ME01947B

ME01947B - Deglikozilovani i desijalidovani dugi pentraksin ptx3

Info

Publication number: ME01947B
Application number: MEP-2011-356A
Authority: ME
Inventors: Santis Rita De; Giovanni Salvatori; Paolo Carminati; Antonio Inforzato
Original assignee: Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date: 2004-10-08
Filing date: 2005-09-28
Publication date: 2012-02-29
Also published as: CN101035805A; SI1797120T1; ATE509950T1; PL1797120T3; CN101035805B; ITRM20040489A1; EP1797120A1; CA2580426A1; AU2005291280B2; US20100209442A1; TW200628488A; EP1797120B1; JP5014999B2; AU2005291280A1; BRPI0516554A; JP2008515846A; US20070249021A1; WO2006037744A1; KR20070083769A; CY1112440T1

Description

Opis pronalaska

Predmetni pronalazak se odnosi na funkcionalno aktivni, potpuno deglikozilovani dugi pentraksin PTX3.

Predmetni pronalazak se posebno odnosi na funkcionalno aktivni, potpuno deglikozilovani dugi pentraksin PTX3 i na desijalidovani dugi pentraksin PTX3, na procese za njihovo dobijanje, na farmaceutske kompozicije koje sadrže ove supstance i na njihovu primenu za dobijanje leka za lečenje bolesti kod kojih je indikovana primena dugog pentraksina PTX3, a naročito kod infektivnih bolesti, zapaljenskih bolesti uključujući autoimune bolesti i bolesti izazvane infarktom tkiva, bolesti kostiju i hrskavice, kao i za lečenje poremećaja plodnosti kod žena i za autologe vakcine za lečenje tumora.

Stanje tehnike

Dugi pentraksin PTX3 je identifikovan diferencijalnim skriningom iz biblioteke cDNK faga dobijenih od humanih endotelijalnih ćelija (HUVEC) podvrgnutih tretmanu sa ILIp (Breviario, et al., 1992, J. Biol. Chem., 267: 22190-22197). Njegova nukleotidna sekvenca je opisana u NCBI bazi podataka pod pristupnim brojem X63613. cDNK PTX3 kodira jedan protein od 381 aminokiselinskih ostataka koji je karakterisan sa signalnim peptidom za sekreciju (ostaci 1-17), sa N-terminalnim domenom (ostaci 18-178) i sa C-terminalnim domenom (ostaci 179-381). Gen humanog dugog pentraksina PTX3 mapira na hromozomu 3 u q25. 2 regionu i karakterisan je sa 3 egzona locirana na 6. 72 kb genomske DNK.

Rekombinantni PTX3, koji je dobijen prečišćavanjem iz supematanta, odnosno izbistrene tečnosti CHO ćelija stabilno inficiranih sa plazmidnim vektorom pSG5h-PTX3 koji sadrži humani cDNK PTX3, analiziran sa SDS-PAGE u redukcionim uslovima, ima izmerenu

molekulsku težinu od 45 kDa (Bottazzi, et al., J. Biol. Chem., 1997; 272: 32817-32823). Njegova aminokiselinska sekvenca pokazuje potencijalno glikozilaciono mesto na ostatku 220. Tretiranje PTX3 sa N-glikozidazom F dovodi do redukcije njegove molekulske težine na približno 42 kDa (određeno pomoću SDS-PAGE), što je u skladu sa vrednosti izračunatom na osnovu same aminokiselinske sekvence.

Ovaj rezultat potvrđuje da je PTX3 N-glikozilovan sa udelom šećera koji iznosi približno 12% molekulske težine. Analizom proteina analiziranog sa SDS-PAGE u neredukcionim uslovima određena je molekulska težina od približno 450 kDa (Bottazzi, et al., J. Biol. Chem., 1997; 272: 32817-32823). Ovi rezultati jasno ukazuju daje PTX3 najvećim delom organizovan u dekameričnu strukturu formiranjem intermolekulskih disulfidnih mostova između cisteinskih ostataka pojedinačnih monomera.

Međutim, protokol deglikozilacije koji je predložen u gore navedenom radu ne dozvoljava dobijanje funkcionalno aktivnog PTX3, zbog činjenice da su neophodne i denaturacija, i redukcija disulfidnih mostova proteina da bi se on izvršio.

Zbog gubitka svojih funkcionalnih karakteristika protein koji se dobij a metodom koji su opisali Bottazzi et al. ne može se primeniti kao lek. Međutim, nije sugerisana primena deglikozilovanog pentraksina.

Predmetni pronalazak rešava ovaj problem realizacijom funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog pentraksina PTX3.

Za pregled pentraksina, vidi H. Gewurz, et al., Current Opinion in Immunology, 1995, 7: 54-64.

Dobro su poznate ranije primene PTX3.

U međunarodnoj prijavi patenta WO 99/32516, koju je podneo aktuelni podnosilac prijave, opisan je dugi pentraksin PTX3 i njegova primena za terapiju infektivnih ili zapaljenskih bolesti ili tumora.

U WO 02/38169 je opisana primena dugog pentraksina PTX3 za dobijanje leka koji se može primeniti za lečenje bolesti koje su povezane sa abnormalnom aktivacijom faktora rasta FGF-2.

U WO 02/36151 je opisano lečenje autoimunih bolesti primenom dugog pentraksina

PTX3.

U WO 03/011326 je opisana primena dugog pentraksina PTX3 za lečenje neplodnosti kod žena.

U WO 03/084561 je opisana primena dugog pentraksina PTX3 za dobijanje leka za lečenje tumora koji su povezani sa abnormalnom aktivacijom faktora rasta FGF-8.

U WO 03/072603 je opisana primena dugog pentraksina PTX3 za dobijanje autologih vakcina za lečenje tumora.

PTX3 sa kratkim pentraksinima CRP i SAP deli sposobnost da se vezuje za Clq, komponentu sistema komplementa. Vezivanje PTX3 za Clq je zasićeno sa Kd od 7, 4 x 10-8 M. Kinetičke studije bimolekulskih interakcija između PTX3 i Clq koje su izvršene primenom BIAcore omogućile su da bude izmeren Kon od 2, 4 x 105 M-1s-1 i Koff 4 x 104 s-1 (Bottazzi, et al, J. Biol. Chern,, 1997; 272: 32817-32823).

Komparativna analiza homologije sekvenci između PTX3 i kratkih pentraksina otkrila je supstancijalnu homologiju C- terminalnog domena PTX3 sa ćelom sekvencom CRP i SAP (Breviario, et al., 1992, J. Biol. Chem., 267: 22190-22197). I CRP, i SAP se nadmeću za vezivanje za Clq sa PTX3, što sugeriše da pentraksini prepoznaju isti region na Clq i da je C-terminalni domen PTX3 mesto vezivanja za Clq. In-vitro studije su pokazale da PTX3 aktivira klasični put komplementa.

Eksperimentalni i klinički dokazi pokazuju da su funkcionalne abnormalnosti komplementa povezane sa većom podložnosti infekcijama patogenima, što dokazuje esencijalnu funkciju urođenog imunog sistema u zaštiti od infekcija (Roos, et al., 2002, Immunobiol., 205: 595-609). Dalje, u oblasti medicine jako je izražena potreba za lekovima koji mogu da podstaknu i pojačaju imuni odgovor na mikrobne infekcije posredovan komplementom.

Pored toga, stručnjaci iz odgovarajuće oblasti traže lekove koji su aktivniji i mogu delovati u sinergiji sa drugim lekovima.

Suština pronalaska

Sada je kao iznenađujuće otkriveno da uklanjanje sijalinske kiseline sa kraja glikozidnog lanca ili potpuno uklanjanje glikozidne grupe iz PTX3 dovodi do veoma značajnog povećanja sposobnosti ovog proteina da aktivira klasični put komplementa.

Takođe je otkriveno da su PTX3 bez sijalinske kiseline (desijalidovani) i deglikozilovani PTX3 korisni agensi za prevenciju ili lečenje infektivnih bolesti, a naročito gljivičnih, bakterijskih ili virusnih infekcija u nižoj dozi od onih doza koje se koriste za nemodifikovani PTX3. Takođe je otkriveno da se PTX3 bez sijalinske kiseline (desijalidovani) i deglikozilovani PTX3 mogu primeniti za prevenciju ili lečenje bolesti koje se već leče sa prirodnim PTX3, a naročito zapaljenskih bolesti uključujući autoinune bolesti, tumore, bolesti zbog abnormalne aktivacije faktora rasta FGF-2, poremećaje plodnosti kod žena, bolesti kostiju i hrskavice i za dobijanje autologih vakcina za lečenje tumora.

Takođe je otkriveno da se i deglikozilovani i desijalidovani PTX3 može primeniti za preventivnu vakcinaciju protiv patogena, koji teži da podstakne imuni odgovor adaptivnog tipa.

Jedan cilj predmetnog pronalaska je onda funkcionalno aktivni, deglikozilovani dugi pentraksin PTX3.

Sledeći cilj predmetnog pronalaska je funkcionalno aktivni, desijalidovani dugi pentraksin PTX3.

Sledeći cilj predmetnog pronalaska sadrži procese za dobijanje napred navedenih proteina.

Sledeći cilj predmetnog pronalaska sadrži farmaceutske kompozicije koje sadrže funkcionalno aktivni, deglikozilovani ili desijalidovani pentraksin PTX3 kao aktivni sastojak i najmanje jedan farmaceutski prihvatljivi ekscipijens, odnosno pomoćnu materiju i/ili nosač.

Sledeći cilj predmetnog pronalaska je primena funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog ili desijalidovanog dugog PTX3 za dobijanje leka za vezivanje komplementa, a naročito za lečenje infektivnih bolesti bakterijskog, gljivičnog, protozoičnog ili virusnog porekla.

Sledeći cilj predmetnog pronalaska je primena funkcionalno aktivnog deglikozilovanog ili desijalidovanog dugog PTX3 kao adjuvansa za preventivnu vakcinaciju protiv patogena i antigena.

Pronalazak će sada biti detaljno opisan uz pomoć primera i slika na kojima:

Fig. 1 prikazuje elektroforetičku mobilnost funkcionalno aktivnog pentraksina deglikozilovanog sa endoglikozidazom F3.

Fig. 2 prikazuje elektroforetičku mobilnost pentraksina desijalidovanog sa sijalidazom A.

Fig. 3A i 3B ilustruju test vezivanja funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog i desijalidovanog dugog pentraksina, respektivno, za Clq.

Fig. 4 prikazuje test aktivacije komplementa.

Detaljni opis pronalaska

Pod izrazom "funkcionalno aktivni, deglikozilovani ili desijalidovani dugi pentraksin PTX3" se podrazumeva bilo koji PTX3, bez obzira da li je prirodnog (humanog ili nehumanog) ili rekombinantnog porekla. Ovi pentraksini PTX3 su opisani u literaturi: vidi, na primer, patentne reference u predmetnoj prijavi i bibliografske reference koje su citirane u njima.

Funkcionalno aktivni, deglikozilovani ili desijalidovani dugi pentraksin PTX3 prvenstveno je onaj humani, čija sekvencaje opisana u WO 99/32516.

Proces za dobijanje deglikozilovanog pentraksina sadrži potpunu deglikozilaciju dugog pentraksina PTX3.

Polazni dugi pentraksin PTX3 je poznat protein, a takođe su poznati i postupci za njegovo dobijanje.

Za ovu svrhu je podesan bilo koji proces deglikozilacije proteina, uz uslov da taj proces ne indukuje bilo kakav gubitak ili suštinsku promenu aktivnosti pentraksina.

U jednom poželjnom primeru izvođenja pronalaska, proces sadrži tretiranje dugog pentraksina PTX3 sa endoglikozidazom EndoF3.

Alternativno, predmetnim pronalaskom je takođe realizovan proces za dobijanje funkcionalno aktivnog, deglikolizovanog dugog pentraksina PTX3 koji sadrži kultivaciju ćelija koje izražavaju dugi pentraksin PTX3 u prisustvu inhibitora glikozilacije. Jedan poželjni inhibitor je tunikamicin. Ćelije koje izražavaju pentraksin su poznate iz stanja tehnike i mogu se lako dobiti na osnovu opšteg znanja stručnjaka iz odgovarajuće oblasti. Primeri takvih ćelija su ćelije transfektovane sa cDNK humanog PTX3, kao što su CHO (jajne ćelije kineskog hrčka, engl. Chinese Hamster Ovary) ćelije.

Slično tome, može se primeniti bilo koji proces desijalidacije proteina koji je podesan za ovu svrhu, uz uslov da taj proces ne indukuje bilo kakav gubitak ili suštinsku promenu aktivnosti pentraksina. Eventualni primer je primena desijalidaze A.

Slično tome, može se primeniti bilo koji proces za inženjering proteina koji je podesan za ovu svrhu, kao što je, na primer, dobijanje kada se rekombinantni PTX3 mutagenizuje destrukcijom mesta glikozilacije, uz uslov da taj proces ne indukuje bilo kakav gubitak ili suštinsku promenu aktivnosti pentraksina.

Predmetnim pronalaskom je realizovana primena funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog i desijalidovanog dugog pentraksina PTX3 leka.

Pod izrazom infektivna bolest se podrazumeva bolest koja je izazvana bakterijskom, gljivičnom, protozoičnom ili virusnom infekcijom.

Primeri autoimunih bolesti su sistemski lupus eritematozus (SLE), multipla skleroza (MS), artritis, dijabetes, tiroiditis, hemolitička anemija, atrofični orhitis, Gudpejsturova bolest, autoimuna retinopatija, autoimuna trombocitopenija, mijastenija gravis, primarna bilijama ciroza, agresivni hronični hepatitis, ulcerativni kolitis, dermatitis, hronični glomerulonefritis, Sjegrenov sindrom, Rajterov sindrom, miozitis, sistemska skleroza i poliartritis.

Pod izrazom infarkt tkiva podrazumeva se srčani infarkt ili cerebralni infarkt.

Pod izrazom lečenje neplodnosti kod žena podrazumeva se bilo kakva primena deglikozilovanog ili desijalidovanog PTX3 za poboljšanje plodnosti kod žena kojima je potrebno takvo lečenje.

Posebno, predmetnim pronalaskom je realizovana primena funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog ili desijalidovanog dugog pentraksina PTX3 za dobijanje leka koji može vezivati komplement.

Poželjna primena se odnosi na lek za prevenciju ili lečenje infektivnih bolesti.

Infektivni agens u pomenutim bolestima je bakterija, gljivica, protozoa ili virus.

Jedan poželjni primer izvođenja pronalaska posebno se odnosi na gljivicu Aspergillus, a naročito na Aspergillus fumigatus.

Sledeći aspekt pronalaska je lek za lečenje gljivičnih infekcija koji sadrži kombinaciju funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog ili desijalidovanog dugog pentraksina PTX3 i antimikotika, a prvenstveno iz klase amfotericina, kao što je amfotericin B, a naročito u vidu deoksiholata ili lipozomalne formulacije. Sledeći cilj predmetnog pronalaska je formulacija.

Takođe je otkriveno da se funkcionalno aktivni, deglikozilovani i/ili desijalidovani dugi pentraksin PTX3 može primeniti kao adjuvans za preventivnu vakcinaciju protiv izabranih patogena ili antigena, i to predstavlja sledeći cilj predmetnog pronalaska.

Vakcina koja sadrži funkcionalno aktivni, deglikozilovani i/ili desijalidovani protein kao adjuvans prvenstveno može se koristiti protiv patogenog agensa, kao što je bakterija, gljivica, protozoa ili virus, ili jednog od njihovih antigena.

U jednom poželjnom primeru izvođenja pronalaska, patogeni agens je gljivica, a naročito Aspergillus, još poželjnije Aspergillus fumigatus, kao i jedan od njegovih antigena.

Osim što sadrži funkcionalno aktivni, deglikozilovani i/ili desijalidovani dugi pentraksin PTX3 kao adjuvans, vakcina prema predmetnom pronalasku se inače u potpunosti priprema pomoću uobičajenih metoda koje su poznate stručnjaku iz odgovarajuće oblasti sa iskustvom u toj oblasti i zbog toga ne zahteva dalja objašnjenja.

U nastavku je dato nekoliko primera koji dalje ilustruju predmetni pronalazak.

Primer 1

Pobijanje deglikozilovanog PTX3

PTX3, prečišćen iz supematanta CHO ćelija stabilno transfektovanih sa plazmidnim vektorom pSG5hPTX3 koji sadrži humanu cDNK PTX3 (kao što je opisano u Bottazzi, et al., J. Biol. Chem. 1997; 272: 32817- 32823), tretiran je sa endoglikozilidazom EndoF3 radi odstranjivanja celog glikozidnog lanca minus N-acetilglikozaminskog ostatka vezanog za asparagin 220.

Posebno, PTX3 je bio inkubiran sa endoglikozidazom F3 koja je poznata zbog svoje selektivne hidrolizacije glikozidne β veze (1 —>4) između dva GlcNac ostatka prisutna u jezgru oligosaharida N-vezanog tipa bi- i triantenamog kompleksa. Endoglikozidaza F3 manifestu) e svoju maksimalnu katalitičku aktivnost na kiselim pH vrednostima. Na osnovu karakteristika rastvorljivosti PTX3, primena fosfatnog pufera je bila optimizovana na pH 5, 5. Endoglikozidaza F3 koja je upotrebljena u ovom eksperimentu poticala je od cDNK Chryseobacterium (Flavobacterium) meningosepticum izražene u E. coli kao rekombinantni protein (Sigma Aldrich kod E2264). Enzimatska hidroliza šećera prečišćenog PTX3 bila je određena pomoću varijacije elektroforetičke mobilnosti sa SDS-PAGE (vidi Fig. 1). Bilo je dodato približno 10 pg PTX3 u 7 pl sterilne vode sa 2 pl fosfatnog pufera na pH 5, 5 (5x) (NaH2P04 250 mM) i sa 1 pl endoglikozidaze F3 uzete iz matičnog rastvora (Sigma Aldrich). Smeša je bila inkubirana na 37°C tokom 12 sati. Reakcija je bila skalabilna do 1 mg PTX3.

Funkcionalno aktivni, deglikozilovani PTX3 dobijen na ovaj način je bio prečišćen hromatografijom gel filtracijom (Superose 6 PHARMACIA) radi odstranjivanja glikozidnih enzima i šećera. SDS-PAGE hromatografija gel filtracijom je bila urađena kao što je opisano u Bottazzi et ah, J. Biol, Chem. 1997; 272: 32817-32823.

Primer 2

Pobijanje funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog PTX3

CHO ćelije koje proizvode PTX3 opisane u Primeru 1 su tretirane sa inhibitorom glikozilacije proteina, kao što je, na primer, tunikamicin (Sigma Aldrich).

Ovako dobijeni funkcionalno aktivni, deglikozilovani PTX3 je prečišćen kao što je opisano u Bottazzi et al., J. Biol Chem 1997; 272: 32817-32823.

Bilo koji drugi poznati metod za deglikozilaciju proteina ili za dobijanje deglikozilovanih proteina koji ne menja njihova funkcionalna svojstva je podesan za svrhe predmetnog pronalaska.

Primer 3

Pobijanje desiialidovanoe PTX3

Upotrebljen je PTX3 koji je prečišćen iz supematanta CHO ćelija stabilno transfektovanih sa plaznidnim vektorom pSG5h-PTX3 koji je sadržao humanu cDNK PTX3.

PTX3 je tretiran sa sijalidazom A. Sijalidaza A [α(2→3, 6, 8, 9) neuraminidaza] koja je upotrebljena dobijena je od cDNK Arthrobacter ureafaciens koja je izražena u E. coli kao rekombinantni protein (SIGMA Aldrich kod N8271). Desijalidacija PTX3 je takođe bila određena analizom varijacije njene elektroforetičke mobilnosti sa SDS-PAGE (vidi Fig. 2).

Ovako dobijeni desijalidovani PTX3 je prečišćen hromatografijom gel filtracijom (Superose 6 PHARMACIA) radi odstranjivanja glikozidnih enzima i šećera.

Bilo koji drugi poznati metod desijalidacije proteina ili za dobijanje desijalidovanih proteina koji ne menja njihova funkcionalna svojstva je podesan za svrhe predmetnog pronalaska.

Primer 4

Test vezivanja funkcionalno aktivnog, deelikozilovanog PTX3 za Clq

Maxisorp (NUNC) ploče su tretirane sa 0, 5 μg/ml Clq (CALBIOCHEM) radi adsorbovanja proteina na unutrašnjoj površini bunarčića. Posle uzastopnih ispiranja u fosfatnom puferu (GIBCO), bunarčići su inkubirani u fosfatnom puferu tokom 1 sat sa deglikozilovanim PTX3 u dozama koje su navedene na Fig. 3.

Relativne količine PTX3 vezanog za C1 q su bile određene upotrebom biotinilovanog anti-PTX3 poliklonalnog antitela, Streptavidina-HRP (PHARMACIA) i bojenjem sa TMB.

Funkcionalno aktivni, deglikolizovani PTX3 je pokazao vezivanje za Clq koje je bilo približno 4-struko veće nego PTX3 koji nije bio tretiran sa glikozidazom (Fig. 3A).

Primer 5

Test vezivanja desiialidovanog PTX3 za Clq

Test vezivanja desijalidovanog PTX3 za Clq bio je izvršen u istim eksperimentalnim uslovima koji su bili opisani u prethodnom primeru i u dozama koje su navedene na Fig. 3B.

I u ovom slučaju, desijalidovani PTX3 je pokazao vezivanje za Clq koje je bilo približno 2-struko veće nego PTX3 koji nije bio tretiran sa desijalidazom (Fig. 3B).

Primer 6

Ocena sposobnosti desijalidovanog PTX3 da aktivira klasični put komplementa

Desijalidovani PTX3 je bio adsorbovan na Maxisorp pločama sa 96 bunarčića u koncentraciji od 5 pg/ml (karbonatni pufer 0, 1 M pH 9, 6). Posle toga bunarčići su bili tretirani sa humanim serumom (NHS) kao izvorom komplementa sa različitim procentima razblaživanja. Količina C4 istaloženog na pločama kao rezultat aktivacije komplementa je bila merena upotrebom anti-C4 antitela (C4-4°) kao što su opisali Nauta et al. u Eur. J. Immunology, 2003, 33: 465-473.

Količina C4 istaloženog na pločicama adsorbovanog sa desijalidovanim PTX3 bila je približno 8-struko veća nego na pločici adsorbovanoj sa kontrolom PTX3 (Fig. 4). Ovaj rezultat pokazuje da je desijalidovani PTX3 aktivniji nego nemodifikovani PTX3 u pogledu svojih svojstava aktivacije komplementa.

Primer 7

Ocena sposobnosti funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog PTX3 da aktivira klasični put komplementa

Deglikozilovani PTX3 je bio testiran u istim eksperimentalnim uslovima koji su bili upotrebljeni za desijalidovani PTX3 opisanim u primeru 6.

Dobijeni rezultati su mogli biti upoređeni sa onima koji su bili dobijeni za desijalidovani PTX3.

Što se tiče aspekata koji se odnose na industrijsku primenljivost, deglikozilovani ili desijalidovani PTX3, ili njihovi peptidni ili peptidomimetični derivati će biti u formi farmaceutskih kompozicija u kojima su aktivni sastojci rastvoreni i/ili kombinovani sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima i/ili nosačima, kao što su sterilna voda, karboksimetilceluloza ili drugi ekscipijensi koji su poznati stručnjacima iz odgovarajuće oblasti.

Primeri farmaceutskih kompozicija koje se mogu upotrebiti za deglikozilovani ili desijalidovani PTX3 su oni isti koji su opisani za dugi pentraksin PTX3 (u WO 99/32516).

Sledeći primeri farmaceutskih kompozicija su oni koji dozvoljavaju oralno ili parenteralno davanje intravenskim, intramuskulamim, subkutanim, transdermalnim, rektalnim ili vaginalnim putem. Farmaceutske kompozicije koje su podesne za ove svrhe su tablete i tvrde ili meke kapsule, supozitorije, ovule, praško vi, rastvori, suspenzije, sirupi, ili čvrsti oblici za pripremu extempore tečnosti. Kompozicije za parenteralno davanje su, na primer, svi intramuskulami, intravenski i subkutani oblici, u obliku rastvora, suspenzija ili emulzija. Takođe treba pomenuti lipozomalne oblike. Takođe su uključeni oblici za kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka, bez obzira da li se radi o oblicima za oralno davanje, kao što su tablete obložene odgovarajućim slojevima, mikrokapsulirani praškovi, ciklodekstrinski kompleksi, depo oblici, npr. subkutani, ili depo injekcije ili implanti. Poželjan oblik davanja mogu predstavljati kompozicije za aerosol.

Dnevna doza će zavisiti od procene ordinirajućeg lekara na osnovu pacijentove težine, uzrasta i opšteg stanja.

Treba naglasiti da se dobijanje pomenutih farmaceutskih kompozicija, uključujući oblike sa usporenim oslobađanjem, može vršiti upotrebom uobičajenih tehnika i instrumenata sa kojima su farmaceuti i stručnjaci iz odgovarajuće oblasti dobro upoznati. Kao referencu, stručnjak iz odgovarajuće oblasti može upotrebiti uobičajenu literaturu, kao što je, na primer, poslednje izdanje Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. N. Y. Što se tiče vakcina, čitalac se upućuje na specifičnu literaturu, npr. na međunarodne prijave patenata WO 03/011903 i PCT/IT03/00162.

Claims

1. Funkcionalno aktivni, deglikozilovani dugi pentraksin PTX3.

2. Desijalidovani dugi pentraksin PTX3.

3. Dugi pentraksin PTX3 prema zahtevu 1 ili 2, koji je prirodnog humanog ili nehumanog ili rekombinantnog porekla.

4. Proces za dobijanje deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1, koji sadrži deglikozilaciju dugog pentraksina PTX3.

5. Proces prema zahtevu 4, u kome se pomenuta deglikozilacija izvodi sa endoglikozidazom EndoF3.

6. Proces za dobijanje deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1, koji sadrži kultivaciju ćelija koje izražavaju dugi pentraksin PTX3 u prisustvu inhibitora glikozilacije.

7. Proces prema zahtevu 6 u kome je pomenuti inhibitor tunikamicin.

8. Proces prema zahtevu 4, u kome se pomenuta deglikozilacija dobija mutagenezom mesta glikozilacije PTX3.

9. Proces za dobijanje deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 2, koji sadrži desijalidaciju dugog pentraksina PTX3.

10. Proces prema zahtevu 9 u kome se pomenuta desijalidacija izvodi sa sijalidazom A.

11. Proces prema bilo kom od zahteva 4-8, u kome se prečišćava deglikozilovani dugi pentraksin PTX3.

12. Proces prema bilo kom od zahteva 9-10, u kome se prečišćava desijalidovani dugi pentraksin PTX3.

13. Proces prema zahtevu 11 ili 12, u kome se pomenuto prečišćavanje izvodi hromatografijom gel filtracijom.

14. Farmaceutska kompozicija koja sadrži deglikozilovani dugi pentraksin PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 u smeši sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom.

15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži desijalidovani dugi pentraksin PTX3 prema zahtevu 2 ili 3 u smeši sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom.

16. Primena deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 ili desijalidovanog dugog pentraksina prema zahtevu 2 ili 3 za dobijanje leka.

17. Primena deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 ili desijalidovanog dugog pentraksina prema zahtevu 2 ili 3 za dobijanje leka koji može vezivati komplement.

18. Primena deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 ili desijalidovanog dugog pentraksina prema zahtevu 2 ili 3 za dobijanje leka za prevenciju ili lečenje bolesti kod kojih je indikovana primena dugog pentraksina PTX3.

19. Primena deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 ili desijalidovanog dugog pentraksina prema zahtevu 2 ili 3 za dobijanje leka za prevenciju ili lečenje infektivnih bolesti.

20. Primena deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 ili desijalidovanog dugog pentraksina prema zahtevu 2 za dobijanje leka za prevenciju ili lečenje zapaljenskih bolesti uključujući autoimune bolesti, tumore, bolesti usled abnormalne aktivacije faktora rasta FGF-2, poremećaje plodnosti kod žena, infarkt tkiva i bolesti kostiju ili hrskavice.

21. Primena prema zahtevu 20, kod koje je autoimuna bolest izabma iz grupe koja se sastoji od sistemskog lupus eritematozusa (SLE), multiple skleroze (MS), artritisa, dijabetesa, tiroiditisa, hemolitičke anemije, atrofičnog orhitisa, Gudpejsturove bolesti, autoimune retinopatije, autoimune trombocitopenije, mijastenije gravis, primame bilijame ciroze, agresivnog hroničnog hepatitisa, ulcerativnog kolitisa, dermatitisa, hroničnog glomerulonefritisa, Sjegrenovog sindroma, Rajterovog sindroma, miozitisa, sistemske skleroze i poliartritisa.

22. Primena prema zahtevu 20, kod koje je infarkt tkiva izabran iz grupe koja se sastoji od srčanog i cerebralnog infarkta.

23. Primena prema zahtevu 19, kod koje je u pomenutim bolestima infektivni agens bakterija, gljivica, protozoa ili virus.

24. Primena prema zahtevu 23, kod koje je pomenuta gljivica Aspergillus.

25. Primena prema zahtevu 24, kod koje je pomenuta gljivica Aspergillus fumigatus.

26. Kombinacija funkcionalno aktivnog, deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 i/ili desijalidovanog dugog pentraksina PTX3 sa antimikotikom.

27. Kombinacija prema zahtevu 26, kod koje antimikotik pripada klasi amfotericina.

28. Kombinacija prema zahtevu 27, kod koje je amfotericin amfotericin B, a naročito kao deoksiholat ili u lipozomnoj formulaciji.

29. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kombinaciju prema bilo kom od zahteva 26-28 u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom.

30. Primena kombinacije prema bilo kom od zahteva 26-28 za dobijanje leka za prevenciju ili lečenje gljivičnih infekcija.

31. Primena prema zahtevu 30, kod koje je gljivica u pomenutoj infekciji Aspergillus.

32. Primena prema zahtevu 31, kod koje je gljivica Aspergillus fumigatus.

33. Primena deglikozilovanog dugog pentraksina PTX3 prema zahtevu 1 ili 3 ili desijalidovanog dugog pentraksina prema zahtevu 2 ili 3 kao adjuvansa za preventivnu vakcinaciju protiv patogena ili antigena.

34. Primena prema zahtevu 33, kod koje je patogen bakterija, gljivica, protozoa ili virus ili pomenuti antigen potiče od bakterije, gljivice, protozoe ili virusa.

35. Primena prema zahtevu 34, kod koje je pomenuta gljivica Aspergillus fumigatus ili pomenuti antigen potiče od Aspergillus fumigatusa.

36. Vakcina koja je karakterisana time što sadrži funkcionalno aktivni, deglikozilovani i/ili desijalidovani dugi pentraksin PTX3 kao adjuvans.