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WO2020067507A1 - 第１級アミン化合物又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートとその製造方法 - Google Patents

第１級アミン化合物又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートとその製造方法 Download PDF

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WO2020067507A1
WO2020067507A1 PCT/JP2019/038368 JP2019038368W WO2020067507A1 WO 2020067507 A1 WO2020067507 A1 WO 2020067507A1 JP 2019038368 W JP2019038368 W JP 2019038368W WO 2020067507 A1 WO2020067507 A1 WO 2020067507A1
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WO
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mmol
substituted
added
unsubstituted
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Ceased
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PCT/JP2019/038368
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English (en)
French (fr)
Inventor
小林　信雄
亮吾 飛鋪
賢一 生津
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Seikagaku Corp
Original Assignee
Seikagaku Corp
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Publication date
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Priority to JP2020549480A priority patent/JPWO2020067507A1/ja
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    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
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    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Definitions

  • the present invention relates to a novel conjugate of a primary or secondary amine compound and an acidic polysaccharide and a method for producing the same. More specifically, the present invention relates to a novel conjugate of a primary or secondary amine compound and an acidic polysaccharide having an aminoacyloxymethyl group capable of controlling a release rate as a linker, and a method for producing the same.
  • Conjugates of drugs and polymers have been widely studied in the area of prodrugs or drug delivery systems (DDS), and have functions such as controlled release, improved absorption, stabilization in vivo, or targeting to target tissues. It is one of the important means.
  • DDS drug delivery systems
  • conjugates of water-soluble non-polypeptide oligomers and calsimimetics have been reported in US Patent Publication No. 2012/238621.
  • CMC sodium carboxymethylcellulose
  • gossypol is reported in Japanese Patent No. 5690944.
  • Alginate which is one of dietary fibers, is also being studied as a polymer used for the conjugate, and conjugates of alginic acid and various drugs are reported in JP-A-8-24325.
  • Glycosaminoglycan has been widely studied as a polymer used for the conjugate, and a conjugate of hyaluronic acid or chondroitin sulfate with a peptide is reported in US Pat. No. 5,955,578. Further, conjugates of heparin and various drugs have been reported in WO 93/18793.
  • Hyaluronic acid has also been studied as a polymer used for the conjugate, and a conjugate of hyaluronic acid and a taxane is also disclosed in WO 2005/085294, and a conjugate of hyaluronic acid and a protein such as a serine protease inhibitor is also available. It is reported in JP-T-2006-504747.
  • JP-T-2000-501082 discloses an acidic polysaccharide which is a polysaccharide having a carboxy group in the monomer structure and a primary or primary acid.
  • a method of forming an amide bond with a secondary amine drug is reported in JP-A-8-24325.
  • PEG Polyethylene glycol
  • PGA poly- ⁇ -glutamic acid
  • an ester bond can be formed with the acidic polysaccharide via a linker, and the drug can be released by hydrolysis of the ester bond.
  • the bond or amide bond formed by reductive amination formed in the conjugate is not easily hydrolyzed, so it is expected that the drug has not sufficient drug releasing ability. Is done.
  • the polymer molecular weight of the conjugate is closely related to its performance as a DDS preparation, and the retention of the conjugate in tissue or blood and the rate of absorption from the digestive tract are improved depending on the size of the polymer molecular weight.
  • increasing the molecular weight of the polymer lowers the water solubility of the polymer itself, and as a result, the conjugate using the high molecular weight polymer also decreases the water solubility.
  • An object of the present invention is to provide a novel conjugate having a primary or secondary amine compound and having a high drug concentration, high retention and solubility, and a method for producing the same.
  • an object of the present invention is to provide a novel conjugate of a primary or secondary amine compound with an acidic polysaccharide and a method for producing the same.
  • the present inventors have conducted intensive studies on the problems of these conjugates that have not been achieved for primary or secondary amine drugs, and as a result, have found that aminoacyloxymethyl groups capable of controlling the release rate can be used as linkers.
  • the present inventors have found a novel conjugate of a primary or secondary amine compound and an acidic polysaccharide, and have completed the present invention.
  • the present invention is a novel conjugate of a primary or secondary amine compound and an acidic polysaccharide and a method for producing the same.
  • FIG. 9 is a graph showing the relationship between time and drug release rate in buffers of pH 7.0 for Examples 22, 23, 29 and 31.
  • FIG. 10 is a graph showing the relationship between time and drug release rate in buffers of pH 7.0 for Examples 34, 63, and 69.
  • FIG. 21 is a graph showing the relationship between time and drug release rate in a pH 7.0 buffer solution for Example 80. It is a graph which shows the relationship between time and the release rate of a drug in buffer solution of pH 7.0 about Examples 36, 38, 41, and 47. It is a graph which shows the relationship between time and the release rate of a drug in buffer solution of pH7.0 about Examples 86, 88, and 89.
  • the conjugate according to one aspect of the present invention is a compound having a structure represented by the following general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • D represents a residue of the primary or secondary amine compound DH excluding the hydrogen atom of the primary or secondary amino group
  • the conjugate is preferably a conjugate with a drug containing a primary or secondary amino group.
  • a primary or secondary amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be collectively described as a "primary or secondary amine compound”.
  • an acidic polysaccharide is used as a carrier of the conjugate
  • a pharmaceutical composition is prepared with a high molecular weight as shown in the test results described below, while still ensuring a high drug loading amount and having less toxicity concerns.
  • the linker having the structure found in the present invention enables the production of a novel primary or secondary amine compound-acidic polysaccharide conjugate, and the conjugate uses an acidic polysaccharide as a carrier, It is possible to provide a highly practical pharmaceutical composition in terms of safety, polymer molecular weight, amount of drug carried, and the like, as compared with conventional techniques. The contribution of the present invention to medical treatment and the like is enormous.
  • the conjugate binds to a hydrocarbon chain (a divalent hydrocarbon group represented by A in the above formula (I)) in the linker by the carboxy group of the acidic polysaccharide residue forming an amide bond.
  • the divalent hydrocarbon group represented by A may be a carbon chain having 1 or more carbon atoms, and may have a branched structure or a cyclic structure.
  • the divalent hydrocarbon group A has a branched structure, at least one point of the molecular chain connecting the carbonyl group and the NH group to which A is bonded in the above general formula (I) with the minimum number of atoms, other than a hydrogen atom It can have a structure where atoms are bonded.
  • branched structures include structures such as 2-methyl-1,3-propylenyl, 1-phenyl-1,3-propylenyl.
  • the ring can be bonded to the remaining part of A at any two points of the ring which may be the same atom.
  • examples of such a cyclic structure include 1,2-phenylene, 1,4-cyclohexylene, 1,1-cyclopropenylene and the like.
  • a ring may be formed integrally with another partial structure, particularly the structure represented by -C (R 1 ) (R 2 )-in the formula (I).
  • the divalent hydrocarbon group A may have a substituent at an arbitrary position, and examples of the substituent are exemplified by the groups of R 3 , R 4 , R 5 and R 6 described above. Can be mentioned.
  • A is preferably -C (R 3 ) (R 4 )-(CH 2 ) 1- (C (R 5 ) (R 6 )) m- (CH 2 ) as represented by the following general formula (II). It is a divalent hydrocarbon group represented by n- (where R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , l, m and n are as defined above).
  • A is preferably a linear or branched alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, and more preferably A has 1 to 6 carbon atoms, from the viewpoint of design and availability of raw materials.
  • the conjugate represented by the formula (I) is preferably a compound represented by the following formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the methylene group may be unsubstituted or substituted, and when substituted, the two substituents may together form a ring, and a part of the divalent hydrocarbon group A ( That is, in the general formula (II), it may be bonded to at least one of R 3 , R 4 , R 5 and R 6 ) to form a ring.
  • the ring may be a condensed ring or a spiro ring.
  • the primary or secondary amine compound DH is present in the conjugate structure as urethane via a linker.
  • the urethane structure D-COO containing a primary or secondary amine compound DH at the end of the conjugate is rapidly decomposed due to the presence of an oxymethylene group bonded thereto, and the primary or secondary amine compound DH can be released.
  • This mechanism will be described below using the compound represented by the formula (I).
  • hydrolysis of the ester bond proceeds in the presence of water, and the hydroxymethyl derivative represented by the formula (VII) It is decomposed into a carboxylic acid compound represented by the formula (VIII).
  • the hydroxymethyl derivative represented by the formula (VII) has a urethane structure and is structurally unstable, it is promptly reacted with the primary or secondary amine compound DH represented by the formula (IX) and the formula (IX) It is decomposed into carbon dioxide represented by X) and an aldehyde compound (or ketone compound) represented by the formula (XI).
  • the function of the primary or secondary amine compound produced here is exhibited. Therefore, the primary or secondary amine compound-acidic polysaccharide conjugate represented by the formula (I) can release the primary or secondary amine compound by controlling the rate of hydrolysis of the ester bond. And the continuity of the function of the primary or secondary amine compound can be controlled.
  • One embodiment of the primary or secondary amine compound-acidic polysaccharide conjugate of the present invention is a compound represented by the above formula (I) or (II), and a compound represented by (I) or (II)
  • the amine compound which is an important intermediate in the production is a compound represented by the following formula (III) or (XII).
  • D, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , A, l, m and n are as defined above.
  • the compound represented by the above formula (III) or (XII) may further form a salt with an inorganic acid or an organic acid.
  • an alkyl group a cycloalkyl group, which includes the groups represented by the substituents R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 ;
  • Specific examples of the alkenyl group, cycloalkenyl group, alkynyl group, aromatic group and heterocyclic group include the following groups.
  • the alkyl group may be any of a linear or branched alkyl group.
  • the alkyl group preferably has 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, a 2-propyl, an n-butyl group, and a 1-methylpropyl group.
  • the cycloalkyl group may be any as long as the carbon atom at the bonding point is included as a ring-constituting atom, and may form a cycloalkane, a cycloalkene, an aromatic ring or a heterocyclic ring, or a spiro ring. You may.
  • the cycloalkyl group preferably has 3, 4, 5, 6, 7, or 8 carbon atoms. Examples of the cycloalkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cycloheptyl group, and a cyclooctyl group.
  • the alkenyl group may be any of a linear or branched alkenyl group.
  • the alkenyl group preferably has 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • Examples of alkenyl groups include vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-methylvinyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 1-ethylvinyl, 1-methyl- 1-propenyl group, 1-methyl-2-propenyl group, 2-methyl-1-propenyl group, 2-methyl-2-propenyl group, 1-pentenyl group, 2-pentenyl group, 3-pentenyl group, 4-pentenyl Group, 1-propylvinyl group, 1-methyl-1-butenyl group, 1-methyl-2-butenyl group, 1-methyl-3-butenyl group, 2-methyl-1-butenyl group, 2-methyl-2- Butenyl group, 2-methyl-3-butenyl group, 3-methyl-1-butenyl group, 3-methyl-2-but
  • Examples of the cycloalkenyl group include 1-cyclopropen-1-yl, 2-cyclopropen-1-yl, 1-cyclobuten-1-yl, 2-cyclobuten-1-yl, 1-cyclopenten- 1-yl group, 2-cyclopenten-1-yl group, 3-cyclopenten-1-yl group, 1-cyclohexen-1-yl group, 2-cyclohexen-1-yl group, 3-cyclohexen-1-yl group, 1-cyclohepten-1-yl group, 2-cyclohepten-1-yl group, 3-cyclohepten-1-yl group, 4-cyclohepten-1-yl group, 1-cycloocten-1-yl group, 2-cyclooctene -1-yl group, 3-cycloocten-1-yl group, 4-cycloocten-1-yl group, 1,3-cyclopentadien-1-yl group, 2,4-cyclopentadi 1-yl group, 1,3-cyclohexadie
  • the alkynyl group may be linear, branched or cyclic.
  • the alkynyl group preferably has 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • Examples of alkynyl groups include ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 3-butynyl, 1-methyl-2-propynyl, 1-pentynyl, -Pentynyl group, 3-pentynyl group, 4-pentynyl group, 1-methyl-2-butynyl group, 1-methyl-3-butynyl group, 2-methyl-3-butynyl group, 3-methyl-1-butynyl group, 1-ethyl-2-propynyl group, 1,1-dimethyl-2-propynyl group, 1-hexynyl group, 2-hexynyl group, 3-hexynyl group, 4-hexynyl group, 1-methyl-2
  • the aromatic group may be monocyclic or polycyclic, and may be condensed with a cycloalkane, cycloalkene, aromatic ring or heterocyclic ring.
  • the number of carbon atoms of the aromatic group is preferably 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14.
  • Examples of the aromatic group include a phenyl group, a naphthyl group, an anthracenyl group and the like.
  • the heterocyclic group contains at least one heteroatom such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom as a ring-constituting atom, and these may be condensed with a cycloalkane, a cycloalkene, an aromatic ring or a heterocycle, or a spiro ring. May be formed.
  • the size of the heterocyclic ring is preferably 3, 4, 5, 6, 7 or 8 membered ring.
  • heterocyclic ring aziridinyl group, azetidinyl group, diazetidinyl group, pyrrolidinyl group, piperidino group, homopiperidino group, pyrazolidinyl group, imidazolidinyl group, triazolidinyl group, tetrazolidinyl group, oxazolidinyl group, isoxazolidinyl group, thiazolidinyl group, thiazolidinyl group Isothiazolidinyl group, oxadiazolidinyl group, thiadiazolidinyl group, piperazinyl group, homopiperazinyl group, triazepanyl group, morpholino group, thiomorpholino group, quinuclidinyl group, tropanyl group, pyrrolinyl group, pyrazolinyl group, imidazolinyl group, oxazolinyl Group, thiazol
  • any two or three of the substituents R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5, and R 6 may form a ring together.
  • the ring include cyclopropane, cyclopropene, cyclobutane, cyclobutene, cyclopentane, cyclopentene, cyclopentadiene, cyclohexane, cyclohexene, cyclohexadiene, cycloheptane, cycloheptene, cycloheptadiene, cycloheptatriene, cyclooctane, cyclooctene, Cyclooctadiene, cyclooctatriene, aziridine, azetidine, diazetidine, pyrrolidine, piperidine, homopiperidine, pyrazolidine, imidazolidine, triazolidine, tetrazolidine, oxazolidine, isoxa
  • an unsaturated ring In the case of an unsaturated ring, at least a part thereof is also included in a hydrogenated ring. In the case of forming a ring, it is preferable to form a ring with any two or three substituents of R 3 , R 4 , R 5 and R 6 .
  • the substituent which the alkyl group, cycloalkyl group, alkenyl group, cycloalkenyl group, alkynyl group, aromatic group, and heterocyclic group may have include a hydroxyl group, an alkyl group, a cycloalkyl group, an alkenyl group, and a cycloalkenyl group.
  • Rx, Ry, Rz and the alkyl group, cycloalkyl group, alkenyl group, cycloalkenyl group, alkynyl group, aromatic group, and heterocyclic group as the substituents except for the hydrogen atoms mentioned here are the same as those described above. It includes groups similar to the groups represented by R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 .
  • the alkyl group of the alkoxy group and the alkylthio group as the substituent is the same as the definition of the alkyl group for R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 , and is the same as the definition of the aryloxy group or the arylthio group.
  • the aryl group has the same meaning as the definition of the aromatic group in R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 .
  • a substituent a guanidino group, an acyl group, a substituted sulfonyl group, a heterocyclyloxy group, a heterocyclylthio group, a carbamoyl group, a ureido group, an amide group, a sulfamoyl group, an acyloxy group, a sulfonamide group, an alkoxycarbonylamino group, and an aminocarbonyl group
  • Examples of the oxy group, substituted sulfinyl group, sulfamide group, aminosulfonyloxy group, alkoxysulfonylamino group, substituted sulfonyloxy group, alkoxycarbonyl group, alkoxycarbonyloxy group, and alkoxysulfonyl group are shown below.
  • R 7 , R 8 , R 8 , R 10 , R 11 and R 12 , R 15 , R 16 , R 17 , R 17 , R 19 , R 20 , R 21 , R 22 , R 23 , R 24 , R 26 , R 28 , R 29 , R 30 , R 31 , R 32 , R 33 , R 34 , R 35 and R 36 , R 38 and R 39 are a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group A substituted or unsubstituted cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted alkenyl group, a substituted or unsubstituted cycloalkenyl group, a substituted or unsubstituted alkynyl group, a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted Represents a heterocyclic group.
  • R 25 , R 27 , R 37 , R 40 , R 41 and R 42 each represent a substituted or unsubstituted alkyl group, a substituted or unsubstituted cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted alkenyl group, a substituted or unsubstituted cyclo group; Represents an alkenyl group, a substituted or unsubstituted alkynyl group, a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heterocyclic group.
  • R 13 and R 14 represent a substituted or unsubstituted heterocyclic group.
  • Examples of the substituent of the substituted alkyl group, the substituted cycloalkyl group, the substituted alkenyl group, the substituted cycloalkenyl group, the substituted alkynyl group, the substituted aromatic group, and the substituted heterocyclic group include the aforementioned R 1 , R 2 , R 3 , The same substituents as those for R 4 , R 5 and R 6 can be used.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted straight-chain or branched-chain having 1 to 6 carbon atoms.
  • the groups represented by R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, or a group represented by R 3 , R 3 4, R 5 and two of linked among R 6 is intended to form a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms is preferred from the viewpoint of availability of raw materials.
  • R 1 and R 2 are hydrogen atoms or one of them is a methyl group.
  • D is It is a structure representing a residue of a primary or secondary amine compound DH excluding a hydrogen atom of a primary or secondary amino group, and DH is specifically represented by the following formula (XIII) Compound.
  • R 43 and R 44 are each independently a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, a substituted or unsubstituted cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted alkenyl group, a substituted or unsubstituted cycloalkenyl group, An unsubstituted alkynyl group, a substituted or unsubstituted aromatic group or a substituted or unsubstituted heterocyclic group, an R 45 O— group, an R 46 S— group, or an R 47 (R 48 ) N— group (where R 45 , R 46 , R 47 and R 48 each independently represent a substituted or unsubstituted alkyl group, a substituted or unsubstituted cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted alkenyl group, a substituted or unsubstituted cycloalkenyl group A substituted or unsubstitute
  • R 43 and R 44 do not simultaneously become hydrogen atoms.
  • two of R 43 and R 44 may form a single bond or a double bond to form a saturated or unsaturated heterocyclic ring, and the ring is a condensed ring or a spiro ring with an aliphatic ring or a heterocyclic ring.
  • a fused ring can be formed with the aromatic ring.
  • the alkyl group, cycloalkyl group, alkenyl group, cycloalkenyl group, alkynyl group, aromatic group or heterocyclic group is defined by the above R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6.
  • Rx and Ry here are the same as the definitions of Rx and Ry in the Rx (Ry) N group which is a substituent of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 .
  • Examples of the saturated or unsaturated heterocyclic ring formed by combining R 43 and R 44 include aziridine, azetidine, diazetidine, pyrrolidine, piperidine, homopiperidine, pyrazolidine, imidazolidine, triazolidine, tetrazolidine, oxazolidine, isoxazolidine, and thiazolidine.
  • an unsaturated heterocyclic ring it includes a heterocyclic ring which is at least partially hydrogenated.
  • a structure in which two or more of these structures are bonded directly or via an alkylene group can also be adopted, and the heterocyclic group is represented by R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 5. It has the same definition as the heterocyclic group represented by 6 , and may have a substituent.
  • the primary or secondary amine compound DH is preferably a compound having biological activity.
  • the compound having biological activity include active ingredients such as pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, in vitro diagnostic pharmaceuticals, products such as regenerative medicine, veterinary pharmaceuticals, agricultural chemicals, and supplements. If the released primary or secondary amine compound DH has biological activity and can form a urethane bond by the primary or secondary amino group of the compound, the structure of the compound is not limited. Instead, known compounds that can be used as compounds can be used.
  • the amine compound represented by the formula (III) or (XI) may form a salt with an inorganic acid or an organic acid.
  • Inorganic acids include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid and the like, and organic acids include trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid and trifluoromethanesulfonic acid.
  • the salt with an inorganic acid or an organic acid preferably forms a salt with an amino group present at the molecular terminal of the amine compound represented by the formula (III) or (XII) and an inorganic acid or an organic acid.
  • the polymer providing a structure derived from the acidic polysaccharide has at least one carboxy group in a monomer unit and can be represented by the formula (IV).
  • the Poly portion may be referred to as an “acid polysaccharide residue”.
  • the acidic polysaccharide has a plurality of carboxy groups in one molecule, and in the conjugate of the present invention, a plurality of amines represented by the formula (III) or (XII) may be condensed.
  • the conjugate can be represented by the following formula (XX), which is equivalent to the compound represented by the formula (I).
  • D, R 1 , R 2 and A are as defined above;
  • the conjugate can be represented by the following formula (XXX), which is equivalent to the compound represented by the formula (II).
  • XXX D, R 1 , R 2 , R 4 , R 5 , R 6 , r and P are as defined above, and q is a compound condensed to the polymer (formula (XII) Represents the number of amines represented by
  • the values of q and r are determined according to the ratio of the compound (amine compound represented by the formula (III) or (XII)) condensed to the acidic polysaccharide.
  • the extent to which the amine represented by the formula (III) or (XII) is condensed to one molecular chain of the acidic polysaccharide is appropriately changed and adjusted according to the structure represented by DH, the type of the acidic polysaccharide, and the like. Can be.
  • the degree to which the compound having the structure represented by DH is introduced can be indicated as “introduction rate” in this specification.
  • the introduction rate can be determined by a method such as calculation of an integration ratio by 1 H NMR or calculation of a concentration by spectroscopy.
  • the introduction ratio (mol%) calculated by the molar ratio, the introduction ratio (wt%) calculated by the concentration, and the like can be collectively referred to simply as “introduction ratio”, and is expressed by q / (q + r) ⁇ 100. Is done.
  • the introduction ratio based on the calculation of the molar ratio (calculation of the integration ratio by 1 H NMR) is not particularly limited, but may be in the range of 1 to 80 mol%.
  • q and r are values that fall within the above-described range of the introduction ratio.
  • the introduction rate is preferably from 2 to 70%, and preferably from 5 to 70%, from the viewpoint of having a high filterability at a high drug concentration (the concentration of the primary or secondary amine compound DH). 60% is more preferable, and 10 to 50% is still more preferable.
  • the carboxy group of the acidic polysaccharide remaining without condensation with the amine compound represented by the formula (III) or (XII) may be present as a free carboxy group, and may be lithium, sodium, potassium, magnesium, or calcium.
  • the conjugate of the present invention preferably has high filterability when converted to an aqueous solution.
  • the filter filtration rate is preferably 50% by weight or more, and preferably 80% by weight. The above is more preferable, and the one with 90% by weight or more is particularly preferable.
  • the filtration rate (% by weight) of the filter can be measured by the method described in Examples described later.
  • the liquid passing through the filter is weighed and can be calculated from the weight ratio of the liquid passing through the filter to the aqueous solution put in the filter unit.
  • acidic polysaccharide examples include alginic acid, hyaluronic acid, heparin, chondroitin, chondroitin sulfate (A, B, C, D and E), keratan sulfate, heparan sulfate, dermatan sulfate, pectin (homogalacturonan and ramgalacturonan). ), Naturally occurring polysaccharides such as xanthan gum, xylan and sacran, carboxymethyl cellulose, carboxymethyl chitin, carboxymethyl chitosan, carboxymethyl dextran, carboxymethyl amylose, and succinyl chitosan.
  • Naturally occurring polysaccharides such as xanthan gum, xylan and sacran, carboxymethyl cellulose, carboxymethyl chitin, carboxymethyl chitosan, carboxymethyl dextran, carboxymethyl amylose, and succinyl chitosan.
  • glycosaminoglycans examples include hyaluronic acid, heparin, chondroitin, chondroitin sulfate (A, B, C, D and E), keratan sulfate, heparan sulfate, and dermatan sulfate.
  • acidic polysaccharides may be previously cross-linked or chemically modified by various methods, and may be further cross-linked or chemically modified after forming a primary or secondary amine compound-acid polysaccharide conjugate.
  • these acidic polysaccharides may form pharmaceutically acceptable salts, for example, salts with metals such as lithium, sodium, potassium, magnesium and calcium, or salts with organic bases such as triethylamine, tributylamine and pyridine.
  • the salt may be formed using tetrabutylammonium hydroxide.
  • the molecular weight of the acidic polysaccharide can be adopted without particular limitation as long as it is a molecular weight of a generally used product, but can also be appropriately adjusted according to the use of the conjugate and the properties required of the conjugate. Examples of preferred molecular weights include, but are not limited to, 10 kDa or more.
  • Poly means a partial structure of the acidic polysaccharide represented by the formula (IV), excluding the carboxy group, which is used for condensation with the amine compound represented by the formula (III) or (XII).
  • Poly is preferably exemplified by acidic polysaccharide residues, glycosaminoglycan residues, chondroitin residues, chondroitin sulfate residues and hyaluronic acid residues. These mean the partial structures of the acidic polysaccharide, glycosaminoglycan, chondroitin, chondroitin sulfate and hyaluronic acid excluding the carboxy group condensed with the compound (III) or (XII), respectively.
  • the concentration of the primary or secondary amine compound DH in the aqueous solution is preferably 0.3 to 30 (w / w)%, More preferably, it is 2020 (w / w)%.
  • the novel primary or secondary amine compound-acidic polysaccharide conjugate of the present invention can be expected to have higher safety than other polymers, and is not largely affected by the polymer molecular weight. It is an excellent conjugate that enables the introduction of a drug in an amount necessary for the onset of drug efficacy.
  • Step 1 a protected amino acid represented by the formula (XIV) is reacted with an iodomethyl carbonate derivative represented by the formula (XV) to produce a p-nitrophenyl ester represented by the formula (XVI). It is a process.
  • This step is carried out by reacting the carboxylic acid of the protected amino acid represented by the formula (XIV) with a metal oxide or a base to form a carboxylate, and then reacting with the iodomethyl carbonate derivative represented by the formula (XV).
  • the reaction can be carried out by reacting the protected amino acid represented by the formula (XIV) with the iodomethyl carbonate derivative represented by the formula (XVI) in the presence of a base.
  • the formation of the salt is preferably performed in a solvent, for example, methanol, ethanol, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether,
  • a solvent for example, methanol, ethanol, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether,
  • a solvent for example, methanol, ethanol, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benz
  • cesium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate, potassium carbonate, sodium hydroxide, water Potassium oxide, lithium hydroxide, or the like can be used as the base.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of usually -30 ° C to 200 ° C, preferably -15 ° C to 80 ° C.
  • a solvent for example, dimethylformamide, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, dimethyl sulfoxide, diethyl ether,
  • a solvent for example, dimethylformamide, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, dimethyl sulfoxide, diethyl ether,
  • An organic solvent medium such as diisopropyl ether and dimethoxyethane can be used.
  • the coexisting base includes cesium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate, potassium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, pyridine, N, N-diisopropylethylamine, triethylamine, 2,6- Lutidine, 4-dimethylaminopyridine, diazabicycloundecene, 1,8-bis (dimethylamino) naphthalene, metal bis (trimethylsilyl) amide, lithium diisopropylamide, and the like can be used.
  • the reaction can be carried out usually at a temperature in the range of ⁇ 30 ° C. to 200 ° C., preferably in the range of 0 ° C. to 80 ° C.
  • Second Step the primary or secondary amine compound represented by the formula (IX) is reacted with the p-nitrophenyl ester compound represented by the formula (XVI) to react with the p-nitrophenyl ester represented by the formula (XVI).
  • This is a step of producing an ester compound.
  • a base can be added as necessary. It is.
  • a solvent for example, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether,
  • a solvent for example, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether,
  • An organic solvent medium such as dimethoxyethane can be used, and if necessary, water can be added to make a two-phase system or a mixed solvent.
  • Examples of the base include pyridine, N, N-diisopropylethylamine, triethylamine, 2,6-lutidine, 4-dimethylaminopyridine, diazabicycloundecene, 1,8-bis (dimethylamino) naphthalene, and metal bis (trimethylsilyl).
  • Amides, lithium diisopropylamide and the like can be used.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of usually -78 ° C to 200 ° C, preferably -20 ° C to 80 ° C.
  • This step is a step for producing a chloroalkyl ester represented by the formula (XIX) from a primary or secondary amine compound represented by the formula (IX).
  • This step can be carried out by reacting a primary or secondary amine compound represented by the formula (IX) with a chloroalkyl chloroformate represented by the formula (XVIII) in the presence of a base.
  • a solvent for example, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether,
  • a solvent for example, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether.
  • An organic solvent such as dimethoxyethane can be used, and if necessary, water can be added to form a two-phase system or a mixed solvent.
  • Examples of the base include sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate, potassium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, pyridine, N, N-diisopropylethylamine, triethylamine, 2,6-lutidine, -Dimethylaminopyridine, diazabicycloundecene, 1,8-bis (dimethylamino) naphthalene, metal bis (trimethylsilyl) amide, lithium diisopropylamide and the like can be used.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of usually -78 ° C to 200 ° C, preferably -20 ° C to 80 ° C.
  • This step is a step of reacting a chloroalkyl ester represented by the formula (XIX) with a protected amino acid represented by the formula (XIV) to produce an ester represented by the formula (XVII).
  • This step can be carried out by reacting the carboxylic acid of the protected amino acid represented by the formula (XIV) with a base to form a carboxylate, and then reacting with a chloroalkyl ester represented by the formula (XIX).
  • the reaction can be carried out by reacting the protected amino acid represented by the formula (XIV) with the chloroalkyl ester represented by the formula (XIX) in the presence of a base.
  • the formation of the salt is preferably performed in a solvent, for example, methanol, ethanol, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, diisopropyl ether, An organic solvent such as dimethoxyethane can be used.
  • a base for example, cesium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate, potassium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide and the like can be used.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of usually -30 ° C to 200 ° C, preferably -15 ° C to 80 ° C.
  • a solvent for example, dimethylformamide, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, dimethyl sulfoxide, diethyl ether, Organic solvents such as diisopropyl ether and dimethoxyethane can be used.
  • a solvent for example, dimethylformamide, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, dimethyl sulfoxide, diethyl ether, Organic solvents such as diisopropyl ether and dimethoxyethane can be used.
  • the coexisting base includes cesium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate, potassium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, pyridine, N, N-diisopropylethylamine, triethylamine, 2,6- Lutidine, 4-dimethylaminopyridine, diazabicycloundecene, 1,8-bis (dimethylamino) naphthalene, metal bis (trimethylsilyl) amide, lithium diisopropylamide, and the like can be used.
  • the reaction can be carried out usually at a temperature in the range of ⁇ 30 ° C. to 200 ° C., preferably in the range of 0 ° C. to 80 ° C.
  • This step is a step for producing an amine compound represented by the formula (III) by deprotecting the ester compound represented by the formula (XVII).
  • Ra is a benzyl group in this step, it can be deprotected by catalytic hydrogenation to produce the amine compound represented by the formula (III).
  • the metal catalyst to be used for example, a platinum catalyst such as platinum oxide or platinum carbon, a palladium catalyst such as palladium carbon, palladium black or palladium oxide, or a nickel catalyst such as Raney nickel can be used.
  • This step is preferably performed in a solvent, for example, methanol, ethanol, isopropyl alcohol, tetrahydrofuran, dimethylformamide, dioxane, water, or the like.
  • the reaction can be carried out usually at a temperature in the range of -50 ° C to 200 ° C, preferably in the range of 10 ° C to 100 ° C.
  • Ra is a t-butyl group in this step, it can be deprotected using an acid to produce the amine compound represented by the formula (III).
  • the acid for example, hydrogen chloride, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, trifluoromethanesulfonic acid, trifluoroacetic acid and the like can be used.
  • the amine compound represented by the formula (III) obtained in this step is produced by forming a salt with these acids. In this step, the reaction can be allowed to proceed without a solvent or in a solvent.
  • the solvent examples include ethyl acetate, dioxane, methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, diethyl ether, and water.
  • the reaction can be carried out usually at a temperature in the range of -50 ° C to 200 ° C, preferably in the range of 0 ° C to 80 ° C.
  • a primary or secondary amine compound represented by the above formula (I) is obtained by condensing an amine compound represented by the above formula (III) with an acidic polysaccharide represented by the above formula (IV).
  • This is a step of producing an acidic polysaccharide conjugate.
  • a polymer which has previously formed a salt with a metal or an organic base may be used.
  • Examples of the condensing agent used in the condensation reaction include 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC or WSC), 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine-2) -Yl) -4-methylmorpholinium chloride (DMT-MM), fluoro-tetramethylformamidium hexafluorophosphate (TFFH), fluoro-bis (tetramethylene) formamidium) hexafluorophosphate (BTFFH) Etc. can be used.
  • EDC or WSC 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine-2) -Yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • THFH fluoro-tetramethylformamidium hexafluorophosphate
  • BTFFH fluoro-bis (tetramethylene) formamidium) hexafluorophosphate
  • This step is preferably performed in a solvent, for example, methylene chloride, chloroform, dichloroethane, toluene, ethyl acetate, acetone, dimethylformamide, formamide, N-methylpyrrolidone, acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, diethyl ether, dimethoxyethane, dimethylsulfoxide
  • organic solvents such as methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol and ethylene glycol, or water. Further, a mixed solvent of these organic solvents and water at an arbitrary ratio can also be used.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5, and R 6 are each a heterocyclic group, and any two or three groups may be combined to form a ring; Each independently represents 0, 1 or 2, and m represents 0 or 1]. 3.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 each independently represent a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted straight-chain having 1 to 6 carbon atoms.
  • a substituent of a cycloalkenyl group, a substituent of an alkynyl group, a substituent of an aromatic group and a substituent of a heterocyclic group are a hydroxyl group, an alkyl group, a cycloalkyl group, an alkenyl group, a cycloalkenyl group, an alkynyl group, Halogen atom, aromatic group, heterocyclic group, alkoxy group, guanidino group, alkylthio group, alkoxycarbonyl group, aryloxy group, arylthio group, acyl group, substituted sulfonyl group, heterocyclyloxy group, heterocyclylthio group, amide group, ureido Group, carboxy group, carbamoyl group, oxo group, thioxo group, sulfamoyl group, sulfo group, cyano group, nitro group, Siloxy group, azide group,
  • the compound according to the above which is represented by the following formula (XX), or a pharmaceutically acceptable salt thereof; [In the formula (XX), D, R 1 , R 2 and A are as defined in the above 1, Represents a polymer excluding the group derived from the carboxy group and the carboxy group of the acidic polysaccharide; q represents the number of compounds condensed to the polymer; r represents the number of carboxy groups. ]. 8.
  • a method for producing a compound represented by the following formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof comprising a step of condensing a compound represented by the following formula (III) with an acidic polysaccharide represented by the following formula (IV): [D, A, R 1 , R 2 and Poly in the formulas (I), (III) and (IV) are as defined in the above 1, and the compound represented by (III) is an inorganic acid or an organic acid. A salt with an acid may be formed. ) 10.
  • a method for producing a conjugate comprising a step of bonding a primary or secondary amine compound and an acidic polysaccharide via a linker represented by the following formula (V).
  • Example 1 Chloromethyl carbonate 4-nitrophenyl ester Under ice-cooling, a solution of 5.6 g (40.3 mmol) of p-nitrophenol and 3.2 g (40.3 mmol) of pyridine in ethyl acetate was added with a solution of 5.7 g (44.3 mmol) of chloromethyl chloroformate in ethyl acetate. Stirred at room temperature for 2 hours. Water was added to the reaction solution, and after stirring, the organic layer was separated. The organic layer was washed with a 10% aqueous potassium hydrogen sulfate solution, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and a saturated saline solution.
  • Example 2 Iodomethyl carbonate 4-nitrophenyl ester Acetone suspension of 11.07 g (73.9 mmol) of sodium iodide and 8.55 g (36.9 mmol) of chloromethyl 4-nitrophenyl carbonate was stirred at 40 ° C. overnight. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, diethyl ether was added, and the mixture was stirred. The insoluble matter was removed by filtration, and the organic layer was washed with water, a 10% aqueous solution of sodium thiosulfate, and saturated saline. After the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain 8.78 g (74%) of the title compound.
  • Example 3 1-chloroethyl carbonate 4-nitrophenyl ester Under ice cooling, a solution of 1-chloroethyl chloroformate 6.3 g (44.3 mmol) in ethyl acetate was added to a solution of p-nitrophenol 5.6 g (40.3 mmol) and pyridine 3.2 g (40.3 mmol) in ethyl acetate. And stirred at room temperature for 2 hours. Water was added to the reaction solution, and after stirring, the organic layer was separated. The organic layer was washed with a 10% aqueous sodium thiosulfate solution, a 1 M aqueous sodium hydroxide solution and saturated saline.
  • Example 4 1-iodoethyl carbonate 4-nitrophenyl ester An acetone suspension of 6.10 g (40.7 mmol) of sodium iodide and 5.00 g (20.4 mmol) of 1-chloroethyl 4-nitrophenyl carbonate was stirred at 40 ° C. overnight. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, diethyl ether was added, and the organic layer was washed with water, a 10% aqueous solution of sodium thiosulfate, and saturated saline. After the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Example 5 N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine [[(4-nitrophenoxy) carbonyl] oxy] methyl ester 3.48 g (15.0 mmol) of silver (I) oxide was added to a solution of 4.73 g (25.0 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine in 60 mL of acetonitrile. Under an argon stream, 30 mL of water was added to the mixture, and the mixture was stirred at 70 ° C for 1 hour. The reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • Example 6 N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine 1-[[(4-nitrophenoxy) carbonyl] oxy] ethyl ester 3.48 g (15.0 mmol) of silver (I) oxide was added to a solution of 4.73 g (25.0 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine in 60 mL of acetonitrile. Under an argon stream, 30 mL of water was added to the mixture, and the mixture was stirred at 70 ° C for 1 hour. The reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • Example 7 N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid chloromethyl ester
  • a mixed solution of 1000 mg (4.6 mmol) of ethylephrine hydrochloride and 1158 mg (13.8 mmol) of sodium hydrogen carbonate in ethyl acetate-water 5 mL: 2.5 mL
  • acetic acid 652 mg (5.1 mmol) of chloromethyl chloroformate under ice cooling.
  • the ethyl solution was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours and 30 minutes.
  • Example 8 N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid [3-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino-1-oxopropoxy] methyl ester
  • a methanol solution of 4730 mg (25.0 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine was added 4073 mg (12.5 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump.
  • N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine cesium salt 674 mg (2.1 mmol) was collected and dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • a solution of 575 mg (2.1 mmol) of chloromethyl N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamate in N, N-dimethylformamide was added thereto, and the mixture was stirred overnight. Water was added to the reaction solution, which was extracted with diethyl ether. After washing the organic layer with water, the aqueous layer was extracted again with diethyl ether.
  • Example 9 N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid (3-amino-1-oxopropoxy) methyl ester hydrochloride N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid [3-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino-1-oxopropoxy] methyl ester 640 mg (1.5 mg (mmol) in ethyl acetate, 3 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution was added, and the mixture was allowed to stand for 4 hours.
  • Example 10 [3-[[(Ethyrefrin-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.4 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring. N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid (3-amino-1-oxopropoxy) methyl ester hydrochloride (42 mg, 0.1 mmol) in 50% ethanol was added to the mixture.
  • Example 11 N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid 1-chloro-2-methylpropyl ester
  • ethylephrine hydrochloride 1000 mg (4.6 mmol) and sodium hydrogencarbonate 1158 mg (13.8 mmol) in ethyl acetate-water (5 mL: 10 mL) was added 943 mg of 1-chloro-2-methylpropyl chloroformate under ice cooling. (5.5 mmol) in ethyl acetate was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature overnight.
  • Example 12 N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid 1- [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methyl-1-oxo Propoxy] -2-methylpropyl ester
  • Example 13 N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid 1- (3-amino-2-methyl-1-oxopropoxy) -2-methylpropyl ester trifluoroacetate N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid 1- [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methyl-1-oxo To a methylene chloride solution of 47 mg (0.1 mmol) of [propoxy] -2-methylpropyl ester was slowly added 0.2 mL of trifluoroacetic acid, and the mixture was allowed to stand for 2 hours and 30 minutes.
  • Example 14 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid chloromethyl ester
  • a methylene chloride solution of 1500 mg (5.1 mmol) of troxipide and 619 mg (6.1 mmol) of triethylamine a methylene chloride solution of 789 mg (6.1 mmol) of chloromethyl chloroformate was added under ice-cooling, followed by stirring at room temperature overnight. After concentrating the reaction solution under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed with water, a 10% aqueous solution of potassium hydrogen sulfate, and saturated saline.
  • Example 15 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1-chloroethyl ester
  • a methylene chloride solution of 1500 mg (5.1 mmol) of troxipide and 619 mg (6.1 mmol) of triethylamine was added a solution of 874 mg (6.1 mmol) of 1-chloroethyl chloroformate in methylene chloride under ice-cooling, followed by stirring at room temperature overnight. After concentrating the reaction solution under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed with water, a 10% aqueous solution of potassium hydrogen sulfate, and saturated saline.
  • Example 16 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] methyl ester
  • a methanol solution of 4730 mg (25.0 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine was added 4073 mg (12.5 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 17 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [[2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] acetyl] oxy] methyl ester 2037 mg (6.3 mmol) of cesium carbonate was added to a methanol solution of 2190 mg (12.5 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -glycine, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump.
  • N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -glycine cesium salt 159 mg (0.5 mmol) was collected and dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • a solution of 200 mg (0.5 mmol) of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid chloromethyl ester in N, N-dimethylformamide was added thereto, and the mixture was stirred overnight.
  • a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with diethyl ether.
  • Example 18 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1- [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] ethyl ester
  • a methanol solution of 4730 mg (25.0 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine was added 4073 mg (12.5 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 19 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1-[[2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] acetyl] oxy] ethyl ester 2037 mg (6.3 mmol) of cesium carbonate was added to a methanol solution of 2190 mg (12.5 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -glycine, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 20 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [[[3-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] methyl ester 763 mg To a solution of (1.4 mmol) in ethyl acetate was added 2 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 3 hours.
  • Example 21 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(2-aminoacetyl) oxy] methyl ester hydrochloride 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [[2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] acetyl] oxy] methyl ester 113 mg (0.2 (mmol) in ethyl acetate was added with 0.75 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution and allowed to stand for 3 hours.
  • Example 22 [3-[[(Troxypid-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.39 mmol) of chondroitin sulfate sodium was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring. 50% of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride 37 mg (0.08 mmol) was added to the mixture.
  • the precipitate was collected using a centrifuge and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried with a vacuum pump overnight to obtain 205 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of troxipide per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 19%.
  • Example 23 [2-[[(Troxypid-carbonyl) oxy] methoxy] -2-oxoethyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.39 mmol) of chondroitin sulfate sodium was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • the reaction solution was added dropwise to 8 mL of 90% ethanol while stirring, and 12 mL of ethanol was added to the mixture, followed by stirring.
  • the precipitate was collected using a centrifuge and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether.
  • the obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 211 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of troxipide per total disaccharide unit (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 27%.
  • Example 24 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid chloromethyl ester
  • a solution of 986 mg (7.7 mmol) of chloromethyl chloroformate in ethyl acetate was added under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 3 hours.
  • the reaction solution was concentrated under reduced pressure, ethyl acetate was added, and the mixture was washed with a 10% aqueous potassium hydrogen sulfate solution and saturated saline.
  • Example 25 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-chloroethyl ester To a solution of 1500 mg (7.0 mmol) of methoxyphenamine and 1210 mg (15.3 mmol) of pyridine in ethyl acetate was added a solution of 1094 mg (7.7 mmol) of 1-chloroethyl chloroformate in ethyl acetate under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 3 hours. did.
  • Example 26 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid [5-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopentoxy] methyl ester
  • To a methanol solution of 2716.0 mg (12.5 mmol) of 5-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] pentanoic acid was added 2036.5 mg (6.3 mmol) of cesium carbonate, followed by stirring at room temperature for 10 minutes. The mixed suspension was evaporated under reduced pressure to remove the solvent, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 27 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1- [4-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxobutoxy] ethyl ester 2037 mg (6.3 mmol) of cesium carbonate was added to a methanol solution of 2540 mg (12.5 mmol) of 4-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] butanoic acid, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The mixed suspension was evaporated under reduced pressure to remove the solvent, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 28 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid (5-amino-1-oxopentoxy) methyl ester hydrochloride N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid [5-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopentoxy] methyl ester 270 mg To a solution of (0.6 mmol) in ethyl acetate was added 1.5 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 3 hours.
  • Example 29 [5-[[(methoxyphenamine-carbonyl) oxy] methoxy] -5-oxopentyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.39 mmol) of chondroitin sulfate sodium was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring. To the mixture was added 30 mg (0.08 mmol) of N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid (5-amino-1-oxopentoxy) methyl ester hydrochloride in 50% ethanol.
  • Example 30 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1- (4-amino-1-oxobutoxy) ethyl ester trifluoroacetate N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1- [4-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxobutoxy] ethyl ester 282 0.5 mL of trifluoroacetic acid was slowly added to a solution of mg (0.6 mmol) in methylene chloride, and the mixture was allowed to stand for 2 hours.
  • Example 31 [4- [1-[(methoxyphenamine-carbonyl) oxy] ethoxy] -4-oxobutyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.39 mmol) of chondroitin sulfate sodium was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring. To the mixture was added 41 mg (0.08 mmol) of N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1- (4-amino-1-oxobutoxy) ethyl ester trifluoroacetate.
  • the obtained precipitate was dried with a vacuum pump overnight to obtain 200 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of methoxyphenamine per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 5%.
  • Reference example 2 2-[[3-oxo-3-[[(troxopido-carbonyl) oxy] methoxy] propyl] amino] -2-oxoethyl-methoxy polyethylene glycol (20,000) conjugate 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] was added to a solution of 294 mg (0.02 mmol) of N-hydroxysuccinimide acetic acid N-hydroxysuccinimide and 15 mg (0.15 mmol) of triethylamine in acetonitrile.
  • Example 32 6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] hexanoic acid silver salt 1.39 g (6.0 mmol) of silver (I) oxide was added to a solution of 2.32 g (10.0 mmol) of 6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] hexanoic acid in 20 mL of acetonitrile. Under an argon stream, 10 mL of water was added to the mixture, and the mixture was stirred at 70 ° C for 1 hour. The reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was dried with a vacuum pump overnight to give 2.73 g (8.1 mmol) (81%) of the title compound.
  • Example 33 6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] hexanoic acid 1-[[(4-nitrophenoxy) carbonyl] oxy] ethyl ester
  • An acetone suspension of 7.12 g (47.5 mmol) of sodium iodide and 2.33 g (9.49 mmol) of 1-chloroethyl 4-nitrophenyl carbonate was stirred at 40 ° C. overnight. After filtering the reaction solution, the filtrate was concentrated under reduced pressure, toluene was added, and the mixture was filtered again.
  • Example 34 [3- [1-[(Ethyrefrin-carbonyl) oxy] -2-methylpropoxy] -3-oxo-2-methylpropyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 100 mg (0.2 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 2 mL of water, and 2 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • Example 35 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1-[(3-amino-1-oxopropoxy)] ethyl ester trifluoroacetate 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1- [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] ethyl ester 74 To a solution of mg (0.1 mmol) in methylene chloride was slowly added 0.1 mL of trifluoroacetic acid under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 8 hours.
  • Example 36 [3-oxo-3- [1-[(troxipido-carbonyl) oxy] ethoxy] propyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring.
  • the reaction solution was added dropwise to 9 mL of ethanol while stirring, and allowed to stand. After decantation of the supernatant, 10 mL of 90% ethanol was added and stirred. The precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 171 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of troxipide per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 14%.
  • Example 37 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1-[(2-aminoacetyl) oxy] ethyl ester trifluoroacetate 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1-[[2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] acetyl] oxy] ethyl ester 106 mg (0.2 mmol) of methylene chloride was slowly added with 0.15 mL of trifluoroacetic acid under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 5 hours.
  • Example 38 [2- [1-[(Troxypid-carbonyl) oxy] ethoxy] -2-oxoethyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring. The mixture was added with 50 mg of 33 mg (0.06 mmol) of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1-[(2-aminoacetyl) oxy] ethyl ester trifluoroacetate.
  • the precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried with a vacuum pump overnight to obtain 157 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of troxipide per total disaccharide unit (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 18%.
  • Example 39 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1- [2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methyl-1-oxopropoxy ]
  • Ethyl ester 79 mg (0.2 mmol) of cesium carbonate was added to a methanol solution of 91 mg (0.5 mmol) of 2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methylpropanoic acid, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 40 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1- (2-amino-2-methyl-1-oxopropoxy) ethyl ester trifluoroacetate 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid 1- [2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methyl-1-oxopropoxy ] To a methylene chloride solution of 143 mg (0.3 mmol) of ethyl ester, 0.19 mL of trifluoroacetic acid was slowly added under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 4 hours.
  • Example 41 [1,1-dimethyl-2-oxo-2- [1-[(tropipid-carbonyl) oxy] ethoxy] ethyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring.
  • Example 42 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-[[[1-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] cyclopentyl] carbonyl] oxy] ethyl ester 254 mg (0.8 mmol) of cesium carbonate was added to a methanol solution of 325 mg (1.4 mmol) of 1-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] cyclopentanecarboxylic acid, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The mixed suspension was evaporated under reduced pressure to remove the solvent, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 43 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-[[(1-aminocyclopentyl) carbonyl] oxy] ethyl ester trifluoroacetate N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-[[[1-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] cyclopentyl] carbonyl] oxy] ethyl To a methylene chloride solution of 259 mg (0.5 mmol) of the ester was slowly added 0.41 mL of trifluoroacetic acid under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 6 hours.
  • Example 44 [1-[[1-[(Methoxyphenamine-carbonyl) oxy] ethoxy] carbonyl] cyclopentyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring. N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-[[(1-aminocyclopentyl) carbonyl] oxy] ethyl ester trifluoroacetate 29 mg (0.06 mmol) was added to the mixture.
  • the precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 221 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of methoxyphenamine per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 1%.
  • Example 46 N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-[[(1-aminocyclopropyl) carbonyl] oxy] ethyl ester trifluoroacetate N- [2- (2-methoxyphenyl) -1-methylethyl] -N-methylcarbamic acid 1-[[[[1-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] cyclopropyl] carbonyl] oxy] To a solution of ethyl ester (148 mg, 0.3 mmol) in methylene chloride was slowly added trifluoroacetic acid (0.25 mL) under ice-cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours.
  • Example 47 [1-[[1-[(methoxyphenamine-carbonyl) oxy] ethoxy] carbonyl] cyclopropyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring.
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • the reaction solution was added dropwise to 9 mL of ethanol while stirring, and allowed to stand. After decantation of the supernatant, 10 mL of 90% ethanol was added and stirred. The precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 145 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of methoxyphenamine per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 10%.
  • Example 48 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid chloromethyl ester To a solution of 613 mg (3.5 mmol) of N-methyl-4- (trifluoromethyl) aniline and 305 mg (3.9 mmol) of pyridine in diethyl ether was added a solution of 496 mg (3.9 mmol) of chloromethyl chloroformate in diethyl ether under ice-cooling. And stirred at room temperature for 1 hour. The reaction solution was filtered, and the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain 926 mg (3.5 mmol) (quantitative) of the title compound.
  • Example 49 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxobutoxy] methyl ester
  • To a methanol solution of 509 mg (2.5 mmol) of 3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] butyric acid was added 408 mg (1.3 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The mixed suspension was evaporated under reduced pressure to remove the solvent, and dried overnight using a vacuum pump.
  • Example 50 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid (3-amino-1-oxobutoxy) methyl ester hydrochloride 275 mg (0.6 mmol) of N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxobutoxy] methyl ester 1.6 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution was added to the ethyl acetate solution, and the mixture was allowed to stand for 3 hours.
  • Example 51 [1-Methyl-3-[[[[methyl [4- (trifluoromethyl) phenyl] amino] carbonyl] oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate conjugate
  • Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring.
  • a 50% aqueous solution of 22 mg (0.06 mmol) of N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid (3-amino-1-oxobutoxy) methyl ester hydrochloride was added to the mixture, and then immediately.
  • the precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 153 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of N-methyl-4- (trifluoromethyl) aniline per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 10%.
  • Example 52 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] methyl ester
  • a methanol solution of 78 mg (0.4 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-alanine was added 73 mg (0.2 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The solvent was distilled off from the mixed suspension under reduced pressure.
  • N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-alanine cesium salt is dissolved in N, N-dimethylformamide, and N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamine is dissolved.
  • a solution of 100 mg (0.4 mmol) of acid chloromethyl ester in N, N-dimethylformamide was added and stirred overnight. Water was added to the reaction solution, which was extracted with diethyl ether. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Example 53 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-amino-1-oxopropoxy] methyl ester hydrochloride N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] methyl ester 147 mg ( (0.3 mmol) in ethyl acetate was added with 1.5 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 8 hours.
  • Example 54 [(1S) -1-methyl-2-[[[[[methyl [4- (trifluoromethyl) phenyl] amino] carbonyl] oxy] methoxy] -2-oxoethyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring.
  • Example 55 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -3-methyl-1-oxobutoxy] methyl ester
  • To a methanol solution of 89 mg (0.4 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-valine was added 73 mg (0.2 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The solvent was distilled off from the mixed suspension under reduced pressure.
  • N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-valine cesium salt is dissolved in N, N-dimethylformamide, and N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamine is dissolved.
  • a solution of 100 mg (0.4 mmol) of acid chloromethyl ester in N, N-dimethylformamide was added and stirred overnight. Water was added to the reaction solution, which was extracted with diethyl ether. The organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Example 56 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-amino-3-methyl-1-oxobutoxy] methyl ester hydrochloride N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -3-methyl-1-oxobutoxy] methyl To a solution of 126 mg (0.3 mmol) of the ester in ethyl acetate was added 2 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 5 hours.
  • Example 57 [(1S) -2-methyl-1-[[[[[[[methyl [4- (trifluoromethyl) phenyl] amino] carbonyl] oxy] methoxy] carbonyl] propyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring. 23 mg (0.06 mmol) of N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-amino-3-methyl-1-oxobutoxy] methyl hydrochloride was added to the mixture.
  • the precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 147 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of N-methyl-4-trifluoromethylaniline per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 16%.
  • Example 58 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -3,3-dimethyl-2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxobutoxy ] Methyl ester
  • N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-tert-leucine was added 73 mg (0.2 mmol) of cesium carbonate, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The solvent was distilled off from the mixed suspension under reduced pressure.
  • N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-tert-leucine cesium salt is dissolved in N, N-dimethylformamide and N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl ]
  • a solution of carbamic acid chloromethyl ester 100 mg (0.4 mmol) in N, N-dimethylformamide was added and stirred overnight.
  • the organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Example 59 N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-amino-3,3-dimethyl-1-oxobutoxy] methyl ester hydrochloride N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -3,3-dimethyl-2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxobutoxy To a solution of 94 mg (0.2 mmol) of methyl ester in ethyl acetate was added 1.5 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 5 hours.
  • Example 60 [(1S) -2,2-dimethyl-1-[[[[[[[[methyl [4- (trifluoromethyl) phenyl] amino] carbonyl] oxy] methoxy] carbonyl] propyl] amino-chondroitin sulfate conjugate Sodium chondroitin sulfate (150 mg, 0.30 mmol) was dissolved in water (3 mL), and ethanol (3 mL) was added dropwise with stirring.
  • N-methyl-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] carbamic acid [(2S) -2-amino-3,3-dimethyl-1-oxobutoxy] methyl ester hydrochloride 24 mg (0.06 mmol)
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • Example 61 [2- (2,6-Dimethylphenoxy) -1-methylethyl] carbamic acid 1- [6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxohexyloxy] ethyl ester
  • a methylene chloride solution of 59 mg (0.27 mmol) of mexiletine hydrochloride and 71 mg (0.55 mmol) of diisopropylethylamine was added 6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] hexanoic acid 1-[[(4-nitrophenoxy )
  • a solution of 121 mg (0.27 mmol) of carbonyl] oxy] ethyl ester in methylene chloride was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight.
  • Example 62 [2- (2,6-dimethylphenoxy) -1-methylethyl] carbamic acid 1- (6-amino-1-oxohexyloxy) ethyl ester trifluoroacetate [[2- (2,6-Dimethylphenoxy)]-1-methylethyl] carbamic acid 1- [6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxohexyloxy] ethyl ester 56 To a solution of mg (0.12 mmol) in methylene chloride was slowly added 0.1 mL of trifluoroacetic acid under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 6 hours.
  • Example 63 [6- [1-[(Mexiletine-carbonyl) oxy] ethoxy] -6-oxohexyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 100 mg (0.2 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 2 mL of water, and 2 mL of dioxane was added dropwise with stirring. To the mixture was added [[2- (2,6-dimethylphenoxy)]-1-methylethyl] carbamic acid 1- (6-amino-1-oxohexyloxy) ethyl ester trifluoroacetate (19 mg, 0.04 mmol).
  • the precipitate was collected using a centrifuge and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried with a vacuum pump overnight to obtain 104 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction rate of mexiletine per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 14%.
  • Example 64 [2- (2,6-dimethylphenoxy) -1-methylethyl] carbamic acid [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] methyl ester N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] - ⁇ -alanine [[(4-nitrophenoxy) carbonyl] was added to a methylene chloride solution containing 98 mg (0.45 mmol) of mexiletine hydrochloride and 117 mg (0.91 mmol) of diisopropylethylamine.
  • Example 65 [2- (2,6-dimethylphenoxy) -1-methylethyl] carbamic acid (3-amino-1-oxopropoxy) methyl ester hydrochloride [[2- (2,6-Dimethylphenoxy)]-1-methylethyl] carbamic acid [3-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxopropoxy] methyl ester 149 mg (0.35 (mmol) in ethyl acetate was added 4 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 6 hours.
  • Example 66 [3-[[(Mexiletine-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.4 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • the reaction solution was added dropwise to 11 mL of 90% ethanol while stirring, and allowed to stand. After decantation of the supernatant, 15 mL of 90% ethanol was added and stirred. The precipitate was collected using a centrifuge and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 207 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction rate of mexiletine per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 11%.
  • Example 67 [2-[[(E)-[5-methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamic acid 1- [6-[[(1,1-dimethylethoxy) ) Carbonyl] amino] -1-oxohexyloxy] ethyl ester To a methylene chloride solution of 200 mg (0.46 mmol) of fluvoxamine maleate and 89 mg (0.69 mmol) of diisopropylethylamine was added 6-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] hexanoic acid 1-[[(4-nitro A solution of 101 mg (0.23 mmol) of phenoxy) carbonyl] oxy] ethyl ester in methylene chloride was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight.
  • Example 68 1- (6-amino-1-oxohexyloxy) ethyl [2-[[(E)-[5-methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamate Ester trifluoroacetate [2-[[(E)-[5-methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamic acid 1- [6-[[(1,1-dimethylethoxy) ) To a methylene chloride solution of 133 mg (0.19 mmol, purity 90 mol%) of carbonyl] amino] -1-oxohexyloxy] ethyl ester, slowly add 0.15 mL of trifluoroacetic acid under ice-cooling, and stir at room temperature for 5 hours.
  • Example 69 [6- [1-[(fluvoxamine-carbonyl) oxy] ethoxy] -6-oxohexyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 100 mg (0.2 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 2 mL of water, and 2 mL of dioxane was added dropwise with stirring.
  • Example 70 [2-[[(E)-[5-Methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamic acid 1-chloro-2-methylpropyl ester
  • a methylene chloride solution of 300 mg (0.69 mmol) of fluvoxamine maleate and 223 mg (1.73 mmol) of diisopropylethylamine a methylene chloride solution of 189 mg (1.11 mmol) of 1-chloro-2-methylpropyl chloroformate under ice cooling was added. Stirred at room temperature for 4 hours.
  • the reaction solution was concentrated, dissolved in ethyl acetate, and washed with a 10% aqueous solution of potassium hydrogen sulfate, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, and saturated saline. After drying over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (10% ethyl acetate / hexane). The solvent was distilled off under reduced pressure, and dried overnight using a vacuum pump to obtain 140 mg (0.31 mmol) (45%) of the title compound.
  • Example 71 [2-[[(E)-[5-methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamic acid 1-[(2S) -2-[[(1, 1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxo-2-phenylethoxy] -2-methylpropyl ester A methanol solution of 502 mg (2.0 mmol) of N-[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] -L-2-phenylglycine was added with 358 mg (1.1 mmol) of cesium carbonate and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 72 [2-[[(E)-[5-methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamic acid 1-[(2S) -2-amino-1-oxo -2-phenylethoxy] -2-methylpropyl ester trifluoroacetate [2-[[(E)-[5-methoxy-1- [4- (trifluoromethyl) phenyl] pentylidene] amino] oxy] ethyl] carbamic acid 1-[(2S) -2-[[(1, To a solution of 1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -1-oxo-2-phenylethoxy] -2-methylpropyl ester 69 mg (0.10 mmol) in methylene chloride (1 mL) was slowly added trifluoroacetic acid (0.25 mL) under ice-cooling.
  • Example 73 [[2- [1-[(fluvoxamine-carbonyl) oxy] -2-methylpropoxy] -2-oxo-1-phenyl] ethyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 200 mg (0.4 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • Example 74 [4- (3-ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid chloromethyl ester
  • a mixed solution of 2000 mg (8.6 mmol) of DL-aminoglutethimide and 2170 mg (25.8 mmol) of sodium hydrogen carbonate in diethyl ether-water (3 mL: 3 mL) was added 1221 mg (9.47 mmol) of chloromethyl chloroformate under ice-cooling. was added and stirred at room temperature for 30 minutes. The aqueous layer was removed, ethyl acetate was added, and the organic layer was washed with water and saturated saline.
  • Example 75 [4- (3-Ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid iodomethyl ester
  • the reaction solution was concentrated under reduced pressure, diethyl ether was added, and the mixture was stirred.
  • the insoluble material was removed by filtration, and the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain 615 mg (quantitative) of the title compound.
  • the obtained compound was used for the next step without purification.
  • Example 76 [4- (3-Ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid [2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methyl-1-oxopropoxy] methyl ester 383 mg (1.7 mmol) of silver (I) oxide was added to a solution of 610 mg (3.0 mmol) of 2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methylpropanoic acid in 10 mL of acetonitrile. Under an argon stream, 5 mL of water was added to the mixture, and the mixture was stirred at 70 ° C for 2 hours.
  • reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was dried with a vacuum pump overnight to obtain 932 mg of silver 2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methylpropanoate.
  • Example 77 [4- (3-ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid (2-amino-2-methyl-1-oxopropoxy) methyl ester hydrochloride [4- (3-Ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid [2-[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] -2-methyl-1-oxopropoxy] methyl To a solution of the ester (90 mg, 0.18 mmol) in ethyl acetate was added 1.5 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 10 hours.
  • Example 78 [4- (3-ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid [2-[[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] methyl] -3-methyl-1-oxo Butoxy] methyl ester
  • 2-[[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] methyl] -3-methylbutanoic acid was added. .
  • Example 79 [4- (3-Ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid [2- (aminomethyl) -3-methyl-1-oxobutoxy] methyl ester hydrochloride [4- [3-Ethyl-2,6-dioxo-3-piperidinyl) phenyl] carbamic acid [2-[[[(1,1-dimethylethoxy) carbonyl] amino] methyl] -3-methyl-1-oxo To a solution of 48 mg (0.09 mmol) of butoxy] methyl ester in ethyl acetate was added 0.6 mL of a 4N hydrochloric acid / dioxane solution, and the mixture was allowed to stand for 10 hours.
  • Example 80 [2-[[[(Aminoglutethimide-carbonyl) oxy] methoxy] carbonyl] -3-methylbutyl] amino-chondroitin sulfate conjugate 150 mg (0.3 mmol) of sodium chondroitin sulfate was dissolved in 3 mL of water, and 3 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • the reaction solution was added dropwise to 9 mL of 90% ethanol while stirring, and allowed to stand. After decantation of the supernatant, 10 mL of 90% ethanol was added and stirred. The precipitate was collected using a centrifuge and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether. The obtained precipitate was dried with a vacuum pump overnight to obtain 151 mg of the title compound. From the integrated value of 1 H-NMR, the introduction ratio of aminoglutethimide per total disaccharide unit (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 15%.
  • Example 81 [3-[[(Ethyrefrin-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate (20,000) conjugate 200 mg (0.4 mmol) of sodium chondroitin sulfate (20,000) was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • the reaction solution was added dropwise to 8 mL of 90% ethanol while stirring.
  • the supernatant was decanted, and the precipitate was dissolved in 16 mL of a 50% aqueous ethanol solution.
  • the supernatant was decanted.
  • 10 mL of 90% ethanol was added, and the precipitate was collected using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and twice with diethyl ether.
  • the obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 233 mg of the title compound. From the integrated value of 1H-NMR, the introduction rate of ethylephrine per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 37.4%.
  • Example 82 [3-[[(Ethyrefrin-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate (40,000) conjugate 200 mg (0.39 mmol) of sodium chondroitin sulfate (40,000) was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring.
  • N-Ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid (3-amino-1-oxopropoxy) methyl ester hydrochloride 72 mg (0.20 mmol) in 50% ethanol Aqueous solution and then immediately 91% (0.20 mmol) of 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride (DMT-MM) in 50% ethanol was added and stirred at room temperature overnight.
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • the reaction solution was added dropwise to 13 mL of ethanol while stirring.
  • the precipitate was separated using a centrifuge, and washed twice with 90% ethanol, twice with ethanol, and once with diethyl ether.
  • the obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 239 mg of the title compound. From the integrated value of 1H-NMR, the introduction rate of ethylenerefrin per total disaccharide units (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 34.7%.
  • Example 83 [3-[[(Ethyrefrin-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-hyaluronic acid (650,000) conjugate 10 mL of ethanol was added dropwise to 10 g (0.25 mmol) of an aqueous solution of 1% sodium hyaluronate (650,000) with stirring.
  • N-ethyl-N- [2-hydroxy-2- (3-hydroxyphenyl) ethyl] carbamic acid (3-amino-1-oxopropoxy) methyl ester hydrochloride (18 mg, 0.05 mmol) in 50% ethanol Aqueous solution, then immediately 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride (DMT-MM) 11 mg (0.02 mmol) in 50% aqueous ethanol was added and stirred at room temperature overnight.
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride
  • Example 84 [3-[[(tropipid-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate (20,000) conjugate 250 mg (0.49 mmol) of sodium chondroitin sulfate (20,000) was dissolved in 5 mL of water, and 5 mL of ethanol was added dropwise with stirring. 50% of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride 116 mg (0.24 mmol) was added to the mixture.
  • Example 85 [3-[[(Troxipido-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-chondroitin sulfate (40,000) conjugate 200 mg (0.39 mmol) of sodium chondroitin sulfate (40,000) was dissolved in 4 mL of water, and 4 mL of ethanol was added dropwise with stirring. 50% of 3-((3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride 94 mg (0.20 mmol) was added to the mixture.
  • the obtained precipitate was dried with a vacuum pump overnight to obtain 240 mg of the title compound. From the integrated value of 1H-NMR, the introduction ratio of troxipide per total disaccharide unit (glucuronic acid) of chondroitin sulfate was 39.6%.
  • Example 86 [3-[[(Troxypid-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-hyaluronic acid (70,000) conjugate
  • 15 g (0.37 mmol) of a 1% aqueous solution of sodium hyaluronate (70,000) was added dropwise 15 mL of ethanol while stirring.
  • Example 87 [3-[[(Troxypid-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-hyaluronic acid (100,000) conjugate 15 mL of ethanol was added dropwise to 15 g (0.37 mmol) of an aqueous solution of 1% sodium hyaluronate (100,000) while stirring. 50% of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride 53 mg (0.11 mmol) was added to the mixture.
  • the obtained precipitate was dried overnight with a vacuum pump to obtain 139 mg of the title compound. From the integrated value of 1H-NMR, the introduction ratio of troxipide per total disaccharide unit (glucuronic acid) of hyaluronic acid was 13.5%.
  • Example 88 [3-[[(Troxypid-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-carboxymethylcellulose conjugate 20 mL of ethanol was added dropwise to 20 g (0.88 mmol) of a 1% aqueous solution of carboxymethyl cellulose while stirring. 50% of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride 21 mg (0.04 mmol) was added to the mixture.
  • the introduction ratio of troxipide was 2%.
  • Example 89 [3-[[(Troxypid-carbonyl) oxy] methoxy] -3-oxopropyl] amino-alginate conjugate 20 mL of ethanol was added dropwise to 20 g (1.01 mmol) of a 1% aqueous sodium alginate solution while stirring. 50% of 24-mg (0.05 mmol) of 3-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl) amino] -1-piperidinecarboxylic acid [(3-amino-1-oxopropoxy)] methyl ester hydrochloride was added to the mixture.
  • the introduction ratio of troxipide was 2%.
  • Test Example 1 Drug-release test of drug-polymer conjugate [Operation] Each evaluation polymer conjugate shown in Table 1 was dissolved and dispensed at a concentration of 1.5 mg / mL in a sodium phosphate buffer pH 7.0. Immediately after dissolution, as an initial state (0 days of storage), after dilution to 0.5 mg / mL with acetonitrile / physiological saline solution (1: 1), the drug-polymer conjugate and free drug present in the solution were analyzed by SEC-HPLC Was analyzed. Immediately after dissolution, the other aliquots were subjected to storage conditions of 36 ° C., and after each time, the same analysis was performed.
  • the drug release rate (%) was calculated from the peak area ratio of the free drug and the drug-polymer conjugate at each time point thus obtained.
  • the novel primary amine compound or secondary amine compound which is the compound of the present invention and the acidic polysaccharide polymer conjugate are all time-dependent.
  • the drug release amount has been increased, and it is possible to impart sustained release regardless of the structure of the primary amine compound or the secondary amine compound having biological activity.
  • the release rate of a biologically active primary amine compound or secondary amine compound is very finely and widely adjusted by the structure of a linker. Is possible.
  • Test Example 2 Filterability comparison test of drug-polymer conjugate [Operation]
  • CS chondroitin sulfate
  • PEG polyethylene glycol
  • a solution having filterability can be performed by filter filtration.
  • the filterability of a filter having a pore size of 0.22 ⁇ m used for sterilization by filtration is one of important parameters in producing a solution preparation such as an eye drop or an injection.
  • the acidic polysaccharide conjugate of the primary amine or secondary amine compound of the present invention can be filtered with a 0.22 ⁇ m filter at a higher drug concentration than the PEG conjugate. Preparation of a suitable solution is possible.
  • the acidic polysaccharide conjugate has a high polymer molecular weight, it is possible to prepare a solution having filterability at a higher drug concentration than the PEG conjugate, and to provide a solution preparation having a high molecular weight and a high drug concentration. Can be.

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Abstract

式（Ｉ）（式中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ａ、Ｐｏｌｙは、明細書にて定義されるとおりである）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩である、第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖との新規なコンジュゲートである。

Description

第１級アミン化合物又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートとその製造方法
　本発明は、第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖との新規なコンジュゲートとその製造方法に関するものである。詳しくは、本発明は放出速度制御可能なアミノアシルオキシメチル基をリンカーとした第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖との新規なコンジュゲートとその製造方法に関するものである。
　薬物とポリマーとのコンジュゲートはプロドラッグ又はドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の領域で広く検討されており、放出制御、吸収改善、生体内安定化又は目的組織へのターゲッティング等の機能を持たせるうえで重要な手段の一つになっている。
　例えば、水溶性非ポリペプチドオリゴマーとカルシミメティクスとのコンジュゲートが米国特許公開第２０１２／２３８６２１号に報告されている。また、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）とゴシポールとのコンジュゲートが特許第５６９０９４４号公報に報告されている。コンジュゲートに使用されるポリマーとして食物繊維の一つであるアルギン酸も検討されており、アルギン酸と各種薬物とのコンジュゲートが特開平８－２４３２５号公報に報告されている。また、コンジュゲートに使用されるポリマーとしてグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）も広く検討されており、ヒアルロン酸又はコンドロイチン硫酸とペプチドとのコンジュゲートが米国特許第５９５５５７８号明細書に報告されている。さらに、ヘパリンと各種薬物とのコンジュゲートが国際公開第９３／１８７９３号に報告されている。また、コンジュゲートに使用されるポリマーとしてヒアルロン酸についても検討されており、ヒアルロン酸とタキサンとのコンジュゲートが国際公開第２００５／０８５２９４号、ヒアルロン酸とセリンプロテアーゼインヒビターなどのタンパク質とのコンジュゲートも特表２００６－５０４７４７号公報に報告されている。
　また、ＧＡＧと第１級アミン薬物とを還元的アミノ化により結合する方法が、特表２０００－５０１０８２号公報に、モノマー構造中にカルボキシ基を有する多糖類である酸性多糖と第１級又は第２級アミン薬物とのアミド結合を形成する方法が特開平８－２４３２５号公報にそれぞれ報告されている。
米国特許公開第２０１２／２３８６２１号 特許第５６９０９４４号公報 特開平８－２４３２５号公報 米国特許第５９５５５７８号明細書 国際公開第９３／１８７９３号 国際公開第２００５／０８５２９４号 特表２００６－５０４７４７号公報 特表２０００－５０１０８２号公報 国際公開第２０１２／０８８５２２号 特表２００３－５１１４２３号公報
J. Control. Rel. 第８８巻、第３５頁－４２頁、２００３年 Expert Opin. Drug Deliv. 第９巻、第１３１９頁－１３２３頁、２０１２年 Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products、２０１４年 EMA/CHMP/SWP/647258/2012 講演2 「食物アレルギーを引き起こす意外なアレルゲン」第32回日本臨床皮膚科医会総会・臨床学術大会、２０１６年 J. Med. Chem. 第３９巻、第４２４頁－４３１頁、１９９６年 Anesthesia & Analgesia、第１０５巻、第７２４頁－７２８頁、２００７年 Int. J. Nanomed. 第７巻、第２９５７頁－２９６６頁、２０１２年
　上述のとおり、薬物－ポリマーコンジュゲートは、種々検討されている。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は汎用的に用いられている水溶性ポリマーの一つであり、直鎖分子の末端に官能基を導入したＰＥＧと薬物とのコンジュゲートが国際公開第２０１２／０８８５２２号及び米国特許公開第２０１２／２３８６２１号に報告されている。また、ポリアミノ酸の一つであるポリ－γ－グルタミン酸（ＰＧＡ）を使用したコンジュゲートが特表２００３－５１１４２３号公報に報告されている。
　これらコンジュゲート化のポリマーとしてＰＥＧやＰＧＡを用いた場合には薬物動態面或いは安全性面での懸念が報告されており、例えばJ. Control. Rel. 第８８巻、第３５頁－４２頁、２００３年及びExpert Opin. Drug Deliv. 第９巻、第１３１９頁－１３２３頁、２０１２年ではＰＥＧ製剤の投与により抗ＰＥＧ抗体が生成し、２回目以降の投与時のクリアランスが早くなるＡｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｌｅａｒａｎｃｅ現象（ＡＢＣ現象）が報告されている。また、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）では、ＰＥＧ化タンパク製剤の臨床試験において、抗タンパク薬物抗体の測定に加えて、抗ＰＥＧ抗体の測定実施が推奨されている（Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products、２０１４年）。さらに、４０kDa以上のＰＥＧ化製剤の反復投与によるマクロファージや上衣細胞の空胞化が観察されている（EMA/CHMP/SWP/647258/2012）。納豆アレルギーの抗原物質でもあるＰＧＡに関しても、遅発性のアナフィラキシーショックを来すケースが報告されている(講演２「食物アレルギーを引き起こす意外なアレルゲン」、第32回日本臨床皮膚科医会総会・臨床学術大会、２０１６年)。
　医薬品としてのコンジュゲートを考えた場合、安全性以外にも薬効発現、溶解性、徐放性能等も考慮する必要性がある。プロドラッグが薬物を遊離させるメカニズムとして、一般に加水分解が利用される。分子内にカルボキシ基又は水酸基を有する薬物の場合には酸性多糖とリンカーを介してエステル結合の形成が可能で、このエステル結合の加水分解による薬物遊離が可能である。一方、第１級又は第２級アミン薬物の場合、コンジュゲートにおいて形成される還元的アミノ化による結合又はアミド結合は加水分解を受けづらいため、十分な薬物遊離能を有していないことが予想される。分子内にカルボキシ基又は水酸基を持たない第１級又は第２級アミン薬物に関しては、従来の方法ではポリマーとリンカーを介してエステル結合を形成することができないため、プロドラッグの基本メカニズムである加水分解を利用した薬物放出制御が達成された酸性多糖コンジュゲートは存在していない。
　コンジュゲート化は薬物の有する官能基に従って反応が選択されるため、従来の方法で徐放性を有する第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖とのコンジュゲートを得ることはできず、新規な方法の構築が望まれている。
　また、コンジュゲートにおけるポリマー分子量はそのＤＤＳ製剤としての性能に深く関係しており、コンジュゲートの組織又は血中における滞留性や消化管からの吸収率は、ポリマー分子量の大きさに依存して向上することが報告されている（J. Med. Chem. 第３９巻、第４２４頁－４３１頁、１９９６年；Anesthesia & Analgesia、第１０５巻、第７２４頁－７２８頁、２００７年；Int. J. Nanomed. 第７巻、第２９５７頁－２９６６頁、２０１２年）。しかしながら、一般的にポリマーの高分子量化はポリマー自体の水溶性を低下させてしまい、結果として高分子量のポリマーを用いたコンジュゲートも水溶性が低下してしまう。このように、組織又は血中における滞留性向上を目的にした担体の高分子量化は単純ではなく、分子量と水溶性とのバランスを図ることが必要となる。ＰＥＧのような薬物と結合する反応点の少ないポリマーを用いる場合、必然的にポリマー１分子に対しての薬物導入量は低くなり、高分子量体を用いた場合は溶解性の問題から薬液中の薬物量の著しい低下を招き、薬効発現に必要な薬物濃度に達しない可能性がある。さらにはＰＥＧでは、上述したように４０kDa以上の分子量にて毒性の懸念が増すため、ポリマーの高分子量化には不利な担体と言える。
　本発明は、第１級又は第２級アミン化合物を有し、高い薬物濃度、滞留性、溶解性を兼ね備えた、新規なコンジュゲートの提供とその製造方法を提供することを目的とする。本発明は特に、第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖との新規なコンジュゲートの提供とその製造方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、第１級又は第２級アミン薬物に対して達成されていなかったこれらコンジュゲートの課題に対して鋭意検討した結果、放出速度制御可能なアミノアシルオキシメチル基をリンカーとした第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖との新規なコンジュゲートを見出し、本発明を完成するに至ったものである。本発明は、第１級又は第２級アミン化合物と酸性多糖との新規なコンジュゲートとその製造方法である。
実施例２２、２３、２９、３１についての、ｐＨ７．０の緩衝液中における、時間と薬物の遊離率の関係を示すグラフである。 実施例３４、６３、６９についての、ｐＨ７．０の緩衝液中における、時間と薬物の遊離率の関係から示すグラフである。 実施例８０についての、ｐＨ７．０の緩衝液中における、時間と薬物の遊離率の関係を示すグラフである。 実施例３６、３８、４１、４７についての、ｐＨ７．０の緩衝液中における、時間と薬物の遊離率の関係を示すグラフである。 実施例８６、８８、８９についての、ｐＨ７．０の緩衝液中における、時間と薬物の遊離率の関係を示すグラフである。 実施例８１及び参考例１についての、０．２２μｍフィルターの濾過性を、薬物濃度と溶液通過率の関係から示すグラフである。 実施例８２及び参考例１についての、０．２２μｍフィルターの濾過性を、薬物濃度と溶液通過率の関係から示すグラフである。 実施例８４、８５及び参考例２についての、０．２２μｍフィルターの濾過性を、薬物濃度と溶液通過率の関係から示すグラフである。
　本発明の一側面にかかるコンジュゲートは、以下の一般式（Ｉ）で示される構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
式（Ｉ）中、Ｄは第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの、第１級又は第２級アミノ基が有する水素原子を除いた残基を表し；Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基であり；Ａは置換又は無置換の２価の炭化水素基であって－Ｃ（＝Ｏ）－又は－ＮＨ－と結合する両端以外に１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、当該ヘテロ原子はそれぞれ独立して－Ｏ－、置換基を有していてもよい－ＮＨ－及び－Ｓ－からなる群から選択され；Ｒ１、Ｒ２及びＡのうち任意の２つ又は３つの基が一体となって環を形成することもでき；Ｐｏｌｙは酸性多糖残基を表し、Ｐｏｌｙに隣接する－Ｃ（＝Ｏ）－は前記酸性多糖のカルボキシ基に由来する。
　Ｐｏｌｙ－ＣＯで表される、酸性多糖Ｐｏｌｙ－ＣＯ２Ｈの、アミン体との縮合に利用されているカルボキシ基のＯＨ部分を除いた構造と、Ｄで表される、それ自体又はその薬学的に許容される塩が第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの、第１級又は第２級アミノ基が有する水素原子を除いた構造とが、Ａを含むリンカーを介して結合されることにより、コンジュゲートを形成する。コンジュゲートは好ましくは、第１級又は第２級アミノ基を含有する薬物とのコンジュゲートである。以下、Ｄに関する記載においては、第１級又は第２級アミン又はそれらの薬学的に許容される塩であるものをまとめて「第１級又は第２級アミン化合物」として説明することがある。
　前述のように、コンジュゲートの部分構造であるポリマーの高分子化はＤＤＳ製剤の機能を考える上で重要な因子となるが、ＰＥＧは構造上の問題や毒性の懸念から高分子化には不利な担体である。一方、酸性多糖をコンジュゲートの担体として用いた場合、後述の試験結果で示すようにポリマーを高分子量化しても尚、高い薬物担持量を確保し、かつ毒性の懸念も少ない医薬組成物を調製することが可能である。
　本発明で見出した構造を有するリンカーは、新規な第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートを製造可能とするものであり、そのコンジュゲートは酸性多糖を担体として用いたことにより、従来技術と比較して安全性、ポリマー分子量、薬物担持量等の点で実用性の高い医薬組成物の提供が可能となる。この発明による医療等への貢献度は多大なものである。
　コンジュゲートは、酸性多糖残基のカルボキシ基がアミド結合を形成することでリンカー中の炭化水素鎖（上記式（Ｉ）においてＡで表される２価の炭化水素基）と結合する。
　Ａで表される２価の炭化水素基は、炭素数１以上の炭素鎖であればよく、分岐構造、環状構造をとっていてもよい。２価の炭化水素基Ａが分岐構造を有する場合、上記一般式（Ｉ）においてＡが結合するカルボニル基及びＮＨ基を最小の原子数で連結する分子鎖の少なくとも１点に、水素原子以外の原子が結合するような構造をとることができる。そのような分岐構造の例としては、２－メチル－１，３－プロピレニル、１－フェニル－１，３－プロピレニルのような構造が挙げられる。２価の炭化水素基Ａの一部が環状構造をとる場合、当該環は同じ原子であってもよい環の任意の２点でＡの残りの部分と結合することができる。そのような環状構造の例としては、１，２－フェニレン、１，４－シクロヘキシレン、１，１－シクロプロペニレンなどが挙げられる。さらに、他の部分構造、特に前記式（Ｉ）において－Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）－で表される構造と一体となって環を形成することもできる。また、２価の炭化水素基Ａは、任意の位置に置換基を有していてもよく、置換基の例としては、前述のＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６の基として例示されているものを挙げることができる。Ａは、好ましくは下記一般式（ＩＩ）が有するような、－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）－（ＣＨ２）ｌ－（Ｃ（Ｒ５）（Ｒ６））ｍ－（ＣＨ２）ｎ－で表される２価の炭化水素基である（ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｌ、ｍ及びｎは、先に定義したとおりである）。設計、原料入手の容易さから、Ａは炭素数１～１０の直鎖又は分岐状アルキレン基であることが好ましく、Ａは炭素数１～６であることがさらに好ましい。
　前記式（Ｉ）で示されるコンジュゲートは、下記式（ＩＩ）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
式（ＩＩ）中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２及びＰｏｌｙは先に定義されるとおりであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ任意の２つ又は３つの基が一体となって環を形成することもでき、ｌ及びｎはそれぞれ独立して０、１又は２であり、ｍは０又は１である。
　前記式（Ｉ）において－、Ａは、エステル結合を介してＣ（Ｒ１）（Ｒ２）－で表されるて、置換又は無置換のメチレン基と結合している。一方、第１級又は第２級アミン化合物はウレタン結合を介して当該メチレン基に結合している。したがって、エステル結合の酸素原子－メチレン基の炭素原子－ウレタン結合の酸素原子－ウレタン結合の炭素原子－第１級又は第２級アミン化合物ＤＨに由来する窒素原子、の順で結合を形成する。メチレン基は無置換でも、置換されていてもよく、置換されている場合、２つの置換基が一緒になって環を形成していてもよく、前記２価の炭化水素基Ａの一部（即ち一般式（ＩＩ）においてはＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６）の少なくとも１点と結合して環を形成していてもよい。当該環は、縮合環、スピロ環であってもよい。第１級又は第２級アミン化合物ＤＨは、リンカーを介して、ウレタンとしてコンジュゲートの構造中に存在する。
　コンジュゲートの末端にある、第１級又は第２級アミン化合物ＤＨを含むウレタン構造Ｄ－ＣＯＯは、これに結合するオキシメチレン基の存在により速やかに分解し、第１級又は第２級アミン化合物ＤＨを遊離することができる。この機構を前記式（Ｉ）で示される化合物を用いて説明すると、以下のとおりである。前記式（Ｉ）で示される第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートは、水の存在下ではエステル結合部分の加水分解が進行し、式（ＶＩＩ）で示されるヒドロキシメチル体と式（ＶＩＩＩ）で示されるカルボン酸体とに分解される。更に式（ＶＩＩ）で示されるヒドロキシメチル体は、ウレタン構造を有することから構造的に不安定であるため、速やかに式（ＩＸ）で示される第１級又は第２級アミン化合物ＤＨと式（Ｘ）で示される二酸化炭素、及び式（ＸＩ）で示されるアルデヒド体（又はケトン体）とに分解される。ここで生成した第１級又は第２級アミン化合物の持つ機能が発揮されるものである。故に、前記式（Ｉ）で示される第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートは、エステル結合部分の加水分解速度を制御することにより、第１級又は第２級アミン化合物の放出を制御し、その第１級又は第２級アミン化合物の持つ機能の持続力を制御することが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
　本発明における第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートの一つの態様は、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物であり、（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物製造の重要中間体であるアミン体は、以下の式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示される化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
　式中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ａ、ｌ、ｍ及びｎは、先に定義したとおりである。上記式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示される化合物は、更に無機酸又は有機酸との塩を形成してもよい。
　式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＸＩＩ）において置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で示される基が包含するアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族基及び複素環基としては、具体的には以下の基が挙げられる。
　アルキル基としては、直鎖状又は分岐状のアルキル基のいずれでもよい。また、アルキル基の炭素数は好ましくは１、２、３、４、５又は６であり、例えばメチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、２－プロピル、ｎ－ブチル基、１－メチルプロピル基、１，１－ジメチルエチル基、２－メチルプロピル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１－エチル－１－メチルプロピル基、１－エチル－２－メチルプロピル基等を挙げることができる。
　シクロアルキル基は、結合点の炭素原子が環を構成する原子として含まれるものであればいずれでもよく、シクロアルカン、シクロアルケン、芳香族環又は複素環と縮合したもの、又はスピロ環を形成してもよい。また、シクロアルキル基の炭素数は、好ましくは３、４、５、６、７又は８である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基を挙げることができる。
　アルケニル基としては、直鎖状又は分岐状のアルケニル基のいずれでもよい。また、アルケニル基の炭素数は、好ましくは２、３、４、５又は６である。アルケニル基の例としては、ビニル基、１－プロペニル基、２－プロペニル基、１－メチルビニル基、１－ブテニル基、２－ブテニル基、３－ブテニル基、１－エチルビニル基、１－メチル－１－プロペニル基、１－メチル－２－プロペニル基、２－メチル－１－プロペニル基、２－メチル－２－プロペニル基、１－ペンテニル基、２－ペンテニル基、３－ペンテニル基、４－ペンテニル基、１－プロピルビニル基、１－メチル－１－ブテニル基、１－メチル－２－ブテニル基、１－メチル－３－ブテニル基、２－メチル－１－ブテニル基、２－メチル－２－ブテニル基、２－メチル－３－ブテニル基、３－メチル－１－ブテニル基、３－メチル－２－ブテニル基、３－メチル－３－ブテニル基、１－エチル－１－プロペニル基、１－エチル－２―プロペニル基、１－（２－メチルエチル）ビニル基、１，２－ジメチル－１－プロペニル基、１，２－ジメチル－２－プロペニル基、１，１－ジメチル－２－プロペニル基、１－ヘキセニル基、２－ヘキセニル基、３－ヘキセニル基、４－ヘキセニル基、５－ヘキセニル基、１－ブチルビニル基、１－メチル－１－ペンテニル基、１－メチル－２－ペンテニル基、１－メチル－３－ペンテニル基、１－メチル－４－ペンテニル基、２－メチル－１－ペンテニル基、２－メチル－２－ペンテニル基、２－メチル－３－ペンテニル基、２－メチル－４－ペンテニル基、３－メチル－１－ペンテニル基、３－メチル－２－ペンテニル基、３－メチル－３－ペンテニル基、３－メチル－４－ペンテニル基、４－メチル－１－ペンテニル基、４－メチル－２－ペンテニル基、４－メチル－３－ペンテニル基、４－メチル－４－ペンテニル基、１－プロピル－１－プロペニル基、１－プロピル－２－プロペニル基、１－エチル－１－ブテニル基、１－エチル－２－ブテニル基、１－エチル－３－ブテニル基、２－エチルー１－ブテニル基、２－エチル－２－ブテニル基、２－エチル－３－ブテニル基、１－（２－メチルプロピル）ビニル基、１，２－ジメチル－１－ブテニル基、１，２－ジメチル－２－ブテニル基、１，２－ジメチル－３－ブテニル基、１－（３－メチルプロピル）ビニル基、１，３－ジメチル－１－ブテニル基、１，３－ジメチル－２－ブテニル基、１，３－ジメチル－３－ブテニル基、２，３－ジメチル－１－ブテニル基、２，３－ジメチル－２－ブテニル基、２，３－ジメチル－３－ブテニル基、３，３－ジメチル－１－ブテニル基、２，２－ジメチル－３－ブテニル基、１，１－ジメチル－２－ブテニル基、１，１―ジメチル－３－ブテニル基、１，１，２－トリメチル－２－プロペニル基、１－エチル－１－メチル－２－プロペニル基、１－エチル－２－メチル－１－プロペニル基、１－エチル－２－メチル－２－プロペニル基、１－（１－メチルエチル）－１－プロペニル基、１－（１－メチルエチル）－２－プロペニル基等を挙げることができる。
　シクロアルケニル基は、結合点の炭素原子及びＣ＝Ｃ二重結合が環を構成する原子として含まれるものであればいずれでもよく、シクロアルカン、シクロアルケン、芳香族環又は複素環と縮合したもの、若しくはスピロ環を形成してもよい。また、シクロアルケニル基の炭素数は好ましくは３、４、５、６、７又は８である。シクロアルケニル基の例としては、１－シクロプロペン－１－イル基、２－シクロプロペン－１－イル基、１－シクロブテン－１－イル基、２－シクロブテン－１－イル基、１－シクロペンテン－１－イル基、２－シクロペンテン－１－イル基、３－シクロペンテン－１－イル基、１－シクロヘキセン－１－イル基、２－シクロヘキセン－１－イル基、３－シクロヘキセン－１－イル基、１－シクロヘプテン－１－イル基、２－シクロヘプテン－１－イル基、３－シクロヘプテン－１－イル基、４－シクロヘプテン－１－イル基、１－シクロオクテン－１－イル基、２－シクロオクテン－１－イル基、３－シクロオクテン－１－イル基、４－シクロオクテン－１－イル基、１，３－シクロペンタジエン－１－イル基、２，４－シクロペンタジエン－１－イル基、１，３－シクロヘキサジエン－１－イル基、１，４－シクロヘキサジエン－１－イル基、１，５－シクロヘキサジエン－１－イル基、２，４－シクロヘキサジエン－１－イル基、２，５－シクロヘキサジエン－１－イル基、１，３－シクロヘプタジエン－１－イル基、１，４－シクロヘプタジエン－１－イル基、１，５－シクロヘプタジエン－１－イル基、１，６－シクロヘプタジエン－１－イル基、２，４－シクロヘプタジエン－１－イル基、２，５－シクロヘプタジエン－１－イル基、２，６－シクロヘプタジエン－１－イル基、１，４－シクロヘプタジエン－１－イル基、１，５－シクロヘプタジエン－１－イル基、３，５－シクロヘプタジエン－１－イル基、１，３－シクロオクタジエン－１－イル基、１，４－シクロオクタジエン－１－イル基、１，５－シクロオクタジエン－１－イル基、１，６－シクロオクタジエン－１－イル基、１，７－シクロオクタジエン－１－イル基、２，４－シクロオクタジエン－１－イル基、２，５－シクロオクタジエン－１－イル基、２，６－シクロオクタジエン－１－イル基、２，７－シクロオクタジエン－１－イル基、３，５－シクロオクタジエン－１－イル基、３，６－シクロオクタジエン－１－イル基、１，３，５－シクロヘプタトリエン－１－イル基、１，３，６－シクロヘプタトリエン－１－イル基、１，４，６－シクロヘプタトリエン－１－イル基、２，４，６－シクロヘプタトリエン－１－イル基、１，３，５－シクロオクタトリエン－１－イル基、１，３，６－シクロオクタトリエン－１－イル基、１，３，７－シクロオクタトリエン－１－イル基、１，４，６－シクロオクタトリエン－１－イル基、１，４，７－シクロオクタトリエン－１－イル基、１，５，７－シクロオクタトリエン－１－イル基、２，４，６－シクロオクタトリエン－１－イル基、２，４，７－シクロオクタトリエン－１－イル基、シクロオクタテトラエン－１－イル基等を挙げることができる。
　アルキニル基としては、直鎖状、分岐鎖状又は環状のいずれでもよい。また、アルキニル基の炭素数は、好ましくは２、３、４、５又は６である。アルキニル基の例としては、エチニル基、１－プロピニル基、２－プロピニル基、１－ブチニル基、２－ブチニル基、３－ブチニル基、１－メチル－２－プロピニル基、１－ペンチニル基、２－ペンチニル基、３－ペンチニル基、４－ペンチニル基、１－メチル－２－ブチニル基、１－メチル－３－ブチニル基、２－メチル－３－ブチニル基、３－メチル－１－ブチニル基、１－エチル－２－プロピニル基、１，１－ジメチル－２－プロピニル基、１－ヘキシニル基、２－ヘキシニル基、３－ヘキシニル基、４－ヘキシニル基、１－メチル－２－ペンチニル基、１－メチル－３－ペンチニル基、１－メチル－４－ペンチニル基、２－メチル－３－ペンチニル基、２－メチル－４－ペンチニル基、３－メチル－１－ペンチニル基、３－メチル－４－ペンチニル基、４－メチル－１－ペンチニル基、４－メチル－２－ペンチニル基、１－ブチル－２－プロピニル基、１－エチル－２－ブチニル基、１－エチル－３－ブチニル基、２－エチル－３－ブチニル基、１，１－ジメチル－２－ブチニル基、１，１－ジメチル－３－ブチニル基、１，２－ジメチル－３－ブチニル基、２，２－ジメチル－３－ブチニル基、３，３－ジメチル－１－ブチニル基、１－エチル－１－メチル－２－プロピニル基、１－（２－メチルエチル）－２－プロピニル基、２－シクロヘキシン－１－イル基、３－シクロヘキシン－１－イル基等を挙げることができる。
　芳香族基としては、単環式でも多環式でもよく、シクロアルカン、シクロアルケン、芳香族環又は複素環と縮合してもよい。また、芳香族基の炭素数は、好ましくは６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４である。芳香族基の例としては、フェニル基、ナフチル基、アントラセニル基等を挙げることができる。
　複素環基としては、環構成原子として窒素原子、酸素原子又は硫黄原子等の複素原子を少なくとも１以上含み、これらはシクロアルカン、シクロアルケン、芳香族環又は複素環と縮合しても、スピロ環を形成してもよい。また、複素環の環の大きさは、好ましくは３、４、５、６、７又は８員環である。複素環の例としては、アジリジニル基、アゼチジニル基、ジアゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジノ基、ホモピペリジノ基、ピラゾリジニル基、イミダゾリジニル基、トリアゾリジニル基、テトラゾリジニル基、オキサゾリジニル基、イソオキサゾリジニル基、チアゾリジニル基、イソチアゾリジニル基、オキサジアゾリジニル基、チアジアゾリジニル基、ピペラジニル基、ホモピペラジニル基、トリアゼパニル基、モルホリノ基、チオモルホリノ基、キヌクリジニル基、トロパニル基、ピロリニル基、ピラゾリニル基、イミダゾリニル基、オキサゾリニル基、チアゾリニル基、イソオキサゾリニル基、イソチアゾリニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、ジヒドロオキサゾリル基、テトラヒドロオキサゾリル基、イソオキサゾリル基、ジヒドロイソオキサゾリル基、テトラヒドロイソオキサゾリル基、チアゾリル基、ジヒドロチアゾリル基、テトラヒドロチアゾリル基、イソチアゾリル基、ジヒドロイソチアゾリル基、テトラヒドロイソチアゾリル基、トリアゾリニル基、トリアゾリル基、オキソジアゾリル基、ジヒドロオキソジアゾリル基、テトラヒドロオキソジアゾリル基、チアジアゾリル基、ジヒドロチアジアゾリル基、テトラヒドロチアジアゾリル基、テトラゾリニル基、テトラゾリル基、フラザニル基、ジヒドロフラザニル基、テトラヒドロフラザニル基、ピペリデイニル基、トリアジナニル基、ピリジル基、ジヒドロピリジル基、テトラヒドロピリジル基、ピラジニル基、ジヒドロピラジニル基、テトラヒドロピラジニル基、ピリミジニル基、ジヒドロピリミジニル基、テトラヒドロピリミジニル基、パーヒドロピリミジニル基、ピリダジニル基、ジヒドロピリダジニル基、テトラヒドロピリダジニル基、パーヒドロピリダジニル基、トリアジニル基、ジヒドロトリアジニル基、テトラヒドロトリアジニル基、オキサジニル基、ジヒドロオキサジニル基、テトラヒドロオキサジニル基、オキサジアジニル基、ジヒドロオキサジアジニル基、テトラヒドロオキサジアジニル基、チアジニル基、ジヒドロチアジニル基、テトラヒドロチアジニル基、チアジアジニル基、ジヒドロチアジアジニル基、テトラヒドロチアジアジニル基、アゼピニル基、ジヒドロアゼピニル基、テトラヒドロアゼピニル基、パーヒドロアゼピニル基、ジアゼピニル基、ジヒドロジアゼピニル基、テトラヒドロジアゼピニル基、パーヒドロジアゼピニル基、オキサゼピニル基、ジヒドロオキサゼピニル基、テトラヒドロオキサゼピニル基、パーヒドロオキサゼピニル基、オキサジアゼピニル基、ジヒドロオキサジアゼピニル基、テトラヒドロオキサジアゼピニル基、パーヒドロオキサジアゼピニル基、チアゼピニル基、ジヒドロチアゼピニル基、テトラヒドロチアゼピニル基、パーヒドロチアゼピニル基、チアジアゼピニル基、ジヒドロチアジアゼピニル基、テトラヒドロチアジアゼピニル基、パーヒドロチアジアゼピニル基、トリアゼピニル基、ジヒドロトリアゼピニル基、テトラヒドロトリアゼピニル基、パーヒドロトリアゼピニル基、アゾシニル基、ジヒドロアゾシニル基、テトラヒドロアゾシニル基、オキソヒドロアゾシニル基、パーヒドロアゾシニル基、モルファニル基、ベンザゾシニル基、アゼピンドリル基、インドリニル基、インドレニニル基、イソインドリニル基、イソインドレニニル基、インドリル基、パーヒドロインドリル基、イソインドリル基、パーヒドロイソインドリル基、インドリジニル基、インドリジジニル基、イミダゾピリジノ基、インダゾリル基、ジヒドロインダゾリル基、パーヒドロインダゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ジヒドロベンゾイミダゾリル基、パーヒドロベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ジヒドロベンゾオキサゾリル基、パーヒドロベンゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ジヒドロベンゾチアゾリル基、パーヒドロベンゾチアゾリル基、ベンゾオキサジアゾリル基、ベンゾチアジアゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、プリニル基、キノリル基、ジヒドロキノリル基、テトラヒドロキノリル基、パーヒドロキノリル基、キノリジニル基、ジヒドロキノリジニル基、テトラヒドロキノリジニル基、イソキノリニル基、ジヒドロイソキノリニル基、テトラヒドロイソキノリニル基、パーヒドロイソキノリニル基、シンノリニル基、ジヒドロシンノリニル基、テトラヒドロシンノリニル基、パーヒドロシンノリニル基、キナゾリニル基、ジヒドロキナゾリニル基、テトラヒドロキナゾリニル基、パーヒドロキナゾリニル基、フタラジニル基、ジヒドロフタラジニル基、テトラヒドロフタラジニル基、パーヒドロフタラジニル基、キノキサリニル基、ジヒドロキノキサリニル基、テトラヒドロキノキサリニル基、パーヒドロキノキサリニル基、ナフチリジニル基、ジヒドロナフチリジニル基、テトラヒドロナフチリジニル基、パーヒドロナフチリジニル基、プテリジニル基、キノリリジニル基、ジヒドロベンゾオキサジニル基、ジヒドロベンゾチアジニル基、ベンゾアゼピニル基、ジヒドロベンゾアゼピニル基、テトラヒドロベンゾアゼピニル基、ベンゾジアゼピニル基、ジヒドロベンゾジアゼピニル基、テトラヒドロベンゾジアゼピニル基、ベンゾオキサゼピニル基、ジヒドロベンゾオキサゼピニル基、テトラヒドロベンゾオキサゼピニル基、ベンゾチアゼピニル基、ジヒドロベンゾチアゼピニル基、テトラヒドロベンゾチアゼピニル基、ベンゾオキサジアゼピニル基、ベンゾチアゼアゼピニル基、ベンザゼピニル基、ピリドアゼピニル基、カルバゾリル基、ジヒドロカルバゾリル基、テトラヒドロカルバゾリル基、パーヒドロカルバゾリル基、β－カルボリニル基、ジヒドロβ－カルボリニル基、テトラヒドロβ－カルボリニル基、パーヒドロβ－カルボリニル基、アクリジニル基、ジヒドロアクリジニル基、テトラヒドロアクリジンニル基、パーヒドロアクリジニル基、フェナジニル基、ジヒドロフェナジニル基、テトラヒドロフェナジニル基、パーヒドロフェナジニル基、フェノチアジニル基、ジヒドロヒドロフェノチアジニル基、テトラヒドロフェノチアジニル基、パーヒドロフェノチアジニル基、フェノキサジニル基、ジヒドロフェノキサジニル基、テトラヒドロフェノキサジニル基、パーヒドロフェノキサジニル基、フェナルサジニル基、フェナントリジニル基、ジヒドロフェナントリジニル基、テトラヒドロフェナントリジニル基、パーヒドロフェナントリジニル基、フェナントロリニル基、ジヒドロフェナントロリニル基、テトラヒドロフェナントロリニル基、パーヒドロフェナントロリニル基、ペリミジニル基、ジヒドロペリミジニル基、テトラヒドロペリミジニル基、パーヒドロペリミジニル基、プテリニル基、ピロリリジニル基、モルフィナニル基、ハスバナニル基、フリル基、ジヒドロフリル基、テトラヒドロフリル基、ピラニル基、ジヒドロピラニル基、テトラヒドロピラニル基、オキセピニル基、ジヒドロオキセピニル基、テトラヒドロオキセピニル基、パーヒドロオキセピニル基、チエニル基、ジヒドロチエニル基、テトラヒドロチエニル基、チオピラニル基、ジヒドロチオピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、チエピニル基、ジヒドロチエピニル基、テトラヒドロチエピニル基、パーヒドロチエピニル基、ベンゾフリル基、ジヒドロベンゾフリル基、テトラヒドロベンゾフリル基、パーヒドロベンゾフリル基、イソベンゾフリル基、ジヒドロイソベンゾフリル基、テトラヒドロイソベンゾフリル基、パーヒドロイソベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、ジヒドロベンゾチエニル基、テトラヒドロベンゾチエニル基、パーヒドロベンゾチエニル基、イソベンゾチエニル基、ジヒドロイソベンゾチエニル基、テトラヒドロイソベンゾチエニル基、パーヒドロイソベンゾチエニル基、ベンゾピラニル基、ジヒドロベンゾピラニル基、パーヒドロベンゾピラニル基、ベンゾチオピラニル基、ジヒドロベンゾチオピラニル基、パーヒドロベンゾチオピラニル基、ベンゾオキセピニル基、ジヒドロベンゾオキセピニル基、テトラヒドロベンゾオキセピニル基、パーヒドロベンゾオキセピニル基、ベンゾチエピニル基、ジヒドロベンゾチエピニル基、テトラヒドロベンゾチエピニル基、パーヒドロベンゾチエピニル基、ベンゾフリル基、ジヒドロジベンゾフリル基、テトラヒドロジベンゾフリル基、パーヒドロジベンゾフリル基、キサンテニル基、ジヒドロキサンテニル基、テトラヒドロキサンテニル基、パーヒドロキサンテニル基、ベンゾチエニル基、ジヒドロジベンゾチエニル基、テトラヒドロジベンゾチエニル基、パーヒドロジベンゾチエニル基、チオキサンテニル基、ジヒドロチオキサンテニル基、テトラヒドロチオキサンテニル基、パーヒドロチオキサンテニル基、フェノキサチイニル基、ジヒドロフェノキサチイニル基、テトラヒドロフェノキサチイニル基、パーヒドロフェノキサチイニル基、ジベンゾジオキシニル基、ジヒドロジベンゾジオキシニル基、テトラヒドロジベンゾジオキシニル基、パーヒドロジベンゾジオキシニル基、チアンスレニル基、ジヒドロチアンスレニル基、テトラヒドロチアンスレニル基、パーヒドロチアンスレニル基、オキシラニル基、オキセタニル基、チイラニル基、チエタニル基、オキサチイニル基、ジヒドロオキサチイニル基、テトラヒドロオキサチイニル基、ベンゾオキサチイニル基、ジヒドロベンゾオキサチイニル基、テトラヒドロベンゾオキサチイニル基、パーヒドロベンゾオキサチイニル基、ベンゾジオキセパニル基、ジオキソラニル基、ジオキサニル基、ジチオラニル基、ジチアニル基、ジオキソインダニル基、ベンゾジオキサニル基、クロマニル基、ベンゾジチオラニル基、ベンゾジチアニル基等を挙げることができ、不飽和複素環基の場合は少なくとも一部が水素化された複素環基も含む。
　また、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ任意の２つ又は３つの置換基が一体となって環を形成してもよい。その環としては、例えばシクロプロパン、シクロプロペン、シクロブタン、シクロブテン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロペンタジエン、シクロヘキサン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロヘプタトリエン、シクロオクタン、シクロオクテン、シクロオクタジエン、シクロオクタトリエン、アジリジン、アゼチジン、ジアゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ホモピペリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、トリアゾリジン、テトラゾリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、オキサゾジアゾリジン、チアジアゾリジン、ピペラジン、ホモピペラジン。トリアゼパン、モルホリン、チオモルホリン、キヌクリジン、トロパン、ピロリン、ピラゾリン、イミダゾリン、オキサゾリン、チアゾリン、イソオキサゾリン、イソチアゾリン、ジヒドロオキサゾール、テトラヒドロオキサゾール、ジヒドロイソオキサゾール、テトラヒドロイソオキサゾール、ジヒドロチアゾール、テトラヒドロチアゾール、ジヒドロイソチアゾール、テトラヒドロイソチアゾール、トリアゾリン、ジヒドロオキサジアゾール、テトラヒドロオキサジアゾール、ジヒドロチアジアゾール、テトラヒドロチアジアゾール、ジヒドロフラザン、テトラヒドロフラザン、ピペリデイン、トリアジナン、ジヒドロピリジン、テトラヒドロピリジン、ジヒドロピラジン、テトラヒドロピラジン、ジヒドロピリミジン、テトラヒドロピリミジン、パーヒドロピリミジン、ジヒドロピリダジン、テトラヒドロピリダジン、パーヒドロピリダジン、オキサジン、ジヒドロオキサジン、テトラヒドロオキサジン、オキサジアジン、ジヒドロオキサジアジン、テトラヒドロオキサジアジン、チアジン、ジヒドロチアジン、テトラヒドロチアジン、チアジアジン、ジヒドロチアジアジン、テトラヒドロチアジアジン、ジヒドロアゼピン、テトラヒドロアゼピン、パーヒドロアゼピン、ジヒドロジアゼピン、テトラヒドロジアゼピン、パーヒドロジアゼピン、オキサゼピン、ジヒドロオキサゼピン、テトラヒドロオキサゼピン、パーヒドロオキサゼピン、オキサジアゼピン、ジヒドロオキサジアゼピン、テトラヒドロオキサジアゼピン、パーヒドロオキサジアゼピン、チアゼピン、ジヒドロチアゼピン、テトラヒドロチアゼピン、パーヒドロチアゼピン、チアジアゼピン、ジヒドロチアジアゼピン、テトラヒドロチアジアゼピン、パーヒドロチアジアゼピン、トリアゼピン、ジヒドロトリアゼピン、テトラヒドロトリアゼピン、パーヒドロトリアゼピン、アゾシン、ジヒドロアゾシン、テトラヒドロアゾシン、オキソヒドロアゾシン、パーヒドロアゾシン、モルファン、アゼピンドール、インドリン、インドレニン、イソインドリン、イソインドレニン、パーヒドロインドール、パーヒドロイソインドール、パーヒドロイソインドール、インドリジジン、ジヒドロインダゾール、パーヒドロインダゾール、ジヒドロベンゾイミダゾール、パーヒドロベンゾイミダゾール、ジヒドロベンゾオキサゾール、パーヒドロベンゾオキサゾール、ジヒドロベンゾチアゾール、パーヒドロベンゾチアゾール、ジヒドロキノリン、テトラヒドロキノリン、パーヒドロキノリン、キノリジン、ジヒドロキノリジン、テトラヒドロキノリジン、ジヒドロイソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、パーヒドロイソキノリン、ジヒドロシンノリン、テトラヒドロシンノリン、パーヒドロシンノリン、ジヒドロキナゾリン、テトラヒドロキナゾリン、パーヒドロキナゾリン、ジヒドロフタラジン、テトラヒドロフタラジン、パーヒドロフタラジン、ジヒドロキノキサリン、テトラヒドロキノキサリン、パーヒドロキノキサリン、ジヒドロナフチリジン、テトラヒドロナフチリジン、パーヒドロナフチリジン、キノリリジン、ジヒドロベンゾオキサジン、ジヒドロベンゾチアジン、ジヒドロベンゾアゼピン、テトラヒドロベンゾアゼピン、パーヒドロベンゾアゼピン、ジヒドロベンゾジアゼピン、テトラヒドロベンゾジアゼピン、パーヒドロベンゾジアゼピン、ジヒドロベンゾオキサゼピン、テトラヒドロベンゾオキサゼピン、パーヒドロベンゾオキサゼピン、ジヒドロベンゾチアゼピン、テトラヒドロベンゾチアゼピン、パーヒドロベンゾチアゼピン、ジヒドロカルバゾール、テトラヒドロカルバゾール、パーヒドロカルバゾール、ジヒドロβ－カルボリン、テトラヒドロβ－カルボリン、パーヒドロβ－カルボリン、ジヒドロアクリジン、テトラヒドロアクリジン、パーヒドロアクリジン、ジヒドロフェナジン、テトラヒドロフェナジン、パーヒドロフェナジン、ジヒドロヒドロフェノチアジン、テトラヒドロフェノチアジン、パーヒドロフェノチアジン、ジヒドロフェノキサジン、テトラヒドロフェノキサジン、パーヒドロフェノキサジン、ジヒドロフェナントリジン、テトラヒドロフェナントリジン、パーヒドロフェナントリジン、ジヒドロフェナントロリン、テトラヒドロフェナントロリン、パーヒドロフェナントロリン、ジヒドロペリミジン、テトラヒドロペリミジン、パーヒドロペリミジン、ピロリリジン、モルフィナン、ハスバナン、ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、ジヒドロオキセピン、テトラヒドロオキセピン、パーヒドロオキセピン、ジヒドロチオフェン、テトラヒドロチオフェン、チオピラン、ジヒドロチオピラン、テトラヒドロチオピラン、ジヒドロチエピン、テトラヒドロチエピン、パーヒドロチエピン、ジヒドロベンゾフラン、テトラヒドロベンゾフラン、パーヒドロベンゾフラン、ジヒドロイソベンゾフラン、テトラヒドロイソベンゾフラン、パーヒドロイソベンゾフラン、ジヒドロベンゾチオフェン、テトラヒドロベンゾチオフェン、パーヒドロベンゾチオフェン、ジヒドロイソベンゾチオフェン、テトラヒドロベンゾチオフェン、パーヒドロベンゾチオフェン、ベンゾピラン、ジヒドロベンゾピラン、パーヒドロベンゾピラン、ベンゾチオピラン、ジヒドロベンゾチオピラン、パーヒドロベンゾチオピラン、ジヒドロベンゾオキセピン、テトラヒドロベンゾオキセピン、パーヒドロベンゾオキセピン、ジヒドロベンゾチエピン、テトラヒドロベンゾチエピン、パーヒドロベンゾチエピン、ジヒドロジベンゾフラン、テトラヒドロジベンゾフラン、パーヒドロジベンゾフラン、キサンテン、ジヒドロキサンテン、テトラヒドロキサンテン、パーヒドロキサンテン、ジヒドロジベンゾチオフェン、テトラヒドロジベンゾチオフェン、パーヒドロジベンゾチオフェン、チオキサンテン、ジヒドロチオキサンテン、テトラヒドロチオキサンテン、パーヒドロチオキサンテン、ジヒドロフェノキサチイン、テトラヒドロフェノキサチイン、パーヒドロフェノキサチイン、ジヒドロジベンゾジオキシン、テトラヒドロジベンゾジオキシン、パーヒドロジベンゾジオキシン、ジヒドロチアンスレン、テトラヒドロチアンスレン、パーヒドロチアンスレン、オキシラン、オキセタン、チイラン、チエタン、ジヒドロオキサチイン、テトラヒドロオキサチイン、ジヒドロベンゾオキサチイン、テトラヒドロベンゾオキサチイン、パーヒドロベンゾオキサチイン、ベンゾジオキセパン、ジオキソラン、ジオキサン、ジチオラン、ジチアン、ジオキソインダン、ベンゾジオキサン、クロマン、ベンゾジチオラン、ベンゾジチアン、ノルボルナン、１－アザノルボルナン、２－アザノルボルナン、７－アザノルボルナン、ノルボルネン、１－アザノルボルネン、２－アザノルボルネン、７－アザノルボルネン、ノルボルナジエン、ビシクロ［２，２，２］オクタン、１－アザビシクロ［２，２，２］オクタン、２－アザビシクロ［２，２，２］オクタン、ノルピナン、ノルピネン、ノルカナン、ノルカネン等を挙げることができ、不飽和環の場合は少なくとも一部が水素化された環も含む。また、環を形成する場合はＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６の任意の２置換基又は３置換基で環を形成することが好ましい。
　また、上記アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族基、及び複素環基が有し得る置換基は、水酸基、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、ハロゲン原子、芳香族基、複素環基、アルコキシ基、グアニジノ基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アシル基、置換スルホニル基、ヘテロシクリルオキシ基、ヘテロシクリルチオ基、アミド基、ウレイド基、カルボキシ基、カルバモイル基、オキソ基、チオキソ基、スルファモイル基、スルホ基、シアノ基、ニトロ基、アシルオキシ基、アジド基、スルホンアミド基、メルカプト基、アルコキシカルボニルアミノ基、アミノカルボニルオキシ基、置換スルフィニル基、スルファミド基、アミノスルホニルオキシ基、アルコキシスルホニルアミノ基、置換スルホニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルコキシカルボニルオキシ基、アルコキシスルホニル基、Ｒｘ（Ｒｙ）Ｎ基及びＲｘ（Ｒｙ）（Ｒｚ）Ｎ＋基（Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚはそれぞれ独立して水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族炭化水素基又は複素環基を表す。また、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚのうちの２つ以上が一体となって飽和又は不飽和の複素環を形成してもよく、その環は脂肪族環或いは複素環とで縮合環或いはスピロ環を形成することもでき、芳香族環とは縮合環を形成することもできる）から選ばれる基が挙げられる。
　なお、ここに挙げた水素原子である場合を除くＲｘ、Ｒｙ、Ｒｚ及び置換基としてのアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族基、複素環基は、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で示される基と同類の基を含む。また、置換基としてのアルコキシ基、アルキルチオ基のアルキル基は前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６におけるアルキル基の定義と同義であり、アリールオキシ基、アリールチオ基のアリール基は前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６における芳香族基の定義と同義である。
　また、置換基としてのグアニジノ基、アシル基、置換スルホニル基、ヘテロシクリルオキシ基、ヘテロシクリルチオ基、カルバモイル基、ウレイド基、アミド基、スルファモイル基、アシルオキシ基、スルホンアミド基、アルコキシカルボニルアミノ基、アミノカルボニルオキシ基、置換スルフィニル基、スルファミド基、アミノスルホニルオキシ基、アルコキシスルホニルアミノ基、置換スルホニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルコキシカルボニルオキシ基、アルコキシスルホニル基の例示を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
　上記例示基中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２６、Ｒ２８、Ｒ２９、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４、Ｒ３５及びＲ３６、Ｒ３８及びＲ３９は、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基、又は置換若しくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２５、Ｒ２７、Ｒ３７、Ｒ４０、Ｒ４１及びＲ４２は、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基、又は置換若しくは無置換の複素環基を表す。Ｒ１３及びＲ１４は、置換又は無置換の複素環基を表す。また、これら置換アルキル基、置換シクロアルキル基、置換アルケニル基、置換シクロアルケニル基、置換アルキニル基、置換芳香族基、置換複素環基の置換基としては、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６におけるこれらの基の置換基と同様のものが挙げられる。
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で示される基は、それぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換の炭素数１～６の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基、置換若しくは無置換の炭素数３～８のシクロアルキル基、置換若しくは無置換の炭素数２～６の直鎖状若しくは分岐状アルケニル基、置換若しくは無置換の炭素数３～８のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換の炭素数２～６の直鎖状若しくは分岐状のアルキニル基、置換若しくは無置換の炭素数６～１４の単環式若しくは多環式芳香族基、又は環構成原子として窒素原子、酸素原子若しくは硫黄原子を少なくとも１つ含む置換若しくは無置換の３～８員環の複素環基であることが好ましい。その中でも、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で示される基は、各々独立して、水素原子又は炭素数１～６のアルキル基であるか、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のうち２つが連結して炭素数３～８のシクロアルキル基を形成するものであることが、原料の入手容易性の面から好ましい。特に、Ｒ１及びＲ２は、共に水素原子であるか、又は一方がメチル基であることが好ましい。
　式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲート、及び式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示される重要中間体であるアミン体において、Ｄは第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの、第１級又は第２級アミノ基が有する水素原子を除いた残基を表した構造であり、ＤＨは具体的には下記式（ＸＩＩＩ）で示される化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
　Ｒ４３及びＲ４４はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基、Ｒ４５Ｏ－基、Ｒ４６Ｓ－基又はＲ４７（Ｒ４８）Ｎ－基（ここで、Ｒ４５、Ｒ４６、Ｒ４７及びＲ４８は、それぞれ独立して、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換、無置換の複素環基、若しくはＲｘ（Ｒｙ）Ｎ基である）である。ここで、Ｒ４３及びＲ４４が同時に水素原子になることはない。また、Ｒ４３及びＲ４４は２つが単結合又は二重結合を形成して飽和又は不飽和の複素環を形成してもよく、その環は脂肪族環又は複素環とで縮合環又はスピロ環を形成することもでき、芳香族環とは縮合環を形成することもできる。ここでのアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族基又は複素環基は、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６での定義と同義である。また、ここでのＲｘ及びＲｙは前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６の置換基であるＲｘ（Ｒｙ）Ｎ基におけるＲｘ及びＲｙの定義と同義である。
　Ｒ４３及びＲ４４が結合して作られる飽和又は不飽和の複素環としては、例えばアジリジン、アゼチジン、ジアゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ホモピペリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、トリアゾリジン、テトラゾリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、オキサジアゾリジン、チアジアゾリジン、ピペラジン、ホモピペラジン、トリアゼパン、モルホリン、チオモルホリン、ピロリン、ピラゾリン、イミダゾリン、トリアゾリン、テトラゾリン、ジヒドロフラザン、テトラヒドロフラザン、ピペリデイン、トリアジナン、ジヒドロピリジン、ジヒドロピラジン、テトラヒドロピラジン、ジヒドロピリミジン、テトラヒドロピリミジン、パーヒドロピリミジン、ジヒドロピリダジン、テトラヒドロピリダジン、パーヒドロピリダジン、ジヒドロトリアジン、テトラヒドロトリアジン、テトラヒドロオキサジン、ジヒドロオキサジアジン、テトラヒドロオキサジアジン、テトラヒドロチアジン、ジヒドロチアジアジン、テトラヒドロチアジアジン、アゼピン、ジヒドロアゼピン、テトラヒドロアゼピン、ジアゼピン、ジヒドロジアゼピン、テトラヒドロジアゼピン、パーヒドロジアゼピン、オキサゼピン、ジヒドロオキサゼピン、テトラヒドロオキサゼピン、パーヒドロオキサゼピン、オキサジアゼピン、ジヒドロオキサジアゼピン、テトラヒドロオキサジアゼピン、パーヒドロオキサジアゼピン、チアゼピン、ジヒドロチアゼピン、テトラヒドロチアゼピン、パーヒドロチアゼピン、チアジアゼピン、ジヒドロチアジアゼピン、テトラヒドロチアジアゼピン、パーヒドロチアジアゼピン、トリアゼピン、ジヒドロトリアゼピン、テトラヒドロトリアゼピン、パーヒドロトリアゼピン、ジヒドロアゾシン、テトラヒドロアゾシン、オキソヒドロアゾシン、パーヒドロアゾシン、モルファン、アゼピンドール、インドリン、イソインドリン、ジヒドロインダゾール、パーヒドロインダゾール、ジヒドロベンゾイミダゾール、パーヒドロベンゾイミダゾール、ジヒドロベンゾオキサゾール、パーヒドロベンゾオキサゾール、ジヒドロベンゾチアゾール、パーヒドロベンゾチアゾール、ジヒドロキノリン、テトラヒドロキノリン、パーヒドロキノリン、ジヒドロイソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、パーヒドロイソキノリン、ジヒドロシンノリン、テトラヒドロシンノリン、パーヒドロシンノリン、ジヒドロキナゾリン、テトラヒドロキナゾリン、パーヒドロキナゾリン、ジヒドロフタラジン、テトラヒドロフタラジン、パーヒドロフタラジン、ジヒドロキノキサリン、テトラヒドロキノキサリン、パーヒドロキノキサリン、ジヒドロナフチリジン、テトラヒドロナフチリジン、パーヒドロナフチリジン、ベンゾアゼピン、ジヒドロベンゾアゼピン、テトラヒドロベンゾアゼピン、ベンゾジアゼピン、ジヒドロベンゾジアゼピン、テトラヒドロベンゾジアゼピン、ジヒドロベンゾオキサゼピン、テトラヒドロベンゾオキサゼピン、ジヒドロベンゾチアゼピン、テトラヒドロベンゾチアゼピン、ベンザゼピン、カルバゾール、ジヒドロカルバゾール、テトラヒドロカルバゾール、パーヒドロカルバゾール、β―カルボリン、ジヒドロβ―カルボリン、テトラヒドロβ―カルボリン、パーヒドロβ―カルボリン、ジヒドロアクリジン、ジヒドロフェナジン、フェノチアジン、フェノキサジン、フェナルサジン、ジヒドロフェナントリジン、ジヒドロペリミジン、プテリン、モルフィナン、ハスバナン等を挙げることができ、不飽和複素環の場合は少なくとも一部が水素化された複素環も含むものである。また、これらの構造が２つ以上、直接又はアルキレン基を介して結合した構造も採用することもでき、該複素環基は、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で示される複素環基と同じ定義であり、置換基を有することができる。
　上記アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族基、複素環基、Ｒ４５Ｏ－基、Ｒ４６Ｓ－基又はＲ４７（Ｒ４８）Ｎ－基並びにＲ４３、及びＲ４４が結合して形成した飽和又は不飽和の複素環が有し得る置換基は、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６におけるこれらの基の置換基と同様のものが挙げられる。
　また、Ｄは第１級又は第２級アミン化合物ＤＨ中のリンカーとの結合に用いられる窒素原子に結合している水素原子を除いた残基を表した構造である。第１級又は第２級アミン化合物ＤＨは生物活性を有する化合物であることが好ましい。生物活性を有する化合物として、例えば、医薬品、医薬部外品、医療機器、体外診断用医薬品、再生医療等製品、動物用医薬品、農薬、サプリメント等の有効成分を挙げることができる。遊離した第１級又は第２級アミン化合物ＤＨが生物活性を有し、かつ該化合物の第１級又は第２級アミノ基によってウレタン結合を形成しうるものであれば、化合物の構造に制限はなく、化合物として利用可能な公知の化合物を用いることができる。
　式（ＩＩＩ）又は（ＸＩ）で示されるアミン体は無機酸、有機酸と塩を形成してもよい。無機酸としては塩酸、硫酸、硝酸等が、有機酸としてはトリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸及びトリフルオロメタンスルホン酸等が挙げられる。無機酸又は有機酸との塩は、好ましくは、式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示されるアミン体の分子末端に存在するアミノ基と、無機酸又は有機酸とで塩を形成している。
　酸性多糖に由来する構造を与えるポリマーは、モノマー単位に少なくとも１つのカルボキシ基を有しており、式（ＩＶ）で表すことができる。
　　　Ｐｏｌｙ－ＣＯ２Ｈ　　　（ＩＶ）
　以下、Ｐｏｌｙの部分を「酸性多糖残基」ということがある。酸性多糖は１分子中に複数のカルボキシ基を有し、本発明のコンジュゲートにおいては式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示されるアミン体が複数縮合されていてもよい。
　例えば、本発明の一態様として、コンジュゲートは以下の式（ＸＸ）で表すこともでき、これは式（Ｉ）で示される化合物と等価である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
（式中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２及びＡは、先に定義したとおりであり、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
で示される部分は、酸性多糖のカルボキシ基に由来する基（－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ａ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（－Ｒ１）（－Ｒ２）ＯＣ（＝Ｏ）Ｄで表される基）及びカルボキシ基を除いたポリマー（ポリマー鎖）を表し、ｑはポリマーに縮合させた化合物（式（ＩＩＩ）で示されるアミン体）の数（すなわち、カルボキシ基に由来する基の数）を表し、ｒはカルボキシ基の数を表す）
　なお、上記式（ＸＸ）は、酸性多糖中に、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ａ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（－Ｒ１）（－Ｒ２）ＯＣ（＝Ｏ）Ｄで示される基、及び－ＣＯＯＨで表される基がそれぞれｑ個及びｒ個連続してブロック状に配列されていることのみを意味しているわけではない。－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ａ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（－Ｒ１）（－Ｒ２）Ｏ（＝Ｏ）Ｄで示される基、及び－ＣＯＯＨで示される基は、ポリマー鎖中に、ランダムに配列されていても、ブロック状又は交互に規則的に配列されていてもよいことを理解すべきである。
　また、本発明の別の一態様として、コンジュゲートは以下の式（ＸＸＸ）で表すこともでき、これは式（ＩＩ）で示される化合物と等価である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
（式（ＸＸＸ）中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｒ及びＰは先に定義したとおりであり、ｑは、ポリマーに縮合させた化合物（式（ＸＩＩ）で示されるアミン体）の数を表す。）
　ｑ及びｒの値は、酸性多糖に縮合させる化合物（式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示されるアミン体）の割合に応じて決定される。酸性多糖１分子鎖にどの程度、前記式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示されるアミン体を縮合させるかは、ＤＨで示される構造、酸性多糖の種類などに応じて、適宜変更、調整することができる。ＤＨで示される構造を有する化合物がどの程度導入されているかは、本明細書においては、「導入率」として示すことができる。導入率は、１Ｈ ＮＭＲによる積分比の計算、分光法による濃度の算出などの方法によって求めることができる。分光法として、例えば、紫外可視吸収分光法が挙げられる。本明細書においては、モル比の計算による導入率（モル％）、濃度計算による導入率（wt％）などをまとめて単に「導入率」ということができ、ｑ／（ｑ＋ｒ）×１００ で表される。モル比の計算（１Ｈ ＮＭＲによる積分比の計算）に基づく導入率は、特に限定されないが、１～８０モル％の範囲が例示できる。ここで、ｑ及びｒは、上記の導入率の範囲となるような値であることが好ましい。本発明のコンジュゲートを水溶液とした場合に、高い薬物濃度（第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの濃度）で濾過性を有するという観点から、導入率は２～７０％が好ましく、５～６０％がより好ましく、１０～５０％がさらに好ましい。
　酸性多糖において式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示されるアミン体と縮合せずに残った酸性多糖のカルボキシ基は遊離のカルボキシ基として存在していてもよく、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等の金属、又はトリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン等の有機塩基との塩を形成していてもよく、又はテトラブチルアンモニウムヒドロキシドを用いて塩を形成していてもよい。
　本発明のコンジュゲートは、水溶液としたときに高い濾過性を有することが好ましい。具体的には、水溶液中の第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの濃度が０．５（w/w）％であるとき、フィルター濾過率が５０重量％以上のものが好ましく、８０重量％以上のものがより好ましく、９０重量％以上のものが特に好ましい。
　このフィルター濾過率（重量％）は、後述の実施例の方法で測定でき、具体的には、孔径０．２２μｍのポリフッ化ビニリデン（PVDF）膜の遠心式フィルターユニットに、７０～９０ｍｇの本発明のコンジュゲートの水溶液を入れ、２５℃、１２０００Ｇで９０分間遠心した後、フィルター通過液を秤量し、フィルターユニットに入れた水溶液に対するフィルター通過液の重量比から算出できる。
　酸性多糖としては、例えば、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、ペクチン（ホモガラクツロナン及びラムガラクツロナン）、キサンタンガム、キシラン及びサクラン等の天然にも存在する多糖類、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルキチン、カルボキシメチルキトサン、カルボキシメチルデキストラン、カルボキシメチルアミロース、サクシニルキトサンが挙げられる。グリコサミノグリカンとして、例えば、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸が挙げられる。
　これら酸性多糖は各種方法によって、あらかじめ架橋又は化学修飾されていてもよく、第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートとした後に、更に架橋又は化学修飾される場合もある。また、これら酸性多糖は薬学的に許容される塩、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等の金属、又はトリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン等の有機塩基との塩を形成していてもよく、又はテトラブチルアンモニウムヒドロキシドを用いて塩を形成していてもよい。
　酸性多糖の分子量は、一般に扱われている製品が有する分子量であれば特に制限なく採用することができるが、コンジュゲートの用途、コンジュゲートに求められる性質に応じて、適宜調整することもできる。好ましい分子量の例としては、１０kDa以上が挙げられるが、これに限定されるものではない。
　Ｐｏｌｙとは、式（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）で示されるアミン体との縮合に利用される、カルボキシ基部分を除いた前記式（ＩＶ）で示される酸性多糖の部分構造を意味するものである。Ｐｏｌｙとしては、酸性多糖残基、グリコサミノグリカン残基、コンドロイチン残基、コンドロイチン硫酸残基及びヒアルロン酸残基を好ましい態様として例示することができる。これらはそれぞれ、化合物（ＩＩＩ）又は（ＸＩＩ）と縮合したカルボキシ基を除いた酸性多糖、グリコサミノグリカン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸の部分構造を意味するものである。
　酸性多糖をコンジュゲートの担体として用いた場合、後述の試験結果で示すようにポリマーを高分子量化しても尚、高い薬物濃度の医薬組成物が調製可能である。例えば、本発明のコンジュゲートを水溶液とした場合、水溶液中の第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの濃度が、０．３～３０ (w/w) ％であることが好ましく、０．５～２０ (w/w)％であることがより好ましい。
　このように本発明である、新規な第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートは、他のポリマーよりも高い安全性が期待できるものであり、且つポリマー分子量に大きな影響を受けずに薬効発現に必要な量の薬物導入を可能とする優れたコンジュゲートである。
　式（Ｉ）で示される第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートの製造例を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
（式中、Ｒａはベンジル基又はｔ－ブチル基を表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｄ、Ａ及びＰｏｌｙは、先に定義したとおりである。）
第１工程
　本工程は前記式（ＸＩＶ）で示される保護アミノ酸と前記式（ＸＶ）で示されるヨードメチルカーボネート体を反応させ、前記式（ＸＶＩ）で示されるp-ニトロフェニルエステル体を製造する工程である。本工程は前記式（ＸＩＶ）で示される保護アミノ酸のカルボン酸と金属酸化物或いは塩基を反応させ、カルボン酸塩とした後、前記式（ＸＶ）で示されるヨードメチルカーボネート体と反応させて実施することができ、又は、塩基存在下、前記式（ＸＩＶ）で示される保護アミノ酸と前記式（ＸＶＩ）で示されるヨードメチルカーボネート体とを反応させて実施することができる。
　塩を形成するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えばメタノール、エタノール、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、トルエン、キシレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン等の有機溶剤媒を用いることができる。金属酸化物としては、例えば酸化銀（Ｉ）、酸化水銀（ＩＩ）を用いることができ、また塩基としては炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等を用いることができる。反応温度としては、通常－３０℃～２００℃の範囲で、好ましくは－１５℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　エステル化を実施するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えばジメチルホルムアミド、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、トルエン、キシレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン等の有機溶剤媒を用いることができる。共存させる塩基としては、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、２，６－ルチジン、４－ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロウンデセン、１，８－ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン、金属ビス(トリメチルシリル)アミド、リチウムジイソプロピルアミド等を用いることができる。反応温度としては、通常－３０℃～２００℃の範囲で、好ましくは０℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　第２工程
　本工程は前記式（ＩＸ）で示される第１級又は第２級アミン化合物と前記式（ＸＶＩ）で示されるp-ニトロフェニルエステル体とを反応させて前記式（ＸＶＩＩ）で示されるエステル体を製造する工程である。本工程は、例えば前記式（ＩＸ）で示される第１級又は第２級アミン化合物が有機酸又は無機酸との塩を形成している場合は、必要に応じて塩基を添加することも可能である。本工程を実施するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えば塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン等の有機溶剤媒を用いることができ、必要に応じて水を添加して二相系あるいは混合溶媒とすることもできる。また塩基としては、例えばピリジン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、２，６－ルチジン、４－ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロウンデセン、1,8-ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン、金属ビス(トリメチルシリル)アミド、リチウムジイソプロピルアミド等を用いることができる。反応温度としては、通常－７８℃～２００℃の範囲で、好ましくは－２０℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　第３工程
　本工程は前記式（ＩＸ）で示される第１級又は第２級アミン化合物から前記式（ＸＩＸ）で示されるクロロアルキルエステル体を製造する工程である。本工程は塩基存在下、前記式（ＩＸ）で示される第１級又は第２級アミン化合物に前記式（ＸＶＩＩＩ）で示されるクロロギ酸クロロアルキルを反応させて実施することができる。
　本工程を実施するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えば塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン等の有機溶媒を用いることができ、必要に応じて水を添加して二相系あるいは混合溶媒とすることもできる。また塩基としては、例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、２，６－ルチジン、４－ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロウンデセン、１，８－ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン、金属ビス(トリメチルシリル)アミド、リチウムジイソプロピルアミド等を用いることができる。反応温度としては、通常－７８℃～２００℃の範囲で、好ましくは－２０℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　第４工程
　本工程は前記式（ＸＩＸ）で示されるクロロアルキルエステル体と前記式（ＸＩＶ）で示される保護アミノ酸とを反応させて前記式（ＸＶＩＩ）で示されるエステル体を製造する工程である。本工程は前記式（ＸＩＶ）で示される保護アミノ酸のカルボン酸と塩基を反応させ、カルボン酸塩とした後、前記式（ＸＩＸ）で示されるクロロアルキルエステル体と反応させて実施することができ、又は、塩基存在下、前記式（ＸＩＶ）で示される保護アミノ酸と前記式（ＸＩＸ）で示されるクロロアルキルエステル体と反応させて実施することができる。
　塩を形成するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えばメタノール、エタノール、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、トルエン、キシレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン等の有機溶媒を用いることができる。また塩基としては、例えば炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等を用いることができる。反応温度としては、通常－３０℃～２００℃の範囲で、好ましくは－１５℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　エステル化を実施するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えばジメチルホルムアミド、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、トルエン、キシレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン等の有機溶媒を用いることができる。共存させる塩基としては、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、２，６－ルチジン、４－ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロウンデセン、１，８－ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン、金属ビス(トリメチルシリル)アミド、リチウムジイソプロピルアミド等を用いることができる。反応温度としては、通常－３０℃～２００℃の範囲で、好ましくは０℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　第５工程
　本工程は前記式（ＸＶＩＩ）で示されるエステル体を脱保護して前記式（ＩＩＩ）で示されるアミン体を製造する工程である。
　本工程でＲａがベンジル基の場合、接触水素添加により脱保護して前記式（ＩＩＩ）で示されるアミン体を製造することができる。用いる金属触媒としては、例えば酸化白金やプラチナカーボン等の白金触媒、パラジウムカーボン、パラジウムブラック又は酸化パラジウム等のパラジウム触媒、ラネーニッケル等のニッケル触媒を用いることができる。本工程を実施するにあたっては、溶媒中で行うことが好ましく、例えばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、水等を用いることができる。反応温度としては、通常－５０℃～２００℃の範囲で、好ましくは１０℃～１００℃の範囲内で進行させることができる。
　本工程でＲａがｔ－ブチル基の場合、酸を用いて脱保護して前記式（ＩＩＩ）で示されるアミン体を製造することができる。酸としては、例えば塩化水素、塩酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等を用いることができる。本工程で得られる前記式（ＩＩＩ）で示されるアミン体はこれらの酸との塩を形成して製造されるものである。本工程は無溶媒又は溶媒中で反応を進行させることができ、溶媒としては例えば、酢酸エチル、ジオキサン、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、ジエチルエーテル、水等を用いることができる。反応温度としては、通常－５０℃～２００℃の範囲で、好ましくは０℃～８０℃の範囲内で進行させることができる。
　第６工程
　本工程は前記式（III）で示されるアミン体と前記式（ＩＶ）で示される酸性多糖とを縮合して前記式（Ｉ）で示される第１級又は第２級アミン化合物－酸性多糖コンジュゲートを製造する工程である。本工程で用いられる前記式（ＩＶ）で示されるカルボキシ基を有するポリマーは、あらかじめ金属や有機塩基との塩を形成しているものを用いてもよい。縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ又はＷＳＣ）、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、フルオロ－テトラメチルホルムアミジウムヘキサフルオロフォスフェート（ＴＦＦＨ）、フルオロ－ビス（テトラメチレン）ホルムアミジウム）ヘキサフルオロフォスフェート（ＢＴＦＦＨ）等を用いることができる。また、酸性多糖のカルボキシ基がＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル又はｐ－ニトロフェニルエステル等の活性エステルに誘導体化された場合、縮合剤の添加は必要なく、式（ＩＩＩ）で示されるアミン体との混合のみ、又は必要に応じて塩基を添加することで縮合することも可能である。
　本工程は溶媒中で行うことが好ましく、例えば塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、トルエン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、ホルムアミド、Ｎ－メチルピロリドン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、エチレンクリコール等の有機溶媒又は水を用いることができる。また、これら有機溶媒と水との任意の割合での混合溶媒を使用することもできる。
　本発明は、以下の各項で特定される発明に関する。
１．　式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
［式（Ｉ）中、Ｄは第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの、第１級又は第２級アミノ基が有する水素原子を除いた残基を表し；Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基であり；Ａは置換又は無置換の２価の炭化水素基であって－Ｃ（＝Ｏ）－又は－ＮＨ－と結合する両端以外に１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、当該ヘテロ原子はそれぞれ独立して－Ｏ－、置換基を有していてもよい－ＮＨ－及び－Ｓ－からなる群より選択され；Ｒ１、Ｒ２及びＡのうち任意の２つ又は３つの基が一体となって環を形成することもでき；Ｐｏｌｙは酸性多糖残基を表し、Ｐｏｌｙに隣接する－Ｃ（＝Ｏ）－は前記酸性多糖のカルボキシ基に由来する］。
２．前記式（Ｉ）が下記式（ＩＩ）で示される、前記１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
［式中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２及びＰｏｌｙは前記１に定義されるとおりであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ任意の２つ又は３つの基が一体となって環を形成することもでき、ｌ及びｎはそれぞれ独立して０、１又は２であり、ｍは０又は１である］。
３．式（Ｉ）又は式（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が、それぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換の炭素数１～６の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基、置換若しくは無置換の炭素数３～８のシクロアルキル基、置換若しくは無置換の炭素数２～６の直鎖状若しくは分岐状アルケニル基、置換若しくは無置換の炭素数３～８のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換の炭素数２～６の直鎖状若しくは分岐状のアルキニル基、置換若しくは無置換の炭素数６～１４の単環式若しくは多環式芳香族基、又は環構成原子として窒素原子、酸素原子若しくは硫黄原子を少なくとも１つ含む置換若しくは無置換の３～８員環の複素環基であることを特徴とする、前記１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
４．式（Ｉ）又は式（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で表される基におけるアルキルの置換基、シクロアルキル基の置換基、アルケニル基の置換基、シクロアルケニルル基の置換基、アルキニル基の置換基、芳香族基の置換基及び複素環基の置換基が、水酸基、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、ハロゲン原子、芳香族基、複素環基、アルコキシ基、グアニジノ基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アシル基、置換スルホニル基、ヘテロシクリルオキシ基、ヘテロシクリルチオ基、アミド基、ウレイド基、カルボキシ基、カルバモイル基、オキソ基、チオキソ基、スルファモイル基、スルホ基、シアノ基、ニトロ基、アシルオキシ基、アジド基、スルホンアミド基、メルカプト基、アルコキシカルボニルアミノ基、アミノカルボニルオキシ基、置換スルフィニル基、スルファミド基、アミノスルホニルオキシ基、アルコキシスルホニルアミノ基、置換スルホニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルコキシカルボニルオキシ基、アルコキシスルホニル基、Ｒｘ（Ｒｙ）Ｎ基及びＲｘ（Ｒｙ）（Ｒｚ）Ｎ＋基（ここで、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚはそれぞれ独立して水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族炭化水素基又は複素環基を表す。また、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚが結合して飽和若しくは不飽和の複素環を形成してもよく、その環は脂肪族環又は複素環とで縮合環或いはスピロ環を形成することもでき、芳香族環とは縮合環を形成することもできる）から選ばれる基であることを特徴とする、前記１～３のいずれか１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
５．式（Ｉ）又は（ＩＩ）中、Ｐｏｌｙがグリコサミノグリカン残基である、前記１～４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
６．式（Ｉ）又は（ＩＩ）中、Ｐｏｌｙがコンドロイチン、コンドロイチン硫酸又はヒアルロン酸残基である、前記１～４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
７．下記式（ＸＸ）で示される前記１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
［式（ＸＸ）中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２及びＡは、前記１に定義したとおりであり、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
で示される部分は、酸性多糖のカルボキシ基に由来する基及びカルボキシ基を除いたポリマーを表し；ｑは前記ポリマーに縮合させた化合物の数を表し；ｒはカルボキシ基の数を表す。］。
８．前記式（ＸＸ）で示される化合物が下記式（ＸＸＸ）で示される化合物である、前記７に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
［式（ＸＸＸ）中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２は前記１に定義されるとおりであり、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は前記２に定義されるとおりであり、ｑ及びｒは前記７に記載されるとおりであり、　
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
で示される部分は、カルボキシ基に由来する基及びカルボキシ基を除いたポリマーを表す。］。
９．下記式（ＩＩＩ）で示される化合物と下記式（ＩＶ）で示される酸性多糖とを縮合する工程を含む、下記式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩の製造方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
［式（Ｉ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）におけるＤ、Ａ、Ｒ１、Ｒ２及びＰｏｌｙは、前記１に定義されるとおりであり、また（ＩＩＩ）で示される化合物は無機酸又は有機酸との塩を形成していてもよい。）
１０．第１級又は第２級アミン化合物と、酸性多糖とを下記式（Ｖ）で示されるリンカーを介して結合される工程を含む、コンジュゲートの製造方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
（ここで、上記の（Ｖ）におけるＲ１、Ｒ２及びＡは、前記１に定義されるとおりであり、記号†は、第１級又は第２級アミン化合物のアミノ基の窒素原子との結合点を表し、記号‡は、酸性多糖に由来するカルボニル炭素との結合点を意味する。）
１１．前記リンカーが下記式（ＶＩ）で表される、前記１０に記載のコンジュゲートの製造方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
（ここで、上記（ＶＩ）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｌ、ｍ及びｎは前記２に定義されるとおりであり、記号†及び‡は前記８に定義されるとおりである。）
　以下に、参考例、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら具体例に限定されるものではない。
参考例１
２－［［３－［［（エチレフリン－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ］－２－オキソエチル－メトキシポリエチレングリコール（２０,０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
メトキシポリエチレングリコール（２０,０００）酢酸　N－ヒドロキシスクシンイミド　エステル551 mg(0.03 mmol)及びトリエチルアミン28 mg(0.28 mmol)をアセトニトリル1.5 mLに溶解した。ここへＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩100 mg(0.3 mmol)のアセトニトリル／ジオキサン(1/1)混合溶液を加え、室温にて一晩攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残渣にアセトニトリル2 mLを加えて溶解した。溶液を攪拌しながら白濁するまでイソプロピルアルコールをゆっくりと滴下した。懸濁液をイソプロピルアルコール25 mLに撹拌しながら滴下し、析出した沈殿をろ取した。フィルター上の沈殿物をイソプロピルアルコールで２回、ジエチルエーテルで１回洗浄した。室温下、真空ポンプで一晩乾燥して標記化合物507.2 mgを得た。1H-NMRの積分値より、エチレフリンの導入率は68.6％であった。
実施例１
炭酸　クロロメチル　４－ニトロフェニル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
　氷冷下、p-ニトロフェノール5.6 g(40.3 mmol)及びピリジン3.2 g(40.3 mmol)の酢酸エチル溶液にクロロギ酸クロロメチル5.7 g(44.3 mmol)の酢酸エチル溶液を加え、同温度で30分、室温で2時間撹拌した。反応液に水を加えて撹拌後、有機層を分取した。有機層を10％硫酸水素カリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去して標記化合物8.6 g(83％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 5.85(2H, s), 7.43(2H, d, J=9Hz), 8.31(2H, d, J=9Hz)
実施例２
炭酸　ヨードメチル　４－ニトロフェニル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
　ヨウ化ナトリウム11.07 g(73.9 mmol)、炭酸　クロロメチル　４－ニトロフェニル　エステル8.55 g(36.9 mmol)のアセトン懸濁液を40℃で一晩撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、ジエチルエーテルを加えて撹拌した。不溶物を濾過して除き、有機層を水、10％チオ硫酸ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去して標記化合物8.78 g(74％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 6.07(2H, s), 7.42(2H, d, J=9Hz), 8.30(2H, d, J=9Hz)
実施例３
炭酸　１－クロロエチル　４－ニトロフェニル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
　氷冷下、p-ニトロフェノール5.6 g(40.3 mmol)及びピリジン3.2 g(40.3 mmol)の酢酸エチル溶液にクロロギ酸1-クロロエチル6.3 g(44.3 mmol)の酢酸エチル溶液を加え、同温度で30分、室温で2時間撹拌した。反応液に水を加えて撹拌後、有機層を分取した。有機層を10％チオ硫酸ナトリウム水溶液、1 M水酸化ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去して標記化合物7.5 g(76％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.93(3H, d, J=6Hz), 6.51(1H, q, J=6Hz), 7.43(2H, d, J=9Hz), 8.30(2H, d, J=9Hz)
実施例４
炭酸　１－ヨードエチル　４－ニトロフェニル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
　ヨウ化ナトリウム6.10 g(40.7 mmol)、炭酸　１－クロロエチル　４－ニトロフェニル　エステル5.00 g(20.4 mmol)のアセトン懸濁液を40℃で一晩撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、ジエチルエーテルを加えて、有機層を水、10％チオ硫酸ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％～40％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製し、標記化合物と出発物質、炭酸　１－クロロエチル　４－ニトロフェニル　エステルとの混合物(mol比 2:3)3.00 g(21％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 2.33(3H, d, J=6Hz), 6.84(1H, q, J=6Hz), 7.43(2H, d, J=9Hz), 8.30(2H, d, J=9Hz)
実施例５
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン　［［（４－ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン4.73 g(25.0 mmol)のアセトニトリル60 mL溶液に酸化銀（Ｉ）3.48 g(15.0 mmol)を加えた。アルゴン気流下、混合液に水30 mLを加え、70℃で1時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、ろ液を減圧下にて濃縮した。残留物を真空ポンプにて一晩乾燥し、Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン銀塩7.77 gを得た。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン銀塩2.96 g(10.0 mmol)の乾燥トルエン懸濁液に炭酸　ヨードメチル　４－ニトロフェニル　エステル1.62 g(5.0 mmol)の乾燥トルエン溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に酢酸エチルを加えて不溶物を濾過して除き、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％～40％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物276 mg(14％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.44(9 H, s), 2.66(2 H, t, J=6 Hz), 3.39-3.50(2 H, m), 4.96(1 H, br s), 5.90(2 H, s), 7.42 (2 H, d, J=9 Hz), 8.30(2 H, d, J=9 Hz)
実施例６
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン　１－［［（４－ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン4.73 g(25.0 mmol)のアセトニトリル60 mL溶液に酸化銀（Ｉ）3.48 g(15.0 mmol)を加えた。アルゴン気流下、混合液に水30 mLを加え、70℃で1時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、ろ液を減圧下にて濃縮した。残留物を真空ポンプにて一晩乾燥し、Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン銀塩7.77 gを得た。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン銀塩2.52 g(8.5 mmol)の乾燥トルエン懸濁液に炭酸　１－ヨードエチル　４－ニトロフェニル　エステルと炭酸　１－クロロエチル　４－ニトロフェニル　エステルの混合物(mol比 2:3)1.50 g(2.1 mmol)の乾燥トルエン溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に酢酸エチルを加えて不溶物を濾過して除き、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％～40％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物116 mg(14％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.43(9 H, s), 1.63(3 H, d, J=5 Hz), 2.61(2 H, t, J=6 Hz), 3.36-3.48(2 H, m), 4.95(1 H, br s), 6.86(1 H, q, J=5 Hz), 7.41(2 H, d, J=9 Hz), 8.29(2 H, d, J=9 Hz)
実施例７
N－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
エチレフリン塩酸塩1000 mg(4.6 mmol)及び炭酸水素ナトリウム1158 mg(13.8 mmol)の酢酸エチル-水(5 mL:2.5 mL)混合溶液に、氷冷下クロロギ酸クロロメチル652 mg(5.1 mmol)の酢酸エチル溶液を滴下し、室温で3時間30分攪拌した。水層を除去し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(12％～100％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物575 mg(2.1 mmol)(46％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.05-1.16(3H, m), 3.20-3.33(2H, m), 3.35-3.56(2H, m), 4.85-4.99(1H, m), 5.06-5.14(1H, m), 5.75-5.87(2H, m), 6.74-6.81(1H, m), 6.82-6.98(2H, m), 7.22(1H, br t, J=8 Hz)
実施例８
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　［３－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン4730 mg(25.0 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム4073 mg(12.5 mmol)を加えて室温で30分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニンセシウム塩から674 mg(2.1 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。ここへＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル575 mg(2.1 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水で洗浄した後、再度水層をジエチルエーテルにて抽出した。得られた有機層を合わせ飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(33％～60％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物640 mg(1.5 mmol)(71％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.02(2H, br t, J=7 Hz), 1.12(1H, br t, J=7 Hz), 1.44(9H, br s), 2.61(2H, t, J=7Hz), 3.05-3.26(1H, m), 3.27-3.47(4H, m), 3.52(1H, br s), 4.74-4.84(1/2H, m), 4.92-4.98(1/2H, m), 5.02(1H, br s), 5.72-5.85(2H, m),  6.73-6.82(1H, m), 6.83-6.94(2H, m), 7.21(1H, br t, J=8 Hz)
実施例９
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　［３－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル640 mg (1.5 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液3 mLを加えて4時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残渣にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取し、エタノールに溶解した。減圧下、溶媒を留去して標記化合物507 mg(1.4 mmol)(93％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.97-1.05(3H, m), 2.73-2.80(2H, m), 3.04(2H, t, J=7 Hz), 3.13-3.31(4H, m), 4.57-4.70(1H, m), 5.39-5.46(1H, m), 5.68(1H, s), 5.74(1H, s), 6.62-6.70 (1H, m), 6.70-6.80(2H, m), 7.12(1H, t, J=8 Hz), 8.00 (3 H, br s), 9.35 (1 H, s) 
実施例１０
［３－［［（エチレフリン－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.4 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液にＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩42 mg(0.1 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)54 mg(0.1 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 4 mL）。反応液を90％エタノール8mLに撹拌しながら滴下し、混合液にエタノール12 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物211 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのエチレフリンの導入率は22％であった。
実施例１１
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－クロロ－２－メチルプロピル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
エチレフリン塩酸塩1000 mg(4.6 mmol)及び炭酸水素ナトリウム1158 mg(13.8 mmol)の酢酸エチル-水(5 mL:10 mL)混合溶液に、氷冷下クロロギ酸１－クロロ－２－メチルプロピル943 mg(5.5 mmol)の酢酸エチル溶液を滴下し、室温で一晩攪拌した。氷冷下、再度クロロギ酸１－クロロ－２－メチルプロピル351 mg(2.1 mmol)の酢酸エチル溶液を滴下し、室温で一晩攪拌した。水層を除去し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(1％～12％メタノール／クロロホルム)にて精製し、真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物409 mg(1.3 mmol)(28％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.01-1.17 (9 H, m), 2.08-2.27(1H, m), 3.12-3.57(4H, m), 4.85-5.00 (1H, m), 6.33-6.44(1H, m), 6.72-6.83(1H, m), 6.84-6.96(2H, m), 7.22(1 H, br t, J=8 Hz)
実施例１２
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチル－１－オキソプロポキシ］－２－メチルプロピル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸509 mg(2.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム408 mg(1.3 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸セシウム塩から416 mg(1.3 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－クロロ－２－メチルプロピル　エステル409 mg(1.3 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液にＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－クロロ－２－メチルプロピル　エステル160 mg(0.5 mmol)をさらに加え、三晩攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えジエチルエーテルにて抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％～40％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製し、真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物109 mg(0.23 mmol)(18％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.92-1.13(9H, m), 1.16(3H, t, J=7 Hz), 1.42(9H, br s), 1.88-2.13(2H, m), 2.72(1H, br s), 2.87-3.48(5H, m), 3.48-3.64(1H, m), 4.75-4.97(1H, m), 5.05-5.25(1H, m), 6.52-6.65(1H, m), 6.72-7.02(3H, m), 7.12-7.23(1H, m)
実施例１３
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－（３－アミノ－２－メチル－１－オキソプロポキシ）－２－メチルプロピル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
Ｎ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチル－１－オキソプロポキシ］－２－メチルプロピル　エステル47 mg (0.1 mmol)の塩化メチレン溶液にトリフルオロ酢酸0.2 mLをゆっくりと加えて2時間30分静置した。減圧下溶媒を留去した後、残渣にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物25 mg (50％)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 0.91-1.06(9H, m), 1.11-1.19(3H, m), 1.97-2.08(1H, m), 2.76-2.83(1H, m), 2.83-2.92(1H, m), 3.01-3.30(5H, m), 4.57-4.67(1H, m), 5.33-5.48(1H, m), 6.45(1/5H, d, J=4 Hz), 6.48 (4/5 H, d, J=4 Hz), 6.61-6.85(3H, m), 7.02-7.18(1H, m), 7.79(3H, br s), 9.22-9.39(1H, m)
実施例１４
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　クロロメチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
トロキシピド1500 mg(5.1 mmol)及びトリエチルアミン619 mg(6.1 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下クロロギ酸クロロメチル789 mg(6.1 mmol)の塩化メチレン溶液を加え、室温にて一晩攪拌した。反応液を減圧下に濃縮後、酢酸エチルを加えて水、10％硫酸水素カリウム水溶液及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(25％ 酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物1824 mg(4.7 mmol)(92％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.55-1.84(3H, m), 1.85-2.10(1H, m), 3.29-3.79(4H, m), 3.88(3H, s), 3.91(6H, s), 4.10-4.29(1H, m), 5.61-5.75(1H, m), 5.81-6.11(3/2H, m), 6.39(1/2H, br s), 6.89-7.06(2H, m)
実施例１５
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－クロロエチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
トロキシピド1500 mg(5.1 mmol)及びトリエチルアミン619 mg(6.1 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下クロロギ酸１－クロロエチル874 mg(6.1 mmol)の塩化メチレン溶液を加え、室温にて一晩攪拌した。反応液を減圧下に濃縮後、酢酸エチルを加えて水、10％硫酸水素カリウム水溶液及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(1％～10％ メタノール／クロロホルム)にて精製して標記化合物1146 mg(2.9 mmol)(56％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.64-2.13(7H, m), 3.14-3.31(1H, m), 3.36-3.66(2H, m), 3.81-3.97(10H, m), 4.10-4.30(1H, m), 5.88-6.14(1/2H, m), 6.46-6.71(3/2H, m), 6.90-7.10(2H, m)
実施例１６
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン4730 mg(25.0 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム4073 mg(12.5 mmol)を加えて室温で30分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニンセシウム塩から643 mg(2.0 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。ここへ３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　クロロメチル　エステル775 mg(2.0 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水で洗浄した後、再度水層をジエチルエーテルにて逆抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(33％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物763 mg(1.4 mmol)(71％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.42(9H, s), 1.56-1.84(2H, m), 1.86-2.10(2H, m), 2.54(2H, br s), 3.15-3.45(4H, m), 3.55-3.79(2H, m), 3.88-3.93(9H, m), 4.05-4.27(1H, m), 4.93(1/2H, br s), 5.10(1/2H, br s), 5.69-6.00(5/2H, m), 6.37(1/2H, br s), 6.90-7.05(2H, m)
実施例１７
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］アセチル］オキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－グリシン2190 mg(12.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム2037 mg(6.3 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－グリシンセシウム塩から159 mg(0.5 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。ここへ３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　クロロメチル　エステル200 mg(0.5 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えジエチルエーテルにて抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％～80％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物113 mg(0.2 mmol)(40％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.43(9H, s), 1.56-1.84(2H, m), 1.86-2.09(2H, m), 3.14-3.43(2H, m), 3.52-3.80(2H, m), 3.84-3.97(11H, m), 4.04-4.27(1H, m), 4.88-5.15(1H, m), 5.70-6.01(5/2H, m), 6.37(1/2 H, br s), 6.90-7.06(2H, m)
実施例１８
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン4730 mg(25.0 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム4073 mg(12.5 mmol)を加えて室温で30分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニンセシウム塩から481 mg(1.5 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。ここへ３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－クロロエチル　エステル600 mg(1.5 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えジエチルエーテルにて抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30％～80％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物231 mg(0.4 mmol)(28％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.37-1.46(9H, m), 1.51(3H, d, J=5 Hz), 1.57-2.13(4H, m), 2.28-2.62(2H, m), 3.06-3.83(6H, m), 3.87-3.93(9H, m), 4.16(1H, br s), 4.87-5.20(1H, m), 6.10(1/2H, br s), 6.44(1/2H, br s), 6.79(1H, br s), 7.01(2H, s)
実施例１９
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］アセチル］オキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－グリシン2190 mg(12.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム2037 mg(6.3 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－グリシンセシウム塩から238 mg(0.8 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。ここへ３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－クロロエチル　エステル300 mg(0.8 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えジエチルエーテルにて抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去して標記化合物213 mg(0.4 mmol)(51％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.43(9H, br s), 1.52(3H, d, J=5 Hz), 1.57-2.08(4 H, m), 3.26-3.73(4H, m), 3.75-3.99(11H, m), 4.09-4.21(1H, m), 4.80-5.02(1H, m), 6.06(1/2H, br s), 6.35 (1/2H, br s), 6.79-6.90(1H, m), 7.00(2H, s)
実施例２０
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［［［３－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル763 mg (1.4 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液2 mLを加えて3時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残渣にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物703 mg(定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.39-1.53(1H, m), 1.54-1.67(1H, m), 1.73-1.85(1H, m), 1.89-1.99(1H, m), 2.75(2H, br t, J=7 Hz), 2.79-2.93(2H, m), 3.04(2H, t, J=7 Hz), 3.71(3H, s), 3.77-3.94(8H, m), 3.96-4.12(1H, m), 5.74(2H, s), 7.18(2H, s), 7.88(3H, br s), 8.30(1H, br s)
実施例２１
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（２－アミノアセチル）オキシ］メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］アセチル］オキシ］メチル　エステル113 mg (0.2 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液0.75 mLを加えて3時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残渣にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物88 mg (91％)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.40-1.53(1H, m), 1.54-1.66(1H, m), 1.74-1.85(1H, m), 1.90-1.98(1H, m), 2.71-2.94(2H, m), 3.71(3H, s), 3.79-3.95(10H, m), 3.97-4.12(1H, m), 5.83(2H, br s), 7.18(2H, s), 8.11(3H, br s), 8.25-8.36(1H, m)
実施例２２
［３－［［(トロキシピド－カルボニル)オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.39 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩37 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)36 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 4 mL)。反応液を90％エタノール8 mLに撹拌しながら滴下し、混合液にエタノール12 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物205 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は19％であった。
実施例２３
［２－［［(トロキシピド－カルボニル)オキシ］メトキシ］－２－オキソエチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.39 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（２－アミノアセチル）オキシ］メチル　エステル　塩酸塩36 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)36 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 4 mL)。反応液を90％エタノール8 mLに撹拌しながら滴下し、混合液にエタノール12 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物211 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は27％であった。
実施例２４
　Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　クロロメチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
メトキシフェナミン1500 mg(7.0 mmol)及びピリジン1210 mg(15.3 mmol)の酢酸エチル溶液に、氷冷下クロロギ酸クロロメチル986 mg(7.7 mmol)の酢酸エチル溶液を加え、室温にて3時間攪拌した。反応液を減圧下に濃縮後、酢酸エチルを加えて10％硫酸水素カリウム水溶液及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30％～80％ 酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物654 mg(2.4 mmol)(35％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.17(3H, d, J=7 Hz), 2.73-2.86(5H, m), 3.83(3H, s), 4.40-4.51(1/2H, m), 4.51-4.60(1/2H, m), 5.53-5.66(1H, m), 5.66-5.74(1H, m), 6.80-6.90(2H, m), 7.02-7.12(1H, m), 7.15-7.21(1H, m)
実施例２５
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－クロロエチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
メトキシフェナミン1500 mg(7.0 mmol)及びピリジン1210 mg(15.3 mmol)の酢酸エチル溶液に、氷冷下クロロギ酸１－クロロエチル1094 mg(7.7 mmol)の酢酸エチル溶液を加え、室温にて3時間攪拌した。反応液を減圧下に濃縮後、酢酸エチルを加えて10％硫酸水素カリウム水溶液及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(30％～80％ 酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物1215 mg(4.3 mmol)(61％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.13-1.22(3H, m), 1.52-1.57(1H, m), 1.73-1.79(2H, m), 2.70-2.86(5H, m), 3.79-3.87(3H, m), 4.42-4.51(1/2H, m), 4.51-4.59(1/2H, m), 6.37(1/3H, q, J=6 Hz), 6.47-6.57(2/3H, m), 6.80-6.88(2H, m), 7.00-7.13(1H, m), 7.14-7.22(1H, m)
実施例２６
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　［５－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソペントキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
５－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ペンタン酸2716.0 mg(12.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム2036.5 mg(6.3 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた５－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ペンタン酸セシウム塩から841 mg(2.4 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　クロロメチル　エステル654 mg(2.4 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水で洗浄した後、再度水層をジエチルエーテルにて逆抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物1002 mg(2.2 mmol)(92％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.15(3H, d, J=7 Hz), 1.42-1.46(9H, m), 1.46-1.56(2H, m), 1.57-1.68(2H, m), 2.29-2.38(2H, m), 2.71-2.83(5H, m), 3.05-3.15(2H, m), 3.83(3H, s), 4.41-4.51(1/2H, m), 4.51-4.64(3/2H, m), 5.50-5.63(1H, m), 5.66-5.75(1H, m), 6.80-6.87(2H, m), 7.00-7.12(1H, m), 7.14-7.21(1H, m)
実施例２７
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［４－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソブトキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
４－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ブタン酸2540 mg(12.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム2037 mg(6.3 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた４－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ブタン酸セシウム塩から352 mg(1.1 mmol)採取し、Ｎ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－クロロエチル　エステル300 mg(1.1 mmol)のＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水で洗浄した後、再度水層をジエチルエーテルにて逆抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(13％～80％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製し、真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物282 mg(0.6 mmol)(59％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.10-1.24(4H, m), 1.37-1.49(11H, m), 1.72-1.83(2H, m), 2.23-2.38(2H, m), 2.71-2.81(5H, m), 3.08-3.19(2H, m), 3.82(2H, s), 3.84(1H, s), 4.39-4.58(1H, m), 4.69(1H, br s), 6.56(1/3H, q, J=5 Hz), 6.69-6.76(2/3H, m), 6.81-6.88(2H, m), 7.00-7.13(1H, m), 7.18(1H, td, J=8, 2 Hz)
実施例２８
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　（５－アミノ－１－オキソペントキシ）メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　［５－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソペントキシ］メチル　エステル270 mg (0.6 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液1.5 mLを加えて3時間静置した。減圧下、溶媒を留去して標記化合物233 mg (定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.05-1.14(3H, m), 1.48-1.63(4H, m), 2.24-2.41(2H, m), 2.64-2.74(5H, m), 2.74-2.83(2H, m), 3.76-3.81(3H, m), 4.32-4.45(1H, m), 5.39-5.53(1H, m), 5.56-5.62(1H, m), 6.80-6.86(1H, m), 6.90-6.96(1H, m), 7.02-7.09(1H, m), 7.18(1H, td, J=8, 2 Hz), 7.84(3H, br s)
実施例２９
［５－［［(メトキシフェナミン－カルボニル)オキシ］メトキシ］－５－オキソペンチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.39 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液にＮ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　（５－アミノ－１－オキソペントキシ）メチル　エステル　塩酸塩30 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)36 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 4 mL)。反応液を90％エタノール8 mLに撹拌しながら滴下し、混合液にエタノール12 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物170 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのメトキシフェナミンの導入率は8％であった。
実施例３０
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－（４－アミノ－１－オキソブトキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［４－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソブトキシ］エチル　エステル282 mg (0.6 mmol)の塩化メチレン溶液にトリフルオロ酢酸0.5 mLをゆっくりと加えて2時間静置した。減圧下、溶媒を留去して標記化合物331 mg (定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.04-1.15(4H, m), 1.31(1H, d, J=5 Hz), 1.38(1H, d, J=5 Hz), 1.71-1.79(2H, m), 2.27-2.46(2H, m), 2.64-2.73(5H, m), 2.75-2.85(2H, m), 3.75-3.82(3H, m), 4.32-4.42(1H, m), 6.37(1/3H, q, J=5 Hz), 6.51-6.64(2/3H, m), 6.82-6.87(1H, m), 6.91-6.98(1H, m), 7.00-7.11(1H, m), 7.14-7.21(1H, m), 7.70(3H, br s)
実施例３１
［４－［１－［(メトキシフェナミン－カルボニル)オキシ］エトキシ］－４－オキソブチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.39 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液にＮ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－N－メチルカルバミン酸　１－（４－アミノ－１－オキソブトキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩41 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）36 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加えた後、反応液を90％エタノール12 mLに撹拌しながら滴下し、混合液にエタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物200 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのメトキシフェナミンの導入率は5％であった。
参考例２
２－［［３－オキソ－３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］プロピル］アミノ］－２－オキソエチル－メトキシポリエチレングリール（２０,０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
メトキシポリエチレングリール（２０,０００）酢酸　N－ヒドロキシスクシンイミド　エステル294 mg(0.02 mmol)およびトリエチルアミン15 mg(0.15 mmol)のアセトニトリル溶液に、３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩35 mg(0.07 mmol)のアセトニトリル／ジオキサン(1/1)混合溶液を加え、室温にて一晩攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残渣にアセトニトリル1 mLを加えて溶解した。溶液を攪拌しながら白濁するまでイソプロピルアルコールをゆっくりと滴下した。懸濁液をイソプロピルアルコール12 mLに撹拌しながら滴下し、析出した沈殿をろ取した。フィルター上の沈殿物をイソプロピルアルコールで２回、ジエチルエーテルで１回洗浄した。室温下、真空ポンプで一晩乾燥して標記化合物285 mgを得た。1H-NMRの積分値より、トロキシピドの導入率は49.4％であった。
実施例３２
６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸　銀塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸2.32 g(10.0 mmol)のアセトニトリル20 mL溶液に酸化銀（Ｉ）1.39 g(6.0 mmol)を加えた。アルゴン気流下、混合液に水10 mLを加え、70℃で1時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、ろ液を減圧下にて濃縮した。残留物を真空ポンプにて一晩乾燥し、標記化合物2.73 g(8.1 mmol)(81%)を得た。
実施例３３
６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸　１－［［（４－ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
ヨウ化ナトリウム7.12 g(47.5 mmol)、炭酸　１－クロロエチル　４－ニトロフェニル　エステル 2.33 g(9.49 mmol)のアセトン懸濁液を40℃で一晩撹拌した。反応液を濾過後、ろ液を減圧下に濃縮し、トルエンを加えて再び濾過した。ろ液を濃縮後、６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸　銀塩2.73 g(8.1 mmol)の乾燥トルエン懸濁液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に酢酸エチルを加えて不溶物を濾過して除き、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％～30％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物700 mg(1.6 mmol)(17%)を得た。
1H NMR (CDCl3, δ): 1.31 - 1.41 (2 H, m), 1.44 (9 H, s), 1.46 - 1.53 (2 H, m), 1.61 (3 H, d, J=5 Hz), 1.67 (2 H, quin, J=8 Hz), 2.38 (2 H, t, J=8 Hz), 3.05 - 3.17 (2 H, m), 4.51 (1 H, br s), 6.84 (1 H, q, J=5 Hz), 7.41 (2 H, d, J=10 Hz), 8.29 (2 H, d, J=9 Hz)
実施例３４
［３－［１－［（エチレフリン－カルボニル）オキシ］－２－メチルプロポキシ］－３－オキソ－２－メチルプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
コンドロイチン硫酸ナトリウム100 mg(0.2 mmol)を水2 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール2 mLを滴下した。混合液にＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　１－（３－アミノ－２－メチル－１－オキソプロポキシ）－２－メチルプロピル　エステル　トリフルオロ酢酸塩19 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)18 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液50 μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 2 mL）。反応液を90％エタノール10 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール15 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物89 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのエチレフリンの導入率は17％であった。
実施例３５
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］エチル　エステル74 mg (0.1 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.1 mLをゆっくりと加えて、室温で8時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物58 mg (79％)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.36 - 1.52 (4 H, m), 1.54 - 1.68 (1 H, m), 1.73 - 1.85 (1 H, m), 1.88 - 1.99 (1 H, m), 2.62 - 2.96 (4 H, m), 2.96 - 3.27 (2 H, m), 3.72 (3 H, s), 3.76 - 3.94 (8 H, m), 3.99 - 4.07 (1 H, m), 6.66 - 6.76 (1 H, m), 7.16 (2 H, s), 7.73 (3 H, br s), 8.12 (1 H, br d, J=7 Hz)
実施例３６
［３－オキソ－３－［１－［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］エトキシ］プロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩34 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 2 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物171 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は14％であった。
実施例３７
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［（２－アミノアセチル）オキシ］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］アセチル］オキシ］エチル　エステル106 mg (0.2 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.15 mLをゆっくりと加えて、室温で5時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物100 mg (90％)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.39 - 1.54 (4 H, m), 1.55 - 1.67 (1 H, m), 1.73 - 1.83 (1 H, m), 1.86 - 2.04 (1 H, m), 2.72 - 2.99 (2 H, m), 3.72 (3 H, s), 3.76 - 3.97 (10 H, m), 4.00 - 4.10 (1 H, m), 6.73 - 6.85 (1 H, m), 7.16 (2 H, s), 8.05 - 8.33 (4 H, m)
実施例３８
［２－［１－［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］エトキシ］－２－オキソエチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［（２－アミノアセチル）オキシ］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩33 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 2 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物157 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は18％であった。
実施例３９
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチル－１－オキソプロポキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸91mg(0.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム79 mg(0.2 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸　セシウム塩をＮ，　Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。ここへ３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－クロロエチル　エステル150 mg(0.4 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて３回抽出した。得られた有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物143 mg(0.3 mmol)(68％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.33 - 1.54 (18 H, m), 1.56 - 2.12 (4 H, m), 2.96 - 3.71 (3 H, m), 3.78 - 4.07 (10 H, m), 4.09 - 4.34 (1 H, m), 4.74 - 4.96 (1 H, m), 6.76 (1H, q, J=5 Hz), 7.02 (2 H, s)
実施例４０
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－（２－アミノ－２－メチル－１－オキソプロポキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチル－１－オキソプロポキシ］エチル　エステル143 mg (0.3 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.19 mLをゆっくりと加えて、室温で4時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物145 mg (定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.32 - 1.65 (11 H, m), 1.71 - 1.86 (1 H, m), 1.87 - 1.99 (1 H, m), 2.67 - 3.03 (2 H, m), 3.70 (3 H, s), 3.75 - 3.94 (8 H, m), 3.96 - 4.10 (1 H, m), 6.67 - 6.81 (1 H, m), 7.15 (2 H, s), 8.12 - 8.32 (1 H, m), 8.46 (3 H, br s)
実施例４１
［１，１－ジメチル－２－オキソ－２－［１－［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］エトキシ］エチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000072
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　１－（２－アミノ－２－メチル－１－オキソプロポキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩34 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 2 mL）。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物233 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は2％であった。
実施例４２
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［［１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロペンチル］カルボニル］オキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロペンタンカルボン酸 325 mg(1.4 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム254 mg(0.8 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロペンタンカルボン酸　セシウム塩から278 mg(0.8 mmol)採取し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－クロロエチル　エステル200 mg(0.7 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物259 mg(0.5 mmol)(77％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.09 - 1.20 (3 H, m), 1.23 (1 H, d, J=5 Hz), 1.37 - 1.50 (11 H, m), 1.66 - 1.79 (4 H, m), 1.80 - 2.06 (2 H, m), 2.10 - 2.21 (1 H, m), 2.22 - 2.34 (1 H, m), 2.67 - 2.83 (5 H, m), 3.79 - 3.89 (3 H, m), 4.37 - 4.46 (1/3 H, m), 4.47 - 4.59 (2/3 H, m), 4.86 (1 H, br s), 6.59 (1/3 H, q, J=5 Hz), 6.69 - 6.80 (2/3 H, m), 6.80 - 6.91 (2 H, m), 7.01 - 7.12 (1 H, m), 7.18 (1 H, td, J=8, 2 Hz)
実施例４３
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［（１－アミノシクロペンチル）カルボニル］オキシ］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［［１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロペンチル］カルボニル］オキシ］エチル　エステル259 mg (0.5 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.41 mLをゆっくりと加えて、室温で6時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にヘキサンを加え攪拌した。上清をデカンテーションして真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物226 mgを得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.06 - 1.16 (3 H, m), 1.22 (1 H, d, J=5 Hz), 1.37 - 1.49 (2 H, m), 1.57 - 1.95 (6 H, m), 1.99 - 2.21 (2 H, m), 2.65 - 2.76 (5 H, m), 3.71 - 3.85 (3 H, m), 4.31 - 4.49 (1 H, m), 6.41 (1/3 H, q, J=5 Hz), 6.57 - 6.69 (2/3 H, m), 6.79 - 6.88 (1 H, m), 6.91 - 6.97 (1 H, m), 6.99 - 7.12 (1 H, m), 7.13 - 7.32 (1 H, m), 8.45 (3 H, br s)
実施例４４
［１－［［１－［（メトキシフェナミン－カルボニル）オキシ］エトキシ］カルボニル］シクロペンチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液にＮ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［（１－アミノシクロペンチル）カルボニル］オキシ］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩29 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 2 mL）。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物221 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのメトキシフェナミンの導入率は1％であった。
実施例４５
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［［１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロプロピル］カルボニル］オキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロプロパンカルボン酸 350 mg(1.7 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム312 mg(1.0 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロプロパンカルボン酸　セシウム塩から257 mg(0.8 mmol)採取し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－クロロエチル　エステル200 mg(0.7 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物148 mg(0.3 mmol)(47％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.07 - 1.23 (6 H, m), 1.35 - 1.54 (13 H, m), 2.67 - 2.85 (5 H, m), 3.80 - 3.85 (3 H, m), 4.34 - 4.47 (1/2 H, m), 4.49 - 4.60 (1/2 H, m), 5.08 (1 H, br s), 6.53 - 6.61 (1/3 H, m), 6.65 - 6.78 (2/3 H, m), 6.80 - 6.92 (2 H, m), 6.99 - 7.14 (1 H, m), 7.14 - 7.23 (1 H, m)
実施例４６
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［（１－アミノシクロプロピル）カルボニル］オキシ］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
Ｎ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［［１－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］シクロプロピル］カルボニル］オキシ］エチル　エステル148 mg (0.3 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.25 mLをゆっくりと加えて、室温で6時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にヘキサンを加え攪拌した。上清をデカンテーションして真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物144 mgを得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.06 - 1.19 (4 H, m), 1.22 - 1.49 (6 H, m), 2.65 - 2.75 (5 H, m), 3.75 - 3.82 (3 H, m), 4.31 - 4.48 (1 H, m), 6.39 (1/3 H, q, J=5 Hz), 6.52 - 6.60 (2/3 H, m), 6.81 - 6.88 (1 H, m), 6.90 - 6.98 (1 H, m), 7.00 - 7.10 (1 H, m), 7.14 - 7.32 (1 H, m), 8.68 (3 H, br s)
実施例４７
［１－［［１－［（メトキシフェナミン－カルボニル）オキシ］エトキシ］カルボニル］シクロプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液にＮ－［２－（２－メトキシフェニル）－１－メチルエチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸　１－［［（１－アミノシクロプロピル）カルボニル］オキシ］エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 2 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物145 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのメトキシフェナミンの導入率は10％であった。
実施例４８
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
Ｎ－メチル－４－（トリフルオロメチル）アニリン613 mg(3.5 mmol)及びピリジン305 mg(3.9 mmol)のジエチルエーテル溶液に氷冷下クロロギ酸クロロメチル496 mg(3.9 mmol)のジエチルエーテル溶液を加え、室温にて１時間攪拌した。反応液を濾過し、減圧下溶媒を留去して、標記化合物926 mg(3.5 mmol)(定量的)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 3.38 (3 H, s), 5.78 (2 H, s), 7.39 (2 H, br d, J=8 Hz), 7.64 (2 H, d, J=9 Hz)
実施例４９
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソブトキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］酪酸509 mg(2.5 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム408 mg(1.3 mmol)を加えて室温で30分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られた３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］酪酸　セシウム塩から275 mg(0.8 mmol)採取し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル200 mg(0.8 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物275 mg(0.6 mmol)(84％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.21 (3 H, d, J=7 Hz), 1.43 (9 H, s), 2.48 - 2.66 (2 H, m), 3.36 (3 H, s), 3.96 - 4.16 (1 H, m), 4.82 (1 H, br s), 5.79 (2 H, s), 7.32 - 7.47 (2 H, m), 7.62 (2 H, d, J=9 Hz)
実施例５０
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソブトキシ）メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソブトキシ］メチル　エステル275 mg (0.6 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液1.6 mLを加えて3時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物253 mg (定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.22 (3 H, d, J=7 Hz), 2.67 (1 H, dd, J=17, 8 Hz), 2.81 (1 H, dd, J=17, 6 Hz), 3.30 (3 H, s), 3.47 - 3.56 (1 H, m), 5.71 - 5.77 (2 H, m), 7.57 (2 H, d, J=8 Hz), 7.76 (2 H, d, J=8 Hz), 8.02 (3 H, br s)
実施例５１
［１－メチル－３－［［［［メチル［４－（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］カルボニル］オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液にＮ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソブトキシ）メチル　エステル　塩酸塩22 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 2 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物153 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのＮ－メチル－４－（トリフルオロメチル）アニリンの導入率は10％であった。
実施例５２
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニン78 mg(0.4 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム73 mg(0.2 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニン　セシウム塩をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル100 mg(0.4 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物150 mg(0.4 mmol)(定量的)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.40 (3 H, d, J=7 Hz), 1.44 (9 H, s), 3.36 (3 H, s), 4.27 - 4.41 (1 H, m), 4.97 (1 H, br s), 5.76 - 5.89 (2 H, m), 7.32 - 7.47 (2 H, m), 7.62 (2 H, d, J=8 Hz)
実施例５３
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－アミノ－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル147 mg (0.3 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液1.5 mLを加えて8時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物96 mg (0.3 mmol)(79%)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.41 (3 H, d, J=7 Hz), 3.31 (3 H, s), 4.18 (1 H, q, J=7 Hz), 5.77 - 5.88 (2 H, m), 7.58 (2 H, d, J=8 Hz), 7.77 (2 H, d, J=8 Hz), 8.43 (3 H, br s)
実施例５４
［（１Ｓ）－１－メチル－２－［［［［メチル［４－（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］カルボニル］オキシ］メトキシ］－２－オキソエチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液にＮ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－アミノ－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル　塩酸塩21 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 2 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物148 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのＮ－メチル－４－（トリフルオロメチル）アニリンの導入率は15％であった。
実施例５５
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－バリン89 mg(0.4 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム73 mg(0.2 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－バリン　セシウム塩をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル100 mg(0.4 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物130 mg(0.3 mmol)(78％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.86 (3 H, d, J=7 Hz), 0.95 (3 H, d, J=7 Hz), 1.44 (9 H, s), 2.07 - 2.22 (1 H, m), 3.35 (3 H, s), 4.26 (1 H, br dd, J=8, 4 Hz), 4.96 (1 H, br d, J=8 Hz), 5.70 - 5.94 (2 H, m), 7.32 - 7.42 (2 H, m), 7.62 (2 H, d, J=9 Hz)
実施例５６
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル エステル126 mg (0.3 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液2 mLを加えて5時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物103 mg (0.3 mmol)(定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 0.92 (3 H, d, J=7 Hz), 0.96 (3 H, d, J=7 Hz), 2.11 - 2.23 (1 H, m), 3.30 (3 H, s), 4.02 (1 H, br d, J=4 Hz), 5.74 - 5.95 (2 H, m), 7.56 (2 H, d, J=9 Hz), 7.77 (2 H, d, J=9 Hz), 8.44 (3 H, br s)
実施例５７
［（１Ｓ）－２－メチル―１－［［［［［メチル［４－（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］カルボニル］オキシ］メトキシ］カルボニル］プロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液にＮ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル エステル　塩酸塩23 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 2 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物147 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのＮ－メチル－４－トリフルオロメチルアニリンの導入率は16％であった。
実施例５８
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－３，３－ジメチル－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソブトキシ］メチル エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－ｔｅｒｔ－ロイシン95 mg(0.4 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム73 mg(0.2 mmol)を加えて室温で10分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－ｔｅｒｔ－ロイシン　セシウム塩をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル100 mg(0.4 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物100 mg(0.2 mmol)(58％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.95 (9 H, s), 1.43 (9 H, s), 3.35 (3 H, s), 4.01 - 4.23 (1 H, m), 5.05 (1 H, br d, J=8 Hz), 5.72 - 5.92 (2 H, m), 7.36 (2 H, br d, J=8 Hz), 7.61 (2 H, d, J=8 Hz)
実施例５９
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－アミノ－３，３－ジメチル－１－オキソブトキシ］メチル エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
Ｎ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－３，３－ジメチル－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソブトキシ］メチル エステル94 mg (0.2 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液1.5 mLを加えて5時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物77 mg (0.2 mmol)(定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 0.97 (9 H, s), 3.30 (3 H, s), 3.82 (1 H, s), 5.70 - 5.97 (2 H, m), 7.56 (2 H, d, J=9 Hz), 7.76 (2 H, d, J=9 Hz), 7.90 - 8.43 (3 H, br s)
実施例６０
［（１Ｓ）－２，２－ジメチル－１－［［［［［メチル［４－（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］カルボニル］オキシ］メトキシ］カルボニル］プロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.30 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液にＮ－メチル－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］カルバミン酸　［（２Ｓ）－２－アミノ－３，３－ジメチル－１－オキソブトキシ］メチル エステル　塩酸塩24 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 3 mL)。反応液をエタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回、更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物151 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのＮ－メチル－４－（トリフルオロメチル）アニリンの導入率は20％であった。
実施例６１
［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）－１－メチルエチル］カルバミン酸　１－［６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソヘキシロキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
メキシレチン塩酸塩59 mg(0.27 mmol)及びジイソプロピルエチルアミン71 mg(0.55 mmol)の塩化メチレン溶液に６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸　１－［［（４－ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ］エチル　エステル121 mg(0.27 mmol)の塩化メチレン溶液を加えて室温で一晩攪拌した。減圧下溶媒を留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(10％～35％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物56 mg(0.12 mmol)(44%)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.30 - 1.38 (2 H, m), 1.39 - 1.51 (17 H, m), 1.59 - 1.71 (2 H, m), 2.26 (6 H, s), 2.27 - 2.41 (2 H, m), 3.10 (2 H, br s), 3.67 - 3.75 (1H, m), 3.75 - 3.87 (1 H, m), 4.06 (1 H, br s), 4.56 (1 H, br s), 5.18 (1 H, br s), 6.81 - 6.88 (1 H, m), 6.90 - 6.95 (1 H, m), 6.98 - 7.02 (2 H, m)
実施例６２
［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）－１－メチルエチル］カルバミン酸　１－（６－アミノ－１－オキソヘキシロキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000093
［［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）］－１－メチルエチル］カルバミン酸　１－［６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソヘキシロキシ］エチル　エステル56 mg (0.12 mmol)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.1 mLをゆっくりと加えて、室温で6時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。上清をデカンテーションして真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物37 mgを得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.18 - 1.24 (3 H, m), 1.25 - 1.36 (2 H, m), 1.40 (3 H, t, J=5.7 Hz), 1.45 - 1.58 (4 H, m), 2.20 (6 H, s), 2.23 - 2.34 (2 H, m), 2.70 - 2.81 (2H, m), 3.61 - 3.66 (2 H, m), 3.80 - 3.91 (1 H, m), 6.67 - 6.73 (1 H, m), 6.90 (1 H, t, J=8 Hz), 7.00 (2 H, d, J=8 Hz), 7.51 - 7.73 (4 H, m)
実施例６３
［６－［１－［（メキシレチン－カルボニル）オキシ］エトキシ］－６－オキソヘキシル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000094
コンドロイチン硫酸ナトリウム100 mg(0.2 mmol)を水2 mLに溶解し、撹拌しながらジオキサン2 mLを滴下した。混合液に［［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）］－１－メチルエチル］カルバミン酸　１－（６－アミノ－１－オキソヘキシロキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩19 mg(0.04 mmol)の50％ジオキサン水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)18 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液50 μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 2 mL）。反応液を90％エタノール10 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール15 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物104 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのメキシレチンの導入率は14％であった。
実施例６４
［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）－１－メチルエチル］カルバミン酸　［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
メキシレチン塩酸塩98 mg(0.45 mmol)及びジイソプロピルエチルアミン117 mg(0.91 mmol)の塩化メチレン溶液にＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－β－アラニン　［［（４－ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ］メチル　エステル175 mg(0.45 mmol)の塩化メチレン溶液を加えて室温で一晩攪拌した。減圧下溶媒を留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(10％～50％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製した。得られた粗精製物を再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー(10％酢酸エチル／トルエン)にて精製し、標記化合物149 mg(0.35 mmol)(78%)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.39 - 1.47 (12 H, m), 2.25 (6 H, s), 2.59 (2 H, t, J=6 Hz), 3.34 - 3.47 (2 H, m), 3.73 (1 H, dd, J=9, 4 Hz), 3.80 (1 H, dd, J=9, 4 Hz), 4.02 - 4.18 (1 H, m), 5.01 (1 H, br s), 5.26 (1 H, br d, J=8 Hz), 5.77 (2 H, s), 6.90 - 6.95 (1 H, m), 7.00 (2 H, d, J=8 Hz)
実施例６５
［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）－１－メチルエチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
［［２－（２，６－ジメチルフェノキシ）］－１－メチルエチル］カルバミン酸　［３－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル149 mg (0.35 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液4 mLを加えて6時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残留物にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。上清をデカンテーションして真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物112 mg(0.31 mmol)(89%)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.23 (3 H, d, J=7 Hz), 2.20 (6 H, s), 2.74 (2 H, t, J=7 Hz), 3.02 (2 H, t, J=7 Hz), 3.64 (2 H, d, J=6 Hz), 3.84 - 3.95 (1 H, m), 5.69 (2 H, s), 6.87 - 6.94 (1 H, m), 7.01 (2 H, d, J=7 Hz), 7.72 (1 H, d, J=8 Hz), 8.00 (3 H, br s)
実施例６６
［３－［［（メキシレチン－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000097
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.4 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液に［［１－メチル－２－（２，６－ジメチルフェノキシ）］エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩28 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)22 mg(0.05 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100 μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 3 mL）。反応液を90％エタノール11 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール15 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物207 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのメキシレチンの導入率は11％であった。
実施例６７
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－［６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソヘキシロキシ］エチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000098
フルボキサミンマレイン酸塩200 mg(0.46 mmol)及びジイソプロピルエチルアミン89 mg(0.69 mmol)の塩化メチレン溶液に６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸　１－［［（４－ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ］エチル　エステル101 mg(0.23 mmol)の塩化メチレン溶液を加えて室温で一晩攪拌した。減圧下溶媒を留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(10％～50％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物134 mg(0.19 mmol, 純度90 mol%)(84%)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.21-1.41 (2H, m), 1.41 - 1.50 (14 H, m), 1.58 - 1.69 (6 H, m), 2.25 - 2.35 (2 H, m), 2.79 (2 H, t, J=7 Hz), 3.02 - 3.17 (2 H, m), 3.32 (3 H, s), 3.35 - 3.44 (2 H, m), 3.47 - 3.66 (2 H, m), 4.27 (2 H, t, J=5 Hz), 4.58 (1 H, br s), 5.37 (1 H, br s), 6.83 (1 H, q, J=5 Hz), 7.62 (2 H, d, J=8 Hz), 7.74 (2 H, d, J=8 Hz)
実施例６８
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－（６－アミノ－１－オキソヘキシロキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000099
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－［６－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソヘキシロキシ］エチル　エステル133 mg (0.19 mmol, 純度90 mol%)の塩化メチレン溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.15 mLをゆっくりと加えて、室温で5時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、トルエンに溶解し、ヘキサンを加えて沈殿を析出させた。上清をデカンテーションして真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物123 mg(定量的)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 1.22 - 1.35 (2 H, m), 1.37 (3 H, d, J=5 Hz), 1.43 - 1.55 (8 H, m), 2.27 (2 H, t, J=7 Hz), 2.71 - 2.81 (4 H, m), 3.19 (3 H, s), 3.23 - 3.41 (4 H, m), 4.15 (2 H, t, J=6 Hz), 6.67 (1 H, q, J=5 Hz), 7.54 (1 H, t, J=6 Hz), 7.61 (3 H, br s), 7.77 (2 H, d, J=8 Hz), 7.86 (2 H, d, J=8 Hz)
実施例６９
［６－［１－［（フルボキサミン－カルボニル）オキシ］エトキシ］－６－オキソヘキシル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000100
コンドロイチン硫酸ナトリウム100 mg(0.2 mmol)を水2 mLに溶解し、撹拌しながらジオキサン2 mLを滴下した。混合液に［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－（６－アミノ－１－オキソヘキシロキシ）エチル　エステル　トリフルオロ酢酸塩25 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)18 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液50 μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 2 mL）。反応液を90％エタノール10 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール15 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物103 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのフルボキサミンの導入率は11％であった。
実施例７０
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－クロロ－２－メチルプロピル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
フルボキサミンマレイン酸塩300 mg(0.69 mmol)及びジイソプロピルエチルアミン223 mg(1.73 mmol)の塩化メチレン溶液に氷冷下クロロギ酸１－クロロ－２－メチルプロピル189 mg(1.11 mmol)の塩化メチレン溶液を加え、室温にて４時間攪拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチルに溶解し、10%硫酸水素カリウム水溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（10% 酢酸エチル／ヘキサン）にて精製した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥して、標記化合物140 mg(0.31 mmol)(45%)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 1.04 (3 H, d, J=6 Hz), 1.05 (3 H, d, J=6 Hz), 1.60 - 1.66 (4 H, m), 2.09 - 2.20 (1 H, m), 2.79 (2 H, t, J=8 Hz), 3.33 (3 H, s), 3.40 (2 H, t, J=6 Hz), 3.58 (2 H, dd, J=10, 5 Hz), 4.26 - 4.33 (2 H, m), 5.53 (1 H, br s), 6.34 (1 H, d, J=4 Hz), 7.62 (2 H, d, J=8 Hz), 7.74 (2 H, d, J=8 Hz)
実施例７１
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－［（２Ｓ）－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソ－２－フェニルエトキシ］－２－メチルプロピル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000102
Ｎ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－２－フェニルグリシン502 mg(2.0 mmol)のメタノール溶液に炭酸セシウム358 mg(1.1 mmol)を加えて室温で30分間攪拌した。混合懸濁液を減圧下、溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥した。得られたＮ－［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］－Ｌ－２－フェニルグリシン　セシウム塩から366 mg(0.95 mmol)採取し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－クロロ－２－メチルプロピル　エステル140 mg(0.31 mmol)のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を加え一晩攪拌した。反応液に水を加えジエチルエーテルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（20% 酢酸エチル／ヘキサン）にて精製した。減圧下溶媒を留去し、真空ポンプを用いて一晩乾燥し、標記化合物71 mg(0.11 mmol)(34％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.63 - 0.75 (3 H, m), 0.94 (3 H, d, J=7 Hz), 1.22 - 1.49 (9 H, m), 1.56 - 1.68 (4 H, m), 1.78 - 1.90 (1/2 H, m), 1.95 - 2.10 (1/2 H, m), 2.71 - 2.86 (2 H, m), 3.26 (1 H, s), 3.32 (2 H, s), 3.35 - 3.45 (3 H, m), 3.48 - 3.64 (1 H, m), 4.07 - 4.23 (1 H, m), 4.29 (1 H, t, J=5 Hz), 5.17 - 5.25 (1/2 H, m), 5.28 - 5.36 (1 H, m), 5.36 - 5.45 (1/2H, m), 5.47 - 5.59 (1/2 H, m), 5.67 - 5.77 (1/2 H, m), 6.58 - 6.69 (1 H, m), 7.28 - 7.39 (5 H, m), 7.59 - 7.63 (2 H, m), 7.69 - 7.77 (2 H, m)
実施例７２
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－［（２Ｓ）－２－アミノ－１－オキソ－２－フェニルエトキシ］－２－メチルプロピル　エステル　トリフルオロ酢酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000103
［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－［（２Ｓ）－２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－１－オキソ－２－フェニルエトキシ］－２－メチルプロピル　エステル69 mg (0.10 mmol)の塩化メチレン1 mL溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸0.25 mLをゆっくりと加えて、室温で3時間攪拌した。減圧下溶媒を留去した後、残留物にヘキサンとジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。上清をデカンテーションして真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物64 mg(0.09 mmol)(95%)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 0.57 (3/2 H, d, J=7 Hz), 0.59 (3/2 H, d, J=7 Hz), 0.86 - 0.92 (3 H, m), 1.41 - 1.54 (4 H, m), 1.71 - 1.80 (1/2 H, m), 1.90 - 1.98 (1/2 H, m), 2.71 - 2.82 (2 H, m), 3.18 (3 H, s), 3.23 - 3.32 (4 H, m), 3.37 - 3.45 (1 H, m), 3.98 - 4.12 (1 H, m), 4.12 - 4.22 (1 H, m), 5.35 - 5.42 (1 H, m), 6.57 (1/2 H, d, J=5 Hz), 6.59 (1/2 H, d, J=5 Hz), 7.39 - 7.54 (5 H, m), 7.77 (2 H, dd, J=9, 2 Hz), 7.86 (2 H, d, J=9 Hz), 8.78 - 8.99 (3 H, m)
実施例７３
［［２－［１－［（フルボキサミン－カルボニル）オキシ］－２－メチルプロポキシ］－２－オキソ－１－フェニル］エチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000104
コンドロイチン硫酸ナトリウム200 mg(0.4 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液に［２－［［（Ｅ）－［５－メトキシ－１－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］ペンチリデン］アミノ］オキシ］エチル］カルバミン酸　１－［（２Ｓ）－２－アミノ－１－オキソ－２－フェニルエトキシ］－２－メチルプロピル　エステル　トリフルオロ酢酸塩53 mg(0.08 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)22 mg(0.05 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100 μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 4 mL）。反応液を90％エタノール12 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール15 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物226 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのフルボキサミンの導入率は11％であった。
実施例７４
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000105
ＤＬ－アミノグルテチミド2000 mg(8.6 mmol) 及び炭酸水素ナトリウム2170 mg(25.8 mmol)のジエチルエーテル-水(3 mL:3 mL)混合溶液に氷冷下クロロギ酸クロロメチル1221 mg(9.47 mmol)のジエチルエーテル溶液を加え、室温にて３０分攪拌した。水層を除去し、酢酸エチルを加え、有機層を水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去して真空ポンプで一晩乾燥し、標記化合物2514 mg(7.7 mmol)(90％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.87 (3 H, t, J=7 Hz), 1.91 (1 H, dq, J=14, 7 Hz), 2.04 (1 H, dq, J=14, 7 Hz), 2.22 (1 H, td, J=14, 5 Hz), 2.32 - 2.46 (2 H, m), 2.56 - 2.64 (1 H, m), 5.83 (2 H, s), 6.87 (1 H, br s), 7.25 (2 H, d, J=9 Hz), 7.43 (2 H, br d, J=8 Hz), 7.91 (1 H, s)
実施例７５
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　ヨードメチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
ヨウ化ナトリウム296 mg(2.0 mmol)及び［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　クロロメチル　エステル475 mg(1.5 mmol)のアセトン懸濁液を40℃で一晩撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、ジエチルエーテルを加えて撹拌した。不溶物を濾過して除き、減圧下溶媒を留去して標記化合物615 mg(定量的)を得た。得られた化合物は精製せずにそのまま次の工程に使用した。
実施例７６
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチル－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000107
２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸610 mg(3.0 mmol)のアセトニトリル10 mL溶液に酸化銀（Ｉ）383 mg(1.7 mmol)を加えた。アルゴン気流下、混合液に水5 mLを加え、70℃で2時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、ろ液を減圧下にて濃縮した。残留物を真空ポンプにて一晩乾燥し、２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸　銀塩932 mgを得た。得られた２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチルプロパン酸　銀塩223 mg(0.72 mmol)の乾燥トルエン懸濁液に［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　ヨードメチル　エステル298 mg(0.72 mmol)の乾燥トルエン溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に酢酸エチルを加えて不溶物を濾過して除き、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(15％～80％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して標記化合物91 mg(0.18 mmol)(26％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.86 (3 H, t, J=8 Hz), 1.37 (9 H, s), 1.46 (3 H, s), 1.50 (3 H, s), 1.90 (1 H, dq, J=15, 7 Hz), 1.97 - 2.07 (1 H, m), 2.17 - 2.26 (1 H, m), 2.32 - 2.45 (2 H, m), 2.55 - 2.64 (1 H, m), 4.91 (1 H, br s), 5.86 (2 H, s), 6.91 (1 H, br s), 7.22 (2 H, d, J=8 Hz), 7.40 (2 H, br d, J=8 Hz), 7.79 (1 H, s)
実施例７７
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　（２－アミノ－２－メチル－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000108
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　［２－［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］－２－メチル－１－オキソプロポキシ］メチル　エステル90 mg (0.18 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液1.5 mLを加えて10時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残渣にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物64 mg (0.15 mmol)(83%)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 0.75 (3 H, t, J=7 Hz), 1.45 (3 H, s), 1.49 (3 H, s), 1.73 - 1.91 (2 H, m), 2.06 - 2.20 (2 H, m), 2.27 - 2.38 (1 H, m), 2.41 - 2.48 (1 H, m), 5.88 (2 H, s), 7.24 (2 H, d, J=8 Hz), 7.47 (2 H, br d, J=8 Hz), 8.73 (3 H, br s), 10.15 (1 H, br s), 10.82 (1 H, s)
実施例７８
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　［２－［［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］メチル］－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル　エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000109
２－［［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］メチル］－３－メチルブタン酸1874 mg(8.1 mmol)のアセトニトリル20 mL溶液に酸化銀（Ｉ）1127 mg(4.9 mmol)を加えた。アルゴン気流下、混合液に水10 mLを加え、70℃で1時間撹拌した。反応液をセライト濾過し、ろ液を減圧下にて濃縮した。残留物を真空ポンプにて乾燥し、２－［［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］メチル］－３－メチルブタン酸　銀塩1875 mgを得た。得られた２－［［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］メチル］－３－メチルブタン酸　銀塩360 mg(1.1 mmol)の乾燥トルエン懸濁液に［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　ヨードメチル　エステル296 mg(0.71 mmol)の乾燥トルエン溶液を加え、室温にて5時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを加えて不溶物を濾過して除き、減圧下溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(15％～80％酢酸エチル／トルエン)にて精製して標記化合物48 mg(0.09 mmol)(13％)を得た。
1H-NMR (CDCl3, δ): 0.87 (3 H, t, J=7 Hz), 0.93 - 1.04 (6 H, m), 1.35 - 1.46 (9 H, m), 1.90 (1 H, dq, J=14, 7 Hz), 1.95 - 2.08 (2 H, m), 2.17 - 2.27 (1 H, m), 2.32 - 2.45 (2 H, m), 2.47 - 2.54 (1 H, m), 2.56 - 2.66 (1 H, m), 3.19 - 3.32 (1 H, m), 3.40 - 3.54 (1 H, m), 4.84 (1 H, br s), 5.80 - 5.89 (2 H, m), 6.91 (1 H, br s), 7.24 (2 H, d, J=9 Hz), 7.36 - 7.46 (2 H, m), 7.81 (1 H, s)
実施例７９
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　［２－（アミノメチル）－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル　エステル　塩酸塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　［２－［［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］メチル］－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル　エステル48 mg (0.09 mmol)の酢酸エチル溶液に4N塩酸/ジオキサン溶液0.6 mLを加えて10時間静置した。減圧下、溶媒を留去した後、残渣にジイソプロピルエーテルを加え攪拌した。析出した結晶をろ取して標記化合物34 mg (0.08 mmol)(83%)を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, δ): 0.75 (3 H, t, J=7 Hz), 0.85 - 0.96 (6 H, m), 1.71 - 1.91 (2 H, m), 1.93 - 2.05 (1 H, m), 2.08 - 2.18 (2 H, m), 2.28 - 2.39 (1 H, m), 2.40 - 2.48 (1 H, m), 2.61 - 2.70 (1 H, m), 2.91 - 2.99 (1 H, m), 3.01 - 3.14 (1 H, m), 5.75 (1 H, d, J=6 Hz), 5.86 (1 H, d, J=6 Hz), 7.23 (2 H, d, J=9 Hz), 7.46 (2 H, br d, J=8 Hz), 7.99 (3 H, br s), 10.08 (1 H, br s), 10.82 (1 H, s)
実施例８０
［２－［［［（アミノグルテチミド－カルボニル）オキシ］メトキシ］カルボニル］－３－メチルブチル］アミノ－コンドロイチン硫酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000111
コンドロイチン硫酸ナトリウム150 mg(0.3 mmol)を水3 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール3 mLを滴下した。混合液に［４－（３－エチル－２，６－ジオキソ－３－ピペリジニル）フェニル］カルバミン酸　［２－（アミノメチル）－３－メチル－１－オキソブトキシ］メチル　エステル　塩酸塩27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)27 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100 μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 1 mL）。反応液を90％エタノール9 mLに撹拌しながら滴下し、静置した。上清をデカンテーション後、90%エタノール10 mLを加えて撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物151 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのアミノグルテチミドの導入率は15％であった。
実施例８１
［３－［［（エチレフリン－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸（２０，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000112
コンドロイチン硫酸ナトリウム（２０，０００）200 mg(0.4 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液にＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩71 mg(0.2 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)90 mg(0.2 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液100μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 5 mL）。反応液を90%エタノール8 mLに撹拌しながら滴下した。上清をデカンテーションし、沈殿物を50%エタノール水溶液16 mLに溶解した。エタノール50 mLを攪拌しながら加えたのち、上清をデカンテーションした。90%エタノール10 mLを加え遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物233 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのエチレフリンの導入率は37.4％であった。
実施例８２
［３－［［（エチレフリン－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸（４０，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000113
コンドロイチン硫酸ナトリウム（４０，０００）200 mg(0.39 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液にＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩72 mg(0.20 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)91 mg(0.20 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液333μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 3 mL）。反応液をエタノール13 mLに撹拌しながら滴下した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて1回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物239 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのエチレフリンの導入率は34.7％であった。
実施例８３
［３－［［（エチレフリン－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－ヒアルロン酸（６５０，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000114
1%ヒアルロン酸ナトリウム（６５０，０００）水溶液10 g(0.25 mmol)に撹拌しながらエタノール10 mLを滴下した。混合液にＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－２－（３－ヒドロキシフェニル）エチル］カルバミン酸　（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）メチル　エステル　塩酸塩18 mg(0.05 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)11 mg(0.02 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に塩化ナトリウム500 mgを加え溶解し、そこへエタノール30 mLを滴下して沈殿を形成した。上清をデカンテーションしてからエタノール10 mLを加え攪拌した。再度上清をデカンテーションしてから、遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物83 mgを得た。1H-NMRの積分値より、ヒアルロン酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのエチレフリンの導入率は9.1％であった。
実施例８４
［３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸（２０，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000115
コンドロイチン硫酸ナトリウム（２０，０００）250 mg(0.49 mmol)を水5 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール5 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩116 mg(0.24 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)113 mg(0.24 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液417μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した(およそ 4 mL)。反応液をエタノール15 mLに撹拌しながら滴下して撹拌した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて1回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物321 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は35.7％であった。
実施例８５
［３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－コンドロイチン硫酸（４０，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000116
コンドロイチン硫酸ナトリウム（４０，０００）200 mg(0.39 mmol)を水4 mLに溶解し、撹拌しながらエタノール4 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩94 mg(0.20 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)91 mg(0.20 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20％塩化ナトリウム水溶液333μLを加え、更に反応液が白濁する直前までエタノールを滴下した（およそ 3 mL）。反応液をエタノール13 mLに撹拌しながら滴下した。遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて1回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合物240 mgを得た。1H-NMRの積分値より、コンドロイチン硫酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は39.6％であった。
実施例８６
［３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－ヒアルロン酸（７０，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000117
1%ヒアルロン酸ナトリウム（７０，０００）水溶液15 g(0.37 mmol)に撹拌しながらエタノール15 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩53 mg(0.11 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)25 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に塩化ナトリウム750 mgを加え溶解し、そこへエタノール45 mLを滴下して沈殿を形成した。上清をデカンテーションしてからエタノール15 mLを加え攪拌した。再度上清をデカンテーションしてから、遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合158 mgを得た。1H-NMRの積分値より、ヒアルロン酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は12.8％であった。
実施例８７
［３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－ヒアルロン酸（１００，０００）　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000118
1%ヒアルロン酸ナトリウム（１００，０００）水溶液15 g(0.37 mmol)に撹拌しながらエタノール15 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩53 mg(0.11 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)25 mg(0.06 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に塩化ナトリウム750 mgを加え溶解し、そこへエタノール45 mLを滴下して沈殿を形成した。上清をデカンテーションしてからエタノール15 mLを加え攪拌した。再度上清をデカンテーションしてから、遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合139 mgを得た。1H-NMRの積分値より、ヒアルロン酸の全二糖単位（グルクロン酸）あたりのトロキシピドの導入率は13.5％であった。
実施例８８
［３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－カルボキシメチルセルロース　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000119
1%カルボキシメチルセルロース水溶液20 g(0.88 mmol)に撹拌しながらエタノール20 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩21 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)25 mg(0.04 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20%塩化ナトリウム水溶液2 mLを加え溶解し、そこへエタノール60 mLを滴下して沈殿を形成した。上清をデカンテーションしてから90%エタノール30 mLを加え攪拌した。再度上清をデカンテーションしてから、遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％エタノールで2回、エタノールで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合201 mgを得た。分光光度計の測定結果(255 nm)より、トロキシピドの導入率は2％であった。
実施例８９
［３－［［（トロキシピド－カルボニル）オキシ］メトキシ］－３－オキソプロピル］アミノ－アルギン酸　コンジュゲート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000120
1%アルギン酸ナトリウム水溶液20 g(1.01 mmol)に撹拌しながらエタノール20 mLを滴下した。混合液に３－［（３，４，５－トリメトキシベンゾイル）アミノ］－１－ピペリジンカルボン酸　［（３－アミノ－１－オキソプロポキシ）］メチル　エステル 塩酸塩24 mg(0.05 mmol)の50％エタノール水溶液、次いで速やかに４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウム クロリド(DMT-MM)23 mg(0.05 mmol)の50％エタノール水溶液を加え、室温にて一晩撹拌した。反応液に20%塩化ナトリウム水溶液3 mLを加え溶解し、そこへアセトン400 mLを滴下して沈殿を形成した。上清をデカンテーションしてから90%アセトン100 mLを加え攪拌した。再度上清をデカンテーションしてから、遠心分離機を用いて沈殿を分取し、90％アセトンで2回、アセトンで2回更にジエチルエーテルにて2回洗浄した。得られた沈殿を真空ポンプにて一晩乾燥して標記化合183 mgを得た。分光光度計の測定結果(255 nm)より、トロキシピドの導入率は2％であった。
試験例１　薬物－ポリマーコンジュゲートの薬物遊離試験
［操作］
　リン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０に、表１に示される各評価ポリマーコンジュゲートを１．５mg/mLの濃度で溶解し分注した。溶解直後を初期状態（保存０日）として、アセトニトリル／生理食塩水溶液（１：１）で０．５mg/mLに希釈した後、溶液中に存在する薬物－ポリマーコンジュゲートと遊離薬物をＳＥＣ－ＨＰＬＣにて分析した。他の分注液を溶解直後から３６℃の保存条件に付し、各時間経過後、同様に分析した。こうして得られた各時点での遊離薬物と薬物－ポリマーコンジュゲートのピーク面積比から、薬物遊離率（％）を算出した。時間と薬物遊離率（Drug Release）との関係は図１、図２、図３、図４及び図５に示すとおりである。
ＨＰＬＣ条件は以下のとおりである。
　カラム：ＴＳＧｇｅｌ　α-３０００（７．８mm×３００mm）
　流速：０．５mL/min
　温度：３５℃
　移動相：アセトニトリル／生理食塩水＝１／２
　薬物遊離率＝遊離薬物ピーク面積／（遊離薬物ピーク面積＋コンジュゲートピーク面積）×１００
［結果］
　図１、図２、図３、図４及び図５が示すように、本発明の化合物である新規な第１級アミン化合物又は第２級アミン化合物と酸性多糖ポリマーコンジュゲートは、何れも時間依存的に薬物遊離量が増加している結果が得られており、生物活性を有する第１級アミン化合物又は第２級アミン化合物の構造によらず徐放性を持たせることが可能である。
　図１、図２、図３、図４及び図５が示すように、生物活性を有する第１級アミン化合物又は第２級アミン化合物の遊離速度をリンカーの構造によって非常に細かく且つ幅広く調節することが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000121
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000122
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000123
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000124
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000125
試験例２　薬物－ポリマーコンジュゲートの濾過性比較試験
［操作］
　エッペンチューブに表６、表８、及び表１０に示される各コンドロイチン硫酸（CS）－コンジュゲート及びポリエチレングリコール（PEG）－コンジュゲートを秤量し、それぞれの検体が表７、表９及び表１１に示されるコンジュゲート濃度となるように蒸留水を加えた。ボルテックスミキサーで３０秒攪拌後、２０００Gで６０秒遠心した。これを２回繰り返した後、室温下で１時間静置した。再度ボルテックスミキサーで３０秒攪拌後、２０００Gで６０秒遠心して溶解液を調製した。
　孔径０．２２μｍ、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）膜の遠心式フィルターユニットに溶解した各種検体を約７０～９０ ｍｇ秤量し、２５℃、１２０００Gで９０分間遠心した。フィルター通過液を秤量し、フィルター通過率（重量％）を算出した。
各検体の導入率から算出した溶液中の薬物濃度とフィルター通過率の関係は図６、図７及び図８に示すとおりである。
［結果］
　濾過性のある溶液ではフィルター濾過による除塵、除菌、滅菌などが可能になる。特に濾過滅菌に使用される孔径０．２２μｍフィルターの濾過性は、点眼剤や注射剤などの溶液製剤を製造する上で重要なパラメータの一つである。
　図６、図７及び図８が示すように、本発明の化合物である第１級アミン又は第２級アミン化合物の酸性多糖コンジュゲートはPEGコンジュゲートよりも高い薬物濃度で０．２２μｍフィルター濾過可能な溶液の調製が可能である。また、酸性多糖コンジュゲートはポリマー分子量を高分子化した場合でも、PEGコンジュゲートよりも高い薬物濃度で濾過性を有する溶液を調製可能であり、高分子量かつ高薬物濃度の溶液製剤を提供することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000126
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000127
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000128
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000129
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000130
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000131
 

Claims (11)

  1. 　式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩；
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    ［式（Ｉ）中、Ｄは第１級又は第２級アミン化合物ＤＨの、第１級又は第２級アミノ基が有する水素原子を除いた残基を表し；Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基であり；Ａは置換又は無置換の２価の炭化水素基であって－Ｃ（＝Ｏ）－又は－ＮＨ－と結合する両端以外に１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、当該ヘテロ原子はそれぞれ独立して－Ｏ－、置換基を有していてもよい-－ＮＨ－及び－Ｓ－からなる群より選択され；Ｒ１、Ｒ２及びＡのうち任意の２つ又は３つの基が一体となって環を形成することもでき；Ｐｏｌｙは酸性多糖残基を表し、Ｐｏｌｙに隣接する－Ｃ（＝Ｏ）－は前記酸性多糖のカルボキシ基に由来する］。
  2. 　前記式（Ｉ）が下記式（ＩＩ）で示される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩；
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    ［式（ＩＩ）中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２及びＰｏｌｙは請求項１に定義されるとおりであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアルケニル基、置換若しくは無置換のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換のアルキニル基、置換若しくは無置換の芳香族基又は置換若しくは無置換の複素環基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ任意の２つ又は３つの基が一体となって環を形成することもでき、ｌ及びｎはそれぞれ独立して０、１又は２であり、ｍは０又は１である］。
  3. 　式（Ｉ）又は式（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が、それぞれ独立して、水素原子、置換若しくは無置換の炭素数１～６の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基、置換若しくは無置換の炭素数３～８のシクロアルキル基、置換若しくは無置換の炭素数２～６の直鎖状若しくは分岐状アルケニル基、置換若しくは無置換の炭素数３～８のシクロアルケニル基、置換若しくは無置換の炭素数２～６の直鎖状若しくは分岐状のアルキニル基、置換若しくは無置換の炭素数６～１４の単環式若しくは多環式芳香族基、又は環構成原子として窒素原子、酸素原子若しくは硫黄原子を少なくとも１つ含む置換若しくは無置換の３～８員環の複素環基であることを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
  4. 　式（Ｉ）又は式（ＩＩ）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６で表される基におけるアルキルの置換基、シクロアルキル基の置換基、アルケニル基の置換基、シクロアルケニルル基の置換基、アルキニル基の置換基、芳香族基の置換基及び複素環基の置換基が、水酸基、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、ハロゲン原子、芳香族基、複素環基、アルコキシ基、グアニジノ基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アシル基、置換スルホニル基、ヘテロシクリルオキシ基、ヘテロシクリルチオ基、アミド基、ウレイド基、カルボキシ基、カルバモイル基、オキソ基、チオキソ基、スルファモイル基、スルホ基、シアノ基、ニトロ基、アシルオキシ基、アジド基、スルホンアミド基、メルカプト基、アルコキシカルボニルアミノ基、アミノカルボニルオキシ基、置換スルフィニル基、スルファミド基、アミノスルホニルオキシ基、アルコキシスルホニルアミノ基、置換スルホニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルコキシカルボニルオキシ基、アルコキシスルホニル基、Ｒｘ（Ｒｙ）Ｎ基及びＲｘ（Ｒｙ）（Ｒｚ）Ｎ＋基から選ばれる基であり、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚはそれぞれ独立して水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、芳香族炭化水素基又は複素環基からなる群から選択され、このとき、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚのうち２つ以上が一体となって飽和又は不飽和の複素環を形成してもよい、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
  5. 　式（Ｉ）又は（ＩＩ）中、Ｐｏｌｙがグリコサミノグリカン残基である、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
  6. 　式（Ｉ）又は（ＩＩ）中、Ｐｏｌｙがコンドロイチン、コンドロイチン硫酸又はヒアルロン酸残基である、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
  7. 　下記式（ＸＸ）で示される請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩；
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    ［式（ＸＸ）中、Ｄ、Ｒ１、Ｒ２及びＡは請求項１に定義したとおりであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    で示される部分は、酸性多糖のカルボキシ基に由来する基及びカルボキシ基を除いたポリマーを表し；ｑは前記ポリマーに縮合させた化合物の数を表し；ｒはカルボキシ基の置換数を表す。］。
  8. 　前記式（ＸＸ）で示される化合物が下記式（ＸＸＸ）で示される化合物である、請求項７に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
    ［式（ＸＸＸ）中、Ｄ、Ｒ１及びＲ２は請求項１に定義されるとおりであり、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は請求項２に定義されるとおりであり、ｑ及びｒは請求項７に記載されるとおりであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
    で示される部分は、カルボキシ基に由来する基及びカルボキシ基を除いたポリマーを表す。］。
  9. 　下記式（ＩＩＩ）で示される化合物と下記式（ＩＶ）で示される酸性多糖とを縮合する工程を含む、下記式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩の製造方法：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
    ［式（Ｉ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）におけるＤ、Ａ、Ｒ１、Ｒ２及びＰｏｌｙは、請求項１に定義されるとおりであり、また式（ＩＩＩ）で示される化合物は無機酸又は有機酸との塩を形成していてもよい。］。
  10. 　第１級又は第２級アミン化合物と、酸性多糖とを下記式（Ｖ）で示されるリンカーを介して結合させる工程を含む、コンジュゲートの製造方法：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
    （ここで、上記の（Ｖ）におけるＲ１、Ｒ２及びＡは、請求項１に定義されるとおりであり、記号†は、第１級又は第２級アミン化合物のアミノ基の窒素原子との結合点を表し、記号‡は、酸性多糖のカルボキシ基に由来するカルボニル炭素との結合点を意味する。）。
  11. 　前記リンカーが、下記式（ＶＩ）で表される、請求項１０に記載のコンジュゲートの製造方法：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
    （ここで、上記の（ＶＩ）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｌ、ｍ及びｎは請求項２に定義されるとおりであり、記号†及び‡は請求項９に定義されるとおりである。）
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