TWI784621B - 中藥發酵液及其提神、改善疲勞、護肝、提升免疫力、降血脂之用途 - Google Patents
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Abstract
一種中藥發酵液，其是以一中藥提取液經複數菌種發酵所得。其中，中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消、與茯苓以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。並且，中藥發酵液具有提神、改善疲勞、護肝、提升免疫力、降血脂等功效。
Description
本發明關於一種中藥發酵液，特別是涉及一種以蛹蟲草（
Cordyceps militaris）、人參（
Panax ginseng）、耳葉牛皮消（
Cynanchum auriculatum）、與茯苓（
Poria cocos）製備的中藥發酵液，其具有提神、改善疲勞、護肝、提升免疫力及降血脂等用途。
由微生物發酵的食品具有更易於消化、香味增加、儲藏時間提升等優勢。例如：泡菜、納豆、水果醋等等都是廣受歡迎的發酵類食品。
發酵飲品也愈來愈受到消費者的喜愛。發酵飲品常以乳品、蔬菜、水果、豆類、草藥等為原料基底，再經由不同種類的微生物作用而製得。
在一些實施例中，一種中藥發酵液，其是以一中藥提取液經複數菌種發酵所得。其中，中藥提取液是由蛹蟲草（
Cordyceps militaris）、人參（
Panax ginseng）、耳葉牛皮消（
Cynanchum auriculatum）、與茯苓（
Poria cocos）以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
在一些實施例中，中藥發酵液的總皂苷含量至少大於6000ug/mL。
在一些實施例中，中藥發酵液的總皂苷含量至少為中藥提取液的總皂苷含量的6.43倍。
在一些實施例中，蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消、茯苓及水的固液比為1：1：1：1：50。
在一些實施例中，一種中藥發酵液用於製備提神及改善疲勞的組合物之用途。其中，中藥發酵液是以中藥提取液經複數菌種發酵所得，中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
在一些實施例中，一種中藥發酵液用於製備護肝的組合物之用途。其中，中藥發酵液是以中藥提取液經複數菌種發酵所得，中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
在一些實施例中，中藥發酵液用以提升白血球介素-10（IL-10）基因的表現量，進而達到抗發炎的作用。
在一些實施例中，中藥發酵液用以抑制脂肪肝形成。
在一些實施例中，中藥發酵液用以降低受體血液的膽紅素含量。
在一些實施例中，中藥發酵液用以改善受體的肌膚蠟黃。
在一些實施例中，一種中藥發酵液用於製備提升免疫力的組合物之用途。其中，中藥發酵液是以中藥提取液經複數菌種發酵所得，中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
在一些實施例中，中藥發酵液用以提升受體的至少之一基因的表現量：白血球介素-1B（IL-1B）基因、白血球介素-6（IL-6）基因及白血球介素-8（IL-8）基因。
在一些實施例中，一種中藥發酵液用於製備降血脂的組合物之用途。其中，中藥發酵液是以中藥提取液經複數菌種發酵所得，中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
在一些實施例中，中藥發酵液用以降低受體的低密度脂蛋白膽固醇的含量。
綜上所述，根據任一實施例的中藥發酵液，其可用以製備用於提神及改善疲勞的組合物、護肝的組合物、提升免疫力的組合物、降血脂的組合物或其組合。其中，中藥發酵液是以中藥提取液經複數菌種發酵所得，而中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消、與茯苓以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。並且，任一實施例的中藥發酵液的總皂苷含量至少大於6000ug/mL。在一些實施例中，中藥發酵液可用以提神及改善疲勞。在一些實施例中，中藥發酵液可用以提升受體的白血球介素-10（IL-10）基因的表現量，進而避免受體體內肝臟等器官因長期發炎而造成病變。在一些實施例中，中藥發酵液可抑制肝臟脂肪合成相關之基因（如SREBP-1c基因、SCD1基因）的表現，進而抑制脂肪肝形成。在一些實施例中，中藥發酵液可用以降低肝細胞損傷，並減少谷丙轉氨酶（Glutamate Pyruvate Transaminase, GPT）的釋出。在一些實施例中，中藥發酵液可用以護肝，並使受體血液的膽紅素含量降低，進而達成改善受體的肌膚蠟黃的功效。在一些實施例中，中藥發酵液可提升受體中白血球介素-1B（IL-1B）基因、白血球介素-6（IL-6）基因、白血球介素-8（IL-8）基因或其組合的表現，進而提升受體的免疫力。在一些實施例中，中藥發酵液可降低受體的低密度脂蛋白膽固醇的含量，進而達到降血脂的功能。
於下列實施方式的說明中，除非另有相關說明，則「%」符號是指重量百分比。
在一些實施例中，中藥發酵液是以中藥提取液經複數菌種發酵所得，而中藥提取液是由蛹蟲草（
Cordyceps militaris）、人參（
Panax ginseng）、耳葉牛皮消（
Cynanchum auriculatum；又名白首烏）、與茯苓（
Poria cocos）以水進行浸提所得，且複數菌種包括酵母菌（Yeast）、乳酸菌（
Lactobacillus）及醋酸菌（
Acetobacter aceti）。
舉例來說，蛹蟲草所採用的部位為其子實體、人參所採用的部位為其根部、耳葉牛皮消所採用的部位為其塊根及莖葉，而茯苓所採用的部位為其乾燥菌核。在一些實施例中，蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消、茯苓及水的固液比為1：1：1：1：50。
在一些實施例中，中藥提取液是以蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消與茯苓加入至水中並進行浸提程序以形成中藥基液後，再加入葡萄糖所得。於此，將中藥基液先行進行浸提程序，有助於中藥基液中的各組成成分的有效成分的確實地釋出。
在另一些實施例中，中藥提取液是以蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消、茯苓及水形成的中藥基液加入葡萄糖後進行浸提程序以形成中藥提取液。於此，由於進行浸提程序前，中藥基液中所添加葡萄糖為完全溶解或未完全溶解。因此，透過浸提程序有助於將中藥基液中的葡萄糖完全溶解並且還可避免污染。
在一些實施例中，浸提程序為於95℃下靜置1小時。舉例來說，浸提程序係指將中藥基液加熱至95℃後並維持在95℃的狀態下靜置1小時。
在一些實施例中，中藥提取液包括中藥基液及中藥基液總重10%的葡萄糖。並且，在加入10%的葡萄糖後，中藥提取液的糖度會大於7°Bx。於此，足夠的糖度可以確保後續發酵的順利進行，並使菌種有足夠的養分生長。
接著，加入複數菌種至中藥提取液中進行發酵7日以得到中藥發酵液。其中，複數菌種包括0.01%~0.5%的酵母菌、0.01%~0.25%的乳酸菌及3~10%的醋酸菌。在一些實施例中，於發酵前不濾除中藥提取液中的固形物（即，進行浸提程序後的蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消與茯苓）。換言之，是直接將菌種加入中藥提取液進行發酵，藉以利用菌種進一步提取固形物中的活性成分。
舉例來說，酵母菌可以是市售的啤酒酵母（
Saccharomyces cerevisiae），例如向財團法人食品工作發展研究所所採購寄存編號BCRC20271（國際寄存ATCC26602）菌株的啤酒酵母。舉例來說，乳酸菌可以是市售的植物乳桿菌（
Lactobacillus plantarum）或採用寄存編號BCRC910808（國際寄存DSM33106）菌株的胚芽乳酸桿菌TCI999。舉例來說，醋酸菌可以是市售醋酸菌，例如向美國菌種中心（American Type Culture Collection, ATCC）採購寄存編號ATCC15973（國內寄存編號BCRC11688）的醋酸菌。
在一些實施例中，於中藥提取液中加入0.1%的酵母菌進行發酵1日後形成第一初發酵液。基此，透過先添加酵母菌至中藥提取液中，可於酵母菌發酵過程中產生酒精，並有利於提取出蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消與茯苓內不同的有效成份。此外，在發酵的過程中，中藥提取液酸鹼值（pH值）亦會逐漸下降，此過程亦可提供不同的pH值得溶液環境以利於從蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消與茯苓內提取出不同的有效成分。在一些實施例中，第一初發酵液的酸鹼值（pH值）小於4，且其糖度約為9°Bx。
加入0.05%乳酸菌至第一初發酵液後進行發酵1日後形成第二初發酵液。基此，透過添加乳酸菌至第一初發酵液中可使其內的葡萄糖被進一步消耗而降低糖度，並產生乳酸以降低第一初發酵液的pH值。並且，降低pH值有利於進一步提取出蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消與茯苓內其他不同的有效成分。在一些實施例中，第二初發酵液的pH值小於3.5±0.5，且其糖度約為6±0.5°Bx。
加入5%醋酸菌至第二初發酵液後進行發酵5日後形成第三初發酵液。基此，透過添加醋酸菌至第二初發酵液可使其內的酒精被消耗，並進一步降低葡萄糖的含量。在一些實施例中，第三初發酵液的pH值為3.4±0.5，且其糖度小於3.5°Bx。
在一些實施例中，將第三初發酵液過濾並濃縮以得到中藥發酵液。舉例來說，過濾方式可以是以200mesh過濾，且濃縮方式可以採取在55℃-65℃下的減壓濃縮。
在一些實施例中，添加寡糖至中藥發酵液以使其糖度達到40±2°Bx以形成中藥發酵飲品。舉例來說，寡糖係指由3個~10個單醣分子聚合而成的低聚糖。其中，寡糖可為果寡糖、半乳寡糖、木寡糖、異麥芽寡糖等。在一些實施例中，所添加的寡糖可為含60%異麥芽寡糖的寡糖溶液。於此，中藥發酵飲品的pH值為3.5±0.5。
由於皂苷（Saponin）於水中的溶解度不佳，而發酵過程中形成的酒精環境，有利於皂苷的萃取。在一些實施例中，中藥發酵液的總皂苷（Saponin）含量至少大於6000ug/mL。舉例來說，中藥發酵液的總皂苷（Saponin）含量至少為6967.22 µg/ml。
於此，中藥發酵液含有皂苷的效性成分，故具有抗疲勞、提神及抗老化等功效，且可增加受體的細胞抗氧化與抗發炎能力。在一些實施例中，中藥發酵液可用以製備提神及改善疲勞的組合物。
在一些實施例中，中藥發酵液具有護肝的能力。舉例來說，中藥發酵液可用以提升抗發炎基因（如，白血球介素-10（IL-10）基因）的表現量，故中藥發酵液可達到抗發炎的作用，進而避免受體的肝臟等器官因長期發炎而造成病變。舉例來說，中藥發酵液可抑制肝臟脂肪合成相關基因（如SREBP-1c基因、SCD1基因）的表現，進而抑制脂肪肝形成。
在一些實施例中，中藥發酵液可用以降低肝細胞損傷，進而達成護肝功能。舉例來說，中藥發酵液可減少作為肝損傷指標的谷丙轉氨酶（Glutamate Pyruvate Transaminase, GPT；又稱ALT）的釋出，代表中藥發酵液可降低肝細胞損傷的可能性。舉例來說，當肝細胞受損或膽管阻塞會導致受體血液中膽紅素升高，而中藥發酵液可降低受體血液中的膽紅素含量，使其指數回復至正常範圍，代表中藥發酵液降低肝細胞損傷的可能性。藉此，中藥發酵液亦可改善受體肌膚蠟黃，並使受體氣色更佳。
在一些實施例中，中藥發酵液可用以提高受體免疫力。舉例來說，中藥發酵液可提升受體的體內的以下至少之一基因的表現量：白血球介素-1B（IL-1B）基因、白血球介素-6（IL-6）基因及白血球介素-8（IL-8）基因。基此，透過提升IL-1B基因的表現量，中藥發酵液可活化受體體內白血球的活性，並促進其血管擴張，以幫助免疫細胞進入感染處殺死病菌。透過提升IL-6基因的表現量，中藥發酵液可活化受體體內的淋巴細胞並增加抗體產生。透過提升IL-8基因的表現量，中藥發酵液可促進受體體內的白血球分化並提升受體的免疫力。
在一些實施例中，中藥發酵液可用以降血脂。舉例來說，中藥發酵液可降低受體的低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量，並降低作為動脈硬化指數的總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值（T.CHOL/HDL），以降低受體罹患心血管疾病的風險，並預防動脈硬化風險增加。
基此，任一實施例之中藥發酵液，在受體服用後可有效降低其血液中的膽紅色含量、降低低密度脂蛋白膽固醇含量，並改善其肌膚蠟黃與疲憊感。換言之，任一實施例之中藥發酵液具有肝膽保健、調節血脂、改善氣色與減少疲勞的功效。並且，中藥發酵液可用以製備提神及改善疲勞的組合物、護肝的組合物、提升免疫力的組合物、降血脂的組合物或其組合。
在一些實施例中，組合物可以為液態（如，中藥發酵飲品等）或固態（如，粉末、錠劑等）。在一些實施例中，液態的組合物的使用劑量為5毫升/天，而固態組合物的使用量為0.65克/天。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為醫藥品。換言之，此醫藥品包含有效含量的中藥發酵液。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於經腸道地、非經腸道地（parenterally）、口服的、或局部地（topically）投藥劑型。
在一些實施例中，經腸道或口服的投藥劑型可為，但不限於，錠劑（tablet）、片劑（troche）、口含錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）或類似之物。在一些實施例中，非經腸道地或局部地投藥劑型可為，但不限於，注射品（injection）、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation） 或類似之物。在一些實施例中，注射品的投藥方式可為皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）或病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，前述之醫藥品可包含被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑可為下列載劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。在一些實施例中，作為醫藥上可接受的載劑的溶劑可為水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝生理鹽水（phosphate buffered saline, PBS）、或含有醇的水性溶液（aqueous solution containing alcohol）。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為食用產品。換言之，食用產品包含特定含量的中藥發酵液。在一些實施例中，食用產品可為一般食品、保健食品或膳食補充品。
在一些實施例中，前述之食用產品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於口服的劑型。在一些實施例中，前述之一般食品可為食用產品本身。在一些實施例中，一般食品可為但不限於：飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）或調味料。
在一些實施例中，所得的中藥發酵液可進一步作為食品添加物（food additive），以製得含有中藥發酵液的食品組合物。於此，能藉由習知方法於原料製備時添加任一實施例的中藥發酵液，或是於食品的製作過程中添加任一實施例的中藥發酵液，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食用產品（即食品組合物）。
例
1
：中藥發酵液的製備
首先，準備1重量份的蛹蟲草、1重量份的人參、1重量份的耳葉牛皮消、1重量份的茯苓及50重量份的水，並將其混合均勻以形成中藥基液。接著，加入中藥基液總重的10%的葡萄糖至中藥基液後，將含葡萄糖的中藥基液加熱至95℃並於95℃下靜置1小時，以形成中藥提取液。於此，上述蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消、茯苓皆為購自中藥行的乾燥中藥材。
於靜置後，待中藥提取液冷卻至小於38℃後加入0.1%的啤酒酵母（
Saccharomyces cerevisiae）（寄存編號為BCRC20271），並於30℃下進行發酵1天以形成第一初發酵液。再加入0.05%的植物乳酸桿菌TCI999（
Lactobacillus plantarumTCI999）（寄存編號為BCRC910808，國際寄存編號DSM33106）至第一初發酵液中，並於30℃下進行發酵1天以形成第二初發酵液。接著，加入5%的醋酸菌（
Acetobacter aceti）（寄存編號為BCRC11688）至第二初發酵液中，並於30℃下進行發酵5天以形成第三初發酵液。於此，第三初發酵液的pH值為3.4±0.5，且其糖度小於3.5°Bx。
接著，以200mesh過濾第三初發酵液後，於60℃下減壓濃縮，以得到中藥發酵液。
例
2
：總
皂苷含量測試
於此，所使用作為標準品的溶液為1000ppm的齊墩果酸（Oleanolic acid，品牌：Sigma，編號：O5504-100MG）溶液，其係以甲醇（Methanol，品牌：JT Baker）溶解配置，並以甲醇序列稀釋為0ppm、100ppm、200ppm、400ppm、600ppm、800ppm等濃度。
將各濃度的齊墩果酸溶液分別取100μL至微量離心管中，並於70℃~85℃烘箱中烘乾各濃度的齊墩果酸溶液使其完全乾燥。接著，於各微量離心管加入100μL的5%香草醛（vanillin，品牌：Sigma，編號：A11169），並加入400μL的高氯酸（Perchloric acid，品牌：Sigma，編號：30755-1L）混合均勻後，置於65℃水浴中反應15分鐘，以形成混合溶液。於此，所使用的5%香草醛是以乙酸（Acetic acid，品牌：JT Baker，編號：9508-03）配置。
接著，取40μL的混合溶液至96孔盤並於每孔加入200μL的乙酸混合均勻以形成測試溶液，並測量其在531nm下之吸光值。於此，依照所量測的吸光值對應齊墩果酸溶液的濃度繪製標準曲線。
於此，將例1得到的中藥提取液作為控制組的測試樣品，且將例1所製備得到的中藥發酵液作為實驗組的測試樣品。
取100μL的測試樣品至微量離心管中，並於70℃~85℃烘箱中烘乾測試樣品使其完全乾燥。接著，於各微量離心管加入100μL的5%香草醛，並加入400μL的高氯酸混合均勻後，置於65℃水浴中反應15分鐘，以形成混合溶液。
取40μL的混合溶液至96孔盤並於每孔加入200μL的乙酸混合均勻以形成測試溶液，並測量其在531nm下之吸光值。接著將依據標準曲線以內插法的方式計算控制組及實驗組的總皂苷含量，如圖1所示。
請參閱圖1。控制組的總皂苷含量為1083.89mg/mL，而實驗組的總皂苷含量為6967.33 mg/mL。換言之，實驗組的總皂苷含量為控制組的總皂苷含量6.43倍。由此可知，透過複數菌種發酵後可顯著提高中藥發酵液的總皂苷含量。因此，相較於服用中藥提取液，當受體服用中藥發酵液或以其製備的組合物時，有助於受體抗疲勞、提神、抗老化、抗氧化與抗發炎。
例
3
：抗發炎基因實驗
於此，所檢測的抗發炎基因為IL-10（GeneID:3586）基因。
首先，取1.5x10
5個人原發性表皮角質形成細胞（Primary Normal Human Epidermal Keratinocytes, adult；ATCC PCS-200-010
TM；以下稱HEKa細胞）至每孔含有2毫升細胞培養基的六孔細胞培養盤中，於37℃下培養24小時。於此，所使用的細胞培養基為添加有角質細胞生長套組（Keratinocyte Growth Kit；ATCC PCS-200-040TM）的皮膚細胞基礎培養基（Dermal Cell Basal Medium；ATCC PCS-200-030
TM）。
將HEK細胞分為實驗組及控制組。移除各組別的細胞培養基並更換為每孔2mL實驗培養基，然後置於37℃下分別接續培養6小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.25vol%的例1中所得到的中藥發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含中藥發酵液）。
收集各組的HEK細胞，並以RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）萃取出各組的RNA。接著，各組取1000奈克（ng）的RNA作為模板，透過SuperScript
®III反轉錄酶（購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051）將RNA反轉錄為相應之cDNA。再藉由ABI StepOnePlus
TM即時PCR系統（ABI StepOnePlus
TMReal-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））、KAPA SYBR FAST（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）及表1的引子（SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2）對各組的cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction）以觀察HEK細胞內IL-10基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應20秒，接著95°C反應3秒，60°C反應30秒，並重複40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因定量，如圖2所示。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量基因的mRNA表現量，進而推斷基因編碼的蛋白質的表現量。
需要特別說明的是，圖2中的基因表現是以相對表現倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖2中，「***」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
表1
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 | 引子長度 |
| IL-10 | IL-10_F | SEQ ID NO:1 | TCAAGGCGCATGTGAACTCC | 20 |
| IL-10_R | SEQ ID NO:2 | GATGTCAAACTCACTCATGGCT | 22 |
於表1中，F為順向引子（Forward primer），而R為反向引子（Reverse primer）。
請參閱圖2。將控制組的各組IL-10基因的相對表現量視為1.00（即控制組的各組基因的表現量為100%）。相較於控制組，實驗組的IL-10基因的相對表現量為11.47。於此，實驗組的IL-10基因的表現量顯著的提升，代表中藥發酵液能有效地提高IL-10基因的表現量。換言之，當受體服用中藥發酵液時，能提高IL-10基因的表現量，進而達成抗發炎的功能，並避免受體體內肝臟等器官因長期發炎而造成病變及達成護肝的功效。
例
4
：
肝臟脂肪合成相關基因實驗
於此，所檢測的肝臟脂肪合成相關基因包括SREBP-1c（SREBF1；GeneID：6720）基因及SCD1（SCD；GeneID：20249）基因。此二基因為促進肝臟脂肪合成之基因。
所使用的細胞培養基為添加有10%的胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；Gibco公司，編號10437-028）、1%的青黴素-鏈黴素（Gibco公司，Cat. 15140122）的DMEM培養基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium；Gibco公司，編號11965-092）。所使用的促進油滴生成的細胞培養液（OA-BSA conjugated medium；以下稱OA培養基）為含有油酸（Oleic acid；Sigma公司；Cat. O1088-5G）溶液（以下稱OA溶液）的細胞培養基，其中OA溶液為油酸溶解於二甲基亞碸（Dimethyl sulfoxide，DMSO）中。
首先，取2x10
5個人類肝癌細胞（ATCC；Cat. HB-8065；以下稱HepG2細胞）接種至每孔含有2毫升細胞培養基的六孔細胞培養盤中，於37℃下培養24小時。
待HepG2細胞貼附於六孔培養盤底部後，將HepG2細胞分為實驗組及控制組。移除各組別的細胞培養基並更換為每孔2mL的實驗培養基，然後置於37℃下分別接續培養24小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.025mg/mL的例1中所得到的中藥發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含中藥發酵液）。
接著，移除各組別的實驗培養基並更換為每孔2mL的OA培養基以促進HepG2細胞內油滴生成，然後置於37°C下分別接續培養24小時。
收集各組的HepG2細胞，並以RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）萃取出各組的RNA。接著，各組取1000奈克（ng）的RNA作為模板，透過SuperScript
®III反轉錄酶（購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051）將RNA反轉錄為相應之cDNA。再藉由ABI StepOnePlus
TM即時PCR系統（ABI StepOnePlus
TMReal-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））、KAPA SYBR FAST（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）及表2的引子（SEQ ID NO:3至SEQ ID NO:6）對各組的cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction）以觀察HepG2細胞內SREBP-1c基因及SCD1基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應20秒，接著95°C反應3秒，60°C反應30秒，並重複40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因定量，如圖3所示。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量基因的mRNA表現量，進而推斷基因編碼的蛋白質的表現量。
需要特別說明的是，圖3中的基因表現是以相對表現倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖3中，「*」代表在與控制組比較下其p值小於0.05、「***」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
表2
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 | 引子長度 |
| SREBP-1c | SREBP-1c_F | SEQ ID NO:3 | GCCATCGACTACATTCGCTTTC | 22 |
| SREBP-1c_R | SEQ ID NO:4 | CCTCCATGAGCACGTCTGTGT | 21 | |
| SCD1 | SCD1_F | SEQ ID NO:5 | CAGCCCCCTGGAAAGTGAT | 19 |
| SCD1_R | SEQ ID NO:6 | CGTCTCCAACTTATCTCCTCCATT | 24 |
於表2中，F為順向引子（Forward primer），而R為反向引子（Reverse primer）。
請參閱圖3。將控制組的各組肝臟脂肪合成相關基因的相對表現量視為1.00（即控制組的各組基因的表現量為100%）。相較於控制組，實驗組的SREBP-1c基因的相對表現量為0.72，且實驗組的SCD1基因的相對表現量為0.23。於此，實驗組的SREBP-1c基因及SCD1基因的表現量相較於控制組有顯著的抑制，代表中藥發酵液能有效地抑制肝臟脂肪合成相關基因。換言之，當受體服用中藥發酵液時，能抑制SREBP-1c基因及/或SCD1基因的表現量，進而可避免脂肪肝症狀發生。
例
5
：肝損傷指標實驗－
GPT
釋放量檢測
當肝細胞受損時，會釋放出谷丙轉氨酶（Glutamate Pyruvate Transaminase, GPT）至血液中，故其可作為肝損傷指標。
所使用的細胞培養基為添加有10%的胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；Gibco公司，編號10437-028）、1%的抗生素-抗黴菌素（Antibiotic-Antimycotic）（Gibco公司，編號15240-062）的DMEM培養基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium；Gibco公司，編號11965-092）。
首先，取5x10
3個人類肝癌細胞（Human hepatocellular carcinoma cell；ATCC；Cat. HB-8065；以下稱HepG2細胞）接種至每孔含有0.2毫升細胞培養基的96孔細胞培養盤中，於37℃下培養24小時。
接著，將HepG2細胞分為空白組、實驗組及對照組。移除各組別的細胞培養基並更換為每孔0.2mL的實驗培養基，然後置於37℃下分別接續培養24小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有100μM的酒精（Ethanol）、0.025mg/mL的例1中所得到的中藥發酵液的細胞培養基。對照組的實驗培養基為添加100μM的酒精的細胞培養基（不含中藥發酵液）。空白組的實驗培養基為單純的細胞培養基（不含酒精及中藥發酵液）。
移除各組別的實驗培養基並以1XPBS（Gibco公司；Cat. 14200-075）清洗HepG2細胞後，每孔加入0.2mL的第一反應液500μM的雙氧水（H
2O
2），然後置於37℃下反應6小時。於此，所使用的第一反應液為500μM的雙氧水（H
2O
2）。
接著，收取各組別100μL的反應後的第一反應液（不含HepG2細胞；以下稱為待測液）。並且，使用谷丙轉氨酶的ELISA試劑套組（ELISA Kit for Alanine Aminotransferase（ALT）；USCN.公司；Cat. SEA207Hu）量測各組別的待測液中含有的谷丙轉氨酶（ALT）含量（亦即GTP釋放量），如圖4所示。
需要特別說明的是，圖4中的GTP相對釋放量是以百分比呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖4中，「*」代表在與控制組比較下其p值小於0.05。
請參閱圖4。將空白組的GPT相對釋放量視為100%。相較於空白組，對照組的GPT相對釋放量為119.0%，而實驗組的GPT相對釋放量為110.8%。於此，對照組代表HepG2細胞在酒精作用下受到傷害死亡而釋放出GPT，實驗組則代表在中藥發酵液的作用下HepG2細胞死亡後的GPT的釋放量。因此，實驗組的GPT相對釋放量相較於對照組的GPT相對釋放量有顯著的降低，代表中藥發酵液能降低HepG2細胞的死亡率，進而減少GPT的釋放。換言之，當受體服用中藥發酵液時，能保護肝細胞並降低肝損傷（例如肝臟解酒時肝細胞受到的酒精傷害）的可能性，進而可避免長期肝損傷導致的慢性肝炎等疾病，並達成護肝作用。
例
6
：免疫力相關基因實驗
於此，所檢測的免疫力相關基因包括IL-1B（GeneID：3553）基因、IL-6（GeneID：3569）基因及IL-8基因（GeneID：3576）。
首先，取1.5x10
5個人原發性表皮角質形成細胞（Primary Normal Human Epidermal Keratinocytes, adult；ATCC PCS-200-010
TM；以下稱HEKa細胞）至每孔含有2毫升細胞培養基的六孔細胞培養盤中，於37℃下培養24小時。於此，所使用的細胞培養基為添加有角質細胞生長套組（Keratinocyte Growth Kit；ATCC PCS-200-040TM）的皮膚細胞基礎培養基（Dermal Cell Basal Medium；ATCC PCS-200-030
TM）。
將HEK細胞分為實驗組及控制組。移除各組別的細胞培養基並更換為每孔2mL實驗培養基，然後置於37℃下分別接續培養6小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.25vol%的例1中所得到的中藥發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含中藥發酵液）。
收集各組的HEK細胞，並以RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）萃取出各組的RNA。接著，各組取1000奈克（ng）的RNA作為模板，透過SuperScript
®III反轉錄酶（購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051）將RNA反轉錄為相應之cDNA。再藉由ABI StepOnePlus
TM即時PCR系統（ABI StepOnePlus
TMReal-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））、KAPA SYBR FAST（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）及表3的引子（SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12）對各組的cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction）以觀察HEK細胞內IL-1B基因、IL-6基因及IL-8基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應20秒，接著95°C反應3秒，60°C反應30秒，並重複40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因定量，如圖5所示。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量基因的mRNA表現量，進而推斷基因編碼的蛋白質的表現量。
需要特別說明的是，圖5中的基因表現是以相對表現倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖5中，「***」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
表3
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 | 引子長度 |
| IL-1B | IL-1B_F | SEQ ID NO:7 | TCTTCATTGACCAAGGAAATCGG | 23 |
| IL-1B_R | SEQ ID NO:8 | TCCGGGGTGCATTATCTCTAC | 21 | |
| IL-6 | IL-6_F | SEQ ID NO:9 | CCACGGCCTTCCCTACTTC | 19 |
| IL-6_R | SEQ ID NO:10 | CAGATTGTTTTCTGCAAGTGCAT | 23 | |
| IL-8 | IL-8_F | SEQ ID NO:11 | TTTTGCCAAGGAGTGCTAAAGA | 22 |
| IL-8_R | SEQ ID NO:12 | AACCCTCTGCACCCAGTTTTC | 21 |
於表3中，F為順向引子（Forward primer），而R為反向引子（Reverse primer）。
請參閱圖5。將控制組的IL-1B基因、IL-6基因及IL-8基因的相對表現量視為1.00（即控制組的各組基因的表現量為100%）。相較於控制組，實驗組的IL-1B基因的相對表現量為5.95、實驗組的IL-6基因的相對表現量為5.15，以及實驗組的IL-8基因的相對表現量為3.83。於此，實驗組的IL-1B基因、IL-6基因及IL-8基因的表現量皆有顯著的提升，代表中藥發酵液能有效地提高IL-1B基因、IL-6基因及IL-8基因的表現量。換言之，當受體服用中藥發酵液時，能提高IL-1B基因、IL-6基因及IL-8基因中至少一基因的表現量，進而達成提高受體的免疫力。
例
7
：人體實驗
於此，將40wt%的例1所製備的中藥發酵液與60wt%的異麥芽寡糖混合以形成中藥發酵溶液，並將5mL的植物發酵溶液以水調配成50mL之中藥發酵飲品。
受試人員：10位受試者（年齡介於20-55歲的男性及女性）。其中，受試者的年齡介於20-55歲，且生活作息為常熬夜、易疲勞或肝指數偏高（血液量測AST＞39或ALT＞41）者。
測試項目：血液中總膽紅素（肝功能指標）、血液中低密度膽固醇含量（血脂指標）、總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值（又稱動脈硬化指數；血脂指標）、膚色蠟黃程度、體感問卷調查。
測試方式：10位受試者每日飲用5mL中藥發酵飲品，並連續飲用4周。於飲用前（即第0週）、飲用2週後（即第2週）以及飲用4週後（即第4週），分別採檢受試者血液以檢測受試者的肝功能指標及血脂指標數值、並以智慧3D肌膚檢測儀（Antera3D
®儀器，Miravex公司；檢測準確率在±5%誤差值）檢測受試者皮膚、以及以問卷評量受試者體感。
需要特別說明的是，圖式中「*」代表在與第0週比較下其p值小於0.05。「**」代表在與第0週比較下其p值小於0.01、「***」代表在與第0週比較下其p值小於0.001。
請參閱圖6。10位受試者所檢測出來血液中平均的總膽紅素從1.1毫克/公合（第0週）下降至1.0毫克/公合（第2週），再降至0.9毫克/公合（第4週）。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使此些受試者血液中的總膽紅素下降18.2%。一般而言，總膽紅素作為肝功能指標的參考值為0.3毫克/公合-1.0毫克/公合，故而服用中藥發酵飲品可使受試者的肝指數回復至正常範圍。由此可知，長期使用中藥發酵液可改善受體的肝臟狀況，即中藥發酵液具護肝之功效。
請參閱圖7。將10位受試者在服用前（第0週）以智慧3D肌膚檢測儀所檢測出來平均肌膚蠟黃程度視為100%。受試者在持續飲用2週後，其平均肌膚蠟黃程度為94.3%，並在持續飲用4週後，其平均肌膚蠟黃程度下降至92.8%。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使此些受試者肌膚蠟黃程度下降7.2%。由此可知，長期使用中藥發酵液可降低受試者的總膽紅素，並改善受試者肌膚蠟黃、氣色差等問題，即中藥發酵液具護肝、養神、改善氣色等功效。
請參閱圖8。10位受試者所檢測出來血液中平均的低密度脂蛋白膽固醇的含量從113.43毫克/公合（第0週）下降至111.25毫克/公合（第2週），再降至109.18毫克/公合（第4週）。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使此些受試者血液中的低密度脂蛋白膽固醇含量下降3.7%。由此可知，長期使用中藥發酵液可降低受體的血液中低密度脂蛋白膽固醇含量，並預防低密度脂蛋白膽固醇含量超標，即中藥發酵液具降血脂之功效。
請參閱圖9。10位受試者所檢測出來血液中平均的總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值從4.17（第0週）下降至3.89（第2週），而第四週時則為3.92（第4週）。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可降低0.25的總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值（即4.17-3.92=0.25）。由此可知，長期使用中藥發酵液可降低受體的血液中總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值，並預防動脈硬化風險增加，即中藥發酵液具降血脂之功效。
並且，受試者在第0週、第2週及第4週時分別填寫體感問卷，其包括生活習慣調查及身體狀況調查。受試者先透過生活習慣調查（例如：是否喝含糖飲料、是否有飲酒習慣、是否服用藥物、是否服用保肝的保健食品、是否有肝臟疾病家族遺傳史或曾罹患過肝臟相關疾病、是否熬夜、睡眠時間長度等問題）後，再針對身體狀況（例如：疲勞程度、休息後精神狀況、工作效率、睡眠品質、情緒、眼白顏色、皮膚顏色、食慾狀況、消化狀況、口腔狀況、皮膚狀況、尿液顏色等）進行嚴重度評估，如表4所示。
表4
| 身體狀況調查 | |||||
| 症狀 | 嚴重程度 | ||||
| 無（1） | 輕微（2） | 明顯（3） | 嚴重（4） | 非常嚴重（5） | |
| 1. 經常覺得疲勞 | |||||
| 2. 有足夠休息卻依然沒精神 | |||||
| 3. 睡眠品質變差(難入睡、夢多、易醒) | |||||
| 4. 工作效率降低 | |||||
| 5. 情緒異常(易怒、易感到煩躁、焦慮) | |||||
| 6. 眼白顏色偏黃 | |||||
| 7. 皮膚偏黃且有搔癢感 | |||||
| 8. 食慾變差，較吃不下東西 | |||||
| 9. 消化不良，感覺感覺積食難消 | |||||
| 10. 容易感到反胃、噁心、想吐 | |||||
| 11. 容易口乾舌燥 | |||||
| 12. 口中異味明顯 | |||||
| 13. 皮膚出現蜘蛛痣、紅斑掌 | |||||
| 14. 尿液顏色變濃，呈紅茶色 |
於表4中，「無」代表1分、「輕微」代表2分、「明顯」代表3分、「嚴重」代表4分、「非常嚴重」代表5分。
請參閱圖10。在服用前（第0週），10位受試者對於「工作效率降低」的平均嚴重程度分數為2.10，在持續飲用2週後（即第2週），其「工作效率降低」的平均嚴重程度分數為2.11，而在持續飲用4週後（即第4週），其「工作效率降低」的平均嚴重程度分數下降至1.80。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使10位受試者對於「工作效率降低」的感覺降低至「輕微」以下，即代表中藥發酵液可提高受體的精神並改善受體的工作效率。
在服用前（第0週），10位受試者對於「睡眠品質變差」的平均嚴重程度分數為2.20，在持續飲用2週後（即第2週），其「睡眠品質變差」的平均嚴重程度分數降為2.11，而在持續飲用4週後（即第4週），其「睡眠品質變差」的平均嚴重程度分數下降至1.70。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使10位受試者對於「睡眠品質變差」的感覺降低至「輕微」以下，即代表中藥發酵液可改善受體的睡眠品質。
在服用前（第0週），10位受試者對於「有足夠休息卻沒精神」的平均嚴重程度分數為2.70，在持續飲用2週後（即第2週），其「有足夠休息卻沒精神」的平均嚴重程度分數為2.67，而在持續飲用4週後（即第4週），其「有足夠休息卻沒精神」的平均嚴重程度分數下降至1.90。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使10位受試者對於「有足夠休息卻沒精神」的感覺從接近「明顯」降低至「輕微」，即代表中藥發酵液可改善受體的精神狀況。
在服用前（第0週），10位受試者對於「經常覺得疲勞」的平均嚴重程度分數為3.20，在持續飲用2週後（即第2週），其「經常覺得疲勞」的平均嚴重程度分數降為2.89，而在持續飲用4週後（即第4週），其「經常覺得疲勞」的平均嚴重程度分數下降至2.20。換言之，相較於服用前（第0週），持續飲用4週含有中藥發酵液的中藥發酵飲品後可使10位受試者對於「經常覺得疲勞」的感覺從「明顯」降低至「輕微」，即代表中藥發酵液可改善受體的疲勞感。
由此可知，長期使用中藥發酵液可改善受體的疲勞感，並提高受體的精神。
綜上所述，根據本發明任一實施例的中藥發酵液，其可用以製備提神及改善疲勞的組合物、護肝的組合物、提升免疫力的組合物、降血脂的組合物或其組合。換言之，前述之組合物具有下列一種或多種功能：提升IL-10基因表現以抗發炎、降低肝臟脂肪合成相關基因（SREBP-1c基因及SCD1基因）的表現以抑制脂肪肝形成、降低血液中總膽紅素含量、改善肌膚蠟黃、提升IL-8基因表現以促進白血球分化、提升IL-1B基因表現以活化白血球活性、提升IL-6基因表現以活化淋巴細胞並增加抗體產生、降低的密度脂蛋白膽固醇含量、降低總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值、改善疲勞感。並且，任一實施例的中藥發酵液的總皂苷含量至少大於6000ug/mL。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
無
圖1是中藥發酵液中的總皂苷含量的數據圖；
圖2是抗發炎基因的實驗結果圖；
圖3是脂肪肝合成相關基因的實驗結果圖；
圖4是肝細胞受損後GPT相對釋放量的實驗結果圖；
圖5是免疫相關蛋白質的實驗結果圖；
圖6是受體血液中的總膽紅素的含量的實驗數據圖；
圖7是受體的肌膚蠟黃程度實驗數據圖；
圖8是受體血液中的低密度脂蛋白膽固醇含量的實驗數據圖；
圖9是受體血液中的總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇比值的實驗數據圖；以及
圖10是疲勞評分問卷的數據分析圖。
Claims (15)
- 一種中藥發酵液，其是以一中藥提取液於30℃下依序在不同天中以0.01%~0.5%的酵母菌、0.01%~0.25%的乳酸菌及3~10%的醋酸菌進行7日的發酵所得，其中該中藥提取液是由蛹蟲草(Cordyceps militaris)、人參(Panax ginseng)、耳葉牛皮消(Cynanchum auriculatum)、與茯苓(Poria cocos)以水於95℃下進行浸提所得。
- 如請求項1所述之中藥發酵液，其中該中藥發酵液的總皂苷含量至少大於6000ug/mL。
- 如請求項1所述之中藥發酵液，其中該中藥發酵液的總皂苷含量至少為該中藥提取液的總皂苷含量的6.43倍。
- 如請求項1所述之中藥發酵液，其中該蛹蟲草、該人參、該耳葉牛皮消、該茯苓及該水的固液比為1：1：1：1：50。
- 一種中藥發酵液用於製備一提神及改善疲勞的組合物之用途，其中該中藥發酵液是以一中藥提取液於30℃下依序在不同天中以0.01%~0.5%的酵母菌、0.01%~0.25%的乳酸菌及3~10%的醋酸菌進行7日的發酵所得，且該中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水於95℃下進行浸提所得。
- 一種中藥發酵液用於製備一護肝的組合物之用途，其中該中藥發酵液是以一中藥提取液於30℃下依序在不同天中以0.01%~0.5%的酵母菌、0.01%~0.25%的乳酸菌及3~10%的醋酸菌進行7日的發酵所得，且該中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水於95℃下進行浸提所得。
- 如請求項6所述之用途，其中該中藥發酵液用以降低肝細胞損傷，進而減少谷丙轉氨酶(Glutamate Pyruvate Transaminase,GPT)的釋出。
- 如請求項6所述之用途，其中該中藥發酵液用以提升白血球介素-10(IL-10)基因的表現量，進而達到抗發炎的作用。
- 如請求項6所述之用途，其中該中藥發酵液用以抑制脂肪肝形成。
- 如請求項6所述之用途，其中該中藥發酵液用以降低一受體血液的膽紅素含量。
- 如請求項10所述之用途，其中該中藥發酵液用以改善該受體的肌膚蠟黃。
- 一種中藥發酵液用於製備一提升免疫力的組合物之用途，其中該中藥發酵液是以一中藥提取液於30℃下依序在不同天中以0.01%~0.5%的酵母菌、0.01%~0.25%的乳酸菌及3~10%的醋酸菌進行7日的發酵所得，且該中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水於95℃下進行浸提所得。
- 如請求項12所述之用途，其中該中藥發酵液用以提升一受體的以下至少之一基因的表現量：白血球介素-1B(IL-1B)基因、白血球介素-6(IL-6)基因及白血球介素-8(IL-8)基因。
- 一種中藥發酵液用於製備一降血脂的組合物之用途，其中該中藥發酵液是以一中藥提取液於30℃下依序在不同天中以0.01%~0.5%的酵母菌、0.01%~0.25%的乳酸菌及3~10%的醋酸菌進行 7日的發酵所得，且該中藥提取液是由蛹蟲草、人參、耳葉牛皮消及茯苓以水於95℃下進行浸提所得。
- 如請求項14所述之用途，其中該中藥發酵液用以降低一受體的低密度脂蛋白膽固醇的含量。
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|---|---|---|---|
| TW110126323A TWI784621B (zh) | 2021-07-16 | 2021-07-16 | 中藥發酵液及其提神、改善疲勞、護肝、提升免疫力、降血脂之用途 |
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|---|---|
| TWI784621B true TWI784621B (zh) | 2022-11-21 |
| TW202304493A TW202304493A (zh) | 2023-02-01 |
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|---|---|
| TW (1) | TWI784621B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL2035174A (en) * | 2022-11-23 | 2023-09-21 | Chongqing Tianyou Dairy Co Ltd | Lactobacillus fermentum and applications of lactobacillus fermentum in preparation for improving hyperlipidemia |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105943577A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-09-21 | 刘东波 | 植物药的微生物发酵 |
| CN108323666A (zh) * | 2017-12-31 | 2018-07-27 | 李闯 | 萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消人参固体饮料及制备方法 |
-
2021
- 2021-07-16 TW TW110126323A patent/TWI784621B/zh active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105943577A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-09-21 | 刘东波 | 植物药的微生物发酵 |
| CN108323666A (zh) * | 2017-12-31 | 2018-07-27 | 李闯 | 萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消人参固体饮料及制备方法 |
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| Title |
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| 期刊 向家俊等 耳葉牛皮消塊根發酵產物的免疫活性及化學成分研究 中國藥學雜誌 55(7) 2020 498-503; * |
| 期刊 鄧桃妹等 茯苓化學成分和藥理作用研究進展及質量標誌物的預測分析 中草藥 51(10) 2020 2703-2717 * |
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| NL2035174A (en) * | 2022-11-23 | 2023-09-21 | Chongqing Tianyou Dairy Co Ltd | Lactobacillus fermentum and applications of lactobacillus fermentum in preparation for improving hyperlipidemia |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202304493A (zh) | 2023-02-01 |
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