[go: up one dir, main page]

WO2025094699A1 - 抗ｃｄ３８－ｃａｒを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物 - Google Patents

抗ｃｄ３８－ｃａｒを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物 Download PDF

Info

Publication number
WO2025094699A1
WO2025094699A1 PCT/JP2024/037114 JP2024037114W WO2025094699A1 WO 2025094699 A1 WO2025094699 A1 WO 2025094699A1 JP 2024037114 W JP2024037114 W JP 2024037114W WO 2025094699 A1 WO2025094699 A1 WO 2025094699A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cells
cell
car
immunocompetent
pluripotent stem
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
PCT/JP2024/037114
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
圭一朗 三原
雅英 高橋
裕次 服部
宏 河本
誠治 永野
貴紀 久保
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujita Health University
Kyoto University NUC
Original Assignee
Fujita Health University
Kyoto University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujita Health University, Kyoto University NUC filed Critical Fujita Health University
Publication of WO2025094699A1 publication Critical patent/WO2025094699A1/ja
Pending legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material

Definitions

  • the present invention relates to cytotoxic immunocompetent cells expressing anti-CD38-CAR, a method for producing the same, and a pharmaceutical composition containing the immunocompetent cells.
  • CD38 Cluster of Differentiation 38
  • CD38 is a transmembrane glycoprotein with a molecular weight of 45 kDa, and is a surface marker for plasma cells, pre-B cells, etc.
  • CD38 is involved in cell differentiation, activation, immune response control, apoptosis, etc., and is known to be expressed in T cells, B cells, etc. at the early stage of development and disappear with maturation, but is expressed again when activated.
  • CD38 is also expressed on normal cells, and is known to be more highly expressed on the surface of hematologic malignant tumor cells, such as myeloma (e.g., multiple myeloma) cells, malignant lymphoma cells, and leukemia cells, than on normal cells (e.g., Non-Patent Document 1).
  • CAR-T therapy which uses CAR-T cells produced by introducing and expressing a gene encoding a chimeric antigen receptor (CAR) that recognizes cancer cell surface antigens into T cells collected from a patient, has been rapidly progressing as a form of cancer immunotherapy (see, for example, Patent Document 1).
  • CAR chimeric antigen receptor
  • CD38 is often highly expressed in hematologic malignant tumor cells, and therefore may be a candidate cancer cell surface antigen in CAR gene therapy such as CAR-T therapy.
  • CAR-T therapy cytotoxic immunocompetent cells
  • killer cells cytotoxic immunocompetent cells
  • anti-CD38-CAR killer cells prepared by transferring an anti-CD38-CAR gene into killer cells may undergo self-killing by fratricide in vitro or ex vivo, and their anti-tumor activity may be impaired.
  • the expression of CD38 can be suppressed by RNA interference using siRNA, DNA editing using Crispr-Cas9, or the like.
  • the primary objective of the present invention is to provide anti-CD38-CAR killer cells that can be easily produced.
  • the inventors attempted to produce anti-CD38-CAR killer cells using killer cells obtained by inducing differentiation of pluripotent stem cells, and found that killer cells derived from pluripotent stem cells were CD38 negative even after gene transfer, and that it was possible to obtain anti-CD38-CAR killer cells while avoiding or suppressing fratricide, leading to the completion of the present invention.
  • One aspect of the present invention provides a cytotoxic immunocompetent cell derived from a pluripotent stem cell, in which a chimeric antigen receptor comprising an extracellular antigen-binding domain, a transmembrane domain, and an intracellular signaling domain is expressed, and the extracellular antigen-binding domain recognizes CD38 as an antigen.
  • the pluripotent stem cells may be human induced pluripotent stem cells or human embryonic pluripotent stem cells.
  • the pluripotent stem cells may be pluripotent stem cells partially or completely deficient in HLA molecules.
  • the immunocompetent cells according to any one of [1] to [3] above may be T cells.
  • the immunocompetent cells according to any one of [1] to [4] above may be CD8 ⁇ heterodimer T cells.
  • the pluripotent stem cells may be pluripotent stem cells into which an exogenous TCR gene has been introduced.
  • the immunocompetent cells according to any one of [1] to [6] above may be negative for CD38 expression.
  • the CD38 may be human CD38.
  • the chimeric antigen receptor may comprise, linked in this order, the extracellular antigen-binding domain, the hinge domain, the transmembrane domain, the costimulatory domain, and the intracellular signaling domain.
  • the extracellular antigen-binding domain may comprise the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a homologous sequence thereof, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 or a homologous sequence thereof.
  • a pharmaceutical composition for treating or preventing a disease associated with expression of CD38 comprising the immunocompetent cell described in any one of [1] to [10] above.
  • the pharmaceutical composition according to [11] above may be used in combination with an anti-CD38 antibody drug.
  • a method for producing CAR-CD8 T cells derived from induced pluripotent stem cells comprising: preparing CD8 T cells induced to differentiate from induced pluripotent stem cells; and introducing a gene encoding a chimeric antigen receptor into the CD8 T cells, wherein the chimeric antigen receptor comprises an extracellular antigen-binding domain, a transmembrane domain, and an intracellular signaling domain, and the extracellular antigen-binding domain recognizes CD38 as an antigen.
  • anti-CD38-CAR killer cells with no or suppressed CD38 expression can be obtained by introducing an anti-CD38-CAR gene into killer cells derived from pluripotent stem cells.
  • FIG. 1 is a schematic diagram illustrating an example of a DNA construct comprising a gene encoding anti-CD38-CAR that can be used in the present invention.
  • FIG. 1 shows a schematic configuration of a retroviral vector comprising a gene encoding anti-CD38-CAR.
  • FIG. 1 shows the results of evaluating, by flow cytometry, the expression of the anti-CD38-CAR gene in cells used for the production of anti-CD38-CAR-reCTL in Experimental Example 3.
  • FIG. 1 shows the results of evaluating, by flow cytometry, the expression of CD38 in cells used for the production of anti-CD38-CAR-reCTL in Experimental Example 3.
  • This figure shows the results of evaluating the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against RPMI8226 cells at various E:T ratios in vitro.
  • This figure shows the results of evaluating the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against KMM1 cells at various E:T ratios in vitro.
  • This figure shows the results of time-dependent evaluation of the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against RPMI8226 cells in vitro.
  • This figure shows the results of time-dependent evaluation of the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against KMM1 cells in vitro.
  • FIG. 1 shows the results of evaluating the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against RPMI8226 cells in the presence of an anti-CD38 antibody drug.
  • This figure shows the results of evaluating the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against THP-1 cells in vitro.
  • This figure shows the results of evaluating the cytotoxic activity of anti-CD38-CAR-reCTL against HT cells in vitro.
  • FIG. 14 shows the amino acid sequences of SEQ ID NO:1 and SEQ ID NO:2.
  • DP cells double positive cells
  • DN cells double negative cells
  • CD4 negative CD8 negative T cells CD4 negative CD8 negative T cells
  • CD8 T cells and “CD8 SP cells” both refer to CD4 negative CD8 positive T cells.
  • CD8 encompasses both the CD8 ⁇ homodimer and the CD8 ⁇ heterodimer.
  • TCR means T cell receptor.
  • CTL cells means cytotoxic T cells. By “T cell” is meant a cell that expresses an antigen receptor called the T cell receptor (TCR) on its surface.
  • a cytotoxic immunocompetent cell (anti-CD38-CAR killer cell derived from a pluripotent stem cell) is provided, in which a chimeric antigen receptor including an extracellular antigen-binding domain, a transmembrane domain, and an intracellular signaling domain is expressed, and the extracellular antigen-binding domain recognizes CD38 as an antigen.
  • a long production period e.g., several weeks to several months
  • high production costs e.g., tens of millions of yen
  • the cells can be cryopreserved in the form of anti-CD38-CAR killer cells, making it possible to perform off-the-shelf storage.
  • the anti-CD38-CAR killer cells derived from the pluripotent stem cells are preferably CD38 negative.
  • negative means that the expression of the protein is not observed completely or substantially
  • positive can mean that the expression of the protein is observed completely or substantially.
  • the expression of a protein in a cell can be evaluated as positive (e.g., when the fluorescence intensity is clearly (in other words, significantly) distinguishable (e.g., when the fluorescence intensity is clearly higher) when the cell is treated with a fluorescently labeled antibody (e.g., a fluorescently labeled anti-G4S linker antibody, a fluorescently labeled anti-CD38 antibody) that specifically binds to the protein, compared to when the cell is treated with a fluorescently labeled antibody against an antigen that should not be present in the cell (so-called an isotype control antibody) in flow cytometry (FCM) analysis, and can be evaluated as negative when this is not the case.
  • a fluorescently labeled antibody e.g., a fluorescently labeled anti-G4S linker antibody, a fluorescently labeled anti-CD38 antibody
  • FCM flow cytometry
  • any immunocompetent cells having cytotoxic activity can be used as the cytotoxic immunocompetent cells (killer cells).
  • specific examples of killer cells include lymphocytes, monocytes, polymorphonuclear leukocytes, etc. Among these, lymphocytes are preferred, and killer T cells such as CD8 T cells (CTL), natural killer (NK) T cells, and ⁇ T cells, and natural killer (NK) cells are more preferred.
  • CTL CD8 T cells
  • NK natural killer
  • NK natural killer
  • the pluripotent stem cells are stem cells that have the pluripotency to differentiate into many cells present in the living body and also have the ability to self-renew.
  • the pluripotent stem cells are preferably mammalian pluripotent stem cells, and more preferably human pluripotent stem cells.
  • pluripotent stem cells examples include embryonic stem (ES) cells, embryonic stem (ntES) cells derived from cloned embryos obtained by nuclear transfer, embryonic germ (EG) cells, induced pluripotent stem (iPS) cells, cultured fibroblasts, and pluripotent cells derived from bone marrow stem cells (Muse cells).
  • ES embryonic stem
  • ntES embryonic stem
  • EG embryonic germ
  • iPS induced pluripotent stem
  • Muse cells pluripotent stem cells derived from bone marrow stem cells
  • iPS cells or ES cells are preferred, and iPS cells are more preferred.
  • the above-mentioned pluripotent stem cells may be pluripotent stem cells that are partially or completely deficient in HLA molecules.
  • Anti-CD38-CAR killer cells derived from such pluripotent stem cells can be prevented from being recognized as non-self by the patient's own killer T cells or helper T cells to which they are administered.
  • the deletion of HLA molecules can be achieved, for example, using genome editing technology.
  • the pluripotent stem cells may have an exogenous TCR gene introduced therein.
  • immunocompetent cells typically T cells
  • pluripotent stem cells e.g., TCR-iPS cells or TCR-ES cells
  • TCR-iPS cells e.g., TCR-iPS cells
  • TCR-ES cells e.g., TCR-ES cells
  • antigen recognition by the TCR e.g., antigen recognition present within cells
  • antigen recognition by the CAR e.g., antigen recognition present on the cell surface
  • the chimeric antigen receptor includes an extracellular antigen-binding domain, a transmembrane domain, and an intracellular signaling domain.
  • the CAR preferably includes an extracellular antigen-binding domain, a hinge domain, a transmembrane domain, a costimulatory domain, and an intracellular signaling domain, and these regions are linked in tandem in this order.
  • an anti-CD38 antibody or a functional portion thereof that recognizes CD38 as an antigen can be appropriately used.
  • a fusion protein in which the light chain (VL) variable region and the heavy chain (VH) variable region of anti-CD38 IgG are linked by a short linker peptide of, for example, about 10 to 25 amino acids is used as the extracellular antigen-binding domain.
  • the extracellular antigen-binding domain may contain the light chain (VL) variable region and the heavy chain (VH) variable region in this order toward the transmembrane domain, or may contain them in this order from the transmembrane domain.
  • CD38 is preferably mammalian CD38, and more preferably human CD38.
  • any suitable antibody capable of specifically binding to CD38 preferably an IgG antibody, can be used.
  • the extracellular antigen-binding domain comprises a VL variable region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:1 or a homologous sequence thereof.
  • the extracellular antigen-binding domain comprises a VH variable region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:2 or a homologous sequence thereof.
  • the scFv comprises a VL variable region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:1 or a homologous sequence thereof, and a VH variable region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:2 or a homologous sequence thereof.
  • the above-mentioned homologous sequence may have, for example, 90% or more, more preferably 95% or more, and even more preferably 98% or more sequence identity with the reference amino acid sequence (specifically, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2).
  • the homologous sequence may be a sequence in which 1 to 10, 8 or less, 5 or less, or 3 or less amino acids of the reference amino acid sequence have been substituted, deleted, or added with other amino acids.
  • the light chain and heavy chain complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 of the homologous sequence may have sufficiently high sequence identity (e.g., 3 or less, 2 or less, 1 or less, or 0 amino acid substitutions, deletions, or additions) with the light chain and heavy chain CDRs 1, 2, and 3 of the reference amino acid sequence, respectively.
  • the hinge domain, transmembrane domain, costimulatory domain, and intracellular signaling domain are not limited as long as the effects of the present invention can be obtained, and any appropriate domain can be adopted as each of the domains constituting the CAR.
  • the hinge domain is designed, for example, to provide space (length) and flexibility for the extracellular antigen-binding domain to access the target epitope.
  • the transmembrane domain can include, for example, the transmembrane domain of CD8, CD28, etc.
  • the costimulatory domain can include, for example, either or both of a domain derived from the 4-1BB domain and a domain derived from the CD28 domain.
  • the intracellular signaling domain can include, for example, a domain derived from the CD3 zeta domain.
  • Anti-CD38-CAR-iPS-CD8 T cells are typically CD4 negative and CD8 positive.
  • Anti-CD38-CAR-iPS-CD8 T cells can be obtained, for example, by preparing CD8 T cells induced to differentiate from iPS cells (preferably human iPS cells) and introducing and expressing a gene encoding a chimeric antigen receptor (anti-CD38-CAR) that recognizes CD38 as an antigen into the CD8 T cells.
  • iPS cells preferably human iPS cells
  • anti-CD38-CAR chimeric antigen receptor
  • CD8 T cells derived from pluripotent stem cells such as iPS cells are typically CD38 negative even after gene introduction, so by introducing a gene encoding anti-CD38-CAR, anti-CD38-CAR-iPS-CD8 T cells can be obtained simply and efficiently without causing the problem of fratricide.
  • the iPS cell-derived CD8 T cells are Step (1): Inducing differentiation of iPS cells to obtain a cell culture containing DN cells and DP cells; step (2): removing DN cells from the cell culture obtained in step (1); and step (3): differentiating DP cells in the cell culture obtained in step (2) into CD8 T cells.
  • the method may be obtained by a method comprising the steps of: According to the above method, it is possible to preferably obtain iPS cell-derived CD8 T cells that do not express CD38 even after stimulation.
  • the killer cells that do not express CD38 even after stimulation it is possible to easily and efficiently obtain anti-CD38-CAR killer cells without the need to suppress the expression of CD38 by RNA interference, genome editing, or the like, or to mask CD38 on the surface of the killer cells by co-incubating with an anti-CD38 antibody, or the like.
  • step (1) iPS cells are induced to differentiate to obtain a cell culture containing DN cells and DP cells.
  • the iPS cells used in step (1) may be iPS cells induced from T cells or somatic cells other than T cells.
  • the iPS cells are preferably human-derived iPS cells.
  • T cells to be induced into iPS cells T cells expressing CD3 and at least one molecule selected from the group consisting of CD4 and CD8 are preferably used.
  • human T cells include helper/regulatory T cells which are CD4 positive cells, cytotoxic T cells which are CD8 positive cells, naive T cells (CD45RA + CD62L + cells), central memory T cells (CD45RA - CD62L + cells), effector memory T cells (CD45RA - CD62L - cells), and terminal effector T cells (CD45RA + CD62L - cells).
  • Human T cells can be isolated from human tissues by known methods. Examples of human tissues include peripheral blood, lymph nodes, bone marrow, thymus, spleen, umbilical cord blood, and diseased tissues. Peripheral blood and umbilical cord blood are particularly preferred.
  • Known methods for isolating human T cells include, for example, flow cytometry using an antibody against a cell surface marker such as CD3 and a cell sorter.
  • the desired T cells can be isolated using the secretion of cytokines or the expression of functional molecules as indicators. In such cases, for example, T cells secrete different cytokines depending on whether they are Th1 type or Th2 type, so that T cells having the desired Th type can be selected using such cytokines as an indicator.
  • cytotoxic (killer) T cells can be isolated using the secretion or production of granzymes, perforin, and the like as indicators.
  • Somatic cells induced to iPS cells may be any animal cell (preferably a mammalian cell, including a human cell) excluding germline cells such as sperm, spermatocytes, eggs, oocytes, and ES cells, or pluripotent cells.
  • Somatic cells include fetal (offspring) somatic cells, neonatal (offspring) somatic cells, and somatic cells of mature healthy individuals or diseased individuals. They also include primary culture cells, passaged cells, and established cell lines.
  • somatic cells include differentiated cells, such as neural stem cells, hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, dental pulp stem cells, and other tissue stem cells (somatic stem cells), tissue progenitor cells, lymphocytes, epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, fibroblasts (skin cells, etc.), hair cells, liver cells, gastric mucosa cells, intestinal cells, spleen cells, pancreatic cells (exocrine pancreatic cells, etc.), brain cells, lung cells, kidney cells, and adipocytes.
  • differentiated cells such as neural stem cells, hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, dental pulp stem cells, and other tissue stem cells (somatic stem cells), tissue progenitor cells, lymphocytes, epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, fibroblasts (skin cells, etc.), hair cells, liver cells, gastric mucosa cells, intestinal cells, spleen cells, pancre
  • iPS cells are induced from the T cells or somatic cells.
  • a method for obtaining iPS cells from T cells or somatic cells for example, the method described in Vizcardo et al., Cell Stem Cell 12, 31-36 (2013) may be used.
  • a desired antigen-specific T cell can be obtained from a subject who has acquired immunity against a certain antigen, and the Yamanaka factor can be introduced into the cell to obtain a T-iPS cell (Takahashi and Yamanaka, Cell 126, 663-673 (2006), Takahashi et al., Cell 131, 861-872 (2007), and Grskovic et al., Nat. Rev. Drug Dscov. 10, 915-929 (2011)).
  • iPS cells are artificial stem cells derived from somatic cells that have almost the same characteristics as ES cells and can be created by applying specific reprogramming factors to somatic cells (K. Takahashi and S. Yamanaka (2006) Cell, 126:663-676; K. Takahashi et al. (2007), Cell, 131:861-872; J. Yu et al. (2007), Science, 318:1917-1920; Nakagawa, M. et al., Nat. Biotechnol. 26:101-106 (2008); WO2007/069666).
  • the reprogramming factor may be composed of a gene that is specifically expressed in ES cells, its gene product or non-coding RNA, or a gene that plays an important role in maintaining the undifferentiated state of ES cells, its gene product or non-coding RNA, or a low molecular weight compound.
  • genes contained in the reprogramming factor include Oct3/4, Sox2, Sox1, Sox3, Sox15, Sox17, Klf4, Klf2, c-Myc, N-Myc, L-Myc, Nanog, Lin28, Fbx15, ERas, ECAT15-2, Tcl1, beta-catenin, Lin28b, Sall1, Sall4, Esrrb, Nr5a2, Tbx3, or Glis1.
  • reprogramming factors may be used alone or in combination. Combinations of reprogramming factors include those described in WO2007/069666, WO2008/118820, WO2009/007852, WO2009/032194, WO2009/058413, WO2009/057831, WO2009/075119, WO2009/079007, WO2009/091659, WO2009/101084, WO2009/101407, WO2009/102983, WO2009/114949, WO2009/117439, WO2009/126250, WO2009/126251, WO2009/ 126655, WO2009/157593, WO2010/009015, WO2010/033906, WO2010/03392 0, WO2010/042800, WO2010/050626, WO2010/056831, WO2010/068955, WO20 10/098419, WO2010/102267, WO2010/111409, WO2010/111422, WO2010/115 050, WO
  • the reprogramming factor may be contacted with or introduced into a somatic cell by any appropriate method depending on its form.
  • the iPS cells obtained as described above are induced to differentiate into a T cell population containing DP cells and DN cells.
  • An example of a method for inducing differentiation of iPS cells into T cells is the method described in Timmermans et al., Journal of Immunology, 2009, 182:6879-6888.
  • iPS cells are co-cultured with OP9 stromal cells, for example, a mouse OP9 stromal cell culture, to obtain blood cell progenitor cells.
  • the obtained blood cell progenitor cells are then co-cultured with OP9/DLL1 cells.
  • IL-7, FIT-3L, and SCF Stem Cell Factor
  • a cell culture containing DN cells and DP cells can be obtained.
  • step (2) DN cells are removed from the cell culture obtained in step (1).
  • the DP cells may be killed by the DN cells, but this phenomenon can be prevented by removing the DN cells.
  • the cell culture from which DN cells have been removed is substantially free of DN cells.
  • the DN cell content in the cell culture from which DN cells have been removed is, for example, 5% or less, preferably 3% or less, and more preferably less than 1%.
  • the process of removing DN cells from a cell culture containing DN cells and DP cells may be referred to as “enrichment of DP cells,” and the cell culture from which DN cells have been removed may be referred to as “enriched DP cell culture.”
  • enrichment of DP cells when cells other than DN cells are simultaneously or individually removed from a cell culture, they may be referred to as “enrichment of DP cells” and “enriched DP cell culture.”
  • Cell cultures containing DN cells and DP cells may contain CD8 SP cells.
  • the CD8 SP cells may be CD8 ⁇ homodimeric T cells, and it is preferable to simultaneously remove CD8 SP cells, particularly CD8 ⁇ homodimeric T cells, when concentrating DP cells (i.e., removing DN cells).
  • DN cells and CD8SP cells can be removed by recovering CD4 positive cells using a carrier (e.g., MACS beads) bound to a CD4 antibody.
  • CD8 ⁇ homodimer T cells can be removed by recovering CD8SP ⁇ heterodimer T cells using a carrier (e.g., MACS beads) bound to a CD8 ⁇ antibody.
  • a cell culture substantially free of DN cells can be obtained by removing the DN cell fraction using a cell sorter, or a cell culture substantially free of DN cells and CD8SP cells can be obtained by collecting the DP cell fraction using a cell sorter.
  • a cell culture substantially free of CD8SP ⁇ homodimer cells can be collected by collecting the CD8SP ⁇ heterodimer cell fraction using a cell sorter.
  • the DP cells in the cell culture obtained in step (2) are differentiated into CD8 SP cells.
  • Differentiation of DP cells into CD8 SP cells can be induced by directly activating one of the activation pathways that occurs when a T cell receptor is stimulated.
  • T cells can be activated in a manner similar to TCR stimulation by adding PMA and Inomysin.
  • An example of stimulation via TCR is culturing DP cells while stimulating them with a CD3 antibody.
  • the culture period in the culture medium containing the CD3 antibody may be 3 to 10 days, for example 4 to 8 days, for example about 6 days.
  • the DP cell culture is a DP cell culture induced from iPS cells that have a specific receptor (e.g., TCR) for a desired antigen
  • a specific receptor e.g., TCR
  • the CD8SP cells obtained by inducing differentiation of enriched DP cell cultures by directly activating one of the activation pathways that occurs when the T cell receptor is stimulated are mostly CD8 ⁇ heterodimer-type T cells that express the CD8 ⁇ heterodimer.
  • the DP cells in the cell culture obtained in step (1) may be differentiated into CD8 SP cells in the presence of a substance that inhibits the cytotoxic activity of DN cells, without performing step (2).
  • substances that inhibit the cytotoxic activity of DN cells include perforin inhibitors, granzyme inhibitors, Fas pathway inhibitors, caspase inhibitors, and NK activating receptor inhibitor antibodies.
  • Differentiation of DP cells into CD8 SP cells can be induced in the same manner as in step (3) above.
  • the CD8 T cells induced to differentiate from the iPS cells can be cytotoxic T cells (CTLs) that have cytotoxic activity, and CAR-T cells in which a gene encoding anti-CD38-CAR has been introduced and expressed in the cytotoxic CD8 T cells can also have cytotoxicity.
  • CTLs cytotoxic T cells
  • CAR-T cells in which a gene encoding anti-CD38-CAR has been introduced and expressed in the cytotoxic CD8 T cells can also have cytotoxicity.
  • FIG. 1 is a schematic diagram illustrating an example of a DNA construct containing a gene encoding an anti-CD38-CAR that can be used in the present invention.
  • the DNA construct 1 encoding the anti-CD38-CAR has a configuration in which a base sequence (a) encoding a signal peptide of CD8 ⁇ , a base sequence (b) encoding an L-chain variable region of an anti-CD38 antibody (e.g., the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1), a base sequence (c) encoding a linker, a base sequence (d) encoding an H-chain variable region of an anti-CD38 antibody (e.g., the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2), a base sequence (e) encoding a hinge domain and a transmembrane domain of CD8 ⁇ , a base sequence (f) encoding a 4-1BB intracellular domain, and a base sequence (g) encoding a CD3 ⁇ chain are sequentially linked.
  • Any appropriate method can be used as a method for introducing and expressing a gene encoding anti-CD38-CAR into iPS cell-derived CD8 T cells.
  • Examples include biological gene transfer methods using viral vectors, physical gene transfer methods such as electroporation, and chemical gene transfer methods such as lipofection and calcium phosphate method. Among these, gene transfer methods using viral vectors can be preferably used.
  • the viral vector is not particularly limited, so long as the produced viral particles infect iPS cell-derived CD8 T cells and the cells express anti-CD38-CAR.
  • Retroviral vectors are preferably used because they allow the introduced gene to be incorporated into the chromosome of the host cell with high efficiency and maintain high expression of the gene.
  • retroviral vectors refer to so-called oncoretroviral vectors (hereinafter simply referred to as retroviral vectors), and include lentiviral vectors, etc.
  • Gene transfer into iPS cell-derived CD8 T cells using a retroviral vector can be performed, for example, by co-transfecting a vector plasmid containing the gene sequence of interest, LTR, and a packaging signal with a packaging plasmid containing the gag sequence, pol sequence, and env sequence but no packaging signal into packaging cells (e.g., Cos cells, 293T cells), and then collecting the produced virus particles (virions) and infecting iPS cell-derived CD8 T cells.
  • a vector plasmid containing the gene sequence of interest may be transfected into packaging cells that express gag, pol, and env and are producing empty virus particles to produce virus particles (virions).
  • retroviral vector plasmids include MSCV (Murine Stern Cell Virus) vector plasmids and lentiviral vector plasmids.
  • MSCV Murine Stern Cell Virus
  • lentiviral vector plasmids Various commercially available products can be used as retroviral vector plasmids, and for example, the MSCV Retro viral Expression System (manufactured by Clontech) can also be used.
  • the desired gene sequence can be inserted into the multiple cloning site (MCS) of the retroviral vector plasmid using standard cloning methods.
  • MCS multiple cloning site
  • a retroviral vector plasmid having an IRES (internal ribosome entry site) sequence is used.
  • An IRES sequence is a sequence that exists inside an mRNA chain and codes for a structure to which a ribosome directly binds, and is used in a mechanism that initiates translation by direct binding of the ribosome, the so-called internal initiation mechanism.
  • a retroviral vector plasmid having an IRES sequence can make the translation of eukaryotic cell mRNA cap structure-independent.
  • a retroviral vector plasmid having a marker gene is used from the viewpoint of selecting and isolating transfected cells.
  • a fluorescent protein such as GFP or EGFP can be used as the marker.
  • Methods for transfecting packaging cells and retroviral vector plasmids into packaging cells can be any method commonly used for gene transfer using retroviral vectors.
  • the virus particles produced by the packaging cells can be obtained as a virus solution, for example, by filtering the culture supernatant.
  • Any appropriate method can be used to introduce the obtained virus particles into iPS cell-derived CD8 T cells and infect them.
  • a method e.g., polybrene method, protamine method
  • the above virus solution is mixed with a positively charged gene transfer aid, and the resulting mixture is added to iPS cell-derived CD8 T cells and cultured.
  • the retronectin method can also be used.
  • cells expressing fluorescence can be easily selected and isolated as cells expressing anti-CD38-CAR, for example, by using a flow cytometer with a fluorescent anti-G4S linker antibody or a fluorescent anti-mouse IgG antibody.
  • anti-CD38-CAR-iPS-CD8 T cells A method for producing anti-CD38-CAR-iPS-CD8 T cells has been described above, but anti-CD38-CAR killer cells derived from pluripotent stem cells other than anti-CD38-CAR-iPS-CD8 T cells can also be produced in a similar manner to the above.
  • differentiation of iPS cells into other cytotoxic immunocompetent cells such as NK cells can be induced according to previously reported methods, or differentiation of other pluripotent stem cells such as ES cells into cytotoxic immunocompetent cells can be induced, and the anti-CD38-CAR gene can be introduced into and expressed in the obtained cytotoxic immunocompetent cells in a similar manner to the above.
  • compositions for treating or preventing a disease associated with the expression of CD38 comprising the anti-CD38-CAR killer cells derived from the pluripotent stem cells described in Section A.
  • the anti-CD38-CAR killer cells can be activated as necessary to kill cells expressing CD38, preferably cells highly expressing CD38.
  • the pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention can be applied to, for example, CAR gene therapy such as CAR-T therapy (including CAR- ⁇ T therapy) and CAR-NK therapy for diseases associated with the expression of CD38.
  • Cancer includes hematological malignancies such as leukemia, lymphoma, myeloma, and B-cell lymphoma.
  • hematological malignancies include multiple myeloma (MM), non-Hodgkin's lymphoma (NHL) such as Burkitt's lymphoma (BL), chronic B-lymphocytic leukemia (B-CLL), acute B and T lymphocytic leukemia (ALL), acute myeloid leukemia (AML), chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma, chronic myeloid leukemia (CML), hairy cell leukemia (HCL), follicular lymphoma, Waldenstrom's macroglobulinemia, mantle cell lymphoma, Hodgkin's lymphoma (HL), plasma cell myeloma, precursor B-cell lymphoblastic leukemia/lymphom
  • the pharmaceutical composition can be used in combination with an anti-CD38 antibody drug.
  • the additive or synergistic effect of the cytotoxic activity of the anti-CD38-CAR killer cells and the activity of the antibody drug e.g., CDC activity, ADCC activity, ADCP activity, etc.
  • the antibody drug e.g., CDC activity, ADCC activity, ADCP activity, etc.
  • the pharmaceutical composition may be a combination containing the anti-CD38-CAR killer cells and an anti-CD38 antibody drug.
  • the pharmaceutical composition may not contain an anti-CD38 antibody drug, and may be administered in combination with a separately prepared anti-CD38 antibody drug.
  • the pharmaceutical composition and the anti-CD38 antibody drug may be administered simultaneously, or each may be administered separately at an appropriate timing.
  • the dosage, administration rate, administration interval, etc. may be appropriately set depending on the conditions of the subject to be treated (height, weight, age, sex, etc.), the disease state, etc.
  • anti-CD38 antibody drugs are in clinical use, each recognizing a different epitope on CD38. It is preferable that the anti-CD38-CAR killer cells bind to a site different from the epitopes they recognize.
  • anti-CD38 antibody drugs examples include daratumumab and isatuximab.
  • the present invention will be specifically explained below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
  • the cytotoxic iPS cell-derived CD8 T cells may be referred to as "reCTL.”
  • G3T-hi and PG13 cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (D-MEM) (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Osaka) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) and 100 U/mL penicillin and 100 ⁇ g/mL streptomycin (PS) (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Osaka).
  • D-MEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • FBS fetal bovine serum
  • PS streptomycin
  • RPMI8226 cells, KMM1 cells, THP-1 cells, and HT cells were cultured in Roswell Park Memorial Institute medium 1640 (RPMI 1640) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) supplemented with 10% FBS and 100 U/mL and 100 ⁇ g/mL PS.
  • reCTLs were cultured in MEM ⁇ (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) supplemented with 10% FBS, 100 U/mL and 100 ⁇ g/mL PS, 10 ng/mL IL-2 (PeproTech, Cranbury, NJ), 5 ng/mL IL-7 (PeproTech, Cranbury, NJ), 10 ng/mL IL-21 (PeproTech, Cranbury, NJ), and 0.03 g/mL vitamin C (Nacalai Tesque, Kyoto).
  • anti-CD3 antibody BioLegend, San Diego, Calif.
  • anti-CD28 antibody Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.
  • Human iPS cell-derived CD8 T cells were obtained by the method described in WO2017/179720. Specifically, the method is as follows. Human iPS cells were induced to become blood cell precursor cells, which are CD34CD43 double positive cells, by differentiation induction using the EB method, which is a mesoderm induction system. These cells were seeded on OP9DL1 feeder cells and cultured while adding a Notch signal, and were induced to become DP cells, which are T precursor cells, to obtain a cell culture containing DN cells and DP cells.
  • DP cells were isolated, and the isolated DP cells were differentiated into CD8 SP cells (reCTL) by adding TCR stimulation using a CD3 antibody.
  • the reCTL thus produced can be expanded by repeating stimulation with a CD3 antibody thereafter, and was used as the base cell for the present CAR-T cells.
  • PG13 cells were seeded on a 6-well plate, and after 24 hours, ecotropic retrovirus supernatant diluted 4-fold with D-MEM medium and polybrene adjusted to a final concentration of 8 ⁇ g/mL were added. After 4 hours or more had passed, the supernatant was discarded, and fresh ecotropic retrovirus supernatant and polybrene were added. The infection procedure for PG13 cells was carried out five times in total. After the final infection, the PG13 cell culture supernatant was collected and filtered through a 0.45 ⁇ m filter to obtain a retrovirus solution. Immediately before transduction, reCTL was stimulated to proliferate with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies.
  • the activated reCTL suspension and retrovirus solution were added in a 1:1 ratio to a polypropylene tube coated with Retronectin, and the tube was centrifuged at 1200 g for 1.5 hours to infect the tube. After 24 hours, the tube was infected again with the retrovirus using the same procedure to prepare anti-CD38-CAR-reCTL.
  • Example 4 Evaluation of anti-CD38-CAR expression in anti-CD38-CAR-reCTL
  • the expression of the anti-CD38-CAR gene in the cells used for producing the anti-CD38-CAR-reCTL in Experimental Example 3 was evaluated by flow cytometry. Specifically, the infected cells were stained with an antibody against the linker sequence of the fluorescently labeled scFV (G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (Alexa Fluor (R) 647 Conjugate) #69782, cell signaling), and measurements were performed using a BD Accuri C6 Plus flow cytometer (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Data was analyzed using BD Accuri C6 Plus Software (FlowJo).
  • the introduction efficiency of the anti-CD38-CAR gene was 95% or more. Since the introduction efficiency of the CAR-T gene in the production of CAR-T cells used in the CAR-T therapy currently being clinically deployed is approximately 25%, the introduction efficiency of the above-mentioned anti-CD38-CAR gene was remarkably high.
  • anti-CD38-CAR-reCTLs were negative for CD38 expression. It is speculated that the high transfection efficiency of the anti-CD38-CAR gene confirmed in Experimental Example 4 is due to the fact that reCTLs do not express CD38 upon stimulation by gene transfection, thereby suppressing fratricide.
  • Target cells RPMI8226 cells, KMM1 cells
  • effector cells anti-CD38-CAR-reCTL or reCTL
  • E:T a ratio of 1:20 to 1:2
  • anti-CD38-CAR-reCTL showed cytotoxic activity against both RPMI8226 cells and KMM1 cells that was dependent on the number of effector cells.
  • Example 7 Evaluation of in vitro cytotoxic activity 2
  • the cytotoxic activity dependent on the co-culture time was evaluated. Specifically, target cells (RPMI8226 cells, KMM1 cells) were seeded at a density of 1 ⁇ 10 5 cells/well, and effector cells were seeded at a density of 5 ⁇ 10 4 cells/well, and the number of target cells was measured by flow cytometry between 0 and 48 hours. The results are shown in FIG. 7 and FIG. 8. In the figures, the data shown as "CD38 CAR" and "Control” respectively show the measurement results using anti-CD38-CAR-reCTL and reCTL as effector cells.
  • anti-CD38-CAR-reCTLs exhibited cytotoxic activity against both RPMI8226 cells and KMM1 cells that was dependent on the co-culture time.
  • anti-CD38-CAR-reCTL exhibited effector cell number- and time-dependent cytotoxic activity against RPMI8226 cells.
  • Target cells THP-1, HT were cultured alone or co-cultured with reCTL or anti-CD38-CAR-reCTL in a 96-well plate.
  • the number of surviving target cells 48 hours after seeding was evaluated by flow cytometry. The results are shown in Figures 11 and 12.
  • tumor growth was suppressed in the anti-CD38-CAR-reCTL administration group and the reCTL administration group compared to the control group not administered effector cells.
  • most of the tumor disappeared in the anti-CD38-CAR-reCTL administration group, confirming a remarkable antitumor effect.
  • Anti-CD38-CAR killer cells according to an embodiment of the present invention can be suitably used in the medical field, such as in CAR-T therapy.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)

Abstract

本発明によれば、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体が発現されており、前記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３８を抗原として認識する、多能性幹細胞由来の細胞傷害性免疫担当細胞および前記多能性幹細胞由来の細胞傷害性免疫担当細胞を含む医薬組成物等が提供される。

Description

抗ＣＤ３８－ＣＡＲを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物
　本発明は、抗ＣＤ３８－ＣＡＲを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物に関する。
　ＣＤ３８（Ｃｌｕｓｔｅｒ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　３８）は分子量４５ｋＤａの膜貫通型糖タンパク質であり、形質細胞、ＰｒｅＢ細胞等の表面マーカーである。ＣＤ３８は細胞の分化、活性化、免疫応答の制御、アポトーシス等に関与しており、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞等においては発生の初期に発現し、成熟とともに消失するが、活性化すると再び発現することが知られている。
　上述のように正常な細胞でも発現しているＣＤ３８は、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）細胞、悪性リンパ腫細胞、白血病細胞等の血液悪性腫瘍細胞の表面で、正常な細胞に比べ高発現していることが知られている（例えば、非特許文献１）。
　また、近年、がん免疫療法の１つとして、患者から採取したＴ細胞にがん細胞表面抗原を認識するキメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ））をコードする遺伝子を導入および発現させたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いたＣＡＲ－Ｔ療法の研究および応用が急速に進められている（例えば、特許文献１）。
特表２０２０－５１７２４４号公報
Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，４６：２３－２７，２００１
　上述のとおり、ＣＤ３８は、血液悪性腫瘍細胞において高発現していることが多いことから、ＣＡＲ－Ｔ療法等のＣＡＲ遺伝子療法におけるがん細胞表面抗原の候補になり得る。
　その一方で、細胞傷害性免疫担当細胞（以下、「キラー細胞」と称する場合がある）は、一般に、遺伝子導入の刺激によってＣＤ３８を発現することから、キラー細胞に抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子を導入して作製された抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｅｘ　ｖｉｖｏにおいてフラトリサイドによる自己殺傷を生じ、その抗腫瘍活性が減損され得る。
　このような問題に対しては、キラー細胞に対して抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子を導入する際に、ｓｉＲＮＡを用いたＲＮＡ干渉、Ｃｒｉｓｐｒ－Ｃａｓ９を用いたＤＮＡ編集等によってＣＤ３８の発現を抑制すること等が行われ得る。
　本発明は、上記状況を鑑み、簡便に作製可能な抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞の提供を主たる目的とする。
　本発明者らが多能性幹細胞を分化誘導して得られたキラー細胞を用いて抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞の作製を試みたところ、多能性幹細胞由来のキラー細胞は遺伝子導入を行った場合であってもＣＤ３８陰性であり、フラトリサイドを回避または抑制しつつ抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞を得ることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
［１］本発明の１つの局面によれば、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体が発現されており、上記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３８を抗原として認識する、多能性幹細胞由来の細胞傷害性免疫担当細胞が提供される。
［２］上記［１］に記載の免疫担当細胞において、上記多能性幹細胞が、ヒト人工多能性幹細胞またはヒト胚性多能性幹細胞であってよい。
［３］上記［１］または［２］に記載の免疫担当細胞において、上記多能性幹細胞が、ＨＬＡ分子を部分的にまたは全て欠損した多能性幹細胞であってよい。
［４］上記［１］から［３］のいずれかに記載の免疫担当細胞は、Ｔ細胞であってよい。
［５］上記［１］から［４］のいずれかに記載の免疫担当細胞は、ＣＤ８αβヘテロダイマー型のＴ細胞であってよい。
［６］上記［１］から［５］のいずれかに記載の免疫担当細胞において、上記多能性幹細胞が、外来性ＴＣＲ遺伝子を導入された多能性幹細胞であってよい。
［７］上記［１］から［６］のいずれかに記載の免疫担当細胞は、ＣＤ３８の発現が陰性であってよい。
［８］上記［１］から［７］のいずれかに記載の免疫担当細胞において、上記ＣＤ３８が、ヒトＣＤ３８であってよい。
［９］上記［１］から［８］のいずれかに記載の免疫担当細胞において、上記キメラ抗原受容体が、この順に連結された、上記細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジドメイン、上記膜貫通ドメイン、補助刺激ドメイン、および上記細胞内シグナル伝達ドメインを含んでよい。
［１０］上記［１］から［９］のいずれかに記載の免疫担当細胞において、上記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号１で表されるアミノ酸配列またはその相同配列と、配列番号２で表されるアミノ酸配列またはその相同配列と、を含んでよい。
［１１］本発明の別の局面によれば、上記［１］から［１０］のいずれかに記載の免疫担当細胞を含む、ＣＤ３８の発現に関連する疾患を治療または予防するための医薬組成物が提供される。
［１２］上記［１１］に記載の医薬組成物は、抗ＣＤ３８抗体薬と組み合わせて用いられてもよい。
［１３］本発明の別の局面によれば、人工多能性幹細胞から分化誘導されたＣＤ８Ｔ細胞を準備すること、および、上記ＣＤ８Ｔ細胞にキメラ抗原受容体をコードする遺伝子を導入することを含み、上記キメラ抗原受容体が、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、上記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３８を抗原として認識する、人工多能性幹細胞由来ＣＡＲ－ＣＤ８Ｔ細胞の製造方法が提供される。
　本発明の実施形態によれば、多能性幹細胞由来のキラー細胞に抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子を導入することにより、ＣＤ３８の発現が無いまたは抑制された抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞を得ることができる。
本発明で用いられ得る抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子を含むＤＮＡコンストラクトの一例を説明する概略図である。 抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子を含むレトロウイルスベクターの概略構成を示す図である。 実験例３の抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの作製に供された細胞における抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子の発現をフローサイトメトリーによって評価した結果を示す図である。 実験例３の抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの作製に供された細胞におけるＣＤ３８の発現をフローサイトメトリーによって評価した結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける種々のＥ：Ｔ比でのＲＰＭＩ８２２６細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける種々のＥ：Ｔ比でのＫＭＭ１細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＲＰＭＩ８２２６細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の経時的な評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＫＭＭ１細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の経時的な評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＲＰＭＩ８２２６細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性のリアルタイム解析結果を示す図である。 抗ＣＤ３８抗体薬の存在下でのＲＰＭＩ８２２６細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＴＨＰ－１細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＨＴ細胞に対する抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの細胞傷害活性の評価結果を示す図である。 ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの抗腫瘍効果の評価結果を示す図である。 図１４は、配列番号１および配列番号２のアミノ酸配列を示す。
　以下、本発明の好ましい実施形態について説明するが、本発明はこれらの実施形態には限定されない。また、文脈上不適切である場合を除き、各実施形態は適宜組み合わせることができる。さらにまた、本明細書中で、数値範囲を表す「～」は、その上限および下限の数値を含む。
　本明細書中、「ＤＰ細胞（ダブルポジティブ細胞）」は、ＣＤ４陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞を意味する。
　「ＤＮ細胞（ダブルネガティブ細胞）」は、ＣＤ４陰性ＣＤ８陰性Ｔ細胞を意味する。
　「ＣＤ８Ｔ細胞」および「ＣＤ８ＳＰ細胞」はいずれも、ＣＤ４陰性ＣＤ８陽性Ｔ細胞を意味する。
　特に断りの無い限り、「ＣＤ８」は、ＣＤ８ααホモダイマーおよびＣＤ８αβヘテロダイマーの両方を包含する。
　「ＴＣＲ」は、Ｔ細胞受容体を意味する。
　「ＣＴＬ細胞」は、細胞傷害性Ｔ細胞を意味する。
　「Ｔ細胞」は、表面にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と称される抗原受容体を発現している細胞を意味する。
Ａ．細胞傷害性免疫担当細胞
　本発明の実施形態によれば、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体が発現されており、上記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３８を抗原として認識する、多能性幹細胞由来の細胞傷害性免疫担当細胞（多能性幹細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞）が提供される。一般に、患者から採取した免疫担当細胞を用いてＣＡＲ細胞を作製する場合、長い作製期間（例えば、数週～数か月）および高い作製コスト（例えば、数千万円）が必要となる。これに対し、予め多能性幹細胞から免疫担当細胞を分化誘導し、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子を導入することで、抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞とした状態で凍結保存できることから、Ｏｆｆ－ｔｈｅ－ｓｈｅｌｆ化が可能となる。
　上記多能性幹細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞は、好ましくはＣＤ３８陰性である。ここで、タンパク質の発現に関して、「陰性」とは、当該タンパク質の発現が完全にまたは実質的に認められないことを意味し、「陽性」とは、当該タンパク質の発現が完全にまたは実質的に認められることを意味し得る。１つの実施形態において、細胞におけるタンパク質の発現は、フローサイトメトリー（ＦＣＭ）解析において、当該細胞を当該タンパク質と特異的に結合する蛍光標識抗体（例えば、蛍光標識抗Ｇ４Ｓリンカー抗体、蛍光標識抗ＣＤ３８抗体）を用いて処置した場合に、当該細胞に存在しないはずの抗原に対する蛍光標識抗体（いわゆる、イソ型コントロール抗体）を用いて処置した場合と比較して、蛍光強度が明らかに（換言すると、有意に）区別できる場合（例えば、蛍光強度が明らかに高い場合）を陽性と評価することができ、そうでない場合を陰性と評価することができる。蛍光強度の比較および解析は、例えば、フローサイトメトリー解析ソフトウェアを用いて行うことができる。
　上記細胞傷害性免疫担当細胞（キラー細胞）としては、細胞傷害活性を有する任意の免疫担当細胞を用いることができる。キラー細胞の具体例としては、リンパ球、単核球、多形核白血球等が挙げられる。なかでも、リンパ球が好ましく、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＴＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、γδＴ細胞等のキラーＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞がより好ましい。
　上記多能性幹細胞は、生体に存在する多くの細胞に分化可能である多能性を有し、かつ、自己増殖能を併せもつ幹細胞である。多能性幹細胞は、好ましくは哺乳動物の多能性幹細胞であり、より好ましくはヒト多能性幹細胞である。
　多能性幹細胞としては、例えば、胚性幹（ＥＳ）細胞、核移植により得られるクローン胚由来の胚性幹（ｎｔＥＳ）細胞、胚性生殖（ＥＧ）細胞、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞、培養線維芽細胞や骨髄幹細胞由来の多能性細胞（Ｍｕｓｅ細胞）等が例示される。なかでも、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞が好ましく、ｉＰＳ細胞がより好ましい。
　上記多能性幹細胞は、ＨＬＡ分子を部分的にまたは全て欠損した多能性幹細胞であってもよい。このような多能性幹細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞によれば、投与される患者自身のキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞から非自己として認識されることを回避し得る。ＨＬＡ分子の欠損は、例えばゲノム編集技術を用いて行うことができる。
　上記多能性幹細胞は、外来性ＴＣＲ遺伝子が導入されていてもよい。例えば、外来性ＴＣＲ遺伝子が導入された多能性幹細胞（例えば、ＴＣＲ－ｉＰＳ細胞またはＴＣＲ－ＥＳ細胞）から分化誘導された免疫担当細胞（代表的には、Ｔ細胞）は、所望のＴＣＲを発現することができる。このような免疫担当細胞にＣＡＲを発現させることで、ＴＣＲによる抗原認識（例えば、細胞内に存在する抗原認識）とＣＡＲによる抗原認識（例えば、細胞表面に存在する抗原認識）とを併用することができる。
　上記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲは、好ましくは細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、補助刺激ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、これらの領域はこの順にタンデムに結合されている。
　細胞外抗原結合ドメインとしては、ＣＤ３８を抗原として認識する抗ＣＤ３８抗体またはその機能部分を適宜用いることができる。好ましくは、抗ＣＤ３８ＩｇＧの軽鎖（ＶＬ）可変領域および重鎖（ＶＨ）可変領域を、例えば１０～２５アミノ酸程度の短いリンカーペプチドで繋いだ融合タンパク質（いわゆる、ｓｃＦｖ）が、細胞外抗原結合ドメインとして用いられる。細胞外抗原結合ドメインは、軽鎖（ＶＬ）可変領域および重鎖（ＶＨ）可変領域を膜貫通ドメインに向かってこの順に含んでいてもよく、膜貫通ドメインからこの順に含んでいてもよい。ＣＤ３８は、好ましくは哺乳類のＣＤ３８であり、より好ましくはヒトＣＤ３８である。
　細胞外抗原結合ドメインが由来する抗ＣＤ３８抗体としては、ＣＤ３８に特異的に結合し得る任意の適切な抗体、好ましくはＩｇＧ抗体が用いられ得る。
　１つの実施形態において、上記細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１で表されるアミノ酸配列またはこれらの相同配列を含むＶＬ可変領域を含む。
　１つの実施形態において、上記細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２で表されるアミノ酸配列またはこれらの相同配列を含むＶＨ可変領域を含む。
　１つの実施形態において、上記ｓｃＦｖは、配列番号１で表されるアミノ酸配列またはこれらの相同配列を含むＶＬ可変領域と、配列番号２で表されるアミノ酸配列またはこれらの相同配列を含むＶＨ可変領域とを含む。
　上記相同配列は、基準となるアミノ酸配列（具体的には、配列番号１または２で表されるアミノ酸配列）と例えば９０％以上、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９８％以上の配列同一性を有し得る。相同配列は、基準となるアミノ酸配列の１以上１０以下、８以下、５以下、もしくは３以下のアミノ酸が他のアミノ酸に置換、欠失または付加された配列であってよい。相同配列の軽鎖および重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３はそれぞれ、基準となるアミノ酸配列の軽鎖および重鎖ＣＤＲ１、２および３と十分に高い配列同一性（例えば３以下、２以下、１以下、または０のアミノ酸の置換、欠失または付加）を有していてもよい。
　ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、補助刺激ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインとしては、本発明の効果が得られる限りにおいて制限されず、ＣＡＲを構成する各ドメインとして任意の適切なドメインを採用することができる。
　ヒンジドメインは、例えば、細胞外抗原結合ドメインが標的エピトープにアクセスするための空間（長さ）および柔軟性を提供し得るように設計される。
　膜貫通ドメインは、例えばＣＤ８、ＣＤ２８等の膜貫通ドメインを含むことができる。
　補助刺激ドメインは、例えば４－１ＢＢドメインに由来するドメインおよびＣＤ２８ドメインに由来するドメインのいずれか一方または両方を含むことができる。
　細胞内シグナル伝達ドメインは、例えばＣＤ３ζドメインに由来するドメインを含むことができる。
　以下、本発明の実施形態による多能性幹細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞の一例として、ｉＰＳ細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ＣＤ８Ｔ細胞（以下、「抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｉＰＳ－ＣＤ８Ｔ細胞」または「抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬ」とも称する）の作製方法について具体的に説明する。抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｉＰＳ－ＣＤ８Ｔ細胞は、代表的にはＣＤ４陰性かつＣＤ８陽性である。
　抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｉＰＳ－ＣＤ８Ｔ細胞は、例えば、ｉＰＳ細胞（好ましくはヒトｉＰＳ細胞）から分化誘導されたＣＤ８Ｔ細胞を準備し、当該ＣＤ８Ｔ細胞に、ＣＤ３８を抗原として認識するキメラ抗原受容体（抗ＣＤ３８－ＣＡＲ）をコードする遺伝子を導入および発現させることによって得られ得る。上述のとおり、ｉＰＳ細胞等の多能性幹細胞由来のＣＤ８Ｔ細胞は、代表的には、遺伝子導入を行った場合であってもＣＤ３８陰性であることから、抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子を導入することにより、フラトリサイドの問題を生じさせることなく、簡便かつ効率よく抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｉＰＳ－ＣＤ８Ｔ細胞を得ることができる。
　ｉＰＳ細胞からＣＤ８Ｔ細胞を分化誘導する方法としては、任意の適切な方法を用いることができる。
　１つの実施形態において、ｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞は、
工程（１）：ｉＰＳ細胞を分化誘導して、ＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物を得る工程、
工程（２）：工程（１）で得られた細胞培養物よりＤＮ細胞を除く工程、および
工程（３）：工程（２）で得られた細胞培養物中のＤＰ細胞をＣＤ８Ｔ細胞へと分化させる工程、
を含む方法によって得られ得る。
　上記方法によれば、刺激後もＣＤ３８を発現しないｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞が好適に得られ得る。刺激後もＣＤ３８を発現しないキラー細胞によれば、ＲＮＡ干渉、ゲノム編集等によってＣＤ３８の発現を抑制すること、抗ＣＤ３８抗体とコインキュベートしてキラー細胞表面のＣＤ３８をマスクすること等の必要がなく、簡便かつ効率的に抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞を得ることができる。
　工程（１）では、ｉＰＳ細胞を分化誘導して、ＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物を得る。
　工程（１）で用いられるｉＰＳ細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞以外の体細胞から誘導されたｉＰＳ細胞であってよい。ｉＰＳ細胞は、好ましくはヒト由来のｉＰＳ細胞である。
　ｉＰＳ細胞へと誘導されるＴ細胞としては、ＣＤ３を発現しており、かつ、ＣＤ４およびＣＤ８からなる群から選択される少なくとも１つの分子を発現しているＴ細胞が好ましく用いられる。このようなヒトＴ細胞としては、例えば、ＣＤ４陽性細胞であるヘルパー／制御性Ｔ細胞、ＣＤ８陽性細胞である細胞傷害性Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋細胞）、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ６２Ｌ＋細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ６２Ｌ－細胞）、およびターミナルエフェクターＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ－細胞）が挙げられる。
　ヒトＴ細胞は、ヒトの組織から公知の手法により単離することができる。ヒトの組織としては、例えば、末梢血、リンパ節、骨髄、胸腺、脾臓、臍帯血、病変部組織等が挙げられる。なかでも、末梢血および臍帯血が好ましい。ヒトＴ細胞を単離するための公知の手法としては、例えば、ＣＤ３等の細胞表面マーカーに対する抗体と、セルソーターとを用いたフローサイトメトリーが挙げられる。また、サイトカインの分泌や機能性分子の発現を指標に、所望のＴ細胞を単離することもできる。このような場合、例えば、Ｔ細胞は、Ｔｈ１タイプかＴｈ２タイプかで分泌されるサイトカインが異なるので、そのようなサイトカインを指標に選別して、所望のＴｈタイプを有するＴ細胞を単離することができる。また、グランザイム、パーフォリン等の分泌または産生を指標として、細胞傷害性（キラー）Ｔ細胞を単離することができる。
　ｉＰＳ細胞へと誘導される体細胞は、精子、精母細胞、卵子、卵母細胞、ＥＳ細胞等の生殖系列細胞または分化多能性細胞を除くあらゆる動物細胞（好ましくは、ヒトを含む哺乳動物細胞）であってよい。体細胞には、胎児（仔）の体細胞、新生児（仔）の体細胞、および成熟した健全個体の体細胞もしくは疾患を有する個体の体細胞のいずれも包含される。また、初代培養細胞、継代細胞、および株化細胞のいずれも包含される。具体的には、体細胞としては、分化した細胞、例えば神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、歯髄幹細胞等の組織幹細胞（体性幹細胞）、組織前駆細胞、リンパ球、上皮細胞、内皮細胞、筋肉細胞、線維芽細胞（皮膚細胞等）、毛細胞、肝細胞、胃粘膜細胞、腸細胞、脾細胞、膵細胞（膵外分泌細胞等）、脳細胞、肺細胞、腎細胞および脂肪細胞等が例示される。
　上記Ｔ細胞または体細胞からｉＰＳ細胞を誘導する。Ｔ細胞または体細胞からｉＰＳ細胞を得る方法としては、例えばＶｉｚｃａｒｄｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ　１２，３１－３６（２０１３）に記載の方法を用いてもよい。例えば所定の抗原に対する免疫を獲得した対象から所望の抗原特異的Ｔ細胞を得、この細胞へヤマナカ因子を導入してＴ－ｉＰＳ細胞を得ることができる（Ｔａｋａｈａｓｈｉ　ａｎｄ　Ｙａｍａｎａｋａ，Ｃｅｌｌ　１２６，６６３－６７３（２００６）、Ｔａｋａｈａｓｈｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｅｌｌ　１３１，８６１－８７２（２００７）、およびＧｒｓｋｏｖｉｃ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ　Ｄｓｃｏｖ．１０，９１５－９２９（２０１１））。
　ｉＰＳ細胞は、特定の初期化因子を、体細胞に作用させることによって作製することができる、ＥＳ細胞とほぼ同等の特性を有する体細胞由来の人工の幹細胞である（Ｋ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ　ａｎｄ　Ｓ．Ｙａｍａｎａｋａ（２００６）Ｃｅｌｌ，１２６：６６３－６７６；Ｋ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ　ｅｔ　ａｌ．（２００７），Ｃｅｌｌ，１３１：８６１－８７２；Ｊ．Ｙｕ　ｅｔ　ａｌ．（２００７），Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１８：１９１７－１９２０；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｍ．ら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１０１－１０６（２００８）；ＷＯ２００７／０６９６６６）。初期化因子は、ＥＳ細胞に特異的に発現している遺伝子、その遺伝子産物もしくはｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡまたはＥＳ細胞の未分化維持に重要な役割を果たす遺伝子、その遺伝子産物もしくはｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ、あるいは低分子化合物によって構成されてもよい。初期化因子に含まれる遺伝子として、例えば、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｓｏｘ１、Ｓｏｘ３、Ｓｏｘ１５、Ｓｏｘ１７、Ｋｌｆ４、Ｋｌｆ２、ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、Ｌ－Ｍｙｃ、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｆｂｘ１５、ＥＲａｓ、ＥＣＡＴ１５－２、Ｔｃｌ１、ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ、Ｌｉｎ２８ｂ、Ｓａｌｌ１、Ｓａｌｌ４、Ｅｓｒｒｂ、Ｎｒ５ａ２、Ｔｂｘ３またはＧｌｉｓ１等が例示される。これらの初期化因子は、単独で用いても良く、組み合わせて用いても良い。初期化因子の組み合わせとしては、ＷＯ２００７／０６９６６６、ＷＯ２００８／１１８８２０、ＷＯ２００９／００７８５２、ＷＯ２００９／０３２１９４、ＷＯ２００９／０５８４１３、ＷＯ２００９／０５７８３１、ＷＯ２００９／０７５１１９、ＷＯ２００９／０７９００７、ＷＯ２００９／０９１６５９、ＷＯ２００９／１０１０８４、ＷＯ２００９／１０１４０７、ＷＯ２００９／１０２９８３、ＷＯ２００９／１１４９４９、ＷＯ２００９／１１７４３９、ＷＯ２００９／１２６２５０、ＷＯ２００９／１２６２５１、ＷＯ２００９／１２６６５５、ＷＯ２００９／１５７５９３、ＷＯ２０１０／００９０１５、ＷＯ２０１０／０３３９０６、ＷＯ２０１０／０３３９２０、ＷＯ２０１０／０４２８００、ＷＯ２０１０／０５０６２６、ＷＯ２０１０／０５６８３１、ＷＯ２０１０／０６８９５５、ＷＯ２０１０／０９８４１９、ＷＯ２０１０／１０２２６７、ＷＯ２０１０／１１１４０９、ＷＯ２０１０／１１１４２２、ＷＯ２０１０／１１５０５０、ＷＯ２０１０／１２４２９０、ＷＯ２０１０／１４７３９５、ＷＯ２０１０／１４７６１２、Ｈｕａｎｇｆｕ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．（２００８），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２６：７９５－７９７、Ｓｈｉ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．（２００８），Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ，２：５２５－５２８、Ｅｍｉｎｌｉ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．（２００８），Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ．２６：２４６７－２４７４、Ｈｕａｎｇｆｕ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．（２００８），Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１２６９－１２７５、Ｓｈｉ　Ｙ，　ｅｔ　ａｌ．（２００８），Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ，３，５６８－５７４、Ｚｈａｏ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．（２００８），Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ，３：４７５－４７９、Ｍａｒｓｏｎ　Ａ，（２００８），Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ，３，１３２－１３５、Ｆｅｎｇ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．（２００９），Ｎａｔ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ．１１：１９７－２０３、Ｒ．Ｌ．Ｊｕｄｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．，（２００９），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２７：４５９－４６１、Ｌｙｓｓｉｏｔｉｓ　ＣＡ，ｅｔ　ａｌ．（２００９），Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ．１０６：８９１２－８９１７、Ｋｉｍ　ＪＢ，ｅｔ　ａｌ．（２００９），Ｎａｔｕｒｅ．４６１：６４９－６４３、Ｉｃｈｉｄａ　ＪＫ，ｅｔ　ａｌ．（２００９），Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ．５：４９１－５０３、Ｈｅｎｇ　ＪＣ，ｅｔ　ａｌ．（２０１０），Ｃｅｌｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ．６：１６７－７４、Ｈａｎ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．（２０１０），Ｎａｔｕｒｅ．４６３：１０９６－１００、Ｍａｌｉ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．（２０１０），Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ．２８：７１３－７２０、Ｍａｅｋａｗａ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．（２０１１），Ｎａｔｕｒｅ．４７４：２２５－９．に記載の組み合わせが例示される。
　初期化因子は、その形態に応じた任意の適切な方法によって体細胞へ接触、または体細胞内へ導入すればよい。
　上記のようにして得られたｉＰＳ細胞を、ＤＰ細胞およびＤＮ細胞を含むＴ細胞集団へと分化誘導する。ｉＰＳ細胞からＴ細胞への分化誘導方法としては、例えばＴｉｍｍｅｒｍａｎｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００９，１８２：６８７９－６８８８に記載の方法が挙げられる。
　１つの実施形態において、ｉＰＳ細胞を、ＯＰ９ストローマ細胞、例えばマウスのＯＰ９ストローマ細胞培養物と共培養して血球前駆細胞を得る。次いで、得られた血球前駆細胞をＯＰ９／ＤＬＬ１細胞と共培養する。ＯＰ９／ＤＬＬ１共培養の際には培地にＩＬ－７、ＦｌＴ－３Ｌ、およびＳＣＦ（Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ　Ｆａｃｔｏｒ）を添加する。上記方法によってｉＰＳ細胞を分化誘導した場合、ＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物が得られ得る。
　工程（２）では、工程（１）で得られた細胞培養物よりＤＮ細胞を取り除く。ＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物をＣＤ３抗体によって刺激すると、ＤＰ細胞がＤＮ細胞によって殺傷され得るが、ＤＮ細胞を取り除くことによりこのような現象を防止することができる。
　ＤＮ細胞を除いた細胞培養物はＤＮ細胞を実質的に含まないことが好ましい。ＤＮ細胞を除いた細胞培養物におけるＤＮ細胞の含有量は、例えば５％以下、好ましくは３％以下、より好ましくは１％未満である。
　以下、ＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物よりＤＮ細胞を除去する工程を「ＤＰ細胞の濃縮」、ＤＮ細胞を除去した細胞培養物を「濃縮したＤＰ細胞培養物」という場合がある。細胞培養物からＤＮ細胞以外の細胞を同時に、あるいは個別に除去する場合も同様に「ＤＰ細胞の濃縮」および「濃縮したＤＰ細胞培養物」という場合がある。
　ＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物はＣＤ８ＳＰ細胞を含む場合がある。当該ＣＤ８ＳＰ細胞はＣＤ８ααホモダイマー型Ｔ細胞である可能性があり、ＤＰ細胞の濃縮（すなわち、ＤＮ細胞の除去）に当たってはＣＤ８ＳＰ細胞、特にＣＤ８ααホモダイマー型Ｔ細胞も同時に取り除くことが好ましい。
　細胞培養物からＤＮ細胞および／またはＣＤ８ＳＰ細胞を除去する方法としては、任意の適切な方法が採用され得る。例えば、ＣＤ４抗体を結合させた担体（例えば、ＭＡＣＳビーズ）を用いてＣＤ４陽性細胞を回収することによってＤＮ細胞およびＣＤ８ＳＰ細胞を除去することができる。また例えば、ＣＤ８β抗体を結合させた担体（例えばＭＡＣＳビーズ）を用いてＣＤ８ＳＰαβヘテロダイマー型Ｔ細胞を回収することによってＣＤ８ααホモダイマー型Ｔ細胞を除去することができる。また例えば、セルソーターにてＤＮ細胞画分を除去することによってＤＮ細胞を実質的に含まない細胞培養物を得ることができ、あるいは、セルソーターにてＤＰ細胞画分を集めることによって、ＤＮ細胞およびＣＤ８ＳＰ細胞を実質的に含まない細胞培養物を得ることができる。また例えば、セルソーターにてＣＤ８ＳＰαβヘテロダイマー型の細胞画分を集めることによってＣＤ８ＳＰααホモダイマー型の細胞を実質的に含まない細胞培養物を集めることができる。
　上記工程（３）では、工程（２）で得られた細胞培養物中のＤＰ細胞をＣＤ８ＳＰ細胞へと分化させる。ＤＰ細胞からＣＤ８ＳＰ細胞への分化誘導は、Ｔ細胞受容体に刺激を加えた時に生じる活性化経路の何れかを直接活性化することによって行うことができる。例えば、ＰＭＡとＩｏｎｏｍｙｓｉｎを添加することによりＴＣＲ刺激に類似した形でＴ細胞を活性化することができる。ＴＣＲを介した刺激としては、例えば、ＤＰ細胞をＣＤ３抗体により刺激しながら培養することが例示される。ＣＤ３抗体による刺激に加え、ＩＬ－７およびＩＬ－２を培養液に添加することが好ましい。ＣＤ３抗体を含む培養液による培養期間は３～１０日間、例えば４～８日、例えば約６日間とすればよい。
　ＤＰ細胞培養物が、所望の抗原に対する特異的受容体（例えばＴＣＲ）を有するｉＰＳ細胞から誘導されたＤＰ細胞培養物である場合には、当該抗原による刺激または当該抗原を提示する抗原提示細胞による刺激を加えることによってもＤＰ細胞からＣＤ８ＳＰ細胞へ分化誘導することが可能である。
　濃縮したＤＰ細胞培養物をＴ細胞受容体に刺激を加えた時に生じる活性化経路の何れかを直接活性化することによって分化誘導して得られるＣＤ８ＳＰ細胞は、そのほとんどがＣＤ８αβヘテロダイマーを発現するＣＤ８αβヘテロダイマー型のＴ細胞である。
　上記ｉＰＳ細胞からＣＤ８Ｔ細胞を分化誘導する方法において、上記工程（２）を行わずに、ＤＮ細胞の細胞傷害活性を抑制する物質の存在下で、工程（１）で得られた細胞培養物中のＤＰ細胞をＣＤ８ＳＰ細胞へと分化させてもよい。ＤＮ細胞の細胞傷害活性を抑制する物質としては、パーフォリン阻害剤、グランザイム阻害剤、Ｆａｓ経路阻害剤、カスパーゼ阻害剤、ＮＫ活性化レセプター阻害抗体等が例示される。ＤＰ細胞からＣＤ８ＳＰ細胞への分化誘導は、上記工程（３）と同様に行われ得る。
　上記ｉＰＳ細胞からＣＤ８Ｔ細胞を分化誘導する方法の詳細については、ＷＯ２０１６／０１０１５４、ＷＯ２０１７／１７９７２０等に記載されている。
　上記ｉＰＳ細胞から分化誘導されたＣＤ８Ｔ細胞（ｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞）は、細胞傷害活性を有する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）であり得、当該細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞に抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子が導入および発現されたＣＡＲ－Ｔ細胞もまた、細胞傷害性を有し得る。
　図１は、本発明で用いられ得る抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子を含むＤＮＡコンストラクトの一例を説明する概略図である。抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードするＤＮＡコンストラクト１は、ＣＤ８αのシグナルペプチドをコードする塩基配列（ａ）、抗ＣＤ３８抗体のＬ鎖可変領域（例えば、配列番号１で表されるアミノ酸配列）をコードする塩基配列（ｂ）、リンカーをコードする塩基配列（ｃ）、抗ＣＤ３８抗体のＨ鎖可変領域（例えば、配列番号２で表されるアミノ酸配列）をコードする塩基配列（ｄ）、ＣＤ８αのヒンジドメインおよび膜貫通ドメインをコードする塩基配列（ｅ）、４－１ＢＢ細胞内ドメインをコードする塩基配列（ｆ）、およびＣＤ３ζ鎖をコードする塩基配列（ｇ）が順次連結された構成を有する。抗ＣＤ３８－ＣＡＲおよびこれをコードするＤＮＡコンストラクトの詳細については、例えばＷＯ２００７／１４２２４１を参照することができる。
　抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子をｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞に導入および発現させる方法としては任意の適切な方法を用いることができる。例えば、ウイルスベクターを用いた生物学的遺伝子導入法、エレクトロポレーション等の物理的遺伝子導入法、およびリポフェクション、リン酸カルシウム法等の化学的遺伝子導入法が挙げられる。なかでも、ウイルスベクターを用いる遺伝子導入法が好ましく用いられ得る。
　ウイルスベクターとしては、産生されるウイルス粒子がｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞に感染し、該細胞が抗ＣＤ３８－ＣＡＲを発現する限り、特に制限されない。導入遺伝子が高い効率で宿主細胞の染色体に組み込まれ、該遺伝子の高発現の維持が可能である観点から、レトロウイルスベクターが好ましく用いられ得る。ここで、レトロウイルスベクターは、いわゆるオンコレトロウイルスベクターを意味し（以下、単にレトロウイルスベクターという）、レンチウイルスベクター等を含む。
　レトロウイルスベクターを用いるｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞への遺伝子導入は、例えば、目的の遺伝子配列、ＬＴＲ、およびパッケージングシグナルを含むベクタープラスミドと、ｇａｇ配列、ｐｏｌ配列、およびｅｎｖ配列を含み、パッケージングシグナルを含まないパッケージングプラスミドとをパッケージング細胞（例えば、Ｃｏｓ細胞、２９３Ｔ細胞）にコトランスフェクトすること、および、産生されたウイルス粒子（ビリオン）を回収し、ｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞に感染させることによって行われ得る。代替的に、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖを発現し、空ウイルス粒子を産生しているパッケージング細胞に目的の遺伝子配列を含むベクタープラスミドをトランスフェクトして、ウイルス粒子（ビリオン）を産生させてもよい。
　レトロウイルスベクタープラスミドとしては、ＭＳＣＶ（Ｍｕｒｉｎｅ　Ｓｔｅｒｎ　Ｃｅｌｌ　Ｖｉｒｕｓ）ベクタープラスミド、レンチウイルスベクタープラスミド等が好ましく例示できる。レトロウイルスベクタープラスミドとしては、種々の市販品を用いることができ、例えば、ＭＳＣＶ　Ｒｅｔｒｏ　ｖｉｒａｌ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（クロンテック社製）を用いることもできる。レトロウイルスベクタープラスミドには、標準的なクローニング方法を用いて目的の遺伝子配列をマルチクローニングサイト（ＭＣＳ）に挿入することができる。
　１つの実施形態においては、ＩＲＥＳ（Ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｒｉｂｏｓｏｍｅ　ｅｎｔｒｙ　ｓｉｔｅ）配列を有するレトロウイルスベクタープラスミドが用いられる。ＩＲＥＳ配列とは、ｍＲＮＡ鎖の内部に存在し、リボソームが直接結合する構造をコードする配列をいい、そのリボソームの直接結合により翻訳を開始する機構、いわゆる内部開始機構に用いられる。ＩＲＥＳ配列を有するレトロウイルスベクタープラスミドによれば、真核細胞ｍＲＮＡの翻訳をキャップ構造非依存性翻訳とすることができる。
　１つの実施形態においては、遺伝子導入細胞の選択、分取等の観点から、マーカー遺伝子を有するレトロウイルスベクタープラスミドが用いられる。マーカーとしては、例えばＧＦＰ、ＥＧＦＰ等の蛍光タンパク質が用いられ得る。
　パッケージ細胞およびパッケージ細胞へのレトロウイルスベクタープラスミド等のトランスフェクト方法としては、レトロウイルスベクターを用いた遺伝子導入において通常用いられているものを適用することができる。
　パッケージング細胞から産生されたウイルス粒子は、例えば培養上清をフィルターろ過することで、ウイルス溶液として得ることができる。
　得られたウイルス粒子をｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞に導入し、感染させる方法としては、任意の適切な方法を用いることができる。例えば、上記ウイルス溶液をプラス荷電の遺伝子導入補助剤と混合し、得られた混合液をｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞に添加して培養する方法（例えばポリブレン法、プロタミン法）が用いられ得る。また、レトロネクチン法を用いることもできる。
　上記感染後、例えばフローサイトメーターにより、蛍光抗Ｇ４Ｓリンカー抗体または蛍光抗マウスＩｇＧ抗体を用いることで、蛍光を発現する細胞を抗ＣＤ３８－ＣＡＲを発現する細胞として容易に選別および単離することができる。
　以上、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｉＰＳ－ＣＤ８Ｔ細胞の作製方法について説明したが、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｉＰＳ－ＣＤ８Ｔ細胞以外の多能性幹細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞についても、上記と同様にして作製することができる。例えば、既報の方法に従ってｉＰＳ細胞からのＮＫ細胞等の他の細胞傷害性免疫担当細胞への分化誘導、または、ＥＳ細胞等の他の多能性幹細胞からの細胞傷害性免疫担当細胞への分化誘導を行い、得られた細胞傷害性免疫担当細胞に上記と同様の方法で抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子を導入および発現させればよい。
Ｂ．医薬組成物
　本発明の別の局面によれば、Ａ項に記載の多能性幹細胞由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞を含む、ＣＤ３８の発現に関連する疾患を治療または予防するための医薬組成物が提供される。上記抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞は、必要により活性化されて、ＣＤ３８を発現する細胞、好ましくはＣＤ３８を高発現する細胞を殺傷することができる。よって、本発明の実施形態による医薬組成物は、例えば、ＣＤ３８の発現に関連する疾患に対するＣＡＲ－Ｔ療法（ＣＡＲ－γδＴ療法を含む）、ＣＡＲ－ＮＫ療法等のＣＡＲ遺伝子療法に適用され得る。
　ＣＤ３８の発現に関連する疾患としては、がん等の悪性腫瘍が挙げられる。がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫、およびＢ細胞リンパ腫等の血液悪性腫瘍を含む。血液悪性腫瘍としては、多発性骨髄腫（ＭＭ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）等の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、急性ＢおよびＴリンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、形質細胞性骨髄腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、形質細胞腫、巨細胞骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫、リンパ腫様肉芽腫症等が挙げられる。
　上記医薬組成物は、抗ＣＤ３８抗体薬と組み合わせて用いられ得る。上記抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞の細胞傷害作用と抗体薬の作用（例えば、ＣＤＣ活性、ＡＤＣＣ活性、ＡＤＣＰ活性等）との相加または相乗効果により、上記疾患に対する治療または予防効果がより好適に得られ得る。
　上記医薬組成物は、上記抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞と抗ＣＤ３８抗体薬とを含む合剤であってよい。あるいは、上記医薬組成物は、抗ＣＤ３８抗体薬を含まず、別途に調製された抗ＣＤ３８抗体薬と組み合わせて投与されてもよい。その場合、医薬組成物と抗ＣＤ３８抗体薬とは、同時に投与されてもよく、各々が適切なタイミングで個別に投与されてもよい。投与量、投与速度、投与間隔等は、処置対象の条件（身長、体重、年齢、性別等）、病状等に応じて適宜設定され得る。
　抗ＣＤ３８抗体薬としては、現在、互いに異なるＣＤ３８のエピトープを認識する２種類の抗体が臨床上、使用されている。上記抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞はこれらの認識するエピトープとは違った部位に結合することが好ましい。
　抗ＣＤ３８抗体薬としては、例えば、ダラツムマブ、イサツキシマブ等が挙げられる。
　以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例の記載において、細胞傷害性を有するｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞を「ｒｅＣＴＬ」と称する場合がある。
［細胞の準備および培養］
　レトロウイルス調製細胞株「Ｇ３Ｔ－ｈｉ細胞」は、ＴａＫａＲａ社より購入した。
　レトロウイルスパッケージング細胞株「ＰＧ１３細胞」、骨髄腫由来細胞株「ＲＰＭＩ８２２６細胞」、「ＫＭＭ１細胞」、および急性単球性白血病由来細胞株「ＴＨＰ－１細胞」、「ＨＴ細胞」は、ＡＴＣＣより購入した。ＲＰＭＩ８２２６細胞、ＫＭＭ１細胞、ＴＨＰ－１細胞、およびＨＴ細胞はＴａｒｇｅｔ細胞として用いられる。
　Ｇ３Ｔ－ｈｉ細胞およびＰＧ１３細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）および１００Ｕ／ｍＬペニシリン・１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（ＰＳ）（富士フィルム和光純薬，大阪）を加えたダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ－ＭＥＭ）（富士フィルム和光純薬、大阪）で培養した。
　ＲＰＭＩ８２２６細胞、ＫＭＭ１細胞、ＴＨＰ－１細胞、およびＨＴ細胞は、１０％ＦＢＳおよび１００Ｕ／ｍＬ・１００μｇ／ｍＬ　ＰＳを加えたロズウェルパーク記念研究所培地１６４０（ＲＰＭＩ　１６４０）（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で培養した。
　ｒｅＣＴＬは、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬ・１００μｇ／ｍＬ　ＰＳ、１０ｎｇ／ｍＬ　ＩＬ－２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｃｒａｎｂｕｒｙ，ＮＪ）、５ｎｇ／ｍＬ　ＩＬ－７（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｃｒａｎｂｕｒｙ，ＮＪ）、１０ｎｇ／ｍＬ　ＩＬ－２１（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｃｒａｎｂｕｒｙ，ＮＪ）、および０．０３ｇ／ｍＬ　ビタミンＣ（ナカライテスク，京都）を加えたＭＥＭα（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で培養した。ｒｅＣＴＬを増殖する場合は、抗ＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と抗ＣＤ２８抗体（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）をＭＥＭαに添加した。
［実験例１：ｉＰＳ由来ＣＤ８Ｔ細胞の作製］
　ＷＯ２０１７／１７９７２０に記載の方法によりヒトｉＰＳ細胞由来ＣＤ８Ｔ細胞（ｒｅＣＴＬ）を得た。具体的には、以下のとおりである。ヒトｉＰＳ細胞を中胚葉誘導系であるＥＢ法を用いた分化誘導によりＣＤ３４ＣＤ４３ダブルポジティブ細胞である血球前駆細胞へ誘導した。それらの細胞をＯＰ９ＤＬ１フィーダー細胞上に播種し、Ｎｏｔｃｈシグナルを加えながら培養することで、Ｔ前駆細胞であるＤＰ細胞まで誘導してＤＮ細胞およびＤＰ細胞を含む細胞培養物を得た。次いで、ＤＰ細胞を単離し、単離されたＤＰ細胞に対しＣＤ３抗体を用いてＴＣＲ刺激を加えることでＣＤ８ＳＰ細胞（ｒｅＣＴＬ）へ分化させた。このようにして作製されたｒｅＣＴＬは、以降ＣＤ３抗体を用いた刺激を繰り返すことにより増幅させることが可能であり、本ＣＡＲ－Ｔ細胞の土台細胞として使用した。
［実験例２：レトロウイルスベクターの作製］
　ＷＯ２００７／１４２２４１の実施例で構築されたレンチウイルスベクターから、ＣＤ８αのシグナルペプチド、抗ＣＤ３８ｓｃＦＶ、ヒンジドメイン、ＣＤ８αの膜貫通ドメイン、４－１ＢＢの細胞内ドメイン、およびＣＤ３ζドメインを含む抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子配列を制限酵素により切り出し、レトロウイルスベクターｐＭＳ３－１（タカラバイオ社）のＭＣＳに挿入した。得られたレトロウイルスベクターの概略構成を図２に示す。
［実験例３：抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの作製］
　トランスダクションの２４時間前に６ｗｅｌｌプレートにＧ３Ｔ－ｈｉ細胞を播種した。ＴｒａｎｓＩＴ－２９３　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｒｕｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）により、実験例２で作製した抗ＣＤ３８－ＣＡＲをコードする遺伝子を含むレトロウイルスベクターをｇａｇ－ｐｏｌ発現ベクターおよびｅｎｖ発現ベクターとともにトランスフェクトした。
　４８時間後に産生されたエコトロピックレトロウイルスを含む上清を回収し、０．４５μｍフィルターでろ過し、保存した。
　ＰＧ１３細胞を６ｗｅｌｌプレートに播種し、２４時間後Ｄ－ＭＥＭ培地で４倍希釈したエコトロピックレトロウイルス上清と終濃度８μｇ／ｍＬになるよう調製したポリブレンを添加した。４時間以上経過した後、上清を捨て、新たなエコトロピックレトロウイルス上清およびポリブレンを添加した。ＰＧ１３細胞に対する感染作業は計５回実施した。
　最終感染後のＰＧ１３細胞培養上清を回収し、０．４５μｍフィルターでろ過してレトロウイルス溶液とした。
　ｒｅＣＴＬに対してトランスダクションの直前に抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体により増殖刺激を与えた。レトロネクチンでコートしたポリプロピレンチューブに活性化したｒｅＣＴＬ懸濁液およびレトロウイルス溶液を液量１：１で添加し、１２００ｇで１．５時間遠心し感染させた。２４時間後、再度同様の手順でレトロウイルスを感染させ、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬを作製した。
［実験例４：抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬにおける抗ＣＤ３８－ＣＡＲ発現の評価］
　実験例３の抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの作製に供された細胞における抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子の発現をフローサイトメトリーによって評価した。
　具体的には、蛍光標識されたｓｃＦＶのリンカー配列に対する抗体（Ｇ４Ｓ　Ｌｉｎｋｅｒ（Ｅ７Ｏ２Ｖ）Ｒａｂｂｉｔ　ｍＡｂ（Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ（Ｒ）６４７　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）＃６９７８２，ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いて感染後の細胞を染色し、ＢＤ　Ａｃｃｕｒｉ　Ｃ６　Ｐｌｕｓフローサイトメーター（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を用いて測定を行った。データはＢＤ　Ａｃｃｕｒｉ　Ｃ６　Ｐｌｕｓ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＦｌｏｗＪｏ）を使用して解析した。
　未染色サンプルを用いてネガティブゲートを設定し、染色したＴａｒｇｅｔ細胞を用いてポジティブゲートを設定した。死細胞集団はヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色を用いて除外した。結果を図３に示す。図中、「ａｎｔｉ－Ｌｉｎｋｅｒ　Ａｂ」は、Ｇ４Ｓ　Ｌｉｎｋｅｒ（Ｅ７Ｏ２Ｖ）Ｒａｂｂｉｔ　ｍＡｂである。
　図３に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子の導入効率は９５％以上であった。現在、臨床展開されているＣＡＲ－Ｔ療法で用いられるＣＡＲ－Ｔ細胞の作製におけるＣＡＲ－Ｔ遺伝子の導入効率は約２５％であることから、上記抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子の導入効率は顕著に高効率であった。
［実験例５：抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬにおけるＣＤ３８発現の評価］
　実験例３の抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの作製に供された細胞におけるＣＤ３８発現をフローサイトメトリーによって評価した。
　具体的には、蛍光標識された抗ＣＤ３８抗体：ＣＤ３８－ＡＰＣ（ＨＩＴ２，ＢＤ　Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて染色した細胞に対して、ＢＤ　Ａｃｃｕｒｉ　Ｃ６　Ｐｌｕｓフローサイトメーター（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を用いて測定を行った。データはＢＤ　Ａｃｃｕｒｉ　Ｃ６　Ｐｌｕｓ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＦｌｏｗＪｏ）を使用して解析した。
　未染色サンプルを用いてネガティブゲートを設定し、染色したＴａｒｇｅｔ細胞を用いてポジティブゲートを設定した。蛍光標識されたｓｃＦＶのリンカー配列に対する抗体を用いて染色した細胞をイソ型コントロールとして用いた。死細胞集団はヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色を用いて除外した。結果を図４に示す。
　図４に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬはＣＤ３８の発現が陰性であった。実験例４で確認された抗ＣＤ３８－ＣＡＲ遺伝子の高い導入効率は、ｒｅＣＴＬが遺伝子導入の刺激によってＣＤ３８を発現せず、フラトリサイドが抑制されたことが寄与すると推測される。
　なお、実験例１と同様にして作製したロット違いのｒｅＣＴＬを用いて、実験例３と同様にして抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬを作製したところ、３つ以上の異なるロット由来の抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬの全てにおいて、ＣＤ３８の発現が陰性であることが確認された。このことから、ｉＰＳ細胞から分化誘導されたｒｅＣＴＬにおいては、遺伝子導入の刺激によるＣＤ３８の発現が生じないことがわかる。
［実験例６：ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの細胞傷害活性の評価１］
　Ｔａｒｇｅｔ細胞（ＲＰＭＩ８２２６細胞、ＫＭＭ１細胞）とＥｆｆｅｃｔｏｒ細胞（抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬまたはｒｅＣＴＬ）とを９６ｗｅｌｌプレートで共培養した。Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞数に依存した細胞傷害活性を確認するため、Ｅｆｆｅｃｔｏｒ対Ｔａｒｇｅｔ比（Ｅ：Ｔ）を１：２０～１：２の範囲で播種し、４８時間後に生存しているＴａｒｇｅｔ細胞数をフローサイトメトリーで評価した。結果を図５および図６に示す。
　図５および図６に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬは、ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＫＭＭ１細胞のいずれに対してもＥｆｆｅｃｔｏｒ細胞数に依存した細胞傷害活性を示した。
［実験例７：ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの細胞傷害活性の評価２］
　共培養時間に依存した細胞傷害活性を評価した。具体的には、Ｔａｒｇｅｔ細胞（ＲＰＭＩ８２２６細胞、ＫＭＭ１細胞）を１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、０時間～４８時間の間のＴａｒｇｅｔ細胞数をフローサイトメトリーで測定した。結果を図７および図８に示す。図中、「ＣＤ３８　ＣＡＲ」および「Ｃｏｎｔｒｏｌ」として表されるデータはそれぞれ、Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞として抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬおよびｒｅＣＴＬを用いた測定結果を示す。
　図７および図８に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬは、ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＫＭＭ１細胞の両方に対して共培養時間に依存した細胞傷害活性を示した。
［実験例８：ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの細胞傷害活性の評価３］
　ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ　ＲＴＣＡ　Ｓ１６（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ　Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を用いた細胞傷害活性のリアルタイム解析を行った。専用プレートにＴａｒｇｅｔ細胞（ＲＰＭＩ８２２６細胞）を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞はＥ：Ｔが１：５～１：１の範囲になるよう播種した。ＲＰＭＩ８２２６細胞の専用プレートへの接着はｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｋｉｔ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｔｕｍｏｒ　Ｋｉｌｌｉｎｇ　Ａｓｓａｙ（ａｎｔｉ－ＣＤ９）　（Ａｇｉｌｅｎｔ，　Ｓａｎｔａ　Ｃｌａｒａ，　ＣＡ）を用いた。メーカーのプロトコルに従い、細胞の播種と経時的なモニタリングを行った。結果を図９に示す。
　図９に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬは、ＲＰＭＩ８２２６細胞に対して、Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞数依存的および時間依存的な細胞傷害活性を示した。
［実験例９：ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの細胞傷害活性の評価４］
　抗ＣＤ３８抗体薬との競合試験を行った。具体的には、Ｔａｒｇｅｔ細胞（ＲＰＭＩ８２２６細胞）を１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種した。次いで、Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ（Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ，Ｂｅｅｒｓｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）またはＩｓａｔｕｘｉｍａｂ（Ｓａｎｏｆｉ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）を終濃度１００μｇ／ｍＬまたは１０００μｇ／ｍＬになるよう各ｗｅｌｌに添加し、その２時間後にＥｆｆｅｃｔｏｒ細胞を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種した。Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞の播種から４８時間後に生存しているＴａｒｇｅｔ細胞数をフローサイトメトリーで評価した。結果を図１０に示す。
　図１０に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬとＤａｒａｔｕｍｕｍａｂまたはＩｓａｔｕｘｉｍａｂとを共存させた場合、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬを単独で用いた場合に比べて高い細胞傷害活性が得られることが確認された。
［実験例１０：ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの細胞傷害活性の評価５］
　９６ｗｅｌｌプレートでＴａｒｇｅｔ細胞（ＴＨＰ－１、ＨＴ）を単独培養、あるいは、ｒｅＣＴＬまたは抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬと共培養した。共培養のＥＴ比はＥ：Ｔ＝１：５であった。播種から４８時間後に生存しているＴａｒｇｅｔ細胞数をフローサイトメトリーで評価した。結果を図１１および図１２に示す。
　図１１に示されるとおり、ＴＨＰ－１細胞を抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬと共培養した場合、単独培養およびｒｅＣＴＬとの共培養の場合に比べて回収されたＴＨＰ－１細胞数が顕著に少なかった。また、図１２に示されるとおり、ＨＴ細胞を抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬと共培養した場合、ｒｅＣＴＬと共培養した場合に比べて回収されたＨＴ細胞数が顕著に少なかった。このことから、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬは、ＴＨＰ－１細胞およびＨＴ細胞に対しても細胞傷害活性を示すことが確認された。
［実験例１１：ｉｎ　ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果の評価］
　ＮＯＧマウスにルシフェラーゼ遺伝子を導入したＲＰＭＩ８２２６（ＲＰＭＩ８２２６－Ｌｕｃ）細胞を１×１０６個、腹腔に接種した。接種後、４日および１１日目に抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬ（導入効率：７０％）またはｒｅＣＴＬをそれぞれ１×１０６個、尾静脈から投与した。接種後２８日目において、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎをマウスに投与後ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｉｍａｇｉｎｇでその発光強度を測定した。結果を図１３に示す。
　図１３に示されるとおり、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬ投与群およびｒｅＣＴＬ投与群は、Ｅｆｆｅｃｔｏｒ細胞非投与のコントロール群に比べて腫瘍の増殖が抑制された。特に、抗ＣＤ３８－ＣＡＲ－ｒｅＣＴＬ投与群においては、腫瘍の大部分が消失しており、顕著な抗腫瘍効果が確認された。
　本発明の実施形態による抗ＣＤ３８－ＣＡＲキラー細胞は、ＣＡＲ－Ｔ療法等の医療分野において好適に用いられ得る。

Claims (13)

  1. 　細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体が発現されており、
    　前記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３８を抗原として認識する、
    　多能性幹細胞由来の細胞傷害性免疫担当細胞。
  2. 　前記多能性幹細胞が、ヒト人工多能性幹細胞またはヒト胚性多能性幹細胞である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  3. 　前記多能性幹細胞が、ＨＬＡ分子を部分的にまたは全て欠損した多能性幹細胞である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  4. 　Ｔ細胞である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  5. 　ＣＤ８αβヘテロダイマー型のＴ細胞である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  6. 　前記多能性幹細胞が、外来性ＴＣＲ遺伝子を導入された多能性幹細胞である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  7. 　ＣＤ３８の発現が陰性である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  8. 　前記ＣＤ３８が、ヒトＣＤ３８である、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  9. 　前記キメラ抗原受容体が、この順に連結された、前記細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジドメイン、前記膜貫通ドメイン、補助刺激ドメイン、および前記細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  10. 　前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号１で表されるアミノ酸配列またはその相同配列と、配列番号２で表されるアミノ酸配列またはその相同配列と、を含む、請求項１に記載の免疫担当細胞。
  11. 　請求項１に記載の免疫担当細胞を含む、ＣＤ３８の発現に関連する疾患を治療または予防するための医薬組成物。
  12. 　抗ＣＤ３８抗体薬と組み合わせて用いられる、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. 　人工多能性幹細胞から分化誘導されたＣＤ８Ｔ細胞を準備すること、および
    　前記ＣＤ８Ｔ細胞にキメラ抗原受容体をコードする遺伝子を導入することを含み、
    　前記キメラ抗原受容体が、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、
    　前記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３８を抗原として認識する、
    　人工多能性幹細胞由来ＣＡＲ－ＣＤ８Ｔ細胞の製造方法。

     
PCT/JP2024/037114 2023-10-30 2024-10-18 抗ｃｄ３８－ｃａｒを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物 Pending WO2025094699A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2023-185701 2023-10-30
JP2023185701A JP2025074700A (ja) 2023-10-30 2023-10-30 抗ｃｄ３８－ｃａｒを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2025094699A1 true WO2025094699A1 (ja) 2025-05-08

Family

ID=95581833

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2024/037114 Pending WO2025094699A1 (ja) 2023-10-30 2024-10-18 抗ｃｄ３８－ｃａｒを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP2025074700A (ja)
WO (1) WO2025094699A1 (ja)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007142241A1 (ja) * 2006-06-05 2007-12-13 Hiroshima University 抗ｃｄ３８抗体を細胞表面に有する免疫担当細胞
JP2017506636A (ja) * 2014-02-14 2017-03-09 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ 免疫細胞と病的細胞の両方に存在する抗原を標的とするように操作された、免疫療法のための細胞
WO2017179720A1 (ja) * 2016-04-15 2017-10-19 国立大学法人京都大学 Ｃｄ８陽性ｔ細胞を誘導する方法
JP2018522907A (ja) * 2015-08-11 2018-08-16 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ Ｃｄ３８抗原を標的とするためおよびｃｄ３８遺伝子を不活化するために操作された、免疫療法用の細胞
CN111484563A (zh) * 2020-04-30 2020-08-04 徐州医科大学附属医院 一种抗cd38嵌合抗原受体及其应用
WO2021256522A1 (ja) * 2020-06-17 2021-12-23 国立大学法人京都大学 キメラ抗原受容体発現免疫担当細胞

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007142241A1 (ja) * 2006-06-05 2007-12-13 Hiroshima University 抗ｃｄ３８抗体を細胞表面に有する免疫担当細胞
JP2017506636A (ja) * 2014-02-14 2017-03-09 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ 免疫細胞と病的細胞の両方に存在する抗原を標的とするように操作された、免疫療法のための細胞
JP2018522907A (ja) * 2015-08-11 2018-08-16 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ Ｃｄ３８抗原を標的とするためおよびｃｄ３８遺伝子を不活化するために操作された、免疫療法用の細胞
WO2017179720A1 (ja) * 2016-04-15 2017-10-19 国立大学法人京都大学 Ｃｄ８陽性ｔ細胞を誘導する方法
CN111484563A (zh) * 2020-04-30 2020-08-04 徐州医科大学附属医院 一种抗cd38嵌合抗原受体及其应用
WO2021256522A1 (ja) * 2020-06-17 2021-12-23 国立大学法人京都大学 キメラ抗原受容体発現免疫担当細胞

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KAWAMOTO, HIROSHI: "A new drug discovery modality called cellular medicine Trends in cellular medicine: From autologous cells to allogeneic super versatile cells", ENSHO TO MEN'EKI - INFLAMMATION AND IMMUNOLOGY, SENTAN IGAKUSHA, TOKYO, JP, vol. 31, no. 4, 1 July 2023 (2023-07-01), JP , pages 26 (306) - 31 (311), XP009563417, ISSN: 0918-8371 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2025074700A (ja) 2025-05-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7364559B2 (ja) 改変されたナチュラルキラー細胞を生成する方法および使用方法
JP6164746B2 (ja) 抗原特異的ｔ細胞の製造方法
KR20230151513A (ko) Cd8 표적 바이러스 벡터의 용도
CN112204133B (zh) Car nk细胞
US9670459B2 (en) Production method for cell populations
US20240344083A1 (en) Use of cd4-targeted viral vectors
JP6971986B2 (ja) 免疫療法の抗腫瘍活性を高めるための間葉系幹細胞
JP2023525720A (ja) Ｉｎ ｖｉｖｏ形質導入のためのベクター及び方法
JP2024012413A (ja) Ｃｄ３陽性細胞の製造方法
JP5911810B2 (ja) 制御性ｔ細胞の製造方法
US20250090583A1 (en) Universal tcr variants for allogeneic immunotherapy
JP2025534646A (ja) レンチウイルスベクター導入による新規な大規模ｃａｒ－ｔ免疫細胞の製造方法
AU2022259170A1 (en) Cell bank composed of ips cells for introducing t cell receptor gene
JP2023504075A (ja) Ｃａｒ－ｎｋ細胞を得る方法
WO2025094699A1 (ja) 抗ｃｄ３８－ｃａｒを発現する細胞傷害性免疫担当細胞、その製造方法、および当該免疫担当細胞を含む医薬組成物
CN114835820B (zh) 用于基因改造的多能干细胞及、自然杀伤细胞的嵌合型Fc受体
CN102046780A (zh) 转染的细胞的生产方法
CN117098849A (zh) 靶向cd8的病毒载体的用途
US20250207095A1 (en) Manufacturing processes for adoptive cell therapies
JP7725014B2 (ja) ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片
WO2026018922A1 (ja) ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症治療および／または予防用細胞及びその製法
WO2023249071A1 (ja) Ｔ細胞受容体
HK40036126B (zh) Car nk细胞
HK40036126A (en) Car nk cells

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 24885473

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1