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WO2023208168A1 - 一种包含亲水性糖结构的配体-药物偶联物 - Google Patents

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WO2023208168A1
WO2023208168A1 PCT/CN2023/091469 CN2023091469W WO2023208168A1 WO 2023208168 A1 WO2023208168 A1 WO 2023208168A1 CN 2023091469 W CN2023091469 W CN 2023091469W WO 2023208168 A1 WO2023208168 A1 WO 2023208168A1
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WO
WIPO (PCT)
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compound
antibody
ligand
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
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Ceased
Application number
PCT/CN2023/091469
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English (en)
French (fr)
Inventor
朱义
万维李
卓识
张宜英
于天姿
杨秀娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd
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Publication date
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    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the invention discloses a ligand-drug conjugate with improved hydrophilicity, its preparation method and application. Specifically, the present invention discloses a ligand-drug conjugate containing a hydrophilic sugar structure (SU), its preparation method and its use in preparing drugs for treating diseases.
  • SU hydrophilic sugar structure
  • Ligand-drug conjugates are composed of targeted ligands coupled with small molecule drugs (cytotoxicants). They not only have the characteristics of powerful lethality of cytotoxic drugs, but also combine It has a high degree of targeting, stability and favorable pharmacokinetic characteristics of the ligand, which are mainly characterized by: strong therapeutic efficacy; high specificity; weak immunogenicity and difficulty in developing drug resistance; long circulation time in serum; Non-target toxicity is weak, etc.
  • a common challenge in the design of ligand-drug conjugates is the hydrophobicity of the payload, which can lead to problems with water solubility, aggregation, and rapid clearance of the conjugate.
  • the weakening or loss of the cytotoxic effects of anticancer drugs is the main reason why tumor cells develop multidrug resistance.
  • PEG polyethylene glycol
  • the already marketed Sacituzumab-govitecan (IMMU-132) is conjugated to SN-38 through a cleavable maleimide linker with a short PEGylation unit to solve the hydrophobicity problem.
  • the present invention discloses a ligand-drug conjugate containing a hydrophilic sugar structure.
  • the invention further discloses a ligand-drug conjugate containing a hydrophilic sugar structure.
  • the hydrophilic nature of the sugar is used to reduce the hydrophobicity of the payload, thereby increasing the hydrophilicity of the ligand-drug conjugate. sex.
  • the hydrophilic structure involved in the present invention is more easily obtained sugars; the naturally occurring reaction sites in sugars are easier to realize in connection with the payload; in addition, tumor cells have better uptake of sugars. The ability is much greater than that of normal cells, further avoiding the non-target side effects of ligand-drug conjugates.
  • the invention provides a ligand-drug conjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as shown in Formula I, Formula II or Formula III:
  • L is selected from ligands
  • M is selected from any joint unit or key
  • A is selected from any connecting bracket
  • B is present or absent, and when present, is selected from any connecting structure or bond;
  • C is present or absent, and when present, is selected from any branching unit or bond;
  • D, D 1 and D 2 are the same or different, and are each independently selected from drugs;
  • SU is selected from sugar or its derivatives
  • L a and L b are the same or different, and are each independently selected from any connecting unit or bond;
  • n is selected from an integer from 1 to 5;
  • n is an integer selected from 1-10;
  • oSelect an integer from 1-10.
  • the ligand L is selected from an antibody, a functional antibody fragment, or a protein with a targeting effect.
  • the ligand L is selected from antibodies, including but not limited to chimeric antibodies, humanized antibodies, fully human antibodies, or murine antibodies.
  • the linker unit M is non-limitingly selected from the structure or bond represented by the following formula.
  • the linker unit M can also be selected from the group consisting of: The open-loop form of the above structure,
  • the position shown by the wavy line is connected to the ligand, the connecting scaffold A, the connecting structure B or the branch unit C without limitation;
  • the carbon at the position shown is a chiral carbon, and its configuration is R-type or S-type;
  • p and p’ are each independently selected from an integer of 1-10;
  • Ac is selected without limitation from residues of natural or unnatural amino acids, polyethylene glycol segments with 1 to 20 repeating units, phosphate groups, carboxylic acid groups, sulfonic acid groups, sulfinic acid groups or the following structures,
  • the position shown by the wavy line is connected to the carbon atom at the position shown by *.
  • the linker unit M is selected without limitation from the structure represented by the following formula or its stereoisomer or its open ring form,
  • the position shown by the wavy line is connected to the ligand, the connecting scaffold A, the connecting structure B or the branch unit C without limitation;
  • the carbon at the position shown is a chiral carbon, and its configuration is R-type or S-type; p and p' are each independently selected from an integer of 1-10;
  • Ac is selected without limitation from residues of natural or unnatural amino acids, polyethylene glycol segments with 1 to 20 repeating units, phosphate groups, carboxylic acid groups, sulfonic acid groups, sulfinic acid groups or the following structures,
  • the position shown by the wavy line is connected to the carbon atom at the position shown by *.
  • the linker unit M is selected from the structure represented by the following formula or its stereoisomer or its open ring form,
  • p is 1.
  • Ac is a glycine residue.
  • the linker unit M is selected without limitation from the structure shown in the following formula or its open ring form,
  • the linker unit M is
  • the carbon at the position shown is a chiral carbon, and its configuration is R-type or S-type;
  • the position shown by the wavy line is connected to the ligand, the connecting scaffold A, the connecting structure B or the branch unit C without limitation.
  • the connecting scaffold A is non-limitingly selected from one or a combination of natural or unnatural amino acids or the following structure,
  • X is selected from N, CH, C3-C8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • q is selected from an integer from 1 to 10;
  • connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C are connected without limitation to the joint unit M, the connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C;
  • R 1 is selected from hydrogen atom, deuterium atom, halogen, C1-C6 alkyl, C1-C6 substituted alkyl, C3-C8 cycloalkyl C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy C1-C6 alkyl, carboxyl , 3-8 membered heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • R2 is selected without limitation from:
  • the wavy line on the left represents the position where R2 is connected to the chiral carbon indicated by *, and the wavy line on the right represents one of the three connection sites connecting scaffold A.
  • connection bracket A is In some embodiments, R2 is
  • the connecting scaffold A is selected from, but is not limited to, the following structures or stereoisomers thereof,
  • Z is selected from -NH-, -O- or -S-;
  • connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C are connected without limitation to the joint unit M, the connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C;
  • connection bracket A is In some embodiments, Z is -NH-.
  • the aryl group is phenyl.
  • the substituted aryl group is a phenyl group substituted by one or more substituents selected from deuterium atoms, halogen, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C1- C6 haloalkyl.
  • the heteroaryl group is a 6-membered monoheteroaryl group containing one or more heteroatoms selected from nitrogen, oxygen, and sulfur.
  • the B is selected from, without limitation, any linkage structure or bond.
  • the C is present or absent, and when C is present, it is non-limitingly selected from one or a combination of natural or unnatural amino acids.
  • the drugs D, D 1 , and D 2 are the same or different, and are each independently and non-limitingly selected from the group consisting of anti-tumor drugs, autoimmune disease drugs, and anti-infectious disease drugs (such as antiviral drugs) , radioactive isotopes, chromogenic molecules or pharmaceutically acceptable salts or solvates of the above drugs.
  • the drugs D, D 1 and D 2 are the same or different, and are each independently and non-limitingly selected from anti-tumor drugs, including but not limited to DNA damaging agents, RNA damaging agents, enzyme inhibitors or Microtubule inhibitors.
  • the SU is selected, without limitation, from natural or non-natural monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, or derivatives thereof.
  • the natural or non-natural monosaccharide, disaccharide, polysaccharide or derivative thereof is selected from, but is not limited to, the following structure,
  • the SU is selected from meglumine, maltose, maltobionic acid, mannuronic acid, beta-cyclodextrin, or mono(6-amino-6-deoxy)-beta-cyclodextrin.
  • the SU is, without limitation, covalently linked to Lb.
  • the linking units L a and L b are the same or different, and are each independently and non-limitingly selected from one of chemically unstable linking units, enzymatically cleavable linking units or non-cleavable linking units, or Several combinations.
  • La is selected from chemically labile linking units or enzymatically cleaved linking units.
  • the linking unit La is selected, without limitation, from the following structures or stereoisomers thereof:
  • R a , R b , R c are the same or different, and are each independently selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen, an alkyl group, a substituted alkyl group, a deuterated alkyl group, a cycloalkyl group, a cycloalkylalkyl group, or an alkoxy group.
  • R b , R c and the carbon atoms connected to them constitute a C3-C8 cycloalkyl group or a 3-8 membered heterocyclyl group;
  • R d is selected from H, NO 2 , HO-SO 3 - or -OSO 3 ;
  • r is selected from an integer from 1 to 10;
  • the position shown by the wavy line on the right is connected to drug D, D 1 or D 2 .
  • the linking units L a -D, L a -D 1 or L a -D 2 are the same or different, and are selected without limitation from the following structures or stereoisomers thereof,
  • the La - D, La - D 1 or La - D 2 is selected from:
  • auristatin derivatives e.g.
  • Camptothecin analogues e.g.
  • the linking unit L b is selected without limitation from the following structures or stereoisomers thereof,
  • R 3 is selected from hydrogen atom, deuterium atom, halogen, C1-C6 alkyl, deuterated C1-C6 alkyl, halogenated C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl C1-C6 alkyl, C1-C6 alkyl Oxygen C1-C6 alkyl, heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • W is selected from -NR 4 -, -O-, -S-, -CO- or -CONR 5 -;
  • R 4 or R 5 are each independently selected from hydrogen atom, deuterium atom, halogen, C1-C6 alkyl, deuterated C1-C6 alkyl, halogenated C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl C1-C6 alkyl base, C1-C6 alkoxy C1-C6 alkyl, heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • s is selected from an integer from 1 to 10;
  • s’ is selected from an integer from 1 to 10;
  • This application also provides a linker-drug compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as shown in Formula IV, Formula V or Formula VI:
  • M is selected from any joint unit
  • A is selected from any connecting bracket
  • B is present or absent, and when present, is selected from any connecting structure or bond;
  • C is present or absent, and when present, is selected from any branching unit or bond;
  • D, D 1 and D 2 are the same or different, and are each independently selected from drugs;
  • SU is selected from sugar or its derivatives
  • L a and L b are the same or different, and are each independently selected from any connecting unit or bond;
  • n is selected from an integer from 1 to 5;
  • oSelect an integer from 1-10.
  • the linker unit M is non-limitingly selected from the structure shown in the following formula.
  • the linker unit M can also be selected from the structure shown.
  • M' is selected without limitation from halogen, OTf or OTs
  • the carbon at the position shown is a chiral carbon, and its configuration is R-type or S-type;
  • p and p’ are each independently selected from an integer of 1-10;
  • Ac is selected without limitation from residues of natural or unnatural amino acids, polyethylene glycol segments with 1 to 20 repeating units, phosphate groups, carboxylic acid groups, sulfonic acid groups, sulfinic acid groups or the following structures,
  • the position shown by the wavy line is connected to the carbon atom at the position shown by *.
  • the linker unit M is selected without limitation from the structure represented by the following formula or its stereoisomer or its open ring form,
  • the carbon at the position shown is a chiral carbon, and its configuration is R-type or S-type; p and p' are each independently selected from an integer of 1-10;
  • Ac is selected without limitation from residues of natural or unnatural amino acids, polyethylene glycol segments with 1 to 20 repeating units, phosphate groups, carboxylic acid groups, sulfonic acid groups, sulfinic acid groups or the following structures,
  • the position shown by the wavy line is connected to the carbon atom at the position shown by *.
  • the linker unit M is selected without limitation from the structure shown in the following formula or its open ring form,
  • the linker unit M is in:
  • the carbon at the position shown is a chiral carbon, and its configuration is R-type or S-type;
  • the position shown by the wavy line is connected to the connecting bracket A, the connecting structure B or the branch unit C without limitation.
  • the connecting scaffold A is non-limitingly selected from one or a combination of natural or unnatural amino acids or the following structure:
  • X is selected from N, CH, C3-C8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • q is selected from an integer from 1 to 10;
  • connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C are connected without limitation to the joint unit M, the connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C;
  • R 1 is selected from hydrogen atom, deuterium atom, halogen, C1-C6 alkyl, C1-C6 substituted alkyl, C3-C8 cycloalkyl C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy C1-C6 alkyl, carboxyl , 3-8 membered heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • R2 is selected without limitation from:
  • the position shown by the wavy line on the left indicates that R 2 is connected to the chiral carbon position marked with *, and the position shown by the wavy line on the right represents one of the three connection sites connecting the scaffold A.
  • the connecting scaffold A is selected from, but is not limited to, the following structures or stereoisomers thereof,
  • Z is selected from -NH-, -O- or -S-;
  • connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C are connected without limitation to the joint unit M, the connection units L a , L b , the connection structure B or the branch unit C;
  • connection bracket A is In some embodiments, Z is -NH-.
  • the B is selected from, without limitation, any linkage structure or bond.
  • the C is present or absent, and when C is present, it is non-limitingly selected from one or a combination of natural or unnatural amino acids.
  • the drugs D, D 1 , and D 2 are the same or different, and are each independently and non-limitingly selected from the group consisting of anti-tumor drugs, autoimmune disease drugs, and anti-infectious disease drugs (such as antiviral drugs) , radioactive isotopes, chromogenic molecules or pharmaceutically acceptable salts or solvates of the above drugs.
  • the drugs D, D 1 and D 2 are the same or different, and are each independently and non-limitingly selected from anti-tumor drugs, including but not limited to DNA damaging agents, RNA damaging agents, enzyme inhibitors or Microtubule inhibitors.
  • the SU is selected, without limitation, from natural or non-natural monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, or derivatives thereof.
  • the natural or non-natural monosaccharide, disaccharide, polysaccharide or derivative thereof is selected from, but is not limited to, the following structure,
  • the SU is selected from meglumine, maltose, maltobionic acid, mannuronic acid, beta-cyclodextrin, or mono(6-amino-6-deoxy)-beta-cyclodextrin.
  • the SU is, without limitation, covalently linked to Lb.
  • the linking units L a and L b are the same or different, and are each independently and non-limitingly selected from one of chemically unstable linking units, enzymatically cleavable linking units or non-cleavable linking units, or Several combinations.
  • La is selected from chemically labile linking units or enzymatically cleaved linking units.
  • the linking unit La is selected, without limitation, from the following structures or stereoisomers thereof,
  • R a , R b , R c are the same or different, and are each independently selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen, an alkyl group, a substituted alkyl group, a deuterated alkyl group, a cycloalkyl group, a cycloalkylalkyl group, or an alkoxy group.
  • R b and R c and the carbon atoms connected to them constitute a C3-C8 cycloalkyl group or a 3-8 membered heterocyclic group;
  • R d is selected from H, NO 2 or HO-SO 3 or -OSO 3 ;
  • r is selected from an integer from 1 to 10;
  • the position shown by the wavy line on the right is connected to drug D, D 1 or D 2 .
  • the La - D, La - D 1 or La - D 2 are the same or different, and are selected without limitation from the following structures or stereoisomers thereof,
  • the position shown by the wavy line is connected to the connecting bracket A, the connecting structure B or the branch unit C.
  • the La - D, La - D 1 or La - D 2 is selected from:
  • auristatin derivatives e.g.
  • Camptothecin analogues e.g.
  • the linking unit L b is selected without limitation from the following structures or stereoisomers thereof,
  • R 3 is selected from hydrogen atom, deuterium atom, halogen, C1-C6 alkyl, deuterated C1-C6 alkyl, halogenated C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl C1-C6 alkyl, C1-C6 alkyl Oxygen C1-C6 alkyl, heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • W is selected from -NR 4 -, -O-, -S-, -CO- or -CONR 5 -;
  • R 4 or R 5 are each independently selected from hydrogen atom, deuterium atom, halogen, C1-C6 alkyl, deuterated C1-C6 alkyl, halogenated C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl C1-C6 alkyl base, C1-C6 alkoxy C1-C6 alkyl, heterocyclyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;
  • s is selected from an integer from 1 to 10;
  • s’ is selected from an integer from 1 to 10;
  • the L b -SU is selected without limitation from the following structures,
  • the L b -SU is selected without limitation from the following structures,
  • the linker-drug compound is selected from, but is not limited to, the following structures,
  • the linker-drug compound is selected from, but is not limited to, the following structures,
  • the linker-drug compound is selected from, but is not limited to, the following structures,
  • the linker-drug compound is selected from, but is not limited to, the following structures,
  • This application also provides a method for preparing a ligand-drug conjugate represented by Formula I, Formula II or Formula III, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, which is characterized by: including the following steps:
  • L is selected from ligands
  • M is selected from any joint unit
  • A is selected from any connecting bracket
  • B is present or absent, and when present, is selected from any connecting structure or bond;
  • C is present or absent, and when present, is selected from any branching unit or bond;
  • D, D 1 and D 2 are the same or different, and are each independently selected from drugs;
  • SU is selected from sugar or its derivatives
  • L a and L b are the same or different, and are each independently selected from any connecting unit or bond;
  • n is selected from an integer from 1 to 5;
  • n is an integer selected from 1-10;
  • oSelect an integer from 1-10.
  • the ligand-drug conjugate of the present invention or its pharmaceutically acceptable salt or solvate, or the ligand-drug conjugate containing the linker-drug compound of the present invention or its pharmaceutically acceptable salt or solvent compound in some embodiments, is selected without limitation from the following structures or stereoisomers thereof,
  • L is selected from ligands, preferably antibodies
  • n is selected from an integer of 1-10, preferably 2-8.
  • the pharmaceutically acceptable salt is selected from:
  • the ligand is selected from a monoclonal antibody, without limitation selected from: anti-EGFRvIII antibody, anti-DLL-3 antibody, anti-PSMA antibody, anti-CD70 antibody, anti-MUC16 antibody, anti-ENPP3 antibody, anti- TDGF1 antibody, anti-ETBR antibody, anti-MSLN antibody, anti-TIM-1 antibody, anti-LRRC15 antibody, anti-LIV-1 antibody, anti-CanAg/AFP antibody, anti-cladin 18.2 antibody, anti-Mesothelin antibody, anti-HER2(ErbB2) Antibody, anti-EGFR antibody, anti-c-MET antibody, anti-SLITRK6 antibody, anti-KIT/CD117 antibody, anti-STEAP1 antibody, anti-SLAMF7/CS1 antibody, anti-NaPi2B/SLC34A2 antibody, anti-GPNMB antibody, anti-HER3 (ErbB3) antibody, anti- MUC1/CD227 antibody, anti-AXL antibody, anti-CD166 antibody, anti-
  • the ligand is an anti-Trop-2 antibody.
  • the light chain and heavy chain sequences of exemplary anti-Trop-2 antibodies are shown in SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, respectively.
  • the ligand is an anti-CD33 antibody.
  • the light chain and heavy chain sequences of exemplary anti-CD33 antibodies are shown in SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, respectively.
  • the present application also provides a pharmaceutical composition containing a therapeutically effective amount of the ligand-drug conjugate of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a linker-drug compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof or Solvates, and pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
  • the application also provides the ligand-drug conjugate of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt or linker thereof, or a pharmaceutical compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, when prepared for the treatment or prevention of tumors or Use in medicines for autoimmune diseases.
  • the tumor is selected from solid or non-solid tumors, such as breast, ovarian, cervical, uterine, prostate, kidney, urinary tract, bladder, liver, stomach, endometrium Cancer, salivary gland cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, bone cancer, skin cancer (such as epidermal cell carcinoma of the skin (also known as cutaneous squamous cell carcinoma)), thyroid cancer, pancreatic cancer, Melanoma, glioma, neuroblastoma, glioblastoma multiforme, sarcomas, lymphomas, and leukemias (e.g., acute leukemia), chronic leukemias (e.g., acute lymphoblastic leukemia (ALL), acute myeloid leukemia (AML) ), chronic myeloid leukemia (CML), chronic lymphocytic leukemia (CLL), hairy cell leukemia, prolymphocytic leukemia).
  • Applicants intend to include the formulations of the product of that trade name, the generic and active pharmaceutical portions of that trade name.
  • ligand is a targeting agent that specifically binds to a target moiety.
  • the ligand is capable of specifically binding to cellular components or to other target molecules of interest.
  • the target moiety or target is usually on the cell surface.
  • the ligand functions to deliver the drug unit to a specific target cell population with which the ligand unit interacts.
  • Ligands include, but are not limited to, proteins, polypeptides and peptides, as well as non-proteins such as sugars.
  • Suitable ligand units include, for example, antibodies, such as full-length (intact) antibodies and antigen-binding fragments thereof.
  • the ligand unit is a non-antibody targeting agent
  • it may be a peptide or polypeptide, or a non-protein molecule.
  • targeting agents include interferons, lymphokines, hormones, growth factors and colony-stimulating factors, vitamins, nutrient transport molecules, or any other cell-binding molecules or substances.
  • the linker is covalently attached to the sulfur atom of the ligand.
  • the sulfur atom is that of a cysteine residue that forms an interchain disulfide bond of the antibody.
  • the sulfur atom is a sulfur atom that has been introduced into a cysteine residue of the ligand unit, which forms an interchain disulfide bond of the antibody.
  • the sulfur atoms are mutated by, for example, site-directed mutagenesis or chemical reaction. The sulfur atom of the cysteine residue of the ligand unit should be introduced.
  • cytotoxic drugs that is, molecules that have a strong ability within tumor or cancer cells to disrupt their normal growth.
  • cytotoxic drugs can kill tumor cells at high enough concentrations.
  • ligand-drug conjugate refers to a molecule in which a ligand is linked to a drug through a stable linking unit.
  • ligand-drug conjugate is preferably an antibody-drug conjugate (ADC), which refers to a monoclonal antibody or a functional antibody fragment or a targeting protein that is stabilized by The connecting unit is connected to the cytotoxic drug.
  • ADC antibody-drug conjugate
  • antibody or “functional antibody fragment” include within their scope any part of the antibody structure. This unit may bind, reactively associate, or complex a receptor, antigen, or other receptor unit present in the targeted cell population.
  • An antibody can be any protein or proteinaceous molecule that binds, complexes, or reacts with a portion of the cell population to be treated or biomodified.
  • Antibodies of the present invention include, but are not limited to, murine antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies and fully human antibodies, with humanized antibodies and fully human antibodies being preferred.
  • linker unit refers to a chemical structural fragment or bond in which one end is connected to a ligand and the other end is directly connected to a drug or connected to other connecting units and then connected to a drug.
  • linker unit Denoted as M.
  • connecting scaffold refers to a chemical structural fragment or bond with a branched structure that can be connected to a linker unit, a ligand, a drug or a hydrophilic unit, etc.
  • the connecting scaffold is represented as A.
  • the connection method in the present invention is preferably covalent connection.
  • linking unit refers to the chemical structural fragments or bonds that can connect different components of antibody-drug conjugates or linker-drug compounds such as branch units, linking structures, drugs, or hydrophilic units, according to intracellular drug release.
  • the mechanism can be divided into two categories: non-breakable connectors and breakable connectors.
  • the connection units are represented as L, L a and L b .
  • the drug release mechanism is: after the conjugate binds to the antigen and is endocytosed by cells, the antibody is enzymatically hydrolyzed in the lysosome, releasing small molecule drugs.
  • linkers, and antibody amino acid residues are composed of active molecules. The resulting change in the structure of the drug molecule does not weaken its cytotoxicity, but because the active molecule is charged (amino acid residues), it cannot penetrate into neighboring cells. Therefore, such active drugs cannot kill adjacent tumor cells that do not express the target antigen (antigen-negative cells) (bystander effect) (Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13).
  • Cleavable linkers can cleave within target cells and release the active drug (the small molecule drug itself).
  • Cleavable linkers can be divided into two main categories: chemically labile linkers and enzyme-labile linkers.
  • Chemically labile linkers can be selectively cleaved due to differences in plasma and cytoplasmic properties. Such properties include pH, glutathione concentration, etc.
  • Linkers that are sensitive to pH are often called acid-cleavable linkers. Such linkers are relatively stable in the neutral environment of blood (pH 7.3-7.5), but will be hydrolyzed in the weakly acidic endosomes (pH 5.0-6.5) and lysosomes (pH 4.5-5.0). Most of the first generation of antibody-drug conjugates use this type of linker, such as hydrazones, carbonates, acetals, and ketals. Due to the limited plasma stability of acid-cleavable linkers, antibody-drug conjugates based on such linkers generally have short half-lives (2-3 days). This short half-life limits the application of pH-sensitive linkers in new generation antibody drug conjugates to a certain extent.
  • Glutathione-sensitive linkers are also called disulfide linkers. Drug release is caused by the difference between high intracellular glutathione concentrations (millimolar range) and relatively low glutathione concentrations in the blood (micromolar range). This is especially true for tumor cells, where low oxygen levels lead to increased activity of reductase enzymes and thus higher glutathione concentrations. Disulfide bonds are thermodynamically stable and therefore have good stability in plasma.
  • Enzyme-labile linkers such as peptide linkers, enable better control of drug release.
  • Peptide linkers can be effectively cleaved by intralysosomal proteases, such as cathepsin (Cathepsin B) or plasmin (the content of these enzymes is increased in some tumor tissues).
  • This peptide linkage is believed to be very stable in the plasma circulation because proteases are often inactive due to inappropriate extracellular pH and serum protease inhibitors.
  • enzyme-labile linkers are widely used as cleavable linkers for antibody-drug conjugates.
  • Typical enzyme-labile linkers include Val-Cit (VC), Phe-Lys, etc.
  • a suicide linker can also be embedded between the cleavable linker and the active drug, or the suicide linker itself is a part of the cleavable linker.
  • the mechanism of action of the suicide linker is: when the cleavable linker is broken under appropriate conditions, the suicide linker can spontaneously undergo structural rearrangement, thereby releasing the active drug connected to it.
  • Common suicide linkers include para-aminobenzyl alcohols (PAB) and ⁇ -glucuronides ( ⁇ -Glucuronide).
  • connection unit or "connection structure” refers to a chemical structural segment or bond with a branched structure that connects different components in the ligand-drug conjugate.
  • the connection method in the present invention is preferably a covalent connection.
  • sucrose is a polyhydroxy aldehyde or ketone compound, and can become one of the above two after hydrolysis, and can be divided into monosaccharides, disaccharides and polysaccharides.
  • natural amino acid refers to an amino acid that can be biosynthesized. Natural amino acids are generally in the L-form, but there are a few exceptions, such as glycine, both natural and biologically synthesized.
  • unnatural amino acid refers to amino acids that can only be synthesized by artificial methods.
  • alkyl refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, which is a straight or branched chain group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably an alkyl group containing 1 to 12 carbon atoms, more preferably 1 to 10 carbon atoms alkyl groups, most preferably alkyl groups containing 1 to 6 carbon atoms.
  • Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1 ,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2- Methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3 -Dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2 -Methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhe
  • lower alkyl groups containing 1 to 6 (eg 1 to 4) carbon atoms
  • non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl , tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-Methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl , 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl base, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, etc.
  • Alkyl groups may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituents may be substituted at any available point of attachment.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups, independently selected from alkyl groups: Base, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyl Oxy group, heterocycloalkoxy group, cycloalkylthio group, heterocycloalkylthio group, oxo group.
  • substituted alkyl means that the hydrogen in the alkyl group is replaced by a substituent group.
  • R', R" and R"' each refer to hydrogen, C 1-8 alkyl, aryl, aryl substituted by 1-3 halogens, A halogen-substituted C 1-8 alkyl group, C 1-8 alkoxy group or C 1-8 thioalkoxy group, or an unsubstituted aryl-C 1-4 alkyl group.
  • R' and R" are connected to When using the same nitrogen atom, they can form a 3-, 4-, 5-, 6- or 7-membered ring together with the nitrogen atom.
  • -NR'R" includes 1-pyrrolidinyl and 4-morpholinyl.
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon group.
  • the ring of the cycloalkyl group contains 3 to 20 carbon atoms, preferably 3 to 12 carbon atoms, and more preferably 3 to 10 carbon atoms. carbon atoms, most preferably containing 3 to 8 carbon atom.
  • Non-limiting examples of monocyclic cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatriene base, cyclooctyl, etc.; polycyclic cycloalkyl includes spiro ring, fused ring and bridged ring cycloalkyl.
  • cycloalkylalkyl means an alkyl group substituted by one or more cycloalkyl groups, preferably by a cycloalkyl group, wherein alkyl is as defined above and wherein cycloalkyl is as defined above.
  • the ring of the cycloalkyl group preferably contains 3 to 12 carbon atoms, more preferably 3 to 10 carbon atoms, most preferably 3 to 8 carbon atoms, and the alkyl group preferably contains a lower alkyl group of 1 to 6 carbon atoms. , more preferably containing 1 to 4 carbon atoms.
  • alkoxy refers to -O-(alkyl) and -O-(cycloalkyl), where alkyl or cycloalkyl is as defined above.
  • alkoxy include: methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy.
  • the alkoxy group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio group.
  • heterocyclyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon radical containing 3 to 20 ring atoms, of which one or more (e.g., 1, 2, 3, or 4) ring atoms are A heteroatom selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (where m is 0, 1 or 2) and the remaining ring atoms are carbon.
  • ring atoms Preferably it contains 3 to 12 ring atoms, of which 1 to 4 are heteroatoms; more preferably it contains 3 to 10 ring atoms.
  • Non-limiting examples of monocyclic heterocyclyl groups include pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, homopiperazinyl, and the like.
  • Polycyclic heterocyclyl groups include spirocyclic, fused cyclic and bridged cyclic heterocyclyl groups.
  • aryl refers to a 6 to 14 membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (i.e., rings sharing adjacent pairs of carbon atoms) group having a conjugated ⁇ electron system, preferably 6 to 10 members, such as phenyl .
  • the aryl group may be substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, selected without limitation from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, and alkylthio.
  • heteroaryl includes 5-8 membered monocyclic heteroaryl groups and 8-12 membered fused heteroaryl groups.
  • 5-8 membered monocyclic heteroaryl refers to an aromatic monocyclic ring containing 5-8 ring atoms (at least one of which is a heteroatom, such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom). group.
  • ring atoms eg carbon atoms, nitrogen atoms or sulfur atoms
  • cyclic structure can be oxo-substituted.
  • 5-8 membered monocyclic heteroaryl includes, for example, "5-7 membered monocyclic heteroaryl", “5-6 membered monocyclic heteroaryl", “5-6 membered monocyclic nitrogen-containing heteroaryl” , “6-membered monocyclic nitrogen-containing heteroaryl”, etc.
  • the heteroatom in the "nitrogen-containing heteroaryl” contains at least one nitrogen atom, for example, only contains 1 or 2 nitrogen atoms, or contains one Nitrogen atom and 1 or 2 other heteroatoms (such as oxygen atoms and/or sulfur atoms), or, containing 2 nitrogen atoms and 1 or 2 other heteroatoms (such as oxygen atoms and/or sulfur atoms) .
  • 5-8 membered monocyclic heteroaryl include but are not limited to furyl, thienyl, pyrrolyl, thiazolyl, isothiazolyl, thiadiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadizoyl Azolyl, imidazolyl, pyrazolyl, 1,2,3-triazolyl, 1,2,4-triazolyl, 1,2,3-oxadiazolyl, 1,2,4-oxadiazole base, 1,2,5-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl, pyridyl, 2-pyridonyl, 4-pyridonyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, 1,2,3-triazinyl, 1,3,5-triazinyl, 1,2,4,5-tetrazinyl, azepantrienyl, 1,3-diazepantrienyl Alken
  • 8-12-membered fused heteroaryl refers to a cyclic structure formed by two or more cyclic structures sharing two adjacent atoms and containing 8-12 ring atoms (at least one of which is a heteroaryl ring atom).
  • atoms such as nitrogen atoms, oxygen atoms or sulfur atoms
  • unsaturated aromatic cyclic structure such as ring atoms (eg carbon atoms, nitrogen atoms or sulfur atoms) in the cyclic structure can be oxo-substituted.
  • “8-12-membered condensed heteroaryl” includes “8-10-membered condensed heteroaryl", “8-9-membered condensed heteroaryl”, etc.; specific examples include but are not limited to: pyrrolopyrrole, pyrrolofuran, pyrrolofuran Azolopyrrole, pyrazothiophene, furanothiophene, pyrazoloxazole, benzofuryl, benzisofuryl, benzothienyl, indolyl, isoindolyl, benzoxazolyl, Benzimidazolyl, indazolyl, benzotriazolyl, quinolinyl, 2-quinolinonyl, 4-quinolinonyl, 1-isoquinolinonyl, isoquinolinyl, acridinyl, Phenanthridinyl, benzopyridazinyl, phthalazinyl, quinazolinyl, quinoxaliny
  • haloalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more halogens, where alkyl is as defined above.
  • deuterated alkyl refers to an alkyl group substituted with one or more deuterium atoms, wherein alkyl is as defined above.
  • hydroxy refers to the -OH group.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • amino refers to -NH2 .
  • nitro refers to -NO2 .
  • derivative refers to a substance that has a similar chemical structure to a compound but also contains at least one chemical group that is not present in the compound and/or lacks at least one chemical group that is present in the compound.
  • the compound to which a derivative is compared is called the "parent” compound.
  • a “derivative” can be produced from a parent compound in one or more chemical reaction steps.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a pharmaceutically acceptable organic or inorganic salt of a compound (eg, a drug, a linker-drug compound, or a ligand-drug conjugate).
  • the compounds or conjugates may contain at least one amino or carboxyl group and may therefore form addition salts with the corresponding acids or bases.
  • Exemplary salts include, but are not limited to: sulfate, trifluoroacetate, citrate, acetate, oxalate, chloride, bromide, iodide, nitrate, bisulfate, phosphate, acidic Phosphates, isonicotates, lactates, salicylates, acid citrates, tartrates, oleates, tannins, pantothenate, bitartrates, ascorbates, salicylates, Formate, benzoate, glutamate, methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate, potassium salt, sodium salt, etc.
  • solvate refers to the linker-drug compound or ligand-drug conjugate in the present invention formed with one or more solvent molecules, including but not limited to water, ethanol, acetonitrile, isopropyl alcohol, DMSO, ethyl acetate, etc.
  • composition refers to a mixture containing one or more compounds of the present invention or physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof and other chemical components, as well as other components such as physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof.
  • Pharmaceutically acceptable carriers and/or excipients are used. The purpose of pharmaceutical compositions. The purpose of pharmaceutical compositions is to facilitate administration to living organisms and facilitate the absorption of active ingredients to exert biological activity.
  • carrier refers to a system that can change the way a drug enters the body and its distribution in the body, controls the release rate of the drug, and delivers the drug to the target.
  • Drug carrier release and targeting systems can reduce drug degradation and loss, reduce side effects, and improve bioavailability.
  • excipient refers to additional substances or excipients other than the main drug in a pharmaceutical preparation.
  • excipients such as binders, fillers, disintegrants, and lubricants in tablets; matrix backup in semi-solid ointments and creams; preservatives, antioxidants, flavorings, aromatics, and auxiliaries in liquid preparations.
  • Solvents, emulsifiers, anti-reflection agents, osmotic pressure regulators, colorants, etc. can all be called excipients.
  • diluent or "filler” are primarily used to increase the weight and/or volume of a formulation. The addition of diluent not only ensures a certain volume, but also reduces the dosage deviation of the main ingredients and improves the compression moldability of the drug.
  • the linker-drug compound is connected to the ligand through a sulfhydryl group generated by an opened inter-chain disulfide bond or a cysteine sulfhydryl group introduced by genetic engineering at a specific site.
  • the coupling reaction can be carried out with The number of drug molecules connected to the ligand will be less than or equal to the theoretical maximum.
  • the drug loading of ligand-drug conjugates can be controlled by the following non-limiting methods, including:
  • Figure 1A is the SEC-HPLC spectrum of ADC-29, showing the aggregation of ADC-29.
  • Figure 1B is the SEC-HPLC spectrum of ADC-56, showing the aggregation of ADC-56.
  • Figure 1C is the SEC-HPLC spectrum of ADC-111, showing the aggregation of ADC-111.
  • Figure 2A is the RP-HPLC spectrum of ADC-29, showing the drug-antibody conjugation ratio (DAR) of ADC-29.
  • DAR drug-antibody conjugation ratio
  • Figure 2B is the RP-HPLC spectrum of ADC-56, showing the drug-antibody conjugation ratio (DAR) of ADC-56.
  • DAR drug-antibody conjugation ratio
  • Figure 2C is the RP-HPLC spectrum of ADC-111, showing the drug-antibody conjugation ratio (DAR) of ADC-111.
  • DAR drug-antibody conjugation ratio
  • Figure 3A shows the in vitro efficacy of ADC-1, ADC-28, ADC-29, ADC-42, ADC-56, ADC-109, and ADC-111 in the A431 cell line.
  • Figure 3B shows the in vitro efficacy of ADC-1, ADC-28, ADC-29, ADC-42, ADC-56, ADC-109, and ADC-111 in the HL-60 cell line.
  • Figure 3C shows the in vitro efficacy of ADC-1, ADC-28, ADC-29, ADC-42, ADC-56, ADC-109, and ADC-111 in the TF-1 cell line.
  • Figure 3D shows the in vitro efficacy of ADC-1, ADC-28, ADC-29, ADC-42, ADC-56, ADC-109, and ADC-111 in the HEL92.1.7 cell line.
  • Figure 3E shows the in vitro efficacy of ADC-1, ADC-28, ADC-29, ADC-42, ADC-56, ADC-109, and ADC-111 in the MV4-11 cell line.
  • Figure 3F shows the in vitro efficacy of ADC-1, ADC-28, ADC-29, ADC-42, ADC-56, ADC-109, and ADC-111 in the MOLM-13 cell line.
  • Solvent A 0.2% TFA water
  • Solvent B acetonitrile
  • N-fluorenylmethoxycarbonyl-L-glutamic acid 1-tert-butyl ester (21g, 48.9mmol), DCC (20.6g, 97.8mmol), Val-Cit-PABOH (18.5g, 48.9mmol) into a 1L single-neck bottle. ), methylene chloride (400mL), cool in an ice-water bath to 0°C, weigh 4-DMAP (610mg, 4.89mmol) and add it to the reaction bottle at one time, slowly warm to room temperature and react for 3 hours. TLC monitors that the reaction is almost complete, and removes by filtration.
  • the filter cake was rinsed three times with dichloromethane, the solvent was evaporated under reduced pressure, and concentrated to obtain a light yellow oily crude product.
  • Compound 30 was prepared with reference to the synthetic route of Example 14; LC-MS m/z (M+H) + :600.5.
  • the first step synthesis of compound NH 2 -PEG 8 - ⁇ -CD
  • Boc-L-glutamic acid 5-tert-butyl ester 50g, 164.8mmol, 1.0eq
  • a 1L single-neck bottle dissolve it in 250mL THF, and add propargylamine (9.97g, 181.3mmol, 1.1eq) in sequence under an ice-water bath.
  • HOBt 22.25g, 164.8mmol, 1.0eq
  • DIEA 54.3mL, 329.6mmol, 2.0eq
  • EDCI 37.7g, 197.7mmol, 1.2eq
  • Boc-L-glutamic acid 5-tert-butyl ester 50g, 164.8mmol, 1.0eq
  • a 1L single-neck bottle dissolve it in 300mL THF, and add FmocNH-(CH 2 ) 2 -NH 2 (51.1) in sequence under an ice-water bath.
  • FmocNH-(CH 2 ) 2 -NH 2 51.1
  • HOBt 22.25g, 164.8mmol, 1.0eq
  • DIEA 54.3mL, 329.6mmol, 2.0eq
  • EDCI 37.7g, 197.7mmol, 1.2eq
  • warm to room temperature and react for 2h TLC monitors the reaction endpoint.
  • Compound 86a was obtained by referring to the synthesis of "Compound 26" in patent CN102933236A. In a 250mL three-necked flask, add compound 86a (3g, 6.7mmol) and 50mL anhydrous THF. Under nitrogen protection, maintain the ice-water bath at 0°C and add sodium borohydride. The solid (384 mg, 10.2 mmol) was reacted at 0°C for 30 min, then raised to room temperature for 2 h, and the reaction end point was monitored by TLC.
  • Antibodies are prepared according to conventional antibody methods. For example, vectors can be constructed and then transfected into eukaryotic cells for purification and expression.
  • anti-CD33 antibodies were used to prepare ligand-drug conjugates.
  • Ligand-drug conjugates containing anti-TROP-2 antibodies can be prepared with reference to the preparation methods in these examples.
  • the antibody molecules L that have passed the preliminary purification and have a monomer rate greater than 95% are changed into phosphate buffer using an ultrafiltration centrifuge tube at a concentration of 10 mg/mL.
  • use an ultrafiltration centrifuge tube with a molecular weight cutoff of 30KDa to change the medium into PBS and remove the uncoupled payload.
  • the ADC samples were filtered using a 0.22 micron sterilizing filter before use.
  • ADC-1 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-2 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-3 was obtained.
  • ADC-4 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-5 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-6 was obtained.
  • ADC-7 was obtained.
  • ADC-8 was obtained.
  • ADC-9 was obtained.
  • ADC-10 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-11 was obtained.
  • ADC-12 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-13 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-14 was obtained.
  • ADC-15 was obtained.
  • ADC-16 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-17 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-18 was obtained.
  • ADC-19 was obtained.
  • ADC-20 was obtained.
  • ADC-21 was obtained.
  • ADC-22 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-23 was obtained.
  • ADC-24 was obtained.
  • ADC-25 was obtained.
  • ADC-26 was obtained.
  • ADC-28 was obtained.
  • ADC-29 was obtained.
  • ADC-30 was obtained.
  • ADC-31 was obtained.
  • ADC-32 was obtained according to the general preparation method of ligand-drug conjugates.
  • ADC-33 was obtained.
  • ADC-34 was obtained.
  • ADC-35 was obtained.
  • ADC-36 was obtained.
  • ADC-37 was obtained.
  • ADC-38 was obtained.
  • ADC-39 was obtained.
  • ADC-40 According to the general preparation method of ligand-drug conjugates, ADC-40 was obtained.
  • ADC-41 was obtained.
  • ADC-42 was obtained.
  • ADC-43 was obtained.
  • ADC-45 was obtained.
  • ADC-46 was obtained.
  • ADC-48 was obtained.
  • ADC-49 was obtained.
  • ADC-50 was obtained.
  • ADC-51 was obtained.
  • ADC-52 was obtained.
  • ADC-53 was obtained.
  • ADC-54 was obtained.
  • ADC-55 was obtained.
  • ADC-56 was obtained.
  • ADC-57 was obtained.
  • ADC-58 was obtained.
  • ADC-59 was obtained.
  • ADC-60 was obtained.
  • ADC-61 was obtained.
  • ADC-62 was obtained.
  • ADC-63 was obtained.
  • ADC-64 was obtained.
  • ADC-65 was obtained.
  • ADC-66 was obtained.
  • ADC-68 was obtained.
  • ADC-68 was obtained.
  • ADC-69 was obtained.
  • ADC-70 was obtained.
  • ADC-71 was obtained.
  • ADC-72 was obtained.
  • ADC-73 was obtained.
  • ADC-74 was obtained.
  • ADC-75 was obtained.
  • ADC-76 was obtained.
  • ADC-78 was obtained.
  • ADC-79 was obtained.
  • ADC-80 was obtained.
  • ADC-81 was obtained.
  • ADC-82 was obtained.
  • ADC-83 was obtained.
  • ADC-84 was obtained.
  • ADC-85 was obtained.
  • ADC-86 was obtained.
  • ADC-87 was obtained.
  • ADC-88 was obtained.
  • ADC-89 was obtained.
  • ADC-90 was obtained.
  • ADC-91 was obtained.
  • ADC-92 was obtained.
  • ADC-93 was obtained.
  • ADC-94 was obtained.
  • ADC-95 was obtained.
  • ADC-96 was obtained.
  • ADC-97 was obtained.
  • ADC-98 was obtained.
  • ADC-99 was obtained.
  • ADC-100 was obtained.
  • ADC-101 was obtained.
  • ADC-102 was obtained.
  • ADC-103 was obtained.
  • ADC-104 was obtained.
  • ADC-105 was obtained.
  • ADC-106 was obtained.
  • ADC-107 was obtained.
  • ADC-108 was obtained.
  • the payload of ADC-109 was prepared by referring to the synthetic route of Example 11 of the patent "WO2018233571A1", and the ligand-drug conjugate was prepared according to the general method of the present invention.
  • the payload of ADC-110 is prepared by referring to the synthetic route of Example 4-3 on page 148 of the patent "WO2019195665A1", and the ligand-drug conjugate is prepared according to the general method of the present invention.
  • the payload of ADC-111 is prepared by referring to the synthetic route of the compound represented by formula (14) of the patent "WO2019044946A1", and the ligand-drug conjugate is prepared according to the general method of the present invention.
  • Figure 1A- Figure 1C are the SEC-HPLC spectra of ADC-29, ADC-56, and ADC-111 respectively, showing the aggregation of each ADC.
  • the ADC of the present invention has the characteristics of low degradation rate and low aggregation rate, and has the excellent property of high monomer rate.
  • Figure 2A- Figure 2C are the RP-HPLC spectra of ADC-29, ADC-56, and ADC111 respectively, showing the drug-antibody coupling ratio (DAR) of each ADC.
  • DAR drug-antibody coupling ratio
  • the ADC of the present invention has the excellent property of high DAR value, and can significantly increase the drug concentration at the target site under the same dosage of ADC drug.
  • ADC sample Take a certain amount of ADC sample and add it to the human plasma from which human IgG has been removed. Repeat three tubes for each ADC and place it in a 37°C water bath for incubation. After incubation for 7 days, 14 days and 21 days, take out the ADC sample and add it to each tube. ProteinA Resin (MabSelect SuReTM LX Lot: #10221479GE, washed with PBS) 100uL, rock the vertical mixer for 2 hours, and go through the washing and elution steps to obtain the incubated ADC. Perform RP-HPLC detection on ADC samples incubated for specific times.
  • the hydrophilicity-enhancing ADC drugs of the present invention such as ADC-1 and ADC-28, have higher monomer rates and less aggregation in plasma after 21 days of plasma incubation at 37°C. It is proved that the ADC drug of the present invention has better hydrophilicity and stability.
  • Example 237 In vitro efficacy testing of antibody-drug conjugates
  • a variety of human tumor cell lines (A431 (human epidermal cancer cells), HL-60 (human promyelocytic acute leukemia cells), TF-1 (human blood leukemia cells), HEL92.1.7 (human erythroblastoma cells), Leukocyte leukemia cells), MV4-11 (human myeloid leukemia cells) and MOLM-13 (human acute myeloid leukemia cells) were used as experimental models to evaluate the in vitro efficacy of ADC conjugated drugs.
  • A431 human epidermal cancer cells
  • HL-60 human promyelocytic acute leukemia cells
  • TF-1 human blood leukemia cells
  • HEL92.1.7 human erythroblastoma cells
  • Leukocyte leukemia cells human myeloid leukemia cells
  • MOLM-13 human acute myeloid leukemia cells
  • Inoculate a certain number of tumor cell lines into a 96-well plate add serially diluted test antibodies and corresponding ADC drugs to the cells, treat for 5 days, use Alamar Blue or MTS to detect cell viability, and evaluate the test antibodies by calculating IC 50 and the inhibitory effect of ADC on tumor cell lines.
  • the starting concentration of the antibody drug is 500nM
  • the dilution factor is 7 times
  • a total of 8 concentration points and the treatment is for 5 days.
  • Example 238 In vivo efficacy detection of antibody-drug conjugates
  • the present invention establishes a human erythroleukemia cell HEL92.1.7BALB/c Nude subcutaneous transplant tumor model to evaluate the in vivo efficacy of ADC coupling drugs.
  • mice 5 ⁇ 10 6 HEL92.1.7 cells (0.1 mL/mouse) were injected subcutaneously into the right scapula of BALB/c Nude mice aged 5 to 6 weeks.
  • vehicle control group Vehicle
  • CD33-mAb monoclonal antibody
  • ADC treatment group 5mg/kg, 10mg/kg
  • mice 5 animals in each group, and started administration (D0) .
  • Each group was administered with tail vein injection at 10 mL/kg body weight.
  • the ADC drug of the present invention can significantly inhibit the growth of tumors at different doses, and is dose-dependent to a certain extent.

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Abstract

一种含有亲水性糖结构（SU）的配体-药物偶联物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及该配体-药物偶联物的制备方法和在制备治疗疾病的药物中的用途。所述配体-药物偶联物具有改善的亲水性。

Description

一种包含亲水性糖结构的配体-药物偶联物 技术领域
本发明公开一种改善亲水性的配体-药物偶联物、其制备方法以及应用。具体而言，本发明公开了一种含有亲水糖结构(SU)的配体-药物偶联物、其制备方法及其在制备治疗疾病的药物中的用途。
背景技术
配体-药物偶联物尤其是抗体-药物偶联物，由具有靶向性的配体与小分子药物(细胞毒素)偶联而成，既具有细胞毒药物杀伤力强大的特点，又结合了配体高度的靶向性、稳定性和有利的药代动力学特征，主要表现为：治疗效力强；特异性高；免疫原性弱，不容易产生抗药性；血清中循环时间长；对非靶点毒性弱等。
目前有100多种抗体-药物偶联物正在进行临床试验，大多数已从I期进展到II期。一些抗体-药物偶联物的III期试验显示积极结果。截止2021年11月，全球已有14款上市的ADC药物，治疗领域主要集中在血液瘤和实体瘤方面，并且主要是用于患者的后线治疗，包括晚期、复发/难治性以及转移性的肿瘤适应症。
配体-药物偶联物设计中的一个常见挑战是有效载荷的疏水性，这可能会导致偶联物在水溶性、聚集性和快速清除方面的问题。研究表明，癌细胞MDR1基因的扩增及其产物(一种能量依赖性转运P-蛋白)的过表达能够将肿瘤细胞内的抗癌药物泵出细胞外，降低细胞内的药物浓度，使疏水性抗癌药物的细胞毒性作用减弱或丧失，是肿瘤细胞产生多药耐药的主要原因。目前，克服这一问题的主要方法是使用聚乙二醇(PEG)连接物来改善配体-药物偶联物在水中的溶解度(参考专利：WO2015057699A2)。已上市Sacituzumab-govitecan(IMMU-132)便是通过具有短聚乙二醇化单元的可裂解马来酰亚胺连接体与SN-38偶联，以解决疏水性问题。
发明内容
为了解决配体-药物偶联物中有效载荷的疏水性，本发明公开了一种包含亲水性糖结构的配体-药物偶联物，本发明还进一步公开了一种包含亲水性糖结构的连接子-药物偶联物，以及上述配体-药物偶联物或连接子-药物偶联物在制备用于治疗或预防疾病(例如肿瘤或自身免疫疾病)的药物中的用途。
具体而言，通过将糖结构(例如单糖、二糖或多糖)连接至有效载荷，利用糖类亲水性的特点降低有效载荷的疏水性，从而提高配体-药物偶联物的亲水性。与现有技术相比，本发明涉及的亲水结构为更易获得的糖类；糖类中天然存在的反应位点在与有效载荷的连接中更容易实现；此外，肿瘤细胞对于糖类的摄取能力远大于正常细胞，进一步避免了配体-药物偶联物的非靶向性副作用。
在一个方面，本发明提供了如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
其中：
L选自配体；
M选自任意接头单元或键；
A选自任意连接支架；
B存在或不存在，当存在时，选自任意连接结构或键；
C存在或不存在，当存在时，选自任意分支单元或键；
D、D1、D2相同或不同，且各自独立地选自药物；
SU选自糖或其衍生物；
La、Lb相同或不同，且各自独立地选自任意连接单元或键；
m选自1-5的整数；
n选自1-10的整数；
o选自1-10的整数。
在一些实施方案中，所述配体L选自抗体、功能性的抗体片段或具有靶向作用的蛋白。
在一些实施方案中，所述配体L选自抗体，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体或鼠源抗体。
在一些实施方案中，所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或键，当所述结构含有环烷基或杂环基时，所述接头单元M还可以选自所述结构的开环形式，
其中：
波浪线所示位置非限制性地与配体、连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
*所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
p、p’各自独立地选自1-10的整数；
Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
在一些实施方案中，所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其立体异构体或其开环形式，
其中：
波浪线所示位置非限制性地与配体、连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
*所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；p、p’各自独立地选自1-10的整数；
Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
在一些实施方案中，所述接头单元M选自如下式所示的结构或其立体异构体或其开环形式，
在一些实施方案中，p为1。在一些实施方案中，Ac为甘氨酸残基。
在一些实施方案中，所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其开环形式，
在一些实施方案中，所述接头单元M为
其中：
*所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
波浪线所示位置非限制性地与配体、连接支架A、连接结构B或分支单元C相连。
在一些实施方案中，所述连接支架A非限制性地选自天然或非天然氨基酸中的一种或几种的组合或以下结构，
其中：
X选自N、CH、C3-C8环烷基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
Y选自-NH-、-O-、-S-、-CO-、-CO2-、-CONH-、-NHCO-、-SO-、-SO2-、-OSO2-或-OP＝O(OH)O-；
q选自1-10的整数；
波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
R1选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、羧基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
R2非限制性的选自：
其中左侧波浪线表示R2连接至*所示的手性碳的位置，右侧波浪线代表连接支架A的任意三个连接位点之一。
在一些实施方案中，所述连接支架A为在一些实施方案中，R2为
在一些实施方案中，所述连接支架A非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
其中：
Z选自-NH-、-O-或-S-；
波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
在一些实施方案中，所述连接支架A为在一些实施方案中，Z为-NH-。
在一些实施方案中，所述芳基为苯基。在一些实施方案中，所述取代芳基为被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基选自氘原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，所述杂芳基为含有一个或多个选自氮、氧、硫的杂原子的6元单杂芳基。
在一些实施方案中，所述B非限制性地选自任意连接结构或键。
在一些实施方案中，所述C存在或不存在，当C存在时，非限制性的选自天然或非天然氨基酸的一种或几种的组合。
在一些实施方案中，所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物、自身免疫疾病药物、抗感染性疾病药物(例如抗病毒药物)、放射性同位素、发色分子或上述药物药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物，包括但不限于DNA损伤剂、RNA损伤剂、酶抑制剂或微管抑制剂。
在一些实施方案中，所述SU非限制性地选自天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物。
在一些实施方案中，所述天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物非限制性地选自以下结构，
在一些实施方案中，所述SU选自葡甲胺、麦芽糖、麦芽糖酸、甘露糖醛酸、β-环糊精或单(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精。
在一些实施方案中，所述SU非限制性地以共价形式连接至Lb。
在一些实施方案中，所述连接单元La、Lb相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自化学不稳定连接单元、酶催化裂解的连接单元或不可断裂连接单元的一种或几种组合。
在一些实施方案中，La选自化学不稳定连接单元或酶催化裂解的连接单元。
在一些实施方案中，所述连接单元La非限制性地选自以下结构或其立体异构体：

其中：
Ra、Rb、Rc相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
或者，Rb、Rc和与二者相连的碳原子构成C3-C8环烷基或3-8元杂环基；
Rd选自H、NO2、HO-SO3-或-OSO3；
r选自1-10的整数；
左侧波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
右侧波浪线所示位置与药物D、D1或D2相连。
在一些实施方案中，连接单元La-D、La-D1或La-D2相同或不同，并且非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
(1)奥瑞斯他汀衍生物(Auristatins)

(2)美登木素生物碱衍生物(maytansinoids)
(3)苯二氮类药物(Benzodiazepines)

(4)喜树碱类似物
(5)Tubulysins
(6)阿霉素类
(7)卡奇霉素类(Calicheamicins)
(8)Duocarmycins

(9)其它抗肿瘤药物
其中：
波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
在一些实施方案中，所述La-D、La-D1或La-D2选自：
奥瑞斯他汀衍生物，例如
苯二氮衍生物，例如
喜树碱类似物，例如
考布他汀衍生物，例如
在一些实施方案中，所述连接单元Lb非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
其中：
R3选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
W选自-NR4-、-O-、-S-、-CO-或-CONR5-；
R4或R5各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
s选自1-10的整数；
s’选自1-10的整数；
左侧波浪线与右侧波浪线所示位置非限制性地连接SU或连接支架A。
本申请还提供了一种如式Ⅳ、式Ⅴ或式Ⅵ所示的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
其中：
M选自任意接头单元；
A选自任意连接支架；
B存在或不存在，当存在时，选自任意连接结构或键；
C存在或不存在，当存在时，选自任意分支单元或键；
D、D1、D2相同或不同，且各自独立地选自药物；
SU选自糖或其衍生物；
La、Lb相同或不同，且各自独立地选自任意连接单元或键；
m选自1-5的整数；
o选自1-10的整数。
在一些实施方案中，所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构，当所述结构含有环烷基或杂环基时，所述接头单元M还可以选自所示结构的开环形式，
其中：
波浪线所示位置非限制性地与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
M’非限制性地选自卤素、OTf或OTs；
*所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
p、p’各自独立地选自1-10的整数；
Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
在一些实施方案中，所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其立体异构体或其开环形式，
其中：
波浪线所示位置非限制性地与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
*所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；p、p’各自独立地选自1-10地整数；
Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
在一些实施方案中，所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其开环形式，
在一些实施方案中，所述接头单元M为其中：
*所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
波浪线所示位置非限制性地与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连。
在一些实施方案中，所述连接支架A非限制性地选自天然或非天然氨基酸中的一种或几种的组合或以下结构：
其中：
X选自N、CH、C3-C8环烷基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
Y选自-NH-、-O-、-S-、-CO-、-CO2-、-CONH-、-NHCO-、-SO-、-SO2-、-OSO2-或-OP＝O(OH)O-；
q选自1-10的整数；
波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
R1选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、羧基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
R2非限制性的选自：

其中左侧波浪线所示位置表示R2连接至*标记的手性碳位置，右侧波浪线所示位置代表连接支架A的任意三个连接位点之一。
在一些实施方案中，所述连接支架A非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
其中：
Z选自-NH-、-O-或-S-；
波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
在一些实施方案中，所述连接支架A为在一些实施方案中，Z为-NH-。
在一些实施方案中，所述B非限制性地选自任意连接结构或键。
在一些实施方案中，所述C存在或不存在，当C存在时，非限制性的选自天然或非天然氨基酸的一种或几种的组合。
在一些实施方案中，所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物、自身免疫疾病药物、抗感染性疾病药物(例如抗病毒药物)、放射性同位素、发色分子或上述药物药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物，包括但不限于DNA损伤剂、RNA损伤剂、酶抑制剂或微管抑制剂。
在一些实施方案中，所述SU非限制性地选自天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物。
在一些实施方案中，所述天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物非限制性地选自以下结构，

在一些实施方案中，所述SU选自葡甲胺、麦芽糖、麦芽糖酸、甘露糖醛酸、β-环糊精或单(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精。
在一些实施方案中，所述SU非限制性地以共价形式连接至Lb。
在一些实施方案中，所述连接单元La、Lb相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自化学不稳定连接单元、酶催化裂解的连接单元或不可断裂连接单元的一种或几种组合。
在一些实施方案中，La选自化学不稳定连接单元或酶催化裂解的连接单元。
在一些实施方案中，所述连接单元La非限制性地选自以下结构或其立体异构体，

其中：
Ra、Rb、Rc相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
或者Rb与Rc和与二者相连的碳原子构成C3-C8环烷基或3-8元杂环基；
Rd选自H、NO2或HO-SO3或-OSO3；
r选自1-10的整数；
左侧波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
右侧波浪线所示位置与药物D、D1或D2相连。
在一些实施方案中，所述La-D、La-D1或La-D2相同或者不同，并且非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
(1)奥瑞斯他汀衍生物(Auristatins)

(2)美登木素生物碱衍生物(maytansinoids)
(3)苯二氮类药物Benzodiazepines

(4)喜树碱类似物
(5)Tubulysins
(6)阿霉素类
(7)卡奇霉素类(Calicheamicins)
(8)Duocarmycins

(9)其它抗肿瘤药物
其中：
波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连。
在一些实施方案中，所述La-D、La-D1或La-D2选自：
奥瑞斯他汀衍生物，例如
苯二氮衍生物，例如
喜树碱类似物，例如
考布他汀衍生物，例如
在一些实施方案中，所述连接单元Lb非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
其中：
R3选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
W选自-NR4-、-O-、-S-、-CO-或-CONR5-；
R4或R5各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
s选自1-10的整数；
s’选自1-10的整数；
左侧波浪线与右侧波浪线所示位置非限制性地连接SU或连接支架A。
在一些实施方案中，所述Lb-SU非限制性地选自以下结构，







在一些实施方案中，所述Lb-SU非限制性地选自以下结构，

在一些实施方案中，所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，




在一些实施方案中，所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，


在一些实施方案中，所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，


在一些实施方案中，所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，


本申请还提供了一种制备如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法，其特征在于：包括如下步骤，

通过修饰后的配体与式Ⅳ、式Ⅴ或式Ⅵ化合物反应，得到如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中：
L选自配体；
M选自任意接头单元；
A选自任意连接支架；
B存在或不存在，当存在时，选自任意连接结构或键；
C存在或不存在，当存在时，选自任意分支单元或键；
D、D1、D2相同或不同，且各自独立地选自药物；
SU选自糖或其衍生物；
La、Lb相同或不同，且各自独立地选自任意连接单元或键；
m选自1-5的整数；
n选自1-10的整数；
o选自1-10的整数。
本发明的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含有本发明的连接子-药物化合物的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，在一些实施方案中，所述配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物非限制性地选自以下结构或其立体异构体，










其中：
L选自配体，优选抗体；
n选自1-10的整数，优选2-8。
在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐选自：
结构式中酸性官能团与碱形成的钠盐、钾盐、钙盐或镁盐；
结构中碱性官能团与酸形成的醋酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、硝酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乳酸盐、油酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
在一些实施方案中，所述配体选自单克隆抗体，非限制性地选自：抗EGFRvIII抗体、抗DLL-3抗体、抗PSMA抗体、抗CD70抗体、抗MUC16抗体、抗ENPP3抗体、抗TDGF1抗体、抗ETBR抗体、抗MSLN抗体、抗TIM-1抗体、抗LRRC15抗体、抗LIV-1抗体、抗CanAg/AFP抗体、抗cladin 18.2抗体、抗Mesothelin抗体、抗HER2(ErbB2) 抗体、抗EGFR抗体、抗c-MET抗体、抗SLITRK6抗体、抗KIT/CD117抗体、抗STEAP1抗体、抗SLAMF7/CS1抗体、抗NaPi2B/SLC34A2抗体、抗GPNMB抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗MUC1/CD227抗体、抗AXL抗体、抗CD166抗体、抗B7-H3(CD276)抗体、抗PTK7/CCK4抗体、抗PRLR抗体、抗EFNA4抗体、抗5T4抗体、抗NOTCH3抗体、抗Nectin 4抗体、抗Trop-2抗体、抗CD142抗体、抗CA6抗体、抗GPR20抗体、抗CD174抗体、抗CD71抗体、抗EphA2抗体、抗LYPD3抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR3抗体、抗FRα抗体、抗CEACAMs抗体、抗GCC抗体、抗Integrin Av抗体、抗CAIX抗体、抗P-cadherin抗体、抗GD3抗体、抗Cadherin 6抗体、抗LAMP1抗体、抗FLT3抗体、抗BCMA抗体、抗CD79b抗体、抗CD19抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD74抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD37抗体、抗CD138抗体、抗CD352抗体、抗CD25抗体或抗CD123抗体；
在一些实施方案中，所述配体为抗Trop-2抗体。示例性的抗Trop-2抗体的轻链和重链序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
在一些实施方案中，所述配体为抗CD33抗体。示例性的抗CD33抗体的轻链和重链序列分别如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。
本申请还提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的本发明的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本申请还提供了本发明的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，在制备用于治疗或预防肿瘤或自身免疫疾病药物中的用途。
在一些实施方案中，所述肿瘤选自实体瘤或非实体瘤，例如乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、骨癌、皮肤癌(例如皮肤表皮细胞癌(又被称为皮肤鳞状细胞癌))、甲状腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、多形性胶质细胞瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病(例如急性白血病、慢性白血病，例如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病、幼淋巴细胞白血病)。
术语定义
除非另有限定，本文所用的所有技术和科学术语均与本发明所属领域普通技术人员的通常理解一致。虽然也可采用与本发明所述相似或等同的任何方法和材料实施或测试本发明，但本发明描述了优选的方法的材料。描述和要求保护本发明时，依据以下定义使用下列术语。
当本发明中使用商品名时，申请人旨在包括该商品名产品的制剂、该商品名的非专利药和活性药物部分。
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“配体”是与靶标部分特异性结合的靶向剂。所述配体能够特异性结合至细胞组分或结合至其他感兴趣的靶标分子。靶标部分或靶标通常在细胞表面上。在一些方面中，配体的作用是将药物单元递送至配体单元与之相互作用的特定靶细胞群。配体包括但不限于蛋白质、多肽和肽，以及非蛋白质如糖。合适的配体单元包括，例如，抗体，例如全长(完整)抗体及其抗原结合片段。在配体单元是非抗体靶向试剂的实施方式中，其可以是肽或多肽，或非蛋白质分子。这类靶向试剂的示例包括干扰素、淋巴因子、激素、生长因子和集落刺激因子、维生素、营养转运分子、或任何其他细胞结合分子或物质。在一些实施方式中，连接子共价连接至配体的硫原子。在一些方面中，硫原子是半胱氨酸残基的硫原子，其形成抗体的链间二硫键。在另一方面中，硫原子是已经导入配体单元的半胱氨酸残基的硫原子，其形成抗体的链间二硫键。在另一方面中，硫原子是通过例如定点诱变或化学反 应导入配体单元的半胱氨酸残基的硫原子。
术语“药物”是指细胞毒性药物，即，能在肿瘤或癌症细胞内具有较强破坏其正常生长的能力的分子。细胞毒性药物原则上在足够高的浓度下都可以杀死肿瘤细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤或癌症细胞的同时，也会导致正常细胞的凋亡，容易导致严重的副作用。
术语“配体-药物偶联物”，指配体通过稳定的连接单元与药物相连形成的分子。在本发明中“配体-药物偶联物”优选为抗体-药物偶联物(Antibody drug conjugate,ADC)，指把单克隆抗体或者功能性的抗体片段或者具有靶向性的蛋白等通过稳定的连接单元与细胞毒性药物相连。
术语“抗体”或“功能性的抗体片段”在其所属的范围内，包括抗体结构的任何部分。这一单元可以结合、反应性关联或者络合一个受体、抗原或者靶向细胞群体具有的其它受体单元。抗体可以是任何蛋白或蛋白类分子，它可以结合、络合或者与待治疗或生物改造的细胞群体的一部分发生反应。
本发明的抗体包括但不限于鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体，优选人源化抗体和全人源抗体。
术语“接头单元”是指一端与配体连接而另一端与药物直接连接或连接至其它连接单元后再与药物连接的化学结构片段或键，在本申请的通式I～VI中，接头单元表示为M。
术语“连接支架”是指能与接头单元、配体、药物或亲水单元等连接的具有分支结构的化学结构片段或者键，连接支架表示为A。本发明中的连接方式优选为共价连接。
术语“连接单元”是指能连接分支单元、连接结构、药物或亲水单元等抗体-药物偶联物或连接子-药物化合物中不同组分的化学结构片段或键，按照在细胞内药物释放的机制，可被分为两类：不可断裂连接子和可断裂连接子，连接单元表示为L、La、Lb。
对于含有不可断裂连接子的配体-药物偶联物，其药物释放机制为：偶联物与抗原结合并被细胞内吞后，抗体在溶酶体中被酶解，释放出由小分子药物、连接子、和抗体氨基酸残基共同组成的活性分子。由此带来的药物分子结构改变并不减弱其细胞毒性，但由于活性分子是带电荷的(氨基酸残基)，从而导致其不能渗入邻近细胞。因此，此类活性药物不能杀死邻近不表达靶向抗原(抗原阴性细胞)的肿瘤细胞(旁观者效应，bystander effect)(Ducry等，2010，Bioconjugate Chem.21:5-13)。
可断裂连接子，顾名思义，可以在目标细胞内断裂并释放出活性药物(小分子药物本身)。可断裂连接子可分为两个主要的类别：化学不稳定连接子和酶不稳定连接子。
化学不稳定连接子可以由于血浆和细胞质性质的不同而选择性地断裂。这样的性质包括pH值，谷胱甘肽浓度等。
对pH值敏感的连接子，通常又称为酸断裂连接子。这样的连接子在血液的中性环境下相对稳定(pH 7.3-7.5)，但是在弱酸性的内涵体(pH 5.0-6.5)和溶酶体(pH 4.5-5.0)内将会被水解。第一代的抗体药物偶联物大多应用这类连接子，例如腙、碳酸酯、缩醛、缩酮类。由于酸断裂连接子有限的血浆稳定性，基于此类连接子的抗体药物偶联物通常具有较短的半衰期(2-3天)。这种较短的半衰期在一定程度上限制了pH敏感连接子在新一代抗体药物偶联物中的应用。
对于谷胱甘肽敏感的连接子，又称二硫键连接子。药物释放是基于细胞内谷胱甘肽的高浓度(毫摩尔范围)与血液中相对较低的谷胱甘肽浓度(微摩尔范围)差异引起的。对于肿瘤细胞而言尤其如此，其低含氧量导致还原酶的活性增强，因而导致更高的谷胱甘肽浓度。二硫键具有热力学稳定性，因此在血浆中具有较好的稳定性。
酶不稳定连接子，如肽连接子，能够更好地控制药物释放。肽连接子能够被溶酶体内蛋白酶，如组织蛋白酶(Cathepsin B)或纤溶酶(在一些肿瘤组织中此类酶含量增加)，有效地切断。这种肽连接被认为在血浆循环中非常稳定，这是因为细胞外不合宜的pH值及血清蛋白酶抑制剂导致蛋白酶通常不具备活性。鉴于较高的血浆稳定性和良好的细胞内断 裂选择性和有效性，酶不稳定连接子被广泛用做抗体药物偶联物的可断裂连接子。典型的酶不稳定性连接子包括Val-Cit(VC)，Phe-Lys等。
在可断裂连接子与活性药物之间，还可以嵌合有自杀式连接子，或者自杀式连接子本身就是可断裂连接子的一部分。自杀式连接子的作用机制是：当可断裂连接子在合宜的条件下断裂后，自杀式连接子能够自发地进行结构重排，进而释放与之连接的活性药物。常见的自杀式连接子包括对氨基苄醇类(PAB)和β-葡萄糖醛酸苷类(β-Glucuronide)等。
术语“分支单元”或“连接结构”是指连接配体-药物偶联物中不同组分的具有分支结构的化学结构片段或者键，本发明中的连接方式优选为共价连接。
术语“糖”是多羟基的醛类或酮类化合物，并且在水解后能变成以上两者之一，可分为单糖、二糖和多糖等。
本发明所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.boil.Chem.1968,243,3558.中所述。
术语“天然氨基酸”指可由生物合成的氨基酸。天然氨基酸一般情况下是L-型的，但也有少数例外，比如甘氨酸，包括天然的和生物体合成的。
术语“非天然氨基酸”指只能通过人工方法合成的氨基酸。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至10个碳原子的烷基，最优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个(例如1至4个)碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“取代烷基”指烷基中的氢被取代基团取代，除非文中另有说明，烷基的取代基可以是选自下组的一种或多种基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，取代基数量为1至(2m’+1)，其中m’为该基团中碳原子的总数，例如1、2、3、4、5或6。R’、R”和R”’各自地指代氢、C1-8烷基、芳基、由1-3个卤素取代的芳基、由1-3个卤素取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基、或未取代的芳基-C1-4烷基。R’和R”连接于同一个氮原子时，它们可与该氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR’R”包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的单环或多环环状烃基，环烷基的环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个 碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“环烷基烷基”指烷基被一个或多个环烷基取代，优选被一个环烷基取代，其中烷基如上所定义，其中环烷基如上所定义。其中，环烷基的环优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个碳原子，烷基优选含有1至6个碳原子的低级烷基，更优选含有1至4个碳原子。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(环烷基)，其中烷基或环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环或多环环状烃基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个(例如1、2、3或4个)环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至10个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(即共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6-10元，例如苯基。芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为以下一个或多个基团，非限制性地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、氘原子、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基或杂环烷硫基。
术语“杂芳基”包括5-8元单环杂芳基和8-12元稠杂芳基。
术语“5-8元单环杂芳基”是指含有5-8个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的单环环状基团。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“5-8元单环杂芳基”包括例如“5-7元单环杂芳基”、“5-6元单环杂芳基”、“5-6元单环含氮杂芳基”、“6元单环含氮杂芳基”等，所述的“含氮杂芳基”中的杂原子至少含有一个氮原子，例如，仅包含1个或2个氮原子，或者，包含一个氮原子和其他的1个或2个杂原子(例如氧原子和/或硫原子)，或者，包含2个氮原子和其他的1个或2个杂原子(例如氧原子和/或硫原子)。“5-8元单环杂芳基”的具体实例包括但不仅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1,3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。
术语“8-12元稠杂芳基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有8-12个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的、不饱和的具有芳香性的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“8-12元稠杂芳基”包括“8-10元稠杂芳基”，“8-9元稠杂芳基”等；具体实例包括但不限于：吡咯并吡咯、吡咯并呋喃、吡唑并吡咯、吡唑并噻吩、呋喃并噻吩、吡唑并噁唑、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、2-喹啉酮基、4-喹啉酮基、1-异喹啉酮基、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、嘌呤基、萘啶基等。
术语“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“氘代烷基”指被一个或多个氘原子取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“硝基”指-NO2。
术语“衍生物”是指具有与化合物相似的化学结构但还含有至少一个化合物中不存在的化学基团和/或缺少至少一个化合物中存在的化学基团的物质。衍生物所比较的化合物被称为“母体”化合物。通常，“衍生物”可在一个或多个化学反应步骤中由母体化合物产生。
术语“药学上可接受的盐”指的是，化合物(例如，药物，连接子-药物化合物或配体-药物偶联物)的药学上可接受的有机或无机盐。该化合物或偶联物可含有至少一个氨基或羧基，并且因此可与相应的酸或碱形成加成盐。示例性的盐包括但不限于：硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐，钾盐、钠盐等。
术语“溶剂化物”指本发明中的连接子-药物化合物或配体-药物偶联物与一种或多种溶剂分子形成的，溶剂分子包括但不限于水、乙醇、乙腈、异丙醇、DMSO、乙酸乙酯等。
术语“药物组合物”是指含有一种或多种本发明所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，以及其它组分例如生理学上/可药用的载体和/或赋形剂。药物组合物的目的时促进对生物体的给药，有利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“载体”是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送至靶点的体系。药物载体释放和靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度。
术语“赋形剂”是指在药物制剂中除主药以外的附加物或辅料。如片剂中的粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质备份；液体制剂中的防腐剂、抗氧化剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增透剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。
术语“稀释剂”或“填充剂”，主要用于增加制剂的重量和/或体积。稀释剂的加入不仅保证一定的体积大小，而且减少主要成分的剂量偏差，改善药物的压缩成型性等。
本发明的一个实施方式中，连接子-药物化合物通过打开的链间二硫键产生的巯基或者与基因工程定点引入的半胱氨酸巯基连接至配体，一般地，偶联反应中能与配体相连的药物分子数将小于或等于理论上的最大值。
可以通过以下非限制性地方法控制配体-药物偶联物的载药量，包括：
1)控制连接试剂和配体的摩尔比，
2)控制反应时间和温度，
3)选择不同的反应试剂。
下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明，应理解，这些实施例只用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比例、比率、或份数按重量计。
附图说明
图1A为ADC-29的SEC-HPLC谱图，显示了ADC-29的聚集情况。
图1B为ADC-56的SEC-HPLC谱图，显示了ADC-56的聚集情况。
图1C为ADC-111的SEC-HPLC谱图，显示了ADC-111的聚集情况。
图2A为ADC-29的RP-HPLC谱图，显示了ADC-29的药物-抗体偶联比(DAR)。
图2B为ADC-56的RP-HPLC谱图，显示了ADC-56的药物-抗体偶联比(DAR)。
图2C为ADC-111的RP-HPLC谱图，显示了ADC-111的药物-抗体偶联比(DAR)。
图3A显示了ADC-1、ADC-28、ADC-29、ADC-42、ADC-56、ADC-109、ADC-111在A431细胞系中的体外药效。
图3B显示了ADC-1、ADC-28、ADC-29、ADC-42、ADC-56、ADC-109、ADC-111在HL-60细胞系中的体外药效。
图3C显示了ADC-1、ADC-28、ADC-29、ADC-42、ADC-56、ADC-109、ADC-111在TF-1细胞系中的体外药效。
图3D显示了ADC-1、ADC-28、ADC-29、ADC-42、ADC-56、ADC-109、ADC-111在HEL92.1.7细胞系中的体外药效。
图3E显示了ADC-1、ADC-28、ADC-29、ADC-42、ADC-56、ADC-109、ADC-111在MV4-11细胞系中的体外药效。
图3F显示了ADC-1、ADC-28、ADC-29、ADC-42、ADC-56、ADC-109、ADC-111在MOLM-13细胞系中的体外药效。
具体实施方式
实施例1：化合物6的合成
将400mL苯甲醇加入1L单口瓶中，水浴冷却下缓慢滴加SOCl2(13.38mL,184.8mmol)，完成滴加后维持水浴温度反应1h，分三批次加入化合物(S)-2-(CBZ-氨基)-3-氨基丙酸(40g,168mmol)，加完室温反应过夜。反应结束后，油泵减压蒸馏除去未反应的苯甲醇，所得褐色残余物用硅胶柱层析色谱纯化分离(DCM：MeOH＝150:1)得到44g化合物1。LC-MS m/z(M+H)+:329.1.
将化合物1(40g,121.6mmol)溶解于600mL乙腈中，冰水浴冷却下加入DIPEA(18.88mL,146.32mmol)，维持低温下滴加溴乙酸叔丁酯(23.9g,120mmol)，滴毕，维持低温下搅拌30min后移至室温下反应，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测反应完全，水浴加压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析色谱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100:1)得到45.5g化合物2。LC-MS m/z(M+H)+:443.3.
将化合物2(45g，25.2mmol)、100mL1,4-二氧六环、100mL水加入500mL单口反应瓶中，再加入DIPEA(25.2m:L，152.5mmol)，室温下滴入Boc酸酐(110.6g，508.7mmol)，反应液呈黄色，滴完室温反应约3-4h，TLC(DCM:MeOH＝30:1)监测反应完全。水浴减压浓缩除去二氧六环，加入DCM(100mL×3)萃取，所得有机相用无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩得黄色油状物粗品，经硅胶柱层析色谱(DCM:MeOH＝300:1)分离得50.3g化合物3。LC-MS m/z(M+H)+:543.2.
将50g化合物3溶于250mL甲醇中，加入10g 5％Pd/C，氢气置换体系内细分2-3次，维持室温反应，TLC(DCM:MeOH＝5:1)监测反应。反应完全后，垫双层滤纸过滤，滤饼用甲醇淋洗三次，所得滤液于40℃下减压浓缩得化合物4，未经纯化直接用于下一步反应。
将粗品化合物4溶于250mL冰乙酸中，加入马来酸酐(18.2g，184.4mmol)，室温搅 拌反应。TLC(DCM:MeOH＝3:1)监测反应。反应完全后直接减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化；
柱：YMC-C18，100mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速200mL/min，于λ＝215nm检测；
溶剂A：0.2％TFA水；
溶剂B：乙腈；
梯度：0-10min 90％A，10-25min，90％A～45％A，25-55min，45％A～40％A；
收集具43min保留时间的馏分并冻干，得白色固体41g化合物5。LC-MS m/z(M+H)+:417.9.
于1L单口瓶中加入化合物5(40g,96mmol,1.0eq)，三乙胺(26.7mL,2.0eq)，甲苯(400mL)，升温至120℃下回流反应2h。TLC监测基本完全反应，降温至50℃下减压旋除溶剂。用乙酸乙酯(150mL)，水(40mL)溶解，冰浴搅拌下用1M HCl调pH至2-3，分液，水层用乙酸乙酯再萃取一次，合并有机层，加入无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化(DCM:MeOH＝40:1)，得到26.6g化合物6；LC-MS m/z(M+H)+:399.3.
实施例2：化合物9的合成
于1L单口瓶中加入N-芴甲氧羰基-L-谷氨酸1-叔丁酯(21g,48.9mmol)，DCC(20.6g,97.8mmol)，Val-Cit-PABOH(18.5g,48.9mmol)，二氯甲烷(400mL)，冰水浴冷却降温至0℃，称取4-DMAP(610mg,4.89mmol)一次性加入反应瓶中，缓慢升温至室温反应3h，TLC监测基本完全反应，过滤除去不溶的固体杂质，滤饼用二氯甲烷淋洗三次，减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化(DCM:MeOH＝100:1-50:1)，得到33.2g化合物7；LC-MS m/z(M+H)+:787.5.
将上述化合物7溶于300mL二氯甲烷中，冰水浴降温至0℃，缓慢滴加TFA(150mL)，缓慢升温至室温下反应5h，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测反应。反应完全后，反应液于45℃下减压浓缩得黄色油状粗品化合物8，未经纯化直接用于下一步反应。
于1L单口瓶中加入上述粗品化合物8(按起始物料投料量48.9mmol)，PyBOP(38.56g,73.4mmol)，炔丙胺(3.3g,58.7mmol)，二氯甲烷(400mL)，冰水浴冷却降温至0℃，滴加DIPEA(2.6mL,14.7mmol)至反应瓶中，缓慢升温至室温反应过夜，TLC(20:1)监测基本完全反应，加入饱和氯化钠水溶液(100mL)稀释，二氯甲烷(100mL)萃取两次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1)，得到25.4g化合物9；LC-MS m/z(M+H)+:768.4.
实施例3：化合物10的合成
室温下，将麦芽糖酸(7.0g,19.5mmol)溶解于70mL无水甲醇中，氮气置换体系内气 氛三次，加入分子筛后加热回流过夜，冷却至室温条件，加入1-氨基-11-叠氮基-3,6,9-三氧十一烷，维持室温搅拌24h，直接将反应液减压浓缩，所得粗产品溶解于5mL甲醇中，随后依次加入30mL氯仿及100mL四氢呋喃，搅拌后静置，得到白色固体，过滤，滤饼用四氢呋喃淋洗两次，将所得到的白色固体溶解于30mL水中，冻干得到5.6g白色固体化合物10；LC-MS m/z(M+H)+:559.3.
实施例4：化合物12的合成
室温下于250mL单口瓶中加入化合物9(5.0g,6.5mmol)，二氯甲烷(100mL)，随后依次加入NPC(10.1g,32.6mmol)，DIPEA(5.7mL,32.6mmol)，维持室温反应过夜，TLC监测基本完全反应，加入饱和氯化钠水溶液(50mL)稀释，二氯甲烷(100mL)萃取两次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化(DCM:MeOH＝100:1-50:1)，得到5.3g化合物11；LC-MS m/z(M+H)+:933.5.
室温下于50mL单口瓶中加入化合物11(1.0g,1.1mmol)，DMF(15mL)，随后依次加入MMAE(723mg,1mmol)，HOBt(304mg,2.2mmol)，DIPEA(390uL,2.2mmol)，维持室温反应过夜，反应完全后直接油泵减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得到1.09g白色固体化合物12；TOF-MS m/z(M+Na)+:1534.0.
实施例5：化合物15的合成
室温下于250mL单口瓶中加入化合物7(10.0g,12.7mmol)，二氯甲烷(130mL)，随后依次加入NPC(19.7g,63.5mmol)，DIPEA(11.1mL,63.5mmol)，维持室温反应过夜，TLC监测基本完全反应，加入饱和氯化钠水溶液(100mL)稀释，二氯甲烷(100mL)萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化(DCM:MeOH＝100:1-50:1)，得到10.5g化合物11；LC-MS m/z(M+H)+:952.3.
室温下于50mL单口瓶中加入化合物13(1.0g,1.05mmol)，DMF(15mL)，随后依次加入MMAE(759mg,1.05mmol)，HOBt(319mg,2.3mmol)，DIPEA(408uL,2.3mmol)，维持室温反应过夜，反应完全后直接油泵减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得到1.22g白色固体化合物14；TOF-MS m/z(M+H)+:1530.9.
室温下于25mL单口瓶中加入化合物14(1g,0.653mmol)，二氯甲烷(5mL)，随后加 入三氟乙酸(2.5mL)，维持室温反应6h，反应完全后直接水浴减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得到0.76g白色固体化合物15；TOF-MS m/z(M+Na)+:1496.8.
实施例6：化合物P1-A的合成
室温下于25mL单口瓶中加入化合物12(30mg,0.02mmol)，四氢呋喃(5mL)，随后依次加入叠氮-β-环糊精(24.2mg,0.02mmol)，碘化亚铜(2.0mg,0.1mmol)，TEA(4uL,0.029mmol)，升温至50℃反应10h，反应完全后加入10mL乙酸乙酯稀释，10mL饱和氯化铵水溶液洗涤有机相两次，水相用10mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得32mg白色固体化合物16；TOF-MS m/z(M+H)+:2671.4.
室温下于5mL单口瓶中加入化合物16(30mg,11.2umol)，DMF(1mL)，随后加入二乙基胺(12uL,0.12mmol)，维持室温下反应12h，油泵减压除去DMF溶剂，所得黄色粗品油状物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
室温下于上述5mL单口瓶中加入二氯甲烷(1mL)，随后依次加入化合物6(45mg,112umol)，羰基二咪唑CDI(19.9mg,0.12mmol)，维持室温下反应10h，所得黄色反应液直接经制备级高效液相色谱纯化，得28mg微黄色固体化合物17；TOF-MS m/z(M+H)+:2829.3.
室温下于5mL单口瓶中加入化合物17(25mg,8.84umol)，二氯甲烷(4mL)，随后加入三氟乙酸(2mL)，维持室温反应2h，反应完全后直接水浴减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得到13mg白色固体化合物P1-A；TOF-MS m/z(M+Na)+:2695.3.
实施例7：化合物P1-B的合成
将化合物单-6-O-(对甲苯磺酰基)-β-环糊精(45mg，0.035mmol)、1-氨基-11-叠氮基-3,6,9-三氧十一烷(9.0mg，0.04mmol)以及5mLDMF加入25mL单口反应瓶中，再加入DIPEA(13uL，0.07mmol)，反应液呈黄色，室温反应约3-4h，所得反应液直接经过制备级高效液相色谱纯化，得到白色固体42.3mg化合物18。LC-MS m/z(M+H)+:1335.6.
后续反应参考实施例6的合成路线，制备9mg化合物P1-B；TOF-MS m/z(M+Na)+:2870.5.
实施例8：化合物P1-C的合成
将化合物单-6-O-(对甲苯磺酰基)-β-环糊精(90mg，0.07mmol)、N-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺(13.2mg，0.08mmol)以及5mLDMF加入25mL单口反应瓶中，再加入DIPEA(26uL，0.14mmol)，反应液呈黄色，室温反应约4h，所得反应液直接经过制备级高效液相色谱纯化，得到白色固体77mg化合物20；LC-MS m/z(M+H)+:1177.5.
室温下于5mL单口瓶中加入化合物20(70mg，0.06mmol)，二氯甲烷(4mL)，随后加入三氟乙酸(2mL)，维持室温反应4h，反应完全后减压旋蒸除去三氟乙酸及二氯甲烷，直接用于下一步反应。
于25mL单口瓶中加入上述粗品化合物(按起始物料投料量0.06mmol)，PyBOP(63.7mg,0.12mmol)，化合物15(88mg,0.06mmol)DMF(5mL)，冰水浴冷却降温至0℃，滴加DIPEA(22uL,0.12mmol)至反应瓶中，缓慢升温至室温反应过夜，所得黄色反应液直接经制备级高效液相色谱纯化，得到55mg化合物21；TOF-MS m/z(M+Na)+:2655.2.
室温下于5mL单口瓶中加入化合物21(50mg,19umol)，DMF(1mL)，随后加入二乙基胺(35uL,0.19mmol)，维持室温下反应过夜，油泵减压除去DMF溶剂，所得黄色粗品油状物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
室温下于上述5mL单口瓶中加入二氯甲烷(1mL)，随后依次加入化合物6(77mg,190umol)，羰基二咪唑CDI(32mg,0.19mmol)，维持室温下反应10h，所得黄色反应液直接经制备级高效液相色谱纯化，得46mg微黄色固体化合物22；TOF-MS m/z(M+H)+:2813.5.
室温下于5mL单口瓶中加入化合物22(45mg)，二氯甲烷(4mL)，随后加入三氟乙酸(2mL)，维持室温反应2h，反应完全后直接水浴减压浓缩，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得到20mg白色固体化合物P1-C；TOF-MS m/z(M+Na)+:2657.2.
实施例9：化合物P1-D的合成
室温下于25mL单口瓶中加入化合物18(40mg)，DMF(5mL)，随后加入Pd/C(40mg)，氢气置换体系内的气氛三次，维持室温下反应1h，过滤，除去催化剂，油泵减压除去DMF溶剂，所得黄色粗品油状物23未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
参照实施例8的合成路线，制备9.9mg微黄色固体化合物P1-D；TOF-MS m/z(M+Na)+:2789.4.
实施例10：化合物P1-E的合成
室温下于25mL单口瓶中加入化合物10(100mg)，DMF(10mL)，随后加入Pd/C(100mg)，氢气置换体系内的气氛三次，维持室温下反应3h，过滤，除去催化剂，油泵减压除去DMF溶剂，所得黄色粗品油状物24未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
参照实施例8的合成路线，制备23mg微黄色固体化合物P1-E；TOF-MS m/z(M+Na)+:2012.5.
实施例11：化合物P1-F的合成
将化合物麦芽糖酸(200mg，0.56mmol)、N-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺(196mg，1.2mmol)以及10mLDMF加入25mL单口反应瓶中，再加入DIPEA(0.22mL，1.2mmol)，反应液呈黄色，室温反应约4h，所得反应液直接经过制备级高效液相色谱纯化，得到白色固体化合物。室温下于25mL单口瓶中加入上述化合物二氯甲烷(6mL)，随后加入三氟乙酸(3mL)，维持室温反应2h，反应完全后减压旋蒸除去三氟乙酸及二氯甲烷，直接用于下一步反应；LC-MS m/z(M+H)+:401.1.
参照实施例8的合成路线，制备23mg微黄色固体化合物P1-F；TOF-MS m/z(M+H)+:1858.1.
实施例12：化合物P1-G的合成
化合物10与化合物12参照实施例6的合成路线，制备15mg白色固体化合物P1-G；TOF-MS m/z(M+H)+:2071.4.
实施例13：化合物P1-H的合成
参照实施例6的合成路线，制备12mg白色固体化合物P1-H；TOF-MS m/z(M+H)+:2291.6.
实施例14：化合物P1-I的合成
化合物27的合成参照实施例3的合成路线；LC-MS m/z(M+H)+:455.4.
参照实施例6的合成路线，制备11mg白色固体化合物P1-I；TOF-MS m/z(M+H)+:1989.2.
实施例15：化合物P1-J的合成
将麦芽糖(500mg，1.46mmol)、13-氨基-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷酸1,1-二甲基乙酯(436mg，1.46mmol)以及15mL无水乙醇加入25mL单口反应瓶中，维持室温下反应约4h，将反应瓶用冰水浴冷却，分两批次加入氰基硼氢化钠(186mg，2.92mmol)，维持该温度继续反应1h后，所得反应液直接经过制备级高效液相色谱纯化，冻干，得到白色固体化合物。室温下于25mL单口瓶中加入上述化合物二氯甲烷(10mL)，随后加入三氟乙酸(5mL)，维持室温反应3h，反应完全后减压旋蒸除去三氟乙酸及二氯甲烷，直接用于下一步反应；LC-MS m/z(M+H)+:519.3.
参照实施例8的合成路线，制备8mg白色固体化合物P1-J；TOF-MS m/z(M+Na)+:1998.2.
实施例16：化合物P1-K的合成
参照实施例8及实施例14的合成路线，制备21mg白色固体化合物P1-K；TOF-MS m/z(M+Na)+:1866.0.
实施例17：化合物P1-L的合成
室温下于25mL单口瓶中加入1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(60mg,0.27mmol)，四氢呋喃(5mL)，随后依次加入N-Boc-氨基丙炔(44mg,0.27mmol)，碘化亚铜(2.0mg,0.1mmol)，TEA(40uL,0.29mmol)，升温至50℃反应10h，过滤，残余物用制备级高效液相色谱纯化，得82mg白色固体化合物29；LC-MS m/z(M+H)+:374.3.
参照实施例14的合成路线，制备化合物30；LC-MS m/z(M+H)+:600.5.
参照实施例8的合成路线，制备17mg白色固体化合物P1-L；TOF-MS m/z(M+Na)+:2079.1.
实施例18：化合物P1-M的合成
参照实施例16的合成路线，制备21mg白色固体化合物P1-M；TOF-MS m/z(M+Na)+:2299.1.
实施例19：化合物P1-N的合成
参照实施例16的合成路线，制备13mg固体化合物P1-N；TOF-MS m/z(M+H)+:1953.2.
实施例20：化合物P1-O8的合成
将麦芽糖(50mg,0.146mmol)、N-Boc-乙二胺(24mg,0.146mmol)以及5mL无水乙醇加入25mL单口反应瓶中，维持室温下反应约4h，将反应瓶用冰水浴冷却，分两批次加入氰基硼氢化钠(18.6mg，0.292mmol)，维持该温度继续反应1h后，所得反应液直接经过制备级高效液相色谱纯化，冻干，得到固体化合物。室温下于25mL单口瓶中加入上述化合物二氯甲烷(4mL)，随后加入三氟乙酸(2mL)，维持室温反应3h，反应完全后减压旋蒸除去三氟乙酸及二氯甲烷，得到粗品化合物31，未经纯化直接用于下一步反应；LC-MS m/z(M+H)+:387.2.
于25mL单口瓶中加入上述粗品化合物(按起始物料投料量0.146mmol)，N-叔丁氧羰基-七聚乙二醇-羧酸(81mg,0.146mmol)、PyBOP(116mg,0.219mmol)，DMF(5mL)，冰水浴冷却降温至0℃，滴加DIPEA(40uL,0.219mmol)至反应瓶中，缓慢升温至室温反应过夜，所得黄色反应液直接油泵减压浓缩，得到黄色油状物；室温下于上述油状物的25mL单口瓶中加入二氯甲烷(4mL)，随后加入三氟乙酸(2mL)，维持室温反应2h，反应完全后减压旋蒸除去三氟乙酸及二氯甲烷，得到粗品，经制备级高效液相色谱柱纯化，冻干，得到66mg白色固体化合物32；LC-MS m/z(M+H)+:810.9.
参照实施例8的合成路线，制备15mg固体化合物P1-O8；TOF-MS m/z(M+Na)+:2289.2.
实施例21：化合物P1-P8的合成
参照实施例19的合成路线，制备化合物33；LC-MS m/z(M+H)+:836.9.
参照实施例6的合成路线，制备23mg固体化合物P1-P8；TOF-MS m/z(M+Na)+:2289.2.
实施例22：化合物P1-Q的合成
参照实施例19的合成路线，制备化合物34；LC-MS m/z(M+H)+:512.5
参照实施例6的合成路线，制备9mg固体化合物P1-Q；TOF-MS m/z(M+H)+:2024.1.
实施例23：化合物P1-R的合成
参照实施例19的合成路线，制备化合物35；LC-MS m/z(M+H)+:486.5
参照实施例8的合成路线，制备14mg固体化合物P1-R；TOF-MS m/z(M+H)+:1943.2.
实施例24：化合物P1-S的合成
参照实施例6的合成路线，制备24mg固体化合物P1-S；TOF-MS m/z(M+Na)+:1929.1.
实施例25：化合物P1-T的合成
参照实施例6的合成路线，制备16mg固体化合物P1-T；TOF-MS m/z(M+H)+:1803.5.
实施例26：化合物P1-U的合成
参照实施例8的合成路线，制备12mg固体化合物P1-U；TOF-MS m/z(M+H)+:1693.9.
实施例27：化合物P1-V的合成
参照实施例8的合成路线，制备19mg固体化合物P1-V；TOF-MS m/z(M+H)+:1840.1.
实施例28：化合物P1-W的合成
参照实施例6的合成路线，制备32mg固体化合物P1-W；TOF-MS m/z(M+H)+:2127.1291.
实施例29：化合物P1-X2的合成
参照实施例6的合成路线，制备27mg固体化合物P1-W；TOF-MS m/z(M+Na)+:2853.2939.
实施例30：化合物P1-Y8的合成
第一步：化合物NH2-PEG8-β-CD的合成
室温下于25mL单口瓶中加入化合物27-氨基-4,7,10,13,16,19,22,25-八氧杂二十七烷酸(100mg,0.22mmol)，DMF(5mL)，随后加入HOSu(28mg,0.23mmol)，DCC(48mg,0.23mmol)，维持室温下反应3h，油泵减压除去DMF溶剂，所得黄色粗品油状物中加入10mLDCM溶解，过滤除去不溶性固体，滤饼用DCM洗涤三次，合并有机相水泵45℃水浴旋干，直接用于下一步反应。
室温下于25mL单口瓶中加入上述粗品化合物(0.22mmol)，DMF(5mL)，随后加入单(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精(275mg,0.23mmol)，DIPEA(74uL,0.44mmol)，维持室温下反应2h，HPLC检测反应结束。反应液经过制备级高效液相色谱纯化，得到纯化液，冻干得到化合物NH2-PEG8-β-CD(145mg)；LC-MS m/z(M+H)+：1157.7。
第二步：化合物P1-Y8的合成
以化合物15及NH2-PEG8-β-CD为原料，参照实施例8的合成路线，制备13mg固体化合物P1-Y8；TOF-MS m/z(M+H)+:3014.4188.。
实施例31：化合物P1-Z的合成
第一步：化合物36的合成
室温下于25mL单口瓶中加入AZIDO-PEG8-NHS(100mg,0.17mmol)，DMF(5mL)，随后加入葡甲胺(34mg,0.17mmol)，DIPEA(66uL,0.4mmol)，维持室温下反应2h，HPLC检测反应结束。反应液经过制备级高效液相色谱纯化，得到纯化液，冻干得到化合物36(120 mg)；LC-MS m/z(M+H)+:645.7。
第二步：化合物P1-Z的合成
以化合物12及化合物36为原料，参照实施例6的合成路线，制备18mg固体化合物P1-Z；TOF-MS m/z(M+H)+:2157.1796。
实施例32：化合物37的制备
于1L单口瓶中加入Boc-L-谷氨酸5-叔丁酯(50g,164.8mmol,1.0eq)，250mL THF溶清，冰水浴下依次加入炔丙胺(9.97g,181.3mmol,1.1eq)，HOBt(22.25g,164.8mmol,1.0eq)，DIEA(54.3mL,329.6mmol,2.0eq)，EDCI(37.7g,197.7mmol,1.2eq)，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应完毕后，将反应液倒入600mL冰水中，加入乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，经过饱和食盐水洗涤两次(300mL×2)、无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品。粗品经过石油醚/乙酸乙酯(2/1)精制，得到35.5g化合物37a；LC-MS m/z(M+H)+：341.2。
于1L单口瓶中加入化合物37a(20g)，150mL二氯甲烷溶清，加入150mL三氟乙酸，室温反应1h，TLC监测反应终点。反应完毕后，将反应液在水泵45℃浓缩，得到粗品油状物。粗品加入甲叔醚析晶过夜，过滤，滤饼经过鼓风45℃干燥4h，称重，得产品7.68g；LC-MS m/z(M+H)+:184.2。
实施例33：化合物39的制备
于1L单口瓶中加入Boc-L-谷氨酸5-叔丁酯(50g,164.8mmol,1.0eq)，300mL THF溶清，冰水浴下依次加入FmocNH-(CH2)2-NH2(51.1g,181.3mmol,1.1eq)，HOBt(22.25g,164.8mmol,1.0eq)，DIEA(54.3mL,329.6mmol,2.0eq)，EDCI(37.7g,197.7mmol,1.2eq)，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应完毕后，将反应液倒入600mL冰水中，加入乙酸乙酯萃取三次(300mL×3)，合并有机相，经过饱和食盐水洗涤两次(300mL×2)、无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品。粗品经过石油醚/乙酸乙酯(2/1)精制，得到纯品57.5g；LC-MS m/z(M+H)+:567.2.
于1L单口瓶中加入化合物38(20g)，150mL二氯甲烷溶清，加入150mL三氟乙酸，室温反应1h，TLC监测反应终点。反应完毕后，将反应液在水泵45℃浓缩，得到粗品油状物。粗品加入甲叔醚析晶过夜，过滤，滤饼经过鼓风45℃干燥4h，称重，得产品11.7g；LC-MS m/z(M+H)+:412.2.
实施例34：化合物40的制备
于50mL单口瓶中加入化合物37(5.0g,27.1mmol)、化合物6(10.8g,27.1mmol)，20mLDMF溶清，冰水浴下加入EEDQ(13.4g,54.2mmol)，加毕，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应液经过高效液相制备纯化，冻干，得到产品7.84g；LC-MS m/z(M+H)+:465.2.
实施例35：化合物44的制备
于50mL单口瓶中加入化合物41(1.0g,1.51mmol,参考专利WO2020063676A1)，15mLDMF溶清，加入5％Pd/C(1.0g)，室温氢化反应2h，HPLC监测反应终点。过滤，滤液备用，记为滤液1；
另取25mL单口瓶中加入化合物40(0.85g,1.51mmol)，15mLDMF溶清，冰水浴下加入DCC(1.55g,7.56mmol)，五氟苯酚(0.31g,1.66mmol)，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应完毕，过滤，得滤液，记为滤液2；
在冰水浴下，将DIEA(0.37mL,2.26mmol)加至滤液1中，再将滤液2加入，升至室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应完毕，反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到502mg白色固体化合物44；LC-MS m/z(M+H)+:985.2.
实施例36：化合物45的制备
于50mL单口瓶中加入化合物44(500mg,0.51mmol)，10mLDMF溶清，冰水浴下依次加入PyBOP(396mg,0.76mmol)，HOBt(103mg,0.76mmol)，依喜替康·甲磺酸盐(270mg,0.51mmol)，再加入DIEA(252uL,1.52mmol)，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应完毕，反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到500mg白色固体化合物45；LC-MS m/z(M+H)+:1402.2.
实施例37：化合物P2-A的合成
于25mL单口瓶中加入化合物45(50mg,0.035mmol)、β-环糊精-N3(41mg,0.035mmol)，5mLDMF溶清，再加入碘化亚铜(2mg,0.007mmol)，TEA(10uL,0.07mmol)，升温至50℃反应10h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，得到59mg化合物46；TOF-MS m/z(M+Na)+:2583.0.
于25mL单口瓶中加入化合物46(50mg,0.019mmol)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(88mg,0.39mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，称量，得到30mg化合物P2-A；TOF-MS m/z(M+H)+:2404.9.
实施例38：化合物P2-B的合成
参照实施例37的合成路线，得到24mg化合物P2-B；TOF-MS m/z(M+H)+:2580.0.
实施例39：化合物49的合成
于50mL单口瓶中加入化合物39(5.0g,12.1mmol)、化合物6(4.83g,12.1mmol)，25mLDMF溶清，冰水浴下加入EEDQ(6.0g,24.3mmol)，加毕，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应液经过高效液相制备纯化，冻干，得到产品5.1g；LC-MS m/z(M+H)+:792.3.
于50mL单口瓶中加入化合物47(0.3g,0.378mmol)，5mLDMF溶清，再加入0.3mL二乙胺，室温搅拌1h，TLC监测反应终点。反应结束后，将反应液减压浓缩除去DMF及二乙胺，得粗品，直接用于下一步。
粗品用5mLDMF溶解，加入单-6-O-(对甲苯磺酰基)-β-环糊精(488mg,0.378mmol)，氮气保护下室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，经高效液相制备纯化，冻干，得到601mg化合物49；TOF-MS m/z(M+H)+:1686.9.
实施例40：化合物P2-C的合成
于25mL单口瓶中加入化合物49(1.05g,0.62mmol)，10mLDMF溶清，冰水浴下加入DCC(653mg,3.1mmol)，五氟苯酚(119mg,0.63mmol)，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应完毕，过滤，得滤液；
在冰水浴下，将DIEA(0.22mL,1.24mmol)加至上述滤液中，再将化合物42(272mg,0.62mmol)加入，升至室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应完毕，反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到588mg白色固体化合物51；TOF-MS m/z (M+H)+:2105.8.
于50mL单口瓶中加入化合物51(500mg,0.24mmol)，10mLDMF溶清，冰水浴下依次加入PyBOP(188mg,0.36mmol)，HOBt(49mg,0.36mmol)，依喜替康·甲磺酸盐(140mg,0.26mmol)，再加入DIEA(86uL,0.48mmol)，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应完毕，反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到403mg固体化合物52；TOF-MS m/z(M+Na)+:2544.0.
于25mL单口瓶中加入化合物52(60mg,0.024mmol)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(109mg,0.48mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，称量，得到29mg化合物P2-C；TOF-MS m/z(M+H)+:2365.9.
实施例41：化合物P2-D的合成
参照实施例39及40的合成路线，得到24mg化合物P2-D；TOF-MS m/z(M+H)+:2500.3.
实施例42：化合物P2-E的合成
参照实施例29的合成路线，得到化合物53；
参照实施例31的合成路线，得到化合物54；
参照实施例40的合成路线，得到33mg化合物P2-E；TOF-MS m/z(M+Na)+:1244.8.
实施例43：化合物P2-F的合成
参照实施例39及40的合成路线，得到16mg化合物P2-F；TOF-MS m/z(M+H)+:1590.7.
实施例44：化合物P2-G的合成
于25mL单口瓶中加入化合物45(50mg,0.035mmol)、化合物10(20mg,0.035mmol)，5mLDMF溶清，再加入碘化亚铜(2mg,0.007mmol)，TEA(10uL,0.07mmol)，升温至50℃反应10h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，称量，得到产品43mg；TOF-MS m/z(M+Na)+:1981.9.
于25mL单口瓶中加入化合物55(40mg,0.02mmol)，3mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(92mg,0.4mmol,20eq)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，称量，得到25mg产品P2-G；TOF-MS m/z(M+H)+:1803.7.
实施例45：化合物P2-H的合成
参照实施例44的合成路线，得到16mg化合物P2-H；TOF-MS m/z(M+H)+:2023.9.
实施例46：化合物P2-I的合成
于25mL单口瓶中加入化合物45(50mg,0.035mmol)、化合物27(16mg,0.035mmol)，5mLDMF溶清，再加入碘化亚铜(2mg,0.007mmol)，TEA(10uL,0.07mmol)，升温至50℃反应10h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，称量，得到产品43mg；TOF-MS m/z(M+H)+:1955.9.
于25mL单口瓶中加入化合物56(40mg,0.021mmol)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(97mg,0.42mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，称量，得到25mg化合物P2-I；TOF-MS m/z(M+H)+:1699.7.
实施例47：化合物P2-J的合成
于50mL单口瓶中加入化合物47(3.0g,3.78mmol)，15mLDMF溶清，再加入3mL二 乙胺，室温搅拌1h，TLC监测反应终点。反应结束后，将反应液减压浓缩除去DMF及二乙胺，得粗品。粗品用20mL甲醇溶解，加入麦芽糖(1.29g,3.78mmol)，氮气保护下室温反应2h，冰水浴下分批加入NaBH4(285mg,7.56mmol)，反应30min，TLC监测反应终点。反应结束后，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取三次(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得粗品。粗品经高效液相制备纯化，冻干，称量，得固体1.4g；LC-MS m/z(M+H)+:896.3.
取25mL单口瓶中加入化合物57(677mg,0.75mmol)，15mLDMF溶清，冰水浴下加入DCC(780mg,3.78mmol)，五氟苯酚(153mg,0.83mmol)，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应完毕，过滤，得滤液；在冰水浴下，将DIEA(187uL,1.13mmol)加至上述滤液中，再将化合物42(0.75mmol)加入，升至室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应完毕，反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到350mg白色固体化合物59；LC-MS m/z(M+H)+:1315.6.
于50mL单口瓶中加入59(200mg,0.15mmol)，10mLDMF溶清，冰水浴下依次加入PyBOP(118mg,0.22mmol)，HOBt(31mg,0.22mmol)，依喜替康甲磺酸盐(80mg,0.15mmol)，再加入DIEA(75uL,0.45mmol)，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应完毕，反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到150mg白色固体化合物60；TOF-MS m/z(M+H)+:1732.7.
于25mL单口瓶中加入化合物60(50mg,0.028mmol)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(130mg,0.57mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，称量，得到30mg产品；TOF-MS m/z(M+H)+:1576.6.
实施例48：化合物P2-K的合成
参照实施例47的合成路线，得到28mg化合物P2-K；TOF-MS m/z(M+H)+:1708.7.
实施例49：化合物P2-L的合成
参照实施例47的合成路线，得到33mg化合物P2-L；TOF-MS m/z(M+H)+:1789.8.
实施例50：化合物P2-M的合成
参照化合物30的合成路线制备77mg化合物61；LC-MS m/z(M+H)+:820.9.
参照实施例40的合成路线制备15mg化合物P2-M；TOF-MS m/z(M+H)+:2010.0.
实施例51：化合物P2-N的合成
参照化合物30的合成路线制备62mg化合物64；LC-MS m/z(M+H)+:496.5.
参照实施例40的合成路线制备23mg化合物P2-N；TOF-MS m/z(M+Na)+:1707.7.
实施例52：化合物P2-O的合成
参照化合物32的合成路线制备71mg化合物66；LC-MS m/z(M+H)+:590.6.
参照实施例40的合成路线制备34mg化合物P2-O；TOF-MS m/z(M+Na)+:1801.9.
实施例53：化合物P2-P的合成
参照实施例46的合成路线制备20mg化合物P2-P；TOF-MS m/z(M+H)+:2081.1.
实施例54：化合物P2-Q的合成
参照实施例46的合成路线制备29mg化合物P2-Q；TOF-MS m/z(M+H)+:1756.7.
实施例55：化合物P2-R的合成
参照实施例40的合成路线制备18mg化合物P2-R；TOF-MS m/z(M+H)+:1675.9.
实施例56：化合物P2-S的合成
参照实施例40的合成路线制备33mg化合物P2-S；TOF-MS m/z(M+H)+:1558.9。
实施例57：化合物P2-T的合成
参照实施例40的合成路线制备42mg化合物P2-T；TOF-MS m/z(M+H)+:1426.8。
实施例58：化合物P2-U的合成
参照实施例46的合成路线制备30mg化合物P2-U；TOF-MS m/z(M+H)+:1640.1。
实施例59：化合物P2-V的合成
参照实施例46的合成路线制备18mg化合物P2-V；TOF-MS m/z(M+H)+:1860.0。
实施例60：化合物P2-W的合成
参照实施例46的合成路线制备21mg化合物P2-W；TOF-MS m/z(M+H)+:1535.8。
实施例61：化合物P2-X2的合成
参照实施例37的合成路线制备11mg化合物P2-X2；TOF-MS m/z(M+H)+:2563.9238。
实施例62：化合物P2-Y8的合成
参照实施例40的合成路线制备12mg化合物P2-Y8；TOF-MS m/z(M+H)+:2747.0488。
实施例63：化合物P2-Z的合成
化合物45(70mg,0.05mmol)、PJA-PEG8-N3(32mg,0.05mmol)，5mLDMF溶清，再加入碘化亚铜(1mg,0.005mmol)，三乙胺(14uL,0.1mmol)，升温至50℃反应过夜，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到69mg产品。
于25mL单口瓶中加入上述化合物(69mg)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(230mg,1mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，得到44mg化合物P2-Z；TOF-MS m/z(M+H)+:1889.8077。
实施例64：化合物P-1的合成
化合物45(50mg,0.035mmol)、1-甲氧基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂烷(8.3mg,0.035mmol)，5mLDMF溶清，再加入碘化亚铜(1.4mg,0.007mmol)，三乙胺(10uL,0.07mmol)，升温至50℃反应10h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到41mg产品；TOF-MS m/z(M+H)+:1634.7。
于25mL单口瓶中加入化合物67(40mg,0.024mmol)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(110mg,0.48mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干，得到25mg化合物P-1；TOF-MS m/z(M+H)+:1478.6。
实施例65：化合物P-2的合成
化合物45(50mg,0.035mmol)、28-叠氮基-2,5,8,11,14,17,20,23,26-九氧杂二十八烷(16.1mg,0.035mmol)，5mLDMF溶清，再加入碘化亚铜(1.4mg,0.007mmol)，三乙胺(10uL,0.07mmol)，升温至50℃反应10h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到45mg产品；TOF-MS m/z(M+H)+:1853.8.
于25mL单口瓶中加入化合物68(40mg,0.021mmol)，5mL硝基甲烷溶清，再加入溴化锌(97mg,0.43mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应进程。反应结束后，反应液经水泵45℃减压浓缩，得到粗品。粗品经高效制备液相纯化，得产品制备液，制备液经冻干得到24mg化合物P-2；TOF-MS m/z(M+H)+:1698.7.
实施例66：化合物P-3的合成
参照实施例6的合成路线制备21mg化合物P-3；TOF-MS m/z(M+H)+:1746.1。
实施例67：化合物P-4的合成
参照实施例6的合成路线制备26mg化合物P-4；TOF-MS m/z(M+H)+:1966.3。
实施例68：化合物69的合成
第一步：化合物69a的合成
于100mL单口瓶中，加入化合物40(10g,17.7mmol)，化合物VAPAB-OH(5.19g,17.7mmol)，30mL DMF溶解，再加入HATU(8.08g,21.2mmol)，HOBt(2.87g,21.2mmol)及DIEA(4.38mL,26.5mmol)，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得化合物69a(9.3g)，收率62.6％，LCMS：[M+H]+＝840.4。
第二步：化合物69b的合成
于100mL单口瓶中，加入化合物69a(9g,10.7mmol)，化合物NPC(16.2g,53.5mmol)，30mL DMF溶解，再加入DIEA(3.24mL,32.1mmol)，室温反应3h，TLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得化合物69b(8.23g)，收率76.5％，LCMS：[M+H]+＝1005.4。
第三步：化合物69c的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物69b(100mg,0.099mmol)，Benzenamine,2-methoxy-5-[(1Z)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethenyl]-,hydrochloride(1:1)(31.3mg,0.099mmol),5mL DMF溶解，再加入DIEA(32.8uL,0.199mmol)，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物69c(75.8mg)，收率64.5％，LCMS：[M+H]+＝1181.5。
第四步：化合物69的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物69c(75mg,0.063mmol)，2mL DCM溶解，加入4mL TFA，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，水泵减压45℃浓缩除去溶剂，得残余物。残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物69(49.6mg)，收率76.3％，LCMS：[M+H]+＝1025.4。
实施例69：化合物P3-A的合成
第一步：化合物P3-A的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物69(25mg,0.024mmol)，环糊精-N3(28.2mg,0.024mmol)，5mLDMF及2.5mL水溶解，再加入CuSO4·5H2O(6.7mg,0.026mmol)，抗坏血酸钠(5.3mg,0.026mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P3-A(40.6mg)，TOF：[M+Na]+＝2206.7。
实施例70：化合物P3-B的合成
第一步：化合物P3-B的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物69(25mg,0.024mmol)，化合物18(27.2mg,0.024mmol)，5mLDMF及2.5mL水溶解，再加入CuSO4·5H2O(6.7mg,0.026mmol)，抗坏血酸钠(5.3mg,0.026mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P3-B(34.5mg)，TOF：[M+H]+＝2360.1。
实施例71：化合物P3-C的合成
第一步：化合物71的合成
于100mL单口瓶中，加入化合物70(5g,9.7mmol)，化合物NCP(14.7g,48.5mmol)，30mL DMF溶解，再加入DIEA(4.9mL,48.5mmol)，室温反应3h，TLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过制备液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得化合物71(7.66g)，LCMS：[M+H]+＝516.3。
第二步：化合物72的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物71(4g,7.76mmol)，Benzenamine,2-methoxy-5-[(1Z)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethenyl]-,hydrochloride(1:1)(2.45g,7.76mmol),15mL DMF溶解，再加入DIEA(2.56mL,15.5mmol)，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物72(4.1g)，LCMS：[M+H]+＝857.5。
第三步：化合物73的合成
于50mL单口瓶中，加入化合物72(4g)，27mL DMF溶解，再加入二乙胺(3mL)，室温反应4h，HPLC监测反应终点。反应结束后，油泵减压浓缩反应液，所得黄色油状物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物73(2.8g)，LCMS：[M+H]+＝635.5。
第四步：化合物P3-C的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物73(80mg,0.126mmol)，5mL DMF溶解，加入DIPEA(42uL,0.252mmol)、化合物50(0.126mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，水泵减压45℃浓缩除去溶剂，得残余物直接用于下一步反应。
于25mL单口瓶中，加入上述粗品化合物，2mL DCM溶解，加入4mL TFA，室温反应0.5h，HPLC监测反应终点。反应结束后，水泵减压45℃浓缩除去溶剂，得残余物。残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P3-C(37.7mg)，TOF：[M+H]+＝2146.8。
实施例72：化合物P3-D的合成
第一步：化合物75的合成
于25mL单口瓶中加入化合物73(200mg,0.315mmol)，10mL DMF，室温下加入化合物74(134mg,0.315mmol)，冰水浴冷却下依次加入HATU(240mg,0.62mmol)，HOBt(84mg,0.62mmol)，DIPEA(0.12mL)，缓慢升温至室温反应3h，TLC监测基本完全反应，减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品未经纯化直接用于下一步反应。
将上述化合物溶于3mL二氯甲烷中，冰水浴降温至0℃，缓慢滴加TFA(1.5mL)，缓慢升温至室温下反应5h，HPLC监测反应。反应完全后，反应液于45℃下减压浓缩得黄色油状粗品化合物，残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物75(162.0mg)，LC-MS：[M+H]+＝986.6。
第二步：化合物76的合成
于25mL单口瓶中加入化合物75(80mg,0.081mmol)，10mL DMF，室温下加入化合物23(106mg,0.081mmol)，冰水浴冷却下依次加入HATU(94mg,0.0.243mmol)，HOBt(16.5mg,0.122mmol)，DIPEA(14uL)，反应2h，HPLC监测完全反应，经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到中间体化合物直接用于下一步。
将上述中间体溶于3mLDMF中，室温下滴加二乙胺(0.3mL)，室温下反应6h，HPLC监测反应。反应完全后，经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物76(123.0mg)，TOF：[M+H]+＝2055.1。
第三步：化合物P3-D的合成
于10mLPE管中加入化合物76(100mg,0.042mmol)，3mL DMF，室温下加入化合物6(17mg,0.042mmol)，冰水浴冷却下依次加入HATU(34mg,0.084mmol)，HOBt(12.5mg,0.084mmol)，DIPEA(22uL)，维持室温反应1h，HPLC监测完全反应，油泵减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品未经纯化直接用于下一步反应。
将上述化合物溶于2mL二氯甲烷中，冰水浴降温至0℃，缓慢滴加TFA(2mL)，缓慢升温至室温下反应2h，HPLC监测反应。反应完全后，反应液于45℃下减压浓缩得黄色油状粗品化合物，残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P3-D(52.0mg)，TOF：[M+Na]+＝2301.1。
实施例73：化合物P3-E的合成
以化合物75与化合物24为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-E(44mg)，LC-MS：[M+H]+＝1502.8。
实施例74：化合物P3-F的合成
以化合物75与化合物25为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-F(26mg)，LC-MS：[M+H]+＝1370.5。
实施例75：化合物P3-G的合成
以化合物69与化合物10为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-G(71mg)，TOF：[M+H]+＝1583.6。
实施例76：化合物P3-H的合成
第一步：化合物PJA-PEG8-N3的合成
于25mL单口瓶中，加入葡甲胺(50mg,0.256mmol)，COOH-PEG-8-N3(150mg,0.256 mmol)，5mLDMF，室温下加入T3P(244mg,0.384mmol,50％in tol)，维持室温下反应5h，HPLC监测反应结束，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物PJA-PEG8-N3(35mg)，LC-MS：[M+H]+＝645.7。
第二步：化合物P3-H的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物69(25mg,0.024mmol)，PJA-PEG8-N3(15.7mg,0.024mmol)，5mLDMF及2.5mL水溶解，再加入CuSO4·5H2O(6.7mg,0.026mmol)，抗坏血酸钠(5.3mg,0.026mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物2(35mg)，收率78.6％，TOF：[M+H]+＝1669.7。
实施例77：化合物P3-I的合成
以化合物69与化合物27为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-I(28mg)，LC-MS：[M+H]+＝1479.8。
实施例78：化合物P3-J的合成
第一步：化合物77的合成
于25mL单口瓶中，加入麦芽糖(2g,5.85mmol)，Fmoc乙二胺(1.7g,6mmol)，10mL无水四氢呋喃溶解，冰水浴冷却至0℃，再加入硼氢化钠(240mg,6mmol)，缓慢升温至室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，冰水浴冷却下加入丙酮10mL淬灭反应，垫硅藻土过滤，滤饼用甲醇200mL淋洗，反应液经过减压浓缩后直接用于下一步；
于25mL单口瓶中，加入上述粗品化合物，加入8mLDMF溶解，室温下滴加二乙胺(2mL)，维持室温下反应5h，HPLC监测反应终点，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物77(1.1g)，LC-MS：[M+H]+＝387.4。
第二步：化合物P3-J的合成
以化合物75与化合物77为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-J(45mg)，LC-MS：[M+H]+＝1356.9。
实施例79：化合物P3-K的合成
以化合物75与化合物28为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-K(39mg)，LC-MS：[M+H]+＝1488.4。
实施例80：化合物P3-L的合成
以化合物75与化合物30-PEG3为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-L(22mg)，LC-MS：[M+H]+＝1569.6。
实施例81：化合物P3-M的合成
以化合物75与化合物61为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-M(29mg)，TOF：[M+H]+＝1790.1。
实施例82：化合物P3-N的合成
以化合物75与化合物64为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-N(24mg)，TOF：[M+H]+＝1465.7。
实施例83：化合物P3-O的合成
以化合物75与化合物66为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-O(31mg)，TOF：[M+H]+＝1759.6。
实施例84：化合物P3-P的合成
以化合物69与化合物33为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-P(41mg)，TOF：[M+H]+＝1861.1。
实施例85：化合物P3-Q的合成
以化合物69与化合物34为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-Q(36mg)，TOF：[M+H]+＝1861.1。
实施例86：化合物P3-R的合成
以化合物75与化合物35为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-R(18mg)，TOF：[M+H]+＝1455.9。
实施例87：化合物P3-S的合成
第一步：化合物78的合成
在100mL单口瓶中加入甘露糖醛酸(5g,25.8mmol)，炔丙胺(11.1g,25.8mmol)，50mL DMF，溶清，冰水浴降至0℃左右，加入EDCI(9.9g,51.6mmol)，HOBt(7g,51.6mmol)及DIEA(12.7mL,77.4mmol)，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应结束后，将反应 液倒入100mL水中，加入乙酸乙酯萃取三次(100mL*3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤两次，再用无水硫酸钠干燥，得到粗品化合物直接用于下一步。
于250mL单口瓶中，加入上述粗品化合物，50mL DMF溶解，再加入10mL二乙胺，室温反应2h，TLC监测反应终点。反应结束后，向反应液中加入500mL甲叔醚，析出白色固体，过滤，干燥，得化合物78(3.96g)，LC-MS：[M-H]+＝369.5。
第二步：化合物P3-S的合成
以化合物75与化合物78为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-S(24mg)，TOF：[M+H]+＝1338.4。
实施例88：化合物P3-T的合成
第一步：化合物79的合成
参照化合物78的合成路线，制备13.2g化合物79，LC-MS：[M-H]+＝237.5。
第二步：化合物P3-T的合成
以化合物75与化合物79为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-T(44mg)，TOF：[M+H]+＝1206.6。
实施例89：化合物P3-U的合成
第一步：化合物80的合成
在50mL单口瓶中加入甘露糖醛酸(1g,5.2mmol)，炔丙胺(2.2g,5.2mmol)，10mL DMF，溶清，冰水浴降至0℃左右，加入EDCI(2.0g,10.3mmol)，HOBt(1.4g,10.3mmol)及DIEA(2.6mL,15.5mmol)，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物80(0.97g)，LC-MS：[M+H]+＝395.6。第二步：化合物P3-U的合成
以化合物69与化合物80为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-U(16mg)，TOF：[M+H]+＝1419.8。
实施例90：化合物P3-V的合成
第一步：化合物81的合成
参照化合物80的合成得到化合物81(0.49g)，LC-MS：[M+H]+＝615.4。
第二步：化合物P3-V的合成
以化合物69与化合物81为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-V(30mg)，TOF：[M+H]+＝1639.9。
实施例91：化合物P3-W的合成
第一步：化合物82的合成
参照化合物80的合成得到化合物82(2.17g)，LC-MS：[M+H]+＝291.1。
第二步：化合物P3-W的合成
以化合物69与化合物82为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-W(35mg)，TOF：[M+H]+＝1315.8。
实施例92：化合物P3-X2的合成
第一步：化合物83的合成
在25mL单口瓶中加入单-6-O-(氨基)-β-环糊精(1g,0.88mmol)，叠氮-乙二醇-乙酸(180mg,0.88mmol)，5mL DMF，溶清，冰水浴降至0℃左右，加入EDCI(386mg,2mmol)，HOBt(276mg,2mmol)及DIEA(0.66mL,4mmol)，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物83(0.66g)，LC-MS：[M+H]+＝1319.6。
第二步：化合物P3-X2的合成
以化合物69与化合物83为原料，参照化合物P3-A的合成路线，制备化合物P3-X2(17mg)，TOF：[M+Na]+＝2365.9。
实施例93：化合物P3-Y8的合成
第一步：化合物84的合成
在25mL单口瓶中加入单-6-O-(氨基)-β-环糊精(1g,0.88mmol)，5,8,11,14,17,20,23,26-八氧杂-2-氮杂二十九碳二酸1-(9H-芴-9-基甲基)酯(585.1mg,0.88mmol)，5mL DMF，溶清，冰水浴降至0℃左右，加入EDCI(388mg,2mmol)，HOBt(275mg,2mmol)及DIEA(0.66 mL,4mmol)，升至室温反应2h，HPLC监测反应终点，反应液经过油泵减压浓缩后直接用于下一步反应。
于25mL单口瓶中，加入上述粗品化合物，10mL DMF溶解，再加入2mL二乙胺，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物84(0.87g)，TOF：[M+H]+＝1557.5。
第二步：化合物P3-Y8的合成
以化合物75与化合物84为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-Y8(21mg)，TOF：[M+Na]+＝2549.1。
实施例94：化合物P3-Z4的合成
第一步：化合物85的合成
参照化合物84的合成得到化合物85(0.91g)，LC-MS：[M+H]+＝1233.3。
第二步：化合物P3-Y8的合成
以化合物75与化合物85为原料，参照化合物P3-D的合成路线，制备化合物P3-Z4(33mg)，TOF：[M+H]+＝2203.1。
实施例95：化合物86的合成
第一步：化合物86b的合成
参照专利CN102933236A中“化合物26”的合成得到化合物86a，在250mL三口瓶中，加入化合物86a(3g,6.7mmol)，50mL无水THF，氮气保护下，冰水浴维持在0℃，加入硼氢化钠固体(384mg,10.2mmol)，在0℃下反应30min，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应结束后，将反应液至于冰水中，缓慢加入50mL水淬灭反应，再加入1N稀HCl直至不冒气泡为止，加入乙酸乙酯萃取(60mL*3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品。粗品经过柱层析纯化(DCM/MeOH＝20:1-5:1)，得到化合物86b(2.08g,黄色固体)，收率74.3％，LC-MS：[M+H]+＝415.1。
第二步：化合物86c的合成
在100mL单口瓶中加入化合物86b(2g,4.8mmol)，TBSCl(1.32g,8.8mmol)，咪唑(1.2g,17.6mmol)，15mL无水DMF溶解，室温下反应3h，TLC监测反应终点。反应结束后将反应倒入30mL水中，用DCM萃取(25mL*3)，合并有机相，用水和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥并且减压蒸发，得到粗品。粗品通过柱层析(PE/EA＝5:1-1:2)，得到化合物86c(2.28g,黄色固体)，收率89.3％，LC-MS：[M+H]+＝529.2。
第三步：化合物86d的合成
在100mL单口瓶中加入化合物3f(2.2g,4.16mmol)，5％甲酸/甲醇溶液30mL，冰浴冷却至5℃以下，搅拌下缓慢加入锌粉(5.44g,83.2mmol)，再升至室温反应1h，TLC监测反应终点。反应结束后趁热过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，滤液以饱和碳酸氢钠溶液调pH至7，然后于45℃下减压浓缩，除去溶剂，得到棕黄色油状物，加入60mL DCM，分出有机层，用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到粗品。粗品经过柱层析纯化(PE：EA＝1:1-1:3)，得到化合物86d(1.87g,淡黄色固体)，收率90.1％，LC-MS：[M+H]+＝500.2。
第四步：化合物86e的合成
在50mL单口瓶中加入化合物3g(1.8g,3.6mmol)，Fmoc-VA-PABO-PNP(2.45g,3.6mmol),15mL DMF溶清，再加入DIEA(893uL,5.4mmol),室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，再冻干，得到化合物86e(2.94g，淡黄色固体)，收率78.3％，LC-MS：[M+H]+＝1040.5。
第五步：化合物86f的合成
在50mL单口瓶中加入化合物86e(2.9g,2.78mmol)，8mLTHF和8mL水溶解，再加入20mL冰乙酸，室温反应，HPLC监测反应终点。反应结束后，将反应液缓慢地滴入400 mL饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取(100mL*3)，合并有机相，用水和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥并且减压蒸发，得到粗品。粗品通过柱层析(DCM/MeOH＝10:1-5:1)，得到化合物86f(1.94g,淡黄色固体)，收率75％，LC-MS：[M+H]+＝926.3。
第六步：化合物86g的合成
于100mL三口瓶中加入化合物86f(1.9g,2.0mmol)，40mL无水DCM溶解，氮气保护下，加入Dess-Martin高碘试剂(0.93g,2.2mmol)，室温反应4h，TLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液经过饱和碳酸氢钠溶液、水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物86g(1.61g,类白色固体)，收率85％，LC-MS：[M+H]+＝924.4。
第七步：化合物86h的合成
于50mL单口瓶中加入化合物86g(1.5g,1.62mmol)，15mLDMF溶清，再加入3mL二乙胺，室温反应1h，TLC监测反应终点。反应结束后，将反应液倒入100mL甲叔醚中，析出固体，过滤，得到脱保护产品。将脱保护产品溶于15mL DMF中，加入化合物40(0.92g,1.62mmol)，EEDQ(0.48g,1.94mmol)，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，冻干得到化合物86h(1.30g,类白色固体)，收率64.2％，LC-MS：[M+H]+＝1248.5。
第八步：化合物86的合成
于50mL单口瓶中加入化合物86h(500mg,0.4mmol)，5mLDCM溶解，再加入三氟乙酸(5mL)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，45℃减压浓缩除去溶剂，得残余物。残余物经过高效液相制备纯化，得产品制备液，冻干得化合物86(294mg)，收率67.4％，LC-MS：[M+H]+＝1092.4。
实施例96：化合物P4-A的合成
第一步：化合物P4-A的合成
于25mL单口瓶中加入化合物86(25mg,0.023mmol)，环糊精-N3(26.5mg,0.023mmol)，5mLDMF及2.5mL水溶解，再加入CuSO4·5H2O(6.7mg,0.026mmol)，抗坏血酸钠(5.3mg,0.026mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P4-A(36.9mg)，收率71.6％，TOF：[M+H]+＝2251.8。
实施例97：化合物P4-B的合成
第一步：化合物P4-B的合成
于25mL单口瓶中加入化合物86(25mg,0.023mmol)，化合物18(30.7mg,0.023mmol)，5mLDMF及2.5mL水溶解，再加入CuSO4·5H2O(6.6mg,0.026mmol)，抗坏血酸钠(5.3mg,0.026mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P4-B(37.2mg)，收率66.6％，TOF：[M+H]+＝2427.2。
实施例98：化合物P4-C的合成
第一步：化合物88的合成
于50mL单口瓶中，加入化合物86g(2g,2.16mmol)，16mL DMF溶解，再加入二乙胺(4mL)，室温反应8h，HPLC监测反应终点。反应结束后，油泵减压浓缩反应液，所得黄色油状物经过油泵旋除溶剂得到化合物88，直接用于下一步。
将上述粗品化合物溶于10mLDMF中，加入DIPEA(714uL,4.32mmol),室温下加入化合物50(4g,2.16mmol)，室温反应3h，HPLC监测反应终点。反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物88(3.9g)，TOF：[M+H]+＝2370.3。
第二步：化合物P4-C的合成
于25mL单口瓶中，加入化合物88(1g,0.42mmol)，4mL DCM溶解，加入4mL TFA，室温反应0.5h，HPLC监测反应终点。反应结束后，水泵减压45℃浓缩除去溶剂，得残余物。残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P4-C(577mg)，TOF：[M+H]+＝2214.0。
实施例99：化合物P4-D的合成
第一步：化合物89的合成
于25mL单口瓶中加入化合物87(300mg,0.43mmol)，10mL DMF，室温下加入化合物74(183mg,0.43mmol)，冰水浴冷却下依次加入HATU(333mg,0.86mmol)，HOBt(118mg,0.86mmol)，DIPEA(0.22mL)，缓慢升温至室温反应5h，TLC监测基本完全反应，减压旋除溶剂，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品未经纯化直接用于下一步反应。
将上述化合物溶于3mL二氯甲烷中，冰水浴降温至0℃，缓慢滴加TFA(3mL)，缓慢升温至室温下反应0.5h，HPLC监测反应。反应完全后，反应液于45℃下减压浓缩得黄色油状粗品化合物，残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物89(266mg)，LC-MS：[M+H]+＝1053.5。
第二步：化合物90的合成
于25mL单口瓶中加入化合物89(200mg,0.19mmol)，10mL DMF，室温下加入化合物23(484mg,0.19mmol)，冰水浴冷却下依次加入HATU(156mg,0.4mmol)，HOBt(82mg,0.6mmol)，DIPEA(100uL)，反应3h，HPLC监测完全反应，经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到中间体化合物直接用于下一步。
将上述中间体溶于3mLDMF中，室温下滴加二乙胺(0.6mL)，室温下反应5h，HPLC监测反应。反应完全后，经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物90(301mg)，TOF：[M+H]+＝2122.1。
第三步：化合物91的合成
于25mL单口瓶中加入化合物90(200mg,0.094mmol)，5mL DMF，室温下加入化合物6(38mg,0.042mmol)，冰水浴冷却下依次加入HATU(76mg,0.188mmol)，HOBt(29mg,0.188mmol)，DIPEA(64uL)，维持室温反应2h，HPLC监测完全反应，经过高效液相制备 纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物91(198mg)，TOF：[M+H]+＝2502.2。第四步：化合物P4-D的合成
将化合物91(100mg,0.04mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰水浴降温至0℃，缓慢滴加TFA(2mL)，缓慢升温至室温下反应0.5h，HPLC监测反应。反应完全后，反应液于45℃下减压浓缩得黄色油状粗品化合物，残余物经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物P4-D(62.0mg)，TOF：[M+Na]+＝2368.0。
实施例100：化合物P4-E的合成
以化合物89和化合物24为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-E(37mg)，LC-MS：[M+H]+＝1569.6。
实施例101：化合物P4-F的合成
以化合物89和化合物25为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-F(41mg)，LC-MS：[M+H]+＝1437.5。
实施例102：化合物P4-G的合成
以化合物86和化合物10为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-G(25mg)，LC-MS：[M+H]+＝1650.6。
实施例103：化合物P4-H的合成
以化合物86和化合物PJA-PEG8-N3为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-H(34mg)，LC-MS：[M+H]+＝1736.8。
实施例104：化合物P4-I的合成
以化合物86和化合物27为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-I(55mg)，LC-MS：[M+H]+＝1546.9。
实施例105：化合物P4-J的合成
以化合物89和化合物77为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-J(31mg)，LC-MS：[M+H]+＝1423.7。
实施例106：化合物P4-K的合成
以化合物89和化合物28为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-K(24mg)，LC-MS：[M+H]+＝1555.7。
实施例107：化合物P4-L的合成
以化合物89和化合物30为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-L(24mg)，LC-MS：[M+H]+＝1636.6。
实施例108：化合物P4-M的合成
以化合物89和化合物61为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-M(20mg)，LC-MS：[M+H]+＝1857.0。
实施例109：化合物P4-N的合成
以化合物89和化合物64为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-N(17mg)，LC-MS：[M+H]+＝1532.7。
实施例110：化合物P4-O的合成
以化合物89和化合物66为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-O(32mg)，LC-MS：[M+H]+＝1626.8。
实施例111：化合物P4-P的合成
以化合物86和化合物33为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-P(42mg)，LC-MS：[M+H]+＝1928.0。
实施例112：化合物P4-Q的合成
以化合物86和化合物34为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-Q(35mg)，LC-MS：[M+H]+＝1603.6。
实施例113：化合物P4-R的合成
以化合物89和化合物35为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-R(31mg)，LC-MS：[M+H]+＝1522.8。
实施例114：化合物P4-S的合成
以化合物89和化合物78为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-S(21mg)，LC-MS：[M+H]+＝1405.5。
实施例115：化合物P4-T的合成
以化合物89和化合物79为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-T(31mg)，LC-MS：[M+H]+＝1273.4。
实施例116：化合物P4-U的合成
以化合物86和化合物80为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-U(47mg)，LC-MS：[M+H]+＝1486.7。
实施例117：化合物P4-V的合成
以化合物86和化合物81为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-V(40mg)，LC-MS：[M+H]+＝1706.7。
实施例118：化合物P4-W的合成
以化合物86和化合物82为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-W(37mg)，LC-MS：[M+H]+＝1382.9。
实施例119：化合物P4-X2的合成
以化合物86和化合物83为原料，参照化合物P4-A的合成路线，制备化合物P4-X2(22mg)，TOF：[M+H]+＝2411.2。
实施例120：化合物P4-Y8的合成
以化合物89和化合物84为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-Y8(29mg)，TOF：[M+H]+＝2594.5。
实施例121：化合物P4-Z4的合成
以化合物89和化合物85为原料，参照化合物P4-D的合成路线，制备化合物P4-Z4(28mg)，TOF：[M+Na]+＝2292.1。
抗体按照抗体常规方法进行制备，例如可进行载体构建后，转染真核细胞纯化表达。
以下为抗Trop-2抗体的序列：
轻链(SEQ ID NO：1)
重链(SEQ ID NO：2)
以下为抗CD33抗体的序列：
轻链(SEQ ID NO：3)
重链(SEQ ID NO：4)
以下实施例中，使用抗CD33抗体进行配体-药物偶联物的制备。可参考这些实施例中的制备方法制备含抗TROP-2抗体的配体-药物偶联物。
实施例122：配体-药物偶联物的制备：
通用偶联方法
将通过初步的纯化后单体率大于95％的抗体分子L，使用超滤离心管换液至磷酸盐缓冲液中，浓度10mg/mL。加入20倍于抗体摩尔分子数的TCEP，室温下反应4h以打开抗体链间二硫键。加入20倍于抗体摩尔分子数的连接子-药物化合物(payload)，室温下反应2h。反应结束后，使用截留分子量为30KDa的超滤离心管换液至PBS中，并去除未偶联的payload。换液后的ADC样品使用0.22微米除菌过滤器过滤后备用。
实施例123：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-1。
实施例124：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-2。
实施例125：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-3。
实施例126：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-4。
实施例127：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-5。
实施例128：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-6。
实施例129：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-7。
实施例130：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-8。
实施例131：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-9。
实施例132：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-10。
实施例133：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-11。
实施例134：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-12。
实施例135：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-13。
实施例136：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-14。
实施例137：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-15。
实施例138：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-16。
实施例139：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-17。
实施例140：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-18。
实施例141：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-19。
实施例142：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-20。
实施例143：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-21。
实施例144：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-22。
实施例145：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-23。
实施例146：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-24。
实施例147：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-25。
实施例148：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-26。
实施例149：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-27。
实施例150：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-28。
实施例151：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-29。
实施例152：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-30。
实施例153：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-31。
实施例154：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-32。
实施例155：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-33。
实施例156：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-34。
实施例157：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-35。
实施例158：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-36。
实施例159：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-37。
实施例160：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-38。
实施例161：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-39。
实施例162：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-40。
实施例163：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-41。
实施例164：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-42。
实施例165：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-43。
实施例166：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-44。
实施例167：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-45。
实施例168：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-46。
实施例169：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-47。
实施例170：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-48。
实施例171：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-49。
实施例172：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-50。
实施例173：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-51。
实施例174：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-52。
实施例175：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-53。
实施例176：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-54。
实施例177：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-55。
实施例178：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-56。
实施例179：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-57。
实施例180：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-58。
实施例181：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-59。
实施例182：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-60。
实施例183：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-61。
实施例184：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-62。
实施例185：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-63。
实施例186：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-64。
实施例187：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-65。
实施例188：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-66。
实施例189：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-68。
实施例190：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-68。
实施例191：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-69。
实施例192：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-70。
实施例193：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-71。
实施例194：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-72。
实施例195：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-73。
实施例196：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-74。
实施例197：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-75。
实施例198：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-76。
实施例199：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-77。
实施例200：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-78。
实施例201：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-79。
实施例202：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-80。
实施例203：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-81。
实施例204：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-82。
实施例205：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-83。
实施例206：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-84。
实施例207：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-85。
实施例208：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-86。
实施例209：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-87。
实施例210：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-88。
实施例211：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-89。
实施例212：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-90。
实施例213：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-91。
实施例214：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-92。
实施例215：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-93。
实施例216：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-94。
实施例217：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-95。
实施例218：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-96。
实施例219：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-97。
实施例220：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-98。
实施例221：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-99。
实施例222：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-100。
实施例223：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-101。
实施例224：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-102。
实施例225：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-103。
实施例226：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-104。
实施例227：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-105。
实施例228：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-106。
实施例229：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-107。
实施例230：
按照配体-药物偶联物的通用制备方法，得到ADC-108。
实施例231：对照组ADC-109
ADC-109的payload参照专利“WO2018233571A1”实施例11的合成路线制备，配体-药物偶联物按照本发明通用方法制备。
实施例232：对照组ADC-110
ADC-110的payload参照专利“WO2019195665A1”第148页Example 4-3的合成路线制备，配体-药物偶联物按照本发明通用方法制备。
实施例233：对照组ADC-111
ADC-111的payload参照专利“WO2019044946A1”式(14)表示的化合物的合成路线制备，配体-药物偶联物按照本发明通用方法制备。
实施例235：ADC单体率的测定
1)使用SEC-HPLC方法测定单体率方法：
色谱柱：Biocore SEC-300 5μm，4.6×300mm；厂家：NanoChrom，货号：B213-050030-04630S；流动相：50mM PB+300mM NaCl+200mM Arg+5％IPA,pH＝6.5
表1方法参数
2)结果：
表2部分实施例合成的配体-药物偶联物(ADC)单体率

图1A-图1C分别为ADC-29、ADC-56、ADC-111的SEC-HPLC谱图，显示了各ADC的聚集情况。
3)结论：
本发明的ADC具有低降解率，低聚集率的特点，具有单体率高的优异性质。
实施例235：DAR值的测定
1)方法：使用RP-HPLC方法测定药物抗体比例DAR：
色谱柱名称:Proteomix RP-1000 4.6×100mm 5μm 1000A；厂家：Sepax货号：465950-4610
表3方法参数
2)结果：
表4部分实施例合成的配体-药物偶联物(ADC)偶联比(DAR)
图2A-图2C分别为ADC-29、ADC-56、ADC111的RP-HPLC谱图，显示了各ADC的药物-抗体偶联比(DAR)。
3)结论：
本发明的ADC具有DAR值高的优异性质，在相同剂量ADC药物的给药剂量下，可以显著提高靶点位置的药物浓度。
实施例236：血浆稳定性
1)操作
取一定量的ADC样品，加入到已去除人IgG的人血浆中，每种ADC重复三管，放置37℃水浴中孵，分别孵育7天、14天、21天后，取出ADC样品，每管加入ProteinA  resin(MabSelect SuReTM LX Lot:#10221479GE，用取PBS洗涤过的)100uL，垂直混合仪晃动吸附2h,经过洗涤洗脱步骤，获得孵育后的ADC。对孵育特定时间的ADC样品进行RP-HPLC检测。
2)结果
表5部分实施例合成的配体-药物偶联物(ADC)的血浆稳定性数据
3)结论
与对照组ADC-109相比，本发明的增强亲水性的ADC药物如ADC-1、ADC-28经过21天37℃的血浆孵育后，单体率更高，血浆中的聚集更少，证明本发明的ADC药物具备更优异的亲水性及稳定性。
实施例237：抗体-药物偶联物体外药效检测
1)方法：
本实施例中利用多种人源肿瘤细胞株(A431(人表皮癌细胞)，HL-60(人早幼粒急性白血病细胞)，TF-1(人血液白血病细胞),HEL92.1.7(人红白细胞白血病细胞),MV4-11(人髓性单核细胞白血病细胞)与MOLM-13(人急性髓系白血病细胞))作为实验模型，以评价ADC偶联药物的体外药效。接种一定数目的肿瘤细胞系于96孔板中，向细胞中加入梯度稀释的受试抗体及对应的ADC药物，处理5天，利用Alamar Blue或MTS检测细胞活力，通过计算IC50评价受试抗体及ADC对肿瘤细胞系的抑制效果。抗体药物起始浓度为500nM，稀释倍数为7倍，共8个浓度点，处理5天。最终算法按照存活率＝(实验组-空白)/(对照组-空白组)×100％，随后利用Graph Pad Prism拟合曲线，计算半数抑制浓度(IC50)。
2)结果：
表6受试ADC药物的体外药效结果：

3)结论：
结果如上表6及图3A-图3F所示，在多种人源肿瘤细胞株(A431，HL-60，TF-1,HEL92.1.7,MV4-11与MOLM-13)的体外药效试验中，本发明的ADC药物具有优异的活性。
实施例238：抗体-药物偶联物体内药效检测
本发明建立了人红白细胞白血病细胞HEL92.1.7BALB/c Nude皮下移植瘤模型，以评价ADC偶联药物的体内药效。
1)方法：
以5×106个HEL92.1.7细胞(0.1mL/只)通过皮下注射到5～6周鼠龄的BALB/c Nude右侧肩胛部，待小鼠肿瘤平均大小生长至230～270mm3左右，随机分为溶媒对照组(Vehicle)、单抗(CD33-mAb)治疗组(10mg/kg)、ADC治疗组(5mg/kg、10mg/kg)，每组5只，并开始给药(D0)。各组均按10mL/kg体重尾静脉注射给药。
2)结果：
表7在人红白血病细胞HEL92.1.7BALB/c-Nude小鼠皮下移植瘤模型中各组药效分析表
*每个受试组中小鼠移植瘤体积的平均值。
表8在人红白血病细胞HEL92.1.7BALB/c-Nude小鼠皮下移植瘤模型中小鼠体重分析表
*每个受试组中小鼠体重的平均值。
3)结论：
如上表7所示，相比于空白对照及单抗治疗组，本发明的ADC药物在不同剂量下均可显著抑制肿瘤的生长，并且在一定程度上呈现出剂量依赖性。
如上表8所示，不同剂量下给药过程中，受试各组动物体重正常，无明显变化，说明本发明的ADC药物无明显毒副作用。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公开的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (50)

  1. 一种如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
    其中：
    L选自配体；
    M选自任意接头单元或键；
    A选自任意连接支架；
    B存在或不存在，当存在时，选自任意连接结构或键；
    C存在或不存在，当存在时，选自任意分支单元或键；
    D、D1、D2相同或不同，且各自独立地选自药物；
    SU选自糖或其衍生物；
    La、Lb相同或不同，且各自独立地选自任意连接单元或键；
    m选自1-5的整数；
    n选自1-10的整数；
    o选自1-10的整数。
  2. 根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述配体L选自抗体、功能性的抗体片段或具有靶向作用的蛋白。
  3. 根据权利要求1或2中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述配体L选自抗体，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体或鼠源抗体。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或键，当所述结构含有环烷基或杂环基时，所述接头单元M还可以选自所述结构的开环形式，
    其中：
    波浪线所示位置非限制性地与配体、连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    *所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
    p、p’各自独立地选自1-10的整数；
    Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
    其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其立体异构体或其开环形式，
    其中：
    波浪线所示位置非限制性地与配体、连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    *所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；p、p’各自独立地选自1-10的整数；
    Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
    其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
  6. 根据权利要求1-5中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其开环形式，
    优选地为
    其中：
    *所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
    波浪线所示位置非限制性地与配体、连接支架A、连接结构B或分支单元C相连。
  7. 根据权利要求1-6中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接支架A非限制性地选自天然或非天然氨基酸中的一种或几种的组合或以下结构，
    其中：
    X选自N、CH、C3-C8环烷基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    Y选自-NH-、-O-、-S-、-CO-、-CO2-、-CONH-、-NHCO-、-SO-、-SO2-、-OSO2-或-OP＝O(OH)O-；
    q选自1-10的整数；
    波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
    R1选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、羧基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    R2非限制性的选自：
    其中左侧波浪线表示R2连接至*所示的手性碳的位置，右侧波浪线代表连接支架A的任意三个连接位点之一。
  8. 根据权利要求1-6中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接支架A非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    其中：
    Z选自-NH-、-O-或-S-；
    波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
    优选地，所述连接支架A为其中，Z为-NH-。
  9. 根据权利要求1-8中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述B非限制性地选自任意连接结构或键。
  10. 根据权利要求1-9中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述C存在或不存在，当C存在时，非限制性的选自天然或非天然氨基酸的一种或几种的组合。
  11. 根据权利要求1-10中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物、自身免疫疾病药物、抗感染性疾病药物(例如抗病毒药物)、放射性同位素、发色分子或上述药物药学上可接受的盐或溶剂化物。
  12. 根据权利要求1-11中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物，包括但不限于DNA损伤剂、RNA损伤剂、酶抑制剂或微管抑制剂。
  13. 根据权利要求1-12中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述SU非限制性地选自天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物。
  14. 根据权利要求1-13中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物非限制性地选自以下结构，

    优选地，所述SU选自葡甲胺、麦芽糖、麦芽糖酸、甘露糖醛酸、β-环糊精或单(6-氨基-6去氧)-β-环糊精。
  15. 根据权利要求1-14中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述SU非限制性地以共价形式连接至Lb。
  16. 根据权利要求1-15中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接单元La、Lb相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自化学不稳定连接单元、酶催化裂解的连接单元或不可断裂连接单元的一种或几种组合。
  17. 根据权利要求1-16中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：La选自化学不稳定连接单元或酶催化裂解的连接单元。
  18. 根据权利要求1-17中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，所述连接单元La非限制性地选自以下结构或其立体异构体：

    其中：
    Ra、Rb、Rc相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    或者，Rb、Rc和与二者相连的碳原子构成C3-C8环烷基或3-8元杂环基；
    Rd选自H、NO2、HO-SO3-或-OSO3；
    r选自1-10的整数；
    左侧波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    右侧波浪线所示位置与药物D、D1或D2相连。
  19. 根据权利要求1-18中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：连接单元La-D、La-D1或La-D2相同或不同，并且非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    (1)奥瑞斯他汀衍生物(Auristatins)
    (2)美登木素生物碱衍生物(maytansinoids)
    (3)苯二氮类药物(Benzodiazepines)
    (4)喜树碱类似物
    (5)Tubulysins
    (6)阿霉素类
    (7)卡奇霉素类(Calicheamicins)
    (8)Duocarmycins
    (9)其它抗肿瘤药物
    其中：
    波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    优选地，所述La-D、La-D1或La-D2选自：
    奥瑞斯他汀衍生物，例如
    苯二氮衍生物，例如
    喜树碱类似物，例如
    考布他汀衍生物，例如
  20. 根据权利要求1-19中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接单元Lb非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    其中：
    R3选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    W选自-NR4-、-O-、-S-、-CO-或-CONR5-；
    R4或R5各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    s选自1-10的整数；
    s’选自1-10的整数；
    左侧波浪线与右侧波浪线所示位置非限制性地连接SU或连接支架A。
  21. 一种如式Ⅳ、式Ⅴ或式Ⅵ所示的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
    其中：
    M选自任意接头单元；
    A选自任意连接支架；
    B存在或不存在，当存在时，选自任意连接结构或键；
    C存在或不存在，当存在时，选自任意分支单元或键；
    D、D1、D2相同或不同，且各自独立地选自药物；
    SU选自糖或其衍生物；
    La、Lb相同或不同，且各自独立地选自任意连接单元或键；
    m选自1-5的整数；
    o选自1-10的整数。
  22. 根据权利要求21所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构，当所述结构含有环烷基或杂环基时，所述接头单元M还可以选自所示结构的开环形式，
    其中：
    波浪线所示位置非限制性地与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    M’非限制性地选自卤素、OTf或OTs；
    *所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
    p、p’各自独立地选自1-10的整数；
    Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
    其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
  23. 根据权利要求21或22中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其立体异构体或其开环形式，
    其中：
    波浪线所示位置非限制性地与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    *所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；p、p’各自独立地选自1-10地整数；
    Ac非限制性地选自天然或非天然氨基酸的残基、具有1-20个重复单元的聚乙二醇链段、磷酸基、羧酸基、磺酸基、亚磺酸基或以下结构，
    其中，波浪线所示位置与*所示位置的碳原子相连。
  24. 根据权利要求21-23中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述接头单元M非限制性地选自如下式所示的结构或其开环形式，
    优选地为其中：
    *所示位置的碳为手性碳，其构型为R型或S型；
    波浪线所示位置非限制性地与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连。
  25. 根据权利要求21-24中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，所述连接支架A非限制性地选自天然或非天然氨基酸中的一种或几种的组合或以下结构：
    其中：
    X选自N、CH、C3-C8环烷基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    Y选自-NH-、-O-、-S-、-CO-、-CO2-、-CONH-、-NHCO-、-SO-、-SO2-、-OSO2-或-OP＝O(OH)O-；
    q选自1-10的整数；
    波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
    R1选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、羧基、3-8元杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    R2非限制性的选自：

    其中左侧波浪线所示位置表示R2连接至*标记的手性碳位置，右侧波浪线所示位置代表连接支架A的任意三个连接位点之一。
  26. 根据权利要求21-25中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接支架A非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    其中：
    Z选自-NH-、-O-或-S-；
    波浪线所示位置非限制性地与接头单元M、连接单元La、Lb、连接结构B或分支单元C相连；
    优选地，所述连接支架A为其中，Z为-NH-。
  27. 根据权利要求21-26中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，所述B非限制性地选自任意连接结构或键。
  28. 根据权利要求21-27中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，所述C存在或不存在，当C存在时，非限制性的选自天然或非天然氨基酸的一种或几种的组合。
  29. 根据权利要求21-28中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物、自身免疫疾病药物、抗感染性疾病药物(例如抗病毒药物)、放射性同位素、发色分子或上述药物药学上可接受的盐或溶剂化物。
  30. 根据权利要求21-29中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述药物D、D1、D2相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自抗肿瘤药物，包括但不限于DNA损伤剂、RNA损伤剂、酶抑制剂或微管抑制剂。
  31. 根据权利要求21-30中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述SU非限制性地选自天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物。
  32. 根据权利要求21-31中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述天然或非天然的单糖、二糖、多糖或其衍生物非限制性地选自以下结构，

    优选的，所述SU选自葡甲胺、麦芽糖、麦芽糖酸、甘露糖醛酸、β-环糊精或单(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精。
  33. 根据权利要求21-32中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述SU非限制性地以共价形式连接至Lb。
  34. 根据权利要求21-33中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接单元La、Lb相同或者不同，各自独立地且非限制性地选自化学不稳定连接单元、酶催化裂解的连接单元或不可断裂连接单元的一种或几种组合。
  35. 根据权利要求21-34中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：La选自化学不稳定连接单元或酶催化裂解的连接单元。
  36. 根据权利要求21-35中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接单元La非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    其中：
    Ra、Rb、Rc相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    或者Rb、Rc和与二者相连的碳原子构成C3-C8环烷基或3-8元杂环基；
    Rd选自H、NO2或HO-SO3或-OSO3；
    r选自1-10的整数；
    左侧波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    右侧波浪线所示位置与药物D、D1或D2相连。
  37. 根据权利要求21-36中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述La-D、La-D1或La-D2相同或者不同，并且非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    (1)奥瑞斯他汀衍生物(Auristatins)
    (2)美登木素生物碱衍生物(maytansinoids)
    (3)苯二氮类药物Benzodiazepines

    (4)喜树碱类似物
    (5)Tubulysins
    (6)阿霉素类
    (7)卡奇霉素类(Calicheamicins)

    (8)Duocarmycins
    (9)其它抗肿瘤药物
    其中：
    波浪线所示位置与连接支架A、连接结构B或分支单元C相连；
    优选地，所述La-D、La-D1或La-D2选自：
    奥瑞斯他汀衍生物，例如
    苯二氮衍生物，例如
    喜树碱类似物，例如
    考布他汀衍生物，例如
  38. 根据权利要求21-37中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述连接单元Lb非限制性地选自以下结构或其立体异构体，
    其中：
    R3选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    W选自-NR4-、-O-、-S-、-CO-或-CONR5-；
    R4或R5各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、C1-C6烷基、氘代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；
    s选自1-10的整数；
    s’选自1-10的整数；
    左侧波浪线与右侧波浪线所示位置非限制性地连接SU或连接支架A。
  39. 根据权利要求21-38中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述Lb-SU非限制性地选自以下结构，






  40. 根据权利要求21-39中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，




  41. 根据权利要求21-39中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，


  42. 根据权利要求21-39中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，


  43. 根据权利要求21-39中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述的连接子-药物化合物非限制性的选自以下结构，



  44. 一种制备如权利要求1-20任一项所述的如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法，其特征在于：包括如下步骤，
    通过修饰后的配体与式Ⅳ、式Ⅴ或式Ⅵ化合物反应，得到如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
    其中：
    L选自配体；
    M选自任意接头单元；
    A选自任意连接支架；
    B存在或不存在，当存在时，选自任意连接结构或键；
    C存在或不存在，当存在时，选自任意分支单元或键；
    D、D1、D2相同或不同，且各自独立地选自药物；
    SU选自糖或其衍生物；
    La、Lb相同或不同，且各自独立地选自任意连接单元或键；
    m选自1-5的整数；
    n选自1-10的整数；
    o选自1-10的整数。
  45. 根据权利要求1-20中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶 剂化物，或含有根据权利要求21-43中任一项所述的连接子-药物化合物的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物非限制性地选自以下结构或其立体异构体，










    其中：
    L选自配体，优选抗体；
    n选自1-10的整数，优选2-8。
  46. 根据权利要求1-20、44中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，或根据权利要求21-43中任一项所述的连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：
    所述药学上可接受的盐选自：
    结构式中酸性官能团与碱形成的钠盐、钾盐、钙盐或镁盐；
    结构中碱性官能团与酸形成的醋酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、硝酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乳酸盐、油酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
  47. 根据权利要求1-20、44中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述配体选自单克隆抗体，非限制性地选自：抗EGFRvIII抗体、抗DLL-3抗体、抗PSMA抗体、抗CD70抗体、抗MUC16抗体、抗ENPP3抗体、抗TDGF1抗体、抗ETBR抗体、抗MSLN抗体、抗TIM-1抗体、抗LRRC15抗体、抗LIV-1抗体、抗CanAg/AFP抗体、抗cladin 18.2抗体、抗Mesothelin抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗c-MET抗体、抗SLITRK6抗体、抗KIT/CD117抗体、抗STEAP1抗体、抗SLAMF7/CS1抗体、抗NaPi2B/SLC34A2抗体、抗GPNMB抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗MUC1/CD227抗体、抗AXL抗体、抗CD166抗体、抗B7-H3(CD276)抗体、抗PTK7/CCK4抗体、抗PRLR抗体、抗EFNA4抗体、抗5T4抗体、抗NOTCH3抗体、抗Nectin 4抗体、抗Trop-2抗体、抗CD142抗体、抗CA6抗体、抗GPR20抗体、抗CD174抗体、抗CD71抗体、抗EphA2抗体、抗LYPD3抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR3抗体、抗FRα抗体、抗CEACAMs抗体、抗GCC抗体、抗Integrin Av抗体、抗CAIX抗体、抗P-cadherin抗体、抗GD3抗体、抗Cadherin 6抗体、抗LAMP1抗体、抗FLT3抗体、抗BCMA抗体、抗CD79b抗体、抗CD19抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD74抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD37抗体、抗CD138抗体、抗CD352抗体、抗CD25抗体或抗CD123抗体；
    优选为抗Trop-2抗体或抗CD33抗体。
  48. 一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1-47中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
  49. 权利要求1-48中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或连接子-药物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，在制备用于治疗或预防肿瘤或自身免疫疾病药物中的用途。
  50. 根据权利要求1-49所述的用途，其中所述肿瘤选自实体瘤或非实体瘤，例如乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、多形性胶质细胞瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病。
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