TWI879859B

TWI879859B - 急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑

Info

Publication number: TWI879859B
Application number: TW109146198A
Authority: TW
Inventors: 山下俊英; 糸数秀; 片岡裕敏; 平田武史; 岩本祥佑; 佐佐木淳
Original assignee: 國立大學法人大阪大學; 日商田邊三菱製藥股份有限公司
Priority date: 2019-12-26
Filing date: 2020-12-25
Publication date: 2025-04-11
Also published as: EP4082574A4; EP4082574A1; WO2021132673A1; CN119454934A; US20240287167A1; CN119454936A; JPWO2021132673A1; JP2025168424A; CN114901313A; TW202136312A; CN114901313B; CN119454935A; AR120898A1

Abstract

本發明提供一種包含RGMa抑制物質的急性期之視神經脊髓炎及視神經脊髓炎的疼痛症狀之預防或治療劑。

Description

急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑

本發明係有關於一種包含RGMa抑制物質的急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑及該視神經脊髓炎的疼痛症狀之預防或治療劑。

視神經脊髓炎(neuromyelitis optica：NMO)亦稱Devic病，係以重度視神經炎與超過3個椎體節段之橫貫性脊髓炎為特徵的發炎性中樞神經疾病。於2004年有人發現對視神經脊髓炎呈專一性的IgG(NMO-IgG)(非專利文獻1)，而且有人報導高密度地表現於星狀細胞之足部突起的水通道蛋白之aquaporin-4：AQP4為其標的抗原，亦即NMO-IgG為抗AQP4抗體(非專利文獻2)。

因此，有別於脫髓鞘疾病之多發性硬化症，視神經脊髓炎係抗AQP4抗體破壞星狀細胞而導致的星狀細胞病變。就視神經脊髓炎的病徵，咸認係細胞性免疫的活化所引起的中樞發炎或血液脊髓障壁(blood spinal cord barrier(BSCB)，在大腦係因血腦障壁(blood brain barrier (BBB)))的穿透性亢進，使抗AQP4抗體流入大腦/脊髓內並產生補體活化，而廣泛發生AQP4的缺漏、星狀細胞的破壞或脫落。咸認因星狀細胞的細胞損傷(補體依賴性、抗體依賴性細胞損傷)及星狀細胞脫落所致之血腦障壁的破壞或麩胺酸代謝異常等功能異常，而二次性地發生發炎性細胞浸潤或脫髓鞘/軸突異常、巨噬細胞或小神經膠質細胞所致之吞噬及組織軟化，其結果便引起神經組織的壞死(非專利文獻3、4)。

作為典型視神經脊髓炎的診斷基準，傳統上係採用Wingerchuk等人於2006年所發表的基準(非專利文獻5)；於2007年，作為視神經脊髓炎相關疾病(NMOSD)，除典型的視神經脊髓炎外，僅有視神經炎(復發性或兩眼性)或超過3個椎體節段的長脊髓炎之症例亦被視為相同範疇的疾病(非專利文獻6)。從而，近年來，視神經脊髓炎被認為是比一般認為單純之視神經脊髓炎更廣的疾病概念。如此，僅由脊髓病變的長度等臨床及影像觀察結果，並不易診斷為視神經脊髓炎，抗AQP4抗體對視神經脊髓炎的診斷及治療方針的決定係極為重要的檢查。

急性期之視神經脊髓炎的症狀，與多發性硬化症相比多為重症，僅1次復發，若為視神經炎便會失明，若為脊髓炎則生活離不開輪椅，從而迅速開始治療係至關重要。此外，視神經脊髓炎發病時，無論為急性期或慢性期皆會伴隨劇烈的疼痛，故一併進行緩和該疼痛之治療亦極為重要。

急性期之視神經脊髓炎治療的第一選擇為膽固醇脈衝療法(非專利文獻7)，於臨床現場可廣泛看出其有效性。而就多發性硬化症，已證明此療法可促進由急性期之臨床症狀惡化恢復之效果。因此，對於視神經脊髓炎，研判亦可獲得同樣的效果(非專利文獻8～10)。膽固醇脈衝療法係與針對多發性硬化症之治療法相同，其標準為以1,000mg/日連續3日用點滴投予甲基培尼皮質醇，若症狀改善不充分時，則進一步追加1～2個治療期(kur)。當膽固醇脈衝療法缺乏治療效果時，作為第二選擇之治療則積極地考慮血漿交換療法(非專利文獻11、12)，在重症例中期望早期進行血漿交換療法。諸如上述，就急性期之治療，目前對於在多發性硬化症或視神經脊髓炎顯示有用性的治療法，僅有累積基於其可能性之症例報告。又，現況在於與急性期之視神經脊髓炎有關的有效治療藥仍未上市。

RGM(repulsive guidance molecule)起初係經鑑定為視覺系軸突誘導分子的膜蛋白質(非專利文獻13)。RGM家族係包含所稱RGMa、RGMb及RGMc的3種成員(非專利文獻14)，已知至少RGMa與RGMb係以相同的訊息傳遞機構發揮作用(非專利文獻15)。RGMc則於鐵代謝中發揮重要的作用。根據其後的研究，闡明RGM具有誘導爪蟾及雞的胚胎之軸突及形成板層，以及控制小鼠胚胎之頭部神經管的閉合等機能(非專利文獻16)。專利文獻1中揭示一種軸突再生促進劑，其含有抗RGM中和抗體作為有效成分。

除產生階段之機能外，由於在成人人類及大鼠的中樞神經系統損傷後可恢復表現，且對於大鼠，抑制RGMa可亢進脊髓損傷後的軸突生長而促進機能恢復(非專利文獻17)，因此RGMa被認為是中樞神經系統損傷後的軸突再生抑制物質。作為中和RGMa的具體抗體，係記載於例如專利文獻2(例如5F9、8D1)、專利文獻3(例如AE12-1、AE12-1Y)及專利文獻4(例如r116A3、r70E4、r116A3C、rH116A3)。又，已知抗RGMa中和抗體對抑制視神經脊髓炎的發病有其效果(非專利文獻18)。如此，對於中樞神經系統損傷，已闡明RGMa之作用，且獲知對抑制視神經脊髓炎的發病之效果；尤其是尚未有人鑑定出RGMa參與急性期之視神經脊髓炎的治療，且尚未得知此種治療藥。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開　WO2005/087268號 [專利文獻2]國際公開　WO2009/106356號 [專利文獻3]國際公開　WO2013/112922號 [專利文獻4]國際公開　WO2016/175236號 [非專利文獻]

[非專利文獻1]Lancet 364 : 2106-2112, 2004 [非專利文獻2]J Exp Med 202 : 473-477, 2005 [非專利文獻3]J. Clin.Immunol. 3582, 129-135(2012) [非專利文獻4]Journal of the Neurological Sciences 306 (2011) 183-187 [非專利文獻5]Neurology 66 : 1485-1489, 2006 [非專利文獻6]Lancet Neurol 6 : 805-815, 2007 [非專利文獻7]Curr Treat Options Neurol 12 : 244-255, 2010 [非專利文獻8]Neurology 53 : 1107-1114, 1999 [非專利文獻9]Magn Reson Med Sci 7 : 55-58, 2008 [非專利文獻10]Tohoku J Exp Med 215 : 55-59, 2008 [非專利文獻11]Neurology 63 : 1081-1083, 2004 [非專利文獻12]Mult Sclr 13 : 128-132, 2007 [非專利文獻13]Neuron 5, 735-743 (1990) [非專利文獻14]Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci., 361: 1513‐29, 2006 [非專利文獻15]Biochem. Biophys. Res. Commun. 382, 795-800 (2009) [非專利文獻16]Curr. Opin. Neurobiol.17, 29-34 (2007) [非專利文獻17]J. Cell Biol. 173, 47-58 (2006) [非專利文獻18]Scientific Reports 8:34 1-9 (2018)

[發明所欲解決之課題]

就抗RGMa中和抗體對視神經脊髓炎的發病抑制效果，係記載於非專利文獻18。於該文獻中，係藉由對健康動物的脊髓直接投予取自抗AQP4抗體陽性NMO患者的IgG，並同時投予抗RGMa中和抗體，而顯示抑制視神經脊髓炎的發病之效果。然而，其中不僅未記載抗RGMa中和抗體對反映人類的病徵之急性期之視神經脊髓炎模型的效果，且僅由該文獻之記載，仍不清楚抗RGMa中和抗體對於急性期之視神經脊髓炎是否具有預防或治療效果。此外，在視神經脊髓炎的發病時，由於會伴隨劇烈的痛楚，從而迫切期望開發出可一併進行該疾病所伴隨之疼痛症狀的緩和或治療之對視神經脊髓炎的預防或治療藥。本發明係以提供一種對急性期之視神經脊髓炎及視神經脊髓炎的症狀屬有效的藥劑為課題。 [解決課題之手段]

本案發明人等為解決上述課題而致力進行研究的結果發現，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體對於急性期之視神經脊髓炎具有對臨床急性惡化之恢復作用、早期修復脊髓炎所致之血液脊髓障壁的破壞之作用及抑制急性期之視神經脊髓炎的病徵中可見之粒細胞的浸潤之作用，由此發現對急性期之視神經脊髓炎的預防或治療具有優良的效果。又，結果發現RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體可治療、減輕或緩和視神經脊髓炎的疼痛症狀，而終至完成本發明。亦即，本發明係如下述。

1.一種急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑，其係包含RGMa抑制物質。 2.如項1之預防或治療劑，其中RGMa抑制物質為抗RGMa中和抗體。 3.如項2之預防或治療劑，其中抗RGMa中和抗體為擬人化抗體。 4.如項2或3之預防或治療劑，其中抗RGMa中和抗體為可辨識選自序列編號16、序列編號36、序列編號37、序列編號38及序列編號39的胺基酸序列之抗體。 5.如項2～4中任一項之預防或治療劑，其中抗RGMa中和抗體係選自下述(a)～(l)： (a)包含：含有包含序列編號5所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號6所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號7所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號8所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號9所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號10所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (b)包含：含有包含序列編號11所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號12所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號13所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號14所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號15所記載之胺基酸序列的HCDR2及胺基酸序列中包含SFG的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (c)包含：含有包含序列編號17所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號18所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號19所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號20所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號21所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號22所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (d)包含：含有包含序列編號23所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號24所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號25所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號26所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號27所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號28所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (e)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號31所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (f)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號35所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (g)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號40所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (h)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號41所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (i)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號42所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (j)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號43所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (k)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號44所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體，及 (l)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號45所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體的抗體。

6.一種視神經脊髓炎的疼痛症狀之預防或治療劑，其係包含RGMa抑制物質。 7.如項6之預防或治療劑，其中RGMa抑制物質為抗RGMa中和抗體。 8.如項7之預防或治療劑，其中抗RGMa中和抗體為擬人化抗體。 9.如項7或8之預防或治療劑，其中抗RGMa中和抗體為可辨識選自序列編號16、序列編號36、序列編號37、序列編號38及序列編號39的胺基酸序列之抗體。 10.如項7～9中任一項之預防或治療劑，其中抗RGMa中和抗體係選自下述(a)～(l)： (a)包含：含有包含序列編號5所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號6所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號7所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號8所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號9所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號10所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (b)包含：含有包含序列編號11所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號12所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號13所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號14所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號15所記載之胺基酸序列的HCDR2及胺基酸序列中包含SFG的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (c)包含：含有包含序列編號17所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號18所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號19所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號20所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號21所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號22所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (d)包含：含有包含序列編號23所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號24所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號25所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號26所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號27所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號28所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (e)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號31所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (f)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號35所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (g)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號40所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (h)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號41所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (i)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號42所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (j)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號43所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (k)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號44所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體，及 (l)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號45所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體的抗體。 11.一種急性期之視神經脊髓炎或視神經脊髓炎的疼痛症狀之預防或治療方法，其包含對需要治療之哺乳動物投予有效量的RGMa抑制物質。 12.如項11之預防或治療方法，其中RGMa抑制物質為抗RGMa中和抗體。 13.一種RGMa抑制物質之用於製造急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑的用途。 [發明之效果]

根據本發明，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體顯示例如早期修復急性期之視神經脊髓炎中可見之血液脊髓障壁(於大腦中為血腦障壁)的破壞之作用等，而有用於作為急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑。又，根據本發明，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體顯示例如可抑制急性期之視神經脊髓炎中可見之粒細胞向脊髓的浸潤之作用，而有用於作為急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑。再者，根據本發明，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體可治療、減輕或緩和視神經脊髓炎中可見之疼痛症狀，而有用於作為此種疼痛症狀之預防或治療劑。

[實施發明之形態]

以下說明本發明所使用之用語。 [中和] 本案中所稱中和，係指可結合於目標標的，且可抑制該標的之任一種機能的作用。例如RGMa抑制物質係指結合於RGMa後，顯示抑制RGMa的生物活性之作用的物質。

[抗原決定位] 本案中所稱抗原決定位，係包含可專一性地結合於免疫球蛋白或T細胞受體的多肽決定基。於一實施形態中，抗原決定位包含分子的化學活性表面基(例如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基)；於一實施形態中可具有特定的三維構造特性及/或特定的電荷特性。抗原決定位係藉由抗體而結合的抗原區域。

[經單離之(isolated)] 本案中所稱經單離之RGMa抑制物質(例如抗體等)等的「經單離之」，係經鑑定且經分離，及/或由自然狀態下的成分回收之意。自然狀態下的雜質係可能妨礙該抗體之診斷或治療用途的物質，可舉出酵素、激素及其他蛋白質性或非蛋白質性的溶質。一般而言，要單離出RGMa抑制物質等，只要藉由至少1個純化步驟進行純化即可；藉由至少1個純化步驟而經純化之RGMa抑制物質可稱作「經單離之RGMa抑制物質」。

[抗體] 本案中所稱抗體，廣義上係指保持免疫球蛋白(Ig)分子之實質上結合於抗原決定位之特徵的2條重鏈(H鏈)與2條輕鏈(L鏈)此4條多肽鏈所構成的Ig分子。

[人類抗體] 本案中所稱人類抗體，係指與輕鏈、重鏈共同源自人類免疫球蛋白的抗體。就人類抗體，根據重鏈之恆定區的差異，係包含具有γ鏈之重鏈的IgG(包含IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)、具有μ鏈之重鏈的IgM、具有α鏈之重鏈的IgA(包含IgA1、IgA2)、具有δ鏈之重鏈的IgD或具有ε鏈之重鏈的IgE。又，原則上輕鏈係包含κ鏈與λ鏈任一者。

[擬人化抗體] 本案中所稱擬人化抗體，係指由源自非人類動物之抗體的互補性決定區與源自人類抗體之架構區所成之可變區，及源自人類抗體之恆定區所構成的抗體。

[嵌合抗體] 本案中所稱嵌合抗體，係指輕鏈、重鏈或其兩者由源自非人類之可變區與源自人類之恆定區所構成的抗體。

[單特異性抗體] 本案中所稱單特異性抗體，係指具有單一抗原特異性之同時具有單一之獨立的抗原辨識部位的抗體。於本說明書中，例如有將可辨識RGMa的單特異性抗體稱為RGMa單特異性抗體。

[多特異性抗體] 本案中所稱多特異性抗體，係指具有2個以上不同抗原特異性之同時具有2個以上之獨立的抗原辨識部位的抗體，可舉出具有2個抗原特異性之二特異性抗體、具有3個抗原特異性之三特異性抗體等。

[互補性決定區(CDR)] 互補性決定區(CDR)係指免疫球蛋白分子的可變區當中形成抗原結合部位的區域，亦稱超可變區，係指根據不同免疫球蛋白分子，胺基酸序列的變化特別大的部分。CDR各於輕鏈及重鏈有3個CDR。有將輕鏈所含的3個CDR分別稱為LCDR1、LCDR2及LCDR3，以及重鏈所含的3個CDR稱為HCDR1、HCDR2及HCDR3。例如免疫球蛋白分子的CDR係依據卡巴特(Kabat)之編號系統(Kabat等人, 1987, Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA)來決定。

[有效量] 有效量係指足以減輕或改善異常或其1個以上之症狀的重症度及/或期間、預防異常的惡化、減緩異常、預防與異常有關之1個以上之症狀的復發、發生、發病或進行、檢測出異常，或者強化或提升其他治療(例如預防藥或治療藥)的1個以上之預防或治療效果之預防或治療劑的量。

[胺基酸序列的百分比(%)同一性] 所稱可變區等之候補多肽序列的胺基酸序列之參照多肽序列的胺基酸序列相關之「百分比(%)同一性」，係定義為整齊排列序列，為了獲得最大的%同一性而有必要的話則導入間隙，且任何的保留取代均未視為序列同一性的一部分後之與特定的參照多肽序列之胺基酸殘基相同的候補序列中之胺基酸殘基的百分比。為達測定%同一性之目的之調正(alignment)可透過使用處於本業者技能範圍的各種方法，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體等可公開取得的電腦軟體來達成。只要是本業者，則可決定包含為了相對於待比較之序列的整個長度而達成最大的調正所需之任意演算法之用以調正序列的適當參數。然而，為達此處之目的，就%同一性值，在成對調正中，可透過使用序列比較電腦程式BLAST而得。在胺基酸序列比較採用BLAST的狀況下，所提供之胺基酸序列A與所提供之胺基酸序列B的%同一性係如下計算：分率X/Y的100倍於此，X係藉由序列調正程式BLAST之A及B的程式調正而為相同時則為一致之評分的胺基酸殘基數，Y係B的總胺基酸殘基數。當胺基酸序列A的長度與胺基酸序列B的長度相異時，可理解為A相對於B的%同一性係與B相對於A的%同一性相異。除非特別合先敘明，否則此處所有的%同一性值係如上段所示，利用BLAST電腦程式而得。

[保留取代] 保留取代係指以實質上未改變胜肽之活性的方式，將胺基酸殘基以其他化學上類似的胺基酸殘基取代之意。可舉出例如將某一疏水性殘基由其他疏水性殘基取代的情形、將某一極性殘基由帶有相同電荷的其他極性殘基取代的情形等。作為可進行此種取代之機能上類似之胺基酸的實例，非極性(疏水性)胺基酸可舉出丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、脯胺酸、色胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸等。極性(中性)胺基酸可舉出甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、半胱胺酸等。帶正電荷之(鹼性)胺基酸可舉出精胺酸、組胺酸、離胺酸等。又，帶負電荷之(酸性)胺基酸可舉出天門冬胺酸、麩胺酸等。

以下就本發明之實施形態詳細加以說明。本發明係提供一種急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑，其為RGMa抑制物質的新穎用途。又，本發明係提供一種急性期之視神經脊髓炎之預防或治療方法，其包含對需要治療之哺乳動物投予包含有效量之RGMa抑制物質的預防或治療劑。

＜RGMa抑制物質＞本發明之RGMa抑制物質只要是可作用於RGMa本身，而抑制或減弱RGMa的活性(以下於本說明書中，有簡稱為「RGMa活性」)之物質即可，茲將具有例如結合於RGMa而直接抑制(減弱)RGMa活性之活性，或者抑制RGMa與受體的結合而間接地抑制(減弱)RGMa活性之活性的物質(例如後述之化合物或抗體等)稱為本發明之RGMa抑制物質。又，本發明之RGMa抑制物質亦可為抑制RGMa的表現之物質，例如抑制RGMa的表現而抑制(減弱)RGMa活性之物質(例如後述之核酸分子等)亦包含於本發明之RGMa抑制物質。

RGMa係經鑑定為中樞神經系統中抑制神經突起生長之蛋白質，人類RGMa蛋白質係如序列編號1所示，以由450個胺基酸所構成的前驅蛋白質形式經生物合成而得。去除存在於N末端之訊息胜肽Met1～Pro47(意指N末端側起第1號甲硫胺酸殘基至第47號脯胺酸殘基之胜肽，以下同樣地記載)，切斷Asp168與Pro169之間的胜肽鍵而生成N末端區，進而自Pro169去除C末側之片段的C末端胜肽Ala425～Cys450，同時對作為C末端之Ala424的C末端羧基加成GPI(多醣磷脂肌醇)錨定物，而生成C末側區。人類RGMa蛋白質係以藉由二硫鍵將上述N末側區(Cys48～Asp168)與C末側區(Pro169～Ala424)相連而成之成熟蛋白質的形式，經由GPI錨定物表現於細胞膜上。

於本發明中，RGMa可為源自任何動物者，較佳為人類RGMa。人類之RGMa的前驅蛋白質係由序列表之序列編號1所示之胺基酸序列所構成。小鼠之RGMa的前驅蛋白質係由序列表之序列編號2所示之胺基酸序列所構成，大鼠之RGMa的前驅蛋白質則由序列表之序列編號3所示之胺基酸序列所構成；但由於C末端胜肽被去除，以成熟蛋白質而言係相同的胺基酸序列。 RGMa基因可舉出例如由序列編號4所示鹼基序列所構成的人類RGMa基因等，但不限定於此。源自各種生物之RGM基因的鹼基序列可由週知之資料庫(GenBank等)容易地取得。

作為本發明之RGMa抑制物質，具體而言可舉出低分子化合物、抗RGMa中和抗體、其機能改變抗體、其連結抗體或彼等之抗原結合片段等；又可舉出屬RGMa之核酸分子的siRNA(short interfering RNA)、shRNA (short hairpin RNA)或反義寡核苷酸等。此等RGMa抑制物質當中，較佳為抗RGMa中和抗體、其機能改變抗體、其連結抗體及彼等之抗原結合片段，更佳為抗RGMa中和抗體或其抗原結合片段，尤以抗RGMa中和抗體為佳。

＜抗RGMa中和抗體＞於本發明中，抗RGMa中和抗體只要是可結合於RGMa而中和RGMa活性的抗體即可，可為多株抗體或單株抗體。於本發明中較佳為單株抗體。又，本發明之抗RGMa中和抗體可為RGMa單特異性抗體或可辨識多種RGMa及其他抗原的多特異性抗體，較佳為RGMa單特異性抗體。

又，作為具體的抗原決定位，對於人類RGMa，較佳為序列編號16(序列編號1之胺基酸編號47-69)、序列編號36(序列編號1之胺基酸編號298-311)、序列編號37(序列編號1之胺基酸編號322-335)、序列編號38(序列編號1之胺基酸編號349-359)、序列編號39(序列編號1之胺基酸編號367-377)中的1個以上，更佳為序列編號36及37之組合，尤佳為序列編號36、37及39之組合。

本發明之抗RGMa中和抗體係包含以RGMa蛋白質或其部分片段(例如上述之抗原決定位片段)為抗原，並將該抗原對小鼠等哺乳動物進行免疫而得的多株抗體及單株抗體、利用基因重組技術所製造的嵌合抗體及擬人化抗體，以及利用人類抗體產生基因轉殖動物等所製造的人類抗體等。將本發明之抗體作成醫藥對人類投予時，基於副作用觀點，宜為擬人化抗體或人類抗體。

作為本發明之抗RGMa中和抗體，具體而言可舉出下述抗體(a)～(l)，個別之製造方法可採用專利文獻2-4所記載之方法。

可舉出選自(a)包含：含有包含序列編號5所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號6所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號7所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號8所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號9所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號10所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號36、37及39作為抗原決定位的抗體)、 (b)包含：含有包含序列編號11所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號12所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號13所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號14所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號15所記載之胺基酸序列的HCDR2及胺基酸序列中包含SFG的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號36、37及38作為抗原決定位的抗體)、 (c)包含：含有包含序列編號17所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號18所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號19所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號20所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號21所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號22所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (d)包含：含有包含序列編號23所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號24所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號25所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號26所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號27所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號28所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (e)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號31所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)、 (f)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號35所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)、 (g)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號40所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)、 (h)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號41所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)、 (i)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號42所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)、 (j)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號43所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)、 (k)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號44所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)，及 (l)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號45所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體(該抗RGMa中和抗體亦進一步包含以序列編號16作為抗原決定位的抗體)的抗體。此等當中，特佳可舉出(a)所記載之抗體。

本發明之抗RGMa中和抗體之製造方法可採用現有一般所使用的製造方法。抗原可直接使用於免疫，亦可形成與載體蛋白質之複合體而使用。抗原與載體蛋白質之複合體的調製可使用戊二醛、碳二醯亞胺、馬來醯亞胺活性酯等縮合劑。載體蛋白質可例示牛血清白蛋白、甲狀腺球蛋白、血藍素、KLH等。

進行免疫之哺乳動物可舉出小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔子、貓、犬、豬、羊、馬或者牛等；接種方法可舉出皮下、肌肉或者腹腔內之投予。於投予之際，可與完全弗氏佐劑或不完全弗氏佐劑混合而投予，投予通常係每隔2～5週各進行1次。由經免疫之動物的脾臟或者淋巴節所得之抗體產生細胞係與骨髓瘤(骨髓癌)細胞進行細胞融合，而以融合瘤形式單離出來。骨髓瘤細胞係使用源自哺乳動物，例如源自小鼠、大鼠、人類等者。

＜多株抗體＞多株抗體可例如藉由將如前述之抗原，視需求與弗氏佐劑(Freund's Adjuvant)共同對如上述之哺乳動物進行免疫而由該免疫敏化動物所得之血清來取得。

＜單株抗體＞具體而言，單株抗體可如下述方式取得。亦即，以如前述之抗原作為免疫原，並將該免疫原視需求與弗氏佐劑(Freund's Adjuvant)共同注射或者移植至如上述之哺乳動物的皮下、肌肉內、靜脈內、足底內或者腹腔內1至數次而實施免疫敏化。一般係自初次免疫起每隔約1～14日進行免疫1～4次，且自最終免疫起約1～5日後由經免疫敏化之該哺乳動物取得抗體產生細胞。

單株抗體可利用本業者熟知之方法而得(例如『Current Protocols in Molecular Biology』(John Wiley & Sons(1987))、Antibodies:A Laboratory Manual, Ed.Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory(1988))。

分泌單株抗體之「融合瘤」的調製可依循Köhler及Milstein等人的方法(自然(Nature) , 256,495, 1975)及以其為基準的修飾方法來進行。亦即，係藉由使由經免疫敏化之哺乳動物取得的脾臟等所含之抗體產生細胞，與源自哺乳動物，較佳為小鼠、大鼠或人類之無自身抗體產生能力的骨髓癌細胞進行細胞融合來調製。

細胞融合所使用之骨髓癌細胞可使用例如源自小鼠之骨髓癌P3/X63-AG8.653(653)、P3/NSI/1-Ag4-1(NS-1)、P3/X63-Ag8.U1(P3U1)、SP2/0-Ag14(Sp2/O、Sp2)、PAI、F0或者BW5147、源自大鼠之骨髓癌210RCY3-Ag.2.3.、源自人類之骨髓癌U-266AR1、GM1500-6TG-A1-2、UC729-6、CEM-AGR、D1R11或者CEM-T15等。

融合促進劑可舉出聚乙二醇等，通常可透過使用濃度20～50%左右的聚乙二醇(平均分子量1000～4000)，在20～40℃，較佳為30～37℃的溫度下，抗體產生細胞數與骨髓瘤細胞數的比通常取1：1～10：1左右，使其反應約1～10分鐘左右來實施細胞融合。

產生單株抗體之融合瘤選殖的篩選可透過在例如微量滴定盤中培養融合瘤，並藉由ELISA等的免疫化學方法測定井孔之培養上清液對免疫抗原的反應性來進行。

在抗體產生融合瘤的篩選中，除了與RGMa蛋白質的結合分析法外，亦進行該抗體是否可抑制本發明之RGMa活性的評估。根據此等篩選方法，可選出本發明之抗RGMa中和抗體。

由含有產生目標抗體之融合瘤的井孔中進一步藉由有限稀釋法進行選殖，可獲得殖株。融合瘤的篩選、育種，通常係添加HAT(次黃嘌呤、胺基喋呤、胸苷)，在含有10～20%胎牛血清的動物細胞用培養基中進行。

從融合瘤製造單株抗體，係藉由在活體外培養融合瘤，或在小鼠、大鼠等哺乳動物的腹水中等的活體內使其增殖，並由所得之培養上清液、或哺乳動物的腹水中單離來進行。

於活體外進行培養時，可配合待培養之細胞物種的特性及培養方法等各種條件，使融合瘤增殖、維持及保存，並使用適於在培養上清液中產生單株抗體的營養培養基。營養培養基可舉出週知之營養培養基或由基本培養基所調製的營養培養基等。

基本培養基可舉出例如Ham’F12培養基、MCDB153培養基或者低鈣MEM培養基等低鈣培養基及MCDB104培養基、MEM培養基、D-MEM培養基、RPMI1640培養基、ASF104培養基或者RD培養基等高鈣培養基等，該基本培養基可視目的而含有例如血清、激素、細胞激素及/或各種無機或者有機物質等。

單株抗體的單離、純化可藉由將上述之培養上清液或者腹水供予至飽和硫酸銨、優球蛋白沉澱法、己酸法、辛酸法、離子交換層析法(DEAE或DE52等)、抗免疫球蛋白管柱或者蛋白質A管柱等親和管柱層析等來進行。具體而言，單株抗體的純化，作為免疫球蛋白之純化法，只要採用已知方法即可，例如可藉由硫酸銨分餾法、PEG分餾法、乙醇分餾法、利用陰離子交換體，甚而使用RGMa蛋白質的親和層析等手段而容易地達成。

單株抗體亦可藉由噬菌體呈現法而取得。就噬菌體呈現法，係將由任意之噬菌體抗體庫所選出的噬菌體，使用目標免疫原進行篩選，而選出對免疫原具有期望之結合性的噬菌體。其次，將噬菌體內所含之抗體對應序列進行單離或序列決定，而基於經單離之序列或決定之序列資訊，建構出包含編碼抗體或抗原結合區之核酸分子的表現載體。然後，藉由培養所述表現載體經轉染之細胞株，可產生單株抗體。作為噬菌體抗體庫，透過使用人類抗體庫，可生成具有期望之結合性的人類抗體。

＜核酸分子＞編碼本發明之抗RGMa中和抗體或其抗原結合片段的核酸分子可例如藉由以下方法而得。首先，由融合瘤等細胞，使用市售之RNA萃取套組調製全RNA，並使用隨機引子等，藉由反轉錄酶合成出cDNA。其次，在已知之人類抗體重鏈基因、輕鏈基因的可變區，藉由將分別經保存之序列的寡核苷酸用於引子的PCR法，使編碼抗體的cDNA進行擴增。對於編碼恆定區的序列，則可藉由將已知之序列以PCR法進行擴增而得。DNA之鹼基序列可藉由嵌入於序列決定用質體等，根據常用方法來決定。或者，藉由化學合成出可變區或其部分序列，並結合於包含恆定區的序列，亦可獲得編碼本發明之單株抗體的DNA。該核酸分子可為編碼所有的重鏈與輕鏈之恆定區與可變區者，惟亦可為僅編碼重鏈與輕鏈之可變區者。編碼所有的恆定區與可變區時之重鏈及輕鏈之恆定區的鹼基序列較佳為Nucleic Acids Research vol.14, p1779, 1986、The Journal of Biological Chemistry vol.257, p1516, 1982 及 Cell vol.22, p197, 1980 所記載者。

＜機能改變抗體＞抗RGMa中和抗體的機能改變抗體能以如下方法調製。例如，若將本案抗RGMa中和抗體作為宿主細胞，並使用破壞α1,6-岩藻糖轉移酶(FUT8)基因的CHO細胞來製造，可獲得糖鏈之岩藻糖含量降低而提高細胞殺傷機能的抗體；若將導入有FUT8基因的CHO細胞作為宿主細胞來製造，則可獲得低細胞殺傷機能的抗體(國際公開第2005/035586號、國際公開第2002/31140號、國際公開第00/61739號)。又，藉由改變Fc區之胺基酸殘基，可調節補體活性化機能(美國專利第6737056號、美國專利第7297775號、美國專利第7317091號)。再者，透過使用提高對Fc受體的1個之FcRn的結合之Fc區的突變體，可延長血中半衰期(橋口周平等人, 生物化學, 2010, Vol.82(8), p710)。此等機能改變抗體可採基因工程來製造。透過使用提高對Fc受體的1個之FcRn的結合之Fc區的突變體，可延長血中半衰期(橋口周平等人, 生物化學, 2010, Vol.82(8), p710)。此等機能改變抗體可採基因工程來製造。

＜連結抗體＞本發明之抗RGMa中和抗體的改變分子可舉出連結抗體。連結抗體可舉出對抗RGMa中和抗體以化學或基因工程方式結合聚乙二醇(PEG)等非胜肽性聚合物、放射性物質、毒素、低分子化合物、細胞激素、生長因子(TGF-β、NGF、Neurotrophin等)、白蛋白、酵素、其他抗體等本案之抗RGMa中和抗體以外的機能分子之連結抗體。

作為機能分子，結合PEG時，PEG可非限定地使用分子量2000至100000Da，更佳為10000至50000Da者，可為直鏈型或分支型者。透過使用例如NHS活性基，PEG可結合於抗RGMa中和抗體之胺基酸的N末端胺基等。

機能分子使用放射性物質時，可使用¹³¹ I、¹²⁵ I、⁹⁰ Y、⁶⁴ Cu、⁹⁹ Tc、⁷⁷ Lu或²¹¹ At等。放射性物質可藉由氯胺T法等直接結合於抗RGMa中和抗體。

機能分子使用毒素時，可使用細菌毒素(例如白喉毒素)、植物毒素(例如蓖麻毒蛋白)、低分子毒素(例如格爾德黴素)、類美登素及卡奇黴素等。

機能分子使用低分子化合物時，可舉出柔紅黴素、阿黴素、甲氨蝶呤、絲裂黴素、新卡他汀、長春醯胺及FITC等螢光色素等。

機能分子使用酵素時，可使用螢光酵素(例如螢火蟲螢光酵素及細菌螢光酵素；美國專利第4737456號)、蘋果酸脫氫酶、脲酶、過氧化酶(例如西洋山葵過氧化酶(HRPO))、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、醣類氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)、雜環式氧化酶(例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶等)、乳過氧化酶、微過氧化酶等。

化學結合毒素、低分子化合物或酵素時所使用的連結子可舉出二價自由基(例如伸烷基、伸芳基、伸雜芳基)、以-(CR₂ )_n O(CR₂ )_n -(R為任意取代基，n為正整數)表示之連結子或烷氧基之重複單元(例如聚乙烯氧基、PEG、聚亞甲基氧基等)及烷胺基(例如聚乙烯胺基，Jeffamine(商標))，以及二酸酯及醯胺(可舉出琥珀酸酯、琥珀醯胺、二甘醇酸酯、丙二酸酯及己醯胺等)。使機能分子結合之化學修飾方法既已於此領域中確立(D.J.King., Applications and Engineering of Monoclonal antibodies., 1998 T.J. International Ltd, Monoclonal Antibody-Based Therapy of Cancer., 1998 Marcel Dekker Inc; Chari et al., Cancer Res., 1992 Vol152:127; Liu et al., Proc Natl Acad Sci USA., 1996 Vol 93:8681)。

＜抗原結合片段＞本發明之實施形態中所稱抗體之「抗原結合片段」，係指如前述之抗體之具有抗原結合性的部分區域，具體而言可舉出F(ab')₂ 、Fab'、Fab、Fv(variable fragment of antibody)、二硫鍵Fv、單股抗體(scFv)及此等之聚合物等；再者，抗原結合片段係包含以化學或基因工程方式結合聚乙二醇(PEG)等非胜肽性聚合物、放射性物質、毒素、低分子化合物、細胞激素、成長因子(TGF-β、NGF、Neurotrophin等)、白蛋白、酵素、其他抗體等本案之抗RGMa中和抗體以外的機能分子的接合片段。

「F(ab')₂ 」及「Fab」係指藉由將免疫球蛋白以蛋白質分解酵素之胃蛋白酶或者木瓜蛋白酶等進行處理所製成，且在存在於鉸鏈區中之2條重鏈間之二硫鍵的前後經消化而生成的抗體片段。例如，若將IgG以木瓜蛋白酶進行處理，則在存在於鉸鏈區中之2條重鏈間之二硫鍵的上游被切斷，可製造由VL(輕鏈可變區)與CL(輕鏈恆定區)所構成的輕鏈，及由VH(重鏈可變區)與CHγ1(重鏈恆定區中的γ1區域)所構成的重鏈片段在C末端區域藉由二硫鍵結合之相同的2個抗體片段。此2個相同的抗體片段係各稱Fab。又，若將IgG以胃蛋白酶進行處理，則在存在於鉸鏈區中之2條重鏈間之二硫鍵的下游被切斷，可製造略大於前述2個Fab由鉸鏈區相連者的抗體片段。此抗體片段係稱F(ab')₂ 。

＜嵌合抗體＞本發明之抗RGMa中和抗體的較佳樣態可舉出嵌合抗體。「嵌合抗體」可例示可變區為源自非人類動物(小鼠、大鼠、倉鼠、雞等)之免疫球蛋白的可變區，且恆定區為源自人類免疫球蛋白的恆定區的嵌合抗體。例如，可將抗原對小鼠進行免疫，並由該小鼠單株抗體之基因切出與抗原結合的可變區，與源自人類骨髓的抗體恆定區結合而製作。源自人類免疫球蛋白的恆定區，根據IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(IgA1、IgA2)、IgD及IgE等的等型，各自具有固有的胺基酸序列；本發明中的重組嵌合抗體之恆定區可為屬任一等型的人類免疫球蛋白之恆定區。較佳為人類IgG的恆定區。使用如此製作之嵌合抗體的基因，可製作表現載體。以該表現載體將宿主細胞進行轉形而得到嵌合抗體產生轉形細胞，並藉由培養該轉形細胞而由培養上清液中獲得目標嵌合化抗體。

＜擬人化抗體＞本發明之抗RGMa中和抗體的其他較佳樣態可舉出擬人化抗體。本發明中的「擬人化抗體」係僅將小鼠等非人類動物抗體之抗原結合部位(CDR；互補性決定區)的DNA序列移植(CDR grafting)至人類抗體基因的抗體。可參照例如日本特表平4-506458號公報及日本專利2912618號說明書等所記載之方法來製作。具體而言，係指以部分或全部的該CDR為源自非人類哺乳動物(小鼠、大鼠、倉鼠等)之單株抗體的CDR，其可變區之架構區為源自人類免疫球蛋白之可變區的架構區，且其恆定區為源自人類免疫球蛋白的恆定區為特徵的擬人化抗體。

本發明中的擬人化抗體可例如如下製造。然而，理當非限定於此種製造方法。

例如源自小鼠單株抗體的重組擬人化抗體可參照日本特表平4-506458號公報及日本特開昭62-296890號公報等，採基因工程而製作。亦即，由產生小鼠單株抗體之融合瘤單離出小鼠重鏈CDR部分的DNA與小鼠輕鏈CDR部分的DNA，並由人類免疫球蛋白基因單離出人類重鏈CDR以外之全部區域的人類重鏈基因與人類輕鏈CDR以外之全部區域的人類輕鏈基因。

將移植有經單離之小鼠重鏈CDR部分的DNA之人類重鏈基因導入至適當的表現載體以使其可表現，同樣地將移植有小鼠輕鏈CDR部分的DNA之人類輕鏈基因導入至適當的另1個表現載體以使其可表現。或者，亦可將移植有小鼠的CDR之人類之重鏈及輕鏈基因導入至同一表現載體以使其可表現。以如此製作之表現載體將宿主細胞進行轉形而得到擬人化抗體產生轉形細胞，並藉由培養該轉形細胞而由培養上清液中獲得目標擬人化抗體。

＜人類抗體＞本發明之抗RGMa中和抗體的其他較佳樣態可舉出人類抗體。人類抗體係指包含構成免疫球蛋白之重鏈之可變區及重鏈之恆定區以及輕鏈之可變區及輕鏈之恆定區的所有區域為源自編碼人類免疫球蛋白之基因的免疫球蛋白之抗體，可將人類抗體基因導入至小鼠而製作。具體而言，例如可藉由至少將人類免疫球蛋白基因嵌入小鼠等人類以外之哺乳動物的基因座中而製作基因轉殖動物，並將此動物以抗原進行免疫敏化，而以與前述之多株抗體或者單株抗體的製作方法同樣的方式來製造。

例如產生人類抗體之基因轉殖小鼠可依循Nature Genetics, Vol.7, p.13-21, 1994；Nature Genetics, Vol.15, p.146-156, 1997；日本特表平4-504365號公報；日本特表平7-509137號公報；國際公開WO94/25585號手冊；Nature, Vol.368,p.856-859, 1994；及日本特表平6-500233號公報等所記載之方法來製作。更具體而言，可舉出HuMab(註冊商標)小鼠(Medarex, Princeton NJ)、KMTM小鼠(Kirin Pharma Company, Japan)、KM(FCγRIIb-KO)小鼠等。

作為本發明之抗RGMa中和抗體，具體而言可舉出具有重鏈可變區包含特定的胺基酸序列之CDR，且具有輕鏈可變區包含特定的胺基酸序列之CDR者(較佳為上述之(a)～(l)的抗RGMa中和抗體)。此外，只要具有與RGMa之結合能力，且可維持抑制(中和)RGMa的活性之本發明抗體之特性，在抗RGMa中和抗體(較佳為上述之(a)～(l)的抗RGMa中和抗體)的胺基酸序列中，亦可為1個或數個胺基酸(1～20個、1～10個或1～5個，較佳為1或2個)的取代、缺失、加成或插入。此種取代、缺失、加成可導入於CDR，而較佳導入於CDR以外的區域。又，該胺基酸取代，為了維持本發明之特性，較佳為保留取代。

胺基酸序列中包含取代、缺失等的本發明之抗RGMa中和抗體(較佳為上述之(a)～(l)的抗RGMa中和抗體)的胺基酸序列係例如胺基酸序列改變後的重鏈可變區與改變前的胺基酸序列具有90%以上(更佳為95%、96%、97%、98%、99%以上)之%同一性的胺基酸序列，且為胺基酸序列改變後的輕鏈可變區與改變前的胺基酸序列具有90%以上(更佳為95%、96%、97%、98%、99%以上)之%同一性的胺基酸序列。

於本發明中，siRNA係指可抑制目標基因(於本發明中為RGMa基因)的表現的短雙股RNA。只要可發揮作為抑制本發明之RGMa活性的siRNA之機能，則鹼基序列或長度(鹼基長度)不特別限定，較佳為約未達30個鹼基，更佳為約19～27個鹼基，再更佳為約21～25個鹼基。於本發明中，shRNA係指藉由在單股RNA部分包含迴文(palindrome)狀的鹼基序列，而於分子內形成雙股構造，由在3'末端具有突出部之短型髮夾構造所構成的約20個鹼基對以上的分子。此種shRNA，導入至細胞內後，在細胞內經分解成約20個鹼基(代表性為例如21個鹼基、22個鹼基、23個鹼基)的長度，與siRNA同樣地可抑制目標基因的表現。於本發明中，上述之siRNA及shRNA，只要是可抑制RGMa基因的表現者則可為任何形態。

於本發明中，siRNA或shRNA能以人工化學合成。又，例如可使用T7RNA聚合酶及T7啟動子，由模板DNA於活體外合成出反義及有義RNA。反義寡核苷酸只要是與RGMa基因之DNA序列中連續的5至100個鹼基序列互補或進行雜交的核苷酸即可，可為DNA或RNA任一者。又，只要不影響其機能，亦可為經修飾者。反義寡核苷酸可藉由常用方法來合成，例如可藉由市售之DNA合成裝置而容易地合成。較佳之序列可採用一般的選擇方法來選擇；就本發明中的siRNA或shRNA，可藉由評估機能性RGMa的表現抑制來確認。

＜急性期之視神經脊髓炎＞視神經脊髓炎的病期，臨床上可粗分為「急性期」(於本發明中係包含急性惡化期之概念)及「慢性期」此2種。此處所稱「急性期」，係指出現視神經炎及脊髓炎等視神經脊髓炎之症狀，且此等症狀持續或症狀加重(惡化)的時期。又，於此種時期，可藉由MRI於部分病變處看出釓顯影效果；或藉由脊髓液檢查看出細胞數增多或蛋白質上升，由此能以此等為參考來判斷急性期。另一方面，「慢性期」係指藉由治療使症狀的惡化好轉，症狀獲改善而呈穩定的時期。又，於此種時期，在MRI中釓顯影效果消失，由此能以此為參考來判斷慢性期。本發明中的視神經脊髓炎之急性期係指前述之「急性期」，非僅為發生初次發作之視神經脊髓炎的急性期之病徵，第二次以後發生視神經脊髓炎之復發時的急性期之病徵亦包含於本發明中。此外，就視神經脊髓炎，對於治療對象(較佳為哺乳動物，尤為人類)，至其症狀的高峰期約為8.5日左右(範圍：2日～63日)(參考文獻：Flanagan et al. Ann Neurol. 2016 Mar; 79(3): 437-47等)。因此，本發明中的急性期之期間，自視神經脊髓炎的發病起，通常為1個月以內。

本發明中的視神經脊髓炎係指視神經脊髓炎相關疾病(Neuromyelitis optica spectrum disorder, NMOSD)，係包含視神經脊髓炎之國際診斷基準(Wingerchuk et al. Neurology, 2015; 8582): 177-189)所列舉之抗AQP4抗體陽性之視神經脊髓炎相關疾病(NMOSD)及抗AQP4抗體陰性之視神經脊髓炎相關疾病(NMOSD)的任一者之概念。其中，於本發明中，較佳為抗AQP4抗體陽性之視神經脊髓炎相關疾病。本發明中的治療對象(較佳為哺乳動物，尤為人類)係以罹患視神經脊髓炎相關疾病(NMOSD)的患者，較佳為罹患抗AQP4抗體陽性之視神經脊髓炎相關疾病(NMOSD)的患者為對象，可對此等患者投予本發明之急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑。

又，就本發明中的急性期之視神經脊髓炎，作為患者的主症狀之一常伴有疼痛；因此，於本發明中，可將RGMa抑制物質，較佳為抗RGMa中和抗體作為視神經脊髓炎中常見的疼痛症狀之預防或治療劑，而使用於伴有此種疼痛的患者。此外，在本發明之急性期之視神經脊髓炎的預防又治療劑，及預防或治療方法中所說明的事項係全部適用於本發明之視神經脊髓炎中常見的疼痛症狀之預防或治療劑，及預防或治療方法的說明。

此處所稱「治療」，係包含對治療對象，較佳為哺乳動物，尤為人類之疾病的任意之治療，包含遏止疾病及症狀的惡化，並消除、治癒、減輕或緩和此種疾病及症狀。

又，「預防」係包含對治療對象，較佳為哺乳動物，尤為人類防止或抑制上述疾病的發生。再者，本發明中的「預防」係包含對治療對象，較佳為哺乳動物，尤為人類緩解或防止反覆復發之上述疾病的復發的「預防復發」。

＜醫藥組成物＞本發明中的急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑，通常係全身或局部地以口服或非口服形式投予。本發明中的急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑能以RGMa抑制物質為有效成分，適宜摻混藥學上可容許之載體或添加劑而製劑化。如此製劑化之醫藥組成物能以口服或非口服形式投予。具體而言，可作成錠劑、被覆錠劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、液劑、懸浮劑、乳劑等口服劑，且可作成注射劑、輸液、塞劑、軟膏、貼劑等非口服劑。就載體或添加劑的摻混比例，只要基於醫藥品領域中通常採用的範圍來適宜設定即可。可摻混之載體或添加劑不特別限制，可舉出例如水、生理食鹽水、其他水性溶劑、水性或油性基劑等的各種載體，例如賦形劑、黏合劑、pH調整劑、崩解劑、吸收促進劑、潤滑劑、著色劑、調味劑、香料等的各種添加劑。

當RGMa抑制物質為抗RGMa中和抗體、其機能改變抗體、其連結抗體或彼等之抗原結合片段時，較佳作成與藥學上可容許之載體共同製劑化之注射劑或輸液，以非口服投予路徑，例如靜脈內、肌肉內、皮膚內、腹腔內、皮下或局部投予。例如包含抗RGMa中和抗體之注射劑或輸液可作為溶液、懸浮液或乳濁液使用。該溶劑可使用例如注射用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄糖溶液及等張液(例如氯化鈉、氯化鉀、甘油、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂、丙二醇等的溶液)等。再者，包含此種抗RGMa中和抗體之注射劑或輸液亦可含有安定劑、增溶劑、懸浮劑、乳化劑、舒緩劑、緩衝劑、保存劑、防腐劑、pH調整劑等。安定劑可使用例如白蛋白、球蛋白、明膠、甘露醇、葡萄糖、葡聚糖、乙二醇、丙二醇、抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、EDTA鈉、檸檬酸鈉、二丁基羥基甲苯等。增溶劑可使用例如醇(例如乙醇等)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇等)、非離子性界面活性劑(例如聚山梨醇酯80(註冊商標)、HCO-50等)等。懸浮劑可使用例如單硬脂酸甘油酯、單硬脂酸鋁、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、月桂基硫酸鈉等。乳化劑可使用例如阿拉伯膠、海藻酸鈉、香精等。舒緩劑可使用例如苯甲醇、氯丁醇、山梨糖醇等。緩衝劑可使用例如磷酸緩衝液、乙酸緩衝液、硼酸緩衝液、碳酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、TRIS緩衝液等。保存劑可使用例如對氧苯甲酸甲酯、對氧苯甲酸乙酯、對氧苯甲酸丙酯、對氧苯甲酸丁酯、氯丁醇、苯甲醇、氯化苄烷銨、脫氫乙酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、硼酸、硼砂等。防腐劑可使用例如氯化苄烷銨、對氧苯甲酸、氯丁醇等。 pH調整劑可使用例如鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、乙酸等。

當RGMa抑制物質為核酸(siRNA、shRNA、反義寡核苷酸等)時，能以非病毒載體或病毒載體之形態投予。若為非病毒載體形態時，可利用：使用微脂體導入核酸分子的方法(微脂體法、HVJ-微脂體法、陽離子型微脂體法、脂質體轉染法、脂染胺法等)、微注射法、以基因槍(Gene Gun)將核酸分子與載體(金屬粒子)共同移入至細胞的方法等。例如使用病毒載體將siRNA或shRNA投予至生物體時，可利用重組腺病毒、反轉錄病毒等病毒載體。藉由對經無毒化之反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、疱疹病毒、牛痘病毒、痘病毒、脊髓灰質炎病毒、正雙鏈病毒、仙台病毒、SV40等DNA病毒或RNA病毒導入表現siRNA或shRNA的DNA，並使細胞或組織感染此重組病毒，可將基因導入至細胞或組織內。

如此所得之製劑，藉由對例如人類或其他哺乳動物(例如大鼠、小鼠、兔子、羊、豬、牛、貓、犬、猿猴等)投予其有效量，可預防或治療急性期之視神經脊髓炎。投予量可考量目的、疾病的嚴重度、患者的年齡、體重、性別、病史、有效成分的種類等來適宜設定。例如有效成分為抗RGMa中和抗體時，以具有約65～70kg之體重的平均人類為對象時，較佳為每日0.02mg～4000mg左右，更佳為0.1mg～200mg左右。每日的總投予量可為單一投予量或分批投予量。

＜與其他藥劑或治療的併用＞於本發明中，急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑可與其他有用於治療視神經脊髓炎的藥劑或治療併用而投予。

可與本發明中的急性期之視神經脊髓炎之預防或治療劑併用而使用的其他藥劑或治療可舉出例如血漿交換及/或免疫球蛋白製劑的靜脈內投予、黴菌酚酸、利妥昔單抗、依庫珠單抗(Eculizumab)及/或沙妥珠單抗(Satralizumab)的投予。此種其他藥劑或治療可為能有效治療如視神經脊髓炎之中樞神經系統異常，或有效延緩中樞神經系統異常的惡化之具生物學活性的其他藥劑或治療。

例如，具生物學活性的其他藥劑可為皮質類固醇、(靜脈內)免疫球蛋白製劑，或抗淋巴球製劑、黴菌酚酸、利妥昔、依庫珠單抗及/或沙妥珠單抗。於較佳之實施形態中，患者係藉由靜脈內免疫療法(例如皮質類固醇，例如如甲基培尼皮質醇之(合成)糖皮質激素)來進行治療。從而，具生物學活性的其他藥劑亦可為皮質類固醇，例如如甲基培尼皮質醇之(合成)糖皮質激素。具生物學活性的其他藥劑係投予至靜脈內。其他藥劑或治療，例如對類固醇輸注無效的患者(例如經過類固醇治療後僅可見未充分抑制中樞神經系統發炎的情形)，亦可進行血漿交換。從而，患者可為類固醇輸注無效的患者，亦可任意接受血漿交換。

上述其他藥劑或治療可於本發明之急性期之視神經脊髓炎的預防或者治療劑的投予前或投予後投予或實施，又，亦可同時投予或實施。 [實施例]

以下舉出實施例對本發明更具體地加以說明，惟本發明非限定於此等。

[實施例1]　抗RGMa中和抗體對急性期之視神經脊髓炎的效果利用急性期重症型NMO大鼠模型，來評估抗RGMa中和抗體對臨床症狀惡化的治療效果。此外，作為抗RGMa中和抗體，係將包含本說明書所記載之(a)之胺基酸序列(序列編號5～10)的抗RGMa中和抗體使用於實驗。

(1-1)誘導大鼠之NMO的程序依據現有報導(Kurosawa K, et al., Acta Neuropathol Commun. 2015;3:82)，來進行急性期重症型NMO大鼠模型的製作。實驗係使用母Lewis大鼠。作為前發炎環境誘發與破壞血液脊髓障壁(BSCB)之刺激，係進行對中樞抗原MBP的免疫導入。作為MBP係使用Guinea pig brain myelin basic protein，以PBS使其溶解成為1 mg/mL，以等量與含有1 mg/mL之死結核菌H37Ra的弗氏完全佐劑混合，藉由超音波震盪製成乳膠。將製作之乳膠(200 μl/head)皮下投予至背部2處，自此10日後，對神經分數為1以下的個體以3 mg/kg的用量單次腹腔內投予抗AQP4抗體(小鼠抗AQP4單株抗體E5415A)，而誘導抗AQP4抗體依賴性的臨床症狀惡化。

(1-2)神經分數評估基於以下判斷基準對神經症狀評分，以尾部及兩後肢之神經分數的合計值作為神經分數(0～6分)而用於評估。尾部分數：0:無麻痺症狀；1:不完全麻痺；2:完全麻痺；各後肢的分數：0:無症狀；1:不完全麻痺；2:後肢拖行之後肢完全麻痺。神經評分係於盲測下實施，以每日1次進行神經症狀的評估至抗RGMa中和抗體投予後第13日(抗AQP4抗體投予後第14日)。

(1-3)分群及抗RGMa中和抗體的投予以抗AQP4抗體投予翌日之神經分數與體重之平均值的偏差於群間達最小的方式分成2群，以10 mg/kg的用量單次尾靜脈內投予抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體(Palivizumab)。抗RGMa中和抗體投予群、等型控制組抗體投予群均以6隻構成。

(1-4)結果將單次投予抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠模型之臨床急性惡化的效果示於圖1。於抗AQP4抗體投予翌日靜脈內投予抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體，以每日1次進行神經症狀的評估至抗AQP4抗體投予後第14日。於抗AQP4抗體投予翌日投予抗RGMa中和抗體之群的神經分數，與投予等型控制組抗體之群相比，在整個觀察期間均顯示較低值，投予抗AQP4抗體後第2-8日及第2-14日的平均分數顯著降低(第2-8日平均分數，2.13±0.41 vs. 3.70±0.20 for isotype control IgG-treated rats，p＜0.01，Mann-Whitney U檢定)；第2-14日平均分數，1.90±0.43 vs. 3.05±0.19 for isotype control IgG-treated rats，p＜0.05，Mann-Whitney U檢定)。由以上結果可知，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體對急性期之視神經脊髓炎的臨床惡化顯示治療效果。

[實施例2]　抗RGMa中和抗體對血液脊髓障壁之破壞的效果使用可製作侷限於脊椎骨節之BSCB破壞的tEAE小鼠，藉由釓顯影MRI來探討抗RGMa中和抗體對BSCB破壞的治療效果。此外，作為抗RGMa中和抗體，係將包含本說明書所記載之(a)之胺基酸序列(序列編號5～10)的抗RGMa中和抗體使用於實驗。

(2-1)tEAE小鼠的製作使用母C57/BL6J小鼠。以PBS 使Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein Peptide Fragment 35-55, rat, mouse (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK(序列編號46); MOG_35-55 ，Sigma-Aldrich)溶解成2 mg/mL，以等量與含有5 mg/mL之死結核菌H37Ra的弗氏完全佐劑混合，藉由超音波震盪製成乳膠。將製作之乳膠各以100 μL皮下投予至背部2處(200 μL/head)，而進行MOG免疫導入。自此約21日後，對第8胸椎下的胸髓深度0.5-0.8 mm注入1.5 μL的細胞激素混合溶液(750 ng Tumor Necrosis Factor-α, 1 μg Interferon-γ)，隨後並於2日後，對尾靜脈內投予200 ng pertussis toxin ，而誘導tEAE。

(2-2)神經分數評估神經分數係基於現有報導的判斷基準(茲參照Tanabe S, Fujita Y, Ikuma K, Yamashita T. Inhibiting repulsive guidance molecule-a suppresses secondary progression in mouse models of multiple sclerosis. Cell Death Dis. 2018;9(11):1061)，於盲測下進行評估。

(2-3)採用釓顯影核磁共振造影法(Magnetic Resonance Imaging，MRI)的BSCB破壞評估利用BioSpec 117/11(Bruker)，取得釓顯影劑(Omniscan, Daiichi Sankyo)投予前後的歷時性T1強化影像(Dynamic contrast-enhanced MRI; DCE-MRI)，由T1訊號強度變化定量性地評估作為BSCB破壞的指標之釓向脊髓內的漏出。於七氟醚麻醉下安裝體溫維持裝置，經由留置於尾靜脈內的導管以0.25 mmol/kg的用量急速投予釓顯影劑。DCE-MRI係針對有效視野(Field of view; FoV)26×26 mm，設定200×200的收集基質(acquisition matrix)，以胸髓注入細胞激素部位為中心，以0.8 mm的切片厚度及間隔共取得11張軸位剖面的影像。又，重複時間(Repetition time; TR)設定為500 ms，回訊時間(Echo time; TE)設定為18 ms，激發次數(Number of excitation; NEX)設定為4次，以約10分鐘隨時間經過共取得6張影像(每張約100秒)。影像係以DICOM形式輸出，利用Fiji (http://fiji.sc/)進行解析。為排除腦脊髓液之T1訊號的影響，而於脊髓內設定感興區(Region of interest; ROI)，並基於式(1)算出各時間點之脊髓內之T1訊號強度的增加率(T1 signal enhancement ratio；SER)。各個體的釓脊髓內漏出強度(Total Gd influx rate)係如式(2)所示，以SER每單位時間的斜率作為釓流入速度，利用Microsoft Excel 2016(Microsoft)之SLOPE函數求得，以11個切片的總和來算出。

由正常小鼠的探討結果，式(2)中之SLOPE(SER0):SER(10), 0:10)的值未達0.02時係視為分析誤差，由式(2)之加算對象中排除。

(2-4)分群及抗RGMa中和抗體的投予以注入細胞激素7日後之釓漏出的定量值於群間成均一的方式分成2群，按每週2次以10 mg/kg的用量對尾靜脈內投予抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體(Palivizumab)。抗RGMa中和抗體投予群以10隻，等型控制組抗體投予群以9隻構成，神經分數評估與MRI解析係於同一個體實施。

(2-5)結果將抗RGMa中和抗體對tEAE小鼠急性期之BSCB破壞與神經症狀的恢復效果示於圖2。以7日後的定量值為基準於同一個體縱向地算出注入細胞激素7、14、21日後的釓漏出強度的變化率，來解析抗RGMa中和抗體對BSCB破壞的恢復效果。於注入細胞激素7日後時間點所發生的脊髓內釓漏出可藉由重複投予抗RGMa中和抗體而顯著獲得抑制(注入細胞激素14日後時間點，p＜0.001，Bonferroni multiple comparison test)，可看出BSCB破壞的早期恢復(圖2之A)。又，於同一個體所取得的神經分數亦顯著獲抑制，對於神經症狀亦可看出早期恢復(圖2之B)。將tEAE小鼠急性期之釓脊髓內漏出強度與神經症狀重症度的相關性示於圖3。注入細胞激素7日後之釓脊髓內漏出強度與神經症狀重症度可看出高度正相關(r = 0.831, p＜0.001)，且於14日後亦可看出正相關(r = 0.549, p ＜ 0.05)。此顯示BSCB破壞的重症度規範神經症狀的重症度。由以上結果可知，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體可藉由對BSCB破壞之修復促進作用而顯示對急性期之視神經脊髓炎的藥效。

[實施例3]　抗RGMa中和抗體對血液脊髓障壁破壞的治療效果藉由免疫組織化學染色解析血液脊髓障壁破壞所致之大鼠IgG的脊髓內漏出，來評估抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠之血液脊髓障壁破壞的治療效果。

(3-1)急性期重症型NMO大鼠模型的製作實驗係使用母Lewis大鼠。於MBP免疫後第10日對神經分數為1以下的個體以3 mg/kg的用量單次腹腔內投予抗AQP4抗體(小鼠抗AQP4單株抗體E5415A)，而誘導NMO病徵。

(3-2)分群及抗RGMa中和抗體的投予以抗AQP4抗體投予翌日之神經分數與體重之平均值的偏差於群間達最小的方式分成2群，以10 mg/kg的用量對尾靜脈內投予抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體(Palivizumab)。抗RGMa中和抗體處置群及等型控制組抗體處置群係各以6隻、健康無處置群則以4隻構成。

(3-3)免疫組織化學染色於抗AQP4抗體投予後第4日進行解剖。去血後採取脊髓，在4℃下於4%多聚甲醛中進行後固定1日。後固定後，進行藉由蔗糖取代之冷凍保護處置後，對OCT複合物包埋組織片。薄切成30μm而製成冷凍切片，使用Alxa488標記驢抗大鼠IgG抗體(1：500，Thermo Fisher Scientific公司)進行免疫組織染色。染色切片的攝影係使用倒立型螢光顯微鏡Olympus IX83，使用影像解析軟體Image J software來測定大鼠IgG陽性面積相對於脊髓剖面的比例(%大鼠IgG陽性面積)。

(3-4)結果將抗RGMa中和抗體對大鼠IgG漏出之脊髓漏出的效果示於圖4。藉由在NMO發病後翌日投予抗RGMa中和抗體，可顯著抑制血液脊髓障壁破壞指標之大鼠IgG的脊髓內漏出。由以上結果指出，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體對急性期之視神經脊髓炎的效果係對血液脊髓障壁破壞的修復促進作用。

[實施例4]　抗RGMa中和抗體對NMO病徵的疼痛症狀的效果對急性期重症型NMO大鼠重複投予抗RGMa中和抗體，來評估抗RGMa中和抗體對持續性疼痛的效果。

(4-1)急性期重症型NMO大鼠模型的製作實驗係使用母Lewis大鼠。於MBP免疫後第10日對神經分數為1以下的個體以3 mg/kg的用量單次腹腔內投予抗AQP4抗體(小鼠抗AQP4單株抗體E5415A)，而誘導NMO病徵。

(4-2)疼痛相關行動的評估利用採von Frey刺激之up-down法(茲參照Chaplan, S.R., Bach, F.W., Pogrel, J.W., Chung, J.M., Yaksh, T.L., Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw, J. Neurosci. Methods, 53, 55-63(1994))求出上抬後肢的50%逃避反應閾值(g)，來評估疼痛。解析係使用兩側後肢之50%逃避反應閾值(g)的平均值。

(4-3)分群及抗RGMa中和抗體的投予以抗AQP4抗體投予翌日之神經分數與體重之平均值的偏差於群間達最小的方式分成2群，按每週1次以10 mg/kg的用量對尾靜脈內投予抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體(Palivizumab)。解析群係以抗RGMa中和抗體處置群、等型控制組抗體處置群、健康無處置群共計3群，均以6隻構成。於神經症狀惡化期由於可看出因後肢的脫力而無法進行von Frey刺激的個體，因此抗AQP4抗體投予後第4日的抗RGMa中和抗體處置群為5例、抗AQP4抗體投予後第7日的等型控制組抗體處置群為2例、抗RGMa中和抗體處置群為3例之數據組。

(4-4)結果將抗RGMa中和抗體對疼痛的抑制效果示於圖5。就從NMO發病後翌日投予抗RGMa中和抗體之群，與投予等型控制組抗體之群相比，較快從50%逃避反應閾值降低恢復，且於抗AQP4抗體投予後第18日及第21日可看出50%逃避反應閾值顯著上升。由以上結果可知，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體顯示對急性期之視神經脊髓炎的疼痛症狀之效果。

[實施例5]　抗RGMa中和抗體對脊髓之粒細胞浸潤的抑制效果藉由免疫組織化學染色來解析抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠脊髓之粒細胞浸潤的抑制效果。

(5-1)急性期重症型NMO大鼠模型的製作實驗係使用母Lewis大鼠。於MBP免疫後第10日對神經分數為1以下的個體以3 mg/kg的用量單次腹腔內投予抗AQP4抗體(小鼠抗AQP4單株抗體E5415A)，而誘導NMO病徵。

(5-2)分群及抗RGMa中和抗體的投予以抗AQP4抗體投予翌日之神經分數與體重之平均值的偏差於群間達最小的方式分成2群，以10 mg/kg的用量對尾靜脈內投予抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體(Palivizumab)。抗RGMa中和抗體處置群及等型控制組抗體處置群係各以6隻、健康無處置群則以4隻構成。

(5-3)免疫組織化學染色於抗AQP4抗體投予後第4日進行解剖。去血後採取脊髓，在4℃下於4%多聚甲醛中進行後固定1日。後固定後，進行藉由蔗糖取代之冷凍保護處置後，對OCT複合物包埋組織片。薄切成30μm而製成冷凍切片，作為1次抗體係使用兔子抗大鼠粒細胞血清(1：5000，LifeSpan BioSciences公司)、2次抗體則使用Alxa488標記驢抗兔子IgG抗體(1：500、Thermo Fisher Scientific公司)來進行免疫組織染色。染色切片的攝影係使用倒立型螢光顯微鏡Olympus IX83，使用影像解析軟體Image J software來測定粒細胞陽性面積相對於脊髓剖面的比例(%粒細胞陽性面積)。

(5-4)結果將抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠脊髓之粒細胞浸潤的抑制效果示於圖6。藉由在NMO發病後翌日投予抗RGMa中和抗體，可顯著抑制NMO大鼠脊髓之粒細胞浸潤。由以上結果判明，RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體可抑制急性期之視神經脊髓炎的病徵中可見之粒細胞之浸潤。由於對粒細胞之浸潤抑制作用研判有助於對急性期之視神經脊髓炎的效果表現，由此指出RGMa抑制物質，尤為抗RGMa中和抗體，藉由粒細胞浸潤抑制作用，顯示對急性期之視神經脊髓炎的效果。

[實施例6]　脊髓之AQP4脫落部位的RGMa表現藉由NMO大鼠脊髓的免疫組織化學染色，來檢測急性期重症型NMO大鼠模型中之RGMa的表現。

(6-1)急性期重症型NMO大鼠模型的製作實驗係使用母Lewis大鼠。以PBS使Guinea pig brain myelin basic protein溶解成1 mg/mL，以等量與含有1 mg/mL的死結核菌H37Ra的弗氏完全佐劑混合，藉由超音波震盪製成乳膠。皮下投予MBP乳膠(200 μl/head)(MBP免疫)，自此10日後，對神經分數為1以下的個體以3 mg/kg的用量單次腹腔內投予抗AQP4抗體(小鼠抗AQP4單株抗體E5415A)，而誘導NMO病徵。

(6-2)免疫組織化學染色於抗AQP4抗體投予後第1日進行解剖。去血後採取脊髓，在4℃下於4%多聚甲醛中進行後固定1日。後固定後，進行藉由蔗糖取代之冷凍保護處置後，對OCT複合物包埋組織片。薄切成30μm而製成冷凍切片，作為1次抗體係使用山羊抗RGMa抗體(1：100，R&D公司)及兔子抗AQP4抗體(1：1000，Cell Signaling Technology公司)、2次抗體則使用Alxa488標記驢抗山羊IgG抗體(1：500，Thermo Fisher Scientific公司)及Alxa647標記驢抗兔子IgG抗體(1：500，Thermo Fisher Scientific公司)來進行雙重免疫組織染色。染色切片的攝影係使用倒立型螢光顯微鏡Olympus IX83。

(6-3)結果將急性期重症型NMO大鼠脊髓切片的免疫組織化學染色影像示於圖7。於NMO病變之AQP4脫落部位可看出RGMa的強烈表現。

＜序列表的說明＞序列編號1：人類RGMa前驅蛋白質的胺基酸序列序列編號2：小鼠RGMa前驅蛋白質的胺基酸序列序列編號3：大鼠RGMa前驅蛋白質的胺基酸序列序列編號4：人類RGMa基因的DNA序列序列編號5：抗RGMa中和抗體r116A3之LCDR1的胺基酸序列序列編號6：抗RGMa中和抗體r116A3之LCDR2的胺基酸序列序列編號7：抗RGMa中和抗體r116A3之LCDR3的胺基酸序列序列編號8：抗RGMa中和抗體r116A3之HCDR1的胺基酸序列序列編號9：抗RGMa中和抗體r116A3之HCDR2的胺基酸序列序列編號10：抗RGMa中和抗體r116A3之HCDR3的胺基酸序列序列編號11：抗RGMa中和抗體r70E之LCDR1的胺基酸序列序列編號12：抗RGMa中和抗體r70E之LCDR2的胺基酸序列序列編號13：抗RGMa中和抗體r70E之LCDR3的胺基酸序列序列編號14：抗RGMa中和抗體r70E之HCDR1的胺基酸序列序列編號15：抗RGMa中和抗體r70E之HCDR2的胺基酸序列序列編號16：人類RGMa之抗原決定位的胺基酸序列序列編號17：抗RGMa中和抗體5F9之LCDR1的胺基酸序列序列編號18：抗RGMa中和抗體5F9之LCDR2的胺基酸序列序列編號19：抗RGMa中和抗體5F9之LCDR3的胺基酸序列序列編號20：抗RGMa中和抗體5F9之HCDR1的胺基酸序列序列編號21：抗RGMa中和抗體5F9之HCDR2的胺基酸序列序列編號22：抗RGMa中和抗體5F9之HCDR3的胺基酸序列序列編號23：抗RGMa中和抗體8D1之LCDR1的胺基酸序列序列編號24：抗RGMa中和抗體8D1之LCDR2的胺基酸序列序列編號25：抗RGMa中和抗體8D1之LCDR3的胺基酸序列序列編號26：抗RGMa中和抗體8D1之HCDR1的胺基酸序列序列編號27：抗RGMa中和抗體8D1之HCDR2的胺基酸序列序列編號28：抗RGMa中和抗體8D1之HCDR3的胺基酸序列序列編號29：抗RGMa中和抗體AE12-1之LCDR1的胺基酸序列序列編號30：抗RGMa中和抗體AE12-1之LCDR2的胺基酸序列序列編號31：抗RGMa中和抗體AE12-1之LCDR3的胺基酸序列序列編號32：抗RGMa中和抗體AE12-1之HCDR1的胺基酸序列序列編號33：抗RGMa中和抗體AE12-1之HCDR2的胺基酸序列序列編號34：抗RGMa中和抗體AE12-1之HCDR3的胺基酸序列序列編號35：抗RGMa中和抗體AE12-1Y之LCDR3的胺基酸序列序列編號36：人類RGMa之抗原決定位的胺基酸序列序列編號37：人類RGMa之抗原決定位的胺基酸序列序列編號38：人類RGMa之抗原決定位的胺基酸序列序列編號39：人類RGMa之抗原決定位的胺基酸序列序列編號40：抗RGMa中和抗體AE12-1F之LCDR3的胺基酸序列序列編號41：抗RGMa中和抗體AE12-1H之LCDR3的胺基酸序列序列編號42：抗RGMa中和抗體AE12-1L之LCDR3的胺基酸序列序列編號43：抗RGMa中和抗體AE12-1V之LCDR3的胺基酸序列序列編號44：抗RGMa中和抗體AE12-1I之LCDR3的胺基酸序列序列編號45：抗RGMa中和抗體AE12-1K之LCDR3的胺基酸序列序列編號46：大鼠・小鼠MOG的胺基酸序列(35-55) [產業上可利用性]

本發明中，由於RGMa抑制物質係有用於急性期之視神經脊髓炎的預防或治療，且有用於視神經脊髓炎的疼痛症狀的預防或治療，而於醫藥品產業中具有高利用價值。

[圖1]為表示抗RGMa中和抗體(有單純記載為抗RGMa抗體)對急性期重症型NMO大鼠模型之臨床急性惡化的治療效果的圖。各數據表示mean±S.E.M.。於圖表圖例的括弧內表示各群例數。 [圖2]為表示抗RGMa中和抗體對tEAE小鼠急性期之血液脊髓障壁破壞與神經症狀的恢復效果的圖。圖2之A表示抗RGMa中和抗體對tEAE小鼠急性期之BSCB破壞時釓向脊髓漏出之程度變化的恢復效果。各數據表示mean±S.E.M.，於圖表圖例的括弧內表示各群例數。於注入細胞激素7日後時間點未看出釓向脊髓漏出的個體及無法取得注入細胞激素14日後之MRI影像的個體係由解析數據中排除，統計解析係利用Bonferroni多重比較檢定來進行(***p＜0.001)。箭號表示抗體投予日。圖2之B表示抗RGMa中和抗體對神經症狀的恢復效果。各數據表示mean±S.E.M.，於圖表圖例的括弧內表示各群例數。箭號表示抗體投予日。統計解析係於各時間點藉由Mann-Whitney U檢定來進行解析(*p＜0.05、**p＜0.01)。 [圖3]為表示tEAE小鼠急性期之釓脊髓內漏出強度與神經症狀重症度的相關性的圖。按每個體對各數據作圖，統計解析係採用SPEARMAN順位相關分析。於圖表圖例的括弧內表示各群例數。有注入細胞激素14日後在MRI影像取得上發生缺漏的1例(抗RGMa中和抗體投予群)。 [圖4]為表示抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠模型之血液脊髓障壁破壞的治療效果的免疫組織化學染色影像及圖。定量解析之各數據表示mean±S.E.M.，利用Turkey之多重比較檢定進行統計解析(*p＜0.05)。 [圖5]為表示抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠模型之疼痛相關行動的效果的圖。各數據表示mean± S.E.M.，利用Turkey之多重比較檢定進行統計解析(***p＜0.001、**p＜0.01、*p＜0.05 vs 健康無處置群；##p＜0.01、#p＜0.05 vs NMO_等型控制組抗體處置群)。箭號表示抗RGMa中和抗體或等型控制組抗體的投予日。 [圖6]為表示抗RGMa中和抗體對急性期重症型NMO大鼠模型之脊髓的粒細胞浸潤的抑制效果的免疫組織化學染色影像及圖。定量解析之各數據表示mean±S.E.M.，利用Turkey之多重比較檢定進行統計解析(**p＜0.01、*p＜0.05)。 [圖7]為表示急性期重症型NMO大鼠模型之脊髓之AQP4脫落部位的RGMa表現的免疫組織化學染色影像。

Claims

一種抗RGMa中和抗體或其抗原結合片段之用途，其係用於製備治療急性期之視神經脊髓炎之藥物，且該抗RGMa中和抗體為可辨識選自序列編號16、序列編號36、序列編號37、序列編號38及序列編號39的胺基酸序列之抗體，且為選自下述(a)～(l)之抗體： (a)包含：含有包含序列編號5所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號6所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號7所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號8所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號9所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號10所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (b)包含：含有包含序列編號11所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號12所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號13所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號14所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號15所記載之胺基酸序列的HCDR2及胺基酸序列中包含SFG的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (c)包含：含有包含序列編號17所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號18所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號19所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號20所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號21所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號22所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (d)包含：含有包含序列編號23所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號24所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號25所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號26所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號27所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號28所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (e)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號31所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (f)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號35所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (g)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號40所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (h)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號41所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (i)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號42所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (j)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號43所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (k)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號44所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體，及 (l)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號45所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體。
如請求項1之用途，其中抗RGMa中和抗體為擬人化抗體。
一種抗RGMa中和抗體或其抗原結合片段之用途，其係用於製備治療急性期視神經脊髓炎的疼痛症狀之藥物，且該抗RGMa中和抗體為可辨識選自序列編號16、序列編號36、序列編號37、序列編號38及序列編號39的胺基酸序列之抗體，且為選自下述(a)～(l)之抗體： (a)包含：含有包含序列編號5所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號6所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號7所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號8所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號9所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號10所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (b)包含：含有包含序列編號11所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號12所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號13所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號14所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號15所記載之胺基酸序列的HCDR2及胺基酸序列中包含SFG的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (c)包含：含有包含序列編號17所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號18所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號19所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號20所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號21所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號22所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (d)包含：含有包含序列編號23所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號24所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號25所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號26所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號27所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號28所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (e)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號31所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (f)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號35所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (g)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號40所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (h)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號41所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (i)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號42所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (j)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號43所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體、 (k)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號44所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體，及 (l)包含：含有包含序列編號29所記載之胺基酸序列的LCDR1、包含序列編號30所記載之胺基酸序列的LCDR2及包含序列編號45所記載之胺基酸序列的LCDR3之輕鏈可變區，以及含有包含序列編號32所記載之胺基酸序列的HCDR1、包含序列編號33所記載之胺基酸序列的HCDR2及包含序列編號34所記載之胺基酸序列的HCDR3之重鏈可變區的抗RGMa中和抗體。
如請求項3之用途，其中抗RGMa中和抗體為擬人化抗體。