioquímica de rFVIII PEGilado in vitro RFVI I I derivado del proceso de fabricación Advate fue PEGilado de acuerdo con el Ejemplo 1 y el producto RVIII PEGilado fue 20 caracterizado bioquímicamente. La actividad funcional del PEG-rFVII I fue determinada por el uso del ensayo cromogénico de F VI 11 (Rosen S, Scand J Haematol 1984;33 (Supl 40): 139-45). El método se basa en Ph.
Eur. 5a edición (5.05) 2.7.4. Assay of Blood Coagultion Factor VI I I (Ensayo de Factor VIII de coagulación en sangre). 25 Una muestra, conteniendo el factor VII I (FVI II :C) se mezcla con trombina, factor IX activado (FlXa), fosfolipidos y factor X (FX) en un amortiguador conteniendo calcio. FVIII es activado por trombina y subsecuentemente forma un complejo con fosfolipidos, FlXa y iones de calcio. Este complejo activa el factor X a factor Xa, el cual a su vez corta el substrato cromogénico FXa-1 (AcOH*CH30CO-D-CH-Gly-Arg-pNA). El curso del tiempo de para-nitroanilina (pNA) liberada es medida con un lector de micro placa a 405 nm. La inclinación de la reacción es proporcional a la concentración de factor VIII en la muestra. El valor de antígeno de FVIII fue medido mediante el uso de un sistema ELISA comercialmente disponible (Cedarlane, Hornby, Ontario, Canadá) con modificaciones menores. A partir de estos valores, las proporciones de cromógeno de FVIII/antígeno de FVIII se calcularon. El contenido de proteina en las preparaciones fue determinado al medir la densidad óptica a 280 nm. A partir de estos datos, el contenido de proteína fue calculado (Hoyer LW en: Human Protein Data. Installments 1-6; Heberli Ed.; Wiley VCH, Weinheim, Alemania, 1998) y expresado en mg/ml. Tabla 1 rFVIII nativo PEG-rFVIII PEG-SS 5 (5 mg por mg de proteína) Actividad de FVlI chr [U/ml] 3,430 64 FVIII:Ag [U/ml] 4,067 81 Proporción FVIII:Chr/FIII:Ag 0.84 0.79 Recuperación de actividad 100 94 biológica (%) Los datos en la Tabla 1 muestra que en la preparación de rFVI I I PEGilado, la actividad biológica (expresada por la proporción de actividad cromogénica de FVI I I a antígeno de FVI I I) es recuperada a más de 90% en comparación con la actividad biológica del rFVI I I nativo (1 00%) .
Ejemplo 3 Caracterización de rFVI II PEGilado por técnicas de SDS-PAGE e inmunoblotting El rFVI I I nativo fue caracterizado por S DS PAGE bajo condiciones reductoras al usar un gel de gradiente de poliacrilamida al 4-1 2% obtenido de I nvitrogen (Carlsbad, California, US) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Conforme los marcadores de peso molecular (MW), se usaron marcadores Precisión Plus (10 kD - 25 kS) obtenidos de Bio-RD (Hercules, CA, US) . Entonces las proteínas fueron transferidas en una membrana de PVDF obtenida de Bio-Rad (Hercules, CA, US) por electroblotting y subsecuentemente se incuban con un anticuerpo de FVI I LC anti-humano de borrego policlonal obtenido de Cedarlane (Hornby, Ontario, Canadá) . Los últimos pasos del procedimiento de inmunomanchado fueron la incubación con un anticuerpo anti-borrego conjugado con fosfatasa alcalina (ALP) de Accurate (Westbury, NY, US) seguido por la visualización final mediante el uso de un kit de substrato ALP (Bio-Rad, Hercules, CA, US). Los resultados son resumidos en la Figura 1 . La mancha demuestra la estructura de dominio de rFVI I I PEGilado y nativo. Se muestra que el rFVI I I PEGilado tiene bandas más anchas y masas moleculares altas que la proteína recombinante nativa.
Ejemplo 4 Farmacocinética de rFVIII PEGilado en un modelo de ratón de knock out deficiente de FVII I Los ratones deficientes en FVI I I descritos en detalle por Bi et al. (Nat Genet 1995; 10: 1 19-21 ) se usaron como un modelo de hemofilia A humana severa. Grupos de 5 ratones recibieron una inyección de bolo (10 ml/kg) vía de vena de cola con ya sea con PEG-rFVI I I (PEG-SS, 5K) preparado de acuerdo con el Ejemplo 1 o rFVIII nativo en una dosis de 200 IU FVI I I/kg de peso corporal. El plasma de citrato por perforación de corazón después de anestesia, se preparó a partir de los grupos respectivos, 5 minutos, 3, 6, 9 y 24 horas después de la inyección. Los niveles de actividad de FVI I I se midieron en muestras de plasma. Los resultados de este experimento son resumidos en la Figura 2. La vida media promedio aumentó de 1 .9 horas (para rFVI I I nativo) a 4.9 horas (Para rFVIII PEGilado), área bajo la curva (AUC) aumentó de 1 3.0 a 25.2 horas*I U/ml. El cálculo de vida media se realizó con MicroMath Scientist, modelo 1 de la librería farmacocinética (MicroMath, Saint Louis, MO, US).
Ejemplo S Análisis detallado de PEGilación de rFVII I mediante técnicas de SDS-PAGE e inmunoblotting Se digirió rFVIII PEGilado y nativo con 1 nM trombina durante 60 minutos a 60°C, lo cual resultó en corte específico de la molécula de FVI I I con productos de degradación bien definidos. Estos fragmentos de cadena pesada y ligera fueron separados mediante SDS-PAGE seguidos por electroblotting, como se describe en el Ejemplo 3. Para visualizar los fragmentos cortados, un anticuerpo policlonal y anticuerpos monocionales contra los dominios A1 y A2 de cadena pesada, el dominio B y el dominio A3 N-terminal de cadena ligera se aplicaron. Como se ve en la Figura 3, todos los dominios fueron PEGilados, aunque a un grado diferente. El dominio B fue PEGilado fuertemente. Tanto los dominios A1 como A2 de la cadena pesada fueron parcialmente PEGilados. Varios grados de PEGilación (mono-, di-, tri-... ) pudieron observarse en el dominio A3 de cadena ligera. De acuerdo con el Ejemplo 6, el FVII I PEGilado pareció ser más resistente a la trombina.
Ejemplo 6 Resistencia a trombina de rFVI I I PEGilado El tratamiento de trombina in vitro de FVI I I resulta en un rápido aumento y subsecuente disminución en su actividad procoagulante. La velocidad de activación e inactivación, la cual depende de la concentración de trombina y de la integridad de FVI I I , fue monitoreada por un ensayo de cofactor FlXa, como sigue: FVII I fue incubado a 37°C con 0.5 o 1 nM trombina. Las submuestras fueron retinadas a intervalos de tiempo entre 0.5 a 40 minutos y se adicionaron a una mezcla de FlXa, FX, Pl-vesículas y CaCI2 conteniendo también un inhibidor de trombina específico para detener las reacciones mediadas por trombina adicionales y se incubaron durante 3 minutos. Se adicionó una submuestra a un substrato cromogénico, el cual es cortado selectivamente por Fxa y EDTA contenido para detener activación de Xa adicional. Después de unos 1 5 minutos de incubación, la reacción se terminó mediante ácido acético. Los valores de absorbancia (A405), los cuales son proporciones a las concentraciones de Fxa, se midieron en un lector de ELISA y se convirtieron a concentraciones de Fxa usando una curva de referencia de Fxa purificada. Las concentracioens de Fxa generadas fueron graficadas contra el tiempo de incubación con trombina. La velocidad de inactivación de pseudo-primer orden de F VI 11 fue determinada ai ajustar la parte declinante de las curvas con un ajuste exponencial simple.
Tabla 2 Como se muestra en la Figura 4 y la Tabla 2, el rFVII I PEGilado mostró una velocidad de inactivación menor a ambas concentraciones de trombina aplicadas.
Ejemplo 7 PEGilación de residuos de lisina en rFVIII con 2,3-bis(metilpolioxietilen-oxi)-1-(1 ,5-dioxo-5-succinimidiloxi, pentiloxi) propano ramificado Una solución de rFVIII en 29 mM amortiguador Hepes, pH 7.4, conteniendo 150 mM NaCI, 0.5% sacarosa y 0.1% Polysorbate 80, se preparó a partir de material a granel derivado del proceso de fabricación de Advate conteniendo 489 IU FVIII/ml. Un reactivo de PEG succinimidil glutarato (PEG-SG) ramificado (2,3-bis(metilpolioxietilen-oxi)-1-(1 ,5-dioxo-5-succinimidloxi, pentiloxi) propano) obtenido de NOF Corporation (Tokio, Japón) con un peso molecular de 20 kD, se adicionó a 153 mi de esta solución bajo agitación suave (5 mg de reactivo / mg de proteína) y el valor de pH se ajustó a 7.4 mediante adición en forma de gotas de 0.5 M NaOH después de 10 minutos. Entonces la PEGilación de rFVIII se realizó bajo agitación suave durante 1 hora a temperatura ambiente. Subsecuentemente, la mezcla de reacción se aplicó sobre una resina de cromatografía de intercambio iónico equilibrado (columna Fractogel EMD TMAE 650 M / Pharmacia XK-50, altura de lecho: 14.5 cm) en 20 mM amortiguador Hepes, 150 mM NaCI, H 7.4, conteniendo 0.5% sacarosa y 0.1% Polysorbate 80 usando una velocidad de flujo lineal de 1 cm/min. La columna se lavó con 25 CV amortiguador de equilibrio para remover el exceso de reactivo (velocidad de flujo lineal: 2 cm/min) y el rFVIII PEGildo se levigó con amortiguador de levigación (20 mM Hepes, 1.0 M NaCI, 0.5% sacarosa, 0.1% Polysorbate 80, pH 7.4) a una velocidad de flujo lineal de 0.5 cm/min . Entonces, el levigado fue concentrado mediante ultraf iltración/diafiltración con una membrana consistiendo de celulosa regenerada y con un corte de peso molecular de 30 kD usando un sisema amortiguador consistiendo de 20 mM Hepes, 1 50 mM NaCI , 0.5% sacarosa, pH 7.4.
Ejemplo 8 Caracerización i n vitro de rFVIII PEGIado con PEG-SG ramificado 20 kD El rFVI I I derivado del proceso de fabricación de Advate fue PEGilado vía residuos de Usina usando un reactivo de PEG-SG ramificado de acuerdo con el Ejemplo 7 y el prod ucto de rFVI I I PEGilado fue caracterizado bioquímicamente como se describe en el Ejemplo 2.
Tabla 3 Los datos en la Tabla 3 muestran que en la preparación de rFVI I PEGilada, la actividad biológica (expresada por la proporción de actividad cromogénica de FVI I I a antígeno de FVI I I) se recuperó completamente en comparación con la actividad biológica del rFVII I nativo (100%). El rFVIII PEGilado fue caracterizado mediante técnicas de SDS-PAGE e inmunoblotting bajo condiciones reductoras usando un gel de gradiente de poliacrilamida 4-12% como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados son resumidos en la Figura 5. La mancha demuestra la estructura de dominio de rFVI I I PEGilado y nativo. Se muestra que el rFVI II PEGilado tiene bandas más amplias y masas moleculares altas que la proteína recombinante nativa. Para análisis más detallado de PEGilación de la preparación de rFVI I I mediante técnicas de SDS-PAGE e inmunoblotting, el rFVIII PEGilado y nativo se digirió con 1 nM Trombina durante 60 minutos a 60°, lo cual resultó en corte específico de la molécula de FVI I I con productos de degradación bien definidos, como se describe en el Ejemplo 5. Los fragmentos fueron separados por SDS-PAGE seguido por electroblotting y se visualizaron por diferentes anticuerpos anti-FVIII . Como se ve en la Figura 6, todos los dominios fueron PEGilados, aunque a un diferente grado. El dominio B fue PEGilado fuertemente. Varios grados de PEGilación (mono-, di-, tri-PEGilación) podrían ser observados en el dominio A3 de cadena ligera. Los resultados indican que el rFVII I PEGilado pareció ser más resistente a trombina. La velocidad de activación e inactivación por trombina fue monitoreado por un ensayo de cofactor FlXa como se describe en el Ejemplo 6 la velocidad de inactivación de pseudo-primer orden de FVI II se determinó al ajustar la parte declinante de las curvas con un ajuste exponencial simple.
Tabla 4 Como se muestra en la Figura 7 y Tabla 4, el rFVI II PEGilado mostró una velocidad de inactivación menor en ambas concentraciones de trombina aplicadas.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1 . Una construcción proteinácea que comprende: (a) una molécula de Factor VI II teniendo al menos una porción del dominio B intacto; y (b) al menos una molécula de polietilenglicol unida a dicha molécula de Factor VI I I, dicha molécula de polietilenglicol tiene un peso molecular de más de 10,000 daltones; dicha construcción tiene una actividad biológica de al menos 80% de la actividad biológica de Factor VI II nativo, en donde las actividades biológicas de la construcción y de Factor VI II nativo son determinadas mediante las proporciones de actividad cromogénica a valor de antígeno de FVI II (FVIII :Chr/FVI I I :Ag) y en donde la vida media in vivo de dicha construcción es incrementada por al menos 1 .5 veces como se compara con la vida media in vivo de Factor VI II nativo.
2. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha construcción tiene una actividad biológica de al menos 90% de la actividad biológica de Factor VI I I nativo.
3. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de Factor VI I I es un Factor VI II recombinante.
4. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de Factor VI I I es Factor VI I I de longitud completa.
5. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de polietilenglicol tiene un peso molecular de más de 1 0,000 Da hasta aproximadamente 125,000 Da.
6. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de polietilenglicol tiene un peso molecular de aproximadamente 15,000 hasta aproximadamente 20,000 Da.
7. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de polietilenglicol tiene un peso molecular de aproximadamente 18,000 hasta aproximadamente 25,000 Da.
8. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de polietilengicol tiene un peso molecular de aproximadamente 20,000 Da.
9. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de polietilenglicol tiene un peso molecular de aproximadamente 20,000 hasta aproximadamente 1 50,000 Da.
10. La construcción proteinácea de la reivindicación 1 , en donde dicha molécula de polietilenglicol tiene una estructura lineal o ramificada.
MX2008012600A 2006-03-31 2007-03-29 Factor viii pegilado. MX2008012600A (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US78796806P 2006-03-31 2006-03-31
US79023906P 2006-04-06 2006-04-06
PCT/US2007/007560 WO2007126808A1 (en) 2006-03-31 2007-03-29 Pegylated factor viii

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MX2008012600A true MX2008012600A (es) 2008-12-12

Family

ID=38330191

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2008012600A MX2008012600A (es) 2006-03-31 2007-03-29 Factor viii pegilado.

Country Status (11)

Country Link
US (2) US7683158B2 (es)
EP (1) EP2010222A1 (es)
JP (1) JP2009532351A (es)
KR (1) KR20080108147A (es)
AU (1) AU2007245190B2 (es)
BR (1) BRPI0708832A2 (es)
CA (1) CA2647314A1 (es)
MX (1) MX2008012600A (es)
NO (1) NO20084608L (es)
NZ (1) NZ572050A (es)
WO (1) WO2007126808A1 (es)

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7179617B2 (en) * 2001-10-10 2007-02-20 Neose Technologies, Inc. Factor IX: remolding and glycoconjugation of Factor IX
EP3153181A1 (en) * 2004-11-12 2017-04-12 Bayer HealthCare LLC Site-directed modification of fviii bdd
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
US7846445B2 (en) * 2005-09-27 2010-12-07 Amunix Operating, Inc. Methods for production of unstructured recombinant polymers and uses thereof
US7645860B2 (en) * 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
US7985839B2 (en) * 2006-03-31 2011-07-26 Baxter International Inc. Factor VIII polymer conjugates
US7982010B2 (en) * 2006-03-31 2011-07-19 Baxter International Inc. Factor VIII polymer conjugates
MX2008012600A (es) 2006-03-31 2008-12-12 Baxter Int Factor viii pegilado.
ES2655639T3 (es) 2006-12-15 2018-02-21 Baxalta GmbH Conjugado de factor VIIa - ácido (poli)siálico que tiene una semivida in vivo prolongada
WO2008116913A2 (en) * 2007-03-28 2008-10-02 Novo Nordisk A/S Peptide compounds with transient biodegradable pegylation
JP5876649B2 (ja) 2007-06-12 2016-03-02 ラツィオファルム ゲーエムベーハーｒａｔｉｏｐｈａｒｍ ＧｍｂＨ ヌクレオチド糖の改良製造法
US20100268055A1 (en) * 2007-07-19 2010-10-21 Arizona Board of Regents, a body corporate acting for and on behalf of Arizona State University Self-Anchoring MEMS Intrafascicular Neural Electrode
EP2185701A4 (en) * 2007-08-15 2011-03-02 Amunix Operating Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCING THE PRODUCTION OF RECOMBINANT POLYPEPTIDES
US8173597B2 (en) * 2007-11-09 2012-05-08 Baxter International Inc. Modified recombinant factor VIII and von Willebrand factor and methods of use
AU2008345183B2 (en) 2007-12-27 2014-08-21 Baxalta GmbH Method and compositions for specifically detecting physiologically acceptable polymer molecules
CN101965200B (zh) * 2008-02-27 2013-06-19 诺沃-诺迪斯克有限公司 缀合的因子ⅷ分子
UA101497C2 (ru) * 2008-04-24 2013-04-10 Селтик Фарма Пег Лтд. Конъюгаты фактора ix с увеличенным временем полужизни
KR101648734B1 (ko) 2008-06-24 2016-08-18 체에스엘 베링 게엠베하 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ｖｉｉｉ, 폰 빌레브란트 인자 또는 이들의 복합체
AU2014268202B2 (en) * 2008-08-01 2017-08-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Factor VIII Polymer Conjugates
AU2009303368B2 (en) * 2008-10-15 2012-04-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Pegylation of recombinant blood coagulation factors in the presence of bound antibodies
CA2738679A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Baxter International Inc. Modified blood factors comprising a low degree of water soluble polymer
EP2387413A4 (en) * 2009-01-19 2015-12-23 Bayer Healthcare Llc PROTEIN CONJUGATE WITH AN ENDOPEPTIDASE-SPLICABLE BIOPROTEKTIVES PART
JP5843357B2 (ja) 2009-02-03 2016-01-13 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド 延長組換えポリペプチドおよび延長組換えポリペプチドを含む組成物
US8703717B2 (en) * 2009-02-03 2014-04-22 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
US8680050B2 (en) * 2009-02-03 2014-03-25 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides fused to extended recombinant polypeptides and methods of making and using same
ES2401965T3 (es) * 2009-02-19 2013-04-25 Novo Nordisk A/S Modificación de Factor VIII
TW201042257A (en) * 2009-05-26 2010-12-01 Baxter Int Detection of antibody that binds to water soluble polymer-modified polypeptides
US9849188B2 (en) 2009-06-08 2017-12-26 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
EP2440228B8 (en) * 2009-06-08 2023-02-22 Amunix Operating Inc. Glucose-regulating polypeptides and methods of making and using same
PL2459224T3 (pl) 2009-07-27 2017-08-31 Baxalta GmbH Koniugaty białka związanego z krzepnięciem krwi
EP2459226B1 (en) * 2009-07-27 2016-06-29 Lipoxen Technologies Limited Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins
US8809501B2 (en) 2009-07-27 2014-08-19 Baxter International Inc. Nucleophilic catalysts for oxime linkage
US8642737B2 (en) 2010-07-26 2014-02-04 Baxter International Inc. Nucleophilic catalysts for oxime linkage
SG178141A1 (en) 2009-07-27 2012-03-29 Baxter Int Blood coagulation protein conjugates
JP2013502458A (ja) * 2009-08-24 2013-01-24 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド 凝固第ｖｉｉ因子組成物ならびにそれを製造および使用する方法
MX353233B (es) 2009-12-06 2018-01-08 Bioverativ Therapeutics Inc Polipéptidos híbridos y quiméricos del factor viii-fc, y métodos de uso de los mismos.
US20130040888A1 (en) 2010-02-16 2013-02-14 Novo Nordisk A/S Factor VIII Molecules With Reduced VWF Binding
WO2011123830A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Alpha 1-antitrypsin compositions and methods of making and using same
GB201007357D0 (en) * 2010-04-30 2010-06-16 Leverton Licence Holdings Ltd Conjugated factor VIII
GB201007356D0 (en) 2010-04-30 2010-06-16 Leverton Licence Holdings Ltd Conjugated factor VIIa
US20130183280A1 (en) * 2010-07-15 2013-07-18 Novo Nordisk A/S Stabilized factor viii variants
EP2651433A1 (en) * 2010-12-16 2013-10-23 Novo Nordisk A/S Aqueous factor viii solution
EA032056B1 (ru) 2010-12-22 2019-04-30 Баксалта Инкорпорейтид Конъюгат терапевтического белка и производного жирной кислоты, способы получения конъюгата терапевтического белка и производного жирной кислоты (варианты)
JP2014520094A (ja) * 2011-05-27 2014-08-21 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法
EP2758426B1 (en) 2011-09-23 2019-08-07 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
EP2814502B1 (en) 2012-02-15 2017-09-13 CSL Behring GmbH Von willebrand factor variants having improved factor viii binding affinity
CA2864126A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
PT3564260T (pt) 2012-02-15 2023-01-18 Bioverativ Therapeutics Inc Composições de fator viii e métodos de produção e utilização das mesmas
EA037979B1 (ru) 2012-02-27 2021-06-18 Амуникс Оперейтинг Инк. Композиции конъюгата xten и способы их получения
EP2838566A2 (en) 2012-04-16 2015-02-25 Cantab Biopharmaceuticals Patents Limited Optimised subcutaneous therapeutic agents
EP2902787B1 (en) 2012-09-28 2018-03-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for evaluating blood coagulation reaction
WO2014106116A2 (en) * 2012-12-28 2014-07-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Delivery of biologic therapeutics
BR112015022730A2 (pt) * 2013-03-15 2017-10-31 Bayer Healthcare Llc formulações de rfviii, método para conjugação covalente de rfviii com um polímero biocompatível e uso de rfviii no preparo de formulação de rfviii para tratamento de hemofilia a
WO2014170496A1 (en) 2013-04-18 2014-10-23 Novo Nordisk A/S Stable, protracted glp-1/glucagon receptor co-agonists for medical use
ES2657291T3 (es) 2013-04-22 2018-03-02 Csl Ltd. Un complejo covalente de factor de von Willebrand y factor VIII asociado por un puente disulfuro
TWI667255B (zh) 2013-08-14 2019-08-01 美商生物化學醫療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
WO2015185640A1 (en) 2014-06-04 2015-12-10 Novo Nordisk A/S Glp-1/glucagon receptor co-agonists for medical use
EP3164150B1 (en) 2014-07-02 2020-11-04 CSL Behring Lengnau AG Modified von willebrand factor
EP3177317B1 (en) 2014-08-04 2020-03-18 CSL Limited Factor viii formulation
CA2978374A1 (en) 2015-03-06 2016-09-15 Csl Behring Recombinant Facility Ag Modified von willebrand factor having improved half-life
JP6573989B2 (ja) 2015-05-22 2019-09-11 ツェー・エス・エル・ベーリング・レングナウ・アクチエンゲゼルシャフト 血友病を処置するための切断型フォン・ヴィルブランド因子ポリペプチド
EP3298036B1 (en) 2015-05-22 2022-04-06 CSL Behring Lengnau AG Methods for preparing modified von willebrand factor
JP2015155469A (ja) * 2015-06-01 2015-08-27 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 第ｆｖｉｉｉ因子ポリマー結合体
JP6552286B2 (ja) * 2015-06-05 2019-07-31 公立大学法人奈良県立医科大学 凝固第ｖｉｉｉ因子の複合体形成能に関する情報の取得方法および試薬キット
EA201890423A1 (ru) 2015-08-03 2018-07-31 Биовератив Терапьютикс Инк. Слитые белки фактора ix, способы их получения и применения
IL319047A (en) 2015-08-28 2025-04-01 Amunix Operating Inc Chimeric polypeptide composition and methods for its preparation and use
EP3395835B1 (en) 2015-12-25 2021-02-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody having enhanced activity, and method for modifying same
DK3400238T3 (da) 2016-01-07 2021-07-26 CSL Behring Lengnau AG Muteret von willebrand faktor
AU2017204955B2 (en) 2016-01-07 2021-04-01 CSL Behring Lengnau AG Mutated truncated von Willebrand Factor
EP3538134B1 (en) 2016-11-11 2021-12-29 CSL Behring Lengnau AG Truncated von willebrand factor polypeptides for extravascular administration in the treatment or prophylaxis of a blood coagulation disorder
AU2017358861B2 (en) 2016-11-11 2022-02-17 CSL Behring Lengnau AG Truncated von Willebrand Factor polypeptides for treating hemophilia
JP7748175B2 (ja) 2016-12-02 2025-10-02 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法
TW202423960A (zh) * 2017-09-29 2024-06-16 日商中外製藥股份有限公司 具有第viii凝血因子(fviii)輔因子機能替代活性的多重特異性抗原結合分子及含有此分子作為有效成分之藥學製劑
JP2018115170A (ja) * 2018-03-02 2018-07-26 バクスアルタ ゲーエムベーハー 第ｆｖｉｉｉ因子ポリマー結合体
CN112512555A (zh) 2018-05-18 2021-03-16 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 治疗血友病a的方法
US20220389082A1 (en) 2019-07-04 2022-12-08 CSL Behring Lengnau AG A truncated von willebrand factor (vwf) for increasing the in vitro stability of coagulation factor viii
US20220348637A1 (en) 2019-11-11 2022-11-03 CSL Behring Lengnau AG Polypeptides for inducing tolerance to factor viii

Family Cites Families (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4356170A (en) * 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4757006A (en) * 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4965199A (en) * 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4970300A (en) * 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
JPS62502589A (ja) 1985-04-11 1987-10-08 ザ・チヤイルドレンズ・メデイカル・センタ−・コ−ポレ−シヨン フオン・ビルブラント因子
US5198349A (en) * 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
US5250421A (en) * 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
CA1339946C (en) * 1987-03-31 1998-07-07 Michael J. Griffith Ultrapurification process for polypeptides
JPH0387173A (ja) 1987-09-10 1991-04-11 Teijin Ltd ヒト活性化天然型ファクター８ｃの製造方法及びそれに用いる形質転換体
US5605884A (en) * 1987-10-29 1997-02-25 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Factor VIII formulations in high ionic strength media
US4877608A (en) * 1987-11-09 1989-10-31 Rorer Pharmaceutical Corporation Pharmaceutical plasma protein formulations in low ionic strength media
US5153265A (en) * 1988-01-20 1992-10-06 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
SE465222C5 (sv) * 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
DE4001451A1 (de) * 1990-01-19 1991-08-01 Octapharma Ag Stabile injizierbare loesungen von faktor viii und faktor ix
SE466754B (sv) * 1990-09-13 1992-03-30 Berol Nobel Ab Saett att kovalent binda biopolymerer till hydrofila ytor
WO1992008790A1 (en) * 1990-11-14 1992-05-29 Cargill, Incorporated Conjugates of poly(vinylsaccharide) with proteins for the stabilization of proteins
AU1676992A (en) 1991-03-18 1992-10-21 Enzon, Inc. Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
DE4111393A1 (de) * 1991-04-09 1992-10-15 Behringwerke Ag Stabilisierte faktor viii-praeparationen
US5846951A (en) 1991-06-06 1998-12-08 The School Of Pharmacy, University Of London Pharmaceutical compositions
MX9203763A (es) 1991-06-28 1993-08-01 Rhone Poulenc Rorer Int Polipeptidos terapeuticos a base del factor de von willebrand
US6037452A (en) * 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
WO1994005332A2 (en) 1992-09-01 1994-03-17 Berlex Laboratories, Inc. Glycolation of glycosylated macromolecules
JP3905921B2 (ja) * 1992-10-02 2007-04-18 ジェネティクス インスチチュート リミテッド ライアビリティー カンパニー 凝固第▲ｖｉｉｉ▼因子を含む組成物及びその製造方法並びに安定剤としての界面活性剤の使用方法
NZ250375A (en) 1992-12-09 1995-07-26 Ortho Pharma Corp Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives
US5298643A (en) * 1992-12-22 1994-03-29 Enzon, Inc. Aryl imidate activated polyalkylene oxides
FR2700268B1 (fr) 1993-01-13 1995-03-31 Lvmh Rech Composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, contenant un extrait de Vismia.
AU6029594A (en) * 1993-01-15 1994-08-15 Enzon, Inc. Factor viii - polymeric conjugates
US5621039A (en) * 1993-06-08 1997-04-15 Hallahan; Terrence W. Factor IX- polymeric conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
DE4435485C1 (de) 1994-10-04 1996-03-21 Immuno Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor
AU6255096A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York, The Pegylated modified proteins
US6127153A (en) 1995-06-07 2000-10-03 Neose Technologies, Inc. Method of transferring at least two saccharide units with a polyglycosyltransferase, a polyglycosyltransferase and gene encoding a polyglycosyltransferase
SE9503380D0 (sv) * 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
US6005077A (en) 1995-11-10 1999-12-21 Immuno Aktiengesellschaft Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation
US6562781B1 (en) 1995-11-30 2003-05-13 Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. Glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
AT405740B (de) 1996-12-13 1999-11-25 Immuno Ag Von willebrand-faktor-derivat sowie ein verfahren zur isolierung von proteinen
AT405403B (de) 1997-02-27 1999-08-25 Immuno Ag Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie
WO1998048837A1 (en) 1997-04-30 1998-11-05 Enzon, Inc. Polyalkylene oxide-modified single chain polypeptides
US6183738B1 (en) 1997-05-12 2001-02-06 Phoenix Pharamacologics, Inc. Modified arginine deiminase
AT405485B (de) 1997-05-28 1999-08-25 Immuno Ag Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation
DE69929311T2 (de) 1998-03-24 2006-09-07 Nof Corp. Oximanderivate und verfahren zu ihrer herstellung
EE05201B1 (et) 1998-10-16 2009-08-17 Biogen Idec Ma Inc. Glkoslitud interferoon-beeta, selle kasutamine ja seda sisaldav farmatseutiline kompositsioon, meetod interferoon-beeta-1a aktiivsuse pikendamiseks ja leiutisekohase valgu valmistamiseks
DE19852729A1 (de) 1998-11-16 2000-05-18 Werner Reutter Rekombinante Glycoproteine, Verfahren zu ihrer Herstellung, sie enthaltende Arzneimittel und ihre Verwendung
AT407750B (de) 1999-02-19 2001-05-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer vwf-präparation
ES2541470T3 (es) * 1999-02-22 2015-07-20 University Of Connecticut Formulaciones de factor VIII libres de albúmina
WO2001005434A2 (en) 1999-07-20 2001-01-25 Amgen Inc. Hyaluronic acid-protein conjugates
US6531122B1 (en) 1999-08-27 2003-03-11 Maxygen Aps Interferon-β variants and conjugates
YU32402A (sh) 1999-11-12 2005-03-15 Maxygen Holdings Ltd. Konjugati gama interferona
SE515295C2 (sv) 1999-11-23 2001-07-09 Medicarb Ab Förfarande för framställning av konjugat av en biologiskt aktiv polysackarid och ett fast substrat, samt sådana konjugat
CN100488562C (zh) 2000-02-11 2009-05-20 拜耳医药保健有限公司 凝血因子VⅡ或VⅡa样分子
US6586398B1 (en) 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
US7118737B2 (en) 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
AU2001290312A1 (en) * 2000-10-16 2002-04-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Peg-modified erythropoietin
AUPR610501A0 (en) 2001-07-04 2001-07-26 Smart Drug Systems Inc Treatment of parasitic disease
US6913915B2 (en) 2001-08-02 2005-07-05 Phoenix Pharmacologics, Inc. PEG-modified uricase
IL161251A0 (en) * 2001-10-10 2004-09-27 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7265084B2 (en) 2001-10-10 2007-09-04 Neose Technologies, Inc. Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
US7026440B2 (en) * 2001-11-07 2006-04-11 Nektar Therapeutics Al, Corporation Branched polymers and their conjugates
HUE058897T2 (hu) * 2003-02-26 2022-09-28 Nektar Therapeutics Polimer VIII-as faktor egység konjugátumok
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
PL1620118T3 (pl) 2003-04-08 2014-11-28 Yeda Res & Dev Leki odwracalnie pegylowane
WO2005032581A2 (en) 2003-10-07 2005-04-14 Novo Nordisk Health Care Ag Hybrid molecules having factor vii/viia activity
KR20060123472A (ko) 2003-12-10 2006-12-01 넥타르 테라퓨틱스 에이엘, 코포레이션 2개의 상이한 군의 중합체-활성제 포합체를 포함하는조성물
ES2434035T3 (es) 2004-12-27 2013-12-13 Baxter International Inc. Conjugados de polímero-factor von Willebrand
US7645860B2 (en) 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
MX2008012600A (es) 2006-03-31 2008-12-12 Baxter Int Factor viii pegilado.
ES2531934T3 (es) 2006-09-01 2015-03-20 Novo Nordisk Health Care Ag Glicoproteínas modificadas
ES2655639T3 (es) 2006-12-15 2018-02-21 Baxalta GmbH Conjugado de factor VIIa - ácido (poli)siálico que tiene una semivida in vivo prolongada

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0708832A2 (pt) 2011-06-14
JP2009532351A (ja) 2009-09-10
US8053561B2 (en) 2011-11-08
NZ572050A (en) 2011-09-30
AU2007245190B2 (en) 2011-07-21
EP2010222A1 (en) 2009-01-07
WO2007126808A1 (en) 2007-11-08
NO20084608L (no) 2008-12-30
US7683158B2 (en) 2010-03-23
US20070244301A1 (en) 2007-10-18
CA2647314A1 (en) 2007-11-08
KR20080108147A (ko) 2008-12-11
US20100168391A1 (en) 2010-07-01
AU2007245190A1 (en) 2007-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MX2008012600A (es) Factor viii pegilado.
US7884075B2 (en) Polymer-factor VIII-von Willebrand factor-conjugates
KR101879838B1 (ko) 인자 ⅷ 중합체 접합체
US20120121613A1 (en) Protein conjugate having an endopeptidase- cleavable bioprotective moiety
CN101415445A (zh) 聚乙二醇化的因子ⅷ
JP2015155469A (ja) 第ｆｖｉｉｉ因子ポリマー結合体
AU2019222949B2 (en) Factor VIII polymer conjugates
HK1127300A (en) Pegylated factor viii
JP2018115170A (ja) 第ｆｖｉｉｉ因子ポリマー結合体
HK1105276B (en) Polymer-von willebrand factor-conjugates
HK1155939B (en) Factor viii polymer conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
FA Abandonment or withdrawal