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TWI745296B - 多價和多重特異性之結合ｇｉｔｒ的融合蛋白 - Google Patents

多價和多重特異性之結合ｇｉｔｒ的融合蛋白 Download PDF

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TWI745296B
TWI745296B TW105123463A TW105123463A TWI745296B TW I745296 B TWI745296 B TW I745296B TW 105123463 A TW105123463 A TW 105123463A TW 105123463 A TW105123463 A TW 105123463A TW I745296 B TWI745296 B TW I745296B
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阿米爾 拉查伊
阿巴辛 胡山
凱特琳 威利斯
奎因 德佛瑞
布蘭登 艾克曼
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美商英伊布里克斯公司
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Abstract

本發明大抵提供專一性接合經糖皮質激素誘導的TNFR相關蛋白(GITR)(TNF受體超家族(TNFRSF)之一員)的分子。更且體地，本發明關於至少結合GITR之多價及/或多重特異性分子。

Description

多價和多重特異性之結合GITR的融合蛋白 相關申請案
本申請案主張於2015年7月23日提出申請之美國臨時申請案第62/195,822號的優先權，該申請案之內容以全部引用之方式併入本文。
本發明大抵提供專一性接合經糖皮質激素誘導的TNFR相關蛋白(GITR)(TNF受體超家族(TNFRSF)之一員)的分子。更且體地，本發明關於至少結合GITR之多價及/或多重特異性分子。
腫瘤壞死因子超家族由數種結構上受體相關的細胞表面受體組成。藉由多聚體配體活化係許多該些受體的常見特性。若經適當地活化，TNFRSF的許多成員在多種病理具有治療效用。重要的是，為了適當地刺激此受體家族通常需要更高階的群聚化，而習知的二價抗體在此不理想。因此，出現針對更多潛在的TNFRSF促效劑分子 的治療需求。
本揭示提供多價TNF受體超家族(TNFRSF)，其結合了至少結合經糖皮質激素誘導的TNFR相關蛋白(GITR，也稱腫瘤壞死因子受體超家族成員18(TNFRSF18)及/或可誘導活化TNFR家族受體(AITR))的融合多肽。這些至少結合GITR的分子稱為「GITR標的分子」或「GITR標的融合物」或「GITR標的蛋白」或「GITR標的融合多肽」或「GITR標的融合蛋白」。在某些實施例中，GITR標的分子為多價分子，例如，多價GITR標的融合蛋白。在某些實施例中，GITR標的分子為多重特異性分子，例如，多重特異性GITR標的融合蛋白。在某些實施例中，GITR標的分子為多價分子及多重特異性分子，例如，多價及多重特異性GITR標的融合蛋白。如本文中所使用，除非另外具體指出，用語「融合蛋白」或「融合多肽」或GITR標的融合蛋白」或「GITR標的融合多肽」表示本揭示之任何融合蛋白實施例，包括，但不限於多價融合蛋白、多重特異性融合蛋白、或多價及多重特異性融合蛋白。
這些GITR標的分子包括結合GITR的至少一域，在本文稱為「GITR結合域」(GITR-BD)。這些GITR-BD包括專一性結合GITR的多肽序列。在某些實施例中，GITR-BD包括多肽序列，肽序列為抗體或包括例如 scFv、Fab、單域抗體(sdAb)、VNAR、或VHH的抗體片段或衍生自上列各者。在某些實施例中，GITR-BD包括人或人化sdAb。
本揭示的GITR標的分子克服來自包括GITR的TNF受體超家族(TNFRSF)的標的成員之習知抗體的問題及限制。TNFRSF的習知抗體標的成員已顯示需要外源性交聯以達到足夠的促效劑活性，如由Fc-γ受體(FcγR)對於DR4、DR5、GITR及OX40的活性抗體之必要性所證明(Ichikawa et al 2001 al Nat.Med.7,954-960,Li et al 2008 Drug Dev.Res.69,69-82；Pukac et al 2005 Br.J.Cancer 92,1430-1441；Yanda et al 2008 Ann.Oncol.19,1060-1067；Yang et al 2007 Cancer Lett.251：146-157；Bulliard et al 2013 JEM 210(9)：1685；Bulliard et al 2014 Immunol and Cell Biol 92：475-480)。除了經由FcγR交聯，其他外源性試劑(包括寡聚配體或抗體結合實體(如，蛋白質A及二級抗體)的添加)已證實可增強抗TNFRSF抗體群聚化與下游傳訊。例如，DR5配體TRAIL的添加增強抗DR5抗體的細胞凋亡誘導能力(Graves et al 2014 Cancer Cell 26：177-189)。這些發現意味著TNFRSF群聚化的需求超過二聚體。
本揭示提供專一性結合GITR之單離多肽。在某些實施例中，單離多肽衍生自抗體或包括scFv、Fab、單域抗體(sdAb)、VNAR、或VHH的抗體片段。在某些實施例中，單離多肽為人或人化sdAb。此sdAb片段可衍生 自VHH、VNAR、經工程化的VH或VK域。VHH可自駱駝科重鏈抗體(heavy chain only antibody)產生。VNAR可自軟骨魚類重鏈抗體產生。已實施多種方法以自習知的異二聚體VH及VK域產生單體sdAb，包括特定生殖系家族的介面設計及選擇。在其他實施例中，單離多肽係衍生自非抗體支架蛋白，例如，但不限於經設計的錨蛋白重覆蛋白(darpin)、高親合性多聚體(avimer)、抗載運蛋白(anticalin)/脂質載運蛋白(lipocalin)、支架蛋白(centyrin)及支架(fynomer)。
在某些實施例中，單離多肽包括選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，單離多肽包括選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，單離多肽包括選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列。
在某些實施例中，單離多肽包括與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，單離多肽包括與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，單離多肽包括與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列。
在某些實施例中，單離多肽包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。
本揭示亦提供多價之結合TNFRSF融合蛋白，其包含二或多個TNFRSF結合域(TBD)，其中至少一TBD結合GITR，在本文稱為「GITR結合域」(GITR-BD)。在某些實施例中，本揭示之融合蛋白具有治療腫瘤的效用。在某些實施例中，本揭示之融合蛋白結合表現在腫瘤細胞上的TNFRSF成員(例如，至少GITR)。
在某些實施例中，本揭示之GITR-BD衍生自抗體或包括scFv、Fab、單域抗體(sdAb)、VNAR或VHH的抗體片段。在某些實施例中，GITR-BD包括人或人化sdAb。此sdAb片段可衍生自VHH、VNAR、經工程化的VH或VK域。VHH可自駱駝科重鏈抗體產生。VNAR可自 軟骨魚類重鏈抗體產生。已實施多種方法以自習知的異二聚體VH及VK域產生單體sdAb，包括特定生殖系家族的介面設計及選擇。在其他實施例中，GITR-BD係衍生自非抗體支架蛋白，例如，但不限於經設計的錨蛋白重覆蛋白(darpin)、高親合性多聚體、抗載運蛋白/脂質載運蛋白、支架蛋白及支架。
一般來說，本揭示之多價融合蛋白包括至少二個以上經由連接子多肽可操作地連接的GITR-BD。在本揭示之多價融合蛋白內作為特定GITR-BD序列之sdAb片段的使用具有避免許多雙/多重特異性抗體法常見的重鏈：輕鏈失配問題之益處。此外，本揭示之多價融合蛋白避免許多雙重特異性抗體必要的長連接子的使用。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有二或多個不同的GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有三或多個不同的GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有四或多個不同的GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有五或多個不同的GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有六或多個不同的GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有多複份之GITR-BD。例如，在某些實施例中，多價融合蛋白含有至少兩複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有至少三複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有至少四複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有至少五複份之GITR-BD。在某些實施例中， 多價融合蛋白含有至少六複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之二或多複份之 GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由 SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之六或多複份 之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之五或多複份之GITR-BD。在某些實施 例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有至少一GITR-BD，該GITR-BD包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白含有二或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、 129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白含有三或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白含有四或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白含有五或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、 112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白含有六或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6 組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選 自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白 含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多 肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序 列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選 自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含 有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例 中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR- BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選 自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白 含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例 中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR- BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含 SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Ec區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序 列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之二或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之三或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之四或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之五或多複份之GITR-BD。在某些實施例中，多價融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之六或多複份之GITR-BD。
在某些實施例中，多價融合蛋白含有至少一GITR-BD，該GITR-BD包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。在某些實施例中，多價融合蛋白含有二或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。在某些實施例中，多價融合蛋白含有三或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、 142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。在某些實施例中，多價融合蛋白含有四或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。在某些實施例中，多價融合蛋白含有五或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含 選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。在某些實施例中，多價融合蛋白含有六或多複份之GITR-BD，該GITR-BD包含CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。
在某些實施例中，多價融合蛋白包含選自由SEQ ID NO：81-105組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含選自由SEQ ID NO：81-93組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含選自由SEQ ID NO：94-105組成的群組的胺基酸序列。
在某些實施例中，多價融合蛋白包含與選自由SEQ ID NO：81-105組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含與選 自由SEQ ID NO：81-93組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含與選自由SEQ ID NO：94-105組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列。
在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：81組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：82組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：83組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：84組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：85組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：86組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：87組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：88組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：89組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：90組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：91組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：92組成的胺 基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：93組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：94組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：95組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：96組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：97組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：98組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：99組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：100組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：101組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：102組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：103組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：104組成的胺基酸序列。在某些實施例中，多價融合蛋白包含由SEQ ID NO：105組成的胺基酸序列。
在某些實施例中，多價GITR標的融合蛋白為四價。如本文中所使用，四價GITR標的分子意指包括兩個GITR-BD的兩複份之GITR標的融合蛋白。例如，在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc。在某些實施例中，本揭示之 四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之結合GITR的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之單離多肽序列。在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之結合GITR的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之sdAb序列。在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之結合GITR的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之人化或完整人sdAb序列。在某些實施例中，GITR-BD包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有兩複份之選自由SEQ ID NO：81-93組成的群組的胺基酸序列。
在某些實施例中，多價GITR標的融合蛋白為六價。如本文中所使用，六價GITR標的分子意指包括三個GITR-BD的兩複份之GITR標的融合蛋白。例如，在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之單離多肽序列。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之sdAb序列。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR- BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為人化或完整人sdAb序列。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子包含選自由SEQ ID NO：94-105組成的群組的胺基酸序列。
相較於無交聯的二價抗體，本揭示之多價融合蛋白能夠增強TNFRSF成員的群聚化相較於無交聯的二價抗體。藉由本揭示之多價融合蛋白調控的經增強的群聚化TNFRSF成員將誘導增強的TNFRSF依賴性傳訊。在大多實施例中，多價融合蛋白將併入超過兩個GITR-BD，例如，三、四、五或六個。在這些實施例中，非TNFRSF抗原的交互作用能夠提供額外的交聯功能並僅藉由一或兩個TBD來達成TNFRSF活化。
在某些實施例中，多價融合蛋白亦包括一或 多個GITR-BD及一或多個結合GITR以外的目標的額外結合域。在某些實施例中，多價、多重特異性融合蛋白亦包括一或多個GITR-BD及一或多個針對非TNFRSF成員抗原的額外結合域。在這些實施例的任一者中，多價、多重特異性融合蛋白亦包括一或多個針對TNFRSF成員的額外結合域，在本文中稱為TNFRSF結合域(TBD)。在這些實施例的任一者中，非TNFRSF抗原的交互作用能夠提供額外的交聯功能並僅藉由一或兩個GITR-BD或一或兩個GITR-BD與TBD來達成TNFRSF活化。
在某些實施例中，多價、多重特異性融合蛋白亦包括一或多個針對TNFRSF成員的額外結合域，在本文中稱為TNFRSF結合域(TBD)。在這些實施例中，多價、多重特異性融合蛋白結合至少兩個不同的抗原。在某些實施例中，多價、多重特異性融合蛋白的所有TBD識別給定之TNFRSF成員上相同的表位。例如，本揭示之多價、多重特異性融合蛋白可併入2、3、4、5或6個TBD，其對給定之TNFRSF成員具有一致的專一性。在其他實施例中，多價、多重特異性融合蛋白將識別給定之TNFRSF成員上不同的表位的TBD併入。例如，本揭示之多價、多重特異性融合蛋白可併入2、3、4、5或6個TBD，其針對GITR、CD40或CD137上各種表位具有不同的識別專一性。在這些實施例中，本揭示之多價、多重特異性融合蛋白含有多個TBD，其標定特定TNFRSF成員的不同區。在某些實施例中，TBD可識別相同TNFRSF成 員上不同的表位或識別不同TNFRSF成員上的表位。例如，本揭示提供併入結合GITR及OX40之TBD的多價、多重特異性融合蛋白。
在其他實施例中，本揭示之融合蛋白係多重特異性融合蛋白，其結合GITR及表現於非腫瘤細胞上的第二TNFRSF成員(諸如，藉由非限制性範例，OX40、CD27、HVEM、CD40、淋巴毒素b受體(LTBR)、外異蛋白A2受體(ED2R)、外異蛋白A受體(EDAR)、TweakR、BCMA、BAFFR、DR3、DR6或CD137)。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白亦為多價。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白為雙特異性。在這些實施例中，本揭示之多重特異性融合蛋白調控免疫細胞導致腫瘤破壞增強。在其他實施例中，本揭示之多重特異性融合蛋白具有治療發炎狀態之用途。在這些實施例中，本揭示之多重特異性融合蛋白調控免疫細胞導致發炎損傷減緩。例如，專一性活化TNFR2可增強Treg增殖而導致免疫抑制。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有 與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列之至少一GITR-BD。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有至少一GITR-BD，GITR-BD包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列的至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之 至少一GITR-BD。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有包含與選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽之至少一GITR-BD。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白含有至少一GITR-BD，該GITR-BD包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列，及包含選自由SEQ ID NO：1-6組成的群組的胺基酸序列之至少一免疫球蛋白Fc區多肽。
相較於無交聯的二價抗體，本揭示之多重特異性融合蛋白能夠增強TNFRSF成員的群聚化。相較於無交聯的二價抗體，藉由本揭示之多重特異性融合蛋白調控的經增強的群聚化TNFRSF成員將誘導增強的TNFRSF依賴性傳訊。在大多實施例中，多重特異性融合蛋白將併入 超過兩個TBD，例如，三、四、五或六個。在某些實施例中，多重特異性融合蛋白將併入TBD及針對非TNFRSF成員抗原的結合域。在這些實施例中，非TNFRSF抗原的交互作用能夠提供額外的交聯功能並僅藉由一或兩個TBD來達成TNFRSF活化。在這些實施例中，多重特異性融合蛋白為結合至少兩個不同的抗原的多重特異性。
在某些實施例中，本揭示之TBD衍生自抗體或包括scFv、Fab、單域抗體(sdAb)、VNAR、或VHH的抗體片段。在某些實施例中，TBD為人或人化sdAb。此sdAb片段可衍生自VHH、VNAR、經工程化的VH或VK域。VHH可自駱駝科重鏈抗體產生。VNAR可自軟骨魚類重鏈抗體產生。已實施多種方法以自習知的異二聚體VH及VK域產生單體sdAb，包括特定生殖系家族的介面設計及選擇。在其他實施例中，TBD係衍生自非抗體支架蛋白，例如，但不限於經設計的錨蛋白重覆蛋白(darpin)、高親合性多聚體、抗載運蛋白/脂質載運蛋白、支架蛋白及支架。
一般來說，本揭示之多重特異性融合蛋白包括至少二個以上經由連接子多肽可操作地連接的TBD。在本揭示作為多重特異性融合蛋白內之特定TBD之sdAb片段的使用具有避免許多雙/多重特異性抗體法常見的重鏈：輕鏈失配問題之益處。此外，本揭示之多重特異性融合蛋白避免許多雙重特異性抗體必要的長連接子的使用。
在某些實施例中，多重特異性融合蛋白的所 有TBD識別給定之TNFRSF成員上相同的表位。例如，本揭示之多重特異性融合蛋白可併入2、3、4、5或6個TBD，其對GITR具有一致的專一性。在其他實施例中，多重特異性融合蛋白將識別給定之TNFRSF成員上不同的表位的TBD併入。例如，本揭示之多重特異性融合蛋白可併入2、3、4、5或6個TBD，其針對GITR、CD40或CD137上各種表位具有不同的識別專一性。在這些實施例中，本揭示之多重特異性融合蛋白含有多個TBD，其標定特定TNFRSF成員的不同區。在某些實施例中，TBD可識別相同TNFRSF成員上不同的表位或識別不同TNFRSF成員上的表位。例如，本揭示提供併入結合GITR及OX40之TBD的多重特異性融合蛋白。
在某些實施例中，本揭示之融合蛋白(如，多價及/或多重特異性融合蛋白)係由單一多肽組成。在其他實施例中，本揭示之融合蛋白係由超過一個多肽組成。例如，異二聚體化域被併入至融合蛋白中，使得構造為不對稱的融合蛋白。例如，若免疫球蛋白Fc區被併入至融合蛋白中，CH3域可用作為同質二聚體化域，或CH3二聚體介面區可被突變以致能異二聚體化。
在某些實施例中，融合蛋白含有TBD及/或GITR-BD在融合蛋白的相對端。例如，在某些實施例中，TBD及/或GITR-BD位在融合蛋白的胺基端(N端)部分及融合蛋白的羧基端(C端)部分兩者上。在其他實施例中，所有TBD及/或GITR-BD位於融合蛋白的相同端上。例 如，TBD及/或GITR-BD位於融合蛋白胺基或羧基端部分上。
在某些實施例中，融合蛋白含有免疫球蛋白Fc區。在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區為選自由IgG1同型、IgG2同型、IgG3同型、及IgG4子類組成的群組的IgG同型。
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或其免疫活性片段為IgG同型。例如，融合蛋白之免疫球蛋白Fc區係由人IgG1同型組成，其具有胺基酸序列：
Figure 105123463-A0202-12-0045-1
Figure 105123463-A0202-12-0045-2
(SEQ ID NO：1)
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或其免疫活性片段包含與SEQ ID NO：1的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的人IgG1多肽序列。
在某些實施例中，人IgG1的Fc區在胺基酸Asn297處經修飾(Boxed,Kabat Numbering)以防止融合蛋白的醣基化，如，Asn297Ala(N297A)或Asn297Asp(N297D)。在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在胺基酸Leu235處經修飾(Boxed,Kabat Numbering)以改變Fc受體的交互作用，如，Leu235Glu(L235E)或Leu235Ala (L235A)。在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在胺基酸Leu234處經修飾(Boxed,Kabat Numbering)以改變Fc受體的交互作用，如，Leu234Ala(L234A)。在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在胺基酸Leu234處經修飾(Boxed,Kabat Numbering)以改變Fc受體的交互作用，如，Leu235Glu(L235E)。在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在胺基酸234及235兩者處經改變，如，Leu234Ala及Leu235Ala(L234A/L235A)或Leu234Val及Leu235Ala(L234V/L235A)。在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在Gly235經改變以減少Fc受體結合。例如，其中Gly235自該融合蛋白刪去。在某些實施例中，人IgG1的Fc區在胺基酸G1y236處經修飾以增強與CD32A的交互作用，如，Gly236Ala(G236A)。在某些實施例中，人IgG1的Fc區缺少Lys447(EU index of Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest)。
在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在下列位置一或多處經改變以減少Fc受體結合：Leu234(L234)、Leu235(L235)、Asp265(D265)、Asp270(D270)、Ser298(S298)、Asn297(N297)、Asn325(N325)或Ala327(A327)。例如，Leu234Ala(L234A)、Leu235Ala(L235A)、Asp265Asn(D265N)、Asp270Asn(D270N)、Ser298Asn(S298N)、Asn297Ala(N297A)、Asn325Glu(N325E)或Ala327Ser(A327S)。在較佳的實施例中，Fc區內的修飾減少對Fc-受體-γ受體的結合，同時對於結合至 新生的Fc受體(FcRn)的影響最小。
在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在下列位置一或多處缺少胺基酸以減少Fc受體結合：Glu233(E233)、Leu234(L234)、或Leu235(L235)。在這些實施例中，這三個胺基酸的缺失減少互補蛋白C1q結合。這些Fc區多肽的修飾在本文中稱為「Fc缺失」多肽。
Figure 105123463-A0202-12-0047-3
Figure 105123463-A0202-12-0047-6
(SEQ ID NO：2)
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或其免疫活性片段包含與SEQ ID NO：2的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的人IgG1多肽序列。
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或融合蛋白的免疫活性片段係由人IgG2同型組成，其具有胺基酸序列：
Figure 105123463-A0202-12-0047-4
Figure 105123463-A0202-12-0047-5
(SEQ ID NO：3)
在某些實施例中，融合蛋白或其免疫活性片段包含與SEQ ID NO：3的胺基酸序列至少50%、60%、
65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的人IgG2多肽序列。
在某些實施例中，人IgG2的Fc區在胺基酸Asn297處經修飾(Boxed,Kabat Numbering)以防止抗體的醣基化，如，Asn297Ala(N297A)或Asn297Asp(N297D)。在某些實施例中，人IgG2的Fc區缺少Lys447(EU index of Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest)。
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或融合蛋白的免疫活性片段係由人IgG3同型組成，其具有胺基酸序列：
Figure 105123463-A0202-12-0048-8
Figure 105123463-A0202-12-0048-7
(SEQ ID NO：4)
在某些實施例中，抗體或其免疫活性片段包含與SEQ ID NO：4的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的人IgG3多肽序列。
在某些實施例中，人IgG3的Fc區在胺基酸Asn297處經飾修(Boxed,Kabat Numbering)以防止抗體的醣基化，如，Asn297Ala(N297A)或Asn297Asp (N297D)。在某些實施例中，人IgG3的Fc區在胺基酸435處經飾修以延長半衰期，如，Arg435His(R435H)。在某些實施例中，人IgG3的Fc區缺少Lys447(EU index of Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest)。
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或融合蛋白的免疫活化片段係由人IgG4同型組成，其具有胺基酸序列：
Figure 105123463-A0202-12-0049-12
Figure 105123463-A0202-12-0049-11
(SEQ ID NO：5)
在某些實施例中，抗體或其免疫活性片段包含與SEQ ID NO：5的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的人IgG4多肽序列。
在某些實施例中，免疫球蛋白Fc區或融合蛋白的免疫活化片段係由人IgG4同型組成，其具有胺基酸序列：
Figure 105123463-A0202-12-0049-9
Figure 105123463-A0202-12-0049-10
(SEQ ID NO：6)
在某些實施例中，抗體或其免疫活性片段包含與SEQ ID NO：6的胺基酸序列至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的人IgG4多肽序列。
在其他實施例中，人IgG4的Fc區在胺基酸235處經修飾以改變Fc受體交互作用，如，Leu235Glu(L235E)。在某些實施例中，人IgG4的Fc區在胺基酸Asn297處經飾修(Kabat Numbering)以防止抗體的醣基化，如，Asn297Ala(N297A)或Asn297Asp(N297D)。在某些實施例中，人IgG4的Fc區缺少Lys447(EU index of Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest)。
在某些實施例中，人IgG的Fc區經修飾以增強FcRn結合。增強結合至FcRn之Fc突變的範例為Met252Tyr、Ser254Thr、Thr256Glu(分別為M252Y、S254T、T256E)(Kabat numbering,Dall’Acqua et al 2006,J.Biol Chem Vol.281(33)23514-23524)、Met428Leu及Asn434Ser(M428L、N434S)(Zalevsky et al 2010 Nature Biotech,Vol.28(2)157-159)、或Met252Ile、Thr256Asp、Met428Leu(分別為M252I、T256D、M428L)，(EU index of Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest)。
在某些實施例中，其中所揭示之融合蛋白包 括Fc多肽，該Fc多肽經突變或修飾。在這些實施例中，使用Kabat編號系統(Kabat numbering system)之經突變或修飾的Fc多狀包括下列突變：Met252Tyr及Met428Leu(M252Y、M428L)。
在某些實施例中，人IgG的Fc區經修飾以改變抗體依賴性細胞介導的細胞毒性作用(antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC)及/或互補依賴性細胞毒性作用(complement-dependent cytotoxicity，CDC)，如，Natsume et al.,2008 Cancer Res,68(10)：3863-72；Idusogie et al.,2001 J Immunol,166(4)：2571-5；Moore et al.,2010 mAbs,2(2)：181-189；Lazar et al.,2006 PNAS,103(11)：4005-4010；Shields et al.,2001 JBC,276(9)：6591-6604；Stavenhagen et al.,2007 Cancer Res,67(18)：8882-8890；Stavenhagen et al.,2008 Advan.Enzyme Regul.,48：152-164；Alegre et al,1992 J Immunol,148：3461-3468；Reviewed in Kaneko and Niwa,2011 Biodrugs,25(1)：1-11中描述之胺基酸修飾。增強ADCC之突變的範例包括在Ser239及Ile332處之修飾，例如Ser239Asp及Ile332Glu(S239D、I332E)。增強CDC之突變的範別包括在Lys326及Glu333處之修飾。在某些實施例中，使用Kabat編號系統的Fc區在這些位置之一或兩者處經修飾，例如Lys326Ala及/或Glu333Ala(K326A及E333A)。
在某些實施例中，人IgG的Fc區經修飾以誘 導異二聚體化。例如，在CH3域內的Thr366處具有胺基酸修飾(當經一更大的胺基酸替代時，如，Try(T366W))能夠與在位置Thr366、Leu368、及Tyr407處修飾成較小胺基酸(如，分別為Ser、Ala及Val(T366S/L368A/Y407V))之胺基酸的第二CH3域優先配對。經由CH3修飾的異二聚體化能夠藉由雙硫鍵的引入而更加穩定，例如藉由在相對的CH3域上將Ser354改變為Cys(S354C)及將Y349改變成Cys(Y349C)(參考Carter,2001 Journal of Immunological Methods,248：7-15)。
在某些實施例中，人IgG的Fc區經修飾以防止二聚體化。在這些實施例中，本揭示之融合蛋白為單體。例如，將在殘基處Thr366修飾為帶電殘基，如Thr366Lys、Thr366Arg、Thr366Asp、或Thr366Glu(分別為T366K、T366R、T366D、或T366E)防止CH3-CH3二聚體化。
在某些實施例中，融合蛋白的Fc區在下列位置一或多處經改變以減少Fc受體結合：Leu234(L234)、Leu235(L235)、Asp265(D265)、Asp270(D270)、Ser298(S298)、Asn297(N297)、Asn325(N325)或Ala327(A327)。例如，Leu234Ala(L234A)、Leu235Ala(L235A)、Asp265Asn(D265N)、Asp270Asn(D270N)、Ser298Asn(S298N)、Asn297Ala(N297A)、Asn325Glu(N325E)或Ala327Ser(A327S)。在較佳的實施例中，Fc區內的修飾減少對Fc-受體-γ受體的結合，同時對於結合至 新生的Fc受體(FcRn)的影響最小。
在某些實施例中，融合蛋白含有衍生自免疫球蛋白鉸鏈區的多肽。鉸鏈區能選自該等人IgG子類之任一者。例如，融合蛋白可含有具有序列為EPKSSDKTHTCPPC(SEQ ID NO：7)之經修飾的IgG1鉸鏈，其中與輕鏈的C端半胱胺酸形成二硫化物的Cys220被突變為絲胺酸，如，Cys220Ser(C220S)。在其他實施例中，融合蛋白含有具有序列DKTHTCPPC(SEQ ID NO：8)的截斷鉸鏈。
在某些實施例中，融合蛋白具有來自IgG4的經修飾鉸鏈(經修飾以防止或減少股交換，如Ser228Pro(S228P))，其具有序列ESKYGPPCPPC SEQ ID NO：9。在某些實施例中，融合蛋白含有連接子多肽。在其他實施例中，融合蛋白含有連接子及鉸鏈多肽。
在某些實施例中，本揭示之融合蛋白缺少或具有減少附接至N連接聚糖鏈於N297處的海藻糖。有多種方法防止海藻糖基化，包括但不限於製造第八型岩藻醣轉移酶(FUT8)缺陷細胞株；對哺乳動物細胞培養基添加抑制劑，例如粟精胺(castanospermine)；以及製造細胞株的代謝工程。
在某些實施例中，TBD經工程化以消除原本就存在於人類中的抗體之識別。在某些實施例中，本揭示之單域抗體藉由位置Leu11突變而被修飾，例如Leu11Glu(L11E)或Leu11Lys(L11K)。在其他實施例中， 本揭示之單域抗體藉由羧基端區的改變而被修飾，例如由GQGTLVTVKPGG(SEQ ID NO：10)或GQGTLVTVEPGG(SEQ ID NO：11)或其修飾組成的端序列。在某些實施例中，本揭示之單域抗體藉由位置11突變與羧基端區改變而被修飾。
在某些實施例中，本揭示之融合蛋白之TBD及/或GITR-BD經由胺基酸連接子可操作地連接。在某些實施例中，這些連接子主要由胺基酸的甘胺酸及絲胺酸組成，在本文中示為GS連接子。本揭示之融合蛋白GS連接子可為各種長度，例如，5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個胺基酸長度。
在某些實施例中，GS連接子包含選自由下列組成的群組的胺基酸序列：GGSGGS，即(GGS)2(SEQ ID NO：12)；GGSGGSGGS，即(GGS)3(SEQ ID NO：13)；GGSGGSGGSGGS，即(GGS)4(SEQ ID NO：14)；及GGSGGSGGSGGSGGS，即(GGS)5(SEQ ID NO：15)。
在某些實施例中，連接子為可撓性連接子，包含甘胺酸殘基，諸如，藉由非限制性範例GG、GGG、GGGG(SEQ ID NO：16)、GGGGG(SEQ ID NO：17)、及GGGGGG(SEQ ID NO：18)。
在某些實施例中，GITR標的融合蛋白包括GS連接子及甘胺酸連接子之組合。
圖1示意性地說明本揭示之例示性多價融合蛋白。
圖2A、2B及2C為證實藉由流式細胞技術評估GITR標的融合蛋白與表現於CHO細胞上的GITR之結合的一系列圖示。GITR抗體、TRX-518在這些研究中被用作為控制組。
圖3A、3B、及3C為證實GITR標的融合蛋白阻斷GITRL與GITR之間的交互作用能力的一系列圖示。在本文中，流式細胞技術分析使用表現GITR的CHO細胞而重組GITRL用於評估阻斷能力。GITR抗體、TRX-518被用在這些研究中被用作為控制組。
圖4A、4B、4C、4D、4E及4F為描述所揭示稱為hzC06v1.1、hzC06v1.2、hzC06v1.3、hzC06v1.4、hzC06v2.1、hzC06v2.2、hzC06v2.3、hzC06v2.4、hzC06v3、hzC06v3.1、hzC06v3.2、hzC06v3.3、hzC06v3.4、hzC06v3.5、hzC06v3.6、hzC06v3.7、hzC06v3.8、hzC06v3.9、hzC06v3.10、hzC06v3.11及hzC06v3.12之GITR標的分子對表現於CHO細胞表面上的人GITR及獼猴GITR(「cyno GITR」)之結合，由流式細胞技術所測量的一系列圖示。
圖5A、5B、5C、5D、5E、5F及5G為描述所揭示稱為hzC04v4.1、hzC04v4.1.2、hzC04v4.2、hzC04v4.2.2、hzC04v5、hzC04v1.2.1、hzC04v5.1、hzC04v5.2、hzC04v5.3、hzC04v5.4、hzC04v5.5、 hzC04v5.6、hzC04v5.7、hzC04v5.8、hzC04v5.9、hzC04v5.10、hzC04v5.11及hzC04v5.12之GITR標的分子對表現於CHO細胞表面上的人GITR及獼猴GITR(「cyno GITR」)之結合，由流式細胞技術所測量的一系列圖示。
圖6為示意性地說明所揭示之四價抗GITR分子，其係以兩份串聯的單域可變區(sdAb)與人IgG1的Fc域融合構成。替代分子係以衍生自小鼠IgG2a的Fc域構成。
圖7為描述所揭示之抗GITR分子(在本文中稱為四價hzC06-hIgG1)與初級人T細胞結合之圖示。四價hzC06-hIgG1係以兩份之SEQ ID NO：93的GITR結合分子構成，其接著以兩份串聯之SEQ ID NO：59的單域可變區(sdAb)與SEQ ID NO：1之人IgG1的Fc域融合構成。
圖8A及8B為描述所揭示之四價GITR標的分子活化表現GITR的報導細胞株中的NF-kB傳訊的能力之一系列圖示。
圖9A、9B及9C為描述不論施予的日期，以所揭示之四價GITR標的分子處理，顯著減少CT26腫瘤生長之一系列圖示。
圖10為描述CT26腫瘤生長的劑量依賴性抑制相對於所揭示之四價GITR標的分子之一系列圖示。
圖11為描述MC38腫瘤生長的劑量依賴性抑 制相對於所揭示之四價GITR標的分子之一系列圖示。
圖12A、12B及12C為描述Fc功能對於抑制CT26腫瘤生長的影響之一系列圖示。
圖13A、13B及13C為描述以四價GITR標的分子處理隨著時間對於攻擊CT26腫瘤產生抗性之一系列圖示。
圖14A、14B及14C為描述以所揭示之四價GITR標的分子處理顯著減少Treg頻率並改變腫瘤微環境內的Treg對Teffector細胞比例之一系列圖示。
圖15A及15B為描述以所揭示之四價GITR標的分子處理顯著誘導CD8 T細胞活化及增殖之一系列圖示。
本揭示提供專一性接合經糖皮質激素誘導的TNFR相關蛋白(GITR)(TNF受體超家族(TNFRSF)之一員)的分子。更且體地，本揭示關於至少結合GITR之多價分子。這些多價TNFRSF結合融合蛋白，其包含二或多個TNFRSF結合域(TBD)，其中至少一TBD結合GITR，在本文稱為「GITR結合域」(GITR-BD)。
GITR為TNFRSF的成員，且基本上表現於腫瘤中的CD4+/CD25+/Foxop3+調節性T細胞(Treg)上，並且在活化後向上調節其他T細胞群。其假設具有並主導Treg調控免疫自身耐受的角色。GITR促效劑減緩Treg之 抑制活性，且在小鼠模型中已顯示增強T細胞殺死腫瘤的效應因子。因此功能性GITR促效劑具有很好的腫瘤免疫治療的潛在性。
在某些實施例中，本揭示之融合蛋白併入至少一GITR-BD。在某些實施例中，融合蛋白為多價融合蛋白。在某些實施例中，融合蛋白為多重特異性融合蛋白，其結合GITR與一第二抗原，諸如，例如任何其他的TNFRSF成員。在某些實施例中，融合蛋白為多重特異性與多價融合蛋白。
在某些實施例中，GITR-BD結合人及獼猴的GITR。在某些實施例中，GITR-BD阻斷、抑制或以其他方式調控GITR與其配體GITR配體(GITR-L)的交互作用。在其他實施例中，GITR-BD不阻斷、抑制或以其他方式調控GITR與GITR-L的交互作用。在某些實施例中，本揭示之融合蛋白併入多份辨識GITR上相同表位之GITR-BD。在某些實施例中，本揭示之融合蛋白併入多個GITR-BD，其識別GITR上的相同表位。在某些實施例中，本揭示之融合蛋白併入多個GITR-BD，其識別GITR上的不同表位。在某些實施例中，本揭示之融合蛋白併入多個GITR-BD，其中一些GITR-BD阻斷GITR-GITR-L的交互作用而其他不阻斷GITR-GITR-L的交互作用。在較佳的實施例中，本揭示的GITR標的融合蛋白誘導腫瘤細胞的直接細胞死亡。
在某些實施例中，GITR標的分子包括至少一 份的單域抗體(sdAb)序列，其專一性結合GITR。在某些實施例中，GITR標的分子包括二或多複份的sdAb，其專一性結合GITR，例如三或更多、四或更多、五或更多或六或多複份的sdAb專一性結合GITR。
單域抗體(sdAb)為由單一單體可變抗體域組成的抗體片段，其可選擇性地結合至特定抗原。當只有12至15kDa的分子量時，單域抗體比一般抗體(150至160kDa)更小，其由兩個重蛋白鏈與兩個輕鏈組成，且甚至小於Fab片段(約50kDa，一輕鏈與半個重鏈)及單鏈可變片段(約25kDa，兩個可變域，一個來自輕鏈一個來自重鏈)。
單域抗體係其互補性決定區為部分單域多肽的抗體。範例包括但不限於重鏈抗體、天生缺乏輕鏈的抗體、衍生自習知的4鏈抗體的單域抗體、經工程化的抗體及衍生自抗體以外的單域支架。單域抗體可衍生自任何物種，包括但不限於老鼠、人、駱駝，駱馬，山羊，兔及/或牛。在某些實施例中，本文中所使用之單域抗體為自然存在之單域抗體，又稱為缺乏輕鏈的重鏈抗體。為了清楚起見，此衍生自天缺乏輕鏈的重鏈抗體的可變域在本文中又稱為VHH以與四鏈免疫球蛋白的習知的VH作區隔。此VHH分子可衍生自駱駝科物種產生的抗體，例如駱駝、駱馬、單峰駱駝、羊駝、原駝。駱駝科以外的其他物種可產生天生缺乏輕鏈的重鏈抗體；此VHH即在本揭示的範圍內。
GITR VHH(衍生自駱馬)及人化序列示於下，而CDR序列示於下列之序列中。在某些實施例中，結合GITR的sdAb與IgG的Fc區融合，且在這些實施例中，融合蛋白為每個分子具有兩個GITR結合域的二價物。在某些實施例中，兩個結合GITR的sdAb(2x)與IgG的Fc區融合，且在這些實施例中，融合蛋白為每個分子具有四個GITR結合域的四價物。在某些實施例中，三個結合GITR的sdAb(3x)與IgG的Fc區融合，且在這些實施例中，融合蛋白為每個分子具有六個GITR結合域的六價物。
結合GITR的sdAb之範例
B09
QVQLQESGGXLVQSGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRLAPGKQRELVAVMSSGSPKYADSVKGRFTISRGSARGTVYLQMDSLKPEDTAVYYCYADVATGWGRDASAYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：19)
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H09
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F05
QVQLVQSGGGLVQAGGSLRLSCTASGSIFSINHMAWYRQAPGKQREMVAHITGGASTKYADSVKGRFTISRDSALNTVSLRMNSLKPEDTAVYYCNAEVNEGWNADYYDVWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：21)
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C06
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2A1
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E2
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B12
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B2
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F2
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B3
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E3
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B4
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B7
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C7
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C4
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B5
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H11
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H11v420
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H11v420.1
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H11v401
EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP(SEQ ID NO：38)
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H11v401.1
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H11v421
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hzC04v5.12
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2x H11v420+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0075-19
Figure 105123463-A0202-12-0075-20
(SEQ ID NO：81)
2x H11v420.1+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0075-21
Figure 105123463-A0202-12-0076-22
Figure 105123463-A0202-12-0076-23
(SEQ ID NO：82)
2x H11v420 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0076-25
Figure 105123463-A0202-12-0076-24
(SEQ ID NO：83)
2x H11v420.1 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0076-27
Figure 105123463-A0202-12-0076-26
(SEQ ID NO：84)
2x H11v401+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0076-28
Figure 105123463-A0202-12-0077-29
Figure 105123463-A0202-12-0077-31
(SEQ ID NO：85)
2x H11v401.1+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0077-33
Figure 105123463-A0202-12-0077-32
(SEQ ID NO：86)
2x H11v401 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0077-34
Figure 105123463-A0202-12-0077-35
(SEQ ID NO：87)
2x H11v401.1 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0078-37
Figure 105123463-A0202-12-0078-36
(SEQ ID NO：88)
2x H11v421+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0078-38
Figure 105123463-A0202-12-0078-39
(SEQ ID NO：89)
2x H11v421.1+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0078-40
Figure 105123463-A0202-12-0078-41
(SEQ ID NO：90)
2x H11v421 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0079-43
Figure 105123463-A0202-12-0079-42
(SEQ ID NO：91)
2x H11v421.1 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0079-44
Figure 105123463-A0202-12-0079-45
(SEQ ID NO：92)
2x hzC06 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0079-46
Figure 105123463-A0202-12-0079-47
(SEQ ID NO：93)
3x H11V420+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0080-48
Figure 105123463-A0202-12-0080-49
(SEQ ID NO：94)
3x H11v420.1+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0080-51
Figure 105123463-A0202-12-0080-50
(SEQ ID NO：95)
3x H11v420 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0080-52
Figure 105123463-A0202-12-0081-54
Figure 105123463-A0202-12-0081-53
(SEQ ID NO：96)
3x H11v420.1 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0081-55
Figure 105123463-A0202-12-0081-56
(SEQ ID NO：97)
3x H11v401+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0081-59
Figure 105123463-A0202-12-0081-58
(SEQ ID NO：98)
3x H11v401.1+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0082-60
Figure 105123463-A0202-12-0082-62
(SEQ ID NO：99)
3x H11v401 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0082-61
Figure 105123463-A0202-12-0082-63
(SEQ ID NO：100)
3x H11v401.1 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0082-64
Figure 105123463-A0202-12-0083-65
Figure 105123463-A0202-12-0083-71
(SEQ ID NO：101)
3x H11v421+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0083-66
Figure 105123463-A0202-12-0083-70
(SEQ ID NO：102)
3x H11v421.1+缺失Fc的多肽
Figure 105123463-A0202-12-0083-67
Figure 105123463-A0202-12-0083-69
(SEQ ID NO：103)
3x H11v421 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0084-72
Figure 105123463-A0202-12-0084-74
(SEQ ID NO：104)
3x H11v421.1 IgG1-Fc
Figure 105123463-A0202-12-0084-73
Figure 105123463-A0202-12-0084-75
(SEQ ID NO：105)
在某些實施例中，融合蛋白標定本揭示之GITR包括經由胺基酸連接子可操作地連接之二或多個多肽序列。在某些實施例中，這些連接子主要由胺基酸的甘胺酸及絲胺酸組成，在本文中示為GS連接子。本揭示之融合蛋白之GS連接子可為各種長度，例如，5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 個胺基酸長度。
在某些實施例中，GS連接子包含選自由下列組成的群組的胺基酸序列：GGSGGS，即(GGS)2(SEQ ID NO：12)；GGSGGSGGS，即(GGS)3(SEQ ID NO：13)；GGSGGSGGSGGS，即(GGS)4(SEQ ID NO：14)；及GGSGGSGGSGGSGGS，即(GGS)5(SEQ ID NO：15)。
在某些實施例中，連接子為可撓性連接子，包含甘胺酸殘基，諸如，藉由非限制性範例GG、GGG、GGGG(SEQ ID NO：16)、GGGGG(SEQ ID NO：17)及GGGGGG(SEQ ID NO：18)。
在某些實施例中，結合GITR的融合蛋白包括GS連接子與甘胺酸連接子的組合。
在某些實施例中，多價GITR標的融合蛋白為四價。在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc。在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之結合GITR的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之單離多肽序列。在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之結合GITR的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之sdAb序列。在某些實施例中，本揭示之四價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份 之結合GITR的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之人化或完整人sdAb序列。在某些實施例中，四價GITR標的分子包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，四價GITR標的分子包含選自由SEQ ID NO：81-93組成的群組的胺基酸序列。
在某些實施例中，多價GITR標的融合蛋白為六價。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR- BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之人化或單離多肽序列。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之sdAb序列。在某些實施例中，本揭示之六價GITR標的分子包括具有下列結構之兩複份之GITR標的融合蛋白：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc，其中GITR-BD為結合GITR之人化或完整人sdAb序列。在某些實施例中，六價GITR標的分子包含互補性決定區1(CDR1)、CDR2及CDR3，該CDR1包含選自由SEQ ID NO：106、109、112、117、120、125、131、138、143、148及149組成的群組的胺基酸序列，該CDR2包含選自由SEQ ID NO：107、110、113、115、118、121、123、128、130、132、134、136、137、139、141、144及147組成的群組的胺基酸序列，且該CDR3包含選自由SEQ ID NO：108、111、114、116、119、122、124、126、127、129、133、135、140、142、145、146及150組成的群組的胺基酸序列。在某些實施例中，六價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：19-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。 在某些實施例中，六價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：42-62組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，六價GITR標的分子含有包含選自由SEQ ID NO：63-80組成的群組的胺基酸序列之至少一GITR-BD。在某些實施例中，六價GITR標的分子包含選自由SEQ ID NO：94-105組成的群組的胺基酸序列。
本文中所述之GITR標的蛋白係可用於治療、診斷及預防適應症各者中。例如，GITR標的蛋白係可用於治療個體之各種疾病及病症。在某些實施例中，GITR標的蛋白可用於治療、緩解症狀、改善及/或延遲個體之疾病或病症的進展，其個體正受到或經識別為有發炎疾病或病症的風險。在某些實施例中，GITR標的蛋白可用於治療、緩解症狀、改善及/或延遲癌症或其他腫瘤病況的進展。在某些實施例中，癌症為膀胱癌、乳癌、子宮/子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃腸癌、胰腺癌、大腸直腸癌、大腸癌、腎癌、頭頸癌、肺癌、胃癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、皮膚癌、中樞神經系統腫瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相關癌。在特定實施例中，癌症為轉移性癌症、頑固性癌症、或復發性癌症。在某些實施例中，GITR標的蛋白可用於減少或消耗有其需求之個體的腫瘤中的調節性T細胞數量。在某些實施例中，GITR標的蛋白可用於刺激個體的免疫反應。在某些實施例中，GITR標的蛋白可用於治 療、緩解症狀、改善及/或延遲自我免疫疾病或病症之進展。在某些實施例中，GITR標的蛋白可用於治療、緩解症狀、改善及/或延遲病毒、細菌及寄生蟲感染之進展。
本揭示之治療配方(包括本揭示之GITR標的分子)係用以治療或緩解與疾病或病症有關的症狀，該疾病或病症有關於個體中GITR的異常活動及/或表現。治療方案係藉由使用標準方法(包括數種臨床及/或實驗室程序任一者)識別個體(如人類病患)受到(或處於發展的風險)疾病或病症而進行，該疾病或病症關於GITR的異常活動及/或表現。病患一詞包括人及家畜個體。個體一詞包括人及其他哺乳類動物。
治療的效率係結合用於診斷或治療與GITR的異常活動及/或表現之特定疾病或病症的任何已知方法來決定。與GITR的異常活動及/或表現有關的疾病或病症之一或多種症候群的緩解意指GITR標的分子賦與臨床上的益處。
本揭示之GITR標的分子的治療用途亦能包括一或多種額外藥劑的施予。在某些實施例中，一或多種額外藥劑為抗GITR抗體或融合蛋白、抗PD1抗體或融合蛋白、LAG-3抗體或融合蛋白、CTLA-4抗體或融合蛋白、及/或PD-L1抗體或融合蛋白。
本發明的GITR標的分子可單獨施予或與其他處理模式一起施予。其可在其他處理模式之前、基本上同時、或之後提供，例如，外科手術、化學治療、放射治 療、或生物製劑，諸如其他治療性多肽/抗體。
在某些實施例中，本發明的GITR標的分子可與化學治療藥劑一起結合使用。化學治療藥劑的範例包括，但不限於烷化劑，諸如沙奧特帕(thiotepa)及Cytoxan®環磷醯胺；烷基磺酸鹽類，諸如硫酸布他卡因(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類，諸如苯佐替派(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及尿烷亞胺(uredopa)；乙烯亞胺類(ethyleneimine)及甲基丙烯醯胺類(methylamelamine)包括六甲密胺(altretamine)、三亞胺三嗪(triethylenemelamine)、三亞乙基膦醯胺(trietylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷醯胺(triethiylenethiophosphoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；乙醯生合成物(acetogenin)(特別是泡番荔枝辛及泡番荔枝辛酮)；喜樹鹼(包括拓普替康(topotecan)合成類似物)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)、比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素類(尤其是念珠藻素1及念珠藻素8)；尾海兔素(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括KW-2189及CB1-TM1合成類似物)；五加素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥類(nitrogen mustard)，諸如氮芥苯丁酸(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷醯胺 (olophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、左旋苯丙氨酸氮芥(melphalan)、新氮芥(novembichin)、膽固醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、松龍苯芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲類(nitrosurea)，諸如亞硝基脲氮芥(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、及雷莫司汀(ranimustine)；抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(如，卡利奇霉素(calicheamicin)，特別是卡利奇霉素γ1I及卡利奇霉素ωI1(參見如，Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；達內霉素(dynemicin)，包括達內霉素A；二膦酸鹽類，諸如氯膦酸鹽(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新抑癌素生色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色素蛋白烯二炔抗生素生色團)、阿克拉霉素類(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、博來霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉霉素(carabicin)、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧-L-正白胺酸、Adriamycin®多比柔星(包括嗎啉基多比柔星(morpholino-doxorubicin)、 氰基嗎啉基多比柔星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉基多比柔星(pyrrolino-doxorubicin)及去氧多比柔星)、表阿霉素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂霉素(mitomycin)諸如絲裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、諾加霉素(nogalamycin)，橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲霉素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、鳥苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝類諸如胺甲喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物諸如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、喋羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物諸如氟達拉賓(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氟氧尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄性素類諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺類諸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦 (trilostane)；葉酸補充劑諸如亞葉酸(folinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)、依洛尼塞(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；美登木素生物鹼類(maytansinoid)諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼樹酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；细交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素類(trichothecene)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A(verracurin A)、漆斑菌素A(roridin A)及蛇形毒素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪 (dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；阿拉伯糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺(cyclophosphamide)；塞替派(thiotepa)；類紫杉醇類(taxoid)如Taxol®紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、Abraxane®無克列莫佛(Abraxane® Cremophor-free)、紫杉醇的經工程化的白蛋白奈米粒子配方(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)、及Taxotere®多西他賽((Rhône-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；Gemzar®吉西他濱；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲喋呤；鉑類似物諸如二氯二胺鉑(cisplatin)、益樂鉑(oxaliplatin)及卡鉑普來錠(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)；鉑(platinum)；依妥普賽(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；Navelbine®長春瑞濱(vinorelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅霉素(daunorubicin)；胺基喋呤(aminopterin)；西羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；依立替康(irinotecan)(Camptosar,CPT-11)(包括依立替康與5-FU及亞葉酸(leucovorin)的治療方案)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃醇類諸如視黃酸；卡培他濱(capecitabine)；康普瑞汀(combretastatin)；亞葉酸 (LV)；奧沙立鉑(oxaliplatin)，包括奧沙立鉑治療方案(FOLFOX)；PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(如埃羅替尼(Tarceva®)及VEGF-A的抑制劑，其減少細胞增生及上述任務的醫藥上可接受的鹽類、酸或衍生物。
其他的非限制例示性化學治療劑包括抗激素藥，其用以調控或抑制激素作用於癌症上，諸如抗雌激素類及選擇性雌激素受體調節子(SERM)，包括，例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括Nolvadex®他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、可莫昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)、及Fareston®他莫昔芬；抑制芳香酶酵素的芳香酶抑制劑，其調控腎上腺的雌激素生產，諸如，例如4(5)-咪唑類、胺麩精(aminoglutethimide)、Megase®醋酸美皆斯妥(megestrol acetate)、Aromasin®依西美坦(exemestane)、福美坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、Rivisor®伏氯唑(vorozole)、Femara®來曲唑(letrozole)、及Arimidex®阿那曲唑(anastrozole)；及抗雄激素類諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸、特別是抑制參與附著細胞增生的訊號傳遞路徑的基因表現之該等者，諸如，例如PKC-α、Ralf及H-Ras；核糖酵素類諸如vegf表現抑制劑(如Angiozyme®核糖酵素)及HER2表現抑制劑；疫苗類 諸如基因治療疫苗，例如Allovectin®疫苗、Leuvectin®疫苗、及Vaxid®疫苗；Proleukin® rIL-2；Lurtotecan®拓撲異構酶1抑制劑；Abarelix® rmRH；及上述任何醫藥上可接受的鹽類、酸或衍生物。
在某些實施例中，本發明之GITR標的分子可與抗血管生成藥劑一起使用。血管生成藥劑意指小分子量物質、多核苷酸(包括，如抑制性RNA(RNAi或siRNA))、多肽、單離蛋白、重組蛋白、抗體或其融合蛋白，其直接地或間接地抑制血管生成、血管新生、或不期望之血管通透性。其應理解為抗血管生成藥劑包括該些藥劑，其結合並阻斷血管生成因子或其受體的血管生成活性。例如，抗血管生成藥劑為血管生成劑的抗體或其他拮抗物，如VEGF-A(如貝伐單抗(Avastin®))或VEGF-A受體(如KDR受體或Flt-1受體)的抗體、抗PDGFR抑制劑諸如Gleevec®(伊馬替尼甲磺酸鹽)、阻斷VEGF受體傳訊的小分子(如PTK787/ZK2284、SU6668、Sutent®/SU11248(蘋果酸舒尼替尼)、AMG706或如描述於國際專利申請案WO 2004/113304之該些者。抗血管生成藥劑亦包括天然血管生成抑制劑，如血管抑制素、內皮抑素等，詳見如Klagsbrun and D’Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53：217-39；Streit and Detmar(2003)Oncogene 22：3172-3179(如，表3所列之惡性黑色素瘤的抗血管生成治療)；Ferrara & Alitalo(1999)Nature Medicine 5(12)：1359-1364；Tonini et al.(2003)Oncogene 22：6549-6556(如，表2所列之已知 抗血管生成因子)；及，Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8：200-206(如表1所列之臨床試驗使用之抗血管生成藥劑)。
在某些實施例中，GITR標的分子與其他抗腫瘤藥劑組合使用，諸如抗HER-2抗體、抗CD20抗體、表皮生長因子受體(EGFR)拮抗劑(如酪胺酸激酶抑制劑)、HER1/EGFR抑制劑(如厄洛替尼(Tarceva®)、血小板衍生生長因子抑制劑(如Gleevec®(伊馬替尼甲磺酸鹽))、COX-2抑制劑(如塞來昔布)、干擾素、CTLA4抑制劑(如抗CTLA抗體伊匹單抗(YERVOY®))、PD-1抑制劑(如抗PD1抗體、BMS-936558)、PDL1抑制劑(如抗PDL1抗體、MPDL3280A)、PDL2抑制劑(如抗PDL2抗體)、細胞激素、拮抗劑(如中和抗體)，其結合至下列目標之一或多者：ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-beta、BlyS、APRIL、BCMA、PD-1、PDL1、PDL2、CTLA4、或VEGF受體、TRAIL/Apo2及其他生物活性與有機化學藥劑等。
在某些實施例中，GITR標的分子係在與一或更多額外藥劑組合處理其間及/或之後而施予。在某些實施例中，GITR標的分子及額外藥劑被配製成單一治療組成物，而GITR標的分子及額外藥劑被同時施予。另外，GITR標的分子及額外藥劑彼此分開，如，各自被配製成分開的治療組成物，而GITR標的分子及額外藥劑同時施予，或GITR標的分子及額外藥劑在處理方案期間在不同時間施予。例如，GITR標的分子在額外藥劑施予前被施 予，GITR標的分子係接著額外藥劑施予後被施予，或GITR標的分子及額外藥劑以交替方式施予。如本文中所述，GITR標的分子及藥劑以單一劑施予或以多劑施予。
在某些實施例中，GITR標的分子及額外藥劑被同時施予。例如，GITR標的分子及額外藥劑可被配製成單一組成物或以二或多個分開的組成物施予。在某些實施例中，GITR標的分子及額外藥劑依序施予，或GITR標的分子及額外藥劑在處理方案期間在不同時間施予。
用於處理所欲之特定性的篩選GITR標的分子的方法包括，但不限於酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)、酵素測定法、流式細胞儀及本領域周知之其他免疫介導技術。
此揭示更提供編碼本融合蛋白的核酸序列及特定DNA序列。較佳地，DNA序列藉由適用於染色體外複製的載體來進行，諸如噬菌體、病毒、質體、噬菌粒(phagemid)、黏質粒(cosmid)、YAC或附加體(episome)。特別是，編碼所欲之融合蛋白的DNA載體可用於促進製備本文中所述之GITR標的分子的方法並且獲得大量融合蛋白。DNA序列可被插入適當表現載體中，亦即，含有轉錄與轉譯插入蛋白質編碼序列的必要元素之載體。多種宿主載體系統可用於表現蛋白質編碼序列。該等包括經病毒(如疫苗病毒、腺病毒等)感染的哺乳動物細胞系統；經病毒(如桿狀病毒)感染的昆蟲細胞系統；微生物諸如含有酵母菌載體的酵母菌，或經噬菌體DNA、質體DNA或黏 質粒DNA轉型的細菌。可使用多種適合的轉錄與轉譯元素的任一種，取決於所使用的宿主載體系統。
本揭示亦提供藉由在導致多肽表現的條件下培養細胞而製造GITR標的分子的方法，其中細胞包含編碼本文所述之GITR標的分子的單離核酸分子，及/或包括該些單離核酸序列的載體。本揭示提供藉由在導致GITR標的分子表現的條件下培養細胞而製造GITR標的分子的方法，其中細胞包含編碼本文所述之GITR標的分子的單離核酸分子，及/或包括該些單離核酸序列的載體。
本揭示之融合蛋白(在本文中亦稱為「活性化合物」)，與其衍生物、片段、類似物及同源物能夠併入適用於施予的醫藥組成物。此種組成物典型地包含融合蛋白及醫藥上可接受的載體。如本文中所使用，「醫藥上可接受的載體」用語意欲包括任何及所有與藥物施予相容的溶劑、分散介質、塗覆物、抗菌及抗霉藥劑、等滲及吸收延遲劑等。最新版Remington’s Pharmaceutical Sciences(本領域標準參考文本)中所述適當的載體藉由參考方式併入本文中。此種載體或稀釋劑的適當範例包括，但不限於水、生理食鹽水、林格氏液(ringer’s solution)、葡萄糖溶液及5%人血清白蛋白。也可使用脂質體及非水性載體，諸如油。用於藥物活性物質的此種介質及藥劑的用途在本領域中為周知的。除非任何傳統介質或藥劑的範圍與活性化合物不相容，否則考慮使用於組成物中。附加的活性化合物亦能併入組成物中。
本揭示之醫藥組成物被配製成與其所欲的施予途徑相容。施予途徑的範例包括胃腸外，如，靜脈內、皮內、皮下、腫瘤內、口服(如，吸入)、經皮(即，局部)、經黏膜及直腸施予。用於胃腸外、皮內、或皮下應用的溶液或懸浮液可包括下列成分：無菌稀釋液，諸如用於注射的水、生理食鹽水溶劑、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌藥劑，諸如苄醇或羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，者如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螫合劑，諸如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽及用於調節張力的藥劑，諸如氯化鈉或葡萄糖。pH可以酸或鹼調節，諸如氫氯酸或氫氧化鈉。胃腸外製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成的安瓶、拋棄式注射器或多劑量管中。
適用於可注射的醫藥組成物使用包括無菌液體溶液(其中水可溶)或用於臨時製備可無菌注射溶液或分散劑的分散劑及無菌粉末。針對靜脈內施予，適用的載體包括生理食鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)。在所有情況中，組成物必需為溶下為無菌且應為流體以達到容易注射的程度。在製造及儲存環境下需為穩定且需防止微生物的污染作用，諸如細菌及真菌。載體可為溶劑或分散介質，例如水、乙醇、聚醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇等)、及其適用的混合物。可維持適當的流動性，例如，藉由塗覆的使用，諸如卵磷脂，藉由在分散情況下 維持所需粒徑及藉由介面活性劑的使用。藉由各種抗菌及抗真菌藥劑，例如，羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等來達成防止微生物的作用。在許多情形中，較佳的包括等滲透藥劑，例如，糖類、多元醇，諸如組成物中的甘露醇、山梨醇、氯化鈉。可注射組成物的延長吸收可藉由包括在組成物中延遲吸收的藥劑(例如，單硬脂酸鋁及明膠)來實現。
無菌可注射的溶液可藉由將活性化合物併入所需要量的適當溶劑中，適當溶劑具有一種或以上列舉之成分組合，如有需要，接著過濾滅菌來製備。一般來說，分散劑藉由將活性化合物併入無菌媒介中來製備，該無菌媒介含有基本分散介質及以上列舉的所需之其他成分。用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情形中，製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥，其產生活性成分粉末加上來自其先前滅菌過濾溶液的任何其他所欲成分。
口服組成物通常包括惰性稀釋劑或可食用載體。其可被封裝於明膠膠囊或壓製成片劑。為了口服治療施予之目的，活性化合物可與賦形劑併入並用於片劑、錠劑或膠囊之形式。口服組成物亦可使用用作為漱口劑的流體載體來製備，其中流體載體化合物藉由口服、漱出、吐出或吞嚥來供應。藥物相容性結合藥劑及/或佐劑材料可被包括為組成物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可含有任何下列成分或類似性質的化合物：結合劑，諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉或乳糖；崩 解劑，諸如藻酸、Primogel或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑，諸如膠體二氧化矽；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；或調味劑，諸如薄荷、水楊酸甲酯或橘子調味劑。
用於由吸入施予，以自加壓容器或含有適當推進器(如，氣體，諸如二氧化碳)或噴霧器的分配器來氣霧噴灑的形式而遞送。
全身性施予亦可藉由經黏膜或經皮方式。針對經黏膜或經皮施予，製劑中使用之適於滲透障壁的滲透劑。此等滲透劑通常在本領域中為已知的，且包括例如經黏膜施予、清潔劑、膽鹽及夫西地酸衍生物。經黏膜施予可透過鼻噴霧劑或栓劑的使用來達成。針對經皮施予，活性化合物被配製於本領域中通常已知之軟膏劑、油膏劑、凝膠劑或乳膏劑中。
化合物亦可以栓劑(如，傳統栓劑基底，諸如可可脂及其他甘油)或用於直腸遞送的保留灌腸劑的形式製備。
在一實施例中，活性化合物以保護化合物抵抗人體快速排除的載體製備，諸如控制釋放製劑，包括植入物及微膠囊遞送系統。可使用生物可降解、生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯及聚乳酸。用於製備此種製劑的方法在本領域之技藝人士為顯而易見的。該等材料亦可自Alza Corporation及Nova Pharmaceuticals,Inc.市售獲得。脂質 體懸浮物亦可用作藥物可接受載體。此等可根據本領域之技藝人士周知的方法來製備，例如，美國專利第4,522,811號中所述。
以劑量單位形式配製口服或胃腸外組成物以易於施予及劑量均勻性是特別有利的。本文中所使用之劑量單元形式意指適用於待治療的個體的單位劑量之物理離散單位；各單位含有經計算以產生結合所需藥物載體之所欲治療效應預定量的活性化合物。本揭示之劑量單元形式之規格由活性化合物之獨特特性及欲達成的特定治療效果決定且直接取決於活性化合物之獨特特性及欲達成的特定治療效果，且該等限制在本領域中之調配用於個體治療的活性化合物為固有的。
醫藥組成物可連同說明書被包括於套件、容器、包裝或分配器以供施予。醫藥組成物可連同說明書被包括於診斷套件中以供使用。
醫藥組成物以對治療或預防特定適應症有效的量施予。治療有效量通常取缺於待治療個體之重量、他或她身體或健康狀況、待治療之廣泛條件或待治療個體的年齡。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約50μg/kg體重至約50mg/kg體重範圍的量施予。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約100μg/kg體重至約50mg/kg體重範圍的量施予。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約100μg/kg體重至約20mg/kg體重範圍的量施予。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約0.5 mg/kg體重至約20mg/kg體重範圍的量施予。
在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約10mg至約1,000mg範圍的量施予。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約20mg至約500mg範圍的量施予。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約20mg至約300mg範圍的量施予。在某些實施例中，醫藥組成物可以每劑量約20mg至約200mg範圍的量施予。
醫藥組成物可被施予至有需求的個體。在某些實施例中，醫藥組成物的有效劑量以一或多次施予個體。在多個實施例中，醫藥組成物的有效劑量施予以每月一次、小於每月一次，諸如，例如每兩個月、每三個月或每六個月。在其他實施例中，醫藥組成物的有效劑量施予以大於每月一次，諸如，例如每兩週、每週、每週兩次、每週三次、每天或每天多次。醫藥組成物的有效劑量以施予個體至少一次。在某些實施例中，醫藥組成物的有效劑量可多次施予，包括至少一個月、至少六個月或至少一年之期間。在某些實施例中，醫藥組成物的有效劑量係施予有需求的個體以緩解病況之一或多種症狀。
除非另外定義，與本揭示結合使用之科學及技術專有名詞應具有本領域普通技術人員一般理解的含義。此外，除非上下文另有要求，單數詞應包括複數且複數詞應包括單數。一般來說，本文所述之細胞與組織培養、分子生物學及蛋白質與寡或多核苷酸化學和雜交的技術以及命名法則為本領域中已知且常用者。標準技術使用 於重組DNA、寡核苷酸合成及組織培養和轉形(如，電穿孔、脂轉染)。酵素反應與純化技術係根據製造商的說明書或本領域一般流程或本文所述者來進行。前述技術及程序通常根據本領域已知且於本說明書通篇中引用及討論之各種一般與多個特定參考文獻所描述之習知的方法進行。參見如Sambrook et al.Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989))。與本文所述之分析化學、合成有機化學及藥物及醫藥化學有關的命名法則與其實驗室程序及技術為本領域已知且常用者。標準技術使用於化學合成、化學分析、醫藥製備、製劑及運送與病患的治療。病患一詞包括人及家畜個體。
根據本揭示所使用，除非另有指示，下列詞應被理解為具有下列含義：如本文中所使用，用語「標的融合蛋白」及「抗體」可為同義詞。如本文中所使用，用語「抗體」意指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即含有專一性結合(免疫反應)抗原的抗原結合位的分子。藉由「專一性結合」或「與...免疫反應」或「定向拮抗」意指抗體與所欲的抗原之一或多個抗原決定因子反應而不與其他多肽反應或不與較低親合力者結合。抗體包括，但不限於多株、單株、嵌合、dAb(域抗體)、單鏈、Fab、Fab’及F(ab’)2片段、Fv、scFvs、Fab表現庫及單域抗體(sdAb)片段，例如VHH、VNAR、經工程化的VH或 VK。
基本抗體結構單元已知包含四聚體。各個四聚體由兩對相同的多肽鏈構成，各對具有一「輕」(約25kDa)及一「重」鏈(約50-70kDa)。各鏈的胺基端部分包括主要負責識別抗原之約100至110或更多胺基酸的可變區。各鏈的羧基端部分定義主要負責效應因子功能的恆定區。一般來說，由人類獲得的抗體分子與任何類型的IgG、IgM、IgA、IgE及IgD有關，其分子中的重鏈在本質上彼此不同。特定類別具有子類(又稱為同型)，諸如IgG1、IgG2及其他者。此外，在人類中，輕鏈可為κ鏈或λ鏈。
如本文中所使用之用語「單株抗體」(mAb)或「單株抗體組成物」意指只含有由獨特輕鏈基因產物及獨特重鏈基因產物構成之抗體分子的一種分子種類的抗體分子群。尤其是，單株抗體的互補性決定區(CDR)在此群中的所有分子都一致。MAB含有能夠與抗原的特定表位免疫反應的抗原結合位，其特徵在於它獨特的結合親合力。
用語「抗原結合位」或「結合部分」意指參與抗原結合的免疫球蛋白分子部分。抗原結合位由重(「H」)及輕(「L」)鏈的N端可變(「V」)區的胺基酸殘基形成。重鏈及輕鏈V區內延伸的三個高度歧化區段(意指「高變區」)被插入稱為「框架區」或「FR」之更保守側翼區段之間。因此，用語「FR」意指本質上在免疫球蛋白中高變區之間發現且相鄰的胺基酸序列。在抗體分子 中，輕鏈的三個高變區及重鏈的三個高變區在三維空間中相對於彼此設置以形成抗原結合表面。抗原結合表面與結合抗原的三維表面互補，且重及輕鏈各者的三個高變區稱為「互補性決定區」或「CDR」。各域胺基酸的分配係根據Kabat的Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987 and 1991))或Chothia & Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987)、Chothia et al.Nature 342：878-883(1989)。
本揭示之融合蛋白的單域抗體(sdAb)片段部分在本文又稱為可互換的目標多肽。
如本文中所使用，用語「表位」包括任何能夠專一性結合至免疫球蛋白或其片段或T細胞受體/由免疫球蛋白或其片段或T細胞受體專一性結合的蛋白決定因子。用語「表位」包括任何能夠專一性結合至免疫球蛋白或T細胞受體/由免疫球蛋白或T細胞受體專一性結合的蛋白決定因子。表位決定因子通常由諸如胺基酸或糖側鏈分子之化學活性表面基團構成且通常具有特定三維結構特性、以及特定電荷特性。當解離常數係
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1μM時抗體係專一性結合抗原；如
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100nM，較佳地
Figure 105123463-A0202-12-0107-352
10nM且更佳地
Figure 105123463-A0202-12-0107-353
1nM。
如本文中所使用，用語「免疫結合」及「免疫結合性質」及「專一性結合」意指發生於免疫球蛋白分子與免疫球蛋白特異性的抗原之間的類型之非共價交互作用。免疫結合交互作用的強度或親合力可利用交互作用的 解離常數(Kd)來表示，其中較小的Kd表示較大的親合力。選定之多肽的免疫結合性質可使用本領域已周知之方法來量化。一種此方法需要計算抗原結合位/抗原複合物形成及解離的速率，其中這些速率取決於複合物配偶體的濃度、交互作用的親合力及均等地影響兩個方向速率的幾合參數。因此，「結合速率常數」(kon)及「解離速率常數」(koff)兩者能藉由計算結合及解離的實際速率與濃度來決定。(見Nature 361：186-87(1993))。koff/kon的速率能夠取消與親合力無關的所有參數，且等於解離常數Kd。(一般參見Davies et al.(1990)Annual Rev Biochem 59：439-473)。本揭示之抗體專一性結合至抗原，當平衡結合常數(Kd)為
Figure 105123463-A0202-12-0108-354
1μM時、較佳地為
Figure 105123463-A0202-12-0108-355
100nM、更佳地為
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10nM及最佳地為
Figure 105123463-A0202-12-0108-357
100pM至約1pM，如由分析所測量，諸如放射性配體結合分析、表面等離子共振(SPR)、流式細胞技術結合分析或本領域之技藝人士所熟知之類似分析。
較佳地，不一致的殘基位置因保守性胺基酸取代而不同。
保守性胺基酸取代意指具有相似側鏈的殘基的可互換性。例如，具有脂族側鏈的胺基酸群組為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；具有脂族-羥族側鏈的胺基酸族群為絲胺酸及蘇胺酸；具有含醯胺側鏈的胺基酸族群為天門冬醯胺及麩醯胺；具有芳族側鏈的胺基酸群組為苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；具有鹼基側鏈的胺基酸群組為離胺酸、精胺酸及組胺酸；及具有含硫基側 鏈的胺基酸群組為半胱胺酸及甲硫胺酸。適合的保守性胺基酸取代基團為：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸-天門冬胺酸及天門冬醯胺-麩醯胺。
如本文中所討論，抗體或免疫球蛋白分子的胺基酸序列中最小變異被視為含括在本揭示中，前提為胺基酸序列中的變異維持至少75%、更佳地至少80%、90%、95%及最佳地99%。尤其是，保守性胺基酸取代列入考量。保守性取代為在與其側鏈相關的胺基酸家族內發生的該些者。基因編碼胺基酸通常分為幾個家族：(1)酸性胺基酸為天門冬胺酸、麩胺酸；(2)鹼性胺基酸為離胺酸、精胺酸、組胺酸；(3)非極性胺基酸為丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸，及(4)不帶電荷極性胺基酸為甘胺酸、天門冬醯胺、麩醯胺、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸。親水性胺基酸包括精胺酸、天門冬醯胺、天門冬胺酸、麩醯胺、麩胺酸、組胺酸、離胺酸、絲胺酸及蘇胺酸。疏水性胺基酸包括丙胺酸、半胱胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。胺基酸的其他家族包括(i)絲胺酸及蘇胺酸，其為脂族-羥基家族；(ii)天門冬醯胺及麩醯胺，其為含有醯胺家族；(iii)丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸，其為脂族家族；及(iv)苯丙胺酸、色胺酸及酪胺酸，其為芳族家族。例如，可合理期待白胺酸與異白胺酸或纈胺酸、天門冬胺酸與麩 胺酸、蘇胺酸與絲胺酸的獨立取代，或具有結構上相關的胺基酸之類似胺基酸取代在所得分子的結合或特性上將不具有主要影響，尤其是若取代不涉及框架位點內的胺基酸。胺基酸改變是否造成功能性胜肽可輕易的由分析多肽衍生物的特定活性而決定。分析如本文中所詳述。抗體或免疫球蛋白分子的片段或類似物可輕易由本領域之通常技藝人士製備。適當的片段或類似物的胺基及羧基端出現在靠近功能域的邊緣。結構及功能域可由核苷酸及/或胺基酸序列資料與公開或專有序列資料庫比較而鑑定。較佳地，電腦化比較法係用於鑑定發生在已知結構及/或功能的其他蛋白質序列基序(sequence motif)或預測蛋白質構造域(conformation domain)。已知鑑別折疊成已知三維結構的蛋白質序列的方法。Bowie et al.Science 253：164(1991)。因此，前述範例證實本領域之技藝人士可識別根據本揭示用以定義結構及功能域的序列基序及結構構造。
較佳的胺基酸取代為下列：(1)減少蛋白質水解的易感性、(2)減少氧化的易感性、(3)改變形成蛋白質複合物的結合親合力、(4)改變結合親合力及(4)賦予或修飾此類似物的其他物理化學或功能性質。類似物可包括自然存在的胜肽序列以外的各種序列的突變。例如，單或多胺基酸取代(較佳地為保守性胺基酸取代)可由自然存在的序列(較佳地在多肽的形成分子間接觸的結構域外的部分)製成。保守性胺基酸取代實質上不應改變母序列的結構特性(如，替代胺基酸不應破壞母序列中存在的螺旋或破壞 賦予母序列特色的其他類型的二級結構)。本領域公認的多肽二級與三級結構的範例係描述於Proteins,Structures and Molecular Principles(Creighton,Ed.,W.H.Freeman and Company,New York(1984))；Introduction to Protein Structure(C.Branden and J.Tooze,eds.,Garland Publishing,New York,N.Y.(1991))；及Thornton et al.Nature 354：105(1991)中。
本文中所使用的用語「多肽片段」意指具有胺基端及/或羧基端缺失的多肽，但其中剩餘的胺基酸序列與自然存在序列(例如，從全長cDNA序列推導的)對應位置一致。片段典型地為至少5、6、8或10個胺基酸長，較佳地至少14個胺基酸長、更佳地至少20個胺基酸長、通常至少50個胺基酸長、及再更佳地至少70個胺基酸長。本文中所使用的用語「類似物」意指多肽，其至少由25個胺基酸的區段組成，該胺基酸實質上與推導的胺基酸序列的部分一致且在適當結合條件下對GITR具有專一性結合。典型地，相對於自然存在的序列，多肽類似物包含保守性胺基酸取代(或添加或缺失)。類似物典型地為至少20個胺基酸長、較佳地至少50個胺基酸長或更長，且通常能與全長的自然存在的多肽一樣長。
胜肽類似物通常用於醫藥工業作為具有類似於模版胜肽該些者的性質之非胜肽藥物。非胜肽化合物的這些類型稱為「胜肽模擬物」(peptide mimetic或peptidomimetic)。Fauchere,J.Adv.Drug Res.15：29 (1986),Veber and Freidinger TINS p.392(1985)；及Evans et al.J.Med.Chem.30：1229(1987)。此種化合物通常在電腦化分子建模的幫助之下被開發。胜肽模擬物在結構上類似於可被用於產生等同治療或預防效果的治療有效胜肽。一般來說，胜肽模擬物在結構上類似於範例多肽(即，具有生化性質或藥理活性的多肽)，諸如人抗體，但具有隨意經選自下列組成的群組之鍵聯取代的一或多個胜肽鍵聯：--CH2NH--、--CH2S-、--CH2-CH2--、--CH=CH--(順式及反式)、--COCH2--、CH(OH)CH2--及-CH2SO--，如本領域所周知之方法。與同類型的(如，D-離胺酸取代L-離胺酸)D-胺基酸之共有序列的一或多個胺基酸的系統性取代可用以產生更多穩定的胜肽。此外，可藉由本領域已知的方法(Rizo and Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992))產生包含共有序列或實質上一致的共有序列變異之受限的胜肽；例如，藉由添加使胜肽能形成環化的分子內二硫鍵的內半胱胺酸殘基。
本文中所使用之用語「試劑」表示化學化合物，化學化合物的混合物、生物巨分子及/或由生物材料製成的粹取物。
如本文中所使用，用語「標定」或「經標定的」意指併入可偵測的標記，如，藉由併入放射標定的胺基酸或附接至可經由標記的抗生物素蛋白(如，含有螢光標記或可由光學或量熱法偵測的酵素活性的鏈霉抗生物素蛋白)所偵測的生物素化基團之多肽。在特定情況中，標 定或標記也可為治療性的。標定多肽及醣蛋白的多種方法在本領域中為已知的且可使用的。多肽的標定範例包括，但不限於下列：放射性同位素或放射性核素(如，3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、螢光標定(如，FITC、羅丹明、鑭系磷光體)、酵素標定(如，辣根過氧化物、β-半乳糖苷酶、螢光酶、鹼性磷酸酶)、由次級報導子(如，白胺酸拉鏈對序列、二級抗體結合位、金屬結合域、表位標籤)識別的化學發光體、生物素基團、預定多肽表位。在某些實施例中，標定藉由各種長度的間隔子臂附接以減少可能的空間位阻。如本文中所使用之用語「醫藥藥劑或藥物」意指當適當施予給病患時可誘導所欲治療效果的化學化合物或組成物。
如本文中所使用，用語「治療(treat、treating、teatment)」及類似者意指減少及/或改善與其相關的病症及/或症候群。「緩解(alleviate及/或alleviating)」意指降低、抑制、減弱、衰減、阻止及/或穩定疾病(諸如，例如癌症)的成長或進程。應理解的是，僅管不排除，治療病症或病況不需要將與其相關的病症、病況或症候群完全消除。
在本揭示中，「包含(comprise)」、「包含(comprising)」、「含有(containing)」、「具有(having)」及相關詞可具有美國專利法中所賦予該等之意義，且可表示為「包括(include)」、「包括(including)」等相關詞；用語「基本上由...組成(consisting essentially of)」或「基 本上組成(consists essentially)」等具有美國專利法中所賦予之意義且這些用語為開放式的，只要所列舉者的基礎或新穎特徵不由現存列舉之更多者所改變，允許存在更多所列舉者，但排除現有技術的實施例。
「有效量」意指改善相對於未經治療病患的疾病之症候群所需的量。用以實踐疾病之治療處理之本揭示的活性化合物之有效量隨著施予方式、個體的年齡、體重及總體健康狀況而變化。最後，主治醫師或獸醫師將決定適當量及給藥方案。此量稱為「有效」量。
「個體」意指哺乳動物，包括，但不限於人類或非人哺乳動物(諸如牛、馬、犬、囓齒動物、綿羊、靈長動物或貓科動物。
如本文中所使用之用語「施予」意指任何模式轉移、遞送、引進或傳輸治療藥劑至有此藥劑治療需求之個體。此模式包括，但不限於口服、局部、靜脈內、腹膜內、肌肉內、皮內、鼻內及皮下施予。
「片段」意指多肽或核酸分子的一部分。此部分較佳地含有參考核酸分子或多肽整體長度之至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。一片段可含有10、20、30、40、50、60、70、80、90或100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000個核苷酸或胺基酸。
本文所提供之範圍應理解為此範圍內所有值的簡寫。例如，1至50的範圍應理解為包括任何數字、 數字的組合、或由下列組成的群組之子範圍：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。
除非特別定義或從上下文顯而易見，如本文中所使用之用語「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」應理解為單數或複數。除非特別定義或從上下文顯而易見，如本文中所使用之用語「或」應理解為包括。
除非特別定義或從上下文顯而易見，如本文中所使用之用語「約」應理解為本領域中正常容忍度之範圍，例如平均之2個標準偏差內。約可理解為在所示值的10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%或0.01%之內。除非上下文另外清楚定義，否則本文中所提供之所有數值由用語「約」來修飾。
本揭示將進一步描述下列範例，其不限制申請專利範圍中所述之本揭示的範圍。
範例 範例1 GITR標的分子結合GITR
如圖2A、2B及2C所示，本揭示之各種GITR標的融合蛋白結合至由流式細胞技術評估的CHO細胞上表現的GITR。GITR抗體、TRX-518在這些研究中被 用作為控制組。
本文中由流式細胞技術決定之CHO細胞之表面上表現的人及獼猴GITR的GITR標的分子的結合親合力稱為hzC06v1.1(SEQ ID NO：42)、hzC06v1.2(SEQ ID NO：43)、hzC06v1.3(SEQ ID NO：44)、hzC06v1.4(SEQ ID NO：45)、hzC06v2.1(SEQ ID NO：46)、hzC06v2.2(SEQ ID NO：47)、hzC06v2.3(SEQ ID NO：48)、hzC06v2.4(SEQ ID NO：49)、hzC06v3(SEQ ID NO：50)、hzC06v3.1(SEQ ID NO：51)、hzC06v3.2(SEQ ID NO：52)、hzC06v3.3(SEQ ID NO：53)、hzC06v3.4(SEQ ID NO：54)、hzC06v3.5(SEQ ID NO：55)、hzC06v3.6(SEQ ID NO：56)、hzC06v3.7(SEQ ID NO：57)、hzC06v3.8(SEQ ID NO：58)、hzC06v3.9(SEQ ID NO：59)、hzC06v3.10(SEQ ID NO：60)、hzC06v3.11(SEQ ID NO：61)、hzC06v3.12(SEQ ID NO：62)、hzC04v4.1(SEQ ID NO：63)、hzC04v4.1.2(SEQ ID NO：64)、hzC04v4.2(SEQ ID NO：65)、hzC04v4.2.2(SEQ ID NO：66)、hzC04v5(SEQ ID NO：67)、hzC04v1.2.1(SEQ ID NO：68)、hzC04v5.1(SEQ ID NO：69)、hzC04v5.2(SEQ ID NO：70)、hzC04v5.3(SEQ ID NO：71)、hzC04v5.4(SEQ ID NO：72)、hzC04v5.5(SEQ ID NO：73)、hzC04v5.6(SEQ ID NO：74)、hzC04v5.7(SEQ ID NO：75)、hzC04v5.8(SEQ ID NO：76)、hzC04v5.9(SEQ ID NO：77)、hzC04v5.10(SEQ ID NO：78)、hzC04v5.11(SEQ ID NO：79)及hzC04v5.12(SEQ ID NO：80)。所得的結果示於圖4A-4E及5A-5E中。
範例2 GITR標的分子阻斷GITR與GITR-L的交互作用
如圖3A、3B及3C所示，本揭示之各種GITR標的融合蛋白能夠阻斷GITRL及GITR之間的交互作用簡要地說，在這些研究中，流式細胞技術分析使用表現GITR的CHO細胞而重組GITRL用於實施評估阻斷能力。GITR抗體、TRX-518在這些研究中被用作為控制組。
範例3 GITR標的分子對人及獼猴GITR的結合親合力
在本文中稱為二價hzC06v3.9-hIgG1或2x hzC06v3.9-IgG1 Fc(SEQ ID NO：93)的GITR標的分子對人及獼猴GITR細胞外域人IgG1融合蛋白(GITR-Fc)之結合親合力係由表面等離子共振來決定。簡要地說，生物素化的人及獼猴GITR-Fc被晶片表面捕獲接著將二價hzC06v3.9-hIgG1以10種濃度(0nM-600nM)於40ul/min注射120秒。接著解離240秒。ka1、kd1及KD1如下表所報告。
Figure 105123463-A0202-12-0117-76
範例4 GITR標的分子對初級人T細胞的結合
在本文中評估本揭示之抗GITR分子(在本文中稱為四價hzC06-hIgG1)對初級人T細胞的能力。四價 hzC06-hIgG1係由兩複份之SEQ ID NO：93的結合GITR分子所構成，其依序係由將兩個SEQ ID NO：59的串聯複份之單域可變區(sdAb)融合至SEQ ID NO：1之人IgG1 Fc域所構成。
經健康人捐贈者製備藉由螢光活化細胞分類所單離之總PBMC或經純化的Treg。細胞在體外以輔以有重組人IL2的抗CD3及抗CD28活化。細胞以不同濃度的四價hzC06-hIgG1及表面表型抗體混合物培養。接著清洗樣本並以螢光標定的抗hIgG二級抗體染色，然後由流式細胞技術評定。經活化的CD4 T細胞藉由以CD3、CD4及CD25染色來加以識別。針對來自三個捐贈者(實心符號、實線)的經活化CD4 T細胞及來自兩個捐贈者(空心符號、虛線)的活化Treg之此等研究的結果顯示於圖7。
範例5 GITR標的分子活化NF-kB傳訊
四價抗GITR標的分子在表現GITR的報導細胞株中活化NF-kB傳訊。本文中所述之研究使用兩個本揭示之四價GITR標的分子。第一個四價GITR標的分子包括兩複份之結合GITR融合蛋白，在本文中稱為2x hzC06v3.9IgG1-Fc(SEQ ID NO：93)，其依序包括兩複份之hzC06v3.9GITR-BD(SEQ ID NO：59)及SEQ ID NO：1之IgG1Fc多肽。第二個四價GITR標的分子包括兩複份之結合GITR融合蛋白，在本文中稱為2x C06 IgG1-Fc，其依序包括兩複份之C06 GITR-BD(SEQ ID NO：22)及 SEQ ID NO：1之IgG1 Fc多肽。
HEK293細胞株含有以人GITR(圖8A)或獼猴GITR(圖8B)穩定轉染的NF-kB驅動分泌的鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因。細胞株於37℃被培養於四價GITR抗體的滴定劑量隔夜。SEAP報導基因表現藉由650nM光學密度測量水解之基質來定量。
範例6 腫瘤模型中的GITR標的分子
如圖9A-9C中所示，以所揭示之GITR標的分子處理，顯著減少CT26腫瘤生長而與施予日無關。BALB/c小鼠皮下接種CT26大腸直腸癌細胞並施予四價C06-hIgG1，其包括兩複份之結合GITR融合蛋白，在本文中稱為2x C06-IgG1 Fc，其依序包括兩複份SEQ ID NO：22之GITR-BD及SEQ ID NO：1之人IgG1 Fc多肽序列或人IgG1-Fc作為第7日(圖9A)、第9日(圖9B)或第11日(圖9C)之控制組，其指出平均腫瘤體積為125、230或310mm3。相較於施予人Fc後的前6-8天(不論處理的日期)，四價C06-IgG1 Fc處理導致顯著的腫瘤生長降低(p<0.05，透過雙尾、獨立t-檢定所決定)。
如圖10中所示，以所揭示之GITR標的分子處理，造成CT26腫瘤生長的劑量依賴性抑制。BALB/c小鼠皮下接種CT26大腸直腸癌細胞並施予四價C06-mIgG2a，其包括兩複份之結合GITR融合蛋白，在本文中稱為2x C06-mIgG1 2a Fc，其依序包括兩複份SEQ ID NO：22之GITR-BD及鼠IgG2a序列或非特異性mIgG2a作為第9日的控制組(腫瘤體積接近260mm3)。相較於當施予2.5、0.25、0.08或0.025mg/kg時的控制組，四價C06-mIgG2a處理導致腫瘤體積顯著減小(p<0.05)。以0.008mg/kg的四價C06-mIgG2a給藥並不顯著抑制CT26腫瘤生長。統計顯著性經由四價C06-mIgG2a組對mIgG2a之多重比較的單因子變異數分析(one-way ANOVA)來決定。
如圖11A-11B中所示，以所揭示之GITR標的分子處理，造成MC38腫瘤生長的劑量依賴性抑制。C57BL/6小鼠皮下接種MC38大腸直腸癌細胞並施予四價C06-mIgG2a或非特異性mIgG2a作為第7日的控制組(平均腫瘤體積110-115mm3)。相較於起始於第14日的mIgG2a控制組，以0.08或更多的劑量施予四價C06-mIgG2a導致顯著的腫瘤生長降低(p<0.05)(圖11A)。相較於起始於第18日的mIgG2a控制組，以0.025施予四價C06-mIgG2a顯著降低腫瘤生長(p<0.05)。以0.008mg/kg的四價C06-mIgG2a給藥並不顯著抑制MC38腫瘤生長。統計顯著性經由C06組對IgG2a之多重比較的單因子ANOVA來決定。在MC38接種後第20日的單一腫瘤體積顯示於圖11B中。在2.5、0.25及0.08mg/kg處理的群組中在此時間點有類似的腫瘤生長降低。
範例7 Fc功能對於抑制CT26腫瘤生長的影響
BALB/c小鼠皮下接種CT26大腸直腸癌細胞並在第9日施予野生型Fc或N297G突變的四價C06-mIgG2a以阻斷對Fc受體(mIgG2a-silent)的結合(平均腫瘤體積260mm3)。非特異性mIgG2a、抗GITRmAb1-mIgG2a與抗GITR控制組mAb1-mIgG2a-silent被用作為控制組。如圖12A所示，相較於控制組，雖然野生型Fc的四價C06為最有效，野生型及靜默型式兩者皆顯著減低腫瘤生長(p<0.05)。當以野生型Fc型式施予時mAb1只抑制CT26生長。統計顯著性經由處理組對mIgG2a之多重比較的單因子ANOVA來決定。在CT26接種後第22日的單一腫瘤體積顯示於圖12B中。四價C06的Fc野生型及靜默型式之間的腫瘤生長差異不顯著，而mAb1抑制腫瘤生長的能力則型式差異顯著。Kaplan-Meier分析顯示以野生型Fc的四價C06處理可顯著提高攜帶CT26的小鼠的存活率(圖12C)。在第10日單一施予四價C06-mIgG2a將中位數存活率延長至66日，相較於mIgG2a控制組為20天。
範例8 以GITR標的分子處理導致對再激發試驗的抗性
接受經四價C06-mIgG2a誘導的CT26排斥小鼠對於再激發試驗有抗性。使經四價C06-mIgG2a處理之排斥CT26腫瘤的BALB/c小鼠重新接種CT26、Renca或EMT6鼠腫瘤細胞株。如圖13A中所示，先前排斥CT26的小鼠隨後以此模型重新接種時完全抵抗腫瘤生長。重要的是，年幼的同齡小鼠展現CT26腫瘤生長。如圖13B中 所示，Renca腫瘤在先前排斥CT26的小鼠中生長不佳。實際上，四隻小鼠中有兩隻具有完全抗性，而相較於年幼的同齡控制組，一隻小鼠的Renca生長顯著下降。Renca與CT26共享T細胞表位，表示經T細胞介導的免疫被誘導。如圖13C中所示，EMT6腫瘤在BALB/c小鼠中生長良好，不論其先前在C06處理時消除CT26的組別或是年幼的組別。EMT6不與CT26共享T細胞表位。
範例9 以GITR標的分子處理對T細胞的影響
處理顯著減少Treg頻率並改變腫瘤微環境內的Treg對Teffector細胞比例。BALB/c小鼠皮下接種CT26大腸直腸癌細胞並在第9日施予2.5mg/kg野生型Fc或N297G突變的四價C06-mIgG2a以阻斷對Fc受體(mIgG2a-silent)的結合。非特異性mIgG2a被用作為控制組。在處理後3天收集末梢血液及腫瘤並由流式細胞技術分析。如圖14A中所示，以四價C06-mIgG2a處理顯著減少體循環Treg、習知的CD4 T細胞(4Tcon)及CD8 T細胞(8T)頻率(p<0.05)。mIgG2a-silent形式沒有觀察到影響。如圖14B中所示，以四價C06-mIgG2a處理顯著減少腫瘤內Treg及習知的CD4 T細胞頻率(p<0.05)，但CD8 T細胞沒有改變。mIgG2a-silent形式沒有觀察到影響。如圖14C中所示，作為由四價C06-mIgG2a有效降低的結果，效應因子T細胞對Treg的比例在腫瘤中顯著增加(p<0.05)。統計顯著性經由雙尾、獨立t-檢定所決定。
範例10 GITR標的分子對T細胞活化及增生的影響
處理顯著誘導CD8 T細胞活化及增生。BALB/c小鼠皮下接種CT26大腸直腸癌細胞並在第9日施予2.5mg/kg野生型Fc或N297G突變的四價C06-mIgG2a以阻斷對Fc受體(mIgG2a-silent)的結合。非特異性mIgG2a被用作為控制組。處理後12天藉由流式細胞技術分析末梢血液。如圖15A中所示，以四價C06-mIgG2a處理顯著誘導體循環CD8 T細胞的頻率，但CD4 T細胞沒有改變。mIgG2a-silent形式沒有觀察到影響。如圖15B中所示，CD8 T細胞亦使用活化的、增生表型(CD62L- Ki67+)，接著以四價C06-mIgG2a處理。統計顯著性經由雙尾、獨立t-檢定所決定。
<110> 英漢布雷克斯公司(INHIBRX LP)
<120> 多價和多重特異性之結合GITR的融合蛋白
<140> TW 105123463
<141> 2016-07-25
<150> US 62/195,822
<151> 2015-07-23
<160> 150
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1
Figure 105123463-A0202-12-0124-77
Figure 105123463-A0202-12-0125-78
<210> 2
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 2
Figure 105123463-A0202-12-0125-79
Figure 105123463-A0202-12-0126-80
<210> 3
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 3
Figure 105123463-A0202-12-0127-81
<210> 4
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 4
Figure 105123463-A0202-12-0128-82
Figure 105123463-A0202-12-0129-83
<210> 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 5
Figure 105123463-A0202-12-0129-84
Figure 105123463-A0202-12-0130-85
<210> 6
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 6
Figure 105123463-A0202-12-0130-86
Figure 105123463-A0202-12-0131-87
<210> 7
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 7
Figure 105123463-A0202-12-0131-88
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 8
Figure 105123463-A0202-12-0132-89
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 9
Figure 105123463-A0202-12-0132-90
<210> 10
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 10
Figure 105123463-A0202-12-0132-91
<210> 11
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 11
Figure 105123463-A0202-12-0132-92
<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 12
Figure 105123463-A0202-12-0133-93
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 13
Figure 105123463-A0202-12-0133-94
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 14
Figure 105123463-A0202-12-0133-95
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 15
Figure 105123463-A0202-12-0133-96
<210> 16
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 16
Figure 105123463-A0202-12-0134-97
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 17
Figure 105123463-A0202-12-0134-98
<210> 18
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<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 18
Figure 105123463-A0202-12-0134-99
<210> 19
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 化學合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 19
Figure 105123463-A0202-12-0134-100
Figure 105123463-A0202-12-0135-101
<210> 20
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 20
Figure 105123463-A0202-12-0135-102
Figure 105123463-A0202-12-0136-103
<210> 21
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 21
Figure 105123463-A0202-12-0136-104
Figure 105123463-A0202-12-0137-105
<210> 22
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 22
Figure 105123463-A0202-12-0137-106
<210> 23
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 化學合成
<400> 23
Figure 105123463-A0202-12-0138-107
<210> 24
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 化學合成
<400> 24
Figure 105123463-A0202-12-0138-108
Figure 105123463-A0202-12-0139-109
<210> 25
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 化學合成
<400> 25
Figure 105123463-A0202-12-0139-110
Figure 105123463-A0202-12-0140-112
<210> 26
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 26
Figure 105123463-A0202-12-0140-113
<210> 27
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
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<210> 28
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<213> 人工序列
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<223> 化學合成
<400> 28
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<210> 29
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<223> 化學合成
<400> 29
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Figure 105123463-A0202-12-0143-118
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<210> 31
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<223> 化學合成
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<223> 化學合成
<400> 32
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Figure 105123463-A0202-12-0145-122
<210> 33
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<400> 33
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<210> 34
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<213> 人工序列
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<400> 34
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<210> 35
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<210> 36
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<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 36
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Figure 105123463-A0202-12-0148-128
<210> 37
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 37
Figure 105123463-A0202-12-0148-129
Figure 105123463-A0202-12-0149-130
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<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 38
Figure 105123463-A0202-12-0149-132
Figure 105123463-A0202-12-0150-133
<210> 39
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 39
Figure 105123463-A0202-12-0150-134
<210> 40
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 40
Figure 105123463-A0202-12-0151-135
<210> 41
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 41
Figure 105123463-A0202-12-0151-136
Figure 105123463-A0202-12-0152-137
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 42
Figure 105123463-A0202-12-0152-138
Figure 105123463-A0202-12-0153-139
<210> 43
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 43
Figure 105123463-A0202-12-0153-140
<210> 44
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 44
Figure 105123463-A0202-12-0154-141
<210> 45
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 45
Figure 105123463-A0202-12-0154-142
Figure 105123463-A0202-12-0155-143
<210> 46
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 46
Figure 105123463-A0202-12-0155-144
Figure 105123463-A0202-12-0156-145
<210> 47
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 47
Figure 105123463-A0202-12-0156-146
<210> 48
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 48
Figure 105123463-A0202-12-0157-147
<210> 49
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 49
Figure 105123463-A0202-12-0157-148
Figure 105123463-A0202-12-0158-149
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 50
Figure 105123463-A0202-12-0158-152
Figure 105123463-A0202-12-0159-153
<210> 51
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 51
Figure 105123463-A0202-12-0159-154
<210> 52
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 52
Figure 105123463-A0202-12-0160-155
<210> 53
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 53
Figure 105123463-A0202-12-0160-156
Figure 105123463-A0202-12-0161-157
<210> 54
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 54
Figure 105123463-A0202-12-0161-158
Figure 105123463-A0202-12-0162-159
<210> 55
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 55
Figure 105123463-A0202-12-0162-160
<210> 56
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 56
Figure 105123463-A0202-12-0163-161
<210> 57
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 57
Figure 105123463-A0202-12-0163-162
Figure 105123463-A0202-12-0164-163
<210> 58
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 58
Figure 105123463-A0202-12-0164-164
Figure 105123463-A0202-12-0165-165
<210> 59
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 59
Figure 105123463-A0202-12-0165-166
Figure 105123463-A0202-12-0166-167
<210> 60
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 60
Figure 105123463-A0202-12-0166-168
<210> 61
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 61
Figure 105123463-A0202-12-0167-169
<210> 62
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 62
Figure 105123463-A0202-12-0167-170
Figure 105123463-A0202-12-0168-171
<210> 63
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 63
Figure 105123463-A0202-12-0168-172
Figure 105123463-A0202-12-0169-173
<210> 64
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 64
Figure 105123463-A0202-12-0169-174
<210> 65
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 65
Figure 105123463-A0202-12-0169-175
Figure 105123463-A0202-12-0170-176
<210> 66
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 66
Figure 105123463-A0202-12-0170-177
Figure 105123463-A0202-12-0171-178
<210> 67
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 67
Figure 105123463-A0202-12-0171-179
<210> 68
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 68
Figure 105123463-A0202-12-0172-180
<210> 69
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 69
Figure 105123463-A0202-12-0172-181
Figure 105123463-A0202-12-0173-182
<210> 70
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 70
Figure 105123463-A0202-12-0173-183
<210> 71
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 71
Figure 105123463-A0202-12-0174-186
<210> 72
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 72
Figure 105123463-A0202-12-0174-187
Figure 105123463-A0202-12-0175-188
<210> 73
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 73
Figure 105123463-A0202-12-0175-189
<210> 74
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 74
Figure 105123463-A0202-12-0176-190
<210> 75
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 75
Figure 105123463-A0202-12-0176-191
Figure 105123463-A0202-12-0177-192
<210> 76
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 76
Figure 105123463-A0202-12-0177-193
Figure 105123463-A0202-12-0178-194
<210> 77
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 77
Figure 105123463-A0202-12-0178-196
<210> 78
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 78
Figure 105123463-A0202-12-0178-197
Figure 105123463-A0202-12-0179-198
<210> 79
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 79
Figure 105123463-A0202-12-0179-199
Figure 105123463-A0202-12-0180-200
<210> 80
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 80
Figure 105123463-A0202-12-0180-201
<210> 81
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 81
Figure 105123463-A0202-12-0181-202
Figure 105123463-A0202-12-0182-203
Figure 105123463-A0202-12-0183-204
<210> 82
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 82
Figure 105123463-A0202-12-0183-205
Figure 105123463-A0202-12-0184-206
Figure 105123463-A0202-12-0185-207
<210> 83
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 83
Figure 105123463-A0202-12-0185-208
Figure 105123463-A0202-12-0186-209
Figure 105123463-A0202-12-0187-210
Figure 105123463-A0202-12-0188-211
<210> 84
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 84
Figure 105123463-A0202-12-0188-212
Figure 105123463-A0202-12-0189-213
Figure 105123463-A0202-12-0190-214
<210> 85
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 85
Figure 105123463-A0202-12-0190-216
Figure 105123463-A0202-12-0191-217
Figure 105123463-A0202-12-0192-218
Figure 105123463-A0202-12-0193-219
<210> 86
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 86
Figure 105123463-A0202-12-0193-220
Figure 105123463-A0202-12-0194-221
Figure 105123463-A0202-12-0195-222
<210> 87
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 87
Figure 105123463-A0202-12-0195-223
Figure 105123463-A0202-12-0196-224
Figure 105123463-A0202-12-0197-225
Figure 105123463-A0202-12-0198-226
<210> 88
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 88
Figure 105123463-A0202-12-0198-227
Figure 105123463-A0202-12-0199-228
Figure 105123463-A0202-12-0200-229
<210> 89
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 89
Figure 105123463-A0202-12-0200-230
Figure 105123463-A0202-12-0201-231
Figure 105123463-A0202-12-0202-232
<210> 90
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 90
Figure 105123463-A0202-12-0203-233
Figure 105123463-A0202-12-0204-234
Figure 105123463-A0202-12-0205-235
<210> 91
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 91
Figure 105123463-A0202-12-0205-236
Figure 105123463-A0202-12-0206-237
Figure 105123463-A0202-12-0207-238
<210> 92
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 92
Figure 105123463-A0202-12-0208-239
Figure 105123463-A0202-12-0209-240
Figure 105123463-A0202-12-0210-241
<210> 93
<211> 479
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 93
Figure 105123463-A0202-12-0210-242
Figure 105123463-A0202-12-0211-243
Figure 105123463-A0202-12-0212-244
<210> 94
<211> 621
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 94
Figure 105123463-A0202-12-0213-245
Figure 105123463-A0202-12-0214-246
Figure 105123463-A0202-12-0215-247
<210> 95
<211> 621
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 95
Figure 105123463-A0202-12-0216-248
Figure 105123463-A0202-12-0217-249
Figure 105123463-A0202-12-0218-250
<210> 96
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 96
Figure 105123463-A0202-12-0219-251
Figure 105123463-A0202-12-0220-252
Figure 105123463-A0202-12-0221-253
<210> 97
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 97
Figure 105123463-A0202-12-0222-255
Figure 105123463-A0202-12-0223-256
Figure 105123463-A0202-12-0224-257
<210> 98
<211> 621
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 98
Figure 105123463-A0202-12-0225-258
Figure 105123463-A0202-12-0226-259
Figure 105123463-A0202-12-0227-260
<210> 99
<211> 621
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 99
Figure 105123463-A0202-12-0228-261
Figure 105123463-A0202-12-0229-262
Figure 105123463-A0202-12-0230-263
<210> 100
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 100
Figure 105123463-A0202-12-0231-264
Figure 105123463-A0202-12-0232-265
Figure 105123463-A0202-12-0233-266
<210> 101
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 101
Figure 105123463-A0202-12-0234-267
Figure 105123463-A0202-12-0235-268
Figure 105123463-A0202-12-0236-269
<210> 102
<211> 621
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 102
Figure 105123463-A0202-12-0237-270
Figure 105123463-A0202-12-0238-271
Figure 105123463-A0202-12-0239-272
<210> 103
<211> 621
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 103
Figure 105123463-A0202-12-0240-273
Figure 105123463-A0202-12-0241-274
Figure 105123463-A0202-12-0242-275
<210> 104
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 104
Figure 105123463-A0202-12-0243-276
Figure 105123463-A0202-12-0244-277
Figure 105123463-A0202-12-0245-278
Figure 105123463-A0202-12-0246-281
<210> 105
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 105
Figure 105123463-A0202-12-0246-280
Figure 105123463-A0202-12-0247-282
Figure 105123463-A0202-12-0248-283
Figure 105123463-A0202-12-0249-284
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 106
Figure 105123463-A0202-12-0249-285
<210> 107
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 107
Figure 105123463-A0202-12-0249-286
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 108
Figure 105123463-A0202-12-0249-287
<210> 109
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 109
Figure 105123463-A0202-12-0250-288
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 110
Figure 105123463-A0202-12-0250-290
<210> 111
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 111
Figure 105123463-A0202-12-0250-289
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 112
Figure 105123463-A0202-12-0250-291
<210> 113
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 113
Figure 105123463-A0202-12-0251-292
<210> 114
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 114
Figure 105123463-A0202-12-0251-293
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 115
Figure 105123463-A0202-12-0251-294
<210> 116
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 116
Figure 105123463-A0202-12-0251-295
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 117
Figure 105123463-A0202-12-0252-296
<210> 118
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 118
Figure 105123463-A0202-12-0252-298
<210> 119
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 119
Figure 105123463-A0202-12-0252-297
<210> 120
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 120
Figure 105123463-A0202-12-0252-299
<210> 121
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 121
Figure 105123463-A0202-12-0253-301
<210> 122
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 122
Figure 105123463-A0202-12-0253-303
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 123
Figure 105123463-A0202-12-0253-304
<210> 124
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 124
Figure 105123463-A0202-12-0253-306
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 125
Figure 105123463-A0202-12-0254-307
<210> 126
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 126
Figure 105123463-A0202-12-0254-308
<210> 127
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 127
Figure 105123463-A0202-12-0254-309
<210> 128
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 128
Figure 105123463-A0202-12-0254-311
<210> 129
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 129
Figure 105123463-A0202-12-0255-312
<210> 130
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 130
Figure 105123463-A0202-12-0255-313
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 131
Figure 105123463-A0202-12-0255-314
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 132
Figure 105123463-A0202-12-0255-315
<210> 133
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 133
Figure 105123463-A0202-12-0256-316
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 134
Figure 105123463-A0202-12-0256-317
<210> 135
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 135
Figure 105123463-A0202-12-0256-318
<210> 136
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 136
Figure 105123463-A0202-12-0256-319
<210> 137
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 137
Figure 105123463-A0202-12-0257-320
<210> 138
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 138
Figure 105123463-A0202-12-0257-321
<210> 139
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 139
Figure 105123463-A0202-12-0257-322
<210> 140
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 140
Figure 105123463-A0202-12-0257-323
<210> 141
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 141
Figure 105123463-A0202-12-0258-324
<210> 142
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 142
Figure 105123463-A0202-12-0258-325
<210> 143
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 143
Figure 105123463-A0202-12-0258-326
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 144
Figure 105123463-A0202-12-0258-327
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 145
Figure 105123463-A0202-12-0259-328
<210> 146
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 146
Figure 105123463-A0202-12-0259-329
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 147
Figure 105123463-A0202-12-0259-330
<210> 148
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 148
Figure 105123463-A0202-12-0259-331
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 149
Figure 105123463-A0202-12-0260-332
<210> 150
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 150
Figure 105123463-A0202-12-0260-333

Claims (23)

  1. 一種結合經糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體(TNFR)相關蛋白(GITR)之單離多肽，其包含至少一個GITR結合域(GITR-BD)，該GITR-BD包含選自由SEQ ID NO：19至28、31至35及42至80組成的群組之胺基酸序列。
  2. 如申請專利範圍第1項之單離多肽，其中該多肽包含2或多個GITR結合域(GITR-BD)，該等GITR-BD專一性結合GITR。
  3. 如申請專利範圍第2項之單離多肽，其中該2或多個GITR結合域係經由連接子多肽可操作地連接。
  4. 如申請專利範圍第1項之單離多肽，其中各該GITR-BD包含選自由SEQ ID NO：19至28、31至35及42至80組成的群組之胺基酸序列。
  5. 如申請專利範圍第4項之單離多肽，其中該多肽包含至少兩複份或至少三複份之相同GITR-BD。
  6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該多肽係四價以結合GITR，其中該多肽包含兩複份融合蛋白，該融合蛋白包含結構：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc。
  7. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該多肽係六價以結合GITR，其中該多肽包含兩複份融合蛋白，該融合蛋白包含結構：(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-(GITR-BD)-連接子-鉸鏈-Fc。
  8. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該GITR-BD係單域抗體(sdAb)序列且包含互補性決定區(CDR)1、CDR2及CDR3，該CDR1包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列，該CDR2包含SEQ ID NO：141之胺基酸序列且該CDR3包含SEQ ID NO：116之胺基酸序列，其中各該GITR-BD包含選自由SEQ ID NO：50至59和61至62組成的群組之胺基酸序列。
  9. 如申請專利範圍第8項之單離多肽，其中該多肽包含SEQ ID NO：93之胺基酸序列。
  10. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其包含1或多個額外結合域。
  11. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該GITR-BD包含單域抗體(sdAb)。
  12. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該GITR-BD包含選自由SEQ ID NO：42至62組成的群組之胺基酸序列，及/或其中該GITR-BD包含選自由SEQ ID NO：63至80組成的群組之胺基酸序列。
  13. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該多肽包含免疫球蛋白Fc區多肽。
  14. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之單離多肽，其中該單離多肽包含選自由SEQ ID NO：81至105組成的群組之胺基酸序列。
  15. 如申請專利範圍第10項之單離多肽，其中該1或多個額外結合域結合非GITR之標的，其中該1或多個 額外結合域結合腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)成員之任一者，其中該TNFRSF成員係選自由OX40、CD27、皰疹病毒進入介質(HVEM)、CD40、淋巴毒素b受體(LTBR)、外異蛋白A2受體(ED2R)、外異蛋白A受體(EDAR)、TweakR、B細胞成熟抗原(BCMA)、B細胞活化因子受體(BAFFR)、死亡受體3(DR3)、死亡受體6(DR6)及CD137組成的群組。
  16. 如申請專利範圍第10項之單離多肽，其中該1或多個額外結合域結合非TNFRSF成員。
  17. 如申請專利範圍第10項之單離多肽，其中該1或多個額外結合域包含抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係scFv、Fab、單域抗體(sdAb)、VNAR或VHH。
  18. 一種單離核酸，其編碼如申請專利範圍第1至17項中任一項之單離多肽。
  19. 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第18項之單離核酸。
  20. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至17項中任一項之單離多肽。
  21. 如申請專利範圍第20項之醫藥組成物，其係用於治療癌症，其中該癌症係選自由膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃腸癌、胰腺癌、大腸直腸癌、大腸癌、腎癌、頭頸癌、肺癌、胃癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、皮膚 癌、中樞神經系統腫瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相關癌組成的群組，其中該癌症係轉移性癌症、頑固性癌症或復發性癌症。
  22. 如申請專利範圍第20項之醫藥組成物，其係用於與抗PD1抗體或抗PDL1抗體組合。
  23. 如申請專利範圍第22項之醫藥組成物，其中該抗體係抗PD1抗體，該抗PD1抗體係BMS-936558。
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Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA41460A (fr) 2015-02-03 2017-12-12 Oncomed Pharm Inc Agents de liaison à la tnfrsf et leurs utilisations
US10093742B2 (en) 2015-07-23 2018-10-09 Inhibrx, Inc. Multispecific GITR-binding fusion proteins and methods of use thereof
WO2017068186A1 (en) * 2015-10-22 2017-04-27 Ablynx Nv Gitr agonists
WO2018005950A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Five Prime Therapeutics, Inc. Combined anti tumor therapy with a gitr agonist and cpg
CA3057687A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer using anti-gitr antibodies
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
TW202515920A (zh) 2017-04-11 2025-04-16 美商因荷布瑞克斯生物科學公司 具有經受限cd3結合的多重特異性多肽構築體及使用其之方法
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
JP7274426B2 (ja) 2017-05-16 2023-05-16 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗ｇｉｔｒアゴニスト抗体での癌の処置
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
US11312783B2 (en) 2017-06-22 2022-04-26 Novartis Ag Antibody molecules to CD73 and uses thereof
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
KR20200019865A (ko) 2017-06-22 2020-02-25 노파르티스 아게 암 치료에 사용하기 위한 il-1베타 결합 항체
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag Il-1beta binding antibodies for use in treating cancer
KR20200022447A (ko) 2017-06-27 2020-03-03 노파르티스 아게 항-tim-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도
KR20200031659A (ko) 2017-07-20 2020-03-24 노파르티스 아게 항-lag-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
MA49950A (fr) 2017-08-25 2020-07-01 Five Prime Therapeutics Inc Anticorps anti-b7-h4 et leurs procédés d'utilisation
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
CA3081602A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies
EP3737692A4 (en) 2018-01-09 2021-09-29 Elstar Therapeutics, Inc. CALRETICULIN AND MODIFIED T-LYMPHOCYTES BINDING CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
SG11202007821WA (en) 2018-02-21 2020-09-29 Five Prime Therapeutics Inc B7-h4 antibody formulations
JP2021516051A (ja) 2018-03-02 2021-07-01 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｂ７−ｈ４抗体及びその使用方法
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
CN110357958A (zh) * 2018-03-26 2019-10-22 信达生物制药(苏州)有限公司 抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)的小型化抗体、其聚合物及应用
CA3096123A1 (en) 2018-04-11 2019-10-17 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and related methods and uses
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
TWI869346B (zh) 2018-05-30 2025-01-11 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CN112955465A (zh) 2018-07-03 2021-06-11 马伦戈治疗公司 抗tcr抗体分子及其用途
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
WO2020012334A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Novartis Ag 3-(5-hydroxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and their use in the treatment of ikaros family zinc finger 2 (ikzf2)-dependent diseases
CA3105891A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs containing a constrained cd3 binding domain and a receptor binding region and methods of using the same
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
JP2022512684A (ja) 2018-10-11 2022-02-07 インヒブルクス インコーポレイテッド Ｂ７ｈ３シングルドメイン抗体およびその治療用組成物
CN113518647A (zh) 2018-10-11 2021-10-19 印希比股份有限公司 5t4单域抗体及其治疗性组合物
EP3864045A2 (en) 2018-10-11 2021-08-18 Inhibrx, Inc. Dll3 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
EP3864049A1 (en) 2018-10-11 2021-08-18 Inhibrx, Inc. Pd-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
EP3897637A1 (en) 2018-12-20 2021-10-27 Novartis AG Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
CA3119582A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1.beta. binding antibodies
US20220025036A1 (en) 2018-12-21 2022-01-27 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
CN113227137A (zh) 2018-12-21 2021-08-06 诺华股份有限公司 IL-1β抗体在骨髓增生异常综合征的治疗或预防中的用途
ES2982474T3 (es) 2019-02-15 2024-10-16 Novartis Ag Derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-1,6-diona sustituidos y usos de estos
CN113490528B (zh) 2019-02-15 2024-12-03 诺华股份有限公司 3-(1-氧代-5-(哌啶-4-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
CN114026122B (zh) 2019-02-21 2024-12-31 马伦戈治疗公司 结合t细胞相关癌细胞的多功能分子及其用途
WO2020172605A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Elstar Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof
CN114502590A (zh) 2019-09-18 2022-05-13 诺华股份有限公司 Entpd2抗体、组合疗法、以及使用这些抗体和组合疗法的方法
IL292347A (en) 2019-10-21 2022-06-01 Novartis Ag Combination treatments with ventoclax and tim-3 inhibitors
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
IL293889A (en) 2019-12-20 2022-08-01 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
EP4084823A4 (en) 2020-01-03 2024-05-15 Marengo Therapeutics, Inc. ANTI-TCR ANTIBODY MOLECULES AND THEIR USES
WO2021144657A1 (en) 2020-01-17 2021-07-22 Novartis Ag Combination comprising a tim-3 inhibitor and a hypomethylating agent for use in treating myelodysplastic syndrome or chronic myelomonocytic leukemia
CN115803091A (zh) * 2020-05-22 2023-03-14 福迈康股份公司 Ace2-fc融合蛋白及其用途
AU2021288224A1 (en) 2020-06-11 2023-01-05 Novartis Ag ZBTB32 inhibitors and uses thereof
WO2021260528A1 (en) 2020-06-23 2021-12-30 Novartis Ag Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
WO2022029573A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Novartis Ag Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP4204021A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Advanced Accelerator Applications International S.A. Method of treating psma-expressing cancers
EP4204020A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Advanced Accelerator Applications International S.A. Method of treating psma-expressing cancers
EP4271715A4 (en) * 2020-12-30 2024-11-20 Wuxi Biologics Ireland Limited MULTI-SPECIFIC ANTIGEN-BINDING PROTEINS
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
WO2022216993A2 (en) 2021-04-08 2022-10-13 Marengo Therapeutics, Inc. Multifuntional molecules binding to tcr and uses thereof
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040220388A1 (en) * 2000-06-30 2004-11-04 Nico Mertens Novel heterodimeric fusion proteins
US20070009523A1 (en) * 1999-01-15 2007-01-11 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2012162583A1 (en) * 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
US20150064204A1 (en) * 2013-08-30 2015-03-05 Amgen Inc. Gitr antigen binding proteins

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
DK2857516T3 (en) * 2000-04-11 2017-08-07 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses thereof
AUPS054702A0 (en) 2002-02-14 2002-03-07 Immunaid Pty Ltd Cancer therapy
US7314974B2 (en) 2002-02-21 2008-01-01 Monsanto Technology, Llc Expression of microbial proteins in plants for production of plants with improved properties
WO2004060319A2 (en) 2002-12-30 2004-07-22 3M Innovative Properties Company Immunostimulatory combinations
PL1638941T3 (pl) 2003-05-22 2010-11-30 Abbvie Bahamas Ltd Indazolowe, benzizoksazolowe i benzizotiazolowe inhibitory kinaz
CN101218257A (zh) * 2005-03-25 2008-07-09 托勒克斯股份有限公司 Gitr结合分子及其用途
CA2602777C (en) 2005-03-25 2018-12-11 Tolerrx, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
WO2006113665A2 (en) 2005-04-15 2006-10-26 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
RU2487888C2 (ru) 2006-06-12 2013-07-20 ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ, ЭлЭлСи Одноцепочечные мультивалентные связывающие белки с эффекторной функцией
AU2007331672A1 (en) * 2006-12-15 2008-06-19 Ablynx N.V. Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system
ES2591281T3 (es) 2007-07-12 2016-11-25 Gitr, Inc. Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR
WO2009032782A2 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Biogen Idec Ma Inc. Compositions that bind multiple epitopes of igf-1r
AU2008328781A1 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprising the same
WO2009068649A2 (en) * 2007-11-30 2009-06-04 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
JPWO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2012-02-02 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
WO2010115156A2 (en) * 2009-04-03 2010-10-07 Synthetic Genomics, Inc. Endophytic fungus and uses therefor
CA2772613C (en) * 2009-09-03 2020-03-10 Schering Corporation Anti-gitr antibodies
SG181533A1 (en) 2009-12-07 2012-07-30 Univ Leland Stanford Junior Methods for enhancing anti-tumor antibody therapy
US10706955B2 (en) 2010-03-23 2020-07-07 Iogenetics, Llc Bioinformatic processes for determination of peptide binding
US9512231B2 (en) 2010-12-27 2016-12-06 Apo-T B.V. Cross-linking polypeptide that induces apoptosis
US20120196339A1 (en) 2011-01-31 2012-08-02 Los Alamos National Security Llc Production of industrially relevant compounds in prokaryotic organisms
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
TWI476001B (zh) 2011-12-26 2015-03-11 Ind Tech Res Inst 三倍體Ｆｃ融合蛋白及其用途
PH12021553014A1 (en) * 2012-02-27 2022-09-05 Ablynx Nv Cx3cr1-binding polypeptides
KR101549637B1 (ko) 2012-06-08 2015-09-03 국립암센터 신규한 Ｔｈ1 세포 전환용 에피토프 및 이의 용도
CN104968364A (zh) * 2012-12-03 2015-10-07 百时美施贵宝公司 强化免疫调变性Fc融合蛋白的抗癌活性
JP6499090B2 (ja) 2013-03-15 2019-04-10 ブイアイビー ブイゼットダブリュＶｉｂ Ｖｚｗ 心血管疾患において使用するための抗マクロファージマンノース受容体単一可変ドメイン
JP6449229B2 (ja) 2013-03-15 2019-01-09 アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド Ｆｃ変異体
EP3019192A4 (en) 2013-07-08 2017-07-05 Nanjingjinsirui Science&Technology Biology Corporation Compositions and methods for increasing protein half-life in a serum
WO2015022420A1 (en) * 2013-08-16 2015-02-19 Medimmune Limited Gip and glp-1 receptor dual-agonists for the treatment of diabetes
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
SMT202100116T1 (it) 2014-05-28 2021-05-07 Agenus Inc Anticorpi anti-gitr e metodi di utilizzo degli stessi
PT3151921T (pt) 2014-06-06 2019-11-21 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos contra recetor do fator de necrose tumoral induzido por glicocorticoide e utilizações dos mesmos
CA2960824A1 (en) 2014-09-13 2016-03-17 Novartis Ag Combination therapies of alk inhibitors
MX2017004311A (es) 2014-10-03 2017-12-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Anticuerpos del receptor del factor de necrosis tumoral inducido por glucocorticoide (gitr) y metodos de uso de los mismos.
ES2774448T3 (es) 2014-10-03 2020-07-21 Novartis Ag Terapias de combinación
MA41044A (fr) * 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
WO2016196912A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce conversion of regulatory t cells into effector t cells for cancer immunotherapy
BR112017025297A2 (pt) 2015-06-03 2018-08-14 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos anti-gitr para diagnóstico do câncer
US10093742B2 (en) 2015-07-23 2018-10-09 Inhibrx, Inc. Multispecific GITR-binding fusion proteins and methods of use thereof
WO2017068186A1 (en) * 2015-10-22 2017-04-27 Ablynx Nv Gitr agonists
WO2018005950A1 (en) * 2016-07-01 2018-01-04 Five Prime Therapeutics, Inc. Combined anti tumor therapy with a gitr agonist and cpg

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070009523A1 (en) * 1999-01-15 2007-01-11 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US20040220388A1 (en) * 2000-06-30 2004-11-04 Nico Mertens Novel heterodimeric fusion proteins
WO2012162583A1 (en) * 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
US20150064204A1 (en) * 2013-08-30 2015-03-05 Amgen Inc. Gitr antigen binding proteins

Also Published As

Publication number Publication date
AR105767A1 (es) 2017-11-08
KR20180031728A (ko) 2018-03-28
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CA2992298A1 (en) 2017-01-26
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TW201718630A (zh) 2017-06-01
EP3325512A4 (en) 2019-03-06
WO2017015623A2 (en) 2017-01-26
JP2018523493A (ja) 2018-08-23
CN108650886A (zh) 2018-10-12
AU2016297249B2 (en) 2020-11-12
BR112018001161A2 (pt) 2018-09-18
RU2018106452A3 (zh) 2019-12-26
US10093742B2 (en) 2018-10-09
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