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WO2025154779A1 - ペプチドの製造方法、化合物、及びペプチド合成試薬 - Google Patents

ペプチドの製造方法、化合物、及びペプチド合成試薬

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WO2025154779A1
WO2025154779A1 PCT/JP2025/001249 JP2025001249W WO2025154779A1 WO 2025154779 A1 WO2025154779 A1 WO 2025154779A1 JP 2025001249 W JP2025001249 W JP 2025001249W WO 2025154779 A1 WO2025154779 A1 WO 2025154779A1
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宏明 田中
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Fujifilm Corp
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Pending legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
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    • C07C229/24—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having more than one carboxyl group bound to the carbon skeleton, e.g. aspartic acid
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    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
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    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present disclosure relates to a method for producing peptides, compounds, and peptide synthesis reagents.
  • Methods for producing peptides include the solid-phase method, the liquid-phase method, etc.
  • the liquid-phase method has good reactivity and allows purification of intermediate peptides by extraction, washing, isolation, etc. after the condensation reaction.
  • Asp/Glu-X combinations of aspartic acid or glutamic acid with other amino acids
  • Patent Document 1 discloses that aspartic acid/glutamic acid derivatives having linear side chain protecting groups can suppress the formation of aspartimide/glutarimide.
  • the inventors discovered that a high effect of inhibiting the formation of aspartimide/glutarimide can be achieved by introducing a branched structure into the protecting group of the aspartic acid side chain, and thus completed the present invention.
  • the present disclosure provides the following aspects.
  • a method for producing a peptide comprising a step of reacting a compound represented by the following formula (1) or the following formula (2) with an amino acid or an amino terminal of a peptide:
  • n is 1 or 2;
  • R 1 , R 2 and R 3 each independently represent an aliphatic hydrocarbon group which may have a substituent not containing an aromatic ring; at least one of R 1 , R 2 and R 3 has a branched structure; two of R 1 , R 2 and R 3 may form a ring; and
  • R 4 represents a protecting group for an amino group.
  • ⁇ 4> The method for producing the peptide according to ⁇ 2>, further comprising a C-terminal deprotection step of deprotecting a C-terminal protecting group, the deprotection being carried out using a trifluoroacetic acid solution of 10% by volume or less.
  • ⁇ 5> The method for producing a peptide according to any one of ⁇ 2> to ⁇ 4>, wherein the C-terminal protected amino acid or the C-terminal protected peptide has a C-terminal protecting group which has an aliphatic hydrocarbon group having 12 or more carbon atoms.
  • a numerical range expressed using "to” means a range that includes the numerical values before and after "to" as the lower and upper limits.
  • the upper or lower limit of one numerical range may be replaced with the upper or lower limit of another numerical range.
  • the upper or lower limit of the numerical range may be replaced with a value shown in the examples.
  • the term "process” includes not only an independent process, but also a process that cannot be clearly distinguished from other processes, as long as the intended purpose of the process is achieved.
  • an "alkyl group” includes not only an alkyl group that does not have a substituent (an unsubstituted alkyl group) but also an alkyl group that has a substituent (a substituted alkyl group).
  • Chemical structures may be written as simplified structures in which hydrogen atoms are omitted. Combinations of two or more preferred aspects are more preferred aspects.
  • n is 1 or 2;
  • R 1 , R 2 and R 3 each independently represent an aliphatic hydrocarbon group which may have a substituent not containing an aromatic ring; at least one of R 1 , R 2 and R 3 has a branched structure; two of R 1 , R 2 and R 3 may form a ring; and
  • R 4 represents a protecting group for an amino group.
  • the aliphatic hydrocarbon group may be saturated or unsaturated and may be linear, branched, or cyclic, provided that at least one of R 1 , R 2 , and R 3 has a branched structure.
  • at least one of R 1 , R 2 and R 3 is a butyl group having a branched structure which may have a substituent not containing an aromatic ring.
  • the aliphatic hydrocarbon group is preferably an alkyl group or an alkenyl group, and more preferably an alkyl group.
  • the alkyl group is preferably an alkyl group having a carbon number (also referred to as the "number of carbon atoms") of 1 to 10.
  • the number of carbon atoms in the alkyl group is more preferably 1 to 6, more preferably 1 to 4, and still more preferably 1 or 2. Specific examples include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, and tert-butyl.
  • the alkenyl group is preferably an alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms, a specific example being 1-propenyl.
  • the aliphatic hydrocarbon group may have a substituent that does not contain an aromatic ring.
  • the aliphatic hydrocarbon group that may have a substituent that does not contain an aromatic ring may be an aliphatic hydrocarbon group that may contain --O--.
  • the substituent not containing an aromatic ring is not particularly limited, but may be a cyclic aliphatic hydrocarbon group, a cyclic aliphatic hydrocarbon group containing --O-- in the ring, or an alkoxy group.
  • the alkoxy group is preferably an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms in the alkoxy group is more preferably 1 to 6, more preferably 1 to 4, and still more preferably 1 or 2. Specific examples include methoxy, ethoxy, and propoxy.
  • substituents that do not contain an aromatic ring include cyclohexyl, tetrahydropyranyl, or alkoxy having 1 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the amino-protecting group represented by R 4 include a formyl group, an acyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxycarbonyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzoyl group, an arylalkylcarbonyl group having 7 to 10 carbon atoms, an arylalkyloxycarbonyl group having 7 to 14 carbon atoms, a trityl group, a monomethoxytrityl group, a 1-(4,4-Dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidene)-3-methylbutyl group, a phthaloyl group, an N,N-dimethylaminomethylene group, a silyl group, and an alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms.
  • the MS spectrum was measured using an ACQUITY SQD LC/MS System (manufactured by Waters, ionization method: ESI (ElectroSpray Ionization) method).
  • the HPLC purity was measured using ACQUITY UPLC (Waters, column: CSH C18 1.7 ⁇ m).
  • the raw material (1) (10.0 g, 10.78 mmol) synthesized according to the example in International Publication WO2023/106356 was dissolved in dichloromethane (110 mL), and Fmoc-Phe-OH (1.5 molar equivalents), 4-dimethylaminopyridine (0.2 molar equivalents) and diisopropylcarbodiimide (1.5 molar equivalents) were added and stirred. After the condensation reaction was completed, 80% aqueous methanol solution (550 mL) was added and stirred, and the precipitate was filtered and dried under reduced pressure to obtain Fmoc-Phe-O-TAG (14.0 g, 100% yield).
  • Trifluoroacetic acid/3,6-dioxa-1,8-octanedithiol/triisopropylsilane/water (92.5/2.5/2.5/2.5:vol%, 10mL) was added to H 2 N-Asp(X)-Gly-Gly-Phe-O-TAG (384mg) at room temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.

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Abstract

本発明の課題は、アスパルチミド／グルタルイミド形成を十分に抑制できるペプチドの製造方法、高いアスパルチミド／グルタルイミド形成抑制効果を示す新規な化合物、及びアスパルチミド／グルタルイミドの形成を十分に抑制できるペプチド合成試薬を提供することである。本発明によれば、下記式（１）又は下記式（２）で表される化合物と、アミノ酸又はペプチドのアミノ末端とを反応させる工程を含む、ペプチドの製造方法が提供される。式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立に、芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの２つの基は環を形成してもよく、Ｒ４はアミノ基の保護基を示す。

Description

ペプチドの製造方法、化合物、及びペプチド合成試薬
　本開示は、ペプチドの製造方法、化合物、及びペプチド合成試薬に関する。
　ペプチドの製造方法としては、固相法、液相法などがある。液相法は、反応性が良好で、縮合反応の後に抽出洗浄、単離等により中間体ペプチドの精製ができる。
　ペプチドの製造において、アスパラギン酸やグルタミン酸と他のアミノ酸の組み合わせ（Ａｓｐ／Ｇｌｕ－Ｘ）は、分子内脱水反応によりアスパルチミド／グルタルイミドを形成することが知られている。アスパラギン酸／グルタミン酸を含有するペプチドを合成する際、それら残基が脱水されたペプチドが不純物として混在することにより、精製が煩雑になることや、又は目的物が得られなくなることが報告されている。例えば、非特許文献１には、アスパラギン酸を含有するペプチドの合成においてアスパルチミドを形成することにより、所望のペプチドの収量が低下することが報告されている。
　特許文献１には、鎖状の側鎖保護基を有するアスパラギン酸／グルタミン酸誘導体が、アスパルチミド／グルタルイミドの形成を抑制できることが開示されている。
ＲＳＣ　Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２０２３，４，２９２－２９９
欧州特許ＥＰ２８８６５３１号公報
　特許文献１に記載の方法ではアスパルチミド／グルタルイミドの形成抑制効果が不十分であることが分かっている。
　本開示の一実施形態が解決しようとする課題は、アスパルチミド／グルタルイミド形成を十分に抑制できるペプチドの製造方法を提供することである。
　また、本開示の他の一実施形態が解決しようとする課題は、高いアスパルチミド／グルタルイミド形成抑制効果を示す新規な化合物を提供することである。
　また、本開示の更に他の一実施形態が解決しようとする課題は、アスパルチミド／グルタルイミドの形成を十分に抑制できるペプチド合成試薬を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、アスパラギン酸側鎖の保護基に分岐構造を導入することで、高いアスパルチミド／グルタルイミド形成抑制効果が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。本開示によれば、以下の態様が提供される。
＜１＞　下記式（１）又は下記式（２）で表される化合物と、アミノ酸又はペプチドのアミノ末端とを反応させる工程を含む、ペプチドの製造方法。
式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立に、芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの２つの基は環を形成してもよく、Ｒ４はアミノ基の保護基を示す。
＜２＞　上記式（１）又は式（２）で表される化合物が、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドであり、
　上記式（１）又は式（２）で表される化合物をＣ末端保護アミノ酸又はＣ末端保護ペプチドと縮合させるペプチド鎖延長工程、及び、
　上記ペプチド鎖延長工程で得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる沈殿工程、
を更に含む、＜１＞に記載のペプチドの製造方法。
＜３＞　上記沈殿工程の後に、
　得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドのＮ末端を脱保護する工程、
　得られたＣ末端保護ペプチドのＮ末端に、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドを縮合させる工程、及び、
　得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる工程
をこの順で１回以上更に含む、＜２＞に記載のペプチドの製造方法。
＜４＞　Ｃ末端保護基を脱保護するＣ末端脱保護工程を更に含み、脱保護は１０体積％以下のトリフルオロ酢酸溶液を用いて行われる、＜２＞に記載のペプチドの製造方法。
＜５＞　上記Ｃ末端保護アミノ酸又はＣ末端保護ペプチドのＣ末端保護基は、炭素数１２以上の脂肪族炭化水素基を有する、＜２＞～＜４＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜６＞　芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基が、－Ｏ－を含んでもよい脂肪族炭化水素基である、＜１＞から＜５＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜７＞　芳香環を含まない置換基が、環式脂肪族炭化水素基、環中に－Ｏ－を含む環式脂肪族炭化水素基、又はアルコキシ基である、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜８＞　芳香環を含まない置換基が、シクロヘキシル、テトラヒドラピラニル、又は炭素数１～６のアルコキシである、＜１＞から＜７＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜９＞　Ｒ４が９－フルオレニルメチルオキシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルである、＜１＞から＜８＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜１０＞　Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、芳香環を含まない置換基を有してもよい、分岐構造を有するブチル基である、＜１＞から＜９＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜１１＞　ｎが１である、＜１＞から＜１０＞の何れか一に記載のペプチドの製造方法。
＜１２＞　下記式（１）又は下記式（２）で表される化合物：
式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立に、芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの２つの基は環を形成してもよく、Ｒ４はアミノ基の保護基を示す。
＜１３＞　芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基が、－Ｏ－を含んでもよい脂肪族炭化水素基である、＜１２＞に記載の化合物。
＜１４＞　芳香環を含まない置換基が、環式脂肪族炭化水素基、環中に－Ｏ－を含む環式脂肪族炭化水素基、又はアルコキシ基である、＜１２＞又は＜１３＞に記載の化合物。
＜１５＞　芳香環を含まない置換基が、シクロヘキシル、テトラヒドラピラニル、又は炭素数１～６のアルコキシである、＜１２＞から＜１４＞の何れか一に記載の化合物。
＜１６＞　Ｒ４が９－フルオレニルメチルオキシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルである、＜１２＞から＜１５＞の何れか一に記載の化合物。
＜１７＞　Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、芳香環を含まない置換基を有してもよい、分岐構造を有するブチル基である、＜１２＞から＜１６＞の何れか一に記載の化合物。
＜１８＞　ｎが１である、＜１２＞から＜１７＞の何れか一に記載の化合物。
＜１９＞　＜１２＞から＜１８＞の何れか一に記載の化合物を含む、ペプチド合成試薬。
　本発明の一実施形態によれば、アスパルチミド／グルタルイミド形成を十分に抑制できるペプチドの製造方法を提供することができる。
　また、本発明の他の一実施形態によれば、高いアスパルチミド／グルタルイミド形成抑制効果を示す新規な化合物を提供することができる。
　また、本発明の更に他の一実施形態によれば、アスパルチミド／グルタルイミドの形成を十分に抑制できるペプチド合成試薬を提供することができる。
　以下、本開示の内容について詳細に説明する。以下に記載する構成要件の説明は、本開示の代表的な実施態様に基づいてなされることがあるが、本開示はそのような実施態様に限定されるものではない。
　本明細書において、特に断らない限り、各用語は次の意味を有する。
　「～」を用いて表される数値範囲は、「～」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
　本明細書中に段階的に記載されている数値範囲において、一つの数値範囲で記載された上限値又は下限値は、他の段階的な記載の数値範囲の上限値又は下限値に置き換えてもよい。また、本明細書中に記載されている数値範囲において、その数値範囲の上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。
　「工程」との語は、独立した工程だけでなく、他の工程と明確に区別できない場合であっても工程の所期の目的が達成されれば、本用語に含まれる。
　基（原子団）の表記において、置換及び無置換を記していない表記は、置換基を有さないものと共に置換基を有するものをも包含するものである。例えば「アルキル基」とは、置換基を有さないアルキル基（無置換アルキル基）のみならず、置換基を有するアルキル基（置換アルキル基）をも包含する。
　化学構造式は、水素原子を省略した簡略構造式で記載する場合もある。
　２以上の好ましい態様の組み合わせは、より好ましい態様である。
　本開示に係るアミノ酸及びペプチドが、ヒドロキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルボニル基、アミド基、グアニジル基、メルカプト基等を有する場合、これらの基は保護されていてもよく、反応後に必要に応じて保護基を除去することにより目的化合物を得ることができる。
　ヒドロキシ基の保護基としては、例えば、アルキル基、アリール基、トリチル基、炭素数７～１０のアリールアルキル基、ホルミル基、炭素数１～６のアシル基、ベンゾイル基、炭素数７～１０のアリールアルキルカルボニル基、２－テトラヒドロピラニル基、２－テトラヒドロフラニル基、シリル基、炭素数２～６のアルケニル基等が挙げられる。これらの基は、ハロゲン原子、炭素数１～６のアルキル基、炭素数１～６のアルコキシ基、及び、ニトロ基よりなる群から選ばれる１個～３個の置換基で置換されていてもよい。
　アミノ基の保護基としては、例えば、ホルミル基、炭素数１～６のアシル基、炭素数１～６のアルコキシカルボニル基、ベンゾイル基、炭素数７～１０のアリールアルキルカルボニル基、炭素数７～１４のアリールアルキルオキシカルボニル基、トリチル基、モノメトキシトリチル基、1-(4,4-Dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidene)-3-methylbutyl基、フタロイル基、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチレン基、シリル基、炭素数２～６のアルケニル基等が挙げられる。これらの基は、ハロゲン原子、炭素数１～６のアルコキシ基、及び、ニトロ基よりなる群から選ばれる１個～３個の置換基で置換されていてもよい。
　カルボキシ基の保護基としては、例えば、上記ヒドロキシ基の保護基、トリチル基等が挙げられる。
　カルボニル基の保護基としては、例えば、環状アセタール（例、１，３－ジオキサン）、非環状アセタール（例、ジ（炭素数１～６のアルキル）アセタール）等が挙げられる。
　アミド基の保護基としては例えばトリチル基等が挙げられる。
　グアニジル基の保護基としては、例えば、２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル基、２，３，４，５，６－ペンタメチルベンゼンスルホニル基、トシル基、ニトロ基等が挙げられる。
　メルカプト基（チオール基）の保護基としては、例えば、トリチル基、４－メチルベンジル基、アセチルアミノメチル基、ｔ－ブチル基、ｔ－ブチルチオ基等が挙げられる。
　上記保護基の除去方法は、公知の方法、例えば、ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄＳｏｎｓ刊（１９８０）に記載の方法等に準じて行えばよい。酸、塩基、紫外光、ヒドラジン、フェニルヒドラジン、Ｎ－メチルジチオカルバミン酸ナトリウム、テトラブチルアンモニウムフルオリド、酢酸パラジウム、トリアルキルシリルハライドを使用する方法、還元法が用いられる。
　「アミノ酸」とは、α、β又はγアミノ酸であり、天然型アミノ酸に限定されず、非天然型アミノ酸であってもよい。またヒドロキシカルボン酸などのアミノ酸類縁体であってもよい。
＜式（１）又は下記式（２）で表される化合物＞
　本発明のペプチドの製造方法においては、下記式（１）又は下記式（２）で表される化合物を使用する。
式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立に、芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの２つの基は環を形成してもよく、Ｒ４はアミノ基の保護基を示す。
　脂肪族炭化水素基は、飽和でも不飽和でもよく、直鎖、分岐、又は環状のいずれでもよい。ただし、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有する。
　好ましくは、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、芳香環を含まない置換基を有してもよい、分岐構造を有するブチル基である。
　脂肪族炭化水素基としては、好ましくは、アルキル基又はアルケニル基であり、より好ましくはアルキル基である。
　アルキル基は、炭素数（「炭素原子数」ともいう。）１～１０のアルキル基が好ましい。アルキル基の炭素数は、１～６がより好ましく、１～４がより好ましく、１又は２がより好ましい。具体例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等が挙げられる。
　アルケニル基は、炭素数２～６のアルケニル基が好ましい。具体例としては、１－プロぺニルが挙げられる。
　脂肪族炭化水素基は、芳香環を含まない置換基を有してもよい。芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基としては、－Ｏ－を含んでもよい脂肪族炭化水素基でもよい。
　芳香環を含まない置換基としては、特に限定されないが、環式脂肪族炭化水素基、環中に－Ｏ－を含む環式脂肪族炭化水素基、又はアルコキシ基である。
　アルコキシ基としては、炭素数１～１０のアルコキシ基が好ましい。アルコキシ基の炭素数は、１～６がより好ましく、１～４がより好ましく、１又は２がより好ましい。具体例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシが挙げられる。
　芳香環を含まない置換基の特に好ましい具体例としては、シクロヘキシル、テトラヒドラピラニル、又は炭素数１～６のアルコキシである。
　Ｒ４が示すアミノ基の保護基としては、例えば、ホルミル基、炭素数１～６のアシル基、炭素数１～６のアルコキシカルボニル基、ベンゾイル基、炭素数７～１０のアリールアルキルカルボニル基、炭素数７～１４のアリールアルキルオキシカルボニル基、トリチル基、モノメトキシトリチル基、1-(4,4-Dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidene)-3-methylbutyl基、フタロイル基、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチレン基、シリル基、炭素数２～６のアルケニル基等が挙げられる。これらの基は、ハロゲン原子、炭素数１～６のアルコキシ基、及び、ニトロ基よりなる群から選ばれる１個～３個の置換基で置換されていてもよい。Ｒ４が示すアミノ基の保護基の特に好ましい具体例としては、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルが挙げられる。
　式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、好ましくはｎは１である。
　式（１）又は下記式（２）で表される化合物の具体例を以下に示す。
　式（１）又は式（２）で表される化合物は、ペプチド合成試薬として使用することができる。ペプチド合成については後記する。
＜式（１）又は式（２）で表される化合物の製造方法＞
　式（１）又は式（２）で表される化合物の製造方法としては、特に限定されないが、公知の方法を参照して製造することができる。
　式（１）又は式（２）で表される化合物の製造に用いる原料化合物は、特に述べない限り、市販されているものを用いてもよいし、公知の方法又はこれらに準ずる方法に従って製造することもできる。
　また、必要に応じ、製造した式（１）又は式（２）で表される化合物は公知の精製方法により、精製してもよい。例えば、再結晶、カラムクロマトグラフィー等によって単離及び精製する方法、及び、溶液温度を変化させる手段や溶液組成を変化させる手段等によって再沈殿により精製する方法等を行うことができる。
　式（１）又は式（２）で表される化合物の合成方法は、特に限定されるものではないが、例えば、以下のスキームに従って合成できる。
　式中、Ｒ１～Ｒ４及びｎは本明細書に定義した通りである。ＤＣＣは、Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジイミドを示し、ＤＭＡＰは、４－ジメチルアミノピリジンを示し、ｒ．ｔ．は室温を示す。
＜ペプチドの製造方法＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、式（１）又は式（２）で表される化合物と、アミノ酸又はペプチドのアミノ末端とを反応させる工程を含む。アミノ酸又はペプチドは、樹脂などの固相担体に結合されているものでもよい。
　本開示に係るペプチドの製造方法においては、好ましくは、式（１）又は式（２）で表される化合物が、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドであり、
　上記式（１）又は式（２）で表される化合物をＣ末端保護アミノ酸又はＣ末端保護ペプチドと縮合させるペプチド鎖延長工程、及び、
　上記ペプチド鎖延長工程で得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる沈殿工程、
を更に含むことが好ましい。
　本発明においては、上記の沈殿工程の後に、
　得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドのＮ末端を脱保護する工程、
　得られたＣ末端保護ペプチドのＮ末端に、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドを縮合させる工程、及び、
　得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる工程
をこの順で１回以上更に含むことが好ましい。
　なお、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドとはＮ末端のみが保護されたアミノ酸又はペプチドであり、Ｎ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸又はペプチドとはＮ末端及びＣ末端が保護されたアミノ酸又はペプチドである。
　各工程におけるアミノ基とカルボキシ基とのペプチド結合の形成反応（縮合反応）、保護基の脱保護は、公知の方法により行うことができる。例えば、国際公開第2020/175473号及び国際公開第2020/175473号が参照され援用され、本願明細書に組み込まれる。
　以下、上述した各工程について詳細に説明する。
＜Ｃ末端保護工程＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、アミノ酸又はペプチドのカルボキシ基又はアミド基をＣ末端保護基で保護するＣ末端保護工程を含むことが好ましい。
　Ｃ末端保護基としては、炭素数１２以上の脂肪族炭化水素基を有するものが好ましく、好ましい炭素数は１５以上であり、より好ましくは２０～３０である。Ｃ末端保護基に脂肪族炭化水素基が複数ある場合、それらの炭素数の合計は、３０～８０が好ましく、３６～８０がより好ましい。Ｃ末端保護基は、環構造を有することが好ましく、縮合多環、芳香族複素環又はナフタレン環を有することが好ましい。
　Ｃ末端保護基としては、国際公開第2020/175473号の式（１）で表される芳香族複素環化合物が好ましい。かかる化合物としては、国際公開第2020/175473号が参照され、本願明細書に組み込まれる。
　Ｃ末端保護基としては、国際公開第2020/175472号の式（１）で表される縮合多環芳香族炭化水素化合物も好ましい。かかる化合物としては、国際公開第2020/175472号が参照され、本願明細書に組み込まれる。
　Ｃ末端保護基としては、国際公開第2020/262259号（特願2019-122492及びそれを基礎とする特許出願）に開示の化合物でもよく、国際公開第2020/262259号（特願2019-122492及びそれを基礎とする特許出願）が参照され、本願明細書に組み込まれる。
　上記Ｃ末端保護工程に用いられるアミノ酸又はペプチドとしては、特に制限はないが、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドが好ましく、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＦｍｏｃ保護ペプチドがより好ましい。
　また、上記Ｃ末端保護工程に用いられるアミノ酸又はペプチドにおけるＣ末端部分以外のヒドロキシ基、アミノ基、カルボニル基、カルボキシル基、アミド基、イミダゾール基、インドール基、グアニジル基、メルカプト基等は保護基により保護されていることが好ましい。
　Ｃ末端保護基の結合部位が－ＯＨ又は－ＳＨである場合、反応に影響を及ぼさない溶媒中、縮合添加剤（縮合活性化剤）存在下、縮合剤を添加するか、酸触媒中で反応させることが好ましい。
　Ｃ末端保護基の結合部位が－ＮＨＲ１８（Ｒ１８は水素原子、アルキル基、アリールアルキル基又はヘテロアリールアルキル基）である場合、縮合添加剤存在下、縮合剤を添加するか、縮合剤と塩基とを反応させることが好ましい。縮合活性化剤、縮合剤、酸触媒としては、国際公開第2020/175473号及び国際公開第2020/175473号が参照され援用され、本願明細書に組み込まれる。
　縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤が、本開示においても制限なく用いることができ、これに限定されないが、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、その塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）、及び、ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢｏｐ）等を挙げることができる。
　中でも、ＤＩＣ、ＥＤＣ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又は、ＣＯＭＵが好ましい。
　縮合剤の使用量は、基質１モル当量に対して、１モル当量～１０モル当量であることが好ましく、１モル当量～５モル当量であることがより好ましい。
　縮合反応に用いる酸触媒としては、ペプチド合成において一般的に用いられる酸触媒を制限なく用いることができ、例えば、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等を挙げることができる。
　中でもメタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸が好ましい。
　酸触媒の使用量は、基質１モル当量に対して、１モル当量～１０モル当量であることが好ましく、１モル当量～５モル当量であることがより好ましい。
　上記Ｃ末端保護工程において、反応を促進し、ラセミ化などの副反応を抑制するため、縮合活性化剤を添加することが好ましい。
　縮合活性化剤とは、縮合剤との共存化で、アミノ酸を、対応する活性エステル、酸無水物などに導いて、ペプチド結合（アミド結合）を形成させやすくする試薬である。
　縮合活性化剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる活性化剤を制限なく用いることができ、例えば、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ－メチルイミダゾール、ボロン酸誘導体、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、エチル　１－ヒドロキシトリアゾール－４－カルボキシレート（ＨＯＣｔ）、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、３－ヒドロキシ－１，２，３－ベンゾトリアゾジン－４（３Ｈ）－オン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシイミド（ＨＯＮｂ）、ペンタフルオロフェノール、エチル（ヒドロキシイミノ）シアノアセタート（Ｏｘｙｍａ）等を挙げることができる。中でも、４－ジメチルアミノピリジン、ＨＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＳｕ、ＨＯＮｂ、又は、Ｏｘｙｍａが好ましい。
　活性化剤の使用量は、基質１モル当量に対して、０モル当量を超え４．０モル当量であることが好ましく、０．１モル当量～１．５モル当量であることがより好ましい。
　溶媒としては、一般的な有機溶媒を反応に用いることができる。具体的にはクロロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素類；１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、シクロペンチルメチルエーテル等の非極性有機溶媒等が挙げられる。これらの溶媒は２種以上を混合して用いてもよい。また、上記ハロゲン化炭素類や非極性有機溶媒に、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類；アセトン、２－ブタノン等のケトン類；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチルピロリドン等のアミド類；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類を混合して用いてもよい。
　反応温度は、特に制限はないが、－１０℃～８０℃であることが好ましく、０℃～４０℃であることがより好ましい。反応時間は、特に制限はないが、１時間～３０時間であることが好ましい。
　また、上記Ｃ末端保護工程により得られたＮ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドは、精製してもよい。
　例えば、得られたＮ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸化合物又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを溶媒（反応溶媒、例えばＴＨＦ）に溶解させ、所望の有機合成反応を行った後に得られる生成物を単離する。そして、Ｎ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸化合物又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドが溶解している溶媒を変化させ（例、溶媒組成の変更、溶媒の種類の変更）、再沈殿させる。
　具体的には、Ｎ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドが溶解するような条件下にて反応を行う。反応後、溶媒を留去後、溶媒置換するか、溶媒を留去せずに、反応系へ極性溶媒を添加することによって、凝集物を沈殿化し不純物を淘汰する。
　置換溶媒又は極性溶媒としては、メタノール、アセトニトリル、水等の極性有機溶媒を単独又は混合して用いる。すなわち、Ｎ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドが溶解するような条件下にて反応を行い、反応後、溶媒置換としては、例えば溶解にはハロゲン化溶媒、ＴＨＦ等を用いて、沈殿化にはメタノール、アセトニトリルや水等の極性有機溶媒を用いる。
＜Ｎ末端脱保護工程＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、上記Ｃ末端保護工程で得られたＮ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドのＮ末端保護基を脱保護するＮ末端脱保護工程を含むことが好ましい。
　Ｎ末端の保護基としては、ペプチド化学等の技術分野で一般的に用いられる後述のアミノ基の保護基が使用可能である。本開示においては、Ｂｏｃ基、Ｃｂｚ基又はＦｍｏｃ基が好適である。
　脱保護条件は、当該一時保護基の種類により適宜選択される。例えば、Ｆｍｏｃ基の場合は、塩基で処理することにより行われ、Ｂｏｃ基の場合は、酸で処理することにより行われる。当該反応は、反応に影響を及ぼさない溶媒中で行われる。
　塩基としては、ジメチルアミン、ジエチルアミンなどの第二級アミンや、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）などの求核性のない有機塩基等が挙げられる。
　溶媒としては、上記の＜Ｃ末端保護工程＞において上述した溶媒を好適に用いることができる。
＜ペプチド鎖延長工程＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、上記Ｎ末端脱保護工程で得られたＣ末端保護アミノ酸又はＣ末端保護ペプチドのＮ末端に、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドを縮合させるペプチド鎖延長工程を含むことが好ましい。
　上記ペプチド鎖延長工程は、上述した縮合剤、縮合添加剤等を使用し、ペプチド化学の分野において一般的に用いられるペプチド合成条件下で好適に行われる。
　Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドとしては、特に制限はなく、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＦｍｏｃ保護ペプチドが好適である。
＜沈殿工程＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、上記ペプチド鎖延長工程で得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる沈殿工程を更に含むことが好ましい。
　沈殿工程は、上記Ｃ末端保護工程の精製（再沈殿）と同様にして行うことができる。
　具体的には、前段の反応後に反応溶媒を留去せずに、反応系へ極性溶媒を添加する。この場合、反応溶媒は非極性有機溶媒としてはＴＨＦを用い、極性溶媒はアセトニトリルを用いる。非極性有機溶媒と極性溶媒との使用割合（体積基準）は、１：１～１：１００が好ましく、１：３～１：５０がより好ましく、１：５～１：２０がさらに好ましい。この使用割合の場合、Ｎ末端保護Ｃ末端保護アミノ酸化合物又はＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを効率的に沈殿させることができ、目的物を効率的に精製することができる。
＜鎖延長＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、上記沈殿工程の後に、得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドのＮ末端を脱保護する工程、得られたＣ末端保護ペプチドのＮ末端に、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドを縮合させる工程、及び、得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿する工程をこの順で１回以上更に含むことが好ましい。
　上記３工程を繰り返し行うことにより、得られるペプチドの鎖延長を容易に行うことができる。
　上記３工程における各工程は、上述した対応する各工程と同様に行うことができる。
＜Ｃ末端脱保護工程＞
　本開示に係るペプチドの製造方法は、Ｃ末端保護基を脱保護するＣ末端脱保護工程を更に含むことが好ましい。
　上記Ｃ末端脱保護工程において、所望のアミノ酸残基数を有するＣ末端保護ペプチドにおける上記Ｃ末端保護基を除去することによって、最終目的物であるペプチドを得ることができる。
　Ｃ末端保護基の除去方法としては、酸性化合物を用いた脱保護方法が好ましく挙げられる。
　例えば、酸触媒を添加する方法や金属触媒を用いて水素添加する方法が挙げられる。酸触媒としては、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）、酢酸などが挙げられる。強酸で分解しないペプチドに対しては、ＴＦＡが好ましく、強酸で分解するペプチドに対しては、ＴＦＥ、ＨＦＩＰ又は酢酸が好ましい。酸の濃度は、伸長するアミノ酸の側鎖保護基及び脱保護条件に応じ、適宜選択することができる。
　例えば、ＴＦＡの濃度は、使用する溶媒の全体積に対し、５０体積％以下が好ましく、３０体積％以下がより好ましく、１０体積％以下がより好ましく、５体積％以下がより好ましく、１体積％以下が特に好ましい。下限値は、０．０１体積％が好ましく、０．１体積％がより好ましく、０．５体積％がより好ましい。
　脱保護時間は、５時間以下が好ましく、３時間以下がより好ましく、１時間以下がより好ましい。
　本開示に係るペプチドの製造方法により得られた最終目的物であるペプチドは、ペプチド化学で常用される方法に従って、単離精製することができる。例えば、反応混合物を抽出洗浄、晶析、クロマトグラフィーなどによって、最終目的物であるペプチドを単離精製することができる。
　本開示に係るペプチドの製造方法により製造されるペプチドの種類は特に限定されないが、ペプチドのアミノ酸残基数が、例えば、数十以下程度であることが好ましい。本開示に係るペプチドの製造方法によって得られるペプチドは、既存の又は未知の合成ペプチドや天然ペプチドと同様に、様々な分野、例えばこれに限定されないが、医薬、食品、化粧品、電子材料、バイオセンサー等の分野に利用できる。
　本開示に係るペプチドの製造方法は、次工程の反応に影響を及ぼさない範囲で上記沈殿工程を適宜省略することも可能である。
　以下に実施例を挙げて本発明の実施形態を更に具体的に説明する。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、及び、処理手順等は、本発明の実施形態の趣旨を逸脱しない限り、適宜、変更することができる。したがって、本発明の実施形態の範囲は以下に示す具体例に限定されない。なお、特に断りのない限り、「％」は質量基準である。また、室温とは、２５℃を意味する。
　特に記載のない場合、カラムクロマトグラフィーによる精製は、自動精製装置ＩＳＯＬＥＲＡ（Ｂｉｏｔａｇｅ社製）又は中圧液体クロマトグラフＹＦＬＣ－Ｗｐｒｅｐ２ＸＹ．Ｎ（山善（株）製）を使用した。
　特に記載のない場合、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおける担体は、ＳＮＡＰＫＰ－Ｓｉｌ　Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ社製）、ハイフラッシュカラムＷ００１、Ｗ００２、Ｗ００３、Ｗ００４又はＷ００５（山善（株）製）を使用した。
　カラムクロマトグラフィーに用いる溶離液における混合比は、体積比である。例えば、「ヘキサン：酢酸エチルの勾配溶離＝５０：５０～０：１００」は、５０％ヘキサン／５０％酢酸エチルの溶離液を最終的に０％ヘキサン／１００％酢酸エチルの溶離液へ変化させたことを意味する。
　また、例えば、「ヘキサン：酢酸エチルの勾配溶離＝５０：５０～０：１００、メタノール：酢酸エチルの勾配溶離＝０：１００～２０：８０」は、５０％ヘキサン／５０％酢酸エチルの溶離液を０％ヘキサン／１００％酢酸エチルの溶離液へ変化させた後、最終的に２０％メタノール／８０％酢酸エチルの溶離液へ変化させたことを意味する。
　ＭＳスペクトルは、ＡＣＱＵＩＴＹ　ＳＱＤ　ＬＣ／ＭＳ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗａｔｅｒｓ社製、イオン化法：ＥＳＩ（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ　Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）法）を用いて測定した。
　ＨＰＬＣ純度は、ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社製、カラム：ＣＳＨ　Ｃ１８　１．７μｍ）を用いて測定した。
　以下の化合物を使用した。比較例１の化合物は東京化成工業社（カタログ番号：Ｂ３１５０）より、比較例２の化合物はシグマアルドリッチ社（カタログ番号：８．５２４１８）より購入したものを使用した。
＜実施例１の化合物の合成＞
化合物（１－２）の合成
　２００ｍＬ容三口ナスフラスコに、イソ吉草酸クロリド（化合物１－１，東京化成工業社製）２．０３ｇ、テトラヒドロフラン（超脱水グレード，富士フイルム和光純薬社製）４０ｍＬを入れ、－７８℃にてｎ－ブチルリチウム ヘキサン溶液（１．６ｍｏｌ／Ｌ，関東化学社製）を滴下した後、室温にて１時間攪拌した。反応終了後、飽和塩化アンモウニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出操作を行った。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥した後、不溶物を濾別した。濾液を減圧下濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）にて精製し、乾燥することで化合物（１－２）２．７８ｇを無色透明シロップ状物として得た。
化合物（１－３）の合成
　５０ｍＬ容ナスフラスコに、化合物（１－２）８００ｍｇ、Ｎ－ベンジルオキシカルボニル－Ｌ－アスパラギン酸４－ベンジル（東京化成工業社製）５００ｍｇ、４－ジメチルアミノピリジン（東京化成工業社製）３４ｍｇ、ジクロロメタン（富士フイルム和光純薬社製）１０ｍＬを入れ、室温にてＮ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジイミド（富士フイルム和光純薬社製）１．１７ｇを４回に分け一時間おきに加えた。さらに室温にて１時間攪拌した後、酢酸２４７μＬを加えた。不溶物を濾別した後、濾液を減圧下濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）にて精製し、乾燥することで化合物（１－３）１１１ｍｇを無色透明シロップ状物として得た。
得られた化合物（１－３）の質量：［Ｍ＋Ｎａ］５６３
化合物（１－４）の合成
　５０ｍＬ容耐圧反応容器に、化合物（１－３）１１１ｍｇ、１０％パラジウム－活性炭素（約５５％水湿潤品，富士フイルム和光純薬社製）２８ｍｇ、テトラヒドロフラン（富士フイルム和光純薬社製）１．０ｍＬ、エタノール（富士フイルム和光純薬社製）１．２ｍＬを入れ、水素雰囲気下、室温にて１０時間攪拌した。反応終了後、セライトを用いた濾過操作により不溶物を濾別した。得られた濾液を減圧下濃縮、乾燥することで化合物（１－４）６５ｍｇを白色固体として得た。
得られた化合物（１－４）の質量：［Ｍ－Ｈ］３１４
実施例（１）の合成
　５０ｍＬ容ナスフラスコに、化合物（１－４）６５ｍｇ、炭酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）９０ｍｇ、テトラヒドロフラン（富士フイルム和光純薬社製）１．３ｍＬ、蒸留水１．３ｍＬを入れ、室温にてＮ－［（９Ｈ－フルオレン－9－イルメトキシ)カルボニルオキシ］スクシンイミド（富士フイルム和光純薬社製）１０５ｍｇを加え、１時間攪拌した。反応終了後、飽和塩化アンモウニウム水溶液とクロロホルムを加え、有機層を分離した後、硫酸ナトリウムを用いて乾燥した。不溶物を濾別し、濾液を減圧下濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１０／１）にて精製し、乾燥することで実施例１の化合物５９ｍｇを白色アモルファスとして得た。
得られた実施例１の化合物の質量：［Ｍ＋Ｎａ］５６１
＜比較データ＞
　化合物として実施例、比較例１又は比較例２の化合物を使用し、モデル配列としてＨ２Ｎ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－ＯＨを合成した際のアスパルチミド（Ａｓｉ）生成率、及び目的物純度をウルトラパフォーマンス液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）の面積値を算出することにより取得した。モデル配列の合成には国際公報ＷＯ２０２３／１０６３５６号公報に記載の置換ベンジル化合物をＣ末端に導入する手法を用いることができる。
アスパルチミド（Ａｓｉ）生成率
評価Ａ：Ａｓｉ生成率が１％未満
評価Ｂ：Ａｓｉ生成率が１％以上３％未満
評価Ｃ：Ａｓｉ生成率が３％以上５％未満
評価Ｄ：Ａｓｉ生成率が５％以上
目的物純度
評価Ａ：目的物純度が９５％以上
評価Ｂ：目的物純度が９３％以上９５％未満
評価Ｃ：目的物純度が９０％以上９３％未満
評価Ｄ：目的物純度が９０％未満
　アスパルチミド（Ａｓｉ）生成率及び目的物純度を評価した結果を以下の表に示す。
＜保護ペプチド（４残基ペプチド：Ｈ２Ｎ－Ａｓｐ（Ｘ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－ＯＨの合成＞
　なお、上述した以外の各略称の詳細を、以下に示す。
　Ｐｈｅ：フェニルアラニン残基
　Ｇｌｙ：グリシン残基
　Ａｓｐ（Ｘ）：本発明の保護基を有するアスパラギン残基
（Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－Ｏ－ＴＡＧの合成）
　国際公報ＷＯ２０２３／１０６３５６号公報の実施例に従って合成した原料（１）（１０．０ｇ，１０．７８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１１０ｍＬ）中に溶解させ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ（１．５モル当量）、４－ジメチルアミノピリジン（０．２モル当量）とジイソプロピルカルボジイミド（１．５モル当量）を添加して撹拌した。縮合反応完結後、８０％メタノール水溶液（５５０ｍＬ）を加えて撹拌し、沈殿物をろ取、減圧乾燥させることにより、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－Ｏ－ＴＡＧ（１４．０ｇ、収率１００％）を得た。
（Ｈ２Ｎ－Ａｓｐ（Ｘ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｏ－ＴＡＧの合成）
　Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－Ｏ－ＴＡＧを用いて、Ｆｍｏｃ基の除去と、下記表２に示す保護アミノ酸の縮合反応とを繰り返し、ペプチド配列を伸長した。
（ペプチドの脱保護）
　Ｈ２Ｎ－Ａｓｐ（Ｘ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｏ－ＴＡＧ（３８４ｍｇ）に、室温下、トリフルオロ酢酸／３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール／トリイソプロピルシラン／水（９２．５／２．５／２．５／２．５：ｖｏｌ％、１０ｍＬ）を加え、室温で１時間攪拌した。氷冷下のシクロプロピルメチルエーテル（５０ｍＬ）に反応液を滴下して沈殿させ、上澄み除去とシクロプロピルメチルエーテルによる洗浄を繰り返し、Ｈ２Ｎ－Ａｓｐ（Ｘ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－ＯＨ（１０２ｍｇ）を得た。
　ＨＰＬＣ純度（２２０ｎｍ）：９５％
　ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／Ｚ）：３９５（Ｍ＋Ｈ）

Claims (19)

  1. 　下記式（１）又は下記式（２）で表される化合物と、アミノ酸又はペプチドのアミノ末端とを反応させる工程を含む、ペプチドの製造方法。
    式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立に、芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの２つの基は環を形成してもよく、Ｒ４はアミノ基の保護基を示す。
  2. 　前記式（１）又は式（２）で表される化合物が、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドであり、
    　前記式（１）又は式（２）で表される化合物をＣ末端保護アミノ酸又はＣ末端保護ペプチドと縮合させるペプチド鎖延長工程、及び、
    　前記ペプチド鎖延長工程で得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる沈殿工程、
    を更に含む、請求項１に記載のペプチドの製造方法。
  3. 　前記沈殿工程の後に、
    　得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドのＮ末端を脱保護する工程、
    　得られたＣ末端保護ペプチドのＮ末端に、Ｎ末端保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチドを縮合させる工程、及び、
    　得られたＮ末端保護Ｃ末端保護ペプチドを沈殿させる工程
    をこの順で１回以上更に含む、請求項２に記載のペプチドの製造方法。
  4. 　Ｃ末端保護基を脱保護するＣ末端脱保護工程を更に含み、脱保護は１０体積％以下のトリフルオロ酢酸溶液を用いて行われる、請求項２に記載のペプチドの製造方法。
  5. 　前記Ｃ末端保護アミノ酸又はＣ末端保護ペプチドのＣ末端保護基は、炭素数１２以上の脂肪族炭化水素基を有する、請求項２に記載のペプチドの製造方法。
  6. 　芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基が、－Ｏ－を含んでもよい脂肪族炭化水素基である、請求項１から５の何れか一項に記載のペプチドの製造方法。
  7. 　芳香環を含まない置換基が、環式脂肪族炭化水素基、環中に－Ｏ－を含む環式脂肪族炭化水素基、又はアルコキシ基である、請求項１から５の何れか一項に記載のペプチドの製造方法。
  8. 　芳香環を含まない置換基が、シクロヘキシル、テトラヒドラピラニル、又は炭素数１～６のアルコキシである、請求項１から５の何れか一項に記載のペプチドの製造方法。
  9. 　Ｒ４が９－フルオレニルメチルオキシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルである、請求項１から５の何れか一項に記載のペプチドの製造方法。
  10. 　Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、芳香環を含まない置換基を有してもよい、分岐構造を有するブチル基である、請求項１から５の何れか一項に記載のペプチドの製造方法。
  11. 　ｎが１である、請求項１から５の何れか一項に記載のペプチドの製造方法。
  12. 　下記式（１）又は下記式（２）で表される化合物：
    式（１）及び式（２）中、ｎは１又は２であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立に、芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも一つは分岐構造を有し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの２つの基は環を形成してもよく、Ｒ４はアミノ基の保護基を示す。
  13. 　芳香環を含まない置換基を有してもよい脂肪族炭化水素基が、－Ｏ－を含んでもよい脂肪族炭化水素基である、請求項１２に記載の化合物。
  14. 　芳香環を含まない置換基が、環式脂肪族炭化水素基、環中に－Ｏ－を含む環式脂肪族炭化水素基、又はアルコキシ基である、請求項１２に記載の化合物。
  15. 　芳香環を含まない置換基が、シクロヘキシル、テトラヒドラピラニル、又は炭素数１～６のアルコキシである、請求項１２に記載の化合物。
  16. 　Ｒ４が９－フルオレニルメチルオキシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルである、請求項１２から１５の何れか一項に記載の化合物。
  17. 　Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、芳香環を含まない置換基を有してもよい、分岐構造を有するブチル基である、請求項１２から１５の何れか一項に記載の化合物。
  18. 　ｎが１である、請求項１２から１５の何れか一項に記載の化合物。
  19. 　請求項１２から１５の何れか一項に記載の化合物を含む、ペプチド合成試薬。
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