MC1915A1 - Procédés pour la préparation de 2',3'-didésoxynucléosides et de formulations pharmaceutiques en contenant - Google Patents

Description

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La présente invention concerne des 21,3'-didésoxy-nucléosides substitués à la position 6, leurs dérivés phar-maceutiquement acceptables et leur emploi en thérapie, notamment pour le traitement ou la prophylaxie de certaines 5 injection virales.

Le SIDA est une maladie immunosuppressive ou immunodestructrice qui prédispose les sujets à des infections opportunistes fatales. De façon caractéristique/ le SIDA est associé à une déplétion lymphocytaire progressive touchant

10 les lymphocytes T, en particulier le sous-groupe inducteur-

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auxiliaire portant le marqueur de surface OKT .

Le Virus Immunodépresseur Humain (HIV) a été isolé de façon reproductible sur des malades atteints du SIDA ou présentant les symptômes qui précèdent souvent le 15 SIDA. Le HIV est cytopathique et s'avère infecter et détruire préférentiellement les lymphocytes T portant le marqueur

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OKT / et il est maintenant généralement reconnu que le HIV est l'agent étiologique du SIDA.

Depuis qu'il a été découvert que le HIV est l'agent 20 étiologique du SIDA/ de nombreuses propositions ont été

faites concernant des agents chimiothérapiques anti-HIV qui puissent être efficaces dans le traitement des personnes souffrant du SIDA. Ainsi/ par exemple/ le brevet européen N° 196 185 décrit la 3 ' -azido-3'-désoxythymidine (ayant 25 reçu le nom homologué "zidovudine")/ ses dérivés pharmaceu-tiquement acceptables et leur emploi dans le traitement d'infections à rétrovirus humains/ y compris le SIDA et les états cliniques associés.

La publication de brevet européen N° 0 206 497 30 concerne d'une façon générale des nucléosides puriques à

utiliser dans le traitement d'infections à HIV et des états pathologiques associés. En particulier/ cette publication propose le 2,6-diaminopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofuran-noside pour le traitement d'infections à HIV. 35 La Demanderesse a maintenant découvert que cer tains 2 ' / 3 '-didésoxynucléosides substitués à la position 6/

R

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tels que visés ci-dessous, sont utiles pour le traitement ou la prophylaxie d'infection virales, notamment d'infections rétrovirales et en particulier du SIDA.

Certains nucléosides puriques substitués à la 5 position 6 ont antérieurement été décrits et, en particulier, le 6-méthylaminopurine-9-6-D-2',31-didésoxyribofuran-noside, décrit ci-après pour son emploi dans le traitement des infections à HIV et états pathologiques associés, a été donné à connaître dans Bioorg Khim 9(1) 52-59 (1983).

10 Sous un premier aspect de la présente invention,

il est fourni de nouveaux 2',3'-didésoxynucléosides substitués à la position 6 répondant a la formule générale (I) suivante :

dans laquelle R^ représente de l'hydrogène ou un groupe 15 amino ; représente un halogène (par exemple le chlore), un groupe alcoxy en C^_C5 (Par exemple propyloxy ou iso-propyloxy) éventuellement substitué par exemple par un groupe cycloalkyle en C^-C^ (tel que cyclopropylméthoxy), un groupe cycloalkyloxy en C^-Cg (par exemple cyclobutyloxy 20 ou cyclopentyloxy), un groupe aryloxy (par exemple phényl-oxy), aralkyle (par exemple benzyle) ou aralkyloxy (par exemple benzyloxy) dans lequel le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène,un groupe cycloalkylthio en 25 C^-C^, un groupe alkylthio en C2~C5' un groupe arylthio ou aralkylthio dans lequel le radical aryle peut éventuellement

être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène, ou bien représente un groupe hétéro-

cyclique contenant un atome d'oxygène ou un ou deux atomes d'azote et 3 à 7 atomes de carbone avec des doubles liaisons facultatives dans le cycle (par exemple pipéridino, pyrroli-dino ou furfuryle), contenant éventuellement un hétéroatome de soufre et/ou d'oxygène et éventuellement substitué sur le cycle par un ou plusieurs groupes alkyle inférieurs, hydroxy ou halogéno, un groupe cycloalkylthio en ou un groupe aralkylthio dont le radical aryle peut être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène, ou bien R2 représente un groupe imidazolylthio dans lequel le fragment imidazolyle peut être substitué par un groupe alkyle inférieur et/ou substitué sur C par le groupe nitro, ou encore R^ représente un groupe amino qui est mono- ou disubstitué par un groupe alkyle en (par exemple méthyle ou éthyle), alcoxy en C^-C^ (par exemple méthoxy), hydroxyalkyle en (par exemple hydroxyéthyle )

et/ou cycloalkyle en C^-C^ (par exemple cyclopropyle ou cyclopentyle), aryle (par exemple phényle), aralkyle (par exemple benzyle) dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène, ou allyle éventuellement substitué par un ou deux groupes alkyle ou alcoxy (par exemple diméthyl-allyle) : et R^ représente de l'hydrogène ou un groupe amino, et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables à l'exception des composés de formule (I) dans lesquels R^ et R^ représentent de l'hydrogène et R^ représente un groupe méthoxy, méthylthio ou méthylamino. Des exemples des groupes amino substitués représentés par R^ dans la formule (I) comprennent les groupes éthylamino, éthylméthylamino, cyclo-propylamino et isopropylamino.

L'expression "alkyle inférieur" dénote ci-dessus des groupes contenant 1 à 6 atomes de carbone, de préférence méthyle ou éthyle, et le terme "halogène" englobe le chlore, le brome, l'iode et le fluor, le chlore et l'iode étant particulièrement préférés.

Des classes préférées des composés de formule (I) comprennent ceux dans lesquels et R2 représentent de l'hydrogène et R£ représente un groupe amino substitué, par exemple un groupe mono(cycloalkyle en C^-C^J-amino ou un groupe mono- ou di(alkyle en C^-C^)-amino, ou un groupe hétérocyclique tel que pipéridino ou pyrrolidino.

Les composés suivants sont les composés préférés de la présente invention :

1. 6-N-pipéridinopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

2. 6-chloropurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

3. 6-éthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

4. 6-éthylméthylamino-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

5. 6-iodopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

6. 6-cyclopropylméthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-ribofurannoside

7. 6-isopropylaminopurine-9-B-D-21^'-didésoxyribofurannoside

8. Thiamiprine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

9. 2-amino-6-n-propoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

10. 6-éthylthiopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

11. 2-amino-6-benzylthiopurine-9-B-D-2'^'-didésoxyribofurannoside

12. 6-éthoxypurine-9-B-D-21,3'-didésoxyribofurannoside

13. 6-diméthylaminopurine-9-B-D-21,3'-didésoxyribofurannoside

14. 6-hydroxyéthylaminopurine-9-B-D-2'^'-didésoxyribofurannoside

15. 6-cyclopropylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

16. 6-cyclopentylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

17. 2-amino-6-méthoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

18. 6-n-propoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

6

19. 6-n-butoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

20. 6-cyclopropylméthoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-ribofurannoside

21. 6-cyclopentyloxypurine-9-B-D-2', 3'-didésoxy-5 ribofurannoside

22. 6-cyclohexyloxypurine-9-B-D-21,3'-didésoxyribofurannoside

23. 6-cyclobutylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

10 24. 6-diéthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

25. 6-pyrrolidinopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

26. 6-morpholinopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside 15 27. 6-7,7-diméthylallylaminopurine-9-&-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside

28. 6-furfurylaminopurine-9-B-D-2'^'-didésoxyribofurannoside

29. 6-benzy1mercaptopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-20 ribofurannoside

30. 6-anilinopurine-9-B-D-21,3'-didésoxyribofurannoside

31. 2-amino-6-éthoxypurine-9-B~D-21,3'-didésoxyribofurannoside

32. 2/6/8-triaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-25 ribofurannoside

33. 2-amino-6-benzylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-ribofurannoside

34. 2-amino-6-cyclopropylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

30 35. 2-amino-6-méthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

36. 2-amino-6-n-propoxypurine-9-&-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

37. 6-benzylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-35 ribofurannoside

38. 6-isopropoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

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5

39- 6-propylaminopurine-9-&-D-2' / 3'-didésoxyribofurannoside

40. 6-cyclohexylaminopurine-9-B-D-21,3'-didésoxy-ribofurannoside

41. 6-méthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

Les composés 1/ 6, 13/ 15, 16, 25 et 41 ci-dessus sont particulièrement préférés du fait de leur activité anti-HIV étonnamment forte.

Les composés de formule (I) ci-dessus et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables, y compris également le composé de formule (I) dans lequel est l'hydrogène et R£ est un groupe méthylamino, visé dans la référence susmentionnée de Bioorg. Khim., sont appelés ci-après les composés selon l'invention.

Sous l'un de ses aspects, l'invention fournit les composés selon l'invention à utiliser en thérapie médicale, notamment pour le traitement ou la prophylaxie d'infections rétrovirales.

20 être traitées ou prévenues conformément à l'invention comprennent les infections rétrovirales humaines telles que les infections par le Virus Immunodépresseur Humain (HIV), HIV-2 et les Virus Lymphotropes Humains des Lymphocytes T (HTLV), par exemple HTLV-I ou HTLV-IV. Les composés selon 25 l'invention sont particulièrement utiles pour le traitement ou la prophylaxie du SIDA et des états cliniques associés tels que le syndrome associé au SIDA (ARC), la lympha-dénopathie progressive généralisée (PGL), les affections neurologiques associées au SIDA telles que la sclérose en 30 plaques ou la paraparésie tropicale, les états à réaction positive à la recherche d'anticorps anti-HIV ou de virus HIV, le sarcome de Kaposi et le purpura thrombocytopénique. Les composés peuvent également être employés dans le traitement ou la prévention du psoriasis.

35 Sous un autre de ses aspects, la présente inven tion englobe :

Des exemples d'infections rétrovirales qui peuvent

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a) Un procédé pour le traitement ou la prophylaxie d'infections rétrovirales, qui consiste à traiter le sujet par une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé selon l'invention.

b) L'utilisation d'un composé selon l'invention dans la fabrication d'un médicament pour le traitement ou la prophylaxie de n'importe lesquels des états, affections ou infections mentionnés ci-dessus.

Par "dérivé pharmaceutiquement acceptables", on entend un quelconque sel, ester ou sel d'un tel ester, pharmaceutiquement acceptable, d'un composé selon l'invention ou tout autre composé qui, étant administré au receveur est capable de fournir (directement ou indirectement) un composé selon l'invention ou un métabolite ou résidu doué d'activité antivirale de ce composé.

Les esters préférés des composés de l'invention comprennent les esters d'acides carboxyliques dans lesquels le fragment non carbonylé du groupement ester est choisi parmi les groupes alkyle à chaîne droite ou ramifiée (par exemple n-propyle, t-butyle, n-butyle), alcoxyalkyle (par exemple méthoxyméthyle), aralkyle (par exemple benzyle), aryloxyalkyle (par exemple phénoxyméthyle) et aryle (par exemple phényle éventuellement substitué par un halogène ou un groupe alkyle en ou alcoxy en C^-C^) : des esters sulfoniques tels que d'alkyl- ou aralkylsulfonyle (par exemple de méthanesulfonyle) ; des esters d'acides aminés (par exemple de L-valyle ou L-isoleucyle) ; et les esters mono-, di- et triphosphoriaues.

En ce qui concerne les esters décrits ci-dessus, sauf indication contraire, tout fragment alkyle présent contient avantageusement 1 à 18 atomes de carbone, en particulier 1 à 4 atomes de carbone'. Tout fragment aryle présent dans ces esters comprend avantageusement un groupe phényle.

Toute référence à l'un quelconque des composés ci-dessus vise également ses sels pharmaceutiquement acceptables

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Des exemples de sels pharmaceutiquement acceptables des composés selon l'invention et de leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables comprennent les sels de bases, par exemple dérivés d'une base appropriée, tels que 5 les sels de métaux alcalins (par exemple le sodium), de métaux alcalino-terreux (par exemple le magnésium), d'ammonium et de NX^ (où X est un groupe alkyle en C^-C^). Les sels physiologiquement acceptables d'un atome d'hydrogène ou d'un groupe amino comprennent des sels d'acides orga-10 niques carboxyliques tels que les acides acétique, lactique, tartrique, malique, iséthionique, lactobionique et succi-nique, des sels d'acides organiques sulfoniques tels que les acides méthanesulfonique, éthanesulfonique, benzène-sulfonique et p-toluènesulfonique, et des sels d'acides 15 minéraux tels que les acides chlorhydrique, sulfurique, phosphorique et sulfamique. Les sels physiologiquement acceptables d'un composé comportant un groupe hydroxyle comprennent l'anion dudit composé en combinaison avec un cation approprié tel que Na+, NH^+ et NX^+ (où X est un 20 groupe alkyle en C^-C^).

Des exemples particuliers de dérivés pharmaceutiquement acceptables du composé de formule (I), qui peuvent être utilisés conformément à la présente invention, comprennent le sel monosodique et les 5'-esters suivants : 25 monophosphate, disodicomonophosphate, diphosphate, tri-

phosphate, acétate, 3-méthyl-butyrate, octanoate, palmitate, 3-chloro-benzoate, benzoate, 4-méthyl-benzoate, hydrogéno-succinate, pivalate, propionate, valérate et mésylate.

Les composés selon l'invention ci-dessus et leurs 30 dérivés pharmaceutiquement acceptables peuvent être employés en association avec d'autres agents thérapeutiques pour le traitement ou la prophylaxie des états, affections ou infections ci-dessus. Des exemples de ces autres agents thérapeutiques comprennent les agents qui sont efficaces pour le 35 traitement ou la prophylaxie des infections à HIV ou états pathologiques associés, tels que la 3'-azido-3'-désoxy-

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thymidine (zidovudine), d'autres 2',3'-didésoxynucléosides tels que la 2'/3'-didésoxycytidine, la 2',3'-didésoxyadéno-sine et la 2',3'-didésoxyinosine, des nucléosides acycliques (par exemple 1'acyclovir), des interférons tels que 5 1'a-interféron, des inhibiteurs d'excrétion rénale tels que le probénécide/ des inhibiteurs de transport de nucléoside tels que le dipyridamole, ainsi que des immunomodulateurs tels que 1'interleukine-II et des facteurs d'activation de colonies de macrophages polynucléaires. Les composés indi-10 viduels entrant dans une telle thérapie d'association peuvent être administrés simultanément, sous des formes pharmaceutiques séparées ou combinées, ou encore à des moments différents, par exemple successivement de manière à obtenir des effets conjugués.

15 Les composés selon l'invention, également appelés ici les ingrédients actifs, peuvent être administrés dans un but thérapeutique par toute voie appropriée, y compris les voies orale, rectale, nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale et parentérale (y compris 20 sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse et intradermique). On comprendra que la voie à préférer diffère selon l'état et l'âge du receveur, la nature de l'infection et l'ingrédient actif choisi.

En général, une dose appropriée se situera dans 25 l'intervalle de 3,0 à 120 mg par kilogramme de poids corporel du receveur et par jour, de préférence dans l'intervalle de 6 à 90 mg par kilogramme de poids corporel et par jour, et mieux encore dans l'intervalle de 15 à 60 mg par kilogramme de poids corporel et par jour. La dose désirée 30 est de préférence présentée en deux, trois, quatre, cinq ou six sous-doses, ou davantage, administrées à intervalles appropriés durant toute la journée. Ces sous-doses peuvent être administrées sous formes posologiques unitaires, contenant par exemple 10 à 1500 mg, de préférence 20 à 1000 mg 35 et,mieux encore,50 à 700 mg d'ingrédient actif par forme posologique unitaire.

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Idéalement, l'ingrédient actif doit être administré de façon à atteindre des concentrations plasmatiques de pointe environ 1 à environ 75pM du composé actif, de préférence environ 2 à 50pM et mieux encore environ 3 à environ 5 30pM. Il est possible d'y parvenir, par exemple, par injection intraveineuse d'une solution à 0,1 à 5 % de l'ingrédient actif, éventuellement dans une solution saline, ou par administration par voie orale sous forme d'un bol contenant environ 1 à environ 100 mg/kg de l'ingrédient actif. Les 10 taux sanguins désirés peuvent être maintenus par des perfusions continues de façon à apporter environ 0,01 à environ 5,0 mg/kg/heure ou par des injections intermittentes contenant environ 0,4 à environ 15 mg/kg de l'ingrédient actif.

Bien que l'ingrédient actif puisse être administré 15 seul, il est préférable de le présenter sous une formulation pharmaceutique. Les formulations de la présente invention comprennent au moins un ingrédient actif, comme défini ci-dessus, ainsi qu'un ou plusieurs supports ou véhicules acceptables pour cet ingrédient actif et, facultativement, 20 d'autres agents thérapeutiques. Chaque support ou véhicule doit être "acceptable" en ce sens qu'il doit être compatible avec les autres ingrédients de la formulation et ne pas être préjudiciable au malade. Les formulations comprennent celles qui sont adaptées à l'administration par voie orale, rectale, 25 nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale ou parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse et intradermique). Les formulations peuvent commodément être présentées en formes posologiques unitaires et être préparées par n'importe quels procédés bien connus 30 dans l'art de la pharmacie. Ces procédés comportent l'étape de mise en association de l'ingrédient actif avec le support ou véhicule qui se compose d'un ou plusieurs ingrédients secondaires. En général, les formulations sont préparées en mettant uniformément et intimement en association 1'ingré-35 dient actif avec des véhicules liquides ou des supports solides finement divisés, ou les deux, puis en conformant le produit si nécessaire.

If

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Les formulations de la présente invention qui sont adaptées à l'administration par voie orale peuvent être présentées sous forme d'unités discrètes telles que des capsules, cachets ou comprimés, contenant chacune une quantité 5 prédéterminée de l'ingrédient actif ; sous forme d'une poudre ou de granulés ; sous forme d'une solution ou d'une suspension dans un liquide aqueux ou non aqueux ; ou sous forme d'une émulsion liquide huile-dans-eau ou d'une émulsion liquide eau-dans-huile. L'ingrédient actif peut également 10 êcre présenté sous forme d'un bol, d'un électuaire ou d'une pâte.

mculage, éventuellement avec un ou plusieurs ingrédients secondaires. On peut préparer des comprimés pressés en com-15 primant, dans une machine appropriée, l'ingrédient actif se trouvant sous une forme à écoulement libre telle qu'une poudre ou des granulés, éventuellement en mélange avec un liant (par exemple la polyvinylpyrrolidone, la gélatine ou 1'hydroxypropylméthyl-cellulose), un lubrifiant, un diluant 20 inerte, un conservateur, un délitant (par exemple 1'amidon-glycolate de sodium, la polyvinylpyrrolidone réticulée ou la carboxyméthyl-cellulose sodique réticulée), un agent tensio-actif ou un agent dispersant. On peut préparer des comprimés moulés en moulant, dans une machine appropriée, 25 un mélange du composé réduit en poudre et humecté avec un diluant liquide inerte. Les comprimés peuvent être éventuellement enrobés ou entaillés et peuvent être formulés de façon à réaliser une libération lente ou réglée de l'ingrédient actif chez le receveur, en utilisant par exemple de 1 'hydroxy-30 propylméthyl-cellulose en diverses proportions pour obtenir le profil de libération désiré. Les comprimés peuvent être facultativement munis d'un revêtement à délitage entérique afin d'assurer une libération dans des parties du tube digestif autres que l'estomac. Ceci est particulièrement 35 avantageux pour les dérivés de nucléosides puriques, étant dcnné que ces composés sont susceptibles d'hydrolyse en milieu acide.

Un comprimé peut être fabriqué par pressage ou

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Les formulations adaptées à une administration topique dans la cavité buccale comprennent des pastilles renfermant l'ingrédient actif dans une base aromatisée, généralement du saccharose et de la gomme arabique ou adra-gante ; des pastilles renfermant l'ingrédient actif dans une base inerte telle que de la gélatine et de la glycérine, ou du saccharose et de la gomme arabique ; et des collutoires renfermant l'ingrédient actif dans un véhicule liquide approprié.

Les formulations adaptées à l'administration par voie rectale peuvent être présentées sous forme d'un suppositoire avec une base appropriée telle que le beurre de cacao ou un salicylate.

Les formulations adaptées à l'administration par voie vaginale peuvent être présentées sous forme de pes-saires, tampons, crèmes, gels, pâtes, mousses ou produits à atomiser contenant, outre l'ingrédient actif, des supports ou véhicules connus dans l'art pour être appropriés.

Les formulations adaptées à une administration par voie parentérale comprennent des solutions injectables isotoniques stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des anti-oxydants, des tampons et des solutés qui rendent la formulation isotonique vis-à-vis du sang du receveur auquel elle est destinée ; et des suspensions stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des agents suspendants et des agents épaississants. Les formulations peuvent être présentées en récipients scellés à dose-unité ou à doses multiples, par exemple des ampoules et flacons, et peuvent être conservées à l'état lyophilisé, en ne nécessitant que l'addition du véhicule liquide stérile, par exemple de l'eau pour injections, immédiatement avant l'emploi. Des solutions et suspensions pour injection extem-poranée peuvent être préparées à partir de poudres,granulés et comprimés du genre précédemment décrit.

Les formulations à dose unitaire préférées sont celles qui contiennent une dose ou unité journalière, une

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sous-dose journalière/ comme celles énumérées ci-dessus/ ou une fraction appropriée de ces doses/ d'un ingrédient actif.

Les composés selon l'invention peuvent également être présentés pour l'emploi sous forme de formulations à usage vétérinaire qui peuvent être préparées/ par exemple/ par des procédés classiques de l'art.

Il est bien entendu qu'outre les ingrédients spécifiquement mentionnés ci-dessus/ les formulations de la présente invention peuvent contenir d'autres agents classiques dans l'art/ eu égard au type de formulation en question ; par exemple, les formulations adaptées à 1'admi nistration par voie orale peuvent contenir des agents addi tionnels tels que des édulcorantS/ des épaississants et des aromatisants.

La présente invention englobe de plus un procédé pour la préparation d'un composé selon l'invention et de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables/ qui consiste soit :

(A) à faire réagir un composé de formule :

«x

(dans laquelle , R£ et R^ sont comme définis ci-dessus e A représente un groupe précurseur du groupe hydroxyle ou d'un groupe pharmaceutiquement acceptable qui en dérive) avec un agent ou dans des conditions propres à convertir ledit groupe précurseur en le groupe correspondant désiré) soit

(B) à faire réagir une base purique de formule

B - H

(III)

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(dans laquelle B est le fragment purique requis d'un composé selon l'invention), ou un équivalent fonctionnel de celle-ci, avec un composé propre à introduire le cycle ribofurannosy-lique désiré à la position 9 de la base purique de formule 5 (III) ; et ensuite, ou en même temps,

à effectuer l'une ou plusieurs des conversions facultatives suivantes :

(i) lorsqu'un composé de formule (I) est formé, le convertir en l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, 10 (ii) lorsqu'un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I) est formé, convertir ce dérivé en un composé de formule (I) ou en un autre dérivé de composé de formule (I).

Dans le procédé selon l'invention décrit ci-dessus, 15 on comprendra que les composés précurseurs de composés de formule (I), ainsi que les agents et conditions mentionnés ci-dessus, seront choisis parmi ceux qui sont connus dans la chimie de la synthèse des nucléosides. Des exemples de tels modes opératoires de conversion sont décrits ci-après 20 et il est bien entendu qu'on pourra les modifier de manière usuelle selon le composé de formule (I) désiré. En particulier, au cas où il est décrit une conversion qui, faute de cette précaution, déterminerait la réaction non désirée de groupes labiles, de tels groupes peuvent alors être protégés 25 de manière usuelle, et les groupes protecteurs éliminés par la suite après l'achèvement de la conversion.

En ce qui concerne le procédé (A), A peut représenter un groupe hydroxyle protégé, par exemple un groupement ester du type visé ci-dessus à propos de la formule (I), 30 notamment le groupe acétoxy, ou un groupe éther tel qu'un groupe trialkylsilyloxy, par exemple t-butyldiméthylsilyloxy, ou un groupe aralcoxy, par exemple triphénylméthoxy. Ces groupes peuvent être convertis, par exemple par hydrolyse, en le groupe hydroxyle désiré ou, par transestérification, 35 en un autre groupe ester.

En ce qui concerne le procédé (B), celui-ci peut

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être exécuté par exemple en traitant une base purique appropriée de formule (III), ou un sel ou dérivé protégé d'une telle base, avec la 3'-désoxythimidine, par exemple en présence de l'enzyme de transfert de pentosyle approprié.

5 Un composé de formule (I) peut être converti en un phosphate ou autre ester pharmaceutiquement acceptable en étant amené à réagir avec, respectivement, un agent phos-phorylant, par exemple POCl^, ou un agent estérifiant approprié, par exemple un halogénure ou anhydride d'acide. 10 Le composé de formule (I), y compris ses esters, peut être converti de manière classique en ses sels pharmaceutiquement acceptables, par exemple par traitement avec une base appropriée. Un ester ou sel d'un composé de formule (I) peut être converti en le composé dont il dérivé, par exemple par 15 hydrolyse.

Les Exemples suivants ne sont donnés qu'à titre illustratif et ne sont pas destinés à limiter en aucune façon le cadre de l'invention. L'expression "ingrédient actif", telle qu'employée dans les Exemples, signifie un 20 composé de formule (I) ou un dérivé pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Exemple 1

6-N-pipéridino-9-B-D~2',3'-didésoxyribofurannoside

On dissout, sous chauffage, 0,5 g (2,41 mmoles) 25 de 6-N-pipéridinopurine (Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA) dans 10 ml de diméthylsulfoxyde. Après refroidissement à la température ambiante, on ajoute 0,82 g (3,62 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Howitz et coll., J. Orq. Chem., 31, 205 (1966)) en même temps que 30 ml de tampon phosphate 30 de potassium lOmM à pH 6,8 contenant 0,04 % d'azoture de potassium.

On ajoute 10 000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 20 000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet 35 des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, adsorbées sur 10 ml de DEAE-cellulose (Whatman), et on agite la suspension à 35°C.

tî

17

Au bout de 8 heures/ on filtre le mélange réactionnel et on applique le filtrat à une série de colonnes couplées. La première colonne contient de la résine AG1-X2 hydroxydée (2,5 x 10 cm) tandis que la seconde colonne est garnie de résine 5 Amberlite XAD-2 (2,5 x 10 cm). Après avoir appliqué l'échantillon/ on lave les colonnes avec un grand volume d'eau et on élue le produit avec du méthanol. Après élimination du solvant et redissolution dans un mélange chloroforme:méthanol (9:1 en volume), on exécute une chromatographie supplémen-10 taire sur une colonne contenant du gel de silice (5 x 20 cm). La phase mobile est le mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). On rassemble les fractions contenant le produit/ les redissout dans l'éthanol et les filtre à travers un filtre de 0,22 pm. On évapore l'éthanol et redissout le pro-15 duit dans l'eau. Après lyophilisation/ l'analyse montre que le 6-N-pipéridinopurine-9-B-D-21,3'-didésoxyribofurannoside (0/265 g) est 0/1 hydraté et 0/3 éthanolique.

Analyse, calculé pour C^ç.H21N,-02 . 0 / 3C2HgO. 0, 1H20 :

Calculé : C-58,74 ; H-7,27 ; N-21,96 20 Trouvé : C-58/86 ; H-7,14 ; N-21,82

RMN : 6 8,36 (s, 1H, Hg) ; 8,19 (s, 1H, H2,) ;

6/23 (dd, 1H, Hx) ; 5,01 (t, 1H, J=5,54, OHg,) ;

4,12 (m, 3H, H , CH2) : 3,52 (m, 2H, H5 , ) ;

2,37 (m, 2H, H2,) ; 2,04 (m, 2H, H3,) ; 25 1,61 (large, 2H, CH2).

Exemple 2

6-chloropurine-9-g-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside

On exécute la synthèse du 6-chloropurine-9-B-D-2 1 /3 '-didésoxyribofurannoside comme décrit à l'Exemple 1/ 30 sauf que l'on dissout de la 6-chloropurine (Sigma Chemicals/ St. Louis/ MO/ USA) dans 5 ml de diméthylformamide et 5 ml de diméthoxyéthane.

Après avoir éliminé les solides par filtration/ on concentre le filtrat sous vide jusqu'à ~5 ml, puis le 35 redissout dans 100 ml d'eau. On chromatographie cette matière sur une colonne de 2/5 x 20 cm contenant de la résine XAD-2.

18

Après avoir lavé cette colonne avec 500 ml d'eau/ on élue le produit avec du méthanol. On rassemble les fractions contenant le produit et on ajoute 20 ml de gel de silice anhydre. On chasse tout le solvant sous vide. On applique 5 le gel de silice anhydre au sommet d'une colonne de gel de silice équilibrée avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). On rassemble les fractions contenant le produit/ exemptes de désoxythymidine/ et/ après avoir chassé le solvant sous vide/ on dissout le résidu dans 10 l'éthanol/ le filtre/ puis le dissout dans l'eau et le lyophilise. On purifie encore cette matière par chromatographie sur une colonne contenant de la résine en C^g Polygosil/ avec un mélange méthanol:eau (8:2 en volume). Après avoir chassé le solvant sous vide, on dissout le pro-15 duit dans l'eau et le lyophilise pour obtenir 0/199 g de 6-chloropurine-9-B-D-21/3'-didésoxyribofurannoside (P.F. = 100°C).

Analyse/ calculé pour C]_qH11C"'"N4Ci2 "

Calculé : C-47,16 : H-4,35 ; N-22,00 ; Cl-13,92 20 Trouvé : C-47/10 ; H-4,35 : N-21,94 ; Cl-13,86

Exemple 3

6-éthylaminopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside

On mélange 0/5 g (2/69 mmoles) de 6-éthylamino-purine (préparée par déplacement nucléophile du chlore de 25 la 6-chloropurine (Sigma Chemicals/ St. Louis/ MO/ USA)

par le groupe amino de 1 ' éthylamine) et 0/755 g (3/33 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horvitz et coll./ J. Org . Chem., 31/ 205 (1966)), ainsi que 50 ml de tampon phosphate de potassium 10mM/ pH 6/8/ contenant 0,04 % d'azoture de potas-30 sium. On ajoute 400 U.I. de thymidine-phosphorylase et 700 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase purifiées et on agite la suspension à 37°C. Au'bout de 48 heures/ on ajoute un supplément de 700 unités de (nucléoside purique)-phosphorylase et 400 unités de thymidine-phosphorylase et on agite 35 le mélange réactionnel à 37°C. Cinq jours plus tard, on filtre le mélange réactionnel et applique le filtrat sur une

(41

19

colonne contenant de la résine AG1-X2 hydroxydée (2,5x 10 cm). On élue le produit par un lavage à l'eau et le chromatographie sur résine Amberlite XAD-2 (2,5 x 20 cm). Après avoir appliqué l'échantillon, on lave cette 5 colonne avec un grand volume d'eau. On élue le produit avec du méthanol. Après avoir chassé le solvant, on redissout le produit dans de l'eau et de l'acétone, puis le lyophilise pour obtenir 0,299 g de 6-éthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre 10 comme 0,2 hydraté et 0,1 acétonique (P.F. <30°C ; [a]20oc = -29,45° (0,5, DMF)).

Analyse, calculé pour C,_H._NcO_.0,2H^0.0,1C_H,0 :

lzl/Dz 2. Jto

Calculé : C-54,17 ; H-6,64 ; N-25,68 Trouvé : C-54,13 ; H-6,69 ; N-25,75 15 Exemple 4

6-éthylméthylaminopurine-9-B~D-2',3'-didésoxyribofurannoside

Le mode opératoire de synthèse du 6-éthylméthyl-aminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside est identique à celui de l'Exemple 2. On filtre le mélange réactionnel 20 et applique le filtrat à une colonne de Dowex-l-hydroxyde (2,5 x 10 cm). On élue le produit avec du méthanol à 90 % dans l'eau (en volume) et le chromatographie sur résine Amberlite XAD-2 (2,5 x 20 cm) après avoir chassé le solvant jusqu'à ~5 ml et redissous le résidu dans 100 ml d'eau. Après 25 avoir appliqué l'échantillon, on lave la colonne avec un grand volume d'eau et on élue le produit avec du méthanol à 95 % dans l'eau (en volume). On rassemble les fractions contenant le produit et on ajoute 20 ml de gel de silice anhydre. On chase tout le solvant sous vide. On applique le gel de silice 30 séché au sommet d'une colonne de gel de silice (4,8 x 20 cm) équilibrée avec un mélange chloroforme :méthanol (98:2 en volume). On rassemble les fractions contenant le produit et, après avoir chassé le solvant sous vide, on dissout tout d'abord dans de l'éthanol et on filtre. Après avoir chassé 35 le solvant et redissous le résidu dans l'eau, on lyophilise la solution pour obtenir 0,3 g de 6-éthylméthylamino-

20

9-&-D-23'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,05 hydraté (P.F. <30°C).

Analyse, calculé pour C^3H^gNç.02 .0 , 05H20 :

Calculé : C-56,12 ; H-6,92 ; N-25,17 5 Trouvé : C-56,12 ; H-6,94 ; N-25,14

RMN : 6 8,36 (s, 1H, Hg) ; 8,19 (s, 1H, H.,) ;

6,23 (dd, 1H, Hlt) ; 5,05 (t, 1H, J=5,58, 0H5 , ) ; 4,09 (m, 1H, H4,) : 4,08 (m, 2H, CH2) :

3,51 (m, 2H, H5,) ; 3,33 (s, 3H, CH3) ; 10 2,41 (m, 2H, H2,) ; 2,03 (m, 2H, H3,) ;

1,14 (t, 3H, J=7,01, CH3).

Exemple 5

6-iodopurine-9-S-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On mélange 0,624 g (2,54 mmoles) de 6-iodopurine 15 (Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA) et 0,71 g (3,13 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) avec 700 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 2000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 7000 U.I. de 20 (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981), et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 48 heures, on filtre le mélange réactionnel et on sèche le filtrat sous vide. On dissout le résidu résultant 25 dans de l'éthanol à 95 % dans l'eau (en volume) et, après avoir ajouté -20 ml de gel de silice, on chasse le solvant sous vide. On applique le gel de silice séché au sommet d'une colonne de gel de silice (2,8 x 50 cm) et on élue le produit avec un mélange chloroforme :méthanol (95:5 en volume). On 30 rassemble les fractions ne contenant que le produit, et on chasse le solvant sous vide. On redissout le résidu dans de l'éthanol et filtre a travers un filtre de 0,22 pm. Après avoir chassé la majeure partie de l'éthanol et ajouté -25 ml d'eau, on lyophilise la matière pour obtenir 0,088 g de 35 6-iodopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,2 hydraté (P.F. = 151-153°C).

tî

21

Analyse, calculé pour C20H11N4°2 ■ 0 , 2^0 :

Calculé : C-35/15 ; H-3/46 ; N-15,77 Trouvé : C-35,31 ; H-3,31 ; N-15,83 Exemple 6

5 6-cyclopropylméthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On prépare de la 6-cyclopropylméthylaminopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemicals/ St. Louis, MO/ USA) par le groupe amino 10 de la cyclopropylméthylamine (Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA).

On dissout 0,50 g (2,64 mmoles) de 6-cyclopropylméthylaminopurine dans 5 ml de diméthylf ormamide. Après refroidissement à la température ambiante, on ajoute 0,90 g 15 (3,98 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) en même temps que 30 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 10 000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 20 000 U.I. de (nucléoside purique)-phos-20 phorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, adsor-bées sur 10 ml de DEAE-cellulose (Whatman), et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 8 heures, on filtre le mélange réactionnel et on applique le filtrat à une série de colonnes 25 couplées. La colonne initiale contient de la résine AG1-X2 forme OH (2,5 x 10 cm), tandis que la seconde colonne contient de la résine Amberlite XAD-2 (2,5 x 20 cm). Après avoir appliqué l'échantillon, on lave les colonnes avec 500 ml d'eau et élue le produit avec du méthanol. On soumet ensuite 30 le produit à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (5 x 20 cm) avec un mélange chloroforme: méthanol (9:1 en volume). On chasse le solvant sous vide et transfère le produit gommeux dans un flacon après dissolution dans l'acétone. Par lyophilisation, on obtient 0,588 g 35 de 6-cyclopropylméthylaminopurine-9-B-D-23'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,15 hydraté et 0,15 acétonique.

22

Analyse, calculé pour c14HlgN^02.0,15H20.0,ÎSC^H^O :

Calculé : C-57,71 ; H-6,77 ; N-23,29 Trouvé : C-57,73 ; H-6,94 ; N-23,39 Exemple 7

5 6-isopropylaminopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside On exécute la synthèse du 6-isopropylaminopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside comme décrit à l'Exemple 1/ sauf que l'on dissout de la 6-isopropylaminopurine (préparée à partir de 6-chloropurine (Sigma Chemicals, St. 10 Louis, MO, USA) et d'isopropylamine) dans 5ml de diméthyl-formamide et 5 ml de diméthylsulfoxyde.

Après lyophilisation, l'analyse montre que le 6-isopropylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside (0,502 g) est 0,2 hydraté (P.F. = 55-57°C).

15 Analyse, calculé pour C^^H29N5°2*0/^H2° :

Calculé : C-55,58 ; H-6,96 ; N-24,93 Trouvé : C-55,54 ; H-6,96 ; N-25,01 Exemple 8

Thiamiprine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside 20 On dissout 0,5 g de Thiamiprine (Burroughs Wellcome

Co., Research Triangle Park, NC, USA) dans 2,5 ml de diméthyl-sulfoxyde et 15 ml de diméthoxyéthane et on mélange la solution avec 0,8 g de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 30 ml de phos-25 phate de potassium, pH 6,8. On ajoute 1600 U.I. de thymidine-phosphorylase et 70 000 U.I. de (nucléoside purique.)-phos-phorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981), et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 96 heures, on filtre 30 le mélange réactionnel et réduit le volume sous vide jusqu'à obtention d'un sirop. On ajoute 25 ml d'eau et conserve la solution pendant une nuit à 3°C. On recueille le précipité par filtration, le met en suspension dans 5 ml de diméthyl-formamide et le filtre. On ajoute 15 ml de méthanol au fil-35 trat et conserve la solution à -20°C. Au bout de 5 jours, on recueille les solides par filtration, les dissout dans

23

du méthanol à 65 % dans l'eau (en volume) et on chro-aatographie sur résine AG-1 X2 hydroxydée. On élue le produit avec du méthanol à 65 % dans l'eau (en volume). Après avoir chassé le solvant sous vide,,—©n—di-ssout les solides dans20 ml de mélange chloroforme :méthanpi^C9vl) et chromatographie sur un lit de gel de silice (3 x 50 cm) équilibré avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). On rassemble Vies fractions contenant le produit et chasse le solvant sou,s vide.-On débarrasse le produi't du gel de silice

10 résiduel \e^i' dissolvant dans de l'éthahol à 95 % dans l'eau

.-"'A

(en vjçlmTieO et en filtrant à travers? un filtre de 0,22 |am. On chasse i^éthanol par évaporatiofr-et on ajoute -200 ml d'eau. On lyophilise la suspension résultante pour obtenir 0,056 g de Thiamiprine-9-B-D-23'-didésoxyribofurannoside 15 que l'analyse montre comme 0,4 hydrate et 0,7 méthanolique (P.F. = 130°C, fusion partielle à/110°C).

Analyse, calculé pour C^H^gSNgO^ . 0 , 4^0.0 , 7CH^0 :

Calculé : C-41,84 ; H-4,68 ; S-7,60 ; N-26,55 Trouvé : C-41>93 ; H-4,43 ; S-7,48 ; N-26,34 20 Exemple 9

2-ami no-6-rv^propoxy pur ine-9 - B-D-2',3'-didésoxy-ribofurannoside

5n mé 1-3^96—0-^21 ^ .de 2-amino-6-n-propoxypurine (préparée par déplacement nucléophile^du chlore de la 25 2-amino-6-chloropurine (Aldrich Chemical jbo., Milwaukee,

WI, USA) par l'anion alcoxy formé entre^l'hydrure de sodium et le propanol)' et 0,29 g de 3 ' -dSsoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Orq. Chem., 31, 205 (1966)) dans 100 ml de phosphate de potassium,,pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture 30 de potassiurii. Oiia^-Oute 1200 U.I- de^thymidine-phosphorylase et 8400 U.i^-de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsk-^Lej^ coll., j^ochemirs-try, 20 , "36i5—(-1-9B1 ) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées et on agite la suspension à 35cC.jAu bout de 48 heures, on filtre le mélange réaction-35 nel ey on chromatographie le filtrat sur une colonne contenant pe la résine AG-1 X2 hydroxydée (2x5 cm). On élue le

(t

24

produit avec du méthanol à 90 % dans l'eau (en volume). On chasse le solvant sous vide et dissout le résidu dans du méthanol. On ajoute 10 ml de gel de silice anhydre et chasse le méthanol sous vide. On applique le gel de silice séché 5 à une colonne de gel de silice (2,5 x 30.cm) équilibrée dans un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). Ce mélange est également le solvant d'élution. On rassemble les fractions ne contenant que le produit et chasse le solvant sous vide. On élimine le gel de silice résiduel et sèche le pro-10 duit comme décrit à l'Exemple 8. On obtient ainsi 0,132 g de 2-amino-6-n-propoxypurine-9-B-D-2'^'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,2 hydraté (P.F. = 70°C).

Analyse, calculé pour C. -H. nNc0-,. 0 , 2H„0 :

«î x y -> o z thiopurine obtenue chez Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, 20 USA, et 4,47 mmoles de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 50 ml d'une solution de phosphate de potassium 15mM à pH 7,2. On ajoute 7890 U.I. de thymidine-phosphorylase et 1980 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Bio-25 chemistry, 20, 3615 (1981 ) et brevet des E.U.A. N" 4 381 444) et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 144 heures, on filtre le mélange réactionnel et conserve le filtrat à -20°C. Après décongélation, on ajuste le filtrat à pH 10,7 avec de l'hydroxyde d'ammonium et le chromatographie sur une colonne 30 contenant de la résine Dowex-l-formiate (2,5 x 8 cm) . On élue cette colonne avec du n-propanol à 30 % dans l'eau (en volume). On rassemble les fractions contenant' le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans du n-propanol à 30 % dans l'eau (en volume) et le chromato-35 graphie sur une colonne contenant du BioRad P-2 (5 x 90 cm). On sépare le produit de la colonne par élution avec du n-pro-

15

Calculé : C-52,91 ; H-6,56 ; N-23,73 Trouvé : C-52,52 ; H-6,62 ; N-23,49 Exemple 10

6-éthylthiopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 1 g (5,5 mmoles) de 6-éthyl-

25

panol à 30 % dans l'eau (en volume). On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide pour obtenir 0/427 g de 6-éthylthiopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0/5 hydraté.

5 Analyse, calculé pour C12H16SN4°2.0,5H20 :

Calculé : C-49,81 ; H-5,92 ; N-19,36 ; S-11,44 Trouvé : C-49,63 ; H-5,95 ; N-19,28 ; S-11,06 RMN : 6 8,71 (s, 1H, Hg) ; 8,67 (s, 1H, H2) ;

6,33 (t, 1H, H1,) ; 4,1 (m, 2H, OH, H4,) ; 10 3,4-3,6 (m, 2H, 5'CH2) ; 1,8-2,4 (m, 4H, 2' et 3'CH2) ;

1,5 (t, 3H, CH3).

Exemple 11

2-amino-6-benzylthiopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

15 On dissout 0,5 g (1,9 mmoles) de 2-amino-6-benzyl-

thiopurine obtenue chez Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA, et 0,543 g (2,0 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 20 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 7, contenant 0,04 % 20 d'azoture de potassium. On ajoute 2000 U.I. de thymidine-

phosphorylase et 2900 U.I. de (nucléoside purique)-phospho-rylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, et on agite la suspension à 35°C. Au bout de trois jours, on ajoute 25 80 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 7. Un jour plus tard, on filtre le mélange réactionnel. On dissout le gâteau dans du méthanol à 90 % dans l'eau (en volume), et on chromatographie le filtrat sur une colonne de 2,5 x 10 cm contenant du Dowex-l-hydroxyde. On sépare le produit de la 30 colonne par élution avec du méthanol à 90 % dans l'eau

(en volume). On rassemble les fractions contenant le produit et, après lyophilisation, on obtient 0,086 g de 2-amino-6-benzylthiopurine-9-B-2',3'-didésoxyribofurannoside. Analyse, calculé pour cj7H^9SN5°2 :

35 Calculé : C-57,13 ; H-5,36 ; N-19,59 ; s-8,97

Trouvé : C-57,02 ; H-5,39 ; N-19,51 ; s-8,89

26

RMN : 6 8,18 (s, lH, Hg ) ; 7,3 (m, 5H, «> ) :

6,6 (s, 2H, NH2) ; 6,08 (dd, 1H, H^ , ) ;

4,93 (large, 1H, 5'OH) ; 4,45 (large, 2H, CH2) ;

4,08 (m, 1H, H4,) ; 3,43-3,65 (m, 2H, 5'CH2) ;

5 2,35 (m, 2H, 2'CH2) ; 2,0 (m, 2H, 3'CH2).

Exemple 12

6-éthoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 0,5 g (3,0 mmoles) de 6-éthoxy-purine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 0,75 g 10 (3,3 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll.,

J. Org. Chem. , 31, 205 (1966)) dans 25 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 800 U.I. de thymidine-phosphorylase et 1200 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. 15 Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 24 heures, on ajoute 85 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, et on agite le mélange réactionnel pendant cinq jours de plus à 35°C. On enlève 20 le précipité réactionnel par filtration et on chromatographie le filtrat sur une colonne de 2,5 x 10 cm contenant du Dowex-l-hydroxyde. On élue le produit avec du méthanol a 90 % dans l'eau (en volume) et on rassemble les fractions contenant le produit. Après avoir chassé le solvant 25 sous vide, on dissout la matière dans un mélange à 30 % de n-propanol/eau (en volume) et la chromatographie sur une colonne de 5 x 90 cm contenant de la résine BioRad P-2. On regroupe les fractions contenant le produit et, après lyophilisation, on obtient 0,225 g de 6-éthoxypurine-9-£-30 D-23'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,15 hydraté.

Analyse, calculé pour ci3H]_7N5°2 . 0 ,15H20 :

Calculé : C-53,98 ; H-6,15 ; N-20,98 Trouvé : C-54,05 ; H-6,15 -, N-20,88 35 RMN : 6 8,6 (s, lH, Hg) ; 8,5 (s, 1H, H2) ;

6,3 (dd, 1H, Hlf) ; 4,97 (t, lH, 5'OH) ;

27

4,6 (m, 2H, -CH2-) ; 4,1 (m, lH, H4,) ;

3,53 (m, 2H, 5'CH2) ; 2,41 (m, 2H, 2'CH2) ;

2,03 (m, 2H, 3'CH2) ; 1,4 (t, 3H, J = 0,035 Hz, CH3). Exemple 13

5 6-diméthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 1 g (6,13 mmoles) de 6-diméthyl-aminopurine (Sigma Chemical C ... , St. Louis, MO, USA) et 1 g (4,44 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 50 ml d'une solution de 10 phosphate de potassium lOmM, pH 7,0, contenant 0,04 % d'azo-ture de potassium. On ajoute 2000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 3000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées et on agite la 15 suspension à 35°C. Au bout de 120 heures, on filtre le mélange réactionnel et chromatographie le filtrat sur une colonne contenant de la résine Dowex-l-hydroxyde (2,5 x 8 cm) avec du méthanol à 90 % dans l'eau (en volume) comme éluant. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse 20 le solvant sous vide. On dissout le résidu dans 25 ml de n-propanol à 30 % dans l'eau (en volume) et le chromatographie sur une colonne contenant du BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue le produit avec du n-propanol à 30 % dans l'eau (en volume). On rassemble les fractions contenant le produit 25 et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans

30 ml d'eau désionisée et le chromatographie sur une colonne contenant de la résine Sephadex G-10 (5 x 90 cm). L'éluant est de l'eau. On rassemble les fractions appropriées et, après lyophilisation, on obtient le 6-diméthylaminopurine-30 9-&-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,3 hydraté (P.F. = 162°C).

Analyse, calculé pour ci2H17N5°2.0,3H20 :

Calculé : C-53,64 ; H-6,60 : N-26,06 Trouvé : C-53,63 ; H-6,63 ; N-25,8

i

28

Exemple 14

6-hydroxyéthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 0,5 g (2,8 mmoles) de 6-hydroxy-éthylaminopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 0,76 g (3,30 mmoles) de 31-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Orq. Chem., 31, 205 (1966)) dans 75 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azo-ture de potassium. On ajoute 400 U.I. de thymidine-phosphorylase et 700 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 8 jours, on ajoute 600 U.I. de thymidine-phosphorylase et 1050 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase. Au bout d'un jour de plus, on filtre le mélange réactionnel et applique le filtrat a une colonne de 2,5 x 10 cm contenant du Dowex-l-hydroxyde. On élue le produit avec du méthanol. On rassemble les fractions contenant le produit et les évapore sous vide. On applique ensuite le produit à une colonne de gel de silice de 2,5 x 50 cm d'où on l'élue sous pression avec un mélange de chloroforme: méthanol (8:2). On rassemble les fractions contenant le produit et, après lyophilisation, on obtient le 6-hydroxyéthyl-aminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,65 hydraté (P.F. = 153°C).

Analyse, calculé pour C^2H]_7N5°3 * ^ "

Calculé : C-49,53 ; H-6,34 ; N-24,07 • Trouvé : C-49,85 ; H-6,07 ; N-23,70 Exemple 15

6-cyclopropylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On dissout 0,5 g (2,86 mmoles) de 6-cyclopropyl-aminopurine (préparée à partir de 6-chloropurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et de cyclopropylamine) et 1 g (4,30 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Orq♦ Chem., 31, 205 (1966)) dans 10 ml d'un mélange diméthylsulfoxyde :N'N'-diméthylformamide a 1:1 et les dilue

29

encore avec 30 ml d'un tampon phosphate de potassium 10mM, pH 6/8, contenant 0/04 % d'azoture de potassium. On ajoute 10 000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 20 000 de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll./ Bio-5 chemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, adsorbées sur 10 ml de résine DEAE (Whatman)/ et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 8 heures, on filtre le mélange réactionnel et applique le filtrat à une série de colonnes couplées. La colonne initiale contient du Dowex-10 1-hydroxyde (2,5 x 10 cm)/ tandis que la seconde colonne est garnie de résine Amberlite XAD-2 (2/5 x 20 cm). Après avoir appliqué l'échantillon/ on lave les colonnes avec un grand volume d'eau et on élue le produit avec du méthanol. On rassemble les fractions contenant le produit et, après 15 lyophilisation/ on obtient 0,54 g de 6-cyclopropylamino-purine-9-6-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre domme 0,55 hydraté (P.F. = 63-65°C).

Analyse, calculé pour C]_3H]_7N5°2 . 0 , 55H,,0 :

Calculé : C-54/75 ; H-6,40 ; N-24,55 20 Trouvé : C-54,67 ; H-6,43 ; N-24/57

Exemple 16

6-cyclopentylaminopurine-&-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On dissout 0/506 g (2,49 mmoles) de 6-cyclopentyl-aminopurine (préparée à partir de 6-chloropurine (Sigma 25 Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et de cyclopentylamine) dans 5 ml de N,N-diméthylformamide et 5 ml de diméthylsul-foxyde. On ajoute 0,894 g (3,94 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) en même temps que 30 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, 30 pH 6,8, et 0,04 % d'azoture de potassium. On ajuste le pH à 6,8 avec de l'acide acétique. On ajoute au mélange réactionnel 10 000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 20 000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. 35 N0 4 381 444) purifiées, liées à de la DEAE-cellulose

(Whatman). On agite la suspension à 35°C pendant 8 heures,

î

30

la filtre et conserve le filtrat pendant une nuit à -20°C. Après décongélation, on applique le filtrat à une colonne de 2,5 x 10 cm contenant de la résine Dowex-l-hydroxyde. On élue le produit avec de l'eau. On rassemble les frac-5 tions contenant le produit et les chromatographie sur une colonne contenant de la résine XAD-2 (2,5 x 20 cm). On élue ce produit avec 350 ml d'eau, puis avec du méthanol. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le méthanol sous vide. On dissout le résidu dans l'eau et, après 10 lyophilisation, on obtient 0,459 g de 6-cyclopentylamino-purine-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,05 hydraté (P.F. = 88°C).

Analyse, calculé pour C. CH~. Nc0-,. 0 , 05H„0

10 ZI D Z Z

Calculé : C-59,21 ; H-6,99 ; N-23,02 15 Trouvé : C-59,24 ; H-7,05 ; N-22,95

Exemple 17

2-amino-6-méthoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On dissout 0,5 g (3,0 mmoles) de 2-amino-6-méthoxy-purine (préparée à partir de 2-amino-6-chloropurine (Aldrich 20 Chemical Co., Milwaukee, WI, USA) et de méthanol) et 1 g

(4,50 mmoles) de 31-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Orq. Chem., 31, 205 (1966)) dans 10 ml d'un mélange de diméthylsulfoxyde:N,N-diméthylformamide à 1:1 et les dilue encore avec 30 ml d'un tampon phosphate de potassium lOmM, 25 pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 10 000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 20 000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, adsorbées sur 10 ml de résine DEAE, 30 et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 8 heures, on filtre le mélange réactionnel et applique le filtrat à une colonne de 2,5 x 10 cm contenant du Dowex-l-hydroxyde. On rassemble les fractions contenant le produit et les réduit à un volume de 70 ml. On applique cet échantillon à une 35 colonne de 2,5 x 20 cm garnie de résine Amberlite XAD-2.

On lave la colonne avec un grand volume d'eau et on élue le tf

31

produit avec du méthanol. On rassemble les fractions contenant le produit et, après lyophilisation, on obtient le 2-amino-6-méthoxypurine-9-B-D-21,3'-didésoxyribofurannoside. Analyse, calculé pour CiiHi5N5°3 :

5 Calculé : C-49,81 ; H-5,70 ; N-26,40

Trouvé : C-49,70 ; H-5,72 ; N-26,34 Exemple 18

6-n-propoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On dissout 0,5 g (2,8 mmoles) de 6-n-propoxypurine 10 (Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA) et 0,96 g (4,2 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 5 ml de diméthylsulfoxyde et 5 ml de N,N-diméthylformamide. On ajoute 30 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de 15 potasium, et 20 000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase et 10 000 U.I. de thymidine-phosphorylase (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) purifiées, adsorbées sur 10 ml de résine DEAE-cellulose, et on agite le mélange réactionnel à 35°C pendant 20 7 heures. On enlève la résine par centrifugation et applique le surnageant à une colonne de AG1-X2 (forme OH) (2,5 x 10 cm) couplée à une colonne de XAD-2 (2,5 x 20 cm). On lave les colonnes avec 500 ml d'eau et on élue le produit avec du méthanol. On soumet le produit a une chromatographie instan-25 tanée sur une colonne de gel de silice (3 x 50 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). Par lyophilisation, on obtient 0,554 g de 6-n-propoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,3 hydraté. Analyse, calculé pour C^H^gN^O^ . 0 , 3H20 :

30 Calculé : C-55,04 ; H-6,61 ; N-19,75

Trouvé : C-55,05 ; H-6,61 ; N-19,72 Exemple 19 '

6-n-butoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 0,5 g (2,6 mmoles) de 6-n-35 butoxypurine (Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA) et 0,70 g (3,1 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll.,

32

J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 100 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 3500 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase et 800 U.I. de thymidine-phosphorylase puri-5 fiées (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite la solution à 32°C. Au bout de 7 jours, on filtre le mélange réactionnel et applique le filtrat à une colonne contenant de la résine AG1-X2 (forme OH ) (2,5 x 10 cm). On élue le 10 produit avec du méthanol aqueux à 90 %. On chasse le solvant du produit sous vide et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (2,5 x 80 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (8:2 en volume). On dissout le produit dans l'eau et l'applique à une colonne 15 contenant de la résine XAD-2 (2,5 x 20 cm). On lave la colonne avec 500 ml d'eau, puis la développe avec du méthanol. Par lyophilisation, on obtient 0,276 g de 6-n-butoxypurine-9-B-D-2',3 '-didésoxyribofurannoside (P.F. = 55°C).

Analyse, calculé pour c^4H2oN4°3 :

20 Calculé : C-57,52 ; H-6,90 ; N-19,17

Trouvé : C-57,86 ; H-7,29 ; N-18,83 Exemple 20

6-cyclopropylméthoxypurine-9-S-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

25 On prépare la 6-cyclopropylméthoxypurine par dépla cement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) par l'anion alcoxy formé entre l'hydrure de sodium et l'alcool cyclopropylméthylique.

On fait réagir 0,505 g (26,5 mmoles) de 6-cyclo-30 propylméthoxypurine et 0,908 g (40,1 mmoles) de 2' , 3'-didésoxy-thymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) et on chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18. On soumet les fractions contenant le produit à une chromatographie instantanée sur une 35 colonne de gel de silice (3 x 50 cm) avec un mélange acéto-nitrile:eau (98:2 en volume). Par lyophilisation, on obtient

33

0/496 g de 6-cyclopropylméthoxypurine-9-B-D-21/31-didésoxyribofurannoside.

Analyse/ calculé pour C-.H.-N.O- :

±H 1o 4 o

Calculé : C-57,92 ; H-6,25 ; N-19,30 5 Trouvé : C-57/99 ; H-6/28 ; N-19/27

Exemple 21

6-cyclopentyloxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On prépare la 6-cyclopentyloxypurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) par l'anion alcoxy formé entre l'hydrure de sodium et le cyclopentanol.

On fait réagir 0,506 g (2,48 mmoles) de 6-cyclopentyloxypurine et 0,856 g (3,78 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) et on chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18. On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (3 x 50 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (95:5 en volume). Par lyophilisation, on obtient 0,385 g de 6-cyclo-pentyloxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,15 hydraté.

Analyse, calculé pour C^^H2qN4Û2•0/I5H2O :

Calculé : C-58/68 : H-6/66 ; N-18,25 Trouvé : C-58,61 ; H-6,53 ; N-18,25 Exemple 22

6-cyc1ohexyloxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On prépare la 6-cyclohexyloxypurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma 30 Chemical Co., St. Louis, MO, USA) par l'anion alcoxy formé entre l'hydrure de sodium et le cyclohexanol.

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,50 g (2,29 mmoles) de 6-cyclohexyloxypurine et 0,776 g (3,42 35 mmoles) de 31-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll.,

J. Org. Chem. , 31, 205 (1966)), sauf que l'on utilise 10 ml

I»

10

15

20

25

34

de glyme en addition aux 5 ml de diméthylsulfoxyde et aux 5 ml de N,N-diméthylformamide et que l'on utilise un total de 70 ml de tampon phosphate de potassium 10mM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. Par lyophilisation, 5 on obtient 0,102 g de 6-cyclohexyloxypurine-9-B-D-2',3'-

didésoxyribofurannoside (P.F. = 105°C) que l'analyse montre comme 0,2 hydraté.

Analyse, calculé pour C,,H..N,0,.0,2H_0 :

16 22 4 3 2

Calculé : C-59,69 ; H-7,01 ; N-17,40 10 Trouvé : C-59,69 ; H-6,93 ; N-17,27

Exemple 23

6-cyclobutylaminopurine-9-g-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On prépare la 6-cyclobutylaminopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma 15 Chemical Co., St. Louis, MO, USA) par le groupe amino de la cyclobutylaminé.

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,510 g (2,62 mmoles) de 6-cyclobutylaminopurine et 0,896 g (3,96 20 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J . Org. Chem., 31, 205 (1966)). On chasse le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (3 x 50 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). Par 25 lyophilisation, on obtient 0,524 g de 6-cyclobutylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside (P.F. = 96-98°C).

Analyse, calculé pour ci4Hi9N5°2 :

Calculé : C-58,12 ; H-6,62 ; N-24,20 Trouvé : C-58,19 : H-6,65 ; N-24,16 30 Exemple 24

6-diéthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On prépare la 6-diéthylaminopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) par le groupe amino de la diéthylamine. 35 on fait réagir et ch romatographie sur AG1-X2

(forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,246 g

If

35

(1/28 mmoles) de 6-diéthylaminopurine et 0,463 g (2,04 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)). On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromato-5 graphie instantanée sur une colonne de gel de silice (5 x 20 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une seconde colonne de gel de silice (2,5 x 50 cm) 10 avec de l'acétate d'éthyle. On transfère le produit gommeux dans un flacon après dissolution dans l'acétone et, par lyophilisation, on obtient 0,098 g de 6-diéthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,25 hydraté et 0,20 acétonique.

15 Analyse, calculé pour C24H21N5°2 • 0 , 2C^HgO. 0 , 25H2O :

Calculé : C-57,03 ; H-7,44 ; N-22,78 Trouvé : C-57,02 ; H-7,39 ; N-22,72 Exemple 25

6-pyrrolidinopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside 20 on prépare la 6-pyrrolidinopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine par le groupe amino de la pyrrolidine.

purine et 0,901 g (3,98 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. 25 Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 5 ml de diméthylsulfoxyde et '5 ml de N,N-diméthylformamide. On ajoute 30 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium, et 20 000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase et 10 000 U.I. de thymi-30 dine-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll., Bio-chemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444), adsorbées sur 10 ml de résine DEAE-cellulose, et on agite le mélange réactionnel à 35°C pendant 7 heures. On élimine la résine par centrifugation et on applique le surnageant à une 35 colonne de AG1-X2 (forme OH) (2,5 x 10 cm) couplée à une colonne de XAD-2 (2,5 x 20 cm). On lave les colonnes avec

On dissout 0,500 g (2,64 mmoles) de 6-pyrrolidino-

36

500 ml d'eau et on élue le produit avec du méthanol. Par lyophilisation/ on obtient 0/385 g de 6-pyrrolidinopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0/05 hydraté (P.F. =158-159°C).

5 Analyse/ calculé pour c14HlgN^02.0,05H20 :

Calculé : C-57,94 ; H-6,63 ; N-24,13 Trouvé : C-57/92 ; H-6,67 ; N-24/11 Exemple 26

6-morpholinopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside

On prépare la 6-morpholinopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemical Co. / St. Louis, MO, USA) par le groupe amino de la morpholine.

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,501 g (2,44 mmoles) de 6-morpholinopurine et 0,842 g (3,72 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)). Par lyophilisation, on obtient 0/292 g de 6-morpholinopurine-9-B-D-2'/3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,2 hydraté (P.F. =97°C).

Analyse, calculé pour C-^H^gN^O^ . 0 , 2H20 :

Calculé : C-54,43 ; H-6,33 : N-22,67 Trouvé : C-54,48 ; H-6,28 ; N-22,51 Exemple 27

6-t<,y-diméthylallylaminopurine-9-b-D-2',3'-didésoxy-25 ribofurannoside

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH), comme décrit à l'Exemple 18, 0,500 g (2,46 mmoles) de 6-7,7-diméthylallylaminopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO/ USA) et 0/752 g (3,32 mmoles) de 3'-désoxythymi-30 dine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)). On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (3 x 50 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (95:5 en volume). On applique 35 ensuite les fractions contenant le produit à une colonne de XAD-2 (2,5 x 20 cm) et on élue avec du méthanol. On transfère t

10

15

20

37

le produit gommeux dans un flacon après dissolution dans l'acétone et, par lyophilisation, on obtient 0,445 g de 6-y, 7-diméthylallylaminopurine-9- fi-D-2 ' , 3 1 - didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,45 hydraté et 5 0,20 acétonique.

Analyse, calculé pour ci5H2iN5°2.0,45H20.0,2C3H60 :

Calculé : C-57,99 ; H-7,21 ; N-21,68 Trouvé : C-57,77 ; H-6,91 ; N-21,41 Exemple 28

10 6-furfurylaminopurine-9-B-D~2',3'-didésoxyribofurannoside On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,502 g (2,33 mmoles) de 6-furfurylaminopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 0,754 g (3,33 mmoles) de 3'-désoxy-15 thymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205

(1966)). On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (5 x 50 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). Par 20 lyophilisation, on obtient 0,303 g de 6-furfurylaminopurine-9-fS-D-2 ', 3 ' -didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,2 hydraté.

Analyse, calculé pour C^^H^^N^O^•0,2H20 :

Calculé : C-56,49 ; H-5,50 ; N-21,96 25 Trouvé : C-56,50 ; H-5,53 ; N-21,97

Exemple 29

6-benzylmercaptopurine-9-g-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH), comme décrit à l'Exemple 18, 0,501 g (2,07 mmoles) 30 de 6-benzylmercaptopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 0,704 g (3,11 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)),

sauf que l'on utilise 10 ml de glyme pour dissoudre la base purique. On chasse sous vide le solvant des fractions con-35 tenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (3 x 50 cm)

38

avec un mélange chloroforme :méthanol (95:5 en volume). On transfère le produit dans un flacon après dissolution dans l'éthanol et, par lyophilisation, on obtient 0,304 g de 6-benzylmercaptopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside 5 que l'analyse montre comme 0,05 hydraté et 0,05 éthanolique (P.F. = 81-83 ° C).

Analyse, calculé pour c;[7H]_gN402S.0,OSH^O.0,OSC^HgO : Calculé : C-59,43 ; H-5,37 ; N-16,21 ; S-9,28 Trouvé : C-59,49 ; H-5,38 ; N-16,32 ; S-9,30 10 Exemple 30

6-anilinopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH), comme décrit à l'Exemple 18, 0,500 g (2,37 mmoles) de 6-anilinopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 15 et 0,752 g (3,32 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)). On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (2,5 x 50 cm) avec un mélange 20 chloroforme :méthanol (95:5 en volume). Par lyophilisation, on obtient 0,470 g de 6-anilinopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,05 hydraté (P.F. =170-172°C).

Analyse, calculé pour C^^H^^N^O^.0,O5H2O :

25 Calculé : C-61,55 ; H-5,52 ; N-22,43

Trouvé : C-61,57 ; H-5,55 ; N-22,43 Exemple 31

2-amino-6-éthoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 30 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,5 g

(2,8 mmoles) de 2-amino-6-éthoxypurine (préparée par déplacement nucléophile du chlore de la 2-amino-6-chloropurine (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, USA) par l'anion alcoxy formé entre l'hydrure de sodium et l'éthanol) et 0,950 g 35 (4,19 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)). On chasse sous vide le sol-

If

39

vant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (5 x 20 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). Par lyophilisation, on obtient 0,443 g 5 de 2-amino-6-éthoxypurine-9-B-D-2' ,3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,3 hydraté (P.F. =150°C, fusion partielle à 65°C).

Analyse, calculé pour C]_2H17N5°3* ^' ^H2° :

Calculé : C-50,63 ; H-6,23 ; N-24,60 10 Trouvé : C-50,77 ; H-6,21 ; N-24,63

Exemple 32

2/6,8-triaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0/500 g 15 (3,0 mmoles) de 2,6,8-triaminopurine (R. Davies et coll., Biochim. Biophys. Acta., 564(3), 448 (1979)) et 1/02 g (4/50 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Orq. Chem., 31, 205 (1966)). Par lyophilisation, on obtient 0,148 g de 2,6,8-triaminopurine-9-3-D-2',3'-didésoxy-20 ribofurannoside que l'analyse montre comme 0,7 méthanolique (P.F. =154°C).

Analyse, calculé pour C^QH^^N702.0,7CH40 :

Calculé : C-44,76 ; H-6,24 ; N-34,08 •

Trouvé : C-44,51 ; H-5,95 ; N-33,78 25 Exemple 33

2-amino-6-benzylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,2 g 30 (0,8 mmoles) de 2-amino-6-benzylaminopurine (préparée par déplacement nucléophile du chlorure de la 2-amino-6-chloro-purine (Aldrich Chemical Co. , Milwaukee, WI, USA) par la benzylamine) et 0,282 g (1,2 mmoles) de 3-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966))/ 35 sauf que l'on utilise de plus petites quantités de (nucléoside purique)-phosphorylase (10 000 U.I.) et de thymidine-

40

phosphorylase (5000 U.I.). Par lyophilisation, on obtient 0,182 g de 2-amino-6-benzylaminopurine-9-B-D-23'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,60 méthanolique (P.F. = 92-94 °C).

5 Analyse, calculé pour ci7H20N6°2 • 0, ôOCH^O :

Calculé : C-58,78 ; H-6,28 ; N-23,37 Trouvé : C-58,60 ; H-6,06 ; N-23,48 Exemple 34

2-amino-6-cyclopropylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-10 ribofurannoside

(forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,495 g (2,1 mmoles) de 2-amino-6-cyclopropylaminopurine (préparée par déplacement nucléophile du chlore de la 2-amino-6-chloro-15 purine (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, USA) par la cyclopropylamine) et 0,73 g (3,2 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem. , 31, 205 (1966)). Par lyophilisation, on obtient 0,419 g de 2-amino-6-cyclo-propylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que 20 l'analyse montre comme 0,3 hydraté (P.F. =82-84°C).

Analyse, calculé pour C^3H]_gNg°2 * ^ ' "^H2° :

Calculé : C-52,80 ; H-6,34 ; N-28,42 _

Trouvé : C-52,83 ; H-6,35 ; N-28,44 Exemple 35

25 2-amino-6-méthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxy-ribofurannoside

6-méthylaminopurine (préparée par déplacement nucléophile du chlore de la 2-amino-6-chloropurine (Aldrich Chemical Co., 30 Milwaukee, WI., USA) par la méthylamine) et 0,893 g (3,9 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem.,

lOmM, pH 6,8, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 2880 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase et 35 1200 U.I. de thymidine-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A.

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2

On met en suspension 0,5 g (3,0 mmoles) de 2-amino-

31, 205 (1966)) dans 100 ml de tampon phosphate de potassium

41

N° 4 381 444) et on agite le mélange réactionnel à 33°C pendant 72 heures. On applique le mélange réactionnel à une colonne de AG1-X2 (forme OH) (2,5 x 10 cm), et on élue le produit avec du méthanol aqueux à 90 %. On chasse le solvant 5 sous vide et soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (2,5 x 30 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (97:3 en volume). Par lyophilisation, on obtient 0,3 g de 2-amino-6-méthylaminopurine-9-B-D-21,31-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre 10 comme 0,4 hydraté (P.F. = 95°C, fusion partielle à 75°C). Analyse, calculé pour C^H^gNg02 . 0 , 4H20 :

Calculé : C-48,66 ; H-6,24 ; N-30,95 Trouvé : C-48,57 : H-6,27 ; N-30,77 Exemple 36

15 2-amino-6-n-propoxypurine-9-6-D-2',3'-didésoxy-ribofurannoside

On met en suspension 0,21 g (1,1 mmoles) de 2-amino-6-n-propoxypurine (préparée par déplacement nucléophile du chlore.de la 2-amino-6-chloropurine (Aldrich Chemical Co., 20 Milwaukee, WI, USA) par l'anion alcoxy formé entre l'hydrure de sodium et le n-propanol) et 0,293 g (1,3 mmoles) de 3'-désoxy-thymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 100 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 7,0, contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 25 2880 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase et 1200 U.I. de thymidine-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite le mélange réactionnel à 35°C pendant 48 heures. On applique le mélange réactionnel à une 30 colonne de AG1-X2 (forme OH) (2,5 x 5 cm) et on élue avec du méthanol aqueux à 90 %. On chasse le solvant sous vide et soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (2,5 x 30 cm) avec un mélange chloroforme :méthanol (9:1 en volume). Par lyophilisation, 35 on obtient 0,132 g de 2-amino-6-n-propoxypurine-9-£J-D-2', 3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,2 hydraté (P.F. = 70°C).

42

Analyse, calculé pour C^H^gNj-O^ . 0 , 2H20 :

Calculé : C-52,59 ; H-6,59 ; N-23,59 Trouvé : C-52,52 ; H-6,62 ; N-24,49 Exemple 37

5 6-benzylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 1,0 g (4,44 mmoles) de 6-benzyl-aminopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 1,0 g (4,4 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 50 ml de tampon phos-10 phate de potassium 15mM, pH 7,2. On ajoute 2000 U.I. de

(nucléoside purique)-phosphorylase et 7900 U.I. de thymidine-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite le mélange réactionnel à 25°C. 15 Au bout de 1 heure, on ajoute 6 ml de diglyme et on agite le mélange réactionnel à 37°C pendant 6 jours. On ajuste le filtrat réactionnel à pH 10,5 avec de l'hydroxyde d'ammonium et l'applique à une colonne de AG1-X2 (forme formiate) (2x6 cm), et on élue le produit avec du propanol aqueux 20 à 30 %. On chromatographie ensuite le produit sur une colonne de P-2 (2,5 x 90 cm), on l'élue avec du propanol aqueux à 30 % et, par lyophilisation, on obtient 0,063 g de 6-benzylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,5 hydraté (P.F. =65°C).

25 Analyse, calculé pour ci7Hi9N5°2.0,5H20 :

Calculé : C-61,06 ; H-6,03 ; N-20,94 Trouvé : C-61,29 ; H-6,21 ; N-20,69 Exemple 38

6-isopropoxypurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside 30 On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2

(forme OH) et XAD-2, comme décrit à l'Exemple 18, 0,5 g (2,8 mmoles) de 6-isopropoxypurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 0,95 g (4,2 mmoles) de 3'-désoxy-thymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 35 (1966)). On chasse sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on dissout le résidu dans du propanol

(S

43

aqueux à 30 %. Par chromatographie sur une colonne de G-10 (5 x 90 cm); développée avec du propanol aqueux à 30 %, on obtient une gomme que l'on transfère, après dissolution dans l'acétone/ dans un flacon de lyophilisation. Par lyo-5 philisation, on obtient 0,313 g de 6-isopropoxypurine-9-&-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,2 hydraté et 0,2 acétonique (P.F. =75°C).

Analyse, calculé pour ci3H]_gN4°3 . 0 , 2CgH60. 0 , 2H20 :

Calculé : C-55,65 ; H-6,73 ; N-19,09 10 Trouvé : C-55,65 ; H-6,59 ; N-19,12

Exemple 39

6-n-propylaminopurine-9-g-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On fait réagir et chromatographie sur AG1-X2 (forme OH) et XAD-2, comme décrit a l'Exemple 18, 0,500 g 15 (2,81 mmoles) de 6-n-propylaminopurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) et 0,957 g (4,26 mmoles) de 3'-désoxy-thymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)), sauf que l'on remplace les 5 ml de diméthylsulfoxyde par un supplément de 5 ml de N,N-diméthylformamide. On chasse 20 sous vide le solvant des fractions contenant le produit et on soumet le résidu à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice (3 x 50 cm) avec un mélange chloroforme ^méthanol (9:1 en volume). Par lyophilisation, on obtient 0,499 g de 6-n-propylaminopurine-9-&-D-2',3'-25 didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,7 hydraté.

Analyse, calculé pour c13HlgN502.0,7H20 :

Calculé : C-53,85 ; H-7,09 ; N-24,15 Trouvé : C-53,93 ; H-7,08 ; N-24,18 30 Exemple 40

6-cyclohexylaminopurine-9-S-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On prépare la 6-cyclohexylaminopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine par la cyclo-hexylamine.

35 on dissout 1,0 g (5 mmoles) de 6-cyclohexylamino purine et 2,07 g (9,1 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P.

44

Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 25 ml d'éther 2-méthoxyéthylique et 500 ml de tampon phosphate de potassium 10mM,pH 7,2. On ajoute 5000 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase et 3850 U.I. de thymidine-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3515 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite le mélange réactionnel à 37°C pendant 7 jours. On applique le mélange réactionnel à une colonne de XAD-2 et le lave abondamment à l'eau. On élue le produit avec du méthanol aqueux à 90 %. On rassemble les fractions absorbant les UV et les applique à une colonne de AG1-X2 (forme OH) (2 x 12 cm) et on élue le produit avec du méthanol aqueux à 30 %. On chromatographie de nouveau le produit sur une colonne de P-2 (2,5 x 90 cm) et une colonne de G-10 (2,5 x 90 cm), et on élue chaque colonne avec du propanol aqueux à 30 %. Par lyophilisation, on obtient 0,093 g de 6-cyclohexylamino-purine-9-6-D-2',3'-didésoxyribofurannoside (P.F. =70-72°C). Analyse, calculé pour C]_5H23N5°2 :

Calculé : C-60,55 ; H-7,30 ; N-22,07 Trouvé : C-60,37 ; H-7,39 ; N-21,94 Exemple 41

6-méthylaminopurine-9-B-D-2',3'-didésoxyribofurannoside

On met en suspension 1 g (4,31 mmoles) de 6-méthyl-aminopurine obtenue chez Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA, et 1 g (4,40 mmoles) de 3'-désoxythymidine (J.P. Horwitz et coll., J. Org. Chem., 31, 205 (1966)) dans 50 ml de tampon phosphate de potassium lOmM, pH 7, et 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 2000 U.I. de thymidine-phosphorylase et 2400 U.I. de (nucléoside purique)-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite la suspension à 35°C. Au bout de trois jours, on conserve le mélange réactionnel à -20°C. Après décongélation, on filtre le mélange réactionnel et applique le filtrat à une colonne de 2,5 x 10 cm contenant du Dowex-l-hydroxyde. On sépare le produit de la colonne par élution avec du méthanol à 90 % dans l'eau

45

10

15

20

25

(en volume). On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On chromatographie deux fois cette matière sur une colonne de 5 x 90 cm contenant de la résine BioRad P-2, en utilisant du n-propanol à 30 % dans l'eau (en volume). On rassemble les fractions contenant le produit et, après lyophilisation, on obtient 0,391 g de 6-méthylaminopurine-9-3-D-2',3'-didésoxyribofurannoside que l'analyse montre comme 0,1 hydraté.

Analyse, calculé pour C11H15N502.0,1H20 :

Calculé : C-52,62 ; H-6,10 : N-27,89 Trouvé : C-52,75 ; H-6,16 ; N-28,01

RMN

6 8,34 (s, 1H, Hg)

8,12 (s, 1H, H2)

6,23 (dd, 1H, H1, )

7,72 (large, lH, NH)

5,06 (t, 1H, 5'OH) ; 4,10 (m, 1H, H4,)

3,58-3,69 (m, lH, 5'CH2) 2,95 (large, 3H, CH^)

3,45-3,55 (m, lH, 2,40 (m, 2H, 2'CH2)

5'CH2) et

>, 2H, 3'CH2).

2,07 Exemple 42

Formulations pour Comprimés

On prépare les formulations A, B et C suivantes en granulant les ingrédients par voie humide avec une solution de polyvinylpyrrolidone, puis en ajoutant le stéarate de magnésium et en pressant.

Formulation A

(a) Ingrédient actif

(b) Lactose BP (Pharmacopée britannique)

(c) Polyvinylpyrrolidone BP

(d) Amidon-glycolate de sodium

(e) Stéarate de magnésium mg/comprimé 250 -210

15 20 5

mg/comprimé 250 26

9 12 3

30

500

500

35

Formulation B

(a) Ingrédient actif

(b) Lactose

(c) Avicel PH 101

(d) Polyvinylpyrrolidone BP

mg/comprimé 250 150 60 15

mg/comprimé 250

26 9

46

mg/comprimé mg/comprimé

(e) Amidon-glycolate de sodium 20 12

(f) Stéarate de magnésium 5 3

500 300

Formulation C mg/comprimé

Ingrédient actif 100

Lactose 200

Amidon 50

Polyvinylpyrrolidone 5

Stéarate de magnésium 4

359

On prépare les formulations D et E suivantes en pressant directement les ingrédients mélangés. Le lactose de la formulation E est du type pour pressage direct (Dairy Crest - "Zeparox").

Formulation D mg/comprimé

Ingrédient actif 250

Amidon prégélatinisé NF15 150

400

Formulation E mg/comprimé

Ingrédient actif 250

Lactose 150

Avicel 100

500

Formulation F (Formulation à Libération Réglée)

On prépare cette formulation en granulant les ingrédients ci-dessous par voie humide avec une solution de polyvinylpyrrolidone, puis en ajoutant le stéarate de magnésium et en pressant.

mg/comprimé

(a) Ingrédient actif 500

(b) Hydroxypropylméthyl-cellulose 112 (Methocel K4M Premium)

(c) Lactose BP 53

47

mg/comprimé

(d) Polyvinylpyrrolidone BP 28

(e) Stéarate de magnésium 7

700

5 La libération du médicament s'effectue sur une période d'environ 6 à 8 heures et elle est totale au bout de 12 heures.

Exemple 43

Formulations pour Capsules 10 Formulation A

On prépare une formulation pour capsule en mélangeant les ingrédients de la Formulation D de l'Exemple 42 ci-dessus et on en remplit une capsule de gélatine dure en deux parties. On prépare la Formulation B (ci-dessous) de manière

15 similaire.

Formulation B mg/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Lactose BP 143

(c) Amidon-glycolate de sodium 25 20 (d) Stéarate de magnésium 2

420

Formulation C mq/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Macrogol 4000 BP 350

25 600

On prépare les capsules de la formulation C en faisant fondre le Macrogol 4000 BP/ en dispersant l'ingrédient actif dans la masse fondue et en remplissant de la masse fondue une capsule de gélatine dure en deux parties.

30 Formulation D mq/capsule

Ingrédient actif 250

Lécithine 100

Huile d'arachide 100

450

d

48

On prépare les capsules de la formulation D en dispersant l'ingrédient actif dans la lécithine et l'huile d'arachide et en remplissant de la dispersion des capsules élastiques de gélatine molle.

5 Formulation E (Capsule à Libération Réglée)

On prépare la formulation suivante de capsules à libération réglée en extrudant les ingrédients a, b et c au moyen d'une extrudeuse, puis en nodulisant l'extrudat et en le séchant. On enrobe ensuite les pastilles séchées 10 avec la membrane régulatrice de libération (d) et on en remplit une capsule de gélatine dure en deux parties.

mg/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Cellulose microcristalline 125 15 (c) Lactose BP 125

(d) Ethyl-cellulose 13

513

Exemple 44

Formulations pour Injectables 20 Formulation A

Ingrédient actif 0,200 g

Solution d'acide chlorhydrique 0,1M, ou

Solution d'hydroxyde de sodium 0,1M, q.s. pour pH 4,0 à 7,0 Eau stérile, q.s. pour 10 ml

25 On dissout l'ingrédient actif dans la plus grande partie de l'eau (35-40°C) et on ajuste le pH entre 4,0 et 7,0 avec l'acide chlorhydrique ou l'hydroxyde de sodium, comme il convient. On complète ensuite le volume de la charge avec l'eau, et on filtre à travers un filtre micropore sté-30 rile en introduisant dans un flacon de verre ambré (type 1) que l'on scelle avec des fermetures et capuchons stériles. Formulation B

Ingrédient actif 0,125 g

Tampon phosphate apyrogène stérile,

35 pH 7, q.s. pour 25 ml

11

49

Exemple 45

Injection intramusculaire Ingrédient actif Alcool benzylique

0,20 g 0,10 g 1,45 g 3,00 ml

5 Glycofurol 75

Eau pour injections, q.s. pour

On dissout l'ingrédient actif dans le Glycofurol.

On ajoute et dissout ensuite l'alcool benzylique et on ajoute de l'eau jusqu'à 3 ml. On filtre ensuite le mélange à tra-10 vers un filtre micropore stérile et l'introduit dans des flacons de verre stériles de 3 ml (type 1) que l'on scelle.

Exemple 46

Sirop

Ingrédient actif 0,25 g

15 Solution de sorbitol 1,50 g

Glycérol 2,00 g

Benzoate de sodium 0,005 g

Arôme, Pêche 17.42.3169 0,0125 ml

Eau purifiée, q.s. pour 5,00 ml

20 on dissout l'ingrédient actif dans un mélange du glycérol et de la majeure partie de l'eau purifiée. On ajoute ensuite une solution aqueuse du benzoate de sodium à la solution, puis on ajoute la solution de sorbitol et enfin l'arôme. On complète au volume avec de l'eau purifiée et 25 mélange bien.

Exemple 47 Suppositoire

2020

* L'ingrédient actif est utilisé sous forme d'une poudre dans laquelle au moins 90 % des particules ont un diamètre mg/suppositoire

Ingrédient actif (63 pm)*

30 Graisse dure BP

(Witepsol H15 -Dynamit Nobel)

1770

250

35

égal ou inférieur à 63 pm.

50

On fait fondre un cinquième du Witepsol H15 dans une cuve à chemise de vapeur d'eau à un maximum de 45°C. On passe l'ingrédient actif au tamis de 200 |im et l'ajoute a la base fondue tout en mélangeant/ en utilisant un 5 Silverson équipé d'une tête coupante, jusqu'à obtention d'une dispersion lisse. En maintenant le mélange à 45°C, on ajoute le reste du Witepsol H15 à la suspension et on agite pour s'assurer d'un mélange homogène. On passe toute la suspension à travers un tamis en acier inoxydable de 10 250 jjm et, tout en continuant à agiter, on laisse refroidir jusqu'à 40°C. A une température de 38°C à 40°C, on introduit 2,02 g du mélange dans des moules appropriés de 2 ml en matière plastique. On laisse les suppositoires refroidir jusqu'à la température ambiante.

15 Exemple 48 Pessaires mg/pessaire

Ingrédient actif 250

Dextrose anhydraté 380

20 Fécule de pomme de terre 363

Stéarate de magnésium 7

1000

On mélange directement les ingrédients ci-dessus et prépare des pessaires par pressage direct du mélange 25 résultant.

Activité Antivirale

On a testé le 6-cyclopropylaminopurine-9-£-D-2',3'-didésoxyribofurannoside et le 6-méthylaminopurine-9-&-D-2',3'-didésoxyribofurannoside pour déterminer leur 30 activité contre HIV, en procédant d'une façon générale selon la méthode décrite par Mitsuya et coll., Proc. Nat. Acad. Sci., USA, Vol. 82, pages 7096-7100, octobre 1985, et on les a trouvés doués d'activité contre HIV à des concentrations lpM.

51

10

15

20

Claims (5)

1. REVENDICATIONS 1. Procédé pour la préparation d'un composé de formule (I) :

   dans laquelle

   R^ représente de l'hydrogène ou un groupe amino, R2 représente un halogène ; un groupe alcoxy en C^-Cg éventuellement substitué par un groupe cycloalkyle en C-j-Cg ; un groupe aryloxy, aralkyle ou aralkyloxy dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène ; un groupe cycloalkylthio en C^-C^ ; un groupe alkylthio en Cx-C6 ; un groupe arylthio ou aralkylthio dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène ; ou bien R2 représente un groupe hétérocyclique contenant un atome d'oxygène ou un ou deux atomes d'azote et 3 à 7 atomes de carbone avec des doubles liaisons facultatives dans le cycle, contenant éventuellement un hétéroatome de soufre et/ou d'oxygène et éventuellement substitué sur le cycle par un ou plusieurs groupes alkyle inférieur, hydroxyle ou halogéno, un groupe cycloalkylthio en C^-C^, un groupe aralkylthio dont le radical aryle peut être substitué par un groupe' alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène ; ou bien R2 représente un groupe imidazolylthio dont le fragment imidazolyle peut être substitué par un groupe alkyle inférieur et/ou substitué sur C par un groupe nitro ; ou encore R2 représente un groupe amino qui est mono- ou

   (I)

   52

   disubstitué par un groupe alkyle en C^-C^, alcoxy en ci-c6 ' * et/ou un groupe cycloalkyle en C^-C^, aryle, aralkyle dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène, 5 ou allyle éventuellement substitué par un ou deux groupes alkyle ou alcoxy ; et représente de l'hydrogène ou un groupe amino, et de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, à l'exception des composés de formule (I) dans lesquels R^ et R^ 10 représentent de l'hydrogène et R2 représente un groupe méthoxy, méthylthio ou méthylamino, qui consiste soit : (A) à faire réagir un composé de formule (II)

   *2

   (dans laquelle R^, R^ et R^ sont comme définis ci-dessus et A représente un groupe précurseur du groupe hydroxyle) 15 avec un agent ou dans des conditions propres à convertir ledit groupe précurseur en le groupe désiré ; soit (B) à faire réagir une base purique de formule (III)

   B-H (III)

   (dans laquelle B est le fragment purique d'un composé de 20 formule (I)) ou un équivalent fonctionnel de celle-ci,

   avec un composé propre à introduire le cycle didésoxy-ribofurannosylique désiré à la position 9 de la base purique de formule (III) ; et ensuite, ou en même temps, à effectuer l'une ou plusieurs des conversions faculta-25 tives suivantes :

   (i) lorsqu'est formé un composé de formule (I), le convertir en un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables ;

   (renvoi ligne 1:)

   * hydroxyalkyle en C-^, C-^,

   if

   53

   (ii) lorsqu'est formé un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I), convertir ledit dérivé en un composé de formule (I) ou en un autre dérivé de composé de formule (I).
2. 2. Procédé pour la préparation d'un composé de formule (I) selon la revendication 1, caractérisé en ce que et R^ représentent chacun de l'hydrogène.
3. 3. Procédé pour la préparation d'un composé de formule (I) selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que R^ et R^ représentent chacun de l'hydrogène et R2 représente un groupe cycloalkylamino en C^-C^.
4. 4. Application du procédé selon l'une quelconque des revendications ci-dessus à la préparation du 6-cyclo-propylaminopurine-9-&-D-2',3'-didésoxyribofurannoside.
5. 5. Procédé pour la préparation d'une formulation pharmaceutique contenant un composé de formule (I)A :

   dans laquelle

   R^ représente de l'hydrogène ou un groupe amino, R2 représente un halogène, un groupe alcoxy en C1-C6 éventuellement substitué par un groupe cycloalkyle en C^-Cg ; un groupe cycloalcoxy en C^-Cg ; un groupe aryloxy, aralkyle ou aralcoxy dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène ; un groupe cycloalkylthio en ' un groupe alkylthio en * un groupe arylthio ou aralkylthio dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène ; ou bien R2 représente un groupe hétérocyclique

   54

   contenant un atome d'oxygène ou un ou deux atomes d'azote et 3 à 7 atomes de carbone avec des doubles liaisons facultatives dans le cycle, contenant éventuellement un hétéro-atome de soufre et/ou d'oxygène et éventuellement substitué sur le cycle par un ou plusieurs groupes alkyle, hydroxyle ou halogéno, un groupe cycloalkylthio en C^-C^, un groupe aralkylthio dont le radical aryle peut être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène ; ou bien R2 représente un groupe imidazolylthio dont le fragment imidazolyle peut être substitué par un groupe alkyle inférieur et/ou substitué sur C par un groupe nitro ; ou encore R2 représente un groupe amino qui est mono- ou disubstitué par un groupe alkyle en alcoxy en C^-C^

   et/ou un groupe cycloalkyle, aryle, aralkyle dont le radical aryle peut éventuellement être substitué par un groupe alkyle inférieur ou hydroxyle ou un halogène, ou allyle éventuellement substitué par un ou deux groupes alkyle ou alcoxy, et

   R^ représente de l'hydrogène ou un groupe amino, ou l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, à l'exception des composés de formule (I) dans lesquels R^ et R^ représentent de l'hydrogène et R2 représente un groupe méthoxy ou méthylthio, qui comprend les étapes* consistant (1) soit

   (A) à faire réagir un composé de formule (II)

   (II)

   (dans laquelle R^, R2 et R^ sont comme définis ci-dessus et A représente un groupe précurseur du groupe hydroxyle)

   f?

   55

   avec un agent ou dans des conditions propres à convertir ledit groupe précurseur en le groupe désiré ; soit (B) à faire réagir une base purique de formule (III)

   B-H (III)

   (dans laquelle B est un fragment purique d'un composé de formule (I)A), ou un équivalent fonctionnel de celle-ci/ avec un composé propre à introduire le cycle didésoxyribo-furannosylique désiré à la position 9 de la base purique de formule (III) ; et ensuite/ ou en même temps, à effectuer l'une ou plusieurs des conversions facultatives suivantes (i) lorsqu'est formé un composé de formule (I)A, le convertir en l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables ;

   (ii) lorsqu'est formé un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I)A, convertir ledit dérivé en un composé de formule (I)A ou en un autre dérivé de composé de formule (I)A, et (2) à mettre le composé de formule (I)A résultant en association avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable pour former ladite formulation pharmaceutique.