TWI908142B - Nectin-4抗體及抗體藥物結合物 - Google Patents

Abstract

本發明提供nectin-4抗體藥物結合物及其醫藥組合物，以及供治療癌症之使用方法。

Description

NECTIN-4抗體及抗體藥物結合物

本發明係關於醫學領域。更特定言之，本發明係關於nectin-4抗體藥物結合物及其醫藥組合物，以及其在治療癌症中之用途。

Nectin-4為Ca2+非依賴性免疫球蛋白樣細胞黏附分子之nectin家族之成員。與nectin家族中之其他成員不同，nectin-4在健康組織中之表現主要為胎盤或胚胎，但在若干種腫瘤類型中過度表現，該等腫瘤類型包括尿道上皮癌、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰臟癌及卵巢癌。研究已將高nectin-4表現與若干種癌症類型之腫瘤發生聯繫起來。

用作腫瘤學治療之抗體藥物結合物(ADC)含有腫瘤靶向抗體，該抗體與設計成一旦進入腫瘤細胞即可殺死細胞之有效負載結合。某些nectin-4抗體已用於產生具有MMAE有效負載(WO201247724)及某些喜樹鹼(camptothecin)類似物(WO2022112356及WO2021151984)之ADC。

用於腫瘤學之ADC為設計起來極具挑戰性的化合物，因為必須平衡分子之多個態樣，包括對腫瘤標靶而非健康細胞之足夠特異性、在維持對旁觀者腫瘤細胞之所需活性的同時毒性可接受，以及允許細胞內遞送且仍維持良好的物理及化學穩定性之易變有效負載。

仍需要用於治療癌症之nectin-4 ADC。特定言之，需要具有基於更佳的耐受性及/或更佳的功效的足夠治療指數之nectin-4 ADC，以支持足夠高的劑量來有效殺死腫瘤細胞且亦為患者可耐受的。特定言之，仍需要具有效應子剔除式抗體及拓樸異構酶I有效負載之nectin-4 ADC。特定言之，仍需要具有增強的針對nectin-4低水平腫瘤之旁觀者活性同時允許較低劑量之nectin-4 ADC。特定言之，仍需要避免或允許更佳地管理在某些nectin-4 ADC中所見之皮膚學事件的nectin-4 ADC。特定言之，仍需要避免在某些nectin-4 ADC中所見之眼部及/或周邊神經病變信號的nectin-4 ADC。特定言之，仍需要具有低免疫原性、穩定的活體內藥物動力學及足夠的化學及物理穩定性之nectin-4 ADC。另外，仍需要具有以下特徵中之一或多者的nectin-4 ADC：展現出在某些腫瘤模型中所量測之更佳的抗腫瘤活性、對nectin-4低水平腫瘤之旁觀者活性增強、免疫原性較低、無可量測的抗體效應子功能及/或更佳的物理及化學穩定性。本文所提供之ADC解決此等需求中之一或多者。

本文提供某些nectin-4 ADC及包含nectin-4 ADC之組合物。本文亦提供將nectin-4 ADC或包含nectin-4 ADC之組合物用於個體之癌症的方法。

在一個態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中HCVR包含重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2及HCDR3，且LCVR包含輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中 a) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 4，該HCDR2包含SEQ ID NO: 5，該HCDR3包含SEQ ID NO: 6，該LCDR1包含SEQ ID NO: 7，該LCDR2包含SEQ ID NO: 8，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 9； b) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 18，該HCDR2包含SEQ ID NO: 19，該HCDR3包含SEQ ID NO: 20，該LCDR1包含SEQ ID NO: 21，該LCDR2包含SEQ ID NO: 22，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 23； c) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 28，該HCDR2包含SEQ ID NO: 29，該HCDR3包含SEQ ID NO: 30，該LCDR1包含SEQ ID NO: 31，該LCDR2包含SEQ ID NO: 32，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 33； d) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 38，該HCDR2包含SEQ ID NO: 39，該HCDR3包含SEQ ID NO: 40，該LCDR1包含SEQ ID NO: 41，該LCDR2包含SEQ ID NO: 42，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 43； e) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 48，該HCDR2包含SEQ ID NO: 49，該HCDR3包含SEQ ID NO: 50，該LCDR1包含SEQ ID NO: 41，該LCDR2包含SEQ ID NO: 42，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 51； f) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 56，該HCDR2包含SEQ ID NO: 57，該HCDR3包含SEQ ID NO: 58，該LCDR1包含SEQ ID NO: 59，該LCDR2包含SEQ ID NO: 60，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 61； g) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 66，該HCDR2包含SEQ ID NO: 67，該HCDR3包含SEQ ID NO: 68，該LCDR1包含SEQ ID NO: 69，該LCDR2包含SEQ ID NO: 70，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 71；或 h) 該HCDR1包含SEQ ID NO: 76，該HCDR2包含SEQ ID NO: 77，該HCDR3包含SEQ ID NO: 78，該LCDR1包含SEQ ID NO: 69，該LCDR2包含SEQ ID NO: 70，且該LCDR3包含SEQ ID NO: 79。

在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中 a) 該HCVR包含SEQ ID NO: 10，且該LCVR包含SEQ ID NO: 11； b) 該HCVR包含SEQ ID NO: 14，且該LCVR包含SEQ ID NO: 15； c) 該HCVR包含SEQ ID NO: 24，且該LCVR包含SEQ ID NO: 25； d) 該HCVR包含SEQ ID NO: 34，且該LCVR包含SEQ ID NO: 35； e) 該HCVR包含SEQ ID NO: 44，且該LCVR包含SEQ ID NO: 45； f) 該HCVR包含SEQ ID NO: 52，且該LCVR包含SEQ ID NO: 53； g) 該HCVR包含SEQ ID NO: 62，且該LCVR包含SEQ ID NO: 63； h) 該HCVR包含SEQ ID NO: 72，且該LCVR包含SEQ ID NO: 73；或 i) 該HCVR包含SEQ ID NO: 80，且該LCVR包含SEQ ID NO: 81。

在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中： a) 該HC包含SEQ ID NO: 2之胺基酸2-444，且該LC包含SEQ ID NO: 3之胺基酸2-215； b) 該HC包含SEQ ID NO: 12之胺基酸2-444，且該LC包含SEQ ID NO: 13之胺基酸2-215； c) 該HC包含SEQ ID NO: 16之胺基酸2-443，且該LC係由SEQ ID NO: 17組成； d) 該HC包含SEQ ID NO: 26之胺基酸2-447，且該LC係由SEQ ID NO: 27組成； e) 該HC包含SEQ ID NO: 36之胺基酸2-446，且該LC係由SEQ ID NO: 37組成； f) 該HC包含SEQ ID NO: 46之胺基酸2-446，且該LC係由SEQ ID NO: 47組成； g) 該HC包含SEQ ID NO: 54之胺基酸2-446，且該LC係由SEQ ID NO: 55組成； h) 該HC包含SEQ ID NO: 64之胺基酸2-450，且該LC包含SEQ ID NO: 65之胺基酸2-216；或 i) 該HC包含SEQ ID NO: 74之胺基酸2-450，且該LC包含SEQ ID NO: 75之胺基酸2-216。

在另一態樣中，本文提供一種抗體藥物結合物(ADC)，其包含本文所揭示之nectin-4抗體，該抗體直接或透過連接子與細胞毒性劑結合。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中細胞毒性劑為包含下式之喜樹鹼類似物：X-Y，其中： Y具有下式： 且X為*-CH₂O-、*-(CH₂)₂O-、*-(CH₂)₃O-、*-(CH₂)₄O-、*-CH₂NH-、*-(CH₂)₂NH-、*-(CH₂)₃NH-、*-(CH₂)₄NH-、*-CH₂N(CH₃)-、*-(CH₂)₂N(CH₃)-、*-(CH₂)₃N(CH₃)-、*-(CH₂)₄N(CH₃)-、*-CH₂N(R¹)-、*-(CH₂)₂N(R¹)-、*-(CH₂)₃N(R¹)-、*-(CH₂)₄N(R¹)-、*-CH₂N(CH₃)C(=O)CH₂O-、*-CH₂N(CH₂R¹)C(=O)CH₂O-、*-CH₂NHC(=O)CH₂O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₂O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₃O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₄O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₅O-、*-CH₂NHC(=O)CH₂-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₂-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₃-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₄-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₅-、*-CH₂SCH₂-、*-CH₂S(CH₂)₂-、*-CH₂S(CH₂)₃-、*-CH₂S(CH₂)₄-或*-CH₂S(CH₂)₅-；其中*為共價連接至Y之位點，且R¹為苯基。

在另一態樣中，本文提供一種下式之抗體藥物結合物(ADC)： 其中：Ab為本文所揭示之nectin-4抗體，且n為約1至約16。

在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之nectin-4抗體及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之nectin-4 ADC及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。

在另一態樣中，本文提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本文所揭示之nectin-4 ADC。在另一態樣中，本文提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本文所揭示之nectin-4 ADC，其中該癌症為尿道上皮癌、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰臟癌、頭頸癌、卵巢癌或前列腺癌。

本申請案根據35 U.S.C. §119(e)主張2023年6月20日申請之美國臨時申請案序列號63/509,077之權益；其揭示內容以引用之方式併入本文中。 序列表之引用

本申請案與ST.26 XML格式之序列表一起提交。序列表以創建於2024年5月03日之標題為「30650_WO」的檔案形式提供，且大小為120千位元組。ST.26 XML格式之序列表資訊係以全文引用之方式併入本文中。

Nectin-4  

如本文所用，「人類nectin-4」係指人類nectin-4蛋白或多肽，亦稱為脊髓灰白質炎病毒受體相關4、Ig超家族受體LNIR或脊髓灰白質炎病毒受體相關蛋白4 (PVRL4)。人類nectin-4之胺基酸序列可在NP_112178.2處找到，包括如SEQ ID NO: 1中所提供之信號肽。

Nectin - 4 抗體 ( 亦稱為抗 nectin - 4 抗體 )

如本文所用，術語「抗體」係指結合抗原之免疫球蛋白分子。抗體可具有任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA)及任何子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。

本發明之例示性抗體為包含以下四條多肽鏈之免疫球蛋白G (IgG)型抗體：經鏈間二硫鍵交聯之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)。四條多肽鏈中之各者之胺基端部分包括具有約100至125個或更多個胺基酸之主要負責抗原識別的可變區。四條多肽鏈中之各者之羧基端部分含有主要負責效應子功能之恆定區。各重鏈包含重鏈可變區(VH，亦稱為HCVR)及重鏈恆定區。各輕鏈包含輕鏈可變區(VL，亦稱為LCVR)及輕鏈恆定區。IgG同型可進一步分為子類(例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)。

VH及VL區可進一步細分為稱為互補決定區(CDR)之高變區，其間穿插有稱為構架區(FR)之更保守的區。CDR暴露於蛋白質之表面上且為抗體之抗原結合特異性的重要區。各VH及VL係由自胺基端至羧基端按以下次序排列之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中，重鏈之三個CDR稱為「HCDR1、HCDR2及HCDR3」且輕鏈之三個CDR稱為「LCDR1、LCDR2及LCDR3」。CDR含有與抗原形成特異性相互作用之大部分殘基。將胺基酸殘基分配至CDR可根據熟知的流程進行，包括描述於以下中之流程：Kabat (Kabat等人, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))、Chothia (Chothia等人, 「Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins」, Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987)；Al-Lazikani等人, 「Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins」, Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997))、North (North等人, 「A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations」, Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011))，或IMGT (可在www.imgt.org獲取之國際免疫遺傳學資料庫(international ImMunoGeneTics database)；參見Lefranc等人, Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212)。本發明之CDR係藉由North來確定。

本文所描述之某些抗體含有IgG1 Fc區或衍生自人類IgG1之Fc區，例如具有改變的Fc效應子功能之經修飾之IgG1 Fc區。已知IgG1誘導抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。本發明之一些抗體具有引入IgG1 Fc區中之改變效應子功能的胺基酸取代。根據本文所揭示之一些內容，在Fc區中在位置234及235處引入突變(根據EU索引編號)。根據本文所揭示之一些內容，在Fc區中在位置234、235及265處引入突變(根據EU索引編號)。在一些態樣中，本發明之nectin-4抗體包含經修飾之人類IgG1 Fc區，該經修飾之人類IgG1 Fc區包含殘基234及235處之丙胺酸，及位置265處之絲胺酸(根據EU索引編號，亦稱為hIgG1效應子剔除或hIgG1EN Fc區)。在其他態樣中，一些抗體具有Fc區中之其他突變，包括位置297處之麩醯胺酸、丙胺酸或甘胺酸，位置322處之丙胺酸或麩醯胺酸，位置329處之丙胺酸或甘胺酸及/或位置331處之丙胺酸或絲胺酸(根據EU索引編號)。在一些態樣中，此等抗體突變為位置234處之丙胺酸、位置235處之麩胺酸、位置237處之丙胺酸、位置330處之絲胺酸及位置331處之絲胺酸(根據EU索引編號)。在其他態樣中，引入IgG1 Fc區中之此等胺基酸取代降低或消除可量測的抗體效應子功能。

在本發明之某些態樣中，nectin-4抗體具有包含一或多個經工程改造之半胱胺酸殘基的經修飾之人類IgG1或人類IgG4恆定域。在其他態樣中，抗體在重鏈恆定域1 (CH1)、重鏈恆定域2 (CH2)及/或重鏈恆定域3 (CH3)內之一或多個位點中包含經工程改造之半胱胺酸。

抗體之哺乳動物表現通常導致醣基化。抗體之醣基化典型地為N-連接或O-連接的。N連接之醣基化係指碳水化合物部分與天冬醯胺酸殘基之側鏈之連接。O連接之醣基化係指例如N-乙醯半乳胺糖、半乳糖或木糖之糖與羥胺基酸之連接。通常，醣基化發生在抗體之Fc區中極度保守之N-醣基化位點(例如根據IMGT或EU索引編號，IgG1中之位置297)。可修飾醣基化位點以改變醣基化(例如阻斷或減少醣基化或改變胺基酸序列以產生額外或多樣化的醣基化)。

哺乳動物表現IgG子類之抗體可導致一或兩條重鏈之C端胺基酸剪斷；舉例而言，對於IgG1抗體，可移除一或兩個C端胺基酸。對於IgG1抗體，若存在C端離胺酸，則其在表現期間可自重鏈截斷或剪斷。另外，次末端的甘胺酸亦可自重鏈截斷或剪斷。

哺乳動物抗體之表現亦可導致N端胺基酸之修飾。舉例而言，當重鏈或輕鏈之最N端胺基酸為麩醯胺酸或麩胺酸時，其可被修飾為焦麩胺酸。舉例而言，當重鏈或輕鏈之最C端胺基酸為離胺酸或甘胺酸時，可將其移除。

如本文中可互換地使用，術語「核酸」或「聚核苷酸」係指併入有天然核苷酸、經修飾之核苷酸及/或核苷酸類似物的核苷酸之聚合物，包括單股及/或雙股含核苷酸之分子，諸如DNA、cDNA及RNA分子。本發明之聚核苷酸亦可包括例如藉由DNA或RNA聚合酶或合成反應併入其中之受質。

本發明之聚核苷酸可在宿主細胞中表現，例如在聚核苷酸已可操作地連接至表現控制序列之後。能夠表現與其可操作地連接之聚核苷酸的表現控制序列為此項技術中所熟知。舉例而言，表現載體可包括編碼一或多個信號肽之序列，該一或多個信號肽促進一或多個多肽自宿主細胞分泌。舉例而言，信號肽可為免疫球蛋白信號肽或異源信號肽。含有所關注之聚核苷酸(例如編碼抗體之多肽的聚核苷酸)的表現載體可藉由熟知方法轉移至宿主細胞中。另外，表現載體可含有一或多個選擇標記，例如四環素、新黴素及二氫葉酸還原酶，以幫助偵測經所需聚核苷酸序列轉型之宿主細胞。

宿主細胞包括經表現本發明之抗體之全部或一部分的一或多種表現載體穩定地或短暫地轉染、轉型、轉導或感染的細胞。根據一些實施例，宿主細胞可經表現本發明之抗體之HC多肽的表現載體及表現本發明之抗體之LC多肽的表現載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本發明之抗體之HC及LC多肽的表現載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染。本發明之抗體可根據此項技術中熟知之技術在哺乳動物細胞(諸如CHO、NS0、HEK293或COS細胞)中產生。

已分泌本發明之抗體的培養基可藉由諸如離子交換及疏水性相互作用層析之混合模式方法的習知技術純化。舉例而言，可使用習知方法將培養基施加至蛋白A或G管柱且自其溶離；亦可使用離子交換及疏水性相互作用層析之混合模式方法。可藉由常見技術，包括尺寸排阻、疏水性相互作用、離子交換或羥基磷灰石層析有效移除可溶聚集體及多聚體。產物可立即冷凍，例如在-70℃下冷藏，或可凍乾。可採用各種蛋白質純化方法，且此類方法為此項技術中已知的且描述於例如Deutscher, Method in Enzymology 182:83-89 (1990)及Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 第3版, Springer, NY (1994)中。

在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中HCVR包含重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2及HCDR3，且LCVR包含輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 4，HCDR2包含SEQ ID NO: 5，HCDR3包含SEQ ID NO: 6，LCDR1包含SEQ ID NO: 7，LCDR2包含SEQ ID NO: 8，且LCDR3包含SEQ ID NO: 9。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 18，HCDR2包含SEQ ID NO: 19，HCDR3包含SEQ ID NO: 20，LCDR1包含SEQ ID NO: 21，LCDR2包含SEQ ID NO: 22，且LCDR3包含SEQ ID NO: 23。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 28，HCDR2包含SEQ ID NO: 29，HCDR3包含SEQ ID NO: 30，LCDR1包含SEQ ID NO: 31，LCDR2包含SEQ ID NO: 32，且LCDR3包含SEQ ID NO: 33。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 38，HCDR2包含SEQ ID NO: 39，HCDR3包含SEQ ID NO: 40，LCDR1包含SEQ ID NO: 41，LCDR2包含SEQ ID NO: 42，且LCDR3包含SEQ ID NO: 43。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 48，HCDR2包含SEQ ID NO: 49，HCDR3包含SEQ ID NO: 50，LCDR1包含SEQ ID NO: 41，LCDR2包含SEQ ID NO:42，且LCDR3包含SEQ ID NO: 51。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 56，HCDR2包含SEQ ID NO: 57，HCDR3包含SEQ ID NO: 58，LCDR1包含SEQ ID NO: 59，LCDR2包含SEQ ID NO: 60，且LCDR3包含SEQ ID NO: 61。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 66，HCDR2包含SEQ ID NO: 67，HCDR3包含SEQ ID NO: 68，LCDR1包含SEQ ID NO: 69，LCDR2包含SEQ ID NO: 70，且LCDR3包含SEQ ID NO: 71。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 76，HCDR2包含SEQ ID NO: 77，HCDR3包含SEQ ID NO: 78，LCDR1包含SEQ ID NO: 69，LCDR2包含SEQ ID NO: 70，且LCDR3包含SEQ ID NO: 79。

在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 10之HCVR及包含SEQ ID NO: 11之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 14之HCVR及包含SEQ ID NO: 15之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之HCVR及包含SEQ ID NO: 25之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 34之HCVR及包含SEQ ID NO: 35之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 44之HCVR及包含SEQ ID NO: 45之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 52之HCVR及包含SEQ ID NO: 53之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 62之HCVR及包含SEQ ID NO: 63之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 72之HCVR及包含SEQ ID NO: 73之LCVR。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 80之HCVR及包含SEQ ID NO: 81之LCVR。

在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，且其中該抗體具有人類IgG1或IgG4同型。在另一態樣中，其中該抗體具有人類IgG1同型。在另一態樣中，其中該抗體包含殘基234及235處之丙胺酸(根據EU索引編號)。在另一態樣中，其中該抗體進一步包含位置265處之絲胺酸(根據EU索引編號)。在另一態樣中，其中該抗體具有人類IgG4同型。

在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 2之胺基酸2-444，且LC包含SEQ ID NO: 3之胺基酸2-215。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 12之胺基酸2-444，且LC包含SEQ ID NO: 13之胺基酸2-215。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 16之胺基酸2-443，且LC係由SEQ ID NO: 17組成。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 26之胺基酸2-447，且LC係由SEQ ID NO: 27組成。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 36之胺基酸2-446，且LC係由SEQ ID NO: 37組成。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 46之胺基酸2-446，且LC係由SEQ ID NO: 47組成。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 54之胺基酸2-446，且LC係由SEQ ID NO: 55組成。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 64之胺基酸2-450，且LC包含SEQ ID NO: 65之胺基酸2-216。在一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 74之胺基酸2-450，且LC包含SEQ ID NO: 75之胺基酸2-216。

在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 2組成，且LC係由SEQ ID NO: 3組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 12組成，且LC係由SEQ ID NO: 13組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 16組成，且LC係由SEQ ID NO: 17組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 26組成，且LC係由SEQ ID NO: 27組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 36組成，且LC係由SEQ ID NO: 37組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 46組成，且LC係由SEQ ID NO: 47組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 54組成，且LC係由SEQ ID NO: 55組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 64組成，且LC係由SEQ ID NO: 65組成。在另一態樣中，本文提供一種結合人類nectin-4之抗體，其中HC係由SEQ ID NO: 74組成，且LC係由SEQ ID NO:75組成。

在另一態樣中，本文提供不同的哺乳動物細胞，其包含DNA分子，該DNA分子包含編碼具有以下之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸序列：SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 36及SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 46及SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 54及SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 64及SEQ ID NO: 65或SEQ ID NO: 74及SEQ ID NO: 75，其中細胞能夠表現本文所揭示之nectin-4抗體。

在另一態樣中，本文提供包含第一DNA分子及第二DNA分子之哺乳動物細胞，其中第一DNA分子包含編碼具有如下胺基酸序列之多肽的聚核苷酸序列，且其中第二DNA分子包含編碼具有如下胺基酸序列之多肽的聚核苷酸序列，其中細胞能夠表現本文所揭示之nectin-4抗體： 第一 DNA 編碼多肽    第二 DNA 編碼多肽SEQ ID NO: 2          SEQ ID NO: 3， SEQ ID NO: 12        SEQ ID NO: 13， SEQ ID NO: 16        SEQ ID NO: 17， SEQ ID NO: 26        SEQ ID NO: 27， SEQ ID NO: 36        SEQ ID NO: 37， SEQ ID NO: 46        SEQ ID NO: 47， SEQ ID NO: 54        SEQ ID NO: 55， SEQ ID NO: 64        SEQ ID NO: 65，或 SEQ ID NO: 74        SEQ ID NO: 75。

在另一態樣中，本文提供一種用於產生nectin-4抗體之方法，其包含在使得抗體被表現之條件下培養本文所揭示之哺乳動物細胞中之一者，及回收經表現之抗體。

在另一態樣中，本文提供一種抗體，其藉由在使得抗體被表現之條件下培養包含DNA分子之哺乳動物細胞，及回收經表現之抗體產生，該DNA分子包含編碼具有以下之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸序列：SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 36及SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 46及SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 54及SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 64及SEQ ID NO: 65或SEQ ID NO: 74及SEQ ID NO: 75。

在另一態樣中，本文提供一種抗體，其藉由在使得抗體被表現之條件下培養包含第一DNA分子及第二DNA分子之哺乳動物細胞，及回收經表現之抗體產生，其中第一DNA分子包含編碼具有以下胺基酸序列之多肽的聚核苷酸序列，且其中第二DNA分子包含編碼具有如下胺基酸序列之多肽的聚核苷酸序列： 第一 DNA 編碼多肽     第二 DNA 編碼多肽SEQ ID NO: 2           SEQ ID NO: 3， SEQ ID NO: 12          SEQ ID NO: 13， SEQ ID NO: 16          SEQ ID NO: 17， SEQ ID NO: 26          SEQ ID NO: 27， SEQ ID NO: 36          SEQ ID NO: 37， SEQ ID NO: 46          SEQ ID NO: 47， SEQ ID NO: 54          SEQ ID NO: 55， SEQ ID NO: 64          SEQ ID NO: 65，或 SEQ ID NO: 74          SEQ ID NO: 75。

如本文所用，術語「恩弗妥單抗(enfortumab)」係指使用標準條件表現及純化之完全人類抗nectin-4 IgG1κ單株抗體，其序列如WO2012047724之圖3A及圖3B中所揭示。

有效負載

本發明之Nectin-4抗體可與各種有效負載(包括其醫藥學上可接受之鹽)結合以形成抗體藥物結合物(ADC)。適用於與本文所揭示之nectin-4抗體結合的部分包括細胞毒性劑(例如化學治療劑)、前藥轉化酶、放射性同位素或化合物、毒素及此項技術中之其他已知有效負載。

本文中之例示性ADC利用基於喜樹鹼之有效負載(例如喜樹鹼類似物)。喜樹鹼為已展示具有抗癌活性之拓樸異構酶I (TOPO 1)抑制劑。喜樹鹼及其衍生物與TOPO 1/DNA複合物結合，此防止重退火，從而導致細胞由於部分裂解之DNA之積聚而死亡。此項技術中已知的其他拓樸異構酶I抑制劑可用作有效負載，諸如SN-38及DXd。

本文所描述之ADC之其他有效負載為類美登素(maytansinoid) (例如DM1及DM4)、吡咯并苯并二氮呯(例如PBD二聚體)、奧瑞他汀肽(auristatin peptide) (例如MMAE及MMAF)、倍癌黴素(duocarmycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、DNA小溝結合物(例如烯二炔及萊克托星(lexitropsin))及紫杉烷(taxane) (例如紫杉醇(paclitaxel)及多西他賽(docetaxel))。

在一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含下式：X-Y，其中： Y具有式I： ； 且其中， R¹為F、CH₃或CF₃； R²為H、F、OR³、SR³、S(O)R⁴、-S(O)₂R⁴、C₁-C₆烷基或C₁-C₆氟烷基；或R¹及R²與其所連接之碳原子一起形成亞甲二氧基或二氟亞甲二氧基環； R³為H或C₁-C₆烷基； R⁴為C₁-C₆烷基；且 X為A-B之式 且其中， B不存在、為-(C₁-C₆伸烷基)-、-(C₁-C₆伸烷基)-X¹-(C₁-C₆伸烷基)-、-X¹'-(C₁-C₆伸烷基)-*或-(C₁-C₆伸烷基)-X¹-L²-*；其中*為共價連接至A之位點； X¹為-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-、-C(-O)-、-NR⁵-、-NR⁵C(-O)-或-C(-O)NR⁵-； 各R⁵獨立地為-H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₃-C₆環烷基、芳基、雜芳基或苯甲基； X¹'為-O-、-S-、-S(O)-或-S(O)₂-； L²為伸苯基； A為-H或-X²； X²為OR⁶、SR⁶、S(O)R⁶、S(O)₂R⁶、SSR⁶或N(R⁶)₂； 各R⁶獨立地為H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₃-C₆環烷基、芳基、雜芳基或苯甲基； B及L²各自獨立地視情況經1至4個選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OR⁷、-SR⁷、-N(R⁷)₂、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₁-C₆雜烷基、C₃-C₆環烷基、C₂-C₁₀雜環烷基、芳基或雜芳基；且 各R⁷獨立地為H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₃-C₆環烷基、芳基、雜芳基或苯甲基； 其限制條件為若R¹為F，則B為-(C₁-C₆伸烷基)-、(C₁-C₆伸烷基)-X¹-(C₁-C₆伸烷基)-、-X¹'-(C₁-C₆伸烷基)-*或-(C₁-C₆伸烷基)-X¹-L²-*；其中*為共價連接至A之位點；且A為-X²；且其限制條件為若R¹為F且R²為-OMe，則-B-A不可為-NH₂。

在一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含下式：X-Y，其中： Y具有式I： ； 且其中， R¹為F、CH₃或CF₃； R²為H、F、OR³、SR³、S(O)R⁴、-S(O)₂R⁴、C₁-C₆烷基或C₁-C₆氟烷基；或R¹及R²與其所連接之碳原子一起形成亞甲二氧基或二氟亞甲二氧基環； R³為H或C₁-C₆烷基； R⁴為C₁-C₆烷基；且 X為*-CH₂O-、*-(CH₂)₂O-、*-(CH₂)₃O-、*-(CH₂)₄O-、*-CH₂NH-、*-(CH₂)₂NH-、*-(CH₂)₃NH-、*-(CH₂)₄NH-、*-CH₂N(CH₃)-、*-(CH₂)₂N(CH₃)-、*-(CH₂)₃N(CH₃)-、*-(CH₂)₄N(CH₃)-、*-CH₂N(R⁵)-、*-(CH₂)₂N(R⁵)-、*-(CH₂)₃N(R⁵)-、*-(CH₂)₄N(R⁵)-、*-CH₂N(CH₃)C(=O)CH₂O-、*-CH₂N(CH₂R⁵)C(=O)CH₂O-、*-CH₂NHC(=O)CH₂O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₂O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₃O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₄O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₅O-、*-CH₂NHC(=O)CH₂-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₂-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₃-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₄-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₅-、*-CH₂SCH₂-、*-CH₂S(CH₂)₂-、*-CH₂S(CH₂)₃-、*-CH₂S(CH₂)₄-或*-CH₂S(CH₂)₅-；其中*為共價連接至Y之位點，且R⁵為苯基。

在一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含下式：X-Y，其中： Y具有式II： 且X為*-CH₂O-、*-(CH₂)₂O-、*-(CH₂)₃O-、*-(CH₂)₄O-、*-CH₂NH-、*-(CH₂)₂NH-、*-(CH₂)₃NH-、*-(CH₂)₄NH-、*-CH₂N(CH₃)-、*-(CH₂)₂N(CH₃)-、*-(CH₂)₃N(CH₃)-、*-(CH₂)₄N(CH₃)-、*-CH₂N(R¹)-、*-(CH₂)₂N(R¹)-、*-(CH₂)₃N(R¹)-、*-(CH₂)₄N(R¹)-、*-CH₂N(CH₃)C(=O)CH₂O-、*-CH₂N(R¹)C(=O)CH₂O-、*-CH₂NHC(=O)CH₂O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₂O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₃O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₄O-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₅O-、*-CH₂NHC(=O)CH₂-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₂-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₃-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₄-、*-CH₂NHC(=O)(CH₂)₅-、*-CH₂SCH₂-、*-CH₂S(CH₂)₂-、*-CH₂S(CH₂)₃-、*-CH₂S(CH₂)₄-或*-CH₂S(CH₂)₅-；其中*為共價連接至Y之位點，且R¹為苯甲基。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含下式中之任一者： 。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含式III：

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含式IV：

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含式V：

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含式VI：

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中喜樹鹼類似物包含式VII：

自分解型單元

ADC之一部分之自分解或自我移除可設計成ADC之全域結構。自分解通常涉及活化觸發基團，且隨後化學及/或生物反應導致基團本身(自分解單元)之自發消除。自分解型單元可向ADC提供積極的屬性，諸如提供空間以減少細胞蛋白酶到達ADC中之肽裂解位點的位阻。

在本發明之一些態樣中，本文所描述之ADC含有自分解型單元。當存在時，自分解型單元位於ADC上連接子之肽單元之後，且因此在蛋白酶裂解ADC之肽單元之後，觸發基團會暴露出來。在其他態樣中，自分解型單元為-NH-CH₂-基團、對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、鄰胺基苯甲基碳酸酯(OABC)或此項技術中已知之其他自分解型單元。

在本發明之一些態樣中，本文所描述之ADC不含自分解型單元。在此等態樣中，來自本文所描述之喜樹鹼類似物之末端胺直接與肽單元連接。

連接子

如本文所揭示，有效負載可藉由熟習此項技術者所理解之方法與nectin-4抗體結合以形成本文所描述之nectin-4 ADC。此類結合之一個實例將包括經由連接子將本文所描述之有效負載連接至本文所描述之nectin-4抗體。

用於ADC之連接子經設計成在血漿中具有穩定性，以便ADC有時間定位至標靶細胞。過早釋放有效負載會損害所有類型之非靶向組織，從而降低ADC之治療指數。當ADC內化至標靶細胞中時，則連接子應提供一種釋放有效負載之機制，使得有效負載可按設計起作用。

熟習此項技術者已知之連接子含有例如可裂解部分及不可裂解部分。因此，本文提供ADC，其中有效負載(例如喜樹鹼類似物)經由具有可裂解部分之連接子與抗體結合，或經由具有不可裂解部分之連接子與抗體結合。

此項技術中已知的任何適合連接子均可用於製備本發明之ADC。在某些態樣中，連接子包含能夠與本發明之抗體及藥物或細胞毒性劑結合之反應性基團。實例包括(但不限於) N-丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-l-甲酸酯(SMCC)、V-丁二醯亞胺基-4-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸酯(SIAB)、雙-順丁烯二醯亞胺基聚乙二醇(BMPEO)、BM(PEO)₂、BM(PEO)₃、N-(b-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)丁二醯亞胺酯(BMPS)、g-順丁烯二醯亞胺基丁酸N-丁二醯亞胺基酯(GMBS)、e-順丁烯二醯亞胺基己酸N-羥基丁二醯亞胺酯(EMCS)、5-順丁烯二醯亞胺基戊酸NHS、HBVS、N-丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-l-羧基-(6-醯胺基己酸酯)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸醯肼或HC1鹽(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸N-丁二醯亞胺酯(SIA)、k-順丁烯二醯亞胺基十一酸N-丁二醯亞胺基酯(KMUA)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸N-丁二醯亞胺酯(SMPB)、丁二醯亞胺基-6-(-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯(SMPH)、丁二醯亞胺基-(4-乙烯磺醯基)苯甲酸酯(SVSB)、二硫代雙-順丁烯二醯亞胺基乙烷(DTME)、l,4-雙-順丁烯二醯亞胺基丁烷(BMB)、l,4-雙順丁烯二醯亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙-順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、雙-順丁烯二醯亞胺基乙烷(BMOE)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基-甲基)環己烷-l-甲酸磺酸基丁二醯亞胺酯(磺酸基-SMCC)、磺酸基丁二醯亞胺基(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸酯(磺酸基-SIAB)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基磺酸基丁二醯亞胺酯(磺酸基-MBS)、N-(y-順丁烯二醯亞胺基丁氧基)磺酸基丁二醯亞胺酯(磺酸基-GMBS或sGMBS)、N-(e-順丁烯二醯亞胺基己酸)磺酸基丁二醯亞胺基酯(磺酸基-EMCS)、N-(K-順丁烯二醯亞胺基十一醯氧基)磺酸基丁二醯亞胺酯(磺酸基-KMUS)及4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸磺酸基丁二醯亞胺酯(磺酸基-SMPB)、丁二醯亞胺基6-肼基菸鹼醯胺丙酮腙(SANH)、4-醯肼基對苯二甲酸丁二醯亞胺酯鹽酸鹽(SHTH)、丁二醯亞胺基菸鹼酸肼鎓鹽酸鹽(SHNH)、丁二醯亞胺基-對甲醯基苯甲酸酯(SFB)及丁二醯亞胺基-對甲醯基苯氧基乙酸酯(SFPA)、V-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、V-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)戊酸酯(SPP)、N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)及V-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)2-磺酸基丁酸酯(磺酸基-SPDB)。

在本發明之某些態樣中，ADC包含可裂解連接子。此項技術中已知在連接子中使用不同的機制來釋放藥物或細胞毒性劑。此等機制包括：(1)利用連接子中將被細胞蛋白酶(例如組織蛋白酶B或β-葡糖醛酸糖苷酶)裂解之蛋白酶裂解位點，(2)使用溶酶體之較低pH引起連接子中酸不穩定單元之水解，或(3)利用細胞內較高水平之麩胱甘肽來還原連接子中之二硫橋鍵。

在本發明之一些態樣中，ADC包含連接子，該連接子包含提供蛋白酶裂解位點之肽單元。在一些態樣中，肽單元為-Gly-Gly-Gly-、-Ala-Val-、-Val-Ala-、-Val-Cit-、-Val-Lys-、-Lys-Val-、-Phe-Lys-、-Lys-Phe-、-Lys-Lys-、-Ala-Lys-、-Lys-Ala-、-Phe-Cit-、-Cit-Phe、-Leu-Cit-、-Cit-Leu-、-Ile-Cit-、-Phe-Ala-、-Ala-Phe-、-Phe-Phe-Lys-、-Lys-Phe-Phe-、-Gly-Phe-Lys-、-Lys-Phe-Gly-、-Leu-Ala-Leu-、-Ile-Ala-Leu-、-Leu-Ala-Ile-、-Val-Ala-Val-、-Ala-Leu-Ala-Leu- (SEQ ID NO: 100)、-Leu-Ala-Leu-Ala- (SEQ ID NO: 101)、-Gly-Phe-Leu-Gly- (SEQ ID NO: 103)、-Gly-Leu-Phe-Gly- (SEQ ID NO: 104)、-Val-Arg-、-Arg-Val-、-Arg-Arg-、-Ala-Ala-、-Ala-Met-、-Met-Ala-、-Thr-Thr-、-Thr-Met-、-Met-Thr-、-Leu-Ala-、-Ala-Leu-、-Cit-Val-、-Gln-Val-、-Val-Gln-、-Ser-Val-、-Val-Ser-、-Ser-Ala-、-Ser-Gly-、-Ala-Ser-、-Gly-Ser-、-Leu-Gln-、-Gln-Leu-、-Phe-Arg-、-Arg-Phe-、-Tyr-Arg-、-Arg-Tyr-、-Phe-Gln-、-Gln-Phe-、-Val-Thr-、-Thr-Val-、-Met-Tyr-、-Tyr-Met-、-Ala-Ala-、-Ala-Ala-Ala-、-Ala-Ala-Ala-Ala- (SEQ ID NO: 105)、-Gly-Ala-Gly-Gly- (SEQ ID NO: 106)、-Gly-Gly-Ala-Gly- (SEQ ID NO: 107)、-Gly-Val-Gly-Gly- (SEQ ID NO: 108)、-Gly-Gly-Val-Gly-(SEQ ID NO: 109)、-Gly-Phe-Gly-Gly- (SEQ ID NO: 110)或-Gly-Gly-Phe-Gly- (SEQ ID NO: 102)。瓜胺酸由Cit表示。在本發明之態樣中，肽單元含有L-胺基酸形式之所有天然胺基酸。在其他態樣中，肽單元可包含所有D-胺基酸或L-胺基酸或其中之組合。

在一些態樣中，本文提供一種ADC，其進一步包含將抗體連接至細胞毒性劑之連接子。在另一態樣中，本文提供包含肽單元之連接子。在另一態樣中，本文所提供之肽單元包含Ala-Ala-Ala、Val-Cit或Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO: 102)。在一態樣中，肽單元包含Ala-Ala-Ala。在一態樣中，肽單元包含Val-Cit。在一態樣中，肽單元包含Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO: 102)。在另一態樣中，肽單元含有L-胺基酸形式之所有天然胺基酸。

在本發明之一些態樣中，ADC包含連接子，該連接子包含間隔子單元(本文中稱為間隔子單元A)，該間隔子單元將本文所揭示之抗體之一或多個半胱胺酸連接至本文所描述之肽單元及/或有效負載。此項技術中用於連接至半胱胺酸之一些化學物質包括順丁烯二醯亞胺、丁二醯亞胺或溴乙醯胺化學物質，且可用於本發明之ADC。在本發明之其他態樣中，可使用順丁烯二醯亞胺型間隔子，諸如順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)或環己烷-1-甲酸順丁烯二醯亞胺基甲酯。

在本發明之一些態樣中，本文提供一種ADC，其具有式VIII之間隔子單元A： 其中z為1至5。

在本發明之一些態樣中，本文提供一種ADC，其具有式IX之間隔子單元A： 其中z為1至5。

在本發明之一態樣中，本文提供一種抗體藥物結合物(ADC)，其中ADC具有下式： 其中：Ab為本文所揭示之nectin-4抗體，且n為約1至約16。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中ADC具有式X： 其中：Ab為本文所揭示之nectin-4抗體，且n為約1至約16。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中ADC具有式XI： 其中：Ab為本文所揭示之nectin-4抗體，且n為約1至約16。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中ADC具有式XII：   其中：Ab為本文所揭示之nectin-4抗體，且n為約1至約16。

在另一態樣中，本文提供一種ADC，其中ADC具有式XIII： 其中：Ab為本文所揭示之nectin-4抗體，且n為約1至約16。

在另一態樣中，n為約2至約12。在另一態樣中，n為約2至約8。在另一態樣中，n為約4至約8。在另一態樣中，n為約8至約12。在另一態樣中，n為約2。在另一態樣中，n為約4。在另一態樣中，n為約6。在另一態樣中，n為約8。在另一態樣中，n為約10。在另一態樣中，n為約12。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含有包含SEQ ID NO: 2之胺基酸2-444的HC及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸2-215的LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含有包含SEQ ID NO: 2之胺基酸2-444的HC及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸2-215的LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 2組成之HC及由SEQ ID NO: 3組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸2-444的HC及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸2-215的LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸2-444的HC及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸2-215的LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 12組成之HC及由SEQ ID NO: 13組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含有包含SEQ ID NO: 16之胺基酸2-443的HC及由SEQ ID NO: 17組成之LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含有包含SEQ ID NO: 16之胺基酸2-443的HC及由SEQ ID NO: 17組成之LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 16組成之HC及由SEQ ID NO: 17組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 26之胺基酸2-447組成之HC及由SEQ ID NO: 27組成之LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 26之胺基酸2-447組成之HC及由SEQ ID NO: 27組成之LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 26組成之HC及由SEQ ID NO: 27組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 36之胺基酸2-446組成之HC及由SEQ ID NO: 37組成之LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 36之胺基酸2-446組成之HC及由SEQ ID NO: 37組成之LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 36組成之HC及由SEQ ID NO: 37組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 46之胺基酸2-446組成之HC及由SEQ ID NO: 47組成之LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 46之胺基酸2-446組成之HC及由SEQ ID NO: 47組成之LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 46組成之HC及由SEQ ID NO: 47組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 54之胺基酸2-446組成之HC及由SEQ ID NO: 55組成之LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 54之胺基酸2-446組成之HC及由SEQ ID NO: 55組成之LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 54組成之HC及由SEQ ID NO: 55組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含：包含SEQ ID NO: 64之胺基酸2-450的HC及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸2-216的LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含：包含SEQ ID NO: 64之胺基酸2-450的HC及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸2-216的LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 64組成之HC及由SEQ ID NO: 65組成之LC。

在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含：包含SEQ ID NO: 74之胺基酸2-450的HC及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸2-216的LC，且其中n為約8。在本文所揭示之一態樣中，其中Ab包含：包含SEQ ID NO: 74之胺基酸2-450的HC及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸2-216的LC，且其中n為約4。在本文所揭示之另一態樣中，其中Ab包含由SEQ ID NO: 74組成之HC及由SEQ ID NO: 75組成之LC。

與抗 Nectin - 4 抗體之結合

本文所揭示之抗體與本文所揭示之有效負載結合的方法為此項技術中已知的。在一些方法中，抗體在第一反應中與連接子結合，且隨後抗體及連接子在第二反應中與有效負載結合。在一些方法中，抗體在一個反應中與有效負載或有效負載/連接子結合。

在本發明之一些態樣中，本文所描述之nectin-4抗體透過位於nectin-4抗體上之一或多個半胱胺酸殘基之硫醇基共價連接至本文所描述之喜樹鹼類似物。在其他態樣中，用於結合之一或多個半胱胺酸殘基各自為鏈間二硫鍵半胱胺酸殘基。此項技術中已知的為控制鏈間二硫鍵還原以允許與彼等所涉及之半胱胺酸結合的方法。在其他態樣中，用於結合之一或多個半胱胺酸殘基經工程改造至抗體中，與用於鏈間二硫鍵之殘基分開。

在本發明之其他態樣中，本文所描述之nectin-4抗體透過位於nectin-4抗體上之一或多個離胺酸殘基之胺基共價連接至本文所描述之喜樹鹼類似物。

在一態樣中，本文提供一種ADC，其中細胞毒性劑、細胞毒性劑-自分解型間隔子或細胞毒性劑-自分解型間隔子-連接子與抗體之連接係透過抗體之一或多個半胱胺酸上之硫醇基發生。在另一態樣中，其中一或多個半胱胺酸各自為抗體之鉸鏈區中之天然半胱胺酸。

藥物與抗體比率 ( DAR )

在本發明中，式中之藥物負載由n表示，該n為每個抗體之藥物分子數目(亦稱為藥物與抗體比率或DAR)。視上下文而定，下標n表示與個別抗體分子連接之藥物分子的數目，且因此為整數值，或可表示平均藥物負載，且因此可為整數或非整數值。平均藥物負載表示組合物中每個抗體之藥物-連接子分子之平均數目。

較高的DAR可產生更有效的ADC，但較高的DAR亦可能導致去穩定、聚集、脫靶毒性增加及藥物自全身循環中清除增強。

在本發明之態樣中，當提及包含ADC群體之組合物時，平均藥物負載為約1至約16、約2至約12、約2至約10。在其他態樣中，DAR為約2至約8。在另一態樣中，DAR為4。在另一態樣中，DAR為約6至約10。在另一態樣中，DAR為8。製劑中之DAR可使用諸如質譜分析、HIC、ELISA分析或HPLC之技術藉由此項技術中已知之習知方式來表徵。

本發明提供一種產生ADC之方法，該方法包含以下步驟： (a) 用還原劑還原本文所揭示之nectin-4抗體以產生經還原之nectin-4抗體；及 (b) 使經還原之nectin-4抗體與本發明之化合物接觸以產生結合物，其中化合物包含式I-IX中之一或多者。另一態樣，其中還原劑為DTT或TCEP。

本發明之結合物或其鹽可藉由一般熟習此項技術者已知之多種程序容易地製備，其中一些在以下製備及實例中加以說明。一般熟習此項技術者認識到，所描述之各途徑中之特定合成步驟可以不同方式組合，或與來自不同流程之步驟結合以製備本發明之結合物或其鹽。各步驟之產物可藉由此項技術中熟知之習知方法回收，包括萃取、蒸發、沉澱、層析、過濾、研磨及結晶。除非另外指示，否則所有取代基如先前所定義。試劑及起始物質為一般熟習此項技術者容易獲得的。以下製備、實例及分析進一步說明本發明，但不應解釋為以任何方式限制本發明之範疇。

治療應用

在另一態樣中，本文提供治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物。在另一態樣中，本文提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本文所描述之ADC或醫藥組合物，其中癌症為膀胱癌、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰臟癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮頸癌或前列腺癌。在另一態樣中，其中本文所描述之ADC或醫藥組合物在圍手術期、輔助或新輔助背景中投與。

在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為膀胱癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為尿道上皮癌。在另一態樣中，其中尿道上皮癌為轉移性尿道上皮癌(mUC)。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為乳癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為肺癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為胃癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為結腸直腸癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為胰臟癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為頭頸癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為卵巢癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為子宮頸癌。在另一態樣中，提供一種治療癌症之方法，其中癌症為前列腺癌。

在另一態樣中，患者在投與維汀-恩弗妥單抗(enfortumab vedotin)之後復發，或患者已難以用維汀-恩弗妥單抗或標準護理治療來治療。在另一態樣中，用本文所描述之ADC或醫藥組合物治療之患者不適於用維汀-恩弗妥單抗治療。在另一態樣中，用本文所描述之ADC或醫藥組合物治療之患者未用維汀-恩弗妥單抗治療。在另一態樣中，用本文所描述之ADC或醫藥組合物治療之患者先前接受程序性死亡受體-1 (PD-1)或計劃性死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑以及新輔助/輔助、局部晚期或轉移背景中之含鉑之化學療法。在另一態樣中，用本文所描述之ADC或醫藥組合物治療之患者對恩弗妥單抗與派姆單抗(pembrolizumab)之組合、或納武單抗(nivolumab)與伊匹單抗(ipilimumab)之組合或阿特珠單抗(atezolizumab)與順鉑(cisplatin)/吉西他濱(gemcitabine)之組合已變得難治或復發。在另一態樣中，用本文所描述之ADC或醫藥組合物治療之患者對順鉑或卡鉑(carboplatin)與吉西他濱之組合已變得難治或復發。在另一態樣中，用本文所描述之ADC或醫藥組合物與PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑組合治療之患者不適於用含順鉑之化學療法治療。

在另一態樣中，提供方法，該等方法包含同時、分開或依序組合投與有效量之本文所描述之ADC或醫藥組合物與一或多種抗腫瘤劑。在另一態樣中，提供方法，該等方法包含同時、分開或依序組合投與有效量之本文所描述之ADC或醫藥組合物與PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。

在另一態樣中，本文提供方法，該等方法包含同時、分開或依序組合投與有效量之本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物與FGFR化合物。在另一態樣中，其中癌症為尿道上皮癌。在另一態樣中，其中FGFR化合物為厄達替尼(erdafitinib)、LOXO-435、福替尼(futibatinib)、沃凡妥單抗(vofatamab)、貝瑪妥珠單抗(bemarituzumab)、德拉贊替尼(derazantinib)、英非替尼(infigratinib)、培米替尼(pemigatinib)、羅加替尼(rogaratinib)、FGF401或培米替尼。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物，其係用於療法。在另一態樣中，提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療癌症。在另一態樣中，癌症為尿道上皮癌、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰臟癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮頸癌或前列腺癌。在另一態樣中，本文所描述之ADC或醫藥組合物係用於圍手術期、輔助或新輔助背景。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物，其係用於治療膀胱癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物，其係用於治療尿道上皮癌。在另一態樣中，其中尿道上皮癌為轉移性尿道上皮癌(mUC)。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療乳癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療肺癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療胃癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療結腸直腸癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療胰臟癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療頭頸癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療卵巢癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療子宮頸癌。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療前列腺癌。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物，其係用於治療癌症，其中癌症已在用維汀-恩弗妥單抗治療後復發，或癌症已難以用維汀-恩弗妥單抗治療。在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物，其係用於治療癌症，其中癌症已在用維汀-恩弗妥單抗治療後復發，或癌症已難以用標準護理治療來治療。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療癌症，其中先前使用維汀-恩弗妥單抗係禁忌的。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療癌症，其中未發生先前使用維汀-恩弗妥單抗。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其係用於治療癌症，其中先前使用過PD-1或PD-L1抑制劑以及新輔助/輔助、局部晚期或轉移背景中之含鉑之化學療法，或其中先前使用過恩弗妥單抗與派姆單抗之組合、或納武單抗與伊匹單抗之組合或阿特珠單抗與順鉑/吉西他濱之組合。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其與PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑同時、分開或依序組合，以用於治療癌症，其中癌症不可用含順鉑之化學療法治療。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物，其與一或多種抗腫瘤劑同時、分開或依序組合以用於治療癌症。在另一態樣中，其中抗腫瘤劑為PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物，其與FGFR化合物同時、分開或依序組合以用於治療癌症。在另一態樣中，其中癌症為尿道上皮癌。在另一態樣中，其中FGFR化合物為厄達替尼、LOXO-435、福替尼、沃凡妥單抗、貝瑪妥珠單抗、德拉贊替尼、英非替尼、培米替尼、羅加替尼、FGF401或培米替尼。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中癌症為膀胱癌、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰臟癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮頸癌或前列腺癌。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中癌症已在用維汀-恩弗妥單抗治療後復發，或癌症已難以用維汀-恩弗妥單抗或標準護理治療來治療。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中先前使用維汀-恩弗妥單抗係禁忌的。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中不存在先前使用維汀-恩弗妥單抗。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中先前使用PD-1或PD-L1抑制劑以及新輔助/輔助、局部晚期或轉移背景中之含鉑之化學療法。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中癌症不可用含順鉑之化學療法治療，且其中該藥劑將與PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑同時、分開或依序投與。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中該藥劑將與一或多種抗腫瘤劑同時、分開或依序投與。在另一態樣中，本文提供本文所描述之ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中該藥劑將與PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑同時、分開或依序投與。

在另一態樣中，本文提供本文所描述之nectin-4 ADC或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療癌症之藥劑，其中該藥劑將與FGFR化合物同時、分開或依序投與。在另一態樣中，其中癌症為尿道上皮癌。在另一態樣中，其中FGFR化合物為厄達替尼、LOXO-435、福替尼、沃凡妥單抗、貝瑪妥珠單抗、德拉贊替尼、英非替尼、培米替尼、羅加替尼、FGF401或培米替尼。

在另一態樣中，膀胱癌為尿道上皮癌、鱗狀細胞癌或腺癌。在另一態樣中，膀胱癌係非侵襲性的、非肌肉侵襲性的或肌肉侵襲性的。在另一態樣中，膀胱癌為肌肉侵襲性膀胱癌且在膀胱切除術之後。在另一態樣中，膀胱癌為膀胱癌、腎盂癌、輸尿管癌或尿道癌。在另一態樣中，乳癌為HR陽性、HER2陰性乳癌或三陰性乳癌(TNBC)。在另一態樣中，乳癌為導管癌或小葉癌。在另一態樣中，肺癌為鱗狀非小細胞肺癌(NSCLC)或非鱗狀NSCLC。在另一態樣中，肺癌為鱗狀細胞癌、腺癌或小細胞癌。在另一態樣中，前列腺癌為轉移性去勢抵抗性前列腺癌。在另一態樣中，胃癌為食道癌或胃食道結合部癌。在另一態樣中，卵巢癌為漿液性或黏液性癌。在另一態樣中，卵巢癌為輸卵癌或腹膜癌。

在另一態樣中，抗腫瘤劑可為化學治療劑(包括含鉑之化學療法)，及/或可包括順鉑、卡鉑、達卡巴𠯤、脂質體阿黴素(liposomal doxorubicin)、多西他賽、環磷醯胺及阿黴素、諾維本(navelbine)、艾瑞布林(eribulin)、紫杉醇、用於可注射懸浮液之紫杉醇蛋白結合粒子、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他濱(capecitabine)、FOLFOX (甲醯四氫葉酸(leucovorin)、氟尿嘧啶及奧沙利鉑(oxaliplatin))、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康(irinotecan))、吉西他濱、拓樸替康(topotecan)、脂質體伊立替康、培美曲塞(pemetrexed)、胺甲喋呤、長春鹼(vinblastine)及西妥昔單抗(cetuximab)。在另一態樣中，化學治療劑為順鉑(或卡鉑)及吉西他濱之組合，包括用於膀胱癌。在另一態樣中，抗腫瘤劑可為免疫腫瘤學藥劑，包括選自由以下組成之群的免疫腫瘤學藥劑：納武單抗、伊匹單抗、匹地利珠單抗(pidilizumab)、派姆單抗、曲美木單抗(tremelimumab)、烏瑞蘆單抗(urelumab)、利瑞魯單抗(lirilumab)、阿特珠單抗、艾卡哚司他(epacadostat)及度伐利尤單抗(durvalumab)。

醫藥組合物及投與方法

本文所描述之抗體或ADC可調配為藉由使抗體或ADC生物可利用之任何途徑投與的醫藥組合物，途徑包括例如經口、局部或皮下投與。

本文亦提供一種醫藥組合物，其包含本文所提供之抗體或ADC及一或多種選自由以下組成之群的藥劑：生理學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑及助劑。

本發明之抗體或ADC或包含其之醫藥組合物可藉由非經腸途徑(例如皮下及靜脈內)投與。本發明之抗體或ADC可與醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑一起以單次或多次劑量向患者單獨投與。本文所描述之醫藥組合物可藉由此項技術中熟知之方法(例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第22版(2012), A. Loyd等人, Pharmaceutical Press)來製備且包含如本文所揭示之抗體或ADC及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。

在一態樣中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之抗體及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。在一態樣中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之ADC及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。

定義

如本文所用，除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所用的術語「一(a)」、「一(an)」、「該」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。

除非另外指示，否則如本文所用之術語「結合(bind)」及「結合(binds)」欲意謂蛋白質或分子與另一蛋白質或分子形成化學鍵或吸引相互作用之能力，藉由此項技術中已知之常用方法所確定，其引起兩種蛋白質或分子接近。

如本文所用，術語「有效量」係指達成所需治療結果所必需之量(對於時段及對於投與方式而言)。蛋白質或結合物之有效量可根據諸如以下之因素而變化：個體之疾病狀態、年齡、性別及體重；及蛋白質或結合物誘發個體中之所需反應的能力。有效量亦為治療有益效果超過蛋白質或結合物之任何毒性或不利效果的量。

如本文所用，術語「治療(treating)」、「治療(treatment)」或「治療(to treat)」係指其中可減緩、控制、延遲或停止本文所揭示之病症或疾病之進展，或改善病症或疾病症狀，但未必指示完全消除所有病症或疾病症狀的所有過程。

如本文所用，術語「患者」係指人類患者。

某些縮寫定義如下：「ACN」係指乙腈；「DCM」係指二氯甲烷；「DIPEA」係指N,N-二異丙基乙胺；「DBU」係指1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯；「DMTMM」係指氯化(4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三𠯤-2-基)-4-甲基-𠰌福啉鎓；「DMAC」係指二甲基乙醯胺；「DMF」係指N,N-二甲基甲醯胺；「DTT」係指二硫蘇糖醇；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「EDTA」係指乙二胺四乙酸，「FA」係指甲酸；「HMPA」係指六甲基磷醯胺；「h」係指小時；「HEPES」係指(N-2-羥基乙基哌𠯤-N'-2-乙磺酸)；「NMM」係指N-甲基𠰌啉；「NMP」係指(N-甲基-2-吡咯啶酮)；「Su」係指丁二醯亞胺；「PPTS」係指對甲苯磺酸吡錠；「THF」係指四氫呋喃；「TsOH」係指對甲苯磺酸；及「TCEP」係指(參(2-羧基乙基)膦)。 實例    實例 1 ： nectin - 4 抗體之產生抗體1-8之CDR、可變區、完整重鏈及輕鏈之胺基酸序列以及編碼該等胺基酸序列之核苷酸序列在下文標題為「胺基酸及核苷酸序列」之部分中列出。另外，表1及表2中展示抗體1-8之CDR、輕鏈、重鏈、輕鏈可變區及重鏈可變區的SEQ ID NO。 本發明之抗nectin-4抗體，包括(但不限於) Ab 1-8，可基本上如下表現及純化。抗體在適當的宿主細胞(諸如HEK293或CHO)中表現，該宿主細胞使用最佳預定之HC:LC載體比率或編碼HC及LC之單個載體系統用用於分泌抗體之表現系統短暫或穩定轉染。表現質體含有抗體之LC及HC基因之cDNA型式(例如表3中所呈現)；且由為此目的常用且適合的構築體表現，諸如基於人類細胞巨大病毒主要即刻早期啟動子之構築體。 已分泌本發明之抗體的培養基可藉由諸如離子交換及疏水性相互作用層析之混合模式方法的習知技術純化。舉例而言，可使用習知方法將培養基施加至蛋白A或G管柱且自其溶離；亦可使用離子交換及疏水性相互作用層析之混合模式方法。可藉由常見技術，包括尺寸排阻、疏水性相互作用、離子交換或羥基磷灰石層析有效移除可溶聚集體及多聚體。產物可立即冷凍，例如在-70℃下冷藏，或可凍乾。可採用各種蛋白質純化方法，且此類方法為此項技術中已知的且描述於例如30 Deutscher, Method in Enzymology 182:83-89 (1990)及Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 第3版, Springer, NY (1994)中。抗體可立即在-70℃下冷凍或在2-8℃下儲存若干個月，或可凍乾，或保存在4℃下以供立即使用。 表 1 ： 例示性人類 nectin - 4 抗體之 CDR 胺基酸序列的 SEQ ID No   

Nectin-4抗體	CDR序列之SEQ ID No.
HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCDR1	LCDR2	LCDR3
Ab1	4	5	6	7	8	9
Ab1a	4	5	6	7	8	9
Ab2	18	19	20	21	22	23
Ab3	28	29	30	31	32	33
Ab4	38	39	40	41	42	43
Ab5	48	49	50	41	42	51
Ab6	56	57	58	59	60	61
Ab7	66	67	68	69	70	71
Ab8	76	77	78	69	70	79

表 2 ：例示性人類 nectin - 4 抗體之 SEQ ID No   

Nectin-4抗體	HC	LC	HCVR	LCVR
Ab1	2	3	10	11
Ab1a	12	13	14	15
Ab2	16	17	24	25
Ab3	26	27	34	35
Ab4	36	37	44	45
Ab5	46	47	52	53
Ab6	54	55	62	63
Ab7	64	65	72	73
Ab8	74	75	80	81

表 3 ： 例示性人類 nectin - 4 抗體之重鏈及輕鏈之 DNA 序列的 SEQ ID No   

Nectin-4抗體	HC	LC
Ab1	82	83
Ab1a	84	85
Ab2	86	87
Ab3	88	89
Ab4	90	91
Ab5	92	93
Ab6	94	95
Ab7	96	97
Ab8	98	99

實例 2 ： nectin - 4 ADC 之產生 喜樹鹼類似物之合成   基本上如ACS Med. Chem. Lett. 2019, 10, 1386-1392及WO2020219287中所製備，本發明之喜樹鹼類似物(諸如A1)可如下合成： 步驟1：向含有無水1,2-二氯乙烷(50 mL)之燒瓶中添加含1 M BCl₃之DCM (9.95 mL，9.95 mmol)，隨後用冰H₂O浴冷卻至0℃。逐份添加3-氟-4-甲基苯胺1 (1.56 g，12.4 mmol)，隨後在0℃下攪拌10分鐘，隨後添加5-溴戊腈2 (1.72 mL，14.9 mmol)，隨後添加AlCl₃ (2.16 g，16.2 mmol)。移除冰浴，且使反應溶液逐漸升溫至室溫。在室溫下攪拌10分鐘之後，將混合物在回流下加熱39小時。使溶液冷卻至室溫，且緩慢添加冷H₂O (25 mL)，隨後添加5% HCl水溶液。30分鐘後，將溶液用DCM (50 mL)稀釋。將有機層用H₂O及鹽水洗滌，經無水Na₂SO₄乾燥，隨後過濾。在減壓下濃縮濾液。將殘餘物使用以下條件藉由逆相層析進行純化：管柱：C18 (100 g)；用25% ACN/H₂O溶離5分鐘，隨後切換至25%至95% ACN/H₂O之梯度溶離15分鐘，隨後用95% ACN/H₂O溶離5分鐘，得到呈灰白色固體狀之化合物3 (1.42 g，40%)。 步驟2：將含化合物3 (3.15 g，15.64 mmol)、化合物4 (3.92 g，14.89 mmol)之甲苯(200 mL)及PPTS (0.037 g，0.15 mmol)懸浮於配備有回流冷凝器之50 mL燒瓶中，該燒瓶中含有無水甲苯(10 mL)。將反應物在回流下加熱40小時，同時在氬氣氛圍下磁性攪拌隔夜，隨後使其冷卻至室溫。過濾混合物，且用甲苯(5 mL)洗滌固體，得到5 (4.74 g，74%)。 步驟3：將化合物5 (0.860 g，1.67 mmol)於HMPA (5 mL)及去離子水(0.9 mL)中之溶液在101℃下加熱18小時。冷卻至室溫後，將溶液裝載至C18濾筒上，且使用以下條件藉由逆相層析進行純化：管柱：C18 (30 g)；用25% ACN/H₂O溶離，隨後切換至25%至95% ACN/H₂O之梯度溶離15分鐘，隨後用95% ACN/H₂O溶離5分鐘，得到混合物。將混合物藉由矽膠層析進一步純化，用0至20% MeOH/CH₂Cl₂之線性梯度溶離15分鐘，得到呈灰白色固體狀之化合物A1 (0.392 g，51%產率)。 連接子 + 自分解型單元 + 喜樹鹼類似物之合成流程   基本上如ACS Med. Chem. Lett. 2019, 10, 1386-1392及WO2020219287中所製備，本發明之喜樹鹼類似物可如下與連接子(具有順丁烯二醯亞胺化學性質)及自分解型單元結合： 步驟4：在20℃下將Fmoc-GGFG (1 g，1.59 mmol，1.5當量)、A1(0.48 mg，1.06 mmol，1當量)及4Å分子篩(3 g，A1之3×重量)於NMP中之混合物用含HCl (4 M，4.5當量)之1,4-二㗁烷處理。藉由添加H2O淬滅反應物。藉由過濾移除固體，且用EtOAc萃取濾液。將有機層經Na₂SO₄乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物藉由正相層析(SiO₂，0-10% MeOH/DCM)純化，得到Fmoc-GGFG-A1 (0.75 g，69%產率)。 步驟5：在0℃下將含Fmoc-GGFG-A1 (0.75 g，0.73 mmol，1當量)之DMF用DBU (0.11 mL，0.77 mmol，1.05當量)處理。藉由添加TsOH (0.25 g，1.47 mmol，2當量)淬滅反應物。將所得混合物在0℃下攪拌4小時，隨後未經進一步純化即直接用於下一步驟中。 步驟6：在0℃下將GGFG-A1 (0.73 mmol，1當量)及TsOH於DMF中之粗混合物用NMM鹼化至pH 7，隨後添加更多的NMM (0.16 mL，1.47 mmol，2當量)及化合物6 (0.283 g，0.917 mmol，1.25當量)。將所得混合物在0℃下攪拌4至6小時，隨後淬滅且藉由正相層析(SiO2，0-10% MeOH/DCM)純化，得到mc-GGFG-A1 (0.51 g，70%產率)。 本發明之喜樹鹼類似物可如下與連接子(具有溴乙醯胺化學性質)及自分解型單元結合： 步驟1：向Fmoc-GGFG-A1 (0.5 g，0.489 mmol)於DMF (5 ml)中之溶液中添加Et₂NH (0.025 g，0.34 mmol)。將混合物在15-25℃之間攪拌1小時。隨後藉由添加THF淬滅反應物，隨後在減壓下濃縮。將殘餘物使用以下條件藉由逆相層析進行純化：管柱：C18，150×30 mm×5 µm；用22-45% ACN/H₂O (0.225% FA)溶離，得到呈FA鹽之GGFG-A1 (0.196 g，47%產率)。 步驟2：在0℃下向化合物7 (2.0 g，12.26 mmol)於20 ml THF中之溶液中添加化合物8 (2.9 g，12.29 mmol)。使反應混合物升溫至20℃。在20℃下繼續攪拌18小時，隨後添加更多的化合物8 (0.5 g，3.06 mmol)。在20℃下再攪拌4小時之後，將反應物在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析進行純化；管柱：C18管柱，150×30 mm×5 µm，用22-45% ACN/H₂O (0.225% FA)溶離，得到化合物9 (1.15 g，33%產率)。 步驟3：使化合物9 (430 mg，1.51 mmol)及DMTMMT (340 mg，1.04 mmol)於DMAC (11 ml)中之混合物冷卻至0℃。逐滴添加GGFG-A1 (0.500 g，0.63 mmol)及DIPEA (0.090 g，0.70 mmol)於DMAC (4 ml)中之混合物。在0℃下繼續攪拌0.5小時，隨後添加DCM (300 mL)。將混合物用10% NaBr水溶液(3×50 ml)洗滌。將有機層經Na₂SO₄乾燥，過濾且在0-10℃之間在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析進行純化；管柱：C18管柱，150×30 mm×5 µm；用15-45% ACN/H₂O (0.225% FA)溶離，得到Br-GGFG-A1 (0.23 g，34.7%產率)。 第 I 部分 . 具有 順丁烯二醯亞胺連接子 - 有效負載之 ADC 之 製備   為了製備每個抗體具有八種藥物之抗體藥物結合物，在37℃下使用6至8莫耳當量之諸如DTT或TCEP的還原劑使IgG1抗體完全還原2小時。隨後使用PD-10脫鹽管柱，在pH 7.0下用50 mM HEPES及2 mM EDTA對經還原之抗體進行緩衝液交換，且用HEPES緩衝液將溶離劑調節至5-10 mg/ml之間的蛋白質濃度。添加過量的連接子-有效負載，諸如10莫耳當量，持續1小時，且可藉由添加顯著過量的L-半胱胺酸，諸如6莫耳當量來停止結合反應。所得ADC之混合物可在pH 5.5下在25 mM組胺酸、9%蔗糖中平衡之PD-10脫鹽管柱上純化，隨後用30 kDa MWCO離心單元進行3次旋轉循環，以移除任何未反應之連接子-有效負載相關物種。最後，可透過0.2 µM過濾器對所得ADC進行無菌過濾，且將其儲存在4℃或-80℃下以供將來使用。 第 II 部分 . 具有溴乙醯基連接子 - 有效負載之 ADC 之製備   為了製備每個抗體具有八種藥物之抗體藥物結合物，在37℃下使用6至8莫耳當量之諸如DTT或TCEP的還原劑使IgG1抗體完全還原2小時。隨後使用PD-10脫鹽管柱，在pH 7.4下用50 mM HEPES及2 mM EDTA對經還原之抗體進行緩衝液交換，且用HEPES緩衝液將溶離劑調節至5-10 mg/ml之間的蛋白質濃度。添加過量的連接子-有效負載，諸如12莫耳當量，持續2至3小時，且可藉由添加顯著過量的L-半胱胺酸，諸如10莫耳當量使結合反應停止。所得ADC之混合物可在pH 5.5下在25 mM組胺酸9%蔗糖中平衡之PD-10脫鹽管柱上純化，隨後用30 kDa MWCO離心單元進行3次旋轉循環，以移除任何未反應之連接子-有效負載相關物種。最後，可透過0.2 µM過濾器對所得ADC進行無菌過濾，且將其儲存在4℃或-80℃下以供將來使用。 實例 3 ： 抗體結合親和力、交叉反應性及選擇性 藉由表面電漿子共振表徵 Nectin - 4 ADC 之人類及跨物種結合   使用Biacore 8K+儀器(Cytiva，Marlborough，MA)測定nectin-4 ADC (本文以如式XI中結合之Ab1-8中之各者為例，且DAR為8)與重組HIS標記之人類(Acro Biosystems目錄號NE4-H52H3，Newark，DE)、食蟹獼猴(Acro Biosystems，目錄號NE4-C52H4)及大鼠(R&D Systems，Minneapolis，MN，目錄號9997-N4-050)之結合相互作用的動力學及親和力參數。 藉由在25℃下將山羊抗人類IgG Fc (Southern Biotech目錄號2014-01，Birmingham，AL)與Biacore Series S CM4 (Cytiva目錄號BR-100534)感測器表面進行胺偶合來製備抗人類Fc感測器表面。使用10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.05% Tween-20，pH 7.4之操作緩衝液進行固定。所有8個通道之流動池1及2均用400 mM 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及100 nM N-羥基丁二醯亞胺(NHS)之1:1 (v/v)混合物以10 μL/min之流動速率活化7分鐘。隨後，藉由以10 μL/min之流動速率將抗人類IgG Fc捕捉試劑注入所有流動池及通道中持續7分鐘來將其與感測器表面偶合(在10 mM乙酸鹽pH 4.5緩衝液中稀釋至50 μg/mL)。藉由以10 μL/min之流動速率向所有流動池及通道中注入100 mM乙二胺(在200 mM硼酸鹽緩衝液中，pH 8.5)持續7分鐘來阻斷剩餘的活性基團。隨後使用以10 μL/min連續三次1分鐘注入75 mM磷酸來對所有通道及流動池進行預處理。 對於動力學/親和力分析，操作及樣品稀釋緩衝液為10 mM磷酸鈉、150 mM NaCl、0.05% Tween-20，pH 7.4、1 mg/mL牛血清白蛋白(BSA)，且分析溫度為37℃。 在各分析循環中，藉由以5 μg/mL及10 μL/min注入ADC，在各通道之流動池2上捕捉不同的ADC。在捕捉之後，將相同的分析物以30 μL/min注入所有8個通道中之流動池1及2中持續2分鐘，且監測解離10分鐘。在解離之後，藉由以10 μL/min三次1分鐘注入75 mM磷酸使所有表面再生。重複ADC捕捉及分析物循環，以獲得各ADC在0、2.5、7.4、22、67、200及600 nM nectin-4之濃度下的分析物結合。 使用Biacore Insight評估軟體v3.0.12.15655中之預設1:1結合模型對感測器圖譜資料進行全域擬合。表4中展示ADC之動力學及親和力參數。 表 4 ： 在 37 ℃ 下 ADC / Nectin - 4 相互作用之動力學及親和力參數。   

ADC 中之Ab	抗原	n	ka (1/Ms)	kd (1/s)	KD (nM)
Ab4	人類Nectin-4	3	(3.59 ± 0.80) × 105	(7.32 ± 1.19) × 10-2	204 ± 56
Ab5	人類Nectin-4	3	(8.78 ± 1.07) × 105	(3.46 ± 0.48) × 10-3	3.94 ± 0.73
Ab1	人類Nectin-4	3	(2.27 ± 1.10) × 105	(3.78 ± 0.99) × 10-2	166 ± 92
Ab3	人類Nectin-4	3	(4.24 ± 0.76) × 105	(4.37 ± 1.56) × 10-4	1.03 ± 0.41
Ab2	人類Nectin-4	3	(1.02 ± 0.34) × 106	(2.14 ± 0.66) × 10-2	21.0 ± 9.6
Ab6	人類Nectin-4	3	(1.78 ± 0.41) × 106	(1.63 ± 0.25) × 10-1	91.8 ± 25.5
Ab8	人類Nectin-4	3	(6.94 ± 1.14) × 105	(3.38 ± 0.75) × 10-2	48.7 ± 13.5
Ab1a	人類Nectin-4	2	2.83×105、4.24×105	4.02×10-2、3.08×10-2	142、72.5
Ab7	人類Nectin-4	2	5.91×105、5.64×105	2.43×10-2、2.12×10-2	41.2、37.6
Ab4	食蟹獼猴Nectin-4	1	3.80×105	7.24×10-2	191
Ab5	食蟹獼猴Nectin-4	1	1.06×106	3.30×10-3	3.10
Ab1	食蟹獼猴Nectin-4	1	非均相動力學*
Ab3	食蟹獼猴Nectin-4	1	4.32×105	4.26×10-4	0.986
Ab2	食蟹獼猴Nectin-4	1	1.01×106	2.00×10-2	19.8
Ab6	食蟹獼猴Nectin-4	1	非均相動力學*
Ab8	食蟹獼猴Nectin-4	1	1.25×106	5.24×10-2	42.1
Ab1a	食蟹獼猴Nectin-4	1	3.10×105	2.60×10-2	83.9
Ab7	食蟹獼猴Nectin-4	1	1.18×106	4.64×10-2	39.2
Ab4	大鼠Nectin-4	1	弱結合
Ab5	大鼠Nectin-4	1	6.36×105	1.99×10-2	31.3
Ab1	大鼠Nectin-4	1	1.85×105	6.12×10-2	331
Ab3	大鼠Nectin-4	1	1.71×105	9.03×10-4	5.28
Ab2	大鼠Nectin-4	1	6.95×105	7.53×10-2	108
Ab6	大鼠Nectin-4	1	9.25×105	1.05×10-1	114
Ab8	大鼠Nectin-4	1	4.82×105	1.65×10-2	34.4
Ab1a	大鼠Nectin-4	1	2.52×105	4.53×10-2	180
Ab7	大鼠Nectin-4	1	4.04×105	2.96×10-2	73.1

* 清楚地觀測到結合 ； 然而 ， 資料展現動力學異質性 ， 導致與 1 : 1 結合模型之擬合較差。   k_a為結合速率常數，k_d為解離速率常數，K_D為平衡解離常數(使用K_D = k_d/k_a計算)，且n為複製次數。對於n=1或2，展示複製值。對於n=3，展示平均值±標準差。   Nectin - 4 抗體對表現 Nectin - 4 受體之細胞株的細胞表面結合   測試一組九種nectin-4抗體與兩種表現nectin-4之腫瘤細胞株的細胞表面結合。選擇代表高受體密度及低受體密度之細胞株，其中SUM190PT腫瘤細胞代表高內源性表現，且NCI-H1781腫瘤細胞代表低內源性表現。經測定，SUM190PT及NCI H1781細胞之抗體結合能力分別為108,000及20,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。選擇T24親本細胞作為nectin-4陰性細胞株。經由流動式細胞測量術對抗體結合進行定量，且記錄各抗體之結合曲線之EC₅₀及最大結合MFI。 使用非酶促解離緩衝液在37℃下將細胞解離5分鐘。對細胞進行計數，且以10⁵個細胞/孔等分至V形底聚丙烯96孔盤中。將細胞以1800 rpm離心5分鐘，且丟棄上清液。在分析緩衝液(含有1% BSA及0.09%疊氮化鈉之1×PBS)中製備11點抗體稀釋系列，自300 nM開始且以1:4稀釋。將稀釋系列以100 μl/孔添加至細胞中且藉由移液混合。僅在分析緩衝液中製備若干未經處理之對照孔/細胞株。將細胞及抗體在4℃下在定軌振盪器上培育1小時。在培育之後，將分析盤離心且用300 μl/孔之分析緩衝液洗滌兩次。隨後將細胞集結粒用Alexa647結合之小鼠抗人類IgG二級抗體在分析緩衝液中的1:500倍稀液以100 μl/孔染色。將分析盤在4℃下在暗處振盪培育1小時。在培育之後，將盤離心，且將細胞用300 μl/孔之分析緩衝液洗滌兩次。將Zombie Green生存力標記物(BioLegend)於1×PBS中之1:5000倍溶液以100 μl/孔等分至細胞中，且將盤在4℃下在暗處振盪培育10分鐘。隨後將細胞集結粒用分析緩衝液洗滌1次，且在室溫下在暗處用200 μl/孔含4%多聚甲醛之1×PBS固定15分鐘。將細胞離心且洗滌1次，隨後再懸浮於65 μL分析緩衝液中，以在Sartorious iQue HTFC細胞儀上採集。 在Sartorious iQue HTFC細胞儀上獲取細胞，且使用ForeCyt標準版(v. 6.2.6652)生成FCS檔案。隨後在FlowJo (v10.8.1)上分析FCS檔案。藉由前向散射(FSC)與側向散射(SSC)門控將碎片排除在分析之外，且經由前向散射面積(FSC-A)與高度(FSC-H)門控選擇單細胞。最後，排除對用Zombie Green染色呈陽性之死細胞，且對活的Alexa647陽性細胞之MFI進行定量。自所有樣品中減去未染色之細胞自體螢光平均值。在GraphPad Prism (v9.5.1)上繪製且分析資料。經由促效劑與反應-可變斜率(四參數)曲線擬合測定EC₅₀，且藉由將各細胞株之最大恩弗妥單抗MFI之平均值設定為100%來計算恩弗妥單抗最大結合之%。 九種nectin-4抗體不與nectin-4陰性T24親本株結合。如表5中所示，抗體對nectin-4高表現及低表現之腫瘤細胞均展示出良好的結合。 表 5 ： Nectin - 4 抗體與表現 Nectin - 4 之 細胞株的細胞表面結合   

	平均最大MFI	恩弗妥單抗之% (平均最大MFI)	EC50 (nM)
mAbs	NCI-H1781	SUM-190PT	NCI-H1781	SUM-190PT	NCI-H1781	SUM-190PT
恩弗妥單抗	9.1E+04	1.1E+06	100.0%	100.0%	0.05	0.11
Ab1	7.3E+04	8.4E+05	80.8%	79.3%	0.92	0.55
Ab1a	7.7E+04	5.9E+05	84.5%	55.6%	0.20	0.12
Ab2	8.7E+04	9.2E+05	95.7%	87.2%	0.06	0.19
Ab3	9.6E+04	1.2E+06	105.4%	111.8%	0.10	0.23
Ab4	8.7E+04	1.0E+06	95.8%	97.9%	0.14	0.19
Ab5	9.3E+04	1.5E+06	102.2%	144.8%	0.08	0.31
Ab6	8.5E+04	1.3E+06	93.8%	126.9%	0.03	0.17
Ab7	8.7E+04	1.2E+06	96.0%	111.8%	0.09	0.14
Ab8	9.0E+04	8.7E+06	99.6%	81.9%	0.10	0.11

MFI=中值螢光強度 使用流動式細胞測量術表徵 Nectin - 4 抗體及 ADC 與正常人類表皮角質細胞之結合   為表徵本發明之nectin-4抗體及ADC與正常人類表皮角質細胞之結合，將HEKα細胞於完全培養基(真皮細胞基礎培養基+角質細胞生長套組，ATCC)中以每孔1百萬個接種於150 × 25 mm組織培養皿(Corning Inc.)中，以在24小時內達到匯合。分化過程再進行5至10天。在誘導分化之後，在37℃下用2 mg/mL來自溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)之XI型膠原蛋白酶(Sigma-Aldrich)解離細胞。對細胞進行計數，且以10⁵個細胞/孔等分至V形底聚丙烯96孔盤(Thermo Scientific Nunc)中。將抗體及ADC自300 nM開始添加至細胞中，在分析緩衝液(含有2% FBS之1×DPBS，Gibco)中以1:4倍連續稀釋。將細胞在4℃下在微量盤振盪器上避光培育1小時。在培育之後，將細胞用200 μl/孔分析緩衝液洗滌兩次且用Alexa Fluor 647結合之親和純化F(ab')2片段山羊抗人類IgG (H+L) (Jackson ImmunoResearch)以1:1,000倍稀釋度染色。在4℃下培育一小時後，將細胞用200 μl/孔分析緩衝液洗滌兩次，且用Zombie Green可固定生存力染料(BioLegend)以1:2,000倍稀釋度染色。將細胞在4℃下在微量盤振盪器上培育20分鐘。將細胞用分析緩衝液洗滌，且在4℃下用200 μl/孔BD Cytofix固定緩衝液固定20分鐘。將細胞再懸浮於分析緩衝液中，以在Attune CytPix流式細胞儀(Thermo Fisher Scientific)上採集。經測定，細胞之抗體結合能力為17,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。 如表6中所示，所測試之nectin-4抗體及ADC (如式XI中結合，且DAR為8)以與恩弗妥單抗及恩弗妥單抗ADC (本文以如式XI中結合之各Ab為例，且DAR為8)類似或更高的EC₅₀與正常人類表皮角質細胞結合。Ab1對HEKα細胞之親和力低於恩弗妥單抗。 表 6 ： Nectin - 4 先導 抗體及 CAMP98 ADC 與 正常人類表皮角質細胞之細胞表面結合   

mAb	EC50 (nM)	ADC	EC50 (nM)
恩弗妥單抗	0.06	恩弗妥單抗	0.03
Ab1	0.32	Ab1	1.6
Ab2	0.05	Ab2	0.05

EC₅₀=半數最大有效濃度 實例 4 ： ADC 結合及內化 使用螢光成像表徵人類 Nectin - 4 陽性細胞中 Nectin - 4 抗體及 ADC 之內化能力   T24細胞株經工程改造以表現人類Nectin-4-eGFP，且經選殖選擇用於高表現。經測定，T24-人類Nectin-4-eGFP純系3之抗體結合能力為379,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。將T24人類Nectin-4-eGFP純系3細胞於完全培養基(McCoy's 5A，經修飾，+ 10% FBS + Glutamax + 400 ug/mL G418 + Pen/Strep)中以12,000個細胞/孔接種於黑色透明底CellCarrier Ultra 384孔微量盤(Perkin Elmer)中。將盤用AeraSeal™密封膜覆蓋，且在37℃、5% CO₂下培育隔夜。第二天，將抗體及ADC添加至細胞中，自300 nM開始，以1:3稀釋度添加。將盤用AeraSeal™覆蓋且置放於培育箱中，以便在24小時時程內在PerkinElmer Opera Phenix篩選系統上進行成像。資料在Harmony及Microsoft Excel中進行處理及分析，且在GraphPad Prism中繪圖。 如表7中所示，nectin-4抗體及nectin-4 ADC (本文以如式XI中結合之Ab1-8中之各者為例，且DAR為8)誘導nectin-4-eGFP信號之衰減。如表7中所示，所測試之nectin-4 ADC之內化潛力等於或大於與Ab1-8相同的ADC型式中之恩弗妥單抗抗體。 表 7 ： Nectin - 4 抗體及 ADC 之活性百分比及 EC₅₀ ( nM )   

mAb	活性%	EC50 (nM)	ADC	活性%	EC50 (nM)
恩弗妥單抗	97	2.13	恩弗妥單抗	119.9	2.55
Ab1	138.7	2.08	Ab1	147.4	2.02
Ab1a	144.8	2.54	Ab1a	150.2	2.30
Ab2	112.6	1.43	Ab2	131.5	1.96
Ab3	64.4	1.30	Ab3	135.5	2.68
Ab4	40.9	0.41	Ab4	142.8	2.10
Ab5	40.1	2.69	Ab5	112.0	2.80
Ab6	65.1	41.42	Ab6	118.0	2.26
Ab7	66.5	3.37	Ab7	126.4	2.61
Ab8	53.7	3.68	Ab8	125.1	2.48

活性%=與恩弗妥單抗mAb (100%)相比之最大GFP信號損失 實例 5 ： ADC 細胞毒性及旁觀者活性 表徵 Nectin - 4 ADC 在低表現及高表現 Nectin - 4 之 細胞株中之細胞毒性   將NCI-H1781細胞(一種低表現細胞株)於培養基(RPMI 1640 + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ 1 mM丙酮酸鈉)中接種於白色透明底96孔組織培養盤中。將細胞在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將ADC以最終工作濃度自100 nM起添加，在培養基中以1:3進行連續稀釋。將盤用Breathe-Easy®密封膜覆蓋，且在37℃及5% CO₂下培育。處理5天之後，使用CellTiter-Glo發光細胞存活率分析讀取盤。將100 μl/孔CellTiter-Glo試劑在室溫下在盤中培育10分鐘。在SpectraMax M5e中讀取冷光。使用SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)。針對無處理計算細胞殺死百分比為0%。使用GraphPad Prism版本9.5.1繪製且分析資料。IC₅₀係經由對數(抑制劑)與反應-可變斜率(四個參數)曲線擬合測定。 T24細胞株經工程改造以表現人類nectin-4且經選殖選擇。將T24-人類nectin-4純系108 (一種高表現純系細胞株)接種於培養基(McCoy's 5A + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ 400 μg/ml G418)中。將ADC以最終工作濃度自200 nM起添加，在培養基中以1:4進行連續稀釋5天。 經測定，T24-人類Nectin-4純系108及NCI H1781細胞之抗體結合能力分別為56,000及20,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。 如表8中所示，所選例示性nectin-4 ADC (本文以如式XI中結合之Ab1-8中之各者為例，且DAR為8)在具有差異表現水平之nectin-4細胞株上展現出與恩弗妥單抗抗體類似的強大的最大細胞殺死，其中該恩弗妥單抗抗體之ADC型式與Ab1-8 (具有效應子剔除式突變且與式XI結合，且DAR為8之恩弗妥單抗)相同。IC₅₀值表明，在T24-人類nectin-4純系108細胞中所測試之ADC具有類似的效能，而在NCI H1781細胞中所測試之ADC具有不同的效能。在所測試之T24 Nectin-4陰性細胞上未觀測到非特異性細胞毒性。 表 8 ： Nectin - 4 結合物對高表現及低表現 Nectin - 4 細胞株之細胞毒性

ADC	T24 Nectin-4純系108 (IC50；nM)	NCI H1781 (IC50；nM)
Ab1	0.0837	0.2201
Ab1a	0.0729	0.0981
Ab2	0.0700	0.0473
Ab3	0.0825	0.0553
Ab4	0.1154	0.3107
Ab5	0.0994	0.0657
Ab6	0.0783	0.0608
Ab7	0.0801	0.0543
Ab8	0.0880	0.0572
恩弗妥單抗	0.0747	0.0409

表徵 Nectin - 4 ADC 在 MMAE 抗性細胞株中之細胞毒性   在對MMAE具有抗性之T24 nectin-4細胞中，測試本文所描述之兩種nectin-4 ADC及維汀-恩弗妥單抗之活性。將T24-hNectin-4純系14細胞於100 μl培養基中以每孔500個接種於白色透明底96孔組織培養盤中，且在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將各ADC在培養基中以1:4連續稀釋，其中起始濃度為400 nM。每孔添加一百μl各種ADC稀釋液，且將盤用Breathe-Easy®密封膜覆蓋且在37℃及5% CO₂下培育。處理5天之後，將盤自培育箱移出，置放於室溫下15分鐘，且每孔移除100 μl培養基。每孔添加一百μl CellTiter-Glo試劑，且將盤在室溫下培育10分鐘。藉由SpectraMax M5e及SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)。針對僅DMSO (對於游離有效負載)或無處理(對於ADC)計算細胞殺死百分比為0%。使用Graphpad Prism版本9.5.1繪製且分析資料。IC₅₀係經由對數(抑制劑)與反應-可變斜率(四個參數)曲線擬合測定。 用Ab1及Ab2製備之ADC (與式XI結合，且DAR為8)保留針對MMAE抗性細胞之活性，而維汀-恩弗妥單抗損失功效。 與維汀 - 恩弗妥單抗相比 ， 具有例示性連接子 / 有效負載之恩弗妥單抗之旁觀者活性   UMUC3細胞株經工程改造以表現人類Nectin4，且選擇兩個具有不同表現水平之純系群體。在平坦的白色透明底96孔盤中，將UMUC3-hNectin4純系F7/UMUC3-Luc-GFP細胞混合且以總共1500個細胞/孔/100 μl以4:1之比率接種於分析培養基(MEM + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ 1 mM丙酮酸鈉)中。將UMUC3-hNectin4純系E3/UMUC3-Luc-GFP細胞混合且以總共2100個細胞/孔/100 μl以6:1之比率接種於分析培養基中。UMUC3-Luc-GFP細胞對nectin-4表現呈陰性。將盤在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將ADC以最終工作濃度自100 nM起添加，在分析培養基中以1:3進行連續稀釋。為了評定細胞株對游離有效負載之敏感性，將游離有效負載以最終工作濃度自200 nM起添加，在分析培養基中以1:3進行連續稀釋。將盤用Breathe-Easy®密封膜覆蓋，且在37℃及5% CO₂下培育。處理5天之後，使用ONE-Glo™螢光素酶分析系統讀取盤。將100 μl/孔ONE-Glo™分析試劑在室溫下在盤中培育10分鐘。在SpectraMax M5e中讀取冷光。使用SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)。針對無處理計算UMUC3-Luc-GFP殺死百分比為0%。使用Graphpad Prism版本9.5.1繪製且分析資料。旁觀者活性之IC₅₀係經由對數(抑制劑)與反應(三個參數)曲線擬合測定，且游離有效負載細胞毒性之IC₅₀係經由對數(抑制劑)與反應(四個參數)曲線擬合測定。 經測定，UMUC3 Nectin-4純系F7及UMUC3 Nectin-4純系E3細胞之抗體結合能力分別為113,000及567,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。 如表9中所示，與維汀-恩弗妥單抗相比，如式XI中結合之且DAR為8之恩弗妥單抗對UMUC3-Luc-GFP細胞展示出更高的旁觀者效應效能。值得注意地，表10展示UMUC3-Luc-GFP細胞株對游離有效負載式XI及MMAE具有同樣的敏感性。陽性細胞株上之較高表現藉由維汀-恩弗妥單抗產生較高的旁觀者活性，然而，其效能保持低於如式XI中結合之恩弗妥單抗。 表 9 ： 式 XI 結合之恩弗妥單抗及維汀 - 恩弗妥單抗對 UMUC3 - Luc - GFP Nectin - 4 陰性細胞之旁觀者效應的 IC50   

	IC50 (nM)
ADC	UMUC3 -Luc -GFP + UMUC3 -hNectin4 純系F7	UMUC3 -Luc -GFP + UMUC3 -hNectin4 純系E3
如式XI中結合之恩弗妥單抗	0.05	0.06
維汀-恩弗妥單抗	4.30	0.35

表 10 ： 式 XI 有效負載及 MMAE 有效負載對 UMUC3 - Luc - GFP Nectin - 4 陰性細胞之細胞毒性的 IC50   

	IC50(nM)
ADC	UMUC3-Luc-GFP
式XI有效負載	0.24
MMAE	0.38

在基本上如本文所描述進行實驗中，使用UMUC3-hNectin-4純系F7/UMUC3-螢光素酶-GFP細胞對評估本文所描述之四種nectin-4 ADC及維汀-恩弗妥單抗之旁觀者效應。將細胞以4:1之比率接種且用各ADC之連續稀釋液處理5天。為測定ADC之旁觀者效應，使用ONE-Glo™螢光素酶分析系統監測螢光素酶冷光。用Ab 1、1a、2及7製備之ADC (與式XI結合，且DAR為8)展現出有效的旁觀者效應，而維汀-恩弗妥單抗展示不太有效的旁觀者效應。 表徵 Nectin - 4 ADC 在 細胞株 T24 nectin - 4 陰性細胞中之旁觀者效應   T24細胞株經工程改造以表現mScarlet，且經選殖選擇以在旁觀者分析中進行測試。將T24-mScarlet純系5及T24-human nectin4純系108混合且於培養基(McCoy's 5A + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ 400 μg/ml G418)中以總共1000個細胞/孔/100 μl以9:1之比率接種於平坦的透明底96孔盤中。T24 mScarlet純系5細胞對nectin-4表現呈陰性。將盤在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將ADC以最終工作濃度自50 nM起添加，在培養基中以1:4進行連續稀釋。將盤用Breathe-Easy®密封膜覆蓋，置放於BioSpa中，且每天在Cytation5中掃描，持續5天。 使用Gen5 Image Prime 3.11藉由Cytation5擷取且分析T24-mScarlet細胞之影像。T24-mScarlet細胞殺死百分比係藉由降低之累積強度(面積×平均強度)來計算，標準化為零小時且無處理。使用GraphPad Prism版本9.5.1繪製且分析資料。IC₅₀係經由對數(抑制劑)與反應-可變斜率(四個參數)曲線擬合測定。 如表11中所示，本發明之某些nectin-4 ADC (本文以如式XI中結合之Ab1-8中之各者為例，且DAR為8)在T24 mScarlet純系5 nectin-4陰性細胞上展示出與恩弗妥單抗抗體類似的效能及旁觀者效應大小，其中該恩弗妥單抗抗體之ADC型式與Ab1-8 (與式XI結合且DAR為8之恩弗妥單抗)相同。 表 11 ： Nectin - 4 ADC 結合物對 T24 mScarlet 純系 5 Nectin - 4 陰性細胞之旁觀者效應的 IC50   

ADC	IC50 (nM)
恩弗妥單抗	0.0593
Ab1	0.0572
Ab1a	0.0410
Ab2	0.0627
Ab3	0.0470
Ab4	0.0798
Ab5	0.0766
Ab6	0.0587
Ab7	0.0836
Ab8	0.0694

表徵具有其他有效負載及其他連接子化學性質之 Nectin - 4 ADC 在低及高 nectin - 4 表現細胞株中之活性   將NCI-H1781細胞於培養基(RPMI 1640 + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ 1 mM丙酮酸鈉)中接種於白色透明底96孔組織培養盤中。將細胞在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將ADC以最終工作濃度自100 nM起添加，在培養基中以1:4進行連續稀釋。將盤用Breathe-Easy®密封膜覆蓋，且在37℃及5% CO₂下培育。處理5天之後，使用CellTiter-Glo發光細胞存活率分析讀取盤。將100 μl/孔CellTiter-Glo試劑在室溫下在盤中培育10分鐘。在SpectraMax M5e中讀取冷光。使用SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)。針對無處理計算細胞殺死百分比為0%。使用GraphPad Prism版本9.5.1繪製且分析資料。IC₅₀係經由對數(抑制劑)與反應-可變斜率(四個參數)曲線擬合測定。 UMUC3細胞株經工程改造以表現人類Nectin4，且經選殖選擇用於高表現。將UMUC3-人類nectin4純系F7工程改造之細胞株接種於培養基(MEM + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ 1 mM丙酮酸鈉+ 500 μg/ml G418)中。將ADC以最終工作濃度自100 nM起添加，在培養基中以1:4進行連續稀釋6天。 經測定，NCI H1781及UMUC3-hNectin4純系F7及細胞之抗體結合能力分別為20,000及113,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。 如表12中所示，如式XI中結合的且DAR為8的Ab2 ADC以及PEG8-VA-依喜替康(PEG8-VA-Exatecan)、DAR 8型式之Ab2 ADC均對NCI-H1781及UMUC3-人類nectin-4純系F7細胞株展現出有效的細胞毒性作用。   表 12 ： 具有其他有效負載及其他連接子化學性質之 Nectin - 4 ADC 對 低表現及高表現 Nectin - 4 細胞株之細胞毒性   

ADC	NCI H1781 (IC50；nM)	UMUC3 Nectin-4純系F7 (IC50；nM)
式XI型式之Ab2	0.0245	0.0569
PEG8-VA-依喜替康型式之Ab2	0.0757	0.1125
陰性對照ADC	23.2300	16.9800

實例 6 ： ADCC 、 ADCP 及 / 或 CDC 分析 Nectin - 4 抗體之活體外抗體依賴性細胞介導之細胞毒性 ( ADCC ) 分析   T24細胞株經工程改造以表現人類Nectin4，且經選殖選擇用於高表現。經測定，T24-人類Nectin4純系147之抗體結合能力為411,000 (使用MESF定量套組，Bangs Laboratories)。將標靶細胞T24-人類nectin4純系147於測試培養基(IMDM + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ Pen-Strep 100 U/ml-100 μg/ml)中添加至透明的組織培養96孔盤中，且在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將40 μl/孔抗體以最終工作濃度自200 nM起添加，在測試培養基中以1:4倍進行連續稀釋。將抗體在37℃及5% CO₂下培育一小時。隨後以200 k/80 μl/孔添加效應細胞Jurkat-Lucia NFAT-CD16，且在37℃及5% CO₂下培育。23小時後，將20 μl上清液及50 μl預製備之QUANTI-Luc/孔混合於白色的不透明盤中。在SpectraMax M5e中讀取冷光。使用SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)，且使用GraphPad Prism版本9.5.1在Y軸上相對於X軸上之化合物濃度繪製RLU。 與具有野生型IgG1 Fc之恩弗妥單抗抗體不同，Ab1-8為效應子剔除式抗體，且不會產生抗體依賴性細胞毒性潛力。 Nectin - 4 抗體之活體外抗體依賴性細胞吞噬作用 ( ADCP ) 分析   T24細胞株經工程改造以表現高水平之人類Nectin4-eGFP且經選殖選擇。將標靶細胞T24-人類nectin4 eGFP純系3於測試培養基(IMDM + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清+ Pen-Strep 100 U/ml-100 μg/ml)中接種於透明的組織培養96孔盤中，且在37℃及5% CO₂下培育隔夜。第二天，將40 μl/孔mAb以最終工作濃度自200 nM起添加，在測試培養基中以1:4倍進行連續稀釋，且在37℃及5% CO₂下培育1小時。隨後以200 k/80 μl/孔添加效應細胞Jurkat-Lucia NFAT-CD32，且在37℃及5% CO₂下培育。23小時後，將20 μl上清液及50 μl預製備之QUANTI-Luc/孔在白色的不透明盤中混合。在SpectraMax M5e中讀取冷光。使用SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)，且使用GraphPad Prism版本9.5.1在Y軸上相對於X軸上之化合物濃度繪製RLU。 與具有野生型IgG1 Fc之恩弗妥單抗抗體不同，Ab1-8為效應子剔除式抗體，且不會產生抗體依賴性細胞吞噬作用潛力。 Nectin - 4 先導抗體之活體外補體依賴性細胞毒性 ( CDC ) 分析   T24細胞株經工程改造以表現高水平之人類Nectin4且經選殖選擇。將T24-人類nectin4純系147細胞於分析培養基(McCoy's 5A + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清)中添加至白色透明底96孔組織培養盤中，且在37℃及5% CO₂下之培育箱中培育隔夜。第二天，將50 μl/孔抗體以最終工作濃度自200 nM起添加，在分析培養基中以1:3倍進行連續稀釋，且在37℃及5% CO₂下培育一小時。隨後將經稀釋之人類血清補體(1:3倍)以50 μl/孔添加至分析培養基中，且在37℃及5% CO₂下培育3小時。使用CellTiter-Glo發光細胞存活率分析讀取盤。將100 μl/孔CellTiter-Glo試劑在室溫下在盤中培育10分鐘。在SpectraMax M5e中讀取冷光。使用SoftMax Pro 5.4獲得相對光單位(RLU)。針對無處理計算細胞殺死百分比。使用GraphPad Prism版本9.5.1繪製且分析資料。 作為陽性對照，在分析培養基(RPMI1640 + 1×GlutaMax + 10%熱滅活胎牛血清)中，用抗CD20抗體按上述方法處理Jeko-1細胞。 與恩弗妥單抗一樣，Ab1-8在表現nectin-4之T24細胞株中並未展示出CDC潛力。抗CD20對照抗體產生CDC活性，用作表現CD20之Jeko-1細胞的陽性對照。 實例 7 ： nectin - 4 ADC 在腫瘤異種移植模型中之功效為測試本發明之nectin-4 ADC (其在Fc區中具有效應子剔除式突變)之功效，且為了與具有野生型Fc且在具有與本發明之有效負載背景相同的有效負載背景之ADC中的恩弗妥單抗抗體進行比較，如所描述對具有高或中等nectin-4表現之兩個腫瘤異種移植模型進行測試。向5-8週齡、體重18-20公克之免疫受損雌性小鼠(nu/nu)的右側腹單側植入具有高nectin-4表現之UM-UC-3 Nectin4純系F7細胞。當腫瘤達到約150-250 mm³時；將動物按腫瘤體積匹配至治療組或對照組，且開始給藥(第0天，每組n=8)。測試物以單次劑量(2 mg/kg)投與，且用5%右旋糖調配。每兩週量測腫瘤，直至第40天。 在單獨的研究中，向5-6週齡之雌性NSG小鼠皮下注射具有中等Nectin-4表現之MDA-MB-468細胞。當腫瘤達到約150-250 mm³時；將動物按腫瘤體積匹配至治療組或對照組，且開始給藥(第0天，每組n=8)。測試物以單次劑量(2 mg/kg)投與，且用5%右旋糖調配。每兩週量測腫瘤，直至第71天。 在兩種模型中，使用2 mg/kg單次劑量治療，即nectin-4 ADC (本文以如式XI中結合之Ab1-8中之各者為例，且DAR為8)或基準恩弗妥單抗ADC (恩弗妥單抗與式XI結合，且DAR為8)。在第40天量測UMUC3 Necin-4純系F7之腫瘤生長，且在第71天量測MDAMB468異種移植之腫瘤生長。如表13中所示，使用效應子剔除式Ab1-8用nectin-4 ADC治療引起腫瘤生長抑制，其功效與具有野生型Fc區之基準恩弗妥單抗ADC等同，或在某些ADC之情況下比該基準恩弗妥單抗ADC的功效更佳。 表 13 ： 用 Nectin - 4 ADC 治療後之腫瘤量測結果 ( 平均腫瘤體積 ±SEM )   

ADC	UMUC3 Nectin-4純系F7異種移植	MDAMB468異種移植
平均值(mm3)	SEM	平均值(mm3)	SEM
媒劑	1338.34	51.2	464.25	28.43
恩弗妥單抗ADC	812.22	187.34	272.28	22.15
對照ADC	1237.24	95.92	484.75	41.46
Ab1 ADC	192.39	69.04	121.05	12.02
Ab1a ADC	234.79	74.12	135.24	19.3
Ab2 ADC	72.57	14.06	124.95	10.32
Ab3 ADC	993.45	189.2	366.45	31.56
Ab4 ADC	928.09	103.94	343.65	36.11
Ab5 ADC	632.99	70.34	220.38	20.41
Ab6 ADC	866.94	119.56	304.9	27.25
Ab7 ADC	319.79	89.97	245.33	16.58
Ab8 ADC	820.06	131.53	349.91	38.36

SEM=平均值之標準誤差 在與使用UM-UC-3 Nectin4純系F7細胞所描述之類似進行的異種移植研究中，本文所描述之nectin-4 ADC係以0.5 mg/kg、1 mg/kg及2 mg/kg與順鉑及吉西他濱組合給藥。在0.5及1 mg/kg之低劑量下，將SOC藥劑與nectin-4 ADC組合後觀測到抗腫瘤活性增加。 胺基酸及核苷酸序列SEQ ID NO: 1 (人類nectin-4) MPLSLGAEMWGPEAWLLLLLLLASFTGRCPAGELETSDVVTVVLGQDAKLPCFYRGDSGEQVGQVAWARVDAGEGAQELALLHSKYGLHVSPAYEGRVEQPPPPRNPLDGSVLLRNAVQADEGEYECRVSTFPAGSFQARLRLRVLVPPLPSLNPGPALEEGQGLTLAASCTAEGSPAPSVTWDTEVKGTTSSRSFKHSRSAAVTSEFHLVPSRSMNGQPLTCVVSHPGLLQDQRITHILHVSFLAEASVRGLEDQNLWHIGREGAMLKCLSEGQPPPSYNWTRLDGPLPSGVRVDGDTLGFPPLTTEHSGIYVCHVSNEFSSRDSQVTVDVLDPQEDSGKQVDLVSASVVVVGVIAALLFCLLVVVVVLMSRYHRRKAQQMTQKYEEELTLTRENSIRRLHSHHTDPRSQPEESVGLRAEGHPDSLKDNSSCSVMSEEPEGRSYSTLTTVREIETQTELLSPGSGRAEEEEDQDEGIKQAMNHFVQENGTLRAKPTGNGIYINGRGHLV SEQ ID NO: 2 (Ab1之HC) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREDWDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 3 (Ab1之LC) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 4 (Ab1及1a之HCDR1) KASGYTFTGYYIH SEQ ID NO: 5 (Ab1及1a之HCDR2) WINPNSGGTN SEQ ID NO: 6 (Ab1及1a之HCDR3) AREDWDFDY SEQ ID NO: 7 (Ab1及1a之LCDR1) RTSQSVSSSYLA SEQ ID NO: 8 (Ab1及1a之LCDR2) YGASNRAT SEQ ID NO: 9 (Ab1及1a之LCDR3) QQYGSSPIT SEQ ID NO: 10 (Ab1之HCVR) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREDWDFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 11 (Ab1之LCVR) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 12 (Ab1a之HC) QVQLVQSGAQVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCAREDWDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 13 (Ab1a之LC) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATDIPDRFSGSGSGTDFTLTINRLEPEDFAVYYCQQYGSSPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 14 (Ab1a之HCVR) 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GAAGTCCAACTAGTGGAGAGCGGCGGGGGCCTGGTCCAGCCCGGGGGTTCTCTCCGTCTCTCTTGCGCTGCATCCGGATTCACATTCTCATCCTATGATATGCACTGGGTGCGACAGGCAACGGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTTAGCGCCATTGGTACTGTGGGCGACACTTACTATCCTGGAAGCGTGAAGGGACGGTTTACAATCTCAAGGGAGAATGCCAAAAACAGTCTGTACCTTCAGATGAACAGTTTGCGCGCTGGCGACACCGCCGTTTACTATTGTGCGAGAGAATGGAATGGAATGGATGTGTGGGGCCAGGGTACCACCGTCACAGTATCCTCTgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 87 (Ab2之LC之DNA) GACATTGTCATGACCCAGTCACCTGACTCCTTGGCGGTGAGCCTGGGAGAAAGAGCAACAATTAACTGCAAATCCAGTCAATCGGTCCTCTACAACTCCAATAACAAGAATTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCACCTAAGCTCCTGATCTATTGGGCTAGTACTCGGGAGTCCGGAGTTCCCGATAGGTTCTCTGGTTCAGGGTCTGGCACCGACTTTACCCTTACAATAAGCAGCCTACAGGCCGAAGATGTAGCCGTGTATTACTGTCAACAGTTCTATACAACGCCATACTCTTTTGGCCAGGGGACTAAAGTGGAGATCAAGagaactgtggcggcgccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatccggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc SEQ ID NO: 88 (Ab3之HC之DNA) GAGGTGCAGCTGGTTGAGAGCGGCGGCGGGTTAGTCAAGCCTGGTGGCTCCCTTCGGCTGTCCTGTGCAGCCTCGGGGTTCAATCTGAACCACTACAACATGAACTGGGTGCGTCAAGCCCCCGGCAAGGGACTCGAATGGGTCTCTAGTGTTTCCTCAGGGGGTGGATTTCGCTACTATGCTGACAGCGTAAGGGGACGATTTACCATTTCTCGGGATAATGCCAAAAACAGCTTGTACCTGCAGATGAATAGTCTAAGAGCAGAAGATACCGCTGTGTATTATTGCGCGAGAGGTGCCGTCTTCCATGACGCTTTCGACATCTGGGGACAGGGCACTCTCGTGACAGTGTCATCTgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 89 (Ab3之LC之DNA) GATATCCAACTGACCCAGTCTCCAAGTTTCCTGTCTGCTTCAGTGGGCGATAGGGTCACAATCACCTGTCGGGCCTCCCAAGACATCTCCTCGTACCTGGCGTGGTACCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAATTGCTCATATACGTTGCAAGTACCCTTCAGAGCGGAGTGCCATCCAGATTCTCAGGGTCCGGAAGCGGGACTGAATTTACACTAACGATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTATTATTGCCAGCAGATTAACTCTTATCCTTTTACATTTGGCCAGGGTACTAAAGTAGAGATTAAGagaactgtggcggcgccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatccggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc SEQ ID NO: 90 (Ab4之HC之DNA) CAAGTGCAGCTGCAGGAGAGTGGACCAGGTCTCGTGAAGCCTAGTGAGACACTTTCACTCACTTGTACAGTAAGTGGCGGTTCTATCAGCGGGTATTACTGGTCCTGGATTCGGCAGCCTCCCGGGAAGGGATTAGAATGGATCGGATATATCTATTATTCCGGCAGCACCAATTACAACCCCTCTCTAAAATCCAGGGTTACGATAAGCGTGGATACCTCTAAAAACCAGTTTTCGTTGAAGCTGTCTAGCGTCACCGCAGCTGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGACTGGGCATCTTCTTTGACGCCTTCGATATTTGGGGGCAGGGCACTCTGGTCACAGTTTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 91 (Ab4之LC之DNA) GATATACAACTAACACAGTCTCCTTCCTTCTTGTCTGCTAGTGTGGGCGACAGGGTCACAATCACTTGCCGGGCAAGCCAGGGAATTTCCTCCTACCTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCCGGGAAAGCTCCCAAGCTCCTGATCTATGCCGCCAGCACGCTTCAGAGCGGGGTGCCATCCAGATTTTCGGGTAGCGGCTCTGGCACTGAGTTTACCCTCACAATTAGTTCACTGCAGCCTGAAGACTTTGCCACCTACTACTGTCAACAGTTCAACTCATATCCATGGACCTTCGGTCAGGGAACCAAAGTTGAGATCAAGagaactgtggcggcgccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatccggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc SEQ ID NO: 92 (Ab5之HC之DNA) CAGGTCCAGCTGGTTCAGTCCGGAGCAGAGGTAAAAAAACCAGGAGCTAGTGTCAAGGTGTCCTGTAAGGCGTCTGGGTACACTTTTACTTCATACTATGTTCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGGCAGGGCCTCGAATGGATGGGCATCATAAACCCCAGTATCATTTCCACCAGCTACGCTCAAAAGTTTCAAGCCCGGGTGACCATGACGAGGGATACCTCGACATCAACTGTCTATATGGAGCTATCCTCTTTGAGATCTGAAGATACAGCCGTGTATTACTGCGCACGCGGCCTTAATTTCGACGCTTTCGACATTTGGGGTCAGGGTACACTGGTGACCGTGAGCAGCgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 93 (Ab5之LC之DNA) GACATCCAGTTAACTCAGTCTCCTAGCTTCCTGAGCGCTTCTGTTGGAGATAGAGTCACAATTACATGTAGGGCCTCCCAGGGGATTTCATCATATCTGGCTTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAAGCACCAAAGCTCCTGATCTATGCCGCATCTACCCTACAATCGGGTGTGCCCTCCCGGTTCAGTGGCTCCGGGAGTGGAACGGAATTTACCCTTACCATCTCCAGCTTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACATACTACTGCCAGCAGCTCAATAACTACCCATTTACTTTTGGTCAGGGCACCAAAGTGGAGATAAAGagaactgtggcggcgccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatccggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc SEQ ID NO: 94 (Ab6之HC之DNA) CAAGTTCAGCTGGTGCAATCCGGAGCTGAGGTCAAGAAGCCTGGTGCAAGCGTGAAAGTGAGTTGTAAAGCCTCAGGCTATACCTTCACTGGGTATTACATGCACTGGGTTCGGCAGGCTCCAGGACAGGGATTGGAATGGATGGGCATCATTAACCCCAGCGGGGGTTCCACAACGTACGCCCAGAAGTTTCAGGGCCGTGTGACCATGACACGCGATACTTCTACATCTACCGTATACATGGAACTCAGTTCCCTGCGATCTGAGGACACTGCAGTCTATTACTGCGCCAGGGGCAGACTTGGCACCTATTTCGACTACTGGGGTCAGGGGACCCTAGTCACAGTGAGCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 95 (Ab6之LC之DNA) AGCTACGTCCTTACTCAGCCACCTAGTGTGTCAGTAGCGCCTGGGCAAACCGCTCGCATAACTTGCGGGGGAAACAACATCGGCTCTAAATCCGTCCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCACCCGTATTGGTTGTTTACGACGATAGCGACAGACCGTCCGGTATCCCAGAGCGGTTTTCCGGTAGTAATTCTGGAAATACAGCTACCCTGACAATTTCTAGGGTGGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTATTGTCAAGTGTGGGATCGATCAAGCGACCAGGTGGTCTTCGGCGGAGGCACGAAGCTGACCGTGCTCggccagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagacaaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca SEQ ID NO: 96 (Ab7之HC之DNA) CAGGTGCAACTGGTGCAGAGTGGAGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTTCGGTCAAGGTTTCATGCAAAGCATCCGGGTATACCTTCACTAACTACTATATGCACTGGGTTCGCCAGGCCCCAGGTCAAGGCTTGGAATGGATGGGAATCATAAATCCTTCTAGCGGTTCTGCATCCTACGCTCAGAAATTTCAGGGACGTGTCACCATGACAAGAGATACATCTACTTCAACCGTCTACATGGAGCTAAGTTCCCTGAGGTCCGAAGACACCGCCGTATATTACTGTGCGCGGGAGGGCGTGGGCCGAGACATTCTCCAGGCTTTCGATATCTGGGGGCAGGGGACGCTTGTGACAGTGAGCAGCgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 97 (Ab7之LC之DNA) CAGTCTGTTCTCACACAACCACCCTCAGTAAGCGAGGCTCCCCGGCAGAGAGTCACAATCTCCTGTAGCGGAAGTAGTTCAAACATAGGGAATAATGCGGTGAACTGGTATCAGCAGTTGCCCGGTAAAGCCCCTAAACTGCTCATTTACTACGACGACTTACTACCTTCCGGCGTGAGCGACAGGTTTTCAGGAAGCAAGTCTGGCACTTCGGCCTCCCTGGCAATCTCTGGACTTCAGAGTGAGGATGAAGCTGACTATTACTGCGCAGCCTGGGATGATTCCTTGAACGGCCACGTCTTCGGTGGCGGGACCAAGTTGACCGTGCTGggccagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagacaaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca SEQ ID NO: 98 (Ab8之HC之DNA) CAGGTGCAGCTCGTCCAGAGTGGGGCCGAGGTGAAAAAGCCTGGCGCTTCGGTCAAGGTTTCATGCAAAGCCTCCGGTTACACCTTCACATCCTATTATATCCACTGGGTGAGACAAGCTCCAGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGAATTATAAACCCCATTAGCGGTCGAACCTCTTCTGCCCAGAAGTTCCAGGGACGTGTGACTATGACTCGGGATACATCCACAAGCACCGTATACATGGAGCTATCTTCACTTAGGAGTGAGGACACTGCAGTTTACTATTGTGCGAAGGAAGGTGTCGGGGGCGAGCTGTTGCGCGCATTTGACATCTGGGGGCAAGGCACCCTGGTGACGGTGTCCAGCgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcGCGctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgtccgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaagactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaagtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctattccaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggcaaa SEQ ID NO: 99 (Ab8之LC之DNA) CAGAGTGTGCTGACCCAGCCCCCAAGCGTCTCCGAGGCACCCAGACAGAGGGTGACAATCTCCTGCTCCGGAAGCAGTTCAAACATAGGCAACAACGCCGTAAATTGGTACCAGCAGCTGCCAGGTAAGGCCCCTAAACTTCTGATCTATTACGATGATTTGCTCCCTTCAGGTGTCTCTGACCGCTTTTCCGGAAGCAAATCTGGGACCAGCGCTTCTTTGGCAATTTCTGGCCTGCAATCGGAAGACGAGGCTGATTACTATTGTGCCGCTTGGGACGACAGTTTAAATGGGTTCGTTTTCGGCGGCGGAACAAAGCTAACTGTGCTCggccagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagacaaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca SEQ ID NO: 100: -Ala-Leu-Ala-Leu- (亦稱為單字母程式碼之ALAL) SEQ ID NO: 101: -Leu-Ala-Leu-Ala- (亦稱為單字母程式碼之LALA) SEQ ID NO: 102 -Gly-Gly-Phe-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GGFG) SEQ ID NO: 103 -Gly-Phe-Leu-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GFLG) SEQ ID NO: 104 -Gly-Leu-Phe-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GLFG) SEQ ID NO: 105 -Ala-Ala-Ala-Ala- (亦稱為單字母程式碼之AAAA) SEQ ID NO: 106 -Gly-Ala-Gly-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GAGG) SEQ ID NO: 107 -Gly-Gly-Ala-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GGAG) SEQ ID NO: 108 -Gly-Val-Gly-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GVGG) SEQ ID NO: 109 -Gly-Gly-Val-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GGVG) SEQ ID NO: 110: -Gly-Phe-Gly-Gly- (亦稱為單字母程式碼之GFGG)

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Claims (19)

1. 一種抗體藥物結合物(ADC)，其包含結合至細胞毒性劑之抗體，其中該細胞毒性劑包含下式： ；且 其中該抗體結合人類nectin-4且包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR包含重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該LCVR包含輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中：該HCDR1具有SEQ ID NO: 18，該HCDR2具有SEQ ID NO: 19，該HCDR3具有SEQ ID NO: 20，該LCDR1具有SEQ ID NO: 21，該LCDR2具有SEQ ID NO: 22，且該LCDR3具有SEQ ID NO: 23。
2. 如請求項1之ADC，其中該HCVR具有SEQ ID NO: 24，且該LCVR具有SEQ ID NO: 25。
3. 如請求項1之ADC，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC具有SEQ ID NO: 16之胺基酸2-443，且該LC具有SEQ ID NO: 17。
4. 如請求項3之ADC，其中該HC具有SEQ ID NO: 16，且該LC具有SEQ ID NO: 17。
5. 如請求項1之ADC，其中該ADC進一步包含將該抗體連接至該細胞毒性劑之連接子，且其中該連接子包含Ala-Ala-Ala或Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO: 102)之肽單元。
6. 如請求項5之ADC，其中該連接子進一步包含該抗體與該肽單元之間的間隔子單元A，其中間隔子單元A具有下式： ，或 ； 其中z為1至5。
7. 如請求項1之ADC，其中該ADC為下式： ，或 ， 其中： Ab為該抗體，且 n為約1至16。
8. 如請求項7之ADC，其中該ADC具有下式： 。
9. 如請求項7之ADC，其中該ADC具有下式： 。
10. 如請求項7之ADC，其中n為約4。
11. 如請求項7之ADC，其中n為約8。
12. 如請求項7之ADC，其中與該抗體之連接係透過該抗體之一或多個半胱胺酸上之硫醇基發生。
13. 如請求項12之ADC，其中該一或多個半胱胺酸各自為該抗體之鉸鏈區中之天然半胱胺酸。
14. 如請求項7之ADC，其中該Ab包含： 具有SEQ ID NO: 16之胺基酸2-443的HC；及 具有SEQ ID NO: 17之LC，且 其中n為約8。
15. 如請求項14之ADC，其中該Ab包含： 具有SEQ ID NO: 16之HC；及 具有SEQ ID NO: 17之LC。
16. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1之ADC及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
17. 一種如請求項1之ADC之用途，其係用於製造治療癌症之醫藥品。
18. 如請求項17之用途，其中該癌症為尿道上皮癌、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰臟癌、頭頸癌、卵巢癌或前列腺癌。
19. 如請求項17之用途，其中該醫藥品係與PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑組合使用或進一步包含PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。