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WO2008138475A1 - Verwendung von crmp1 als marker für chronisch psychiatrische erkrankungen und monoklonaler antikörper gegen crmp1 - Google Patents

Verwendung von crmp1 als marker für chronisch psychiatrische erkrankungen und monoklonaler antikörper gegen crmp1 Download PDF

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Publication number
WO2008138475A1
WO2008138475A1 PCT/EP2008/003407 EP2008003407W WO2008138475A1 WO 2008138475 A1 WO2008138475 A1 WO 2008138475A1 EP 2008003407 W EP2008003407 W EP 2008003407W WO 2008138475 A1 WO2008138475 A1 WO 2008138475A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
crmp1
marker
depression
insoluble
schizophrenia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2008/003407
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English (en)
French (fr)
Inventor
Carsten Korth
Verian Bader
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of WO2008138475A1 publication Critical patent/WO2008138475A1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
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    • G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry
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    • G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry
    • G01N2800/302—Schizophrenia
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    • G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry
    • G01N2800/304—Mood disorders, e.g. bipolar, depression

Definitions

  • the invention relates to a novel marker for chronic psychiatric disorders, in particular schizophrenia, bipolar disorder or depression.
  • Chronic psychiatric disorders are among the most common diseases with lifetime prevalence rates of about 1% for schizophrenia and bipolar disorder and up to 10% for depression.
  • a test is known in which the activity or concentration of phospholipase (cPLA.sub.2) is measured. Increases in the measured values from normal values are indicative of bipolar disorders, e.g. Taken schizophrenia.
  • cPLA.sub.2 phospholipase
  • US Pat. No. 4,874,694 describes the gel electrophoretic measurement of phospho-protein patterns for the diagnosis of neurological diseases, e.g. Schizophrenia.
  • U.S. Patent Application 20050208519 relates to biomarker combinations that can be used in the diagnosis of schizophrenia. These are certain genes and their products, e.g. the genes of ADSS, APOBEC3B, (ATM); (CLC), CTBPl, C-X-C, (CXCLI), etc.
  • US Patent Application 20050089927 relates to specific short peptides which are selectively bound by samples from schizophrenic patients while in Samples from non-schizophrenic patients show little or no binding.
  • WO 2005/077978 proposes a method with which biological markers for bipolar disorders can be identified.
  • a protein fraction is obtained in a first step from brain samples of diseased patients, enriched in the insoluble proteins.
  • this protein fraction by conventional means, e.g. by immunization of animals, antibodies produced.
  • Antibodies which appear to be suitable are determined for the proteins recognized by them, the theory being that these proteins, if they are specifically present only in diseased patients in insoluble form, are suitable as markers.
  • the object of the invention is to provide, starting from the known method, a marker with which a safer diagnosis of chronic psychiatric diseases such as e.g. Schizophrenia, bipolar disorder, and depression and a possible re-definition of such diseases is possible.
  • chronic psychiatric diseases such as e.g. Schizophrenia, bipolar disorder, and depression and a possible re-definition of such diseases is possible.
  • the invention is based on polypeptides contained in insoluble brain regions, which are recognized by a monoclonal antibody with the internal name mAb 6HI 1 isolated in the context of the invention.
  • Advantageous embodiments of the invention are specified in the subclaims.
  • the antibody mAb 6HI 1 is segregated from a hybridoma cell line deposited by the applicant on April 4, 2007 under the number DSM ACC2836 with the DSMZ German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH.
  • An essential aim of the use according to the invention is therefore to define a new subset of patients suffering, for example, either "schizophrenia, bipolar disorder or recurrent depression" via the polypeptide serving as a marker.
  • a common feature of this, and possibly other patients who have not yet been examined in this chronic psychiatric Diseases suffer from, is that at least one of the antibodies recognized by the antibody mAb 6Hl 1 polypeptides in the brain becomes insoluble or aggregated.
  • the marker for diagnosis and accompanying medical therapy serves to monitor the progress of the diseases defined via it.
  • the antibody mAb 6HI 1 recognizes essentially 3 proteins with molecular weights of 54 kDa, 62 kDa and about 74 kDa,
  • the two larger proteins are splice variants of the protein CRMP1 (collapsin response mediator protein 1) (see eg with respect to the 55 kDa variant example 2), while the smaller 54 kDa band either represents a hitherto unknown smaller splice variant or a degradation product of the two higher variants is.
  • the protein CRMP1 is specific at a number of times z. established disease patterns across subset of chronic psychiatric disorders becomes insoluble, aggregated, and thus can be used as a specific biological marker for these disorders.
  • CRMP1 protein or a specific fragment of CRMP1 is used as the marker.
  • the CRMP1 gene currently has two transcripts expressed in proteins of different length (splice variants), the long form CRMP1-I has 686 amino acids, the short form CRMP 1-2 572 amino acids.
  • the amino acid sequences of both variants are shown in FIG. 1 (CRMP1-I, 74 kDa) and FIG. 2 (CRMP1-2, 62 kDa) and in SEQ ID NO: 1 (CRMP1-I, 74) and SEQ ID NO: 3 (CRMP 1-2).
  • the gene sequences are shown in SEQ ID NO: 2 (CRMP1-I) and SEQ ID NO: 4 (CRMP1-2).
  • the use of the indication CRMP1 in this application is intended to cover all variants occurring in vivo, including various splice forms and polymorphism-induced mutations of this protein, and at the protein level conformations, degradation forms, or other post-translationally altered forms, such as phosphorylated forms. Furthermore, the indication CRMP1 should also include fragments which can be detected in tissue samples and clearly assigned to CRMP1.
  • the invention relates to the use of the protein CRMP1, its splice forms, and fragments, as well as the associated gene as a marker for the classification and diagnosis of chronic psychiatric disorders, in particular schizophrenia, bipolar disorders or depression, or clarifying whether a predisposition to these diseases exists , for the evaluation of drugs in the context of a therapy control, as well as appropriate procedures.
  • the CRMP1 protein in general, or specific degradation products can be used as markers.
  • a specific degradation pattern of CRMP1 could also be disease-specific and be detected by protein-biochemical methods capable of recognizing specific fragments.
  • the insoluble version has different degradation patterns than the soluble one, since other targets within the same polypeptide sequence are available for degrading proteases. It is therefore conceivable that disease-specific CRMPl is degraded differently than CRMPl in healthy or not predisposed persons. In this case, a different degradation pattern can occur. It is conceivable, for example, that in diseased or predisposed persons a particular fragment is clearly enriched, which is e.g. could be detected by the use of specific antibodies or other appropriate methods.
  • CRMP1 should also include polymorphisms or mutated versions in addition to the splice forms and fragments mentioned. It is conceivable that the insolubility of CRMP1 can be genetically engineered e.g. B. is determined by polymorphisms or mutations in the CRMPl gene. Examination of the CRMPl gene for such deviations may therefore allow a routine nescreening or an estimation of the disease risk or in case of diseased persons a safe and fast diagnosis.
  • CRMP1 as a marker, regardless of whether the protein is dissolved or in insoluble form.
  • the insoluble variant presumably due to a misfolding associated with the disease is deliberately used as a marker. Detection may be via an antibody that specifically recognizes the insoluble variant of CRMP1.
  • the tissue used as a sample material is biochemically purified in such a way that the insoluble CRMP form, if present, is enriched and can then be detected.
  • insoluble CRMP1 tends to form aggregates, which in turn may be detected macroscopically.
  • Suitable tissues for detection are eg blood, cerebrospinal fluid or brain. Depending on the tissue used, the purification is carried out in different ways known to those skilled in the art. Alternative tissues or tissue fluids are also available for the diagnostic isolation of CRMP1 or its gene, such as saliva, tears, urine; The removal of skin or muscle biopsies is also conceivable. With suitable ligands which detect CRMP1 and are labeled, for example, with fluorescent dyes, it is also possible, if appropriate after their application of a patient to be tested with non-invasive methods, to test them. which, like an ophthalmoscope, attempts to detect aggregated CRMPl in the ocular fundus.
  • CRMP1 is also referred to in the literature as dihydropyriminidase related protein 1 (DRP1).
  • DRP2 dihydropyriminidase related protein 1
  • a related protein of the same family are described in the literature (Johnston-Wilson et al., 2000, Molecular Psychiatry 5: 142-149, Hong et al., 2005, American Journal of Medical Genetics, Part B (Neuropsychiatric Genetics). 136B: 8-11) compounds for schizophrenia.
  • no significant association of the DRP2 protein with schizophrenia, depression or bipolar disease could be found in the insoluble brain fraction of post mortem material in our own investigations in FIG.
  • CRMP1 as a marker has the following advantages over the prior art:
  • the advantage of CRMP1-based diagnostics is that the marker is specific, in contrast the detection of phospholipase is suggested, as for example in US Pat. No. 7,015,006.
  • the invention also relates to a method for diagnosing psycchiatrical diseases such as bipolar disorders schizophrenia and recur-
  • the method is based in one embodiment on the fact that from a suitable tissue sample of a patient, a fraction is purified, enriched in the insoluble proteins. In this fraction, then by means of e.g. An antibody test checks whether CRMPl is present or not. The positive case is indicated as an indication of the presence of e.g. Assessed schizophrenia or depression.
  • An advantage of this embodiment is that an antibody can be used, the CRMPl generally recognizes, ie in the soluble as well as the insoluble variant, since it can be assumed that in the examined fraction only the insoluble variant is present.
  • insoluble CRMP1 It has not yet been conclusively clarified why the increased occurrence of insoluble CRMP1 is causally linked to eg schizophrenia or depression. Furthermore, it is very likely that the formation of insoluble variants of the CRMP1 is genetically predisposed, eg in the form of polymorphisms or the like. To date, all protein aggregates identified in chronic brain disease processes have been identifiable in familial forms of specific diseases as well as in sporadic forms (Prusiner, 2001, New England Journal of Medicine 344: 1516-1526). The human CRMPl gene is located on chromosome 4pl6. Genetic changes in this region are associated with a risk of developing psychiatric disorders (Als et al., 2004, Molecular Psychiatry 9: 93-98).
  • the gene coding for CRMP1 is isolated from a tissue sample from a patient and checked for the presence of polymorphisms, mutations, etc., where possible polymorphisms or mutations speak for a disease or a predisposition.
  • a further embodiment of the invention therefore provides that the gene coding for CRMP1 is examined for the presence of genetic deviations from the standard sequence and in particular detected polymorphisms are taken as an indication for a predisposition of the named diseases.
  • drugs can be tested for their effectiveness.
  • the procedure can be carried out with different tissue samples. Genetic sequence studies may use any sample that allows the isolation of DNA. In protein level studies, all tissue materials are suitable in which an antibody test for CRMP1 or its fragments can be performed.
  • CRMPI aggregate-specific ligands for example antibodies, are produced, which then selectively bind the insoluble CRMP1 and not the soluble CRMP1.
  • CRMPl bind and are thus disease-specific without the need for the previous biochemical purification.
  • CRMPl insolubility of CRMPl during the disease process in schizophrenia, bipolar disorder or recurrent depression interferes with binding proteins. This can lead to a loss of binding partners or an increase in binding partners.
  • the loss of the known CRMPl binding partners Axinl, Rockl, Cdk5, GSK3, CRMP2, PlexAl, Fyn, reelin, neurotrophin could thus be diagnostically relevant for schizophrenia, bipolar disorder or depression.
  • the determination of corresponding protein concentrations parallel to the CRMP1 could therefore be useful.
  • the simultaneous occurrence of polymorphisms in the CRMP1 gene AND in one of the genes of the interaction partners can be particularly disease-relevant.
  • inventive novelty described herein of being able to diagnose insoluble CRMP1 as a marker for psychiatric disorders also makes it possible to provide this diagnostic as a method for new causal screening assays to identify novel drugs for patients with schizophrenia, bipolar disorder or recurrent depression.
  • an assay can be developed in which insoluble CRMP1 is produced in a cell line, such as by overexpression and / or insertion of appropriate mutations or polymorphisms of CRMP1; Therapeutic substances may then be tested by addition to the cell culture medium when the disappearance of the insoluble CRMP1 is then measured by the inventive assay.
  • a transgenic organism for example a mouse, which expresses a gene which, for example by adding mutations, produces a particularly high amount of insoluble CRMP1; Therapeutic substances to be tested are then administered to the animal in an appropriate manner and the disappearance of the insoluble CRMP1 measured.
  • This measurement can be carried out, for example, by biochemical fractionation of the insoluble proteins and subsequent detection with CRMP1 antibodies, for example mAb 6HI 1.
  • CRMP1 antibodies for example mAb 6HI 1.
  • it may also be attempted to simulate the insolubility of CRMP1 in vitro, such as by expression of appropriate CRMP1 constructs in Escherichia coli and corresponding refolding in vitro, and testing the concomitant addition of therapeutic substances.
  • FIG. 3 shows western blots of the aggregate (misfolded protein fractions) of 60 brains of patients with schizophrenia (S), depression (D), bipolar disorder (B), or no brain disease (-).
  • the immunoreactivity for mAb 6HI 1 to CRMP1 can be seen above, in each case the immunoreactivity for DRP-2 (also called CRMP2) as comparison below.
  • the blot shows a specific reactivity of a monoclonal antibody labeled mAb6HI1 with a subset of patients with schizophrenia, depression, or bipolar disorder (underlined cases), which is not true for the reactivity of the DRP-2 antiserum, as it also reacts with false positives.
  • Fig. 4 shows a scheme of identification of the mAb 6HI 1 antigen by means of protein chips. On an array of recombinantly expressed proteins, mAb 6HI 1 reacts only with individual proteins, which are individually recombined in the sequence. nant be expressed and incubated on the Western blot with mAb 6Hl 1 (see Figure 3).
  • FIG. 5 documents the expression of various clones identified as positive on the protein chip in E. coli and their reactivity in the Western blot with mAb 6HI 1 (right).
  • mAb 6HI 1 (right).
  • the second line it can be seen that the clone corresponding to the CRMP1 gene reacts most strongly with mAb 6H1.
  • Fig. 6 shows a size separation of a schizophrenia brain homogenate with mAb 6HI lim Western blot.
  • mAb 6HI 1 shows immunoreactivity in different fractions, i.a. in a fraction at about 54 kDa (lines 8 and 9), and in higher-running multimeric fractions (lines 5 to 7, about 62 kDa) or as long CRMPl at about 74 kDa (lines 1 to 3).
  • the individual aggregate fractions of the 60 brains were then separated by SDS gel electrophoresis, blotted and incubated with the mAb 6Hl 1. It was shown that the mAb 6Hl 1 recognizes an antigen which is 75-55 kDa in various forms and is specific in the aggregation of patients with schizophrenia, bipolar disorder or depression (FIG. 3).
  • mAb 6HI 1 insoluble CRMP1 could be identified in a collection of 60 brains in the following cases: 4 bipolar disorders, 3 depression, 2 schizophrenia. No normal brains were found to be false positives with mAb 6Hl 1, so the specificity is 100% and the ability to identify patients with chronic psychiatric illness has been proven. Subgroups of the disease phenotypes bipolar disorder, depression and schizophrenia were identified. Recent studies show a variability of psychiatric disease phenotypes with the same genotype, which explains the overlaps that have been identified here in the phenomenological diagnosis of the disease
  • the hybridoma cell line which secretes the antibody 6HI 1 was deposited on April 4, 2007 under the number DSM ACC2836 with the DSMZ German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH, Inhoffenstrasse 7B, 38124 Braunschweig.

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Abstract

Verwendung von CRMPl oder des dafür codierenden Gens als Marker für chronisch psychiatrische Erkrankungen, insbesondere Schizophrenie, bipolare Erkrankung oder Depression.

Description

VERWENDUNG VON CRMPl ALS MARKER FÜR CHRONISCH PSYCHIATRISCHE ERKRANKUNGEN UND MONOKLONALER ANTIKÖRPER GEGEN CRMPl
Die Erfindung bezieht sich auf einen neuen Marker für chronisch psychiatrische Erkrankungen insbesondere Schizophrenie, bipolare Erkrankung oder Depression.
Chronisch psychiatrische Erkrankungen gehören zu den häufigsten Krankheiten überhaupt mit Lebenszeitprävalenzen von ca. 1% für die Schizoprenie und die bipolare Störung und bis zu 10% für die Depression.
Über die biologischen Ursachen dieser Erkrankungen ist wenig bekannt. Neu- rotransmitter-Ungleichgewichte sind für bestimmte Phänotype und Symptome aller dieser Erkrankungen veranwortlich und werden als pharmakologisches Target genutzt. Wie diese Neurotransmitter-Ungleichgewichte jedoch entstehen, d.h. die übergeordenten und ursächlichen Vorgänge für diese Störungen sind nicht bekannt.
Ahnlich problematisch gestaltet sich die Diagnose. Bislang werden die Diagnosen für diese Erkrankungen klinisch per Interview gestellt, da keine für die Routinediagnose geeigneten biologischen Marker vorliegen.
Genetische Untersuchungen in von chronisch psychiatrischen Erkrankungen betroffenen Familien haben zur Identifizierung verschiedener mit diesen Erkran- kungen wahrscheinlich auf noch unbekannte Weise zusammenhängenden Genen geführt. Da in diesen Familien ein Gen verschiedene Phänotypen wie Schizophrenie, bipolare Erkrankung oder wiederkehrende Depression haben kann, wird vermutet, dass es - im Gegensatz zu herkömmlichen Vorstellungen, die auf rein klinischer Diagnostik beruhen - aufgrund neuer biologischer Marker zu Umgruppierungen oder einer re-Definition in der psychiatrischen Diagnostik kommen wird. Dabei würde eine chronisch psychiatrische Erkrankung und insbesondere die daraus abgeleitete Therapiestrategie über einen biologischen Marker und nicht über eine klinische Diagnose definiert.
Es gibt einzelne Ansätze, bipolare Erkrankungen mittels z.B. Messung bestimmter Proteine oder genetischer Marker zu diagnostizieren.
So ist z.B. aus dem US-Patent 7,015,006 ist ein Test bekannt, bei dem die Aktivität bzw. Konzentration von Phospholipase (cPLA.sub.2) gemessen wird. Erhöhungen der gemessenen Werte gegenüber Normalwerten werden als Indiz für bipolare Erkrankungen z.B. Schizophrenie genommen.
US Patent 4,874,694 beschreibt die gelektrophoretische Messung von Phospho- protein Mustern zur Diagnose von neurologischen Erkrankungen, wie z.B. Schizophrenie.
Die US-Patent- Anmeldung 20050208519 betrifft Biomarker- Kombinationen, die bei der Diagnose von Schizophrenie verwendet werden können. Es handelt sich dabei um bestimmte Gene und deren Produkte z.B. die Gene von ADSS, APOBEC3B, (ATM); (CLC), CTBPl, C-X-C, (CXCLl), etc.
Die US Patent-Anmeldung 20050089927 betrifft spezielle kurze Peptide, die selektiv von Proben aus schizophrenen Patienten gebunden werden während in Proben von nicht schizophrenen Patienten keine oder nur eine geringere Bindung stattfindet.
Keiner der bekannten Marker oder Tests erlaubt allerdings bislang eine routine- mässige sichere Diagnose von bipolaren Erkrankungen, Schizophrenie oder Depression bzw. die oben angesprochene re-Definition dieser und anderer chronisch psychiatrischer Erkrankungen.
In der WO 2005/077978 wird ein Verfahren vorgeschlagen, mit dem biologische Marker für bipolare Erkrankungen identifiziert werden können. In dem Verfahren wird in einem ersten Schritt aus Hirnproben erkrankter Patienten eine Proteinfraktion gewonnen, in der unlösliche Proteine angereichert vorliegen. Mit dieser Proteinfraktion werden auf üblichen Weg, z.B. durch Immunisierung von Tieren, Antikörper hergestellt. Zu geeignet erscheinenden Antikörper werden die von ihnen erkannten Proteine ermittelt, wobei die Theorie ist, dass diese Proteine, wenn sie spezifisch nur bei erkrankten Patienten in unlöslicher Form vorliegen, als Marker in Frage kommen.
Aufgabe der Erfindung ist, ausgehend von dem bekannten Verfahren einen Marker bereitzustellen, mit dem eine sicherere Diagnose von chronisch psychiatrischen Erkrankungen wie z.B. Schizophrenia, bipolarer Erkrankung, und Depression und eine eventuelle re-Definition solcher Erkrankungen möglich ist.
Zur Lösung dieser Aufgabe geht die Erfindung aus von in unlöslichen Himfrak- tionen enthaltenen Polypeptiden, die von einem im Rahmen der Erfindung isolierten monoklonalen Antikörper mit der internen Bezeichnung mAk 6Hl 1 erkannt werden. Vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung sind in den Unteransprüchen angegeben.
Der Antikörper mAk 6Hl 1 wird von einer von dem Anmelder am 04. April 2007 unter der Nummer DSM ACC2836 bei der DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH hinterlegten Hybrydomazelllinie sekre- tiert.
Erfindungsgemäß ist vorgesehen, mindestens eines der von mAk 6H11 erkannten Polypeptide oder des dafür codierenden Gens als Marker für chronisch psychiatrische Erkrankungen., insbesondere Schizophrenie, bipolarer Erkrankung oder Depression zu verwenden.
Wie oben ausgeführt, scheint es, dass von einem biologischen Standpunkt her gesehen zumindest einige chronisch psychiatrische Erkrankungen, wie z.B. "Schizophrenie, bipolare Erkrankung und rekurrierende Depression" diagnostisch nicht ausreichend zueinander abgegrenzt sind. Es ist davon auszugehen, dass z.B. Patienten bei denen verschiedene der genannten Erkrankungen klinisch diagnostiziert wurden, bei näherer Betrachtung und entsprechenden diagnostischen Voraussetzungen aufgrund u.a. hier ausgeführter biologischer Zusammenhänge einer neuen gemeinsamen Gruppe zugeordnet werden könnten, die ihrem Krankheitsbild gerechter wird als das bei den bislang vorgenommenen Einteilungen der Fall ist.
Ein wesentliches Ziel der erfindungsgemäßen Verwendung ist daher, eine neue Teilgruppe von Patienten, die z.B. entweder an "Schizophrenie, biplarer Erkrankung oder rekurrierender Depression" leiden, über das als Marker dienende Polypeptid zu definieren. Gemeinsames Merkmal dieser, und eventuell auch weiterer Patienten, die an diesbezüglich noch nicht untersuchten chronisch psychiatrischen Erkrankungen leiden, ist, dass mindestens eines der vom Antikörper mAk 6Hl 1 erkannten Polypeptide im Gehirn unlöslich wird oder aggregiert.
Selbstverständlich ist erfindungsgemäß auch abgedeckt, dass der Marker zur Diagnose und unter begleitender medikamentöser Therapie Verlaufskontrolle der über ihn definierten Erkrankungen dient.
Wie in Fig. 6 dargestellt, erkennt der Antikörper mAk 6Hl 1 im wesentlichen 3 Proteine mit Molekulargewichten von 54 kDa, 62 kDa und ca. 74 kDa,
Die beiden grosseren Proteine sind (siehe z.B bezüglich der 55 kDa- Variante Beispiel 2) Splicevarianten des Proteins CRMPl (Collapsin response mediator protein 1), während die kleinere 54 kDa Bande entweder eine bislang unbekannte kleinere Splicevariante darstellt, oder ein Degradationsprodukt der beiden höheren Varianten ist.
Im Rahmen der durchgeführten Untersuchungen hat sich überraschend herausgestellt, dass das Protein CRMPl spezifisch bei einer mehrere z.Zt. etablierte Krankheitsbilder übergreifenden Untergruppe chronisch psychiatrischer Erkrankungen unlöslich wird, aggregiert, und damit als spezifischer biologischer Marker für diese Erkrankungen verwendet werden kann.
Erfindungsgemäß ist daher vorgesehen, dass als Marker CRMPl Protein oder ein spezifisches Fragment von CRMPl verwendet wird.
Vom CRMPl Gen sind derzeit zwei Transkripte beschrieben worden, die in Proteine unterschiedlicher Länge (Splicevarianten) exprimiert werden, die lange Form CRMPl-I hat 686 Aminosäuren, die kurze Form CRMP 1-2 572 Aminosäuren. Die Aminosäuresequenzen beider Varianten sind in Fig. 1 (CRMPl-I, 74 kDa) und Fig. 2 (CRMP1-2, 62 kDa) abgebildet und unter SEQ ID NO: 1 (CRMPl-I, 74) und SEQ ID NO: 3 (CRMP 1-2) wiedergegeben. Die Gensequenzen sind in unter SEQ ID NO:2 (CRMPl-I) und SEQ ID NO:4 (CRMP1-2) wiedergegeben. Veröffentlicht sind die angesprochenen Sequenzen in "Gene Bank" unter den Accession Nummern NM_001014809 (Aminosäure- und Nukleinsäuresequenz von CRMPl-I) und NM_001313 (Aminosäure- und Nukleinsäuresequenz von CRMP1-2).
Es ist bislang unklar, ob es - etwa in bestimmten bei Schizophrenie, bipolarer Erkrankung oder rekurrierender Depression besonders betroffenen neuronalen Zellpopulationen - noch weitere Spliceformen gibt, die aufgrund ihrer geringen relativen Häufigkeit in einer ungezielten Hirnuntersuchung nicht detektiert werden können. Es ist aber vorstellbar, dass bestimmte Transkripte, auch die hier beschriebenen, unterschiedliche Funktionen haben und unterschiedlich Krankheitsrelevant sind. Der Nachweis verscheidener einzelner Spliceformen und/oder deren Verhältnis zueinander, auch in bestimmten Hirnregionen oder -zeiltypen kann daher die diagnostische Spezifität und Sensitivität erhöhen.
Der Gebrauch der Angabe CRMPl in dieser Anmeldung soll sämtliche in vivo auftretenden Varianten einschließlich verschiedener Spliceformen und durch Polymorphismen hervorgerufenen Mutationen dieses Proteins abdecken, sowie auf Proteinebene Konformationen, Degradationsformen, oder sonstige posttranslatio- nal veränderte Formen, wie z.B. phosphorylierte Formen. Weiterhin soll die Angabe CRMPl auch Fragmente mitumfassen, die in Gewebeproben nachweisbar und eindeutig CRMPl zuordenbar sind. Zusammengefasst betrifft die Erfindung die Verwendung des Proteins CRMPl, seiner Spliceformen, und Fragmente, sowie des dazugehörigen Gens als Marker für die Einordnung und Diagnose chronisch psychiatrischer Erkrankungen, insbesondere Schizophrenie, bipolare Erkrankungen oder Depression, bzw. die Klärung ob eine Prädisposition für diese Erkrankungen vorliegt, zur Evaluierung von Medikamenten im Rahmen einer Therapiekontrolle, sowie entsprechende Verfahren.
Grundsätzlich kann im Rahmen der Erfindung das CRMPl -Protein generell, oder spezifische Degradationsprodukte als Marker verwendet werden.
Erfindungsgemäss könnte auch ein bestimmtes Degradationsmuster von CRMPl krankheitsspezifisch sein und mit solchen proteinbiochemischen Methoden de- tektiert werden, die spezifische Fragmente erkennen können. Es ist beispielsweise vorstellbar, dass die unlösliche Version andere Degradationsmuster besitzt als die lösliche, da andere Angriffspunkte innerhalb derselben Polypeptidsequenz für degradierende Proteasen zur Verfügung stehen. Denkbar ist daher, dass krankheitspezifisches CRMPl anders abgebaut wird als als CRMPl in gesunden bzw nicht prädisponierten Personen. Dabei kann ein unterschiedliches Abbaumuster auftreten. Denkbar ist z.B., dass bei kranken bzw. prädisponierten Personen ein bestimmtes Fragment deutlich angereichert vorliegt, was z.B. über den Einsatz spezifischer Antikörper oder anderer geeigneter Methoden festgestellt werden könnte.
Unter den Begriff CRMPl sollen neben den genannten Spliceformen und Fragmente auch Polymorphismen bzw. mutierte Versionen fallen. Es ist denkbar, dass das Unlöslichwerden von CRMPl genetisch z. B. durch Polymorphismen oder Mutationen im CRMPl -Gen determiniert ist. Die Untersuchung des CRMPl -Gens auf solche Abweichungen erlaubt also unter Umständen ein Routi- nescreening bzw. eine Abschätzung des Erkrankungsrisikos bzw. bei erkrankten Personen eine sichere und schnelle Diagnose.
Genausogut ist es natürlich auch möglich, auf der Proteinebene mit spezifischen Antikörpern zu analysieren, ob ein als krankheitsspezifisch identifizierter Polymorphismus bei CRMPl vorliegt.
Die bislang erwähnten Möglichkeiten decken grundsätzlich die Verwendung von CRMPl als Marker ab, unabhängig davon, ob das Protein gelöst ist oder in unlöslicher Form vorliegt.
Bevorzugt wird jedoch gezielt die unlösliche Variante, die voraussichtlich auf eine mit der Krankheit einhergehende Fehlfaltung zurückgeht, als Marker verwendet. Der Nachweis kann über einen Antikörper erfolgen, der spezifisch die unlösliche Variante von CRMPl erkennt. Bevorzugt wird das als Probematerial eingesetzte Gewebe biochemisch derart aufgereinigt, dass die unlösliche CRMP Form, soweit vorhanden, angereichert wird und dann detektiert werden kann. Weiterhin kann man sich auch zunutze machen, dass unlösliches CRMPl zur Ausbildung von Aggregaten neigt, die ihrerseits eventuell makroskopisch erfasst werden können.
Geeignete Gewebe zum Nachweis sind z.B. Blut, Liquor oder Gehirn. Je nach verwendetem Gewebe erfolgt die Aufreinigung auf unterschiedlichem, dem Fachmann jedoch bekanntem Wege. Es stehen auch alternative Gewebe oder Gewebsflüssigkeiten zur diagnostischen Isolierung von CRMPl oder seines Gens zur Verfügung wie etwa, Speichel, Tränenflüssigkeit, Urin; denkbar sind auch die Entnahme von Haut oder Muskelbiopsien. Mit geeigneten Liganden, die CRMPl detektieren und z.B. mit Fluoreszenzfarbstoffen gelabelt sind, kann ggf. auch nach deren Applikation eines zu testenden Patienten mit nicht-invasiven Metho- den wie einer Augenspiegelung versucht werden im Augenhintergrund aggre- giertes CRMPl nachzuweisen.
CRMPl wird in der Literatur auch als Dihydropyriminidase related protein 1 (DRPl) bezeichnet. Zu DRP2, einem verwandten Protein der gleichen Familie sind in der Literatur (Johnston- Wilson et al., 2000, Molecular Psychiatry 5:142- 149; Hong et al., 2005, American Journal of Medical Genetics, Part B (Neuropsychiatric Genetics) 136B:8-11) Verbindungen zur Schizophrenie beschrieben. In eigenen Untersuchungen in Fig. 3 dargestellt, konnte in der unlöslichen Hirnfraktion von post mortem Materials aber keine signifikante Assoziation des DRP2 Proteins mit Schizophrenie, Depression oder bipolarer Erkrankungn gefunden werden. Zwischen CRMPl und DRP2 besteht eine 76%ige Homologie auf dem Aminosäureebene, allerdings sind die Gene in ihrer Funktion sehr unterschiedlich, weswegen die Expressionsmuster in verschiedenen Geweben und innerhalb des Gehirns und seiner Zellen auch sehr verschieden sind (Veyrac et al., 2005, European Journal of Neuroscience 21:2635-2648; Bretin et al., 2005, Journal of Comparative Neurology 486:1-17)
Eine weitere Veröffentlichung (Wang & Strittmatter, 1997, Journal of Neuro- chemistry 69:2261-2269) zeigt, dass CRMPl Oligomere bildet. Zu dem Lösungsverhalten der Oligomere wird nichts ausgesagt und ebenso wenig ein Zusammenhang zur Schizophrenie hergestellt.
Die Verwendung von CRMPl als Marker weist gegenüber dem Stand der Technik folgende Vorteile auf: Der Vorteil von CRMPl -basierter Diagnostik ist, dass der Marker spezifisch ist, im Gegensatz dazu ist der Nachweis von Phospholipase wie zum Beispiel in US-Patent 7,015,006 vorgeschlagen wird, nicht spezifisch, da auch unspezifische neuronale Störungen, die mit Membranverletzungen einhergehen, wie Hirnverletzungen, Entzündungen oder Durchblutungsstörungen, Phsospholipase freisetzen oder deren Expression erhöhen, wie in US-Patent 7,015,006 angegeben.
Die Erfindung betrifft weiterhin auch ein Verfahren zur Diagnose psycchiatri- schen Erkrankungen wie z.B. bipolaren Erkrankungen Schizophrenia und rekur- rierenden Depressionen. Das Verfahren beruht in einer Ausgestaltung darauf, dass aus einer geeigneten Gewebeprobe eines Patienten eine Fraktion aufgereinigt wird, in der unlösliche Proteine angereichert vorliegen. In dieser Fraktion wird dann mittels z.B. eines Antikörpertests überprüft, ob CRMPl vorliegt oder nicht. Der positive Fall wird als Indiz für das Vorliegen von z.B. Schizophrenie oder Depression gewertet. Vorteilhaft an dieser Ausgestaltung ist, dass ein Antikörper verwendet werden kann, der CRMPl generell erkennt, also in der löslichen wie auch der unlöslichen Variante, da davon ausgegangen werden kann, dass in der untersuchten Fraktion nur noch die unlösliche Variante vorliegt.
Es ist bislang nicht abschliessend geklärt, warum das verstärkte Auftreten von unlöslichem CRMPl ursächlich mit z.B. einer Schizophrenie oder Depression verknüpft ist. Weiterhin ist sehr wahrscheinlich, dass die Bildung von unlöslichen Varianten des CRMPl genetisch prädisponiert ist, z.B. in Form von Polymorphismen oder dergleichen. Bislang waren alle Proteinaggregate, die im Rahmen von chronischen Krankheitsprozessen des Gehirns identifiziert wurden, sowohl bei familiären Formen spezifischer Erkrankungen als auch bei sporadischen Formen identifizierbar (Prusiner, 2001, New England Journal of Medicine 344:1516- 1526). Das Gen für CRMPl beim Menschen liegt auf Chromosom 4pl6. Genetische Veränderungen in dieser Region sind mit einem Risiko an psychiatrischen Erkrankungen zu erkranken verbunden (Als et al., 2004, Molecular Psychiatry 9: 93-98). Denkbar ist natürlich auch, dass aus einer Gewebeprobe eines Patienten das für CRMPl kodierende Gen isoliert wird und auf das Vorliegen von Polymorphismen, Mutationen etc überprüft wird, wobei eventuelle Polymorphismen oder Mutationen für eine Erkrankung bzw. eine Prädisposition sprechen.
Eine weitere Ausgestaltung der Erfindung sieht daher vor, dass das für CRMPl kodierende Gen auf das Vorliegen genetischer Abweichungen gegenüber der Normsequenz untersucht wird und insbesondere nachgewiesene Polymorphismen als Indiz für eine Prädisposition der genannten Krankheiten genommen wird.
Gleichzeitig lassen sich in beiden Ausgestaltungen Medikamente auf ihre Wirksamkeit untersuchen.
Im ersten Fall könnte man Substanzen daraufhin untersuchen, ob sie in der Lage sind die unlösliche Form von CRMPl wieder in die lösliche Form zu überführen bzw. die Bildungsrate der unlöslichen Form zu verlangsamen. Im anderen Fall wäre es denkbar, Medikamente auf ihre Eignung zu untersuchen, den Zeitpunkt, an dem im Stoffwechsel unlösliches CRMPl auftritt nach hinten zu verschieben, bzw. die Bildung von unlöslichem CRMPl zu unterdrücken.
Das Verfahren kann mit unterschiedlichen Gewebeproben durchgeführt werden. Bei Untersuchungen der Gensequenz kann jede Probe verwendet werden, die die Isolierung von DNA erlaubt. Bei Untersuchungen auf Proteinebene sind alle Gewebematerialien geeignet, in denen ein Antikörpertest auf CRMPl oder dessen Fragmente durchgeführt werden kann.
Denkbar ist auch, dass CRMPl -Aggregat-spezifische Liganden, z.B. Antikörper hergestellt werden, die dann selektiv das unlösliche CRMPl und nicht das lösli- che CRMPl binden und somit Krankheits- spezifisch sind ohne die vorige biochemische Auf reinigung zu benötigen.
Es ist anzunehmen, dass die Unlöslichkeit von CRMPl während des Krankheitsprozesses bei Schizophrenie, bipolarer Erkrankung oder rekurrierender Depression die Interaktion mit bindenen Proteinen beeinträchtigt. Hierbei kann es zu einem Verlust von Bindungspartnern oder einem Zugewinn von Bindungspartnern kommen. Der Verlust der bekannten CRMPl Bindungspartner Axinl, Rockl, Cdk5, GSK3, CRMP2, PlexAl, Fyn, reelin, neurotrophin könnte somit auch diagnostisch relevant für Schizophrenie, bipolare Erkrankung oder Depression sein. Die Bestimmung entsprechender Proteinkonzentrationen parallel zur CRMPl könte somit sinnvoll sein. Ebenfalls ist denkbar, dass das gleichzeitige Auftreten von Polymorphismen im CRMPl Gen UND in einem der Gene der Interaktionspartner besonders krankheitsrelevant sein kann. Somit ist die genetische Diagnostik von CRMPl wie oben beschreiben UND die seiner Interaktionspartner von Interesse.
Die erfinderische hier beschriebene Neuheit, unlösliches CRMPl als Marker für psychiatrische Erkrankungen diagnostizieren zu können ermöglichst es auch diese Diagnostik als Verfahren für neue, kausal ansetzende Screeningassays zur Identifizierung neuartiger Pharmaka für Patienten mit Schizophrenie, bipolarer Erkrankung oder rekurrierender Depression zu schaffen.
So kann beispielsweise ein Assay entwickelt werden, bei dem unlösliches CRMPl in einer Zelllinie erzeugt werden, etwa durch Überexpression und/oder einfügen geeigneter Mutationen oder Polymorphismen von CRMPl; therapeutische Substanzen können dann durch Hinzufügen in das Zellkulturmedium gestestet werden, wenn mit dem erfinderischen Assay dann das Verschwinden des unlöslichen CRMPl gemessen wird. Alternativ kann auch auf ähnliche Überex- pression ein transgenes Lebewesen, z.B. eine Maus hergestellt werden, die ein Gen (über) exprimiert, das etwa durch Hinzufügen von Mutationen besonders viel unlösliches CRMPl produziert; therapeutisch zu testende Substanzen werden dann dem Lebewesen auf geeignete Art verabreicht und das Verschwinden der unlöslichen CRMPl gemessen. Diese Messung kann etwa durch biochemische Fraktionierung der unlöslichen Proteine und anschliessende Detektion mit CRMPl Antikörpern, etwa mAk 6Hl 1 erfolgen. Alternativ kann auch versucht werden, die Unlöslichkeit von CRMPl in vitro, etwa durch Expression von geeigneten CRMPl Konstrukten in Escherichia coli und entsprechende Umfaltung in vitro zu simulieren und das gleichzeitige Hinzugeben von therapeutischen Substanzen getestet werden.
Im Folgenden soll die Erfindung anhand von Beispielen und Abbildungen näher erläutert werden.
Fig. 3 zeigt Western blots des Aggregoms (missgefalteten Proteinfraktionen) von 60 Hirnen von Patienten mit Schizophrenie (S), Depression (D), bipolarer er- krankung (B), oder keine Hirnerkrankung (-). Oben ist jeweils die Immunreaktivität für mAk 6Hl 1 gegen CRMPl zu sehen, als Vergleich unten die Immunreaktivität für DRP-2 (auch CRMP2 genannt). Der Blot zeigt eine spezifische Reaktivität eines mit mAk6Hl 1 bezeichneten monoklonalen Antikörpers mit einer Untergruppe von Patienten mit Schizophrenie, Depression, oder bipolarer Erkrankung (unterstrichene Fälle), was für die Reaktivität des DRP-2 Antiserums nicht zutrifft, da dieses auch falsch positiv reagiert.
Fig. 4 zeigt ein Schema der Identifikation von des mAk 6Hl 1 Antigens mit Hilfe von Proteinchips. Auf einem Array von rekombinant exprimierten Proteinen reagiert mAk 6Hl 1 nur mit einzelnen Proteinen, die in der Folge einzeln rekombi- nant exprimiert werden und auf dem Western blot mit mAk 6Hl 1 inkubiert werden (siehe Figur 3).
Fig. 5 dokumentiert die Expression von verschiedenen, als positiv auf dem Proteinchip identifizierten Klonen in E. coli und Reaktivität derselben im Western blot mit mAk 6Hl 1 (rechts). In der 2. Linie ist zu sehen, dass der Klon, der dem CRMPl Gen entspricht, am stärksten mit mAk 6Hl 1 reagiert.
Fig. 6 zeigt eine Grössenauftrennung eines Schizophrenie-Hirnhomogenats mit mAk 6Hl lim Western blot. mAk 6Hl 1 zeigt Immunreaktivität in verschiedenen Fraktionen, u.a. in einer Fraktion bei ca. 54 kDa (Linien 8 und 9) , und in höher laufenden multimeren Fraktionen (Linien 5 bis 7, ca. 62 kDa) oder als Long- CRMPl bei ca. 74 kDa(Linien 1 bis 3).
Beispiel 1
Nachweis dass unlösliches CRMPl spezifisch mit chronisch psychiatrischen Erkrankungen Schizophrenie, bipolare Erkrankung und Depression assoziiert ist.
Post mortem Hirnmaterial von klnisch diagnostizierten 15 normalen Patienten, 15 depressiven Patienten, 15 bipolaren Patienten und 15 schizophrenen Patienten wurde so fraktioniert, das nur diejenigen Proteine übrigblieben, die in 0.2% kaltem Sarkosyl unlöslich sind ("Aggregom"; siehe Patent "Missgefaltete Proteine"). Die gepoolten Fraktionen der einzelnen Hirne wurde Mäusen immunisiert und nach erfolgter Fusion der Splenozyten mit Myelomzellen wurden Hybrido- maüberstände auf spezifische Erkennung von Schizophrenieaggregom vs. normalem Kontrollaggregom gescreent. Mehrere Klone mit einer spezifischen Erkennung wurden identifziert, u.a der Klon 6Hl 1.B6. Dieser Klon sezerniert einen monoklonalen Antikörper gleichen Namens, ein IgM. Die einzelnen Aggregomfraktionen der 60 Hirne wurden nun per SDS Gelelektrophorese aufgetrennt, geblottet und mit dem mAk 6Hl 1 inkubiert. Dabei zeigte sich, dass der mAk 6Hl 1 ein Antigen erkennt, das in verschiedenen Formen 75- 55 kDa gross ist und sich spezifisch im Aggregom von Patienten mit Schizophrenie, bipolarer Erkrankung oder Depression befindet (Fig. 3).
Mit Hilfe des mAk 6Hl 1 konnte in einer Sammlung von 60 Hirnen bei folgenden Fällen unlösliches CRMPl identifiziert werden: 4 Bipolare Störungen, 3 Depressionen, 2 Schizophrenien. Es wurden keine Normalhirne mit mAk 6Hl 1 falsch positiv identifiziert, somit ist die Spezifität 100% und die Eignung zur Identifizierung von Patienten mit chronisch psychiatrischen Erkrankungen erwiesen. Es wurden jeweils Untergruppen der Krankheitsphänotypen bipolare Erkrankung, Depression und Schizophrenie identifiziert. Neuere Untersuchungen zeigen eine Variabilität von psychiatrischen Krankheitsphänotypen bei gleichem Genotyp, wodurch die auch hier festgestellten Überlappungen in der phänomenologischen Krankheitsdiagnose zu erklären sind
Beispiel 2
Identifizierung des mAk 6Hl 1 Antigens
Es wurden Proteinchips der Firma RZPD (Deutsches Ressourcenzentrum für Genomforschung GmbH/ www.rzpd.de) eingesetzt. Der mAk 6Hl 1 wurde auf den Proteinchips inkubiert und mehrere positive Klone identifiziert (Fig. 4). Diese Klone wurden einerseits sequenziert und in E. coli exprimiert. Expression in E. coli ergab nur für einen Klon eine starke Immunreaktivität mit mAk 6Hl 1 (Fig. 5). Dieser Klon exprimierte ein Fragment des CRMPl Gens. Somit wurde als Antigen für den psychiatrischen Krankheits-spezifischen mAk 6Hl 1 das CRMPl Protein identifiziert. Die erwartete Grosse des Proteins bei ca. 62 kDa, bzw. 74 kDa stimmt mit der Grosse im Western blot (Fig. 6) überein. Angaben zur Hinterlegung gemäss Budapester Vertrag:
Die Hybridomazellinie, die den Antikörper 6Hl 1 sekretiert, wurde am 04. April 2007 unter der Nummer DSM ACC2836 bei der DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstrasse 7B, 38124 Braunschweig hinterlegt.

Claims

25VERWENDUNG VON CRMPl ALS MARKER FÜR CHRONISCH PSYCHIATRISCHE ERKRANKUNGENANSPRÜCHE:
1. Monoklonaler Antikörper 6Hl 1 gegen in unlöslichen Hirnfraktionen enthaltene Polypeptide, sekretiert von Hybridomazelllinie DSM ACC2836.
2. Verwendung mindestens eines des gemäß Anspruch 1 vom monoklonalen Antikörper 6Hl 1 erkannten Polypeptids oder des dafür codierenden Gens als Marker für chronisch psychiatrische Erkrankungen, insbesondere Schizophrenie, bipolare Erkrankung oder Depression.
3. Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet dass der Marker zur Diagnose und Verlaufskontrolle der Erkrankungen dient.
4. Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Marker CRMPl Protein oder ein spezifisches Fragment von CRMPl ist.
5. Verwendung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass Marker unlösliches CRMPl bzw. ein Fragment davon ist. 26
6. Verwendung nach Anspruch 2-5, dadurch gekennzeichnet, dass die Bestimmung des Markers in Blut, Liquor oder Gehirnmaterial erfolgt.
7. Verfahren zur Diagnose chronisch psychiatrischer Erkrankungen, insbesondere Schizophrenie, biplarer Erkrankunge oder Depression, bei dem aus Patienten gewonnene Gewebeproben derart fraktioniert aufbereitet werden, dass in einer Fraktion unlösliche Proteine angereichert vorliegen, und diese Fraktion dann auf die Anwesenheit von CRMPl (Fragmente, Spliceformen, etc.) analysiert wird, wobei die Anwesenheit von CRMPl in dieser Fraktion als positives Signal für das Vorliegen einer Schizophrenie, bipolaren Erkrankung, oder rekurrieren- den Depression gewertet wird.
8. Verfahren zur Diagnose einer eventuellen Prädisposition für eine Untergruppe chronisch psychiatrischer Erkrankungen, insbesondere Schizophrenie oder Depressionen bipolare Erkrankungen, bei denen aus einer Gewebeprobe eines Patienten das für CRMPl kodierende Gen isoliert wird und auf das Vorliegen von Polymorphismen oder Mutationen überprüft wird, wobei eventuelle Polymorphismen oder Mutationen für eine Prädisposition sprechen.
9. Verfahren bei dem ein Test gemäss Anspruch 7 oder 8 durchgeführt wird um die Wirksamkeit oder Unwirksamkeit bestimmter Medikamente zu prognostizieren.
10. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüchen, dadurch gekennzeichnet, dass die Gewebeprobe eine Blut-, Liquor- oder Gehirnprobe ist.
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