TWI584731B

TWI584731B - Antibacterial agents

Info

Publication number: TWI584731B
Application number: TW100124998A
Authority: TW
Inventors: Takehisa Yano; Hiromi Kubota; Horiyuki Morii; Yoshiko Miyahara
Original assignee: Kao Corp
Priority date: 2010-07-14
Filing date: 2011-07-14
Publication date: 2017-06-01
Also published as: JP2012036179A; MY160464A; CN103002732B; CN103002732A; JP5818546B2; WO2012008499A1; TW201206342A

Description

抗菌劑

本發明係關於一種對防止生活環境中所產生之粉紅污垢附著及去除粉紅污垢有用之抗菌劑。

近年來，對將家庭或工作場所、公共設施等生活環境保持得更為清潔之要求逐漸提高。然而另一方面，由於近年來之建築物，尤其是城市中之辦公大樓或高級公寓存在密閉性較高而容易聚集濕氣之傾向，故而處於容易繁殖細菌或黴菌等微生物之環境下。尤其是於廁所、浴室、盥洗室、廚房等所謂之用水場所中，由於水分或濕氣或者溫度等條件，而更加容易繁殖微生物。

用水場所等生活環境中顯著之污垢之一為以呈現為紅色或粉紅色等帶紅色之顏色的附著物或黏液為代表之粉紅污垢。粉紅污垢於排水口、墊圈、吃水栓部、浴室之地板、臉盆或洗髮精瓶等容器之底部等部位尤為顯著。另外，由於粉紅污垢即便清掃亦會立刻再產生，故而對於清掃者而言為麻煩之污垢。又，粉紅污垢不僅難以去除，且因由黏液感及外觀所致之異樣感，而給用水場所之使用者帶來不快感。期望開發出一種有效地去除粉紅污垢，保持用水場所清潔之方法。

作為自粉紅污垢分離出之菌，報告有Rhodotorula(紅酵母)屬酵母、Methylobacterium(甲基桿菌)屬細菌、Brevundimonas(泡囊短波單胞菌)屬細菌、Microbacterium(微桿菌)屬細菌等(專利文獻1、非專利文獻1)。其中Rhodotorula屬酵母與其他菌種相比，增殖速度較快，故而認為其為粉紅污垢之主原因菌(專利文獻1)。並且，作為對於Rhodotorula屬酵母抗菌活性較高、且對抑制黏液有效之成分，報告有銀系、鋅系、鈦系、銅系之抗菌性金屬等無機系抗菌劑、烷基三甲基銨鹽、二烷基二甲基銨鹽、苄烷銨鹽、咪唑啉鹽等界面活性劑系抗菌劑等(專利文獻1)。

然而，迄今為止並不存在關於粉紅污垢，著眼於Methylobacterium屬細菌，自抑制該細菌之生長之觀點來討論去除粉紅污垢之報告。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本專利特願2006-151908號公報

[非專利文獻]

[非專利文獻1]洗滌之科學，2007年，52卷4號16~22頁

本發明係以下之發明。

1)一種抗菌劑，其係組合以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑而成：

(A)選自二烷基二甲基銨鹽及烷基苄基二甲基銨鹽之一種以上之四級銨鹽；

(B)選自芳香族醇、芳香族醛、下述式(1)及(2)所示之化合物之一種以上之有機溶劑；

[化1]

[式中，R表示碳數為5~10之烷基或烯基、或苄基，A表示碳數為1~10之伸烷基，n表示0~5之數，n個A可相同，亦可不同]。

2)一種抗菌劑組合物，其含有上述1)之抗菌劑。

3)一種防止粉紅污垢附著或去除粉紅污垢之方法，其特徵在於：將上述抗菌劑或抗菌劑組合物使用於容易產生微生物污染之場所。

4)一種抗菌劑之使用，該抗菌劑係組合以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑而成：

[化2]

5)一種以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑之組合之使用，其用以製造抗菌劑：

[化3]

6)一種抗菌方法，其特徵在於：組合以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑而使用：

[化4]

本發明係關於提供一種對防止於生活環境，尤其是廁所、浴室、廚房周圍等之硬質表面所產生的粉紅污垢附著及去除粉紅污垢有用之抗菌劑組合物。

本發明者等人使用掃描式電子顯微鏡(SEM，Scanning Electron Microscope)或共軛焦雷射顯微鏡(CLSM，Confocal Laser Scanning Microscope)分析實際之粉紅污垢，其結果發現粉紅污垢之主原因菌並非先前所知之Rhodotorula屬酵母，而是Methylobacterium屬細菌。並且，對於可有效地抑制或阻止Methylobacterium屬細菌之生長之成分進行研究，結果發現於組合特定之四級銨鹽與有機溶劑而使用之情形時，對Methylobacterium屬細菌發揮優異之抗菌活性，對去除粉紅污垢較為有用。

根據本發明之抗菌劑，於使用於生活環境，尤其是廚房或浴室、廁所、洗臉台等之壁或地板、器具、機器等硬質表面時，可實現該硬質表面之殺菌及防汙，具體而言，可防止粉紅污垢附著及容易地去除附著之粉紅污垢。

於本發明中，作為成分(A)之四級銨鹽的二烷基二甲基銨鹽及烷基苄基二甲基銨鹽係作為抗菌性之陽離子界面活性劑而公知之化合物。

於本發明中，作為二烷基二甲基銨鹽及烷基二甲基銨鹽，較佳為分別舉出：二烷基(C_8-18)二甲基銨鹽、烷基(C_8-18)二甲基銨鹽。

此處，作為烷基，可舉出：碳數為8~18之直鏈烷基，例如辛基、癸基、十二烷基(月桂基)、十四烷基(肉豆蔻基)、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)，較佳為辛基、癸基、十二烷基。

作為較佳之二烷基二甲基銨鹽，可舉出二癸基二甲基銨鹽，作為烷基苄基二甲基銨鹽，可舉出辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽等。

銨鹽可舉出與F^-、Cl^-、Br^-、I^-等鹵化物離子、NO^-、及SO₄ ^2-等之鹽，較佳為與鹵化物離子之鹽，更佳為與氯化物離子之鹽。

作為更佳之四級銨鹽，可舉出：辛基苄基二甲基氯化銨、十二烷基苄基二甲基氯化銨、二癸基二甲基氯化銨等。

上述本發明之成分(A)之四級銨鹽可使用公知之方法製造，亦可使用市售品。例如，可購買Quartamin D10(花王股份有限公司製造)作為二烷基二甲基銨鹽，購買Sanisol 08、Sanisol C(花王股份有限公司製造)等作為烷基苄基二甲基銨鹽而使用。

已知本發明之四級銨鹽一般單獨使用時對細菌等顯示出優異之抗菌力。然而，如後述實施例所示，若以對E.coli(大腸桿菌)、S.aureus(金黃色葡萄球菌)、P.aeruginosa(綠膿桿菌)顯示出充分之抗菌力之濃度，則並不對Methylobacterium屬細菌顯示抗菌活性，若不以10倍以上之濃度以30分鐘以上之接觸時間使用，則無法確認有意義之菌數減少。即，判明Methylobacterium屬細菌對該四級銨鹽耐藥性非常高。

於該情形時，發現藉由將該四級銨鹽與成分(B)之有機溶劑組合使用，其抗菌力顯著地提高。因此，組合上述成分(A)之四級銨鹽之一種以上與成分(B)之有機溶劑之一種以上而成之抗菌劑可用作抑制(抑菌)或阻止(殺菌)含有Methylobacterium屬細菌之微生物的生長之抗菌劑、或用以防止生活環境中之粉紅污垢附著或去除粉紅污垢之抗菌劑。

此處，所謂「生活環境」，係包含家庭、工作場所、學校、公共設施等可存在活著的人或動物之所有環境，較佳為尤其是濕氣較多之環境及容易產生粉紅污垢之環境，例如可舉出浴室、盥洗室、洗濯室、廁所或廚房等所謂之用水場所、飲水器、游泳池、清洗設備、及其他水管設備周邊，更具體而言，可舉出廚房或浴室、廁所、洗臉台等之壁面或地板面、臉盆之底部、洗髮精等之瓶底部、排水口、水龍頭周圍、廁所之便器內之吃水線部等硬質表面。

又，所謂「粉紅污垢」係指以附著物或黏液為代表之稍微呈現出帶紅色之顏色的來源於微生物之污垢。此處，所謂帶紅色之顏色，包含紅色、粉紅色、或該等之中間色。例如，亦可為於490 nm附近具有最大吸收波長之顏色(「浴室等居住環境中產生之黏質」，防菌防黴vol. 24,No. 11，p. 723-728,1996)。

成分(B)之有機溶劑之中，作為芳香族醇，較佳為舉出：苄醇、苄氧基乙醇、苯氧基乙醇、1-苯氧基-2-丙醇等，其中更佳為苄醇。

作為芳香族醛，較佳為舉出：苯甲醛、苯乙醛、4-甲基苯甲醛、2-苯丙醛等，其中更佳為苯甲醛、苯乙醛。

於式(1)所示之羥基化合物、式(2)所示之醛化合物中，作為A所示之碳數為1~10之伸烷基，較佳為碳數為2或3之伸烷基。

作為R所示之碳數為5~10之烷基或烯基，可為直鏈或支鏈之任一者，但較佳為碳數為5~8之烷基，例如可舉出正丁基、正己基、2-乙基己基等。

n為0~3之數，較佳為1~3，進而較佳為1或2。

再者，n個A可相同，亦可不同。

作為成分(B)之有機溶劑之較佳之具體例，例如可舉出：苄醇、乙二醇單正丁醚、乙二醇單己醚、2-(2-乙基己氧基)乙醇、二乙二醇單正丁醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、苯甲醛、苯乙醛、4-甲基苯甲醛、2-苯丙醛、己醛、2-乙基丁醛、二乙二醇單己醚、戊醇、1-苯氧基-2-丙醇等。

因此，作為成分(A)與成分(B)之較佳組合，可舉出如下情形：成分(A)為選自辛基苄基二甲基氯化銨、十二烷基苄基二甲基氯化銨及二癸基二甲基氯化銨之一種以上，成分(B)為選自苄醇、乙二醇單正丁醚、乙二醇單己醚、2-(2-乙基己氧基)乙醇、二乙二醇單正丁醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、苯甲醛、苯乙醛、4-甲基苯甲醛、2-苯丙醛、己醛、2-乙基丁醛、二乙二醇單苄基醚、戊醇及1-苯氧基-2-丙醇之一種以上；成分(A)為選自辛基苄基二甲基氯化銨、十二烷基苄基二甲基氯化銨及二癸基二甲基氯化銨之一種以上，成分(B)為選自苄醇、乙二醇單己醚及二乙二醇單正丁醚之一種以上；及成分(A)為辛基苄基二甲基氯化銨，成分(B)為苄醇。

於本發明之抗菌劑中，成分(A)與(B)之質量比較佳為(A)/(B)為200/1~1/200，進而較佳為10/1~1/10。

本發明之抗菌劑可僅為成分(A)與(B)，或者亦可視需要為了謀求抗菌效果之進一步提高或效果之持續性等而含有其他成分，例如螯合劑、水溶性溶劑、其他陽離子性界面活性劑、香料、pH值調整劑等。又，亦可用作用以對上述各種生活環境、或於生活環境中使用之製品或製劑(例如洗滌乾燥機清洗劑、排水口清洗劑、水龍頭護理劑、浴室用洗滌劑、廁用洗劑等)賦予抗菌性之原材料。

此處，作為螯合劑，可舉出：(1)三聚磷酸、焦磷酸、正磷酸、六偏磷酸及該等之鹼金屬鹽，(2)乙二胺四乙酸、羥基亞胺基二乙酸、二羥乙基甘胺酸、次氮基三乙酸、羥基乙二胺三乙酸、二伸乙三胺五乙酸、三伸乙四胺六乙酸及該等之鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，(3)胺基三亞甲基膦酸、1-羥基亞乙基-1,1-二膦酸、乙二胺四亞甲基膦酸、二伸乙三胺五亞甲基膦酸、胺基三亞甲基膦酸之N-氧化物及該等之鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，(4)選自丙烯酸及甲基丙烯酸之單體之均聚物或共聚物、丙烯酸-順丁烯二酸共聚物、聚α-羥基丙烯酸及其鹼金屬鹽，(5)選自從檸檬酸、丁二酸、蘋果酸、反丁烯二酸、酒石酸、丙二酸、順丁烯二酸中選擇之多元羧酸及該等之鹼金屬鹽之一種以上，(6)烷基甘胺酸-N,N-二乙酸、天冬醯胺酸-N,N-二乙酸、絲胺酸-N,N-二乙酸、麩胺酸二乙酸、乙二胺二丁二酸或該等之鹽等。

又，可於本發明之抗菌劑中視需要適當調配例如油分、高級脂肪酸、聚矽氧類、pH值調整劑、增黏劑、懸浮劑、粉末成分、天然萃取物、色素、香料等添加劑，並攪拌混合而使其分散或溶解來製造本發明之抗菌劑組合物。

此處，作為pH值調整劑，可單獨或複合使用如下成分：鹽酸或硫酸等無機酸、檸檬酸、丁二酸、蘋果酸、反丁烯二酸、酒石酸、丙二酸、順丁烯二酸等有機酸等酸劑，氫氧化鈉或氫氧化鉀、氨或其衍生物、單乙醇胺或二乙醇胺、三乙醇胺等胺鹽等、碳酸鈉、碳酸鉀等鹼劑。又，亦可將該等酸劑與鹼劑組合而作為緩衝劑系使用。

上述本發明之抗菌劑組合物較佳為藉由上述pH值調整劑，以20℃下之pH值成為2~12之方式進行調整，自抗菌性之方面而言，尤佳為使pH值成為4~11。

自抗菌活性之觀點而言，本發明之抗菌劑組合物中之成分(A)之含量較佳為0.1~100,000 ppm，更佳為10~10,000 ppm。

又，成分(B)之含量較佳為100 ppm~100,000 ppm，更佳為100 ppm~50,000 ppm，進而較佳為2,000 ppm~20,000 ppm。

成分(A)及(B)之含量更具體而言，於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，且使用苄醇作為成分(B)之情形時，例如可例示：成分(A)為2,000~6,000 ppm，成分(B)為5,000 ppm~20,000 ppm；成分(A)為2,400~6,000 ppm，成分(B)為5,000 ppm；成分(A)為25~400 ppm，成分(B)為2,000~5,000 ppm等。

又，於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，且使用苄醇、乙二醇單己醚、二乙二醇單正丁醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、苯甲醛、二乙二醇單苄基醚、戊醇或1-苯氧基-2-丙醇作為成分(B)之情形時，例如可例示：成分(A)為10~10,000 ppm，成分(B)為4,000 ppm~760,000 ppm等。

又，於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，且使用二乙二醇單正丁醚或乙二醇單己醚作為成分(B)之情形時，例如可例示：成分(A)為10,000~100,000 ppm，成分(B)為100 ppm~100,000 ppm等。

又，本發明之抗菌劑如上所述，可僅使用成分(A)與(B)，或者可與其他成分一起使用，或者可調配於用於各種生活環境之製品或製劑中使用，但於任一情形時，均較佳為以使接觸微生物時之成分(A)與(B)之濃度成為上述範圍之方式使用。因此，本發明之抗菌劑組合物亦可為設想於實際使用時稀釋為上述範圍之進而經濃縮之組合物。

藉由將本發明之抗菌劑或含有其之抗菌劑組合物使用於容易產生微生物污染之場所，可防止粉紅污垢附著或去除粉紅污垢。

即，本發明之抗菌劑或含有其之抗菌劑組合物可對於生活環境，尤其是溫度或濕度容易變高之居住空間(浴室、廚房、盥洗室、廁所等)等中之容易產生微生物污染之場所之硬質表面，例如廚房或浴室、廁所、洗臉台等之壁面或地板面、臉盆之底部、洗髮精等之瓶底部、排水口、水龍頭周圍、廁所之便器內之吃水線部等，於粉紅污垢產生前或產生後藉由塗佈而使用。此處，塗佈並未特別限定，可舉出將組合物直接施加於對象面、填充於觸發器或噴霧器等噴霧裝置中進行噴霧等。

[實施例]

以下，基於實施例進一步詳細地說明本發明。

參考例1粉紅污垢之原因菌之分析 (1)　藉由SEM觀察之粉紅污垢之原因菌之分析

自14個家庭之浴室利用牙籤擦取39個樣本之浴室之粉紅污垢，懸浮於2.5%戊二醛溶液中並固定後，利用pH值為7.6之100 mM磷酸緩衝液進行洗滌，利用乙醇上升系統進行脫水。進而冷凍乾燥，對表面進行白金、釩蒸鍍後，使用掃描式電子顯微鏡(SEM)(S4300SE/N，Hitachi)於7~15 kV下進行觀察。將SEM觀察結果之一例示於圖1。

於所有樣本中，大部分之菌為3 μm以下之大小，未確認到5 μm以上之菌。即，於所有樣本中，具有細菌之大小及形狀之菌優勢性地存在，酵母大小之菌未優勢性地存在。因此，顯示粉紅污垢之主要原因菌並非作為酵母之Rhodotorula屬。

(2)　藉由FISH(Fluorescence in Situ Hybridization，螢光原位雜交)之使用共軛焦雷射顯微鏡觀察之粉紅污垢之分析

自13個家庭之浴室回收17個樣本之附著粉紅污垢之容器，同時削取該容器上之粉紅污垢與附著粉紅污垢之部分，於3%(v/v)三聚甲醛水溶液(Sigma-Aldrich Japan股份有限公司)中固定2小時。利用紙巾去除多餘之水分後，包埋至聚丙烯醯胺凝膠中。藉由用以檢測Methylobacterium屬細菌之螢光探針(對於AGCGCCGTCGGGTAAGA(序列編號1，Pirttila,A.,M.,Laukkanen,H.,Pospiech,H.,Myllyla,R.,and Hohtola,Anja.(2000)「Detection of intracellular bacteria in the buds of Scotch pine(Pinus sylvestris L.) by in situ hybridization.」Appl. Envion. Microbiol. vol.66(7):3073-3077.)，於5'末端側進行rhodamine X(玫瑰紅X)修飾者)對該包埋樣本進行雜交處理，繼而，藉由可檢測較多細菌之螢光探針(GCTGCCTCCCGTAGGAGT(序列編號2，Amann.,R.,I.,Krumholz,L.,and Stahl,D.,A.(1990)「Fluorescent-oligonucleotide probing of whole cells for determinative,phylogenetic,and environmental studies in microbiology.」J Bacteriol. vol. 172(2):762-770.)，於5'末端側進行fluorescein isothiocyanate(螢光異硫氰酸鹽)修飾者)進行雜交處理後，使用作為尤其是用以將真菌中大量含有之多糖染色的螢光試劑之Calcofluor white(螢光增白劑)(BD)進行染色，利用共軛焦雷射顯微鏡(CLSM)(Carl Zeiss LSM META)對其進行觀察。再者，於螢光探針之雜交處理中，為了提高Methylobacterium屬細菌檢測用探針之特異性與螢光強度而使用輔助探針。探針為未進行螢光色素修飾之寡核苷酸，設計AGCGCCGTCTGGTAAGA(序列編號3)及CCAACTCCCATGGTGTGACGG(序列編號4)而使用。輔助探針具有如下作用：藉由結合於與探針之結合序列相似之序列而提高探針對結合序列之特異性，或藉由結合於探針之結合區域附近之DNA而使DNA之3維結構發生變化，從而使探針容易結合於結合序列。輔助探針均以與探針成為相同之莫耳數之方式與探針同時添加。將CLSM圖像之一例示於圖2。紅色表示Methylobacterium屬細菌，黃綠色表示其他細菌，淡藍色表示黴菌與多糖。

於所觀察到之全部17個樣本中，顯示Methylobacterium屬細菌優勢地存在。因此，顯示粉紅污垢之主原因菌為Methylobacterium屬細菌。

(3)　藉由菌之分離之粉紅污垢之分析

使用Potato Dextrose Agar(PDA，馬鈴薯葡萄糖瓊脂)(Difco)、PDA+Chloramphenicol(氯黴素)(50 μg/ml)、Nutrient Agar(NA，營養瓊脂)(Difco)、或R2A Agar(Difco)作為培養基，將自13個家庭之浴室採集之17個樣本之粉紅污垢(樣本A~Q)於3日以內在室溫下進行培養。因於該狀態下，在瓊脂培養基上重疊有各種菌而形成菌落，故而利用白金耳挑取各個菌落，接種至新培養基上，關於R2A，在25℃下，關於其他培養基，在30℃下反覆進行於3~7日中進行培養之操作，藉此分離菌。關於根據使用API試驗(bioMerieux)之生化性狀之分析而假定為Methylobacterium屬細菌之菌，決定其16SrRNA區域之DNA之鹼基序列，藉由基於其同源性檢索及鹼基序列之系統分析，進行菌種之鑑定。

除根據形態觀察而判斷之Rhodotorula屬酵母以外，亦大量地分離Methylobacterium屬細菌。

將樣本A~Q之分析結果示於表1。顯示粉紅污垢中既存在細菌亦存在酵母，但所存在之菌大部分由Methylobacterium屬細菌佔據。

參考例2　Methylobacterium屬細菌之抗菌劑耐性

使用PDA平板培養基(Difco)將自揭示於參考例1(3)之浴室粉紅污垢樣本F分離、鑑定之M.mesophilicum(嗜中溫甲基桿菌)FP4之菌體於30℃下培養一夜，利用一個白金耳挑取培養基上之M.mesophilicum FP4之菌體，懸浮於另外之Potato Dextrose Broth(PDB，馬鈴薯葡萄糖肉湯)，於30℃下振動培養3日。將其離心分離(7000 g×5 min)去除上清液後，懸浮於等量之生理食鹽水中。其後再一次進行離心分離(7000 g×5 min)，利用生理食鹽水製備OD0.8之菌液。對該菌液10 μl添加利用殺菌水稀釋後之辛基苄基二甲基氯化銨溶液(Sanisol 08，花王股份有限公司)1 ml，接觸5分鐘。並且，藉由對LP(Lecithin Polysorbate，卵磷脂-聚山梨醇酯)稀釋液(和光純藥工業)添加10分之1之量，而稀釋辛基苄基二甲基氯化銨，使其不活化，藉由瓊脂塗抹法求出存活菌數。以同樣之順序製備E.coli NBRC3972、S.aureus NBRC13276、及P.aeruginosa NBRC13275(均為自NBRC(獨立行政法人製品評價技術基盤機構生物遺傳資源部門)購入)之菌液，求出辛基苄基二甲基氯化銨溶液添加後之存活菌數。

如表2所示，於E.coli、S.aureus、P.aeruginosa中，藉由與240~480 ppm之濃度之辛基苄基二甲基氯化銨溶液接觸5分鐘，觀察到減少log2以上之菌數，相對於此，於M.mesophilicum中，僅於藉由與6000 ppm之濃度之辛基苄基二甲基氯化銨溶液接觸60分鐘之情形時觀察到有意義之菌數減少。根據該等結果，顯示Methylobacterium屬細菌對抗菌劑之耐藥性非常高。

根據該結果，亦顯示生存能力較高之Methylobacterium屬細菌為粉紅污垢之主原因菌。

* ¹)辛基苄基二甲基氯化銨濃度(ppm)

實施例1　對Methylobacterium屬細菌之抗菌力之評價(1)

以與參考例2相同之順序製備M.mesophilicum FP4菌液。又，以與參考例2相同之順序製備辛基苄基二甲基氯化銨溶液(2400~6000 ppm)，以成為5000 ppm之方式於其中添加苄醇(BA，Benzyl Alcohol)。將該辛基苄基二甲基氯化銨+BA溶液(1 ml)添加至M.mesophilicum FP4菌液(10 μl)，與菌接觸5分鐘。將結果示於表3。

根據表3，藉由在單獨且5分鐘之接觸時間下不具有抗菌性之辛基苄基二甲基氯化銨濃度2400~6000 ppm下添加BA5000 ppm，可獲得極高之併用效果。

實施例2　對於Methylobacterium屬細菌之抗菌力之評價(2)

以與參考例2相同之順序製備表4所示之各種Methylobacterium屬細菌菌液。再者，M.fujisawaense(藤澤氏甲基桿菌)GP1及M.radiotolerans(耐輻射甲基桿菌)AP2係與M.mesophilicum FP4同樣地自浴室分離而獲得。剩餘之菌株係自獨立行政法人理化學研究所生物資源中心(RIKEN BioResource Center)獲取。又，以與參考例2相同之順序製備十二烷基苄基二甲基氯化銨溶液(39~313 ppm)，以成為2000~5000 ppm之方式於其中添加苄醇(BA)。於該十二烷基苄基二甲基氯化銨+BA溶液(1 ml)中添加各細菌菌液(10 μl)，與菌接觸5分鐘。將結果示於表4。表中，以+++>++>+之順序表示確認旺盛之增殖。又，-表示未確認有增殖。因此，以->+>++>+++之順序表示抗菌性較高。

根據表4，關於全部株，藉由在十二烷基苄基二甲基氯化銨中添加BA而確認抗菌性提高。

實施例3　對Methylobacterium屬細菌之抗菌力之評價(3)

以與參考例2相同之順序製備M.mesophilicum FP4菌液。又，以與參考例2相同之順序製備辛基苄基二甲基氯化銨溶液(10~10000 ppm)，以成為表5所揭示之濃度之方式於其中添加表5所示之各種有機溶劑。將該辛基苄基二甲基氯化銨+有機溶劑溶液(1 ml)添加至M.mesophilicum FP4菌液(10 μl)中，與菌接觸5分鐘。將結果示於表5。

根據表5，關於苄醇、乙二醇單己醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、二乙二醇單苄基醚、戊醇、1-苯氧基-2-丙醇、苯甲醛、二乙二醇單正丁醚，於溶劑單獨、辛基苄基二甲基氯化銨單獨不具有抗菌性之濃度下，確認與辛基苄基二甲基氯化銨之併用效果。

實施例4　對Methylobacterium屬細菌之抗菌力之評價(4)

以與參考例2相同之順序製備M.mesophilicum FP4菌液。又，以與參考例2相同之順序製備辛基苄基二甲基氯化銨溶液(10,000~100,000 ppm)，以成為揭示濃度之方式於其中添加表6所示之各種有機溶劑。將該辛基苄基二甲基氯化銨+有機溶劑溶液(1 ml)添加至M.mesophilicum FP4菌液(10 μl)，接觸1分鐘。將結果示於表6。

根據表6，關於二乙二醇單正丁醚、乙二醇單己醚，於溶劑單獨、辛基苄基二甲基氯化銨單獨並不顯示抗菌性之濃度及接觸時間下，確認與辛基苄基氯化銨之併用效果。

實施例5　對Methylobacterium屬細菌之抗菌力之評價(5)

以與參考例2相同之順序製備M.mesophilicum FP4菌液。又，以與參考例2相同之順序製備表7所示之四級銨鹽溶液(25 ppm或400 ppm)，以成為5000 ppm之方式於其中添加苄醇。將該四級銨鹽+苄醇溶液(1 ml)添加至M.mesophilicum FP4菌液(10 μl)中，與菌接觸5分鐘。將結果示於表7。

根據表7，除辛基苄基二甲基氯化銨以外，對於十二烷基苄基二甲基氯化銨或二癸基二甲基氯化銨亦確認較高之併用效果。

實施例6　對模型粉紅污垢之清洗性能評價

以與參考例2相同之順序製備M.mesophilicum FP4之菌液(OD0.8)。繼而將10×10×2(mm)之FRP(Fiber Reinforced Plastics，纖維強化塑膠)切片浸漬於乙醇後照射UV(Ultraviolet，紫外線)來殺菌，將該FRP切片放入微量滴定盤(Microtiter Dish)中，添加菌液1 mL。將其於30℃下靜置培養6日，僅將FRP切片移至新的24孔盤中，於30℃下乾燥一晚，藉此製作模型粉紅污垢。

將附著有模型污垢之FRP切片浸漬於辛基苄基二甲基氯化銨(10,000 ppm)溶液、或辛基苄基二甲基氯化銨(10,000 ppm)+BA(5,000 ppm)溶液中，靜置5分鐘後，將切片移置分別注入LP稀釋液1 mL之試管中，利用旋渦混合器激烈地攪拌，藉此使菌剝離、分散，測定剝離、分散之菌之菌數。又，將使菌剝離、分散後之FRP切片再次放入微量滴定盤中，於30℃下靜置培養，測定直至菌再增殖為止之時間。將結果示於表8及9。

浸漬於將BA溶液添加於對Methylobacterium屬細菌具有較高之除菌能力之辛基苄基二甲基氯化銨中而成的溶液中之FRP切片中，菌數大量減少。又，直至菌於切片中再增殖會花費大量時間。另一方面，浸漬於辛基苄基二甲基氯化銨溶液中之FRP切片中，菌數未減少，又，發現菌迅速地再增殖。

<110>　花王公司

<120>　抗菌劑

<130>　KS1149

<140>　100124998

<141>　2011-07-14

<150>　JP 2010-159992

<151>　2010-07-14

<160>　4

<170>　PatentIn第3.1版

<210>　1

<211>　17

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　寡核苷酸探針

<400>　1

<210>　2

<211>　18

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　寡核苷酸探針

<400>　2

<210>　3

<211>　17

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　寡核苷酸探針

<400>　3

<210>　4

<211>　21

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　寡核苷酸探針

<400>　4

圖1係粉紅污垢之SEM圖像；及

圖2係粉紅污垢之使用FISH之共軛焦雷射顯微鏡圖像。

Claims

一種防止由Methylobacterium(甲基桿菌)屬細菌所造成之粉紅污垢附著或去除粉紅污垢之方法，其特徵在於：將組合以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑而成之對Methylobacterium(甲基桿菌)屬細菌具有抗菌作用之抗菌劑、或含有上述抗菌劑之抗菌劑組合物使用於容易產生微生物污染之場所：(A)選自二烷基二甲基銨鹽及烷基苄基二甲基銨鹽之一種以上之四級銨鹽；(B)選自苄醇、乙二醇單己醚、二乙二醇單正丁醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、苯甲醛、二乙二醇單苄基醚、戊醇及1-苯氧基-2-丙醇中之一種以上之有機溶劑。
如請求項1之方法，其中成分(B)之有機溶劑為苄醇。
如請求項1或2之方法，其中成分(A)之四級銨鹽為選自辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽及二癸基二甲基銨鹽中之一種以上。
如請求項3之方法，其中銨鹽為與氯化物離子之鹽。
如請求項1之方法，其中成分(A)之四級銨鹽為辛基苄基二甲基氯化銨，成分(B)之有機溶劑為苄醇。
如請求項1或2之方法，其中於組合物中含有成分(A)0.1~100,000ppm、成分(B)100ppm~100,000ppm。
如請求項1或2之方法，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)2,000~6,000ppm、成分(B)5,000ppm~20,000ppm。
如請求項1或2之方法，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)2,400~6,000ppm、成分(B)5,000ppm。
如請求項1或2之方法，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)25~400ppm、成分(B)2,000~5,000ppm。
一種對Methylobacterium(甲基桿菌)屬細菌具有抗菌作用之抗菌劑於生活環境中的使用，該抗菌劑係組合以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑而成：(A)選自二烷基二甲基銨鹽及烷基苄基二甲基銨鹽之一種以上之四級銨鹽；(B)選自苄醇、乙二醇單己醚、二乙二醇單正丁醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、苯甲醛、二乙二醇單苄基醚、戊醇及1-苯氧基-2-丙醇中之一種以上之有機溶劑。
如請求項10之使用，其中成分(B)之有機溶劑為苄醇。
如請求項10或11之使用，其中成分(A)之四級銨鹽為選自辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽及二癸基二甲基銨鹽中之一種以上。
如請求項12之使用，其中銨鹽為與氯化物離子之鹽。
如請求項10之使用，其中成分(A)之四級銨鹽為辛基苄基二甲基氯化銨，成分(B)之有機溶劑為苄醇。
如請求項10或11之使用，其中於組合物中含有成分(A)0.1~100,000ppm、成分(B)100ppm~100,000ppm。
如請求項10或11之使用，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)2,000~6,000ppm、成分(B)5,000ppm~20,000ppm。
如請求項10或11之使用，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)2,400~6,000ppm、成分(B)5,000ppm。
如請求項10或11之使用，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)25~400ppm、成分(B)2,000~5,000ppm。
一種於生活環境中之抗菌方法，其係抑制或阻止含有Methylobacterium(甲基桿菌)屬細菌之微生物之生長者；該方法之特徵在於：組合以下成分(A)所示之四級銨鹽及(B)所示之有機溶劑而使用：(A)選自二烷基二甲基銨鹽及烷基苄基二甲基銨鹽之一種以上之四級銨鹽；(B)選自苄醇、乙二醇單己醚、二乙二醇單正丁醚、二乙二醇單己醚、2-[2-(2-乙基己氧基)乙氧基]乙醇、2-苄氧基乙醇、2-苯氧基乙醇、苯甲醛、二乙二醇單苄基醚、戊醇及1-苯氧基-2-丙醇中之一種以上之有機溶劑。
如請求項19之方法，其中成分(B)之有機溶劑為苄醇。
如請求項19或20之方法，其中成分(A)之四級銨鹽為選自辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽及二癸基二甲基銨鹽中之一種以上。
如請求項21之方法，其中銨鹽為與氯化物離子之鹽。
如請求項19之方法，其中成分(A)之四級銨鹽為辛基苄基二甲基氯化銨，成分(B)之有機溶劑為苄醇。
如請求項19或20之方法，其中於組合物中含有成分(A)0.1~100,000ppm、成分(B)100ppm~100,000ppm。
如請求項19或20之方法，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)2,000~6,000ppm、成分(B)5,000ppm~20,000ppm。
如請求項19或20之方法，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)2,400~6,000ppm、成分(B)5,000ppm。
如請求項19或20之方法，其中於使用辛基苄基二甲基銨鹽、十二烷基苄基二甲基銨鹽或二癸基二甲基銨鹽作為成分(A)，使用苄醇作為成分(B)之情形時，含有成分(A)25~400ppm、成分(B)2,000~5,000ppm。