MX2007008768A - Dosificacion fija de anticuerpos her. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a la dosificacion fija de anticuerpos HER, tal como Pertuzumab.

Description

DOSIFICACIÓN FIJA DE ANTICUERPOS HER Campo de la Invención La presente invención se refiere a la dosificación fija de anticuerpos HER, tal como pertuzumab. Antecedentes de la Invención Receptores HER y Anticuerpos contra los mismos La familia HER del receptor de las tirosina quinasas son importantes mediadores del crecimiento, diferenciación y supervivencia celular. La familia del receptor incluye cuatro miembros diferentes incluyendo el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, ErbBl, o HERÍ), HER2 (ErbB2 o pl85peu) , HER3 (ErbB3) y HER4 (ErbB4 o tyro2 ) . El EGFR, codificado por el gen erbBl, ha estado causalmente implicado en la malignidad humana. En particular, la expresión aumentada del EGFR ha sido observada en el cáncer de mama, vejiga, pulmón, cabeza, cuello y estómago como así también en los glioblastomas. La expresión aumentada del receptor del EGFR a menudo esta asociada con la producción incrementada del ligando de EGFR, factor de crecimiento transformante alfa (TGF-a ) , por las mismas células tumorales dando por resultado la activación del receptor mediante una vía de estimulación autócrina. Baselga y Mendelsohn, Phar ac .

Ther. 64:127-154 (1994). Se han evaluado los anticuerpos monoclonales dirigidos contra el EGFR o sus ligandos, TGF-a y EGF, como agentes terapéuticos en el tratamiento de tales malignidades. Ver, por ejemplo, Baselga & Mendelsohn, supra; Masui et al . , Cáncer Research 44: 1002 - 1 007 (1984 ) ; Wu et al . , J. Clin . Invest . 95: 1897-1905 (1995) . El segundo miembro de la familia HER, pl85peu, se identificó originalmente como el producto del gen transformante de neuroblastomas de ratas tratadas químicamente. La forma activada del proto-oncogen neu da por resultado una mutación puntual (valina a ácido glutámico) en la región transmembrana de la proteína codificada. La amplificación del homólogo humano de neu se observo en cánceres de pecho y ovario y se correlaciona con un pronóstico pobre (Sla on et al., Sci ence , 235: 177-182 (1987); Slamon et al . , Science, 244:707-712 (1989); y Patente de los E.U.A. No. 4,968,603) . A la fecha, no se ha informado de ninguna mutación puntual análoga a la del neu proto-oncogen para tumores humanos. La sobre expresión de HER2 (frecuente pero no uniformemente debido a la amplificación de genes) ha sido además observada en otros carcinomas incluyendo carcinomas de estómago, endometrio, glándula salival, pulmón, riñon, colon, tiroides, páncreas y vejiga. Ver, entre otros, King et al., Science, 229:974 (1985); Yokota et al., Lancet: 1:765-767 (1986); Fukushige et al., Molecular Biol., 6:955-958 (1986); Guerin et al., Oncogene Res., 3:21-31 (1988); Cohén et al., Oncogene, 4:81-88 (1989); Yonemura et al., Cáncer Res., 51:1034 (1991); Borst et al., Gynecol . Oncol., 38:364 (1990); Weiner et al., Cáncer Res., 50:421-425 (1990); Kern et al., Cáncer Res., 50:5184 (1990); Park et al., Cáncer Res., 49:6605 (1989); Zhau et al., Mol. Carcinog. , 3:254-257 (1990); Aasland et al., Sr. J. Cáncer 57:358-363 (1988); Williams et al., Pathobiology 59:46-52 (1991); y McCann et al., Cáncer, 65:88-92 (1990). El HER2 puede sobreexpresarse en el cáncer de próstata (Gu et al . , Cáncer Lett. 99:185-9 (1996); Ross et al. , Hum. Pathol. 28:827-33 (1997); Ross et al, Cáncer 79:2162-70 (1997); y Sadasivan et al., J. Urol . 150:126-31 (1993)). Se han descrito anticuerpos dirigidos contra el pl85"eu de rata y los productos proteicos de HER2 humana. Drebin y colegas han desarrollado anticuerpos contra el producto génico neu de rata, pl85neu Ver, por ejemplo, Drebin et al., célula 41:695-706 (1985); Myers et al., Meth. Enzym. 198:277-290 (1991); y W094122478. Drebin et al., Oncogene 2:273- 277 (1988) informan que las mezclas de anticuerpos reactivos con dos regiones distintas de pl85peu dan por resultado efectos anti- tumorales sinérgicos sobre células NIH-3T3 neu-transformadas implantadas en ratones desnudos. Ver además Patente de los E.U.A. No. 5.824.311, emitida el 20 de octubre de 1998. Hudziak et al . , Mol . Cell Biol . 9 (3) : 1165-1172 (1989) describe la generación de un panel de anticuerpos HER2 los cuales se caracterizaron utilizando la línea celular del tumor de pecho humano SK-BR-3. La proliferación celular relativa de las células SK-BR-3 a continuación de la exposición a los anticuerpos se determino mediante la tinción de color violeta cristal de las monocapas después de 72 horas. Al usar este ensayo, se obtuvo la inhibición máxima con el anticuerpo denominado 4D5 el cual inhibió la proliferación celular en un 50%. Otros anticuerpos en el panel redujeron la proliferación celular en menor grado en este ensayo. Además se halló que el anticuerpo 4D5 sensibiliza las líneas células del tumor de pecho que sobre-expresan HER2 a los efectos citotóxicos de TNF-a. Ver además Patente de los E.U.A. No. 5.677.171 emitida el 14 de octubre, 1997. Los anticuerpos HER2 mencionados en Hudziak et al . , además se caracterizan en Fendly et al . , Cáncer Research 50: 1550-1558 (1990); Kotts et al . , In Vi tro 26(3) : 59A (1990); Sarup et al . , Growth Regula tion 1:72-82 (1991); Shepard et al . , J. Clin . I inmuno 1 . 11 (3 ): 117-127 (1991); Kumar et al., Mol. Cell Biol. 11 (2): 979-986 (1991); Lewis et al., Cáncer I inmuno 1. Immunother. 37:255-263 (1993); Pietras et al., Oncogene 9:1829-1838 (1994); Vitetta et al., Cáncer Research 54:5301-5309 (1994); Sliwkowski et al., J. Biol. Chem. 269(20): 14661-14665 (1994); Scott et al., J. Biol. Chem. 266:14300-5 (1991); D'souza et al., Proc. Nati. Acad. Sci. 91:7202-7206 (1994); Lewis et al., Cáncer Research 56: 1457-1465 (1996); y Schaefer et al., Oncogene 15:1385-1394 (1997). 0 Una versión humanizada recombinante del anticuerpo 4D5 de HER2 de murino (huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, trastuzumab o HERCEPTIN®; Patente de los E.U.A. No. .821.337) está clínicamente activa en pacientes con cánceres de pecho metastásicos que sobre-expresan HER2 5 que han recibido una extensa terapia anticancerígena anterior (Baselga et al., J. Clin. Oncol. 14:737-744 (1996)) . El trastuzumab recibió aprobación comercial de la Food & Drug Administration el 25 de Septiembre, 1998 para el tratamiento de pacientes con cáncer de mama o metastásico cuyos tumores sobre-expresan la proteína HER2. Otros anticuerpos HER2 con varias propiedades se han descrito en Tagliabue et al., Int. J. Cáncer 47:933-937 (1991); McKenzie et al., Oncogene 4:543-548 5 (1989); Maier et al., Cáncer Res. 51:5361-5369 (1991); Bacus et al., Molecular Carcinogenesis 3:350-362 (1990); Stancovski et al., PNAS (USA) 88:8691-8695 (1991); Bacus et al., Cáncer Research 52:2580-2589 (1992); Xu et al., Int. J. Cáncer 53:401-408 (1993); WO94100136; Kasprzyk et al., Cáncer Research 52:2771-2776 (1992); Hancock et al., Cáncer Res. 51:4575-4580 (1991); Shawver et al., Cáncer Res. 54:1367-1373 (1994); Arteaga et al., Cáncer Res. 54:3758-3765 (1994); Harwerth et al., J. Biol. Chem. 267:15160-15167 (1992); Patente de los E.U.A. No. 5.783.186; y Klapper et al., Oncogene 14:2099-2109 (1997) . El rastreo de homología ha dado por resultado la identificación de otros dos miembros de la familia del receptor HER; HER3 (Patentes de los E.U.A. Nos. 5.183.884 y 5.480.968 como así también Kraus et al., PNAS (USA) 86:9193-9197 (1989)) y HER4 (Solicitud de Patente EP No 599,274; Plowman et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90:1746-1750 (1993); y Plowman et al., Nature, 366:473-475 (1993)). Ambos de estos receptores muestran la expresión aumentada sobre al menos algunas líneas celulares del cáncer de mama. En general, los receptores HER se hallan en varias combinaciones en células y se cree que la heterodimerización aumenta la diversidad de respuestas celulares a una variedad de ligandos HER (Earp et al . , Breast Cáncer Research and Treatment 35:115-132 (1995)). El EGFR está unido por seis diferentes ligandos; factor de crecimiento epidérmico (EGF) , factor de crecimiento transformante alfa (TGF-a), amfiregulina, factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina (HB-EGF) , betacelulina y epiregulina (Groenen et al . , Growth Factors 11:235-257 (1994)). Una familia de proteínas de heregulina que surgen de un corte y empalme alternativo de un único gen son los ligandos para HER3 y HER4. La familia de la heregulina incluye heregulinas alfa, beta, y gamma (Holmes et al . , Science, 256:1205-1210 (1992); Patente de los E.U.A. No. 5,641,869; y Schaefer et al . , Oncogene 15:1385-1394 (1997)); factores de diferenciación neu (NDFs) , factores de crecimiento glial (GGFs) ; actividad que induce el receptor de acetilcolina (ARIA) ; factor sensorial y motor derivado (SMDF) . Para una revisión, ver Groenen et al . , Growth Factors 11:235-257 (1994); Lemke, G . Molec . & Cell Neurosci . 7:247-262 (1 996) y Lee et al . , Pharm. Rev. 47:51-85 (1995). Recientemente se identificaron tres ligandos HER adicionales; neuregulina-2 (NRG-2) de la cual se informa que une ya sea el HER3 o HER4 (Chang et al . , Nature 387 509-512 (1997); y Carraway et al . , Nature 387 512-516 (1997)); neuregulina-3 que se une a HER4 (Zhang et al . PNAS (USA) 94 (18) : 9562-7 (1997)); y neuregulina-4 que se une a HER4 (Harari et al., Oncogene 18:2681-89 (1999)) HB-EGF, betacelulina y epiregulina además se unen a HER4. Mientras EGF y TGFa no se unen a HER2 , el EGF estimula el EGFR y HER2 para formar un heterodímero, que activa el EGFR y da por resultado la transfosforilación de HER2 en el heterodímero. La dimerización y/o transfosforilación parece activar la HER2 tirosina quinasa. Ver Earp et al., supra. De igual modo, cuando HER3 es co- expresado con HER2 , se forma un complejo de señalización activo y los anticuerpos dirigidos contra HER2 son capaces de interrumpir este complejo (Sliwkowski et al., J. Biol. Chem. , 269 (20) : 14661-14665 (1994)) . Además, la afinidad de HER3 para heregulina (HRG) se incrementa a un estado de afinidad superior cuando se coexpresa con HER2. Ver además, Levi et al., Journal of Neuroscience 15:1329-1340 (1995); Morrissey et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 92: 1431-1435 (1995); y Lewis et al., Cáncer Res., 56: 1457-1465 (1996) con respecto al complejo proteico HER2-HER3. HER4 , como HER3 , forma un complejo de señalización activo con HER2 (Carraway y Cantley, Cell 78:5-8 (1994)) . Las publicaciones de patentes relacionadas con los anticuerpos HER incluyen: US 5,677,171, US 5,720,937, US 5,720,954, US 5,725,856, US 5,770,195, US 5,772,997, US 6,165,464, US 6,387,371, US 6,399,063, US2002/0192211A1, US 6,015,567, US 6,333,169, US 4,968,603, US 5,821,337, US 6,054,297, US 6,407,213, US 6,719,971, US 6,800,738, US2004/0236078A1 , US 5,648,237, US 6,267,958, US 6,685,940, US 6,821,515, W098/17797, US 6,127,526, US 6,333,398, US 6,797,814, US 6,339,142, US 6,417,335, US 6,489,447, WO99/31140, US 2003/0147884A1 , US 2003/0170234A1, US 2005/0002928A1 , US 6,573,043, US 2003/0152987A1, W099/48527, US 2002/0141993A1 , WO01/00245, US 2003/0086924, US 2004/0013667A1 , WO00/69460, WO01/00238, WO01/15730, US 6,627,196B1, US 6,632,979B1, WOOl/00244, US 2002/0090662A1 , WO01/89566, US 2002/0064785, US 2003/0134344, WO04/24866, US 2004/0082047, US 2003/0175845A1 , WO03/087131, US 2003/0228663, WO2004/008099A2 , US 2004/0106161, WO2004/048525, US 2004/0258685A1 , US 5,985,553, US 5,747,261, US 4,935,341, US 5,401,638, US 5,604,107, WO87/07646, WO89/10412, WO91/05264, EP 412,116B1, EP 494,135B1, US 5,824,311, EP 404,181B1, EP 1,006,194A2, US 2002/0155527A1, WO91/02062, US 5,571,894, US 5,939,531, EP 502,812B1, WO93/03741, EP 554,441B1, EP 565,367A1, US 5,288,477, US 5,514,554, US 5,587,458, WO93/12220, W093/16185, US 5,877,305, W093/21319, W093/21232, US 5,856,089, W094/22478, US 5,910,486, US 6,028,059, WO96/07321, US 5,804,396, US 5,846,749, EP 711,565, W096/16673, US 5,783,404, US 5,977,322, US 6,512,097, WO97/00271, US 6,270,765, US 6,395,272, US 5,837,243, WO96/40789, US 5,783,186, US 6,458,356, WO97/20858, W097/38731, US 6,214,388, US 5,925,519, WO98/02463, US 5,922,845, W098/18489, W098/33914, US 5,994,071, W098/45479, US 6,358,682B1, US 2003/0059790, W099/55367, WO01/20033, US 2002/0076695A1 , WO00/78347, WOOl/09187, WO01/21192, WO01/32155, WOOl/53354, WO01/53604, WO01/76630, WO02/05791, WO02/11677, US 6,582,919, US 2002/0192652A1, US 2003/0211530A1 , WO02/44413, US 2002/0142328, US 6,602,670B2, WO02/45653, WO02/055106, US 2003/0152572, US 2003/0165840, WO02/087619, WO03/006509, WO03/012072, WO03/028638, US2003/0068318 , WO03/041736, EP 1,357,132, US 2003/0202973, US 2004/0138160, US 5,705,157, US 6,123,939, EP 616,812B1, US 2003/0103973, US 2003/0108545, US 6,403,630B1, WOOO/61145, WO00/61185, US 6,333,348B1, WOOl/05425, WOOl/64246, US 2003/0022918, US 2002/0051785A1, US 6,767,541, WOOl/76586, US 2003/0144252, WOOl/87336, US 2002/0031515A1 , WO01/87334, WO02/05791, WO02/09754, US 2003/0157097, US 2002/0076408, WO02/055106, WO02/070008, WO02/089842 y WO03/86467. Diagnóstico Los pacientes tratados con el anticuerpo HER2 trastuzumab se seleccionan para terapia en base a la sobre-expresión/amplificación de HER2. Ver, por ejemplo, WO99131140 (Patón et al . ) , US2003/0170234A1 (Hellmann, S.), y US200310147884 (Patón et al.); como así también W001189566, US2002/ 0064785 , y US2003101 34344 (Mass et al . ) . Ver , además, US2003/0152987 , Cohén et al . , que se refiere a la inmunohistoquímica (IHC) e hibridación in si tu fluorescente (FISH) para detectar la sobre-expresión y amplificación de HER2. El documento WO20041053497 (Bacus et al . ) se refiere a la determinación o predicción de la respuesta a la terapia de HERCEPTIN7. La US2004/013297A1 (Bacus et al . ) se refiere a la determinación o predicción de la respuesta a la terapia del anticuerpo ABX0303 EGFR. El documento WO2004/000094 (Bacus et al . ) está dirigido a determinar la respuesta a GW572016, una pequeña molécula, inhibidor del EGFR-HER2 tirosina quinasa. El documento WO2004/063709 , Amler et al . , se refiere a biomarcadores y métodos para determinar la sensibilidad al inhibidor del EGFR, eriotinib HCl. El documento US2004/0209290 , Cobleigh et al . , se refiere a los marcadores de expresión génica para pronóstico del cáncer de mama. Los pacientes tratados con pertuzumab se pueden seleccionar para terapia en base a la activación o dimerización de HER. Las publicaciones de patente que se refieren a pertuzumab y la selección de pacientes para terapia con las mismas incluyen: WO01/00245 (Adams et al . ) ; US2003/0086924 (Sliwkowski, M . ) ; US200410013667A1 (Sliwkowski, M.); así como también WO2004/008099A2 , y US2004/0106161 (Bossenmaier et al.) . Cronin et al. , Am. J. Path. 164 (1) : 35-42 (2004) describe la medición de la expresión génica en tejidos incrustados en parafina archival . Ma et al., Cáncer Cell 5:607-616 (2004) describe el perfil génico para el micro-alineamiento oligonucleótido génico utilizando ARN aislado de secciones de tejido tumoral a partir de biopsias primarias archivadas. Dosificación de fármacos antineoplásicos y anticuerpos HER Los documentos que mencionan la dosificación de fármacos antineoplásicos incluyen: Egorin, M. " Clin Oncol 2003; 21:182-3 (2003); Baker et al., J Nati Cáncer Tnst 94:1883-8 (2002); Felici et al., Eur J Cáncer 38:1677-84 (2002); Loos et al., Clin. Cáncer Res. 6:2685-9 (2000); de Jongh et al., J. Clin Oncol. 19:3733-9 (2001); Mathijssen et al., J. Clin Oncol. 20:81-7 (2002); y de Jong et al., Clin Cáncer Res 10:4068-71 (2004). Típicamente, los anticuerpos monoclonales de IgG humanizados disponibles en el comercio (es decir, trastuzumab, y bevacizumab, Genentech Inc., South San Francisco y gemtuzumab ozogomicin, Wyeth Pharmaceuticals, Filadelfia) y fármacos de pequeñas moléculas citotóxicas en oncología han sido administrados mediante un método de dosificación sobre una base en peso (mg/kg) o sobre una base de área de superficie corporal (BSA) . Cetuximab (ERBITUX®) es un anticuerpo que se une al receptor de EGF y esta aprobado para terapia de cáncer colorrectal. En cáncer colorrectal, se administra 400 mg/m2 de cetuximab como dosis de carga mediante infusión intravenosa durante 2 horas. Esto es seguido de una dosis de mantenimiento de una vez a la semana de 250 mg/m2 administrada durante 1 hora. Ver información de prescripción de cetuximab. Trastuzumab (HERCEPTIN®) se administra a pacientes con cáncer de mama metastásico como una dosis de carga de 4 mg/kg, seguido de dosis de 2 mg/kg semanal. Ver información de prescripción de trastuzumab. Ver, además, WO99/31140; US2003/0147884A1 ; US2003/0170234A1; US2005/0002928A1 ; WO00/69460; WO01/15730 y US 6,627,196B1 que se refieren a la dosificación de trastuzumab. Pertuzumab (también conocido como anticuerpo monoclonal humano recombinante 2C4; OMNITARG™, Genentech, Inc, South San Francisco) representa el primero en una clase nueva de agentes conocidos como inhibidores de la dimerización de HER (HDI) y actúa para inhibir la capacidad de HER2 para formar heterodímeros activos con otros receptores HER (tales EGFF/HER1, HER3 y HER4 ) y es activo al margen de los niveles de expresión HER2. Ver, por ejemplo, Harari y Yarden Oncogene 19:6102-14 (2000); Yarden y Sliwkowski. Na t Rev Mol Cell Biol 2:127-37 (2001); Sliwkowski Na t Struct Biol 10:158-9 (2003); Cho et al . , Na ture 421:756-60 (2003); y Malik et al . , Pro Am Soc Cáncer Res 44:176-7 (2003) . El bloqueo de Pertuzumab en la formación de los heterodímeros HER2-HER3 en células tumorales ha demostrado inhibir la señalización celular crítica, la cual da por resultado una reducida proliferación y supervivencia del tumor (Agus et al . , Cáncer cell 2:127-37 (2002) ) . Pertuzumab ha sido sometido a ensayo como único agente en clínica con una prueba de fase la en pacientes con cánceres avanzados y pruebas de fase II en pacientes con cáncer de ovario y cáncer de mama como así también en cáncer de pulmón y próstata. En un estudio de Fase I, los pacientes que tenían tumores sólidos metastáticos o recurrentes, localmente avanzados e incurables, los cuales habían avanzado durante o después de una terapia estándar se trataron con pertuzumab administrado por vía intravenosa cada 3 semanas . En general Pertuzumab f e bien tolerado. Se logró la recesión del tumor en 3 de 20 pacientes evaluados para respuesta. Dos pacientes habían confirmado respuestas parciales. La enfermedad estable que se prolonga durante más de 2.5 meses se observó en 6 de 21 pacientes (Agus et al . , Pro Am Soc Clin Oncol 22:192 (2003)) . En dosis de 2.0-15 mg/kg, la farmacocinética de pertuzumab fue lineal, y la distancia media varió de 2.69 a 3.74 ml/día/kg y el período de vida de la eliminación terminal media varió de 15.3 a 27.6 días. No se detectaron anticuerpos al pertuzumab (Allison et al . , Pro Am Soc Clin Oncol 22:197 (2003)). Pertuzumab se dosificó sobre una base en peso (mg/kg) en la prueba de Fase I . Los ensayos de Fase II han sido iniciados utilizando una dosis fija. Síntesis de la Invención La presente invención aporta la primera evaluación crítica del impacto y la utilidad de dosificación fija de un anticuerpo monoclonal de IgGI humanizado en farmacocinética y concentraciones de fármaco blanco. Los objetivos esenciales de este análisis del pertuzumab del anticuerpo HER consistieron en: 1) evaluar la farmacocinética de la población y covariados previsibles para pertuzumab en pacientes con cáncer, y 2) examinar la variabilidad de concentraciones de sima permanentes y exposiciones después de una dosificación fija, o de peso corporal, y en base al área de superficie corporal . En consecuencia, en un primer aspecto, la invención aporta un método para tratar cáncer que comprende la administración de una o más dosis de un anticuerpo HER a un paciente humano en una cantidad eficaz para tratar el cáncer. En otro aspecto, la invención aporta un método para tratar cáncer en un paciente humano que comprende la administración de al menos una dosis fija de pertuzumab al paciente, donde la dosis fija se selecciona del grupo que consiste en aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg, y aproximadamente 1050 mg de pertuzumab. La invención además se refiere a un artículo de fabricación que comprende un frasco que contiene una dosis fija de un anticuerpo HER, donde la dosis fija se selecciona del grupo que consiste en aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg y aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER. Breve descripción de los dibujos La Figura 1 aporta un esquema de la estructura de la proteína HER2 , y secuencias de aminoácidos para los Dominios I-IV (SEC ID Nos. 19-22, respectivamente) del dominio extracelular de la misma. Las Figuras 2A y 2B describen alineamientos de las secuencias de aminoácidos de los dominios livianos variables (V (Fig. 2A) y pesados variables (VH) (Fig. 2B) del anticuerpo monoclonal murino 2C4 (SEC ID Nos. 1 y 2, respectivamente) ; los dominios VL y VH de la versión 574 de 2C4 (SEC ID Nos. 3 y 4, respectivamente), y los marcos de consenso VL y VH (hum Kl , subgrupo kappa liviano I; humIII, subgrupo pesado III) (SEC ID Nos. 5 y 6, respectivamente) . Los asteriscos identifican las diferencias entre la versión 574 de 2C4 humanizada y el anticuerpo 2C4 monoclonal murino o entre la versión 574 de 2C4 humanizada y el marco humano. Las Regiones de Determinación de Complementariedad (CDRs) están entre paréntesis . Las Figuras 3A y 3B muestran las secuencias de aminoácidos de cadena liviana y cadena pesada de pertuzumab (SEC ID Nos. 13 y 14, respectivamente) . Las CDRs se muestran en negrita. Las masas moleculares calculadas de la cadena liviana y la cadena pesada son 23.526, 22 Da y 49.216, 56 Da (cisteínas en forma reducida) . El resto carbohidrato esta unido al Asn 299 de la cadena pesada. La Figura 4 describe, esquemáticamente la unión de 2C4 en el sitio de unión heterodimérica del HER2 , previniendo de este modo la heterodimerización con EGFR o HER3 activado. La Figura 5 describe el acoplamiento de HER2/HER3 a las vías de MAPK y Akt.

La Figura 6 compara las diversas actividades de trastuzumab y pertuzumab. Las Figuras 7A y 7B muestran las secuencias de aminoácidos de cadena liviana (Fig. 7A; SEC ID No. 15) y cadena pesada (Fig. 7B; SEC ID No. 16) de trastuzumab, respectivamente . Las Figuras 8A y 8B describen una secuencia de cadena liviana de una variante de pertuzumab (Fig. 8A; SEC ID No. 17) y una secuencia de cadena pesada de una variante de pertuzumab (Fig. 8B; SEC ID No. 18), respectivamente . Las Figuras 9A y 9B son perfiles representativos de datos de PK de un único sujeto mediante uno (Fig. 9A) o dos (Fig. 9B) modelos compartamentales . Los círculos abiertos indican la concentración observada. Las líneas punteadas y sólidas indican la concentración poblacional previsible y la concentración individual previsible, respectivamente. Las Figuras 10A y 10B representan gráficos de diagnóstico modelo. La Fig. 10A describe las concentraciones de pertuzumab observadas versus las previsibles. La línea entera es la línea de unidad. La Fig. 10B describe las concentraciones de pertuzumab previsibles versus las residuales en peso. La línea punteada es un alisamiento LOESS de datos.

Las Figuras HA y 11B describen el efecto aleatorio ( ? ) para la distancia (CL) en peso (WT) y el volumen en el compartimiento central (Ve) por área de superficie corporal (BSA) para el modelo base (Fig. HA) y el modelo final (Fig. 11 B) . Las Figuras 12A-F muestran la evaluación modelo del modelo farmacocinético de población final de pertuzumab utilizando un registro de modelo posterior. Valores observados y distribución previsible posterior para la estadística del ensayo: Fig. 12A -2.5 grados; Fig. 12B - 5 grados; Fig. 12C - 50 grados, Fig. 12D - 90 grados, Fig. 12E - 95 grados, Fig. 12F - 97.5 grados. La línea vertical en cada histograma representa el valor observado de la estadística de ensayo. La Figura 13 ilustra la concentración valle del estado estacionario de pertuzumab previsible (Día 84) después de una dosis fija, en peso o basada en BSA para 1000 sujetos simulados obtenidos del conjunto de datos farmacocinéticos (PK) originales de acuerdo con el modelo final . Las Figuras 14A y 14B muestran la concentración valle del estado estacionario de pertuzumab (día 84) después de una dosis fija, en peso o basada en BSA para poblaciones de pacientes con valores en peso < 10 grados (50.4 kg) (Fig. 14A) o > 90 grados (88.5 kg) (Fig. 14B) .

Descripción detallada de las realizaciones preferidas I. Definiciones Una dosis "fija" o "plana" de un agente terapéutico se refiere, en la presente, a una dosis que se administra a un paciente humano sin tomar en consideración el peso o área de superficie corporal (BSA) del paciente. Por lo tanto, la dosis fija o plana no se suministra como una dosis en mg/kg o una dosis en mg/m2 sino más bien como una cantidad absoluta del agente terapéutico En general, una dosis "de carga", en la presente, comprende una dosis inicial de un agente terapéutico administrada a un paciente, y está seguida de una o más dosis de mantenimiento de la misma. En general, se administra una única dosis de carga, pero las dosis de carga múltiples están contempladas en la presente. Usualmente, la cantidad de dosis de carga administradas excede la cantidad de la o las dosis de mantenimiento administrada y/o la o las dosis de carga se administran con mayor frecuencia que la o las dosis de mantenimiento, para lograr la concentración permanente deseada del agente terapéutico antes que pueda lograrse con la dosis de mantenimiento En la presente, una dosis de "mantenimiento" se refiere a una o más dosis de un agente terapéutico administrado al paciente durante un período de tratamiento. Usualmente, las dosis de mantenimiento se administran a intervalos de tratamiento espaciados, tal como aproximadamente cada semana, aproximadamente cada 2 semanas, aproximadamente cada 3 semanas, o aproximadamente cada 4 semanas . Un "receptor HER" es un receptor proteína tirosina quinasa que pertenece a la familia del receptor HER e incluye los receptores EGFR, HER2 , HER3 y HER4. El receptor HER, en general, comprenderá un dominio extracelular, que puede unirse a un ligando HER y/o dimerizar con otra molécula del receptor HER; un dominio de transmembrana lipofílica; un dominio de tirosina quinasa intracelular conservada; y un dominio de señalización de terminal carboxilo que aloja varios residuos de tirosina que pueden estar fosforilados . El receptor HER puede ser un receptor HER de secuencia® Anativa o una variante® de secuencia de aminoácidos del mismo. Con preferencia, el receptor HER es un receptor HER humano de secuencia nativa. Los términos "ErbBl", "HERÍ", receptor® del factor de crecimiento Aepidermico y AEGFR® se utilizan intercambiablemente en la presente y se refieren al EGFR según se reveló, por ejemplo, en Carpenter et al . , Ann . Rev. Biochem . 56:881-914 (1987), incluyendo sus formas mutantes que se producen en forma natural (por ejemplo un EGFR mutante de selección como en Humphrey et al . , PNAS (USA) 87:4207-4211 (1990)). El término erjbBl se refiere al gen que codifica el producto de la proteína EGFR. Las expresiones "ErbB2" y "HER2" se utilizan intercambiablemente en la presente y se refieren a la proteína humana HER2 descrita, por ejemplo, en Semba et al . , PNAS (USA) 82:6497-6501 (1985) y Yamamoto et al . , Na ture 319:230-234 (1986) (número de depósito del Genebank X03363) . El término " erb 2 " se refiere al gen que codifica la ErbB2 humana y " neu " se refiere al gen que codifica el pl85neu de rata. El HER2 preferido el HER2 humano de secuencia nativa. El dominio extracelular de HER2 comprende cuatro dominios: "Dominio I" (residuos de aminoácidos desde aproximadamente 1-195; SEC ID NO:19), "Dominio II" (residuos de aminoácidos desde aproximadamente 196-319; SEC ID NO: 20), ADominio III® (residuos de aminoácidos desde aproximadamente 320-488: SEC ID NO: 21), y Adominio IV® (residuos de aminoácidos desde aproximadamente 489-630; SEC ID NO: 22) (numeración de residuo sin péptido de señal). Ver Garrett et al . , Mol . Cell . 11:495-505 (2003), Cho et al . , Na ture 421:756-760 (2003), Franklin et al . , Cáncer Cell 5:317-328 (2004), y Plowman et al . , Proc . Nati . Acad . Sci . 90:1746-1750 (1993), como también la Fig. 1 en la presente. Los términos "ErbB3" y "HER3" se refieren al polipéptido del receptor según se describió, por ejemplo, en las Patentes de los E.U.A. Nos. 5,183,884 y 5,480,968 como así también en Kraus et al . , PNAS (USA) 86:9193-9197 (1989) . Los términos "ErbB4" y "HER4" se refieren al polipéptido del receptor según se describió, por ejemplo, en la Solicitud de Patente EP No 599,274; Plowman et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA , 90:1746-1750 (1993); y Plowman et al . , Nature, 366:473-475 (1993), incluyendo sus isoformas, por ejemplo, según se describió en W099/19488, publicada el 22 de abril de 1999. ** (ya estaban estos asteriscos) Por "ligando HER" se entiende un polipéptido que se une a y/o activa un receptor HER. El ligando HER de particular interés en la presente es un ligando HER humano de secuencia nativa tal como el factor de crecimiento epidérmico (EGF) (Savage et al . , J. Biol . Chem . 247.7612-7621 (1972)); factor de crecimiento transformante alfa (TGF-a) (Marquardt et al . , Science 223:1079-1082 (1984)); amfiregulma también conocida como schwannoma o factor de crecimiento autocnno de queratmocitos (Shoyab et al . , Science 243:1074-1076 (1989); Kimura et al . , Nature 348:257-260 (1990); y Cook et al., Mol. Cell. Biol. 11:2547-2557 (1991)); betacelulina (Shing et al., Science 259:1604-1607 (1993); y Sasada et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 190:1173 (1993)); factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina (HB-EGF) (Higashiyama et al., Science 251:936-939 (1991)); epiregulina (Toyoda et al., J. Biol. Chem. 270:7495-7500 (1995); y Komurasaki et al., Oncogene 15:2841-2848 (1997)); una heregulina (ver a continuación); neuregulina-2 (NRG-2) (Carraway et al., Nature 387:512-516 (1997)); neuregulina-3 (?RG-3) (Zhang et al., Proc. Nati. Acad. Sci. 94:9562-9567 (1997)); neuregulina-4 (?RG-4) (Harari et al., Oncogene 18:2681-89 (1999)); y cripto (CR-1) (Kannan et al., J. Biol. Chem. 272 (6) : 3330-3335 (1997)). Los ligandos HER que se unen a EGFR incluyen EGF, TGF-a, amfiregulina, betacelulina, HB-EGF y epiregulina. Los ligandos HER que se unen a HER3 incluyen heregulinas. Los ligandos HER capaces de unirse a HER4 incluyen betacelulina, epiregulina, HB-EGF, ?RG-2, ?RG-3, ?RG-4, y heregulinas. "Heregulina" (HRG) cuando se utiliza en la presente se refiere a un polipéptido codificado por el producto génico heregulina según se revela en la Patente de los E.U.A. ?o . 5,641,869, o Marchionni et al., Nature, 362:312-318 (1993). Ejemplos de heregulinas incluyen heregulina- a , heregulina- ßl , heregulina- ß2 y heregulina- ?3 (Holmes et al . , Sci ence, 256:1205-1210 (1992); y Patente de los E.U.A. No. 5,641,869); factor de diferenciación neu (NDF) (Peles et al . , Cell 69:205-216 (1992)); actividad de inducción del receptor de acetilcolina (ARIA) (Falls et al . , Cell 72:801-815 (1993)); factores de crecimiento glial (GGFs) (Marchionni et al . , Na ture, 362:312-318 (1993)); factor sensorial y motor derivado (SMDF) (Ho et al . , J. Biol . Chem . 270: 14523-14532 (1995)); ? -heregulina (Schaefer et al . , Oncogene 15:1385-1394 (1997)). Un "dímero HER" en la presente, es un dímero asociado no covalentemente que comprende al menos dos receptores HER. Tales complejos pueden formarse cuando una célula que expresa dos o más receptores HER se expone a un ligando HER y puede aislarse por inmuno-precipitación y analizarse por SDS-PAGE según se describe en Sliwkowski et al . , J. Biol . Chem. , 269 (20) : 14661-14665 (1994), por ejemplo. Ejemplos de tales dímeros HER incluyen EGFR-HER2, HER2-HER3 y heterodímeros HER3-HER4. Más aún, el dímero HER puede comprender dos o más receptores HER2 combinados con un receptor HER diferente, tal como HER3 , HER4 o EGFR. Otras proteínas, tales como una sub-unidad del receptor de citoquina (por ejemplo gpl30) puede asociarse con el dímero. Un "inhibidor HER" es una agente que interfiere con la activación o función HER. Ejemplos de inhibidores HER incluyen anticuerpos HER (por ejemplo anticuerpos EGFR, HER2 , HER3 , o HER4 ) ; fármacos con blanco EGFR; anticuerpos HER de pequeñas moléculas; inhibidores de HER tirosina quinasa; inhibidores dual de HER2 y EGFR tirosina quinasa tales como lapatinib/GW572016 ; moléculas antisentido (ver, por ejemplo, WO2004/87207) ; y/o agentes que se unen a, o interfieren con la función de, moléculas de señalización corriente abajo, tales como MAPK o Akt (ver Fig. 5) . Con preferencia, el inhibidor HER es un anticuerpo o pequeña molécula que se une a un receptor HER. Un "anticuerpo HER" es un anticuerpo que se une a un receptor HER. Opcionalmente, el anticuerpo HER además interfiere con la activación o función HER. Con preferencia, el anticuerpo HER se une al receptor HER2. Un anticuerpo HER2 de particular interés en la presente es el pertuzumab. Otro ejemplo de un anticuerpo HER2 es trastuzumab. Ejemplos de anticuerpos de EGFR incluyen cetuximab y ABX0303. El término "Activación de HER" se refiere a la activación, o fosforilación, de cualquiera de uno o más receptores HER, en general, la activación HER da por resultado la transducción de señal (por ejemplo, la causada por un dominio de quinasa intracelular de un receptor HER que fosforila los residuos de tirosina en el receptor HER o un polipéptido de sustrato) . La activación de HER se puede mediar por la unión del ligando HER a un dímero HER que comprende el receptor HER de interés . El ligando HER que se une al dímero HER puede activar un dominio de quinasa de uno o más de los receptores HER en el dímero y de este modo da por resultado la fosforilación de los residuos de tirosina en uno o más de los receptores HER y/o fosforilación de residuos de tirosina en polipéptidos de sustrato adicionales, tales como Akt o MAPK quinasas intracelulares. Ver, por ejemplo la Fig. 5. El término "Fosforilación" se refiere al agregado de uno o más grupos fosfato a una proteína, tal como un receptor HER, o un sustrato del mismo. Un anticuerpo que "inhibe la dimerización® HER" es un anticuerpo que inhibe, o interfiere con, la formación de un dímero HER. Con preferencia, tal anticuerpo se une al HER2 en el sitio de unión heterodimérica del mismo. El anticuerpo más preferido que inhibe la dimerización en la presente es pertuzumab o MAb 2C4. La unión de 2C4 al sitio de unión heterodimérica de HER2 se ilustra en la Fig. 4. Otros ejemplos de anticuerpos que inhiben la dimerización de HER incluyen anticuerpos que se unen a EGFR e inhiben su dimerización con uno o más de los otros receptores HER (por ejemplo anticuerpo monoclonal 806 de EGFR, MAb 806, que se une al EGFR activado o Adesactivado®; ver Johns et al . , J. Biol . Chem . 279 (29) :30375-30384 (2004)); anticuerpos que se unen a HER3 e inhiben su dimerización con uno o más de otros receptores HER; y anticuerpos que se unen a HER4 e inhiben su dimerización con uno o más de otros receptores HER. Un anticuerpo que inhibe la dimerización HER en forma más efectiva que el trastuzumab® es uno que reduce o elimina los dímeros HER en forma más efectiva (por ejemplo al menos aproximadamente 2 veces más efectivo) que el trastuzumab. Con preferencia, tal anticuerpo inhibe la dimerización de HER2 al menos en forma casi tan eficaz como un anticuerpo seleccionado del grupo integrado por un anticuerpo 2C4 monoclonal de murino, un fragmento Fab de anticuerpo 2C4 monoclonal de murino, pertuzumab, y un fragmento Fab de pertuzumab. Se puede evaluar la inhibición de la dimerización de HER estudiando los dímeros HER en forma directa, o evaluando la activación HER, o señalización corriente abajo, que resulta de la dimerización de HER, y/o evaluando el sitio de unión anticuerpo-HER2 , etc. Los ensayos para rastrear los anticuerpos con la capacidad de inhibir la dimerización HER en forma más eficaz que el trastuzumab se describen en Agus et al . , Cáncer Cell 2:127-137 (2002) y WO01/00245 (Adams et al . ) . A modo de ejemplo solamente, se puede ensayar la inhibición de la dimerización de HER evaluando, por ejemplo, la inhibición de formación del dímero HER (ver, por ej emplo, la Fig. 1A-B de Agus et al . , Cáncer Cell 2:127-137 (2002); y WO01/00245); reducción en la activación del ligando HER de células que expresan los dímeros HER (WO01/00245 y la Fig. 2A-B de Agus et al . , Cáncer Cell 2:127-137 (2002), por ejemplo); bloqueo de la unión del ligando HER a células que expresan dímeros HER (WO01/00245, y la Fig. 2E de Agus et al . , Cáncer Cell 2: 127-137 (2002), por ejemplo); inhibición del crecimiento celular de células cancerígenas (por ejemplo células MCF7 , MDA-MD-134, ZR-75-1, MD-MB-175, T-47D) que expresan los dímeros HER en presencia (o ausencia) del ligando HER (WO01/00245 y Figs. 3A-D de Agus et al . , Cáncer Cell 2: 127-137 (2002), por ejemplo); inhibición de la señalización corriente abajo (por ejemplo inhibición de fosforilación de AKT dependiente de HRG o inhibición de fosforilación de MAPK dependiente de HRG o TGF ) (ver, WO01/00245, y Fig. 2C-D de Agus et al . , Cáncer Cell 2 : 127-137 (2002), por ejemplo) . Se puede determinar si el anticuerpo inhibe la dimerización HER estudiando el sitio de unión de anticuerpo-HER2 , por ejemplo, evaluando una estructura o modelo, tal como una estructura de cristal, del anticuerpo unido a HER2 (Ver, por ejemplo, Franklin et al . , Cáncer Cell 5:317-328 (2004)). Un "sitio de unión" heterodimérico en HER2 , se refiere a una región en el dominio extracelular de HER2 que se pone en contacto, o interactúa con, una región en el dominio extracelular de EGFR, HER3 o HER4 al cabo de la formación de un dímero con el mismo. La región se halla en el Dominio II de HER2. Franklin et al . , Cáncer Cell 5:317-328 (2004) . El anticuerpo HER2 puede inhibir la fosforilación® de AKT dependiente de HRG y/o inhibir el MAPK dependiente de AHRG o TGFa en forma más eficaz (por ejemplo al menos 2 veces en forma más eficaz) que el trastuzumab (ver Agus et al . , Cáncer Cell 2:127-137 (2002) y WO01/00245, a modo de ejemplo) . El anticuerpo HER2 puede ser uno que no inhibe la escisión di ectodominio de® (Molina et al . , Cáncer Res . 61:4744-4749 (2001)). Un anticuerpo HER2 que se une a un sitio de unión heterodimérica® de HER2 , se une a los residuos en el dominio II (y opcionalmente además se une a los residuos en otro de los dominios del dominio extracelular HER2 , tal como dominio I y III), y puede impedir estéricamente, al menos en cierto grado, la formación de un heterodímero HER2-EGFR, HER2-HER3, o HER2-HER4. Franklin et al . , Cáncer Cell 5 317-328 (2004) caracterizan la estructura de cristal de HER2 -pertuzumab, depositada en el Banco de Datos de Proteínas RCSB (Código ID IS78), que ilustra un anticuerpo a modo de ejemplo, que se une al sitio de unión heterodimérico de HER2. Un anticuerpo que se "une al dominio II" de HER2 se une a los residuos en el dominio II y opcionalmente los residuos en otros dominios de HER2 , tal como los dominios I y III. Con preferencia el anticuerpo que se une al dominio II se une a la unión entre los dominios I, II y III de HER2. Un polipéptido de "secuencia nativa" es uno que tiene la misma secuencia de aminoácidos que un polipéptido (por ejemplo receptor de HER o ligando de HER) derivado de la naturaleza. Tales polipéptidos de secuencia nativa se pueden aislar de la naturaleza o se pueden producir por medios recombmantes o sintéticos. De este modo, un polipéptido de secuencia nativa puede tener la secuencia de aminoácidos del polipéptido humano que se produce en forma natural, polipéptido munno, o polipéptido de cualquier otra especie mamífera. El término "anticuerpo" se utiliza, en la presente, en el sentido más amplio y específicamente cubre anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos específicos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) formados de al menos dos anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpo, en la medida que exhiban la actividad biológica deseada. El término "anticuerpo monoclonal" tal como se utiliza en la presente se refiere a un anticuerpo de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos y/o se unen al o a los mismos epítopes, excepto posibles variantes que pueden surgir durante la producción del anticuerpo monoclonal, tales variantes, en general están presentes en cantidades menores. Tal anticuerpo monoclonal típicamente incluye un anticuerpo que comprende una secuencia polipeptídica de unión a un blanco, donde la secuencia polipeptídica que se une al blanco se obtuvo mediante un proceso que incluye la selección de una secuencia polipeptídica de unión al blanco a partir de una pluralidad de secuencias polipeptídicas . Por ejemplo, el proceso de selección puede ser la selección un único clon a partir de una pluralidad de clones, tal como un acervo de clones de hibridoma, clones de fago o clones de ADN recombinante. Debe entenderse que la secuencia de unión al blanco seleccionada puede alterarse posteriormente, por ejemplo, para mejorar la afinidad para el blanco, humanizar la secuencia de unión al blanco, mejorar su producción en el cultivo celular, reducir su inmunogenicidad in vivo, crear un anticuerpo multiespecífico, etc., y que un anticuerpo que comprende la secuencia de unión al blanco alterada además es un anticuerpo monoclonal de esta invención. A diferencia de las preparaciones del anticuerpo policlonal que incluye típicamente diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopes), cada anticuerpo monoclonal de una preparación de anticuerpo monoclonal esta dirigida contra un único determinante sobre un antígeno. Además de su especificidad, las preparaciones de anticuerpo monoclonal son ventajosas en que no están típicamente contaminadas por otras inmunoglobulinas. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo como que se obtiene de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, y no debe considerarse como que requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier método. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a ser utilizados de acuerdo con la presente invención se pueden obtener mediante una variedad de técnicas, incluyendo, por ejemplo, el método del hibridoma ((por ej emplo, Kohler et al . , Na ture, 256:495 (1975); Harlow et al . , Antibodies : A Labora tory Manual , (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ° ed . 1988); Hammerling et al . , in : Monoclonal Antibodi es y T- cell Hybridomas 563-681, (Elsevier, N.Y., 1981)), métodos de ADN recombinante (ver, por ejemplo, Patente de los E.U.A. No. 4,816,567), tecnologías de exposición de fago (ver, por ejemplo, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338 (2 ): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340 (5) :1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-1 2472 (2004); y Lee et al., J. Immunol . Methods 284 (1-2 ): 119-132 (2004), y tecnologías para producir anticuerpos tipo humano o humanos en animales que tienen partes o todos los loci de inmunoglobulina humanos o genes que codifican las secuencias de inmunoglobulina humana (ver, por ejemplo, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993); Patente Estadounidense Nos. 5,545,806; 5,569,825; 5,591,669 (todas de GenPharm) ; Patente de los E.U.A. No. 5,545,807; WO 1997/17852; Patente Estadounidense Nos. ,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; y ,661,016; Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature, 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature, 368: 81 2-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996); Neuberger, Na ture Biotechnology, 14: 826 (1996); y Lonberg y Huszar, In tern . Rev. Im unol . , 13: 65-93 (1995) . En la presente, los anticuerpos monoclonales incluyen específicamente anticuerpos "quiméricos" en los cuales una porción de la cadena pesada y/o liviana es idéntica u homologa a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la cadena es idéntica u homologa a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otra especie o que pertenece a otra clase o subclase de anticuerpos, como así también a fragmentos de tales anticuerpos, en la medida que exhiban la actividad biológica deseada (Patente de los E.U.A. No. 4,816,567; y Morrison et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)). Los anticuerpos quiméricos de interés incluyen anticuerpos de "primatizad" que comprenden secuencias de unión al antígeno del dominio variable (por ejemplo Oíd World Monkey, Ape etc) y secuencias regionales constantes humanas. El término "fragmentos de anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo intacto, preferentemente comprende la región de unión al antígeno del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, y Fv; anticuerpos biespecíficos ; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de una sola cadena; y anticuerpos multi-específieos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. Un "anticuerpo intacto" es uno que comprende dos regiones de unión al antígeno, y una región Fe. Con preferencia, el anticuerpo intacto tiene una o más funciones efectoras . Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, anticuerpos intactos se pueden asignar a diferentes clases®. Existen cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, igD, IgE, igG, y IgM, y varios de estos se pueden dividir posteriormente en "subclases" (isotipos), por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4 , IgA, y IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, d , e , ? , y µ , respectivamente. Las estructuras de la subunidad y las configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas. Las "funciones efectoras" del anticuerpo se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a una región Fe (una región Fe de secuencia nativa o una región Fe variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras del anticuerpo incluyen unión de Clq; citotoxicidad dependiente del complemento; unión al receptor Fe ; citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC); fagocitosis; regulación por disminución de receptores de superficie celular (por ejemplo, receptor de célula B; BCR) , etc. Los términos "citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos" y "ADCC" se refieren a una reacción mediada por células en la cual las células citotóxicas no especificas que expresan los receptores Fe (FcRs) (por ejemplo células asesinas por naturaleza (NK) , neutrófilos y macrófagos) reconocen el anticuerpo unido sobre una célula blanco y subsiguiente causan lisis de la célula blanco. Las células primarias para mediar ADCC, células NK, expresan Fc^RIII únicamente, por lo que los monocitos expresan Fc^RI, Fc/RII y Fc^RIII. La expresión FcR en células hematopoyéticas se resume en la Tabla 3 en la página 464 de Ravetch y Kmet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) . Para determinar la actividad de ADCC de una molécula de interés, se puede realizar un ensayo de ADCC m vi tro, tal como el descrito en la Patente de los E.U.A. No. No. 5,500,362 o 5,821,337. Las células efectoras útiles para tales ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células asesinas por naturaleza (NK) . Alternativamente, o además, la actividad de ADCC de la molécula de interés se puede determinar m vi vo, por ejemplo en un modelo animal tal como el descrito en Clynes et al . , PNAS (USA) 95:652-656 (1998) . Las "células efectoras humanas" son leucocitos que expresan uno o más FcRs y llevan a cabo funciones efectoras. Con preferencia, las células expresan al menos Fc^RIII y realizan la función efectora de ADCC. Ejemplos de leucocitos humanos que median la ADCC incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) , células asesinas por naturaleza (NK) , monocitos, células T citotóxicas y neutrófilos; siendo las preferidas las células PBMCs y NK. Las células efectoras se pueden aislar de una fuente natural de la misma, por ejemplo, de sangre o PBMCs según se describió en la presente. Los términos "receptor Fe" o "FcR" se utilizan para describir un receptor que se une a la región Fe de un anticuerpo. La FcR preferida es una FcR humana de secuencia natural. Más aun, una FcR preferida es una que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases Fc/RI, Fc^RII, y Fc/RIII, incluyendo variantes alélicas y alternativamente formas cortadas y empalmadas de estos receptores . Los receptores Fc^RII incluyen Fc^RIIA (un "receptor de activación") y Fc/RIIB (un "receptor de inhibición"), que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren esencialmente en los dominios citoplasmáticos de los mismos. El receptor de activación Fc^RIIA contiene un motivo de activación de receptor inmunológico basado en tiroxina (ITAM) en su dominio citoplasmático . El receptor de inhibición Fc/RIIB contiene un motivo de inhibición de receptor inmunológico basado en tiroxina (ITIM) en su dominio citoplasmático (ver review M. in Daéron, Annu. Rev. Immunol . 15:203-234 (1997)). Las FcRs se revisaron en Ravetch y Kinet, Annu . Rev. Im unol 9:457-92 (1991); Capel et al . , Immuno methods 4:25-34 (1994); y de Haas et al . , J. Lab . Clin . Med . 126:330-41 (1995). Otras FcRs, incluyen las que se van a identificar en el futuro, están comprendidas en el término "FcR" en la presente. El término además incluye el receptor neonatal, FcRn, el cual es responsable por la transferencia de lgGs maternales al feto (Guyer et al . , J. Immunol . 117:587 (1976) y Kim et al . , J. Immunol . 24:249 (1994)), y regula las homeostasis de las inmunoglobulinas. "Citotoxicidad dependiente del complemento" o "CDC" se refiere a la capacidad de una molécula de lisar un blanco en presencia de complemento. La trayectoria de activación del complemento se inicia por la unión del primer componente del sistema de complemento (Clq) (por ejemplo, un anticuerpo) complejado con un antígeno cognado. Para determinar la activación del complemento, se puede llevar a cabo un ensayo CDC, por ejemplo según se describe en Gazzano-Santoro et al . , J. Immunol . Methods 202:163 (1996). "Anticuerpos nativos" son usualmente glicoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150.000 daltons, compuestas de dos cadenas livianas (L) idénticas y dos cadenas pesadas (H) idénticas. Cada cadena liviana se enlaza a una cadena pesada por un enlace disulfuro covalente, mientras que la cantidad de enlaces disulfuro varia entre las cadenas pesadas de diferentes isótopos de inmunoglobulina. Cada cadena pesada y liviana además tiene puentes disulfuro intracatenarios espaciados regularmente. Cada cadena pesada tiene en un extremo un dominio variable (VH) seguido de una cantidad de dominios constantes . Cada cadena liviana tiene un dominio variable en un extremo (VL) y un dominio constante en su otro extremo. El dominio constante de la cadena liviana se alinea con el primer dominio constante de la cadena pesada, y el dominio variable de la cadena liviana con el dominio variable de la cadena pesada. Se cree que los residuos de aminoácidos particulares forman una interfaz entre los dominios variables de cadena pesada y cadena liviana. El término "variable" se refiere al hecho de que ciertas porciones de los dominios variables difieren extensivamente en secuencias entre anticuerpos y se utilizan en la unión y especificidad de cada anticuerpo particular para su antígeno particular. Sin embargo, la variabilidad no está distribuida uniformemente a lo largo de los dominios variables de los anticuerpos. Se concentra en tres segmentos denominados regiones hipervariables en los dominios de la cadena liviana y la cadena pesada. Las porciones más conservadas de los dominios variables se denominan regiones de marco (FRs) . Los dominios variables de las cadenas livianas y pesadas naturales comprenden cuatro FRs, que adoptan principalmente la configuración de lamina ß conectados por tres regiones hipervariables, que forman bucles que conectan, y en algunos casos forman parte de, la estructura de la lamina ß . Las regiones hipervariables en cada cadena se mantienen juntas en proximidad por los FRs y, con las regiones hipervariables de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno de los anticuerpos (ver Kabat et al . , Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5° ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD . (1991)) . Los dominios constantes no están involucrados directamente en la unión de un anticuerpo a un antígeno, pero exhiben varias funciones efectoras, tales como participación del anticuerpo en la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) . El término "región hipervariable" cuando se utiliza en la presente se refiere a los residuos de aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión al antígeno. La región hipervariable comprende residuos de aminoácidos de una "región determinante de complementariedad" o "CDR" (por ejemplo, residuos 24-34 (Ll) , 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el dominio variable de cadena liviana y 31-35 (Hl), 50-65 (H2) y 95-102 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Kabat et al . , Sequences of Proteins of Immunologi cal In teres t , 5 ° ed , Public Health Service, National institutes of Health, Bethesda, MD . (1991)) y/o los residuos de un "anillo hipervariable" (por ejemplo residuos 26-32 (Ll) , 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en el dominio variable de cadena liviana y 26-32 (Hl), 53-55 (H2) y 96-101 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Chothia & Lesk *. Mol . Biol . 196:901-917 (1987)). Residuos de "marco" o "FR" son los residuos de dominio variable diferentes a los residuos de la región hipervariable según se definen en la presente. La digestión con papaína de anticuerpos produce dos fragmentos de unión al antígeno idénticos, denominas fragmentos "Fab", cada uno con un sitio de unión a antígeno simple, y un fragmento residual "Fe", cuyo nombre refleja su capacidad de cristalizarse fácilmente. El tratamiento con pepsina da un fragmento F(ab')2 que tiene dos sitios de unión al antígeno y es aún capaz de entrecruzar al antígeno. "Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno completo y un sitio de unión al antígeno. Esta región consiste en un dímero de un dominio variable de cadena pesada y uno de cadena liviana en asociación firme, no covalente. Es en esta configuración que las tres regiones hipervariables de cada dominio variable interactúan para definir un sitio de unión al antígeno sobre la superficie del dímero VH-VL. Colectivamente, las seis regiones hipervariables confieren especificidad de unión del antígeno al anticuerpo. Sin embargo, aún un simple dominio variable (o la mitad de un Fv que comprende solo tres regiones hipervariables específicas para un antígeno) tiene la capacidad de reconocer y unir el antígeno, si bien a una afinidad menor que el sitio de unión completo. El fragmento Fab además contiene el dominio constante de la cadena liviana y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab ' diferente de los fragmentos Fab por la adición de unos pocos residuos en el extremo carboxilo terminal del dominio CH1 de cadena pesada incluyendo una o más cisteínas de la región bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la designación, en la presente, para Fab' en la cual el residuo de cisteína de los dominios constantes portan al menos un grupo tiol libre. Los fragmentos del anticuerpo F(ab')2 se producen originalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteínas bisagras entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos. Las "cadenas livianas" de anticuerpos de cualquier especie vertebrada pueden asignarse a uno de los dos tipos claramente diferentes, denominados kappa ( K ) y lambda ( ? ) , basados en las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. Fragmentos de anticuerpo "Fv de cadena simple" o "scFv" comprenden los dominios VH y VL del anticuerpo, donde estos dominios están presentes en una cadena polipeptídica simple. Con preferencia, el polipéptido Fv además comprende un conector polipeptídico entre los dominios VH y VL que permite al scFv formar la estructura deseada para la unión al antígeno. Para una revisión del scFv ver Plückthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , vol. 113, Rosenburg & Moore eds., Springer-Verlag, New York, págs. 269-315 (1994). Los fragmentos del scFv del anticuerpo HER2 se describen en WO 93/16185; Patente Estadounidense No. 5,571,894; y Patente de los E.U.A. No. 5,587,458. El término "anticuerpos biespecíficos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpo con dos sitios de unión al antígeno, fragmentos que comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena liviana (VL) en la misma cadena polipeptídica (VH-VL) . Al utilizar un conector que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios sobre la misma cadena, los dominios se fuerzan para emparejarse con los dominios complementarios de otra cadena y crean dos sitios de unión al antígeno. Los anticuerpos biespecíficos se describen en forma más completa en, por ejemplo, EP 404.097; WO 93/11161; y Hollinger et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993) . Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo roedores) son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. Para la mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en los cuales los residuos de una región hipervariable del receptor se reemplazan con residuos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como ratón, rata, conejo o primate no humano que tienen la especificidad, afinidad y capacidad deseada. En algunos casos, los residuos de la región de marco (FR) de la inmunoglobulina humana se reemplazan con los residuos no humanos correspondientes. Más aún, los anticuerpos humanizados pueden contener residuos que no se encuentran en el anticuerpo del receptor ni en el anticuerpo del donante. Estas modificaciones se realizan para refinar el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado contendrá sustancialmente todo de al menos uno, y típicamente dos, dominios variables, en los cuales todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todos o sustancialmente todas las FRs son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado además contendrá opcionalmente al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fe) , típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para mayores detalles, ver Jones et al . , Na ture 321 522- 525 (1 986); Riechmann et al . , Na ture 332:323-329 (1 988); y Presta, Curr. Op . Struct . Biol . 2:593-596 (1992). Los anticuerpos HER2 humanizados incluyen huMAb4D5-l, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 y huMAb4D5-8 o trastuzumab (HERCEPTIN7) según se describe en la Tabla 3 de la Patente de los E.U.A. No. 5,821,337 incorporada expresamente a la presente como referencia; 520C9 humanizado (W093/21319) ; y anticuerpos 2C4 humanizados según se describe en la presente. A los fines de la presente, "trastuzumab", "HERCEPTIN®" , y "huMAb4D5-8" se refieren a un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena liviana y pesada en las SEC ID NOS. 15 y 16, respectivamente . En la presente, "pertuzumab" y "OMNITARG" se refiere a un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena liviana y pesada en las SECs ID NOS. 13 y 14, respectivamente. Las diferencias entre las funciones de trastuzumab y pertuzumab se ilustran en la Fig. 6. Un "anticuerpo desnudo" es un anticuerpo que no esta conjugado a una molécula heteróloga, tal como resto o radio marcador citotóxico. Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido identificado y separado y/o recuperado de un componente de su medio ambiente natural . Los componentes contaminantes de su medio natural son materiales que interferirían con los usos diagnósticos o terapéuticos para el anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteínicos o no proteínicos. En realizaciones preferidas, el anticuerpo estará purificado (1) a más del 95% en peso del anticuerpo según se determino por el método Lowry, y con mayor preferencia más del 99% en peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia de aminoácidos N terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria o (3) hasta homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul Coomassie o, preferentemente, tinción de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in si tu dentro de las células recombinantes dado que al menos un componente del medio natural del anticuerpo no estará presente. Normalmente, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparara mediante al menos un paso de purificación. Un "anticuerpo madurado por afinidad" es uno con una o más alteraciones en una o más regiones hipervariables del mismo que da por resultado una mejora en la afinidad del anticuerpo para el antígeno, en comparación con un anticuerpo progenitor que no posee esas alteraciones. Los anticuerpos madurados por afinidad tendrán afinidades nanomolares o aún picomolares para el antígeno blanco. Los anticuerpos madurados por afinidad se producen mediante procedimientos conocidos en la técnica. Marks et al . , Bio/Technology 10:779-783 (1992) describe la mutación por afinidad mediante la combinación del dominio VH y VL . La mutagénesis aleatoria de los residuos de CDR y/o de marco se describen en: Barbas et al . , Proc Na t . Acad . Sci , USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al . , Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al . , J. Immunol . 155:1994-2004 (1995); Jackson et al . , J. Immunol . 154 (7) : 3310-9 (1995); y Hawkins et al , J. Mol , Bi ol . 226:889-896 (1992) . El término "anticuerpo de especie principal", en la presente, se refiere a la estructura del anticuerpo en una composición la cual es la molécula del anticuerpo cuantitativamente predominante en la composición. En una realización, el anticuerpo de especie principal es un anticuerpo HER2 , tal como un anticuerpo que se une al Dominio II de HER2 , anticuerpo que inhibe la dimerización de HER en forma más efectiva que el trastuzumab, y/o un anticuerpo que se une a un sitio de unión heterodimérica de HER2. La realización preferida, en la presente, del anticuerpo de especie principal es una que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y liviana variables en las SECs ID Nos. 3 y 4, y con mayor preferencia que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y liviana en las SECs ID Nos. 13 y 14 (pertuzumab) . En la presente, un anticuerpo de "variante de secuencia de aminoácidos" es un anticuerpo con una secuencia de aminoácidos que difiere de un anticuerpo de especie principal. En forma ordinaria, las variantes de secuencia de aminoácidos tendrán al menos aproximadamente 70% de homología con el anticuerpo de especie principal, y con preferencia, serán al menos aproximadamente 80%, con mayor preferencia al menos aproximadamente 90% homólogo con el anticuerpo de especie principal . Las variantes de secuencia de aminoácido tienen sustituciones, supresiones, y/o agregados en ciertas posiciones dentro o adyacente a la secuencia de aminoácidos del anticuerpo de especie principal. Ejemplos de variantes de secuencia de aminoácidos incluyen la variante acida (por ejemplo variante de anticuerpo desamidado) , variante básica, el anticuerpo con una extensión líder amino-terminal (por ejemplo, VH S-) sobre una o dos cadenas livianas de la misma, anticuerpo un residuo de lisina C-terminal sobre una o dos cadenas pesadas de la misma, etc, e incluye combinaciones de variaciones a las secuencias de aminoácidos de cadenas pesadas y/o livianas. La variante del anticuerpo particular interés en la presente es el anticuerpo que comprende una extensión líder amino- terminal sobre una o dos cadenas livianas de la misma, opcionalmente comprende además otra secuencia de aminoácidos y/o diferencias de glicosilación con respecto al anticuerpo de especie principal . Un "anticuerpo de variante de glicosilación" en la presente, es un anticuerpo con uno o más restos de carbohidrato unido al mismo que difiere de uno o más restos de carbohidrato unido a un anticuerpo de especie principal. Ejemplos de variantes de glicosilación incluyen un anticuerpo con una estructura oligosacárida Gl o G2 , en lugar de una estructura oligosacárida GO, unida a una región Fe de la misma, anticuerpo con uno o dos restos de carbohidrato unido a una o dos cadenas livianas de la misma, anticuerpo sin carbohidrato unido a una o dos cadenas pesadas del anticuerpo, etc., y combinaciones de alteraciones de glicosilación. Siempre que el anticuerpo tenga una región Fe, una estructura oligosacárida tal como la que se muestra en la Fig. 9 puede estar unida a una o dos cadenas pesadas del anticuerpo, por ejemplo, en el residuo 299 (298, numeración eu de residuos) . Para pertuzumab, GO fue la estructura oligosacarida predominante, hallándose en menor cantidad otras estructuras oligosacaridos tales como GO-F, G-1, Man5 , Man6 , Gl-1, Gl(l-6), Gl(l-3) y G2 en la composición de pertuzumab. A menos que se indique lo contrario, una estructura oligosacarida Gl incluye estructuras G-1, Gl-1, Gl(l-6) y Gl(l-3).

Una "extensión líder amino-terminal " se refiere a uno o más residuos aminoácidos de la secuencia líder amino-terminal que están presentes en el terminal amino de cualquiera de una o más cadenas pesadas o livianas de un anticuerpo. Una extensión líder amino-terminal a modo de ejemplo comprende o consiste en tres residuos aminoácidos, VHS, presentes en una o ambas cadenas livianas de una variante de anticuerpo. Un "anticuerpo desamidado" es uno en el cual uno o más residuos de asparagina del mismo ha sido derivado, por ejemplo a un ácido aspártico, una succinimida, o un ácido iso-aspártico . Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren o describen la condición fisiológica en mamíferos que se caracteriza típicamente por el crecimiento celular no regulado. Ejemplos de cáncer incluyen, pero sin estar limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma (incluyendo meduloblastoma y retinoblastoma) , sarcoma (incluyendo liposarcoma y sarcoma de célula sinovial), tumores neuroendocrinos (incluyendo tumores carcinoides, gastrinoma, y cáncer de célula isleta) , mesotelioma, schwannoma (incluyen neuroma acústico), meningioma, adenocarcinoma, melanoma, y leucemia o malignidades linfoides. Ejemplos más particulares de tales cánceres incluyen cáncer de célula escamosa (por ejemplo, cáncer de célula escamosa epitelial), cáncer de pulmón incluye cáncer de pulmón microcítico (SCLC) , cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) , adenocarcinoma de pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o estomacal incluyendo cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama (incluye cáncer de mama metastático), cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándula salival, cáncer de riñon o renal, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, y carcinoma, cáncer del pene, cáncer testicular, cáncer esofágico, tumores del tracto biliar, como así también cáncer de cabeza y cuello . En la presente, un "paciente" es un paciente humano. El paciente puede ser un paciente de cáncer, es decir uno que esta sufriendo o en riesgo de sufrir de uno o más síntomas de cáncer, u otro paciente que podría beneficiarse de la terapia con un anticuerpo HER. Una "muestra biológica" se refiere a una muestra, en general células o tejido derivado de una fuente biológica. Una "muestra de paciente" se refiere a una muestra obtenida de un paciente, tal como un paciente de cáncer . Una "muestra de tumor" es una muestra derivada o que comprende células tumorales del tumor de un paciente. Ejemplos de muestras de tumor incluyen, pero sin estar limitados a, biopsias de tumor, células de tumor circulantes, proteínas de plasma circulantes, fluido ascítico, cultivos celulares primarios o líneas celulares derivadas de tumores o que muestran propiedades del tipo tumor, como así también muestras de tumor preservadas, tales como muestras de tumor incrustadas en parafma, fijas en formalma, o muestras de tumor congeladas . Una "muestra de tumor fija" es una que ha sido conservada histológicamente utilizando un agente de fijación . Una "muestra de tumor fija" en formalma es una que ha sido conservada utilizando formaldehído como el agente de fijación. Una "muestra de tumor incrustada" es una rodeada de un medio, en general, fuerte y firme tal como parafina, cera, cellaoidín, o resma. La incrustación hace posible el corte de las secciones delgadas para examen microscópico o para generación de micro alineamientos de tejido (TMAs) .

Una "muestra de tumor incrustada en parafina" es una rodeada de una mezcla purificada de hidrocarburos sólidos derivados de petróleo. En la presente, una "muestra de tumor congelada" se refiere a una muestra de tumor la cual esta, o ha sido, congelada. Una muestra biológica o de cáncer que "exhibe la expresión, amplificación o activación de HER" es una que, en un ensayo diagnóstico, expresa (incluyendo sobre expresa) un receptor HER, tiene un gen HER amplificado, y/o muestra, de otro modo, la activación o fosforilación de un receptor HER. Tal activación puede determinarse en forma directa (por ejemplo, midiendo la fosforilación HER) o en forma indirecta (por ejemplo, mediante perfilación de la expresión génica o mediante la detección de heterodímeros HER, según se describe en la presente) . Un cáncer con "sobre expresión o amplificación del receptor HER" es uno que tiene niveles significativamente más elevados de una proteína o gen del receptor HER en comparación con una célula no-cancerosa del mismo tipo de tejido. Tal sobre expresión puede ser causada por amplificación génica o por transcripción o traducción aumentada. La sobre expresión o amplificación del receptor HER puede determinarse en un ensayo de diagnóstico o pronóstico evaluando los niveles aumentados de la proteína HER presente en la superficie de una célula (por ejemplo, mediante un ensayo inmunohistoquímico; IHC) . Alternativamente, o de manera adicional, se pueden medir los niveles del ácido nucleico que codifica HER en la célula, por ejemplo mediante técnicas dehibridación in si tu fluorescente (FISH; ver W098/45479 publicada en Octubre, 1998), transferencia southern, o reacción en cadena de polimeraza (PCR) , tal como PCR de tiempo real cuantitativo (qRT-PCR) . Además se puede estudiar la sobre expresión o amplificación del receptor HER midiendo el antígeno secretado (por ejemplo, dominio extracelular de HER) en un fluido biológico tal como suero (ver, por ejemplo, Patente de los E.U.A. No. 4,933,294 emitida el 12 de junio, 1990; WO91/05264 publicada el 18 de abril, 1991; Patente Estadounidense 5,401,638 emitida el 28 de marzo, 1995; y Sias et al . , J. Immunol . Methods 132:73-80 (1990)). Además de los ensayos anteriores, varios ensayos in vivo están disponibles para el profesional capacitado. Por ejemplo, se pueden exponer células dentro del cuerpo del paciente a un anticuerpo que esta opcionalmente marcado con una marca detectable, por ejemplo un isótopo radioactivo, y puede evaluarse la unión del anticuerpo a las células en el paciente, por ejemplo, mediante barrido externo por radioactividad o analizando una biopsia tomada de un paciente previamente expuesto al anticuerpo. Por el contrario, un cáncer que "no sobre expresa o amplifica el receptor HER" es uno que no tiene niveles más elevados que los normales de la proteína o gen del receptor HER en comparación con una célula no cancerosa del mismo tipo de tejido. Los anticuerpos que inhiben la dimerización HER, tal como pertuzumab, se pueden utilizar para tratar el cáncer que no sobre expresa o amplifica el receptor HER2. Un "agente inhibidor del crecimiento" cuando se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto o composición que inhibe el crecimiento de una célula, especialmente una célula cancerosa que exprese HER ya sea in vi tro o in vivo . De este modo, el agente inhibidor del crecimiento puede ser uno que reduce significativamente el porcentaje de células que expresan HER en la fase S. Ejemplos agentes inhibidores del crecimiento incluyen agentes que bloquean el avance del ciclo celular (en un lugar diferente de la fase S) , tal como agentes que inducen el impedimento Gl y el impedimento de fase M. Los bloqueantes de fase M clásicos incluyen los inhibidores vincas (vincristina y vinblastina), taxanos, y topo II tales como doxorubicin, epirubicin, daunorubicin, etoposida, y bleomicin. Esos agentes que impiden el Gl además se propagan en el impedimento de la fase S, por ejemplo, agentes alquilantes de ADN tal como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatino, metotrexato, 5-fluorouracil , y ara-C. Más información se puede hallar en The Molecular Basis of Cáncer, Mendelsohn y Israel , eds . , Capitulo 1, titulado "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al . , (WB Saunders: Filadelfia, 1995), especialmente p. 13. Ejemplos de anticuerpos "inhibidores del crecimiento" son aquellos que se unen al HER2 e inhiben el crecimiento de células cancerosas que sobre expresan el HER2. Los anticuerpos HER2 inhibidores del crecimiento preferidos inhiben el crecimiento de las células SK-BR-3 del tumor de pecho en el cultivo celular en más del 20%, y con preferencia más del 50% (por ejemplo, desde aproximadamente 50% a aproximadamente 100%) a una concentración del anticuerpo de aproximadamente 0.5 a 30 //g/ml, donde la inhibición del crecimiento se determina seis días después de la exposición de las células SK-BR-3 al anticuerpo (ver Patente de los E.U.A. No. 5,677,171 emitida el 14 de octubre, 1997) . El ensayo de crecimiento de la célula SK-BR-3 se describe en detalle en esa patente y de aquí en adelante. El anticuerpo inhibidor del crecimiento preferido es una variante humanizada del anticuerpo 4D5 monoclonal de murino, por ejemplo, trastuzumab . Un anticuerpo que "induce la apoptosis" es uno que induce la muerte celular programada según se determina por la unión de anexina V, fragmentación del ADN, contracción celular, dilación del retículo endoplásmico, fragmentación celular, y/o formación de vesículas de membrana (denominadas cuerpos apotóticos) . La célula es usualmente una que sobre expresa el receptor HER2. Con preferencia la célula es una célula tumoral, por ejemplo, célula del pecho, ovárica, estomacal, endometrial, de la glándula salival, pulmonar, del riñon, del colon, de la tiroides, pancreática o vesicular. In vi tro, la célula puede ser SK-BR-3, BT474, célula Calu 3, MDA-MB-453, MDA-MB-361 o SKOV3. Están disponibles varios métodos para evaluar los eventos celulares asociados con la apoptosis. Por ejemplo, la translocación de fosfatidil serina (PS) se puede medir por la unión de anexina; la fragmentación de ADN se puede evaluar a través de la típica imagen en escalera del ADN (laddering) ; y la condensación nuclearlcromatina junto con la fragmentación del ADN se pueden evaluar mediante un incremento en las células hipodiploides . Con preferencia, el anticuerpo que induce la apoptosis es uno que da por resultado en aproximadamente 2 a 50 veces, con preferencias, aproximadamente 5 a 50 veces, y con mayor preferencia aproximadamente 10 a 50 veces, la inducción de la unión de anexina con relación a la célula no tratada en un ensayo de unión de anexina que utiliza células BT474 (ver a continuación) . Ejemplos de anticuerpos HER2 que inducen la apoptosis son 7C2 y 7F3. El "epítope 2C4" es la región en el dominio intracelular de HER2 al cual el anticuerpo 2C4 se une. A fin de rastrear anticuerpos que se unen al epítope 2C4, se puede llevar a cabo un ensayo de bloque cruzado de rutina tal como el descrito en Antibodi es, A Labora tory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow y David Lañe (1988). Preferentemente, el anticuerpo bloquea la unión de 2C4 al HER2 en aproximadamente 50% o más. Alternativamente, la cartografía del epítope se puede llevar a cabo para determinar si el anticuerpo se une al epítope 2C4 del HER2. El epítope 2C4 comprende residuos del Dominio II en el dominio extracelular de HER2. El 2C4 y pertuzumab se unen al dominio extracelular de HER2 como la unión de dominios I, II y III. Franklin et al . , Cáncer Cell 5: 317-328 (2004) . El "epítope 4D5" es la región en el dominio extracelular de HER2 al cual se unen el anticuerpo 4D5 (ATCC CRL 10463) y trastuzumab. Este epítope esta próximo al dominio de transmembrana de HER2 , y dentro del Dominio IV de HER2. Para rastrear los anticuerpos que se unen al epítope 4D5, se lleva a cabo un ensayo de bloqueo cruzado de rutina tal como el descrito en Antibodies , A Labora tory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow y David Lañe (1988) . Alternativamente, el epítope 4D5 de HER2 (por ej emplo cualquiera de uno o más residuos en la región desde aproximadamente el residuo 529 a aproximadamente el residuo 625, inclusive del ECD de HER2 , numeración del residuo que incluye el péptido de señal ) . El "epítope 7C217F3" es la región en la terminal N, dentro del Dominio I, del dominio extracelular de HER2 al cual los anticuerpos 7C2 y/o 7F3 se unen (cada uno depositado con el ATCC, ver a continuación) . Para rastrear los anticuerpos que se unen al epítope 7C2/7F3, se puede realizar un ensayo de bloqueo cruzado de rutina tal como el descrito en Antibodies , A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow y David Lañe (1988) . Alternativamente, la cartografía del epítope se puede realizar para establecer si el anticuerpo se une al epítope 7C2/7F3 sobre HER2 (por ejemplo cualquiera de uno o más de los residuos en la región desde aproximadamente el residuo 22 a aproximadamente el residuo 53 del ECD de HER2 , numeración de residuo que incluye péptido de señal ) . El término "tratamiento" se refiere tanto al tratamiento terapéutico y profiláctico o a medidas preventivas. Los que necesitan tratamiento incluyen a aquellos que padecen la enfermedad como así también aquellos en los cuales la enfermedad debe prevenirse. De este modo, el paciente a ser tratado en la presente puede haber sido diagnosticado con la enfermedad o puede estar predispuesto o susceptible de padecerla. El término "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un fármaco eficaz para tratar el cáncer en el paciente. La cantidad eficaz del fármaco puede reducir la cantidad de células cancerígenas; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, disminuir en cierto grado y con preferencia detenerlo) la infiltración de la célula cancerígena en órganos periféricos; inhibir (es decir, disminuir en cierto grado y con preferencia detener) la metástasis del tumor; inhibir, en cierto grado, el crecimiento del tumor; y/o aliviar en cierto grado uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. En la medida eu el fármaco pueda prevenir el crecimiento y/o matar las células cancerígenas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. La cantidad eficaz puede extender la supervivencia libre de avance (por ejemplo, según lo medido por los Criterios de Evaluación de Respuesta para Tumores Sólidos, RECIST, o cambios CA-125) , dan por resultado una respuesta objetiva (incluyendo una respuesta parcial, PR, o respuesta completa, CR) , incrementar el tiempo de supervivencia total, y/o mejorar uno o más síntomas del (por ej emplo según se determino por FOSI) . El término "supervivencia completa" se refiere al paciente que permanece vivo durante un período de tiempo definido, tal como 1 año, 5 años, etc., por ejemplo a partir del momento de diagnóstico o tratamiento . El término "supervivencia libre de avance" se refiere al paciente que permanece vivo, sin que el cáncer empeore. Una "respuesta objetiva" se refiere a una respuesta medible, incluyendo respuesta completa (CR) o respuesta parcial (PR) . Por "respuesta completa" o "remisión completa" se entiende la desaparición de todos los signos del cáncer en respuesta al tratamiento. Esto no siempre significa que el cáncer ha sido curado. Una "respuesta parcial" se refiere a una disminución en el tamaño de uno o más tumores o lesiones, o en la extensión del cáncer en el cuerpo, en respuesta al tratamiento. El término "agente citotóxico" tal como se utiliza en la presente se refiere a una sustancia que inhibe o previene la función de las células y/o causa la destrucción de las células. El término incluye isótopos radioactivos (por ejemplo At211, I131", I125, Y90, Re186, Re188, Sm153 , Bi212, P32, e isótopos radioactivos de Lu) , agentes quimioterapéuticos, y toxinas tales como toxinas macromoleculares o toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico, vegetal o animal, incluyendo sus fragmentos y/o variantes. Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen agentes alquilantes tales como tiotepa y CYTOXAN® ciclosfosfamida, sulfonatos de alquilo tales como busulfán, improsulfán y piposulfán; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa, y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida , trietilentiofosforamida y trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona) ; delta-9- tetrahidrocannabíno (dronabinol, MARINOL®) ; beta lapachona; lapachol; colchicinas; ácido betulínico; una camptotecina (incluyendo topotecan análogo sintético (HYCAMTIN®) ; CPT-11 (irinotecan, CAMPTOSAR®) , acetilcamptotecina, scopolectina, y 9-aminocaptotecina) ; briostatin; calistatin; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adozelsin, carzelesin y bizelesin) ; podofilotoxina; ácido podofilínico; teniposida; criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW-2189 y CB1 -TMl) ; eleuterobin; pancratistatina; una sarcodictiina; espongistatina; mostazas nitrogenadas tales como clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalan, movembichin, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza uracilo, nitrosureas tales como carmustina, clorozotocin, fotemustina, lomustina, minustina, y ranimmustina; bifosfonatos , tales como cloronato; antibióticos tales como los antibióticos de endiina (por ejemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gamma II y caliqueamicina omega II (ver, por ejemplo, Agnew, Chem. Int . Ed . Engl . 33:183-1 86 (1994)); antraciclinas tales como annamicina, AD 323, alcarubicin, daunorubicin, dexrazoxano, DX-52-1, epirubicin, GPX-100, idrubicin, KRN5500, menogaril, dinemicin, incluyendo dinemicin A; un esperamicin, neocazinostatin cromóforo y cromóforos relacionados con antibióticos de enediina cro oproteína, aclacinomisinas , actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilin, cromomicinis , dactinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, ADRIAMYCIN® doxorubicin (incluyendo morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina y deoxidoxorubicina, esorubicina, marcellomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas , peplomicina, potfiromicina, puromicina, quela icina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatin, y zorubicin; análogos del ácido fólico tales como denopterin, pteropterin, y trimetrexato, análogos de purina tales como fludarabina, 6 -mercaptopurina, tia iprina, y tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluiridina, enocitabina, floxuridina; androgenos tales como calusterona, dromostanolona propionato, epitiostanol , meptitiostano, y testolactona; anti-adrenales tales como aminoglutehimida, mitotano, trilostano; reaprovisionador de ácido fólico tal como ácido folínico (leucovorin) ; aceglatona; agentes anti-neoplásicos anti-folato tales como ALIMTA®, LY231514 pemetrexed, inhibidores de dihidrofolato reductasa tales como metotrexato, antimetabolitos tales como 5-fluorouracil (5-FU) y sus profármacos tales como UFT, S-I y capecitabina, e inhibidores de timidilato sintasa e inhibidores de glicinamida ribonucleotida formiltransferasa tales como raltitrexed (TOMUDEX™, TDX) ; inhibidores de dihidropirimidina dehidrogenasa tales como eniluracil; aldofosfamida glicosida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucil ; bisantreno; edatraxato; delofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; elliptinio acetato; una epotilona; etoglucid; gallium nitrato; hidroxiurea; lentinan; lonidainina; maitansinoides tales como maytansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol ; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarubicin; losoxantrona,- 2-etilhidrazida; procarbazina; complejo polisacarido de PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR) ; razoxano; rizoxin; sizofiran; espirogermanio; ácido tenuazonico; triaziquona; 2 , 2 ' , 2 " -triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, varracurin A, roridin A y anguidina) ; uretano; vindesina (ELDISINE®, FILDESIN®) ; dacarbazina; manomustina; mitobronitol ; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinosido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides y taxanos, por ejemplo TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ libre de cremofor, formulación de nanopartículas diseiiadas con albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) , y TAXOTERE® doxetaxel (Rhone Poulenc Rorer, Antony, Francia); cloranbucil; gemcitabina (GEMZAR®); 6-tioguanina; mercaptopurina; platino; análogos de platino o análogos basados en platino tales como cisplatino, oxiliplatino y carboplatino; vinblastina; (VELBAN®) ; etoposido (VP16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; (ONCOVIN®) ; vinca alcaloide; vinorelbina (NAVELBINE®) , novantrona; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO) ; retinoides tales como ácido retinoico; sales aceptables para uso farmacéutico, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores; como así también combinaciones de dos o más de los anteriores como CHOP, un abreviatura para una terapia combinada de ciclofosfamida, doxorubicin, vincristina, y prednisolona, y FOLFOX, una abreviatura para un régimen de tratamiento con oxaliplatin (ELOXATIN™) combinado con 5-FU y leucovorin . Además se incluyen en esta definición agentes anti-hormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal sobre tumores tales como anti-estrógenos y moduladores del receptor de estrógenos selectivos (SERMs), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX® tamoxifeno) , raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno; keoxifeno, LY117018, noapristona, y FARESTON; toremifeno; inhibidores de aromatasa que inhiben la aromatasa enzimatica, que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarenales , tales como, por ejemplo, 4 (5) -imidazoles , aminoglutehimida, MEGASE® megestrol acetato, AROMASINB exemestano, formestanie, fadrozol, RIVISOR® vorozol, FERMARA® letrozol, y ARIMIDEX® anastrazol; y antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, y goserelina; como así también troxacitabina (un análogo de 1,3-dioxolan nucleosido citosina) ; oligonucleótidos antisentido, particularmente aquellos que inhiben la expresión de los genes en vías de de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Ralf y H-Ras; y receptor del factor del crecimiento epidérmico (EGF-R) ; vacunas tales como vacunas de terapia génica, por ejemplo, ALLOVECTIN® vacuna, LEUVECTIN® vacuna, y VAXID® vacuna; PROLEUKIN® rlL-2; inhibidor de LURTOTECAN® topoisomerasa 1; ABARELIX® mRH; y sales aceptables para uso farmacéutico, ácido o derivados de cualquiera de los anteriores . Un "agente quimioterapéutico antimetabolito" es un agente que es estructuralmente similar a un metabolito, pero no puede ser usado por el cuerpo de una manera productiva. Muchos agentes quimioterapéuticos antimetabolitos interfieren con la producción de ácidos nucleicos, ARN y AND. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos antimetabolito incluyen gemcitabina (GEMZAR7) , 5-fluorouracil (5-FU) , capecitabina (XELODAJ) , 6-mercaptopurina, metotrexato, 6-tioguanina, pemetrexed, raltitrexed, arabinosilcitosina ARA-C citarabina (CYTOSAR-U7) , dacarbazina (DTIC-DOME7) , azocitosina, deoxicitosina, piridmideno, fludarabina (FLUDARA7), cladrabina, 2-deoxi-D-glucosa, etc. El agente quimoterapéutico antimetabolito es gemcitabina. "Gemcitabina" o "2 ' -deoxi-2 ' , 2'-difluorocitidin monoclorhidrato (isómero b) " es un análogo nucleósido que exhibe actividad antitumoral . La formula empírica para HCl de gemcitabina es C9H11F2N304 A HCl . HCl de Gemcitabina está comercializado por Eli Lilly bajo la marca comercial GEMZAR7. Un "agente quimioterapéutico basado en platino" comprende un compuesto orgánico que contiene platino como parte integral de la molécula. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos basados en platino carboplatino, cisplatino, y oxaliplatíno . Por "quimioterapia basada en platino" se entiende la terapia con uno o más agentes quimioterapéuticos basados en platino, opcionalmente en combinación con uno o más agentes quimioterapéuticos. Por "cáncer resistente al platino" significa que el paciente de cáncer ha avanzado mientras recibía quimioterapia en base a platino (es decir el paciente es refractario al platino) , o el paciente ha avanzado dentro de los 12 meses (por ejemplo, dentro de los 6 meses) posteriores a la terminación del régimen de quimioterapia basada en platino. Un "agente anti-angiogénico" se refiere a un compuesto que bloquea, o interfiere, en cierto grado, con el desarrollo de los vasos sanguíneos. El factor antiangiogénico puede, por ejemplo, ser una pequeña molécula o anticuerpo que se une a un factor de crecimiento o receptor del factor de crecimiento involucrado en promover la angiogénesis. El factor antiangiogénico preferido es un anticuerpo que se une al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , tal como bevacizumab ( (AVASTIN®) . El término "citoquina" es un término genérico para proteínas liberadas por una población celular que actúa sobre otra célula como mediadores intercelulares . Ejemplos de tales citoquinas son las linfoquinas, monoquinas, y hormonas polipeptídicas tradicionales. Se incluyen entre las citoquinas la hormona del crecimiento; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorelaxina; hormonas de glicoproteína tales como hormona estimulante de los folículos (FSH) , hormona estimulante de la tiroides (TSH) , y hormona luteínica (LH) ; factor de crecimiento hepático; factor de crecimiento fibroblasto, prolactina, lactógeno placental; factor a o ß de necrosis tumoral; sustancia inhibidora de molerían; péptido asociado a la gonadotropina de ratón; inhibin; activin; factor de crecimiento endotelial vascular; integrina; trombopoyetina (TPO) ; factores de crecimiento nervioso tales como NGF- ?; factor de crecimiento plaquetario; factores de crecimiento transformante (TGFs) tales como TGF-a y TGF- ?; factor I y II de crecimiento tipo insulina; eritropoyetina (EPO) ; factores osteoinductivos ; interferones tales como interferon- a , -ß , y ? ; factores de estimulación de colonias (CSFs) tales como macrófago-CSF (M-CSF) ; granulocito-macrófago-CSF (GM-CSF) ; y granulocito-CSF (G-CSF) ; interleuquinas (ILs) tales como IL-I, IL-la, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-I I, IL-12, IL-15; un factor de necrosis tumoral tal como TNF-a o TNF- ?; y otros factores polipeptídicos incluyendo LIF y ligando de kit (KL) . Tal como se utiliza en la presente, el término citoquina incluye proteínas de fuentes naturales o de cultivo celular recombinante y equivalentes biológicamente activos de las citoquinas de secuencia natural . Tal como se utiliza en la presente, el término "fármaco dirigido a EGFR" se refiere a un agente terapéutico que se une a EGFR y, opcionalmente, inhibe la activación de EGFR. Ejemplos de tales agentes incluyen anticuerpos y pequeñas moléculas que se unen a EGFR. Ejemplos de anticuerpos que se unen a EGFR incluyen MAb 579 (ATCC CRL HB 8506) , MAb 455 (ATCC CRL HB8507) , MAb 225 (ATCC CRL 8508) , MAb 528 (ATCC CRL 8509) (ver, Patente de los E.U.A. No. 4,943,533, Mendelsohn et al . ) y sus variantes, tales como 225 quimerizada (C225 o Cetuximab; ERBUTIX7) y 225 humana readaptada (H225) (ver, WO 96/40210, Imclone Systems Inc.); anticuerpos que se unen a EGFR mutante tipo II (Patente de los E.U.A. No. 5,212,290); anticuerpos humanizados y quiméricos que se unen a EGFR según se describe en la Patente de los E.U.A. No. 5,891,996; y anticuerpos humanos que se unen a EGFR, tales como ABX-EGF (ver WO98/50433, Abgenix); EMD 55900 (Stragliotto et al . , Eur . J. Cáncer 32A: 636-640 (1996)); y mAb 806 o mAb 806 humanizado (Johns et al . , J. Biol . Chem . 279 (29) ¡30375-30384 (2004)) . El anticuerpo anti-EGFR puede conjugarse con un agente citotóxico, generando de este modo un inmunoconjugado (ver, por ej emplo, EP659,439A2, Patente Merck GmbH) . Ejemplos de pequeñas moléculas que se unen a EGFR incluyen ZD1839 o Gefitinib (IRESSAJ; Astra Zeneca) ; CP-358774 o Eriotinib HCL (TARCEVAJ; Genentech/OSI ) ; y AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen) . Un "inhibidor de tiroxina quinasa" es una molécula que inhibe la actividad de tiroxina quinasa de una tiroxina quinasa tal como un receptor HER. Ejemplos de tales inhibidores incluyen los fármacos dirigidos a EGFR mencionados en el párrafo precedente; inhibidor HER2 tiroxina quinasa de pequeñas moléculas tal como TAK165 disponible de Takeda; inhibidores HER duales tal como EKB- 569 (disponible de Wyeth) que se une preferentemente a EGFR pero inhibe a células que sobre expresan tanto HER2 y EGFR; GW572016 (disponible de Glaxo) un inhibidor oral de HER2 y EGFR tiroxina quinasa; PKI-166 (disponible de Novartis) ; inhibidores pan-HER tal como canertinib (CI-1033; Pharmacia); inhibidores Raf-I tal como agente antisentido ISIS-5132 disponible de ISIS Pharmaceuticals que inhibe la señalización de Raf-I; inhibidores TK non-HER dirigidos tales como Imatinib mesilato (GleevacJ) disponible de Glaxo; inhibidor CI-1040 de quinasa I regulada por MAPK extracelular (disponible de Pharmacia) ; quinazolinas, tales como PD 153035, 4 - (3 -cloroanilino) quinazolina; piridopirimidinas ; pirimidopirimidinas ; pirrolopirimidinas, tales como CGP 59326, CGP 60261 y CGP 62706; pirazolopirimidinas , 4 -( fenilamino) - 7H-pirrolo [2 , 3 -dipirimidinas ; curcumin (diferuloil metano, 4,5-bis ( -fluoroanilino) ftalimida) ; trifostinas que contienen restos de nitrotiofeno; PD-0183805 (Warner-Lamber) ; moléculas antisentido (por ejemplo las que se unen al ácido nucleico que codifica HER) ; quinoxalinas (Patente de los E.U.A. No. 5,804,396); trifostinas (Patente de los E.U.A. No. 5,804,396); ZD6474 (Astra Zeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG) ; inhibidores pan-HER tales como CI-1033 (Pfizer); Affinitac (ISIS 3521; Isis/Lilly) ; Imatinib mesilato (Gleevac; Novartis); PKI 166 (Novartis) ; GW2016 (Glaxo SmithKIine) ; CI-1033 (Pfizer) ; EKB-569 (Wyeth) ; Semaxinib (Sugen) ; ZD6474 (AstraZeneca) ; PTK-787 (Novartis/Schering AG) ; INC-1C11 (Imclona); o según se describe en cualquiera de las siguientes publicaciones de patentes: Patente de los E.U.A. No. 5,804,396; WO99/09016 (American Cyanamid); WO98/43960 (American Cyanamid); W097/38983 (Warner Lambert); WO99/06378 (Warner Lambert) ; WO99/06396 (Warner Lambert) ; WO96/30347 (Pfizer, Inc) ; W096/33978 (Zeneca) ; W096/3397 (Zeneca) ; y WO96/33980 (Zeneca) . Una "enfermedad autoinmune" es una enfermedad o trastorno que surge de y esta dirigida contra los tejidos propios de un individuo o un co- segregado o manifestación de la misma o una afección resultante de la misma. Ejemplos de enfermedades o trastornos autoinmunes incluye, pero sin limitarse a artritis (artritis reumatoide tal como artritis aguda, artritis reumatoide crónica, artritis gotosa, artritis gotosa aguda, artritis inflamatoria crónica, artritis degenerativa, artritis infecciosa, artritis de Lyme, artritis proliferativa, artritis soriásica, artritis vertebral, artritis reumatoide al inicio de la adolescencia, osteoartritis, artritis crónica progresiva, artritis deformante, poliartritis crónica primaria, artritis reactiva, y espondilitis anquilosante) , enfermedades de la piel hiperproliferativas, psoriasis tal como psoriasis de placas, psoriasis guttata, psoriasis pustular, y psoriasis de las uñas, atopia incluyendo enfermedades atópicas tales como fiebre de heno y síndrome de Job, dermatitis incluyen dermatitis de contacto, dermatitis de contacto crónica, dermatitis alérgica, dermatitis de contacto alérgica, dermatitis herpetifor is , y dermatitis atópica, síndrome de IgM hiper x-ligado, urticaria tal como urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, incluyendo urticaria autoinmune crónica, polimiositis/dermatoiositis , dermatomiositis juvenil, necrólisis epidérmica tóxica, escleroderma (incluyendo escleroderma sistémica) , esclerosis tal como esclerosis sistémica, esclerosis múltiples (EM) tal como EM neuromielitis óptica, EM progresiva primaria (EMPP) , y EM de remisión recurrente (EMRR) , esclerosis sistémica progresiva, aterosclerosis, esclerosis diseminada, y esclerosis atáxica, enfermedad del intestino inflamatoria (IBD) (por ejemplo, enfermedad de Crohn, enfermedades gastrointestinales mediadas autoinmune, colitis tal como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis microscopical colitis colagenosa, colitis poliposa, enterocolitis necrotizante, y colitis transmural, y enfermedad del intestino inflamatoria autoinmune) , pioderma gangrenoso, eritema nodos, colangitis esclerosante primaria, episclerities) , síndrome disneico respiratorio, incluyendo síndrome disneico respiratorio agudo o adulto (SDRA) , meningitis, inflamación de toda o parte de la uvea, iritis, coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, espondilitis reumatoide, perdida de la audición repentina, enfermedades mediadas por IgE tales como anafilaxis, uveítis, tal como uveítis anterior, uveítis anterior aguda, uveítis granulomatosa, uveítis no-granulomatosa, uveítis facoantigénica, uveítis posterior, o uveítis autoinmune, glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico tal como glomerulonefritis crónica o aguda tal como GN primaria, GN mediada- inmune, GN membranosa (nefropatía membranosa) , GN membranosa idiopática o nefropatía membranosa idiopática, GN proliferativa membranosa o de membrana (MPGN) , incluyendo Tipo I y II, y GN rápidamente progresiva, afecciones alérgica y respuestas, reacción alérgica, eczema incluyen eczema alérgica o atópica, asma tal como asma bronquial, y asma auto- inmune, afecciones que involucran infiltración de células T y respuestas inflamatorias crónicas, reacciones inmunes contra antígenos extraños tales como grupos sanguíneos A-B-O- fetal durante el embarazo, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, miocarditis autoinmune, deficiencia de adhesión leucocítica, lupus eptematoso sistémico (SLE) o lupus eritematodos sistémico tal como SLE cutáneo, lupus eptematoso cutáneo subagudo, síndrome de lupus neonatal (NLE), lupus eritematoso dissemmatus , lupus (incluyendo nefritis, cerebritis, pediátrico, no-renal, supra-renal, discoide, alopecia), diabetes mellitus (tipo I) al inicio de la adolescencia, incluyendo diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM), diabetes mellitus al inicio de la adultez (diabetes tipo I), diabetes autoinmune, diabetes insipidus ídiopática, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citoqumas y linfocitos T, tuberculosis, sarcoidosis, granulomatosis incluyendo granulomatosis lmfomatoide, granulomatosis de Wegener, agranulocitosis , vasculitides , incluyendo vasculitis (incluyendo vasculitis de vasos grandes (incluyendo polimialgia reumática y arteritis de células gigantes (de Takayasu) , vasculitis de vasos medios (incluyendo enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa (periarteritis nodosa) , poliarteritis microscópica, vasculitis del SNC, vasculitis necrotizante, cutánea, o vasculitis de hipersensibilidad, vasculitis necrotizante sistémica, y vasculitis asociada con ANCA, tal como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) ) , arteritis temporal, anemia aplásica, anemia aplásica autoinmune, anemia positiva de Coombs, anemia Diamond Blackfan, anemia hemolítica o anemia hemolítica autoinmune incluyendo anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia perniciosa, enfermedad de Addison, anemia de glóbulos rojos pura o aplasia (PRCA), deficiencia del Factor VIII, hemofilia A, neutropenia autoinmune, pancitopenia, leucopenia, enfermedades que involucran diapédesis leucocítica, trastornos inflamatorios del SNC, síndrome de daño orgánico múltiple tal como aquellos secundarios a la septicemia, trauma o hemorragia, enfermedades mediadas por el complejo antígeno-anticuerpo, enfermedad de membrana basal anti -glomerular , síndrome del anticuerpo anti-fosfolípido, neuritis alérgica, enfermedad de Bechet o Behcet, síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjogren, síndrome de Steven-Johnson, pénfigoide tal como pénfigoide bulloso y pénfigoide cutáneo, pénfigo (incluyendo pénfigo vulgar, pénfigo foliáceo, pénfigo mucoso-pénfigoide membranoso y pénfigo eritematoso), poliendocrinopatias autoinmunes, enfermedad o síndrome de Reiter, nefritis de complejo inmune, nefritis mediada por el anticuerpo, neuromielitis óptica, polineuropatías , neuropatía crónica tal como polineuropatías de IgM o neuropatía mediada por IgM, trombocitopenia (como la desarrollada por pacientes con infarto de miocardio, por ejemplo), incluyendo púrpura trombocitopénica trombótica (TTP) , púrpura postransfusión (PTP) , trombocitopenia inducida por heparina, y trombocitopenia mediada inmune o autoinmune tal como púrpura trombocitopenica idiopática (ITP) incluyendo ITP crónico o agudo, enfermedad autoinmune de testículos y ovarios incluyendo orquitis autoinmune y ooforitis, hipotiroidismo primario, hipoparatiroidismo, enfermedades endocrinas autoinmunes incluyendo tiroiditis tal como tiroiditis autoinmune, enfermedad de Hashimoto, tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) , o tiroiditis subaguda, enfermedad de la tiroide autoinmune, hipotiroidismo idiopático, enfermedad de Grave, síndromes poliglandulares tales como síndromes poliglandulares autoinmunes (o síndromes de endocrinopatía poliglandular) , síndromes paraneoplásicos, incluyendo síndromes paraneoplásicos neurológicos tales como síndrome miasténico Lambert-Eaton o síndrome de Eaton-Lambed, síndrome del hombre rígido (stiff-man o stiff- person) , encefalomielitis tal como encefalomielitis alérgica, y encefalomielitis alérgica experimental (EAE) , miastenia gravis, tal como miastenia gravis asociada con timoma, degeneración cerebral, neuromiotonia, síndrome opsoclonus-mioclono u opsoclonus (OMS) , y neuropatía sensorial, neuropatía motriz muítifocal, síndrome de Sheehan, hepatitis autoinmune, hepatitis crónica, hepatitis lupoide, hepatitis de células gigantes, hepatitis activa crónica o hepatitis activa crónica autoinmune, pneumonitis intersticial linfoide (LIP) , bronquiolitis obliterante (no- transplante) vs NSIP, síndrome de Guillam-Barré, enfermedad de Berger (nefropatía IgA) , nefropatia IgA ídiopática, dermatosis de IgA lineal, cirrosis biliar primaria, pneumonocirrosis , síndrome enteropático autoinmune, enfermedad celiaca, esprúe celiaco (enteropatia de gluten), esprúe refractaria, esprue ídiopático, crioglobulmemia, esclerosis lateral amilotrópica, (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , enfermedad de las arterias coronarias, enfermedad autoinmune del oído tal como enfermedad autoinmune del oído interno (AIED) , sordera autoinmune, síndrome opsoclonus-mioclono (OMS); policondptis tal como policondritis refractaria o recurrente, protemosis alveolar pulmonar, amiloidosis, escleritis, lmfocitosis no cancerosa, lmfocitosis primaria, la cual incluye linfocitosis de células B monoclonales (por ejemplo, gamopatía monoclonal benigna y gamopatía monoclonal de significancia indeterminada, MGUS) , neuropatía periférica, síndrome paraneoplásico, canalopatías tales como epilepsia, migratia, arritmia, trastornos musculares, sordera, ceguera, parálisis periodical y canalopatias del SNC, autismo, miopatia inflamatoria, glomerulosclerosis segméntales focales (FSGS) , oftalmopatía endocrina, uveoretinitis , trastorno autoinmune hepatológico, fibromialgia, deficiencia endocrina múltiple, síndrome de Schmidt, adrenalitis, atrofia gástrica, demencia presenil, enfermedades desmielinantes tal como enfermedades desmielinantes autoinmunes y polineuropatia desmielinante inflamatoria, nefropatía diabética, síndrome de Dressler, alopecia áreata, síndrome de CREST (calcionosis , fenómeno de Raynaud, dismotilidad esofágica, esclerodactilia, y telangiectasia) , infertilidad autoinmune masculina y femenina, enfermedad del tejido conectivo mixto, enfermedad de Chagas, fiebre reumática, aborto recurrente, pulmón de granjero, eritema multiforme, síndrome poscardiotomia, síndrome de Cushing, pulmón de criadores de aves, angiitis granulomatosa alérgica, angiitis linfocítico benigno, síndrome de Alport, alveolitis tal como alveolitis alérgica y alveolitis fibrosante, enfermedad de pulmón intersticial, reacción a la transfusión, lepra, malaria, leishmaniasis , kipanosomiasis , esquistosomiasis , ascariasis, aspergilosis , síndrome de Sampter, síndrome de Caplan, dengue, endocarditis, fibrosis endomiocardíaca, fibrosis pulmonar intersticial difusa, fibrosis pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis cística, endoftalmitis , eritema elevatum et diutinum, eritroblastosis fetalis, faciitis eosinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, flariasis, ciclitis tal como ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis (aguda o crónica) , o ciclitis de Fuch, púrpura de Henoch-Schonlein, infección por virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , infección por ecovirus, cardiomiopatia, enfermedad de Alzheimer, infección por parvovirus, infección por virus de la rubéola, síndromes de posvacunación, infección por rubéola congénita, infección por virus Epstein-Barr , parotiditis infecciosa, síndrome de Evan, deficiencia gonadal autoinmune, corea de Sydenham, nefritis post-estreptococo, tromboangitis ubiterans, tirotóxicosis, tabes dorsalis, corioiditis, polimialgia de células gigantes, oftamopatía endocrina, neumonitis de hipersensibilidad crónica, queratoconjuntivitis sicca, queratoconjuntivitis epidemical síndrome nefrítico idiopático, nefropatía de cambio mínimo, daño por reperfusión isquémica y familiar benigna, autoinmunidad retinal, inflamación de las articulaciones, bronquitis, enfermedad de las vías respiratorias obstructiva crónica, silicosis, estomatitis aftosa, trastornos arterioscleroticos , aspermiogenese, hemolisis autoinmune, enfermedad de Boeck, crioglobulinemia, contractura de Dupuytren, endoptalmia facoanafiláctica, enteritis alérgica, eritema nodoso leproso, parálisis facial idiopática, síndrome de fatiga crónica, fiebre reumática, enfermedad de Hamman-Rich, pérdida de la audición sensoneural, hemoglobinuria paroxismática, hipogonadismo, ileitis regionalis, leucopenia, mononucleosis infecciosa, mielitis traversa, mixedema idiopática primaria, nefrosis, oftalmía simpática, orquitis granulomatosa, pancreatitis, poliradiculitis aguda, pioderma gangrenosa, tiroiditis de Quervain, atrofia espénica adquirida, infertilidad debido a anticuerpos antiespermatozoos, timoma no-maligna, vitíligo, SCID y enfermedades asociadas con el virus de Epstein-Barr, síndrome de deficiencia inmune adquirida (SIDA) , enfermedades parasitarias tales como Lesihmania, síndrome de choque tóxico, envenenamiento de los alimentos, afecciones que involucran la infiltración de células T, deficiencia de adhesión de leucocitos, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retarda mediada por citoquinas y linfocitos T, enfermedades que involucran diapédesis leucocítica, síndrome del daño orgánico múltiple, enfermedades mediadas por el complejo antígeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular , neuritis alérgica, poliendocrinopatías autoinmunes, ooforitis, mixdema primaria, gastritis atrófica autoinmune, oftalmía simpática, enfermedades reumáticas, enfermedad del tejido conectivo mixto, síndrome nefrótico, insulities, deficiencia poliendocrina, neuropatía periférica, síndrome poliglandular autoinmune tipo I, hipoparatiroidismo idiopático al inicio de la adultez (AOIH) , alopecia totalis, cardiomiopatía dilatada, epidermolisis bullosa acquisita (EBA), hemocromatosis , miocarditis, síndrome nefrótico, colangitis esclerosante primaria, sinusitis purulenta o no-purulenta, sinusitis aguda o crónica, sinusitis etmoide, frontal, maxilar, o esfenoide, trastornos relacionados con esosinófilos tales como eosinofilia, eosinofilia de infiltración pulmonar, síndrome de eosinofilia-mialgia, síndrome de Loffler, neumonía eosinofílica crónica, eosinofilia pulmonar tropical, aspergilosis bronconeumonica, aspergilona, o granulomas que contienen eosinofilos, anafilaxis, espondiloartritides seronegativa, enfermedad autoinmune poliendocrina, colangitis esclerosante, esclera, episclera, candidiasis monocutánea crónica, síndrome de Bruton, hipogamaglobulinemia transitoria de la infancia, síndrome de Wiskott-Aldrich, ataxia telangiectasia, trastornos autoinmunes asociados con enfermedades del colágeno, reumatismo, enfermedad neurológica, linfadenitis, trastorno de reperfusión isquémica, reducción en respuesta a la presión sanguínea, disfunción vascular, antgiectasis , dafio tisular, isquemia cardiovascular, hiperalgesia, isquemia cerebral, y vascularización que acompafia a la enfermedad, trastornos de hipersensiblidad alérgica, glomerulonefritís , daño por reperfusión, daño por reperfusión del miocardio u otros tejidos, dermatosis con componentes inflamatorios agudos, meningitis purulenta aguda, u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central, trastornos inflamatorios ocular y orbitales, síndromes asociados con la transfusión de granulositos , toxicidad inducida por citoquinas, narcolepsia, inflamación seria aguda, inflamación intratable crónica, pielitis, neumonocirrosis , retinopatía diabética, trastorno diabético de grandes arterias, hiperplasia endoarterial , úlcera péptica, valvulitis, y endometriosis. Un "trastorno hiperproliferativo benigno" significa un estado en un paciente que se relaciona con la proliferación celular y el cual esta reconocido como anormal por miembros de la comunidad médica. Un estado anormal se caracteriza por un nivel de una propiedad que es estadísticamente diferente del nivel observado en organismos que no sufren del trastorno. La proliferación celular se refiere al crecimiento o extensión por la multiplicación de células e incluye la división celular. La velocidad de la proliferación celular puede medirse por conteo de la cantidad de células producidas en una unidad dada de tiempo. Ejemplos de trastornos proliferativos benignos incluyen psoriasis y pólipos. Una "enfermedad respiratoria" involucra el sistema respiratorio e incluye bronquitis crónica, asma incluyendo asma agudo y asma alérgico, fibrosis cística, bronquiectasis , rinitis o sinusitis alérgica o de otro tipo, deficiencia de antitripsma a l , tos, enfisema pulmonar, fibrosis pulmonar o vías respiratorias hiper-reactivas, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, y trastorno pulmonar obstructivo crónico. "Psoriasis" es una afección caracterizada por la irrupción de maculopápulos circunscriptos, discretos y confluentes, rojizos en escalas plateadas. En general, las lesiones psoriásicas se producen predominantemente en hombros, rodillas, cuero cabelludo y tronco, y mostrar microscópicamente las paraquerotosis característica y la elongación de crestas interpapilares. El término incluye las diversas formas de psoriasis, incluyendo formas eritrodérmicas , pustular, moderada-severa y recalcitrante de la enfermedad. "Endometriosis" se refiere a la ocurrencia ectópica del tejido endometrial, que forma frecuentemente quistes que contienen sangre alterada. El término "trastorno o enfermedad vascular" se refiere a las diversas enfermedades o trastornos que impactan el sistema vascular, incluyendo el sistema cardiovascular. Ejemplos de tales enfermedades incluyen arteriosclerosis, reobstrucción vascular, aterosclerosis, estenosis vascular posquirúrgica, restenosis, oclusión vascular o enfermedad obstructiva carótida, enfermedad arterial coronaria, angina, enfermedad de pequeños vasos, hipercolesterolemia, hipertensión, y afecciones que involucran la proliferación o función anormal de células epiteliales vasculares. El término "estenosis" se refiere al enangostamiento o estructura del pasaje hueco (por ejemplo un ducto o canal) en el cuerpo. El término "estenosis vascular" se refiere a la oclusión o enangostamiento de vasos sanguíneos. La estenosis vascular a menudo resulta del depósito graso (como en el caso de la aterosclerosis) o migración excesiva o proliferación de células del músculo liso vasculares y células endoteliales. Las arterias son particularmente susceptibles a la estenosis. El término "estenosis" tal como se utiliza en la presente incluye específicamente la estenosis inicial y restenosis. El término "restenosis" se refiere a la recurrencia de estenosis después del tratamiento de estenosis inicial con éxito aparente. Por ejemplo, "restenosis" en el contexto de la estenosis vascular, se refiere a la recurrencia de estenosis vascular después que ha sido tratada con éxito aparente, por ejemplo por eliminación del depósito graso por angioplastía (por ejemplo, angioplastía coronaria transluminal percutánea), aterectomía coronaria de dirección o stent, etc. Uno de los factores que contribuyen a la restenosis es la hiperplasia íntima. El término "hiperplasia íntima", utilizado intercambiablemente con "hiperplasia neoíntimo" y "formación neoíntíma", se refiere al engrosamiento de la capa más interna de los vasos sanguíneos, íntima, como consecuencia de la proliferación excesiva y migración de células del músculo liso vascular y células endoteliales. Los diversos cambios que tienen lugar durante la restenosis a menudo se denominan en forma colectiva como "remodelación de la pared vascular". Los términos "angioplastía con globo" y "angioplastía coronaria transluminal percutánea" (PTCA) a menudo se utilizan intercambiablemente, y se refieren a un tratamiento basado en un catéter no quirúrgico para la eliminación de halos de la arteria coronaria. La estenosis o restenosis a menudo conduce a la hipertensión como resultado de la resistencia incrementada al flujo sanguíneo . El término "hipertensión" se refiere a la presión sanguínea anormalmente alta, es decir más allá del valor superior del rango normal . El término "pólipos" se refiere a una masa de tejido que pandea o se proyecta hacia fuera o hacia arriba del nivel de superficie normal, siendo por lo tanto microscópicamente visible como una estructura hemisferoidal , esperoidal, o tipo montículo irregular que se desarrolla a partir de una base relativamente ancha o una caña delgada. Ejemplos incluyen pólipos de colon, rectal y nasal . El término "fibroadenoma" se refiere a un neoplasma benigno derivado del epitelio glandular, en el cual existe un estroma conspicuo de proliferación de fibroblastos y elementos de tejido conductivo. Esto ocurre normalmente en tejido de pecho. El "asma" es una afección que da por resultado una dificultad en la respiración. El asma bronquial se refiere a una afección de los pulmones en la cual se produce un enangostamiento amplio de las vías respiratorias, que puede deberse a la contracción (espasmo) del músculo liso, edema de la mucosa, o moco en el lumen de los bronquios y bronquiolos . "Bronquitis" se refiere a la inflamación de la membrana mucosa de los viales bronquiales. A los fines de la presente, un "vial" se refiere a un envase que porta un agente terapéutico. El vial puede estar sellado por un llenador penetrable mediante una jeringa. En general, el vial se forma de material de vidrio. El agente terapéutico en el vial puede estar en varios estados incluyendo líquido, liofilizado, congelado, etc. Un "inserto de envase" se refiere a las instrucciones incluidas habitualmente en envases comerciales de los agentes terapéuticos, que contiene información acerca de las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o avisos relacionados con el uso de tales productos terapéuticos . II. Producción de anticuerpos A continuación sigue una descripción de las técnicas, a modo de ejemplo, para la producción de anticuerpos HER utilizados de acuerdo con la presente invención. El antígeno HER a ser utilizado para la producción de anticuerpos puede ser, por ejemplo, una forma soluble del dominio extracelular de HER o una porción del mismo, que contiene el epítope deseado. Alternativamente, las células que expresan HER en su superficie celular (por ejemplo, células NIH-3T3 transformadas para sobre expresar HER2 ; o una línea celular de carcinoma tal como células SK-BR-3, ver Stancovski et al . , PNAS (USA) 88:8691-8695 (1991)) se pueden utilizar para generar anticuerpos. Otras formas del receptor HER útiles para generar anticuerpos serán evidentes para los expertos en la técnica, (i) Anticuerpos policlonales Con preferencia los anticuerpos monoclonales se forman en animales mediante múltiples inyecciones subcutáneas o intraperitoneales del antígeno relevante y adyuvante. Se puede utilizar para conjugar el antígeno relevante con una proteína que es inmunogénica en las especies a ser inmunizadas, por ejemplo, la hemocianina de la lapa californiana (keyhole limpet) , albúmina de suero, tiroglobulina bovina, o inhibidor de tripsina de soja utilizando un agente bifuncional o derivatizante, por ejemplo, maleimidobenzoil sulfosuccinimido ester (conjugación a través de los residuos de cisteína) , N-hidroxisuccinimida (a través de residuos de lisina) , glutaraldehido, anhídrido succínico, S0C12, o R1N=C=NR, donde R y R1 son diferentes grupos alquilo. Los animales se inmunizan contra el antígeno, los conjugados inmunogénicos, o derivados combinando, por ejemplo, 100 µ g o 5 µ g de la proteína o conjugado (para conejos o ratones, respectivamente) con 3 volúmenes de adyuvante completo de Freund e inyectando la solución por vía intradérmica en múltiples sitios. Un mes más tarde los animales se refuerzan con 1/5 o 1/10 de la cantidad original de péptido o conjugado en adyuvante completo de Freund mediante inyección subcutánea en múltiples sitios. Siete a catorce días más tarde los animales se sangran y se ensaya el suero para determinar el título del anticuerpo. Los animales se refuerzan hasta la meseta del título. Con preferencia, el animal se refuerza con el conjugado del mismo antígeno, pero conjugado con una proteína diferente y/o a través de un reactivo de entrecruzamiento diferente. Los conjugados además se pueden obtener en cultivos de células recombinantes como fusiones proteicas. Además, los agentes de agregación tales como alum se utilizan adecuadamente para mejorar la respuesta inmune. (ii) Anticuerpos monoclonales En la técnica se dispone de varios métodos para producir anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales se pueden producir utilizando el método de hibridoma descrito por Kohler et al . , Na ture, 256:495 (1975), por métodos de ADN recombinante (Patente de los E.U.A. No. 4,816,567). En el método del hibridoma, un ratón u otro animal huésped apropiado, tal como un hámster, se inmuniza según se describió en la presente anteriormente para permitir que los linfocitos produzcan o sean capaces de producir anticuerpos que se unirán específicamente a la proteína utilizada para inmunización. Alternativamente, los linfocitos se inmunizan in vi tro . Luego los linfocitos se fusionan con células de mieloma utilizando un agente de fusión adecuado, tal como polietilen glicol, para formar una célula de hibridoma (Goding, Monoclonal Antibodies : Principies and Practice, págs. 59-103 (Academic Press, 1986)). Las células del hibridoma preparadas de este modo se siembran y se desarrollan en un medio de cultivo adecuado que contiene preferentemente una o más sustancias que inhiben el crecimiento o supervivencia de las células del mieloma progenitor, no fusionadas. Por ejemplo, si las células del mieloma progenitor carecen de la enzima hipoxantina guanina fosforribosil transferasa (HGPRT o HPRT) , el medio de cultivo para los hibridomas típicamente incluirá hipoxantina, aminopterina, y timidma (medio de HAT) , sustancias que previenen el desarrollo de células deficientes en HGPRT. Las células del mieloma preferidas son aquellas que se fusionan eficazmente, soportan la producción de alto nivel estable del anticuerpo mediante las células de producción de anticuerpos selecionadas , y son sensibles a un medio tal como el medio de HAT. Entre estas, las líneas celulares del mieloma preferidas son líneas del mieloma de murmo, tales como las derivadas de tumores de ratón MOPC-21 y MPC-11 disponibles del Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California, EE.UU. y células SP-2 o X63-Ag8-652 disponibles de la American Type Culture Collection, Rockville, Mariland, EE.UU. Las líneas celulares del heteromieloma ratón-humano y del mieloma humano además se describen para la producción de anticuerpos monoclonales humanos (Kozbor, J. Immunol , 133:3001 (1984); Brodeur et al . , Monoclonal Antibody Production Techniques and Applica tions, págs. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)). El medio de cultivo en el cual se desarrollan las células del hibridoma se ensayan para la producción de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno. Con preferencia, la especificidad de unión de los anticuerpos monoclonales producidos por las células del hibridoma se determina por la mmunoprecipitación o por un ensayo de unión m vi tro, tal como radiommunoensayo (RÍA) o ensayo inmunoabsorbente enlazado a la enzima (ELISA) . La afinidad de unión del anticuerpo monoclonal se puede determinar, por ejemplo, mediante el análisis Scatchard de Munson et al . , Anal . Biochem . 107:220 (1980) . Después que se identificaron las células del hibridoma que producen anticuerpos de la especificidad, afinidad y/o actividad deseada, los clones se pueden subclonar limitando los procedimientos de dilución y se puede desarrollar mediante métodos estándar (Goding, Monoclonal Antibodies : Principies and Practice , págs. 59-103 (Academic Press, 1986)). Los medios de cultivo adecuados para este fin incluyen, por ejemplo el medio D-MEM o RPMI-1640. Además, las células del hibpdoma se pueden desarrollar in vivo como tumores de ascitis en un animal . Los anticuerpos monoclonales secretados por los subclones se separan adecuadamente del medio de cultivo, fluido de ascitis, o suero mediante procedimientos de purificación de mmunoglobulma convencionales tales como, por ejemplo, proteína A-Sefarosa, cromatografía de hidroxiapatita, electroforesis en gel, diálisis, o cromatografía de afinidad.

El ADN que codifica los anticuerpos monoclonales se aisla fácilmente y se secuencia utilizando procedimientos convencionales (por ejemplo, utilizando sondas oligonucleotídicas que son capaces de unirse específicamente a genes que codifican las cadenas pesadas y livianas de anticuerpos murinos) . Las células del hibridoma sirven como una fuente preferida de tal ADN. Una vez aislado, el ADN se puede colocar en vectores de expresión, que luego se transfectan a células huésped tales como células de E. coli , células de COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO) , o células del mieloma que de otro modo no produce proteínas de inmunoglobulina, para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en células huésped recombinantes. Los artículos de revisión sobre expresión recombinante en bacterias de ADN que codifican el anticuerpo incluyen Skerra et al . , Curr . Opini ón in Im unol . , 5:256:262 (1993) y Pluckthun, Immunol . Revs . , 130:151-188 (1992). En otra realización, los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos se pueden aislar de bibliotecas de fagos de anticuerpos generadas utilizando las técnicas descritas en McCafferty et al . , Nature, 348:552-554 (1990). Clackson et al . , Na ture, 352:624-628 (1991) y Marks et al . , J. Mol . Biol . 222:581-597 (1991) describen el aislamiento de anticuerpos murinos y humanos, respectivamente, utilizando bibliotecas de fagos. Publicaciones subsiguientes describen la producción de anticuerpos humanos de alta afinidad (rango nM) por barajado de cadenas (Marks et al . , Bio/Technology, 10:779-783 (1992)), como así también infección combinatoria y recombinación in vivo como estrategia para construir bibliotecas de fagos muy grandes (Waterhouse et al . , Nuc . Acids . Res . , 21:2265-2266 (1993)). De este modo, estas técnicas son alternativas viables de las técnicas de hibridoma de anticuerpo monoclonal tradicional para aislamiento de anticuerpos monoclonales. El ADN se puede modificar, por ejemplo, por sustitución de la secuencia codificadora para dominios constantes de cadena liviana y pesada humanos en lugar de las secuencias de murino homologas (Patente de los E.U.A. No. 4,816,567; Morrison et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA, 81:6851 (1984)), o mediante la unión covalente a la secuencia codificadora de inmunoglobulina de toda o parte de la secuencia codificadora para un polipéptido distinto de inmunoglobulina. Típicamente dichos polipéptidos sin inmunoglobulina sustituyen a los dominios constantes de un anticuerpo, o sustituyen a los dominios variables de un sitio de combinación de antígenos de un anticuerpo para crear un anticuerpo quimérico bivalente que comprende un sitio de combinación de antígenos que tiene especificidad para un antígeno y otro sitio de combinación de antígenos que tiene especificidad para un antígeno diferente. (i i i ) An ti cuerpos Humani zados Los métodos para humanizar anticuerpos no humanos se han descrito en la técnica. Preferentemente, un anticuerpo humanizado tiene uno o más residuos de aminoácido introducidos en ellos desde una fuente que no es humana. Estos residuos de aminoácidos no humanos generalmente se denominan residuos de "importación", que se toman típicamente de un dominio variable "importación". La humanización puede realizarse esencialmente siguiendo el método de Winter y colaboradores (Jones et al . , Na ture, 321:522-5 (1986); Riechmann et al . , Na ture, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al . , Sci ence, 239:34-36 (1988)), substituyendo las secuencias de región hipervariable en lugar de las secuencias correspondientes de un anticuerpo humano. En consecuencia, dichos anticuerpos "humanizados" son anticuerpos quiméricos (Patente de los E.U.A. No. 4,816,567) en los cuales sustancialmente se ha sustituido menor que un dominio variable humano intacto por la secuencia correspondiente de una especie no humana. En la práctica, los anticuerpos humanizados son típicamente anticuerpos humanos en los cuales algunos residuos de región hipervariable y posiblemente algunos residuos de FR se sustituyen por residuos de sitios análogos en anticuerpos de roedores. La elección de dominios variables humanos, tanto livianos como pesados, que se usan para fabricar anticuerpos humanizados es muy importante para reducir la antigenicidad. De acuerdo con el denominado método "más adecuado", la secuencia del dominio variable de un anticuerpo de roedor se compara con toda la biblioteca de secuencias humanas de dominio variable conocidas. La secuencia humana que esta más cercana a la del roedor luego se acepta como la región marco (FR) humana para el anticuerpo humanizado (Sims et al . , J. Immunol , 1:2296 (1993); Chothia et al . , J. Mol . Biol . , 196:901 (1987)). Otro método utiliza una región marco particular derivada de la secuencia de consenso de todos los anticuerpos humanos de un subgrupo particular de regiones variables de cadena liviana o pesada. Se puede usar el mismo marco para varios anticuerpos humanizados diferentes (Cárter et al . , Proc . Na ti . Acad, Sci . USA, 89:4285 (1992); Presta et al . , J. Inmunol . , 1:2623 (1993)). Además es importante que los anticuerpos se humanicen con retención de alta afinidad para los antígenos y otras propiedades biológicas favorables. Para lograr este objetivo, de acuerdo a un método preferido, los anticuerpos humanizados se preparan a través de un proceso de análisis de secuencias progenitoras y varios productos conceptuales humanizados con modelos tridimensionales de las secuencias progenitoras y humanizadas. Los modelos tridimensionales de inmunoglobulina están disponibles comúnmente y son familiares para los expertos en la técnica. Hay programas de computación disponibles que ilustran y muestran estructuras conformacionales tridimensionales probables de secuencias de inmunoglobulina candidata seleccionada. La inspección de estas muestras permite el análisis del papel de la probabilidad de los residuos en el f ncionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, es decir, el análisis de los residuos que influyen en la capacidad de la inmunoglobulina candidata para que se una a su antígeno. De esta forma, se pueden seleccionar los residuos de FR y combinarse a partir de las secuencias receptora e importadora de manera tal que se logre la característica del anticuerpo deseado, tal como afinidad aumentada para el (los) antígeno (s) blanco. En general, los residuos de región hipervariable se involucran directamente y más sustancialmente en la influencia de la unión al antígeno. El documento WO01/00245 describe la producción de anticuerpos HER2 humanizados que se unen a HER2 y bloquean la activación del ligando de un receptor de HER. El anticuerpo humanizado de particular interés bloquea la activación mediada por EGF, TGF-a y/o HRG de MAPK esencialmente en forma tan efectiva como el anticuerpo 2C4 monoclonal de murino (o un fragmento Fab del mismo) y/o se une a HER2 esencialmente en forma tan efectiva como el anticuerpo 2C4 monoclonal de murino (o un fragmento Fab del mismo) . El anticuerpo humanizado puede comprender, por ejemplo, residuos de una región hipervariable no humana incorporada en un dominio pesado variable humano y además puede comprender una sustitución de región de marco (FR) en una posición selecionada del grupo integrado por 69H, 71H y 73H utilizando el sistema de numeración de dominio variable establecido en Kabat et al . , Sequences of Proteins of immunological Interés t , 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). En una realización, el anticuerpo humanizado comprende las sustituciones de FR en dos o todas las posiciones 69H, 71H y 73H. A modo de ejemplo un anticuerpo humanizado de interés comprende residuos que determinan complementariedad de dominio pesado variable GFTFTDYTMX, donde X es preferentemente D o S (SEC ID NO: 7) ; DVNPNSGGSIYNQRFKG (SEC ID NO: 8); y/o NLGPSFYFDY (SEC ID NO: 9), opcionalmente comprende las modificaciones de aminoácidos de estos residuos de CDR, por ejemplo las modificaciones esencialmente mantienen o mejoran la afinidad del anticuerpo. Por ejemplo, la variante de anticuerpo de interés puede tener de aproximadamente uno a aproximadamente siete o aproximadamente cinco sustituciones de aminoácidos en las secuencias de CDR pesadas variables. Tales variantes de anticuerpo se pueden preparar por maduración por afinidad, por ejemplo, según se describe a continuación. El anticuerpo humanizado más preferido comprende la secuencia de aminoácidos de dominio pesado variable en SEC ID NO: 4. El anticuerpo humanizado puede comprender residuos que determinan la complementariedad del dominio liviano variable KASQDVSIGVA (SEC ID NO: 10); SASYX?X3, donde X1 es preferentemente R o L, X2 es preferentemente Y o E, y X3 es preferentemente T o S (SEC ID NO: 11) ; y/o QQYYIYPYT (SEC ID NO: 12), por ej emplo, además de esos residuos de CDR de dominio pesado variable en el párrafo precedente. Tales anticuerpos humanizados comprenden opcionalmente modificaciones de aminoácidos de los residuos de CDR anteriores, por ejemplo, cuando las modificaciones esencialmente mantienen o mejoran la afinidad del anticuerpo. Por ejemplo, la variante del anticuerpo de interés puede tener de aproximadamente uno a aproximadamente siete o aproximadamente cinco sustituciones de aminoácidos en las secuencias de CDR livianas variables anteriores. Tales variantes de anticuerpo se pueden preparar por maduración por afinidad, por ejemplo según se describe a continuación. El anticuerpo humanizado más preferido comprende la secuencia de aminoácidos de dominio liviano variable en SEC ID NO 3. La presente solicitud además contempla los anticuerpos madurados por afinidad que se unen a HER2 y bloquean la activación del ligando de un receptor de HER. El anticuerpo progenitor puede ser un anticuerpo humano o un anticuerpo humanizado, por ejemplo uno que comprende las secuencias livianas y/o pesadas variables de las SECs ID Nos 3 y 4, respectivamente (es decir, variante 574) . El anticuerpo madurado por afinidad preferentemente se une al receptor de HER2 con una afinidad superior a ese del 2C4 de mupno o variante 574 (por ejemplo, de aproximadamente dos o aproximadamente cuatro veces, a aproximadamente 100 veces o aproximadamente 1000 veces de afinidad mejorada, por ejemplo, según se determinó utilizando un dominio extracelular de HER2 (ECD) ELISA) . A modo de ejemplo los residuos de CDR pesados variables para sustitución incluyen H28, H30, H34, H35, H64, H96, H99, o combinaciones de dos o más (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, o siete de estos residuos) . Ejemplos de residuos de CDR livianos variables para alteración incluyen L28, L50, L53, L56, L91, L92, L93, L94 , L96, L97 o combinaciones de dos o más (por ej emplo dos a tres, cuatro, cinco, o hasta aproximadamente diez de estos residuos) . Se contemplan varias formas del anticuerpo humanizado o anticuerpo madurado por afinidad. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado o el anticuerpo madurado por afinidad puede ser un fragmento del anticuerpo, tal como un Fab, el cual esta opcionalmente conjugado con uno o más agentes citotóxicos para generar un inmuno- conj ugado . Alternativamente, el anticuerpo humanizado o el anticuerpo madurado por afinidad puede ser un anticuerpo intacto, tal como un anticuerpo de IgGI intacto. El anticuerpo de IgGI intacto preferido comprende la secuencia de cadena liviana en la SEC ID NO: 13 y la secuencia de cadena pesada en la SEC ID NO: 14. ivj Anticuerpos humanos Como alternativa a la humanización, se pueden generar anticuerpos humanos. Por ejemplo, ahora es posible producir animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que son capaces, luego de una inmunización, de producir un repertorio completo de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena. Por ejemplo, se ha descrito que la supresión homoziga del gen de la región de unión de cadena pesada (JH) del anticuerpo en ratones quiméricos y mutantes de línea germinal da como resultado la inhibición completa de una producción endógena de anticuerpos. La transferencia de la matriz genética de inmunoglobulina en la línea germinal humana en dichos ratones mutantes de la línea germinal dará como resultado la producción de anticuerpos humanos en una provocación de antígeno. Ver, por ejemplo, Jakobovits et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA , 90:51 (1993); Jakobovits et al . , Nature, 362:5-8 (1993); Bruggermann et al . , Year in Inmuno . , 7:33 (1993); y Patentes de los E.U.A. Nos. 5,591,669, 5,589,369 y 5, 545, 807. De manera alternativa, se puede utilizar la tecnología de despliegue de fagos (McCafferty et al . , Na ture 348:552-553 (1990)) para producir anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpos ín vitro, provenientes de los repertorios de genes de dominios variables (V) de inmunoglobulina de donantes no inmunizados. De acuerdo con esta técnica, se clonan los genes del dominio V del anticuerpo en el marco ya sea en un gen de proteína de envoltura mayor o menor de un bacteriófago filamentoso, tal como M13 o fd, y se despliega como fragmentos de anticuerpo funcionales en la superficie de la partícula del fago. Debido a que la partícula filamentosa contiene una sola copia de ADN monocatenario del genoma del fago, las selecciones basadas en las propiedades funcionales del anticuerpo también dan como resultado una selección del gen que codifica el anticuerpo exhibiendo aquellas propiedades. En consecuencia, el fago imita algunas de las propiedades de la célula B. Se puede realizar el despliegue de fagos en una variedad de formatos; para esta revisión ver, por ejemplo, Johnson, Kevin S. y Chiswell, David J. , Curren t Opinión in Structural Biology 3564-571 (1993) . Varias fuentes de segmentos de gen V se pueden usar para el despliegue de fagos. Clackson et al . , Na ture , 352:624-628 (1991) aisló una matriz diversa de anticuerpos anti-oxazolona de una biblioteca combinatoria aleatoria pequeña de genes V derivada de los bazos de ratones inmunizados. Se puede construir un repertorio de genes V de donantes humanos no inmunizados y se pueden aislar anticuerpos contra un conjunto diverso de antígenos (incluyendo auto-antígenos) siguiendo esencialmente las técnicas descritas por Marks et al . , J. Mol . Biol . 222:581-597 (1991), o Griffith et al . , EMBO J. 12:7-734 (1993). Ver también las Patentes de los E.U.A. Nos. 5, 565,332 y 5, 573, 905. Según se mencionó anteriormente, los anticuerpos humanos también pueden ser generados por células B activadas in vi tro (Ver Patentes Estadounidenses 5,567,610 y 5,229,275). Los anticuerpos HER2 humanos se describen en la Patente de los E.U.A. No. 5,772,997 emitida el 30 de junio de 1998 y WO 97/00271 publicada el 3 de enero de 1997. (v) Fragmentos de Anticuerpo Se han desarrollado varias técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpo que comprende una o más regiones de unión al antígeno. Tradicionalmente, estos fragmentos se derivaron a través de la digestión proteolítica de anticuerpos intactos (ver, por ejemplo, Morimoto et al . , Journal of Biochemicaland Biophysi cal Methods 24:7-117 (1992) y Brennan et al . , Sci ence, 229:81 (1985)) . Sin embargo, ahora estos fragmentos se pueden producir directamente a través de células huésped recombinantes. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpo se pueden aislar de las bibliotecas de fagos de anticuerpos analizadas anteriormente. De manera alternativa, fragmentos Fab'-SH se pueden recuperar directamente de E. coli y acoplar químicamente para formar fragmentos F(ab')2 (Cárter et al . , Bio/Technology 10:163-167 (1992)) . Conforme a otro enfoque, se pueden aislar los fragmentos F(ab')2, directamente del cultivo de la célula huésped recombinante. Otras técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos serán evidentes para los profesionales en la técnica. En otras realizaciones, el anticuerpo de elección es un fragmento Fv de cadena única (scFv) . Ver WO 93/16185; Patente de los E.U.A. No. 5,571,894; y Patente de los E.U.A. No. 5,587,458. También el fragmento de anticuerpo puede ser un "anticuerpo lineal", por ejemplo, según se describe en la Patente de los E.U.A. No. 5,641,870. Dichos fragmentos de anticuerpo lineales pueden ser monoespecíficos o biespecíficos . (vi ) An ticuerpos biespecíf icos Los anticuerpos biespecíficos son anticuerpos que tienen especificidades de unión para al menos dos epítopes diferentes. Los anticuerpos biespecíficos ejemplares pueden unirse a dos epítopes diferentes de la proteína HER2. Otros anticuerpos pueden combinar un sitio de unión de HER2 con el o los sitios de unión para EGFR, HER3 y/o HER4. De manera alternativa, un brazo de HER2 puede combinarse con un brazo que se une a una molécula disparadora en un leucocito tal como una molécula receptora de células T (por ejemplo CD2 o CD3 ) , o receptores Fe para IgG (Fc^R), tales como Fc^RI (CD64), Fc^RII (CD32) y Fc^RIII (CD16) de manera de enfocar los mecanismos de defensa celular a la célula que expresa el HER2. Los anticuerpos biespecíficos también se pueden utilizar para localizar agentes citotóxicos para las células que expresan el HER2. Estos anticuerpos poseen un brazo de unión a HER2 y un brazo que conecta el agente citotóxico (por ejemplo saporina, anti-interferón-a, alcaloide vinca, cadena A de ricino, metotrexato o hapteno con isótopo radioactivo) . Se pueden preparar anticuerpos biespecíficos como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpo (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos F(ab')2). El documento WO 96/16673 describe un anticuerpo HER2/Fc RUI biespecífico y la Patente de los E.U.A. No. No. 5,837,234 revela un anticuerpo HER2/Fc RI biespecífico IDM1 (Osidem) . Un anticuerpo HER2/Fca biespecífico se muestra en WO98/02463. La Patente de los E.U.A. No. 5,821,337 enseña un anticuerpo HER2/CD3 biespecífico. MDX-210 es un HER2-Fc^RIII Ab biespecífico . Se conocen en la técnica métodos para hacer anticuerpos biespecíficos . La producción tradicional de anticuerpos biespecíficos de longitud completa se basa en la coexpresión de dos pares de cadenas de inmunoglobulina pesada y liviana, en las cuales las dos cadenas tienen especificidades diferentes (Millstein et al . , Nature, 5:537-539 (1983)). Debido al surtido aleatorio de las cadenas de inmunoglobulina pesada y liviana, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de 10 moléculas de anticuerpo diferentes, de las cuales solamente una tiene la estructura biespecífica correcta. La purificación de la molécula correcta, que se hace generalmente a través de pasos de cromatografía de afinidad, es bastante engorrosa, y los rendimientos de los productos son bajos. Se describen procedimientos similares en WO 938829, y en Traunecker et al . , EMBO J. , 10 :3655-3659 (1991) . De acuerdo con un enfoque diferente, los dominios variables del anticuerpo con las especificidades de unión deseadas (sitios de combinación de anticuerpoantígeno) se fusionan a las secuencias de dominio constante de la inmunoglobulina. La fusión preferentemente es con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina, que comprende al menos parte de las regiones bisagra, CH2 y CH3. Se prefiere tener la primera región constante de cadena pesada (CHI) que contiene el sitio necesario para la unión de la cadena liviana, presente en al menos una de las fusiones. Los ADNs que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y, si se desea, la cadena liviana de inmunoglobulina, se introduce en vectores de expresión separados, y se co-transfectan a un organismo huésped apropiado Esto proporciona gran flexibilidad para ajustar las proporciones mutuas de los tres fragmentos de polipéptidos en realizaciones cuando proporciones desiguales de las tres cadenas de polipéptidos utilizadas en la construcción proporcionan el rendimiento óptimo Sin embargo, es posible introducir las secuencias codificadoras para dos o para las tres cadenas de polipéptidos en un vector de expresión cuando la expresión de al menos dos cadenas de polipéptidos en proporciones iguales da como resultado alto rendimiento o cuando las proporciones son de importancia no particular En una realización preferida de este enfoque, los anticuerpos biespecíficos se componen de una cadena pesada de mmunoglobulma híbrida con una primera especificidad de unión en un brazo, y un par de cadena liviana-cadena pesada de inmunoglobulina híbrida (que proporciona una segunda especificidad de unión) en el otro brazo Se encontró que ésta estructura asimétrica facilita la separación del compuesto biespecífico deseado de las combinaciones de cadena de inmunoglobulina no deseadas, ya que la presencia de la cadena liviana de mmunoglobulma en solamente una mitad de la molécula biespecífica proporciona una manera fácil de separación. Este enfoque se analiza en la WO 94/04690. Para obtener mayores detalles acerca de la generación de anticuerpos biespecíficos remítase, por ejemplo, a Suresh et al . , Methods in Enzymology, 121:2 (1986). De acuerdo con otro enfoque descrito en Patente de los E.U.A. No. No. 5,731,168, la interfaz entre un par de moléculas de anticuerpo se puede diseñar por ingeniería para maximizar el porcentaje de los heterodímeros que se recuperan del cultivo de la célula recombinante. La interfaz preferida comprende al menos una parte de dominio de CH3 de un dominio constante de anticuerpo. En este método, una o más cadenas laterales de aminoácidos menores desde la interfaz de la primera molécula de anticuerpo se reemplazan con cadenas laterales más grandes (por ejemplo tirosina o triptofano). Las "cavidades" compensatorias de tamaño idéntico o similar a la(s) cadena (s) lateral (es) grande (s) se crean en la interfaz de la segunda molécula de anticuerpo reemplazando las cadenas laterales de aminoácido grande con las más pequeñas (por ejemplo alanina o treonina) . Esto proporciona un mecanismo para aumentar el rendimiento del heterodímero por sobre los productos finales no deseados tales como homodímeros . Los anticuerpos biespecíficos incluyen anticuerpos de entrecruzamiento o "heteroconjugados" . Por ejemplo, uno de los anticuerpos en el heteroconjugado se puede acoplar a avidina, el otro a biotina. Se han propuesto dichos anticuerpos, por ejemplo, para apuntar a las células del sistema inmunológico para células no deseadas (Patente de los E.U.A. No. 4,676,980), y para el tratamiento de la infección de HIV (WO 91/00360, WO 92/200373, y EP 03089). Los anticuerpos heteroconjugados se pueden hacer con cualquier método de entrecruzamiento conveniente. Los agentes de entrecruzamiento apropiados se conocen bien en la técnica, y se describen en la Patente de los E.U.A. No. 4,676,980, junto con un número de técnicas de entrecruzamiento. Las técnicas para generar los anticuerpos biespecíficos de los fragmentos de anticuerpo también se han descrito en la literatura. Por ejemplo, los anticuerpos biespecíficos se pueden preparar utilizando la unión química. Brennan et al . , Science, 229:81 (1985) describe un procedimiento en el cual anticuerpos intactos se parten proteolíticamente para generar fragmentos de F(ab')2. Estos fragmentos se reducen en presencia del agente complejante de ditiol arsenito de sodio para estabilizar los ditioles vecinales y evitar la formación de disulfuro intermolecular. Los fragmentos de Fab' generados luego se convierten a derivados de tionitrobenzoato (TNB) . Uno de los derivados de Fab' -TNB luego se reconvierte a Fab' -tiol a través de la reducción con mercaptoetilamina y se mezcla con una cantidad equimolar del otro derivado de Fab' -TNB para formar el anticuerpo biespecífico. Los anticuerpos biespecíficos producidos se pueden utilizar como agentes para la inmovilización selectiva de las enzimas. El reciente avance ha facilitado la recuperación directa de los fragmentos Fab'-SH de E . coli , que puede acoplarse químicamente para formar anticuerpos biespecíficos . Shalaby et al . , J. Exp . Med . , 175:217-225 (1992) describe la producción de una molécula F(ab')2 del anticuerpo biespecífico totalmente humanizado. Cada fragmento Fab' se secretó por separado de E. coli y se sometió al acoplamiento químico dirigido in vi tro para formar el anticuerpo biespecífico. El anticuerpo biespecífico formado de este modo pudo unirse a las células que sobre expresan el receptor de HER2 y las células T humanas normales, como así también dispara la actividad lítica de los linfocitos citotóxicos humanos contra los blancos del tumor de pecho humano. También se han descrito varias técnicas para hacer y aislar fragmentos biespecíficos de anticuerpos directamente del cultivo de la célula recombinante. Por ejemplo, los anticuerpos biespecíficos se han producido usando zippers de leucina. Kostelny et al . , J. Inmunol . , 148(5) :47-53 (1992). Los péptidos del zipper de leucina de las proteínas Fos y Jun se conectaron a las porciones Fab' de dos anticuerpos diferentes por fusión de genes. Los homodímeros de anticuerpo se redujeron en la región bisagra para formar los monómeros y luego se re-oxidaron para formar los heterodímeros de anticuerpo. También se puede utilizar este método para la producción de homodímeros de anticuerpos. La tecnología de "anticuerpo biespecífico" descrita por Hollinger et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993) ha proporcionado un mecanismo alternativo para hacer fragmentos de anticuerpo biespecíficos . Los fragmentos comprenden un dominio variable (VH) de cadena pesada conectado a un dominio variable (VL) de cadena liviana a través de una unión que es demasiado corta para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena. En consecuencia, los dominios VH y VL de un fragmento son obligados a aparearse con los dominios VL y VH complementarios de otro fragmento, formando así los sitios de unión de dos antígenos. Se ha informado también otra estrategia para hacer fragmentos biespecíficos de anticuerpo a través del uso de dímeros de cadena de Fv (sFv) simples. Remítase a Gruber et al . , J. Inmunol . , 2:5368 (1994). Los anticuerpos con más de dos valencias se contemplan. Por ejemplo, se pueden preparar anticuerpos triespecíficos . Tutt et al . , J. Inmunol . 147:60 (1991). (vii ) Otras modi fi caciones de secuencia de aminoácidos La(s) modificación (es) de las secuencias de aminoácido de los anticuerpos descritos en la presente se contemplan. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/u otras propiedades biológicas del anticuerpo. Las variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo se preparan a través de la introducción de cambios de nucleótidos apropiados al ácido nucleico del anticuerpo, o a través de la síntesis del péptido. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, eliminaciones de, y/o introducciones de y/o sustituciones de, residuos dentro de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo. Cualquier combinación de eliminación, introducción, y sustitución se hace para llegar a la construcción final, siempre que la construcción final tenga las características deseadas. Los cambios de aminoácido también pueden alterar los procesos post-traduccionales del anticuerpo, tales como cambio de número o posición de sitios de glicosilación. Un método útil para la identificación de ciertos residuos o regiones del anticuerpo que son ubicaciones preferidas para la mutagénesis se denomina "mutagénesis de barrido de alanina" según se describe por Cunningham y Wells Sci ence, 244:81-85 (1989). Aquí, se identifica un residuo o grupo de residuos blanco (por ejemplo, los residuos cargados tales como arg, asp, his, lis y glu) y se reemplazan por un aminoácido neutro o cargado negativamente (más preferentemente alanina o polialanina) para afectar la interacción de los aminoácidos con el antígeno. Estas ubicaciones de aminoácidos que demuestran sensibilidad funcional a las sustituciones luego se refinan a través de la introducción de más u otras variantes de, o para, los sitios de sustitución. En consecuencia, mientras que el sitio para introducir una variación de secuencia de aminoácido se predetermina, la naturaleza de la mutación en si no necesita ser predeterminada. Por ejemplo, para analizar el rendimiento de una mutación en un lugar determinado, el barrido de ala o la mutagénesis aleatoria se lleva a cabo en el codon o la región buscados y las variantes de anticuerpos expresadas se seleccionan para determinar la actividad deseada. Las introducciones de secuencia de aminoácido incluyen fusiones amino- y/o carboxilo-terminales que oscilan en longitud entre un residuo hasta polipéptidos que contienen cien o más residuos, así como también las introducciones de intrasecuencia de residuos de aminoácidos únicos o múltiples. Los ejemplos de introducciones terminales incluyen un anticuerpo con un residuo metionilo N-terminal o el anticuerpo fusionado a un polipéptido citotóxico. Otras variantes insercionales de la molécula del anticuerpo incluyen la fusión a los extremos N- o C-terminales del anticuerpo de una enzima, o un polipéptido que aumenta la vida media sérica del anticuerpo . Otro tipo de variante es una variante de sustitución de aminoácido. Estas variantes tienen al menos un residuo de aminoácido en la molécula anticuerpo reemplazada por un residuo diferente. Los sitios de mayor interés para la mutagénesis sustitucional de los anticuerpos del anticuerpo incluyen las regiones hipervariables, pero las alteraciones FR también se contemplan. Se muestran sustituciones conservativas en la Tabla 1 bajo el encabezamiento "sustituciones preferidas". Si dichas sustituciones dan como resultado un cambio en la actividad biológica entonces se pueden introducir cambios más importantes, denominados "sustituciones ejemplificativas" en Tabla 1, o según se describe más detalladamente en la referencia a las clases de aminoácido, y seleccionar los productos. Tabla 1 Las modificaciones importantes en las propiedades biológicas del anticuerpo se logran a través de la selección de las sustituciones que difieren de manera significativa en su efecto en el mantenimiento de (a) la estructura de la cadena principal del polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo, como conformación de lámina plegada o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio blanco, o (c) el volumen de la cadena lateral . Los aminoácidos pueden agruparse de acuerdo con las similitudes en las propiedades de sus cadenas laterales (en A. L. Lehninger, in Biochemi s try, segunda ed., págs. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)): (1) no-polar: Ala (A), Val (V), Leu (L) , He (I), Pro (P) , Phe (F) , Trp (W) , Met (M) (2) polar no cargado: Gly (G) , Ser (S) , Thr (T) , Cys (C) , Tyr (Y) , Asn (N) , Gln (Q) (3) acídico: Asp (D) , Glu (E) (4) básico: Lys (K) , Arg (R) , His (H) Alternativamente, los residuos que se producen de forma natural, se pueden dividir en grupos basados en las propiedades de sus cadenas laterales comunes: (1) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lie; (2) hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) acídico: Asp, Glu; (4) básico: His, Lys, Arg; (5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; (6) aromático: Trp, Tyr, Phe. Las sustituciones no conservadoras involucrarán el intercambio de un miembro de una de estas clases por otra clase. Cualquier residuo de cisteína no involucrado en el mantenimiento de la conformación apropiada del anticuerpo también se puede sustituir, generalmente con serina, para mejorar la estabilidad oxidativa de la molécula y prevenir el entrecruzamiento aberrante. A la inversa, la(s) unión (es) de cisteína se puede (n) agregar al anticuerpo para mejorar su estabilidad (particularmente cuando el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fv) . Un tipo particularmente preferido de variante sustitucional involucra la sustitución de uno o más residuos de región hipervariable de un anticuerpo progenitor. Generalmente, la(s) variante (s) resultante (s) selecionada (s) para desarrollo posterior tendrá (n) propiedades biológicas mejoradas con relación al anticuerpo progenitor a partir del cual fueron generados. Una forma conveniente para generar dichas variantes sustitucionales en la maduración por afinidad utilizando el despliegue de fagos. Brevemente, varios sitios de región hipervariable (por ejemplo sitios 6-7) se mutan para generar todas las sustituciones de amino posible en cada sitio. Las variantes de anticuerpo que se generan en consecuencia se muestran de una forma monovalente a partir de las partículas del fago filamentoso como fusiones al producto del gen III de MI3 envasado dentro de la partícula. Las variantes desplegadas en fagos luego se seleccionan para obtener su actividad biológica (por ejemplo afinidad de unión) según se describe en la presente. Para identificar los sitios de región hipervariable candidatos para la modificación, se puede realizar la mutagénesis de barrido de alanina para identificar los residuos de región hipervariable que contribuyen significativamente al antígeno de unión. De manera alternativa, o de forma adicional, puede ser beneficioso para analizar una estructura de cristal del complejo del anfígeno-anticuerpo para identificar los puntos de contacto entre el anticuerpo y antígeno. Dichos residuos de contacto y residuos vecinos son candidatos para la sustitución de acuerdo con las técnicas elaboradas en la presente. Una vez que se generan dichas variantes, el panel de variantes se somete a examen según se describe en la presente y los anticuerpos con propiedades superiores en uno o más ensayos relevantes se pueden seleccionar para mayor desarrollo. Otro tipo de variante de aminoácido del anticuerpo altera el patrón de la glicosilación original del anticuerpo. Dicha alteración incluye la eliminación de uno o más restos de carbohidrato encontrados en el anticuerpo, y/o el agregado de uno o más sitios de glicosilación que no están presentes en el anticuerpo. La glicosilación de anticuerpos es típicamente de unión a N o de unión a O. De unión a N se refiere a unir el resto de carbohidrato a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Las secuencias tripeptídicas asparagina-X-serina y asparagina-xtreonina, en las cuales X es cualquier aminoácido salvo prolina, son las secuencias de reconocimiento para el agregado enzimático del resto de carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. En consecuencia, la presencia de cualquiera de estas secuencias tripeptídicas en un polipéptido crea un sitio de glicosilación potencial. La glicosilación de unión a O se refiere a la unión de uno de los azúcares Nacetilgalactosamina, galactosa o xilosa a un hidroxiaminoácido, más comúnmente serina o treonina, a pesar de que 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina también se pueden utilizar. El agregado de sitios de glicosilación al anticuerpo se logra convenientemente alterando la secuencia de aminoácidos de manera tal que contenga una o más de las secuencias tripeptídicas anteriormente descritas (para los sitios de glicosilación de unión N) . La alteración también se puede hacer a través del agregado de, o la sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia del anticuerpo original (para los sitios de glicosilación de unión a O) . Cuando el anticuerpo comprende una región Fe, el carbohidrato unido a la misma se puede alterar. Por ejemplo, los anticuerpos con una estructura de carbohidrato maduro que no tiene una fucosa unida a una región Fe del anticuerpo se describe en la Solicitud de Patente de EE.UU. No US 2003/0157108 al Presta, L. Ver además US 2004/0093621 al (Kyowa Hakko Kogyo Co . , Ltd). Los anticuerpos con una N-acetilglucosamina (GlcNAc) de bisección en el carbohidrato unido a una región Fe del anticuerpo se mencionan en la WO03/011878, Jean-Mairet et al . , y Patente de los E.U.A. No. 6,602,684, Umana et al . , Los anticuerpos con al menos un residuo de galactosa en el oligosacarido adjunto a una región Fe del anticuerpo se informan en la WO97/30087, Patel et al . , Ver, además, W098/58964 (Raju, S.) y W099/22764 (Raju, S.) con respecto a los anticuerpos con carbohidrato alterado unido a la región Fe de los mismos. Es probable que sea deseable modificar el anticuerpo de la invención con respecto a la función efectora, por ejemplo para mejorar la citotoxicidad mediada por células dependientes del antígeno (ADCC) y/o la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) del anticuerpo. Esto se puede lograr a través de la introducción de una o más sustituciones de aminoácidos en una región Fe del anticuerpo. De manera alternativa o de forma adicional, el (los) residuo (s) de cisteína se pueden introducir en la región Fe, y permitir en consecuencia la formación de la unión disulfuro intercatenaria en esta región. El anticuerpo homodimérico que se genera de este modo, puede tener una capacidad de internalización mejorada y/o la destrucción aumentada de las células mediadas por el complemento y citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) . Ver Carón et al . , J. Exp Med . 176:1191-1195 (1992) y Shopes, B . J. Inmunol . 148:2918-2922 (1992). Los anticuerpos homodiméricos con actividad mejorada antitumoral también se pueden preparar usando agentes de entrecruzamiento heterobifuncionales según se describen en Wolff et al . , Cáncer Research 53:60-65 (1993) . De manera alternativa, se puede diseflar a través de la ingeniería anticuerpos que tienen regiones Fe duales y por lo tanto pueden tener lisis complementaria mejorada y capacidades de ADCC. Ver Stevenson et al . , Drugs anti -cancer Design 3:219-2 (1989) . El documento WOOO/42072 (Presta, L.) describe anticuerpos con función de ADCC mejorada en presencia de células efectoras humanas, en la cual los anticuerpos comprenden sustituciones de aminoácido en la región Fe del mismo. Preferentemente, el anticuerpo con ADCC mejorada comprende sustituciones en las posiciones 298, 333, y/o 334 de la región Fe. Preferentemente la región Fe alterada es una región Fe de IgGI humana que comprende o esta compuesta de sustituciones en una, dos o tres de estas posiciones. Los anticuerpos con unión a Clq alterada y/o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) se describen en W099/51642, Patente de los E.U.A. No. 6,194,551B1, Patente de los E.U.A. No. 6,242,195B1, Patente de los E.U.A. No. 6,528,624Bl y Patente de los E.U.A. No. 6,538,124 (Idusogie et al . ) . Los anticuerpos comprenden una sustitución de aminoácido en una o más posiciones de aminoácido 270, 322, 326, 327, 329, 313, 333 y/o 334 de la región Fe del mismo. Para aumentar la vida media sérica del anticuerpo, se puede incorporar un epítope de unión al receptor de salvataje en el anticuerpo (especialmente un fragmento de anticuerpo) según se describe en Patente de los E.U.A. No. 5,739,277, por ejemplo. Según se utiliza en la presente, el término "epítope de unión de receptor de salvataje" se refiere a un epítope de la región Fe de una molécula de IgG (por ejemplo, IgG^ IgG2, IgG3 o IgG4) que es responsable del aumento de la vida media sérica in vi vo de la molécula de IgG. Los anticuerpos con sustituciones en una región Fe del mismo y vidas medias séricas aumentadas también se describen en WOOO/42072 (Presta, L.). Estos anticuerpos comprenden una región Fe con una o más sustituciones en la misma que mejoran la unión de la región Fe al FcRn. Por ejemplo, la región Fe puede tener sustituciones en una o más de las posiciones 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 o 434. La variante del anticuerpo que comprende la región Fe preferida con unión de FcRn mejorada comprende sustituciones de aminoácidos en una, dos o tres de las posiciones 307, 380 y 434 de la región Fe región de la misma. Los anticuerpos disefiados por ingeniería de tres o más (preferentemente cuatro) sitios de unión a antígenos funcionales también se contemplan (Solicitud estadounidense No. US2002/0004587 Al, Miller et al . ) . Las moléculas de ácido nucleico que codifican las variantes de la secuencia de aminoácido del anticuerpo se preparan por una variedad de métodos conocidos en la técnica. Estos métodos incluyen, pero sin limitación, aislamiento de una fuente natural (en el caso de las variantes de secuencias de aminoácido que ocurren naturalmente) o la preparación a través de la mutagénesis mediada por oligonucleótidos (o de sitio dirigido) , mutagénesis por PCR y mutagénesis de cásete de una variante preparada anteriormente o una versión no variante del anticuerpo. (viii ) Selección de anticuerpos con las propi edades deseadas Anteriormente se han descrito técnicas para generar anticuerpos. Además se pueden seleccionar anticuerpos con ciertas características biológicas, según se desee. Para identificar un anticuerpo que bloquea la activación del ligando de un receptor HER, se puede determinar la capacidad del anticuerpo para bloquear la unión del ligando HER a células que expresan el receptor HER (por ejemplo, en conjugación con otro receptor HER con el cual el receptor HER de interés forma un hetero-oligómero HER) . Por ejemplo, células que expresan en forma natural, o transfectadas para expresar, receptores HER del hetero-oligómero HER se pueden incubar con el anticuerpo y luego exponerse al ligando HER marcado. Luego se puede evaluar la capacidad del anticuerpo para bloquear la unión del ligando al receptor HER en el hetero-oligomero HER. Por ejemplo, la inhibición de la unión de HRG a las líneas celulares del tumor de pecho MCF7 por anticuerpos de HER2 se puede llevar a cabo utilizando cultivos de MCF7 monocapas sobre hielo en un formato de placa de 24 pocilios esencialmente según se describe en WO01/00245. Los anticuerpos de HER2 monoclonales se pueden agregar a cada pocilio e incubarse durante 30 minutos. Luego se puede agregar el rHRG?1177.224 125I-marcado (25 pm) , y se puede continuar con la incubación durante 4 a 16 horas. Las curvas de respuesta de dosis se pueden preparar y se puede calcular el valor de IC50 para el anticuerpo de interés. En una realización, el anticuerpo que bloquea la activación del ligando de un receptor HER tendrá un IC50 para inhibir la unión de HRG a las células MCF7 en este ensayo de aproximadamente 50nM o menor, con mayor preferencia lOnM o menor. Cuando el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fab, el ICS0 para inhibir la unión de HRG a las células MCF7 en ese ensayo, puede ser, por ejemplo, de aproximadamente lOOnM o menor, con mayor preferencia 50nM o menor. Alternativamente, o de manera adicional, la capacidad de un anticuerpo para bloquear la fosforilación de tirosina estimulada por el ligando HER de un receptor HER presente en un hetero-oligómero HER se puede determinar. Por ejemplo, células que expresan de forma endógena los receptores HER o transfectadas para expresarlas se pueden incubar con el anticuerpo y luego ensayarse para la actividad de fosforilación de tirosina dependiente del ligando HER utilizando un monoclonal de fosfotirosina (el cual está opcionalmente conjugado con una marca detectable) . El ensayo de activación del receptor de quinasa descrito en la Patente de los E.U.A. No. 5,766,863 también esta disponible para determinar la activación del receptor HER y bloquear esa actividad por un anticuerpo. En una realización, se puede seleccionar un anticuerpo que inhibe la estimulación por HRG de la fosforilación de pl80 tirosina en células MCF7 esencialmente según se describe en WO01/00245. Por ejemplo, las células MCF7 se pueden plaquear en placas de 24 pocilios y se pueden agregar anticuerpos monoclonales al HER2 a cada pocilio e incubarse durante 30 minutos a temperatura ambiente; luego se puede agregar rHRG/?1177.2,,4 a cada pocilio hasta una concentración final de 0.2 nM, y la incubación puede continuarse durante 8 minutos. Se pueden aspirar medios para cada pocilio, y las reacciones se pueden detener por el agregado de 100 pl de buffer de muestra de SDS (5% de SDS, 25 mM de DTT, y 25 mM de Tris- HCl, pH 6.8) . Cada muestra (25 µ l ) puede electroforearse sobre un gel de 4-12% de gradiente (Novex) y luego transferirse electroforéticamente a la membrana de difluoruro de polivinilideno. Se pueden desarrollar inmunotransferencias de antifosfotirosina (a 1 //g/ml), y la intensidad de la banda de reactivo predominante a M, -180,000 se puede cuantificar por densitometría de reflectancia. El anticuerpo selecionado, preferentemente, inhibirá de forma significativa la estimulación por HRG de la fosforilación de pl80 tirosina a aproximadamente 0-35% de control en este ensayo. Una curva de respuesta de dosis para la inhibición de la estimulación por HRG de la fosforilación de pl80 tirosina según lo determinado por densitometría de reflectancia se puede preparar y se puede calcular un IC50 para inhibir la estimulación por HRG de la fosforilación de pl80 tirosina en este ensayo de aproximadamente 50 nM o menor, con mayor preferencia lOnM o menor. Cuando el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fab, el IC50 para inhibir la estimulación por HRG de la fosforilación de pl80 tirosina en este ensayo puede, por ejemplo, ser aproximadamente lOOnM o menor, con mayor preferencia 50nM o menor . Además se pueden determinar los efectos inhibidores de crecimiento del anticuerpo sobre células MDA-MB-175 células, por ejemplo, esencialmente según se describe en Schaefer et al . , Oncogene 15:1385-1394 (1997) . De acuerdo con este ensayo, las células MDA-MB-175 se pueden tratar con un anticuerpo HER2 monoclonal (10 //g/ml) durante 4 días y teñirse con violeta cristal. La incubación con un anticuerpo HER2 puede mostrar un efecto inhibidor del crecimiento sobre esta línea celular similar a la exhibida por el anticuerpo 2C4 monoclonal . En otra realización, el HRG exógeno no revertirá significativamente esta inhibición. Con preferencia, el anticuerpo podrá inhibir la proliferación celular de las células MDA-MB-175 en mayor grado que el anticuerpo 4D5 monoclonal (y opcionalmente en un mayor grado que el anticuerpo 7F3 monoclonal), ambos en presencia y ausencia de HRG exógeno. En una realización, el anticuerpo HER2 de interés puede bloquear la asociación dependiente de heregulina de HER2 con HER3 en ambas células MCF7 y SK-BR-3 según lo determinado en un experimento de co-inmunoprecipitación tal como el descrito en WO01/00245 sustancialmente más eficaz que el anticuerpo 405 monoclonal, y con mayor preferencia, sustancialmente más eficaz que el anticuerpo 7F3 monoclonal . Para identificar los anticuerpos HER2 inhibidores del crecimiento, se pueden seleccionar anticuerpos que inhiban el crecimiento de células cancerígenas que sobreexpresan HER2. En una realización, el anticuerpo inhibidor del crecimiento de elección puede inhibir el crecimiento de las células SK-BR-3 en cultivo celular en aproximadamente 20-100% y preferentemente en aproximadamente 50-100% en una concentración de anticuerpo de aproximadamente 0.5 a 30 //g/ml. Para identificar tales anticuerpos, se puede llevar a cabo el ensayo SK-BR-3 descrito en la Patente de los E.U.A. No. No. 5,677,171. De acuerdo con este ensayo, las células SK-BR-3 se desarrollaron en una mezcla 1:1 de F12 y medio DMEM suplementado con 10% de suero bovino fetal, glutamina y penicilin estreptomicina. Las células SK-BR-3 se plaquean a 20.000 células en una placa de cultivo celular de 35mm (placa de 2mls/35mm) . Se agregó por placa 0.5 a 30 /g/ml del anticuerpo HER2. Después de 6 días, la cantidad de células, comparadas con las células no tratadas se contaron utilizando un contador celular COULTERJ electrónico. Esos anticuerpos que inhiben el crecimiento de las células SK-BR-3 en aproximadamente 20-100% o aproximadamente 50-100% se pueden seleccionar como anticuerpos inhibidores del crecimiento. Ver Patente de los E.U.A. No. 5,677,171 para ensayos para seleccionar anticuerpos inhibidores del crecimiento, tales como 4D5 y 3E8.

A fin de seleccionar anticuerpos que inducen la apoptosis, se dispone de un ensayo de unión de anexina utilizando células BT474. Las células BT474 se cultivan y se siembran en placas según se mencionó en el párrafo anterior. El medio luego se remueve y se reemplaza con medio fresco sólo o medio que contiene 10 µ g del anticuerpo monoclonal . A continuación de un período de incubación de tres días, las monocapas se lavaron con PBS y se separaron por tripsinización . Luego las células se centrifugaron, se suspendieron nuevamente en un buffer de unión Ca2+ y se dividieron en alícuotas en viales según se mencionó anteriormente para el ensayo de muerte celular. Luego los viales reciben anexina marcada (por ejemplo, V-FTIC de anexina) (1 //g/ml) . Las muestras se pueden analizar utilizando un citometro de flujo FACSCANJ y software FACSCONVERTJ CellQuest (Becton Dickinson) . Esos anticuerpos que inducen niveles estadísticamente significativos de unión de anexina con relación al control, se seleccionan como anticuerpos de inducción de apoptosis. Además del ensayo de unión de anexina, se dispone de un ensayo de tinción de ADN utilizando células BT474. Para llevar a cabo este ensayo, las células BT474 que han sido tratadas con el anticuerpo de interés según se describió en los dos párrafos anteriores se incubaron con 9 //g/ml de HOECHST 33342J durante 2 horas a 37 grados C, luego se analizaron sobre un citometro de flujo EPICS ELITEJ (Coulter Corporation) utilizando software MODFIT LTJ (Verity Software House) . Anticuerpos que inducen un cambio en el porcentaje de células apoptóticas el cual es 2 veces o más (y con preferencia 3 veces o más) que las células no tratadas (hasta 100% de células apoptóticas) se pueden seleccionar como anticuerpos pro-apoptóticos utilizando este ensayo. Ver W098/17797 para ensayos para selección de anticuerpos que inducen la apoptosis, tales como 7C2 y 7F3. Para seleccionar anticuerpos que se unen a un epítope sobre HER2 unido por un anticuerpo de interés, se puede llevar a cabo un ensayo de bloqueo cruzado de rutina tal como el descrito en Antijbodies, A Labora tory Manual , Cold Spring Harbor Labora tory, Ed Harlow y David Lañe (1988), para determinar si el anticuerpo entre bloquea la unión de un anticuerpo, tal como 2C4 o pertuzumab, al HER2. Alternativamente, o de manera adicional, la cartografía del epítope se puede realizar por métodos conocidos en la técnica y/o se puede estudiar la estructura anticuerpo-HER2 (Franklin et al . , Cáncer Cell 5:317-328 (2004)) para ver qué dominio o dominios de HER2 está o están unidos por el anticuerpo. (ix) Composiciones de Pertuzumab En una realización de una composición de anticuerpo HER2 , la composición comprende una mezcla de un anticuerpo de pertuzumab de la especie principal y una o más variantes de la misma. La realización preferida de un anticuerpo de la especie principal de pertuzumab es una que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada variable y cadena liviana variable en las SECs ID Nos . 3 y 4 , y con mayor preferencia que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena liviana SEC ID No. 13 y 17, y una secuencia de aminoácidos de cadena pesada selecionada de SEC ID No. 14 y 18 (incluyendo variantes desaminadas y/u oxidadas de esas secuencias) . En una realización, la composición comprende una mezcla del anticuerpo de pertuzumab de especie principal y una variante de secuencia de aminoácidos de la misma que comprende una extensión lider aminoterminal . Con preferencia, la extensión lider amino-terminal esta sobre una cadena liviana de la variante de anticuerpo (por ejemplo sobre una o dos cadenas livianas de la variante de anticuerpo) . El anticuerpo HER2 de especie principal o la variante del anticuerpo puede ser un anticuerpo de longitud completa o fragmento de anticuerpo (por ejemplo Fab de F(ab=)2 fragmentos), pero con preferencia son anticuerpos de longitud completa. La variante del anticuerpo puede comprender una extensión lider amino-terminal sobre cualquiera de una o más de las cadenas pesadas o livianas de la misma. Preferentemente, la extensión lider amino-terminal está sobre una o dos cadenas livianas del anticuerpo. La extensión lider aminoterminal comprende preferentemente o consiste de VHS- . La presencia de la extensión lider amino-terminal en la composición puede detectarse por varias técnicas analíticas incluyendo, pero sin limitarse a, análisis de secuencia N-terminal, ensayo para heterogeneidad de carga (por ejemplo, cromatografía de intercambio catiónico o electrofóresis de zona capilar) , espectrometría de masa, etc. La cantidad de variante del anticuerpo en la composición, en general varía de una cantidad que constituye el límite de detección de cualquier ensayo (preferentemente análisis de secuencia de N-terminal) utilizado para detectar la variante a una cantidad inferior a la cantidad del anticuerpo de especie principal. En general, casi el 20% o menor (por ejemplo, de aproximadamente 1% a aproximadamente 15%, por ejemplo de 5% a aproximadamente 15%) de las moléculas del anticuerpo en la composición comprenden una extensión lider amino-terminal. Tales cantidades de porcentaje están determinadas preferentemente utilizando análisis de secuencia N-terminal o análisis de intercambio catiónico (preferentemente utilizando una columna de alta resolución, de intercambio catiónico débil, tal como columna de intercambio cationico PROPAC WCX-10J) . Además de la variante de extensión líder amino-terminal se contemplan otras alteraciones de secuencia de aminoácidos del anticuerpo de especie principal y/o variante, incluyendo pero sin limitarse a un anticuerpo que comprende un residuo de lisina C-terminal sobre una o ambas cadenas pesadas de la misma, una variante de anticuerpo desaminada, etc. Más aún, el anticuerpo de especie principal o variante además puede comprender variaciones de glicosilación, ejemplos no limitantes de los cuales incluye un anticuerpo que comprende una estructura oligosacárida Gl o G2 unida a la región Fe del mismo, un anticuerpo que comprende un resto de carbohidrato unido a una cadena liviana del mismo (por ejemplo, uno o dos restos de carbohidratos, tal como glucosa o galactosa, unidos a una o dos cadenas livianas del anticuerpo, por ejemplo unidos a uno o más residuos de lisina), un anticuerpo que comprende una o dos cadenas pesadas glicosiladas, o un anticuerpo que comprende un oligosacárido sialidado unido a una o dos cadenas pesadas del mismo, etc. La composición puede recuperarse a partir de una línea celular disefiada genéticamente, por ejemplo línea celular de ovario de hámster chino (CHO) que expresa el anticuerpo HER2 , o se puede preparar por síntesis peptídica. (x) Immunoconjugados La invención además pertenece a inmunoconjugados que comprenden un anticuerpo conjugado para un agente citotóxico tal como un agente quimioterapéutico, toxina (por ejemplo, una toxina de molécula pequeña o una toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano, fúngico, vegetal o animal, incluyendo fragmentos y/o variantes de la misma) , o un isótopo radioactivo (es decir, un radioconjugado) . Los agentes quimioterapéuticos útiles en la generación de tales inmunocon ugados se han descrito anteriormente. Los conjugados de un anticuerpo y una o más toxinas de moléculas pequeñas, tales como una caliqueamicina, una maytansina (Patente de los E.U.A. No. 5,208,020), un tricoteno, y CC1065 también se contemplan en la presente. En una realización preferida de la invención, el anticuerpo se conjuga para una o más moléculas de maytansina (por ejemplo aproximadamente 1 a aproximadamente 10 moléculas maytansina por molécula de anticuerpo) . La maytansina puede, por ejemplo, convertirse en May-SS-Me la cual puede reducirse a May-SH3 y hacerse reaccionar con el anticuerpo modificado (Chari et al . , Cáncer Research 52: 127-1 31 (1992)) para generar un inmunoconjugado maytansinoide-anticuerpo. Otro inmunoconjugado de interés comprende un anticuerpo conjugado para una o más moléculas de caliqueamicina. La familia de caliqueamicina de antibióticos es capaz de producir rupturas de ADN de doble hebra a concentraciones subpicomolares . Análogos estructurales de caliqueamicina los cuales se pueden utilizar incluyen, pero sin limitarse a, y 11 , o 12 , a 12 , N-acetil- ? , PSAG y ?11 (Hinman et al . , Cáncer Research 53:3336-3342 (1993) y Lode et al . , Cáncer Research 58:2925-2928 (1998)). Ver, además, Patentes de los E.U.A.

Nos. 5,714,586; 5,712,374; 5,264,586; y 5,773,001 incorporadas expresamente a la presente como referencia. Las toxinas enzimáticamente activas y sus fragmentos que se pueden utilizar incluyen cadena A de difteria, fragmentos activos sin unión de toxina de difteria, cadena A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa) , cadena A de ricina, cadena A de abrina, cadena A de modeccin, alfa-sarcin, proteínas Aleurites fordii, proteínas de diantína, proteínas de Phytolaca ameri cana (PAPI, PAPII, y PAP-S), inhibidor de momordica charantia, curcin, crotin, inhibidor de sapaonaria officinalis, gelonin, mitogellin, restrictocin, fenomicin, enomicin y los tricotecenos . Ver, por ejemplo, WO 93/21232 publicada el 28 de octubre, 1993.

La presente invención además contempla un inmunocon ugado formado entre un anticuerpo y un compuesto con actividad nucleolítica (por ejemplo, una ribonucleasa o una ADN endonucleasa tal como una deoxiribonucleasa, Dnasa) . Una variedad de isótopos radioactivos están disponibles para la producción de anticuerpos HER2 radioconjugados . Ejemplos incluyen At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 e isótopos radioactivos de Lu Conjugados del anticuerpo y el agente citotóxico se pueden producir utilizando una variedad de agentes de acoplamiento de proteína bifuncional tal como N-succ?n?m?d?l-3- (2-p?r?d?ld?t?ol) propionato (SPDP), succ?n?m?d?l-4 - (N-maleimidometil) c?clohexano-1-carboxilato, ímmotiolano (IT) , derivados bifuncionales de ímidoesteres (tales como dimetil adipimidato HCL) , esteres activos (tales como disuccinimidil suberato) , aldehidos (tal como glutaraldehido) , compuestos de bis-azido (tal como bis (p-azidobenzoil) hexanodíamina) , derivados de bis-diazonio (tal como bis- (pdiazoniobenzoil) -etilendia ma) , dusocianatos (tal como tolieno 2 , 6-d??soc?anato) , y compuestos de flúor bis-activo (tal como 1 , 5-d?fluoro-2 , 4-dm?trobenceno) .

Por ejemplo, una mmunotoxina de nema se puede preparar según se describe en Vitetta et al . , Science 238:1098 (1987) . El ácido 1- isotiocianatobencil-3 -metildietilen triaminapentaacetico carbono- 14 -marcado (MX-DTPA) es un agente quelante ejemplificativo para la conjugación del radionucleótido al anticuerpo. Ver WO94/11026. El conector puede ser un "conector escindible" que facilita la liberación del fármaco citotóxico en la célula. Por ejemplo, se puede utilizar un conector lábil de ácido, conector sensible a la peptidasa, conector de dimetilo o conector que contiene disulfuro (Chari et al . , Cáncer Research 52:127-131 (1992)). Alternativamente, se puede producir una proteína de fusión que comprende el anticuerpo y el agente citotóxico, por ejemplo mediante técnicas recombinantes o síntesis peptídica. En la presente, se contemplan otros inmunoconjugados. Por ejemplo, el anticuerpo se puede conectar a uno de una variedad de polímeros no proteínaceos, por ejemplo, polietilén glicol, polipropilen glicol, polioxialquilenos, o copolimeros de polietilenglicol y polipropilenglicol. El anticuerpo además puede entramparse en microcápsulas preparadas, por ejemplo, por técnicas de coacervación o por polimerización interfacial (por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli-(metilmetacilato) , respectivamente) , en sistemas de administración de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nano-partículas y nanocápsulas) , o en macroemulsiones . Tales técnicas se revelan en Remington ' s Pharmaceu ti cal Sciences , 16° edición, Oslo, A., Ed., (1980). Los anticuerpos revelados en la presente además pueden formularse como inmunoliposomas. Los liposomas que contienen el anticuerpo se preparan mediante métodos conocidos en la técnica, tal como los descritos en Epstein et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA , 82:3688 (1985); Hwang et al . , Proc . Na ti Acad . Sci . USA , 77:4030 (1980); Patentes de los E.U.A. Nos. 4,485,045 y 4,544,545; y W097/38731 publicadas el 23 de octubre, 1997. Los liposomas con un tiempo de circulación mejorado se revelan en la Patente de los E.U.A. No. 5,013,556. Los liposomas particularmente útiles se pueden generar por el método de evaporación de fase reversa con una composición lípida que comprende fosfatidilcolina, colesterol y fosfatidiletanolamina derivatizada de PEG (PEG-PE) . Los liposomas se extruyen a través de filtros de tamaño de poro definido para dar liposomas con el diámetro deseado. Los fragmentos Fab' del anticuerpo de la presente invención se pueden conjugar para los liposomas según se describe en Martin et al . , J. Biol . Chem . 257:286-288 (1982) mediante una reacción de intercambio de disulfuro. Opcionalmente un agente quimioterapéutico puede estar contenido dentro del liposoma. Ver Gabizon et al . , J. National Cáncer Inst . 81(19) 1484 (1989) . III. Selección de pacientes para terapia En la presente el paciente esta opcionalmente sometido a un ensayo diagnóstico antes de la terapia. Por ejemplo, el ensayo diagnóstico puede evaluar la expresión HER (por ejemplo, HER2 o EGFR) (incluyendo sobre expresión) amplificación y/o activación (incluyendo fosforilación o dimerización) . En general, si se lleva a cabo un ensayo diagnóstico, se puede obtener una muestra de un paciente que necesita de la terapia. Si el paciente tiene cáncer, la muestra, en general, es una muestra de tumor. En la realización preferida, la muestra de tumor es de una muestra de tumor de cáncer de ovario, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, cáncer de mama metastásico (MBC) , cáncer de pulmón de células no microcíticas (NSCLC), cáncer de próstata, o cáncer colorrectal . Sin embargo, debe notarse que en la presente se describen otras indicaciones terapéuticas no malignas para anticuerpos HER. Si el paciente debe ser tratado para esas indicaciones no malignas, se puede obtener una muestra adecuada del paciente y someterla a un ensayo diagnóstico según se describe en la presente. La muestra biológica puede ser una muestra fija, por ejemplo, fija en formalina, una muestra incrustada en parafina (FFPE) , o una muestra congelada. De acuerdo con una realización de la invención, el paciente seleccionado para terapia tiene un tumor que muestra la activación de HER (y preferentemente HER2 ) . En una realización, la extensión de la activación de HER (o HER2 ) en células cancerígenas excede significativamente el nivel de activación de ese receptor en células no cancerosas del mismo tipo de tejido. Tal activación excesiva puede resultar de la sobre-expresión del receptor de HER y/o niveles mayores que los normales de un ligando HER disponible para activar el receptor de HER en las células cancerígenas. Tal activación excesiva puede causar y/o ser causada por el estado maligno de una célula cancerígena. En algunas realizaciones, el cáncer estará sujeto a un ensayo diagnóstico o pronóstico para determinar si la amplificación y/o la sobre expresión de un receptor de HER se esta produciendo lo que da por resultado una activación excesiva del receptor de HER. Alternativamente, o de manera adicional, el cáncer puede estar sujeto a un ensayo diagnóstico o pronóstico para determinar si la amplificación y/o sobre-expresión de un ligando HER se esta produciendo en el cáncer que atribuye a una activación excesiva del receptor. En un subconjunto de tales cánceres, la activación excesiva del receptor puede resultar de una trayectoria estimulante autócrina . A continuación se describirán varios ensayos para determinar la activación de HER en más detalle. (i ) Dímeros de HER Las muestras de tumor se pueden evaluar para la presencia de dímeros de HER, en la manera que indican la activación de HER o HER2. Cualquier método conocido en la técnica se puede utilizar para detectar dímeros de HER2 , tal como EGFR-HER2, HER2-HER3, en tumores. A continuación se describen varios métodos preferidos . Estos métodos detectan interacciones proteína-proteína no covalentes o indican, de otro modo, la proximidad entre proteínas de interés . Se pueden utilizar métodos basados en inmunoafinidad tal como inmunoprecipitación o ELISA, para detectar dímeros de HER. En una realización, se utilizan anticuerpos de HER2 para inmunoprecipitar complejos que comprenden HER2 de células tumorales, y el inmunoprecipitador resultante luego se sondea para la presencia de EGFR o HER3 por inmunotransferencia. En otra realización, se pueden utilizar anticuerpos EGFR o HER3 para el paso de inmunoprecipitación y el munoprecipitador luego se sondea con anticuerpos de HER2. En otra realización, los ligandos de HER específicos a complejos de EGFR, HER3 , EGFR/HER2 o complejos de HER2/HER3 se pueden utilizar para precipitar complejos, los cuales luego se sondean para la presencia de HER2. Por ejemplo, los ligandos se pueden conjugar para avid y complejos purificados sobre una columna de biot a . En otras realizaciones, tal como ELISA o ensayos de tipo "sandwich" del anticuerpo, los anticuerpos para HER2 se inmovilizan sobre un soporte sólido, contactado con células tumorales o lisado de célula tumoral, se lavan y luego se exponen al anticuerpo contra EGFR o HER3. La unión del último anticuerpo, el cual puede detectarse directamente o por un anticuerpo secundario conjugado para una marca detectable, indica la presencia de heterodímeros. En ciertas realizaciones, el anticuerpo de EGFR o HER3 se inmoviliza, y el anticuerpo HER2 se utiliza para el paso de detección. En otras realizaciones, los ligandos HER se pueden utilizar en lugar de, o en combinación con anticuerpos HER. El entrecruzamiento UV o químico además se puede utilizar para unir covalentemente dímeros sobre la superficie de células vivas. "Hunter et al . , Biochem . J. , 320:847-53. Ejemplos de entrecruzamientos químicos incluyen ditiobis (succinimidil) propionato (DSP) y 3,3-ditiobis (sulfosuccinimidil ) propionato (DTSSP) . En una realización, los extractos celulares de las células tumorales entrecruzadas químicamente se analizan mediante SDS-PAGE y se inmunotransfieren con anticuerpos para EGFR y/o HER3. Una banda supercambiada del peso molecular apropiado probablemente representa dímeros de EGFR-HER2 o HER2-HER3, ya que HER2 es el acompafiante de dimerización preferido para EGFR y HER3. Este resultado puede confirmarse por inmunotransferencia subsiguiente con anticuerpos de HER2. La transferencia de energía de fluorescencia resonante (FRET) además se puede utilizar para detectar los dímeros EGFR-HER2 o HER2-HER3. FRET detecta los cambios conformacionales de la proteína y las interacciones proteína-proteína in vivo e in vi tro basadas en la transferencia de energía de un fluoroforo donante a un fluoroforo aceptante. Selvin, Na t . Struct . Biol . 7:730-34 (2000) . La transferencia de energía tiene lugar solo si el fluoróforo donante esta en suficiente proximidad al fluoróforo aceptante. En un experimento FRET típico, dos proteínas o dos sitios sobre una única proteína se marcan con diferentes sondas fluorescentes. Una de las sondas, la sonda donante, se excita a un estado de energía superior mediante luz incidente de una longitud de onda especificada. La sonda donante luego transmite su energía a la segunda sonda, la sonda aceptante, dando por resultado una reducción en la intensidad de fluorescencia del donante y un incremento en la emisión de fluorescencia del aceptante. Para medir la extensión de la transferencia de energía, se compara la intensidad del donante en una muestra marcada con sondas donantes y aceptantes con su intensidad en una muestra marcada con una sonda donante únicamente. Opcionalmente, la intensidad del aceptante se compara en muestras donante/aceptante y aceptante solamente. En la técnica se conocen las sondas adecuadas e incluyen, por ejemplo, colorantes permeables de membrana, tal como fluoresceina y rodamina, colorantes orgánicos, tal como colorantes de cianina, y átomos de lantanida. Selvin, supra . Además se conocen en la técnica, los métodos y la instrumentación para detectar y medir la transferencia de energía. Selvin, supra . Las técnicas basadas en FRET adecuadas para detectar y medir las interacciones proteína-proteína en células individuales también son conocidas en la técnica. Por ejemplo, la microscopía de transferencia de energía de fluorescencia resonante fotoblanqueadora del donante (pbFRET) y la microscopía de imagen del período de vida de la fluorescencia (FLIM) se puede utilizar para detectar la dimerización de los receptores de superficie celular. Selvin, supra ; Gadella & Jovin, J. Cell Biol . , 129:1543-58 (1995). En una realización se utiliza la pbFRET sobre células "en suspensión" o " in si tu" para detectar y medir la formación de dímeros de EGFR-HER2 o HER2-HER3, según se describe en Nagy et al . , Cytometry, 32:120-131 (1998) . Estas técnicas miden la reducción en un período de vida de la fluorescencia del donante debido a la transferencia de energía. En una realización particular, se puede utilizar una técnica de FRET del tipo Foerster citométrica de flujo (FCET) para investigar la dimerización de EGFR-HER2 y HER2-HER3, según se describe en Nagy et al . , supra , y Brockhoff et al . , Cyfometry, 44:338-48 (2001). La FRET se utiliza preferentemente junto con técnicas de marcación inmunohistoquímicas estándar. Kenworthy, Methods , 24:289-96 (2001). Por ejemplo, los anticuerpos conjugados para colorantes fluorescentes adecuados se pueden utilizar como sondas para marcar dos proteínas diferentes. Si las proteínas están dentro de la proximidad una de otra, los colorantes fluorescentes actúan como donantes y aceptantes para FRET. La transferencia de energía se detecta por medios estándar. La transferencia de energía puede detectarse por medios citométricos de flujo o por sistemas microscópicos digitales, tales como microscopía confocal o microscopía de fluorescencia de campo amplio acoplada a una cámara de dispositivo acoplada de carga (CCD) . En una realización de la presente invención, los anticuerpos de HER2 y los anticuerpos de EGFR o HER3 se marcan directamente con dos fluoróforos diferentes, por ejemplo según se describe en Nagy et al , supra . Las células tumorales o los lisados celulares del tumor se ponen en contacto con los anticuerpos marcados diferencialmente, los cuales actúan como donantes y aceptantes para FRET en presencia de dímeros de EGFR-HER2 o HER2-HER3. Alternativamente, se utilizan anticuerpos no marcados contra HER2 y EGFR o HER3 junto con anticuerpos secundarios marcados diferencialmente que sirven como donantes y aceptantes. Ver, por ejemplo, Brockhoff et al . , supra . La transferencia de energía se detecta y la presencia de dímeros se determina si las marcas se encuentran próximas entre si. En otras realizaciones los ligandos del receptor de HER que son específicos para HER2 y HERÍ o HER3 se marcan con fluorescencia y se utilizan para estudios de FRET. Aún en otras realizaciones de la presente invención, la presencia de dímeros sobre la superficie de células tumorales se demuestra por la co-localización de HER2 con EGFR o HER3 utilizando técnicas de inmunofluorescencia directa o indirecta estándar y microscopía de barrido láser confocal. Alternativamente, la imagen por barrido de láser (LSI) se utiliza para detectar la unión al anticuerpo y la colocalización de HER2 con EGFR o HER3 en un formato de alta capacidad, tal como una placa de micropocillo, según se describe en Zuck et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA , 96:11122-27 (1999). En otras realizaciones, la presencia de dímeros de EGFR-HER2 y/o HER2-HER3 se determina identificando la actividad enzimática que depende de la proximidad de los componentes del dímero. Un anticuerpo HER2 se conjuga con una enzima y un anticuerpo de EGFR o HER3 se conjuga con una segunda enzima. Se agrega un primer sustrato para la primera enzima y la reacción produce un segundo sustrato para la segunda enzima. Esto conduce a una reacción con otra molécula para producir un compuesto detectable, tal como un colorante. La presencia de otro químico quiebra el segundo sustrato, de modo que se evita la reacción con la segunda enzima a menos que la primera y la segunda enzimas, y de este modo los dos anticuerpos, están muy próximos uno de otro. En una realización particular, las células tumorales o los lisados celulares se ponen en contacto con un anticuerpo HER2 que se conjuga con glucosa oxidasa y un anticuerpo HER3 o HERÍ que se conjuga con peroxidasa de rábano picante. Se agrega glucosa a la reacción, junto con un precursor de colorante, tal como DAB, y catalasa. La presencia de dímeros se determina mediante el desarrollo del color al cabo de la coloración para DAB. Además, los dímeros se pueden detectar utilizando métodos en base al sistema de ensayo eTag™ (Aclara Bio Sciences, Mountain View, CA) , según se describe, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Estadounidense 2001/0049105, publicada el 6 de diciembre de 2001, las cuales se incorporan expresamente a la presente como referencia en su totalidad. Un eTag™, o "etiqueta electroforética, " comprende un resto informante detectable, tal como un grupo fluorescente. Además puede comprender un "modificador de movilidad" , que consiste esencialmente en un resto que tiene una única movilidad electroforética . Estos restos permiten la separación y detección del eTag™ a partir de una mezcla compleja en condiciones electroforéticas definidas, tal como electrofóresis capilar (CE) . La porción del eTag™ que contiene el resto informante y, opcionalmente, el modificador de movilidad se conecta a un primer resto de unión al blanco mediante un grupo de conexión escindible para producir un primer compuesto de unión. El primer resto de unión al blanco reconoce específicamente un particular primer blanco, tal como un ácido nucleico o proteína. El primer resto de unión al blanco no esta limitado de ninguna manera, y puede ser por ejemplo, un polinucleótido o un polipéptido. Preferentemente, el primer resto de unión al blanco es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. Alternativamente, el primer resto de unión al blanco puede ser un ligando del receptor HER o su fragmento competente para la unión. El grupo conector preferentemente comprende un resto escindible, tal como un sustrato enzimático, o cualquier enlace químico que pueda escindirse en condiciones definidas. Cuando el primer resto de unión al blanco se une a su blanco, el agente de escisión se introduce y/o se activa, y el grupo conector se escinde, liberando de este modo la porción del eTag™ que contiene el resto informante y el modificador de movilidad. De este modo, la presente de un eTag™ "libre" indica la unión del resto de unión al blanco a su blanco. Preferentemente, un segundo compuesto de unión comprende el agente de escisión y un segundo resto de unión al blanco que reconoce específicamente un segundo blanco. El segundo resto de unión al blanco además no se limita de ninguna manera y puede ser, por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo o un ligando del receptor HER o un fragmento del ligando competente para la unión. El agente de escisión es tal que escindirá solo el grupo conector en el primer compuesto de unión si el primer compuesto de unión y el segundo compuesto de unión están en íntima proximidad. En una realización de la presente invención, un primer compuesto de unión comprende un eTag™ en el cual un anticuerpo para HER2 sirve como el primer resto de unión al blanco. Un segundo compuesto de unión comprende un anticuerpo para EGFR o HER3 unido a un agente de escisión capaz de escindir el grupo conector del eTag™. Preferentemente, el agente de escisión debe ser activado para poder escindir el grupo conector. Las células tumorales o lisados celulares se ponen en contacto con el eTag™, el cual se une a HER2 , y con el anticuerpo de EGFR o HER3 modificado, el cual se une a EGFR o HER3 sobre la superficie celular. El compuesto de unión no ligado se elimina, y el agente de escisión se activa, si fuera necesario. Si los dímeros de EGFR-HER2 o HER2-HER3 están presentes, el agente de escisión escindirá el grupo conector y liberará el eTag™ debido a la proximidad del agente de escisión al grupo conector. El eTag™ libre luego puede detectarse por cualquier método conocido en la técnica, tal como electrofóresis capilar. En una realización, el agente de escisión es una especie química activa que actúa sobre el grupo conector. Por ejemplo, el agente de escisión puede activarse por exposición de la muestra a la luz. En otra realización, el eTag™ se construye utilizando un anticuerpo para EGFR o HER3 como el primer resto de unión al blanco, y el segundo compuesto de unión se construye a partir de un anticuerpo para HER2. Aún en otra realización, el dímero de HER se detecta utilizando un anticuerpo u otro agente el cual se une específica o preferentemente al dímero en comparación con su unión a cualquier receptor HER en el dímero. (ii ) Fosforilación de HER2 La inmunoprecipitación con el anticuerpo EGFR, HER2 , o HER3 según se menciona en la sección anterior se puede seguir opcionalmente mediante un ensayo funcional para dímeros, como alternativa o complemento de la inmunotransferencia. En una realización, la inmunoprecipitación con el anticuerpo HER3 se sigue mediante un ensayo para la actividad de la tirosina quinasa del receptor en el inmunoprecipitador . Debido a que HER3 no tiene actividad intrínseca de tirosina quinasa, la presencia de la actividad de tirosina quinasa en el inmunoprecipitador indica que HER3 probablemente está asociado con HER2. Graus-Porta et al . , EMBO J. , 16:1647-55 (1997); Klapper et al . , Proc . Na ti . Acad. Sci . USA, 96:4995-5000 (1999). Este resultado se puede confirmar por inmunotransferencia con anticuerpos para HER2. En otra realización, la inmunoprecipitación con el anticuerpo HER2 se sigue mediante un ensayo para la actividad de tirosina quinasa del receptor EGFR. En este ensayo, el inmunoprecipitador se pone en contacto con el ATP radioactivo y un sustrato peptídico que imita el sitio in vivo de la transfosforilación de HER2 por EGFR. La fosforilación del péptido indica la co-inmunoprecipitación y de este modo la dimerización del EGFR con HER2. Los ensayos de actividad de la tirosina quinasa del receptor son bien conocidos en la técnica e incluyen ensayos que detectan la fosforilación de sustratos blanco, por ejemplo, por el anticuerpo de fosfotirosina, y la activación de las vías de transducción de serial cognitiva, tal como la trayectoria de MAPK. La fosforilación del receptor HER se puede determinar por la inmunoprecipitación de uno o más receptores HER, tal como el receptor HER, y el análisis de transferencia Western. Por ejemplo, la positividad esta determinada por la presencia de una banda fosfo-Her2 sobre el gel, utilizando un anticuerpo anti- fosfotirosina para detectar el o los residuos de tirosina fosforilados en el o los receptores HER inmunoprecipitados . Los anticuerpos de anti-fosfotirosina están disponibles en el comercio de PanVera (Madison, WI), una subsidiaria de Invitrogen, Chemicon International Inc. (Temecula, CA) , o Upstate Biotechnology (Lake Placid, NY) . La negatividad está determinada por la ausencia de la banda. En otra realización, la fosforilación del receptor HER2 (HER2) esta determinada por inmunohistoquímica utilizando un anticuerpo HER2 fosfo-específico (clon PN2A; Thor et al . , J. Clin . Oncol , 18 (18 ): 3230-3239 (2000)). Otros métodos para detectar la fosforilación del o de los receptores HER incluyen, pero sin estar limitados a, KIRA ELISA (Patentes de los E.U.A. Nos. 5,766,863; 5,891,650; ,914,237; 6,025,145; y 6,287,784), espectrometría de masa (comparando el tamaño de HER2 fosforilado y no-fosforilado) , y el ensayo de proximidad de e-tag con ambos, un anticuerpo HER (por ejemplo Her2) y un anticuerpo de fosfo-tirosina específico o fosfo-específico (por ejemplo usando el kit de ensayo de eTag™ disponible de Aclara BioSciences (Mountain View, CA) . Los detalles del ensayo de eTag se describieron anteriormente. Además se pueden utilizar anticuerpos fosfo-específicos en el alineamiento celular para detectar el estado de fosforilación en una muestra celular de la proteína de transducción de señal (US2003/0190689) . (i i i ) Perfi l de expresi ón géni ca En una realización, un análisis de expresión génica puede servir como un surrogado para medir la fosforilación o activación de HER directamente. Esto es particularmente útil cuando la muestra es una muestra fija (por ejemplo, una muestra de tumor fija de formalina, incrustada en parafina) donde la fosforilación de HER puede ser difícil de cuantificar confiablemente. De acuerdo con este método, se evalúa la expresión de dos o más receptores HER y uno o más ligandos HER en una muestra, donde la expresión de los dos o más receptores HER y uno o más ligandos de HER indica la fosforilación o activación de HER positiva en la muestra. En una realización de este método, se puede medir la expresión de betacelulina y/o amfiregulina en la muestra, donde la expresión de betacelulina y/o amfiregulina indica la fosforilación o activación de HER en la muestra. De acuerdo con este método, se ensaya una muestra del paciente para la expresión de dos o más receptores HER (preferentemente selecionados de EGFR, HER2 , y HER3 ) y uno o más ligandos HER (preferentemente selecionados de betacelulina, amfiregulina, epiregulina, y TGF-a, con mayor preferencia betacelulina o amfiregulina) . Por ejemplo, los dos o más receptores HER pueden ser EGFR y HER2 , o HER2 y HER3. Con preferencia, se determina la expresión de HER2 y EGFR o HER3 , como así también la betacelulina o amfiregulina. La muestra puede ensayarse para la expresión de betacelulina o amfiregulina solas, o en combinación con el ensayo para la expresión de dos o más receptores HER. La expresión positiva del gen o de los genes identificados indica que el paciente es candidato para la terapia con un anticuerpo HER, tal como pertuzumab. Más aún, la expresión positiva del o de los genes indica que el paciente, probablemente responda más favorablemente a la terapia con el anticuerpo HER que un paciente que no tiene tal expresión positiva. Varios métodos para determinar la expresión de ARNm o de la proteína incluyen, pero sin limitarse a, perfil de expresión génica, reacción en cadena de polimerasa (PCR) incluyen PCR de tiempo real cuantitativa (qRT-PCR) , análisis de microalineamiento, análisis serial de la expresión génica (SAGE) , MassARRAY, Análisis de Expresión Génica por Secuenciamiento de Señal Paralela Masivamente (MPSS) , proteómica, inmunohistoquímica (IHC) , etc. Con preferencia se cuantifica el ARNm. Tal análisis de ARNm se lleva a cabo preferentemente utilizando la técnica de reacción en cadena de polimerasa (PCR) , o análisis de microalineamiento. Cuando se emplea PCR, una forma preferida de PCR es la PCR de tiempo real cuantitativo (qRT-PCR) . En una realización, la expresión de uno o más de los genes mencionados anteriormente se considera expresión positiva si está en la media o antes, por ejemplo comparada con otras muestras del mismo tipo de tumor. El nivel de expresión medio puede determinarse esencialmente contemporáneamente con la medición de la expresión génica, o puede haberse determinado previamente . Varios métodos ejemplificativos para determinar la expresión génica. Los pasos de un protocolo representativo para perfilar la expresión génica utilizando tejidos incrustados en parafina, fijos como la fuente de ARN, incluyendo el asilamiento de ARNm, purificación, extensión y amplificación del cebador se muestran en varios artículos de diarios publicados (por ejemplo: Godfrey et al . , J. Molec . Diagnostics 2:84-91 (2000); Specht et al . , Am . J. Pathol . 158:419-29 (2001)). Brevemente, un proceso representativo se inicia con el corte de sección de aproximadamente 10 microgramos de espesor de muestras de tejido tumoral incrustado en parafina. Luego se extrae el ARN, y se eliminan la proteína y el ADN. Después del análisis de la concentración de ARN, se pueden incluir los pasos de reparación y/o amplificación de ARN, si fuera necesario, y el ARN se transcribe en reverso utilizando promotores específicos génicos seguidos de PCR. Finalmente, los datos se analizan para identificar la mejor opción de tratamiento disponible para el paciente sobre la base del patrón de expresión génica característico identificado en la muestra de tumor examinada. (iv) Expresión y Amplificación de HER Para determinar la expresión o amplificación de HER en el cáncer, se dispone de varios ensayos diagnósticos/pronósticos. En una realización, la sobre expresión de HER puede analizarse por IHC, por ejemplo utilizando el HERCEPTEST® (Dako). Las secciones de tejido incrustadas en parafina de una biopsia de tumor se pueden someter al ensayo de IHC y de acuerdo con los siguientes criterios de intensidad de coloración de la proteína de HER2 : Puntaje 0 no se observa coloración o se observa coloración de membrana en menos del 10% de las células tumorales . Puntaje 1+ una coloración de membrana escasamente perceptible se detecta en más del 10% de las células tumorales . Las células solo se colorean en parte de su membrana . Puntaje 2+ una coloración de membrana completa de débil a moderada en más del 10% de las células tumorales. Puntaje 3+ una coloración de membrana completa de moderada a fuerte en más del 10% de las células tumorales . Esos tumores con puntajes de 0 o 1+ para la determinación de la sobre expresión de HER2 se pueden caracterizar como que no sobre expresan HER2 , por lo que esos tumores con puntajes de 2+ o 3+ se pueden caracterizar como que sobre expresan HER2. Los tumores que sobreexpresan HER2 se pueden valuar por puntajes inmunohistoquímicos correspondientes a la cantidad de copias de moléculas de HER2 expresadas por célula, y se pueden determinar bioquímicamente. 0 = 0-10.000 copias/célula, 1+ = al menos aproximadamente 200.000 copias/célula, 2+ = al menos aproximadamente 500.000 copias/célula, 3+ = al menos aproximadamente 2.000.000 copias/célula. La sobre expresión de HER2 en el nivel 3+, que conduce a la activación independiente del ligando de la tirosina quinasa (Hudziak et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA, 84:7159-7163 (1987)), se produce en aproximadamente 30% de los cánceres de pecho, y en estos pacientes, disminuye la supervivencia libre de recaídas y la supervivencia completa (Slamon et ai., Sci ence, 244:707-712 (1989); Slamon et al . , Sci ence, 235:177-182 (1987)). Alternativamente, o de manera adicional, los ensayos FISH tal como el INFORM™ (comercializado por Ventana, Arizona) o PATHVISION™ (Vysis, Illinois) se pueden llevar a cabo sobre tejido tumoral incrustado en parafina, fijo en formalina para determinar la extensión (si existiera) de la amplificación de HER2 en el tumor. En una realización, el cáncer será uno que exprese (y pueda sobre-expresar) EGFR, tal expresión puede evaluarse con relación a los métodos para evaluar la expresión de HER2 según se mencionó anteriormente. Además puede evaluarse la sobre-exprésion o amplificación del ligando de HER o el receptor HER utilizando un ensayo diagnóstico in vi vo, por ejemplo administrando una molécula (tal como un anticuerpo) que se une a la molécula a ser detectada y se marca con una etiqueta detectable (por ejemplo un isótopo radioactivo) y se controla externamente el paciente para localización de la etiqueta. IV. Formulaciones Farmacéuticas Las formulaciones terapéuticas de los anticuerpos usados de conformidad con la presente invención se preparan para el almacenamiento a través de la mezcla de un anticuerpo que tiene el grado deseado de pureza con vehículos aceptables de uso farmacéutico opcionales, excipientes o estabilizantes (Remington ' s Pharmaceu tical Sci ences 16° edición, Osol, A. Ed. (1980)), en la forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los vehículos, excipientes, o estabilizantes aceptables son no tóxicos para las personas en las dosificaciones y concentraciones empleadas, e incluyen buffers tales como fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, alcohol bútilico o bencílico,-alquil parabenos tales como metil- o propil -parabeno; catecol; resorcinol; ciciohexanol; 3 -pentanol; y m-cresol); polipéptidos de peso molecular bajo (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofilicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, o lisina; monosacaridos , disacaridos, y otros carbohidratos incluyendo glucosa, mañosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo complejos de proteína-Zn) ; y/o surfactantes no iónicos tales como TWEEN™, PLURONICS™ o polietilenglicol (PEG) . Formulaciones de anticuerpos liofilizados se describen en WO 97/04801, incorporada expresamente a la presente como referencia.

La formulación de pertuzumab preferida para uso terapéutico comprende 30 mg/ml de pertuzumab en 20 mM de histidin acetato, 120 mM de sacarosa, 0.02% de polisorbato 20, a pH 6.0. Una formulación de pertuzumab alterna comprende 25 mg/ml de pertuzumab, 10 mM de buffer de histidina-HCI , 240 mM de sacarosa, 0.02% de polisorbato 20, pH 6.0. La formulación de la presente también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la indicación particular que se esta tratando, preferentemente aquellas con actividades complementarias que no se afectan adversamente entre si. Varios fármacos que pueden combinarse con el anticuerpo HER se describen en la sección de método de tratamiento a continuación. Tales moléculas están presentes de manera adecuada en combinación en cantidades que son eficaces para los fines propuestos . Los ingredientes activos también se pueden encerrar en microcápsulas preparadas, por ejemplo, a través de las técnicas de coacervación o a través de polimerización interfacial, por ejemplo microcápsulas de hidroximetilcelulosa o de gelatina y microcápsulas de poli- (metilmetacilato) , respectivamente, sistemas de administración de fármacos coloidales (por ejemplo liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nano-partículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones . Dichas técnicas se describen en Remington ' s Pharmaceutical Sciences 16ava edición, Osol, A. Ed. (1980) . Se pueden elaborar preparaciones de liberación sostenida. Ejemplos de las preparaciones de liberación sostenida apropiadas incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices están en la forma de artículos, por ejemplo películas, o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo poli (2-hidroxietil-metacrilato) , o alcohol polivinílico, poliláctidos (Patente de los E.U.A. No. 3,773,919), copolímeros de ácido L-glutamico y ? etil-L-glutamato, acetato de etilen-vinilo no degradable, copolímeros de ácido glicólico-ácído láctico degradables tales como el LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímeros de ácido glicólico-ácido láctico y acetato de leuprolido) , y ácido poli-D- (-) -3-hidroxibutírico . Las formulaciones que se usarán para la administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra fácilmente a través de la filtración por membranas de filtración estériles.

V. Tratamiento y Dosificación de anticuerpos HER Ejemplos de varios cánceres que pueden tratarse con una dosis fija de un anticuerpo HER se mencionan en la sección definición anterior. Las indicaciones de cáncer preferidas incluyen cáncer de ovario; cáncer peritoneal; cáncer de las trompas de Falopio; cáncer de mama, incluyendo cáncer de mama metastásico (MBC); cáncer de pulmón, incluyendo cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC); cáncer de próstata; cáncer colorectal; y/o cáncer que muestra la expresión, amplificación y/o activación de HER. En una realización, el cáncer que se trata es cáncer resistente a la quimioterapia o cáncer resistente al platino. La administración de dosis fijas del anticuerpo dará por resultado una mejora en las señales o síntomas del cáncer. Además del cáncer, las dosis fijas de los anticuerpos HER según se revela en la presente, se pueden utilizar para tratar varias enfermedades o trastornos no alignos. Tales enfermedades o trastornos no-malignos incluyen enfermedad autoinmune (por ejemplo, psoriasis; ver definición anterior); endometriosis; esclerodema; restenosis; pólipos tales como pólipos de colon, pólipos nasales o pólipos gastrointestinales; fibroadenoma; enfermedad respiratoria (ver definición anterior) ; colecistitis; neurofíbromatosis; enfermedad del riñon poliquístico; enfermedades inflamatorias; trastornos de la piel incluyendo psoriasis y dermatitis; enfermedad vascular (ver definición anterior) ; enfermedades que involucran la proliferación anormal de células epiteliales vasculares; úlceras gastrointestinales; enfermedad de Menetrier, adenomas secretores o síndrome de pérdida de proteínas; trastornos renales; trastornos angiogénicos; enfermedad ocular tal como degeneración macular relacionada con la edad, síndrome de histoplasmosis ocular simulada, neovascularización ret al de la retmopatía diabética proliferativa, vascularización ret al, retmopatía diabética, o degeneración macular relacionada con la edad; patologías asociadas con los huesos tales como osteoartritis, raquitismo y osteoporosis ; daño seguido de un evento isquémico cerebral, enfermedades fibróticas o edémicas tales como cirrosis hepática, fibrosis pulmonar, carcoidosis, tiroiditis, síndrome sistémico de hiperviscosidad, enfermedad de Osler Weber-Rendu, enfermedad pulmonar oclusiva crónica, quemaduras seguido de edema, trauma, radiación, apoplejía, hipoxia o isquemia; reacción de hipersensibilidad de la piel ; ret opatía diabética y nefropatía diabética; síndrome de Guillam-Barre; enfermedad de injerto versus huésped o rechazo al transplante; enfermedad de Piaget, inflamación de huesos y articulaciones; fotoenvejecimiento (por ejemplo causado por la radiación UV o piel humana); hipertrofia prostática benigna; ciertas infecciones microbianas incluyendo patógenos microbianos selecionados de adenovirus, hantavirus, Borrelia burgdorferi, Yersinia spp. y Bordetella pertussis; trombo causado por agregación plaquetaria; afecciones reproductivas tales como endometriosis, síndrome de hiperestimulación ovárica, preeclampsia, sangrado uterino disfuncional, o menometrorragia; sinovitis; ateroma; nefropatías agudas y crónicas (incluyendo glomerulonefritis proliferativa y enfermedad renal inducida por diabetes) ; eczema; formación de escaras; choque endotóxico e infección fúngica; poliposis adenomatosis familiar; enfermedades neurodegenerativas (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, demencia relacionada con el SIDA, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, retinitis pigmentosa, atrofia muscular espinal y degeneración cerebelosa) ; síndromes mielodisplásicos ; anemia aplásica daño isquémico; fibrosis del pulmón, riñon o hígado enfermedad de hipersensibilidad mediada por células T estenosis pilórica hipertrófica infantil; síndrome obstructivo urinario; artritis psoriásica; y tiroiditis de Hashimoto. Las indicaciones no malignas preferidas para terapia en la presente incluyen psoriasis, endometriosis, escleroderma, enfermedad vascular (por ejemplo restenosis, arterosclerosis , enfermedad de la arteria coronaria, o hipertensión) , pólipos de colon, fibroadenoma o enfermedad respiratoria (por ejemplo, asma, bronquitis crónica, bronquiectasis o fibrosis quística) . El anticuerpo HER se administra a un paciente humano de acuerdo con métodos conocidos, tales como administración intravenosa, por ejemplo, como un bolo o por infusión continua durante un período de tiempo, por via intramuscular, intraperitoneal, intracerobrospinal , subcutánea, intra-articular, intrasinovial , intratecal, oral, tópica o inhalación. Se prefiere la administración por vía intravenosa del anticuerpo. Para la prevención o tratamiento de la enfermedad, la dosis fija del anticuerpo HER dependerá del tipo de enfermedad a ser tratada, según se definió anteriormente, la severidad y curso de la enfermedad, si el anticuerpo se administra para fines preventivos o terapéuticos, terapia previa, la historia clínica del paciente y la respuesta al anticuerpo, y el criterio del profesional actuante. La dosis fija se administra de manera adecuada al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos. Preferentemente, la dosis fija está en el rango de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 2000 mg del anticuerpo HER. Por ejemplo, la dosis fija puede ser de aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg, o aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER. En caso que se administre una serie de dosis fijas, éstas pueden, por ejemplo, administrarse aproximadamente cada semana, aproximadamente cada 2 semanas, aproximadamente cada 3 semanas, o aproximadamente cada 4 semanas, pero preferentemente aproximadamente cada 3 semanas. Por ejemplo, puede continuarse con la administración de la dosis fija hasta el avance de la enfermedad, evento adverso, u otro momento que determine el profesional actuante. Por ejemplo, se pueden administrar de aproximadamente dos, tres, o cuatro, hasta aproximadamente 17 o más dosis fijas . En una realización, se administran una o más dosis de carga del anticuerpo, seguido de una o más dosis de mantenimiento del anticuerpo. En otra realización, una cantidad de la misma dosis fija se administra al paciente . De acuerdo con una realización preferida de la invención, se administra una dosis fija del anticuerpo HER (por ej emplo pertuzumab) de aproximadamente 840 mg (dosis de carga) seguido de una o más dosis de aproximadamente 420 mg (dosis de mantenimiento) del anticuerpo. Las dosis de mantenimiento se administran preferentemente aproximadamente cada 3 semanas, durante un total de al menos dos dosis, hasta 17 o más dosis. De acuerdo con otra realización preferida de la invención, se administran una o más dosis fijas de aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER ( (por ej emplo pertzumab) , por ejemplo cada 3 semanas. De acuerdo con esta realización, se administran una, dos o más de las dosis fijas, por ejemplo durante hasta un año (17 ciclos)), y más según se desee. En otra realización, se administra una dosis fija de aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER2 (por ej emplo pertuzumab) como una dosis de carga, seguido de una o más dosis de mantenimiento de aproximadamente 525 mg del anticuerpo. Aproximadamente una, dos o más dosis de mantenimiento se pueden administrar al paciente cada 3 semanas de acuerdo con esta realización. De este modo, la invención aporta un método para tratar el cáncer en un paciente humano que comprende la administración al menos de una dosis fija de pertuzumab al paciente, donde la dosis fija aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 m , aproximadamente 840 mg, o aproximadamente 1050 mg of pertuzumab . Cuando la enfermedad es cáncer, el paciente se trata preferentemente con una combinación del anticuerpo HER, y uno o más agentes quimioterapéuticos. Preferentemente al menos uno de los agentes quimioterapéuticos es una agente quimioterapéutico antimetabolito tal como gemcitabina. La administración combinada incluye la coadministración o administración concurrente, utilizando formulaciones separadas o una sola formulación farmacéutica, y la administración consecutiva en cualquier orden, donde preferentemente hay un período de tiempo mientras que ambos (o todos) los agentes activos ejercen simultáneamente sus actividades biológicas. De este modo, el agente quimioterapéutico antimetabolito puede administrarse antes de, o a continuación, de la administración del anticuerpo HER. En esta realización, el tiempo entre al menos una administración del agente quimioterapéutico antimetabolito y al menos una administración del anticuerpo HER es con preferencia aproximadamente 1 mes o menos, y con mayor preferencia aproximadamente 2 semanas o menos. Alternativamente, el agente quimioterapéutico antimetabolito y el anticuerpo HER se administran en forma concurrente al paciente, en una única formulación o en formulaciones separadas. El tratamiento con la combinación del agente quimioterapéutico (por ejemplo, el agente quimioterapéutico antimetabolito tal como gemcitabina) y el anticuerpo HER (por ejemplo pertuzumab) puede dar por resultado un beneficio sinérgico, o más que aditivo, terapéutico al paciente. Un agente quimioterapéutico antimetabolito, si se administra, usualmente se administra en dosificaciones conocidas para el mismo, u opcionalmente disminuidas debido a la acción combinada de los fármacos o los efectos colaterales negativos atribuibles a la administración del agente quimioterapéutico antimetabolito. Los programas de preparación y dosificación para tales agentes quimioterapéuticos se pueden utilizar de acuerdo con las instrucciones de los fabricantes o según se determinó empíricamente por el profesional capacitado. Cuando el agente quimioterapéutico antimetabolito es gemcitabina, preferentemente, se administra a una dosis entre aproximadamente 600 mg/m2 a 1250 mg/m2 (por ejemplo aproximadamente 1000 mg/m2), por ejemplo, los días 1 y 8 de un ciclo de 3 semanas. Además del anticuerpo HER y el agente quimioterapéutico antimetabolito, se pueden combinar con otros regímenes terapéuticos. Por ejemplo, se puede administrar un segundo (tercero, cuarto, etc) agente o agentes quimioterapéuticos, donde el segundo agente quimioterapéutico es ya sea otro agente quimioterapéutico antimetabolito diferente o un agente quimioterapéutico que no es un antimetabolito. Por ejemplo, el segundo agente quimioterapéutico puede ser un taxano (tal como paclitaxel o docetaxel), capecitabina o un agente quimioterapéutico basado en platino (tal como carboplatino, cisplatino, u oxaliplatino) , antraciclina (tal como doxorubicin, incluyendo, doxorubicin liposomal), topotecan, pemetrexed, vinca alcaloide (tal como vinorelbina), y TLK 286. Se pueden administrar "cócteles" de diferentes agentes quimioterapéuticos. Otros agentes terapéuticos que se pueden combinar con el anticuerpo HER incluyen uno o más de: un segundo anticuerpo HER diferente (por ejemplo, un anticuerpo HER2 inhibidor del crecimiento, tal como trastuzumab, o un anticuerpo HER2 que induce la apoptosis de una célula que sobreexpresa HER2 , tal como 7C2, 7F3 o sus variantes humanizadas) ; un anticuerpo dirigido contra un antígeno diferente asociado al tumor, tal como EGFR, HER3 , HER4 ; compuesto anti -hormonal , por ej emplo, un compuesto anti -estrógeno tal como tamoxifeno, o un inhibidor de aromatasa; un cardioprotector (para prevenir o reducir cualquier disfunción miocardíaca asociada con la terapia) ; una citoquina; un fármaco dirigido a EGFR (tal como TARCEVA®, IRESSA® o Cetuximab) ; un agente antiangiogénico (especialmente Bevacizumab comercializado por Genentech bajo el nombre comercial de AVASTIN®) ; un inhibidor de tirosina quinasa; un inhibidor de COX (por ejemplo un inhibidor COX-1 o COX-2) ; un fármaco antiinflamatorio no esteroidal, Celecoxib (CELEBREX7); inhibidor de farnesil transferasa (por ejemplo, Tipifarnib/ZARNESTRA® R115777 disponible de Johnson & Johnson o Lonafarnib SCH66336 disponible de Schering-Plough) ; anticuerpo que se une a la proteína oncofetal CA 125 tal como Oregovomab (MoAb B43.13); vacuna de HER2 (tal como vacuna HER2 AutoVac de Pharmexia, o vacuna de la proteína APC8024 de Dendreon, o vacuna peptídica de HER2 de GSWCorixa) ; otra terapia que apunta a HER (por ej emplo trastuzumab, cetuximab, gefitinib, eriotinib, CI1033, GW2016, etc); inhibidor Raf y/o ras (ver, por ejemplo, WO 2003/86467); inyección de liposoma de HCl doxorubicin (DOXIL®) ; inhibidor de topoisomerasa I tal como topotecan; taxano; inhibidor de HER2 y EGFR dual tirosina quinasa tal como lapatinib/GW572016 ; TLK286 (TELCYTA®) ; EMD-7200; un medicamento que trata las nauseas tal como un antagonista de serotonina, esteroide, o benzodiazepina; un medicamento que previene o trata la erupción cutánea o terapia de acné estándar, incluyendo antibióticos tópicos u orales; un medicamento que reduce la temperatura corporal tal como acetaminofeno, difenidramina, o meperidina; factor del crecimiento hematopoyético, etc. Dosificaciones adecuadas para cualquiera de los agentes coadministrados anteriores son aquellos utilizados actualmente y pueden disminuirse debido a la acción combinada (sinergia) del agente y el anticuerpo HER. Además de los regímenes terapéuticos anteriores, el paciente puede estar sujeto a la eliminación quirúrgica de las células cancerígenas y/o terapia radioactiva. Preferentemente, el anticuerpo administrado es un anticuerpo desnudo. Sin embargo, el anticuerpo administrado puede conjugarse con un agente citotóxico. Preferentemente, el inmunoconjugado y/o antígeno al cual esta unido esta internalizado por la célula, dando por resultado una eficacia terapéutica aumentada del inmunoconjugado para matar la célula cancerígena a la cual se une. En una realización preferida, el agente citotóxico apunta o interfiere con el ácido nucleico en la célula cancerígena. Ejemplos de tales agentes citotóxicos incluyen maytansinoides, caliqueamicinas, ribonucleasas y endonucleasas de ADN. Además de la administración de la proteína del anticuerpo al paciente, la presente solicitud contempla la administración de un anticuerpo o inhibidor de proteína mediante terapia génica. Ver, por ejemplo, WO96/07321 publicada el 14 de marzo de 1996 con relación al uso de la terapia génica para generar anticuerpos mtraceluíares Existen dos enfoques principales para obtener el ácido nucleico (opcionalmente contenido en un vector) en las células del paciente; m vivo y ex vi vo . Para administración in vi vo, se inyecta ácido nucleico directamente en el paciente, usualmente en el sitio donde se requiere el anticuerpo. Para tratamiento ex vi vo, se remueven las células del paciente, se introduce el ácido nucleico en estas células aisladas y las células modificadas se administran al paciente ya sea directamente, o por ejemplo, encapsuladas dentro de las membranas porosas las cuales se implantan en el paciente, (ver, por ej emplo Patentes de los E.U.A. Nos. 4,892,538 y ,283,187). Existe una variedad de técnicas disponibles para introducir ácidos nucleicos en células viables . Las técnicas varían dependiendo de, si el ácido nucleico se transfiere a células cultivadas in vi tro, o in vivo en las células del huésped destinado. Las técnicas adecuadas para la transferencia del ácido nucleico en células mamíferas m vi tro incluyen el uso de liposomas, electroporación, microinyección, fusión de células, DEAE-dextrano, el método de precipitación de fosfato de calcio, etc. Un vector normalmente utilizado para la administración ex vivo del gen es un retrovirus. Las técnicas de transferencia de ácido nucleico in vivo normalmente preferidas incluyen transfección con vectores virales (tal como adenovirus, virus Herpes simplex I, o virus adeno-asociado) y sistemas basados en lípidos (lípidos útiles para transferencia mediada por lípidos del gen son DOTMA, DOPE y DC-Chol, por ejemplo) . En algunas situaciones es deseable suministrar la fuente de ácido nucleico con un agente que apunta las células blanco, tal como un anticuerpo específico para una proteína de membrana de superficie celular o la célula blanco, un ligando para un receptor sobre la célula blanco, etc. Cuando se emplean liposomas, se pueden utilizar proteínas que se unen a una proteína de membrana de superficie celular asociada con endocitosis para dirigir y/o facilitar la recaptación, proteínas de la cápsida o sus fragmentos trópicos para un tipo de célula particular, anticuerpos para proteínas que se someten a la internalización en el ciclado, y proteínas que apuntan a la localización intracelular y mejoran el tiempo de vida intracelular. La técnica de endocitosis mediada por el receptor se describe, por ejemplo, en Wu et al . , J.

Biol . Chem . 262:4429-4432 (1987); y Wagner et al . , Proc . Na ti . Acad . Sci . USA 87:3410-3414 (1990). Para revisión de la marcación génica normalmente conocida y los protocolos de terapia génica ver Anderson et al . , Science 256:808-813 (1992). Ver además WO 93/25673 y las referencias citadas en la misma. VI. Artículos de fabricación En otra realización de la invención, se aporta un artículo de fabricación que contiene materiales útiles para el tratamiento del cáncer o los otros trastornos descritos anteriormente. El artículo de fabricación comprende un vial con una dosis fija del anticuerpo HER contenido en el mismo y, opcionalmente, un inserto de envase. El vial puede estar formado de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico, y puede sellarse mediante un llenador penetrable mediante una jeringa. Por ejemplo, el vial puede ser un vial de vidrio de vitro formal tipo I (por ej emplo un vial de 20cc para una dosis fija de 420 mg o un vial de 50cc para una dosis fija de 1050 mg) , con un llenador laminado de fluoro-resina DAIKYO GREY™, y una tapa superior de aluminio de 20 mm . El artículo de fabricación además puede incluir otros materiales deseables del punto de vista comercial y del usuario, incluyendo buffers, diluyentes, filtros, agujas, y jeringas, etc.

En la realización preferida, el artículo de fabricación comprende un vial que contiene una dosis fija de un anticuerpo HER (por ej emplo pertuzumab) , donde la dosis fija es aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg, o aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER. El artículo de fabricación además comprende preferentemente un inserto de envase. El inserto de envase puede aportar instrucciones para administrar la dosis fija a un paciente de cáncer, incluyendo pero sin limitarse a un paciente con cáncer de ovario, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, cáncer de mama metastásico (MBC) , cáncer de pulmón de células no microcíticas (NSCLC) , cáncer de próstata, cáncer colorrectal, y/o administrar la dosis fija a un paciente de cáncer cuyo cáncer muestra la expresión, amplificación y/o fosforilación de HER. En una realización, el artículo de fabricación comprende dos viales, donde un primer vial contiene una dosis fija de aproximadamente 840 mg de pertuzumab, y un segundo vial contiene una dosis fija de aproximadamente 420 mg de pertuzumab. En otra realización, el artículo de fabricación comprende dos viales, donde un primer vial contiene una dosis fija de aproximadamente 1050 mg de pertuzumab, y un segundo vial contiene una dosis fija de aproximadamente 525 mg de pertuzumab. VII. Depósito de Materiales Las siguientes líneas celulares del hibridoma han sido depositadas con la American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 201 10-2209, USA (ATCC) : Otros detalles de la invención se ilustran mediante ios siguientes ejemplos no limitantes. Las descripciones de todas las citas en la memoria descriptiva se incorporan expresamente a la presente como referencia. EJEMPLO 1 El presente ejemplo evalúa la tarmacoc ética de población (PK) y covariantes predictivas para el pertuzumab del anticuerpo HER, y examinó la variabilidad de las concentraciones de suero de sima permanentes después de métodos de dosificación basados en el peso corporal, o basados en BSA. Se administró pertuzumab por infusión IV (semana q3 ) ya sea como una dosis basada en peso (0.5-15 mg/kg) o una dosis fija (420 mg o 1050 mg) . Los datos de concentración de suero de pertuzumab de ensayos de una fase la y dos fases II (ovario y pecho) , que comprende 153 pacientes y 1458 puntos de tiempo de concentración, se reunieron para este análisis usando NONMEM™ con la primera estimación condicional de primer orden con el método de Interacción (Interacción FOCE) . Un modelo de compartimiento 2 lineal describió mejor los datos. El peso corporal, albúmina de suero, y alcalina fosfatasa de suero fueron covariantes significativas que afectan la distancia (CL) , y el área de superficie corporal (BSA) fue una variable significativa que afecta el volumen de distribución en el compartimiento central (Ve) . En el modelo final, CL y Ve fueron 0.214 1/día y 2.74 1, respectivamente. El peso solo explicó 8.3% de la variabilidad inter-paciente para CL . La evaluación del modelo de PK de población final utilizando un control previsible posterior mostró un buen rendimiento. Comparado con la dosificación fija, la dosificación en base al peso y a BSA sólo redujo la variabilidad de población de concentraciones de sima permanentes en 6.2% y 5.8%, respectivamente, en 1000 sujetos simulados extraídos del conjunto de datos originales utilizando el modelo final. Las simulaciones además mostraron los porcentajes de sujetos con concentraciones de sima permanentes previsibles por debajo de un objetivo de 20 mcg/ml fueron similares siguiendo la dosificación fija basada en el peso o BSA. Se concluyó que si bien los anticuerpos humanizados se dosificaron típicamente en peso, los análisis en este ejemplo mostraron la necesidad de administrar el anticuerpo HER, pertuzumab, utilizando una dosis fina para tratar el cáncer. MÉTODOS Estudios y Patentes Los tres estudios utilizados en este análisis fueron aprobados por los comités de ética apropiados de los centros participantes. Se obtuvo consentimiento por escrito de todos los pacientes. El Estudio 1 fue un estudio de Fase la, etiqueta abierta, multicentro, de escala de dosis para evaluar la seguridad, tolerabilidad, y los perfiles farmacocinéticos de pertuzumab administrados por vía intravenosa como un único agente a sujetos con malignidades sólidas avanzadas. Estos pacientes recibieron una dosis de pertuzumab administrada por la vía IV cada 3 semanas como una infusión IV de 90 minutos en el primer ciclo, luego como una infusión de 30 minutos en ciclos subsiguientes. Las dosis fueron escalonadas (0.5, 2, 5, 10, y 15 mg/kg) en cohortes de 3 o 6 sujetos hasta que se definió la dosis máxima tolerada (MTD) o se alcanzó el nivel de dosis más alto. Durante el primer ciclo de tratamiento, las muestras de suero para la determinación de concentraciones de pertuzumab se recolectaron en puntos de tiempo seriados; antes de la dosis, al final de la infusión IV, a l, 5, 4 y 9 horas, y los días 2, 5, 8 y 15. Durante el segundo ciclo de tratamiento, las muestras de suero para la determinación de concentraciones de pertuzumab se recolectaron antes de la dosis, 29 minutos después del inicio de la infusión IV, y el día 8. El Estudio 2 fue un ensayo de fase II, etiqueta abierta, un solo brazo, multicentro para evaluar la eficacia completa, seguridad, tolerabilidad y el efecto de la activación del HER2 basado en el tumor sobre la eficacia del pertuzumab en pacientes con cáncer de ovario avanzado, en el cual su enfermedad fue refractaria o había recurrido después de la quimioterapia. Estas mujeres recibieron infusiones IV de pertuzumab administradas en forma de un agente simple durante un período de 90 minutos durante el primer ciclo de tratamiento a una dosis fija de 840 mg, seguido de una dosis de mantenimiento de 420 mg, administrada como una infusión de 30 minutos cada 3 semanas durante los ciclos de tratamiento subsiguientes. Durante el primer y segundo ciclo de tratamiento, las muestras de suero para la determinación de concentraciones de pertuzumab se recolectaron antes de la dosis, 15 minutos seguidos del final de la infusión, y en los días 8 y 15. Las muestras de suero adicionales para la determinación de concentraciones de pertuzumab se recolectaron antes de la dosis y 15 minutos después del final de la infusión IV durante los ciclos de tratamiento subsiguientes . El Estudio 3 fue un estudio de Fase II, etiqueta abierta, un solo brazo, multicentro aleatorizado para evaluar la eficacia y seguridad de dos dosis diferentes de pertuzumab administradas en forma de un agente único en pacientes con cáncer de mama metastásico con baja expresión de HER2. En el cohorto de primera dosis, los pacientes recibieron pertuzumab como una infusión IV administrada durante un período de 90 minutos como una dosis de carga de 840 mg en el primer ciclo, seguido de una dosis de mantenimiento de 420 mg administrada cada 3 semanas como una infusión IV de 30 minutos durante los ciclos de tratamiento subsiguientes. En el cohorto de segunda dosis, los pacientes recibieron una infusión IV de pertuzumab como una dosis de 1050 mg durante un período de 90 minutos en el primer ciclo, y como una dosis de 1050 mg como una infusión IV de 30 minutos cada 3 semanas durante ciclos de tratamiento subsiguientes. En el estudio 3, las muestras de suero para la determinación de concentraciones de pertuzumab se recolectaron antes de la dosis, 15 minutos después del final de la infusión, y los días 8 y 15 durante los primeros dos ciclos de tratamiento. Muestras de suero adicionales para la determinación de concentraciones de pertuzumab se recolectaron antes de la dosis y 15 minutos después del final de la infusión durante los ciclos de tratamiento subsiguientes. Ensayo de Fármaco Las concentraciones de suero de Pertuzumab se determinaron por un ensayo inmunoabsorbente, ligado a enzimas, de unión al receptor (ELISA) . El ensayo utilizó el dominio extracelular pl85HER2 para capturar pertuzumab de las muestras de suero. Se detectó el pertuzumab unido con peroxidasa de rábano picante Fe anti-humano de ratón (HRP) (Jackson Inmuno Research Laboratories , Inc . ) , y tetrametil bencidina (TMB) (KPL, Inc.) se utilizó como el sustrato para el desarrollo del color para cuantificar el pertuzumab del suero. El ensayo tiene una concentración cuantificable mínima de 0.25 mcg/ml para pertuzumab en suero humano.

Análisis farmacocinético de la población El modelaje de efecto mixto no lineal de la población se llevo a cabo utilizando NONMEM™ (Boeckmann y Beal NONMEM™ User Guide. San Francisco: NONMEM™ Project Group, University of California, San Francisco (1994)) software (Versión V, Nivel 1.0) con NM-TRAM y PREDPP y el compilador Compaq Visual Fortran (Versión 6.5) . Dos modelos estructurales básicos diferentes, un modelo PK lineal de dos compartimientos con infusión IV, se fijaron a los datos de concentración-tiempo del pertuzumab de suero. El método de estimación condicional de primer orden (FOCE) con interacción ? - e se utilizó a través del procedimiento de construcción del modelo. Un modelo de error exponencial se utilizó para describir la variabilidad interindividual para los parámetros de PK: l'i = oxP(?))l,) (1) Se implemento un modelo de regresión de covariante multiplicativa de la siguiente forma: p¡ - 0)( X' y i U„¡)) (2) d(X j donde ? ip denota la diferencia proporcional entre los parámetros "ciertos" (Pi) de 1° pacientes individuales y el valor típico ( ) en la población, ajustado para valores de covariantes iguales a las de este paciente individual. El ? significa los efectos aleatorios con media cero y variante ? 2 . Los ?? l y TD son los coeficientes de regresión a ser estimados para covariantes continuas (por ejemplo WT) o dicotómicas (por ejemplo SEX y RACE), respectivamente. Las variables continuas se centraron sobre sus valores medios (med (X)), de este modo permitiendo ?l l representar el estimado de distancia para el paciente típico con covariantes medias . Las covariantes dicotómicas se codificaron 0 o 1 (por ejemplo, SEX=0 para femenino, SEX=1 para masculino; RACE=0 para Caúcaso, y RACE=1 para otros) . La variabilidad residual se modeló como el modelo de error proporcional -aditivo : ' ' ' ,,µ µ ' , donde Pí V ^ N' son los j o medidos y la concentración previsible del modelo, respectivamente, para i° individuales, y *'•prop 'fW| a d denotan los errores aleatorios intra-individuales residuales aditivos y proporcionales _ 2 2 distribuidos con medias cero y vanantes Las relaciones entre los estimados Bayesianos basados en el modelo estructural de los parámetros de PK y las covariantes individuales se exploraron gráficamente. En base al análisis exploratorio preliminar, se ensayó el efecto de cada covariante sobre los parámetros de PK. Inicialmente, se examinó la influencia de las covariantes sobre los parámetros de PK individuales (es decir, distancia y volumen del compartimiento central) . Luego se construyó un modelo de covariante completa para los parámetros de PK individuales incorporando las covariantes significativas en el modelo. Un proceso de eliminación posterior se utilizó para determinar el modelo de covariante final para cada parámetro de PK individual reteniendo solamente las covariantes significativas en el modelo. Cuando las covariantes muy correlacionadas tuvieron un significado farmacológico similar (tal como peso y BSA) , sólo el factor más significativo se retuvo en el modelo. Este modelo de covariante final obtenido para cada parámetro de PK luego se combinó para formar un nuevo modelo completo y el modelo de PK de población final se elaboró utilizando un proceso de eliminación posterior. La comparación de los modelos estructurales alternativos y la construcción del modelo de covariante se basó en las unidades diagnósticas con precisión de ajuste típicos y la prueba de probabilidad de ratio. Cuando se comparan los modelos jerárquicos alternativos, las diferencias en el valor de la función objetiva se distribuye aproximadamente j i-cuadrado con n grado de libertad (n es la diferencia en la cantidad de parámetros entre el modelo completo y el reducido) . Ésta aproximación ha demostrado ser confiable para el método de estimación FOCE-INTERACTION (Wahlby et al . , J Pharmacokinet Pharmacodyn 28:231-52 (2001)). Para discriminar dos modelos jerárquicos, se utilizó una diferencia en una función objetiva superior a 7.9 (1 grado de libertad) , que corresponde a un nivel de significancia de p<0.005. La fracción de variante inter- individual (% de variante) explicada por las covariantes en el modelo de regresión para parámetros de PK dado (por ej emplo, CL) se computó de la siguiente forma: variante = Donde ? 2 CL, BASED y ? 2 CL, FINAL representaban la variante inter- individual de distancia en el modelo de PK de base y final, respectivamente. Evaluación del Modelo Farmacocinético de Población La evaluación del modelo en este estudio utilizó la técnica de remuestreo de autoelevador para evaluar la estabilidad del modelo final y estimar el intervalo de confianza de los parámetros. Ésta técnica de evaluación del modelo consiste en crear primero los conjuntos de datos que utilizan la opción de autoelevador en el paquete de software Wings para NONMEM™ (N Holford, Versión 404, Junio 2003, Auckland, New Zealand) obteniendo luego los estimados de parámetro para cada uno de los conjuntos de datos replicados. Se obtuvieron los resultados de 1000 corridas exitosas, y se determinaron la media y las percentils 2.5° y 97.5° (que denotan el intervalo de confianza del 95%) para los parámetros de población y se compararon con los estimados de los datos originales . Además, se utilizaron controles del modelo previsto posterior para evaluar la capacidad del modelo final para describir los datos observados (Yano et al . , J Pharmacokinet Pharmacodyn 28: 171-92 (2001); Gelman & Meng, Model checking and model improvement . In: Gilks WR, Richardson S, Spiegelhalter DJ, eds. Markov Chain Monte Cario in Practi ce . Boca Ratón: Chapman & Hall/CRC, 189-202 (1996); Gelman et al . , Bayesian Data Analysis . Boca Ra tón : Chapman & Hall/CRC (2004). En estos análisis, las percentils 2.5°, 5o, 10°, 25°, 50° (media), 75°, 90°, y 95° de los datos observados se computaron y seleccionaron como las estadísticas de ensayo para el posterior control del modelo previsto. El modelo de PK de población final, incluyendo parámetros de efecto aleatorio y fijo final, se utilizó para simular 1000 replicados del conjunto de datos observado y se computaron las estadísticas de ensayo de cada uno de los conjuntos de datos simulados. La distribución previsible posterior de las estadísticas de ensayo del conjunto de datos simulado luego se comparó con la estadística de ensayo observada, y el valor p (pPPC) se puede estimar calculando la proporción de los casos en el cual la estadística de ensayo del conjunto de datos simulados excede el valor realizado de la estadística de ensayo observada de acuerdo con la siguiente ecuación (Gelman y Meng, (1996) supra ) . > l|l<> ;-' .ü) - Ti y. ü,)> N , p > donde I ( . ) es la función indicadora que toma el valor 1 cuando su argumento es cierto y 0 de otro modo.

T(y, ? ) es un "valor realizado" de la estadística de ensayo observada porque se realiza mediante los datos observados y. Tíy 61*, ? ) es la estadística de ensayo de un conjunto de datos simulado i (rango del a 1000) (Gelman y Meng, (1996) supra) . Además, se calcularon las cuantilas 2.5°, 5o, 95°, y 97.5° de los datos simulados para cada punto de tiempo para pacientes individuales . Se determinaron las cantidades de datos observados que estuvieron dentro de los límites de las cuantilas 2.5° y 95.5° (intervalo del 95%), cuantilas 5° y 95° (intervalo del 90%) de los datos simulados reunidos .

Exposiciones de Pertuzumab después de una dosificación fija, basada en peso y en BSA. El modelo de PK de población final se utilizó para determinar las concentraciones de sima permanentes y la exposición después de la dosificación en base al peso y a BSA. Los perfiles de tiempo-concentración de suero y distancia de pertuzumab para 1000 sujetos se simularon para un régimen de dosificación en base al peso y en base al BSA utilizando el modelo final con un conjunto de datos obtenidos autoelevando (con reemplazo) el conjunto de datos de PK original. Todos los sujetos simulados recibieron una infusión iv de 840 mg, 12.2 mg/kg, o 485 mg/m2 iv durante 90 min el Día 0, luego una infusión iv de 420 mg, 6.1 mg/kg, o 242.5 mg/m2 durante 30 min los días 21, 42 y 63. Se evaluaron las concentraciones de sima permanentes obtenidas el día 84 (CSStrough) después de diferentes regímenes de concentración. Además, se calculó el porcentaje de sujetos con concentraciones de sima permanentes por debajo de una concentración blanco (20 mcg/ml) después de una dosis basada en el peso y basada en BSA. Los valores de distancia se utilizaron para determinar la exposición promedio permanente (AUCss0_t) de acuerdo con la siguiente ecuación: RESULTADOS Datos demográficos . Las características demográficas de los pacientes incluidas en este análisis de PK se mencionan en la Tabla 2. Tabla 2. Características demográficas de los pacientes incluidos en el análisis Mediana Rango Edad (años) 56.0 32.0-78.0 BSA* (m2) 1.73 1.40 - 2.53 Peso (kg) 69.0 45.0 - 150.6 Albúmina (g/1) 39.2 21.0 - 52.0 Fosfatasa alcalina (ALK) (IU/L) 107.0 39.0 - 367.0 Cantidad de Pacientes % Sexo Masculino 8 5.2 Femenino 145 94.8 Raza Caucásico 141 92 . 2 Afro-americano 3 2 . 0 Hispano 4 2 . 6 Asiático 3 2 . 0 Indio Nativo 0 0 Otros 2 1 . 3 rBSA, área de superficie corporal Un total de 1458 puntos de tiempo en concentración en suero de pertuzumab se recolectaron de 153 pacientes en los tres estudios. Del total, 18 pacientes fueron del ensayo de fase la, 60 del ensayo de cáncer de ovario de fase II, y 75 del ensayo de cáncer de mama de fase II. De este modo, la mayoría (94,8%) de los pacientes en este análisis fueron femeninos y registraron 1110 (76%) de los datos de concentración de pertuzumab. Todos los sujetos tuvieron baja expresión de HER2 en tumor confirmada por el análisis de FISH (hibridación in si tu fluorescente) y tuvieron un buen estado funcional físico según lo indicó un estado de rendimiento ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) de tanto 0 o 1. La cantidad de pacientes con covariantes faltantes fue muy baja (4,6% tanto en peso como en BSA) y las covariantes faltantes se imputaron con los valores medios. En 384 muestras de concentración de pertuzumab en suero (20.8%) con sólo una fecha de muestreo documentada, el tiempo de muestreo se imputó a las 12 del mediodía. Un análisis de sensibilidad realizado para determinar los efectos de estos tiempos imputados sobre los estimados de parámetros de población en el modelo no reveló influencia significativa . Análisis de PK de Población. Un modelo de dos compartimientos describió los datos mejor que un modelo de un compartimiento basado en el cambio de la función objetiva ( =-736,2) y ploteos diagnósticos. Un perfil de tiempo-concentración en suero de pertuzumab representativo fijo a un modelo de compartimiento unitario o doble se ilustra en las Figuras 9A-B. El término variabilidad ínter- individual (q) de K12 se eliminó de los modelos de dos compartimientos dado que la eliminación de este término ? no resultó en un incremento estadísticamente significativo ( <7.88) en la función objetivo. Por lo tanto, solo 77CL, ? vc y ? k21 se retuvieron en el modelo de base final . Luego se determinó el efecto de la presencia de una expresión covariante entre ? CL, ? Vc y "7k21- La incorporación de las expresiones de una covariante entre ^C ' >7vc Y ?72i mejoró el ajuste ($= -23.2, df=3). Sin embargo, se halló que las expresiones covariantes pobremente estimadas (%CV > 100), tienen una correlación estimada pequeña (rCLVc=0.37; rVc K21=0.27; rVc ?21=0142 ) , y tienen poca influencia sobre las estimaciones de parámetros (no se muestran datos) . Por lo tanto, las expresiones covariante no se retuvieron para la construcción del modelo de efecto de covariante. En un análisis exploratorio que utiliza el modelo de base final, no se identificaron relaciones aparentes entre covariantes potenciales y /7k21. Por lo tanto, el efecto covariante sobre ? k21 no se examinó durante el desarrollo del modelo final con covariantes. Para el modelo final con covariantes, las concentraciones en suero de pertuzumab observadas versus las previsibles y los residuales en peso versus los ploteos de concentración en suero previsibles se muestran en las Figuras 10A-B. En el modelo final, la albúmina en suero (ALB) , el peso corporal (BW) y la alcalina fosfatasa (ALKP) fueron las covariantes más significativas que explican la variabilidad interindividual para la distancia de pertuzumab (CL) . El BSA fue la covariante más significativa que explica la variabilidad interindividual del volumen de distribución del compartimiento central de pertuzumab (Ve) . La incorporación de las expresiones covariantes entre r¡ CL , U ve Y k2i mejoró el ajuste ($= -14.0, df=3) . Sin embargo, la correlación estimada no fue grande (rcL_vc=0 , 45 ; rCL. ?21=0128; rVc K21=0 , 39) y los estimados parametrales no ejercieron influencia (no se muestran datos) . De este modo, las expresiones covariantes no se incluyen en el modelo final . El modelo final se ilustra de la siguiente forma : . 0u < , 1 ., ( AI.B . o.M H.n < ( ?LKJí ??i ?r y>. ¿ — ÜS.? fi?^ '•' W- -= t)v. X • ) ( ? < Los estimados de parámetros del modelo final se resumen en la Tabla 3. Tabla 3. Estimados de parámetros del modelo farmacocinético de población final y la estabilidad de los parámetros que utilizan un procedimiento de validación de autoelevación Conjunto de 1000 replicados datos autoelevados originales Estimado Media (95% Cl) (%RSE)a Modelo Estructural CL (L/día) 0.214 (3.1) 0.214 (0.201, 0.228) vc (L) 2.740 (1.9) 2.739 (2.640, 2.840) K12 (día-1) 0.203 (16.6) 0.220 (0.159, 0.416) K21 (día_x) 0.258 (15.6) 0.275 (0.203, 0.480) Variabilidad ínter- individual CL %CV 31.1 (11.0) 30.6 (27.0, 34.1) Ve %CV 16.2 (20.3) 16.0 (12.7, 19.2) K21 %CV 25.2 (37.6) 24.1 (11.4, 33.6) Modelo Covariante ALB sobre CL 1.010 (18.4; 1.019 (-1.420, -0.632) * " A B_CL' WT sob re CL 0.57Í :i9.3! 0.589 (0.372, 0.826! v tf HT^CL / ALKP sobre 0.169 (29.5) 0.170 (0.067, 0.258) CL ( ^A KP_vc) BSA sobre Vc 1.160 (12.2: 1.151 (0.890, 1.45i: " BsA_vc ' Variabilidad Residual Error 0.037 (19.4; 0.037 (0.030, 0.045) proporcional s 2 prop Error 2.265 (77.8) 2.24 (0.002, 4.160: aditivo cr 2 prop mcg/ml a. %RSE : por ciento de error estándar relativo del estimado = SE/estimado de parámetro x 100 El CL de pertuzumab en suero en la población de análisis se estimó en 0.214 L/día y el Ve fue 2.74 L. Los ?i2 y K2i fueron 0.203 y 0.258 días"1, respectivamente. La variabilidad interindividual para CL y Ve en el modelo final, calculada como la raíz cuadrada de la variante interindividual ( ? 2 ) y expresada como %CV, son 31.1% y 16.2%, respectivamente, comparada con 38.0% y 20.8% para el modelo base sin covariantes. El efecto covariante de ALB, WT, y ALKP en el modelo final por lo tanto resultó aproximadamente 33% de la variante interindividual para CL . Sin embargo, el peso solo explicó sólo 8.3% de la variabilidad inter-paciente para CL . El efecto de covariante de BSA explicó aproximadamente 39% de la variante interindividual para Ve en el modelo final . La dependencia de CL sobre WT y Ve sobre BSA con el modelo de base da cuenta del modelo final como se muestra en las Figuras 11A-B. Los t1/2 a y t1/2 estimados fueron 1,4 y 17,2 días, respectivamente. Evaluación del modelo. A partir del conjunto de datos originales se obtuvieron 1000 corridas autoelevadas exitosas y se compararon con los datos originales observados . Los estimados de PK de población medios obtenidos del procedimiento de autoelevación fueron similares a los estimados parametrales del conjunto de datos original (Tabla 3), indicando que el modelo desarrollado fue estable. El 95% de los intervalores de confianza para los parámetros fijo-efecto fueron angostos, lo que indicó una buena precisión. Un control de modelo previsible posterior se utilizó para evaluar la capacidad del modelo final para describir los datos observados. El modelo farmacocinético de población final, incluyendo los parámetros aleatorio-efecto y fijo final, se utilizó para simular 1000 replicados. Las estadísticas de ensayo luego se compararon para cada uno de estos 1000 conjuntos de datos simulados. Las Figs. 12A-F muestran histogramas de los 1000 valores simulados de estadísticas de ensayo selecionadas , con el "valor realizado" de la estadística de ensayo observada indicada por la línea vertical. Las distribuciones previsibles posteriores estuvieron próximas a los valores observados con los valores p estimados mayores a 0,05 para cada estadística de ensayo. Además, los porcentajes de concentraciones de pertuzumab observadas dentro del rango de cuantila de 90% y 95% de los datos simulados reunidos fueron 89,3 y 94,7%, respectivamente. Estos resultados sugirieron que el modelo podía describir y predecir los datos razonablemente bien. Exposiciones de Pertuzumab después de la dosificación fija, basado en peso y BSA.

Se estimaron las concentraciones en suero de sima permanente de pertuzumab previstas el día 84 (Css trough) para 1000 sujetos simulados autoelevados del conjunto de datos de PK original y el modelo final que utiliza una dosis fija, basada en peso, o basada en BSA de acuerdo con los programas de dosis delineados en la sección Métodos . Estos datos mostraron que con la dosificación basada en peso y BSA, la variabilidad de población de Csstrough disminuyó en 6.17 y 5.76%, respectivamente, cuando se comparó con la dosis fija (Fig.13 y Tabla 4) . Tabla 4. Concentración de sima permanente de Pertuzumab prevista (Día 84) después de una dosis fija, basada en peso o BSA para 1000 sujetos simulados autoelevados del conjunto de datos de PK original de acuerdo con el modelo final aEl porcentaje de cambio de variante de dosis fija se calculó utilizando la siguiente ecuación: Porcentaje de cambio de varianza = (Varianza peso o BSA - dOSls base " Varianza dosls £l]a/Narianza dosls fl]a) X 100 El porcentaje de sujetos con Cssvalle por debajo de una concentración en suero blanco de 20 mcg/ml fue similar, con valores de 8.3%, 8.7%, y 8.3% para dosificación fija, basada en peso o basada en BSA, respectivamente (Tabla 4). Se obtuvieron resultados similares para el análisis de AUBs0t permanente en suero de pertuzumab para 1000 sujetos simulados, y la dosificación basada en peso y en BSA sólo redujo la variabilidad de la población en 2.2 y 4.2%, respectivamente, cuando se compara con la dosificación fija. El mismo conjunto de datos simulado se utilizó para determinar el Css valle después de una dosis fija, dosis basada en peso y en BSA para poblaciones con peso extremo (es decir, percentil en peso <10° y _>90°) (Figs. 14AB) . El Css valle de pertuzumab mediano para la población con peso inferior o igual a un 10° percentil fue 72.3 (rango: 8.7 a 16605), 52.8 (rango: 6.8 a 125.7) y 63.2 (rango: 7.8 a 150.1) mcg/ml para una dosis fija, dosis basada en peso y en BSA, respectivamente. El porcentaje de sujetos en población con Css valle por debajo de una concentración en suero blanco de 20 mcg/ml fue 5.4%, 12.6%, y 9.0% para una dosificación fija, basada en peso y en BSA, respectivamente. El Css valle de pertuzumab mediano para la población con peso superior o igual a 90° percentil fue 42.1 (rango: 7.0 a 119.8), 62.8 (rango: 14.4 a 167.3) y 52.9 (rango: 10.2 a 133.3) mcg/ml para una dosis fija, dosis basada en peso y en BSA, respectivamente. Los Varianza % de cambio de varianza de dosis fija a Porcentaje de sujetos con Csß?Valle porcentajes de sujetos en esta población con Css valle por debajo de una concentración en suero blanco de 20 mcg/ml fueron similares, con valores de 7.4%, 2.8%, y 5.6% para una dosis fija, dosis basada en peso y en BSA, respectivamente. Se obtuvieron resultados similares para el análisis de AUCss0t permanente en suero de pertuzumab de estos subgrupos de 1000 sujetos simulados. DISCUSIÓN Típicamente, los anticuerpos monoclonales de IgG humanizados y los fármacos de moléculas pequeñas citotóxicas en oncología se han administrado sobre una base de dosis basada en BSA o en peso (mg/kg) . El pertuzumab ha sido sometido a ensayo en la clínica con un ensayo de fase la en pacientes con cánceres avanzados y en ensayos de fase II en pacientes con cáncer de ovario, pecho, pulmón y próstata. Se dosificó pertuzumab sobre una base en peso (mg/kg) en un ensayo de Fase I, y luego se inició utilizando una dosis fija en ensayos de fase II. Utilizando datos de tiempo-concentración de pertuzumab en suero y demográficos recolectados en estos tres ensayos, se creó un modelo de población de PK con covariantes predecibles para PK de pertuzumab. Este modelo luego se utilizó para examinar las concentraciones permanentes después de una dosis fija con métodos de dosificación basada en peso y en BSA. El PK de pertuzumab obtenido de este análisis fue muy similar a los informados para otros fármacos de IgGI monoclonales humanizados utilizados en oncología (Harris et al . , Proc Am Soc Clin Oncol 21:488a (2002); Leiland-Jones et al . , J Clin Oncol 21:3965-71 (2003); y Lu et al . , Clin Pharmacol Ther 75:91 (2004)). Un modelo de PK lineal de 2 compartimientos lineal describe mejor los datos y en el modelo final el CL de pertuzumab fue 0.214 1/día. El Ve típico de pertuzumab fue 2.741 o aproximadamente 40 ml/kg, el cual es igual al volumen de plasma humano y fue uniforme con los valores informados para otros fármacos de IgGI monoclonales (Harris et al . , (2002), supra ; y Lu et al . , (2004), supra) . El CL de pertuzumab se vio afectado significativamente por el peso corporal y las concentraciones en suero de PK de pertuzumab no se pueden determinar debido a la pequeña cantidad de sujetos masculinos (5.2%) incluida en el análisis. Los resultados de un procedimiento de autoelevación y control del modelo posterior sugirió que el modelo final era estable y capaz de describir y predecir los datos razonablemente bien. El efecto de peso sobre CL y BSA sobre Ve sugirió que pertuzumab podría dosificarse en base a cualquier peso corporal o BSA. Sin embargo, el efecto covariante del peso solo y el BSA solo en el modelo solo explicó aproximadamente 8.3% y 40% del efecto interindividual de CL y Ve, respectivamente. Esto sugirió que mientras el peso es un predictor de CL y BSA es un predictor para Ve, el efecto del peso y del BSA sobre las exposiciones de pertuzumab después de la dosis podría ser medible pero no contribuiría mucho. Por lo tanto, el próximo paso determinó el impacto de los diversos métodos de dosificación sobre las exposiciones de pertuzumab utilizando las simulaciones. En 1000 sujetos autoelevados del conjunto de datos original, se halló que la dosificación en peso o en BSA disminuyeron la variabilidad de población de concentraciones en suero de sima permanente simuladas el día 84 en solo 6.2 y 5.8%, respectivamente, cuando se comparó con la dosis fija. Además, los porcentajes de sujetos con concentraciones en suero de sima permanente previsible por debajo de un blanco seleccionado de 20 mcg/ml fueron similares con los tres métodos de dosificación. Se obtuvieron resultados similares del análisis del subgrupo en una población con peso corporal extremo (es decir peso < 10° y > 90° percentil) . Por lo tanto, se llegó a la conclusión de que el PK de pertuzumab se relaciona con el peso y el BSA. Sin embargo, el peso y el BSA explicaron sólo un pequeño porcentaje de la variabilidad inter- individual de CL y Ve, y la dosificación en peso y BSA no parecen mejorar la previsibilidad de las exposiciones permanentes de pertuzumab. Se recomienda aplicar regímenes de dosificación fijos para pertuzumab en pacientes con cáncer . Se cree que la presente invención representa la primera revelación de una evaluación crítica del impacto de la dosificación basada en peso y en BSA de un anticuerpo monoclonal de IgGl humanizado en concentraciones de fármaco permanentes en paciente de cáncer. La implementación de una dosificación planafija tiene varias implicancias económicas y de cuidado del paciente significativas: i) costos más bajos debido a una mayor eficiencia en la producción, almacenamiento y embarque de dosis unitaria simple, n) preparación eficiente de una sola dosis en farmacias y hospitales sin la necesidad de la individualización del paciente, m) mayor eficiencia por parte del profesional actuante en la prescripción de la dosis unitaria única, y ív) menor probabilidad de que el paciente reciba una dosis incorrecta debido a los errores de cálculo de la dosis. Si bien los anticuerpos humanizados típicamente se dosifican en peso o BSA, los análisis en la presente muestran la factibilidad de la administración del pertuzumab del anticuerpo HER utilizando una dosis fija en pacientes con cáncer.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> ALLISON, DAVID E.

BRUNO, RENE LU, JIAN-FENG NG, CHEE <120> DOSIFICACIÓN FIJA DE ANTICUERPOS HER <130> P2202R1 <141> 205-06-15 <150> US 60/645,697 <151> 2005-01-21 <160> 22 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Asp Thr Val Met Thr Gln Ser His Lys He Met Ser Thr Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Ser He Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asp Val Ser 20 25 30 He Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys 35 40 45 Leu Leu He Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr He 65 70 75 Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Tyr He Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 95 100 105 He Lys <210> 2 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 35 40 45 Glu Trp He Gly Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser He Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Arg Ser 65 70 75 Ser Arg He Val Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Phe Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 3 <211> 107 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 3 Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser 20 25 30 He Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu He Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Tyr He Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 He Lys <210> 4 <211> 119 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser He Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 5 <211> 107 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 5 Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser He Ser 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu He Tyr Aia Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 He Lys <210> 6 <211> 119 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Val He Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Val Gly Tyr Ser Leu 95 100 105 Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <220> <221> Xaa <222> 10 <223> Xaa es preferentemente D o S <400> 7 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Xaa 1 5 10 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 8 Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser He Tyr Asn Gln Arg Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza. <400> 9 Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 10 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser He Gly Val Ala 1 5 10 <210 > 11 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <220> <221> Xaa <222> 5 <223> Xaa es preferentemente R o L <221> Xaa <222> 6 <223> Xaa es preferentemente Y o E <220> <221> Xaa <222> 7 <223> Xaa es preferentemente T o S <400> 11 Ser Ala Ser Tyr Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 12 Gln Gln Tyr Tyr He Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 13 <211> 214 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 13 Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser 20 25 30 He Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu He Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Tyr He Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 He Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro 110 115 120 Ser Asp Glu i Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 140 145 150 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu 155 160 165 Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 170 175 180 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 185 190 195 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 200 205 210 Arg Gly Glu Cys <210> 14 <211> 448 <212> PRT <213> Secuencia artifical <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Giu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser He Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 110 115 120 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 125 130 135 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 140 145 150 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 155 160 165 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 170 175 180 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 185 190 195 Gly Thr Gln Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 200 205 210 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 215 220 225 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 320 325 330 Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 335 340 345 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 350 355 360 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 365 370 375 Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 380 385 390 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 395 400 405 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 410 415 420 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 425 430 435 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Secuencia artifical <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 15 Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn 20 25 30 Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu He Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 He Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro 110 115 120 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 140 145 150 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu 155 160 165 Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 170 175 180 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 185 190 195 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 200 205 210 Arg Gly Glu Cys <210> 16 <211> 449 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn He Lys 20 25 30 Asp Thr Tyr He His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Arg He Tyr Pro Thr Asn Giy Tyr Thr Arg Tyr 50 55 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr 95 100 105 Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 120 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 125 130 135 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 140 145 150 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 155 160 165 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 170 175 180 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 185 190 195 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 200 205 210 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 215 220 225 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 320 325 330 Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gln 335 340 345 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 350 355 360 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 365 370 375 Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 380 385 390 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 395 400 405 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 410 415 420 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 425 430 435 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 17 <211> 217 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 17 Val His Ser Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 1 5 10 15 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Lys Ala Ser Gln 20 25 30 Asp Val Ser lie Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gin Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly 50 55 65 Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 Leu Thr He Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 80 85 90 Cys Gln Gln Tyr Tyr He Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr 95 100 105 Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He 110 115 120 Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 125 130 135 Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin 140 145 150 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser 155 160 165 Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 170 175 180 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 185 190 195 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 200 205 210 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 18 <211> 449 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> La secuencia se sintetiza <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser He Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 110 115 120 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 125 130 135 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 140 145 150 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 155 160 165 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 170 175 180 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 185 190 195 Gly Thr Gln Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 200 205 210 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 215 220 225 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 320 325 330 Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 335 340 345 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 350 355 360 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 365 370 375 Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 380 385 390 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 395 400 405 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 410 415 420 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 425 430 435 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 440 445 <210> 19 <211> 195 <212> PRT <213> Homo sapiens Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala 1 5 10 15 Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly 25 30 Cys Gin Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr 35 40 45 Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp He Gln Glu Val Gln Gly 50 55 60 Tyr Val Leu He Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln 65 70 75 Arg Leu Arg He Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr 80 85 90 Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr 95 100 105 Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu 110 115 120 Arg Ser Leu Thr Glu He Leu Lys Gly Gly Val Leu He Gln Arg 125 130 135 Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr He Leu Trp Lys Asp He 140 145 150 Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu He Asp Thr Asn 155 160 165 Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser 170 175 180 Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg 185 190 195 <210> 20 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro 1 5 10 15 Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro 20 25 30 Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly 35 40 45 He Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp 50 55 60 Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly 65 70 75 Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp 80 85 90 Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val 95 100 105 Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro 110 115 120 Cys Ala Arg Val <210> 21 <211> 169 <212> PRT <213> Homo sapiens 21 Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val 1 5 10 15 Thr Ser Ala Asn He Gln Glu Phe Ala Giy Cys Lys Lys He Phe 20 25 30 Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala 35 40 45 Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu 50 55 60 Thr Leu Glu Glu He Thr Gly Tyr Leu Tyr He Ser Ala Trp Pro 65 70 75 Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gin Asn Leu Gln Val He 80 85 90 Arg Gly Arg He Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln 95 100 105 Gly Leu Gly He Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu 110 115 120 Gly Ser Gly Leu Ala Leu He His His Asn Thr His Leu Cys Phe 125 130 135 Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln 140 145 150 Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly 155 160 165 Glu Gly Leu Ala <210> 22 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro 1 5 10 15 Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys 20 25 30 Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val 35 40 45 Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln 50 55 60 Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val 65 70 75 Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys 80 85 90 Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro He Trp Lys 95 100 105 Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro He Asn Cys 110 115 120 Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu 125 130 135 Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr 140

Claims (40)

1. REIVINDICACIONES Habiendo así especialmente descrito y determinado la naturaleza de la presente invención y la forma como la misma ha de ser llevada a la práctica, se declara reivindicar como de propiedad y derecho exclusivo : 1. Un método para tratar el cáncer que comprende la administración de una o más dosis fijas de un anticuerpo HER a un paciente humano en una cantidad eficaz para tratar el cáncer.
2. 2. El método de la reivindicación 1, en el cual el anticuerpo se une a un receptor HER seleccionado del grupo integrado por EGFR, HER2 y HER3.
3. 3. El método de la reivindicación 2, en el cual el anticuerpo se une a HER2.
4. 4. El método de la reivindicación 3, en el cual el anticuerpo HER2 se une al Dominio II del dominio extracelular de HER2.
5. 5. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo se une a una unión entre los dominios I, II y III del dominio extracelular de HER2.
6. 6. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo HER inhibe la heterodimerización de HER2 con EGFR o HER3.
7. 7. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo HER comprende las secuencias de aminoácidos livianas variables y pesadas variables de las SEC ID Nos. 3 y 4, respectivamente.
8. 8. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo HER es pertuzumab. . El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual la dosis fija está en el rango de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 2000 mg del anticuerpo HER. 10. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual la dosis fija se selecciona del grupo integrado por aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg y aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER. 11. El método de la reivindicación 10, en el cual la dosis fija es aproximadamente 420 mg del anticuerpo HER. 12. El método de la reivindicación 10, en el cual la dosis fija es aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER. 13. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual una dosis fija del anticuerpo HER se administra al paciente aproximadamente cada semana, aproximadamente cada 2 semanas, aproximadamente cada 3 semanas, o aproximadamente cada 4 semanas . 14. El método de la reivindicación 13, en el cual una dosis fija del anticuerpo HER se administra al paciente aproximadamente cada 3 semanas . 15. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo HER es un anticuerpo desnudo. 16. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo HER es un anticuerpo intacto. 17. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el cual el anticuerpo HER es un fragmento de anticuerpo que comprende una región de unión al antígeno. 18. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el anticuerpo HER es un anticuerpo de IgGI humanizado o humano. 1
9. 9. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el cáncer muestra la expresión, amplificación o activación de HER. 20. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual el cáncer es cáncer de ovario, peritoneal o de las trompas de Falopio. 21. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el cual el cáncer es cáncer de mama metastásico (MBC) . 22. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el cual el cáncer es cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) . 23. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el cual el cáncer es cáncer de próstata. 24. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el cual el cáncer es cáncer colorrectal . 25. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende la administración de un segundo agente terapéutico al paciente . 26. El método de la reivindicación 25, en el cual el segundo agente terapéutico se selecciona del grupo integrado por un agente quimioterapéutico, un anticuerpo HER diferente, un anticuerpo dirigido contra un antígeno diferente asociado al tumor, un compuesto anti -hormonal , un cardioprotector, un fármaco dirigido a EGFR, un agente anti-angiogénico, un inhibidor de tirosina quinasa, un inhibidor de COX, un fármaco anti- inflamatorio no-esteroidal , un inhibidor de farnesil transferasa, un anticuerpo que se une a la proteína CA 125 oncofetal, una vacuna de HER2 , otra terapia dirigida a HER, un inhibidor de Raf o ras, una inyección de liposomas de doxorubicina HCl, topotecan, taxano, un inhibidor dual de tirosina quinasa, TLK286, EMD-7200, un medicamento que trata las náuseas, un medicamento que previene o trata la erupción cutánea o terapia de acné estándar, un medicamento que reduce la temperatura corporal, y un factor de crecimiento hematopoyético. 27. El método de la reivindicación 26, en el cual el segundo agente terapéutico es un agente quimioterapéutico . 28. El método de la reivindicación 27, en el cual el agente quimioterapéutico es un agente quimioterapéutico antimetabolito . 29. El método de la reivindicación 28, en el cual el agente quimioterapéutico antimetabolito es gemcitabina . 30. El método de la reivindicación 26, en el cual el segundo agente terapéutico es trastuzumab, eriotinib HCl o bevacizumab. 31. Un método para tratar el cáncer en un paciente humano que comprende la administración de al menos una dosis fija de pertuzumab al paciente, en el cual la dosis fija se selecciona del grupo integrado por aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg, y aproximadamente 1050 mg de pertuzumab . 32. El método de la reivindicación 31, en el cual una dosis fija de pertuzumab se administra al paciente aproximadamente cada 3 semanas . 33. El método de la reivindicación 31 o de la reivindicación 32, en el cual el cáncer se selecciona del grupo integrado por cáncer de ovario, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, cáncer de mama metastásico (MBC) , cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC), cáncer de próstata y cáncer colorrectal. 34. Un artículo de fabricación que comprende un vial que contiene una dosis fija de un anticuerpo HER, en el cual la dosis fija se selecciona del grupo integrado por aproximadamente 420 mg, aproximadamente 525 mg, aproximadamente 840 mg, y aproximadamente 1050 mg del anticuerpo HER. 35. El artículo de fabricación de la reivindicación 34, en el cual el anticuerpo HER es pertuzumab . 36. El artículo de fabricación de la reivindicación 34 o la reivindicación 35, que comprende además un inserto de envase que instruye al usuario respecto a la administración de la dosis fija a un paciente con cáncer. 37. El artículo de fabricación de la reivindicación 36, en el cual el cáncer se selecciona del grupo integrado por cáncer de ovario, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, cáncer de mama metastásico (MBC) , cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC), cáncer de próstata y cáncer colorrectal. 38. El artículo de fabricación de la reivindicación 36 o la reivindicación 37, en el cual el inserto de envase además instruye al usuario respecto de la administración de la dosis fija a un paciente de cáncer cuyo cáncer muestra la expresión, amplificación o activación de HER. 39. El artículo de fabricación de cualquiera de las reivindicaciones 34 a 38, que comprende dos viales, en el cual un primer vial contiene una dosis fija de aproximadamente 840 mg de pertuzumab, y un segundo vial contiene una dosis fija de aproximadamente 420 mg de pertuzumab. 40. El artículo de fabricación de cualquiera de las reivindicaciones 34 a 38, que comprende dos viales, en el cual un primer vial contiene una dosis fija de aproximadamente 1050 mg de pertuzumab, y un segundo vial contiene una dosis fija de aproximadamente 525 mg de pertuzumab .