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WO2013035866A1 - 生物試料をそのままの姿で観察するための電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡 - Google Patents

生物試料をそのままの姿で観察するための電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡 Download PDF

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WO2013035866A1
WO2013035866A1 PCT/JP2012/072982 JP2012072982W WO2013035866A1 WO 2013035866 A1 WO2013035866 A1 WO 2013035866A1 JP 2012072982 W JP2012072982 W JP 2012072982W WO 2013035866 A1 WO2013035866 A1 WO 2013035866A1
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WO
WIPO (PCT)
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sample
electron microscope
composition
evaporation
chamber
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2012/072982
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English (en)
French (fr)
Inventor
孝彦 針山
康春 高久
鈴木　浩司
祥悟 村中
太田　勲
正嗣 下村
大佑 石井
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Japan Science and Technology Agency
Original Assignee
Japan Science and Technology Agency
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to EP12829935.1A priority patent/EP2755225B1/en
Priority to JP2013532684A priority patent/JP6055766B2/ja
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    • H01J2237/2002—Controlling environment of sample
    • H01J2237/2003—Environmental cells
    • H01J2237/2004—Biological samples

Definitions

  • the present invention relates to an observation method using an electron microscope for observing a biological sample as it is in a scanning electron microscope, a transmission electron microscope, and the like, a composition for suppressing evaporation under vacuum used therefor, a scanning electron microscope And a transmission electron microscope.
  • the sample for the scanning electron microscope is prepared by removing moisture by vacuum drying in advance, and then adding a conductive material (platinum, carbon, gold, palladium, etc.) to impart conductivity and increase the generation efficiency of secondary electrons.
  • a conductive material platinum, carbon, gold, palladium, etc.
  • the surface of the sample is coated by means such as vapor deposition or sputtering.
  • the moisture content of wet samples such as gel substances and foods can be observed at room temperature using a low vacuum SEM, cryo SEM, environmental control SEM (ESEM), or the like. According to these methods, not only a wet sample but also a sample can be observed as it is untreated. However, in order to perform observation at a high magnification, a high vacuum is required, and the vacuum resistance or conductivity of the sample is required. For this reason, it is difficult to obtain an image at a high magnification as it is in a living state even in the observation of a biological / biological sample.
  • Patent Document 1 and Non-Patent Document 2 describe that a sample wet with an ionic liquid was observed by SEM.
  • Non-patent document 2 describes the application to cells.
  • Patent Document 2 discloses a method of using an ionic liquid technique for observation with a transmission electron microscope.
  • the sample Since the measurement environment of the electron microscope is in a vacuum state, the sample is placed in an extremely dry state. For this reason, the sample is deformed or altered, and it is impossible to observe a state close to a living state.
  • a water-containing sample freezes instantly when placed under vacuum, and deformation or alteration occurs due to the ice crystals of the sample, making it impossible to observe a state close to the original state.
  • An electron beam is irradiated for observation with an electron microscope, but it is not deformed or denatured due to electrical or thermal factors caused by the irradiation of the electron beam, and the biological sample is left alive. It is necessary to obtain a microscopic image.
  • barrier performance so far we have proposed a technology that uses organic substances, inorganic substances, and organic / inorganic hybrid materials to create a film on the sample surface by means of spin coating, vapor deposition, coating, etc. to provide barrier performance.
  • organic substances, inorganic substances, and organic / inorganic hybrid materials to create a film on the sample surface by means of spin coating, vapor deposition, coating, etc. to provide barrier performance.
  • spin coating vapor deposition, coating, etc.
  • the present invention has been made in view of the circumstances as described above.
  • An observation method using an electron microscope that can suppress damage to the state of the sample itself without deforming the sample even under vacuum, and the vacuum used for the observation method. It is an object of the present invention to provide an evaporation suppression composition, a scanning electron microscope, and a transmission electron microscope.
  • an electron microscope can be used to observe a biological sample as it is, and a moving state can be observed.
  • the method for observing a sample with an electron microscope uses an evaporation suppression composition containing at least one selected from an amphiphilic compound, an oil and fat, and an ionic liquid on the surface of the sample. Forming a thin film by applying to the film, and covering the sample with the thin film; and displaying an electron microscope image of the sample covered with the thin film contained in the sample chamber under vacuum on the display device. It is said.
  • the method for observing a sample with an electron microscope of the present invention includes a step of applying an evaporation inhibiting composition containing at least one selected from an amphiphilic compound, an oil and fat, and an ionic liquid to the surface of the sample, and an evaporation inhibition
  • the sample to which the composition is applied is irradiated with an electron beam or plasma to form a polymer film as a thin film on the surface of the sample, the sample is covered with the polymer film, and the polymer film stored in a sample chamber under vacuum
  • a step of displaying on the display device an electron microscope image of the sample covered with includes a step of applying an evaporation inhibiting composition containing at least one selected from an amphiphilic compound, an oil and fat, and an ionic liquid to the surface of the sample, and an evaporation inhibition
  • the sample to which the composition is applied is irradiated with an electron beam or plasma to form a polymer film as a thin film on the surface of the sample, the sample is covered with the
  • the sample is irradiated with an electron beam for sample observation in the sample chamber of the electron microscope to cause a polymerization reaction, thereby forming a polymer film as a thin film on the surface of the sample.
  • the polymerization reaction is performed by irradiating the sample with an electron beam or plasma separate from the electron beam for sample observation using the electron microscope before the sample observation using the electron microscope. Then, a polymerized film is formed as a thin film on the surface of the sample.
  • the evaporation suppression composition contains an amphiphilic compound and at least one selected from a metal compound and a sugar.
  • an electron microscope image of the wet sample as it is wet is displayed on the display device without breaking the wet sample.
  • the evaporation suppression composition is applied to the surface of a living biological sample to form a thin film, and the sample is covered with a thin film. Displaying on a display device an electron microscopic image of the live movement of the biological sample covered with this thin film placed in the sample chamber.
  • the thin film suppresses a temperature drop caused by evaporation from the inside of the biological sample, gives the biological sample motility, and maintains the form of the biological sample itself.
  • the thin film maintains the body temperature for the biological sample to be active even under vacuum.
  • a scanning electron microscope is used to display the electron microscope image of the sample on the display device without causing the sample to be charged up.
  • composition for suppressing evaporation under vacuum forms a thin film on the surface of a sample containing a substance that can be evaporated under vacuum, covers the sample,
  • the composition for suppressing evaporation under vacuum used for providing a barrier ability to suppress evaporation thereof in the above-mentioned composition contains at least one selected from amphiphilic compounds, fats and oils, and ionic liquids.
  • a thin film is formed on the surface of a living biological sample so as to cover the biological sample, and the evaporation material in the biological sample is evaporated under vacuum. Used to provide an inhibiting barrier ability.
  • a polymer film is formed as a thin film on the surface of the sample by irradiating the sample to which the composition for suppressing evaporation is irradiated with an electron beam or plasma. Covered.
  • the composition for suppressing evaporation, contains an amphiphilic compound and at least one selected from a metal compound and a sugar.
  • a scanning electron microscope of the present invention is a scanning electron microscope used in the above-described method for observing a sample with an electron microscope, and includes a preliminary exhaust chamber capable of introducing a sample to be arranged in a sample chamber in the lens body, and a sample chamber And an exhaust device for degassing the preliminary exhaust chamber.
  • a glove box is provided in the preliminary exhaust chamber.
  • the sample chamber or the preliminary exhaust chamber is provided with a plasma irradiation device or an electron beam irradiation device.
  • a three-dimensional manipulator device capable of acting on the sample is provided in the sample chamber or the preliminary exhaust chamber.
  • the scanning electron microscope of the present invention is a scanning electron microscope used in the above-described method for observing a sample with the electron microscope, and the relative position between the secondary electron detector and the sample is three-dimensionally arranged in the sample chamber.
  • An adjustable detection position adjustment mechanism is provided.
  • a scanning electron microscope of the present invention is a scanning electron microscope used in the above-described method for observing a sample with an electron microscope, and includes a high-speed color camera capable of acquiring color information of a sample in a sample chamber. It is said.
  • a scanning electron microscope of the present invention is a scanning electron microscope used in the above-described method for observing a sample with an electron microscope, and includes a temperature adjustment device capable of adjusting the temperature of a sample stage in a sample chamber. Yes.
  • a scanning electron microscope of the present invention is a scanning electron microscope used in the above-described method for observing a sample by an electron microscope, and includes an electric sensor (surface resistance measurement, bioelectric response, etc.), an optical sensor ( Biostimulation light measurement, spectroscopic sensor, photon number measurement, etc.), gas sensor (measurement of biological polymer such as pheromone, oxygen concentration / nitrogen concentration measurement, etc.), water sensor (water vapor, surface moisture content measurement, etc.), and temperature It is characterized by including at least one sensor selected from sensors.
  • the transmission electron microscope of the present invention is a transmission electron microscope used in the above-described sample observation method using an electron microscope, and includes a preliminary exhaust chamber into which a sample to be placed in a sample chamber in a lens body can be introduced, and a sample chamber And an exhaust device for degassing the preliminary exhaust chamber.
  • a glove box is provided in the preliminary exhaust chamber.
  • the transmission electron microscope of the present invention is a transmission electron microscope used in the method for observing a sample by the electron microscope, wherein the evaporation suppression composition has electrons on both sides of the grid mesh on which the sample is arranged. It is characterized by having a polymerized film formed by irradiation with lines or plasma.
  • a living biological sample can be observed alive using an electron microscope, and a moving ultrafine structure can be observed.
  • FIG. 2 is a photograph showing a state of SEM video shooting in Example 1.
  • FIG. It is a photograph which shows the mode of SEM video imaging
  • FIG. 6 is a photograph showing a state of SEM video shooting in Example 3.
  • 6 is a photograph showing the state of SEM video shooting in Example 4.
  • 6 is a photograph showing a state of TEM video shooting in Example 5.
  • 10 is a photograph showing a state of SEM video shooting in Example 6.
  • 6 is a photograph showing a state of TEM video shooting in Example 7.
  • FIG. 10 is a photograph showing the state of SEM video shooting in Example 8.
  • 10 is a photograph showing a state of TEM video shooting in Example 9. It is a photograph which shows the mode of SEM video imaging
  • FIG. 10 is a photograph showing a state of SEM video shooting in Example 3.
  • Example 2 is a photograph of the polymer film of Example 11. It is a photograph which shows the mode of the polymeric film of the sample surface of Example 11, and the mode of SEM video imaging
  • vacuum means, for example, a range of 10 ⁇ 1 Pa or less, 10 ⁇ 2 to 10 ⁇ 4 Pa, particularly 10 ⁇ 4 to 10 ⁇ 8 Pa.
  • composition for suppressing evaporation of the present invention forms a barrier on the surface of a biological sample so that the biological sample can be put in the body of an electron microscope while it is alive and observed under an electron microscope. .
  • This barrier has a function (water barrier property) that can maintain the water in the living body in a liquid state without being dried even under vacuum (water barrier property), and a function that suppresses degassing of gaseous substances such as oxygen in the living body (gas barrier property)
  • water barrier property a function that suppresses degassing of gaseous substances such as oxygen in the living body
  • gas barrier property a function that suppresses degassing of gaseous substances such as oxygen in the living body
  • it also has a function (conductivity / heat resistance) to suppress electrical and thermal deformation due to electron beam irradiation in order to obtain an electron microscope image.
  • amphiphilic compounds, fats and oils, and ionic liquids retain water and air (gas) under vacuum (with water / gas barrier function).
  • a uniform protective film is formed, and the water / gas barrier ability is exhibited under atmospheric pressure and vacuum.
  • the water in the living body is not frozen because the biological sample remained alive despite being in a vacuum. That is, it is suggested from the observation results that the temperature decrease due to decompression is suppressed, and this indicates that the amphiphilic compound alone, the combined use of the amphiphilic compound and the metal compound or sugar, the fat or oil alone, or This is confirmed from the experiment of temperature measurement under vacuum of ionic liquid alone.
  • Amphiphilic compounds combined use of amphiphilic compounds with metal compounds or sugars, oils and fats, or ionic liquids give Surface Shielding Effect (SS effect). It is also found that it functions as a multifunctional barrier performance film because it is suppressed and thermal damage caused by electron beams is suppressed.
  • SS effect Surface Shielding Effect
  • a living organism / biological sample can be observed with an electron microscope in a living state.
  • the present invention is not limited to providing a solution for observing a biological / biological sample with an electron microscope, and widely provides a composition of an SS solution that gives a Surface Shielding Effect (SS effect).
  • SS effect Surface Shielding Effect
  • the SS solution which gives Surface Shielding Effect contains an amphiphilic compound, or contains an amphiphilic compound as a main component, a metal compound or a sugar, or contains fats and oils. Contains amino acids and derivatives thereof, vitamins and derivatives thereof, inorganic salts, metal oxides, fatty acids and derivatives thereof, conductive polymers, nanoclays, etc. in any proportion. In addition, it can be used for various purposes.
  • the SS solution contains an amphiphilic compound as a main component (base material).
  • a surfactant can be used as the amphiphilic compound.
  • Surfactants are largely distinguished from molecular structures such as anionic surfactants, cationic surfactants, nonionic surfactants, zwitterionic surfactants, naturally occurring surfactants, etc. . Although it is used in a wide range of fields such as industrial, food, and medical products, a certain barrier performance can be exhibited even if basically any surfactant is used.
  • the anionic surfactant is classified into, for example, a carboxylic acid type, a sulfate ester type, a sulfonic acid type, and a phosphate ester type.
  • specific examples include sodium dodecyl sulfate, sodium laurate, sodium ⁇ -sulfo fatty acid methyl ester, sodium dodecyl benzene sulfonate, sodium dodecyl ethoxylate sulfate, etc.
  • sodium dodecyl benzene sulfonate is used. It is preferable to use it.
  • the cationic surfactant is classified into, for example, a quaternary ammonium salt type, an alkylamine type, and a heterocyclic amine type.
  • Specific examples include stearyl trimethyl ammonium chloride, distearyl dimethyl ammonium chloride, didecyl dimethyl ammonium chloride, cetyl tripyridinium chloride, dodecyl dimethyl benzyl ammonium chloride, and the like.
  • nonionic surfactant for example, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene mono fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan mono fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, Examples include polyglycerin fatty acid ester, alkyl polyglycoside, N-methylalkylglucamide.
  • amphoteric surfactants include, for example, lauryldimethylaminoacetic acid betaine, dodecylaminomethyldimethylsulfopropylbetaine, 3- (tetradecyldimethylaminio) propane-1-sulfonate, 3-[(3-Colamidopropyl) dimethylammonio] -1-propanesulfonate (CHAPS), 3-[(3-Colamidopropyl) dimethylammonio] -2-hydroxy-1-propanesulfonate (CHAPSO) Etc.) are preferably used.
  • lauryldimethylaminoacetic acid betaine dodecylaminomethyldimethylsulfopropylbetaine
  • 3- (tetradecyldimethylaminio) propane-1-sulfonate 3-[(3-Colamidopropyl) dimethylammonio] -1-propanesulfonate (CHAPS), 3-[(3-Colamido
  • naturally-occurring surfactants include, for example, lecithin and saponin.
  • lecithin specifically, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, phosphatidylserine Phosphatidic acid, phosphatidylglycerol and the like are preferable.
  • saponin Kiraya saponin is preferable.
  • rhamnolipid sophorolipid, mannosyl erythritol lipid, etc.
  • biosurfactant it is preferable to use rhamnolipid, sophorolipid, mannosyl erythritol lipid, etc., as the microorganism-derived amphiphilic compound (biosurfactant).
  • surfactants particularly used in cosmetics include, for example, almond oil PEG-6, acyl (C12,14) Na aspartate, acyl (C12, 14) aspartate TEA, araffles-20, stearyl alcohol, alkyl (C11, 13, 15) sodium sulfate, alkyl (C11, 13, 15) TEA sulfate, alkyl ( C11,13,15) potassium phosphate, alkyl (C12,13) sulfate DEA, alkyl (C12,13) sodium sulfate, alkyl (C12,13) sulfate TEA, alkyl (C12,14,16) ammonium sulfate, alkyl (C12) -14) oxyhydroxypropyl arginine hydrochloride, alkyl (C 2-14) Diaminoethylglycine hydrochloride, alkyl (C 2-14) Diaminoethylglycine hydrochloride
  • fluorine-based surfactants can also be used. Specifically, for example, ammonium heptadecafluoro-1-octanesulfonate, ammonium pentadecafluorooctanoate, heptadecafluorooctanesulfonate, lithium hepadecafluoro-1-octanesulfonate, pentadecafluorooctanoate, penta Examples include decafluorooctanoic acid hydrate and potassium heptadecafluoro-1-octanesulfonate.
  • N-long chain acyl amino acid salts such as N-long chain acyl sarcosine salts, N-long chain acyl amino acid salts, N-long chain fatty acid acyl-N-methyl taurine salts, alkyl sulfates and alkylene oxide adducts thereof , Fatty acid amide ether sulfate, metal salt of fatty acid, sulfosuccinic acid surfactant, alkyl phosphate and its alkylene oxide adduct, higher alkyl sulfate ester, alkyl ether sulfate ester, alkyl hydroxy ether carboxylate, alkyl ether carboxyl
  • Anionic surfactant for example, N-long chain
  • the SS solution contains an amphiphilic compound and a metal compound. Any metal compound can be used as long as it contains a metal ion.
  • the metal compound may be a salt (single salt) composed of a cation and an anion, or a salt (double salt) composed of two or more kinds.
  • the above metal compound may be a compound such as oxide, hydroxide, halide, sulfate, nitrate, carbonate, acetate.
  • a compound such as oxide, hydroxide, halide, sulfate, nitrate, carbonate, acetate.
  • the metal compound may be a metal oxide.
  • a metal alkoxide is a compound represented by MOR and consists of a metal (M) and an alkoxide (RO ⁇ ) (R is a hydrocarbon).
  • Specific examples of the metal (M) include silicon, titanium, aluminum, boron, zirconium, boron, vanadium, tungsten, phosphorus, germanium, indium, hafnium, and molybdenum, and metal alkoxides can be obtained from various alcohols. .
  • These metal alkoxides may be used as they are, or a reaction product obtained by subjecting these metal alkoxides to a sol-gel reaction in the presence of an acid or an alkali may be used.
  • As the metal alkoxide two or more kinds may be mixed without using a single component.
  • the metal compound may be a metal complex.
  • the SS solution contains an amphiphilic compound and a sugar. It is a new finding by the present inventors to give an SS effect to a combination of a sugar and an amphiphilic compound.
  • sugars monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, polysaccharides and their derivatives are blended. Specific examples of the monosaccharide include glucose and fructose. Examples of the disaccharide include sucrose, and examples of the polysaccharide include heparin, chondroitin sulfate, pullulan, pectin, guar gum, xanthan gum, carrageenan, propylene glycol, and carboxymethylcellulose. preferable.
  • caramel, honey and beeswax may be used.
  • the SS solution contains fats and oils.
  • oils examples include silicone oil.
  • Silicone oil functions as a water retention agent that maintains the water environment of the tissue or cells of the biological sample, thereby achieving dynamic observation of the living biological sample. That is, it can be used as a material having a barrier property that does not lose tissue or cell water even under vacuum.
  • silicone oil for example, one having a viscosity of 1 to 100,000 mPa ⁇ s at 25 ° C. can be used.
  • Wako Pure Chemical Industries “636-04001”, Shin-Etsu Silicone “KF-54”, “KF-96” and the like can be used.
  • composition for suppressing evaporation (SS solution) of the present invention using silicon oil preferably contains 10% by weight or more of silicon oil with respect to the total amount of the composition, and other components as exemplified below May be blended.
  • the SS solution contains an ionic liquid.
  • Examples of the ionic liquid include imidazolium salts, pyridinium salts, piperidinium salts, pyrrolidinium salts, quaternary ammonium salts, phosphoniums, sulfoniums, pyrazoliums, and the like.
  • imidazolium salts include 1-alkyl-3-alkylimidazolium, 1,3-dimethylimidazolium, 1-ethyl-3-methylimidazolium, 1-butyl-3-methylimidazolium, 1-hexyl- 3-methylimidazolium, 3-methyl-1-octylimidazolium, 1-dodecyl-3-methylimidazolium, 1-dodecyl-3-methylimidazolium, 1-methyl-3-tetradecylimidazolium, 1- Hexadecyl-3-imidazolium, 1-octadecyl-3-methylimidazolium, 1-allyl-3-methylimidazolium, 1-allyl-3-methylimidazolium, 1-allyl-3-methylimidazolium, 1-allyl-3-methylimidazolium, 1-allyl-3-ethylimidazolium, 1-allyl -3-Butylimidazolium, 1,3-
  • Examples of 1-alkyl-2,3-dialkylimidazolium salts include 1-ethyl-2,3-dimethylimidazolium, 1,2,3-triethylimidazolium, and 1,2-dimethyl-3-propylimidazolium. And lithium, 1-butyl-2,3-dimethylimidazolium, 1-hexyl-2,3-dimethylimidazolium, 1,3-didecyl-2-methylimidazolium, and the like.
  • pyridinium salts examples include 1-methylpyridinium, 1-ethylpyridinium, 1-butylpyridinium, 1-hexylpyridinium, 1-ethyl-3-methylpyridinium, 1-methyl-4-methylpyridinium, 1-propyl-4 -Methylpyridinium, 1-propyl-3-methylpyridinium, 1-butyl-2-methylpyridinium, 1-butyl-3-methylpyridinium, 1-ethyl-3-hydroxymethyl, 1- (3-hydroxypropyl) pyridinium, etc. Is mentioned.
  • piperidinium salts examples include 1-methyl-1-propylpiperidinium, 1-butyl-1-methylpiperidinium, 1- (methoxyethyl) -1-methylpiperidinium, and the like.
  • pyrrolidinium salts include 1,1-dimethylpyrrolidinium, 1-ethyl-1-methylpyrrolidinium, 1-methyl-1-propylpyrrolidinium, 1-butyl-1-methylpyrrolidinium, 1 -(Methoxyethyl) -1-methylpyrrolidinium and the like.
  • quaternary ammonium salts include tetramethylammonium, tetrabutylammonium, butyltrimethylammonium, ethyl-dimethyl-propylammonium, tributylmethylammonium, methyltrioctylammonium, 2-hydroxyethylammonium, choline, N, N-diethyl-N-methyl-N- (2-methoxyethyl) ammonium, trimethylamine oxide and the like can be mentioned.
  • Examples of phosphoniums include tetrabutylphosphonium, tributylhexadecylphosphonium, triethylpentylphosphonium, triethyloctylphosphonium, tetraoctylphosphonium, triisobutylmethylphosphonium, tributyltetradecylphosphonium, triethyltetradecylphosphonium, and the like.
  • sulfoniums examples include triethylsulfonium and diethylmethylsulfonium.
  • pyrazoliums examples include 1-ethyl-2,3,5-trimethylpyrazolium, 1-propyl-2,3,5-trimethylpyrazolium, 1-butyl-2,3,5-trimethylpyrazo
  • guanidinium, N- (methoxyethyl) -N-methylmorpholinium, and the like can be given.
  • the anion sites may be as follows. That is, in addition to saturated / unsaturated hydrocarbon groups, aromatic hydrocarbon groups, ether groups, alkyl hydroxyl groups, chlorides, bromides, iodides, acetates, lactates, methoxysulfonates, ethoxysulfonates, dimethoxyphosphates, n-butylsulfonates, diethoxy Phosphate, ethyl sulfonate, n-hexyl phosphate, hydrogen phosphate, thiocyanate, octyl sulfonate, 2- (2-methoxyethoxy) ethyl sulfate, tricyanomethane, tetrafluoroborate, hexafluorophosphate, triflate, bis (trifluoromethylsulfonyl) Imide, trifluoromethanesulfonate, bis (trifluoromethylsulfonyl) Imide
  • the anion site may be any amino acid obtained by ion exchange by the method shown in J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 2398-2399.
  • the amino acid herein may be a monomer, a dipeptide or an oligopeptide.
  • Non-Patent Document 3 forms counter ions at a ratio of 1: 1 with respect to the imidazolium salt, but the ionic liquid in the present invention does not need to be at a ratio of 1: 1.
  • the SS solution contains an amphiphilic compound, or contains an amphiphilic compound and a metal compound or sugar, or contains an oil or fat, or contains an ionic liquid.
  • Amino acids and derivatives thereof, polyhydric alcohols, vitamins and derivatives thereof, fatty acids and derivatives thereof, polymer materials, and the like listed in the following items may be added at any ratio.
  • the amino acid and its derivative may be blended as the composition of the solution giving the SS effect.
  • amino acids include glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, methionine, asparagine, glutamine, proline, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine and the like
  • Examples thereof include hydrochlorides, those bonded with two or more molecules, and polymers thereof. These may be one kind alone or a mixture of two or more kinds. Furthermore, these derivatives may be sufficient.
  • a polyhydric alcohol and a derivative thereof may be blended.
  • Those having a hydroxyl group in the molecule and a low vapor pressure substance are preferred.
  • Specific examples include, for example, glycerin, triglyceride, polyresorcinol, polyphenol, tannic acid, urushiol, and the like other than those exemplified for the above naturally-derived amphiphilic compounds, and in particular, tannic acid is used. preferable.
  • Vitamins and their derivatives and related substances may be blended as the composition of the solution giving the SS effect.
  • retinal, ⁇ -carotene, vitamin B 3 (nicotinic acid, nicotinamide), vitamin B 6 (pyridoxine, pyridoxal, pyridoxamine) and vitamin B 9 (folic acid) are preferable.
  • vitamin derivatives include D-araboascorbic acid, cetoflavin T, 4-deoxypyridoxine hydrochloride, dibenzoylthiamine, 2,6-di-O-palmitoyl-L-ascorbic acid, flavin adenine dinucleotide disodium Hydrate, (+)-5,6-O-isopropylidene-L-ascorbic acid, 6-O-palmitoyl-L-ascorbic acid, proflavine hemisulfate hydrate, pyridoxal hydrochloride, pyridoxal 5-phosphate Examples thereof include monohydrate, pyridoxine 3,4-dipalmitate, sodium isoascorbate monohydrate, thiamine disulfide hydrate, thiamine disulfide nitrate, and the like.
  • vitamin-related substances include choline chloride, choline bromide, choline dihydrogen citrate, choline bitartrate coenzyme Q10, coenzyme Qo, methionine methylsulfonyl chloride, and inositols.
  • polymer material examples include polyvinyl alcohol, Teflon (registered trademark), polyvinylidene fluoride, tetraethoxysilane, tetramethoxysilane, titanium isopropoxide, zirconium butoxide and the like.
  • the ionic liquid as described above may be added to other essential components.
  • the following components may be blended as the composition of the solution that gives the SS effect.
  • Coordination compounds crown ether, cyclodextrin, resorcin cyclic tetramer, calixarene, dendrimer, etc.
  • Fatty acids and their derivatives Fatty acids and their derivatives: linoleic acid, oleic acid, palmitic acid, linolenic acid, etc.
  • Sugar and fatty acid derivatives hyaluronic acid, ceramide, amphiphilic compounds, collagen, amino acids, essential oils, petrolatum, etc.
  • Gelling agent Poly (pyridinium-1,4-diyliminocarbonyl-1,4-phenylenemethylene chloride, etc.
  • Dye Chlorophyll, carotenoid (lycopene), phycobilin, melanin, paprika dye, malachite green, etc.
  • Conductive polymer Polyacetylene, polyaniline, polythiophene, Nafion, etc.
  • Nanoclay Products marketed under the name Nanoclay Nanomer (R) Laponite and montmorillonite.
  • Matrix materials mainly used for MALDI method in mass spectrometry 3-amino-4-hydroxybenzoic acid, sinapinic acid, esculetin, 4-hydroxyazobenzene-2'-carboxylic acid, 3-hydroxy-2-pyridinecarboxylic acid Nicotinic acid, 2 ′, 4 ′, 6′-trihydroxyacetophenone, ⁇ -cyano-4-hydroxycinnamic acid, 2,5-dihydroxybenzoic acid and the like.
  • composition for suppressing evaporation of the present invention may be in a solid state or in a liquid state, but is preferably in a liquid and highly viscous state in order to maintain the water environment of the sample tissue under vacuum. Moreover, the thing of a solid state can be used in a liquid state, when using.
  • the evaporation inhibiting composition of the present invention can form a very thin film on the surface of the sample by, for example, dissolving the above-described components in water, an organic solvent, etc. and directly coating the sample.
  • the blending ratio of the amphiphilic compound, the metal compound and the sugar is not particularly limited, but for example, the following composition is preferred.
  • Amphiphilic compound (sodium dodecylbenzenesulfonate) / metal compound (ethylenediamine nickel complex) 0.005 / 0.001 to 0.05 / 0.01
  • Amphiphilic compound (sodium dodecyl sulfate) / metal compound (ethylenediamine nickel complex) 0.005 / 0.0001 to 0.05 / 0.001
  • Amphiphilic compound (sodium dodecylbenzenesulfonate) / metal compound (tetraammine cobalt complex) 0.005 / 0.001 to 0.05 / 0.01
  • Amphiphilic compound (Tween 20) / sugar (trehalose) 3/1-20/2
  • Amphiphilic compound (Tween 20) / sugar (pullulan) 3
  • samples for TEM observation are processed by media application, adhesion, coating, coating, embedding and the like.
  • the film thickness of the thin film formed on the sample surface in this way can be in the range of 5 nm to 1000 nm, for example.
  • biological sample includes prokaryotes and eukaryotes.
  • Prokaryotes include eubacteria and archaea.
  • Eubacteria include Acidobacteria, Aquifex, Actinobacteria, Ersimicrobium, Cardisericum, Chlamydia, Chlorobium, Chloroflexus, Crisiogenes, Thermodesulfobacterium, Thermomicro Via, Cyanobacteria, Gematimonus, Sinergistes, Spiro réelle, Dictioglomus, Deinococcus-Thermus, Tenerikutes, Deferibacter, Thermotoga, Nitrospira, Bacteroides, Firmictes, Fibrobacter, This includes the Fusobacterium gate, Planktomicus gate, Proteobacteria gate, Welcom microbium gate, and Lentisfaela gate.
  • Archaeobacteria include Clenarchiota Gate (Kai), Yuriakiota Gate (Kai), Colarchiota Gate (Kai), Nanoarchotata Gate, and Taum Archoicide Gate.
  • Eukaryotes include the Protists, Plants, Fungi and Animal kingdoms.
  • the protozoan kingdom includes algae (green algae, brown algae, red algae, diatoms, Euglena plant gates, cryptophyte gates, dinoflagellate plant gates), protozoa (ciliata, rhizopods, amoeba, foraminifera, Solar insects, radiolarians), spore insects (apicomplexa, microspores, myxospores), flagellates (trypanosomes, flagellates, hyperflagellates, polyflagellates)), other moths, deformed fungi, cellular It includes slime molds, Labyrinthula, and trichomes.
  • algae gate In the plant kingdom, there are green algae gate, moss plant gate, axle algae gate, vascular plant subfamily (old pine balun gate, higeokazura gate, toxa plant gate, red snapper gate, fern plant gate, cone plant gate (pine gate), cycad Gate, Ginkgo Gate, Maou Gate, Angiospermia Gate (Moglen Gate (Dicotyledon Plants (Mokuren)), Monocotyledon Plants (Lily))).
  • vascular plant subfamily old pine balun gate, higeokazura gate, toxa plant gate, red snapper gate, fern plant gate, cone plant gate (pine gate), cycad Gate, Ginkgo Gate, Maou Gate, Angiospermia Gate (Moglen Gate (Dicotyledon Plants (Mokuren)), Monocotyledon Plants (Lily))).
  • the fungal kingdom includes Aspergillus oryzae, zygomycetes (mushrooms, spider molds), ascomycetes (yeast, red mold), basidiomycetes (mushrooms), imperfect fungi, and lichens.
  • anatomical animal phylum Horticidae
  • anal anatomical gate helminth phylum
  • brachiopod phylum mollusc phylum (shellfish, squid, octopus), arachnid gate, star mouth zoo ( Beetle), caterpillar gate, annelid gate (earthworm, sandworm), slow-walking animal gate (kumushi), five-necked animal gate, clawed animal gate (kalegoridae), arthropod gate (anchor antler) Horseshoe Crab (Spider Crab), Spider Upper (Spider, Scorpion)), Crustacea (Shrimp, crab), multi-legged diatomite (centipede class (lip leg class, centipede), komcade class (joint class, komkade), edahgemushi class (small leg class, edahegushi), millipede class (double leg class, millipede)
  • the evaporation suppression composition is applied to the surface of the sample to form a thin film.
  • the sample can be observed by displaying on the display device an electron microscope image of the sample covered and covered with this thin film contained in the sample chamber under vacuum.
  • the sample to which the evaporation inhibiting composition is applied is irradiated with an electron beam or plasma, and a polymer film (polymer film) is formed as a thin film on the surface of the sample.
  • the sample can be observed by forming and covering the sample with this polymerized film, and displaying on the display device an electron microscope image of the sample covered with this polymerized film housed in a sample chamber under vacuum.
  • This polymerized film can be formed on the surface of a sample by causing a polymerization reaction by irradiating the sample with an electron beam for sample observation in a sample chamber of an electron microscope.
  • the sample before the sample observation with the electron microscope, the sample can be preliminarily polymerized by irradiating the sample with an electron beam or plasma separate from the electron beam for sample observation with the electron microscope, and can be formed on the surface of the sample.
  • Irradiation conditions are appropriately selected depending on the evaporation suppression composition to be used, and are not particularly limited.
  • an SEM electron beam is applied to a biological sample covered with the evaporation suppression composition without conventional pretreatment. (For example, about 5.0 kV) by irradiating in the sample chamber for 60 minutes, SEM observation of a living biological sample in a high vacuum (for example, 10 -4 -10 -7 Pa), for example, in a normal FE-SEM Observation becomes possible.
  • the biological sample covered with the evaporation-suppressing composition without conventional pretreatment is irradiated with plasma for 3 minutes in advance, so that the living biological sample in a high vacuum can be observed by SEM. TEM observation is possible.
  • the surface of the sample is covered with a thin polymer film by such electron beam or plasma irradiation.
  • the thickness of this polymerized film can be in the range of 5 nm to 1000 nm, for example, when it is formed on the surface of a biological sample.
  • Polymerization by plasma irradiation can be performed, for example, using a conventional ion sputtering apparatus or the like under conditions of a pressure of 10 ⁇ 3 to 10 5 Pa, ⁇ 20 to + 80 ° C., and 1 to 10 kV DC. Alternatively, it can be carried out by an apparatus or method such as a reaction tube used in conventional plasma polymerization.
  • a sample for SEM observation is processed by application, adhesion, coating, coating, or the like of an evaporation suppression composition.
  • an evaporation suppression composition for example, in the case of application, after application, excess liquid is blotted with a soft cloth-like paper such as Kimwipe, filter paper, or the like.
  • a sample for TEM observation is processed by application, adhesion, coating, coating, embedding, or the like of the evaporation inhibiting composition.
  • the sample can be observed without damaging the state of the sample itself without deforming the sample.
  • a living biological sample can be observed alive using an electron microscope, and a moving state can be observed.
  • the composition that provides the SS effect is not limited to a sample of an electron microscope, and can suppress loss of the sample in a vacuum.
  • the composition for suppressing evaporation of the present invention functions as a good visualization agent for observing a sample with an electron microscope.
  • Surface-Shielding-Effect (SS effect) that suppresses damage caused by drying, ice crystals, and temperature changes under reduced pressure, and also barriers water / gas in the sample.
  • a good secondary electron image is given by electron beam irradiation under vacuum, for example, by preventing charging by electron beam irradiation. Enables electron microscope observation of live samples at high magnification in the live state.
  • composition for suppressing evaporation of the present invention functions as a good visualization agent for observing a sample with an electron microscope, and is therefore suitable for use in observing a sample with a scanning electron microscope or a transmission electron microscope.
  • composition for observing the shape of a sample itself without deforming the sample in a sample observation method using an electron microscope, particularly in a biological / biological sample.
  • a protective film is formed on the surface of the biological sample by a chemical substance.
  • the membrane prevents water and air (gaseous substances) contained in the biological sample from being lost under vacuum.
  • the film can be formed under atmospheric pressure conditions or vacuum conditions, and the formed film becomes more robust under vacuum.
  • the film can be formed as a single film or multiple layers.
  • the composition for suppressing evaporation of the present invention imparts a barrier ability to a substance having evaporability such as water and gas in an organism under atmospheric pressure and vacuum. Its ability can prevent the evaporation of biological matter under vacuum.
  • the ability to exercise can be imparted without causing a temperature drop due to evaporation, the form of the biological sample itself can be maintained, and the body temperature at which the living organism can operate can be maintained even under reduced pressure.
  • a living sample When the sample is covered with the evaporation inhibiting composition of the present invention, a living sample can be coated as it is, and the living organism can survive even after being coated.
  • the living state of the biological sample By covering the body surface of a living organism with a thin film of the composition for inhibiting evaporation of the present invention, the living state of the biological sample can be observed with a scanning electron microscope and the structure of a biological fine surface and the like.
  • the living surface of a living sample can be directly observed without being charged (charged up) with a scanning electron microscope by covering the body surface of the living organism. .
  • composition for suppressing evaporation of the present invention enables not only a biological sample but also a wet sample of a water-containing sample to be observed with an electron microscope under vacuum without breaking the sample.
  • the composition for suppressing evaporation of the present invention suppresses deformation and alteration of the sample even during measurement with an electron microscope, and does not cause significant damage to the sample before and after the measurement.
  • the water / gas barrier performance and suppression of a significant decrease in temperature in the sample are exhibited even when irradiated with an electron beam under vacuum.
  • it prevents charging by electron beam irradiation and suppresses thermal damage.
  • sample observation by a scanning electron microscope and a transmission electron microscope can be performed by an apparatus having a configuration known so far.
  • a scanning electron microscope is generally composed of a lens barrel (mirror body) and an operation unit.
  • generation of an electron beam by an electron gun narrowing of an electron beam by an electron lens, shaping of an electron probe, scanning of an electron probe in the observation area of the sample surface by a deflection coil, and the like are performed.
  • the sample chamber in which the sample is placed includes a sample stage and a detector that detects a signal emitted from the sample. Since the lens barrel must be maintained in a clean vacuum, a vacuum exhaust mechanism is provided according to the purpose.
  • the operation unit controls the generation of the electron beam, the lens action of the electron lens, astigmatism correction, the scanning range (magnification) and scanning speed of the electron probe on the sample surface, and the detected signal is displayed on the CRT. Display as video.
  • sample observation by a scanning electron microscope and a transmission electron microscope can be performed by an apparatus having a configuration known so far, but an apparatus having a novel configuration as described below is the present invention. Suitable for the method.
  • FIG. 22 is a diagram schematically showing the main part of an embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • the scanning electron microscope (SEM) 1 includes a preliminary exhaust chamber 2 into which a sample 4 disposed in a sample chamber in the body can be introduced, and an exhaust device 7 for degassing the sample chamber and the preliminary exhaust chamber 2. .
  • the sample is set in the sample chamber for observation.
  • a preliminary exhaust chamber 2 is provided as a sample exchange chamber between the sample chamber and the outside, and a sample exchange rod is provided. 3, the sample 4 is taken in and out.
  • This preliminary exhaust chamber 2 communicates with an exhaust device 7 such as a vacuum pump, and an adjustment valve 6 such as a needle valve is provided in an exhaust passage between them, and a Pirani vacuum gauge is located upstream of the adjustment valve 6 on the exhaust side.
  • a vacuum gauge 5 is provided.
  • a mechanism in which the vacuum gauge 5 and the adjusting valve 6 are combined is attached to the SEM 1 so that the evacuation speed up to the ultimate vacuum in the rotary pump region can be controlled.
  • This step-by-step exhaust system (which can be used at different degrees of vacuum) is equipped with a high-performance vacuum pump so that the pre-exhaust chamber 2 and the sample chamber can be enlarged and a large chamber can be evacuated efficiently.
  • FIG. 23 is a diagram schematically showing the main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • (a) is a front view of the SEM body and power supply
  • (b) is a side view thereof
  • (c) is a side view with the glove box removed
  • (d) is a side view with the glove box attached
  • (e ) Is a perspective view showing a state in which an inert gas cylinder is attached to the glove box.
  • the preliminary exhaust chamber 2 is provided with a glove box 12.
  • a glove box By installing a glove box in the preliminary exhaust chamber 2, it is possible to work in a vacuum.
  • the glove box 12 is housed in the sample chamber 10 below the mirror body 8 of the SEM 1 to which the power source 9 is attached, and the sample folder 11 is housed in the housing 14 in the glove box 12. It is installed side by side.
  • the glove box 12 has a work inlet 15 to which rubber gloves or the like are attached and a window portion 14 through which the inside can be seen, so that the work of handling the sample can be performed under vacuum. And it is possible to introduce
  • a plasma polymerization film can be formed in the glove box 12 connected to the SEM 1.
  • the glove box 12 can handle samples under vacuum, and as shown in (e), the glove box 12 is provided with an inert gas cylinder 16 into which an inert gas such as argon or nitrogen can be introduced. It is also possible to replace the inside of the box 12 with an inert gas. This is suitable for plasma processing and the like. For example, when a polymer film is formed on the surface of the sample by a polymerization reaction in the preliminary exhaust chamber 2, the reaction can be controlled by filling a specific gas such as nitrogen or argon.
  • FIG. 24 is a diagram schematically showing the main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • the preliminary exhaust chamber 2 is provided with a plasma irradiation device or an electron beam irradiation device 18.
  • this plasma irradiation apparatus or the electron beam irradiation apparatus 18 may install this plasma irradiation apparatus or the electron beam irradiation apparatus 18 in the sample chamber of SEM1.
  • the preliminary exhaust chamber 2 is provided with a transparent bell jar 17. Via this transparent bell jar 17, it is possible to irradiate plasma or electron beam from a plasma irradiation device or electron beam irradiation device 18.
  • a handy type that can be held in the hand is added.
  • Each can also be made available.
  • the irradiation diameter of the plasma can be adjusted in the range of several nanometers to several tens of centimeters, and the irradiation area and intensity can be changed according to the size of the sample 4, not only the current amount can be controlled, The device can change the size of the irradiation diameter itself.
  • the sample stage on which the sample 4 is arranged may have a function of rotating three-dimensionally so that the entire surface of the sample can be uniformly polymerized by electron beam or plasma irradiation.
  • a design that allows the electron beam or plasma to pass through the sample stage can be applied so that the polymerization reaches the back side of the sample.
  • a CCD camera that reflects the work in the preliminary exhaust chamber 2 can be installed to monitor the state of the sample 4 in the preliminary exhaust state and the state of plasma irradiation.
  • control of the irradiation time or current amount of the plasma irradiation device or electron beam irradiation device 18 is possible. Can be controlled automatically or manually.
  • FIG. 25 is a diagram schematically showing the main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • a three-dimensional manipulator device 21 capable of acting on the sample 4 is provided in the sample chamber 19.
  • the three-dimensional manipulator device 21 may be installed in the preliminary exhaust chamber 2.
  • This three-dimensional manipulator device 21 is used for controlling movement of a sample such as a living organism as a target (including blur reduction at the time of viewing).
  • the three-dimensional manipulator device 21 can also be used for fine biological dissection, stimulation, biological signal derivation, and the like.
  • a three-dimensional manipulator device 21 can be provided in the sample chamber 19 as a moving mechanism for moving a member used for sample movement, microdissection of the sample, or physical or chemical stimulation.
  • the three-dimensional manipulator device 21 as a moving mechanism can be used as a device for performing fine dissection, physical or chemical stimulation of the sample 4 while observing with the SEM 1.
  • FIG. 26 is a diagram schematically showing a main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • a sample position adjustment mechanism capable of three-dimensionally adjusting the relative position between the secondary electron detector 22 and the sample 4 is provided in the sample chamber 19.
  • the secondary electron detector 22 is movable within the SEM 1 and is brought close to the sample 4 or touched at a special angle as necessary. Thereby, detection secondary electrons can be enhanced.
  • This detection position adjustment mechanism is suitable for installing a high-speed photographing device. That is, it is possible to increase the scanning speed, and for the TV mode capable of slow reproduction, it is possible to control the area of the detector, control the working distance to the detector, etc., and collect secondary electrons without waste. Software that characterizes the motion by taking the difference between the front and back can also be applied as an interpolation technique.
  • FIG. 27 is a diagram schematically showing a main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • a high-speed color camera 23 capable of acquiring color information of the sample 4 is provided in the sample chamber 19.
  • the present invention it becomes possible to observe the sample 4 as it is, so that the color of the sample 4 is maintained as it is. Therefore, by installing a high-speed color camera 23 in the sample chamber 19 so that information such as color can be recorded, it is possible to use the recorded actual color and apply it as a pseudo color to the SEM observed image. it can.
  • FIG. 28 is a diagram schematically showing the main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • a temperature adjusting device 24 that can adjust the temperature of the sample stage 20 in the sample chamber 19 is provided.
  • a stage that is not affected by a magnetic field that can control the temperature of the sample stage 20 between ⁇ 20 ° C. and 100 ° C. from outside the mirror body can be installed.
  • a Peltier element or the like can be installed as a device that keeps the temperature of the sample stage 20 constant (for example, 37 ° C.).
  • the temperature adjusting device 24 can adjust the temperature of the sample 4 such as a biological sample placed on the sample stage 20.
  • FIG. 29 is a diagram schematically showing the main part of another embodiment of the scanning electron microscope of the present invention.
  • the sample chamber 19 is provided with various sensors 25.
  • Examples of the sensor 25 include an electric sensor, an optical sensor, a gas sensor, a water sensor, and a temperature sensor.
  • a high-sensitivity sensor (with a dark field camera) that can measure with weak light can be installed.
  • the sensor 25 can obtain information on the sample 4 such as a biological sample placed on the sample stage 20, can respond to a physical or chemical stimulus, monitor or measure a polymerization reaction, or the like.
  • FIG. 30 is a diagram schematically showing the main part of an embodiment of the transmission electron microscope of the present invention
  • FIG. 31 is a perspective view schematically showing the main part of FIG.
  • each of both surfaces of a grid mesh 33 on which a sample is arranged has a polymerized film 32 formed by irradiating the evaporation suppressing composition with an electron beam or plasma.
  • a grid mesh 33 sandwiched between upper and lower polymer films 32 is disposed under a c-ring 30 and an o-ring 31.
  • the polymer film 32 can be sealed with, for example, vacuum grease and an O-ring.
  • a sample cell 34 is obtained by superposing a polymer film 32 by plasma on a grid mesh 33, placing the cell 34 on the polymer film 32, applying the composition for evaporation suppression, and irradiating with plasma.
  • the polymer film 32 is formed.
  • the transmission electron microscope includes a preliminary exhaust chamber into which a sample placed in the sample chamber in the lens body can be introduced, and an exhaust device for degassing the sample chamber and the preliminary exhaust chamber. Can be provided.
  • a plasma irradiation apparatus or an electron beam irradiation apparatus can be provided in the sample chamber or the preliminary exhaust chamber.
  • the polymerization film 32 can be formed by applying the evaporation suppressing composition and irradiating the plasma.
  • the irradiation area can be changed according to the size of the sample.
  • dynamic analysis can be performed while alive even in a high vacuum. Samples with gold colloid bound can also be observed.
  • STEM SccanningScantransmission electron microscope
  • SEM observation was typically performed using a field emission scanning electron microscope (FESEM, S-4800 (Hitachi)) at an acceleration voltage of 5.0 kV.
  • FESEM field emission scanning electron microscope
  • S-4800 Hitachi
  • the SEM image data was transferred directly to a video recorder (Hi-band digital formatted video recorder, Pioneer, DVR-DT95).
  • TEM observation was typically performed using JEM-1220 (JEOL) at an acceleration voltage of 120 kV.
  • Plasma polymerization is typically performed by an ion sputtering system (JFC-1100, JEOL) in which a metal target is disassembled, and plasma irradiation is performed at 1.0 kV DC (8.0 mA) for 3 minutes at room temperature at a vacuum level of about 1.0 Pa. Went.
  • JFC-1100, JEOL ion sputtering system
  • Plasma irradiation is performed at 1.0 kV DC (8.0 mA) for 3 minutes at room temperature at a vacuum level of about 1.0 Pa.
  • An evaporation inhibiting composition was prepared using 0.1% aqueous solution of sodium laurylbenzenesulfonate as an amphiphilic compound and 0.01 wt% of an ethylenediamine nickel complex as a metal compound.
  • the live beetle was immersed in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off the excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • Example 2 An evaporation inhibiting composition was prepared using 0.1% aqueous solution of sodium laurylbenzenesulfonate as an amphiphilic compound and 0.01 wt% of an ethylenediamine nickel complex as a metal compound.
  • the live fly insect was dipped in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off the excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • Example 3 An evaporation inhibiting composition was prepared using Tween 20 as a 10% aqueous solution as an amphiphilic compound, 1% (w / v) trehalose as a sugar, and 0.1% (w / v) as pullulan.
  • Example 4 An evaporation inhibiting composition was prepared using Tween 20 as a 10% aqueous solution as an amphiphilic compound, 1% (w / v) trehalose as a sugar, and 0.1% (w / v) as pullulan.
  • Live owl larvae were immersed in the evaporation-inhibiting composition for 1 minute, then removed and the excess was wiped off, and the body surface was covered with a thin film.
  • Example 5 An evaporation inhibiting composition was prepared using Tween 20 as a 10% aqueous solution as an amphiphilic compound, 1% (w / v) trehalose as a sugar, and 0.1% (w / v) as pullulan.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off the surplus, and the body surface was covered with a thin film.
  • Example 6 An evaporation inhibiting composition was prepared using 0.1% aqueous solution of sodium laurylbenzenesulfonate as an amphiphilic compound and 0.01 wt% of an ethylenediamine nickel complex as a metal compound.
  • Ants were wrapped in gelatin capsules, fixed with antistatic carbon tape, and the holes were closed with gelatin. In this way, while putting the ants in the gelatin capsule and keeping the atmosphere inside, only the leg of the observation site is taken out of the capsule, the evaporation suppression composition is applied to this leg part, and SEM observation is kept alive Went. Video of the movement of the leg was able to be taken (FIG. 6).
  • Example 7 An evaporation inhibiting composition was prepared using 0.1% aqueous solution of sodium laurylbenzenesulfonate as an amphiphilic compound and 0.01 wt% of an ethylenediamine nickel complex as a metal compound.
  • Example 8 An evaporation inhibiting composition was prepared using Tween 20 as a 10% aqueous solution as an amphiphilic compound, 1% (w / v) trehalose as a sugar, and 0.1% (w / v) as pullulan.
  • Example 9 An evaporation inhibiting composition was prepared using Tween 20 as a 10% aqueous solution as an amphiphilic compound, 1% (w / v) trehalose as a sugar, and 0.1% (w / v) as pullulan.
  • the live planarian was dipped in a composition for suppressing evaporation (silicone oil) for 1 minute, then taken out and wiped off the excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • a composition for suppressing evaporation silicone oil
  • Tween 20 was used as an amphiphilic compound.
  • 50% (v / v) Tween 20 was dissolved in 100% ethanol, spread on a glass using a spin coater (3000rpm, 5s) (SC8001, Aiden) and plasma polymerized. .
  • the polymerized thin film was dissociated from the glass plate in ethanol.
  • Fig. 11 (a) is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (Tween 20) prepared by plasma irradiation, (b) is a chemical formula of Tween 20, (c) is an AFM image of the film surface, and (d) is a cross section of the film. It is a TEM image. In (d), the space between the arrows is a polymerized film of Tween 20. A thin layer was formed on the irradiation side surface (the part between the arrowheads).
  • composition for suppressing evaporation was prepared by using Tween 20 as a 1% aqueous solution as an amphiphilic compound.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off the surplus, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 12 shows a conventional SEM image and a new SEM image using a sample coated with a plasma irradiation film (Tween 20).
  • (a) is an image of a Bow-Fura optical microscope
  • (b) to (d) are SEM conventional images
  • (f) to (n) are plasma-irradiated individuals (without Tween20 coating (fi), with (kn))
  • (e, j , O) is a TEM image of the sample cross section.
  • the living bowfra (a, time 0) was irradiated with an electron beam for 30 minutes under high vacuum in the SEM (b-d, time 30). Arrowheads indicate areas of electrostatic charge.
  • k-n a live bowfra was irradiated with an electron beam by a conventional SEM (k is an optical microscope image) and then observed (l-n).
  • FIG. 13A is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (Triton TM X-100) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 13B is a chemical formula of Triton TM X-100.
  • Triton TM X-100 was used as an amphiphilic compound as a 1% aqueous solution to prepare an evaporation suppression composition.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 14 (a) is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (Triton TM X-100) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 14 (b) is a chemical formula of pluronic (R) F-127.
  • pluronic (R) F-127 was used as an amphiphilic compound as a 1% aqueous solution to prepare an evaporation inhibiting composition.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 14 shows 0 min and d shows 30 min. The inside of d is enlarged (e) and further enlarged (f). Even after the start of electron beam irradiation, the larvae of the bow flares were observed to move.
  • Brij (R) 35 was used as the amphiphilic compound. 1% (v / v) Brij (R) 35 was dissolved in distilled water, spread on a glass using a spin coater and plasma polymerized, and a self-supporting thin film was obtained in the same manner as in Example 11.
  • FIG. 15A shows an optical microscope image of a self-supporting polymer film (Brij (R) 35) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 15B shows a chemical formula of Brij (R) 35.
  • Brij (R) 35 was used as an amphiphilic compound as a 1% aqueous solution to prepare an evaporation inhibiting composition.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 15 shows 0 min and d shows 30 min. The inside of d is enlarged (e) and further enlarged (f). Even after the start of electron beam irradiation, the larvae of the bow flares were observed to move.
  • CHAPS was used as an amphiphilic compound. 1% (v / v) CHAPS was dissolved in distilled water, spread on a glass using a spin coater and plasma polymerized, and a self-supporting thin film was obtained in the same manner as in Example 11.
  • FIG. 16 (a) is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (CHAPS) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 16 (b) is a chemical formula of CHAPS.
  • composition for suppressing evaporation was prepared by using CHAPS as an amphiphilic compound in a 1% aqueous solution.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 16 shows an optical microscope image of a self-supporting polymer film (MEGA8) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 17B shows a chemical formula of MEGA8.
  • MEGA8 was used as an amphiphilic compound as a 1% aqueous solution to prepare an evaporation inhibiting composition.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 17 shows 0 min and d shows 30 min. The inside of d is enlarged (e) and further enlarged (f). Even after the start of electron beam irradiation, the larvae of the bow flares were observed to move.
  • Sodium cholate was used as an amphiphilic compound. 1% (v / v) sodium cholate was dissolved in distilled water, spread on a glass using a spin coater and plasma polymerized, and a self-supporting thin film was obtained in the same manner as in Example 11.
  • FIG. 18A is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (Sodium cholate) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 18B is a chemical formula of Sodium cholate.
  • composition for suppressing evaporation was prepared using 1% aqueous sodium cholate as an amphiphilic compound.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • N-Dodecyl- ⁇ -D-maltoside was used as an amphiphilic compound. 1% (v / v) of n-Dodecyl- ⁇ -D-maltoside was dissolved in distilled water, spread on a glass using a spin coater, and plasma polymerized. Got. FIG. 18
  • FIG. 19A is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (n-Dodecyl- ⁇ -D-maltoside) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 19B is a chemical formula of n-Dodecyl- ⁇ -D-maltoside. It is.
  • n-Dodecyl- ⁇ -D-maltoside was used as an amphiphilic compound as a 1% aqueous solution to prepare a composition for suppressing evaporation.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • FIG. 20 (a) is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (n-Octyl- ⁇ -D-glucoside) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 20 (b) is a chemical formula of n-Octyl- ⁇ -D-glucoside. It is.
  • composition for suppressing evaporation was prepared using n-Octyl- ⁇ -D-glucoside as an amphiphilic compound as a 1% aqueous solution.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.
  • Example 20 1,3-Diallylimidazolium bromide was used as the ionic liquid. 1% (v / v) 1,3-Diallylimidazolium bromide was dissolved in distilled water, spread on a glass using a spin coater and plasma polymerized, and a self-supporting thin film was obtained in the same manner as in Example 11. .
  • FIG. 20 1,3-Diallylimidazolium bromide was used as the ionic liquid. 1% (v / v) 1,3-Diallylimidazolium bromide was dissolved in distilled water, spread on a glass using a spin coater and plasma polymerized, and a self-supporting thin film was obtained in the same manner as in Example 11. .
  • FIG. 20 (a) is an optical microscope image of a self-supporting polymer film (1,3-Diallylimidazolium bromide) prepared by plasma irradiation
  • FIG. 20 (b) is a chemical formula of 1,3-Diallylimidazolium bromide.
  • 1,3-Diallylimidazolium bromide was used as an ionic liquid as a 1% aqueous solution to prepare an evaporation suppression composition.
  • Live owl larvae were soaked in the composition for evaporation suppression for 1 minute, then taken out, wiped off excess, and the body surface was covered with a thin film.

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Abstract

　電子顕微鏡を用いて生物試料を生きたままで観察することができ、動いている様子を観察することができる、電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を提供する。　本発明の電子顕微鏡による試料の観察方法は、両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有する蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用して薄膜を形成し、この試料を薄膜で覆う工程と、真空下の試料室に収容されたこの薄膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含むことを特徴としている。

Description

生物試料をそのままの姿で観察するための電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡
　本発明は、走査型電子顕微鏡や透過型電子顕微鏡などにおいて、生物試料をそのままの姿で観察するための電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡に関する。
　走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡で試料の観察を行うためには、試料を真空下におくことから、試料の耐真空性と、像を得るために必要な導電性の付与が必要である。
　走査型電子顕微鏡の試料の調製は、試料を予め真空乾燥することによって水分を除去した後に、導電性を付与し２次電子の発生効率を上げるために導電材料（白金、炭素、金、パラジウム、オスミニウムなど）を蒸着、スパッタなどの手段で試料の表面にコートして行われる。
　金属や半導体などのように、導電性を有し、耐真空性があるものは、このような前処理は必要としないが、導電性が無いものは導電性材料に導電膜コートが必要である。また、耐真空性などに劣るもの、すなわち、真空乾燥や、電子顕微鏡観察時の真空中で電子ビーム照射によって変形するものである場合も、導電性材料による導電膜コートが必要である。
　生物／生体試料は、大量の水分を含むため、予め真空乾燥を要する場合が多い。このため、表面の形状が著しく変形してしまうこともあり、生きた状態をそのままの状態で電子顕微鏡観察することは困難であった。
　ゲル状物質、食品などの湿潤試料の含水状態は、低真空SEMやクライオSEM、環境制御型SEM（ESEM）などを用いて、常温での観察が可能である。これらの方法によれば、湿潤試料に限らず、試料を未処理のままで観察可能である。しかし、高倍率での観察を行うためには、高真空にする必要があり、試料の耐真空性、あるいは導電性が必要となる。そのため、生物／生体試料の観察においても、生きた状態のままの高倍率での像を得ることは困難であった。
　近年は、イオン液体を用いた電子顕微鏡観察方法が提案されている。特許文献１および非特許文献２には、イオン液体を用いて濡れた試料をSEM観察したことが記載されている。細胞への応用についても非特許文献２に記載されている。また、特許文献２にはイオン液体の技術を透過型電子顕微鏡観察に用いる方法が開示されている。
国際公開ＷＯ２００７／０８３７５６号パンフレット 特開２００９－２６６７４１号公報
Langmuir, 2011, 27, 9671-9675 Microsc. Res. Tech. 2011, 74, 415-420
　しかしながら、環境SEMを用いる観察や上記の各文献による方法であっても、試料のそのままの状態を直接高倍率での電子顕微鏡像を得ることはできていない。そして生物／生体試料に関しては、生きたままの状態を生きたままで電子顕微鏡観察することは達成されていない。
　すなわち、生物試料においては、生きたままの生物試料の動いている様子の電子顕微鏡観察を行うことは達成されていない。
　また、電子顕微鏡での観察後、回収した試料が成長を続けることや、生き続けるということはできなかった。すなわち生還を果たす電顕観察は不可能とされていた。
　電子顕微鏡の測定環境は、真空状態であるため試料は極度の乾燥状態におかれる。このため試料は変形や変質がおこり、生きたままの状態に近い状態を観察することができない。
　さらに、含水試料においては、真空下に置かれた際に瞬時に凍結してしまい、試料の氷晶によって変形や変質がおこり、もとの状態に近い状態を観察することができない。
　生物試料においては、真空下におかれるため、外界からの酸素供給を絶たれ、酸欠状態に陥る。また、乾燥状態におかれるため、干物のようになってしまい（イカがスルメのようになってしまう。）、生物試料を生きたままの状態で電子顕微鏡の鏡体内にいれることは難しい。
　乾燥状態に耐えることができる生物であっても、生体内に含まれる水が凍ってしまうことから、動いている状態を観察する前に、あるいは観察中に死んでしまう。
　電子顕微鏡での観察を行うために電子ビームを照射するが、この電子ビームの照射による電気的な要因や熱的な要因などによって変形、変性をきたさず、生物試料を生きたままの状態で電子顕微鏡像を得ることが必要である。
　バリア性能に関しては、これまでに有機物、無機物、有機／無機ハイブリッド素材を使用して、試料をスピンコート、蒸着、塗布するなどの手段によって試料表面に膜を作製しバリア性能を付与する技術は提案されているものの、このようなバリア性能を電子顕微鏡の試料作製に応用する例はこれまでにない。
　本発明は、以上の通りの事情に鑑みてなされたものであり、真空下においても試料を変形させずに試料そのものの状態を損なうことを抑制できる、電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を提供すること課題としている。
　また、電子顕微鏡を用いて生物試料を生きたままで観察することができ、動いている様子を観察することができる、電子顕微鏡による観察方法とそれに用いられる真空下での蒸発抑制用組成物、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を提供すること課題としている。
　上記の課題を解決するために、本発明の電子顕微鏡による試料の観察方法は、両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有する蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用して薄膜を形成し、この試料を薄膜で覆う工程と、真空下の試料室に収容されたこの薄膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含むことを特徴としている。
　また本発明の電子顕微鏡による試料の観察方法は、両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有する蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用する工程と、蒸発抑制用組成物を適用した試料に電子線またはプラズマを照射して試料の表面に薄膜として重合膜を形成し、この重合膜で試料を覆う工程と、真空下の試料室に収容されたこの重合膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含むことを特徴としている。
　この電子顕微鏡による試料の観察方法における好ましい１つの態様では、電子顕微鏡の試料室内において試料観察用の電子線を試料に照射することによって重合反応させ、試料の表面に薄膜として重合膜を形成する。この電子顕微鏡による試料の観察方法における好ましい別の態様では、電子顕微鏡による試料観察前に予め、電子顕微鏡の試料観察用の電子線とは別途の電子線またはプラズマを試料に照射することによって重合反応させ、試料の表面に薄膜として重合膜を形成する。
　この電子顕微鏡による試料の観察方法における好ましい別の態様では、蒸発抑制用組成物は、両親媒性化合物と、金属化合物および糖から選ばれる少なくとも１種とを含有する。
　この電子顕微鏡による試料の観察方法における好ましい別の態様では、含水試料の濡れたままの状態の電子顕微鏡像を、含水試料の破壊を伴わずに前記表示装置に表示する。
　この電子顕微鏡による試料の観察方法における好ましい別の態様では、蒸発抑制用組成物を生存している生物試料の体表に適用して薄膜を形成し、この試料を薄膜で覆う工程と、真空下の試料室に置かれたこの薄膜で覆った生物試料の生きたままの運動の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含む。この場合、好ましい態様では、前記薄膜によって、生物試料体内からの蒸発に伴う温度低下を抑制して生物試料に運動能を与え、かつ生物試料そのものの形態を維持する。好ましい別の態様では、前記薄膜によって、生物試料が活動できるための体内温度を真空下においても維持する。
　この電子顕微鏡による試料の観察方法における好ましい別の態様では、走査型電子顕微鏡を用いて、試料のチャージアップを起こさずに試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示する。
　本発明の真空下での蒸発抑制用組成物は、真空下において蒸発性のある物質を含有する試料の表面に薄膜を形成してこの試料を覆い、前記蒸発性のある物質に対して真空下においてその蒸発を抑制するバリア能を与えるために使用される真空下での蒸発抑制用組成物であって、両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有する。
　この蒸発抑制用組成物における好ましい態様では、生存している生物試料の体表に薄膜を形成してこの生物試料を覆い、生物試料体内の蒸発性のある物質に対して真空下においてその蒸発を抑制するバリア能を与えるために使用される。
　この蒸発抑制用組成物における好ましい別の態様では、蒸発抑制用組成物を適用した試料に電子線またはプラズマを照射することによって試料の表面に薄膜として重合膜が形成され、この重合膜で試料が覆われる。
　この蒸発抑制用組成物における好ましい別の態様では、両親媒性化合物と、金属化合物および糖から選ばれる少なくとも１種とを含有する。
　本発明の走査型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、鏡体内の試料室に配置する試料を導入可能な予備排気室と、試料室および予備排気室を脱気する排気装置とを備えることを特徴としている。
　この走査型電子顕微鏡における好ましい態様では、予備排気室にグローブボックスを備えている。
　この走査型電子顕微鏡における好ましい別の態様では、試料室または予備排気室に、プラズマ照射装置または電子線照射装置を備えている。
　この走査型電子顕微鏡における好ましい別の態様では、試料室または予備排気室に、試料への作用が可能な３次元マニピュレータ装置を備えている。
　本発明の走査型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室に２次電子の検出器と試料との相対位置を３次元的に調節可能な検出位置調節機構を備えることを特徴としている。
　本発明の走査型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室に試料の色情報を取得可能な高速度カラーカメラを備えることを特徴としている。
　本発明の走査型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室内の試料台の温度を調節可能な温度調節装置を備えることを特徴としている。
　本発明の走査型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室に、電気センサ（表面抵抗測定、生体電気応答など）、光センサ(生体用光刺激光測定、分光センサ、光量子数測定など)、ガスセンサ（フェロモンなどの生体由来高分子測定、酸素濃度・窒素濃度測定など）、水センサ（水蒸気、表面水分量測定など）、および温度センサから選ばれる少なくとも１種のセンサを備えることを特徴としている。
　本発明の透過型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される透過型電子顕微鏡であって、鏡体内の試料室に配置する試料を導入可能な予備排気室と、試料室および予備排気室を脱気する排気装置とを備えることを特徴としている。
　この走査型電子顕微鏡における好ましい態様では、予備排気室にグローブボックスを備えている。
　本発明の透過型電子顕微鏡は、前記の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される透過型電子顕微鏡であって、試料を配置するグリッドメッシュの両面のそれぞれに、前記蒸発抑制用組成物に電子線またはプラズマを照射して形成した重合膜を有することを特徴としている。
　本発明によれば、試料を変形させずに試料そのものの状態を損なうことなく高倍率で観察することができる。
　また、電子顕微鏡を用いて生きた生物試料を生きたままで観察することができ、動いている状態の超微細構造を観察することができる。
実施例１のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例２のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例３のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例４のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例５のTEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例６のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例７のTEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例８のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例９のTEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１０のSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１１の重合膜の写真である。 実施例１１の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１２の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１３の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１４の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１５の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１６の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１７の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１８の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例１９の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 実施例２０の試料表面の重合膜とSEMビデオ撮影の様子を示す写真である。 本発明の走査型電子顕微鏡の一実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。 本発明の透過型電子顕微鏡の一実施形態の要部を模式的に示した図である。 図３０の要部を模式的に示した斜視図である。
　以下に、本発明を詳細に説明する。
　なお、本発明において「真空」とは、例えば10-1Pa以下、さらには10-2～10-4Pa、特に10-4～10-8Paの範囲を意味する。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、生物試料を生きたままの状態で電子顕微鏡の鏡体内に入れ、生きたままの状態で電子顕微鏡観察を行うために、生物試料の表面にバリアを形成する。
　このバリアは、真空下でも生物体内の水が乾燥されず液体状態のままで維持できる機能（水バリア性）、生体内の酸素などのガス状物質の脱気を抑える機能（ガスバリア性）を持ち、これら水／ガスバリア性能に加えて、電子顕微鏡像を得るために電子ビーム照射による電気的かつ熱的な変形変質を抑える機能（導電性／耐熱性）を併せ持つ。
　現在の光学装置や電子線装置で生物試料あるいは非生物試料を観察しようとしたとき、高真空条件下で行われる事が常であるが、この条件下では大気圧下における試料の状態とはかけ離れてしまう。試料中の水、ガス状分子を大気圧の状態のままに保持できなくなり、著しいダメージを試料に与えてしまう場合もある。もともとの形態をそのままに維持し、より高精密に観察することが求められている。すなわち、生物試料であるならば、生きたままの状態を損なう事なくライブで動的観察ができること、非生物試料であっても、含水試料の乾燥等のダメージなく観察できることである。
　本発明者らは、両親媒性化合物、油脂類、そしてイオン液体が真空下において水と空気（ガス）を保持する（水／ガスバリア機能がある）ことを見いだした。この溶液を生物試料にかけることによって、均一な保護膜が形成され、大気圧および真空下において水／ガスバリア能が発現される。
　特にこの溶液を電子顕微鏡での生物試料の観察に用いると、生物試料が電子顕微鏡の鏡体内で乾燥されずに、変形、変質を伴うことなく、生きたままの状態を維持でき、動いている様子のSEM画像を得ることができた。高倍率にしても、電子ビームによる変形や変性もなく、動いている様子を観察可能でき、帯電することもなく良好なSEM観察が可能であった。
　真空下であるにも関わらず、生物試料が生きたままでいられたことから、生体内の水は凍っていない。すなわち、減圧するのに伴う温度低下が抑制されていることも観測結果から示唆され、このことは両親媒性化合物単独や、両親媒性化合物と金属化合物または糖との併用、油脂類単独、あるいはイオン液体単独の真空下での温度測定の実験から確認している。
　この結果から、両親媒性化合物や、両親媒性化合物と金属化合物または糖との併用、油脂類、あるいはイオン液体あるいは油脂類が、水／ガスバリア性能を付与する保護膜を形成することが明らかとなった。本発明者はこの水／ガスバリア性能をSurface Shielding Effect（SS効果）と唱えている。
　両親媒性化合物や、両親媒性化合物と金属化合物または糖との併用、油脂類、あるいはイオン液体が、Surface Shielding Effect（SS効果）を付与するが、これらのバリア性能とあわせて、導電性を与えること、電子線による熱的ダメージも抑制されることから、多機能なバリア性能膜として機能することも見い出される。
　本発明によれば、生物／生体試料を生きたままの状態で電子顕微鏡観察することができる。生物／生体試料の電子顕微鏡観察のための溶液を提供することに限定されず、広くSurface Shielding Effect（SS効果）を与えるSS溶液の組成について提供する。
　本発明によれば、Surface Shielding Effect（SS効果）を与えるSS溶液は、両親媒性化合物を含有し、または主成分の両親媒性化合物と、金属化合物または糖とを含有し、あるいは油脂類を含有し、あるいはイオン液体を含有するが、以下の項目に挙げるアミノ酸およびその誘導体、ビタミン類およびその誘導体、無機塩類、金属酸化物、脂肪酸およびその誘導体、導電性高分子、ナノクレイなどを任意の割合で加えてさまざまな用途に用いることが可能である。
　本発明の一つの態様によれば、SS溶液は、両親媒性化合物を主成分（基材）としている。両親媒性化合物は、例えば、界面活性剤を用いることができる。界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性イオン界面活性剤、天然由来の界面活性剤などのように分子構造から大きく区別されている。工業、食品、医療品など幅広い分野で用いられているが、基本的にどの界面活性剤を用いてもある一定のバリア性能は発現することができる。
　上記、界面活性剤のうち、陰イオン性界面活性剤としては、例えば、カルボン酸型、硫酸エステル型、スルホン酸型、リン酸エステル型に分類される。このうち、具体的には、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、α-スルホ脂肪酸メチルエステルナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ドデシルエトキシレート硫酸ナトリウムなどが挙げられ、中でも、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを用いることが好ましい。
　上記、界面活性剤のうち、陽イオン性界面活性剤としては、例えば、第四級アンモニウム塩型、アルキルアミン型、複素環アミン型に分類される。具体的には、例えば、ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド、ジステアリルジメチルアンモニウムクロライド、ジデシルジメチルアンモニウムクロライド、セチルトリピリジニウムクロライド、ドデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライドなどが挙げられる。
　上記、界面活性剤のうち、非イオン界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンモノ脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノ脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、アルキルポリグリコシド、N-メチルアルキルグルカミドなどが挙げられる。中でも、ドデシルアルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、ラウロイルジエタノールアマイドの他、TritonTMX（TritonTMX-100など）、Pluronic(R) （Pluronic(R) F-123、F-68など）、Tween (Tween 20、40、60、65、80、85など)、Brij(R)（Brij(R)35、58、98など）、Span (Span 20、40、60、80、83、85)の名前で市販されているものが好ましい。
　上記、界面活性剤のうち、両性界面活性剤としては、例えば、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ドデシルアミノメチルジメチルスルホプロピルベタイン、3-(テトラデシルジメチルアミニオ)プロパン-1-スルホナートなどがあるが、3-[(3-コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]-1-プロパンスルホナート（CHAPS）、3-[(3-コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]-2-ヒドロキシ-1-プロパンスルホナート（CHAPSO）などを用いることが好ましい。
　上記、界面活性剤のうち、天然由来の界面活性剤としては、例えば、レシチン、サポニンが好ましく、レシチンとして称される化合物のうち、具体的には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロールなどが好ましい。また、サポニンとしてはキラヤサポニンが好ましい。
　上記、界面活性剤のうち、微生物由来の両親媒性化合物（バイオサーファクタント）としては、ラムノリピド、ソフオロリピド、マンノシルエリストールリピッドなどを用いることが好ましい。
　上記、界面活性剤に例示したもの以外に、一般に公知のものとして使用されている界面活性剤のうち、特に化粧品類に用いられている界面活性剤としては、例えば、アーモンド油ＰＥＧ-６、アシル（Ｃ１２，１４）アスパラギン酸Ｎａ、アシル（Ｃ１２、１４）アスパラギン酸ＴＥＡ、アラキデス-２０、ステアリルアルコール、アルキル（Ｃ１１、１３、１５）硫酸ナトリウム、アルキル（Ｃ１１，１３，１５）硫酸ＴＥＡ、アルキル（Ｃ１１，１３，１５）リン酸カリウム、アルキル（Ｃ１２，１３）硫酸ＤＥＡ、アルキル（Ｃ１２，１３）硫酸ナトリウム、アルキル（Ｃ１２，１３）硫酸ＴＥＡ、アルキル（Ｃ１２，１４，１６）硫酸アンモニウム、アルキル（Ｃ１２-１４）オキシヒドロキシプロピルアルギニン塩酸塩、アルキル（Ｃ１２-１４）ジアミノエチルグリシン塩酸塩、アルキル（Ｃ１２-１４）硫酸ＴＥＡ、アルキル（Ｃ１２-１５）硫酸ＴＥＡ、アルキル（Ｃ１４-１８）スルホン酸ナトリウム、アルキル（Ｃ１６，１８）トリモニウムクロリド、アルキル（Ｃ２８）トリモニウムクロリド、イソステアラミドＤＥＡ、イソステアリルアルコール、イソステアリルグリセリル、イソステアリルラウリルジモニウムクロリド、イソステアリン酸ＰＥＧ-２、イソステアリン酸ＰＥＧ-３、イソステアリン酸ＰＥＧ-４、イソステアリン酸ＰＥＧ-６、イソステアリン酸ＰＥＧ-８、イソステアリン酸ＰＥＧ-１０、イソステアリン酸ＰＥＧ-１２、イソステアリン酸ＰＥＧ-１５グリセリル、イソステアリン酸ＰＥＧ-２０、イソステアリン酸ＰＥＧ-２０グリセリル、イソステアリン酸ＰＥＧ-２０水添ヒマシ油、イソステアリン酸ＰＥＧ-２０ソルビタン、イソステアリン酸ＰＥＧ-３０、イソステアリン酸ＰＥＧ-３０グリセリル、イソステアリン酸ＰＥＧ-４０、イソステアリン酸ＰＥＧ-５０水添ヒマシ油、イソステアリン酸ＰＥＧ-５８水添ヒマシ油、イソステアリン酸ＰＥＧ-６０グリセリル、イソステアリン酸ＰＧ、イソステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルベス-３、イソステアリン酸ポリグリセリル-２、イソステアリン酸ポリグリセリル-３、イソステアリン酸ポリグリセリル-４、イソステアリン酸ポリグリセリル-５、イソステアリン酸ポリグリセリル-６、イソステアリン酸ポリグリセリル-１０、イソステアレス-２、イソステアレス-１０、イソステアレス-１５、イソステアレス-２２、イソステアロイル加水分解コラーゲン、イソステアロイル加水分解コラーゲンＡＭＰＤ、イソステアロイル乳酸ナトリウム、イソセテス-１０、イソセテス-２０、イソパルミチン酸オクチル、イソパルミチン酸ポリグリセリル-２、イソ酪酸酢酸スクロース、ウンデシレノイル加水分解コラーゲンカリウム、エチレンジアミンテトラキスヒドロキシイソプロピルジオレイン酸、エポキシエステル-１、エポキシエステル-２、エポキシエステル-３、エポキシエステル-４、エポキシエステル-５、エルカ酸グリセリル、オクタン酸ＰＥＧ-４、ノノキシノール-１４、オクチルドデセス-２、オクチルドデセス-５、オクチルドデセス-１０、オクチルドデセス-３０、オクテニルコハク酸デキストリンＴＥＡ、オクトキシノール-１、オクトキシノール-２エタンスルホン酸ナトリウム、オクトキシノール-１０、オクトキシノール-２５、オクトキシノール-７０、オリーブ油ＰＥＧ-６、オリゴコハク酸ＰＥＧ-３-ＰＰＧ-２０、オレアミドＤＥＡ、オレアミンオキシド、オレイルベタイン、オレイル硫酸ナトリウム、オレイル硫酸ＴＥＡ、オレイン酸ＰＥＧ-２、オレイン酸ＰＥＧ-１０、オレイン酸ＰＥＧ-１０グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ-１５グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ-２０グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ-３０グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ-３６、オレイン酸ＰＥＧ-４０ソルビット、オレイン酸ＰＥＧ-７５、オレイン酸ＰＥＧ-１５０、オレイン酸ＰＧ、オレイン酸スクロース、オレイン酸ヒドロキシ｛ビス（ヒドロキシエチル）アミノ｝プロピル、オレアミドＤＥＡ、オレイン酸ポリグリセリル-２、オレイン酸ポリギリセリル-５、オレイン酸ポリグリセリル-１０、オレオイル加水分解コラーゲン、オレオイルサルコシン、オレオイルメチルタウリン酸ナトリウム、オレス-２、オレス-３リン酸ＤＥＡ、オレス-７リン酸ナトリウム、オレス-８リン酸ナトリウム、オレス-１０、オレス-１０リン酸、オレス-１０リン酸ＤＥＡ、オレス-２０、オレス-２０リン酸、オレス-３０、オレス-５０、オレフィン（Ｃ１４-１６）スルホン酸ナトリウム、カオチン化加水分解コムギタンパク-１、カオチン化加水分解コムギタンパク-３、カオチン化加水分解コンキオリン-２、カオチン化加水分解ダイズタンパク-１、カオチン化加水分解ダイズタンパク-２、カオチン化加水分解ダイズタンパク-３、カオチン化デキストラン-２、カプラミドＤＥＡ、牛脂脂肪酸グリセリル、キョウニン油ＰＥＧ-６、クエン酸ジステアリル、クエン酸脂肪酸グリセリル、クオタニウム-１４、クオタニウム-１８、クオタニウム-１８ヘクトライト、クオタニウム１８ベントナイト、クオタニウム-２２、クオタニウム-３３、コーン油ＰＥＧ-６、コーン油ＰＥＧ-８、コカミド、コカミドＤＥＡ、コカミドＭＥＡ、コカミドプロピルベタイン、ココアミンオキシド、ココアンホ酢酸ナトリウム、ココアンホジ酢酸二ナトリウム、ポリオキシエチレントリデシル硫酸ナトリウム、ココアンホジプロピオン酸ニナトリウム、ココアンホプロピオン酸ナトリウム、ココイルアラニンＴＥＡ、ココイルアルギニンエチルＰＣＡ、ココイルイセチオン酸ナトリウム、ココイル加水分解カゼインカリウム、ココイル加水分解ケラチンカリウム、ココイル加水分解酵母カリウム、ココイル加水分解酵母タンパクカリウム、ココイル加水分解コムギタンパクカリウム、ココイル加水分解コラーゲン、ココイル加水分解コラーゲンカリウム、ココイル加水分解コラーゲンナトリウム、ココイル加水分解コラーゲンＴＥＡ、ココイル加水分解ジャガイモタンパクカリウム、ココイル加水分解ダイズタンパクカリウム、ココイル加水分解トウモロコシタンパクカリウム、ココイル加水分解バレイショタンパクカリウム、ココイルグリシンカリウム、ココイルグリシンＴＥＡ、ココイルグルタミン酸、ココイルグルタミン酸カリウム、ココイルグルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸ＴＥＡ、ココイルサルコシン、ココイルサルコシンナトリウム、ココイルサルコシンＴＥＡ、ココイルタウリンナトリウム、ココイルメチルアラニン、ココイルメチルアラニンナトリウム、ココイルメチルタウリンカリウム、ココイルメチルタウリンマグネシウム、ココイルメチルタウリンナトリウム、ココグリセリル硫酸ナトリウム、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチン、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解シルク、ココベタイン、コハク酸ＰＥＧ-５０水添ヒマシ油、コハク酸脂肪酸グリセリル、コレス-１０、コレス-１５、酢酸イソセテス-３、酢酸セテス-３、酢酸イソブチル、酢酸エチル、酢酸グリセリル、酢酸脂肪酸グリセリル、酢酸ステアリン酸スクロース、酢酸トリデセス-３、酢酸トリデセス-１５、酢酸ブチル、酢酸モノステアリン酸グリセリル、酢酸ラネス-９、ジアセチル酒石酸脂肪酸グリセリル、ジアルキル（Ｃ１２-１５）ジモニウムクロリド、ジアルキル（Ｃ１２-１８）ジモニウムクロリド、ジイソステアリン酸ＰＥＧ-８、ジイソステアリン酸ＰＧ、ジイソステアリン酸ポリグリセリル-２、ジオレイン酸ＰＥＧ-４、ジオレイン酸ＰＥＧ-１０、ジオレイン酸ＰＥＧ-３２、ジオレイン酸ＰＥＧ-７５、ジオレイン酸ＰＥＧ-１２０メチルグルコース、ジオレイン酸ＰＥＧ-１５０、ジオレイン酸ＰＧ、ジオレイン酸グリコール、ジオレイン酸ポリグリセリル-６、ジ牛脂アルキルジモニウム硫酸セルロース、ジココジモニウムクロリド、ジ酢酸ステアリン酸グリセリル、ジステアリルジモニウムクロリド、ジステアリン酸ＰＥＧ-２、ジステアリン酸ＰＥＧ-１２、ジステアリン酸ＰＥＧ-２０メチルグルコース、ジステアリン酸ＰＥＧ-１２０、ジステアリン酸ＰＥＧ-２５０、ジステアリン酸ＰＥＧ-トリメチロールプロパン、ジステアリン酸ＰＧ、ジステアリン酸ＰＰＧ-２０メチルグルコース、ジステアリン酸グリコール、ジステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸スクロース、ジステアリン酸ソルビタン、ジステアリン酸ポリグリセリル-６、ジステアリン酸ポリグリセリル-１０、ジセチルジモニウムクロリド、ジセテアリルリン酸ＭＥＡ、ジヒドロキシエチルステアリルベタイン、ジパルミチン酸ＰＥＧ-３、ジヒドロキシエチルラウラミンオキシド、（ジヒドロキシメチルシリルプロポキシ）ヒドロキシプロピル加水分解カゼイン、（ジヒドロキシメチルシリルプロポキシ）ヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン、（ジヒドロキシメチルシリルプロポキシ）ヒドロキシプロピル加水分解シルク、ジヒドロコレス-１５、脂肪酸（Ｃ８-２２）ポリグリセリル-１０、ジメチコンコポリオール、ジメチコンコポリオールエチル、ジメチコンコポリオールブチル、ジメチルステアラミン、ジラウリン酸ＰＥＧ-４、ジラウリン酸ＰＥＧ-１２、ジラウリン酸ＰＥＧ-３２、ジラウリン酸スクロース、ジラウレスー４リン酸、ジラウレス-１０リン酸、ジラウロイルグルタミン酸マグネシウム、水酸化レシチン、水添ココグリセリル、水添ダイズ脂肪酸グリセリル、水添タロウアミドＤＥＡ、水添タロウグルタミン酸ニナトリウム、水添タロウグルタミン酸ＴＥＡ、水添ラノリン、水添ラノリンアルコール、水添リゾレシチン、水添レシチン、ステアラミド、ステアラミドＤＥＡ、ステアラミドＭＥＡ、ステアラミドエチルジエチルアミン、ステアラミドプロピルジメチルアミン、ステアラミンオキシド、ステアラルコニウムクロリド、ステアラルコニウムヘクトライト、ステアリルジメチルベタインナトリウム、ステアリルトリモニウムサッカリン、ステアリルトリモニウムブロミド、ステアリルベタイン、ステアリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ＰＥＧ-２、ステアリン酸ＰＥＧ-６ソルビット、ステアリン酸ＰＥＧ-１０、ステアリン酸ＰＥＧ-１０グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ-１４、ステアリン酸ＰＥＧ-２０グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ-２３、ステアリン酸ＰＥＧ-２５、ステアリン酸ＰＥＧ-４０、ステアリン酸ＰＥＧ-１００、ステアリン酸ＰＥＧ-１２０グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ-１５０、ステアリン酸ＰＥＧ-２００グリセリル、ステアリン酸ＰＧ、ステアリン酸ＴＥＡ、ステアリン酸グリコール、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸スクロース、ステアリン酸ステアレス-４、ステアリン酸ステアロイルジヒドロキシイソブチルアミド、ステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸ポリオキシエチレンセチルエーテル、ステアリン酸ポリグリセリル-２、ステアリン酸ポリグリセリルー１０、ステアリン酸/リンゴ酸グリセリル、ステアルジモニウムヒドロキシジプロピル加水分解ケラチン、ステアルジモニウムヒドロキシジプロピル加水分解コラーゲン、ステアルジモニウムヒドロキシジプロピル加水分解シルク、ステアルトリモニウムクロリド、ステアレス-２リン酸、ステアレス-３、ステアレス-１０、ステアレス-１６、ステアレス-５０、ステアレス-８０、ステアレス-１００、ステアロイル加水分解コラーゲンカリウム、ステアロイル加水分解コラーゲンナトリウム、ステアロイルグルタミン酸、ステアロイルグルタミン酸ニナトリウム、ステアロイルグルタミン酸カリウム、ステアロイルグルタミン酸ナトリウム、ステアロイルグルタミン酸ジオクチルドデシル、ステアロイルコラミノホルミルメチルピリジウムクロリド、ステアロイル乳酸カルシウム、ステアロイル乳酸ナトリウム、ステアロイルメチルタウリンナトリウム、スルホコハク酸（Ｃ１２-１４）パレスニナトリウム、スルホコハク酸ＰＥＧ-２オレアミドニナトリウム、スルホコハク酸ＰＥＧ-４ココイルイソプロパノールアミドニナトリウム、スルホコハク酸ＰＥＧ-５ラウラミドニナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、スルホコハク酸シトステレスー１４-２ナトリウム、スルホコハク酸ラウリルニナトリウム、スルホコハク酸ラウレスニナトリウム、セスキイソステアリン酸ソルビタン、セ







スキオレイン酸グリセリル、セスキオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ジグリセリル、セスキステアリン酸ＰＥＧ-２０メチルグルコース、セスキステアリン酸ソルビタン、セスキステアリン酸メチルグルコース、セチルジメチコンコポリオール、セチルピリジウムクロリド、セチル硫酸ナトリウム、セチルリン酸ＤＥＡ、セチルリン酸カリウム、セテアリルアルコール、セテアリルグルコシド・セテアリルアルコール、セテアリル硫酸ナトリウム、セテアレス-１０、セテアレス-１５、セテアレス-２２、セテアレス-３４、セテアレス-５５、セテアレス-６０、セテアレス-６０ミリスチルグリコール、セテアレス-１００、セテス-８リン酸、セテス-１０、セテス-１０リン酸、セテス-１２、セテス-２４、セテス-４５、セトリモニウムクロリド、セトリモニウムサッカリン、セトリモニウムプロミド、セトレス-１０、セトレス-２０、セトレス-２５、タロウアミドＭＥＡ、デカイソステアリン酸ポリグリセリル-１０、デカオレイン酸ポリグリセリル-１０、デカステアリン酸ポリグリセリル-１０、デシルグルコシド、テトラオクタン酸ジグリセロールソルビタン、テトラオレイン酸ソルベス-３０、テトラオレイン酸ソルベス-４０、テトラオレイン酸ソルベス-６０、テトラステアリン酸ソルベス-６０、ドデシルベンゼンスルホン酸ＴＥＡ、トリＰＥＧ-８アルキル（Ｃ１２-１５）リン酸、トリ（イソステアリン酸ＰＥＧ-３）トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-１０グリセリル、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-１５水添ヒマシ油、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-２０水添ヒマシ油、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-３０グリセリル、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-３０水添ヒマシ油、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-５０グリセリル、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-５０水添ヒマシ油、トリイソステアリン酸ＰＥＧ-１６０ソルビタン、トリイソステアリン酸ポリグリセリル-２、トリオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ポリグリセリル-１０、トリステアリン酸ＰＥＧ-３ソルビット、トリステアリン酸ＰＥＧ-１４０グリセリル、トリステアリン酸ＰＥＧ-１６０ソルビタン、トリステアリン酸スクロース、トリステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ポリグリセリル-１０トリデセス-三酢酸ナトリウム、トリデセス-六酢酸ナトリウム、トリデセス-９、トリデセス-１０、トリデセス-１１、トリデセス-２０、トリデセス-２１、トリヒドロキシステアリン、トリベヘン酸スクロース、トリラウリルアミン、トリラウレス-四リン酸、トリラウレス-四リン酸ナトリウム、乳酸脂肪酸グリセリル、ノニルノノキシノール-１０、ノニルノノキシノール-１００、ノノキシノール-３、ノノキシノール-４硫酸ナトリウム、ノノキシノール-６リン酸、ノノキシノール-６リン酸ナトリウム、ノノキシノール-１０、ノノキシノール-１０リン酸、ノノキシノール-２３、ノノキシノール-５０、ノノキシノール-１２０、パーフルオロアルキルＰＥＧリン酸、パーフルオロアルキルリン酸ＤＥＡ、パーム核脂肪酸アミドＤＥＡ、パーム核脂肪酸アミドエチルヒドロキシエチルアミノプロピオン酸ナトリウム、パーム核脂肪酸アミドプロピルベタイン、パーム脂肪酸グルタミン酸ナトリウム、パルミタミドＭＥＡ、パルミチン酸ＰＥＧ-６、パルミチン酸ＰＥＧ-１８、パルミチン酸ＰＥＧ-２０、パルミチン酸スクロース、パルミチン酸ソルビタン、パルミトイルアスパラギン酸二ＴＥＡ、パルミトイルメチルタウリンナトリウム、ピーナッツ油ＰＥＧ-６、ヒドロキシステアリン酸グリセリル、ヒドロキシプロピルトリモニウム加水分解カゼイン、ヒドロキシプロピルトリモニウム加水分解ケラチン、ヒドロキシプロピルトリモニウム加水分解コムギタンパク、ヒドロキシプロピルトリモニウム加水分解コラーゲン、ヒドロキシプロピルトリモニウム加水分解シルク、ヒドロキシラノリン、プロピオン酸ＰＰＧ-２ミリスチル、ヘプタステアリン酸ポリグリセリル-１０、ヘプタデシルヒドロキシエチルカルボキシラートメチルイミダゾリニウム、ベヘナミドプロピルＰＧジモニウムクロリド、ベヘナミンオキシド、ベヘネス-１０、ベヘネス-３０、ベヘン酸グリセリル、ベヘントリモニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ペンタイソステアリン酸ポリグリセリル-１０、ペンタオクタン酸ジグリセロールソルビタン、ペンタオレイン酸ＰＥＧ-４０ソルビット、ペンタオレイン酸ポリグリセリル-６、ペンタオレイン酸ポリグリセリル-１０、ペンタステアリン酸ポリグリセリル-１０、ポリアクリル酸カリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸アンモニウム、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルリン酸ＴＥＡ、ポリオキシエチレンエーテルリン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンオクチルエーテルリン酸、ポリオキシエチレンセチルステアリルジエーテル、ポリオキシエチレンフィトスタノール、ポリオキシエチレンブチルエーテル、ポリオキシエチレンヤシ脂肪酸ジエタノールアミド、ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸ＴＥＡ、ポリオキシプロピレンカルボキシアルキル（Ｃ１４-１８）ジグルコシド、ポリオキシプロピレングリセリルエーテルリン酸、ポリオキシプロピレンソルビット、ポリオレイン酸スクロース、ポリグリセリル-２オレイル、ポリステアリン酸スクロース、酢酸セチル、酢酸ラノリンアルコール、ポリバーム脂肪酸スクロース、ポリラウリン酸スクロース、ポリリシノレイン酸ポリグセリル、ポリリノール酸スクロースポロキサマー１８１、ポロキサマー３３３、ポロキサミン３０４、ポロキサミン９０１、ポロキサミン１１０４、ポロキサミン１３０２、ポロキサミン１５０８、マルチトールヒドロキシアルキル（Ｃ１２，１４）、ミリスタミドＤＥＡ、ミリスタミンオキシド、ミリスタルコニウムクロリド、ミリスチルＰＧヒドロキシエチルデカナミド、ミリスチルベタイン、ミリスチル硫酸ナトリウム、ミリスチン酸ＰＥＧ-８、ミリスチン酸ＰＥＧ-２０、ミリスチン酸グリセリル、ミリスチン酸スクロース、ミリスチン酸ポリグリセリル-１０、ミリスチン酸ミレス-３、ミリストイル加水分解コラーゲン、ミリストイル加水分解コラーゲンカリウム、ミリストイルグルタミン酸、ミリストイルグルタミン酸カリウム、ミリストイルグルタミン酸ナトリウム、ミリストイルサルコシンナトリウム、ミリストイルメチルアラニンナトリウム、ミリストイルメチルタウリンナトリウム、ミレス-３、ミレス-３硫酸ナトリウム、モノ酢酸モノステアリン酸グリセリル、ヤシ脂肪酸ＴＥＡ、ヤシ脂肪酸グリセリル、ヤシ脂肪酸スクロース、ヤシ脂肪酸ソルビタン、ヤシ脂肪酸リシン、ラウラミドＤＥＡ、ラウラミドＭＥＡ、ラウラミドプロピルベタイン、ラウラミノジ酢酸ナトリウム、ラウラミノプロピオン酸、ラウラミノプロピオン酸ナトリウム、ラウラミンオキシド、ラウリミノジプロピオン酸ナトリウム、ラウリルDEA、ラウリルイソキノリニウムサッカリン、ラウリルイソキノリニウムプロミド、ラウリルグルコシド、ラウリルジアミノエチルグリシンナトリウム、ラウリルジモリニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチン、ラウリルジモリニウムヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン、ラウリルジモリニウムヒドロキシプロピル加水分解シルクラウリルスルホ酢酸ナトリウム、ラウリルヒドロキシ酢酸アミド硫酸ナトリウム、ラウリルヒドロキシスルタイン、ラウリルピリジニウムクロリドラウリルベタイン、ラウリル硫酸ＤＥＡ、ラウリル硫酸カリウム、ラウリル硫酸ＭＥＡ、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ＴＥＡラウリル硫酸アンモニウム、ラウリルリン酸、ラウリルリン酸ニナトリウム、ラウリルリン酸ナトリウム、ラウリン酸ＰＥＧ-２、ラウリン酸ＰＥＧ-４ＤＥＡ、ラウリン酸ＰＥＧ-６、ラウリン酸ＰＥＧ-８、ラウリン酸ＰＥＧ-８グリセリル、ラウリン酸ＰＥＧ-９、ラウリン酸ＰＥＧ-１０、ラウリン酸ＰＥＧ-１２グリセリル、ラウリン酸ＰＥＧ-２３グリセリル、ラウリン酸ＰＥＧ-３２、ラウリン酸ＰＥＧ-７５、ラウリン酸ＰＥＧ-１５０、ラウリン酸ＰＥＧソルビット、ラウリン酸ＰＧ、ラウリン酸ＴＥＡ、ラウリン酸グリセリル、ラウリン酸スクロース、ラウリン酸ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ラウリン酸ポリグリセリル-６、ラウリン酸ポリグリセリル-１０、ラウリン酸マルチトール、ラウルトリモニウムクロリド、ラウルトリモニウムプロミド、ラウレス-２-硫酸アンモニウム、ラウレス-３酢酸、ラウレス-３硫酸ＴＥＡ、ラウレス-３硫酸アンモニウム、ラウレス-３リン酸、ラウレス-４リン酸、ラウレス-４リン酸ナトリム、ラウレス-４．５酢酸カリウム、ラウレス-５酢酸、ラウレス-５硫酸ナトリム、ラウレス-６酢酸、ラウレス-６酢酸ナトリム、ラウレス-７リン酸、ラウレス-９、ラウレス-１０、ラウレス-１０酢酸、ラウレス-１０酢酸カリウム、ラウレス-１６酢酸ナトリム、ラウレス-１７酢酸ナトリウム、ラウレス-４０、ラウレス硫酸ＴＥＡ、ラウロアンホPG酢酸リン酸ナトリウム、ラウロアンホ酢酸ナトリウム、ラウロイルアスパラギン酸、ラウロイル加水分解コラーゲンカリウム、ラウロイル加水分解コラーゲンナトリウム、ラウロイル加水分解シルクナトリウム、ラウロイルグルタミン酸、ラウロイルグルタミン酸カリウム、ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、ラウロイルグルタミンＴＥＡ、ラウロイルグルタミン酸ジオクチルドデシル、ラウロイルグルタミン酸ジオクチルドデセス-２、ラウロイルグルタミン酸ジオクチルドデシル、ラウロイルグルタミン酸ジコレステリル、ラウロイルグルタミン酸ジステアレス-２、ラウロイルグルタミン酸ジステアレス-５、ラウロイルサルコシン、ラウロイルサルコシンナトリウム、ラウロイルサルコシンＴＥＡ、ラウロイルトレオニンカリウム、ラウロイル乳酸ナトリウム、ラウロイルメチルアラニン、ラウロイルメチルアラニンナトリウム、ラウロイルメチルアラニンＴＥＡ、ラウロイルメチルタウリンナトリウム、ラネス-１０、ラネス-２５、ラネス-４０、ラネス-７５、ラノリン脂肪酸ＰＥＧ-４、ラノリン脂肪酸ＰＥＧ-１２、ラノリン脂肪酸アミドＤＥＡ、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ラノリン脂肪酸オクチルドデシル、ラノリン脂肪酸グリセリル、ラノリン脂肪酸コレステリル、ラピリウムクロリド、リシノレイン酸アミドプロピルベタイン、リシノレイン酸グリセリル、リシノレイン酸スクロース、リシノレイン酸ポリオキシプロピレンソルビット、リシノレイン酸ポリグリセリル-６、リノール酸ラノリル、リノレアミドＤＥＡ、硫酸化ヒマシ油、リンゴ酸ラウラミド、ロジン加水分解コラーゲン、ロジン加水分解コラーゲンＡＭＰＤなどが挙げられる。
　上記、界面活性剤の他、フッ素系の界面活性剤を用いることもできる。具体的には、例えば、ヘプタデカフルオロ-1-オクタンスルホン酸アンモニウム、ペンタデカフルオロオクタン酸アンモニウム、ヘプタデカフルオロオクタンスルホン酸、ヘプタデカフルオロ-１-オクタンスルホン酸リチウム、ペンタデカフルオロオクタン酸、ペンタデカフルオロオクタン酸水和物、ヘプタデカフルオロ-１-オクタンスルホン酸カリウムなどが挙げられる。
　上記、界面活性剤の他、例えば、Ｎ-長鎖アシルグルタミン酸塩、Ｎ-長鎖アシルアスパラギン酸塩、Ｎ-長鎖アシルグリシン塩、Ｎ-長鎖アシルアラニン塩、Ｎ-長鎖アシルスレオニン塩、Ｎ-長鎖アシルサルコシン塩などのＮ-長鎖アシル中性アミノ酸塩等のＮ-長鎖アシルアミノ酸塩、Ｎ-長鎖脂肪酸アシル-Ｎ-メチルタウリン塩、アルキルサルフェートおよびそのアルキレンオキシド付加物、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、脂肪酸の金属塩、スルホコハク酸系界面活性剤、アルキルフォスフェートおよびそのアルキレンオキシド付加物、高級アルキル硫酸エステル塩、アルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキルヒドロキシエーテルカルボン酸塩、アルキルエーテルカルボン酸などのアニオン界面活性剤、グリセリンエーテルおよびそのアルキレンオキシド付加物などのエーテル型界面活性剤、グリセリンエステルおよびそのアルキレンオキシド付加物などのエステル型界面活性剤、ソルビタンエステルおよびそのアルキレンオキシド付加物などのエーテルエステル型界面活性剤、脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸ジエタノールアミドなどの脂肪酸アルキロールアミド、ポリオキシアルキレン脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレン水添ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、グリセリンエステル、脂肪酸ポリグリセリンエステル、アシルアミノ酸ポリグリセリンエステル、ソルビタンエステル、ショ糖脂肪酸エステルなどのエステル型界面活性剤、アルキルグルコシド類、硬化ヒマシ油ピログルタミン酸ジエステルおよびそのエチレンオキシド付加物、脂肪酸アルカノールアミドなどの含窒素型の非イオン性界面活性剤などの非イオン性界面活性剤、アルキルアンモニウムクロライド、ジアルキルアンモニウムクロライド、塩化アルキルトリメチルアンモニウム（Ｃ１６-Ｃ２２）、ジアルキルジメチルアンモニウムメトサルフェート塩などの脂肪族アミン塩、それらの４級アンモニウム塩、ベンザルコニウム塩などの芳香族４級アンモニウム塩、脂肪酸アシルアルギニンエステル、Ｎ－長鎖アシルアルギニンエチルピロリドンカルボン酸塩、アミドアミン類、ステアラミドプロピルジメチルアミングルタミン酸塩、ステアラミドプロピルジメチルアミン乳酸塩、ステアラミドプロピルジメチルアミンピロリドンカルボン酸塩、ベヘナミドプロピルジメチルアミングルタミン酸塩ベヘナミドプロピルジメチルアミン乳酸塩、ベヘナミドプロピルジメチルアミンピロリドンカルボン酸塩等のカチオン両親媒性化合物並びにアルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、スルホベタイン、イミダゾリニウムベタイン、アミノプロピオネート、カルボキシベタインなどのベタイン型両親媒性化合物、Ｎ－長鎖アシルアルギニン、Ｎ－（３－アルキル（１２，１４）オキシ－２－ヒドロキシプロピル）アルギニン塩酸塩、アミノカルボン酸型界面活性剤、イミダゾリン型界面活性剤などの両性界面活性剤などを用いることもできる。
　本発明の一つの態様によれば、SS溶液は両親媒性化合物と金属化合物を含む。金属化合物としては、金属イオンを含むものであれば幅広く用いることができる。
　上記の金属化合物は、陽イオンと陰イオンからなる塩（単塩）であっても、二種類以上からなる塩（複塩）であってもよい。
　上記の金属化合物は、酸化物、水酸化物、ハロゲン化物、硫酸塩、硝酸塩、炭酸塩、酢酸塩などの化合物であってもよい。具体的には、例えば、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化カリウム、塩化ストロンチウム、塩化リチウム、塩化ハフニウム、塩化鉄、塩化アルミニウム、塩化亜鉛、塩化銅、塩化コバルト、塩化硫酸マグネシウム、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。
　上記の金属化合物は、金属酸化物であってもよい。金属アルコキシドはMORで示される化合物であり、金属(M)とアルコキシド(RO-)（Rは炭化水素）からなる。金属(M)として、具体的には、ケイ素、チタン、アルミニウム、ホウ素、ジルコニウム、ホウ素、バナジウム、タングステン、リン、ゲルマニウム、インジウム、ハフニウム、モリブデンなどが挙げられ、種々のアルコールから金属アルコキシドが得られる。これらの金属アルコキシドをそのまま用いてもよく、これらの金属アルコキシドを酸またはアルカリ存在下でゾルゲル反応を行った反応物を用いてもよい。金属アルコキシドとしては、単一成分を用いず、二種類以上のものを混合してもよい。
　上記の金属化合物は、金属錯体であってもよい。
　本発明の別の態様によれば、SS溶液は両親媒性化合物と糖を含む。糖・両親媒性化合物の組み合わせについて、SS効果を与えることは、本発明者らによる新知見である。糖としては、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類とその誘導体を配合する。具体的には、単糖類として、グルコース、フルクトースなどが挙げられる。二糖類として、スクロースなどが挙げられる他、多糖類として、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、プルラン、ペクチン、グアーガム、キサンアンガム、カラギーナン、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースなどを挙げることができ、特にプルランのような多糖類が好ましい。その他、カラメル、蜂蜜、ミツロウを用いてもよい。
　また、本発明の別の態様によれば、SS溶液は油脂類を含む。
　油脂類としては、例えば、シリコンオイルなどが挙げられる。シリコンオイルは、生物試料の組織または細胞の水環境を保つ水分保持剤として機能し、これにより生きたままの生物試料の動的観察を達成する。すなわち、真空下においても組織や細胞の水が失われない、バリア性能を有する材料として用いることができる。
　シリコンオイルとしては、例えば、２５℃における粘度が１～１００，０００ｍＰａ・sのものを使用できる。例えば、和光純薬工業「６３６－０４００１」、信越シリコーン「ＫＦ－５４」、「ＫＦ－９６」などが使用できる。
　シリコンオイルを用いた本発明の蒸発抑制用組成物（SS溶液）は、シリコンオイルを組成物全量に対して好ましくは１０重量％以上含有し、それ以外の成分として、下記に例示したような成分を配合してもよい。
　また、本発明の別の態様によれば、SS溶液はイオン液体を含む。
　イオン液体としては、例えば、イミダゾリウム塩類、ピリジニウム塩類、ピペリジニウム塩類、ピロリジニウム塩類、四級アンモニウム塩類、ホスホニウム類、スルホニウム類、ピラゾリウム類などが挙げられる。
　イミダゾリウム塩類としては、例えば、1-アルキル-3-アルキルイミダゾリウム、1,3-ジメチルイミダゾリウム、1-エチル-3-メチルイミダゾリム、1-ブチル-3-メチルイミダゾリウム、1-ヘキシル-3-メチルイミダゾリウム、3-メチル-1-オクチルイミダゾリウム、1-ドデシル-3-メチルイミダゾリウム、1-ドデシル-3-メチルイミダゾリイウム、1-メチル-3-テトラデシルイミダゾリウム、1-ヘキサデシル-3-イミダゾリウム、1-オクタデシル-3-メチルイミダゾリウム、1-アリル-3-メチルイミダゾリウム、1-アリル-3-メチルイミダゾリウム、1-アリル-3-エチルイミダゾリウム、1-アリル-3-ブチルイミダゾリウム、1,3-ジアリルイミダゾリウム、1-ベンジル-3-メチルイミダゾリウム、1-(2-ヒドロキシエチル)-3-メチルイミダゾリウムなどが挙げられる。
　1-アルキル-2,3-ジアルキルイミダゾリウム塩としては、例えば、1-エチル-2,3-ジメチルイミダゾリウム、1,2,3,-トリエチルイミダゾリウム、1,2-ジメチル-3-プロピルイミダゾリウム、1-ブチル-2,3-ジメチルイミダゾリウム、1-ヘキシル-2,3-ジメチルイミダゾリウム、1,3-ジデシル2-メチルイミダゾリウムなどが挙げられる。
　ピリジニウム塩類としては、例えば、1-メチルピリジニウム、1-エチルピリジニウム、1-ブチルピリジニウム、1-ヘキシルピリジニウム、1-エチル-3-メチルピリジニウム、1-メチル-4-メチルピリジニウム、1-プロピル-4-メチルピリジニウム、1-プロピル-3-メチルピリジニウム、1-ブチル-2-メチルピリジニウム、1-ブチル-3-メチルピリジニウム、1-エチル-3-ヒドロキシメチル、1-(3-ヒドロキシプロピル)ピリジニウムなどが挙げられる。
　ピペリジニウム塩類としては、例えば、1-メチル-1-プロピルピペリジニウム、1-ブチル-1-メチルピペリジニウム、1-(メトキシエチル)-1-メチルピペリジニウムなどが挙げられる。
　ピロリジニウム塩類としては、例えば、1,1-ジメチルピロリジニウム、1-エチル-1-メチルピロリジニウム、1-メチル-1-プロピルピロリジニウム、1-ブチル-1-メチルピロリジニウム、1-(メトキシエチル)-1-メチルピロリジニウムなどが挙げられる。
　四級アンモニウム塩類としては、例えば、テトラメチルアンモニウム、テトラブチルアンモニウム、ブチルトリメチルアンモニウム、エチル-ジメチル-プロピルアンモニウム、トリブチルメチルアンモニウム、メチルトリオクチルアンモニウム、2-ヒドロキシエチルアンモノウムなどの他、コリン、N,N-ジエチル-N-メチル-N-(2-メトキシエチル)アンモニウム、トリメチルアミンオキシドなどが挙げられる。
　ホスホニウム類としては、例えば、テトラブチルホスホニウム、トリブチルヘキサデシルホスホニウム、トリエチルペンチルホスホニウム、トリエチルオクチルホスホニウム、テトラオクチルホスホニウム、トリイソブチルメチルホスホニウム、トリブチルテトラデシルホスホニウム、トリエチルテトラデシルホスホニウムなどが挙げられる。
　スルホニウム類としては、例えば、トリエチルスルホニウム、ジエチルメチルスルニウムなどが挙げられる。
　ピラゾリウム類としては、例えば、1-エチル-2,3,5-トリメチルピラゾリウム、1-プロピル-2,3,5-トリメチルピラゾリウム、1-ブチル-2,3,5-トリメチルピラゾリウムなどの他、グアニジニウム、N-(メトキシエチル)-N-メチルモルホリニウムなどが挙げられる。
　上記、イオン液体と称される化合物のうち、アニオン部位は、次のようなものであってよい。すなわち、飽和／不飽和炭化水素基の他、芳香族炭化水素基、エーテル基、アルキル水酸基、クロライド、ブロマイド、アイオライド、アセテート、ラクテート、メトキシスルホネート、エトキシスルホネート、ジメトキシホスフェート、n-ブチルスルホネート、ジエトキシホスフェート、エチルスルホネート、n-ヘキシルホスフェート、ハイドロゲンホスフェート、チオシアネート、オクチルスルホネート、2-(2-メトキシエトキシ)エチルサルフェート、トリシアノメタン、テトラフルオロボレート、ヘキサフルオロホスフェート、トリフラート、ビス（トリフルオロメチルスルホニル）イミド、トリフルオロメタンスルホネート、ビス（フルオロスルホニル）イミド、ビス（ノナフルオロブタンスルホニル）イミド、エチルサルフェート、パーフルオロブタンスルホネート、ジシアンアミド、トリフルオロアセテート、ホルメート、りん酸二水素イオン（ジハイドロゲンホスフェート）、炭酸水素、メチルカルボネート、ジブチルホスフェート、トリス（ペンタフルオロエチル）トリフルオロホスフェート、ビス［オキサレート(2-)-O,O’］ボレート、デカノエート、ビス（2,4,4-トリメチルペンチル）ホスフィネート、ドデシルベンゼンスルホネート、p-トリエンスルホネート、ジエチルホスホネート、ベンゾエート、チオサリシネート、テトラクロロフェラート、テトラクロロアルミネート、ヘキサフルオロアンチモネートなどであってもよい。
　また、アニオン部位は、J.Am.Chem.Soc., 2005, 127, 2398-2399に示す方法による方法でイオン交換して得られる任意のアミノ酸であってもよい。ここでいうアミノ酸はモノマーであっても、ジペプチド、オリゴペプチドであってもよい。また、非特許文献３はイミダゾリウム塩に対して1:1の割合で対イオンをなしているが、本発明におけるイオン液体については1:1の割合である必要は無い。
　また、本発明によれば、SS溶液は両親媒性化合物を含み、あるいは両親媒性化合物と金属化合物または糖とを含み、あるいは油脂類を含み、あるいはイオン液体を含むが、これらの成分に加え、以下の項目に挙げるアミノ酸およびその誘導体、多価アルコール、ビタミン類およびその誘導体、脂肪酸およびその誘導体、高分子材料などを任意の割合で加えてもよい。
　上記、SS効果を与える溶液の組成分として、アミノ酸およびその誘導体を配合しても良い。アミノ酸としては、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジンなどの単体、塩酸塩、二分子以上で結合しているもの、その高分子などが挙げられる。これらは１種単独であっても二種類以上の混合物であってもよい。さらに、これらの誘導体であってもよい。
　上記、SS効果を与える溶液の組成分として、多価アルコールおよびその誘導体を配合してもよい。水酸基を分子内にもち、低蒸気圧物質であるものが好ましい。具体的には、例えば、グリセリン、トリグリセリド、ポリレゾルシノール、ポリフェノール、タンニン酸、ウルシオールなど、上記の天然由来の両親媒性化合物で例示したもの以外のものが挙げられ、特にタンニン酸を用いることが好ましい。
　上記、SS効果を与える溶液の組成分として、ビタミン類およびその誘導体と関連物質を配合してもよい。具体的には、例えば、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB7、ビタミンB9、ビタミンB12、ビタミンA、ビタミンD、ビタミンE、ビタミンK、あるいはこれら誘導体が挙げられる。中でも、レチナール、β-カロテン、ビタミンB3（ニコチン酸、ニコチンアミド）、ビタミンB６（ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン）、ビタミンB9（葉酸）が好ましい。この他、ビタミン誘導体としては、D-アラボアスコルビン酸、セトフラビンT、4-デオキシピリドキシン塩酸塩、ジベンゾイルチアミン、2,6-ジ-O-パルミトイル-L-アスコルビン酸、フラビンアデニンジヌクレオチド二ナトリウム水和物、(+)-5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸、6-O-パルミトイル-L-アスコルビン酸、プロフラビンヘミ硫酸塩水和物、ピリドキサール塩酸塩、5-りん酸ピリドキサール一水和物、ピリドキシン3,4-ジパルミタート、イソアスコルビン酸ナトリウム一水和物、チアミンジスルフィド水和物、チアミンジスルフィド硝酸塩などが挙げられる。ビタミン関連物質としては、塩化コリン、臭化コリン、くえん酸二水素コリン、重酒石酸コリンコエンザイムQ10、補酵素Qo、メチオニンメチルスルホニルクロリド、イノシトール類などが挙げられる。
　高分子材料としては、例えば、ポリビニルアルコール、テフロン（登録商標）、ポリフッ化ビニリデン、テトラエトキシシラン、テトラメトキシシラン、チタンイソプロポキシド、ジルコニウムブトキシドなどが挙げられる。
　上記、SS効果を与える溶液の組成分として、前述したようなイオン液体を他の必須成分に加えて配合してもよい。
　上記、SS効果を与える溶液の組成分として、両親媒性化合物、金属化合物、糖など、上記に例示した成分以外に、下記の成分を配合してもよい。
　配位化合物：クラウンエーテル、シクロデキストリン、レゾルシン環状四量体、カリックスアレーン、デンドリマーなど。
　脂肪酸とその誘導体：リノール酸、オレイン酸、パルミチン酸、リノレイン酸など。
　糖と脂肪酸の誘導体：ヒアルロン酸、セラミド、両親媒性化合物、コラーゲン、アミノ酸、精油、ワセリンなど。
　ゲル化剤：Poly(pyridinium-1,4-diyliminocarbonyl-1,4-phenylenemethylene chlorideなど。
　色素：クロロフィル、カロテノイド（リコペン）、フィコビリン、メラニンなどの他、パプリカ色素、マラカイトグリーンなど。
　導電性ポリマー：ポリアセチレン、ポリアニリン、ポリチオフェンなどの他、ナフィオンなど。
　ナノクレイ：Nanoclay Nanomer(R) Laponiteの名前で商品化されているものやモンモリロナイトなど。
　質量分析用試薬で主にMALDI法に用いられるマトリックス素材：3-アミノ-4-ヒドロキシ安息香酸、シナピン酸、エスクレチン、4-ヒドロキシアゾベンゼン-2'-カルボン酸、3-ヒドロキシ-2-ピリジンカルボン酸、ニコチン酸、2',4',6'-トリヒドロキシアセトフェノン、α-シアノ-4-ヒドロキシけい皮酸、2,5-ジヒドロキシ安息香酸など。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、固体状態や液状であってよいが、真空下において試料組織の水環境を保持するために、液状で粘性の高い状態のものが好ましい。また、固体状態のものは、使用する際は液状態にして用いることができる。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、例えば、上記した各成分を水、有機溶剤などに溶かして、試料に直接コートなどすると、試料の表面にごく薄い膜を形成することができる。
　本発明の蒸発抑制用組成物において、両親媒性化合物と、金属化合物および糖との配合割合は、特に限定されないが、例えば次のような組成が好ましいものとして例示される。
(1) 両親媒性化合物（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム）／金属化合物（エチレンジアミンニッケル錯体）＝0.005／0.001～0.05／0.01
(2) 両親媒性化合物（ドデシル硫酸ナトリウム）／金属化合物（エチレンジアミンニッケル錯体）＝0.005／0.0001～0.05／0.001
(3) 両親媒性化合物（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム）／金属化合物（テトラアンミンコバルト錯体）＝0.005／0.001～0.05／0.01
(4) 両親媒性化合物（Tween 20）／糖（トレハロース）＝3／1～20／2
(5) 両親媒性化合物（Tween 20）／糖（プルラン）＝3／0.2～20／2
(6) 両親媒性化合物（Tween 20／糖（イヌリン）＝3／0.１～20／7
　本発明の蒸発抑制用組成物は、塗布、付着、コート、被覆などにより試料表面に適用される。例えば塗布の場合には、塗布した後、余分な液をキムワイプのような柔らかい布状の紙、ろ紙などで吸い取る。TEM観察のための試料は、媒体の塗布、付着、コート、被覆、包埋などにより処理される。
　このようにして試料表面に形成される薄膜の膜厚は、例えば、5nm～1000nmの範囲にすることができる。
　なお、上記において「生物試料」には、原核生物および真核生物が含まれる。
　原核生物には、真正細菌、古細菌が含まれる。
　真正細菌には、アシドバクテリア門、アクイフェックス門、アクチノバクテリア門、エルシミクロビウム門、カルディセリクム門、クラミジア門、クロロビウム門、クロロフレクサス門、クリシオゲネス門、サーモデスルフォバクテリウム門、サーモミクロビア門、シアノバクテリア門、ゲマティモナス門、シネルギステス門、スピロヘータ門、ディクチオグロムス門、デイノコッカス-サーマス門、テネリクテス門、デフェリバクター門、テルモトガ門、ニトロスピラ門、バクテロイデス門、フィルミクテス門、フィブロバクター門、フソバクテリア門、プランクトミケス門、プロテオバクテリア門、ウェルコミクロビウム門、レンティスファエラ門が含まれる。
　古細菌には、クレンアーキオータ門（界）、ユリアーキオータ門（界）、コルアーキオータ門（界）、ナノアーキオータ門、タウムアーキオータ門が含まれる。
　真核生物には、原生生物界、植物界、菌界 、動物界が含まれる。
　原生生物界には、藻類（緑藻、褐藻、紅藻、珪藻類、ユーグレナ植物門、クリプト植物門、渦鞭毛植物門）、原生動物（繊毛虫門、根足虫類（アメーバ、有孔虫、太陽虫、放散虫）、胞子虫門（アピコンプレクサ、微胞子虫、粘液胞子虫）、鞭毛虫（トリパノソーマ類、襟鞭毛虫、超鞭毛虫、多鞭毛虫））、その他 、変形菌門、細胞性粘菌、ラビリンチュラ、二毛菌門が含まれる。
　植物界には、緑藻門、コケ植物門、車軸藻門、維管束植物亜界 （古マツバラン門、ヒゲノカズラ門、トクサ植物門、ハナヤスリ門、シダ植物門、球果植物門（マツ門）、ソテツ門、イチョウ門、マオウ門、被子植物門（モクレン門（双子葉植物綱（モクレン綱）、単子葉植物綱（ユリ綱）））が含まれる。
　菌界には、ツボカビ門（ツボカビ）、接合菌門（ケカビ、クモノスカビ）、子嚢菌門(酵母、アカパンカビ)、担子菌門（キノコ）、不完全菌、地衣植物門が含まれる。
　動物界には、海綿動物門、平板動物門（センモウヒラムシ）、刺胞動物門（クラゲ、イソギンチャク、サンゴ）、有櫛動物門（クシクラゲ）、中生動物門（ニハイチュウ）、扁形動物門（ウズムシ、プラナリア）、紐形動物門（ヒモムシ）、顎口動物門、腹毛動物門、輪形動物門（ワムシ）、動吻動物門、鉤頭動物門、内肛動物門、線形動物門（回虫、C. elegans）、類線形動物門（ハリガネムシ）、外肛動物門、箒虫動物門、腕足動物門、軟体動物門（貝、イカ、タコ）、鰓曳動物門、星口動物門（ホシムシ）、ユムシ動物門、環形動物門（ミミズ、ゴカイ）、緩歩動物門（クマムシ）、五口動物門、有爪動物門（カギムシ）、節足動物門（鋏角亜門（ウミグモ上綱、カブトガニ上綱（カブトガニ）、クモ上綱（クモ、サソリ））、甲殻亜門（エビ、カニ）、多足亜門 （ムカデ綱（唇脚綱、ムカデ）、コムカデ綱（結合綱、コムカデ）、エダヒゲムシ綱（少脚綱、エダヒゲムシ）、ヤスデ綱（倍脚綱、ヤスデ））、六脚亜門（内顎綱、外顎綱（昆虫綱）））、有鬚動物門、棘皮動物門（ウニ、ヒトデ、クモヒトデ、ナマコ、ウミユリ）、毛顎動物門（ヤムシ）、半索動物門（ギボシムシ）、脊索動物門（尾索動物亜門（ホヤ）、頭索動物亜門（ナメクジウオ）、脊椎動物亜門（無顎上綱（ヌタウナギ綱、頭甲綱（ヤツメウナギ））、顎口上綱（軟骨魚綱（サメ、エイ、ギンザメ）、肉鰭綱（シーラカンス、ハイギョ）、条鰭綱、両生綱、爬虫綱、哺乳綱、鳥綱）））が含まれる。
　本発明の電子顕微鏡による試料の観察方法によれば、以上に説明した蒸発抑制用組成物を用いて、蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用して薄膜を形成し、この試料を薄膜で覆い、真空下の試料室に収容されたこの薄膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示することによって試料を観察することができる。
　特に、この蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用した後、蒸発抑制用組成物を適用した試料に電子線またはプラズマを照射して、試料の表面に薄膜として重合膜（ポリマーの膜）を形成してこの重合膜で試料を覆い、真空下の試料室に収容されたこの重合膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示することによって試料を観察することができる。
　この重合膜は、電子顕微鏡の試料室内において試料観察用の電子線を試料に照射することによって重合反応させ、試料の表面に形成することができる。
　あるいは、電子顕微鏡による試料観察前に予め、電子顕微鏡の試料観察用の電子線とは別途の電子線またはプラズマを試料に照射することによって重合反応させ、試料の表面に形成することができる。
　照射条件は、使用する蒸発抑制用組成物等によって適宜に選択され、特に限定されないが、一例としては、従来の前処理をせずに蒸発抑制用組成物で覆った生物試料にSEMの電子ビーム（例えば5.0kV程度）を試料室内で60分間照射することによって、高真空（例えば10-4-10-7Pa）での生きたままの生物試料のSEM観察、例えば通常のFE-SEMでの観察が可能になる。
　また、別の一例では、従来の前処理をせずに蒸発抑制用組成物で覆った生物試料に予め3分間プラズマを照射することによって、高真空での生きたままの生物試料のSEM観察やTEM観察が可能になる。
　このような電子線やプラズマの照射によって、試料の表面は、薄い重合膜で覆われる。この重合膜の厚さは、生物試料表面に形成する場合には、例えば、5nm～1000nmの範囲にすることができる。
　プラズマの照射による重合は、例えば、従来のイオンスパッタリング装置などを用いて、圧力10-3～105Pa、-20～+80℃、1～10kV DCの条件で行うことができる。あるいは、従来のプラズマ重合で用いられているような反応管のような装置や方法で行うことができる。
　本発明において、電子顕微鏡による観察のために、SEM観察のための試料は、蒸発抑制用組成物の塗布、付着、コート、被覆などにより処理される。例えば塗布の場合には、塗布した後、余分な液をキムワイプのような柔らかい布状の紙、ろ紙などで吸い取る。TEM観察のための試料は、蒸発抑制用組成物の塗布、付着、コート、被覆、包埋などにより処理される。
　本発明によれば、試料を変形させずに試料そのものの状態を損なうことなく観察できるようになる。また、電子顕微鏡を用いて生きた生物試料を生きたままで観察することができ、動いている様子を観察することができる。本発明によれば、SS効果を与える組成物は、電子顕微鏡の試料に限らず、真空中での試料の損失を押さえることができる。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、電子顕微鏡による試料を観察するための良好な可視化剤として機能する。すなわち、生物／生体試料であるものを従来の脱水、化学固定、電子染色を施すことなく、生きたものを生きたままの状態で電子顕微鏡の鏡体内にいれることを可能にし、観察時においても、減圧下における、乾燥、氷晶、温度変化によるダメージを抑制し、かつ、試料中の水／ガスをバリアするSurface Shielding Effect（SS効果）を与える。
　また、電子線照射による帯電を防ぐなどして、真空下において、電子線照射により良好な２次電子像を与える。生きたままの試料の生きたままの状態での高い倍率で電子顕微鏡観察を可能にする。
　すなわち本発明の蒸発抑制用組成物は、電子顕微鏡による試料を観察するための良好な可視化剤として機能するため、走査型電子顕微鏡、透過型電子顕微鏡での試料観察への利用に適している。
　電子顕微鏡による試料観察方法において試料を変形させずに試料そのものの形状を観察する、特に生物／生体試料においては、生きたままの状態を観察するための手段と組成物（試薬材料）を提供する。
　生物試料の表面には化学物質によって保護膜が形成される。その膜は、真空下において生物試料に含まれている水や空気（ガス状物質）が抜けていってしまうのを防ぐ。膜の形成は大気圧条件下でも真空条件下でも形成可能であり、形成された膜は真空下ではより強堅なものになる。膜の形成は一枚膜でも多層でも可能である。
　外界と内界を隔てるために、無機物質（セラミクス）で覆うなどの方法がある。この方法では、表面が硬く、試料の動きが妨げられたり、生きた試料である場合は、呼吸が妨げられ死んでしまう場合もある。これに対して本発明では、試料全体を袋のようなもので一様に覆う方法によってこれらの問題を解決している。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、大気圧下および真空下において生物体内の水やガスなどの蒸発性のある物質に対して、バリア能を与える。その能力によって、真空下において生物内物質の蒸発を防ぐことができる。そして蒸発に伴う温度低下を引き起こさずに運動能を与え、かつ生物試料そのものの形態を維持でき、生物が活動できるための体内温度を減圧下においても維持することができる。
　本発明の蒸発抑制用組成物で試料を覆う場合、生物試料であれば生きたままのコートが可能であり、コートした後も生物は生存する。生きた生物の体表を本発明の蒸発抑制用組成物による薄膜で覆うことによって、生物試料の生きた状態を走査型電子顕微鏡でかつ生物微細表面などの構造を観察できる。
　そして本発明の蒸発抑制用組成物によれば、生きた生物の体表を覆うことによって、生物試料の生きた状態を走査型電子顕微鏡で帯電（チャージアップ）することなく直接観察を可能にする。
　また、電子顕微鏡での観察においていままでに必要とされてきた、生物／生体試料の試料作製に必要であった化学固定→導電染色→脱水→乾燥→コーティング、あるいは、化学固定→脱水→包埋→超薄切→電子染色→コーティングなどの行程を行うことなく高倍率での観察を可能にする。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、生物試料に限らず含水試料の濡れたままの状態を試料の破壊をともなわず真空下での電子顕微鏡観察を可能にする。
　本発明の蒸発抑制用組成物は、電子顕微鏡による測定中においても試料の変形、変質を抑制し、測定の前後に置いて著しいダメージを試料に与えない。真空下において、水／ガスバリア性能、試料内の温度の著しい低下の抑制のほか、真空下において、電子線を照射しても、水／ガスバリア性能、試料内の温度の著しい低下の抑制を発現するほか、電子線照射による帯電の防止、熱的ダメージの抑制を与える。試料が生物試料である場合は、生きた状態のものを生きたままで観察でき、鏡体から出しても試料になんら変化はみられない。
　本発明において、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡による試料観察は、これまでに知られている構成の装置によって行うことができる。
　走査型電子顕微鏡は、一般に鏡筒部（鏡体）と操作部とから構成されている。鏡筒部では、電子銃による電子線の発生、電子レンズによる電子線の絞り込み、電子プローブの整形、偏向コイルによる電子プローブの試料表面の観察領域での走査などが行われる。試料が載置される試料室は、試料台と、試料から放出された信号を検出する検出器を備えている。この鏡筒部は、清浄な真空で維持されなければならないため、目的に応じた真空排気機構が設けられる。
　操作部は、電子線の発生、電子レンズのレンズ作用、非点補正、電子プローブの試料面上での走査範囲（倍率）や走査速度などの制御を行い、また検出された信号をCRT上に映像として表示する。
　また、静止した走査型電子顕微鏡像ではノイズの少ないロースキャン画像で観察・撮影するのが一般的であったが、生きた生物試料の走査型電子顕微鏡による観察ではTVモードでの観察、すなわち動画の映像が主になる。したがって、走査型電子顕微鏡にはノイズの少ない（S/Nの小さい）TVモード画像表示・録画回路を付加し、高画質のTVモードで走査型電子顕微鏡像の表示と録画を行うことも考慮される。
　本発明において、走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡による試料観察は、これまでに知られている構成の装置によって行うこともできるが、次に説明するような新規な構成の装置は、本発明の方法に適している。
　図２２は、本発明の走査型電子顕微鏡の一実施形態の要部を模式的に示した図である。この走査型電子顕微鏡（SEM）１は、鏡体内の試料室に配置する試料４を導入可能な予備排気室２と、試料室および予備排気室２を脱気する排気装置７とを備えている。

　SEM１による試料観察においては、試料室の中に試料をセットして観察するが、高真空を維持するために試料室と外部との間に試料交換室として予備排気室２を設け、試料交換棒３によって試料４の出し入れを行うようにしている。
　この予備排気室２は真空ポンプ等の排気装置７と連通し、これらの間の排気通路にはニードルバルブ等の調節バルブ６が設けられ、調節バルブ６よりも排気上流側には、ピラニー真空計等の真空計５が設けられている。　このように、試料室および予備排気室２を排気装置７によって徐々に脱気できる機構を取り付け、一定の真空度を保つようにして、それぞれの真空度において別の作業が遂行できるように構成されている。

　生体試料をSEM１で観察する場合に、生体試料を大気圧中から真空中に持ち込まなければならない。ところが、生体試料はもちろん、微細な構造体であっても排気時の圧力変化や風圧によって障害を受ける。したがって、大気圧からの真空排気をより穏やかにする機構を設けることが必要となる。
　そこで、この実施形態では、ロータリーポンプ領域の到達真空度までの真空排気速度を制御できるように、真空計５と調節バルブ６を組み合わせた機構をSEM１に取り付けている。　このように段階的に排気する装置（異なる真空度で使用可能）は、予備排気室２と試料室を大きくし、かつ大きい部屋に対して効率よく真空にできるように高機能の真空ポンプを設置し、かつ真空度コントロールが瞬時に行えるようにすることが好ましい。
　図２３は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。(a)はSEM本体と電源の正面図、(b)はその側面図、(c)はグローブボックスを取り外した状態の側面図、(d)はグローブボックスを取り付けた状態の側面図、(e)はグローブボックスに不活性ガスボンベを取り付けた状態を示す斜視図である。
　この実施形態では、予備排気室２にグローブボックス１２を備えている。予備排気室２にグローブボックスを設置することで、真空内での作業を行うことができる。
　(c)および(d)に示すように、電源９を取り付けたSEM１の鏡体８の下部の試料室１０に、グローブボックス１２を、グローブボックス１２内のハウジング１４内に試料フォルダー１１が収容されるように横付けで設置している。
　グローブボックス１２は、ゴム手袋等が取り付けられた作業用入口１５と、内部を見ることができる窓部１４とを有し、真空下で試料を扱う作業ができるようになっている。そして試料を覆う薄膜を大気圧に曝すことなく、試料導入部としてのグローブボックス１２内から試料フォルダー１１によってSEM１内の試料室に導入することが可能である。例えば、SEM１に連結されたグローブボックス１２内でプラズマ重合膜を成膜することができる。
　また、グローブボックス１２は、真空下でサンプルを取り扱えるほか、(e)に示すように、グローブボックス１２内にアルゴンや窒素等の不活性ガスを導入可能な不活性ガスボンベ１６を設置して、グローブボックス１２内を不活性ガスで置換して使用することも可能である。これは、プラズマ処理等に好適である。例えば、予備排気室２内で重合反応によって試料の表面に重合膜を形成するときに、窒素、アルゴンなどの特定のガスを充填して反応をコントロールすることができる。
　図２４は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。この実施形態では、予備排気室２に、プラズマ照射装置または電子線照射装置１８を備えている。
　なお、このプラズマ照射装置または電子線照射装置１８は、SEM１の試料室に設置してもよい。
　また予備排気室２は、透明なベルジャー１７を備えている。この透明なベルジャー１７を介して、プラズマ照射装置または電子線照射装置１８からのプラズマや電子線を照射できるようになっている。
　例えば、プラズマ照射装置として、従来のイオンエッチングに使用されているような照射部分が固定されているタイプのものに加えて、照射部分が手に持って収まるようなハンディタイプのものを付加してそれぞれが使用できるようにすることもできる。さらに、プラズマの照射径を数nmから数十cmの範囲で調整できるようにして、試料４のサイズに応じて照射面積・強度を変えることができるようにすると、電流量のコントロールだけでなく、照射径自身のサイズも変更可能な装置となる。
　試料４が配置される試料台は、電子線やプラズマの照射により試料全面が均一に重合できるように、３次元的に回転する機能を有していてもよい。あるいは、試料裏面にまで重合が及ぶように、電子線あるいはプラズマが試料台を通過できるデザインを施すことができる。また、予備排気室２内での作業を映すCCDカメラを設置して、予備排気状態の試料４の様子およびプラズマ照射の様子をモニタリングすることができる。
　以上のような例などのように、予備排気室２にプラズマや電子線を様々な条件で照射できる装置を組み込むことで、プラズマ照射装置また電子線照射装置１８の照射時間や電流量などのコントロールが自動もしくは手動でコントロールすることができる。
　図２５は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。この実施形態では、試料室内部１９に、試料４への作用が可能な３次元マニピュレータ装置２１を備えている。
　なお、この３次元マニピュレータ装置２１は、予備排気室２に設置してもよい。
　この３次元マニピュレータ装置２１は、対象となる生きたままの生物等の試料の動きを制御するために（観撮影時のブレ軽減を含む）に用いられる。
　この３次元マニピュレータ装置２１は、微細生体解剖、刺激、生体信号導出等にも用いることができる。

　例えば、試料の移動、試料の微細解剖、または物理的もしくは化学的刺激に用いられる部材を移動するための移動機構として試料室内部１９に３次元マニピュレータ装置２１を設けることができる。生体試料への試薬の接触、浸透などの反応をダイナミックにSEM１で観察するには、電子線を出して２次電子像等を観察しながら反応実験を開始できる装置を必要とする。そのために、移動機構としての３次元マニピュレータ装置２１を、SEM１で観察しながら試料４の微細解剖、物理的もしくは化学的刺激などを行う装置として用いることができる。　図２６は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。この実施形態では、試料室内部１９に２次電子検出器２２と試料４との相対位置を３次元的に調節可能な検出位置調節機構を備えている。
　２次電子検出器２２をSEM１内で移動可能にし、必要に応じ、試料４に近付けたり特別な角度で接するようにする。これにより検出２次電子の増強が可能になる。
　この検出位置調節機構は、高速度撮影装置を設置するのに適している。すなわちスキャン速度を上げることができ、スロー再生のできるTVモードのために、検出器のエリアコントロール、および検出器までのワーキングディスタンスのコントロール等を可能にし、２次電子を無駄なく集めることができる。前後の差分をとって動きを特徴化するソフトなども補間技術として適用することができる。
　図２７は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。この実施形態では、試料室内部１９に試料４の色情報を取得可能な高速度カラーカメラ２３を備えている。
　本発明によれば、生きたままの試料４を観察できるようになるので、試料４の色はそのまま維持される。そこで、試料室内部１９に高速度カラーカメラ２３を設置し、色などの情報も記録できるようにすることで、記録した実際の色を利用し、SEM観察した像に疑似カラーとして応用することができる。
　図２８は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。この実施形態では、試料室内部１９の試料台２０の温度を調節可能な温度調節装置２４を備えている。
　例えば、鏡体外から試料台２０の温度を-20℃～100℃の間でコントロールできる磁場の影響を受けないステージを設置することができる。具体的には、例えば、試料台２０の温度を一定に（例えば37℃）する装置として、ペルチェ素子などを設置することができる。
　この温度調節装置２４によって、試料台２０に配置される生物試料等の試料４の温度を調節することができる。
　図２９は、本発明の走査型電子顕微鏡の別の実施形態の要部を模式的に示した図である。この実施形態では、試料室内部１９に、各種のセンサ２５を備えている。
　センサ２５としては、例えば、電気センサ、光センサ、ガスセンサ、水センサ、温度センサなどが挙げられる。また、微弱光で測定できる高感度センサ（暗視野カメラ付き）を設置することができる。
　このセンサ２５によって、試料台２０に配置される生物試料等の試料４の情報を得たり、物理的もしくは化学的刺激等への応答、重合反応等の監視や測定などを行うことができる。
　図３０は、本発明の透過型電子顕微鏡の一実施形態の要部を模式的に示した図、図３１は、図３０の要部を模式的に示した斜視図である。この実施形態では、試料を配置するグリッドメッシュ３３の両面のそれぞれに、前記蒸発抑制用組成物に電子線またはプラズマを照射して形成した重合膜３２を有している。
　図３０に示すように、サンドイッチ状のTEM用試料フォルダーは、ｃ－リング３０、ｏ－リング３１の下に、上下の重合膜３２で挟まれたグリッドメッシュ３３が配置されている。重合膜３２は、例えば、真空グリスとO-リングにより封止することもできる。
　図３１に示すように、試料の細胞３４は、グリッドメッシュ３３にプラズマによる重合膜３２を重ね、その重合膜３２上に細胞３４を載せ、さらに前記蒸発抑制用組成物を塗布し、プラズマ照射して重合膜３２を形成する。例えば、透過型電子顕微鏡は、図２２のSEMの場合と同様に、鏡体内の試料室に配置する試料を導入可能な予備排気室と、試料室および予備排気室を脱気する排気装置とを備えることができる。また、図２４のSEMの場合と同様に、試料室または予備排気室に、プラズマ照射装置または電子線照射装置を備えることができる。このようにTEMの予備排気室内でプラズマあるいは電子線重合を行えるように改良した中で、前記蒸発抑制用組成物を塗布し、プラズマ照射して重合膜３２を形成することができる。プラズマの照射径を数nmから数十cmの範囲で調節することで、試料のサイズに応じて照射面積を変えることができる。また、このような方法で標的細胞および培養液を試料フォルダー内に密封することで、高真空中でも生きたまま動的解析を行うことができる。金コロイドを結合させた試料も観察可能である。また、STEM（Scanning transmission electron microscope）を改良して、TEM内に入れた生きた試料に照射される電子線量を減少させることで、長時間の観察が可能になる。
　以下に、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
　以下の実施例において、SEM観察は、典型的には、電界放射型走査電子顕微鏡（FESEM、S-4800 (Hitachi)）を用いて、5.0 kVの加速電圧で行った。生物試料のダイナミックな動きを記録するために、SEMの画像データは直接にビデオ・レコーダー（Hi-band digital formatted video recorder, Pioneer, DVR-DT95）に転送した。
　TEM観察は、典型的には、120kVの加速電圧で、JEM-1220（JEOL）を用いて行った。
　プラズマ重合は、典型的には、金属ターゲットが解体されたイオンスパッタリング装置(JFC-1100, JEOL)によって行い、約1.0Paの真空レベルで、室温において1.0kV DC（8.0mA）で3分間プラズマ照射を行った。 
＜実施例1＞
　両親媒性化合物としてSodium laurylbenzenesulfonateを0.1 %水溶液として、金属化合物としてエチレンジアミンニッケル錯体を0.01wt%を使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたハムシを蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１）。電子ビーム照射開始後もハムシが運動する様子が観察された。
　そしてSEM観察後に試料室からハムシを取り出した後も生存していた。
＜実施例２＞
　両親媒性化合物としてSodium laurylbenzenesulfonateを0.1 %水溶液として、金属化合物としてエチレンジアミンニッケル錯体を0.01wt%を使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたトビムシを蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図２）。電子ビーム照射開始後もトビムシが運動する様子が観察された。
　そしてSEM観察後に試料室からトビムシを取り出した後も生存していた。
＜実施例３＞
　両親媒性化合物としてTween 20を10 %水溶液として、糖としてtrehaloseを1% (w/v)、pullulanを0.1% (w/v)使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたセスジユスリカの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図３）。電子ビーム照射開始後もセスジユスリカの幼虫が運動する様子が観察された。
　そしてSEM観察後に試料室からセスジユスリカの幼虫を取り出した後も生存し、成虫に変態した。
＜実施例４＞
　両親媒性化合物としてTween 20を10 %水溶液として、糖としてtrehaloseを1% (w/v)、pullulanを0.1% (w/v)使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラ（ヒトスジシマカ）の幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図４）。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
　そしてSEM観察後に試料室からボウフラの幼虫を取り出した後も生存し、成虫に変態した。
＜実施例５＞
　両親媒性化合物としてTween 20を10 %水溶液として、糖としてtrehaloseを1% (w/v)、pullulanを0.1% (w/v)使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後TEM試料室に入れてビデオ撮影した（図５）。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例６＞
　両親媒性化合物としてSodium laurylbenzenesulfonateを0.1 %水溶液として、金属化合物としてエチレンジアミンニッケル錯体を0.01wt%を使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　アリをゼラチンカプセルで包み、帯電防止用カーボンテープで固定し、ゼラチンで穴を塞いだ。このようにして、アリをゼラチンカプセルに入れて内部の大気を保ちつつ、観察部位の脚のみをカプセル外に出して、蒸発抑制用組成物をこの脚部分に塗布し、生きたままのSEM観察を行った。脚部分の動きをビデオ撮影することができた（図６）。
　そしてSEM観察後に試料室からアリを取り出した後も生存していた。
＜実施例７＞
　両親媒性化合物としてSodium laurylbenzenesulfonateを0.1 %水溶液として、金属化合物としてエチレンジアミンニッケル錯体を0.01wt%を使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたメダカの鱗を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後TEM試料室に入れてビデオ撮影した（図７）。電子ビーム照射開始後も内部の微細構造が変化する様子が観察された。
＜実施例８＞
　両親媒性化合物としてTween 20を10 %水溶液として、糖としてtrehaloseを1% (w/v)、pullulanを0.1% (w/v)使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　グッピーをマイクロチューブに飼育水ごと封入し、尾びれのみをチューブ外に出し、デンタルワックスで穴を塞いだ。このようにして、グッピーをマイクロチューブに入れて内部の大気および水系を保ちつつ、観察部位の尾びれのみをチューブ外に出して、蒸発抑制用組成物をこの脚部分に塗布し、生きたままのSEM観察を行った。電子ビーム照射開始後も尾びれの動きをビデオ撮影することができた（図８）。
　そしてSEM観察後に試料室からグッピーを取り出した後も生存していた。
＜実施例９＞
　両親媒性化合物としてTween 20を10 %水溶液として、糖としてtrehaloseを1% (w/v)、pullulanを0.1% (w/v)使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　ヒドラ外胚葉性上皮細胞を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後TEM試料室に入れて、電子ビーム照射開始後も生きたままビデオ撮影した（図９）。図中、左が光学顕微鏡像、右がTEMのビデオ撮影像である。従来の前処理は行わずに上記の処理を行った後、直接に高真空下で3分間電子線照射（120kV）を行った。
＜実施例１０＞
　蒸発抑制用組成物として油脂類を用いた。
　生きたプラナリアを蒸発抑制用組成物（シリコンオイル）に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１０）。電子ビーム照射開始後もプラナリアが運動する様子が観察された。
　そしてSEM観察後に試料室からプラナリアを取り出した後も生存していた。
＜実施例１１＞
　両親媒性化合物として、Tween 20を用いた。自立した薄膜を作るために、50 % (v/v)のTween 20を100％エタノールに溶解し、ガラス上にスピンコーター(3000rpm, 5s) (SC8001, Aiden)を使用して広げてプラズマ重合した。重合後の薄膜は、ガラス板からエタノール中で解離させた。
　図１１(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(Tween20)の光学顕微鏡像、(b)はTween 20の化学式、(c)は膜表面のAFM像、(d)は膜断面のTEM像である。(d)において矢印の間がTween 20の重合膜である。照射側の表面（矢尻の間の部分）には薄い層が形成されていた。
　次に、両親媒性化合物としてTween 20を1%水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１２）。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
　図１２は、SEM従来像と、プラズマ照射膜(Tween20)でコートされた試料による新規SEM像である。(a)はボウフラ光学顕微鏡像、(b)～(d)はSEM従来像、(f)～(n)はプラズマ照射個体 (Tween20塗布無し (f-i), 有り (k-n) )、(e, j, o)は試料断面のTEM像である。
　生きたボウフラ(a, time 0)に、SEM内の高真空下で電子線を30分照射した(b-d, time 30)。矢尻は静電帯電のエリアを示す。
　f-iでは、1% Tween 20で覆った生きたボウフラに3分間プラズマ照射し(f, time 0)、その後SEMで30分間観察した(g-i)。
　k-nでは、生きたボウフラを従来のSEMで電子線照射し（kは光学顕微鏡像）、その後観察した(l-n)。
　b, g, lのそれぞれの四角内を拡大し(c, h, m)、さらに拡大した(d, i, n)。
　(e, j, o)は試料断面のTEM像であり、矢尻の間の層はプラズマ処理によって形成された重合膜である。
＜実施例１２＞
　両親媒性化合物として、TritonTMX-100を用いた。1 % (v/v)のTritonTM X-100を蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１３(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(TritonTMX-100)の光学顕微鏡像、図１３(b)はTritonTM X-100の化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてTritonTM X-100を１%水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１３）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１３＞
　両親媒性化合物として、pluronic(R) F-127を用いた。1 % (v/v)のpluronic(R) F-127を蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１４(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(TritonTMX-100)の光学顕微鏡像、図１４(b)はpluronic(R) F-127の化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてpluronic(R) F-127を1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１４）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１４＞
　両親媒性化合物として、Brij(R) 35を用いた。1 % (v/v)のBrij(R) 35を蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１５(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(Brij(R) 35)の光学顕微鏡像、図１５(b)はBrij(R)35の化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてBrij(R) 35を1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１５）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１５＞
　両親媒性化合物として、CHAPSを用いた。1 % (v/v)のCHAPSを蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１６(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(CHAPS)の光学顕微鏡像、図１６(b)はCHAPSの化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてCHAPSを1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１６）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１６＞
　両親媒性化合物として、MEGA8を用いた。1 % (v/v)のMEGA8を蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１７(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(MEGA8)の光学顕微鏡像、図１７(b)はMEGA8の化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてMEGA8を1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１７）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１７＞
　両親媒性化合物として、Sodium cholateを用いた。1 % (v/v)のSodium cholateを蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１８(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(Sodium cholate)の光学顕微鏡像、図１８(b)はSodium cholateの化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてSodium cholateを1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１８）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１８＞
　両親媒性化合物として、n-Dodecyl-β-D-maltosideを用いた。1 % (v/v)のn-Dodecyl-β-D-maltosideを蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図１９(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(n-Dodecyl-β-D-maltoside)の光学顕微鏡像、図１９(b)はn-Dodecyl-β-D-maltosideの化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてn-Dodecyl-β-D-maltosideを1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図１９）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例１９＞
　両親媒性化合物として、n-Octyl-β-D-glucosideを用いた。1 % (v/v)のn-Octyl-β-D-glucosideを蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図２０(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(n-Octyl-β-D-glucoside)の光学顕微鏡像、図２０(b)はn-Octyl-β-D-glucosideの化学式である。
　次に、両親媒性化合物としてn-Octyl-β-D-glucosideを1 %水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図２０）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
＜実施例２０＞
　イオン液体として、1,3-Diallylimidazolium bromideを用いた。1%(v/v)の1,3-Diallylimidazolium bromideを蒸留水に溶解し、ガラス上にスピンコーターを使用して広げてプラズマ重合し、実施例１１と同様にして自立性の薄膜を得た。図２０(a)は、プラズマ照射により作成した自立性の重合膜(1,3-Diallylimidazolium bromide)の光学顕微鏡像、図２０(b)は1,3-Diallylimidazolium bromideの化学式である。
　次に、イオン液体として1,3-Diallylimidazolium bromideを1%水溶液として使用し、蒸発抑制用組成物を調製した。
　生きたボウフラの幼虫を蒸発抑制用組成物に1分間浸漬し、その後取り出して余剰分をふき取り、その体表を薄膜で覆った。
　その後SEM試料室に入れてビデオ撮影した（図２１）。cは0min、dは30minでの様子を示し、dの四角内を拡大し(e)、さらに拡大した(f)。電子ビーム照射開始後もボウフラの幼虫が運動する様子が観察された。
１　　　走査型電子顕微鏡（SEM）
２　　　予備排気室
３　　　試料交換棒
４　　　試料
５　　　真空計
６　　　調節バルブ
７　　　真空ポンプ
８　　　鏡体
９　　　電源
１０　　試料室
１１　　試料フォルダー
１２　　グローブボックス
１３　　グローブボックス内のハウジング
１４　　窓部
１５　　作業用入口
１６　　不活性ガスボンベ
１７　　ベルジャー
１８　　プラズマ照射装置または電子線照射装置
１９　　試料室内部
２０　　試料台
２１　　３次元マニピュレータ
２２　　２次電子検出器
２３　　高速度カラーカメラ
２４　　温度調節装置
２５　　センサ
３０　　ｃ－リング
３１　　ｏ－リング
３２　　重合膜
３３　　グリッドメッシュ
３４　　細胞

Claims (26)

  1. 　両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有する蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用して薄膜を形成し、この試料を薄膜で覆う工程と、真空下の試料室に収容されたこの薄膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含むことを特徴とする電子顕微鏡による試料の観察方法。
  2. 　両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有する蒸発抑制用組成物を試料の表面に適用する工程と、蒸発抑制用組成物を適用した試料に電子線またはプラズマを照射して試料の表面に薄膜として重合膜を形成し、この重合膜で試料を覆う工程と、真空下の試料室に収容されたこの重合膜で覆った試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含むことを特徴とする電子顕微鏡による試料の観察方法。
  3. 　電子顕微鏡の試料室内において試料観察用の電子線を試料に照射することによって重合反応させ、試料の表面に薄膜として重合膜を形成することを特徴とする請求項２に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  4. 　電子顕微鏡による試料観察前に予め、電子顕微鏡の試料観察用の電子線とは別途の電子線またはプラズマを試料に照射することによって重合反応させ、試料の表面に薄膜として重合膜を形成することを特徴とする請求項２に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  5. 　蒸発抑制用組成物は、両親媒性化合物と、金属化合物および糖から選ばれる少なくとも１種とを含有することを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  6. 　含水試料の濡れたままの状態の電子顕微鏡像を、含水試料の破壊を伴わずに前記表示装置に表示することを特徴とする請求項１から５のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  7. 　蒸発抑制用組成物を生存している生物試料の体表に適用して薄膜を形成し、この試料を薄膜で覆う工程と、真空下の試料室に置かれたこの薄膜で覆った生物試料の生きたままの運動の電子顕微鏡像を表示装置に表示する工程とを含むことを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  8. 　前記薄膜によって、生物試料体内からの蒸発に伴う温度低下を抑制して生物試料に運動能を与え、かつ生物試料そのものの形態を維持することを特徴とする請求項７に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  9. 　前記薄膜によって、生物試料が活動できるための体内温度を真空下においても維持することを特徴とする請求項７または８に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  10. 　走査型電子顕微鏡を用いて、試料のチャージアップを起こさずに試料の電子顕微鏡像を表示装置に表示することを特徴とする請求項１から９のいずれかに記載の電子顕微鏡による試料の観察方法。
  11. 　真空下において蒸発性のある物質を含有する試料の表面に薄膜を形成してこの試料を覆い、前記蒸発性のある物質に対して真空下においてその蒸発を抑制するバリア能を与えるために使用される真空下での蒸発抑制用組成物であって、両親媒性化合物、油脂類、およびイオン液体から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする真空下での蒸発抑制用組成物。
  12. 　生存している生物試料の体表に薄膜を形成してこの生物試料を覆い、生物試料体内の蒸発性のある物質に対して真空下においてその蒸発を抑制するバリア能を与えるために使用されることを特徴とする請求項１１に記載の真空下での蒸発抑制用組成物。
  13. 　蒸発抑制用組成物を適用した試料に電子線またはプラズマを照射することによって試料の表面に薄膜として重合膜が形成され、この重合膜で試料が覆われることを特徴とする請求項１１または１２に記載の真空下での蒸発抑制用組成物。
  14. 　両親媒性化合物と、金属化合物および糖から選ばれる少なくとも１種とを含有することを特徴とする請求項１１から１３のいずれか一項に記載の蒸発抑制用組成物。
  15. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、鏡体内の試料室に配置する試料を導入可能な予備排気室と、試料室および予備排気室を脱気する排気装置とを備えることを特徴とする走査型電子顕微鏡。
  16. 　予備排気室にグローブボックスを備えることを特徴とする請求項１５に記載の走査型電子顕微鏡。
  17. 　試料室または予備排気室に、プラズマ照射装置または電子線照射装置を備えることを特徴とする請求項１５に記載の走査型電子顕微鏡。
  18. 　試料室または予備排気室に、試料への作用が可能な３次元マニピュレータ装置を備えることを特徴とする請求項１５に記載の走査型電子顕微鏡。
  19. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室に２次電子の検出器と試料との相対位置を３次元的に調節可能な検出位置調節機構を備えることを特徴とする走査型電子顕微鏡。
  20. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室に試料の色情報を取得可能な高速度カラーカメラを備えることを特徴とする走査型電子顕微鏡。
  21. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室内の試料台の温度を調節可能な温度調節装置を備えることを特徴とする走査型電子顕微鏡。
  22. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される走査型電子顕微鏡であって、試料室に、電気センサ、光センサ、ガスセンサ、水センサ、および温度センサから選ばれる少なくとも１種のセンサを備えることを特徴とする走査型電子顕微鏡。
  23. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される透過型電子顕微鏡であって、鏡体内の試料室に配置する試料を導入可能な予備排気室と、試料室および予備排気室を脱気する排気装置とを備えることを特徴とする透過型電子顕微鏡。
  24. 　予備排気室にグローブボックスを備えることを特徴とする請求項２３に記載の透過型電子顕微鏡。
  25. 　試料室または予備排気室に、プラズマ照射装置または電子線照射装置を備えることを特徴とする請求項２３に記載の透過型電子顕微鏡。
  26. 　請求項１から１０のいずれか一項に記載の電子顕微鏡による試料の観察方法に使用される透過型電子顕微鏡であって、試料を配置するグリッドメッシュの両面のそれぞれに、前記蒸発抑制用組成物に電子線またはプラズマを照射して形成した重合膜を有することを特徴とする透過型電子顕微鏡。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP2013091741A (ja) * 2011-10-27 2013-05-16 Fujifilm Corp 硬化物の製造方法および硬化物
WO2015115502A1 (ja) * 2014-01-29 2015-08-06 独立行政法人科学技術振興機構 含水状態の生物試料の電子顕微鏡観察用保護剤、電子顕微鏡観察用キット、電子顕微鏡による観察、診断、評価、定量の方法並びに試料台
JP2016166868A (ja) * 2015-02-25 2016-09-15 学校法人日本大学 イオン液体を用いた透過型電子顕微鏡による錯体の観察方法及び観察用試料
JP2017534729A (ja) * 2014-10-29 2017-11-24 ザ インダストリー アンド アカデミック コオペレーション イン チュンナム ナショナル ユニバーシティー（アイエーシー） 気−液界面プラズマ重合による高分子薄膜の製造方法及びこれにより製造された高分子薄膜
JP2018078028A (ja) * 2016-11-09 2018-05-17 株式会社メルビル 試料ホルダー
WO2021070338A1 (ja) * 2019-10-10 2021-04-15 株式会社日立ハイテク 荷電粒子線装置
JP2022054466A (ja) * 2020-09-26 2022-04-07 ＮａｎｏＳｕｉｔ株式会社 食品のコーティング方法及びコーティング装置
CN116396809A (zh) * 2023-03-30 2023-07-07 橙的(福建)卫生用品有限责任公司 一种厨房湿巾的制备方法
JP2023110930A (ja) * 2022-01-28 2023-08-10 国立大学法人千葉大学 被覆装置、被覆方法

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6496184B2 (ja) * 2014-06-27 2019-04-03 日本電子株式会社 試料導入方法、試料ステージ、および荷電粒子線装置
CN104908063A (zh) * 2015-06-24 2015-09-16 中山安荞生物科技有限公司 一种真空手套箱
DE102016202379A1 (de) * 2016-02-17 2017-08-17 Carl Zeiss Microscopy Gmbh Verfahren zur Präparation von Objekten für Untersuchungen mit geladenen Teilchenstrahlen
TWI594288B (zh) * 2016-03-14 2017-08-01 台灣電鏡儀器股份有限公司 電子顯微鏡
WO2018048899A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Micromatrix Medical Inc. Use of resected liver serum for whole liver engineering
CN107860783B (zh) * 2017-10-23 2019-09-24 中国科学院化学研究所 Xps进样装置
JP7001425B2 (ja) * 2017-10-26 2022-01-19 シンフォニアテクノロジー株式会社 マウンタ用エア制御装置
US12224154B2 (en) 2018-01-10 2025-02-11 University Of Kansas Conductive fixation for electron microscopy
CN110243640B (zh) * 2018-03-08 2022-01-25 中国科学院海洋研究所 深海有孔虫的内腔磨片快速制备方法
CN108802080A (zh) * 2018-08-16 2018-11-13 扬州大学 一种玉米成熟种子中胚乳淀粉生长环的原位观察方法
EP3941497A4 (en) * 2019-03-21 2022-12-21 Miromatrix Medical Inc. ENHANCED DECELLULARIZATION OF ISOLATED ORGANS
CN109916942B (zh) * 2019-04-18 2021-09-21 攀钢集团攀枝花钢铁研究院有限公司 捕收剂的电子显微镜表征方法
CN110441084A (zh) * 2019-09-04 2019-11-12 海南省农业科学院热带果树研究所 一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法
WO2021256412A1 (ja) 2020-06-16 2021-12-23 学校法人中部大学 走査型電子顕微鏡を用いた観察方法、及びそのための試料ホルダ
CN111855507A (zh) * 2020-07-17 2020-10-30 北方民族大学 一种空气颗粒物的检测装置及检测方法
CN112611775B (zh) * 2020-12-16 2023-08-11 聚束科技（北京）有限公司 一种用于观察生物组织的方法及电子显微镜
KR102740532B1 (ko) 2021-11-03 2024-12-16 대한민국 스마트 온실 로봇을 위한 농약 자동 공급 장치 및 그 동작 방법
CN114773216A (zh) * 2022-03-24 2022-07-22 天津大学 一种l-亮氨酸球形晶体及其制备方法和应用
CN118330207B (zh) * 2024-06-12 2024-08-09 成都海默云因医学检验实验室有限公司 一种改善固定细胞免疫荧光法中荧光背景的固定剂及其固定细胞的方法

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57147857A (en) * 1981-03-06 1982-09-11 Koichi Kanetani Sample observation through scanning electron microscope
JPS612250A (ja) * 1984-06-15 1986-01-08 Hitachi Ltd 走査電子顕微鏡およびその類似装置における試料導入装置
JPS6188442A (ja) * 1984-10-05 1986-05-06 Hitachi Ltd イオンビ−ム照射装置
JPH01197626A (ja) * 1988-02-02 1989-08-09 Ushio Inc 封入検鏡試料の作製方法
JPH02147U (ja) * 1988-06-13 1990-01-05
JPH10134751A (ja) * 1996-10-29 1998-05-22 Nikon Corp 環境制御型の走査型電子顕微鏡
JP2004319518A (ja) * 2004-07-22 2004-11-11 Topcon Corp 走査型電子顕微鏡装置
JP2005026530A (ja) * 2003-07-04 2005-01-27 Jeol Ltd 試料ホルダ移動機構及び真空装置並びに荷電粒子ビーム装置
WO2007083756A1 (ja) 2006-01-20 2007-07-26 Juridical Foundation Osaka Industrial Promotion Organization 電子顕微鏡用チャージアップ防止液状媒体、及びそれを用いた試料観察方法
JP2009266741A (ja) 2008-04-28 2009-11-12 Hitachi High-Technologies Corp 透過型電子顕微鏡、及び試料観察方法
JP2010025656A (ja) * 2008-07-17 2010-02-04 Jeol Ltd イオン液体を用いた試料の処理方法及び処理システム

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6176676U (ja) * 1984-10-25 1986-05-23
JPS6378116A (ja) 1986-09-22 1988-04-08 Mitsubishi Electric Corp 広帯域光学撮像装置
JPH04106853A (ja) * 1990-08-28 1992-04-08 Jeol Ltd 走査電子顕微鏡
JPH078116A (ja) 1993-06-29 1995-01-13 Kubota Corp 育苗箱構造
JPH1012173A (ja) * 1996-06-20 1998-01-16 Hitachi Ltd 電子顕微鏡の汚染防止システム
JP3019038B2 (ja) * 1997-09-17 2000-03-13 日本電気株式会社 半導体装置
JP2001153760A (ja) * 1999-11-30 2001-06-08 Shimadzu Corp 搬送用試料容器
JP2003203595A (ja) * 2002-01-08 2003-07-18 Jeol Ltd 電子顕微鏡
JP3946602B2 (ja) * 2002-09-03 2007-07-18 株式会社日立ハイテクノロジーズ 荷電粒子線装置
DE10344492B4 (de) * 2003-09-24 2006-09-07 Carl Zeiss Nts Gmbh Teilchenstrahlgerät
JP2005285485A (ja) * 2004-03-29 2005-10-13 Toudai Tlo Ltd プラズマ発生装置及び低真空走査電子顕微鏡
JP2010002300A (ja) * 2008-06-20 2010-01-07 Jeol Ltd 試料保持体、試料検査装置及び試料検査方法
JP4799690B2 (ja) * 2009-12-01 2011-10-26 国立大学法人北海道大学 電子顕微鏡による試料観察用の液状媒体とそれを用いた電子顕微鏡による試料観察方法
JP5422416B2 (ja) * 2010-01-28 2014-02-19 株式会社日立製作所 試料搬送装置

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57147857A (en) * 1981-03-06 1982-09-11 Koichi Kanetani Sample observation through scanning electron microscope
JPS612250A (ja) * 1984-06-15 1986-01-08 Hitachi Ltd 走査電子顕微鏡およびその類似装置における試料導入装置
JPS6188442A (ja) * 1984-10-05 1986-05-06 Hitachi Ltd イオンビ−ム照射装置
JPH01197626A (ja) * 1988-02-02 1989-08-09 Ushio Inc 封入検鏡試料の作製方法
JPH02147U (ja) * 1988-06-13 1990-01-05
JPH10134751A (ja) * 1996-10-29 1998-05-22 Nikon Corp 環境制御型の走査型電子顕微鏡
JP2005026530A (ja) * 2003-07-04 2005-01-27 Jeol Ltd 試料ホルダ移動機構及び真空装置並びに荷電粒子ビーム装置
JP2004319518A (ja) * 2004-07-22 2004-11-11 Topcon Corp 走査型電子顕微鏡装置
WO2007083756A1 (ja) 2006-01-20 2007-07-26 Juridical Foundation Osaka Industrial Promotion Organization 電子顕微鏡用チャージアップ防止液状媒体、及びそれを用いた試料観察方法
JP2009266741A (ja) 2008-04-28 2009-11-12 Hitachi High-Technologies Corp 透過型電子顕微鏡、及び試料観察方法
JP2010025656A (ja) * 2008-07-17 2010-02-04 Jeol Ltd イオン液体を用いた試料の処理方法及び処理システム

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. AM. CHEM. SOC., vol. 127, 2005, pages 2398 - 2399
LANGMUIR, vol. 27, 2011, pages 9671 - 9675
MICROSC. RES. TECH., vol. 74, 2011, pages 415 - 420
See also references of EP2755225A4 *

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013091741A (ja) * 2011-10-27 2013-05-16 Fujifilm Corp 硬化物の製造方法および硬化物
CN105940291B (zh) * 2014-01-29 2019-03-08 国立研究开发法人科学技术振兴机构 含水状态的生物试样的电子显微镜观察用保护剂、试剂盒、利用电子显微镜进行观察、诊断、评价、定量的方法以及试样台
WO2015115502A1 (ja) * 2014-01-29 2015-08-06 独立行政法人科学技術振興機構 含水状態の生物試料の電子顕微鏡観察用保護剤、電子顕微鏡観察用キット、電子顕微鏡による観察、診断、評価、定量の方法並びに試料台
CN105940291A (zh) * 2014-01-29 2016-09-14 国立研究开发法人科学技术振兴机构 含水状态的生物试样的电子显微镜观察用保护剂、电子显微镜观察用试剂盒、利用电子显微镜进行观察、诊断、评价、定量的方法以及试样台
JPWO2015115502A1 (ja) * 2014-01-29 2017-03-23 国立研究開発法人科学技術振興機構 含水状態の生物試料の電子顕微鏡観察用保護剤、電子顕微鏡観察用キット、電子顕微鏡による観察、診断、評価、定量の方法並びに試料台
JP2017534729A (ja) * 2014-10-29 2017-11-24 ザ インダストリー アンド アカデミック コオペレーション イン チュンナム ナショナル ユニバーシティー（アイエーシー） 気−液界面プラズマ重合による高分子薄膜の製造方法及びこれにより製造された高分子薄膜
JP2016166868A (ja) * 2015-02-25 2016-09-15 学校法人日本大学 イオン液体を用いた透過型電子顕微鏡による錯体の観察方法及び観察用試料
JP2018078028A (ja) * 2016-11-09 2018-05-17 株式会社メルビル 試料ホルダー
WO2021070338A1 (ja) * 2019-10-10 2021-04-15 株式会社日立ハイテク 荷電粒子線装置
JP2022054466A (ja) * 2020-09-26 2022-04-07 ＮａｎｏＳｕｉｔ株式会社 食品のコーティング方法及びコーティング装置
JP7665174B2 (ja) 2020-09-26 2025-04-21 ＮａｎｏＳｕｉｔ株式会社 食品のコーティング方法及びコーティング装置
JP2023110930A (ja) * 2022-01-28 2023-08-10 国立大学法人千葉大学 被覆装置、被覆方法
JP7685158B2 (ja) 2022-01-28 2025-05-30 国立大学法人千葉大学 被覆装置、被覆方法
CN116396809A (zh) * 2023-03-30 2023-07-07 橙的(福建)卫生用品有限责任公司 一种厨房湿巾的制备方法

Also Published As

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Muto et al. Correlative Fluorescence and Scanning Electron Microscope Imaging of Cultured Neurons Pretreated with Ionic Liquid
Work Overview of Cryo-Electron Microscopy (Cryo-EM) Technology

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