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MX2007002312A - Compuestos de aminoheteroarilo enantiomericamente puros como inhibidores de proteina quinasa. - Google Patents

Compuestos de aminoheteroarilo enantiomericamente puros como inhibidores de proteina quinasa.

Info

Publication number
MX2007002312A
MX2007002312A MX2007002312A MX2007002312A MX2007002312A MX 2007002312 A MX2007002312 A MX 2007002312A MX 2007002312 A MX2007002312 A MX 2007002312A MX 2007002312 A MX2007002312 A MX 2007002312A MX 2007002312 A MX2007002312 A MX 2007002312A
Authority
MX
Mexico
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cr6r7
mmol
phenyl
dichloro
ethoxy
Prior art date
Application number
MX2007002312A
Other languages
English (en)
Inventor
Lei Jia
Pei-Pei Kung
Jerry Jialun Meng
Mitchell David Nambu
Mason Alan Pairish
Hong Shen
Jingrong Jean Cui
Lee Andrew Funk
Michelle Bich Tran-Dube
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35967909&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2007002312(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of MX2007002312A publication Critical patent/MX2007002312A/es

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Abstract

Se proporciona un compuesto enantiomericamente puro de formula 1 (ver formula 1) asi como procedimientos para su sintesis y uso; los compuestos preferidos son potentes inhibidores de la proteina quinasa c-Met, y son utiles en el tratamiento de trastornos del crecimiento celular anormal, tales como canceres.

Description

COMPUESTOS DE AMINOHETEROARILO ENANTIOMERICAMENTE PUROS COMO INHIBIDORES DE PROTEINA QUINASA CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere generalmente a nuevos compuestos y procedimientos químicos. Más particularmente, la invención proporciona compuestos de aminoheteroarilo enantioméricamente puros, particularmente aminopiridinas y aminopirazinas, que tienen actividad de proteína tirosina quinasa, y procedimientos para sintetizar y usar tales compuestos. Son compuestos preferidos inhibidores de c-Met útiles para el tratamiento del crecimiento celular anormal tal como cánceres.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En muchos cánceres humanos se ha demostrado que el receptor del factor de crecimiento de hepatocitos (c-MET o HGFR) o receptor de tirosina quinasa (RTK) está implicado en la oncogénesis, progresión tumoral con movilidad e invasión celular potenciadas, así como metástasis (véase, por ejemplo, Ma, P.C., Maulik, G., Christensen, J. & Salgia, R. (2003b). Cáncer Metástasis Rev, 22, 309-25; Maulik, G., Shrikhande, A., Kijima, T., Ma, P.C., Morrison, P.T. & Salgia, R. (2002b). Cytokine Growth Factor Rev, 13, 41-59). c-MET (HGFR) puede activarse a través de sobreexpresión o mutaciones en diversos cánceres humanos incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC) (Ma, P.C., Kijima, T., Maulik, G., Fox, E.A., Sattler, M., Griffin, J.D., Johnson, B.E. & Salgia, R. (2003a). Cáncer Res, 63, 6272-6281 ). c-MET es un receptor de tirosina quinasa que está codificado por el proto-oncogen Met y transduce los efectos biológicos del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), que también se denomina factor de dispersión (SF). Jiang y col., Crit. Rev. oncol. Hematol. 39: 209-248 (1999). c-MET y HGF se expresan en numerosos tejidos, aunque su expresión normalmente está limitada principalmente a células de origen epitelial y mesenquimal, respectivamente. c-MET y HGF se requieren para el desarrollo normal de mamíferos y se ha demostrado que son importantes en la migración celular, proliferación celular y supervivencia, diferenciación morfogénica, y organización de estructuras tubulares tridimensionales (por ejemplo, células tubulares renales, formación de glándulas, etc.). Además de sus efectos en células epiteliales, se ha informado de que HGF/SF es un factor angiogénico, y que la señalización de c-MET en células endoteliales puede inducir muchas de las respuestas celulares necesarias para la angiogénesis (proliferación, movilidad, invasión). Se ha demostrado que el receptor de c-MET se expresa en numerosos cánceres humanos. Se ha demostrado que c-Met y su ligando, HGF, se co-expresan a niveles elevados en diversos cánceres humanos (particularmente sarcomas). Sin embargo, como el receptor y el ligando normalmente se expresan mediante diferentes tipos de células, la señalización de c-MET se regula más comúnmente por interacciones tumor-estroma (tumor-huésped). Además, se ha observado amplificación, mutación y transposición del gen de c-MET en una subserie de cánceres humanos. Las familias con mutaciones de línea germinal que activan la quinasa c-MET son propensas a múltiples tumores renales así como a tumores en otros tejidos. Numerosos estudios han correlacionado la expresión de c-MET y/o HGF/SF con el estado de la progresión de la enfermedad de diferentes tipos de cánceres (incluyendo cánceres de pulmón, colon, mama, próstata, hígado, páncreas, cerebro, riñon, ovarios, estómago, piel y huesos). Además, se ha demostrado que la sobreexpresión de c-MET o HGF está correlacionada con una prognosis pobre e inicio de la enfermedad en numerosos cánceres humanos importantes incluyendo de pulmón, hígado, gástrico y mama. c-MET también ha estado directamente implicado en cánceres sin un régimen de tratamiento satisfactorio tal como cáncer pancreático, glioma y carcinoma hepatocelular. Los Ejemplos de inhibidores de c-MET (HGFR), sus síntesis y uso, pueden encontrarse en la Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 10/786,610, titulada "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors" (Compuestos de Aminoheteroarilo como Inhibidores de Proteína Quinasa) presentada el 26 de febrero de 2004, y la solicitud internacional correspondiente PCT/US2004/005495 con el mismo título, presentada el 26 de febrero de 2004, cuyas descripciones se incorporan en este documento como referencia en su totalidad.
Sería deseable tener nuevos inhibidores de c-MET (HGFR) y procedimientos para usar tales inhibidores para el tratamiento del crecimiento celular anormal, tal como cáncer.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En una realización, la invención proporciona un compuesto enantioméricamente puro de fórmula en la que Y es N o CR12; R1 se selecciona entre hidrógeno, halógeno, arilo C-6-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3.-|2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, -O(CR6R7)nR4, -C(O)R4, -C(O)OR4, -CN, -NO2, -S(O)mR4, -SO2NR R5, -C(O)NR4R5. -NR4C(O)R5, -C(=NR6)NR4R5, alquilo C1-8, alquenilo C2-s y alquinilo C2-ß; y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por uno o más grupos R3; R2 es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-12, alquenilo C2-?2, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3.-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)pR5 o -C(O)NR4R5 y cada hidrógeno en R2 está opcionalmente sustituido por R8; cada R3 es independientemente halógeno, alquilo C1.-12, alquenilo C2-12, alquinilo C2-?2, cicloalquilo C3--?2, arilo C6-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, -(CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5, cada hidrógeno en R3 está opcionalmente sustituido por grupos R8, y los grupos R3 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un arilo C6-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3.-?2 o un grupo heteroalicíclico de 3-12 miembros; cada R4, R5, R6 y R7 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo CM2, alquenilo C -12, alquinilo C2-12> cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de nitrógeno, junto con el nitrógeno al que están unidos, pueden combinarse para formar un grupo heteroalicíclico de 3 a 12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros que contiene opcionalmente de 1 a 3 heteroátomos adicionales seleccionados entre N, O y S; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de carbono pueden combinarse para formar un cicloalquilo C3.12, arilo C6-12, grupo heteroalicíclico de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros; y cada hidrógeno en R4, R5, R6 y R7 está opcionalmente sustituido por R8; cada R8 es independientemente halógeno, alquilo C-?-12, alquenilo C2.?2, alquinilo C2.?2, cicloalquilo C3.12, arilo C6-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -NH2, -CN, -OH, -O-alquilo CM 2, -O-(CH2)n-cicloalquilo C3-12, -O-(CH2)n-arilo C6-12, -O-(CH2)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros) o -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros); y cada hidrógeno en R8 está opcionalmente sustituido por R11; cada R9 y R10 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo CLI 2, cicloalquilo C3.-|2, arilo C6-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5; R9 o R10 pueden combinarse con un átomo de anillo de A o un sustituyente de A para formar un cicloalquilo C3-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, arilo C6-?2 o un anillo heteroarilo de 5-12 miembros condensado con A; y cada hidrógeno en R9 y R10 está opcionalmente sustituido por R3; cada R11 es independientemente halógeno, alquilo CLI 2, alcoxi C?-?2, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12> heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -O-alquilo C?-12, -O-(CH2)ncicloalquilo C3-?2, -O- (CH2)narilo C6-12, -O-(CH2)n(heteroalicíclico de 3-12 miembros), -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros) o -CN y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por halógeno, -OH, -CN, -alquilo C?-12 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -O-alquilo C?-12 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -CO, -SO o -SO2; R12 es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-12, alquenilo C2-12. alquinilo C2.12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(0)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5 y cada hidrógeno en R12 está opcionalmente sustituido por R3; cada R13 es independientemente halógeno, alquilo CM 2, alquenilo C2-?2, alquinilo C2.?2, cicloalquilo C3-12, arilo C6.?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, (CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR S(O)pR5, -C(O)NR4R5, -(CR6R7)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros), -(CR6R7)n(cicloalquilo C3-12), -(CR6R7)n(arilo C6-12), -(CR6R7)n(heteroarilo de 5-12 miembros), -(CR6R7)nC(O)NR4R5, o -(CR6R7)nC(O)R4, los grupos R13 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un grupo arilo Cd-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2 o heteroalicíclico de 3-12 miembros y cada hidrógeno en R13 está opcionalmente sustituido por R3; cada m es independientemente 0, 1 ó 2; cada n es independientemente 0, 1 , 2, 3 ó 4; cada p es independientemente 1 ó 2; o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. En un aspecto particular de esta realización, R2 es hidrógeno. En otro aspecto particular de esta realización, Y es N. En otro aspecto particular de esta realización, Y es N y R2 es hidrógeno. En otro aspecto particular de esta realización, Y es CR12. En otro aspecto particular de esta realización, Y es CR12 y R12 es H. En otro aspecto particular de esta realización y en combinación con cualquier otro aspecto particular no contradictorio, R1 es un grupo furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, ¡sotiazol, oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano o fenilo y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por uno o más grupos R3.
En otro aspecto particular de esta realización y en combinación con cualquier otro aspecto particular no contradictorio, R1 es un grupo heteroarilo de anillo condensado y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido pom uno o más grupos R3. En otro aspecto particular de esta realización y en combinación con cualquier otro aspecto particular no contradictorio, R1 es hidrógeno. En otro aspecto particular de esta realización y en combinación con cualquier otro aspecto particular no contradictorio, R1 es un halógeno. En otra realización, la invención proporciona un compuesto enantioméricamente puro de fórmula 1 en la que: Y es N o CH; R1 es un grupo furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano, azitidina o fenilo; y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por R3; cada R3 es independientemente halógeno, alquilo C?-12, alquenilo C2-12, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3.?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, -(CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5, cada hidrógeno en R3 está opcionalmente sustituido por R8 y los grupos R3 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un grupo arilo C6-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2 o heteroalicíclico de 3-12 miembros; cada R4, R5, R6 y R7 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C?-12l alquenilo C2-12, alquinilo C2.12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de nitrógeno, junto con el nitrógeno al que están unidos, pueden combinarse para formar un grupo heteroalicíclico de 3 a 12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros que contiene opcionalmente de 1 a 3 heteroátomos adicionales seleccionados entre N, O y S; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de carbono pueden combinarse para formar un grupo cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroalicíclico de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros; y cada hidrógeno en R4, R5, R6 y R7 está opcionalmente sustituido por R8; cada R8 es independientemente halógeno, alquilo C-?.-|2, alquenilo C2.-12, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -NH2, -CN, -OH, -O-alquilo C?.-?2, -O-(CH2)ncicloalquilo C3.12, -O-(CH2)narilo C6-12, -O-(CH2)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros) o -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros); y cada hidrógeno en R8 está opcionalmente sustituido por R11; cada R9 y R10 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C-?-?2, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -N02, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5; R9 o R10 puede combinarse con un átomo de anillo de A o un sustituyente de A para formar un anillo cicloalquilo C3-12, heteroalicíclico de 3-12 miembros, arilo C6.12 o heteroarilo de 5-12 miembros condensado con A; y cada hidrógeno en R9 y R10 está opcionalmente sustituido por R3; cada R11 es independientemente halógeno, alquilo C?-12, alcoxi Cv-12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -O-alquilo C?-12, -O-(CH2)ncicloalquilo C3-12, -O-(CH2)narilo C6-12, -O-(CH2)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros), -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros) o -CN y cada hidrógeno en R11 está opcionalmente sustituido por halógeno, -OH, -CN, -alquilo d-?2 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -O-alquilo C?-12 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -CO, -SO o -SO2; cada R13 es independientemente halógeno, alquilo CM2, alquenilo C2-12. alquinilo C2.12, cicloalquilo C3.12, arilo C6.12, heteroaliciclilo de 3- 12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, - S(O)2OR4, -N02, -NR R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, (CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)pR5, -C(O)NR4R5, -(CR6R7)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros), -(CR6R7)n(cicloalquilo C3.12), -(CR6R7)n(arilo C6-12), -(CR6R7)n(heteroarilo de 5-12 miembros), -(CR6R7)nC(O)NR R5, o -(CR6R7)nC(O)R4, los grupos R13 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un grupo arilo C6-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2 o heteroalicíclico de 3-12 miembros y cada hidrógeno en R13 está opcionalmente sustituido por R3; cada m es independientemente 0, 1 ó 2; cada n es independientemente 0, 1 , 2, 3 ó 4; cada p es independientemente 1 ó 2; o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la invención proporciona un compuesto enantioméricamente puro seleccionado entre el grupo compuesto por 5-Bromo-3-[(f?)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina; 5-yodo-3-[(R)1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina; 5-bromo-3-[1(R)-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina; ácido 4-{5-Amino-6-[(f?)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzoico; (4-{5-Amino-6-[(r?)-1-(2,6- dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-fenil)-piperazin-1 -il-metanona; éster ferc-butílico del ácido 4-(4-{5-Amino-6-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzoil)-piperazin-1 -carboxílico; 3-[(1f?)-1 -(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-[4-(piperazin-1-ilcarbonil)fenil]piridin-2-amina; 4-{6-amino-5-[(1 R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-?/-[2-(dimetilamino)etil]-?/-metilbenzamida; (4-{6-amino-5-[(1 R)-1 -(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}fenil)metanol; 4-{6-amino-5-[(1 ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-?/-[3-(dimetilamino)propil]-?/-metilbenzamida; 4-(4-{6-amino-5-[(1 R)-1 -(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}benzoil)piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo; 3-[(R)-1 -(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1 -(1 -metil-piperidin-4-il)-1 H-pirazol-4-il]-piridin-2-ilamina; 1 -[4-(4-{6-Amino-5-[( )-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-piperidin-1 -il]-2-hidroxi-etanona; 3-[(R)A -(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1 /-/-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina; 3-[(f?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1 H-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-ÍI-1 /-/-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina; 3-[(R)-1 -(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1 r -pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina; 1-[4-(4-{5-Amino-6-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1 -il)-piperidin-1 -il]-2-hidroxi-etanona; 3-[(f?)-1 -(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1 -(1 -metil-piperidin-4-il)-1 H-pirazol-4-il]-pirazin-2-ilamina; 1-[4-(4-{5-Amino-6-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1 -il)-piperidin-1 -il]-2-dimetilamino-etanona; 3-[(R)-1 -(2-Cloro-3,6-difIuoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1 rV-pirazol-4-il)-p¡ridin-2-ilamina; o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra realización, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos de la ¡nvención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de tales composiciones se describen más adelante. Los compuestos preferidos de la invención incluyen los que tienen actividad inhibidora de c-MET como se define mediante uno cualquiera o más de Cl50, Ki, o porcentaje de inhibición (%l). Un especialista en la técnica puede determinar fácilmente si un compuesto tiene tal actividad realizando el ensayo apropiado, y las descripciones de tales ensayos se muestran en la sección de Ejemplos de este documento. En una realización, los compuestos particularmente preferidos tienen una Ki de c-MET de menos de 5 µM o de menos de 2 µM, o de menos de 1 µM, o de menos de 500 nM o de menos de 200 nM o de menos de 100 nM. En otra realización, los compuestos particularmente preferidos tienen una inhibición de c-MET a 1 µM de al menos el 10%, o de al menos el 20% o de al menos el 30% o de al menos el 40%, o de al menos el 50% o de al menos el 60% o de al menos el 70% o de al menos el 80% o de al menos el 90%. En los Ejemplos de este documento se describen procedimientos para medir la actividad de c-MET/HGFR. En otra realización, la invención proporciona un procedimiento para tratar el crecimiento celular anormal en un mamífero, incluyendo un ser humano, comprendiendo el procedimiento administrar al mamífero cualquiera de las composiciones farmacéuticas de la invención. En una realización específica de cualquiera de los procedimientos de la invención descritos en este documento, el crecimiento celular anormal es cáncer, incluyendo, pero sin limitación, cáncer de pulmón, cáncer de huesos, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer de riñon o de uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (SNC), linfoma del SNC primario, tumores de la columna vertebral, glioma del tallo encefálico, adenoma de la pituitaria, o una combinación de uno o más de los anteriores cánceres. En otra realización de dicho procedimiento, dicho crecimiento celular anormal es una enfermedad proliferativa benigna, incluyendo, pero sin limitación, psoriasis, hipertrofia prostática benigna o reestenosis. En otra realización, la ¡nvención proporciona un procedimiento para tratar un trastorno mediado por HGFR en un mamífero, incluyendo un ser humano, comprendiendo el procedimiento administrar al mamífero cualquiera de las composiciones farmacéuticas de la invención.
En realizaciones más específicas de cualquiera de los procedimientos de la ¡nvención descritos en este documento, el procedimiento comprende además administrar al mamífero una cantidad de una o más sustancias seleccionadas entre agentes antitumorales, agentes anti-angiogénesis, inhibidores de la transducción de señales, y agentes antiproliferativos, cuyas cantidades son conjuntamente eficaces en el tratamiento de dicho crecimiento celular anormal. Tales sustancias incluyen las descritas en las Publicaciones PCT N° WO 00/38715, WO 00/38716, WO 00/38717, WO 00/38718, WO 00/38719, WO 00/38730, WO 00/38665, WO 00/37107 y WO 00/38786, cuyas descripciones se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Los ejemplos de agentes antitumorales incluyen inhibidores mitóticos, por ejemplo derivados de vinca alcaloides tales como vinblastina, vinorelbina, vindescina y vincristina; colquinas, alocoquina, halicondrina, N-benzoiltrimetil-metil éter del ácido colchicínico, dolastatina 10, maistansina, rizoxina, taxanos tales como taxol (paclitaxel), docetaxel (Taxotere), 2'-?/-[3-(dimetilamino)propil]glutaramato (derivado de taxol), tiocolchicina, tritil cisteína, tenipósido, metotrexato, azatioprina, fluorouricilo, citocina arabinósido, 2',2,-difluorodesoxicitidina (gemcitabina), adriamicina y mitamicina. Agentes de alquilación, por ejemplo cis-platino, carboplatino, oxiplatino, iproplatino, éster etílico de ?/-acetil-DL-sarcosil-L-leucina (Asaley o Asalex), ácido 1 ,4-ciclohexadien-1 ,4-dicarbámico, 2,5-b/s-(1-azirdinil)-3,6-dioxo-, éster dietílico (diaziquona), 1 ,4-b/s-(metanosulfoniloxi)butano (bisulfán o leucosulfán), clorozotocina, clomesona, cianomorfolinodoxorrubicina, ciclodisona, dianhidroglactitol, fluorodopán, hepsulfam, mitomicina C, hicanteonemitomicina C, mitozolamida, diclorhidrato de 1-(2-cloroet¡l)-4-(3-cloropropil)-piperaz¡na, piperazindiona, pipobromán, porfiromicina, mostaza de espirohidantoína, teroxirona, tetraplatino, tiotepa, trietilenmelamina, mostaza nitrogenada de uracilo, clorhidrato de b/s(3-mesiloxipropil)amina, mitomicina, agentes de nitrosoureas tales como ciclohexil-cloroetilnitrosourea, metilciclohexil-cloroetilnitrosourea, 1 -(2-cloroetil)-3-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1 -nitroso-urea, o/'s(2-cloroetil)nitrosourea, procarbazina, dacarbazina, compuestos relacionados con la mostaza de nitrógeno tales como mecloroetamina, ciclofosfamida, ifosamida, melfalán, clorambucilo, fosfato sódico de estramustina, estreptozoína, y temozolamida. Antimetabolitos de ADN, por ejemplo 5-fluorouracilo, citosina arabinósido, hidroxiurea, 2-[(3-hidroxi-2-pirinodinil)metilen]-hidrazincarbotioamida, desoxifluorouridina, 5-hidroxi-2-formilpiridin-tiosemicarbazona, alfa-2'-desoxi-6-tioguanosina, glicinato de afidicolina, 5-azadesoxicitidina, beta-tioguanin-desoxirribosido, ciclocitidina, guanazol, glicodialdehído de inosina, macbecina II, pirazolimidazol, cladribina, pentostatina, tioguanina, mercaptopurina, bleomicina, 2-clorodesoxiadenosina, inhibidores de timidilato sintasa tales como raltitrexed y pemetrexed disódico, clofarabina, floxuridina y fludarabina. Antimetabolitos de ADN/ARN, por ejemplo, L-alanosina, 5-azacitidina, acivicina, aminopterina y derivados de los mismos tales como ácido A/-[2-cloro-5-[[(2,4-diamino-5-metil-6-quinazolinil)metil]amino]benzoil]-L-aspárt¡co, ácido ?/-[4-[[(2,4-diamino-5-etil-6-quinazolinil)metil]amino]benzoil]-L-aspártico, ácido ?/-[2-cloro-4-[[(2,4-diaminopteridinil)met¡l]amino]benzoil]-L-aspártico, antifol de Baker soluble, dicloroalil lawsona, brequinar, ftoraf, dihidro-5-azacitidina, metotrexato, sal tetrasódica del ácido ?/-(fosfonoacetil)-L-aspártico, pirazofurano, trimetrexato, plicamicina, actinomicina D, criptoficina y análogos tales como criptoficina-52 o, por ejemplo, uno de los antimetabolitos preferidos descritos en la Solicitud de Patente Europea N° 239362 tal como ácido ?/-(5-[?/-(3,4-dihidro-2-metil-4-oxoquinazolin-6-ilmetil)-?/-metilamino]-2-tenoil)-L-glutámico; inhibidores del factor de crecimiento; inhibidores del ciclo celular; antibióticos de intercalación, por ejemplo adriamicina y bleomicina; proteínas, por ejemplo interferón; y anti-hormonas, por ejemplo antiestrógenos tales como Nolvadex™ (tamoxifeno) o, por ejemplo antiandrógenos tales como Casodex™ (4'-ciano-3-(4-fluorofenilsulfon¡l)-2-hidrox¡-2-metil-3'-(trifluorometil)propionanil¡da). Tal tratamiento conjunto puede conseguirse mediante la dosificación simultánea, secuencia o por separado de los componentes individuales del tratamiento. Los agentes anti-angiogénesis incluyen inhibidores de MMP-2 (metaloproteinasa 2 de matriz), inhibidores de MMP-9 (metaloproteinasa 9 de matriz) e inhibidores de COX-II (ciclooxigenasa II). Los ejemplos de inhibidores de COX-II útiles incluyen CELEBREX™ (alecoxib), valdecoxib, y rofecoxib. Se describen ejemplos de inhibidores de metaloprotenasa de matriz útiles en los documentos WO 96/33172 (publicado el 24 de octubre de 1996), WO 96/27583 (publicado el 7 de marzo de 1996), Solicitud de Patente Europea N° 97304971 ,1 (presentada el 8 de julio de 1997), Solicitud de Patente Europea N° 99308617,2 (presentada el 29 de octubre de 1999), WO 98/07697 (publicado el 26 de febrero de 1998), WO 98/03516 (publicado el 29 de enero de 1998), WO 98/34918 (publicado el 13 de agosto de 1998), WO 98/33768 (publicado el 13 de agosto de 1998), WO 98/33768 (publicado el 6 de agosto de 1998), WO 98/30566 (publicado el 16 de julio de 1998), Publicación de Patente Europea 606,046 (publicada el 13 de julio de 1994), Publicación de Patente Europea 931 ,788 (publicada el 28 de julio de 1999), WO 90/05719 (publicado el 31 de mayo de 1990), WO 99/52910 (publicado el 21 de octubre de 1999), WO 99/52889 (publicado el 21 de octubre de 1999), WO 99/29667 (publicado el 17 de junio de 1999), Solicitud Internacional PCT N° PCT/IB98/01113 (presentada el 21 de julio de 1998), Solicitud de Patente Europea N° 99302232,1 (presentada el 25 de marzo de 1999), solicitud de patente de Gran Bretaña número 9912961 ,1 (presentada el 3 de junio de 1999), Solicitud Provisional de Estados Unidos N° 60/148,464 (presentada el 12 de agosto de 1999), Patente de Estados Unidos 5,863,949 (expedida el 26 de enero de 1999), Patente de Estados Unidos 5,861 ,510 (expedida el 9 de enero de 1999), y Publicación de Patente Europea 780,386 (publicada el 25 de junio de 1997), todos los cuales se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Son inhibidores de MMP-2 y MMP-9 preferidos los que tienen poca o ninguna actividad inhibidora de MMP-1. Se prefieren más los que inhiben selectivamente MMP-2 y/o MMP-9 con respecto a las demás metaloproteinasas de matriz (es decir, MMP-1 , MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11 , MMP-12 y MMP-13). Los ejemplos de inhibidores de MMP incluyen AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830 y los siguientes compuestos: ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenox¡)-bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclopentil)-amino]-propiónico; hidroxiamida del ácido 3-exo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3,2,1]octano-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido (2R,3R) 1 -[4-(2-cloro-4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-hidroxi-3-metil-piperidin-2-carboxílico; hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-piran-4-carboxílico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclobutil)-amino]-propiónico; hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-piran-4-carboxílico; hidroxiamida del ácido 3-[4-(4-cloro-fenox¡)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-piran-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido (2R,3R) 1-[4-(4-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-hidroxi-3-metil-piperidin-2-carboxílico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-1 -metil-etil)-amino]-propiónico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenox¡)-bencenosulfonil]-(4-hidroxicarbamoil-tetrahidro-piran-4-¡l)-amino]-propiónico; hidroxiamida del ácido 3-exo-3-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3,2,1]octano-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido 3-endo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilam¡no]-8-oxa-biciclo[3,2, 1 ]octano-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido 3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-furan-3-carboxílico; y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Los ejemplos de inhibidores de transducción de señales incluye agentes que pueden inhibir las respuestas del EGFR (Receptor del factor de crecimiento epidérmico), tales como anticuerpos anti-EGFR, anticuerpos anti-EGF, y moléculas que son inhibidores de EGFR; inhibidores de VEGF (factor de crecimiento endotélico vascular); e inhibidores del receptor erbB2, tales como moléculas orgánicas o anticuerpos que se unen al receptor erbB2, por ejemplo HERCEPTIN™ (Genentech, Inc. of South San Francisco, California, Estados Unidos). Los inhibidores de EGFR se describen, por ejemplo, en los documentos WO 95/19970 (publicado el 27 de julio de 1995), WO 98/14451 (publicado el 9 de abril de 1998), WO 98/02434 (publicado el 22 de enero de 1998) y la Patente de Estados Unidos 5,747,498 (expedida el 5 de mayo de 1998). Los agentes que inhiben EGFR incluyen, pero sin limitación, los anticuerpos monoclonales C225 y anti-EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated of New York, Nueva York, Estados Unidos), los compuestos ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc. of Annandale, New jersey, Estados Unidos), y OLX-103 (Merck & Co. of Whitehouse Station, New Jersey, Estados Unidos), VRCTC-310 (Ventech Research) y toxina de fusión a EGF (Seragen Inc. of Hopkinton, Massachusetts). Los inhibidores de VEGF, por ejemplo SU-5416 y SU-6668 (Sugen Inc. of South San Francisco, California, Estados Unidos), también pueden combinarse o co-administrarse con la composición. Los inhibidores de VEGF se describen, por ejemplo, en los documentos WO 99/24440 (publicado el 20 de mayo de 1999), solicitud Internacional PCT/IB99/00797 (presentada el 3 de mayo de 1999), en los documentos WO 95/21613 (publicado el 17 de agosto de 1995), WO 99/61422 (publicado el 2 de diciembre de 1999), Patente de Estados Unidos N° 5,834,504 (expedida el 10 de noviembre de 1998), WO 98/50356 (publicado el 12 de noviembre de 1998), Patente de Estados Unidos 5,883,113 (expedida el 16 de marzo de 1999), Patente de Estados Unidos 5,886,020 (expedida el 23 de marzo de 1999), Patente de Estados Unidos N° 5,792,783 (expedida el 11 de agosto de 1998), documento WO 99/10349 (publicada el 4 de marzo de 1999), WO 97/32856 (publicado el 12 de septiembre de 1997), WO 97/22596 (publicado el 26 de junio de 1997), WO 98/54093 (publicado de 3 de diciembre de 1998), WO 98/02438 (publicado el 22 de enero de 1998), WO 99/16755 (publicado el 8 de abril de 1999), y WO98/02437 (publicado el 22 de enero de 1998), todos los cuales se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Otros ejemplos de algunos inhibidores de VEGF específicos son IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Washington, Estados Unidos); anticuerpo monoclonal anti-VEGF bevacizumab (Genentech, Inc. of South San Francisco, California); y angiozima, una ribozima sintética de Ribozyme (Boulder, Colorado) y Chiron (Emeryville, California). Los inhibidores del receptor ErbB2, tales como GW-282974 (Glaxo Wellcome pie), y los anticuerpos monoclonales AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. of The Woodlands, Texas, Estados Unidos) y 2B-1 (Chiron), pueden administrarse en combinación con la composición. Tales inhibidores de erbB2 incluyen los descritos en los documentos WO 98/02434 (publicado el 22 de enero de 1998), WO 99/35146 (publicado el 15 de julio de 1999); WO 99/35132 (publicado el 15 de julio de 1999), WO 98/02437 (publicado el 22 de enero de 1998), WO 97/13760 (publicado el 17 de abril de 1997), WO 95/19970 (publicado el 27 de julio de 1995), Patente de Estados Unidos 5,587,458 (expedida el 24 de diciembre de 1996), y Patente de Estados Unidos 5,877,305 (expedida el 2 de marzo de 1999), cada uno de los cuales se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. También se describen inhibidores del receptor ErbB2 útiles en la presente invención en la solicitud provisional de Estados Unidos N° 60/117,341 , presentada el 27 de enero de 1999, y en la Solicitud Provisional de Estados Unidos N° 60/117,346 presentada el 27 de enero de 1999, incorporándose ambas en este documento como referencia en su totalidad. Otros agentes antiproliferativos que pueden usarse incluyen inhibidores de la enzima farnesil proteína transferasa e inhibidores del receptor de tirosina quinasa PDGFr, incluyendo los compuestos descritos y reivindicados en las siguientes solicitudes de Patente de Estados Unidos: 09/221946 (presentada el 28 de diciembre de 1998); 09/454058 (presentada el 2 de diciembre de 1999), 09/501163 (presentada el 9 de febrero de 2000); 09/539930 (presentada el 31 de marzo de 2000); 09/202796 (presentada el 22 de mayo de 1997); 09/384339 (presentada el 26 de agosto de 1999); y 09/383755 (presentada el 26 de agosto de 1999); y los compuestos descritos y reivindicados en las siguientes solicitudes de patente provisional de Estados Unidos 60/168207 (presentada el 30 de noviembre de 1999); 60/170119 (presentada el 10 de diciembre de 1999); 60/177718 (presentada el 21 de enero de 2000); 60/168217 (presentada el 30 de noviembre de 1999) y 60/200834 (presentada el 1 de mayo de 2000). Cada una de las solicitudes de patente y solicitudes de patente provisionales anteriores se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Las composiciones de la invención también pueden usarse con otros agentes útiles en el tratamiento del crecimiento celular anormal o cáncer, incluyendo, pero sin limitación agentes capaces de potenciar las respuestas inmunes anti-tumorales, tales como anticuerpos contra CTLA4 (antígeno de linfocitos citotóxicos 4), y otros agentes capaces de bloquear CTLA4; y agentes anti-proliferativos tales como otros inhibidores de farnesil proteína transferasa. Los anticuerpos específicos contra CTLA4 que pueden usarse en la presente invención incluyen los descritos en la Solicitud Provisional de Estados Unidos 60/113.647 (presentada el 23 de diciembre de 1998), que se incorpora en este documento como referencia en su totalidad.
Definiciones A menos que se indique otra cosa, los siguientes términos usados en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones tienen los significados indicados a continuación. Las variables definidas en esta sección, tales como R, X, n y similares, son únicamente para referencia en esta sección, y no quiere decir que tengan el mismo significado que puede usarse fuera de esta sección de definiciones. Además, muchos de los grupos definidos en este documento pueden sustituirse opcionalmente. La lista en esta sección de definiciones de sustituyentes típicos es ilustrativa y no pretende limitar en ningún momento los sustituyentes definidos en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones. "Alquilo" se refiere a un radical hidrocarburo alifático saturado que incluye grupos de cadena lineal y cadena ramificada de 1 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a 8 átomos de carbono, o de 1 a 6 átomos de carbono, o de 1 a 4 átomos de carbono. "Alquilo inferior" se refiere específicamente a un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, /so-butilo, terc-butilo, pentilo y similares. Alquilo puede estar sustituido o no sustituido. Los grupos de sustituyentes típicos incluyen cicloalquilo, arilo, heteroarilo, heteroaliciclilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, ciano, halo, carbonilo, tiocarbonilo, O-carbamilo, ?/-carbamilo, O-tiocarbamilo, A iocarbamilo, C-amido, A/-amido, C-carboxi, O-carboxi, nitro, sililo, amino y -NRxRy, donde Rx y Ry se seleccionan independientemente entre el grupo compuesto por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, carbonilo, acetilo, sulfonilo, trifluorometanosulfonilo y, combinado, un anillo heteroalicíclico de cinco o seis miembros. "Cicloalquilo" se refiere a un grupo de anillo monocíclico de 3 a 8 miembros siendo todos carbono, un grupo de anillo bicíclico condensado de 5 miembros/6 miembros o de 6 miembros/6 miembros siendo todos carbono, o un grupo de anillo condensado multicíclico (un sistema de anillo "condensado" significa que cada anillo en el sistema comparte un par de átomos de carbono adyacentes con cada uno de los demás anillos en el sistema) donde uno o más de los anillos pueden contener uno o más dobles enlaces pero ninguno de los anillos tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. Son ejemplos, sin limitación, de grupos cicloalquilo; ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, ciciohexano, ciclohexadieno, adamantano, cicioheptano, cicloheptatrieno, y similares. Un grupo cicloalquilo puede estar sustituido o no sustituido. Los grupos de sustituyentes típicos incluyen alquilo, arilo, heteroarilo, heteroaliciclilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, ciano, halo, carbonilo, tiocarbonilo, C-carboxi, O-carboxi, O-carbamilo, ?/-carbamilo, C-amido, ?/-amido, nitro, amino y -NRxRy, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. Los ejemplos ilustrativos de cicloalquilo se derivan, pero sin limitación, de los siguientes: "Alquenilo" se refiere a un grupo alquilo, como se define en este documento, compuesto por al menos dos átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, etenilo, 1 -propenilo, 2-propenilo, 1-, 2- ó 3-butenilo, y similares. "Alquinilo" se refiere a un grupo alquilo, como se define en este documento, compuesto por al menos 2 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo, 1-, 2- ó 3-butinilo y similares. "Arilo" se refiere a grupos monocíclicos o policíclicos de anillo condensado siendo todos los miembros del anillo de átomos de carbono, de 6 a 12 átomos de carbono que tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. Son ejemplos, sin limitación, de grupos arilo, fenilo, naftalenilo, y antracenilo. El grupo arilo puede estar sustituido o no sustituido. Los sustituyentes típicos incluyen halo, trihalometilo, alquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, ciano, nitro, carbonilo, tiocarbonilo, C-carboxi, O-carboxi, O-carbamilo, ?/-carbamilo, O-tiocarbamilo, ?/-tiocarbamilo, C-amido, ?/-amido, sulfinilo, sulfonilo, amino y -NRxRy con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "Heteroarilo" se refiere a un grupo de anillo monocíclico o condensado de 5 a 12 átomos en el anillo que contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos en el anillo seleccionados entre N, O y S, siendo los átomos restantes en el anillo C, y además, teniendo un sistema de electrones pi completamente conjugado. Son ejemplos, sin limitación, de grupos heteroarilo no sustituidos pirrólo, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirimidina, quinolina, isoquinolina, purina, tetrazol, triazina y carbazol. El grupo heteroarilo puede estar sustituido o no sustituido. Los sustituyentes típicos incluyen alquilo, cicloalquilo, halo, trihalometilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, ciano, nitro, carbonilo, tiocarbonilo, sulfonamido, C-carboxi, O-carboxi, sulfinilo, sulfonilo, O-carbamilo, ?/-carbamilo, O-tiocarbamilo, ? iocarbamilo, C-amido, ?/-amido, amino y -NR Ry con Rx y Ry como se han definido anteriormente. Un heteroarilo farmacéuticamente aceptable es uno que es suficientemente estable para unirse a un compuesto de la invención, formularse en una composición farmacéutica y administrarse posteriormente a un paciente en necesidad del mismo. Los ejemplos de grupos heteroarilo monocíclicos típicos incluyen, pero sin limitación: p oirrol f ourano ti feno pi yrazol m azo (pirrolilo) (furanilo) (tiofenilo) (pirazolilo) (imidazolilo) ¡s oxazol isotiazol tiazol 1 ,2,3,-triazol (isoxazolilo) (oxazolilo) (isotiazolilo) (tiazolilo) (1 ,2,3-triazolilo) 1 ,3,4-triazol 1-oxa-2,3-diazol 1-oxa-2,4-diazol 1-oxa-2,5-diazol (1 ,3,4-triazolilo) (1-oxa-2,3-diazolilo) (1-oxa-2,4-diazolilo) (1-oxa-2,5-diazolilo) 1-oxa-3,4-diazol 1-tia-2,3-diazol 1-tia-2,4-diazol 1-tia-2,5-diazol (1-oxa-3,4-diazolilo) (1-tia-2,3-diazolilo) (1-tia-2,4-diazol¡lo) (1-tia-2,5-diazolilo) 1-tia-3,4-diazol tetrazol piridina piridazina pirimidina (1-tia-3,4-diazolilo) (tetrazolilo) (piridinilo) (piridazinilo) (pirimidinilo) pirazma (pirazinilo) Los ejemplos de grupos heteroarilo de anillo condensado adecuados incluyen, pero sin limitación: (benzofuranilo (benzotiofenilo) (indolilo) (bencimldazolilo) (indazolilo) benzotriazol p?rrolo[2,3-b]p?r?d?na p?rrolo[2,3-c]p?pd?na p?rrolo[3,2-c]p?r?d?na (benzotriazolilo) (p?rrolo[2,3-b]p?pd?n?lo) (p?rrolo[2,3-c]p?r?d?n?lo) (p?rrolo[3,2-c]p?pd?n?lo) p?rrolo[3,2-b]p?r?d?na imidazo[4,5-b]p?r?d?na im¡dazo[4,5-c]p?r?d?na p?razolo[4,3-d]p?pd?na (p?rrolo[3,2-b]p?r?d?n?lo) (imidazo[4,5-b]p?r?d?n?lo) (lmidazo[4,5-c]p?pd?n?lo) (p?razolo[4,3-d]p?pd?p?lo) 3-c]p?r?d?na p?razolo[3,4-c]p?pd?na p? Crazoloo[3,4-b]co* p?razolo[4, p?r?d?na isoindol p?razolo[4,3-c]p?r?d?n?lo) (p?razolo[3,4-c]p?pd?n?lo) (p?razolo[3,4-b]p?r?d?n?lo) (isoindolilo) Indazol punna indolizina ímidazoll ,2-a]p?r?d?na ?m?dazo[1 ,5-a]p?r?d?na (¡ndazolilo) (purinilo) (indolininilo) (imldazo[1 ,2-a]p?pd?n?lo) (imldazof ,5-aJpmd?n?lo) p?razolo[1 ,5-a]p?r?d?na p?rrolo[1,2-b]p?r?daz?na lmldazo[1 ,2-c]p?pm?d?na (p?razolo[1 ,5-a]p?r?d?n?lo) (pyrrolop-?.bjpipdazimlo) (im?dazo[1,2-c]p?r?m?d?n?lo) quinolina isoquinolina cinnolina quinazolina (quinolinilo) (isoquinolinilo) (cinnolinilo) (azaquinazolina) quínoxalina ftalazina 1 ,6-naft?r?d?na 1 ,7-naft?r?d?na (quinoxalinilo) (ftalazinilo) (1 ,6-naft?pd?n?lo) (1 ,7-nafl?r?d?n?lo) 1 ,8-naft?r?d?na 1 ,5-naft?ridina 2,6-nafi?r?d?na 2,7-nafl?r?d?na (1 ,8-nafl?r?d?n?lo) (1 ,5-naft?r?d?nilo) (2,6-nafi?r?d?n?lo) (2,7-nafi?pd?n?lo) p?rido[3,2-d]p?pm?d?na p?rido[4,3-d]pirim?d?na p?rido[3,4-d]p?rim?d?na (p?rido[3,2-d]p?r?m?d?n?lo) (pirido[4,3-d)p?rim?din?lo) (prrido[3,4-d]p?r?m?d?n?lo) p?rido[2,3-d]pirim?d?na p?rido[2,3-b] pirazina p?rido[3,4-b]p?razina (p?rido[2,3-d]p?r?m?d?n?lo) (p¡rido[2,3-b]piraz?nilo) (pirido[3,4-b]p?raz?n?lo) p?rimido[5,4-d]pirim?d?na p?razlno[2,3-b]pirazina p?rimido[4,5-d]?irim?d?na (pfrimido[5,4-d]p?rimidin?lo) (pirazino[2,3-b]piraz?nilo) (pirimido[4,5-d]p?rim?d?n?lo) "Heteroaliciclilo" o "heterociclo" se refiere a un grupo de anillo condensado o monocíclico que tiene en el anillo o anillos de 3 a 12 átomos en el anillo, y donde uno o dos átomos en el anillo son heteroátomos seleccionados entre N, O y S(O)n (donde n es 0, 1 ó 2), siendo el resto de átomos en el anillo C. Los anillos también pueden tener uno o más dobles enlaces. Sin embargo, los anillos no tienen un sistema de electrones pi completamente conjugado. Los ejemplos de grupos heteroalicíclicos saturados adecuados incluyen, pero sin limitación: o no (oxiranilo) (tiaranilo) (azindinilo) (oxetanilo) (liatanilo) (azeüdimlo) (tetrahidrofuranilo) tetrahidrotiofeno pirr óolidina t?trahidropirano tetra idrotiopirano (tetrahidrotiofenilo) (pirrolidinilo) (tetrahidropiranilo) (tßtrahidrotiopiranilo) piperidina 1 ,4-dioxano 1,4-oxat?ano moríolina 1 ,4-d?t?ano (piperidinilo) (1,4-d?oxan?lo) (1 ,4-oxat?an?lo) (m 0orfolinilo) (1 ,4-dit?an?lo) piperazina 1,4-azat?ano oxepano tiepano azepano (piperazinilo) (1 ,4-azat?an?lo) (oxßpanilo) (tiepanilo) (azepanilo) 1 ,4-dioxßpano 1,4-oxat?epano 1 ,4-oxaazepano 1 ,4-dit?epano (1 ,4-d?oxepan?lo) (1,4-oxat?epan?lo) (1 ,4-oxaazßpan?lo) (1 ,4-dit?epan?lo) 1 ,4-t?eazepano 1 ,4-diazepano (1 ,4-t?eazepan?lo) (1 ,4-diazepan?lo) Los ejemplos de grupos heteroalicíclicos parcialmente insaturados adecuados incluyen, pero sin limitación: 3,4-dihidro-2H-p¡rano 5,6-dihidro-2H-pirano 2H-pirano (3,4-dihidro -2H-piranilo) (5,6-dihidro -2H-piranilo) (2H-piranilo) 1 ,2,3,4-tetrahidropiridina 1 ,2,5,6-tetrahídropiridina (1 ,2,3,4-t?trahidropiridinilo) (1 ,2,5,6-tetrahidropiridinilo) El grupo heterociclo está opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, alquilo inferior, alquilo inferior sustituido con carboxi, hidroxi éster, o mono o dialquilamino. "Hidroxi" se refiere a un grupo -OH. "Alcoxi" se refiere a un grupo -O-(alquilo) o a un grupo -O-(cicloalquilo no sustituido). Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi, ciclohexiloxi y similares.
"Haloalcoxi" se refiere a un grupo -O-(haloalquilo). Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, trifluorometoxi, tribromometoxi y similares. "Ariloxi" se refiere a un grupo -O-arilo o a un grupo O-heteroarilo, como se define en este documento. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, fenoxi, piridiniloxi, furaniloxi, tieniloxi, pirimidiniloxi, piraziniloxi y similares, y derivados de los mismos. "Mercapto" se refiere a un grupo -SH. "Alquiltio" se refiere a un grupo -S-(alquilo) o a un grupo -S-(cicloalquilo no sustituido). Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio, ciclopropiltio, ciclobutiltio, ciclopentiltio, ciclohexiltio y similares. "Ariltio" se refiere a un grupo -S-arilo o a un grupo -S-heteroarilo, como se define en este documento. Los ejemplos representativos, incluyen, pero sin limitación, feniltio, piridiniltio, furaniltio, tieniltio, pirimidiniltio y similares y derivados de los mismos. "Acilo" o "carbonilo" se refiere a un grupo -C(O)R", donde R" se selecciona entre el grupo compuesto por hidrógeno, alquilo inferior, trihalometilo, cicloalquilo no sustituido, arilo opcionalmente sustituido con uno o más, preferiblemente uno, dos o tres sustituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por alquilo inferior, trihalometilo, alcoxi inferior, halo y grupos -NRxRy, heteroarilo (unido a través de un carbono de anillo) opcíonalmente sustituido con uno o más, preferiblemente uno, dos o tres sustituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por alquilo inferior, trihaloalquilo, alcoxi inferior, halo y grupos -NRxRy y heteroaliciclilo (unido a través de un carbono de anillo) opcionalmente sustituido con uno o más, preferiblemente uno, dos, o tres sustituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por alquilo inferior, trihaloalquilo, alcoxi inferior, halo y grupos -NRxRy. Los grupos acilo representativos incluyen, pero sin limitación, acetilo, trifluoroacetilo, benzoílo y similares. "Aldehido" se refiere a un grupo acilo en el que R" es hidrógeno. "Tioacilo" o "tiocarbonilo" se refiere a un grupo -C(S)R", con R" como se ha definido anteriormente. Un grupo "tiocarbonilo" se refiere a un grupo -C(S)R", con R" como se ha definido anteriormente. Un grupo "C-carbox¡" se refiere a un grupo -C(O)OR", con R" como se ha definido anteriormente. Un grupo "O-carboxi" se refiere a un grupo -OC(O)R" con R" como se ha definido anteriormente. "Éster" se refiere a un grupo -C(O)OR" con R" como se define en este documento con la excepción de que R" no puede ser hidrógeno. Grupo "acetilo" se refiere a un grupo -C(O)CH3. Grupo "halo" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo, preferiblemente flúor o cloro. Grupo "trihalometilo" se refiere a un grupo metilo que tiene tres sustituyentes halo, tales como un grupo trifluorometilo. "Ciano" se refiere a un grupo -C=N. Un grupo "sulfinilo" se refiere a un grupo -S(O)R" en el que además de ser como se ha definido anteriormente, R" también puede ser un grupo hidroxi. Un grupo "sulfonilo" se refiere a un grupo -S(O)2R" en el que además de ser como se ha definido anteriormente, R" también puede ser un grupo hidroxi. "S-sulfonamido" se refiere a un grupo -S(O)2NRxRy, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "?/-sulfonamido" se refiere a un grupo -NRxS(O)2Ry, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "O-carbamilo" se refiere a un grupo -OC(O)NR Ry, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "?/-carbamilo" se refiere a un grupo RyOC(O)NRx, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "O-tiocarbamilo" se refiere a un grupo -OC(S)NRxRy, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "?/-tiocarbamilo" se refiere a un grupo RyOC(S)NRx, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "Amino" se refiere a un grupo -NRxRy en el que Rx y Ry son ambos hidrógeno. "C-amido" se refiere a un grupo -C(O)NRxRy, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "?/-amido" se refiere a un grupo RxC(O)NRy-, con Rx y Ry como se han definido anteriormente. "Nitro" se refiere a un grupo -NO2. "Haloalquilo" significa un alquilo, preferiblemente alquilo inferior, que está sustituido con uno o más átomos halo iguales o diferentes, por ejemplo, -CH2CI, -CF3, -CH2CF3, -CH2CCI3 y similares. "Hidroxialquilo" significa un alquilo, preferiblemente alquilo inferior, que está sustituido con uno, dos o tres grupos hidroxi; por ejemplo, hidroximetilo, 1 ó 2-hidroxietilo, 1 ,2-, 1 ,3- ó 2,3-dihidroxipropilo y similares. "Aralquilo" significa alquilo, preferiblemente alquilo inferior, que está sustituido con un grupo arilo como se ha definido anteriormente; por ejemplo, -CH2-fenilo, -(CH2)2fenilo, -(CH2)3fenilo, CH3CH(CH3)CH2fenilo y similares y derivados de los mismos. Grupo "heteroaralquilo" significa alquilo, preferiblemente alquilo inferior, que está sustituido con un grupo heteroarilo; por ejemplo, -CH2piridinilo, -(CH2)2pirimidinilo, -(CH2)3imidazolilo, y similares, y derivados de los mismos. "Monoalquilamino" significa un radical -NHR en el que R es un grupo alquilo o cicloalquilo no sustituido; por ejemplo metilamino, (1-metiletil)amino, ciclohexilamino y similares. "Dialquilamino" significa un radical -NRR en el que cada R es independientemente un grupo alquilo o cicloalquilo no sustituido; dimetilamino, dietilamino, (l-metiletil)-etilamino, ciciohexilmetilamino, ciclopentilmetilamino y similares. "Opcional" u "opcionalmente" significa que el evento o circunstancia descrito posteriormente puede producirse pero no necesariamente, y que la descripción incluye casos en los que el evento o circunstancia se produce y casos en los que no se produce. Por ejemplo, "grupo heterociclo opcionalmente sustituido con un grupo alquilo" significa que el alquilo puede estar presente aunque no necesariamente, y la descripción incluye situaciones en las que el grupo heterociclo está sustituido con un grupo alquilo y situaciones en las que el grupo heterociclo no está sustituido con el grupo alquilo. Una "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de uno o más de los compuestos descritos en este documento, o a sales, solvatos, hidratos o profármacos fisiológica/farmacéuticamente aceptables de los mismos, con otros componentes químicos, tales como vehículos y excipientes fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables. El propósito de una composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo. Como se usa en este documento, un "vehículo fisiológica/farmacéuticamente aceptable" se refiere a un vehículo o diluyente que no provoca una irritación significativa a un organismo y que no anula la actividad biológica y propiedades del compuesto administrado. Un "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sustancia inerte añadida a una composición farmacéutica para facilitar adicionalmente la administración de un compuesto. Los ejemplos, sin limitación, de excipientes incluyen carbonato calcico, fosfato calcico, diversos azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles. Como se usa en este documento, la expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que retienen la eficacia y propiedades biológicas del compuesto parental. Tales sales incluyen: (i) sales de adición de ácidos, que pueden obtenerse mediante la reacción de la base libre del compuesto parental con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico y similares, o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido málico (D) o (L), ácido maleico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico y similares; o (2) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto parental o bien se reemplaza por un ion metálico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion alcalinotérreo, o un ion aluminio; o se coordina con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, ?/-metilglucamina y similares. "PK" se refiere al receptor de la proteína tirosina quinasa (RTK), a la tirosina quinasa no receptora o "celular" (CTK) y las serina-treonina quinasas (STK). "Modulación" o "modular" se refiere a la alteración de la actividad catalítica de RTK, CTK y STK. En particular, modular se refiere a la activación de la actividad catalítica de RTK, CTK y STK, preferiblemente a la activación o inhibición de la actividad catalítica de RTK, CTK y STK, dependiendo de la concentración del compuesto o de la sal a la que la RTK, CTK o STK se expone, o más preferiblemente, la inhibición de la actividad catalítica de RTK, CTK y STK. "Actividad catalítica" se refiere a la velocidad de fosforilación de la tirosina bajo la influencia, directa o indirecta, de RTK y/o CTK o a la fosforilación de la serina y treonina bajo la influencia, directa o indirecta, de STK. "Poner en contacto" se refiere a llevar un compuesto de esta ¡nvención y una PK diana juntos de tal forma que el compuesto pueda afectar a la actividad catalítica de la PK, directamente, es decir, interactuando con la propia quinasa, o indirectamente, es decir, interactuando con otra molécula sobre la que la actividad catalítica de la quinasa es dependiente. Tal "poner en contacto" puede realizarse "in vitro", es decir en un tubo de ensayo, una placa petri o similares. En un tubo de ensayo, poner en contacto puede implicar sólo un compuesto y una PK de interés o puede implicar células enteras. Las células también pueden mantenerse o cultivarse en placas de cultivo celular y pueden ponerse en contacto con un compuesto en dicho medio. En este contexto, la capacidad de un compuesto particular para afectar a un trastorno relacionado con PK, es decir, la Cl50 del compuesto, definida más adelante, puede determinarse antes de que se intente el uso de los compuestos in vivo con organismos vivos más complejos. Para células fuera del organismo, existen múltiples procedimientos, y éstos son bien conocidos para los especialistas en la técnica, para conseguir que las PK estén en contacto con los compuestos incluyendo, pero sin limitación, microinyección celular directa y numerosas técnicas de transporte transmembrana. "In vitro" se refiere a procedimientos realizados en un medio artificial tal como, por ejemplo, sin limitación, en un tubo de ensayo o en un medio de cultivo. "In vivo" se refiere a procedimientos realizados en un organismo vivo, tal como, sin limitación, un ratón, rata o conejo. "Trastorno relacionado con PK", "trastorno dirigido por PK" y "actividad anormal de PK" se refieren a una afección caracterizada por actividad catalítica de PK inapropiada, es decir infla-actividad o más comúnmente sobreactividad, donde la PK particular puede ser un RTK, una CTK o una STK. La actividad catalítica inapropiada puede conseguirse como resultado de: (1 ) expresión de PK en células que normalmente no expresan PK, (2) aumento de la expresión de PK que conduce a una proliferación, diferenciación y/o crecimiento celular no deseado, o, (3) disminución de la expresión de PK que conduce a reducciones no deseadas de la proliferación, diferenciación y/o crecimiento celular. La sobreactividad de una PK se refiere a la amplificación del gen que codifica una PK particular o a la producción de un nivel de actividad de PK que puede correlacionarse con un trastorno de proliferación, diferenciación y/o crecimiento celular (es decir, cuando el nivel de PK aumenta, la gravedad de uno o más de los síntomas del trastorno celular aumenta). La infra-actividad es, por supuesto, lo contrario, donde la gravedad de uno o más síntomas de un trastorno celular aumenta cuando el nivel de la actividad de PK disminuye. "Tratar" y "tratamiento" se refieren a un procedimiento para aliviar o anular un trastorno celular mediado por PK y/o sus síntomas asociados. Con respecto particularmente al cáncer, estos términos simplemente significan que la esperanza de vida de un individuo que padece cáncer aumentará o que se reducirán uno o más de los síntomas de la enfermedad. "Organismo" se refiere a cualquier entidad viva que comprende al menos una célula. Un organismo vivo puede ser tan simple como, por ejemplo, una célula eucariótica sencilla o tan compleja como un mamífero, incluyendo un ser humano. "Cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto a administrar que aliviará hasta cierto punto uno o más de los síntomas del trastorno a tratar. Con respecto al tratamiento del cáncer, una cantidad terapéuticamente eficaz se refiere a la cantidad que tiene al menos uno de los siguientes efectos: (1 ) reducir el tamaño del tumor; (2) inhibir (es decir, ralentizar hasta cierto punto, preferiblemente interrumpir) la metástasis tumoral; (3) inhibir hasta cierto punto (es decir, ralentizar hasta cierto punto, preferiblemente interrumpir) el crecimiento tumoral, y (4) aliviar hasta cierto punto (o, preferiblemente, eliminar) uno o más síntomas asociados con el cáncer.
"Controlar" significa observar o detectar el efecto de poner en contacto un compuesto con una célula que expresa una PK particular. El efecto observado o detectado puede ser un cambio en el fenotipo celular, en la actividad catalítica de una PK o un cambio en la interacción de una PK con una pareja de unión natural. En la técnica se conocen bien técnicas para observar o detectar tales efectos. El efecto se selecciona entre un cambio o una ausencia de cambio en un fenotipo celular, un cambio o ausencia de cambio en la actividad catalítica de dicha proteína quinasa o un cambio o ausencia de cambio en la interacción de dicha proteína quinasa con una pareja de unión natural en un aspecto final de esta invención. "Fenotipo celular" se refiere a la apariencia externa de una célula o tejido o la función biológica de la célula o del tejido. Son ejemplos, sin limitación, de un fenotipo celular el tamaño celular, el crecimiento celular, la proliferación celular, la diferenciación celular, la supervivencia celular, la apoptosis y la absorción y uso de nutrientes. Tales características fenotípicas se pueden medir mediante técnicas bien conocidas en la técnica. "Pareja de unión natural" se refiere a un polipéptido que se une a una PK particular en una célula. Las parejas de unión naturales pueden desempeñar un papel en la propagación de una señal en un procedimiento de transducción de señales mediado por PK. Un cambio en la interacción de la pareja de unión natural con la PK puede manifestarse por sí mismo como un aumento o disminución de la concentración del complejo de pareja de unión natural/PK y, como resultado en un cambio observable en la capacidad de la PK para mediar la transducción de señales. Como se usa en este documento, las expresiones "ópticamente puro", "enantioméricamente puro", "enantiómero puro" y "enantiómero ópticamente puro" significan una composición que comprende un enantiómero de un compuesto y carece sustancialmente del enantiómero opuesto del compuesto. Un compuesto ópticamente puro típico comprende más de aproximadamente el 80% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente el 20% en peso del enantiómero opuesto del compuesto, más preferiblemente, más de aproximadamente el 90% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente el 10% en peso del enantiómero opuesto del compuesto, incluso más preferiblemente más de aproximadamente el 95% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente el 5% en peso del enantiómero opuesto del compuesto, y aún más preferiblemente más de aproximadamente el 97% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente el 3% en peso del enantiómero opuesto del compuesto.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En la sección de Ejemplos de este documento pueden encontrarse esquemas generales para sintetizar los compuestos de la invención. Algunos de los procedimientos generales se muestran con referencia a la síntesis de compuestos en los que el resto 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi es el isómero (R) puro, y algunos se muestran con referencia a compuestos en los que dicho resto es una mezcla racémica. Debe entenderse que los procedimientos en este documento pueden usarse para producir compuestos racémicos o isómeros (R) enantioméricamente puros eligiendo el material de partida racémico o enantioméricamente puro correspondiente. Los procedimientos mostrados en este documento pueden usarse para producir una amplia variedad de compuestos enantioméricamente puros mediante la selección del material de partida enantioméricamente puro apropiado. Además de los compuestos mostrados en este documento, la invención también proporciona compuestos enantiómericamente puros que corresponden a los compuestos 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fen¡l)-etoxi]-piridin-2-ilamina y 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina mostrados en la Solicitud de Patente de Estados Unidos con el N° de Serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495); en la Solicitud de Estados Unidos con el N° de Serie por asignar, número de expediente PC 32546, presentada el 26 de agosto de 2004 y titulada "Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors"; (Compuestos de Aminoheteroarilo Sustituidos con Pirazolo como Inhibidores de Proteína Quinasa); y en la Solicitud de Estados Unidos con N° de Serie por asignar, número de expediente PC 32548, presentada el 26 de agosto de 2004 y titulada "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors" (Compuestos de Aminoheteroarilo como Inhibidores de Proteína Quinasa). Las descripciones de estos documentos se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. A menos que se indique otra cosa, todas las referencias en este documento a los compuestos de la invención incluyen referencias a sales, solvatos, hidratos y complejos de los mismos y a solvatos, hidratos y complejos de sales de los mismos, incluyendo polimorfos, estereoisómeros y versiones isotópicamente marcadas de los mismos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácidos y básicas (incluyendo disales). Las sales de adición de ácidos adecuadas se forman a partir de ácidos que forman sales no tóxicas.
Los ejemplos incluyen las sales acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metiisulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, sacarato, estearato, succinato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato. Las sales básicas adecuadas se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen las sales de aluminio, arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina y cinc.
Para un análisis sobre sales adecuadas, véase "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use" de Stahl y Wermuth, (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Una sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos de la invención puede prepararse fácilmente mezclando conjuntamente soluciones del compuesto y la base o ácido deseado, según sea apropiado. La sal puede precipitar a partir de la solución y puede recogerse por filtración o recuperarse por evaporación del disolvente. El grado de ionización en la sal puede variar de completamente ionizado a casi no ionizado. Los compuestos de la invención pueden existir tanto en formas no solvatadas como solvatadas. El término "solvato" se usa en este documento para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de disolvente farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol. El término "hidrato" se emplea cuando dicho disolvente es agua. Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen hidratos y solvatos en los que el disolvente de cristalización puede estar isotópicamente sustituido, por ejemplo D2O, d6-acetona, d6-DMSO. Dentro del alcance de la invención también se incluyen complejos tales como clatratos, complejos de inclusión fármaco-huésped en los que, al contrario que los solvatos mencionados anteriormente, el fármaco y el huésped están presentes en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. También se incluyen complejos del fármaco que contiene dos o más componentes orgánicos y/o inorgánicos que pueden estar en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. Los complejos resultantes pueden estar ionizados, parcialmente ionizados o no ionizados. Para un análisis de tales complejos véase J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 de Haleblian (agosto de 1975), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. También dentro del alcance de la invención están polimorfos, profármacos e isómeros (incluyendo isómeros ópticos, geométricos y tautoméricos) de los compuestos de la invención. Los derivados de compuestos de la invención que pueden tener poca o ninguna actividad farmacológica por sí mismos pueden convertirse, cuando se administran a un paciente, en compuestos de la invención, por ejemplo, por escisión hidrolítica. Tales derivados se denominan "pro-fármacos". Se puede encontrar información adicional sobre el uso de profármacos en "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi y W. Stella) y "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987 (ed. E. B. Roche, American Pharmaceutical Association), cuyas descripciones se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Los profármacos de acuerdo con la invención pueden, por ejemplo, producirse reemplazando las funcionalidades apropiadas presentes en los compuestos de la invención con ciertos restos que los especialistas en la técnica conocen como "pro-restos" como se describe, por ejemplo, en "Design of Prodrugs" por H. Bundgaard (Elsevier, 1985), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Algunos ejemplos de profármacos de acuerdo con la invención incluyen: (i) cuando el compuesto contiene una funcionalidad ácido carboxílico (-COOH), un éster del mismo, por ejemplo, remplazamiento del hidrógeno con alquilo (C C8); (ii) cuando el compuesto contiene una funcionalidad alcohol (-OH), un éter del mismo, por ejemplo, remplazamiento del hidrógeno por alcanoiloximetilo (d-Cß); y (iii) cuando el compuesto contiene una funcionalidad amino primaria o secundaria (-NH2 o -NHR donde R?H), una amida del mismo, por ejemplo, remplazamiento de uno o los dos hidrógenos por alcanoílo (CrC?o). Otros ejemplos de grupos de remplazamiento de acuerdo con los ejemplos anteriores y ejemplos de otros tipos de profármacos pueden encontrarse en las referencias mencionadas anteriormente. Finalmente, ciertos compuestos de la invención pueden actuar por sí mismos como profármacos de otros compuestos de la invención. Los compuestos de la invención que contienen uno o más átomos de carbono asimétricos pueden existir en forma de dos o más estereoisómeros. Cuando un compuesto de la invención contiene un grupo alquenilo o alquenileno, son posibles isómeros geométricos cis/trans (o Z/E).
Cuando el compuesto contiene, por ejemplo, un grupo ceto u oxima, o un resto aromático, puede producirse isomería tautomérica ("tautomería"). Un único compuesto puede mostrar más de un tipo de isomería. Dentro del alcance de la ¡nvención se incluyen todos los estereoisómeros, isómeros geométricos y formas tautoméricas de los compuestos de la invención, incluyendo compuestos que muestran más de un tipo de isomería y mezclas de uno o mas de los mismos. También se incluyen sales de adición de ácidos o básicas en las que el contraión es ópticamente activo, por ejemplo, D-lactato o L-lisina, o racémico, por ejemplo DL-tartrato o DL-arginina. Los isómeros cis/trans pueden separarse por técnicas convencionales bien conocidas para los especialistas en la técnica, por ejemplo, cromatografía y cristalización fraccionada. Las técnicas convencionales para la preparación/aislamiento de enantiómeros individuales incluyen síntesis quiral a partir de un precursor adecuado ópticamente puro o resolución del racemato (o el racemato de una sal o derivado) usando, por ejemplo, cromatografía líquida de alta presión quiral (HPLC). Como alternativa, el racemato (o precursor racémico) se puede hacer reaccionar con un compuesto ópticamente activo adecuado, por ejemplo, un alcohol o, en el caso de que el compuesto contenga un resto ácido o básico, un ácido o base tal como ácido tartárico o 1 -feniletilamina. La mezcla diastereomérica resultante puede separarse por cromatografía y/o cristalización fraccionada y uno o ambos de los diastereoisómeros puede convertirse en el(los) correspondiente(s) enantiómero(s) puro(s) por medios bien conocidos para un especialista en la técnica. Los compuestos quirales de la invención (y precursores quirales de los mismos) pueden obtenerse en forma enantioméricamente enriquecida usando cromatografía, típicamente HPLC, sobre una resina asimétrica con una fase móvil que consiste en un hidrocarburo, típicamente heptano o hexano, que contiene del 0 al 50% de isopropanol, típicamente del 2 al 20% y del 0 al 5% de una alquilamina, típicamente dietilamina al 0.1 %. La concentración del eluato proporciona la mezcla enriquecida. Los conglomerados estereoisoméricos pueden separarse por técnicas convencionales conocidas para los especialistas en la técnica; véase, por ejemplo, "Stereochemistry of Organic Compounds" de E. L. Eliel (Wiley, Nueva York, 1994), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. La presente invención también incluye compuestos de la invención isotópicamente marcados, en los que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene el mismo número atómico pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos adecuados para inclusión en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, tales como 2H y 3H, carbono, tales como 1 C, 13C y 1 C, cloro tal como 36CI, flúor, tal como 18F, yodo, tales como 123l y 125l, nitrógeno, tales como 13N y 15N, oxígeno, tales como 15O, 17O y 18O, fósforo, tal como 32P y azufre, tal como 35S. Ciertos compuestos isotópicamente marcados de la invención, por ejemplo, los que incorporan un isótopo radiactivo, son útiles en estudios de distribución de fármaco y/o sustrato en tejidos. Los isótopos radiactivos tritio, 3H, y carbono 14, 1 C, son particularmente útiles para este propósito en vista de su facilidad de incorporación y de los fáciles medios de detección. La sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, 2H puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la semivida in vivo o reducción de los requerimientos de dosificación, y por lo tanto se puede preferir en algunas circunstancias. La sustitución con isótopos que emiten positrones, tales como 11C, 18F, 15O y 13N puede ser útil en estudios de Tomografía de Emisión de Positrones (PET) para examinar la ocupación de receptores del sustrato. Los compuestos isotópicamente marcados de la invención pueden prepararse generalmente por técnicas convencionales conocidas para los especialistas en la técnica o por procedimientos análogos a los descritos en este documento, usando un reactivo apropiado isotópicamente marcado en lugar del reactivo no marcado empleado de otra forma. Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquellos en los que el disolvente de cristalización puede estar isotópicamente sustituido, por ejemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO.
Los compuestos de la invención deseados para uso farmacéutico pueden administrarse en forma de productos cristalinos o amorfos, o mezclas de los mismos. Pueden obtenerse, por ejemplo, en forma de lechos cortos sólidos, polvos o películas mediante procedimientos tales como precipitación, cristalización, liofilización, secado por pulverización o secado evaporativo. Para este propósito puede usarse secado por microondas o radiofrecuencia. Los compuestos pueden administrarse solos o en combinación con uno o más compuestos de la invención distintos, o en combinación con uno o más fármacos distintos (o como cualquier combinación de los mismos). Generalmente, se administrarán en forma de una formulación junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" se usa en este documento para describir cualquier ingrediente diferente del/de los compuesto(s) de la invención. La elección del excipiente dependerá en gran parte de factores tales como el modo de administración particular, el efecto del excipiente en la solubilidad y estabilidad y la naturaleza de la forma de dosificación. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración de compuestos de la invención y procedimientos para su preparación serán fácilmente evidentes para los especialistas en la técnica. Tales composiciones y procedimientos para su preparación pueden encontrarse, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 19a Edición (Mack Publishing Company, 1995), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad.
Administración Oral Los compuestos de la ¡nvención pueden administrarse por vía oral. La administración oral puede implicar tragar, de forma que el compuesto entre en el tracto gastrointestinal o puede emplearse administración bucal o sublingual, mediante la cual el compuesto entra directamente en el torrente circulatorio desde la boca. Las formulaciones adecuadas para administración oral incluyen formulaciones sólidas tales como comprimidos, cápsulas que contienen particulados, líquidos o polvos, grageas (incluyendo las cargadas de líquido), gomas de mascar, multi- y nano-particulados, geles, solución sólida, liposomas, películas (incluyendo muco-adhesivas), óvulos, pulverizaciones y formulaciones líquidas. Las formulaciones líquidas incluyen suspensiones, soluciones, jarabes y elixires. Tales formulaciones pueden usarse como cargas en cápsulas duras o blandas e incluyen típicamente un vehículo, por ejemplo agua, etanol, polietilenglicol, propilenglicol, metilcelulosa o un aceite adecuado y uno o más agentes emulsionantes y/o agentes de suspensión. Las formulaciones líquidas también pueden prepararse por reconstitución de un sólido, por ejemplo, a partir de un sello. Los compuestos de la invención también pueden usarse en formas de dosificación de disolución rápida y disgregación rápida tales como las descritas en Expert Opinión in Therapeutic Patents, H (6), 981-986 de Liang y Chen (2001 ), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Para formas de dosificación en comprimidos, dependiendo de la dosis, el fármaco puede constituir del 1 % en peso al 80% en peso de la forma de dosificación, más típicamente del 5% en peso al 60% en peso de la forma dosificación. Además del fármaco, los comprimidos contienen generalmente un disgregante. Los ejemplos de disgregantes incluyen almidón glicolato sódico, carboximetilcelulosa sódica, carboximetilcelulosa calcica, croscarmelosa sódica, crospovidona, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilcelulosa sustituida con alquilo inferior, almidón, almidón pregelatinizado y alginato sódico. Generalmente, el disgregante comprenderá del 1 % en peso al 25% en peso, preferiblemente del 5% en peso al 20% en peso de la forma de dosificación. Los aglutinantes se usan generalmente para impartir cualidades de cohesión a una formulación en comprimido. Los aglutinantes adecuados incluyen celulosa microcristalina, gelatina, azúcares, polietilenglicol, gomas naturales y sintéticas, polivinilpirrolidona, almidón pregelatinizado, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa. Los comprimidos también pueden contener diluyentes tales como lactosa (monohidrato, monohidrato secado por pulverización, anhidro y similares), manitol, xilitol, dextrosa, sacarosa, sorbitol, celulosa microcristalina, almidón y fosfato calcico dibásico dihidrato.
Los comprimidos también pueden incluir opcionalmente agentes tensioactivos tales como lauril sulfato sódico y polisorbato 80 y deslizantes tales como dióxido de silicio y talco. Cuando están presentes, los agentes tensioactivos están típicamente en cantidades del 0.2% en peso al 5% en peso del comprimido y los deslizantes son típicamente del 0.2% en peso al 1% en peso del comprimido. Los comprimidos también contienen generalmente lubricantes tales como estearato de magnesio, estearato de calcio, estearato de zinc, estearil fumarato sódico y mezclas de estearato de magnesio con lauril sulfato sódico. Los lubricantes generalmente están presentes en cantidades del 0.25% en peso al 10% en peso, preferiblemente del 0.5% en peso al 3% en peso del comprimido. Otros ingredientes convencionales incluyen anti-oxidantes, colorantes, agentes aromatizantes, conservantes y agentes de enmascaramiento del sabor. Los comprimidos ilustrativos contienen hasta aproximadamente el 80% en peso de fármaco, de aproximadamente el 10% en peso a aproximadamente el 90% en peso de aglutinante, de aproximadamente el 0% en peso a aproximadamente el 85% en peso de diluyente, de aproximadamente el 2% en peso a aproximadamente el 10% en peso de disgregante y de aproximadamente el 0.25% en peso a aproximadamente el 10% en peso de lubricante.
Las mezclas de comprimidos pueden comprimirse directamente o con un rodillo para formar comprimidos. Las mezclas de comprimidos o porciones de mezclas pueden, de forma alternativa, granularse en húmedo, en seco o en estado fundido, congelarse en estado fundido, o extruirse antes de la formación de comprimidos. La formulación final puede incluir una o más capas y puede estar recubierta o no recubierta; o encapsulada. La formulación de comprimidos se analiza con detalle en "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1", de H. Lieberman y L. Lachman, Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Las formulaciones sólidas para administración oral pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retrasada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida y programada. Las formulaciones de liberación modificada adecuadas se describen en la Patente de Estados Unidos N° 6,106,864. Los detalles de otras tecnologías de liberación adecuadas tales como dispersiones de alta energía y partículas osmóticas y recubiertas se encuentran en Verma y col., Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001). El uso de goma de mascar para conseguir la liberación controlada se describe en el documento WO 00/35298. Las descripciones de estas referencias se incorporan en este documento como referencia en su totalidad.
Administración Parenteral Los compuestos de la ¡nvención también pueden administrarse directamente en el torrente circulatorio, en el músculo o en un órgano interno. Los medios adecuados para administración parenteral incluyen intravenoso, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, ¡ntraventricular, intrauretral, intraestemal, intracraneal, intramuscular y subcutáneo. Los dispositivos adecuados para administración parenteral incluyen inyectores con aguja (incluyendo microagujas), inyectores sin aguja y técnicas de infusión. Las formulaciones parenterales son típicamente soluciones acuosas que pueden contener excipientes tales como sales, carbohidratos y agentes tamponantes (preferiblemente a un pH de 3 a 9), pero, para algunas aplicaciones, pueden formularse de forma más adecuada como solución estéril no acuosa o como una forma seca a usar junto con un vehículo adecuado tal como agua estéril sin pirógenos. La preparación de formulaciones parenterales en condiciones estériles, por ejemplo, por liofilización, puede realizarse fácilmente usando técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas para los especialistas en la técnica. La solubilidad de compuestos de la invención usados en la preparación de soluciones parenterales puede aumentarse mediante el uso de técnicas de formulación apropiadas, tales como la incorporación de agentes que mejoran la solubilidad.
Las formulaciones para administración parenteral pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retrasada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida y programada. De esta forma, los compuestos de la invención pueden formularse como un sólido, semi-sólido o liquido tixotrópico para la administración en forma de un depósito implantado que proporciona liberación modificada del compuesto activo. Los ejemplos de tales formulaciones incluyen stents recubiertos con fármaco y microesferas de PGLA.
Administración Tópica Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía tópica a la piel o mucosa, es decir por vía dérmica o transdérmica. Las formulaciones típicas para este propósito incluyen geles, hidrogeles, lociones, soluciones, cremas, pomadas, polvos finos, apositos, espumas, películas, parches cutáneos, obleas, implantes, esponjas, fibras, vendas y microemulsiones. También pueden usarse liposomas. Los vehículos típicos incluyen alcohol, agua, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, glicerina, polietilenglicol y propilenglicol. Pueden incorporarse potenciadores de la penetración; véase, por ejemplo, J Pharm Sci, 88 (10) 955-958 de Finnin y Morgan (octubre de 1999). Otros medios de administración tópica incluyen administración por electroporación, iontoforesis, fonoforesis, sonoforesis e inyección con microaguja o sin aguja (por ejemplo, Powderject™, Bioject™, etc). Las descripciones de estas referencias se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Las formulaciones para administración tópica pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retrasada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida y programada.
Administración Inhalada / Intranasal Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía intranasal o por inhalación, típicamente en forma de polvo seco (solo, en forma de mezcla, por ejemplo, en una mezcla seca con lactosa, o en forma de una partícula de componente mixto, por ejemplo, mezclado con fosfolípidos, tales como fosfatidilcolina) desde un inhalador de polvo seco o como una pulverización en aerosol a partir de un recipiente presurizado, bomba, pulverizador, atomizador (preferiblemente un atomizador que usa electrohidrodinámica para producir una neblina fina) o nebulizador, con o sin el uso de un propulsor adecuado, tal como 1 ,1 ,1 ,2-tetrafluoroetano o 1 ,1 ,1 ,2,3,3,3-heptafluoropropano. Para el uso intranasal, el polvo puede incluir un agente bioadhesivo, por ejemplo quitosano o ciclodextrina. El recipiente presurizado, bomba, pulverizador, atomizador o nebulizador contiene una solución o suspensión del compuesto o compuestos de la ¡nvención que comprende, por ejemplo, etanol, etanol acuoso o un agente alternativo adecuado para dispersar, solubilizar o ampliar la liberación del agente activo, un propulsor(es) como disolvente y un tensioactivo opcional, tal como trioleato de sorbitano, ácido oleico o un ácido oligoláctico. Antes de usarse en una formulación en polvo seco o en suspensión, el producto del fármaco se microniza a un tamaño adecuado para la administración por inhalación (típicamente menos de 5 micrómetros). Esto puede conseguirse por cualquier procedimiento de trituración apropiado tal como trituración con chorro en espiral, trituración con chorro en lecho fluido, procesado en fluido supercrítico para formar nanopartículas, homogeneización a alta presión o secado por pulverización. Las cápsulas (hechas, por ejemplo, de gelatina o HPMC), blisters y cartuchos para uso en un inhalador o insuflador pueden formularse para que contengan una mezcla en polvo del compuesto de la invención, una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón y un modificador del rendimiento tal como /-leucina, manitol o estearato de magnesio. La lactosa puede ser anhidra o estar en forma de monohidrato, preferiblemente la última. Otros excipientes adecuados incluyen dextrano, glucosa, maltosa, sorbitol, xilitol, fructosa, sacarosa y trehalosa. Una formulación en solución adecuada para uso en un atomizador que usa electrohidrodinámica para producir una neblina fina puede contener de 1 µg a 20 mg del compuesto de la invención por actuación y el volumen de actuación puede variar de 1 µl a 100 µl. Una formulación típica incluye un compuesto de la invención, propilenglicol, agua estéril, etanol y cloruro sódico. Los disolventes alternativos que pueden usarse en lugar de propilenglicol incluyen glicerol y polietilenglicol. Pueden añadirse aromatizantes adecuados tales como mentol y levomentol, o edulcorantes tales como sacarina o sacarina sódica, a las formulaciones de la invención deseadas para administración inhalada/intranasal. Las formulaciones para administración inhalada/intranasal pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada usando, por ejemplo, poli(ácido DL-láctico-coglicólico) (PGLA). Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retrasada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida y programada. En el caso de inhaladores y aerosoles de polvo seco, la unidad de dosificación se determina por medio de una válvula que administra una cantidad medida. Las unidades de acuerdo con la invención se disponen típicamente para administrar una dosis medida o "puff' que contiene una cantidad deseada del compuesto de la invención. La dosis diaria total puede administrarse en una única dosis o, más habitualmente, en dosis divididas a lo largo del día.
Administración Rectal/lntravaqinal Los compuestos de la invención pueden administrarse por vía rectal o vaginal, por ejemplo, en forma de un supositorio, pesario o enema. La manteca de cacao es una base de supositorio tradicional pero pueden usarse diversas alternativas según sea apropiado. Las formulaciones para administración rectal/vaginal pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retrasada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida y programada.
Administración Ocular Los compuestos de la invención también pueden administrarse directamente en el ojo u oído, típicamente en forma de gotas de una suspensión o solución micronizada en solución salina isotónica estéril con pH ajustado. Otras formulaciones adecuadas para la administración ocular y aural incluyen pomadas, implantes biodegradables (por ejemplo, esponjas con geles absorbibles, colágeno) y no biodegradables (por ejemplo, silicona), obleas, lentes y sistemas de particulados o vesículas tales como niosomas o liposomas. Un polímero tal como ácido poliacrílico reticulado, poli(alcohol vinílico), ácido hialurónico, un polímero celulósico, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa o metilcelulosa o un polímero de heteropolisacárido, por ejemplo, goma de gelano, puede incorporarse junto con un conservante tal como cloruro de benzalconio. Tales formulaciones también pueden administrarse por iontoforesis. Las formulaciones para administración ocular/aural pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retrasada, sostenida, por pulsos, controlada, dirigida o programada.
Otras Tecnologías Los compuestos de la invención pueden combinarse con entidades macromoleculares solubles, tales como ciclodextrina y derivados adecuados de las mismas o polímeros que contienen polietilenglicol para mejorar su solubilidad, velocidad de disolución, enmascaramiento del sabor, biodisponibilidad y/o estabilidad para uso en cualquiera de los modos de administración mencionados anteriormente. Se descubre que los complejos de fármaco-ciclodextrina, por ejemplo, son generalmente útiles para la mayoría de las formas de dosificación y vías de administración. Pueden usarse tanto complejos de inclusión como de no inclusión. Como alternativa a la complejación directa con el fármaco, la ciclodextrina puede usarse como aditivo auxiliar, es decir, como vehículo, diluyente o solubilizador. Las más utilizadas para estos propósitos son las ciclodextrinas alfa, beta y gamma, cuyos ejemplos pueden encontrarse en las publicaciones PCT N° WO 91/11172, WO 94/02518 y WO 98/55148, cuyas descripciones se incorporan en este documento como referencia en su totalidad.
Dosificación La cantidad del compuesto activo administrado dependerá del sujeto a tratar, la gravedad del trastorno o afección, la velocidad de administración, la disposición del compuesto y el criterio del médico que prescribe. Sin embargo, una dosificación eficaz está típicamente en el intervalo de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal al día, preferiblemente de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 35 mg/kg/día, en dosis únicas o divididas. Para un ser humano de 70 kg, esta cantidad sería de aproximadamente 0.07 a aproximadamente 7000 mg/día, preferiblemente de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 2500 mg/día. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado anteriormente pueden ser más que adecuados, aunque en otros casos pueden usarse dosis todavía más altas sin provocar ningún efecto secundario perjudicial, con tales dosificaciones más altas típicamente divididas en varias dosis más pequeñas para administración a lo largo del día.
Kit de Partes Mientras sea deseable administrar una combinación de compuestos activos, por ejemplo, con el propósito de tratar una enfermedad o afección particular, está dentro del alcance de la invención que puedan combinarse convenientemente dos o más composiciones farmacéuticas, al menos una de ellas contiene un compuesto de acuerdo con la ¡nvención, en forma de un kit adecuado para la coadministración de las composiciones. De esta forma, el kit de la invención ¡ncluye dos o más composiciones farmacéuticas distintas, al menos una de las cuales contiene un compuesto de la invención y medios para guardar por separado dichas composiciones, tales como un recipiente, frasco dividido o envase de lámina dividido. Un ejemplo de tal kit es el conocido envase de tipo blister usado para el envasado de comprimidos, cápsulas y similares. El kit de la invención es particularmente adecuado para administrar diferentes formas de dosificación, por ejemplo, oral y parenteral, para administrar las distintas composiciones en diferentes intervalos de dosificación o para valorar las distintas composiciones entre sí. Para fomentar la aceptación, el kit incluye típicamente instrucciones para la administración y puede proporcionarse con un sistema recordatorio.
EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, "Et" significa etilo, "Ac" significa acetilo, "Me" significa metilo, "Ms" significa metanosulfonilo (CH3SO2), "¡Pr" significa isopropilo, "HATU" significa hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1.1.3.3-tetrametiluronio, "Ph" significa fenilo, "Boc" significa rerc-butoxicarbonilo, "EtOAc" significa acetato de etilo, "HOAc" significa ácido acético, "NEt3" o "Et3N" significa trietilamina; "THF" significa tetrahidrofurano, "DIC" significa diisopropilcarbodiimida, "HOBt" significa hidroxi benzotriazol, "MeOH" significa metanol, "i-PrOAc" significa acetato de isopropilo; "KOAc" significa acetato de potasio, "DMSO" significa dimetiisulfóxido, "AcCI" significa cloruro de acetilo, "CDCI3" significa cloroformo deuterado, "MTBE" significa metil f-butil éter, "DMF" significa dimetilformamida, "Ac2O" significa anhídrido acético, "Me3SOI" significa yoduro de trimetiisulfoxonio, "DMAP" significa 4-dimetilaminopiridina, "dppf significa difenilfosfino ferroceno, "DME" significa éter dimetílico de etilenglicol, HOBT significa 1 -hidroxibenzotriazol, EDC significa 1 -etil-3-(3-d¡metilam¡noprop¡l)-carbod¡imida. Los siguientes ejemplos se dan para ilustrar la presente ¡nvención. Debe entenderse, sin embargo, que la ¡nvención no se limita a las condiciones o detalles específicos descritos en estos ejemplos. Pueden sintetizarse reactivos como se muestra en este documento, o están disponibles a partir de fuentes comerciales (por ejemplo, Aldrich, Milwaukee, Wl; Acros, Morris Plains, NJ; Biosynth International, Naperville, IL; Frontier Scientific, Logan, UT; TCI America, Portland, OR; Combi-Blocks, San Diego, CA; Matrix Scientific, Columbia, SC; Acros, Morris Plains, NJ; Alfa Aesar, Ward Hill, MA; Apollo Scientific, UK; etc) o pueden sintetizarse mediante procedimientos conocidos en la técnica. La síntesis de varios reactivos específicos se muestra en la solicitud de Patente de Estados Unidos N° 10/786,610 titulada "Amínoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors", (Compuestos de Aminoheteroarilo como Inhibidores de Proteína Quinasa), presentada el 26 de febrero de 2004, y la solicitud internacional correspondiente PCT/US2004/005495 del mismo título, presentada el 26 de febrero de 2004. Pueden sintetizarse otros reactivos adaptando los procedimientos contenidos en dichos documentos y un especialista en la técnica puede adaptar fácilmente esos procedimientos para producir los compuestos deseados. Además, estas referencias contienen procedimientos generales y ejemplos específicos para la preparación de una gran cantidad de compuestos heteroarilamino, y un especialista en la técnica puede adaptar fácilmente tales procedimientos y ejemplos a la preparación de compuestos de la presente invención. Las descripciones de estas referencias se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Cuando se hace referencia a un procedimiento sintético general o ilustrativo, un especialista en la técnica puede determinar fácilmente los reactivos apropiados, si no están indicados, mediante extrapolación a partir de los procedimientos generales o ilustrativos. Algunos de los procedimientos generales se dan como ejemplos para preparar compuestos específicos. Un especialista en la técnica puede adaptar fácilmente tales procedimientos a la síntesis de otros compuestos. Debe entenderse que los grupos R mostrados en los procedimientos generales pretenden ser genéricos y no limitantes, y no corresponden a las definiciones de los grupos R en cualquier otra parte de este documento. Cada uno de tal grupo R representa uno o múltiples restos químicos que pueden ser iguales o diferentes de otros restos químicos también representados mediante el mismo símbolo R. Un especialista en la técnica puede apreciar fácilmente el intervalo de grupos R adecuado en las síntesis ilustrativas. Además, la representación de una posición no sustituida en las estructuras mostradas o indicadas en los procedimientos generales es para conveniencia y no excluye la sustitución como se describe en cualquier otra parte de este documento. Para grupos específicos que pueden estar presentes, como grupos R en los procedimientos generales o como sustituyentes opcionales no mostrados, se refieren a las descripciones en el resto de este documento, incluyendo las reivindicaciones, sumario y descripción detallada. Algunos de los procedimientos generales se muestran con referencia a la síntesis de compuestos en los que el resto 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi es el isómero (R) puro, y algunos se muestran con referencia a compuestos en los que dicho resto es una mezcla racémica. Debe entenderse que los procedimientos en este documento pueden usarse para producir compuestos racémicos o isómeros (R) enantioméricamente puros eligiendo el correspondiente material de partida racémico o enantioméricamente puro. Los procedimientos mostrados en este documento pueden usarse para producir una amplia variedad de compuestos enantioméricamente puros mediante la selección del material de partida enantioméricamente puro apropiado. Además de los compuestos mostrados en este documento, la invención también proporciona compuestos enantioméricamente puros que corresponden a los compuestos 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina y 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina mostrados en la solicitud de Patente de Estados Unidos con el N° de serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495); en la solicitud de Estados Unidos con el N° de serie por asignar, número de expediente PC 32546, presentada el 26 de agosto de 2004 y titulada "Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compouds as Protein Kinase Inhibitors" (Compuestos de Aminoheteroarilo Sustituidos con Pirazolo como Inhibidores de Proteína Quinasa); y en la solicitud de Estados Unidos con el N° de Serie por asignar, N° de expediente PC 32548, presentada el 26 de agosto de 2004 y titulada "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors" (Compuestos de Aminoheteroarilo como Inhibidores de Proteína Quinasa). Las descripciones de estos documentos se incorporan en este documento como referencia en su totalidad.
Selección de Materiales de partida 5-bromo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi1-piridin-2-ilamina (racemato) 1. Se agitó 2,6-dicloro-3-fluoroacetofenona (15 g, 0.072 mol) en THF (150 ml, 0.5 M) a 0°C usando un baño de hielo durante 10 min. Se añadió lentamente hidruro de litio y aluminio (2.75 g, 0.072 mol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió gota a gota agua (3 ml) seguido de la adición lenta de NaOH al 15% (3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadieron NaOH al 15% (9 ml) y MgSO4 y la mezcla se filtró para retirar los sólidos. Los sólidos se lavaron con THF (50 ml) y el filtrado se concentró, dando 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol (14.8 g, rendimiento del 95%) en forma de un aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 1.45 (d, 3H), 5.42 (m, 2H), 7.32 (m, 1 H), 7.42 (m, 1 H). 2. A una solución agitada de trifenilfosfina (8.2 g, 0.03 mol) y DEAD (13.65 ml de una solución al 40% en tolueno) en THF (200 ml) a 0°C se le añadió una solución de 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol (4.55 g, 0.021 mol) y 3-hidroxi-nitropiridina (3.35 g, 0.023 mol) en THF (200 ml). La solución naranja brillante resultante se agitó en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 4 horas, momento en el que todos los materiales de partida se habían consumido. El disolvente se retiró y el material bruto se cargó en seco sobre gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo-hexanos (20:80), produciendo 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benciloxi)-2-nitro-piridina (6.21 g, 0.021 mol, 98%) en forma de un sólido rosa. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 1.8-1.85 (d, 3H), 6.0-6.15 (c, 1 H), 7.0-7.1 (t, 1 H), 7.2-7.21 (d, 1 H), 7.25-7.5 (m, 2H), 8.0-8.05 (d, 1 H). 3. En una mezcla agitada de AcOH (650 ml) y EtOH (500 ml) se suspendieron 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benciloxi)-2-nitro-piridina (9.43 g, 0.028 mol) y pedacitos de hierro (15.7 g, 0.28 mol). La reacción se calentó lentamente a reflujo y se dejó en agitación durante 1 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se añadieron éter dietílico (500 ml) y agua (500 ml). La solución se neutralizó cuidadosamente mediante la adición de carbonato sódico. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO3 sat. (2 x 100 ml), H2O (2 x 100 ml) y salmuera (1 x 100 ml), después se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a sequedad al vacío, produciendo 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benciloxi)-piridin-2-¡lamina (9.04 g, 0.027 mol, 99%) en forma de un sólido rosa claro. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 1.8-1.85 (d, 3H), 4.9-5.2 (s a, 2H), 6.7-6.84 (c, 1 H), 7.0-7.1 (m, 1 H), 7.2-7.3 (m, 1 H), 7.6-7.7 (m, 1 H). 4. Una solución en agitación de 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benciloxi)-piridin-2-ilamina (9.07 g, 0.03 mol) en acetonitrilo se enfrió a 0°C usando un baño de hielo. A esta solución se le añadió en porciones ?/-bromosuccinimida (NBS) (5.33 g, 0.03 mol). La reacción se agitó a 0°C durante 15 min. La reacción se concentró a sequedad al vacío. El aceite oscuro resultante se disolvió en EtOAc (500 ml) y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice. Después, los disolventes se retiraron al vacío, produciendo 5-bromo-3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benciloxi)-piridin-2-ilamina (5.8 g, 0.015 mol, 51 %) en forma de un sólido blanco cristalino. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 1.85-1.95 (d, 3H), 4.7-5.0 (s a, 2H), 5.9-6.01 (c, 1H), 6.8-6.95 (d, 1 H), 7.01-7.2 (t, 1 H), 7.4-7.45 (m, 1 H), 7.8-7.85 (d, 1 H). 5-yodo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil-piridin-2-ilamina (racemato); A una solución de 3-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (10.0 g, 33.2 mmol) en acetonitrilo (600 ml) y ácido acético (120 ml) se le añadió ?/-yodosuccinimida (11.2 g, 49.8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y la reacción se inactivo con una solución de Na2S2O5. Después de la evaporación, el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con una solución 2 N de NaOH y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice, proporcionando 5-yodo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (7.1 g, rendimiento del 50%). EM m/z 427 [M+1]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.74 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 5.91 - 5.99 (m, 3H) 6.82 (d, J = 1.26 Hz, 1 H) 7.46 (t, J = 8.72 Hz, 1 H) 7.56 (dd, J = 8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.62 (d, J = 1.52 Hz, 1 H). 5-bromo-3-[1-(2,6-d¡cloro-3-fluoro-fenil)-etoxp-pirazin-2-ilamina (racemato): 1. Se agitó 2,6-Dicloro-3-fluoroacetofenona (15 g, 0.072 mol) en THF (150 ml, 0.5 M) a 0°C usando un baño de hielo durante 10 min. Se añadió lentamente hidruro de litio y aluminio (de Aldrich, 2.75 g, 0.072 mol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió gota a gota agua (3 ml) seguido de la adición lenta de NaOH al 15% (3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadieron NaOH al 15% (9 ml), MgSO4 y la mezcla se filtró para retirar los sólidos. Los sólidos se lavaron con THF (50 ml) y el filtrado se concentró, dando 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol (14.8 g, rendimiento del 95% en forma de un aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 1.45 (d, 3H), 5.42 (m, 2H), 7.32 (m, 1 H), 7.42 (m, 1 H). 2. Se preparó 5-Bromo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina siguiendo el procedimiento 2 mostrado más adelante, a partir de 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol y 3,5-dibromo-pirazin-2-ilamina. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 1.74 (d, 3H), 6.40 (m, 1 H), 6.52 (s a, 2H), 7.30 (m, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.56 (s, 1 H); EM m/z 382 (M+1 ).
Materiales de partida enantioméricamente puros PLE es una enzima producida por Roche y comercializada a través de Biocatalytics Inc. en forma de una preparación de esterasa bruta de hígado de cerdo, conocida comúnmente como PLE-AS (adquirida en Biocatalytics como ICR-123, comercializada en forma de una suspensión en sulfato amónico). La enzima se clasifica en el registro de CAS como una "hidrolasa de éster carboxílico, CAS N° 9016-18-6". El número de clasificación de la enzima correspondiente es EC 3.1.1.1. Se sabe que la enzima tiene una amplia especificidad de sustrato con respecto a la hidrólisis de una gran variedad de esteres. La actividad de lipasa se determina usando un procedimiento basado en la hidrólisis de butirato de etilo en un valorador de pH. 1 LU (unidad de lipasa) es la cantidad de enzima que libera 1 µmol de ácido butírico valorable por minuto a 22°C, pH 8.2. La preparación presentada en este documento (PLE-AS, en forma de una suspensión) se transporta normalmente en forma de un líquido pardo-verde opaco con una actividad declarada de >45 LU/mg (contenido proteico de aproximadamente 40 mg/ml). (1 S)A -(2.6-dicloro-3-fluorofenil)etanol Se preparó (1 S)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol, mostrado como compuesto (S-1 ) en los esquemas mostrados más adelante, mediante una combinación de hidrólisis enzimática de acetato de 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etilo racémico, esterificación e hidrólisis química con inversión de acuerdo con el Esquema B. Se preparó acetato de 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etilo racémico (compuesto A2) de acuerdo con el Esquema A.
ESQUEMA A 1-(2.6-dicloro-3-fluorofen¡netanol (A1 ): Se añadió borohidruro sódico (90 mg, 2.4 mmol) a una solución de 2'.6'-dicloro-3'-fluoro-acetofenona (Aldrich, catálogo N° 52.294-5) (207 mg, 1 mmol) en 2 ml de CH3OH anhidro. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se evaporó, dando un residuo oleoso incoloro. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 0 ? 10% en hexanos), dando el compuesto A1 en forma de un aceite incoloro (180 mg; 0.88 mmol; rendimiento del 86.5%). EM (IQPA) (M-H)- 208. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.64 (d, J = 6.82 Hz, 3H) 3.02 (d, J = 9.85 Hz, 1 H) 6.97 - 7.07 (m, 1 H) 7.19 - 7.33 (m, 1 H). acetato de 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etilo (A2): Se añadieron secuencialmente anhídrido acético (1.42 ml, 15 mmol) y piridina (1.7 ml, 21 mmol) a una solución del compuesto A1 (2.2 g, 10.5 mmol) en 20 ml de CH2CI2. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h y después se evaporó, dando un residuo oleoso amarillento. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 7?9% en hexanos), dando el compuesto A2 en forma de un aceite incoloro (2.26 g; 9.0 mmol; rendimiento del 85.6%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.88 (d, J = 6.82 Hz, 3H) 2.31 (s, 3H) 6.62 (c, J = 6.82 Hz, 1 H) 7.25 (t, J = 8.46 Hz, 1 H) 7.49 (dd, J = 8.84, 5.05 Hz, 1 H).
ESQUEMA B A un matraz con una cubierta exterior de 50 ml equipado con un electrodo de pH, un agitador superior y una línea de adición de base (NaOH 1 M), se le añadieron 1.2 ml de tampón fosfato potásico 100 mM a pH 7.0 y 0.13 ml de suspensión de PLE AS. Después, se añadió gota a gota el compuesto A2 (0.13 g, 0.5 mmol, 1.00 equiv.) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 h, manteniendo el pH de la reacción constante a 7.0 usando NaOH 1 M. Tanto la conversión como los valores de ee de la reacción se controlaron por HPLC-FI y se interrumpió después de que se consumiera el 50% del material de partida (aproximadamente 17 horas en estas condiciones). Después, la mezcla se extrajo tres veces con 10 ml de acetato de etilo, recuperando el éster y el alcohol en forma de una mezcla de R-1 y S-2, Se añadió cloruro de metanosulfonilo (0.06 ml, 0.6 mmol) a una solución de una mezcla de R-1 y S-2 (0.48 mmol) en 4 ml de piridina en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y después se evaporó, obteniendo un aceite. A la mezcla se le añadió agua (20 ml) y después se añadió EtOAc (20 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron, se filtraron y se evaporaron, dando una mezcla de R-3 y S-2. Esta mezcla se usó en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.66 (d, J = 7.1 Hz, 3H) 1.84 (d, J = 7.1 Hz, 3H) 2.09 (s, 3H) 2.92 (s, 3H) 6.39 (c, J = 7.0 Hz, 1 H) 6.46 (c, J = 6.8 Hz, 1 H) 6.98-7.07 (m, 1 H) 7.07-7.17 (m, 1 H) 7.23-7.30 (m, 1 H) 7.34 (dd, J = 8.8, 4.80 Hz, 1 H). Se añadió acetato potásico (0.027 g, 0.26 mmol) a una mezcla de R-3 y S-2 (0.48 mmol) en 4 ml de DMF en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añadió agua (20 ml) y se añadió EtOAc (20 ml x 2) para extraer la solución acuosa. La fase orgánica combinada se secó, se filtró y se evaporó, dando un aceite de S-2 (72 mg, rendimiento del 61 % en dos etapas). Quiralidad ee: 97.6%. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.66 (d, J = 7.1 Hz, 3H) 2.09 (s, 3H) 6.39 (c, J = 6.8 Hz, 1 H) 7.02 (t, J = 8.5 Hz, 1 H) 7.22-7.30 (m, 1 H).
Se añadió lentamente metóxido sódico (19 mmol; 0.5 M en metanol) al compuesto S-2 (4.64 g, 18.8 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a 0°C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se evaporó y se añadió H2O (100 ml). La mezcla de reacción enfriada se neutralizó con una solución de tampón de acetato sódico-ácido acético a pH 7. Se añadió acetato de etilo (100 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se evaporaron, obteniendo un sólido blanco (4.36 g, rendimiento del 94.9%). CFS-EM: 97% de ee. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.65 (d, J = 6.8 Hz, 3H) 5.58 (c, J = 6.9 Hz, 1 H) 6.96-7.10 (m, 1 H) 7.22-7.36 (m, 1 H). 3-[(1 f?)-1-(2l6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi1-2-nitropiridina Se añadieron secuencialmente 3-Hidroxi-2-nitropiridina (175 mg, 1.21 mmol) y trifenilfosfina (440 mg, 1.65 mmol) a una solución agitada de (1S)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol (229.8 mg, 1.1 mmol) en THF (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 1 h y después se añadió azo-dicarboxilato de diisopropilo (0.34 ml, 1.65 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó durante 12 h más. La mezcla de reacción se evaporó al vacío, dando un aceite. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 20?25% en hexanos), dando el compuesto del titulo en forma de un sólido blanco (321.5 mg; 0.97 mmol; rendimiento del 88.3%). EM (IQPA) (M+H)+ 331. CFS-EM: 99.5% de ee. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.85 (d, J = 6.6 Hz, 3H) 6.10 (c, J = 6.6 Hz, 1 H) 7.04-7.13 (m, 1 H) 7.21 (dd, J = 8.5, 1.14 Hz, 1 H) 7.30 (dd, J = 9.0, 4.9 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J = 8.6, 4.6 Hz, 1 H) 8.04 (dd, J = 4.6, 1.3 Hz, 1 H). 3-[(1 R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxflpiridin-2-amina Se añadió hierro (365 mg) a una solución agitada de 3-[(1 f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-2-nitropiridina (321 mg, 0.97 mmol) en una mezcla de EtOH (2 ml) y HCl 2 M (0.2 ml) a 0°C. La solución resultante se calentó a 85°C durante 2 h. A la mezcla de reacción enfriada se le añadió Celite (0.5 g). Esta mezcla se filtró sobre un lecho de celite y se evaporó, dando el compuesto del título en forma de un aceite oscuro. EM (IQPA) (M+H)+ 301. 5-bromo-3-[1 ( )-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil-piridin-2-ilamina: El isómero R enantioméricamente puro se preparó como se ha descrito anteriormente para el racemato, pero usando los materiales de partida enantioméricamente puros descritos anteriormente. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 1.74 (d, 3H), 6.40 (m, 1 H), 6.52 (s a, 2H), 7.30 (m, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.56 (s, 1 H). EM m/z 382 (M+1 ). 5-vodo-3-f(f?)1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxp-piridin-2-ilamina: Se añadieron secuencialmente ácido peryódico (60 mg, 0.24 mmol), yodo (130 mg, 0.5 mmol) y ácido sulfúrico (0.03 ml) a una solución agitada de 3-[(1 )-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-2-amina (0.97 mmol) en una mezcla de ácido acético (3 ml) y H2O (0.5 ml). La solución resultante se calentó a 80°C durante 5 h. La mezcla de reacción enfriada se inactivo con Na2SO3 (80 mg) y se basificó con Na2CO3 saturado (2 x 100 ml) a pH 7. Se añadió CH2CI2 (2 x 50 ml) para extraer la solución acuosa. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO , después se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 35 ? 40% en hexanos), dando el compuesto del título en forma de un aceite amarillo (254 mg; 0.6 mmol; rendimiento del 61.6%). EM (IQPA) (M+H)+ 426. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.81 (d, J = 6.8 Hz, 3H) 4.86 (s, 2H) 5.98 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.96 (d, J = 1.5 Hz, 1 H) 7.08 (dd, J = 9.0, 8.0 Hz, 1 H) 7.31 (dd, J = 8.8, 4.8 Hz, 1 H) 7.78 (d, J = 1.8 Hz, 1 H). 5-bromo-3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2- ¡lamina: El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 2, a partir de (1 S)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.53 (s, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.39 (t, 1 H), 6.48 (s, 2H), 6.41 (c, 1 H), 1.74 (d, 3H). EMCL: 381 [M+1]; ki de c-Met: 0.796 µM.
Esquema general I para la síntesis de 5-aril-3-(benc¡loxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (6): Procedimiento general 1 Para la síntesis de 5-Bromo-3-(benc¡loxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (5): 1. Preparación de 3-(benciloxi-sustituido)-2-nitro-piridina (3): A una solución agitada de Cs2CO3 (1.0 equivalente molar) en DMF (0.2 M) en una atmósfera de N2 que contiene 3-hidroxi-4-nitro-piridina (Aldrich, 1.0 equivalente molar) se le añade bromuro de bencilo sustituido (1.0 equivalente molar). La mezcla se agita durante 6 h a temperatura ambiente. Después, la reacción se diluye con EtOAc y se reparte con H2O. La fase acuosa se extrae dos veces con EtOAc. Después, las fases orgánicas se combinan, se lavan con H2O y salmuera, se secan sobre Na2SO , se filtran y se concentran a sequedad al vacío, produciendo 3-(benciloxi-sustituido)-2-nitro-piridina (3) en forma de un sólido. 2. Preparación de 3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (4): En una mezcla agitada de AcOH y EtOH (1.3:1 ) se suspenden 3-(benciloxi- sustituido-2-nitro-piridina (1.0 equivalente molar, 1 M) y pedacitos de hierro (1.0 equivalente molar). La reacción se calienta lentamente a reflujo y se deja en agitación durante 1 h. La reacción se enfría a temperatura ambiente y después se filtra a través de una capa de celite. El filtrado resultante se neutraliza con NH OH conc. y después se extrae tres veces con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavan con NaHCO3 saturado, H2O y salmuera, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a sequedad al vacío, produciendo 3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (4) en forma de un sólido. 3. Preparación de 5-bromo-3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (5): Una solución en agitación de 3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (4) (1.0 equivalente molar) en acetonitrilo se enfría a 0°C usando un baño de hielo. A esta solución se le añade en porciones ?/-bromosuccinimida (Aldrich, 1.0 equivalente molar). La reacción se agita a 0°C durante 15 min. La reacción se concentra a sequedad al vacío. El aceite oscuro resultante se disuelve en EtOAc y se reparte con H2O. Después, la fase orgánica se lava dos veces con NaHCO3 saturado y una vez con salmuera. A la fase orgánica se le añade carbón activado y se calienta a reflujo. Después, la solución se enfría a temperatura ambiente y se filtra a través de una capa de celite. Después, la fase orgánica se concentra a sequedad al vacío hasta un tercio del volumen original. Después, los sólidos se retiran por filtración, produciendo 5-bromo-3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilamina (5) en forma de un sólido.
Esquema general II Para la síntesis de 5-Aril-3-(benciloxi-sustituido)-pirazin-2-ilamina Procedimiento general 2 Para la síntesis de 5-Bromo-3-(benciloxi-sust¡tuido)-pirazin-2-ilamina.
A una solución enfriada con hielo de alcohol bencílico sustituido (1.0 equivalente molar) y tetrahidrofurano anhidro (0.14 M) se le añadió lentamente hidruro sódico (1.0 equivalente molar) en atmósfera de nitrógeno. Después de agitar durante 30 minutos, se añadió gota a gota a una velocidad rápida 3,5-dibromopirazin-2-ilamina (1.0 equivalente molar) en tetrahidrofurano (0.56 M) mediante un embudo de adición. Una vez que se completó la adición, el baño de hielo se retiró y la reacción se calentó a reflujo en atmósfera de nitrógeno y se controló por HPLC de fase inversa. Después de 18 h, la HPLC demostró que la mayor parte de la 3,5-dibromopirazin-2-ilamina de partida se había consumido y la reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó usando un gel de sílice eluyendo con 1 :1 de acetato de etilo/diclorometano, produciendo la 5-bromo-3-(benciloxi-sustituido)-pirazin-2-ilamina en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 60-90%.
Procedimiento general 3 Para la síntesis de 5-Ar¡l-3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilam¡na y 5-Aril-3-(benciloxi-sustituido)-pirazin-2-¡lamina. P PP a Arilo J( « Una mezcla de 5-bromo-3-(benciloxi-sustituido)-pirid¡n-2-ilamina o 5-bromo-3-(benciloxi-sustituido)-pirazin-2-ilamina (1 equivalente molar), ácido o éster arilbórico (1.2 equivalentes molares), cloruro de b/s(trifenilfosfina)paladio II (0.03 equivalentes molares) y carbonato sódico (3.0 equivalentes molares) en éter dimetílico de etilenglicol y agua (10:0.5, 0.03 M) se desgasifica y se carga tres veces con nitrógeno y después se calienta a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante una noche. La reacción se enfría a temperatura ambiente y se diluye con acetato de etilo. La mezcla se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4 y se purifica sobre una columna de gel de sílice, proporcionando 5-aril-3-(benciloxi-sustituido)-piridin-2-ilamina, o 5-aril-3-(benciloxi-sustituido)-pirazin-2-¡lam¡na.
Procedimiento general 4 Para la reacción de amidación del ácido 6-amino-5-(benciloxi-sustituido)-piridin-3-il]-benzoico: A una solución de ácido 6-amino-5-(benc¡loxi-sustituido)-piridin- 3-il]-benzoico (1 equivalente molar), 1 -hidroxibenzotriazol hidrato (HOBT, 1.2 equivalentes molares) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 1.2 equivalentes molares) en DMF (0.2 M) se le añade amina (1.2 equivalentes molares). La solución de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche, después se diluye con EtOAc y se reparte con H2O. La fase orgánica se separa y la acuosa se extrae con EtOAc. Las fases orgánicas se combinan, se lavan con NaHCO3 saturado y se concentran a sequedad al vacío. El material se purifica usando cromatografía en columna (gel de sílice, de 99:1 a 95:5 de CH2CI2/MeOH). Las fracciones que contienen el producto se concentran al vacío, produciendo el producto amida.
Procedimiento general 5 Para la preparación de 3-(benciloxi-sustituido)-5-(3-dialquilaminometil-1 /-/-indol-5-il)-piridin-2-ilamina: A una solución de benzotriazol (1.0 equivalente molar) en diclorometano (0.2 M) se le añade amina (1.0 equivalente molar). La reacción se agita durante 5 minutos a temperatura ambiente, después de lo cual se añade formaldehído (al 37% en peso, 1.0 equivalente molar) y la reacción se tapa y se agita a temperatura ambiente durante 3 h. Una vez que la CCF (acetato de etilo al 10%:diclorometano) muestra el consumo del benzotriazol de partida, la reacción se seca con sulfato de magnesio anhidro (10 g), se filtra y se concentra al vacío. El producto bruto se purifica con una columna de gel de sílice eluyendo con 1 :1 de acetato de etilo:diclorometano, produciendo el producto deseado en forma de un sólido blanco. A una solución del intermedio aminometilbenzotriazol (1.0 equivalente molar) en diclorometano (0.43 M) se le añade cloruro de aluminio (2.0 equivalentes molares) seguido de 3-(2,6-dicloro-benciloxi)-5-(1 7-indol-5-il)- piridin-2-ilamina (1.1 equivalentes molares). La reacción se tapa y se calienta con agitación a 40°C durante 3-4 h. Después, la reacción se retira del calor y se deja enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluye con hidróxido sódico (0.2 M) y cloroformo, se tapa de nuevo y se agita vigorosamente a temperatura ambiente para disolver el residuo en el vial. El cloroformo se extrae de la fase acuosa, se seca sobre sulfato sódico anhidro y se concentra al vacío. El producto bruto se purifica con una columna sobre gel de sílice, eluyendo primero con 1 :1 de acetato de etilo:diclorometano, para eluir las impurezas menos polares y después eluyendo el producto con 90:9:1 de cloroformo:metanol:hidróxido amónico. (Rendimientos del 10-67%) Procedimiento general 6 Para la síntesis de 3-(benciloxi-sustituido)-5-fenil-piridin-2-¡lamina usando 3-(3-metoxi-benc¡lox¡)-5-fenil-piridin-2-ilamina: A una solución de 3-benciloxi-5-fenil-piridin-2-ilamina (Ejemplo I- 87, 3.27 g, 11.8 mmol) en metanol (30 ml) se le añadió Pd(OH)2 (2.5 g, 2.37 mmol). La mezcla se desgasificó y se cargó tres veces con hidrógeno y después se agitó bajo una atmósfera proporcionada por un globo de hidrógeno durante 5 h. La reacción se filtró a través de una capa de celite, se lavó con metanol y se condensó. Después del secado a alto vacío, se obtuvo 2-amino-5-fenil-piridin-3-ol (2.04 g, rendimiento del 93%). EM m/z 187 [M+1], A una solución de 2-amino-5-fenil-piridin-3-ol (2.04 g, 10.95 mmol) en THF (anhidro, 30 ml) se le añadió lentamente NaH (1.31 g, 32.85 mmol). La mezcla se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 20 minutos y después se añadió cloruro de tritilo (3.66 g, 13.14 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche en atmósfera de nitrógeno. El disolvente se evaporó y el residuo se disolvió en diclorometano, se lavó con agua y se secó sobre Na2SO . Después de la filtración y la condensación, el producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con EtOAc-Hexano (1 :10), proporcionando 5-fenil-2-(tritil-amino)-piridin-3-ol (1.09 g, rendimiento del 23%). EM m/z 427 [M+1]. A una solución de 5-fenil-2-(tritil-amino)-pir¡din-3-ol (100 mg, 0.24 mmol) en THF (3 ml) se le añadió Cs2CO3 (79 mg, 0.24 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se añadió bromuro de 3-metoxibencilo (0.037 ml, 0.26 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche, se diluyó con diclorometano (5 ml) y se filtró para retirar las sales. Los disolventes se evaporaron y el residuo se disolvió en ácido trifluoroacético al 10% en diclorometano (2 ml). La reacción se agitó durante 2 h y se evaporó. El residuo se disolvió en diclorometano, se lavó con NaHCO3 sat. y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración y la concentración, el producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con metanol-diclorometano (gradiente del 3% al 15%), proporcionando 3-(3-metoxi-benciloxi)-5-fenil-piridin-2-ilamina en forma de un sólido blanco (43.5 mg, rendimiento del 60%).
Procedimiento general 7 Para la síntesis de 3-(benciloxi-sustituido)-5-aril-pirid¡n-2-ilamina usando 5-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-3-(3-nitro-benciloxi)-piridin-2-ilamina: A una solución de 2-amino-5-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-piridin-3-ol (preparado de acuerdo con los procedimientos para 2-amino-5-fenil-piridin-3-ol en el Ejemplo 1-88 de la Solicitud de Patente de Estados Unidos con el N° de serie 10/786.610 (PCT/US2004/005495) (45.5 mg, 0.14 mmol) en DMF (3 ml) a 0°C se le añadió NaH (al 60% en aceite) (5.6 mg, 0.14 mmol) y la mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. Después, se añadió 1-bromometil-3-nitro-benceno y la mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió HCl acuoso 1 N frío (0.1 ml) y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (CH2CI2:MeOH:NH4OH = 100:3:0.3), dando 5-[4-(2- morfolin-4-il-etoxi)-fen¡l]-3-(3-n¡tro-benciloxi)-piridin-2-ilamina en forma de un sólido amarillo (44 mg, 68%).
Procedimiento general 8 Para la síntesis de {4-[6-Amino-5-(benciloxi-sustituido)-piridin-3- ¡l]-fenil}-[(2f?)-2-pirrolidin-1-ilmetil-pirrolidin-1-il]-metanona usando {4-[6-amino-5-(4-fluoro-2-trífluorometil-benciloxi)-piridin-3-¡l]-fen¡l}-[(2 ?)-2-pirrolidin-1-¡lmetil-pirrolidin-1-il]-metanona: 1. Se preparó ácido 6-amino-5-benciloxi-nicotínico de acuerdo con el procedimiento 3 a partir de 3-benciloxi-5-bromo-piridin-2-ilamina y ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzoico. EM /T7/ 321 (M+1 ). 2. Se preparó [4-(6-amino-5-benciloxi-piridin-3-il)-fenil]-[(2R)-2-pirrolidin-1-ilmetil-pirrolidin-1-il]-metanona siguiendo el procedimiento 4 usando ácido 6-amino-5-benciloxi-nicotínico y (2 )-pirrolidin-1 -ilmetil-pirrolidina (preparada en el Ejemplo I-39 de la Solicitud de Patente de Estados Unidos con N° de serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495)). EM m/z 457 (M+1 ). 3 A una solución de [4-(6-amino-5-benciloxi-piridin-3-il)-fenil]-[(2f?)-pirrolidin-1-ilmetil-pirrolidin-1-il]-metanona (2.28 g, 5.00 mmol) en metanol (25 ml) se le añadió Pd al 10%/C (100 mg). La mezcla se desgasificó y se cargó tres veces con hidrógeno y después se agitó bajo una atmósfera proporcionada por un globo de hidrógeno durante una noche. La reacción se filtró a través de una capa de celite, se lavó con metanol y se condensó. Después del secado a alto vacío, se obtuvo [4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-fenil]-[(2R)-2-p¡rrolidin-1 -ilmetil-pirrolidin-1 -il)-metanona (1.74 g, rendimiento del 95%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.79 (s, 1 H), 7.54 (m, 3H), 7.46 (m, 2H), 7.14 (s, 1 H), 5.68 (s, 2H), 4.22 (m, 1 H), 3.45 (m, 2H), 2.66 (m, 1 H), 2.52 (m, 4H), 1.96 (m, 2H), 1.84 (m, 3H), 1.64 (m, 4H). EM m/z 367 (M+1 ). 4. A una solución agitada de [4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-fen¡l]-[(2R)-2-pirrolidin-1 -tlmetil-pirrolidin-1 -il]-metanona (100 mg, 0.27 mmol) en DMF anhidra (15 ml) en una atmósfera de N2 a 0°C se le añadió hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite mineral, 11 mg, 0.49 mmol). La mezcla se dejó en agitación a 0°C durante 30 min. Se añadió 1-(bromometil)-4-fluoro-2-(trifluorometil)benceno (0.046 ml, 0.27 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se repartió con H O. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 25 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con H2O (1 x 15 ml) y salmuera (1 x 15 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron, se concentraron y se purificaron sobre una columna de gel de sílice, produciendo {4-[6-amino-5-(4-fluoro-2-tr¡fluorometil-benciloxi)-piridin-3-il]-fenil}-[(2R)-2-pirrol¡din-1-ilmetil-p¡rrolidin-1-il]-metanona en forma de cristales blanquecinos.
Procedimiento general 9 Para la síntesis de [6-amino-5-(benciloxi-sustituido)-piridin-3-il]-fenil-amida del ácido 2-dialquilamino-etanosulfónico usando {4-[6-amino-5-(2-cloro-3,6-difluoro-benciloxi)-p¡ridin-3-il]-fen¡l}-amida del ácido 2-dietilamino-etanosulfónico. 1. A una solución de 4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenilamina (5 g, 22.8 mmol) en diclorometano (120 ml) se le añadió N-metilmorfolina (7.5 ml, 68.4 mmol). Esta mezcla se enfrió a 0°C en atmósfera de nitrógeno. Después, se añadió gota a gota cloruro de 2-cloroetanosulfonilo (2.5 ml, 23.9 mmol) en diclorometano (60 ml) con agitación. Una vez que se completó la adición, el matraz se agitó a 0°C durante 1 h y después a temperatura ambiente mientras se controlaba por CCF (1 :1 de acetato de etilo:hexanos) y se teñía con ninhidrina. Después de 4 h de agitación, aún quedaba algo del éster bórico de partida y se añadieron gota a gota a temperatura ambiente 0.2 equivalentes más (0.5 ml) de cloruro de 2-cloroetanosulfonilo en diclorometano (25 ml). Después de 1 h, el éster bórico se había consumido como se demostró por CCF y el volumen total de reacción se redujo a la mitad por rotavapor. Los contenidos se diluyeron con acetato de etilo (200 ml), se lavaron con salmuera al 50% (2 x 100 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El producto bruto se purificó usando gel de sílice (120 g) y eluyendo con acetato de etilo al 10% y diclorometano, produciendo [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida del ácido etenosulfónico en forma de un sólido blanco (6.2 g, 20.2 mmol, rendimiento del 89%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.76 (d, J = 8.4, 2H), 7.12 (d, J = 8.45, 2H) 6.65 (s, 1 H), 6.55 (dd, J = 9.77, 6.7, 1 H), 6.31 (d, J = 16.54, 1 H), 5.96 (d, J = 9.8, 1 H), 1.33 (s, 12H). 2. A una solución de [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida del ácido etenosulfónico (0.500 g, 1.6 mmol) en metanol (5 ml) se le añadió dietilamina (0.707 g, 4.0 mmol) en metanol (5 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente y se controló por CCF (1 :1 de acetato de etilo: hexanos). Después de 2 h, la reacción se concentró al vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml). Después, el acetato de etilo se lavó con salmuera al 50% (1 x 50 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó usando una columna sobre gel de sílice compactada previamente de 10 g, eluyendo con 1 :1 de acetato de etilo:diclorometano, proporcionando [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida del ácido 2-dietilamino-etanosulfónico en forma de un sólido blanco (0.346 g, 0.90 mmol, 56%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.78 (d, J = 6.65, 2H) 7.15 (d, J = 6.66, 2H), 3.20 (m, 2H), 3.0 (m, 2H), 2.55 (c, J = 7.15, 7.16, 4H), 1.34 (s, 12H), 1.05 (t, J = 7.19, 6H). 3. Se preparó {4-[6-amino-5-(2-cloro-3,6-difluoro-bencilox¡)-piridin-3-il]-fenil}-amida del ácido 2-dietilamino-etanosulfónico siguiendo el procedimiento general de acoplamiento de Suzuki 3 a partir de 5-bromo-3-(2-cloro-3,6-difluoro-benciloxi)-piridin-2-ilamina y [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida del ácido 2-dietilamino-etanosulfónico preparada en la parte 2 en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 60%.
Procedimiento general 10: 1 : Se disolvió 4-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-anilina (3 g, 0.013 mol) en diclorometano (350 ml) a lo que se añadieron piridina (1.02 g, 0.013 mol) y cloroformiato de 4-nitrofenilo. La reacción se agitó durante 13 h, momento en el que el análisis por CCF mostró el consumo de todos los materiales de partida. La solución se lavó con NaHCO3 saturado (3 x 50 ml), agua (3 x 50 ml) y salmuera (3 x 50 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO y el disolvente se retiró, produciendo un sólido blanco cristalino, éster fenílico del ácido [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-carbámico, 4.45 g, 91%. 1H RMN (CDCI3 300 MHz) d 1.4 (s, 12H), 7.1 (s a, 1 H), 7.3 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.8 (d, 2H), 8.3 (d, 2H). 2: Se disolvió éster fenílico del ácido [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-carbámico (500 mg, 1.3 mmol) en diclorometano anhidro (0.5 ml) y trietilamina (0.187 ml, 1.3 mmol). A esta solución agitada se le añadió 1-metilpiperazina (o cualquier otra amina) (0.144 ml, 1.3 mmol). La solución se volvió inmediatamente de color amarillo y el análisis por cef mostró el consumo de todo el material de partida. La reacción se lavó con agua (3 x 500 ml) y bicarbonato sódico saturado (2 x 200 ml) y se secó antes de la retirada de los disolventes al vacío. Los esteres bóricos se usaron sin purificación. 3: A una mezcla de 2.1 ml de DME y 2.8 ml de Na2CO3 2 N se le añadieron 100 mg de la estructura de bromuro, 1 equivalente del ácido bórico y 5% en moles de Pd(PPh3)4. La reacción se agitó y se calentó a 80°C durante una noche en un vial de dos dracmas (3.544 g). La mezcla bruta se filtró a través de celite y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavaron con NaHCO3 (1 x 100 ml), seguido de agua (1 x 100 ml) y después salmuera saturada (1 x 100 ml). La mezcla resultante se concentró al vacío. El residuo se disolvió en hexano y se purificó por cromatografía en columna.
Procedimiento general 11 : 1 : A una solución de 3-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin- 2-ilamina (10.0 g, 33.2 mmol) en acetonitrilo (600 ml) y ácido acético (120 ml) se le añadió N-yodosuccinimida (11.2 g, 49.8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y la reacción se inactivo con una solución de Na2S205. Después de la evaporación, el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con una solución 2 N de NaOH y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice, proporcionando 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]- 5-yodo-piridin-2-ilamina (7.1 g, rendimiento del 50%). EM m/z 427 [M+1] 2: A una solución de 3-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-5- yodo-piridin-2-ilamina (7.1 g, 16.6 mmol) y éster rerc-butílico del ácido prop-2- inil-carbámico (3.1 g, 20.0 mmol) en THF (60 ml) y Et3N (60 ml) se le añadieron Cul (63 mg, 0.3 mmol) y Pd(PPh3) (384 mg, 0.3 mmol). La mezcla se agitó en atmósfera de nitrógeno y se controló por CCF hasta que la reacción se completó. La mezcla se extrajo con EtOAc y se lavó con agua. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con EtOAc al 20-40% en hexanos, proporcionando éster rerc-butílico del ácido (3-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-prop-2-inil)-carbámico (2.2 g, rendimiento del 29%). 3: La solución de éster terc-butílico del ácido (3-{6-amino-5-[1 -(2,6-d¡cloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-prop-2-inil)-carbámico en TFA al 25% en diclorometano se agitó durante 2 h, después se lavó con NaOH 2 N, dos veces con agua, y con salmuera y se secó sobre Na2SO . Después de la filtración y la evaporación, se obtuvo 5-(3-amino-prop-1-inil)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina con un rendimiento del 93%. 4: A una solución de 5-(3-amino-prop-1-inil)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (0.282 mmol, 1 equiv.) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (1 equiv.) en diclorometano anhidro (10 ml) se le añadió piridina (1 equiv.). La reacción se agitó durante 4 h en atmósfera de nitrógeno y después se añadieron la amina seleccionada (1 equiv.) y trietilamina (1 equiv.). La mezcla se calentó a reflujo durante 5 minutos y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con agua. La fase orgánica se evaporó y se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con metanol al 0-20% en diclorometano sobre columnas de sílice compactadas previamente. Los rendimientos finales variaron entre el 24% y el 71 %.
Procedimiento general 12: 1 : A una solución de 5-(3-amino-prop-1-inil)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (preparada en el procedimiento 11 ) (400 mg, 1.1 mmol) en diclorometano (17 ml) se le añadió cloruro de cloroacetilo (153 mg, 1.4 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente con control por CCF de la finalización de la reacción. Después de finalizarse, el disolvente se evaporó, consiguiendo el producto bruto. 2: A una solución de ?/-(3-{6-Amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-prop-2-inil)-2-cloro-acetamida (1 equiv.) en acetonitrilo (5 equiv.) se le añadió la amina individual (5 equiv.). La mezcla se calentó a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante una noche. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con metanol al 1-10% en diclorometano, proporcionando el producto con rendimientos que variaban entre el 47% y el 97%.
Procedimiento general 13: 1. A una solución agitada de 2-amino-3-benciloxipiridina (42.0 g, 0.21 mol) en CH3CN (600 ml) a 0°C se le añadió ? -bromosuccinimida (37.1 g, 0.21 mol) durante 30 minutos. La mezcla se agitó durante 0.5 h, después de lo cual la reacción se diluyó con EtOAc (900 ml.) y se repartió con H2O (900 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró a sequedad al vacío, produciendo 3-benciloxi-5-bromo-pir¡din-2-¡lamina (31.0 g, 0.11 mol, 53%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 4.63-4.78 (s a, 2H), 5.04 (s, 2H), 7.07 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 7.33-7.42 (m, 5H), 7.73 (d, 1 H, J, 1.8 Hz). 2. A una mezcla agitada de 3-benciloxi-5-bromo-piridin-2-ilamina (31.0 g, 0.11 mol) en una mezcla de DME (600 ml) y H2O (600 ml) se le añadieron ácido 4-carboximetilbórico (29.9 g, 0.11 mol), Pd(PPh3)4 (6.4 g, 5.55 mmol) y Na2CO3 (82.0 g, 0.78 mol). La reacción se calentó lentamente a reflujo y se dejó en agitación durante 3 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se diluyó con CH2CI2 (1.5 I) y se repartió con H2O (700 ml).
La fase orgánica se lavó con NaHCO3 saturado (700 ml), se secó (Na2SO ), se filtró y se concentró al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, de 1 :1 a 4:1 de EtOAc:hexanos) y las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron al vacío, produciendo éster metílico del ácido 4-(6-amino-5-bencilox¡-piridin-3-il)-benzoico (29.4 g, 0.086 mol, 79%). H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 3.92 (s, 3H), 4.82-4.94 (s a, 2H), 5.15 (s, 2H), 7.22 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 7.33-7.42 (m, 5H), 7.54 (d, 2H, J, 8.6), 7.98 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 8.06(d, 2H, J, 8.6 Hz). 3. A una solución en agitación de éster metílico del ácido 4-(6-amino-5-bencilox¡-piridin-3-il)-benzoico (10.0 g, 0.03 mol) en EtOH:H2O (95:5, 600 ml) se le añadió Pd/C (15.9 g, 0.015 mol) (la reacción se desgasificó al vacío). La solución se dejó en agitación en una atmósfera de H2 durante 22 h. La solución se filtró a través de celite húmedo y el celite se lavó con EtOH. El filtrado se concentró al vacío, produciendo éster metílico del ácido 4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoico (2.3 g, 9.3 mmol, 31 %). 1H RMN (MeOD, 300 MHz) d 3.90 (s, 3H), 7.21 (d, 1 H, J, 1.9 Hz), 7.62 (d, 2H, J, 8.5 Hz), 7.76 (d, 1 H, J, 1.9 Hz), 8.04 (d, 2H, J, 8.5 Hz). 4. A una solución en agitación de éster metílico del ácido 4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoico (2.3 g, 9.3 mmol) en CH2CI2 (180 ml) se le añadieron ?/,?/-diisopropiletilamina (3.2 ml, 0.019 mol), cloruro de 4-metil-bencenosulfonilo (2.66 g, 0.014 mol) y PS-DMAP (cantidad catalítica). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h y después se filtró para retirar la resina. La resina se lavó con CH2CI2 (3 x 20 ml) y las fracciones combinadas se lavaron con ácido cítrico al 10% (100 ml) y NaCI saturado (100 ml), se secaron (Na2SO ), se filtraron y se concentraron al vacío. El material bruto resultante se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, de CH2CI2 al 100% a 95:5 de CH2CI2:MeOH) y las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se concentraron al vacío, produciendo éster metílico del ácido 4-[6-amino-5-(tolueno-4-sulfoniloxi)-piridin-3-il]-benzoico (3.3 g, 8.2 mmol, 88%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 2.47 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 4.81 -4.88 (s a, 2H), 7.36-7.44 (m, 5H), 7.81 (d, 2H, J, 8.3 Hz), 8.05 (d, 2H, J, 8.4 Hz), 8.19-8.27 (s a, 1 H). 5. A una solución agitada de 1-(3-fluoro-2-trifluorometil-fenil)-etanol (2.0 g, 9.6 mmol) en DMF anhidra (500 ml) a 0°C en una atmósfera de N2 se le añadió NaH (0.38 g, 9.6 mmol). La reacción se dejó en agitación durante 0.5 h. Se añadió una solución de éster metílico del ácido 4-[6-amino-5-(tolueno-4-sulfoniloxi)-piridin-3-il]-benzoico (3.8 g, 9.6 mmol) en DMF anhidra (30 ml) a la mezcla de reacción que se dejó volver lentamente a la temperatura ambiente y se agitó durante 21 h a esta temperatura. La reacción se diluyó con EtOAc (500 ml) y H2O (100 ml). La fase orgánica se retiró por separación y la fase acuosa se extrajo además con EtOAc (1 x 200 ml). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera (1 x 100 ml), se secaron con Na2SO y se concentraron a sequedad al vacío. La mezcla bruta se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, de 40:60 a 70:30 de EtOAc:hexanos) y las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron al vacío, produciendo éster metílico del ácido 4-{6-amino-5-[1-(3-fluoro-2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-¡l}-benzoico (1.4 g, 3.2 mmol, 34%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 1.73 (d, 3H, J, 6.2 Hz), 3.91 (s, 3H), 4.87-4.64 (s a, 2H), 5.81 (c, 1 H, J, 6.1 , 6.3 Hz), 6.92 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 7.38 (d, 2H, J, 8.5 Hz), 7.46-7.66 (m, 3H), 7.93 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 8.02 (d, 2H, J, 8.5 Hz). 6. A una solución agitada de éster metílico del ácido 4-{6-amino-5-[1-(3-fluoro-2-trifluoromet¡l-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-benzoico (1.4 g, 3.2 mmol) en IPA caliente (72 ml) se le añadió H2O (38 ml) que contenía LiOH (0.68 g, 16.2 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 3.5 h. La reacción se neutralizó, se diluyó con EtOAc (200 ml) y se extrajo después de la refrigeración. La fase orgánica se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO y se concentró al vacío, produciendo el ácido 4-{6-amino-5-[1-(3-fluoro-2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-benzoico (1.2 g, 2.8 mmol, 88%). 1H RMN (MeOD, 300 MHz) d 1.75 (d, 3H, J, 6.2 Hz), 4.88-4.93 (m, 1 H), 7.01 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 7.39 (d, 2H, J, 8.3 Hz), 7.52-7.67 (m, 3H), 7.80 (d, 1 H, J, 1.8 Hz), 7.97 (d, 2H, J, 8.3 Hz). 7. Preparación de compuestos amida: Una solución en agitación del ácido 4-{6-amino-5-[1 -(3-fluoro-2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-pirid¡n-3-il}-benzoico (50 mg, 0.12 mmol), EDC (27.0 mg, 0.13 mmol) y HOBt (18.0 mg, 0.13 mmol) en DMF (2 ml) se añadió a un vial de dos dracmas (3.54 g) que contenía NHR-|R2 (0.12 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Después, la reacción se diluyó con CH2CI2 (3 ml) y se repartió con H2O. La fase orgánica se separó y se lavó con NaCI saturado (1 x 2 ml) y NaHCO3 saturado (1 x 2 ml). La fase orgánica se concentró a sequedad al vacío. El material se purificó usando cromatografía en columna (gel de sílice, de 99:1 a 95:5 de CH2CI2/MeOH). Las fracciones que contenían el producto se concentraron al vacío, produciendo los compuestos amida.
Procedimiento general 14: 1 : A una mezcla de clorhidrato de 1-(2-cloroetil)pirrolidina (200 mg, 1.18 mmol) y 4-[4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fen¡l]-1/-/-pirazol (229 mg, 1.19 mmol) en DMF (6 ml) se le añadió Cs2CO3. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después, a la mezcla se le añadió agua (10 ml). El producto se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Después, los extractos combinados se lavaron con salmuera (5 x 10 ml) para retirar la DMF, después se secaron sobre Na2SO y se concentraron (142 mg, rendimiento del 41 %). 2: A una mezcla de 3-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-yodo-p¡ridin-2-ilamina (200 mg, 0.468 mmol), éster pinacol-bórico (1.2 equiv.) y Na2CO3 (149 mg, 1.41 mmol) en agua (1.25 ml) y dimetil etil glicol (3.75 ml, 0.1 M) se le añadió Pd(PPh3)2CI2 (16 mg, 0.020 mmol) en un recipiente de reacción de microondas. El sistema se desgasificó y se cargó con nitrógeno. La mezcla se agitó a 160°C en un aparato de microondas durante 15 minutos. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente seguido de la adición de agua (10 ml). El producto se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml), se secó sobre Na2S04 y se concentró. El producto bruto se purificó por HPLC de fase inversa con TFA al 0.1 % en agua y acetonitrilo.
Procedimiento general 15: 1 : A una solución de 3/-/-oxazolo[4,5-b]piridin-2-ona (13.6 g, 100 mmol) en acetonitrilo (600 ml) y ácido acético (120 ml) se le añadió N-bromosuccinimida (21.4 g, 120 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y la reacción se inactivo con una solución de Na2S2O5. Después de la evaporación, el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con una solución 2 N de NaOH y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice, proporcionando 6-bromo-3r7-oxazolo[4,5-b]piridin-2-ona (11.5 g, rendimiento del 55%). 2: 6-bromo-3/-/-oxazolo[4,5-b]piridin-2-ona (21.5 g, 100 mmol) se suspendió en una solución de NaOH (2 N, 250 ml, 500 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante una noche y se obtuvo una solución transparente. Después de la refrigeración a temperatura ambiente, la solución de reacción se neutralizó a pH -7. Se liberó mucha cantidad de CO2 y también se observó un precipitado. El producto se filtró, se lavó con agua y se secó a alto vacío, proporcionando 2-amino-5-bromo-piridin-3-ol en forma de un sólido blanquecino (17.8 g, rendimiento del 98%). 3: A una solución de 2-amino-5-bromo-pirid¡n-3-ol (358 mg, 1.89 mmol) en DMF (8 ml) se le añadió Cs2CO3 (620 mg, 1.89 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 1 h. A la mezcla de reacción se le añadió lentamente compuesto de bromo (0.9 equiv.) en DMF (5 ml). La solución de reacción se agitó en atmósfera de nitrógeno durante cinco h y después se repartió entre agua y acetato de etilo. La fase orgánica se lavó tres veces con salmuera y se secó sobre MgSO4. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con hexano-acetato de etilo (4:1 ), proporcionando el producto con un rendimiento del 70%-80%.
Procedimiento general 16 Usando el Ejemplo I-488 de la Solicitud de Patente de Estados Unidos con N° de serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495): 1. A una solución de 3-benciloxi-5-bromo-piridin-2-ilamina (1 g, 3.58 mmol) en dimetiisulfóxido (7 ml) se le añadieron secuencialmente b/s(pinacolato)diborano (1.0 g, 3.94 mmol), acetato potásico (1.05 g, 10.7 mmol) [1 ,1 '-b/s(difen¡lfosf¡no)ferrocina]d¡cloropaladio (II), complejo con diclorometano (1 :1 ) (146 mg, 0.18 mmol). La mezcla se calentó a 80°C durante 16 h y después se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se filtró. El filtrado se lavó con agua (2 x 50 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La concentración al vacío produjo el borato bruto en forma de un sólido pardo (1.13 g, 97%). 1H RMN (CDCI3) d 1.32 (s, 12 H), 5.08 (s, 2H), 5.44 (s a, 2H), 7.33-7.42 (m, 6H), 8.03 (s, 1 H). 2. Un recipiente de reacción de 18 ml se cargó con la 3-benciloxi- 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina bruta (161 mg, 0.49 mmol), dimetoxietano (3 ml) y 2-bromopiridina (117 mg, 0.74 mmol). A esta solución se le añadió [1 ,1,-b/s(difenilfosfino)ferrocina]dicloropaladio (II), complejo con diclorometano (1 :1 ) (20 mg, 0.05 mmol) y una solución 2 M de carbonato de cesio en agua (0.75 ml, 1.5 mmol). El reactor se calentó a 80°C durante 66 h en una atmósfera de nitrógeno y después se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo (5 ml) y agua (5 ml). La fase orgánica se lavó con más agua (5 ml) y se diluyó con dimetilformamida (5 ml). A la solución orgánica se le añadió ácido sulfónico unido a polímero (0.5 g, 2.1 mmol) y la mezcla resultante se agitó suavemente durante 2 h. La resina se filtró y se lavó con dimetilformamida, metanol y cloruro de metileno (3 x 5 ml cada disolvente). Después, el polímero se hizo reaccionar con amoniaco 2 M en metanol durante 1 h. La resina se filtró y se lavó con más amoniaco 2 M en metanol (2 x 5 ml) y los filtrados combinados se concentraron al vacío. La purificación del producto bruto por cromatografía ultrarrápida en columna produjo 52.2 mg del producto en forma de un sólido castaño (rendimiento del 38%).
Procedimiento general 17 1. A la solución de 3-(2-Cloro-3,6-difluoro-benciloxi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilam¡na (procedimiento 16) (10.0 g, 24.3 mmol) en alcohol f-butílicol (50 ml) se le añadió anhídrido de boc (5.83 g, 26.7 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió más anhídrido de boc (2.25 g, 10.3 mmol) y la reacción se agitó de nuevo durante una noche. El material se concentró hasta un aceite negro viscoso y se usó como tal. 2. El éster bórico bruto (24.3 mmol teórico) en THF (150 ml) se añadió a una solución de bicarbonato sódico (16.3 g, 194 mmol) en agua (150 ml) y acetona (23 ml). La mezcla se enfrió a 2°C y se añadió lentamente oxona (13.5 g, 21.9 mmol), manteniendo la temperatura por debajo de 8°C. Una vez completada la adición, la reacción se agitó durante 5 minutos y después se inactivo con bisulfito sódico (14.2 g) en agua (28 ml). Se añadió acetato de etilo (200 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se neutralizó con HCl 6 N y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (250 ml) y salmuera (250 ml), se secaron (Na2SO4) y se concentraron hasta un aceite negro bruto. La cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano) dio el producto en forma de una espuma parda clara (4.78 g, 49.0%). 1H RMN (CDCI3) d 1.48 (s, 9H), 1.74 (d, 3H), 5.75 (c, 1 H), 6.61 (d, 1 H), 6.89 (dt, 1 H), 6.94-7.04 (m, 2H), 7.26(d, 1 H), 8.19 (s a, 1 H). EM m/z 401 (M+H)+. 3. Al carbonato de cesio en un vial de 2 dracmas (3.54 g) se le añadió éster terc-butílico del ácido [3-(2-cloro-3,6-difluoro-benciloxi)-5-hidroxi-piridin-2-il]-carbámico (100 mg, 0.25 mmol) en DMF anhidra (1 ml) seguido de bromuro de bencilo (89.2 µl, 0.75 mmol). El vial se tapó y se agitó a 90°C durante una noche. La reacción se filtró a través de un tubo Chem-Elut de 5 ml humedecido previamente con agua (3.5 ml) y se eluyó con 1 :1 de acetato de etilo:cloruro de metileno. Después de la concentración parcial, se añadió HCl 4 N en dioxano (1-2 ml) y la solución se concentró. La cromatografía de fase inversa (agua:acetonitrilo, TFA al 0.05%) seguido de liofilización, dio el producto deseado en forma de un sólido amorfo blanquecino (25.3 mg, 20.0%) y el producto de b/s-adición en forma de un sólido amorfo castaño (35.2 mg, 23.7%).
Procedimiento general 18: Se añade borohidruro sódico (1.5 equivalentes molares) a una solución de cetona (3.89 mmol) en 10 ml de etanol en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 12 h. Después, la mezcla se pone en un baño de hielo y se inactiva con HCl acuoso diluido. El etanol se evapora y se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. La fase de EtOAc se seca sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso, el compuesto A5. El residuo se usa sin purificación adicional. Se añaden 3-hidroxi-2-nitropiridina (1.1 equivalentes molares) y trifenilfosfina (1.5 equivalentes molares) a una solución del compuesto A5 (1.1 mmol) en 10 ml de THF. Después, la mezcla de reacción se pone en un baño de hielo y se le añade azodicarboxilato de diisopropilo (1.5 equivalentes molares). El baño de hielo se retira y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 12 h. El disolvente se evapora, dando un residuo oleoso amarillo. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc en hexanos), dando el compuesto A1. Se añade HCl 2 M (0.2 ml) a la solución del compuesto A1 (0.97 mmol) en 2 ml de etanol. Después, la mezcla se pone en un baño de hielo y se añade lentamente polvo de Fe (365 mg). La reacción se calienta a 85°C durante 1 h y se enfría a temperatura ambiente. Se añade celite (0.5 g) para agitar y la mezcla resultante se filtra a través un lecho de celite y se aclara con etanol. El filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo, el compuesto A2. El residuo se usa sin purificación adicional. Se añaden ácido peryódico (0.25 equivalentes molares), yodo (0.5 equivalentes molares), H2O (0.5 ml) y ácido sulfúrico concentrado (0.03 ml) a una solución del compuesto A2 en 3 ml de ácido acético. La mezcla de reacción se calienta a 85°C durante 5 h. Después, la mezcla de reacción se enfría en un baño de hielo y se basifica con Na2CO3 saturado ac. a un pH de 3-4. Se añade acetato de etilo para extraer la solución acuosa. Secar la fase EtOAc sobre Na2SO . El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A3.
Procedimiento general 19: Se añade éster bórico o ácido bórico (1.3 equivalentes molares) a una solución del compuesto A3 (0.47 mmol) en 5 ml de DME. La mezcla se purgó varias veces con nitrógeno y después se añade diclorob/s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 1 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A4.
Procedimiento general 20: El compuesto A6 se preparó usando procedimiento general 19. Se añaden pentafluoruro de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-?/,?/,?/',?/-tetrametiluronio fósforo (HATU) (1.1 equivalentes molares), diisopropiletilamina (5 equivalentes molares) y amina (1.3 equivalentes molares) a una solución del compuesto A6 (0.17 mmol) en 3 ml de DMF en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se deja en agitación a temperatura ambiente durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade NaHCO3 saturado para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO . El Na2SO se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc y hexanos), dando el producto de amida deseado, el compuesto A7, en forma de un aceite amarillo.
Procedimiento general 21 : A7 A8 Se añade ácido (16 equivalentes molares o menos) al compuesto A7 (0.13 mmol) a temperatura ambiente. La solución resultante se agita a temperatura ambiente o se calienta a 60°C durante 12 h. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, EtOAc y CH2CI2), dando el producto de amida deseado, el compuesto A8, en forma de un sólido de amarillento a blanco.
Procedimiento general 22: A9 A10 A11 El compuesto A9 se prepara usando el procedimiento general 19. Se añaden dicarbonato de di-terc-butilo (3 equivalentes molares) y 4- (dimetilamino)piridina (0.14 equivalentes molares) a una solución del compuesto A9 (3 mmol) en 20 ml de DMF. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO . El Na2SO se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo amarillo. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 25?30% en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A10, en forma de un aceite amarillento (rendimiento del 87.8%). Se burbujea ozono a través de una solución del compuesto A10 en 50 ml de CH2CI2 a -78°C y se añade sulfuro de dimetilo para interrumpir la reacción. A la mezcla de reacción se le añade cloruro sódico saturado y se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. La fase de EtOAc combinada se seca sobre Na2SO . El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso amarillo. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 35?40% en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A11 , en forma de un aceite amarillento (rendimiento del 58.4%).
Procedimiento general 23: Aminación reductora A1 1 A12 A13 Se añaden sal clorhidrato de amina (1.2 equivalentes molares), acetato sódico (2 equivalentes molares a la sal clorhidrato de amina) a una solución del compuesto A11 (0.45 mmol) en 4 ml de CH3OH en una atmósfera de nitrógeno. A la mezcla de reacción se le añade tamiz molecular (0.5 g) y después se añade cianoborohidruro sódico (2 equivalentes molares). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 12 h en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se filtra a través un lecho de celite y el filtrado se evapora y se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, EtOAc y CH2CI2), dando el producto deseado, el compuesto A12 en forma de un aceite (rendimiento del 52.6%). Se añade ácido (16 equivalentes molares o menos) al compuesto A12 (0.17 mmol) a temperatura ambiente. La solución resultante se agita a temperatura ambiente o se calienta a 60°C durante 12 h. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, EtOAc y CH2CI2), dando el producto deseado, el compuesto A13.
Procedimiento general 24: Se añaden O-fenildiaminas (1.2 equivalentes molares) y bisulfito sódico (2.1 equivalentes molares) a una solución del compuesto A11 (0.41 mmol) en 5 ml de DMA. La solución resultante se calienta a 110°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo amarillo. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A14. Se añade ácido (16 equivalentes molares o menos) al compuesto A14 (0.16 mmol) a temperatura ambiente. La solución resultante se agita a temperatura ambiente o se calienta a 60°C durante 12 h. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, EtOAc y CH2CI2), dando el producto de amida deseado, el compuesto A15.
Procedimiento general 25: A18 Se añaden dicarbonato de di-terc-butilo (3 equivalentes molares) y 4-(dimetilamino)piridina (0.14 equivalentes molares) a una solución del compuesto A3b (2 mmol) en 10 ml de DMF. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo amarillo (compuesto a16). El residuo se usa sin purificación adicional. Se añaden b/s(pinacolato)diboro (1.2 equivalentes molares) y acetato potásico (3.4 equivalentes molares) a una solución del compuesto a16 en 4 ml de DMSO. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se añade diclorob/s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). La solución resultante se calienta a 80°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 30% en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A17 (rendimiento del 76%). Se añade HCl (5 equivalentes molares) a una solución del compuesto A17 (0.43 mmol) en 4 ml de CH2CI2. La mezcla resultante se calienta a 50°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade NaHCO3 saturado para neutralizar la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando el producto deseado (compuesto A18) en forma de un sólido amarillo (rendimiento del 75%).
Procedimiento General 26: A17 A19 A20 El compuesto A17 (1.3 equivalentes molares) se añade a una solución de haluro de arilo (0.36 mmol) en 3 ml de DME. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se añade d¡clorob/'s(trifenilfosf¡no)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 0.8 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO . El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A19 (rendimiento del 74.4%). Se añade HCl (5 equivalentes molares) a una solución del compuesto A19 (0.26 mmol) en 10 ml de alcohol isopropílico. La mezcla resultante se calienta a 50°C durante 12 h. El disolvente se evapora, dando el producto deseado, el compuesto A20.
Procedimiento general 27: A18 A21 El compuesto A18 (1.3 equivalentes molares) se añade a una solución de haluro de arilo (0.21 mmol) en 3 ml de DME. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se añade diclorob/s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 0.6 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4.
El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2l EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A21.
Procedimiento general 28: Se añaden amina (1.5 equivalentes molares) y K CO3 (1.5 equivalentes molares) a una solución de haluro de 4-halobenc¡lo (1.0 equivalente molar) en 2 ml de tolueno. La mezcla resultante se somete a microondas usando un sintetizador Smith (150°C, 1 h). A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO . El Na2SO se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando el producto deseado, el compuesto A23. El residuo se usa en el procedimiento 1 1 sin purificación adicional para sintetizar el compuesto A22.
Procedimiento general 29: Se añaden amina (1.2 equivalentes molares) y diisopropilamina (5 equivalentes molares) a una solución de cloruro de 4-bromobencenosulfonilo (0.77 mmol) en 5 ml de CHCI3 en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 4 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando el producto deseado, el compuesto A25. El residuo se usa en el procedimiento 11 sin purificación adicional para sintetizar el compuesto A24.
Procedimiento general 30: Se añade éster bórico o ácido bórico (1.2 equivalentes molares) a una solución de 1-cloro-4-yodobenceno (0.84 mmol) en 10 ml de (DME) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se añade diclorob/s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 1.8 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto A27. El compuesto A27 se usa en el procedimiento 11 para sintetizar el compuesto A26.
Procedimiento general 31 para la separación guiral de racematos: La muestra racémica se purifica usando cromatografía de fluidos supercríticos preparativa CFS-EM. Condiciones de purificación ilustrativas: columna Chiralpak AD-H, 250 x 21 mm, 5 mieras, columna 100A (Columna N°: ADH0CJ-C1003); temperatura de la columna 35°C; fase móvil metanol al 35% (con isopropilamina al 0.1 %)-modificada con CO2; caudal preparativo 52 ml/min; presión isobárica a 120 bar (12000 kPa).
Procedimiento general 32: usando (4-{6-Amino-5-[1 -(3-trifluorometil-fenil)-etox¡]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-1-il)-metanona In situ A una mezcla de éster terc-butílico del ácido 4-[4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoil]-2,6-dimetil-piperazin-1-carboxílico (100 mg, 0.23 mmol) y 1-(1-bromo-etil)-3-trifluorometil-benceno (64 mg, 0.25 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió NaH (12 mg, 0.47 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó durante una noche. La EMCL demostró gue la reacción estaba completa y la DMF y el agua se retiraron. Al residuo se le añadió TFA (2 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se retiró TFA seguido de la adición de metanol. El residuo se purificó por HPLC prep., proporcionando (4-{6-Amino-5-[1-(3-trifluoromet¡l-fen¡l)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperaz¡n-1-il)-metanona (30 mg, rendimiento del 25.7%).
Procedimiento general 33: Usando (4-{6-amino-5-[1-(2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-1-il)-metanona ln situ A una mezcla de éster terc-butílico del ácido 4-[4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoil]-2,6-dimetil-piperazin-1 -carboxílico (50 mg, 0.12 mmol) y 1-(1-bromo-etil)-2-trifluorometil-benceno (32 mg, 0.12 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió Cs2CO3 2 M (0.18 ml, 0.35 mmol), seguido de agua (0.5 ml), la mezcla se agitó durante una noche y después se calentó a 70°C durante 8 h, la EMCL demostró que la reacción estaba completa. La DMF y el agua se retiraron. Al residuo se le añadió TFA (2 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El TFA se retiró, seguido de la adición de metanol. El residuo se purificó por HPLC prep., proporcionando (4-{6-amino-5-[1-(2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-p¡ridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-1-il)-metanona (20 mg, rendimiento del 34.2%).
Procedimiento general 34 Usando {4-[6-Amino-5-(2-met¡l-benciloxi)-pirid¡n-3-il]-fenil}-(3,5-dimet¡l-piperazin-1-il)-metanona A una mezcla de éster terc-butílico del ácido (2f?,6S)-4-[4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoil]-2,6-dimetil-piperazin-1 -carboxílico (100 mg, 0.23 mmol) y 1-bromometil-2-metil-benceno (47 mg, 0.25 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió Cs2CO3 2 M (0.35 ml, 0.7 mmol) seguido de agua (0.5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La EMCL demostró que la reacción estaba completa, la DMF se retiró, seguido de la adición de HCl 4 N en dioxano (2 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Los volátiles se retiraron seguido de la adición de metanol. Esta solución se purificó por HPLC prep., proporcionando {4-[6-amino-5-(2-metil-benciloxi)-piridin-3-il]-fenil}-(3,5-dimetil-piperazin-1-¡l)-metanona (47 mg, rendimiento del 46.6%).
Procedimiento general 35 Usando (6-amino-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-3-il)-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-p¡ridin-3-il}-fenil)-metanona A una mezcla de éster terc-butílico del ácido [3-(4-yodo-benzoil)-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-6-il]-carbámico (100 mg, 0.234 mmol) y 3-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina (100 mg, 0.234 mmol) en DME (2 ml) se le añadieron Pd(dppf)2CI2- CH2CI2 (10 mg, 0.012 mmol) y Cs2CO3 (351 mg, 0.702 mmol). La mezcla se burbujeó con nitrógeno durante 10 min y después se sometió a microondas a 150°C durante 30 min. La EMCL comprobó que la reacción estaba completa. La mezcla de reacción bruta se diluyó con acetato de etilo seguido de lavados con agua y salmuera. La solución se secó sobre MgSO4.
La purificación por HPLC prep. proporcionó un sólido. El sólido se agitó con HCl 4 N/dioxano (3 ml) durante 3 h a temperatura ambiente. La retirada de los volátiles dio lugar a un residuo que se purificó por HPLC prep., proporcionando (6-amino-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-3-il)-(4-{6-amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-metanona (30 mg, rendimiento del 26%).
Procedimiento general 36 Usando 5-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-6'-(2-morfolin-4-il-etoxiHS.S'lbipiridinil-d-ilamina A una mezcla de 6'-amino-5'-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-[3.3']bipiridinil-6-ol (78 mg, 0.20 mmol), trifenilfosfina (63 mg, 0.24 mmol) y 2-morfolin-4-il-etanol (0.026 ml, 0.22 mmol) se le añadió DEAD (0.034 ml, 0.22 mmol). Después de agitar durante una noche, se añadieron más PPh3 (63 mg, 0.24 mmol) y más DEAD (0.034 ml, 0.22 mmol). Después de varias horas, se añadió más alcohol (0.026 ml, 0.22 mmol). Después de varias horas más, se añadieron más PPh3 (63 mg, 0.24 mmol) y más DEAD (0.034 ml, 0.22 mmol). Después de agitar durante una noche, la mezcla se repartió entre diclorometano y salmuera semi-saturada. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO y se concentraron por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, metanol, proporcionando 5-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-6'-(2-morfolin-4-il-etoxi)-[3.3,]bipiridinil-6-ilamina (53 mg, 53%).
Procedimiento general 37 Usando el Ejemplo 1-650 de la Solicitud de Patente de Estados Unidos con N° de serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495) 3-(2,6-Dicloro-3-fluoro-benciloxi)-5-tiazol-2-il-piridin-2-ilamina: A un tubo de microondas equipado con una barra agitadora se le añadieron el material de partida de yodo-piridilo (300 mg, 0.702 mmol), tefraqív/'s(tr¡fenilfosfina)paladio (0) (40 mg, 5% en moles) y tetrahidrofurano (anhidro, 6 ml). El vial se tapó y se purgó con nitrógeno durante 5 minutos. Después, se añadió bromuro de 2-tiazolilcinc (0.5 M en THF, 1.4 mmol, 2.8 ml) mediante una jeringa. El vial se calentó a 120°C en el microondas durante 10 minutos. La CCF (1 :1 de acetato de etilo loruro de metileno) mostró una gran cantidad de material de partida restante. Se añadió más bromuro de 2-tiazolilcinc (0.5 M en THF, 500 µl) y el vial se calentó a 120°C en el microondas durante 20 minutos. La CCF (1 :1 de acetato de etilo:cloruro de metileno) mostró una gran cantidad de material de partida aún restante. Se añadió más bromuro de 2-tiazolilcinc (0.5 M en THF, 500 µl) y el vial se calentó a 120°C en el microondas durante 60 minutos. La CCF (1 :1 de acetato de etilo loruro de metileno) aún mostraba una gran cantidad de material de partida que seguía quedando pero también se había vuelto muy turbia. Los contenidos del vial se vertieron en una solución sat. de NH CI (10 ml) y esta solución se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 ml). Las fases de acetato de etilo combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto bruto se cargó sobre una columna de gel de sílice de 10 g compactada previamente y se usó 1 :1 de acetato de etilo:cloruro de metileno para eluir el producto deseado. (40 mg, 15%).
Procedimiento general 38 Usando el Ejemplo I-652 de la Solicitud de Patente de Estados Unidos con N° de serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495) 3-[1 -(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1 -metil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-2-ilamina: Se disolvió ?/-metilimidazol (92 mg, 1.1 mmol) en tetrahidrofurano (anhidro, 4 ml) en un matraz de fondo redondo de 50 ml. El matraz se enfrió con un baño de hielo seco/acetona en atmósfera de nitrógeno. Se añadió /V-butillitio (2.5 M, 562 µl, 1.4 mmol) mediante una jeringa en porciones de 100 µl durante 5 minutos. La reacción se agitó a -70°C durante 30 minutos. Se añadió cloruro de cinc sólido (anhidro, 383 mg, 2.8 mmol) y la reacción se agitó durante 15 minutos. Después, el baño de hielo se retiró y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Una vez que todo el cloruro de cinc estaba en solución y la reacción a temperatura ambiente, se añadió una estructura de yodo (400 mg, 0.936 mmol) en tetrahidrofurano (anhidro, 4 ml), seguido de teíraqí7/'s(trifenilfosfina)paladio (0) (108 mg, 10% en moles) y la reacción se calentó a reflujo. La reacción se controló por CL/EM hasta que se consumió toda la estructura de yodo de partida. La reacción se dejó enfriar y después se diluyó con una solución sat. de NH4CI (20 ml). Esta solución se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Las fases de acetato de etilo combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto bruto se cargó sobre una columna de 10 g de gel de sílice compactada previamente y se usó metanol al 10%:acetato de etilo para eluir el producto deseado (25 mg, 7%).
Procedimiento general 39: Usando el Ejemplo I-657 de la Solicitud de Patente de Estados Unidos con N° de serie 10/786,610 (PCT/US2004/005495) A 6-Amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-n¡cotinonitrilo (400 mg, 1.23 mmol) en 70 ml de metanol seco a 0°C se le burbujeó gas HCl durante 3 minutos. Se agitó durante una noche a 3°C. Los volátiles se retiraron y los sólidos se lavaron con éter dietílico, produciendo cuantitativamente el imidato. A 200 mg del imidato en 4 ml de metanol a 0°C se le añadió metilamina 2 N en THF (837 µl). Dejar en agitación a 0°C durante aproximadamente 1 h y después dejar calentar a ta durante una noche. Los volátiles se retiraron y el residuo se cromatografió con metanol al 10-20%/diclorometano, produciendo 70 mg de producto.
Procedimiento general 40: 1. Ácido 6-nitro-5-hidroxinicotínico (B2): A una solución de ácido 5-hidroxinicotínico (B1 ) (7.0 g, 50 mmol) en H2SO4 concentrado se le añadieron 9 ml de HNO3 fumante (90%) (9 ml). La mezcla de reacción se agitó a 55-60°C en un tubo de ensayo cerrado herméticamente durante cuatro días.
Después, la mezcla se vertió en hielo y el pH se ajustó a 3 con NaOH al 50%.
Se añadió MgSO4 para saturar la mezcla acuosa, que después se extrajo con alcohol isopropílico (4 x 45 ml). Después de la retirada del alcohol isopropílico a presión reducida, se obtuvieron 5.93 g (rendimiento del 64%) de B2 en forma de un sólido amarillo. EM (IQPA), (M+H)+ 185, 1H RMN (DMSO-d6) d 8.01 (d, 1 H, Ar-H), 8.41 (d, 1 H, Ar-H). 2.2,6-Diclorobencil-6-nitro-5-[(2,6-diclorobencil)oxi]nicotinato (B3): Se disolvieron ácido 6-nitro-5-h¡droxinicotínico (B2) (3.4 g, 18.5 mmol), bromuro de 2,6-diclorobencilo (8.88 g, 37 mmol) y DIPEA (5.5 g, 42.5 mmol) en DMF (25 ml) en un matraz de fondo redondo de 250 ml y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 h y después se concentró a presión reducida. La mezcla resultante se vertió en hielo y se filtró. El sólido recogido se secó a presión reducida, dando 4.25 g (rendimiento del 46%) de B3. EM (IQPA) (M+H)+ 503. 1H RMN (DMSO-de) d 5.47 (s, 2H, ArCH2O), 5.71 (s, 2H, ArCH2O), 7.24-7.43 (m, 6H, Ar-H), 8.26 (d, 1 H, Ar-H), 8.66 (d, 1 H, Ar-H). 3.2,6-Diclorobencil-6-amino-5-[(2,6-diclorobencil)oxi]n¡cotinato (B4): Una mezcla de 2,6-diclorobencil-6-nitro-5-[(2,6-diclorobencil)oxi]nicotinato (B3) (5.5 g, 10.96 mmol), polvo de hierro (0.92 g, 16.43 mmol), ácido acético glacial (20 ml) y metanol (17 ml) se agitó a 85°C durante tres h. La mezcla de reacción se concentró casi a sequedad y se añadió hidróxido amónico (30%) para neutralizar la mezcla. Se añadió una cantidad mínima de DMF para disolver la mezcla de reacción, que se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: EtOAc-EtOH, 9:1 ), dando 4.5 g (87%) de B4 en forma de un sólido amarillo pálido. EM (IQPA) (M+H)+ 473. 4.Ácido 6-amino-5-[(2,6-diclorobencil)oxi]nicotínico (B5): Una mezcla de 2,6-diclorobencil-6-amino-5-[(2,6-diclorobencil)oxi]nicotinato (B4) (3.5 g, 7.4 mmol), hidróxido de litio (0.41 g, 17 mmol), agua (22 ml) y metanol (30 ml) se agitó y se calentó a reflujo a 85°C durante 5 h. La mezcla se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en agua, se extrajo con una mezcla de Et2O/hexano (1 :1 , 4 x 25 ml) y se neutralizó con HCl 1 N para formar un precipitado blanco, que se filtró y se secó a presión reducida, proporcionando 1.83 gramos (79%) de B5 en forma de un sólido blanco. EM (IQPA) (M+H)+ 313. 1H RMN (DMSO-d6) d 5.26 (s, 2H, ArCH2O), 6.37 (s, 2H, NH2), 7.43-7.48 (t, 1 H, Ar-H), 7.54 (s, 2H, Ar-H), 7.56 (s, 1 H, Ar-H), 8.18 (s, 1 H, Ar-H).
A una serie de 400 µl de una solución 0.2 M de diferentes aminas en DMF en una placa de 96 pocilios se le añadieron 400 µl (0.2 M en DMF) de ácido 4-[6-amino-5-(2,6-dicloro-3-fluoro-benciloxi)-piridin-3-il]-benzoico, 80 µl de trietilamina (1 M en DMF) y 160 µl de HATU (0.5 M en DMF) y las reacciones se agitaron a 70°C durante 2 h. El disolvente se retiró usando el aparato SpeedVac y las mezclas de reacción brutas se disolvieron de nuevo en DMSO y se transfirieron usando un manipulador de líquidos hasta una placa de 96 pocilios de 1 ml, dando una concentración final teórica de -10 mM. Las reacciones se analizaron y se realizó la identificación positiva del producto usando CL/EM. La solución madre se diluyó hasta 50 nM y se ensayó en ella el porcentaje de inhibición de c-MET a 50 nM.
Procedimiento general 41 : A una serie de 400 µl de una solución 0.2 M de diferentes aminas en DMF en una placa de 96 pocilios se le añadieron 400 µl (0.2 M en DMF) de ácido 6-amino-5-[(2,6-diclorobencil)oxi]nicotínico, 80 µl de trietilamina (1 M en DMF) y 160 µl de HATU (0.5 M en DMF) y las reacciones se agitaron a 70°C durante 2 h. El disolvente se retiró usando el aparato SpeedVac y las mezclas de reacción brutas se disolvieron de nuevo en DMSO y se transfirieron usando un manipulador de líquidos hasta una placa de 96 pocilios de 1 ml, dando una concentración teórica final de ~10 mM. Las reacciones se analizaron y se realizó la identificación positiva del producto usando CL/EM. La solución madre se diluyó hasta 1 µM y se sometió a ensayo. Procedimiento general 42 Usando 2-(4-{6-amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirid¡n-3-¡l}-pirazol-1-il)-?/-(3-dimetilamino-propil)-¡sobutiramida A una solución de 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 /-/-pirazol (5 g, 25.77 mmol) y éster metílico del ácido 2-bromo-2-metil-propiónico (12.6 g, 27.06 mmol) en DMF (85 ml), se le añadió Cs2CO3 (12.6 g, 38.65 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 90°C en un baño de aceite durante una noche. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se repartió entre agua y acetato de etilo. La solución de acetato de etilo combinada se lavó cinco veces con agua, se secó sobre Na2SO y se concentró, dando el producto éster metílico del ácido 2-metil-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-¡l)-pirazol-1-il]propiónico (4.776 g, rendimiento del 63%). A una solución de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-yodo-piridin-2-ilamina (6.363 g, 14.901 mmol) y éster metílico del ácido 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirazol-1-il]propiónico (4.6 g, 15.64 mmol) en DME (27 ml) se le añadió una solución de CsF (6.79 g, 44.7 mmol) en agua (9.3 ml). La mezcla de reacción se desgasificó 3 veces con N2. Se añadió Pd(dppf)CH2CI2 y la mezcla de reacción se desgasificó 3 veces con N2. La reacción se calentó a 120°C en el microondas (posteriormente se añadió Pd en intervalos de 30 minutos hasta que la reacción se completó). Se añadió agua y la reacción se extrajo con EtOAc, se secó sobre Na2SO y se concentró, dando éster metílico del ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-¡l)-2-metil-propiónico. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con un gradiente de EtOAc al 25%-50%/hexanos, proporcionando éster metílico del ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-2-metil-propiónico (1.46 g, rendimiento del 21 %) con un Rf de 0.11 (EtOAc al 50%/hexanos). A una solución del éster metílico (2.92 g, 6.25 mmol) en MeOH (31 ml) se le añadió una solución de LiOH (450 mg, 18.76 mmol) en agua (6.25 ml). La reacción se calentó a 60°C hasta que EMCL mostró que la hidrólisis estaba completa (aproximadamente 45 minutos). El MeOH se retiró al vacío y se añadieron MeOH (2.5 ml) y agua (1 ml). El pH se ajustó a pH 5 con HCl 1 N, momento en el que el producto precipitó. Se obtuvo el producto ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-pirid¡n-3-¡l}-pírazol-1-il)-2-metil-propiónico después de la filtración (2.825 g, cuant.). A una solución del ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-2-metil-propiónico (1.00 g, 2.20 mmol) en DMF (5.5 ml) se le añadieron HOBT (300 mg, 2.20 mmol), EDC (633 mg, 3.30 mmol) y ?/,?/-dimetil-propano-1 ,3-diamina (225 mg, 2.20 mmol). La reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Después, la reacción se purificó por HPLC prep. C-18 de fase inversa eluyendo con acetonitrilo/agua con ácido acético al 0.1 %, proporcionando 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-?/-(3-dimetilamino-propil)-isobutiramida (170 mg, rendimiento del 14%).
Procedimiento general 43 Usando 3-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(3-metil-pirazol-1 -il)-piridin-2-ilamina A una solución agitada de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-yodo-piridin-2-ilamina (100 mg, 0.23 mmol) y 3-metil-1 /-/-pirazol (59 mg, 0.70 mmol) en DMSO (1 ml) se le añadió K3PO4 (101 mg, 0.47 mmol), dodecano (0.015 ml, 0.05 mmol), ciclohexanodiamina (0.009 ml, 0.07 mmol) y yoduro de cobre (Cul) (14 mg, 0.07 mmol). La solución se burbujeó con nitrógeno durante 5 minutos y después se irradió con microondas a 150°C durante 2 horas. La EMCL comprobó que la reacción estaba completa y la mezcla se purificó por HPLC prep., dejando 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(3-metil-pirazol-1-il)-piridin-2-¡lam¡na (30 mg), rendimiento del 34.2% Procedimiento general 44 23 25 Se disolvió 2,5-dibromopiridina (1 equiv. molar) en tolueno anhidro (0.085 M) y se enfrió a -78°C. Se añadió lentamente n-BuLi (1.2 equiv. molar) durante 5 minutos y después la mezcla resultante se dejó en agitación a -78°C. Después de 2 h, se añadió R-?COR2 (1.3 equiv. molares) y la solución se mantuvo a -78°C. Después de 1 h, se añadió NH4CI saturado acuoso y la solución se calentó a temperatura ambiente. El producto se extrajo con EtOAc (3 x) y los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (Na2S?4), se concentraron y se purificaron por cromatografía en columna (EtOAc al 10%/Hexanos-EtOAc al 100%), proporcionando el producto bruto. Se usó directamente en el Procedimiento general 27, proporcionando 25.
Procedimiento general 45 A una solución de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (1.8 g, 6.04 mmol), cianuro de cinc al 98% (2.07 g, 12.07 mmol) y 1 ,1 '-b/'s(difenilfosf¡no)-ferroceno al 97% (0.4 g, 0.712 mmol) en DMF (48 ml.) se le añadió el complejo de [1 ,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (1 :1 ) (0.25 g, 0.30 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 150°C durante una noche en atmósfera de nitrógeno. La reacción se diluyó con EtOAc (50 ml), se lavó con 4:1 :4 de NH4CI saturado/NH4OH al 28%/H2O (2 x 28 ml) y se secó sobre Na2SO . La mezcla bruta se purificó con una columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente lineal del 25%-50% (EtOAc/hexanos), proporcionando 2-[1 -(2-amino-piridin-3-iloxi)-etil]-3-cloro-4-dimetilamino-benzonitrilo en forma de un sólido amarillo (rendimiento del 37%) y 2-[1-(2-amino-piridin-3-iloxi)-etil]-4-dimetilamino-isoftalonitrilo en forma de un sólido pardo oscuro (rendimiento del 33%).
Procedimiento general 46 o B )t-Bu A una mezcla de 4-bromo-imidazol (995 mg, 6.77 mmol), hidróxido potásico (380 mg, 6.77 mmol), carbonato potásico (936 mg, 6.77 mmol) y bromuro de tetra-n-butilamonio (109 mg, 0.339 mmol) en diclorometano (7 ml) se le añadió bromoacetato de terc-butilo (0.50 ml, 3.4 mmol). Después de agitar durante una noche, la reacción se filtró. El filtrado se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, acetato de etilo, proporcionando éster terc-butílico del ácido (4-bromo-imidazol-1-il)-acético (696 mg, 79%).
Procedimiento general 47 Se añadió una solución 4 M de ácido clorhídrico en dioxano (0.22 ml, 0.89 mmol) a una solución de éster terc-butílico del ácido (4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fen¡l)-etoxi]-piridin-3-il}-imidazol-1-il)-acético (86 mg, 0.18 mmol) en diclorometano (2 ml). Después de agitar durante dos días, la reacción se concentró por rotavapor y el residuo se disolvió en una cantidad mínima de metanol. Esta solución se añadió gota a gota a éter y la mezcla resultante se dejó en reposo durante una noche. La mezcla se filtró y el precipitado se lavó con éter y se secó al aire, dando el ácido (4-{6-amino-5-[1-(2,6-d¡cloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-imidazol-1 -il)-acético (83 mg, 93%).
Procedimiento general 48 Una mezcla de 4-bromo-imidazol (217 mg, 1.48 mmol) y carbonato de cesio (875 mg, 2.69 mmol) en dimetilformamida (5 ml) se agitó durante 30 minutos. Se añadió clorhidrato de 4-(2-cloro-etil)-morfolina (250 mg, 1.34 mmol) y la mezcla se calentó a 50°C. Después de calentar durante una noche la reacción se concentró por rotavapor. El residuo se suspendió en una mezcla de diclorometano y metanol y se filtró. El filtrado se concentró por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, metanol, proporcionando 4-[2-(4-Bromo-imidazol-1-il)-etil]-morfolina (148 mg, 42%).
Procedimiento general 49 N-o NIS TFA \J Se añadió isoxazol (0.64 ml, 10 mmol) a una solución de N-yodosuccinimida (2.3 g, 10 mmol) en ácido trifluoroacético (20 ml). Después de agitar durante una noche, a la reacción se le añadieron agua (50 ml), hexanos (50 ml) y bisulfito sódico. Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre Na2SO , se filtró y se concentró por rotavapor, dando 4-yodo-isoxazol (218 mg, 11 %).
Procedimiento general 50 Se añadió ácido trifluoroacético (5 ml) a una solución de 6'-bromo-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-[3.3,]bipiridinil-6-il-b/'s-(terc-butoxicarbonil)-am¡na (1.3 g, 2.0 mmol) en diclorometano (15 ml). Después de 3 horas, se añadieron porciones ¡guales de agua y bicarbonato sódico saturado acuoso. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO y se concentraron por rotavapor, dando 6'-bromo-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxij- .S'jbipiridinil-e-ilamina (968 mg, 106%). Se cargó un tubo de ensayo con 6'-bromo-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fen¡l)-etoxi]-[3.3']bipiridin¡l-6-ilamina (92 mg, 0.20 mmol), 4-pirrolidin-1 -il-piperidina (0.62 g, 4.0 mmol) y ?/-metilpirrolidinona (0.8 ml). El tubo de ensayo se cerró herméticamente y la mezcla se calentó a 80°C durante una noche. La temperatura se aumentó a 100°C durante 5.5 horas y después el calentamiento se interrumpió. La reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, metanol e hidróxido amónico, proporcionando 5"-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-4-pirrolidin-1 -il-3,4,5,6-tetrahidro-2H-[1 ,2,;5,,3"]terpirid¡n-6"-ilamina (53 mg, 50%).
Procedimiento general 51 Se añadió hidruro sódico (56 mg, 2.3 mmol) a una solución de piperidin-4-ol (214 mg, 2.11 mmol) en DMSO (8 ml). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió 2,5-dibromopiridina. Después de agitar durante 24 horas, se añadió hidruro sódico (56 mg, 2.3 mmol). Después de agitar durante 24 horas más, la reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, metanol e hidróxido amónico, proporcionando 5-bromo-2-(piperidin-4-iloxi)-piridina (316 mg, 58%).
Procedimiento general 52 Se cargó un tubo de ensayo con 2,5-dibromopiridina (0.24 g, 1.0 mmol), éster terc-butílico del ácido 4-amino-piperidin-1 -carboxílico (0.22 g, 1.1 mmol), di-isopropiletilamina (0.19 ml, 1.1 mmol) y ?/-metilpirrol¡dinona (1.0 ml). El tubo de ensayo se cerró herméticamente y la mezcla se calentó a 80°C durante una noche. La temperatura se aumentó a 120°C y se calentó durante una noche. La reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO y se concentraron por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de acetato de etilo y hexanos, proporcionando éster terc-butílico del ácido 4-(5-bromo-p¡ridin-2-ilamino)-piperidin-1 -carboxílico (36 mg, 10%).
Procedimiento General 53 Éster terc-butílico del ácido 4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-etoxi-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-benzoil)-piperazin-1 -carboxílico: A 4 ml de DMSO se le añadieron 0.124 ml de etanol seguido de 32 mg de NaH. Después de agitar durante 30 minutos, se añadieron 250 mg de éster terc-butílico del ácido 4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirid¡n-3-il}-benzoil)-piperazin-1 -carboxílico y la reacción se calentó a 40°C. Después de tres horas, la reacción se enfrió y se vertió en agua para precipitar. Después de la neutralización a pH 6, se aislaron 200 mg de un sólido castaño, 77%.
Procedimiento general 54 (4-{6-Amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-hidroxi-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-piperazin-1 -il-metanona: A 140 mg de éster terc-butílíco del ácido 4-[4-(6-amino-5-{1-[2,6-dicloro-3-(2,4,6-trimetoxi-benciloxi)-fen¡l]-etoxi}-piridin-3-il)-benzoil]-piperazin-1 -carboxílico (a partir del procedimiento general 53) se le añadió 1 ml de TFA y la solución se volvió inmediatamente de color rojizo seguido de la adición de 100 µl de trietilsilano 3 segundos después. La solución se volvió de color amarillo. Después de agitar durante cuatro horas, se añadieron 5 ml de tolueno y el disolvente se retiró al vacío. La cromatografía con MeOH al 10%/CH2CI2 a NH4OH del 0.5% al 1 %/MeOH del 9.5 al 9%/CH2CI2 al 90% llevó a 55 mg de un sólido blanco, rendimiento del 62%.
Procedimiento general 55 A18 2-(4-bromo-2-metoxifenoxi)etanol (8a): Se añadió carbonato potásico (1.4 g, 10 mmol) a una solución de carbonato de etileno (1.8 g, 20 mmol) y 4-bromo-2-metoxifenol (1.05 g, 5 mmol) en 5 ml de tolueno en una atmósfera inerte. La reacción se calentó a 115°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añadieron agua (50 ml) y acetato de etilo (2 x 100 ml) para agitar. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron, se filtraron y se evaporaron, consiguiendo un residuo oleoso amarillo. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 40?45% en hexanos), dando el compuesto 8a en forma de un aceite amarillo pardo claro (1 g; 4.13 mmol; rendimiento del 82.6%). EM (IQPA) (M+H)+ 246.
H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 2.83 (t, J = 6.3 Hz, 1 H) 3.84 (s, 3H) 3.89-4.01 (m, 2H) 4.03-4.13 (m, 2H) 6.78 (d, J = 8.3 Hz, 1 H) 6.99 (d, 1 H) 7.02 (d, 1 H). 4-bromo-1 -(2-cloroetoxi)-2-metoxibenceno (8b): Se añadió cloruro de tionilo (0.3 ml) a una solución del compuesto 1 en 1 ml de piridina en un baño de hielo. La reacción se agitó en el baño de hielo durante 10 minutos y después se calentó a 100°C durante 2 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó con HCl diluido (1 M). Se añadió CH2CI2 (2 x 100 ml) para extraer la solución acuosa. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y después se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 10?15% en hexanos), dando el compuesto 8b en forma de un aceite incoloro (485 mg; 1.84 mmol; rendimiento del 50.3%); EM (IQPA) (M+H)+ 264. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 3.81 (t, J = 6.2 Hz, 2H) 3.85 (s, 3H) 4.23 (t, J = 6.2 Hz, 2H) 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 1 H).
Compuesto 9: Los compuestos de fórmula 9 pueden formarse siguiendo el procedimiento ilustrativo: El compuesto A18 (1.3 equivalentes molares) se añade a una solución de haluro de arilo (0.51 mmol) en 7 ml de DME. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se añade d¡cloroD/'s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 1.5 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (20 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (50 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 9.
Compuesto 10: Los compuestos de fórmula 10 pueden formarse siguiendo el procedimiento ilustrativo: Se añade amina (7 equivalentes molares) a una solución del compuesto 9 (0.17 mmol) en 3 ml de 2-metoxietanol. La solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (20 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (50 ml x 2) para extraer la solución acuosa. La fase de EtOAc se seca sobre Na2SO4. El Na2SO se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo claro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 10.
Procedimiento general 56 13 Compuesto 14: Los compuestos de fórmula 14 pueden formarse siguiendo el procedimiento ilustrativo: Se añade hexametildisililazida de litio (1.2 equivalentes molares; 1 M en THF) a una solución de alcohol (1 mmol) en 2 ml de THF. La mezcla se agita a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 30 min y después se añade 5-bromo-2-cloropirimidina (1 equivalente molar). La solución resultante se calienta a 75°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (20 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (50 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 14.
Compuesto 11 : El Compuesto A18 (1.3 equivalentes molares) se añade a una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina o compuesto 14 (1 mmol) en 24 ml de DME. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se le añade dicloroD/'s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 3 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (50 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (100 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con EtOAc al 40- 55% en hexanos), dando el compuesto 11.
Compuesto 12: Se añade amina (2 equivalentes molares) a una solución del compuesto 11 en 3 ml de n-butanol. La mezcla de reacción se irradia en el microondas a 120°C durante 30 min. La mezcla resultante se vierte en una mezcla de H2O y EtOAc (100 ml; v:v: 1 :1 ). La fase orgánica se seca, se filtra y se evapora, dando un residuo oleoso pardo claro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 12.
Compuesto 13: Se añade ácido (16 equivalentes molares o menos) al compuesto 12 (0.14 mmol) a temperatura ambiente. La solución resultante se agita a temperatura ambiente o se calienta a 60°C durante 12 h. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, EtOAc y CH2CI2), dando el producto de amida deseado, el compuesto 13, en forma de un sólido de amarillento a blanco.
Procedimiento general 57 Compuesto 15: Se añadieron hidruro sódico (1.3 equivalentes molares) y RX (1.1 equivalentes molares) a una solución de 2-amino-5-bromopiridina (0.84 mmol) en 3 ml de DMF. La mezcla de reacción se irradia en el microondas a 100°C durante 20 min. La mezcla resultante se vierte en una mezcla de H2O y EtOAc (100 ml; v:v: 1 :1 ). La fase orgánica se seca, se filtra y se evapora, dando un residuo oleoso pardo claro. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 15.
Compuesto 16: El Compuesto A18 (1.3 equivalentes molares) se añade a una solución del compuesto 15 (0.25 mmol) en 5 ml de DME. La mezcla se purga varias veces con nitrógeno y después se añade diclorojb/s(tr¡fenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añade carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 0.8 ml de H2O y la solución resultante se calienta a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (50 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (100 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purifica por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 16.
Compuesto 17: Se añade ácido (16 equivalentes molares o menos) al compuesto 16 (0.114 mmol) a temperatura ambiente. La solución resultante se agita a temperatura ambiente o se calienta a 60°C durante 12 h. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, EtOAc y CH2CI2), dando el producto de amida deseado, el compuesto 17, en forma de un sólido de amarillento a blanco.
Procedimiento general 58 Se disolvió ácido 1-(í-butoxicarbonil)azetidin-3-carboxílico (1-1 ) (AXL016917, 1000 mg, 4.97 mmol) en MeOH (5 ml)/Tolueno (20 ml) y después se enfrió a 0°C. Después, se añadió gota a gota TMSCHNN (trimetilsilildiazometano) (7.45 mmol) durante 15 minutos observándose algo de burbujeo. El color comenzó siendo transparente y se volvió lentamente de color amarillo. La solución se agitó durante 10 minutos a 0°C y después se calentó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, la solución se concentró y se bombeó para retirar el tolueno, proporcionando 1.055 g de 3- met¡l-azetidin-1 ,3-d¡carboxilato de 1-f-butilo (1-2) que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificarse (rendimiento bruto del 99%). Se disolvió 3-metil-azetidin-1 ,3-dicarboxilato de 1 -terc-butilo (1055 mg, 4.90 mmol) en THF (17 ml) y después se enfrió a 0°C. Se añadieron secuencialmente MeOH (0.397 ml, 9.80 mmol) y LiBH4 (14.7 mmol). La reacción se calentó a temperatura ambiente durante 3 h. Después, se añadieron tartrato sódico potásico acuoso tetrahidrato al 10% (Sal de Rochelle) (30 ml) y EtOAc (30 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La fase orgánica se separó y después se secó (Na2SO ) y se concentró, proporcionando 674 mg de 3-(hidroximetil)azetidin-1 -carboxilato de f-butilo (1-3) en forma de un producto bruto (aceite transparente). El producto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación. Se disolvió 3-(hidroximetil)azetidin-1 -carboxilato de f-butilo (674 mg, 3.60 mmol) en CH2CI2 (13 ml, 0.25 M) y después se añadieron secuencialmente Et3N (1.0 ml, 7.20 mmol), DMAP (44 mg, 0.360 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (0.31 ml, 3.96 mmol) a 0°C realizándose lentamente la adición de MsCl. La solución se calentó a ta durante 1 h. Después de 15 h, se añadió NaHCO3 saturado acuoso (50 ml) y después el producto se extrajo con CH2CI2 (2 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron (Na2SO4), se concentraron y se purificaron por cromatografía ultrarrápida (Biotage Horizon- EtOAc al 10%/hexanos-EtOAc al 100%), proporcionando 962 mg de (1^4) en forma de un aceite (cuantitativo). Se combinó NaH (al 95%, 96 mg, 3.99 mmol) en DMF (10 ml) en atmósfera de N2 a ta. Después, se añadió 4-bromopirazol (533 mg, 3.63 mmol) y la mezcla se agitó a ta. Después de 30 minutos, se añadió (1 -4) y la solución se calentó a 95°C. Después de 2 h, se añadieron NH CI saturado acuoso (50 ml) y después EtOAc (50 ml). El extracto orgánico se secó (Na2SO4) y se concentró y después se llevó a través de una capa corta de gel de sílice con EtOAc al 50%/Hexanos, proporcionando 846 mg de (1-5) bruto que se usó directamente en la siguiente etapa (rendimiento bruto del 74%). Se combinaron (1-5) (846 mg, 2.68 mmol), (1-6) (815 mg, 3.21 mmol), [1 ,1 '-b/'s(difenilfosfino)-ferroceno)dicloropaladio (108 mg, 0.133 mmol) y KOAc (893 mg, 9.10 mmol) en DMSO (10 ml, purgado con N2 durante 10 minutos) y después la solución se calentó a 80°C. Después de 16 h, la solución se filtró a través de Celite y después se añadieron H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml). La fase orgánica se extrajo y se secó (Na2SO ), se concentró y después se pasó a través de un lecho corto de sílice con EtOAc al 50%/Hexano. El disolvente se concentró, proporcionando 1.22 g de (1-7) bruto que se usó directamente en la siguiente etapa. El éster bórico (17) (4144 mg, 11.4 mmol), ( ) (2890 mg, 7.60 mmol), dicloroD/'s(trifenilfosfina)paladio (II) (534 mg, 0.760 mmol), DME (40 ml, desgasificado durante 30 minutos con N2) y Na2CO3 1 N (40 ml, desgasificado durante 30 minutos con N2) se combinaron y se calentaron a 80°C. Después de 16 h, la reacción se enfrió a ta y se añadió EtOAc (80 ml). La solución se filtró a través de celite y después se añadió agua (80 ml). La fase orgánica se separó, se secó (Na2SO ) y se concentró. El producto se purificó por cromatografía ultrarrápida, proporcionando 1486 mg de (1-9) en forma de un sólido castaño (36%). Se preparó 1 gramo de resina de intercambio de iones DOWEX 50WX2-400 lavándola con H2O (500 ml), 1 :1 de H2O/MeOH, MeOH (5 x 250 ml), CH2CI2 (500 ml) y hexanos (500 ml). Después, el DOWEX se secó en una estufa de vacío a 40°C durante 1 día. Se disolvió (1-9) en MeOH y después se añadió DOWEX (588 mg, 1.096 mmol). La solución se agitó a ta durante 2 h. Después, la solución se filtro y la resina se lavó con MeOH (3 x 200 ml) y el lavado se desechó. Después, la resina se lavó con NH3 3.5 M/MeOH y se recogió. Después, la solución se concentró, proporcionando 374 mg de (1-10) en forma de un sólido gomoso (78%). Para formar compuestos de fórmula (1-11 ), puede seguirse el siguiente procedimiento ilustrativo. Se disuelve 1 equivalente molar de (1-10) en DMF o CH2CI2 y después se añade una base (3 equivalentes molares) y/o reactivo de acoplamiento (1.5 equivalentes molares). A la solución se le añade X-R (1.1 equivalentes molares), donde X es, por ejemplo, Cl, Br, I, OMs, COCÍ, CO, COOH, etileno o carbonato y R es un grupo deseado tal como los mostrados en los ejemplos de este documento o grupos similares. La solución resultante se agita a ta durante 4 h. Se añaden H2O y EtOAc y la fase orgánica se extrae, se seca (Na2SO ) y se concentra. El producto bruto puede purificarse por HPLC preparativa u otros procedimientos bien conocidos en la técnica, proporcionando el producto (1-11 ).
Procedimiento general 59 , ,, 2-11 (85%) 3-Azetidinol (2-2): Una mezcla de reacción de la sal HCl de N-benzhidrilazetidin-3-ol (2.76 g, 10.0 mmol) con hidróxido de paladio, Pd al 20% (base seca) sobre C (400 mg) en 50 ml de MeOH se hidrogenó a 379.21 1 kPa (55 psi) durante 48 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con MeOH. El filtrado se concentró al vacío en un baño de agua a temperatura ambiente. El residuo se trató con éter (3 x 30 ml) y el disolvente se decanta. El sólido se secó al aire, dando 571 mg del producto sal HCl (2-2) en forma de un sólido blanco (rendimiento del 52%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 3.33 (s, 1 H) 3.63-3.80 (m, 2H) 3.93-4.09 (m, 2H) 4.40-4.58 (m, 1 H) 6.18 (d, J = 6.32 Hz, 1 H). Éster ferc-butílico del ácido 3-hidroxi-azetidin-1 -carboxílico (3-3): A una solución agitada y enfriada (baño a 0°C) del compuesto (2-2) (570 mg, 5.20 mmol) en 10 ml de EtOH se le añadieron Et3N (1.8 ml, 13.0 mmol) y dicarbonato de di-rerc-butilo (1.702 g, 7.38 mmol). La mezcla resultante de la solución transparente se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución 0.5 N de ácido cítrico (30 ml) y salmuera (30 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO ) y después se concentró al vacío, dando 899 mg (2-3) en forma de un aceite transparente (52%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.42 (s, 9 H) 3.78 (dd, J = 9.47, 4.42 Hz, 2H) 4.13 (dd, J = 9.35, 6.57 Hz, 2H) 4.49-4.63 (m, 1 H). Éster ferc-butílico del ácido 3-metanosulfoniloxi-azetidin-1-carboxílico (2-4): A una solución del compuesto (2-3) (466 mg; 2.69 mmol) con Et3N (0.75 ml; 5.38 mmol) y 4-(dimetilamino)-piridina (33 mg, 0.269 mmol) en 10 ml de CH2CI2 a 0°C se le añadió cloruro de metanosulfonilo (0.25 ml 3.23 mmol). La mezcla resultante de la solución de color pardo se agitó de 0°C a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se inactivo con NaHCO3 y después se repartió entre CH2CI2 (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO ) y después se filtró a través de una capa de gel de sílice, eluída con hexano:EtOAc/1 :1 ; el filtrado se concentró al vacío, dando 614 mg (2-4) en forma de un aceite amarillo (rendimiento del 91 %). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.43 (s, 9 H) 3.05 (s, 3H) 4.08 (dd, J = 10.36, 4.29 Hz, 2H) 4.26 (dd, J = 10.36, 6.82 Hz, 2H) 5.11-5.26 (m, 1 H). 1 -(éster ferc-butílico del ácido 3-azetidin-1-carboxílico)-4-bromopirazol (2-6): Un tubo de microondas de 5 ml se cargó con el compuesto (2-4) (304 mg, 1.21 mmol); 4-bromopirazol (2^, 178 mg, 1.21 mmol) y NaH al 60% en aceite mineral (73 mg, 1.82 mmol) con 2 ml de DMF. La mezcla resultante se sometió a microondas a 110°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml); salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y después se concentró al vacío, proporcionando 360 mg de (2-6) en forma de un aceite amarillo (98%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.36-1.43 (m, 9 H) 4.08 (s, 2H) 4.18-4.31 (m, 2H) 5.12-5.22 (m, 1 H) 7.67 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H). 3-[4-(4,4,5,5-Tetrametil-1 ,3-dioxoborolan-2-il)-1 H-pirazol-1 -il]azetidin-1- carboxilato de terc-butilo (2-8): Una mezcla del compuesto (2-6) (225 mg, 0.74 mmol) y £>/s(pinacolato)diboro (2-7, 227 mg, 0.89 mmol) con KOAc (247 mg, 2.52 mmol) en 3 ml de DMSO se purgó con N2 durante 15 minutos y después se añadió PdCI2(dppf)2 CH2CI2 (30 mg, 2.52 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80°C en atmósfera de N2 durante una noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con EtOAc. El filtrado se extrajo con H2O (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y después se concentró al vacío. Después, el residuo se filtró a través de una capa de gel de sílice y se eluyó con hexano:EtOAc/3:2. El filtrado se concentró al vacío, dando 250 mg de (2-8) en forma de un aceite transparente (rendimiento del 97%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.18-1.27 (m, 9 H) 1.28-1.34 (m, 6 H) 1.41 -1.49 (m, 6 H) 4.22-4.33 (m, 2H) 4.36 (t, J = 8.59 Hz, 2H) 4.98-5.13 (m, 1 H) 7.83 (s, 2H). 3-(4-{6-Amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-1 /-/-pirazol-1 -il)azetidin-1 -carboxilato de terc-butilo (2-10): Una mezcla del compuesto (2-8) (459 mg; 1.31 mmol) y 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-yodopiridin-2-amina (2-9) (374 mg; 0.88 mmol) en 13 ml de éter dimetílico de etilenglicol anhidro (DME) se purgó con N2 durante 15 minutos, después se añadió Pd(ll)(PPh3)2CI2 (46 mg, 0.07 mmol) y continuó purgándose con N2 durante 15 minutos más. Se añadió una solución 1.0 N de Na2CO3 (3.9 ml; 3.9 mmol) después de purgar con N2 durante 15 minutos. La mezcla resultante se agitó a 85°C en atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con MeOH. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml); salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO ) y después se concentró al vacío. El residuo se purificó con un sistema Biotage (25 M, CH2CI2 al 100%; de CH2CI2 al 100% a CH2CI2 al 90% con MeOH al 10%) para recoger la fracción deseada, proporcionando 421 mg de (2-10) en forma de una grasa de color pardo (rendimiento del 92%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.17-1.26 (m, 9 H) 1.80 -1.87 (m, 3H) 4.04-4.18 (m, 2H) 4.20-4.33 (m, 2H) 4.34-4.41 (m, 1 H) 4.79 (s, 2H) 5.02 (d, J = 7.58 Hz, 1 H) 7.04 (t, J = 8.46 Hz, 1 H) 7.33-7.41 (m, 1 H) 7.44-7.52 (m, 1 H) 7.53-7.58 (m, 1 H) 7.59-7.65 (m, 1 H) 7.72-7.78 (m, 1 H); EMCL cale, para C24H26CI2FN5O3 (M+H) 523, encontrado 523. 5-(1-Azetidin-3-il-1 H-pirazol-4-il)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-2-amina (2-11 ): Una mezcla del compuesto (2-10) (421 mg; 0.81 mmol) con HCl 4.0 M en dioxano (2.0 ml; 8.1 mmol) en 5 ml de CH2CI2 se agitó a temperatura ambiente durante 2.0 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se trató con EtOAc. El sólido precipitado se retiró por filtración y se lavó bien con EtOAc y hexano y después se secó al vacío, dando 275 mg de (2-11 ) en forma de un sólido de color arena de la sal HCl (rendimiento del 81 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.79-1.89 (m, 3H) 3.56 (s, 1 H) 4.35 (s, 4H) 5.40 (s, 1 H) 6.23 (d, J = 6.57 Hz, 2H) 7.09 (s, 1 H) 7.40 -7.54 (m, 1 H) 7.59 (dd, J = 8.84, 5.05 Hz, 1 H) 7.73-7.83 (m, 1 H) 7.86 (s, 1 H) 8.12 (s, 1 H) 9.20 (s, 1 H). EMCL cale, para C19H18CI2FN5O (M+H) 423, encontrado 423.
Los compuestos de fórmula 2-12 pueden prepararse mediante el siguiente procedimiento ilustrativo: A una mezcla de reacción del compuesto (2-11 ) (1.0 equiv.) con Et3N (2.0 equiv.) en 2.0 ml de DMF a temperatura ambiente se le añade bromuro de alquilo (1.1 equiv.). La mezcla resultante se agita en atmósfera de N2 a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se reparte entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml); salmuera (50 ml). La fase orgánica se seca (Na2SO ) y después se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante un sistema Dionex (MeCN del 5% al 95%:H2O con tampón de HOAc al 0.1 %) para recoger la fracción deseada, proporcionando (2-12). Como alternativa, los compuestos de fórmula 2-12 pueden prepararse mediante el siguiente procedimiento ilustrativo: A una solución de reacción de alquilamina (1.0 equiv.) con ¡Pr2EtN (diisopropiletilamina) (3.0 equiv.) en 2.0 ml de DMF se le añade HATU (1.5 equiv.). Después de agitar durante 30 minutos, se añade el compuesto (2-11 ) (1.0 equiv.). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se reparte entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se seca (Na2SO4) y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante un sistema Dionex (MeCN del 5% al 95%:H2O con HOAc al 0.1%) para recoger el producto deseado, proporcionando (2-12).
Procedimiento general 60: 1-Oxa-6-azaespiro[2,5]octano-6-carboxilato de terc-butilo (3-2): Se preparó una solución de metiluro de dimetiisulfoxonio en atmósfera de N2 a partir de una dispersión al 60% de NaH en aceite mineral (440 mg; 11.0 mmol) y yoduro de trimetiisulfoxonio (2.421 g; 11.0 mmol) en 5 ml de DMSO anhidro. Se añadió gota a gota otra solución de carboxilato de 1-Boc-4-oxo-1 -piperidina (3-1. 1.993 g; 10.0 mmol) en 5 ml de DMSO. La mezcla resultante se agitó a 55°C durante 6 horas. La mezcla de reacción enfriada se vertió en hielo-H2O y se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml), después se secaron (Na2SO ) y después se concentraron al vacío, dando 1.4791 g de (3-2) en forma de un aceite amarillo (rendimiento del 69%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.37-1.52 (m, 11 H) 1.71-1.84 (m, 2H) 2.63-2.72 (m, 2H) 3.35-3.49 (m, 2H) 3.62-3.78 (m, 2H). 4-Hidroxi-4-{[4-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 /-/-pirazol-1 -¡l]metil}piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (3-4): Una mezcla del compuesto (3-2) (214 mg; 1.0 mmol) y 4-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 /-/-pirazol (3-3, 194 mg; 1.0 mmol) con una dispersión de NaH al 60% en aceite mineral (60 mg; 1.5 mmol) en 3 ml de DMF se agitó a 90°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO ) y se concentró al vacío, dando 361 mg de (3-4) en forma de una grasa amarilla (rendimiento del 89%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.21-1.34 (m, 12 H) 1.39-1.50 (m, 9 H) 1.56-1.78 (m, 4H) 3.14 (s, 2H) 3.72-3.91 (m, J = 32.34 Hz, 2H) 4.05 (s, 2H) 7.65 (s, 1 H) 7.80 (s, 1 H) 8.00 (s, 1 H). EMCL cale, para C2oH34BN3O5 (M+H) 408, encontrado 408, pureza de HPLC del 85%. 4-[(4-{6-Amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-1 /-/-pirazol-1-il)metil]-4-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (3-6): Una mezcla del compuesto (3-4) (361 mg; 0.89 mmol) y 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-yodopiridin-2-amina (3-5) (378 mg; 0.89 mmol) en 9.0 ml de éter dimetílico de etilenglicol, anhidro (DME) se purgó con N2 durante 15 minutos y después se añadió Pd(ll)(PPh3)2CI2 (32 mg, 0.05 mmol) y continuó purgándose con N2 durante 15 minutos más. Se añadió otra solución 1.0 N de Na2CO3 (3.9 ml; 3.9 mmol) después de purgar con N2 durante 15 minutos. La mezcla resultante se agitó a 85°C en atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con MeOH. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml); y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y después se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante un sistema Dionex (MeCN del 25% al 95%:H2O con tampón de HOAc al 0.1 %) para recoger la fracción deseada, proporcionando 147 mg de (3-6) en forma de un sólido blanco (rendimiento del 28%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.34-1.39 (m, 9 H) 1.70-1.77 (m, 2H) 1.79 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 3.06 (d, J = 12.63 Hz, 2H) 3.62 (s, 2H) 4.03 (s, 2H) 4.79 (s, 1 H) 5.66 (s, 2H) 6.08 (d, J = 6.82 Hz, 1 H) 6.86 (d, J = 1.52 Hz, 1 H) 7.44 (t, J = 8.72 Hz, 1 H) 7.51-7.58 (m, 2H) 7.58-7.65 (m, 2H) 7.73 (d, J = 1.52 Hz, 1 H) 7.78 (s, 1 H). EMCL cale, para C27H32CI2FN5O4 (M+H) 581 , encontrado 581 , pureza de HPLC del 87%. 4-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-1 /-/-pirazol-1-il)metil]piperidin-4-ol (3-7): Una mezcla del compuesto (3-6) (145 mg; 0.25 mmol) con HCl 4.0 M en dioxano (2.0 ml; 8.1 mmol) en 5 ml de CH2CI2 se agitó a temperatura ambiente durante 2.0 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante un sistema Dionex (MeCN del 5% al 95%:H2O con tampón de HOAc al 0.1 %) para recoger la fracción deseada, proporcionando 76 mg de (3-7) en forma de una grasa amarilla (rendimiento del 63%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.41-1.55 (m, 2H) 1.59-1.71 (m, 2H) 1.81 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 2.88-3.00 (m, 2H) 3.02-3.14 (m, 2H) 4.08 (s, 2H) 5.17 (s, 2H) 6.14-6.27 (m, J = 6.57 Hz, 1 H) 7.05 (s, 1 H) 7.40-7.49 (m, J = 8.72, 8.72 Hz, 1 H) 7.51-7.60 (m, J = 9.09, 4.80 Hz, 1 H) 7.63 (s, 1 H) 7.76 (s, 1 H) 7.91 (s, 1 H) 8.51 (s, 1 H) 8.81 (s, 1 H). EMCL cale, para C22H24CI2FN5O2 (M+H) 481 , encontrado 481 , pureza de HPLC del 98%. Anal. (C22H24CI2FN5O2x2.2HOAcx2.3H2O) C, H, N.
Procedimiento general 61 : á=d 2-[(4-Bromo-1 H-pirazol-1 -il)metil]ciclopropanocarboxilato de etilo (4-3): A una solución de reacción de 2-(hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de etilo (4-1 ) (577 mg; 4.0 mmol) con Et3N (1.1 ml; 8.0 mmol) y DMAP (49 mg; 0.4 mmol) en 12 ml de CH2CI2 a 0°C se le añadió cloruro de metanosulfonilo (0.4 ml; 4.8 mmol). La mezcla resultante de la suspensión de color pardo se agitó de 0°C a temperatura ambiente en atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla de reacción se inactivo con NaHCO3 y después se repartió entre CH2CI2 (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (50 ml); salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y después se filtró a través de una capa de gel de sílice, eluído con hexano:EtOAc/1 :1. El filtrado se concentró al vacío, dando 880 mg de 2-{[(metilsulfonil)oxi]metil}ciclopropanocarboxilato de etilo en forma de un aceite amarillo (rendimiento del 99%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 0.91-1.02 (m, 1 H) 1.26 (c, J = 6.99 Hz, 3H) 1.29-1.36 (m, 1 H) 1.63-1.74 (m, 1 H) 1.79-1.92 (m, 1 H) 3.02 (s, 3H) 3.99-4.24 (m, 4H). Se formó una mezcla de 2-{[(metilsulfonil)oxi]metil}ciclopropanocarboxilato de etilo (880 mg; 4.0 mmol), 4-bromopirazol (4-2, 588 mg, 4.0 mmol) y NaH al 60% en aceite mineral (240 mg, 6.0 mmol) con 3.0 ml de DMF. La mezcla resultante se agitó a 90°C en atmósfera de N2 durante cuatro horas. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml); salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO ) y después se concentró al vacío, proporcionando 812 mg de (4-3) en forma de un aceite amarillo (74%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 0.85 (dd, J = 7.96, 3.16 Hz, 1H) 0.88-0.98 (m, 1 H) 1.18-1.29 (m, 3H) 1.56-1.71 (m, 1 H) 1.79-1.94 (m, 1 H) 3.96-4.08 (m, 2H) 4.07-4.17 (m, 2H) 7.45 (d, J = 3.79 Hz, 2H). EMCL cale, para C10H13BrN2O2 (M+H) 274, encontrado 274, pureza de HPLC del 95%. 2-{[4-(4,4,5,5-Tetrametil-1 ,3-dioxoborolan-2-il)-1 H-pirazol-1 -il]metil}ciclopropanocarboxilato de etilo (4-4): Una mezcla del compuesto (4-3) (812 mg, 2.97 mmol) y b/s(pinacolato)diboro (906 mg, 3.57 mmol) con KOAc (991 mg, 10.10 mmol) en 10.0 ml de DMSO se purgó con N2 durante 15 minutos y después se le añadió PdCI2(dppf)2 CH2CI2 (122 mg, 0.15 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80°C en atmósfera de N2 durante una noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con EtOAc. El filtrado se extrajo con H2O (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y después se concentró al vacío. Después, el residuo se filtró a través de una capa de gel de sílice y se eluyó con hexano:EtOAc/3:1. El filtrado se concentró al vacío, dando 945 mg de (4-4) en forma de un aceite amarillo (rendimiento del 98%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 0.85 (dd, J = 7.83, 3.03 Hz, 1 H) 0.90-0.96 (m, 1 H) 1.20-1.24 (m, 3H) 1.29-1.34 (m, 12 H) 1.62-1.71 (m, 1 H) 1.84-1.97 (m, 1 H) 3.96 -4.07 (m, 1 H) 4.06-4.14 (m, 2H) 4.15-4.23 (m, J = 14.27, 6.44 Hz, 1 H) 7.73 (s, 1 H) 7.77 (s, 1 H). 2-[(4-{6-am¡no-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-1 /-/-pirazol-1-il)metil]ciclopropanocarboxilato de etilo (4-6): Una mezcla del compuesto (4-4) (643 mg; 2.01 mmol) y 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-yodopiridin-2-amina (4-5) (572 mg; 1.34 mmol) en 20.0 ml de éter dimetílico de etilenglicol anhidro (DME) se purgó con N2 durante 15 minutos, después se añadió Pd(ll)(PPh3)2CI2 (71 mg, 0.1 mmol) y continuó purgándose con N2 durante 15 minutos más. Se añadió otra solución 1.0 N de Na2CO3 (6.0 ml; 6.0 mmol) después de purgarse con N2 durante 15 minutos. La mezcla resultante se agitó a 85°C en atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con MeOH. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y después se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante un sistema Biotage (CH2CI2 25 M al 100%; de CH2CI2 al 100% a CH2CI2 al 90%:MeOH al 10%) para recoger la fracción deseada, proporcionando 600 mg de (4-6) en forma de una grasa de color pardo (rendimiento del 91 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 0.96-1.10 (m, 2H) 1.15 (t, J = 7.07 Hz, 2H) 1.74 (s, 3H) 1.79 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 3.95-4.14 (m, 4H) 5.66 (s, 2H) 6.08 (d, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.88 (s, 1 H) 7.43 (t, J = 8.72 Hz, 1 H) 7.49-7.62 (m, 2H) 7.73 (s, 1 H) 7.88 (s, 1 H). EMCL cale, para C23H23CI2FN4O3 (M+H) 494, encontrado 494, pureza de HPLC del 95%. Ácido 2-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-1 /-/-pirazol-1-il)metil]ciclopropanocarboxílico (4 7): A una solución de reacción del compuesto (4-6) (377 mg, 0.76 mmol) en 5.0 ml de MeOH a temperatura ambiente en atmósfera de N2 se le añadió otra solución de NaOH 2.0 N (2) (1.5 ml, 3.04 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío para retirar la mayor parte de MeOH y se acidificó con HCl 2 M a pH 4.0. La mezcla se extrajo con CH2CI2 (2 x 200 ml); las fases orgánicas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron (Na2SO4) y se concentraron al vacío, dando 324 mg de (4-7) en forma de un sólido amarillo, (rendimiento del 92%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 0.92-1.04 (m, 2H) 1.57-1.72 (m, 2H) 1.76 -1.90 (m, 3H) 3.98-4.18 (m, 2H) 6.46 (s, 2H) 6.89-7.02 (m, 1 H) 7.29-7.52 (m, 2H) 7.52-7.63 (m, 2H) 7.73 (d, J = 1.52 Hz, 1 H) 7.94 (s, 1 H) 12.19 (s, 1 H). EMCL cale, para C2?H19CI2FN4O3 (M-H) 463, encontrado 463, pureza de HPLC del 87%. 2-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-1 H-pirazol-1-il)metil]-/V-metilciclopropanocarboxamida (4-8) (R = Me, R' = H): A una solución de reacción de (4-7) (1.0 equiv.) con ¡Pr2EtN (2.0 equiv.) en 1.0 ml de DMF se le añadió HATU (1.5 equiv.). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió alquilamina (1.1 equiv.). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y se concentró al vacío. La muestra se convirtió en la base libre repartiéndose entre EtOAc (200 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (50 ml) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (Na2SO4) y se concentró al vacío. El residuo se trató con 1.0 ml de H2O y se liofilizó, proporcionando (4-8).
Procedimiento general 62: A una solución de 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (12.83 g, 33.76 mmol) en DMF anhidra (100 ml) se le añadieron dicarbonato de di-terc-butilo (21.25 g, 97.35 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0.793 g, 6.49 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas en atmósfera de nitrógeno. A la mezcla se le añadió una solución saturada de NaHCO3 (300 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 250 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (5 x 100 ml), NaHCO3 sat. y salmuera y después se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, la evaporación y el secado a alto vacío, se obtuvo 5-bromo-3-[(/?)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina protegida con di-boc en forma de un sólido espumoso blanquecino (19.59 g, rendimiento del 100%). 1H RMN (DMSO-de, 400 MHz) d 8.18 (d, 1 H), 7.83 (d, 1 H), 7.59 (dd, 1 H), 7.48 (t, 1 H), 6.25 (c, 1 H), 1.75 (d, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.19 (s, 9H). A una solución de la 5-bromo-3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina protegida con di-boc (19.58 g, 33.76 mmol) en DMSO (68 ml) se le añadieron acetato potásico (11.26 g, 114.78 mmol) y o/'s(pinacolato)diboro (10.29 g, 40.51 mmol). La mezcla se desgasificó, se cargó tres veces con nitrógeno y después se añadió Pd(dppf)CI2- CH2CI2 (1.38 g, 1.69 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó y se cargó tres veces con nitrógeno y después se agitó en un baño de aceite a 80°C en atmósfera de nitrógeno durante 12 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se filtró a través de una capa de celite que se lavó con acetato de etilo. La solución de acetato de etilo combinada (700 ml) se lavó con agua (5 x 100 ml) y salmuera (100 ml) y se secó sobre Na2SO . Después de la filtración y la concentración, el residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con EtOAc/Hexano (0%-50%), proporcionando 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina protegida con di-boc en forma de un sólido espumoso (20.59 g, rendimiento del 97%). 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) d 8.20 (d, 1 H), 7.70 (d, 1 H), 7.63 (dd, 1 H), 7.47 (t, 1 H), 6.20 (c, 1 H), 1.73 (d, 3H), 1.50-1.13 (m, 30H). A una solución de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-¡l)-p¡ridin-2-ilamina protegida con di-boc (20.34 g, 32.42 mmol) en CH2CI2 (80 ml) se le añadió una solución de HCl seco en dioxano (4 N, 40.5 ml, 162 mmol). La solución de reacción se agitó en un baño de aceite a 40°C en atmósfera de nitrógeno durante 12 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (400 ml) y después se lavó cuidadosa pero rápidamente con NaHCO3 saturado hasta que la fase de agua fue básica (pH >8). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO . Después de la filtración, la evaporación y el secado a alto vacío, se obtuvo 3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina en forma de un sólido espumoso blanquecino (13.48 g, rendimiento del 97%). 1H RMN (DMSO-de, 400 MHz) d 8.01 (d, 1 H), 7.27 (dd, 1 H), 7.17 (d, 1 H), 7.03 (t, 1 H), 6.12 (c, 1 H), 5.08 (s a, 2H), 1.81 (d, 3H), 1.30 (s, 6H), 1.28 (S.6H). A una solución agitada de 3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina (4.2711 g, 10.0 mmol) y éster terc-butílico del ácido 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-piperidin-1-carboxílico (véase el procedimiento 11 ) (3.9628 g, 12.0 mmol) en DME (40 ml) se le añadió una solución de Na2CO3 (3.1787 g, 30.0 mmol) en agua (10 ml). La solución se desgasificó y se cargó tres veces con nitrógeno. A la solución se le añadió Pd(PPh3)2CI2 (351 mg, 0.50 mmol). La solución de reacción se desgasificó y se cargó de nuevo tres veces con nitrógeno. La solución de reacción se agitó en un baño de aceite a 87°C durante aproximadamente 16 horas (o hasta que se consumió el éster de pinacol borano), se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (200 ml). La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de celite y se lavó con EtOAc. La solución de EtOAc se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con un sistema de EtOAc/hexano (de EtOAc al 0% a EtOAc al 100%), proporcionando éster terc-butílico del ácido 4-(4-{6-amino-5-[(R)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1 -carboxílico (3.4167 g, rendimiento del 65%, pureza de -95%) con un Rf de 0.15 (EtOAc al 50%/Hexanos). EM rn/e 550 (M+1 )+. A una solución de éster terc-butílico del ácido 4-(4-{6-amino-5- [(R)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-piperidin-1 -carboxílico (566.7 mg, 1.03 mmol) en metanol (5 ml) o diclorometano (30 ml) se le añadió HCl 4 N/dioxano (15 ml). La solución se agitó durante aproximadamente 1 hora o hasta que se completó la desprotección. Los disolventes se evaporaron y el residuo se disolvió en metanol y se purificó sobre una columna C-18 de HPLC preparativa de fase inversa eluyendo con acetonitrilo/agua con ácido acético al 0.1 % del 5% al 30% con un gradiente lineal. Después de la liofilización, se obtuvo acetato de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3- fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1/-/-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina en forma de un sólido blanco (410 mg, rendimiento del 78%, pureza de HPLC del 100%, 96.4% de ee). 1H RMN (DMSO-de, 400 MHz) d 7.84 (s, 1 H), 7.68 (d, 1 H), 7.50 (dd, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 7.37 (t, 1 H), 6.83 (d, 1 H), 6.02 (c, 1 H), 5.57 (s a, 2H), 4.09 (m, 1 H), 2.98 (m, 2H), 2.53 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.73 (d, 3H), 1.70 (m, 2H). EM m/e 450 (M+1 )+.
Procedimiento general 63: A una suspensión de 3-[1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-5-(1-piperidin-4-il-1/-/-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina en forma de la sal HCl (procedimiento 6) (150 mg, 0.288 mmol) en CH2CI2 (2 ml) se le añadió NEt3 (0.121 ml, 0.863 mmol) y se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reacción se enfrió a 0°C, se le añadió clorocarbonilmetiléster del ácido acético y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción se controló por CL-EM y después de que se completara la conversión en el producto deseado, se añadió agua (2 ml). La reacción se extrajo con EtOAc (4 x 10 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró, dando un rendimiento cuantitativo de 2-[4-(4-{6-amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1-il]-2-oxo-etil-éster del ácido acético (164 mg, cuant.). A una solución de 2-[4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1-il]-2-oxo-etil-éster del ácido acético (164 mg, 0.298 mmol) en MeOH (4 ml) se le añadió LiOH (7 mg, 0.298 mmol) disuelto en 1 ml de agua. La reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, momento en el que la CL-EM mostró la completa conversión en la 1-[4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1-il]-2-hidroxi-etanona. El producto se purificó sobre columna C-18 de HPLC preparativa de fase inversa eluyendo con acetonitrilo/agua que tenía ácido acético al 0.1 % del 10% al 40%.
Procedimiento general 64: Un matraz de 100 ml con una barra agitadora se secó en una estufa y se enfrió en una atmósfera de nitrógeno seco. El matraz estaba equipado con una tapa de jeringa de goma. El matraz se sumergió en un baño de hielo-agua en atmósfera de nitrógeno y se introdujeron 1.6 ml (1.6 mmol) de una solución 1.0 M de borano en THF. Después, se introdujo ácido 2-(4-{5-amino-6-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1-il)-2-metil-propiónico (procedimiento 5) (0.1 g, 0.221 mmol) en THF anhidro (1.0 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 5 horas y se añadió lentamente HCl 6 N (1.1 ml) y después se introdujeron H2O (1.1 ml) y MeOH (7.4 ml). La mezcla de reacción se agitó continuamente durante una noche. La mayor parte de los disolventes se evaporaron al vacío y después se usó una solución 1 N de NaOH para ajustar el pH a 11. Se añadió agua y la solución se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml) y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración y la concentración, el producto bruto se purificó con HPLC preparativa de fase inversa eluyendo con acetonitrilo/agua que contenía ácido acético al 0.1 % del 10% al 60%. Después de la liofilización de las fracciones puras, se obtuvo acetato de 2-(4-{6-amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-2-metil-propan-1 -ol en forma de un sólido blanco (21 mg, rendimiento del 22%).
Procedimiento general 65: A una solución agitada de éster terc-butílico del ácido 4-hidroxi-piperidin-1 -carboxílico (7.94 g, 39.45 mmol) en CH2CI2 (100 ml), enfriada a 0°C, se le añadió lentamente NEt3 (5.54 ml, 39.45 mmol) seguido de cloruro de metanosulfonilo (3.06 ml, 39.45 mmol) y DMAP (48 mg, 0.39 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A la mezcla se le añadió agua (30 ml). La extracción con CH2CI2 (3 x 30 ml) seguido del secado (Na2SO ) y la retirada del disolvente al vacío produjeron éster terc-butílico del ácido 4-metanosulfoniloxi-piperidin-1 -carboxílico en forma de un sólido blanco (11.00 g, rendimiento >99%). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 4.89 (m, 1 H), 3.69 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.95 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.46 (s, 9H). A una solución agitada de 4-bromo-pirazol (10.44 g, 71.03 mmol) en DMF anhidra (96 ml), enfriada a 0°C, se le añadió lentamente NaH (al 60% en aceite mineral) (3.13 g, 78.133 mmol). La solución se agitó durante 1 hora a 0°C. Se añadió lentamente éster terc-butílico del ácido 4-metanosulfoniloxi-piperidin-1 -carboxílico (19.82 g , 71.03 mmol) y la reacción se calentó a 100°C durante una noche o hasta gue se consumió el pirazol según RMN. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (20 ml) seguido de extracción con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con NaCI saturado acuoso (4 x 20 ml), se secaron con Na2SO4 y se concentraron, proporcionando éster terc-butílico del ácido 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-piperidin-1 -carboxílico en forma de un aceite naranja. El aceite se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc al 10%/hexanos a EtOAc al 25%/hexanos, proporcionando éster terc-butílico del ácido 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-piperidin-1 -carboxílico en forma de un sólido blanco (10.55 g, rendimiento del 45%) con un Rf = 0.4 (EtOAc al 25%/hexanos, usando yodo como colorante). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) d 7.46 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 4.23 (m, 3H), 2.88 (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.47 (s, 9H). A una solución de éster terc-butílico del ácido 4-(4-bromo-pirazol- 1-il)-piperidin-1 -carboxílico (500 mg, 1.515 mmol) en CH2CI2 (3 ml) se le añadió TFA (3 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que la EMCL indicó la finalización de la reacción. Los disolventes se retiraron al vacío y el residuo se disolvió en MeOH (15 ml). El pH de la solución se ajustó a 9 con resina de hidróxido, proporcionando 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-piperidina. A una solución de 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-piperidina (375 mg, 1.63 mmol) en DMF (3.26 ml) se le añadió NEt3 (230 µl, 1.63 mmol) y se agitó durante 5 minutos. Se añadió yoduro de metilo (Mel) (1.63 ml, Mel 1 M en DMF, preparado recientemente) y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le añadió agua y la solución se extrajo con EtOAc (4 x 10 ml). La solución orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4, se concentró y se secó al vacío, proporcionando 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-1-metil-piperidina (251 mg, rendimiento del 63%).
Procedimiento general 66: A una solución de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1H-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina (295 mg, 0.80 mmol) en DMF anhidra (4 ml) se le añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 30.7 mg, 0.80 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 0.5 h y después se introdujo éster terc-butílico del ácido 4-metanosulfoniloxi-piperidin-1 -carboxílico (223.5 mg, 0.80 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un baño de aceite a 90°C durante 0.5 h en atmósfera de nitrógeno y se enfrió a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió lentamente agua, y se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice, proporcionando éster tere- butílico del ácido 4-(4-{5-amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-pirazin-2-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1 -carboxílico en forma de un sólido blanco (265 mg, rendimiento del 59%). A una solución de éster terc-butílico del ácido 4-(4-{5-amino-6-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1 -carboxílico (265 mg, 0.48 mmol) en CH2CI2 se le añadió HCl 4 N/dioxano (4 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Después de la evaporación, el residuo se disolvió en metanol (2.5 ml) y se purificó sobre una columna C-18 de HPLC preparativa de fase inversa eluyendo con acetonitrilo/agua que contenía ácido acético al 0.1 % con un gradiente lineal de 10%-40%. Después de la liofilización, se obtuvo acetato de 3-[(R)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidín-4-il-1H-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina en forma de un sólido blanco (125 mg, rendimiento del 51 %).
Procedimiento general 67: Se añadió pentafluoruro de O-(7-azabenzotriazol-1-¡l)-?/,/V,?/',/V -tetrametiluronio y fósforo (HATU) (66 mg, 0.17 mmol) a una solución de ácido 2-(4-{6-amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-propiónico (69 mg, 0.16 mmol), trietilamina (0.024 ml, 0.17 mmol) y 3-dimetilamino-propilamina (0.022 ml, 0.17 mmol) en 1.6 ml de DMF. Después de agitar durante 3 horas, la reacción se concentró por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, metanol e hidróxido amónico, proporcionando 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-?/-(3-dimetilamino-propil)-propionamida. (41 mg, 50%).
Procedimiento general 68: Se añadió dietilazodicarboxilato (0.48 ml, 3.1 mmol) a una solución a 0°C de trifenilfosfina (0.80 g, 3.1 mmol) en THF (20 ml). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió 4-bromo-pirazol (0.30 mg, 2.0 mmol). Después de 5 minutos más de agitación, se añadió éster terc-butílico del ácido (2-hidroxietil)-metil-carbámico (0.45 g, 2.6 mmol). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. La reacción se enfrió a 0°C y se filtró. El filtrado se concentró por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de diclorometano, acetato de etilo, proporcionando éster terc-butílico del ácido [2-(4-bromo-pirazol-1-il)-etil]-metil-carbámico (541 mg, 87%).
Procedimiento general 69: Se añadió hidruro sódico (0.12 g, 4.9 mmol) a una solución de 4-bromo-4/-/-pirazol (0.60 g, 4.1 mmol) en DMF (10 ml). Después de agitar durante 10 minutos, se añadió una solución de éster metílico del ácido 2-cloro-propiónico en DMF (4 ml). Después de agitar durante 4 horas, la reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron por rotavapor. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de elución de acetato de etilo y hexanos, proporcionando éster metílico del ácido 2-(4-bromo-pirazol-1-il)-propiónico (733 mg, 77%).
Procedimiento general 70: Se añadió una solución de LiOH (34 mg, 1.4 mmol) en agua (0.4 ml) a una solución de éster metílico del ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-propiónico (70 mg, 0.15 mmol) en una mezcla de THF (1.5 ml) y MeOH (0.4 ml). Después de agitar durante una noche, la reacción se repartió entre diclorometano y salmuera semi-saturada. Se añadió una pequeña cantidad de etanol y el pH se ajustó a 7 con HCl 1 M. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron por rotavapor, dando el ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-propiónico (69 mg, 100%).
Procedimiento general 71 : A una solución agitada de éster metílico del ácido 4-(3-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-pirrolidin-2-carboxílico (105 mg, 0.21 mmol) en THF (5 ml) se le añadió CH3NH2 2 M en THF (1.06 ml, 2.12 mmol) y la mezcla se agitó y se calentó a 55°C durante 18 horas. La EMCL comprobó que la reacción estaba completa, el THF se retiró y el residuo se purificó por HPLC prep., dejando metilamida del ácido 4-(4-{6-amino-5-[1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1 -il)-pirrolidin-2-carboxílico (30 mg), rendimiento del 28.6%.
Procedimiento general 72: L = Br, OMs 4-(4,4,5,5-Tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol-1 - carboxilato de terc-butilo (21-1 ): Se añadieron dicarbonato de di-terc-butilo (7.2 equivalentes molares), 4-(dimetilamino)piridina (0.84 equivalentes molares) a una solución de 4,4,5,5-tetrametil-2-(1 H-pirazol-4-il)-1 ,3,2- dioxaborolano (6 mmol) en 40 ml de DMF. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añadió agua para interrumpir la reacción. Después, se añadió EtOAc para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO . El Na2SO se retiró por filtración y el filtrado se evaporó, dando un residuo oleoso pardo amarillo como compuesto 2X? (1.32 g; 4.56 mmol; 76%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.32 (s, 12 H) 1.63 (s, 9 H) 7.91 (s, 1 H) 8.37 (s, 1 H). El residuo se usó en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. Compuesto 21-3, mostrado con el ejemplo específico de 3-[1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-(1 /-/-pirazol-4-il)piridin-2-amina (21-3a): El compuesto 21-1 (1.0 equivalente molar) se añadió a una solución del compuesto 21 -2a (Compuesto 21-2, con sustituyentes R, dando 2,6-dicloro-3-fluorofenil) (1.92 mmol) en 20 ml de DME. La mezcla se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 30 minutos y después se le añadió diclorob/s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añadió carbonato sódico (3 equivalentes molares) en 4 ml de H2O y la solución resultante se calentó a 85°C durante 12 h. Las bases alternativas usadas fueron CsF y Cs2CO3 con 1 ó 2 equivalentes de éster bórico y a temperatura ambiente (CsF) o a 80°C (todos). A la mezcla de reacción se le añadió agua para interrumpir la reacción. Después, se añadió EtOAc (150 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retiró por filtración y el filtrado se evaporó, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con MeOH al 0- 10% en acetato de etilo), dando el producto deseado, el compuesto 2X 3a (2.05 g, rendimiento del 53.6%). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.60 (s, 1 H) 1.84 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 5.07 (s, 2H) 6.06 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.89 (d, J = 1.77 Hz, 1 H) 6.96-7.06 (m, 1 H) 7.22 -7.33 (m, 1 H) 7.67 (s, 2H) 7.80 (d, J = 1.52 Hz, 1 H).
Para fabricar compuestos de fórmula 21-4, puede usarse el siguiente procedimiento ilustrativo: se añade hidruro sódico (1.2 equivalentes molares) a una solución del compuesto 21-3 (0.87 mmol) en 10 ml de DMF. La mezcla se agita a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 30 min y después se añade el compuesto 21-6 (1 equivalente molar). La solución resultante se calienta a 85-90°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (20 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (50 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc en hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 21-4 (rendimiento del 20-50%).
Procedimiento general 73: 22-1 22-3 L = Br, Cl, COOH, COCÍ, OMs, carbonato de etileno, aldehido Los compuestos de fórmula 22-3 pueden prepararse mediante el siguiente procedimiento ilustrativo: el compuesto 22-2 (1.2 equivalentes molares) se añade a una solución del compuesto 22-1 (0.24 mmol) y base (3-5 equivalentes molares) y/o reactivo de acoplamiento (1 equivalente molar) en 5 ml de DMF. La mezcla se agita en una atmósfera de nitrógeno durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (20 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (50 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 22-3.
Procedimiento general 74: El siguiente procedimiento puede usarse para preparar derivados de piperidin-pirazol-2-aminopiridina. o 23-7a 4-(4-yodo-1 H-pirazol-1 -il)piperid¡n-1 -carboxilato de terc-butilo (23-1 a) Se añadió en porciones NaH (1.2 equiv., 0.68 mmol) a una solución agitada de 4-yodopirazol (0.57 mmol) en DMF (2 I) a 4°C. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a 4°C y después se añadió el compuesto 23-4 (1.1 equiv., 0.63 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante 12 h. La reacción se interrumpió con H2O y se extrajo varias veces con EtOAc.
Las fases orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron, proporcionando un aceite naranja. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 5% en pentano), dando el compuesto 23-1 a en forma de un sólido blanco (140 g, 66%). 4-r4-(4,4,5,5-Tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-l -carboxilato de terc-butilo (23-1 b) Se añadieron secuencialmente b/'s(pinacolato)diboro (1.4 equiv., 134 g, 0.52 mol) y acetato potásico (4 equiv., 145 g, 1.48 mol) a una solución del compuesto 23-1a (140 g, 0.37 mol) en 1.5 I de DMSO. La mezcla se purgó varias veces con nitrógeno y después se añadió dicloros s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equiv., 12.9 g, 0.018 mol). La mezcla resultante se calentó a 80°C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se lavó con NaCI saturado (500 ml x 2), se secó sobre Na2SO , se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 5% en hexanos), dando el compuesto 23: 1 b en forma de un sólido blanco (55 g, 40%). El compuesto 23-2 (1.0 equivalente molar) se añadió a una solución del compuesto 23-1 b (1.3 equivalentes molares) en 15 ml de DME. La mezcla se purgó varias veces con nitrógeno y después se añadió dicloroD/'s(trifenilfosfino)paladio (II) (0.05 equivalentes molares). A la mezcla de reacción se le añadió carbonato de cesio (3 equivalentes molares) en 4 ml de H2O y la solución resultante se calentó a 85°C durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añadió agua (10 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añadió EtOAc (150 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retiró por filtración y el filtrado se evaporó, dando un residuo oleoso pardo oscuro. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 75?100% en hexanos), dando el compuesto 23-3a (rendimiento del 61 %). Se añadió clorhidrato (19 equiv., 12 mmol) a una solución del compuesto 23-3a (0.63 mmol) en MeOH (4 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. El disolvente se evaporó y se añadió H2O (10 ml). Se añadió NaHCO3 saturado (ac.) para neutralizar la solución a pH 7. Se añadió acetato de etilo (100 ml x 2) para extraer la solución acuosa. La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó, dando el compuesto 23-5a en forma de un residuo sólido (0.6 mmol, rendimiento del 95%). Los compuestos de fórmula 23-7 pueden formarse de acuerdo con el siguiente procedimiento general: El compuesto 23-8 (1.2 equivalentes molares) se añade a una solución del compuesto 23-5a (0.24 mmol) y base (3-5 equivalentes molares) y/o reactivo de acoplamiento (1 equivalente molar) en 5 ml de DMF. La mezcla se agita en una atmósfera de nitrógeno durante 12 h. A la mezcla de reacción se le añade agua (20 ml) para interrumpir la reacción. Después, se añade EtOAc (50 ml x 2) para extraer la solución acuosa. Secar la fase de EtOAc sobre Na2SO4. El Na2SO4 se retira por filtración y el filtrado se evapora, dando un residuo oleoso. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (eluyendo con CH3OH, CH2CI2, EtOAc y hexanos), dando el producto deseado, el compuesto 23-7a.
Procedimiento general 75: Los compuestos 3-metoxi pueden prepararse a partir de los compuestos 3-fluoro correspondientes mediante el siguiente procedimiento general: A 4 ml de DMSO se le añaden 0.124 ml de etanol seguido de 32 mg de NaH. Después de agitar durante 30 minutos, se añaden 250 mg de 24-1 y la reacción se calienta a 40°C. Después de tres horas, la reacción se enfría y se vierte en agua para precipitar. Después de la neutralización a pH 6, se aisla el producto 24-2.
Procedimiento general 76: A una solución agitada de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1-(2.2-dimetil-[1 ,3]dioxolan-4-ilmetil)-1 /-/-pirazol-4-il]-piridin-2-ilamina (150 mg, 0.31 mmol) en THF (3 ml) y H2O (2 ml) se le añadió TFA (2 ml) a 0°C, la mezcla se agitó y se calentó a temperatura ambiente y después se calentó a 50°C durante 5 horas. La EMCL comprobó que la reacción estaba completa, el THF se retiró y el residuo se purificó por HPLC prep., dejando 3-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-propano-1 ,2-diol (102 mg), rendimiento del 74.2%.
Procedimiento general 77: A una solución agitada de 4-bromo-1 /-/-pirazol en DMF se le añadió hidruro sódico a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 30 minutos, se añadió [1 ,3]dioxolan-2-ona y la mezcla se agitó y se calentó lentamente a temperatura ambiente. La reacción se controló por CCF. Después de realizarse la reacción, se añadió EtOAc, se lavó con NaHCO3 saturado, agua y salmuera, se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por gel de sílice, eluyentes EtOAc y DCM al 10%, dando 2-(4-Bromo-pirazol-1-il)-etanol 0.22 g, rendimiento del 34%. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 7.49 (s, 1 H) 7.46 (s, 1 H) 4.18-4.23 (m, 2H) 3.93-3.98 (m, 2H) 3.09 (s, 1 H).
EJEMPLO 1 5-Bromo-3-f( ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡1-pirazin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 2, a partir de (1 S)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.53 (s, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.39 (t, 1 H), 6.48 (s, 2H), 6.41 (c, 1 H), 1.74 (d, 3H); EMCL: 381 [M+1]; Ki de c-Met: 0.796 µM.
EJEMPLO 2 Ácido 4-{5-amino-6-f(/?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxp-pirazin-2-il}- benzoico El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 3. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8.16 (s, 1 H), 7.84 (d, 2H), 7.77 (d, 2H), 7.53 (m, 1 H), 7.37 (t, 1 H), 6.64 (s, 2H), 6.53 (c, 1 H), 1.78 (d, 3H); EMCL: 422 [M+1]; ki de c-Met: 0.154 µM.
EJEMPLO 3 (4-(5-Am¡no-6-r( ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil-pirazin-2-il>-fenil)- piperazin-1-M-metanona El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 4. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8.11 (s, 1 H), 7.73 (d, 2H), 7.53 (m, 1 H), 7.37 (t, 1 H), 7.31 (d, 2H), 6.55 (m, 3H), 3.51 (a, 2H), 3.32 (a, 2H), 2.67 (a, 4H), 1.77 (d, 3H); EMCL: 490 [M+1]; ki de c-Met: 0.027 µM.
EJEMPLO 4 Éster terc-butílico del ácido 4-(4-{5-amino-6-r( ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro- fenil)-etoxfl-pirazin-2-il}-benzoil)-piperazin-1 -carboxílico El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 16 seguido del 20. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8.12 (s, 1 H), 7.72 (d, 2H), 7.50 (m, 1 H), 7.33 (t, 3H), 6.55 (m, 3H), 3.51 (a, 2H), 3.39 (m, 3H), 3.32 (a, 3H), 1.77 (d, 3H), 1.40 (s, 9H). EMCL: 590 [M+1]; ki de c-Met: 0.335 µM.
EJEMPLO 5 3-f(1 ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi1-5-r4-(piperazin-1- ilcarbonil)fen¡np¡ridin-2-amina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 20 seguido del 21 en forma de una mezcla racémica con el enantiómero S correspondiente del Ejemplo 119, seguido de separación por cromatografía quiral. El compuesto del título también se preparó en forma de un compuesto enantioméricamente puro partiendo del material de partida quiral 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.83 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 3.35 (s, 4H) 3.69 (s, 4H) 6.24 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.91-7.08 (m, 2H) 7.10 (d, J = 1.26 Hz, 1 H) 7.46 (t, J = 8.72 Hz, 1 H) 7.50 (s, 4H) 7.58 (dd, J = 8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.91 (d, J = 1.77 Hz, 1 H) 9.35 (s, 2H). EMCL: 490 [M+1]; ki de c-Met: 0.01 µM.
EJEMPLO 6 4-(6-amino-5-r(1R)-1-(2.6-dicloro-3-fluorofenil)etox¡1piridin-3-il)-?/-r2- (dimetilamino)etill-?/-metilbenzamida El compues VtoA título se preparó de acuerdo con el procedimiento 20. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.80 (d, J = 6.82 Hz, 3H) 1.97 (s, 3H) 2.19 (s, 3H) 2.30-2.42 (m, J = 1.77 Hz, 2H) 2.93 (s, 3H) 3.22-3.29 (m, 1 H) 3.44-3.61 (m, 1 H) 5.95 (s, 2H) 6.14 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.98 (d, J = 1.01 Hz, 1 H) 7.30-7.39 (m, 2H) 7.40-7.47 (m, 3H) 7.51-7.62 (m, 1 H) 7.87 (d, J = 1.77 Hz, 1 H) EMCL: 506 [M+1]; ki de c-Met: 0.01 µM.
EJEMPLO 7 (4-(6-amino-5-r(1 )-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxppiridin-3- il}fenil)metanol El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 27. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.84 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 4.49 (d, J = 5.81 Hz, 2H) 5.20 (t, J = 5.81 Hz, 1 H) 6.25 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.46-6.88 (m, 2H) 7.04 (d, J = 1.52 Hz, 1 H) 7.34 (s, 4H) 7.46 (t, J = 8.72 Hz, 1 H) 7.59 (dd, J = 8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.76 (d, J = 1.52 Hz, 1 H); EMCL: 408 [M+1]; ki de c-Met: 0.051 µM.
EJEMPLO 8 4-(6-amino-5-r(1 ?)-1-(216-dicloro-3-fluorofenil)etoxi1piridin-3-il>-?/-r3- (dimetilamino)prop¡n-?/-metilbenzamida El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 27. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) d ppm 1.60-1.73 (m, 2H) 1.80 (d, J = 6.57 Hz, 3H) 1.94 (s, 3H) 2.13 (s, 3H) 2.20-2.29 (m, 2H) 2.92 (s, 3H) 3.36-3.50 (m, 2H) 5.96 (s, 2H) 6.14 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.98 (s, 1 H) 7.37 (s, 2H) 7.40-7.51 (m, 3H) 7.55 (dd, J = 8.84, 4.80 Hz, 1 H) 7.86 (d, J = 1.77 Hz, 1 H); EMCL: 520 [M+1]; ki de c-Met: 0.01 µM.
EJEMPLO 9 4-(4-(6-Am¡no-5-f(1 ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi1piridin-3- il)benzoil)piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 20. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-D) d ppm 1.46 (s, 9 H) 1.86 (d, J = 6.82 Hz, 3H) 3.30-3.89 (m, 8 H) 4.90 (s, 2H) 6.11 (c, J = 6.57 Hz, 1 H) 6.98 (d, J = 1.52 Hz, 1 H) 7.01-7.10 (m, 1 H) 7.30 (dd, J = 8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.35-7.43 (m, 4H) 7.88 (d, J = 1.77 Hz, 1 H); EMCL: 590 [M+1]; ki de c-Met: 0.03 µM.
EJEMPLO 10 3-í(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi1-5-p-(1-metil-p¡peridin-4-il)-1H- pirazol-4-¡p-piridin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 62 usando 3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina y 4-(4-bromo-pirazol-1 -il)-1 -metil-piperidina (preparada de acuerdo con el procedimiento general 11 ). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.65 (s, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.31 (m.1 H), 7.06 (m, 1 H), 6.87 (s, 1 H), 6.08 (m, 1 H), 5.50 (s a, 2H), 4.18 (m, 1 H), 3.11 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.30 (m, 2H), 2.20 (m, 4H), 2.07 (s, 3H), 1.86 (d, J = 8 Hz, 3H); EMCL: 464 [M+1J; ki de c-Met: 0.01 µM.
EJEMPLO 11 1-f4-(4.(6-Amino-5-r(?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi1-piridin-3-il)- pirazol-1-il)-piperídin-1-¡p-2-hidroxi-etanona El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 63. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.72 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.08 (m, 1H), 5.00 (s a, 2H), 4.70 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.21 (s, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.18 (m, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.223 (m, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.86 (d, J = 8 Hz, 3H); EMCL: 508 [M+1]; ki de c-Met: 0.004 µM.
EJEMPLO 12 3-í( ?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi1-5-(1-p¡peridin-4-il-1r/-p¡razol-4- il)-piridin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 62 usando 3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina y 4-(4-bromo-pirazol-1 -il)-1 -ciclopentil-piperidina (preparada de acuerdo con el procedimiento general 11 usando bromociclopentano como reactivo de alquilación). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.73 (s, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.48 (s, 1 H), 7.31 (m, 1 H), 7.07 (m, 1 H), 6.88 (s, 1 H), 6.08 (m, 1 H), 4.64 (m, 1 H), 2.04 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.86 (d, J = 8 Hz, 3H), 1.73 (m, 2H); EMCL: 435 [M+1]; ki de c-Met: 0.02 µM.
EJEMPLO 13 3-r(?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil-5-(1-piper¡din-4-il-1r-pirazol-4- il)-piridin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 62. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.69 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.07 (m, 1H), 5.25 (s a, 2H), 4.30 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 2.96 (m, 2H), 2.26 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 1.86 (d, J = 8 Hz, 3H); EMCL: 450 [M+1]; ki de c-Met: 0.003 µM.
EJEMPLO 14 3-r( ?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil-5-(1-piperid¡n-4-il-1ry-pirazol-4- il)-pirazin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 66. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.86 (s, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 7.63 (m, 2H), 7.54 (m, 1 H), 7.37 (t, 1 H), 6.46 (c, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 4.10 (m, 1 H), 3.01 (m, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.85 (s, 2H), 1.75 (d, 3H), 1.67(dd, 1 H); EMCL: 451 [M+1]; ki de c-Met: 0.010 µM.
EJEMPLO 15 3-r(/?)-1-(2.6-Dicloro-3-fluoro-fenip-etoxi1-5-(1ry-pirazol-4-il)-pirazin-2- ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 3 usando 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-pirazin-2-ilamina y éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 , 3, 2]dioxaborolan-2-il)-pirazol-1 -carboxílico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 12.81 (s, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.36 (t, 1 H), 6.48 (c, 1H), 6.12 (s, 2H), 1.75 (d, 3H); EMCL: 368 [M+1]; ki de c-Met: 0.065 µM.
EJEMPLO 16 1-r4-(4.(5-Amino-6-r( ?)-1-(2.6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi1-pirazin-2-il)- pirazol-1-il)-piperidin-1-¡p-2-hidroxi-etanona El compuesto del título se preparó de acuerdo con los procedimientos 62 y 63, usando 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina como material de partida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.91 (s, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.49 (m, 1 H), 7.36 (t, 1 H), 6.46 (c, 1 H), 6.15 (s, 2H), 4.57 (a, 1 H), 4.40 (m, 2H), 4.12 (a, 2H), 3.77 (m, 1 H), 3.35 (m, 2H), 3.43 (m, 1 H), 3.16 (m, 2H), 1.75 (d, 3H); EMCL: 509 [M+1]; ki de c-Met: 0.015 µM.
EJEMPLO 17 3-r( ?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxn-5-p-(1-metil-piperidin-4-¡l)-1H- pirazol-4-in-pirazin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 62 usando 5-bromo-3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina y 4-(4-bromo-pirazol-1-il)-1-metil-piperidína (preparada de acuerdo con el procedimiento general 11 ). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.88 (s, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.49 (m, 1 H), 7.36 (t, 1 H), 6.46 (c, 1 H), 6.15 (s, 2H), 4.02 (m, 1 H), 2.84 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.00 (m, 4H), 1.85 (m, 3H), 1.75 (d, 3H); EMCL: 465 [M+1]; ki de c-Met: 0.03 µM.
EJEMPLO 18 1-f4.(4-(5-Amino-6-r( ?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi1-pirazin-2-il)- pirazol-1-il)-piperidin-1-in-2-dimetilamino-etanona El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 63 usando 3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1/-/-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina acoplada con ácido dimetilamino-acético en presencia de HOBt/EDC/trietilamina en DMF como se ha descrito en el procedimiento 5 usando 5-bromo-3-[(f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina como material de partida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.90 (s, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.49 (m, 1 H), 7.36 (t, 1 H), 6.47 (c, 1 H), 6.15 (s, 2H), 4.39 (m, 1 H), 4.16 (m, 1 H), 3.16 (m, 2H), 3.02 (m, 1 H), 2.75 (m, 1 H), 2.19 (s, 6H), 2.01 (m, 2H), 1.88 (s, 1 H), 1.75 (d, 3H).; EMCL: 536 [M+1]; ki de c-Met: 0.015 µM.
EJEMPLO 19 3-r( ?)-1-(2-Cloro-3,6-difluoro-fenil)-etoxil-5-(1-piperidin-4-il-1H-pirazol-4- il)-piridin-2-ilamina El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento 62 usando 5-bromo-3-[(f?)-1-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina como material de partida (de acuerdo con los procedimientos para la síntesis de 5-bromo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina a partir de (S)-1-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-etanol, obtenido en SynChem, Inc.). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.88 (s, 1H), 7.70 (s, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.38 (m, 1 H), 7.25 (m, 1 H), 6.99 (s, 1 H), 5.88 (m, 1 H), 5.48 (s a, 2H), 4.08 (m, 1 H), 2.96 (m, 2H), 2.53 (m, 1 H), 2.45 (m, 1 H), 1.89 (m, 1 H), 1.80 (m, 4H), 1.67 (m, 4H); EMCL: 434 [M+1]; ki de c-Met: 0.09 µM.
EJEMPLOS BIOLÓGICOS Se apreciará que, en cualquier serie dada de compuestos, se observará un intervalo de actividades biológicas. En sus aspectos actualmente preferidos, esta invención se refiere a nuevos compuestos capaces de modular, regular y/o inhibir la actividad de proteína quinasa. Los siguientes ensayos pueden emplearse para seleccionar aquellos compuestos que demuestran el grado óptimo de la actividad deseada.
Procedimientos de Ensayo El siguiente ensayo in vitro puede usarse para determinar el nivel de actividad y el efecto de los diferentes compuestos de la presente invención en una o más de las PK. Pueden diseñarse ensayos similares de acuerdo con las mismas indicaciones para cualquier PK usando técnicas bien conocidas en la técnica. Se proporciona una referencia bibliográfica. (Technikova-Dobrova Z, Sardanelli AM, Papa S FEBS Lett. 1991 Nov. 4; 292: 69-72). El procedimiento general es como sigue: los compuestos y reactivos del ensayo quinasa se introducen en pocilios de ensayo. El ensayo se inicia mediante la adición de la enzima quinasa. Los inhibidores enzimáticos reducen actividad medida de la enzima. En el ensayo espectrofotométrico acoplado continuo se determina la producción dependiente del tiempo de ADP por la quinasa mediante el análisis de la velocidad de consumo de NADH mediante la medición de la disminución de la absorbancia a 340 nm. A medida que la PK produce ADP, esta se reconvierte en ATP mediante reacción con fosfoenolpiruvato y piruvato quinasa. El piruvato también se produce en esta reacción. El piruvato se convierte posteriormente con lactato mediante reacción de lactato deshidrogenasa, que simultáneamente convierte NADH en NAD. NADH tiene una absorbancia medible a 340 nm mientras que NAD no. El protocolo actualmente preferido para realizar los experimentos espectrofotométricos acoplados continuos para PK específicas se proporciona a continuación. Sin embargo, la adaptación de este protocolo para determinar la actividad de compuestos contra otras RTK, así como para CTK y STK, está bien dentro del alcance del conocimiento de los especialistas en la técnica.
Ensayo espectrofotométrico acoplado continuo de HGFR Este ensayo analiza la actividad tirosina quinasa de HGFR sobre el sustrato peptídico Met-2, un péptido derivado del bucle de activación del HGFR.
Materiales y Reactivos: 1. Enzima de HGFR de Upstate (Met, activo) Cat. N° 14-526 2. Péptido Met-2 (Bucle de activación de HGFR) Ac- ARDMYDKEYYSVHNK (PM = 1960). Disolver en Hepes 200 mM, pH 7.5 en una solución madre 10 mM. 3. PEP 1 M (fosfo-enol-piruvato) en HEPES 200 mM, pH 7.5 4. NADH 100 mM (B-Nicotinamida Adenina Dinucleótido, forma reducida) en HEPES 200 mM, pH 7.5 5. MgCI2 4 M (Cloruro de Magnesio) en ddH2O 6. DTT 1 M (Ditiotreitol) en HEPES 200 mM, pH 7.5 7. 15 Unidades/ml de LDH (Deshidrogenasa Láctica) 8. 15 Unidades/ml de PK (Piruvato quinasa) 9. NaCI 5 M disuelto en ddH2O 10. Tween-20 (Calidad Proteica) solución al 10% 11. Tampón HEPES 1 M: Sal de sodio (ácido ?/-[2-hidroxietil]piperazin-/V-[2-etanosulfónico]). Disolver en ddH2O, ajustar el pH a 7.5, llevar el volumen a 1 I. Filtrar a 0.1 µm. 12. Agua de calidad de HPLC; Burdick y Jackson N° 365-4, 1 x 4 litros (o equivalente) 13. DMSO al 100% (SIGMA) 14. Costar N° 3880 - placas de semiárea de fondo liso transparentes negras para la determinación de K¡ y el % de inhibición. 15. Costar N° 3359 - placas de polipropileno de 96 pocilios, fondo redondo para diluciones en serie 16. Costar N° 3635 - placas UV de fondo plano transparentes para el % de inhibición 17. Beckman DU-650 con soportes de microcélulas 18. Cubeta microcelular en posición 4 Beckman Procedimiento: Preparación del tampón de dilución (DB) para la enzima (para 30 ml de prep). 1. La concentración final de DB es DTT 2 mM, NaCI 25 mM, MgCI2 5 mM, Tween-20 al 0.01 % y tampón HEPES 50 mM, pH 7.5. 2. Preparar HEPES 50 mM añadiendo 1.5 ml de HEPES 1 M en 28.1 ml de ddH2O. Añadir el resto de los reactivos. En un vial cónico de 50 ml, añadir 60 µl de DTT 1 M, 150 µl de NaCI 5 M, 150 µl de MgCI2 1 M y 30 µl de Tween-20 al 10% dando un volumen total de 30 ml. 3. Agitar vorticialmente durante 5-10 segundos. 4. Extraer una alícuota de DB a 1 ml/tubo y marcar los tubos como "DB HGFR" 5. Nota: Esto puede prepararse y almacenarse antes de tiempo. 6. Congelar las alícuotas no usadas en tubos de microcentrífuga en un congelador a -20°C.
Preparación de compuestos 1. Para la placa de dilución del compuesto, añadir 4 µl de solución madre 10 mM en la columna 1 de placa, y llevar el volumen a 100 µl con DMSO al 100%. 2. Establecer el procedimiento de dilución Precisión 2000. Una concentración final del compuesto 200 µM en DMSO al 50%, HEPES 100 mM (1 :2 de dilución en serie).
Preparación del tampón enzimático acoplado: 1. Concentración final en ensayo: Reactivo (Conc de la Solución Madre) Conc Final en Ensayo a PEP ( 1 M) 1 mM b NADH (100 mM) 300 µM c MgCI2 (4 M) 20 mM d DTT (1 M) 2 mM e ATP (500 mM) 300 µM f HEPES 200 mM (pH 7 5) 100 mM g Piruvato Quinasa (PK) 15 unidades/ml h Deshidrogenase Láctica (LDH) 15 unidades/ml i Péptido Met-2 (10 mM) 0 500 mM i HGFR 50 nM 2. Para 10 ml de un tampón de reacción añadir 10 µl de PEP 1 M, 33 µl de NADH 100 mM, 50 µl de MgCI2 4 M, 20 µl de DTT 1 M, 6 µl de ATP 500 mM, y 500 µl de péptido Met-2 10 mM en tampón HEPES 100 mM, pH 7 5 y agitar vorticialmente/mezclar. 3. Añadir enzimas de acoplamiento, LDH y PK, en la mezcla de reacción. Mezclar por inversión suave.
Procesamiento de las muestras: 1. Potencias del espectrofotómetro: i Longitud de onda de absorbancia (?) 340 nm n. Tiempo de Incubación: 10 m?n ni Tiempo de Procesamiento 10 min iv Temperatura 37°C 2. Añadir 85 µl de la mezcla de reacción CE en cada pocilio de placa de ensayo. 3. Añadir 5 µl del compuesto diluido en un pocilio de la placa de ensayo. 4. Añadir 5 µl de DMSO al 50% para el control negativo en la última columna de la placa de ensayo. 5. Mezclar con una pipeta de múltiples canales o agitador orbital. 6. Pre-incubar durante 10 minutos a 37°C. 7. Añadir 10 µl de HGFR 500 nM a cada pocilio de la placa de ensayo; la concentración final de HGFR es de 50 nM en un volumen final total de 100 µl. 8. Medir la actividad durante 10 minutos a ? = 340 nm a 37°C. Los siguientes ensayos in vitro pueden usarse para determinar el nivel de actividad y el efecto de los diferentes compuestos de la presente invención en una o más de las PK. Pueden diseñarse ensayos similares de acuerdo con las mismas indicaciones para cualquier PK usando técnicas bien conocidas en la técnica. Se realizan varios ensayos descritos en este documento en un formado ELISA (Ensayo de Sandwich Inmunoabsorbente Ligado a una Enzima) (Voller y col., 1980, "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay", Manual of Clinical Immunology, 2d. ed., Rose y Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., págs. 359-371 ). El procedimiento general es como sigue: un compuesto se introduce en células que expresan la quinasa de ensayo, de forma natural o recombinante, durante un período de tiempo seleccionado después del cual, si la quinasa de ensayo es un receptor, se añade un ligando que se sabe que activa el receptor. Las células se lisan y el lisado se transfiere a los pocilios de una placa de ELISA recubierta previamente con un anticuerpo específico que reconoce el sustrato de la reacción de fosforilación enzimática. Los componentes que no son sustrato del lisado celular se retiran por lavado y la cantidad de fosforilación en el sustrato se detecta con una fosfotirosina que reconoce específicamente el anticuerpo en comparación con células de control que no estaban en contacto con un compuesto de ensayo. Los protocolos actualmente preferidos para realizar los experimentos de ELISA con respecto a las PK específicas se proporcionan a continuación. Sin embargo, la adaptación de estos protocolos para determinar la actividad de los compuestos contra otras RTK, así como para CTK y STK, está bien dentro del alcance del conocimiento de los especialistas en la técnica. Otros ensayos descritos en este documento miden la cantidad de ADN fabricada en respuesta a la activación de una quinasa de ensayo, que es una medida general de una respuesta proliferativa. El procedimiento general para este ensayo es como sigue: un compuesto se introduce en células que expresan la quinasa de ensayo, de forma natural o recombinante, durante un período de tiempo seleccionado después del cual, si la quinasa de ensayo es un receptor, se añade un ligando que se sabe que activa el receptor. Después de la incubación durante al menos una noche, se añade un reactivo de mareaje del ADN tal como 5-bromodesoxiuridina (BrdU) o H3-timidina. La cantidad del ADN marcado se detecta con un anticuerpo anti-BrdU o midiendo la radiactividad y se compara con las células de control que no están en contacto con un compuesto de ensayo.
Ensayo de Transfosforilación de MET Este ensayo se usa para medir los niveles de fosfotirosina en un sustrato poli(ácido glutámico: tirosina, 4:1 ) como medio para identificar agonistas/antagonistas de la transfosforilación de MET del sustrato.
Materiales y Reactivos: 1. Placas Corning de ELISA de 96 pocilios, Catálogo de Corning N° 25805-96. 2. Poli(glu-tyr); 4:1 , Sigma, Cat. N° P 0275. 3. PBS, Catalogo de Gibco N° 450-1300EB. 4. HEPES 50 mM. 5. Tampón de bloqueo: disolver 25 g de albúmina de suero bovino, Cat. Sigma N° A-7888, en 500 ml de PBS, filtrar a través de un filtro de 4 µm. 6. Proteína de fusión GST purificada que contiene el dominio quinasa de Met, SUGEN, Inc. 7. Tampón de TBST. 8. DMSO acuoso al 10% (MilliQue H2O). 9. Adenosina-5'-trifosfato acuoso 10 mM (dH2O), Cat. de Sigma N° A-5394. 10. 2X tampón de dilución de quinasa: para 100 ml, mezclar 10 ml de HEPES 1 M a pH 7.5 con 0.4 ml de BSA al 5%/PBS, 0.2 ml de ortovanadato sódico 0.1 M y 1 ml de cloruro sódico 5 M en 88.4 ml de dH2O. 11. 4X mezcla de reacción de ATP: para 10 ml, mezclar 0.4 ml de cloruro de manganeso 1 M y 0.02 ml de ATP 0.1 M en 9.56 ml de dH20. 12. 4X mezcla de controles negativos: para 10 ml, mezclar 0.4 ml de cloruro de manganeso 1 M en 9.6 ml de dH2O. 13. Placas de polipropileno con fondo V de 96 pocilios NUNC, Catalogo de Applied Scientific N° S-72092. 14. EDTA 500 mM. 15. Tampón de dilución de anticuerpo: para 100 ml, mezclar 10 ml de BSA al 5%/PBS, 0.5 ml de Instant Milk Camation® al 5% en PBS y 0.1 ml de ortovanadato sódico 0.1 M en 88.4 ml de TBST. 16. Anticuerpo policlonal de conejo antifosfotirosina, SUGEN, Inc. 17. Anticuerpo de cabra anticonejo conjugado con peroxidasa de rábano picante, Biosource, Inc. 18. Solución de ABTS: para 1 I, mezclar 19.21 g de ácido cítrico, 35.49 g de Na2HPO4 y 500 mg de ABTS con suficiente dH2O para preparar 1 I. 19. ABTS/H2O2: mezclar 15 ml de solución de ABST con 2 µl de H2O2 cinco minutos antes del uso. 20. HCl 0.2 M Procedimiento: 1. Recubrir placas de ELISA con 2 µg de Poli(Glu-Tyr) en 100 µl de PBS, mantener durante una noche a 4°C. 2. Bloquear la placa con 150 µl de BSA al 5%/PBS durante 60 minutos. 3. Lavar la placa dos veces con PBS, después una vez con tampón Hepes 50 mM, pH 7.4. 4. Añadir 50 µl de la quinasa diluida a todos los pocilios. (La quinasa purificada se diluye con tampón de dilución de quinasa. La concentración final debe ser de 10 ng/pocillo). 5. Añadir a la placa 25 µl del compuesto de ensayo (en DMSO al 4%) o DMSO solo (al 4% en dH2O) para los controles. 6. Incubar la mezcla quinasa/compuesto durante 15 minutos. 7. Añadir 25 µl de MnCI2 40 mM a los pocilios de control negativo. 8. Añadir 25 µl de la mezcla ATP/MnCI2 a todos los demás pocilios (excepto a los controles negativos). Incubar durante 5 minutos. 9. Añadir 25 µl de EDTA 500 mM para interrumpir la reacción. 10. Lavar la placa 3x con TBST. 11. Añadir 100 µl de anticuerpo policlonal de conejo anti-Ptyr diluido 1 :10.000 en Tampón de Dilución de Anticuerpo a cada pocilio. Incubar, con agitación, a temperatura ambiente durante una hora. 12. Lavar la placa 3x con TBST. 13. Diluir el anticuerpo anticonejo conjugado con HRP de Biosource 1 :6.000 en tampón de dilución de anticuerpos. Añadir 100 µl por pocilio e incubar a temperatura ambiente, con agitación durante una hora. 14. Lavar la placa 1X con PBS. 15. Añadir 100 µl de la solución de ABTS/H2O2 a cada pocilio. 16. Si es necesario, interrumpir el desarrollo de la reacción con la adición de 100 µl de HCl 0.2 M por pocilio. 17. Leer las placas en un lector de ELISA Dynatech MR7000 con el filtro de ensayo a 410 nM y el filtro de referencia a 630 nM.
Ensayos de incorporación de brdu Los siguientes ensayos usan células diseñadas por ingeniería genética para expresar un receptor seleccionado y para después evaluar el efecto de un compuesto de interés en la actividad de la síntesis de ADN inducida por ligando determinando la incorporación de BrdU en el ADN. Los siguientes materiales, reactivos y procedimientos son generales para cada uno de los siguientes ensayos de incorporación de BrdU. Se observan cambios en ensayos específicos.
Materiales y reactivos generales: 1. El ligando apropiado. 2. Las células diseñadas por ingeniería genética apropiadas. 3. Reactivo de mareaje de BrdU: 10 mM, en PBS, pH 7.4 (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN). 4. FixDenat: solución de fijación (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN). 5. Anti-BrdU-POD: anticuerpo monoclonal de ratón conjugado con peroxidasa (Chemicon, Temecula, CA). 6. Solución del sustrato TMB: tetrametilbencidina (TMB, listo para usar, Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN). 7. Solución de lavado de PBS: 1X PBS, pH 7.4. 8. Albúmina de suero bovino (BSA), fracción V polvo (Sigma Chemical Co., Estados Unidos).
Procedimiento General: 1. Las células se siembran a 8000 células/pocilio en CS al 10%, Gln 2 mM en DMEM, en una placa de 96 pocilios. Las células se incuban durante una noche a 37°C en CO2 al 5%. 2. Después de 24 horas, las células se lavan con PBS, y después se mantienen sin suero en medio sin suero (DMEM CS al 0% con BSA al 0.1 %) durante 24 horas. 3. El día 3, el ligando apropiado y el compuesto de ensayo se añaden a las células simultáneamente. Los pocilios de control negativo reciben DMEM sin suero con sólo BSA al 0.1%; las células de control positivo reciben el ligando pero no el compuesto de ensayo. Los compuestos de ensayo se preparan en DMEM libre de suero con ligando en una placa de 96 pocilios, y se diluyen en serie para 7 concentraciones de ensayo. 4. Después de 18 horas de activación de ligando, el reactivo de mareaje de BrdU diluido (1 :100 en DMEM, BSA al 0.1 %) se añade y las células se incuban con BrdU (la concentración final es 10 µM) durante 1.5 horas. 5. Después de la incubación con reactivo de mareaje, el medio se retira por decantación y dando golpecitos a la placa invertida sobre papel secante. Se añade la solución de FixDenat se añade (50 µl/pocillo) y las placas se incuban a temperatura ambiente durante 45 minutos en un agitador de placas. 6. La solución de FixDenat se retira por decantación y dando golpecitos a la placa invertida sobre papel secante. Se añade leche (leche deshidratada al 5% en PBS, 200 µl/pocillo) como solución de bloqueo y la placa se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas. 7. La solución de bloqueo se retira por decantación y los pocilios se lavan una vez con PBS. Se añade solución anti-BrdU-POD (1 :200 de dilución en PBS, BSA al 1 %, 50 µl/pocillo) y la placa se incuba durante 90 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas. 8. El conjugado de anticuerpo se retira por decantación y se aclaran los pocilios cinco veces con PBS, y la placa se seca invirtiéndola y golpearla suavemente sobre un papel secante. 9. Se añade solución de sustrato TMB (100 µl/pocillo) y se incuba durante 20 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas hasta que el desarrollo del color es suficiente para la detección fotométrica. 10. La absorbancia de las muestras se mide a 410 nm (en modo de "longitud de onda dual" con un filtro que lee a 490 nm, como una longitud de onda de referencia) en un lector de placas ELISA Dynatech.
Ensayo de Incorporación de BrdU Inducido por HGF Materiales y Reactivos: 1. HGF humano recombinante (Cat. N° 249-HG, R&D Systems, Inc. Estados Unidos). 2. Células BxPC-3 (ATCC CRL-1687).
Materiales y Reactivos Restantes, como anteriormente.
Procedimiento: 1. Las células se siembran a 9000 células/pocilio en RPMI, FBS al 10% en una placa de 96 pocilios. Las células se incuban durante una noche a 37°C en CO2 al 5%. 2. Después de 24 horas, las células se lavan con PBS, y después se mantienen sin suero en 100 µl de medio sin suero (RPMI con BSA al 0.1 %) durante 24 horas. 3. El día 3, se añaden a las células 25 µl que contienen el ligando (preparado a 1 µg/ml en RPMI con BSA al 0.1 %; la conc. de HGF final es de 200 ng/ml) y los compuestos de ensayo. Los pocilios de control negativo reciben 25 µl de RPMI sin suero con sólo BSA al 0.1 %; los pocilios de control positivo reciben el ligando (HGF) pero no el compuesto de ensayo. Los compuestos de ensayo se preparan a cinco veces su concentración final en RPMI sin suero con ligando en una placa de 96 pocilios, se diluyen en serie dando 7 concentraciones de ensayo. Típicamente, la concentración final más alta del compuesto de ensayo es 100 µM, y se usan diluciones 1 :3 (es decir, el intervalo de concentración del compuesto de ensayo final es 0.137-100 µM). 4. Después de 18 horas de activación de ligando, se añaden a cada pocilio 12.5 µl del reactivo de mareaje de BrdU diluido (1 :100 en RPMI, BSA al 0.1 %) y las células se incuban con BrdU (la concentración final es de 10 µM) durante 1 hora. 5. Igual que en el procedimiento general. 6. Igual que en el procedimiento general. 7. La solución de bloqueo se retira por decantación y los pocilios se lavan una vez con PBS. Se añade solución anti-BrdU-POD (dilución 1 :100 en PBS, BSA al 1 %) (100 µl/pocillo) y la placa se incuba durante 90 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas. 8. Igual que en el procedimiento general. 9. Igual que en el procedimiento general. 10. Igual que en el procedimiento general.
Ensayo de Autofosforilación de HGFR celular En este ensayo se usaron células A549 (ATCC). Las células se sembraron en los medios de cultivo (RPMI + FBS al 10%) en placas de 96 pocilios y se cultivaron durante una noche a 37°C para la unión. Las células se expusieron a los medios de privación (RPMI + BSA al 0.05%). Las diluciones de los inhibidores se añadieron a las placas y se incubaron a 37°C durante una hora. Después, las células se estimularon añadiendo 40 ng/ml de HGF durante 15 minutos. Las células se lavaron una vez con Na3VO 1 mM en HBSS y después se usaron. Los lisados se diluyeron con Na3VO4 1 mM en HBSS y se transfirieron a una placa recubierta con anticuerpo de cabra anticonejo de 96 pocilios (Pierce) que se pre-recubrió con el anticuerpo anti-HGFR (Zymed Laboratories). Las placas se incubaron durante una noche a 4°C y se lavaron con Tween 20 al 1% en PBS 7 veces. HRP-PY20 (Santa Cruz) se diluyó y se añadió a las placas durante una incubación de 30 minutos. Después, las placas se lavaron de nuevo y se añadió el sustrato de TMB peroxidasa (Kirkegaard & Perry) y se incubó durante 10 minutos. Después, la reacción se interrumpió añadiendo H2SO 0.09 N. Las placas se midieron a una DO-450 nm usando un espectrofotómetro. Los valores de CI5o se calcularon mediante el ajuste de curva usando un análisis de cuatro parámetros. Los compuestos de la invención se midieron con respecto a la actividad de inhibición de HGFR; los datos se mostraron en cada ejemplo. Los datos de Ki se obtuvieron usando el ensayo espectrofotométrico acoplado continuo de HGFR y los datos de Cl50 se obtuvieron usando el ensayo de autofosforilación de HGFR celular, los cuales se han descrito anteriormente. Aunque la invención se ha ilustrado por referencia a realizaciones específicas y preferidas, los especialistas en la técnica reconocerán que pueden realizarse variaciones y modificaciones a través de la experimentación rutinaria y la práctica de la invención. De esta forma, la invención no pretende estar limitada por la descripción anterior, pero pretende estar definida por las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes. Todas las referencias citadas en este documento, incluyendo cualquier documento de prioridad, se incorporan en este documento como referencia en su totalidad.

Claims (6)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1. - Un compuesto enantioméricamente puro de fórmula 1 en la que Y es N o CR12; R1 se selecciona entre hidrógeno, halógeno, arilo C6- 12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, -O(CR6R7)nR4, -C(O)R4, -C(O)OR4, -CN, -NO2, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -C(O)NR4R5, -NR4C(O)R5, -C(=NR6)NR4R5, alquilo C?-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C2-8; y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por uno o más grupos R3; R2 es hidrógeno, halógeno, alquilo C?-?2, alquenilo C2-?2, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)pR5 o -C(O)NR4R5 y cada hidrógeno en R2 está opcionalmente sustituido por R8; cada R3 es independientemente halógeno, alquilo C?-?2, alquenilo C2-1
2. alquinilo C2-12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -N02, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, (CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5, cada hidrógeno en R3 está opcionalmente sustituido por grupos R8, y los grupos R3 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un arilo C6-?2, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2 o un grupo heteroalicíclico de 3-12 miembros; cada R4, R5, R6 y R7 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C?-?2, alquenilo C2-? , alquinilo C2-?2, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de nitrógeno, junto con el nitrógeno al que están unidos, pueden combinarse para formar un grupo heteroalicíclico de 3 a 12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros que contiene opcionalmente de 1 a 3 heteroátomos adicionales seleccionados entre N, O y S; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de carbono pueden combinarse para formar un cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, grupo heteroalicíclico de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros; y cada hidrógeno en R4, R5, R6 y R7 está opcionalmente sustituido por R8; cada R8 es independientemente halógeno, alquilo C?-?2, alquenilo C2-?2, alquinilo C2-?2, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12> heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -NH2, -CN, -OH, -O-alquilo CM2, -O-(CH2)n-cicloalquilo C3-12, -O-(CH2)n-arilo C6-12. -O- (CH2)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros) o -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros); y cada hidrógeno en R8 está opcionalmente sustituido por R11; cada R9 y R10 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C?.?2, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -NR C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5; R9 o R10 pueden combinarse con un átomo de anillo de A o un sustituyente de A para formar un cicloalquilo C3-?2, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, arilo C6-12 o un anillo heteroarilo de 5-12 miembros condensado con A; y cada hidrógeno en R9 y R10 está opcionalmente sustituido por R3; cada R11 es independientemente halógeno, alquilo C?.?2, alcoxi C1.12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12> heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -O-alquilo CM2, -O-(CH2)ncicloalquilo C3-?2, -O-(CH2)narilo C6-12, -O-(CH2)n(heteroalicíclico de 3-12 miembros), -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros) o -CN y cada hidrógeno en R11 está opcionalmente sustituido por halógeno, -OH, -CN, -alquilo d.12 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -O-alquilo C?-?2 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -CO, -SO o -SO ; R12 es hidrógeno, halógeno, alquilo CM2, alquenilo C2-12, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -N02, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(0)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, - ? y cada hidróg ,?e„no en R D1"2 está opcionalmente sustituido por R3; cada R13 es independientemente halógeno, alquilo C1-12, alquenilo C2-?2, alquinilo C2-?2, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -N02, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, (CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)pR5, -C(O)NR4R5, -(CR6R7)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros), -(CR6R7)n(cicloalquilo C3.12), -(CR6R7)n(arilo C6-?2), -(CR6R7)n(heteroarilo de 5-12 miembros), -(CR6R7)nC(O)NR4R5, o -(CR6R7)nC(O)R4, los grupos R13 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un grupo arilo C6-?2, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2 o heteroalicíclico de 3-12 miembros y cada hidrógeno en R13 está opcionalmente sustituido por R3; cada m es independientemente 0, 1 ó 2; cada n es independientemente 0, 1 , 2, 3 ó 4; cada p es independientemente 1 ó 2; o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 2.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que R2 es hidrógeno. 3.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que Y es N. 4.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que Y es N y R2 es hidrógeno. 5.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que Y es CR12. 6.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que Y es CR y R12 es H. 7.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que R1 es un grupo furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, pirídina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano, azitidina o fenilo y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por R
3. 8.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que R es un grupo heteroarilo de anillo condensado de 7 a 12 miembros y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por uno o más grupos R3. 9.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que R1 es hidrógeno. 10.- El compuesto de la reivindicación 1 , en el que R1 es un halógeno. 11.- Un compuesto enantioméricamente puro de fórmula la 1a en la que: Y es N o CH; R1 es un grupo furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano, azitidina o fenilo; y cada hidrógeno en R1 está opcionalmente sustituido por R3; cada R3 es independientemente halógeno, alquilo C?.12, alquenilo C2-12, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, -(CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5, cada hidrógeno en R3 está opcionalmente sustituido por R8 y los grupos R3 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un grupo arilo C6-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3-?2 o heteroalicíclico de 3-12 miembros; cada R4, R5, R6 y R7 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C1-12, alquenilo C2-12, alquinilo C2-?2, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12> heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de nitrógeno, junto con el nitrógeno al que están unidos, pueden combinarse para formar un grupo heteroalicíclico de 3 a 12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros que contiene opcionalmente de 1 a 3 heteroátomos adicionales seleccionados entre N, O y S; o dos cualquiera de R4, R5, R6 y R7 unidos al mismo átomo de carbono pueden combinarse para formar un grupo cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroalicíclico de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-12 miembros; y cada hidrógeno en R4, R5, R6 y R7 está opcionalmente sustituido por R8; cada R8 es independientemente halógeno, alquilo C?-?2, alquenilo C2-12, alquinilo C2-12, cicloalquilo C3-?2, arilo Cß-12. heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -NH2, -CN, -OH, -O-alquilo C?-12, -O-(CH2)ncicloalquilo C3-12, -O-(CH2)narilo Cß.12, -O-(CH2)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros) o -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros); y cada hidrógeno en R8 está opcionalmente sustituido por R11; cada R9 y R10 es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C?-?2, cicloalquilo C3-?2, arilo Cß-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nNCR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)PR5 o -C(O)NR4R5; R9 o R10 puede combinarse con un átomo de anillo de A o un sustituyente de A para formar un anillo cicloalquilo C3-12, heteroalicíclico de 3-12 miembros, arilo C6-12 o heteroarilo de 5-12 miembros condensado con A; y cada hidrógeno en R9 y R10 está opcionalmente sustituido por R3; cada R11 es independientemente halógeno, alquilo C?.?2, alcoxi C?.?2, cicloalquilo C3-?2, arilo Cß-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -O-alquilo CM2, -O-(CH2)nCicloalquilo C3-12, -O-(CH2)narilo C-6-12. -O-(CH2)n(heteroalic¡clilo de 3-12 miembros), -O-(CH2)n(heteroarilo de 5-12 miembros) o -CN, y cada hidrógeno en R11 está opcionalmente sustituido por halógeno, -OH, -CN, -alquilo CM2 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -O-alquilo C?_?2 que puede estar parcial o totalmente halogenado, -CO, -SO o -SO2; cada R13 es independientemente halógeno, alquilo C?-12, alquenilo C2-12, alquinilo C2_?2, cicloalquilo C3-?2, arilo C6-12, heteroaliciclilo de 3-12 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros, -S(O)mR4, -SO2NR4R5, -S(O)2OR4, -NO2, -NR4R5, -(CR6R7)nOR4, -CN, -C(O)R4, -OC(O)R4, -O(CR6R7)nR4, -NR4C(O)R5, -(CR6R7)nC(O)OR4, -(CR6R7)nOR4, -(CR6R7)nC(O)NR4R5, -(CR6R7)nNCR4R5, -C(=NR6)NR4R5, -NR4C(O)NR5R6, -NR4S(O)pR5, -C(O)NR4R5, (CR6R7)n(heteroaliciclilo de 3-12 miembros), -(CR6R7)n(cicloalquilo C3-?2), -(CR6R7)n(arilo C6-12), -(CR6R7)n(heteroarilo de 5-12 miembros), -(CR6R7)nC(O)NR4R5, o -(CR6R7)nC(O)R4, los grupos R13 en átomos adyacentes pueden combinarse para formar un grupo arilo C6-12, heteroarilo de 5-12 miembros, cicloalquilo C3- 2 o heteroalicíclico de 3-12 miembros y cada hidrógeno en R13 está opcionalmente sustituido por R3; cada m es independientemente 0, 1 ó 2; cada n es independientemente 0, 1 , 2, 3 ó 4; cada p es independientemente 1 ó 2; o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 12.- Un compuesto enantioméricamente puro seleccionado entre el grupo compuesto por 5-Bromo-3-[(fi)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etox¡]-pirazin-2-ilamina; 5-yodo-3-[(r?)1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-¡lamina; 5-bromo-3-[1 (f?)-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina; ácido 4-{5-Amino-6-[(f?)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzoico; (4-{5-Amino-6-[(r?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-fenil)-piperazin-1 -il-metanona; éster terc-butílico del ácido 4-(4-{5-Amino-6- [(r?)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzoil)-piperazin-1-carboxílico; 3-[(1 R)A -(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-[4-(piperazin-1 -ilcarbonil)fenil]piridin-2-amina; 4-{6-amino-5-[(1 R)A -(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-?/-[2-(dimetilamino)etil]-/\/-metilbenzamida; (4-{6-amino-5-[(1 f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]pir¡din-3-il}fenil)metanol; 4-{6-amino-5-[(1 R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-?/-[3-(dimetilamino)propil]-/V-metilbenzamida; 4-(4-{6-amino-5-[(1 f?)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}benzoil)piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo; 3-[(f?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1-(1-metil-piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]-piridin-2-ilamina; 1-[4-(4-{6-Amino-5-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-piperidin-1-il]-2-hidroxi-etanona; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1 /-/-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina; S-K^J-I-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1H-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidin-4-il-1 /-/-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina; 3-[(í?)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1 /-/-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina; 1 -[4-(4-{5-Amino-6-[(f?)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1 -il)-piperidin-1 -il]-2-hidroxi-etanona; 3-[(R)A -(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1-(1-metil-piperidin-4-il)-1H-p¡razol-4-il]-pirazin-2-ilamina; 1 -[4-(4-{5-Amino-6-[(R)-1 -(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1 -il)-piperidin-1 -il]-2-dimetilamino-etanona; 3-[(f?)-1 -(2-Cloro-3,6-difluoro-fenil)-etoxi]-5-(1 -piperidin-4-il-1 H-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina; o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo. 13.- El uso de un compuesto, sal, hidrato o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en la fabricación de un medicamento útil para tratar el crecimiento celular anormal en un mamífero. 14.- El uso que se reclam en la reivindicación 13, en donde el crecimiento celular anormal es cáncer. 15.- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto, sal, hidrato o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1 -12 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
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