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TWI891945B - 抗tslp抗體藥物組合物及其用途 - Google Patents

抗tslp抗體藥物組合物及其用途

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TWI891945B
TWI891945B TW110143428A TW110143428A TWI891945B TW I891945 B TWI891945 B TW I891945B TW 110143428 A TW110143428 A TW 110143428A TW 110143428 A TW110143428 A TW 110143428A TW I891945 B TWI891945 B TW I891945B
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pharmaceutical composition
seq
antibody
tslp
histidine
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TW110143428A
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王志萬
吳婷婷
洵 劉
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大陸商江蘇恒瑞醫藥股份有限公司
大陸商上海恒瑞醫藥有限公司
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Abstract

本發明關於一種含抗TSLP抗體的藥物組合物及其用途。具體而言，本發明關於一種藥物組合物，其包含抗TSLP抗體及緩衝劑。

Description

抗TSLP抗體藥物組合物及其用途
本發明要求申請日為2020年12月3日的中國專利申請202011405207.9的優先權。本發明引用上述中國專利申請的全文。
本發明屬於藥物製劑領域，具體關於一種包含抗TSLP抗體的藥物組合物，以及其作為治療疾病或病症的藥物的用途。
這裡的陳述僅提供與本發明有關的背景訊息，而不必然地構成現有技術。
哮喘是嚴重的氣道慢性炎症疾病，全球約有3.34億哮喘病人。隨著環境惡化和空氣污染加劇，可能會有更多人罹患此病，嚴重危害人類的生命健康。
胸腺基質淋巴細胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP)是上皮細胞響應促炎症刺激而產生的細胞因子，主要藉由其對樹突細胞和肥大細胞的活性來促進過敏性炎症反應。TSLP是一種類白細胞介素7(IL-7)細胞因子，最早從小鼠的胸腺基質細胞條件培養基中發現。TSLP主要在肺、皮膚和腸道上皮細胞中表現。TSLP由4個α-螺旋以及AB和CD兩個環組成，分子內有三對由六個半胱胺酸組成的二硫鍵，有兩個N糖基化位點，分子量約為15-20kD。TSLP的受體是個複合物，包括兩部分，一部分為TSLPR，另一部分為IL-7Rα。TSLP先與TSLPR以相對較低的親和力結合，然後以高親和力招募IL-7Rα的結合，最終以stat5等訊號傳遞路徑的活化，導致DC的成熟和T細胞的分化。
骨髓源性樹突狀細胞(myeloid dendritic cell，mDC)是TSLP最主要的效應細胞，TSLP作用於未成熟的mDC，mDC分泌細胞因子IL-8、eotaxin-2、TARC和MDC，同時高表現OX40L。在沒有IL-12的前提下，OX40L與天然CD4+T細胞結合，使其分化成Th2細胞，進而Th2細胞分泌IL-5、IL-4、IL-9、IL-13和TNF等Th2細胞因子，誘導機體Th2炎症反應。另外，TSLP還可以誘導DC細胞產生細胞因子IL-8，進而招募嗜中性白血球，導致嗜中性白血球天然免疫炎症。TSLP還可以誘導DC產生eotaxin-2，eotaxin-2招募嗜酸性白血球，和IL-5一起作用，使機體迅速進入嗜酸性白血球浸潤的炎症狀態。TSLP也作用於肥大細胞、自然殺手細胞，藉由誘導產生IL-4、IL-6、IgE等來介導天然炎症。綜上，TSLP可同時導致天然炎症和Th2炎症，進而使組織黏液增多，氣道重塑導致氣管狹窄，細胞纖維化嚴重，進而逐步演變成哮喘、過敏性皮炎和過敏性鼻炎等三大過敏性疾病。因此，阻斷TSLP對治療哮喘、過敏性皮炎等疾病是一個潛在的有效策略。
目前，全球範圍內尚無TSLP單抗獲批上市。為了保持抗體有效，抗體必須在生產、純化、運輸和儲存期間維持其生物活性。然而，抗體在配製和儲存過程中容易發生變性、聚集、污染等其他改變，是製備抗體製劑的重大障礙。由於抗體的多樣性，沒有適合於所有抗體的儲存的通用配方或條件，一種抗體的最佳製劑對於該抗體通常是特定的。抗體的製劑通常是商業抗體研究和開發過程的重要部分，因此，存在開發穩定的抗體製劑的必要。
本發明提供一種抗TSLP抗體的藥物組合物及其用途。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含抗TSLP抗體和緩沖劑，其中所述的緩衝劑為組胺酸鹽緩衝劑或琥珀酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含抗TSLP抗體和緩沖劑，其中所述的緩衝劑為組胺酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑為組胺酸-醋酸鹽緩衝劑或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑為琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝劑。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中： i)所述重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 94和SEQ ID NO: 28所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和 所述輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 113和SEQ ID NO: 31所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3； ii)所述重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21和SEQ ID NO: 22所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和 所述輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 24和SEQ ID NO: 25所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3； iii)所述重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15和SEQ ID NO: 45所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和 所述輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或 iv)所述重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33和SEQ ID NO: 34所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和 所述輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36和SEQ ID NO: 37所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體包含如下任一項所示的重鏈可變區和輕鏈可變區： a)如SEQ ID NO: 97所示的重鏈可變區序列和如SEQ ID NO: 119所示的輕鏈可變區； b)如SEQ ID NO: 69所示的重鏈可變區序列和如SEQ ID NO: 74所示的輕鏈可變區； c)如SEQ ID NO: 50所示的重鏈可變區序列和如SEQ ID NO: 52所示的輕鏈可變區；或 d）如SEQ ID NO: 132所示的重鏈可變區序列和如SEQ ID NO: 125所示的輕鏈可變區。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體包含： a)如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈； b)如SEQ ID NO: 137所示的重鏈和如SEQ ID NO: 138所示的輕鏈； c)如SEQ ID NO: 135所示的重鏈和如SEQ ID NO: 136所示的輕鏈；或 d)如SEQ ID NO: 141所示的重鏈和如SEQ ID NO: 142所示的輕鏈。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑的濃度為5mM-50mM，包括但不限於5mM-10mM、10mM-15mM、15mM-25mM、25 mM-35mM或35mM-45mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑的濃度為10mM-30mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑的濃度為5mM-50mM，包括但不限於5mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑的濃度為10mM-20mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝劑的濃度為約20mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝液的pH為5.0-6.5，包括但不限於5.0-5.5、5.5-6.0或6.0-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝液的pH為5.0-6.5，包括但不限於5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝液的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝液的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的緩衝液的pH為約6.2。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物的pH可能存在漂移，漂移程度約為±0.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的藥物組合的pH為5.0-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的藥物組合的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的藥物組合的pH為約5.8-6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的藥物組合的pH為約6.0-6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的藥物組合的pH為約6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體的濃度為1mg/mL-150mg/mL，包括但不限於80mg/mL-150mg/mL、80mg/mL-120mg/mL、80mg/mL-100mg/mL、100mg/mL-150mg/mL或100mg/mL-120mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體的濃度為1mg/mL-150mg/mL，包括但不限於1mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體的濃度為100mg/mL-150mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體的濃度為約100mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述藥物組合物還包含表面活性劑。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨酯。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨酯80或聚山梨酯20。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨酯80。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑濃度為0.01mg/mL-1.0 mg/mL，包括但不限於0.05mg/mL-1.0mg/mL、0.05mg/mL-0.8mg/mL、0.1mg/mL-1.0mg/mL、0.1mg/mL-0.8mg/mL、0.1mg/mL-0.6mg/mL、0.1mg/mL-0.4mg/mL、0.2mg/mL-1.0mg/mL、0.2mg/mL-0.8mg/mL、0.2mg/mL-0.6mg/mL或0.2mg/mL-0.4mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑濃度為0.1mg/mL-0.8mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑濃度為0.01mg/mL-1.0mg/mL，包括但不限於0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL、0.3mg/mL、0.35mg/mL、0.4mg/mL、0.45mg/mL、0.5mg/mL、0.55mg/mL、0.6mg/mL、0.65mg/mL、0.7mg/mL、0.75mg/mL、0.8mg/mL、0.85mg/mL、0.9mg/mL、0.95mg/mL、1.0mg/mL，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述表面活性劑濃度為約0.8mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述組合物還包含穩定劑，其中所述穩定劑選自糖、胺基酸和EDTA中的一種或更多種。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸中的一種或多種。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為蔗糖。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為20mg/mL-100mg/mL，包括但不限於30mg/mL-90mg/mL、30mg/mL-70mg/mL、50mg/mL-90mg/mL或50mg/mL-70mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為30mg/mL-100mg/mL，包括但不限於40mg/mL-90mg/mL、40mg/mL-80mg/mL、50mg/mL-80mg/mL、60mg/mL-90mg/mL或60mg/mL-80mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為20mg/mL-100mg/mL，包括但不限於20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為50mg/mL-70mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為50mg/mL-60mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為約70mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為30mg/mL-70mg/mL，其中所述的糖為海藻糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露醇。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其中所述的糖為海藻糖，其濃度為約60mg/mL-70mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為蔗糖，其濃度為70mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑為山梨糖醇或甘露醇，其濃度為50mg/mL。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為5mM-50mM，包括但不限於10mM-50mM、10mM-40mM、10mM-30mM或10mM-20mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為5mM-50mM，包括但不限於5mM-40mM、5mM-30mM、5mM-20mM、20mM-30mM、20mM-40mM或30mM-40mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為10mM-30mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為約30mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為5mM-50mM，包括但不限於5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為5mM-50mM，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為10mM-30mM，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為30mM，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包括EDTA，其濃度為0.1mM-10mM，包括但不限於0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM，以及這些點值之間的任意範圍。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包括EDTA，其濃度為0.1mM-10mM，包括但不限於0.1mM-8mM、0.1mM-6mM、0.1mM-4mM或0.1mM-2mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包括EDTA，其濃度為0.37mM-10mM，包括但不限於0.37mM-9mM、0.37mM-7mM、0.37mM-5mM、0.37mM-3mM。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為30mg/mL-70mg/mL糖和10mM-30mM的胺基酸；其中所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸中的一種或多種。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為30mg/mL-70mg/mL糖和0.37mM-10mM的EDTA；其中所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為30mg/mL-70mg/mL糖、10mM-30mM胺基酸和0.37mM-10mM的EDTA；其中所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸中的一種或多種。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為： i)30mg/mL糖和30mM的胺基酸； ii)70mg/mL糖和0.37mM-10mM的EDTA；或 iii)70mg/mL糖、20mM胺基酸和0.37mM-10mM的EDTA；其中所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇，其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為： i)30mg/mL蔗糖和30mM的組胺酸、色胺酸或甲硫胺酸； ii)70mg/mL蔗糖和0.37mM-10mM的EDTA；或 iii)70mg/mL蔗糖、20mM甲硫胺酸和0.37mM-10mM的EDTA。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的穩定劑為： i)30mg/mL蔗糖和30mM的組胺酸、色胺酸或甲硫胺酸； ii)70mg/mL蔗糖和10mM的EDTA；或 iii)70mg/mL蔗糖、20mM甲硫胺酸和10mM的EDTA。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述藥物組合物的pH為5.0-6.5。在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述藥物組合物的pH為約6.0-6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯80；和(c)10mM-30mM的組胺酸鹽緩衝劑；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯80；和(c)10mM-30mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯80；和(c)10mM-30mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；其中所述藥物組合物的pH為6.0-6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的糖；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的糖；其中所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇，所述聚山梨酯選自聚山梨酯20和聚山梨酯80；所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸鹽緩衝劑；和(d)30mg/mL-70mg/mL的蔗糖和10mM-30mM的胺基酸；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸鹽緩衝劑；和(d)30mg/mL-70mg/mL的蔗糖和0.37mM-10mM的EDTA；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸鹽緩衝劑；和(d)30mg/mL-70mg/mL的蔗糖、10mM-30mM的胺基酸和0.37mM-10mM的EDTA；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其中所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇；和/或所述聚山梨酯選自聚山梨酯20和聚山梨酯80；和/或所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸；和/或所述的組胺酸鹽緩衝劑選自組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑和組胺酸-醋酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和(d)30mg/mL-100mg/mL的海藻糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露醇；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
(a)100mg/mL-150 mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL-0.8 mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的海藻糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露醇；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)約100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)約0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)約20mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和(d)約70mg/mL的蔗糖；其中所述藥物組合物的pH為約6.0-6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100 mg/mL-150 mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈； (b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯； (c)10mM-30mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和 (d)30mg/mL-70mg/mL的糖和10mM-30mM胺基酸；或
所述藥物組合物包含： (a)100mg/mL-150mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈； (b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯； (c)10mM-30mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和 (d)30mg/mL-70mg/mL的糖和0.37mM-10mM的EDTA；或
所述藥物組合物包含： (a)100mg/mL-150mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈； (b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯； (c)10mM-30mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和 (d)30mg/mL-70mg/mL的糖和0.37mM-10mM的EDTA和10mM-30mM胺基酸；
其中： 所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇， 所述胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸， 所述的聚山梨酯選自聚山梨酯80和聚山梨酯20；並且 所述藥物組合物的pH為5.5-6.5；優選地，pH為約6.0-6.3。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；和(c)10mM-30mM的醋酸鹽緩衝劑；其中所述藥物組合物的pH為4.5-6.5；優選藥物組合物的pH為4.5-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100 mg/mL-150 mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯80；和(c)10mM-30mM的醋酸鹽緩衝劑；其中所述藥物組合物的pH為4.5-6.5；優選藥物組合物的pH為4.5-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的醋酸鹽緩衝劑；和(d)30mg/mL-100mg/mL的糖；其中所述藥物組合物的pH為4.5-6.5；優選藥物組合物的pH為4.5-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯；(c)10mM-30mM的醋酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的糖；其中所述藥物組合物的pH為4.5-6.5；優選藥物組合物的pH為4.5-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL-150mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)10mM-30mM的醋酸鹽緩衝劑；和(d)30mg/mL-70mg/mL的蔗糖；其中所述藥物組合物的pH為4.5-6.5；優選藥物組合物的pH為4.5-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.0-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5-6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約6.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的磷酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約6.0-7.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的磷酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的磷酸鹽緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約7.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約4.5-5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約4.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80；和(c)20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，其中所述的藥物組合物的pH為約5.5。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.2mg/mL-0.6mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)70mg/mL的蔗糖；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.2mg/mL-0.6mg/mL的聚山梨酯20；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)70mg/mL的蔗糖；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.4mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的蔗糖；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.4mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的海藻糖；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.4mg/mL的聚山梨酯80；(c)20 mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的山梨糖醇；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.4mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的甘露醇；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100 mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；(d)70mg/mL的蔗糖；和(e)30mM胺基酸；其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸；所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；(d)70mg/mL的蔗糖；和(e)10mM EDTA；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；(d)70mg/mL的蔗糖；和(e)10mM EDTA和20mM胺基酸；其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸；所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)20 mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；(d)70mg/mL的蔗糖；和(e)10mM EDTA和20mM甲硫胺酸；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；(d)70mg/mL的蔗糖；和(e)0.37mM-10 mM的EDTA；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.8mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；(d)70mg/mL的蔗糖；和(e)0.37mM-5mM的EDTA；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，前述的藥物組合物，其包含如下組分： (a)150mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.4mg/mL的聚山梨酯80；(c)20mM的組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)70mg/mL的蔗糖；其中所述的藥物組合物的pH為約6.0。
本發明還提供一種包含抗TSLP抗體的凍乾製劑，其中所述的凍乾製劑藉由將如前任一所述的藥物組合物經冷凍乾燥獲得。
本發明還提供一種製備如前任一所述的藥物組合物的方法，所述方法包括將抗TSLP抗體原液經緩衝液置換的步驟。
本發明還提供一種製品，其包括容器，所述容器中裝有如前任一所述的藥物組合物或如前所述的凍乾製劑。
本發明還提供一種治療疾病或病症的方法，所述方法包括向受試者施用治療有效量的如前任一所述的藥物組合物，或如前所述的凍乾製劑。
本發明還提供一種如前任一所述的藥物組合物，或如前所述的凍乾製劑在製備用於治療疾病或病症的藥物中的用途。
本發明中所述的如前任一所述的藥物組合物，或如前所述的凍乾製劑可用作治療疾病或病症的藥物。
在一些實施方案中，所述疾病或病症選自過敏性疾病、癌症和免疫性疾病；所述過敏性疾病選自：哮喘、特發性肺纖維化、異位性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、蕁麻疹、Netherton氏症候群(Netherton Syndrome)、嗜酸性白血球性食管炎、食物過敏、過敏性腹瀉、嗜酸性白血球性胃腸炎、過敏性支氣管與肺的麴菌病、過敏性真菌鼻竇炎和慢性瘙癢；所述癌症選自：乳腺癌、結腸癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌；所述免疫性疾病選自：類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病、全身性硬化、多發性硬化症、瘢痕瘤、潰瘍性結腸炎、鼻息肉病、慢性嗜酸性白血球性肺炎、嗜酸性白血球性支氣管炎、腹腔病、查格-施特勞斯症候群(Churg–Strauss syndrome)、嗜酸性白血球性肌痛症候群、高嗜酸白血球症候群、嗜酸性白血球性肉芽腫病伴隨多血管炎、炎性腸病、硬皮病、間質性肺病、B型或C型慢性肝炎引發的纖維化、輻射誘發的纖維化和傷口癒合引發的纖維化。
在一些實施方案中，前述的疾病或病症與TSLP有關。
術語
為了更容易理解本發明，以下具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文中另有明確定義，本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本發明所屬領域中具有通常知識者通常理解的含義。
說明書和請求項書中所用的單數形式「一個」、「一種」和「所述」包括複數指代，除非上下文清楚表明並非如此。
除非上下文另外清楚要求，否則在整個說明書和申請專利範圍中，應將詞語「包含」、「具有」、「包括」等理解為具有包含意義，而不是排他性或窮舉性意義；也即，「包括但不僅限於」的意義。
術語「和/或」，例如「X和/或Y」應當理解為意指「X和Y」或「X或Y」並且應當被用來提供對兩種含義或任一含義的明確支持。
術語「胸腺基質淋巴細胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP)」是四α-螺旋束I型細胞因子，也是響應促炎症刺激而產生的上皮細胞衍生的細胞因子，與白細胞介素-7(IL-7)密切相關，其藉由刺激樹突細胞(DC)起始變態反應，是調節人體免疫反應的重要因子。術語「TSLP」包括TSLP的變體、同種型、同系物、直系同源物和旁系同源物。
「緩衝劑」指藉由其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝劑。將pH控制在適當範圍中的緩衝劑的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝劑。
「組胺酸鹽緩衝劑」是包含組胺酸根離子的緩衝劑。組胺酸鹽緩衝劑的實例包括組胺酸-鹽酸鹽、組胺酸-醋酸鹽、組胺酸-磷酸鹽、組胺酸-硫酸鹽等緩衝劑，優選組胺酸-醋酸鹽緩衝劑或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；組胺酸-醋酸鹽緩衝劑是組胺酸與醋酸配製而成；組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑是組胺酸與鹽酸配製而成。
「檸檬酸鹽緩衝劑」是包括檸檬酸根離子（即檸檬酸根離子）的緩衝劑。檸檬酸鹽緩衝劑的實例包括檸檬酸-檸檬酸鈉、檸檬酸-檸檬酸鉀、檸檬酸-檸檬酸鈣、檸檬酸-檸檬酸鎂等。優選的檸檬酸鹽緩衝劑是檸檬酸-檸檬酸鈉。
「琥珀酸鹽緩衝劑」是包括琥珀酸根離子的緩衝劑。琥珀酸鹽緩衝劑的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽等。優選的琥珀酸鹽緩衝劑是琥珀酸-琥珀酸鈉。示例性的，所述的琥珀酸-琥珀酸鈉可由琥珀酸與氫氧化鈉配製而成，或由琥珀酸與琥珀酸鈉配製而成。
「磷酸鹽緩衝劑」是包括磷酸根離子的緩衝劑。磷酸鹽緩衝劑的實例包括磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉-檸檬酸等。優選的磷酸鹽緩衝劑是磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉。
「醋酸鹽緩衝劑」是包括醋酸根離子的緩衝劑。醋酸鹽緩衝劑的實例包括醋酸-醋酸鈉、醋酸組胺酸鹽、醋酸-醋酸鉀、醋酸-醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂等。優選的醋酸鹽緩衝劑是醋酸-醋酸鈉。
「表面活性劑(surfactant)」是指表面活性劑(surface-activeagent)，優選非離子表面活性劑。使用表面活性劑可以降低製劑中蛋白質的聚集和/或降低顆粒的形成。添加的表面活性劑的量是使得其可以在製劑中降低蛋白質的聚集，並最小化顆粒形成的量。本發明的表面活性劑可選自聚山梨酯（包括但不限於聚山梨酯20、聚山梨酯80）、聚羥亞烴、氚核(Triton)、十二烷基磺酸鈉、月桂基磺酸鈉、辛基糖甙鈉、月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆蔻基-磺基甜菜鹼、亞油基-磺基甜菜鹼、硬脂基-磺基甜菜鹼、月桂基-肌胺酸、肉豆蔻基-肌胺酸、亞油基-肌胺酸、硬脂基-肌胺酸、亞油基-甜菜鹼、肉豆蔻基-甜菜鹼、鯨蠟基-甜菜鹼、月桂醯胺基丙基-甜菜鹼、柯卡醯胺基丙基-甜菜鹼、亞油醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺基丙基-甜菜鹼、異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-二甲基胺、棕櫚醯胺基丙基-二甲基胺、異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺、甲基可可醯基鈉、甲基油基牛磺酸鈉、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯與丙烯二醇的共聚物等等。優選的表面活性劑是聚山梨酯80或聚山梨酯20，更優選為聚山梨酯80。
「穩定劑」是指有助於維持生物製藥藥物的結構完整性的組分，特別是在冷凍和/或凍乾和/或儲存期間（特別是當暴露於應激(stress)時）。這種穩定作用可以由於多種原因而產生，通常這種穩定劑可起到減輕蛋白質變性的滲透劑的作用。如在本文中所使用的，穩定劑包括糖、胺基酸和EDTA；本文所述穩定劑中的胺基酸，是除緩衝液中的胺基酸之外，另添加的胺基酸。
本發明的「糖」包含常規組合物(CH 2O) n及其衍生物，包括單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原性糖、非還原性糖等等。本發明中的糖可選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖苷、甘油、赤藻糖醇、丙三醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、密裡二糖、松三糖、蜜三糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、山梨醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異-麥芽酮糖等等。優選的糖是蔗糖、海藻糖、山梨糖醇和甘露醇，更優選為海藻糖或蔗糖，最優選為蔗糖。
「置換」是指溶解抗體蛋白的溶劑體系的置換，例如，使用穩定製劑的緩衝體系經物理操作方式將含抗體蛋白的高鹽或高滲溶劑體系置換，從而使抗體蛋白存在於穩定製劑中。所稱物理操作方式包括但不限於超濾、透析或離心後複溶。
本文所用術語「約」、「大約」是指數值在由本發明所屬技術領域中具有通常知識者所測定的具體值的可接受誤差範圍內，所述數值部分取決於怎樣測量或測定（即測量體系的限度）。例如，在本領域每一次實行中「約」可意味著在1內或超過1的標準差。或者，「約」或「基本上包含」可意味著其後所示的具體數值±10%的範圍。此外，特別對於生物學系統或過程而言，該術語可意味著至多一個數量級或數值的至多5倍。除非另外說明，否則當具體值在本發明和請求項中出現時，「約」或「基本上包含」的含義應該假定為在該具體值的可接受誤差範圍內。
儘管本發明提供了含量範圍或含量值，但本發明所屬技術領域具有通常知識者理解，所述含量範圍或含量值涵蓋了所測定具體值的可接受誤差範圍。
「藥物組合物」表示含有一種或多種本文所述抗體藥物偶聯物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，所述其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是保持抗體活性成分的穩定性，促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
本發明中，「藥物組合物」和「製劑」並不互相排斥。
本發明中所述藥物組合物的溶液形式，若無特殊說明，其中的溶劑均為水。
本發明所述的藥物組合物能夠達到一種穩定的效果：其中的抗體在貯藏後基本上保留其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學活性的藥物組合物，優選地，藥物組合物在貯藏後基本上保留其物理和化學穩定性以及其生物學活性。貯藏期一般基於藥物組合物的預定保存期來選擇。目前有多種測量蛋白質穩定性的分析技術，可測量在選定溫度貯藏選定時間段後的穩定性。
穩定的製劑是在下述情況下沒有觀察到顯著變化的製劑：在冷藏溫度(2-8℃)保存至少3個月、優選6個月、更優選1年，甚至更優選地多達2年。另外，穩定的液體製劑包括這樣的液體製劑：其在包括25℃的溫度保存包括1個月、3個月、6個月在內的時段後表現出期望的特徵。穩定性的典型的例子：藉由SEC-HPLC測得，通常不超過約10%、優選不超過約5%的抗體單體發生聚集或降解。藉由視覺分析，製劑是無色至淡黃色、澄清透明至稍微乳白色的液體。所述製劑的濃度、pH和重量克分子滲透壓濃度具有不超過±10%變化。通常觀察到不超過約10%、優選不超過約5%的減少。通常形成不超過約10%、優選不超過約5%的聚集。
如果在目檢顏色和/或澄清度後，或者藉由UV(ultra-violet)光散射、尺寸排阻色譜法(size-exclusion chromatography，SEC)和動態光散射(dynamic light scattering，DLS)測得，抗體藥物偶聯物沒有顯示出顯著的聚集增加、沉澱和/或變性，那麼所述抗體藥物偶聯物在藥物製劑中「保留它的物理穩定性」。蛋白構象的變化可以藉由螢光光譜法（其確定蛋白三級結構）和藉由FTIR光譜法（其確定蛋白二級結構）來評價。
如果抗體沒有顯示出顯著的化學改變，那麼所述抗體在藥物製劑中「保留它的化學穩定性」。藉由檢測和定量化學上改變的形式的蛋白，可以評估化學穩定性。經常改變蛋白化學結構的降解過程包括水解或截短（藉由諸如尺寸排阻色譜法和CE-SDS(capillary electrophoresis sodiu dodecyl sulfate)等方法來評價）、氧化（藉由諸如與質譜法或MALDI/TOF/MS結合的肽譜法等方法來評價）、脫醯胺作用（藉由諸如離子交換色譜法、毛細管等電聚焦、肽譜法、異天冬胺酸測量等方法來評價）和異構化（藉由測量異天冬胺酸含量、肽譜法等來評價）。
如果抗體在給定時間的生物活性是在製備藥物製劑時表現出的生物活性的預定範圍內，那麼所述抗體在藥物製劑中「保留它的生物活性」。
「凍乾製劑」表示液體或溶液形式的藥物組合物或液體或溶液製劑經真空冷凍乾燥步驟之後獲得的製劑或藥物組合物。
本發明所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J. biol. chem, 243, p3558(1968)中所述。
本發明的術語「抗體」以最廣義使用，其涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體（例如雙特異性抗體）、全長抗體或其抗原結合片段（也稱「抗原結合部分」），只要它們展現出期望的抗原結合活性。全長抗體是包含由二硫鍵互相連接的至少兩條重鏈和兩條輕鏈的免疫球蛋白(Ig)。根據免疫球蛋白重鏈恆定區的胺基酸組成和排列順序不同，可將免疫球蛋白分為五類，或稱為免疫球蛋白的同種型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相應的重鏈分別為µ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈、和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別，又可分為不同的亞類，如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由恆定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。
術語「可變區」或「可變域」指抗體重鏈或輕鏈中涉及抗體結合抗原的域。VH和VL各包含四個保守的框架區(FR)和三個互補決定區(CDR)。其中，術語「互補決定區」、「CDR」指可變結構域內主要促成抗原結合的區域；「框架」或「FR」是指除CDR殘基之外的可變結構域殘基。VH包含3個CDR區：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3個CDR區：LCDR1、LCDR2、和LCDR3。每個VH和VL由從胺基末端排到羧基末端按以下順序排列的三個CDR和四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。單個VH或VL可能足以賦予抗原結合特異性。
可以藉由各種公知方案來確定CDR的胺基酸序列邊界，例如：「Kabat」編號規則（參見Kabat等(1991)，「Sequences of Proteins of Immunological Interest」，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD）、「Chothia」編號規則、「ABM」編號規則、「contact」編號規則（參見Martin, ACR. Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J]. 2001）和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則（Lefranc， M.P.等，Dev. Comp. Immunol.，27，55-77(2003)；Front Immunol. 2018 Oct 16;9:2278）等。各編號系統之間的關係是本發明所屬技術領域中具有通常知識者熟知的，並且如下表1中所示。 表1 CDR編號系統之間的關係
CDR IMGT Kabat AbM Chothia Contact
HCDR1 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35
HCDR2 56-65 50-65 50-58 52-56 47-58
HCDR3 105-117 95-102 95-102 95-102 93-101
LCDR1 27-38 24-34 24-34 24-34 30-36
LCDR2 56-65 50-56 50-56 50-56 46-55
LCDR3 105-117 89-97 89-97 89-97 89-96
除非另有說明，本發明實施例中的可變區和CDR序列均適用「Kabat」編號規則。
術語「抗原結合片段」或「功能片段」或「抗原結合部分」是指保持特異性結合抗原的能力的完整抗體的一個或更多個片段。已顯示可利用全長抗體的片段來進行抗體的抗原結合功能。示例性的，涵蓋在術語「抗原結合片段」的結合片段的實例包括：(i)Fab片段，一種由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價片段；(ii)F(ab') 2片段，一種包含藉由鉸鏈區上的二硫鍵橋連接的兩個Fab片段的二價片段，(iii)由VH和CH1結構域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的VH和VL結構域組成的Fv片段；(v)dsFv，由VH和VL經鏈間二硫鍵形成的穩定的抗原結合片段；(vi)scFv；(vii)包含scFv、dsFv、Fab等片段的雙抗體、雙特異性抗體和多特異性抗體。
術語「單鏈抗體」、「單鏈Fv」或「scFv」意指包含藉由接頭連接的抗體重鏈可變結構域（或區域，VH）和抗體輕鏈可變結構域（或區域，VL）的分子。此類scFv分子可具有一般結構：NH 2-VL-接頭-VH-COOH或NH 2-VH-接頭-VL-COOH。現有技術已公開眾多適於連接抗體VH和VL的接頭，例如由重複的GGGGS胺基酸序列或其變體組成，例如使用1-4個重複的變體（Holliger等人(1993)，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90: 6444-6448）。可用於本發明的其他接頭由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immuno l.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
雙抗體是其中scFv或Fab被二聚體化的抗體片段，是具有二價抗原結合活性的抗體片段。在二價抗原結合活性中，兩個抗原可以是相同或不同的。
雙特異性抗體和多特異性抗體是指能同時結合兩個或多個抗原或抗原決定簇的抗體，其中包含能結合TSLP的scFv或Fab片段。
本發明中所述人抗體重鏈恆定區和人抗體輕鏈恆定區的「常規變體」是指現有技術已公開的來源於人的不改變抗體可變區結構和功能的重鏈恆定區或輕鏈恆定區的變體，示例性變體包括對重鏈恆定區進行定點改造和胺基酸替換的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重鏈恆定區變體，具體替換如現有技術已知的YTE突變，L234A和/或L235A突變，S228P突變，和/或獲得knob-into-hole結構的突變（使得抗體重鏈具有knob-Fc和hole-Fc組合），這些突變已被證實使得抗體具有新的性能，但不改變抗體可變區的功能。
術語「全長抗體」、「完整抗體」、「完全抗體」和「全抗體」在本文中可互換使用，指基本上完整形式的抗體，與下文定義的抗原結合片段相區分。該術語特別指輕鏈和重鏈包含恆定區的抗體。
術語「特異性結合」、「選擇性結合」、「選擇性地結合」和「特異性地結合」是指抗體對預先確定的抗原上的表位的結合。通常，抗體以大約小於10 -8M，例如大約小於10 -9M、10 -10M、10 -11M、10 -12M或更小的親和力(KD)結合。
術語「KD」是指特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數。通常，本發明的抗體以小於大約10 -7M，例如小於大約10 -8M或10 -9M的解離平衡常數(KD)結合TSLP，例如，在本發明中抗體與細胞表面抗原的親和力採用FACS或Biacore法測定KD值。
本文中使用的術語「核酸分子」是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，優選是雙鏈DNA或單鏈mRNA或修飾的mRNA。當將核酸與另一個核酸序列置於功能關係中時，核酸是「有效連接的」。例如，如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，那麼啟動子或增強子有效地連接至所述編碼序列。
胺基酸序列「同一性」指在比對胺基酸序列及必要時引入間隙，以達成最大序列同一性百分比，且不將任何保守性取代視為序列同一性的一部分，第一序列中與第二序列中的胺基酸殘基同一的胺基酸殘基的百分比。為測定胺基酸序列同一性百分比的目的，比對可以藉由屬於本領域技術的範圍內的多種方式來實現，例如使用公開可得到的電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)軟體。本發明所屬領域中具有通常知識者可確定適用於測量比對的參數，包括在所比較的序列全長上達成最大比對所需的任何算法。
術語「表現載體」是指能夠運輸已與其連接的另一個核酸的核酸分子。在一個實施方案中，載體是「質粒」，其是指可將另外的DNA區段連接至其中的環狀雙鏈DNA環。在另一個實施方案中，載體是病毒載體，其中可將另外的DNA區段連接至病毒基因組中。本文中公開的載體能夠在已引入它們的宿主細胞中自主複製（例如，具有細菌的複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體）或可在引入宿主細胞後整合入宿主細胞的基因組，從而隨宿主基因組一起複製（例如，非附加型哺乳動物載體）。
現有技術中熟知生產和純化抗體和抗原結合片段的方法，如冷泉港的抗體實驗技術指南，5-8章和15章。例如，鼠可以用人TSLP或其片段免疫，所得到的抗體能被覆性、純化，並且可以用常規的方法進行胺基酸測序。抗原結合片段同樣可以用常規方法製備。本發明所述的抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或更多個人源FR區。人FR種系序列可以藉由比對IMGT人類抗體可變區種系基因數據庫和MOE軟體，從ImMunoGeneTics(IMGT)的網站http://imgt.cines.fr得到，或者從免疫球蛋白雜誌，2001ISBN012441351上獲得。
術語「宿主細胞」是指已向其中引入了表現載體的細胞。宿主細胞可包括細菌、微生物、植物或動物細胞。易於轉化的細菌包括腸桿菌科(enterobacteriaceae)的成員，例如大腸桿菌( Escherichia coli)或沙門氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢桿菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢桿菌( Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；鏈球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌( Haemophilus influenzae)。適當的微生物包括釀酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)和畢赤酵母( Pichia pastoris)。適當的動物宿主細胞系包括CHO（中國倉鼠卵巢細胞系）、293細胞和NS0細胞。
本發明工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如，編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列，可以複製並重組至GS表現載體。重組的免疫球蛋白表現載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術，哺乳動物類表現系統會導致抗體的糖基化，特別是在Fc區的高度保守N端位點。藉由表現與人TSLP特異性結合的抗體得到穩定的複製。陽性的複製在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化。比如，用含調整過的緩衝液的A或G Sepharose FF柱進行純化。洗去非特異性結合的組分。再用pH梯度法洗脫結合的抗體，用SDS-PAGE檢測抗體片段，收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用常規方法去除，比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍，如-70℃，或者凍乾。
「施用」、「給予」和「處理」當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。「施用」、「給予」和「處理」可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中所述流體與細胞接觸。「施用」、「給予」和「處理」還意指藉由試劑、診斷、結合組合物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。「處理」當應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。
「治療」意指給予患者內用或外用治療劑，例如包含本發明的任一種結合化合物的組合物，所述患者具有一種或多種疾病症狀，而已知所述治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發展到任何臨床右測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量（也稱作「治療有效量」）可根據多種因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本發明的實施方案（例如治療方法或製品）在緩解每個目標疾病症狀方面可能無效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗（H檢驗）、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
「保守修飾」或「保守置換或取代」是指具有類似特徵（例如電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構象和剛性等）的其它胺基酸置換蛋白中的胺基酸，使得可頻繁進行改變而不改變蛋白的生物學活性。本發明所屬技術領域具有通常知識者知曉，一般而言，多肽的非必需區域中的單個胺基酸置換基本上不改變生物學活性（參見例如Watson等(1987)Molecular Biology of the Gene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224頁，（第4版））。另外，結構或功能類似的胺基酸的置換不大可能破環生物學活性。示例性保守取代於下表2「示例性胺基酸保守取代」中陳述。 表2 示例性胺基酸保守取代
原始殘基 保守取代
Ala(A) Gly；Ser
Arg(R) Lys；His
Asn (N) Gln；His；Asp
Asp(D) Glu；Asn
Cys(C) Ser；Ala；Val
Gln(Q) Asn；Glu
Glu(E) Asp；Gln
Gly(G) Ala
His(H) Asn；Gln
Ile(I) Leu；Val
Leu(L) Ile；Val
Lys(K) Arg；His
Met(M) Leu；Ile；Tyr
Phe(F) Tyr；Met；Leu
Pro(P) Ala
Ser(S) Thr
Thr(T) Ser
Trp(W) Tyr；Phe
Tyr(Y) Trp；Phe
Val(V) Ile；Leu
「有效量」或「有效劑量」指獲得任一種或多種有益的或所需的治療結果所必需的藥物、化合物或藥物組合物的量。對於預防用途，有益的或所需的結果包括消除或降低風險、減輕嚴重性或延遲病症的發作，包括病症、其併發症和在病症的發展過程中呈現的中間病理表型的生物化學、組織學和/或行為症狀。對於治療應用，有益的或所需的結果包括臨床結果，諸如減少各種本發明靶抗原相關病症的發病率或改善所述病症的一個或更多個症狀，減少治療病症所需的其它藥劑的劑量，增強另一種藥劑的療效，和/或延緩患者的本發明靶抗原相關病症的進展。
「外源性」指根據情況在生物、細胞或人體外產生的物質。「內源性」指根據情況在細胞、生物或人體內產生的物質。
「同源性」是指兩個多核苷酸序列之間或兩個多肽之間的序列相似性。當兩個比較序列中的位置均被相同鹼基或胺基酸單體亞基佔據時，例如如果兩個DNA分子的每一個位置都被腺嘌呤佔據時，那麼所述分子在該位置是同源的。兩個序列之間的同源性百分率是兩個序列共有的匹配或同源位置數除以比較的位置數×100的函數。例如，在序列最佳比對時，如果兩個序列中的10個位置有6個匹配或同源，那麼兩個序列為60%同源；如果兩個序列中的100個位置有95個匹配或同源，那麼兩個序列為95%同源。通常，當比對兩個序列時進行比較以給出最大百分比同源性。例如，可以藉由BLAST算法執行比較，其中選擇算法的參數以在各個參考序列的整個長度上給出各個序列之間的最大匹配。以下參考文獻涉及經常用於序列分析的BLAST算法：BLAST算法(BLAST ALGORITHMS)：Altschul，S.F.等人，(1990)J. Mol. Biol. 215:403-410；Gish，W.等人，(1993)Nature Genet. 3:266-272；Madden，T.L.等人，(1996)Meth. Enzymol. 266:131-141；Altschul，S.F.等人，(1997)Nucleic Acids Res. 25:3389-3402；Zhang，J.等人，(1997)Genome Res. 7:649-656。其他如NCBI BLAST提供的常規BLAST算法也為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知。
本文使用的表述「細胞」、「細胞系」和「細胞培養物」可互換使用，並且所有這類名稱都包括後代。因此，單詞「轉化體」和「轉化細胞」包括原代受試細胞和由其衍生的培養物，而不考慮轉移數目。還應當理解的是，由於故意或非有意的突變，所有後代在DNA含量方面不可能精確相同。包括具有與最初轉化細胞中篩選的相同的功能或生物學活性的突變後代。在意指不同名稱的情況下，其由上下文清楚可見。
「任選」或「任選地」意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。
本發明中與TSLP相關的疾病沒有限制，只要它是與TSLP相關的疾病即可，例如利用本發明的抗體誘導的治療反應可藉由結合人類TSLP，然後阻遏TSLP與其受體結合，或殺傷過表現TSLP的細胞；或抑制過表現TSLP的細胞的生長。
在以上說明書中提出了本發明一種或多種實施方式的細節。雖然可使用與本文所述類似或相同的任何方法和材料來實施或測試本發明，但是以下描述優選的方法和材料。藉由說明書和申請專利範圍，本發明的其他特點、目的和優點將是顯而易見的。在說明書和申請專利範圍中，除非上下文中有清楚的另外指明，單數形式包括複數指代物的情況。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語都具有本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解的一般含義。說明書中引用的所有專利和出版物都藉由引用納入。提出以下實施例是為了更全面地說明本發明的優選實施方式。這些實施例不應以任何方式理解為限制本發明的範圍，本發明的範圍由申請專利範圍限定。
實施例
以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制本發明的範圍。
本發明實施例或測試例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。參見Sambrook等，《分子複製——實驗室手冊》，冷泉港實驗室；《當代分子生物學方法》，Ausubel等著，Greene出版協會，Wiley Interscience，NY。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
第一部分抗體
實施例1-1TSLP和TSLP受體的表現
分別將編碼帶His標籤的人TSLP、食蟹猴TSLP、帶人IgG1-Fc標籤的人TSLP、食蟹猴TSLP、人TSLP受體胞外區序列複製到phr載體上，構建成表現質粒，然後轉染HEK293E。具體轉染步驟為：前一天將HEK293E細胞以0.8×10 6/mL接種於Freestyle表現培養基（含有1% FBS）中，放置於37℃恆溫搖床(120rpm)繼續培養24小時。24小時後，將轉染質粒和轉染試劑PEI用0.22μm的濾器除菌，然後將轉染質粒調整為100μg/100mL細胞，PEI(1mg/mL)和質粒的質量比為3:1，以200mL HEK293E細胞的轉染為例，取10mL的Opti-MEM和200μg質粒混勻，靜置5分鐘(min)；另取10mL的Opti-MEM和600μg PEI混勻，靜置5min。將質粒和PEI進行混勻，靜置15 min。將質粒和PEI混合物緩慢加入200mL HEK293E的細胞中，放入8% CO 2，120rpm，37℃的搖床中培養。轉染第3天，補充10%體積的補料培養基。待轉染第6天，取樣4500rpm離心10min收集細胞上清，過濾，將重組的TSLP和TSLP受體蛋白上清按照實施例1-2進行純化，純化的蛋白可用於下述各實施例實驗中。相關序列如下所示。
1.帶his標籤的人TSLP抗原(huTSLP-his)胺基酸序列 MFPFALLYVLSVSFRKIFILQLVGLVLTYDFTNCDFEKIKAAYLSTISKDLITYMSGTKSTEFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTAGCASLAKEMFAMKTKAALAIWCPGYSETQINATQAMKKARKSKVTTNKCLEQVSQLQGLWRRFNRPLLKQQ GSSDYKDDDDKHHHHHH(SEQ ID NO: 1) 註：下劃線為訊號肽序列；斜體部分為Flag-His6-tag標記。
2.帶Fc標籤的人TSLP抗原(huTSLP-Fc)胺基酸序列 MFPFALLYVLSVSFRKIFILQLVGLVLTYDFTNCDFEKIKAAYLSTISKDLITYMSGTKSTEFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTAGCASLAKEMFAMKTKAALAIWCPGYSETQINATQAMKKARKSKVTTNKCLEQVSQLQGLWRRFNRPLLKQQ DIEGRMDEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO: 2) 註：下劃線為訊號肽序列；斜體部分為接頭-人Fc-tag標記。
3.帶His標籤的食蟹猴TSLP抗原(cynoTSLP-His)胺基酸序列 METDTLLLWVLLLWVPGSTGYDFTNCDFQKIEADYLRTISKDLITYMSGTKSTDFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTPRCASLAKEMFARKTKATLALWCPGYSETQINATQAMKKARKSKVTTNKCLEQVSQLLGLWRRFIRTLLKQQ GSSDYKDDDDKHHHHHH(SEQ ID NO: 3) 註：下劃線為訊號肽序列；斜體部分為flag-His6-tag標記。
4. 帶Fc標籤的食蟹猴TSLP抗原(cyno TSLP-Fc)胺基酸序列 METDTLLLWVLLLWVPGSTGYDFTNCDFQKIEADYLRTISKDLITYMSGTKSTDFNNTVSCSNRPHCLTEIQSLTFNPTPRCASLAKEMFARKTKATLALWCPGYSETQINATQAMKKARKSKVTTNKCLEQVSQLLGLWRRFIRTLLKQQ DIEGRMDEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO: 4） 註：下劃線為訊號肽序列；斜體部分為接頭-人Fc-tag標記。
5.帶Fc標籤的人TSLP受體胞外區(人TSLPR-Fc-ECD)胺基酸序列 GAAEGVQIQIIYFNLETVQVTWNASKYSRTNLTFHYRFNGDEAYDQCTNYLLQEGHTSGCLLDAEQRDDILYFSIRNGTHPVFTASRWMVYYLKPSSPKHVRFSWHQDAVTVTCSDLSYGDLLYEVQYRSPFDTEWQSKQENTCNVTIEGLDAEKCYSFWVRVKAMEDVYGPDTYPSDWSEVTCWQRGEIRDACAETPTPPKPKLSK DIEGRMDEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO: 5） 註：下劃線部分為人TSLPR的胞外區，斜體部分為接頭-人Fc-tag。
實施例1-2 TSLP和TSLP受體(TSLPR)重組蛋白的純化
2.1帶His標籤的各種屬TSLP重組蛋白的純化
將細胞表現上清高速離心去除雜質，過濾，PBS溶液平衡鎳柱，沖洗10倍柱體積。將過濾後的上清上柱。用含有30mM咪唑的PBS溶液沖洗柱子，至A 280讀數降至基線。再用含有300mM咪唑的PBS溶液洗脫目的蛋白，並收集洗脫峰。PBS濃縮換液，LC-MS鑑定為正確後分裝備用。得到帶His標籤的人TSLP和食蟹猴TSLP。
2.2帶人Fc標籤的各種屬TSLP和人TSLP受體胞外區重組蛋白的純化
將細胞表現上清高速離心去除雜質，重組抗體表現上清用Protein A柱進行純化。用PBS沖洗柱子，至A 280讀數降至基線。用100mM乙酸(pH3.5)洗脫目的蛋白，用1M Tris-HCl，pH8.0中和。濃縮換液，所得到的蛋白經電泳、LC-MS鑑定為正確後分裝備用。
實施例1-3重組TSLP受體和IL-7Rα受體細胞系的構建和鑑定
為篩選可以阻斷TSLP結合TSLP受體的抗體，構建了同時表現人TSLP受體和人IL-7Rα(TSLPR/IL-7Rα)的CHO-K1和BaF3細胞株。採用慢病毒包裝目的基因TSLPR/IL-7Rα複製至目的細胞株內形成穩定高表現細胞株。首先分別將人TSLPR和人IL-7Rα基因複製至pCDH-CMV-MCS-EF1-puro和pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo(SBI，CD500B-1)質粒內，然後藉由慢病毒感染的方法將人TSLPR複製至CHO-K1和BaF3細胞株內，經10 μg/mL嘌呤黴素(puromycin，Gibco，US)篩選壓力下選擇培養三週。在此基礎上進行第二輪感染，再將人IL-7Rα基因複製進去，用1 mg/mL G418(Gibco，US)和10 μg/mL嘌呤黴素時篩選兩至三週。最後藉由流式分選的方法，篩選出同時高表現TSLPR和IL-7Rα的CHO-K1和BaF3單株細胞株。
實施例1-4 抗人TSLP單株抗體的製備和篩選
抗人TSLP單株抗體藉由免疫小鼠產生，實驗用SJL白小鼠，雌性，6-8週齡（北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK（京）2012-0001）。飼養環境：SPF級。小鼠購進後，實驗室環境飼養1週，12/12小時光/暗週期調節，溫度20-25℃；濕度40-60%。將已適應環境的小鼠用重組蛋白huTSLP-Fc(25μg)、huTSLP-his(12.5μg)和cyno TSLP-his(12.5μg)與TiterMax、Alum或CpG佐劑免疫。在第4-5次免疫以後，選擇血清中抗體滴度高並且滴度趨於平臺的小鼠，處死後，取脾細胞，與骨髓瘤細胞融合。採用優化的PEG介導的融合步驟將脾淋巴細胞與骨髓瘤細胞Sp2/0細胞(ATCC® CRL-8287™)進行融合得到雜交瘤細胞。
初次篩選用針對人和食蟹猴TSLP的ELISA結合實驗、阻斷人TSLP結合其受體TSLPR的實驗和抑制TSLP誘導的BaF3細胞的增殖實驗進行。當將雜交瘤細胞轉移到24孔板後，對其上清進行複篩。篩選出的陽性克隆經過兩輪亞克隆後，得到雜交瘤複製，用於抗體生產，並藉由親和方法純化。
篩選得到活性好的單株雜交瘤細胞株3號、119號、179號和199號，分別收集對數生長期雜交瘤細胞，用NucleoZol(MN)提取RNA，並進行反轉錄(PrimeScript™ Reverse Transcriptase，Takara, cat#2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用mouse Ig-Primer Set(Novagen, TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增後送測序公司測序。經測序得到鼠源抗TSLP抗體：mab3、mab119、mab179和mab199，其可變區胺基酸序列如下（下劃線部分為互補決定區序列）：
mab3鼠源重鏈可變區序列(SEQ ID NO: 6)： EVQLQQSGPVLVKPGASVKMSCKASGYTFT DDYMNWVKQSHGKSLEWIG IISPYNGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELNSLTSEDSAVYYCAR EDYDYDGYAMDHWGQGTSVTVSS
mab3鼠源輕鏈可變區序列(SEQ ID NO: 7)： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTC RASSSVSYMHWYQQKPGSSPKPWIY ATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYC QQWSSNRTFGGGTKLEIK
mab119鼠源重鏈可變區序列(SEQ ID NO: 8)： QAYLQQSGAELVRPGASVKMSCKASGFAFT TYNMHWVKHTPGQGLEWIG AIYPGNGETSYNQKFKDRATLTVDKSSRTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAR EDDYGEGYFDVWGAGTTVTVSS
mab119鼠源輕鏈可變區序列(SEQ ID NO: 9)： DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQPPRLLLY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTLNPVETDDVATYYC QQINTDPLTFGAGTKLELK
mab179鼠源重鏈可變區序列(SEQ ID NO: 10)： QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFT NYLIEWVKQRPGQGLEWIG VIDPGNGDTNYNENFKGKATLTADKSSSTAYIELSRLTSEDSAVYFCAR EDNTGTAFDYWGQGTTLTVSS
mab179鼠源輕鏈可變區序列(SEQ ID NO: 11)： SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTISC KASQSVSSDVTWYQQKPGQSPKLLIY YVSNHYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTISSVQAEDLAVYFC QQHHRFPLTFGAGTKLELK
mab199鼠源重鏈可變區序列(SEQ ID NO: 12)： QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFT TYWMHWVKQRPGQGLEWIG MIDPSDSETTLIQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTLTVSS
mab199鼠源輕鏈可變區序列(SEQ ID NO: 13)： DIQMTQSPASLSASVGETVTITC RASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVY FAKTLAEGVPSRFSGSVSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYC QHHYGTPWTFGGGTKLEIK
根據Kabat編號規則獲得的CDR區胺基酸序列如下表3所示： 表3 雜交瘤複製來源抗體重鏈及輕鏈的CDR區序列
抗體 重鏈 輕鏈
mab3 HCDR1 DDYMN SEQ ID NO: 14 LCDR1 RASSSVSYMH SEQ ID NO: 17
HCDR2 IISPYNGGTSYNQKFKG SEQ ID NO: 15 LCDR2 ATSNLAS SEQ ID NO: 18
HCDR3 EDYDYDGYAMDH SEQ ID NO: 16 LCDR3 QQWSSNRT SEQ ID NO: 19
mab119 HCDR1 TYNMH SEQ ID NO: 20 LCDR1 RASESVDNSGLSFMH SEQ ID NO: 23
HCDR2 AIYPGNGETSYNQKFKD SEQ ID NO: 21 LCDR2 RASNLGS SEQ ID NO: 24
HCDR3 EDDYGEGYFDV SEQ ID NO: 22 LCDR3 QQINTDPLT SEQ ID NO: 25
mab179 HCDR1 NYLIE SEQ ID NO: 26 LCDR1 KASQSVSSDVT  SEQ ID NO: 29
HCDR2 VIDPGNGDTNYNENFKG SEQ ID NO: 27 LCDR2 YVSNHYT SEQ ID NO: 30
HCDR3 EDNTGTAFDY SEQ ID NO: 28 LCDR3 QQHHRFPLT SEQ ID NO: 31
mab199 HCDR1 TYWMH SEQ ID NO: 32 LCDR1 RASENIYSYLA SEQ ID NO: 35
HCDR2 MIDPSDSETTLIQKFKD SEQ ID NO: 33 LCDR2 FAKTLAE SEQ ID NO: 36
HCDR3 TLDGYYDY SEQ ID NO: 34 LCDR3 QHHYGTPWT SEQ ID NO: 37
將上述鼠源抗體的輕重鏈可變區與人源抗體的輕、重鏈恆定區（如SEQ ID NO: 134所示的kappa恆定區和如SEQ ID NO: 133所示的IgG1-YTE恆定區）連接後形成嵌合抗體，mab3號複製對應的嵌合抗體命名為Ch3，mab119號複製的嵌合抗體命名為Ch119，mab179號複製對應的嵌合抗體命名為Ch179，mab199號複製對應的嵌合抗體命名為Ch199。
實施例1-5 抗人TSLP單株抗體的人源化設計
為了降低鼠源抗體的免疫原性，將已篩選出的體內外活性優異的mab3、mab119、mab179和mab199抗體進行了人源化。鼠源單株抗體的人源化根據本領域許多文獻公示的方法進行。簡言之，使用人抗體恆定結構域替代親本（鼠源抗體）恆定結構域，根據鼠源抗體和人抗體的同源性選擇人種系抗體序列，進行CDR移植。然後以鼠源抗體的三維結構為基礎，藉由對VL和VH的胺基酸殘基進行回復突變，將鼠源抗體的恆定區替換為人恆定區，得到最終的人源化分子。
5.1 mab3的人源FR區的選擇和回復突變
(1)人源FR區的選擇和回復突變
mab3的人源化VH模板為IGHV1-3*01+IGHJ6*01，人源化VL的模板為IGKV3-20+IGKJ4*01，將mab3的CDR移植到人源模板上，移植後獲得的可變區序列如下：
hu3 VL-CDR grafted：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIY ATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQWSSNRTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 38)
hu3 VH-CDR grafted：EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DDYMNWVRQAPGQRLEWMG IISPYNGGTSYNQKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDYDYDGYAMDHWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO: 42)
mab3人源化抗體的回復突變設計如下表4所示： 表4 mab3人源化抗體的回復突變
hu3 VL hu3VH
hu3VL1 Grafted hu3VH1 Grafted
hu3VL2 L46P、F71Y hu3VH2 I69L、R71V、T73K
hu3VL3 L46P、L47W、I58V、F71Y hu3VH3 R38K、M48I、V67A、I69L、R71V、T73K
hu3VL4 L46P、L47W、I58V、D70S、F71Y
註：Grafted（移植的）代表鼠抗體CDR植入人種系FR區序列，L46P表示依照Kabat編號系統，將46位L突變回P。
移植後獲得的mab3人源化抗體的可變區序列如下：
hu3VL1(hu3 VL-CDR grafted)(SEQ ID NO: 38)：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIY ATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQWSSNRTFGGGTKVEIK
hu3VL2(SEQ ID NO: 39)：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PLIY ATSNLASGIPARFSGSGSGTD YTLTISRLEPEDFAVYYC QQWSSNRTFGGGTKVEIK
hu3VL3(SEQ ID NO: 40)：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PWIY ATSNLASG VPARFSGSGSGTD YTLTISRLEPEDFAVYYC QQWSSNRTFGGGTKVEIK
hu3VL4(SEQ ID NO: 41)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PWIY ATSNLASG VPARFSGSGSGT SYTLTISRLEPEDFAVYYC QQWSSNRTFGGGTKVEIK
hu3VH1(hu3 VH-CDR Grafted)(SEQ ID NO: 42)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DDYMNWVRQAPGQRLEWMG IISPYNGGTSYNQKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDYDYDGYAMDHWGQGTTVTVSS
hu3VH2(SEQ ID NO: 43)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DDYMNWVRQAPGQRLEWMG IISPYNGGTSYNQKFKGRVT LT VD KSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDYDYDGYAMDHWGQGTTVTVSS
hu3VH3(SEQ ID NO: 44)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DDYMNWV KQAPGQRLEW IG IISPYNGGTSYNQKFKGR AT LT VD KSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDYDYDGYAMDHWGQGTTVTVSS 註：單下劃線部分為CDR區，雙下劃線部分為回復突變位點。
將上述輕、重鏈可變區與人種系輕鏈、重恆定區序列組合形成最終的完整輕、重鏈序列，進而得到全長序列的抗體。示例性的，本發明中mab3人源化抗體的重鏈恆定區為如SEQ ID NO: 133所示IgG1-YTE恆定區，輕鏈恆定區為如SEQ ID NO: 134所示的kappa鏈恆定區，但也可以更換為其他本領域內公知的恆定區。
獲得的mab3人源化抗體重、輕鏈可變區的序列見下表5： 表5 mab3人源化抗體重、輕鏈可變區序列
抗體 VH(SEQ ID NO) VL(SEQ ID NO)
hu3-01 42 39
hu3-02 42 40
hu3-03 42 41
hu3-04 43 38
hu3-05 43 39
hu3-06 43 40
hu3-07 43 41
hu3-08 44 39
hu3-09 44 40
hu3-10 44 41
藉由ELISA方法檢測mab3人源化抗體與人TSLP的結合活性，結果顯示，mab3人源化抗體與人TSLP具有很好的結合能力。
(2)hu3抗體的點突變
經檢測發現，mab3人源化抗體的HCDR3的MDH序列和LCDR3的NTR序列上存在熱點，因此，將相應的熱點進行位點突變。突變後得到mab3人源化抗體的CDR區序列如下表6所示： 表6 突變後的HCDR3、LCDR3序列
hu3 HCDR3-H110Y EDYDYDGYAMDY SEQ ID NO: 45
hu3LCDR3-N93D QQWSSDRT SEQ ID NO: 46
註：表6中突變位點的位置採用的是根據可變區序列的自然順序編號。
由此可得出，mab3人源化抗體CDR序列如下表7所示： 表7 mab3人源化抗體突變後的CDR
重鏈 輕鏈
HCDR1 DDYMN SEQ ID NO: 14 LCDR1 RASSSVSYMH SEQ ID NO: 17
HCDR2 IISPYNGGTSYNQKFKG SEQ ID NO: 15 LCDR2 ATSNLAS SEQ ID NO: 18
HCDR3（通式） EDYDYDGYAMDX 1SEQ ID NO: 47 LCDR3（通式1） QQWSSX 2RT SEQ ID NO: 48
其中，X 1選自H或Y，X 2選自N或D。
示例性的，突變後得到的人源化抗體hu3-11的CDR及重、輕鏈可變區如下表8所示： 表8 hu3-11的CDR區
重鏈 輕鏈
HCDR1 DDYMN SEQ ID NO: 14 LCDR1 RASSSVSYMH SEQ ID NO: 17
HCDR2 IISPYNGGTSYNQKFKG SEQ ID NO: 15 LCDR2 ATSNLAS SEQ ID NO: 18
HCDR3-H110Y EDYDYDGYAMDY SEQ ID NO: 45 LCDR3-N93D QQWSSDRT SEQ ID NO: 46
hu3-11的輕鏈可變區(hu3VL4-N93D)的胺基酸序列如下： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PWIY ATSNLASG VPARFSGSGSGT SYTLTISRLEPEDFAVYYC QQWSSDRTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 49)
hu3-11的重鏈可變區(hu3VH2-H110Y)的胺基酸序列如下： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DDYMNWVRQAPGQRLEWMG IISPYNGGTSYNQKFKGRVT LT VD KSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDYDYDGYAMDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO: 50)
將熱點突變後的輕、重鏈可變區與人種系輕鏈、重恆定區序列重組形成完整輕、重鏈序列，進而得到全長序列的抗體。
使用ELISA方法檢測突變後得到的抗體與人TSLP結合活性，結果顯示，hu3-11與人TSLP的親和活性依然較高，說明mab3人源化抗體的HCDR3和LCDR3上的熱點突變，並不會影響抗體的活性。
(3)hu3-11抗體的親和力成熟
對hu3-11的分子進行了親和力成熟。親和力成熟的過程如下：
酵母文庫的構建：設計簡並引物，藉由PCR的方法將設計的突變胺基酸引入到抗體hu3-11的scFv突變體文庫中，每個文庫的大小約10 9左右，構建好的酵母菌文庫藉由測序的方法驗證文庫的多樣性。
在第一輪篩選中，將來自hu3-11-scFv突變體文庫的約5×10 10個細胞與生物素化的TSLP-Fc蛋白(1-10μg/mL)在50mL含0.1%牛血清白蛋白(BSA)-磷酸鹽緩衝液(PBSA)中於室溫下孵育1小時。然後，混合物用0.1% PBSA洗滌，以去除未結合的抗體片段。然後往結合生物素化TSLP-Fc的hu3-11-scFv抗體突變體文庫中加入100 μL鏈菌素微珠(Mi1envi Biotec, Auburn, CA)，並使其負載於AutoMACS系統上用於分選。收集具有對TSLP-Fc的高親和力的抗體文庫的細胞，於250rpm和20℃下誘導18h。將所得到的富集文庫進行針對與生物素化的重組TSLP-Fc蛋白的第二輪篩選。
對於第三輪和第四輪的篩選，將來自前一輪的文庫細胞與生物素化的重組TSLP-Fc蛋白(0.1-1μg/mL)和10μg/mL鼠抗-cMyc(9E10, sigma)抗體在0.1% PBSA中於室溫下孵育1小時(h)，混合物用0.1%PBSA洗滌，以去除未結合的抗體片段。加入羊抗鼠-Alexa488(A-11001, Life technologies)和Strepavidin-PE(S-866, Life technologies)於4℃下孵育1h，混合物用0.1% PBSA洗滌，以去除未結合的抗體片段。最後，藉由FACS篩選出親和力高的抗體。
hu3-11-scFv突變體文庫利用生物素化的TSLP-Fc抗原，經過2輪MACS篩選和2輪FACS篩選。再挑選400個左右的酵母單株培養和誘導表現，使用FACS檢測酵母單株對TSLP-Fc抗原的結合，挑選出親和力高的酵母單株進行測序驗證，對測序複製進行比對分析，去除冗餘序列之後，將非冗余序列轉換成全長抗體後進行哺乳動物細胞表現。
親和力成熟獲得的輕鏈可變區序列如下：
hu3VL5(SEQ ID NO: 51)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PWIY ATSNLASG VPARFSGSGSGT SYTLTISRLEPEDFAVYYC QQSDNVRGFGGGTKVEIK
hu3VL6(SEQ ID NO: 52)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PWIY ATSNLASG VPARFSGSGSGT SYTLTISRLEPEDFAVYYC QQSDSGREFGGGTKVEIK 註：單下劃線部分為CDR區，雙下劃線部分為回復突變位點。
將獲得的輕鏈可變區與mab3人源化抗體的重鏈可變區重組，得到新的mab3人源化抗體，示例性的，將huVL5和huVL6分別與hu3VH2-H110Y組合，得到新的抗體分子hu3-12和hu3-13，具體如下表9所示： 表9 親和力成熟獲得的抗體
抗體 hu3VH hu3VL
hu3-12 hu3VH2-H110Y hu3VL5
hu3-13 hu3VH2-H110Y hu3VL6
親和力成熟後，得到的mab人源化抗體的CDR序列如下表10所示： 表10 親和力成熟獲得的mab3人源化抗體的CDR
抗體 重鏈 輕鏈
hu3-12 HCDR1 DDYMN SEQ ID NO: 14 LCDR1 RASSSVSYMH SEQ ID NO: 17
HCDR2 IISPYNGGTSYNQKFKG SEQ ID NO: 15 LCDR2 ATSNLAS SEQ ID NO: 18
HCDR3-H110Y EDYDYDGYAMDY SEQ ID NO: 45 LCDR3-V1 QQSDNVRG SEQ ID NO: 53
hu3-13 HCDR1 DDYMN SEQ ID NO: 14 LCDR1 RASSSVSYMH SEQ ID NO: 17
HCDR2 IISPYNGGTSYNQKFKG SEQ ID NO: 15 LCDR2 ATSNLAS SEQ ID NO: 18
HCDR3-H110Y EDYDYDGYAMDY SEQ ID NO: 45 LCDR3-V2 QQSDSGRE SEQ ID NO: 54
對得到的新的mab3人源化抗體進行ELISA檢測其結合人TSLP活性。結果顯示，hu3-12、hu3-13與人TSLP依然具有較高的結合能力。說明，LCDR3中某些胺基酸的改變，並不會影響hu3系列抗體的活性。
綜上，mab3人源化抗體的CDR具有如下表11所示的序列： 表11 mab3人源化抗體的CDR區通式序列
重鏈 輕鏈
HCDR1 DDYMN SEQ ID NO: 14 LCDR1 RASSSVSYMH SEQ ID NO: 17
HCDR2 IISPYNGGTSYNQKFKG SEQ ID NO: 15 LCDR2 ATSNLAS SEQ ID NO: 18
HCDR3（通式） EDYDYDGYAMDX 1SEQ ID NO: 47 LCDR3（通式2） QQSDX 3X 4RX 5SEQ ID NO: 55
其中，X 1為H或Y，X 3為N或S，X 4為V或G，X 5為G或E。
mab3人源化抗體熱點突變親和力成熟後的抗體重輕鏈可變區組合見下表12： 表12 親和力成熟抗體的序列
抗體 VH(SEQ ID NO) VL(SEQ ID NO)
hu3-11 50 49
hu3-12 50 51
hu3-13 50 52
5.2 mab119的人源FR區的選擇和回復突變
(1)人源FR區的選擇和回復突變
mab119的VH選取IGHV1-69*02和HJ6*01作為模板，VL選取IGKV4-1*01和IGKJ2*01以及IGKV3-11*01和IGKJ2*01作為模板，將鼠源抗體的CDR區移植到選擇的人源化模板上，並對FR區進行回復突變，得到不同的輕鏈和重鏈可變區，CDR移植得到的可變區序列如下：
hu119VL(Grafted, IGKV4-1*01)(SEQ ID NO: 56)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQPPKLLIY RASNLGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL4(Grafted, IGKV3-11*01)(SEQ ID NO: 59)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQAPRLLIY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VH(Grafted, IGHV1-69*02)(SEQ ID NO: 62)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWMG AIYPGNGETSYNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
mab119人源化抗體的回復突變見下表13： 表13 mab119回復突變
hu119VL hu119VH
hu119VL1 Grafted(IGKV4-1*01) hu119VH1 Grafted(IGHV1-69*02)
hu119VL2 Grafted(IGKV4-1*01)+M4L hu119VH2 G27F、I69L、A71V
hu119VL3 Grafted(IGKV4-1*01)+I48L、V58I hu119VH3 G27F、M48I、V67A、I69L、A71V
hu119VL4 Grafted(IGKV3-11*01) hu119VH4 G27F、R38K、Q39H、M48I、V67A、I69L、A71V
hu119VL5 Grafted(IGKV3-11*01) +A43P、I48L hu119VH5 M48I、V67A、I69L、A71V
hu119VL6 Grafted(IGKV3-11*01)+E1D、A43P、I48L hu119VH6 V2A、G27F、M48I、V67A、I69L、A71V
    hu119VH7 M48I、V67A、I69L、A71V、S76R
    hu119VH8 V2A、G27F、M48I、V67A、I69L、A71V、S76R
註：如M4L表示依照Kabat編號系統，將第4位M突變回L。Grafted（移植的）代表鼠抗體CDR植入人種系FR區序列。
mab119人源化抗體可變區具體序列如下：
hu119VL1(Grafted(IGKV4-1*01))(SEQ ID NO: 56)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQPPKLLIY RASNLGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL2(SEQ ID NO: 57)： DIV LTQSPDSLAVSLGERATINC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQPPKLLIY RASNLGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL3(SEQ ID NO: 58)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQPPKLL LY RASNLGSG IPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL4(Grafted, IGKV3-11*01)(SEQ ID NO: 59)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQAPRLLIY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL5(SEQ ID NO: 60)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQ PPRLL LY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL6(SEQ ID NO: 61)： DIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNSGLSFMHWYQQKPGQ PPRLL LY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VH1(Grafted)(SEQ ID NO: 62)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWMG AIYPGNGETSYNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH2(SEQ ID NO: 63)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG FTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWMG AIYPGNGETSYNQKFKDRVT LT VDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH3(SEQ ID NO: 64)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG FTFS TYNMHWV KHAPGQGLEW IG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH4(SEQ ID NO: 65)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG FTFS TYNMHWV KHAPGQGLEW IG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH5(SEQ ID NO: 66)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWIG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH6(SEQ ID NO: 67)： E AQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG FTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWIG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA REDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH7(SEQ ID NO: 68)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS TYNMHWVRQAPGQGLEW IG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKST RTAYMELSSLRSEDTAVYYCA REDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS
hu119VH8(SEQ ID NO: 69)： E AQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG FTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWIG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKST RTAYMELSSLRSEDTAVYYCA REDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS 註：單下劃線部分為可變區，雙下劃線部分為回復突變。
將上述輕、重鏈可變區與人種系輕、重鏈恆定區序列組合形成最終的完整輕、重鏈序列，進而得到全長序列的抗體。示例性的，本發明中mab119人源化抗體的重鏈恆定區為如SEQ ID NO: 133所示的IgG1-YTE恆定區，輕鏈恆定區為如SEQ ID NO: 134所示的kappa鏈恆定區，但也可以更換為其他本領域內公知的恆定區。
mab119人源化抗體的重、輕鏈可變區見表14。 表14 mab119人源化抗體的重、輕鏈可變區
抗體 VH(SEQ ID NO) VL(SEQ ID NO)
hu119-01 62 56
hu119-02 63 56
hu119-03 64 56
hu119-04 65 56
hu119-05 62 57
hu119-06 63 57
hu119-07 64 57
hu119-08 65 57
hu119-09 62 58
hu119-10 63 58
hu119-11 64 58
hu119-12 65 58
hu119-13 64 59
hu119-14 66 59
hu119-15 67 59
hu119-16 68 59
hu119-17 69 59
hu119-18 64 60
hu119-19 66 60
hu119-20 67 60
hu119-21 68 60
hu119-22 69 60
hu119-23 64 61
hu119-24 66 61
hu119-25 67 61
hu119-26 68 61
hu119-27 69 61
使用ELISA方法檢測人源化抗體與人TSLP結合活性，結果顯示，mab119人源化抗體可與人TSLP特異性結合。
(2)hu119的突變
經檢測發現，mab119人源化抗體的LCDR1 DNS序列存在熱點，因此，將相應的位點突變為N31S或N31Q。突變後得到的LCDR1序列如表15所示： 表15 mab119人源化抗體點突變後的LCDR1
hu119 LCDR1-N31S RASESVDSSGLSFMH SEQ ID NO: 70
hu119 LCDR1-N31Q RASESVDQSGLSFMH SEQ ID NO: 71
註：表15中突變位點的位置採用的是自然順序編號。
示例性的，突變後得到的hu119VL2、hu119VL6突變體序列如下：
hu119VL2-N31S(SEQ ID NO: 72) DIV LTQSPDSLAVSLGERATINC RASESVDSSGLSFMHWYQQKPGQPPKLLIY RASNLGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL2-N31Q(SEQ ID NO: 73) DIV LTQSPDSLAVSLGERATINC RASESVDQSGLSFMHWYQQKPGQPPKLLIY RASNLGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL6-N31S(SEQ ID NO: 74) DIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDSSGLSFMHWYQQKPGQ PPRLL LY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK
hu119VL6-N31Q(SEQ ID NO: 75) DIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDQSGLSFMHWYQQKPGQ PPRLL LY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK 註：單下劃線部分為可變區，雙下劃線部分為回復突變。
將得到的hu119VL2、hu119VL6突變體與hu119VH組合，得到新的人源化hu119抗體，示例性的，hu119VL2-N31S、hu119VL2-N31Q分別與hu119VH3組合，得到的抗體hu119-28和hu119-29；hu119VL3-N31S與hu119VH8組合，得到抗體hu119-30，示例性的突變後抗體的可變區組合如表16所示： 表16 熱點突變後的人源化抗體可變區組合
  hu119VH hu119VL
hu119-28 hu119VH3 hu119VL2-N31S
hu119-29 hu119VH3 hu119VL2-N31Q
hu119-30 hu119VH8 hu119VL6-N31S
使用ELISA方法檢測突變後得到的抗體與人TSLP的親和力，結果顯示，hu119-28、hu119-29抗體依然與人TSLP具有較高的親和力，這說明，LCDR2的N31S、N31Q的突變並不會影響抗TSLP抗體活性。
綜上，mab119人源化抗體的CDR具有如表17所示的序列： 表17 mab119人源化抗體的CDR
HCDR1 TYNMH SEQ ID NO: 20 LCDR1-通式 RASESVDX 6SGLSFMH SEQ ID NO: 76
HCDR2 AIYPGNGETSYNQKFKD SEQ ID NO: 21 LCDR2 RASNLGS SEQ ID NO: 24
HCDR3 EDDYGEGYFDV SEQ ID NO: 22 LCDR3 QQINTDPLT SEQ ID NO: 25
其中，X 6選自N、S和Q。
5.3 mab179的人源化FR區的選擇和回復突變
(1)mab179鼠源抗體人源化模板選擇及回復突變
mab179的VH選取IGHV1-69*02和IGHJ6*01作為模板，VL選取IGKV4-1*01和IGKJ2*01或IGKV2-29*02和IGKJ2*01作為模板，將鼠源抗體的CDR區移植到選擇的人源化模板上，並對FR區進行回復突變，如表18所示，得到不同序列的輕鏈和重鏈可變區。人源化可變區序列及回復突變如下：
hu179VL1(Grafted(IGKV4-1*01))(SEQ ID NO: 77) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQPPKLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL5(Grafted(IGKV2-29*02))(SEQ ID NO: 81) DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VH1(Grafted)(SEQ ID NO: 85) EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWMG VIDPGNGDTNYNENFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS 表18 mab179人源化模板及回復突變
hu179VL1VL hu179VH
hu179VL1 Grafted(IGKV4-1*01) hu179VH1 Grafted(IGHV1-69*02)
hu179VL2 Grafted(IGKV4-1*0) P43S hu179VH2 G27Y、I69L
hu179VL3 Grafted(IGKV4-1*01) P43S、L73F hu179VH3 G27Y、M48I、V67A、I69L、M80I
hu179VL4 Grafted(IGKV4-1*01) D1S、P43S hu179VH4 G27Y、R38K、M48I、R66K、V67A、I69L、M80I、S82bR
hu179VL5 Grafted(IGKV2-29*02) hu179VH5 G27Y、T28A、M48I、V67A、I69L
hu179VL6 Grafted(IGKV2-29*02) D1S    
hu179VL7 Grafted(IGKV2-29*02) D1S、L73F    
hu179VL8 Grafted(IGKV2-29*02) D1S、S67Y    
註：如P43S表示依照Kabat編號系統，將43位P突變回S。Grafted代表鼠抗體CDR植入人種系FR區序列。
mab179人源化抗體的可變區如下所示：
hu179VL1(Grafted(IGKV4-1*01))(SEQ ID NO: 77)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQPPKLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2(SEQ ID NO: 78)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179 VL3(SEQ ID NO: 79)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFT FTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179 VL4(SEQ ID NO: 80)： SIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL5(Grafted(IGKV2-29*02))(SEQ ID NO: 81)： DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL6(SEQ ID NO: 82)： SIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL7(SEQ ID NO: 83)： SIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFT FKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL8(SEQ ID NO: 84)： SIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVSNHYTGVPDRFSGSG YGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VH1(Grafted)(SEQ ID NO: 85)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWMG VIDPGNGDTNYNENFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS
hu179VH2(SEQ ID NO: 86)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG YTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWMG VIDPGNGDTNYNENFKGRVT LTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS
hu179VH3(SEQ ID NO: 87)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG YTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWIG VIDPGNGDTNYNENFKGR AT LTADKSTSTAY IELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS
hu179VH4(SEQ ID NO: 88)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG YTFS NYLIEWV KQAPGQGLEW IG VIDPGNGDTNYNENFKG KAT LTADKSTSTAY IELS RLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS
hu179VH5(SEQ ID NO: 89)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG YAFS NYLIEWVRQAPGQGLEW IG VIDPGNGDTNYNENFKGR AT LTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS 註：單下劃線部分為CDR，雙下劃線部分為回復突變位點。
將上述輕、重鏈可變區與人種系輕、重鏈恆定區序列組合形成最終的完整輕、重鏈序列，進而得到全長序列的抗體。示例性的，本發明中mab199人源化抗體的重鏈恆定區為如SEQ ID NO: 133所示的IgG1-YTE恆定區，輕鏈恆定區為如SEQ ID NO: 134所示的kappa鏈恆定區，但也可以更換為其他本領域內公知的恆定區。
獲得的mab179人源化抗體重、輕鏈可變區的序列如下表19所示： 表19 mab179人源化抗體的重、輕鏈可變區組合
抗體 VH(SEQ ID NO) VL(SEQ ID NO)
hu179-01 85 77
hu179-02 85 78
hu179-03 86 77
hu179-04 86 78
hu179-05 87 77
hu179-06 87 78
hu179-07 87 79
hu179-08 87 81
hu179-09 87 82
hu179-10 87 83
hu179-11 87 84
hu179-12 88 77
hu179-13 88 78
hu179-14 89 79
hu179-15 89 80
hu179-16 89 81
hu179-17 89 82
hu179-18 89 83
hu179-19 89 84
使用ELISA方法檢測mab179人源化抗體與人TSLP的親和力，結果顯示mab179人源化抗體與人TSLP具有很好的親和力。
(2)hu179抗體的突變
經檢測發現，mab179人源化抗體的HCDR2和LCDR2序列上存在熱點，因此，將相應的位點突變以消除分子修飾風險。
在其中一個實施例中，對hu179VH1的HCDR2的GNG進行胺基酸突變，hu179VH1突變後的序列如下：
hu179VH1-N55Q(SEQ ID NO: 90)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWMG VIDPG Q GDTNYNENFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS
hu179VH1- N55V(SEQ ID NO: 91)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWMG VIDPG V GDTNYNENFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS
hu179VH1- G56V(SEQ ID NO: 92)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWMG VIDPGN V DTNYNENFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS 註：單下劃線部分為CDR，雙下劃線部分為回復突變位點。
突變後得到mab179人源化抗體的HCDR2區序列如表20所示： 表20 mab179人源化抗體的HCDR2突變體
hu179 HCDR2-N55Q VIDPG QGDTNYNENFKG SEQ ID NO: 93
hu179 HCDR2-N55V VIDPG VGDTNYNENFKG SEQ ID NO: 94
hu179 HCDR2-G56V VIDPGN VDTNYNENFKG SEQ ID NO: 95
註：表20中突變點的位置採用的是自然順序編號。
由上可獲得mab179人源化抗體突變後的CDR區，如表21所示： 表21 mab179人源化抗體突變後CDR
HCDR1 NYLIE SEQ ID NO: 26 LCDR1 KASQSVSSDVT  SEQ ID NO: 29
HCDR2（通式） VIDPGX 7X 8DTNYNENFKG SEQ ID NO: 96 LCDR2 YVSNHYT SEQ ID NO: 30
HCDR3 EDNTGTAFDY SEQ ID NO: 28 LCDR3 QQHHRFPLT SEQ ID NO: 31
其中，X 7選自N，Q或V，X 8選自G或V。
將突變後得到的hu179VH1突變體與人源化的hu179VL組合，得到新的mab179人源化抗體，示例性的hu179VH1突變體與hu179VL2組合的抗體如表22所示： 表22 突變後抗體可變區組合
可變區 hu179VH1-N55Q hu179VH1-N55V hu179VH1-G56V
hu179VL2 hu179-20 hu179-21 hu179-22
使用ELISA方法檢測突變後得到的抗體與人TSLP的親和力，結果顯示，HCDR2突變後的抗體與人TSLP依然保持較高的親和力。這表明mab179人源化抗體的HCDR2的點突變N55Q、N55V和G56V基本不影響抗體與TSLP的親和活性。
按照同樣的方法，在hu179VH2、hu179VH3、hu179VH4、hu179VH5上分別進行N55Q、N55V和G56V點突變（自然順序編號），並將突變獲得重輕鏈可變區重新組合，得到新的mab179人源化抗體。示例性的，hu179VH3突變的序列如下所示：
hu179VH3-N55V(SEQ ID NO: 97)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG YTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWIG VIDPGVGDTNYNENFKGR AT LTADKSTSTAY IELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS 註：單下劃線部分為CDR，雙下劃線部分為回復突變位點。 在另一些實施例中，對mab179人源化抗體的LCDR2進行胺基酸突變，示例性的，hu179VL2突變後的序列如下：
hu179VL2-Y50E(SEQ ID NO: 98)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY E VSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-S52D(SEQ ID NO: 99)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVDNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-S52E(SEQ ID NO: 100)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVENHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-N53Q(SEQ ID NO: 101)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSQHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-N53D(SEQ ID NO: 102)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSDHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-N53E(SEQ ID NO: 103)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSEHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-H54Y(SEQ ID NO: 104)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNYYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-H54D(SEQ ID NO: 105)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNDYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-H54E(SEQ ID NO: 106)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNEYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
hu179VL2-Y55E(SEQ ID NO: 107)： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVSSDVTWYQQKPGQ SPKLLIY YVSNHETGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK 註：單下劃線部分為CDR，雙下劃線部分為回復突變位點。
突變後獲得的mab179人源化抗體LCDR2的序列如表23所示： 表23 mab179人源化抗體LCDR2突變體
突變體 序列
hu179 LCDR2-Y50E EVSNHYT SEQ ID NO: 108
hu179 LCDR2-S52D YV DNHYT SEQ ID NO: 109
hu179 LCDR2-S52E YV ENHYT SEQ ID NO: 110
hu179LCDR2-N53Q YVS QHYT SEQ ID NO: 111
hu179 LCDR2-N53D YVS DHYT SEQ ID NO: 112
hu179 LCDR2-N53E YVS EHYT SEQ ID NO: 113
hu179 LCDR2-H54Y YVSN YYT SEQ ID NO: 114
hu179 LCDR2-H54D YVSN DYT SEQ ID NO: 115
hu179 LCDR2-H54E YVSN EYT SEQ ID NO: 116
hu179 LCDR2-Y55E YVSNH ET SEQ ID NO: 117
註：雙下劃線部分為回復突變位點。
由上可知，mab179人源化抗體LCDR2通式為：X 9VX 10X 11X 12X 13T(SEQ ID NO: 118)，其中X 9選自Y或E，X 10選自S、D或E，X 11選自N，Q，D或E；X 12選自H，Y，D或E；X 13選自E或Y。mab179人源化抗體的CDR區如下表24所示： 表24 mab179人源化抗體的CDR
HCDR1 NYLIE SEQ ID NO: 26 LCDR1 KASQSVSSDVT SEQ ID NO: 29
HCDR2 VIDPGX 7X 8DTNYNENFKG SEQ ID NO: 96 LCDR2 X 9VX 10X 11X 12X 13T SEQ ID NO: 118
HCDR3 EDNTGTAFDY SEQ ID NO: 28 LCDR3 QQHHRFPLT SEQ ID NO: 31
其中，X 7選自N，Q或V，X 8選自G或V；X 9選自Y或E；X 10選自S、D或E；X 11選自N，Q，D或E；X 12選自H，Y，D或E；X 13選自E或Y。
將突變後得到的hu179VL2突變體與人源化的hu179重鏈可變區組合，得到新的mab179人源化抗體，示例性的hu179VL2突變體與hu179VH1、hu179VH3組合，獲得的mab179人源化抗體的CDR及重輕鏈可變區組合如下表25所示： 表25 LCDR2突變後mab179人源化抗體CDR區序列
HCDR1 NYLIE SEQ ID NO: 26 LCDR1 KASQSVSSDVT SEQ ID NO: 29
HCDR2 VIDPGNGDTNYNENFKG SEQ ID NO: 27 LCDR2 X 5VX 6X 7X 8X 9T SEQ ID NO: 118
HCDR3 EDNTGTAFDY SEQ ID NO: 28 LCDR3 QQHHRFPLT SEQ ID NO: 31
其中，X 5選自Y或E；X 6選自S、D或E；X 7選自N，Q，D或E；X 8選自H，Y，D或E；X 9選自E或Y。
獲得的mab179人源化抗體重、輕鏈可變區的序列如下表26所示： 表26 LCDR2突變後mab179人源化抗體的重、輕鏈可變區組合
抗體 VH(SEQ ID NO) VL(SEQ ID NO)
hu179-23 85 102
hu179-24 85 104
hu179-25 87 98
hu179-26 87 99
hu179-27 87 100
hu179-28 87 101
hu179-29 87 103
hu179-30 87 105
hu179-31 87 106
hu179-32 87 107
使用ELISA的方法檢測LCDR2突變後獲得的mab179人源化抗體與人TSLP的親和力，結果顯示，對LCDR2的熱點位點突變後，得到的抗體與人TSLP依然具有較好的親和力。說明LCDR2的熱點位點的突變也不會影響mab179人源化抗體的結合活性。
按照同樣的方法，對hu179VL3、hu179VL4、hu179VL5、hu179VL6、hu179VL7和hu179VL8的LCDR2進行N53Q、N53D、N53S、H54Y、Y50E、S52D、S52E、N53E、H54D、H54E或Y55E的突變。將突變後的輕鏈可變區與重鏈可變區組合，形成新的mab人源化抗體。在一種實施方案中，hu179VL8突變後的序列如下所示：
hu179VL8-N53E(SEQ ID NO: 119)： SIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVSEHYTGVPDRFSGSG YGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK
將突變得到的hu179VL8-N53E與hu179VH3-N55V組合，得到新的抗體分子hu179-33，該分子的CDR序列如下表27所示： 表27 hu179-33抗體的CDR區
HCDR1 NYLIE SEQ ID NO: 26 LCDR1 KASQSVSSDVT SEQ ID NO: 29
HCDR2-N55V VIDPGVGDTNYNENFKG SEQ ID NO: 94 LCDR2-N53E YVSEHYT SEQ ID NO: 113
HCDR3 EDNTGTAFDY SEQ ID NO: 28 LCDR3 QQHHRFPLT SEQ ID NO: 31
Biacore檢測突變後得到的抗體與人TSLP結合活性，示例性的抗體的結合活性如下表28所示： 表28 hu179-33與人TSLP的親和力
抗體 huTSLP親和力KD(M)
AMG157 8.12E-12
hu179-33 9.03E-13
表中，AMG157（tezepelumab，抗TSLP抗體）為陽性對照。結果顯示，hu179-33抗體與人TSLP具有較高的特異性結合活性。這表明同時在HCDR2和LCDR2上進行熱點的點突變，並不會影響mab179人源化抗體與人TSLP親和力。由此可知，在mab179人源化抗體分子中，同時在HCDR2上做N55Q、N55V、G56V突變，在LCDR2中做N53Q、N53D、N53S、H54Y、Y50E、S52D、S52E、N53E、H54D、H54E或Y55E的突變，並不會影響抗體與人TSLP的結合，即不會影響抗TSLP抗體的活性。
5.4 mab199抗體人源FR區的選擇和回復突變
mab199的VH選取IGHV1-46*01和HJ6*01為模板，VL選取IGKV1-39*01和IGKJ4*01為模板，將鼠源抗體的CDR區移植到選擇的人源化模板上，並對FR區進行回復突變，得到具有不同序列的輕鏈和重鏈可變區，回復突變如表29所示。 表29 mab199的回復突變設計
hu199VL hu199VH
hu199VL1 Grafted hu199VH1 Grafted
hu199VL2 I48V hu199VH2 R71V、T73K、V78A
hu199VL3 A43S、K45Q、I48V、D70Q hu199VH3 M69L、R71V、T73K、V78A
hu199VL4 G66V hu199VH4 M48I、V67A、M69L、R71V、T73K、V78A
hu199VL5 I48V、G66V hu199VH5 R38K、M48I、R66K、V67A、M69L、R71V、T73K、V78A
hu199VL6 A43S、K45Q、I48V、G66V、D70Q hu199VH6 R38K、R66K、R71V、T73K、V78A
hu199VH7 R38K、R67K、M69L、R71V、T73K、V78A
註：如I48V表示依照Kabat編號系統，將48位I突變回V。Grafted代表鼠抗體CDR植入人種系FR區序列。
mab199人源化抗體的可變區如下所示：
hu199VL1(Grafted)(SEQ ID NO: 120)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIY FAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK
hu199VL2(SEQ ID NO: 121)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLL VY FAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK
hu199VL3(SEQ ID NO: 122)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGK SP QLL VY FAKTLAEGVPSRFSGSGSGT QFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK
hu199VL4(SEQ ID NO: 123)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIY FAKTLAEGVPSRFSGS VSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK
hu199VL5(SEQ ID NO: 124)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLL VY FAKTLAEGVPSRFSGS VSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK
hu199VL6(SEQ ID NO: 125)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGK SP QLL VY FAKTLAEGVPSRFSGS VSGT QFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK
hu199VH1(Grafted)(SEQ ID NO: 126)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWVRQAPGQGLEWMG MIDPSDSETTLIQKFKDRVTMT RD TSTST VYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS
hu199VH2(SEQ ID NO: 127)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWVRQAPGQGLEWMG MIDPSDSETTLIQKFKDRVTMT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS
hu199VH3(SEQ ID NO: 128)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWVRQAPGQGLEWMG MIDPSDSETTLIQKFKDRVT LT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS
hu199VH4(SEQ ID NO: 129)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWVRQAPGQGLEW IG MIDPSDSETTLIQKFKDR AT LT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS
hu199VH5(SEQ ID NO: 130)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWV KQAPGQGLEW IG MIDPSDSETTLIQKFKD KAT LT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS
hu199VH6(SEQ ID NO: 131)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWV KQAPGQGLEWMG MIDPSDSETTLIQKFKD KVTMT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS
hu199VH7(SEQ ID NO: 132)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWV KQAPGQGLEWMG MIDPSDSETTLIQKFKD KVT LT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS 註：單下劃線部分為CDR，雙下劃線部分為回復突變位點。
將上述輕、重鏈可變區與人種系輕、重鏈恆定區序列組合形成最終的完整輕、重鏈序列進而得到全長序列的抗體。在本發明中如無明確說明時，mab199人源化抗體的輕鏈恆定區為如SEQ ID NO: 134所示的恆定區，重鏈恆定區為如SEQ ID NO: 133所示的恆定區。
得到的mab199人源化抗體如下表30所示： 表30 mab199人源化抗體的重、輕鏈可變區序列
抗體 VH(SEQ ID NO) VL(SEQ ID NO)
hu199-01 127 120
hu199-02 127 121
hu199-03 127 122
hu199-04 127 123
hu199-05 127 124
hu199-06 127 125
hu199-07 128 120
hu199-08 128 121
hu199-09 128 122
hu199-10 128 123
hu199-11 128 124
hu199-12 128 125
hu199-13 129 120
hu199-14 129 121
hu199-15 129 122
hu199-16 129 123
hu199-17 129 124
hu199-18 129 125
hu199-19 130 120
hu199-20 130 121
hu199-21 130 122
hu199-22 130 123
hu199-23 130 124
hu199-24 130 125
hu199-25 131 120
hu199-26 131 121
hu199-27 131 122
hu199-28 131 123
hu199-29 131 124
hu199-30 131 125
hu199-31 132 120
hu199-32 132 121
hu199-33 132 122
hu199-34 132 123
hu199-35 132 124
hu199-36 132 125
使用ELISA方法的檢測mab199人源化抗體阻斷TSLP結合TSLP受體的活性，檢測結果如下表31所示： 表31 mab199人源化抗體阻斷TSLP結合TSLP受體的活性
抗體 IC50(nM) 抗體 IC50(nM) 抗體 IC50(nM) 抗體 IC50(nM)
hu199-01 0.1912 hu199-10 0.3910 hu199-191 0.6584 hu199-28 0.4619
hu199-02 0.2193 hu199-11 0.3648 hu199-20 0.4001 hu199-29 0.5543
hu199-03 0.2077 hu199-12 0.3700 hu199-21 0.5353 hu199-30 0.3493
hu199-04 0.4242 hu199-13 0.2395 hu199-22 0.3449 hu199-31 0.3044
hu199-05 0.4726 hu199-14 0.3112 hu199-23 0.3370 hu199-32 0.2870
hu199-06 0.3806 hu199-15 0.2866 hu199-24 0.4960 hu199-33 0.2055
hu199-07 0.2834 hu199-16 0.7367 hu199-25 0.2460 hu199-34 0.7107
hu199-08 0.2828 hu199-17 0.6111 hu199-26 0.3651 hu199-35 0.4849
hu199-09 0.2732 hu199-18 0.4806 hu199-27 0.3544 hu199-36 0.7273
Ch199 0.4266            
結果顯示，mab199人源化抗體依然具有較高的阻斷人TSLP與TSLP受體結合的活性。
5.5 抗體恆定區
人源化抗體及嵌合抗體重鏈恆定區可選自IgG1、IgG2、IgG4及其變體的恆定區，示例性的，本發明中使用了IgG1-YTE恆定區，其序列如SEQ ID NO: 133所示。輕鏈恆定區可選自人源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區，示例性的，本發明中使用了人源κ鏈的恆定區，其序列如SEQ ID NO: 134所示。
IgG1-YTE重鏈恆定區(SEQ ID NO: 133)： ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL YI TR EPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 註：下劃線為設計的M252Y、S254T、T256E突變。
κ輕鏈恆定區(SEQ ID NO: 134)： RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
將本發明中的人源化的重輕鏈可變區與上述恆定區重組，得到重、輕鏈的全長序列，示例性的，抗體的序列如下所示：
hu3-13抗體重鏈(SEQ ID NO: 135)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DDYMNWVRQAPGQRLEWMG IISPYNGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDYDYDGYAMDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL YI TR EPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
hu3-13抗體輕鏈(SEQ ID NO: 136)： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSYMHWYQQKPGQAPR PWIY ATSNLASG VPARFSGSGSGT SYTLTISRLEPEDFAVYYC QQSDSGREFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
hu119-30抗體重鏈(SEQ ID NO: 137)： E AQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG FTFS TYNMHWVRQAPGQGLEWIG AIYPGNGETSYNQKFKDR AT LT VDKST RTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EDDYGEGYFDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL YI TR EPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
hu119-30抗體輕鏈(SEQ ID NO: 138)： DIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDSSGLSFMHWYQQKPGQ PPRLL LY RASNLGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC QQINTDPLTFGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
hu179-33抗體重鏈(SEQ ID NO: 139)： EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG YTFS NYLIEWVRQAPGQGLEWIG VIDPG V GDTNYNENFKGR AT LTADKSTSTAY IELSSLRSEDTAVYYCAR EDNTGTAFDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL YI TR EPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
hu179-33抗體輕鏈(SEQ ID NO: 140)： SIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC KASQSVSSDVTWYLQKPGQSPQLLIY YVS E HYTGVPDRFSGSG YGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQHHRFPLTFGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
hu199-36抗體重鏈(SEQ ID NO: 141)： EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT TYWMHWV KQAPGQGLEWMG MIDPSDSETTLIQKFKD KVT LT VD KSTST AYMELSSLRSEDTAVYYCAR TLDGYYDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL YI TR EPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
hu199-36抗體輕鏈(SEQ ID NO: 142)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASENIYSYLAWYQQKPGK SP QLL VY FAKTLAEGVPSRFSGS VSGT QFTLTISSLQPEDFATYYC QHHYGTPWTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC註：下劃線部分為CDR，斜體部分為恆定區。
本發明將AMG157作為陽性對照，其序列如SEQ ID NO: 143和SEQ ID NO: 144所示。
AMG157的重鏈序列(SEQ ID NO: 143)： QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
AMG157的輕鏈序列(SEQ ID NO: 144)： SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
此外，在測試抗體活性時，本發明還使用了人TSLP受體和人IL-7Rα構建細胞系，其序列如下所示：
人TSLP受體全長序列胺基酸序列(SEQ ID NO: 145)： MGRLVLLWGAAVFLLGGWMALGQGGAAEGVQIQIIYFNLETVQVTWNASKYSRTNLTFHYRFNGDEAYDQCTNYLLQEGHTSGCLLDAEQRDDILYFSIRNGTHPVFTASRWMVYYLKPSSPKHVRFSWHQDAVTVTCSDLSYGDLLYEVQYRSPFDTEWQSKQENTCNVTIEGLDAEKCYSFWVRVKAMEDVYGPDTYPSDWSEVTCWQRGEIRDACAETPTPPKPKLSKFILISSLAILLMVSLLLLSLWKLWRVKKFLIPSVPDPKSIFPGLFEIHQGNFQEWITDTQNVAHLHKMAGAEQESGPEEPLVVQLAKTEAESPRMLDPQTEEKEASGGSLQLPHQPLQGGDVVTIGGFTFVMNDRSYVAL 註：下劃線部分為訊號肽。
人IL-7Rα全長序列胺基酸序列（Uniprot編號：P16871）(SEQ ID NO: 146)： MTILGTTFGMVFSLLQVVSGESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNTTNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVIYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMDPILLTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNP VAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ 註：下劃線部分為訊號肽。
本發明的抗體可用常規基因複製、重組表現的方法進行複製、表現和純化。
第二部分抗體活性檢測
測試例1ELISA測定抗TSLP抗體與人TSLP的結合
用pH7.4的PBS（上海源培，B320）緩衝液將人TSLP-his(SEQ ID NO: 1)稀釋至1μg/mL，以100μg/孔的體積加入96孔酶標板(Corning，CLS3590-100EA)中，於4℃孵育過夜。棄去液體後，加入用PBS稀釋的5%脫脂牛奶（光明脫脂奶粉）封閉液200μL/孔，37℃孵育箱孵育2小時進行封閉。封閉結束後，棄去封閉液，用PBST緩衝液（pH 7.4PBS含0.1%(v/v)tween-20）洗板3次後，加入100μL/孔用樣品稀釋液稀釋的不同濃度待測抗體和陽性抗體AMG157，放於37℃孵育箱孵育1小時。孵育結束後用PBST洗板3次，加入100μL/孔用樣品稀釋液稀釋的HRP標記的羊抗鼠二抗(Jackson Immuno Research，115-035-003)，37℃孵育1小時。用PBST洗板6次後，加入50µL/孔TMB顯色底物(KPL，52-00-03)，於室溫孵育10-15min，加入50µL/孔1M H 2SO 4終止反應，用NOVOStar酶標儀在450nm處讀取吸收值，計算TSLP抗體對TSLP的結合EC50值，結果見下表32。 表32 抗體與人TSLP結合活性結果
抗體 EC50(nM) 抗體 EC50(nM) 抗體 EC50(nM)
Ch3 0.4929 hu119-14 0.345 hu179-09 0.1573
hu3-01 0.8494 hu119-15 0.3497 hu179-10 0.19
hu3-02 0.6285 hu119-16 0.366 hu179-11 0.1369
hu3-03 0.5545 hu119-17 0.3515 hu179-12 0.1437
hu3-04 0.4353 hu119-18 0.3455 hu179-13 0.2011
hu3-05 0.5168 hu119-19 0.3533 hu179-14 0.2053
hu3-06 0.594 hu119-20 0.3412 hu179-15 0.2035
hu3-07 0.3853 hu119-21 0.3987 hu179-16 0.2287
hu3-08 0.4687 hu119-22 0.351 hu179-17 0.218
hu3-09 0.4941 hu119-23 0.3404 hu179-18 0.2458
hu3-10 0.3879 hu119-24 0.3446 hu179-19 0.1616
hu3-12 0.1519 hu119-25 0.3575 hu179-20 0.7077
hu3-13 0.1477 hu119-26 0.3782 hu179-21 0.9784
Ch119 0.851 hu119-27 0.3347 hu179-22 0.7519
hu119-01 0.107 hu119-28 0.2648 hu179-23 0.997
hu119-02 0.1938 hu119-29 0.2729 hu179-24 0.6358
hu119-03 0.1593 hu119-28 0.2648 hu179-25 0.1313
hu119-04 0.1881 hu119-29 0.2729 hu179-26 0.2006
hu119-05 0.1445 Ch179 0.2023 hu179-27 0.1799
hu119-06 0.2206 hu179-01 0.1248 hu179-28 0.0906
hu119-07 0.2132 hu179-02 0.1697 hu179-29 0.2041
hu119-08 0.2015 hu179-03 0.138 hu179-30 0.246
hu119-09 0.1492 hu179-04 0.1886 hu179-31 0.2012
hu119-10 0.2329 hu179-05 0.1416 hu179-32 0.145
hu119-11 0.174 hu179-06 0.2188 Ch199 0.5157
hu119-12 0.2034 hu179-07 0.4478 AMG157 0.7219
hu119-13 0.3438 hu179-08 0.1615
結果顯示，本發明中的抗體與人的TSLP有很好的結合活性。
測試例2Biacore測定抗TSLP人源化抗體與不同種屬TSLP的親和力
用Biacore T200(GE)儀器測定待測人源化TSLP抗體和人和猴TSLP的親和力。
用Protein A生物傳感晶片(Cat. # 29127556，GE)親和捕獲待測分子，然後於晶片表面流經抗原（huTSLP-his，cynoTSLP-his，實施例1-1製備所得），用Biacore T200儀器實時檢測反應訊號獲得結合和解離曲線。在每個實驗循環解離完成後，用甘胺酸-鹽酸再生溶液(pH 1.5 Cat. # BR-1003-54，GE)將生物傳感晶片洗淨再生。用BIAevaluation version 4.1，GE軟體以(1:1)Langmuir模型擬合數據，得出親和力數值，如下表33所示。 表33 抗TSLP抗體與不同種屬TSLP的親和力
抗體 huTSLP親和力 KD(M) Cyno TSLP親和力 KD(M)
AMG157 8.12E-12 9.22E-12
hu179-33 9.03E-13 3.04E-11
hu3-13 1.0E-12 3.40E-10
hu119-30 5.0E-12 1.95E-09
hu199-36 10.5E-12 1.72E-11
結果顯示，本發明中的抗TSLP抗體與人TSLP的親和力較高，也可和食蟹猴TSLP結合。
測試例3基於ELISA的抗TSLP抗體阻斷TSLP結合TSLP受體實驗
TSLP受體有兩個亞基，TSLPR和IL-7R，其中TSLPR為TSLP特異性受體，IL-7R為TSLP與IL-7的共用受體。TSLP先與TSLPR結合，再與IL-7R結合。本測試例用來鑑定TSLP抗體是否可以阻斷TSLP結合到重組表現的TSLPR受體蛋白胞外區。
將人-TSLPR-Fc-ECD(2μg/mL，SEQ ID NO: 5)包被ELISA板，4℃孵育過夜，棄去液體後，加入用PBS稀釋的5%脫脂牛奶封閉液200μL/孔，37℃孵育箱孵育2小時進行封閉。封閉結束後，棄去封閉液，並用PBST緩衝液（pH7.4 PBS含0.05%(v/v)吐溫20）洗板3次，將生物素標記的huTSLP-Fc抗原配製成3nM，待測抗體從200nM開始梯度稀釋，抗原和抗體1:1混勻後37℃放置15min，100μL每孔加入酶標板中，37℃放置1h，用PBST洗板3次後，加入100μL/孔用樣品稀釋液以1:4000濃度稀釋的Streptavidin−Peroxidase Polymer，於37℃孵育1小時。用PBST洗板5次後，加入100µL/孔TMB顯色底物(KPL，52-00-03)，於室溫孵育3-10min，加入100µL/孔1MH 2SO 4終止反應，用NOVOStar酶標儀在450nm處讀取吸收值，計算TSLP抗體阻斷TSLP與TSLPR結合的IC50值，結果如表34和圖1所示。 表34 抗體阻斷活性結果
抗體 hu179-33 hu119-30 hu3-13 hu199-36
IC50(nM) 0.5038 0.5192 0.4975 0.5693
結果顯示，本發明抗體均可較強地抑制TSLP與其受體TSLPR的結合。
測試例4 基於FACS的TSLP抗體阻斷TSLP結合TSLP受體實驗
本測試例用來鑑定抗TSLP抗體可以分別阻斷TSLP結合到CHOK1細胞系表面的TSLPR/IL-7R受體。
具體方法是：用含10%FBS，1mg/mL G418，10μg/mL puromicine的DME/F12來培養CHOK1-TSLPR/IL-7R，將狀態良好的CHOK1-TSLPR/IL-7R細胞離心(1000rpm，5min)，用2%FBS的PBS洗一遍，並且計數，將細胞濃度調整濃度至1×10 6/mL，取50μL加入到圓底的96孔板中。用含2% BSA的PBS溶液稀釋待測抗體，初始濃度為20nM，按1:4倍比稀釋8個梯度。生物素標記的TSLP-Fc抗原配製成2nM，抗原和抗體1:1混勻後37℃放置15min，50μL每孔加到已鋪細胞的96孔板中，在4℃孵育1小時。孵育結束後，4℃離心(800g，5min)，棄掉上清，用200μL的預冷PBS離心洗滌，重複兩次後加入1:1000稀釋的PE-SA二抗，4℃避光孵育40min後，4℃離心(800g，5min)，棄掉上清，加入200μL的預冷PBS，吹起細胞，4℃離心洗滌，重複三次，加入100μL PBS，上機讀板，根據螢光訊號值計算TSLP抗體阻斷TSLP與TSLPR/IL-7R結合的IC50值。結果如表35所示。 表35 抗體阻斷細胞表面TSLPR結果
抗體 AMG157 hu179-33 hu119-30 hu3-13 hu199-36
IC50(nM) 0.2068 0.1867 0.1368 0.1325 0.2270
結果顯示，本發明抗體均可較強地阻斷TSLP與細胞表面的TSLPR/IL-7R結合。
測試例5 抗TSLP抗體抑制TSLP誘導的趨化因子的產生 TSLP可以誘導初始髓樣樹突狀細胞(mDC)成熟並分泌趨化因子胸腺活化調節趨化因子(Thymus activation regulated chemokin，TARC)和破骨細胞抑制因子(Osteoprotegerin，OPG)，從而進一步介導先天和適應性免疫炎症反應。本測試例用來驗證所得抗體可以阻斷TSLP誘導mDC產生趨化因子，進而阻斷先天和適應性炎症反應的發生。
採用磁珠分選的方法（CD1c(BDCA-1)+樹突狀細胞分離試劑盒，Miltenyi Biotec）從人外周血單核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中分離純化初始髓樣mDC，將得到的mDC種植於96孔細胞培養板內，梯度稀釋的抗體樣品和人TSLP（huTSLP-his，終濃度50ng/mL），預先孵育45分鐘左右(37℃)，再分別加入到含有mDC的各細胞培養孔內，體外刺激mDC，置於培養箱中培養48小時。收集細胞培養上清，適當稀釋後採用ELISA的方法檢測其中趨化因子的含量。TARC採用R&D公司的人CCL17/TARC Quantikine ELISA Kit檢測；OPG含量採用人CCL22/MDC Quantikine ELISA Kit(R&D)檢測，結果如圖4A-4B所示。
結果顯示，本發明中的抗體均可顯著抑制TSLP誘導的趨化因子TARC和OPG的產生，說明本發明中的抗體可以阻斷先天和適應性炎症反應的發生。
測試例6抗TSLP抗體阻斷天然TSLP誘導的BaF3-TLSPR/IL-7R細胞的增殖
BaF3-hTSLPR/hIL-7R細胞可在天然(native)TSLP的刺激下增殖，抗體與天然TSLP結合後降低TSLP對BaF3-hTSLPR/hIL-7R細胞的刺激作用。
培養NHLF細胞（北納生物BNCC340764）、HLF1細胞（北納生BNCC337730），當細胞生長至80%時，棄掉上清，使用人10ng/mL IL1-β(Sino Biological GMP-10139-HNAE)，20ng/mL IL13(R&D 213-ILB-005)，20ng/mL TNF-α(PEPROTECH 300-01A)刺激人肺成纖維細胞NHLF（北納生物BNCC340764）和HLF1（北納生物，BNCC337730）72小時，誘導其產生天然TSLP。刺激結束後收集細胞上清，離心去掉細胞碎片，4500rpm，離心5分鐘，收集上清後用濃縮柱進行濃縮，大約濃縮10倍，過濾後備用。
BaF3-hTSLPR/hIL-17R細胞培養於10%FBS的RPMI1640(10ng/mL mIL3，R&D 213-ILB-005)中，調整密度為1×10 4個/mL，於37℃，5% CO 2培養箱中培養至對數生長期。收集細胞，800rpm/分鐘，離心5min，棄上清；用PBS洗三遍除去培養基中刺激其增殖的細胞因子。使用4% FBS RPMI1640培養基將細胞重懸，按照4000個細胞/50μL/孔接種於96孔板，培養箱中培養2h。使用天然TSLP稀釋待測抗體，抗體起始濃度為100nM，10倍比進行梯度稀釋，稀釋3個梯度100nM、10nM和1nM。將稀釋好的抗體/抗原混合物50μL/孔加入細胞中，抗體終濃度為50nM、5nM和0.5nM，37℃，5% CO 2培養箱中培養72h。然後每孔加入30μL Cell Titer-Glo(Promega)室溫避光孵育10分鐘，用Cytation5細胞成像儀Luminescence程序檢測。結果見下表36。 表36 抗TSLP抗體抑制BaF3-TLSPR/IL-7R細胞的增殖結果
抗體 AMG157 hu179-33 hu3-13 hu119-30
IC50(nM) 3.379 0.02279 0.2888 1.533
結果顯示，本發明所得抗體均可以顯著抑制天然TSLP刺激BaF3增殖的活性，尤其是hu179-33，其活性是AMG157的100倍以上。
測試例7 抗TSLP抗體抑制TSLP誘導的過表現TSLPR/IL7R的BaF3細胞增殖實驗
TSLP可以與BaF3表面的TSLPR/IL-7R結合，進而促進BaF3的增殖。本測試例用來鑑定本發明抗體可以阻斷TSLP的誘導BaF3增殖的活性。
具體為：過表現TSLPR/IL-7R的BaF3細胞培養於10%FBS以及2ng/mLrhIL3（聯科生物，Catalog No. 96-AF-300-03-20）的RPMI1640，於37℃，5% CO 2培養箱中培養，細胞密度不要超過1×10 6個/mL。檢測抗體時，取對數生長期的細胞用PBS洗三遍800rpm離心5分鐘，用RPMI1640（2% FBS，重組人TSLP-Fc: 40ng/mL）調整細胞密度8000個/孔/90μL，並加入10μL梯度稀釋的待測抗體到96孔培養2天後，加入30μL cell titer混勻後進行檢測，根據讀值計算IC50。結果如表37和圖3所示。 表37 抗體抑制BaF3細胞增殖活性
抗體 AMG157 hu179-33 hu119-30 hu3-13 hu199-36
IC50(nM) 0.5730 0.4092 0.4305 0.4436 0.4769
結果顯示，本發明的抗體均具有較強的抑制TSLP介導的BaF3細胞增殖的能力。
測試例8 人源化抗TSLP抗體阻斷TSLP誘導的天然CD4 +T細胞往Th2細胞的分化
TSLP可以誘導原代髓樣mDC細胞成熟，成熟的mDC細胞高表現OX40配體，OX40配體可以與天然CD4 +T細胞表面的OX40結合，進而使天然CD4 +T分化成Th2細胞，產生IL-4/IL-5/IL-13等免疫應答相關因子，使機體發生Th2炎症反應。本測試例用來檢測本發明所得抗體可以阻斷TSLP誘導的Th2細胞的分化。
採用磁珠分選的方法（CD1c(BDCA-1)+樹突狀細胞分離試劑盒，Miltenyi Biotec）從人外周血單核細胞(PBMC)中分離純化初始髓樣DC，將得到的mDC種植於96孔細胞培養板內，梯度稀釋的抗體樣品和重組表現的人TSLP（huTSLP-his，終濃度50ng/mL）預先孵育(37℃)45分鐘左右，再分別加入到含有mDC的各細胞培養孔內，37℃培養24小時。收集刺激成熟的mDC，用PBS洗兩次。用磁珠分離法(Myltenyi，Biotec)從PBMC中提取CD4 +CD45RA +天然T細胞。將分離得到的天然T細胞和成熟的mDC以5:1的比例混合種植於96孔細胞培養板內，共同培養6天。收集細胞，種植於anti-CD3(10 μg/mL)預包被的96孔板內，並加入anti-CD28(1 μg/mL)，再刺激分化的T細胞，培養24小時，最後收集細胞培養上清。ELISA檢測上清中細胞分泌的Th2相關的細胞因子。IL-4和IL-5細胞因子用的是R&D的ELISA試劑盒檢測，TNF-α和IL-13用欣博盛的ELISA試劑盒檢測。結果如圖5A-5D所示；其中mDC+TSLP+T細胞組和T細胞組沒有加入抗體。
結果顯示，本發明所得抗體可以顯著抑制Th2細胞因子IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α的產生，表明本發明所得抗體可以阻斷TSLP誘導的Th2細胞的分化。
第三部分 製劑
製劑製備與檢測過程中使用的設備及結果計算方法如下：
SEC分子排阻色譜法：
根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析的方法。
SEC單體含量百分比SEC%=A單體/A總*100%（A單體為樣品中主峰單體的峰面積，A總為所有峰面積之和）
SEC測定用儀器：安捷倫1260；柱子：waters，XBrige BEH200Å SEC(300×7.8mm，3.5µm)
CE(NR)毛細管凝膠電泳：
將凝膠移到毛細管中作為支持介質進行的一種電泳，並在一定的電壓下根據樣品分子量的大小進行分離的方法。
非還原CE純度百分比CE-(NR)%=A主峰/A總*100%（A主峰為樣品中主峰的峰面積，A總為所有峰面積之和）
CE測定用儀器：Beckman型號plus800
iCIEF成像毛細管等電聚焦電泳：
根據蛋白質等電點pI不同進行分離的技術。
iCIEF中性峰含量百分比iCIEF%=中性峰面積/總面積*100%（總面積為酸性峰、中性峰和鹼性峰面積之和）。
iCIEF測定所用儀器廠商simple protein，型號muarice。
IEC離子交換色譜：
以離子交換樹脂為固定相，藉由增加流動相中鹽離子濃度，按照帶電蛋白與固定離子基團的親和力由弱到強的順序而依次將蛋白洗脫出來的技術。
IEC中性峰含量百分比=中性峰面積/總面積*100%（總面積為酸性峰、中性峰和鹼性峰面積之和）
IEC測定所用儀器廠商Agilent，型號1260 Bio。
滲透壓測定：
冰點法測定滲透壓，以冰點下降值與溶液的摩爾濃度成正比例關係為基礎，採用高靈敏度感溫元件，測定溶液結冰點，藉由電量轉化為滲透壓。儀器廠商羅澤Loser，型號OM815。
蛋白濃度測定：
蛋白濃度測定儀器：紫外可見分光光度計，型號：Nano Drop oneC。
實施例2-1製劑緩衝體系與pH值的篩選
使用以下不同緩衝液，配製含有100 mg/mL hu179-33抗體，0.1mg/mL聚山梨酯80(PS80)的製劑。採用超濾置換方法將抗體置換至下列各緩衝液中。 1. 20mM琥珀酸-琥珀酸鈉(SA)，pH 5.0； 2. 20mM SA，pH 5.5； 3. 20mM檸檬酸-檸檬酸鈉(CA)，pH 5.0； 4. 20mM CA，pH 5.5； 5. 20mM組胺酸-鹽酸鹽(His-HCl)，pH 5.5； 6. 20mM His-HCl，pH 6.0； 7. 20mM His-HCl，pH 6.5； 8. 20mM組胺酸-醋酸鹽(His-AA)，pH 5.5； 9. 20mM His-AA，pH 6.0； 10. 20mM His-AA，pH 6.5； 11. 20mM磷酸鹽(PB)，pH 7.0； 12. 20mM PB，pH 7.5； 13. 20mM三（羥甲基）胺基甲烷-鹽酸鹽(TRIS)，pH 7.5。
將每種製劑分別過濾、灌裝、加塞、軋蓋，取樣品進行高溫穩定性(40℃)、振搖(25℃，300rpm)和-35℃至2-8℃凍融5次循環(FT5C)的強制降解實驗。從外觀、SEC單體、非還原CE單體(CE(NR))和iCIEF中性峰方面考察抗體在各緩衝體液中的穩定性，結果見下表38。 表38緩衝液和pH篩選的穩定性結果
緩衝液及pH 放置條件 外觀 SEC% △SEC% CE (NR)% △CE (NR)% iCIEF% △ iCIEF%
20mM SA 5.0 0h 澄清透明 98.67 / 94.71 / 58.02 /
FT5C 澄清透明 97.74 0.93 94.73 -0.02 58.2 -0.18
振搖D7 澄清透明 97.77 0.9 94.24 0.47 57.32 0.7
40℃M1 澄清透明 92.39 6.28 85.73 8.98 30.03 27.99
20mM SA 5.5 0h 澄清透明 98.72 / 94.61 / 58.41 /
FT5C 澄清透明 97.74 0.98 94.43 0.18 58.39 0.02
振搖D7 澄清透明 97.77 0.95 94.21 0.4 57.29 1.12
40℃M1 澄清透明 93.17 5.55 86.17 8.44 33.98 24.43
20mM CA 5.0 0h 乳光 98.7 / 94.8 / 57.6 /
FT5C 乳光 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
振搖D7 細小顆粒+++ N/A N/A N/A N/A N/A N/A
40℃M1 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
20mM CA 5.5 0h 乳光 98.68   94.68   58.6  
FT5C 乳光 97.85 0.83 94.55 0.13 57.78 0.82
振搖D7 乳光 97.84 0.84 94.06 0.62 57.71 0.89
40℃M1 細小顆粒++ 93.32 5.36 87.66 7.02 28.6 30
20mM His-HCl 5.5 0h 澄清透明 98.75 / 94.81 / 57.64 /
FT5C 澄清透明 97.82 0.93 94.95 -0.14 58.51 -0.87
振搖D7 澄清透明 97.87 0.88 94.16 0.65 58 -0.36
40℃M1 澄清透明 94.21 4.54 87.38 7.43 37.07 20.57
20mM His-HCl 6.0 0h 澄清透明 98.71 / 94.79 / 57.64 /
FT5C 澄清透明 97.71 1 94.69 0.1 57.86 -0.22
振搖D7 澄清透明 97.81 0.9 94.77 0.02 58.01 -0.37
40℃M1 澄清透明 94.08 4.63 88.86 5.93 39.06 18.58
20mM His-HCl 6.5 0h 澄清透明 98 / 94.81 / 57.47 /
FT5C 澄清透明 97.68 0.32 94.67 0.14 57.51 -0.04
振搖D7 澄清透明 97.9 0.1 94.71 0.1 58.33 -0.86
40℃M1 懸浮顆粒+ 93.63 4.37 88.76 6.05 36.12 21.35
20mM His-AA 5.5 0h 澄清透明 98.67 / 94.71 / 57.8 /
FT5C 澄清透明 97.82 0.85 94.5 0.21 58.28 -0.48
振搖D7 澄清透明 97.84 0.83 94.43 0.28 57.81 -0.01
40℃M1 澄清透明 93.96 4.71 88.68 6.03 34.98 22.82
20mM His-AA 6.0 0h 澄清透明 97.91 / 94.74 / 57.37 /
FT5C 澄清透明 97.91 0 94.56 0.18 57.29 0.08
振搖D7 澄清透明 97.76 0.15 94.66 0.08 57.83 -0.46
40℃M1 澄清透明 94.13 3.78 90.09 4.65 36.61 20.76
20mM His-AA 6.5 0h 澄清透明 98.33 / 94.85 / 57.51 /
FT5C 澄清透明 97.46 0.87 94.61 0.24 57.46 0.05
振搖D7 澄清透明 97.95 0.38 94.76 0.09 57.36 0.15
40℃M1 澄清透明 93.61 4.72 88.92 5.93 36.03 21.48
20mM PB7.0 0h 乳光 98.5 / 94.6 / 58.4 /
FT5C 乳光 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
振搖D7 渾濁 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
40℃M1 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
20mM PB7.5 0h 乳光 98.49 / 94.55 / 58.3 /
FT5C 乳光 97.23 1.26 94.49 0.06 57.29 1.01
振搖D7 乳光 97.07 1.42 94.06 0.49 56.27 2.03
40℃M1 乳光 89.62 8.87 80.01 14.54 18.29 40.01
20mM TRIS 7.5 0h 乳光 98.1 / 94.6 / 58.7 /
FT5C 乳光 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
振搖D7 絮狀顆粒+++ N/A N/A N/A N/A N/A N/A
40℃M1 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
備註：表中「D」表示天，例如D3表示3天，「M」表示月，例如M1表示1個月；「0h」表示實驗開始時；「△」表示變化量，「FT5C」表示凍融5次，「N/A」表示未檢測；下同。
結果分析如下：
外觀顯示，抗體在CA pH 5.0、CA pH 5.5緩衝體系、PB pH 7.0、PB pH 7.5緩衝體系和TRIS pH7.5緩衝體系中，在實驗開始時和反復凍融之後，外觀顯示有乳光。振搖7天後，外觀並未改善或出現顆粒或渾濁，說明抗體在上述緩衝液中穩定性不佳。而抗體在SA(pH5.0、pH 5.5)、His-HCl（pH5.5、pH 6.0和pH 6.5）和His-AA（pH5.5、pH 6.0和pH 6.5）緩衝體系中，在反復凍融、振搖及40℃放置1個月的強制降解條件下，製劑的外觀依然澄清透明；僅His-HCl pH6.5緩衝體系在40℃放置1個月後出現懸浮顆粒，說明抗體在SA、His-HCl，pH5.0-6.0和His-AA，pH5.0-6.5的緩衝體系中比較穩定。
SEC和非還原CE數據顯示：在反復凍融和振搖7天條件下，所有處方的SEC單體、CE(NR)單體和iCIEF均無明顯變化；但在40℃M1條件下，SA pH5.0緩衝體系中，SEC單體下降約6.28%，CE(NR)單體下降8.98%；SA pH5.5緩衝體系中，SEC單體下降約5.55%，CE(NR)單體下降8.44%；而His-HCl和His-AA緩衝體中，SEC單體下降約3.78-4.72%、CE(NR)單體下降約4.65-7.43%，下降幅度小於SA pH5.0、SA pH5.5緩衝體系。說明抗體在His-HCl和His-AA體系中穩定性優於在SA緩衝體系的穩定性。
綜上，抗TSLP抗體的緩衝體系優選為His-AA和His-HCl體系，SA體系次之；pH為5.0-6.5，優選為pH 5.5-6.5。
實施例2-2 糖種類篩選
製備分別含有蔗糖、海藻糖、山梨糖醇和甘露醇的20mM His-AA pH6.0緩衝液、0.4 mg/mL PS80和100 mg/mL的hu179-33抗體製劑。將每種製劑分別過濾、灌裝、加塞、軋蓋。將樣品進行高溫穩定性研究(40℃)、振搖(25℃，300rpm)和凍融5次循環(-35℃-2~8℃)強制降解實驗，考察不同的糖對製劑穩定性的影響，結果見下表39。 表39 糖種類篩選結果
糖種類 放置條件 SEC% △SEC% CE (NR)% △CE (NR)% iCIEF% △ iCIEF%
70mg/mL蔗糖 D0 98.3 / 94.1 / 57.2 /
FT5C 98.3 0 94 0.1 58.2 -1
振搖D7 98.1 0.2 93.9 0.2 60.1 -2.9
40℃D17 95.6 2.7 92.4 1.7 46.6 10.6
70mg/mL海藻糖 D0 98.3 / 94.2 / 59.3 /
FT5C 98.4 -0.1 94.2 0 59.1 0.2
振搖D7 98.1 0.2 93.7 0.5 59.8 -0.5
40℃D17 95.6 2.7 92.3 1.9 46.2 12.9
50mg/mL山梨糖醇 D0 98.3 / 94.1 / 58.9 /
FT5C 98.4 -0.1 94.1 0 58.6 0.3
振搖D7 98.1 0.2 93.7 0.4 60.1 -1.2
40℃D17 95.8 2.5 92.4 1.7 47.3 11.6
50mg/mL甘露醇 D0 98.3 / 94.1 / 59.2 /
FT5C 98.3 0 94 0.1 58.9 0.3
振搖D7 98.1 0.2 93.6 0.5 59.9 -0.7
40℃D17 95.8 2.5 92.1 2 47 12.2
註：表格中海藻糖的含量是以α,α-二水合海藻糖的含量計量的。
結果顯示，糖種類及濃度對各處方的穩定性的影響無明顯差異，即蔗糖、海藻糖、山梨糖醇和甘露醇均可作為TSLP抗體製劑的穩定劑。
實施例2-3表面活性劑種類及濃度篩選
製備包含20mM組胺酸-醋酸鹽緩衝液pH6.0、70 mg/mL蔗糖、100 mg/mL的hu179-33抗體和不同聚山梨酯的製劑。具體處方如下表40所示： 表40 聚山梨酯種類及濃度
聚山梨酯 緩衝液 抗體濃度
PS80 0.2 mg/mL 20mM His-AA pH6.0+70mg/mL蔗糖 100 mg/mL
PS80 0.4 mg/mL
PS80 0.6 mg/mL
PS20 0.2 mg/mL
PS20 0.6 mg/mL
將每種製劑分別過濾、灌裝、加塞、軋蓋。取樣品進行高溫穩定性(40℃)、振搖(25℃，300 rpm)和凍融5次循環(-35℃-2~8℃)強制降解實驗，PS80和PS20對製劑的穩定性的影響，結果見下表41。 表41 聚山梨酯種類篩選結果
PS種類和濃度 放置條件 SEC% △SEC% CE (NR)% △CE (NR)% iCIEF% △iCIEF%
0.2mg/mL PS80 D0 98.3 / 94.2 / 58.8 /
FT5C 98.4 -0.1 93.8 0.4 59 -0.2
振搖D7 98.2 0.1 93.6 0.6 60.5 -1.7
40℃D17 95.9 2.4 92.4 1.8 46.1 12.7
0.4mg/mL PS80 D0 98.3 / 94.1 / 58.2 /
FT5C 98.4 -0.1 93.7 0.4 59.6 -1.4
振搖D7 98.2 0.1 93.6 0.5 59.7 -1.5
40℃D17 95.7 2.6 92.1 2 46.6 11.6
0.6mg/mL PS80 D0 98.3 / 94 / 58.9 /
FT5C 98.4 -0.1 93.7 0.3 59.3 -0.4
振搖D7 98.2 0.1 94 0 60.2 -1.3
40℃D17 95.4 2.9 92.2 1.8 45.5 13.4
0.2mg/mL PS20 D0 98.4 / 94 / 58.6 /
FT5C 98.4 0 93.6 0.4 59.4 -0.8
振搖D7 98.2 0.2 94.2 -0.2 59.7 -1.1
40℃D17 96.2 2.2 92.5 1.5 47.9 10.7
0.6mg/mL PS20 D0 98.3 / 93.8 / 58.6 /
FT5C 98.4 -0.1 93.7 0.1 58.4 0.2
振搖D7 98.3 0 93.4 0.4 60.6 -2
40℃D17 96.1 2.2 92.4 1.4 47.6 11
實驗結果顯示，不同種類的聚山梨酯均可用於本發明中的抗體製劑；不同濃度的聚山梨酯20或80對TSLP抗體製劑的穩定性影響無差異。
實施例2-4 製劑的穩定性研究
製備包含20mM His-AA pH6.0，100mg/mL hu179-33抗體，70mg/mL蔗糖，和0.8mg/mL PS80的製劑。無菌過濾、罐裝。將樣品進行高溫穩定性研究(40℃)、振搖(25℃，300rpm)和凍融5次循環(-35℃-2~8℃)研究的強制降解實驗，從SEC、非還原CE和iCIEF方面考察製劑的穩定性，結果見下表42。 表42製劑穩定性結果
放置條件 SEC% CE(NR)% iCIEF%
0h 98.2 94.8 59.9
FT5C 97.8 94.7 59.3
振搖D10 97.4 94.7 60.8
40℃M1 93.6 88.7 39.3
結果顯示，在凍融和振搖條件下，各檢測項結果無明顯變化；40℃放置1個月後，SEC、CE及iCIEF的變化均在正常的穩定性變動範圍內，因此包含0.8mg/mL PS80的抗體製劑的非常穩定。
為了考察製劑的長期穩定性，將包含20mM His-AA pH6.0，100mg/mLhu179-33抗體，70mg/mL蔗糖，和0.8mg/mLPS80的製劑放置4°C，3個月後，檢測製劑的穩定性，結果見下表43。 表43 4℃穩定性實驗結果
時間 外觀 SEC單體% IEC中性峰% CE(NR)%
0h 澄明 98.7 59.8 96.4
4℃ M3 澄明 97.8 58.8 97.0
結果顯示：上述製劑在4℃放置3個月後，各檢測指標幾乎無變化，說明製劑的穩定良好。
實施例2-5 穩定劑的篩選
製備包含20mM組胺酸-醋酸鹽緩衝液，pH6.0、0.8mg/mL PS80、100 mg/mL的hu179-33抗體和不同穩定劑的製劑，具體處方如下： 1. 30mg/mL蔗糖和30mM組胺酸(His)； 2. 30mg/mL蔗糖和30mM色胺酸(Trp)； 3. 30mg/mL蔗糖和30mM甲硫胺酸(Met)； 4. 70mg/mL蔗糖和10mM EDTA； 5. 70mg/mL蔗糖、20mM甲硫胺酸和10mM EDTA。
將每種製劑分別過濾、灌裝、加塞、軋蓋。取樣品進行高溫穩定性（40℃）研究，考察不同穩定劑對抗體製劑的穩定性的影響，具體結果見下表44。 表44不同穩定劑的實驗結果
穩定劑 放置條件 外觀 SEC% CE(NR)% iCIEF%
30mg/mL蔗糖+30mM His D0 澄明 98.3 94.87 60.74
40℃M1 澄明 92.9 90.1 38.2
30mg/mL蔗糖+30mM Trp D0 澄明 98.3 94.68 62.82
40℃M1 澄明 94.1 89.9 42.4
30mg/mL蔗糖+30mM Met D0 澄明 98.2 96.14 61.41
40℃M1 澄明 94.5 90.7 41.8
70mg/mL蔗糖+10mM EDTA D0 澄明 98.3 94.63 61.16
40℃M1 略有乳光 94.7 92 43.4
70mg/mL蔗糖+10mM EDTA+20mM Met D0 澄明 98.2 97.2 61.68
40℃M1 略有乳光 95.6 93.6 45.5
實驗結果顯示，組胺酸、色胺酸、甲硫胺酸和EDTA以及兩者混合也可以抑制抗體聚集和降解，但對抗體的穩定性影響不是很大。因此，本發明中的製劑也可以選擇性的添加上述成分。
實施例2-6 EDTA濃度篩選
製備包含20mM組胺酸-醋酸鹽緩衝液pH6.0、70mg/mL蔗糖、0.8mg/mL PS80、100mg/mL的hu179-33抗體和不同濃度EDTA的製劑，具體處方設計見下表45。 表45 EDTA濃度篩選處方表
EDTA濃度 其他成分 抗體濃度
0.37 mM 20mM組胺酸-醋酸鹽緩衝液pH6.0、70mg/mL蔗糖、0.8mg/mL PS80 100 mg/mL
1mM
2 mM
5 mM
10 mM
將每種製劑分別過濾、灌裝、加塞、軋蓋。取樣品進行高溫穩定性(40℃)研究，考察製劑的外觀、SEC、非還原CE和iCIEF，實驗結果見下表46。 表46 EDTA濃度篩選結果
EDTA 放置條件 外觀 SEC% CE(NR)% iCIEF
0 mM D0 澄明 98.4 97.2 62.4
40℃M1 澄明 93.4 91.9 42.1
0.37mM D0 澄明 98.1 97.2 61.5
40℃M1 澄明 94.5 92.2 44.4
1mM D0 澄明 98.1 97.2 62.2
40℃M1 澄明 94.7 92.1 43.2
2mM D0 澄明 98.2 97.1 61.2
40℃M1 澄明 94.7 92.5 43.9
5mM D0 澄明 98.1 97.2 61.1
40℃M1 澄明 94.9 92.9 43.5
10mM D0 略有乳光 98.1 97.2 61.4
40℃M1 略有乳光 95.1 93.1 43.8
實驗結果顯示，0.37mM-10mM EDTA也可抑制抗體聚集和降解，但對製劑的穩定性影響不大。因此，本發明中的製劑也可以選擇性的添加EDTA成分。
實施例2-7 高濃度製劑製備
製備包含20mM His-AA pH6.0、150mg/mL hu179-33抗體、70mg/mL蔗糖和0.4mg/mL PS80的製劑，無菌過濾、罐裝。將樣品進行高溫穩定性研究(40℃)、振搖(25℃，300rpm)和凍融5次循環(-35℃-2~8℃)強制降解試驗，考察製劑穩定性，實驗結果見下表47。 表47 高濃度製劑穩定性
濃度 放置條件 SEC% CE(NR)% iCIEF%
150mg/mL D0 98.2 95.1 60.0
FT5C 98.1 93.7 58.5
振搖D7 97.9 94.1 60.4
40℃M1 93.0 89.6 38.7
實驗結果顯示，包含抗體濃度為150mg/mL製劑的穩定性仍然良好。
雖然以上描述了本發明的具體實施方式，但是本發明所屬技術領域中具有通常知識者應當理解，這些僅是舉例說明，在不背離本發明的原理和實質的前提下，可以對這些實施方式做出多種變更或修改。因此，本發明的保護範圍由所附申請專利範圍限定。
圖1：抗體阻斷TSLP與TSLP受體結合活性的結果。 圖2：抗體阻斷TSLP與細胞表面TSLP受體結合活性的結果。 圖3：抗體抑制TSLP誘導的BaF3細胞的增殖活性。 圖4A：抗體抑制TSLP誘導的趨化因子TARC產生的活性。 圖4B：抗體抑制TSLP誘導的趨化因子OPG產生的活性。 圖5A：抗體抑制Th2細胞因子IL-13產生的活性。 圖5B：抗體抑制Th2細胞因子IL-4產生的活性。 圖5C：抗體抑制Th2細胞因子TNF-α產生的活性。 圖5D：抗體抑制Th2細胞因子IL-5產生的活性。

Claims (25)

  1. 一種藥物組合物，包括： (a)抗TSLP抗體，所述抗TSLP抗體的濃度為1 mg/mL-150 mg/mL；其中所述抗TSLP抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中： 所述重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 94和SEQ ID NO: 28所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和 所述輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 113和SEQ ID NO: 31所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3； (b)表面活性劑，所述表面活性劑為聚山梨酯80或聚山梨酯20，所述表面活性劑的濃度為0.01 mg/mL-1.0 mg/mL； (c)緩衝劑，所述緩衝劑為組胺酸-醋酸鹽緩衝劑、組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑或琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝劑，所述緩衝劑的濃度為5 mM-50 mM；以及 (d)穩定劑，所述穩定劑選自糖、胺基酸和EDTA中的一種或多種； 其中所述藥物組合物的pH為5.0-6.5。
  2. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體包含如下所示的重鏈可變區和輕鏈可變區： 如SEQ ID NO: 97所示的重鏈可變區和如SEQ ID NO: 119所示的輕鏈可變區。
  3. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述的抗TSLP抗體包含： 如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈。
  4. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述緩衝劑的濃度為10mM-30mM。
  5. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述抗TSLP抗體的濃度為100 mg/mL-150mg/mL。
  6. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨酯80。
  7. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述表面活性劑的濃度為0.1mg/mL-0.8mg/mL。
  8. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述穩定劑選自糖、胺基酸和EDTA中的一種或更多種； 其中所述糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種；和/或， 其中所述胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸中的一種或多種。
  9. 如請求項8所述之藥物組合物，其中所述穩定劑為蔗糖。
  10. 如請求項8所述之藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為30mg/mL-100mg/mL。
  11. 如請求項10所述之藥物組合物，其中所述穩定劑為糖，其濃度為50mg/mL-70mg/mL。
  12. 如請求項10所述之藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為5mM-50mM。
  13. 如請求項12所述之藥物組合物，其中所述穩定劑還包含胺基酸，其濃度為10mM-30mM。
  14. 如請求項10所述之藥物組合物，其中所述穩定劑還包括EDTA，其濃度為0.1mM-10mM。
  15. 如請求項14所述之藥物組合物，其中所述穩定劑還包括EDTA，其濃度為0.37mM-10mM。
  16. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述的穩定劑為： i) 30 mg/mL-70 mg/mL的糖和10 mM-30 mM的胺基酸； ii) 30 mg/mL-70 mg/mL的糖和0.37 mM-10 mM的EDTA；或 iii) 30 mg/mL-70 mg/mL的糖、10 mM-30 mM的胺基酸和0.37 mM-10 mM的EDTA； 其中所述糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種；和/或 其中所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸中的一種或多種。
  17. 如請求項16所述之藥物組合物，所述穩定劑為： i) 30 mg/mL的蔗糖和30 mM的組胺酸、色胺酸或甲硫胺酸； ii) 70 mg/mL的蔗糖和0.37 mM-10 mM的EDTA；或 iii) 70 mg/mL的蔗糖、20 mM甲硫胺酸和0.37 mM-10 mM 的EDTA。
  18. 如請求項1所述之藥物組合物，其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
  19. 如請求項1所述之藥物組合物，其包含如下組分： (a)100 mg/mL-150 mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1 mg/mL-0.8 mg/mL的聚山梨酯80或聚山梨酯20；(c)10 mM-30 mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)50 mg/mL-70 mg/mL的糖；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5；或 其中所述藥物組合物包含如下組分： (a)100 mg/mL-150 mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1 mg/mL-0.8 mg/mL的聚山梨酯80或聚山梨酯20；(c)10 mM-30 mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)30 mg/mL-70 mg/mL的糖和10 mM-30 mM的胺基酸；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5；或 其中所述的藥物組合物包含如下組分： (a)100 mg/mL-150 mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1 mg/mL-0.8 mg/mL的聚山梨酯80或聚山梨酯20；(c)10 mM-30 mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)30 mg/mL-70 mg/mL的糖和0.37 mM-10 mM的EDTA；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5；或 其中所述的藥物組合物包含如下組分： (a)100 mg/mL-150 mg/mL的所述抗TSLP抗體；(b)0.1 mg/mL-0.8 mg/mL的聚山梨酯80或聚山梨酯20；(c)10 mM-30 mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑；和(d)30 mg/mL-70 mg/mL的糖、10 mM-30 mM的胺基酸和0.37 mM-10 mM的EDTA；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5； 其中，所述的糖選自海藻糖、蔗糖、山梨糖醇和甘露醇中的一種或多種；所述的胺基酸選自組胺酸、色胺酸和甲硫胺酸中的一種或多種。
  20. 如請求項19所述之藥物組合物，其中所述藥物組合物包含如下組分： (a)約100 mg/mL的抗TSLP抗體；(b)約0.8 mg/mL的聚山梨酯80；(c)20 mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和(d)70 mg/mL的蔗糖，其中所述藥物組合物的pH為6.0-6.3。
  21. 一種藥物組合物，其包含： (a)100mg/mL-150mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)0.1mg/mL-0.8mg/mL的聚山梨酯20或80；(c)10mM-30mM的組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和(d)50mg/mL-70mg/mL的海藻糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露醇；其中所述藥物組合物的pH為5.5-6.5。
  22. 如請求項21所述之藥物組合物，所述藥物組合物包含如下組分： (a)約100mg/mL的抗TSLP抗體，其中所述的抗TSLP抗體包含如SEQ ID NO: 139所示的重鏈和如SEQ ID NO: 140所示的輕鏈；(b)約0.8 mg/mL的聚山梨酯80；(c)約20mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑；和(d)約70 mg/mL的蔗糖；其中所述藥物組合物的pH為約6.0-6.3。
  23. 一種含抗TSLP抗體的凍乾製劑，所述凍乾製劑藉由將如請求項1至22中任一項所述之藥物組合物經冷凍乾燥獲得。
  24. 一種製品，其包括容器，所述容器中裝有如請求項1至22中任一項所述之藥物組合物或如請求項23所述之凍乾製劑。
  25. 一種如請求項1至22中任一項所述之藥物組合物，或如請求項23所述之凍乾製劑在製備用於治療與TSLP有關的疾病或病症的藥物中的用途，其中所述疾病或病症選自過敏性疾病、癌症和免疫性疾病； 所述過敏性疾病選自：哮喘、特發性肺纖維化、異位性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、蕁麻疹、Netherton氏症候群、嗜酸性白血球性食管炎、食物過敏、過敏性腹瀉、嗜酸性白血球性胃腸炎、過敏性支氣管與肺的麴菌病、過敏性真菌鼻竇炎和慢性瘙癢； 所述癌症選自：乳腺癌、結腸癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌； 所述免疫性疾病選自：類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病、全身性硬化、多發性硬化症、瘢痕瘤、潰瘍性結腸炎、鼻息肉病、慢性嗜酸性白血球性肺炎、嗜酸性白血球性支氣管炎、腹腔病、查格-施特勞斯症候群、嗜酸性白血球性肌痛症候群、高嗜酸白血球症候群、嗜酸性白血球性肉芽腫病伴隨多血管炎、炎性腸病、硬皮病、間質性肺病、B型或C型慢性肝炎引發的纖維化、輻射誘發的纖維化和傷口癒合引發的纖維化。
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