MX2008011905A - Terapia de combinacion. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al uso de antagonistas VEGF y antagonistas alfa5betal para tratar el cáncer e inhibir la angiogénesis y/o la permeabilidad vascular, incluyendo la inhibición de la angiogénesis anormal en enfermedades. La presente invención se refiere también al uso de agonistas VEGFR y agonistas alfa5betal para promover la angiogénesis y la permeabilidad vascular. La presente invención se refiere también a nuevos anticuerpos anti-alfa5betal, composiciones y equipos que los comprenden y a métodos para producir y utilizar los mismos.

Description

TERAPIA DE COMBINACIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de antagonistas VEGF y antagonistas alfa5betal para tratar el cáncer e inhibir la angiogénesis y/o inhibir la permeabilidad vascular, incluyendo la angiogénesis anormal en enfermedades. La presente invención también se refiere al uso de antagonistas VEGFR y antagonistas alfa5betal para promover la angiogénesis y la permeabilidad vascular. La presente invención también se refiere a anticuerpos anti-alfaSbetal , composiciones y equipos que los comprenden, y a métodos para elaborarlos y utilizarlos. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El importante papel de un VEGF-A en la angiogénesis patológica y no patológica se encuentra bien establecido. La administración de VEGF en modelos in vivo indica una potente respuesta angiogénica (Plouet, J. et al., (1989) EMBO J. 8:3801-3808; Leung D.W. et al., (1989) Science 246:1306-1309) . La pérdida de un solo alelo de VEGF-A dio origen a una letalidad embriónica en ratones (Carmeliet P. et al., (1996) Nature 380:435-439; Ferrara N. et al., (1996) Nature 380:439-442). El VEGF se conoce también como un factor de permeabilidad vascular debido a su capacidad para inducir la infiltración vascular (Senger D.R. et al., (1995) Science 219:983-985; Dvorak H.F. et al., (1995) Am. J. Pathol . , 146:1029-1039). Así, el VEGF-A se encuentra implicado en la angiogénesis de desarrollo, reproductiva y ósea además de otras angiogénesis no patológicas. El VEGF-A se enlaza a dos tirosina cinasas receptoras (RTK) , VEGFR-1 (Flt-1) y VEGFR-2 (KDR, Flk-1) . Se considera en general que VEGFR-2 es el principal mediador de los efectos mitogénicos, angiogénicos y de mejoramiento de permeabilidad de VEGF-A. En Febrero de 2004, la US Food and Drug Administration (FDA) aprobó el bevacizumab, un anticuerpo monoclonal A anti-VEGF humanizado (factor de crecimiento endotelial vascular) , para el tratamiento de cáncer colorrectal metastásico en combinación con regímenes de quimioterapia a base de 5-fluorouracilo (FU) . Subsecuentemente, la FDA aprobó el pegaptinib, un aptámero que bloquea la isoforma del aminoácido 165 de VEGF-A, para el tratamiento de la forma húmeda (neovascular) de la degeneración macular relacionada con la edad (AMD) . A pesar de estos avances, muchos pacientes tratados con antagonistas de VEGF sucumbieron eventualmente a sus enfermedades. Consecuentemente, existe la necesidad de desarrollar nuevos medicamentos y tratamientos para tratar enfermedades que ya no responden o responden solo parcialmente a las terapias con antagonista VEGF. Existe también la necesidad de desarrollar terapias alternativas y/o mejores para tratar el cáncer y enfermedades de evolución desfavorable, ocasionadas o efectuadas por la angiogénesis anormal . SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a medicamentos y a métodos para tratar pacientes que se beneficiarían de una disminución de la angiogénesis, que sufren de angiogénesis anormal y/o que sufren de una neoplasia. De acuerdo con una modalidad, la presente invención proporciona un método para inhibir la angiogénesis y/o la permeabilidad vascular en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal concurrente o secuencialmente . De acuerdo con otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar a un sujeto que sufre de una enfermedad, en donde el sujeto ha respondido al tratamiento para la enfermedad con un antagonista VEGF, pero que responde parcialmente o ya no responde al antagonista VEGF, que comprende la etapa de administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista alfa5betal. De acuerdo con otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar a un sujeto que sufre de una enfermedad, en donde la enfermedad ha sido resistente o refractaria a una terapia con antagonista alfa5betal, solo o en combinación con quimioterapia, que comprende la etapa de administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista VEGF . La presente invención se refiere también a nuevos anticuerpos anti-alfa5betal , equipos y composiciones que los comprenden, y a métodos para elaborarlos o utilizarlos. De acuerdo con una modalidad, el nuevo anticuerpo anti-alfa5betal es el anticuerpo 7H5 o el anticuerpo 7H12 descrito en la presente, o una forma humanizada o quimérica del mismo. De acuerdo con otra modalidad específica, el anticuerpo 7H5 o el anticuerpo 7H12, o la forma humanizada o quimérica del mismo, puede encontrarse en forma de un Fab, Fab' , un F(ab)'2, Fv monocatenario (scFv) , un fragmento Fv; un diacuerpo, anticuerpo multi -específico y un anticuerpo lineal. De acuerdo con otra modalidad, los nuevos anticuerpos anti -alfa5betal pueden encontrarse conjugados a otra entidad tal como, pero sin limitarse a, un agente terapéutico o un colorante fluorescente u otro marcador, para detectar el alfa5betal en pacientes o en muestras de pacientes. Tales nuevos anticuerpos alfa5betal pueden utilizarse en una variedad de métodos terapéuticos y diagnósticos. Por ejemplo, tales anticuerpos anti -alfa5betal pueden utilizarse para tratar la angiogénesis anormal, neoplasia, enfermedades oculares y enfermedades autoinmunes . Tales anticuerpos pueden utilizarse para detectar la proteína alfa5betal en pacientes o muestras de pacientes, poniendo en contacto tales anticuerpos con la proteína alfa5betal en pacientes o en muestras de pacientes y determinando cualitativamente o cuantitativamente el anticuerpo anti-alfa5betal enlazado a la proteína alfa5betal. Aún de acuerdo con otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que comprende la etapa de administrar un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal concurrentemente o secuencialmente . De acuerdo con una modalidad preferida, el cáncer responde a las terapias con antagonista VEGF. En otra modalidad, se proporciona un método para tratar la degeneración macular relacionada con la edad (AMD) , incluyendo la degeneración macular húmeda relacionada con la edad, en un sujeto que sufre de AMD, que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal concurrentemente o secuencialmente. Aún en otra modalidad, se proporciona un método para tratar una enfermedad autoinmune en un sujeto, que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal concurrentemente o secuencialmente. En una modalidad, puede administrarse al sujeto que va a tratarse el antagonista VEGF inicialmente , y subsecuentemente tratarlo con el antagonista alfa5betal. En otra modalidad, se trata al sujeto con el antagonista VEGF y el antagonista alfa5betal de manera simultánea. De acuerdo con otra modalidad, se trata al sujeto con el antagonista VEGF hasta que el sujeto no responde al tratamiento con antagonista VEGF y después se trata al sujeto con el antagonista alfa5betal. En una modalidad particular, se trata al sujeto con el antagonista VEGF cuando el cáncer es no invasivo o se encuentra en etapa temprana y se trata con el antagonista alfa5betal cuando el cáncer es invasivo. En otra modalidad, el sujeto que se trata con el antagonista alfa5betal tiene niveles elevados de alfa5betal en un tejido enfermo en comparación con el tejido de un sujeto que no sufre de la enfermedad. En este ejemplo, el método puede incluir además la etapa de detectar el alfa5betal en el sujeto e.g., en un tejido enfermo después del tratamiento con un antagonista VEGF. De acuerdo con una modalidad, el cáncer invasivo es un cáncer metastasicado . De acuerdo con otra modalidad, el cáncer en etapa temprana es un cáncer tratado mediante terapia adyuvante (e.g., quimioterapia o retiro quirúrgico) . En una modalidad preferida, el sujeto sufre de una enfermedad que tiene angiogénesis anormal. De acuerdo con otra modalidad, la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de un cáncer, una enfermedad inmune o una enfermedad ocular. De acuerdo con una modalidad preferida, la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de un tumor sólido, un tumor metastásico, un tumor de tejido blando, una enfermedad que tiene neovascularización ocular, una enfermedad inflamatoria que tiene angiogénesis anormal, una enfermedad que surge después del transplante al sujeto y una enfermedad que tiene una proliferación anormal del tejido fibrovascular . De acuerdo con otra modalidad preferida, el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer de mama (incluyendo cáncer de mama metastásico), cáncer cervical, cáncer colorrectal (incluyendo cáncer colorrectal metastásico) , cáncer pulmonar (incluyendo cáncer pulmonar de célula no pequeña) , linfoma no de Hodgkin (NHL) , leucemia linfocítica crónica, cáncer renal, cáncer de próstata incluyendo cáncer de próstata de hormona refractaria, cáncer hepático, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer ovárico, mesotelioma, cáncer de tejido blando, tumor estromal gastrointestinal, glioblastoma multiforme y mieloma múltiple. De acuerdo con otra modalidad preferida, la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de retinopatía, degeneración macular inducida por la edad (e.g., AMD húmeda), edema macular diabético, rubeosis; psoriasis, una enfermedad renal inflamatoria, síndrome urémico hemolítico, nefropatía diabética (e.g., retinopatía diabética proliferativa) , artritis (e.g., artritis psoriática, osteoartritis , artritis reumatoide) , enfermedad intestinal inflamatoria, inflamación crónica, desprendimiento retinal crónico, uveítis crónica, vitritis crónica, rechazo al injerto de córnea, neovascularización de córnea, neovascularización de injerto de córnea, enfermedad de Crohn, miopía, enfermedad neovascular ocular, enfermedad de Paget , penfigoide, poliarteritis , queratotomía radial post-láser, neovascularización retinal, síndrome de Sogren, colitis ulcerativa, rechazo al injerto, inflamación pulmonar, síndrome nefrótico, edema, ascitis asociada con malignidades, apoplegía, angiofibroma y glaucoma neovascular. En otra modalidad, se administra además al sujeto un agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste de un agente anti-neoplásico, un agente quimioterapéutico y un agente citotóxico . De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, el sujeto que va a tratarse con un antagonista alfa5betal sufre de una recaída después del tratamiento con antagonista VEGF o se ha vuelto refractario al tratamiento con antagonista VEGF. De acuerdo con otra modalidad, el sujeto que va a tratarse con un antagonista alfa5betal y un antagonista VEGF sufre de un cáncer metastásico o se ha tratado previamente con terapia adyuvante. En una modalidad, el paciente candidato es recurrente, refractario o resistente a agentes quimioterapéuticos tales como irinotecan. Ejemplos de tales enfermedades, incluyen, pero no se limitan a, cáncer colorrectal metastásico, cáncer colorrectal metastásico recurrente, cáncer de mama metastásico, cáncer de mama metastásico recurrente, cáncer de mama HER2+ metastásico, cáncer de mama adyuvante, cáncer de mama HER2+ adyuvante, cáncer pancreático metastásico, cáncer de colon adyuvante, cáncer pulmonar adyuvante de célula no pequeña, cáncer rectal adyuvante, cáncer pulmonar adyuvante de célula no pequeña, cáncer pulmonar metastásico de célula no pequeña, cáncer ovárico metastásico, cáncer metastásico de célula renal y cáncer adyuvante de célula renal . De acuerdo con una modalidad, se administra al sujeto que sufre de una enfermedad descrita en la presente una terapia de mantenimiento después del tratamiento para la enfermedad con un antagonista VEGF, en donde la terapia de mantenimiento es un antagonista alfa5betal solo o secuencialmente o concurrentemente con un antagonista VEGF. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista VEGF puede seleccionarse del grupo que consiste de un anticuerpo, una inmunoadhesina , un peptibody, una molécula pequeña y un ácido nucleico que se híbrida a una molécula de ácido nucleico que codifica para VEGF bajo condiciones rigurosas (e.g., ribozima, ARNsi y aptámero) . De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista VEGF es un anticuerpo. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal . De acuerdo con una modalidad preferida, el anticuerpo VEGF es capaz de inhibirse competitivamente a partir del enlace al VEGF humano mediante el anticuerpo Avastin®. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo anti-VEGF es humano, humanizado o quimérico. De acuerdo con una modalidad específica, el anticuerpo anti-VEGF es el anticuerpo Avastin®. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo anti-VEGF se selecciona del grupo que consiste de un Fab, Fab' , un F(ab)'2, Fv monocatenario (scFv) , un fragmento Fv: un diacuerpo y un anticuerpo lineal. De acuerdo con otra modalidad, el antagonista VEGF es un anticuerpo biespecífico que se enlaza a VEGF y alfa5betal y es un antagonista alfa5betal. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista alfa5betal puede seleccionarse del grupo que consiste de un anticuerpo, una inmunoadhesina, un peptibody, una molécula pequeña y un ácido nucleico que se híbrida a una molécula de ácido nucleico que codifica para alfa5betal bajo condiciones rigurosas. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista alfa5betal es un anticuerpo. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal . De acuerdo con una modalidad adicional, el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo quimérico tal como el anticuerpo alfa5betal anti-humano conocido como M200 o F200. De acuerdo con una modalidad, el anticuerpo anti -alfa5betal comprende la secuencia de VH de la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de VL de la SEQ ID NO: 2. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo anti-alfa5betal comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 3 y la secuencia de la SEQ ID NO: 4, y la secuencia de la SEQ ID NO: 5. De acuerdo con una modalidad preferida, el anticuerpo anti -alfa5betal es capaz de inhibirse competitivamente a partir del enlace a alfa5betal humano mediante el anticuerpo 7H5 o el anticuerpo 7H12. De acuerdo con una modalidad preferida, el anticuerpo anti-alfa5betal es humano, humanizado o quimérico. De acuerdo con una modalidad específica, el anticuerpo anti-alfa5betal es el anticuerpo 7H5 , el anticuerpo 7H12 o un anticuerpo quimérico o humanizado de los mismos. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo anti-alfa5betal se selecciona del grupo que consiste de Fab, Fab' , un Fv monocatenario (scFv) , un fragmento Fv, un diacuerpo y un anticuerpo lineal. De acuerdo con otra modalidad, el antagonista alfa5betal es un anticuerpo biespecífico que se enlaza a VEGF y alfa5betal y es un antagonista VEGF. Aún de acuerdo con otra modalidad, el antagonista anti-alfaSbetal tiene una función efectora alterada. De acuerdo con una modalidad, el anticuerpo anti -alfa5betal se altera para disminuir o prevenir la actividad de citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) o de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) (e.g., alterando la secuencia de ácido nucleico que codifica para la porción Fe del anticuerpo) . Aún de acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo anti-alfa5betal se ha alterado para mejorar su vida media en humanos (e.g., alterando la secuencia de ácido nucleico que codifica para la porción Fe del anticuerpo) . De acuerdo con una modalidad, el antagonista VEGF o el antagonista alfa5betal se conjuga a un agente citotóxico o a un agente quimioterapéutico . De acuerdo con otra modalidad, el agente citotóxico es un isótopo radiactivo o una toxina . La presente invención proporciona composiciones que comprenden un antagonista VEGF, un antagonista alfa5betal y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La presente invención proporciona también artículos de manufactura que comprenden instrucciones para detectar el alfa5betal en un sujeto que ha sido tratado con un antagonista VEGF. La presente invención también se refiere al uso de agonistas VEGFR y agonistas alfa5betal para promover la angiogénesis y la permeabilidad vascular y de composiciones que comprenden agonistas VEGF y agonistas alfa5betal y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las terapias de combinación de agonistas VEGFR y agonistas alfa5betal pueden utilizarse para tratar una variedad de enfermedades que se beneficiarían de un incremento en la angiogénesis y en la permeabilidad vascular, incluyendo, por ejemplo, cicatrización de heridas tal como en el tratamiento de heridas crónicas, heridas agudas y heridas normales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra el restablecimiento de células estromales que expresan alfa5betal después del tratamiento de tumores de xenoinjerto HT29 con el anticuerpo anti-VEGF, B20-4.1. La Figura 2 es una gráfica que muestra el enlace de los anticuerpos 7H5 y 7H12 a células HUVEC en un análisis de enlace directo. La Figura 3 muestra el enlace de los anticuerpos 7H5 y 7H12 a células HUVEC, pero no a las RAJI mediante análisis FACS. La Figura 4 es una gráfica que muestra la adhesión de HUVEC a fibronectina en presencia de anticuerpos monoclonales 7H5 y 7H12 purificados. La Figura 5A - 5B es (A) una gráfica e barras que muestra el efecto de 7H5 y 7H12 en la proliferación de células HUVEC mediante la cuenta celular total y (B) una gráfica de barras que muestra el efecto de 7H5 y 7H12 en la proliferación de células HUVEC mediante coloración con azul Alamar en otro análisis. La Figura 6A-6D son fotografías de la migración de células HUVEC después del tratamiento con 7H5 a 0 horas y 3 horas en comparación con un control negativo (IgG). La Figura 7 es una gráfica de barras que muestra cuantitativamente la migración de células HUVEC después del tratamiento con 7H5 y 7H12. La Figura 8 es una gráfica de barras que muestra el porcentaje de células HUVEC que expresa caspasa 3 activada en un análisis de apoptosis después del tratamiento con 7H5 y 7H12. La Figura 9 es una gráfica de barras que muestra la actividad de caspasa 3/7 de HUVEC después del tratamiento con 7H5 y 7H12. La Figura 10 es una gráfica de barras que muestra la actividad de 7H12 y/o bevacizumab en un modelo de cicatrización de heridas en la oreja de un conejo. La Figura 11A - 11B muestra los resultados de ratones tratados con anticuerpo anti-VEGF +/- anticuerpo anti-alfa5betal en un modelo de cáncer de mama como (A) una gráfica que muestra el volumen de tumor medio de grupo de los ratones tratados o (B) un trazo Kaplan-Meier que muestra el porcentaje de los animales que permanecen en el estudio como una función de tiempo. Se retiró a los animales del estudio cuando sus tumores alcanzaron o excedieron 1500 MI3 . La Figura 12A - 12B muestra los resultados de ratones tratados con anticuerpo anti-VEGF +/- anticuerpo anti-alfa5betal en un modelo de cáncer de colon como (A) una gráfica que muestra el volumen de tumor medio de grupo de los ratones tratados o (B) un trazo Kaplan-Meier que muestra el porcentaje de los animales que permanecen en el estudio como una función de tiempo. Se retiró a los animales del estudio cuando sus tumores alcanzaron o excedieron 1500 mm3. La Figura 13A - 13B muestra los resultados de ratones tratados con anticuerpo anti-alfa5betal o un agente quimioterapéutico en un modelo de cáncer de colon como (A) una gráfica que muestra el volumen de tumor medio de grupo de los ratones tratados o (B) un trazo Kaplan-Meier que muestra el porcentaje de los animales que permanecen en el estudio como una función de tiempo. Se retiró a los animales del estudio cuando sus tumores alcanzaron o excedieron 1500 mm3. La Figura 14 muestra un trazo scatchard del enlace de 125I-7H5 a alfa5betal en R9ab, una linea celular de fibroblasto de conejo. La Figura 15 muestra un trazo scatchard del enlace de 125I-7H12 a alfa5betal en R9ab, una linea celular de fibroblasto de conejo. La Figura 16 muestra los resultados de análisis de mapeo de epitope/enlace competitivo de IgG alfa5betal anti-integrina con varios anticuerpos anti-alfa5betal . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Sin enlazarse a una teoría, se propone que el restablecimiento de célula estromal incrementado puede conducir otros factores de crecimiento vascular a los sitios enfermos que podrían compensar la pérdida de la actividad de VEGF en pacientes tratados con terapias de antagonista VEGF.

El dirigir células estromales que expresan a5bl con un anticuerpo anti-a5bl puede dar como resultado la reducción de las células estromales, reduciendo así la producción de factores de crecimiento vascular compensatorios potenciales. Alternativamente o adicionalmente , se ha propuesto que la inhibición de las interacciones de matriz endotelial-extracelular, y particularmente, la inhibición de las interacciones de enlace de alfa5betal, potenciará las terapias con antagonista VEGF inhibiendo el retorno de la angiogénesis a lo largo de los canales de matriz extracelular abandonados por los vasos que regresan debido a la terapia con antagonista VEGF. En consecuencia, el tratamiento con antagonistas alfa5betal concurrentemente o después de cualquier tratamiento con antagonista VEGF puede inhibir la recuperación de vasos a partir de ese tratamiento con antagonista VEGF y, en consecuencia, el retorno del crecimiento neovascular. "Alfa5betal" o "a5bl" o "a5bl" es una integrina que comprende dos proteínas diferentes (i.e., subunidades alfa5 y betal) . Alfa5betal ha mostrado enlazarse a fibronectina , Ll-CAM y fibrinógenos . La integrina alfa5betal también se ha nombrado activación 5 muy tardía, VLA-5, alfa5betal, CD49e/CD29, receptor de fibronectina, FNR y GPIc-IIa. De acuerdo con una modalidad preferida, el alfa5betal es un alfa5betal humano.

"Alfa5" , también conocido como CD49e, alfa5, subunidad de alfa5 integrina, subunidad de alfa VLA-5, subunidad de IC de GPIc-IIa y cadena de alfa FNR, tiene cuatro isoformas generadas por corte y empalme alternativo (A-D) . Éstas varían dentro de sus dominios citoplásmicos . Las secuencias de aminoácido para las isoformas humanas de alfa5 pueden encontrarse e.g., en los números de acceso del Genbank: X07979, U33879, U33882 y U33880, respectivamente. "Betal", también llamado CD29, betal, GPIIa de plaquetas; cadena VLA-beta; cadena beta-1 de integrina, CD29; FNRB; DF2; VLAB; GPIIA; MSK12 y VLA5B . Las secuencias de aminoácido para beta 1 humano pueden encontrarse, e.g., en el número de acceso del Genbank X06256. El término "VEGF" o "VEGF" como se utiliza en la presente, se refiere al factor de crecimiento celular endotelial vascular humano del aminoácido 165 y a los factores de crecimiento celular endotelial vascular humanos del aminoácido 121, 189 y 206 relacionados, como se describe por Leung et al., Science, 246:1306 (1989), y Houck et al., Mol. Endocrin. , 5:1806 (1991), conjuntamente con las formas de origen natural alélicas y procesadas de los mismos. el término "VEGF" se refiere también a VEGFs de especies no humanas tales como de ratón, rata o primate. Algunas veces, el VEGF de una especie específica se indica por términos tales como hVEGF para VEGF humano, mVEGF para VEGF murino y etc. El término "VEGF" también se utiliza para referirse a formas truncadas del polipéptido que comprende los aminoácidos 8 a 109 o l a 109 del factor celular endotelial vascular humano del aminoácido 165. La referencia a cualquiera de tales formas de VEGF puede identificarse en la presente solicitud, e.g., por "VEGF (8-109)", "VEGF (1-109)" o "VEGF165" . Las posiciones de aminoácido para un VEGF nativo "truncado" se enumeran como se indica en la secuencia de VEGF nativa. Por ejemplo, la posición de aminoácido 17 (metionina) en el VEGF nativo truncado es también la posición 17 (metionina) en el VEGF nativo. El VEGF nativo truncado tiene afinidad de enlace para los receptores KDR y Flt-1, comparable con el VEGF nativo. De acuerdo con una modalidad preferida, el VEGF es VEGF humano. Un "antagonista VEGF" se refiere a una molécula capaz de neutralizar, bloquear, inhibir, abrogar, reducir o interferir con las actividades de VEGF incluyendo su enlace a VEGF o a uno o más receptores de VEGF o al ácido nucleico que los codifica. Preferentemente, el antagonista VEGF se enlaza a VEGF o a un receptor de VEGF. Los antagonistas de VEGF incluyen anticuerpos anti-VEGF y fragmentos de enlace al antígeno de los mismos, polipéptidos que se enlazan a VEGF y a receptores de VEGF y bloquean la interacción ligando-receptor (e.g., inmunoadhesinas , peptibodies) , anticuerpos del receptor anti-VEGF y antagonistas del receptor de VEGF tales como los inhibidores de molécula pequeña de las tirosina cinasas VEGFR, aptámeros que se enlazan a VEGF y ácidos nucleicos que se hibridan bajo condiciones rigurosas a secuencias de ácido nucleico que codifican para VEGF o para el receptor de VEGF (e.g., ARNi) . De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista VEGF se enlaza a VEGF e inhibe la proliferación celular endotelial inducida por VEGF in vitro. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista VEGF se enlaza a VEGF o a un receptor de VEGF con mayor afinidad que a un no VEGF o a un receptor no VEGF. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista VEGF se enlaza a VEGF o a un receptor de VEGF con un Kd de entre 1 uM y 1 pM. De acuerdo con otra modalidad preferida, el antagonista VEGF se enlaza a VEGF o a un receptor de VEGF a entre 500 nM y 1 pM. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista VEGF se selecciona del grupo que consiste de un polipéptido tal como un anticuerpo, un peptibody, una inmunoadhesina , una molécula pequeña o un aptámero. En una modalidad preferida, el anticuerpo es un anticuerpo anti-VEGF tal como el anticuerpo AVASTIN® o un anticuerpo del receptor anti-VEGF tal como el anticuerpo anti-VEGFR2 o uno anti-VEGFR3. Otros ejemplos de antagonistas VEGF incluyen: VEGF-Trap, Mucagen, PTK-787, SU11248, AG-013736, Bay 439006 (sorafenib) , ZD-6474, CP632, CP-547632, AZD-2171, CDP-171, SU-14813, CHIR-258, AEE-788, SB786034, BAY579352, CDP-791, EG-3306, GW-786034, RWJ-417975/CT6758 y KRN-633. Un "anticuerpo anti-VEGF" es un anticuerpo que se enlaza a VEGF con afinidad y especificidad suficiente. Preferentemente, el anticuerpo anti-VEGF de la invención, puede utilizarse como un agente terapéutico en la dirección y la interferencia con enfermedades o condiciones en donde se encuentra involucrada la actividad de VEGF. Un anticuerpo anti-VEGF comúnmente no se enlazará a otros homólogos de VEGF tales como VEGF-B o VEGF-C, ni a otros factores de crecimiento tales como PIGF, PDGF o bFGF . Un anticuerpo anti-VEGF preferido es un anticuerpo monoclonal que se enlaza al mismo epítope que el anticuerpo anti-VEGF monoclonal A4.6.1 producido por el hibridoma ATCC HB 10709. Más preferentemente, el anticuerpo anti-VEGF es un anticuerpo monoclonal anti-VEGF humanizado recombinante generado de acuerdo con Presta et al., (1997) Cáncer Res., 57:4593-4599, incluyendo, pero sin limitarse al anticuerpo conocido como bevacizumab (BV; Avastin®) . De acuerdo con otra modalidad, los anticuerpos anti-VEGF que pueden utilizarse incluyen, pero no se limitan a, los anticuerpos descritos en la WO 2005/012359. De acuerdo con una modalidad, el anticuerpo anti-VEGF comprende la región pesada variable y la ligera variable de cualquiera de los anticuerpos descritos en las Figuras 24, 25, 26, 27 y 29 de la WO 2005/012359 (e.g., G6 , G6-23, G6-31, G6-23.1, G6-23.2, B20, B20-4 y B20.4.1). en otra modalidad preferida, el anticuerpo anti-VEGF conocido como Ranibizumab es el antagonista VEGF administrado para enfermedades oculares tales como la neuropatía diabética y AMD. El anticuerpo anti-VEGF "Bevacizumab (BV) " , también conocido como "rhuMAb VEGF" o "Avastin®" , es un anticuerpo monoclonal anti-VEGF humanizado recombinante generado de acuerdo con Presta et al., (1997) Cáncer Res., 57:4593-4599. Éste comprende las regiones de estructura IgGl humanas mutadas y las regiones determinantes de complementariedad de enlace al antígeno del anticuerpo monoclonal anti-hVEGF murino A.4.6.1, que bloquea el enlace del VEGF humano a sus receptores. Aproximadamente el 93% de la secuencia de aminoácido de Bevacizumab, incluyendo la mayoría de las regiones de estructura, se deriva de IgGl humano, y aproximadamente el 7% de la secuencia se deriva del anticuerpo murino A.4.6.1. Bevacizumab tiene una masa molecular de aproximadamente 149,000 daltones y se encuentra glicosilado. Otros anticuerpos anti-VEGF incluyen los anticuerpos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 6884879 y la WO 2005/044853. El anticuerpo anti-VEGF Ranibizumab e el anticuerpo LUCENTIS® o rhuFab V2 , es un fragmento Fab de VEGF anti-humano humanizado madurado por afinidad. Ranibizumab se produce mediante métodos estándar de tecnología recombinante en el vector de expresión de Escherichia coli y en fermentación bacteriana. Ranibizumab no se encuentra glicosilado y tiene una masa molecular de -48,000 daltones. Ver O 98/45331 y US 20030190317. "Antagonista alfa5betal" se refiere a cualquier molécula que inhibe la actividad biológica de alfa5betal. De acuerdo con una modalidad preferida, la molécula antagonista se enlaza específicamente a alfa5betal. De acuerdo con una modalidad preferida, la molécula antagonista se enlaza a alfa5. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista alfa5betal preferentemente se enlaza a alfa5betal con mayor afinidad en relación a una integrina no alfa5betal. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista se selecciona del grupo que consiste de un polipéptido tal como un anticuerpo, un peptibody o una inmunoadhesina , una molécula pequeña o un aptámero que inhibe el enlace de alfa5betal a su ligando (particularmente, fibronectina) o un ácido nucleico que se híbrida bajo condiciones rigurosas a una molécula de ácido nucleico que codifica para alfa5betal (e.g., AR i que interfiere con la expresión de alfa5) . Una actividad biológica de alfa5betal puede ser cualquiera, una combinación o todos los efectos seleccionados del grupo que consiste de (1) enlace a fibronectina , (2) mejoramiento de la migración celular en fibronectina , (3) incremento de la supervivencia de células que comprenden alfa5betal en presencia de fibronectina , (4) incremento en la proliferación de células que comprenden alfa5betal en presencia de fibronectina y (5) incremento en la formación de tubos en células que comprenden alfa5betal en presencia de fibronectina . Ejemplos de anticuerpos antagonistas de anti-alfa5betal incluyen M200 y F200 (WO 2004/089988 A2) , el anticuerpo 7H5 y el anticuerpo 7H12 descritos en la presente, y anticuerpos quiméricos, completamente humanos y humanizados de los mismos. por ejemplo, los anticuerpos 200 y F200 pueden derivarse de las cadenas pesada variable y ligera variable del anticuerpo alfa5betal anti-humano de ratón, IIA1 (Pharmingen, San Diego, Ca) . Ejemplos de inhibidores de molécula pequeña de alfa5betal incluyen Ac-PHSCN-NH2 (WO 9822617 Al) y ácido (S) -2 - [ (2 , 4 , 6-trimetilfenil) sulfonil] amino-3- [7-benciloxicarbonil-8- (2-piridinilaminometil ) -l-oxa-2 , 7-diazaspiro- (4,4) -???-2-en-il] carbonilamino] propiónico . De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista anti5betal se enlaza a alfa5betal y no a alfaVbeta3 o a alfaVbeta5 o a alfaVbetal. De acuerdo con una modalidad preferida, el antagonista alfa5betal se enlaza a alfa5betal con un Kd de entre 1 uM y 1 pM. De acuerdo con otra modalidad preferida, el antagonista alfa5betal se enlaza a alfa5 con un Kd de entre 500 nM y 1 p . De acuerdo con una modalidad preferida, el anticuerpo alfa5betal es un anticuerpo que puede competir con el anticuerpo 7H5 o el anticuerpo 7H12 por el enlace a alfa5betal en un análisis de enlace competitivo. De acuerdo con otra modalidad preferida, el anticuerpo es un anticuerpo que puede inhibirse competitivamente a partir del enlace a alfa5betal mediante el anticuerpo producido a partir del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) o del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en Marzo 7 de 2006. "Antagonista VEGFR" se refiere a una molécula que puede activar un receptor de VEGF o incrementar su expresión. Los agonistas VEGFR incluyen, pero no se limitan a, e.g., agonistas de ligando de un VEGF, variantes de VEGF, anticuerpos y fragmentos activos. "Agonista alfa5betal" se refiere a una molécula que puede activar a alfa5betal o incrementar su expresión. Los agonistas alfa5betal incluyen, pero no se limitan a, e.g., agonistas de ligando de alfa5betal. Las moléculas, tales como anticuerpos, caracterizados por enlazarse o sobreponerse o lo similar, a áreas sobre un objetivo, pueden identificarse mediante análisis de inhibición/enlace competitivos. En una modalidad, las HUVEC u otras células que expresan alfa5betal se utilizan en un análisis de inhibición competitivo y se utiliza FACS para evaluar las localidades de enlace de dos anticuerpos anti -alfa5betal en relación entre sí. Por ejemplo, las células HUVEC pueden lavarse en un tubo cónico y girarse 5 minutos a 1000 r.p.m. El gránulo se lava típicamente dos veces. Después, las células pueden resuspenderse , contarse y mantenerse sobre hielo hasta su uso. 100 ul de un primer anticuerpo anti-alfa5betal (e.g., inicio a una concentración de 1 ug/ml o a una concentración más baja) pueden agregarse al pozo. Enseguida, pueden agregarse 100 ul (e.g., 20 x 10"5 células) de las células por pozo e incubarse sobre hielo durante 30 minutos. Enseguida, 100 ul de un anticuerpo anti -alfa5betal biotinilado (reserva de 5 ug/ml) pueden agregarse a cada pozo e incubarse sobre hielo durante 30 minutos. Las células se lavan entonces y se granulan durante 5 minutos a 1000 r.p.m. El sobrenadante se aspira. Se agrega un segundo anticuerpo de estreptavidina R-ficoeritrina conjugado (Jackson 016-110-084) al pozo (100 ul a 1:1000) . Enseguida, la placa puede envolverse en hoja metálica e incubarse sobre hielo durante 30 minutos. Después de la incubación, el gránulo puede lavarse y granularse 5 minutos a 1000 r.p.m. El gránulo puede resuspenderse y transferirse a micro tubos de titulación para el análisis FACS . Un "factor o agente angiogénico" es un factor de crecimiento que estimula el desarrollo de los vasos sanguíneos, e.g., promueve la angiogénesis , el crecimiento celular endotelial, la estabilidad de los vasos sanguíneos y/o la vasculogénesis , etc. Por ejemplo, los factores angiogénicos incluyen, pero no se limitan a, e.g., VEGF y miembros de la familia VEGF, PIGF, familia PDGF, familia del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFs) , ligandos TIE (angiopoyetinas) , afrinas, Del-1, factores de crecimiento de fibroblastos: folistatina acídica (aFGF) y básica (bFGF) , factor de estimulación de colonia de granulocitos (G-CSF) , factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) /factor de dispersión (SF) , interleucina- 8 (IL-8), leptina, midkina, factor de crecimiento placentario, factor de crecimiento celular endotelial derivado de plaquetas (PD-ECGF) , factor de crecimiento derivado de plaquetas, especialmente PDGF-BB o PDGFR-beta, pleyotropina (PTN) , progranulina , proliferina, factor alfa de crecimiento de transformación (TGF-alfa) , factor beta de crecimiento de transformación (TGF-beta) , factor alfa de necrosis de tumor (TNF-alfa) , factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) /factor de permeabilidad vascular (VPF) , etc. También incluye factores que aceleran la cicatrización de heridas, tales como la hormona de crecimiento, factor-1 de crecimiento tipo insulina (IGF-1) , VIGF, factor de crecimiento epidérmico (EGF) , CTGF y miembros de su familia, y TGF-alfa y TGF-beta. Ver e.g., Klagsbrun y D'amore, Annu. Rev. Physiol . , 53:217-39 (1991); Streit y Detmar, Oncogene, 22:3172-3179 (2003); Ferrara & Alitalo, Nature Medicine 5 (12) : 1359-1364 (1999); Tonini et al . , Oncogene, 22:6549-6556 (2003) (e.g., la Tabla 1 enlista factores angiogénicos conocidos); y Sato Int. J. Clin. Oncol., 8:200-206 (2003). El "Kd" o "valor Kd" para un anticuerpo anti-VEGF de acuerdo con esta invención se encuentra en una modalidad preferida, medido mediante un análisis de enlace de VEGF radiomarcado (RIA) llevado a cabo con la versión Fab del anticuerpo y una molécula VEGF, como se describe por medio del siguiente análisis que mide la afinidad de enlace en solución de Fabs o VEGF equilibrando el Fab con una mínima concentración de VEGF (109) marcado con (125I) en presencia de una serie de titulaciones de VEGF no marcado, después capturando el VEGF enlazado con una placa recubierta con anticuerpo anti-Fab (Chen et al., (1999) J. Mol. Biol . , 293:865-881). Para establecer las condiciones para el análisis, se recubren durante la noche las placas de microtitulación con 5 ug/ml de un anticuerpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) en 50 mM de carbonato de sodio (pH 9.6) y subsecuentemente se bloquean con albúmina de suero bovino al 2% (peso/volumen) en PBS durante dos a cinco horas a temperatura ambiente (aproximadamente 23 °C) . En una placa no absorbente (Nunc # 269620) , se mezclan 100 pM o 26 pM de VEGF (109= [125I] con diluciones seriales de un Fab de interés, e.g., Fab-12 (Presta et al., (1997) Cáncer Res. 57:4593-4599) . El Fab de interés se incuba entonces durante la noche; sin embargo, la incubación puede continuar durante 65 horas para asegurar que se alcance el equilibrio. Enseguida, las mezclas se transfieren a la placa de captura para su incubación a temperatura ambiente durante una hora. La solución se retira entonces y la placa se lava ocho veces con Tween-20 al 0.1% en PBS . Cuando las placas se han secado, se agregan 150 ul/pozo de escintilante (MicroScint -20 ,· Packard) , y las placas se cuentan en un contador gamma Topcount (Packard) durante diez minutos. Las concentraciones de cada Fab que proporcionan menos o igual a 20% de enlace máximo se seleccionan para su uso en análisis de enlace competitivo. De acuerdo con otra modalidad, el Kd o valor Kd se mide utilizando análisis de resonancia de plasmon de superficie utilizando un BIAcore™-2000 o un BIAcore™-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25°C con chips CM5 de hVEGF inmovilizado (8-109) a -10 unidades de respuesta (RU) . Brevemente, se activan los chips biosensores de dextrano carboximetilado (CM5, BIAcore Inc.) con hidrocloruro de N-etil-N' - (3-dimetilaminopropil) -carbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) de acuerdo con las instrucciones del proveedor. Se diluye VEGF humano con 10 mM de acetato de sodio, pH 4.8, en 5 ug/ml (-0.2 uM) antes de la inyección a una tasa de flujo de 5 ul/minutos para lograr aproximadamente unidades de respuesta (RU) de la proteína acoplada. Después de la inyección del VEGF humano, se inyecta 1 M de etanolamina para bloquear los grupos no reactivados. Para las mediciones de cinética, se inyectan diluciones seriales dos veces de Fab (0.78 nM a 500 nM) en PBS con Tween 20 al 0.05% (PBST) a 25 °C a una tasa de flujo de aproximadamente 25 ul/minuto. Se calculan los índices de asociación (kon) y los índices de disociación (kDff) utilizando un modelo de enlace Langmuir de uno-a-uno (BIAcore Evaluation Software versión 3.2) ajustando simultáneamente el sensograma de asociación y disociación. La constante de disociación de equilibrio (Kd) se calculó como la proporción k0ff/kon- Ver e.g., Chen Y., et al., (1999) J. Mol. Biol . 293_865-881. Si el índice-on excede 106 M"1 S"1 mediante el análisis de resonancia de plasmon de superficie anterior, entonces el índice-on puede determinarse utilizando una técnica de saciado fluorescente que mide el incremento o la disminución en la intensidad de la emisión de fluorescencia (excitación = 295 nm; emisión = 340 nm, 16 nm paso de banda) a 25 °C de 20 nM de un anticuerpo anti-VEGF (forma Fab) en PBS, pH 7.2, en presencia de concentraciones aumentadas de la forma corta de VEGF humano (8-109) o de VEGF de ratón medidas en un espectrómetro, tal como un espectrómetro equipado con paro de flujo (Aviv Instruments) o un espectrómetro SLM-Aminco serie 8000 (ThermoSpectronic) con una cuba agitada. Pueden llevarse a cabo análisis de enlace similares para determinar el Kd de un Fab anti-alfa5betal o un anticuerpo utilizando alfa5betal como objetivo. Como se utiliza en la presente, un sujeto que va a tratarse es un mamífero (e.g., humano, primate no humano, rata, ratón, vaca, caballo, cerdo, oveja, cabra, perro, gato, etc.) . El sujeto puede ser un paciente clínico, un voluntario de estudio clínico, un animal experimental, etc. El sujeto puede ser sospechoso de tener o de encontrarse en riesgo de tener un cáncer, una enfermedad inmune, o cualquier otra enfermedad que tiene angiogénesis anormal, o ser diagnosticado con cáncer, enfermedad inmune o cualquier otra enfermedad que tiene angiogénesis anormal . Se conocen en la técnica muchos métodos diagnósticos para el cáncer, enfermedad inmune o cualquier otra enfermedad que exhibe angiogénesis anormal y la delineación clínica de esas enfermedades. De acuerdo con una modalidad preferida, el sujeto que va a tratarse, de acuerdo con esta invención, es un humano . El término angiogénesis anormal se presenta cuando crecen nuevos vasos sanguíneos ya sea excesivamente o inapropiadamente (e.g., siendo no deseada la ubicación, el tiempo o el inicio de la angiogénesis desde el punto de vista médico) en un estado de enfermedad o tal que ocasione un estado de enfermedad. La angiogénesis excesiva, inapropiada o no controlada se presenta cuando existe un crecimiento de nuevos vasos sanguíneos que contribuye al empeoramiento del estado de enfermedad u ocasiona un estado de enfermedad, tal como en el cáncer, tumores sólidos especialmente vascularizados (incluyendo cáncer de colon, de pulmón (especialmente cáncer pulmonar de célula pequeña) o cáncer de próstata) , enfermedades ocasionadas por la neovascularización ocular, especialmente ceguera diabética, retinopatías , retinopatía principalmente diabética o degeneración macular inducida por la edad, neovascularización coroidal (CNV) , edema macular diabético, miopía patológica, enfermedad von Hippel -Lindau, histoplasmosis del ojo, oclusión de la vena retinal central (CRVO) , neovascularización de córnea, neovascularización de retina y rubeosis; psoriasis, artritis psoriática, hemangioblastoma tal como hemangioma; enfermedades renales inflamatorias, tales como glomerulonefritis , especialmente glomerulonefritis mesangioproliferativa , síndrome urémico hemolítico, nefropatía diabética o nefroesclerosis hipertensiva , varias enfermedades inflamatorias, tales como artritis, especialmente artritis reumatoide, enfermedad intestinal inflamatoria, psoriasis, sarcoidosis, arteroesclerosis arterial y enfermedades que se presentan después de transplantes, endometriosis o asma crónica y más de 70 condiciones diferentes. Los nuevos vasos sanguíneos pueden alimentar los tejidos enfermos, destruir los tejidos normales y, en el caso del cáncer, los nuevos vasos pueden permitir que las células de tumor escapen hacia la circulación y se alojen en otros órganos (metástasis del tumor) . La presente invención contempla el tratamiento de aquellos pacientes que se encuentran en riesgo de desarrollar las enfermedades antes mencionadas . Otros pacientes que son candidatos para recibir los anticuerpos o polipéptidos de esta invención, tienen o se encuentran en riesgo de desarrollar, la proliferación anormal del tejido fibrovascular, rosácea de acné, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, oclusión de arterias, queratitis atópica, úlceras bacterianas, enfermedad de Bechets, tumores contenidos en la sangre, enfermedad obstructiva de carótida, neovascularización coroidal, inflamación crónica, desprendimiento de retina crónico, uveítis crónica, vitritis crónica, sobre utilización de lentes de contacto, rechazo al injerto de córnea, neovascularización de córnea, neovascularización de injerto de córnea, enfermedad de Crohn, enfermedad de Eales, queratoconj untivitis epidémica, úlceras por hongos, infecciones de herpes simple, infecciones de herpes zoster, síndromes de hiperviscosidad, sarcoma de Kaposi, leucemia, degeneración de lípidos, enfermedad de Lyme, queratolisis marginal, úlcera Mooren, infecciones por micobacterias diferentes a lepra, miopía, enfermedad neovascular ocular, fosas ópticas, síndrome Osler-Weber (Osler-Weber-Rendu, osteoartritis , infecciones por protozoarios , planitis pars, penfigoide, filectenulosis , poliarteritis , complicaciones post-láser, infecciones por protozoarios, pseudoxantoma elasticum, queratitis sicca pterygium, queratotomía radial, neovascularización retinal, retinopatía de premadurez, fibroplasias retrolentales , sarcoide, escleritis, anemia drepanocítica , síndrome de Sogren, tumores sólidos, enfermedad de Stargart, enfermedad de Steven Johnson, queratitis límbica superior, sífilis, lupus sistémico, degeneración marginal de Terrien, toxoplasmosis , trauma, tumores de sarcoma Ewing, tumores de neuroblastoma, tumores de osteosarcoma , tumores de retinoblastoma, tumores de rhabdomiosarcoma , colitis ulcerativa, oclusión de venas, deficiencia de vitamina A y sarcoidosis de Wegener, angiogénesis no deseada asociada con diabetes, enfermedades parasitarias, cicatrización anormal de heridas, hipertrofia posterior a cirugía, lesión o trauma, inhibición del crecimiento del cabello, inhibición de la ovulación y formación de corpus luteum, inhibición de implantación e inhibición del desarrollo del embrión en el útero . Las terapias anti -angiogénesis son útiles en el tratamiento general del rechazo al injerto, inflamación pulmonar, síndrome nefrótico, preeclampsia, efusión de pericardio, tal como la asociada con pericarditis, y efusión de la pleura, enfermedades y trastornos caracterizados por una permeabilidad vascular indeseable, e.g., edema asociado con tumores cerebrales, ascitis asociada con malignidades, síndrome de Meig, inflamación pulmonar, síndrome nefrótico, efusión del pericardio, efusión de la pleura, permeabilidad asociada con enfermedades cardiovasculares tales como la condición posterior a infartos al miocardio y choques y lo similar . Otras enfermedades dependientes de la angiogenesis, de acuerdo con esta invención, incluyen angiofibroma (sangre anormal de vasos propensos a sangrado) , glaucoma neovascular (crecimiento de vasos sanguíneos en el ojo), malformaciones arteriovenosas (comunicación anormal entre arterias y venas) , fracturas de seudoartrosis (fracturas sin cicatrización) , placas arteroescleróticas (endurecimiento de las arterias) , granuloma piogénico (lesión común de piel compuesta de vasos sanguíneos), escleroderma (una forma de enfermedad del tejido conectivo) , hemangioma (tumor compuesto de vasos sanguíneos) , tracoma (causa principal de ceguera en el tercer mundo) , articulaciones hemofílicas, adhesiones vasculares y escaras hipertróficas (formación anormal de escaras) . "Tratamiento" se refiere tanto a tratamiento terapéutico como a medidas profilácticas o preventivas. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen a aquellos ya con el trastorno así como aquellos en los cuales va a prevenirse el trastorno. Los términos "recurrencia" , "recaída" , o "recurrente" se refieren al retorno de un cáncer o una enfermedad después de la evaluación clínica de la desaparición de la enfermedad. Un diagnóstico de metástasis distante o recurrencia local puede considerarse una recaída. El término "refractario" o "resistente" se refiere a un cáncer o enfermedad que no ha respondido al tratamiento. El término "terapia adyuvante" se refiere al tratamiento proporcionado después de la terapia primaria, comúnmente cirugía. La terapia adyuvante para el cáncer o enfermedad puede incluir terapia inmune, quimioterapia, terapia de radiación o terapia hormonal . El término "terapia de mantenimiento" se refiere a un re- ratamiento programado que se proporciona para ayudar a mantener los efectos de un tratamiento previo. La terapia de mantenimiento se proporciona frecuentemente para ayudar a mantener el cáncer en remisión o para prolongar una respuesta a una terapia específica sin importar el progreso de la enfermedad. El término "cáncer invasivo" se refiere a un cáncer que se ha extendido más allá de la capa de tejido en la cual se inició hacia los tejidos normales circundantes. Los cánceres invasivos pueden o no ser metastásicos .

El término "cáncer no invasivo" se refiere a un cáncer muy temprano que no se ha extendido más allá del tejido de origen. El término "supervivencia libre de progresión" en oncología, se refiere a la longitud de tiempo durante y después del tratamiento, en el que el cáncer no crece. La supervivencia libre de progresión incluye la cantidad de tiempo en que los pacientes han experimentado una respuesta completa o una respuesta parcial, así como la cantidad de tiempo en que los pacientes han experimentado una enfermedad estable . El término "enfermedad progresiva" en oncología, puede referirse a un crecimiento del tumor de más de 20 por ciento desde que se inició el tratamiento, ya sea debido a un incremento en la masa o a una extensión en el tumor. Un "trastorno" es cualquier condición que se beneficiaría del tratamiento con el anticuerpo. Por ejemplo, los mamíferos que sufren de o que necesitan profilaxis contra la angiogénesis anormal (angiogénesis excesiva, inapropiada o no controlada) o la permeabilidad vascular. Esto incluye trastornos o enfermedades crónicas y agudas incluyendo aquellas condiciones patológicas que predisponen al mamífero al trastorno en cuestión. Ejemplos no limitantes de los trastornos que van a tratarse en la presente, incluyen tumores malignos y benignos; no leucemias y malignidades linfoides; trastornos neuronales, gliales, astrocitales , hipotalámicas y otros glandulares, macrófagos, epiteliales, estromales y blastocélicos ; y trastornos inflamatorios, angiogénicos e inmunológicos . Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren a o describen la condición física en mamíferos, que se caracteriza típicamente por un crecimiento celular no regulado. Ejemplos de cáncer incluyen, pero no se limitan a carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia. Ejemplos más particulares de tales cánceres incluyen cáncer de célula escamosa, glioblastoma , cáncer cervical, cáncer ovárico, cáncer hepático, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial, carcinoma de glándula salival, cáncer de riñon, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer rectal, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, incluyendo cáncer pulmonar de célula pequeña, cáncer de célula no pequeña, adenocarcinoma del pulmón y carcinoma escamoso del pulmón, cáncer de célula escamosa (e.g., cáncer de célula escamosa epitelial) , cáncer de próstata, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago incluyendo cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, retinoblastoma, astrocitoma, tracomas, arrenoblastomas , hepatoma, malignidades hematologicas incluyendo linfoma no de Hodgkin (NHL) , mieloma múltiple y malignidades hematológicas agudas, carcinoma endometrial o uterino, endometriosis , fibrosarcomas , coriocarcinoma , carcinoma de glándula salival, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinomas esofagales, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, carcinoma nasofaríngeo, carcinomas de laringe, sarcoma de Kaposi, melanoma, carcinomas de piel, Schwanoma, oligodendroglioma, neuroblastomas , rhabdomiosarcoma, sarcoma osteogénico, leiomiosarcomas , carcinomas del tracto urinario, carcinomas de tiroides, tumor de Wilm, asi como linfoma de célula B (incluyendo linfoma no de Hodgkin de bajo grado/folicular (NHL) ; NHL linfocítico pequeño (SL) ; NHL de grado intermedio/folicular; NHL difuso de grado intermedio; NHL inmunoblástico de grado alto; NHL linfoblástico de grado alto; NHL de célula no dividida pequeña de grado alto; NHL de enfermedad voluminosa; linfoma de célula mantle; linfoma relacionado con SIDA; y macroglobulinemia de aldenstrom) ; leucemia linfocítica crónica (CLL) ; leucemia linfoblástica aguda (ALL) ; leucemia de célula cabelluda; leucemia mieloblástica crónica; y trastorno linfoproliferativo post-transplante (PTLD) , así como la proliferación vascular anormal asociada con fakomatosis y síndrome de Meig. "Tumor", como se utiliza en la presente, se refiere a todo crecimiento y proliferación de célula neoplásica, ya sea maligno o benigno, y en todas las células y tejidos pre- cancerosos y cancerosos . El término "composición anti -neoplásica" o "agente anti-neoplásico" se refiere a una composición útil para tratar el cáncer, que comprende al menos un agente terapéutico activo, e.g., "agente anti-cáncer" . Ejemplos de agentes terapéuticos (agentes anti-cáncer) incluyen, pero no se limitan a, e.g., agentes quimioterapéuticos , agentes inhibidores del crecimiento, agentes citotóxicos, agentes utilizados en terapia de radiación, agentes anti-angiogénesis , agentes anti-tubulina, y otros agentes para tratar el cáncer, tales como anticuerpos anti-HER2, anticuerpos anti-CD20, un antagonista del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) (e.g., un inhibidor de tirosina cinasa) , inhibidor de HER1/EGFR (e.g., erlotinib (Tarceva™) , inhibidores del factor de crecimiento derivados de plaquetas (e.g., Gleevec™ (Imatinib mesilato) ) , un inhibidor COX-2 (e.g., celecoxib) , interferonas , citosinas, antagonistas (e.g., anticuerpos de neutralización) que se enlazan a uno o más de los siguientes objetivos ErbB2 , ErbB4 , PDGFR-beta, BAFF, BR3 , APRIL, BCMA o receptor (es) VEGF, TRAIL/Apo2 y otros agentes químicos bioactivos y orgánicos, etc. También se contemplan en esta invención las combinaciones de los mismos. Un "agente inhibidor del crecimiento" como se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto o composición que inhibe el crecimiento de una célula in vitro y/o in vivo. Así, el agente inhibidor del crecimiento puede ser uno que reduce significativamente el porcentaje de células en fase S. Ejemplos de agentes inhibidores del crecimiento incluyen agentes que bloquean el progreso del ciclo celular (en un sitio diferente a la fase S) , tales como los agentes que inducen el arresto de Gl y el arresto de fase M. los bloqueadores de fase M clásicos incluyen los inhibidores vinca (vincristina y vinblastina) TAXOL®, y topo II tales como doxorubicin, epirubicin, daunorubicin, etoposida y bleomicin. Esos agentes que arrestan Gl también se derraman sobre el arresto de fase S, por ejemplo, agentes de alquilación de ADN tales como tamoxifen, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatin, metrotrexato , 5-fluoroacilo y ara-C. Puede encontrarse información adicional en The Molecular Basis of Cáncer (La base molecular del cáncer), Mendelsohn e Israel, eds . , Capítulo 1, titulado "Cell cycle regulation, oncogenes and antineoplastic drugs" (Regulación del ciclo celular, oncógenos y drogas antineoplásicas) por Murakami et al., (WB Saunders : Philadelphia, 1995), especialmente p. 13. El término "agente citotóxico" como se utiliza en la presente, se refiere a una sustancia que inhibe o evita la función de las células y/o que ocasiona la destrucción de las células. El término pretende incluir isótopos radiactivos (e.g., I131, I125, Y90 y Re186), agentes quimioterapéuticos y toxinas tales como toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, de hongos, vegetal o animal, o fragmentos de los mismos . Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen un compuesto útil en el tratamiento del cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen agentes de alquilación tales como tiotepa y CYTOXAN® ciclofosfamida ; alquil sulfonatos tales como busulfan, improsulfan y piposulfan; aziridinas tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluyendo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida , trietilenotiofosforamida y trimetilolomelamina ; acetogeninas (especialmente bullatacin y bullatacinona) ; una camptotecina (incluyendo el análogo sintético topotecan) ; briostatina ; calistatina ; CC-1065 (incluyendo los análogos sintéticos adozelesin, carzelesin y bizelesin) ; criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8) ; dolastatin; duocarmicin (incluyendo los análogos sintéticos K -2189 y CB1-TM1) ; eleuterobin; pancratistatin; una sarcodictina ; espongistatin; mostazas de nitrógeno tales como clorambucil, clornafazina , colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, hidrocloruro de óxido de mecloretamina , melfalan, novembicin, fenesterina, prednimustina , trofosfamida, mostaza de uracilo, nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocin, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimustina ; antibióticos tales como los antibióticos de enediína (e.g., caliqueamicin, especialmente caliqueamicin gamma II y caliqueamicin omega II (ver, e.g., Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl . , 33:183-186 (1994)); dinemicin, incluyendo dinemicin A; bisfosfonatos , tales como clodronato; una esperamicina ; así como cromóforo de neocarzinostatina y cromóforos del antibiótico de cromoproteína de enediína) , aclacinomicinas , actinomicina , autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicin, carabicin, carminomicin, carzinofilin, cromomicinas , dactinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, ADRIAMYCIN® doxorubicin (incluyendo morfolino-doxorubicin, cianomorfolino-doxorubicin, 2 -pirrolino-doxorubicin y deoxidoxorubicin) , epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicin, olivomicinas , peplomicin, potfiromicin, puromicin, quelamicin, rodorubicin, estreptonigrin, estreptozocin, tubercidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin; anti -metabolitos tales como metotrexato y 5-fluoroacilo (5-FU) ; análogos de ácido fólico tales como denopterin, metotrexato, pteropterin, trimetrexato ; análogos de purina tales como fludarabina, 6- mercaptopurina , tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6 -azauridina , carmofur, citarabina, dideoxiuridina , doxifluridina , enocitabina, floxuridina ; andrógenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitioestanol , mepitiostano , testolactona ; anti-adrenales tales como aminoglutetimida , mitotano, trilostano; rellenador de ácido fólico tal como ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glicosida; ácido aminolevulínico ; eniluracilo ; amsacrina; bestrabucil ; bisantreno; edatrexato; defofamina; demecolcina ; diazicuona; elfornitina ; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglucida; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinan; lonidainina ; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas ; mitoguazona; mitoxantrona ; mopidanmol; nitraerina; pentostatina ; fenamet; pirarubicin; losoxantrona ; ácido podofilínico; 2 -etilhidrazida; procarbazina ; complejo de polisacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR) ; razoxano; rizoxin; sizofiran; espirogermanio ; ácido tenuazónico; triazicuona; 2 , 2 ' , 2 ' ' -triclorotrietilamina ; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurin A, roridin A y anguidina) ; uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol ; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinosida ("Ara-C"); ciclofosfamida ; tiotepa; taxoides, e.g., TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANTEM libre de cremofor, formulación de paclitaxel de nanopartículas fabricadas de albúmina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) y TAXOTERE® doxetaxel (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Francia) ; cloranbucil ; GEMZAR® gemcitabina ; 6-tioguanina; mercaptopurina ; metotrexato ; análogos de platino tales como cisplatin y carboplatin; vinblastina ; platino; etoposida (VP-16) ; ifosfamida; mitoxantrona ; vincristina; NAVELBINE® vinorelbina; novantrona; teniposida; edatrexato; daunomicin; aminopterin; xeloda; ibandronato ; irinotecan (Camptostar, CPT-ll) (incluyendo el régimen de tratamiento de irinotecan con 5-FU y leucovorin) ; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO) ; retinoides tales como ácido retinoico; capecitabina ; combretastatin; leucovorin (LV) ; oxaliplatin; incluyendo el régimen de tratamiento de oxaliplatin (FOLFOX) ; inhibidores de PKC-alfa, Raf , H-Ras y EGFR (e.g., erlotinib (Tarceva TM) ) que reducen la proliferación celular, y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores. También se encuentran incluidos en esta definición los agentes hormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal en tumores, tales como los anti-estrógenos y moduladores selectivos del receptor de estrógenos (SERMs) , incluyendo, por ejemplo, tamoxifen (incluyendo NOLVADEX® tamoxifen) , raloxifeno, droloxifeno, 4 -hidroxitamoxifen, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, y FARESTON toremifeno; inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa que regula la producción de estrógenos en las glándulas adrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminogluteimida, MEGASA® acetato de megestrol, AROMASIN® exemestano, formestaina, fadrozol, RIVISOR® vorozol, FEMARA® letrozol, y ARIMIDEX® anastrozol; y anti-andrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; así como troxacitabina (un análogo de 1 , 3 -dioxolano nucleósido citosina) ; oligonucleótidos de antisentido, particularmente aquellos que inhiben la expresión de genes en las trayectorias de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras; ribozimas tales como el inhibidor de expresión de VEGF (e.g., ANGIOZYME® ribozima) y un inhibidor de expresión de HER2 ; vacunas tales como vacunas de terapia de gen, por ejemplo, vacuna ALLOVECTIN®, vacuna LEUVECTIN®, y vacuna VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; LUROTECAN® inhibidor de topoisomerasa 1; ABARELIX® rmRH; vinorelbina y esperamicinas (ver Patente de E.U. No. 4,675,187) y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores. El término "prodroga" como se utiliza en esta solicitud, se refiere a una forma de precursor o derivado de una sustancia farmacéuticamente activa (e.g., molécula pequeña) que es menos tóxica a las células enfermas en comparación con la droga original y que es capaz de activarse enzimáticamente o convertirse en la forma original más activa. Ver, e.g., Wilman, "Prodrugs in Cáncer Chemotherapy" (Prodrogas en quimioterapia de cáncer) Biochemical Society Transactions , 14 pp . 375-382, 615a Conferencia, Belfast (1986) y Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery" (Prodrogas: un procedimiento químico para suministro de drogas dirigido) Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.) pp. 247-267, Humana Press (1985). Las prodrogas de esta invención incluyen, pero no se limitan a, prodrogas que contienen fosfato, prodrogas que contienen tiofosfato, prodrogas que contienen sulfato, prodrogas que contienen péptido, prodrogas modificadas con D-aminoácido , prodrogas glicosiladas , prodrogas que contienen beta-lactam, prodrogas que contienen fenoxiacetamida sustituida u opcionalmente prodrogas que contienen fenilacetamida sustituida, 5-fluorocitosina y otras prodrogas de 5-fluorouridina que pueden convertirse en la droga libre citotóxica más activa. Ejemplos de drogas citotóxicas que pueden derivatizarse en una forma de prodroga para su uso en esta invención, incluyen, pero no se limitan a, aquellos agentes quimioterapéuticos descritos anteriormente. "Aislado", cuando se utiliza para describir los varios polipéptidos descritos en la presente, significa un polipéptido que se ha identificado y separado y/o recuperado de una célula o de un cultivo celular del cual se expresó. Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que típicamente interferirían con los usos diagnósticos o terapéuticos para el polipéptido, y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteináceos o no proteináceos . En modalidades preferidas, el polipéptido se purificará (1) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos de terminal N o internas mediante el uso de un secuenciador de cuba giratoria, o (2) hasta homogeneidad mediante SDS-PAGE bajo condiciones de no reducción o de reducción utilizando azul de Coomassie o, preferentemente, colorante de plata. El polipéptido aislado incluye el polipéptido in situ dentro de células recombinantes , dado que al menos un componente del ambiente natural del polipéptido no se encontrará presente. Comúnmente, sin embargo, el polipéptido aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación. Un ácido nucleico que codifica para el polipéptido "aislado" u otro ácido nucleico que codifica para el polipéptido es una molécula de ácido nucleico que se identifica y se separa de al menos una molécula contaminante de ácido nucleico con la cual se asocia comúnmente en la fuente natural del ácido nucleico que codifica para el polipéptido. Una molécula de ácido nucleico que codifica para el polipéptido aislado es diferente a la que se encuentra en la forma o ubicación en la cual se encuentra en la naturaleza. En consecuencia, las moléculas de ácido nucleico que codifican para el polipéptido aislado se distinguen de la molécula de ácido nucleico que codifica para el polipéptido específico dado que existen en las células naturales. Sin embargo, la molécula de ácido nucleico que codifica para el polipéptido aislado incluye moléculas de ácido nucleico que codifican para el polipéptido contenidas en las células que comúnmente expresan el polipéptido, cuando, por ejemplo, la molécula de ácido nucleico se encuentra en una ubicación cromosómica diferente de aquella de las células naturales. El término "secuencias de control" se refiere a las secuencias de ADN necesarias para la expresión de una secuencia de codificación operablemente enlazada en un organismo huésped particular. Las secuencias de control que son adecuadas para procariotos, por ejemplo, incluyen un promotor, opcionalmente una secuencia operadora y un sitio de enlace de ribosoma . Se sabe que las células eucariótícas utilizan promotores, señales de poliadenilacion y mej oradores . El ácido nucleico se encuentra "operablemente enlazado" cuando se encuentra colocado en una relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, el ADN para una presecuencia o guía secretorio se encuentra operablemente enlazado al ADN para un polipéptido, si se expresa como una preproteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o mej orador se encuentra operablemente enlazado a una secuencia de codificación si afecta la transcripción de la secuencia; o un sitio de enlace de ribosoma se encuentra operablemente enlazado a una secuencia de codificación, si se encuentra colocado a fin de facilitar la translación. Generalmente, "operablemente enlazado" significa que las secuencias de ADN enlazadas son contiguas y, en el caso de un guía secretorio, contiguas y en fase de lectura. Sin embargo, los mejoradores no tienen que ser contiguos. El enlace se logra mediante ligación en los sitios de restricción convenientes. Si tales sitios no existen, se utilizan los adaptadores o enlazadores de oligonucleótido sintéticos de acuerdo con la práctica convencional . "Condiciones rigurosas" o "condiciones de alta rigurosidad", como se define en la presente, pueden identificarse como aquellas que: (1) emplean baja fuerza iónica y alta temperatura para el lavado, por ejemplo, 0.015 M de cloruro de sodio/0.0015 M de citrato de sodio/dodecil sulfato de sodio al 0.1% a 50°C; (2) emplean, durante la hibridación, un agente de desnaturalización, tal como formamida, por ejemplo, formamida al 50% (v/v) con albúmina de suero bovino al 0.1%/Ficoll al 0.1%/polivinilpirrolidona al l%/50 mM de amortiguador de fosfato de sodio a un pH 6.5 con 750 mM de cloruro de sodio, 75 mM de citrato de sodio a 42°C; o (3) hibridación durante la noche en una solución que emplea formamida al 50%, 5 x SSC (0.75 M de NaCl , 0.075 M de citrato de sodio) , 50 mM de fosfato de sodio (pH 6.8) , pirofosfato de sodio al 0.1%, 5 x solución de Denhardt , ADN de esperma de salmón sonicado (50 ug/ml) , SDS al 0.1% y sulfato de dextrano al 10% a 42 °C, con un lavado de 10 minutos a 42 °C en 0.2 x SSC (cloruro de sodio/citrato de sodio) seguido por un lavado de 10 minutos de alta rigurosidad que consiste de 0.1 x SSC conteniendo EDTA a 55°C. "Identidad porcentual (%) de secuencia de aminoácidos" , con respecto a las secuencias de polipéptido identificadas en la presente, se define como el porcentaje de residuos de aminoácido en una secuencia candidato que son idénticos a los residuos de aminoácido en el polipéptido que se compara, después de alinear las secuencias e introducir espacios, si es necesario, para lograr la máxima identidad porcentual de secuencia y sin considerar ninguna sustitución conservadora como parte de la identidad de secuencia. La alineación para propósitos de determinación de la identidad porcentual de secuencia de aminoácidos, puede lograrse de varias maneras que se encuentran dentro de la experiencia en la técnica, por ejemplo, utilizando software computarizado públicamente disponible tal como el software BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNASTAR) . Los expertos en la técnica pueden determinar los parámetros apropiados para medir la alineación, incluyendo cualquier algoritmo necesario para lograr la alineación máxima sobre la longitud total de las secuencias que se comparan. Para los propósitos en la presente, sin embargo, los valores de la identidad porcentual de secuencia de aminoácidos se generan utilizando el programa computarizado de comparación de secuencia ALIGN-2. El programa computarizado de comparación de secuencia ALIGN-2 fue autorizado por Genentech Inc., y el código de fuente (Tabla 1) se ha presentado con la documentación del usuario en la U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559, en donde se registra bajo el No. del U.S. Copyright Registration TXU510087. El programa ALIGN-2 se encuentra públicamente disponible mediante Genentech Inc., South San Francisco, California. El programa ALIGN-2 debe compilarse para su uso en un sistema de operación UNIX, preferentemente UNIX V4-0D. Todos los parámetros de comparación de secuencia se establecen por el programa ALIGN-2 y no varían. Las secuencias de aminoácidos descritas en la presente son secuencias de aminoácidos contiguas a menos que se especifique de otra manera. Como se utiliza en la presente, el término "inmunoadhesina" designa moléculas tipo anticuerpo que combinan la especificidad de enlace de una proteína heteróloga (una "adhesina") con las funciones de efector de los dominios constantes de inmunoglobulina .

Estructuralmente, las inmunoadhesinas comprenden una fusión de una secuencia de aminoácidos con la especificidad de enlace deseada que es diferente al reconocimiento del antígeno y al sitio de enlace de un anticuerpo (i.e., es "heteróloga") y una secuencia de dominio constante de inmunoglobulina. La parte de adhesina de una molécula de inmunoadhesina es típicamente una secuencia de aminoácidos contigua que comprende al menos el sitio de enlace de un receptor o de un ligando, tal como un ligando VEGF o uno de fibronectin. La secuencia de dominio constante de inmunoglobulina en la inmunoadhesina puede obtenerse a partir de cualquier inmunoglobulina, tal como los subtipos IgG-1, IgG-2, IgG-3, o IgG-4, IgA (incluyendo IgA-1 q IgA-2), IgE, IgD o IgM. Los peptibodies, que comprenden frecuentemente una secuencia derivada de una selección de despliegue de fago de las secuencias que se enlazan específicamente a un objetivo fusionado a una porción Fe de una inmunoglobulina, pueden considerarse, en la presente, inmunoadhesinas. El término "anticuerpo" se utiliza en el sentido más amplio y cubre específicamente, por ejemplo, anticuerpos monoclonales únicos (incluyendo anticuerpos agonistas, antagonistas y neutralizantes) , composiciones de anticuerpo con especificidad poliepitópica, anticuerpos policlonales , anti -anticuerpos monocatenarios y fragmentos de anticuerpos (ver a continuación) siempre que se enlacen específicamente a un polipéptido nativo y/o que exhiban una actividad biológica o la actividad inmunológica de esta invención. De acuerdo con una modalidad, el anticuerpo se enlaza a una forma oligomérica de una proteína objetivo, e.g., una forma trimérica. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo se enlaza específicamente a una proteína, cuyo enlace puede inhibirse mediante un anticuerpo monoclonal de esta invención (e.g., un anticuerpo depositado de esta invención, etc.). La frase "fragmento o análogo funcional" de un anticuerpo es un compuesto que tiene una actividad biológica cualitativa en común con un anticuerpo al cual se refiere. Por ejemplo, un fragmento o análogo funcional de un anticuerpo de esta invención puede ser uno que puede enlazarse específicamente a VEGF o a alfa5betal. En una modalidad, el anticuerpo puede evitar o sustancialmente reducir la capacidad de un VEGF para inducir la proliferación celular. Un "anticuerpo aislado" es uno que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural . Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interferirían con los usos diagnósticos o terapéuticos del anticuerpo y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteináceos o no proteináceos . En modalidades preferidas, el anticuerpo se purificará (1) a más del 95% por peso del anticuerpo según se determina por medio del método Lowry, y más preferentemente a más del 99% por peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia de aminoácidos de terminal N o interna mediante el uso de un secuenciador de cuba giratoria, o (3) hasta homogeneidad mediante SDS-PAGE bajo condiciones de reducción o de no reducción utilizando azul de Coomassie o, preferentemente, colorante de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células recombinantes , dado que al menos un componente del ambiente natural del polipéptido no se encontrará presente. Sin embargo, comúnmente, el anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación. La unidad de anticuerpo básico de 4 cadenas es una glicoproteína heterotetramérica compuesta de dos cadenas ligeras (L) idénticas y dos cadenas pesadas (H) idénticas (un anticuerpo Ig consiste de 5 de las unidades de heterotetrámero básicas conjuntamente con un polipéptido adicional llamado cadena J, y en consecuencia, contiene 10 sitios de enlace al antígeno, mientras que los anticuerpos IgA secretados pueden polimerizarse para formar ensamblajes polivalentes que comprenden 2-5 de las unidades básicas de 4 cadenas conjuntamente con la cadena J) . En el caso de las IgGs, la unidad de 4 cadenas es generalmente de aproximadamente 150,000 daltones. Cada cadena L se encuentra enlazada mediante un enlace disulfuro covalente, mientras que las dos cadenas H se encuentran enlazadas entre sí mediante uno o más enlaces disulfuro dependiendo del isótopo de cadena H. cada cadena H y L tiene también puentes disulfuro intracadenas regularmente espaciados. Cada cadena H tiene en la terminal N, un dominio variable (VH) seguido por tres dominios constantes (CH) para cada una de las cadenas alfa y gamma y cuatro dominios CH para los isotipos u y e. Cada cadena L tiene en la terminal N, un dominio variable (VL) seguido por un dominio constante (CL) en su otro extremo. El VL se encuentra alineado con el VH y el CL se encuentra alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada (CH1) . Se considera que los residuos de aminoácido particulares forman una interfaz entre los dominios variables de cadena ligera y de cadena pesada. La formación de pares de un VH y un VL conjuntamente, forma un solo sitio de enlace al antígeno. Para la estructura y propiedades de diferentes clases de anticuerpos, ver, e.g., Basic and Clinical Immunology (Inmunología básica y clínica) 8a edición, Daniel P. Stites, Abba I. Terr y Tristam G Parslow (eds) Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, página 71 y capítulo 6. La cadena L de una especie vertebrada puede asignarse a uno de dos tipos claramente distintos llamados kappa y lambda, en base a las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas (CH) , las inmunoglobulinas pueden asignarse a diferentes clases o isotipos. Existen cinco clases de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, que tienen cadenas pesadas designadas, a, d, y, e y u, respectivamente. Las clases y y a se dividen además en subclases en base a las diferencias relativamente menores en la secuencia CH y a la función, e.g., los humanos expresan las siguientes subclases IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 , IgAl e IgA2. El término "variable" se refiere al hecho de que ciertos segmentos de los dominios variables difieren extensamente en secuencia entre los anticuerpos. El dominio V media el enlace al antígeno y define la especificidad de un anticuerpo particular para su antígeno particular. Sin embargo, la variabilidad no se encuentra uniformemente distribuida a través de la extensión del aminoácido 110 de los dominios variables. Por el contrario, las regiones V consisten de estrechamientos relativamente no variantes llamados regiones de estructura (FRs) de 15-30 aminoácidos separadas por regiones más cortas de extrema variabilidad llamadas "regiones hipervariables" que son cada una de 9-12 aminoácidos de longitud. Los dominios variables de cadenas nativas pesadas y ligeras comprenden cuatro FRs, que adoptan en gran medida una configuración de lámina beta, conectada mediante tres regiones hipervariables , que forman circuitos que conectan y, en algunos casos, forman parte de la estructura de lámina beta. Las regiones hipervariables en cada cadena se mantienen juntas en cercana proximidad por medio de las F s y, con las regiones hipervariables de la otra cadena contribuyen a la formación del sitio de enlace al antígeno de los anticuerpos (ver, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (Secuencias de proteínas de interés inmunológico) 5a ed. , Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, D (1991)). Los dominios constantes no se encuentran directamente implicados en el enlace de un anticuerpo a un antígeno, pero exhiben varias funciones de efector, tales como la participación del anticuerpo en la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) . El término "región hipervariable" , cuando se utiliza en la presente, se refiere a los residuos de aminoácido de un anticuerpo que son responsables del enlace al antígeno. La región hipervariable comprende generalmente los residuos de aminoácido de una "región determinante de complementariedad" o "CDR" (e.g., alrededor de aproximadamente los residuos 24-34 (Ll) , 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el VL, y alrededor de aproximadamente 31-35B (Hl) , 50-65 (H2) y 95-102 (H3) en el VH (en una modalidad, Hl se encuentra alrededor de aproximadamente 31-35); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (Secuencias de proteínas de interés inmunológico) 5a ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)) y/o aquellos residuos de un "circuito hipervariable" (e.g., los residuos 26-32 (Ll) , 50.52 (L2) y 91-96 (L3) en el VL y 26-32 (Hl) , 53-55 (H2) y 96-101 (H3) en el VH; Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). El término "anticuerpo monoclonal" como se utiliza en la presente, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, i.e., los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos, excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden presentarse en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, siendo dirigidos contra un solo sitio antigénico. Además, en contraste con preparaciones de anticuerpo policlonal que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopes) , cada anticuerpo monoclonal se dirige contra una sola determinante en el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos en que pueden sintetizarse sin contaminarse con otros anticuerpos. El modificador "monoclonal" no debe interpretarse que requiere la producción del anticuerpo mediante algún método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales útiles en la presente invención pueden prepararse mediante la metodología de hibridoma primeramente descrita por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975) o pueden prepararse utilizando los métodos de ADN recombinante en células bacterianas, eucarióticas animales o vegetales (ver, e.g., Patente de E.U. No. 4,816,567) . Los "anticuerpos monoclonales" también pueden aislarse a partir de bibliotecas de anticuerpo de fago utilizando las técnicas descritas en Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) , Marks et al., J. Mol. Biol . , 222:581-597 (1991) y en los Ejemplos siguientes, por ejemplo. Los anticuerpos monoclonales en la presente, incluyen anticuerpos "quiméricos" en los cuales una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homologa a las secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase particular de anticuerpo, mientras que el resto de la(s) cadena (s) es idéntico u homólogo a las secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de tales anticuerpos, siempre que exhiban una actividad biológica de esta invención (ver Patente de E.U. No. 4,816,567; y Morrison et al., Proc . Nati. Acad. Sci., EUA 81:6851-6855 (1984)) . Los anticuerpos quiméricos de interés en la presente incluyen anticuerpos "primatizados" que comprenden secuencias de enlace al antígeno de dominio variable derivadas de un primate no humano (e.g., mono del viejo mundo, simio, etc.) y secuencias humanas de región constante . Un anticuerpo "intacto" es uno que comprende un sitio de enlace al antígeno así como un CL y al menos los dominios de cadena pesada CH1, CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (e.g., dominios constantes de secuencia nativa humana) o una variante de secuencia de aminoácidos de los mismos. Preferentemente, el anticuerpo intacto tiene una o más funciones de efector. Los "fragmentos de anticuerpo" comprenden una porción de un anticuerpo intacto, preferentemente el enlace al antígeno o la región variable del anticuerpo intacto. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen Fab, Fab' , F(ab) #2 y fragmentos Fv; diabodies; anticuerpos lineales (ver Patente de E.U. No. 5,641,870, Ejemplo 2; Zapata et al., Protein Eng . , 8 (10) : 1057-1062 [1995]); moléculas de anticuerpo monocatenario ; y anticuerpos multiespecífieos formados de fragmentos de anticuerpo. La expresión "anticuerpos lineales" se refiere generalmente a los anticuerpos descritos en Zapata et al., Protein Eng., 8(10): 1057-1062 (1995). Brevemente, estos anticuerpos comprenden un par de segmentos Fd en serie (VH-CH1-VH-CH1) que, conjuntamente con los polipeptidos de cadena ligera complementarios, forman un par de regiones de enlace al antígeno. Los anticuerpos lineales pueden ser biespecíficos o monoespecífieos . La digestión de papaína de los anticuerpos produce dos fragmentos idénticos de unión al antigeno llamados fragmentos "Fab" y un fragmento "Fe" residual, una designación que refleja la capacidad para cristalizarse fácilmente. El fragmento Fab consiste de una cadena L completa conjuntamente con el dominio de región variable de la cadena H (VH) y el primer dominio constante de una cadena pesada (CHl) . Cada fragmento Fab es monovalente con respecto al enlace al antígeno, i.e., tiene un solo sitio de enlace al antígeno. El tratamiento con pepsina de un anticuerpo produce un solo fragmento F(ab)'2 grande que corresponde aproximadamente a dos fragmentos Fab enlazados a disulfuro que tienen una actividad de enlace al antígeno bivalente y aún es capaz de reticular el antígeno. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por tener algunos residuos adicionales en la terminal carboxi del dominio CHl incluyendo una o más cisteínas de la región de articulación del anticuerpo. Fab' -SH es la designación en la presente para Fab', en la cual el (los) residuo (s) de cisteína de los dominios constantes contiene (n) un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpo F(ab)'2 se produjeron originalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteínas de articulación entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpo. El fragmento Fe comprende las porciones de terminal carboxi de ambas cadenas H que se mantienen juntas mediante disulfuros. Las funciones de efector de los anticuerpos se determinan por las secuencias en la región Fe, cuya región es también la parte reconocida por los receptores Fe (FcR) encontrados en ciertos tipos de células. "Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un reconocimiento de antígeno y un sitio de enlace completos. Este fragmento consiste de un dímero de un dominio de región variable de cadena pesada y uno de cadena ligera, en estrecha asociación no covalente. A partir del doblamiento de estos dos dominios emanan seis circuitos hipervariables (3 circuitos cada uno de la cadena H y L) que contribuyen con los residuos de aminoácido para el enlace al antígeno y confieren una especificidad de enlace al antígeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un solo dominio variable (o la mitad de un Fv que comprende solamente tres CDRs específicos para un antígeno) tiene la capacidad de reconocer y enlazarse al antígeno aunque a una afinidad menor que el sitio de enlace completo. "Fv monocatenario" también abreviado como "sFv" o "scFv" son fragmentos de anticuerpo que comprenden los dominios de anticuerpo VH y VL conectados en una sola cadena de polipéptido. Preferentemente, el polipéptido de sFv comprende además un enlace de polipéptido entre los dominios VH y VL que permite que el sFv forme la estructura deseada para el enlace al antígeno. Para una revisión del sFv, ver Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies (La farmacología de anticuerpos monoclonales) , vol . 113, Rosenburg y Moore eds . , Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994) ; Borrebaeck 1995, infra. El término "diabodies" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpo preparados construyendo fragmentos de sFv (ver el párrafo precedente) con enlaces cortos (aproximadamente 5-10 residuos) entre los dominios VH y VL de manera que se logra la formación de pares inter-cadena pero no intra-cadena de los dominios V, dando como resultado un fragmento bivalente, i.e., un fragmento que tiene dos sitios de enlace al antígeno. Los diabodies biespecífieos son heterodímeros de dos fragmentos de sFv "de cruce" en los cuales los dominios VH y VL de los dos anticuerpos se encuentran presentes en diferentes cadenas de polipéptido. Los diabodies se describen más completamente, por ejemplo, en la EP 404,097; WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc . Nati. Acad. Sci. EUA, 90:6444-6448 (1993). Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (e.g., roedores) son anticuerpos quiméricos que contienen una mínima secuencia derivada del anticuerpo no humano. En su mayoría, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las cuales los residuos de una región hipervariable del receptor se reemplazan por residuos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como de ratón, rata, conejo o primate no humano, que tiene la especificidad, afinidad y capacidad del anticuerpo deseada. En algunos ejemplos, los residuos de región de estructura (FR) de la inmunoglobulina humana se reemplazan por los residuos no humanos correspondientes. Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante. Estas modificaciones se efectúan para refinar posteriormente el desempeño del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos de al menos uno, y típicamente dos, dominios variables, en los cuales todos o sustancialmente todos los circuitos hipervariables corresponden a aquellos de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las FRs son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado opcionalmente comprenderá también al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fe) , típicamente aquella de una inmunoglobulina humana. Para detalles adicionales, ver Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); y Presta, Curr. Op . Struct . Biol . 2:593- 596 (1992) . Un "anticuerpo dependiente de la especie" es un anticuerpo que tiene una afinidad de enlace más fuerte para un antígeno de una primera especie de mamífero que la que tiene para un homólogo de ese antígeno de una segunda especie de mamífero. Normalmente, el anticuerpo dependiente de la especie se "enlaza específicamente" a un antígeno humano (i.e., tiene un valor de afinidad de enlace (Kd) de no más de aproximadamente 1 x 10"7 , preferentemente de no más de aproximadamente 1 x 10"8 y de mayor preferencia de no más de aproximadamente 1 x 10"9 M) pero tiene una afinidad de enlace para un homólogo del antígeno de una segunda especie de mamífero no humano que es al menos aproximadamente 50 veces, o al menos aproximadamente 500 veces, o al menos aproximadamente 1000 veces, más débil que su afinidad de enlace para el antígeno humano. El anticuerpo dependiente de la especie puede ser de cualquiera de los varios tipos de anticuerpos definidos anteriormente, pero preferentemente es un anticuerpo humanizado o humano. En tales modalidades, el grado de enlace del polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición, a una proteína "no objetivo" será menor que aproximadamente 10% del enlace del polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición, a su proteína objetivo particular según se determina mediante análisis de selección celular activada por fluorescencia (FACS) o radioinmunoprecipitación (RIA) . Con respecto al enlace de un polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición, a una molécula objetivo, el término "enlace específico" o "se enlaza específicamente a" o "es específico para" un polipéptido particular o un epítope en un objetivo de polipéptido particular, significa un enlace que es calculablemente diferente de una interacción no específica. El enlace específico puede medirse, por ejemplo, determinando el enlace de una molécula en comparación con el enlace de una molécula de control, que generalmente es una molécula de una estructura similar que no tiene actividad de enlace. Por ejemplo, el enlace específico puede determinarse mediante competencia con una molécula de control que es similar al objetivo, por ejemplo, un objetivo no marcado excesivo. En este caso, el enlace específico se indica si el enlace del objetivo marcado a una sonda se inhibe de manera competitiva mediante un objetivo no marcado excesivo. El término "enlace específico" o "se enlaza específicamente a" o es "específico para" un polipéptido particular o un epítope en un objetivo polipéptido particular como se utiliza en la presente, puede exhibirse, por ejemplo, por una molécula que tiene un Kd para el objetivo de al menos aproximadamente ío-4 M, alternativamente de al menos aproximadamente 10~5 M, alternativamente de al menos aproximadamente 10"6 M, alternativamente de al menos aproximadamente 10"7 M, alternati amente de al menos aproximadamente 10~8 M, alternativamente de al menos aproximadamente 10"9 M, alternativamente de al menos aproximadamente io-10 M, alternativamente de al menos aproximadamente lO"11 M, alternativamente de al menos aproximadamente 10~12 M, o mayor, en una modalidad, el término "enlace específico" se refiere al enlace en el cual una molécula se enlaza a un polipéptido particular o a un epitope en un polipéptido particular sin enlazarse sustancialmente a cualquier otro polipéptido o epítope de polipéptido. Las "funciones de efector" del anticuerpo se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fe (una región Fe de secuencia nativa o región Fe variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo, y varían con el isotipo del anticuerpo. Ejemplos de funciones de efector del anticuerpo incluyen: enlace de Clq y citotoxicidad dependiente del complemento; enlace del receptor Fe; citotoxicidad mediada por la célula dependiente del anticuerpo (ADCC) ; fagocitosis; sub-regulación de los receptores de superficie celular; y activación de la célula B. Una "región Fe de secuencia nativa" comprende una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia de aminoácidos de una región Fe encontrada en la naturaleza. Se describen ejemplos de secuencias Fe en, por ejemplo, pero sin limitarse a, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest (Secuencias de interés inmunológico) 5a ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda Md (1991) ) . Una "región Fe variante" comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de aquella de una región Fe de secuencia nativa en virtud de al menos "una modificación de aminoácido" como se define en la presente. Preferentemente, la región Fe variante tiene al menos una sustitución de aminoácido en comparación con una región Fe de secuencia nativa o la región Fe de un polipéptido de origen, e.g., de aproximadamente una a aproximadamente diez sustituciones de aminoácido, y preferentemente de aproximadamente una a aproximadamente cinco sustituciones de aminoácido en una región Fe de secuencia nativa o en la región Fe del polipéptido de origen. En una modalidad, la región Fe variante de la presente, poseerá al menos aproximadamente 80% de homología, al menos aproximadamente 85% de homología, al menos aproximadamente 90% de homología, al menos aproximadamente 95% de homología, o al menos aproximadamente 99% de homología con una región Fe de secuencia nativa. De acuerdo con otra modalidad, la región Fe variante de la presente, poseerá al menos aproximadamente 80% de homología, al menos aproximadamente 85% de homología, al menos aproximadamente 90% de homología, al menos aproximadamente 95% de homología, o al menos aproximadamente 99% de homología con una región Fe de un polipeptido de origen. La "identidad porcentual (%) de secuencia de aminoácidos" u "homología" , con respecto a las secuencias de polipéptidos y anticuerpos identificadas en la presente, se define como el porcentaje de residuos de aminoácido en una secuencia candidato, que son idénticos a los residuos de aminoácido en el polipéptido que se compara, después de alinear las secuencias que consideran cualquier sustitución conservadora como parte de la identidad de secuencia. La alineación, para el propósito de determinar la identidad porcentual de secuencia de aminoácidos, puede lograrse de varias maneras que se encuentran dentro de la experiencia en la técnica, por ejemplo, utilizando software públicamente disponible tal como el software BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNASTAR) . Los expertos en la técnica pueden determinar los parámetros apropiados para medir la alineación, incluyendo cualquier algoritmo necesario para lograr la máxima alineación sobre la longitud total de las secuencias que se comparan. Para los propósitos de la presente, sin embargo, los valores porcentuales de la identidad de secuencia de aminoácidos se generan utilizando el programa computarizado de comparación de secuencia ALIGN-2. El programa computarizado de comparación de secuencia ALIGN-2 fue autorizado por Genentech Inc., y el código de fuente se ha presentado con la documentación del usuario en la U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559, en donde se registra bajo el No. del U.S. Copyright Registration TXU510087. El programa ALIGN-2 se encuentra públicamente disponible mediante Genentech Inc., South San Francisco, California. El programa ALIGN-2 debe compilarse para su uso en un sistema de operación UNIX, preferentemente UNIX V4-0D digital . Todos los parámetros de comparación de secuencia se establecen por el programa ALIGN-2 y no varían. El término "polipéptido que comprende la región Fe" se refiere a un polipéptido, tal como un anticuerpo o inmunoadhesina (ver las definiciones abajo) , que comprende una región Fe. La lisina de terminal C (residuo 447 de acuerdo con el sistema de numeración EU) de la región Fe puede retirarse, por ejemplo, durante la purificación del polipéptido o fabricando de manera recombinante el ácido nucleico que codifica para el polipéptido. Por consiguiente, una composición que comprende polipéptidos , incluyendo anticuerpos, que tienen una región. Fe de acuerdo con esta invención, puede comprender poblaciones de polipéptidos con todos los residuos K447 retirados, poblaciones de polipéptidos sin ningún residuo K447 retirado o poblaciones de polipéptidos que tienen una mezcla de polipéptidos con un sin el residuo K447. A lo largo de la presente especificación y reivindicaciones, el sistema de numeración Kabat se utiliza generalmente al referirse a un residuo en el dominio variable (aproximadamente, los residuos 1-107 de la cadena ligera y los residuos 1-113 de la cadena pesada) (e.g., Kabat et al., Sequences of Immunological Interest (Secuencias de interés inmunológico) 5a ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda d (1991) ) . El "sistema de numeración EU" o "índice EU" se utiliza generalmente al referirse a un residuo en una región constante de cadena pesada de inmunoglobulina (e.g., el índice EU reportado en Kabat et al., Sequences of Immunological Interest (Secuencias de interés inmunológico) 5a ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda Md (1991) ) que se incorpora en la presente expresamente mediante la referencia) . A menos que se defina de otra manera en la presente, las referencias a los números de residuos en el dominio variable de los anticuerpos significa la numeración de residuos por el sistema de numeración Kabat. A menos que se defina de otra manera en la presente, las referencias a los números de residuos en el dominio constante de los anticuerpos significa la numeración de los residuos por el sistema de numeración EU. Los términos "receptor Fe" o "FcR" se utilizan para describir un receptor que se enlaza a la región Fe de un anticuerpo. En una modalidad, un FcR de esta invención es uno que se enlaza a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye los receptores de las subclases FcyRI , FcyRII y FcyRIII, incluyendo las variantes alélicas y las formas alternativamente cortadas y empalmadas de estos receptores. Los receptores FcyRII incluyen FcYRIIA (un "receptor de activación") y FcyRIIB (un "receptor de inhibición"), que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en sus dominios citoplásmicos . El receptor de activación FcyRIIA contiene un motivo de activación a base de un inmunorreceptor de tirosina (ITAM) en su dominio citoplásmico . El receptor de inhibición FcyRIIB contiene un motivo de inhibición en base a un inmunorreceptor de tirosina (ITIM) en su dominio citoplásmico (ver revisión M en Daeron, Annu. Rev. Immunol . , 15:203-234 (1997)). El término incluye alotipos, tales como los alotipos de FcyRIIIA: FcyRIIIA-Phel58, FcyRIIIA-Vall58 , FcyRIIA-R131 y/o FcyRIIA-H131. Los FcRs se encuentran revisados en Ravetech y Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); y de Haas et al., J. Lab. Clin. Med., 126:330-41 (1995) . Otros FcRs incluyendo aquellos a identificar en el futuro, se encuentran abarcados por el término "FcR" en la presente. El término incluye también el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de las IgGs materas al feto (Guyer et al., J. Immunol., 117:587 (1976) y Kim et al., J. Immunol., 24:249 (1994)). El término "FcRn" se refiere al receptor Fe neonatal (FcRn) . El FcRn es estructuralmente similar al complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) y consiste de una cadena A enlazada de manera no covalente a la microglobulina E2. Las múltiples funciones del receptor Fe neonatal FcRn se revisan en Ghetie y Ward (2000) Annu. Rev. Immunol . , 18, 739-766. El FcRn juega un papel en el suministro pasivo de IgGs de inmunoglobulina de la madre al feto y en la regulación de los niveles de IgG en suero. El FcRn puede actuar como un receptor salvaje, enlazando y transportando las IgGs pinocitosadas en forma intacta tanto dentro como a través de las células y rescatándolas de una trayectoria degradativa de falla. La WO 00/42072 (Presta) y Shields et al., J. Biol . Chem. , 9 (2) : 6591-6604 (2001) describen variantes de anticuerpo con enlace mejorado o disminuido a FcRs . El contenido de esas publicaciones se incorpora específicamente en la presente mediante la referencia. El "dominio CH1" de una región Fe de IgG humana (también referido como dominio "Cl" o "Hl") comúnmente se extiende desde aproximadamente el aminoácido 118 hasta aproximadamente el aminoácido 215 (sistema de numeración EU) . La "región de articulación" se define generalmente estrechando desde Glu216 hasta Pro230 de la IgGl humana (Burton, Molec. Immunol., 22:161-206 (1985)). Las regiones de articulación de otros isotipos IgG pueden alinearse con la secuencia IgGl colocando los residuos primero y último formando enlaces S-S entre cadenas pesadas en las mismas posiciones . La "región de articulación inferior" de una región Fe se define normalmente como el estrechamiento de los residuos inmediatamente en la terminal C a la región de articulación, i.e., los residuos 233 a 239 de la región Fe. en reportes previos, el enlace de FcR se atribuyó generalmente a los residuos de aminoácido en la región de articulación inferior de una región Fe de IgG. El "dominio CH2" de una región Fe de IgG humana (referido también como dominio "C2" o "H2") comúnmente se extiende desde aproximadamente el aminoácido 231 hasta aproximadamente el aminoácido 340. El dominio CH2 es único en que no se encuentra cercanamente formado en pares con otro dominio. Por el contrario, dos cadenas de carbohidrato ramificadas enlazadas a N se encuentran interpuestas entre los dos dominios CH2 de una molécula IgG nativa intacta. Se ha especulado que el carbohidrato puede proporcionar un sustituto para la formación de pares de dominio-dominio y ayuda a estabilizar el dominio CH2. Burton, Molec. Immunol . , 22 : 161-206 (1985) . El "dominio CH3" (también referido como dominio "C2" o "H3") comprende el estrechamiento de los residuos de terminal C a un dominio CH2 en una región Fe (i.e., aproximadamente desde el residuo de aminoácido 341 hasta el extremo de terminal C de una secuencia de anticuerpo, típicamente en el residuo de aminoácido 446 a 447 de una IgG) - Una "región Fe funcional" posee una "función efectora" de una región Fe de secuencia nativa. De manera ejemplar, las "funciones de efector" incluyen el enlace Clq; la citotoxicidad dependiente del complemento; el enlace del receptor Fe; la citotoxicidad mediada por la célula dependiente del anticuerpo (ADCC) ; fagocitosis; sub-regulación de los receptores de superficie celular (e.g., receptor de célula B; BCR) , etc. Tales funciones de efector requieren generalmente que la región Fe se combine con un dominio de enlace (e.g., un dominio variable de anticuerpo) y pueden evaluarse, por ejemplo, utilizando varios análisis como se describe en la presente. "Clq" es un polipéptido que incluye un sitio de enlace para la región Fe de una inmunoglobulina . El Clq, conjuntamente con dos serina proteasas, Clr y Cls, forma el complejo Cl, el primer componente de la trayectoria de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) . El Clq humano puede adquirirse comercialmente de e.g., Quidel, San Diego, CA. El término "dominio de enlace" se refiere a la región de un polipéptido que se enlaza a otra molécula. En el caso de un FcR, el dominio de enlace puede comprender una porción de una cadena de polipéptido del mismo (e.g., la cadena alfa del mismo) que es responsable por el enlace de una región Fe. un dominio de enlace útil es el dominio extracelular de una cadena alfa de FcR. Un anticuerpo o peptibody con un Fe de IgG variante con afinidad de enlace a FcR "alterada" o una actividad ADCC, es uno que tiene una actividad de enlace a FcR ya sea mejorada o disminuida (e.g., FcyR o FcRn) y/o una actividad ADCC en comparación con un polipéptido de origen o con un polipéptido que comprende una región Fe de secuencia nativa. El Fe variante que "exhibe enlace incrementado" a un FcR se enlaza a al menos un FcR con mayor afinidad (e.g., menor valor Kd o IC50 aparente) que el polipéptido de origen o una secuencia de Fe de IgG nativa. De acuerdo con algunas modalidades, el mejoramiento en el enlace en comparación con un polipéptido de origen es de aproximadamente 3 veces, preferentemente de aproximadamente 5, 10, 25, 50, 60, 100, 150, 200 hasta 500 veces, o aproximadamente 25% a 1000% de mejoramiento en el enlace. La variante de polipéptido que "exhibe un enlace disminuido" a un FcR, se enlaza a al menos un FcR con menor afinidad (e.g., un valor aparente Kd mayor o IC50 mayor) que un polipéptido de origen. La disminución en el enlace en comparación con un polipéptido de origen puede ser de aproximadamente 40% o más disminución en el enlace.

La "citotoxicidad mediada por la célula dependiente del anticuerpo" o "ADCC" se refiere a una forma de citotoxicidad en la cual la Ig secretada enlazada a receptores de Fe (FcRs) presente en ciertas células citotóxicas (e.g., células desactivadoras naturales (NK) , neutrófilos y macrófagos) permite que estas células efector citotóxicas se enlacen específicamente a una célula objetivo que contiene antígeno y subsecuentemente destruyan la célula objetivo con citotoxinas. Los anticuerpos "arman" a las células citotóxicas y se requieren absolutamente para tal desactivación. Las células primarias para mediar la ADCC, células NK, expresan solamente FcyRIII, mientras que los monocitos expresan FcyRI , FcyRII y FcyRIII. La expresión de FcR en las células hematopoyéticas se resume en la Tabla 3 en la página 464 de Ravetch y Kinet, /Annu. Rev. Immunol . , 9:457-92 (1991) . Para evaluar la actividad ADCC de una molécula de interés, puede llevarse a cabo un análisis de ADCC in vitro, tal como el descrito en la Patente de E.U. No. 5,500,362 o 5,821,337 o en los Ejemplos siguientes. Las células efector útiles para tales análisis incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células desactivadoras naturales (NK) . Alternativamente o adicionalmente , la actividad ADCC de la molécula de interés puede evaluarse in vivo, e.g., en un modelo animal tal como el descrito en Clynes et al . , PNAS (EUA) 95:652-656 (1998).

El polipéptido que comprende una región Fe variante que "exhibe ADCC incrementada" o que media la citotoxicidad mediada por la célula dependiente del anticuerpo (ADCC) en presencia de células efector humanas, más efectivamente que un polipéptido que tiene un Fe de IgG de tipo silvestre o un polipéptido de origen, es uno que, in vitro o in vivo, es sustancialmente más efectivo para mediar la ADCC, cuando las cantidades del polipéptido con región Fe variante y del polipéptido con una región Fe de tipo silvestre (o el polipéptido de origen) en el análisis, son esencialmente las mismas. Generalmente, tales variantes se identificarán utilizando el análisis ADCC in vitro como se describe en la presente, pero se contemplan otros análisis o métodos para determinar la actividad de ADCC, e.g., en un modelo animal, etc. En una modalidad, la variante preferida es de aproximadamente 5 veces a aproximadamente 100 veces, e.g., de aproximadamente 25 a aproximadamente 50 veces más efectiva para mediar la ADCC que el Fe de tipo silvestre (o el polipéptido de origen) . "Citotoxicidad dependiente del complemento" o "CDC" se refiere a la lisis de una célula objetivo en presencia de un complemento. La activación de la trayectoria de complemento clásica se inicia por medio del enlace del primer complemento del sistema de complemento (Clq) a los anticuerpos (de la subclase apropiada) , que se encuentran enlazados a su antígeno cognado. Para evaluar la activación del complemento, puede llevarse a cabo un análisis CDC, e.g., como se describe en Gazzano-Santoro et al., J. Immunol . Methods 202:163 (1996). Las variantes de polipéptido con secuencias de aminoácido de región Fe alteradas y capacidad de enlace Clq incrementada o disminuida, se describen en la patente de E.U. No. 6,194,551 Bl y la WO 99/51642. El contenido de aquellas publicaciones de patente se incorpora específicamente en la presente mediante la referencia. Ver también Idusogie et al., J. Immunol., 164:4178-4184 (2000). Las "células efector humanas" son leucocitos que expresan uno o más FcRs y que llevan a cabo funciones de efector. De acuerdo con una modalidad, las células expresan al menos FcyRIII y llevan a cabo una función efectora ADCC . Los ejemplos de leucocitos humanos que median la ADCC incluyen células mononucleares de sangre periférica (PB C) , células desactivadoras naturales (NK) , monocitos, células T citotóxicas y neutrófilos ; siendo preferidas las PB Cs y las células NK. Las células efector pueden aislarse a partir de una fuente nativa de las mismas, e.g., de sangre o PBMCs como se describe en la presente. Los métodos para medir el enlace a FcRn son conocidos (ver, e.g., Ghetie 1997, Hinton 2004) así como los descritos en los Ejemplos abajo. El enlace a FcRn humano in vivo y la vida media en suero de los polipéptidos de enlace de alta afinidad a FcRn humano pueden analizarse, e.g., en ratones transgénicos o en líneas celulares humanas transfectadas que expresan FcRn humano, o en primates a los que se administran los polipéptidos variantes de Fe. En una modalidad, específicamente los anticuerpos anti-alfa5betal de la invención que tienen Fe de IgG variante, exhiben una incrementada afinidad de enlace de FcRn humano sobre un polipéptido que tiene Fe de IgG de tipo silvestre, por al menos 2 veces, al menos 5 veces, al menos 10 veces, al menos 50 veces, al menos 60 veces, al menos 70 veces, al menos 80 veces, al menos 100 veces, al menos 125 veces, al menos 150 veces. En una modalidad específica, la afinidad de enlace del FcRn humano aumenta aproximadamente 170 veces. Para la afinidad de enlace a FcRn, en una modalidad, el EC50 o el Kd aparente (a un pH 6.0) del polipéptido es menor que 1 u , más preferentemente menor que o igual a 100 nM, más preferentemente menor que o igual a 10 nM. En una modalidad, para una incrementada afinidad de enlace a FcyRIII (F158; i.e., isotipo de baja afinidad) el EC50 o el Kd aparente es menor que o igual a 10 nM, y para FcyRIII (C158; isotipo de alta afinidad) el EC50 o el Kd aparente es menor que o igual a 3 nM. De acuerdo con otra modalidad, una reducción en el enlace de un anticuerpo a un receptor de Fe relativo a un anticuerpo de control (e.g., el anticuerpo Herceptin®) puede considerarse significativo en relación al anticuerpo de control si el índice de los valores de las absorbencias en los puntos medios de las curvas de enlace del anticuerpo de prueba y el anticuerpo de control ^e . CJ . , A450 nm (anticuerpo) /A45o nm (Ab control)) es menor que o igual a 40%. De acuerdo con otra modalidad, un incremento en el enlace de un anticuerpo a un receptor de Fe relativo a un anticuerpo de control (e.g., el anticuerpo Herceptin®) puede considerarse significativo en relación al anticuerpo de control si el índice de los valores de las absorbencias en los puntos medios de las curvas de enlace del anticuerpo de prueba y el anticuerpo de control (e.g., A450 nm (anticuerpo) /A50 nm (Ab control) ) es mayor que o igual a 125%. Ver e.g., Ejemplo 16. Un "polipéptido de origen" o "anticuerpo de origen" es un polipéptido o anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de la cual surgió el polipéptido o anticuerpo variante y contra el cual se compara el polipéptido o anticuerpo variante. Típicamente el polipéptido de origen o anticuerpo de origen carece de una o más de las modificaciones de la región de Fe descritas en la presente y difiere en la función efectora en comparación con una variante del polipéptido como se describe en la presente. El polipéptido de origen puede comprender una región de Fe de secuencia nativa o una región de Fe con las modificaciones de secuencia de aminoácidos preexistentes (tales como adiciones, supresiones y/o sustituciones). Los anticuerpos de esta invención pueden derivarse del despliegue de fago. Como se utiliza en la presente, "biblioteca" se refiere a una pluralidad de secuencias de anticuerpos o de fragmentos de anticuerpo, o de los ácidos nucleicos que codifican para estas secuencias, siendo las secuencias diferentes en la combinación de aminoácidos variantes que se introducen en estas secuencias de acuerdo con los métodos de la invención. "Despliegue de fago" es una técnica mediante la cual los polipéptidos variantes se despliegan como proteínas de fusión hacia al menos una porción de la proteína de recubrimiento sobre la superficie de las partículas del fago, e.g., fago filamentoso. Una utilidad del despliegue de fago se basa en el hecho de que grandes bibliotecas de variantes de proteína aleatorizadas pueden seleccionarse rápida y eficientemente para aquellas secuencias que se enlazan a un antígeno objetivo con alta afinidad. El despliegue de bibliotecas de péptido y proteína en fago se ha utilizado para visualizar millones de polipéptidos por unos con propiedades de enlace específicas. Los métodos de despliegue de fago polivalentes se han utilizado para desplegar pequeños péptidos aleatorios y pequeñas proteínas a través de fusiones ya sea al gen II o al gen VIII del fago filamentoso. Wells y Lowman, Curr. Opin. Struct . Biol . , 3:355-362 (1992), y las referencias citadas en la misma. En un despliegue de fago monovalente, una biblioteca de proteína o péptido se fusiona a un gen III o a una porción del mismo, y se expresa a bajos niveles en presencia de una proteína del gen III de tipo silvestre de manera que las partículas del fago despliegan una copia o ninguna de las proteínas de fusión. Los efectos de avidez se reducen en relación al fago polivalente de manera que la selección se hace en base a la intrínseca afinidad del ligando, y se utilizan los vectores de fagémido, lo cual simplifica las manipulaciones del ADN. Lowman y Wells, ethods : A companion to Methods in Enzimology, 3:205-0216 (1991) . Un "fagémido" es un vector de plásmido que tiene un origen de replicación bacteriano, e.g., ColEl, y una copia de una región intergénica de un bacteriófago. El fagémido puede utilizarse en cualquier bacteriófago conocido, incluyendo un bacteriófago filamentoso y un bacteriófago lambdoide. El plásmido también contendrá generalmente un marcador seleccionable para la resistencia al antibiótico. Los segmentos de ADN clonados en estos vectores pueden propagarse como plásmidos. Cuando las células que albergan estos vectores se proporcionan con todos los genes necesarios para la producción de partículas de fago, el modo de replicación del plásmido cambia a replicación de círculo enrollado para generar copias de una cadena del ADN del plásmido y partículas de fago empaquetadas. El fagémido puede formar partículas del fago infecciosas o no infecciosas. Este término incluye fagémidos que contienen un gen de proteína de recubrimiento de fago o un fragmento del mismo enlazado a un gen de polipéptido heterólogo como una fusión del gen, de manera que el polipéptido heterólogo se despliega en la superficie de la partícula de fago. El término "vector de fago" significa una forma replicativa bicatenaria de un bacteriófago que contiene un gen heterólogo y capaz de replicación. El vector de fago tiene un origen de replicación de fago que permite la replicación del fago y la formación de partículas de fago. El fago es preferentemente un bacteriófago filamentoso, tal como un fago 13, fl, fd, Pf3 o un derivado del mismo, o un fago lambdoide, tal como lambda 21, phi80, phi81, 82, 424, 434, etc., o un derivado del mismo. Las modificaciones covalentes de polipeptidos tales como peptibodies, inmunoadhesinas , anticuerpos y péptidos cortos, se encuentran incluidas dentro del alcance de esta invención. Un tipo de modificación covalente incluye reactivar los residuos de aminoácido objetivo de un polipéptido con un agente de derivatización orgánico que es capaz de reaccionar con cadenas laterales seleccionados o los residuos de terminal C del polipéptido. La derivatización con agentes bifuncionales es útil, por ejemplo, para la reticulación del polipéptido a una matriz o superficie de soporte insoluble en agua para su uso en el método de purificación de anticuerpos y viceversa. Los agentes de reticulación comúnmente utilizados incluyen, e.g., 1,1-bis (diazoacetil) -2 -feniletano, glutaraldehído, ésteres de N-hidroxisuccinimida, por ejemplo, ésteres con ácido 4-azidosalicílico, imidoésteres homobifuncionales , incluyendo ésteres de disuccinimidilo tales como 3,3'-ditiobis (succinimidil-propionato) , maleimidas bifuncionales tales como bis-N-maleimido-1 , 8-octano y agentes tales como metil -3 - [ (p-azidofenil ) ditio] ropionato . Otras modificaciones incluyen la deamidación de residuos glutaminilo y asparaginilo a los residuos glutamilo o aspartilo correspondiente, respectivamente, la hidroxilación de prolina y lisina, la fosforilación de grupos hidroxilo de residuos serilo o treonilo, la metilación de los grupos alfa-amino de las cadenas laterales de lisina, arginina e histidina [T.E. Creighton, Proteins : Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co . , San Francisco, pp . 79-86 (1983)], la acetilación de la amina de terminal N y la amidación de cualquier grupo carboxilo de terminal C. Otras modificaciones incluyen la conjugación de toxinas a los antagonistas tales como maitansina y maitansinoides , caliqueamicina y otros agentes citotoxicos. Otro tipo de modificación covalente del polipéptido comprende el enlace del polipéptido a uno de una variedad de polímeros no proteináceos , e.g., polietilenglicol (PEG) , polipropilenglicol , o polioxialquilenos , de la manera descrita en las Patentes de E.U. Nos. 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 o 4,179,337. El polipéptido de la presente invención también puede modificarse si es ventajoso de alguna manera, para formar una molécula quimérica que comprende el polipéptido fusionado a otro, polipéptido heterólogo o secuencia de aminoácidos (e.g., inmunoadhesinas o peptibodies) . En una modalidad, tal molécula quimérica comprende una fusión del polipéptido con un dominio de transducción de proteínas que se dirige al polipéptido para el suministro a varios tejidos y más particularmente a través de la barrera sanguínea del cerebro, utilizando, por ejemplo, el dominio de transducción de proteínas de la proteína TAT del virus de inmunodeficiencia humana (Schwarze et al., 1999, Science 285: 1569-72) . En otra modalidad, tal molécula quimérica comprende una fusión del polipéptido con un polipéptido de marca que proporciona un epítope al cual puede unirse selectivamente el anticuerpo anti-marca. El marcador de epítope se coloca generalmente en la terminal amino o carboxilo del polipéptido. La presencia de tales formas marcadas con epítope del polipéptido puede detectarse utilizando un anticuerpo contra el polipéptido marcado. También la provisión del marcador de epítope permite purificar fácilmente el polipéptido mediante purificación de afinidad utilizando un anticuerpo anti-marca u otro tipo de matriz de afinidad que se enlaza al marcador de epítope. Se conocen en la técnica varios polipéptidos marcados y sus respectivos anticuerpos. Los ejemplos incluyen marcas de poli-histidina (poli-His) o poli-histidina-glicina (poli-His-gly) ; el polipéptido marcado flu HA y su anticuerpo 12CA5 [Field et al., Mol. Cel. Biol . , 8:2159-2165 (1981)]; el marcador c-myc y los anticuerpos 8F9, 3C7, 6E10, G4 , B7 y 9E10 para los mismos [Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985) ] ; y el marcador de glicoproteína D (gD) del virus de herpes simple y su anticuerpo [Paborsky et al . , Protein Engineering 3(6):547.553 (1990)]. Otros polipéptidos marcados incluyen el péptido Flag [Hopp et al., BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)]; el péptido de epítope KT3 [Martin et al., Science 255:192-194 (1992)],- un péptido de epítope de alfa-tubulina [Skinner et al., J. Biol. Chem. 266:15163-15166 (1991)]; y el marcador de péptido de proteína 10 del gen T7 [Lutz-Freyermuth et al., Proc . Nati. Acad. Sci . EUA, 87:6393-6397 (1990)]. En una modalidad alternativa, la molécula quimérica puede comprender una fusión del polipéptido con una inmunoglobulina o una región particular de una inmunoglobulina . Para una forma bivalente de la molécula quimérica /e.g., una "inmunoadhesina" ) , tal fusión podría ser a la región Fe de una molécula de IgG. Las fusiones de Ig de esta invención incluyen los polipéptidos que comprenden aproximadamente o solamente los residuos 94-243, los residuos 33-53 o los residuos 33-52 de humano en lugar de al menos una región variable dentro de una molécula de Ig. En una modalidad particularmente preferida, la fusión de inmunoglobulina incluye las regiones de articulación, CH2 y CH3 o de la articulación CH1, CH2 y CH3 de una molécula de IgGl . Para la producción de fusiones de inmunoglobulina, ver también la Patente de E.U. No. 5,428,130 expedida en Junio 27 de 1995. La invención proporciona métodos y composiciones para inhibir o prevenir el crecimiento de tumor recurrente o el crecimiento de la célula cancerosa recurrente. En varias modalidades, un cáncer es el crecimiento de tumor recurrente o el crecimiento de célula cancerosa recurrente, en donde el número de células cancerosas no se ha reducido significativamente o se ha incrementando, o el tamaño del tumor no se ha · reducido significativamente o se ha incrementado, o falla en cualquier reducción posterior del tamaño o del número de células cancerosas. La determinación de si las células cancerosas son un crecimiento de tumor recurrente o crecimiento de células cancerosas recurrente puede efectuarse ya sea in vivo o in vitro mediante cualquier método conocido en la técnica para analizar la efectividad del tratamiento en células cancerosas. Un tumor resistente al tratamiento anti-VEGF es un ejemplo de un crecimiento de tumor recurrente. Una "cantidad efectiva" de un polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición, como se describe en la presente, es una cantidad suficiente para llevar a cabo un propósito específicamente delineado. Una "cantidad efectiva" puede determinarse empíricamente y mediante métodos conocidos con relación al propósito delineado. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad de un anticuerpo, polipéptido o antagonista de esta invención, efectiva para "tratar" una enfermedad o trastorno en un mamífero (paciente) . En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente efectiva de la droga puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño o el peso del tumor; inhibir (i.e., retardar hasta cierto grado y preferentemente detener) la infiltración de las células cancerosas en los órganos periféricos; inhibir (i.e., retardar hasta cierto grado y preferentemente detener) la metástasis del tumor; inhibir hasta cierto grado el crecimiento del tumor; y/o aliviar hasta cierto grado uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. Hasta el grado en que la droga pueda evitar el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, ésta puede ser citostática y/o citotóxica. En una modalidad, la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad inhibidora del crecimiento. En otra modalidad, la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad que extiende la supervivencia de un paciente. En otra modalidad, la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad que mejora la supervivencia libre de progresión de un paciente. En el caso de la cicatrización de heridas, el término "cantidad efectiva" o " cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad de una droga que es efectiva para acelerar o mejorar la cicatrización de heridas en un sujeto. Una dosis terapéutica es una dosis que exhibe un efecto terapéutico en el paciente y una dosis sub-terapéutica es una dosis que no exhibe un efecto terapéutico en el paciente tratado. Una "herida crónica" se refiere a una herida que no cicatriza. Ver, e.g., Lazarus et al., Definitions and guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing, (Definiciones y guías para evaluar heridas y para la evaluación de la cicatrización) , Arch. Dermatol . , 130:489-93 (1994) . Las heridas crónicas incluyen, pero no se limitan a, e.g., úlceras arteriales, úlceras diabéticas, úlceras de presión, úlceras venosas, etc. Una herida aguda puede evolucionar en una herida crónica. Las heridas agudas incluyen, pero no se limitan a, heridas ocasionadas por, e.g., lesión térmica, trauma, cirugía, excisión de extensa piel cancerosa, profundas infecciones por hongos y bacterias, vasculitis, escleroderma, penfigus, necrolisis epidérmica tóxica, etc. Ver e.g., Buford, Wound Healing and Pressure Sores, (Cicatrización de heridas y escaras por presión) HealingWell.com publicada en Octubre 24, 2002. Una "herida normal" se refiere a una herida que experimenta una reparación normal de cicatrización de heridas. Una "cantidad inhibidora del crecimiento" de un polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición de esta invención, es una cantidad capaz de inhibir el crecimiento de una célula, especialmente un tumor, e.g., célula cancerosa, ya sea in vitro o in vivo. Una "cantidad inhibidora del crecimiento" de un polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición de esta invención, para los propósitos de inhibir el crecimiento de células neoplásicas, puede determinarse empíricamente y mediante los métodos conocidos o mediante los ejemplos proporcionados en la presente. Una "cantidad citotóxica" de un polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición de esta invención, es una cantidad capaz de ocasionar la destrucción de una célula, especialmente de tumor, e.g., una célula cancerosa, ya sea in vitro o in vivo. Una "cantidad citotóxica" de un polipéptido, anticuerpo, antagonista o composición de esta - - invención, para los propósitos de inhibir el crecimiento de células neplásicas, puede determinarse empíricamente y mediante los métodos conocidos en la técnica. Una "enfermedad autoinmune" en la presente, es una enfermedad o trastorno que surge de y dirigida contra los tejidos de un individuo o un co-segregado o manifestación de la misma o una condición resultante de la misma. Ejemplos de enfermedades o trastornos autoinmunes incluyen, pero no se limitan a artritis (artritis reumatoide tal como artritis aguda, artritis reumatoide crónica, artritis gotosa, artritis gotosa aguda, artritis inflamatoria crónica, artritis degenerativa, artritis infecciosa, artritis de Lyme, artritis proliferativa, artritis psoriática, artritis vertebral, artritis reumatoide de inicio juvenil, osteoartritis , artritis crónica progrediente , artritis deformante, poliartritis crónica primaria, artritis reactiva, y espondilitis anquilosante) , enfermedades inflamatorias hiperproliferativas de la piel, psoriasis tal como psoriasis de placas, psoriasis gutatte, psoriasis pustular, y psoriasis de las uñas, dermatitis incluyendo dermatitis por contacto, dermatitis por contacto crónica, dermatitis alérgica, dermatitis alérgica por contacto, dermatitis herpetiforme , y dermatitis atópica, síndrome de hiper IgM enlazada a x, urticaria tal como urticaria idiopática crónica, incluyendo urticaria autoinmune crónica, polimiositis/dermatomiositis , dermatomiositis juvenil, necrolisis epidérmica tóxica, escleroderma (incluyendo escleroderma sistémico) , esclerosis tal como esclerosis sistémica, esclerosis múltiple (MS) tal como MS espino-óptica, MS progresiva primaria, y MS de remisión recurrente, esclerosis sistémica progresiva, arteroesclerosis , arterioesclerosis , esclerosis diseminada, y esclerosis atáxica, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis tal como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis microscópica, colitis colagenosa, colitis poliposa, enterocolitis necrotizante , y colitis transmural, y enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune) , pioderma gangrenoso, eritema nodoso, colangitis esclerosante primaria, epiescleritis) , síndrome de trastorno respiratorio, incluyendo síndrome de trastorno respiratorio adulto o agudo (ARDS) , meningitis, inflamación de todo o parte de la uvea, iritis, coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, espondilitis reumatoide, pérdida repentina de la audición, enfermedades mediadas por IgE tales como la anafilaxis y rinitis alérgica y atópica, encefalitis tal como la encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbica y/o de raíz cerebral, uveítis, tal como la uveítis anterior, uveítis anterior aguda, uveítis granulomatosa, uveítis no granulomatosa, uveítis facoantigénica , uveítis posterior o uveítis autoinmune, glomerulonefritis (GN) con u sin síndrome nefrótico tal como glomerulonefritis crónica o aguda tal como GN primaria, GN mediada por inmunidad, GN membranosa (nefropatía membranosa) , GN idiopática membranosa, GN proliferativa membranosa (MPGN) , incluyendo GN Tipo I y Tipo II y rápidamente progresiva, condiciones alérgicas, reacción alérgica, eczema incluyendo ezcema alérgico o atópico, asma tal como asma bronquial, asma bronquial, y asma autoinmune, condiciones que implican la infiltración de células T y respuestas inflamatorias crónicas, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, miocarditis autoinmune, deficiencia de adhesión de leucocitos, lupus eritematoso sistémico (SLE) o lupus eritematoso sistémico tal como SLE cutáneo, lupus eritematoso cutáneo subagudo, síndrome de lupus neonatal (NLE) , lupus eritematoso diseminado, lupus (incluyendo nefritis, cerebritis, pediátrico, no renal, discoide, alopecia), diabetes melitus (Tipo I) de inicio juvenil, incluyendo diabetes melitus pediátrica dependiente de insulina (IDDM) , diabetes melitus de inicio adulto (diabetes Tipo II) , diabetes autoinmune, diabetes idiopática insípida, respuestas inmunes asociadas con la hipersensibilidad retardada mediada por citosinas y linfocitos T, tuberculosis, sarcoidosis, granulomatosis incluyendo granulomatosis linfomatoide , granulomatosis de egener, agranulocitosis , vasculitidas , incluyendo vasculitis (incluyendo vasculitis de vaso grande (incluyendo polimialgia reumática y de célula gigante (arteritis de Takayasu) , vasculitis de vaso mediano (incluyendo enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa) , poliarteritis microscópica, vasculitis del CNS, necrotizante , cutánea o vasculitis por hipersensibilidad, vascultis necrotizante y vasculitis asociada a ANCA, tal como vascultis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) ) , arteritis temporal, anemia aplásica, anemia aplásica autoinmune, anemia positiva de Coomb, anemia de Diamond Blackfan, anemia hemolítica, o anemia hemolítica inmune incluyendo anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia perniciosa (anemia perniciosa) , enfermedad de Addison, anemia de célula roja pura o aplasia (PRCA), deficiencia del factor VIII, hemofilia A, neutropenia autoinmune, pancitopenia, leucopenia, enfermedades que implican diapedesis de leucocitos, trastornos inflamatorios del CNS, síndrome de daño de órganos múltiple tal como el secundario a septicemia, trauma o hemorragia, enfermedades mediadas por complejos de antígeno-anticuerpo, enfermedad de membrana base anti -glomerular, síndrome de anticuerpo anti-fosfolípido, neuritis alérgica, Bechet o enfermedad de Bechet , síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjorgen, síndrome de Stevens-Johnson, penfigoide tal como penfigoide bultoso y penfigoide de piel, pénfigus (incluyendo pénfigus vulgaris, pénfigus foliáceo, pénfigus penfigoide de membrana mucosa y pénfigus eritematoso) , poliendocrinopatías autoinmunes, enfermedad o síndrome de Reiter, nefritis de complejo inmune, nefritis mediada por anticuerpos, neuropatía crónica, tal como polineuropatías de IgM o neuropatía mediada por IgM, trombocitopenia (desarrollada por pacientes de infarto al miocardio, por ejemplo) , incluyendo púrpura trombocitopenica trombótica (TTP) y trombocitopenia autoinmune o mediada por inmunidad tal como púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) incluyendo ITP crónica o aguda, enfermedad autoinmune de testis y ovario incluyendo orquitis autoinmune y ooforitis, hipotiroidismo primario, hipoparatiroidismo, enfermedades endocrinas autoinmunes incluyendo tiroiditis tales como tiroiditis autoinmunes, enfermedad de Hashimoto, tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) , o tiroiditis subaguda, enfermedad tiroidea autoinmune, hipotiroidismo idiopático, enfermedad de Grave, síndromes poliglandulares tales como síndromes poliglandulares inmunes (o síndromes de endocrinopatía poliglandular) , síndromes paraneoplásicos , incluyendo síndromes paraneoplásicos neurológicos tales como el síndrome miasténico de Lambert-Eaton o síndrome de Eaton-Lambert, síndrome de hombre rígido o de persona rígida, encefalomielitis tales como encefalomielitis alérgica o encefalomielitis alérgica y encefalomielitis alérgica experimental (EAE) , miastenia gravis, degeneración cerebelar, neuromiotonia, síndrome de opsoclono o de mioclono opsoclono (OMS) , y neuropatía sensorial, síndrome de Sheehan, hepatitis autoinmune, hepatitis crónica, hepatitis lupoide, hepatitis de célula gigante, hepatitis activa crónica o hepatitis activa autoinmune crónica, pneumonitis intersticial linfoide, bronquiolitis obliterans (no de transplante) vs NSIP, síndrome de Guillain-Barré , enfermedad de Berger (nefropatía de IgA) , nefropatía de IgA idiopática, dermatosis de IgA lineal, cirrosis biliar primaria, pneumonocirrosis , síndrome de enteropatía autoinmune, enfermedad de Celiac, enfermedad de Coeliac, sprue celiac (enteropatía de gluten), sprue refractario, sprue idiopático, crioglobulinemia, esclerosis lateral amilotrófica (ALS; enfermedad de Lou Gehrig) , enfermedad de arteria coronaria, enfermedad autoinmune del oído interno (AIED) , o pérdida de audición autoinmune, síndrome de mioclono opsoclono (OMS) , policondritis tal como policondritos refractaria o recurrente, proteinosis alveolar pulmonar, amiloidosis, escleritis, linfocitosis no cancerosa, una linfocitosis primaria, que incluye linfocitosis de célula B monoclonal (e.g., gammopatía monoclonal benigna y gammopatía monoclonal de significación no determinada MGUS) , neuropatía periférica, síndrome paraneoplásico, canalopatías tales como epilepsia, migraña, arritmia, trastornos musculares, sordera, ceguera, parálisis periódica y canalopatías del CNS, autismo, miopatía inflamatoria, glomeruloesclerosis segmental focal (FSGS) , oftalmopatía endocrina, uveorretinitis , coriorretinitis , trastorno hepatológico autoinmune, fibromialgia , falla endocrina - - múltiple, síndrome de Schmidt, afrenalitis, atrofia gástrica, demencia presenil, enfermedades desmielinantes tales como enfermedades de desmielinación autoinmune, nefropatía diabética, síndrome de Cressler, alopecia areata, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, inmovilidad esofagal, esclerodactilidad y telangiectasia) , infertilidad autoinmune masculina y femenina, enfermedad de tejido conectivo mezclado, enfermedad de Chagas, fiebre reumática, aborto recurrente, neuropatía de granjero, eritema multiforme, síndrome post-cardiotomía, síndrome de Cushing, neumopatía de avicultor, angiítis granulomatosa alérgica, angiítis linfocítica benigna, síndrome de Alport , alveolitis tal como alveolitis alérgica y alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, reacción de transfusión, lepra, malaria, leishmaniasis , kypanosomiasis , esquistosomiasis , ascariasis, aspergilosis , síndrome de Sampter, síndrome de Caplan, dengue, endocarditis, fibrosis endomiocardial , fibrosis pulmonar intersticial difusa, fibrosis pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis quística, endoftalmitis , eritema elevatum et diutinum, eritoblastosis fetal, faciítis eosinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, flariasis, ciclitis tal como ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica , iridociclitis , o ciclitis de Fuch, púrpura de Henoch-Schonlein, infección por virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , infección por ecovirus, cardiomiopatía , enfermedad de Alzheimer, infección por parvovirus, infección por virus de rubéola, síndromes post-vacunación, infección por rubéola congénita, infección por virus Epstein-Barr, sarampión, síndrome de Evan, falla gonadal autoinmune, corea de Sydenham, nefritis postestreptococo, tromboangiítis ubiterans, tirotoxicosis , tabes dorsalis, corioiditis, polimialgia de célula gigante, oftalmopatía endocrina, pneumonitis por hipersensibilidad crónica, queratoconjuntivitis sicca, queratoconj untivitis epidémica, síndrome nefrítico idiopático, nefropatía de cambio mínimo, lesión familiar benigna y de reperfusión por isquemia, autoinmunidad retinal, inflamación de articulaciones, bronquitis, enfermedad de vías respiratorias obstructiva crónica, silicosis, aftosa, estomatitis aftosa, trastornos de arterioesclerosis , aspermiogenesia , hemolisis autoinmune, enfermedad de Boack, crioglobulinemia, contractura de Dupuytren, endoftalmia facoanafiláctica , enteritis alérgica, lepra de eritema nodoso, parálisis facial idiopática, síndrome de fatiga crónica, fiebre reumática, enfermedad de Hamman-Rich, pérdida de audición sensoneural , hemoglobinuria paroxismática , ileítis regional, leucopenia, mononucleosis infecciosa, mielitis transversal, mixedema idiopático primario, nefrosis, oftalmía simpática, orquitis granulomatosa , pancreatitis, poliradiculitis aguda, pioderma gangrenoso, tireoiditis de Quervain, atrofia esplénica adquirida, infertilidad debida a anticuerpos antiespermatozoarios, timoma no maligno, vitíligo, enfermedades asociadas con virus SCID y Epstein-Barr, síndrome de deficiencia inmune adquirida (SIDA) , enfermedades parasitarias tales como Leishmania, síndrome de choque tóxico, envenenamiento alimenticio, condiciones que implican infiltración de células T, deficiencia de adhesión de leucocitos, respuestas inmunes asociadas con la hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citosinas y linfocitos T, enfermedades que implican diapedesis de leucocitos, síndrome de lesión múltiple de órganos, enfermedades mediadas por el complejo de antígeno-anticuerpo, enfermedad de membrana base anti -glomerular, neuritis alérgica, poliendocrinopatías autoinmunes, ooforitis, mixedema primario, gastritis atrófica autoinmune, oftalmía simpática, enfermedades reumáticas, enfermedad del tejido conectivo mezclado, síndrome nefrótico, insulitis, falla poliendócrina, neuropatía periférica, síndrome poliglandular autoinmune tipo I, hipoparatiroidismo idiopático de inicio adulto (AOIH) , alopecia totalis, cardiomiopatía dilatada, epidermolisis bultosa adquirida (EBA) , hemocromatosis , miocarditis, síndrome nefrótico, colangitis esclerosante primaria, sinusitis purulenta o no purulenta, sinusitis aguda o crónica, sinusitis etmoide, frontal, maxilar, o esfenoide, un trastorno relacionado con eosinofilia tal como eosinofilia, eosinofilia de infiltración pulmonar, síndrome de eosinofilia-mialgia , síndrome de Loffler, neumonía eosinofílica crónica, eosinofilia pulmonar tropical, aspergilosis bronconeumónica, aspergiloma, o granulomas que contienen eosinófilos, anafilaxis, espondiloartritis seronegativa , enfermedad autoinmune poliendócrina , colangitis esclerosante, esclera, epiesclera, candidiasis mucocutánea crónica, síndrome de Bruton, hipogammaglobulinemia transitoria de la infancia, síndrome de Wiskott -Aldrich, ataxia telangiectasia, trastornos autoinmunes asociados con enfermedad por colágeno, reumatismo, enfermedad neurológica, trastorno de reperfusión isquémica, reducción en la respuesta a la presión sanguínea, disfunción vascular, angiectasia, lesión al tejido, isquemia cardiovascular, hipe'ralgesia , isquemia cerebral, y enfermedad que acompaña la vascularización, trastornos de hipersensibilidad alérgica, glomerulonefritis , lesión por reperfusión, lesión por reperfusión del miocardio u otros tejidos, dermatosis con componentes inflamatorios agudos, meningitis purulenta aguda u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central, síndromes asociados con transfusión de granulocitos , toxicidad inducida por citosina, inflamación aguda seria, inflamación intratable crónica, pielitis, pneumonocirrosis , retinopatía diabética, trastorno diabético de arteria grande, hiperplasia endoarterial , úlcera péptica, valvulitis y endometriosis . El tratamiento para el cáncer puede evaluarse, e.g., pero sin limitarse a, mediante la regresión del tumor, el peso del tumor o el encogimiento del tumor, el tiempo para la progresión, duración de supervivencia, supervivencia libre de progresión, índice total de respuesta, duración de la respuesta, calidad de vida, expresión y/o actividad de la proteína. Debido a que los agentes anti -angiogénicos descritos en la presente se dirigen a la vasculatura del tumor y no necesariamente a las células neoplásicas en sí, éstos representan una clase única de drogas anticáncer, y en consecuencia pueden requerir mediciones y definiciones únicas de aquellos que responden clínicamente a las drogas. Por ejemplo, el encogimiento del tumor mayor que 50% en un análisis bidimensional , es el corte estándar para declarar una respuesta. Sin embargo, los antagonistas alfa5betal y los antagonistas VEGF de la invención pueden ocasionar la inhibición de la extensión metastásica sin encogimiento del tumor primario, o simplemente pueden ejercer un efecto tumouristásico . Por consiguiente, pueden utilizarse procedimientos para determinar la eficacia de la terapia, incluyendo, por ejemplo, la medición de plasma o marcadores urinarios de la angiogénesis y la medición de la respuesta mediante visualización radiológica. Dependiendo de la indicación que va a tratarse y de los factores relevantes a la dosificación con los cuales se familiariza el médico experto en el campo, los anticuerpos de la invención se administrarán a una dosis eficaz para el tratamiento de esa indicación, mientras minimicen la toxicidad y los efectos secundarios. Para el tratamiento de un cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad de inmunodeficiencia, la dosis terapéuticamente efectiva puede encontrarse, e.g., en el rango de 50 mg/dosis a 2.5 g/m2. En una modalidad, la dosis administrada es de aproximadamente 250 mg/m2 a aproximadamente 400 mg/m2 o 500 mg/m2. En otra modalidad, la dosis es de aproximadamente 250.375 mg/m2. Aún en otra modalidad, el rango de dosis es de 275-375 mg/m2. Los tratamientos para la degeneración macular relacionada con la edad (AMD) pueden evaluarse, sin limitación, mediante la reducción en el grado o en la prevención de la pérdida de visión posterior. Para la terapia de AMD, la eficacia in vivo puede medirse, e.g., mediante uno o más de los siguientes: evaluando el cambio medio en la agudeza visual mejor corregida (BCVA) desde la línea base hasta un tiempo deseado, evaluando la proporción de los sujetos que perdieron menos que 15 letras en la agudeza visual en un tiempo deseado en comparación con la línea base, evaluando la proporción de los sujetos que aumentaron más que o igual a 15 letras en la agudeza visual en el tiempo deseado en comparación con la línea base, evaluando la proporción de los sujetos con una agudeza visual Snellen equivalente a 20/2000 o peor en un tiempo deseado, evaluando el cuestionario de funcionamiento visual NEI, evaluando el tamaño de la CNV y la cantidad de infiltración de la CNV en un tiempo deseado, según se evalúa mediante angiografía de fluorescencia, etc. El término "detectar" pretende incluir la determinación de la presencia o ausencia de una sustancia o la cuantificación de la cantidad de la sustancia. El término se refiere, por tanto, al uso de los materiales, composiciones y métodos de la presente invención para las determinaciones cualitativas y cuantitativas. En general, la técnica particular utilizada para la detección no es crítica para la práctica de la invención. Por ejemplo, "detectar" de acuerdo con la invención, puede incluir: observar la presencia o ausencia del producto del gen alfas, las moléculas de ARNm, o un polipéptido alfa5; un cambio en los niveles del polipéptido alfa5 o en la cantidad enlazada a un objetivo, un cambio en la función/actividad biológica de un polipéptido alfa5. En algunas modalidades, "detectar" puede incluir detectar los niveles de alfa5 de tipo silvestre (e.g., los niveles de ARNm o de polipéptido) . La detección puede incluir cuantificar un cambio (incremento o disminución) de cualquier valor de entre 10% y 90%, o de cualquier valor entre 30% y 60%, o arriba de 100%, al compararse con un control. La detección puede incluir la cuantificación de cualquier valor de entre 2 veces y 10 veces, inclusive, o de más de e.g., 100 veces. La palabra "marca" cuando se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto o composición detectable que se conjuga directamente o indirectamente al anticuerpo. El marcador puede en sí ser detectable por si misma (e.g., marcas de radioisótopo o marcas fluorescentes) , o, en el caso de un marcador enzimática, puede catalizar una alteración química de un compuesto o composición de sustrato que sea detectable . Nuevos Anticuerpos Anti -alfa5betal Se proporcionan en la presente nuevos anticuerpos que pueden enlazarse a alfa5betal humano e inhibir competitivamente el enlace de un anticuerpo anti-alfa5betal al alfa5betal humano. De acuerdo con una modalidad, el anticuerpo anti-alfa5betal se produce mediante un hibridoma seleccionado del grupo que consiste del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) y del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo se produce mediante un hibridoma seleccionado del grupo que consiste del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) y del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No.

PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006. Aún de acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo comprende la secuencia del dominio pesado variable (VH) y ligero variable (VL) del anticuerpo producido mediante el hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) en la ATCC en Marzo 7 de 2006. En otra modalidad, el anticuerpo comprende la secuencia del dominio pesado variable (VH) y ligero variable (VL del anticuerpo producido mediante el hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006. También se contemplan las formas humanas o quiméricas de los anticuerpos de los hibridomas depositados. De acuerdo con una modalidad, el anticuerpo se enlaza a un alfa5betal humano con un Kd de entre 500 nM y 1 pM. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo no se enlaza a alfaVbeta2 o a alfaVbeta5 o a alfaVbetal. De acuerdo con otra modalidad, el anticuerpo comprende una secuencia de Fe de una IgG humana, e.g., IgGl humana o IgG4 humana. En otra modalidad, una secuencia de Fe se ha alterado o de otra manera cambiado de manera que carezca de una función efectora de citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) , frecuentemente relacionada con su enlace a receptores de Fe (FcRs) . Existen muchos ejemplos de cambios o mutaciones a las secuencias de Fe que pueden alterar la función efectora. Por ejemplo, la WO 00/42072 (Presta) y Shields et al., J. Biol . Chem. , 9 (2 ): 6591-6604 (2001) describen variantes de anticuerpo con enlace mejorado o disminuido a FcRs . El contenido de esas publicaciones se incorpora específicamente en la presente mediante la referencia. El anticuerpo puede encontrarse en forma de un Fab, Fab' , un F(ab)'2/ Fv monocatenario (scFv) , un fragmento de Fv; un diacuerpo y un anticuerpo lineal. También, el anticuerpo puede ser un anticuerpo multiespecífico que se enlaza a alfa5betal y que es un antagonista de alfa5betal, pero que también se enlaza a uno o más objetivos diferentes e inhibe si función (e.g., VEGF) . El anticuerpo puede conjugarse a un agente terapéutico (e.g., un agente citotóxico, un radioisótopo y un agente quimioterapéutico) o a un marcador para detectar el alfa5betal en muestras de pacientes o in vivo mediante visualización (e.g., radioisótopo, colorante fluorescente y enzima) . También se contemplan las moléculas de ácido nucleico que codifican para los anticuerpos alfa5betal, los vectores de expresión que comprenden moléculas de ácido nucleico que codifican para uno o ambos dominios variables y las células que comprenden las moléculas de ácido nucleico. Estos anticuerpos pueden utilizarse en las terapias descritas en la presente y para detectar la proteína alfa5betal en muestras de pacientes (e.g., FACS, inmunohistoquímica (IHC) , análisis ELISA) o en pacientes. Nuevas Combinaciones Nuevas combinaciones para inhibir la angiogénesis y/o la permeabilidad vascular en un sujeto que sufre de una enfermedad, cuyas combinaciones comprenden un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal. El antagonista VEGF y el antagonista alfa5betal pueden administrarse en ciclos de tratamiento concurrentes o secuenciales . Tales tratamientos combinatorios son útiles para tratar una enfermedad, incluyendo aquellas enfermedades que tienen una angiogénesis y/o una permeabilidad vascular anormal y que se beneficiarían de una terapia anti -angiogénesis . Tales enfermedades incluyen, pero no se limitan a cáncer, enfermedad ocular y enfermedad autoinmune . Alternativamente, el sujeto puede tratarse con el antagonista VEGF y administrarse subsecuentemente con el antagonista alfa5betal, e.g., tratarse con el antagonista VEGF hasta que el sujeto no responda al tratamiento con el antagonista VEGF y después tratar al sujeto con el antagonista alfa5betal. De acuerdo con una modalidad, se trata al sujeto con el antagonista VEGF cuando el cáncer es no invasivo y después se trata con el antagonista alfa5betal cuando el cáncer es invasivo. Algunos pacientes que experimentan elevados niveles de alfa5betal naturalmente o en respuesta a la terapia con el antagonista VEGF, comparados con pacientes no enfermos o con el control, pueden responder especialmente a este tratamiento de combinación. También se contemplan las combinaciones que comprenden además un agente terapéutico (e.g., un agente anti-neoplásico, un agente quimioterapéutico, un agente inhibidor del crecimiento y un agente citotóxico) . Por ejemplo, los pacientes que van a tratarse con quimioterapia (e.g., irinotecan) y antagonistas alfa5betal, o que se han tratado con quimioterapia y antagonistas alfa5betal, pueden beneficiarse de la terapia con antagonista VEGF. Alternativamente, los pacientes que se han tratado con quimioterapia y antagonistas VEGF pueden beneficiarse de la terapia con el antagonista alfa5betal. En una modalidad preferida el anticuerpos anti-VEGF es el anticuerpo Avastin®. En otra modalidad preferida, el anticuerpo anti-alfa5betal es un anticuerpo anti -alfa5betal descrito en la presente. Se contemplan los equipos que comprenden el antagonista VEGF, un antagonista alfa5betal y, opcionalmente un agente quimioterapéutico . Formulaciones Farmacéuticas Las formulaciones terapéuticas de los anticuerpos utilizados de acuerdo con la presente invención se preparan para almacenamiento mezclando un anticuerpo que tiene el grado de pureza deseado con vehículos, excipientes o estabilizadores opcionales farmacéuticamente aceptables (Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edición, Osol , A. Ed., (1980)) , en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los vehículos, excipientes o - - estabilizadores aceptable son no tóxicos a los receptores en las dosis y concentraciones empleadas e incluyen amortiguadores tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservadores (tales como cloruro de octadecildimetilbencilamonio ; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; alcohol fenólico, butílico o bencílico; alquil parabenos tales como metil o propil paraben; catecol ; resorcinol; ciclohexanol ; 3-pentanol; y m-cresol; polipéptidos de bajo peso molecular (menor que aproximadamente 10 residuos; proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina, o inmunoglobulinas ; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona ; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos ; disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo glucosa, mannosa, o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como sucrosa, mannitol, trehalosa o sorbitol ; contraiones formadores de sal tales como sodio; complejos de metal (e.g., complejos de Zn-proteína) ; y/o surfactantes no iónicos tales como TWEEN™, PLURONICS™ o polietilenglicol (PEG) . Las formulaciones de anticuerpo ejemplares se describen en la WO 98/56418, expresamente incorporada en la presente mediante la referencia. Las formulaciones liofilizadas adaptadas para administración subcutánea se describen en la WO 97/04801.

Tales formulaciones liofilizadas pueden reconstituirse con un diluyente adecuado a una alta concentración de proteínas y la formulación reconstituida puede administrarse de manera subcutánea al mamífero que va a tratarse en la presente. La formulación en la presente también puede contener más de un compuesto activo, según sea necesario, para la indicación particular que se trata, preferentemente aquellos con actividades complementarias que no se afectan adversamente entre sí. Por ejemplo, puede ser deseable proporcionar además un agente citotóxico, un agente quimioterapéutico , citosina o un agente inmunosupresor (e.g., uno que actúa en las células T, tal como ciclosporina o un anticuerpo que se enlaza a las células T, e.g., uno que se enlaza a LFA-1) . La cantidad efectiva de tales otros agentes depende de la cantidad de anticuerpo presente en la formulación, del tipo de enfermedad o trastorno o tratamiento y de otros factores tratados anteriormente . Éstos generalmente se utilizan en las mismas dosis y mediante las vías de administración descritas en la presente o de aproximadamente 1 a 99% de las dosis anteriormente empleadas. Los ingredientes activos también pueden atraparse en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli- (metilmetacrilato) , respectivamente, en sistemas de suministro de droga coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones . Tales técnicas se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edición, Osol , A. Ed. (1980) . Pueden prepararse preparaciones de liberación sostenida. Ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semi -permeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el antagonista, cuyas matrices se encuentran en forma de artículos configurados, e.g., películas o microcápsulas . Ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2 -hidroxietil -metacrilato) , o poli (vinilalcohol) ) , poliláctidos (Patente de E.U. No. 3,773,919), copolímeros de ácido L-glutámico y etil-L-glutamato, acetato de etileno-vinilo no degradable, copolímeros degradables de ácido láctico-ácido glicólico tales como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida) y ácido poli-S- ( - ) -3 -hidroxibutírico . Las formulaciones que van a utilizarse para la administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra fácilmente mediante filtración a través de membranas estériles de filtración. Artículos de Manufactura y Equipos Otra modalidad de la invención es un artículo de manufactura que contiene materiales útiles para el tratamiento de tumores, enfermedad ocular o enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas. El artículo de manufactura puede comprender un envase y una etiqueta o inserto de empaque en o asociado con el envase. Tales envases adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, etc. Los envases pueden formarse de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. Generalmente, el envase contiene una composición que es efectiva para tratar la condición y puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el envase puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un obturador perforable mediante una aguja de inyección hipodérmica) . Al menos un agente activo en la composición es un antagonista VEGF o un antagonista alfa5betal o un agonista VEGF o un agonista alfa5betal de la invención. La etiqueta o inserto de empaque indica que la composición se utiliza para tratar la condición particular. La etiqueta o inserto de empaque comprenderá además instrucciones para administrar la composición de anticuerpo al paciente. También se contemplan los artículos de manufactura y equipos que comprenden terapias de combinación descritos en la presente. Inserto de empaque se refiere a las instrucciones comúnmente incluidas en empaques comerciales de productos terapéuticos, que contienen información acerca de las indicaciones, uso, dosis, administración, contraindicaciones y/o avisos concernientes al uso de tales productos terapéuticos. En una modalidad, el inserto de empaque indica que la composición se utiliza para tratar linfoma no de Hodgkin . Adicionalmente , el artículo de manufactura puede comprender además un segundo envase que comprende un amortiguador farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyección (B FI), salina amortiguada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros materiales deseables desde el punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros amortiguadores, diluyentes, filtros, agujas y jeringas. También se proporcionan equipos que son útiles para varios propósitos, e.g., para aislamiento o detección de alfa5betal y/o VEGF en pacientes, opcionalmente en combinación con los artículos de manufactura. Para el aislamiento t la purificación de alfa5betal, el equipo puede contener un anticuerpo anti -alfa5betal acoplado a perlas (e.g., perlas de sefarosa) . Pueden proporcionarse equipos que contienen los anticuerpo para la detección y cuantificación de alfa5betal y/o VEGF in vitro, e.g., en un inmunoanálisis ELISA o Western. Como con el artículo de manufactura, el equipo comprende un envase y una etiqueta o inserto de empaque insertado en o asociado con el envase. Por ejemplo, el envase contiene una composición que comprende al menos un anticuerpo anti -alfa5betal de la invención. Pueden incluirse envases adicionales que contienen e.g., diluyentes y amortiguadores, anticuerpos de control. La etiqueta o inserto de empaque puede proporcionar una descripción de la composición así como instrucciones para el uso diagnóstico pretendido in vitro. Anticuerpos Monoclonales Los anticuerpos monoclonales pueden prepararse, e.g., utilizando métodos de hibridoma, tales como los descritos por Kohler y Milstein Nature, 256:495 (1975) o pueden prepararse mediante métodos de ADN recombinantes (Patente de E.U. No. 4,816,567) o pueden producirse mediante los métodos descritos en la presente en la sección de Ejemplos. En un método de hibridoma, típicamente se inmuniza a un ratón, hámster u otro animal huésped apropiado con un agente de inmunización para emitir linfocitos que producen o son capaces de producir anticuerpos que se enlazarán específicamente al agente de inmunización. Alternativamente, los linfocitos pueden inmunizarse in vitro. El agente de inmunización incluirá típicamente un polipéptido o una proteína de fusión de la proteína de interés o una composición que comprende la proteína. Generalmente se utilizan ya sea linfocitos de sangre periférica ("PBLs") si se desean células de origen humano, o se utilizan células de bazo o células de nodo linfático si se desean fuentes de mamífero no humano. Los linfocitos se fusionan entonces con una línea celular inmortalizada utilizando un agente de fusión adecuado tal como polietilenglicol , para formar una célula de hibridoma. Goding, onoclonal Antibodies: Principies and Practice (Anticuerpos monoclonales : principios y práctica) (New York: Academic Press, 1986), pp. 59-103. Las líneas celulares inmortalizadas son comúnmente células de mamífero transformadas, particularmente células de mieloma de origen de roedor, bovino y humano. Comúnmente se emplean líneas celulares de mieloma de rata o ratón. Las células de hibridoma pueden cultivarse en un medio de cultivo adecuado que contiene preferentemente una o más sustancias que inhiben el crecimiento o la supervivencia de las células inmortalizadas no fusionadas. Por ejemplo, si las células de origen carecen de la enzima hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT o HPRT) , el medio de cultivo para los hibridomas incluirás típicamente hipoxantina, aminopterina y timidina ("medio HAT") cuyas sustancias evitan el crecimiento de las células deficientes en HGPRT. Las líneas celulares inmortalizadas preferidas son aquellas que se fusionan eficientemente, soportan la expresión estable de alto nivel del anticuerpo mediante las células seleccionadas que producen el anticuerpo, y son sensibles a un medio tal como el medio HAT. Las líneas celulares inmortalizadas más preferidas son las líneas de mieloma murino, que pueden obtenerse, por ejemplo, del Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California, y del American Type Culture Collection, Manassas, Virginia. Se han descrito las líneas celulares de mieloma humano y de heteromieloma de ratón-humano para la producción de anticuerpos monoclonales humanos. Kozbor, J. Immunol . , 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications (Técnicas de producción y aplicaciones de anticuerpos monoclonales) (Marcel Dekker Inc., New York, 1987) pp . 51-63. El medio de cultivo en el cual se cultivan las células de hibridoma puede analizarse entonces por la presencia de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el polipéptido. La especificidad de enlace de los anticuerpos monoclonales producidos mediante las células de hibridoma puede determinarse mediante inmunoprecipitacion o mediante un análisis de enlace in vitro, tal como un radioinmunoanálisis (RIA) o un análisis inmunoabsorbente enlazado a enzimas (ELISA) . Tales técnicas y análisis son conocidos en la técnica. La afinidad de enlace del anticuerpo monoclonal, por ejemplo, puede determinarse mediante el análisis Scatchard de unson y Pollard, Anal. Biochem. , 107:220 (1980) . Después de identificar las células de hibridoma deseadas, los clones pueden subclonarse limitando los procedimientos de dilución y cultivarse mediante métodos estándar. Goding supra . Los medios de cultivo adecuados para este propósito incluyen, por ejemplo, el medio de Eagle modificado de Dulbecco y el medio RPMI-1640. Alternativamente, las células de hibridoma pueden cultivarse in vivo como ascitos en un mamífero. Los anticuerpos monoclonales secretados por los subclones pueden aislarse o purificarse a partir del medio de cultivo o el fluido de ascitos mediante procedimientos convencionales de purificación de inmunoglobulina tales como, por ejemplo, proteína A sefarosa, cromatografía de hidroxilapatita , electroforesis de gel , diálisis o cromatografía de afinidad. Los anticuerpos monoclonales también pueden producirse mediante métodos de ADN recombinante , tales como los descritos en la Patente de E.U. No. 4,816,567. El ADN que codifica para los anticuerpos monoclonales de la invención puede aislarse y secuenciarse fácilmente utilizando procedimientos convencionales (e.g., utilizando sondas de oligonucleótidos capaces de enlazarse específicamente a genes que codifican para las cadenas pesada y ligera de anticuerpos murinos) . Las células de hibridoma de la invención sirven como una fuente preferida de tal ADN. Una vez aislado, el ADN puede colocarse en vectores de expresión, que entonces se transfectan en células huésped tales como células COS de simio, células de ovario de hámster Chino (CHO) , o células de mieloma que de otra manera no producen proteínas de inmunoglobulina , para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células huésped recombinantes . El ADN también puede modificarse, por ejemplo, sustituyendo la secuencia de codificación por dominios constantes de cadena pesada y de cadena ligera en lugar de las secuencias murinas homologas (Patente de E.U. No. 4,816,567; Morrison et al., supra) o uniendo covalentemente a la secuencia de codificación de inmunoglobulina toda o parte de la secuencia de codificación para un polipéptido no inmunoglobulina. Tal polipéptido no inmunoglobulina puede sustituirse por los dominios constantes de un anticuerpo de la invención, o puede sustituirse por los dominios variables de un sitio que contiene antígeno de un anticuerpo de la invención para crear un anticuerpo quimérico bivalente. Los anticuerpos pueden ser anticuerpos monovalente.

Los métodos para preparar anticuerpos monovalentes se conocen en la técnica. por ejemplo, un método implica la expresión recombinante de la cadena pesada de inmunoglobulina y la cadena pesada modificada. La cadena pesada se trunca generalmente en cualquier punto en la región Fe a fin de evitar la reticulación de la cadena pesada. Alternativamente, los residuos de cisteína relevantes se sustituyen con otro residuo de aminoácido o se suprimen a fin de evitar la reticulación. Los métodos in vitro también son adecuados para preparar anticuerpos monovalentes. La digestión de anticuerpos para producir fragmentos de los mismos, particularmente los fragmentos Fab, puede lograrse utilizando, pero sin limitarse a, técnicas conocidas en la técnica. Anticuerpos Humanos y Humanizados Los anticuerpos pueden ser anticuerpos humanizados o anticuerpos humanos. Las formas humanizadas de anticuerpos no humanos (e.g., murinos) son inmunoglobulinas quiméricas, cadenas de inmunoglobulina o fragmentos de los mismos (tales como Fv, Fab, Fab', F(ab)'2 u otras subsecuencias de enlace al antígeno de los anticuerpos) que contienen típicamente una mínima secuencia derivada de inmunoglobulina no humana. Los anticuerpos humanizados incluyen inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las cuales los residuos de una CDR del receptor se reemplazan por los residuos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como de ratón, rata, o conejo, que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseada. En algunos ejemplos, los residuos de estructura Fv de la inmunoglobulina humana se reemplazan por los residuos no humanos correspondientes. Los anticuerpos humanizados pueden comprender también residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni en la CDR importada o en las secuencias de estructura. En general, el anticuerpo humanizado puede comprender sustancialmente todos de al menos uno y típicamente dos, dominios variables, en los cuales todas o sustancialmente todas las regiones CDR corresponden a aquellas de una inmunoglobulina humana, y todas o sustancialmente todas las regiones FR son aquellas de una secuencia de consenso de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá preferentemente al menos una porción de una región constante (Fe) de inmunoglobulina, típicamente la de una inmunoglobulina humana. Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); Presta, Curr. Op . Struct . Biol . , 2 :593-596 (1992) . Algunos métodos para humanizar anticuerpos no humanos se describen en la técnica y abajo en los Ejemplos. Generalmente, un anticuerpo humanizado tiene uno o más residuos de aminoácido introducidos en el mismo a partir de una fuente que es no humana. Estos residuos de aminoácido no humanos se refieren frecuentemente como residuos "importados" que típicamente se toman de un dominio variable "importado" . De acuerdo con una modalidad, la humanización puede llevarse a cabo esencialmente siguiendo el método de Winter y colaboradores (Jones et al., Nature, 321:522.525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)), sustituyendo CDRs de roedor o secuencias de CDR para las secuencias de un anticuerpo humano correspondientes. Por consiguiente, tales anticuerpos "humanizados" son anticuerpos (Patente de E.U. No. 4,816,567) en donde sustancialmente menos de un dominio variable humano intacto se ha sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana. En la práctica, los anticuerpos humanizados son típicamente anticuerpos humanos en los cuales algunos residuos de CDR y posiblemente algunos residuos de FR se sustituyen por residuos de sitios análogos en anticuerpos de roedor. Como una alternativa a la humanización, pueden generarse anticuerpos humanos. Por ejemplo, ahora es posible producir animales transgénicos (e.g., ratones) que son capaces, al inmunizarlos, de producir un repertorio completo de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena. Por ejemplo, se ha descrito que la supresión homózigua del gen de la región de unión (JH) de la cadena pesada del anticuerpo en ratones mutantes quiméricos y de línea germina, da como resultado la completa inhibición de la producción de anticuerpo endógeno. La transferencia del ordenamiento del gen de inmunoglobulina de línea germinal humana en tales ratones mutantes de línea germinal dará como resultado la producción de anticuerpos humanos al reto con antígeno. Ver, e.g., Jakobovits et al., Proc . Nati. Acad. Sci. EUA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993); Patentes de E.U. Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669 (todas de GenPharm) ; 5.545,807; y WO 97/17852. Alternativamente, los anticuerpos humanos pueden producirse introduciendo sitios de inmunoglobulina humana en animales transgénicos , e.g., ratones en los cuales se han inactivado parcial o completamente los genes de inmunoglobulina endógenos. Al retarlos, se observa una producción de anticuerpo humano que se asemeja cercanamente a la observada en humanos en todos los aspectos, incluyendo reordenamiento, ensamblaje y repertorio de anticuerpos del gen. Este procedimiento se describe, por ejemplo, en las Patentes de E.U. Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; y 5,661,016 y en las siguientes publicaciones científicas: Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature, 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996); Lonberg y Huzar, Intern. Rev. Immunol . , 13:65-93 (1995). Alternativamente, puede utilizarse tecnología de despliegue de fago (McCafferty et al., Nature 348:552-553 [1990] ) para producir anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpo in vitro, a partir de repertorios de gen de dominio variable (V) de inmunoglobulina de donantes no inmunizados. De acuerdo con una modalidad de esta técnica, las secuencias de dominio V de anticuerpo se clonan en marco en un gen de proteína de recubrimiento mayor o menor de un bacteriófago filamentoso, tal como M13 o fd, y se despliegan como fragmentos de anticuerpo funcionales sobre la superficie de la partícula de fago. El despliegue de fago puede llevarse a cabo en una variedad de formatos, e.g., como se describe abajo en la sección de Ejemplos o como se revisa, e.g., en Johnson, Kevin S. y Chiswell, David J. Current Opinión in Structural Biology 3:564-571 (1993). Varias fuentes de segmentos del gen V pueden utilizarse para el despliegue de fago. Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) aislaron una disposición diversa de anticuerpos anti-oxazolona a partir de una pequeña biblioteca combinatoria aleatoria de genes V derivados de los bazos de ratones inmunizados. Un repertorio de genes V de donantes humanos no inmunizados puede construirse y pueden aislarse anticuerpos para una diversa disposición de antígenos (incluyendo auto-antígenos) siguiendo esencialmente las técnicas descritas por arks et al., J. Mol. Biol . , 222:581-597 (1991), o Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993). Ver también Patentes de E.U. Nos. 5,565,332 y 5,573,905. Como se trató anteriormente, los anticuerpos humanos también pueden generarse mediante células B activadas in vitro (ver Patentes de E.U. 5,567,610 y 5,229,275). Los anticuerpos humanos también pueden producirse utilizando varias técnicas conocidas en la técnica incluyendo bibliotecas de despliegue de fago. Hoogenboom y Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol . , 222:581 (1991) . Las técnicas de Colé et al., y de Boerner et al . , también se encuentran disponibles para la preparación de anticuerpos monoclonales humanos. Colé et al., Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy (Anticuerpos monoclonales y terapia de cáncer), Alan R. Liss p. 77 (1985) y Boerner et al., J. Immunol . , 147(1) :86-95 (1991). Anticuerpos Multiespecífieos Los anticuerpos multiespecífieos son anticuerpos monoclonales preferentemente humanos o humanizados que tienen especificidades de enlace para dos o más antígenos diferentes (e.g., los anticuerpos biespecífieos tienen especificidades de enlace para al menos dos antígenos) . Por ejemplo, una de las especificidades de enlace puede ser para el anticuerpo alfa5betal, la otra puede ser para cualquier otro antígeno, de acuerdo con una modalidad preferida, el otro antígeno es una proteína de superficie celular o receptor o subunidad de receptor. Por ejemplo, la proteína de superficie celular puede ser un receptor de célula de desactivación natural (NK) . Así, de acuerdo con una modalidad, un anticuerpo biespecífico de esta invención puede enlazarse a alfa5betal y enlazarse a VEGF. Se han descrito ejemplos de los métodos para producir anticuerpos biespecífieos . Tradicionalmente , la producción recombinante de anticuerpos biespecífieos se basa en la co-expresión de dos pares de cadena pesada/cadena ligera de inmunoglobulina, en donde las dos cadenas pesadas tienen diferentes especificidades. Milstein y Cuello, Nature 305: 537-539 (1983). Debido a la selección aleatoria de las cadenas pesada y ligera de inmunoglobulina, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de diez diferentes moléculas de anticuerpo, de las cuales solo una tiene la estructura biespecífica correcta. La purificación de la molécula correcta se logra comúnmente mediante etapas de cromatografía de afinidad. Se describen procedimientos similares en la WO 93/08829 publicada el 13 de Mayo de 1993, y en Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991). Los dominios variables con las especificidades de enlace deseadas (sitios de combinación de anticuerpo-antígeno) pueden fusionarse a secuencias de dominio constante de inmunoglobulina. La fusión es preferentemente con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende al menos parte de las regiones de articulación CH2 y CH3. Se prefiere tener presente la primera región constante de cadena pesada (CH1) conteniendo el sitio necesario para el enlace de cadena ligera en al menos una de las fusiones. Los ADNs que codifican para las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y, si se desea, la cadena ligera de inmunoglobulina, se encuentran insertados en vectores de expresión separados y se co-transfectan en un organismo huésped adecuado. Para detalles adicionales para generar anticuerpos biespecífieos , ver por ejemplo, Suresh et al., Methods in Enzymology (Métodos en enzimología) 121:210 (1986) . También se han descrito varias técnicas para producir y aislar fragmentos de anticuerpo biespecífico directamente a partir del cultivo de célula recombinante . Por ejemplo, los anticuerpos biespecífieos se han producido utilizando zipers de leucina. Kostelny et al., J. Immunol . , 148 (5) : 1547-1553 (1992). Los péptidos de ziper de leucina de las proteínas Fos y Jun se enlazaron a las porciones Fab' de dos anticuerpos diferentes mediante fusión del gen. los homodímeros de anticuerpo se redujeron en la región de articulación para formar monómeros y después se re-oxidaron para formar los heterodímeros de anticuerpo. Este método también puede utilizarse para la producción de homodímeros de anticuerpo. La tecnología de "diacuerpo" descrita por Hollinger et al., Proc . Nati. Acad. Sci . , EUA 90:6444-6448 (1993) ha proporcionado un mecanismo alternativo para producir fragmentos de anticuerpo biespecífico. Los fragmentos comprenden un VH conectado a un VL mediante un enlace que es demasiado corto para permitir la formación de pares entre los dos dominios en la misma cadena. Por consiguiente, los dominios VH y VL de un fragmento se fuerzan a formar pares con los dominios VL y VH complementarios de otro fragmento, formando así dos sitios de enlace al antígeno. También se ha reportado otra estrategia para producir fragmentos de anticuerpo biespecífico mediante el uso de dímeros Fv monocatenarios (sFv) . Ver Gruber et al., J. Immunol., 152:5358 (1994). Se contemplan los anticuerpos con más de dos valencias. Por ejemplo, pueden prepararse anticuerpos triespecíficos . Tutt et al., J. Immunol., 147:60 (1991). Anticuerpos Heteroconjugados Los anticuerpos heteroconjugados se componen de dos anticuerpos covalentemente unidos. Tales anticuerpos, por ejemplo, se han propuesto para dirigir células del sistema inmune a células no deseadas (Patente de E.U. No. 4,676,980), y para el tratamiento de infección por VIH. WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089. Se contempla que los anticuerpos pueden prepararse in vitro utilizando métodos conocidos en la química de proteínas sintéticas, incluyendo aquellos que implican agentes de reticulación. Por ejemplo, pueden construirse inmunotoxinas utilizando una reacción de intercambio de disulfuro o formando un enlace de tioéter.

Ejemplos de los reactivos adecuados para este propósito incluyen iminotiolato y metil -4 -mercaptobutirimidato y los descritos, por ejemplo, en la Patente de E.U. No. 4,676,980. Elaboración de la Función de Efector Puede ser deseable modificar el anticuerpo de la invención con respecto a la función efectora a fin de mejorar, e.g., la efectividad del anticuerpo para tratar el cáncer. Por ejemplo, el (los) residuo (s) de cisteína puede (n) introducirse en la región Fe permitiendo asó la formación del enlace de disulfuro intercatenario en esta región. El anticuerpo homodimerico así generado puede tener capacidad de internalización mejorada y/o desactivación celular mediada por el complemento y citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) mejoradas. Ver Carón et al . , J. Exp. Med., 176:1191-1195 (1992) y Shopes J. Immunol . , 148:2918-2922 (1992). Los anticuerpos homodiméricos con actividad antitumor mejorada también pueden prepararse utilizando reticuladores heterobifuncionales como se describe en Wolff et al., Cáncer Research., 53:2560-2565 (1993). Alternativamente, puede fabricarse un anticuerpo que tiene regiones Fe dobles y que puede en consecuencia tener capacidades mejoradas de lisis del complemento y de ADCC. Ver, Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design (Diseño de drogas anti-cáncer) 3:219-230 (1989). Pueden realizarse mutaciones o alteraciones en las secuencias de región Fe para mejorar el enlace de Fc (e.g.( FcgammaR, FcRn) . De acuerdo con una modalidad, un anticuerpo de esta invención tiene al menos una función efectora alterada seleccionada del grupo que consiste de ADCC, CDC y enlace de FcRn mejorado en comparación con una IgG nativa o un anticuerpo de origen. Ejemplos de varias mutaciones específicas útiles se describen e.g., en Shields, RL. Et al., (2001) JBC 276(6)6591-6604; Presta L.G., (2002) Biochemical Society Transactions 30 (4 ) : 487-490 ; y publicación WO, WO 00/42072. De acuerdo con una modalidad, la mutación del receptor de Fe es una sustitución en al menos una posición seleccionada del grupo que consiste de: 238, 239, 246, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272 , 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293 , 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322 , 324, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333 , 334, 335, 337, 338, 340 , 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414 , 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438, o 439 de la región Fe, en donde la numeración de los residuos en la región Fe se encuentra de acuerdo con el sistema de numeración EU. Inmunoconj ugados La invención también se refiere a inmunoconjugados que comprenden un anticuerpo conjugado a un agente citotóxico tal como un agente quimioterapéutico, toxina (e.g., una - - toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano, de hongos, vegetal o animal, o fragmentos de la misma) o un isótopo radiactivo (i.e., un radioconjugado) . Los agentes quimioterapéuticos útiles en la generación de tales inmunoconj ugados se han descrito anteriormente. Las toxinas enzimáticamente activas y sus fragmentos que pueden utilizarse, incluyen cadena A de difteria, fragmentos activos de no enlace de la toxina de difteria, cadena A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa) , cadena A de ricina, cadena A de abrina, cadena A de modecina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, PAP-S) , inhibidor de momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de sapaonaria officinalis, genolina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina, y los tricotecenos . Se encuentra disponible una variedad de radionúclidos para la producción de anticuerpos radioconjugados . Los ejemplos incluyen 212Bi , 1311 , 131In, 90Y, y 186Re . Los conjugados del anticuerpo y el agente citotóxico se producen utilizando una variedad de agentes de acoplamiento de proteína bifuncionales tales como N-succinimidil-3 - (2-piridilditiol) propionato (SPDP) , iminotiolano (IT) , derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato HCl) , ésteres activos (tales como disuccinimidil suberato) , aldehidos (tales como glutaraldehído) , compuestos bis-azido (tales como bis (p-azidobenzoil ) hexanodiamina) , derivados de bis-diazonio (tales como bis- (p-diazoniobenzoil ) -etilenodiamina) , diisocianatos (tales como tolieno 2 , 6 -diisocianato) y compuestos de flúor bis-activos (tales como 1 , 5 -difluoro-2 , 4 -dinitrobenceno) . Por ejemplo, una inmunotoxina de ricina puede prepararse como se describe en Vitetta et al., Science, 238:1098 (1987). El ácido 1 -isotiocianatobencil -3 -metildietileno triaminapentaacético marcado con carbono 14 ( X-DTPA) es un agente quelante ejemplar para la conjugación de un radionucleótido al anticuerpo. Ver, O 94/11026. En otra modalidad, el anticuerpo puede conjugarse a un "receptor" (tal como estreptavidina) para su uso en la pre-dirección al tumor, en donde el conjugado de anticuerpo-receptor se administra al paciente, seguido por el retiro del conjugado no enlazado de la circulación, utilizando un agente de despejado y después por la administración de un "ligando" (e.g., avidina) que se conjuga a un agente citotóxico (e.g., un radionucleótido) . Inmunoliposomas Los anticuerpos descritos en la presente también pueden formularse como inmunoliposomas. Los liposomas que contienen el anticuerpo se preparan mediante métodos conocidos en la técnica, tales como los descritos en Epstein et al., Proc . Nati. Acad. Sci . EUA 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc. Nati. Acad. Sci . EUA 77:4030 (1989); y en las Patentes de E.U. Nos. 4,485,045 y 4,544,545. Los liposomas con tiempo de circulación mejorado se describen en la Patente de E.U. No. 5, 013, 556. Pueden generarse liposomas particularmente útiles mediante el método de evaporación de fase inversa con una composición de lípidos que comprende fosfatidilcolina, colesterol y fosfatidiletanolamina derivatizada con PEG (PEG-PE) . Los liposomas se extruyen a través de filtros de un tamaño de poro definido para producir liposomas con el diámetro deseado. Los fragmentos Fab' del anticuerpo de la presente invención pueden conjugarse a los liposomas como se describe en Martin et al., J. Biol . Chem. , 257:286-288 (1982) mediante una reacción de intercambio de disulfuro. Un agente quimioterapéutico (tal como doxorubicina) se encuentra opcionalmente contenido dentro del liposoma. Ver, Gabizon et al., J. National Cáncer Inst . , 81(19): 1484 (1989). Composiciones Farmacéuticas de Anticuerpos y Polipéptidos Los anticuerpos que se enlazan específicamente a un polipéptido identificado en la presente, así como otras moléculas identificadas mediante los análisis de visualización descritos anteriormente en la presente, pueden administrarse para el tratamiento de varios trastornos, como se anotó anteriormente y a continuación, en forma de composiciones farmacéuticas.

Pueden utilizarse lipofectinas o liposomas para suministrar los polipéptidos y anticuerpos o las composiciones de esta invención hacia las células. Cuando se utilizan fragmentos de anticuerpo, se prefiere el fragmento inhibidor más pequeño que se enlaza específicamente al dominio de enlace de la proteína objetivo. Por ejemplo, en base a las secuencias de región variable de un anticuerpo, pueden diseñarse moléculas de péptido que retienen la capacidad para enlazarse a la secuencia de proteína objetivo. Tales péptidos pueden sintetizarse químicamente y/o producirse mediante tecnología de ADN recombinante . Ver, e.g., Marasco et al., Proc . Nati. Acad. Sci . , EUA, 90:7889-7893 (1993) . La formulación en la presente también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la indicación particular que se trata, preferentemente aquellos con actividades complementarias que no se afectan adversamente entre sí. Alternativamente o adicionalmente , la composición puede comprender un agente que mejora su función, tal como, por ejemplo, un agente citotóxico, un agente quimioterapéutico, o un agente inhibidor del crecimiento. Tales moléculas se encuentran presentes adecuadamente en combinación, en cantidades que son efectivas para el propósito pretendido. Los ingredientes activos también pueden encontrarse atrapados en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli-(metilmetacrilato) , respectivamente, en sistemas de suministro de droga coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones . Tales técnicas se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, supra . La formulación que va a utilizarse para la administración in vivo debe encontrarse estéril . Esto se logra fácilmente mediante filtración a través de membranas estériles de filtración. Pueden prepararse preparaciones de liberación sostenida. Ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semi-permeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices se encuentran en forma de artículos configurados, e.g., películas o microcápsulas. Ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2 -hidroxietil -metacrilato) , o poli (vinilalcohol ) ) , poliláctidos (Patente de E.U. No. 3,773,919), copolímeros de ácido L-glutámico y etil-L-glutamato, acetato de etileno-vinilo no degradable, copolímeros degradables de ácido láctico-ácido glicólico tales como LUPRON DEPOT (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida) y ácido poli -S- ( - ) -3 -hidroxibutírico . Aunque los polímeros tales como acetato de etileno-vinilo y ácido láctico-ácido glicólico permiten la liberación de moléculas durante más de 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas durante períodos de tiempo más cortos. Cuando los anticuerpos encapsulados permanecen en el cuerpo durante un largo tiempo, pueden desnaturalizarse o agregarse como resultado de la exposición a la humedad a 37 °C, dando como resultado una pérdida en la actividad biológica y posibles cambios en la inmunogenicidad . Pueden diseñarse estrategias racionales para la estabilización dependiendo del mecanismo implicado. Por ejemplo, si se descubre que el mecanismo de agregación es una formación de enlace S-S intermolecular mediante intercambio de tio-disulfuro, la estabilización puede lograrse modificando los residuos de sulfhidrilo, liofilizando a partir de soluciones acídicas, controlando el contenido de humedad, utilizando aditivos apropiados y desarrollando composiciones específicas de matriz de polímero . Uso Diagnóstico y Visualización Los anticuerpos marcados y derivados y análogos de los mismos, que se enlazan específicamente a un polipéptido, pueden utilizarse para propósitos diagnósticos para detectar, diagnosticar o monitorear enfermedades y/o trastornos asociados con la expresión, la expresión y/o actividad aberrante de un polipéptido de la invención. De acuerdo con una modalidad preferida, los anticuerpos de esta invención pueden utilizarse en análisis diagnósticos o en visualización que implican la inyección del anticuerpo al sujeto. La invención proporciona la detección de la expresión aberrante de un polipéptido VEGF o alfa5betal, que comprende (a) analizar la expresión del polipéptido en células (e.g., tejidos) o en el fluido corporal de un individuo utilizando uno o más de los anticuerpos de esta invención y (b) comparar el nivel de expresión del gen con un nivel estándar de expresión del gen, mediante lo cual un aumento o disminución en el nivel de expresión del gen analizado en comparación con el nivel de expresión estándar es indicativo de expresión aberrante . Los anticuerpos de la invención pueden utilizarse para analizar los niveles de proteína en una muestra biológica utilizando métodos inmunohistológicos clásicos conocidos por los expertos en la técnica (e.g., Jalkanen et al., J. Cell. Biol . , 101:976-985 (1985); Jalkanen et al., J. Cell. Biol., 105:3087-3096 (1987)). Otros métodos a base de anticuerpos útiles para detectar la expresión del gen en proteína incluyen inmunoanálisis tales como el análisis inmunoabsorbente enlazado a enzimas (ELISA) y el radioinmunoanálisis (RIA) . Las marcas adecuadas para análisis de anticuerpos se conocen en la técnica e incluyen marcas de enzimas, tales como glucosa oxidasa; radioisótopos tales como yodo (131I, 125I, 123I, 121I), carbono (14C) , azufre (3H) , indio (115mIn, 113mIn, 112In, mIn) , y tecnetium (99Tc, 99mTc) , talio (201Ti), galio (68Ga, 67Ga) , paladio (103Pd) , molibdeno (99Mo) , xenón (133Xe) , flúor (18F) , 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru; luminol ; y marcas fluorescentes tales como rodamina y biotina fluorescentes. Pueden aplicarse las técnicas conocidas en la técnica para marcas los anticuerpos de la invención. Tales técnicas incluyen, pero no se limitan a, el uso de agentes de conjugación bifuncionales (ver e.g., Patentes de E.U. Nos. 5,756,065; 5,714,631; 5,696,239; 5,652,361; 5,505,931; 5,489,425; 5,435,990; 5,428,139; 5,342,604; 5,274,119; 4,994,560; y 5,808,003; cuyo contenido se incorpora en la presente mediante la referencia en su totalidad) . El diagnóstico de una enfermedad o trastorno asociado con la expresión o la expresión aberrante de VEGF y/o alfa5betal en un animal, preferentemente un mamífero y más preferentemente un humano, puede comprender la etapa de detectar moléculas alfa5betal y/o VEGF en el mamífero. En una modalidad, después de administrar un antagonista VEGF, el diagnóstico comprende: (a) administrar (por ejemplo, parenteralmente , subcutáneamente, o intraperitonealmente) a un mamífero una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-alfa5betal marcado (b) esperar durante un intervalo de tiempo después de la administración para permitir que la molécula marcadora se concentre preferentemente en sitios en el sujeto en donde se expresa la molécula alfa5betal (y para que la molécula no enlazada se limpie a nivel de fondo) ; (c) determinar el nivel de fondo; y (d) detectar la molécula marcadora en el sujeto, de manera que la detección de la molécula marcadora por arriba del nivel de fondo indica que el sujeto tiene una enfermedad o trastorno particular asociado con la expresión o con la expresión aberrante de alfa5betal. El nivel de fondo puede determinarse mediante varios métodos incluyendo, comparando la cantidad de la molécula marcadora detectada con un valor estándar previamente determinado para un sistema particular. De acuerdo con una modalidad específica, la expresión o la sobreexpresión del polipéptido alfa5betal se determina en un análisis diagnóstico o pronóstico después de la administración de un agente terapéutico de antagonista VEGF evaluando los niveles de alfa5betal presentes en la superficie de una célula (e.g., mediante un análisis inmunohistoquímico utilizando anticuerpos anti -alfa5betal ) . Alternativamente o adicionalmente , pueden medirse los niveles de ácido nucleico que codifica para el polipéptido alfa5betal o del AR m en la célula, e.g., mediante hibridación in situ fluorescente utilizando una sonda a base de ácido nucleico que corresponde a un ácido nucleico que codifica para alfa5betal o el complemento del mismo; (FISH: ver WO 98/45479 publicada en Octubre, 1998) , inmunoanálisis Southern, inmunoanálisis Northern, o técnicas de reacción de cadena de polimerasa (PCR) , tales como PCR cuantitativa en tiempo real (RT-PCR) . También puede estudiarse la sobreexpresión de alfa5betal midiendo el antígeno depositado en un fluido biológico tal como el suero, e.g., utilizando análisis a base de anticuerpos (ver también la Patente de E.U. No. 4,933,294 expedida en Junio 12, 1990; WO 91/05264 publicada en Abril 18, 1991; Patente de E.U. 5,401,638 expedida en Marzo 28, 1995; y Sias et al., J. Immunol . Methods 132:73-80 (1990)). Además de los análisis anteriores, se encuentran disponibles varios análisis in vivo para el practicante experto. Por ejemplo, pueden exponerse las células, dentro del cuerpo del mamífero, a un anticuerpo que se encuentra opcionalmente marcado con un marcador detectable, e.g., un isótopo radiactivo, y puede evaluarse el enlace del anticuerpo a las células en el mamífero, e.g., mediante exploración externa por radiactividad o analizando una biopsia tomada de un mamífero previamente expuesto al anticuerpo. Todas las publicaciones (incluyendo patentes y solicitudes de patentes) citadas en la presente, se incorporan en la presente en su totalidad mediante la referencia, incluyendo específicamente, la Solicitud Provisional de los Estados Unidos No. 60/784,704, presentada en Marzo 21 de 2006, la Solicitud Provisional de los Estados Unidos No. 60/785,330, presentada en Marzo 22 de 2006; y la Solicitud Provisional de los Estados Unidos No. 60/871,743 presentada en Diciembre 22 de 2006. Las siguientes secuencias de ADN se depositaron bajo los términos del Tratado de Budapest con el American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Blvd. , Manassas, VA 20110-2209, EUA, como se describe abajo: Material Depósito No. Fecha de depósito Alfa5betal 7H5 , 4 , 2 , 8 PTA-7421 Marzo 7, 2006 Alfa5betal 7H12.5.1.4 PTA-7420 Marzo 7, 2006 Los depósitos en la presente se efectuaron bajo las provisiones del Tratado de Budapest en la International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure and the Regulations Thereunder (Reconocimiento internacional del depósito de microorganismos para el propósito del procedimiento de patentes y regulaciones bajo el mismo (Tratado de Budapest) . Esto asegura el mantenimiento de un cultivo viable de los depósitos durante 30 años a partir de la fecha de depósito. Los depósitos se encontrarán disponibles por la ATCC bajo los términos del Tratado de Budapest y sujetos a acuerdo entre Genentech Inc., y ATCC, lo cual asegura una disponibilidad permanente e irrestricta de la progenie del cultivo de los depósitos al público, a la expedición de la patente de E.U. pertinente o a la apertura al público de cualquier solicitud de patente de E.U. o extranjera, lo que ocurra primero, y asegura la disponibilidad de la progenie a quien determine autorizado el U.S. Commissioner of Patents and Trademarks a la misma de acuerdo con el 35 U.S.C. 122 y con las reglas del Comisionado conforme a la misma (incluyendo 37 C.F.R. 1.14 con referencia particular a la 886 OG 638) . El cesionario de la presente solicitud ha acordado que si un cultivo de los materiales en depósito muere o se pierde o se destruye al cultivarse bajo las condiciones adecuadas, los materiales se reemplazarán con prontitud a su notificación con otros iguales. La disponibilidad del material depositado no debe entenderse como una licencia para practicar la invención contraviniendo de los derechos concedidos bajo la autoridad de cualquier gobierno de acuerdo con sus leyes de patente. Los reactivos comercialmente disponibles referidos en los Ejemplos se utilizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante a menos que se indique de otra manera. La fuente de aquellas células identificadas en los siguientes Ejemplos, y a lo largo de la especificación, por medio de los números de acceso de la ATCC es la American Type Culture Collection, Manassas, VA. A menos que se anote de otra manera, la presente invención utiliza procedimientos estándar de la tecnología de ADN recombinante, tales como los descritos anteriormente y en los siguientes textos: Sambrook et al . , supra; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos actuales en biología molecular) (Green Publishing Associates y Wiley Interscience , N.Y., 1989); Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Protocolos de PCR: Una guía para métodos y aplicaciones) (Academic Press Inc.: N.Y. 1990); Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual (Anticuerpos: un manual de laboratorio) (Cold Spring Harbor Press: Cold Spring Harbor, 1988); Gait, Oligonucleotide Synthesis (Síntesis de oligonucleótidos) (IRL Press: Oxford 1984); Freshney, Animal Cell Culture (Cultivo de células animales) 1987; Coligan et al., Current Protocols in Immunology (Protocolos actuales en inmunología), 1991. A lo largo de esta especificación y reivindicaciones, se entenderá que la palabra "comprenden" o variaciones tales como "comprende" o "que comprende", implica la inclusión de un entero o grupo de enteros declarados, pero no la exclusión de cualquier otro entero o grupo de enteros. La descripción escrita anteriormente se considera suficiente para permitir que un experto en la técnica practique la invención. Se ofrecen los siguientes Ejemplos solamente para propósitos ilustrativos, y no pretenden limitar el alcance de la presente invención en modo alguno. De hecho, varias modificaciones de la invención además de aquellas mostradas y descritas en la presente, se harán aparentes para los expertos en la técnica a partir de la descripción anterior, y recaen dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. EJEMPLOS Ejemplo 1 - Restablecimiento de células estromales que expresan alfa5betal después de la terapia anti-VEFG Las secciones de xenoinjertos de carcinoma colorrectal humano HT-29 que se habían tratado con monoterapia del anticuerpo anti-VEGF B20-4.1 en ratones atímicos, se colorearon para la expresión de anti-alfa5betal . En comparación con un grupo de control tratado con un anticuerpo de control (anticuerpo anti -hierba mala) en este estudio, la monoterapia con B20-4.1 produjo un punto de tiempo medio a final (TTE) que correspondió a poca o ninguna actividad. Los tumores se habían medido dos veces por semana por una duración de 58 días. Se eutanizó a los animales cuando sus tumores alcanzaron el volumen de punto final de 1000 mm3 o en el Día 58, lo que ocurriera primero, y se calculó el (TTE) para cada ratón. El inicio del tratamiento se había determinado a partir del retraso porcentual del crecimiento del tumor (% TGD) , definido como el incremento porcentual en el TTE medio de los ratones tratados contra los de control, considerando significativas las diferencias a 0.01 < P < 0.05, y altamente significativas a P < 0.01 utilizando análisis Logrank. El valor TTE medio del grupo de control fue de 20.6 días. El tratamiento con monoterapia con B20-4.1 produjo un TTE medio de 20.1 días que correspondió a no actividad. La Figura 1 muestra secciones de tumor coloreadas con anticuerpo anti-alfa5betal . Se observó un restablecimiento incrementado de células estromales después del tratamiento con anti-VEGF. Estas células estromales son positivas para integrina a5bl (color verde claro) . Ejemplo 2 - Anticuerpos Anti-alfa5betal Se inyectó a los ratones con alfa5betal humano purificado (Chemicon CC1027) . Se aislaron las células de plasmacitoma que expresan anticuerpos anti-alfa5betal y se transformaron en líneas celulares de hibridoma. Se depositaron dos líneas celulares de hibridoma designadas 7H5.4.2.8 y /H12.5.1.4 con la ATCC . Ver lo anterior. El anticuerpo producido a partir del hibridoma 7H5.4.2.8 es un anticuerpo mIgG2a kappa (también referido en la presente como el "anticuerpo 7H5") . El anticuerpo producido a partir del hibridoma 7H12.5.1.4 es un anticuerpo mIgG2b kappa (también referido en la presente como el "anticuerpo 7H12"). Ejemplo 3 - Análisis de Enlace Directo a HUVEC Los cultivos de tejido conteniendo células endoteliales umbilicales humanas crecientes (HUVEC) se lavaron dos veces con PBS . Las células se retiraron del matraz de cultivo con 3-4 mi de una solución de 5 mM de EDTA/PBS. Se agregó medio de cultivo nuevo a las células y se mezcló. Se contó un alícuota de las células en la mezcla. Las células se centriinfiltraron y se lavaron con amortiguador de lavado (50 mM de Tris, 150 mM de NaCl, pH 7.5) una vez. La concentración de células se ajustó de manera que las células pudieran sembrarse a 25 ul por pozo sobre placas de alto enlace MSD de 96 pozos a 25,000 células/pozo o 4,000 células/pozo en una placa de 384 pozos (Cat # L11XB-1 o # L11XB-2, respectivamente, Meso Scale Diagnostics, LLC) . Las células se incubaron 1 hora a temperatura ambiente en la placa para permitir la captura. Para bloquear el pozo, se agregaron al pozo 25 ul de amortiguador de reserva (suero bovino fetal al 30% (FBS) en TBS (50 mM de Tris, 150 mM de NaCl) + 1 mM de CaC12/l mM de MgCl2, pH 7.5) y se incubó a temperatura ambiente durante de 30 minutos a 1 hora. Los anticuerpos anti-alfa5betal se diluyeron en serie con amortiguador de análisis (TBS con 1 mM de CaC12/l mM de MgCl2, pH 7.2 + 2.4% FBS) para tener una variedad de concentraciones de anticuerpo. Los pozos se lavaron dos veces con amortiguador de lavado después se secaron por manchado. 25 ul de la dilución de anticuerpo se agregaron a un pozo y después se incubaron sobre hielo durante una hora. Los pozos se lavaron tres veces con TBS . Se agregaron 25 ul de una solución marcada con 0.5 ug/ml de xmuFc-sulfo a cada pozo y se incubaron sobre hielo durante de 45 minutos a una hora. El marcador de xmuFc-sulfo es una IgG de cabra anti-murino: R23-AC-5, marca de MSD-SA: R32-21-AD-5, sobre hielo durante de 45 minutos a 1 hora. Los pozos se lavaron tres veces con TBS. 150 ul de 2X de amortiguador de lectura se agregaron a cada pozo (4 X MSD amortiguador de lectura, diluido a 2X con dH20, cat # R92TD-1 (libre de surfactante) ) . La señal electroquimioluminiscente (ECL) consecuente se midió mediante fotodiodos y se cuantificó como una unidad luminosa relativa utilizando un lector MSD (protocolo 6000 de falla) . La EC50 del anticuerpo 7H5 fue de 0.22 nM. La EC50 del anticuerpo 7H12 fue de 0.38 nM. Ejemplo 4 - Análisis FACS del anticuerpo Anti-alfa5betal Los anticuerpos 7H12 o 7H5 se incubaron ya sea con células RAJI (una línea celular que no expresa el AR m alfa5betal) o células HUVEC (una línea celular que expresa altos niveles de ARNm alfa5betal) en 100 ul . Las células enlazadas se detectaron utilizando un segundo anticuerpo conjugado de manera fluorescente. La Figura 3 muestra mediante análisis FACS que 7H12 y 7H5 se enlazan a células HUVEC y no a células RAJI . Utilizando las mismas técnicas con sinoviocito de conejo (HIG-82) o células de mono rhesus (CL-160 fibroblastos de macaca mulatta o células endoteliales de retina CRL-1780) , se observó el enlace de 7H12 y 7H5 a células de conejo y de mono. Ejemplo 5 - Adhesión celular a flbronectina en presencia de anticuerpos anti-alfa5betal Se diluyó fibronectina (Sigma F1141 (bovina) o Roche 1080938 (humana) a 1 ug/ml en un amortiguador de carbonato de sodio. 100 ul de la solución de fibronectina se agregaron por cada pozo de una placa NUNC maxisorp de 96 pozos y se dejó enlazar durante la noche a 4°C ( inmunoplacas NUNC de fondo plano de 96 pozos, axiSorp N/Ster 439454 (VWR 62409-002)). Los pozos se lavaron entonces con salina amortiguada con fosfato (PBS) y se bloquearon con BSA al 1% (Sigma A9418) durante al menos 30 minutos. Las placas se lavaron entonces tres veces con PBS. Se agregaron 20,000 células HUVEC en cada pozo y se incubaron con varias concentraciones de 7H5 o 7H12 en medio de crecimiento conteniendo 1.4 mM de MgCl2 y 1.4 mM de CaC12. La mezcla de incubación se agregó entonces a la placa recubierta con fibronectina. Se agregaron aproximadamente 20,000 células en el mismo medio de crecimiento a cada pozo de control cuando no se agregó ningún anticuerpo inhibidor. Las placas se hicieron girar 5 minutos a 140 g para sincronizar el contacto de las células con el sustrato. Las células se incubaron en un incubador de C02 por varias duraciones de tiempo (de 0 a 120 minutos) . La longitud de tiempo de la incubación varió para cada línea celular. Las placas se lavaron entonces tres veces en PBS . Se retiró todo el liquido de los pozos y se congeló a -80°C. Las placas se descongelaron entonces a temperatura ambiente. Se agregó amortiguador CyQuant (Molecular Probes CyQuant C7026) a los pozos y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se midió la lectura OD. La Figura 4 muestra que la IC50 del anticuerpo 7H5 fue de 0.85 ug/ml (3.44 nM) y la IC50 del anticuerpo 7H12 fue de 0.7 ug/ml (4.38 nM) . Ejemplo 6 - Análisis de proliferación utilizando células HUVEC Se recubrieron placas de 96 pozos con fibronectina (1 ug/ml) durante la noche. La placa se lavó entonces con PBS. Se agregaron 3000 - 5000 células endoteliales (EC) para 96 pozos y se dejaron unir al pozo completamente. Se agregaron anticuerpos anti-alfa5 (incluyendo controles de isotipo) . Se utilizaron 3 pozos para cada condición. Las células se incubaron entonces con los anticuerpos durante 1-24 horas. Los anticuerpos alfa5betal anti-integrina se probaron en varias concentraciones (e.g., 0 ug/ml, 4 ug/ml, 16 ug/ml, 60 ug/ml, 120 ug/ml) . Las células se marcaron entonces con BrdU incubándolas con 2 ul de solución de reserva de BrdU (25 mg/ml en PBS) en 1 mi de medio de cultivo de tejido (EGM2 + todos los suplementos de Clonetics (Cat # CC-4176) . Después de esta incubación, las células se fijaron con PFA al 4%, se trataron con 1N de HC1 durante 20 minutos, se lavaron varias veces con PBS y después se bloquearon en suero de cabra al 10% (PBS con Tritón al 0.2%) durante 1-2 horas. Las células se colorearon entonces con un anticuerpo monoclonal contra BrdU (BD Cat # 347580 1:40) PBS con Tritón al 0.2% y suero de cabra al 5%) y se incubaron durante la noche a 4°C. al día siguiente, las células se lavaron tres veces con PBS y se incubaron con anticuerpo secundario anti-conejo conjugado con Alexa-594 (1:800) durante 4 horas a temperatura ambiente en la oscuridad. Los pozos se lavaron de nuevo y se incubaron con DAPI (1:10,000 en PBS) durante 10 minutos. Después de un lavado final con PBS, el número total de células por pozo se contó tomando una fotografía de la coloración DAPI a 5 X. Las células que fueron positivas para BrdU en los mismos campos se fotografiaron utilizando el filtro rojo. La proliferación se evalúa como el porcentaje de células positivas para BrdU en el campo. Los resultados se analizaron entonces utilizando Excel. La Figura 5a muestra la cuenta total de células HUVEC a 32 horas después de un número inicial de células de 5000. La Figura 5b muestra la cuenta total de células HUVEC a 24 horas en una concentración de anticuerpos de 20 ug/ml. Ejemplo 7 - Protocolo del Análisis de Migración Se cultivaron células HUVEC en EGM2 + todos los suplementos de Clonetics (Cat # CC-4176) en placas de 24 pozos recubiertas con 5 ug/ml de fibronectina hasta confluencia. Las células en el centro de cada pozo se rasparon mediante una punta de pipeta de 2 ul , y las células retiradas mediante el raspado se lavaron de nuevo. El medio de cultivo celular, ya sea con anticuerpo de control, 7H5 o 7H12 se agregó a pozos diferentes. Todos los anticuerpos probados se utilizaron a 20 ug/ml. Después las células se dejaron crecer durante 1 a 2 días. Las áreas heridas se monitorearon . La Figura 6 muestra una fotografía de la migración de HUVEC en 5 ug/ml de fibronectina con 20 ug/ml de anticuerpos anti-alfa5 (7H5) en ECM-2 a 0 horas y a 30 horas. La Figura 7 es una gráfica del % de migración a las 30 horas, para las células tratadas con los anticuerpos 7H5 o 7H12. Ejemplo 8 - Análisis de Apoptosis por inmunocoloración de caspasa 3 activada con HUVEC Se recubrieron placas de 96 pozos con fibronectina (1 ug/ml) durante la noche) . Las placas se lavaron con PBS . Después, se colocaron en placas 3000 - 5000 células HUVEC para los 96 pozos durante la noche en medio completo (medio EBM 2 (Cambrex CC-3156) con el EGM-2 SingleQuots (Cambrex CC-4176) . Si van a utilizarse células endoteliales de ratón 2H- 11 para el análisis de apoptosis, entonces el medio es medio 50/50 con FBS al 10%. Al día siguiente, un grupo de pozos se cambió por medio libre de suero y se incubó durante 4-6 horas para agotar las células y colocarlas en un estado de no proliferación. El otro grupo de células se mantuvo en medio completo y representó las células que proliferaron activamente. Después de 4-6 horas, se agregaron los anticuerpos (incluyendo controles de isotipo) . Generalmente, se utilizan 3 pozos para cada condición. Las células se incubaron entonces con los anticuerpos durante 1-48 horas. Los anticuerpos alfa5betal anti-integrina se probaron generalmente en las siguientes concentraciones: 0 ug/ml, 4 ug/ml, 16 ug/ml, 60 ug/ml y 120 ug/ml. Después de esta incubación, las células se fijaron con PFA al 4%, se bloquearon en suero de cabra al 10% (PBS con Tritón al 0.2%) durante 1-2 horas y después se colorearon con un anticuerpo monoclonal que reconoce específicamente la forma activada de caspasa 3 (e.g., anticuerpo de conejo anti-activo de caspasa 3 de BioVision, 1:50 diluido en PBS con Tritón al 0.2% y suero de cabra al 5%) . El anticuerpo anti-caspasa 3 y las células fijadas se incubaron durante la noche a 4°C. Al siguiente día, las células se lavaron 3 veces con PBS y se incubaron con un anticuerpo secundario anti -conejo conjugado a Alexa-594 (1:800) durante 4 horas a temperatura ambiente durante la noche. Los pozos se lavaron de nuevo y se incubaron con DAPI (1:10,000 en PBS) durante 10 minutos. Después de un lavado final con PBS, el número total de células por pozo se contó tomando una fotografía de la coloración DAPI a 5X. Las células que son positivas para caspasa 3 activada en los mismos campos se fotografiaron utilizando el filtro rojo. La apoptosis se evaluó como el porcentaje de células positivas para la caspasa 3 activada. Los resultados se analizaron entonces utilizando Excel. La Figura 8 muestra que el 7H5 y el 7H12 no inducen activamente la apoptosis. Ejemplo 9 - Análisis Colorimétrico de la Actividad de caspasa 3/7 en HUVEC Se condujo un análisis de la actividad de caspasa 3/7 utilizando los anticuerpo 7H5 y 7H12 (Apo-One Caspase 3/7 Assay, de Promega, ver Technical Bulletin No. 295 para instrucciones de un análisis estándar en 96 pozos) . Generalmente, se recubrieron placas de 96 pozos con fibronectina (1 ug/ml) durante la noche. Las placas se lavaron con PBS. Después, se colocaron en placas 3000 - 5000 células HUVEC para 96 pozos y se cultivaron durante la noche en medio completo (medio EB 2 (Cambrex CC-3156) con el EGM-2 SingleQuots (Cambrex CC-4176) . Si van a utilizarse células endoteliales de ratón 2H-11 para el análisis de apoptosis, entonces el medio es medio 50/50 con FBS al 10%.

Al día siguiente, un grupo de pozos se cambió por medio libre de suero y se incubó durante 4-6 horas para agotar las células y colocarlas en un estado de no proliferación. El otro grupo de células se mantuvo en medio completo y representó las células que proliferaron activamente. Después de 4-6 horas, se agregaron los anticuerpos (incluyendo controles de isotipo) . Generalmente, se utilizan 3 pozos para cada condición. Las células se incubaron entonces con los anticuerpos durante 24-48 horas. Los anticuerpos alfa5betal anti - integrina se probaron generalmente en las siguientes concentraciones: 0 ug/ml, 4 ug/ml, 16 ug/ml, 60 ug/ml y 120 ug/ml. Después de esta incubación, se agregaron 100 ul del reactivo Apo-One Caspase 3/7 a cada pozo, y la placa se mezcló suavemente utilizando un agitador de placa a 300 r.p.m. durante 30 segundos. La placa se incubó entonces a temperatura ambiente durante 1 a 8 horas utilizando entonces un lector de placa. La fluorescencia de capa pozo a una longitud de onda de excitación de 485 nm y se midió una emisión de 530 nm. La señal fluorescente (RLU) resultante de la división del sustrato de caspasa 3/7 indicó la apoptosis. La Figura 9 muestra que el 7H5 y el 7H12 no inducen activamente la apoptosis. Ejemplo 10 - Análisis de Formación de Tubos Los anticuerpos anti-alfa5betal pueden evaluarse por su capacidad para inhibir la formación de tubos. Lo siguiente es un ejemplo de un análisis de formación de tubos en base a los brotes de HUVEC y de un análisis de formación de tubos descrito en Nakatsu et al., (2003) Microvascular Research 66 (2003) 102-112. Generalmente, las células HUVEC pueden mezclarse con microvehículos Cytodex 3 recubiertos con dextrano (Amersham Pharmacia Biogech., Piscataway, NJ) a una concentración de 400 HUVEC por gránulo en un mi de medio EGF-2. Los gránulos con células pueden agitarse suavemente cada 20 minutos durante 4 horas a 37 °C y en C02 al 5%. Después de la incubación, los gránulos con células pueden transferirse a un matraz de cultivo de tejido de 25 cm2 (BD Biosciences, Bedford, A) y dejarse durante 12-16 horas en 5 mi de AGM-2 a 37°C y en C02 al 5%. Al siguiente día, los gránulos con células se lavaron tres veces con EGM-2 y se resuspendieron a una concentración de 200 gránulos recubiertos con células/ml en 2.5 mg/ml de fibrinógeno (Sigma, St . Louis, O) . Pueden agregarse quinientos microlitros de la solución de fibrinógeno/gránulos a 0.625 unidades de trombina (Sigma) en un pozo de una placa de cultivo de tejido de 24 pozos. La solución de fibrinógeno/gránulos puede coagularse durante 5 minutos a temperatura ambiente y después a 37 °C y en C02 al 5% durante 20 minutos. Puede agregarse un mililitro de EGM-2 (que contiene FBS al 2%) a cada pozo y equilibrarse con el coágulo de fibrina durante 30 minutos a 37 °C y en C02 al 5%. El medio se retirará del pozo y se reemplazará con 1 mi de medio nuevo. Pueden colocarse aproximadamente veinte mil células de fibroblasto de piel (Detroit 551, ATCC, Rockville, MD) en la parte superior del coágulo. El medio puede cambiarse cada tercer día. Los análisis del gránulo pueden monitorearse por 7 dias. Los gránulos recubiertos con HUVEC pueden cultivarse en geles de fibrina con o sin 500 ul de anticuerpos anti -alfa5betal (7H5 y 7H12) en la parte superior del gel durante 2-3 días y después transferirse a la etapa de un Nicon Eclipse TE300, equipado con ejes multidimensionales y mantenerse a 37 °C y en C02 al 5% durante 72 horas. La concentración final del anticuerpo que va a utilizarse puede calcularse tomando en cuenta el volumen del gel de fibrina, i.e., concentración final del anticuerpo = peso total del anticuerpo/volumen medio + volumen del gel de fibrina. Pueden capturarse imágenes de múltiples gránulos cada 20 minutos utilizando software Metamorph. La cuantificación de los envases in vitro puede lograrse utilizando imágenes de alta resolución de los gránulos. (e.g., microscopio 1X70 Olympus con un objetivo 4x) . El número de brotes por gránulo puede determinarse en comparación con un control (no tratado) , en donde el brote puede definirse como un envase de longitud igual al diámetro del gránulo. La longitud del brote puede medirse mediante unidades arbitrarias . Ejemplo 11 - Estudios de Combinación en Modelos de tumor de xenoinj erto/aloinj erto La administración concurrente y secuencial de la terapia de antagonista alfa5betal y las terapias de antagonista VEGF puede evaluarse en modelos de tumor de xenoinj erto/aloinj erto . Preferentemente, los modelos tienen poca o ninguna respuesta a la monoterapia con antagonista VEGF. Lo siguiente son ejemplos de modelos que pueden utilizarse: (a) aloinjerto Fo5 en ratones atímicos (tumor de mama derivado de ratones transgénicos mmtv-Her2) (Finkle D.( et al., (2004) Clin. Cáncer Res., 10:2499-2511); (b) xenoinj erto HT29 en ratones atímicos (línea colorrectal humana) ; y (c) RIP-TbAg (tumores pancreáticos en un modelo Tg) . Las terapias pueden administrarse típicamente de manera intraperitoneal , subcutánea o intravenosa. Por ejemplo, el anticuerpo anti-VEGF puede administrarse a 10 mg/kg una vez a la semana o a 5 mg/kg dos veces a la semana. La cantidad del antagonista alfa5betal, tal como un anticuerpo, que va a administrarse, puede estimarse en base a su afinidad y actividad. En un experimento, el antagonista VEGF y el antagonista alfa5betal pueden administrarse en un programa simultáneo durante 5-6 semanas. Alternativamente o adicionalmente , el antagonista VEGF y el antagonista alfa5betal pueden administrarse secuencialmente (e.g., el anticuerpo anti-VEGF durante tres semanas seguido por la dosificación con el anticuerpo anti -alfa5betal durante tres semanas) . La eficacia del tratamiento puede evaluarse, entre otras cosas, en base al progreso del tumor, la perfusión del tumor, la densidad vascular del tumor, la morfología y/o la supervivencia. El progreso del tumor puede medirse, e.g., por medio del volumen del tumor y/o el peso del tumor. La perfusión de FITC-lectina, así como la coloración con marcador vascular, pueden utilizarse para evaluar los cambios vasculares concomitantes con el progreso neoplásico. Ejemplo 12 - Modelo de tumor de mama humano MDA-MB231 Se inyectó a ratones atímicos hembra HRLN con 5 x 106 células de cáncer de mama humano MDA-MB231 de manera subcutánea en el costado (HRLN es el nombre de una especie) . Los tumores se dejaron crecer hasta alcanzar un tamaño promedio de 80-120 mm cúbicos. Los ratones portadores de tumor se dividieron en 4 grupos y el tratamiento comenzó cuando el volumen promedio de tumor por grupo fue de -100 mm cúbicos . Los volúmenes de tumor se midieron dos veces a la semana durante el estudio. La medición del volumen del tumor se llevó a cabo utilizando un método de medición de calibre estándar. El mab alfa5 de integrina de hámster anti-ratón, conocido como 10E7, se generó en Genentech. El punto final del experimento se alcanzó cuando el tumor fue de 1.5 gramos o cuando hubieron pasado 60 días, lo que ocurriera primero. Los que respondieron pudieron haberse seguido por más tiempo en algunos casos. Se eutanizó a los animales cuando se alcanzó el punto final. Los detalles del tratamiento se describen abajo: (1) Grupo de control: mab de control anti-hierba mala inyectado (10 mg/kg, intraperitonealmente (ip) una vez a la semana) (2) Grupo con agente único anti-VEGF: B20.4.1 mab anti-VEGF inyectado (10 mg/kg ip, una vez a la semana) (3) Grupo de combinación: B20.4.1 (10 mg/kg, ip. Una vez a la semana) más mab 10E7 de alfa5 de integrina de hámster anti-ratón (10 mg/kg, ip, dos veces a la semana) (4) Grupo de agente único alfa 5 anti-integrina : mab 10E7 de alfa5 de integrina de hámster anti-ratón inyectado (10 mg/kg, ip, dos veces a la semana) Datos del grupo de cont Datos del grupo de sólo agente Anti-VEGF Datos Anti-VEGF y Anti -Alfa5Betal Estos datos preliminares muestras signos tempranos de actividad combinatoria de anti-alfa5 + anti-VEGF. Después del punto final del estudio, se calcularon los volúmenes medios del tumor para cada grupo (Figura 11A) . También se construyeron trazos Kaplan-Meier para mostrar el porcentaje de animales que permanecieron en el estudio como una función de tiempo (Figura 11B) . Los datos muestran que el anticuerpo alfa5betal anti-integrina mejora la eficacia del anti-VEGF en un modelo de cáncer de mama. Ejemplo 13 - 7H12 y Bevacizumab en el modelo de cicatrización de herida de oreja de conejo Se pesaron y se anestesiaron con isofluorano conejos blancos de Nueva Zelanda. En cada conejo, se retiró el pelo de la superficie interna y a lo largo de los bordes de ambas puntas de las orejas. Se retiró todo el pelo restante de los sitios quirúrgicos con loción depiladora. Los sitios quirúrgicos se limpiaron con frotamiento con betadina seguido por enjuague con alcohol. Utilizando una técnica aséptica, se utilizó un instrumento para biopsia circular de 8 mm para producir una herida a la profundidad del cartílago de la oreja en cada oreja. El pericondrio subyacente se retiró con un elevador perostal y una tijera delgada. Se colocó un vendaje adhesivo Opsite® sobre cada herida, y se dejó que el conejo se recuperara de la anestesia. Los apositos Opsite® se retiraron diariamente, se inspeccionaron las heridas, los tratamientos se aplicaron tópicamente y se aplicaron apositos nuevos. Se calculó la separación de la herida midiendo el diámetro de la herida en los días 0 (inmediatamente después de la cirugía), 7, 10, 14 y 18. Los grupos de tratamiento fueron: Bevacizumab (anticuerpo anti-VEGF) 100 ug en 30 ul a cada herida diariamente (n = 4) 7H12 (anticuerpo anti-alfa5betal) 100 ug en 30 ul a cada herida diariamente (n = 4) Bevacizumab 100 ug en 15 ul + 7H12 en 15 ul a cada herida diariamente (n = 4) Trastuzumab (anticuerpo anti-HER2) 100 ug en 30 ul a cada herida diariamente (n = 3) Los datos muestran que las terapias combinatorias con anti-VEGF y anti -alfa5betal tienen un efecto penetrante en este modelo de angiogénesis contra los agentes únicos solos (Figura 10) . Ejemplo 14 - Terapia de combinación con anti-alfa5betal y anti-VEGF en cáncer de colon Se inyectó a ratones un/un hembra HRLN con 1 mm3 de fragmentos de tumor HT29 (tumor de colon) de manera subcutánea en sus costados. Los tumores se dejaron crecer hasta alcanzar un tamaño promedio de 80-120 mm cúbicos antes del tratamiento con las terapias. Los ratones portadores de tumor se dividieron entonces en 4 grupos : qwk = una vez a la semana 2x/wk = 2 veces por semana La medición del volumen del tumor se llevó a cabo dos veces a la semana utilizando un método de medición de calibre estándar. El mab alfa5 de integrina de hámster anti-ratón, conocido como 10E7, se generó en Genentech. La IgG de control fue un anticuerpo monoclonal anti -hierba mala. Se midió el peso corporal 5 veces durante 2 días, después dos veces por semana (biwk) hasta el final del estudio. el punto final del experimento fue un volumen de tumor de 1 gramo o a los 90 días, lo que ocurriera primero. Algunos que tuvieron respuesta se siguieron durante más tiempo. Cuando se alcanzó el punto final, se eutanizó a los animales. El volumen de dosis fue de 10 ml/kg (o.200 ml/20 g por ratón) cuyo volumen se ajustó al peso corporal. Para los animales que mostraron una regresión completa (CR) , se recolectaron los tejidos en el sitio de implantación del tumor en el punto final y se preservaron en formulina seguido por EtOH al 70% para un estudio posterior. Todas las muestras que se congelaron se colocaron en un criomolde, se envolvieron en hoja metálica y se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido. Después del punto final del estudio, se calcularon los volúmenes medios del tumor para cada grupo (Figura 12A) . También se construyeron trazos Kaplan-Meier para mostrar el porcentaje de animales que permanecieron en el estudio como una función de tiempo (Figura 12B) . Los datos muestran que el anticuerpo alfa5betal anti - integrina mejora la eficacia del anti-VEGF en un modelo de cáncer de colon. Ejemplo 15 - Anti-alfa5betal + quimioterapia en un cáncer de colon Se inyectó a ratones un/un hembra HRLN con 5 x 106 HCT116 células de tumor (células de tumor de colon) de manera subcutánea en sus costados. Se dejó crecer a los tumores hasta que alcanzaron un tamaño promedio de 80-120 mm cúbicos antes del tratamiento con las terapias. Los ratones portadores de tumor se dividieron entonces en 4 grupos: biak = dos veces por semana qwk = una vez a la semana La medición del volumen del tumor se llevó a cabo dos veces a la semana utilizando un método de medición de calibre estándar. El mab alfa5 de integrina de hámster anti-ratón, conocido como 10E7, se generó en Genentech. Se midió el peso corporal 5 veces durante 2 días, después dos veces por semana (biwk) hasta el final del estudio. El punto final del experimento fue un volumen de tumor de 1.5 gramos o a los 60 días, lo que ocurriera primero. Algunos que tuvieron respuesta se siguieron durante más tiempo. Cuando se alcanzó el punto final, se eutanizó a los animales. El volumen de dosis fue de 10 ml/kg (o.200 ml/20 g por ratón) cuyo volumen se ajustó al peso corporal. El 10E7 se administró 30 minutos antes de la administración de irinotecan. Para los animales que mostraron una regresión completa (CR) , se recolectaron los tejidos en el sitio de implantación del tumor en el punto final y se preservaron en formulina seguido por EtOH al 70% para un estudio posterior. Todas las muestras que se congelaron se colocaron en un criomolde, se envolvieron en hoja metálica y se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido . Después del punto final del estudio, se calcularon los volúmenes medios del tumor para cada grupo (Figura 13A) . También se construyeron trazos Kaplan-Meier para mostrar el porcentaje de animales que permanecieron en el estudio como una función de tiempo (Figura 13B) . Los datos muestran que el anticuerpo alfa5betal anti - integrina no mejora la eficacia de la actividad de un agente quimioterapéutico (irinotecan) en un modelo de cáncer de colon, pero tampoco obstruye la actividad del agente quimioterapéutico . Esta observación es consistente con nuestra creencia de que si se presenta un daño vascular antes del anti -alfa5betal , la terapia puede ser significativamente útil en la anti -angiogénesis , en general, y en la anti -angiogénesis en particular en un contexto oncológico. Tal daño vascular puede ocasionarse por un antagonista VEGF, tal como el anticuerpo AVASTIN®. Por sí mismo, el agente quimioterapéutico en este modelo, no ocasionó un daño vascular significativo. Puede contemplarse el uso de todos estos agentes (antagonista VEGF/antagonista alfa5betal/agente quimioterapéutico) simultáneamente o secuencialmente , e manera que el antagonista VEGF se encuentra presente para ocasionar el daño vascular. Ejemplo 16 - Trazos Scatchard de alfa5betal Los anticuerpos anti-alfa5betal se yodaron utilizando el método Iodogen, y el anticuerpo radiomarcado se purificó del 125I-Na libre mediante filtración de gel utilizando una columna PD-10. Se sembraron células R9ab, una línea celular de fibroblasto de conejo (adquiridas de ATCC, No. CCL-193) a -50,000 por pozo en placas de 24 pozos y se incubaron durante 48 horas en C02 al 5% a 37 °C. Las células se lavaron tres veces con amortiguador de enlace (50_50 DMEM/medio F12 conteniendo FBS al 2% y 50 mM de HEPES, pH 7.2) y después se incubaron sobre hielo durante 15 minutos. Las células lavadas se incubaron durante 4 horas sobre hielo con aproximadamente 50 pM de anticuerpo monoclonal 125I anti-alfa5betal conteniendo concentraciones disminuidas de anticuerpo monoclonal anti -alfa5betal no marcado diluido serialmente a partir de 0.5 uM en amortiguador de enlace para 13 concentraciones analizadas por triplicado. Las células se lavaron tres veces con amortiguador de enlace y después se solubilizaron con 200 ul de amortiguador de lisis de SDS (SDS al 1%, 8 M de urea, 10 mM de glicina, pH 3.0) . Los lisados celulares se contaron en un contador gamma Wallac Wizard 1470. Los datos del enlace se evaluaron utilizando el programa de Genentech NewLigand, que utiliza el algoritmo de adaptación de curva de Munson y Robard (Munson P. y Robard D. (1980) Anal. Biochem. , 107:220-239) para determinar la afinidad de enlace del anticuerpo y la concentración en los sitios de enlace. Las Figuras 14 y 15 muestran que el anticuerpo 7H5 tiene un Kd de 0.10 nM y el anticuerpo 7H12 tiene un Kd de 0.30 nM, respectivamente, en estos análisis de enlace . Ejemplo 17 - Análisis de mapeo de epítope de IgG de alfa5betal anti-integrina/enlace competitivo Se incubaron primero diluciones seriales de tres veces de IgGs de alfa5betal anti - integrina con una placa Nunc MaxiSorp de 96 pozos recubierta con antígeno alfa5betal de integrina humana (1 ug/ml; R&D) en amortiguador de PBST y BSA al 0.5% (peso/volumen) y Tween 20 al 0.05% (v/v) durante 1-2 horas a temperatura ambiente, seguido por la adición de 0.3 nM de h7H5.vl hlgGl biotinilado (una variante de anticuerpo de 7H5 generada por Genentech Inc.), que se determinó primero mediante una señal de enlace sub-máxima (50-70%) durante 15 minutos. Después la placa se lavó con amortiguador de PBT (PBS y Tween 20 al 0.05% v/v) por 5 veces. El h7H5.vl hlgGl biotinilado enlazado detectado con conjugado de espretptavidina peroxidasa de horseradish (Pierce) diluido 1:2500 en amortiguador de PBST, se reveló con sustrato de 3, 3' , 5, 5' -tetrametilbenzidina (TMB, Kirkegaard & Perry Labs., Gaithersburg, MD) durante aproximadamente 5 minutos, se sació con 1.0 M de H3P04, y se leyó espectrométricamente a 450 nm. Las curvas se ajustaron con un programa de ajuste de curva de regresión no lineal de cuatro parámetros (Kaleidagraph, Synergy Software) . La Figura 16 muestra que el h7H5.vl enlazado se compitió mediante cantidades incrementadas de m7H5 frío. De hecho, la curva de competición de m7H5 fue casi idéntica a la curva de competición de h7H5.vl (datos no mostrados) . El m7H12 frío compitió también con la biotina h7H5.vl por el enlace a alfa5betal, indicando que los epítopes de enlace de h7H5.vl y de m7H12 en alfa5betal se encuentran sobrepuestos. El anticuerpo de control, por otra parte, no compitió con el h7H5.vl enlazado.

Claims (60)

REIVINDICACIONES 1. Un anticuerpo que puede enlazarse a alfa5betal humano e inhibir competitivamente el enlace de un anticuerpo anti-alfa5betal al alfa5betal humano, en donde el anticuerpo anti-alfa5betal se produce mediante un hibridoma seleccionado del grupo que consiste del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) y del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006. 2. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación

1, en donde el anticuerpo se produce mediante un hibridoma seleccionado del grupo que consiste del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.

2.8 (ATCC No. PTA-7421) y del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006.

3. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende la secuencia de dominio pesado variable (VH) y ligero variable (VL) del anticuerpo producido mediante el hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) en la ATCC en Marzo 7 de 2006.

4. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende la secuencia de dominio pesado variable (VH) y ligero variable (VL) del anticuerpo producido mediante el hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006.

5. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es un anticuerpo humanizado o quimérico del anticuerpo anti-alfa5betal producido mediante un hibridoma seleccionado del grupo que consiste del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) y del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006.

6. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el anticuerpo enlaza un alfa5betal humano con un alfa5 con un Kd entre 500 nM y 1 pM.

7. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo no se enlaza a alfaVbeta3 o a alfaVbeta5 o a alfaVbetal.

8. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-5, en donde el anticuerpo comprende una secuencia Fe de una IgG humana.

9. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3-5, en donde el anticuerpo comprende una secuencia Fe de una IgGl humana o de una IgG4 humana.

10. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el anticuerpo comprende una secuencia Fe que carece de la función efectora de citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) .

11. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3-5, cuyo anticuerpo se selecciona del grupo que consiste de un Fab, Fab' , un F(ab)'2, Fv monocatenario (scFv) , un fragmento de Fv, un diacuerpo y un anticuerpo lineal.

12. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3-5, en donde el anticuerpo es un anticuerpo multiespecífico .

13. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3-5, conjugado a un agente terapéutico.

14. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el agente terapéutico se selecciona del grupo que consiste de un agente citotóxico, un radioisótopo y un agente quimioterapéutico .

15. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3-5, conjugado a un marcador.

16. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el marcador se selecciona del grupo que consiste de un radioisótopo, colorante fluorescente y enzimas.

17. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica para el dominio de cadena pesada variable (VH) o para el dominio de cadena ligera variable (VL) o para ambos dominio VH y VL de cualquiera de los anticuerpos de las reivindicaciones 1-5.

18. Un vector de expresión que codifica para la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 17.

19. Una célula que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 17.

20. La célula de acuerdo con la reivindicación 19, en donde la célula es el hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H5.4.2.8 (ATCC No. PTA-7421) o del hibridoma depositado como Alfa5/betal 7H12.5.1.4 (ATCC No. PTA-7420) en la ATCC en Marzo 7 de 2006.

21. Un método para producir un anticuerpo que comprende cultivar la célula de la reivindicación 19 o de la reivindicación 20 y recuperar el anticuerpo del cultivo celular.

22. Una composición que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-5, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

23. Un método para detectar la proteína alfa5betal en una muestra de un paciente, poniendo en contacto el anticuerpo, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, con la muestra, y detectando el anticuerpo anti-alfa5betal enlazado a la proteína alfa5betal.

24. El método de acuerdo con la reivindicación 23, en donde el anticuerpo se utiliza en un análisis de inmunohistoquímica (IHC) o en un análisis ELISA.

25. El uso del anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-5 en la elaboración de un medicamento para inhibir la angiogénesis y/o la permeabilidad vascular en un sujeto.

26. El uso del anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-5 en la elaboración de un medicamento para tratar una enfermedad en un sujeto, en donde la enfermedad tiene una angiogénesis o una permeabilidad vascular anormales.

27. Un método para inhibir la angiogénesis y/o la permeabilidad vascular en un sujeto que sufre de una enfermedad, que comprende administrar un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal.

28. Un método para tratar el cáncer en un sujeto, que comprende un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal, que comprende administrar un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal.

29. Un método para tratar una enfermedad ocular en un sujeto, que comprende administrar un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal.

30. Un método para tratar una enfermedad autoinmune en un sujeto, que comprende administrar un antagonista VEGF y un antagonista alfa5betal.

31. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27 a 30, en donde se administra al sujeto el antagonista VEGF y subsecuentemente se administra el antagonista alfa5betal.

32. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27 a 30, en donde se administra al sujeto el antagonista VEGF y el antagonista alfa5betal concurrentemente .

33. El método de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el sujeto sufre de una enfermedad que tiene angiogénesis o permeabilidad vascular anormales.

34. El método de acuerdo con la reivindicación 27, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de un tumor, una enfermedad inmune o una enfermedad ocular.

35. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27 a 30, en donde se trata al sujeto con el antagonista VEGF hasta que el sujeto no responde al tratamiento con el antagonista VEGF y después se trata al sujeto con un antagonista alfa5betal.

36. El método de acuerdo con la reivindicación 28, en donde se trata al sujeto con el antagonista VEGF cuando el cáncer es no invasivo y se trata con el antagonista alfa5betal cuando el cáncer es invasivo.

37. El método de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el sujeto tiene niveles elevados de alfa5betal en un tejido enfermo en comparación con el tejido de un sujeto que no sufre de la enfermedad.

38. El método de cualquiera de las reivindicaciones 27-30, en donde se administra además al sujeto un agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste de un agente anti-neoplásico, un agente quimioterapéutico , un agente inhibidor del crecimiento y un agente citotóxico.

39. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27-30, en donde el anticuerpo anti-VEGF puede inhibirse competitivamente del enlace a VEGF humano mediante el anticuerpo Avastin®.

40. El método de acuerdo con la reivindicación 42, en donde el anticuerpo anti-VEGF es el anticuerpo Avastin®.

41. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27-30, en donde el antagonista alfa5betal se conjuga a un agente citotóxico.

42. El método de acuerdo con la reivindicación 41, en donde el agente citotóxico es un isótopo radiactivo, un agente quimioterapéutico o una toxina.

43. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27-30, en donde el antagonista VEGF es un anticuerpo .

44. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27-30, en donde el antagonista alfa5betal es un anticuerpo.

45. El método de acuerdo con la reivindicación 43, en donde el anticuerpo anti-VEGF es un anticuerpo humanizado o humano .

46. El método de acuerdo con la reivindicación 44, en donde el anticuerpo anti-alfa5betal es un anticuerpo - - humanizado o humano.

47. Una composición que comprende un antagonista VEGF, un antagonista alfa5betal y un inhibidor farmacéuticamente aceptable.

48. Un equipo que contiene instrucciones para detectar alfa5betal en un sujeto que se ha tratado con un antagonista VEGF.

49. El uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 47 en la elaboración de un medicamento para inhibir la angiogénesis y/o la permeabilidad vascular en un sujeto que sufre de una enfermedad.

50. El uso de acuerdo con la reivindicación 49, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de un cáncer, una enfermedad ocular y una enfermedad autoinmune en un sujeto.

51. El uso de acuerdo con la reivindicación 49, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de un tumor sólido, un tumor metastásico, un tumor de tejido blando, una enfermedad que tiene neovascularización ocular, una enfermedad inflamatoria que tiene angiogénesis anormal, una enfermedad que surge después de un transplante en el sujeto y una enfermedad que tiene proliferación anormal del tejido fibrovascular .

52. El uso de acuerdo con la reivindicación 50, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer de mama, cáncer cervical, cáncer colorrectal, cáncer pulmonar, linfoma no de Hodgkin (NHL) , cáncer de célula renal, cáncer de próstata, cáncer hepático, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer ovárico, mesotelioma, cáncer de tejido blando, y mieloma múltiple.

53. El uso de acuerdo con la reivindicación 49, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de retinopatía, degeneración macular inducida por la edad, rubeosis; psoriasis, artritis psoriática, una enfermedad renal inflamatoria, síndrome urémico hemolítico, nefropatía diabética, artritis, enfermedad intestinal inflamatoria, inflamación crónica, desprendimiento retinal crónico, uveítis crónica, vitritis crónica, rechazo al injerto de córnea, neovascularización de córnea, neovascularización de injerto de córnea, enfermedad de Crohn, miopía, enfermedad neovascular ocular, osteoartritis , enfermedad de Paget, penfigoide, poliarteritis , queratotomía radial post-láser, neovascularización retinal, síndrome de Sogren, colitis ulcerativa, rechazo al injerto, inflamación pulmonar, síndrome nefrótico, edema, ascitis asociada con malignidades, apoplegía, angiofibroma y glaucoma neovascular.

54. El uso de un antagonista alfa5betal en la elaboración de un medicamento para tratar a un sujeto que sufre de una enfermedad, en donde el sujeto ha respondido al tratamiento para la enfermedad con un antagonista VEGF, pero responde parcialmente o ya no responde al antagonista VEGF.

55. El uso de acuerdo con la reivindicación 54, en donde el sujeto tiene niveles elevados de alfa5betal en un tejido enfermo en comparación con el tejido de un sujeto que no sufre de la enfermedad.

56. El uso de acuerdo con la reivindicación 54, en donde se administra además al sujeto un agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste de un agente anti-neoplásico, un agente quimioterapéutico, un agente inhibidor del crecimiento y un agente citotóxico.

57. El uso de un antagonista VEGF en la elaboración de un medicamento para tratar a un sujeto que sufre de una enfermedad, en donde el sujeto ha respondido al tratamiento para la enfermedad con un antagonista alfa5betal, pero responde parcialmente o ya no responde al antagonista alfa5betal .

58. Una composición que comprende un agonista VEGF y un agonista alfa5betal.

59. El uso de la composición de acuerdo con la reivindicación 58 en la elaboración de un medicamento.

60. El uso de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el medicamento promueve la cicatrización de heridas.