TWI628189B - 脂質化存活素（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）及其用以預防及治療癌症之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於以大腸桿菌表現系統製備之經單離的重組人類脂質化存活素。本發明之經單離的重組人類脂質化存活素可增加共刺激分子(MHC II、CD40、CD80、CD83與CD86)及細胞介素(IL-6、IL-12與TNF-α)之表現量。於TC-1腫瘤細胞刺激動物模式及HLA-A11轉殖基因小鼠中進行的研究結果顯示，本發明之經單離的重組人類脂質化存活素能夠引起對抗腫瘤生長的免疫反應，並可應用於存活素表現的腫瘤。
Description
本發明係關於一種由細菌表現之脂質化存活素，用於免疫動物以引發對抗腫瘤生長的免疫反應。更特別地，本發明係關於一種於大腸桿菌為主之系統表現的重組人類脂質化存活素。
腫瘤免疫療法的主要目的係在於，激活人體自身的免疫防禦系統，以對抗然後消除現有腫瘤。然而，免疫療法在達到成功的癌症治療方面，面臨到一些固有的困難。包括，腫瘤與正常細胞之間的抗原相似性，低免疫原性的腫瘤細胞生長快速，以及腫瘤細胞具有逃脫免疫監控的逃避天性。欲激活成功的免疫反應通常需要有佐劑存在，其所扮演的作用似乎係在於活化抗原呈現細胞(antigen-presenting cell)。樹突狀細胞是一種捕捉及處理存在周邊組織中之抗原，表現淋巴細胞共刺激分子，遷移到淋巴器官，分泌細胞因子以引發免疫反應，並於將抗原呈現予CD4+和CD8+ T細胞時發揮核心作用的專業抗原呈現細胞(Banchereau et al.,Annu Rev Immunol 18,767-811,2000；Banchereau and Steinman,Nature 392,245-252,1998)。
製造用於增強重組蛋白抗原性的脂蛋白，已成為有希望開發新型疫苗的方法(Bockenstedt et al.,J Immunol 151,900-906,1993；Chen et al.,Vaccine 27,1400-1409,2009；Chiang et al.,PLoS One 6,e23319,2011；Infante-Duarte and Kamradt,Infect Immun 65,4094-4099,1997；Johnson et al.,Vaccine 13,1086-1094,1995；Oftung et al.,Scand J Immunol 46,445-451,1997)。但是，重組脂蛋白因為
表現量低，而無法完全被利用做為疫苗後選物。最近，本案發明人建立一套能夠表現大量具有刺激免疫系統特性之重組脂蛋白的新穎平台技術(Chen et al.,2009)。使用此技術，吾等可製備用以活化抗原呈現細胞，並且增強免疫反應之脂質化疫苗後選物。
存活素(Survivin)係屬防止細胞凋亡及促進細胞增生之細胞凋亡抑制蛋白家族(IAP)的一成員(Altieri,Nat Rev Cancer 8,61-70,2008；Li,J Cell Physiol 197,8-29,2003；Li et al.,Nature 396,580-584,1998)。已有報告顯示存活素之表現具有高度的腫瘤特異性，而很少表現於終端分化的成體組織中(Ambrosini et al.,Nat Med 3,917-9211997；Duffy et al.,Cancer Lett 249,49-60,2007)。存活素在數種人類癌症中被過度表現，包括(但不限定於)肺癌(Monzo et al.,J Clin Oncol 17,2100-2104,1999)、乳癌(Ryan et al.,Ann Oncol 17,597-604,2006；Span et al.,Clin Chem 50,1986-1993,2004)、前列腺癌(Shariat et al.,Cancer 100,751-757,2004)及卵巢癌(Sui et al.,Int J Oncol 21,315-320,2002；Takai et al.,Int J Mol Med 10,211-216,2002)。最近，已有文獻報導存活素不僅在癌細胞中受到增量調節，亦在腫瘤相關基質中表現量增高(Kawasaki et al.,Cancer 91,2026-2032,2001)。存活素係一種生長因子可誘導的基因，於形成血管之活躍分裂的內皮細胞中強烈過度表現，並且在抵消凋亡刺激及穩定血管網絡中發揮重要作用(Mesri et al.,Am J Pathol 158,1757-1765,2001；O'Connor et al.,Am J Pathol 156,393-398,2000；Papapetropoulos et al.,J Biol Chem 275,9102-9105,2000)。因此，存活素可做為一種用於癌症免疫療法的通用標靶抗原。
減量調控生存素將嚴重影響腫瘤細胞的生存能力，而對患者有益。有多篇報導已顯示，腫瘤中的高含量生存素與罹患不同類型癌症之患者的不良預後有關(Ambrosini et al.,1997；Duffy et al.,2007；Monzo et al.,1999；Ryan et al.,2006；Shariat et al.,2004；Span et al.,2004；Sui et al.,2002；Takai et al.,2002)。此等結果暗示，存活素是用於對抗癌症之治療性疫苗接種的理想靶標候選，因為其不受免疫選擇(挑選不表現存活素之細胞)的影響。已有
幾項臨床試驗已使用生存素做為免疫治療標靶物。
目前，在臨床上大多數以生存素為主的疫苗為胜肽類疫苗(Berntsen et al.,J Immunother 31,771-780,2008；Ichiki et al.,Lung Cancer 48,281-289,2005；Kameshima et al.,Cancer Sci 102,1181-1187,2011；Miyazaki et al.,Cancer Sci 102,324-329,2011；Otto et al.,Vaccine 23,884-889,2005；Wobser et al.,Cancer Immunol Immunother 55,1294-1298,2006)。其需要事先了解HLA配對胜肽，此意味著該項策略不能被廣泛應用。此外，一些使用存活素胜肽-負載樹突狀細胞的策略是針對每個患者定制的，這導致高的疫苗接種成本。
而根據本發明之方法，利用脂質化存活素進行疫苗接種，能減低疫苗接種成本且不受限於HLA配對胜肽。
於是，本發明之一方面係關於，一種重組脂質化存活素(lipo-survivin)，包含一脂質訊號胜肽與一存活素之胺基酸序列。於一項實例，所述之存活素包含人類存活素(AAC51660)。
較佳地，所述之重組脂質化存活素於其C-端含有一額外的多-六組胺酸序列，且係於T7啟動子調控下，於大腸桿菌為主之表現系統中被大量表現。
於本發明之一些具體實施態樣，所述之脂質訊號胜肽包含一衍生自天然脂蛋白之脂質化序列。於本發明之其他具體實施態樣，所述之脂質訊號胜肽包含Ag473之D1功能域。
本發明之另一方面，係關於一種對抗由腫瘤關連抗原所引起之人類癌症疾病的免疫治療組成物，包含一包括脂質訊號胜肽與一存活素之胺基酸序列的重組脂質化存活素。
於本發明之一些具體實施態樣，所述之免疫治療組成物進一步包含一化療藥物。於本發明之一項具體實施態樣，所述之免疫治療組成物進一步包含另一用於增加抗腫瘤活性之佐劑。
圖1A為用於製造重組人類存活素之表現質體pSurvivin的圖譜，而圖1B為用於製造重組人類脂質化存活素之表現質體pLSurvivin的圖譜。
圖2係顯示存活素(A,B)與脂質化存活素蛋白(C,D)之純化，藉由15%還原性SDS-PAGE隨後以考馬斯藍(Coomassie Blue)染色(列1-4,9-12)，或使用抗-His-標幟抗體進行免疫轉漬(列5-8,13-16)進行偵測之結果。箭號指出存在凝膠或轉漬膜上之存活素或脂質化存活素的電泳位置。列1,5,9,13：經IPTG誘導後之蛋白質表現；列2,6,10,14：未經IPTG誘導之蛋白質表現；列3,7,11,15：自包涵體萃取之蛋白質；列4,8,12,16：經純化之蛋白質。
圖3係顯示重組存活素經Waters® MALDI micro MXTM質譜法分解過夜後之分析結果。大部分主要高峰經鑑定為重組人類存活素的片段。經鑑定之重組人類存活素片段係以星號標記，且對應之胺基酸序列係加底線列出。
圖4係顯示重組脂質化存活素經Waters® MALDI micro MXTM質譜法分解過夜後之分析結果。大部分主要高峰經鑑定為重組人類脂質化存活素的片段。經鑑定之重組人類脂質化存活素片段係以星號標記，且對應之胺基酸序列係加底線列出。
圖5係顯示重組人類脂質化存活素之N-端的分析結果。以胰蛋白酶分解2天後，獲得重組人類脂質化存活素片段之
N-端並進行鑑定。經分解之樣本置於Waters® nano Acquity UPLC-Synapt HDMS G2質譜儀進行分析。MALDI-TOF MS光譜顯示存在A與B兩組高峰。A組含有三個高峰，分別具有m/z值為1452、1466及1480。B組由具有m/z值為1936、1950及1964之高峰組成。此等高峰先前於其他重組脂蛋白中經鑑定為一種脂質化特徵。
圖6係顯示脂質化存活素對於RAW 264.7巨噬細胞之表面標記物MHC II、CD40、CD80、CD83及CD86的影響。培養於單獨培養基之細胞的平均螢光強度(MFI)，係定義為基本表現量。繪製相對MFI圖。列示出得自四次獨立實驗之平均值與標準偏差。藉由ANOVA Bonferroni post test測定統計顯著性。* p<0.05；** p<0.01。
圖7係顯示脂質化存活素對於RAW 264.7巨噬細胞生產細胞激素((A)IL-6、(B)IL-12及(C)TNF-α)之影響。列示出得自四次獨立實驗之平均值與標準偏差。藉由ANOVA Bonferroni post test測定統計顯著性。** p<0.01；*** p<0.0001。
圖8係顯示脂質化存活素可有效被樹突狀細胞內化。骨髓衍生之樹突狀細胞與存活素或脂質化存活素(10μg/mL)培養一段所指定時間。經單獨PBS處理之樹突狀細胞作為對照組。經過培養後，將細胞清洗、固定、以所指定之標記物進行細胞內染色，然後使用共聚焦顯微鏡分析。結果以經鬼筆環肽(phalloidin)標定之肌動蛋白(激活呈綠色螢光)、針對細胞核之赫斯特染色(激活呈藍色螢光)及抗-存活素抗體染色(激活呈紅色螢光)顯現。
圖9係顯示脂質化存活素免疫小鼠可抑制TC-1腫瘤生長。C57BL/6小鼠組(n=5/組)經皮下免疫30μg重組存活素或脂質化存活素，每次免疫間隔兩週。以PBS免疫之小鼠做為對照組。結果顯示(A)腫瘤體積及(B)具有腫瘤體積<3000mm3之小鼠的存活分析。結果為兩次代表性實驗其
中之一。使用Kruskal-Wallis test計算統計學數據，包含對腫瘤植入後40天的腫瘤體積進行之Dunn氏多重比較檢驗。對生存數據進行對數秩檢驗(Log-rank tests)。**：p<0.01相較於PBS。
圖10係顯示脂質化存活素免疫HLA-A11轉殖基因小鼠可誘發抗腫瘤反應。HLA-A11轉殖基因小鼠組(n=5-6/組)以重組存活素或脂質化存活素免疫，每次免疫間隔兩週。以PBS免疫之小鼠做為對照組。於最後一次免疫後一週，將脾臟細胞過繼轉移至NOD-SCID小鼠。該等小鼠係於過繼轉移前四天，以表現HLA-A11之人類肺癌細胞(CL1-5,2.5X106/小鼠)進行接種。結果顯示(A)腫瘤體積及(B)具有腫瘤體積<3000mm3之小鼠的存活分析。結果為兩次代表性實驗其中之一。使用Kruskal-Wallis test計算統計學數據，包含對腫瘤植入後21天的腫瘤體積進行之Dunn氏多重比較檢驗。對生存數據進行對數秩檢驗(Log-rank tests)。*：p<0.05相較於PBS。**：p<0.01相較於PBS。
圖11係顯示CD8+ T細胞在由重組脂質化存活素誘發之抗腫瘤反應中具有重要作用。C57BL/6小鼠組(n=7/組)經皮下免疫30μg重組脂質化存活素，每次免疫間隔兩週。於最後一次免疫後一週，將小鼠接種2X 105 TC-1細胞。每週觀察腫瘤生長三次。於腫瘤接種前一天，經由腹膜內途徑投藥同型對照組抗體或抗-CD8抗體。以PBS免疫及以PBS耗盡之小鼠做為對照組。藉由流式細胞計數分析得自每組一隻小鼠之脾臟細胞，以確定CD8+ T細胞之耗盡(A)。顯示(B)腫瘤體積及(C)具有腫瘤體積<3000mm3之小鼠的存活分析結果。結果為兩次代表性實驗其中之一。
本發明之其他特色及優點將於下列實施範例中被進
一步舉例與說明，而該實施範例僅作為輔助說明，並非用於限制本發明之範圍。
實施例一、重組人類脂質化存活素之表現及純化
將編碼人類存活素(AAC51660)之DNA序列針對大腸桿菌密碼子利用進行最適化並完全合成。將PCR產物選殖入pER22b-為底之載體(pET-22b(+))的NdeI與XhoI切位中，而產生用於製造重組人類存活素之表現質體pSurvivin(參見圖1A)。關於pLSuvivin之構築，係將存活素基因與一段位於該存活素基因前方的脂質訊號胜肽編碼序列選殖入pET22b-為底之載體的NdeI BamHI與XhoI切位中，而產生用於製造重組人類脂質化存活素之質體pLSurvivin(參見圖1B)。該二重組蛋白皆含有一位於C端之額外的六組胺酸序列(His-tag)，並且於T7啟動子調控下進行表現。
將大腸桿菌株BL21(DE3)以表現質體pSurvivin進行轉型，以表現重組人類存活素。將經轉型之細胞於37℃下培養過夜，然後經由添加1mM之異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)，隨後再於37℃下培養3小時誘導蛋白質表現。將大腸桿菌株C43(DE3)以表現質體pLSurvivin進行轉型，以表現重組人類脂質化存活素。將經轉型之細胞於37℃下培養過夜，然後藉由添加1mM之異丙基硫代半乳糖苷，隨後於25℃下培養過夜誘導蛋白質表現。
藉由使用French Press(Constant Systems,Daventry,UK)於27Kpsi.下，於均質化緩衝液[20mM Tris(pH 8.0),50mM蔗糖，500mM NaCl與10%甘油]中打破並收取細胞，以進行重組蛋白質之純化。將細胞溶解產物於80,000 x g下離心40分鐘，大部分重組蛋白係存在包涵體中。然後使用萃取緩衝液[50mM NaH2PO4/5mM EDTA/200mM NaCl/0.5M尿素/1% Triton X-100(pH 6.0)]將重組蛋白質溶解。將萃取部分加樣至固定化金屬親合性層析術管柱(QIagen,Hilden，德國)上，分別純化得重組人類存活素及人類脂質化存活素。
如結果所示，分離得的存活素及脂質化存活素皆含有一段位於C端之額外的六組胺酸序列(His-tag)。分別藉由
SDS-PAGE(圖2A及2C)與使用抗-His標誌抗體進行之免疫轉漬法(圖2B及2D)，監測存活素及脂質化存活素的純化。去除脂多醣(LPS)後，於所得之存活素及脂質化存活素中的LPS殘留量少於0.1EU/mg。
實施例二、重組人類脂質化存活素之特性分析
將重組人類存活素及脂質化存活素以胰蛋白酶(Sigma,St.Louis,MO)進行分解。於分解作用後，將反應混合物進一步使用Zip Tip(Millipore,Massachusetts)純化。將1-μL等量經Zip Tip-研磨之胰蛋白酶分解片段與1mL α-氰基-4-羥基肉桂酸溶於乙腈/0.1%三氟乙酸(1：3，vol/vol)之飽和溶液混合。將一微升混合物置於使用基質輔助雷射脫附游離/飛行時間(MALDI-TOF)之質譜儀(Burker)之標的平盤上進行分析。如圖3及4之結果所示，鑑定出質譜中對應於存活素及脂質化存活素之片段的主要高峰。
進一步測量重組人類脂質化存活素經胰蛋白酶分解之N-端片段的精確質量。如圖5所示，鑑定出位於A組中具有m/z值為1452、1466及1480的三個主要高峰，及於B組中具有m/z值為1936、1950及1964之三個主要高峰。此等高峰先前於其他重組脂蛋白中經鑑定為一種脂質化特徵(Chen et al.,2009，同前述)。綜合以上結果，證明所純化得之重組人類存活素及脂質化存活素符合原始的設計。
實施例三、脂質化存活素增加表面標記物表現量
為分析重組人類脂質化存活素之功能活性，遂將RAW 264.7巨噬細胞以濃度為1μg/mL之重組人類存活素或脂質化存活素進行刺激16-18小時。使用流式細胞計量法分析MHC II、CD40、CD80、CD83或CD86於RAW 264.7巨噬細胞上的表現量。如圖6所示，重組人類脂質化存活素可增量調節MHC II、CD40、CD80、CD83及CD86之表現。
此外，細胞激素IL-6、IL-12及TNF-α之產量亦因重組人類脂質化存活素刺激增加。將RAW 264.7巨噬細胞培養於單獨或補充以濃度為1μg/mL之存活素或脂質化存活素的培養基
中。經過16-18小時培養後，收取上清液並使用ELISA分析(A)IL-6、(B)IL-12及(C)TNF-α之含量。相反地，重組人類存活素對於增量調節此等表面分子及細胞激素並無功效(圖7)。
實施例四、重組人類脂質化存活素可被樹突狀細胞內化
樹突狀細胞(DCs)為哺乳動物免疫系統之抗原呈獻細胞(亦稱為輔助細胞)。其主要功能係處理抗原物質，並將其呈獻於細胞表面上以刺激T細胞。一旦被活化，樹突狀細胞直接活化次組輔助T細胞以及殺手T細胞。T細胞一旦被樹突狀細胞活化後，也會與其他抗原呈獻B細胞及巨噬細胞劇烈地相互作用，以產生來自這些細胞的額外免疫反應。於本實施例，係檢驗脂質化存活素是否會被樹突狀細胞內化。
將骨髓衍生之樹突狀細胞與存活素或脂質化存活素(10μg/mL)培養一段所指定時間。經單獨PBS處理之樹突狀細胞作為對照組。經過培養後，將細胞清洗、固定、以所指定之標記物，鬼筆環肽(phalloidin)標定針對肌動蛋白(激活呈綠色螢光)、赫斯特染色針對細胞核(激活呈藍色螢光)，及抗-存活素抗體染色(激活呈紅色螢光)進行細胞內染色。然後使用共聚焦顯微鏡分析所呈現的染色結果。
在誘發T細胞反應中的一項重要程序是，抗原被抗原呈現細胞內化以供進行抗原處理。如圖8所示，以PBS處理之樹突狀細胞(每一時間點的最左欄)代表背景值。觀察到，以脂質化存活素處理之樹突狀細胞(每一時間點的最右欄)攝取了相當數量的存活素，且對於所有檢測的時間點，皆較以存活素處理之樹突狀細胞(每一時間點的中間欄)更有效率。此等結果顯示，相較於非-脂質化存活素，脂質化存活素可有效被骨髓衍生之樹突狀細胞內化，以供進一步抗原處理。
實施例五、經重組人類脂質化存活素免疫之小鼠可產生抗腫瘤反應
人類存活素與小鼠存活素非常相似。人類存活素與
小鼠存活素之間的胺基酸同一性大於84%。本實例遂採取此項優點，並利用TC-1小鼠腫瘤模式。TC-1為一種經致癌基因Ras、HPV16 E6及E7轉形之小鼠肺上皮細胞系。
雌性C57BL/6小鼠是購自國家實驗室動物中心。NOD-SCID小鼠、HLA-A11轉殖基因小鼠係於國家衛生研究院之實驗室動物中心培育得。所有的動物研究皆經核准，且按照國家衛生研究院之動物委員會的指導方針進行。將小鼠任意分配給各組，並經皮下免疫30μg重組存活素或脂質化存活素兩次，每次免疫間隔兩週。以PBS免疫之動物做為陰性對照組。
為檢測人類脂質化存活素是否能於活體內誘發抗腫瘤反應，遂將各組小鼠在經重組存活素、脂質化存活素或PBS免疫後，以TC-1腫瘤細胞刺激。於最後一次免疫後一週，藉由皮下注射方式將TC-1細胞(2X105)接種入C57BL/6小鼠。每週觀察腫瘤生長三次。利用目視檢查與觸診分析有或無腫瘤存在。每週以測徑尺測量腫瘤大小三次，並於腫瘤體積達3000mm3時將小鼠犧牲。腫瘤體積係以下列方程式估算：V=寬度X長度X(寬度+長度)/2。如圖9A所示，在經重組人類脂質化存活素免疫之小鼠中，腫瘤生長明顯受到抑制。此外，經重組人類脂質化存活素免疫之小鼠亦顯現其存活時間延長(圖9B)。
接著檢測於人類肺癌細胞之抗腫瘤功效。CL1-5為一種表現HLA-A11之人類肺癌細胞。因此，將HLA-A11轉殖基因小鼠組以重組存活素、脂質化存活素或PBS進行免疫，每次免疫間隔兩週。藉由皮下注射方式將CL1-5細胞(2X106)接種入NOD-SCID小鼠。於腫瘤接種後四天，將NOD-SCID小鼠任意分配給各組，並接受得自經30μg重組存活素、脂質化存活素或PBS免疫之HLA-A11轉殖基因小鼠的脾臟細胞(5X107)。利用目視檢查與觸診分析有或無腫瘤存在。每週以測徑尺測量腫瘤大小三次，並於腫瘤體積達3000mm3時將小鼠犧牲。腫瘤體積係以下列方程式估算：V=寬度X長度X(寬度+長度)/2。
於最後一次免疫後一週，將脾臟細胞過繼轉移至
NOD-SCID小鼠。此等NOD-SCID小鼠係以CL1-5細胞進行接種，於CL1-5接種後第四天接受得自經免疫之HLA-A11轉殖基因小鼠的脾臟細胞。如圖10之結果顯示，相較於接受得自經重組人類存活素或PBS免疫之小鼠的脾臟細胞之小鼠組，在接受得自經重組人類脂質化存活素免疫之小鼠的脾臟細胞之小鼠，其腫瘤生長受到延遲且存活時間增長。此等結果指示，重組人類脂質化存活素能夠誘發對抗人類腫瘤之抗腫瘤反應。
實施例六、CD8
+
T細胞在經由重組脂質化存活素誘發之抗腫瘤反應中具有重要作用
存在腫瘤中之T細胞(亦稱作腫瘤浸潤淋巴細胞，TIL)在過去幾年已經被深入研究。令人信服的證據表明，腫瘤部位中存在大量T細胞，特別是CD8記憶T細胞與對於罹患結直腸癌(CRC)之患者的總生存(OS)之間具有臨床相關性，且對於其他固體腫瘤亦然。於本實例，進一步確認CD8+ T細胞是否參與由重組脂質化存活素誘發之抗腫瘤反應。
C57BL/6小鼠組(n=7/組)經皮下免疫30μg重組脂質化存活素，每次免疫間隔兩週。於最後一次免疫後一週，將小鼠以2X105 TC-1細胞進行接種。每週觀察腫瘤生長三次。於腫瘤接種前一天，經由腹膜內途徑投予同型對照組抗體或抗-CD8抗體。以PBS免疫及以PBS耗盡之小鼠做為對照組。
在施予腫瘤接種前一天，將CD8+ T細胞使用抗-CD8抗體耗盡。在以抗-CD8抗體處理後24小時，經由流式細胞計數分析確定活體內CD8+ T淋巴細胞次組已從小鼠耗盡(圖11A)。於經重組脂質化存活素免疫接種之小鼠的抗腫瘤效用，在以抗-CD8抗體進行耗盡的小鼠中呈現廢止，而在以同型抗體進行耗盡的小鼠中則否(圖11B)。此等結果顯示，CD8+ T細胞在經由重組脂質化存活素誘發之抗腫瘤反應中產生主要作用。
結論，重組人類脂質化存活素能藉由使用本發明之平台技術成功地大量表現。將非脂質化存活素轉變為脂質化存活素，可活化抗原呈現細胞，並進而增強免疫反應。重要地，重組
人類脂質化存活素能有效被樹突狀細胞內化，而誘發對抗人類腫瘤之抗腫瘤反應。此等結果顯示，重組人類脂質化存活素對於癌症免疫治療具有較存活素更大的潛力。未來，為發現脂質化存活素提高抗腫瘤活性的可能性，吾等可以應用上述發明的概念和方法，進一步研究化學療法或其他佐劑與脂質化存活素的組合。
<110> 國家衛生研究院
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<211> 151
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 重組存活素
<400> 1
<210> 2
<211> 176
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 重組人類脂質化存活素
<400> 2
Claims (10)
- 一種單離的重組脂質化存活素(lipo-survivin)，包含一脂質訊號胜肽與一存活素及/或存活素類似物之胺基酸序列。
- 如請求項1之單離的重組脂質化存活素，其中該存活素包含人類存活素(AAC51660)。
- 如請求項1之單離的重組脂質化存活素，其進一步包含一位於C-端之額外的多-組胺酸序列。
- 如請求項1之單離的重組脂質化存活素，其係於T7啟動子調控下於大腸桿菌為主之表現系統中被表現。
- 如請求項1之單離的重組脂質化存活素，其中該脂質訊號胜肽包含一衍生自天然脂蛋白之脂質化序列。
- 如請求項1之單離的重組脂質化存活素，其中該脂質訊號肽包含Ag473之D1功能域。
- 一種對抗由腫瘤關連抗原所引起之人類癌症疾病的免疫治療組成物，包含如請求項1之單離的重組脂質化存活素。
- 如請求項7之免疫治療組成物，其中該存活素包含人類存活素(AAC51660)。
- 如請求項7之免疫治療組成物，其進一步包含一化療藥物。
- 如請求項7之免疫治療組成物，其進一步包含另一用於增加抗腫瘤活性之佐劑。
Applications Claiming Priority (2)
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| GenBank AAC51660.1 apoptosis inhibitor survivin [Homo sapiens] [online] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/AAC51660] 2004/09/02 |
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