UA129038C2

UA129038C2 - Сухий порошкоподібний склад антитіла, що зв'язує тимічний стромальний лімфопоетин (tslp)

Info

Publication number: UA129038C2
Application number: UAA202201316A
Authority: UA
Inventors: Кетрін Ежені Чайлан Хантінгтон; Кэтрин Эжени Чайлан Хантингтон; Сьюзан Хоу; Пракаш Маніквар; Пракаш МАНИКВАР; Роланд Вільгельм Колбек; Роланд Вильхельм Колбек; Емма Сюзанн Коен; Эмма Сюзанн Коен; Саба Газвіні; Саба Газвини; Давід Лечуга-Баллестерос; Давид Лечуга-Баллестерос; Келліса Бет Хансен; Келлиса Бет Хансен; Декстер Джозеф Д'Са
Original assignee: Медіммуне Лімітед; Медиммуне Лимитед
Priority date: 2019-10-28
Filing date: 2020-10-27
Publication date: 2024-12-25
Also published as: US20250099386A1; HUE071069T2; BR112022008031A2; CN114867748B; CA3154999A1; CN114867748A; PL4051708T3; WO2021083908A1; US20210121406A1; EP4051708B1; US20230201120A1; JP2025169423A; TW202131947A; AU2020376222A1; SI4051708T1; US11904053B2; EP4051708A1; AR120309A1; US12178911B2; EP4534075A2

Abstract

Винахід стосується сухого порошкоподібного складу антитіла, специфічного до тимусного стромального лімфопоетину (TSLP).

Description

1. Сухий порошкоподібний склад, що містить множину мікрочастинок, при цьому мікрочастинки містять: а) від 8 до 11 95 лейцину за вагою;

Б) від 2 до 4 95 трилейцину за вагою; й с) антигензв'язуючий фрагмент антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (Т5І Р), що містить: варіабельний домен важкого ланцюга, що містить: 1) послідовність СІКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 1; 11) послідовність СІК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 2; 1 1) послідовність СЮОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 3, 1 варіабельний домен легкого ланцюга, що містить: 1) послідовність СІ)КІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 5; 11) послідовність СІКО легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 6; 1 1) послідовність СІ)КЗ3 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 7; при цьому лейцин і трилейцин присутні у співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин, що становить від 1:1 до 12.1. 2. Сухий порошкоподібний склад за п. І, який відрізняється тим, що зазначений сухий порошкоподібний склад характеризується щільністю спресованої нерозфасованої речовини, що становить 0,4-1,0 г/см". 3. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх пунктів, який додатково містить засіб для стабілізації скла. 4. Сухий порошкоподібний склад за п. 3, який відрізняється тим, що зазначений засіб для стабілізації скла являє собою аморфний сахарид або буфер. 5. Сухий порошкоподібний склад за п. 3, який відрізняється тим, що зазначений засіб для стабілізації скла містить аморфний сахарид і буфер. б. Сухий порошкоподібний склад за п. 4 або 5, який відрізняється тим, що зазначений аморфний сахарид вибраний з групи, що складається з трегалози, сахарози, рафінози, інуліну, декстрану, маніту та циклодекстрину.

7. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 4-6, який відрізняється тим, що зазначений буфер вибраний з групи, що складається з цитратного буфера, фосфатного буфера, гістидинового буфера, гліцинового буфера, ацетатного буфера та тартратного буфера. 8. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 4-7, який відрізняється тим, що зазначений аморфний сахарид являє собою трегалозу. 9. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 1-8, який відрізняється тим, що зазначене співвідношення концентрацій лейцин:трилейцин становить 5,25:1. 10. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 1-9, який містить 10,5 о лейцину за вагою та 2 о трилейцину за вагою. 11. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 1-10, який додатково містить поверхнево-активну речовину, при цьому поверхнево-активну речовину необов'язково вибирають з полісорбату-20 (Р5б-20), полісорбату-40 (Р5-40), полісорбату-б0 (РБ-60), полісорбату-80 (Р5-80) 1 полоксамеру-188. 12. Сухий порошкоподібний склад за п. 11, який відрізняється тим, що зазначена поверхнево-активна речовина являє собою Р5-80, при цьому необов'язково Р5-80 присутній в концентрації у діапазоні від 0,27 до 2,7 о за вагою, необов'язково від 0,67 до 1,33 905 за вагою. 13. Сухий порошкоподібний склад за п. 12, який відрізняється тим, що зазначений Р5-80 присутній в концентрації 1,1 90 за вагою. 14. Сухий порошкоподібний склад, що містить множину мікрочастинок, при цьому мікрочастинки містять: а) 10,5 7о лейцину за вагою;

Б) 2 о трилейцину за вагою; с) від 1 до 40 95 за вагою антигензв'язуючого фрагмента антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (Т5І Р), що містить: варіабельний домен важкого ланцюга, що містить: 1) послідовність СІКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 1; 11) послідовність СІК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 2; 1 1) послідовність СЮОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 3; 1 варіабельний домен легкого ланцюга, що містить:

1) послідовність СІ)КІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 5; 11) послідовність СІКО легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 6; 1 1) послідовність СІ)КЗ3 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 7; 4) 1,1 9о за вагою полісорбату-80; е) буфер; і

Ї) трегалозу в кількості за вагою для отримання 100 96. 15. Сухий порошкоподібний склад за п. І, який відрізняється тим, що зазначений антигензв'язуючий фрагмент містить: а) варіабельний домен важкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 4; 1

Б) варіабельний домен легкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 8. 16. Сухий порошкоподібний склад за п. 15, який відрізняється тим, що зазначений антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 28, 1 легкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у

ЗБО ІРР МО: 29. 17. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що зазначений антигензв'язуючий фрагмент вибраний з Каб, Каб", Е(аб')2, 5сЕу, мінітіла або діатіла. 18. Сухий порошкоподібний склад за п. 17, який відрізняється тим, що зазначений антигензв'язуючий фрагмент являє собою Гар. 19. Сухий порошкоподібний склад за п. 18, який відрізняється тим, що зазначений Каб є людським або гуманізованим. 20. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що зазначене антитіло до Т5ІР, з якого отриманий антигензв'язуючий фрагмент, являє собою Ів 1. 21. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 1-20 для застосування у способі лікування. 22. Сухий порошкоподібний склад для застосування за п. 21 у способі лікування астми. 23. Сухий порошкоподібний склад для застосування за п. 22, який відрізняється тим, що зазначена астма являє собою астму легкого ступеня тяжкості, астму помірного ступеня тяжкості, астму тяжкого ступеня тяжкості, еозинофільну форму астми або нееозинофільну форму астми, або низьку еозинофільну форму астми.

24. Сухий порошкоподібний склад для застосування за п. 22, який відрізняється тим, що зазначена астма характеризується менше ніж трьома з наступного: симптоми астми у денний час - більше двох разів на тиждень; нічні пробудження у зв'язку з астмою; застосування засобу для полегшення астми - понад два рази на тиждень; й обмеження активності у зв'язку з астмою. 25. Сухий порошкоподібний склад для застосування за будь-яким із пп. 21-24, який відрізняється тим, що зазначений склад підлягає введенню за допомогою інгаляції. 26. Сухий порошкоподібний склад за п. 14, який відрізняється тим, що антигензв'язуючий фрагмент містить: а) варіабельний домен важкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 4;:1

Ь) варіабельний домен легкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 8. 27. Сухий порошкоподібний склад за п. 26, який відрізняється тим, що антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у БЕО ІЮ МО: 28, і легкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 29. 28. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 14, 26 або 27, який відрізняється тим, що зазначений антигензв'язуючий фрагмент вибраний з Каб, Каб, К(аб')2, 5сЕу, мінітіла або діатіла. 29. Сухий порошкоподібний склад за п. 28, який відрізняється тим, що зазначений антигензв'язуючий фрагмент являє собою Гар. 30. Сухий порошкоподібний склад за п. 29, який відрізняється тим, що зазначений Каб є людським або гуманізованим. 31. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 14 або 26-30, який відрізняється тим, що зазначене антитіло до Т5ІР, з якого отриманий антигензв'язуючий фрагмент, являє собою Ів 1. 32. Сухий порошкоподібний склад за будь-яким із пп. 14 або 26-31 для застосування у способі лікування. 33. Сухий порошкоподібний склад за п. 32 для застосування у способі лікування астми. 34. Сухий порошкоподібний склад для застосування за п. 33, який відрізняється тим, що зазначена астма являє собою астму легкого ступеня тяжкості, астму помірного ступеня тяжкості, астму тяжкого ступеня тяжкості, еозинофільну форму астми або нееозинофільну форму астми, або низьку еозинофільну форму астми. 35. Сухий порошкоподібний склад для застосування за п. 33, який відрізняється тим, що астма характеризується менше ніж трьома з наступного:

симптоми астми у денний час - більше двох разів на тиждень;

нічні пробудження у зв'язку з астмою;

застосування засобу для полегшення астми - понад два рази на тиждень; й обмеження активності у зв'язку з астмою.

36. Сухий порошкоподібний склад для застосування за будь-яким із пп. 32-35, який відрізняється тим, що зазначений склад підлягає введенню за допомогою інгаляції.

37. Антигензв'язуючий фрагмент антитіла до Т5І1Р, який містить важкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 28; 1 легкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 29, при цьому антигензв'язуючий фрагмент являє собою Каб, отриманий з Ів.

Спосіб за даним винаходом у цілому відноситься до сухих порошкоподібних складів антигензв'язуючих фрагментів, отриманих із антитіл, специфічних до тимічного стромального лімфопоетину (Т5І Р), а також до способів лікування бронхіальної астми, у тому числі бронхіальної астми легкого, помірного та важкого ступеня тяжкості, бронхіальної астми та нееозинофільної форми бронхіальної астми/низьковгозинофільної форми бронхіальної астми із застосуванням сухих порошкоподібних складів за допомогою доставки у легені. Сухі порошкоподібні склади містять суміш лейцину та трилейцину, в результаті чого утворюється склад, зокрема, придатний для доставки антигензв'язуючих фрагментів, отриманих із антитіл до Т5І Р, за допомогою інгаляції.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

За оцінками, бронхіальна астма вражає 300 мільйонів людей у всьому світі, включаючи всі вікові групи, та створює серйозний тягар для системи охорони здоров'я та суспільства через втрату продуктивності на робочому місці та порушення сімейного життя. ("РосКеї Сціде їог АзШта

Мападетепі апа Ргемепііоп," СіІобаї Іпійайме Тог Авіпта; 2019). Бронхіальна астма викликає симптоми, такі як свистяче дихання, задишка, стиснення в грудях та кашель, які згодом варіюють залежно від їх виникнення, частоти та інтенсивності. Симптоми часто асоційовані із бронхоконстрикцією, потовщенням стінок дихальних шляхів та підвищеним виділенням слизу. Бронхіальна астма може характеризуватися різними ступенями прояву симптомів та бути добре контрольованою або слабко контрольованою залежно від кількості нападів та тяжкості.

Тимічний стромальний лімфопоетин (Т5ІР), цитокін епітеліальних клітин, що продукується у відповідь на середовищні та прозапальні подразники, призводить до активації численних запальних клітин та нижчерозташованих шляхів. Рівень ТЗІ Р є підвищеним у дихальних шляхах пацієнтів із бронхіальною астмою та корелює з експресією цитокінів ТН2 та хемокінів та тяжкістю захворювання.

Хоча Т5І Р займає центральне місце у регуляції імунітету у зв'язку з ТП2, він також може відігравати ключову роль в інших шляхах запалення і, таким чином, мати відношення до численних фенотипів бронхіальної астми.

Доставка антитіл до Т5ІР пацієнту, зокрема, за допомогою інгаляції, могла б забезпечити покращений спосіб лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму, у тому числі пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму легкого ступеня тяжкості, яким може знадобитися щоденне введення низьких доз.

КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ

З урахуванням викладеного вище, в одному з аспектів у даному документі представлений сухий порошкоподібний склад, що містить безліч мікрочастинок, при цьому мікрочастинки містять: лейцин, від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину за вагою та антигензв'язуючий фрагмент антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (Т5І Р).

У деяких варіантах здійснення, антигензв'язуючий фрагмент антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (Т5І Р) містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить: послідовність СОК1 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5БО ІЮО МО: 1, послідовність СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО

І МО: 2, та послідовність СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 3, при цьому будь-яка СОКІ, 2 або 3 важкого ланцюга необов'язково містить одну амінокислотну заміну, та варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність

СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 5, послідовність СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮ

МО: 6, та послідовність СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЗЕО ІЮО МО: 7, при цьому будь-яка СОКІ, 2 або 3 легкого ланцюга необов'язково містить одну амінокислотну заміну, при цьому лейцин та трилейцин присутні у співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин, що становить від близько 0,1:11 до близько 30:11. В іншому аспекті у даному документі представлений спосіб лікування бронхіальної астми у пацієнта, що включає введення шляхом інгаляції сухого порошкоподібного складу за першим аспектом. В іншому аспекті у даному документі представлений сухий порошкоподібний склад відповідно до першого аспекту для застосування у способі лікування, при цьому склад слід вводити за допомогою інгаляції. У деяких варіантах здійснення склад призначений для застосування у лікуванні бронхіальної астми.

КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ

Викладені вище та інші характеристики та аспекти способу за даним винаходом можуть бути зрозумілі із наступного опису варіантів здійснення та проілюстровані у графічних матеріалах, що додаються. Додані графічні матеріали, які включені у даний документ та утворюють частину даного опису, служать додатково для ілюстрації принципів способу за даним винаходом. Графічні матеріали не обов'язково наведені у масштабі.

На Фіг. 1 зображено зв'язування Раб: з Т5І Р людини, виміряне за допомогою КіпЕХА.

На Фіг. 2 зображено зв'язування Раб; з Т5І Р яванського макака, виміряне з використанням КіпЕХА.

На Фіг. 3 зображено конкурентне зв'язування Рабі з Т5І Р людини як показник з використанням аналізу НТЕЕ.

На Фіг. 4 зображено, що Раб; пригнічує вивільнення ССІ 17 з РВМС, що зазнали впливу ТЗІ Р.

На Фіг. 5 зображено, що Рар'ї, Рарг та Рарз пригнічують індуковане Т5І Р вивільнення ССІ 17 з

РВМС.

На Фіг. бА-6С зображені РК профілі Барі у сироватці крові, ВАЇ та ЕЇР після інгаляції з одноразовим підвищенням дози (група 1 та 2) та повторним підвищенням дози (група 3).

На Фіг. 7 зображені мікрочастинки із сухого порошкоподібного складу відповідно до варіантів здійснення даного документа.

На Фіг. 8А зображені результати щільності спресованої нерозфасованої речовини залежно від вмісту лейцину та трилейцину у сухих порошкоподібних складах.

На Фіг. 88 зображено заповнення капсул сухими порошкоподібними складами, описаними у даному документі.

На Фіг. 9 зображені результати вимірювання питомої площі поверхні із використанням ВЕТ, м3/г, для мікрочастинок сухих порошкоподібних складів відповідно до варіантів здійснення даного документа.

На Фіг. 10 зображена непряма кореляція вмісту вологи залежно від концентрації лейцину.

На Фіг. 11А-110 зображена шорсткість поверхні мікрочастинок, як виявлено із використанням ЗЕМ.

На Фіг. 12 зображена кореляція між медіанним масовим аеродинамічним діаметром (ММАБ) та значеннями ваг. 95 лейцину та трилейцину.

На Фіг. 13 зображена кореляція між відкладенням на пристрої та значеннями ваг. 95 лейцину та трилейцину.

На Фіг. 14 зображена кореляція між фракцією дрібнодисперсних частинок (ЕРЕ) та значеннями ваг. Уо лейцину та трилейцину.

На Фіг. 15А зображено кількість невидимих неозброєним оком частинок після розведення складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Рар: та різні концентрації полісорбату-80 (Р5-80) до концентрації розчину

ЕРаб:, що становить 30 мг/мл (на фігурі "»" означає верхню межу розміру, що становить 200 мкм).

На Фіг. 158 зображено кількість невидимих неозброєним оком частинок після розведення складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Барі та різні концентрації РО-80 до концентрації розчину Рарі, що становить 2,5 мг/мл (на фігурі "2" означає верхню межу розміру, що становить 200 мкм).

На Фіг. 16А зображено кількість невидимих неозброєним оком частинок після розведення складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Рар: та різні концентрації полоксамеру-188 до концентрації розчину Рабр1, що становить 30 мг/мл (на фігурі "»" означає верхню межу розміру, що становить 200 мкм).

На Фіг. 168 зображено кількість невидимих неозброєним оком частинок після розведення складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Гарі та різні концентрації полоксамеру-188 до концентрації розчину Раб, що становить 2,5 мг/мл (на фігурі "»" означає верхню межу розміру, що становить 200 мкм).

На Фіг. 17А зображено 95 вмісту вологи складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Раб: та 1,1 55 Р5-80 після зберігання протягом 1 або З місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) та протягом З місяців при температурі 25 "С та відносній вологості 60 95 (25/60).

На Фіг. 178 зображено розподіл розміру частинок (РО) складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Раб та 1,1 95 Р5-80 після зберігання протягом 1 або З місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) та протягом З місяців при температурі 25 "С та відносній вологості 60 о (25/60).

На Фіг. 17С зображена морфологія частинок складу, що містить 40 95 (ваг./ваг.) Рар: та 1,1 95 Р5Б- 80 після зберігання протягом 1 або З місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) та протягом

З місяців при температурі 25 "С та відносній вологості 60 9Уо (25/60).

На Фіг. 18А зображено 95 вмісту вологи складу, що містить 1 95 (ваг./ваг.) Раб: та 1,1 95 Р5-80 після зберігання протягом 1 або З місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) та протягом З місяців при температурі 25 "С та відносній вологості 60 95 (25/60).

На Фіг. 188 зображено розподіл розміру частинок (РОЮ) складу, що містить 1 95 (ваг./ваг.) Раб: та 1,1 95 Р5-80 після зберігання протягом 1 або З місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) та протягом З місяців при температурі 25 "С та відносній вологості 60 о (25/60).

На Фіг. 18С зображена морфологія частинок складу, що містить 1 95 (ваг./ваг.) Рар: та 1,1 У5 Р5-80 після зберігання протягом 1 або З місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) та протягом З місяців при температурі 25 "С та відносній вологості 60 95 (25/60).

На Фіг. 19А зображено кількість невидимих неозброєним оком частинок після розведення складу, що містить 40 95 Раб! та 1,1 95 Р5-80 (ваг./ваг.) до концентрації розчину Раб:, що становить 30 мг/мл, після зберігання в умовах 40/75 протягом 1 або З місяці та в умовах 25/60 протягом З місяців.

На Фіг. 198 зображено кількість невидимих неозброєним оком частинок після розведення складу, що містить 1 95 Рабрі1 та 1,1 95 Р5-80 (ваг./ваг.) до концентрації розчину Рабр;:, що становить 0,75 мг/мл, після зберігання в умовах 40/75 протягом 1 або З місяці та в умовах 25/60 протягом З місяців.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ

Сухий порошковий склад, описаний у даному документі, задовольняє незадоволену потребу внаслідок забезпечення застосування зв'язуючих фрагментів антитіла до Т5ІР для лікування бронхіальної астми у первинній системі охорони здоров'я. Суб'єкти, що страждають на бронхіальну астму, зазвичай контролюють симптоми бронхіальної астми за допомогою фармацевтичних композицій, що доставляються самостійно, таких як бета-агоністи та/або глюкокортикоїди тривалої дії, за допомогою інгаляції.

У той час як існуючі біологічні лікарські препарати, або схвалені, або такі, що проходять клінічні випробування, пропонують нову парадигму лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму, вони, як правило, не можуть бути доставлені суб'єктам за допомогою звичного легеневого шляху.

Тезепелумаб, біологічний лікарський препарат нового покоління, являє собою моноклональне антитіло (тАБ) на основі імуноглобуліну С» (ІдО2) людини, яке зв'язується із Т5І Р, попереджаючи його взаємодію із рецепторним комплексом Т5ІР. У недавньому рандомізованому подвійному сліпому плацебо контрольованому дослідженні фази 2 у суб'єктів, що страждають на бронхіальну астму, які отримували підшкірні ін'єкції тезепелумабу, частота клінічно значущих загострень бронхіальної астми була нижчою, ніж у суб'єктів, які отримували плацебо (Соіїтеп еї а! (2017) МЕМ 377:936-946).

Даний винахід, описаний у даному документі, поєднує у собі терапевтичні переваги біологічних лікарських препаратів наступного покоління, таких як тезепелумаб, із більш звичним для суб'єктів, що страждають на бронхіальну астму, способом введення. Таким чином, даний винахід дозволяє застосовувати такі терапевтичні засоби наступного покоління первинної системи охорони здоров'я, за рахунок чого розширюється доступність цих лікарських препаратів для суб'єктів за межі досяжності спеціалізованої допомоги.

Крім того, склади, описані у даному документі, можуть бути особливо застосовні для лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму менш важкого ступеня тяжкості, яких зазвичай лікують у первинній системі охорони здоров'я. Наприклад, пацієнти із показником за шкалою Глобальної ініціативи з бронхіальної астми (СІМА), що становить З або менше, прийнятніше із показником за шкалою СІМА, що становить 2 або 3, можуть особливо піддаватися лікуванню за допомогою складу, описаного у даному документі. У певних варіантах здійснення пацієнти із показником за шкалою СІМА, що становить 3, піддаються лікуванню за допомогою складу, описаного у даному документі. У певних варіантах здійснення пацієнти із показником за шкалою СІМА, що становить 2, піддаються лікуванню за допомогою складу, описаного у даному документі. Крім того, за рахунок доставки біологічних лікарських препаратів безпосередньо у легені знижуються побічні ефекти, асоційовані із системним введенням (наприклад, запалення у місці ін'єкції).

Крім того, склади забезпечують можливість лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму помірного або тяжкого ступеня тяжкості, яких можна лікувати у первинній системі охорони здоров'я, або для лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму помірного та тяжкого ступеня тяжкості з обмеженим доступом до лікування за допомогою спеціалізованої допомоги.

Наприклад, склади можуть бути застосовні для лікування пацієнтів із бронхіальною астмою помірного або тяжкого ступеня тяжкості із показником за шкалою Глобальної ініціативи з бронхіальної астми (СІМА), що становить 4-5. Відповідно, склади забезпечують можливість лікування бронхіальної астми помірного та тяжкого ступеня тяжкості, яка є неконтрольованою. Відповідно, склади забезпечують можливість лікування бронхіальної астми помірного та тяжкого ступеня тяжкості, яка є неконтрольованою при введенні середньої або високої дози ІС51АВА з одним або декількома загостреннями та частими симптомами.

Термін "біля" використовується у даному документі для позначення приблизно, орієнтовно, орієнтовно або приблизно. Якщо термін "біля" застосовується у поєднанні із числовим діапазоном, він змінює цей діапазон, шляхом розширення межі вище та нижче представлених числових значень. Як правило, термін "близько" використовується у даному документі для модифікації числового значення вище та нижче зазначеного значення на величину відхилення, що становить 10 95.

Як описано у даному документі, для стабілізації та доставки фармацевтично активних засобів представлені сухі порошкоподібні склади. Відповідно, сухі порошкоподібні склади складають для доставки у легені, у тому числі шляхом інгаляції через інгалятор сухого порошку (ОРІ).

Як використовується у даному документі, термін "сухий порошкоподібний склад" відноситься до складу, який містить безліч твердих мікрочастинок у порошкоподібній композиції, яка зазвичай містить менш ніж близько 20 95 вологи, більш прийнятніше менш ніж 10 95 вологи, менш ніж близько 5-6 95 вологи або близько З 95 вологи. Як описано у даному документі, сухі порошкоподібні склади можна застосовувати для доставки пацієнту за допомогою інгаляції. В інших варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади можна розводити та вводити в рідкій формі перорально, внутрішньовенно, парентерально і т. д. Як описано в даному документі, перевага представлених сухих порошкоподібних складів полягає у підвищеному обсязі виробництві для поліпшення технологічності виробництва.

Додатковою перевагою є те, що платформа складу, описана у даному документі, забезпечує високу щільність спресованої нерозфасованої речовини. Це означає, що на одиницю доставки (наприклад, усередині капсули) може бути упакована більша маса порошку. Це означає, що на одиницю доставки суб'єкту може бути доставленависока доза активного засобу. Така несподівана перевага може покращити комплаєнтність пацієнта за рахунок зниження кількості разових доз, необхідних для вживання. Крім того, висока щільність спресованої нерозфасованої речовини може сприяти доставці більш високої дози активного засобу, при цьому збільшується верхня межа діапазону доз, що вводяться. Це може забезпечити доставку активних засобів у терапевтично ефективних дозах у випадках, коли раніше це було неможливо.

Термін "мікрочастка", як використовується у даному документі, відноситься до твердої частки, що характеризується середнім масовим діаметром (ММО), що становить менше 20 мкм. Середній масовий діаметр є показником середнього розміру частинок мікрочастинок, виміряного із використанням відповідного способу, у тому числі, наприклад, відцентрового осадження, електронної мікроскопії, світлорозсіювання, лазерної дифракції і т. д.

Сухі порошкоподібні склади, описані у даному документі, відповідно містять безліч мікрочастинок.

Як використовується у даному документі, термін "безліч" відноситься до 2 або більше одиниць та відповідно відноситься до 5 або більше, 10 або більше, 50 або більше, 100 або більше, 500 або більше, 1000 або більше і т. д.

У варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять безліч мікрочастинок, при цьому мікрочастинки прийнятніше містять лейцин; від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину за вагою; та зв'язуючий фрагмент антитіла до Т5І Р, визначений у даному документі. Якщо не зазначено інше, "активний засіб" відноситься до антигензв'язуючого фрагмента, отриманого з антитіла до Т5І Р, як визначено у даному документі.

На Фіг. 7 зображена мікрофотографія, отримана за допомогою скануючого електронного мікроскопа, мікрочастинок ілюстративного сухого порошкоподібного складу, представленого у даному документі. У додаткових варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади, що містять безліч мікрочастинок, прийнятніше містять від близько 1 95 до близько 25 95 лейцину; від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину; та активний засіб.

Як використовується у даному документі, термін "лейцин", незалежно від того, присутній він у вигляді окремої амінокислоти або у вигляді амінокислотного компонента пептиду, відноситься до амінокислоти лейцину (СеНізМО»), яка може являти собою рацемічну суміш або її О- або І -форму, а також модифіковані форми лейцину (тобто де один або декілька атомів лейцину були заміщені іншим атомом або функціональною групою). Хімічна структура лейцину представлена нижче: о ие

МН.

Термін "трилейцин", як використовується у даному документі, відноситься до хімічної сполуки, в якій три молекули лейцину зв'язані разом у вигляді пептиду, такого як лейцин-лейцин-лейцин (І еи-

І ен-ІГ еи), СівНаз5МзОх. Хімічна структура трилейцину представлена нижче: у о г

Н

М,,, он нм З М

Н о о о

Кількості лейцину та трилейцину, представлені у даному документі, якщо не зазначено інше, представлені у вагових відсотках (ваг. 95) складів. Оскільки сухі порошкоподібні склади по суті не містять води або містять вкрай малу її кількість, вагові компоненти сухих порошкоподібних складів, таким чином, є відсотками сухої ваги кінцевих складів.

У варіантах здійснення складу, що містить лейцин; трилейцин; та антигензв'язуючий фрагмент, лейцин та трилейцин підтримують у необхідному діапазоні співвідношень, який забезпечує покращені характеристики щільності спресованої нерасфасованної речовини, описані у даному документі, а також забезпечує необхідні характеристики мікрочастинок, які дозволяють поліпшити зберігання та доставку. У варіантах здійснення вагове співвідношення лейцину та трилейцину у мікрочастинках, тобто співвідношення лейцин:трилейцин, становить від близько 0,1:1 до 30:1. У додаткових варіантах здійснення лейцин та трилейцин присутні у ваговому співвідношенні лейцин:трилейцин, що становить від близько 0,111 до 25:11, від близько 0,5:1 до близько 20:1, від близько 1:11 до близько 20:1, від близько 1:1 до близько 15:1, від близько 1:1 до близько 12: 1, від близько 1:1 до близько 10:1, від близько 1:1 до близько 7:1, від близько 1:1 до близько 6:1, або близько 1:1, близько 2:1, близько 3:1, близько 4:1, близько 5:1, близько 5,1:1, близько 5,2:1, близько 5,25:1, близько 5,3:1, близько 5,4:1, близько 5,5:1, близько 5,75:1 або близько 6:1.

Якщо не зазначено інше, співвідношення, описані у даному документі, виражені у вигляді вагових 95 (ваг./ваг. - також позначається як "вагове співвідношення"), тобто вага лейцину:вага трилейцину у складах, описаних у даному документі. Співвідношення досягаються за рахунок забезпечення необхідної концентрації лейцину та трилейцину у вихідній сировині у мг/мл, а потім сушіння для видалення розчинника у вихідній сировині з отриманням розпилених мікрочастинок, де вихідне співвідношення концентрацій (виражене в мг/мл), підтримується у вигляді кінцевого співвідношення лейцин:трилейцин за вагою.

Ілюстративні вагові відсотки лейцину та трилейцину, які можна використовувати у сухих порошкоподібних складах для досягнення цих співвідношень, описані у даному документі. Відповідно, сухі порошкоподібні склади містять від близько 5 95 до близько 15 95 лейцину та від близько 1 95 до близько 5 95 трилейцину. У варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять від близько 8 95 до близько 11 95 лейцину та від близько 2 95 до близько 4 95 трилейцину, та у деяких варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять близько 10,5 95 лейцину та близько 2 95 трилейцину.

В ілюстративних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину за вагою, більш прийнятніше від близько 1 95 до близько 9 95, від близько 1 95 до близько 8 95, від близько 1 95 до близько 7 925, від близько 1 95 до близько 6 95, від близько 1 95 до близько 5 95, від близько 2 95 до близько 10 925, від близько 2 95 до близько 9 95, від близько 2 95 до близько 8 95, від близько 2 95 до близько 7 95, від близько 2 95 до близько 6 95, від близько 2 95 до близько 5 95, від близько 2 95 до близько 4 95, або близько 1 95, близько 1,5 95, близько 2 95, близько 2,595 близько 3 95, близько 3,595, близько 4 95, близько 4,595, близько 595, близько 5,5 95 або близько 6 95 трилейцину за вагою.

В ілюстративних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять від близько 1 95 до близько 25 95 лейцину за вагою, більш прийнятніше від близько 2 95 до близько 20 95, від близько З 95 до близько 20 95, від близько 4 95 до близько 20 95, від близько 5 95 до близько 20 95, від близько 5 95 до близько 15 95, від близько 7 95 до близько 12 95, від близько 8 95 до близько 11 95, від близько 9 95 до близько 11 95, від близько 10 95 до близько 11 95, або близько 5 95, близько 6 95, близько 7 95, близько 8 95, близько 8,5 95, близько 9 95, близько 10 95, близько 10,5 95, близько 11 95, близько 11,5 95, близько 12 95, близько 12,5 95 або близько 13 95 лейцину за вагою.

У відповідних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять від близько 8 95 до близько 11 95 лейцину та від близько 2 95 до близько 4 95 трилейцину за вагою, більш прийнятніше від близько 995 до близько 1195 лейцину та від близько 295 до близько 395 трилейцину за вагою. В ілюстративних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять близько 10,5 95 лейцину та близько 2 95 трилейцину за вагою.

Як описано у даному документі, несподівано було виявлено, що застосування комбінації лейцину та трилейцину у сухому порошкоподібному складі дозволяє знизити загальну кількість лейцину та трилейцину, необхідну для отримання мікрочастинок, порівняно із сухими порошкоподібними складами, які містять тільки один із цих компонентів, при цьому забезпечується потрібна стабільність.

У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом характеризуються підвищеною щільністю спресованої нерасфасованої речовини порівняно зі складами, відомими із рівня техніки, що може забезпечити доставку активного засобу більш високої концентрації у легені пацієнта після інгаляції. Ці покращені характеристики, мабуть, пов'язані із включенням у мікрочастинки лейцину та трилейцину.

Ілюстративний спосіб отримання сухого порошкоподібного складу відповідно до варіантів здійснення даного документа може здійснюватися наступним чином. Рідку вихідну сировину, що містить необхідні кінцеві компоненти сухого порошкоподібного складу, розпиляють за допомогою розпилювача до дрібнодисперсного аерозолю. Потім дрібнодисперсний аерозоль сушать, як описано у даному документі. Розпилені краплі містять розчинені компоненти, початково у вигляді крапель рідини. По мірі висихання краплі різні компоненти складу починають насичуватися та осаджуватися з різними швидкостями. Як описано у даному документі, навколо зовнішньої поверхні мікрочастинок сухих порошкоподібних складів починає утворюватися оболонка. Ця оболонка прийнятніше містить компоненти лейцину та трилейцину на зовнішній поверхні оболонки. Слід зазначити, що лейцин та трилейцин прийнятніше розташовуються на зовнішній поверхні мікрочастинок, у той час як лейцин та трилейцин у менших кількостях можуть виявлятися у всьому об'ємі мікрочастинок. У варіантах здійснення більш високі концентрації лейцину та трилейцину зазвичай виявляються на поверхні або поблизу поверхні мікрочастинок, а не поблизу центру мікрочастинок. У варіантах здійснення центр мікрочастинок містить значну кількість активного засобу разом із іншими допоміжними компонентами, як описано у даному документі, прийнятніше в аморфній формі. Як використовується у даному документі, термін "значна кількість" активного засобу означає, що щонайменше близько 60 95 активного засобу (тобто всього активного засобу у складі) знаходиться у центрі мікрочастинок або поблизу нього, прийнятніше щонайменше близько 70 95, та більш прийнятніше щонайменше близько 7595, щонайменше близько 80595, щонайменше близько 85595, щонайменше близько 90 95, щонайменше близько 95595, та у варіантах здійснення близько 95 95-100 95 активного засобу знаходиться у центрі або поблизу центру мікрочастинок.

У додаткових варіантах здійснення мікрочастинки містять лейцин та трилейцин, локалізовані по суті у всьому обсязі мікрочастинок, але у більш високих кількостях на поверхні мікрочастинок або поблизу неї. Як використовується у даному документі, термін "по суті у всьому обсязі мікрочастинок" означає, що лейцин та/або трилейцин розташовуються у градієнті від зовнішньої поверхні мікрочастинок до центру мікрочастинок, але прийнятніше зі зменшенням кількості лейцину та/або трилейцину по мірі просування до центру, та у варіантах здійснення лейцин або трилейцин не виявляються у центрі мікрочастинок, де знаходиться активний засіб. В інших варіантах здійснення кількості лейцину та трилейцину можуть бути по суті однаковими по всій поверхні поперечного зрізу мікрочастинок.

У варіантах здійснення по суті кожна із мікрочастинок сухих порошкоподібних складів містить лейцин та трилейцин. Іншими словами, прийнятніше щонайменше близько 60 95 мікрочастинок містять лейцин та трилейцин або щонайменше близько 70 95, та прийнятніше щонайменше близько 75 95, щонайменше близько 80 95, щонайменше близько 85 95, щонайменше близько 90 95, щонайменше близько 95595, та у варіантах здійснення близько 95 95-100 95 мікрочастинок містять лейцин та трилейцин. У варіантах здійснення кожна із мікрочастинок сухих порошкоподібних складів містить лейцин та трилейцин.

У додаткових варіантах здійснення лейцин та/або трилейцин можна виявити у сухих порошкоподібних складах, але вони не містяться всередині мікрочастинки складу або не асоційовані із нею. Таким чином, у варіантах здійснення у сухих порошкоподібних складах може бути виявлений вільний лейцин та/або трилейцин, не асоційовані із мікрочастинками. Проте у цілому кількість вільного лейцину та/або трилейцину (тобто не асоційованих із мікрочастинкою) становить порядку менш ніж близько 10 95, менш ніж близько 5 95, менш ніж близько 1 95, та більш прийнятніше менш ніж близько 0,1 95 від загальної кількості лейцину та/або трилейцину у складах.

У певних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади, описані у даному документі, характеризуються щільністю спресованої нерозфасованої речовини, що дозволяє доставляти велику кількість активного засобу. "Щільність спресованої нерозфасованої речовини" відноситься до маси на одиницю об'єму (відповідно г/см) порошку при вимірі у наступних умовах. Відповідний аналіз для вимірювання щільності спресованої нерасфасованной речовини (СВО) описаний у прикладах (див., наприклад, Приклад 6). Прийнятніше щільність спресованої нерасфасованной речовини (СВО) порошків вимірюють із використанням аналізатора щільності, такого як аналізатор щільності зеоРусе

Моавеї! 1360 (Місготегійс5, Норкрос, Джорджія). Зразки порошку прийнятніше отримують у середовищі із низькою вологістю («5 95 КН) перед перенесенням у камеру для проб аналізатора щільності, яку продували газоподібним азотом. Фіксують масу нетто зразка порошку, а потім за допомогою поршня до зразка прикладають зусилля стиснення 10-14 Н, прийнятніше 12 Н, зі швидкістю 250-350 етапів ущільнення за секунду, прийнятніше 300 етапів ущільнення за секунду. Лінійна відстань, пройдена поршнем на кожному етапі ущільнення, перетворюється на об'ємне зміщення зразка порошку.

Середнє значення вимірювань на кожному етапі ущільнення потім перетворюється на розрахункове значення щільності нерозфасованої речовини для сухого порошкоподібного складу, виражене у г/см3.

Прийнятніше щільність спресованої нерасфасованої речовини сухого порошкоподібного складу, описаного у даному документі, становить щонайменше 0,4 г/см3, та прийнятніше від близько 0,4 г/см до близько 1,0 г/сму, та більш прийнятніше близько 0,4-0,9 г/см3, близько 0,4-0,8 г/см3, близько г/см, близько 0,5-0,8 г/см3, близько 0,6-0,8 г/см3, або близько 0,4 г/см3, близько 0,5 г/см3, близько 0,6 г/см3, близько 0,7 г/см?, або близько 0,8 г/см). У деяких варіантах здійснення щільність спресованої нерасфасованої речовини сухого порошкоподібного складу, описаного у даному документі, становить від близько 0,4 г/см? до близько 0,9 г/см3. У деяких варіантах здійснення щільність спресованої нерасфасованої речовини сухого порошкоподібного складу, описаного у даному документі, становить від близько 0,5 г/см3 до близько 0,8 г/см3.

На Фіг. 8А зображені результати щільності спресованої нерозфасованої речовини залежно від вмісту лейцину та трилейцину у сухих порошкоподібних складах, описаних у даному документі. Кожна із колонок представляє кількість трилейцину у складах. У кожній колонці кількість лейцину підвищується від близько 195 до близько 2095. Як продемонстровано, підвищення кількості трилейцину призводить до зниження щільності спресованої нерозфасованої речовини, а підвищення вмісту лейцину у кожній групі також знижує щільність спресованої нерозфасованої речовини. Для досягнення щільності спресованої нерозфасованої речовини, що становить від близько 0,5 г/см3 до близько 0,8 г/см3, кількість трилейцину повинна підтримуватися на рівні нижче 4 95 за вагою.

Склади, описані у даному документі, містять антигензв'язуючий фрагмент антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (антитіло до Т5І Р). Прийнятніше, автори даного винаходу виявили, що склади, описані у даному документі, забезпечують доставку антигензв'язуючого фрагмента за допомогою інгаляції безпосередньо у легеню. Доставка терапевтично активного антигензв'язуючого фрагмента антитіла до Т5І Р за допомогою інгаляції прийнятніше дозволяє використовувати біологічні лікарські препарати для лікування бронхіальної астми у первинній системі охорони здоров'я.

Послідовність поліпептиду ТЗІ Р представлена нижче:

Меї Рне Рго Рне Аїа ГГ еи І єи Туг Ма! І еи бег Ма! бег Рне Аго Гуз Пе РНе Пе І єи Сій І еи Маї Спу І еи маї Геи ТАиг Туг А5р Рпе Тниг Азп Суз Ар РНе си Гуз Пе Гуз Аа Аа Туг І еи бег Тит Пе Зег Гуз Авр І еи

Пе ТАг Туг Меї Зег Спіу Тиг Гуз 5ег Тиг Сім Рпе Азп Азп ТАг Маї Бег Суз Зег Азп Агу Рго Ніз Суз ГІ еи ТНг

Сі Пе Сп бег Гей Тнг Рпе Авп Рго ТНг Аа Сіу Суз Аа 5ег ГГ еи Аа Гуз Сім Меї Рне Аїа Меї Гуз ТАг Гуз

Аа Аа ГГ еи Аа Іе Ттр Су Рго Сіу Туг Зег Сіи ТАг Сп Пе Авп Аа Тнг Сіп Аа Меї Гуз І уз Агу Агу Гуз Агу

Гуз Ма! Тиг Тиг Авп Гуз Суз І ви Спи Сип Ма! Зег Сіп Геи Сіп Спу Геи Тгр Агу Агу Рне Азп Аг Рго І єи

Ї еи Гуз Сп Сп (5ЕО ІО МО: 27)

Термін "антитіло", як використовується у даному документі, відноситься до білка, що містить щонайменше два важкі ланцюги та два легкі ланцюги, з'єднані дисульфідними зв'язками. Термін "антитіло" включає антитіла, що зустрічаються у природі, а також всі рекомбінантні форми антитіл, наприклад, гуманізовані антитіла, повністю людські антитіла та химерні антитіла. Кожен важкий ланцюг складається з варіабельної області важкого ланцюга (МН) та константної області важкого ланцюга (СН). Кожен легкий ланцюг складається із варіабельної області легкого ланцюга (МІ) та константної області легкого ланцюга (СІ). Однак термін "антитіло" також включає інші типи антитіл, такі як однодоменні антитіла, антитіла з важким ланцюгом, тобто антитіла, що складаються тільки з одного або декількох, зокрема, двох важких ланцюгів, та нанотіла, тобто антитіла, що складаються лише з одного мономерного варіабельного домену. Зв'язуючі фрагменти антитіл включають (Її) фрагменти Рар, моновалентні фрагменти, що складаються з варіабельної області та першого константного домену кожного із важкого та легкого ланцюга; (її) фрагменти Е(аб)2, бівалентні фрагменти, що містять два фрагменти Раб, зв'язані дисульфідним містком у шарнірній області; (її) фрагменти Га, що складаються із варіабельної області та першого константного домену СНІ важкого ланцюга; (м) фрагменти Ему, що складаються із варіабельної області важкого ланцюга та легкого ланцюга одного плеча антитіла; (м) фрагменти 5сЕм, фрагменти Ем, що складаються з одного поліпептидного ланцюга; (мі) фрагменти (Ем)2, що складаються із двох ковалентно зв'язаних один з одним фрагментів Ем; (мії) варіабельний домен важкого ланцюга; та (мії) мультитіла, що складаються із варіабельної області важкого ланцюга та варіабельної області легкого ланцюга, ковалентно зв'язані один з одним таким чином, що асоціація варіабельних областей важкого ланцюга та легкого ланцюга може відбуватися лише міжмолекулярно, але не внутрішньомолекулярно. У варіантах здійснення зв'язуючий фрагмент антитіла за даним винаходом вибирають із Раб, Раб", Е(аб)2, зсЕм, мінітіла або діатіла. У деяких варіантах здійснення зв'язуючий фрагмент антитіла являє собою Бар. У деяких варіантах здійснення антитіло до Т5І Р, з якого отримують антигензв'язуючий фрагмент, являє собою

ІДИ.

Послідовності ілюстративного Бар за даним винаходом (позначені у даному документі Еар1) включають:

ЕАВІ НСОВІ

Тиг Туг Сіу Меї Ні (БЕО ІО МО: 1)

ЕАВІ НСОВН2 ма! Ме Тр Туг Азр а1у 5ег Авп Гуз Ніз Туг АІа Азр 5ег Маї Гуз Спу (ЗЕО ІО МО: 2)

ЕАВІ НСОВЗ

Аа Рго СіІп Тгтр Си І еи Маї Ніз Сіш Аіа Рне Азр Пе (ЗЕО ІО МО: 3)

ЕАВІ МН ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА

Сип Меї Сіп І єи Ма! Си бег Сіу СіІу Сіу Маї Ма! СіІп Рго Сіу Ага 5ег ей Агу І еи бег Суз Аа Аа 5ег

Сіу Рпе Тнг Ріє Аг Тнг Туг Сіу Меї Ні Тгр Маї Ага Сіп Аїа Рго Сту Гуз Сіу Геи Сім Тр Маї Аїіа Ма! Пе Ттр

Туг Азр Сіу Зег Авп Гуз Ні Туг Аіа Азр 5ег Маї Гуз Спу Ага РНе Тнг Пе ТАг Ага Авр Авп 5ег Гуз Азп ТНг

Ї еи Авп І ви Сп Меї Авп 5ег І єи Агу Аа Сіиш Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агу Аїа Рго Сіп Тгр Си Ї еи маї Ніз Сі Аа Ріє Ар Іе Тгр Сіу Сіп Сіу ТНг Меї маї Тнг Маї Зег Зег (БЕО ІЮ МО: 4)

ЕАВІ І СОВІ1

Сту Су Авп Авп І єи Спу бег Гуз 5ег Маї! Ніз (ЗЕО ІО МО: 5)

ЕАВІІ СОВ2

Ар Азвр 5ег Авр Агу Рго бег (БЕО І МО: 6)

ЕАВІ І СОВЗ

Сіп Маї Тгтр Ар 5ег Зег 5ег Ар Ніз Маї Ма! (ЗЕО ІО МО: 7)

ЕАВІ МІ ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи ТНиг СіІп Рго Рго Зег Маї 5ег Маї Аа Рго Спіу Сіп ТАг Аа Ага Пе ТАиг Суз Спіу Сіу Авп

Авп І еи Спу 5ег Гуз Зег Маї Ні Ттр Туг Сип Сіп Гу Рго Спу Сп Аа Рго Маї І еи Маї Ма! Туг Азр Азр 5ег

Ар Аг Рго 5ег Тр Іе Рго Сім Агу Рпе 5ег Спу 5ег Азп бег Сіу Азп ТНг Аа ТНг Геи Тпг Пе бег Ага Спу

Сім Аа Спу Авр Сі Аа Азвр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Авр 5ег 5ег Зег Авр Ніз Ма! Ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг

Гуз Геи Тнг МаїЇ Геи (ЗЕО ІО МО: 8)

ЕАВТ МН ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА (нуклеїнова кислота) садаїдсаді їіддандааїс ддіддсодас діддодсадс сіддсадас ісдадасід бо іспудссу ссіссддсії сасснсада ассіасддаа дсасіддді ссдасаддсс 120 ссіддсаааяд дайодааю ддісдссую аштоддіасу асддсіссаа саадсасіас 180 дссдасіссу Ідаадддсаяд ансассаїс ассададаса асіссаадаа сасссідаас 240 сюсадаюа асісссдад адссдаддас ассдссдюі асіанйдідс їададссссі З00 саддддаас ісдіадсаїда ддесідас аіїсіддддсс адддаасааї ддісассдіс 360 їЇссіса 366 (5ЕО І МО: 9)

ЕАВІ МІ ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА (нуклеїнова кислота) ісаїаїднсе НЦасасаасс ассдісдай Іісдданодсіс саддасааас адсісдаай бо асаюдсддад дааасаассі сддаїсдаад ісдуднсасі ддіаїсааса ааадссадда 120 саадсіссад йсісдідді діасдаюдаї ісадаїсдас саїсаюдаї сссададсда 180 псісаддаї сааасіс9ду аааїасідсс асдсісасаа Шсасос9д9 адаадсдддаа 240 даюдааядсід апйасіанд ссаадідїіду дасісдісої садаїєсаюі шішсдаа З00 даддаасаа адсісасаді дсіс 324 (5ЕО ІЮО МО: 10)

ЕАВІТ ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА (поліпептид)

Сип Меї Сіп І и Ма! Си бег Сіу Сіу Сіу Маї Ма! Сіп Рго Сіу Агу 5ег І єи Ага І еи Зег Суз Аа Аа 5ег

Сіу Рпе Тиг Рпеє Аг Тнг Туг Сіу Меї Ні Тгр Маї Ага Сіп Аїа Рго Сту Гуз Сіу Геи Сім Тр Маї Аа Маї! Пе Ттр

Туг Азр Сіу Зег Авп Гуз Ні Туг Аіа Азр 5ег Ма! Гуз Спу Ага РНпе Тнг Пе ТАг Агу Ар Авп Зег Гуз Азп ТНг

Ї еи Авп І ви Сп Меї Авп 5ег І єи Агу Аа Сіиш Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агу Аїа Рго Сіп Тгр Си Ї еи маї Ніз Сіш Аіа Ріе Азр Іе Ттр Спіу Сіп Спіу Тнг Меї Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа Зег Тиг Гуз Сіу Рго 5ег Маї

Рне Рго І еи Аа Рго 5ег 5ег Гуз бег Тиг Зег Спіу Сіу ТНиг Аа Айа І єи Стпу Суз І еи Ма! Гуз Авр Туг Рне Рго

Сіш Рго Ма! Тнг Ма! Зег Тр Азп 5ег ау Аа Геи Тниг Зег Сіу Ма! Ніз Тиг Рне Рго Аїа Маї І еи Сіп Зег Зег

СУ Г еи Туг 5ег І ви 5ег Зег Ма! Ма! Тиг Маї Рго Зег 5ег Зег І еи Сіу ТНг Сп ТАг Туг Пе Суз Авп Маї Авзп

Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг І уз Маї Азр І уз Агу Маї Сім Рго І уз бег Суз Авр І уз (ЗЕО ІЮО МО: 28)

ЕАВІ ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА (поліпептид) зег Туг Ма! І еи ТНиг СіІп Рго Рго Зег Маї 5ег Маї Аа Рго Спіу Сіп ТАг Аа Ага Пе ТАиг Суз Спіу Сіу Авп

Ар Аг Рго Зег Тгтр Іе Рго Сім Агу Рпе 5ег Спу 5ег Азп 5ег Сіу Азп ТНг Аа ТНг Геи Тпг Пе бег Агуд Спу

Гуз Г еи ТНг Маї І еи

Стпу Сп Рго Гуз Аа Аа Рго 5ег Маї ТНг І еи Рне Рго Рго 5ег 5ег Си Сі І еи Сп Аа Авп Гуз Аа ТНг

Ї еи Маї Суз І еи Пе 5ег Авр РНе Туг Рго Сіу Аа Маї Тнг Маї Аа Ттр Гуз Аа Авр 5ег 5ег Рго Маї Гуз Аа

Сіу Ма! Сім Тнг ТАк Тиг Рго Зег Гуз Сіп 5ег Азп Авзп Гуз Туг Аа Аа бег 5ег Туг ГГ еи Зег І еи Тниг Рго Си

Сіп Тер Гуз 5ег Ніз Агу 5ег Туг 5ег Суз СіІп Маї Тиг Ніз Спи Спіу бег ТАиг Ма! Си Гуз Тнг Маї Аа Рго ТНг

Сім Суз бБег (5ЕО І МО: 29)

ЕАВТІ ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА (нуклеїнова кислота) садаїдсаді тойоааїс ддіддсоддс діддідсадс сіддсадаїйс ісідадасід бо існдїдссо ссіссоддсії сассісада ассіасддаа дсасіддої ссдасаддсс 120 ссіддсааад дайддааїд даїсдссудю ашоддіасо асоддсіссаа саадсасіас 180 дссдасіссуд даадддсад ансассаїс ассададаса асіссаадаа сасссідаас 240 сіюсадащда асісссдад адссдаддас ассдссуді асіандідс іададссссі З00 садшюаддаас ісдідсаїда ддаестодас асіддсс адддаасааї ддісассдіс 360 іссісадссі ссассаадду сссаїсддіс Неоссссіду сасссіссіс саададсасс 420 іїсюддаса садсудсссії дддсідссід дісааддасі асіссссда ассддщдасд 480 дідісдідда асісаддсдс ссідассадс ддсоадсаса ссісссддс щіссіасад 540 іссісаддас ісіасісссі садсадсуюд дюдасадідс ссіссадсад спдддсасс 600 садассіаса ісідсаасодї дааіїсасаад сссадсааса ссааддідда саададацчії 6бо дадсссаааї сідідасаа 681 (5ЕО ІЮО МО: 30)

ЕАВІ ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА (нуклеїнова кислота) ісаїаїднсе НЦасасаасс ассдісдай Іісдданодсіс саддасааас адсісдаай бо асаюдсддад дааасаассі сддаїсдаад ісдуднсасі ддіаїсааса ааадссадда 120 саадсіссад йсісдідді діасдаюдаї ісадаїсдас саїсаюдаї сссададсда 180 псісаддаї сааасісдду аааїасідсс асдсісасаа Шсасос9д9 адаадсоддда 240 даюдааядсід апйасіанд ссаадідїіду дасісдісої садаїєсаюі шішсдаа З00 дадодаасаа адсісасаді дсісддісад сссаадусід сссссісдаї сасісюнс 360 ссдсссіссї сдаддадсі ісаадссаас ааддссасас іддідщісі саїаадідас 420 псіасссдо дадссоаюдас адіюдссідд ааддсадаїа дсадссссдї сааддсуддда 480 діддадасса ссасасссіс сааасааадс аасаасааді асдсддссад садсіаїсід 540 адссідасдс сідадсадід даадісссас адаадсіаса дсідссадодї сасдсаюдаа 600 дддадсассяд ддадаадас адіддссссї асадаащдії са 642 (5ЕО ІЮО МО: 31)

Сухі порошкоподібні склади, представлені у даному документі, містять безліч мікрочастинок, при цьому мікрочастинки містять: лейцин; від близько 195 до близько 1095 трилейцину за вагою; та антигензв'язуючий фрагмент антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (Т5І Р), при цьому лейцин та трилейцин присутні при співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин від близько 0,1:1 до близько 30:1.

У певних варіантах здійснення антигензв'язуючий фрагмент у сухому порошкоподібному складі містить а. варіабельний домен важкого ланцюга, що містить: послідовність СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у

ЗБО ІО МО: 1, послідовність СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІО МО: 2, та послідовність СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮО МО: 3, при цьому будь-яка з СОК'І, 2 або 3 важкого ланцюга необов'язково містить одну амінокислотну заміну, та р. варіабельний домен легкого ланцюга, що містить: послідовність СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у

ЗБО ІО МО: 5, послідовність СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІО МО: 6, та послідовність СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 7, при цьому будь-яка з СОК'І, 2 або 3 легкого ланцюга необов'язково містить одну амінокислотну заміну.

У певних варіантах здійснення антигензв'язуючий фрагмент у сухому порошкоподібному складі містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить послідовність СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 1, послідовність СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 2, та послідовність

СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮО МО: 3, та послідовність СОК1 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ

МО: 5, послідовність СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у

ЗЕБЕО ІО МО: 6, та послідовність СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІО МО: 7.

У додаткових варіантах здійснення антигензв'язуючий фрагмент для застосування у сухих порошкоподібних складах містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮО МО: 4; та варіабельний домен легкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 8. У додаткових варіантах здійснення антигензв'язуючий фрагмент для застосування у сухих порошкоподібних складах містить важкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у ЗЕО ІЮО МО: 28; та легкий ланцюг, що містить послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 29.

У додаткових варіантах здійснення антигензв'язуючий фрагмент для застосування у сухих порошкоподібних складах містить варіабельний домен важкого ланцюга, який являє собою послідовність амінокислот, яка на щонайменше 95 95, 90 9», 85 У або 80 95 ідентична 5ЕО ІО МО: 4, та варіабельний домен легкого ланцюга, який являє собою послідовність амінокислот, яка на щонайменше 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентична 5ЕО ІЮО МО: 8.

У додаткових варіантах здійснення антигензв'язуючий фрагмент для застосування у сухих порошкоподібних складах містить (а) варіабельний домен важкого ланцюга, який являє собою послідовність амінокислот, яка на щонайменше 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентична ЗЕО ІЮО МО: 4; або послідовність амінокислот, що кодується полінуклеотидною послідовністю, яка на щонайменше 8095 ідентична 5ЕБЕО ІО МО: 30, (Б) варіабельний домен легкого ланцюга, який являє собою послідовність амінокислот, яка на щонайменше 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентична ЗЕО ІЮО МО: 8; або послідовність амінокислот, що кодується полінуклеотидною послідовністю, яка на щонайменше 80 95 ідентична ЗЕО ІО МО: 31; або варіабельний домен важкого ланцюга (а) та варіабельний домен легкого ланцюга (Б)

Додаткові послідовності СОК легкого ланцюга (СО), варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), СОК важкого ланцюга (НСОК) та варіабельного домену важкого ланцюга (УН) антигензв'язуючих фрагментів за даним винаходом включають:

ЕАВ2 І СОВІ1

Сту Су Азп Авп Пе Сіу 5ег Гуз 5ег Ма! Ні5 (ЗЕО ІЮ МО: 11)

ЕАВ2 М ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи ТНиг СіІп Рго Рго Зег Маї 5ег Маї Аа Рго Спіу Сіп ТАг Аа Ага Пе ТАиг Суз Спіу Сіу Авп

Азп Пе Спу Зег Гуз Зег Маї! Ні5 Тгтр Туг Сп Сіп Гуз Рго Сіу Сіп Аа Рго Маї І еи Маї Маї Туг Азр Азвр 5ег

Ар Аг Рго 5ег Тр Іе Рго Сіш Агд Ре 5ег Спіу бег Азп 5ег Сіу Азп ТНг Аа ТНг Геи Тнг Пе 5ег Агу Сіу

Сім Аа Спу Авр Сі Аа Азвр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Авр Ніз Ма! Ма! Рне Сіу Спу Су Тиг

Гуз Геи Тнг Ма! Геи (ЗЕО І МО: 12)

ЕАВЗІ СОН

Сту Су Азп Азп Маї Стпу 5ег Гуз 5ег Маї Ні5 (ЗЕО ІО МО: 13)

ЕАВЗ МІ.ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи ТНиг СіІп Рго Рго Зег Маї 5ег Маї Аа Рго Спіу Сіп ТАг Аа Ага Пе ТАиг Суз Спіу Сіу Авп

Азп Маї ау 5ег Гуз 5ег Маї Ні Тгтр Туг Сіп СіІп Гуз Рго Сіу Сіп Аа Рго Маї І еи Маї Ма! Туг Азр Азвр 5ег

Ар Аг Рго 5ег Тр Іе Рго Сіш Агу Рпе 5ег Спіу 5ег Азп бег Сіу Азп ТНг Аа ТНг Геи Тпг Пе бег Ага Спу

Гуз Геи Тнг Ма! Геи (ЗЕО ІО МО: 14)

ЕАВА НСОВ2 ма! Ме Тер Туг Азр а1у 5ег Авп Гуз Ні Туг Аіа Сім Зег Ма! Гуз СІу (5ЕО ІО МО: 15)

ЕАВА МН ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА

Туг А5р Су Зег Авп Гуз Ні Туг Аіа Сіи 5ег Ма! Гуз Спу Агу Рпе ТНиг Пе Тниг Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг

Ї еи Авп І ви Сп Меї Авп 5ег І єи Агу Аа Сіиш Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агу Аїа Рго Сіп Тгр Си Ї еи маї Ніз Си Аа Рпе Азр Пе Тгтр Сіу Сіп Спу ТАг Меї Маї Тнг Ма! Зег 5ег (ЗЕО І МО: 16)

ЕАВ5 НСОВ2 ма! Ме Тр Туг Азр аїу 5ег Авп Гуз Ні Туг Аа Азр 5ег Маї Гуз Аа (БЕО ІЮ МО: 17)

ЕАВ5 МН ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА

Туг Азр Сіу Зег Авп Гуз Ніз Туг Аа Азр 5ег Маї Гуз Аїа Ага РНе Тнг Пе ТАг Ага Авр Авп 5ег Гуз Азп Тиг

Ї еи Авп І ви Сп Меї Авп 5ег І єи Агу Аа Сіиш Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агу Аїа Рго Сіп Тгр Си Ї еи маї Ніз Си Аа Рпе Азр Пе Тгтр Сіу Сіп Спу ТАг Меї Маї Тнг Маї Зег 5ег (ЗЕО ІЮО МО: 18)

ЕАВбІ СОН

Сту Стпу Сіп Авп ГГ еи Су 5ег Гуз Зег Ма! Ні (ЗЕО ІО МО: 19)

ЕАВб МІ. ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи Тнг Сп Рго Рго 5ег Маї 5ег Маї Аа Рго Сіу Сип Тнг Аа Агу Пе Тнг Суз Спіу Спу Сіп Авп

Ї ви Спу 5ег Гуз 5ег Маї Ніз Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Сіу Сіп Аїа Рго Маї ГГ еи Маї Маї! Туг Азр Ар 5ег Азр

Агу Рго 5ег Тр Іе Рго Сім Агу Рпе 5ег Сіу Зег Азп Зег Сіу Азп ТНиг Аа Тпг Геи ТНг Пе 5ег Агу Спіу Си

Аа Сіпу Азр Сім Аїа Азр Туг Туг Суз Сп Маї Тгтр Авр 5ег 5ег Зег Авр Ніз Маї Ма! Рпе Спу Спіу Спу ТАг Гуз

Ї еи Тиг Ма! І еи (ЗЕО І МО: 20)

ЕАВ7 СОН

Сту Стпу Азп Сп ГГ еи сту 5ег Гуз Зег Маї Ні5 (ЗЕО І МО: 21)

ЕАВ7 МІ. ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи Тнг Сп Рго Рго 5ег Маї 5ег Маї Аа Рго Сіу Сип Тнг Аа Агу Пе Тнг Суз Спіу Спу Авзп Сп

Ї ви Стпу 5ег Гуз 5ег Маї Ні Тгтр Туг Сіп Сп Гуз Рго Сту Сп Аа Рго Маї І єи Маї Маї Туг Азр Авр 5ег Азр

Ага Рго 5ег Тгр Пе Рго Сім Агу Рпе 5ег Сіу 5ег Азп 5ег Спіу Азп ТНг Аа ТНг ГГ еи ТНг Пе бег Ага Спіу

Гуз Геи Тнг Ма! Геи (ЗЕО І МО: 22)

ЕАВВІСОВЗ

Сіп Маї Тгтр Ар ТАг Зег 5ег Авр Ніз Маї Ма! (ЗЕО ІО МО: 23)

ЕАВ8 МІ. ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи ТНиг СіІп Рго Рго Зег Маї 5ег Маї Аа Рго Спіу Сіп ТАг Аа Ага Пе ТАиг Суз Спіу Сіу Авп

Ар Аг Рго 5ег Тр Іе Рго Сіи Агу Рпе 5ег Спу 5ег Азп 5ег Сіу Азп ТНг Аа ТНАг Геи Тпг Пе бег Ага Спу

Сім Аа Спу Азр Си Аа Ар Туг Туг Суз Сіп Ма! Ттр Азр Тиг 5ег 5ег Авр Ні Ма! Ма! Рне Сіу Счу СІу Тиг

Гуз Геи Тнг Ма! Геи (ЗЕО І МО: 24)

ЕАВО І СОВЗ

Сіп Маї Тгтр Ар 5ег Тнг 5ег Авр Ніз Маї Ма! (ЗЕО ІО МО: 25)

ЕАВУ МІ. ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА зег Туг Ма! І еи ТНиг СіІп Рго Рго Зег Маї 5ег Маї Аа Рго Спіу Сіп ТАг Аа Ага Пе ТАиг Суз Спіу Сіу Авп

Сім Аа Спу Азр Си Аа Ар Туг Туг Суз Сіп Ма! Ттр Ар 5ег ТАг 5ег Авр Ні Ма! Ма! Рне Сіу Счу СІу Тиг

Гуз Геи Тнг Ма! Геи (ЗЕО ІО МО: 26).

У певних варіантах здійснення варіабельні домени важкого ланцюга та варіабельні домени легкого ланцюга антигензв'язуючого фрагмента за даним винаходом містять будь-яку із комбінацій послідовностей СОК, представлених у наступній таблиці:

11111101 совт2тазмн. | сові. 2тазмМм///З

Склад, розкритий у даному документі, можна вводити у комбінації із додатковим активним засобом для лікування бронхіальної астми. Ілюстративні активні засоби, які можна вводити у комбінації із сухим порошкоподібним складом, описаним у даному документі, включають без обмеження інгаляційні кортикостероїди (ІС5), бронходилататори (у тому числі бета-агоністи тривалої дії (ІГАВА), антимускаринові агоністи тривалої дії (ГАМА), бета-агоністи короткої дії (БАВА) та мускаринові В2- агоністи (МАВА)), антигістамінні засоби, антилейкотрієни, інгібітори РОЕ-4, інгібітори дапив-кінази та інгібітори фосфоінозитид-З-кнази. У певних варіантах здійснення додатковий активний засіб комбінують у складі за даним винаходом разом із зв'язуючим фрагментом антитіла до Т5ІР, розкритим у даному документі.

У відповідних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади, описані у даному документі, додатково містять засіб для стабілізації скла, що сприяє стабілізації складу та, зокрема, стабілізації активного засобу. "Засіб для стабілізації скла" відноситься до допоміжного засобу, який стабілізує активний засіб (відповідно, поліпептид) у сухому порошкоподібному складі, прийнятніше у результаті заміщення води на поверхні активного засобу під час сушіння або іншим чином перешкоди процесу розкладання, та утворює аморфну тверду речовину, що включає активний засіб. Приклади засобів для стабілізації скла включають аморфні сахариди, полімерні цукри, буфери, солі або синтетичні полімери (наприклад, полі-І- гліколеву кислоту), а також суміші таких компонентів. У відповідних варіантах здійснення засіб для стабілізації скла являє собою аморфний сахарид. У додаткових варіантах здійснення засіб для стабілізації скла являє собою буфер. В інших варіантах здійснення склади, описані у даному документі, можуть містити як аморфний сахарид, так і буфер, які разом або окремо можуть виступати як засіб стабілізації скла.

Ілюстративні аморфні сахариди для застосування у складах, описаних у даному документі, включають без обмеження трегалозу, сахарозу, рафінозу, інулін, декстран, маніт та циклодекстрин.

Прийнятніше аморфний сахарид присутній у кількості від близько 30 95 до близько 70 95 (ваговий відсоток) у сухому порошкоподібному складі. У додаткових варіантах здійснення аморфний сахарид присутній у кількості від близько 30 95 до близько 65 95, від близько 35 95 до близько 65 95, від близько

З5 95 до близько 60 95, від близько 40 95 до близько 60 95, від близько 30 95 до близько 50 95, або близько 30 95, близько 35 95, близько 40 95, близько 45 95, близько 50 95, близько 55 95 або близько 60 95. Прийнятніше аморфний сахарид являє собою трегалозу, та він присутній у складах у кількості близько 30 95-60 95, прийнятніше близько 35 95-55 У, або близько 35 95, близько 40 95, близько 45 95 або близько 50 95 ваги сухого порошкоподібного складу.

Ілюстративні буфери, які можуть бути включені у сухі порошкоподібні склади, прийнятніше як засоби стабілізації скла, включають різні цитратні буфери (такі як цитрат натрію), фосфатний буфер, гістидиновий буфер, гліциновий буфер, ацетатний буфер та тартратний буфер, а також комбінації таких буферів. Кількості буферів, які можуть бути включені у сухі порошкоподібні склади, можуть знаходитися у діапазоні від близько 0,1 95 до близько 20 95, більш прийнятніше від близько 0,5 95 до близько 15 95, від близько 1 95 до близько 10 95, від близько 2 95 до близько 8 95, від близько З 95 до близько 7 95, або близько 1 95, близько 2 95, близько З 95, близько 4 95, близько 5 95, близько 6 95, близько 7 95, близько 8 95, близько 9 95 або близько 10 95.

Буфери також забезпечують контроль рН сухих порошкоподібних складів, прийнятніше підтримуючи рН від рН 5 до рн 8, наприклад, рН від рН 5 до рн 6, або від близько рН 5,5 до близько рН 6,5, або від близько рН 6 до близько рН 7, або від близько рН 6,5 до близько рН 7,5, або від близько рН 7 до близько рн 8.

У додаткових варіантах здійснення представлені сухі порошкоподібні склади, які містять близько 95-50 95 трегалози, близько 10 95-11 У5 лейцину, близько 1 95-3 95 трилейцину, близько 8 95-9 95 цитратного буфера, та активний засіб, більш прийнятніше близько 39 95 трегалози, близько 10,5 95 лейцину, близько 2 95 трилейцину, близько 8,5 95 цитратного буфера, та активний засіб.

У додаткових варіантах здійснення представлені сухі порошкоподібні склади, які складаються по суті із близько 30 95-50 У5 аморфного сахариду лейцину, від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину, від близько 195 до близько 10 95 буфера, та активного засобу, при цьому лейцин та трилейцин присутні у співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин, що становить від близько 0,1:1 до близько 30:1. У додаткових варіантах здійснення представлені сухі порошкоподібні склади, які складаються по суті із близько 30 95-50 95 аморфного сахариду, від близько 8 95 до близько 11 95 лейцину, від близько 2 У до близько 4 95 трилейцину, від близько 1 95 до близько 10 95 буфера, та активного засобу.

Представлені додаткові сухі порошкоподібні склади, які складаються по суті із близько 35 95-45 95 трегалози, від близько 9 95 до близько 11 95 лейцину, від близько 2 95 до близько З 95 трилейцину, від близько 295 до близько 8595 цитратного буфера, та активного засобу. У додаткових варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади складаються по суті із близько 39 95 трегалози, близько 10,5 95 лейцину, близько 2 95 трилейцину, близько 8,5 95 цитратного буфера, та активного засобу.

У композиціях та складах, які "складаються по суті" із перерахованих інгредієнтів, такі композиції та склади містять зазначені компоненти та компоненти, які суттєво не впливають на основні та нові характеристики заявлених складів. Компоненти, які істотно не впливають на основні та нові характеристики складів, що заявляються, являють собою компоненти, які не обмежують здатність лейцину та трилейцину стабілізувати сухі порошкоподібні склади. Прийнятніше композиції та склади, які складаються по суті із перерахованих інгредієнтів, специфічно виключають інші амінокислоти або амінокислоти трипептидні, але можуть включати додаткові сахари, буфери і т. д.

В ілюстративних варіантах здійснення представлений сухий порошкоподібний склад, який містить близько 30 95-50 95 трегалози, близько 10 95-11 95 лейцину, близько 1 95-3 95 трилейцину, близько 8 9о5- 995 цитратного буфера та близько 30 95-50 95 фрагмента антитіла до ТЗІ Р, більш прийнятніше близько 39 95 трегалози, близько 10,5 95 лейцину, близько 2 95 трилейцину, близько 8,5 95 цитратного буфера та близько 40 95 фрагмента антитіла до Т5І Р.

В інших ілюстративних варіантах здійснення представлений сухий порошкоподібний склад, який складається по суті із близько 30 95-50 95 трегалози, близько 10 95-11 95 лейцину, близько 1 95-3 95 трилейцину, близько 8 95-9 95 цитратного буфера та близько 30 95-50 95 фрагмента антитіла до Т5І Р, більш прийнятніше близько 3995 трегалози, близько 10,5 95 лейцину, близько 2 95 трилейцину, близько 8,5 95 цитратного буфера та близько 40 95 активного засобу.

Мікрочастинки, які складають сухі порошкоподібні склади, описані у даному документі, прийнятніше характеризуються вказаним масовим медіанним аеродинамічним діаметром (ММАВБ), коли вони представлені в аерозольній формі. Мікрочастинки також можуть характеризуватися певним еквівалентним оптичним середньооб'ємним діаметром (0ОММО). оОММО також може бути позначений розподілом частинок за розмірами (Р5О або рР5б).

Як використовується у даному документі, термін "масовий аеродинамічний медіанний діаметр" або "ММАО" являє собою показник аеродинамічного розміру диспергованої мікрочастинки.

Аеродинамічний діаметр використовується для опису аерозольного порошку з точки зору його осадження та являє собою діаметр сфери одиничної щільності, що характеризується тією ж швидкістю осадження у повітрі, що і мікрочастинка. Аеродинамічний діаметр охоплює форму частинки, щільність та фізичний розмір мікрочастинки. Як використовується у даному документі, термін ММАО відноситься до середньої точки або медіани аеродинамічного розподілу розміру частинок аерозольного порошку, що визначається за допомогою методу каскадного імпактора, якщо не зазначено інше. Прийнятніше мікрочастинки сухих порошкоподібних складів, представлених у даному документі, характеризуються масовим медіанним аеродинамічним діаметром (ММАБ) від близько 1 мкм до близько 10 мкм, більш прийнятніше від близько 2 мкм до близько 8 мкм, від близько 2 мкм до близько 7 мкм, від близько 2 мкм до близько 6 мкм, від близько 2 мкм до близько 5 мкм, від близько 2 мкм до близько 4 мкм, від близько З мкм до близько 7 мкм, від близько 4 мкм до близько 7 мкм, від близько З мкм до близько 6 мкм мкм, або близько 2 мкм, близько З мкм, близько 4 мкм, близько 5 мкм, близько 6 мкм або близько 7 мкм.

Відповідно, фракція дрібнодисперсних частинок (фракція частинок, що викидаються з інгаляційного пристрою, мають аеродинамічний діаметр частинок менш ніж 5 мкм сухих порошкоподібних складів, описаних у даному документі, становить 250 95, більш прийнятніше 260 95.

Ця фракція дрібнодисперсних частинок (ЕРЕ) може сприяти низькому утримуванню у пристрої сухих порошкоподібних складів, що становить менше ніж 20 95, прийнятніше менше ніж 15 95, менше ніж 95 або менше ніж 5 95, що залишаються у пристрої після доставки пацієнту.

У додаткових варіантах здійснення мікрочастинки прийнятніше характеризуються еквівалентним оптичним середньооб'ємним діаметром (0ММО) від близько 0,5 до близько 7 мкм. Еквівалентний оптичний середньооб'ємний діаметр (0ММО) відноситься до середнього діаметра сфери, який найкраще апроксимує конкретну оптичну взаємодію мікрочастинки зі світлом, де половина мікрочастинок найкраще апроксимується еквівалентною сферою меншого розміру, а половина мікрочастинок найкраще апроксимується еквівалентною сферою при вимірі із використанням відповідної оптичної методики. В ілюстративних варіантах здійснення мікрочастинки характеризуються еквівалентним оптичним середньооб'ємним діаметром (ОМ) від близько 0,5 мкм до близько 6 мкм, або від близько 1 мкм до близько 5 мкм, або від близько 1 мкм до близько 4 мкм, або від близько 2 мкм до близько 4,5 мкм, або від близько 2,5 мкм до близько 4 мкм, або від близько 2 мкм до близько 4 мкм, або від близько 2 мкм до близько З мкм, або від близько 2 мкм до близько 3,5 мкм, або близько 1 мкм, близько 1,5 мкм, близько 2 мкм, близько 2,5 мкм, близько З мкм, близько 3,5 мкм, близько 4 мкм, близько 4,5 мкм, або близько 5 мкм. Як описано у даному документі, висока щільність спресованої нерасфасованного речовини дозволяє доставляти більшу кількість активного засобу, використовуючи той же об'єм доставки. Для доставки певних біологічних засобів може знадобитися корисне навантаження до 50 мг/доза або вище для ефективного лікування. Як ілюстративно зображено на фіг. 8В, комбінація лейцину та трилейцину може призводити до отримання сухого порошкоподібного складу, який характеризується більш високою щільністю нерасфасованного речовини, та, отже, при однаковій вазі наповнювача займає істотно менший об'єм.

Ілюстративні склади платформ, зображені на Фіг. 88, представлені нижче. І ТС вказує на склад без трилейцину (Ті еи), але такий, що містить лейцин, трегалозу та цитратний буфер; ТТС вказує на склад без лейцину (І еи), але такий, що містить трилейцин, трегалозу та цитратний буфер; ТІ ТС вказує на включення як лейцину, так і трилейцину, а також трегалози та цитратного буфера. Сії відноситься до цитратного буфера. Тге відноситься до трегалози.

Таблиця 1

Ілюстративні склади платформ с 17146 | щБ 45 17777770 11119 716 777777817171771111101111111111111112е |117800

Капсули (капсули розміру 3) кожного складу зображені з відповідною вагою наповнення на фіг. 88.

Як проілюстровано, для складу ТІ ТС комбінація трилейцину та лейцину дозволяє заповнити капсулу 100 мг сухого порошкоподібного складу, зберігаючи при цьому деякий простір, що залишився у капсулі. Інші склади не могли бути наповнені вагою наповнювача вище близько 70-80 мг. Це являє собою значне поліпшення, що забезпечується застосуванням лейцину та трилейцину у комбінації для отримання складу із високою щільністю спресованої нерасфасованої речовини, що дозволяє отримати велику вагу наповнення.

Як описано у даному документі, застосування лейцину та трилейцину у сухих порошкоподібних складах також призводить до отримання мікрочастинок, що характеризуються необхідними розмірами (ММА), а також необхідної площі поверхні (З5А) та шорсткості, що призводить до отримання мікрочастинок, які можуть належним чином переміщатися та доставлятися у легені за допомогою різних інгаляційних платформ.

Питома площа поверхні (З5А) мікрочастинок визначається як загальна площа поверхні мікрочастинок на одиницю маси (переважно в одиницях м2/г). Способи вимірювання 55А відомі із рівня техніки та включають, наприклад, вимірювання Брунауера-Емета-Телера (ВЕТ) із використанням оцінки питомої поверхні поглинання матеріалів азоту, що вимірюється в залежності від відносного тиску. Площа поверхні визначається за допомогою розрахунку кількості адсорбованого газу, що відповідає мономолекулярному шару на поверхні мікрочастинок. Методика сприяє виміру зовнішньої площі та будь- яких оцінок площі пір для визначення загальної питомої площі поверхні.

Прилади вимірювання ВЕТ відомі із рівня техніки.

У варіантах здійснення питома площа поверхні (З5А) мікрочастинок сухого порошкоподібного складу становить від близько З ме/г до близько 8 м-/г. У відповідних варіантах здійснення 554А безлічі мікрочастинок становить близько 3,5 ме/г-7,5 мг/г, або близько 4 ме//--7 мг/г, або близько 4,5 ме/г--7 ме/г, або близько 5 м2/г-7 ме/г, або близько 4,5 м2/г-6 ме/г, або близько 5 м2/г-6 мг/г, або близько 4 мг/г, близько 4,5 мг/г, близько 5 м2/г, близько 5,5 м2/г, близько 6 м2/г, близько 6,5 мг/г або близько 7 мг/г.

На Фіг. 9 зображені результати вимірювання питомої площі поверхні із застосуванням ВЕТ, у м2/г.

Кожен стовпець на Фіг. 9 представляє різну кількість трилейцину у складах. У кожній колонці кількість лейцину підвищується від близько 1 95 до близько 20 95. Мікрофотографії на вставках демонструють фізичний вигляд мікрочастинок при низькому значенні З55А (знизу ліворуч) та при більш високому значенні 55А (зверху праворуч). Як показано, при більш низькому ваг. 95 трилейцину значення 55А залишається нижче приблизно 5 мг/г, але підвищується при підвищенні вмісту лейцину. При вмісті трилейцину вище близько 2 95 значення 55А підвищується до більш ніж 3,0 ме/г, а також підвищується по мірі підвищення відсотка лейцину. Значення 55А, що становлять вище 5,5 м-/г, та наближаються до 7,0 ме/г, досягаються при кількостях трилейцину, що становлять вище 4 95. Необхідний діапазон питомої площі поверхні, що становить близько 4-7 мг/г, може бути легко досягнутий із застосуванням близько 1-6 95 трилейцину та кількості лейцину, що становить близько 1-20 95. Як показано, при застосуванні кількості трилейцину, що становить нижче близько 695, кількість лейцину може становити нижче 10 95, навіть нижче 5 95, та при цьому підтримуються необхідне значення 55А та мікрочастинки з шорсткістю поверхні. На мікрофотографії у лівому верхньому куті зображена форма мікрочастинок сухих порошкоподібних складів, описаних у даному документі, що демонструє необхідний розмір, питому площу поверхні та шорсткість поверхні. У певних варіантах здійснення сухий порошкоподібний склад характеризується щільністю спресованої нерозфасованої речовини, що становить близько 0,4-1,0 г/см3. Прийнятніше щільність спресованої нерозфасованої речовини сухого порошкоподібного складу становить близько 0,5-0,8 г/см3. У варіантах здійснення щільність спресованої нерозфасованої речовини сухого порошкоподібного складу, описаного у даному документі, становить близько 0,4-0,9 г/см3, близько 0,4-0,8 г/см3, близько 0,5-0,8 г/см3, близько 0,6-0,8 г/см3 або близько 0,4 г/см3, близько 0,5 г/см3, близько 0,6 г/см3, близько 0,7 г/см? або близько 0,8 г/см3.

У деяких варіантах здійснення щільність спресованої нерасфасованої речовини сухого порошкоподібного складу, описаного у даному документі, становить від близько 0,4 г/см? до близько 0,9 г/см3. У деяких варіантах здійснення щільність спресованої нерасфасованої речовини сухого порошкоподібного складу, описаного у даному документі, становить від близько 0,5 г/см? до близько 0,8 г/см3.

Сухі порошкоподібні склади прийнятніше містять стабілізатор скла, як описано у даному документі, у тому числі аморфний сахарид або буфер, або застосовується як аморфний сахарид, так і буфер.

Ілюстративні аморфні сахариди містять сахариди, описані у даному документі, у тому числі трегалозу, сахарозу, рафіноз, інулін, декстран та циклодекстрин. Прийнятніше аморфний сахарид присутній у кількості від близько 30 95 до близько 7095, та у варіантах здійснення являє собою трегалозу, прийнятніше присутню у кількості близько 35 95-60, або 35 95-55 95.

Ілюстративні буфери для застосування у сухих порошкоподібних складах описані у даному документі та включають цитратний буфер, фосфатний буфер та тартратний буфер. Прийнятніше буфер присутній у кількості від близько 1 95 до близько 10 95, та у варіантах здійснення являє собою цитратний буфер. У певних варіантах здійснення рН цитратного буфера становить від близько рН 5,5 до близько рН 6,5, наприклад, близько рН 5,5, близько рН 5,6, близько рН 5,7, близько рН 5,8, близько рН 5,9, близько рН 6,0, близько рн 6,1, близько рН 6,2, близько рН 6,3, близько рН 6,4 або близько рН 6,5. У певних варіантах здійснення рН цитратного буфера становить близько рн 6,4.

У певних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади, описані у даному документі, містять поверхнево-активну речовину. Як зазначено у даному документі, "поверхнево-активна речовина" відноситься до молекули або сполуки, яка зменшує агломерацію частинок, адгезію частинок до поверхні капсули, стінок контейнера або компонентів клапана інгаляційного пристрою доставки. Також було виявлено, що поверхнево-активна речовина знижує утворення невидимих неозброєним оком частинок (ЗУР) під час розведення складу. Видалення ЗУР або зниження їхнього утворення спрощує аналітичну характеристику складу, оскільки усуває необхідність відстеження утворення ЗМР під час виготовлення. Аналітична характеристика ЗМР може включати розробку ортогональних методик для ідентифікації та кількісного визначення 5УР з метою контролю якості. Таким чином, видалення 5УР або їх зниження до прийнятних рівнів усуває необхідність цього етапу характеристики із виробничого процесу, оптимізуючи виробництво. Видалення 5МР також може зробити діапазон доз прогнозованішим, оскільки кінетика вивільнення лікарського засобу із МР є невідомою. Крім того, видалення 5МР, ймовірно, призведе до підвищення кількості активного засобу, доступного для включення у фармакологічну активність після розведення, що може означати не тільки те, що може бути досягнута більша доза, що доставляється, але і може бути розрахований більш точний прогноз доставленої дози. Більш висока доза може також принести користь пацієнту, наприклад, у результаті потенційного зниження кількості або частоти доз, які повинні бути доставлені для отримання фармакологічної користі. "Невидима неозброєним оком частинка" ("ЗМР") являє собою невидиму неозброєним оком частинку розміром від близько 1 мкм до близько 200 мкм. Присутність невидимих неозброєним оком частинок можна визначити шляхом розведення сухого порошкоподібного складу та рідини, що характеризується каламутною якістю. Фактичне визначення наявності 5УР може бути підтверджено за допомогою такої методики як візуалізація мікропотоку. Візуалізація мікропотоку (або МЕЇ) поєднує мікрофлюїдну проточну мікроскопію та аналіз частинок із візуалізацією високої роздільної здатності для кількісної оцінки кількості МР. МЕЇ може групувати ці значення у діапазоні розмірів частинок, наприклад, групуючи значення частинок у діапазоні розмірів від близько 1 до близько 200 мкм, від близько 2 мкм до близько 200 мкм, від близько 5 мкм до близько 200 мкм, від близько 10 мкм до близько 200 мкм та від близько 25 мкм до близько 200 мкм. Приклади показують, що включення поверхнево-активної речовини до сухого порошкоподібного складу знижує присутність ЗМР у кожному діапазоні розмірів частинок порівняно із контрольним складом, в якому поверхнево-активна речовина відсутня (наприклад, Фіг. 15А). Таким чином, у певних варіантах здійснення сухий порошкоподібний склад, розкритий у даному документі, містить поверхнево-активну речовину, при цьому після розведення кількість невидимих неозброєним оком частинок у складі знижується. У деяких варіантах здійснення кількість невидимих неозброєним оком частинок знижено порівняно з еквівалентним складом, що не містить поверхнево-активної речовини. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 25 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 30000 частинок на мл, наприклад, 25000 частинок на мл, 20000 частинок на мл, 15000 частинок на мл, 10000 частинок на мл або 5000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗУР розміром від близько 25 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 1000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість

ЗМР розміром від близько 25 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 1000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 25 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 100 частинок на мл.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 10 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 100 000 частинок на мл, наприклад, 90 000 частинок на мл, 80 000 частинок на мл, 70 000 частинок на мл, 60 000 частинок на мл, 50 000 частинок на мл, 40 000 частинок на мл або 30 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 10 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 10 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість

ЗМР розміром від близько 10 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 1 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 10 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 100 частинок на мл.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 5 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 200 000 частинок на мл, наприклад, 180 000 частинок на мл, 170 000 частинок на мл, 160 000 частинок на мл, 150 000 частинок на мл або 140 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість МР розміром від близько 5 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 50 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 5 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 10 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 5 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 2 000 частинок на мл.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 1х105 частинок на мл, наприклад, 0,8х109 частинок на мл, 0,7х109 частинок на мл, 0,6х105 частинок на мл або 0,5х105 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 100 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 50 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість БМР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 10 000 частинок на мл.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 1 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 2х105 частинок на мл, наприклад, 1,8х1094 частинок на мл, 1,7х106 частинок на мл, 1,6х105 частинок на мл або 1,5х105 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 1 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 200 000 частинок на мл. У певних варіантах здійснення кількість ЗУР розміром від близько 1 мкм до близько 200 мкм знижується до менше 150 000 частинок на мл.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 25 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж у 2 рази, наприклад, більш ніж у З рази, більш ніж у 4 рази, більш ніж у 5 разів, більш ніж у 6 разів, більш ніж у 7 разів, більш ніж у 8 разів або більш ніж у 9 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 25 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж в 10 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 10 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж у 2 рази, наприклад, більш ніж у З рази, більш ніж у 4 рази, більш ніж у 5 разів, більш ніж у 6 разів, більш ніж у 7 разів, більш ніж у 8 разів або більш ніж у 9 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 10 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж в 10 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 5 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж у 2 рази, наприклад, більш ніж у З рази, більш ніж у 4 рази, більш ніж у 5 разів, більш ніж у 6 разів, більш ніж у 7 разів, більш ніж у 8 разів або більш ніж у 9 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж в 10 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж у 2 рази, наприклад, більш ніж у З рази, більш ніж у 4 рази, більш ніж у 5 разів, більш ніж у 6 разів, більш ніж у 7 разів, більш ніж у 8 разів або більш ніж у 9 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем. У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж в 10 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем. У певних варіантах здійснення кількість 5МР розміром від близько 2 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж в 100 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем.

У певних варіантах здійснення кількість ЗМР розміром від близько 1 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж у 2 рази, наприклад, більш ніж у З рази, більш ніж у 4 рази, більш ніж у 5 разів, більш ніж у 6 разів, більш ніж у 7 разів, більш ніж у 8 разів або більш ніж у 9 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем. У певних варіантах здійснення кількість 5МР розміром від близько 1 мкм до близько 200 мкм знижується більш ніж в 10 разів при розведенні порівняно з еталонним контролем.

У певних варіантах здійснення еталонний контроль являє собою еквівалентний склад без поверхнево-активної речовини. У деяких варіантах здійснення, склад розводять у воді. У деяких варіантах здійснення, склад розводять до концентрації активного засобу, що становить 30 мг/мл. У деяких варіантах здійснення, склад розводять до концентрації активного засобу, що становить 2,5 мг/мл. У деяких варіантах здійснення, кількість ЗМР визначають за допомогою візуалізації мікропотоків (МЕЇ). У певних варіантах здійснення кількість «МР визначають за допомогою візуалізації мікропотоків (МЕЇ) із застосуванням способу, як визначено у прикладах.

Ілюстративні поверхнево-активні речовини, придатні для застосування у сухих порошкоподібних складах, описаних у даному документі, включають без обмеження полісорбат-20 (Р5-20), полісорбат- (РБ5-40), полісорбат-60 (Р5О-60), полісорбат-80 (РО-80) та полоксамер-188. У певних варіантах здійснення склади, описані у даному документі, містять Р5О-80, прийнятніше у концентрації у діапазоні від близько 0,27 95 за вагою до близько 2,7 95 за вагою, прийнятніше від 0,27 У за вагою до 1,33 95 за вагою, прийнятніше від близько 0,67 ую за вагою до близько 1,33 У5 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить РО-80 у концентрації у діапазоні від близько 0,3 95 за вагою до близько З 95 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить РО-80 у концентрації у діапазоні від близько 0,3 95 за вагою до близько 2,595 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить Р5-80 у концентрації у діапазоні від близько 0,5 95 за вагою до близько 2,5 95 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить РО-80 у концентрації у діапазоні від близько 0,5 95 за вагою до близько 2 95 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить РО-80 у концентрації у діапазоні від близько 0,5 95 за вагою до близько 1,5 95 за вагою.

В ілюстративних варіантах здійснення склад містить Р5-80 у концентрації у діапазоні від близько 0,67 Фь до близько 1,33 95.

В ілюстративних варіантах здійснення склад містить Р5-80 у концентрації близько 0,7 95 (ваг./ваг.), близько 0,8 95 (ваг./ваг.), близько 0,9 95 (ваг./ваг.), близько 1,0 9» (ваг./ваг.), близько 1,1 9» (ваг./ваг.), близько 1,2 95 (ваг./ваг.) або близько 1,3 95 (ваг./ваг.). У деяких варіантах здійснення склад містить Р5о- 80 у концентрації близько 1,1 95 (ваг./ваг.).

В ілюстративних варіантах здійснення композиція містить Р5З-80 у концентрації близько 0,7 9У5520,35 (ваг./ваг.), близько 0,8 950,4 (ваг./ваг.), близько 0,9 9520,45 (ваг./ваг.), близько 1,0 95520,5 (ваг./ваг.), близько 1,1 900,55 (ваг./ваг.), близько 1,2 950,6 (ваг./ваг.), близько 1,3 950,65 (ваг./ваг.), близько 1,4 95-0,7 (ваг./ваг.), близько 1,5 955-0,75 (ваг./ваг.), близько 1,6 95-0,8 (ваг./ваг.;) або близько 1,7 Уо-0,75 (ваг./ваг.). У деяких варіантах здійснення склад містить РеО-80 у концентрації 1,1 У5-0,55 (ваг./ваг.).

У певних варіантах здійснення склад, описаний у даному документі, містить полоксамер-188, прийнятніше у концентрації у діапазоні від близько 195 за вагою до близько 1095 за вагою. В ілюстративних варіантах здійснення склад містить полоксамер-188 (Р188) у концентрації у діапазоні від близько 0,67 95 до близько 2,67 У5. У певних варіантах здійснення склад містить РІ188 у концентрації у діапазоні від близько 0,3 У5 за вагою до близько З 95 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить Р188 у концентрації у діапазоні від близько 0,3 95 за вагою до близько 2,5 95 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить Р188 у концентрації у діапазоні від близько 0,590 за вагою до близько 2,595 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить Р188 у концентрації у діапазоні від близько 0,5 95 за вагою до близько 2 95 за вагою. У певних варіантах здійснення склад містить Р188 у концентрації у діапазоні від близько 0,5 9У5 за вагою до близько 1,5 95 за вагою.

В ілюстративних варіантах здійснення склад містить Р188 у концентрації у діапазоні від близько 0,67 Фь до близько 1,67 95.

В ілюстративних варіантах здійснення склад містить Р188 у концентрації близько 0,7 95 (ваг./ваг.), близько 0,8 95 (ваг./ваг.), близько 0,9 95 (ваг./ваг.), близько 1,0 9» (ваг./ваг.), близько 1,1 9» (ваг./ваг.), близько 1,2 95 (ваг./ваг.), близько 1,3 95 (ваг./ваг.), близько 1,4 9» (ваг./ваг.), близько 1,5 9» (ваг./ваг.), близько 1,6 95 (ваг./ваг.) або близько 1,7 95 (ваг./ваг.).

В ілюстративних варіантах здійснення сухі порошкоподібні склади містять близько 39 95 трегалози, близько 10,5 95 лейцину, близько 2 95 трилейцину, близько 8,5 95 цитратного буфера, та активний засіб. Відповідні розміри мікрочастинок сухих порошкоподібних складів описані у даному документі, та у варіантах здійснення безліч мікрочастинок характеризуються медіанним масовим аеродинамічним діаметром (ММАЮ) від близько 2 до близько 4 мкм при отриманні в аерозольній формі. Відповідні питомі площі поверхні (55А) мікрочастинок описані у даному документі та включають, наприклад, питому площу поверхні, що становить близько 4-7 мг/г. Прийнятніше мікрочастинки характеризуються еквівалентним оптичним середньооб'ємним діаметром (ОМ) від близько 1 до близько 5 мкм.

У додаткових варіантах здійснення у даному документі запропоновано спосіб отримання сухого порошкоподібного складу. У варіантах здійснення спосіб прийнятніше включає отримання рідкої вихідної сировини, що містить лейцин, від близько 0,1 мг/мл до Є мг/мл трилейцину, активний засіб та прийнятніше додатково містить засіб для стабілізації скла. Стабілізатор скла, як описано у даному документі, може бути виключений із сухих порошкоподібних складів, за необхідності. Рідка вихідна сировина може також містити поверхнево-активну речовину. Рідку вихідну сировину отримують за допомогою об'єднання цих компонентів у рідкому розчиннику з отриманням вихідної сировини, в якій розчинений кожен із компонентів. Нагрівання може бути додано при необхідності або потребуватися підвищення розчинності різних компонентів із утворенням рідкої вихідної сировини. Ілюстративні рідкі розчинники включають воду, у тому числі деіонізовану воду, а також розчини спиртів, що розбавляються водою. У варіантах здійснення активний засіб прийнятніше додають до рідкої вихідної сировини після додавання та розчинення інших компонентів вихідної сировини.

У відповідних варіантах здійснення способів отримання лейцин та трилейцин присутні у співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин, що становить від близько 0,1:1 до близько 301 у рідкій вихідній сировині. Як описано у даному документі, при отриманні рідкої вихідної сировини лейцин та трилейцин представляють у вигляді кількостей у мг/мл. Таким чином, у таких варіантах здійснення співвідношення концентрацій лейцин:трилейцин, що становить від близько 0,1:1 до близько 30:1, у заданому об'ємі рідкої вихідної сировини відповідає співвідношенню лейцин:трилейцин за вагою у рідкій вихідній сировині. У додаткових варіантах здійснення лейцин та трилейцин присутні у співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин від близько 0,1:1 до близько 25:1, від близько 0,5:1 до близько 20:1, від близько 1:11 до близько 20:1, від близько 1:11 до близько 15:1, від близько 1:1 до близько 12: 1, від близько 1:11 до близько 10:1, від близько 1:1 до близько 7:1, від близько 1:1 до близько 6:1, або близько 1:1, близько 2:1, близько 3:1, близько 4:1, близько 5:1, близько 5,1:1, близько 5,21, близько 5,25:1, близько 5,3:1, близько 5,4:1, близько 5,5:1, близько 5,75:1 або близько 671 у рідкій вихідній сировині.

Потім рідка вихідна сировина може бути розпилена. У певних варіантах здійснення рідку вихідну сировину фільтрують перед розпиленням. У певних варіантах здійснення рідку вихідну сировину фільтрують через фільтр із діаметром пор 0,22 мікрон. У певних варіантах здійснення рідка вихідна сировина, що містить лейцин та трилейцин, фільтрують перед додаванням активного засобу. У певних варіантах здійснення рідку вихідну сировину фільтрують після додавання активного засобу перед розпиленням. Розпилення відноситься до перетворення рідкої вихідної сировини у дрібні краплі, прийнятніше із використанням стисненого газу (такого як СО: або інертний газ). Ілюстративні пристрої для отримання розпиленої рідкої вихідної сировини відомі із рівня техніки та включають застосування різних розпилювальних форсунок, які характеризуються необхідними розмірами та характеристиками потоку. Ілюстративні параметри розпилення включають температуру на виході, що становить близько "06-90 "С, прийнятніше близько 60 "С-80 "С або близько 70 "С; швидкість подачі вихідної сировини, що становить близько 8-15 мл/хв., прийнятніше близько 9-14 мл/хв., близько 10-13 мл/хв. або близько 12 мл/хв.; швидкість потоку газу розпилювача, що становить близько 9-15 кг/година (годину або год.), прийнятніше близько 10-14 кг/год., близько 12-14 кг/год. або близько 13 кг/год.; та швидкість потоку газу-осушувача, що становить близько 60-100 кг/год., прийнятніше близько 60-90 кг/год., близько 70-90 кг/год. або близько 80 кг/год. Потім розпилену рідку вихідну сировину може бути висушено, прийнятніше при нагріванні та у поєднанні з потоком повітря для полегшення сушіння. У результаті сушіння отримують безліч мікрочастинок. Температура сушіння зазвичай знаходиться у діапазоні близько 50 "0-100 "С, або близько 607С-100 "С, або близько 70 70-90 С; швидкість потоку повітря може становити близько 10-40 мЗ/година. Ілюстративні засоби для стабілізації скла, у тому числі аморфні сахариди та буфери, описані у даному документі, як і відповідні кількості засобів для стабілізації скла. Відповідні кількості лейцину та трилейцину також представлені у всьому описі.

Зрештою сухий порошкоподібний склад повинен містити зазначені кількості лейцину та трилейцину (та інших компонентів), такі кількості також використовуються у рідкій вихідній сировині. Результатом процесу сушіння після розпилення є видалення будь-якого рідкого розчинника, та, таким чином, повна кількість вихідної сухої ваги компонентів відповідає кінцевій сухій вазі сполук у сухому порошкоподібному складі. Ілюстративні активні засоби також описані у даному документі. Способи отримання сухих порошкоподібних складів, описані у даному документі, прийнятніше включають отримання мікрочастинок, що характеризуються зазначеними необхідними фізичними характеристиками, у тому числі необхідну щільність спресованої нерозфасованої речовини, питому площу поверхні та розміри. Ілюстративні розміри описані у даному документі, як і ілюстративні 55А, у тому числі питома площа поверхні, що становить менше ніж 10 ме/г, прийнятніше близько 4-7 ме/г.

Прийнятніше способи включають отримання безлічі мікрочастинок, що характеризуються еквівалентним оптичним середньооб'ємним діаметром (ОММО) від близько 1 мкм до близько 5 мкм, як описано у даному документі; медіанним масовим аеродинамічним діаметром (ММАБ) від близько 2 мкм до близько 4 мкм, коли вони представлені в аерозольній формі; щільністю спресованої нерозфасованої речовини від близько 0,4 г/см до 0,8 г/см3.

Перевага способів отримання сухих порошкоподібних складів, описаних у даному документі, пов'язана із високим виходом способу. Наприклад, якщо швидкість розпилення встановленана рівні 20 мл/хв., було визначено наступний вихід у г/година.

Таблиця 2

Вплив концентрації на вихід

Максимальне завантаження Вихід (г/год.) (при

Вміст лейцину | Вміст трилейцину твердих частинок (мг/мл) швидкості потоку при МО (максимальна розчинність | способу, що становить 20 обмежена) мл/хв.) 001112бояь1 11111125 Ї111111111130с1 60096 Ї777777711111111111111111111111931111 11111114 45096 77777714 11111115 С 00 71111лобяв1 11111150 Ї111111111116ссСсСс2С 30096 Ї7771111111111111111111111111117671111111 11111181

Як зазначено вище, із використанням у вихідній сировині тільки трилейцину із максимальною концентрацією трилейцину, що становить 5 мг/мл, було досягнуто максимального завантаження твердих частинок, що становить 25 мг/мл (відносно максимальної розчинності). Це призводить до виходу, що становить 30 г/година. При використанні тільки лейцину у концентрації 6095, з максимальною концентрацією лейцину, що становить 20 мг/мл, було досягнуто максимального завантаження твердих частинок, що становить 33 мг/мл, та вихід, що становить 40 г/година. Також показані додаткові результати при використанні тільки лейцину та трилейцину. На відміну від цього, для трьох досліджених видів вихідної сировини, які містили як лейцин, так і трилейцин, максимальне завантаження твердих речовин становило 250 мг/мл, а продуктивність, що становить 300 г/година, була досягнута тільки із використанням 895 лейцину та 295 трилейцину. Це являло собою незвичайний та несподіваний результат переваг способів та складів, розкритих у даному документі, в тому, що частинка, що диспергується, може бути отримана із використанням відносно невеликих кількостей лейцину та трилейцину, але також допускається великий вихід. Такий високий вихід значно впливає на можливість масштабування виробництва сухих порошкоподібних складів, описаних у даному документі, коли потрібні великі кількості складів.

Способи та склади, описані у даному документі, дозволяють отримувати капсули, блістерні упаковки і т. д., а також інші відповідні контейнери для сухих порошкоподібних складів. Такі контейнери можуть бути виготовлені із 10-200 мг сухого порошку, прийнятніше 10-100 мг або 25-75 мг, або 50 мг сухого порошкоподібного складу. Такі контейнери можуть прийнятніше доставляти 0,1-10 мг сухого порошкоподібного складу у легені пацієнта.

В деяких варіантах здійснення застосування способів, описаних у даному документі, дозволяє отримати сухі порошкоподібні склади, які можуть зменшити загальну кількість капсул, необхідних для інгаляційного пристрою. Наприклад, об'єм, необхідний для доставки 50-100 мг активного засобу, може бути зменшений із двох великих капсул розміру 00 до однієї капсули розміру 3.

Способи, описані у даному документі, також включають механізм підвищення щільності спресованої нерозфасованої речовини та питомої площі поверхні сухого порошкоподібного складу, що містить безліч мікрочастинок. Як описано у всьому описі, при включенні лейцину та трилейцину у сухий порошкоподібний склад може бути легко досягнута щільність спресованої нерозфасованої речовини, що становить близько 0,4-1,0 г/см? (прийнятніше близько 0,5-0,8 г/см). Крім того, також може бути досягнута питома площа поверхні, що становить близько 5-10 мг/г (прийнятніше від близько 5 ме/г до близько 7 мг/г). У додаткових варіантах здійснення розміри мікрочастинок можуть бути сформовані в діапазонах, описаних у даному документі, у тому числі мікрочастинок із медіанним масовим аеродинамічний діаметром (ММАЮ) від близько 2 мкм до близько 4 мкм при отриманні в аерозольній формі.

Способи отримання аерозольної форми сухого порошкоподібного складу відомі із рівня техніки та включають, наприклад, застосування інгаляційних пристроїв, таких як інгалятор для сухого порошку (ОРІ) (наприклад, Моподозе К5О1 ОРІ від РІ А5ТІАРЕ (Озпаодо, Італія)). Сухі порошкоподібні склади, описані у даному документі, можуть розподілятися у потоці газу за допомогою або пасивного або активного інгаляційного пристрою та залишатися у зваженому стані у газі протягом часу, достатнього для того, щоб пацієнт вдихнув щонайменше частину мікрочастинок так, щоб частина мікрочастинок досягла легень. У даному документі також представлені способи лікування медичного стану у пацієнта-ссавця, які включають введення пацієнту за допомогою інгаляції (у тому числі за допомогою інгалятора для сухого порошку) складів сухого порошку, як описано у даному документі.

Медичні стани, які можна лікувати із застосуванням способів, описаних у даному документі, включають медичні стани, що впливають на нервову систему, ендокринну систему, м'язову систему, серцево-судинну систему, травну систему, дихальну систему (і, зокрема, легені), гормональні системи, імунну систему, репродуктивну систему і т. д.

У варіантах здійснення, представлених у даному документі, представлений спосіб лікування запального стану, пов'язаного із Т5І Р, у пацієнта. Запальні стани, пов'язані із Т5І Р, можуть бути викликані алергічними реакціями або подразниками або стимуляторами навколишнього середовища.

У деяких варіантах здійснення запальний стан, пов'язаний із Т5І Р, може являти собою бронхіальну астму, хронічну обструктивну хворобу легень, алергічний риніт, алергічний риносинусит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит або еозинофільний езофагіт.

У деяких варіантах здійснення запальний стан, пов'язаний із ТЗІ Р, являє собою бронхіальну астму, та зазначений спосіб лікування включає введення пацієнту за допомогою інгаляції сухого порошкоподібного складу, що містить терапевтично ефективну кількість антитіла до Т5ІР або варіанта фрагмента антитіла. У певних варіантах здійснення пацієнт являє собою людину. У певних варіантах здійснення пацієнт являє собою дитину або підлітка.

Як описано у даному документі, прийнятніше сухий порошкоподібний склад містить безліч мікрочастинок, при цьому мікрочастинки містять: лейцин; від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину за вагою; та антитіло до тимічного стромального лімфопоетину (антитіло до Т5І Р) або варіант антитіла, при цьому лейцин та трилейцин присутні при співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин від близько 0,1:1 до близько 30:11. Сухий порошкоподібний склад може характеризуватися щільністю спресованої нерозфасованої речовини, що становить близько 0,3-1,0 г/см3. Ілюстративні компоненти для включення до складу та їх кількості описані у всьому документі.

Як описано у даному документі, здатність доставляти антитіло до тимічного стромального лімфопоетину (антитіло до Т5І Р) або варіант антитіла за допомогою інгаляції включає механізм доставки, більш зручний для застосування у первинній системі охорони здоров'я.

У варіантах здійснення способів лікування бронхіальної астми сухий порошкоподібний склад часто вводять у більш низьких дозах, ніж лікарський препарат, що системно вводиться, спрямований проти

Т5І Р. У деяких варіантах здійснення склад можна вводити щодня. Такі варіанти здійснення можуть бути зручнішими для суб'єкта або пацієнта. Крім того, такі варіанти здійснення можуть зменшити побічні ефекти, що можуть виникати при системному введенні.

Відповідно, антигензв'язуючий фрагмент антитіла для застосування у способах лікування містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить: послідовність СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЗЕОІО МО: 1; послідовність СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЗЕОІО МО: 2; послідовність СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у

ЗЕОІО МО: З; та варіабельний домен легкого ланцюга, що містить: послідовність СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЗЕОІО МО: 5; послідовність СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у

ЗЕОІЮ МО: б; та послідовність СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у

ЗЕО ІЮО МО: 7.

У додаткових варіантах здійснення способів лікування антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 4; та варіабельний домен легкого ланцюга, що містить 5ЕО ІО МО: 8.

У деяких варіантах здійснення форми бронхіальної астми, що піддаються лікуванню за допомогою складу за даним винаходом, включають бронхіальну астму легкого ступеня тяжкості, бронхіальну астму помірного ступеня тяжкості, бронхіальну астму тяжкого ступеня тяжкості, нееозинофільну бронхіальну астму, низькоеозинофільну бронхіальну астму та високоеозинофільну бронхіальну астму.

У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом можуть бути призначені для застосування у лікуванні бронхіальної астми легкого ступеня тяжкості. У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом можуть бути призначені для застосування у лікуванні бронхіальної астми помірного ступеня тяжкості. У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом можуть бути призначені для застосування у лікуванні бронхіальної астми тяжкого ступеня тяжкості. У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом можуть бути призначені для застосування у лікуванні нееозинофільної бронхіальної астми. У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом можуть бути призначені для застосування в лікуванні низькоеозинофільної бронхіальної астми. У певних варіантах здійснення склади за даним винаходом можуть бути призначені для застосування в лікуванні високоеозинофільної бронхіальної астми. Терміни "бронхіальна астма легкого ступеня тяжкості" та "бронхіальна астма помірного ступеня тяжкості? що використовуються у даному документі, відносяться до бронхіальної астми, яка характеризується показником за шкалою

Глобальної ініціативи з бронхіальної астми (СІМА), що становить 3 або менше, прийнятніше показником за шкалою СІМА, що становить 2 або 3. Шкала СІМА вимірює тяжкість бронхіальної астми на основі наступних критеріїв (див. "РосКеї Сціде Тог Азійта Мападетепі апа Ргемепійоп," СПобаї!

Іпіайме Ттог Азіпта; 2019).

Термін "бронхіальна астма важкого ступеня тяжкості", що використовується у даному документі, відноситься до бронхіальної астми, яка вимагає високоінтенсивного лікування (наприклад, етапи 4 та за СІМА) для підтримки високого контролю або якщо високий контроль не досягається, незважаючи на високоіїнтенсивне лікування (СІМА, Сіоба! 5ігаїеду ог Авіпта Мападетенпі апа Ргемепійоп. СіІобаї

Іпйайме Тог Авійта (СІМА) Юесетбрег 2012). Термін "бронхіальна астма тяжкого ступеня тяжкості" також охоплює бронхіальну астму помірного або тяжкого ступеня тяжкості. Особи із бронхіальною астмою помірного або тяжкого ступеня тяжкості, які підходять для лікування складами, описаними у даному документі, можуть являти собою осіб, які характеризуються відсутністю контролю при введенні середньої або високої дози ІС5:І АВА з одним або декількома загостреннями та частими симптомами.

У певних варіантах здійснення бронхіальна астма тяжкого ступеня тяжкості додатково визначається як бронхіальна астма тяжкого ступеня тяжкості із запаленням 2 типу, що характеризується підвищеним рівнем еозинофілів у крові (тобто число еозинофілів у крові 2 150 клітин/мкл) та/"або підвищеним рівнем РБеМо (тобто Ремо г 20 ррб).

Термін "ТЕМО" відноситься до фракційного оксиду азоту, що видихається, який являє собою біомаркер запалення бронхів або дихальних шляхів. РЕМО продукується епітеліальними клітинами дихальних шляхів у відповідь на запальні цитокіни, такі як ТІ Р, ІІ -4 та І--13. Рівні РЕМО у здорових дорослих знаходяться у діапазоні від 2 до 30 частин на мільярд (ррб). Ілюстративний аналіз для вимірювання ГЕМО включає вдихання суб'єктами до повної ємності легень через монітор запалення дихальних шляхів МІОХ МІМОФ, а потім видихання протягом 10 секунд зі швидкістю 50 мл/сек (за допомогою візуальних та слухових сигналів).

Термін "високоеозинофільна бронхіальна астма", як використовується у даному документі, відноситься до пацієнта із бронхіальною астмою, у якого є вміст еозинофілів у крові при скринінгу 2 250 клітин/мкл.

Зокрема, склади забезпечують можливість лікування пацієнтів із бронхіальною астмою менш тяжкого ступеня тяжкості, яких зазвичай лікують у первинній системі охорони здоров'я. Наприклад, пацієнтів із показником за шкалою Глобальної ініціативи з бронхіальної астми (СІМА), що становить З або менше, прийнятніше із показником за шкалою СІМА, що становить 2 або 3. Шкала СІМА вимірює тяжкість бронхіальної астми на основі наступних критеріїв (див. "РосКеї Сціде ог Авіпта Мападетепі апа Ргемепійоп," Спобаї Іпіайме ог Авіпта; 2019): симптоми бронхіальної астми у денний час більше двох разів на тиждень; нічні пробудження у зв'язку із бронхіальною астмою; застосування засобу для полегшення бронхіальної астми понад два рази на тиждень; та обмеження активності у зв'язку із бронхіальною астмою. Нульовий бал за цими критеріями вважається "добре контрольованим". Бал 1-2 за цими критеріями вважається "частково контрольованим". Бал 3-4 за цими критеріями вважається "неконтрольованим".

У деяких варіантах здійснення склади забезпечують можливість лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму помірного або тяжкого ступеня тяжкості, яких можна лікувати у первинній системі охорони здоров'я, або для лікування пацієнтів, які страждають на бронхіальну астму помірного та тяжкого ступеня тяжкості з обмеженим доступом до лікування за допомогою спеціалізованої допомоги. Наприклад, склади можуть бути застосовні для лікування пацієнтів із бронхіальною астмою помірного або тяжкого ступеня тяжкості із показником за шкалою Глобальної ініціативи з бронхіальної астми (СІМА), що становить 4-5. Відповідно, склади забезпечують можливість лікування бронхіальної астми помірного та тяжкого ступеня тяжкості, яка є неконтрольованою. Відповідно, склади забезпечують можливість лікування бронхіальної астми помірного та тяжкого ступеня тяжкості, яка є неконтрольованою при введенні середньої або високої дози ІС5: АВА з одним або декількома загостреннями та частими симптомами.

Додаткові ілюстративні варіанти здійснення

У варіанті здійснення 1 представлений сухий порошкоподібний склад, що містить безліч мікрочастинок, при цьому мікрочастинки містять: лейцин, від близько 1 95 до близько 10 95 трилейцину за вагою та антигензв'язуючий фрагмент антитіла до тимічного стромального лімфопоетину (Т51І Р), що містить: а. варіабельний домен важкого ланцюга, що містить послідовність СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 1, послідовність СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 2, та послідовність

СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 3, при цьому будь-яка СОКІ, 2 або З важкого ланцюга необов'язково містить одну амінокислотну заміну, та р. варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІО МО: 5, послідовність СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІО МО: 6, та послідовність СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮО МО: 7, при цьому будь-яка

СОК 1, 2 або З легкого ланцюга необов'язково містить одну амінокислотну заміну, при цьому лейцин та трилейцин присутні у співвідношенні концентрацій лейцин:трилейцин, що становить від близько 0,111 до близько 30:1.

У варіанті здійснення 2 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 1, при цьому зазначений сухий порошкоподібний склад характеризується щільністю спресованої нерозфасованої речовини, що становить близько 0,4-1,0 г/см3.

У варіанті здійснення З представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх варіантів здійснення, що додатково містить засоби для стабілізації скла.

У варіанті здійснення 4 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 3, при цьому зазначений стабілізатор скла являє собою аморфний сахарид або буфер.

У варіанті здійснення 5 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 3, при цьому зазначений стабілізатор скла містить аморфний сахарид та буфер.

У варіанті здійснення 6 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 4 або варіантом здійснення 5, при цьому зазначений аморфний сахарид обраний із групи, що складається із трегалози, сахарози, рафінози, інуліну, декстрану, маніту та циклодекстрину.

У варіанті здійснення 7 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 4-6, при цьому зазначений буфер обраний із групи, що складається із цитратного буфера, фосфатного буфера, гістидинового буфера, гліцинового буфера, ацетатного буфера та тартратного буфера. У варіанті здійснення 8 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 4-7, при цьому зазначений аморфний сахарид присутній у кількості від близько

ЗО 95 до близько 70 95 за вагою.

У варіанті здійснення 9 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 4-8, при цьому зазначений аморфний сахарид являє собою трегалозу.

У варіанті здійснення 10 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 9, при цьому зазначена трегалоза присутня у кількості від близько 30 95 до близько 65 95 за вагою.

У варіанті здійснення 11 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 4-10, при цьому зазначений буфер присутній у кількості від близько 1 95 до близько 10 95 за вагою.

У варіанті здійснення 12 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-11, при цьому співвідношення концентрацій лейцин:трилейцин становить від близько 1:1 до 12:1.

У варіанті здійснення 13 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-12, при цьому співвідношення концентрацій лейцин:трилейцин становить від близько 1:1 до 7:11.

У варіанті здійснення 14 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-13, при цьому співвідношення концентрацій лейцин:трилейцин становить близько 5,25:1.

У варіанті здійснення 15 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-14, що містить від близько 1 95 до близько 7 95 трилейцину за вагою.

У варіанті здійснення 16 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-15, що містить від близько 8 95 до близько 11 95 лейцину за вагою та від близько 2 95 до близько 4 95 трилейцину за вагою.

У варіанті здійснення 17 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-16, що містить близько 10,5 95 лейцину за вагою та близько 2 95 трилейцину за вагою.

У варіанті здійснення 18 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-17, що додатково містить поверхнево-активну речовину, при цьому поверхнево-активну речовину необов'язково вибрано із полісорбату-20 (Р5-20), полісорбату-40 (РБ5-40), полісорбату-60 (РБ-60), полісорбату-80 (Р5-80) та полоксамеру-188.

У варіанті здійснення 19 представлений сухий порошкоподібний склад за п. 18, при цьому зазначена поверхнево-активна речовина являє собою РБ-80, при цьому необов'язково Рое-80 присутній у концентрації у діапазоні від близько 0,27 95 за вагою до близько 2,7 9Уо за вагою.

У варіанті здійснення 20 представлений сухий порошкоподібний склад за п. 18, при цьому зазначена поверхнево-активна речовина являє собою полоксамер-188, при цьому необов'язково полоксамер-188 присутній у концентрації у діапазоні від близько 1 95 до 10 95 за вагою.

У варіанті здійснення 21 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-20, при цьому безліч мікрочастинок характеризуються еквівалентним оптичним середньооб'ємним діаметром (ОМ) від близько 1 мкм до близько 5 мкм.

У варіанті здійснення 22 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-21, при цьому безліч мікрочастинок характеризуються масовим медіанним аеродинамічним діаметром (ММАО) від близько 2 мкм до близько 4 мкм, коли вони представлені в аерозольній формі. У варіанті здійснення 23 представлений сухий порошкоподібний склад за будь- яким із варіантів здійснення 2-22, при цьому щільність спресованої нерозфасованої речовини становить від близько 0,5 г/см3 до близько 0,8 г/см3.

У варіанті здійснення 24 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 2-23, що містить близько 3995 трегалози, близько 10,595 лейцину, близько 2 95 трилейцину та близько 8,5 95 цитратного буфера.

У варіанті здійснення 25 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-24, при цьому безліч мікрочастинок характеризуються питомою площею поверхні, що становить менш ніж близько 10 ме/г.

У варіанті здійснення 26 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 25, при цьому безліч мікрочастинок характеризуються питомою площею поверхні від близько 4 мг/г до близько 7 ме/г.

У варіанті здійснення 27 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх варіантів здійснення, при цьому зазначена СОКІ1 варіабельного домену важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО І МО: 1, СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮ МО: 2, СОКЗ варіабельного домену важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 3, СОКІ1 варіабельного домену легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ

МО: 5, СОМК2 варіабельного домену легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЗЕО ІЮ МО: б, та СОКЗ варіабельного домену легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІО МО: 7. У варіанті здійснення 28 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 27, при цьому антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить 5ЕО ІЮ МО: 4, та варіабельний домен легкого ланцюга, що містить 5ЕО ІО МО: 8.

У варіанті здійснення 29 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх варіантів здійснення, при цьому вказаний антигензв'язуючий фрагмент обраний із Раб, Рабр', Е(аб)2, 5СЕМ, мінітіла або діатіла.

У варіанті здійснення 30 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 29, при цьому зазначений антигензв'язуючий фрагмент являє собою Гарб.

У варіанті здійснення 31 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 30, при цьому зазначений Раб є людським або гуманізованим.

У варіанті здійснення 32 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із попередніх варіантів здійснення, при цьому зазначене антитіло до Т5І Р, з якого отриманий антигензв'язуючий фрагмент, являє собою Ідс1.

У варіанті здійснення 33 представлений спосіб лікування бронхіальної астми у пацієнта, що включає введення за допомогою інгаляції сухого порошкоподібного складу за будь-яким варіантом здійснення 1-29.

У варіанті здійснення 34 представлений спосіб варіанта здійснення 33, при цьому зазначена бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму легкого ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 35 представлений спосіб варіанта здійснення 33, при цьому зазначена бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму помірного ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 36 представлений спосіб варіанта здійснення 33, при цьому зазначена бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму тяжкого ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 37 представлений спосіб варіанта здійснення 33, при цьому зазначена бронхіальна астма являє собою еозинофільну форму бронхіальної астми та нееозинофільну форму бронхіальної астми.

У варіанті здійснення 38 представлений спосіб варіанта здійснення 33, при цьому зазначена бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму тяжкого ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 39 представлений спосіб за будь-яким із варіантів здійснення 33-38, при цьому бронхіальна астма характеризується менш ніж трьома з наступного: симптоми бронхіальної астми вдень більше двох разів на тиждень; нічні пробудження у зв'язку із бронхіальною астмою; застосування засобу для полегшення бронхіальної астми більш ніж двічі на тиждень; та обмеження активності у зв'язку із бронхіальною астмою.

У варіанті здійснення 40 представлений сухий порошкоподібний склад за будь-яким із варіантів здійснення 1-32 для застосування у способі лікування, який відрізняється тим, що зазначений склад підлягає введенню за допомогою інгаляції.

У варіанті здійснення 41 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 37 для застосування у способі лікування бронхіальної астми.

У варіанті здійснення 42 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 38, при цьому бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму легкого ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 43 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 38, при цьому бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму помірного ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 44 представлений сухий порошкоподібний склад варіанта здійснення 38, при цьому бронхіальна астма являє собою бронхіальну астму тяжкого ступеня тяжкості.

У варіанті здійснення 45 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 38, при цьому бронхіальна астма являє собою еозинофільну форму бронхіальної астми або нееозинофільну форму бронхіальної астми.

У варіанті здійснення 46 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 38, при цьому бронхіальна астма являє собою низькоеозинофільну форму бронхіальної астми.

У варіанті здійснення 47 представлений сухий порошкоподібний склад за варіантом здійснення 38, при цьому бронхіальна астма характеризується менш ніж трьома з наступного: симптоми бронхіальної астми вдень більше двох разів на тиждень; нічні пробудження у зв'язку із бронхіальною астмою; застосування засобу для полегшення бронхіальної астми більш ніж двічі на тиждень; та обмеження активності у зв'язку із бронхіальною астмою.

ПРИКЛАДИ

ПРИКЛАД 1 - ОТРИМАННЯ ЕАВ ДО Т5І Р

Серію зв'язуючих фрагментів антитіл (Раб), отриманих із моноклонального антитіла до Т5І Р "АБ", розкритого у УМО 2009/035577, яка включена у даний документ за допомогою посилання у повному обсязі, отримували із застосуванням стандартних методик молекулярної біології та клонування.

Коротко, послідовності СОК А5б5 клонували до каркасу Бар Ідс1!, у результаті чого отримували фрагмент Раб, позначений у даному документі як Бар! або Рар1. Послідовності МН та МІ Барі розкриті як 52Е0 10. МО: 4 та 8 відповідно.

Варіанти Рар2-9 також отримували із Рабї, що містить мутації в областях СОК. Комбінації СОК УНН та Мі. для кожного з Рабр11-9 показані у Табл. 3.

Таблиця З

Послідовність СОК Еаб1-9 до Т5І Р 11111111 соБтл2тазмн | сові 2тазм/:

Аналізували чистоту, стабільність та здатність Барі до агрегації. Коротко, 50 мг/мл Еар!1 становили на основі 30 мМ цитрату натрію, 105 мМ трегалози, рН 6,0. Зразки поміщали у камери стабільності при 40 "С та 5 "С протягом різних періодів часу. У різні часові точки зразки тестували за допомогою відповідних аналітичних методик, таких як високоефективна ексклюзивна хроматографія (НР-5ЕС). Використовували систему НРІ С Адііепі з автоматичним пробовідбірником із регульованою температурою, АЮ або ММО та програмне забезпечення Адіїепі Спетеїайоп/Орепі АВ ЕСМ СО5 від

Адііепі ТесппоЇодіез (Санта-Клара, Каліфорнія, США). Також використовували запобіжну колонку, колонку Т5Каеї (внутрішній діаметр 7,9 мм, каталожний номер 08543) та колонку ТЗК-Се! СЗО00О5МУХІ (5 мкм, 250 А і 7,8х300 мм, каталожний номер 08541) від Тозой Віозсієпсе (Спезпеїт, Германія). Як рухливу фазу використовували 0,1 М двоосновний безводний фосфат натрію, 0,1 М сульфат натрію, рН 6,8. Результати аналізу стабільності та агрегації представлені у Табл. 4.

Таблиця 4

Стабільність та агрегація Барбі

00 | 99557 | 043 | 000 | 99557 | 043 | 000 02 | ЮБ2 ЇЇ БюЮжщфКБї | 99556 | 044 | 000 05 | 99551 | 049 | 000 | 9931 | 055 | 04 07 ЇЇ 7171777777171111717711111111117119925 | 061 рр 04 71 | 9948 | 052 | 000 | 9913 | 065 | 021 72 | 9949 | 051 | 000 | ( її 3 | 9947 | 053 | 000 | ( її

Бо ШЕ НИЗ НС НЯ ВОНИ ВОАС НИ ВСЯ і вБОо | 06504 | 06504 | нв | 09296 | 09447 | 08943

Стабільність Рар11 також тестували за допомогою диференціальної скануючої калориметрії (055).

Для тестування використовували МісгоСаіІ СаріШагу МР О5С від МаМегп Рапаїуііса! (Малверн,

Великобританія), а для аналізу даних використовували програмне забезпечення Огідіп 7.0 (Нортгемптон, Массачусетс, США). Зразок Бабі розбавляли до 5 мг/мл буфером складу (30 мМ цитрату натрію, 105 мм трегалози, рН 6,0). Для кожного окремого циклу 500 мкл розведеного зразка

Еабі та еталона (буфер складу) вводили у зразок ЮО5С та еталонні комірки за допомогою автоматичного пробовідбірника. Розчини нагрівали від 25 С до 100 С зі швидкістю сканування 95 "С/година. Сканування буфера (заповненого як зразком, так і еталонними комірками) також отримували як холосту пробу для корекції зразка вихідного рівня.

Профіль заряду Барі також визначали за допомогою візуалізації ізоелектричного фокусування (ІЕР) за допомогою аналізатора ІСЕЗ. Капілярний аналізатор ІЕЕ ЇСЕЗ, автоматичний пробовідбірник

РіпСЕ МісгоІпіесіог, капіляр для перенесення з покриттям МісгоІпіесйоп купували та постачали компанією Ргоїєїп Зітріє. Зразки аналізували із використанням картриджа ЕС із капіляром із фторвуглецевим покриттям та вбудованими резервуарами для електроліту (Частина Мо 101701,

Ргоїєїп бітріє). Автоматичний пробовідбірник підтримували при 4 С протягом усього аналізу.

Визначали, що діапазон рі Раб: становить від 8,35 до 8,80.

ПРИКЛАД 2 - ГАВІ ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ ІЗ Т5І Р ЛЮДИНИ ТА ЯВАНСЬКОГО МАКАКА З АФІННІСТЮ,

ЩО ВИМІРЮЄТЬСЯ У ПМ

Афінність зв'язування Рарб: із Т5І Р, визначена за допомогою ВіАсоге

Специфічність та афінність Раб: по відношенню до рекомбінантних клітин ссавців ТІ Р людини та яванського макака, що експресуються клітинами, визначали із використанням приладу Віасоге 8К 5РК (СЕ Неасаге, Літл Чалфонт, Бакс, Великобританія).

Біосенсорні чіпи 5 бегіеєє С1, набори для зв'язування амінів, буфери на основі фізіологічного розчину, забуферені Нерез5, та буфери для регенерації отримані від СЕ Неайсаге та використовували відповідно до інструкцій виробника. Поверхні зі стрептавідином готували за допомогою ліофілізованого стрептавідину, розведеного за допомогою О-РВ5. Коротко, стрептавідин розбавляли до 4 мкг/мл в 10 мМ ацетаті натрію, рН 4,5, та ковалентно імобілізували на трьох поверхнях проточної кювети біосенсорного чіпа 5 Зегіе5 С1 із застосуванням стандартних способів імобілізації за аміногрупою. Кінцева поверхня стрептавідину досягала 170 одиниць відповіді (КО).

Реагенти для імобілізації аміногрупи також використовували для отримання контрольної холостої поверхні без імобілізованого стрептавідину, яка служила еталонною поверхнею у кожній проточній кюветі. Потім мічений на М-кінці біотинільований Т5І Р (людини та яванського макака) титрували на кожній поверхні стрептавідину для забезпечення зв'язування «100 КО Раб: при насиченні (Ктах).

Низький рівень зв'язування аналіту гарантував, що артефакти, спричинені масопереносом, зводили до мінімуму, особливо у поєднанні із відносно високими швидкостями потоку аналізу, що становлять 50 мкл хв.-1, що використовуються на етапах вимірювання кінетики. Розведення (багатоциклова кінетика) мономеризованого Рабрі (2-кратні розведення у НВ5-ЕР- буфері у діапазоні від 1,25 до 20 нМ) вводили при швидкості потоку аналізу 50 мкл/хв-1. протягом 2 хвилин асоціації та 10 хвилин дисоціації. Декілька введень тільки із використанням буфера виконували в одних і тих самих умовах протягом усього експерименту для забезпечення подвійної обробки еталона кінцевих наборів сенсограм.

Поверхню чіпа повністю регенерували через пропускання двох З0-секундних імпульсів, що складаються з 10 мМ гліцину, рН 1,7. Афінність зв'язування та кінетику визначали із використанням моделі Ленгмюра у співвідношенні 1:1.

Результати, представлені у Табл. 5 демонструють, що Рарі зв'язується з імобілізованими Т5І Р людини та яванського макака з аналогічними афінностями («у межах 2-кратного значення; 46 пМ та 88

ПМ відповідно).

Таблиця 5

Афінність зв'язування, яка визначається за допомогою аналізу кінетичного виключення (КіпЕХхХА).

Афінність зв'язування фази розчину (Ко) Рабі із Т5ЇР людини та яванського макака також визначали із використанням приладу КіпЕХА 3200 (Зарідупе Іпзігитепів, Бойсе, Айдахо, США), а отримані дані обробляли із використанням програмного забезпечення КіпЕхА Рго версії 4.1.11.

Розглядали методологію КіпЕХА (ПОаїіпа апа Вгашції, 2004).

Еар1 попередньо змішували із різними концентраціями кожного з Т5ІЇР людини та яванського макака доти, доки не було досягнуто рівновагу (щонайменше 12 концентрацій кожного Т5І Р. людини та яванського макака отримували із використанням методу 2-кратного серійного розведення). Потім вимірювали кількість вільного Барбі із використанням приладу КіпЕХА за допомогою захоплення вільного ар за допомогою гранул, покритих ТЗІ Р людини, вимивання незв'язаного матеріалу та флуорометричного виявлення зв'язаного Барі із використанням комерційного видоспецифічного антитіла (міченого АІеха ЕРійог 647 специфічного мишачого антитіла до важкого та легкого ланцюга людини (Часк5зоп Іттипогезеагсі 209-605-088)). Ко Раб: для Т5І Р. людини отримували за допомогою глобального підбору 1:1 відносно трьох наборів даних, отриманих у результаті титрування Т5ІР людини розчинами Еабі із фіксованою концентрацією 1000 пМ (заштриховані ромби), 500 ПМ (перевернені заштриховані трикутники) або 40 пМ (незаштриховані квадрати) (Фіг. 1). Ко Раб: для

Т5І Р. яванського макака отримували за допомогою глобального підбору 1:1 відносно двох наборів даних, отриманих у результаті титрування Т5І Р яванського макака розчинами Раб: із фіксованою концентрацією 1000 пМ (заштриховані ромби) або 40 пМ (незаштриховані квадрати) (Фіг. 2).

Кількість вільного Барі, виявлену при кожній концентрації Т5І Р людини та яванського макака, наносили на графік залежно від концентрації титрованої Т5І Р (Фіг. 1 та 2 відповідно). Програмне забезпечення КіпЕхА використовували для розрахунку рівноважної константи дисоціації (КО).

Результати, наведені в Табл. 6 демонструють, що Раб: зв'язується із Т5І Р людини з афінністю в 1,7 рази вище, ніж з Т5І Р яванського макака у вільному розчині.

Таблиця 6

Афінність розчинної фази Раб: відносно Т5І Р людини та яванського макака із використанням КіпЕХхА

ПРИКЛАД З - БАВІ ТА ТЕЗЕПЕЛУМАБ ЗВ'ЯЗУЮТЬСЯ ІЗ Т5ІР З АНАЛОГІЧНИМИ

ХАРАКТЕРИСТИКАМИ ЗВ'ЯЗУВАННЯ

Характеристики зв'язування Раб! із Т5І Р людини безпосередньо порівнювали з тезепелумабом.

Тезепелумаб являє собою моноклональне антитіло (тАбБ) на основі імуноглобуліну 52 (Ід52) людини, яке зв'язується із Т5ІР, попереджаючи його взаємодію із рецепторним комплексом Тв Р.

Дослідження для підтвердження концепції у пацієнтів із легкою формою атопічної бронхіальної астми продемонструвало, що тезепелумаб пригнічує ранню та пізню астматичну відповідь та пригнічує біомаркери запалення Тп2 після впливу алергену при вдиханні. Тезепелумаб на даний час досліджується у клініці як спеціалізований засіб для лікування бронхіальної астми важкого ступеня тяжкості.

Зв'язуючу здатність Барі іп мійго визначали із використанням гомогенної флуоресценції із тимчасовою роздільною здатністю (НТКЕФ, Сізбріо Іпіегпайопаї) на основі гомогенної флуоресценції із резонансним переносом енергії (ЕКЕТ) на основі аналізу зв'язування Т5І Р та тАБб. Для виявлення біотинілованого ТЗІ Р використовували криптат стрептавідину. Коротко, зразки неміченого ГЕабр'і титрували в аналізі НТКЕ для конкурування із міченим бугідні тезепелумабом за зв'язування з біотинільованим міченим Ніз-Амі Т5ІР людини. Також проводили конкурентний аналіз із використанням неміченого тезепелумабу та міченого Бу ідпї тезепелумабу як позитивний контроль.

Результати показують, що Барі конкурує за зв'язування із Т5ІЇР людини із тезепелумабом та зв'язується із ТЗІ Р людини з ефективністю, аналогічною до тезепалумабу (050: Барі - 0,38 нм; тезепелумаб - 0,23 нМ - Фіг. 3). Аналіз НТКЕ також проводили із використанням Еабр2-9, який показує, що кожен із цих Рар також конкурує за зв'язування із Т5І Р людини із тезепелумабом та зв'язується з пи ТО Р з ефективністю, аналогічною тезепелумабу (Табл. 7).

Таблиця 7

ІСво Гар2-9, визначена за допомогою аналізу НТКЕ

СС1111111111111псювцмС1С

ПРИКЛАД 4 - ГАВІ НЕЙТРАЛІЗУЄ АКТИВНІСТЬ Т5ІР У АНАЛІЗІ МОНОНУКЛЕАРНИХ КЛІТИН

ПЕРИФЕРИЧНОЇ КРОВІ (РВМС)

Потім визначали, чи характеризується зв'язування Рабі із Т5ІР функціональною блокуючою активністю в аналізі первинних клітин шляхом вимірювання індукованого Т5І Р вивільнення ССІ 17 із

РВМС при обробці Раб.

Кров отримували від здорових донорів у рамках програми донорства крові, створеної у

МеаіІттипе, Кембридж, Великобританії. Мононуклеарні клітини периферичної крові виділяли із використанням градієнта у фіколі. Коротко, 20 мл крові, розведеної РВ5 (10 мл крові:30 мл РВ5) нашаровували на 15 мл фіколу. Пробірки обертали при 400 д протягом 40 хвилин при кімнатній температурі без гальмування. Шари РВМС збирали та клітини двічі промивали 50 мл РВ5. РВМС підраховували із використанням гемоцитометра та трипанового синього для виключення мертвих клітин та ресуспендували у культуральному середовищі (КРМІ із 1095 фетальною телячою сироваткою та 1 95 розчином пеніцилін/стрептоміцин) перед висіванням у 9б-лунковий планшет.

Клітини стимулювали за допомогою Т5ІР (0,5 нг/мл) у присутності Т5І Р-зв'язуючого фрагмента антитіла Барі протягом 48 годин. Аналізи також проводили із використанням Т5І Р-зв'язуючого антитіла тезепелумабу як позитивний контроль. Через 48 годин супернатанти видаляли та аналізували відносно продукування ССІ17 з використанням Ка. ацозеї ЕГІ5А, відповідно до протоколу виробника. Експерименти проводили за участю шести донорів у трьох незалежних експериментах.

Результати показують, що Раб; пригнічує продукування ССІ 17 із РВМС із ІСво, що становить 1,39

НМ (Фіг. 4). Аналіз повторювали, використовуючи на додаток до Еарі, Бар» та Рабз (що містять послідовності варіабельної області важкого ланцюга та варіабельної області легкого ланцюга, як показано у Табл. 3), та отримували аналогічні результати (Фіг. 5).

ПРИКЛАД 5 - ВИЗНАЧЕННЯ МАКСИМАЛЬНО ПЕРЕНОСИМОЇ ДОЗИ ТА ФАРМАКОКІНЕТИКА

ПІСЛЯ ІНГАЛЯЦІЇ ЕАВІ У ЯВАНСЬКИХ МАКАК

Мета дослідження полягала у тому, щоб визначити максимально дозу (МТО) або максимально можливу дозу (МЕО) та фармакокінетику (РК) аерозольного Рабрі після інгаляційного впливу через маску для обличчя у яванських макак.

Самиці яванських макаків отримували одноразову інгаляцію Раб: протягом 8 хвилин та 20 хвилин (групи 1 та 2, по три тварини у групі). Дози, що доставляють у легені для груп 1 та 2, становили 1 та 2 мг/кг на основі 25 95 легеневих відкладень. Група З являла собою групу із повторним підвищенням дози. Одну самицю та одного самця яванського макака обробляли наступним чином: інгаляції щодня протягом 8 хвилин протягом перших 2 днів, інгаляції щодня протягом 20 хвилин протягом 2 днів, інгаляції щодня протягом 60 хвилин протягом З днів. Серійні зразки крові збирали для визначення РК

Раб: у сироватці крові та концентрації сечовини. Зразки бронхоальвеолярного лаважу (ВАГ) збирали для визначення РК Раб: та концентрації сечовини. Рідину епітеліальної вистілки (ЕГЕ) розраховували на основі ВАЇ із використанням концентрації сечовини як маркер розведення. Гібридний спосіб визначення імуноафінності Ї.С-М5/М5 застосовували для визначення концентрації Габ! у матрицях зразків сироватки крові та ВАГ. Нижня межа кількісного визначення становила 4 нг/мл у сироватці крові та 10 нг/мл у ВАГ. Некомпартментний аналіз (МСА) виконували на основі даних фармакокінетики плазми крові індивідів із використанням РПоепіх УМіпМопіїп (версія 7.0, Сепага, І Р, Сент-Луїс, Міссурі).

Після інгаляції Гарі концентрація РК, ВАГ. та ЕГЕ у сироватці крові підвищувалася залежно від дози, та спостерігали високу варіабельність концентрації Раб: (Фіг. бА-6С). Середній кінцевий період напівжиття Раб: у сироватці крові варіював у діапазоні від 9,75 до 13,6 годин. Стах у сироватці крові досягалася при медіані Ттах від 2 до 4 годин після інгаляції. Концентрація ЕЇ Е була набагато вищою, ніж у сироватці крові після інгаляції (22000 разів вище), вказуючи на те, що розподіл Раб: у сироватці крові був низьким після інгаляційної дози.

Приклад 6. ОЦІНКА ФІЗИЧНИХ ХАРАКТЕРИСТИК ВИСУШЕНИХ РОЗПИЛЕННЯМ СКЛАДІВ, ЩО

МІСТЯТЬ ЛЕЙЦИН ТА ТРИЛЕЙЦИН

У наступних способах оцінюють вплив співвідношень концентрацій трилейцину та лейцину на властивості частинок.

Загалом 24 порошки із різним ваг. 9о трилейцину, лейцину та трегалози (ТІ Т) сушили розпиленням на пілотній розпилювальній сушарці із використанням ідентичних параметрів способу при загальній концентрації твердих речовин у вихідній сировині, що становить 10 95. Оскільки вихідну сировину отримували при загальній концентрації твердих речовин, що становить 10 95 (100 мг/мл), всі значення ваг. ую у цьому дослідженні також ідентичні значенням концентрації (мг/мл). Діапазон значень концентрації для кожної допоміжної речовини у вигляді частинок показаний у Табл. 8.

Таблиця 8

Діапазони складів компонентів частинок

Кожну вихідну сировину (Табл. 9) отримували за допомогою розчинення допоміжних речовин у воді. Після повного розчинення усіх допоміжних речовин сировину сушили розпиленням при наступних параметрах способу: температура на виході 70 "С; швидкість подачі вихідної сировини 12 мл/хв.; потік газу розпилювача 13 кг/год.; та швидкість газу-осушувача 80 кг/год. Параметри вибирали для досягнення цільових властивостей частинок та аерозолю для складу сухого порошку, призначеного для інгаляції. Кожну із 24 композицій виготовляли партіями по 18 г, щоб забезпечити достатньо порошку для характеристики та оцінки функціональних характеристик продукту. Партії рандомізували та отримували протягом двох днів.

Таблиця 9

Концентрації вихідної сировини для складів 1-24

Концентрація | Концентрація | Концентрація Концентрація Співвідношення

Цикл трилейцину лейцину трегалози цитрату концентрації тринатрію лейцин/трилейцин о ммл// | омимл | -мимл | -ммл/ | Су 2 | 071 | 062 | 906 | 85 | 098 6 | 286 | 71495 | 7369 | 85 | 52 8 | 286 | 71994 | 6870 | 85 | 70 9 | ющ286 | 436 | 8428 | 85 | 15

Для усіх складів тестували фізичні характеристики порошку.

Таблиця 10

Параметри частинок, що аналізують тІСила 300000 Н/м, або 38 Н при використанні камери для зразка розміром 12,7 мм.

Щільність спресованої нерозфасованої речовини (СВО) порошків вимірювали із використанням аналізатора щільності СеоРус?б Моде! 1360 (Місготегтййс5, Норкрос, Джорджія). Зразки порошку отримували у середовищі із низькою вологістю («5 95 КН) перед перенесенням у камеру для проб аналізатора щільності, яку продували газоподібним азотом. Фіксували масу нетто зразка порошку, а потім за допомогою поршня до зразка прикладали зусилля стиснення 12 Н, зі швидкістю 300 етапів ущільнення на секунду. Лінійна відстань, пройдена поршнем на кожному етапі ущільнення, перетворювали на об'ємне зміщення зразка порошку. Середнє значення вимірювань на кожному етапі ущільнення потім перетворювали на розрахункове значення щільності нерозфасованої речовини, виражене у г/см3.

Результати показують, що вміст лейцину та трилейцину значно впливає на властивості частинок.

Трилейцин визначали як первинний фактор із найбільш високим впливом, у той час як лейцин ідентифікували як вторинний фактор із помітним впливом. Результати представлені у Табл. 11.

Таблиця 11

Результати визначення характеристик частинок

Вміст залишкової вологи . - лейцину (див. Фіг. 14 й Для лейцину або трилейцину тенденції не спостерігали розміром 2, . Первинна негативна кореляція із трилейцином; вторинна

Щільність спресованої 2. . ; 0,85 г/см3 (Фіг. 8А). поверхні (Фіг. 11А-110

Первинна позитивна кореляція із трилейцином; вторинна

Питома площа поверхні позитивна кореляція із лейцином складів 55А становить від 2,5 до 6,5 ме/г (Фіг. 9)

Більш високу кристалічність досягали при більш високому

Кристалічність вмісті лейцину у поєднанні з більш низьким вмістом трилейцину. . Більше високе покриття поверхні досягається за рахунок

Покриття поверхні частинки . о й . БО 9/; ПОКОИТТЯ допоміжною речовиною підвищення ваг. /о трилейцину та лейцину ( о р частки трилейцину досягали при вмісті вище 1,4 ваг. Уо тІСила 300000 Н/м, або 38 Н при використанні камери для зразка розміром 12,7 мм.

ПРИКЛАД 7 - ФУНКЦІОНАЛЬНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ АЕРОЗОЛЮ СКЛАДІВ ЛЕЙЦИН/ГРИЛЕЙЦИН

У наступному прикладі оцінюють характеристики аерозолю складів, що містять лейцин та трилейцин, у пристрої для інгаляції сухого порошку. Вихідні функціональні характеристики аерозолів, перелічені у Табл. 7, тестували у 20 з 24 складів, перелічених у Табл. 4. Характеристику всіх функціональних характеристик продукту виконували із використанням Моподозе К5ЗО1 пристрою із капсулами розміру 3. Аналіз імпактора нового покоління (МОЇ) виконували при швидкості потоку, що становить 60 л/хв.

Каскадне імпресійне випробування проводили відповідно до ОБР «601» для вимірювання функціональних характеристик аерозолю висушених розпиленням складів при доставці із пристрою для інгаляції сухого порошку. Як каскадний імпакторний пристрій використовувався імпактор нового покоління (МОЇ; ОБРА, розділ «601»). Для вимірювань аерозолю, проведених у цих прикладах, одну капсулу НРМС розміру З, що містить висушений розпиленням склад порошку, диспергували із пристрою для інгаляції сухого порошку та доставляли у МО під вакуумом із виштовхуваним при 60 л/хв. відповідно до методики О5Р. Зразки із кожної стадії МО вилучали та аналізували відносно вмісту білка за допомогою УФф- поглинання при 280 нм. Основними параметрами аерозольних характеристик, які розраховані на основі цих вимірювань, були: а) фракцією дрібнодисперсних частинок «5 мкм (ЕРЕ «5 мкм), яка визначається як частка порошку, що викидається із пристрою, яка при вимірюванні повинна становити «5 мкм в аналізі аеродинамічного діаметра частинок; та 5) медіанний масовий аеродинамічний діаметр ММАОЮ.

Таблиця 12

Характеристики аерозолів

ММАЮ

Результати аналізу аерозолю представлені у Табл. 13.

Таблиця 13

Результати характеристики аерозолю аеродинамічний діаметр) діапазону значень ММАО від 1,75 до 3,25 мкм (Фіг. 12).

Покрокова кореляція із трилейцином. Як правило,

Фо відкладення на пристрої використання ваг. ую трилейцину вище З 95 призводило до зниження відкладення на пристрою (Фіг. 13).

Позитивна кореляція із трилейцином. до ЕРЕ (фракція дрібнодисперсних | Негативна кореляція із лейцином. Усі 20 протестованих частинок) « 5 мкм складів характеризувалися ЕРЕ » 60 95, що свідчить про високі функціональні характеристики (Фіг. 14).

ПРИКЛАД 8 - ОТРИМАННЯ ІНГАЛЯЦІЙНИХ СКЛАДІВ ЛЕЙЦИН/ТРИЛЕЙЦИН, ЩО МІСТЯТЬ

ЗВ'ЯЗУЮЧИЙ ФРАГМЕНТ АНТИТІЛА ДО Т5І Р (ГРАВ)

Тестували характеристики іншого складу, що містить інший Бар. Використовували Раб до Т5І1Р, отриманий із моноклонального антитіла (951 людини, яке специфічно зв'язує Т5І Р (стромальний лімфопоетин тимусу) (див. послідовності, представлені у 5ЕО ІЮО МО: 1-8, представлені у даному документі). Створювали окремі склади, що містять масові концентрації, зазначені у Табл. 14.

Таблиця 14

Склади висушених розпиленням складів, що містять Раб до Т5І Р

Їо ваг./ваг.| Їо ваг./ваг.| Їо ваг./ваг. Їо ваг./ваг.| Їо ваг./ваг.

Спочатку Раб до Т5І Р отримували у рідкому буфері, що містить 105 мМ трегалози, 30 мм цитрату, рН 6,0. Лейцин, трилейцин, трегалозу та цитрат розчиняли в окремому водному розчині, який потім додавали до розчину баб до Т5ІР для створення нерозфасованих рідких вихідних розчинів для сушіння розпиленням. У Табл. 15 наведені склади вихідної сировини, приготовані для отримання цільових композицій складів порошку. Потім рідкі розчини вихідної сировини сушили розпиленням із використанням параметрів способу, перерахованих Табл. 16. Параметри вибирали для досягнення цільових властивостей частинок та аерозолю для складу сухого порошку, призначеного для інгаляції.

Таблиця 15

Склади рідкої вихідної сировини для сушіння розпиленням 11111111 17117 Склад Мо! Склад Ме2 Склад МеЗ

Габ до Т5І.Р |мг/млі 71075 | 6:80... ЮжБк24

Трегалоза (мг/мл)

Лейцин (мг/мл)

Трилейцин мг/мл)

Цитрат, рН 6,0 (мг/мл)

Загальна концентрація вихідної 75 75 сировини (мг/млі

Таблиця 16

Основні параметри сушіння розпиленням 11111117 Склад Мої Склад Ме2 Склад МеЗ

Температура на виході СС)

Швидкість подачі вихідної сировини 20 17 З (мл/хв.)

Швидкість потоку газу розпилювача 13 13 гм (кг/год.)

Швидкість потоку газу-осушувача 155 155 59,5 (кг/год.)

Результати характеристики функціональних характеристик порошку та аерозолю складів, висушених розпиленням, представлені у Табл. 17. Для вимірювання функціональних характеристик аерозолю всі три склади були тестовані з 20 мг висушеного розпиленням порошку, поміщеного у капсулу НРМС розміру З та диспергованого із пристрою для інгаляції сухого порошку.

Таблиця 17

Властивості порошку та аерозолю висушених розпиленням складів, що містять Бар до Т5І Р

Склад Мо1 Склад Мео2 Склад МеЗ 1 У ваг./ваг. Раб до | 12 95 ваг./ваг. Раб до | 40 95 ваг./ваг. Раб до

ТО Р ТО Р ТО Р с 1,5 (а50) 1,5 (а50) 1,9 (або)

УМО (мкм! (п-2) 3,5 (490 3,5 (490 41 (490 сво (г/см3

З5А |М2/І)

ЕРМ: змо (мг Раб) (пе 3)

ЕРЕ-вмк (95 (п-3

ММАО (п-З

Особливо слід відзначити ефективність наповнення 50 мг складу МеЗ в одну капсулу із НРМС розміру З завдяки високій щільності нерозфасованого порошку. Висока об'ємна густина (СВО) дозволила доставити дуже велике корисне навантаження з однієї капсули (ЕРМ «5 мкм близько 14 мг,

ЕРЕ 82 95, ММАО 2,4 мкм).

Крім того, склад МеЗ3 демонструє аналогічну СВО (0,58 г/см3) та 55А (4,6 мг/г) порівняно зі складом

Мо2 Ра до ІІ -4 (СВО-0,59 г/см3, 55А-4,5 мг/г), що вказує на те, що властивості порошку поширюються на фармацевтичні склади, що містять різні активні інгредієнти.

ПРИКЛАД 9 - ВЛАСТИВОСТІ ПОРОШКУ ТА АЕРОЗОЛЮ ВИСУШЕНИХ РОЗПИЛЕННЯМ СКЛАДІВ,

СПРЯМОВАНИХ ПРОТИ Т5І Р, ПРИ ТРЬОХ РОЗМІРАХ ПАРТІЙ

У цьому прикладі представлений аналіз властивостей порошку та аерозолю складів Раб до Т5І Р на основі лейцину/тгрилейцину із використанням партій більшого розміру для проведення токсикологічних досліджень при інгаляційному введенні, що не відповідають Сі Р, та таких, що відповідають сі Р. Масштабування вимагає використання обладнання для розпилювального сушіння альтернативного масштабу та коригування параметрів способу розпилювального сушіння з урахуванням підвищення теплового та масового потоку через систему та необхідності у більш тривалих циклах обробки.

Три партії висушених розпиленням складів бар до Т5І Р виготовляли при зростаючих розмірах партій. Партії включали: баб Т5І Р 40 95 ваг./ваг., трегалозу 39 9о ваг./ваг., лейцин 10,5 Фо ваг./ваг., трилейцин 2 95 ваг./ваг. та цитрат рН 6,0 8,5 95 ваг./ваг. Параметри способу, вибрані для кожної партії, показані у Табл. 18.

Таблиця 18

З 5 12 (мл/хв.) (кг/год.) озпилювальна сушарка масштаб масштаб масштаб "Вага обробленого порошку.

Тестування аерозольних характеристик партії Мо1 проводили із масою наповнювача порошку, що становить 50 мг, у капсулі НРМС розміру З, тоді як партії Мо2 та Мо3 випробовували із масою наповнювача, що становить 20 мг. Незважаючи на незначне підвищення ОММО по мірі підвищення розміру партії з 8,5 г до 1,2 кг, щільність пресованого нерозфасованого порошку (СВО) досягала від 0,45 до 0,85 г/см3. Функціональні характеристики аерозолю порошків також зберігалися незалежно від розміру партії завдяки доставці високого корисного навантаження у вигляді Раб до Т5І1Р з інгаляційного пристрою на основі капсули. Це демонструє масштабованість складу із мінм мальними коригуваннями способу сушіння розпиленням. Повні результати визначення характеристик порошку та тестування функціональних характеристик аерозолю наведено у Табл. 19.

Таблиця 19

Властивості порошку та характеристики аерозолю для трьох партій Раб до Т5І Р при зростаючих розмірах партій 11111110 ПартіяМмої | ПартіяМмо2 | ПартіяМо3 1,5 (а50) 1,7 (або) 1,9 (або) сумо мк (пн) свОофйсм 1111111111111111111111111111111111111111058щЩ

ЗАМ 1111111111111111111111111111111111111114600

ММАО (|мкмі (пе)

ПРИКЛАД 10. ДОДАТКОВА ХАРАКТЕРИСТИКА СКЛАДІВ ЛЕЙЦИН/ТРИЛЕЙЦИН, що містять поверхнево-активну речовину.

Отримували додаткові партії складів трилейцин/лейцин, що містять різні кількості РБ-80.

Композиції складів та параметри способу отримання кожної партії показані у Табл. 20. В іншому отримання складу було таким же, як описано у Прикладі 6.

Таблиця 20

Композиції складів та параметри способу сушіння розпиленням для складів, що містять зростаючі кількості Ре-80

АО 95 ЕАВ 40 95 ЕАВІ, 40 95 ЕАВІ, 40 95 ЕАВІ, 40 95 ЕАВІ, 40 95 ЕАВІ,

Опис конт оль (без 0,27 95 ваг./ваг.|0,67 95 ваг./ваг.|1,33 95 ваг./ваг. |2,00 Фо ваг./ваг.|2,67 95 ваг./ваг.

РеВО) РБЗВО (0,0295 | РО8О (0,0595 | РОВ8О (0,10 95 | РБВО (0,15 95 | РБВО (0,20 95 ваг./об. Р580) | ваг./об. РЗ80) | ваг./об. Р580) | ваг./об. РЗ80) | ваг./об. РО8О ваг ваг ваг ваг ваг ваг 40,00 29,60 40,00 |29,601| 40,00 30,00) 40,00 | 30,00) 40,00 | 30,00) 40,00 | 29,20

Безводний цитрат 7,75 | 5,74 7,75 5,74 7,75 5,81 7,715 5,81 7,75 5,81 7,75 5,66 тринатрію

Безводна лимонна 0,751 0,561 0,75 | 0,56| 0,75 | 0,56| 0,75 | 0,56| 0,75 | 0,56| 0,75 | 0,55 кислота 39,00 | 28,86 | 38,73 |28,66| 38,34 | 28,75) 37,67 |28,26)| 37,02 | 27,76 | 36,29 | 26,49 10,50 10,50 10,50 10,50 10,50 10,50

РБВО 0001000 027 |020| 066 | 0,50) 1,93 | 0991 1,98 | 149 | 271 | 1,98

Газ- ст. л./хВ.

Швидкість подачі 5 5 5 5 5 5 рідини мл/хв.

Розпилюва

Температур а на вході 100 100 100 100 100 100 "с

Температур а на виході 70 70 70 70 70 70 "с

Властивості аерозолю складів у Табл. 20 аналізували із застосуванням способів, розкритих у

Прикладі 7. Результати аналізу показані у Табл. 21.

Таблиця 21

Функціональні характеристики аерозолю складів, що містять Р5-80

Чо ЕРЕ 11111111мо її 95 ЕАВІ, контроль 40 95 ЕАВІ, 0,27 95 ваг./ваг. РУЗВО 40 95 ЕАВІ, 0,67 95 ваг./ваг. РУЗВО 40 95 ЕАВІ, 1,33 95 ваг./ваг. РУЗВО 40 95 ЕАВІ, 2,00 95 ваг./ваг. РУЗВО

(406 АВ,2,67сваг/вал РЕВОЇ | 68 2 щ | 40 | 263

Вміст агрегатів, оОММО, залишковий вміст вологи, Т9, СВО та 55А також вимірювали із застосуванням способів, описаних у попередніх прикладах. Результати аналізу властивостей порошку представлені у Табл. 22.

Таблиця 22

Властивості порошку сухих порошкоподібних складів, що містять ЕАВ»: та різні (ваг./ваг.) кількості Р5-80

Жжагрегатів./ | 01 | 01 | 02 | 02 | 0 | о сумо та стані СС) нИщ в| »ію вою стані СС) сВО(г/см) | 058 | 060 | 0659 | 2 щ 059 | внв'/ | 055 вБА(м/) | 460 | 502 | 437 | 405 | нв. | 424 "н. в. - не визначено

Аналіз показує, що властивості порошку багато в чому еквівалентні контрольному складу незалежно від 95 (ваг./ваг.) кількості Р5-80.

Потім склади, описані у Табл. 22 аналізували відносно вмісту невидимих неозброєним оком частинок (5УР). Кількість невидимих неозброєним оком частинок (5УР) вимірювали із використанням способу візуалізації мікропотоків (МЕ). МЕЇ поєднує мікрофлюїдну проточну мікроскопію та аналіз частинок із візуалізацією високого дозволу для кількісної оцінки кількості 5МР та групування цих значень у діапазоні розмірів частинок. Перед тестуванням зразки порошку розчиняли у воді та обережно збовтували для забезпечення рівномірного розподілу частинок, а потім завантажували у

Ргоївіп б5ітріє МЕЇ 5200 (Каліфорнія, США). Результати представляли у вигляді кількості частинок різних розмірів (х1 мкм, 52 мкм, 55 мкм, «10 мкм та х25 мкм) на мл. На Фіг. 14А показано, що включення 0,27 95 (ваг./ваг.) РЗ-80 у складі сухого порошку знижує абсолютну кількість БМР на мл при розведенні. Зниження кількості ЗМР знижується у разі зростання концентрації Р5З-80. Значні зниження

ЗМР спостерігали при додаванні 0,67 95 (ваг./ваг.) Р5-80 із незначною кількістю 5МУР із діаметром частинок більше 5 мкм. Тенденцію спостерігали, коли склад розводили до концентрації 30 мг/мл ЕАВ1 або 2,5 мг/мл ЕАВ»: (Фіг. 148).

Характеристику складу та аналіз 5УР проводили, як описано вище для другого складу, що містить допоміжну речовину. У даному дослідженні як допоміжну речовину використовували полоксамер 188, на відміну від РО-80.

Досліджували кілька бо ваг./ваг. кількостей полоксамеру 188. Композиції складу та параметри способу отримання кожної партії складів були такими, як описано у Табл. 20 складів, що містять Р5- 80. Кількість трегалози модифікували для того, щоб компенсувати кількість полоксамеру 188, що варіює. Вміст агрегатів, ОММО, залишковий вміст вологи, ТУ, СВО та 55А також вимірювали із застосуванням способів, описаних у попередніх прикладах. Результати аналізу властивостей порошку представлені у Табл. 23.

Таблиця 23

Властивості порошку сухих порошкоподібних складів, що містять ЕАВ» та різні (ваг./ваг.) кількості полоксамеру-188 о бсваг/вал Р-188. | 0 | 06795 | 195 | 16796| 267 | 1095

ЗЕС а10 (мкм) а50 (мкм) сумо Таво (мкм)

У відкритому 123 122 121 123 123 122 та стані СС)

У закритому 102 94 103 103 стані СС) сво (г/см 058 | 060 | 0657 | 067 | 075 | нв

З5А (ме/)) (460 | нв. | 471 | нв | 445 | нев. "н. в. - не визначено

Аерозольні властивості складів полоксамеру-188 також аналізували із використанням способів, розкритих у Прикладі 7. Результати представлені у Табл. 24.

Таблиця 24

Функціональні характеристики аерозолю складів, що містять полоксамер-188 (Р188)

Чо ЕРЕ ЕРМ (« 5,0 мкм) 95 ЕАВІ, контроль 40 95 ЕАВІ, 0,67 95 ваг./ваг. Р188 40 95 ЕАВІ, 1 95 ваг./ваг. Р188 77861... 54 Щ | 282 40 95 ЕАВІ, 1,67 95 ваг./ваг. Р188 7661... 42 | 276 40 95 ЕАВІ, 2,67 95 ваг./ваг. Р188 40 95 ЕАВІ, 10 95 ваг./ваг. Р188

Склади Р188 аналізували відносно вмісту ЗУР із застосуванням способів, описаних вище. На Фіг. 15А показано, що включення 0,67 9о (ваг./ваг-) Р1І88 у складі сухого порошку знижує абсолютну кількість ЗМР на мл при розведенні. Тенденцію спостерігали, коли склад розводили до концентрації 30 мг/мл РАВІ (Фіг. 15А) або 2,5 мг/мл РАВІ (Фіг. 158). ,

ПРИКЛАД 11. ХАРАКТЕРИСТИКА СКЛАДІВ ЛЕЙЦИН/ТРИЛЕЙЦИН, що містять 1,1 95 (ВАГ./ВАГ.)

РБ-80

У цьому прикладі аналізували властивості порошку сухого порошкоподібного складу, що містить або 1 95, або 40 95 (ваг./ваг.) Раб: та 1,1 95 (ваг./ваг.) РО-80. Повні композиції складів показані у Табл. 25. Склади виготовляли, як описано в Прикладі 6.

Таблиця 25

Вагові кількості допоміжних речовин у сухих порошкоподібних складах, що містять 1,1 95 (ваг./ваг.) РЗ-80, та або 40 9; (ваг./ваг.), або 1 95 (ваг./ваг.) Барі 1 Еабу 40 95 (ваг./ваг.) Раб: 1 97 (ваг./ваг.)

Цитратний буфер

Стабільність складів аналізували після зберігання протягом одного або трьох місяців при 40 "С та відносній вологості 75 95 (40/75) або 25 С та відносній вологості 60 95 (25/60). Тестували розподіл частинок за розмірами, вміст вологи та шорсткість поверхні. На Фіг. 16А та В зображено, що вміст вологи та розподіл частинок за розмірами залишалися стабільними із часом для складів, що містять 40 95 (ваг./ваг.) Раб. На Фіг. С З зображено, що морфологія частинок залишається незмінною із часом.

На Фіг. 17А та 17В зображено, що вміст вологи та розподіл частинок за розмірами залишалися стабільними із часом для складів, що містять 1 95 (ваг./ваг.) Барі. На Фіг. 17С зображено, що морфологія частинок залишається незмінною із часом.

Аналізували утворення 5УР при розведенні після зберігання або в умовах 40/75 протягом 1 або З місяців, або в умовах 25/60 протягом З місяців. Аналіз проводили, як описано у Прикладі 8. На Фіг. 18А показано, що при розведенні 40 95 (ваг./ваг.) бабі до концентрації Барбі, що становить 30 мг/мл, кількість МР, що утворюються при кожній умови, залишається незмінною. На Фіг. 188 показано, що при розведенні 1 Фо (ваг./ваг.) Раб: до концентрації баб, що становить 0,75 мг/мл, кількість ЗМР, що утворюються при кожній умови, залишається незмінною.

Характеристики аерозолю також тестували після зберігання. Результати представлені у Табл. 26 та 27.

Таблиця 26

Функціональні характеристики аерозолю складів, що містять 40 95 (ваг./ваг.) Раб: та 1,1 95 (ваг./ваг.) РУ-80 невідкладно після виготовлення та після зберігання протягом 1 або З місяців в умовах 40/75 або протягом З місяців в умовах 25/60 т- (| 2 | 1 15 (25 40/75 40/75 25/60

ЕРМ (х 5мкм) (мг)

Таблиця 27

Функціональні характеристики аерозолю складів, що містять 1 95 (ваг./ваг.) Раб: та 1,1 Фо (ваг./ваг.) РУЗ-80 невідкладно після виготовлення та після зберігання протягом 1 або З місяців в умовах 40/75 або протягом З місяців в умовах 25/60 т- 6 5 15 | 555 40/75 40/75 25/60

ЕРМ (х 5 мкм) (мг)

Відсоток доставленої дози (00) також характеризували після зберігання кожного складу у кожній умови. Результати представлені у Табл. 26 та 27.

Активність Бабі у кожному зі складів, описаних у Табл. 25, також тестували після зберігання в умовах 40/75 протягом 1 або З місяців або в умовах 25/60 протягом З місяців.

Активність визначали із використанням гомогенної флуоресценції із тимчасовою роздільною здатністю (НТКЕ). НТКЕ поєднує технологію передачі енергії флуоресцентного резонансу (ЕКЕТ) із вимірюваннями з тимчасовою роздільною здатністю (ТК). Коли два флуорофори, донор та акцептор, перебувають у безпосередній близькості один від одного, збудження донора викликає передачу енергії акцептору, створюючи у такий спосіб сигнал ЕКЕТ. У цьому аналізі стрептавідин-європію криптат, зв'язаний з біотинильованим Т5ІР людини, являє собою донор, а мічене йа2 тАБ до Т5І Р являє собою акцептор. РАВ! зв'язується ізТ5іІ Р людини та попереджає зв'язування міченого тАБ. Це, у свою чергу, призводить до збільшення відстані між донорними та акцепторними флуорофорами та призводить до зниження сигналу ЕКЕТ.

Після оцінки паралелізму між еталонним стандартом та аналітичним контролем або між еталонним стандартом та тестованими зразками виконується апроксимація чотирипараметричної логістичної кривої (4РІ) та розраховуються відносні активності контрольного та випробуваного зразків

ЕАВі за допомогою поділу значення ІСвзо еталонного стандарту на значення ІС5во аналітичного контролю або кожного тестованого зразка та множення на 100 95.

Рівні активності Раб: становили від 85 до 110 95 активності Рар:і, розведеного невідкладно (тобто 1-50) з еквівалентного складу.

Список литературних джерел:

Бапіпо ВУ, Вгацшії РА. Аззау апа Огпид ОемеІортепі Тесппоіодієв5. 2004:2:647-657

Сацймгтеаи СМ, О'Вугпе РМ, Вошівї І Р, єї а. М Епаді У Меа 2014:370:2102-10

Террег, 95, еї аї Іпі У Тохісої 2016;35: 376-92

Веппаго, 51, еї а! У Аррі РНузіо! 1986;60:532-538

Фахівцю у даній галузі техніки буде очевидно, що інші відповідні модифікації та адаптації способів та варіантів застосування, описаних у даному документі, можуть бути виконані без відхилення від об'єму будь-якого із варіантів здійснення. Наступні приклади включені у даний документ тільки з ілюстративною метою та не призначені носити обмежувальний характер.

Слід розуміти, що хоча у даному документі були проілюстровані та описані певні варіанти здійснення,

Claims

формула винаходу не повинна обмежуватися конкретними формами або розташуванням описаних та показаних частин. В описі були розкриті ілюстративні варіанти здійснення, і хоча використовуються конкретні терміни, вони використовуються тільки у загальному та описовому сенсі, а не з метою обмеження. Численні модифікації та варіанти здійснення можливі з погляду ідей, викладених у наведеному вище описі. Таким чином, слід розуміти, що варіанти здійснення можуть бути реалізовані іншим чином, ніж конкретно описано. Хоча вище були описані різні варіанти здійснення, слід розуміти, що вони представлені тільки як ілюстрації та приклади способу за даним винаходом, а не як обмеження. Фахівцям у даній галузі техніки буде очевидно, що у них можуть бути внесені різні зміни у формі та деталях без відхилення від суті та об'єму способу даного винаходу. Об'єм вимог та об'єм даного винаходу не повинні обмежуватися будь-яким із вищеописаних аспектів, але повинні визначатися тільки відповідно до наступної формули винаходу та їх еквівалентів. Також буде зрозуміло, що кожна ознака кожного варіанту здійснення, що обговорюється у даному документі, та кожного посилання, що цитується у даному документі, може використовуватися у поєднанні з ознаками будь-якого іншого варіанта здійснення. Усі патенти та публікації що обговорюються у даному документі, включені у даний документ через посилання у повному об'ємі. 1305 У х і ЕЕ 5 ї : Є ; її ХУ З . М і - оо сечею кю ув куми, Пе людини

Фіг. 1 ке Її БЕ Я х мА код конк їй . Зб Кк Ше во і З Ів. КС ж ме ; і в : х у о аж Ка ч о щ Ух х і

Її. ра повноправні я пак ї пого я ДОБ ОБ ! доБ-пе Тов? ЖК Є енуюи о му БЖ

Фіг. 2 Я й 10 кА х сне Її х рос Ж ай си ї ек ї : ж ке тд кввеи пе вк 5 Од с те Тезапелеає пл - У : у т ак сь щ х 5 «ко ох В ся ж «ше Ба: хе х Я сни: а ї и ще - Х З А х У Х Я ї : пов Ф - х ко де ї нн : сх У ч са ; ех це . їх ї ї і Її Ї Ї ї ї КЗ жк док: й - я Я «ОВ -В «Ї о и СощМ «ріг. З

КР зносу - З 5 ГКлкнй Йо Зх окм нава бе А МОЗМ і я ї БОЖУ і ЩА Ю | я зе сади ЩЕ фе і оксЙ ї шк Кабе Те Я Кк Ех ще з Кя їх до Я - В збе Е шк ОО їі. пох УЖ КО Я чех со З Ох Я з НИЙ ї з «ше: уд і ко ЩЕ Ох ще ще Я " "ку х. ща Ж Я о: шк В чих хе в ї З - «А Я хм. КЕ Ох м | ж щі Я В БО щ | ше Й, -- дам ето ттюстоткттоветеотетеотттюттоветестететю готове потею гокетевхтесяететс тоо коня Іс. Іо посютосонся ще хе Я Я ї Я я че М ча я вуз ще 4 до ії ЕЕ у ї 1 У у Кк ік істини ЗХ

Фіг. 4 ще, ем вк Жов ях сіро кава їз . кох т ВЕ с ї Ж щк зе пеня каз во ще ооо зі ще х МК ОС . шко т 0 ЖАЙ а 5 «ке ВВ щ- хм й Ро се бе зе й че «дх х. - сх Ж. ке й « ше хіх Б о - зво КК ке М з» ГЕОБМЛеЛУ М ЩО м Х З З к зе БУ «й ВХ АЖ х ру мг о ух : х ; що У Р Ж рих 5 їх ех їх т В, З 1 о 5 бе 5 фе АК. ЕЕ Са ща ще ті і 1 ї І і і Ж. я хх с ям во М ОО

Фіг. 5 т й ка Ж з ї - В 0 Яков се пов ів ав Ме подо

Фіг. БА Група есе МК 10000- Фон ха МЕ ж во - Не а чи ї 14 зе». В

5. г З хе з, Б, Є бо ск ща з Ки Ми пф ПО 8 19 18 54 30 36 49 48 часів

Фіг. 6 мо в. 70003 ев Бо очв. пн ВА. ш- ОО З У Кс же Ше Шк це ПО 6 1218 24 30 36 49 48

Фіг. ас ооо ЗО в о В В В В со ВВ с ВК ОК ОХ Ще ОО КК КК Ії о. с с с а В он В п ї ; 5 і . о є с : с о . о о . стен вішн янниНС

Фіг. 7

«НО запежно від ваг. З пенонех Трипейцин. ваг. я пак. ЛЗ ОВ З 065 Б ва ОО ж ї ї х к К : еко рожа. : . ! : а, : : Е ї ! о а | р п нь ши ; ї Е 3 Е В і

ПЕВ. . : я ' ши ше Е І Е 3 Е І ї : : : і . ік 1 ку ї ї ї : К : : : ї ї з г. « : : ї : ї : : 5 ї 3 ї : : п45 . : : . Ку ях Ж У х х ЖЖ Кк ОК КОЮ М 7 І я Б Я і и в а и я КЕ КЕ НК Мейшен, ваг. ль

Фіг. ЗА з МО ме . ПЕНЯ у ї о . ШИНИ МЕ ХХ 5. . ЗХ ОО 5 ХЕ нн х п Ен п: : |і нн шо ВВ

НС. о г З сх 2 ВОНО ОО ООН о 01 ПЕ І п шо. Б г ПИККИКНК КН с о. КО я о. г

Фіг. 28 мк хх; с Шок Божу ха са ук ех ому ЮК ФВ Ух УМІВ лм км хе МВ ОО ї КН М Я ї ї І МИЛОМ, М. В х Е КС ; сх ок х З Кк З с У Зх ї ви т КЕ Ше я м й і х Ку х З кЖ х ех ІЗ ої З М х З 3 сно х ХЕ М У ї ї ; З : Н : х їх ї 3 х ї ї ї Е ї 1 3 : ої х ї 3 ї ї : Е Ж леж ї і 3 ї ї ї їх Х ї ї 3 ї ї : Е ї ї і 3 ї ї : Е їх ї 3 х ї ї ї Е х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х 3 : х ї ї 3 ї ї є ї кох : : : і : : ж я і ї ї 3 х ї - Ї Е їх ї 3 х ї ї ї Е х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х ї 1 3 : ї ї З З Н : : ж Е х х і 3 ї ї : Е ї у і З Н жі ї ї 4 ї ї ї Я х и : і Н Н ж ї К я ї І х ї Жанни х ї 1 3 ї їі кекмкмвннаммннннни ї ї ї ї : : о : Е ї 1 ї ї ї ОО ХОМ: х ї і 3 і: і ВЕН х ї 1 3 ї І ВЕ х х ї 3 ї І СОМ КОХ М х ї ї ї ї їі ВОМ КК ХХ х ї ї 5 ї ї ВБЕМ СХ ОО ше ї ї і 3 в ї ї ки ОКО ї ї і 3 - ї ї ОВ ОКО х ї 1 3 ї ї ЗМК ПК: х ї і 3 ї і ВЕС Ж ї ї 3 Її жк і ЕОМ Є х ї ї ї їх їі ЗЕМ КК х ї 1 ї ї І ВЕН хх ОО : х ї ї КЗ 5 ї і ВЕН кох ї і їх 3 ї і ВЕБ ех ї 1 ї ї І ВН: х ї Ган 3 ї ї КК : я х ї ї ї ї т ВЕН ї ї і . ї ї ї п : ї ї 3 жк і ї о ВМ ї 1 : г ї ї ї 3 ї ї ї х «жк х ; х ї ї ї Е щх Ж ї Ко я 3 ї ї : їх Ук х ї 7 3 ї ї ї х ех ї ї З ї ї ї Е ХХ ї З ї ї ї ї х ї ї З З Н : : ї х ї і ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х ї і 3 ї ї ї х х х ї 3 : ї ї : З Н Н : ї Ж ї ї 3 ї ї ї Ех ща : і З : : : ї ї у і З Н Н : ї ї Я З З Н Н : Е х ї і 3 ї ї ї х х х ї 3 : : : че : : : ! ї У - їі З Н : : Е х ї 1 : : ї 3 З : : : ї х і і 3 ї ї ї х х т 3 ї - - Ї Е х ї 1 : : ї й 3 З : : : ї ї ковснкввннни Н : : ї Е х НО КК 3 ї ї ї х : В ХО Н : : Н Е

Х.. а М ХА ї ї ї ї їх ж Ох З: : : : Е Ох ОХ ОХ Х ОК 3 ї ї : Е ї ОХ ХК Є ще 3 ї ї : Е х Кен ОХ хе 3 ї ї ї х Ж ЗХ ОХ ж 3 ї ї : х ї ж о. З : : : Е Е х КО ВХ З 3 ї ї ї х ї а З п МУ 3 ї ї ї х їх ОХ ОК ОО ї ї ї ї їх ММ ММ 3 : ї я 3 у у ї їх х КО Н ї ї ї х ї ОО ох ї ї ї ї їх х МОХ ще х 5 ї ї ї Ех туї ОКХ з їх 5 : й кн уки М си в се ати з я се Му о кА о до реоореюекря уд ТТ Еге же ШК. с же о хе а же у ках ше Ж, Я ох в . з й ою опо ооо ооо мою ме КУЄ ОЖ к ов ж Ом Мо ЯК А ХХ З о Кк їх лк М я кож Хтнмхктхшвї омномх М, хи ШИМИ ЗНМ, МК в

ІЕМ Ме кв є : г : ве ХА о. З Фев МИ МеВ ско ее скік КЕ ОВ МеВ БНО ЯКО КОН ТВ Те ТКУ . шк 7 й 7 т й ж т Б. де Ка ков ек

З 2. яю 0 Вкужм . и Зх Я Я Б Ех ще - 2 ей я Ж дк Є я ж з же з з Б.Й Фе а ж ж гос ж ж Я ще й Ха і ха й т т З ї ГхЯ 10 як і ШЕ й : с 18 ям «В їх . - ох Х ужив Мак е о сек ак га се м ТОНЦЕВНТ КВ ЛеБВІЯНУ ГАСУ

Фіг. 10 т я З ек ни ї З В їж ки Її З ке Є ак жи іївр Сі тев сво БА жо Хе ж дя Ж ше в Зк же вжи 57 08 03 852 05 603.

Я. їх і Му ; й КАК у Ж ОХ г с сл зх с о. ОО ОКХ Х ОО Сх о ХУ с ОО ОО с МКК ММ їх У с Я З ХО ОО ОН с с о. 5 ЗХ ОО З ОО В ОО ОК МОХ ОМ Є о 5 ОХ ОН ОХ с с: ОО ОХ ОО М М М ЄМ НЕ Ж АН Я вок з ОА Я ОК ХО з. ЗАД «ріг. 118

11 Тен ево ва ВМО ОО ОК В В У с ах с

! о. с

ЗЕ . с В пами м м В Х000о їжа ЗІОВОО

Фіг. 11 їв во 3 тен сво ВА, п М ЗК ХО ї-ео СНАЧКВО

Фіг. 11с сосок орг сскодсюх с роееоеерооссрюес 5 е кі тях В : А Зі ії ТПевос 58 А воля ЦЯ ет 07 99750 708 077 344. С Я КОХ хлж КО ОО ЩО КО З с с г ОО М я о с с а с с : с Я є о. о с о. а МКК З ОО З ЕК х ОО па с : г а ОККО Ен с. ЗКУ ох у с с є ОХ ОО ОККО ща о. о і є о. с а о . !

о. МОЗ Зх НПС . о жек и А ОКХ ; иа м за хи ще сн Як ЩІ і щем КО Ж ТОВ ЯК хе | В Фіг 1

Ж моухм жу Я ща ; чи соди, ох сек схе. Томи ІМЕН чаша ЩІ КЕ Ж меКщЕЕ МНОЮ СТ МІ залежна МБО. 7 ПЕКУН ВЖКХ х З КИ че як ї ї хе ск М Ї ОБИМеЙЦнЯ, В. З пос кооо дового ооо родоводу етос М Поворот ппадавеот ко ооодддег форс М я а ОО їх З55 5 х сх , й ек, КЕ ОК, У. З. а се о. і т а кю Сех ож ВТМ ах 5 скоЖе 5 охжжи ВК овх, : у ї ї Ї ї : - ї ї ї ї ; їх Кк к ї Й їх Кк к ї Й ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; ї Е Е 5 ; їх Кк к ї Й їх Кк к ї Й ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; їх Кк к ї Й їх Кк к ї Й їх Кк к ї Й ї Е ї ї ї . т Е Ех ї ; ; Н Е Е З : їх к к ї Й ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; їх Кк к ї Й їх Кк к ї Й їх к к ї Й слу ї Е Е ї : т ї Е : З : «3 Ера 3 еЕ Е ї : ж Н Е Е З : з ї со КЕ і їх КЕ їх Й ї о Е 5 ; ї к Е 5 ; ї Е . Е 5 ; їх КЕ к ї Й їх к к ї Й ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; їх Кк к ї Й ї Е с Е 5 ; ї Е ї ї ї ї Е - Е . ї : Ж ї ї щі ОА ЖОНМЯ СЕ х ї ї жо і че : : 3 Е се ї Ї : КЗ ї Е ЕК : : ЗЕ х т КЕ їх . ї ; я ї Ї : : ї : т : Е Е ч З : Я т Е Е о ї ; їх Кк к ї Й І Ї : ь З : ої Е Е х З : ої ї Е с ї ї чек ї ї ї у З ї у Е Е с і зе : ї і х : : роя З ї ї а ї Ї ОЗ ї Е їх ї як ї ї ї с ї ї кн їх ї Е Фе ї ; ся, о їх Ж ї ї с ї ї С о г ї ї Ї з З : ву я ї ї Е в З й си 7 Е Кк се і й ї ї ї - х ї «ду ї ї : ХЕ ; ї ї ще ї Е Е я 3 : - ! ї і че : ї ї, т Е » З і ї Е : є ЩІ : т Е ши ; ї Е ї та Х ї ї ї ї ої : ї к Е ях : : ї - І ї : Е Е : ї Же Е ї ; ї Же ї 3 ї ї Е ї ї ї ї Е ї ї Ї 95 ї Е : х : 4 ї Е -х : і, й ї ї шо ї 3 ї х їх к к ї Й З І Е Е З : ї Е ї ї ї ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; ї ї Е І я Її : ї : Ж ГО жі 3 ї Її о ї ї ї ї ї Ж : ї ї к Е їх : ї Е Е 5 ; ї ї ї їх : ї Е ї 5. : ї Е Е Б Ей : ї Е Е ї ; ї ї ї їх : ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; ї Е ї їх : й ї Е : З : се Ї Е Е : : Ж 5 ї Е ї х Ї ять : Ї Ї 5 : ї ї КЕ їх ї ї Е Ех 3 Ї : Е Ї Бо ї ; т ї ; ї ї ї їх : ї ї ї їх : ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; ї ї ї їх : ї ї ї їх : ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; ї Е Е 5 ; ї ї ї їх : ї ї ї їх : ї Е ї ї ї ї Е Е 5 ; ї ї ї їх : ї Е ї їх : яко З ї Е ї ї ГИ т ї ї ТЗ т ЖЕ ; ; ; ; х се жк ; ха ву де ше ж ще соя п5'Ю ою ОБ юЮ юОо5юЮ МОЮ 0050 20050 5 т Я м РЕЯ х МЕ Б Ж У МЕ і Кеаосттзкі: мч ДЕ Камаз: си В а ММК, ВЕЖ. с З де ЕК Ї ЗУ НК ДН х у , , . у й Й з - й ік ж ЗУ ск жи пини Є сх Є Х ІМК ї а т и, хх Ох пдЕ с гемо Еней - З а. ке Є п з в с с . Го З ке М у Я в у їх мкіик ямка ок тихих пІиЖ рату що ШКІВ БМВ ЩЕ екз у их ВЕН ОБО КЛЕ ННЯ На Пот ЗМ еЖнО ВШ 5 з ЛеМЦИНУ теме кв о ЖК ех куек оку фер отвур т по паражето піакпедання на повотрєї ! Гевлюмин. ве, 5 . х і з зі ся ї ік к З м.

КО. Я : х т ЕЕ Я Є у х шк Я ї --Яе1 023.5 ---й6.3-02.. 1-4 й я ЕЕ ЕТ ШЕ ЖИ т ди, З ї , х х ІПЕШЛЕ ВО ї ї ї ї ИПИИН ЛИ ВИ ик ВИ ТИЖ ХЕ Е х ї ПЛИТИ ВЛ ОПТОВОЮ ПИ ПЕК ХЕ Е х ї ПИППИ ЛИПИ Ци МИ Пи МИ ИиЗ ДИТЯ Ж Кк х ПИШНІ ШИ НИК ВИПИВ ПИТИ ї Е х ї Ше я ї ї х ї соя ВИТОКИ ЖІ КМ КИ ПЕЛЕТИ ТИ ї х х ї 7 це. ПО о в ов ї ї ї : ж Кк ЕК и КТК Й х ; х : ПМ В ВИТ фам ж пк кої щі х ї ШВИ ИН МИ ПИ НП ПИШИ шИщИн ші І у катки ви І о кт х х о ПЕ КЕНЕ со ВИЩЕ ОПиЗЬКО Я ТВ і ї ї и и ОО ОН , :

з. ПЕ в Ен шт пиши ї х х ї МИЛИ Пи ИН ПИВО ї Е Ж їх КЗ КЕКВ ЕК ЕЕ ПИШИ ЩО і ї ї дк ПТК ПИТИ ВИШ ППП ППКП ХЕ Е х ї ще 8- ПЕ ОЯ ЕВ во ПОЖЛЕ Е ; Е ї жк б ПШИИВ МИТИ ЛИН ЛИН Ж ПД ПОШИ Мф плит ХЕ Е х ї щ ПОТ ЕК КК КИ КК ВИ АК КТ ВК ї ; х ї щу ПИЛИ ЖИВЕ ПИВО ОТ КИ ї ї х ї ще ПИШИ ВИТ ПИВ ПЕКИ ДИ ї Е х ї у ПЛЕН ВИИИПИ ТЕЛЕ В ХЕ : х ї же УП ТИПИ ЖД у ДИТИ 3 ХЕ Е х ї ще ИН НН 3 ї . Ж Ж ї щк ХО КЕЕВКиНИ ї Же ПИЛИ МОЖ ПИТИ пото ї ї - пане ї «ШИМИ ППП ПИ ДТП ї я їх 3 ПИШНЕ ДК В КК ЕК ЩЕ ї «АЖЕ о. її їх 3 ЗПИКНИЛИ М ПЕ ПИ ПИ ВИКИДИ КВ ї АК ко їх 3 ПИ НПП Ки ШИ ПЛИНИ, ї У 4 і Е : В м я ї х 3 ФОТОН ПИВ ПОПИ ПИ ПЛИТИ ПЕПИПИ ПИЩИК їх ї Опиши т ї Е З ЛЕ КТ о КК ЖК ТИ КЕ ї х ФЕП В В КА СЕК В Ж ДТ КНТ, ї х дО пп ТПП ЛИПИ ЖИЛИ ПИЛИП ПИЛИ ТИ ПИШНИМИ. ї їх - ДФІ, ом А КМ КИ ї Е Ш Ен ї Б и І ПН в ! пф ж жид їх ПОКИ Ми ВИ НИЖ п лв ЕК ви, Ж й їх ПЛИНИ ПОВИ КИ ПИВ КЕ ПИ ЖИ ПИЛИП Ж Ж ЗИЖИ ПУ ПИ ЦИДИ ЖИ ПИ о ИЛИПИПИ ВИНИ ДИТИ ПИ Ж х ПИКИПИМ ПУ ИН ПИЛИ ПИТИ ПЕН ИИИИИЖИИОИИ ШІ ИКИ ПИШИ ї їх Ж ПИЛИ ПИЛИ ПИ ТИЛ ЛИПИ КИ ЕТ ИН ДИТИ ї ї дов НВК В рн їх дини ЕТ в ВИНИ ЕЕ МНЕ ї ї фе ПЕЛЕТИ ВЕДУ ПИТИ ЖЕНЕ ТИ КТ ТУ ЖЕ ТЕ КЛИН «і Е З ше и ЕЕ панна Куца Я уча шов ї Роде шев в БЕ НИЖ СЛИЗ я ТОВ «М ї і нн ан : " х 3 ППИПОПОПИМЕ ТИ НП КИТИ ПИ ШИТИ ПЛИНИ ї х 3 ПИТИ ТИПИ ДК ИИИНИИИ ї Е 3 ПФфЕЕЖ НИ шим Ж ї їх 1 ї ПЕШИИЙ ППППИМИ ВИН НИ їх х х ї ї ши х ї ї 3 ї ї ї ї Е 3 ї ! х ї Е 3 ї ; х ї ї 3 Е ї х ї Е ї ї ї ї ї ях і х і ї ; ї ї як КК ЕХ КОКО Ох ІЕЕ ЕЕ ЕЕ ЕЕ аю 200510 200510 200510 200510 200510 200510 20 хЕ їЕ я х МУ т ко їх х. Ж г ки Я жк Ек ех ми ЩЕ МЛеЕНЦеН ВАГ. в мех, СК СК МЕ я вл ООН їх. . Пп од ах Кая : 0 й С вк ШЕУ РІЙ ши ких кет М т и Я ка пік ак СБС Ж А х 7 пок мі Ге ув; М ВК «В вок

Фіг. 13 х ж ж - КОМ ик ки ле сечо М щВ 5 мом Ж З ЕРК С вимо залежно вм; ваги З пенцину Я Ї зр КА ще х Ї кад еманіа шщ БЕ х І Кк. |. В я Е Х х г х Я ча 5 Б НВ, сефреннснтнненнянфя ; : - : : шо г і Е З ї Е : х Ї 7 Е ї Е : ї Я ї Її 3 ї Е : х ї 3 ї ї ї Е : х Ї ї Е ї х Е ІЗ х и ї КЕ х ї Е : їх и ї КЕ х ї Е : їх Ї ї ї їх ї Е : о їх Ї : Е х ї Е Ко х : їх к т . ІЗ КЯ и ї КЕ х ї Е : їх Я Її Її : ї Е : х Ї Н ї ї їх Е : х : 3 Е З ї ї : ї и ї КЕ х ї Е : їх ї ї ї ї ї Е : х Ї ї Е ї Е : ї Ї Ні : ї ї Е : х и ї КЕ їх ї Е : їх : Н Е З х Її ' Е : Н Е З т ; х ї КЗ ї Е ї ї ї З х з ! і : ; : ! . й; ї ї ї ХК ї : х ЕЕ т 1 ї ї їж Е ІЗ їх м ї ї ї ї Е : ж х г : Ї З ї з ї : х : : ї З ї Ж Е : х Г ї Е ї їх Е ІЗ не ї Ї ї ї х ї Е : дк х : ї : З ї ; : й ї Ї ї х ї ї : ї и ї КЕ х ї Е : їх : і Ї З ї Її Її ее х : Ї : я ін ї ї де ї Я І ї ї ї Е о Е г і щ : ї ї Е я х : ї хх: КЕ х Ко Ех Е ся ІЗ х : 3 х Е - Її ще і ї г ї ї ї ї Е с : х

І. ї Е ї х Е ІЗ х й Її Е З ї ; як : ї Я ї ї ї ї ї жо : х ї ї ї ї ї Е У : х же Я ї Е х ї Е ей : Е її Я ї ї ї ї х Ж : х Кер Ї ї ї х ї й : Е хх Же ї Е їх « х ІЗ ї ж ї Я ї Е х Й ї я : ї в х й 3 їх ї ї ще Е І ї ж : 3 Е 3 ї Е : ї ще : і : Б З ї : : ї ЩА Ї ї ї 3 ї ї : х ЇХ Ї ї Е х ї ї : ї У Ї ї ї ї 5 ї : ї пхх Я ї ї ї ка ї : ї - Ї і ї З ж Е : ї . Е ї Е їх ОКХ. схе ШЕ, ї їх ЩЕ Ї ї Е 5 Х Квт В х : х ще й 3 Е х ї З а КК : ї т ї З ї ї й ї х : в її Ї ї ї ї У ї Е : ї Ї ї ї Х ї ї : х Ї ї ї М ї Е : Е : Ж 3 Е й ї ї : ї ї ї ї я ї Е : х Ї ї ї ях ї Е : ї ї ї ї ? ї ї Е : х іх Ї ї Кох зе ї їх Е : х . Ї ГУ ее ї ї Е : х ХК т 2 ї : 5 : Е : х ж З х ї х ї ї : х г Н З : І ї : ' ї ї І ї ї ї Е : х Ї ї Е ї х Е ІЗ х Ї ї КЕ х ї Е : їх Ї ї КЕ х ї Е : їх Ї ї КЕ х ї Е : їх Ї і : ї ї Е : х Ї Ї ї ї ї Е : х Ї ї ї ї ї Е : Е Ї ї Ж ї ї Е М ї Ї ї х А ї Е : ї

Ї. пе х Ж Ї 3 : хо ї ї Е : х Ї ї КЕ х ї Е : їх Я З ї х ї Е : х Е ї : х ї ї ї ї ї Е : х Ї 3 ї х ї Е : ї Ї і ї ї ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї ї ї Е : ї Ї ї ї ї ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї 3 ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї КЯ Ї ї Е ї їх Е ІЗ їх й ї ї З ї Е : х ж ї Ех х ї ї : ї ше ї х х їх Е : х ке і їх ї ї Е : х : і Е З ї ї : ї Я ї ї ї ї Е : х Ї ї Е ї їх Е ІЗ їх Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї ї х ї Е : ї Ї ї КЯ Ї ї Е ї їх Е ІЗ їх Ї ї х х х : , Її заоггднаньняькії г КЕ КЕ Е; т хе х х щй ж ко 7 зжаж хо ж Ок. ж В У : У ки ж ви б 25 їх дк Ж фе НІ Б Зо щі ОБІо ова 53 Вп О 0 вч Зо пз оз ШО ем АНУ В МН ем з ж Хахізкпам мак Ж Певцик, ва, о Кохжнхя «М З ОО в з . м з х; Ух р . а на о. х зі а М 7 ВЕК маг «щ Зк і Ка ІК АХ НН ЕЕ 3 ца хх Х ВО буе з хх п ХАКІ о дк ех шен ЕХ ай св ух

МО мими АВ, т шах Ван «или її що НІ Фа ї з св кх Я ; ж х ее Ж в М лю0ООО Ше чі

Шо. коза і зооооос я МГ ОБ оно во спожи ШК, чує ВК я З ам жав. й щи ве ЕЕ Сх 345 п я ! м і вче Ге У ех Кя із «ЕЕ як вер х Я шк 3 ТЕ ох ОО ще ік ще їх ж ие Кі ВЕ ши У КЕ що ех Я шк КІ З ж: КЗ і і хЕ: ех т сич я ШУКАВ: а сх ше: о; ШЕ яОо шк вх т НН шо » х Бо 0 хі ї і я гук я ок ! Я: - і ; Ї ОО ще в БИ | о Ек ї Я ОК еВ ек ї я ! з сх ! 5 т я ЯКІ Ко Іри і же я с ОЇ рова Ше шо я КК КІ ОК що. є що т ше ЩО п о зав Ше ре М ї Ме шо шк Б з Шк й Ош ОК ск ще ше х Я хе З г. хІ1К- АЖ . З ' го ЧК я і МСЕ КЗ о ще Ко се ке с 75 шк тех Ж кю сю ех лом Ж хі Ем ше ВКМ б ММ лож ОО ЩЕМ ШЕ овтроль РО и? Зв вагова РЕ КЗ Б ЗБ ваговає РЯВВ МО ТО З ваговаг, БО Еш Є ОО 5 мов ваг. АЙ С В 5 ваговаг. РОЗ

Фіг. 15А ср ї гл ЗК кзківус Аг ж МІЯ КЕ ярих ЧЕ пок Я ге окн вк ика ав о в Ух 5 200000 4 МВ ЕН м ще ОО м Щи: шк ск як х Я сю Я ска їх хв ких. ся Ки МОЮ і аа. т ЗХ ока г ОО вас оо Н

БК. Кк з ко КК г Ка що «оо Шота Б 8 Є МОЖЕ КОТА СА з о: МИ КЕ ж З ча ШЕ: ж не чи кі жа: ШК: А КН Я КИ ШЕ. ох 7 7 шк 3 ще з ОВ зіань З я Кч п ТУ Ж ж КК - Рани м Бех ше ех м с о : тує хх ї ; З а - як же с ще Ек 0 ї : ху же її: -ї . р її с х У Я ж з з й ЕК А Ше ШЕ газ : ще еане РК 00 Ше ШЕ Її - 5 йадя КК шк ше | кв к МАЯ зе КЕ я ЩЕ М: яко г ке Я з ке ЖК до ше З ще 2 ЖЕ: ЖК У хх «Й я КО ЕЕ ЕЕ ж: В З ШЕ а вада РЕК тю ще ПЕК ря ВУ К ТЕ: ; ще ож ЕВ з «КЕ ще ЩЕ Кк Кі ЇЇ и М ЖОВ з ОХ. норкові СЕ ЖЕ - КД УК КЗ ше 00 БО У як З УК Ір З Як сі Еш З ЩЕ о КЕ з: ж КІ З її ще: Я Оз ла Я РК З шкі 5 Є ШЕ ще. . і а: ев 00 ВК Ше ше С т аг ЯЗ ШК ШЕ ШЕ ие і «і

ВЕ. КОРУ МІ З КО ЖІХ : я З ж т її ми ї. І ЩІ З ще К ЕКО Ж ШО ШЕ ДО мої Є й х и ше Шо ЩЕ ЯМ пе і А ОК ОН що ШЕ ку то ку Я Ех ни ; ШИ ЇЖІ я я. КЕ 3 Ж ї Її ре ОВ З 5 З ОКО КЕ Кем : ШЕ КА. шк З ке о ОХ ре з ОК Ки : З кі ше ХХ З ЗА ЕЕ ШЕ І шо ше к х що х МІЖ В з ОК Же : ШК М як хх х як ОК ря ШКО Кі шк : ЕКО У. З КОВІ З з я КІН ; я М З й ЖЕ " КЗ Я хе ШЕ КО Ке : ШОЇ оон ШЕ КЕ Зх я як ше 0 Ше й Ва ШЕ Х ЕВ зе З ШЕ С їх ще ШЕ щ ев у 00 ІІ ЩЕ 0 Ше ту хх КОМІ ї ОКО ж : З Б вх шк ОС КЗ Я ШК. У о 5 їх З. КК ЖК : У 7 з У Я ех хх ва сексом осн кю То соскою ос фон Ко у дмкнкюкюккнкнкюкюсюс о Дккнкккккккикх З Ж корка Як куки Зк Ж каві Зк ЖЕ кока жк Ж как шо Ще о ВМ я МКМ ОБО НК як хх МЕ зни: Шина щ ! ВЕН ТеН ДУУУ ДЕК ВУ слу бкрлую ща Ех о КР ЖЖ В делую кру хх Є ой й Ше Та ЕМ ВЕ ОК демо МЖК сок Вік ща Я ОКО шви сек МЕ їх Ман БОНН Ге ЖЕК Ж В ВК зквім их І ЩО ТМ ваг. ОБ УЖ ях ж же г кчткех рими КО УЖКЖ ККЕ сах безе БЕК Шен є 5 Ва іваг, ОВО Дж ж ЖК ЖЕ ї, керкч хо. х Ох ОК жу лю КІМ ою А ХХ В КЕ Ва я ша М й

Фіг. 156 ух рах Її. Е. В У МИУМИ КАХ Її ЩЕ ї з т Кі Ко як х я Я В З ей 4 Шк СО САКЕ зи «НЕ у ще Я й За НЕК в юю Ж КАН о шах и ме "ак МН зе свиня оя МНН а ИЖКНЕ К; в ї їх КЕ Ки ником КЕ ї Ка

ОО. й и табей о Її жена крук ек хх, ЖОб азю ХУ г ЯМ т З ЖЕК: ЯК ж ЕК Ж о. Ф Я і Ж Ми Мих в вк г ЕЕ З я Ів В К и ги Я ; ї Оу їх ЕЕ ко ЗК М нн Я ее о. жа : : М Кв І Ж хх МК : Кк ШЕ З Я Ті 4 їх яю й ця ШО ШО ні Б МЕ ше ЩЕ ЗШ / до й Б) вуює КУМ о ВУ Е ШК 3 й жк Оу жк еМЕККУ ШК Я: х Я ж КК Їж ше я ті І с а Тож ве пот » о 5 те хі 3 Я ж КОХ Я Ж х Я їх х ї хх х НК : У Я Ех Я Е її 3 КОХ З ЖЕ г І ЯН ЖЕ Е ШІ З ЕУК ЕЕ Ка Ще м ХЕ Я Я х Я З Кк ї 5 Її Е Ко за СВК ШК с ; : : БІ ше Е шо ІК: ї х Її Е жк ва ШЕУ о ШЕ НЯ: БОБ ШЕ ноя «нання руку жк ШК ї Я я : ї ї ; 1 Ка Я ЯНВ о ТАТ В З Кт Е ШК ї Е ОКА М ВХ ? ? ШК Ех ШК ІВ ха щи ; ї й ше я ж ек и її А ше Я ше І А ШЕ шт о ШК Я Ех ШОК 3 хх ЕВ Я АХ шу є ОН Ше В Р. еще ЕЕ пи о ВК Я ГУ ОЗ ї їх КОБЮ В ри КЕ В «Ж ШК Ж Я: КЕ ШК ек 3 і ЕОЖУЮ х КЕ Ух - З ШЕ о ше Неї т Мф до сьо Ж : ше 1 з З Ж ї ес г ВЕ ШЕ ї ше 3 і У ТЕЗ ї і Ї ЕЕ ї дя Ме З ЩЕ ї ше вх й т і Ї С І т аю КІ КЗ ШО веж ще Х, ; Я ОК Е Ж шк Х СЕ ІЗ хм ЖЕ Ж. Я о ох х хе. : жен Ух ше ї КК ТЕ З Я ЩЕ 6 ОН Ше та ШИ т мм Я Ж: ї ШК 1 пня В ОК ВЕ КЕ Я І Я КВ х Я С 1 КІ ЖК Я х КІ 3 ЗК ШЕ Я З ев ЯР ЕІ шу Я 3: ї ши ТО я Іще ЕЕ Ж ЖЕ Я ШО Ех шк 3 су НО ОО ЖОЕ 3 Я ШК Е ше ї М Е (3 і ГА і Ше 0 ШК я ев ; ШК ЗК 3 х 5 5 х У 5 Я МАК Ше 0 шо НЯ но Я іа ЩЕ з: і З ше ше Кроки ря ЩЕ Б ли ЩА вовни Її ШТ В што: з КО ОК Б Б і ї КЗ «З шк НЯ ше ї І ня КК КК Я 5 НК, ше Ех ЕК ї ех НЕ Е БК і Я Е Ада ШК Я Е ше КЕ 3 Би Я КК ООБКЖ Я З ЯК: їх ше о Ах ї ЖІ де сф КК Я вам БЕК ше Е ШОВ ІКТЕ БЕЗ: Х х Ко Її у ШЕ Я ех ох Я Я х ше 3 я ЯК я -К Я хх а ШК ї ше НО А КОКО: і її З З ЩЕ Е ШОК КЕ УЗ Е Ес КІ Ж Я її х х Я Є ї Ех Я Ж ї с В: х хе сощк КЕ Я її Я ж І Я Я у КК їх ЕК жом х КК Я КЕ Я БЕЗ їх шк КК КІ о ТЕ Я ях У шк ВН ШК ІК Ж х Б ЕТ Я ЖК ях Я СЯ х ше 3 ЕК КВ Я ТЕ Я ЖК МГ, ши х ші 1 кое я иа | її ЯК Я ї Я р 1 НІ Ва 14 Я ж ШК ї шк 1 І ЯК и Я х Ше: Е ше Я а Я х зо ШО ї ші стен ШВИ як і МЕ хе щи де МЕ КМ алОмем шк ВК ЕМ ж вт г со Кк хчу ЗМ ежоквоя титв Я0МЬ 7 З вагова г М КОНТ СК їх ЗЛАК БУМ ЕММНКХ НЯ кетони ТВ І ПОТОКОМ Б за М ВК 5 Ж можн В духи ЕЕ КА ВІ МОЇ ОМ ще Защг заха ЯКО СОУ Зо вагова, виде дк во я Ек саках З сет Я КТ З ВАГ ВОК, пелООКеО КА тм ххх У Мих ях ПОПОВ 5 Ж сесвхкоммо ЗВ полоковмеру 185 РМ, Я Б М шовк брак дез ТАКО вве лвах. пня ПО секс к ую М КВ М ТЕ ЖК Фан су Жоюкюккя худож коуч ото Кс т зом з їх т п; -к ВИЗ їх Ж 4: х Я шаава . А не пи і ж я й і. ще ТА Ки шо си НК Я ШЕ неза й се МО Ж моє и ово і кови 003 и иадке 5200 Ві Я С ХЕ а й п чз965о ев ЖЕ Ж у жк ХЕ : ЕВ. Я воро ЩЕ ИО вв КХ у а и ЖЕ Ж : З ЩЕ Ї ах ОО Ж Ж ви «КО і КЕ ЗЕ Ж шк ОК ТЕ ТИ УК теля зе Же 00 ШО, МИ ОЗ зоре «ЩІ ; БВ З у й її ї ! ї їх Її Ї що Я й дня вв 5 ше ШЕ Й ви «во ОА щі І с-г КВ дна й 0 и пи ше г я КЕ КЕ Й Ж ШЕ ЕЯО ї Кк ХЕ 8: в є ОО і ше І ї Б бе «З ди я ; З ЕК Ж ші ЖІ КЕ у ШЕ 5 ї ще З З КЕ Ж я: Е ІТ ШЕ КОЗІЇ о меча я УЮ. в ШК Не ШО) 25 їх З Я ше 0 ВМ ТВ Шо Ех я З КЕ Ж Я се ІЗ ї щі. НК і чад. . ї 29 ж ше М НЕ ші. Б 5 Фо. В Ще. Шк з я й зе шо с ж. щи ші той ме що З Бе т Я я ї ж їн шк: с г З ГУ кв ЕІ Ж ШЕ ЖК. ЕІ ШЕ ле ; «а я ше 0 ШО ВЕБ. ші хр я Кк БЕ 00 ШК ЗШ. В Е г ТЕ 1 ; пе Ж ши КЕ ЯКІ КО ЗК т : жене ЯК. Ж ШК КО Я ше ї З З Е я Ї Ж их яке Е м ї ШІ КЗ в» в сеї І : Х ШК : КІ ШЕ ОЗ. Б ВІ шо кн ЕЕ - я І ре 0 ШАХ Ок я Е :- соня ж ж. и | о ї Я. ше КМ КУ ше Я шк ЖК 0 реу,, за! й 50 й ва ши У Оп еу це | чі 0 шо Як: ШК Ен ЕЕ Я р Ж Й ем КР роя НК ше Б и КЕ У З о 0 Ше КІ т З кі: МН

І. Б ЯК. ШЕ т ше в 0 ШЕ Я чих | Кі ще Кн же ше Же З: У і КЕ Ж ШЕ ЗХ КК ше З ЕЕ й ; ан 0 Ше З МІ ШЕ Ж Х же З ше. я. ше о ! їй зн й З

Як. ок ! я й Ж жк ЖК дак де; вавя ще арка шк ВЕК С ЩА ше ВК ж щих мк хбиш з Кн хІОМмкВ Я Б 5 зага. ЩІ ТИХ УА ФЖЕ КІ р МОБ 5 вв. ФВ вагову. ся екоусоннци дини: ВЕУ ВЕК УВК, У Ж, с пелоноваеву ЗВ т) полоксамеру 188 Ії ТММ МОМОТ Ос з ДІБ Я во аг щ я о СУЯ ТО ЖД БК зт г де Бк КДАОЬ Іван до 101 весло, й ПЕВНЕ КК ЗА х. моно. АЖ ПЕК Му КАХ : петюевгаману я що КЕ КУКИ ОК

Фіг. 358

Кк сх не Й цк я ж ку 4 А : Є ад» б ск - ще 7 - З а в ЩЕ Де же т КЗ; - Ма Я. 5 хі й ї Є знфйрх сер» еф йо В у сю с з Х ВІНКИ ЗМЕН. їх ВКА, «В ВАК, поки кт Же НЕ ВОМ МЕ і ЕКО ев ИЙ У З З З З З ї .

Фіг. 17А ш-е ВАК хе в. ї-х зі члени ж й Б.Я - й ж « ЩЕ -- що ЗА: Ех зу Му х я ши ех. ох ех х с о. «х, 4 В а З е Е Я х х х є З тав 300 кидаю ТЕ уд Ж жало ОНИ ї З МН. «ОН КОМ КВ, си ! же зе кЕ пк ї ї ї ; г зх х Я

ОО мом ння с М с 0:

о. о с о. . о. є ХХ З ше КЕ ОО ЗХ З а о с г БЕ Зріне бла ВОМ, 0 ревіЗ ЗО й похо ково 5 І МОМ В шині ви с о.

Фіг. 172 хе 5 З сяох Я о щк КУ р З 5 яко уй З ж а ати. я Кл 1-- А: ха зу - Е -2-- , БЕ і, ме Й 1 х Є і Му я ї Уке тку Я і ха У со щу Ж ку ЖАВИ ЗОВ, 5 МКУ Ся ЕЕ ВЕК, - зач ї зок пк ку Уеомзї ЖК, 3 Я ВКА КЕЕКУМ КК З ЕМ АНКМ 3 : 3 З зх

Фіг. 1ВА ще ї ЕХ ї Е шеоде ї чу Е х Е Е Е І і і - Ї Ух Е Е й де. г ї се і їх Е х Е Е Е Е й : ї 4 Е і . Е ; ОК ж ж . а: ке - Е т ск Е я не ї т х Е я Е те Е шу ко жк. Е її йо ї з Е д Е Я с ї Ж ї Е Е о ; Е Зк Я 5 а я Е . ї їду ї - ї ї Е Е - ї й БУ ее са с у се ї ща З Бе - в. ку Е Е Е з ї ії ї в х Ка Х Е Еко Ж січе ї баці З кісви Е МНН Ж ВОМ їх ВМНЦЬ Ф БК, ї ННЯ ІЕЕ ї ЗЕ ЕЕ Е ВЕНЬ ЩЕ о БО ї ї їх Е їх Е їх Е їх Е ї ї ум Ум

. о З ши є хаще с о її. с С Ден ОА З ЕХ ПК ОВ ПИТ ОН о. .

о. ТЯ ОО г вн 5 о с о о. що ме с . о ОО Бе СМ -ї о о . о: о. 5 с с у о. 0. с г Б ЗО 5 її . пе Х ОО со З Оу ооо. о КЕ С ее о. В; 5 нс . є г . п с. о що а ЕЕ 5 БЕ В ВО о: с «в МаЖу УТ порт 6 0 БЕ» рак Ж ЖЖЖЕХ м КК сх оон тен ен нк ОКХ Е їж в пен» З її ше п.

г и. йо о. БО о. . . й . НЕ 55. о. З с п М . Ох ХХ: и о зе шо то. о" З ОКХ ОХ Ме В ОО о. о о ОО ОО МКК ОО ' з подо аоетву шин ЖЕ М КІ яння -н ще шт ще ! ше п ОВ о, о оон о. . З т о її о.

о: . с . .

М В. ша с . ЕЕ с . й о зе пов й, гя сон Кок Б х хв моде загЕоВЕН о хЮ Бах І

Фіг. 18С шк

УМО З іхоя де г Тівмов ж КОМ ДМК й о00оскден с Е р данні оБк Юа ект ВЗ Те 1 Я Б ЯЗ ее КО чне ШО са еВ зер Ве Ж п 5 зво они. МЕ з У РОЗ БО дв М п тиви З У вк х Ка жу ЇХ дек є шо ШКО М ему ВТ, і ОВ зо в о. З ОМ ОМ ОН: Зв ге 7 Бо т а ї кова ж ї х и Й х їх Я З нирї са МБ Ш ПИ А вх 2 ШО ж я ро. ж т 169 я ве ес: СК и и ся ун щу м Км, ня Я Я Фі ЕС ТХ ен. Я СХ Б Ме се ЯМ с ОО х І я С ще. І 5 3 о М ЗКУ им св кпк п я. ої а кер и и уз е а ї х во и х тя тні тя 1 ИЙ ее В 5 шкі ху х х ж мкм мкм х мах Оу жк моху мим ТЯ мета ВМТ КОС дао В

Фіг. 194 ЗОВ у , «опор КО 01 зт Я ях у путнет 200001 и и таттв 100000 кю ВАВ ТЗІ об. Ще Гео и ум Зовав: С 3 ші 80в 485 кет я я і й да: і 5 ав: й шк ви в'я. 2000 я м, МУЛУ т 0003 ЩЕ же мас цк аз Ж БІ вт о и ЯК обох ЕЯ ЗИ кох я о я я ко ї 00005 ще ще я т Ки щу що ит мя їж й Ко -іВ Щі ай. р ща: я КЕ А, 7 м є Ку ї я х ко БЕ я т я о ня К ї о Ка ко ях й ОК У жк я м ее а Ко 4 ре их я М т 7 й й х се й ке ї ке ях МК ся М Как ок 5 и лик ях т ні я ж ще з кт ки п жжаке ен сне кн чн офі кхх юн» о Кекс кккнінк 1 мкм ж я МЕМ 2 Бк ж 0 мем х б мае й: їг КУ У - х г виг ши Поідний СЯ зовн, Яд ТЯ тека С з екн МНЕ

Фіг. 198 ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«ЦЕ МЕЛЬВАСМЕ ТУНЕЛЬ «М Са поренонотон склалк внтнтії, по няхуУюЮтТЬ ТехИчиНИ спомальнни лмфопоетнн СКАТ ях сс фі спирти ІТ5І Р таспособн їх застосування «іще ДЕККЛУСЬРСТ «150: 3 Ер атехов я З Ж «РМ Рабів верст 3.5 Сили лу «1 сл. ж пі «КД «а» БАВІ БСОКІ «ще 1 НТ Те сих КЕ НІ і 5 і 3 пл т паші вил. ДТ «12: БІЛОК їм Ікар захи ід ЕТО МАЕ Ежен, Ах сохне МКС КБАТІЛЕЕ. «даже КАВІ НЕБЕЗ це: З У Це Тце тек АЮ Су зе ямі хе Ні Бе Аз Азр о5ег УТ ух хх сили поїв ій он. ТЕ «а» БОЮ п зе»

Арка сі Пор ке ев УЖ Ве Кх АЧа Ре А во Це «Це 4 Я но, тр Ен 13 «іх» БІЛОК «Пе ТЛ джу втутрауку «ЗІ» Бепю хан тк, люк што ТЕ ти «Др» МЕС ЕБАТОКЕ стютюо і тв птдосжу тую рі ге ре уЮт «аа АВІ УНН ВАК ЛАНКА стору В «Не а як, дж т. т, Ху Ж стан КЗ ке ме ТТ ТЯ 47 Пн у шт Месстщвіва УМ неті сії су У Уві і рт пу Ате і х їй 15 «о хе щи же 3 83. о и Ве ть Ва доти зетівиАте ви бек сля Ав Аз Зег Сі Рее Тр Рбе Ат 15 Б йо М Зо оду нн вн нн щі и і сі Ме Нволо с Аг Ст АБ то Сну хз клуі вв ст То У ї5 4 45 ща ПА Та Та Тут ви Ко ба се Так Пт 15 хо дит Вів Ум Пе Нр об борту бет Ам Еуе На Тут Афз Ар его уд! тиж Я.

Во ра сте Пд То ду й сн біде Та б и Те т до де із У Аук Ре Пи бе Пк Ат Ав Ас ет ув Пт Б еп АВ ж ри, Ка а Ной Х п З с г.

Я ТОЖ, х. т дея іви Сп імер Али бегі «о Яги Ав Си йлр ТВ Ав УВІ Бук Тут Ко Зїя ту й а Око ЕТ а Лв 1 Бе Є та Юа боб т ААти А) Ро СВ Мр Світе УК Ні Се Айя Ре Асо Не Ту

Но но Мо

Се е ГІ Міеє Ух! Ебг Уві Зах ех се а кри х «що «ДЕ» «2 БИК.

ср їх ще «1» Нашю заоет шу «аа В, яти дит «Ві» МЩОС БЕАТОКЕ сптулюо два т яти «аж» БАВІ ТС

Су СлуАсвАхвівц Стр егіхи ех УВІ НІХ З З 13 хе й «ре ШТ Ж псеахлк я ск «1» Боюся «Я «ар» МБ БЕАТОКЕ уз Аді тет «й БАНІ ЇСОВО «ВЖЕ й З МАЕ і З «а «2» БІЛОЮ ТЯ ку ие « «Же Блю сарневя «Її й ще ї «щю Сію тпзаАхо бегбегбегАзв Не У уд «0» «2» БІО т чу.

Жх 7. «л1ЖХ» Ноше зарене «І Я ще «же УРЛЕГ КОКО ЛАНЦЮГА. «кор «21» МІК ББАТОВЕ сивину. «Же В Кат Пот За: дах Та ау Пе Сак лев ан і 1 Па Ех Бегіук УВІ ка: ПТ св гто Бгто ек УЖЕ Бег Сві Ада Рго СК БВ 1 7 10 15 Кг Ада Але Пе Тк я СНУ СПУ Аз Асі оту Зегі хх Мет У ру Ук т Кз - Ен Зх. 4 7 й й Єва Нв пе Бл осінні Ро бі ів ів Ро Узі іем Уві Уві ТУ СУ, Ки х. їх З 45 - х й М жк я Ж де хо ЖЕ ТЕ, х 5.0 У тло дк йсразв Бе Аа Аг Рв зе Но Де Рез С Ате Ре Бех ту ех З га ЩЕ, Е З З в ща З Са ку божу те В Б лах ха Та Кк М сі ін З сх Асп зе Ск Ап ПЕ Ав ІБт ем ТП Це бек Ага СУ СЛ АТ СЯ т тих -ї ще гей від й Тут То й че й З Ту йея ож ет Дак В ем Б Аве Аа ав я Тр уз УЛ Но блю Зег Зет ет Адв Бо тил ВВ. тя: ле я о ж ока у З Ук Ущ Ре Су ін Сі Мн іі ев пи УМ і ем ю 10 стат й «аНЕ В сажі ие «ЩІ» ДНК шлю Ж дути плід «д1х: Попо сммене слутрек «НИ щусе бедя пиши ДАВ БЕЩИТЕ:

«кі. павВі ваше пІТНЗ ух тех пачки пат «даже БАНІ ВА РІАБЕЛЬНОГО ЛОМЕНА ВАЖКО ЛАН ЛОГА «НЕ: галхнесаі ЕЕ нЕВа іст сЕс шісоірснис сірки леви ОБ есе шОТІЛТХ Еш МА АД шк ше рас ше сне ув ду Кк селу ук дич од спите сотку си чле кприхссссксаросвоспооса сс незассювмвст состав 120 тя Ме: ча лаку Соч -е лаку дить р лан тУжссулютух пллекстювію дуету ссто литі дет єад стат ІЧ щшвтадня ясне еаВір коту сев дис е вес са сис іже Ме раса Ех ше де шк шт щ-щшешкрпл щ втезсіииісспдвсосди зпраста вресасвовра поста зеза сага Се ВСЕ ЕЕ КЕ МИС МОМ ЕМЕМОСЯ жива СВОЮ «ни скоетмйктух приво т тити ск ст татв ит правити Встати Зе сівсвсвіса скоса прославезс поси ссіст вс ніесявявосесі ОО ще фот я ррстотя ск як он авт т пост е си дж; а сашеЕрсвас Кріса просіісве ВКіверссс перслааі ввісвосв ОН тес За «ій» 10 шві. «їх ХА и СИ -3 3 ох м кодтутео а КІС крееме КЕ,

ау. Кк с «айі» вихо фвабже «сті: павібБатарврпльенКу;плиМщша пигеетуХ пато тай: БАНІ НАРАБЕЛЬНСОКО ЛОМЕНА ЛЕГКОГО ЛАНА «НЕ Та еліти ехруха отр дует тк футів со сера ке сти «п кан нс зсясевос вссвісиеН сенс сзевоснанс оса 0 пед гу жену Еоскестутев ум. о болеютак вив, Е хата кутник ат лужттех ях зспіБсвиае рвдасязогісрсвкезаи овес всі пек лноя заалеосвивя 120 ЕСЕВАВ В БЕВКЕНАВ ВЕ ЕЕ БКСВЕТ -- с СЕ Є р Ж. - к фндит. од. шо -к. чт суч Е г. . Ж твавстсан і Кісвівсі ісп Маса співів сосвсвшсвя ЗБ киев яв сти сспавс ту т, евмухеттьм. Фк уу ту стує ух с - Ж Ноклетв сажнів заатвос пояс тзсли НК Всрсвє зсвадевшев ЗО ЖЕ ЕЕ Е с ЕСЕ ЗЕЖЗЕСЕКЕ. пйста тити спе ху з Е ухв ук ств сті Фокетт сісти оптику ЗЕ епівларсіс бас е стані се раді сарани ввя 0 М БЕКЕНАВЕВ Е ЕАБАБЕ ЕККЖСЕНСЕУ САВЯСЧЕУ ТЕСНСЕВ фопарялнтов, срутеевух окт сей к витЕЕжасна Висісяової сіє Ку ах бачку бе ко жа «ацЕе ве «й я тики «2 БО се І ее Бідпи комкаух а ДМЕ крем «Де ше Вт КЕ гЕТВ «ві» МЕ ББАТОВКЕ. сключух. ТЕ тгюкх «Ашан БАВО1СТВІ сце ії і А ас АК 3 З Ку ж Тон ї- От СУ Сі Ах Ах Пе ж Зегую бек УЮ НЕ р 7 «ие 15 пк, ЗИ ситу Тут

Ж. Ж долину дес ув вдчет «Е1Е» Бшоє гаріеце Туя «Де лю. яти штати са» МРС ББЕАДТЕЖКЕ.

яз. пат тету тат «аа» БАНІ ЛЕГКОГО ЛАНИ А тт, о Ех шлю ЯТЬ шраутіл пакї МІС РБАТОВЕ . яю, тк ку її т тишу Кг то С де ших «же БАНІ УТ ЛЕГКОГО ЛАНКА БИ ку «Вже 17 ЗІ ше ну МОХ я Ж АОСТ Се ТЯ ан В, Я ля Єв, ж Зегіу Уміє Вт ств та то Чек Уж Зет Узі Аїв Рез Су СЕ 4 - ча 15 Т ї 4 1 3 тин 5 зо А «Ті Кін ям й я Ал Пе інт днк КТ оз с а ТЕХ В Ав Ате бе Тв С Ст Кум Ази Не Ну чего бег УЩІ за їх хо Ме Та Тік 7 Кн уж Є У Ка Ва нн у Ту - Бе То Бл обі Сів т ух Різ 1 Сн Аів Ро УЖ Іви Уві Уа ТУ хх 40 45

Б. З оби 5 с, Бех Ті Ше КТ З Сом Кол Каже ох Аа лор зе Ав Ат Рез ек То Це Рез СТВ Аге Ре Заг СМУ бе дяка Код ах лах й жа Пан о тА Кох В Хе І гц хі Бегсйу Аква Пи Або Ті ї мо 1 Бг Ле Заг А те ЛУ СИХ АНа СТУ

Х дв М ж жк ее ун жк й БО ла шк улн ЩО Гу доле М два С ліз Ав Кт Га С мн УЯІ Пр Али» же Зех бек Ав БЦо Ф г пт кх ха лілея свв жо Я м У УВІ Еней ки Пк ее ЗБ У ех що 105 статую і «ді» 1 ше лва. ШЩЕтути «лі1же БІЛОК ши Ж схтякт ож кр пит. АТ ще тя тру «Іх1» МЕС БЕАТІКЕ «І» БАВЗІСТКІ ух Шк «Же 13 гу: Я: й де й ну ЗЛА Ек а Т хм де ТЗ ШТ я Ст сСпу баз ж ві Кк ет ув бек АЗК ЕЕ 1 5 ів се я, «ле 15 яр. шожеклукк «дій: Поше харіене СІК стужі» ВЕ рат г МЕС ББАТОБЕ сел. ТУ хтттттути тдОКтИя, «дж» РАНІ ЛВГЕОГО ЛАНПЮГА сет... Ж р дит я «ар е МІ ББАТОКЕ ква БаАЛКВ ЧІВ пет парта «ДЕ БАЗ УЇ ЛЕТ КОГО ЛАНИ А, «Же 14 і ша ож ЗО арк ех Бе «нт ТУ Са о а Дн Кі: Кк бек Узі їсте Тк В Руз то ех Ух Зег УВІ Афа Різ СУ Ста тя бін й "з Че ке Й: КМ й сту Доля ЗЛУ Кв Ку ли др ТЕ ТА Ат Де тіж су СПУ тан зп УМ ТУ ет зер УВІ за й во іх - яке ук Зоя Ку ля В т ТЯ Ж ха КР Не в Бл сів сів Бо СЛУ С А їто Уві ем УВІ У х ж я хх жк і ж: --ко У с сдкая с - тез до АлюАща я Аве Ат Ріо зех Но Пе Раз ста Ат РНе бет КПУ Зах Ж ях Жде и В юне Те В а їла Пе Та Жде й хе й Зх я Він г Ав бе Сі а іга Пи бе їіх Це Заг Ат СУ Са Дія У щ ща 75 що Зх іє іа ох Се Ге м і ЕТ З ех ат лат Х х ще Аге Св Ав лев пт бл Ст Сів УВІ То Адю бех Хеї ет Ав Еа У Уві Ре сіт Сік ОБ бе б: і ев іч УК гей ню це ши че ч «іх «Дії» 17 нти. ДІТИ «13» Бнис заненя тю, ша сту ВЕТО ШБАТІНИЕ аг ІС ББАТОКЕ «аж Аа НСВКО зн 15 ШЕ ТЕ ух Тен В ях СЕ Ж хе ЖЛІА Око ВО жу Ж ОТ ок М Пеппі Аз ау не йявіх Ню бе Аа ба зе У Гу іт «Ло» 15 «ії» 1 «ле БЛОК «1Ж» Бошою бичем пив юх я, ЕД ше ЗТ штат «і» МС ЕБАТОВЕ аа» БАВА НАЖКОГО ЛАННЮТА «АЖ» «гаї» МІС ББАТОКЕ елжтьт і. т К я моли ут ять тт В кт АЮ ТАНЯ УП ВАЖКОГО ЛАННЮГА снбумю. х ж: 16 У кока С то Ви Же Кк я я В І т Дюк ТМ ші мМерсвіви У Сім ер сту ту СТУ УВІ У С Ріо Су Ате К со ук ок й ву З ія Є сх Шо СК Сп ЗеівєзАгіви Бе Сі Ах Ав бе ШУ Ре ГП РБейтя 155 т В З 3 пак ВТ, оп ЕХ ятакя КЕ ех А як охо Пк ОТО сту Месії в У Ате С Ада Рез Сх ув зі. ви сх Іпрокяі 4о 45

Фоулк кліку й Пи Ре Те й шт й ат ке б сю Пре т Ж Туз КУ Ат Ре Пт Ве ГГ Ак персів беті у Ав ТБ Бей Ав З 7 т5 5 т іх ек ста м Жах й б й іх; Мт Чу 5 б ха кл Тв чад Іви спи МерАсв ері ее Ат Аз Си ср Пі Аа Уві Тут Бут Со Хі й ки й Їя Же ЯМ ух 2 я КТ Ті М ди Пе й тА АівАхе ія Ро За Про іви Ух Бе Сб Аля Ре Авв Че Тр це То "Хе в на «Жак Ін І а Сх Сів сте зх Ме У іш Узі Бех бжег кт кочоть 115 1 ШК т «ЩО 17 «КЕ» ї7 «те ші тку «12 БЛОК та Ех тод гідхжоя спятно пити. кт тт «Злі» МЕС ББАТОВЕ стю ЕТО ТК пору юья «аж АНУ НС а сбетх. - «Я: 17 УМ Це То Тут Азр сіу зе Ав і ух БИ Тут Афа Алю бегонії 5 Б да ся я «ле 1х Я ЩО «З шо БЕ ТК С кп спетумозіхстух «іже Ново арен «ОК ет, ов т дир т «ге МІ ББАТОСКЕ сту А долу туту диттттучих «р стан.

ХТО тт тт «ді» МРЕЄ БЕАТСКЕ «чл т тещу ТТ тт «і» БАН УНН ВАЖКОГО ЛАНКА Кто, МЕ «Не 15 уз Кеті дн ЗЛ 4 ет М в в лі ТИ Сх Ва те сесії ез У й бе Су Су Сік УЖ щі бів Рго іх те 1 й 15 15 ж тя й я дек 1 й їх Код 2 Б Пе По й є ее т Загівеч Атві ви ер Ся Аз Айа бе СУ Ріе Тх Рре Ат ТЕ ТУ ще І 30 сту Меб Біб Пр УЗ Аве Сів Аа Ро іх іх сі ев Кма То Уві зе ій жх У З 4 Атеа і ті ЯПреже йо слх Дає Коли тях Ту Х дю й пах Шах їх Аїв УВІ Це По зх Ахр у ет Ав і хе Га Га Ада А що Бех У т до х тк. Я З З з ж: З УЖ с же: 35 Аа Ате ре Ті Пе Піх Ате хв Ас епі Азв 1Бгіеч Аєи т я онко Же д дя а Зе В ті З Првлю Кт іш МегАсбегті во Ат А СВ Ат Пи Ав уві Гук Бур Ж тут з мя т в т Бей іа Бе дев Віз Ате Аз Ето сі Проівц У Пе СВ: Ав Реве Ав Це Тр що що о ум у Кг Ме Гі УщЕ Зег бех М о сиро їв се 15 «ре ша тьо ШТ «а» БІЛОК. «213: Боте ха «ох АХ стяг кит веди Ай» БАНІ СОКІ ше 15 рейки З ст Хв КК ко Ша ТЛАХ ЗТ сі су шівлзн ів сік егіх бер УВІ Пх Ї З 1 «Ер» З Ен НЕ 2: БІЛОК «1» Ново доменне и ТЗ ЖЕЛЕ свт томи ять... жу шер десерт «ві» МЕ БЕАТОКЕ шлю. ЩА ит ут ту ТТ у ТЕТ, «ТІ» АВО ЛЕГКОГО ЛАННЮЮГА т, шля ВАВ тат чиї" МЕС РЕАТИОКЕ «я» БАН УЮ ЛЕГКОГО ЛАНЦЮМ А З ше он ТТН до ел КТ, ня Ме ОТО ЖАХ з Є у Бест і бец Ті бив Рто Ра бех Уві Зег Уа Ав Рус СЛУ бів у душ Еш Тік й Ме Я: их й з Хв ее Тон Кок Кін Ав Аге Пе бін Су сих У А ямі еп у Зегі ух ек М за 25 зо ва пт ВТ В дя, здо КІ їх У су БО - Низ То лобі Сів г у5 Ре Су С АЧа Ріо УЗ ех У ЛЮ ях Ка 40 45 х з - х з дн х, ЩЕ ся 4 як х о НК Аво Али ет дра Ро бег Пр Це Рез СТ Агя Ре ех СТУ БеГ х Же дж пом В Б Х А А ре ІА х пли дор розу Ав о зег СЛУ св Кг Ав Ті ви Ті Пе Зет Аве СИ СХ Аа СУ Я ет хх іа дя Тут Теле й М Хе Ту жу у ах бак сю ЕК Ав Св АНВАхв пт Гл сів У Просо Зах ех Бег Ада Но що Зх Зв Уві Ре сі СУ СБУ Пе іх Ева Пи і вх 100 15 «ЕЕ З «МЕ І «а БІО Шу Ж дехжакосте «ЕЕ» ть ВЕТО пот тт «ау» МІС ББАТОВЕ лю. БАХ ТІ «дае АВТ ТСОКІ «КЕ Зі Тож є й ЕМ Її дах Єву Тл Кат ля ТТ СІ Ст Ах Сів ви Ст Зег Був Мет УЖ БИ 1 З ів «Ще У «дії» «812» БІЛОК шк т т уйдхох «іже Поу екрневе я ЗТ ЩІ «і» МЕС БЕАТОВЕ питні ТЕ ТЕТ КТ тат «дах» БАНІ ЛЕГКОГО ЛАНЦЕН А «ау» МІС ББАТИВЕ тд БЖ. ЕОМ МВВ «а 23 Ку "б ЗЕ дах З Уч фея Ср с и а Вів шу ні ЗехБя ев ім Св Рі то Зжт Уді бек УЛ Ада Ро У КВ

1 2 1 15 Інга Ах Це ТП Су у СУ Ап бін І ен сп бегіхко ех Уві за їх 3 пл прос о жа Лк й й Я В ощ ле Бі По Бл чн Був ре у Ла Ада Рго Мі Лем УВІ У я 4х а 35 Дех б В а зт ЮК де ока Т - йде й т Ж Є де Й ле Аж Авр Бех АврАте то Зег їтр Де Ро С: Авке Рбе Хех ЄМу ех з т сто : зо Пн а ях. й ле й Кв М їж Ох Али бег Кіх Аза Пе Аа їі веи ТБ Це бех Аве СХ СА ЛІВ СХ Х ак ж бек а Ж хе ка бик ше Мат да тя Тс Ав Сі: Аз Асо Б Тур ех Сів УВІ Ів Ало зег бех Заг Ар Бе У УМ Рейну У ніх Без ін Узі у 15 «де ха шля ть ЖИ «2» БІЛОК «тру т. : : «13» Болю садеце «я» КАНЕВІ СОКУ «а 3 -х ХА р шк Фе сте М. пи.

ЗЛЕ Сів уві Пр Асо Гр ех ет Ар Ні УДО «Ме са старт Кт «хе БЛОК «21» Бош жов Ся ре ель ЖЕК шт и тот «Ії» МЕ ЕБАТОКЕ «ДЕ: «21» МЕС ББАТІВЕ АЖ й «Ян да ФЗех ГГ Я. ев Бк Си Рто Рез бек УВІ бет УЗА Дів Ріо СНУ КИ пон В Я ее тон бут Ка и А вчи З жи Ж щує КЛ Же Ж зме Ед Х Ті Ай Аг Пе Те Суб Кпу Сі Ав Ал тем ст бегі хх бек уві ще 25 35 Бе и Путь Так хо Ео- Кк и. В з т, ТВ Ко а ка Бе о гло Сів у то СЯ Сі Ада Рез Ук ем Кві УЖ кт ХХ БІВ 45 лю ех й т од кк Т Хе ке ст Жив Мазт їх Мих Ав зр ек А Ахе Ро ек о Пе Рез Сн Ате Ре беї СПУ БІ х шк Жде й. Коса Пе а Р т що Те Та Жоден м Я Аз Ахібе Сі Асі Пи Абе Пи ев Тк Пе Зег Али Оу СТИ Лі СМІХ 53 КВ. т о п нич чн о о щі НІ ІЧ Ахв Си Ліз Ля т Буг Су Сів УВІ Пів Ало 115 Бех ЗІ ов ГОЗ к що ща 1 це «я

37. ТК «3» БЦ шила ун ЖХлхжлих ях ; «КН» са стю Ту шрот стю. ВК Моя та «Хе БАВВІСОВКУ екетю.. СЕ «Ж: 5 ях я КА Ж "Ен нях б та а 5 а УЖ Тр Аврозех Пш зет Ав Не У Уві «Ще де и ТТ «е БІЛОЮ «ЯН «ін МЕС ББАТОКЕ «Же КАНОЕ КОГО ЛАНЦЮГА пр «ЕН: шт Вт пр дит «Мі» МЕС ББАТСКЕ «ВІЗ БАВО МІ ЛЕГО СО ЛАНЦЮГА сейм «Ж ле Жах АК тпм Ах Є Ск ТЕ т А бен і ЕХ бЗегрія ів га Рі Бгто без Уві Зет Уві Ада Ро СНУ Сп

: - щи 1 ї а 10 М тт; З яр ет н ВТВ Коста й «Ж ша їх Шоу Те вт 3 Ти АщАге Небі са сі А Аміна сту зегі ле ет У ще й 5 : З св Ка ук га ія Ше; 57 3 Те Нвіп Бл свв 35 Ро біт ов ліз Рг УЮ Бен УВУ я Ь їх з з со Код та Же, чт ЩЕ Мт Яке Ку хв Ар Бех Ащо Атя Рго ех Но Це Рез С Ате Рбе Бет іх ех ж ж ж : : з Ходи" да не З дат Тіт Та Кр й ки Ко Зх Ва ЕК хи дег СЛУ Ажа Пи Ада Тіт і ер Тх Пе Бег Ага СПУ Кн Аза СИ 2 7 -ї лу та Ех ха ; й яоотк ; хх ЖЕ т сте Кн Я ит бу ек ТБ Кот й кт ВЛЕ хв в Аз Ахо Бл Вт Сів У То Ахо Зег Ті бек зр БОе їх що А з - 4, ся Ка ен о т Ето І к МИ Ві Ріесну він іх гі ім ПЕ УМ ев о КВ «НЕ: 27 «а1Ее 150 стру ЖУК ТЯ ти соуси ух «іже Нопю саріеве «ае 2 Те ен 13 Тк Її ру Теле ЗА Ж шах бу 33 Ск Фе охо Ме Ріє РгтоРіейізівсієц ік Уміле УЮ зе ГБеАгі хв я « т «Ж і 2 10 15 Ве ТЕ пня Тк ЛЯ Ки 5 т пе лит В ех В м ЗеРієЦеіга сті УЮ Сіті веи У ги Пт Тур Авр Ре Пе за з зо З іл В ті; ска КТ хх Пи Тех й Дао Т вях бат Тео Те бах Ахв Сх Адю Ре См гу Пе хе Ах Ада Бут Тен бет Гвх Де бег Е тд еле З Я Є шва Та ах ТЕ Ти ах Х ле фа Ахвієч Летів Га Між: бе бу Пік хх бах КБ Са Ріе дев "ях ж - ях во За ща сто то св ст Ге 2 ев кж не й ха З Ле Б її ше т Кн Па Ада Пи Уві бек Ся Бех Адв Ате Ро Ні Сл ех 1 мг Се Де Стів ш- т -- ще сх бика й бе 1 Ази Аїа жаги Мія ов КУН Зегіви Пи Рбе хв Рез Тбг Ада Сі ств Ав Бекі ви ів Був СВ 8 що Ка зелюто т Коти тя та ан дів Ма Тен їнє Вул Ме Ме грай Мету Пи 55 Ах Ада Бен Аза Ве Про Го ОВ я г ть 1 цк МО ле Киї ВЕ СЯ дк ух Яіїа ть м ВЕ дк я «с б сет ух Ба зер ЄЧи 15 СЯ Ве Ав Ада Ті Св Ай Мет і яв і у Ав Ат чок че - Й 7 13 12 135 Ж ж Ат її ою 13 ГЬк ТМ Арх мой Ко Як й і ВХ сша р дих іже Агаіхв Уві БЕ ів Аюзі ух Су Бе а Сів Уві беріз Гев 130 135 140 хх Ки Ж дахах А уст бос По кит Є Т дя Ж дже Т яхо Я КЗ сс іви Пе Аля йхе Ре сп о ле Рів і ев еніхв Сів СТВ ЕХ іп 7 шана ШТУК «дій» БІЛОК шля тн фл «1ї» Ноато Бармен сно ЛЬ не ЗЕ хе Ж Жож а.

Такі 123 Ку С їн Ки 1 ТИ и Ве йо Дт Сім МерсСіві ез У Се зер сту СТУ СЯ Уві УВІ Св то СИ Ага ЄСтдя Ж лк З т. «дб В Я до ях КК Бе Ти Бо В с я вже бегіез Ат! аа бек ля Афв Лія бех СТУ Ре ім Ре Атв Пе їх ж тла зе ве 25 30 хх В пк МО В й лю В З Пе ди Ж ня и Са ся Се Піх Ту УЖ Аве Сів АЛЕ рт Сб Гуз Сх ер ти То У люд я Я їх 40 45 хо т хр п Ж аж КІ Жах же хо кн ж її я хх Ав УМ Пе То їх Асв Бу ет Ав Ех БИ Тя ліз Абр бек УЩІ - чи гх Та й й нт Шан Те Па ТМ й б лу й Онук й ек Ту Т дез бе іхз су Ат Рре Пи Бе іт Азв плраАсн ет і Ало ТБг вм Ав нт т -х -к і зл 7 З ЗЕ ї Х М т де ЗЖж й як Ми сет М Бар Ж Б ач і З З Тож їх іеп в У яв Зегі вах те Аа Стів йхо І А Уві їх Бут Су; жа й Ж жа Лео ба Пи Ех Тех 128 Бе б Ва ро й ха Аза Ахте Аа то Св Прі ей Уві Но См ія Рре А со Де Тр тк в.

КК жор ТК дн у ВО тот ек ВТ соя Сік ол сту Ті ет Уві Тр ові бе ет Аіа бек 1 птідя их го зе хх фай 115 12 115 Ст ск ШЕ : ЗЕ фея Ми бах її их ух Кк Ки й ік нн ТІ Зег Уві Ре Ро З ев Аа Рез бет ех їв ех ЕНк бек СУ СНУ 1 і1хО і35 14й пе и і и і АзАзіви Сіті і Ахо Бу Ре Рро сів то У ТВ шо ше Ж І ж я Та С ше Те ТВ тя п Сх Бе Уж дек Плов ет СПУ Авт ев ТП сеї Су УВІ Ні ТЕ Ре Рга к-т ба щук Кук Як тут Сн т «ще Ко дх ТІ й АівУш ів ств бе сісівен і егісц екв УМ УВІ Те ча: Ше Мт Кат Жак ЇХ ше ЕВ Тіт бу кл от ех у бот У то бЗегЗегбегрів ву Пи Св біж іт ПебЗп Ас У Асв ятки де Тіт Ки 75 бек Те Я яхт бух т уче Є чн дах Бизіхе Ро зер Азв'ібгуя УМ Або Бук Ап УМ ОТа Бгто ух зе й так т те 7 7 з 215 22а ме лиц» З ха а сля «а па спліт ДІ чвіх» БІЛОК «д1Ж» Напо Зареце «Не Фет Тит ат Тететьх Бон Пчоє Ка Я Сех й За Деу КЗ ЕВ Зег Г Ущ т ев ТБ св Ре Бр бек УКі ех У Аа Рез СУ Св т КЕ З іх сних КВ Я с-еть ї їн Тех Ке У Бщ Ті ліз Аг Не бін Суб ОІУ СЛУ Ас Ахв ев Сх Бегіз ет Уві 2а 25 во шт т, т. т, Кт кн жк пк ік Кл щу кт й ВЕБ по Бут ств іп і хх Ро іх і Аза Ро і без щі УВІ Гук 5 ча 45 Ходи. ся х.

Б Ян лях их ню Вк я Тк.

Хна КК М кі АвхАвр ет Аа Ате Го ех Кох Це Рто С: Ате бе Зах СТУ бег х ж «Тр М ст.

Ж ов т т ті Ка Од Кл жо їх ск Аа ек у яв Пе ів БП во Твбг Ве Зех Ате СНУ СВ Аа СТУ я са да Б УУ ща Кук ТЯ Бе й о й Й и Тех ТК ха Те УК Т зх Кк я ВТ хх У Уа ему іх і Пш їз бе Ужівеа Сі ом Рто їх що 5 116 да й За Бе шт Зла п дощ Бех Пн, Жде де у е дізАзвРгобег у їні ев Ре Рхо Рто бег ет СТІ СВ 1 ев Ста.

дя Я Тех Я БА ли т. ТКА ух т шлак Ля С х мод, те - АвАхвіх АВ іт іви УМ Ста ев Че бе Ахр Ре Тут Ре Су 150 1: 130 хз ту І а оту хе а й МХват Сек Пух СИ Їх да Не Аа і УВА Прі Аів Ав я Зек Ро У Е хе АВ ак ж жу вд з й т Но ЕМ І ее АК ще ЕТ - о Же ж і Жак Я чу ож Лі АТ ЗВЕ Кт Те ТТ Тр Рез бет іх С ЗБК Ази Адм хо Пт іх Аів 5, Ел Зк Си ок р Же див Как Ж рах и. тп Та Коля Лів Вт Как Зегзехт Тл івп зеті ва хто Са Са Мерів ет Ні Аге Бе Яги тт што 153 155 155 а Ж щен як В то Пк З хх Хо пеки КУ дв жов Пов ТО Ки оті иа УВІ ТБ ЕНа ВЕНУ ех ЗБЕ Ма кл ге 18 і З ЩО Ж ж п Ле В жу Кок Аіврт Пе НК Бех ЗІ «а хз ох сла. ІТ сеть ЖЕ що кер тк «вік Нее саиец «Не М сорту вики «ке кетстунійит спи тоитсвух т ї севстхю уж отуку хто Ко спині в кисжсаві с сснсва вра сиес вивів с Стр оте иВо со ши де ди дод сиди шт ШУ МД ши ШЕУ о хни ув Уют пока с уже секти есеї с спря секти се Ен Епос ссКссссп св Кен ссср сю ісеві ссраовав 52 Зоо Ме: Ха се Хан За аку Мис Зх Ми пулу ала пліт лупу піл сваи пив платив ог сспослаза вапосаас свое ВІК всяее ВсшЕсСісва сеазЕеВоас 15 вессрАсСігЕ Бавиесрове яНозссаю вссзсасяся асбоваяаа свсосісняє ОС Чат - чо Чат ато жу о жі ж и тя о к кит, - К со сеструч ств сфе тя сит. м К ще ЄВ стекти де ЗЕ сВЕБТЕЕЕВаС КЕ омиа Ер стідве Ерос песня вся ОЗ ШЕ НВ ВЕ ШБЕШМУ ЗЕБЕ БЕ ї той сту сети стул ь сфитуюи и дути си сет ЯН косарі ссзсснаеви соя осів Е саосс ев спадаревес Я ібесессзсассввоссі веЕствестс сісазрвасіаспссссвм мсЕвівВов СНИ ЕК КЕ ЕНН УНН ЕЖННЯ ВЕК ЕХ ЗОВ 7 ях. - - спиртах КАК сти ихут - сив. -. т: ниж Ектфеут тку КО півксірваз сс есвс сія ссаре пвопівсвов сосМосояво п вбсіеяЕ ОС чат с свити а ж -ко лк Мак лакто Мих ч-о чт туту ус т пе не Келут. Я «сх ке п етери утит ет ут ви УеЕеспуют уч ЖЖ їосбслееве Мін іссісавсярсві: діва шівс осіслеспя сбеессяоо ОБ Мих ах Ша ск см сао я мк ко іш моих сто Кусйовує кл Мокодвинки етики сетйстотт сК сук отве ка саЕВОСТСЯ Кіссоасрі кання вс осв сВас сова са свв швовиИ БО шале ит я кї ВАК КККИВХ МЕТ М У а ЕЕ ати В «ие ДІ стат кал ТЕ» БІ сту ТУ ЛЕ ЖУ З дат случаког «15: Новою заене ел кутики вух я я тку й овухетуттв ст сусла лету тк г Кавепс Масясвасс жостсвен хе нЕс садсвсавас ВЕС яяа же жестйтетитуту пуоврхсу ть нути Ж щи ух йортит скосу тету ; тел вв сексар славсявсі сесаюваво мене сосітанасв ваясисаеея. 1255 ЦЕН» ЕХО ЕНЕР БЕ НЕ ситості тонн класс Веди тори З ЕЕ СИНЕСЄВЕ ПЕК ЦЕЄ Вер ЕВ ЕВ сс СВ СоСаЕВЕСиИ Вам я мік с ель Ко ек, тт «лах й Кк е: я СЯ я то. стосу у пи тк Пскваесві слав се авобастясс вевОЖ са ся сесее ярварсввЕя С ат Маси жк б хо али бої Ж Жах п о т ан а зеукрихдй. пох ; те риівадЕсір ас осла свои Сас свв я ОБО МКК ЕК Е Еш ее МНЕ ше МАМО яспитали ер т пробути, г око тєт сети ит подив ЗА ребвсвасап сс асавісооссвссоспваесс соопомосі гасі 0 ЗБ шейюх пит р тб Хихт -й Матч а аю З-о сеЕСОСЖеЇ Статеві пав сслях Вашросв ас ЕЕ Е і сяде ОМ су кто ку ут, - с ет ях сх полукт пьетки й кт -. зер ктутуя. -х СЕК шкщОошШУ щит дя ше шк ШИ У щш ЩА ХХ шінсаивесп сс сваасяанос наспасоасізсвстоссвзи спос Й БЕН ся ще меди НЕ їх пиужнтя я 5. сток ту Еочутувт хто вки пжулутовя т слу стать ВЕ прссіасяс ст восввіх слаЕвссасасплесіов вот сеаиті свовсвівах ОС о ла ак Мао ле лок бно! ла бат о Хе ча Чак ах о й ; й : щ сих печу мк он тльт р пит пе пу КИ тя МЕ