MC1766A1 - Procede pour la preparation de 3'-azido-nucleosides et procede pour preparer des formulations pharmaceutiques les contenant - Google Patents

Description

La présente invention concerne des 3'-azido-nucléosides, leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables, des associations les contenant et leur emploi en thérapie,_ en particulier pour le traitement ou la prophylaxie de certaines infections virales et bactériennes.

Dans le domaine de la chimiothérapie, il existe peu de médicaments qui combattent efficacement le virus en soi, du fait de la difficulté d'attaquer le virus tout en laissant intactes les cellules hôtes non infectées. On a longtemps supposé que, en raison de la nature extrêmement parasitique des virus, tous les moyens nécessaires à la réplication virale étaient fournis par la cellule hôte. On a récemment établi que certains stades du cycle de vie des virus, qui varient d'une espèce à une autre, sont déterminés par le virus lui-même, et ces stades peuvent se révéler sensiblesà l'attaque dans le cas où ils diffèrent suffisamment de toute fonction correspondante de la cellule hôte. Cependant, en raison de la grande similitude entre les fonctions du virus et de l'hôte, il s'est avéré très difficile de trouver des traitements efficaces.

Pour cette raison, les composés reconnus comme étant adaptés au traitement d'infections virales ont habituellement une certaine toxicité envers l'hôte. Ainsi, la médication idéale est non toxique aux concentrations effi-cacescontre un virus mais, en l'absence d'un tel traitement,

I

le composé doit avoir un bon rapport thérapeutique, c'est-à-dire que les concentrations auxquelles le traitement est toxique sont beaucoup plus élevéesque celles auxquelles une activité antivirale est observée.

Un groupe de virus qui a pris récemment une importance particulière est celui des rétrovirus. Les rétro-virus constituent un sous-groupe des virus ARN qui, afin de se répliquer, doivent tout d'abord faire la "transcription inverse" de l'ARN de leur génome en ADN (la "transcription désigne conventionnellement la synthèse d'ARN à partir d'ADN). Une fois qu'il est sous la forme d'ADN, le génome

b viral peut être incorporé dans le génome de la cellule hôte, ce qui lui permet de tirer pleinement parti des mécanismes transcription/translation de la cellule hôte aux fins de la réplication. Dès lors qu'il est incorporé, 11 ADN viral est 5 virtuellement indiscernable de 11 ADN hôte et, dans cet état, le virus peut persister aussi longtemps que vit la cellule. Du fait qu'il est pratiquement impossible à attaquer sous cette forme, tout traitement doit être axé sur un autre stade du cycle de vie du virus et doit nécessairement être 10 poursuivi jusqu'à ce que toutes les cellules infectées par le virus soient mortes.

HTLV-I et HTLV-II sont deux rétrovirus et ils sont connus comme les agents causaux de la leucémie chez l'homme. Les infections par HTLV-I sont notamment très 15 répandues et sont la cause de nombreux décès chaque année de par le monde.

Une espèce de rétrovirus a également été isolée de façon reproductible sur des sujets atteints du SIDA. Bien qu'il ait été largement caractérisé, il y a encore quelque 20 dissension pour donner au virus un nom qui puisse être reconnu sur le plan international. Ce virus est ordinairement connu en tant que virus lymphotrope des lymphocytes T (HTLV-III), rétrovirus associé au SIDA (ARV) ou encore virus associé à la lymphadénopathie (LAV), mais on prévoit 25 que le nom devant être internationalement admis sera "virus de 1'immunodéficience acquise humaine" (HIV pour "Human Immunodeficiency Virus). Ce virus (dénommé ici HIV) s'est avéré infecter et détruire préférentiellement les lymphocytes T portant le marqueur de surface OKT^ et il est géné-30 ralement reconnu à l'heure actuelle comme l'agent étiolo-gique du SIDA. Le malade perd progressivement ce groupe de lymphocytes T, ce qui bouleverse l'équilibre d'ensemble de son système immunitaire, réduit sa capacité de combattre d'autres infections et le prédispose à des infections op-35 portunistes qui s'avèrent fréquemment mortelles. Ainsi, la cause habituelle de mort chez les victimes du SIDA est une

k infection opportuniste, telle qu'une pneumonie ou des cancers qui peuvent être provoqués par un virus, mais la mort n'est pas nécessairement une conséquence directe de l'infection par HIV. D'autres affections associées à l'infec-5 tion par HIV comprennent le purpura thrombocytopénique et le sarcome de Kaposi.

d'autres types de tissus, y compris les lymphocytes B présentant le marqueur T4, les macrophages et le tissu non 10 associé au sang du système nerveux central. Cette infection du système nerveux central n'est pas nécessairement associée au SIDA classique et on l'a rencontrée chez des malades atteints d'infections asymptomatiques par HIV. L'infection par HIV du système nerveux central est associée à une dé-15 myélination progressive qui entraîne des pertes et des symptômes tels que l'encéphalopathie, la dysarthrie progressive, l'ataxie et la désorientation. D'autres affections associées à une infection par HIV sont l'état de porteur sain, la lym-phadénopathie généralisée évolutive (LGE) et le syndrome 20 associé au SIDA (SAS).

sont maintenant considérées comme étant provoquées par des rétrovirus. Ces infections comprennent par exemple la sclérose en plaque chez l'homme, les infections par le virus de 25 l'encéphalite arthritique caprine chez la chèvre et les infections de Visna-Maedi chez le mouton.

composés contre divers rétrovirus, par exemple le virus de la leucémie de Friend (VLF), un rétrovirus des murinés. Par 30 exemple, Krieg et coll. (Exp. Cell Res., 116 (1978) 21-29) ont constaté que la 3'-azido-3'-désocythymidine est active contre VLF dans des expériences in vitro, et Ostertag et coll. (Proc. Nat. Acad. Sci. (1974) 71_, 4980-85) ont déclaré que, sur la base de l'activité antivirale relative à VLF et 35 d'une absence de toxicité cellulaire, la 3'-azido-3'-didésoxy-thymidine "pourrait avantageusement acer la bromodésoxy-

Récemment, AIDV a également été retrouvé dans

Certaines infections neurologiques chroniques

Des compte-rendus ont décrit la mise à l'essai de

5"

uridine dans le traitement médical de maladies provoquées par des virus ADN". Cependant, De Clerq et coll. (Biochem. Pharm. (1980) 29_, 1849-1851) ont établi six ans plus tard que la 3'-azido-31-désoxythymidine ne présentait pas d'ac-5 tivité appréciable contre aucun des virus utilisés dans leurs essais, y compris des virus ADN tels que le virus vaccinal, HSVI et herpesvirus varicellae.

Les bactéries présentent également un problème en thérapie étant donné que tous les organismes mettent 10 mutuellement en oeuvre des processus vitaux extrêmement proches, si bien qu'une substance toxique pour l'un sera vraisemblablement toxique pour un autre. De plus, l'expérience a montré qu'il se développe au bout d'un certain temps des souches de bactéries qui sont résistantes aux 15 agents antibactériens couramment utilisés.

On a maintenant découvert que certains 3'-azido-nucléosides tels que décrits ci-après sont utiles dans la thérapie d'infections virales et bactériennes, notamment d'infection rétrovirales, comprenant les infections par 20 HIV, et d'infections par des bactéries Gram-négatives, comprenant certaines souches de bactéries Gram-négatives résistances aux agents antibactériens couramment utilisés. -

Ainsi, selon un premier aspect de la présente invention, il est fourni un composé de formule

25 dans laquelle A est une base purique ou pyrimidique autre que la thymine, liée à la position 9 ou 1, ou un composé pharmaceutiquement acceptable de ce composé, destiné à être employé en thérapie humaine ou vétérinaire.

6

Les composés de formule (I) et leurs dérivés phar-maceutiquement acceptables sont désignés ici par composés selon l'invention.

Les infections rétrovirales affectent fréquemment 5 le système nerveux central du sujet et, à ce point de vue, un avantage particulier des composés selon l'invention réside, comme des expérience 1'ontdémontré,dans leur aptitude à franchir la barrière hémato-encéphalique en quantités cli-niquement efficaces.

10 On a constaté que les composés selon l'invention sont doués d'une activité particulièrement puissante contre les infections rétrovirales et bactériennes Gram-négatives.

Par conséquent, il est fourni (a) les composés selon l'invention destiné à être utilisés dans le traitement 15 ou. la prophylaxie d'infections rétrovirales ou bactériennes Gram-négatives et (b) l'emploi des composés selon l'invention dans la fabrication d'un médicament pour le traitement ou la prophylaxie d'une infection rétrovirale ou bactérienne Gram-négative.

20 L'expression "infections rétrovirales", tel qu'elle est employéeici, se rapporte à n'importe quel virus qui,

pour une partie intégrante de son cycle de vie, emploie une transcriptase inverse.

Des bactéries particulières contre lesquelles on 25 a constaté une bonne activité sont les suivantes : Escheri-chia coli. Salmonella dublin. Salmonella typhosa, Salmonella typhimurium. Shiqella flexneri. Citrobacter freundii, Kleb-siëlla pneumoniae. Vibrio cholerae, Vibrio anquillarum, Enterobacter "àeroqenes, Pasteurella multocida. Haemophilus 30 influenzae, Yersinia enterocolitica, Pasteurella haemolytica, Proteus mirabilis et Proteus vulgaris, ces microorganismes étant responsables d'affections telles que la diarrhée des voyageurs, les infections du tractus urinaire, la shigellose, la fièvre typhoïde et le choléra chez l'homme, ainsi que de 35 de maladies animales telles que l'entérite néonatale du veau, l'entérite de post-sevrage du porc et la colisepticémie du poulet.

Les conposés selon l'invention sont doués d'une activité particulièrement bonne contre les virus suivants : virus lymphotropes des lymphocytes T humains (HTLV), notamment HTLV-I, HTLV-II et HTLV-III (HIV); virus de la leucémie féline, virus de l'anémie infectieuse équine, virus de l'arthrite caprine et autres lentivirus, ainsi que contre d'autres virus humains tels que le virus de l'hépatite B, le virus Epstein-Barr (EBV) et l'agent causal de la sclérose en plaque (SP). On a constaté que les composés selon l'invention sont également efficaces dans le traitement du sarcome de Kaposi (SK) et du purpura thrombocytopénique (PT).

Pour ces dernières indications (SP, SK et PT) et le virus de l'arthrite caprine, la présente invention englobe les composés de formule (I), dans laquelle A est la thymine, destinés à être utilisés dans leur traitement ou leur prophylaxie, ainsi que l'utilisation de tels composés dans la fabrication d'un médicament pour leur traitement ou leur prophylaxie.

L'activité des composés selon l'invention à 1'encontre d'un aussi grand éventail d'infections virales et. bactériennes constitue clairement .un grand avantage en médecine, et le nouveau mode d'action permet l'emploi de ces composés dans une thérapie d'association afin de réduire les chances d'apparition d'une résistance. Ces associations sont d'ailleurs particulièrement utiles du fait que les 3'-azidonucléosides présentent une surprenante capacité de potentialisation par d'autres agents thérapeutiques comme décrit ci-après.

On a découvert que les 3'-azidonucléosides coopèrent synergiquement avec une large gamme d'autres agents thérapeutiques, en accroissant ainsi hors de toute proportion. le potentiel thérapeutique des deux agents. Il faut notablement moins de chaque composé pour le traitement, le rapport thérapeutique est accrû et, par conséquent, le risque de toxicité due à l'un ou l'autre composé est réduit.

%

Par conséquent, selon un autre aspect de la présente invention, il est fourni un composé de formule :

dans laquelle B est une base purique ou pyrimidique liée à la position 9 ou 1 respectivement, ou un dérivé pharma-5 ceutiquement acceptable de ce composé, destiné à être utilisé en thérapie d'association avec au moins un autre agent thérapeutique.

En particulier, il est fourni un composé de formule (I)A, ou un dérivé pharmaceutiquement acceptable de 10 ce composé, destiné à être utilisé en thérapie d'association comme décrit ci-dessus, les deux agents actifs étant présents en un rapport potentialisant.

Un "rapport potentialisant" est le rapport du composé de formule (I)A, ou d'un dérivé pharmaceutiquement 15 acceptable de ce composé, au second agent thérapeutique,

qui procure un effet thérapeutique plus.grand que la somme des effets thérapeutiques des composants individuels.

On notera que, bien qu'il existe habituellement un rapport optimal pour assurer la potentialisation maxi-20 maie, une quantité même extrêmement petite d'un agent suffira à potentialiser l'effet de l'autre à un certain degré, et donc que n'importe quel, rapport de deux médicaments po-tentialisants présentera l'effet synergique requis. Cependant, la synergie la plus forte est observée lorsque les 25 deux agents sont présents en un rapport de 500:1 à 1:500, de préférence de 100:1 à 1:100, en particulier de 20:1 à 1:20 et mieux encore de 10:1 à 1:10.

La présente invention fournit donc encore une association thérapeutique d'un composé de formule (I)A,

*

ou d'un dérivé pharmaceutiquement acceptable de ce composé, et d'au moins un autre agent thérapeutique.

Les associations décrites.ci-dessus sont désignées ici par associations selon l'invention.

5 Ainsi, il est encore proposé une association selon l'invention destinée à être utilisée dans le traitement ou la prophylaxie de l'une quelconque des infections ou indications mentionnées ci-dessus, ou l'emploi de telles associations dans la fabrication d'un médicament pour le traitement 10 ou la prophylaxie d'une telle infection ou indication.

Les associations selon 1'invention peuvent commodément être'administrées ensemble, par exemple dans une formulation. pharmaceutique unitaire, ou séparément, par exemple en une association de comprimés et d'injections adminis-15 trées au même"moment ou à des moments différents, afin d'obtenir l'effet thérapeutique désiré.

Dans des tests antiviraux, on a constaté que, par exemple, les azidonucléosides sont potentialisés par divers agents tels que les interférons, les inhibiteurs de trans-20 port de nucléosides, les inhibiteurs de glucuronidation, les inhibiteurs d'excrétion rénale et même par d'autres nucléosides thérapeutiques qui peuvent ne pas être nécessairement doués d'activité à 1'encontre des mêmes microorganismes que les composés de formule (I)A. 25 Des types particulièrement préférés d'interféron sont les types a, & et y, tandis que les inhibiteurs de transport de nucléoside comprennent des agents tels que . le dilazep, la dipyri-damole, la.6-/ (4-nitrobenzoyl)thio7-9-(0-.D-ribofurannosyl)pyrine, la papavérine, la mioflazine, l'hexobendine, la lidoflazine et leurs sels d'addition d'acides.

30 Le probénécide est particulièrement utile en asso ciation avec les 31-azidonucléosides de formule (I)A, car il est à la fois doué d'activité inhibitrice d'excrétion rénale et d'activité inhibitrice de glucuronidation. Des exemples d'autres composés utiles sous cet aspect compren-35 nent 1'acétaminophène, l'aspirine, le lorazépam, la ciméti-dine, la ranitidine, le zomépirac, le cLtfïibrate, l'indo-

I®

méthacine, le cétoprofène, le naproxène et autres composés qui exercent une compétition dans le mécanisme de glucuronidation ou subissent d'une autre façon une glucuronidation notable.

5 Les 31-azidonucléosides de formule (I)A et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables sont potentialisés par d'autres dérivés thérapeutiques de nucléosides comme décrit ci-dessus, y compris des nucléosides acycliques du type décrit par exemple dans le brevet du Royaume-Uni 10 N° 1 523 865, le brevet des E.U.A,. N° 4 360 522, les brevets européens N° 74 306, 55 239 et 146 516 et les demandes de brevet européen N° 434 393 et 434 395, et en particulier les composés de formule générale :

z n

\

/ (A)

n /

I

chx çhch oh y dans, laquelle Z représente un atome d'hydrogène ou un groupe 15 hydroxyle ou amino ; et (a) X représente un atome d'oxygène ou de soufre ou un groupe méthylène et Y représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxyméthylène, ou bien (b) X représente un groupe oxyméthylène (-O.CE^) et Y représente un groupe hydroxyle,

20 et les dérivés pharmaceutiquement acceptables de ces composés.

Des exemples des dérivés susmentionnés sont des sels et esters et ils comprennent les sels de base, par exemple les sels de métaux alcalins (comme le sodium) ou les sels de métaux alcalino-terreux, et les sels pharmaceu-25 tiquement acceptables d'acides organiques tels que les acides lactique, acétique, malique, et p-toluènesulfonique, ainsi que les sels pharmaceutiquement acceptables d'acides miné-

n

10

15

20

25

30

Les esters des composés de formule (A) qui peuvent être commodément utilisés selon la présente invention comprennent ceux qui contiennent un groupement ester formyl-oxy ou alcanoyloxy en C^-C16 (par exemple (par exem ple acétoxy ou propionyloxy), aralcanoyloxy éventuellement substitué (par exemple phényl(alcanoyloxy en tel que pbénylacétoxy) ou aroyloxy éventuellement substitué (par exemple benzoyloxy ou naphtoyloxy), présent à l'une ou aux deux positions terminales de la chaîne latérale située en position 9 des composés de formule (A). Les groupes ester aralcanoyloxy et aroyloxy susmentionnés peuvent être substitués, par exemple par un ou plusieurs atomes d'halogène (par exemple le chlore ou le brome.) ou des groupes amino, nitrile ou sulfamido, le fragment aryle du groupement contenant avantageusement 6 à 10 atomes de carbone.

Des exemples particulièrement préférés de composés de formule générale (A) ci-dessus, pour qu'ils soient utilisés selon la présente invention, comprennent la 9-[(2-hydroxy-l-hydroxyméthyléthoxy)méthyl]guanine, la 2-amino-9-(2-hydroxyéthoxyméthyl)purine et en particulier la 9-(2-hydroxyéthoxyméthyUguanine (acyclovir). On a constaté que ce dernier composé exerce un effet potentialisateur particulièrement bon, notamment lorsque le composé de formule I(A) est la 3'-azido-3'-désoxythymidine, comme décrit dans les Exemples.

Dans le domaine antibactérien, on a également constaté qu'une large gamme d'antibiotiques sont efficaces pour potentialiser l'activité d'azidonucléosides. Ces antibiotiques comprennent divers agents tels que : les benzyl-pyrimidines, par exemple la 2,4-diamino-5-(3',4',5'-tri-méthoxybenzyl)pyrimidine (Triméthoprime) et ses analogues, par exemple comme décrit dans le brevet du Royaume-Uni N° 1 405 246 ; les suifonamides, par exemple la sulfadimi-dine ; la rifampicine ; la tobramycine ; 1'acide fusidique ; le chloramphénicol ; la clindamycine et 1'érythromycine.

Ainsi, selon un autre aspect, il est proposé des

associations ^elon l'invention dans lesquelles le second agent est au moins l'un des agents ou classes d'agents antiviraux ou antibactériens susmentionnés.

D'autres associations convenant à une utilisation selon la présente invention comprennent celles dans lesquelles le second agent est, par exemple, 11interleukine-II, la suramine, le phosphonoformate, HPA 23, des 2',3'-didésoxy-nucléosides, par exemple la 2',3'-didésoxycytidine et la 2',3'-didésoxyadénosine, ou des médicaments tels que le lévamisole ou la thymosine de façon à accroître le nombre et/ou renforcer la fonction des lymphocytes, comme il convient.

On notera encore que les composés et les associations selon l'invention peuvent également être utilisés conjointement à une autre thérapie de modulation immune, comprenant par exemple la greffe de moelle osseuse et l'apport de lymphocytes.

Certaines des infections rétrovirales décrites ci-dessus, par exemple le SIDA, sont couramment associées à des infections opportunistes. Ainsi, on notera que, par exemple, une association de 3'-azido-3'-désoxythymidine (AZT) et d'acyclovir s'avère particulièrement utile dans le traitment d'un malade atteint du SIDA et d'une infection opportuniste du type herpès, tandis qu'une association de AZT et de 9-C(2-hydroxy-l-hydroxyméthyléthoxy)méthyl]guanine est utile dans le traitement d'un malade atteint du SIDA et d'une infection opportuniste à cytomégalovirus.

Les pyrimidines de formule (I) ou (I)A généralement préférées pour un usage selon la présente invention sont celles qui répondent à la formule :

/ n

w

10

15

20

25

30

ho

N3

dans laquelle R est un groupe hydroxy, mercapto, amino, alkylthio, aralcoxy, alcoxy, cyano, alkylamino ou dialkyl-amino, les groupes alkyles étant éventuellement unis et formant ainsi un hétérocycle,

R est l'hydrogène ou un groupe acyle, alkyle, aroyle ou sulfonate ;

3

R est un groupe hydroxy, mercapto, amxno, triazolyle, alkylamino, dialkylamino, où les groupes alkyle sont éventuellement liés pour former un hétérocycle, aralcoxy, alcoxy ou alkylthio ;

R^ est un groupe alkyle, alkyle substitué, halogéno, perha-

logénométhyle, hydroxy, alcoxy, cyano, nitro, alcényle, alcé-

nyle substitué, alcynyle, alcynyle substitué ou l'hydrogène ;

et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables.

Dans la formule générale (II), les lignes en traits interrompus aux positions 2 à 6 ont pour but d'indiquer la présence de liaisons simples ou doubles à ces positions, les positions relatives des liaisons simples ou doubles étant

1 2

déterminées par le fait que les substituants R et R sont des groupes capables de tautomérisme, par exemple céto-énol.

Des classes préférées de nucléoside pyrimidique selon l'invention sont les dérivés de cytidine, par exemple

3

les composés de formule (II) dans laquelle R est un groupe amino ou alkylamine, en particulier lorsque le groupe azido en 3' est dans la configuration érythro ("azido en bas") ; les dérivés de thymidine et d'uridine (par exemple les composés de formule Cil) dans laquelle R^ est autre chose qu'un a

groupe amino ou alkylamine) dans lesquels le groupe azido en 3' est en configuration érythro ou thréo ("azido en haut"); et les_nucléosides insaturés entre les positions 5C et 6C.

Les purines de formules (I) et (I)A généralement préférées pour un usage selon la présente invention répondent à la formule :

( II ) A

6 7

dans laquelle R et R peuvent être identiques ou différents et sont choisis parmi 11 hydrogène et les groupes amino, hydroxy, mercapto, alkylthio, alcoxy, aralcoxy, cyano 10 et alkylamino ; et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables .

Des classes préférées de nucléoside purique selon l'invention sont les dérivés d'adénine, par exemple les com-posés de formule (II)A dans laquelle R est un groupe amino

15 ou amino substitué, et les dérivés de guanine, par exemple

* 6

les composés de formule (II)A dans laquelle R est comme défini et autre chose qu'un groupe amino ou amino substitué, 7

et R est un groupe amino ou amino substitué.

Les groupes acyle susmentionnés comprennent des 20 groupes alkyle ou aryle comme décrits ci-après. En ce qui concerne.JLes composés de formules (II) et (II)A ci-dessus, les groupes alkyle susmentionnés contiennent avantageusement 1 à 8 atomes de carbone, en particulier 1 à 4 atomes de carbone, par exemple les groupes méthyle ou éthyle, 25 éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants

If appropriés, comme décrit ci-après. Les groupes aryle susmentionnés comprenant des fragments aryle de groupes tels qu'aralcoxy sont de préférence des groupes phényle éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants appropriés, comme décrit ci-après. Les groupes alcényle et alcynyle susmentionnés contiennent avantageusement 2 à 8, en particulier 2 à 4, atomes de carbone, par exemple les groupes éthényle ou éthynyle, éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants appropriés comme décrit ci-après.

Des substituants appropriés fixés sur les groupes alkyle, alcényle, alcynyle et aryle susmentionnés sont avantageusement choisis parmi les groupes halogéno, hydroxy,

alcoxy en alkyle en C^-C4» aryle en Cg-C^2' aralcoxy en cajrb°xyr amino et amino substitué où l'amino est

à substitution simple ou double par un groupe alkyle en Cet, lorsqu'ils sont à substitution double, les groupes alkyle sont éventuellement liés pour former un hétérocycle.

D'autres classes de composés préférés de formule (II) comprennent celles dans lesquelles l'un ou plusieurs de r\ R^, R^ et R^ sont comme définis ci-dessous, à savoir:

R^" est un groupe hydroxy, mercapto, alcoxy en C-^-C^ ou amino ;

R^ est l'hydrogène ou un groupe méthyle, alcanoyle en C-, -C9 ou benzoyle ;

3

R est un groupe hydroxy, mercapto, amino ou amino substitué ;

4 3

R est l'hydrogène lorsque R est un groupe amino ou amino substitué, et un groupe halogéno, perhalogénométhyle, alkyle en C2~C3' alc®nYle en C2~C3 ou éthényle substitué lorsque R^ est autre chose qu'un groupe amino ou amino substitué,

et les dérivés en 5' de ces composés, y compris des esters d'alkyles à chaîne droite ou ramifiée éventuellement substitués par des groupes carboxy (par exemple succinate), des thio-esters en C-^-Cg, des esters d ' aryles éventuellement a

if substitués, un mésylate, un glucuronide ou des mono-, di-ou triphosphates.

D'autres classes de composés préférés de formule (II)A comprennent celles dans lesquelles : 5 est un groupe amino, alkylamino en C1~C4, mer capto, hydroxy ou alcoxy en C^-C4 et/ou

R^ est un groupe amino, alkylamino en C1~C4 ou 1'hydrogène ;

et des dérivés en 5' de tels composés, y compris des esters 10 d'alkyles à chaîne droite ou ramifiée éventuellement substitués par des groupes carboxy (par exemple succinate), des thio-esters en C^-Cg, ^es esters d'aryles éventuellement substitués, un mésylate, un glucuronide ou des mono-, di-ou triphosphates.

15 Des composés préférés de formule (I) pour une uti lisation dans le traitement ou la.prophylaxie d'infections virales sont les composés de formule (II) dans laquelle :

R^" est un groupe hydroxy, mercapto, alcoxy en C^-Cg, amino, aralcoxy en Cg-.C^ ou bien est une liaison 20 O-anhydro reliant les positions 2 et 5' ;

2

R est un groupe méthyle ou benzoyle ou l'hydrogène ;

3

R est un groupe hydroxy, mercapto, amino, amino substitué ou aralcoxy en Cg-C12 ;

25 R^ est comme défini, pourvu que A dans la formule

(I) ne soit par un résidu de thymine ;

et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables. Le groupe azido est avantageusement en configuration érythro. Des composés particulièrement préférés sont des composés comme dé-

30 crits ci-dessus qui ne diffèrent que par l'un des substi-1 4

tuants R -R du noyau de pyrimidine de ceux ayant un résidu

1 3 p de thymine (où R et R sont des groupes hydroxy, R est l'hydrogène et R^ est un groupe méthyle). Des composés préférés de formule (I) pour une utilisation dans le traite-35 ment ou la prophylaxie d'infections virales sont comme décrits ci-dessus à propos de la formule (I) -mais englobent il

tir de plus les composés de formule (I)A dans laquelle B est un résidu de thymine, et notamment lorsque ce composé est 1°L. 3 '.-azido-3 1 -désoxythymidine.

Les composés de formule (I) qui sont préférés pour une utilisation dans le traitement ou la prophylaxie d'infections bactériennes sont les composés de formule (II) dans laquelle :

R"*" est l'oxygène, le soufre ou un groupe benzyl-oxy ou méthoxy ;

2

R est l'hydrogène ou le groupe benzoyle ;

3

R est comme défini ci-dessus ;

R est le groupe méthyle ou un halogène, pourvu que A dans la formule (I) ne soit pas un résidu de thymine; et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables.

Le groupe 3'-azido peut être dans n'importe quelle configuration, mais la configuration érythro est particulièrement préférée, et les dérivés pharmaceutiquement acceptables préférés sont les 5'-esters d'acides organiques simples, de préférence les acides en C2-Ci8*

Des composés particulièrement préférés sont ceux comme décrit ci-dessus qui ne diffèrent que par l'un des 1 4

substituants R -R du noyau, de pyrimidine de ceux ayant' un résidu de thymine (où R"'" et R^ sont des groupes hydroxy,

2 .. 4

R est 1'hydrogéné et R est le groupe méthyle).

Les composés particulièrement préférés de formule (I)A pour une utilisation dans le traitement ou la prophylaxie d'infections bactériennes sont comme décrits ci-dessus à propos de la formule (I) mais englobent de plus les composés de formule (I)A dans laquelle. B est un résidu de thymine, et notamment lorsque ce composé est la 3'-azido-3*-désoxythymidine.

L'expression "dérivé pharmaceutiquement acceptable" désigne tout sel, ester, ou sel d'un tel ester, pharmaceutiquement acceptable, ou tout autre composé qui, étant administré au receveur, est capable de fournir (directement ou indirectement) .le 3'-azidonucléoside d^origine ou un

Al»

métabolite ou résidu thérapeutiquement efficace de celui-ci. Un exemple d'un composé qui n'est pas un ester est le dérivé dans lequel les atomes 5'-C et 2-C sont reliés par un atome d'oxygène pour former un groupe anhydro.

5 Des esters préférés des composés de formule (I)

comprennent les esters d'acides carboxyliques dans lesquels le fragment non carbonylé du groupement ester est choisi parmi les groupes alkyle à chaîne droite ou ramifiée, alcoxy-alkyle (par exemple méthoxyméthyle), aralkyle (par exemple 10 benzyle), aryloxyalkyle (par exemple phénoxyméthyle), aryle (par exemple phényle éventuellement substitué par un groupe alkyle en C2.~C4' alcoxy en C^-C^ ou un halogène); les esters sulfoniques tels que ceux à groupe alkylr-ou aralkylsulfonyie (par exemple méthanesulfonyle) ; et les estefcs mono-> di-ou 15 triphosphoriques. Toute référence faite à l'un quelconque des composés ci-dessus englobe également une référence à un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé.

En ce qui concerne les esters décrits ci-dessus, sauf indication contraire, tout fragment alkyle présent 20 contient avantageusement 1 à 18 atomes de carbone, en particulier 1 à 4 atomes de carbone. Tout fragment aryle présent dans ces esters comprend avantageusement un groupe phényle.

Des exemples de sels pharmaceutiquement accepta-25 bles des composés de formule (I) et de leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables comprennent les sels de base, dérivés par oexemple d'une base appropriée tels que les sels de métaux, alcalins (par exemple de sodium), les sels de métaux alca,lino-terreux (par exemple de magnésium) , les 30 sels d'ammonium et de NX^ (où X est un groupe alkyle en

C1~C4^ et '*"es se^s d'acides minéraux tels que chlorhydrate.

Des exemples particuliers de dérivés pharmaceutiquement acceptables du composé de formule (I), qui peuvent être utilisés selon la présente invention, comprennent le 35 sel monosodique et les 5'-esters suivants : monophosphate ; monophosphate disodique ; diphosphate, triphosphate ; acé-

H

tate ; 3-méthyl-butyrate ; octanoate ; palmitate ; 3-chloro-benzoate ; benzoate ; 4-méthyl-benzoate ; hydrogéno-succi-nate ; pivalate ; et mésylate.

Certains des composés selon l'invention sont nouveaux. Par conséquent, la présente invention fournit les composés de formule :

dans laquelle C est une base purique ou pyrimidique liée à la position 9 ou 1 respectivement, et leurs dérivés pharmaceutiquement 'acceptables, autres que :

(a) les composés de formule (I)B dans laquelle C est une adénine, guanine, uridine, cytidine ou thymine base, et leurs esters 5'-mono- ou 51-triphosphoriques ;

(b) les dérivés 5'-O-acétate, 5'-0-trityle et 5'-0-

(4-méthylbenzènesulfonate) du composé de formule (I)B dans

*

laquelle C est une'uridine base et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ;

(c) les composés de formule (I)B dans laquelle C est

(i) un résidu de 5-bromovirtyluridine ou 5-trifluorométhyl-uridine et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ;

(ii) un résidu d1uridine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ; et (iii) un résidu 5-iodo ou 5-fluori-dine et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ou thréo ; et les dérivés 5'-0-trityle de tels composés ;

(d) les composés de formule (I)B dans laquelle C est (i) un résidu de 5-bormovinyluridine ou de cytidine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ; (ii) un résidu de 5-fluorocytidine et le groupe 3'-azido est en configura-tion érythro ; ou (iii) un résidu de 5-méthylcytidine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ou érythro ;

(e) les esters 51-O-acétiques des composés de formule (I)B dans laquelle C est une 4-chloro-2(1H)pyrimidinone ou une 4-(lH-l,2,4-triazole-l-yl)-2(lH)pyrimidinone (éventuellement substituée à la position 5 par du fluor ou un groupe méthyle) et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ;

(f) le dérivé 5,-0-(4-méthoxyphényl)diphénylméthyle du composé de formule (I)B dans laquelle C est un résidu de cytidine et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ;

(g) le dérivé 5'-0-trityle du composé de formule (I)B dans laquelle C est un résidu d'adénine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo.

Les composés préférés sont ceux décrits ci-dessus à propos de la thérapie, autres que ceux spécifiquement exclus ci-dessus.

Les composés de formules (I) et (I)A, et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables, également désignés ici par ingrédients actifs, peuvent être administrés à des fins thérapeutiques par toute voie appropriée, y compris orale, rectale, nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale et parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse et intradermique). On notera que la voie préférée diffère selon l'état et l'âge du receveur, la nature de l'infection et l'ingrédient actif choisi.

En général, une dose appropriée est de 3,0 à 120 mg par kilogramme de poids corporel du receveur et par jour, de préférence de 6 à 90 mg par kilogramme de poids corporel et par jour, et mieux encore de 15 à 60 mg par kilogramme de poids corporel et par jour. La dose désirée est de préférence présentée en deux, trois, quatre, cinq ou six sous-doses ou davantage, administrées à intervalles appropriés tout au long du jour. Ces sous-doses peuvent être administrées sous formes posologiques unitaires, contenant par exemple 10 à 1500 mg, de préférence 20 à 1000 mg, et mieux encore 50 à 700 mg de l'ingrédient actif par forme posologique unitaire.

Des expériences menées avec la 3'-azido-31-désoxythymidine suggèrent qu'une dose doit être administrée de

y façon à atteindre des concentrations plasmatiques maximales du composé actif d'environ 1 à environ 75 juM, de préférence d'environ 2 à 50 jiM, et mieux encore d'environ 3 à environ 30 pM. On peut y parvenir, par exemple, par l'injection intraveineuse d'une solution à 0,1 à 5 % de l'ingrédient actif, éventuellement dans du sérum physiologique, ou par administration orale sous forme d'un embol contenant environ 1 à environ 100 mg/kg de l'ingrédient actif. On peut maintenir des taux sanguins souhaitables par une perfusion continue de façon à apporter environ 0,01 à environ 5,0 mg/kg/heure ou par des perfusions intermittentes contenant environ 0,4 à environ 15 mg/kg de l'ingrédient actif.

Les associations selon l'invention peuvent être administrées d'une manière similaire à celle décrite ci-dessus pour apporter les dosages thérapeutiques désirés de l'ingrédient actif et de l'autre agent thérapeutique concerné. La posologie de l'association dépend de l'affection en traitement, de l'ingrédient actif particulier et de l'autre agent thérapeutique concerné, ainsi que d'autres facteurs cliniques tels que le poids et l'état du malade et la voie d'administration de l'association. Comme indiqué ci-dessus, l'ingrédient actif et l'autre agent thérapeutique peuvent être administrés simultanément (par exemple dans une formulation pharmaceutique ,unitaire) ou séparément (par exemple en formulations pharmaceutiques séparées) et, en général, les associations peuvent être administrées par les voies topique, orale, rectale ou parentérale (par exemple intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire).

En particulier, les associations selon l'invention dans lesquelles le second agent est un inhibiteur de transport de nucléoside peuvent être administrées au sujet concerné d'une manière classique. Cependant, pour l'administration par la voie orale, une posologie de 1 à 200 mg/kg/jour, de préférence de 5 à 50 mg/kg/jour, est généralement suffisante. Pour l'administration par la voie parentérale, une posologie d1 ingrédient actif de 1 à 100 mg/kg/jour, de pré

férence 2 à 30 mg/kg/jour, est généralement suffisante. La quantité d'inhibiteur de transport de nucléoside dans l'association est indépendante de la quantité d'ingrédient actif spécifiée ci-dessus et elle est suffisante pour inhiber effi-5 cacement le transport de nucléoside et se situe de préférence de 0,1 à 100 mg/kg/jour, et en particulier de 1 à 20 mg/kg/ jour.

Les associations selon l'invention dans lesquelles le second agent est un inhibiteur d'excrétion rénale ou un 10 inhibiteur de glucuronidation ou les deux, peuvent être administrées au sujet concerné d'une manière classique. Cependant, pour l'administration par voie orale, une posologie d'ingrédient actif de 1 à 200 mg/kg/jour, de préférence de 5 à 50 mg/kg/jour, est généralement suffisante. Pour l'ad-15 ministration par voie parentérale, une posologie d'ingrédient actif de 1 à 100 mg/kg/jour, de préférence de 2 à 30 mg/kg/ jour, est généralement suffisante. La quantité de l'inhibiteur d'excrétion/glucuronidation dans .1'association est indépendante de la quantité d'ingrédient actif et elle est suf-20 fisante pour apporter 4 à 100 mg/kg/jour, de préférence 5 à 60 mg/kg/jour, et mieux encore 10 à 40 mg/kg/jour.

Les associations selon l'invention dans lesquelles le second agent est un interféron, contiennent avantageusement l'ingrédient actif en quantités aptes à apporter 5 à

25 250 mg par kg par jour ; et la plage, convenable de doses

* 6 6

efficaces pour 1*interféron est de 3x10 à 10x10 UI par mètre carré de surface corporelle et par jour, de préférence de 4 x 10® à 6x10® UI par mètre carré et par jour. L'ingrédient actif et' l'interféron doivent être administrés dans g

30 un rapport d'environ 5 mg par kg d'ingrédient actif à 3x10 UI par mètre carré d'interféron à environ 250 mg par kg par jour d'ingrédient actif à 10x10 UI par mètre carré et par jour d'interféron, de préférence d'environ 5 mg par kg par jour d'ingrédient actif à 4 x10 UI par mètre carré par jour 35 d'interféron à environ 100 mg par kg par jour d'ingrédient

/T

actif à 6 x10 UI par mètre carré par jour d'interféron.

(I'

L'interféron est de préférence administré par injection (par exemple sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse), tandis que l'ingrédient actif est de préférence administré par voie orale ou par injection, mais il peut être administré par n'importe quel mode décrit ici. L1interféron et l'ingrédient actif peuvent être administrés ensemble ou séparément, et la dose quotidienne de l'un et l'autre peut de préférence être administrée en doses fractionnées .

Pour les associations selon l'invention dans lesquelles le second agent est un autre nucléoside thérapeutique, la plage convenable de doses efficaces par voie orale de l'ingrédient actif est de 2,5 à 50 mg par kg de poids corporel et par jour, de préférence 5 à 10 mg par kg et par jour ; et la plage convenable de doses efficaces

I

par voie orale du second nucléoside thérapeutique est de 5 à 100 mg par kg de poids corporel et par jour, de préférence 15 à 75 mg par kg et par jour. Il est préférable que pour l'administration orale le rapport de l'ingrédient actif au second nucléoside thérapeutique soit d'environ 1:1 à 1:10, et mieux encore d'environ 1:2 à 1:8.

La plage convenable de doses efficaces par voie intraveineuse de l'ingrédient actif est généralement d'environ 1,5 à 15 mg par kg et par jour, et la plage convenable de doses efficaces par voie intraveineuse du nucléoside thérapeutique est généralement d'environ 5 à 30 mg par kg et par jour. Il est préférable que pour l'administration intraveineuse le rapport de l'ingrédient actif au second nucléoside thérapeutique soit d'environ 2:1 à 1:20, et mieux encore d'environ 1:2 à 1:10.

Les deux composants de l'association sont de préférence administrés par voie orale ou par injection et peuvent être administrés ensemble ou séparément. La dose quotidienne de l'un et l'autre peut être administrée en doses fractionnées.

Pour les associations selon l'invention dans les-

, f)

quelles le second agent est un agent antibactérien, la plage convenable de doses efficaces de l'ingrédient actif est de 2,5 à 50 mg/kg/jour. de préférence de 5 à 10 mg/kg/ jour, et la plage convenable de doses efficaces de l'agent antibactérien est de 2 à 1000 mg/kg/jour, de préférence de 50 à 500 mg/kg/jour. Les rapport préférés de l'ingrédient actif à l'agent antibactérien sont de 20:1 à 1:500, en particulier de 2:1 à 1:25.

On notera que, bien que des associations contenant trois agents thérapeutiques ou davantage ne soient pas spécifiquement décrites ici, de telles associations font partie de la présente invention. Par exemple, une association de 31-azido-31-désoxythymidine (AZT) avec 1'acyclovir et le probénécide présente le double avantage, de potentialiser l'activité de AZT et d'accroître sa disponibilité. De même, des associations de composés de formule (I)A avec deux ou plusieurs de la:même variété du second agent thérapeutique font également partie de l'invention, par exemple AZT avec la suifanimidine et le triméthoprime.

Bien que l'ingrédient actif puisse être administré seul, il est préférable de le présenter sous forme d'une formulation pharmaceutique. Les formulations de la présente invention comprennent au moins un ingrédient actif, comme défini ci-dessus, ainsi qu'un ou plusieurs supports acceptables pour celui-ci,et éventuellement d'autres agents thérapeutiques. Chaque support doit être "acceptable" en ce sens qu'il doit être compatible avec les autres ingrédients de la formulation et ne pas être préjudiciable au malade. Les formulations comprennent celles qui sont adaptées à l'administration orale, rectale, nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale ou parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire et intradermique). Les formulations peuvent commodément être présentées sous forme poso-logique unitaire et peuvent être préparées par tous les procédés bien connus dans l'art pharmaceutique. Ces procédés comprennent l'étape consistant à mettre en association

l'ingrédient actif avec le support qui se compose d'un ou plusieurs ingrédients secondaires. En général, les formulations sont préparées en mettant uniformément et intimement en association l'ingrédient actif avec des supports liquides ou des supports solides finement divisés ou les deux, puis, si nécessaire, en conformant le produit.

Les formulations de la présente invention qui sont adaptées à l'administration orale peuvent être présentées sous forme d'unités discrètes telles que des capsules, cachets ou comprimés, chacune contenant une quantité prédéterminée de l'ingrédient actif ; sous forme de poudre ou de granules ; sous forme d'une suspension dans un liquide aqueux ou non. aqueux ; ou sous forme d'une émulsion huile-dans-eau ou d'une émulsion eau-dans-huile. L'ingrédient actif peut également être présenté sous forme d'un bol, d'un électuaire ou d'une pâte.

Un comprimé peut être fabriqué par compression ou moulage, éventuellement avec un ou plusieurs ingrédients secondaires. On peut préparer des comprimés en comprimant, dans une machine appropriée, l'ingrédient actif sous une forme s'écoulant librement telle qu'une poudre ou des granules, éventuellement en mélange avec un liant (par exemple la polyvinylpyrrolidone, la gélatine ou 1'hydroxypropyl-méthyl-cellulose), un lubrifiant, un diluant inerte, un conservateur, un désintégrant (par exemple 1'amidon-glycollate de sodium, la polyvinylpyrrolidone réticulée, la carboxy-méthyl-cellulose sodique réticulée), un surfactif ou un dispersant. On peut préparer des comprimés moulés en moulant, dans une machine appropriée, un mélange du composé réduit en poudre et humidifié avec un diluant liquide inerte. Les comprimés peuvent éventuellement être enrobés ou entaillés et ils peuvent être formulés de façon à effectuer une libération lente ou réglée de l'ingrédient actif qu'ils contiennent, par exemple en utilisant de 1'hydroxypropylméthyl-cellulose en diverses proportions pour obtenir le profil désiré de libération.

K>

Les formulations adaptées à l'administration topique dans la bouche comprennent des tablettes qui renferment l'ingrédient actif dans une base aromatisée, ordinairement le saccharose et la gomme arabique ou adragante ; des pastilles renfermant l'ingrédient actif dans une base inerte telle que la gélatine ou la glycérine, ou le saccharose et la gomme arabique ; et des bains de bouche renfermant l'ingrédient actif dans un support liquide approprié.

Les formulations adaptées à l'administration rectale peuvent être présentées sous forme de suppositoire avec une base appropriée comprenant par exemple du beurre de cacao ou un salicylate.

Les formulations adaptées à l'administration vaginale peuvent être présentées sous forme de pessaires, tampons, crèmes, gels, pâtes, mousses ou formulations à pulvériser , contenant, en plus de 1'ingrédient actif, des supports tels qu'ils sont connus en pratique pour être appropriés.

Les formulations adaptées à l'administration parentérale comprennent des solutions pour injection aqueuses et non aqueuses isotoniques stériles qui peuvent contenir des anti-oxydants, des tampons, des bactériostats et des solutés qui rendent la formulation isotonique vis-à-vis du sang du receveur intéressé ; et des suspensions aqueuses et non aqueuses stériles qui peuvent contenir des agents suspendants et des épaississants. Les formulations peuvent être présentées dans des récipients obturés à dose unique ou à doses multiples, par exemple des ampoules et des flacons,

I

et elles peuvent être conservées à l'état cryodesséché (lyophilisé) qui ne nécessite que l'addition du support liquide stérile, par exemple de l'eau pour injections, immédiatement avant emploi. Des solutions et suspensions pour injection extemporanées peuvent être préparées à partir de poudres, granules et comprimés stériles du type précédemment décrit.

Les formulations à dose unitaire préférées sont celles qui contiennent une dose ou unité quotidienne, une

«r sous-dose quotidienne, comme indiqué ci-dessus, ou une fraction appropriée de celle-ci, d'un ingrédient actif.

être présentés pour être utilisés sous forme de formulations à usage vétérinaire qui peuvent par exemple être préparées par des procédés classiques en pratique. Des exemples de telles formulations à usage vétérinaire comprennent celles adaptées à :

(a) l'administration orale, par exemple des breuvages (par exemple des solutions ou suspensions aqueuses ou non aqueuses) ; des comprimés ou des grosses pilules ; des poudres, granulés, ou pastilles à mélanger avec les aliments ; et des pâtes pour application à la langue ;

(b) l'administration parentérale, par exemple par injection sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, par exemple sous forme d'une solution ou suspension stérile ; ou (si cela est approprié) par injection intramammaire où une suspension ou solution est introduite dans la mamelle par le mammelon ;

(c) l'application topique, par exemple sous forme de crème, pommade ou pulvérisation appliquée à la peau ; ou

(d) l'administration intravaginale, par exemple sous forme de pessaire, crème ou mousse.

On notera que les formulations telles que décrites ci-dessus conviennent également pour la présentation des associations selon l'invention, qu'il s'agisse de formulations unitaires ou séparées, et peuvent être préparées de manière analogue.

particuliers mentionnés ci-dessus, les formulations de la présente invention peuvent comprendre d'autres agents classiques en pratique eu égard au type de la formulation en question, par exemple, les formulations adaptées à l'administration orale peuvent contenir des agents additionnels tels que des édulcorants, des épaississants et des .ts aromatisants.

Les__ composés selon l'invention peuvent également

Il est bien entendu qu'en plus des ingrédients

n

Les composés de formule (I)A et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés de manière classique en utilisant des techniques qui sont bien connues en pratique, par exemple comme décrit dans : Synthetic Procédures in Nucleic Acid Chemistry (_1, 321, (1968), T.A. Krenitsky et coll.), J. Med. Chem. (26^, 981 (1983)) ; Nucleic Acid Chemistry, Improved and New Synthetic Procèsses, Methods and Techniques (Parties 1 et 2, Ed. L.D. Townsend, R.S. Tipson, (J. Wiley) 1978) ; J.R. Horwitz et coll. (J. Org. Chem. 29_, (juillet 1964) 2076-78) ; M. Imazawa et coll. (J. Org. Chem. 43^ (15) (19 78) 3044-3048) ; K.A. Watanabe et coll. (J. Org. Chem., 45, 3274 (1980)) ; et R.P. Glinski et coll. (J. Chem., Soc.

Chem. Commun., 915 (1970)), ou en employant des techniques analogues à celles décrites ici.

La présente invention englobe de plus un procédé pour préparer un composé de formule (I) et des dérivés pharmaceutiquement acceptables de ce composé, qui consiste à faire réagir un composé de formule :

A

M

(dans laquelle A est comme défini ci-dessus et M représente un groupe précurseur pour le groupe 3'-azido) ou un dérivé (par exemple un ester ou sel) de celui-ci, avec un agent ou dans des conditions servant à transformer ledit groupe précurseur en le groupe azido désiré ;

(B) à faire réagir un composé de formule :

R

(IV a)

(IVb)

ou ho

-p;

n_

1 a'

r:

r.

a',"a'„"a'„ 1 „2 3

K

6 7 *

R et R représentent res-

(dans lesquelles R pectivement les groupe R"1", R groupes précurseurs de ceux-ci, pourvu qu'au moins l'un de r

R6 et R7

ou des

Ra'

> 3 4

R et R„ dans la formule (IVa) ou au moins l'un des 1 6 3 7

groupes R_ et R= dans la formule (IVb) représente un groupe a a précurseur) avec un agent ou dans des conditions servant à transformer le ou lesdits groupes précurseurs en les groupes correspondant désirés ;

(C)

à faire réagir un composé de formule

(Va) ou

(Vb)

10 (dans lesquelles R , R , R , R , R et R sont comme définis ci-dessus) ou un équivalent fonctionnel de celui-ci, avec un composé servant à introduire le cycle ribofurannosyle désiré à la position 1 du composé de formule (IVa) ou à la position 9 du composé de formule (IVb) ; ou 15 (d) pour la préparation de composés de formule (II),

à faire réagir une purine de formule (Vb) avec un noyau de pyrimidine de formule

11

I

2$

HO

py

(VI)

(dans laquelle Py représente un groupe 1-pyrimidinyle) ; et par la suite ou concomitamment, à effectuer l'une ou plusieurs des transformations facultatives suivantes :

(i) lorsqu'un composé de formule (I) est formé, transformer 5 ce composé en un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables ; et

(ii) lorsqu'un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I) est formé, transformer ce dérivé en le composé d'origine de formule (I) ou en un autre

10 dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I).

Dans le procédé selon l'invention décrit ci-dessus, on notera que le choix des composés précurseurs dans les procédés (A) à (D) est largement dicté par le composé particu-15 lier que l'on désire préparer, les agents et conditions susmentionnés étant choisis d'après ceux qui sont connus dans l'art de la chimie de la synthèse des nucléosides. Des exemples de tels modes opératoires de transformation sont décrits ci-après à titre indicatif et il va de soi que l'on 20 peut les modifier de manière classique selon le composé désiré. En particulier, par exemple, au cas où il est décrit une transformation qui entraînerait autrement la réaction non désirée de groupes labiles, de tels groupes peuvent alors être protégés de manière classique, les groupes pro-25 tecteurs étant ensuite éliminés après l'achèvement de la transformation.

Ainsi, par exemple, en ce qui concerne le procédé (A), le groupe M du composé de formule (Illa) ou (Illb) peut représenter, par exemple, un halogène (par exemple le chlore), 30 ou un radical hydroxy ou organosulfonyloxy (par exemple tri-

fl

ff fluorométhylsulfonyloxy, méthanesulfonyloxy ou p-toluène-sulfonyloxy).

Pour la préparation de composés de formule (I)

dans laquelle de groupe 31-azido est en configuration thréo, un composé de formule (lira) ou (Ilib) dans laquelle M est un groupe hydroxy en configuration érythro (le groupe 5'-hydroxy étant avantageusement protégé, par exemple par un groupe trityle) peut être traité avec, par exemple, de la triphénylphosphine, du tétrabromure de carbone et de l'azo-ture de lithium. En variante, M peut représenter un groupe partant organosulfonyloxy en configuration érythréo qui peut être transformé en un groupe azido en configuration thréo par traitement avec, par exemple, de l'azoture de lithium ou de sodium, le groupe 5'-hydroxy étant protégé de même que décrit ci-dessus. L'élimination du groupe protecteur 5'-trityle peut être effectuée par la suite, par exemple par traitement dans des conditions acides douces ou par du bromure de zinc.

Pour la préparation de composés de formule (I)

dans laquelle le groupe 3'-azido est en configuration érythréo , un composé de formule (Illa) ou (Ilib) dans laquelle le groupe M est un groupe halogéno (par exemple chloro) en configuration thréo (le groupe 5'-hydroxy étant avantageusement protégé, par exemple par un groupe trityle) peut être traité avec, par exemple, de l'azoture de lithium ou de sodium. La matière de départ 3'-thréo-halogénée (par exemple chlorée) peut être obtenue, par exemple, par réaction du composé 3'-thréo-hydroxylé correspondant avec, par exemple, la triphénylphosphine et le tétrachlorure de carbone ou, en variante, par traitement avec un halogénure d'organosulfonyle (par exemple le chlorure de trifluoro-méthanesulfonyle) pour former un composé 3'-thréo-organo-sulfonyloxylé qui est ensuite halogène, par exemple comme décrit ci-dessus. En variante, un composé 3'-thréo-hydroxylé ou organosulfonyloxylé de formule (Illa) ou (Ilib)

peut être traité, par exemple, avec la triphénylphosphine,

le tétrabromure de carbone et l'azoture de lithium, pour former le composé 3'-érythro-azido correspondant.

En ce qui concerne le procédé (B), ce qui suit représente des exemples de diverses méthodes par lesquelles 5 les groupes précurseurs de la formule (IVa) peuvent être transformés en les groupes r\ R^, R"^ et R4 désirés :

(a) Lorsque R^" représente un groupe alcoxy (par exemple méthoxy ou éthoxy), ces composés peuvent être préparés à partir des composés correspondants de formule (IVa) dans

10 laquelle R^ représente une liaison 2,5'-O-anhydro, par exemple par traitement par un nucléophile approprié tel qu'un alcoolate, commodément en présence de carbonate de potassium;

(b) Lorsque R"'" représente un groupe mercapto, ces composés peuvent être préparés à partir des composés correspon-

15 dants de formule (IVa) dans laquelle R"*" représente un groupe cl alcoxy (par exemple éthoxy), par exemple par traitement par de llhydrogène sulfuré ;

2

(c) Lorsque R représente un groupe alkyle, ces composés peuvent être préparés à partir des composés corres-

2

20 pondants de formule (IVa) dans laquelle R représente un a

atome d'hydrogène, par exemple par traitement par un agent alkylant, tel que le diméthylacétal de N,N-diméthylformamide ;

(d) Lorsque R représente un groupe mercapto, ces composés peuvent être préparés à partir des composés correspon-

i 3

25 dants de formule (IVa) dans laquelle R represente un groupe cl partant approprié, par exemple 1,2,4-triazolyle, par traitement avec, par exemple, un mercaptan de métal alcalin (par exemple le sodium) ;

3

(e) Lorsque R représente un groupe amino, ces compo-

30 sés peuvent être préparés à partir des composés correspon-

3

dants de formule (IVa) dans laquelle R= représente un groupe

3.

hydroxy, par traitement par un agent aminant, par exemple 11hexaméthyl-disilazane et le sulfate d'ammonium, dans une bombe ;

35 (f) Lorsque R4 représente un radical halogéno (par exemple chloro), ces composés peuvent être préparés à partir

9

de composés correspondants de formule (IVa) dans laquelle

4 v

R represente un atome d'hydrogéné, par traitement par un

3.

agent halogénant, par exemple l'acide m-chloroperbenzoïque.

Des méthodes similaires peuvent être employées pour effectuer la transformation du groupe précurseur de la

6 7

formule (IVb) en le groupe R ou R désiré, ainsi que les méthodes décrites par exemple dans les références susmentionnées .

En ce qui concerne le procédé (C), il peut par exemple être conduit en traitant la pyrimidine ou la purine appropriée de formule (Va) ou (Vb) ou un sel ou dérivé protégé de celle-ci, avec un composé de formule :

(dans laquelle Y représente un groupe partant, par exemple un groupe acétoxy, benzoyloxy ou halogéno tel que chloro, et le groupe 5'-hydroxyle est éventuellement protégé, par exemple par un groupe p-toluènesulfonyloxy), et en éliminant ensuite tous les groupes protecteurs.

En ce qui concerne le procédé (D), la réaction des composés de formules (Vb) et (VI) est commodément conduite en présence d'une enzyme phosphorylante et, au besoin, en séparant les anomères 3'-azido de manière classique.

Lorsqu'est formé un composé de formule (I), ce composé peut être transformé en un phosphate ou autre ester pharmaceutiquement acceptable en faisant réagir le composé de formule (I) avec, respectivement, un agent phosphorylant tel que POClg ou un agent estérifiant approprié tel qu'un halogénure ou anhydride d'acide. Les composés de formule (I), y compris leurs esters, peuvent être transformés en leurs sels pharmaceutiquement acceptables de manière classique, par exemple par traitement par une base approprié^.

pf

Lorsqu'est formé un dérivé d'un composé de for-

j mule (I), un tel composé peut être transforme en le composé d'origine, par exemple par hydrolyse.

Les Exemples non limitatifs suivants illustrent 5 la présente invention. L'expression "ingrédient actif",

telle qu'employée dans les Exemples signifie un composé de formule (I) ou (I)A ou un dérivé pharmaceutiquement accep-

tî

<

10

15

20

25

30

35

Exemple 1 : Formulations de Comprimés ?

On prépare les formulations A et B suivantes par granulation par voie humide des ingrédients avec une solution de povidone, puis addition de stéarate de magnésium et compression.

mq/comprimé mq/comprimé

Formulation A

(a) Ingrédient actif

(b) Lactose B.P. (Pharmacopée britannique)

(c) Povidone B.P.

(d) Amidon-glycollate de sodium

(e) Stéarate de magnésium

Formulation B

(a) Ingrédient actif

(b) Lactose 150

(c) Avicel PH 101

(d) Povidone B.P.

(e) Amidon-glycollate de sodium

(f) Stéarate de magnésium

Formulation C Ingrédient actif Lactose Amidon Povidone

Stéarate de magnésium

250

210 15 20

5_

500

mq/comprimé 250

60 15 20 5

250

26 9 12

3_

300

mq/comprimé 250

26 9 12 3

500 mq/comprimé 100 200 50 5

4

359

300

On prépare les formulations D et E suivantes par compression directe des ingrédients mélangés. Le lactose utilisé dans la formulation E est du type pour compression directe (Dairy Crest - "Zeparox").

Formulation D mg/capsule

Ingrédient actif 250

Amidon prégélatinisé NF15 150

400

•i

Formulation E

/ n <

mq/capsule

Ingrédient actif 250

Lactose 150

5 Avicel 100

500

Formulation F (Formulation pour Libération Réglée)

On prépare la formulation par granulation par voie humide des ingrédients(ci-dessous) avec une solution 10 de povidone, puis addition de stéarate du magnésium et compression.

mg/comprimé

(a) Ingrédient.actif 500

(b) Hydroxypropylméthylcellulose

15 (Methocel K4M Premium) 112

(c) Lactose B.P. 53

(d) Povidone B.P.C. 28

(e) Stéarate de magnésium 7

700

20 Exemple 2 : Formulations de Capsules Formulation A

On prépare une formulation de capsule en ajoutant ■ et mélangeant les ingrédients de la Formulation D de l'Exemple 1 ci-dessus et en en remplissant une capsule 25 de gélatine dure en deux parties. La Formulation B (ci-dessous) est préparée d'une façon analogue.

Formulation B

mq/capsule

(a) Ingrédient actif 250

30 (b) Lactose B.P. 143

(c) Amidon-glycollate de sodium 25

(d) Stéarate de magnésium 2

420

Formulation C mq/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Macrogol 4000 BP 350

A ^ 600

yr

On prépare des capsules en faisant fondre Macrogol 4000 BP, en dispersant l'ingrédient actif dans

_la masse, .fondue et en introduisant la masse fondue dans une capsule de gélatine dure en deux parties.

5 Formulation D

mq/capsule

Ingrédient actif 250

Lécithine 100

Huile d'arachide 100

10 450

On prépare des capsules en dispersant l'ingrédient actif dans la lécithine et l'huile d'arachide et en introduisant la dispersion dans des capsules molles de gélatine élastique.

15 Formulation E (Capsule pour Libération Réglée)

On prépare la formulation suivante de capsule pour libération réglée en extrudant les ingrédients a, b et c à l'aide d'une extrudeuse, puis en sphéronisant l'extrudat et en séchant. On revêt les pastilles séchées 20 avec la membrane pour libération réglée (d) et on en remplit une capsule de gélatine dure en deux parties.

mq/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Cellulose microcristalline 125 25 (c) Lactose BP 125 125

(e) Ethyl-cellulose 13

513

Exemple 3 : Formulation d'Injectables Formulation A

30 Ingrédient actif 0,200 g

Solution 0,1M d'acide chlorhydrique q.s. pour pH 4,0 à 7,0 Solution 0,1M d'hydroxyde de sodium q.s. pour pH 4,0 à 7,0 Eau stérile q.s. jusqu'à 10 ml

On dissout l'ingrédient actif dans la plus grande 35 partie de l'eau (35°-40°C) et on ajuste le pH entre 4,0 et 7,0 avec l'acide chlorhydrique ou l'hydroxyde de sodium

n selon les besoins, La charge est alors amenée au volume avec l'eau et filtrée sur un filtre stérile à micropores dans un flacon en verre ambré stérile de 10 ml (type 1) et obturé avec des fermetures et des joints recouvrants 5 stériles.

Formulation B

Ingrédient actif 0,125 g

Tampon phosphate stérile apyrogène

à pH 7 q.s. jusqu'à 25 ml

10 Exemple 4 : Injection intramusculaire Poids (g)

Ingrédient actif 0,20

Alcool benzylique 0,10

Glycofurol 75 1,45

Eau pour injèction q.s. jusqu'à 3,00 ml

15 On dissout l'ingrédient actif dans le glycofurol.

On ajoute ensuite l'alcool benzylique et on le dissout et on ajoute de l'eau jusqu'à 3 ml. On filtre ensuite le mélange sur un filtre stérile à micropores et on l'enferme dans des flacons en verre ambré stériles de 3 ml 20 (type 1).

Exemple 5 : Sirop

Formulation A Poids (g)

Ingrédient actif 0,2500

Solution de sorbitol 1,5000

25 Glycérol 2,0000

Benzoate de sodium 0,0050

Arôme, pêche 17.42.3169 0,0125 ml

Eau purifiée q.s. pour 5,0000 ml

On dissout l'ingrédient actif dans un mélange du 30 glycérol et de la plus grande partie de l'eau purifiée. On ajoute ensuite une solution aqueuse du benzoate de sodium à la solution, puis on ajoute la solution de sorbitol et enfin l'arôme. On complète le volume avec de l'eau purifiée et on mélange bien.

35 Lorsque l'ingrédient actif est faiblement soluble,

on utilise la formulation (B) suivante.

Formulation' B Poids (y)

Ingrédient actif 0,250

Solution de sorbitol. 1,500

Glycérol 0,005

Cellulose dispersable 0,005

Benzoate de sodium 0,010 ml Arôme

Eau purifiée, jusqu'à 5,000 ml

Mélanger la solution de sorbitol, le glycérol 10 et une partie de l'eau purifiée. Dissoudre le benzoate de sodium dans l'eau purifiée et ajouter la solution à la masse. Ajouter et disperser la cellulose dispersi-ble et l'arôme. Ajouter et disperser l'ingrédient actif. Compléter au volume avec, l'eau purifiée.

15 Exemple 6 : Suppositoire mg/suppositoire

Ingrédient actif (63 pm)* 250 Graisse dure, BP (Witepsol H15 -

Dynamit NoBel) 1770

20 2020

* On utilise l'ingrédient actif sous forme d'une poudre dans laquelle 90 % au moins des particules ont un diametre de 63 pm ou moins.

On fait fondre un cinquième du Witepsol H15 dans 25 un récipient chemisé de vapeur d'eau à 45°C au maximum.

On tamise l'ingrédient actif à travers un tamis de 200 pm et l'ajoute à la base fondue en mélangeant, en utilisant un appareil Silverson muni d'une tête de coupe, jusqu'à dispersion homogène. En maintenant le mélange à 45°C, 30 on ajoute le Witepsol H15 restant à la suspension et on agite pour assurer un mélange homogène. On fait passer la totalité de la suspension à travers un tamis en acier inoxydable de 250 pm et, tout en poursuivant l'agitation, on laisse refroidir à 40°C. A une température de 38°C à 35 40°C, on introduit 2,02 g du mélange dans des moules en matière plastique appropriés de 2 ml. On laisse les sup-

positoires refroidir jusqu'à la température ambiante.? Exemple 7 : Pessaires mg/pessaire

Ingrédient actif (63 um) 250

5 Dextrose anhydre 380

Fécule de pomme de terre 363

Stéarate de magnésium 7

1000

On mélange directement les ingrédients ci-dessus et on prépare des pessaires par compression directe du mélange résultant.

Les Exemples 8 à 10 suivants illustrent la préparation de formulations contenant un composé de formule (I)A (ingrédient actif) et un autre nucléoside thérapeu-15 tique, comme spécifié.

Exemple 8 : Injection Formulation A

Poids (mg)

Acyclovir 400

20 Ingrédient actif 200

NaOH 1M selon les besoins

Eau stérile, jusqu'à 10 ml

Formulation B

Poids (mg)

25 2-amino-9~(2-hydroxyéthoxyméthyl)purine 400

Ingrédient actif 200

NaOH 1M selon les besoins

Eau. stérile, j.ysqu'à 10 ml

Pour les formulations ci-dessus, le nucléoside 30 thérapeutique est ajouté à la solution de NaOH 1M et agité jusqu'à dissolution. On ajoute l'ingrédient actif et on le dissout.- Ajouter l'eau stérile jusqu'à 10 ml. Filtrer sur un filtre stérile et remplir des flacons stériles. Lyophiliser.

35 Pour les formulations ci-dessus, le nucléoside thérapeutique est ajouté à la solution de NaOH 1M et agité

10

15

20

25

30

35

jusqu'à dissolution. On ajoute l'ingrédient actif et

«

le dissout. Ajouter l'eau stérile jusqu'à 10 ml. Filtrer sur un filtre stérile et remplir, des flacons stériles. Lyophiliser.

Exemple 9 : Comprimés Formulation A

Acyclovir Ingrédient actif Povidone

Amidon-glycollate de sodium Stéarate de magnésium

Formulation B

Ingrédient actif

2-amino-9-(2-hydroxyéthoxyméthyl)purine Povidone

Amidon-glycollate de sodium Stéarate de magnésium

Poids (mg) 500 125 14 25

6_

670

Poids (mg) 125 125 8 12 3

273

Pour les formulations A et B ci-dessus, le nucléoside thérapeutique et l'ingrédient actif sont mélangés avec 1'amidon-glycollate de sodium et granulés avec une solution de povidone. Après séchage, les granules sont malaxés avec le stéarate de magnésium et comprimés.

Exemple 10 : Capsules

Formulation A Poids (mg)

Acyclovir 250

Ingrédient actif 62,5

Lactose 170,5

Amidon-glycollate de sodium 15

Stéarate de magnésium 2

5.00

Mélanger les ingrédients et en remplir des capsules de gélatine dure.

kt^

Formulation B

f

Poids (mg)

Ingrédient, actif 125

2-amino-9-(2-hydroxyéthoxyméthyl)purine 125 5 Lactose 133

Amidon-glycollate de sodium 15

Stéarate de magnésium 2

400

Mélanger les ingrédients et en remplir des capsules de 10 gélatine dure.

L'Exemple 11 illustre une formulation contenant de 1'interféron et un composé de formule (I)A (ingrédient actif).

Exemple 11 : Injection 15 Interféron 3 méga-unités

Ingrédient actif 200 mg

Tampon stérile pH 7, jusqu'à 50 ml

Dissoudre 1'interféron et l'ingrédient actif dans l'eau stérile. -Filtre sur un filtre stérile et remplir des 20 flacons-stériles.

Les Exemples 12 à 15 suivants décrivent la préparation de formulations contenant un composé de formule I(A) (l'Ingrédient Actif), par exemple la 3'-azido-3'-désoxythymidine, en association avec un inhibiteur de 25 transport de nucléoside, par exemple le dipyridamole. Exemple 12 : Comprimé

Poids (mg)

Inhibiteur de transport de nucléoside 300

Ingrédient actif 200

30 Lactose 105

Amidon 50

Polyvinylpyrrolidinone 20

Stéarate de magnésium 10

Poids total 685

35 On mélange les composés actifs avec le lactose et l'amidon et on les granules par voie humide avec une

4? j solution de ,1a polyvinylpyrrolidinone. On sèche les granules, les tamise et les mélange avec le stéarate de magnésium,-. puis on les comprime sous la forme de comprimés.

Exemple 13 : Capsule

5 Poids (mg)

Inhibiteur de transport de nucléoside 300

Ingrédient actif 100

Lactose 100

Amidon-glycollate de sodium 10

10 Polyvinylpyrrolidinone 10

Stéarate de magnésium 3

Poids total' 523

On mélange les composés actifs avec le lactose et 1'amidon-glycollate de sodium et les granule par voie 15 humide avec une solution delà polyvinylpyrrolidinone.

On sèche les granules, les tamise et les mélange avec le stéarate de magnésium et les introduit dans des capsules de gélatine dure.

Exemple 14 ; Crème 20 Poids (g)

Inhibiteur de transport de nucléoside

7,5

Ingrédient actif

5,00

Glycérol

2,00

Alcool cétostéarylique

6, 75

Lauryl-sulfate de sodium

0,75

Paraffine blanche molle

12,50

Paraffine liquide

5,00

Chlorocrésol

0,10

Eau purifiée, jusqu'à

100,00

30 On dissout les composés actifs dans un mélange de l'eau purifiée et du glycérol et on chauffe à 70°C. On chauffe les autres ingrédients ensemble à 70°C On rassemble les deux parties et les émulsionne. On refroidit le mélange et on en remplit des récipients.

Vt

Exemple 15 : Injections intraveineuses

' / \ ' Quantité (mg)

(1) Ingrédient actif 200 Inhibiteur de transport de nucléoside 300

Glycérol 200

Solution d'hydroxyde de sodium, q.s. pH 7,0-7,5 Eau pour Injections» jusqu'à 10 ml

On ajoute le glycérol à une partie de l'eau pour injections. On ajoute les deux composés actifs et on ajuste le pH à 7,0-7,5 avec la solution d'hydroxyde de sodium. On complète-la solution au volume avec un supplément de l'Eau pour Injections. Dans des conditions aseptiques, on stérilise la solution par filtration, on en remplit des ampoules stériles et on ferme hermétiquement les ampoules.

Quantité (mg)

(2) Ingrédient actif 100 Inhibiteur de transport de nucléoside 150

Mannitol 125

Solution d'hydroxyde de sodium, q.s. pH 8,0-9,0 Eau pour injections» jusqu'à 2,5 ml

On dissout les composés actifs et le mannitol dans une partie de l'eau pour injections. On ajuste le pH à 8,0-9,0 avec la solution d'hydroxyde de sodium et on complète le volume avec un supplément d'eau pour injections. Dans des conditions aseptiques, on stérilise la solution-par filtration, on l'introduit dans des flacons stériles et on élimine l'eau par lyophilisation. On ferme hermétiquement les flacons sous atmosphère d'azote, et on les ferme avec une fermeture stérile et un collier métallique.

Les Exemples 16 à 18 suivants décrivent la préparation de formulations contenant un composé de formule I(A) (l'Ingrédient actif), par exemple la 2'-azido-3'-

i désoxythymidine, en association avec un inhibiteur de glucuronidation/excrétion rénale, par exemple le probené-

cide.

Exemple 16 : Comprimé

Poids (mg)

Ingrédient actif 100 Inhibiteur de glucuronidation/excrétion rénale 200

Lactose 105

Amidon 50

Polyvinylpyrrolidinone 20

Stéarate de magnésium 10

Poids total 485

On mélange les composés actifs avec le lactose et l'amidon et les granule par voie humide avec une solution de la polyvinylpyrrolidinone. On sèche les granules, les tamise et les mélange avec le stéarate de magnésium et les comprime ensuite à la forme de comprimés.

Exemple 17 : Capsule

Poids (mg)

Ingrédient actif 100 Inhibiteur de glucuronidation/excrétion rénale 100

Lactose 100

Amidon-glycollate de sodium 10

Polyvinylpyrrolidinone 10

Stéarate de magnésium 3_

Poids total 323

On (ïiélange les composés actifs avec le lactose et 11amidon-glycollate de sodium et les granules par voie humide avec une solution de la polyvinylpyrrolidinone. On sèche les granules, les tamise et les mélange avec le stéarate de magnésium et on en remplit des capsules de gélatine dure.

H

!

Exemple 18 : Injections intraveineuses ^

Quantité (mg)

(1) Ingrédient actif 200 Inhibiteur de glucuronidation/excrétion rénale 300

Glycérol 200

Solution d'hydroxyde de sodium, q.s. pour pH 7,2-7,5

Eau pour injections, jusqu'à 10 ml

On ajoute le glycérol à une partie de l'eau pour injections. On ajoute les deux composés actifs et on ajuste le pH à 7,0-7,5 avec la solution d'hydroxyde de sodium. On complète la solution au volume avec un supplément d'eau pour injections. Dans des conditions aseptiques, on stérilise la solution par filtration, l'introduit dans de's ampoules stériles et on ferme les ampoules hermétiquement.

Quantité (mg)

(2) Ingrédient actif 100 Inhibiteur de glucuronidation/excrétion rénale 150

Mannitol 125

Solution d'hydroxyde de sodium, q.s. pour pH 8,0-9,0

Eau pour injections, jusqu'à 2,5 ml

On dissout les composés actifs et le mannitol dans une partie de l'eau pour injections. On ajuste le pH à 8,0-9,0 avec la solution d'hydroxyde de sodium et on complète au volume avec un supplément d'eau pour injections. Dans des conditions aseptiques, on stérilise la solution par filtration, l'introduit dans des flacons stériles et on élimine l'eau- par lyophilisation. On ferme hermétiquement les flacons sous une atmosphère d'azote et les ferme à l'aide d'une fermeture stérile et d'un collier métallique.

kr

Formulations Vétérinaires (Exemples 19-22)

Exemple 19 v Comprimé pour petits animaux ■

Par comprimé

Ingrédient actif 120,0 mg

Amidon de maïs 20,0 mg

Cellulose microcristalline 100,0 mg

Stéarate de magnésium 1,5 mg

On mélange l'ingrédient actif, la cellulose microcristalline et l'amidon de maïs. On ajoute une quantité suffisante de solution d'amidon, sous agitation continue, pour obtenir une masse humide que l'on passe au tamis pour obtenir des granules. On applique dessus le stéarate de magnésiunpar tamisage. Les comprimés sont produits par compression directe des granules.

Exemple 20 : Granules pour médication.dans les aliments

Poids (g)

Ingrédient actif 6,0

Povidone 1,0

Lactose 93,0

Alcool aqueux, q.s.

On mélange l'ingrédient actif avec le lactose. On ajoute à ce mélange l'alcool aqueux contenant la povidone dissoute. On ajoute une quantité suffisante d'alcool aqueux pour obtenir une masse humide que l'on fait passer au tamis pour obtenir des granules qui sont ensuite séchés.

Exemple 21 : Pâte à usage oral

Poids (g)

Ingrédient actif 24

Gomme de xanthane 0,5

Hydroxybenzoate de méthyle 0,1

Polysorbate 80 0,1

Eau purifiée,.jusqu'à 100,0 ml

On dissout le polysorbate 80 et 1'hydroxybenzoate de méthyle dans la masse de l'eau. On ajoute la gomme de Xanthane et on laisse gonfler. On ajoute l'ingrédient actif et le disperse, et on dilue au volume.

X

H

i i

i

Exemple 22 : Pommade j

Poids(q)

Ingrédient actif- 12

Paraffine blanche molle 88,0

On fait fondre la paraffine blanche molle à 60°C. On ajoute l'ingrédient actif et on disperse, on laisse refroidir, et on en remplit des tubes métalliques compressibles.

Exemple 23 : 3'-azido-3',5■-didésoxy-5'-[(N,N-diméthyl-thiocarbamoyl ) thio"! thymidine

(a) On mésyle le groupe 5'-hydroxyle de 3,0 g (11,2 mmoles) de 3'-azido-3■-désoxythymidine par l'addition de 2,7 ml de chlorure de méthanesulfonyle à 20 ml d'une solution de la 3'-azido-3'-désoxythymidine dans 20 ml de pyridine anhydre. On laisse la réaction s'effectuer à 5°C pendant une heure, puis on verse le mélange réactionnel sur de l'eau glacée. On recueille le précipité par filtration. On obtient le produit désiré en faisant réagir la 3'-azido-3'-désoxy-5'-mésylthymidine obtenue dans la première étape avec 0,78 g (5,6 mmoles) de carbonate de potassium dans 75 ml de DMF. On chauffe le mélange réactionnel dans un bain d'huile à 80°C pendant six heures, puis on le versedansde l'eau glacée. On extrait le produit de l'eau avec de l'acétate d'éthyle. On chasse le solvant sous vide et on soumet l'huile résultante à une chromatographie instantanée sur gel de silice en éluant avec CHCl^iKeOH (9:1 en volume). On obtient le produit

•s en un faible rendement. P.F.. = 184-186°C.

(b) On ajoute 0,642 g (3,58 mmoles) du sel de sodium d'acide diméthyldithiocarbamique dihydraté et 3,58 ml d'une solution d'hydroxyde de tétrabutylammonium IN dans MeOH à 25 ml de DMF. On amène la solution à l'ébullition pour éliminer l'eau et MeOH. Après refroidissement, on ajoute 0,85 g (3,4 mmoles) de 2,5'-0-anhydro-3'-azido-3* -désoxythymidine dissoute dans 15 ml de DMF. On chauffe le mélange réactionnel dans un bain d'huile à 55°C pen

i dant 16 heures environ. On verse le mélange réactionnel f

dans de l'eau glacée et on sépare le précipité par filtration.. On extrait, le .produit dans le filtrat avec de l'acétate d'éthyle. On chasse l'acétate d'éthyle sous vide et on purifie l'huile résultante par chromatogra-phie instantanée sur gel de silice en éluant avec CHClgîMeOH (95:5 en volume). La chromatographie a été nécessaire-une seconde fois sur gel de silice. La seconde élution est effectuée avec CHCl^MeOH (98:2 en volume). On procède à une purification finale par chromatographie à phase inversée sur C^g en éluant avec un mélange eau:méthanol (3:7). Le rendement est de 2,5 %. Exemple 24 : 3'-azido-3'-désoxy-5'-0-acétyl-4-thio-thymidine

On dissout 1,41 g (3,9 mmoles) de 3'-azido-3'-désoxy-5'-0-acétyl-4-(1,2,4-triazole)thymidine (Lin, et coll., J. Med. Chem. 26, 1691 (1983)) dans 100 ml d'acétone et 30 ml de H20, puis on traite avec 0,39 g de NaSH.xHgO (Sung. J. Chem. Soc. Chem. Comm. 522, (1982)). On-agite le mélange pendant 30 minutes, on réduit le volume de moitié et on extrait avec 200 ml de CHClg. On lave le CHCl^ avec 100 ml de HgO et le déshydrate sur NagSO^. On chasse le solvant sous vide et on place l'huile résultante sur un tampon de gel de silice (6,5 x 3 cm), ce qui est suivi d'une élution avec 750 ml de CHClg. On chasse le solvant sous vide pour obtenir une .huile jaune que l'on recristallise dans i-PrOH pour obtenir 0,64 g (1,9 mmole ; 48,7 %) ; P.F. = 75 - 78°C. Exemple 25 3'-azido-3'-désoxy-4-thiothymidine

-On dissout 0,25 g (0,76 mmole, Exemple 21) de 3'-azido-3'-désoxy-5'.-0-acétyl-4-thiothymidine dans un mélange de 5 ml de dioxanne et 5 ml de NH^OH concentré et on agite pendant 18 heures. On chasse le solvant sous vide et on applique le résidu sur une colonne de gel de silice en éluant avec CHClg/EtOAc (3:1 en volume). On rassemble les fractions appropriées et on chasse le

solvant sous vide pour obtenir une huile jaune que l'on

!

dissout dans EtgO, formant des cristaux par concentration: 0,16 g .{0,56 mmole ; . 74 %) ; P.F.. = 116-118°C.

Exemple 26-: 3-N-méthyl-3'-azido-3'-désoxythymidine

•On chauffe au reflux dans 20 ml de CHCl^ pendant 48 heures 0,5 g (1,9 mmole) de 3'-azido-3'-désoxythymidine et 0,9 ml (7,5 mmoles) de diméthylacétal de N>N-diméthyl-formamide (Zemlicka, Coll. Czech. Chem. Comm. _35> 35 72 (1972)). On chasse le solvant sous vide et on place la matière sur une colonne de gel de silice. L'élution avec EtOAc/CHClg (1:1 en volume) donne la matière pure sous forme d'une huile visqueuse : 0,26 g (0,9 mmole* 47 %). Exemple 27 : 3 ?-azido-3'-désoxy-2-thiothymidine

On effectue la synthèse de la 3'-azido-2-thio-thymidine par une séquence réactionnelle à cinq étapes en partant de 2,31-O-anhydro-5'-tritylthymidine (J.J. Fox. J. Org. Chem. 28, 936 (1963)).

On ajoute 10,5 g (22,4 mmoles) de 2,3'-0-anhydro-5'-tritylthymidine à une solution de 0,52 g (22 >4 mmoles). de sodium dans 1,2 litre d'éthanol anhydre et on chauffe le mélange réactionnel au reflux pendant six heures. On refroidit le mélange réactionnel et le neutralise avec HC1 IN. On chasse le solvant sous vide et on purifie l'huile résultante par chromatographie instantanée sur gel de silicç en éluant avec CHCl^MeOH (96:4 en volume). On obtient un rendement de 30 % en l-(2'-désoxy-5'-trityl-D-lyxofurannosyl)-2-éthoxythymine. On dissout 3,5 g (16,8 mmoles) du dérivé 2-éthoxythymidine dans 35 ml de DMF contenant 2,2 ml de triéthylamine. On sature la solution froide avec h^S. On place le mélange réactionnel dans une bombe en acier et on le chauffe à 95°C. Au bout de vingt-sept heures, la CCM (chromatographie en couche mince) montre qu'il ne reste pas de matière de départ. On purge le mélange réactionnel avec N2 pendant plusieurs heures et on le verse sur de l'eau glacée. On recueille le produit par filtration et le purifie par chromatogra-

phie instantanée sur gel de silice en éluant avec CHCl^: MeOH (97:3 en volume). On obtient un rendement de 37 % en

I

1-(2 * -désoxy-5 ' -trityl-p -D-lyxofurannosy 1 )-2-th-io thymine. Le spectre UV max à pH 1 de 277 nm et à pH 11 de 241 nm indique la formation d'une 2-thiothymidine.

On mésyle le groupe 3'-hydroxyle du dérivé de type thiothymidine de la façon suivante : On ajoute 665 ml (3,5 équivalents) de chlorure de méthanesulfonyle, en quatre portions, pendant six heures, à une solution de 1,25 g de 1-(21-désoxy-5 '-trityl-|3-D-lyxofurannosyl)-2-thiothymidine-dans 15 ml de pyridine anhydre à 5°C. On maintient le mélange•réactionnel à 5°C pendant 16 heures environ. On verse le mélange réactionnel sur de l'eau glacée et on recueille le produit par filtration. On effectue la purification par chromatographie instantanée sur gel de silice en éluant avec un mélange acétate d'éthyle:hexane (1:1 en volume). Le rendement est de 50 %.

On dissout 0,3 g (6 mmoles) d'azoture de lithium dans 20 ml de DMF anhydre ét on ajoute 0,72 g (1,2 mmole) de l-(2'-désoxy-3'-mésyl-5'-trityl- -D-lyxofurannosyl)-2-thiothymine. On chauffe la solution dans DMF'à 85°C pendant 2,5 heures. On verse le mélange réactionnel sur de l'eau glacée et on recueille le produit par filtration. On effectue une purification par chromatographie instantanée sur gel de silice en éluant avec CHC^iMeOH (98:2 en volume). Le rendement est de 78 %. Une bande dans le spectre IR à 2100 cmindique la présence d'un azide d'alkyle. Le spectre UV confirme la présence d'une 2-thiothymidine.

On. prépare le produit final en débloquant le groupe 5'-hydroxyle de 0,1 g de 3'-azido-3'-désoxy-2-thio-5'-tritylthymidine dans 5 ml d'acide acétique à 80 % sur un bain-marie pendant 45 minutes. On obtient 0,021 g de 3'-azido-3'-désoxy-2-thiothymidine par chromatographie sur gel de silice en éluant avec CHCl3:MeOH (96:4 en volume) en un rendement de 3 7 %.

fît

\

Exemple 28 : 3'-azido-31-désoxy-2-éthoxythymidine {

-On prépare la 31-azido-3'-désoxy-2-éthoxythymi-dine en chauffant au reflux 2,6 g (7,5 mmoles) de 3'-azido-3'-désoxy-5'-mésylthymidine dans 25 ml d'éthanol 5 anhydre avec deux équivalents de carbonate de potassium (1,08 g, 7,5 mmoles) pendant cinq heures. On neutralise la solution et la reprend jusqu'à former une huile sous vide. On purifie l'huile par chromatographie instantanée sur gel de silice en éluant avec un mélange acétate 10 d'éthylezméthanol. On isole le produit désiré en un rendement de 39 % ; P.F. = 98-100°C.

Exemple 29 : 3'-azido-3'-désoxy-2-méthoxythymidine

On prépare la 3'-azido-3'-désoxy-2-méthoxy-thymidine à partir de 1,6 g (4,6 mmoles) de 3'-azido-15 3'-désoxy-5'-mésylthymidine par le mode opératoire de l'Exemple 25. Le rendement est de 42 % ; P.F. = 47-51°C. Exemple 30 : 3'-azido-2',3'-didésoxy-5-méthylisocytidine

On dissout 0,35 g (1,4 mmole) de 2,5'-0-anhydro-3'-azido-3'-désoxythymidine dans 15 ml de MeOH préalable-20 ment saturé avec de l'ammoniac et on le ' place dans une bombe à 77°C (bain d'huile) pendant 48 heures (Skaric and Matulic-Adamic, Helv. Chim. Acta. 63_, 2179 (1980)). D'après la CCM (CHCl^/MeOH à 6:1 en volume), la réaction est incomplète. On chasse le solvant sous vide et on 25 place l'huile résultante sur une colonne de gel de silice, puis on élue avec CHClg/MeOH (6:1 en volume). On rassemble les fractions appropriées pour obtenir 0,14 g (0,53 mmole; 38 %) du composé du titre ; P.F. = 107-108°C.

Exemple 31 : 3 ' -azido-«5-chloro-2 ' ,.3 '-didésoxyuridine

..On dissout 0,25 g (1 mm'ole) de 3 '-azido-2 ' , 3 '-didésoxyuridine dans 2 ml de diméthylacétamide (DMAC) anhydre, on refroidit à 0°C et on ajoute 2 ml de HC1 0,5M dans DMAC. On ajoute en deux portions, en l'espace de dix minutes., .0,277 g (1,6 mmole) d'acide m-chloroperbenzoïque et on laisse-le mélange atteindre la température ambiante. Au bout de deux heures, on ajoute 4 ml de H2°/iet on

M

30

35

*

la solution. On extrait la solution aqueuse de DMAC avec 3 x 3 ml de Et2Û et on évapore Et2Û sous vide jusqu'à obtention d'une huile que l'on applique à une colonne de gel de silice. L'élution avec CHCl^MeOH (15:1 en volume), le rassemblement des fractions appropriées et 1'évaporation sous vide donnent une huile que l'on cristallise dans Et2Û pour obtenir 58,5 mg (0,2 mmole, 20 %) ; P.F. = 169-170°C.

UV (nm): à pH 1 A max = 276 (£ = 7400), min = 239 ( £ = 500); à pH 13 \max = 274 ( l = 6400), A min = 249 U = 3800)

H1 RMN . (DMSO-dg) 5 8,29 (s,lH,H6), 6,04 (t,lH,Hl', J=5,5 Hz), 5,49-5,29 (m, 1H,5'-0H), 4,44-4,20 (m,lH,H3'), 3,88-3,71 (m, 1H,H4'), 3,71-3,53 (m,2H,H5'), 2,63-2,31 (m,2H,H2«);

Analyse pourC^H^gN^O^Cl

Calculé • C 37,58, H 3,50, N, 24,35, Cl 12,32 Trouvé 0 37,67, H 3,54, N 24,39, Cl 12,40

Exemple 32 : 3'-azido-5-bromo~2',3'-didésoxyuridine

On prépare la 3'-azido-5-bromo-2',3'-didésoxy uridine à partir de 0,827 g (3,3 mmoles) de 3'-azido-2*,3'-didésoxyuridine (T.A. Krenitsky et coll., J. Med. Chem., 26, 891 (1^SS)) en acétylant tout d'abord le groupe 5'-hydroxyle avec 15 ml d'anhydride acétique puis en bromant la position 5 par l'addition de 0,5 ml d'acide acétique ët de 0,566 g de brome. On agite la solution brun-rouge à la température ambiante pendant deux heures. On reprend le mélange réactionnel sous vide jusqu'à former une huile que l'on triture avec de l'éther d'éthyle. On dissout l'huile dans une solution méthanoliquei d'ammoniac pour éliminer le groupe acétyle. On isole le produit désiré par chromatographie sur gel de silice en éluant avec CHClg:Me0H (95:5 en volume). Le .rendement est de 32 % ; P.F. = 148-149°C.

Exemple 33 : 3 ' -âzido-2-' , 3 ' -didésoxy-5-iodouridine

On prépare'la*3'-azido-2',3'-didésoxy-5-iodouridine à partir de 10 g (28 mmoles) de 2'*3'-

<r

&

I

didésoxy-5-iodouridine par une séquence réactionnelle à

J

quatre étapes décrite dans la littérature (T.A. Krenitsky et coll., J. Med. Chem., 26, 891. (1983)) P.F. = 126-130 Exemple 34-: 31-azido-2',3'-didésoxy-5-trifluorométhyl-uridine

On prépare la 3'-azido-2',31-didésoxy-5-trifluorométhyluridine par la séquence réactionnelle à quatre étapes suivante :

On trityle le groupe 5'-hydroxyle de 5,0 g ( 16,9 mmoles) de 2',3'-didésoxy-5-trifluorométhyl-uridine par addition de 5,65 g (20,2 mmoles) de chlorure de triphénylméthyle à la matière de départ dans une suspension de 1,4 .ml de dichlorométhane, 70 ml de pyridine et 55 g de tamis moléculaires 3A. On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant quatre jours. Après filtration et évaporation sous vide, on chromatograpiiie le produit huileux sur gel de silice en éluant avec CHgClgrMeOH (95:5 en volume). On rassemble les fractions de produit et on chasse le solvant sous vide. On triture l'huile résultante avec de l'eau et l'on recueille par filtration le solide qui se forme. On chlore le groupe 3'-hydroxyle en dissolvant 3,0 g de 1'uridine protégée en 5' dans 30 ml de diméthyl-acétamide contenant 3,27 g de triphénylphosphine et en ajoutant 51 ml de tétrachlorure de carbone. On agite le mélange réactionneljà la température ambiante pendant 16 heures environ. On ajoute 1 ml de méthanol. On reprend le mélange réactionnel jusqu'à formation d'une huile que l'on chromatographie sur gel de silice >en éluant avec CI-^C^iEtOAc (9:1 en volume). On recueille le produit désiré sous forme d'une huile. On débloque l'huile, le 1-(3'-chloro-2'-désoxy-5'-trityl-thréo- -D-ribofuranno-syl).-5-trifluorométhyluracile, par dissolution dans 80 ml de nitrométhane et addition de 4,45 g de bromure de zinc dissous dans 80 ml de nitrométhane par le procédé de V. Kohli et coll. (Tetrahedron Letters, _2jL, page 2683,

1980). On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 16 heures environ. On ajoute encore 3,0 g de bromure dç zinc le lendemain et on laisse la réaction se poursuivre pendant 16 heures environ. L'addition finale 5 de 3,7 g de bromure de zinc sous léger chauffage amène la réaction à un point d'arrêt. On verse le mélange réactionnel dans de 1"'acétate d'ammonium 1M. On extrait le produit dans du dichlorométhane. On chasse le dichloro-méthane sous vide et on chromatographie l'huile résultante 10 sur dU gei de silice en éluant avec CI-^C^^eOH (95:5 en volume). On obtient le produit final en traitant 0,48 g (1,53 mmole) de l-(3'-chloro-2'-désoxy-p-Di-ribofuranno-syl )-5-trif luorométhyluracile avec 0,19 g (3,8 mmoles) d'azoture de lithium dans 4,8 ml de diméthylacétamide. 15 On chauffe le mélange réactionnel à 90°C pendant quatre heures. On reprend le mélange réactionnel jusqu'à former une huile que l'on chromatographie sur gel de silice en éluant avec CHCl^iMeOH (95:5 en volume). Une seconde chromatographie est nécessaire. Par élution sur gel de 20 silice avec Cî^C^^eOH (97:3 en volume), on obtient un produit sensiblement pur. Par cristallisation dans le toluène, on obtient le produit pur en un rendement de

à partir de 2,2 g (7,9 mmoles) de 3'-azido-2',3'-didésoxyuridine sous -forme du HCl par le mode opératoire de T.A. Krenitsky et coll. (J. Med. Chem., _26, 891 (1983)). Le rendement est de 40 % ; P.F. = 174,5-176,5°C.

30 Exemple 36 : 3'-azido-2',3'-didésoxy-5-méthylcytidine

10 %.

25

Exemple 35 : 3'-azido-2',3'-didésoxycytidine

On prépare la 3'-azido-2',3'-didésoxycytidine

..On prépare la-3'-azido-2',3'-didésoxy-5-

méthylcytidine à partir de 0,8 g (3,0 mmoles) de 3'-azido-3'-désoxythymidine par le mode opératoire de 1 ' Exemple..35. Le rendement est de 19 %.

35 Exemple 37 : Thréo-3'-azido-21,3'-didésoxycytidine

On effectue la synthèse de la thréo-3'-azido

i

2 ' , 3 ' -didésoxycytidine à partir de 2 ' -désoxyuridine en| quatre étapes.

__ On trityle le groupe 5'-hydroxyle de la 2'-désoxyuridine par le procédé décrit dans Synthetic Procédures in 5 Nucleic Acid Chemistry, _1, 321 (1968).

On prépare la thréo-3'-azido-2',3'-didésoxy-5'-trityluridine en faisant réagir 5,0 g (10,6 mmoles) de 2'-désoxy-5'-trityluridine avec 3,07 g (11,7 mmoles, 1,1 équivalent) de triphénylphosphine, 3,88 g (11,7 10 mmoles, 1,1 équivalent) de -tétrabromure de carbone et

5,21 g (106 mmoles, 10 équivalents) d'azoture de lithium dans 80 ml de DMF. On ajoute le tétrabromure de carbone en dernier. On laisse la réaction s'effectuer à la température ambiante pendant 16 heures environ. On ajoute 5 ml 15 de méthanol. On reprend la solution sous vide jusqu'à

former une huile et la soumet à une chromatographie instantanée sur gel de silice en éluant avec de l'acétate d'éthyle. On effectue le déblocage de la position 5'-hydroxyle en chauffant dans de l'acide acétique à 80 % 20 sur un bain-marie pendant vingt minutes. Par refroidissement, le"tritylcarbinol précipite et on le sépare par filtration. On porte le filtrat à siccité et on le délaie dans de l'éther d'éthyle. On utilise, le produit, à savoir la thréo-31 --azido-2 ' ,3' -didésoxyuridine » sans autre puri-25 fication. On prépare le produit final, à savoir la thréo-3*-azido-21,3'-didésoxycytidine sous forme du HCl à partir de -l'analogue de type uridine exactement par lê même mode opératoire que celui utilisé pour la préparation de lrisomère érythro (T.A. Krenitsky et coll., J. Med. Chem., 3° 26,j 891 (1983)). La- quantité • obtenue est de 0,021 g, soit un rendement..de 7 %.

Exemple 38 ; 9-(31-azido-2',3'-didésoxy-a-D-ribofuranno-sy 1 ). adénine

On prépare la 9-(3 '-azido-2 ' ,3 1 -didésoxy-a-E)-35 ribofurannosyl)adénine en deux étapes à partir de 2,0 g

(7,7 mmoles) de Ng-octanoyladénine et de 1,13 g (4,2 mmoles)

&

î

de 3'-azido-3'-désoxythymidine par le mode opératoire 5

décrit par M. Imazawa et F. Eckstein (J. Org. Chem.,

43, 3044 (1978) ; P.F. = 120-122°C.

UV pH l^max 258nm^.min 230 nm pH 13Amax 260nmAmin 229 nm

CHN pour C10H12N8°2

Calculé : C-43,48; H-4,38; N-40,56 Trouvé : C-43,28; H-4,45; N40 » 38

Exemple 39 : 9-(3'-azido-21,3'-didésoxy-p-P-ribofuranno-syDadénine

On prépare la 9-(3 '-azido-21 ,3 1-didésoxy-p-JD-ribofurannosyDadénine en deux étapes.à partir de 2^0 g (7,7 mmoles) de Ng-octanoyladénine et de 1,13 g (4,2 mmoles) de 3'-azido-3'-désoxythymidine par le mode opératoire décrit par M. Imazawa et F. Eckstein, J. Org. Chem., 43, 3044 (1978).

P.F. » 184-185°C.

UV pH Umax" 257nmXmin 230nm pH 13Amax 260nmAmin 228nm

CHN pour C10H12N802 Calculé : C-43,48; H-4,38; N-40,56 Trouvé : C-43,33; H-4,45; N-40,41

Exemple 40 ; 5'-acétyl-3'-azido-3-benzoy1-3'-désoxythymidine ..

On dissout 0,75 g (2,4 mmoles) de 5'-acétyl-3'-azido-3'-désoxythymidine dans 5 ml de pyridine et on ajoute..1,4 ml (12 mmoles, 5 équivalents) de chlorure de

!

benzoyle à la température ambiante. On agite le mélange réactionnel durant 16 heures environ, puis on le verse sur 250 ml d'eau glacée. On ajuste .à 1 le pH de la solution-aqueuse. On extrait le produit au chloroforme. On lave la phase organique à l'eau, la déshydrate avec MgS0^_ et la filtre. On chasse le chloroforme et on sou-

H

t met le produit huileux à une chromatographie instantanée sur gel de silice en éluant avec du chloroforme. On recueille -le produit sous forme d'une huile.

H1 RMN (DMSO-dg): 68,04-7,50 (m,6H;3N-benzoy!e et 6H), 66,12 (dd,lH, = 5,6Hz, Jlt 2fal = 6,7 Hz, 1 • H), 6 4,55-3,96 (m, 4H; 3'H,4'H,5H'), 62,62-2,38 (m,2H,2'H), 62,07 (s,3H, de 5'-acétyle), 61,90 (d, 3H, J5^=l,0Hz, 5CH3)

CHN calculé pour ci9Hi9N5°6 Calculé î C-55,20; H-4,63; N-16,94 Trouvé : C-55,29; H-4,64; N-16,93

Exemple 41 : Thréo-3'-azido-5-bromo-2' ,3'-didésoxyuridine ; On prépare la thréo-31-azido-5-bromo-2',3'-

didésoxyuridine à partir dé 2'-désoxyuridine par une séquence-réactionnelle à cinq étapes.'

On effectue la protection du groupe 5'-hydroxyle de la 2*-désoxyuridine avec un groupe triphénylméthyle de la manière habituelle- On mésyle le groupe 3'-hydroxyle. On introduit un groupe 3'-azido avec la stéréochimie correcte en ajoutant 22 g (40 mmoles) de 2'-désoxy-3'-mésyl-5'-trityluridine à une solution de 7,84 g (120 mmoles, 3 équivalents) d'azoture de sodium dans 380 ml de diméthyl-formamide à 80°C. On poursuit la réaction pendant 35 heures. On verse la solution sur 2 litres d'eau glacée et on recueille le précipité par filtration. On isole le produit par chromatographie sur gel de silice en éluant avec un mélange chloroformecméthanol (1:1 en volume,)

en un rendement de 51 %. On débloque la position 5'-hydroxyle avec de 1^acide acétique à 80 % sur un bain-marie pendant 25 minutes. Après refroidissement, on sépare le tritylcarbinol par filtration. On réduit le filtrat sous vide en une huile épaisse. On isole le produit par chromatographie instantanée sur gel de silice, en éluant avec un mélange chloroforme:méthanol (85:15 en volume). On brome la position 5 de la thréo-3'-azido-2',3'-didés-

oxyuridine par exactement le même mode opératoire qué celui indiqué pour la bromation de 1'érythro-3'-azido-2-3 '-didésoxyuridine.

UV pH 1 Amax 280, t = 9400, <^min 244, [ = 2600 pH 13 A max 276 t = 6700, A min 251 £ = 3700

H1 RMN (DMSO-dg): 611,86 (s,lH,3-NH), 68,02 (s,lH,6H), 65,99 (dd,lH, 2a,

3,0 Hz;

Jl' 2b» = 7'5 Hz' rH)' 05,1 (t'1H' J5'CH 5'0H = 5'4 Hz' 5,QH)' ô4'49

(m,lH,3'H), 64,05 (m,lH,4'H), 63,71 (m,^H,5'H), 62,72 (m,lH,2b«), 62,18

(m,lH,2a')

CHN pour CgH^QBrNgO^-0,25 HgO-Ojl C2H402 Calculé : C-32,25; H-3,21; N-20,44; Br-23,32 Trouvé : C-32,17; H-3,21-, N-20,33; Br-23,19

■Exemple 42 ; 1— (3 1 -azido-2 ' , 3 ' -didésoxy- (3-D-érythro-pentofurannosyl)-2-(benzyloxo)-5-méthyl-4-(lH)-pyrimidinone On fait réagir 0,4 g (17,4 mmoles, 2,6 équivalents) de sodium avec 10 ml d-alcool benzylique anhydre pendant une heure à la température ambiante. On ajoute 1,65 g (6,6 mmoles) de 2,5'-0-anhydro-3,-azido-3'-désoxythymidine. On laisse la réaction se poursuivre pendant une heure. Après avoir versé le mélange réactionnel sur 250 ml d'eau glacée, on ajuste le pH à 7 et on extrait.la phase aqueuse à 1-acétate d'éthyle. On extrait la phase organique quatre fois à l'eau.

Après déshydratation sur MgSO^, on chasse 1*acétate d'éthyle sous vide. On soumet l'huile résultante à une chromatographie sur gel de silice, en éluant tout d'abord avec de l'acétate d'éthyle, puis avec un mélange acétate d•éthyle:méthanol (9:1 en volume). On recueille

J

les fractions contenant le produit et on chasse les sol'i-vantssous vide pour obtenir une huile. L'huile précipite en la recouvrant d'éther d-éthyle ; P.F. = 125-126,5°C.

UV pH 1 instable 5 pH 13 \max 256, A= 10700, £min 240, ^ = 8900

H1 RMN (DMSO-dg): 67,8 (d,lH,J65 = 1,2 Hz, 6H), 07,49-7,38 (m,5H,2-phényle ) , 66,08 (dd,lH,J1, 2a, = 5,0 Hz; J1 2b, = 7,0 Hz, l'H), 65,37 (s,2H,2CH2), 65,25 (t,lH,J5,CH 5,0H = 5,4 Hz, 5'OH) 64,36-4,32 (m,lH,3'H), 63,85-3,81 10 (m,lH,4'H), %3,7-3,58(m,2H,5'H), 62,53-2,34 (m,2H,2'H), 61,82 (d,3H,J5 =

1,0 Hz, 5CH3)

CHN pour C17H19N504 Calculé : C-57,14; H-5,36; N-19,60 15 Trouvé : C-57,02; H-5,43; N-19,53

Exemple 43 : l-(3'-azido-21,3'-didésoxy-P-D-thréo-pento-furannosvl)-2-éthoxy-5-méthyl-4-( 1H) -pyrimidinone

20 On dissout 1,08 g (3,13 mmoles) de thréo-3'-

azido-5'-O-mésylthymidine Préparéeà partir de thréo-3'-azidothymidine dans 100 ml de EtOH et on traite avec 0,26 g (3,13 mmoles) de NaHCO^ au reflux pendant 18 heures. On refroidit le mélange réactionnel et on le filtre. 25 On chasse les solvants sous vide et on place le résidu sur une colonne de gel de silice, puis on élue avec CHClgîMeOH (9:1 en volume). En rassemblant les fractions appropriées et en chassant les solvants sous vide, on obtient une quantité de 0,7 g (2,4 mmoles, 75,7 %) ; 30 P.F. » 120—122°C.

UV (nrn)ï pH lrl max = 260 ( t = 9300), A min = 237 ( t = 5500), Aépauleinent = 221 ( i = 7500); à pH 13 A max = 256 ( fc = 10000), Amin = 240 ( t= 7700).

H1 RMN (DMSO-dg) 67,58 (s,lH,H6), 66,0 (dd,lH,Hl', J = 2,9, 4,56 Hz), 65,06 35 (t,lH,5'OH, J = 4,91 Hz), 64,51-4,47 (m,lH,H3'), 64,34 (q,2H,-OCH2-, J = 7,14 Hz),-64,10-4,05 (m,lH,H4'),6 3,73 (t,2H,H5', J = 5,62 Hz), 62,82-2,73 (m,lH,H2'b), 62,21-2,14 (m,lH,H2'a), 61,82 (s,3H,5CH3), 61,31 (t,3H,-CH2-CH3, 6,65 Hz).

é

H

Analyse pour C12H17N5°4 •Calculé : 048,81, H 5,80, N 23,72

Trouvé • : C 48,59, H 5,86, N 23,64 5 Exemple 44 : Thréo-3'-azido-23'-didésoxy-4-thiothymidine

5'-O-trityl-3'-désoxy-4-(1,2,4-triazole)thymidine (préparée selon le procédé de W. Sung, Nucleic Acids Research (1981), _9, 6139) dans 100 ml d'acétone et 30 ml de H20 10 et on traite avec 0,22 g de NaSH.xH^O. On agite le mélange pendant 3 heures. On réduit le volume de moitié et on extrait avec 300 ml de CHC^. On lave le CHClg avec 50 ml de H2O, on le déshydrate sur Na2S04, puis on le chasse sous vide pour obtenir une huile. On élimine le 15 groupe 5'-0-trityle en dissolvant cette huile dans 100 ml de HOAc à 80 %, On chauffe la solution sur un bain-marie pendant 2 heures, puis on la refroidit, on la dilue avec 100 ml de H20 et la filtre. On chasse les solvants sous vide et on place l'huile sur une colonne de gel de silice. 20 En éluant avec CHClgîMeOH (20:1 en volume), en recueillant les fractions appropriées, puis en chassant les solvants sous vide, on obtient une quantité de 0,18 g (0,62 mmole); 28 %) ; P.P. = 65-67°C.'

UV (nm): à pH 1 Àmax = 337 ( £ = 20700),à min = 280 ( t = 1200), A épaulsment = 238 25 Ct = 3400);

à pH 13 A max = 320 ( t = 18400),,1 min = 257 (£ = 1700);

H1 RMN (DMSO-dJ 67,63 (s,lHfHl', J = 2,93, 4,89 Hz), 65,06 (s,lH,5'OH), 64,50-4HO •

4,46 (m,lH,H3'), 64,10-4,04 (m,lH,H4'), 63,73 (d,2H,H5', J = 5,61 Hz), 62,78-2,68 (m,lH,H2'b), 62,20-2,14 (m,lH,H2'a), 62,00 (s,3H,5CH3).

Analyse pour C10H13N503S.O,1 C2H50-0,25 H20 Calculé : C 41,90, H 4,86, N 23,95, S 10,97 35 Trouvé : C 41,99, H 4,73, N 23,88, S 10,91

On dissout 1,25 g (2,2 mmoles) de thréo-3'-azido-

i

Exemple 45 : 4-amino-3'-azido-5-bromo-2',3'-didésoxy-i uridine

On-acétyle de la 3'-azido-2',3'-didésoxyuridine et la brome selon le procédé de Visser (Synthetic Procédures in Nucleic Acid Chemistry, Vol. 1, page 410)

pour obtenir de la 5'-acétyl-3'-azido-5-bromo-2',3'-didésoxyuridine. On fait réagir cette matière avec 5 équivalents de 1,2,4-triazole et deux équivalents de dichlorophosphate de 4-chlorophényle dans la pyridine anhydre' à la température ambiante pendant 7 jours pour obtenir la 5'-acétyl-3'-azido-5-bromo-4-(1,2,4-triazolyl)-2',3'-didésoxyuridine sous forme d'unè huile jaune, en un rendement modéré. Par traitement à la température ambiante avec du méthanol saturé d'ammoniac à 0°C pendant 18 heures, on obtient, après recristallisation dans l'acétate d'éthyle et filtration des cristaux résultants, 173 mg (0,5 mmole, .6,3 %) de 4-amino-3'-azido-5-bromo-2',3'-didésoxyuridine ; P.F. = 162-165°C (déc.).

UV (nm): à pH 1 A max = 300,215 (£ = 10700, 12100), A min = 253 (t = 1500); à pH 13 X max = 288 ( i = 7300) X min = 260 ( t = 3900)

H1 RMN (DMSO-dg) 5 8,3 (s, 1H, H6), 67,85 (large s, 1H, 4-NH2), 67,05 (large s, 1H, 4-NHz), 66,0 (t, 1H, Hl', J = 5,94 Hz), 65,33 (t, 1H, 5'-OH, J = 5,01 Hz), 64,4-4,3 (m, 1H, H3'), 63,9-3,5 (m, 3H, H4', H5'), 62,31 (t, 2H,H2', J = 6,27 Hz).

Analyse .pour C9"llN6°3Br

Calculé : C 32,64, H, 3,35, N 25,38, Br 24,13.

Trouvé : C 32,52, H 3,41, N 25,32, Br 24,04.

Exemple 46 : 3'-azido-5-bromovinyl-23'-didésoxyuridine

.On synthétise de la 5-bromoviny1-2'-désoxyuridine (BVDU) en faisant appel au procédé de Jones et coll. (Tetrahedron Letters 45_, 4415 (1979)) pour obtenir des rendements similaires. On trityle BVDU et oh le mésyle par le procédé de Horwitz et coll., J. Org. Chemfo 31, 205

*

i !

(1966). On traite ce produit avec une quantité équimq-laire de bicarbonate de sodium dans du méthanol au reflux pour obtenir la 3'-2-0-anhydro-5-bromovinyl-21 -désoxyuridine. On traite ce produit avec 3 équivalents d'azoture de lithium dans du diméthylformamide/l %

d'eau à 130°C. La chromatographie sur gel de silice de la matière brute, suivie d'une combinaison et d'une éva-poration des fractions appropriées, donne la 3'-àzido-5-bromovinyl-2',3'-didésoxyuridine sous forme d'une huile de couleur or.

UV (nm); à pH 1 A max = 292,247 A min = 270, 238;

a pH 13 A max = 253, A min = 238, A épaulement : 284;

H1 RMN (DMSO-dg)ô Bf06(s, 1H, Hg), Ô7,25(d, 1H, -CH=CHBr, J=13,4 Hz) 66,85(d, 1H, =CHBr, J=13, 7Hz) Ô6,07(t, 1H, Hp, J=6,3 Hz), 65,30(large s, 1H, 5»-OH), 64,42{q, 1H, Hy, 3=6,3, 6,1 Hz), 63,86-3,82(m, 1H, H4,), 63,68-3,59(m, 2H, H5,), 62,47-2,32(m, 2H,

Analyse pour cnHi2N5°4Br Calculé : C, 36,89; H, 3,38; N, 19,55. "

Trouvé : 36,86; H, 3,41; N, 19,51

Exemple 47 : Thréo-3'-azido-5-chloro-28,3'-didésoxyuridine

On prépare le composé du titre d'une manière analogue à celle utilisée pour préparer la 3'-azido-5-chloro-2',3'-didésoxyuridine (Exemple 31) pour obtenir 0,15 g (0,5 mmole, 25 %) ; P.F. = 65°C.

UV (nm); à pH lA max = 278, 212 ( i = 8900), Àmin = 240 (£ = 1600); à pH 13 Xmax = 275 (£ = 6600),7\min = 248 (i = 3300);

H1 RMN (DMSO-dg)S ll,89(s, 1H, NH), Ô7,94(s, 1H, Hg), Ô6,00(dd, 1H, H^, J=2,93, 4,64 Hz), 65,1 (t, 1H, 5'0H,J=5,1 Hz), 64,50-4,46(m, 1H, Hj,), 64,08-4,03(m, 1H, H4,), Ô3,71(t, 2H, H5„ J=5,32 Hz), S2,77-2,67(m, 1H, H2,b), 52,23-2,16(m, 1H, H2,a).

Analyse pour c:gH^oN504C'1 0,1 H20~0'1 C4H8°2 Calculé : C, 37,85; H, 3,72; N, 23,48; Cl, 11,89 h

Trouvé : C, 37,94; H, 3,91; N, 23,23.; Cl, 11,86 j

4

Exemple 48 : 1-( 3 ' -azido-2 ' , 3 ' -didésoxy-|3-D-érythro-« pentofurannosyl)-5-méthyl-2-(pentyloxo)-- 4-(1H)-pyrimidinone On prépare la 1-(3'-azido-2',3'-didésoxy-p-D-érythro-pentafurannosyl)-5-méthyl-2-(pentyloxo)-4-(1H)-pyrimidinone par le procédé utilisé pour préparer la 1-(31-azido-2',3'—didésoxy-p-D-érythro-pentafuran-nosyl)-2-(benzyloxo)-5-méthyl-4-(1H)-pyrimidinone (Exemple 42). La purification finale s'effectue par chromatographie en phase liquide à haute pression sur C18 élué avec un mélange eaurméthanol (3:7). On chasse les solvants par évaporation pour recueillir le produit sous forme d'une huile.

UV pHl ,\mav 258 nm £ = 9400, A . 232 nm £= 5900 iiiax min

PHi3Àmax 256 nm £ = 10600, A min 239 nm £= 8200 RMN:relevée dans.DMS0-d6.

RMN ; 67,81(s,lH,6H), 56/04(t,lH,J1, 2,=6,7Hz, l'H) 65,28(t,lH,J5,CH2 5,0H

64,27(t,2H,J2_Q(1CH 2CH )=6,6Hz,2-0(CH2)1)

63,88-3,84(m,lH,4lH^63/75-3,50(m,2H,5lCH2) 52,50-2,34(m,2H,2'H),

61,80(s,3H,5CH,), 61,72-1,68(m,2H,2-0(CH9)7), ôl,38-l,30(m,4H,2-0(CH9). et 4) ù£ c '

S0,92-0,87(m, 3H-, 2-0 (CH3 ) 5 >

CHN. pour ^5H23^5^4 **2®

Calculé : C-52,70; H-6,93; N-20,48 Trouvé : . C-52,63; Hr6,92; N-20,48

Exemple 49 : 3'-azido-3-benzoy1-3'-désoxy-5'-mésylthymidine

On prépare la 3'-azido-3-benzoyl-3'-désoxy-5'-mésylthymidine à partir de 3'-azido-3'-désoxy-5'-mésylthymidine par un procédé analogue à celui utilisé dans l'Exemple 40 pour préparer la 5'-acétyl-3'-azido-3-benzoyl-3'-désoxythymidine à partir de 5•-acétyl-3*-azido-3'-désoxythymidine ; P.F. = 8b-88°C.

UV pHl S max 259 nm l= 21200, A min 230 nm t = 6400 pH13 >y max 265 nm fc = 9600, Amin 248 nm t= 8000

1 (

H RMN (DMS0-d6) 68,00-7,58 (m,6H,6H et phényle), 66,15(t,lH,J^( 2,=£,1Hz,1'H) 64,55-4,47(m,3H; 3'H et 5'CH2), 64,12-4,10(m,lH,4'H)

53,28 (s^H^'-SO^CH-j), 62,65-2,4(m,2H,2'H),

61,89 (d,3H,J5>6=l,3Hz, 5CH3)

CHN pour ^gH^NsOyS Calculé : C-48,10; H-4,26; N-15,58î S-7,13 Trouvé : C-48,00; H-4,23; N-15,39; S-7,10 Exemple 50 : Thréo-3'-azido-2',3'-didésoxy-5-iodouridine On trityle et mésyle la 5-iodo-2'-désoxyuridine selon Horwitz et coll. (J. Org. Chem., 31 (1966), 205). On chauffe ce produit avec 3 équivalents d'azoture de lithium dans du diméthyl-formamide anhydre à 74°C pendant 48 heures. La chromatographie sur gel de silice du mélangé réactionnel avec un mélange CHClg/MeOH (20:1 en volume) suivie d'un rassemblement et d'une évaporation des fractions appropriées,donne la thréo-3'-azido-2',3'-didésoxy-5-iodo-5'-trityluridine. On débloque le groupe 5'-hydroxyle avec une solution saturée de bromure de zinc/nitrométhane à 0°C. La chromatographie sur gel de silice du produit brut en utilisant un mélange CHCl^/MeOH (9:1 en volume) suivie d'un rassemblement et d'une évaporation des fractions appropriées, donne la thréo-3'-azido-2',3'-didésoxy-5-iodouridine sous forme d'un solide ; P.F. = 80°C.

UV (nm); à ; pH 1 min = 247; à pH 13 * max = 277, * min = 252;

H1 RMN (DMSQ-dg) 6 8,37 (s, IH, Hé), 66,00 (t, IH, Hl', J = 6,17 Hz), 65,4-5,3

(m, IH, 5' OH), 64,4-4;3 (m, IH, H3'), 63,9-3,8 (m, IH, H4'), 63,7-3,6 (m, 2H, H5').

1

Analyse pour C9HioN5°4I 0,4 C4H8°2 Calculé : C 30,73, H 3,21, N 16,90, I 30,63.

Trouvé : C 30,93, H 3,09, N 16,61, I 30,94.

10

Exemple 51 : 1-(5'-0-acéty1-3'-azido-2',3'-didésoxy-^-

D-érythro-pentafurannosyl)-5-méthyl-4-(1,2,4-triazolyl-1)- 2(IH)-pyrimidinone On fait réagir la 5'-acétyl-31-azido-3'-désoxythymidine avec 5 équivalents de 1,2,4-triazole et deux équivalents de dichlorophosphate de 4-chlorophényle dans la pyridine anhydre à la température ambiante pendant 10 jours. La chromatographie sur gel de silice du produit brut en utilisant un mélange EtOAc/hexane (1:1 en volume) suivie du rassemblement et de 1'évaporation des fractions appropriées donne une huile. La cristallisation dans EtOAc donne le composé du titre sous forme d'un solide pesant 2,7 g (7,5 mmoles ; 60 %) ; P.F. = 143-145°C.

15 UV (nm); à pH 1 Amax = 324,245,215 ( t = 9300, 10000, 20500), *mip = 282,233

( U 2100,8200); à pH 13 XmQv s 276 (U 6000), X . = 242 ( i= 2000) . i nidA n un

H1 RMN (DMSO-dg) 69,34, 8,40 (2s, 2H, triazolyle»,68,23 (s, IH, H6), 66,12 (t, IH, Hl', J = 6,16 Hz), 64,48-4,17 (m, 4H, H3', H4',H5'), 62,35 (s, 3H, 5'-acétyle),62,07 20 (s, 3H, 5CH3).

Analyse pour C14H16N8°4 Calculé ï C, 46,67; H, 4,48; N, 31,10.

Trouvé : C, 46,58; H, 4,51; N, 31,02.

^ Exemple 52 : l-(3'-azido-21,3'-didésoxy-B-D-érythro-

pentofurannosyl)-4-diméthylamino-5-méthyl-2-(1H)-pyrimidinone On dissout la 5'-acétyl-3'-azido-3'-désoxy-4-(1,2,4-triazolyl)thymidine dans 1'acétonitrile anhydre 30 à la température ambiante sous atmosphère d'azote. On ajoute 20 équivalents de diméthylamine en une seule fois et on agite le mélange réactionnel pendant 30 minutes. On chasse les solvants, on dissout le résidu dans du méthanol .saturé d'ammoniac et on agite la

35

solution pendant 30 minutes. On chasse les solvants et on dissout le résidu dans EtOAc. Le composé du titre

$

pr

4

?

précipite lentement de la solution et on le sépare par filtration pour obtenir un solide blanc : P.F. = 157-

- --159°C."

UV(nm): à pH 1, ?^max=299,224( £=14900,7900) A min=254 ( t=2500);

5 à pH 13 A max=287 (t=14000), "A min=243 ( £=6800).

HJ RMN (DMSO-d6) 6 7,63 (s,lH,H6), 5 6,06 (t,lH,Hl',J=6,53Hz), 55,22

(t,lH,5'OH,J=5,2Hz), 64,37-4,34 (m,lH,H30, 63,83-3,80 (m,lH,H4'), 63,65-3,60 (m,2H,H5'), 63,06 (s,6H,N(CH3)2), 62,29-2,23 (m,2H,H2'), 62,11 (s,3H,5-CH3).

10

Analyse pour ci2H18N6°3 Calculé : C48,97, H 6,16, N 28,56 Trouvé : C 49,06, H 6,20, N 28,50

Exemple 53 : 1-C3'~azido-23'-didésoxy-P-D-érythro-

pentofurannosyl)-5~méthyl-2-(isopentyloxo)-4-(lH)-pyrimidinone On prépare le composé du titre par un procédé analogue à celui utilisé pour préparer la l-(3'-azido-2 ' , 3 ' -didésoxy-p-D_-érythro-pentof urannosyl ) -2-(benzyloxo)-5-méthyl-4-(lH)-pyrimidinone (Exemple 42).

UV pHl(nm) A max 258 b=9000, Amin 237 £=6000 pH13 (nm) A max 255 l =11000, X min 239 £=8000

25 H1 RMN . (DMSO-d6): 67,79 (s,lH,6H), 6 6,02 (t,lH,Jr 2,=6,3 Hz, l'H), 65,23 (t,lH,J5,OHj5,H=5,2 Hz, 5'OH),

64,4-4,3 (m,3'H et 2-0-CH2-CH2CH(CH3)2),

63,9-3,8 (m,lH,4'H), 6 3,7-3,5 (m,2H,5'H), 6 2,5-2,3 (m,2'H)

61,78 (s,3H,5CH3), 6 1,7-1,5 (m,3H,2-OCH2-CH2-CH(CH3)2) 30 60,92 et 0,89 (d,6H,J=6,3 Hz,2-0(CH2)2CH(CH3)2)

CHN pour . C'15H23N504

Calculé : C-53,40, H-6,87, N-20,76 Trouvé : C-53,14, H-6,92, N-20,62

K

Exemple 54 : 3--acétyl-3 '-azido-5 ' -0- ( 3-chlorobenzoy 1 ) — 3'-désoxythymidine

^ A un mélange de 0,3 g (0,74 mmole) de 3'-azido-

5'-()-(4-chlorobenzoyl )-3 '-désoxythymidine et de 0,4 g (3,0 mmoles) de cyanure d'argent dans 20 ml de benzène, on ajoute en plusieurs portions 2,6 g (33 mmoles) de'' chlorure d'acétyle en excès- On agite le mélange à la température ambiante jusqu'à ce que la matière de départ disparaisse (4 heures), comme déterminé par CCM en éluant avec un mélange CHCl^/MeOH (20:1 en volume). On filtre le mélange réactionnel et on évapore le filtrat à sec sous pression réduite. On chromatographie le résidu huileux résultant sur gel de silice , en éluant avec un mélange chloroforme/hexane (1:1 en volume), puis avec du chloroforme pour obtenir 0,21 g (64 %) du produit désiré sous forme d'une huile.

UV (nrn): à pH 1 \ max 273 (£=9000), A min 251 ( t=6200);

pH 13 A max 266 (£=8800), A min 247 U=7000)

H1 RMN (DMSO-dg) 5 1,68 (s, 3H, 5-CH3), 52,47 (s, 3-COCH3), 52,3-2,5 (m, 2'H), 64,1-4,2 et. 4,4-4,7 (m, 4H,3'H, 4«H et 5'H), 66,1 (t, IH, Jr 2,=6,3 Hz, l'H), 57,5-8,0 (m, 5H, 6H et phényle)

Analyse pour G19H^gN50gCl-0,2 CHCl^

Calculé : C~, 48,89; H, 3,89; N, 14,85; Cl, 12,03 Trouvé : C, 49,05; H, 3,94; N, 14,79; Cl, 12,56

Exemple 55 : 3'-azido-5-cyano-2',3'-didésoxyruridine

•On fait réagir la 5-iodo-231-didésoxyuridine avec 2,1 équivalents d'anhydride acétique dans la pyridine en excluant l'humidité à la température ambiante pendant 2 heures pour obtenir la 2',3 *-didésoxy-3',51-diacétyl-5-iodouridine. On combine-1 équivalent du nucléoside, 1,3 équivalent de cyanure de potassium et 1,3 équivalent d'acétate de potassium dans DMSO anhydre et on chauffe à 97°C sous azote pendant 2 heures. On chasse les solvants sous vide et on applique l'huile résiduelle sur une

êf colonne de gel de silice en éluant avec CHCl^/EtOAc ? (1:1 en volume). On recueille les fractions appropriées, les combine et les.évapore pour obtenir la 5-cyano-2',31-didésoxy-31,5'-diacétyluridine. On dissout le composé dans du méthanol saturé d'ammoniac et on agite à 0°C pendant 18 heures. On chasse les solvants sous vide à la température ambiante pour obtenir des cristaux du composé du titre ; P.F. = 160-162°C.

UV(nm): à pH 1 *max=276,215 (£=13500,11200), Amin=238 ( t=1700); à-, pH 13 Àmax=276 (£=10100), Xmin=240 (t=3400)

H3 RMN(DMSO-d6) 58,81 (s,lH,H6), 66,00 (t,lH,Hl*, J=5,94Hz), 55,3-5,21

54,28-4,15 (m,lH,H3'), 53,82-3,77 (m,lH,H4'), 53,7-3,5 (m,2H,H5«), 62,18 (t,2H,H2«, 3=5,75 Hz).

Analyse pour cioH11N3°5 H2°

Calculé ï C 46,61, h 4,50, n 16,31 Trouvé : C 46,67, h 4,71, n 16,54

Exemple 56 : l-(3'-azido-21 , S'-didésoxy-(3-D-thréo-

pentafurannosyl)-5-méthyl-2-pentyloxy-4-(IH)-pyrimidinone On ajoute de la 2,5,-0-anhydro-l-(3'-azido-2•,31-didésoxy-P-D-érythro-pentofurannosyl)-thymine à une solution de 0,y5 équivalente de t-butylate de potassium dans le pentane-l-ol. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à la température ambiante sous azote. On chasse les solvants sous vide et on applique le résidu sur une colonne de gel de silice. L'élution avec CHCl^/MeOH (20:1 en volume), suivie d'une combinaison et de 11évaporation des fractions appropriées, donne une huile limpide qui forme lentement des cristaux du composé du titre au repos ; P.F. = 110-111°C.

4

UV (nm): à pH 1 Àmax=255 (t=10200), Amin=237 (fc=6200), Xép.=222 (t= 9000) ; à pH 13 \max=251,226 ( 1=11600,9600), ,\min=238 (t=8600)

H1 RMN (DMSO-dg) 67,58 (s,lH,H6), 65,98. (dd,lH,Hl,,J=2,98, 4,88Hz), 65,07 (t,lH,5'OH,J=5,42Hz), 64,5-4,47 (m,lH,H3'), 64,31-4,25 (m,2H,-OCH2-), 64,1-4,06 (m,lH,H4'), 63,73(t,2H,H5',J=5,62Hz), 62,82-2,72 (m,lH,H2'), 62,2-2,14 (m,lH,H2'), 61,82 (s,3H,5-CH3), 61,75-1,65 (m,2H,pentyle>,61,4-1,3 (m,4H,pentyle ) 60,92-0,87 (m,3H,pentyle ).

Analyse pour ci5H23N4°4 Calculé : C53,40, H 6,87, N 20,76.

Trouvé : C 53,31, H 6,90, N 20,74

Exemple 57 : l-(3'-azido-23'-didésoxy-p-D-thréo-pento-furannosyl)-2-benzyloxy-5-méthyl-4-( IH) -pyrimidinone On prépare le composé du titre d'une manière analogue à celle décrite pour la 1—(3'-azido-2',3'-didésoxy- (3-JD-jchréo-pentof urannosyl )-5-méthy 1-2-penty 1-oxy-4-(lH)-pyrimidinone (Exemple 56) en utilisant l'alcool benzylique à la place du pentane-l-ol ; P.F. = 137—139°C.

UV<nm): à pH lXmax-266 (t=9100), Amin=235 (fc=3000);

à pH 13 A max=256 ( £=11500), * min=240 ( j-=9600).

H1 RMN ;(DMSO-d6) 67,6 (s,lH,H6), 67,49-7,37 (m,5H, phényle) ,66,01 (dd,lH,Hl', J=2#52}5f0Hz), 65,35 (s,2H,benzyle), 55,1-5,0 (m,lH,5'OH), 54,5-4,4 (m,lH,H3«), 54,1-4,0 (m,lH,H4'), 63,77-3,67 (m,2H,H5'), 62,85-2,70 (m,lH,H2'), 52,25-2,15 (m,lH,H2*) 51,83 (s,3H,5-CH3).

Analyse pour C^yH^çjNijO^ 0,25 H20

Calculé : C 56,43, H 5,43, N 19,35.

Trouvé : c 56,51, H 5,37, N 19,36.

Exemple 58 : 1-(3'-azido—2',3'-didésoxy-P-D-érythro-

pentofurannosyl)-4-mébhoxy-5-méthyl-2(IH)-pyrimidinone On traite la 5•-acétyl-3'-azido-3'-désoxy-4-(1,2,4-triazolyl)thymidine à la température ambiante avec du méthylate de sodium 0,5N dans le méthanol pen-

1*

dant 24 heures. On neutralise la solution à pH 7 avéc une résine d'acide sulfonique (DOW 50W, H+), on sépare - la-résine par filtration et on évapore le filtrat sous vide jusqu'à former un solide. On dissout ce solide 5 dans une petite quantité de CHCl^, on l'applique sur une colonne de gel de silice et l'élue avec 2 % de MeOH dans CHClg» On recueille les fractions appropriées, les rassemble et les évapore à sec pour obtenir un solide blanc ; P.F. = 119-123°C.

10

UV(ntn): à pH 1 Amax=279 (£=7500), Amin=239 (t=1700);

à pH 13 Amax=279 (t=6400), ,\min=243 (£=1300).

H1 RMN (DMSO-dg) 58,02 (s,lH,H6), 66,08 (t,lH,Hl', J=5,86Hz), 55,29 (t,lH,5'OH, j=5,48Hz), 64,41-4,33 (m,lH,H3'), 63,9-3,86 (m,lH,H4'), 63,86 (s,3H,4-15 OCHj), 63,75-3,58 (m, 2H,H5'), 52,4-2,3 (m,2H,H2'), 51,89 (s,3H,5-CH3).

Analyse pour C11H15N504

Calculé : C 46,97, H 5,38, N 24,90.

Trouvé : C 47,06, H 5,40, N 24,86

20

Exemple 59 : l-( 3 ' -azido-2 ' , 31 -didéxoxy- |3~D-érythro-

pentofurannosyl)-5-méthyl-4-(1-pyrrolidinyl)-2-(IH)-pyrimidinone On dissout la 5'-acétyl-3'-azido-3'-désoxy-4-25 (1,2,4-triazolyl)thymidine dans 1'acétonitrile anhydre à la température ambiante sous atmosphère d'azote. On ajoute goutte à goutte 5 équivalents de pyrrolidine en l'espace de 5 minutes et on agite le mélange réactionnel pendant-2 heures. On chasse les solvants sous 30 vide pour obtenir une huile. On dissout cette huile dans du méthanol saturé d'ammoniac à la température ambiante et on agite pendant 4 heures. On chasse les solvants sous vide et on applique le résidu 'sur une colonne de gel de silice. L'éluation avec CHCl^/MeOH 35 (20:1 en volume)., suivie d-une combinaison et d'une évaporation des fractions appropriées, donne le composé du

(4

titre sous forme d'un solide blanc ; P.F. 158-171°C. ? UV(nm): à PH 1 Xmax=295, 233 (L=15700, 9500), A min=253 (1=2600); à pH 13 \max=285 (<t=i530a), Amin=241 (t=7900).

H1 RMN (DMSQ-d6) 67,57 (s,lH,H6), 66,02 (t,lH,Hl', J=6,5Hz), 65,22

(t,lH,5'OH,J=5,15Hz), 64,4-4,3 (m,lH,H3'), 63,84-3,77 (m,lH,H4'), 63,67-3,51 (m,6H,H5',4 H de pyrrolidine), 62,24 (t,2H,H2',J=6,08Hz) 62,14 (s,3H,5-CH3), 61,87-1,78 (m,4H,pyrrolidine).

Analyse pour ci4H2oN6°3 Calculé : C 52,49, H 6,29, N 26,23 Trouvé : C 52,37, H 6,33, N 26,17

Exemple 60 ; l-(3'-azido-2',31-didésoxy-P-D-érythro-pentofurannosyl)-4-benzyloxy-5-méthyl-2-(IH)-pyrimidinone On ajoute goutte à goutte la 5'-acétyl-3'-azido-3'-désoxy-4-(1,2,4-triazolyl)thymidine, dissoute dans 1'acétonitrile anhydre, à la température ambiante sous azote en l'espace de 5 minutes, à une suspension de 5 équivalents d'alcool benzylique et de 2 équivalents de t-butylate de potassium dans 1'acétonitrile anhydre. On agite le mélange réactionnel pendant une heure et on chasse les solvants sous vide. On place le résidu sur une colonne de gel de silice et on élue avec un mélange CHClg/EtOAc (3:1 en volume). On recueille les fractions appropriées, les combine et les évapore pour obtenir un solide. On recristallise le solide dans un mélange 1:1 CHClg/EtOAc (en volume) et on sépare par filtration les cristaux résultants pour obtenir le composé du titre ; P.F. 133-134°C.

UV(nm): à pH 1 A max=276 ( fc=8000), A min=237 (t=2000);

à pH 13 Xmax=281 (£=8100), Amin=237 (£=1600).

H1 RMN (DMSO-dg) 68,05 (s, 1H,H6), 67,45-7,35 (m,5H,phényle),66,07 (t,lH,Hl', J=5,94Hz), 65,35 (s,2H,benzy!e ) , 65,27 (t,lH,5'OH,J=5,20Hz), 64,41-4,31 (m,lH,H3') 63,91-3,83 (m,lH,H4'), 63,7-3.6 (m,2H,H5'), 62,4-2,3 (m,2H,H2'), 61,9 (s,3H,5-CH3). ~

n

<

i

Analyse pour c^gH2iN5°5 Calculé : C 57,14, H 5.36, N 19,60

Trouvé : C 57,06, H 5,37, N 19,58.

Exemple 61 : 5'-acétyl-3'-azido-5-bromo-23'-didésoxy-uridine

On acétyle et brome la 3'-azido-23'-didésoxyuridine selon le procédé de Visser (Synthetic Procédures in Nucleic Acid Chemistry, _1_,' 410) pour obtenir le composé du titre ; P.F. = 112-114°C.

UV(nm): à pH 1 Amax=279,210 (19500,10600), Amin=243 (£=2000); •à pH 13 Xmax=276 (£=700), \min=250 (1=4000).

RMN .(DMSO-dg) 611,88(s,lH,NH), 68,02(s,lH,H6), 66,08-6,01 (m,lH,HD, §4,47-4,40 (m,lH,H3'), 64,27-4,24 (m,2H,H5'), 64,03-4,00 (m,lH,H4!), 62,41-2,34 (m,2H,H2'), 62,09 (s,3H,acétyle) •

Analyse pour C 5

Calculé : C 35,31, H 3,23, N 18,72, Br 21,36.

Trouvé : C 35,29, H 3,25, N 18,66, Br 21,45

Exemple 62 : 1—( 3 azido— 21 ,3 ' — didésoxy—(3— D—thréo—pento— f urannosyl-5-.( trif luorométhyl ) uracile On protège le groupe 5'—hydroxyle de la 5— trifluorométhyl-2'-désoxyuridine avec un groupe triphénylméthyle et on mésyle le groupe 3'-hydroxyle. On fait réagir 3,0 g (4,9 mmoles) du produit à 70°C avec 0,7 g de LiN^ dans 50 ml de DMF pendant environ 26 heures.-On verse le mélange réactionnel refroidi sur de la glace en agitant. On isole le solide, le lave avec de l'eau et le purifie par chromatographie instantanée en utilisant un mélange hexane/acétate d'éthyle (2:1 en volume).' En rassemblant les fractions appropriées et en chassant le solvant, on obtient 0,83 g du produit tritylé. On le dissout dans une solution saturée de bromure de zinc dans 1'acétonitrile et on agite à 0°C

tt durant 16 heures environ. Après avoir ajouté 100 ml d'acétate d'ammonium (1M), on sépare la phase organique et la porte à siccité sous vide. On purifie le résidu par chromatographie instantanée en utilisant un mélange chclg/ch^oh (20:1 en volume). On rassemble les fractions et les porte à siccité sous vide. Le rendement en produit du titre est de 0,25 g, 0,8 mmole, 5,3 % ; P.F. 118-120°C.

Analyse- pour c10hioF3n5°4

Calculé : C 37,39, H 3,14, N 21,80, F 17,74

Trouvé : C 37,31, H 3,23, N 21,75, F 17,60

Exemple 63 :l-(3'-azido-2',3'-didéxoxy-P-D-thréo-pento-furannosyl)uracile On protège le groupe 5'-hydroxyle de 2'-désoxyuridine et on mésyle le groupe 3'-hydroxyle. On déplace le groupe 3'-mésyle avec inversion de configuration par chauffage dans le diméthylformamide à 80°C avec 3 équivalents d'azoture de lithium pendant 24 heures. On verse le mélange réactionnel dans de l'eau glacée et le produit précipite. Après filtration,- on-débloque le-produit humide. La purification finale s'effectue par chromatographie sur gel de silice, en éluant avec un mélange chloroforme/méthanol (95:5). On rassemble les fractions appropriées et on chasse les solvants pour obtenir le composé du titre sous forme d'un solide ; P.F. 142-145°C. Exemple 64 : l-(3'-azido-21,3'-didésoxy-ft-D-érythro-pentofurannosy 1)uracile On trityle le groupe 5'-hydroxyle de 30 g (0,13 mole) de 2'-désoxyuridine par le procédé de Horowitz et coll. (J.-Org. Chem., _31, 205 (196b). On chlore le groupe 3'-hydroxyle (12,6 g, 0,027 mole) par le procédé de l'Exemple 62. On chasse le diméthylacétamide sous vide et on verse l'huile épaisse dans 500 ml d'eau. On extrait le produit trois fois à l'éther. On chasse le solvant et on chromatographie 1Jhuile résultante sur gel de silice, en éluant tout d'abord avec du dichlorométhane,

«

\

\

puis avec 1 % de méthanol dans le dichlorométhane.

«

On rassemble-lés fractions de produit et on chasse les solvants sous vide. On débloque le groupe 5'-hydroxyle,

sans autre purification, en chauffant dans l'acide acé-5 tique à 80 % sur un bain-marie pendant 20 minutes. Par refroidissement, le tritylcarbinol précipite et on le sépare par filtration. On concentre le filtrat sous vide et on le chromatographie sur gel de silice en éluant avec de l'acétate d'éthyle. On déplace le groupe 3-chloro par chauffage dans HMPA. avec 3 équivalents d'azoture de lithium à 90°C pendant 16 heures environ. On verse le mélange réactionnel dans l'eau et l'entrait au chloroforme. Le chloroforme contient le produit et on le déshydrate sur MgSO^. L'élimination du chloroforme donne un solide 15 que l'on recristallise tout d-abord dans un mélange acétate d•éthyle/méthanol, puis avec de l'eau. On dissout les solides recristallisés dans l'eau et les applique à une colonne de XAO. Après lavage à l'eau, on élue le composé du titre avec de 1'éthanol. On chasse l'éthanol •20 sous vide pour obtenir un solide ; P.F. = lbb,5-168,5°C. Exemple 65 : 1-13'-azido-2',3'-didésoxy-érythro-p-D-pentofurannosyl-5-éthyl)uracile On prépare la 5-chloromercuri-2'-désoxyuridine à partir de 10 g (.0,044 mole) de 2 *-désoxyuridine par le 25 mode opératoire de Bergstron et Ruth (J. Carb. Nucl. and Nucl., 4, 257, (1977)). On prépare la 2'-désoAy-5-éthyluridine-par le-procédé de Berstrom et coll. (J. Am. Chem. Soc., 100, 8106 (1978)). On protège le groupe 5■-hydçoAyle par le.procédé de 1-Exemple b2. On chlore 30 le groupe 5"-hydroxyle .et on. élimine la protection du groupe 5'-hydroxyle par le procédé de l'Exemple 64. On déplace-le groupe 3'-chloro de la thréo-3 ' -chloroT-2 ■ , 3 ■ -didésoxyuridine avec inversion de configuration par chauffage dans HMPA avec 5 équivalents d'azoture de lithium à 35 55°C pendant une heure. On purifie le composé du titre par chromatographie sur gel de silice en éluant avec de

À

.1

l'acétate d-éthyle. L'élimination du solvant des fractions appropriées1 donne le-composé desire ; P.F. = 112,5-115°C. Exemple tok : 1— ( 3 * -azido-2 • , 3 * -didéso^y- p-D-chréo-pento— furannosyl)-5-(2-bromovinyl)uracile 5 On synthétise la 5-bromovinyl-2'-désoxyuridine

(BVDU) par le procédé de Jones et coll. (Tetrahedron Letters 45, 4415 (1979)) pour obtenir des rendements similaires. On trityle la BVDU et la mésyle par le procédé de Horowitz et coll. (J. Org. Chem., 3JL, 205 (1966)). 10 On dissout 4,25 g (6,5 mmoles) de ce produit dans 100 ml de DMF'contenant 0,955 g (19,5 mmoles) de Li^ et on chauffe à 74°C pendant 24 heures. On verse le mélange réactionnel sur '600 ml de glace en agitant. On isole le solide qui se forme et on le purifie par chromatogra-15 phie pour obtenir une gomme (2,48 g). Un traitement par dissolution dans 100 ml d'acide acétique à 80 % et chauffage sur un bain-marie pendant 3 heures débloque le composé. On dilue le mélange réactionnel refroidi avec de l'eau et on le filtre pour éliminer le trityl-carbinol. 20 On réduit le volume du filtrat en une huile que l'on purifie par chromatographie instantanée dans CHCl^/CH^OH (9:1 en volume). Le rassemblement des fractions appropriées et lélimination du solvant donnent un solide que l'on cristallise deux fois dans du méthanol aqueux. 25 Rendement : 0,66 g, 1,8 mmole, 27,7 % ; P.F. 165-166°C.

Analys.e pour cnHi2BrH5°4 ~ H2°

Calculé : C, 35,98; H, 3,57; N, 19,07, Br, 21,85

Trouvé : C, 35,98, H, 3,57; N, 19,07; Br 21,76

30

Exemple 67 : l-(3'-azido-23'-didésoxy-p-D-thréo-pento-furannosyl)-5-méthylisocytosine On combine 0,5 g (2 mmoles) de l-(3'-azido-2',3'-didésoxy-ft-D-thréo-pentofurannosyl)-2-méthoxy-5-35 méthyl-4(H)-pyrimidinone avec 15 ml de méthanol saturé

d'ammoniac dans une bombe. Après 6 jours a la température

*

w

\

ambiante, on chauffe la bombe dans un bain d'huile à £5°C pendant 4 jours. On porte le mélange réactionnel à siccité et on le purifie par cristallisation dans un mélange CHClg/CH^OH (9:1 en volume). On lave le solide avec CHCl^ et le sèche à l'air pour obtenir 0,16 g (0,6 mmole, 30 %) de produit ; P.F. 158-160°C.

Analyse - pour <-ioH14N6°3 H2°

Calculé : C, 44,36 ; H, 5,40 ; N, 31,04

Trouvé : C, 44,42 ; H, 5,36 ; N, 31,04

Exemple 68 : 1-(3'-azido-2',3'-didésoxy-p-D-thréo-pento-furannosyl)-3-méthy1thymine On chauffe au reflux dans 50 ml de CHCl^ pendant 96 heures, 1,0 g (1,95 mmole) de 51-trityl-3'-thréo-3'-azido-3'-désoxythymidine et 0,93 g (7,8 mmoles) de diméthylacétal de N,N-diméthylformamide (Zemlicka, Coll. Czech. Chem. Comm., _35, 3572 (1972)). Par élimination du solvant, on obtient une huile que l'on purifie davantage par chromatographie instantanée en utilisant CHClg. Par élimination du solvant, on obtient 0,54 g d'une mousse. On effectue le déblocage par chauffage de la mousse dans 50 ml d'acide acétique à 80 % sur un bain-marie pendant 2 heures. On élimine le trityl-carbinol par filtration après avoir dilué le mélange réactionnel avec HgO. On porte le filtrat sous vide à l'état d'une huile et on purifie l'huile par chromatographie instantanée en utilisant CHCl^/EtOAc (2:1 en volume). On chasse le solvant pour obtenir le composé sous forme d'une huile en une quantité de 0,20 g.

UV max (nm) àpHl S max=267 ( £=3100, /\ ep.=209 (£.=8500) ; à pH13 ^nax=267(£ =8000).

H1 RMN(DMSO-d6): 5 7,56 (s,lH,H6); 6 6,07 (dd,lH,Hr); 6 3,17 (s,3H,N-gH3); 6 1,86 (s,3H,5-CH3).

Analyse pour ^■^^•15^5^4 ~ H®Ac °'3 H2° '

Calculé : C 45,62, H 5,58, N 22,54

Trouvé : C 45,67, H 5,60, N 22,57

Exemple 69 : Acide (E)-3-|"l-(3 '-azido—2' , 3 '-didésoxy-(3— D-érythro-pentofurannosyl)-1,2,3,4-tétra-hydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl 1-2-propénoi'que On transforme la 2'-désoxyuridine en le dérivé 5—chloromercuri selon le procédé de la littérature,

en un rendement de 96 % (Bergstrom et Ruth, J. Carb.

Nucl., _4, 267, (1977)). On dissout 50 g (1,04 mole) de ce produit dans 800 ml de MeOH anhydre contenant 104 g (1,04 mole) d'acrylate d'éthyle et une solution 0,1N de L^PdCl^ dans MeOH (1040 ml). On agite la solution pendant 4 heures, puis on la traite avec H2S pendant 2 minutes. On filtre la suspension sur un tampon de Celite et on évapore le filtrat à sec sous vide. On triture le résidu avec MeOH pour obtenir un solide que l'on filtre et sèche pour obtenir 22 g d'un solide blanc. On trityle ce produit et le mésyle par le procédé de Horowitz et coll. (J. Org. Chem., 3>1, 205 (1966)). On dissout une portion de 7,06 g (10,9 mmoles) de cette matière dans 100 ml de MeOH anhydre contenant 0,92 g (10,9 mmoles) de NaHCOg et on chauffe au reflux pendant 6 heures. On chasse les solvants sous vide, on fait tourbillonner le résidu avec H2O, puis on filtre et sèche à l'air pour obtenir 6,1 g d'un solide blanc. On dissout ce produit dans 50 ml de DMF/1 ml de H2O contenant 1,6 g (33,2 mmoles) de-LiNg et on le chauffe à 125°C pendant 4 heures. On verse le mélange réactionnel sur 200 ml de glace, on recueille le précipité et le lave avec H2O. On dissout ensuite cette matière dans 100 ml de HOAC à 80 %

I

et on chauffe à 100°C pendant 4 heures. On dilue le mélange réactionnel avec H2O et on sépare le précipité par filtration. On évapore le filtrat à sec pour obtenir 800 mg d'une huile. On dissout cette huile dans 20 ml de NaOH 0,5N et on l'agite à la température ambiante pendant

<

2 heures. On ajuste le pH de la solution à 3, on sépare le précipité .par filtration et le sèche à l'air pour obtenir-550 mg (1,7 mmole) du composé du titre : P.F. supérieur à 250°C.-

UV (nm): à pHl^max = 300 (£ = 20400)J min = 230 (£ = 3900), ^ = 262 (£= 13100)

à pH13^max = 297,266 (£= 15600, 14800),X min = 281, 288 (£= 13600, 8600);

H1 RMN (DMSO-d6) 68,37 (s,lH,H6), 67.30 (s, 1H,-CH=, 5=15,57Hz), 66,78 (d,lH, = CH-COOH, 5=15,93Hz), 66,1-6,06 (m,lH,HD, 65,41-5,37 (m, 1H,5'0H), 64,47-4,39 (m,lH,H3'), 63,87-3,83 (m,lH,H4), 63,74 3,58 (m, 2H,H5'), 62,54-2,81 (m,2H,H2*).

Analyse pour G^2H13N5°6 Calculé : C 44,59, H 4,05, N 21,67

Trouvé : C 44,45, H 4,06, N 21,60.

Exemple 70 : Acide (E)~3-[l-(3t-azido-2< ,3'-didésoxy-(3-

D-thréo-pentofurannosyl)~1,2,3,4-tétrahydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl1—- 2-propénoïque On1 transforme la 2'-désoxyuridine en le dérivé 5-chloromercuri . selon le procédé de la littérature, ■en un rendement de 96 % (Bergstrom et Ruth, J. '.Carb.

Nucl» Nucl, 4, 257 (1977)). On dissout 50 g (1,04 mole) de ce produit dans 800 ml de MeOH anhydre contenant 10,4 g (1,04 mole) d'acrylate d'éthyle et une solution 0,1N de Li2PdCl^ dans 10,40 ml de MeOH. On agite la solution pendant 4 heures, puis on la traite avec H2S pendant 2 minutes.-On filtre la suspension sur un tampon de Celite et on évapore le filtrat à sec sous vide. On triture le résidu avec MeOH pour obtenir un solide que l'on filtre et sèche à l'air pour obtenir 22 g d'un solide blanc. On trityle ce produit et le mésyle par le procédé de Horowitz et coll. (J. Org. Chem., _31, 205 (1966)). On dissout une portion de 2,7 g (4,2 mmoles) de cette matière dans 55 ml de DMF anhydre contenant 0,62 g (12,7 mmoles) de LiN^ et on chauffe à 70°C sous N2 pendant 24 heures. On verse le mélange réactionnel

AI

p

\

sur 400 ml de glace, on recueille le précipité et on

?

le purifie par chromatographie instantanée. L'élution' avec un mélange CHCl^/MeOH (50:1 .en volume) donne 1,48 g de l'intermédiaire azido. On traite cette matière avec de l'acide acétique à 50 % (100 ml) à 100°C pendant 3 heures. Par dilution avec ^0, filtration de la suspension résultante et évaporation du filtrat sous vide, on

I

obtient 710 mg d'une huile. On dissout cette huile dans 50 ml de NaOH et on l'agite à la température ambiante pendant 2 heures. On porte le pH de la solution à 3, on sépare le précipité par filtration et le sèche à l'air pour obtenir 240 mg (0,7 mmole, 50 %) du composé du titre ; P.F. = 250°C.

UV{nm) à pHl ^ max = 301 (£=19500), } min = 230 ( £ = 3600)&ép.=249 ( £. = 12700)

à pH 13 ^ max = 299,267 ( £= 1400,13200), ][ min = 232,239 ( £ = 1200, 7560] H18HN (DMSO-dg) 53,13 (s,7H,H6) 67,32 (d,lH,-CH=, 6 = 15,87 Hz) 66,78(d,lH, = CH-COOH, J=15,62Hz), 56,01-5,98 (m,lH,Hl'), 55,11-5,98 (m,lH,5'OH), 64,50-4,43 (m,lH,H3'), 54,13-4,08 (m,lH,H4'), 63,80-3,75 (m,2H,H5'), 62,77-3,67 (m,lH,H3"), 52,30-2,20 (m,lH,H2')

Analyse pour C^2^13H5^6 ~ IjSHjO Calculé : C 41,15, H 4,60, N 19,99

Trouvé : C 41,38, H 4,50, N 20,01.

Exemple 71 : Acide (E)-3- fl-(3'-azido-2',3'-didésoxy-3-D-érythro-pentof urannosyl ) — 1,2,3-, 4-tétra-hydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl] -2T-propanoïque On prépare-la 5'-trityl-31-mésyl-5-propénoate-2'-désoxyuridine selon le mode opératoire de l'Exemple 69. On hydrogène cette matière avec 10 % de Pd sur C dans EtOH pour obtenir le dérivé propanoïque. On traite ensuite ce produit de la manière décrite dans le procédé ci-dessus pour obtenir le composé du titre ; P.F. = 118-120°C.

\

<

UV (nm): à pHl/v max = 265 (£= 9900),J\ min = 235 ( £.= 3100); ,,

à pH13^ max = 265 (£=7400) J min - 247 (Ç. = 5400);

H1 RMN (DMSO-dg) ô 7,68 (s,lH,H6), 6 6,11-6,06 (m, 1H,H1'), 6 4,45-4,35 (m,lH,H3'), S 3,85-3,80 'm,lH,H4'),. 6 3,68-3,53 (m,lH, H5')

5 Analysé pour

Calculé : C 44,31, H 4,65, N 21,53

*

Exemple 72 : Etude clinique f;

On a administré oralement de la 3'-azido-3'-désoxy thymidine (AZT) à deux malades atteints du SIDA à une dose de 2 mg/kg- toutes les 8 heures aux jours 1 et 2 du traitement

Aux jours 2 et 3, les malades ont également reçu 500 mg de probénécide (PB) toutes les 6 heures et une seule dose de

AZT leur a été administrée au jour 3. Les taux maximum (Cmax et minimum (C . ) de AZT au jour 3 (après l'administration mm J r de probénécide) ont été notablement plus élevés que les taux correspondants au jour 1, ce qui s'est traduit par une réduc tion d'un facteur 3 de la clairance corporelle totale (Cl/F) et une prolongation de la demi-vie moyenne (tl/2) de AZT (0,88 à 1,73 heure) pendant le traitement par PCB. Le rapport moyen de AZT-glucuronide/AZT dans l'urine a été fortement réduit, de 7,3 à 2,4, après le traitement par PB. Le Tableau 1 résume les principaux paramètres pharmacocinéti-ques de AZT avant et après co-administration de PB.

Tableau 1

Malade

AUC

Cmax

Cmin

Tmax

Cltot/F

tl/2

N°

(h *tim)

(pm)

(ym)

(h)

(ml/min/70kg)

(h)

1. AZT/PB

10,41

6,13

0,15

0,25

829,50

1,84

2. AZT/PB

10,00

6,46

0,27

0,50

921,00

1,61

MOYENNE

10,21

6,30

0,21

0,38

875,25

1,73

±Ecart-type

0,29

0,23

0,08

0,18

64,70

0,16

1. AZT

3,70

3,74

0,00

0,50

2333,80

0,87

2. AZT

3,04

2,51

0,00

0,31

3027,00

0,89

MOYENNE

3,37

3,13

0,00

0,41

2680,40

0,88

iEcart-type

0,47

0,87

0,00

0,13

480,17

0,01

Exemple 73 : Activité antivirale

Le Tableau 2 montre l'accentuation de l'activité anti-virus de la leucémie de Friend (VLF) de la 3'-azido-31-désoxythymidine (AZT) par le dipyridamole, le dilazep

tf

\

et la 6-[(4-nitrobenzyl)thio]-9-3-D-ribofurannosyl)purine comme inhibiteurs de transport de nucléoside. On a ense-' mencé une plaque avec des cellules FG-10 un jour avant de les infecter avec FLV. Une heure après l'infection, on a 5 ajouté des concentrations connues des composés/associations d'essai. On a fait incuber les plaques pendant 3 jours, remplacé les milieux par du milieu frais 5A de McCoy et fait incuber pendant 3 autres jours. On a déterminé comme indiqué sur le Tableau 2 les concentrations des composé/associations 10 d'essai donnant 50 % d'inhibition des plaques. Ni le dipyridamole (10 pM) ni le dilazep (5 jiM) seuls ne présentaient d'effet antiviral.

Tableau 2

Composé/Association DE^Q de azidothymidine (nM)

15 AZT 5

AZT + dipyridamole 1 juM 1

AZT + dipyridamole 5 pM 0,5

AZT + dipyridamole 10 pM 0,2

AZT + dilazep 5 pM 0,5

20 AZT + 6-C(4-nitrobenzyl)thio]-

9-g-D-ribofurannosyl)purine 5 pM 3

Exemple 74 ; Activité anti-PTI de la 3'-azido-3'-désoxythymidine (AZT)

On a diagnostiqué qu'un malade dont le nombre de

' —3

25 plaquettes était de 38 000 mm était atteint de purpura

—3

thrombocytopénique (nombre de plaquettes < 10Q 000 mm ) et on l'a traité pendant 6 semaines avec 5 mg/kg de AZT par voie intraveineuse toutes les six heures et pendant cette

— 3

période son nombre de plaquettes s'est élevé à 140 000 mm 30 On a ensuite modifié le traitement en 5 mg/kg/4 heures oralement pendant 4 semaines et l'a interrompu pendant 4 semaines lorsqu'on a observé une chute du nombre de plaquettes

-3 -3

à 93 000 mm au bout de 2 semaines, et à 70 000 mm au bout de 4 semaines. On a repris le traitement à raison de 5 mg/

35 kg/4 heures oralement pendant 5 semaines et le nombre de

— 3

plaquettes s'est élevé à 194 000 mm , une réduction à

B

2,5 mg/kg/4 heures oralement sans limitation de durée s'est traduite par un léger déclin du nombre de plaquettes, mais pas dans la mesure d'un diagnostic de PTI.

Exemple 75 : Traitement du Sarcome de Kaposi par la 3'-azido-

atteints du sarcome de Kaposi (SK) par AZT et on a observé les effets suivants.

Une guérison complète a été obtenue chez un malade. 10 Trois malades ont présenté une régression des lésions.

Chez 2 malades SK est resté stable.

Chez 3 malades les lésions ont progressé.

La réponse à =* 50 % est comparable à celle obtenue en traitant par la thérapie actuelle préférée pour SK, un 15 a-interféron recombinant.

Exemple 76 : Associations AZT/acyclovir contre HIV in vitro

En appliquant une méthode analogue à celle de l'Exemple 79 , on a testé des associations de AZT et d'acyclovir (ACV) pour déterminer leur efficacité in vitro, con-20 tre HIV.

ACV seul présentait peu d'activité, une concentration de' 16 jug/ml (la plus grande qui ait été testée) manifestant moins de 30 % de protection, tandis que AZT à 8 juM manifestait 100 % de protection par cette méthode. 25 Le Tableau 3 montre les associations des deux médicaments qui étaient requises pour atteindre 100 % de protection.

5

désoxythymidine (AZT)

Dans cette étude, on a traité 9 malades déclarés

Tableau 3

ACV (ug/ml)

AZT (UM) 0

0,5

30

8

2

1 4 8

1

0

35

Ces résultats montrent que ACV potentialise d'environ 3 fois l'activité antivirale de AZT.

Exemple 77 : Associations AZT/interféron contre HIV in vitro

On a obtenu des cellules mononucléaires du sang périphérique (CMSP) provenant de donneurs volontaires sains séronégatifs pour HIV, par sédimentation Ficoll-Hypaque de sang hépariné. On a traité les cellules avec 10 jug/ml de phyto-hémagglutinine (PHA) et les a développées dans du milieu RPMI 1640 additionné de 20 % de sérum foetal de veau (SFV), d'antibiotiques, de 1-glutamine et de 10 % d'inter-leukine-2 (IL-2) (Electronucléonics, Bethesda, Maryland). A compter de 4 à 6 jours après l'exposition à PHA, on a distribué les cellules à des concentrations de 4 x 10 cel-lules/ml dans des fioles de 25 cm contenant 5 ml de milieu, puis les a exposées aux médicaments et virus indiqués en détail ci-après. Le jour de l'inoculation du virus est dénommé le jour 0. Au jour 4, on a ajouté du milieu frais. Ensuite, tous les 3 à 4 jours, on a prélevé une portion de la suspension de cellules pour l'analyser et l'a remplacée par du milieu acellulaire. Les expériences 2 et 4 ont été achevées au bout de 14 jours et les expériences 1 et 3 au bout de 16 jours.

Les réserves de virus étaient des liquides surnageant acellulaires de cellules H9 infectées par HIV congelés dans des portions aliquotes à -70°C. La dose infectant

à 50 % les cultures tissulaires (DICTcn) de la réserve b

de virus était de 10 /ml.

On a effectué quatre expériences séparées en utilisant CMSP provenant de différents donneurs (Tableau 4).

Dans l'expérience 1, on a ajouté les deux médicaments après que les cellules aient été exposées au virus. On a mis en g

suspension des portions aliquotes de 40 x 10 cellules dans

5

20 ml de milieu contenant 10 DICT^q de virus pendant 1 heure, puis les a lavées 3 fois et remises en suspension dans du milieu sans virus. Dans les expériences 2 à 4, on a fait incuber les cellules pendant 24 heures dans du milieu contenant ou ne contenant pas d'a-interféron recombinant (rlFNaA), puis les a exposées à AZT et au virus. On a ajouté

¥

directement le virus aux cultures dans un petit volume dé milieu et on ne l'a pas éliminé par lavage. Les inoculumè viraux étaient de 4 x 103, 103 et 2 x 103 DICT5Q dans les expériences 2, 3 et 4 respectivement. On a ajusté les con-5 centrations de médicament à chaque changement de milieu de telle façon que les concentrations initiales ont été maintenues.

Dans toutes les expériences, on a étudié des dilutions successives de deux fois d'une association déter-10 minée de rIFNaA et de AZT. On a également étudié seule chaque concentration de rlFN^A et de AZT utilisés en association, pour obtenir des points de référence.

Dans toutes les expériences, on a conservé des doubles des cultures pour chaque concentration et pour les 15 témoins infectés et non infectés. Dans l'expérience 1, on a étudié AZT 3,2 pM et 128 unités/ml (U/ml) de rIFNaA,

ainsi que 5 dilutions de deux fois de cette association.

Dans les expériences 2 et 3, on a employé AZT 0,16 pM et 128 U/ml de rIFNaA, et 3-4 dilutions de deux 20 fois de cette association. Dans l'expérience 4, on a employé AZT 0,08 pM conjointement à 128 U/ml de rIFNaA, et 2 dilutions de deux fois de cette association.

Au bout d'environ une semaine, on a évalué les cultures tous les 3 à 4 jours quant à la présence de virus. 25 Les cellules ont été évaluées quant aux antigène de HIV

par immunofluorescence indirecte ; les liquides surnageants ont été évalués quant à la transcriptase inverse (TI), aux virus produits et à l'antigène p24 de HIV par radio-immuno-dosage.

30 Pour calculer les effets des médicaments associés on a s'est servi de l'analyse des effets de médicaments mul tiples de Chou et Talalay (Advances in Enzyme Régulation, (1984), 22, 27-55).

On a également évalué les résultats par la tech-35 nique de 1'isobologramme, une méthode géométrique pour apprécier les interactions médicamenteuses. La concentration i

r i

de AZT produisant un effet désiré (par exemple inhibiteur à 50 %) est tracée sur l'axe horizontal, et la concentration de rIFNaA produisant le même degré d'effet est tracée sur l'axe vertical. On trace une droite reliant ces points et on trace la concentration des agents dans l'association qui produit le même effet. Si ce point tombe au-dessous de la droite, l'association est considérée comme synergique.

Dans l'expérience 1, toutes les concentrations de AZT étaient totalement inhibitrices, de sorte qu'il a été impossible de juger des effets combinés. Dans les expériences 2-4, on a nettement observé une interaction synergique des deux agents (Tableaux 4-9). La synergie était évidente par toutes les mesures de réplication virale employées, et elle a persisté même lorsque l'effet de rIFNaA seul était négligeable. On a fait des calculs de synergie en appliquant l'analyse des effets de médicaments multiples aux résultats concernant TI obtenus dans les expériences 2-4, aux résultats concernant la production de virus obtenus dans les expériences 2 et 3 et aux résultats de dosage radio-immunologique obtenus dans l'expérience 4. La méthode de 1'isobologramme indiquait également une synergie.

Tableau 4

Méthode a

HIV

Chronologie de 11

1 addition

d'inoculation ajouté

des médicaments

Expérience de HIV

(dict50)

rIFNaA

AZT

1

A

105

0

0

2

B

4 x 103

-24 heures

0

3

B

103

-24 heures

0

4

B

2 x 103

-24 heures

0

(a) methode A : on a mis en suspension 40 x 10 cellules

5

dans 20 ml de milieu contenant 10 DICT^q de HIV pendant 1 heure à 37 °C, puis les a lavées et remises en suspension.

méthode B : on a ajouté la quantité indiquée de virus à 2 x 10^ cellules dans du milieu ; on n'a pas lavé les cellules ensuite. à

H

Tableau 5

Expérience 2 - Jour 10

Effets de rIFNaA et AZT sur les valeurs moyennes de trans-

ules x 103)

rIFNaA (U/ml)

6 3

criptase inverse (CPM/10 cellules x 10 )

AZT (juM)

0

_8

1_6

32

64

128

0

205

173

150

193

169

151

o %

o

H

159

85

0,02

110

42

0,04

71

10

o %

o

00

31

4

0,16

7

1

Tableau

6

Expérience 3 -

Jour 13

Effets de rIFNaA

et

AZT

sur les valeurs moyennes de TI

(CPM/106

cellules

1

x

103)

rIFNaA

(U/ml)

AZT (lum)

0

16

32

6±

128

0

157

143

117

117

130

CM ©

*

O

51

10

0,04

10

0

00

o *

o

2

0

vo

H *

o

5

0

Tableau 7 Expérience 4 - Jour 11 Effets de rIFNaA et AZT sur les valeurs moyenne de TI (CPM/10® cellules x 103)

rIFNaA (U/ml)

AZT (uM) 0 32 64 128

0 32 5 4 2

0,02 8 1

0,04 4 0

0,08 1 0

ff

Tableau 8

Expérience

3 - Jour

13

Effets de rIFNaA et

AZT sur la production de virus

(DICT50/ml)

5

!

rIFNaA (U/ml)

AZT (uM)

0

16

32

64

128

0

105'7

105'6

5 3 10 '

105'1

105'0

0,02

104'8

101'9

0,04

100'3

1 9

<10x'*

10

0,08

101,9

1 9

<10'L'y

0,16

<101,9

<101,9

Tableau 9 Expérience 4 - Jour 14

Effets de rIFNaA et AZT sur p24 de HIV 3

15 rIFNaA (U/ml)

AZT (uM) 0 32 64 128

0 200-300 100-200 50-100 25-30 0,02 100-200 2,2

0,04 25-30 1,0

20 0,08 11,2 0,8

ales taux de p24 de HIV sont présentés en ng de protéine/ml

Tableau 10

Indices d'association pour AZT et rIFNaA, calculés d'après

25 les résultats concernant TI

Indices d'association à différents pourcentages d'inhibition de TI

Expérience

Jour en culture

50 %

90 %

95 %

30

2

7

2,14

0,34

0,23

2

10

0,37

0,30

0,28

3

6

0,26

0,73

1,39

3

13

0,12

0,15

0,17

3

16

<0,01

0,02

0,05

35

4

8

0,01

0,03

0,03

4

14

0,02

0,07

0,12

V

Les valeurs de I.A. sont déterminées en résolvant l'équation pour différents degrés d'inhibition de TI. Des valeurs de I.A. inférieures à 1 indiquent une synergie. Les valeurs données de I.A. ont été obtenues en utilisant la forme mu-5 tuellement non exclusive de l'équation ; les valeurs obtenues en utilisant la forme mutuellement exclusive étaient toujours légèrement inférieures.

Exemple 78 : Etudes in vitro de synergie antibactérienne

On a traité de la 3'-azido-3'-désoxythymidine et 10 8 agents antibactériens connus (énumérés sur le Tableau 11) chacun avec du N,N-diméthylformamide pendant 30 minutes. On a préparé des dilutions pour microtitrage en utilisant du bouillon de Wellcotest.

Avant les tests de synergie, on a procédé à des 15 déterminations de concentration inhibitrice minimale (CIM) pour chaque composé individuel contre le microorganisme d'essai (E. coli CN314). Le Tableau 11 montre les points finaux de CIM de chaque médicament pour E. coli CN314.

On a préparé des dilutions successives de deux 20 fois des médicaments d'essai ou de 3'-azido-3'-désoxythymidine, dans des plaques de microtitrage "à fond plat" ou

îf

"de transfert", respectivement. On a combiné les plaques contenant les dilutions appropriées, ce qui a donné une série de 192 dilutions/associations. On a également inclus des témoins consistant en le composé seul. La plus forte concentration de l'un quelconque des médicaments utilisés était double de sa valeur CIM (Tableau 11).

On a ensemencé les plaques d'essai avec une culture de germes bactériens contenant approximativement 5 x10^ unités formant colonies (UFC)/ml et les a ensuite fait incuber à 27°C pendant 18 heures. On a coté les réservoirs quant au développement ou à 1'absence de développement bactérien, et déterminé les CIM. On a calculé les "concentrations inhibitrices fractionnaires" (CIF) d'après les valeurs CIM en divisant la CIM en association par la CIM de chaque agent isolé. On a ensuite calculé la somme des fractions (somme des concentrations inhibitrices fractionnaires). Un résultat d'environ 0,5 ou moins est révélateur de synergie.

Tableau 11

Concentrations inhibitrices minimales (CIM) des médicaments d'essai seuls

Composé CIM (uq/ml)

Tobramycine 0,4

Acide fusidique 1000

Chloramphénicol 3,1

Clindamycine 100

Erythromycine 25

Rifampicine 6,2

3'-azido-3'-désoxythymidine 1,0

Triméthoprime 0,125

Sulfadimidine 32

Les. résultats des expériences de synergie sont indiqués sur le Tableau 12.

JU

1

Tableau 12

}

Etudes de synergie : Associations de AZT et d'autres agents antibactériens

CIM optimale (jug/ml) :

Association

Médicament/AZT

Indice CIF

Tobramycine/AZT

0,2/0,125

0,25

Acide fusidique/AZT

250/0,03

0,28

Chloramphénicol/AZT

1,6/0,06

0,31

Clindamycine/AZT

12,5/0,25

0,375

Erythromycine/AZT

6,2/0,25

0,5

Rifampicine/AZT

3,1/0,06

0,56

Triméthoprime/AZT

0,004/0,5

0,504

Suifadimidine/AZT

0,25/0,125

0,375

Exemple 79 : Activité anti-HIV de 3'-azidonucléosides in vitro

On a testé l'activité in vitro de 31-azidonucléosides (médicaments) dans deux lignées cellulaires, à savoir: H9 (lignée de lymphocytes T OKT4+, permettant la réplication de HIV mais partiellement résistants à l'effet cytopathique de HIV) et TM3 (clone de lymphocytes T, spécifiquement dirigé contre l'anatoxine tétanique, immortalisé par HTLV-I létalement irradié et sélectionné pour un développement rapide et une sensibilité à l'effet cytopathique de HIV).

Le test d'inhibition a été effectué comme suit : On a stimulé les cellules TM3 par des lymphocytes mononucléaires du sang périphérique (MSP) autologues frais irradiés (4000 rad ; 40 Gy) positifs à l'antigène et cultivés dans du milieu complet contenant 15 % en volume d'interleukine-2 (IL-2,appauvrie en lectine ; Cellular Products, Buffalo, New York), 6 jours avant le test. On a utilisé des cellules ATH8 sans stimulation par l'antigène. Après les avoir préalablement exposés à 2 jug de Polybrène par ml pendant 30 min, on a pastillé les lymphocytes T ci-blés (2 x 10 ), les a exposés à HIV pendant 45 min, les a remis en suspension dans 2 ml de milieu frais et les a mis à incuber dans des tubes de culture à 37°C dans de l'air

humidifié contenant du CC>2. On a traité de même des cellules

' f / /

témoins mais sans les exposer au virus. Les cellules ont ete continuellement exposées à IL-2 et au médicament. Quand on a utilisé des cellules ATH8 dans ce système de test, cinq particules de virus par cellule étaient la dose cytopathique minimale de virus. Dans des expériences menées en co-culture

, 4

de cellules, on a ajoute 5 x 10 cellules H9 productrices de

5

HIV RF-II ou cellules H9 non infectées à 2 x 10 lymphocytes T cibles. A divers instants, on a compté les cellules viables totales dans un hémocytomètre au microscope par la méthode d'exclusion du bleu tryptan.

Les résultats sont indiqués sur le Tableau 13.

Tableau 13

Composé DE5Q (juM)

3'-azido-21,3'-didésoxycytidine 10

3•-azido-5-bromo-21,31-didésoxyuridine 5

31-azido-5-bromo-2',3'-didésoxycytidine 5

Acide (E)-3-[l-(31-azido-2',31-didésoxy-g-D-érythro-pentafurannosyl)-1,2,3,4-tétrahydro-2,4-dioxo-5-pyrimidinyl]-2-propénoïque 100

Exemple 80 : Activité antibactérienne in vitro de 3'-azidonucléosides

Le Tableau 14 montre l'activité antibactérienne in vitro de 3'-azidonucléosides en termes de Concentration Inhibitrice Minimale (CIM) contre diverses espèces bactériennes .

La référence utilisée était le triméthoprime (TMP) et le milieu utilisé était de la gélose pour test de sensibilité de Wellcotest additionnée de 7 % de sang de cheval lysé.

!

i

Tableau 14

CIM (uq/ml)

Microorqanisme . Composé Référence

1

2

3

4

5

6

7

8

E.coli

0,1»

>100

10

0,1»

10

0,1»

10

10

>100

Salmonella typhimurium

0,1»

10

10

0,1»

>100

10

10

>100

0,5

Salmonella typhosa

0,1»

0,1»

10

0,1»

0,1»

10

10

0,1»

0,1

Entero. aeroqenes

0,1»

10

>100

>100

100

10

10

>100

0,5

Citro. freundii

10

10

10

0,1»

10

10

10

>100

0/5

Les composés utilisés étaient :

1) 31-azido-31-désoxy-4-thiothymidine

2) 3'-azido-31-désoxy-5'-0-acétyl-4-thiothymidine

3) 3'-azido-31-désoxy-2-désoxy-2-thiothymidine

4) 51-acétyl-3'-azido-3-benzoyl-31-désoxythymidine

5) 1-(51-0-acétyl-3'-azido-21,31-désoxy-g-D-érythro-pentofurannosyl)-5-méthyl-4-(1,2,4-triazole-l-yl)-2(IH)-pyrimidinone

6) 1-(31-azido-21,31-didésoxy-B-D-érythro-pentofuran-nosyl)-2-(benzyloxo)-5-méthyl-4-(IH)-pyrimidinone

7) 3'-azido-3'-désoxy-2-méthoxythymidine

8) 31-azido-5-bromo-21,31-didésoxyuridine

<

Claims (27)

REVENDICATIONS , , ,

1. Procédé pour la préparation d'un composé de formule :

C

dans laquelle C est une base purique ou pyrimidique liée 5 à la position 9 ou 1 respectivement, et ses dérivés pharmaceutiquement acceptables autres que :

(a) les composés de formule (I)B dans laquelle C est

1'adénine, guanine, uridine, cytidine ou thymine base, et leurs esters 5*-mono- ou 5•-triphosphoriques ; 10 (b) les dérivés 5'-O-acétate, 5'-0-trityle et 5'-0-

(4-méthylbenzènesulfonate) du composé de formule (l)B dans laquelle C est une uridine base et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ;

(c) les composés de formule (I)B dans laquelle C est 15 (i) un résidu de 5-bromovinyluridine ou de 5-trifluoro-

méthyluridine et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ; (ii) un résidu d1uridine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ; et (iii) un résidu de 5-iodo ou 5-fluoruridine et le groupe 3'-azido est en configura-20 tion érythro ou thréo ; et les dérivés 5'-0-trityle de ces composés ;

(d) les composés de formule (I)B dans laquelle C est (i) un résidu de 5-bromovinyluridine ou de cytidine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ; (ii) un résidu

25 de 5-fluorocytidine et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ; ou (iii) un résidu de 5-méthylcytidine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ou érythro ;

(e) les esters 51-O-acétiques des composés de formule (I)B dans laquelle C est une 4-chloro-2(lH)pyrimidinone ou

V\

¥

4-(1H-1,2,4-triazole-l-yl)-2(IH)pyrimidinone (éventuellement substituée à la position 5 par du fluor ou un group'e méthyle) et le groupe 3'-azido est en configuration érythro

(f) le dérivé 5 1-0-[ ( 4-méthoxyphényl )diphénylméthyie] du composé de formule (I)B dans laquelle C est un résidu de cytidine et le groupe 3'-azido est en configuration érythro ; et

(g) le dérivé 5'-0-trityle du composé de formule (I)B dans laquelle C est un résidu d'adénine et le groupe 3'-azido est en configuration thréo ;

caractérisé en ce qu'il consiste soit :

(A) à faire réagir un composé de formule

A

(III)

(dans laquelle A est une base purique ou pyrimidique, autre que la thymine, liée à la position 9 ou 1 respectivement, et M représente un groupe précurseur pour le groupe 3'-azido) ou un dérivé de ce composé, avec un agent ou dans des conditions servant à transformer ledit groupe précurseur en le groupe azido désiré ; soit (B) à faire réagir un composé de formule

R4 a

(IVa) ou

N3

(IVb)

fr

(dans laquelle R^, R^, R3, R4, R6 et R7 représentent res-

^ a 1 a 2 3 3 4a g *7 JL'

pectivement les groupes R,R,R,R,R et R , et R e'st un groupe hydroxy, mercapto, amino, alkylthio, aralcoxy,

alcoxy, cyano, alkylamino, les groupes alkyle étant éven-

✓ 2

tuellement liés pour former un hétérocycle ; R est l'hydrogène ou un groupe acyle, alkyle, aroyle ou sulfonate ;

3

R est un groupe hydroxy, mercapto, amino, triazolyle, alkylamino, dialkylamino, les groupes alkyle étant éventuellement liés pour former un hétérocycle, aralcoxy,

4

alcoxy ou alkylthio ; R est un groupe alkyle, alkyle substitué, halogéno, perhalogénométhyle, hydroxy, alcoxy, cyano,

nitro, alcényle, alcényle substitué, alcynyle, alcynyle

6 7

substitué ou l'hydrogène ; et R et R peuvent être identiques ou différents et sont choisis parmi l'hydrogène et les groupes amino, hydroxy, mercapto, alkylthio, alcoxy,

aralcoxy, cyano et alkylamino ; ou des groupes précurseurs

12 3 4

de ceux-ci, pourvu que l'un au moins de R_, R , R_ et R_

a a a « a dans la formule (IVa) ou l'un au moins des groupes R_ et

7 , ,

R dans la formule (IVb) représente un groupe précurseur)

a avec un agent ou dans des conditions servant à transformer le ou lesdits groupes précurseurs en les groupes correspondants désirés ; soit

(C) à faire réagir un composé de formule

(dans laquelle R"*", R^, R3, R4, R® et R7 sont comme défini) ou un équivalent fonctionnel de ce composé, avec un composé servant à introduire le cycle de ribofurannosyle désiré à la position 1 du composé de formule (IVa) ou à la position 9 du composé de formule (IVb) ; soit

(D) lorsque A du composé de formule (I) est un résidu de purine, à faire réagir une purine de formule (Vb) avec un noyau de pyrimidine de formule :

(dans laquelle Py représente un groupe 1-pyrimidinyle) ; et par la suite ou concomitamment, à effectuer l'une ou plusieurs des transformations facultatives suivantes :

(i) lorsqu'est formé un composé de formule (I)B, transformer ce composé en un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptable ; et

(ii) lorsqu'est formé un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I)Br transformer ce dérivé en le composé d'origine de formule (I)B ou en un autre dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I)B.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'est préparé un 3'-azido-3'-désoxypyrimidinenucléo-side, ou un dérivé pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, dans lequel : R est un groupe hydroxy, mercapto, alcoxy en C^-Cj ou amino ; R est l'hydrogène ou un groupe méthyle, alcanoyle en ci~^2 ou benzoyle ; R3 est un groupe hydroxy, mercapto, amino ou amino substitué ; et R4 est l'hydrogène lorsque R est un groupe amino ou amino substitué, et un halogène ou un groupe perhalogénométhyle, alkyle en alcényle en C2~C3 ou éthényle substitué lorsque R3 est autre qu'un groupe amino ou amino substitué.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'est préparé un 3'-azido-3'-désoxypurinenucléoside,

ou un dérivé pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, dans

6

lequel : R est un groupe amino, alkylamino en Cj-C4» mer-

11

7 '!

capto, hydroxy ou alcoxy en C^-C^ ; et R est un groupe jt amino, alkylamino en ou l'hydrogène.

4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le groupe 3'-azido est en configuration érythro.

5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le groupe C de la formule (I)B est un dérivé de guanine, adénine, thymine, uridine ou cytidine.

6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 4 et 5, caractérisé en ce que le groupe C est un dérivé de thymine ou d1uridine et en ce que le groupe 3'-azido est en configuration thréo.

7. Procédé pour préparer une formulation pharma-ceutiquè, caractérisé en ce qu'il comprend la mise en association d'un composé de formule

(dans laquelle B est une base purique ou pyrimidique liée à la position 9 ou 1 respectivement), ou d'un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé, à titre de premier ingrédient actif, avec au moins un autre agent thérapeutique, à titre de second ingrédient actif, et un support pharmaceutiquement acceptable pour ceux-ci.

8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que les deux ingrédients actifs sont présents en un rapport potentialisant.

9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est un inhibiteur de glucuronidation et/ou un inhibiteur d'excrétion rénale.

10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé en ce que le second ingrédient '

actif est un inhibiteur de glucuronidation.

11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est notablement glucuronide in vivo.

12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 11, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est le probénécide, l'aspirine, 1'acétaminophène,

le lorazépam, la cimétidine, la ranitidine, le zomépirac, le clofibrate, 11indométhacine, le cétoprofène ou le na-proxène.

13. Procédé selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est un inhibiteur de transport de nucléoside.

14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est le dilazep, le dipyridamole, la

6-/j4-nitrobenzoyl)thio/-9-(^ -D-ribofurannosyl)purine,là papavérine, la mioflazine, l'hexobendine, la lidoflazine.et leurs sels d'addition d'acides

15. Procédé selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est un autre nucléoside thérapeutique.

16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le second nucléoside thérapeutique répond à la formule

H2N

(A)

CHX ÇHCH OH Y

dans laquelle Z est l'hydrogène ou un groupe hydroxy ou amino ; et X est (a) un atome d'oxygène ou de soufre ou un groupe méthylène et Y est un atome d'hydrogène ou un groupe

H

hydroxyméthylène, ou bien (b) un groupe méthylènoxy (-OCH„) et Y est un groupe hydroxy ; ou est un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un tel nucléoside.

17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est la 9-[(2-hydroxy-1-hydroxyméthyléthoxy)méthyl]guanine, la 2-amino-9-(2-hydroxy-éthoxyméthyl)purine ou la 9-(2-hydroxyéthoxyméthyl)guanine.

18. Procédé selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est un agent antibactérien.

19. Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est la 2,4-diamino-5-(3',4' ,5'-triméthoxybenzyl)-pyrimidine ou un de ses analogues, la suifadimidine, la rifampicine, la tobramycine, l'acide fu-sidique, le chloramphénicol, la clindamycine ou l'érythro-mycine.

20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 19, caractérisé en ce que, dans le composé de formule (I)A ou son dérivé pharmaceutiquement acceptable,

B est un résidu de thymine.

21. Procédé selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que le composé de formule (I)A est la 3'-azido-3'-désoxythymidine.

22. Procédé selon la revendication 21, caractérisé en ce que le second ingrédient actif est la 9-(2-hydroxyéthoxyméthyl )guanine.

23. Procédé pour préparer une formulation pharmaceutique, caractérisé en ce qu'il comprend la mise en association d'un composé de formule (I)A, selon la revendication 7, ou d'un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé, avec un support pharmaceutiquement acceptable pour ce composé ou ce dérivé.

24. Procédé selon la revendication 23, caractérisé en ce que les ingrédients sont stériles.

25. Procédé selon la revendication 24, caractérisé en ce que la formulation est adaptée à l'administration par injection.

|ol^

26. Procédé selon la revendication 23, caractérise en ce que la formulation est adaptée à l'administration * orale.

27. Procédé selon la revendication 26, caractérisé 5 en ce que la formulation est sous forme de comprimé ou de capsule.

-28. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 27, caractérisé en ce qu'il comprend (i) la préparation du composé de formule (I)A, ou d'un de ses dérivés 10 pharmaceutiquement acceptables, par le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 6, et (ii) la mise en association dudit composé ou dérivé avec le second ingrédient actif et/ou un support pharmaceutiquement acceptable pour le composé ou dérivé et, s'il est présent, le second 15 ingrédient actif.