TWI719503B - 百香果籽萃取物用於提升ｔｐｈ１基因、ｄｄｃ基因及ａａｎａｔ基因表現量的用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種百香果籽萃取物用於提升TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量的用途；其中，本發明之百香果籽萃取物係以水、醇類、或醇水混合物為溶劑對百香果籽進行萃取而製得。
Description
本發明係關於一種百香果籽萃取物之用途，特別係關於一種百香果籽萃取物用於備提升TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量之組合物的用途。
百香果(Passiflora edulis)，又稱西番蓮、雞蛋果，為多年生蔓性藤本植物，原產地係於巴西、巴拉圭與阿根廷等美洲國家。百香果在全台灣的栽培面積約680公頃，主要分布於於南投埔里及其他中南部地區。其中，台農1號為台灣主要百香果之商業栽培品種。百香果之果實呈球型至卵型，成熟時呈紅褐色，果皮硬而厚，內果皮呈白色，果實內有許多黑色種子，呈扁桃形，種子外被白色或淡黃色的假種皮(Aril)所包覆。
百香果為台灣中南部地區重要特色果樹，占全台灣百香果栽培面積90%以上，已成當地一大特色產業。近年來，隨著甜食、飲品購買風氣的興盛，民眾對於各式飲品、冰品、甜點的需求量大增。百香果甜中帶酸的汁液可與各類飲品、冰品、甜點搭配，增添食品的風味、色澤，刺激消費者購買的慾望且多元化的百香果加工食品也特別受到民眾喜愛，使百香果加工需求增加，種植面積亦逐年擴增，造就了台灣百香果產業的蓬勃發展。百香果在台灣的種產值從2007年的1億餘元至2017年已成長至近8億元，單位面積產值居果樹類前列。
以百香果商業上的處理方式來說，會透過取汁設備取得百香果果實內的汁液，再進行後續加工以作為食品添加物。然而，去汁後的百香果籽(包括種子及部分假種皮)因無法被應用而被丟棄，造成資源之浪費，並衍生後續食品廢棄物的處理問題，也增加百香果加工業者的廢棄物處理費用。
此外，百香果籽不易消化，容易刮傷胃壁，即使咬碎再吞，也無法分解，最後會隨著糞便而排出體外。因此幼兒、腸胃功能不佳之族群會避免食用百香果籽。整體而言，百香果籽之食用性不便且無法被食品業者善加利用，因此，急需找出百香果籽之其他用途。
有鑑於此，希望對經過加工處理後殘餘的百香果籽進行利用，並開發百香果籽的用途，希冀提升百香果籽之經濟價值。
本發明之一目的在提供一種百香果籽萃取物用於製備提升色氨酸羥化酶(Tryptophan hydroxylase 1,TPH1)基因、多巴脫羧酶(Dopa Decarboxylase,DDC)基因、及/或5-羥色胺-N-乙醯基轉移酶基因(Aralkylamine N-Acetyltransferase,AANAT)基因表現量之組合物之用途，其中該百香果籽萃取物係以一溶劑萃取一百香果籽所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物。
在本發明之一實施例中，該百香果籽包括百香果種子及包覆於百香果種子外的假種皮。
在本發明之一實施例中，該溶劑與該百香果籽之液固比為10-20：1-5。
在本發明之一實施例中，該溶劑之萃取溫度為50℃-100℃。
在本發明之一實施例中，該溶劑所萃取的時間為0.5-2小時。
在本發明之一實施例中，該百香果籽萃取物的濃度為至少0.25mg/mL。
在本發明之一實施例中，該百香果籽萃取物的濃度為0.25-0.50mg/mL。
在本發明之一實施例中，該組合物為醫藥組合物或食品組合物。
在本發明之一實施例中，該組合物係醫藥組合物，且該醫藥組合物係呈一選自以下群組之劑型：口服、靜脈注射及皮下注射。
在本發明之一實施例中，該組合物係食品組合物，且該食品組合物係一健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品或特殊營養食品。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1所示為相較於控制組，本發明之百香果籽萃取物-高劑量組及本發明之百香果籽萃取物-低劑量組於調控人類神經母細胞瘤細胞之TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量之長條圖。
以下將描述根據本發明之部分具體實施態樣；惟，在不背離本發明精神下，本發明尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將本發明保護範圍解釋為限於說明書所具體陳述者或後附申請專利範圍所界定者。
除非文中有另外說明，於本說明書中(尤其是在後述專利申請範圍中)所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式。
在本發明之一實施例中，百香果之品種可為紫色種(P.edulis Sims)、黃色種(P.edulis forma flavicarpa)、甜百香果(P.ligularis)、樟葉西番蓮(P. lauriofolia)、大果西番蓮(P.quadrangularis)、長百香果(P.mollissima)及台農一號(TainungNO.1)，但本發明不以此為限。
在本發明之一實施例中，本發明之百香果籽萃取物係以溶劑萃取百香果籽所獲得，其中該百香果籽所指的是位於百香果果實內的黑色種子以及包覆在黑色種子外的假種皮，較佳地，該百香果籽不含有百香果果實內的汁液。詳細而言，本發明將經過習知去汁處理後所殘留之百香果果實內皮內的黑色種子以及包覆在黑色種子外的假種皮，再以溶劑萃取出該百香果籽萃取物。
本文所述醫藥組合物係可呈任何合宜的型式，並無特殊限制，端視所欲之用途而呈對應之合宜劑型。舉例言之，但不以此為限，該醫藥組合物可以口服或非經口服(例如：經皮)之投藥方式施用至有需要之個體上。其中，視使用形式及用途而定，可選用合宜之載劑以提供該醫藥組合物，其中，該載劑包括賦形劑、稀釋劑、輔助劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、吸濕劑等。
以適於口服之劑型為例，本文所述之醫藥組合物中係可含有任何不會不利影響活性成分(即，百香果籽萃取物)之所欲效益的醫藥上可接受之載劑，例如：水、食鹽水、葡萄糖(Dextrose)、甘油、乙醇或其類似物、纖維素、澱粉、糖膨潤土(Sugar bentonite)、及前述之組合。可利用任何合宜之方法，將該醫藥組合物以適於口服投藥的劑型提供，例如：錠劑(例如糖衣錠)、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、酊劑等。
以適於經皮投予之劑型為例，本文所述之醫藥組合物可呈供直接外用之貼布、乳液、乳霜、凝膠(例如水凝膠)、膏狀物(例如分散膏、軟膏)、噴霧劑、或溶液(例如懸浮液)等形式，但不以此為限。
本文所述之醫藥組合物係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同投藥頻率施用，端視投予個體之需求、年齡、體重、及健康況狀而異。視實係應用需求，可調整該醫藥組合物中百香果籽萃取物於組合物中的含量比例。此外，該醫藥組合物可視需要另含一或多種其他活性成分，或者與含該一
或多種其他活性成分之藥物併用，以進一步加強該醫藥組合物之功效或增加製劑配方的運用靈活性與調配度，只要該其他活性成分對本發明活性成分(即，百香果籽萃取物)之效益沒有不利的影響即可。
視需要地，該醫藥組合物或食品組合物可另含有合宜用量之添加劑，例如可提高該醫藥組合物或食品組合物於服用時的口適感及視覺感受之調味劑、調色劑、著色劑等，以及可改善該醫藥組合物或食品組合物的穩定性及儲存性之緩衝劑、保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等。
本文所述之食品組合物可以是健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品或特殊營養食品，且可製成例如乳製品、肉類加工品、麵包類、麵食品、餅乾、口含錠、膠囊、果汁類、茶類、運動飲料、營養飲料等產品，但不以此為限。較佳地，該食品組合物係以健康食品的型式提供。
本文所述之健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品及特殊營養食品係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同頻率食用，端視投予個體之年齡、體重、及健康狀況而異。亦可針對特定族群之需要，調整該健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品及特殊營養食品中百香果籽萃取物的含量，例如，調整至每日應服用的量。
本文所述之健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品及/或特殊營養食品，可於其外包裝上標示建議使用量、特定族群的使用標準及條件、或與其他食品或醫藥共同服用的建議事項等，以利使用者在無醫師、藥師或相關執事人員指導下自行服用而無安全疑慮。於本文所述之食品組合物中，有關該百香果籽萃取物之態樣以及相關之應用，均如上述之說明。
茲以下列實施例進一步例示說明本發明。其中該等實施例僅提供作為說明，而非用以限制本發明之保護範圍。本發明保護範圍係如後附申請專利範圍所示。
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
於以下實施例中，所使用的物料來源如下：
1.百香果：產地為台灣。
2.人類神經母細胞瘤細胞(Human neuroblastoma cell；SH-SY5Y)：購自美國典型培養物保藏中心(ATCC)，產品編號CRL-2266。
3.DMEM培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)：購自Gibco，產品編號12100-038。
4.胎牛血清：購自Gibco，產品編號10437-028。
5.青黴素/鏈黴素：購自Gibco，產品編號15140-122。
6.RNA萃取套組(RNA Extraction Kit)：購自Geneaid。
7.反轉錄酶(SuperScript® III Reverse Transcriptase)：購自Invitrogen公司。
8.KAPA SYBR FAST qPCR套組：購自KAPA Biosystems公司。
9.Step One Plus儀器：購自ABI公司。
實驗步驟：
在本發明之一實施例中，將百香果果實整顆清洗，取出洗淨後之百香果果實中之百香果籽(包括種子以及包覆在種子外的假種皮)，並去除百香果籽的汁液後，將該經去汁的百香果籽與水、醇、或醇水混合物之萃取溶劑以10-20：1-5之液固比混合，其中最佳萃取溶劑為水，均質後於50-100℃進行萃取1-2小時，以獲得粗萃取物，其中，較佳萃取溫度為60-90℃，較佳萃取時間為1.5-2小時。將該粗萃取物後冷卻至室溫後，將該粗萃取物經由400網目之濾網過濾以獲得濾液。最後，將該濾液於45-70℃進行減壓濃縮，即得到本發明之百香果籽萃取物。
將人類神經母細胞瘤細胞(Human neuroblastoma cell；SH-SY5Y)依每孔2 x 105個細胞接種於6-孔盤中，培養24小時後，將細胞分為控制組、本發明之百香果籽萃取物-高劑量組、及本發明之百香果籽萃取物-低劑量組(各組皆進行三重複)，並分別以如下培養基進行培養：
1.控制組：含有10%之胎牛血清、及1%青黴素/鏈黴素之DMEM培養基；
2.本發明之百香果籽萃取物-高劑量組：如控制組之培養基，但額外添加0.50mg/mL由實施例1所獲得之百香果籽萃取物。
3.本發明之百香果籽萃取物-低劑量組：如控制組之培養基，但額外添加0.25mg/mL由實施例1所獲得之百香果籽萃取物。
其後，以上述方法培養48小時後，分別收集上述各組細胞，以RNA萃取套組進行RNA萃取，再以反轉錄酶將該RNA反轉錄為cDNA。接著，使用ABI Step One Plus儀器及KAPA SYBR FAST qPCR套組，以TPH1基因之正向引子5’-AAATATTGTGGATATCGGGAGGATAA-3’(SEQ ID NO：1)與反向引子5’-AGGACGGATGGAAAAACCTGTA-3’(SEQ ID NO：2)、DDC基因之正向引子5’-ACCACAACATGCTGCTCCTTT-3’(SEQ ID NO：3)與反向引子5’-ATCAACGTGCAGCCATATGTCT-3’(SEQ ID NO：4)、AANAT基因之正向引子5’-AACGTCATGACCCCTCAGAAGT-3’(SEQ ID NO：5)、反向引子5’-ATTCACTGTGCCTCACCCTGTA-3’(SEQ ID NO：6)與GAPDH基因之正向引子5’-CTGGGCTACACTGAGCACC-3’(SEQ ID NO：7)與反向引子5’-AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG-3’(SEQ ID NO：8)對前述之cDNA進行qPCR(quantitative polymerase chain reaction)，以檢測各組細胞之TPH1基因、DDC基因及AANAT基因的表現量。最終，使用
方法測定目標基因的相對表現量。所謂相對表現量定義為實驗組(添加百香果籽萃取物之組別)之一目標基因相對於控制組之同一基因的RNA表現量倍數變化。該方法係以GAPDH基因的循環閾值作為內部控制基因的循環閾值(Ct)，按照以下公式計算倍數變化：△Ct=Ct萃取物組或控制組的目標基因-Ct GAPDH (甘油醛3-磷酸脫氫酶，GAPDH，作為內部控制)，△△Ct=△Ct
萃取物組-△Ct控制組，
，再利用Excel軟體進行非成對單尾Student-t test以決定變異係數與是否在統計上具有顯著差異(*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001)，該實驗結果顯示於圖1。
由圖1可知，本發明之百香果籽萃取物-高劑量組的TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量分別為控制組的1.77倍、1.38倍、及1.41倍，且皆顯著高於控制組；而本發明之百香果籽萃取物-低劑量組的TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量分別為控制組的2.41倍、1.4倍、及1.3倍，且皆顯著高於控制組。該些結果顯示，本發明之百香果籽萃取物確實可以有效地提升TPH1基因、DDC基因、及AANAT基因的表現量。
上述結果顯示，本發明以水、醇、或醇水混合物為溶劑所萃取得之百香果籽萃取物確實可以有效地提升TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量。因此，本發明之百香果籽萃取物可用於製備提升TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現之組合物之用途。
<110> 大江生醫股份有限公司
<120> 百香果籽萃取物用於提升TPH1基因、DDC基因及AANAT基因表現量的用途
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
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<220>
<223> 合成引子
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Claims (10)
- 一種百香果籽萃取物用於製備提升色氨酸羥化酶(Tryptophan hydroxylase 1,TPH1)基因、多巴脫羧酶(Dopa Decarboxylase,DDC)基因、及/或5-羥色胺-N-乙醯基轉移酶基因(Aralkylamine N-Acetyltransferase,AANAT)基因表現量之組合物之用途，其中該百香果籽萃取物係以一溶劑萃取一百香果籽所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，其中該溶劑與該百香果籽之液固比為10：1-20：5，該溶劑之萃取溫度為50℃-100℃，且其中該溶劑所萃取的時間為0.5-2小時。
- 一種百香果籽萃取物用於製備提升睡眠品質之組合物之用途，其中該百香果籽萃取物係以一溶劑萃取一百香果籽所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，其中該溶劑與該百香果籽之液固比為10：1-20：5，該溶劑之萃取溫度為50℃-100℃，且其中該溶劑所萃取的時間為0.5-2小時。
- 如申請專利範圍第2項之用途，其中該百香果籽萃取物係透過提升褪黑激素分泌量以達到該睡眠品質之提升。
- 如申請專利範圍第3項之用途，其中該百香果萃取物係透過提升色氨酸羥化酶(Tryptophan hydroxylase 1,TPH1)基因、多巴脫羧酶(Dopa Decarboxylase,DDC)基因、及/或5-羥色胺-N-乙醯基轉移酶基因(Aralkylamine N-Acetyltransferase,AANAT)基因表現以達到該褪黑激素分泌量之提升。
- 如申請專利範圍第1-4項所述之用途，其中該百香果籽包括一百香果種子及一包覆於百香果種子外的假種皮(Aril)。
- 如申請專利範圍第1-4項所述之用途，其中該百香果籽萃取物的濃度為至少0.25mg/mL。
- 如申請專利範圍第1-4項所述之用途，其中該百香果籽萃取物的濃度為0.25-0.50mg/mL。
- 如申請專利範圍第1-4項所述之用途，其中該組合物為醫藥組合物或食品組合物。
- 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中該組合物係醫藥組合物，且該醫藥組合物係呈一選自以下群組之劑型：口服、靜脈注射及皮下注射。
- 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中該組合物係食品組合物，且該食品組合物係一健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品或特殊營養食品。
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