TWI698521B

TWI698521B - 植物發酵物及其用於調控ｃｄ３６基因、ａｂｃａ１基因、ｐｒｏｃ基因、ｖｗｆ基因、ｆ３基因、ｓｅｒｐｉｎｅ１基因、ｐｄｇｆｃ基因、ｆｇｆ２基因、ｉｇｆ２ｂｐ３基因、ｉｇｆ１ｒ基因、ｉｌ８基因、ｖｃａｍ１基因及ｃａｓｐ８基因的表現量及心血管保健的用途

Info

Publication number: TWI698521B
Application number: TW108102980A
Authority: TW
Inventors: 林詠翔; 莊偉秀
Original assignee: 大江生醫股份有限公司
Priority date: 2019-01-25
Filing date: 2019-01-25
Publication date: 2020-07-11
Also published as: CN111481594B; CN111481594A; TW202028452A

Abstract

本發明提供一種植物發酵物及其用於調控CD36基因、ABCA1基因、PROC基因、VWF基因、F3基因、SERPINE1基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、IL8基因、VCAM1基因及CASP8基因的表現量，及心血管保健的用途。

Description

植物發酵物及其用於調控CD36基因、ABCA1基因、PROC基因、VWF基因、F3基因、SERPINE1基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、IL8基因、VCAM1基因及CASP8基因的表現量及心血管保健的用途

本發明是有關於一種植物發酵物及其用於調控CD36基因、ABCA1基因、PROC基因、VWF基因、F3基因、SERPINE1基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、IL8基因、VCAM1基因及CASP8基因的表現量，及心血管保健的用途。

心血管疾病是人類健康的一大威脅，根據中華民國衛生福利部公佈的資料，國人十大死因中，心血管疾病就占了三項，其中心臟疾病及腦血管疾病更分別高居第2及第4位。而在美國，心血管疾病更是美國人民的第一大死亡原因，由此可見，心血管疾病對人類健康的威脅已達不容忽視的程度，其發病之初通常沒有明顯症狀，但等到一旦出現併發症時，例如腦中風、心肌梗塞、心衰竭、腎衰竭或視網膜出血等，患者生命通常已遭受嚴重的威脅，且為了治療心血管疾病，心臟血管用藥的需求亦居高不下，成為醫療資源的龐大負擔。因此，本領域的相關技術人員皆致力於開發用於保護心血管的產品(包括食品產品以及醫藥品)，以因應廣大人類健康需求。

然而，目前所使用的心血管保健的產品大多由化學成分所製成，長期使用不但對人體健康有害無益，且這些產品往往價格昂貴，並非為一般使用者所能負擔。為了解決上述問題，本領域的技術人員亟需研發出具有心血管保健功效之新穎醫藥品或食品產品以造福有此需求的廣大族群。

有鑑於此，本發明之目的為提供一種植物發酵物，係藉由一包含下列步驟之方法而製得：(a)以水萃取一由槴子(Gardenia jasminoides)及馬齒莧(Portulaca oleracea)所構成的組合，而得到一植物萃取物；以及(b)將該植物萃取物與啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵，而得到該植物發酵物。

在本發明的一實施例中，該啤酒酵母菌與該胚芽乳酸菌之發酵時間為1至5天，及該醋酸菌之發酵時間為3至8天。

在本發明的一實施例中，該植物發酵物的有效濃度為至少2%(v/v)。

在本發明的一實施例中，該啤酒酵母菌的濃度介於0.01~0.5%(v/v)，該胚芽乳酸菌的濃度介於0.01~0.25%(v/v)，及該醋酸菌的濃度介於1~20%(v/v)。

在本發明的一實施例中，該槴子及該馬齒莧及該水的體積比例介於1~5：1：40~60。

本發明之另一目的為提供一種植物發酵物用於製備一調控CD36基因、ATP結合匣子族A成員1(ATP binding cassette subfamily A member 1,ABCA1)基因、C蛋白(protein C,PROC)基因、溫韋伯氏凝血因子(von Willebrand factor,VWF)基因、F3基因、絲胺酸蛋白酶抑制劑家族E成員1(serine protease inhibitorfamily E member 1,SERPINE1)基因、血小板衍生型生長因子C(platelet derived growth factor C,PDGFC)基因、纖維母細胞生長因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)基因、似胰島素生長因子2 mRNA結合蛋白3(Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因、似胰島素生長因子1受體(insulin like growth factor 1 receptor,IGF1R)基因、介白素8(Interleukin-8,IL8)基因、血管細胞附著分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM1)基因及凋亡蛋白酶8(caspase 8,CASP8)基因的表現量之組成物的用途，其中該植物發酵物係藉由一包含下列步驟之方法而製得：(a)以水萃取一由槴子(Gardenia jasminoides)及馬齒莧(Portulaca oleracea)所構成的組合，而得到一植物萃取物；以及(b)將該植物萃取物與啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵，而得到該植物發酵物。

本發明之另一目的為提供一種植物發酵物用於製備一心血管保健之組成物的用途，其中該植物發酵物係藉由一包含下列步驟之方法而製得：(a)以水萃取一由槴子(Gardenia jasminoides)及馬齒莧(Portulaca oleracea)所構成的組合，而得到一植物萃取物；以及(b)將該植物萃取物與啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵，而得到該植物發酵物。

在本發明的一實施例中，該槴子、該馬齒莧及該水的體積比例介於1~5：1：40~60。

在本發明的一實施例中，該組成物是呈一醫藥品或一食品產品的形式。

綜上所述，本發明植物發酵物之功效在於：可藉由調控CD36基因、ABCA1基因、PROC基因、VWF基因、F3基因、SERPINE1基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、IL8基因、VCAM1基因及CASP8基因的表現量，調理五行經絡中的整條心經，調控血管舒張、動脈粥狀硬化基因表現，減少血栓形成，調控血管新生基因，舒張血壓，同時降低血管發炎基因降低凝血反應，達到心血管保健功效。

以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

圖1是本發明植物發酵物的總黃酮含量檢測之數據圖。

圖2是本發明植物發酵物在調控與動脈粥狀硬化相關的基因(包括CD36基因及ABCA1基因)表現上的功效之數據圖，其中“*”表示與對照組比較，p<0.05；“**”表示與對照組比較，p<0.01。

圖3是本發明植物發酵物在調控與心血管保健相關的基因(包括PROC、VWF、F3、及SERPINE1基因)表現上的功效之數據圖，其中“***”表示與對照組比較，p<0.001。

圖4是本發明植物發酵物在調控與心血管保健相關的基因(包括PDGFC、FGF2、IGF2BP3、及IGF1R基因)表現上的功效之數據圖，其中“*”表示與對照組比較，p<0.05；“***”表示與對照組比較，p<0.001。

圖5是本發明植物發酵物在調控與心血管保健相關的基因(包括IL8及VCAM1基因)表現上的功效之數據圖，其中“*”表示與對照組比較，p<0.05；“**”表示與對照組比較，p<0.01；“***”表示與對照組比較，p<0.001。

圖6是本發明植物發酵物在調控與心血管保健相關的基因(亦即CASP8基因)表現上的功效之數據圖，其中“***”表示與對照組比較，p<0.001。

定義

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。

使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，個此之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)分析。

依據本發明，槴子(Gardenia jasminoides)是茜草科(Rubiaceae)槴子屬(Gardenia)的常綠灌木，別名木丹及鮮支。槴子在中醫上以果實入藥，性寒、味苦，功能清熱瀉火，主治目赤、黃疸、吐血及熱毒瘡瘍。

依據本發明，馬齒莧(Portulaca oleracea)是馬齒莧科(Portulacaceae)馬齒莧屬(Portulaca)的草本植物，別名馬生菜、馬齒菜、馬屎莧及五行草。馬齒莧在中醫上以地上全草入藥，味甘酸、性寒、無毒，功效為清熱解毒，除濕止痢，利尿潤肺，止渴生津。

依據本發明，有關發酵培養的操作程序與參數條件等是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

如本文中所使用的，用語「啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)」、「胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)」以及「醋酸菌(Acetobacter aceti)」分別意欲涵蓋那些為熟習此項技術人士可易於獲得的啤酒酵母菌、胚芽乳酸菌以及醋酸菌(例如，可購自於國內或國外寄存機構者)，或者利用本技藝中所慣用的微生物分離方法而從天然來源中所分離純化出的啤酒酵母菌、胚芽乳酸菌以及醋酸菌菌株。

依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或口服地(orally)投藥的劑型(dosage form)，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。

依據本發明的醫藥品可以一選自於由下列所構成的群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)以及靜脈內注射(intravenous injection)。

依據本發明的醫藥品可包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含糖溶液、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)，以及它們的組合。

依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。

依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。

實施例1. 植物發酵物的製備

首先，將來自中國的槴子(Gardenia jasminoides)、馬齒莧(Portulaca oleracea)及水以1~5：1：40~60的體積比例混合，並在50℃~100℃下分別滅菌萃取0.5~3小時，得到一植物萃取物。將該植物萃取物冷卻至室溫供後續三段式發酵使用。三段式發酵係為把植物萃取物依序接種0.01~0.5%(v/v)啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)BCRC 20271與0.01~0.25%(v/v)胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)TCI028(BCRC 910805)發酵1~5天；1~20%(v/v)醋酸菌(Acetobacter aceti)BCRC 11688(以上菌株皆是購自於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC))發酵3~8天。之後，於45℃~70℃下減壓濃縮，並以200~400網目(mesh)的網篩過濾。接著，添加40~70%異麥芽寡糖調整規格後滅菌，得到植物發酵物。

實施例2. 植物發酵物的總黃酮含量檢測

總黃酮含量檢測的實驗流程如下：檢測總黃酮含量以芸香素(rutin)(ChromaDex ASB-00018440)當量作為總黃酮相對含量的表示。準備材料包含有10%硝酸鋁(Aluminum nitrat)(水溶液)(Alfa Aesar 12360)、5%檸檬酸鈉(sodium nitrite)(水溶液)(Sigma 31443)、4%氫氧化鈉(sodium hydroxide)(水溶液)(Macron 7708-10)及200μg/mL芸香素(甲醇溶液)。

取上述芸香素標準液0、200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL及1200μL分別加入試管中，分別依序加入1200μL、1000μL、800μL、600μL、400μL、200μL及0μL的水，震盪均勻混合；取200μL各濃度之芸香素溶液；分別加入200μL之5%檸檬酸鈉，混合均勻後靜置6分鐘；加入200μL之10%硝酸鋁，混合均勻後靜置6分鐘；再加入2mL之4%氫氧化鈉混合均勻後，再加入1.4mL H₂O混合均勻；取200μL上述反應液於96孔反應盤中，以分光光度計於500nm偵測吸光值，並繪製標準曲線。

將實施例1所得到的植物發酵物作為實驗組，將植物萃取物作為比較組。實驗組或比較組經適當之稀釋後，取200μL之實驗組或比較組樣品置於試管中；加入200μL 5%檸檬酸鈉，混合均勻後靜置6分鐘；加入200μL 10%硝酸鋁，混合均勻後靜置6分鐘；加入2mL 4%氫氧化鈉混合均勻後，再加入1.4mL H₂O混合均勻；取200μL上述反應液於96孔反應盤中，以分光光度計於500nm偵測吸光值。總黃酮含量的結果顯示於圖1。

圖1是本發明植物發酵物的總黃酮含量檢測之數據圖。由圖1可見，與比較組相較之下，實驗組的總黃酮含量有顯著的提升(提升1.4倍)。本實施例的結果顯示，本發明植物發酵物會大量釋出總黃酮。

實施例3. 植物發酵物在心血管保健上的效用評估 3.1 植物發酵物在調控與動脈粥狀硬化相關的基因表現上之功效

首先，將人類單核球細胞(human monocytic cell)THP-1(對應於ATCC,TIB202)培養於RPMI-1640培養基(Gibco)(添加有10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(Gibco)、0.05mM 2-巰基乙醇(2-mercaptoethanol)、100units/mL青黴素(penicillin)及100μg/mL鏈黴素(streptomycin))中。於6孔培養盤的每孔中加入2mL的培養基，使每孔具有1.5 x 10⁵個THP-1細胞。接著，添加具有500nM佛波醇-12-十四烷醯-13-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)的分化培養基並培養48小時。之後，更換新鮮培養基並再培養48小時。

另外，製備單方的植物發酵物(包括單一的馬齒莧發酵物、單一的槴子發酵物)作為比較組的分析樣品，製備方式參照上面實施例1的流程來進行，不同之處在於：以單方的馬齒莧及槴子來取代由槴子及馬齒莧所構成的組合。

之後，將THP-1細胞分成5組，其中包括1個實驗組、2個比較組(亦即比較組1及比較組2)、1個LPS(脂多醣，Lipopolysaccharides)組及1個對照組。將2%(v/v)依據上面實施例1的植物發酵物添加至實驗組的細胞中，將2%(v/v)馬齒莧發酵物添加至比較組1的細胞中，將2%(v/v)槴子發酵物添加至比較組2的細胞中，及將100ng/mL脂多醣(Lipopolysaccharides,LPS)添加至LPS組的細胞中，俾以誘發細胞發炎反應，其與血管功能障礙(vascular dysfunction)有關。至於對照組的細胞則不做任何處理。接著，於培養箱中培養各組細胞24小時，接而收取各組細胞培養物並拿來進行基因表現分析。

在本實施例中，用來分析與動脈粥狀硬化相關的基因包括CD36基因及ATP結合匣子族A成員1(ATP binding cassette subfamily A member 1,ABCA1)基因。

以RNA萃取套組(Genemark)對上面所得到的各組細胞培養物進行RNA的萃取。對由此所得到的各組RNA取2,000ng並以SuperScript^® III反轉錄酶(Invitrogen)將萃取出的RNA反轉錄為cDNA。接著，以cDNA作為模版，並且使用用來擴增標的基因的引子對，包括CD36、ABCA1及ACTB(作為內部對照組)，它們的核苷酸序列顯示於下表1，在StepOne Plus即時PCR系統(ABI)中利用KAPA CYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行定量即時PCR，俾以對標的基因進行擴增及定量。PCR產物的熔化曲線是在定量即時PCR反應期間進行確認。

標的基因的相對表現量是推導自方程式

，並利用ACTB基因(作為內部對照組)及基準基因的循環閾值及藉由標準差來計算相對倍數變化，其中△Ct=Ct_{目標基因/基準基因}-Ct_ACTB，△△Ct=△Ct_目標基因-△Ct_基準基因，

。以對照組的標的基因表現量作為1的比較基準。各組之間的統計學顯著差異是藉由單尾史徒登氏t-檢定來決定。本實施例的結果顯示於圖2。

圖2是本發明植物發酵物在調控與動脈粥狀硬化相關的基因(包括CD36基因及ABCA1基因)表現上的功效之數據圖。由圖2可見，就CD36基因而言，與對照組、LPS組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因倍數變化有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低70%。就ABCA1基因而言，與對照組、LPS組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因倍數變化有顯著的提升，其中與對照組比較，約提升100%。本實驗結果顯示，本發明植物發酵物可藉由調控與動脈粥狀硬化相關的基因(包括CD36基因及ABCA1基因)表現，避免泡沫細胞形成，減少動脈粥狀硬化風險，達到心血管保健的功效。

3.2 植物發酵物在調控與心血管保健相關的基因表現上之功效

之後，將THP-1細胞分成4組，其中包括1個實驗組、2個比較組(亦即比較組1及比較組2)及1個對照組。將0.5%(v/v)依據上面實施例1的植物發酵物添加至實驗組的細胞中，將0.5%(v/v)馬齒莧發酵物添加至比較組1的細胞中，及將0.5%(v/v)槴子發酵物添加至比較組2的細胞中。至於對照組的細胞則不做任何處理。接著，於培養箱中培養各組細胞24小時，接而以細胞分解緩衝液(cell lysis buffer)來處理細胞，然後收取各組細胞培養物並拿來進行基因表現分析。

在本實施例中，用來分析與心血管保健相關的基因包括C蛋白(protein C,PROC)基因、溫韋伯氏凝血因子(von Willebrand factor,VWF)基因、F3基因、絲胺酸蛋白酶抑制劑家族E成員1(serine protease inhibitorfamily E member 1,SERPINE1)基因、血小板衍生型生長因子C(platelet derived growth factor C,PDGFC)基因、纖維母細胞生長因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)基因、似胰島素生長因子2 mRNA結合蛋白3(Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因、似胰島素生長因子1受體(insulin like growth factor 1 receptor,IGF1R)基因、介白素8(Interleukin-8,IL8)基因、血管細胞附著分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM1)基因及凋亡蛋白酶8(caspase 8,CASP8)基因。

以RNA萃取套組(Genemark)對上面所得到的各組細胞培養物進行RNA的萃取。對由此所得到的各組RNA取2,000ng並以SuperScript^® III反轉錄酶(Invitrogen)將萃取出的RNA反轉錄為cDNA。接著，以cDNA作為模版，並且使用用來擴增標的基因的引子對，包括PROC、VWF、F3、SERPINE1、PDGFC、FGF2、IGF2BP3、IGF1R、IL8、VCAM1、CASP8及ACTB(作為內部對照組)，它們的核苷酸序列顯示於下表2，在StepOne Plus即時PCR系統(ABI)中利用KAPA CYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行定量即時PCR，俾以對標的基因進行擴增及定量。PCR產物的熔化曲線是在定量即時PCR反應期間進行確認。

標的基因的相對表現量是推導自方程式

。以對照組的標的基因表現量作為1的比較基準。各組之間的統計學顯著差異是藉由單尾史徒登氏t-檢定來決定。本實施例的結果顯示於圖3至圖6。

圖3至圖6是本發明植物發酵物在調控與心血管保健相關的基因(包括PROC、VWF、F3、SERPINE1、PDGFC、FGF2、IGF2BP3、IGF1R、IL8、VCAM1、及CASP8基因)表現上的功效之數據圖。由圖3可見，就PROC基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的提升，其中與對照組比較，約提升320%；就VWF基因而言，與對照組、比較組1 及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低70%；就F3基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低75%；就SERPINE1基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低20%。

由圖4可見，就PDGFC基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低75%；就FGF2基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低30%；就IGF2BP3基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低60%；就IGF1R基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低45%。

由圖5可見，就IL8基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低45%；就VCAM1基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低60%。

由圖6可見，就CASP8基因而言，與對照組、比較組1及比較組2相較之下，實驗組的基因相對表現量有顯著的降低，其中與對照組比較，約降低60%。

本實驗結果顯示，本發明植物發酵物可藉由提升PROC基因表現，抑制血栓形成；藉由抑制VWF、F3、及SERPINE1基因表現，降低血栓形成；藉由抑制PDGFC、FGF2、IGF2BP3、及IGF1R基因表現，抑制因血管細胞增生導致的血管收縮，調解血壓；藉由抑制IL8、VCAM1、及CASP8基因表現，降低凝血產生。

綜上所述，本發明植物發酵物可藉由調控CD36基因、ABCA1基因、PROC基因、VWF基因、F3基因、SERPINE1基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、IL8基因、VCAM1基因及CASP8基因的表現量，調理五行經絡中的整條心經，調控血管舒張、動脈粥狀硬化基因表現，減少血栓形成，調控血管新生基因，舒張血壓，同時降低血管發炎基因降低凝血反應，達到心血管保健功效。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

<110> 大江生醫股份有限公司

<120> 植物發酵物及其用途

<130> 107B0608-I1

<160> 28

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 1

<210> 2

<211> 19

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<213> 人工序列

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<223> 合成引子

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<223> 合成引子

<400> 3

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<223> 合成引子

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<223> 合成引子

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<223> 合成引子

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 11

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 12

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 13

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 14

<210> 15

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 15

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 16

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 17

<210> 18

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 18

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 19

<210> 20

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 20

<210> 21

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 21

<210> 22

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 22

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 23

<210> 24

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 24

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 25

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 26

<210> 27

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 27

<210> 28

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 28

Claims

一種植物發酵物，係藉由一包含下列步驟之方法而製得：(a)以水萃取一由槴子(Gardenia jasminoides)及馬齒莧(Portulaca oleracea)所構成的組合，而得到一植物萃取物，其中該植物萃取物是在50℃~100℃下進行萃取0.5~3小時而得到；以及(b)將該植物萃取物與啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵，而得到該植物發酵物，其中該啤酒酵母菌與該胚芽乳酸菌之發酵時間為1至5天，及該醋酸菌之發酵時間為3至8天；該啤酒酵母菌的濃度介於0.01~0.5%(v/v)，該胚芽乳酸菌的濃度介於0.01~0.25%(v/v)，及該醋酸菌的濃度介於1~20%(v/v)；該槴子、該馬齒莧及該水的體積比例介於1~5：1：40~60。
如申請專利範圍第1項所述的植物發酵物，其有效濃度為至少2%(v/v)。
一種植物發酵物用於製備一調控CD36基因、ATP結合匣子族A成員1(ATP binding cassette subfamily A member 1,ABCA1)基因、C蛋白(protein C,PROC)基因、溫韋伯氏凝血因子(von Willebrand factor,VWF)基因、F3基因、絲胺酸蛋白酶抑制劑家族E成員1(serine protease inhibitorfamily E member 1,SERPINE1)基因、血小板衍生型生長因子C(platelet derived growth factor C,PDGFC)基因、纖維母細胞生長因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)基因、似胰島素生長因子2 mRNA結合蛋白3(Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因、似胰島素生長因子1受體(insulin like growth factor 1 receptor,IGF1R)基因、介白素8(Interleukin-8,IL8)基因、血管細胞附著分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM1)基因及凋亡蛋白酶8(caspase 8,CASP8)基因的表現量之組成物的用途，其中該植物發酵物係藉由一包含下列步驟之方法而製得： (a)以水萃取一由槴子(Gardenia jasminoides)及馬齒莧(Portulaca oleracea)所構成的組合，而得到一植物萃取物，其中該植物萃取物是在50℃~100℃下進行萃取0.5~3小時而得到；以及(b)將該植物萃取物與啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵，而得到該植物發酵物，其中該啤酒酵母菌與該胚芽乳酸菌之發酵時間為1至5天，及該醋酸菌之發酵時間為3至8天；該啤酒酵母菌的濃度介於0.01~0.5%(v/v)，該胚芽乳酸菌的濃度介於0.01~0.25%(v/v)，及該醋酸菌的濃度介於1~20%(v/v)；該槴子、該馬齒莧及該水的體積比例介於1~5：1：40~60。
一種植物發酵物用於製備一促進血管舒張與血管新生、緩解動脈粥狀硬化與血管發炎、減少血栓形成、舒張血壓及降低凝血反應之組成物的用途，其中該植物發酵物係藉由一包含下列步驟之方法而製得：(a)以水萃取一由槴子(Gardenia jasminoides)及馬齒莧(Portulaca oleracea)所構成的組合，而得到一植物萃取物，其中該植物萃取物是在50℃~100℃下進行萃取0.5~3小時而得到；以及(b)將該植物萃取物與啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳酸菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵，而得到該植物發酵物，其中該啤酒酵母菌與該胚芽乳酸菌之發酵時間為1至5天，及該醋酸菌之發酵時間為3至8天；該啤酒酵母菌的濃度介於0.01~0.5%(v/v)，該胚芽乳酸菌的濃度介於0.01~0.25%(v/v)，及該醋酸菌的濃度介於1~20%(v/v)；該槴子、該馬齒莧及該水的體積比例介於1~5：1：40~60；該植物發酵物是於45℃~70℃下減壓濃縮，並以400網目(mesh)的網篩過濾，接而添加40~70%異麥芽寡糖調整規格後滅菌而得到。
如申請專利範圍第3項或第4項所述的用途，其中該植物發酵物的有效濃度為至少2%(v/v)。
如申請專利範圍第3項或第4項所述的用途，其中該組成物是呈一醫藥品或一食品產品的形式。