TWI845521B

TWI845521B - 適配體製劑

Info

Publication number: TWI845521B
Application number: TW108122887A
Authority: TW
Inventors: 中村義一; 秋田一雅; 優素福阿里
Original assignee: 日商力博美科股份有限公司
Priority date: 2018-06-29
Filing date: 2019-06-28
Publication date: 2024-06-21
Also published as: BR112020026634A2; US20210269802A1; WO2020004607A1; EP3815715A1; EP3815715A4; SG11202012933QA; KR102841342B1; EP3815715B1; AU2019292134B2; JP7340264B2; KR20210025083A; EP3815715C0; IL279595A; TW202012625A; CN112384246B; IL279595B1; MX2020014124A; ES2992308T3; CA3105002A1; JPWO2020004607A1

Abstract

本發明提供能長期安定保持適配體(尤其是針對FGF2之適配體)之活性的製劑處方，再者，提供以適配體(尤其是FGF2適配體)作為有效成分之醫藥製劑。

Description

適配體製劑

本發明係關於適配體製劑，尤其是以針對鹼性纖維母細胞增殖因子(FGF2)之適配體作為有效成分的適配體製劑。

近年，對RNA適配體之治療藥、診斷藥、試藥的應用受到矚目，有幾個RNA適配體正進入臨床階段或實用化階段。2004年12月，世界上首次的RNA適配體醫藥的Macugen(註冊商標)(一般名：哌加他尼(pegaptanib)鈉)係以作為老年性黃斑變性症之治療藥而被美國許可，在日本亦於2008年7月獲得許可。Macugen(註冊商標)係以針對VEGF之適配體作為活性本體。該適配體係由包含28個核酸分子之合成寡核苷酸所構成，在其5’末端與聚乙二醇(PEG)衍生物結合。

Macugen(註冊商標)之劑型為預裝填注射器的注射劑，係注射至玻璃體內。其為無色至略為著色之澄清水性注射液，添加有磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、等張化劑及pH調整劑。藉由此製劑處方，在25±2℃之加速試驗中經過6個月、或於5±3℃之長期保存試驗下經過36個月，均顯示安定地存在(非專利文獻1)。

另一方面，在本案提出申請之時間點，除了Macugen(註冊商標)以外，尚無以適配體作為有效成分之醫藥品存在，亦全然不知適配體製劑是以何種製劑處方為適宜。

申請人以針對FGF2之適配體作為有效成分，開發以老年黃斑變性症、軟骨發育不全症、或癌性疼痛作為適應症的醫藥品(專利文獻1及2)。本發明人等在FGF2適配體製劑之開發過程中，以被認為與Macugen(註冊商標)大致相同之製劑處方、或以磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)作為介質之製劑處方，得到所謂「無法維持FGF2適配體之活性」的結果。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開第2011/099576號

[專利文獻2]國際公開第2015/147017號

[非專利文獻]

[非專利文獻1]醫藥品訪談表格，老年黃斑變性症治療劑Macugen(註冊商標)玻璃體內注射用套組0.3mg，2015年3月(改訂第5版)

因此，本發明之目的係提供能長期安定地保持適配體(尤其是針對FGF2之適配體)之活性的製劑處方，再者，提供以適配體(尤其是FGF2適配體)作為有效成分的醫藥製劑。

本發明人等為達成上述之目的而重覆專心檢討的結果，成功地發現FGF2適配體之最佳製劑條件，於是完成本發明。

亦即，本發明提供下述者。

[1]一種水性液劑，係含有：與FGF2結合之適配體或其鹽、以及作為非電解質之滲透壓調整劑；其中，該適配體或其鹽為長期安定者。

[2]如[1]記載之水性液劑，其中，除了前述適配體或其鹽以外，實質上不含電解質。

[3]如[1]或[2]記載之水性液劑，其中，前述適配體係包含下式(1)所示之核苷酸序列，

N¹GGAN²ACUAGGGCN³UUAAN⁴GUN⁵ACCAGUGUN⁶ (1)

其中，N¹及N⁶各自獨立地表示0至複數個任意鹼基，N²、N³、N⁴及N⁵各自獨立地表示1個任意鹼基，惟尿嘧啶亦可為胸腺嘧啶；並且，前述適配體為下述(a)或(b)之任一者，

(a)在該適配體所含之核苷酸中，

(i)各嘧啶核苷酸之核糖之2’位為氟原子，並且

(ii)各嘌呤核苷酸之核糖之2’位為羥基者；

(b)在該(a)之適配體中，

(i)各嘧啶核苷酸之核糖之2’位的氟原子各自獨立地未被置換或被選自由氫原子、羥基及甲氧基所構成之群組中的原子或基置換，並且

(ii)各嘌呤核苷酸之核糖之2’位的羥基各自獨立地未被置換或被選自由氫原子、甲氧基及氟原子所構成之群組中的原子或基置換者。

[4]如[1]或[2]記載之水性液劑，其中，前述適配體係包含下式(3)所示的核苷酸序列，

N¹GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCN⁶² (3)

其中，N¹及N⁶²各自獨立地表示0至複數個任意鹼基。

[5]如[1]或[2]記載之水性液劑，其中，前述適配體係包含序列編號3、8、9、10或12所示的任一種核苷酸序列。

[6]如[1]至[5]中任一項記載之水性液劑，其中，適配體之濃度為1至60mg/mL。

[7]如[1]至[6]中任一項記載之水性液劑，其中，滲透壓調整劑之調配比率為水性液劑總量的2至7.5%(w/v)。

[8]如[1]至[7]中任一項記載之水性液劑，其中，滲透壓調整劑為甘露醇。

[9]如[8]記載之水性液劑，其中，相對於1mg之適配體，以1至50mg之比率含有甘露醇。

[10]如[1]至[9]中任一項記載之水性液劑，其係於5℃以下保存。

[11]如[1]至[10]中任一項記載之水性液劑，其於4℃保存3個月後的單體適配體的比率為80%以上。

[12]如[1]至[11]中任一項記載之水性液劑，其為注射劑。

[13]如[1]至[12]中任一項記載之水性液劑，其係用於伴隨血管新生之疾病、骨/軟骨疾病或疼痛的預防或治療。

[14]一種伴隨血管新生之疾病、骨/軟骨疾病或疼痛的預防或治療方法，其包含將[1]至[12]中任一項記載之水性液劑投予至對象。

[15]如[1]至[12]中任一項記載之水性液劑，其係為了預防或治療伴隨血管新生之疾病、骨‧軟骨疾病或疼痛而使用者。

若依照本發明，由於能將作為有效成分的針對FGF2之適配體或其鹽以水性液劑之形態長期安定地保存，因此可提供操作容易的適配體製劑。

本發明提供以針對FGF2之適配體或其鹽作為有效成分且可將該適配體或其鹽長期安定保持的醫藥製劑(以下，亦稱為「本發明之適配體製劑」)。其中，所謂「長期安定」意指在玻璃瓶中封入該製劑並於4℃保存3個月後的單體適配體之比率為70%以上。單體適配體之比率，係使用尺寸排除層析法(size exclusion chromatography)，依照以下之條件，將單體及多聚體予以分離/檢測而算出(單體之峰面積)/(單體及多聚體之峰面積之和)×100(%)的值。

裝置：Waters公司製ACQUITY UPLC H-Class Bio

檢測器：Waters公司製TUV檢測器

管柱：Waters公司製ACQUITY UPLC BEH200 SEC管柱

樣本濃度：0.2mg/mL

注入量：5μL

溶離液：10%乙腈/PBS

流速：0.3mL/分鐘

管柱溫度：25℃

本發明之適配體製劑係含有：作為有效成分的針對FGF2之適配體或其鹽、以及作為非電解質之滲透壓調整劑。

適配體意指對預定之標的分子具有結合活性的核酸分子。適配體藉由結合於預定之標的分子，可阻礙該標的分子之活性。作為本發明之適配體製劑之有效成分的適配體，為對於FGF2具有結合活性的適配體。在較佳之實施態樣中，該適配體為能與FGF2結合而阻礙FGF2與FGF受體結合的適配體。亦即，該適配體具有對FGF2之阻礙活性。

本發明中所用的適配體為與FGF2結合之適配體，更佳者為能與FGF2結合而阻礙FGF2與FGF受體之結合的適配體。本發明中所用的適配體是否能阻礙FGF2與FGF受體之結合，可藉由利用例如實施例1等之表面電漿子共振法的試驗而評價。

針對FGF2之適配體係無特別限制，例如為國際公開第2015/147017號記載之適配體，具體而言，該適配體係包含下式(1)所表示之核苷酸序列，惟尿嘧啶亦可為胸腺嘧啶，N¹GGAN²ACUAGGGCN³UUAAN⁴GUN⁵ACCAGUGUN⁶ (1)並且，該適配體為下述(a)或(b)之任一者，

(a)在該適配體所含之核苷酸中，

(i)各嘧啶核苷酸之核糖的2’位為氟原子，並且

(ii)各嘌呤核苷酸之核糖的2’位為羥基者；

(b)在該(a)之適配體中，

上述式(1)中，N¹及N⁶各自獨立地表示0至複數個任意鹼基，N²、N³、N⁴及N⁵獨立地表示1個任意鹼基。在本說明書中「鹼基」意指構成核酸的腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)之任一種。

N¹之鹼基數，只要包含式(1)所示之核苷酸序列的適配體可與FGF2結合，將無特別限定，例如，可為0至約10個、0至9個、0至8個、0至7個、0至6個、0至5個、0至4個、0至3個、0至2個等，較佳為0至2個。

關於N⁶之鹼基數，亦與N¹同樣地無特別限定，例如，可為0至約10個、0至9個、0至8個、0至7個、0至6個、0至5個、0至4個、0至3個等，較佳為0至10個、3至9個、或5至8個。

在較佳之實施態樣中，上述式(1)中，

N¹為G、GG、AG、C或空白，

N²為A或U，

N³為G、C或A，

N⁴為G、C或U，

N⁵為G或U，

N⁶為UUCN⁶¹或AGUCN⁶²(式中，N⁶¹及N⁶²各自獨立地為0至複數個任意鹼基)。其中，N¹為「空白」時係意指式(1)中N¹不存在，亦即N¹為0個鹼基。

N⁶¹之鹼基數係無特別限定，例如，可為0至約10個、0至7個、0至6個、0至5個、0至4個等，較佳可為0至5個、1至5個、或2至4個。

關於N⁶²之鹼基數，亦無特別限定，例如，可為0至約10個、0至7個、0至5個、0至4個、0至3個等，較佳可為0至5個、0至4個、或0至3個。

在其他較佳實施態樣中，上述式(1)中，

N¹為G、GG、AG或空白，

N²為A或U，

N³為G或A，

N⁴為C或U，

N⁵為G或U，

N⁶為UUCN⁶¹或AGUCN⁶²(式中，N⁶¹及N⁶²與上述同義)。

在較佳之實施態樣中，本發明中所用的適配體係包含下式(2)或(3)所示之核苷酸序列，更佳為包含式(3)所示之核苷酸序列，

GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCN⁶¹ (2)

N¹GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCN⁶² (3)

式中，N¹、N⁶¹及N⁶²與前述同義。

在較佳之實施態樣中，本發明中所用的適配體係包含序列編號1至12之任一項所表示的核苷酸序列。以下，展示序列編號1至12所示之核苷酸序列(惟尿嘧啶亦可為胸腺嘧啶)。以下，A、G、C及U分別表示核苷酸之鹼基為腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶及尿嘧啶。

序列編號1：GGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCUCGA

序列編號2：GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCUCGA

序列編號3：GGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCC

序列編號4：GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCC

序列編號5：GGGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCCC

序列編號6：AGGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCC

序列編號7：GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCCC

序列編號8：CGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCG

序列編號9：CCGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCGG

序列編號10：GGGAUACUAGGGCGUUAACGUUACCAGUGUAGUCCC

序列編號11：GGGAUACUAGGGCCUUAAGGUUACCAGUGUAGUCCC

序列編號12：GGGAUACUAGGGCAUUUAUGUUACCAGUGUAGUCCC

在較佳之一實施態樣中，本發明中所用的適配體係包含序列編號1、3、4、5、6、8、9、10或12，更佳為包含序列編號3、8、9、10或12所示之核苷酸序列。

在其他較佳之實施態樣中，本發明中所用的適配體係包含序列編號2或7所示之核苷酸序列(包含於上述式(2))。

在進一步其他較佳之實施態樣中，本發明中所用的適配體係包含序列編號1、3、4、5、6或8所示之核苷酸序列(包含於上述式(3))。

在一實施態樣中，本發明中所用的適配體，可包含在上述任一核苷酸序列中之1或複數個核苷酸被置換、刪除、插入或附加而成的核苷酸序列，只要其依然能與FGF2結合，亦即該適配體可為下述(a)或(b)中之任一者：

(a)在該適配體所含之核苷酸中，

(i)各嘧啶核苷酸之核糖的2’位為氟原子，並且

(ii)各嘌呤核苷酸之核糖的2’位為羥基者；

(b)在該(a)之適配體中，

其中，上述置換、刪除、插入或附加之核苷酸數，只要在置換、刪除、插入或附加後依然能與FGF2結合，將無特別限定，可為例如1至約10個，較佳為1至6個，更佳為1至5個，進一步更佳為1至4個，再進一步更佳為1至3個、最佳為1個或2個。核苷酸被置換、刪除、插入或附加之部位，亦只要在置換、刪除、插入或附加後依然能與FGF2結合，將無特別限定，不過在上述式(1)、(2)及(3)中，在以1種核苷酸(亦即，A、G、C或U)所特定的部位，係於1至3處(較佳為1或2處，更佳為1處)進行核苷酸置換、刪除、插入或附加。另一方面，式(1)、(2)及(3)中，於可採取複數種核苷酸之部位(亦即，N¹、N²、N³、N⁴、N⁵、N⁶、N⁶¹或N⁶²)，亦容許更多核苷酸(例如1至約10個，較佳為1至6個，更佳為1至5個，進一步更佳為1至4個)之置換、刪除、插入或附加。例如，若將以序列編號3表示之核苷酸序列作為原始序列，則序列編號1為序列編號3之3’末端之CC被UCGA置換者，序列編號4為序列編號3之兩末端分別各刪除1核苷酸者，序列編號5為分別在序列編號3之5’末端附加G並在3’末端附加C者，序列編號6為序列編號3之5’末端附加A者，序列編號8為分別將序列編號3之5’末端之G置換為C並將3’末端之C置換為G者，序列編號9為分別將序列編號3之5’末端之GG置換為CC並將3’末端之CC置換為GG者，序列編號10為分別將序列編號3之14號的A置換為G並將19號之U置換為C者，序列編號12為將序列編號3之17號的A置換為U者。

本發明中所用的適配體之長度無特別限定，通常可為約10至約200個核苷酸，例如，可為約20個核苷酸以上(例如25個核苷酸以上、30個核苷酸以上、31個核苷酸以上、32個核苷酸以上、33個核苷酸以上)，較佳為25個核苷酸以上，更佳為30個核苷酸以上，進一步更佳為33個核苷酸以上。此外，例如，可為約100個核苷酸以下，通常為約80個核苷酸以下，較佳為約70個核苷酸以下，更佳為約60個核苷酸以下，進一步更佳為約50個核苷酸以下，再進一步更佳為約45個核苷酸以下(例如44個核苷酸以下、43個核苷酸以下、42個核苷酸以下、41個核苷酸以下、40個核苷酸以下)。若總核苷酸數少，則更容易進行化學合成及大量生產，且成本方面之優點亦大。另外，可認為化學修飾亦容易，活體內安定性亦高，毒性亦低。

因此，就本發明中所用的適配體之長度而言，通常可為約10至約200個核苷酸，較佳為20至80個核苷酸，更佳為25至60個核苷酸，進一步更佳為25至50個核苷酸，最佳為30至45個核苷酸。

此外，本發明中所用的適配體可為選自由「包含上述式(1)所示之核苷酸序列之適配體(適配體(A))的複數個連結物」、「包含在上述式(1)所示之核苷酸序列中1或複數個核苷酸被置換、刪除、插入或附加之核苷酸序列之適配體(適配體(B))的複數個連結物」、以及「由1或複數個適配體(A)與1或複數個適配體(B)所成之連結物」所構成之群組中的連結物。此等連結物亦可與FGF2結合。

其中，連結可藉由串聯結合而進行。此外，連結時亦可利用連接子(linker)。就連接子而言，可列舉核苷酸鏈(例如1至約20個核苷酸)、非核苷酸鏈(例如-(CH₂)_n-連接子、-(CH₂CH₂O)_n-連接子、六聚乙二醇連接子、TEG連接子、包含肽之連接子、包含-S-S-鍵之連接子、包含-CONH-鍵之連接子、包含-OPO₃-鍵之連接子)。上述複數個連結物中之複數個只要為2個以上，即無特別限定，例如可為2個、3個或4個。

本發明中所用的適配體所含之各核苷酸，可分別相同或相異，可為在核糖(例如嘧啶核苷酸之核糖、嘌呤核苷酸之核糖)之2’位中含有羥基之核苷酸(亦即，天然之核糖核苷酸)，或可為在核糖之2’位中羥基被任意之原子或基置換(修飾)的核苷酸(在本說明書中，有時被記載為「修飾核苷酸」)。

就此等任意之原子或基而言，例如，可列舉氫原子、氟原子或-O-烷基(例如-O-Me基)、-O-醯基(例如-O-CHO基)、胺基(例如-NH₂基)。此外，本發明中所用的適配體中，至少1種(例如1、2、3或4種)核苷酸可為在核糖之2’位中包含上述之任意之原子或基(例如選自由氫原子、氟原子、羥基及-O-Me基所構成之群組中的至少2種(例如2、3或4種)基)的修飾核苷酸。

另外，本發明中所用的適配體中，全部的嘧啶核苷酸可皆為核糖之2’位為氟原子的核苷酸，或者是該氟原子可相同或相異地未被置換或被上述之任意之原子或基(較佳為選自由氫原子、羥基及甲氧基所構成之群組中的原子或基)置換的核苷酸。尤其，就本發明中所用的適配體之製造方法而言，當採取使用DuraSeribe^TM T7 Transeription Kit(Epicentre公司製)之製造方法時，可得到全部的嘧啶核苷酸之核糖2’位皆氟化的適配體。氟原子被其他上述原子或基置換之適配體，可依照後述之方法製造。

此外，在本發明中所用的適配體中，全部的嘌呤核苷酸可皆為核糖之2’位為羥基的核苷酸，或者是該羥基可相同或相異地未被置換或被上述之任意之原子或基(較佳為選自由氫原子、甲氧基及氟原子所構成之群組中的原子或基)置換之核苷酸。羥基被其他上述原子或基置換之適配體，可依照後述之方法製造。

另外，本發明中所用的適配體中，全部的嘧啶核苷酸可皆為核糖之2’位的氟原子被上述之任意之原子或基(例如選自由氫原子、羥基及-O-Me基所構成之群組中的相同的原子或基)置換之核苷酸。

再者，本發明中所用的適配體中，全部的嘌呤核苷酸可皆為核糖之2’位的羥基被上述之任意之原子或基(例如選自由氫原子、氟原子及-O-Me基所構成之群組中的相同的原子或基)置換之核苷酸。

在較佳之實施態樣中，本發明中所用的適配體所含之各嘧啶核苷酸皆為核糖之2’位中含有氟原子的核苷酸，且各嘌呤核苷酸皆為核糖之2’位中含有羥基的核苷酸。在其他實施態樣中，上述各嘧啶核苷酸之核糖之2’位的氟原子可各自獨立地被選自由氫原子、羥基及甲氧基所構成之群組中的原子或基置換，且上述各嘌呤核苷酸之核糖的2’位之羥基可各自獨立地被選自由氫原子、甲氧基及氟原子構成之群組的原子或基置換。

再者，在本說明書中，雖然將構成適配體之核苷酸假設為RNA(亦即將糖基假設為核糖)來說明對核苷酸中之糖基修飾的態樣，然而，此並非意指欲將DNA從構成適配體之核苷酸中排除，亦可改解讀為對DNA作適宜的修飾。例如，在構成適配體之核苷酸為DNA之情況下，「將核糖之2’位之羥基置換成X」可改解讀為「將去氧核糖之2’位的氫原子置換成X」。

在本發明中所用的適配體中，藉由將尿嘧啶置換為胸腺嘧啶，可提高對FGF2之結合性、FGF2與FGF受體之結合阻礙活性、適配體之安定性、藥物送達性、血液中之安定性等。

此外，在本發明中所用的適配體中，核苷酸中之磷酸二酯鍵之1或複數個(例如，1至2個、1至3個、1至4個、1至5個)核苷酸可被任意之置換基修飾或置換。例如，磷酸二酯鍵可被置換成硫代磷酸酯(phosphorothioate)鍵、二硫代磷酸酯(phosphorodithioate)鍵、烷基膦酸酯鍵、胺基磷酸酯(phosphoroamidate)鍵等。其中，例如「核苷酸被置換成硫代磷酸酯鍵」意指為在鄰接的核苷酸之間之鍵結部位的磷酸基被硫化，亦即表示磷酸二酯鍵被改變為硫代磷酸酯鍵。

另外，在本發明中所用的適配體中，為了將適配體安定化並使其活性提高，可將1或複數個(例如，1至2個、1至3個、1至4個、1至5個)核苷酸以架橋化核酸(Bridged Nucleic Acid(BNA)或鎖核酸(Locked Nucleic Acid(LNA)))置換。其中，「架橋化核酸」意指將核酸之自由度藉由分子內架橋來拘束，而提高對互補序列之結合親和性，且保持獲得核酸酶耐性之構造者，例如，可列舉2’,4’-BNA(LNA)、2’-O,4’-C-伸乙基-架橋化核酸(ENA)等，惟不受此等限定。

本發明中所用的適配體，為了提高對FGF2之結合性、安定性、藥物送達性等，亦可為各核苷酸之糖殘基(例如核糖)被修飾者。就糖殘基中被修飾之部位而言，例如，可列舉將糖殘基之2’位、3’位及/或4’位之氧原子置換為其他原子者等。就修飾之種類而言，例如，可列舉氟化、O-烷基化(例如O-甲基化、O-乙基化)、O-烯丙基化、S-烷基化(例如S-甲基化、S-乙基化)、S-烯丙基化、胺基化(例如-NH₂)。另外，可列舉將4’位之氧置換為硫的4’-SRNA、將2’位及4’位經由亞甲基而架橋之LNA(鎖核酸)、將3’位之羥基置換為胺基之3’-N-胺基磷酸酯核酸等例子。本發明中所用的適配體，視其製造方法而有將嘧啶核苷酸之核糖2’位的氧原子進行一定之修飾而製造的情況，例如，在採取使用DuraScribe^TMT7 Transcription Kit(Epicentre公司製)之製造方法的情況下，較佳為製造全部的嘧啶核苷酸之核糖2’位經氟化的適配體。因此，藉由對所得到之適配體隨後施加此種糖殘基之改變，可製造鹼基序列相同但活性提高的各種變異之適配體。依據以上之說明，本發明中所用的適配體較佳可為至少一個核苷酸之糖殘基被修飾的適配體。此種糖殘基之改變可藉由本身周知之方法進行(例如請參照Sproat et al.,(1991),Nucl.Acid.Res.19,733-738；Cotton et al.,(1991),Nucl.Acid.Res.19,2629-2635；Hobbs et al.,(1973),Biochemistry 12,5138-5145)。具體而言，以全部嘧啶核苷酸之核糖2’位的羥基均被置換為氟之適配體為基礎，可製造將核糖2’位之羥基被選自由氫原子、羥基及甲氧基所構成之群組中的原子或基置換之適配體。

此外，本發明中所用的適配體，為了提高對FGF2之結合性、多聚體化之防止、安定性、藥物送達性等，亦可為將核酸鹼基(例如嘌呤、嘧啶)改變(例如化學性置換)者。就此種改變而言，例如，可列舉5位嘧啶改變、6及/或8位嘌呤改變、藉由環外胺之改變、藉由4-硫代尿苷之置換、藉由5-溴或5-碘-尿嘧啶之置換。另外，為了能對核酸酶及水解具有耐性，亦可將本發明中所用的適配體所含之磷酸基改變。例如，P(O)O基亦可被P(O)S(硫代)、P(S)S(二硫代)、P(O)N(R)R’(醯胺化)、P(O)R、P(O)OR、CO或CH₂(甲縮醛)或3’-胺(-NH-CH₂-CH₂-)置換[其中各個R或R’獨立地為H，或者是經取代或未經取代之烷基(例如甲基、乙基)]。

就連結基而言，可例示-O-、-N-或-S-，經由此等連結基，可與鄰接之核苷酸結合。

此外，所謂改變可包含如封端(capping)的3’及5’之改變。

就改變而言，可進一步藉由將聚乙二醇(PEG)、胺基酸、肽、反向dT(inverted dT)、核酸、核苷、肉豆蔻醯基、石膽酸-油基(Lithocolic-oleyl)、二十二醯基(Docosanyl)、月桂醯基、硬脂醯基、棕櫚醯基、油醯基、亞麻油醯基(Linoleoyl)、其他脂質、類固醇、膽固醇、咖啡因、維生素、色素、螢光物質、抗癌劑、毒素、酵素、放射性物質、生物素等附加於末端而進行。關於此種改變，例如請參照美國專利第5,660,985號及第5,756,703號。

尤其，在藉由PEG之末端附加而進行改變的情況下，PEG之分子量無特別限定，惟較佳為1000至100000，更佳為30000至90000。PEG可為直鏈狀，亦可為分枝成二個以上之鏈者(多臂PEG)。PEG之末端附加係有用於防止後述的適配體之多聚體化。

就此種PEG而言，無特別限定，若為本發明所屬技術領域中具有通常知識者，可適宜選擇市售或周知之PEG而使用(例如請參照http：//www.peg-drug.com/peg_product/branched.html)，就適合本發明中所用之適配體的PEG之較佳例而言，具體言之，可列舉分子量40000之2分枝GS型PEG(SUNBRIGHT GL2-400GS日油製)、分子量40000之2分枝TS型PEG(SUNBRIGHT GL2-400TS日油製)、分子量40000之4分枝TS型PEG(SUNBRIGHT GL4-400TS日油製)、分子量80000之2分枝TS型PEG(SUNBRIGHT GL2-800TS日油製)、或分子量80000之4分枝TS型PEG(SUNBRIGHT GL4-800TS日油製)等。

在此情況下，本發明中所用的適配體中，PEG雖可直接附加於末端，但較佳係於其末端附加具有可與PEG結合之基的連接子等，再經由該連接子，將PEG附加於本發明中所用的適配體。

就PEG與本發明中所用的適配體之連接子而言，無特別限定，可依據結合部位或PEG之種類等而適宜選擇碳鏈數或官能基等。就此種連接子而言，可列舉如具有胺基之連接子，具體而言，在附加於5’末端之情況下可例示ssH Linker(SAFC)或DMS(O)MT-AMINO-MODIFIER(GLENRESEARCH)，在附加於3’末端之情況下可例示TFA Amino C-6 lcaa CPG(ChemGenes)等。在選擇此連接子之情況下，對於PEG，例如藉由附加N-羥基琥珀醯亞胺之活性基並使其與連接子側之胺基進行反應，而可將本發明中所用的適配體與PEG藉由連接子而結合。

再者，就PEG或連接子而言，較佳係可使用市售者。此外，關於PEG、連接子及本發明中所用的適配體之結合的反應條件等，若為本發明所屬技術領域中具有通常知識者，即可適宜設定。

就本發明中所用的適配體之更佳實施態樣而言，包含序列編號3所表示之核苷酸序列的適配體ID1：GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT；

包含序列編號8所表示之核苷酸序列的適配體ID2：GL2-400TS-C6-C(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)G(M)-idT；

包含序列編號9所表示之核苷酸序列的適配體ID3：GL2-400TS-C6-C(M)C(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)G(M)G(M)-idT；

包含序列編號10所表示之核苷酸序列的適配體ID4： GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)G(M)U(M)U(F)A(M)A(M)C(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT；

包含序列編號12所表示之核苷酸序列的適配體ID5：GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)U(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT；及

包含序列編號3所表示之核苷酸序列的適配體ID6：idT-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-C6-GL2-400TS(上述各式中，各核苷酸中之括弧表示核糖之2’位的修飾，F表示氟原子，M表示甲氧基)。

此等適配體中，由於使用任一者均可在本發明之適配體製劑的構成中安定地存在，故可適合作為本發明之適配體製劑的有效成分。

本發明中所用的適配體，可為游離體，亦可為其醫藥上容許之鹽。就此種鹽而言，可列舉金屬鹽、銨鹽、有機胺加成鹽、胺基酸加成鹽等。就金屬鹽而言，可列舉鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽，鎂鹽、鈣鹽等鹼土金屬鹽，鋁鹽、鋅鹽等。就銨鹽而言，可列舉銨、四甲基銨等之鹽。就有機胺加成鹽而言，可列舉參羥基胺基甲烷等之鹽。就胺基酸加成鹽而言，可列舉離胺酸、精胺酸、組胺酸、色胺酸、鳥胺酸等之鹽。

本發明中所用的針對FGF2之適配體的濃度，無特別限定，只要能使本發明之適配體製劑可達到目的之效能效果，含有多少均可。在本說明書中，「適配體之濃度」意指構成適配體分子之以5’→3’磷酸鍵所連結的核酸部分之重量在製劑之總體積中所佔的比率(mg/mL)。就該適配體之濃度而言，例如，可列舉1至60mg/mL。

若針對FGF2之適配體的濃度超過20mg/mL，則即使在通常之保存溫度(即4至5℃)，亦有容易生成該適配體之多聚體的傾向。針對FGF2之適配體，雖然在以單體存在的情況會結合於FGF2而阻礙FGF2之功能並發揮其藥效，但若多聚體化，則在使用BIAcore之檢定中會未觀察到與FGF2的結合，而可認為並未阻礙FGF2之功能(請參照實施例4)。在適配體之濃度低的情況，分子間距離遠，多聚體化之傾向低，但若適配體濃度超過20mg/mL，則即使在通常之保存溫度(即4至5℃)下亦會多聚體化，結果對FGF2之結合活性就整體而言有降低之傾向(請參照實施例5)。因此，本發明之適配體製劑中的FGF2適配體濃度之上限，期望為不超過20mg/mL之濃度。此外，在本發明之適配體製劑之適配體濃度低時，有無法得到作為注射劑之效果的情況。因此，本發明之適配體製劑中的FGF2適配體濃度之下限，只要為能得到作為注射劑之效果的濃度，即無特別限定，例如期望為1mg/mL以上之濃度。

本發明之適配體製劑的劑型，只要為水性液劑，無特別限定，而較佳為注射劑。由於本發明之適配體製劑為水性液劑，故作為有效成分的針對FGF2之適配體係溶解於溶劑中而存在。

通常周知，適配體為了維持其高次構造，必須加入作為強電解質之無機鹽。在現今上市的唯一的適配體醫藥品之Macugen(註冊商標)中，有添加磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、等張化劑及pH調整劑。在此狀態下，Macugen於25±±2℃之加速試驗中顯示安定地存在歷經6個月，於5±3℃之長期保存試驗中顯示安定地存在歷經36個月。因此，本發明所屬技術領域中具有通常知識者自然會認為，為了在保持適配體之高次構造之情況下使其安定地存在於注射劑中，無機鹽(電解質)係為必要者。

然而，如後述之實施例所示，可知本發明之有效成分(即上述針對FGF2之適配體)若使用PBS或生理食鹽水作為溶劑，則在作為強電解質之無機鹽的影響下會失去安定性，有形成多聚體之傾向，結果失去對FGF2之結合活性。於是，本發明人等使用不含無機鹽(電解質)之水作為溶劑時，意外地發現可抑制FGF2適配體之多聚體化，並使FGF2適配體以單體存在的比率增大(請參照實施例3)。

雖不期望拘泥於任何理論，然而，在將FGF2適配體溶解於水中之情況下，會如實施例1所示而無法測定FGF2適配體之Tm值，此外，如實施例2所示而無法觀測到NMR中之質子位移，所以，可推測溶解於水中之FGF2適配體係以單體伸展之狀態存在。亦即，可推測藉由使用不含無機鹽之水作為溶劑，使被視為活性構築所需的適配體的高次構造被破壞、變性，而以單股狀態存在，因此而可防止失活(多聚體化)。並且，由於如實施例4及5所示，若溶解於含有電解質之溶液中並實施表面電漿子共振(SPR)檢定時，FGF2適配體會保持與FGF2之結合活性，所以，若將溶解於水中之FGF2適配體投予至體內，則藉由體液中所存在的電解質之作用，可再構築適配體活性所需之高次構造，而發揮活性。

如此，藉由溶解在不含電解質之溶劑中，刻意使FGF2適配體的高次構造崩壞並成為伸展的狀態，而可於長期保存中防止多聚體化，在投予後藉由調整至生理之鹽濃度，使高次構造再構築，而發揮藥效的製劑處方，其結果可使FGF2適配體之活性長期維持。本發明係藉由對此種溶液中的適配體之存在形式進行詳細地驗證而完成，即使本發明所屬技術領域中具有通常知識者亦無法輕易地完成之。

依照以上所述，就本發明之適配體製劑中所用的溶劑而言，係以不含無機鹽(電解質)之水性溶劑為較佳，特佳為水。

本發明之適配體製劑，如上所述，由於使用不含無機鹽(電解質)之溶劑，故滲透壓低，無法直接以原樣作為注射劑使用。因此，本發明之適配體製劑，為了將對於血漿滲透壓之滲透壓比調至1以上(較佳為1至3)，係以包含作為非電解質之滲透壓調整劑(滲透劑(osmolyte))為其特徵。

就本發明之適配體製劑中所用的滲透壓調整劑而言，若為非電解質，即無特別限定，只要排除無機離子類(鉀離子、氯化物離子等)，即可使用任何一般所用的滲透壓調整劑。就此種滲透壓調整劑而言，可列舉多元醇(甘油、甘露醇、海藻糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、肌醇等)、胺基酸類(丙胺酸、甘胺酸、麩胺酸、脯胺酸、GABA、牛磺酸、四氫嘧啶(ectoine)等)、甲基銨類(TMAO、膽鹼、乙醯基膽鹼、甘胺酸甜菜鹼、GPC、DMSP等)、尿素類等，較佳係使用多元醇，更佳係使用甘露醇。

滲透壓調整劑之量無特別限定，若為本發明所屬技術領域中具有通常知識者，即可依據製劑中所含的FGF2適配體之量、所使用的滲透壓調整劑之種類(分子量)、目標滲透壓而適宜變更。例如使用甘露醇作為滲透壓調整劑並將對於生理食鹽水之滲透壓比設定為約1的情況下，滲透壓調整劑於注射劑總量中的調配比率為2至7.5%(w/v)。更具體而言，在對於生理食鹽水之滲透壓比調成1的情況下，若上述FGF2適配體之濃度為2mg/ml，則甘露醇之調配比率為4.9%，若上述FGF2適配體之濃度為20mg/ml，則甘露醇之調配比率成為3.6%。

本發明之適配體製劑中，除了作為有效成分之針對FGF2之適配體或其鹽以外，以實質上不含電解質為較佳。其中，所謂「實質上不含」意指在能使製劑中之FGF2適配體長期安定地保存的範圍內亦可含有少量之電解質。更佳為本發明之適配體製劑中，除了含有作為有效成分之針對FGF2之適配體或其鹽以外，不含電解質。

本發明之適配體製劑，視需要可進一步含有醫藥上容許之添加劑。就此種添加劑而言，例如，可列舉安定化劑、保存劑、助溶劑、緩衝劑、pH調整劑、無痛化劑等，較佳係可使用以往作為注射劑用之添加劑而周知慣用的屬於非電解質類的醫藥添加物。

本發明之適配體製劑之pH無特別限制，不過在作為注射劑使用時則期望為中性附近之pH，例如可適宜選擇pH5至9，較佳為6至8之範圍內。若將作為有效成分的針對FGF2之適配體或其鹽溶解於水中，由於溶液之pH成為上述範圍內，故本發明之適配體製劑中不需要刻意添加作為電解質之pH調整劑、緩衝劑。

在本發明之適配體製劑中，只要不對FGF2適配體之活性或安定性有不良影響，亦可調配其他活性成分。就此種活性成分而言，亦可含有作為伴隨血管新生之疾病等之治療藥的McGen(註冊商標)、樂舒晴(Lucentis(註冊商標))、Airia(註冊商標)、癌思停(Avastin(註冊商標))等VGEF阻礙劑、類固醇等抗炎症劑，作為骨疾病治療藥等之諾德欣(Norditropin(註冊商標))、增若托平(Genotropin(註冊商標))等人類成長荷爾蒙製劑、嗎啡等鎮痛/鎮靜劑。可列舉老年黃斑變性症等伴隨血管新生的疾病、骨質疏鬆症、風濕性關節炎、變形性關節症、骨折等骨/軟骨疾病、疼痛之治療用或預防用的醫藥化合物。

本發明之適配體製劑，藉由採取上述之構成，即使於4℃中，亦可有3個月以上為安定。其中，所謂「安定」意指如上述般在玻璃瓶中將該製劑封入並於4℃保管後，製劑中所存在的單體適配體之比率為70%以上。較佳為本發明之適配體製劑於4℃下保存3個月後，製劑中之單體適配體的比率為80%以上。此外，本發明之適配體製劑，在暴露於白色螢光燈或近紫外螢光燈之狀態下亦安定。

因此，本發明之適配體製劑係以維持原樣之水性液劑的形態，較佳為以已預充填之注射器劑或藥筒(cartridge)劑等注射劑的劑型，藉由冷藏保存於5℃以下而可長期安定地保存，操作極為容易。

本發明之適配體製劑，較佳可使用於作為例如老年黃斑變性症等伴隨血管新生的疾病、骨質疏鬆症、風濕性關節炎、變形性關節症、骨折等骨/軟骨疾病、疼痛之治療用或預防用的醫藥。

本發明之適配體製劑可藉由非經口方式(例如靜脈內投予、皮下投予、肌肉內投予、局部投予、腹腔內投予、經鼻投予、經肺投予、點眼投予等)來投予。本發明之適配體製劑的投予量，係依據FGF2適配體之種類/活性、疾病之嚴重度、作為投予對象之動物種類、投予對象之藥物接受性、體重、年齡等而異，通常，就成人每1日有效成分(適配體之寡核苷酸部分)量而言，可為約0.0001至約100mg/kg，例如約0.0001至約10mg/kg，較佳為約0.005至約1mg/kg。

[實施例]

以下，雖然藉由展示實施例而更詳細地說明，然而本發明不受此等實施例所限定。

實施例1(溶劑中之FGF2適配體的構造解析：Tm值之決定)

將適配體ID1所表示之適配體的構造展示如下。大寫文字表示RNA，小寫文字表示DNA，idT表示反向dT(inverted dT)。再者、各核苷酸中之括弧表示其2’位之修飾，F表示氟原子，M表示O-甲基。C6為-(CH₂)₆-連接子，PEG40TS2為分子量40000之2分枝TS型聚乙二醇(SUNBRIGHT GL2-400TS日油製)。

適配體ID1：GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT

將適配體ID1所表示之適配體，以水溶解成為0.1mg/mL，或以PBS或生理食鹽水溶解成為0.06mg/mL。將所得到之溶液於95℃加熱5分鐘後，冷卻至室溫，充填於石英玻璃製之光析管(cuvette)中。將溫度從20℃變化至90℃，同時以分光光度計測定UV吸收，決定Tm值。

結果，在PBS中為60.1℃，在生理食鹽水中為69.6℃。另一方面，在水中則未觀測到特定之Tm值。由此可推想，適配體ID1所表示之適配體，在通常可成為注射劑之溶劑的PBS或生理食鹽水中，會藉由分子間相互作用而形成高次構造。此外，推想適配體ID1所表示之適配體，在不含電解質之水中，於分子間、分子內未形成鹼基對，並且未產生高次構造。

實施例2(重水中之FGF2適配體的構造解析：NMR光譜之測定)

將20mg之適配體ID1所表示之適配體充填於玻璃製小瓶(vial)中，使其溶解於約1mL之重水中，作為測定樣本。使用Bruker Avance 600MHz NMR spectrometer進行測定。結果，未觀測到原本應能在小於8ppm之低磁場觀測到之來自鹼基對的亞胺基質子信號。

由此可推想，適配體ID1所表示之適配體，在不含電解質之水中，分子間、分子內並未形成鹼基對，並且未產生高次構造。

實施例3(於含有電解質之溶液中的FGF2適配體之構造解析：SEC-MALS測定)

將適配體ID1所表示之適配體溶解於生理食鹽水中而成為20mg/mL，於37℃培育2週，調製以人工方式形成高次構造的FGF2適配體製劑。將其與調製後立即冷凍保存而以最小限度形成高次構造的樣本，分別用生理食鹽水稀釋成為0.2mg/mL，供於分析。

藉由尺寸排除層析法而分離單體及多聚體，使用Wyatt Technology公司之MALS(Multi Angle Light Scattering)檢測器分別測定該等之分子量。尺寸排除層析法係以Waters公司製ACQUITYUPLC並使用BEH200 SEC管柱而實施。

結果，測得被認為是單體的峰之分子量為約64000，被認為是由多聚體所構成之高次構造的峰之分子量為約122000。從此結果可知，適配體ID1所表示之適配體在含有電解質之水中所形成的高次構造為二聚體。

實施例4(適配體之單體含有率與結合活性之關係)

將適配體ID1所表示之適配體溶解於PBS、生理食鹽水或3.3%之甘露醇水溶液而成為20mg/mL或2mg/mL，在表1所示之保存條件下，調製顯示各種單體含有率的FGF2適配體製劑。其中，調製之各FGF2適配體製劑的單體含量係藉由尺寸排除層析法而決定。其結果亦示於表1。

調製之各FGF2適配體製劑對FGF2蛋白質之結合活性，係使用GE公司製之Biacore T200並藉由表面電漿子共振(SPR)而測定。感應器芯片係使用與胺基反應之CM4。人類FGF2係溶解於固定化溶液(10mM醋酸鈉，pH6)而成為10μg/mL。在蛋白質側之胺基與芯片側之羧基的反應中，使用乙基-3-碳化二亞胺鹽酸鹽及N-羥基琥珀醯亞胺。反應後，藉由乙醇胺進行封阻(blocking)。FGF2之固定化量係設為約1000RU。將分析物用之適配體調製成5μM。運作緩衝液(running buffer)係使用含有295mM氯化鈉、5.4mM氯化鉀、0.8mM氯化鎂、1.8mM氯化鈣、20mM Tris、0.05% Tween20之pH7.6者，再生用液係使用2M氯化鈉。FGF2係固定化於流動槽(flow cell)FC2或FC4中，減去FC1或FC3之結果，形成最終之感應圖譜(sensorgram)。活性係以相對於「在不含電解質之溶液中於使用時才調製的多聚體含量極低的FGF2適配體製劑標準」的相對值來進行評價。

將各FGF2適配體製劑之調製方法、單體含有率及對FGF2蛋白質之結合活性的測定結果示於表1中。從此結果可知，FGF2適配體製劑的單體之含量係與對FGF2蛋白質之結合活性有相關關係。

[表1]

實施例5(FGF2適配體製劑之安定性試驗)

將適配體ID1所表示之適配體以成為20mg/mL或2mg/mL之方式溶解於3.3%或3.6%或4.9%之甘露醇溶液，並依照表2所示的各種溫度條件保存3個月後，藉由尺寸排除層析法及SPR法測定單體含有率及結合活性。將結果示於表2。

從此結果可知，藉由不含電解質之甘露醇水溶液所調製的FGF2適配體製劑為安定的。

[表2]

實施例6(其他FGF2適配體製劑之結果)

將適配體ID2至6所表示之適配體以適當之濃度溶解於水(甘露醇水溶液)、生理食鹽水或PBS，調製成FGF2適配體製劑。將所得到的各FGF2適配體製劑於各種溫度條件及保存溫度下保存數個月後，藉由尺寸排除層析法及SPR法測定單體含有率及結合活性。

適配體ID2：GL2-400TS-C6-C(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)G(M)-idT；

適配體ID3： GL2-400TS-C6-C(M)C(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)G(M)G(M)-idT；

適配體ID4：GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)G(M)U(M)U(F)A(M)A(M)C(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)idT-；

適配體ID5：GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)U(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)idT-；及

適配體ID6：idT-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-C6-GL2-400TS

從此等結果可知，關於其他FGF2適配體，藉由不含電解質之甘露醇水溶液所調製的FGF2適配體製劑亦為安定的。

比較例1(FGF2適配體製劑之安定性試驗)

將適配體ID1所表示之適配體以生理食鹽水或PBS溶解而成為20mg/mL，調製成FGF2適配體製劑。將所得到的各FGF2適配體製劑於表3所示之各種溫度條件下保存3個月後，藉由尺寸排除層析法測定單體含有率。將結果示於表 3。從此結果可知，藉由包含電解質之生理食鹽水或PBS所調製的FGF2適配體製劑為不安定的。

[表3]

[產業上之可利用性]

本發明之適配體製劑，係即使將針對FGF2之適配體或其鹽以注射劑等水性液劑的形式予以冷藏保存亦能長期安定地保存，所以，就作為對於藉由阻礙FGF2而可發揮藥效的疾病(例如老年黃斑變性症等伴隨血管新生之疾病、骨質疏鬆症、風濕性關節炎、變形性關節症、骨折等骨/軟骨疾病、疼痛)之治療或預防劑而言，從可提供操作上優良之製劑的觀點，極為有用。

本申請案係以在日本所申請的特願2018-124390(申請日：平成30年6月29日)為基礎，其內容全部包含於本說明書中。

<110> 日商力博美科股份有限公司(RIBOMIC INC.)

<120> 適配體製劑

<130> 092922

<140> TW 108122887

<141> 2019-06-28

<150> JP 2018-124390

<151> 2018-06-29

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 38

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 1

<210> 2

<211> 37

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 2

<210> 3

<211> 36

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 3

<210> 4

<211> 34

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 4

<210> 5

<211> 38

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 5

<210> 6

<211> 37

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 6

<210> 7

<211> 35

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 7

<210> 8

<211> 36

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 8

<210> 9

<211> 36

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 9

<210> 10

<211> 36

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 10

<210> 11

<211> 36

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 11

<210> 12

<211> 36

<212> RNA

<213> 人造序列

<220>

<223> FGF2適配體

<400> 12

Claims

一種水性液劑，係含有：與FGF2結合之適配體或其鹽、以及甘露醇；其中，該適配體係包含下式(1)所示之核苷酸序列，N¹GGAN²ACUAGGGCN³UUAAN⁴GUN⁵ACCAGUGUN⁶ (1)在此，N¹及N⁶各自獨立地表示0至複數個任意鹼基，N²、N³、N⁴及N⁵獨立地表示1個任意鹼基，惟尿嘧啶亦可為胸腺嘧啶；並且，該適配體係下述(a)或(b)之任一者，(a)在該適配體所含之核苷酸中，(i)各嘧啶核苷酸之核糖之2’位為氟原子，並且(ii)各嘌呤核苷酸之核糖之2’位為羥基者；(b)在該(a)之適配體中，(i)各嘧啶核苷酸之核糖之2’位的氟原子各自獨立地未被置換或被選自由氫原子、羥基及甲氧基所構成之群組中的原子或基置換，並且(ii)各嘌呤核苷酸之核糖之2’位的羥基各自獨立地未被置換或被選自由氫原子、甲氧基及氟原子所構成之群組中的原子或基置換者；前述適配體之濃度為1至20mg/mL；甘露醇的調配比率為水性液劑總量之2至7.5%(w/v)；除了前述適配體或其鹽以外，實質上不含電解質。
如申請專利範圍第1項所述之水性液劑，其中，該適配體係包含下式(3)所示之核苷酸序列，N¹GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCN⁶² (3) 其中，N¹及N⁶²各自獨立地表示0至複數個任意鹼基。
如申請專利範圍第1或2項所述之水性液劑，其中，該適配體係包含序列編號3、8、9、10或12所示的任一個核苷酸序列。
如申請專利範圍第1或2項所述之水性液劑，其中，相對於1mg之該適配體，以1至50mg之比率含有甘露醇。
如申請專利範圍第1或2項所述之水性液劑，其係保存於5℃以下。
如申請專利範圍第1或2項所述之水性液劑，其於4℃保存3個月後的單體適配體的比率為80%以上。
如申請專利範圍第1或2項所述之水性液劑，其為注射劑。