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WO2000048997A1 - DERIVES D'ACETYLPYRIDINE SUBSTITUEE ET PROCEDE DE PREPARATION D'INTERMEDIAIRES POUR AGONISTE DU RECEPTEUR ADRENERGIQUE β3 OPTIQUEMENT ACTIF, FAISANT APPEL A CES DERIVES - Google Patents

DERIVES D'ACETYLPYRIDINE SUBSTITUEE ET PROCEDE DE PREPARATION D'INTERMEDIAIRES POUR AGONISTE DU RECEPTEUR ADRENERGIQUE β3 OPTIQUEMENT ACTIF, FAISANT APPEL A CES DERIVES Download PDF

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WO2000048997A1
WO2000048997A1 PCT/JP2000/000861 JP0000861W WO0048997A1 WO 2000048997 A1 WO2000048997 A1 WO 2000048997A1 JP 0000861 W JP0000861 W JP 0000861W WO 0048997 A1 WO0048997 A1 WO 0048997A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
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group
candida
carbon atoms
production method
genus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2000/000861
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Susumu Amano
Naoaki Taoka
Masaru Mitsuda
Kenji Inoue
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kaneka Corp
Original Assignee
Kaneka Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kaneka Corp filed Critical Kaneka Corp
Priority to US09/926,021 priority Critical patent/US6515134B1/en
Priority to KR1020017010419A priority patent/KR20010102198A/ko
Priority to EP00903975A priority patent/EP1153919A4/en
Priority to JP2000599738A priority patent/JP4676614B2/ja
Priority to CA002362070A priority patent/CA2362070A1/en
Priority to AU25713/00A priority patent/AU2571300A/en
Publication of WO2000048997A1 publication Critical patent/WO2000048997A1/ja
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    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing an intermediate of optically active beta-13-adrenergic receptor agonist, which is important in the production of pharmaceuticals, and an important intermediate thereof.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • the method (i) has a problem in industrial use because it uses highly toxic osmium oxide and requires an expensive asymmetric ligand.
  • the method (ii) is industrially problematic because it requires stoichiometric amounts of diisopinocamphenyl chloride, which is an expensive asymmetric reducing agent. Further, the haloacetylpyridine derivative substituted at the 2-position or substituted with chlorine, which is used as an asymmetric reduction substrate, is produced by halogenating the methyl group of the corresponding methyl ketone. However, it is difficult to obtain the methyl ketone, and it is necessary to synthesize it using diazomethane, which is industrially difficult to handle due to toxicity and explosiveness.
  • R 1 and R 2 are independently hydrogen, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an aralkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an acyl group having 1 to 10 carbon atoms or 1 carbon atom Represents an alkyloxycarbonyl group of up to 10.
  • Y 1 is a halogen, a hydroxyl group, an acyloxy group having 1 to 10 carbon atoms, a sulfonyloxy group having 1 to 10 carbon atoms, or a carbon atom having 1 to 1 carbon atoms.
  • aralkylsulfanyl group represented by 10) is a substituted acetyltylidine derivative substituted at the 2-position with an amino group, which is important for producing an intermediate of an optically active beta-3adrenoline receptor agonist.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • the loyloxyacetylpyridine derivative was also expected to be an important compound for producing an intermediate of an optically active beta-13-adrenergic receptor agonist, but was unknown in the literature.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • the active bivalyloxyhydroxyxetylpyridine derivative was also expected to be an important compound for producing an intermediate of an optically active beta-13-adrenergic receptor agonist, but was unknown in the literature. Compound.
  • optically active dihydroxyxetylpyridine derivative represented by or a salt thereof was also expected to be an important compound in producing an intermediate of an optically active beta-13-adrenergic receptor agonist. It was an unknown compound in the literature. Summary of the Invention
  • optically active vector 3 adrenergic receptor agonist e.g., W09
  • An object of the present invention is to produce a shetylpyridine derivative and an optically active oxysilane derivative from easily available raw materials in a safe and efficient manner, and furthermore, by an industrially advantageous method.
  • the present invention relates to the general formula (1)
  • R 1 and R 2 are independently hydrogen, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an aralkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an acyl group having 1 to 10 carbon atoms or 1 carbon atom Represents an alkyloxycarbonyl group of up to 10.
  • Y 1 is a halogen, a hydroxyl group, an acyloxy group having 1 to 10 carbon atoms, a sulfonyloxy group having 1 to 10 carbon atoms, or a carbon atom having 1 to 1 carbon atoms.
  • a substituted acetyltylidine derivative in which the 2-position is substituted with an amino group represented by the formula:
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • an optically active dihydroxyxetylpyridine derivative represented by or a salt thereof Or an optically active dihydroxyxetylpyridine derivative represented by or a salt thereof.
  • the present invention also provides a compound represented by the following general formula (5):
  • Y 2 represents halogen.
  • Z represents hydrogen, an alkali metal, an alkali earth metal halide, or a silyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • R 3 represents a carbon number. Represents an alkyl group having 1 to 10 or an aralkyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • Y 1 represents a halogen, Hydroxyl group, C1 to C10 alkoxy group, C1 to C10 sulfonyloxy group, C1 to C10 alkoxy group, amino group, C1 to C15 alkylamino group, C1 Represents an aralkylamino group, a sulfanyl group, an alkylsulfanyl group having 1 to 10 carbon atoms, or an aralkylsulfanyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • General formula (10) represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • Y 1
  • the present invention provides a substituted acetylpyridine derivative represented by the above general formula (7),
  • R 6 represents an alkyl group having 1 to 15 carbon atoms, an aralkyl group having 1 to 15 carbon atoms, or an aryl group having 6 to 16 carbon atoms.
  • the reaction is carried out in the presence of a base and a quaternary ammonium salt.
  • the present invention provides a method for reducing the substituted acetylpyridine derivative represented by the above general formula (12) by enantioselective, comprising the steps of:
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • R 6 represents a carbon number.
  • Alkyl group having 1 to 15 carbon atoms, aralkyl group having 1 to 15 carbon atoms, or 6 carbon atoms Represents an aryl group of ⁇ 16. * Represents an asymmetric carbon.
  • the present invention provides a method comprising subjecting an optically active acyloxyhydroxyethylpyridine derivative represented by the above general formula (13) to solvolysis in a lower alcohol solvent in the presence of quaternary ammonium hydroxide.
  • the present invention further provides a method for preparing an enolate by reacting a halogenated acetic acid derivative represented by the above general formula (5) with a base, and converting the enolate into a substituted dicotate ester represented by the above general formula (6). After reacting with an acid, the mixture is subjected to an acid treatment to prepare a substituted acetylpyridine derivative represented by the above general formula (7), and this is reduced by enantioselection.
  • the present invention further provides an enolate prepared by reacting a halogenated acetic acid derivative represented by the above general formula (5) with a base, After reacting with acid, the mixture is subjected to an acid treatment to prepare a substituted acetylpyridine derivative represented by the above general formula (7), which is selectively reduced by enantio-selection, and is represented by the above general formula (15).
  • General formula (16) comprising preparing an optically active hydroxyxetylpyridine derivative and treating it with a base.
  • the present invention further relates to a method of reacting the acetylated pyridine derivative represented by the general formula (7) with a carboxylic acid represented by the general formula (11) in the presence of a base and a quaternary ammonium salt.
  • a substituted acetyltyl pyridine derivative represented by the general formula (12) is prepared, and this is selectively reduced by enantio to prepare an optically active acyloxyhydroxyxyl pyridine derivative represented by the above general formula (13).
  • the substituted acetylpyridin derivative represented by the above general formula (12) is solvolyzed while being selectively reduced in the presence of a base in the presence of a base, and is represented by the above general formula (14)
  • the present invention also provides a method for producing an optically active dihydroxyxethyl pyridine derivative (14), which comprises directly obtaining an optically active dihydroxyxyl pyridine derivative.
  • both the optically active oxysilane derivative represented by the general formula (16) and the optically active dihydroxyxetyl pyridine derivative represented by the general formula (14) can be produced.
  • the outline is basically represented by the following reaction formula.
  • the steps for producing the optically active oxysilane derivative include: (a) a step of converting a substituted nicotinic acid ester represented by the general formula (6) into a substituted acetylpyridine derivative represented by the general formula (7); 3) a step of reducing this to an optically active hydroxyxetylpyridine derivative represented by the general formula (15); and (c) a step of further deriving the optically active oxysilane derivative by treatment with a base.
  • a process for producing an optically active dihydroxyxetylpyridine derivative includes:
  • an enolate is prepared by reacting a base with a halogenated acetic acid derivative represented by the above general formula (5), and this is combined with a substituted nicotinic acid ester represented by the above general formula (6). After the reaction, the resultant is subjected to an acid treatment to prepare a substituted acetylpyridine derivative represented by the general formula (7).
  • Y 2 represents halogen. Specific examples include fluorine, chlorine, bromine and iodine. Preferably, it is chlorine or bromine, and more preferably, chlorine.
  • Z represents hydrogen, an alkali metal, an alkaline earth metal halide, or a silyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • Specific examples include hydrogen, lithium, sodium, potassium, magnesium chloride, magnesium bromide, calcium chloride, trimethylsilyl, tert-butyldimethylsilyl, phenyldimethylsilyl, and the like. It is not limited. Preferably, it is sodium or magnesium chloride.
  • halogenated acetic acid derivative represented by the general formula (5) sodium chloroacetate, sodium bromoacetate, magnesium chloroacetate, and magnesium bromoborate are preferable.
  • magnesium chloride at the mouth can be used, which is prepared in advance by mixing sodium acetate with magnesium chloride and magnesium chloride to precipitate sodium chloride.
  • the amount of the halogenated acetic acid derivative represented by the general formula (5) is 1 to 10 molar equivalents, preferably 1 to 3 mol, based on the substituted nicotinic acid ester represented by the general formula (6). Is equivalent.
  • the base used in preparing the enolate from the halogenated acetic acid derivative represented by the general formula (5) is not particularly limited, and examples thereof include lithium amide, sodium amide, lithium diisopropylamide, and magnesium chloride diisopropylamide.
  • Metal amides such as magnesium bromide diisopropylamide, magnesium chloride dicyclohexyl amide, etc .; methyl lithium, n-butyl lithium, methyl magnesium bromide, i-propyl magnesium chloride, tert-butyl magnesium chloride, etc.
  • Metal alkoxides such as sodium methoxide, magnesium ethoxide and potassium tert-butoxide; metal hydrides such as lithium hydride, sodium hydride, potassium hydride and calcium hydride.
  • Rukoto can. Among them, preferred are those represented by the general formula (8)
  • R 4 and R 5 independently represent an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms or a silyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • R 4 and R 5 may be the same or different. Specific examples include a methyl group, an ethyl group, an i-propynole group, a tert-butyl group, an n-octyl group, a trimethylsilyl group, a triethylsilyl group, and a phenyldimethylsilyl group. It is not limited to.
  • each of R 4 and R 5 represents an isopropyl group.
  • Q represents halogen.
  • chlorine, bromine Or iodine more preferably chlorine.
  • the magnesium amide represented by the general formula (8) can be obtained by a known method (for example, see Japanese Patent Application Laid-Open No. 8-52324) from an inexpensive and easily available secondary amide and a Grignard reagent. Can be easily prepared.
  • the amount of such a base to be used is 1 to 10 molar equivalents, preferably 2 to 6 molar equivalents, relative to the substituted nicotinic acid ester represented by the general formula (6).
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group. Represent.
  • a substituted amino group such as an oxycarbonylamino group and an ethoxycarbonylamino group.
  • hydrogen, chlorine, and acetylamino are preferred.
  • R 3 represents an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms or an aralkyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • a force that can be exemplified by a methyl group, an ethyl group, a tert-butyl group, a phenyl group, a benzyl group, a p-methoxybenzyl group and the like is not limited thereto.
  • it is a lower alkyl group such as a methyl group or an ethyl group.
  • the mixing order of the halogenated acetic acid derivative, the base and the substituted nicotinic acid ester is arbitrary, but for example, WO 00/48997 PCT / JP00Ban 61 —-
  • the reaction solvent used in step (a) is preferably a non-protonic organic solvent.
  • the nonprotonic organic solvent is not particularly limited. Examples thereof include hydrocarbon solvents such as benzene, toluene, n-hexane, and cyclohexane; getyl ether, tetrahydrofuran (THF), and 1,4-dioxane.
  • Methyl t-butyl ether dimethoxetane, ethylene glycol dimethyl ether and other ether solvents; methylene chloride, chloroform, 1,1, 1-trichloroethane and other halogen solvents
  • Non-protonic polar solvents such as dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, and hexamethyl 1; These may be used alone or in combination of two or more.
  • hydrocarbon solvents such as benzene, toluene, n-hexane and cyclohexane; dimethyl ether, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, methyl t-butyl ether, dimethoxetane, diethylene glycol It is an ether solvent such as dimethyl ether.
  • the reaction temperature is preferably from 180 ° C to 100 ° C, and more preferably from 120 ° C to 60 ° C.
  • the acid used in the acid treatment in this step (a) may be a common inorganic acid or organic acid, and examples thereof include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, acetic acid, and citric acid.
  • This acid treatment can be performed, for example, by mixing an acid in an amount sufficient to neutralize the base with the reaction solution at 0 ° C. to room temperature and stirring for several minutes to several hours.
  • a general post-treatment may be performed to obtain a product from the reaction solution.
  • a common extraction solvent such as ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, and hexane.
  • the reaction solvent and the extraction solvent are distilled off from the obtained extract by an operation such as heating under a low pressure, the desired product is obtained.
  • the target product thus obtained is almost pure, but may be further purified by a general method such as crystallization purification, fractional distillation, or column chromatography to further increase the purity.
  • the optically active hydroxyxetyl pyridine derivative represented by the general formula (10) is reduced by enantioselectively reducing the substituted acetyltyl pyridine derivative represented by the general formula (9). Is prepared.
  • the reduction substrate that can be used in the enantioselective reduction reaction of the present invention has the general formula
  • X represents a hydrogen, a halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • halogens such as hydrogen, chlorine, bromine and iodine, hydroxyl, amino, or acetylamino, benzoylamino, phthaloylamino, dimethylamino, dibenzylamino, benzyloxycarbonylamino, tert-butyl.
  • a substituted amino group such as an oxycarbonylamino group and an ethoxycarbonylamino group. More preferred are hydrogen, chlorine, or a substituted amino group such as an amino group or an acetylamino group: hydrogen, chlorine, and an acetylamino group are particularly preferred.
  • Y 1 represents a halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, a sulfonyloxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, Alkylamino group having 1 to 15 carbon atoms, aralkylamino group having 1 to 15 carbon atoms, sulfanyl group, alkylsulfanyl group having 1 to 10 carbon atoms, or charcoal Represents an aralkylsulfanyl group having a prime number of 1 to 10.
  • halogens such as chlorine, bromine and iodine; hydroxyl groups; acyloxy groups such as acetyloxy group and benzoyloxy group; sulfonyloxy groups such as methanesulfonyloxy group, benzenesulfonyloxy group and toluenesulfonyloxy group. And more preferably a halogen, a hydroxyl group, and an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms. Of the halogens, chlorine is preferred.
  • the substituted acetylpyridine derivative in which Y 1 is halogen [general formula (7)] can be used as it is obtained in the step (a).
  • the substituted acetylpyridin derivative in which Y 1 is halogen can be derived from the general formula (7) using a known method or the like. For example, when an alkoxy-one, an acyloxy anion, or an alkylsulfanyl anion is reacted with a substituted acetyl pyridine derivative represented by the general formula (7), ⁇ 1 is an alkoxy group, an acyloxy group, or an alkyl sulfanyl group, respectively.
  • a substituted acetyl pyridine derivative is obtained. Further, by hydrolyzing the substituted acetyl pyridine derivative thus substituted with an acetyl group or the like, a substituted acetyl pyridine derivative in which Y 1 is a hydroxyl group is obtained.
  • R 6 represents an alkyl group having 1 to 15 carbon atoms, an arylalkyl group having 1 to 15 carbon atoms, or an aryl group having 6 to 16 carbon atoms.
  • the enantioselective reduction in step (b) is an asymmetric reduction performed by biological or chemical means.
  • Biological asymmetric reduction includes asymmetric reduction by a microorganism or a reductase thereof.
  • the chemical asymmetric reduction includes hydrogen transfer-type reduction using a catalyst prepared with a ruthenium complex, an optically active amine, and a base; a compound consisting of a dimethyl, ruthenium, iridium, or palladium compound and a chiral phosphine ligand.
  • Asymmetric hydrogenation using an asymmetric catalyst such as: borane reduction using an amino alcohol derived from an optically active alpha amino acid as an asymmetric ligand. Of these, reduction using a microorganism and hydrogen transfer type reduction are preferred.
  • the substituted acetyltilidine derivative as a substrate can be selectively reduced by (R) to obtain a (R) -hydroxyxylpyridine derivative preferentially.
  • the reduction reaction can be carried out using a carbonyl reductase derived from a microorganism, a culture of a microorganism capable of producing the carbonyl reductase, or the treated product.
  • Microorganisms capable of producing carbonyl reductase in the R-selective reduction include genus Acibia, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Guillamondella, Hansenula, Menicobia, Pichia, Rhodotorula, Microorganisms belonging to the genera Rhodosporidium, Saccharomycopsis, Schwanomyces, Spolidioboras, Sporoboromyces, Torraspora, and Jarovia can be used.
  • microorganisms can generally be obtained from stocks that are easily available or purchased. It can also be separated from nature.
  • the microorganism capable of producing the enzyme may be a wild type or a mutant.
  • a microorganism capable of producing the enzyme a microorganism derived by a genetic technique such as cell fusion or genetic manipulation can also be used.
  • Genetically engineered microorganisms producing this enzyme may be, for example, a step of isolating and / or purifying the enzyme to determine a part or all of the amino acid sequence of the enzyme, and encoding the enzyme based on this amino acid sequence.
  • a step of obtaining a DNA sequence to be transformed, a step of introducing this DNA into another microorganism to obtain a recombinant microorganism, and culturing the recombinant microorganism to obtain the present enzyme It can be obtained by a method containing a process (Japanese Patent Application No. 11-3455541).
  • the above transformed cell wherein the enzyme having the ability to regenerate the coenzyme is glucose dehydrogenase; the above transformed cell, wherein the glucose dehydrogenase is derived from Bacillus megaterium; The above-mentioned transformed cells wherein the cell is pNTCRG, the above-mentioned transformed cells wherein the transformed cell is Escherichia coli, and the like.
  • E.co 1 i HB 101 (p NT C RG) Accession No. FE RM— BP 6 8 9 8 [Depositary institution: Institute of Biotechnology, Industrial Technology Institute, Ministry of International Trade and Industry (Ibaraki, Japan) Tsukuba East 1-Chome 1-3), Deposit: September 28, 1999].
  • any nutrient source that these microorganisms can utilize can be used.
  • sugars such as glucose, sucrose and maltose
  • organic acids such as lactic acid, acetic acid, citric acid, and propionic acid
  • alcohols such as ethanol and glycerin
  • hydrocarbons such as paraffin, soybean oil, rapeseed oil And the like, or a carbon source such as a mixture of these
  • a nitrogen source such as ammonium sulfate, ammonium phosphate, urea, yeast extract, meat extract, peptone, and colonica.
  • other nutrients such as inorganic salts and vitamins may be appropriately mixed.
  • Microorganisms can be cultured under general conditions, for example, ⁇ ⁇ 4.0 to 9.5, temperature range 20 to 45 ° C, aerobically for 10 to 96 hours. I do.
  • a culture solution of the microorganism can be used as it is for the reaction, but a concentrate of the culture solution can also be used.
  • components in the culture solution adversely affect the reaction, it is preferable to use cells or a processed product of the cells obtained by treating the culture solution by centrifugation or the like.
  • the treated cells of the above microorganisms are not particularly limited, and include, for example, dried cells obtained by dehydration treatment with acetone or diphosphorus pentoxide or drying using a desiccator or an electric fan, or treated with a surfactant. , Lysed enzyme, immobilized cells or cells Examples include crushed cell-free extract preparations. Further, an enzyme that catalyzes an asymmetric reduction reaction may be purified from the culture and used.
  • the substituted acetyltyl pyridine derivative serving as a substrate may be added all at once at the beginning of the reaction, or may be added in portions as the reaction progresses.
  • the temperature during the reaction is usually from 10 to 60 ° C, preferably from 20 to 40 ° C, and the pH during the reaction is from 2.5 to 9, preferably from 5 to 9.
  • the concentration of the microorganism in the reaction solution may be appropriately determined according to the ability to reduce these substrates.
  • the substrate concentration in the reaction solution is preferably from 0.01 to 50% (W / V), and more preferably from 0.1 to 30%.
  • the reaction is usually carried out with shaking or aeration and stirring.
  • the reaction time is appropriately determined depending on the substrate concentration, the concentration of the microorganism, and other reaction conditions. Usually, it is preferable to set each condition so that the reaction is completed in 2 to 168 hours.
  • an energy source such as glucose or ethanol at a ratio of 1 to 30% to the reaction solution since excellent results can be obtained.
  • coenzymes such as reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and reduced nicotinamide.adenine dinucleotide phosphate (NAD PH), which are generally required for reduction reactions by biological methods, are added. Thereby, the reaction can be promoted. Specifically, these may be added directly to the reaction solution, or the reaction system for producing NADH and NADPH may be added to the reaction solution together with the oxidized coenzyme.
  • NADH reduced nicotinamide adenine dinucleotide
  • NAD PH reduced nicotinamide.adenine dinucleotide phosphate
  • reaction system that reduces NAD to NADH when formate dehydrogenase produces carbon dioxide and water from formic acid, or a NAD or NADP when glucose dehydrogenase produces glyconolactone from glucose.
  • a reaction system that reduces to NADH or NAD PH, respectively, can be used.
  • a surfactant such as Triton (manufactured by Nacalai Tesque), Span (manufactured by Kanto Kagaku), or Twin (manufactured by Nakarai Tesque) to the reaction solution.
  • a water-insoluble organic solvent such as ethyl acetate, butyl acetate, isopropyl ether, and toluene is added to the reaction solution. You may.
  • methanol, ethanol, acetone, tetrahydrofura were used to increase the solubility of the substrate.
  • optically active hydroxyxetylpyridine derivative (10) generated by the reduction reaction can be collected directly from the reaction solution or after separating cells and the like, extracting with a solvent such as ethyl acetate or toluene, and removing the solvent. Do. Furthermore, a high-purity optically active hydroxyxethyl pyridine derivative can be obtained by recrystallization or silica gel column chromatography.
  • the substituted acetyltilidine derivative as a substrate is selectively reduced by (R) or (S) depending on the selection of a catalyst to be used, and is reduced by (R) — or (S ) —Hydroxitytylpyridine derivative can be obtained preferentially.
  • the catalyst used here is, for example, a catalyst prepared by mixing a ruthenium complex, an optically active amine and a base, and is prepared, for example, by the method described in JP-A-10-130289. be able to.
  • the ruthenium complex is preferably a divalent ruthenium-allene complex, particularly bis (r- 6 -benzene) diruthenium, bis ( 6 — ⁇ -cymene) diruthenium or bis (77) chloride 6 —Mesitylene) Ruthenium is particularly preferred.
  • the optically active amine is preferably an optically active diamine monosulfonate or an optically active amino alcohol, and is preferably a 1,2-diphenylethylenediamine sulfonate, specifically (S, S) — ⁇ —. ⁇ -tosyl-1,2-diphenylethylenediamine, (R, R) — N—p-tosyl-1,2-diphenylethylenediamine, (S, S) -N-benzenesulfonyl 1,2-diphene Ninoleethylene diamine, (R, R) 1 N-benzenesulfonyl 1,2-dipheninoleethylene diamine, (S, S) —N-methanesulfonyl 1,2-diphenylethylene diamine Amin, (R, R) -N-methanesulfonyl- 1,2, -diphenylethylenediamine, (S, S) -N-trifrenoleolomethansnolehonin
  • the base used in the preparation of the catalyst is a general organic or inorganic base and is not particularly limited.
  • the base may be added as an aqueous solution.
  • the ruthenium complex, the optically active amine and the base may be mixed in an appropriate solvent in any order.
  • the basic molar ratio of the optically active amine base is 1: 1: 1 in terms of ruthenium, but an excess amount of the optically active amine and the base may be used.
  • the solvent at the time of preparing the catalyst is not particularly limited, but it is preferable to use the same solvent as that used at the time of the reduction reaction described below in consideration of the efficiency of operation.
  • the temperature during the preparation of the catalyst is from 0 to 10 ° C, preferably from 15 to 60 ° C.
  • the catalyst preparation time is about 1 to 10 hours.
  • the catalyst thus prepared is subjected to the reduction reaction as a solution.
  • the catalyst isolated by crystallization from the solution may be used for the reduction reaction.
  • the convenient amount of the catalyst is 0.001 to 5 molar equivalents in terms of ruthenium relative to the substituted acetylpyridine derivative as a reducing substrate.
  • the hydrogen transfer type reduction reaction can be carried out, for example, by mixing the catalyst prepared as described above, a substituted acetyltylidine derivative as a substrate, and a hydrogen transfer source.
  • the hydrogen transfer source that is, the compound acting as a hydrogen donor for the substrate
  • isopropyl alcohol, benzohydrol, or formic acid or a salt of formic acid can be used, and isopropyl alcohol is preferred.
  • the hydrogen transfer source needs to be at least 1 molar equivalent to the reducing substrate, and it is preferable to use a large excess of 10 equivalents or more.
  • isopropyl alcohol is used as a hydrogen transfer source, it is preferable to use this as a solvent. Any solvent can be used as the reaction solvent.
  • alcohol solvents such as methanol, ethanol, butanol, isopropyl alcohol, ethylene glycol, and methoxyethanol
  • amine solvents such as getylamine, pyrrolidine, and piperidine
  • benzene, toluene, and cyclohexane Hydrocarbon solvents such as Jethyl ether, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, methyl t-butyl ether, dimethoxetane, etc .
  • ester solvents such as ethyl acetate, butyl acetate, etc .
  • acetone Ketone solvents such as methyl, methyl ethyl ketone
  • halogen solvents such as methylene chloride, chloroform, 1,1, 1-trichloroethane
  • nitrogen-containing solvents such as dimethyl formamide and acetonitrile
  • dimethyl sulfoxide N-methyl borolidone, hexa
  • the reaction temperature is from 0 to 150 ° C, preferably from 15 to 60 ° C.
  • the reaction mixture during the reaction was analyzed by thin-layer chromatography, high-performance liquid chromatography, gas chromatography, etc., and the reduction of the substituted acetylpyridin derivative as the substrate and the formation of the hydroxyxylpyridine derivative were observed. Can be determined.
  • reaction substrate of the hydrogen transfer type reduction is represented by the general formula (1 2)
  • X represents hydrogen, halogen, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, an amino group, or a substituted amino group.
  • R 6 represents a carbon number. Represents an alkyl group having 1 to 15 atoms, an aralkyl group having 1 to 15 carbon atoms, or an aralkyl group having 6 to 16 carbon atoms.
  • X represents the same group as described above. * Represents an asymmetric carbon.
  • An optically active dihydroxyxetylpyridine derivative represented by the following formula can be directly obtained.
  • the base coexisting for directly obtaining the optically active dihydroxypyridine is not particularly limited, and an inorganic or organic base such as n-butyllithium, sodium hydride, potassium t-butoxide, sodium ethoxide, sodium carbonate, carbonic acid Lithium, sodium bicarbonate, bicarbonate, sodium hydroxide, hydroxide, calcium hydroxide, lithium hydroxide, barium hydroxide, magnesium hydroxide, sodium acetate, potassium acetate, ammonia, triethylamine, pyridine, Piperidine, N, N-dimethylaminopyridine and the like.
  • it is sodium hydroxide or potassium hydroxide.
  • the amount of the base used is preferably 0.1 to 10 molar equivalents relative to the substituted acetylpyridinine derivative as the substrate.
  • the base may be added as an aqueous solution.
  • a general post-treatment may be performed to obtain a product from the reaction solution.
  • water is added to the reaction solution after the completion of the reaction, and an extraction operation is performed using a common extraction solvent, for example, ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, hexane and the like.
  • a common extraction solvent for example, ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, hexane and the like.
  • the reaction solvent and the extraction solvent are distilled off from the obtained extract by an operation such as heating under reduced pressure, the desired product is obtained.
  • the same operation may be performed after distilling off the reaction solvent by an operation such as heating under reduced pressure.
  • the target product thus obtained is almost pure, but may be further purified by a general method such as crystallization purification, fractional distillation, or column chromatography to further increase the purity.
  • a general method such as crystallization purification, fractional distillation, or column chromatography to further increase the purity.
  • an (R) -form or (S) -form optically active hydroxyxetylpyridine derivative represented by the general formula (8) is obtained.
  • Preferred optically active hydroxyxyl viridine derivatives are those having the absolute configuration of (R).
  • an optically active hydroxyxyl derivative represented by the above general formula (16) is produced by treating an optically active hydroxyxetyl pyridine derivative represented by the above general formula (15) with a base. It consists of doing.
  • the base used in this step (c) is an inorganic base or an organic base.
  • metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide and calcium hydroxide
  • metal carbonates such as sodium carbonate, sodium hydrogen carbonate, carbon dioxide lime, hydrogen hydrogen carbonate and cesium carbonate
  • Alkyl metals such as methyllithium, n-butyllithium, methylmagnesium bromide, i-propylmagnesium chloride, tert-butylmagnesium chloride
  • Metal amides such as diisopropylamide, magnesium bromide diisopropylamide, magnesium chloride dicyclohexyl amide
  • metal alkoxides such as sodium methoxide, magnesium ethoxide, potassium tert-butoxide
  • lithium hydride Metal hydrides such as trimethylamine, sodium hydride, potassium hydride and calcium hydride
  • metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide and calcium hydroxide
  • metal carbonates such as sodium carbonate, sodium hydrogen carbonate, potassium carbonate, potassium hydrogen carbonate and cesium carbonate.
  • the amount of the base used in the step (c) is 1 to 10 molar equivalents with respect to the optically active hydroxyxylpyridine derivative represented by the general formula (15), and is preferably; ⁇ 3 molar equivalents.
  • the reaction solvent that can be used in step (c) is water, an organic solvent, or a mixed solvent of water and an organic solvent.
  • the organic solvent is not particularly limited and includes, for example, alcohol solvents such as methanol, ethanol, butanol, isopropyl alcohol, ethylene glycol, and methoxyethanol; hydrocarbon solvents such as benzene, toluene, and cyclohexane; Jetir ⁇ tel, Tetrahidrofran (THF), 1, 4- WO 00/48997 PCT / JP00 / 00861 ⁇ . _
  • Ether solvents such as dioxane, methyl tert-butyl ether, and dimethoxetane; ester solvents such as ethyl acetate and butyl acetate; ketone solvents such as acetone and methyl ethyl ketone; methylene chloride; Halogen-based solvents such as 1,1,1-trichloromethane, etc .; Nitrogen-containing solvents such as dimethylformamide and acetonidyl; Non-protonic polarities such as dimethylsulfoxide, N-methylpyrrolidone, hexamethylphosphate triamide And the like. These may be used alone or in combination of two or more. Preferred are water, acetone, acetate nitrile and tetrahydrofuran.
  • the reaction temperature of step (c) is between ⁇ 50 ° C. and 100 ° C., preferably between 20 ° C. and 30 ° C.
  • a general post-treatment may be performed to obtain a product from the reaction solution.
  • water is added to the reaction solution after the completion of the reaction, and extraction is performed using a common extraction solvent such as ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, and hexane.
  • a common extraction solvent such as ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, and hexane.
  • the reaction solvent and the extraction solvent are distilled off from the obtained extract by an operation such as heating under reduced pressure, the desired product is obtained.
  • the same operation may be performed immediately after the reaction solvent is distilled off by an operation such as heating under reduced pressure.
  • the target substance thus obtained is almost pure, but may be further purified by a general method such as crystallization purification, fractional distillation, or column chromatography to further increase the purity.
  • step (d) the substituted acetylethylpyridine derivative represented by the general formula (7) produced in the step (a) is added to the general formula (11) Wherein a carboxylic acid represented by the following formula is reacted in the presence of a base and a quaternary ammonium salt to prepare a substituted acetylpyridine derivative represented by the general formula (12).
  • R 6 is an alkyl group having 1 to 15 carbon atoms, Represents an aralkyl group having 15 or an aryl group having 6 to 16 carbon atoms. More specifically, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, tert-butyl, n-octyl, benzyl, Examples thereof include, but are not limited to, anisyl, p-nitrobenzyl, phenyl, p-tolyl, and naphthyl.
  • the amount of the carboxylic acid (11) used in this step (d) is preferably 1 to 5 molar equivalents, more preferably 1 to 3 molar equivalents, with respect to the substituted acetylphenylpyridine derivative of the general formula (7).
  • the base used in this step (d) may be any as long as it forms a salt with the carboxylic acid of the general formula (11), and a common organic or inorganic base can be used.
  • a common organic or inorganic base can be used.
  • Examples include lithium, barium hydroxide, magnesium hydroxide, triethylamine, pyridine, piperidin, N, N-dimethylaminopyridine, but are not particularly limited thereto.
  • they are sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate, and potassium carbonate.
  • the amount of the base used in this step (d) is preferably 1 to 5 molar equivalents, more preferably 1 to 3 molar equivalents, with respect to the substituted acetylpyridine derivative of the general formula (7).
  • a salt prepared by separately mixing the carboxylic acid and the base in advance may be added instead of adding the carboxylic acid and the base to the reaction system.
  • the salt prepared by separately mixing a carboxylic acid and a base in advance is, for example, a sodium salt or a potassium salt of a carboxylic acid, and specifically, sodium acetate, potassium acetate, sodium bivalate, and bivalyl acid salt. , Sodium benzoate, benzoic acid realm, etc.
  • the quaternary ammonium salt used in this step (d) is commercially available and available There is no particular limitation as long as it is easy.
  • tetra-n-butylammonium chloride tetra-n-bromide -Butylammonium, tetra-n-butylammonium iodide, tetra-n-butylammonium hydroxide, tetra-n-butylammonium hydrogen sulfate, tetra-n-butylammonium acetate, tetramethylammonium chloride
  • Aluminum tetramethylammonium bromide, benzyltrimethylammonium chloride, benzyltrimethylammonium bromide, and the like.
  • Preferred are tetra-n-butylammonium chloride and tetra-n-butylammonium bromide.
  • the amount of the quaternary ammonium salt used in this step (d) is preferably 0.1 to 2 molar equivalents, more preferably 0.05 to 0.2 molar equivalents, based on the substituted acetylpyridine derivative of the general formula (7). Is more preferred.
  • organic solvents can be used as a reaction solvent.
  • the organic solvent include hydrocarbon solvents such as benzene, toluene and cyclohexane; ether solvents such as getyl ether, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, methyl t-butyl ether, and dimethoxetane; Ester solvents such as ethyl acetate and butyl acetate; Halogen solvents such as methylene chloride, chloroform, 1,1,1-trichloroethane and the like: N, N-dimethylformamide, acetoamide, formamide, acetonitrile, etc.
  • Nitrogen-containing solvents non-protonic polar solvents such as dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, and hexamethylphosphoric triamide.
  • the above organic solvents may be used alone or in combination of two or more.
  • the reaction temperature in this step (d) is preferably from 0 ° C to 150 ° C, more preferably from 20 ° C to 80 ° C.
  • a general post-treatment may be performed to obtain a product from the reaction solution. For example, a small amount of water is added, and a common extraction solvent such as ethyl acetate, getyl ether gamma methylene chloride, toluene, and hexane is added. And perform an extraction operation. When the reaction solvent and the extraction solvent are distilled off from the obtained extract by an operation such as heating under reduced pressure, the desired product is obtained.
  • the target product thus obtained is almost pure, but may be further purified by a general method such as crystallization purification, fractional distillation, column chromatography or the like to further increase the purity.
  • the reaction is carried out in water or a protonic organic solvent, or a mixed solvent of water or a protonic organic solvent and a nonprotonic organic solvent.
  • the protonic organic solvent include lower alcohol-based solvents such as methanol, ethanol, butanol, isopropyl alcohol, ethylene glycol, and methoxyethanol; amine-based solvents such as getylamine, pyrrolidine, and piperidine. No.
  • non-protonic organic solvent examples include hydrocarbon solvents such as benzene, toluene, and cyclohexane; dimethyl ether, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, methyl t-butyl ether, and dimethoxetane.
  • Ether solvents such as ethyl acetate and butyl acetate
  • ketone solvents such as acetone and methyl ethyl ketone
  • halogen solvents such as methylene chloride, chloroform, 1,1,1-trichloroethane and the like.
  • Solvents such as dimethylformamide and acetonitrile; and non-protonic polar solvents such as dimethylsulfoxide, N-methylpyrrolidone, and hexamethylphosphoric triamide.
  • Nitrogen-containing solvents such as dimethylformamide and acetonitrile
  • non-protonic polar solvents such as dimethylsulfoxide, N-methylpyrrolidone, and hexamethylphosphoric triamide.
  • it is water or a lower alcohol, more preferably a lower alcohol.
  • Particularly preferred is methanol.
  • Bases that can be used in solvolysis are inorganic or organic bases, such as sodium carbonate, carbonated carbonate, sodium bicarbonate, sodium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, water.
  • quaternary ammonium hydroxides such as tetra-n-butylammonium hydroxide, tetramethylammonium hydroxide, and benzyltrimethylammonium hydroxide are preferred as bases, and tetra-n-butylammonium hydroxide is more preferred. preferable.
  • the amount of the base used is 0.01 to 5 equivalents, preferably 0.01 to 1.0 equivalent, based on the optically active acyloxyhydroxyshetyl pyridine derivative.
  • the reaction temperature in step (e) is from 120 ° C to 100 ° C. C, preferably from 10 ° C to 50 ° C.
  • a general post-treatment may be performed to obtain a product from the reaction solution.
  • water is added to the reaction solution after the completion of the reaction, and an extraction operation is performed using a common extraction solvent, for example, ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, hexane and the like.
  • a common extraction solvent for example, ethyl acetate, dimethyl ether, methylene chloride, toluene, hexane and the like.
  • the reaction solvent and the extraction solvent are distilled off from the obtained extract by an operation such as heating under reduced pressure, the desired product is obtained.
  • the same operation may be performed after distilling off the reaction solvent by an operation such as heating under reduced pressure.
  • the target product thus obtained is almost pure, but may be further purified by a general method such as crystallization purification, fractional distillation, or column chromatography to further increase the purity.
  • a general method such as crystallization purification, fractional distillation, or column chromatography to further increase the purity.
  • solubility of the product in water is high and the solubility in an organic solvent is extremely low, it is difficult to obtain the target product by the usual reaction operation as described above.
  • a solvolysis reaction using a quaternary ammonium hydroxide as a base is performed in a lower alcohol solvent, and a low-polar solvent is added to the reaction solution after the completion of the solvolysis to precipitate crystals of the target substance. By filtering this, it is possible to obtain a high-purity target substance with good yield by a simple operation.
  • the lower alcohol solvent and hydroxylated quaternary ammonium used here are as described above.
  • the low-polarity solvent refers to a low-polarity solvent including a nonpolar solvent, and any solvent can be used as long as the optically active dihydroxyxetylpyridine derivative (14) is hardly soluble and can be mixed with the solvolysis solvent. And especially limited do not do.
  • a hydrocarbon solvent is preferable as the low-polar solvent, for example, n-hexane, n-pentane, benzene, toluene, xylene, petroleum ether, Petroleum benzine and the like. More preferably, it is toluene.
  • the substituted acetyl-pyridine derivative represented by the general formula (1) in which the 2-position of the pyridine ring is an amino group, is a conventional one.
  • This is a novel compound that can be produced by the method of the present invention [step (a) and, if necessary, a subsequent substitution reaction], because a production method by technology is not known.
  • This derivative is extremely useful in producing an intermediate of an optically active beta-13 adrenergic receptor agonist.
  • 13 ⁇ 4 1 and 13 ⁇ 4 2 is hydrogen, alkyl Le group of from 1 to 1 0 carbon atoms, Ararukiru group of from 1 to 1 0 carbon atoms, Ashiru group or the number of carbon atoms in the number of 1-1 0 carbon Represents an alkyloxycarbonyl group of 1 to 10; R 1 and R 2 may be the same or different. Among them, R 1 preferably represents an acetyl group, and R 2 preferably represents hydrogen. Note that Y 1 is the same as Y 1 described in the general formula (9).
  • the bivaloyloxyacetylviridine derivative represented by the general formula (2) and the optically active vivayl derivative represented by the general formula (3) are prepared.
  • Royloxyhydroxyl pyridine derivatives are useful intermediates having improved stability and handling of compounds due to the introduction of a vivaloyl group.
  • these are novel compounds which can be produced by the method of the present invention, because the production method according to the prior art is not known.
  • X in general formulas (2) and (3) is the same as X described in general formula (6).
  • the compound represented by the formula (4) is converted by the present inventors into a
  • 144 mg of sodium benzoate (1.0 mg mmo1) and 322 mg (1.0 mmo1) of tetrabutylammonium bromide were added at room temperature, and the mixture was refluxed for 3 hours.
  • the reaction solution was subjected to suction filtration, and the filtrate was extracted with ethyl acetate.
  • the organic phase was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and dried over sodium sulfate.
  • Candida Nono Noretorasu the (I FO 1 94 1), 5 00 mi Sakaguchi semisynthetic medium 3 Om 1 were sterilized in a flask (Darko Ichisu 40 g, yeast extract 3 g, KH 2 P0 4 0. 7 g, ( NH 4) 2 HP0 4 1. 3 g, M g SO 4 ⁇ 7 H 2 O 0. 8 g, Z n S 0 4 - 7 H 2 0 0. 0 6 g, F e S 0 4 - 7 H 2 0 0. 0 9 g, C u S 0 4 - 7 H 2 0 0. 00 5 g, Mn SO 4 0. 0 1 g, N a C 1 0.
  • yeast strains 5 00 m 1 sterilized in Sakaguchi flask 3 0 semisynthetic medium m 1 (glucose 4 0 g, yeast extract 3 g, KH 2 P 0 4 1 g, (NH 4) 2 HP0 6. 5 g Mg SO 4 - 7 H 2 0 0. 8 g, Z n S_ ⁇ 4, 7 H 2 0 0. 0 6 g, F e S 0 4 ⁇ 7 H 2 0 0. 0 9 g, C u SO 4 '7 H 2 ⁇ 0. 0 0 5 g, Mn S 0 4 0. 0 1 g, N a C l 0.
  • an optically active dihydroxyxetylpyridine derivative and an optically active oxysilane derivative, which are intermediates of beta-13 adrenergic receptor agonist can be safely and efficiently obtained from easily available raw materials.
  • it can be produced by an industrially advantageous method.

Landscapes

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Description

WO 00/48997 PCT/JPOO/00861 - 明 細 書
置換ァセチルビリジン誘導体とそれを用いた光学活性ベータ一 3ァゴニスト中間 体の製造法 技術分野
本発明は、 医薬品の製造上重要な光学活性ベータ一 3ァドレナリン受容体ァゴ 二ス トの中間体の製造方法、 及び、 その重要中間体に関する。 背景技術
光学活性なベータ一 3ア ドレナリン受容体ァゴニス トの中間体である、 一般式 (1 4)
Figure imgf000003_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れる光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体、 又は、 一般式 （1 6)
Figure imgf000003_0002
(式中、 Xは、 上記と同じ基を表す。 ） で表される光学活性ォキシラン誘導体の 製造方法としては、 従来、
( i ) ビニルピリジン誘導体の触媒的不斉ジヒドロキシ化反応を経由する方法 （ WO 9821 1 84号） 、
( i i ) ハロアセチルピリジン誘導体の塩化ジイソピノカンフエニルボランによ る不斉還元を経由する方法 （US 556 1 42号、 US 571 4506号） 、 及 ぴ、 - ( i i i ) アミノアセチルピリジン誘導体の微生物による不斉還元を経由する方 法 （WO 9 8 0 3 6 7 2号）
が知ら ている。
しかし、 （ i ) の方法は、 毒性の高い酸化オスミウムを用い、 更に、 高価な不 斉配位子を必要とするため、 工業的な利用に問題がある。
( i i ) の方法は、 高価な不斉還元剤である塩化ジイソピノカンフエニルボラ ンを化学量論量必要とするため、 工業的に問題がある。 また、 不斉還元基質とし て用いられる、 2位が無置換又は塩素で置換されたハロアセチルピリジン誘導体 は、 対応するメチルケトンのメチル基をハロゲン化することにより製造される。 しかしながら、 そのメチルケトンの入手が困難であり、 毒性及び爆発性のためェ 業的に取り扱いが困難なジァゾメタンを用いて合成する必要がある。
( i i i ) の方法は、 ピリジン上に置換基がない [すなわち、 下記一般式 （7 ) 又は （9 ) で Xが水素である] 誘導体に関する実施例に限られており、 2—ァ ミノピリジン誘導体等の、 2位が置換されたピリジン誘導体の製造方法が開示さ れていない。
Figure imgf000004_0001
(式中、 R 1及び R 2は、 独立して、 水素、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基、 炭素 数 1〜 1 0のァラルキル基、 炭素数 1〜 1 0のァシル基又は炭素数 1〜 1 0のァ ルキルォキシカルボ二ル基を表す。 Y 1は、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0 のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のスルホニルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のァ ルコキシ基、 アミノ基、 炭素数 1〜 1 5のアルキルアミノ基、 炭素数 1〜 1 5の ァラルキルアミノ基、 スルファニル基、 炭素数 1〜 1 0のアルキルスルファニル 基、 又は、 炭素数 1〜 1 0のァラルキルスルファニル基を表す。 ） で表される、 2位がアミノ基で置換された置換ァセチルビリジン誘導体は、 光学活性なベータ — 3ァドレナリン受容体ァゴニス 卜の中間体を製造するに際して重要な化合物で あると予想されていたものの、 文献上の未知化合物であつ
また、 一般式 （2 )
Figure imgf000005_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れるビバロイルォキシァセチルピリジン誘導体は、 同様に光学活性なベータ一 3 アドレナリン受容体ァゴニス 卜の中間体を製造するに際して重要な化合物である と予想されていたものの、 文献上の未知化合物であった。
また、 一般式 （3 )
Figure imgf000005_0002
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れる光学活性ビバロイルォキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体は、 同様に光学 活性なベータ一 3ァドレナリン受容体ァゴニス 卜の中間体を製造するに際して重 要な化合物であると予想されていたものの、 文献上の未知化合物であった。
また、 式 （4 )
Figure imgf000005_0003
で表される光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体、 又はその塩は、 同様に 光学活性なベータ一 3ァドレナリン受容体ァゴニス 卜の中間体を製造するに際し て重要な化合物であると予想されていたものの、 文献上の未知化合物であった。 発明の要約
本発 ¾は、 上記現状に鑑み、 下記一般式 （1 7)
Figure imgf000006_0001
で表される光学活性べ一ター 3ア ドレナリ ン受容体ァゴニス ト （例えば、 W09
82 1 1 84号、 US 5 5 6 1 1 42号に記載） を製造する上で重要な中間体、 すなわち公知の簡便な手法により上記化合物 （1 7) への変換が容易な光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体及び光学活性ォキシラン誘導体を、 入手容易 な原料から、 安全かつ効率的に、 更には工業的に有利な方法で製造することを目 的とするものである。
すなわち、 本発明は、 一般式 （ 1)
Figure imgf000006_0002
(式中、 R1及び R2は、 独立して、 水素、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基、 炭素 数 1〜 1 0のァラルキル基、 炭素数 1〜 1 0のァシル基又は炭素数 1〜 1 0のァ ルキルォキシカルボ二ル基を表す。 Y1は、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0 のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のスルホニルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のァ ルコキシ基、 アミノ基、 炭素数 1〜1 5のアルキルアミノ基、 炭素数 1〜1 5の ァラルキルアミノ基、 スルファニル基、 炭素数 1〜 1 0のアルキルスルファニル 基、 又は、 炭素数 1〜 1 0のァラルキルスルファニル基を表す。 ） で表される、 2位がァミノ基で置換された置換ァセチルビリジン誘導体である。
また本発明は、 一般式 （2)
Figure imgf000007_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れる、 ビバロイルォキシァセチルピリジン誘導体である。
また本発明は、 一般式 （3)
Figure imgf000007_0002
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れる光学活性ビバロイルォキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体である。
また本発明は、 式 （4)
Figure imgf000007_0003
で表される光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体、 又はその塩である。 本発明は、 また、 一般式 （5)
Figure imgf000007_0004
(5)
(式中、 Y2は、 ハロゲンを表す。 Zは、 水素、 アルカリ金属、 ハロゲン化アル カリ土類金属、 又は、 炭素数 1〜 1 0のシリル基を表す。 ） で表されるハロゲン 化酢酸誘導体に塩基を作用させてエノラートを調製し、 これを一般式 （6)
Figure imgf000008_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 R 3は、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素数 1〜 1 0のァラルキル基を表す。 ） で表 される置換ニコチン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付すことからなる、 一 般式 （7 )
Figure imgf000008_0002
(式中、 Y 2及び Xは、 上記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルピリジ ン誘導体の製造方法である。
また本発明は、 一般式 （9 )
Figure imgf000008_0003
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1 〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換ァミノ基を表す。 Y 1は、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のスルホ ニルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 ァミノ基、 炭素数 1〜 1 5のァ ルキルァミノ基、 炭素数 1 〜 1 5のァラルキルァミノ基、 スルファニル基、 炭素 数 1 ~ 1 0のアルキルスルファニル基、 又は、 炭素数 1〜 1 0のァラルキルスル ファニル基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体をェナンチォ選択 的に還元することからなる、 一般式 （1 0 )
Figure imgf000009_0001
(式中、 X及び Y1は、 前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ) で表され る光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法である。
また本発明は、 上記一般式 （7) で表される置換ァセチルビリジン誘導体に、 一般式 （1 1)
Figure imgf000009_0002
(式中、 R6は、 炭素数 1〜1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6〜 1 6のァリール基を表す。 ） で表されるカルボン酸を塩基と 4 級アンモニゥム塩の共存下に反応させることからなる、 一般式 （1 2)
Figure imgf000009_0003
(式中、 X及び R6は前記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン 誘導体の製造方法である。
また本発明は、 上記一般式 （1 2) で表される置換ァセチルビリジン誘導体を ェナンチォ選択的に還元することからなる、 一般式 （1 3)
Figure imgf000009_0004
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換ァミノ基を表す。 R6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6 〜 1 6のァリール基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ) で表される光学活性ァシロ キシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法である。
また本発明は、 上記一般式 （ 1 3) で表される光学活性ァシロキシヒ ドロキシ ェチルピリジン誘導体に、 低級アルコール溶媒中、 水酸化 4級アンモニゥム存在 下、 加溶媒分解を行うことからなる、 一般式 （1 4)
Figure imgf000010_0001
(式中、 Xは前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表される光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法である。
本発明は、 更にまた、 上記一般式 （5) で表されるハロゲン化酢酸誘導体に塩 基を作用させてエノラートを調製し、 これを上記一般式 （6) で表される置換二 コチン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付して、 上記一般式 （7) で表され る置換ァセチルビリジン誘導体を調製し、 これをェナンチォ選択的に還元するこ とからなる、 一般式 （1 5)
Figure imgf000010_0002
(式中、 Y2及び Xは、 上記と同じ基を表す。 *は、 不斉炭素を表す。 ） で表さ れる光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法でもある。
本発明は、 更にまた、 上記一般式 （5) で表されるハロゲン化酢酸誘導体に塩 基を作用させてエノラートを調製し、 これを上記一般式 （6) で表される置換二 コチン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付して、 上記一般式 （7) で表され る置換ァセチルビリジン誘導体を調製し、 これをェナンチォ選択的に還元して、 上記一般式 （ 1 5) で表される光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を調製 し、 更に塩基で処理することからなる、 一般式 （1 6)
Figure imgf000011_0001
(式中、 Xは、 上記と同じ基を表す。 *は、 不斉炭素を表す。 ） で表される光学 活性ォキシラン誘導体の製造方法でもある。
本発明は、 更にまた、 上記一般式 （7) で表される置換ァセチルビリジン誘導 体に、 上記一般式 （1 1 ) で表されるカルボン酸を塩基と 4級アンモニゥム塩の 共存下に反応させ上記一般式 （1 2) で表される置換ァセチルビリジン誘導体を 調製し、 これをェナンチォ選択的に還元して上記一般式 （1 3) で表される光学 活性ァシロキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を調製し、 これを加溶媒分解す ることからなる、 上記一般式 （1 4) で表される光学活性ジヒ ドロキシェチルピ リジン誘導体の製造方法でもある。 _
本発明は、 更にまた、 上記一般式 （1 2) で表される置換ァセチルビリジン誘 導体を塩基の存在下、 ェナンチォ選択的に還元しつつ加溶媒分解し、 上記一般式 (1 4) で表される光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を直接取得する ことからなる、 光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体 （1 4) の製造方法 でもある。
以下、 本発明を詳述する。 発明の詳細な 示
本発明の製造方法を用いることにより、 一般式 （1 6) で表される光学活性ォ キシラン誘導体および一般式 （1 4) で表される光学活性ジヒ ドロキシェチルピ リジン誘導体の両方を製造することができる。 その概要は基本的に下記の反応式 で表される。 光学活性ォキシラン誘導体を製造するための工程は、 （a) —般式 (6) で表される置換ニコチン酸エステルを一般式 （7) で表される置換ァセチ ルビリジン誘導体に変換する工程、 （b ) これを一般式 （1 5) で表される光学 活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体に還元する工程、 及び、 （c ) 更に、 塩基 で処理することにより光学活性ォキシラン誘導体に誘導する工程の 3工程からな る。 - 一方、 光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を製造するための工程は、
(a) 上記と同様、 一般式 （6) で表される置換ニコチン酸エステルを一般式 （ 7) で表される置換ァセチルビリジン誘導体に変換する工程、 （d) これを一般 式 （1 2) で表されるァシロキシ基で置換された置換ァセチルビリジン誘導体に 変換する工程、 （b) 上記と同様に、 これを一般式 （ 1 3) で表される光学活性 ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体に還元する工程、 及び、 （e) 更に、 ァシロキ シ基を加溶媒分解することにより光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体に 誘導する工程の 4工程からなる。 以下に順を追って、 これら （a ) から （e) の 各工程を詳細に説明する。
Figure imgf000012_0001
1. 工程 "）
本工程 （a ) は、 上記一般式 （5) で表されるハロゲン化酢酸誘導体に塩基を 作用させてエノラートを調製し、 これを上記一般式 （6) で表される置換ニコチ ン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付すことにより、 上記一般式 （7) で表 される置換ァセチルビリジン誘導体を調製することからなる。
一般式 （5 ) 又は （7) において、 Y2は、 ハロゲンを表す。 具体的には、 フ ッ素、 塩素、 臭素、 ヨウ素等を挙げることができる。 好ましくは、 塩素又は臭素 であり、 より好ましくは塩素である。
また、 一般式 （5) において、 Zは、 水素、 アルカリ金属、 ハロゲン化アル力 リ土類金属、 又は、 炭素数 1〜 1 0のシリル基を表す。 具体的には、 水素、 リチ ゥム、 ナトリウム、 カリウム、 塩化マグネシウム、 臭化マグネシウム、 塩化カル シゥム、 ト リメチルシリル基、 t e r t —ブチルジメチルシリル基、 フエニルジ メチルシリル基等を挙げることができるが、 これらに限定されるものではない。 好ましくは、 ナトリゥム又は塩化マグネシウムである。
一般式 （5 ) で表されるハロゲン化酢酸誘導体としては、 クロ口酢酸ナトリウ ム、 ブロモ酢酸ナトリウム、 塩化クロ口酢酸マグネシウム、 及び、 臭化ブロモ齚 酸マグネシウムが好ましい。 また、 あらかじめクロ口酢酸ナトリウムと塩化マグ ネシゥムを混合し塩化ナトリゥムを析出させて系中で調製した塩化ク口口酢酸マ グネシゥムを用いることもできる。
一般式 （5 ) で表されるハロゲン化酢酸誘導体の使用量は、 一般式 （6 ) で表 される置換ニコチン酸エステルに対して、 1〜1 0モル当量であり、 好ましくは 1〜 3モル当量である。
一般式 （5 ) で表されるハロゲン化酢酸誘導体からエノラートを調製する際に 用いられる塩基としては特に限定されず、 例えば、 リチウムアミ ド、 ナトリウム アミ ド、 リチウムジイソプロピルアミ ド、 塩化マグネシウムジイソプロピルアミ ド、 臭化マグネシウムジイソプロピルアミ ド、 塩化マグネシウムジシクロへキシ ルアミ ド等の金属アミ ド類； メチルリチウム、 n—ブチルリチウム、 メチルマグ ネシゥムブロミ ド、 i —プロピルマグネシウムクロリ ド、 t e r t—ブチルマグ ネシゥムク口リ ド等のアルキル金属類；ナトリゥムメ トキシド、 マグネシウムェ トキシド、 カリウム t e r t —ブトキシド等の金属アルコキシド；水素化リチウ ム、 水素化ナトリウム、 水素化カリウム、 水素化カルシウム等の金属水素化物等 を挙げることができる。 なかでも好ましいものは、 一般式 （8 )
Q
R5 ( 8 )
で表されるマグネシウムアミ ドである。 一般式 （8 ) において、 R 4及び R 5は、 独立して、 炭素数 1〜1 0のアルキル基又は炭素数 1〜 1 0のシリル基を表す。 R 4と R 5は同一でもよく、 異なっていてもよい。 具体的には、 メチル基、 ェチ ル基、 i —プロピノレ基、 t e r t —ブチル基、 n—ォクチル基、 トリメチルシリ ル基、 トリェチルシリル基、 フエ二ルジメチルシリル基等を挙げることができる 、 これらに限定されるものではない。 好ましくは、 R 4と R 5のそれぞれが、 イソプロピル基を表す。 また、 Qは、 ハロゲンを表す。 好ましくは、 塩素、 臭素 又はヨウ素であり、 より好ましくは塩素である。
なお、 一般式 （8 ) で表されるマグネシウムアミ ドは、 安価で入手容易な第 2 ァミンと、 グリニャール （G r i g n a r d ) 試薬から、 公知の方法 （例えば、 特開平 8— 5 2 3 4 2 0号の明細書に記載の方法） で容易に調製することができ る。
このような塩基の使用量は、 一般式 （6 ) で表される置換ニコチン酸エステル に対して、 1〜 1 0モル当量であり、 好ましくは 2〜6モル当量である。
上記一般式 （6 ) 又は （ 7 ) において、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素 数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 具体的には、 水素、 フッ素、 塩素、 臭素、 ヨウ素、 水酸基、 ァセチルォキシ基、 ベンゾィルォキシ基、 メ トキシ基、 ブトキシ基、 ベンジルォ キシ基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基、 ベンゾィルァミノ基、 フタロイルァミノ 基、 ジメチルァミノ基、 ジベンジルァミノ基、 ベンジルォキシカルボニルァミノ 基、 t e r t —ブチルォキシカルボニルァミノ基、 エトキシカルボニルァミノ基 等を挙げることができるが、 これらに限定されるものではない。
なかでも好ましいものは、 水素、 塩素、 臭素、 ヨウ素等のハロゲン、 水酸基、 アミノ基、 又は、 ァセチルァミノ基、 ベンゾィルァミノ基、 フタロイルァミノ基、 ジメチルァミノ基、 ジベンジルァミノ基、 ベンジルォキシカルボニルァミノ基、 t e r t —ブチルォキシカルボニルァミノ基、 エトキシカルボニルァミノ基等の 置換アミノ基である。 より好ましいものは、 水素、 塩素、 あるレ、は、 アミノ基、 又は、 ァセチルァミノ基等の置換アミノ基である。 特に、 水素、 塩素、 ァセチル ァミノ基が好ましい。
また、 一般式 （6 ) において、 R 3は、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素 数 1〜 1 0のァラルキル基を表す。 具体的には、 メチル基、 ェチル基、 t e r t 一ブチル基、 フエニル基、 ベンジル基、 p —メ トキシベンジル基等が挙げること ができる力 これらに限定されるものではない。 好ましくは、 メチル基、 ェチル 基等の低級アルキル基である。
本工程 （a ) において、 ハロゲン化酢酸誘導体、 塩基及び置換ニコチン酸エス テルの混合順序は任意であるが、 例えば、 置換ニコチン酸エステルとハロゲン化 WO 00/48997 PCT/JP00扁 61 —-
13
酢酸誘導体の混合溶液に対して塩基の溶液を滴下することで、 エノラー卜の調製、 及び、 エノラ一トと置換ニコチン酸エステルとの反応を一度に行うことができる。 工程 （a ) において用いられる反応溶媒は、 非プロ トン性有機溶媒が好ましい。 非プロ トン性有機溶媒としては特に限定されず、 例えば、 ベンゼン、 トルエン、 n—へキサン、 シクロへキサン等の炭化水素系溶媒； ジェチルエーテル、 テトラ ヒ ドロフラン （T H F ) 、 1， 4—ジォキサン、 メチル t —ブチルェ一テル、 ジ メ トキシェタン、 エチレングリコ一ルジメチルエーテル等のエーテル系溶媒；塩 化メチレン、 クロ口ホルム、 1， 1 , 1— トリクロロェタン等のハロゲン系溶媒
； ジメチルホルムアミ ド、 N—メチルピロリ ドン、 へキサメチル 1；ン酸トリアミ ド等の非プロ トン性極性溶媒等を挙げることができる。 これらは単独で用いても よく、 2種以上を併用してもよい。 好ましくは、 ベンゼン、 トルエン、 n—へキ サン、 シクロへキサン等の炭化水素系溶媒； ジェチルエーテル、 テトラヒ ドロフ ラン、 1， 4—ジォキサン、 メチル t —ブチルェ一テル、 ジメ トキシェタン、 ジ エチレングリコールジメチルェ一テル等のエーテル系溶媒である。
その反応温度としては、 一 8 0 °C〜 1 0 0 °Cが好ましく、 より好ましくは一 2 0 °C〜 6 0 °Cである。
本工程 （a ) の酸処理で用いられる酸は、 一般的な無機酸又は有機酸であれば よく、 例えば、 塩酸、 硫酸、 硝酸、 酢酸、 クェン酸等を挙げることができる。
この酸処理は、 例えば、 塩基を中和するのに充分な量の酸を 0 °Cから室温程度 で反応液と混合し、 数分から数時間程度攪拌して行うことができる。
本工程 （a ) において、 一連の反応が終了した後、 反応液から生成物を取得す るためには、 一般的な後処理を行えばよい。 例えば、 酸処理の後、 酢酸ェチル、 ジェチルェ一テル、 塩化メチレン、 トルエン、 へキサン等の一般的な抽出溶媒を 用いて抽出操作を行う。 得られた抽出液から、 减圧加熱等の操作により反応溶媒 及び抽出溶媒を留去すると、 目的物が得られる。 このようにして得られる目的物 は、 ほぼ純粋なものであるが、 晶析精製、 分別蒸留、 カラムクロマトグラフィー 等の一般的な手法により精製を行って、 更に純度を高めてもよい。
2 . 工程 （： - WO 00/48997 PCT/JP00扁 61 —-
14
本工程 （b ) は、 上記一般式 （9 ) で表される置換ァセチルビリジン誘導体を ェナンチォ選択的に還元することにより、 上記一般式 （ 1 0 ) で表される光学活 性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を調製することからなる。
本発明のェナンチォ選択的な還元反応において使用できる還元基質は、 一般式
( 9 )
Figure imgf000016_0001
で表される置換ァセチルビリジン誘導体である。 一般式 （9 ) において Xは、 水 素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のァ ルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 具体的には、 水素、 フッ素、 塩素、 臭素、 ヨウ素、 水酸基、 ァセチルォキシ基、 ベンゾィルォキシ基、 メ トキ シ基、 ブトキシ基、 ベンジルォキシ基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基、 ベンゾィ ルァミノ基、 フタロイルァミノ基、 ジメチルァミノ基、 ジベンジルァミノ基、 ベ ンジルォキシカルボニルァミノ基、 t e r t —ブチルォキシカルボニルァミノ基、 ェトキシカルボニルァミノ基等を挙げることができるが、 これらに限定されるも のではない。
なかでも好ましいものは、 水素、 塩素、 臭素、 ヨウ素等のハロゲン、 水酸基、 アミノ基、 又は、 ァセチルァミノ基、 ベンゾィルァミノ基、 フタロイルァミノ基、 ジメチルァミノ基、 ジベンジルァミノ基、 ベンジルォキシカルボニルァミノ基、 t e r t—ブチルォキシカルボニルァミノ基、 エトキシカルボニルァミノ基等の 置換アミノ基である。 より好ましいものは、 水素、 塩素、 あるいは、 アミノ基、 又は、 ァセチルァミノ基等の置換アミノ基である： 特に、 水素、 塩素、 ァセチル ァミノ基が好ましい。
一般式 （9 ) において Y 1は、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォ キシ基、 炭素数 1〜 1 0のスルホニルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 炭素数 1〜 1 5のアルキルアミノ基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキルァ ミノ基、 スルファニル基、 炭素数 1〜 1 0のアルキルスルファニル基、 又は、 炭 素数 1〜 1 0のァラルキルスルファニル基を表す。 具体的には、 水素、 フッ素、 塩素、 臭素、 ヨウ素、 水酸基、 ァセチルォキシ基、 ベンゾィルォキシ基、 トリフ ノレォロ _7セチルォキシ基、 メタンス /レホニルォキシ基、 ベンゼンスノレホニ/レオキ シ基、 トルエンスルホニルォキシ基、 メ トキシ基、 t e r t一ブチルォキシ基、 ベンジルォキシ基、 アミノ基、 ジメチルァミノ基、 ェチルァミノ基、 フエニルェ チルァミノ基、 p—二トロフエニルェチルァミノ基、 フエノキシェチルァミノ基 等を挙げることができるが、 これらに限定されるものではない。
好ましくは、 塩素、 臭素、 ヨウ素等のハロゲン；水酸基； ァセチルォキシ基、 ベンゾィルォキシ基等のァシルォキシ基； メタンスルホニルォキシ基、 ベンゼン スルホニルォキシ基、 トルエンスルホニルォキシ基等のスルホニルォキシ基であ り、 より好ましくは、 ハロゲン、 水酸基、 及び、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ 基である。 ハロゲンの中では、 塩素が好ましい。
一般式 （9 ) において Y 1がハロゲンである置換ァセチルビリジン誘導体 [一 般式 （7 ) ] は、 前述の工程 （a ) で得られるものをそのまま利用できる。 一般 式 （9 ) において Y 1がハロゲンである置換ァセチルビリジン誘導体は、 公知の 方法等を用いて一般式 （7 ) から誘導することができる。 例えば、 一般式 （7 ) で表される置換ァセチルビリジン誘導体に対して、 アルコキシァ-オン、 ァシル ォキシァニオン又はアルキルスルファニルァニオンを反応させると、 それぞれ、 γ 1がアルコキシ基、 ァシルォキシ基又はアルキルスルファニル基である置換ァ セチルピリジン誘導体が得られる。 また、 このようにしてァシルォキシ基等で置 換された置換ァセチルビリジン誘導体を加水分解すると、 Y 1が水酸基である置 換ァセチルピリジン誘導体が得られる。
特に、 Y 1がァシルォキシ基である置換ァセチルビリジン誘導体、 すなわち一 般式 （1 2 )
Figure imgf000017_0001
で表される置換ァセチルビリジン誘導体は、 後述する新規な方法にて一般式 （7 ) の置換ァセチルビリジン誘導体から誘導できる。 一般式 （1 2 ) において、 X は、 前記と同じである。 R 6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5 のァラ 2レキル基、 又は、 炭素数 6〜 1 6のァリ一ル基を表す。 具体的には、 メチ ル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i —プロピル基、 n—ブチル基、 i 一ブチル 基、 t e r t —ブチル基、 n—ォクチル基、 ベンジル基、 ァニシル基、 p—ニト 口べンジル基、 フエニル基、 p—トリル基、 ナフチル基、 等を挙げることができ るがこれらに限定されるものではない。 好ましくはメチル基、 ェチル基、 n—プ 口ピル基、 i 一プロピル基、 n—ブチル基、 t e r t—ブチノレ基、 フエニル基で あり、 より好ましくはメチル基、 t e r t —ブチル基、 フエニル基であり、 更に 好ましぐは t e r t—プチル基である。
工程 （b ) におけるェナンチォ選択的な還元は、 生物的又は化学的な手法で行 われる不斉還元である。 生物的な不斉還元としては、 微生物又はその還元酵素に よる不斉還元を挙げることができる。 また、 化学的な不斉還元としては、 ルテニ ゥム錯体と光学活性ァミンと塩基とで調製される触媒による水素移動型還元； 口 ジゥム、 ルテニウム、 イリジウム又はパラジウムと、 キラルなホスフィン配位子 からなる不斉触媒を用いた不斉水素化； 光学活性なアルファアミノ酸から誘導さ れるァミノアルコールを不斉配位子とするボラン還元等を挙げることができる。 なかでも、 微生物を用いた還元と水素移動型還元が好ましい。
ェナンチォ選択的な還元に微生物を用いる場合は、 基質である置換ァセチルビ リジン誘導体を （R ) 選択的に還元し、 （R ) —ヒ ドロキシェチルピリジン誘導 体を優先的に得ることができる。 この場合は、 微生物由来のカルボニル還元酵素、 又は、 該カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物の培養物若しくは該処理物 を用いて還元反応を行うことができる。
R選択的な還元において、 カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物として は、 ァシビア属、 キャンディダ属、 クリプトコッカス属、 デバリオマイセス属、 グイラ一モンデラ属、 ハンゼヌラ属、 メッニコビア属、 ピキア属、 ロ ドトルラ属、 ロ ドスポリジゥム属、 サッカロマイコプシス属、 シュヮニォマイセス属、 スポリ ディオボラス属、 スポロボロマイセス属、 トルラスポラ属、 ャロビア属に属する 微生物が使用しうる。 具体的には例えば、 ァシビア ' ゴシピィ、 キャンディダ ·カティヌラータ、 キ ヤンディダ · フルクタス、 キャンディダ 'ガラクタ、 キャンディダ · グロペンジ ヱセリィー、 キャンディダ ·グイラ一モンディ一、 キャンディダ .ヘムロニー、 キャンディダ 'ホルミィ一、 キャンディダ ·インタ一メディア、 キャンディダ ' マグノリエ、 キャンディダ .マルトーサ、 キャンディダ . メリニー、 キャンディ ダ 'パラプシロシス、 キャンディダ 'ルゴーサ、 キャンディダ ' ソノレンシス、 キャンディダ ' トロピカリス、 キャンディダ 'ュティリス、 キャンディダ .ベル サティリス、 クリプトコッカス 'アルビダス 'ノくノレ 'アルビダス、 デバリオマイ セス ·ノヽンセニー ' ノくラエティ ' フアブリ一、 デバリォマイセス ノヽンセニー、 デバリオマイセス 'マラマ、 デバリオマイセス 'ネパレンシシ、 グイラーモンデ ラ .セレノスポラ、 ハンゼヌラ 'グ^^コジーマ、 ノヽンゼヌラ 'サッノレヌス、 メッ ニコビア ' レゥカウブイ一、 ピキア 'ボビス、 ピキア . ファリノ一サ、 ロ ドトノレ ラ · グルティニス .ノくノレ · ダイレネンシス、 口 ドトルラ · グラミニス、 口 ドトル ラ . ミヌタ、 ロ ドトルラ .ルブラ、 ロ ドスポリジゥム .ディオボバタム、 ロ ドス ポリジゥム 'スファェロカ一パム、 ロ ドスポリジゥム ' トルロイデス、 サッカロ マイコプシス .マランガ、 シュヮニォマイセス .カステリ一、 スポリディオボラ ス ' ジョンソ二一、 スポロボロマイセス 'ノ、。ラロセウス、 スポロボロマイセス ' サルモニカラー、 トルラスボラ 'デルブルエキー、 ャロビア ' リポリティ力など を用いることができる。 特に好ましくは、 キャンディダ *マグノリエ I FOO 70 5である。
これら微生物は一般に、 入手または購入が容易な保存株から得ることができる。 また、 自然界から分離することもできる。 また上記酵素の産生能を有する微生物 としては、 野生株または変異株のいずれでもあり得る。
あるいは、 上記酵素の産生能を有する微生物として、 細胞融合または遺伝子操 作等の遺伝学的手法により誘導される微生物も用いられ得る。 遺伝子操作された 本酵素生産する微生物は、 例えば、 これらの酵素を単離及び Zまたは精製して酵 素のァミノ酸配列の一部または全部を決定する工程、 このアミノ酸配列に基づい て酵素をコードする DN A配列を得る工程、 この DN Aを他の微生物に導入して 組み替え微生物を得る工程、 及びこの組み替え微生物を培養して、 本酵素を得る 工程を含有する方法により得られ得る （特願平 1 1一 3 4 5 5 4 1号） 。
例えば、 キャンディダ属に属する微生物由来である力ルポニル還元酵素をコ一 ドする DNA、 及び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有する酵素をコー ドする D N Aを有するプラスミ ドで形質転換された形質転換細胞が挙げられる。 好ましくは、 前記補酵素を再生する能力を有する酵素がグルコース脱水素酵素で ある上記形質転換細胞、 前記グルコース脱水素酵素がバシラス · メガテリゥム （ B a c i l l u a s m e g a t e r i um) 由来である上記形質転換細胞、 前 記プラスミ ドが p NT C RGである上記形質転換細胞、 形質転換細胞が大腸菌で ある上記形質転換細胞等が挙げられる。 より好ましくは、 E. c o 1 i HB 1 0 1 (p NT C RG) 受託番号 F E RM— B P 6 8 9 8 [寄託機関：通商産業 省工業技術院生命工学工業技術研究所 （日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番 3号 ) 、 寄託ョ : 1 9 9 9年 9月 2 8日] が挙げられる。
これらの微生物の培養には、 通常これらの微生物が資化しうる栄養源であれば でも使用しうる。 たとえば、 グルコース、 シュ一クロース、 マルト一ス等の糖 類、 乳酸、 酢酸、 クェン酸、 プロピオン酸等の有機酸類、 エタノール、 グリセリ ン等のアルコール類、 パラフィン等の炭化水素類、 大豆油、 菜種油等の油脂類、 またはこれらの混合物等の炭素源や、 硫酸アンモニゥム、 リン酸アンモニゥム、 尿素、 酵母エキス、 肉エキス、 ペプトン、 コ一ンスチ一プリカ一等の窒素源を混 合することもできる。 更に、 その他の無機塩、 ビタミン類等の栄養源を適宜混合 することもできる。
微生物の培養は通常一般の条件により行なうことができ、 例えば、 ρ Η4. 0 〜9. 5、 温度範囲 20°C〜4 5°Cの範囲で、 好気的に 1 0〜9 6時間培養する。 還元基質に微生物を反応させる場合においては、 通常、 上記微生物の培養液をそ のまま反応に使用することもできるが、 培養液の濃縮物も用いることができる。 また、 培養液中の成分が反応に悪影響を与える場合には、 培養液を遠心分離等に より処理して得られる菌体または菌体処理物を使用することが好ましい。
上記微生物の菌体処理物としては特に限定されず、 例えば、 アセ トンや五酸化 二リンによる脱水処理またはデシケ一タ一や扇風機を利用した乾燥によって得ら れる乾燥菌体、 界面活性剤処理物、 溶菌酵素処理物、 固定化菌体または菌体を破 砕した無細胞抽出標品などをあげることができる。 更に、 培養物より不斉還元反 応を触媒する酵素を精製し、 これを使用してもよい。
還元反応の際には、 基質である置換ァセチルビリジン誘導体を反応の初期に一 括して添加してもよく、 反応の進行にあわせて分割して添加してもよい。
また、 反応時の温度は通常 1 0〜6 0°C、 好ましくは、 2 0〜4 0°Cであり、 反応時の p Hは 2. 5〜9、 好ましくは、 5〜9である。
反応液中の微生物の濃度はこれらの基質を還元する能力に応じ適宜決定すれば よい。 また、 反応液中の基質濃度は 0. 0 1〜50% (W/V) が好ましく、 よ り好ましくは、 0. 1〜3 0%である。
反応は通常、 振とうまたは通気攪拌しながら行なう。 反応時間は基質濃度、 微 生物の濃度およびその他の反応条件により適宜決定される。 通常、 2〜1 6 8時 間で反応が終了するように各条件を設定することが好ましい。
還元反応を促進させるために、 反応液にグルコース、 エタノールなどのエネル ギ一源を 1〜3 0 %の割合で加えると優れた結果が得られるので好ましい。 また、 一般に生物学的方法による還元反応に必要とされている還元型ニコチンアミ ド アデニンジヌクレオチド (NADH) 、 還元型ニコチンアミ ド .アデニンジヌク レオチドりん酸 （NAD P H) 等の補酵素を添加することにより、 反応を促進さ せることもできる。 具体的には、 反応液に直接これらを添加してもよく、 NAD H、 NADPHを生成する反応系を酸化型の補酵素とともに反応液に添加しても よい。 例えば、 ギ酸脱水素酵素がギ酸から二酸化炭素と水とを生成する際に NA Dを N A D Hに還元する反応系や、 グルコース脱水素酵素がグルコースからグル コノラク トンを生成する際に NADまたは NAD Pを NADHまたは NAD P H にそれぞれ還元する反応系を利用することができる。
また、 トリ トン （ナカライテスク社製） 、 スパン （関東化学社製） 、 ツイ一ン (ナカライテスク社製） などの界面活性剤を反応液に添加することも効果的であ る。 さらに、 基質およびノまたは還元反応の生成物であるアルコール体による反 応の阻害を回避する目的で、 酢酸ェチル、 酢酸ブチル、 イソプロピルエーテル、 トルエンなどの水に不溶な有機溶媒を反応液に添加してもよい。 さらに、 基質の 溶解度を高める目的で、 メタノール、 エタノール、 アセトン、 テトラヒ ドロフラ ン、 ジメチルスルホキシドなどの水に可溶な有機溶媒を添加することもできる。 還元反応により生成した光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体 （1 0 ) の 採取は、 反応液から直接、 あるいは菌体等を分離後、 酢酸ェチル、 トルエン等の 溶剤で抽出し、 脱溶剤することにより行なう。 さらに、 再結晶操作、 シリカゲル カラムクロマ トグラフィー等により精製すれば高純度の光学活性ヒ ドロキシェチ ルビリジン誘導体を得ることができる。
一方、 ェナンチォ選択的な還元として水素移動型還元を行う場合は、 使用する 触媒の選択により基質である置換ァセチルビリジン誘導体を （R ) または （S ) 選択的に還元し、 （R ) —または （S ) —ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を優 先的に得ることができる。
水素移動型還元を行うに際しては、 還元反応の事前に触媒を調製する必要があ る。 ここで使用される触媒は、 例えばルテニウム錯体と光学活性ァミンと塩基を 混合して調製される触媒であり、 例えば、 特開平 1 0— 1 3 0 2 8 9に記載され ている方法で調製することができる。
ルテニウム錯体は、 2価のルテニウムァ一レン錯体が好ましく、 なかでも、 四 塩化ビス （ r? 6—ベンゼン） 二ルテニウム、 四塩化ビス （ 6— ρ—シメン） 二 ルテニウム、 又は、 四塩化ビス （ 77 6—メシチレン） 二ルテニウムが特に好まし レ、。
光学活性ァミンは、 光学活性ジァミン類のモノスルホネートあるいは光学活性 アミノアルコ一ル類が好ましく、 1， 2—ジフエニルエチレンジァミンのスルホ ネート、 具体的には、 （S， S ) — Ν— ρ—トシルー 1， 2—ジブェニルェチレ ンジァミン、 （R， R) — N— p—トシルー 1， 2—ジフエニルエチレンジアミ ン、 （S， S ) 一 N—ベンゼンスルホ二ルー 1， 2—ジフエニノレエチレンジアミ ン、 （R， R ) 一 N—ベンゼンスルホ二ノレ一 1， 2—ジフエニノレエチレンジアミ ン、 （S， S ) — N—メタンスルホ二ルー 1， 2—ジフエニルエチレンジァミン、 ( R , R ) —N—メタンスルホニル一 1 , 2—ジフエ二ルエチレンジァミン、 （ S , S ) —N—ト リフノレオロメタンスノレホニノレ一 1， 2—ジフエニグレエチレンジ ァミン、 （R， R ) —N— トリフルォロメタンスルホニル一 1， 2—ジフエ二ル エチレンジァミン、—等が挙げられる。 特に （S， S ) — N— p— トシル一 1， 2 21
—ジフエニルエチレンジァミン、 又は、 （R， R) — N— p—トシル一 1， 2— ジフユニルエチレンジァミンがより好ましい。
触媒調製の際に使用する塩基は、 有機または無機の一般的な塩基であり特に限 定されることはなレ、。 例えば、 n—ブチルリチウム、 水素化ナトリウム、 力リウ ム tーブトキシド、 ナトリウムエトキシド、 炭酸ナトリウム、 炭酸カリウム、 炭 酸水素ナトリゥム、 炭酸水素力リゥム、 水酸化ナトリゥム、 水酸化力リゥム、 水 酸化カルシウム、 水酸化リチウム、 水酸化バリウム、 水酸化マグネシウム、 酢酸 ナトリウム、 酢酸カリウム、 アンモニア、 トリェチルァミン、 ピリジン、 ピペリ ジン、 N， N—ジメチルァミノピリジン等である。 好ましくは水酸化ナトリウム または水酸化カリウムである。 塩基は水溶液として添加しても良い。
水素移動型還元の触媒を調製するためには、 上記のルテニウム錯体と光学活性 ァミンと塩基を適当な溶媒中、 任意の順序で混合すればよい。 ルテニウム錯体ノ 光学活性アミン 塩基の混合モル比は、 ルテニウム換算で 1 ： 1 ： 1が基本であ るが、 光学活性ァミンおよび塩基を過剰量使用しても差し支えない。 触媒調製時 の溶媒は、 特に限定されないが、 操作面の効率性を考慮して後述する還元反応時 の溶媒と同じものを用いるのが好ましい。 触媒調製時の温度は 0〜 1 0 o °c、 好 ましくは 1 5〜6 0 °Cである。 触媒調製時間は 1〜 1 0時間程度である。 尚、 こ のようにして調製した触媒を、 溶液のまま還元反応に供するのが簡便で好ましい 力 S、 溶液から結晶化させるなどして単離した触媒を還元反応に用いても差し支え ない。 触媒の便用量は還元基質である置換ァセチルビリジン誘導体に対し、 ルテ ニゥム換算で 0 . 0 0 1モル当量から 5モル当量である。
水素移動型の還元反応は、 例えば上記のようにして調製した触媒と基質である 置換ァセチルビリジン誘導体と水素移動源を混合して行うことができる。
水素移動源、 すなわち基質に対して水素供与体として作用する化合物は、 例え ば、 イソプロピルアルコール、 ベンゾヒ ドロール、 あるいは、 ギ酸またはギ酸の 塩が使用可能であり、 ィソプロピルアルコールが好ましい。
水素移動源は還元基質に対し 1モル当量以上必要であり、 1 0当量以上の大過 剰量用いるのが好ましい。 ィソプロピルアルコールを水素移動源として用いる場 合は、 これを溶媒.として使用することが好ましい。 反応溶媒は任意の溶媒を使用できる。 例えば、 水； メタノール、 エタノール、 ブタノ一ル、 イソプロピルアルコール、 エチレングリ コ一ル、 メ トキシエタノー ル等のアルコール系溶媒； ジェチルァミン、 ピロリジン、 ピぺリジン等のアミン 系溶媒；ベンゼン、 トルエン、 シクロへキサン等の炭化水素系溶媒； ジェチルェ —テル、 テ トラヒ ドロフラン、 1， 4一ジォキサン、 メチル t —ブチルェ一テル、 ジメ トキシェタン等のェ一テル系溶媒；酢酸ェチル、 酢酸ブチル等のエステル系 溶媒； アセトン、 メチルェチルケトン等のケトン系溶媒；塩化メチレン、 クロ口 ホルム、 1， 1 , 1 — トリクロロェタン等のハロゲン系溶媒； ジメチルホルムァ ミ ド、 ァセトニトリル等の含窒素系溶媒； ジメチルスルホキシド、 N—メチルビ ロ リ ドン、 へキサメチルリン酸トリアミ ド等が挙げられる。 イソプロピルアルコ —ルが最も好ましい。
反応温度は、 0〜1 5 0 °Cで、 好ましくは 1 5〜6 0 Cである。
反応の終点は、 反応中の反応液を薄層クロマトグラフィー、 高速液体クロマト グラフィ一、 ガスクロマトグラフィー等で分析し、 基質である置換ァセチルピリ ジン誘導体の減少とヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の生成を観測して判断でき る。
なお、 水素移動型還元の反応基質として、 一般式 （1 2 )
Figure imgf000024_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 R 6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6 〜 1 6のァリール基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体を用い、 水素移動源にィソプロピルアルコールを使用してェナンチォ選択的に還元をする 際に、 塩基を反応系中に共存させると、 一般式 （1 4 )
Figure imgf000025_0001
(式中、 Xは前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表される光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を直接得ることができる。
光学活性ジヒ ドロキシピリジンを直接得るために共存させる塩基は特に限定さ れず、 無機または有機塩基、 例えば、 n—ブチルリチウム、 水素化ナトリウム、 カリウム t —ブトキシド、 ナトリウムエトキシド、 炭酸ナトリウム、 炭酸力リウ ム、 炭酸水素ナトリゥム、 炭酸水素力リゥム、 水酸化ナトリウム、 水酸化力リゥ ム、 水酸化カルシウム、 水酸化リチウム、 水酸化バリウム、 水酸化マグネシウム、 酢酸ナトリウム、 酢酸カリウム、 アンモニア、 トリェチルァミン、 ピリジン、 ピ ペリジン、 N， N—ジメチルァミノピリジン等である。 好ましくは水酸化ナトリ ゥムまたは水酸化カリゥムである。 操作面の効率性から触媒調製時に塩基を過剰 量添加しておき、 その過剰分をもって光学活性ジヒ ドロキシピリジンを直接得る ための塩基とするのが好ましい。 塩基の使用量は基質である置換ァセチルピリジ ン誘導体に対し、 0 . 1〜 1 0モル当量が好ましい。 塩基は水溶液として添加し ても良い。
反応終了後、 反応液から生成物を取得するためには、 一般的な後処理を行えば よい。 例えば、 反応終了後の反応液に水を加え、 一般的な抽出溶媒、 例えば酢酸 ェチル、 ジェチルェ一テル、 塩化メチレン、 トルエン、 へキサン等を用いて抽出 操作を行う。 得られた抽出液から、 減圧加熱等の操作により反応溶媒及び抽出溶 媒を留去すると、 目的物が得られる。 また、 反応終了後、 直ちに減圧加熱等の操 作により反応溶媒を留去してから同様の操作を行ってもよい。 このようにして得 られる目的物は、 ほぼ純粋なものであるが、 晶析精製、 分別蒸留、 カラムクロマ トグラフィ一等一般的な手法により精製を加え、 さらに純度を高めてもよい。 この工程により、 （R ) 体又は （S ) 体の、 一般式 （8 ) で表される光学活性 ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体が得られる。 好ましい光学活性ヒ ドロキシェチ ルビリジン誘導体は、 （R ) の絶対立体配置を有するものである。 3 . 工程 （c )
本ェ§ ( c ) は、 上記一般式 （1 5 ) で表される光学活性ヒ ドロキシェチルピ リジン誘導体を塩基で処理することにより、 上記一般式 （ 1 6 ) で表される光学 活性ォキシラン誘導体を製造することからなる。
本工程 （c ) で用いられる塩基は、 無機塩基又は有機塩基である。 具体的には、 水酸化リチウム、 水酸化ナトリウム、 水酸化カリウム、 水酸化カルシウム等の金 属水酸化物；炭酸ナトリウム、 炭酸水素ナトリゥム、 炭酸力リゥム、 炭酸水素力 リウム、 炭酸セシウム等の炭酸金属類； メチルリチウム、 n—ブチルリチウム、 メチルマグネシウムブロミ ド、 i —プロピルマグネシウムクロリ ド、 t e r t— ブチルマグネシウムクロリ ド等のアルキル金属類； リチウムアミ ド、 ナトリウム アミ ド、 リチウムジイソプロピルアミ ド、 塩化マグネシウムジイソプロピルアミ ド、 臭化マグネシウムジイソプロピルアミ ド、 塩化マグネシウムジシクロへキシ ルァミ ド等の金属ァミ ド類；ナトリウムメ トキシド、 マグネシウムエトキシド、 カリウム t e r t —ブトキシド等の金属アルコキシド；水素化リチウム、 水素化 ナトリウム、 水素化カリウム、 水素化カルシウム等の金属水素化物； トリェチル ァミン、 ェチルジイソプロピルァミン、 N—メチルピロ リジン、 ジメチルァニリ ン、 ピリジン等のアミン類を挙げることができるが、 これらに限定されるもので はない。 好ましくは、 水酸化リチウム、 水酸化ナトリウム、 水酸化カリウム、 水 酸化カルシウム等の金属水酸化物、 及び、 炭酸ナトリウム、 炭酸水素ナトリウム、 炭酸カリウム、 炭酸水素カリウム、 炭酸セシウム等の炭酸金属類である。
工程 （c ) で用いられる塩基の使用量は、 一般式 （1 5 ) で表される光学活性 ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体に対して、 1〜1 0モル当量であり、 好ましく は、 ；！〜 3モル当量である。
工程 （c ) で使用できる反応溶媒は、 水、 有機溶媒、 又は、 水と有機溶媒の混 合溶媒である。 上記有機溶媒としては特に限定されず、 例えば、 メタノール、 ェ タノール、 ブタノール、 イソプロピルアルコール、 エチレングリ コール、 メ トキ シエタノール等のアルコール系溶媒；ベンゼン、 トルエン、 シクロへキサン等の 炭化水素系溶媒； ジェチルェ一テル、 テ トラヒ ドロフラン （T H F ) 、 1， 4 - WO 00/48997 PCT/JP00/00861 ―. _
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ジォキサン、 メチル t 一ブチルエーテル、 ジメ トキシェタン等のェ一テル系溶媒 ；酢酸ェチル、 酢酸ブチル等のエステル系溶媒；アセ トン、 メチルェチルケトン 等のケ トン系溶媒；塩化メチレン、 クロ口ホルム、 1， 1， 1—トリクロ口エタ ン等のハロゲン系溶媒； ジメチルホルムアミ ド、 ァセトニドリル等の含窒素系溶 媒； ジメチルスルホキシド、 N—メチルピロリ ドン、 へキサメチルリン酸トリア ミ ド等の非プロ トン性極性溶媒等が挙げられる。 これらは単独で用いてもよく、 2種以上を併用してもよい。 好ましくは、 水、 アセ トン、 ァセ トニ トリル及ぴテ トラヒ ドロフランである。
工程 （ c ) の反応温度は、 — 5 0 °C〜 1 0 0 °Cであり、 好ましぐは一 2 0 °C〜 3 0 °Cである。
反応終了後、 反応液から生成物を取得するためには、 一般的な後処理を行えば よい。 例えば、 反応終了後の反応液に水を加え、 酢酸ェチル、 ジェチルエーテル、 塩化メチレン、 トルエン、 へキサン等の一般的な抽出溶媒を用いて抽出操作を行 う。 得られた抽出液から、 減圧加熱等の操作により反応溶媒及び抽出溶媒を留去 すると、 目的物が得られる。 また、 反応終了後、 直ちに減圧加熱等の操作により 反応溶媒を留去してから同様の操作を行ってもよい。 このようにして得られる目 的物は、 ほぼ純粋なものであるが、 晶析精製、 分別蒸留、 カラムクロマトグラフ ィ一等一般的な手法により精製を加え、 さらに純度を高めてもよい。
4 . 工程 （d )
本工程 （d ) は、 工程 （a ) によって生成する一般式 （7 ) で表される置換ァ セチルピリジン誘導体に、 一般式 （1 1 )
Figure imgf000027_0001
で表されるカルボン酸を塩基と 4級アンモニゥム塩の共存下に反応させることを 特徴とする一般式 （1 2 ) で表される置換ァセチルビリジン誘導体を調製するこ とからなる。
一般式 （1 1 ) において、 R 6は、 炭素数 1〜1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6〜 1 6のァリ一ル基を表す。 具体的には、 具体的には、 メチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i —プロピル基、 n—ブチ ル基、 i 一ブチル基、 t e r t—ブチル基、 n—ォクチル基、 ベンジル基、 ァニ シル基、 p—二トロべンジル基、 フエニル基、 p—トリル基、 ナフチル基、 等を 挙げることができるがこれらに限定されるものではなレ、。 好ましくはメチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 i —プロピル基、 n—ブチル基、 t e r t —ブチル 基、 フエニル基であり、 より好ましくはメチル基、 t e r t —ブチル基、 フエ二 ル基であり、 更に好ましくは t e r t —ブチル基である。
本工程 （d ) におけるカルボン酸 （1 1 ) の使用量は、 一般式 （7 ) の置換ァ セチルピリジン誘導体に対して、 1〜5モル当量が好ましく、 1〜3モル当量が より好ましい。
本工程 （d ) で使用される塩基は、 一般式 （1 1 ) のカルボン酸と塩を形成す るものであれば良く、 有機または無機の一般的な塩基が使用できる。 例えば、 n —ブチルリチウム、 水素化ナトリウム、 カリウム t—ブトキシド、 ナトリウムェ トキシド、 炭酸ナトリウム、 炭酸カリウム、 炭酸水素ナトリウム、 炭酸水素カリ ゥム、 水酸化ナトリウム、 水酸化カリウム、 水酸化カルシウム、 水酸化リチウム、 水酸化バリウム、 水酸化マグネシウム、 トリェチルァミン、 ピリジン、 ピペリジ ン、 N， N—ジメチルァミノピリジン等であるが特にこれらに限定されることは ない。 好ましくは、 炭酸水素ナトリウム、 炭酸ナトリウム、 炭酸水素カリウム、 炭酸カリウムである。
本工程 （d ) における塩基の使用量は、 一般式 （7 ) の置換ァセチルビリジン 誘導体に対して、 1〜5モル当量が好ましく、 1〜 3モル当量がより好ましい。 また、 本工程 （d ) において上記のカルボン酸および塩基をそれぞれ反応系に 投入するかわりに、 カルボン酸および塩基を別途事前に混合して調製される塩を 投入しても差し支えない。 カルボン酸および塩基を別途事前に混合して調製され る塩とは、 例えば、 カルボン酸のナトリウム塩あるいはカリウム塩であり、 具体 的には、 酢酸ナトリウム、 酢酸カリウム、 ビバリル酸ナトリウム、 ビバリル酸力 リゥム、 安息香酸ナトリゥム、 安息香酸力リゥム、 等である。
本工程 （d ) において使用される 4級アンモニゥム塩は、 市販されており入手 容易なものであれば特に限定されることはない。 例えば、 ハロゲン化 4級アンモ 二ゥム、 水酸化 4級アンモニゥム、 硫酸 4級アンモニゥム、 酢酸 4級アンモニゥ ム、 等であり、 具体的には、 塩化テトラ n—プチルアンモニゥム、 臭化テトラ n ーブチルアンモニゥム、 ヨウ化テトラ n—ブチルアンモニゥム、 水酸化テトラ n —ブチルアンモニゥム、 硫酸水素テトラ n—ブチルアンモニゥム、 酢酸テトラ n —ブチルアンモ-ゥム、 塩化テトラメチルアンモェゥム、 臭化テトラメチルアン モニゥム、 塩化べンジルトリメチルアンモニゥム、 臭化べンジルトリメチルアン モニゥム、 等である。 好ましくは、 塩化テトラ n—プチルアンモニゥム、 臭化テ トラ n—ブチルアンモニゥムである。
本工程 （d ) における 4級アンモニゥム塩の使用量は、 一般式 （7 ) の置換ァ セチルピリジン誘導体に対して、 0 . 1〜 2モル当量が好ましく、 0 . 0 5〜0 . 2モル当量がより好ましい。
工程 （d ) の反応において、 各種有機溶媒を反応溶媒として使用できる。 上記 有機溶媒としては、 例えば、 ベンゼン、 トルエン、 シクロへキサン等の炭化水素 系溶媒； ジェチルエーテル、 テトラヒ ドロフラン、 1， 4—ジォキサン、 メチル t 一ブチルエーテル、 ジメ トキシェタン等のェ一テル系溶媒；酢酸ェチル、 酢酸 ブチル等のエステル系溶媒；塩化メチレン、 クロ口ホルム、 1， 1， 1—トリク ロロエタン等のハロゲン系溶媒： N， N—ジメチルホルムアミ ド、 ァセトアミ ド、 ホルムアミ ド、 ァセトニトリル等の含窒素系溶媒； ジメチルスルホキシド、 N— メチルピロリ ドン、 へキサメチルリン酸トリアミ ド等の非プロ トン性極性溶媒等 が挙げられる。 上記有機溶媒は、 単独で用いてもよく、 2種以上を併用してもよ レ、。 好ましくはジェチルェ一テル、 テトラヒ ドロフラン、 1， 4—ジォキサン、 メチル t —ブチルェ一テル、 ジメ トキシェタン等のエーテル系溶媒であり、 より 好ましくはテトラヒ ドロフランである。
本工程 （d ) の反応温度としては、 0 °C~ 1 5 0 °Cが好ましく、 より好ましく は 2 0 °C〜 8 0 Cである。
本工程 （d ) において、 反応が終了した後、 反応液から生成物を取得するため には、 一般的な後処理を行えばよい。 例えば、 少量の水を添加し、 酢酸ェチル、 ジェチルエーテル γ 塩化メチレン、 トルエン、 へキサン等の一般的な抽出溶媒を 用いて抽出操作を行う。 得られた抽出液から、 減圧加熱等の操作により反応溶媒 及び抽出溶媒を留去すると、 目的物が得られる。 このようにして得られる目的物 は、 ほぼ純粋なものであるが、 晶析精製、 分別蒸留、 カラムクロマ トグラフィー 等の一般的な手法により精製を行って、 更に純度を高めてもよい。
5 . 工程 （e )
本工程 （e ) では、 工程 （b ) で得られる光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン 誘導体のうち、 一般式 （1 3 ) で表される光学活性ァシロキシヒ ドロキシェチル ピリジン誘導体を加溶媒分解して、 一般式 （1 4 ) で表される光学活性ジヒ ドロ キシェチルピリジン誘導体を製造する。
本工程 （e ) の加溶媒分解は、 水若しくはプロ トン性の有機溶媒、 又は、 水若 しくはプロ トン性有機溶媒と非プロ トン性有機溶媒との混合溶媒中で反応を行う。 上記プロ トン性有機溶媒として、 例えば、 メタノール、 エタノール、 ブタノール、 イソプロピルアルコール、 エチレングリ コール、 メ トキシエタノール等の低級ァ ルコール系溶媒； ジェチルァミン、 ピロ リジン、 ピぺリジン等のアミン系溶媒； 等が挙げられる。 上記非プロ トン性有機溶媒として、 例えば、 ベンゼン、 トルェ ン、 シクロへキサン等の炭化水素系溶媒； ジェチルエーテル、 テトラヒ ドロフラ ン、 1， 4 _ジォキサン、 メチル t—ブチルェ一テル、 ジメ トキシェタン等のェ —テル系溶媒；酢酸ェチル、 酢酸ブチル等のエステル系溶媒； アセ トン、 メチル ェチルケトン等のケトン系溶媒；塩化メチレン、 クロ口ホルム、 1， 1， 1ート リク口ロェタン等のハロゲン系溶媒； ジメチルホルムァミ ド、 ァセトニトリル等 の含窒素系溶媒； ジメチルスルホキシド、 N—メチルピロリ ドン、 へキサメチル リン酸トリアミ ド等の非プロ トン性極性溶媒等が挙げられる。 好ましくは水又は 低級アルコールであり、 より好ましくは低級アルコールである。 特に好ましくは メタノールである。
本工程 （e ) の加溶媒分解では、 塩基を添加して反応を加速することができる。 加溶媒分解において使用できる塩基は、 無機または有機塩基、 例えば、 炭酸ナト リゥム、 炭酸力リゥム、 炭酸水素ナトリ ゥム、 炭酸水素力リゥム、 水酸化ナトリ ゥム、 水酸化カリウム、 水酸化カルシウム、 水酸化リチウム、 水酸化バリウム、 水酸化マグネシウム、 酢酸ナトリウム、 酢酸カリウム、 アンモニア、 トリェチル ァミン、 ピリジン、 ピぺリジン、 N， N—ジメチルァミノピリジン、 水酸化テト ラ n— チルアンモニゥム、 水酸化テトラメチルアンモニゥム、 水酸化べンジル トリメチルアンモニゥム、 等が挙げられる。 中でも、 水酸化テトラ n—プチルァ ンモニゥム、 水酸化テトラメチルアンモニゥム、 水酸化べンジルトリメチルアン モニゥム、 等の水酸化 4級アンモニゥムが塩基として好ましく、 水酸化テトラ n —ブチルアンモニゥムがより好ましい。
この場合の塩基の使用量は光学活性ァシロキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導 体に対し、 0 . 0 0 1当量から 5当量、 好ましくは、 0 . 0 1当量から 1 . 0当 量である。
工程 （e ) の反応温度は、 一 2 0 °Cから 1 0 0。C、 好ましくは一 1 0 °Cから 5 0 °Cである。
反応終了後、 反応液から生成物を取得するためには、 一般的な後処理を行えば よい。 例えば、 反応終了後の反応液に水を加え、 一般的な抽出溶媒、 例えば酢酸 ェチル、 ジェチルェ一テル、 塩化メチレン、 トルエン、 へキサン等を用いて抽出 操作を行う。 得られた抽出液から、 減圧加熱等の操作により反応溶媒及び抽出溶 媒を留去すると、 目的物が得られる。 また、 反応終了後、 直ちに減圧加熱等の操 作により反応溶媒を留去してから同様の操作を行ってもよい。 このようにして得 られる目的物は、 ほぼ純粋なものであるが、 晶析精製、 分別蒸留、 カラムクロマ トグラフィ一等一般的な手法により精製を加え、 さらに純度を高めてもよい。 また、 生成物の水に対する溶解度が高く、 有機溶媒に対する溶解度が著しく低 い場合は、 上記のような通常の反応操作により目的物を取得するのは困難である。 その場合は、 水酸化 4級アンモニゥムを塩基とする加溶媒分解反応を低級アルコ ール溶媒中で行い、 加溶媒分解終了後の反応液に低極性溶剤を添加し、 目的物の 結晶を析出させ、 これをろ過することにより、 簡便な操作で高純度の目的物を収 率良く取得することができる。 ここで用いられる低級アルコール溶媒および水酸 化 4級アンモニゥムは上記の通りである。 低極性溶剤は、 無極性溶剤を含む極性 の低い溶剤のことをいい、 光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体 （1 4 ) が難溶であり、 加溶媒分解反応溶媒と混合するものであれば任意であり特に限定 しない。 加溶媒分解反応溶媒にアルコール系溶媒を用いる場合は、 低極性溶剤と して炭化水素系溶剤が好ましく、 例えば、 n—へキサン、 n—ペンタン、 ベンゼ ン、 トルエン、 キシレン、 石油ェ一テル、 石油ベンジン等が挙げられる。 より好 ましくはトルエンである。
なお、 上述した一般式 （9) で表される置換ァセチルビリジン誘導体のなかで も、 上記一般式 （ 1 ) で表される、 ピリジン環の 2位がアミノ基である置換ァセ チルピリジン誘導体は、 従来技術による製造方法が知られておらず、 本発明の方 法 [工程 （a) 及び必要な場合にはその後の置換反応] によって製造することが 可能になった新規の化合物である。 この誘導体は、 光学活性なベータ一 3ァドレ ナリン受容体ァゴニストの中間体を製造する際に極めて有用なものである。
上記一般式 （1 ) において、 1¾1及び1¾2は、 水素、 炭素数 1〜 1 0のアルキ ル基、 炭素数 1〜 1 0のァラルキル基、 炭素数 1〜 1 0のァシル基又は炭素数 1 〜 1 0のアルキルォキシカルボ二ル基を表す。 R1と R2は、 同一であってもよ く、 異なっていてもよい。 なかでも、 R1はァセチル基を表し、 R2は水素を表 すことが好ましい。 なお、 Y1は一般式 （9) において説明した Y1と同じもの である。
また、 上述した本発明における光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の 製造過程において、 一般式 （2) で表されるビバロイルォキシァセチルビリジン 誘導体および一般式 （3) で表される光学活性ビバロイルォキシヒ ドロキシェチ ルビリジン誘導体は、 ビバロイル基が導入されていることによって化合物の安定 性および取り扱いが改善された有用な中間体である。 またこれらは、 従来技術に よる製造方法が知られておらず、 本発明の方法によって製造することが可能にな つた新規の化合物である。 なお、 一般式 （2) 及び （3) の Xは一般式 （6) に おいて説明した Xと同じものである。
さらに、 本発明によって製造が可能となったジヒ ドロキシェチルピリジン誘導 体のうち、 式 （4) で表される化合物は、 本発明者らによって |3— 3受容体ァゴ ニスト中間体への用途が示された新規化合物である。 発明を実施するための最良の形態
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、 本発明はこれら実施例 のみに限定されるものではない。 実施例 1 N 1 - [5— (2—クロロアセチル） ピリジン一 2—ィル] エタンァ ミ K
Figure imgf000033_0001
6 - (メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3—力ルボン酸メチル 5. 8 g ( 0. 030 m o 1 ) を THF l O Om l に溶かした溶液に、 クロ口酢酸ナトリゥ ム 5. 2 g (0. 045 m o 1 ) と塩化マグネシウム 4. 3 g (0. 045 m o 1 ) を加え室温で 3時間攪拌した。 この溶液に塩化マグネシウムジイソプロピル ァミ ド溶液 [ 1. 8 M/ k gの n—ブチルマグネシゥムクロリ ド THF溶液 6 7 m l (0. 1 20 m o 1 ) にジイソプロピルアミン 20 m 1 (0. 1 44 m o 1 ) を 40 °Cで滴下した後、 40 °Cで 3時間攪拌した溶液] を 0 °Cで 30分かけ滴 下し、 室温で 27時間攪拌した。 反応溶液に、 濃塩酸 25m l (0. 300 m o I ) を水 50 m 1 に溶かした溶液に 0°Cで滴下した。 酢酸ェチルで抽出を行い有 機相を飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗浄し、 硫酸ナトリウムにより乾燥した。 減圧下溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマトグラフィー （へキサン：酢酸ェチ ル = 1 ： 1 ) により単離精製し、 目的の N 1— [5— (2—クロロアセチル） ピ リジン一 2—ィル] ェタンアミ ドを 4. 5 g (収率 7 1 %) 得た。
'H-NMR (40 OMH z , DMSO— d 6) 6 1 0. 93 ( 1 H， s ) ， 8. 90 (1 H， s) ， 8. 2 9 ( 1 H, d, J = 8. 8 H z ) , 8. 1 9 ( 1 H， d， J = 8. 8Hz) ， 5. 1 6 ( 2 H, s) ， 2. 1 3 (3 H， s) 。 13C-NMR ( 1 0 OMH z , DMSO- d 6) δ 1 8 9. 7， 1 70. 1， 1 55. 4, 1 4 9. 4， 1 3 8. 4， 1 25. 6， 1 1 2. 5, 4 7. 4， 2 4. 1。 I R (KB r ) 1 690 c m一1。 実施例 6— (メチルカルボキシアミ ド） 一3— [ 2 - (フエニルカルボ二ノレ ォキシ） ァセチル] ピリジン
Figure imgf000034_0001
N 1 - [5— （2—クロロアセチル） ピリジン一 2—ィル] エタンァミ ド 1 0 6mg (0. 5mmo 1 ) T H F 5 m 1 に溶かした溶液に、 安息香酸ナトリウム 1 44 m g (1. 0 mm o 1 ) とテトラブチルアンモニゥムブロミ ド 3 22 mg (1. 0 mm o 1 ) を室温で加え 3時間還流した。 反応溶液を吸引ろ過し、 ろ液 を酢酸ェチルで抽出した。 有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、 硫 酸ナトリゥムにより乾燥した。 減圧下溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマトグ ラフィ一 （へキサン ：酢酸ェチル = 1 ： 1 ) により単離精製し、 目的の 6— (メ チルカルボキシアミ ド） 一 3— [2— (フエ二ノレカルボニルォキシ） ァセチノレ] ピリジン 1 28 m g (収率 86 %) を得た。
1 H-NMR (40 OMH z , DMSO— d 6) δ 1 0. 96 ( 1 H, s ) ， 8. 96 ( 1 H, d , J = 2. 5 H z ) , 8. 33 ( 1 H， d d， J = 8. 8 H z， 1. 9 H z ) , 8. 2 2 (1 H， d， J = 8. 8 H z ) , 8. 03 (1 H， d， J = 7. 8H z) ， 7. 70 ( 1 H, t , J = 7. 2 H z ) , 7. 57 (2 H， d d， J = 7. 6 H z ) , 5. 73 ( 2 H, s ) ， 2. 1 5 (3 H， s) 。 13C- NMR ( 1 0 OMH z , DMS O— d 6) δ 1 9 1. 0， 1 70. 1， 1 6 5. 3， 1 5 5. 6， 14 9. 0， 1 3 8. 0， 1 3 3. 8， 1 29. 4， 1 29. 1， 1 28. 9， 1 25. 2， 1 1 2. 6， 6 6. 9， 24. 1。
I R (KB r ) 1 7 20, 1 700, 1 6 90 c m— 実施例 3 2 - [ 6 - (メチルカルポキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] — 2— ォキソェチル エタノエ一ト
Figure imgf000035_0001
N 1 - [5— （2—クロロアセチル） ピリジン一 2—ィル] エタンァミ ド 1 0 6 m g (0. 5mmo 1 ) を THF 5m 1 に溶かした溶液に、 酢酸ナトリウム 8 2 m g ( 1. 0 mm o 1 ) とテトラブチルアンモニゥムブロミ ド 322 m g ( 1. Ommo 1 ) を室温で加え、 その後 2時間還流した。 反応溶液を吸引ろ過し、 ろ 液を酢酸ェチルで抽出した。 有機相を飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗浄し、 硫酸ナトリゥムにより乾燥した。 減圧下溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマト グラフィー （へキサン：酢酸ェチル = 1 ： 1) により単離精製し、 目的の 2— [ 6 - (メチルカルボキシアミ ド） ピ] λジン一 3—ィル] — 2—ォキソェチル ェ タノエート 1 1 Omg (収率 93 %) を得た。
XH-NMR (40 OMH z , DMS O- d 6) 0. 93 ( 1 H， s )
8. 89 (1 H， d， J = 2. 4 H z ) , 8. 28 ( 1 H， d d， J = 8. 8 H z， 2. 0H z) ， 8. 1 9 ( 1 H, d， J = 8. 8 H z ) , 5. 43 (2H,
) , 2. 1 4 (3 H, s ) ， 2. 1 3 (3 H， s) 。
13C-NMR ( 1 0 OMH z , DMSO— d 6) δ 1 9 1. 1 1 70. 2 , 1 70. 1， 1 5 5. 6， 1 48. 9, 1 38. 0， 1 25. 3， 1 2. 6 , 66. 3， 24. 2， 20. 4。
I R (KB r ) 1 750, 1 7 1 0, 1 6 90 c m— 実施例 4 N. [5— し 2—ヒ ドロキシァセチル) _ ピリジン一 2—ィル 1 エタ ンァミ ド
Figure imgf000035_0002
2 - [6— （メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] — 2—ォキソェ チル エタノエー ト 48m g (0. 20 mm o 1 ) をメタノ一ノレ 5 m i に溶かし た溶液に、 炭酸カリウム 3 mg (0. 0 2 mmo 1 ) を加え、 室温で 2時間攪拌 した。 g応溶液を酢酸ェチルで抽出し、 硫酸ナトリウムにより乾燥した後、 減圧 下溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマトグラフィ一 （へキサン ：酢酸ェチル = 1 ： 1 ) により単離精製し、 目的の N 1— [5— (2—ヒ ドロキシァセチル） ピ リジン一 2—ィル] ェタンアミ ドを 1 8 m g (収率 45 %) 得た。
1 H-NMR (40 OMH z , DMSO— d 6) 6 1 0. 86 ( 1 H, s ) ， 8. 8 5 ( 1 H, d， J = 3. 4 H z ) , 8. 24 ( 1 H， d d， J = 4. 4 H z， 2. 0 H z ) , 8. 1 8 ( 1 H, d， J = 6. 4 H z ) , 5. 20 (1 H， d， J = 5. 4 H z ) , 4. 7 5 ( 2 H, d， J = 5. 3 H z ) , 2. 1 2 (3 H， s ) 。
13C-NMR ( 1 0 OMH z , DMSO— d 6) δ 1 9 7. 5， 1 70. 1， 1 5 5. 2, 1 48. 7, 1 3 7. 9, 1 25. 9， 1 1 2. 6 , 6 5. 4, 2 4. 2。 実施例 5 2— [6— （メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] — 2— ォキソェチル _2 , _2—ジメチルプロパノエ一ト
Figure imgf000036_0001
Ν 1 - [5— (2—クロロアセチル） ピリジン一 2—ィル] ェタンアミ ドド 4. 0 g ( 1 9 mm o 1 ) を THF 70 m 1 に溶かした溶液に、 ビバロイル酸 3. 8 g (38 mm o 1 ) 、 炭酸水素ナトリウム 4. 7 g (56 mmo 1 ) とテトラブ チルアンモニゥムブロミ ド 0. 6 1 g (1. 9 mm o 1 ) を室温で加え 2時間還 流した。 反応溶液に水 1 00m l を加え、 酢酸ェチル 1 00m l で三回抽出した。 有機層を飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗浄し、 硫酸ナトリゥムにより乾燥し た。 減圧下溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマトグラフィー （へキサン：酢酸 ェチル = 1 ： 1) により単離精製し目的の 2— [6— (メチルカルボキシアミ ド ) ピリジン一 3—ィル] — 2—ォキソェチル 2， 2—ジメチルプロパノエ一ト 4. 2 g (収率 79%) を得た。
1 H - NM R (4 00MH z , CDC 1 3) 6 8. 8 1 ( 1 H, s ) ， 8. 3 2 (1 H， d， J = 8. 6 H z) ， 8. 20 ( 1 H， d d , J = 8. 8 H z , 1. 9 H z ) , 8. 1 0 (1 H， s) ， 5. 24 ( 2 H, s ) ， 2. 25 (3H， s ) ， 1. 30 ( 9 H, s ) 。
13C-NMR ( 1 0 O H z , CDC 1 3) 6 1 90. 3， 1 78. 1， 1 69. 0， 1 54. 8， 1 48. 5 , 1 38. 0， 1 26. 1， 1 1 3. 2 , 65. 6, 38. 8, 27. 1， 24. 8。 実施例 6 2ーォキソ一 2—ピリジン一 3
ノエ一ト
Figure imgf000037_0001
3 - ( 2—クロロアセチル） ピリジンヒ ドロクロリ ド 5. 0 g (26 mm o 1 ) を THF 80m 1 に溶かした溶液に、 ビバロイル酸 5. 3 g (52mmo l ) 、 炭酸水素ナトリウム 8. 8 g ( 1 04 mm o 1 ) とテトラブチルアンモ-ゥムブ ロミ ド 0. 84 g (2. 6mmo l ) を室温で加え 2時間還流した。 反応溶液に 水 1 0 Om 1 を加え、 酢酸ェチル 1 00m lで三回抽出した。 有機層を飽和炭酸 水素ナトリウム水溶液で洗浄し、 硫酸ナトリウムにより乾燥した。 減圧下溶媒を 留去しシリカゲルカラムクロマトグラフィー （へキサン：酢酸ェチル = 1 ： 1 ) により単離精製し目的の 2—ォキソ一 2—ピリジン一 3—ィルェチル 2， 2—ジ メチルプロパノエ一ト 5. 3 g (収率 9 2%) を得た。
1 H-NMR (4 00 MH z , DMS O - d 6 ) δ 9. 1 3 ( 1 H, s ) ， 8. 84 ( 1 H, d， J = 4. 4 H z ) , 8. 29 ( 1 H, d， J = 7. 8 H z ) , 7. 5 9 ( 1 H, d d , J = 7. 8 H z , 4. 9 H z ) , 5. 50 (2H， s) ， 1. 2 2 ( 9 H， s ) 。 13C-NMR ( 1 0 OMH z , D S O- d 6) 6 1 9 2. 8， 1 7 7. 0， 1
54. 0， 1 4 9. 0， 1 3 5. 3， 1 2 9. 5， 1 2 4. 0， 6 6. 4， 2 7.
0， 2 6. 9。
1 R (KB r ) 1 74 0, 1 70 0 c m- 1 実施例 7 ^学活性 N 1 — [5— (2—クロ口一 1 —ヒ ドロキシェチル)— ピリジ
Figure imgf000038_0001
キャンディダ ノヽノレトラス （ I FO 1 94 1 ) を、 5 00 m i坂口フラスコ で滅菌した 3 Om 1 の半合成培地 （ダルコ一ス 40 g、 酵母エキス 3 g、 KH2 P04 0. 7 g、 (NH4) 2HP04 1. 3 g、 M g S O 4 · 7 H 2 O 0. 8 g、 Z n S 04 - 7 H20 0. 0 6 g、 F e S 04 - 7 H20 0. 0 9 g、 C u S 04 - 7 H20 0. 00 5 g、 Mn S O4 0. 0 1 g、 N a C 1 0. 1 g、 C a C〇35 g、 水 1 L、 p H= 6. 8 ) に接種し、 3 0。Cで 2日間、 好気 的に振とう培養した。 培養液に N 1 — [ 5— (2—クロロアセチル） ピリジン一 2—ィル] ェタンアミ ド 3 00 m g、 グルコース 1. 2 gを添加した後、 3 0 °C で攪拌、 4 8時間反応を行った。 反応終了後、 反応液を酢酸ェチルで抽出、 減圧 濃縮し、 生成物の濃縮物を得た。 上記濃縮物をシリカゲルカラム （へキサン /酢 酸ェチル = 1 /1 ) で精製し、 光学活性 N 1— [5— （2—クロ口一 1ーヒ ドロ キシェチル） ピリジン一 2 _ィル] ェタンアミ ドを得た。
H P LC分析 [カラム ： C h i r a 1 c e 1 AS (ダイセル社製） 、 溶離液： へキサン ィソプロパノ一ル= 8 0/2 0 , 流速： 1 m l /m i n、 温度： 4 0 °C、 検出波長： 2 1 0 nm] を行ったところ、 光学純度は 9 8 % e eであった。 1 H-NMR (4 0 OMH z , DMS O— d 6) δ 1 0. 4 6 ( 1 Η, s ) ， 8. 2 9 ( 1 Η， s ) ， 8. 0 1 ( 1 Η, d， J = 8. 3 H z ) , 7. 76 ( 1 H, d， J = 8. 8 H z) ， 5. 90 ( 1 H, t， J = 4. 4 H z ) , 4. 8 2 一 4. 79 ( 1 H, m) ， 3. 79 - 3. 74 ( 2 H, m) ， 2. 0 7 (3 H, s) 。
13C-NMR ( 1 0 OMH z , DMSO— d 6) δ 1 6 9. 5， 1 5 1. 6， 1 46. 3， 1 3 6. 4， 1 3 2. 8， 1 1 2. 9， 70. 2, 49. 9， 24. 0。
I R (KB r ) 3440, 1 660 c m—
[a] D 22 : + 0. 032 (C= 1. 00、 ァセトン中） 。 実施例 8 光学活性 N l— [5 - (2—クロ口一 1—ヒ ドロキシ: £チル） ピリジ ン一 2—ィル] ェタンアミ ド
Figure imgf000039_0001
口 ドトルラ ルブラ （ I FO 03 83) を、 500m l坂口フラスコで滅菌 した 3 0 m 1の半合成培地 （ダルコ一ス 40 g、 酵母エキス 3 g、 KH2 P04
0. 7 g、 (NH4) 2HP04 1. 3 g、 Mg S04 ' 7H20 0. 8 g、 Z n S 04 · 7 H20 0. 06 g、 F e S O 4 · 7 H2 O 0. 0 9 g、 C u S 04 - 7H20 0. 00 5 g、 Mn SO4 0. 0 1 g、 N a C 1 0. l g、 C a C035 g、 水 1 L、 p H= 6. 8) に接種し、 30 °Cで 2日間、 好気的に振 とう培養した。 培養液に N 1— [5— (2—クロロアセチル） ピリジン— 2—ィ ル] ェタンアミ ド 300 m g、 グルコース 1. 2 gを添加した後、 30。Cで攪拌、 48時間反応を行った。 反応終了後、 反応液を酢酸ェチルで抽出、 減圧濃縮し、 生成物の濃縮物を得た。 上記濃縮物をシリカゲルカラム （へキサン Z酢酸ェチル = 1ノ 1) で精製し、 光学活性 N 1— [5— （2—クロ口一 1—ヒ ドロキシェチ ル） ピリジン一 2—ィル] ェタンアミ ドを得た。
HP LC分析 [カラム ： Ch i r a l c e l AS (ダイセル製） 、 溶離液：へ キサン ィソプロパノ一ル= 80/20, 流速： 1 m l /m i n、 温度： 40 、 検出波長： 2 1 0 nm] を行ったところ、 光学純度は 9 8 % e eであった。 [ a] D 22 ： - 0. 0 3 5 (C = 1. 0 0、 ァセ トン中） 実施例 9 光学活性 2—ヒ ドロキシ一 2— [6 - (メチルカルボキシアミ ド） ピ リジン一 3—ィル] ェチル 2. 2—ジメチルプロパノエ一ト
Figure imgf000040_0001
各種酵母株を、 5 00 m 1坂口フラスコで滅菌した 3 0 m 1 の半合成培地 （グ ルコース 4 0 g、 酵母エキス 3 g、 KH2 P 04 1 g、 (NH4) 2HP0 6. 5 g Mg S O4 - 7 H20 0. 8 g、 Z n S〇4 ， 7 H20 0. 0 6 g、 F e S 04 · 7 H20 0. 0 9 g、 C u S O4 ' 7 H2〇 0. 0 0 5 g、 Mn S 04 0. 0 1 g、 N a C l 0. l g、 C a C〇3 5 g、 水 l L、 p H = 6. 8) に接種し、 3 0°Cで 2日間、 好気的に振とう培養した。 中型試験管に、 得られた培養液 l m l、 2 - [6— (メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3— ィル] — 2—ォキソェチル 2， 2—ジメチルプロパノエ一ト 5 m g、 及びグル コース 4 O m gを添加した後、 3 0°Cで 1 日間振とう反応した。 反応終了後、 反 応液を酢酸ェチルで抽出した後、 減圧濃縮し 2—ヒ ドロキシー 2— [6— (メチ ルカルポキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] ェチル 2, 2—ジメチルプロパノエ ―ト粗生成物を得た。 粗生成物を HP L C分析 （カラム ： D e V e 1 o s i 1
ODS— HG— 3 (野村化学製） 、 溶離液： ァセトニトリル/ . 1 % K H 2 P 04 = 2 5 7 5、 流速： 1. 0 m l /m i n、 カラム温度 ： 4 0°C、 検出波長 ： 2 1 0 nm) する事により変換率を、 また、 粗生成物を薄層クロマトグラフィ —で精製した後、 H P L C分析 （カラム ： C h i r a 1 c e 1 〇 J (ダイセル 製） 、 溶離液：へキサン/ィソプロパノ一ル= 90/1 0、 流速： 1 m l /m i n、 温度： 4 0°C、 検出波長： 2 1 0 nm) する事により光学純度を求めた。 そ の結果を下記表 1に示した。 表 1
_J¾生物 変換率 光学純度絶対配置
% %ee
A shbys eossvoif IFO 0560 96 QQ
Csndids ca tenuis ts I O 0731 64 p
Csndids f uctus IFO 1 581 42 71 Δ
Candida IFO 10031 66 0 1
pro nf*npif» IFO 0(55*3 yu K en Hlie mondii IFO 0454 75 n yj K
Csndi 3
Figure imgf000041_0001
Candida hnimii IFO Π66Ω t
Candida IFO 0761 fid R sndida ma enolise IFO 0705 fil 77 R
Csndida IFO 1 975 7ft 81 R
IFO 0747 95
Candida IFO O^R RA /o K i sndida fligOS3 e. 81 R
Candids sono ensis IFO 100ί>7 69 R w w "/Yj / c 1 1 fiク 61 R u 100 R
IFO 1 Q41 ςΛ l Uu R y iilHi t ι r Λ ίπι ϋ c IPO m7fl ςΛ 0 R
Figure imgf000041_0002
Deharvo vces
Figure imgf000041_0003
IFO 008? *r 89 R
1 \- uuuo 97 R
Figure imgf000041_0004
liuHliG mondetls I on
1F 1 O I 1 fi^O 71
09 K
Hansenuia elucoz vms IFO 1472 45 QO K
Hansenuls s^tumus |FO Q80Q y / K
Metsc nikowid euksufii IFO 0749 76 oy
Pichis bovis IFO 1886 68 Qク D r
Pichia farinoss IFO 0463 86 Qク p
Rhodotorula glutinis var, dairenensis IFO 0415 96 1 wU
Rhodotorula gra ints IFO 0190 45 g5
Rhodotorula minuta IFO 0928 39 73 R
Rhodotorula rubra IFO 0383 73 94 R
Rhodsporidium diobovatum IFO 0688 56 94 R
Rhodsporidium sphaerocarpum IFO 1 38 64 96 R
Rhodsporidium toruloides IFO 0413 64 94 R
Saccharomycopsis malanga IFO 1710 48 74 R
Schwanniomyces caste///'/ IFO 1840 44 73 R
Sporidiobolus Johnson//' IFO 6903 73 99 R
Sporobolomyces pararoseus IFO 0471 45 84 R
Sporobolomyces salmonicolor 關 12249 41 83 R
Torulaspora delbrueckii IFO 0381 41 62 R
Yarrowia lipolytica IFO 1548 97 99 R 2—ヒ ドロキシ一 2— [6— （メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] ェチル 2， 2—ジメチルプロパノエ一ト ：
1 H- NMR (4 0 OMH z , C DC 1 3) δ 1 0. 4 6 ( 1 H, s ) ， 8. 2 6 ( 1 H， d， J = 2. 5 H z) ， 8. 0 2 ( 1 H, d， J = 8. 3 H z ) , 7. 7 3 ( 1 H, d d， J = 8. 8 H z , 2. 5 H z ) , 5. 6 6 ( 1 H, d， J =
4. 4 H z ) ， 4 78 ( 1 H, d d , J = 1 0. 7 H z , 5. 9 H z) ， 4. 1 5 ( 1 H, d d J = 1 0. 7 H z , 5. 9 H z) ， 4 0 3 ( 1 H, d d， T = 1 1. 6 H z 5. 4 H z ) , 2. 0 6 (3 H， s ) 1. 0 5 ( 9 H, s
) 。
1 3C-NMR ( 1 0 OMH z , CDC 1 3) 6 1 7 7. 1， 1 6 9. 2， 1 5
4， 1 4 6. 1， 1 3 6. 2， 1 3 2. 7， 2. 6， 6 8. 0， 6 7. 8， 6 7. 8， 3 8. 2 , 2 6. 8, 2 3. 8。 実施例 1 0 光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体
各種酵母株を、 50 Om 1坂口フラスコで滅菌した 3 Om 1の半合成培地 （グ
/レコース 4 0 g、 酵母エキス 3 g KH2 P O g、 (NH4) 2HP04 6.
5 g、 Mg S O4 ' 7 H20 0. 8 g、 Z n S 04 ' 7 H20 0. 0 6 g、 F e S 04 - 7 H20 0. 0 9 g、 C u S O4 ' 7 H2O 0. 0 0 5 g、 Mn S 04 0. 0 1 g、 N a C l 0. l g、 C a C〇3 5 g、 水 l L、 p H = 6. 8) に接種し、 30°Cで 2日間、 好気的に振とう培養した。 中型試験管に、 得られた培養液 l m l、 一般式 （9) に示される各種置換ァセチルビリジン誘導 体 5mg、 及びグルコース 4 0 m gを添加した後、 3 0 °Cで 1 日間振とう反応し た。 反応終了後、 反応液を酢酸ェチルで抽出した後、 減圧濃縮し粗生成物を得た。 粗生成物を H P L。分析 （カラム ： D e v e 1 o s i 1 OD S— HG— 3 (野 村化学製） 、 溶離液： ァセ トニトリル Z水 = 2 5 7 5、 流速： 1. 0 m l Zm i n、 カラム温度： 4 0°C、 検出波長： 2 1 0 nrn) する事により変換率を、 ま た、 上記粗生成物を薄層クロマトグラフィーで精製した後、 H P L C分析 （カラ ム ： C h i r a l c e l O J (ダイセル製） 、 溶離液：へキサンノィソプロノく ノ一ル = 9 5 Z 5、.. 流速： 1 m l /m i n、 温度： 4 0 °C、 検出波長： 2 1 0 η m) する事により光学純度を求めた。 その結果を下記表 2に示した。
Figure imgf000043_0001
表 2 1 基 K(9) £換率 光竽純度絶対 ί
X Y， % ee
Candida intermedia IFO 0761 AcNH CI 56 78 R
Candida tropicalis IFO1 04 AcNH CI 44 67 R
Cryptococcus albtaus var. albidas IFO 0378 AcNH CI 20 84 R
Rhodotowla grammis IFO 0190 AcNH CI 48 87 R
Rhodotorula rubra IFO 0383 AcNH CI 67 98 R
Sporid bolus Johnsonu IFO 6903 AcNH CI S4 91 R
Scfmanniomycas castelW IFO 1840 H CI 47 61 R
Candid* magnoliae IFO 0705 H OGOtBu 100 71 R
Soonaiobolus Johnsonii IFO 6903 H OCOtBu 70 6β R
実施例 1 1 (R) 2—クロ口 —ピリジン一 3—ィルェタン' オール
Figure imgf000043_0002
組替え大腸菌 HB 1 0 1 (p NTC RG) 受託番号 F E RM B P— 68 98 を、 500 m 1容坂ロフラスコ中で滅菌した 1 00m lの半合成培地 （グリセリ ン 1 5 g、 ィ一ス トエキス 3 g、 N a 2HP 04 6 g、 KH2HP04 3 g、 Na C l 2 g、 Mg S〇4 ' 7H20 0. 5 g、 水 l L、 p H= 7. 2) に 接種し、 3 7 °Cで 28時間振とう培養した。 2—クロ口一 1—ピリジン一 3—ィ ルェタン— 1—オン塩酸塩 2 gを燐酸緩衝液 8 m 1 に懸濁し、 懸濁液を 5 NN a OHにて p H=5. 5に調整した後、 上記培養液 40 m 1 、 トリ トン X— 1 00
0. 04m l , グルコース 2. 8 g、 N AD P 2. 3 mgを添加し、 30でで 攪拌、 7時間反応を行った。 反応終了後、 反応液を酢酸ェチルで抽出、 減圧濃縮 した後、 シリカゲルカラム （へキサン ：酢酸ェチル = 1 ： 2) にて精製する事に より、 （R) — 2—クロ口一 1—ピリジン一 3—ィルェタン一 1—オール 1. 0 4 gを透明油状物として得た。 また、 実施例 1 0と同様の方法にて光学純度の分 析を行ったところ、 光学純度は 9 7. l % e eであった。
1 H- NMR (400Mz、 CD3〇D) δ 8 - 58 ( d , 1 Η) 、 δ 8. 4 6 (d d， 1 Η) 、 ό 7. 90 ( d , 1 Η) 、 δ 7. 44 (d d， 1 Η) 、 δ 4. 93 (m, 1 Η) 、 ό 3. 75 (m, 2 Η)
得られた （R) — 2—クロ口一 1—ピリジン一 3 _ィルェタン一 1—オールを 塩酸メタノール溶液に溶解した後、 メチルー t—ブチルエーテルをゆつく りと滴 下し、 室温で 1時間攪拌した。 生成した白色沈殿物を濾過する事により、 （R) — 2—クロ口 _ 1一ピリジン一 3—ィルェタン一 1—オール塩酸塩 1. 04 gを 白色結晶として得た。 光学純度は 99. 7%e eであった。
1 H- NMR (400Mz、 CD3OD) δ 8 - 93 ( d , 1 Η) 、 δ 8. 84 (d d， 1 Η) 、 δ 8. 7 2 ( d , 1 Η) 、 δ 8. 1 0 (d d， 1 Η) 、 δ 5. 23 (m, 1 Η) 、 S 3. 88 (m， 2 Η) 実施例 1 2 (R) — 2—ヒ ドロキシ一 2—ピリジン _ 3—ィルェチル 2, 2 - ジメチルプロハ °ノエ一ト
Figure imgf000044_0001
実施例 1 1で用いた培養液 2 Om 1 に、 2—ォキソ— 2—ピリジン _ 3—ィル ェチル 2， 2—ジメチルプロパノエート 2 g、 グルコース 2. 8 g、 NADP 2. 3 mg、 トリ トン X 1 00 0. 0 2m lを添加し、 5 Nの水酸化ナトリウ ム水溶液で p H=6. 5に調整しつつ 30°Cで攪拌、 2時間反応を行った。 反応 終了後、 反応液を酢酸ェチルで抽出し、 减圧濃縮し、 （R) — 2—ヒ ドロキシー 2—ピリジン一 3—ィルェチル 2， 2—ジメチルプロパノエート 2. l gを薄黄 色油状物として得た。 また、 実施例 1 0と同様の方法にて光学純度の分析を行つ たところ、 光学純度は 1 00%e eであった。
1 H- NMR (4 00 MH z , DMSO— d 6) 6 8. 5 7 ( 1 H， s ) ， 8. 48 ( 1 H, d， J = 4. 9 H z ) , 7. 78 (1 H， d， J = 6. 9 H z ) , 7. 3 7 ( 1 H, d d， J = 7. 6H z， 4. 6 H z ) , 5. 77 (1 H， s) , 4. 86 ( 1 H, t， J = 5. 4H z) ， 4. 20 (1 H， d d， J = 1 1. 0 H z， 6. 1 H z ) , 4. 08 ( 1 H, d d， J = 1 1. 3 H z , 5. 4 H z ) , 1. 05 ( 9 H， s ) 。
13C-NMR ( 1 0 OMH z , DMSO— d 6) 6 177. 1， 1 48. 6， 1 48. 0， 1 3 7. 4， 1 34. 1， 1 23. 3， 6 8. 3， 6 7. 9 , 38. 2， 26. 8。
I R (KB r ) 3 200， 1 730 c m—1
[a] D 25 = - 22. 8 7 (c = l、 Me OH) 実施例 1 3 (R) —2—ヒ ドロキシ一 2— [6 - (メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] ェチル エタノエート
Figure imgf000045_0001
四塩化ビス （ 7? 6—メシチレン） 二ルテニウム 3. 1 0mg (0. 00 53 m mo l ) 、 （S， S) — N— p— トシルー 1， 2—ジフエ二ルエチレンジァミン 7. 73 m g (0. 02 1 mm o 1 ) 、 および実施例 3の方法によって得た 2— [6 - (メチルカルボキシアミ ド） ピリジン— 3—ィル] —2—ォキソェチル エタノエ一ト 50mg (0. 2 1 2mmo l ) を 5. 5m lのイソプロピルアル コール中で混合し、 アルゴン雰囲気下 8 0°Cで 20分撹拌後、 0°Cに冷却し 1M 一水酸化カリウム Zイソプロピルアルコール溶液 0. 053 m l を添加した。 さ らに、 この溶液を 0°Cで 2時問、 1 5〜20°Cで 1 8時間撹拌した後に、 反応液 に水を加え酢酸ェチルで抽出した。 有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、 減 圧下に溶媒を留去し、 得られた残查をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一にて 精製し、 （R) — 2—ヒ ドロキシ一 2— [6— (メチルカルボキシアミ ド） ピリ ジン一 3—ィル] ェチル エタノエ一ト 3 6. 8mg (収率 73%) を得た。 ま た実施^ 9に記載の方法で生成物の光学純度を測定したところ 8 9. 7%e eで めった。
— NMR (400MH z, CDC 1 3) δ 9. 1 4 ( 1 H， b s ) , 8.
27 (1 H， s) ， 8. 20 ( 1 H, d) ， 7. 74 (1 H， d d) ， 4. 9 7 (1 H， d d) ， 4. 28 (1 H， d d) ， 4. 1 7 ( 1 H, d d) ， 2. 8 6 (1 H， b s ) , 2. 2 1 (3 H, s) ， 2. 1 1 (3 H， s) ， 1. 69 (1
H, b s ) 。 実施例 1 4 光学活性 N 1 (5—ォキシラン一 2 f ルビリジン一 2—ィル) _ ェタンアミ ド
Figure imgf000046_0001
光学活性 N 1 _ [5— (2—クロ口一 1—ヒ ドロキシェチル） ピリジン一 2— ィノレ] エタンァミ ド 1 0 7mg (0. 50 mm o 1 ) をァセトン 5 m 1 に溶力 し た溶液に、 1 N水酸化ナトリウム 0. 5m l (0. 50 mm o 1 ) を 0°Cで加え， 0°Cで 2時間攪拌した。 反応溶液に冷水を加え、 酢酸ェチルで抽出し、 硫酸ナト リゥムにより乾燥した後、 減圧下溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマトグラフ ィ一 （へキサンノ酢酸ェチル = 1 1 ) により単離精製し、 目的の光学活性 N 1 - (5—ォキシラン一 2—ィルピリジン一 2—ィル） ェタンアミ ドを 8 2m g ( 収率 9 2%) 得た。
^-NMR (40 OMH z , CDC 1 3) δ 8. 4 7 ( 1 Η， b r ) ， 8. 2 1 (1 H， s) ， 8. 20 ( 1 H, d， J = 1 2. 2 H z ) , 7. 56 (1 H， d d， J = 8. 8H z， 1. 7 H z) , 3. 86 (1 H， s) ， 3. 1 7 ( 1 H, d d, J = 4. 4 H z ) , 2. 83 ( 1 H, d d， J = 4. 9H z, 2. 0H z ) ， 2. 20 (3 H, s ) 。 実施例 1 5 ^RJ — N 1 — 「 5— (J^_ 2—ジヒ ドロキシェチル） ピリ
2—ィル] ェタンアミ ド H
Figure imgf000047_0001
実施例 9の方法によって得た （R) — 2—ヒ ドロキシ一 2— [6— (メチルカ ルボキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] ェチル 2， 2—ジメチルプロパノエート 1. 50 g (5. 3 5 mm o 1 , 1 00 % e e ) を 1 5m lのメダノ一ノレに溶解 し、 1 M—水酸化テトラ n—ブチルアンモニゥム Zメタノール溶液 0. 5m l を 加え、 20°Cで 4時間撹拌した。 この溶液にトルエン 3 0 m 1 を添加し、 一20 。Cで 3時間撹拌した。 析出した結晶をろ過後、 トルエンで洗浄、 さらに 40°C、 1 T o r rで 6時間乾燥すると、 （ R) — N 1— [ 5— ( 1， 2—ジヒ ドロキシ ェチル） ピリジン一 2—ィル] ェタンアミ ドが 0. 93 7 g (89%収率） を白 色結晶として得られた。
1 H- NMR (4 00 MH z , DMS O— d 6) δ 1 0. 43 (1 H， s ) 8. 22 ( 1 H, d， J = 2. 0Hz) , 8. 00 ( 1 H, d， J = 8. 3 H z ) ， 7. 69 ( 1 H, d d， J = 8. 3， 2. 0H z) , 5. 3 1 ( 1 H, d， J = 3. 9) , 4. 74 - 4. 77 ( 1 H, m) ， 4. 5 1 -4. 53 (1 H， m) , 3. 33 - 3. 5 9 (2H， m) ， 2. 07 (3 H, s) 。 実施例 1 6 (R) 一ピリジン一 3—ィルェタン- 2—ジオール塩酸塩 H
Figure imgf000047_0002
実施例 1 2で得られた 2—ヒ ドロキシ一 2—ピリジン一 3—ィルェチル 2， 2 —ジメチルプロパノエ一ト濃縮物 2 gを塩酸メタノール溶液に溶解し、 48時間 還流した後、 減圧濃縮した。 濃縮物をメタノールに再溶解し、 ゆっく りとメチル - t一プチルェ一テを滴下し、 室温で 1時間攪拌した。 生成した白色沈殿物を濾 過する事により、 （R) — 1—ピリジン一 3 _ィルェタン一 1， 2—ジォ一ル塩 酸塩 1. 3 1 gを白色結晶として得た。
1 H J^ R (40 O z , CD3OD) δ 8. 7 9 (d， 1 H) 、 δ 8. 70 (d， 1 H) 、 δ 8. 60 (d， 1 H) 、 δ 8. 00 (d d， 1 H) 、 ό 4. 8
7 (m, 1 H) 、 S 3. 6 8 (m， 2 H)
[a] D 25 = - 20. 99 ( c = 1 , Me OH) 実施例 1 7 (R) ピリジン一 3—ィルェタン一 1 , 2—ジオール
Figure imgf000048_0001
実施例 1 2で得られた 2—ヒ ドロキシ一 2—ピリジン _ 3—ィルェチル 2， 2 —ジメチルプロパノエ一ト濃縮物 1 0 Omgをメタノール l m 1 に溶解し、 1M
B u4NHOHメタノール溶液 50 u 1 を添加し、 室温で 3時間反応させた。 反応液を減圧濃縮した後、 シリカゲルカラム （酢酸ェチル： メタノール =4 ： 1 ) にて精製する事により、 （R) — 1—ピリジン— 3—^ Γルェタン一 1， 2—ジ オール 50 m gを薄黄色油状物として得た。
1 H- NMR (400M z、 C D3OD) δ 8. 79 (d， 1 H) 、 δ 8. 70 (d， 1 H) 、 δ 8. 60 (d， 1 H) 、 6 8. 00 (d d， 1 H) 、 64. 8 7 (m， 1 H) 、 δ 3 - 6 8 (m, 2 H) 実施例 1 8 (R) -N 1 - [ 5 - (1 , 2—ジヒ ドロキシェチル） ピリジン. 2—ィル] _ェタンァミ ド
Figure imgf000048_0002
四塩化ビス （ 7? 6—メシチレン） 二ルテニウム 3. 1 0 m g (0. 00 53 m m o 1 ) 、 （S， -S) —N— p—トシノレー 1， 2—ジフエニルエチレンジァミン 7. 7 3 m g (0. 0 2 1 mm o 1 ) 、 および実施例 3の方法によって得た 2— [6— (メチルカルボキシアミ ド） ピリジン一 3—ィル] — 2—ォキソェチル エタノエ一ト 5 0 m g (0. 2 1 2 mm o 1 ) を 5. 5 m lのィソプロピノレアノレ コール中で混合し、 アルゴン雰囲気下 8 0°Cで 2 0分撹拌後、 0°Cに冷却し 1 M —水酸化カリウム/イソプロピルアルコール溶液 0. 2 7m l を添加した。 さら に、 この溶液を 0°Cで 6時間撹拌した後に、 トルエン 1 0 m 1を添加して析出し た結晶を減圧下にろ過した。 結晶を冷イソプロピルアルコールで洗浄後、 真空乾 燥 （4 0°C、 1 t o r r、 6時間） すると、 （R) — N 1— [5— （1， 2—ジ ヒ ドロキシェチル） ピリジン一 2—ィル] ェタンアミ ドが 20. 8 m g (収率 5 0 %) 光学純度： 9 0. 6 % e eで得られた。
尚、 ここで得られた生成物の光学純度は、 生成物のビシナルジオール部位をァ セトン中 2， 2—ジメ トキシプロパンと p—トルエンスルホン酸で処理してァセ トニドに誘導した後、 HP LC分析 （カラム ： C h i r a l c e l O J (ダイ セル製） 、 溶離液：へキサン Zイソプロパノ一ル = 90Z10、 流速： 1 m 1 m i n、 温度： 4 0°C、 検出波長： 2 1 0 n m) する事により求めた。 産業上の利用可能性
本発明は、 上述の構成よりなるので、 ベータ一 3アドレナリン受容体ァゴニス 卜の中間体である光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体及び光学活性ォキ シラン誘導体を、 入手容易な原料から、 安全かつ効率的に、 更には工業的に有利 な方法で製造することができる。

Claims

請 求 の 範 囲
Figure imgf000050_0001
(式中、 R1及び R2は、 独立して、 水素、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基、 炭素 数 1〜1 0のァラルキル基、 炭素数 1〜 1 0のァシル基又は炭素数 1〜 1 0のァ ルキルォキシカルボ二ル基を表す。 Y1は、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0 のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のスルホニルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のァ ルコキシ基、 アミノ基、 炭素数 1〜 1 5のアルキルァミノ基、 炭素数 1〜 1 5の ァラルキルアミノ基、 スルファ-ル基、 炭素数：！〜 1 0のアルキルスルファニノレ 基、 又は、 炭素数 1〜 1 0のァラルキルスルファニル基を表す。 ） で表されるこ とを特徴とする、 2位がアミノ基で置換された置換ァセチルビリジン誘導体。
2. R1は、 ァセチル基を表し、 R2は、 水素を表す請求項 1記載の置換ァセ チルピリジン誘導体。 3. Y1は、 ハロゲンを表す請求項 1又は 2記載の置換ァセチルビリジン誘導 体。
4. Y1は、 塩素を表す請求項 3記載の置換ァセチルビリジン誘導体。 5. Y1は、 水酸基、 又は、 炭素数 1〜： I 0 基を表す請求項 又は 2記載の置換ァセチルピリジン誘導体。
6 一般式 （2)
Figure imgf000051_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れることを特徴とするビバロイルォキシァセチルピリジン誘導体。
7 . Xは、 水素、 塩素、 ァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 6記載のピ バロィルォキシァセチルピリジン誘導体。
Figure imgf000051_0002
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 ） で表さ れることを特徴とする光学活性ビバロイルォキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導 体。
9 . Xは、 水素、 塩素、 ァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 8記載の光 学活性ビバロイルォキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体。
Figure imgf000051_0003
で表されることを特徴とする光学活性ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体、 又は その塩。
1 1. —般式 （5)
Figure imgf000052_0001
(5)
(式中、 Y2は、 ハロゲンを表す。 Zは、 水素、 アルカリ金属、 ハロゲン化アル カリ土類金属、 又は、 炭素数 1〜 1 0のシリル基を表す。 ） で表されるハコゲン 化酢酸誘導体に塩基を作用させてエノラートを調製し、 これを一般式 （6)
Figure imgf000052_0002
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換ァミノ基を表す。 R3は、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素数 1〜 1 0のァラルキル基を表す。 ） で表 される置換ニコチン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付すことを特徴とする、 一般式 （7)
Figure imgf000052_0003
(式中、 Y2及び Xは、 前記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルピリジ ン誘導体の製造方法。
1 2. Y2は、 塩素を表す請求項 1 1記載の製造方法。
1 3. Zは、 ナトリウム又は塩化マグネシウムを表す請求項 1 1又は 1 2記載 の製造方法。
4 塩基は、 一般式 （8)
Q
R5 (8)
(式中、 R4及び R5は、 独立して、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素数 1 〜 1 0のシリル基を表す。 Qは、 ハロゲンを表す。 ） で表されるマグネシウムァ ミ ドである請求項 1 1、 1 2又は 1 3記載の製造方法。
1 5. R4及び R5は、 それぞれ、 イソプロピル基を表す請求項 1 4記載の製 造方法。 1 6. Qは、 塩素を表す請求項 1 4又は 1 5記載の製造方法。
1 7. Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 1 1、 1 2、 1 3、 1 4、 1 5又は 1 6記載の製造方法。
8. 一般式 （9)
Figure imgf000053_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 Y1は、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のスルホ ニルォキシ基、 炭素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 炭素数 1〜 1 5のァ ルキルアミノ基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキルアミノ基、 スルファニル基、 炭素 数 1〜 1 0のアルキルスルファニル基、 又は、 炭素数 1〜 1 0のァラルキルスル ファニル基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体をェナンチォ選択 的に還元することを特徴とする、 一般式 （ 1 0 )
Figure imgf000054_0001
(式中、 X及び Y 1は、 前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表され る光学活性ヒ ドロキシュチルピリジン誘導体の製造方法。
1 9 . Y 1は、 塩素を表す請求項 1 8記載の製造方法。
2 0 . Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 1 8又 は 1 9記載の製造方法。
2 1 . ェナンチォ選択的な還元が （R ) 選択的な還元であり、 微生物由来の力 ルポニル還元酵素、 又は、 該カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物の培養 物若しくは該処理物を用いて行われるものである請求項 1 8、 1 9又は 2 0記载 の製造方法。
2 2 . カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア属、 キャンデ イダ属、 クリプトコッカス属、 デバリオマイセス属、 グイラーモンデラ属、 ハン ゼヌラ属、 メッニコビア属、 ピキア属、 ロ ドトルラ属、 ロ ドスポリジゥム属、 サ ッカロマイコプシス属、 シュヮニォマイセス属、 スポリディオボラス属、 スポロ ボロマイセス属、 トルラスボラ属、 ャロビア属に属する微生物である請求項 2 1 記載の製造方法。
2 3 . カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア · ゴシピィ、 キャンディダ ·カティヌラータ、 キャンディダ 'フルクタス、 キャンディダ 'ガ ラクタ、 キャンディダ ' グロペンジェセリイ一、 キャンディダ ' グイラーモンデ ィ一、 キャンディダ 'ヘムロニ一、 キャンディダ 'ホルミィ一、 キャンディダ - インタ一メディア、 キャンディダ ·マグノリエ、 キャンディダ ·マルトーサ、 キ ヤンデイダ ' メリ二一、 キャンディダ 'パラプシロシス、 キャンディダ 'ルゴ一 サ、 キャンディダ ' ソノレンシス、 キャンディダ ' トロピカリス、 キャンディダ -ュティリス、 キャンディダ ·ベルサティリス、 タリプトコッカス 'アルビダス •ノ ル ·アルビダス、 デバリオマイセス ·ハンセニー 'バラエティ · フアブリ一、 デバリオマイセス 'ハンセ二一、 デバリオマイセス 'マラマ、 デバリオマイセス ' ネノ、。レンシシ、 グイラーモンデラ ·セレノスポラ、 ハンゼヌラ グノレコジーマ、 ハンゼヌラ ·サッ レヌス、 メッニコビア · レゥカウブイ一、 ピキア ·ボビス、 ピ キア 'ファ リ ノーサ、 口 ド トノレラ · グゾレティニス · バノレ ·ダイレネンシス、 口 ド トルラ ·グラミニス、 ロ ドトルラ ' ミヌタ、 ロドトルラ .ルブラ、 ロ ドスポリジ ゥム .ディオボバタム、 ロ ドスポリジゥム .スファエロカーパム、 ロ ドスポリジ ゥム . ト ロイデス、 サッカロマイコプシス 'マランガ、 シュヮニォマイセス . カステリ一、 スポリディオボラス 'ジョンソニー、 スポロボロマイセス 'パラ口 セウス、 スポロボロマイセス 'サルモニカラー、 トルラスポラ 'デルブルエキー、 ャロビア · リポリティ力からなる群から選ばれた微生物である請求項 22記載の 製造方法。 24. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ ·マグノ リエ I FO 0705である請求項 23記載の製造方法。
25. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ属に属す る微生物由来であるカルボニル還元酵素をコ一ドする DNA、 及び該酵素が依存 する補酵素を再生する能力を有する酵素をコードする DNAを有するプラスミ ド で形質転換された形質転換細胞である請求項 2 1記載の製造方法。
26. 形質転換細胞が E. c o l i HB 1 0 1 (p NTCRG) 受託番号 F E RM-B P 6898である請求項 25記載の製造方法。
27. 一般式 （7)
Figure imgf000056_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 Y2はハ ロゲンを表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体に、 一般式 （1 1)
Figure imgf000056_0002
)
(式中、 R6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6〜 1 6のァリール基を表す。 ） で表されるカルボン酸を塩基と 4 級アンモニゥム塩の共存下に反応させることを特徴とする、 一般式 （1 2)
Figure imgf000056_0003
(式中、 X及び R6は前記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン 誘導体の製造方法。
28. R6は、 メチル基、 t e ！ ブチル基、 又は、 フエニル基のいずれか を表す請求項 27記載の製造方法 c
29. Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 27又 は 28記載の製造方法。
30. Y2は、 塩素である請求項 2 7、 28又は 29記載の製造方法 c
3 1 . 塩基が、 炭酸水素ナトリゥム、 炭酸ナトリゥム、 炭酸水素力リゥム又は 炭酸力 IIゥムのいずれかである請求項 2 7、 2 8、 2 9又は 3 0記載の製造方法。
3 2 . 4級アンモニゥム塩が、 塩化テトラ n—プチルアンモニゥム又は臭化テ トラ n—ブチルアンモニゥムのいずれかである請求項 2 7、 2 8、 2 9、 3 0又 は 3 1に記載の製造方法。
Figure imgf000057_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1 ~ 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 R 6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6 〜 1 6のァリール基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体をェナン チォ選択的に還元することを特徴とする、 一般式 （ 1 3 )
Figure imgf000057_0002
(式中、 X及び R 6は、 前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表され る光学活性ァシロキシヒ ドロキシヱチルピリジン誘導体の製造方法。
3 4 . R 6は、 メチル基、 t e r t —ブチル基、 又は、 フエニル基のいずれか を表す請求項 3 3記載の製造方法。
3 5 . Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 3 3又 は 3 4記載の製造方法。
3 6 . —光学活性ァシロキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体 （ 1 3 ) ( R ) —体の立体配置を有する請求項 3 3 、 3 4、 又は、 3 5記載の製造方法。
3 7 . ェナンチォ選択的な還元が （R ) 選択的な還元であり、 微生物由来の力 ルポニル還元酵素、 又は、 該カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物の培養 物若しくは該処理物を用いて行われるものである請求項 3 3 、 3 4 、 3 5又は 3
6に記載の製造方法。
3 8 . カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア属、 キャンデ イダ属、 クリプトコッカス属、 デバリオマイセス属、 グイラ一モンデラ属、 ハン ゼヌラ属、 メッニコビア属、 ピキア属、 ロ ドトルラ属、 ロ ドスポリジゥム属、 サ ッカロマイコプシス属、 シュヮニォマイセス属、 スポリディオボラス属、 スポロ ポロマイセス属、 トルラスボラ属、 ャロビア属に属する微生物である請求項 3 7 に記載の製造方法。
3 9 . カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア · ゴシピィ、 キャンディダ 'カティヌラータ、 キャンディダ ' フルクタス、 キャンディダ 'ガ ラクタ、 キャンディダ ' グロペンジェセリイ一、 キャンディダ ' グイラーモンデ ィー、 キャンディダ 'ヘムロニー、 キャンディダ 'ホルミィ一、 キャンディダ ' インタ一メディア、 キャンディダ ·マグノ リエ、 キャンディダ ·マルト一サ、 キ ヤンディダ ' メリ二一、 キャンディダ 'パラプシロシス、 キャンディダ 'ルゴ一 サ、 キャンディダ · ソノレンシス、 キャンディダ · トロピカリス、 キャンディダ
. ュティリス、 キャンディダ 'ベルサティリス、 クリプトコッカス .アルビダス
• バノレ ·アルビダス、 デバリォマイセス ·ハンセニー ·バラエティ ·フアブリ一、 デバリオマイセス 'ハンセニー、 デバリオマイセス .マラマ、 デバリオマイセス
'ネパレンシシ、 グイラーモンデラ 'セレノスポラ、 ハンゼヌラ ·グ^^コジーマ、 ハンゼヌラ 'サッ ヌス、 メッニコビア ' レゥカウフィ一、 ピキア 'ボビス- ピ キア ' ファリノ—サ、 口 ドトノレラ · グノレティニス ·バノレ ·ダイレネンシス、 口 ド トルラ ·グラミニス、 口 ドトルラ · ミヌタ、 ロ ドトルラ ·ルブラ、 口 ドスポリジ ゥム 'ディオボバタム、 ロ ドスポリジゥム 'スファェロカ一パム、 ロ ドスポリジ ゥム . トルロイデス、 サッカロマイコプシス 'マランガ、 シュヮニォマイセス . カステリ一、 スポリディオボラス 'ジョンソ二一、 スポロボロマイセス ·パラ口 セウス、 スポロボロマイセス .ザ/レモ二カラー、 トノレラスポラ 'デノレブノレェキー、 ャロビア · リポリティ力からなる群から選ばれた微生物である請求項 3 8に記載 の製造方法。 40. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ ·マグノ リエ I FO 0705である請求項 3 9に記載の製造方法。
4 1. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ属に属す る微生物由来であるカルボニル還元酵素をコードする DNA、 及び該酵素が依存 する補酵素を再生する能力を有する酵素をコードする DNAを有するプラスミ ド で形質転換された形質転換細胞である請求項 3 7に記載の製造方法。
42. 形質転換細胞が E. c o 1 i HB 1 0 1 (p NTC RG) 受託番号 F E RM-B P 68 98である請求項 4 1に記載の製造方法。
43. ェナンチォ選択的な還元は、 ルテニウム錯体と光学活性ァミンと塩基と で調製される触媒により、 水素移動源を用いた水素移動型還元で行われるもので ある請求項 3 3、 34、 3 5又は 3 6に記載の製造方法。 44. 水素移動源はィソプロピルアルコールである請求項 4 3に記載の製造方 法。
45. ルテニウム錯体として、 四塩化ビス （ 6—ベンゼン） 二ルテニウム、 四塩化ビス （" 6— p—シメン） 二ルテニウム、 又は、 四塩化ビス （η 6—メシ チレン） 二ルテニウムのいずれかを用いる請求項 4 3又は 44に記載の製造方法。
46. —光学活性ァミンとして、 （S， S) — N— p—トシル一 1， 2—ジフエ ニルエチレンジァミン、 又は、 （R， R) — N—p—トシルー 1， 2—ジフエ二 ルエチレンジァミンのいずれかを用いる請求項 43、 44又は 4 5に記載の製造 方法。
4 7. 一般式 （ 1 3)
Figure imgf000060_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 R6は、 炭素数 1〜1 5のアルキル基、 炭素数 1〜1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6 〜1 6のァリール基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表される光学活性ァシロ キシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体に、 低級アルコール溶媒中、 水酸化 4級ァ ンモニゥム存在下、 加溶媒分解を行うことを特徴とする、 一般式 （1 4)
Figure imgf000060_0002
(式中、 Xは前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表される光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法。
48. R6は、 メチル基、 t e r t—ブチル基、 又は、 フエニル基のいずれか を表す請求項 4 7に記載の製造方法。
49 Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 4 7又 は 48記載の製造方法。
50. —低級アルコール溶媒として、 メチルアルコールを使用する請求項 4 7、
48又は 4 9記載の製造方法。
5 1. 水酸化 4級アンモニゥムとして、 水酸化テトラ n—ブチルアンモニゥム を使用する請求項 4 7、 48、 49又は 50記載の製造方法。
52. 加溶媒分解後の反応液に低極性溶剤を添加して、 光学活性ジヒ ドロキシ ェチルピリジン誘導体 （1 4) を結晶として取得する請求項 4 7、 48、 4 9、
50又は 5 1記載の製造方法。
53. 低極性溶剤としてトルエンを使用する請求項 52記載の製造方法。 54. —般式 （5) 0
、
(5) (式中、 Y2は、 ハロゲンを表す。 Zは、 水素、 アルカリ金属、 ハロゲン化アル カリ土類金属、 又は、 炭素数 1〜 1 0のシリル基を表す。 ） で表されるハロゲン 化酢酸誘導体に塩基を作用させてエノラートを調製し、 これを一般式 （6)
Figure imgf000061_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 ァミノ基、 又は、 置換ァミノ基を表す。 R3は、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素数 1〜 1 0のァラルキル基を表す。 ） で表 される置換ニコチン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付して、 一般式 （7)
Figure imgf000062_0001
. (式中、 Y2及び Xは、 前記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルピリジ ン誘導体を調製し、 これをェナンチォ選択的に還元することを特徴とする、 一般 式 （1 5)
Figure imgf000062_0002
(式中、 Y2及び Xは、 前記と同じ基を表す。 *は、 不斉炭素を表す。 ） で表さ れる光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法。
55 -般式 （5)
Figure imgf000062_0003
(5)
(式中、 Y2は、 ハロゲンを表す。 Zは、 水素、 アルカリ金属、 ハロゲン化アル カリ土類金属、 又は、 炭素数 1〜 1 0のシリル基を表す。 ） で表されるハロゲン 化酢酸誘導体に塩基を作用させてエノラートを調製し、 これを一般式 （6)
Figure imgf000062_0004
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 R3は、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素数 1〜 1 0のァラルキル基を表す。 ） で表 される置換ニコチン酸エステルと反応させた後、 酸処理に付して、 一般式 （7)
Figure imgf000063_0001
(式中、 Y2及び Xは、 前記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルピリジ ン誘導体を調製し、 これをェナンチォ選択的に還元して、 一般式 （1 5)
Figure imgf000063_0002
(式中、 Y2及び Xは、 前記と同じ基を表す。 *は、 不斉炭素を表す。 ） で表さ れる光学活性ヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を調製し、 更に塩基で処理するこ とを特徴とする、 一般式 （1 6)
Figure imgf000063_0003
(式中、 Xは、 前記と同じ基を表す。 *は、 不斉炭素を表す。 ） で表される光学 活性ォキシラン誘導体の製造方法。
56. Y2は、 塩素を表す請求項 54又は 55記載の製造方法。 57. Zは、 ナトリウム又は塩化マグネシウムを表す請求項 54、 5 5又は 5 6記載の製造方法。
58. 塩基は、 一般式 （8) WO 00/48997 ,Λ PCT/JP00/00861 --
62
Q
R5 (8)
(式中、 R4及び R5は、 独立して、 炭素数 1〜 1 0のアルキル基又は炭素数 1 〜 1 0のシリル基を表す。 Qは、 ハロゲンを表す。 ） で表されるマグネシウムァ ミ ドである請求項 54、 5 5、 56又は 5 7記載の製造方法。
5 9. R4及び R5は、 それぞれ、 イソプロピル基を表す請求項 58記載の製 造方法。
60. Qは、 塩素を表す請求項 58又は 59記載の製造方法。
6 1. Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基を表す請求項 54、 5 5、 56、
57、 58、 59又は 60記載の製造方法。
62. ェナンチォ選択的な還元が （R) 選択的な還元であり、 微生物由来の力 ルポニル還元酵素、 又は、 該カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物の培養 物若しくは該処理物を用いて行われるものである請求項 54、 5 5、 5 6、 5 7、 58、 5 9、 60又は 6 1記載の製造方法。
63. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア属、
イダ属、 クリプトコッカス属、 デバリオマイセス属、 グイラ一モンデラ属、 ハン ゼヌラ属、 メッニコビア属、 ピキア属、 ロ ドトルラ属、 ロ ドスポリジゥム属、 サ ッカロマイコプシス属、 シュヮニォマイセス属、 スポリディオボラス属、 スポロ ボロマイセス属、 トルラスボラ属、 ャロビア属に属する微生物である請求項 6 2 記載の製造方法。
64. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア · ゴシピィ、 キャンディダ . カティヌラ一タ、 キャンディダ ' フルクタス、 キャンディダ ' ガ ラクタ、 キャンディダ ' グロペンジェセリイ一、 キャンディダ ' グイラ一モンデ ィー、 キャンディダ 'ヘムロニー、 キャンディダ 'ホルミィ一、 キャンディダ * インターメディア、 キャンディダ .マグノ リエ、 キャンディダ 'マルトーサ、 キ ヤンデイダ ' メリ二一、 キャンディダ 'パラプシロシス、 キャンディダ 'ルゴ一 サ、 キャンディダ ' ソノレンシス、 キャンディダ ' トロピカリス、 キャンディダ 'ュティリス、 キャンディダ 'ベルサティ リス、 クリプトコッカス 'アルビダス .バル■アルビダス、 デバリオマイセス ·ハンセニ一 ·バラエティ · フアブリ一、 デバリオマイセス ' ハンセ二一、 デバリオマイセス 'マラマ、 デバリオマイセス 'ネパレンシシ、 グイラ一モンデラ 'セレノスポラ、 ハンゼヌラ 'ダルコジーマ、 ハンゼヌラ 'サツルヌス、 メッニコビア ' レゥカウフィ一、 ピキア 'ボビス、 ピ キア · ファリノ—サ、 口 ドトルラ ·グルティニス ·ノくノレ ·ダイレネンシス、 口 ド トルラ . グラミニス、 ロ ドトルラ . ミヌタ、 ロ ドトルラ .ルブラ、 ロ ドスポリジ ゥム .ディオボバタム、 ロ ドスポリジゥム . スファェロカ一パム、 ロ ドスポリジ ゥム . トルロイデス、 サッカロマイコプシス 'マランガ、 シュヮニォマイセス ' カステリ一、 スポリディオボラス 'ジョンソニー、 スポロボロマイセス 'パラ口 セウス、 スポロボロマイセス .サノレモニカラ一、 トノレラスポラ .デレブノレエキー、 ャロビア · リポリティ力からなる群から選ばれた微生物である請求項 63記載の 製造方法。 65. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ ·マグノ リエ I FOO 705である請求項 64記載の製造方法。
66. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ属に属す る微生物由来であるカルボニル還元酵素をコ一ドする DNA、 及び該酵素が依存 する補酵素を再生する能力を有する酵素をコードする DNAを有するプラスミ ド で形質転換された形質転換細胞である請求項 62記載の製造方法。
67. 形質転換細胞が E. c o l i HB 10 1 (p NTC RG) 受託番号 F E RM-B P 68 98である請求項 66記載の製造方法。
68. -般式 （7)
Figure imgf000066_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜 1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 ◦のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換ァミノ基を表す。 Y2はハ ロゲンを表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体に、 一般式 （1 1)
Figure imgf000066_0002
(式中、 R6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル 基、 又は、 炭素数 6〜1 6のァリール基を表す。 ) で表されるカルボン酸を塩基 と 4級アンモニゥム塩の共存下に反応させ一般式 （1 2)
Figure imgf000066_0003
(式中、 X及び R6は前記と同じ基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン 誘導体を調製し、 これをェナンチォ選択的に還元して一般式 （1 3)
Figure imgf000066_0004
(式中、 X及び R6は、 前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表され る光学活性ァシロキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を調製し、 これを加溶媒 分解することを特徴とする、 一般式 （ 1 4)
Figure imgf000067_0001
(式中、 Xは前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表される光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体の製造方法。
6 9. R6は、 メチル基、 t e r t一ブチル基、 又は、 フエニル基のいずれか を表す請求項 68記載の製造方法。
70. Xは、 水素、 塩素又はァセチルァミノ基のいずれかを表す請求項 68又 は 6 9記載の製造方法。
7 1. Y2は、 塩素である請求項 68、 6 9又は 70記載の製造方法。
72. 塩基が、 炭酸水素ナトリウム、 炭酸ナトリウム、 炭酸水素カリウム又は 炭酸カリウムのいずれかである請求項 68、 69、 70又は 7 1記載の製造方法。
73. 4級アンモニゥム塩が、 塩化テトラ n—プチルアンモニゥム又は臭化テ トラ n—ブチルアンモニゥムのいずれかである請求項 68、 69、 70、 71又 は 72に記載の製造方法。
74. 光学活性ァシロキシヒ ドロキシェチルピリジン誘導体が （R) —体の立 体配置を有する請求項 68、 6 9、 70、 71、 72又は 73記載の製造方法。
75. ェナンチォ選択的な還元が （R) 選択的な還元であり、 微生物由来の力 ルポニル還元酵素、 又は、 該カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物の培養 物若しくは該処理物を用いて行われるものである請求項 68、 6 9、 70、 7 1、 72、 73又は 74記載の製造方法。
7 6 . カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア属、 キャンデ イダ属、—クリプトコッカス属、 デバリオマイセス属、 グイラーモンデラ属、 ハン ゼヌラ属、 メッニコビア属、 ピキア属、 ロ ドトルラ属、 ロ ドスポリジゥム属、 サ ッカロマイコプシス属、 シュヮニォマイセス属、 スポリディオボラス属、 スポロ ボロマイセス属、 卜ルラスボラ属、 ャロビア属に属する微生物である請求項 7 5 記載の製造方法。
7 7 . カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 ァシビア · ゴシピィ、 キャンディダ 'カティヌラータ、 キャンディダ ' フルクタス、 キャンディダ 'ガ ラクタ、 キャンディダ ' グロペンジェセリイ一、 キャンディダ ' グイラーモンデ ィー、 キャンディダ 'ヘムロニ一、 キャンディダ ' ホ^^ミィ一、 キャンディダ インターメディア、 キャンディダ 'マグノリエ、 キャンディダ 'マルトーサ、 キ ヤンデイダ ' メリニー、 キャンディダ 'パラプシロシス、 キャンディダ 'ルゴ一 サ、 キャンディダ · ソノレンシス、 キャンディダ ' トロピカリス、 キャンディダ 'ュティリス、 キャンディダ 'ベルサティリス、 クリプトコッカス 'アルビダス •バル .アルビダス、 デバリオマイセス ·ハンセニー ·バラエティ · フアブリ一、 デバリオマイセス 'ハンセ二一、 デバリオマイセス 'マラマ、 デバリオマイセス 'ネパレンシシ、 グイラーモンデラ 'セレノスポラ、 ノヽンゼヌラ ' ダルコジーマ、 ハンゼヌラ 'サツルヌス、 メッニコビア ' レゥカウフィ一、 ピキア 'ボビス、 ピ キア ' ファリノ—サ、 口 ドトルラ ·グノレティニス · ノくノレ · ダイレネンシス、 口 ド トルラ ·グラミニス、 口 ドトルラ · ミヌタ、 ロ ドトルラ ·ルブラ、 口 ドスポリジ ゥム .ディオボバタム、 ロ ドスポリジゥム ' スファェロカ一パム、 ロ ドスポリジ ゥム . トルロイデス、 サッカロマイコプシス 'マランガ、 シュヮニォマイセス ' カステリ一、 スポリディオボラス 'ジョンソニー、 スポロボロマイセス 'パラ口 セウス、 スポロボロマイセス 'サルモニカラ一、 トノレラスポラ 'デルブルエキー、 ャロビア · リポリティ力からなる群から選ばれた微生物である請求項 7 6記載の 製造方法。
法 8
2
7 8. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ ·マグノ リエ I FO 0 7 0 5である請求項 7 7記載の製造方法。
7 9. カルボニル還元酵素の産生能を有する微生物が、 キャンディダ属に属す る微生物由来であるカルボニル還元酵素をコードする DNA、 及び該酵素が依存 する補酵素を再生する能力を有する酵素をコードする DN Aを有するプラスミ ド で形質転換された形質転換細胞である請求項 7 5載の製造方法。
80. 形質転換細胞が E. c o l i HB l O l (p NTC RG) 受託番号 F E RM- B P 6 8 9 8である請求項 7 9記載の製造方法。
8 1. ェナンチォ選択的な還元は、 ルテニウム錯体と光学活性ァミンと塩基と で調製される触媒により、 水素移動源を用いた水素移動型還元で行われるもので ある請求項 6 8、 6 9、 70、 7 1、 7 2、 73又は 74記載の製造方法。 水素移動源はィソプロピルアルコールである請求項 8 1に記載の製造方
8 3. ルテニウム錯体として、 四塩化ビス （η 6—ベンゼン） 二ルテニウム、 四塩化ビス （ η 6— ρ—シメン） 二ルテニウム、 又は、 四塩化ビス （ 77 6—メシ チレン） 二ルテニウムのいずれかを用いる請求項 8 1又は 8 2に記載の製造方法。
84. 光学活性ァミンと して、 （S， S) — Ν— ρ— トシル一 1， 2—ジフエ ニルエチレンジァミン、 又は、 （R， R) 一 N— p— トシル一 1， 2—ジフエ二 ルエチレンジァミンのいずれかを用いる請求項 8 1、 8 2又は 8 3記載の製造方 法。
8 5. 加溶媒分解を低級アルコール溶媒中で行う請求項 6 8、 6 9、 70、 7 1、 7 2、 7 3、 74、 7 5、 7 6、 7 7、 7 8、 7 9、 80、 8 1、 8 2、 8 3又は 84記載の製造方法 c
8 6. —低級アルコール溶媒として、 メチルアルコールを使用する請求項 8 5記 載の製造方法。
8 7. 加溶媒分解を水酸化 4級アンモニゥム存在下で行う請求項 6 8、 6 9、 70、 7 1、 72、 73、 74、 7 5、 7 6、 7 7、 7 8、 7 9、 8 0、 8 1、 8 2、 8 3、 84、 8 5又は 8 6記載の製造方法。 8 8. 水酸化 4級アンモニゥムとして、 水酸化テトラ n—ブチルアンモニゥム を使用する請求項 8 7記載の製造方法。
8 9. 加溶媒分解後の反応液に低極性溶剤を添加して、 光学活性ジヒ ドロキシ ェチルピリジン誘導体 （1 4) を結晶として取得する請求項 6 8、 6 9、 70、 7 1、 7 2、 73、 74、 7 5、 76、 7 7、 78、 7 9、 8 0、 8 1、 8 2、 8 3、 84、 8 5、 8 6、 8 7又は 8 8記載の製造方法。
9 0. 低極性溶剤としてトルエンを使用する請求項 8 9記載の製造方法。 9 一般式 （1 2)
Figure imgf000070_0001
(式中、 Xは、 水素、 ハロゲン、 水酸基、 炭素数 1〜1 0のァシルォキシ基、 炭 素数 1〜 1 0のアルコキシ基、 アミノ基、 又は、 置換アミノ基を表す。 R6は、 炭素数 1〜 1 5のアルキル基、 炭素数 1〜 1 5のァラルキル基、 又は、 炭素数 6 〜1 6のァリール基を表す。 ） で表される置換ァセチルビリジン誘導体を塩基の 存在下、 ェナンチォ選択的に還元しつつ加溶媒分解し、 一般式 （1 4) (14)
(式中、 Xは前記と同じ基を表す。 *は不斉炭素を表す。 ） で表される光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体を直接取得することを特徴とする、 光学活性 ジヒ ドロキシェチルピリジン誘導体 （1 4) の製造方法。
92. ェナンチォ選択的な還元は、 ルテニウム錯体と光学活性ァミンと塩基と で調製される触媒により、 水素移動源を用いた水素移動型還元で行われるもので ある請求項 9 1記載の製造方法。
93. 水素移動源はィソプロピルアルコールである請求項 9 2に記載の製造方 法。
94. ルテニウム錯体として、 四塩化ビス （7? 6—ベンゼン） 二ルテニウム、 四塩化ビス （ 7] 6— 一シメン） 二ルテニウム、 又は、 四塩化ビス （ 7] 6—メシ チレン） 二ルテニウムのいずれかを用いる請求項 9 2又は 93記載の製造方法。 95. 光学活性ァミンとして、 （S， S) — N— p—トシルー 1， 2—ジフエ ニルエチレンジァミン、 又は、 （R， R) — N—p—トシルー 1， 2—ジフエ二 ルエチレンジァミンのいずれかを用いる請求項 92、 93又は 94記載の製造方 法。
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