MX2007008562A

MX2007008562A - Composiciones farmaceuticas de bendamustina para liofilizacion.

Info

Publication number: MX2007008562A
Application number: MX2007008562A
Authority: MX
Inventors: Jason Edward Brittain; Joe Craig Franklin
Original assignee: Cephalon Inc
Priority date: 2005-01-14
Filing date: 2006-01-13
Publication date: 2007-09-07
Also published as: US8609863B2; IL184394A0; CN102078305A; JP2013056902A; MY157661A; KR20070094848A; AU2006204817B2; JP5726833B2; US20200237726A1; US20130338205A1; NO343659B1; AR052877A1; KR20170096221A; WO2006076620A2; US8895756B2; US20180296534A1; JP2013056901A; US20130131131A1; US8436190B2; US20140148490A1

Abstract

La presente invencion proporciona formulaciones farmaceuticas de bendamustina liofilizada adecuada para uso farmaceutico. La presente invencion proporciona ademas metodos para producir bendamustina liofilizada. Las formulaciones farmaceuticas pueden usarse para cualquier enfermedad que sea sensible a tratamiento con bendamustina, tal como enfermedades neoplasticas. El solvente preferido usado en una composicion pre-liofilizada de bendamustina el alcohol butilico terciario.

Description

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS DE BENDAMUSTINA PARA LIOFILIZACION CAMPO DE LA I NVENCIÓN La presente invención pertenece al campo de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de varios estados de enfermedad, especialmente enfermedades neoplásticas y enfermedades autoinmunes. En particular, se refiere a formulaciones farmacéuticas que comprenden mostazas de nitrógeno, en particular la mostaza de nitrógeno bendamustina, por ejemplo, HCl de bendamustina.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención reclama el beneficio de y prioridad de la estadounidense serial no. 60/644,354, presentada el 14 de enero de 2005, titulada "Bendamustina Pharmaceutical Compositions" (Composiciones farmacéuticas de bendamustina), la cual es incorporada en la presente por referencia en su totalidad, incluyendo figuras y reivindicaciones. La siguiente descri pción incluye información que puede ser útil para entender la presente invención. No es un reconocimiento que cualquiera de dicha información es técnica anterior, o relevante, a las invenciones actualmente reclamadas, o que cualquier publicación de manera específica o impl ícita referida sea técnica anterior. Debido a su alta reactividad en soluciones acuosas, las mostazas de nitrógeno son difíciles de formular como farmacéuticos "y son suministradas frecuentemente para la admi nistración en una forma liofilizada que requiere reconstitución, usualmente en agua , por personal de hospital experto antes de la administración. Una vez en solución acuosa, las mostazas de nitrógeno son sometidas a degradación mediante hidrólisis, de esta manera, el producto reconstituido debería ser administrado a un paciente tan pronto como sea posible después de su reconstitución. La bendamustina, ácido (4-{5-[bis(2-cloroetil)amino]-1 -metil-2-bencimidazolil} butírico, es una estructura atípica con u n anillo de bencimidazol , cuya estructura incluye una mostaza de nitrógeno activa (ver Fórmula I , la cual muestra hidrocloruro de bendamustina) .

Fórmula 1 La bendamustina fue sintetizada inicialmente en 1 963 en la República Democrática Alemana (GDR) y estuvo disponible desde 1971 hasta 1992 en esa ubicación bajo el nombre de Cytostasan®. Desde ese momento, ha sido comercializada en Alemania bajo el nombre comercial Ribomustin®. Se ha usado ampliamente en Alemania para tratar leucemia linfocítica crónica, enfermedad de Hodgkin , linfoma no de Hodgkín , mieloma múltiple y cáncer de pecho. Debido a su degradación en soluciones acuosas (como otras mostazas de nitrógeno), la bendamustina es suminstrada como un producto liofilizado. La formulación liofilizada actual de bendamustina (Ribomustin®) contiene hidrocloru ro de bendamustina y manitol en una forma liofilizada estéril como un polvo blanco para uso intravenoso siguiendo la reconstitución. El liofilizado terminado es inestable cuando se expone a la luz. Por lo tanto, el producto es almacenado en botellas de vidrio color café o ámbar. La formulación liofilizada actual de bendamustina contiene productos de degradación que pueden ocurrir durante la fabricación de la substancia de medicamento y/o durante el proceso de liofilización para hacer el producto de medicamento terminado. Actualmente, la bendamustina es formulada como un polvo liofilizado para inyección con 100 mg de medicamento por 50 ml de vial o 25 mg de medicamento por 20 ml de vial. Los viales son abiertos y reconstituidos tan cerca del momento de administración al paciente como sea posible. El producto es reconstituido con 40 ml (para la presentación de 100 mg) o 10 ml (para la presentación de 25 mg) de Agua estéril para inyección. El producto reconstituido es diluido adicionalmente en 500 ml, q.s. , 0.9% de cloruro de sodio para inyección. La ruta de administración es mediante infusión intravenosa sobre 30 a 60 minutos. o Siguiendo la reconstitución con 40 ml de agua estéril para i nyección, los viales de bendamustina son estables durante un periodo de 7 horas bajo almacenamiento a temperatura ambiente o durante 6 días sobre almacenamiento a 2-8°C. La solución de mezcla de 500 ml debe ser administrada al paciente dentro de 7 horas de reconstitución de vial (asumiendo almacenamiento a temperatura ambiente de la mezcla). La reconstitución del presente polvo liofilizado de bendamustina es difícil. Reportes de la clínica indican que la reconstitución puede requerir al menos quince minutos y puede requerir tanto como treinta minutos. Además de ser gravoso y lento para el profesional de cuidado de la salud responsble de reconstituir el producto, la prolongada exposición de bendamustina a agua durante el proceso de reconstitución aumenta el potencial para pérdida de potencia y formación de impureza debido a la hidrólisis del producto en agua. De esta manera, existe la necesidad de formulaciones liofilizadas de bendamustina que son más fáciles de reconstituir y las cuales tienen un mejor perfil de impureza que las actuales formulaciones de liofilado (polvo liofilizado) de bendamustina. La patente alemanta (GDR) no. 34727 describe un método para preparar ácidos ?-[5-bis-(ß-cloroetil)-amino-bencimidazolil-(2)}-alcano carboxílicos substituidos en la posición 1 . La patente alemana (GDR) no. 80967 describe una preparación inyectable de hidrocloruro de ácido ?-[1 -metil-5-bis-(ß-cloroetil)-amino-bencimidazolil-(2)]-butírico. La patente alemana (GDR) no. 159877 describe un método para preparar ácido 4-[1 -metil-5-bis (2-cloroetil) amino-bencimidazolil-2)-butírico. La patente alemana (GDR) no. 1 59289 describe una solución inyectable de bendamustina.

La monografía de producto de bendamustina Ribomustin® (actualizada 1 /2002) http://www.ribosepharm.de/pdf/ribomustin bendamustin/productmonoqraph.pdf proporciona información sobre Ribomustin(R) incluyendo la descripción de producto. Ni et a. reportan que la nitrosourea SarCNU fue más estable en butanol terciario puro que en ácido acético puro, sulfóxido de dimetilo, etilhidroxi , agua o en mezclas de TBA/agua (Ni et al. (2001 ) Intl. J . Pharmaceutics 226:39-46) . La ciclofosfamida liofilizada es conocida en la técnica, ver, por ejemplo, las patentes estadounidenses nos. 5,41 8,223; 5,413,995; 5,268,368; 5,227, 374; 5, 130,305; 4,659,699; 4, 537, 883; y 5,066,647. La mostaza de nitrógeno liofilizada Ifosfamide es descrita en la publicación internacional no. WO 2003/066027; patentes estadounidenses nos. 6,61 3,927; 5,750, 1 31 ; 5, 972,91 2; 5,227,373; y 5,204, 335. Teagarden et al. describen formulaciones liofilízadas de prostaglandina E-1 hecha al disolver PGE-1 en una solución de lactosa y alcohol butílico terciario (patente estadounidense no. 5,770,230).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a composiciones farmacéuticas estables de mostazas de nitrógeno, en particular bendamustina liofilizada y su uso en tratamiento de varios estados de enfermedad, especialmente enfermedades neoplásticas y enfermedades autoinmunes.

Una modalidad de la invención es una composición farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina) HP 1 , como se muestra en la Fórmula I I , Fórmula I I en el momento de liberación o donde la H P1 es la cantidad de HP1 presente en el tiempo cero después de la reconstitución de una composición famracéutica liofilizada de bendamustina como se describe en la presente. En una modalidad preferida, es una composición farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP1 , de preferencia no más de aproximadamente 0.45%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.40%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.35% , aún más preferiblemente no más de 0.30%. Otra modalidad de la invención es una preparación liofilizada de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.1 % hasta aproximadamente 0.3% de dímero de bendamustina como se muestra en la Fórmula l l l en la liberación o a tiempo cero después de la reconstitución Fórmula l l l .

Todavía otra modalidad de la invención es una preparación liofilizada de bendamustina que contiene no más de aproximadamente 0.5% , de preferencia 0.1 5% hasta aproximadamente 0.5%, de etiléster de bendamustina, como se muestra en la Fórmula IV a la liberación o a tiempo cero después de la reconstitución Fórmula IV.

Todavía otra modalidad de la invención es una preparación liofilizada de bendamustina , en donde la concentración de etiléster de bendamustina (Fórmula IV) no es más de 0.2%, de preferencia 0.1 %, mayor que la concentración de etiléster de bendamustina como se encuentra en la substancia de medicamento usada para hacer la preparación liofilizada . Otra modalidad de la inven ción es una preparación liofilizada de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina) HP1 en el momento de liberación de producto de medicamento. En una modalidad preferida está una preparación liofilizada de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.50% (por ciento de área de bendamustina) HP1 , de preferencia no más de aproximadamente 0.45%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.40%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.35%, aún más preferiblemente no más de 0.30%. Un aspecto de esta modalidad es preparaciones liofilizadas de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9% , de preferencia 0.5% , (por ciento de área de bendamustina) HP1 en el momento de liberación de producto de medicamento donde la preparación liofilizada es empacada en un vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable.

Todavía en otro aspecto de la invención, las preparaciones liofilizadas de bendamustina son estables con respecto a la cantidad de HP1 durante al menos aproximadamente 6 meses, de preferencia 12 meses, de preferencia 24 meses, hasta aproximadamente 36 meses o más cuando se almacena a aproximadamente 2o hasta aproximadamente 30°. Las temperaturas preferidas para almacenamiento son aproximadamente 5°C y aproximadamente temperatura ambiente. Otra modalidad de la invención es una forma de dosificación farmacéutica que incluye una composición farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9% de H P1 , de preferencia no más de aproximadamente 0.50% , de preferencia no más de aproximadamente 0.45%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.40%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.35%, aún más preferiblemente no más de 0.305%, donde HP1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación o en el tiempo cero después de la reconstitución de una preparación liofilizada de bendamustina de la presente invención . En aspectos preferidos de la invención, la forma de dosificación puede ser aproximadamente 5 hasta aproximadamente 500 mg de bendamustina, aproximadamente 10 hasta aproximadamente 300 mg de bendamustina, aproximadamente 25 mg de bendamustina, aproximadamente 1 00 mg de bendamustina y aproximadamente 200 mg de bendamustina. Todavía otra modalidad de la invención es una forma de dosificación farmacéutica que incluye una preparación liofilizada de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9%, de preferencia 0.5%, HP1 . Las formas de dosificación preferidas pueden ser aproximadamente 5 hasta aproximadamente 500 mg de bendamustina, aproximadamente 1 0 hasta aproximadamente 300 mg de bendamustina, aproximadamente 25 mg de bendamustina, aproximadamente 1 00 mg de bendamustina y aproximadamente 200 mg de bendamustina. Todavía en otra modalidad, la invención incluye una composición farmacéutica de bendamustina incluyendo bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina) , de preferencia no más de aproximadamente 0.50%, de preferencia no más de aproximadamente 0.45%, más preferiblemente no más de aproximadamente 0.40% , más preferiblemente no más de aproximadamente 0.35%, aún más preferiblemente no más de 0.30%, y una cantidad en trazas de uno o más solventes orgánicos, en donde dicha H P1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación o tiempo cero después de la reconstitución de una composición farmacéutica liofilizada de bendamustina como se describe en la presente. En diferentes aspectos de esta modalidad , el solvente orgánico es seleccionado de uno o más de butanol terciario, n-propanol, n-butanol , isopropanol, etanol , metanol , acetona, acetato de etilo, carbonato de dimetilo, acetonitrilo, diclorometano, metil etil cetona, metil isobutil cetona, 1 -pentanol, acetato de meti lo, tetracloruro de carbono, sulfóxido de dimetilo, hexafluoroacetona, clorobutanol, dimetil sulfona, ácido acético y ciciohexano. Los solventes orgánicos preferidos incluyen uno o más de etanol , metanol, propanol, butanol, isopropanol y butanol terciario. Un solvente orgánico más preferido es butanol terciario, también conocido como TBA, t-butanol, alcohol ter-butílico o alcohol butílico terciario. La presente invención involucra un método para obtener la aprobación de agencia para un producto de bendamustina, la mejora incluye ajustar una especificación de liberación para degradantes de bendamustina a menos de aproximadamente 4.0%, de preferencia aproximadamente 2.0% hasta aproximadamente 4.0% (por ciento de área de bendamustina) o de otra manera para alcanzar las composiciones farmacéuticas descritas en la presente. Un aspecto de esta modalidad, es un método para obtener la aprobación de agencia para un producto de bendamustina, el cual incluye ajustar una especificación de liberación para H P1 para ser menor que o igual a 1 .5% (por ciento de área de bendamustina). El producto de bendamustina en la presente contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP1 en la liberación. Otra modalidad es un método para obtener la aprobación de agencia para un producto de bendamustina, la mejora incluye ajustar la especificación de vida de anaquel para degradantes de bendamustina a menos de aproximadamente 7.0%, de preferencia aproximadamente 5.0% hasta aproximadamente 7.0% , (por ciento de área de bendamustina), donde el producto es almacenado a aproximadamente 2°C hasta aproximadamente 30°C. Las temperaturas preferidas para almacenamiento son aproximadamente 5°C y aproximadamente temperatura ambiente. El producto de bendamustina en la presente contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP 1 en la liberación. Otra modalidad de la invención es un proceso para fabricar una preparación liofilizada de bendamustina, la cual incluye controlar la concentración de degradantes de bendamustina en el producto final, de manera que la concentración de degradantes de bendamustina es menor que aproximadamente 4.0% , de preferencia no más de aproximadamente 2.0% hasta aproximadamente 4.0%, (por ciento de área de bendamustina) en la liberación o de otra manera para alcanzar las composiciones farmacéuticas descritas en la presente. El producto de bendamustina en la presente contiene no más de aproximadamente 0. % hasta aproximadamente 0.9% , de preferencia aproximadamente 0.5%, (por ciento de área de bendamustina) HP1 en la liberación. La presente invención describe un proceso para fabricar una preparación liofilizada de bendamustina , la cual comprende controlar la concentración de degradantes de bendamustina en el producto final, de manera que, en la liberación, la concentración de HP1 es menor que 0.9%, de preferencia 0.5%, (por ciento de área de bendamustina) y, en el tiempo de expiración de producto, la concentración de degradantes de bendamustina es menor que aproximadamente 7.0% , de preferencia no más de aproximadamente 5.0% hasta aproximadamente 7.0%; en donde dicho producto es almacenado a aproximadamente 2°C hasta aproximadamente 30°C. Otra modalidad de la invención es una solución o dispersión de pre-liofilización de bendamustina que comprende uno o más solventes orgánicos, donde la solución o dispersiones incluyen al menos una concentración estabilizante de un solvente orgánico, el cual reduce el nivel de degradación de bendamustina, de manera que la cantidad de HP1 producida durante la liofilización desde aproximadamente 0 hasta 24 horas no excede aproximadamente 0.% hasta aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina), de preferencia 0.50%, de preferencia 0.45% , más preferiblemente 0.40% , más preferiblemente 0.35%, aún más preferiblemente 0.30%. Un aspecto de esta modalidad, es el polvo liofi lizado producido a partir de la solución o dispersión de pre-liofilización. Todavía otra modalidad de la invención es una solución o dispersión de pre-liofilización de bendamustina comprendiendo uno o más solventes orgánicos, donde la solución o dispersiones incluyen al menos una concentración estabilizante de un solvente orgánico, el cual reduce el nivel de degradación de bendamustina , de manera que la cantidad de etiléster de bendamustina producido durante la liofilización desde aproximadamente 0 hasta 24 horas no excede aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) . Un aspecto de esta modalidad es el polvo liofilizado producido a partir de la solución o dispersión de pre-liofilización. Todavía otra modalidad de la invención es una solución o dispersión de pre-liofilización de bendamustina que comprende uno o más solventes orgánicos, donde la solución o dispersiones incluyen al menos una concentración estabilizante de un solvente orgánico, el cual reduce el nivel de degradación de bendamustina, de manera que la cantidad de etiléster de bendamustina (como se muestra en la Fórmula IV) producida durante la liofilización desde aproximadamente 0 hasta 24 horas no s más de 0.2%, de preferencia 0.1 %, mayor que la concentración de etiléster de bendamustina como se encuentra en la substancia de medicamento usada para hacer la solución de pre-liofilización. Un solvente orgánico preferido es butanol terciario. La invención también describe métodos para preparar una preparación liofilizada de bendamustina que incluye disolver bendamustina en una concentración estabilizante de un solvente de alcohol de entre aproximadamente 5% hasta aproximadamente 1 00% (v/v alcohol para formar una solución de pre-liofilización; y liofilizar la solución de pre-liofilización; en donde la preparación liofilizada de bendamustina hecha de tales métodos no contiene más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9%, de preferencia 0.5%, (por ciento de área de bendamustina) HP1 como se muestra en la Fórmula II, en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación o en el tiempo cero después de la reconstitución de la composición farmacéutica liofi lizada de bendamustina. Otras concentraciones de alcohol incluyen aproximadamente 5% hasta aproximadmaente 99.9%, aproximadamente 5% hasta aproximadamente 70% , aproximadamente 5% hasta aproximadamente 60%, aproximadamente 5% hasta aproximadamente 50% , aproximadamente 5% hasta aproximadamente 40%, aproximadamente 20% hasta aproximadamente 35%. Las concentraciones preferidas de alcohol son desde aproximadamente 20% hasta aproximadamente 30% . Los alcoholes preferidos incluyen uno o más de metanol, etanol , propanol, iso-propanol, butanol y butanol terciario. Un alcohol más preferido es butanol terciario. Una concentración preferida de butanol terciario es aproximadamente 20% hasta aproximadamente 30%, de preferencia aproximadamente 30%. Un aspecto de esta modalidad es la adición de un excipiente antes de la liofilización. Un excipiente preferido es manitol . Las concentraciones pre-liofilizadas preferidas de bendamustina son desde aproximadamente 2 mg/ml hasta aproximadamente 50 mg/ml . En un método preferido para preparar una preparación liofilizada de bendamustina , liofilizar la solución de pre-liofilización comprende i) congelar la solución de pre-liofilización a una temperatura por debajo de -40°C, de preferencia -50°C, para formar una solución congelada; ¡i) sostener la solución congelada a o por debajo de -40°C, de preferencia -50°C, durante al menos 2 horas; i ii) brincar la solución congelada a una temperatura de secado primari a entre aproximadamente -40°C y aproximadamente -10°C para formar una solución seca; iv) sostener durante aproximadamente 1 0 hasta aproxi madamente 70 horas; v) brincar la solución seca a una temperatura de secado secundaria entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C; y vii) sostener durante aproximadamente 5 hasta aproxi madamente 40 horas para formar una preparación liofilizada de bendamustina. En un método más preferido, liofilizar la solución de pre-liofilización comprende i) congelar la solución de pre-liofilización a aproximadamente -50°C para formar una solución congelada; ii) sostener la solución congelada a aproximadamente -50°C durante al menos 2 horas hasta a proximadamente 4 horas; iii) brincar a una temperatura de secado primaria entre aproximadamente -20°C y aproximadamente -12°C para formar una solución seca; iv) sostener a una temperatura de secado primaria durante aproximadamente 10 hasta aproximadamente 48 horas; v) brincar la solución seca a una temperatura de secado secundaria durante al menos 5 horas hasta aproximadmente 20 horas. Un alcohol preferido es butanol terciario. Una concentración preferida de butanol terciario es aproximadamente 20% hasta aproximadamente 30%, de preferencia aproximadamente 30%. Un aspecto de esta modalidad es la adición de un excipiente antes de la liofilización . Un excipiente preferido es manitol. Las concentraciones pre-liofilizadas preferidas de bendamustina son desde aproximadamente 2 mg/ml hasta aproximadamente 50 mg/ml. Otra modalidad de la invención es el polvo liofilizado o preparación obtenido a partir de los métodos para preparar una preparación liofilizada de bendamustina descrita en la presente. La invención también involucra formulaciones de bendamustina para liofilización que incluyen un excipiente y una concentración estabilizante de un solvente orgánico. Una formulación preferida incluye bendamustina a una concentración de aproximadamente 1 5 mg/ml, manitol a una concentración de aproximadamente 25.5 mg/ml, alcohol butílico terciario a una concentraión de aproximadamente 30% (v/v) y agua. Están incluidas en esta modalidad de la invención las preparaciones liofilizadas hechas a partir de tales formulaciones de bendamustina. Están incluidos en las invenciones los métodos para tratar una condición médica en un paciente que involucran administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica de la invención , donde la condición es dócil a tratamiento con dicha composición farmacéutica. Algunas condiciones dóciles a tratamiento con las composiciones de la invención incluyen leucemia linfocítica crónica (CLL) , enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin (NHL), mileoma múltiple (MM), cáncer de pecho, cáncer de pulmón de células pequeñas, desórdenes hiperproliferativos y una enfermedad autoinmune. Las condiciones preferidas incluyen artritis reumatoide, esclerosis múltiple o lupus. Está incluido en las invenciones el uso de composiciones farmacéuticas o preparaciones farmacéuticas de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición médica , como se define en la presente, en un paciente que involucra administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica de la invención, donde la condición es dócil a tratamiento con dicha composición farmacéutica. También se incluyen en la invención, métodos para tratamiento en los cuales las composiciones farmacéuticas de la invención están en combinación con uno o más agentes antineoplásticos, donde el agente antineoplástico está dado antes, concurrentemente o subsecuente a la administración de la composición farmacéutica de la invención. Los agentes antineoplásticos preferidos son anticuerpos específicos para CD20. Otra modalidad de la invención es un ciclo de liofilización para producir preparaciones de bendamustina liofilizada de la invención. Un ciclo de liofilización preferido incl uye a) congelar a aproximadamente -50°C sobre aproximadamente 8 horas; b) sostener a -50°C durante aproximadamente 4 horas; c) brincar a -25°C sobre aproximadamente 3 horas; d) sostener a -10°C durante 30 horas; e) brincar a entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C o mayor durante aproximadamente 3 horas; f) sostener entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C durante aproximadamente 25 horas; g) brincar a aproximadamente 20°C en 1 hora; h) descargar a aproximadamente 20°C , a una presión de 0.9490 kg/cm2 (1 3.5 psi) en un recipiente farmacéuticamente aceptable que está herméticamente sellado; en donde la presión es aproximadamente 1 50 mieras a lo largo del secado primario y 50 mieras a lo largo del secado secundario. Un aspecto de este ciclo involucra el paso (e), el cual es brincado hasta aproximadamente 30-35°C durante 3 horas y entonces brincado a 40°C durante 5 horas. Otro aspecto de esta modalidad es el polvo liofilizado preparado a partir de tales ci clos de liofilización. Un ciclo de liofilización más preferido incluye i) iniciar con una temperatura de anaquel de aproximadamente 5°C para carga; ii) congelar hasta aproximadamente -50°C sobre aproximadamente 8 horas; iii) sostener a -50°C durante aproximadamente 4 horas; iv) brincar a aproximamente -20°C sobre aproximadamente 3 horas; v) sostener a aproximadamente -20°C durante 6 horas; brincar hasta aproximadamente -1 5°C sobre aproximadamente 1 hora; vi) sostener a -1 5°C durante aproximadamente 20 horas; vii) brincar hasta aproximadamente -1 5°C sobre aproximadamente 1 hora; viii) sostener a aproximadamente -1 5°C durante aproximadamente 20 horas; ix) brincar a aproximadamente -1 2°C sobre aproximadamente 0.5 hora; x) sostener a aproximadamente -1 2°C durante aproximadamente 1 5.5 horas; xi) brincar a entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C o mayor durante aproximadmente 1 5 horas; xii) sostener entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C durante aproximadamente 10 horas; xiii) brincar a aproximadamente 40°C sobre aproximadamente 1 hora; y xiv) sostener a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 5 horas; descargar a aproximadamente 5°C, a una presión de aproximadamente 0.9490 kg/cm2 (1 3.5 psi) en un recipiente farmacéuticamente aceptable que está herméticamente sellado; en donde la presión es aproximadamente 1 50 mieras a lo largo del secado primario y 50 mieras a lo largo del secado secundario. En una modalidad preferida, el paso (xi) se brinca hasta aproximadamente 30-35°C durante aproximadamente 15 horas. La invención también abarca una forma de dosificación farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 0.9%, de preferencia 0.5%, HP1 (por ciento de área de bendamustina), en donde dicha forma de dosificación comprende un vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable, en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente pre-reconstitución en el tiempo cero después de la reconstitución de dicha forma de dosificación. Las concentraciones preferidas de bendamustina incluyen aproximadamente 10 hasta aproximadamente 500 mg/recipiente, aproximadamente 1 00 mg/recipiente, aproximadamente 5 mg hasta aproximadamente 2 g/recipiente y aproximadamente 170 mg/recipiente.

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas pre-liofilizadas de bendamustina . Una composición pre-liofilizada preferida incluye HCl de bendamustina aproximadamente 15 mg/ml , manitol aproximadamente 25.5 mg/ml, aproximadamente 30% (v/v) de alcohol butíl ico terciario y agua. Estas y otras modalidades de la invención son descritas a continuación en la presente o son evidentes para personas de habilidad ordinaria en la técnica con base en las siguientes descripciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DI BUJOS La Fig. 1 muestra la solubilidad de bendamustina a varias temperaturas para dos soluciones diferentes de bendamustina en butanol terciario. La Fig. 2 muestra los resultados de pureza de un análisis de H PLC después de incubar bendamustina en varios alcoholes durante 24 horas a 5°C. Los resultados son presentados como el por ciento de área del pico de bendamustina. La Fig. 3 muestra la formación de H P1 (Fórmula I I) después de 24 horas en varios co-solventes de alcohol/agua a 5°C. La Fig. 4 muestra la formación de dímero (Fórmujla l l l) después de 24 horas en varios co-solventes de alcohol/agua a 5°C. La Fig. 5 muestra un ciclo de liofilización para bendamustina usando un co-solvente de TBA/agua. La Fig. 6 muestra un cromatograma para Ribomustin® usando HPLC, método no. 1 .

DESCRI PCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se usa en la presente, los términos "formular" se refieren a la preparación de un medicamento, por ejemplo, bendamustina, en una forma adecuada para administración a un paciente mamífero, de preferencia un humano. De esta manera, "formulación" puede incluir la adición de excipientes, diluyentes o portadores farmacéuticamente aceptables. Como se usa en la presente, el término "polvo liofilizado" o "preparación liofilizada" se refiere a cualquier material sólido obtenido mediante liofilización, es decir, secado por congelación de una solución acuosa. La solución acuosa puede contener un solvente no acuoso, es decir, una solución compuesta por un solvente acuoso y uno o más solventes no acuosos. De preferencia , una preparación liofilizada es una en la cual el material sólido es obtenido al secar por congelación una solución compuesta de solvente acuoso y uno o más solventes no acuosos, más preferiblemente el solvente no acuoso es un alcohol. Por "composición farmacéutica estable" se quiere decir una composición farmacéutica que tiene estabilidad suficiente para tener utilidad como un producto farmacéutico. De preferencia, una composición farmacéutica estable tiene estabilidad suficiente para permitir almacenamiento a una temperatura conveniente, de preferencia, entre -20°C y 40°C, más preferiblemente aproximadamente 2°C hasta aproximadamente 30°C, para un periodo razonable, por ejemplo, la vida de anaquel del producto que puede ser tan corta como una boca, pero normalmente es seis meses o más, más preferiblemente un año o más aún más peferiblemente veinticuatro meses o más, y aún más preferiblemente treinta y seis meses o más. La vida de anaquel o expiración puede ser la cantidad de tiempo donde el ingrediente activo se degrada a un punto por debajo de 90% de pureza. Para fines de la presente invención, una composición farmacéutica estable incluye referencia a composiciones farmacéuticas con rangos específicos de impurezas como se describe en la presente. De preferencia , una composición farmacéutica estable es una que tiene degradación mínima del ingrediente activo, por ejemplo, retiene al menos aproximadamente 85% de activo no degradado, de preferencia al menos aproximadamente 90% , y más preferiblemente al menos aproximadamente 95%, después de almacenamiento a 2-30°C durante un periodo de 2-3 años. Por "preparación liofilizada estable" se quiere decir cualquier preparación liofilizada que tiene estabilidad suficiente, tales características como se define de manera similar en la presente para una composición farmacéutica estable, para tener utilidad como un producto farmacéutico. Por "degradado" se quiere decir que el activo ha experimentado un cambio en la estructura qu ímica. El término "cantidad terapéuticamente efectiva", como se usa en la presente, se refiere a aquella cantidad del compuesto siendo administrado que liberará en algún grado uno o más de los síntomas del desorden siendo tratado. En referencia al tratamiento de neoplasmas, una cantidad terapéuticamente efectiva se refiere a esa cantidad que tiene el efecto de (1 ) reducir el tamaño del tumor, (2) inhibir (es decir, retardar en algún grado, de preferencia detener), metástasis de tumor, (3) inhibir en algún grado (es decir, retardar en algún grado, de preferencia detener) , crecimiento de tumor, y/o (4) aliviar en algún grado (o de preferencia, eliminar) uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. La cantidad terapéuticamente efectiva también puede significar prevenir que la enfermedad ocurra en un animal que puede estar predispuesto a la enfermedad, pero todavía no experimenta o exhibe síntomas de la enfermedad (tratamiento profiláctico). Adicionalmente, la cantidad terapéuticamente efectiva puede ser la cantidad que aumenta la esperanza de vida de un paciente afectado con un desorden terminal. Las dosis terapéuticamente efectivas de bendamustina para el tratmiento de linfoma no de Hodgkin puede ser desde aproximadamente 60-120 mg/m2 dada como una sola dosis en dos días consecutivos. El ciclo puede ser repetido aproximadamente cada tres a cuatro semanas. Para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica (CLL), la bendamustina puede ser administrada a aproximadamente 80-1 00 mg/m2 en el día 1 y 2. El ciclo puede ser repetido después de aproximadamente 4 semanas. Para el tratamiento de enfermedad de Hodgkin (etapas ll-IV), la bendamustina puede ser administrada en el "régimen DBVBe" con daunorubicina 25 mg/m2 en los d ías 1 y 15, bleomicina 10 mg/m2 en los d ías 1 y 1 5, vincristina 1 .4 mg/m2 en los días 1 y 15 y bendamustina 50 mg/m2 en los días 1 -5 con repetición del ciclo cada 4 semanas. Para cáncer de pecho, la bendamustina (120 mg/m2) en los días 1 y 8 puede darse en combinación con metotrexato 40 mg/m2 en los días 1 y 8, y 5-fluorouracilo 600 mg/m2 en los días 1 y 8 con repetición del ciclo cada 4 semanas. Como una segunda línea de terapia para cáncer de pecho, la bendamusti na puede administrarse a aproximadamente 100-1 50 mg/m2 en los días 1 y 2 con repetición del ciclo cada 4 semanas. Como se usa en la presente, "neoplástico" se refiere a un neoplasma, el cual es un crecimiento anormal, tal crecimiento ocurre debido a una proliferación de células no sujetas a las limitaciones usuales de crecimiento. Como se usa en la presente, "agente antineoplástico" es cualquier compuesto, composición , mezcla, co- mezcla o combinación, que inhibe, elimina, retarda o revierte el fenotipo neoplástico de una célula. Como se usa en la presente, "hiperproliferación" es la sobreproducción de células en respuesta a un factor de crecimiento particular. "Desórdenes hiperproliferativos" son enfermedades en las cuales las células se sobre-reproducen en respuesta a un factor de crecimiento particular. Ejemplos de tales "desórdenes hiperproliferativos" incluyen retinopatía diabética, psoriasis, endometriosis, cáncer, desórdenes degenerativos maculares y desórdenes de crecimiento benigno, tales como agrandamiento de próstata. Como se usa en la presente, el término "vial" se refiere a cualquier reci piente con pared, ya sea rígido o flexible. "Controlar" como se usa en la presente, significa poner controles de proceso en su lugar para facilitar la ejecución de la cosa siendo controlada. Por ejemplo, en un dado caso, "controlar" puede significar muestras de prueba de cada lote o una variedad de lotes de manera regular o aleatoria; ajustar la concentración de degradantes como una especificación de liberación; seleccionar condiciones de proceso, por ejemplo, uso de alcoholes y/u otros solventes orgánicos en la solución o dispersión de pre-liofilización, con el fin de asegurar que la concentración de degradantes del ingrediente activo no sea inaceptablemente alta; etc. Controlar degradantes al ajustar las especificaciones de liberación para la cantidad de degradantes pueden usarse para facilitar la aprobación reguladora de un producto farmacéutico por una agencia reguladora, tal como, la U . S. Food and Drug Administration y agencias similares en otros países o regiones ("agencia") . El término "farmacéuticamente aceptable", como se usa en la presente, significa que la cosa que es farmacéuticamente aceptable, po r ejemplo, componentes, incluyendo recipientes, de una composición farmacéutica, no puede provocar pérdida inaceptable de actividad farmacológica o efectos laterales adversos inaceptables. Ejemplos de componentes farmacéuticamente aceptables son provistos en la U nited States Pharmacopeia (USP), el National Formulary (NF), adoptado en la United States Pharmacopeial Convention, celebrada en Rockville, Md. En 1 990 y FDA Inactive I ngredient Guide 1 990, 1 996 emitida por la U.S. Food and Drug Administration (incorporadas aquí por referencia, incluyendo cualquier dibujo). Otros grados de soluciones o componentes que pueden cumplir límites y/o especificaciones necesarios que estén fuera de USP/NF también pueden usarse. El térmio "composición farmacéutica", como se usa en la presente, deberá significa una composición que se hace bajo condiciones tales, que es adecuada para administración a humanos, por ejemplo, se hace bajo condiciones de GMP y contiene excipientes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, sin limitación, estabilizantes, agentes de volumen, amortiguadores, portadores, diluyentes, veh ículos, solubilizantes y ligantes. Como se usa en la presente, la composición farmacéutica incluyen , pero no está limitada a, solución o dispersión de pre-liofilización así como una forma líquida lista para inyección o infusión después de reconstitución de una preparación liofilizada. Una "forma de dosificación farmacéutica", como se usa en la presente, significa las composiciones farmacéuticas descritas en la presente que están en un recipiente y en una cantidad adecuada para reconstitución y administración de una o más dosis, normalmente aproximadamente 1 -2, 1 -3, 1 -4 , 1 -5, 1 -6, 1 -1 0 o aproximadamente 1 -20 dosis. De preferencia, una "forma de dosificación farmacéutica", como se usa en la presente, significa una composición farmacéutica liofilizada descrita en la presente en un reci piente y en una cantidad adecuada par reconstitución y entrega de una o más dosis, normalmente aproximadamente 1 -2, 1 -3 , 1 -4, 1 -5, 1 -6, 1 -1 0 o aproximadamente 1 -20 dosis. La forma de dosificación farmacéutica puede comprender un vial o jeringa u otro recipiente farmacéuticamente aceptable adecuado. La forma de dosificación farmacéutica adecuada para uso de inyección o infusión puede incluir soluciones o dispersiones acuosas estériles o polvos estériles comprendiendo un ingrediente activo, los cuales son adaptados para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables o infunsionalbes estériles. En todos los casos, la forma de dosificación final debería ser estéril, fluida y estable bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. El portador o vehíuclo líquido puede ser un solvente o medio de dispersión líquido comprendiendo, por ejemplo, agua, etanol, un poliol, tal como, glicerol, propilenglicol o polietilenglicoles l íquidos y similares, aceites vegetales, esteres de glicerilo no tóxicos y mezclas adecuadas de los mismos. La prevención del crecimiento de microorganismos puede lograrse mediante varios agentes antibacterianos y antifungales, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. Como se usa en la presente, el término "excipiente" significa las substancias usadas para formular ingredientes farmacéuticos activos (API) en formulaciones farmacéuticas; en una modalidad preferida, un excipiente no disminuye o interfiere con el efecto terapéutico primario de API . De preferencia, un excipiente es terapéuticamente inerte. El término "excipiente" abarca portadores, diluyentes, vehículos, solubilizantes, estabilizantes, agentes de volumen y ligantes. Los excipientes también puede ser aquellas substancias presentes en una formulación farmacéutica como un resultado indirecto o no pretendido del proceso de fabricación. De preferencia, los excipientes son aprobados o considerados seguros para administración humana y animal, es decir, substancias GRAS (generalmente consideradas como seguras). Substancias GRAS son listadas por la Food and Drug Administration en el Code of Federal Regulations (CFR) a 21 CFR § 182 y 21 CFR § 1 84, incorporados en la presente por referencia. Los excipientes preferidos incluyen, pero no están limitados a, hexitoles, incluyendo manitol y similares. Como se usa en la presente "una concentración estabilizante de un solvente orgánico" o "una concentración estabilizante de un alcohol", singifica que la cantidad de un solvente o alcohol orgánico que reduce el nivel de degradación de bendamustina para alcanzar un nivel especificado de degradantes en e l producto de medicamento final. Por ejemplo, con respecto al HP1 degradante, una concetración estabilizante de un solvente orgánico es que la cantidad que resulta en una concentración de HP1 (por ciento de área de bendamustina) de menos de aproximadamente 0.5% , de preferencia menos de 0.45%, de preferencia menos de 0.40%, más preferiblemente menos de 0.35%, más preferiblemente menos de 0.30% , y aún más preferiblemente menos de 0.25%. Con respecto a la concentración de degradante global o total del producto de medicamento final, una concentración estabilizante de un solvente orgánico es esa cantidad que resulta en una concentración de degradante total (en el momento de liberación de producto de medicamento) de menos de aproximadamente 7% (por ciento de área de bendamustina), de preferencia menos de aproximadamente 6%, más preferiblemente menos de aproximadamente 5% , y aún más preferiblemente menos de aproximadamente 4.0%. Por "por ciento de área de bendamustina" se quiere decir la cantiad de un degradante especificado, por ejemplo, HP 1 , en relación a la cantidad de bendamustina como es determinado, por ejemplo, por HPLC. El término "solvente orgánico" significa un material orgánico, usualmente un líquido, capaz de disolver otras substancias. Como se usa en la presente, "cantidad en trazas" de un solvente orgánico" significa una cantidad de solvente que es igual a o está por debajo de los niveles recomendados para productos farmacéuticos, por ejemplo, como se recomienda por ICH líneas de guía (I nternational Conferences on Harmonization, I mpurities - Guidelines for Residual Solvents. Q3C. Federal Register. 1 997;62(247) :67377) . El límite inferior es la cantidad más baja que puede ser detectada.

El término "liberar" o "en liberación" significa que el producto de medicamento ha cumplido las especificaciones de liberación y puede usarse para su propósito farmacéutico pretendido.

A. General La invención proporciona composiciones estables, farmacéuticamente aceptables, preparadas a partir de bendamustina. En particular, la invención proporciona formulaciones para la liofilización de HCl de bendamustina. El polvo liofilizado obtenido a partir de tales formulaciones es reconstituido más fácilmente que el polvo liofilizado de bendamustina actualmente disponible. Además, los productos liofilizados de la presente invención tienen un mejor perfil de impueza que Ribomustin® con respecto a ciertas impurezas, en particular HP1 , dímero de bendamustina y etiléster de bendamustina, antes de la reconstitución, sobre almacenamiento del liofilado, o siguiendo la reconstitución y mezcla. La presente invención proporciona además formulaciones de bendamustina útiles para tratar enfermedades neoplásticas. Las formulaciones descritas en la presente pueden ser administradas solas o en combinación con al menos un agente antineoplástico adicional y/o terapia radioactiva. Un aspecto de la invención son las condiciones y medios para intensificar la estabilidad de bendamustina antes de y durante el proceso de liofilización , sobre el almacenamiento de anaquel o sobre reconstitución.

Los agentes antineoplásticos, los cuales pueden ser utilizados en combinación con las formulaicones de la invención incluyen aquéllos provistos en el Merck Index 1 1 , pp 16-17, Merck & Co. , Inc. (1 989) y The Chemotherapy Source Book ( 1 997) . Ambos libros son ampliamente reconocidos y fácilmente disponibles para el técnico experto. Existen grandes cifras de agentes antineoplásticos disponibles en uso comercial , en eval uación cl í nica y en desarrollo pre-cl ínico, los cuales podrían ser seleccionados para tratamiento de neoplasia mediante quimioterapia de medicamento de combinación. Tales agentes anti-nepolásticos caen en varias categorías mayores, a saber, agentes tipo antibiótico, mediamentos de unión de DNA covalentes, agentes antimetabolitos, agentes hormonales, incluyendo glucocorticoides, tales como, prednisona y dexametasona, agentes inmunológicos, agentes tipo interferón, agentes diferenciadores, tales como, los retinoides, agentes pro-apoptóticos, y una categoría de agentes diversos, incluyendo compuestos tales como antisentido, RNA de interferencia pequeño y similares. De manera alternativa, otros agentes antineoplásticos, tales como, inhibidores de proteasas de metalomatriz (MMP) , SOD imitadores o inhibidores alfav beta3 pueden usarse. Una familia de agentes antineoplásticos que pueden usarse en combinación con los compuestos de las invenciones consiste de agentes antineoplásticos tipo antimetabol itos. Los agentes antineoplásticos antimetabolitos adecuados pueden ser seleccionados del grupo que consiste de alanosina, AG2037 (Pfizer), 5-FU-fibrinógeno, ácido acantifólico, aminotiadiazol, brequ inar sodio, carmofur, Ciba-Geigy CGP- 3069, ciclopentil citosina, fosfato estearato de citarabina, conjugados de citarabina, Lilly DATHF, Merrel Dow DDFC , dezaguanina, dideoxicitidna, dideoxiguanisona, didox, Yoshitomi DMDC, doxifluridina, Wellcome EHNA, Merck & Co. EX01 5, fazarabina, floxuridina, fosfato de fludarabina, 5-fluorouracilo, N-(2'-furanidiil)-5-fluorouracilo, Daiichi Seiyaku FO-1 52, isopropil pirrolizina, Lily LY- 1 8801 1 , Lilly LY-26461 8, metobenzaprim , metotrexato, Wellcome MZPES; norsperidina, NCI NSC-1 27716, NCI NSC-264880, NCI NSC-39661 , NCI NSC-612567, Warner-Labmert PALA, pentostatina, piritrexim , plicamicina, Asahi Chemical PL-AC , Takeda TAC-788, tiogua nina, tiazofurina, Erbamont TIF, trimetrexato, inhibidores de tirosina cinasa, inhibidores de tirosina proteína cinasa, Taiho UFT y uricitina. Una segunda familia de agentes neoplásticos que puede ser usada en combinación con los compuestos de la invención consiste de agentes de unión de DNA covalentes. Los agentes antineoplásticos tipo alquilatante adecuados pueden ser seleccionados del grupo que consiste de Shionogi254-S, análogos de aldo-fosfamida, altretamina, anaxirona, Boehringer Mannheim BBR-2207, bestrabucil, budotitano, Wakunaga CA-1 02, carboplatina, carmustina, Chinoin-1 39, Chinoin-1 53, clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida, American Cyanamid CL-286558, Sanofi CY-233, ciplatato, Degussa D-1 9-384, Sumimoto DACHP(Myr)2, difenilspiromustina, diplatino citostático, derivados de Erba distamicina, Chugai DWA-21 14R, ITI E09, elm ustina, Erbamont FCE-24517, fosfato de estramustina de sodio, fotemustina, Unimed G-6-M , Chinoin GYKI-1 7230, hepsul-fam , ifosfamida, iproplatina, lomustina, mafosfamida, melfalano, mitolactol , Nippon Kayaku N K- 121 , NCI NSC-264395, NCI NSC-34221 5, oxil ¡platina, Uphohn PCNU , prednimustina, Proter PTT-1 19, ranimustina, semustina , SmithKIine SK&F-1 01772, Yakult Honsha SN-22, spiromustina, Tanabe Seiyaku TA-0977, tauromustina, emozolomida, teroxirona, tetraplatina y trimelamol. Otra familia de agentes anti neoplásticos que puede ser usada en combinación con los compuestos descritos en la presente consiste de agentes antineoplásticos tipo antibiótico. Los agentes antineoplásticos tipo antibiótico pueden ser seleccionados del grupo que consiste de Taiho 41 81 -A, aclarubicina, actinomicina D, actinoplanona, alanosina, Erbamont ADR-456, derivado de aeropolisinina, Ajinomoto AN-201 -I I , Ajinomoto AN-3, Nippon Soda anisomicinas, antraciclina, azino-micina-A, bisucaberina, Bristol-Myers BL-6859, Bristol-Myers BMY-25067, Bristol-Myers BMY-25551 , Bristol-Myers BMY-26605, Bristol-Myers BMY-27557, Bristol-Myers BMY-28438, sulfato de bleomicina, briostatina-1 , Taiho C-1 027, calichemicina , cromoximicina, dactinomicina, daunorubicina, Kyowa Hakko DC-1 02, Kyowa Hakko DC-79, Kyowa Hakko DC-88A, Kyowa Hakko DC89-A1 , Kyowa Hakko DC92-B, ditrisarubicina B, Shionogi DOB-41 , doxorubicina, doxorubicina-fibrinógeno, elsamicina-A, epirubicina, erbstatina, esorubicina, esperamicina-A1 , esperamicina-A1 b, Erbamont FCE-21 954, Fujisawa FK-973, fostriecina, Fujisawa FR-900482, glidobactina, gregatina-A, grincamicina, herbimicina, idarubicina, iludínas, kazusamicina, kesarirodinas, Kyowa Hakko KM-5539, Kirin Brewery KRN-8602, Kyowa Hakko KT-5432, Kyowa Hakko KT-5594, Kyowa Hakko KT-6149, American Cyanamid LL-D49194, Meiji Seika ME 2303, menogaril, mitomicina, mitoxantrona, SmithKIine M-TAG, neoenactina , Nippon Kayaku NK-31 3, Nippon Kayaku N KT-01 , SRI International NSC-357704, oxalisina, oxaunomicina, peplomicina, pilatina , pirarubicina, porotramicina, pirindamicina A, Tobishi RA-I , rapamicina, rhizoxina, rodorubicina, sibanomicina, siwenmicina, Sumitomo SM-5887, Snow Brand SN-706, Snow Brand SN-07, sorangicina-A, sparsomicina, SS Pharmaceutical SS-21020, SS Pharmaceutical SS-731 3B, SS Pharmaceutical SS-9816B, estefimicina B, Taiho 41 81 -2, talisomicina, Takeda TAN-868A, terpentecina , trazina, tricrozarina A, Upjohn U-73975, Kyowa Hakko UCN-1 00281 A, Fujisawa WF-3405, Yoshitomi Y-25024 y zorubicina. U na cuarta familia de agentes antineoplásticos que puede usarse en combinación con los compuestos de la invención incluye una familia diversa de agentes antineoplásticos seleccionados del grupo que consiste de alfa-caroteno, alfa-difluorometil-arginina, acitretina, trióxido de arsénico, Avastin® (Bevacizu mab) , Biotec AD-5, Kyorin AHC-52, alstonina , amonafida, anfetinilo, amsacrina, Angiostat, ankinomicina, anti-neoplaston A10, antineoplaston A2, antinepolaston A3, antineoplaston A5, antineoplasto n AS2-1 , Henkel APD, glicinato de afidicolina, asparaginasa, Avarol, Bacarina, batracilina , benfluron, benzotript, Ipsen-Beaufour BI M-2301 5, bisantreno, Bristo-Myers BMY-40481 , Vestar boro-1 0, bromofosfamida, Wellcome BW-502, Wellcome BW-773, caracemida, hidrocloru ro de carmetizol, Ajinomoto CDAF, clorsulfaquinoxalona , Chemes CHX-2053, Chemex CHX-1 00, Warner- Lambert CI-921, Warner-Lambert CI-937, Warner-Lambert CI-941, Warner-Lambert CI-958, clanfenur, claviridenona, ICN compuesto 1259, ICN compuesto 4711, Contracan, Yakult Honsha CPT-11, crisnatol, curaderm, citocalasina B, citarabina, citocitina, Merz D-609, maleato de DABIS, dacarbazina, dateliptinio, didemnina-B, éter de dihematoporfirina, dihidrolenperona, dinalina, distamicina, Toyo Pharmar DM-341, Toyo Pharmar DM-75, Daiichi Seiyaku DN-9693, eliprabina, acetato de eliptinio, epotionas Tsumura EPMTC, erbitux, ergotamina, erlotnib, etopósido, etretinato, fenretinida, Fujisawa FR-57704, nitrato de galio, genkwadafinina, Gleevec® (imatnib), Chugai GLA-43, Glaxo GR-63178, gefitinib, grifolan NMF-5N, hexadecilfosfocolina, Green Cross HO-221, homoharringtonina, hidroxiurea, BTG ICRF-187, indanocina, ilmofosina, isoglutamina, isotretinoina, Otsuka Jl_36, Ramot K-477, Otsuak K-76COONa, Kureha Chemical K-AM, MECT Corp KI-8110, American Cyanamid L-623, leucoregulina, lonidamina, Lundbeck LU-23-112, Lilly LY-186641, NCI (US) MAP, maricina, mefloquina, Merrel Dow MDL-27048, Medco MEDR-340, merbarona, derivados de merocianina, metilanilinoacridina, Molecular Genetics MGI-136, minactivina, mitonafída, mitoquidona, mopidamol, motretinida, Zenyaku Kogyo MST-16, N-(retinoil)aminoácidos, Nisshin Flour Milling N-021, dehidroalaninas N-aciladas, nafazatrom, Taisho NCU-190, derivado de nocodazol, Normosang, NCI NSC-145813, NCI NSC-361456, NCI NSC-604782, NCI NSC-95580, octreótido, Ono ONO-112, oquizanocina, Akzo Org-10172, paclitaxel, pancratistatina, pazeliptina, Warner-Lambert PD-111707, Warner-Lambert PD-115934, Warner-Lambert PD-131141, Pierre Fabre PE-1001 , ICRT péptido D, piroxantrona, polihemotoporfirina, ácido polipreico, Efamol porfirina, probimano, procarbazina, proglumida, Invitron proteasa nexina I , Tobishi RA-700, razoxano, Sapporo Breweries RBS, restrictina-P, reteliptina, ácido retinoico, Rhone-Poulenc RP-49532, Rhone-Poulenc RP-56976, Ritoxan® (y otros anticuerpos anti-CD20, por ejemplo, Bexxar®, Zevalin®) , SmithKIine SK&F-104864, estatinas (Lipitor®, etc.), Sumitomo SM-1 08, Kuraray SMANCS, SeaPharm SP-10094, espatol, derivados de espirociclopropano, espirogermanio, U nimed, SS Pharmaceutical SS-554, estiropoldinona, Stypoldione, Syntory SU N 0237, Suntory Sun 2071 , superóxido dismutasa, Thalidomide, análogos de Thalidomide, Toyama T-506, Toyama T-680, taxol , Teijin TEI-0303, tenipósido, taliblastina, Eastman Kodak TJB-29, tocotrienol, Topostin, Teijin TT-82, Kyowa Hakko UCN-01 , Kyowa Hakko UCN-1028, ucraín, Eastman Kodak USB-006, sulfato de vinblastina , vincristina, vi ndesina, vinestramida, vinorelbina, vintriptol, vinzolidina, witanólidos y Yamanouchi YM-534, Zometa®. Ejemplos de agentes radioprotectores que pueden ser usados en combinación con quimioterapia de esta invención son AD-5, adcnón, análogos de amifostina, detox, dimesna, 1 -1 02 , MM-159, dehidroalaninas N-aciladas, TG F-Genentech, triprotimod , amifostina, WR-151327, FUT-187, ketoprofeno transdérmico, nabumetona, superóxido dismutasa (Chiron y E nzon) . Los métodos para la prepa ración de los agentes antineoplásticos descritos antes puede encontrarse en la literatura . Los métodos para la preparación de doxorubicina son descritos, por ejemplo, en las patentes estadounidenses nos. 3.590,028 y 4, 012,448. Los métodos para preparar inhibidores de proteasa de metalomatriz son descritos en EP 780386. Los métodos para preparar inhibidores alfav.beta3 son descritos en WO 97/081 74. Los agentes antineoplásticos preferidos incluyen, sin limitación, uno o más de daunorubicina, bleomicina, vincristina, doxorubicina, dacarbazina, prednisolona, mitoxantrona, prednisona, metotrexato, 5- fluoruracilo, dexametasona, talidomida, derivados de talidomida, 2ME2, Neovastat, R 1 1 5777, trióxido de arsénico, bortezomib, tamoxifeno, G3139 (antisentido) y SU5416, mitomicina, anticuerpos anti-CD20, tales como Rituxan® y R-etodolac. Los regímenes de medicamento preferidos para los cuales la presente formulación puede usarse en conjunción con o como un reemplazo para uno o más de los componentes incluye, sin limitación , ABVD (doxorubicina, bleomicina, vincristina, dacarbazina) , DBV (daunorubicina, bleomicina, vincristina, CVPP (ciclofosfamida, vinblastina, procarbazina, prednisolona), COP (ciclofosfamida, vincristina, prednisolona), CHOP (ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina y prednisona) y CMF (ciclofosfamida, metotrexato, 5- fluorouracilo). Reg ímenes adicionales están dados en la Tabla A a continuación.

Tabla A - Regímenes terapéuticos para cáncer Como se describe en la presente, una formulación liofilizada de bendamustina es lograda siguiendo la remoción de un solvente orgánico en agua. El ejemplo más típico del solvente usado para preparar esta formulación es butanol terciario (TBA). Otros solventes orgánicos pueden ser usados incluyendo etanol, n-propanol , n-butanol, ¡sopropanol, acetato de etilo, carbonato de dimetilo, acetonitrilo, diclorometano, metil etil cetona, metil isobutil cetona, acetona, 1 -pentanol, acetato de metilo, metanol, tetracloruro de carbono, sulfóxido de dimetilo, hexafluoroacetona, clorobutanol , dimetil sulfona, ácido acético, ciciohexano. Estos solventes precedentes pueden serusados de manea individual o en combinación. Los solventes útiles deben formar solucones estables con bendamustina y no deben degradar o desactivar apreciablemente los API . La solubilidad de bendamustina en el solvente seleccionado debe ser sufucientemente alto para formar concentraciones comercialmente útiles del medicamento en solvente. De manera adicional , el solbente debería ser capaz de ser removido fácilmente a partir de una dispersión o solución acuosa del producto de medicamento, por ejemplo, a través de liofilización o secado al vacío. De preferencia, se usa una solución teniendo una concentración de aproximadamente 2-80 mg/ml, de preferencia aproximadamente 5 hasta 40 mg/ml, más preferiblemente 5-20 mg/ml y aún más preferiblemente 12 hasta 1 7 mg/ml de bendamustina. Un excipiente de liofilización farmacéuticamente aceptable puede ser disuelto en la fase acuosa. Ejemplos de excipientes útiles para la presente invención incluyen, sin l imitación, fosfato de sodio o potasio, ácido cítrico, ácido tartárico, gelatina, glicina y carbohidratos, tales como, lactosa, sacarosa, maltosa, glicerina, dextrosa, dextrano, trehalosa y hetaalmidón. El man itol es un excipiente preferido. Otros excipientes que pueden ser usados si se desea, incluyen antioxidantes, tales como, sin limitación, ácido ascórbico, acetilcisteína, cistína, sulfito ácido de sodio, butil-hidroxianisol , butil-hidroxitolueno o acetato de alfa-tocoferol o quelantes. Una formulación normal y ciclo de liofilización útil de acuerdo con la presente invención se proporciona a continuación. La liofilización puede ser realizada usando equipo estándar como se usa para liofilización o secado al vacío. El ciclo puede variarse dependiendo del equipo e instalaciones usadas para el llenado/terminado. De acuerdo con una modal idad normal de la presente invención, una solución o dispersión acuosa de pre-liofilización es formulada primero en un recipiente formador de compuesto farmacéuticamente aceptable. La solución es filtrada de manera aséptica en un recipiente estéril, llenada en un vial de tam año apropiado, tapada parcialmente y cargada en el liofilizador. Usando técnicas de liofilización descritas en la presente, la solución es liofilizada hasta que se alcanza un contenido de humedad en el rango de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 8.0 por ciento. El polvo de liofilización resultante es estable como un polvo liofilizado durante aproximadamente seis meses hasta más de aproximadamente 2 años, de preferencia más de aproximadamente 3 años a aproximadamente 5°C hasta aproximadamente 25°C y puede reconstituirse fácilmente con Agua estéril para inyección , u otro portador adecuado, para proporcionar formulaciones líquidas de bendamustina, adecuadas para administración interna, por ejemplo, mediante inyección parenteral . Para administración intravenosa, la formulación líquida reconstituida, es decir, la composición farmacéutica, de preferencia es una solución. La solución o dispersión de pre-liofilización normalmente es formulada primero en un recipiente farmacéuticamente aceptable al: 1 ) adicionar un excipiente, tal como manitol (aproximadamente 0 hasta aproximadamente 50 mg/ml) con mezclado de agua (aproximadamente 65% del volumen total) a temperatura ambiente, 2) adicionar un solvente orgánico (0.5-99.9% v/v) , tal como, TBA a la solución acuosa con mezclado a aproximadamente 20°-35°C, 4) adicionar HCl de bendamustina a la concentración deseada con mezclado, 5) adicionar agua para alcanzar el volumen final, y 6) enfriar la solución a aproximadamente 1 °C hasta aproximadamente 30°C, de preferencia aproximadamente 5°C. Aunque los pasos precedentes son mostrados en cierto orden, se entiende que un experto en la técnica puede cambiar el orden de los pasos y cantidades según es necesario. Las cantidades también pueden prepararse en una base en peso. La solución o dispersión de pre-liofilización puede ser esterilizada antes de la liofilización , la esterilización es realizada generalmente mediante filtración aséptica , por ejemplo, a través de un filtro de 0.22 mieras o menos. Los filtros de esterilización múltiple pueden ser usados. La esteril ización de la solución o dispersión puede lograrse mediante otros métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, radiación.

En este caso, después de la esterilización, la solución o dispersión está lista para la liofilización. En general , la solución filtrada será introducida en un recipiente receptor estéril y entonces es transferida a cualquier recipiente o recipientes adecuados, en los cuales la formulación puede ser liofilizada de manera efectiva. Usualmente la formulación es liofilizada de manera efectiva y eficiente en los recipientes en los cuales el producto va a ser comercializado, tal como, sin limitación, un vial , como se describe en la presente y como es sabido en la técnica. Un procedimiento normal para usarse para liofilizar las soluciones o dispersiones de pre-liofilización es expuesto a continuacikón. Sin embargo, una persona experta en la técnica entendería que pueden hacerse modificaciones al procedimiento o proceso dependiendo de tales cosas como, pero no limitadas a, la solución o dispersión de pre-liofilización y equipo de liofilización. De manera inicial , el prod ucto es colocado en una cámara de liofilización bajo un rango de tmeperaturas y entonces se somete a temperaturas muy por debajo del punto de congelación del producto, generalmente por varias horas. De preferencia, la temperatura estará a o por debajo de aproximadamente -40°C durante al menos 2 horas. Después de que se termina la congelación, la cámara y el condensador son evacuados a través de bombas de vacío, habiendo sido enfriada previamente la superficie del condensador mediante refrigerante circulante. De preferencia, el condensador habrá sido enfriado por abajo del punto de congelación de la solución, de preferencia hasta aproximadamente -40°C, más preferiblemente hasta aproximadamente -50°C o menor, aún más preferiblemente hasta aproximadamente -40°C, más preferiblemente hasta aproximadamente -50°C o menor, aún más preferiblemente hasta aproximadamente -60°C o menor. Adicionalmente, la evacuación de la cámara debería continuar hasta que se obtiene una presión de aproximadamente 1 0 hasta aproximadamente 600 mieras, de preferencia aproximadamente 50 hasta aproximadamente 150 mieras. La composición de producto es calentada entonces bajo vacío en la cámara y condensador. Usualmente esto se realizará al calentar los anaqueles dentro del liofilizador sobre los cuales descansa el producto durante el proceso de liofilización a una presión que varía desde aproximadamente 1 0 hasta aproximadamente 600 mieras. El proceso de calentamiento tendrá lugar de manera óptima muy gradualmente, durante el curso de varias horas. Por ejemplo, la temperatura de producto inicialmente deberá ser i ncrementada desde aproximadamente -30°C hasta aproximadamente -1 0°C y mantenida durante aproximadamente 1 0-70 horas. De manera adicional , la temperatura de producto puede ser incrementada a partir de la temperatura de congelación hasta aproximadamente 25°C-40°C sobre un periodo de 30-1 92 horas. Para prevenir la eyecci ón de polvo del liofilado de los viales, la remoción completa del solvente orgánico y agua debería hacerse durante la fase de secado inicial. El secado completo puede ser confirmado mediante estabilización de vacío, temperatura de condensador y temperatura de anaquel de producto. Después del secado inicial, la temperatura de producto debería ser incrementada hasta aproximadamente 25°C-40°C y mantenida durante aproximadamente 5-40 horas. Una vez que el ciclo de secado se ha completado, la presión en la cámara puede ser liberada lentamente a presión atmosférica (o ligeramente por debajo) con gase nitrógeno seco, estéril (o gas equivalente) . Si la composición de producto ha sido liofilizada en recipientes, tales como, viales, los viales pueden ser tapados, removidos y sellados. Varias muestras representativas pueden ser removidas para fines de realizar varias pruebas físicas, químicas y microbiológicas para analizar la calidad del producto. La formulación de bendamustina liofilizada es comercializada normalmente en la forma de dosificación farmacéutica. La forma de dosificación farmacéutica de la presente invención, aunque normalmente en la forma de un vial , puede ser cualquier recipiente adecuado, tal como, ampolletas, jeringas, co-viales, los cuales son capaces de mantener un ambiente estéril. Tales recipientes pueden ser de vidrio o plástico, siempre que el material no interactúe con la formulación de bhendamustina. El cierre normal mente es un tapón, muy normalmente un tapón de goma estéril, de preferencia, un tapón de goma de bromobutilo, el cual proporciona u n sello hermético. Después de la liofilización , el polvo de liofilización de bendamustina puede ser llenado en recipientes, tales como, viales, o de manera alternativa, la solución de pre-liofilización puede ser llenada en tales viales y liofilizados en los m ismos, resultando en viales los cuales contienen directamente la formulación de bendamustina liofilizada. Tales viales son, depsués de llenado o liofilización de la solución en los mismos, sellados, como con un tapón , para proporcionar una forma de dosificación farmacéutica, estéril, sellada. Normalmente, un vial contendrá un polvo liofilizado incluyendo aproximadamente 1 0-500 mg/vial , de preferencia aproximadamente 1 00 mg/vial, bendamustina y aproximadamente 5 mg-2g/vial, de preferencia aproximadamente 170 mg/vial, manitol. Las formulaciones liofilizadas de la presente invención pueden ser reconstituidas con agua, de preferencia Agua estéril para inyección, u otro fluido estéril , tal como, co-solventes, para proporcionar una solución apropiada de bendamusti na para administración, como a través de la inyección paren teral siguiendo dilución adicional en un recipiente de mezcla intravenosa apropiada, por ejemplo, solución salina normal.

B. Solubilidad La solubilidad de HCL de bendamustina (bendamustina) en agua (sola) y con cantidades variantes de alcoholes comúnmente usadas en liofilización, por ejemplo, metanol , etanol , propanol , isopropanol, butanol y alcohol butílico terciario (TBA) se determinó mediante inspección visual. Las cantidades de bendamustina a 1 5 mg/ml, combinadas con manitol a 25.5 mg/ml se prepararon en 1 0 ml de las soluciones de alcohol indicadas a temperatura ambiente (ver Tabla 1 ). Las muestras fueron refrigeradas entonces a 5°C e inspeccionadas después de 0, 3, 6 y 24 horas para particulados y/o precipitados.

Los resultados mostrados en la Tabla 1 indican que la solubi lidad de bendamustina es dependiente de temperatura y la cantidad de alcohol en soluciones acuosas. Para los alcoholes probados, la solubilidad de bendamustina aumentó conforme aumentó la concentración de alcohol. La formación de un precipitado también fue dependiente de la temperatura y el tiempo. La bendamustina no precipitó inmediatamente con cualquier alcohol , pero cristalizó después de almacenamiento a 5°C. Los alcoholes variaron en su efecto sobre la solubilidad. Sin desear ligar a una teoría particular, alcoholes más pequeños tales como metanol y etanol tienen menos de un efecto sobre la solubilidad como se compara con alcoholes mayores (butanol terciario y n-butanol) . Sin embargo, la forma del alchol también es importante. Por ejemplo, se encontró que n-propanol es mejor que ¡so-propanol para prevenir la precipitación en este sistema. Los dos alcoholes con el mayor efecto sobre solubilidad fueron n-propanol y butanol terciario.

Tabla 1 . Solubilidad de bendamustina sobre un periodo de 24 horas en varios alcoholes cuando se almacena a 5°C 30% CCS CCS CCS CCS CCS singifica solución incolora transparente Experimentos para determinar cuantitativamente la solublidad de bendamustina a varias temperaturas para tres diferentes soluciones se resumen en la Figura 1 y Tabla 2. La cantidad de TBA, 20% (v/v) y 30% (v/v), usada en el experimento, se basó en estudios de estabilidad (resultados descritos más adelante) . Para ambas soluciones probadas, la solubilidad de bendamustina disminuyó linealmente con temperaturas desde 25°C hasta 0°C. Este experimento confirmó los datos mostrados en la Tabla 1 y resalta la diferenci a en solubilidad de bendamustina para soluciones de TBA de 20% y 30% .

Tabla 2. Solubilidad de bendamustina en TBA C. Estabilidad Debido a su inestabilidad en soluciones acuosas debido a la hidrólisis con agua , la bendamustina requiere liofilización con el fin de hacer un producto adecuado para uso farmacéutico. Sin embargo, durante la fabricación de productos de medicamento liofilizados, las soluciones acuosas son comúnmente necesarias para llenado, antes de la liofilización. De esta manera, el uso de soluciones acuosas durante los procesos de formación de compuesto y llenado para bendamustina y otras mostazas de nitrógeno puede resultar en degradación del producto de medicamento. En consecuencia, el efecto de varios alcoholes sobre la degradación de bendamustina fue evaluado para determinar si las formulaciones podrían encontrarse que permitieran tiempos de llenado-terminado más largos, proporcionar polvos de liofilado que pudieran reconstituirse más rápidamente que la formulación de Ribomustin® actual , y/o proporcionar preparaciones liofilizadas de bendamustina con un mejor perfil de impurezas con respecto a ciertas impurezas, por ejemplo, HP 1 , y dímero de BM 1 que Ribomustin®. De preferencia, una preparación liofilizada de la invención es estable con respecto a HP 1 , es decir, la cantidad de HP1 no aumenta apreciablemente (no excede las especificaciones de vida de anaquel) , druante 6 meses, más preferiblemente 1 2 meses, y aún más preferiblemente mayor que 24 meses, por ejemplo, 36 meses, cuando se almacena a aproxi madamente 2°C hasta aproximadamente 30°C, de preferencia 5°C . La Tabla 3 muestra los resu ltados de estabilidad de bendamustina en agua si n adición de alcohol so bre un periodo de 24 horas a 5°C. La bendamustina se degrada rápidamente en agua sola y forma predominantemente el producto de hidrólisis, HP1 (monohidroxi bendamustina).

Monohidroxi bendamustina (HP1) Fórmula II Tabla 3. Estabilidad de bendamustina en agua El otro degradante principal observado durante este estudio y otros estudios de estabilidad a largo plazo fue el dímero de bendamustina.

Dímero de bendamustina (Dímero de BM1) Fórmula lll Otros degradantes contenidos en el producto liofilizado de Ribomustin son etiléster de bendamustina (BM 1 EE) (Fórmula IV) y BM 1 DCE (Fórmula V). BM 1 EE se forma cuando la bendamustina reacciona con alcohol etílico.

Etiléster de bendamustina (BM 1 EE) Fórmula IV BM 1 DCE Fórmula V La Figura 2 resume los resultados de pureza de un análisis de H PLC después de incubar bendam ustina en varios alcoholes durante 24 horas a 5°C. Los resultados son presentados como el por ciento de área del área pico total . Los valores numéricos para la Figura 2 son provistos en las Tablas 3-9. La pureza fue más alta en soluciones conteniendo mayor concentración de alcoholes, sin importar el alcohol. De los alcoholes evaluados, la be ndamustina se degradó menos en una solución conteniendo aproximad amente 30% (v/v) de TBA. En soluciones de alcohol al aproximadamente 1 0% y aproximadamente 20%, el n-butanol fue superior para prevenir la degradación de bendamustina.

A 20% y 30% (v/v) , el n-butanol en agua resultó en un sistema bifásico debido a la insolubilidad de n-butanol en agua a estas concentraciones.

Las Figuras 3 y 4 muestran la cantidad de degradación de bendamustina según se miden mediante HP1 y formación de d ímero cuantificada mediante HPLC (como se describe en la presente). HP1 y formación de d ímero aumentó conforme la cantidad de concentración de alcohol disminuyó sin importar el alcohol . Este aumento en impurezas ocurrió con una dependencia de tiempo anticipada (ver Tablas 3-9). El ter-butanol y n-butanol parecieron superiores a los otros alcoholes para prevenir la degradación del producto. Como se ve en la Tabla 1 0, el manitol no tuvo efecto sobre la estabilización de bendamustina con TBA.

Tabla 4. Resultados de estabilidad de HPLC para la estabilidad de bendamustina en varias concentraciones de alcohol etílico sobre un periodo de 24 horas. HP1 y dímero fueron impurezas que aumentaron en este estudio.

Tabla 5. Resultados de estabilidad de H PLC para bendamustina en varias concentraciones de ter-butanol sobre un periodo de 24 horas. HP1 y dímero fueron impurezas que aumentaron en este estudio.

Tabla 6. Resultados de estabilidad de HPLC para varias concentraciones de alcohol n-propílico sobre un periodo de 24 horas. H P1 y dímero fueron impurezas que aumentaron en este estudio.

Tabla 7. Resultados de estabilidad de H PLC para bendamustina en varias concentraciones de alcohol isopropílico sobre un periodo de 24 horas. HP1 y dímero fueron impurezas que aumentaron en este estudio.

Tabla 8. Resultados de estabilidad de HPLC para bendamustina en varias concentraciones de alcohol metílico sobre un periodo de 24 horas. HP 1 y dímero fueron impurezas que aumentaron en este estudio.

Tabla 9. Resultados de estabilidad de HPLC para bendamustina en varias concentraciones de alcohol n-butílico sobre un periodo de 24 horas. H P 1 y dímero fueron impurezas que aumentaron en este estudio. a - Ambas soluciones tuvieron 2 capas/fases de líquidos en e vial. Las soluciones fueron agitadas antes de la preparación de la muestra.

Los resultados en las Tablas 1 -9 indican que la estabilidad de HCl de bendamustina con respecto a HP 1 y d ímero mejora con la concentración creciente de alcohol .

Tabla 1 0. Resultados de estabil idad de H PLC para bendamustina en TBA con y sin manitol sobre un periodo de 24 horas.

NOTA: Las muestras analizadas sin manitol fueron analizads con HPLC usando un método de fase normal mientras que las muestras analizadas con manitol usaron un método de HPLC de fase inversa. Puede verse ligera variabilidad en otras muestras analizadas entre los dos métodos.

D. Desarrollo de ciclo de liofilización Se prepararon diferentes formulaciones de pre-liofilización a varias concentraciones de bendamustina, manitol y alcoholes en agua. El desarrollo de ciclo fue cambiado y optimizado en cada paso para congelar (rápido vs. lento) , secado primario (tanto temperatura como presión) , y secado secundario como se describe en la presente.

Con base en toda la información detallada antes sobre solubilidad, estabilidad y facilidad de liofilización, las formulaciones preferidas incluyen las siguientes: Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 2-40 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-50 mg/ml Alcohol Aproximadamente 0.5%-40% (v/v) Agua, q .s. hasta Volumen deseado en donde el alcohol es seleccionado de metanol , n-propanol o isopropanol Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 5-20 mg/ml Manitol 10-30 mg/ml Alcohol 1 -20% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado en donde el alcohol es seleccionado de metanol , n-propanol o isopropanol Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 5-20 mg/ml Manitol 10-30 mg/ml Alcohol 5-40% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 1 2-1 7 mg/ml Manitol Aproximadamente 20-30 mg/ml Alcohol Aproximadamente 5-1 5% (v/v) Agua, q .s. hasta Volumen deseado I ngredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 15 mg/ml Manitol Aproximadamente 25.5 mg/ml Alcohol Aproximadamente 1 0% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 2-40 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-50 mg/ml Alcohol Aproximadamente 0.5-20% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 5-20 mg/ml Manitol Aproximadamente 10-30 mg/ml Alcohol Aproximadamente 1 -1 0% (v/v) Agua , q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 12-17 mg/ml Manitol Aproximadamente 20-30 mg/ml Alcohol Aproximadamente 1 -1 0% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 15 mg/ml Manitol Aproximadamente 25.5 mg/ml Alcohol Aproximadamente 10% (v/v) Agua, q. s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 2-50 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-50 mg/ml Alcohol Aproximadamente 0.5-100% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 2-50 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-50 mg/ml Alcohol Aproximadamente 0.5-99.9% (v/v) Agua , q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 2-50 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-50 mg/ml Alcohol Aproximadamente 0.5-99% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 2-50 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-50 mg/ml Alcohol Aproximadamente 90-99% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado Ingredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 5-20 mg/ml Manitol Aproximadamente 1 0-30 mg/ml Alcohol Aproximadamente 5-80% (v/v) Agua, q. s. hasta Volumen deseado I ngredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 12-17 mg/ml Manitol Aproximadamente 20-30 mg/ml Alcohol Aproximadamente 1 0-50% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado I ngredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 12.5-1 5 mg/ml Manitol Aproximadamente 0-30 mg/ml Alcohol Aproximadamente 20-30% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado I ngredientes Concentración Bendamustina Aproximadamente 1 5 mg/ml Manitol Aproximadamente 25.5 mg/ml Alcohol Aproximadamente 30% (v/v) Agua, q.s. hasta Volumen deseado EJEMPLOS Los siguientes Ejemplos son provistos para ilustrar ciertos aspectos de la presente invención y para ayudar a aquéllos de habilidad en la técnica a practicar la invención. Estos Ejemplos no serán considerados de ninguna manera por limitar el alcance de la invención en manera alguna.

Materiales HCl de bendamustina, (Degussa, Lot #s 0206005 y 0206007) Manitol , NF o equivalente (Mallinckrodt) Alcohol etílico deshidratado (200 proof), USP o equivalente (Spectrum) Alcohol butílico terciario, ACS (E Science) Metanol (Spectrum y EMD) Propanol (Spectrum) Iso-propanol (Spectrum) Butanol (Spectrum) Agua, grado HPLC o equivalente (EMD) Acetonitrilo , grado HPLC o equivalente (EMD) Acido trifluoroacético, J.T. Baker Metanol, grado HPLC o equialente (EM Science, Cat # MX0488P-1 ) Acido trifluoroacético, grado HPLC o equivalente (JT Baker, Cat # JT9470-01 ) Equipo Sistema de HPLC Waters 2695 Alliance con detector de arreglo de fotodiodo Sistema de HPLC Waters 2795 Alliance con detector de longitud de onda dual Balanza analítica (Mettler AG285, I D #1 028) y (Mettler XS205) VirTis Lyophilizer AdVantage Columna Agilent Zorbax SB-C 1 8 5 µm 80Á 4.6 x 250 mm, Cat # 880975- 902 Ejemplo 1 - Procedimientos de HPLC Método 1 Fase móvil A: 0.1 % TFA; H2O Fase móvl B: 0.1 % TFA; 50% ACN:50% H2O UV: 230 nm Velocidad de flujo: 1 .0 ml/min Temp de columna: 30°C Columna: Zorbax SB-C 1 8 5 µm 80Á 4.6 x 250 mm Temp. Muestra: 5°C Volumen de inyección: 1 0 µl Conc. de muestra: 0.25 mg/ml en MeOH Gradiente: 20% B durante 1 min 20-90% B en 23 min 90% B durante 6 min Nuevamente a 20% B en 1 min Sostener a 20% B durante 4 min Tiempo de corrida: 30 min Tiempo post-corrida: 5 min Método 2 Fase móvil A: 0.1 % TFA; H2O:ACN (9: 1 ) Fase móvil B: 0.1 % TFA; H2O:ACN (5:5) UV: 230 nm Velocidad de flujo: 1 .0 ml/min Columna: Zorbax SB-C 1 8 5 µm 80Á 4.6 x 250 mm Temp de columna: 30°C Temp. Muestra: 5°C Volumen de inyección: 1 0 µl Conc. de m uestra: 0.25 mg/ml en MeOH Gradiente: 0% B durante 3 min 0-50% B en 1 3 min 50-70% B en 17 min 70-90% B en 2 min 90% B durante 5 min Nuevamente a 0% B en 1 min Sostener a 0% B durante 4 min Tiempo de corrida: 40 min Tiempo post-corrida: 5 min Método 3 Fase A: agua grado HPLC con 0.1% TFA (v/v) Fase B: ACN grado HPLC/agua(1:1v/v) con 0.1%TFA(v/v) UV: 254 nm Velocidad de flujo: 1.0 ml/min Columna: Zorbax SB-C185 µm 80Á 4.6 x 250 mm Temp de columna: 30°C Temp. Muestra: 5°C Volumen de inyección: 5 µl Tiempo de adquisición: 30 min Post tiempo: 9 min Diluyente: metanol Gradiente: Preparación de muestra - disolver el producto de medicamento con 200 ml de MeOH. Sonicar 6 minutos. La solución puede inyectarse directamente en HPLC (ca. 0.5 mg/ml).

Método 4 Fase A: agua grado HPLC con 0.1 % TFA (v/v) Fase B: ACN grado HPLC con 0.1 % TFA (v/v) UV: 254 nm Velocidad de flujo: 1 .0 ml/min Columna: Zorbax Bonus RP-C14 5 µm 4.6 x 1 50 mm Temp. columna: 30°C Temp. muestra: 5°C Volumen de inyección : 2 µl Tiempo de adquisición: 31 min Post tiempo: 5 min Diluyente: NMP/0.1 % TFA en agua (50: 50 v/v) Gradiente: Preparación de muestra para el método 4 - disolver el producto de medicamento con una cantidad conocida de diluyente para preparar una concentración de 4.2 mg/ml para inyección directamente en H PLC. Puede ser necesario realizar una segunda dilución (la forma de dosificación de 1 00 mg/vial) para obtener una concentración de muestra de 4.2 mg/ml .

Resultados Los tiempos de retención para algunas ímpuezas de bendamustina usando método de H PLC 1 descrito antes son mostrados en la Tabla 1 1 . Una cromatografía de HPLC para Ribomustin® usando el procedimiento de H PLC descrito en la presente se muestra en la Figura 6.

Tabla 1 1 : Tiempo de retención para bendamustina y algunas de sus impurezas usando el método de HPLC 1 Aunque El método de HPLC 1 fue capaz de resolver impurezas encontradas en bendamustina, no fue capaz de separar una impureza potencial formada durante el análisis, el metil éster de bendamustina (BM 1 ME) . La diferencia de tiempo de retención entre MB 1 ME y dímero BM1 fue solo 0.3 minutos. Con el fin de resolver dímero BM 1 , se desarrolló otro método de HPLC (#2) . El método de HPLC #2 fue capaz de separar todas las impurezas pero requirió un tiempo de corrida mayor de 45 minutos (Tabla 12).

Tabla 12: Tiempo de retención para bendamustina e impurezas usando el método de HPLC 2.

El perfil de impurezas de varios lotes de Ribomustin usando el método de H PLC 3 se muestra en la Tabla 1 3.

Tabla 1 3: Perfil de impurezas de Ribomustine usando el método de HPLC 3 Ejemplo 2 - Solubilidad La solubilidad de HCL de bendamustina (bendamustina) en agua (sola) y con cantidades varia ntes de metanol, etanol, propanol, isopropanol , butanol y alcohol butílico terciario (TBA) fue determinada mediante inspección visual. Las cantidades de bendamustina a 1 5 mg/ml , manitol a 25.5 mg/ml fueron preparadas en 1 0 ml de las soluciones de alcohol indicadas (Tabla 1 ) a temperatura ambiente. Las muestras fueron refrigeradas entonces a 5°C e inspeccionadas después de 0, 3, 6 y 24 horas por particulados y/o precipitados. Los resultados resumidos en la Tabla 1 indican que la solubi lidad de bendamustina es dependiente de la temperatura y la cantidad de alcohol en soluciones acuosas. Para todos los alcoholes, la solublidad de bendamustina aumentó conforme aumentó la concentración de alcohol. La formación de un precipitado también fue dependiente de la temperatura y del tiempo. La solubilidad de bendamustina también fue determinada en 20% (v/v) de TBA conteniendo 25.5 mg/ml de manitol en agua, 30% (v/v) de TBA conteniendo 25.5 mg/ml de manitol en agua (Fig. 1 ). Se adicionó bendamustina a 4 ml de cada sol ución mientras se mezclaba hasta que ya no se disolvió más. Se permitió que las soluciones saturadas se mezclaran durante 1 hora a -8°C, 0°C, 5°C o 25°C. Las muestras fueron centrifugadas y colocadas nuevamente a la temperatura original durante un mínimo de 30 minutos. La muestra de -8°C fue colocada en un baño de hielo conteniendo cloruro de sodio, lo cual baja la temperatura del baño de hielo y la temperatura se midió cuando la muestra se tomó para análisis. Una al ícuota de cada muestra fue tomada y preparada para análisis de H PLC. Los resultados de estos experimentos son mostrados en la Figura 1 y Tabla 2. La cantidad de TBA, 20% (v/v) y 30% (v/v), usada en el experimento (Fig. 1 ) se basó en estudios de estabilidad descritos en la presente. Como se indica en la Fig. 1 , la solubilidad de bendamustina disminuyó linealmente con la temperatura (25°C hasta 0°C). La solubilidad de bendamustina fue dependiente de la temperatura ya sea disuelta en agua sola o con alcohol. El 20% (v/v) de TBA puede ser probablemente el l ímite inferior requerido para fabricación farmacéutica eficiente y robusta debido a la estabilidad y solubilidad de bendamustina. Una solución de llenado de 1 5 mg/ml de bendamustina está cerca del l ímite de saturación de 17.2 mg/ml de bendamustina a 5°C pero mayor que el límite a 0°C . El 30% (v/v) de TBA es la concentración recomendada de TBA para la formulación final y está dentro del l ímite de solubilidad sin importar la temperatura.

Ejemplo 3 - Estabilidad A. Estabilidad en agua Soluciones de bendamustina (1 5 mg/ml) y manitol (25.5 mg/ml) fueron preparadas en agua a tempratura ambiente y se colocaron inmediatamente en un baño de hielo (para bajar la temperatura rápidamente a aproximadamente 5°C) durante 1 0 minutos y entonces refrigerarse a 5°C. Una muestra de cada formulación se analizó mediante HPLC usando los métodos descritos en la presente después de 0, 3, 6 y 24 horas cuando se almacena a 5°C .

B. Estabilidad en alcoholes Las soluciones conteniend o 1 5 mg/ml de bendamustina, 25.5 mg/ml de manitol y 1 .9%, 5%, 10%, 20% o 30% (v/v) de alcohol etílico en agua o 5% , 1 0% , 20% o 30% (v/v) de TBA, metanol, propanol , isopropanol o butanol en agua se prepararon a temperatura ambiente, se colocaron en un baño de hielo durante 1 0 minutos y entonces se refrigeraron a 5°C. Una muestra de cada formulación se analizó mediante H PLC después de O, 3, 6 y 24 horas cuando se almacenó a 5°C.

C. Resultados de estabilidad La Tabla 3 muestra los resultados de estabilidad de bendamustina en agua sin adición de alcohol sobre un periodo de 24 horas a 5°C. La bendamustina se degrada rápidamente en agua pero la estabilidad de bendamustina aumenta con concentraciones crecientes de alcohol (Figs. 2, 3 y 4). Aunque los alcoholes son usados frecuentemente en liofilización para ayudar a los problemas de solublidad , el efecto de alcoholes sobre la estabilidad de bendamustina es única, inesperada y útil para fabricar bendamustina con menos impurezas debido a que una solución acuosa puede ser usada al tiempo que se mantiene la estabilidad de la bendamustina. Se encontró que TBA es el mejor estabilizante de los seis alcoholes probados (Figs. 2, 3 y 4). Todos los alcoholes a 30% (v/v) redujeron la formación de iprezas dew HP1 y dímero a 5°C por hasta 24 horas. Con respecto a TBA; HP1 alcanza solamente aproximadamente 0.4% cuando se almacena a 5°C por hasta 24 horas. Menores concentra ciones de alcohol pueden no ser eficientes, cuando se formulan a 1 5 mg/ml de bendamustina y almacenan a 5°C debido a la precipitación de bendamustina y formación de impurezas.

Ejemplo 4 - Optimización de formulación Después de que se determinaron la solubilidad y estabilidad de la bendamustina, la formulación fue optimizada para liofilización . Debido a que la concentración de bendamustina es mayor en una solución saturada de 30% TBA/agua como se compara con otras soluciones de alcohol, se anticipa que el tamaño de vial requerido para llenar 100 mg de bendamustina puede ser disminuido de la presentación de Ribomustin® actual. Aunque una solución saturada de bendam ustina contiene 1 8 mg/ml a 0°C, una concentración de 1 5 mg/ml fue elegida para la formulación para com pensar las ligeras diferencias en solubilidad de API debido a las diferencias en pureza de API a granel com un resultado de diferencias de lote. Una concentración de 1 5 mg/ml de bendamustina requiere 6.67 ml para llenar 1 00 mg de HCL de bendamustina por vial. La proporción de área de superficie (sublimación) a volumen es crítica para producir un producto liofilizado con buena apariencia que seca por congelación rápidamente. En general , los productos liofilizados ocupan entre 30% a 50% del volumen inicial. Un vial de 20 ml con 6.67 ml contiene aproxi madamente 30% de su capacidad y tiene una proporción de área de superficie de 0.796 cm2/ml . El manitol fue seleccionado como el agente de volumen con el fin de mantener una formulación si milar a Ribomustin®. Se realizaron estudios para evaluar el efecto de manitol sobre solubilidad de bendamustina y apariencia del producto. El manitol disminuye la solubilidad de bendamustina (a 1 5 mg/ml) tanto en soluciones acuosas de etanol como TBA. Por ejemplo , las soluciones conteniendo 5% y 1 0% de etanol y TBA si n manitol n o precipitaron sobre 24 horas. Sin embargo, para muestras con manitol (Tabla 1 ), se observó precipitado dentro de 24 horas. No hubo precipitado con soluciones acuosas conteniendo 30% (v/v) de TBA, 1 5 mg/ml de bendamustina y 25.5 mg/ml de manitol. Con el fin de mantener una torta bien formada resistenta a ruptura durante el manejo, se requirió un mínimo de 1 34 mg/vial de manitol sin diferencia observada en viales hasta 200 mg/vial de manitol.

Todos los alcoholes probados aumentaron la estabilidad y solubilidad de bendamustina. Sin embargo, se requirió una fracción mol significativa para afectar la estabilidad de la solución de llenado y la facilidad de fabricación. Alcoholes más pequeños tienen el efecto indeseable de bajar el punto de congelación de la solución de volumen y requiriendo así ciclos de liofilización largos a temperaturas menores. Mayores concentraciones de metanol y etanol produjeron tortas no atractivas que fueron difíciles de reconstituir. Se prepararon soluciones acuosas de 1 0% de etanol , 20% de etanol, 10% de iso-propanol, 20% de iso-propanol o 30% de TBA conteniendo bendamustina (1 5 mg/ml), manitol (25.5 mg/ml) y se liofiliza ron. Los viales liofilizados llenados a partir de soluciones de 1 0% de etanol , 20% de etanol , 1 0% de isopropanol, 20% de íso-propanol produjeron ya sa una torta colapsada o un residuo de película. El único sistema de solvente que produce una torta aceptable fue 30% de TBA. Adicionalmente, la reconstitución de viales liofilizados de 1 0% de etanol , 20% de etanol , 1 0% de isopropanol, 20% de iso-propanol fueron difíciles y no se disolvieron completamente hasta >45 minutos . La capacidad para utilizar un vial más pequeño es restringida por la concentración o solubilidad de bendamustina en la solución acuosa/orgánica. A concentraciones menores de etanol , metanol, isopropanol y n-propanol , las cuales produjeron apariencia de torta aceptable, una solución más diluida de bendamustina es requerida debido a limitaciones de solubilidad. Para mantener una presentación con 1 00 mg de bendamustina por vial, un vial mayor que 50 ml sería requerido. Además, los estudios de estabilidad en la presente indicaron que a la menor concentración de alcohol, la estabilidad qu ímica no fue suficiente para permitir tiempos de llenado aceptables. Uno de los factores que afectan la facilidad de reconstitución es la porosidad del liofilado. En general , los sólidos amorfamente precipitados con poca área de superficie son más difíciles de solubilizar. La mayoría de los liofilados conteniendo manitol se reconstituirán dentro de 3-5 minutos, siempre y cuando no se forme precipitado durante la liofilización, provocada frecuentemente por la evaporación de un l íquido (fundido nuevamente). Con base en nuestra experiencia con varios sistemas de solvente de liofilización y sin desear ligar a una teoría particular, los problemas asociados con rec onstitución de Ribomustin® pueden asociarse con precipitación provocada por fusión nuevamente durante la liofilización. La mayoría de solventes orgánicos no liofilizan de manera eficiente y provocan fusión nuevamente debido a su bajo punto de fusión . El TBA (alcohol butílico terciario) tiene un alto punto de fusión y una presión de vapor similar como se compara con agua . El TBA es removido mediante sublimación , sin evaporación, a aproximadamente la misma razón que el agua . Los liofilados producidos con 30% (v/v) de TBA de acuerdo con la invención se reconstituyen dentro de 3-1 0 minutos como se compara con Ribomustin comercialmente disponible, lo cual puede tomar 30-45 minutos. Con base en la solubilidad, estabilidad, facilidad de reconstitución y consideraciones de fabricación , lo siguiente es una formulación de pre-liofilización preferida de la presente invención: HCl de bendamustina aproximadamente 1 5 mg/ml, manitol aproximadamente 25.5 mg/ml, aproximadamente 30% (v/v) de alcohol butílico terciario, y q.s. usando agua para I nyección . La formulación es llenada entonces a 5°C usando 6.67 ml en un vial ámbar de 20 ml , 20 mm y tapado parcialmente con un tapón de bromobutilo y cargado en un liofilizador pre-enfriado.

Ejemplo 5- Valoración de impurezas Las i mpurezas principales introducidas durante el procedimiento de fabricación , formación de compuesto, llenado y liofilización de Ribomustin®, como se determina mediante el análisis de H PLC (Fig. 6) , son el producto de hidrólisis HP1 , el dímero, y el etil éster de bendamustina, BM 1 EE. BM 1 EE puede formarse durante la fabricación de substancia de medicamento, por ejemplo, durante los procesos de recristalización y/o purificación . BM1 EE es sabido como un medicamento citotóxico más potente que la bendamustina. Los experimentos fueron intentados para determinar si el uso de una solución acuosa de llenado de 30% de TBA conduciría a la formación de t-butil éster de bendamustina. Los experimentos fueron realizados usando condiciones de reacción de esterificación de Fisher tradicionales requeridos para la formación de t-butil éster de bendamustina. La bendamustina fue calentada en 60°C TBA con HCl durante 20 horas. No se observó ninguna reacción. Este resultado indicó que sería muy difícil formar el ter-butil éster de bendamustina durante el proceso de llenado/terminado. Ninguna nueva impureza en producto de medicamento fabricado a partir de TBA ha sido observada en los estudios de estabilidad a la fecha. Para ayudar en la prueba del producto de medicamento, se desarrollaron rutas sintéticas usando fuentes más reactivas de la porción de t-butilo. Otro intento para hacer ter-butil éster fue realizado mediante formación del cloruro de acilo de bendamustina. Una suspensión de bendamustina en cloruro de metileno fue tratada con cloruro de oxalilo y N , N-dimetilformamida. Después de que se formó el cloruro de acilo, el solvente fue concentrado. El residuo fue adicionado al cloruro de metileno, ter-butanol , trietilamina y 4-dimetilaminopiridina y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de adicionar todos los solventes y la purificación, se dio un compuesto desconocido. La LC-MS no igualó el peso molecular de ter-butil éster de bendamustina y el NMR de protón no mostró el pico para ter-butilo. Por lo tanto, este intento también falló en producir el ter-butil éster de bendamustina. De esta manera, usar TBA como el co-solvente tiene un beneficio adicional de no formar el éster a partir del alcohol .

Ejemplo 6 - Desarrollo de ciclo de liofilización Numerosos ciclos de liofilización fueron realizados para evaluar las etapas críticas de liofilización y alcanzar el ciclo de secado más eficiente. Los experimentos fueron realizados para evaluar el efecto de la velocidad de congelación, temperatura de secado primaria, tiempo y presión en el producto.

A. Velocidad de congelación La literatura reporta que el TBA adopta diferentes formas de cristal dependiendo de la velocidad de congelación. En algunas soluciones de TBA, mientras más lento se congele el producto, más rápido se secará. Los cristales más grandes formados durante la congelación lenta producen poros más grandes, que permiten una sublimación más eficiente. Sin embargo, durante los estudios con bendamustina, la velocidad de congelación no fue encontrada como un parámetro de procesamiento crítico, cuando se evalúa a 2 y 8 horas.

B. Secado primario y secundario Durante los primeros intentos para liofilizar a partir de soluciones de 30% de TBA, la torta liofilizada fracturada y el polvo fue expulsado del vial. Estas tortas parecieron contener partículas amorfas dentro del liofilado, una indicación de fusión nuevamente. Este fenómeno fue reproducible y ocurrió cuando el producto alcanzó aproximadamente -1 0°C (referir a la Fig. 5) independ i ente de la velocidad de calentamiento. Varias variables fueron probadas para determinar la causa y solución al problema de la expulsión de polvo . La presión fue elevada desde 50 µm hasta 1 50 µm durante el secado primario, pero la expulsión de polvo todavía fue observada pero a un menor grado. Este experimento fue repetido entonces, excepto que la velocidad de congelación se extendió a 8 horas desde 2 horas. Este cambio no tuvo efecto. La longitud de secado pri mario fue evaluada a continuación . Por ejemplo, el siguiente ciclo de secado muy lento fue evaluado: congelar a partir de +25°C hasta -50°C en ocho horas; mantener a -50°C durante 5 horas, calentar y secar desde -50°C hasta -25°C en siete horas; mantener durante veinte horas a -25°C, calentar y secar desde -25°C hasta -1 5°C en dos horas y mantener durante veinte horas a -1 5°C, calentar y secar desde -1 5°C hasta 40°C en seis horas y mantener durante veinte horas a 40°C mientras que se mantiene una presión de cámara de 1 50 µm a lo largo del secado. No se observó expulsión de polvo (Fig 5). Este ciclo resultó en una torta bien formada sin fractura que la que se reconstituyó fácilmente. Sin desear ligar a una teoría particular, los problemas sin expulsión de polvo y dificultad de reconstitución pueden ser el resultado de secar el liofilado demasiado rápidamente, resultando así en fuerte flujo de vapor fuera de la torta así como fusión nuevamente. Con el uso de un ciclo de secado menos agresivo, se formó de manera reproducible una torta estética, estable y fácil de reconstituir. De esta manera, remover toda el agua no ligada y alcohol butílico terciario antes del secado secundario puede prevenir la fusión nuevamente así como la expulsión de polvo. El ciclo de liofilización fue optimizado adicionalmente bajo estas condiciones suaves (Fig. 5) . No hubo productos de degradación inmediatos como un resultado de secado a 40°C por hasta 20 horas.

Ejemplo 7 - Ciclo de liofilización Todas las composiciciones y métodos descritos y reclamados en la presente pueden hacerse y ejecutarse sin experimentación indebida a la luz de la presente descripción. Aunque las composiciones y métodos de esta invención han sido descritos en términos de modalidades preferidas, será evidente para aq uéllos de habilidad en la técnica, que pueden aplicarse variaciones a l as composiciones y métodos y en los pasos o en la secuencia de paso s del método descritos en la presente sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. De manea más específica, será evidente que ciertos solventes que están tanto q uímica como fisiológicamente relacionados con los solventes descritos en la presente, pueden ser substituidos por los solventes descritos en la presente mientras que los mismos o resultados similares serían alcanzados. Todos esos substitutos y modificaciones similares evidentes para aquéllos expertos en la técnica son considerados dentro del espíritu y alcance de la invención como se define por las reivindicaciones anexas. Todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones mencionadas en la especificación son indicativas de los niveles de aquéllos de habilidad ordinaria en la técnica a la cual pertenece la invención. Todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones son incorporadas en la presente por referncia al mismo grado como si cada publicación individual fuera indicada específica e individualmente por ser incorporada popr referenci a. La invención descrita ilustrativamente en la presente de manera adecuada, puede practicarse en la ausencia de cualquier elemento(s) no descrito específicamente en la presente. De esta manera, por ejemplo, en cada caso en la presene, cu alquiera de los términos "comprende", "consiste esencialmente de" y "consiste de" puede ser reemplazado con cualquiera de los otros dos térm i nos. Los términos y expresiones que han sido emepleados son usados como términos de descripción y no de limitación y no hay intención de que en el uso de tales términos y expresiones se excluya algún equivalente de las características mostradas y descritas o porciones de las mismas, sino que se reconoce que varias modificaciones son posibles dentro del alcance de la invención reclamada. De esta manera, se debería entender que aunque la presente invención ha sido descrita específicamente mediante modalidades preferidas y características opcionales, la modificación y variación de los conceptos descritos en la presente pueden ser reclasificados por aquéllos expertos en la técnica, y que tales modificaciones y variaciones son consideradas como que están dentro del alcance de esta invención como se define por las reivindicaciones anexas.

Claims

REIVI N DICACIONES 1 . Una composición farmacéutica de bendamustina que contiene no más de aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina) HP1 como se muestra en la Fórmula I I , Fórmula I I en donde dicho H P1 es la cantidad de HP 1 presente en el tiempo cero después de la reconstitución de una preparación liofilizada de bendamustina. 2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde la cantidad de HP 1 no es más de 0.5% (por ciento de área de bendamustina) en el tiempo cero después de la reconstitución de una preparación liofilizada de bendamustina. 3. La composición de acuerdo con la reivndicación 1 , en donde la cantidad de H P1 no es más de 0.4% (por ciento de área de benamustina) en el tiempo cero después de la reconstitución de una preparación liofilizada de bendamustina. 4. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde la cantidad de H P1 no es más de 0.3% (por ciento de área de bendamustina) en el tiempo cero después de la reconstitución de una preparación liofilizada de bendamustina. 5. Una preparación liofilizada de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina) HP1 en la liberación. 6. Una preparación liofilizada de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) H P1 en la liberación. 7. La preparación liofilízada de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la preparación es empacada en un vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable. 8. La prepración liofilizada de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha preparación es estable con respecto a la cantidad de HP1 durante al menos aproximadamente seis meses cuando se almacena a 5°C. 9. La preparación liofilizada de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha preparación es estable con respecto a la cantidad de HP1 durante al menos aproximadamente 12 meses cuando se almacena a 5°C. 10. La preparación liofilizada de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha preparación es estable con respecto a la cantidad de HP1 durante al menos aproximadamente 24 meses, cuando se almacena a 5°C. 1 1 . Una forma de dosificación farmacéutica que comprende una composición farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.9% HP1 , en d onde dicha H P1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación. 12. Una forma de dosificación farmacéutica que comprende una composición farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% H P 1 , en donde dicha HP 1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación. 1 3. Una forma de dosificación farmacéutica de la reivindicación 1 1 , en donde la forma de dosificación farmacéutica comprende aproximadamente 5 mg hasta aproximadamente 500 mg de bendamustina. 14. Una forma de dosificación farmacéutica de la reivindicación 1 1 , en donde la forma de dosificación farmacéutica comprende aproximadamente 1 0 mg hasta aproximadamente 300 mg de bendamustina. 1 5. Una forma de dosificación farmacéutica de la reivindicación 1 1 , en donde la forma de dosificación farmacéutica comprende aproximadamente 25 mg de bendamustina. 1 6. Una forma de dosificación farmacéutica de la reivindicación 1 1 , en donde la forma de dosificación farmacéutica comprende aproximadamente 1 00 mg de bendamustina. 1 7. Una forma de dosificación farmacéutica de la reivindicación 1 1 , en donde la forma de dosificación farmacéutica comprende aproximadamente 200 mg de bendamustina. 1 8. U na forma de dosificación farmacéutica que comprende la preparación liofilizada de la reivindicación 5. 1 9. Una composición farmacéutica de bendamustina que comprende bendamustina que contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP1 y una cantidad en trazas de uno o más solventes orgánicos, en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación. 20. Una composición farmacéutica de bendamustina de acuerdo con la reivindicación 1 9, en donde el solvente orgánico es seleccionado del grupo que consiste de uno o más de butanol terciario, n-propanol , n-butanol, isopropanol , etanol , metanol, acetona, acetato de etilo, carbonato de dimetilo, acetonitrilo, diclorometano, metil etil cetona, metil isobutil cetona, 1 -pentanol, acetato de metilo, tetracloruro de carbono, sulfóxido de dimetilo, hexafluoroacetona, clorobutanol, dimetil sulfona, ácido acético y ciciohexano. 21 . Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el solvente orgánico es seleccionado del grupo que consiste de uno o más de etanol, metanol, propanol, butanol, isopropanol y butanol terciario. 22. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 9, en donde el solvente orgánico es butanol terciario. 23. Una preparación liofilizada de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende además una cantidad en trazas de un solvente orgánico. 24. Una preparación liofilizada de acuerdo con la reivindicación 23, en donde dicho solvente orgánico es butanol terciario. 25. En un método para obtener la aprobación de agencia para un producto de bendamustina, la mejora comprende ajustar una especificación de liberación para degradantes de bendamustina a menos de 4.0% (por ciento de área de bendamustina) para un producto de bendamustina que contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP1 en la liberación. 26. En un método para obtener la aprobación de agencia para un producto de bendamustina, la mejora comprende ajustar una especificación de liberación para bendamustina de HP1 a menos de o igual a 1 .5% para un producto de bendamustina que contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP1 en la liberación. 27. En un método para obtener la aprobación de agencia para un producto de bendamustina, la mejora comprende ajustar una especificación de vida de anaquel para degradantes de bendamustina a menos de 7.0% (por ciento de área de bendamustina) para un producto de bendamustina que contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) H P1 en la liberación. 28. Un proceso para fabricar una preparación liofilizada de bendamustina, el cual comprende controlar la concentración de degradantes de bendamustina en el producto final, de manera que, en la liberación, la concentración de degradantes de bendamustina sea menor que 4.0% (por ciento de área de bendamustina) y la concentración de HP1 sea menos que 0.5% (por ciento de área de bendamustina) . 29. Un proceso para fabricar una preparación liofilizada de bendamustina, el cual comprende controlar la concentración de degradantes de bendamustina en el producto final , de manera que, la concentración de HP1 sea menor que 0.9% (por ciento de área de bendamustina) en la liberación y la concentración de degradantes sea menor que 7.0% en el momento de expiración de producto; en donde dicho producto es almacenado a 5°C. 30. U n proceso para fabricar una preparación liofilizada de bendamustina, el cual comprende controlar la concentración de degradantes de bendamustina en el producto final , de manera que la concentración de HP1 es menor que 0.5% (por ciento de área de bendamustina) en la liberación y la concentración de degradantes de bendamustina es menor que 7.0% en el tiempo de expiración de producto; en donde dicho prod ucto es almacenado a 5°C. 31 . Una preparación liofilizada de bendamustina, en donde la concentración de etiléster de bendamustina (como se muestra en la Fórmula IV) Fórmula IV no es más de 0.25% mayor q ue la concentración de etiléster de bendamustina como se encuentra en la substancia de medicamento usada para hacer la preparación liofilizada. 32. Una preparación liofilizada de bendamustina de acuerdo con la reivindicación 5, que contiene no más de aproximadamente 0.5% de etiléster de bendamustina como se muestra en la Fórmula IV Fórmula IV. 33. U na solución o dispersión de pre-liofilización de bendamustina que comprende uno o más solventes orgánicos, en donde dicha solución o dispersión comprende al menos una concentración estabilizante de un solvente orgánico, el cual reduce el nivel de degradación de bendamustina, de manera que la cantidad de HP1 producida durante la liofilización , desde aproximadamente 0 hasta 24 horas, no excede 0.9% (por ciento de área de bendamustina). 34. Una solución o dispersión de pre-liofilización de bendamustina que comprende uno o más solventes orgánicos, en donde dicha solución o dispersión comprende al menos una concentración estabilizante de un solvente orgánico, el cual reduce el nivel de degradación de bendamustina, de manera que la cantidad de H P 1 producida durante la liofilización, desde aproximadamente 0 hasta 24 horas, no excede 0.5% (por ciento de área de bendamustina). 35. El polvo liofilizado producido a partir de la solución o dispersión de pre-liofilización de acuerdo con la reivindicación 33. 36. Un método para preparar una preparación liofilizada de bendamustina que comprende, a) disolver bendamustina en una concentración estabilizante de un solvente de alcohol que comprende entre aproximadamente 5% hasta aproximadamente 1 00% (v/v) de alcohol para formar una solución de pre-liofilización; y b) liofilizar la solución de pre-liofilización ; en donde dicha preparación liofilizada de bendamustina contiene no más de aproximadamente 0.9% (por ciento de área de bendamustina) H P1 como se muestra en la Fórmula I I ; en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación. 37. Un método para preparar una preparación liofilizada de bendamustina que comprende, a) disolver bendamustina en una concentración estabilizante de un solvente de alcohol que comprende entre aproximadamente 5% hasta aproximadamente 1 00% (v/v) alcohol para formar una solución de pre-liofílización ; y b) liofilizar la solución de pre-liofilización ; en donde dicha preparación liofilizada de bendamustina contiene no más de aproximadamente 0.5% (por ciento de área de bendamustina) HP1 como se muestra en la Fórmula I I , en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente en la liberación. 38. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde la concentración de alcohol está entre aproximadamente 5% hasta aproximadamente 99.9%. 39. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde dicho alcohol es seleccionado de uno o más de metanol, etanol, propanol , isopropanol , butanol y butanol terciario. 40. Un método de acuerdo con la reivindicación 39, en donde dicho alcoholes es butanol terciario. 41 . Un método de acuerdo con la reivindicación 40, en donde dicho butanol terciario está a una concentración de aproximadamente 20% hasta 30%. 42. Un método de acuerdo con la reivindicación 40, en donde dicho butanol terciario está a una concentración de aproximadamente 30%. 43. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde un excipiente es adicionado antes de la liofilización. 44. Un método de acuerdo con la reivindicación 43, en donde el excipiente es manitol. 45. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde la concentración de bendamustina es aproximadamente 2 hasta 50 mg/ml. 46. El polvo liofilizado obtenido del método de acuerdo con una de las reivindicaciones 36 a 45. 47. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde el paso b) comprende: i) congelar la solución de pre-liofilización a una temperatura por debajo de aproximadamente -40°C para formar una solución congelada; ii) sostener la solución congelada a o por debajo de -40°C durante al menos 2 horas; iii) brincar la solución congelada a una temperatura de secado primaria entre aproximadamente -40°C y aproximadamente -10°C para formar una solución seca; iv) sostener durante aproximadamente 1 0 hasta aproximadamente 70 horas; v) brincar la solución secada a una temperatura de secado secundaria entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C ; y vii) sostener durante aproximadamente 5 hasta aproximadamente 40 horas para formar una preparación liofilizada de bendamustina. 48. Un método de acuerdo con la reivindicación 47, en donde dicho alcohol es butanol terciario. 49. Un método de acuerdo con la reivindicación 48, en donde dicho butanol terciario está a una concentración de aproximadamente 20% hasta 30%. 50. Un método de acuerdo con la reivindicación 49, en donde dicho butanol terciario está a una concentración de aproximadamente 30%. 51 . El polvo liofilizado obtenido a partir del método de acuerdo con una de las reivindicaciones 47 a 50. 52. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde el paso b) comprende: i) congelar la solución de pre-liofilización hasta aproximadamente -50°C para formar una solución congelada ; ¡i) sostener la solución congelada a aproximadamente -50°C durante al menos 2 horas hasta aproximadamente 4 horas; iii) brincar a una temperatura de secado primaria entre aproximadamente -20°C y aproximadamente -1 2°C para formar una solución seca; iv) sostener a una temperatura de secado primaria durante aproximadamente 1 0 hasta aproxi madamente 48 horas; v) brincar la solución seca a una temperatura de secado secundaría entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C ; y vi) sostener a una temperatura de secado secundaria durante al menos 5 horas hasta aproximadamente 20 horas. 53. Un método de acuerdo con la reivindicación 52, en donde dicho alcohol es butanol terciario. 54. Un método de acuerdo con la reivindicación 53, en donde dicho butanol terciario está a una concentración de aproximadamente 20% hasta 30%. 55. Un método de acuerdo con la reivindicación 54, en donde dicho butanol terciario está a una concentración de aproximadamente 30%. 56. El polvo liofilizado obtenido del método de acuerdo con una de las reivindicaciones 52 a 55. 57. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde el paso b) comprende: i) iniciar con una temperatura de anaquel de aproximadamente 5°C para carga; ii) congelar a aproximadamente -50°C sobre aproximadamente 8 horas; iii) sostener a -50°C durante aproximadamente 4 horas; iv) brincar hasta aproximadamente -20°C sobre aproximadamente 3 horas; v) sostener a aproximadamente -20°C durante 6 horas; brincar a aproximadamente -1 5°C sobre aproximadamente 1 hora ; vi) sostener a a-1 5°C durante aproximadamente 20 horas; víi) brincar hasta aproximadmaente -15°C sobre aproximadamente 1 hora; viii) sostener a aproximadamente -1 5aC durante aproximadamente 20 horas; ix) brincar hasta aproximadamente -12°C sobre aproximadamente 0.5 horas; x) sostener a aproximadamente -1 2°C durante aproximadamente 1 5.5 horas; xi) brincar hasta entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C o más durante aproximadamente 1 5 horas; xii) sostener entre aproximadamente 25°C y aproximadamente 40°C durante aproximadamente 10 horas; xiii) brincar hasta aproximadamente 40°C sobre aproximadamente 1 hora; y xiv) sostener a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 5 horas; descargar a aproximadamente 5°C , a una presión de aproximadamente 0.9490 kg/cm2 (1 3.5 psi) en un recipiente farmacéuticamente aceptable que está herméticamente sellado; en donde la presión es aproximadamente 1 50 mieras a lo largo del secado primario y 50 mieras a lo largo del secado secundario. 58. Un ciclo de liofilización de acuerdo con la reivindicación 57, en donde el paso (xi) es brincado hasta aproximadamente 30-35°C durante aproximadamente 1 5 horas. 59. El polvo liofilizado preparado a partir del ciclo de liofilización de la reivindicación 57 o 58. 60. Una formulación para liofilización que comprende bendamustina a una concentración de aproximadamente 1 5 mgml, manitol a una concentración de aproximadamente 25.5 mg/ml , alcohol butílico terciario a una concentración de aproximadamente 30% (v/v) y agua. 61 . Una preparación liofilizada hecha a partir de la formulación de acuerdo con la reivindicación 60. 62. Un método para tratar una condición médica en un paciente que comprende disolver la preparaicón de la reivi ndicación 5 en un solvente farmacéuticamente aceptable para producir una solución farmacéuticamente aceptable y administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de dicha solución, en donde dicha condición es dócil a tratamiento con dicha preparación. 63. Un método para tratar de acuerdo con la reivindicación 62, en donde dicha condición es seleccionada de leucemia linfocítica crónica, enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, cáncer de pecho, cáncer de pulmón de células pequeñas y una enfermedad autoinmune. 64. Un método para tratamiento de acuerdo con la reivindicación 63, en donde dicha condición es linfoma no de Hodgkin. 65. Un método de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 63, en donde dicha condición de leucemia linfocítica crónica. 66. Un método de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 63, en donde dicha condición es mieloma múltiple. 67. Un método de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 62, que comprende además administrar la preparación disuelta de la reivindicación 5 en combinación con uno o más agentes antineoplásticos, en donde dicho agentes antineoplástico es dado antes, concurrentemente o subsecuente a la administración de la preparación disuelta de la reivindicación 5. 68. Un método de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 68, en donde el agente antineoplástico es u n anticuerpo específico para CD20, en donde dicho anticuerpo está dado antes, concurrentemente o subsecuente a la administración de la preparación disuelta de la reivindicación 5. 69. Un método de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 62, en donde la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, exclerosis múltiple o lupus. 70. Un método de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 62, en donde la condición médica es un desorden hiperproliferativo. 71 . Una forma de dosificación farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.9% H P1 (por ciento de área de bendamustina), en donde dicha forma de dosificación comprende un vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable, en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente pre-reconstitucíón o en el tiempo cero después de la reconstitución de dicha forma de dosificación . 72. Una forma de dosificación farmacéutica de bendamustina conteniendo no más de aproximadamente 0.5% H P1 (por ciento de área de bendamustina) , en donde dicha forma de dosificación comprende un vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable, en donde dicha HP1 es la cantidad de HP1 presente pre-reconstitución o en el tiempo cero después de la reconstitución de dicha forma de dosificación . 73. Una forma de dosificación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 72, en donde el vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable contiene bendamustina a una concentración de aproximadamente 10 hasta aproximadamente 500 mg/recipiente. 74. Una forma de dosificación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 72, en donde el vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable contiene bendamustina a una concentración de aproximadamente 1 00 mg/recipiente. 75. Una forma de dosificació n farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 72, en donde el vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable comprende además manitol a una concentración de aproximadamente 5 mg hasta aproximadamente 2 g/recipiente. 76. Una forma de dosificación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 72, en donde el vial u otro recipiente farmacéuticamente aceptable comprende además manitol a una concentración de aproximadamente 170 mg/recipiente. 77. Una composición farmacéutica pre-liofilizada de bendamustina que comprende aproxi madamente 1 5 mg/ml de HCl de bendamustina, aproximadamente 25.5 mg/ml de manitol , aproxi madamente 30% /v/v) de alcohol butílico terciario y agua. 78. La preparación de la reivindicación 5, la cual es una composición farmacéutica.