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TWI806840B - 使用包含parp抑制劑的組合產品治療癌症 - Google Patents

使用包含parp抑制劑的組合產品治療癌症 Download PDF

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TWI806840B
TWI806840B TW106133227A TW106133227A TWI806840B TW I806840 B TWI806840 B TW I806840B TW 106133227 A TW106133227 A TW 106133227A TW 106133227 A TW106133227 A TW 106133227A TW I806840 B TWI806840 B TW I806840B
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湯志宇
羅侶松
魏旻
康 李
宋兢
張彤
王鶴翔
任博
昌友 周
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英屬開曼群島商百濟神州有限公司
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Abstract

本申請公開了在受試者中預防癌症、延遲癌症進展或治療癌症的方法，包括向有此需要的受試者施用PARP抑制劑(特別是(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮，其倍半水合物，或其醫藥上可接受之鹽)與免疫檢查點抑制劑或化療劑的組合。此外，本申請公開了包含PARP抑制劑(特別是(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮，其倍半水合物，或其醫藥上可接受之鹽)與免疫檢查點抑制劑或化療劑的藥物組合產品及其用途。

Description

使用包含PARP抑制劑的組合產品治療癌症
本申請公開了在受試者中預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症的方法，包括向有此需要的受試者施用PARP抑制劑(特別是(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮或其醫藥上可接受之鹽，(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮倍半水合物)與免疫檢查點抑制劑或化療劑的組合產品(combination)。本申請還公開了包含PARP抑制劑(特別是(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮或其醫藥上可接受之鹽，(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮倍半水合物)與免疫檢查點抑制劑或化療劑的組合的藥物組合產品及其用途。
癌症的標誌和驅動力之一是遺傳的不穩定性[Hanahan D and Weinberg R A, Hallmarks of cancer: the next generation. Cell, 2011. 144(5): p. 646-74. ]。特別是在家族性癌症中，乳腺癌易感性中的突變體BRCA1和BRCA2腫瘤抑制基因，即同源重組(HR)中的關鍵角色，已經與乳腺癌或卵巢癌發展的風險增加相關聯[Li X and Heyer W D, Homologous recombination in DNA repair and DNA damage tolerance. Cell Res, 2008. 18(1): p. 99-113. ]。就在該患者群體中，聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制劑最近受到了關注。PARP家族成員，PARP1和PARP2，在DNA複製、轉錄調節和DNA損害修復中發揮重要作用[Rouleau M, Patel A, Hendzel M J, et al., PARP inhibition: PARP1 and beyond. Nat Rev Cancer, 2010. 10(4): p. 293-301. ]。在2005年，兩篇突破性《自然》雜誌的文章表明單獨給予PARP抑制劑會殺死預先存在DNA修復缺陷、特別在BRCA1/2基因中的突變的癌細胞[Bryant H E, Schultz N, Thomas H D, et al., Specific killing of BRCA2-deficient tumors with inhibitors of poly(ADP-ribose) polymerase. Nature, 2005. 434(7035): p. 913-7; Farmer H, McCabe N, Lord C J, et al., Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy. Nature, 2005. 434(7035): p. 917-21 ]。
在臨床前模型中，PARP抑制和突變體BRCA在合成上是致命的(lethal)，表明了是一種巧妙的、靶向的和毒性最小的治療患者的方式。
WO2013/097225A1公開了一系列具有以下通式 (I) 的PARP抑制劑或其立體異構體、或其醫藥上可接受之鹽， 式 (I )
特別地，在WO2013/097225A1中公開的(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮(下文稱為化合物 A )具有高度的選擇性和潛在的PARP1/2抑制活性。 化合物 A
PCT申請PCT/CN2016/096200還公開了化合物 A 的結晶形式，特別是(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮倍半水合物(下文稱為化合物 B )。 化合物 B
本申請的發明人已經發現PARP抑制劑(特別是上述化合物 A 或化合物 B )與免疫治療劑(例如免疫檢查點抑制劑)或者化療劑的組合治療與單獨的上述活性藥劑的單一療法相比展示出更好的抗腫瘤活性，沒有嚴重毒性。
在第一態樣，本申請公開了在受試者中預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症的方法，包括向有此需要的受試者施用治療有效量的式 (I) 的PARP抑制劑或其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物與治療有效量的免疫檢查點抑制劑或化療劑的組合。
在第二態樣，本申請公開了預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症的藥物組合產品，其包含式 (I) 的PARP抑制劑、其立體異構體或其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物與治療有效量的免疫檢查點抑制劑或化療劑的組合。
在第三態樣，本申請公開了式 (I) 的PARP抑制劑或其立體異構體或其醫藥上可接受之鹽，其與治療有效量的免疫檢查點抑制劑或化療劑組合，用於預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症。在該態樣的一個實施例中，本申請公開了免疫檢查點抑制劑或化療劑，其與式 (I) 的PARP抑制劑或其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物組合，用於預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症。
在第四態樣，本申請公開了藥物組合產品在製備用於預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症的藥物中的用途，所述藥物組合產品包含式 (I) 的PARP抑制劑或其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物及免疫檢查點抑制劑或化療劑。
在第五態樣，本申請公開了製品或“套組”，其包含第一容器、第二容器和藥品說明書(package insert)，其中所述第一容器包含至少一個劑量的包含式 (I) 的PARP抑制劑或其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物的藥物；所述第二容器包含至少一個劑量的包含免疫檢查點抑制劑或化療劑的藥物，並且所述藥品說明書包含使用所述藥物治療癌症的說明。
在第六態樣，本申請公開了在受試者中預防癌症或延遲癌症進展或治療癌症的方法，包括： (i) 在治療週期中，與第一數量的式(I)的PARP抑制劑一起向有此需要的受試者施用化療劑；和 (ii) 在維持階段中，向已經在上述治療週期中接受治療的受試者施用第二數量的式(I)的PARP抑制劑。
在一些實施例中，所述PARP抑制劑為化合物A。在其它實施例中，所述PARP抑制劑為化合物B。
在一些實施例中，所述PARP抑制劑在治療週期中連續或間斷地施用。
在一些實施例中，所述方法包括1至3個治療週期，並且各治療週期包括1至4周。
在一些實施例中，所述化療劑選自紫杉醇(paclitaxel)或依託泊苷(etopside)加卡鉑(carboplatin) (E/C)。
在一些實施例中，所述化療劑以標準給藥治療方案施用。具體而言，C/E的標準給藥日程表包括每週期21天，每21天的第1天順鉑75mg/ m2 ，第1、2、3天依託泊苷100mg/ m2 ；或，每週期21天，每21天的第1天卡鉑AUC 5-6，第1、2、3天依託泊苷100mg/ m2 ；以及紫杉醇的標準給藥日程表為：每週期28天，每28天的第1、8、15天靜脈內注射(iv) 80 mg/m2 。
在一些實施例中，治療週期中第一數量的PARP抑制劑不同於維持階段中第二數量的PARP抑制劑。
在一些實施例中，治療週期中第一數量的PARP抑制劑低於維持階段中第二數量的PARP抑制劑。
在一些實施例中，維持階段中第二數量的PARP抑制劑為1-120 mg (就母體化合物而言)，施用頻率為每天一次至每天兩次；優選地，PARP抑制劑的施用劑量為1-80 mg (就母體化合物而言)，並且施用頻率為每天兩次(BID)。在其它實施例中，維持階段中第二數量的PARP抑制劑為約120-240 mg，每天一次(QD)，且治療週期中第一數量的PARP抑制劑為約60-120 mg，每天一次(QD)。
本申請公開的方法和藥物組合產品(pharmaceutical combination)，作為組合療法，相比於任一單獨的藥劑，產生更有效的抗腫瘤響應。具體而言，抗PD-1抗體(Mab-1)和化合物 B 的組合被證實展現出協同效果。化合物 A 或化合物 B 與紫杉醇或依託泊苷加卡鉑(E/C)的組合產品也被證實展現出協同效果。
在上述六個態樣中每一個的實施例中，化療劑選自紫杉醇、或依託泊苷加卡鉑(E/C)。在上述六個態樣中每一個的實施例中，免疫檢查點抑制劑為抗體。在上述六個態樣中每一個的實施例中，免疫檢查點抑制劑為單克隆抗體。在上述六個態樣中每一個的實施例中，免疫檢查點抑制劑為PD-1的抑制劑。在上述六個態樣中每一個的實施例中，癌症選自結腸直腸癌、胃癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、輸卵管癌、子宮頸癌、腹膜癌、前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌、膽管癌、胃/胃-食管接合部癌、泌尿道上皮癌、胰腺癌、外周神經鞘癌、子宮癌、黑素瘤或淋巴瘤。在上述六個態樣中每一個的實施例中，PARP抑制劑為(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮(化合物 A )，或其醫藥上可接受之鹽。在上述六個態樣中每一個的實施例中，PARP抑制劑為(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氫-5,6,7a,11-四氮雜環庚並[def]環戊並[a]茀-4(5H)-酮倍半水合物(化合物 B )。在上述六個態樣中每一個的實施例中，PARP抑制劑和免疫檢查點抑制劑或化療劑同時、順序或間隔施用。
定義
除非在本文件中另外具體指定，否則本申請所使用的所有其它科學和技術術語具有本發明所屬領域的技術人員通常理解的含義。
本申請包括所附申請專利範圍使用的單數形式的詞語諸如“一 ”、“一種 ”和“所述 ”，包括它們對應的複數指代，除非上下文清楚地表明其它情況。
術語“或 ”用來表示並可與術語“和/或”互換使用，除非上下文另外清楚表示其它含義。
在本說明書和申請專利範圍的全文中，除非上下文有其它要求，術語"包含 "及變體諸如"含有 "和"包括 "，將會被理解隱含包括所述活性劑(例如，mAb或Btk抑制劑)或所述胺基酸序列，但是不排除任何其它活性成份或胺基酸序列。當在本申請中使用時，術語"包含 "可與術語"含有 "或“包括 ”互換。
本申請的術語"烷基 "是指選自包含1-18，諸如1-12，又諸如1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基的烴基。烷基的實例可選自甲基、乙基、1-丙基或正丙基("n-Pr")、2-丙基或異丙基("i-Pr")、1-丁基或正丁基("n-Bu")、2-甲基-1-丙基或異丁基("i-Bu")、1-甲基丙基或仲丁基("s-Bu")和1,1-二甲基乙基或叔丁基("t-Bu")。烷基的其它實例可選自1-戊基(n-戊基、-CH2 CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-戊基(-CH(CH3 )CH2 CH2 CH3 )、3-戊基(-CH(CH2 CH3 )2 )、2-甲基-2-丁基(-C(CH3 )2 CH2 CH3 )、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3 )CH(CH3 )2 )、3-甲基-1-丁基(-CH2 CH2 CH(CH3 )2 )、2-甲基-1-丁基(-CH2 CH(CH3 )CH2 CH3 )、1-己基(-CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-己基(-CH(CH3 )CH2 CH2 CH2 CH3 )、3-己基(-CH(CH2 CH3 )(CH2 CH2 CH3 ))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3 )2 CH2 CH2 CH3 )、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3 )CH(CH3 )CH2 CH3 )、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3 )CH2 CH(CH3 )2 )、3-甲基-3-戊基(-C(CH3 )(CH2 CH3 )2 )、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2 CH3 )CH(CH3 )2 )、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3 )2 CH(CH3 )2 )和3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3 )C(CH3 )3 基團。
本申請的術語"烯基 "是指選自包含至少一個C=C雙鍵和2-18、諸如2-12、又諸如2-6個碳原子的直鏈烴基或支鏈烴基的烴基。烯基的實例可選自乙烯基(ethenyl或vinyl) (-CH=CH2 )、丙-1-烯基(-CH=CHCH3 )、丙-2-烯基(-CH2 CH=CH2 )、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。
本申請的術語"炔 基 "是指包含至少一個C≡C三鍵和2-18、諸如2-12、又諸如2-6個碳原子的直鏈烴基或支鏈烴基的烴基。炔基的實例包括乙炔基(-C≡CH)、1-丙炔基(-C≡CCH3 )、2-丙炔基(炔丙基，-CH2 C≡CH)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
本申請的術語"環烷基 "是指選自飽和及部分飽和的環狀烴基的烴基，包括單環和多環(例如，二環和三環)基團。例如，環烷基可包括3-12、諸如3-8、又諸如3-6、3-5、3-4個碳原子。再例如，環烷基可選自3-12、諸如3-8、又諸如3-6個碳原子的單環基團。單環環烷基的實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基和環十二烷基。二環環烷基的實例包括具有7-12個環原子的排列為選自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]和[6,6]環體系二環的彼等，或排列為選自二環[2.2.1]庚烷、二環[2.2.2]辛烷和二環[3.2.2]壬烷的橋接二環的彼等。所述環可為飽和的或者具有至少一個雙鍵(即，部分飽和的)，但不是完全共軛的，且不是芳族的，如本申請所定義的芳族的。
本申請的術語"芳基 "是指選自以下的基團： 5和6元碳環芳族環，例如，苯基； 二環體系諸如7-12元二環體系，其中至少一個環為碳環和芳族環，選自例如萘和茚滿；和 三環體系諸如10-15元三環體系，其中至少一個環為碳環和芳族環，例如，芴。
例如，所述芳基選自稠合至任選含有至少一個選自N、O和S的雜原子的5至7元環烷基或雜環的5和6元碳環芳族環，條件是當碳環芳族環與雜環稠合時，連接點在碳環芳族環處，且當碳環芳族環與環烷基稠合時，連接點可位於碳環芳族環處或位於環烷基處。從經取代的苯衍生物形成的且在環原子處具有自由價的二價基團命名為經取代的亞苯基。通過以自由價從碳原子除去一個氫原子而衍生自名稱以"-基"結尾的單價多環碳基團的二價基團通過將“亞”添加至對應的單價基團名稱中，例如，具有兩個連接點的萘基稱為亞萘基。然而，芳基在任何情況下不包括下文分開定義的雜芳基或者與下文分開定義的雜芳基不重疊。因此，如果一個或多個碳環芳族環與雜環芳族環稠合，所得環體系為雜芳基，而不是如本申請定義的芳基。
本申請的術語"芳基烷基 "是指被如上所定義的芳基所取代的如上所定義的烷基。
本申請的術語"鹵素 "或"鹵基 "是指F、Cl、Br或I。
本申請的術語"雜芳基 "是指選自以下的基團： 5-7元芳族單環，其包含至少一個雜原子，例如1-4個，在一些實施例中1-3個，選自N、O和S的雜原子，且其餘環原子為碳； 8-12元二環，其包含至少一個雜原子，例如1-4個，在一些實施例中1-3個，在其它實施例中1或2個，選自N、O和S的雜原子，且其餘環原子為碳，且其中至少一個環為芳族的，且在芳族環中存在至少一個雜原子；和 11-14元三環，其包含至少一個雜原子，例如1-4個，或在一些實施例中1-3個，或在其它實施例中1或2個，選自N、O和S的雜原子，且其餘環原子為碳，且其中至少一個環為芳族的，且在芳族環中存在至少一個雜原子。
例如，雜芳基包括與5-7元環烷基環稠合的5-7元雜環芳族環。就其中僅一個環包含至少一個雜原子的上述稠合二環雜芳基環系而言，連接點可位於雜芳族環或環烷基環。
當雜芳基中S和O原子的總數超過1時，彼等雜原子不彼此相鄰。在一些實施例中，雜芳基中S和O原子的總數不大於2。在一些實施例中，芳族雜環中S和O原子的總數不大於1。
雜芳基的實例包括但不限於(由優先指定為1的連接位置開始編號)，吡啶基(諸如2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2,4-嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,4-咪唑基、咪唑並吡啶基、異噁唑基、噁唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、四唑基、噻吩基、三嗪基、苯並噻吩基、呋喃基、苯並呋喃基、苯並咪唑基、吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、酞嗪基、吡嗪基、噠嗪基、吡咯基、三唑基、喹啉基、異喹啉基、吡唑基、吡咯並吡啶基(諸如1H-吡咯並[2,3-b]吡啶-5-基)、吡唑並吡啶基(諸如1H-吡唑並[3,4-b]吡啶-5-基)、苯並噁唑基(諸如苯並[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧雜-2,3-二唑基、1-氧雜-2,4-二唑基、1-氧雜-2,5-二唑基、1-氧雜-3,4-二唑基、1-硫雜-2,3-二唑基、1-硫雜-2,4-二唑基、1-硫雜-2,5-二唑基、1-硫雜-3,4-二唑基、呋咱基、苯並呋咱基、苯並噻吩基、苯並噻唑基、苯並噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮雜萘基、呋喃並吡啶基、苯並噻唑基(諸如苯並[d]噻唑-6-基)、吲唑基(諸如1H-吲唑-5-基)和5,6,7,8-四氫異喹啉基。
本申請的術語“雜環的 ”、“雜環 ”或“雜環基 ”是指選自4-12元單環、二環和三環飽和及部分不飽和環的環，除至少一個雜原子、諸如1-4個雜原子又諸如1-3個或又諸如1或2個選自氧、硫和氮的雜原子外其還包含至少一個碳原子。本申請的“雜環”還指與5、6和/或7元環烷基、碳環芳環或雜芳環稠合的包含至少一個選自N、O和S的雜原子的5-7元雜環，條件是當雜環與碳環芳環或雜芳環稠合時，連接點位於雜環，而當雜環與環烷基稠合時，連接點可位於環烷基或雜環。本申請的“雜環”還指包含至少一個選自N、O和S的雜原子的脂族螺環，條件是連接點位於雜環。所述環可為飽和的或具有至少一個雙鍵(即部分不飽和的)。雜環可取代有側氧基。連接點可為雜環中的碳或雜原子。雜環不是本申請定義的雜芳基。
雜環的實例包括但不限於(由優先指定為1的連接位置開始編號)，1-吡咯啶基、2-吡咯啶基、2,4-咪唑烷基、2,3-吡唑烷基、1-呱啶基、2-呱啶基、3-呱啶基、4-呱啶基、2,5-呱嗪基、哌喃基、2-嗎啉基、3-嗎啉基、氧雜環丙基、氮雜環丙基、硫雜環丙基、氮雜環丁基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、1,2-二硫雜環丁基、1,3-二硫雜環丁基、二氫吡啶基、四氫吡啶基、硫嗎啉基、氧硫雜環己基、呱嗪基、高呱嗪基、高呱啶基、氮雜環庚基、氧雜環庚基、硫雜環庚基、1,4-氧硫雜環己基、1,4-二氧雜環庚基、1,4-氧硫雜環庚基、1,4-氧氮雜環庚基、1,4-二硫雜環庚基、1,4-硫氮雜環庚基、1,4-二氮雜環庚基、1,4-二噻烷基、1,4-氮硫雜環己基、氧氮雜䓬基、二氮雜䓬基、硫氮雜䓬基、二氫噻吩基、二氫哌喃基、二氫呋喃基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫哌喃基、四氫噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二氧雜環戊基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫雜環戊基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、1,1-二側氧基-硫嗎啉基、3-氮雜二環[3.1.0]己基、3-氮雜二環[4.1.0]庚基和氮雜二環[2.2.2]己基。經取代的雜環還包括取代有一個或多個側氧基部分的環系，諸如呱啶基-N-氧化物、嗎啉基-N-氧化物、1-側氧基-1-硫嗎啉基和1,1-二側氧基-1-硫嗎啉基。
本申請描述的化合物可含有不對稱中心並且因此可作為對映異構體存在。若本申請描述的化合物具有兩個或更多個不對稱中心，它們可另外作為非對映異構體存在。對映異構體和非對映異構體都落入立體異構體的更廣泛分類裡。意在包括所有此等可能的立體異構體，如基本上純的拆分的對映異構體，其外消旋混合物，以及非對映異構體混合物。意在包括本申請公開的化合物和/或其醫藥上可接受之鹽的所有立體異構體。除非另有說明，否則對一種異構體的引用適用於所有可能的異構體。當未指明具體的異構體組合物時，包括所有可能的異構體。
本申請使用的術語"基本上純 "表示目標立體異構體含有不超過35重量%、諸如不超過30重量%、又諸如不超過25重量%、再又諸如不超過20重量%的其它立體異構體。在一些實施例中，術語"基本上純"表示目標立體異構體含有不超過10重量%、諸如不超過5重量%，諸如不超過1重量%的任何其它立體異構體。
當本申請描述的化合物含有烯烴雙鍵時，除非另有指明，否則這種雙鍵意在包括E和Z幾何異構體兩者。
本申請描述的一些化合物可存在有不同的氫連接點，稱為互變異構體。例如，包括羰基-CH2 C(O)-基團(酮形式)的化合物可經歷互變現象形成羥基-CH=C(OH)-基團(烯醇形式)。當適用時，還意在包括酮和烯醇形式這兩者，單獨地以及其混合物。
可能有利的是將反應產物彼此分開和/或將產物與起始物質分開。通過本領域習知技術將每個步驟或系列步驟的期望產物分離和/或純化(下文稱為分離)至期望程度的均一性。典型地，這種分離涉及多相萃取、從溶劑或溶劑混合物結晶、蒸餾、昇華或層析法。層析法可以涉及任何數量，包括例如：反相和正相；尺寸排阻；離子交換；高壓、中壓、低壓液相層析方法和設備；小規模分析；模擬移動床("SMB")和製備型薄層或厚層層析，以及小規模薄層和急驟層析技術。本領域技術人員會應用各技術以實現所期望的分離。
非對映異構體可通過本領域技術人員已知的方法基於它們的物理化學差異分離為它們單個的非對映異構體，此等方法諸如層析和/或分步結晶。對映異構體可通過如下方法分離：通過與合適的旋光化合物(例如，手性助劑諸如手性醇或Mosher醯氯)反應將對映異構體混合物轉化成非對映異構體混合物，將非對映異構體分離並將單獨的非對映異構體轉化(例如，水解)成相應的純的對映異構體。對映異構體還可通過使用手性HPLC柱分離。
單個的立體異構體，例如基本上純的對映異構體可通過使用諸如旋光拆分試劑的方法將外消旋混合物拆分而得到(Eliel, E. and Wilen, S. Stereochemistry of Organic Compounds. New York: John Wiley & Sons, Inc., 1994; Lochmuller, C. H., et al. "Chromatographic resolution of enantiomers: Selective review." J. Chromatogr., 113(3) (1975): pp. 283-302 )。本發明的手性化合物的外消旋混合物可通過任何合適的方法分開並分離，合適的方法包括：(1)與手性化合物形成離子性的非對映異構體鹽並通過分步結晶或其它方法進行分離，(2)與手性衍生試劑形成非對映異構體化合物，分離非對映異構體並轉化成純的立體異構體，和(3)直接在手性條件下分離基本上純的或富集的立體異構體。參見:Wainer, Irving W., Ed. Drug Stereochemistry: Analytical Methods and Pharmacology. New York: Marcel Dekker, Inc., 1993 .
"醫藥上可接受之鹽 "包括但不限於與無機酸形成的鹽，選自，例如，鹽酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、亞磺酸鹽和硝酸鹽；以及與有機酸形成的鹽，選自，例如，蘋果酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、烷醇鹽諸如乙酸鹽，和與HOOC-(CH2 )n -COOH (其中n選自0至4)形成的鹽。類似地，醫藥上可接受之陽離子的實例包括但不限於，鈉、鉀、鈣、鋁、鋰和銨。
此外，如果以酸加成鹽形式獲得本申請公開的化合物，游離鹼可通過將酸鹽的溶液鹼化得到。相反，如果產物為游離鹼，則加成鹽諸如醫藥上可接受之加成鹽可如下製備：根據從鹼化合物製備酸加成鹽的習知操作，將游離鹼溶解於合適的有機溶劑中並以酸處理該溶液。本領域技術人員會認識到無需過度實驗就可用於製備無毒性醫藥上可接受之加成鹽的各種合成方法。
如本申請所定義的，"其醫藥上可接受之鹽 "包括至少一種式I、II (包括II-1、II-2或II-3)或III的化合物的鹽，以及至少一種式I、II (包括II-1、II-2或II-3)或III化合物的立體異構體的鹽，諸如對映異構體的鹽和/或非對映異構體的鹽。
"治療 "、"處理 "或"處置 "或"緩解 "是指將本申請公開的至少一種化合物和/或至少一種醫藥上可接受之鹽施用至被識別為有此需要的受試者，所述受試者具有例如癌症疾病或具有例如癌症疾病的症狀或具有患例如癌症疾病的傾向，目的在於治癒、癒合、緩解、減輕、改變、彌補、改善、促進或影響例如癌症疾病、例如癌症疾病的症狀或患例如癌症疾病的傾向。
術語"有效量 "是指有效地(如上定義)"治療"受試者中的疾病或病症的至少一種本申請所公開的化合物、其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽和其溶劑合物。在癌症的情況中， 有效量會在受試者中引起可觀察到的或可量測的任何變化，如在上文"治療"、"處理"、"處置"和"緩解"的定義中所描述的。例如，有效量可以減少癌症或腫瘤細胞的數量；減少腫瘤尺寸；抑制或停止腫瘤細胞滲透進入周圍器官，包括例如腫瘤擴散進入軟組織和骨；抑制和停止腫瘤轉移；抑制和停止腫瘤生長；在一定程度上緩解與癌症相關的一個或多個症狀，減少發病率和死亡率；改善生活品質；或者此等效果的組合。有效量可為足以降低響應抑制PARP的疾病的症狀的數量。對於癌症療法，體內功效可例如通過評估以下項目來量測：存活持續時間、疾病推進的時間(TTP)、響應率(RR)、響應持續時間和/或生活品質。有效量可如本領域技術人員所認識的，根據施用途徑、賦形劑使用和與其它試劑的共同使用而變化。
術語"抑制 "表明在生物活性或工藝的基線活性中的降低。"抑制PARP"是指作為對本申請公開的至少一種化合物和/或其至少一種醫藥上可接受之鹽的直接或間接響應，在PARP活性中的降低，相對於不存在所述至少一種化合物和/或其至少一種醫藥上可接受之鹽情況下的PARP的活性而言。活性的降低不受理論的限制並且可以是由於本申請公開的至少一種化合物、其立體異構體和其醫藥上可接受之鹽與PARP的直接相互作用，或者是由於本申請公開的至少一種化合物、其立體異構體和其醫藥上可接受之鹽與一種或多種轉而影響PARP活性的因素的作用。例如，本申請公開的至少一種化合物、其立體異構體和其醫藥上可接受之鹽的存在可通過直接結合至PARP、通過(直接或間接)造成另一降低PARP活性的因素或者通過(直接或間接)降低PARP在細胞或有機體中的存在量而降低PARP活性。
術語"至少一個取代基 "包括，例如，1-4個、諸如1-3個、又諸如1或2個取代基。例如，本申請中的"至少一個取代基R12 "包括1-4個、諸如1-3個、又諸如1或2個選自本申請描述的R12 列表的取代基
本申請中的術語“施用 ”、“給藥 ”，當應用於動物、人類、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物體液時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人類、受試者、細胞、組織、器官或生物體液的接觸。對細胞的處置包括試劑與細胞的接觸及試劑與體液的接觸，其中所述體液與細胞接觸。術語“施用 ”也指例如試劑、診斷劑、結合化合物或另一種細胞的體外和離體處置，例如對細胞的體外和離體處置。本申請中的術語“受試者”包括任何有機體，優選動物，更優選哺乳動物(例如，大鼠、小鼠、犬、貓、兔)且最優選人類。
本申請中的術語“抗體 ”以最廣義使用且具體涵蓋抗體(包括全長單克隆抗體)及抗體片段，只要其識別抗原諸如靶向抗原(例如，CD20)或免疫檢查點(例如，PD-1)即可。抗體分子通常為單特異性的，但也可描述為獨特特異性、異種特異性或多特異性的。抗體分子借助於特異性結合位點與抗原上的特異性抗原決定簇或抗原決定基結合。
本申請中的術語“單克隆抗體 ”或“mAb ”或“Mab ”是指基本上均質的抗體群，即包含在群中的抗體分子除可少量存在的可能天然存在的突變外在胺基酸序列態樣是相同的。相反地，習知(多克隆)抗體製品通常包含多種不同的抗體，所述多種不同的抗體在其可變域特別是其CDR中具有不同的胺基酸序列，所述習知(多克隆)抗體製品通常對不同的抗原決定基都具有特異性。修飾語“單克隆”表示由基本上均質的抗體群獲得的抗體的特徵且不應被解釋為需要通過任何特定方法產生抗體。單克隆抗體(mAb)可通過本領域技術人員已知的方法獲得。參見例如美國專利4,376,110 。本申請公開的mAb可為任何免疫球蛋白類別，包括IgG、IgM、IgD、IgE、IgA及其任何亞類。可對產生mAb的雜交瘤進行體外或體內培養。體內產生可獲得高滴度的mAb，其中將來自各個雜交瘤的細胞腹膜內注射到小鼠(諸如原始-始發態(pristine-primed)Balb/c小鼠)中以產生含有高濃度期望mAb的腹水液。可使用本領域技術人員公知的柱層析法由上述腹水液或培養物上清液純化同功異型物IgM或IgG的mAb。
通常，基本抗體結構單元包含四聚體。每個四聚體包含兩對相同的多肽鏈，每對具有一條“輕鏈 ”(約25kDa)和一條“重鏈 ”(約50-70kDa)。每條鏈的胺基末端部分包含主要負責抗原識別的具有約100-110個或更多個胺基酸的可變區。重鏈的羧基末端部分可限定主要負責效應子功能的恒定區。通常，人輕鏈被分類為κ和λ輕鏈。另外，人重鏈通常被分類為α、δ、ε、γ或μ且將抗體的同功異型物分別限定為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在輕鏈和重鏈中，可變區和恒定區通過具有約12個或更多個胺基酸的“J”區連接，其中重鏈還包含具有約10個或更多個胺基酸的“D”區。
每個輕鏈/重鏈(Vl/Vh)對的可變區形成抗體結合位點。因此，完整抗體通常具有兩個結合位點。除雙功能或雙特異性抗體外，兩個結合位點通常是相同的。
通常，重鏈和輕鏈的可變結構域都包含位於相對保守的架構區(FR)之間的三個高變區(也稱為“互補決定區 (CDR)”)。CDR通常通過架構區來對齊，由此能夠結合特異性抗原決定基。通常，從N末端到C末端，輕鏈和重鏈可變結構域兩者均包含FR-1 (或FR1)、CDR-1 (或CDR1)、FR-2 (或FR2)、CDR-2 (或CDR2)、FR-3 (或FR3)、CDR-3 (或CDR3)和FR-4 (或FR4)。通常，根據以下文獻的定義將胺基酸指派至各個結構域：Sequences of Proteins of Immunological Interest,Kabat 等 , National Institutes of Health, Bethesda, Md., 5＜m＞ed., NIH Publ. No. 91-3242(1991)；Kabat(1978)Adv. Prot. Chem. 32:1-75 ； Kabat 等 (1977)J. Biol. Chem. 252:6609-6616 ； Chothia 等 (1987)J Mol. Biol. 196:901-917 ；或 Chothia 等 (1989)Nature 342:878-883 。
術語“高變區 ”是指抗體的負責抗原結合的胺基酸殘基。高變區包含來自“互補決定區”或“CDR”(即輕鏈可變結構域中的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3及重鏈可變結構域中的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)的胺基酸殘基。參見Kabat 等 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.( 通過序列定義抗體的 CDR 區 ) ；另見 Chothia and Lesk(1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 (通過結構定義抗體的CDR區)。術語“架構”或“FR”是指除本申請定義為CDR殘基的高變區殘基外的彼等可變結構域殘基。
除非另有說明，否則“抗體片段 ”或“抗原結合片段 ”是指抗體的抗原結合片段，即保留與由全長抗體結合的抗原特異性結合的能力的抗體片段，例如保留一個或多個CDR區的片段。抗原結合片段的實例包括但不限於，Fab、Fab’、F(ab’)2 和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子，例如，單鏈Fv (sc-Fv)；納米抗體；和由抗體片段形成的多特異性抗體。
與特定標靶蛋白“特異性結合 ”的抗體是與其它蛋白質相比優先與該標靶結合的抗體，但是該特異性不需要絕對結合特異性。若抗體的結合在例如不產生不期望的結果諸如假陽性的情況下決定樣品中標靶蛋白的存在，則抗體被認為就其所預期的標靶而言是“特異性的”。可用於本發明的抗體或其結合片段將以比與非標靶蛋白的親和力大至少2倍、優選大至少10倍、更優選大至少20倍且最優選大至少100倍的親和力與標靶蛋白結合。據說，本申請抗體與包含給定胺基酸序列的多肽例如成熟人PD-1分子的胺基酸序列特異性結合，條件是其與包含該序列的多肽結合，但是不與不具有該序列的蛋白質結合。
本申請中的術語“人抗體 ”是指僅包含人免疫球蛋白序列的抗體。若在小鼠、小鼠細胞或衍生自小鼠細胞的雜交瘤中產生，則人抗體可含有鼠型糖鏈。類似地，“小鼠抗體 ”或“大鼠抗體 ”是指分別僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗體。
術語“人源化抗體 ”是指以下抗體形式，其含有來自非人類(例如，鼠類)抗體以及人抗體的序列。上述抗體含有衍生自非人類免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗體將包含基本上所有至少一個且通常為兩個可變結構域，其中所有或基本上所有高變環與非人類免疫球蛋白的彼等高變環是對應的且所有或基本上所有FR區是人免疫球蛋白序列的彼等FR區。人源化抗體任選還將包含免疫球蛋白恒定區(Fc)通常為人免疫球蛋白恒定區(Fc)的至少一部分。當必要時，將前綴“hum ”、“hu” 、“Hu ”或“h ”添加至抗體克隆名稱以區分人源化抗體與親本齧齒動物抗體。齧齒動物抗體的人源化形式通常將包含與親本齧齒動物抗體相同的CDR序列，儘管可包括某些胺基酸取代以增加親和力、增加人源化抗體的穩定性或出於其它原因。
本申請中的術語“癌症 ”或“腫瘤 ”表示或描述的是涉及具有侵入或擴散至身體其它部分的可能性的異常細胞生長的生理狀況。“疾病 ”是指任何病、不適、恙、症狀或適應症，且可用術語“病症 ”或“病況 ”替代。
在一些實施例中，所述癌症為結腸直腸癌、胃癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、輸卵管癌、子宮頸癌、腹膜癌、前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌、膽管癌、胃/胃-食管接合部癌、泌尿道上皮癌、胰腺癌、外周神經鞘癌、子宮癌、黑素瘤或淋巴瘤。
術語“CDR ”是指免疫球蛋白可變區中的互補性決定區，使用Kabat編碼系統進行限定，除非另有指明。免疫檢查點抑制劑
在一些實施例中，PARP抑制劑與免疫檢查點抑制劑共同施用，所述免疫檢查點抑制劑為PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、Gal-9、CTLA-4、CD80、CD86、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、BTLA、HVEM、IDO1、IDO2、TDO、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD90、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、ICOS、LAIR1、LIGHT、MARCO、PS、OX-40、SLAM TIGHT、CTCNI的抑制劑或其組合。
“免疫檢查點 ( 檢查點蛋白 ) ”是免疫系統中調高信號(共刺激分子)或調低信號的分子。並且它們還調節T細胞活化或功能。許多癌症通過抑制T細胞信號保護自身不受免疫系統攻擊。完全或部分降低、抑制、干涉或調控一個或多個檢查點蛋白的“免疫檢查點抑制劑 ”已經越來越多地被視為癌症免疫治療的標靶。已知多個檢查點蛋白，諸如PD-1 (程序性死亡分子1, CD279)及其配位體PD-L1 (也稱為CD274或B7-H1)和PD-L2；TIM-3 (T細胞免疫球蛋白結構域和粘蛋白結構域3，也已知為HAVCR2)及其配位體Gal-9；CTLA-4 (細胞毒性T淋巴細胞相關的蛋白4, CD152)及其配位體CD80和CD86；和A2AR (腺苷A2A受體)；B7-H3 (CD276)；B7-H4 (VTCN1)；BTLA (B和T淋巴細胞衰減器, CD272)及其配位體HVEM (皰疹病毒侵入介體)；IDO (吲哚胺2,3-雙加氧酶)；LAG3 (淋巴細胞活化基因-3)；VISTA (T細胞活化的V結構域Ig抑制劑)；KIR (殺傷細胞免疫球蛋白樣受體)。此等蛋白負責T細胞響應的共調解性和抑制性相互作用。免疫檢查點蛋白調節和保持生理免疫響應的持續時間和幅度及自身耐受。免疫檢查點抑制劑包括抗體或衍生自抗體。
免疫系統具有對於保持自身耐受和調控免疫響應很關鍵的多個抑制通路。在T細胞中，響應的幅度和質量經由通過T細胞受體的抗原識別而啟動，並且由平衡共刺激性和抑制性信號的免疫檢查點蛋白調節。
PD-1為免疫檢查點蛋白，其限制在對感染的炎性響應時外周組織中T細胞的活性且體外限制自身免疫性PD-1阻斷，在混合淋巴細胞反應中通過特定抗原標靶或同種細胞增強響應於挑戰的T細胞增殖和細胞因子產生。PD-1表現和響應之間的強的聯繫顯示為PD-1的阻斷(Pardoll, Nature Reviews Cancer, 12: 252-264, 2012 )。PD-1阻斷可通過包括結合PD-1或其配位體的抗體的多種機制來完成。PD-1和PD-L1阻斷劑的實例，也稱為PD-1和PD-L1抑制劑，描述於US7488802；US7943743；US8008449；US8,168,757；US8217149及WO03042402、WO2008156712、WO2010089411、WO2010036959、WO2011066342、WO2011159877、WO2011082400、WO2011161699和WO2015035606中。在一些實施例中，所述PD-1抑制劑包括特異性結合PD-1的抗體或其抗原結合片段。在某些其它實施例中，所述PD-1阻斷劑包括抗PD-1抗體和類似的結合蛋白，諸如描述於US8008449B2中的納武單抗(nivolumab) (MDX 1106, BMS 936558, ONO-4538, Opdivo®)，一種通過其配位體PD-L1和PD-L2結合PD-1並阻斷PD-1的活化的全人IgG4抗體；公開於US8168757B2中的派姆單抗(pembrolizumab) (lambrolizumab, MK-3475或SCH 900475, Keytruda®)，一種針對PD-1的人源化單克隆IgG4抗體；皮地利珠單抗(pidilizumab) (CT-011)，一種結合PD-1的人源化抗體；AMP-224，一種B7-DC的融合蛋白；一種抗體Fc部分；BMS-936559 (MDX-1105-01)，用於PD-L1 (B7-H1)阻斷，用於PD-1阻斷。
在一些實施例中，所述免疫檢查點抑制劑為抗體或其抗原結合片段，或化學分子藥物。在一些實施例中，所述免疫檢查點抑制劑為化學分子藥物，其為PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、Gal-9、CTLA-4、CD80、CD86、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、BTLA、HVEM、IDO1、IDO2、TDO、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD90,CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、ICOS、LAIR1、LIGHT、MARCO、PS、OX-40、SLAM TIGHT、CTCNI的抑制劑，或其組合；或抗體或其抗原結合片段，其特異性結合一種或多種選自以下的檢查點蛋白：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、Gal-9、CTLA-4、CD80、CD86、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、BTLA、HVEM、IDO1、IDO2、TDO、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD90、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、ICOS、LAIR1、LIGHT、MARCO、PS、OX-40、SLAM TIGHT或CTCNI。在一些實施例中，所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1抗體。
在一些實施例中，所述免疫檢查點抑制劑為在WO 2015/035606 A1中公開的單克隆抗體或其片段。
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為包含重鏈可變區(Vh)和輕鏈可變區(Vl)的抗體，其含有下列互補決定區(CDR)：
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為包含重鏈可變區(Vh)和輕鏈可變區(Vl)的抗體，其含有下列CDR的任意組合：
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為包含重鏈可變區(Vh)和輕鏈可變區(Vl)的抗體，其包含：
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為含有IgG4重鏈效應子或恒定域的抗體，其包含SEQ ID NO: 83-88中的任一種。
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為含有F(ab)或F(ab)2 的抗體，其包含上述結構域，包括重鏈可變區(Vh)、輕鏈可變區(Vl)和IgG4重鏈效應子或恒定域。
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為包含重鏈可變區(Vh)和輕鏈可變區(Vk)及IgG4重鏈效應子或恒定域的抗體，其包含SEQ ID NO: 87或88，其中所述重鏈可變區(Vh)和輕鏈可變區(Vl)包含：
優選地，所述抗PD-1單克隆抗體為包含重鏈可變區(Vh)和輕鏈可變區(Vl) (各包含SEQ ID No 24和SEQ ID No 26)及IgG4重鏈效應子或恒定域(包含SEQ ID NO 88)的抗體，下文稱為Mab1 ，其特異性結合PD-1，特別是包括K45和I93或者I93、L95和P97的PD-1殘基；並且抑制PD-1介導的細胞信號傳導和免疫細胞的活性，抗體結合至一組其配位體結合所要求的胺基酸殘基。
所述抗PD1單克隆抗體及其抗體片段可根據WO2015/035606 A1中的公開內容製備，將其全文公開內容作為參考引入本申請。化療劑
在一些實施例中，所述PARP抑制劑與化療劑共同施用。
化療劑是使用一種或多種抗癌藥物(化療劑)作為標準化化療治療方案中的部分的一類癌症治療。在一些實施例中，所述化療劑選自紫杉醇或依託泊苷加卡鉑(E/C)。PARP 抑制劑
“PARP 抑制劑 ”是指式 (I) 化合物或其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物。
如在上述六個態樣中的每一個中所公開的，所述PARP抑制劑為式 (I) 化合物、其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物， 式 (I) 其中：RN 選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；X 選自C、N、O和S；m 和n ，可以相同或不同，各自為0、1、2或3的整數；t 為0、1、2或3的整數；R1 ，在各自出現時，獨立地選自鹵素、CN、NO2 、OR9 、NR9 R10 、NR9 COR10 、NR9 SO2 R10 、CONR9 R10 、COOR9 、SO2 R9 、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；R2 選自氫、COR9 、CONR9 R10 、CO2 R9 、SO2 R9 、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；R3 、R4 、R5 、R6 、R7 和R8 ，可以相同或不同，各自獨立地選自氫、鹵素、-NR9 R10 、-OR9 、側氧基、-COR9 、-CO2 R9 、-CONR9 R10 、-NR9 CONR10 R11 、-NR9 CO2 R10 、-NR9 SO2 R10 、-SO2 R9 、烷基、烯基、環烷基、芳基、雜環基、炔基和雜芳基，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、雜環基和雜芳基中每一個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代， 或(R3 和R4 )和/或(R4 和R5 )和/或(R5 和R6 )和/或(R6 和R7 )和/或(R7 和R8 )與它們所連接的原子一起形成3-至8-元飽和的、部分或全部不飽和的具有0、1或2個獨立選自以下的雜原子的環：-NR13 -、-O-、-S-、-SO-或-SO2 -，並且所述環任選被至少一個取代基R12 取代，前提是： 當X 為O時，R5 和R6 不存在， 當X 為N時，R6 不存在， 當X 為S時，R5 和R6 不存在，或R5 和R6 中至少一個為側氧基， 當R3 和R4 中一個為側氧基時，另一個不存在， 當R7 和R8 中一個為側氧基時，另一個不存在，且 當X為C且R5 和R6 中一個為側氧基時，另一個不存在；R9 、R10 和R11 ，可以相同或不同，各自選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；R12 選自CN、鹵素、鹵代烷基、NO2 、-NR'R"、-OR'、側氧基、-COR'、-CO2 R'、-CONR'R"、-NR'CONR"R"'、-NR'CO2 R"、-NR'SO2 R"、-SO2 R'、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中R'、R"和R"'各自獨立地選自氫、鹵代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，或(R'和R")和/或(R"和R"')與它們所連接的原子一起形成3-至8-元飽和的、部分或全部不飽和的具有0、1或2個獨立選自以下的另外雜原子的環：-NR13 -、-O-、-S-、-SO-和-SO2 -，R13 選自氫、烷基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基。
在一些實施例中，所述PARP抑制劑為式 (II) 的化合物、其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物， 式 (II) 其中：RN 選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；m 和n ，可以相同或不同，各自為0、1、2或3的整數；t 為0、1、2或3的整數；R1 ，在各自出現時，獨立地選自鹵素、CN、NO2 、OR9 、NR9 R10 、NR9 COR10 、NR9 SO2 R10 、CONR9 R10 、COOR9 、SO2 R9 、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；R2 選自氫、COR9 、CONR9 R10 、CO2 R9 、SO2 R9 、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；R3 、R4 、R5 、R7 和R8 ，可以相同或不同，各自獨立地選自氫、鹵素、-NR9 R10 、-OR9 、側氧基、-COR9 、-CO2 R9 、-CONR9 R10 、-NR9 CONR10 R11 、-NR9 CO2 R10 、-NR9 SO2 R10 、-SO2 R9 、烷基、烯基、環烷基、芳基、雜環基、炔基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代，或(R3 和R4 )和/或(R4 和R5 )和/或(R5 和R7 )和/或(R7 和R8 )與它們所連接的原子一起形成3-至8-元飽和的、部分或全部不飽和的具有0、1或2個獨立選自以下的雜原子的環：-NR13 -、-O-、-S-、-SO-和-SO2 -，並且所述環任選被至少一個取代基R12 取代，前提是： 當R3 和R4 中一個為側氧基時，另一個不存在，且 當R7 和R8 中一個為側氧基時，另一個不存在；R9 、R10 和R11 ，可以相同或不同，各自選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每個獨立地任選被至少一個取代基R12 取代；R12 選自CN、鹵素、鹵代烷基、NO2 、-NR'R"、-OR'、側氧基、-COR'、-CO2 R'、-CONR'R"、-NR'CONR"R"'、-NR'CO2 R"、-NR'SO2 R"、-SO2 R'、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中R'、R"和R"'各自獨立地選自氫、鹵代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，或(R'和R")和/或(R"和R"')與它們所連接的原子一起形成3-至8-元飽和的、部分或全部不飽和的具有0、1或2個獨立選自以下的另外雜原子的環：-NR13 -、-O-、-S-、-SO-或-SO2 -；且R13 選自氫、烷基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環基。
在一些實施例中，所述PARP抑制劑選自下列化合物： 其立體異構體、其醫藥上可接受之鹽或其溶劑合物。
如在上述六個態樣中每一個中所公開的，所述PARP抑制劑為式 (III )化合物—即，化合物 A ， 式 (III) 或其醫藥上可接受之鹽。
如在上述六個態樣中每一個中所公開的，所述PARP抑制劑為式 (IV )化合物—即，化合物 B 。 式 (IV)
本申請公開的PARP抑制劑，諸如式 (III) 和(IV) 化合物，可通過在WO2013/097225A1和PCT申請PCT/CN2016/096200中公開的合成路線來合成，將其全部內容引入本申請作為參考。組合療法
組合療法可按同時或分開或依序方案來施用。當依序施用時，組合可按兩次或更多次給藥來施用。組合施用包括使用分開的製劑共同施用和以任意順序連續施用，其中優選存在兩種(或所有)活性劑同時發揮其生物活性的時段。
任何上述共同施用的藥劑的合適劑量是目前使用的彼等劑量且可由於PARP抑制劑和化療劑或免疫檢查點抑制劑的組合作用(協同作用)諸如增加的治療指數或減輕的毒性或其它副作用或後果而降低。
在抗癌療法的具體實施例中，PARP抑制劑和化療劑或免疫檢查點抑制劑可進一步與手術療法和放射療法組合。
在上述六個態樣中每一個的一些實施例中，本申請公開的PARP抑制劑和化療劑或免疫檢查點抑制劑的量及施用的相對時間安排通過待治療的患者的個體需要、施用途徑、疾病或病痛的嚴重程度、給藥時間表以及指定醫生所作出的評價和判斷來確定。
例如， PARP抑制劑的施用劑量為1-120 mg (就母體化合物而言)、優選1-80 mg (就母體化合物而言)，並且施用頻率為每天兩次(BID)；PARP抑制劑的施用劑量為1-120-240 mg (就母體化合物而言)、優選60-120 mg (就母體化合物而言)，並且施用頻率為每天一次(QD)。在一些情況中，更適合應用上述劑量範圍的下限，而在其它情況中，可使用更高的劑量而不會導致有害的副作用。
PD-1拮抗劑以0.5-30 mg/kg、諸如0.5-20 mg/kg、又諸如0.5-10 mg/kg的劑量每週一次(QW)、或每兩週一次(Q2W)、或每三週一次(Q3W)或每四周一次(Q4W)施用。優選地，所述PD-1拮抗劑以2 mg/kg的劑量每三週一次(Q3W)施用或以200 mg的劑量每三週一次(Q3W)施用。
本申請公開的PARP抑制劑和化療劑或免疫檢查點抑制劑可按多種已知方式施用，諸如口服、局部、經直腸、胃腸外、通過吸入噴霧或經由植入的儲庫，儘管任何給定情況下最合適的途徑將取決於具體的主體及施用活性成分所針對的病症的性質和嚴重程度。本申請使用的術語“胃腸外 ”包括皮下、皮內、靜脈內、肌內、關節內、動脈內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內和顱內注射或輸注技術。
在上述六個態樣中每一個的一些實施例中，本申請公開的PARP抑制劑和化療劑或免疫檢查點抑制劑可按不同途徑施用。在優選的實施例中，所述PARP抑制劑口服施用，而化療劑或免疫檢查點抑制劑腸胃外施用，諸如皮下、皮內、靜脈內或腹膜內施用。
在上述六個態樣中每一個的一個實施例中，所述抗PD-1單克隆抗體是名稱為Mab-1 的抗體，其包括重鏈可變結構域(Vh)和輕鏈可變結構域(Vl) (分別包括SEQ ID No 24和SEQ ID No 26)和IgG4重鏈效應子或恒定域(包括SEQ ID NO 88)；並且所述PARP抑制劑為本申請所公開的式 (III )或(IV) 的化合物。
在上述六個態樣中每一個的一些實施例中，所述PD-1拮抗劑Mab-1 以0.5-20 mg/kg的劑量向受試者靜脈內注射(i.v.)或腹膜內注射(i.p.) QW或Q2W或Q3W或Q4W施用，並且所述PARP抑制劑化合物 A 或化合物 B 以1-120 mg BID的劑量向受試者施用。在一些優選的實施例中，所述PD-1拮抗劑Mab-1 以0.5-10 mg/kg的劑量向受試者靜脈內注射或腹膜內注射QW或Q2W或Q3W或Q4W施用，並且所述PARP抑制劑化合物 A 或化合物 B 以1-80 mg BID的劑量向受試者施用。在上述六個態樣中每一個的一些實施例中，所述PD-1拮抗劑Mab-1 以2 mg/kg每三週一次(Q3W)向受試者施用，並且所述PARP抑制劑化合物 A 或化合物 B 以1-80 mg BID的劑量向受試者施用。在上述六個態樣中每一個的一些實施例中，所述PD-1拮抗劑Mab-1 以2 mg/kg的劑量向受試者Q3W施用，並且所述PARP抑制劑化合物 A 或化合物 B 以PARP抑制劑為20 mg、40 mg或60 mg BID的劑量向受試者施用，優選地，以40 mg BID的劑量向受試者施用。在上述六個態樣中每一個的一些實施例中，所述PD-1拮抗劑Mab-1 以200 mg的劑量向受試者Q3W施用，並且所述PARP抑制劑化合物 A 或化合物 B 以40或60 mg BID的劑量向受試者施用，優選地，以40 mg BID的劑量向受試者施用。實例
本發明進一步由舉例說明本發明的以下實例進行示例性說明，但是並不受其限制。在本發明的實例中，除非另有明確陳述，否則技術或方法為本領域中習知的技術或方法。實例 1. 製備化合物 A 和化合物 B
步驟1：合成化合物-2
溴乙酸叔丁基酯(51.7 Kg)溶解在無水乙腈(72 Kg)中。將溫度升高至65-75℃，然後添加甲基二氫吡咯(22 Kg)。在反應完成後濃縮反應混合物，殘餘的乙腈通過添加THF除去且然後濃縮。GC顯示完全除去乙腈後，添加更多的THF並攪拌。所得固體經過濾並經收集。得到44.1 Kg的灰白色固體化合物-2。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 4.91 (s, 2H), 4.15 (m, 2H), 3.29 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), ), 2.14 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)ppm。
步驟2：合成化合物-3
向三甲基甲矽烷基乙炔(12.4 Kg)在THF中的冷(-60℃)溶液中添加正丁基鋰在己烷(43.4 Kg)中的溶液。在完成添加正丁基鋰溶液後，所得混合物再攪拌1-2小時且然後將全部溶液轉移至化合物-2 (31 Kg)在THF中的懸浮液(於-60℃冷卻)中。轉移完成後，所得混合物溫熱至室溫並攪拌1小時。反應以水淬滅，以石油醚萃取。有機相以鹽水洗滌，以硫酸鈉乾燥，濃縮得到25.1 Kg的化合物-3。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 3.34 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.78 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.27 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.68 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.24 (s, 3H), 0.13 (s, 9 H) ppm。
步驟3：合成化合物-4
向70.1 Kg的化合物-3在THF中的冷(0-5℃)溶液添加在THF中的四丁基氟化銨(13.3 Kg)。在完成脫甲矽烷基化，反應以水淬滅，以石油醚萃取(290 Kg)並且有機相經濃縮並流經矽膠墊。濾液經濃縮得到48 Kg的化合物-4。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 3.36 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.82 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.28 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.70 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.26 (s, 3H)ppm。
步驟4：合成化合物-5
將化合物-4 (48 Kg)在THF中的溶液溫熱至50-60℃，向上述溶液中添加(-)-二-對甲基苯甲醯基-L-酒石酸(69.6 Kg)在THF中的溶液。所得混合物於50-60℃攪拌1-2小時且然後逐漸冷卻至0-10℃。所得鹽固體經過濾並且重懸於甲基叔丁基醚中並在50-60℃加熱1小時。混合物逐漸冷卻至0-5℃。所得固體經過濾得到13.1 Kg的灰白色固體。該固體以氫氧化鈉水溶液處理，以石油醚萃取，濃縮得到13.1 Kg的化合物-5 (ee≥96%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 3.36 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.82 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.29 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.70 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.26 (s, 3H) ppm。
步驟5：合成化合物-6
中間物B (14 Kg)、雙(三苯基)二氯化鈀(0.7 Kg)、CuI (0.42 Kg)和四甲基胍(11.5 Kg)溶解於DMF (48.1 Kg)中。所得溶液經攪拌並脫氣且然後在氮氣下加熱。滴加化合物-5 (9.24 Kg)在DMF (16 Kg)中的溶液。偶聯後，有機相經濃縮，殘餘物以水(145 Kg)和甲基叔丁基醚(104 Kg)攪拌，全部混合物流經矽藻土(celite)墊，分離。有機相以硫脲(14 Kg)在水(165 kg)和鹽水(100 Kg)中的溶液洗滌，濃縮。殘餘物溶解在正庚烷(120 Kg)和乙酸乙酯(28 Kg)的混合物中。溶液與木炭(1.4 kg)混合，於40-50℃加熱1-2小時，通過矽膠墊過濾。濾液經濃縮得到化合物-6固體(14.89 Kg)和液體濾液(13 Kg庚烷溶液，含有1.24 Kg的化合物-6)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.85 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.32 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.37 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 3.22 (m ,1H), 2.94 (d,J = 16.0, Hz, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.29 (s, 3h), 2.26 (m,1 H), 1.82 (m, 2H), 1.49 (s, 3H), 1.43 (s, 9H) ppm。
步驟6：合成化合物-7
將化合物-6的上述庚烷溶液添加至冷的三氟甲烷磺酸(66.1 Kg)中，同時保持內部溫度低於25℃。然後分批添加固體化合物-6 (14.87 Kg)。完成添加化合物-6後，將反應混合物溫熱至25-30℃並攪拌直到完成反應。全部混合物倒入乙酸鈉(123.5 Kg)在水(240 Kg)中的溶液中。然後通過添加固體碳酸鉀(46.1 Kg)將溶液的 pH調節至7-8。混合物以二氯甲烷(509 Kg)萃取，濃縮。殘餘物與正庚烷(41 Kg)混合，再次濃縮得到沉澱，其經過濾並以正庚烷(8 Kg)洗滌並乾燥。得到8.78 Kg的化合物-7。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.30 (s, 1H), 7.35 (dd,J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 7.08 (dd,J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.68 (d,J = 17.2 Hz, 1H), 3.21 (d,J = 17.2 Hz, 1H), 3.06 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.49 (s, 3H) ppm。
步驟7：合成化合物 A -粗產物1
化合物-7 (8.76 Kg)溶解在甲醇(69 Kg)中並將內部冷卻至低於25℃。添加乙酸(9.3 Kg)和肼水合物(7.4 Kg, 85%)，同時保持內部溫度低於25℃。在脫氣並再次填充氮氣(重複三次)後，反應混合物於55-60℃攪拌4小時。完成反應後，混合物與水(29 Kg)混合。有機相經濃縮並添加在水(40 Kg)中的碳酸鉀(12.5 Kg)。所得固體經過濾，以水(18.3 Kg)洗滌。固體以水(110 Kg)漿化，離心，乾燥並以乙醇(9.4 Kg)漿化，真空乾燥得到化合物 A -粗產物1 (7.91 Kg)。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.0 (s, 1H), 10.2 (s, 1H), 7.31 (dd, 1H,J =9.6, 2.0 Hz), 7.19 (dd, 1H,J =9.6, 2.0 Hz), 3.77 (d, 1H,J =16.4 Hz), 3.34 (d,1H,J =16.4 Hz), 2.97-3.02 (m, 1H), 2.54-2.58 (m, 1H), 2.35-2.40 (m, 1H), 1.90-1.94 (m, 1H), 1.73-1.75 (m, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.43-1.45(m, 1H) ppm。MS (ESI) m/e [M+1]+ 299。
步驟8：合成化合物 A -粗產物2
在氮氣保護下，化合物A (粗產物1) (7.88 Kg)與異丙醇(422 Kg)一起攪拌並於70-80℃加熱1-2小時直到固體完全消失。添加(+)-二-對甲基苯甲醯基-D-酒石酸(10.25 Kg)在異丙醇(84.4 Kg)中的溶液。攪拌混合物14-16小時，過濾並以異丙醇(16 Kg)洗滌，乾燥。所得鹽添加至碳酸鉀(6.15 Kg)在水(118 Kg)中的攪拌溶液。沉澱經離心、過濾並以水(18 Kg)洗滌。固體以水(110 Kg)漿化，離心，乾燥。固體溶解在THF (75 Kg)中，添加活性碳(0.8 Kg)。混合物經脫氣並通過氮氣再保護，攪拌並於40-45℃加熱1-2小時，冷卻，通過矽藻土過濾，濃縮得到固體，其以乙醇(6.5 Kg)漿化，過濾得到5.6 Kg的化合物 A 粗產物2。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.0 (s, 1H), 10.2 (s, 1H), 7.31 (dd, 1H,J =9.6, 2.0 Hz), 7.19 (dd, 1H,J =9.6, 2.0 Hz), 3.77 (d, 1H,J =16.4 Hz), 3.34 (d,1H,J =16.4 Hz), 2.97-3.02 (m, 1H), 2.54-2.58 (m, 1H), 2.35-2.40 (m, 1H), 1.90-1.94 (m, 1H), 1.73-1.75 (m, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.43-1.45(m, 1H) ppm。MS (ESI) m/e [M+1]+ 299.
步驟9：合成化合物B 化合物 B
化合物 A -粗產物2 (5.3 Kg)與異丙醇(41.6 Kg)和水(15.9 Kg)的溶液混合。混合物經脫氣並在氮氣下再保護且然後加熱至60℃並攪拌2-4小時直到固體完全溶解。將溫度升高至70-80℃並添加水(143 Kg)。所得混合物加熱至內部溫度為70-80℃且然後停止該加熱但溫和地攪拌16小時。沉澱經過濾，以水(19 Kg)洗滌並以水(21 kg)漿化2小時。所得固體經過濾，以水(20 Kg)洗滌。過濾的固體在低於45℃的溫度乾燥24-36小時。得到化合物A 倍半水合物(4.22 kg)，其粒徑為D90=51.51um, D50=18.62 um, D10=7.63 um。該PSD範圍對於製劑研發幾乎是理想的。
粉末X射線衍射圖(PXRD)用來表徵晶體化合物 2 ，參見圖 1 。晶體化合物 2 的1 H-NMR示於圖 2中。晶體化合物 2 的13 C-NMR示於圖 3 中。實例 2 PARP 抑制劑和抗 PD-1 mAb 組合的效果 材料和方法 PBMC分離和活化
簽署知情同意書後，收集健康人捐贈者的血液並根據具有小的修改的製造商的方案用Ficoll (GE Healthcare, 17-1440-02)分離PBMC。簡而言之，以等體積的1×DPBS (Gibco®, 14190-144)稀釋新鮮血液，將等體積的Ficoll添加至50 mL無菌管中，並非常小心地將新鮮的血液添加至Ficoll的表面上。隨後在400g室溫離心40分鐘。小心移除上層並將淋巴細胞層移液至乾淨的無菌管，添加3體積的1×DPBS並在200g室溫離心10分鐘。棄上清後，以10 mL 1×DPBS懸浮細胞並再洗滌2次。以5 mL RPMI-1640 (Gibco®, 22400-089)完全培養基(添加有10%胎牛血清(Gibco®, 10099-141)懸浮細胞。
對於PBMC的活化，將具有1 μg/mL 抗CD3抗體(eBioscience, 16-0037-85)的5 mL 1×DPBS添加至T25平板(Corning, 430168)，在4℃溫育過夜。丟棄T25板中的液體並用5 mL 1×DPBS洗滌板2次，丟棄1×DPBS並添加懸浮於5 mL RPMI-1640完全培養基中的新鮮分離的6-8×106 個PBMC。將板放置於37℃, 5% CO2 細胞溫育器。2-3天后，收集細胞並計數和量。 原代人腫瘤細胞分離
具有癌症的患者簽署知情同意書後，收集來自患者的腫瘤活檢組織切片(biopsy)或手術腫瘤組織樣品。在收集腫瘤當日，在生物安全櫃中將腫瘤無菌切碎成小塊。隨後以10 mL消化緩衝液懸浮腫瘤塊，在37℃和200 rpm消化0.5-1小時。通過使用70 μm過濾器過濾移除未消化的腫瘤塊。通過過濾器的具有腫瘤細胞的液體以300g室溫離心5分鐘。丟棄上清並以10 mL 1×DPBS懸浮細胞並再洗滌2次。以培養基BGB重懸細胞。
所述培養基是培養基BGB，其包含如下所列的基質： 1) F12/DMEM 1:1培養基500 mL (Gibco®, 31765-035); 2) 胎牛血清50ml (Gibco®, 10099-141); 3) B-27上清1x (Gibco®, 17504-044); 4) B2上清1x (Gibco®, 17502-048); 5) 胰島素-轉鐵蛋白-硒(ITS -G) 0.5x (Gibco®, 41400045); 6) N-乙醯基-L-半胱氨酸1.25mM (Sigma®, V900429); 7) L-抗壞血酸25ug/ml (Sigma®, V900134); 8) 葉酸3.5uM (Sigma®, V900422); 9) 腐胺180uM (Sigma®, V900377); 10) [Leu15]-胃泌素10 nM (Sigma®, SCP0151); 11) 硒1.2uM (Gibco®, 51300-044); 12) 葡萄糖25mM (Sigma®, V900392); 13) β-ME 0.2mM (Sigma®, M7522-100ML); 14) 重組人HB-EGF 10ng/ml (Peprotech, 100-47); 15) 重組人R-脊椎蛋白-1 1 μg/ml (Peprotech, 120-38); 16) 重組人Noggin 100 ng/ml (Peprotech, 120-10C); 17) HEPES 1x (Gibco®, 15630080); 18) 穀氨醯胺2 mM (Gibco®, 25030081); 19) MEM非必需胺基酸溶液1x (Gibco®, 11140050); 20) 丙酮酸鈉1x (Gibco®, 11360070); 21) 青黴素-鏈黴素1x (Gibco, 15140122); 和 22) ROCK抑制劑y-27632 10μM (Sigma®, Y0503)。 流式細胞術分析
收集活化的PBMC並以1×DPBS洗滌。使用熒光探針綴合的抗PD-1抗體(eBioscience, 12-2799-42)染色3×105 個細胞。通過流式細胞術分析PBMC上表現的PD-1。 在飼養細胞上培養原代人腫瘤細胞
C3H10T1/2細胞(ATCC, ATCC® CCL-226™)是小鼠胚胎細胞株並用作飼養細胞。當約90%的C3H10T1/2細胞匯合時，以10 μg/mL絲裂黴素C (MCC, Sigma®, M0503)在37℃處理細胞2小時。隨後丟棄具有MMC的培養基並以1×DPBS洗滌3次。收集細胞並在液氮中保存。在接種分離的原代腫瘤細胞前4小時，將經MMC處理的C3H10T1/2細胞接種至6孔板中。腫瘤細胞接種後2天，更換培養基以去除未附著的細胞。根據培養基的顏色更換培養基。當約70-90%匯合時，胰蛋白酶消化原代腫瘤細胞並在以經MMC處理的C3H10T1/2預接種的96孔板繼代培養。培養原代腫瘤細胞至足以使用PBMC繼代培養的匯合。 在Matrigel® 中培養原代人腫瘤細胞
將在培養基中懸浮的分離的原代腫瘤細胞與2% Matrigel® (BD, 356234)混合並隨後接種於48孔板中。根據培養基顏色更換培養基。在應當繼代培養細胞時，收集Matrigel® 中的類器官並移液以將Matrigel® 分散成小塊並繼代培養至96孔板以與PBMC共培養。 人IFN-γ的ELISA
以1×PBST (添加有0.5%吐溫20 (Sigma®, P1379)的PBS)洗滌板3次後，在37℃以經純化的抗人IFN-γ (Biolegend, 502402)包被96孔高結合板(Corning, 9018) 2小時或過夜，使用溶解於1×PBST的3% BSA (ChemCruz®, sc-2323)封閉板。然後在室溫溫育共培養系統的上清2小時或過夜。以1×PBST洗滌板3次後，在室溫以生物素綴合的抗人IFN-γ (Biolegend, 502504)溫育板1小時。以1×PBST洗滌板3次後，在室溫以HRP綴合的鏈黴親和素(Themo Scientific, 21130)溫育平板30分鐘。以1×PBST洗滌板5次後，將100 μL 1×TMB (ebioscience, 00-4201-56)添加至板的每孔，5至15分鐘後，以50 μL的2 mM H2 SO4 添加每孔以終止反應。在450 nm讀取吸光度。PARP 抑制劑和抗 PD-1 mAb 組合的效果
將在Matrigel® 中培養的來自具有結直腸癌的患者的原代腫瘤細胞與未預活化的同種異體人PBMC共培養，具有50 ng/ml EpCAM×CD3雙特異性T細胞銜接子且伴隨或不伴隨稱為化合物 B (30 nM)的PARP抑制劑或稱為Mab-1 (1 μg/mL)的抗PD-1抗體或其組合(簡稱為Mab-1 +化合物 B )，並培養72小時。量測共培養系統上清中的人IFN-γ並作為讀出數(參見圖 4 )。每種雙特異T細胞銜接子濃度組的IFN-γ濃度標準化至抗體治療組濃度除以對照組濃度的倍數變化。Matrigel® 中培養的原代腫瘤細胞對抗PD-1抗體響應。
使用50ng/mL雙特異性T細胞銜接子，化合物 B 組IFN-γ的倍數變化僅幾乎接近1 (值為1.08)，其表明原代腫瘤細胞可能不對單獨的30 nM化合物 B 響應。儘管抗PD-1抗體和組合治療組的倍數變化都大於1.3，組合的倍數變化大於單獨的抗PD-1抗體治療組，其表明原代腫瘤細胞不但對單獨的抗PD-1抗體響應，而且抗PD-1抗體和化合物 B 對Matrigel® 中培養的原代腫瘤細胞還存在顯著的協同效應。結果表明該癌症患者不但對測試的抗PD-1抗體響應，還對其與化合物 B 的組合的效果響應。Mab-1和化合物 B 的組合的效果顯示比單獨的抗PD-1抗體治療更好的活性，表明抗PD-1抗體(Mab-1)和化合物 B 對Matrigel® 中培養的原代腫瘤細胞存在顯著的協同效應。實例 3 PARP 抑制劑和紫杉醇的組合在原代人胃腫瘤異種移植模型中的作用 方法
從具有胃癌的患者手術移除腫瘤組織。患者手術後2至4小時內，將腫瘤的小碎片(3×3×3mm3 )皮下植入麻醉的NOD/SCID小鼠的肩胛區域。腫瘤生長至約300-1000 mm3 後，手術移除腫瘤並將碎片通過隨後的植入在NOD/SCID小鼠中傳代。BALB/c裸鼠中的植入在3次成功傳代後在NOD/SCID小鼠中實施。腫瘤碎片接種前將每只BALB/C裸鼠中的右腋下區域使用70%乙醇清潔。經由20號套針在右側脅腹使用胃癌碎片(約3×3×3 mm3 )皮下植入每只動物。
當平均腫瘤大小達到約200 mm3 時，使用分層隨機化操作將動物分成7組，其中每組8只小鼠。隨後以媒劑(0.5%甲基纖維素)、12 mg/kg化合物 A 每日兩次(BID)處理小鼠，或以15 mg/kg紫杉醇(30mg/5ml，使用前即刻使用鹽水稀釋至1.5 mg/ml), 北京協和藥廠)每四日一次(Q4D)處理小鼠，或以紫杉醇(15 mg/kg)和化合物 A (6或12 mg/kg BID)的組合處理小鼠。全部劑量以游離鹼重量為基礎。以10 ml/kg體重的體積，對於媒劑和化合物 A 通過口服灌胃(p.o.)或對於紫杉醇腹膜內(i.p.)施用治療。給藥前即刻評估體重並相應地調整給藥體積。
每週兩次記錄個體體重和腫瘤體積，其中在研究的持續過程中每日監測小鼠的毒性臨床指征。一旦其腫瘤體積達到≥2,000 mm3 、腫瘤潰爛或體重減輕超過25%，使用二氧化碳麻醉小鼠。
植入後，使用卡尺在兩個維度上量測原代腫瘤體積。使用下式計算腫瘤體積： V = 0.5 × (a × b2 )，其中a和b分別是腫瘤的長和短直徑。使用下式計算腫瘤生長抑制(TGI)：
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Figure 02_image178
Figure 02_image180
Figure 02_image182
(1) 治療t = 在時間t時經治療的腫瘤體積 治療t0 = 在時間0時經治療的腫瘤體積 安慰劑t = 在時間t時安慰劑的腫瘤體積 安慰劑t0 = 在時間0時安慰劑的腫瘤體積 使用斯氏T檢驗實施統計學分析。認為P ＜ 0.05是統計學顯著的。 結果：
圖 5 和 6 中顯示化合物 A 和紫杉醇組合的體內抗腫瘤效力。單一藥劑治療、紫杉醇(15 mg/kg Q4D×3)和化合物 A (12 mg/kg BID)對腫瘤生長具有微弱的作用或無作用，在第21天分別具有31%、-29%和30%的腫瘤生長抑制(TGI) (與媒劑組無顯著差異)。全部組合治療，紫杉醇和化合物 A (6和12 mg/kg BID)顯示顯著更好的抗腫瘤活性，在第21天分別具有80%、70%和77%的TGI (p ＜ 0.05，與紫杉醇單一藥劑治療相比)。在整個研究中，在全部的單一藥劑和組合治療組中，相比媒劑組未觀察到對體重的顯著作用。在原代胃癌異種移植模型中，化合物 A 還在與紫杉醇的組合中展現比紫杉醇單一藥劑更好的抗腫瘤活性，而無嚴重毒性。實例 4 PARP 抑制劑和依託泊苷 / 卡鉑 (E/C) 的組合在原代人 SCLC 腫瘤異種移植模型中的作用 方法
從具有局限期小細胞肺癌(SCLC)的患者手術移除腫瘤組織。患者活檢後2至4小時內，將腫瘤樣品皮下植入麻醉的NOD/SCID小鼠的肩胛區域。腫瘤生長至約300-1000 mm3 後，手術移除腫瘤並通過皮下植入將碎片在NOD/SCID小鼠中傳代。在NOD/SCID中3次成功傳代後實施在BALB/c裸鼠中的植入。腫瘤碎片接種前使用70%乙醇清潔每只BALB/C裸鼠的右腋下區域。經由20號套針在右側脅腹使用肺癌碎片(約3×3×3 mm3 )皮下植入每只動物。
當腫瘤大小達到約230 mm3 時，使用分層隨機化操作將動物分成4組，其中每組10只小鼠。隨後使用媒劑(0.5%甲基纖維素)每日兩次(BID)處理小鼠達42天，或依託泊苷(Adamas Reagent Co., Ltd. CAS# 33419-44-0)/卡鉑(CAS#41575-94-4,來自Beijing Fei Long Rui Co., Ltd.) [7天週期的12 mg/kg的依託泊苷(第1-3天) + 60 mg/kg的卡鉑(第1天)]達3個週期，隨後媒劑BID達21天(第22-42天)，或1.36 mg/kg BID的 E/C與化合物 B [7天週期的第1-7天(連續)或第1-4天(間歇)]達3個週期，隨後使用5.45 mg/kg BID的化合物 B 維持療法達21天(第22-42天)。全部劑量以游離鹼重量為基礎。以10 ml/kg體重的體積，對於媒劑和化合物 B 通過口服灌胃(p.o.)或對於依託泊苷腹膜內(ip)，或對於卡鉑靜脈內施用治療。在給藥前即刻評估體重並相應地調整給藥體積。
從第1-31天每週兩次且其後每週一次記錄個體體重和腫瘤體積，其中在研究持續過程中每日監測小鼠的毒性臨床指征。一旦其腫瘤體積達到³ 2000 mm3 或腫瘤潰爛，使用二氧化碳麻醉小鼠。
植入後，使用卡尺在兩個維度上量測原代腫瘤的體積。使用下式計算腫瘤體積：V = 0.5 × (a × b2 )，其中a和b分別是腫瘤的長和短直徑。部分消退(PR)定義為在三次連續量測中腫瘤的體積小於給藥第一天初始腫瘤體積的50%且完全消退(CR)定義為在三次連續量測中腫瘤的體積小於14 mm3 。在具有PR腫瘤的動物中，進展性的疾病定義為在兩次連續量測中腫瘤體積大於初始腫瘤體積的50%。在具有CR腫瘤的動物中，進展性疾病定義為在兩次連續量測中腫瘤體積大於14 mm3 。無腫瘤定義為在研究結束的第72天腫瘤的體積小於14 mm3 。
使用下式計算腫瘤生長抑制(TGI)：
Figure 02_image188
Figure 02_image178
Figure 02_image191
Figure 02_image192
(2) 治療t = 在時間t時經治療的腫瘤體積 治療t0 = 在時間0時經治療的腫瘤體積 安慰劑t = 在時間t時安慰劑的腫瘤體積 安慰劑t0 = 在時間0時安慰劑的腫瘤體積 使用斯氏T檢驗實施統計學分析。認為P ＜ 0.05是統計學顯著的。 結果：
圖 7 和8 中顯示化合物 B 和E/C的組合的體內抗腫瘤效力。與臨床發現一致的是，依託泊苷/卡鉑治療後在主體患者中觀察到PR，3個週期的E/C導致經治療的全部動物中的客觀響應(6PR/4CR/10)。然而，停止E/C治療後，這10個腫瘤中的7個具有進展性疾病且在第72天平均腫瘤體積達到246 mm3 。在E/C治療週期的過程中，使用1.36 mg/kg BID連續(第1-7天)或間歇(第1-4天)添加化合物 B 和5.45 mg/kg BID作為維持療法顯著增強抗腫瘤活性，其中在治療的過程中全部動物變得無腫瘤(100% CRR)。當動物處於化合物 B 維持療法時，未發生復發，表明使用化合物 B 的維持療法可提供進一步的抗腫瘤效益。完成維持治療三十天后(第72天)，大多數的動物仍為無腫瘤。在全部組合治療組中，相比E/C治療組，在E/C同時施用期過程中未觀察到對體重的顯著作用。在維持期過程中，在全部治療組中不存在顯著的體重變化。化合物 B 和E/C的組合治療展示比單獨E/C治療更好的抗腫瘤活性，而無嚴重的毒性。實例 5 PARP 抑制劑和 E/C 的組合在原代人 SCLC 異種移植模型中的作用 方法
從具有廣泛期SCLC的患者手術移除腫瘤組織。患者活檢後2至4小時內，將腫瘤樣品皮下植入麻醉的NOD/SCID小鼠的肩胛區域。腫瘤生長至約300-1000 mm3 後，手術移除腫瘤並通過皮下植入將碎片在NOD/SCID小鼠中傳代。在NOD/SCID中3次成功傳代後實施在BALB/c裸鼠中的植入。腫瘤碎片接種前使用70%乙醇清潔每只BALB/C裸鼠的右腋下區域。經由20號套針在右側脅腹使用肺癌碎片(約3×3×3 mm3 )皮下植入每只動物。
植入47天后，將帶有腫瘤的動物分為兩個組群，組群1使用較小腫瘤用於組合設置且組群2使用較大腫瘤用於維持設置。在組群1中，使用分層隨機化操作將具有約150 mm3 的平均腫瘤大小的動物分為6組，其中每組9只小鼠。隨後使用媒劑(0.5%甲基纖維素)每日兩次(BID)或5.45 mg/kg BID的化合物 B 處理小鼠達21天，或E/C [7天週期的12 mg/kg的依託泊苷(第1-3天) + 60 mg/kg的卡鉑(第1天)]達3個週期，隨後媒劑BID達21天(第22-42天)，或0.68、1.36或2.73 mg/kg BID的E/C與化合物 B 的組合(7天週期的第1-4天)達3個週期，隨後5.45 mg/kg BID化合物 B 維持療法達21天(第22-42天)。在組群2中，首先使用E/C處理具有約400 mm3 的平均腫瘤大小的動物達3個週期。在第22天，使用分層隨機化操作將20只動物分成2組，其中每組10只小鼠，隨後使用媒劑(0.5%甲基纖維素)每日兩次(BID)處理22天(第22-42天)，或5.45 mg/kg BID的化合物 B 的維持療法達21天(第22-42天)。全部劑量以游離鹼的重量為基礎。以10 ml/kg體重的體積，對於媒劑和化合物 B 通過口服灌胃(p.o.)或對於依託泊苷腹膜內(ip)，或對於卡鉑靜脈內施用治療。在給藥前即刻評估體重並相應地調整給藥體積。
從第1-31天每週兩次且其後每週一次記錄個體體重和腫瘤體積，其中在研究持續過程中每日監測小鼠的毒性臨床指征。一旦其腫瘤體積達到³ 2000 mm3 或腫瘤潰爛，使用二氧化碳麻醉小鼠。
植入後，使用卡尺在兩個維度上量測原代腫瘤的體積。使用下式計算腫瘤體積：V = 0.5 × (a × b2 )，其中a和b分別是腫瘤的長和短直徑。部分消退(PR)定義為在三次連續量測中腫瘤的體積小於給藥第一天初始腫瘤體積的50%且完全消退(CR)定義為在三次連續量測中腫瘤的體積小於14 mm3 。在具有PR腫瘤的動物中，進展性的疾病定義為在兩次連續量測中腫瘤體積大於初始腫瘤體積的50%。在具有CR腫瘤的動物中，進展性疾病定義為在兩次連續量測中腫瘤體積大於14 mm3 。無腫瘤定義為在研究結束的第72天腫瘤的體積小於14 mm3 。
使用下式計算腫瘤生長抑制(TGI)：
Figure 02_image197
Figure 02_image199
Figure 02_image201
Figure 02_image192
(3) 治療t = 在時間t時經治療的腫瘤體積 治療t0 = 在時間0時經治療的腫瘤體積 安慰劑t = 在時間t時安慰劑的腫瘤體積 安慰劑t0 = 在時間0時安慰劑的腫瘤體積 使用斯氏T檢驗實施統計學分析。認為P ＜ 0.05是統計學顯著的。 結果：
圖 9 、 10 、 11 和12 中顯示化合物 B 和E/C的組合的體內抗腫瘤效力。與臨床發現一致的是，依託泊苷/卡鉑治療後在主體患者中觀察到PR但迅速復發，E/C治療導致兩組群中都客觀響應但停止E/C治療後腫瘤進展。組群1中，E/C達3個週期導致治療動物中的客觀響應(3PR/0CR/9)但平均腫瘤體積在第45天反彈至1206 mm3 。在E/C治療週期過程中，添加0.68、1.36或2.73mg/kg BID的化合物 B ，隨後以5.45 mg/kg BID作為維持療法，顯著增強抗腫瘤活性伴隨腫瘤消退(分別為5PR/9、4PR/4CR/9和2PR/6CR/9)。在維持治療完成時(第45天)，在化合物 B 2.73mg/kg組的9只動物仍有6只為無腫瘤。在全部的組合治療組中，相比於E/C治療組，在E/C同時施用期和維持期觀察到對體重沒有顯著作用。在組群2中，在3個週期的E/C治療完成時，將動物分為2組並使用媒劑或化合物 B 5.45 mg/kg BID治療21天。在媒劑組，在第45天平均腫瘤體積反彈至1353mm3 。然而，使用化合物 B 治療後，平均腫瘤體積僅達到571mm3 ，其展示比單獨的E/C更持續的腫瘤生長抑制。維持期過程中，相比E/C治療組不存在顯著的體重變化。化合物 B 和E/C的組合治療展示比單獨的E/C治療更好的抗腫瘤活性但無嚴重毒性。化合物 B 作為維持療法還展示顯著的抗腫瘤活性。實例 6 與 Mab1 組合的化合物 B 的臨床試驗
使用化合物 B 製備膠囊，與Mab 1 組合的化合物 B 的Ia期臨床安全性研究在施用10、20、40和60 mg BID的化合物 B 以及2 mpk (mg/kg)或200 mg Q3W的43位受試者上完成。結果顯示全部組合都是安全和良好耐受的。
詳細的研究如下所述：6至12位患者的組群各接受5個計劃劑量水平(DL)的治療。以2 mg/kg每3周(Q3W)施用Mab 1 ，其中在DL1、2和3中分別以20、40或60 mg每日兩次(BID)施用化合物 B 。還以200 mg Q3W的固定劑量施用Mab 1 ，其中在DL 4和 5中分別以40或60 mg BID施用化合物 B 。
對於10位患者治療的持續時間超過200天，且共7位患者在數據截止時仍然處於治療狀態(2017年3月31日)。安全性分析表明Mab 1 和化合物 B 的組合在具有晚期實體瘤的患者中一般是良好耐受的，儘管在3位患者中發生了劑量限制的毒性，包括在DL4或DL5的噁心或嘔吐或在DL5的自身免疫性肝炎。然而，未報導致命的不良事件且全部事件在有或沒有皮質類固醇治療都是可逆的。
Mab-1 與化合物 B 的共施用對每種化合物的藥物動力學概況不具有顯著影響。在具有卵巢或輸卵管癌的患者、具有乳腺癌的患者、具有胰腺癌的患者、具有子宮癌的患者中都觀察到完全響應或部分響應；且彼等響應是耐久的，且在具有野生型和突變體gBRCA 狀態的患者中觀察到完全響應或部分響應。在具有前列腺癌的患者和具有膽管癌的患者中觀察到穩定的疾病。參與研究的其它腫瘤類型包括膀胱癌、宮頸癌、肺癌和周圍神經鞘癌。
上述某些實施例的實例和說明應認為是闡述性的，而不應認作是限制由申請專利範圍所限定的本發明。可容易理解的是，可利用上述特徵的多種變化和組合而不脫離如申請專利範圍所述的本發明。全部此等變化旨在包括於本發明的範圍內。引用的全部參考文獻通過引用以其整體併入本申請。
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無
圖 1 顯示了晶體化合物 B 的X射線衍射圖。
圖 2 顯示了晶體化合物 B 的1 H-NMR。
圖 3 顯示了晶體化合物 B 的13 C-NMR。
圖 4 顯示了在EpCAM×CD3雙特異性T細胞銜接子(engager)平臺中，在用化合物 B 、Mab-1 或者Mab-1 和化合物 B 的組合治療的Matrigel®/ PBMC共培養系統中培養的原發性人腫瘤細胞的PBMC產生的IFN-γ的水平。
圖 5 顯示了在人原發性胃癌異種移植模型中化合物 A 、紫杉醇和(化合物 A +紫杉醇)對腫瘤生長的作用。
圖 6 顯示了在人原發性胃癌異種移植模型中化合物 A 、紫杉醇和(化合物 A +紫杉醇)對體重的作用。
圖 7 顯示了在原發性人SCLC (有限階段)異種移植模型中依託泊苷和卡鉑(E/C)、以及化合物 B 與E/C的組合對腫瘤生長的作用。
圖 8 顯示了在原發性人SCLC (有限階段)異種移植模型中依託泊苷和卡鉑(E/C)、以及化合物 B 與E/C的組合對體重的作用。
圖 9 顯示了在原發性人SCLC (擴展階段)異種移植模型中化合物 B 、依託泊苷和卡鉑(E/C)、化合物 B 與E/C的組合對腫瘤生長的作用。
圖 10 顯示了在原發性人SCLC (擴展階段)異種移植模型中化合物 B 、依託泊苷和卡鉑(E/C)和化合物 B 對體重的作用。
圖 11 顯示了在原發性人SCLC (擴展階段)異種移植模型中化合物 B 在E/C之後作為維持療法對腫瘤生長的作用。
圖 12 顯示了在原發性人SCLC (擴展階段)異種移植模型中化合物 B 在E/C之後作為維持療法對體重的作用。

Claims (15)

  1. 一種式(III)的PARP抑制劑與免疫檢查點抑制劑或化療劑的組合在製備用於治療癌症的藥物中的用途，其中所述PARP抑制劑為式(III)化合物，
    Figure 106133227-A0305-02-0056-1
     其醫藥上可接受之鹽或其水合物，以及其中所述化療劑選自紫杉醇或依託泊苷加卡鉑(E/C)；其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1單克隆抗體或其片段，該抗體抗原結合域特異性結合人類PD-1，且該抗體抗原結合域包含：SEQ ID No 24的重鏈可變區(Vh)胺基酸序列、SEQ ID No 26的輕鏈可變區(Vl)胺基酸序列和SEQ ID NO 88的IgG4恒定域胺基酸序列；所述癌症選自結腸直腸癌、胃癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、輸卵管癌、子宮頸癌、腹膜癌、前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌、膽管癌、胃/胃-食管接合部癌、泌尿道上皮癌、胰腺癌、外周神經鞘癌、子宮癌。
  2. 如請求項1的用途，其中所述PARP抑制劑為式(IV)化合物，
    Figure 106133227-A0305-02-0056-4
  3. 如請求項1的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑和所述PARP抑制劑同時、順序或分開施用。
  4. 如請求項1的用途，其中所述PARP抑制劑以1-120mg的劑量每天 兩次口服施用。
  5. 如請求項1的用途，其中所述PARP抑制劑以120-240mg的劑量每天一次口服施用。
  6. 如請求項1的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑以0.5-10mg/kg的劑量每週一次、或每兩週一次或每三週一次或每四周一次腸胃外施用。
  7. 如請求項1的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑以2mg/kg的劑量每三週一次施用。
  8. 如請求項1的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑以2mg/kg的劑量每三週一次(Q3W)施用，並且所述PARP抑制劑以20mg、40mg或60mg的劑量每天兩次施用，優選以40mg的劑量每天兩次施用。
  9. 如請求項1的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑以200mg的劑量每三週一次施用，並且所述PARP抑制劑以40或60mg每天兩次施用，優選地，以40mg的劑量每天兩次施用。
  10. 一種式(III)的PARP抑制劑在製備用於治療癌症的藥物中的用途，所述治療包括：(i)在治療週期中，與第一數量的式(III)的PARP抑制劑一起向有此需要的受試者施用化療劑，其中所述化療劑選自紫杉醇或依託泊苷加卡鉑(E/C)；和(ii)在維持階段中，向已經在上述治療週期中接受治療的受試者施用第二數量的式(III)的PARP抑制劑，其中所述PARP抑制劑為式(III)化合物，
    Figure 106133227-A0305-02-0057-7
     其醫藥上可接受之鹽或其水合物， 其中所述癌症選自結腸直腸癌、胃癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、輸卵管癌、子宮頸癌、腹膜癌、前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌、膽管癌、胃/胃-食管接合部癌、泌尿道上皮癌、胰腺癌、外周神經鞘癌、子宮癌、黑素瘤或淋巴瘤。
  11. 如請求項10的用途，其中所述PARP抑制劑為式(IV)化合物，
    Figure 106133227-A0305-02-0058-6
  12. 如請求項10的用途，其中所述PARP抑制劑在治療週期中連續或間斷地施用。
  13. 如請求項10的用途，其中所述治療包括1至3個治療週期，並且各治療週期包括1至4周。
  14. 如請求項10的用途，其中所述治療週期中第一數量的PARP抑制劑不同於所述維持階段中第二數量的PARP抑制劑。
  15. 如請求項10的用途，其中所述治療週期中第一數量的PARP抑制劑低於所述維持階段中第二數量的PARP抑制劑。
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