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TWI542581B - Containing aromatic aromatic heterocyclic compounds - Google Patents

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TWI542581B
TWI542581B TW102106727A TW102106727A TWI542581B TW I542581 B TWI542581 B TW I542581B TW 102106727 A TW102106727 A TW 102106727A TW 102106727 A TW102106727 A TW 102106727A TW I542581 B TWI542581 B TW I542581B
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difluoro
pyrimidin
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TW102106727A
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Minoru Kameda
Ikumi Kuriwaki
Kazuhiko Iikubo
Hiroyuki Hisamichi
Yuichiro Kawamoto
Hiroyuki Moritomo
Tomoyuki Suzuki
Takashi Futami
Atsushi Suzuki
Kazuhisa Tsunoyama
Makoto Asaumi
Hiroshi Tomiyama
Atsushi Noda
Yoshinori Iwai
Kazuo Tokuzaki
Haruki Okada
Kozo Miyasaka
Original Assignee
Astellas Pharma Inc
Kotobuki Pharmaceutical Co Ltd
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Description

含氮芳香族雜環化合物
本發明係關於醫藥組成物、特別是關於有用於作為變異FGFR3陽性膀胱癌治療用醫藥組成物之有效成分的化合物。
纖維母細胞增殖因子(FGF)與其受體之纖維母細胞增殖因子受體(FGFR)的訊息路徑，為發育之進展中由早期胚胎形成至各種器官形成，具有最重要功能之訊息路徑之一。FGF配位子中存在有18種基因、FGFR中存在有4種(FGFR1~4)基因，於各種形態的細胞中表現，且與細胞增殖、分化、生存相關。近年來，各種癌之發病中，FGF訊息之重要性已被報導，FGF或FGFR特異性之藥劑的開發正在進行(Nature Reviews Cancer 2010；10,116-129、J.Med.Chem.2011；54,7066-7083、AACR 2011,No.1643 AstraZeneca)。
關於FGFR1，在肺癌(特別是扁平上皮癌)及激素療法抗性之乳癌中，FGFR1基因之放大被報導，且亦報導該等細胞株中，顯示有依存於FGFR1之細胞增殖(Sci. Transl.Med.2010；2(62)：62ra93、Breast Cancer Res.2007；9(2)：R23、Cancer Res.2010,70(5),2085-2094)。
關於FGFR2，有被報導胃癌及三重陰性乳癌中之基因放大、子宮體癌中的活性化變異(Laboratory Investigation 1998,78(9)；1143-1153、Virchows Arch,1997,431；383-389、J.Cancer Res.Clin.Oncol.,1993,119,265-272、AACR 2011,No.1643 AstraZeneca、Oncogene 2010；29,2013-2023)，該等癌細胞中亦觀察到依存於FGFR2之增殖。
又，FGFR3在膀胱癌中約50%之病例顯示活性化基因變異。膀胱癌係粗分為非浸潤性、浸潤性及轉移性3種。非浸潤性膀胱癌之5年存活率為高達70%以上，但復發頻率高、且一部分會朝向浸潤性進行；另一方面，浸潤性或轉移性膀胱癌5年存活率低達50%以下，分別均成為問題。作為FGFR3變異之非浸潤性膀胱癌的現行療法，有經尿道的膀胱腫瘤切除術(TUR-BT)及術後BCG療法或化學療法劑之膀胱內注入，但復發預防效果依然不充分，血尿、膀胱刺激症狀等副作用會成為問題。另一方面，浸潤或轉移性膀胱癌，雖主要進行膀胱全摘除及化學療法劑之全身投與，但有效性或副作用上係有問題。作為膀胱癌之特徵，已知癌細胞會由膀胱組織剝落至一部分尿中，作為膀胱癌之診斷，進行有尿細胞診察。最近，報導了可使用尿中的沈澱物來檢測FGFR3變異(Biochem.Biophys. Res.Commun.2007 Nov 3；362(4)：865-71)。藉由此FGFR3變異的有無，可選擇FGFR3變異陽性膀胱癌患者，期望製出FGFR3選擇性的抑制劑。
又，已報導FGFR基因與TACC(Transforming Acidic Coiled-coil)基因之融合基因(FGFR3-TACC3及FGFR1-TACC1)在一部分之神經膠質母細胞瘤患者的腫瘤有表現(Science,2012 Sep 7；337(6099)：1231-5)。依此報告，由將FGFR3-TACC3及FGFR1-TACC1對astrocyte強制表現之轉形，顯示了該等融合基因具有癌化能力，且FGFR3-TACC3局部存在於分裂期之紡錘體極，誘導依存於激酶活性之染色體非整倍體性。又，對FGFR3-TACC3表現細胞處置FGFR抑制劑時，染色體非整倍體性被抑制，且抑制此細胞之增殖。因此，暗示了FGFR抑制劑有效於具有FGFR-TACC融合基因之神經膠質母細胞瘤患者的治療之可能性。
又，已報導於人類膀胱癌細胞株RT112、RT4、LUCC2中會表現FGFR3-TACC3融合基因、同樣地人類膀胱癌細胞株SW780中會表現FGFR3-BAIAP2L1融合基因(Hum Mol Genet.,2013 Feb 15,22(4),795-803)。依此報告，將該等融合基因導入NIH3T3細胞，結果，確認了非貼附依存性之增殖亢進作用。又，表現該等FGFR3融合基因之上述膀胱癌細胞株的增殖，會被FGFR抑制劑所抑制，故本融合基因之存在檢測，可能有用於有效於FGFR抑制劑之治療的患者選擇。
下述式(A)之化合物被報導會顯示各種激酶抑制，有用於作為癌、及心肌梗塞等血管障礙的治療劑(專利文獻1)。該文獻之表2中，揭示了數個化合物之關於Yes、VEGFR、EphB4、PDGFRβ及FGFR1的激酶抑制試驗結果，且揭示了FGFR1抑制活性之IC50值比1000nM大，相較於其他激酶活性抑制為弱。又，該文獻中並無後述本案發明之式(I)化合物的具體揭示。
(式中，A分別為CH、N等；B分別為CH等；A1為O、CR2等；R0為H等；A2為NR、O等；L1為鍵結、O等；L2為鍵結、C1-C6烷基等；R1為3~6員雜環等；此外，Re、Rf為H、C1-C6烷基、羥基烷基等。其他符號參照該公報)。
下述式(B)之化合物被報導會顯示Ab1抑制作用，對各種癌有用(專利文獻2)。但是，該文獻中並無關於FGFR抑制作用之具體記載。又，與後述本案發明之式(I)化合物，在其基(R1)p方面，與式(B)化合物的構造相異。
(式中，G為CH等、A為3-羥基苯基等、Y為乙烯基或伸乙基。其他符號參照該公報)。
下述式(C)之化合物，被報導用於治療癌、血管障礙等，對於由Src、VEGFR2、Yes、Fyn、Lck、Ab1、PDGFR、EGFR及RET所構成之各種激酶具有抑制作用(專利文獻3)。但是，該文獻中並無對FGFR之抑制作用的揭示。進一步地，該文獻中並無後述本願發明之式(I)化合物的具體揭示。
(式中，G1表示可具有取代基之芳基、可具有取代基之雜芳基等；L1表示O、SO、SO2、可經取代之烷基等；L2表示可經取代之烷基、雜環等；A1表示鍵結、O、C(Ra)2等；A2表示NRa、O等。其他符號參照該公報)。
下述式(D)被報導具有TIE-2及/或VEGFR-2激酶 抑制作用，有用於包含癌之血管新生相關的疾病治療(專利文獻4)。但是，該文獻中並無關於FGFR抑制之具體記載。又，後述本發明之式(I)化合物在其基L1不具有胺基的這點、及包含X及Y之環的2個鍵結鍵位於對位之這點上，係與式(D)化合物構造相異。
(式中，W為N或CR、R為H等。其他符號參照該公報)。
下述式(E)化合物被報導顯示多數之受體蛋白質酪胺酸激酶活性，特別是FGFR活性之抑制作用，可使用於該等酵素之異常或過度活性相關聯之各種疾病的處置(專利文獻5)。但是，就後述本發明之式(I)化合物，N原子不取代其基L1的這點、進一步地，就包含X及Y之環的2個鍵結鍵位於對位的這點而言，與式(E)化合物之構造相異。
(式中，X、Y及Z中之2個為N、第3個為CH或N。其他符號參照該公報)。
下述式(F)，被報導對各種激酶會顯示抑制作用，有用於發炎或自體免疫疾病(專利文獻6)。另一方面，就後述本發明之式(I)化合物，其基L1並非醯胺基的這點、及包含X及Y之環的2個鍵結鍵位於對位的這點而言，與式(F)化合物構造相異。
(式中，A1、A2、A3及A4分別為CR4、CR5、CR6及CR7或N；L為-C(O)NR7-、-NR7C(O)-等。其他符號參照該公報)。
下述式(G)及式(H)之化合物，被報導會顯示FGFR抑制作用，可使用於各種癌之治療(專利文獻7及專利文獻8)。
(式(G)中，B環依情況而表示可含有由O、S及N中選擇之至少1個雜原子之5或6員芳香族基。其他符號參照該公報)。
下述式(J)化合物，被報導會顯示葡萄糖激酶活性化作用，可使用於糖尿病相關之疾病的治療(專利文獻9)，其構造上之特徵，在於吡啶之2號位置經胺基取代。
(式中符號參照該公報)。
又，具有下述構造之化合物，分別作為CAS註冊編號1371065-79-0、1317903-92-6，在資料庫上已知。
〔先前技術文獻〕 〔專利文獻〕
〔專利文獻1〕 國際公開第WO2006/101977號
〔專利文獻2〕 國際公開第WO2007/056075號
〔專利文獻3〕 國際公開第WO2008/008234號
〔專利文獻4〕 國際公開第WO2003/066601號
〔專利文獻5〕 國際公開第WO2007/071752號
〔專利文獻6〕 國際公開第WO2007/022380號
〔專利文獻7〕 國際公開第WO2008/075068號
〔專利文獻8〕 國際公開第WO2009/153592號
〔專利文獻9〕 國際公開第WO2009/046784號
本發明提供醫藥組成物、特別是有用於作為變異FGFR3陽性之膀胱癌治療用醫藥組成物的有效成分之化合物。
本發明者等人，針對具有FGFR抑制作用之化合物進 行努力探討的結果，發現本發明之含氮芳香族雜環化合物具有FGFR1、2及3抑制作用，特別是良好的變異FGFR3抑制作用，完成了本發明。
亦即，本發明係關於式(I)化合物或其鹽、以及含有式(I)化合物或其鹽及製藥學上容許之賦形劑的醫藥組成物。
(式中，X與Y係相同或互異地為CH或N、但X與Y不同時為N，L1為-低級伸烷基-、-低級伸烷基-O-、-O-低級伸烷基-或-低級伸炔基(alkynylene)-；Z為N或CH；R1係相同或互異地為可經鹵素取代之低級烷基、-O-(可經鹵素取代之低級烷基)、鹵素、氰基或-N(低級烷基)2；p為2至4之整數；環W為可經取代之芳香族碳環、可經取代之芳香族雜環、或可經取代之非芳香族雜環；Q為-L2-R2或R3； L2為可經取代之芳香族雜環或可經取代之非芳香族雜環；R2為可經低級烷基取代之非芳香族雜環基、可經取代之環烷基、可經由-OH及-O-低級烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基、-C(O)-R0、-C(O)-可經取代之環烷基、-NH-R0、-N(低級烷基)-R0、可經-L3-取代之非芳香族雜環基或H；R0為可經-OH取代之低級烷基；R3為(1)可經由：-C(O)OH、-OH、-O-R0、可經1個或2個R0取代之胺基、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、可經取代之芳香族雜環基、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基、(2)-O-(可經由：-C(O)OH、-OH、-O-R0、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基)、(3)-NH-(可經由：-OH、可經低級烷基取代之非芳香族雜環基、及可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基)、(4)-N(低級烷基)-(可經由：-OH、可經低級烷基取代之非芳香族雜環基、及可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級 烷基)、(5)-C(O)OH、(6)-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基、(7)-O-(可經低級烷基取代之非芳香族雜環基)、或(8)可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基；以及L3為鍵結、-NH-、-N(低級烷基)-或低級伸烷基)。
再者，若無特別記載，本說明書中之某化學式中的記號於其他化學式中亦被使用時，相同記號表示相同意思。
又，本發明係關於含有式(I)化合物或其鹽與製藥學上容許之賦形劑的與FGFR1、2及/或3相關之各種癌、例如與FGFR1相關之肺癌或激素療法抗性之乳癌、與FGFR2相關之胃癌、三重陰性乳癌或子宮體癌、及與FGFR3相關之膀胱癌及神經膠質母細胞瘤的治療用醫藥組成物。再者，該醫藥組成物包含與FGFR1、2及/或3相關之各種癌的治療劑。作為其一態樣，係含有式(I)之化合物或其鹽與製藥學上容許之賦形劑之與FGFR3相關之膀胱癌的治療用醫藥組成物。作為另一態樣，係含有式(I)之化合物或其鹽與製藥學上容許之賦形劑之變異FGFR3陽性膀胱癌的治療用醫藥組成物。再者，本說明書中，「變異」包含點變異、融合變異、缺失變異、插入變異，作為其一態樣，係包含點變異及融合變異之概念、作為另一態樣，係為點變異、作為又一態樣，係為融合變 異。
又，本發明亦關於由用於FGFR1、2及/或3相關之各種癌的治療用醫藥組成物之製造的式(I)化合物或其鹽之使用；用於FGFR1、2及/或3相關之各種癌的治療之式(I)化合物或其鹽之使用；及用於FGFR1、2及/或3相關之各種癌的治療之式(I)化合物或其鹽；以及將式(I)化合物或其鹽之有效量投與至對象所構成的FGFR1、2及/或3相關之各種癌的治療方法。進一步地，本發明亦關於由用於變異FGFR3陽性膀胱癌之治療用醫藥組成物的製造之式(I)化合物或其鹽之使用；用於變異FGFR3陽性膀胱癌之治療的式(I)化合物或其鹽之使用；用於變異FGFR3陽性膀胱癌之治療之式(I)化合物或其鹽；以及將式(I)化合物或其鹽之有效量投與至對象所構成的變異FGFR3陽性膀胱癌之治療方法。再者，上述「對象」，係指以其治療為必要的人類或其他動物，作為其一態樣，係為以其治療為必要的人類。
式(I)之化合物或其鹽，係具有FGFR1、2及/或3抑制作用，特別是變異FGFR3抑制作用，可作為FGFR1、2及/或3相關之各種癌，例如肺癌或激素療法抗性之乳癌、胃癌、三重陰性乳癌、子宮體癌、膀胱癌及神經膠質母細胞瘤等之治療劑，特別是作為變異FGFR3陽性膀胱癌之治療劑來使用。
以下，詳細說明本發明。
本說明書中「低級烷基」係指直鏈或分枝狀之碳數1至8(以後略稱為C1-8)之烷基，例如甲基、乙基、n-丙基、異丙基、n-丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、n-戊基、n-己基、n-庚基、n-辛基等。作為另一態樣，係為C1-4烷基，作為又另一態樣，係為甲基，作為又再另一態樣，係為乙基。
「低級伸烷基」係為直鏈或分枝狀之C1-8的伸烷基，例如亞甲基、伸乙基、三亞甲基、四亞甲基、五亞甲基、六亞甲基、七亞甲基、八亞甲基、伸丙基、甲基亞甲基、乙基伸乙基、1,2-二甲基伸乙基、1,1,2,2-四甲基伸乙基等。作為另一態樣，為C1-4伸烷基，作為又另一態樣，為亞甲基，作為又再另一態樣，為伸乙基。
「低級伸炔基」係為直鏈或分枝狀之C2-6的伸炔基，例如伸乙炔基、伸丙炔基、伸丁炔基、伸戊炔基、伸己炔基、1,3-伸丁二炔基、1,3-伸戊二炔基等。作為另一態樣，為C2-4伸炔基，作為又另一態樣，為伸乙炔基。
「環烷基」係為C3-10之飽和烴環基，亦可具有交聯。例如為環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、金剛烷基等。作為另一態樣，為C3-8環烷基，作為又另一態樣，為C3-6環烷基，作為又再另一態樣，為環丙基。
「芳香族碳環」係為C6-14之單環~三環式芳香族烴 環。例如為苯、萘、蒽，作為另一態樣，為苯。
「芳香族雜環」係為具有1至4個由氮、氧及硫所構成群組中選擇之雜原子之環員數5至10之芳香族雜環，例如吡啶、吡咯、吡嗪、嘧啶、嗒嗪、咪唑、吡唑、噻唑、噁唑、異噁唑、噻吩、異噻唑、呋喃、噁二唑、噻二唑、吲哚、異吲哚、吲唑、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并噻唑、喹啉、異喹啉、辛啉、酞嗪、喹唑啉、喹噁啉、噻吩并吡啶、噻吩并嘧啶、噻吩并吡嗪等。作為另一態樣，係為吡啶、吡咯、吡嗪、嘧啶、嗒嗪、咪唑、吡唑、噻唑、噁唑、噻吩、呋喃、噁二唑、吲唑。作為又另一態樣，係為吡啶、嘧啶、咪唑、吡唑、噻唑、吲唑，作為又另一態樣，係為吡啶、咪唑、吡唑，作為又另一態樣，係為吡啶，作為又另一態樣，係為吡唑，作為又再另一態樣，係為咪唑。
「芳香族雜環基」係指前述「芳香族雜環」之1價基，例如吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、嗒嗪基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噻吩基、呋喃基、1,2,4-噁二唑基等，作為另一態樣，係為具有1至2個氮原子之環員數5至6的芳香族雜環基，作為又另一態樣，係為吡啶基。
「非芳香族雜環」係指具有1至4個由氮、氧及硫所構成群組中選擇之相同或相異之雜原子的環員數3至10、作為其一態樣為環員數4至8之非芳香族雜環，該非芳香族雜環可與苯環或噻吩環縮合、可經低級伸烷基交 聯、可與另一個非芳香族雜環形成螺環、亦可於環之一部分具有不飽和鍵，又，環構成原子之硫原子或氮原子亦可經氧化。例如氮丙啶、氧雜環丁烷、氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶、氮雜環庚烷、二氮雜環庚烷、氮雜環辛烷、哌嗪、4-氧化哌嗪、高哌嗪(homopiperazine)、嗎啉、氧雜氮雜環庚烷(高嗎啉、oxazepane)、硫代嗎啉、1,1-二氧化硫代嗎啉、1,1-二氧化四氫硫代吡喃、1,1-二氧化四氫噻唑、硫雜氮雜環庚烷(thiazepane)、1-氮雜雙環〔2.2.2〕辛烷、7-氧雜雙環〔2.2.1〕庚烷、2,5-二氮雜雙環〔2.2.1〕庚烷、3-氮雜雙環〔3.2.1〕辛烷、8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛烷、9-氮雜雙環〔3.3.1〕壬烷、3,9-二氮雜雙環〔3.3.1〕壬烷、3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷、2,6-二氮雜螺〔3.3〕庚烷、2-氧雜-6-氮雜螺〔3.3〕庚烷、2-氧雜-7-氮雜螺〔3.5〕壬烷、四氫吡喃、四氫呋喃、二噁烷、二氧雜環戊烷、四氫噻吩、四氫硫代吡喃、四氫噻吩并吡啶、四氫苯并氮呯、四氫苯并二氮呯、二氫苯并呋喃、二氫苯并噻吩、二氫苯并吡喃、二氫苯并二噁烷、苯并二噁烷、二氫吡喃、二氫吡咯、二氫吡啶、四氫吡啶、四氫吡嗪等。作為另一態樣，為具有1至2個由氮、氧及硫所構成群組中選擇之相同或相異之雜原子的環員數5至7之非芳香族雜環，作為又另一態樣，係具有至少1個氮原子，且進一步可具有1個由氮、氧及硫所構成群組中選擇之雜原子之含氮5至7員非芳香族雜環，作為又另一態樣，為6員含氮非芳香族雜環，例如哌嗪、哌啶、嗎啉、硫代嗎 啉、1,1-二氧化硫代嗎啉等。作為又另一態樣，為氧雜環丁烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、4-氧化哌嗪、1,1-二氧化硫代嗎啉、四氫吡喃、四氫呋喃、四氫噻吩、四氫吡啶、1-氮雜雙環〔2.2.2〕辛烷、8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛烷、3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷、2,6-二氮雜螺〔3.3〕庚烷、2-氧雜-6-氮雜螺〔3.3〕庚烷、2-氧雜-7-氮雜螺〔3.5〕壬烷，作為又另一態樣，為嗎啉、哌啶、哌嗪、4-氧化哌嗪、3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷、2,6-二氮雜螺〔3.3〕庚烷，作為又另一態樣，為哌啶，作為又再另一態樣，為哌嗪。
「非芳香族雜環基」係為非芳香族雜環之1價基，且為具有1至4個之由氮、氧及硫所構成群組中選擇之相同或相異之雜原子的環員數3至10之非芳香族雜環基，可經低級伸烷基交聯、於環之一部分可具有不飽和鍵、亦可與另一個非芳香族雜環形成螺環。又，環構成原子之硫原子或氮原子亦可經氧化。例如、氮丙啶基、氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、氮雜環庚烷基、二氮雜環庚烷基、氮雜環辛烷基、哌嗪基、高哌嗪基、嗎啉基、氧雜氮雜環庚烷基(oxazepanyl)、硫代嗎啉基、1,1-二氧化硫代嗎啉基、硫雜氮雜環庚烷基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、二噁烷基、二氧雜環戊烷基、四氫噻吩基、四氫硫代吡喃基、7-氧雜雙環〔2.2.1〕庚基、2,5-二氮雜雙環〔2.2.1〕庚基、3-氮雜雙環〔3.2.1〕辛基、8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛基、9-氮雜雙環〔3.3.1〕壬基、3,9-二 氮雜雙環〔3.3.1〕壬基、二氫吡喃基、二氫吡咯基、二氫吡啶基、四氫吡啶基、四氫吡唑基、9-二氮雜螺〔5.5〕十一碳-3-基、1,9-二氮雜螺〔5.5〕十一碳-9-基、2,8-二氮雜螺〔4.5〕癸-8-基、1,4-二氧雜-8-氮雜螺〔4.5〕癸-8-基等。作為另一態樣，為具有1至2個之由氮、氧及硫所構成群組中選擇之相同或相異之雜原子的環員數5至7之非芳香族雜環基，作為又另一態樣，為至少具有1個氮原子之環員數5至7之非芳香族雜環基，作為又另一態樣，為6員含氮非芳香族雜環基，例如哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、1,1-二氧化硫代嗎啉基等。作為又另一態樣，為氧雜環丁烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、4-氧化哌嗪基、1,1-二氧化硫代嗎啉基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡啶基、1-氮雜雙環〔2.2.2〕辛基、8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛基、3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一碳-3-基、2,6-二氮雜螺〔3.3〕庚-2-基、2-氧雜-6-氮雜螺〔3.3〕庚-6-基，作為又另一態樣，為哌啶基、哌嗪基，作為又另一態樣，為哌啶基，作為又再另一態樣，為哌嗪基。
「鹵素」係為-F、-Cl、-Br及-I。作為另一態樣，為-F，作為又另一態樣，為-Cl。
式(I)中之L1為-低級伸烷基-O-時，式(I)之化合物或其鹽，係意指式(II)之化合物或其鹽。
(式中，L4表示低級伸烷基。以下相同。)
又，(R1)p中，2個至4個之R1分別可相同亦可相異。
本說明書中，「可經取代之」，意指可為無取代、或具有1~5個取代基。再者，具有複數個的取代基時，該等取代基可為相同、亦可為互異。又，例如，「可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基」中之氮上的2個R0，可分別為同樣的低級烷基、亦可分別為相異之低級烷基。又，R0可各自以-OH取代、可為一者經取代、亦可為兩者均無取代。
本說明書中，式(I)之W中「可經取代之芳香族碳環」、「可經取代之芳香族雜環」及「可經取代之非芳香族雜環」中的取代基，例如為下述D1群中所示之基。
D1群係為由(1)可經-OH基及低級烷基中選擇之1個以上之取代基取代之芳香族雜環基、(2)可經-OH基及低級烷基中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基、(3)鹵素、 (4)-O-低級烷基、-S-低級烷基、-OH及-SH、(5)-CN及-NO2、(6)-CO2H及-CO2-低級烷基、以及(7)可經由上述(1)~(6)記載之基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基或-O-低級烷基所構成之群組。
作為D1群之另一態樣，可列舉(1)可經-OH基取代之芳香族雜環基、(2)鹵素、(3)-OH、(4)-CN、(5)-CO2H、以及(6)可經由如上述(1)~(5)記載之取代基所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之低級烷基或-O-低級烷基。
又，作為D1群之另一態樣，可列舉(1)可經鹵素取代之低級烷基、(2)可經可經-OH基取代之芳香族雜環基取代之-O-低級烷基、(3)鹵素、及(4)-CN。
又，作為D1群之另一態樣，可列舉可經鹵素取代之低級烷基、-O-(可經由可經側氧基取代之非芳香族雜環基、可經-OH取代之芳香族雜環基、及鹵素所構成群組中 選擇之1個以上取代基取代之低級烷基)、鹵素、氰基、側氧基。
式(I)之L2中之「可經取代之芳香族雜環」、「可經取代之非芳香族雜環」、R2中之「可經取代之環烷基」、「可經取代之非芳香族雜環基」、及、R3中之「可經取代之芳香族雜環基」、「可經取代之非芳香族雜環基」中可容許的取代基，可列舉例如由D2群中選擇之取代基。
D2群係為由(1)鹵素、(2)-OH及-SH、(3)-CN、以及(4)可經由上述(1)~(3)記載之取代基所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之低級烷基所構成之群組。
作為D2群之另一態樣，可列舉(1)可經-OH取代之低級烷基、及(2)-OH。
式(I)之化合物或其鹽的其一態樣如以下所示。
(1)x為N、Y為CH之化合物或其鹽。作為另一態樣，係X為CH、Y為N之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係X為CH、Y為CH之化合物或其鹽。
(2)L1為低級伸烷基或-低級伸烷基-O-之化合物或其鹽。L1為-低級伸烷基-之化合物或其鹽。作為又另一態 樣，係L1為-低級伸烷基-O-之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係L1為伸乙基或-亞甲基-O-之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係L1為伸乙基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係L1為-亞甲基-O-之化合物或其鹽。作為又再另一態樣，係L1為伸乙炔基之化合物或其鹽。
(3)Z為CH之化合物或其鹽。作為另一態樣，係Z為N之化合物或其鹽。
(4-1)p為2或4之化合物或其鹽。作為另一態樣，係p為2之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係p為4之化合物或其鹽。
(4-2)R1相同或互異地為-O-低級烷基或鹵素之化合物或其鹽。作為另一態樣，係R1相同或互異地為-O-低級烷基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R1相同或互異地為鹵素之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R1相同或互異地為-O-甲基或F之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R1相同或互異地為-O-甲基或Cl之化合物或其鹽。作為又再另一態樣，係R1全部為F之化合物或其鹽。
(5)式(I)中，經p個之R1取代之具有Z作為環構成原子之6員芳香環，為2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基或2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基之化合物或其鹽。作為另一態樣，式(I)中，經p個之R1取代之具有Z作為環構成原子之6員芳香環，為2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基之化合物或其鹽。作為另一態樣，式(I)中，經p個之R1取代 之具有Z作為環構成原子之6員芳香環，為2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基之化合物或其鹽。
(6)環W為可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之芳香族碳環或可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之芳香族雜環之化合物或其鹽。作為另一態樣，係環W為經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之苯環或分別可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之吡唑、吡啶、嘧啶、噻唑、吲唑或咪唑之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之苯環或可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之吡唑之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之苯環之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經由低級烷基、-O-低級烷基及鹵素所構成群組中選擇之1個以上取代基取代之苯環之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經由甲基、-O-甲基及鹵素所構成群組中選擇之1個取代基取代之苯環之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經-O-甲基取代之苯環之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經由D1群中選擇之1個以上之取代基取代之吡唑之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經低級烷基取代之吡唑之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為可經甲基取代之吡唑之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W為經甲基取代之吡唑之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係環W 為吡唑之化合物或其鹽。
(7)Q為-L2-R2之化合物或其鹽。作為另一態樣，係Q為R3之化合物或其鹽。
(8)L2為可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環之化合物或其鹽。作為另一態樣，係L2可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之含氮非芳香族雜環之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係L2分別可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之哌嗪、4-氧化哌嗪、哌啶、嗎啉、氮雜環丁烷、3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷、2,6-二氮雜螺〔3.3〕庚烷、2-氧雜-6-氮雜螺〔3.3〕庚烷、2-氧雜-7-氮雜螺〔3.5〕壬烷、8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛烷或1-氮雜雙環〔2.2.2〕辛烷之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係L2可經1個以上之甲基取代之哌嗪、係可經1個以上之甲基取代之哌啶或3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷之化合物或其鹽。作為又再另一態樣，係L2為哌啶或4-甲基哌嗪之化合物或其鹽。
(9)R2為可經由-OH及-O-低級烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基、-NH-(可經-OH取代之低級烷基)、可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基、-低級伸烷基-(可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基)或H之化合物或其鹽。作為另一態樣，係R2為可經由-OH及-O-低級烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基、-NH-(可經-OH取代之低級烷基)、可經低級烷基 (該低級烷基可經-OH取代)取代之非芳香族雜環基或H之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R2為可經甲基取代之哌嗪、可經甲基取代之哌啶、2-羥基乙基胺基或H之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R2為4-甲基哌嗪、2-羥基乙基胺基或H之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R2為4-甲基哌嗪之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R2為2-羥基乙基胺基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R2為H之化合物或其鹽。
(10)R3為可經由：-C(O)OH、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、-OH、可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基；或-O-(可經由：-C(O)OH、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、-OH、可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基)之化合物或其鹽。作為另一態樣，係R3為經由：-C(O)OH、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、-OH、可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經由D2群中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R3為經由： -OH、可經由-OH及低級烷基中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經由-OH及低級烷基所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之低級烷基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R3為經由：-OH、可經低級烷基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經-OH取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之低級烷基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R3為經由：-OH、可經甲基取代之哌嗪基及-C(O)-(可經-OH取代之氮雜環丁烷基)所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基之化合物或其鹽。進一步作為另一態樣，係R3為2-羥基乙基、2,3-二羥基丙基或4-甲基哌嗪-1-基甲基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R3為4-甲基哌嗪-1-基甲基之化合物或其鹽。作為又另一態樣，係R3為可經1個以上之-OH取代之低級烷基之化合物或其鹽。作為又再另一態樣，係R3為2-羥基乙基或2,3-二羥基丙基之化合物或其鹽。
(11)上述(1)至(10)記載之態樣中不矛盾之任意二種以上之組合的化合物或其鹽。
本發明中，係包含如上述(11)記載之如上述(1)至(10)記載之態樣中任意二種以上之組合的化合物或其鹽，其具體例亦可列舉以下態樣。
(12)X為N、Y為CH、且L1為低級伸烷基或-低級伸烷基-O-之化合物或其鹽。
(13)如(12)記載之化合物或其鹽，其中Z為CH、R1相同或互異地為-O-低級烷基或鹵素、p為2或4、且環W為可經取代之芳香族碳環或可經取代之芳香族雜環。
(14)如(13)記載之化合物或其鹽，其中L1為伸乙基或-亞甲基-O-、p為4、且環W為可經取代之苯環或可經取代之吡唑。
(15)如(12)~(14)中任一項記載之化合物或其鹽，其中Q為-L2-R2、L2為可經取代之非芳香族雜環、R2為可經由-OH及-O-低級烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基、-NH-(可經-OH取代之低級烷基)、可經取代之非芳香族雜環基、-低級伸烷基-(可經取代之非芳香族雜環基)或H。
(16)如(15)記載之化合物或其鹽，其中p為4；L2為可經1個以上之甲基取代之哌嗪、可經1個以上之甲基取代之哌啶或3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷；R2為可經甲基取代之哌嗪、可經甲基取代之哌啶、2-羥基乙基胺基或H。
(17)如(16)記載之化合物或其鹽，其中R1相同或互異地為-O-甲基或F；L1為-亞甲基-O-；環W為可經-O-甲基取代之苯環；L2為哌啶或4-甲基哌嗪；R2為4-甲基哌嗪、2-羥基乙基胺基或H。
(18)如(12)~(14)中任一項記載之化合物或其鹽，其中環W為可經取代之吡唑；Q為R3；R3為可經 由：-C(O)OH、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、-OH、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基。
(19)如(18)記載之化合物或其鹽，其中p為4；R3為經由：-OH、可經低級烷基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經-OH取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之低級烷基。
(20)如(19)記載之化合物或其鹽，其中R1相同或互異地為-O-甲基或F；L1為-亞甲基-O-；環W為可經甲基取代之吡唑；R3為2-羥基乙基、2,3-二羥基丙基或4-甲基哌嗪-1-基甲基。
又，作為式(I)化合物或其鹽之另一態樣，可列舉X與Y係相同或互異地為CH或N，但X與Y不同時為N，L1為-低級伸烷基-、-低級伸烷基-O-、-O-低級伸烷基-或低級伸炔基，Z為N或CH，R1係相同或互異地為可經鹵素取代之低級烷基、-O-(可經鹵素取代之低級烷基)、鹵素、氰基或-N(低級烷基)2，p為2至4之整數，環W為可經取代之芳香族碳環、可經取代之芳香族雜環、或可經取代之非芳香族雜環， Q為-L2-R2或R3，L2為可經取代之芳香族雜環或可經取代之非芳香族雜環，R2為可經由-OH及-O-低級烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基、-C(O)-可經取代之環烷基、-NH-(可經-OH取代之低級烷基)、-L3-可經取代之非芳香族雜環基或H，R3為可經由：-C(O)OH、-OH、-NH-低級烷基、-N(低級烷基)2、-C(O)-NH-低級烷基、-C(O)-N(低級烷基)2、可經取代之芳香族雜環基、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基；-O-(可經由-OH、-C(O)-NH-低級烷基及-C(O)-N(低級烷基)2所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基)；-NH-(可經由-OH、-C(O)-NH-低級烷基及-C(O)-N(低級烷基)2所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基)；-N(低級烷基)-(可經由-OH、-C(O)-NH-低級烷基及-C(O)-N(低級烷基)2所構成群組中選擇之1個以上之基取代之低級烷基)；-C(O)OH或-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基，以及L3為鍵結或低級伸烷基之化合物或其鹽。
包含於式(I)之化合物或其鹽的具體化合物例子，可列舉以下之化合物。
5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-〔3- 甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、(2S)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-氟-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2- 胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{4-〔(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基〕-3-甲氧基苯基}嘧啶-2-胺、N-〔4-(3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一碳-3-基)-3-甲氧基苯基〕-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕-1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)乙酮、(2R)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、2-({1-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-4-基}胺基)乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-甲基-5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)甲基〕-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺、及、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4- (4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、以及該等之鹽。作為包含於式(I)之化合物或其鹽之具體化合物之例子的另一態樣，可列舉以下化合物。5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、(2S)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-氟-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲 氧基-4-〔4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{4-〔(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基〕-3-甲氧基苯基}嘧啶-2-胺、N-〔4-(3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一碳-3-基)-3-甲氧基苯基〕-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕-1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)乙酮、及、(2R)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、以及該等之鹽。
作為包含於式(I)之化合物或其鹽之具體的化合物例子的又另一態樣，可列舉以下化合物。
5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇、(2R)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、2-({1-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-4-基}胺基)乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-甲基-5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)甲基〕-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺、及、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、以及該等之鹽。
作為包含於式(I)化合物或其鹽之具體的化合物例子的又另一態樣，可列舉以下化合物。
5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇、及、(2R)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二 醇、以及該等之鹽。
作為包含於式(I)化合物或其鹽之具體的化合物例子的又另一態樣，可列舉以下化合物。
2-({1-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-4-基}胺基)乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-甲基-5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)甲基〕-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺、及、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、以及該等之鹽。
式(I)之化合物中，隨取代基種類不同，可存在有互變異構物或幾何異構物。本說明書中，或有僅記載式(I)化合物之異構物的一形態者，但本發明亦包含其以外之異構物，異構物之經分離者、或該等之混合物。
又，式(I)之化合物中或有具有不對稱碳原子或軸對掌性之情況，亦可存在有來自其之之光學異構物。本發明亦包含式(I)化合物之光學異構物經分離者、或該等之混合物。
進一步地，本發明亦包含以式(I)所示化合物在製藥學上容許之前驅藥物。製藥學上容許之前驅藥物，係指具有可藉由加溶劑分解而在或生理學條件下轉換為胺基、羥基、羧基等之基的化合物。形成前驅藥物之基可列舉例如Prog.Med.,5,2157-2161(1985)、或「醫藥品之開發」(廣川書店、1990年)第7卷分子設計163-198中記載之 基。
又，式(I)之化合物之鹽，係指式(I)化合物在製藥學上容許之鹽，隨著取代基種類不同，或有形成酸加成鹽或與鹼之鹽之情況。具體而言，可列舉與鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等之無機酸；或與甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、苦杏仁酸、酒石酸、二苄醯基酒石酸、二甲苯甲醯基酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸、天門冬胺酸、麩胺酸等有機酸之酸加成鹽；與鈉、鉀、鎂、鈣、鋁等之無機鹼；與甲基胺、乙基胺、乙醇胺、賴胺酸、鳥胺酸等之有機鹼的鹽；與乙醯基白胺酸等各種胺基酸及胺基酸衍生物之鹽或銨鹽等。
進一步地，本發明亦包含式(I)化合物及其鹽之各種水合物或溶劑合物、及結晶多形物質。又，本發明亦包含經各種放射性或非放射性同位體標記之化合物。
(製造法)
式(I)之化合物及其鹽，可利用來自其基本構造或取代基之種類的特徵，應用各種公知之合成法來製造。此時，依其官能基種類不同，將該官能基於由原料至中間體之階段預先取代為適當之保護基(可容易轉化為該官能基之基)，有時在製造技術上會有效果。作為如此的保護基，可列舉例如、P.G.M.Wuts及T.W.Greene著、「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis(第4 版、2006年)」所記載之保護基等，只要係依該等之反應條件作適當選擇來使用即可。如此的方法中，導入該保護基進行反應後，可藉由依需要去除保護基，得到所期望之化合物。
又，式(I)之化合物的前驅藥物，與上述保護基同樣地，可藉由在由原料至中間體之階段導入特定之基，或使用所得之式(I)化合物進一步進行反應而製造。反應可藉由應用通常之酯化、醯胺化、脫水等所屬技術領域中具有通常知識者公知之方法來進行。
以下，說明式(I)之化合物的代表製造法。各製法亦可參照該說明所附之參考文獻來進行。再者，本發明之製造法不受以下所示例子所限定。
(第一製法)
(式中，L5表示鹵素、甲基亞磺醯基或甲基磺醯基。以下相同。)
本發明化合物(I)可藉由化合物(1a)與化合物 (2a)之耦合反應而得。
本反應，係使用化合物(1a)與化合物(2a)之當量或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應惰性之溶劑中、或無溶劑下，在指定觸媒之存在下，於由室溫加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。本反應較佳為在惰性氣體環境下進行。此處所用之溶劑的例子，無特殊限定，可列舉苯、甲苯、二甲苯等之芳香族烴類；二乙基醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷等之醚類；二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿等之鹵化烴類；N-甲基吡咯啶酮、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、二甲基亞碸、乙酸乙酯、乙腈、tert-丁醇及該等之混合物。指定之觸媒可列舉乙酸鈀、參(二亞苄基丙酮)二鈀等。又，使用鈀觸媒時，作為其配位子，亦可使用三苯基膦、1,1'-聯萘-2,2'-二基雙(二苯基膦)、2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽。又，在三乙基胺、N,N-二異丙基乙基胺或N-甲基嗎啉等之有機鹼；或在tert-丁氧基鈉、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、或氫氧化鉀等之無機鹼存在下進行反應，就使反應順利進行的觀點上或為有利。藉由微波照射加熱反應混合物，就使反應順利進行的觀點上或為有利。
〔文獻〕
S.R.Sandler及W.Karo著、「Organic Functional Group Preparations」、第2版、第1卷、Academic Press Inc.、1991年
日本化學會編、「第5版實驗化學講座(第14卷)」、丸善、2005年
(第二製法)
(式中，L6顯示低級伸炔基。以下相同。)
(第一步驟)
本步驟係為藉由化合物(1b)與末端炔衍生物之薗頭耦合反應(Sonogashira coupling)而得到本發明化合物(I-1)之步驟。
本步驟係使用化合物(1b)與末端炔衍生物之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑中，在鹼、鈀觸媒及碘化銅存在下，於由室溫加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。本反應較佳為在惰性氣體環境下進行。此處所用之溶劑的例子，並無特殊限定，可列舉苯、甲苯、二甲苯等之芳香族烴類；二乙基醚、四氫呋 喃、二噁烷、二甲氧基乙烷等之醚類；二氯甲烷、1,2-二氯乙烷或氯仿等之鹵化烴類；甲醇、乙醇、2-丙醇、丁醇等之醇類；N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、及該等之混合溶劑。鹼較佳為三乙基胺、N,N-二異丙基乙基胺或N-甲基嗎啉等之有機鹼；或碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、或、氫氧化鉀等之無機鹼。鈀觸媒較佳為肆(三苯基膦)鈀、二氯雙(三苯基膦)鈀、氯化鈀-1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵等。又，藉由微波照射加熱反應混合物，就使反應順利進行的觀點上或為有利。
〔文獻〕
A. d. Meijere及F. Diederich編、「Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions」、第1版、VCH Publishers Inc.、1997年
日本化學會編「實驗化學講座(第5版)」13卷(2005年)(丸善)
(第二步驟)
本步驟係將本發明化合物(I-1)之炔部分，藉由氫化或二醯亞胺還原而還原為伸烷基，得到本發明化合物(I-2)之步驟。
本步驟係使用本發明化合物(I-1)與鈀碳之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑中，於氫環境下、於由室溫加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。此處所用之溶劑的例子，並無特殊限定，可列舉二乙基醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷等之醚 類；甲醇、乙醇、2-丙醇、丁醇等之醇類；及該等之混合溶劑。
於氫化反應以外，使用本發明化合物(I-1)與指定之二醯亞胺之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑中，於由室溫加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。此處所用之溶劑的例子與上述相同。又，指定之二醯亞胺可列舉例如4-甲基苯磺醯基醯肼。
式(I)之化合物中，環W上之取代基，可藉由以式(I)化合物作為原料，使用後述實施例記載之反應、所屬技術領域中具有通常知識者所周知之反應、或該等之變化方法，輕易地轉換為其他官能基。可任意組合例如還原、鹵化、去保護、水解、醯胺化、胺基化、氧化、還原性胺基化、醯化、O-烷基化、N-烷基化、還原性烷基化、環氧化等所屬技術領域中具有通常知識者通常可採用之步驟來進行。
(原料化合物之製造)
上述製造法中之原料化合物，可使用例如下述之方法、後述製造例所記載之方法、公知方法、或該等之變化法來製造。
(原料合成1)
(式中，R4表示-OH或-低級伸烷基-OH；L7表示鹵素、-OH、-低級伸烷基-OH、-低級伸烷基-OMs、-低級伸烷基-OTs、-低級伸烷基-OTf、或-低級伸烷基-鹵素；L8表示-低級伸烷基-O-或-O-低級伸烷基-。以下相同。)
本製法係製造第一製法之原料化合物(1a)當中L1為-O-低級伸烷基或-低級伸烷基-O-之化合物(3c)的方法。
L7為鹵素、-低級伸烷基-OMs、-低級伸烷基-OTs、-低級伸烷基-OTf、或-低級伸烷基-鹵素之化合物(3a)的情況時，係使用該化合物(3a)與化合物(3b)之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑中，鹼之存在下、於由室溫加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。此處所用之溶劑的例子，並無特殊限定，可列舉N-甲基吡咯啶酮、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸等。又，鹼較佳為碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、或、氫氧化鉀等之無機鹼。
L7為-OH或-低級伸烷基-OH之化合物(3a)的情況時，係使用該化合物(3a)與化合物(3b)之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑 中，在指定之膦試藥及縮合劑存在下，於由室溫加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。此處所用之溶劑的例子，並無特殊限定，可列舉二乙基醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷等之醚類。作為指定之膦試藥，可列舉三丁基膦、三苯基膦等。作為指定之縮合劑，可列舉偶氮二羧酸二乙酯、1,1'-(偶氮二羰基)二哌啶等。又，使用(氰基亞甲基)三甲基磷烷以取代指定之膦及指定之縮合劑時，就使反應順利進行的觀點上或為有利。
(原料合成2)
(式中，L9表示鹵素。以下相同。)
本製法係為製造於第一製法之原料化合物(1a)中L1為低級伸烷基之化合物(4d)的方法。
(第一步驟)
本步驟係藉由化合物(4a)與末端炔衍生物之薗頭耦合反應，而得到化合物(4b)之步驟。
反應條件係與第二製法之第一步驟相同。
(第二步驟)
本步驟係藉由使化合物(4b)之炔部分氫化，還原為低級伸烷基，而得到化合物(4c)之步驟。
反應條件係與第二製法之第二步驟相同。
(第三步驟)
本步驟係將化合物(4c)之胺基轉換為鹵素，而得到化合物(4d)之步驟。
本步驟係使用化合物(4c)與氯化銅(II)及亞硝酸n-戊酯之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑中，在由冰冷之下加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。此處所用之溶劑的例子，並無特殊限定，可列舉二氯甲烷、1,2-二氯乙烷或氯仿等之鹵化烴類。
(原料合成3)
本製法，係為製造第二製法之原料化合物(1b)當中，X為N之化合物(5c)的方法。
本反應係為藉由化合物(5a)與化合物(5b)之 IPSO取代反應，而得到化合物(5c)之反應。
使用化合物(5a)與化合物(5b)之當量、或一者使用過剩量，將該等之混合物在對反應為惰性之溶劑中，在氫環境下、在由冰冷之下加熱回流下，通常攪拌0.1小時~5日。此處所用之溶劑的例子，並無特殊限定，可列舉甲醇、乙醇、2-丙醇、丁醇等之醇類；N-甲基吡咯啶酮、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、及該等之混合溶劑。又，使用甲磺酸、乙酸、三氟乙酸、氯化氫、硫酸等之酸時，就使反應順利進行的觀點上或為有利。
式(I)化合物之藥理活性，係藉由以下試驗來確認。
試驗例1 FGFR1、2及3酵素分析
酵素分析係使用人類重組FGFR1、FGFR2、FGFR3(Carnabio公司、目錄編號08-133,08-134,08-135)，FGFR1與FGFR2係在室溫、FGFR3係在30℃實施反應。測定法如以下顯示其概略。
將化合物以二甲基亞碸(DMSO)溶液稀釋(10倍公比、4點)，以DMSO濃度成為2%之方式，以reaction buffer(100mM HEPES(pH 7.5)、0.003% Brij-35、0.004% Tween 20、0.5mM DTT、10mM MgCl2)稀釋。於384孔盤中，於化合物溶液4μL添加經reaction buffer稀釋之FGFR1酵素(2或3ng/μL)、FGFR2酵素(2ng/μL)、或FGFR3酵素(6ng/μL)2μL，20分鐘後添加基質-ATP溶液(100mM HEPES(pH 7.5)、0.003% Brij-35、0.004% Tween 20、0.5mM DTT、10mM MgCl2、3.75μM substrate-FL-peptide 22+ 500μM(FGFR1)ATP、188μM(FGFR2)ATP或250μM(FGFR3)ATP)4μL，反應30分鐘。反應停止後，以LabChip EZ Reader測定。以所得之抑制率為基準，由非線形回歸算出IC50值。將數個化合物之結果示於表1。表中之Ex係表示後述實施例化合物編號。
試驗例2變異FGFR3強制表現細胞(FGFR3_S249C/NIH3T3)之增殖分析
將FGFR3_S249C/NIH3T3細胞各添加3000cells/well/90μL於96孔球形盤(U底)，翌日添加化合物溶液(10μL)(DMSO之最終濃度0.1%)。化合物溶液係由最高濃度10mM，以DMSO、3倍公比(9點及僅DMSO)階段稀釋，以培養液(DMEM,10%FBS)稀釋100倍而調製。化合物添加5日後，以Promega(G7573)CellTiter-Glo(註冊商標)Luminescent Cell Viability Assay評估化合物之增殖抑制。再者，將添加DMSO之well為控制組、計數0作為100%抑制，由非線形回歸算出IC50值。將數個化合物之結果示於表2。
試驗例3 UM-UC-14(FGFR3_S249C陽性細胞、膀胱癌)抗腫瘤試驗
於裸鼠(CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu)、雄、4-5週齡)右腹側之皮下移植3×106個cells/0.1mL (PBS+Matrigel、1：1)之UM-UC-14細胞，於腫瘤大小成為約250mm3時，開始藥劑投與(Day 1)。1日投與1次或2次，每2~3日以游標卡尺測定腫瘤徑及體重，最終以第11日之腫瘤體積mm3(短徑mm×短徑mm×長徑mm/2)來判定抗腫瘤效果(n=3-5)。再者，控制群係投與0.5%MC(甲基纖維素)。表中之%抑制，例如100%抑制時係表示將控制組的腫瘤成長抑制為Day 1之腫瘤體積，%退縮係指比Day 1之腫瘤體積更退縮幾%。再者，Day 1之腫瘤體積係表示藥物剛要投與前的腫瘤體積。將經口投與1mg/kg/day時(惟實施例95之化合物為3mg/kg/day)之數個化合物結果如表3所示。
由上述試驗，確認了包含於本發明之式(I)的複數個實施例化合物係有FGFR1、2及/或3抑制作用。又，包含於式(I)之複數個實施例化合物會抑制經強制表現 變異FGFR3之細胞的增殖，進一步地，於負荷有變異FGFR3陽性膀胱癌之動物模式中，確認了膀胱癌之成長的抑制或膀胱癌本身的退縮。由以上可知式(I)之化合物或其鹽可作為FGFR1、2及/或3相關之各種癌、特別是變異FGFR3陽性膀胱癌之治療劑來使用。
試驗例4 FGFR3-TACC3_v1之單離
對於肺癌臨床檢體(美國Asterand公司)200檢體，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及隨機引子(Random Primers、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，合成cDNA。
接著，使用序列編號1所示之FGFR3_TACC3_RT_F及序列編號2所示之FGFR3_TACC3_RT_R之引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(TaKaRa Ex Taq；Takara Bio股份有限公司)進行PCR(98℃ 10秒、55℃ 15秒、68℃ 1分30秒、30循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號3所示之FGFR3_TACC3_nested_F及序列編號4所示之FGFR3_TACC3_nested_R的引子，使用同樣之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 1分、30循環)。PCR反應後、電泳後，可知僅樣品Lg344檢體即得到約500base之PCR產物。
之後，將PCR產物藉由雙去氧定序法來決定序列(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。此結果，得知了約500base之PCR產物，係為登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)的編碼序列(以下CDS)顯子18之3'末端與TACC3(NM_006342.1)之CDS的顯子11之5'末端融合的序列。
對於來自扁平上皮肺癌患者肺癌組織之RNA(美國Asterand公司)Lg344檢體RNA，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及寡(dT)引子(寡(dT)20引子、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號5所示之FGFR3-TACC3_cloning_F及序列編號6所示之FGFR3-TACC3_cloning_R的引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、60℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號7所示之FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F及序列編號8所示之FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。PCR反應後、電泳後，可知得到約2.9kbase之PCR產物。將PCR產物選殖至選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限公司)。插入序列係藉由雙去氧定序法來決定序列 (BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。結果，得知了約2.9kbase之PCR產物係存在有登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)CDS之5'末端至顯子18之3'末端與TACC3(NM_006342.1)CDS之顯子11之5'末端至CDS之3'末端融合的轉錄產物(FGFR3-TACC3_v1)(序列編號9)。以序列編號9編碼的多肽(FGFR3-TACC3_v1融合多肽)係如序列編號10所示。
試驗例5 FGFR3-TACC3_v2之單離
對於膀胱癌(美國Asterand公司)59檢體，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及隨機引子(Random Primers、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號1所示之FGFR3_TACC3_RT_F及序列編號2所示之FGFR3_TACC3_RT_R之引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(TaKaRa Ex Taq；Takara Bio股份有限公司)進行PCR(98℃ 10秒、55℃ 15秒、68℃ 1分30秒、30循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號3所示之FGFR3_TACC3_nested_F及序列編號4所示之FGFR3_TACC3_nested_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 1分、30循環)。PCR反應後、電泳後，可知以樣品Bd106檢體得到約600base之PCR產物。
之後，藉由雙去氧定序法對PCR產物定序(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。結果，得知了約600base之PCR產物，係登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)CDS的顯子18之3'末端與TACC3(NM_006342.1)之CDS的顯子10之5'末端融合的序列。對於來自膀胱癌患者膀胱癌組織之RNA(美國Asterand公司)Bd106檢體RNA，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及寡(dT)引子(寡(dT)20引子、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號5所示之FGFR3-TACC3_cloning_F及序列編號6所示之FGFR3-TACC3_cloning_R之引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、60℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號7所示之FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F及序列編號8所示之FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。PCR反應後、電泳後，可知得到約3.0kbase之PCR產物。將PCR產物選殖於選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限 公司)。藉由雙去氧定序法來決定插入序列之序列(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。結果，得知了約3.0kbase之PCR產物中，存在有登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)CDS之5'末端至顯子18之3'末端與TACC3(NM_006342.1)CDS之顯子10的5'末端至CDS之3'末端融合的轉錄產物(FGFR3-TACC3_v2)(序列編號11)。由序列編號11編碼之多肽(FGFR3-TACC3_v2融合多肽)係如序列編號12所示。
試驗例6 FGFR3-TACC3_v3之單離
對於膀胱癌(美國Asterand公司)59檢體，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及隨機引子(Random Primers、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號1所示之FGFR3_TACC3_RT_F及序列編號2所示之FGFR3_TACC3_RT_R之引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(TaKaRa Ex Taq；Takara Bio股份有限公司)進行PCR(98℃ 10秒、55℃ 15秒、68℃ 1分30秒、30循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號3所示之FGFR3_TACC3_nested_F及序列編號4所示之FGFR3_TACC3_nested_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 1分、30循環)。PCR反應後、電泳後，得知以樣品Bd021檢體得到 約650base之PCR產物。
之後，以雙去氧定序法決定PCR產物之序列(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。結果，得知了約650base之PCR產物，係登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)之CDS的顯子19之中間序列與TACC3(NM_006342.1)內含子10-11之一部分融合，且進一步與TACC3之CDS的顯子11之5'末端融合的序列。
對於來自膀胱癌患者膀胱癌組織之RNA(美國Asterand公司)Bd021檢體RNA，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及寡(dT)引子(寡(dT)20引子、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號5所示之FGFR3-TACC3_cloning_F及序列編號6所示之FGFR3-TACC3_cloning_R之引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、60℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號7所示之FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F及序列編號8所示之FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。PCR反應後、電泳後，得知得到約 3.0kbase之PCR產物。將PCR產物選殖至選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限公司)。藉由雙去氧定序法對插入序列定序(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。結果，得知約3.0kbase之PCR產物中，存在有登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)CDS之5'末端至顯子19之中間序列與TACC3(NM_006342.1)內含子10-11之一部分融合，且進一步與TACC3之CDS的顯子11之5'末端至CDS之3'末端融合的轉錄產物(FGFR3-TACC3_v3)(序列編號13)。由序列編號13編碼之多肽(FGFR3-TACC3_v3融合多肽)係如序列編號14所示。
試驗例7由來自膀胱癌患者之細胞株RT-112單離FGFR3-TACC3_v1
對於由來自膀胱癌患者之細胞株RT-112(從Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH購入)純化的RNA，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及寡(dT)引子(寡(dT)20引子、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號5所示之FGFR3-TACC3_cloning_F及序列編號6所示之FGFR3-TACC3_cloning_R之引子，以上述所得之cDNA為模板， 使用DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、60℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號7所示之FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F及序列編號8所示之FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 3分30秒、25循環)。PCR反應後、電泳之結果，得到約2.9kbase之PCR產物。將PCR產物選殖於選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限公司)，藉由雙去氧定序法(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)對插入序列定序，結果得知與登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)之CDS的N末端至顯子18之3'末端與TACC3(NM_006342.1)之CDS顯子11之5'末端至CDS之C末端融合的轉錄產物(FGFR3-TACC3_v1)(序列編號9)相同。
試驗例8由來自膀胱癌患者之細胞株RT4單離FGFR3-TACC3_v4
對於由來自膀胱癌患者之細胞株RT4(從ECACC(European Collectionof Cell Cultures)購入)純化的RNA，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及寡(dT)引子(寡(dT)20引子、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉 錄反應，而合成cDNA。接著，使用序列編號5所示之FGFR3-TACC3_cloning_F及序列編號6所示之FGFR3-TACC3_cloning_R之引子，以上述所得之cDNA為模板，使用DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、60℃ 15秒、68℃ 5分30秒、30循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號7所示之FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F及序列編號8所示之FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 5分、30循環)。PCR反應後、電泳之結果，得到約4.5kbase之PCR產物。將PCR產物選殖於選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限公司)，藉由雙去氧定序法(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)對插入序列定序，結果得知存在有登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)CDS之5'末端至顯子18之3'末端與FGFR3之內含子18-19序列的一部分融合，且進一步由TACC3(NM_006342.1)之顯子4的中途開始融合，與TACC3之CDS之3'末端為止融合的轉錄產物(FGFR3-TACC3_v4)。經確認之序列，第882號之鹼基序列由T取代為C(SNPs登錄編號；rs2234909)、第2484號之鹼基序列由C取代為T、第2663號之鹼基序列由G取代為A(序列編號15)。由序列編號15編碼之多肽(FGFR3- TACC3_v4融合多肽)係如序列編號16所示。
試驗例9 FGFR3-TACC3_v1、FGFR3-TACC3_v2、FGFR3-TACC3_v3及FGFR3-TACC3_v4之反轉錄病毒液之製作
為了將FGFR3-TACC3_v1、FGFR3-TACC3_v2、FGFR3-TACC3_v3及FGFR3-TACC3_v4之ORF全長作為蛋白質來表現，由試驗例4、試驗例5、試驗例6及試驗例8中製作之選殖載體，以限制酵素BamHI進行37℃、3小時之酵素反應，純化經限制酵素處理後之DNA片段，進一步地，以EcoRI進行37℃、3小時之酵素反應，純化經限制酵素處理後之DNA片段。將含有此ORF之DNA片段選殖於存在於表現載體(pMXs-puro；Cosmobio公司)之多選殖位點的BamHI及EcoRI位點，構築表現質體(FGFR3-TACC3_v1/pMXs-puro、FGFR3-TACC3_v2/pMXs-puro、FGFR3-TACC3_v3/pMXs-puro及FGFR3-TACC3_v4/pMXs-puro)。
將FGFR3-TACC3_v1/pMXs-puro、FGFR3-TACC3_v2/pMXs-puro、FGFR3-TACC3_v3/pMXs-puro及FGFR3-TACC3_v4/pMXs-puro各9μg，使用轉染試藥(FUGENE(註冊商標)HD、Roche公司)，對Platinum-E細胞實施轉染。轉染24小時後，更換為包含10%牛血清(Nichirei Bioscience公司)之D-MEM培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium培養基；Invitrogen公司)，進一步採取24小時後之培養基上清液，製作反 轉錄病毒溶液。
試驗例10 FGFR3-TACC3_v1、FGFR3-TACC3_v2、FGFR3-TACC3_v3及FGFR3-TACC3_v4之非貼附依存性之增殖亢進作用之探討
試驗例9中，於使用FGFR3-TACC3_v1/pMXs-puro、FGFR3-TACC3_v2/pMXs-puro、FGFR3-TACC3_v3/pMXs-puro及FGFR3-TACC3_v4/pMXs-puro製作之病毒溶液中以4μg/mL之濃度添加聚凝胺(Polybrene；Sigma公司)後，添加至NIH3T3細胞使其感染。添加6小時後更換為包含10%牛血清(Nichirei Bioscience公司)之D-MEM培養基，感染1日後更換為包含10%牛血清(Nichirei Bioscience公司)及1μg/mL之嘌呤黴素(Sigma公司)之D-MEM培養基(Invitrogen公司)，在5%CO2存在下、37℃持續4週培養，取得穩定表現FGFR3-TACC3_v1、FGFR3-TACC3_v2、FGFR3-TACC3_v3及FGFR3-TACC3_v4之NIH3T3細胞。(分別命名為FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞及FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞)。
為了探討FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞及FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞之非貼附依存性之增殖亢進能力，於96孔球形盤(Sumilon cell tight spheroid 96U；住友Bakelite)中分別 將FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞及經空載體pMXs-puro感染之NIH3T3細胞(Mock/NIH3T3細胞)，以成為每1孔1×103個的方式以包含10%牛血清(Nichirei Bioscience公司)之D-MEM培養基(Invitrogen公司)來播種。在5%CO2存在下、37℃培養後，以細胞數測定試藥(CELLTITER-Glo(註冊商標)Luminescent Cell Viability Assay；Promega公司)遵照使用說明的方法來測定翌日(Day1)及4日後(Day4)之細胞數。檢測係使用發光測定裝置。Mock/NIH3T3細胞，由Day1至Day4，細胞數之計數不增加，相對於此，FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞由Day1至Day4確認了約3.1倍之細胞數計數的增加、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞由Day1至Day4確認了約2.8倍之細胞數計數的增加、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞由Day1至Day4確認了約2.3倍之細胞數計數的增加、FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞由Day1至Day4確認了約2.5倍之細胞數計數的增加。
由以上可知，FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞及FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞顯示了非貼附依存性之細胞增殖。
試驗例11化合物對FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3 細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞、來自膀胱癌患者之細胞株RT-112及來自膀胱癌患者之細胞株RT4之非貼附依存性之細胞增殖抑制作用
非貼附依存性之細胞增殖的測定(群落法等)，已知係作為探討化合物抗癌作用(藥理效果)之系統(臨床腫瘤學第二版、癌與化學療法社)。作為變為群落法之測定細胞非接著性增殖的方法，係有使用如前述之球形盤(spheroid plate)的方法。
於96孔球形盤(Sumilon cell tight spheroid 96U；住友Bakelite)中，將FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞以成為每1孔1×103個的方式以包含10%胎牛血清之D-MEM培養基來播種。同樣地將來自膀胱癌患者之細胞株RT-112以成為每1孔1×103個的方式以包含10%胎牛血清及2mM L-glutamine之RPMI1640培養基播種；將來自膀胱癌患者之細胞株RT4以成為每1孔1×103個的方式以包含10%胎牛血清之RPMI1640培養基播種。又，作為正控制用，調製僅添加培養基之孔。在5%CO2存在下、37℃培養一晚後，以最終濃度100nM、10nM及1nM添加被測化合物。作為負控制，將化合物之溶劑即DMSO，以成為與化合物添加時同濃度(0.1%)的方式添 加。之後，在5%CO2存在下、37℃培養4日，添加細胞數測定試藥(CellTiter-Glo(註冊商標)Luminescent Cell Viability Assay；Promega公司)，攪拌20分鐘後，使用發光測定裝置來測定。分別以正控制、負控制之值為100%抑制值、0%抑制值，算出各化合物之增殖抑制%。結果，如表4所示，發現了數個本發明化合物，會抑制FGFR3-TACC3_v1表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v2表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v3表現/NIH3T3細胞、FGFR3-TACC3_v4表現/NIH3T3細胞、來自膀胱癌患者之細胞株RT-112及來自膀胱癌患者之細胞株RT4之非貼附依存性之增殖亢進作用。
由以上結果，得知表現FGFR3-TACC3_v1、FGFR3-TACC3_v2、FGFR3-TACC3_v3及FGFR3-TACC3_v4之癌細胞或腫瘤之增殖，可藉由本發明化合物來抑制。
試驗例12化合物對FGFR3-TACC3融合多肽之體外激酶活性的抑制作用
(1)FLAG標籤融合表現質體(FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+))之構築
為了取得FLAG標籤融合於5'末端之FGFR3-TACC3融合聚核苷酸，使用試驗例4、試驗例5、及試驗例6中選殖之載體作為模板，實施於5'末端加成FLAG標籤之 PCR。使用序列編號17所示之FGFR3_N_FLAG_BamHI及序列編號8所示之FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R之引子及DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 3分30秒、12循環)。將PCR產物選殖於選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限公司)。藉由雙去氧定序法對插入序列定序(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)。結果，確認了PCR產物係序列編號9、序列編號11及序列編號13記載之序列當中，編碼第一個甲硫胺酸之3個鹼基(ATG)被刪除，編碼開始密碼子與FLAG標籤之核酸序列(序列編號24)被加成於5'末端之核酸序列。將藉由該等所編碼之多肽分別稱為FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽，將該等總稱為FGFR3-TACC3(N-FLAG)融合多肽。又，為了構築將經加成該等之FLAG序列之FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)之ORF全長作為蛋白質來表現之表現載體，將由上述選殖載體以限制酵素BamHI進行37℃、3小時之酵素反應而經限制酵素處理之DNA片段純化，進一步地純化以EcoRI進行37℃、3小時之酵素反應而經限制酵素處理之DNA片段。將含有此ORF之DNA片段選殖於存在於表現載體(pcDNA3.1/Zeo(+)；Life Technologies股 份有限公司)之多選殖位點的BamHI及EcoRI位點，構築表現質體(FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+))。
(2)FGFR3-TACC3(N-FLAG)融合多肽之取得
於轉染實施前一日，使用包含10%胎牛血清之D-MEM培養基，於經膠原蛋白塗覆之15cm培養盤每1枚0.5×107個HEK293細胞，培養10枚。於轉染當日，分別將FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)(試驗例12)1枚培養盤使用27μg，使用轉染試藥(FUGENE(註冊商標)HD、Roche公司)81μL，對HEK293細胞實施轉染。轉染24小時後，去除培養基，以PBS洗淨3次，添加1mL之PBS，以細胞刮具(康寧公司)剝下細胞後，回收於聚丙烯製之管。以1200rpm離心5分鐘後，去除上清液，添加150μL之細胞溶解液(50mM Tris-HCl(pH8.0)、150mM NaCl、1%NP-40、1mM EDTA、蛋白酶抑制劑cocktail complete)，於冰上靜置30分鐘，使細胞溶解。將存在於離心後所得之上清中之FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽分別使用M2抗體親和凝膠(ANTI-FLAG M2 Affinity Gel；SIGMA-ALDRICH公司)遵照產品資訊記載之方法來純化。洗淨及溶出係分別使用洗淨液(50mM Tris-HCl(pH8.0)、150mM NaCl、1%NP-40、1mM EDTA、蛋白酶抑制劑cocktail complete)、溶出液(20mM Tris-HCl(pH7.4)、10mM MgCl2、10mM MnCl2、0.5mg/mL FLAG peptide)，而得到100μL之溶出液。對於溶出液進行使用了抗FGFR3抗體(Cell Signaling公司)及抗FLAG M2抗體(SIGMA-ALDRICH公司)之免疫墨點法以及銀染色，確認了得到FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽。
(3)FGFR3-TACC3(N-FLAG)融合多肽之體外激酶活性之檢測
使用激酶活性檢測套組(HTRF KinEASE-TK；Cisbio公司)來探討上述經純化之FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽對胜肽基質之磷氧化活性。使用康寧公司384孔、Low-volume Black plate，以上述溶出液之1倍稀釋溶液、3倍稀釋溶液或10倍稀釋溶液各1μL作為酵素源，於套組所附之5x Kinase buffer中分別添加DTT及Mg使最終濃度成為1mM及5mM，作為反應溶液。以套組所附之TK Substrate作為基質最終濃度成為2.0μM、且以ATP未添加及ATP之最終濃度成為100μM之方式添加，以最終容量5.0μL，各自於 室溫反應1小時。反應後，遵照套組推薦的方法，調製Sa-XL665及TK Antibody-Eu(K)溶液，分別添加2.5μL添加，於室溫反應1小時後，檢測HTRF之計數(即胜肽基質之磷氧化)。結果，得知相對於ATP未添加，ATP添加時，HTRF之計數，於添加包含上述FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽或FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽之各溶出液1倍稀釋溶液1μL時，分別增加約38倍、約40倍及約38倍；添加上述溶出液3倍稀釋溶液1μL時，分別增加約27倍、34倍、31倍；添加上述溶出液10倍稀釋溶液1μL時，分別增加5倍、18倍、11倍。
如以上所述，藉由使用激酶活性檢測套組，可檢測各融合多肽之體外激酶活性。
(4)化合物對FGFR3-TACC3(N-FLAG)融合多肽之體外激酶活性之抑制作用
使用上述激酶活性檢測套組及同樣之384孔盤，探討被測化合物對FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽之體外激酶活性之抑制作用。以各化合物最終濃度成為100nM、10nM及1nM的方式添加，作微控制組，添加DMSO成為0.1%，對於FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽，添加上述溶出液2倍稀釋溶液1μL、對於FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽，添加上述溶出液3倍稀釋溶液1μL、 及對於FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽，添加上述溶出液3倍稀釋溶液1μL，然後，添加套組所附的TK Substrate作為基質，使最終濃度成為2.0μM，在室溫反應15分鐘。接著，添加ATP使最終濃度成為100μM，或不添加，以最終容量5.0μL在室溫反應60分鐘。其他，係分別添加與上述(3)之方法同樣方式調製之Sa-XL665及TK Antibody-Eu(K)溶液2.5μL，於室溫反應1小時後，檢測HTRF之計數。將化合物非存在下(與化合物添加時同濃度來添加DMSO 0.1%)之ATP未添加及添加時之磷氧化計數分別作為100%抑制、0%抑制，用以下算式算出化合物所致之FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽激酶活性之抑制%。
〔化合物所致之激酶活性抑制(%)〕=(1-〔化合物添加ATP添加時之磷氧化計數-化合物未添加ATP未添加時之磷氧化計數〕/〔化合物未添加ATP添加時之磷氧化計數-化合物未添加ATP未添加時之磷氧化計數〕)×100
結果，如表5所示，發現了數個本發明之化合物，會抑制純化之FGFR3-TACC3_v1(N-FLAG)融合多肽、FGFR3-TACC3_v2(N-FLAG)融合多肽及FGFR3-TACC3_v3(N-FLAG)融合多肽對胜肽基質之磷氧化活性。
試驗例13由來自膀胱癌患者之細胞株SW780單離FGFR3-BAIAP2L1
對由來自膀胱癌患者之細胞株SW780(由ATCC購入)所純化的RNA，使用反轉錄酵素(SuperScriptIII、Life Technologies公司)及寡(dT)引子(寡(dT)20引子、Life Technologies公司)，遵照套組之實驗流程進行反轉錄反應，而合成cDNA。
接著，使用序列編號18所示之FGFR3-BAIAP2L1_cloning_F及序列編號19所示之FGFR3-BAIAP2L1_cloning_R之引子，以上述所得之cDNA為模 板，使用DNA聚合酶(KOD-plus-Ver.2；東洋紡績股份有限公司)進行PCR(98℃ 15秒、60℃ 15秒、68℃ 5分、30循環)。之後，以10倍稀釋之前述PCR產物為模板，使用序列編號20所示之FGFR3_BAIAP2L1_cloning_BamHI_F及序列編號21所示之FGFR3_BAIAP2L1_cloning_NotI_R之引子，使用相同之DNA聚合酶進行PCR(98℃ 15秒、55℃ 15秒、68℃ 4分、30循環)。PCR反應後、電泳之結果，得到約3.8kbase之PCR產物。將PCR產物選殖於選殖載體(TOPO XL PCR Cloning Kit；Life Technologies股份有限公司)，將插入序列以雙去氧定序法(BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit；Life Technologies)定序，結果得知係為登錄於NCBI之FGFR3(NM_001163213.1)之CDS的5'末端至顯子18之3'末端與BAIAP2L1(NM_018842.4)之CDS的顯子2之5'末端至CDS之3'末端融合的轉錄產物(FGFR3-BAIAP2L1)。經確認之序列，第3558號的鹼基序列由G取代為A(SNPs登錄編號；rs1045916)、第3723號之鹼基序列由C取代為T、第3747號之鹼基序列由G取代為A(序列編號22)。以序列編號22所編碼之多肽係如序列編號23所示。
試驗例14 FGFR3-BAIAP2L1之反轉錄病毒液之製作
為了構築將FGFR3-BAIAP2L1之ORF全長作為蛋白質表現的表現質體，由上述選殖載體以限制酵素BamHI進行37℃、3小時之酵素反應，純化經限制酵素處理之 DNA片段，進一步地以NotI進行37℃、3小時之酵素反應，純化經限制酵素處理之DNA片段。將含有此ORF之DNA片段選殖於存在於表現載體(pMXs-puro；Cosmobio公司)之多選殖位點的BamHI及NotI位點，構築表現質體(FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro)。使用所製作之FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro，遵照試驗例9之方法來製作反轉錄病毒溶液。
試驗例15 FGFR3-BAIAP2L1之非貼附依存性之增殖亢進作用之探討
使用於試驗例14中使用FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro所製作之病毒溶液，遵照試驗例10之方法，取得安定表現FGFR3-BAIAP2L1之NIH3T3細胞(命名為FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞)。
為了探討FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞之非貼附依存性之增殖亢進能力，以與試驗例10同樣之方法探討。Mock/NIH3T3細胞由Day1至Day4細胞數的計數並無增加，相對於此，FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞確認了由Day1至Day4有約2.5倍之細胞數計數的增加。由以上可知，FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞顯示非貼附依存性之細胞增殖。
試驗例16對FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞之非貼附依存性之細胞增殖抑制作用
於96孔球形盤(Sumilon cell tight spheroid 96U；住友Bakelite)中以含有10%胎牛血清之D-MEM培養基播 種FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞，使每1孔成為1×103個。又，調製僅添加培養基之孔作為正控制用。在5%CO2存在下、37℃培養一晚後，以最終濃度100nM、10nM及1nM來添加被測化合物。作為負控制，添加化合物之溶劑之DMSO使成為與化合物添加時同濃度(0.1%)。之後，在5%CO2存在下、37℃培養4日，添加細胞數測定試藥(CellTiter-Glo(註冊商標)Luminescent Cell Viability Assay；Promega公司)，攪拌20分鐘後，使用發光測定裝置測定。以正控制、負控制之值分別為100%抑制值、0%抑制值，算出各化合物之增殖抑制%。結果，如表6所示，發現了數個之本發明化合物，會抑制FGFR3-BAIAP2L1表現/NIH3T3細胞之非貼附依存性之增殖亢進作用。
由以上結果，得知表現FGFR3-BAIAP2L1之癌細胞或腫瘤的增殖，可被本發明化合物抑制。
含有式(I)化合物或其鹽之1種或2種以上作為有效成分之醫藥組成物，可使用所屬技術領域通常所使用之賦形劑、亦即藥劑用賦形劑或藥劑用載體等，藉由通常所使用之方法來調製。
投與可為錠劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑等之經口投與；或關節內、靜脈內、肌肉內等之注射劑、栓劑、點眼劑、眼軟膏、經皮用液劑、軟膏劑、經皮用貼附劑、經黏膜液劑、經黏膜貼附劑、吸入劑、膀胱內注入劑等之非經口投與的任意形態。
用於經口投與之固體組成物，可使用錠劑、散劑、顆 粒劑等。如此之固體組成物中，係將1種或2種以上之有效成分與至少1種之不活性賦形劑混合。組成物可遵照一般方法，而含有不活性之添加劑，例如潤滑劑或崩解劑、安定化劑、溶解輔助劑。錠劑或丸劑亦可依需要以糖衣或胃溶性或腸溶性物質之薄膜來被膜。
用於經口投與之液體組成物，係含有藥劑學上容許之乳濁劑、溶液劑、懸濁劑、糖漿劑或酏劑等，且含有一般所用之不活性稀釋劑，例如純水或乙醇。該液體組成物於不活性稀釋劑以外，亦可含有如可溶化劑、濕潤劑、懸濁劑之輔助劑；甘味劑、風味劑、芳香劑、防腐劑。
用於非經口投與之注射劑，含有無菌之水性或非水性溶液劑、懸濁劑或乳濁劑。作為水性之溶劑，包含例如注射用蒸餾水或生理食鹽液。作為非水性之溶劑，係有例如乙醇之醇類。如此之組成物，亦可進一步含有等張化劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、安定化劑、或溶解輔助劑。該等係藉由例如通過細菌保留濾膜而過濾、藉由殺菌劑之摻合或照射而無菌化。又，該等亦可經製造無菌固體組成物，且於使用前溶解或懸濁於無菌水或無菌之注射用溶劑來使用。
外用劑係包含軟膏劑、硬膏劑、乳劑、膠狀劑、泥罨劑、噴霧劑、洗劑、點眼劑、眼軟膏等。含有一般所用之軟膏基劑、洗劑基劑、水性、或非水性之液劑、懸濁劑、乳劑等。
吸入劑或經鼻劑等之經黏膜劑，可使用固體、液體、 或半固體狀者，可遵照以往公知之方法來製造。亦可適當添加例如公知之賦形劑、或進一步適當添加pH調整劑、防腐劑、界面活性劑、潤滑劑、安定劑或增黏劑等。投與可使用適當的吸入或吹送所用之裝置。例如，可使用計量投與吸入裝置等之公知裝置或噴霧器，作為化合物單獨或經處方之混合物的粉末、或與醫藥上可容許之載體組合而作為溶液或懸濁液投與。乾燥粉末吸入器等，可為單次或多數次投與用者，可利用乾燥粉末或含有粉末之膠囊。或可為適當的驅出劑，例如、使用氯氟烷或二氧化碳等之適合的氣體之加壓氣溶膠噴霧等之形態。
通常經口投與的情況時，1日投與量以體重來計約0.001~100mg/kg、較佳為0.1~30mg/kg、更佳為0.1~10mg/kg為適當，將其1次或分為2次~4次投與。靜脈內投與時，1日投與量以體重來計約0.0001~10mg/kg為適當，係1日1次~分為複數次投與。又，經黏膜劑，以體重來計約0.001~100mg/kg以1日1次~分為複數次投與。投與量係考慮症狀、年齡、性別等依照個別場合來適當決定。
雖依投與路徑、劑形、投與部位、賦形劑或添加劑之種類而不同，但本發明之醫藥組成物，係含有0.01~100重量%、作為一態樣係含有0.01~50重量%之有效成分之1種或其以上之式(I)化合物或其鹽。
式(I)化合物，可與可認為前述式(I)化合物會顯示有效性之疾病的各種治療劑或預防劑併用。該併用可為 同時投與、或各自連續、或隔著所期望之時間間隔來投與。同時投與製劑可為摻合劑亦可各自被製劑化。
〔實施例〕
以下，基於實施例，進一步詳細說明式(I)化合物之製造法。再者，本發明不受下述實施例記載之化合物所限定。又，原料化合物之製法係如製造例所示。進一步，式(I)化合物之製造法，不僅限定於以下所示之具體實施例之製造法，式(I)化合物亦可藉由該等之製造法的組合、或所屬技術領域中具有通常知識者所顯而易知的方法來製造。
又，實施例、製造例及後述表中，亦有使用以下略記的情形。
PEx：製造例編號、Ex：實施例編號、PSyn：以同樣之方法製造之製造例編號、Syn：以同樣之方法製造之實施例編號、Str：化學構造式(Me：甲基、Et：乙基、iPr：異丙基、tBu：tert-丁基、Boc：tert-丁氧基羰基、Bn：苄基、THP：四氫吡喃基)、DAT：物理化學之數據、ESI+：質量分析中之m/z值(離子化法ESI、無特別指明時為(M+H)+)、ESI-：m/z值(離子化法ESI、無特別指明時為(M-H)-)、EI：質量分析中之m/z值(離子化法EI、無特別指明時為(M)+)、APCI/ESI+：質量分析中之m/z值(離子化法APCI與ESI之同時測定、無特別指明時為(M+H)+)、NMR1：二甲基亞碸-d6中之 1H-NMR的δ(ppm)、NMR2：CDCl3中之1H-NMR的δ(ppm)、NMR3：CD3OD中之1H-NMR的δ(ppm)、製造例及實施例中之「M」：表示mol/L。又，構造式中之HCl表示鹽酸鹽，HCl前之數字表示莫耳比。例如2HCl係意指二鹽酸鹽。又，製造例表及實施例表中附有「*」之化合物，表示其化合物為光學活性體)。
製造例1
氬環境下，於3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯胺(300mg)與乙醇(6mL)之混合物中添加甲磺酸(128μL)，於室溫攪拌30分鐘後，添加5-溴-2-氯嘧啶(229mg)，於100℃攪拌4小時。追加5-溴-2-氯嘧啶(95mg)，於於100℃攪拌12小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將所得之殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇)純化，得到5-溴-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(352mg)。
製造例2
於3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯胺(253mg)與異丙醇(6mL)之混合物中添加甲磺酸(162μL)，於室溫攪拌30分鐘後，添加2-氯-5-碘嘧啶(200mg)，於90℃攪拌12小時，進一步在微波照射下、130℃攪拌2小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，過 濾。將濾液減壓濃縮後，將所得到之殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-碘-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(282mg)。
製造例3
氬環境下，將1-乙炔基-3,5-二甲氧基苯(3g)與乙腈(30mL)之混合物冰冷，添加硫醯氯(3.15mL)，於室溫攪拌4小時。進一步添加硫醯氯(449μL)，於室溫攪拌12小時。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉水，於室溫攪拌30分鐘。濾取所產生之固體，以乙酸乙酯洗淨後，減壓乾燥，得到2,4-二氯-3-乙炔基-1,5-二甲氧基苯(1.99g)。
製造例4
將1-乙炔基-3,5-二甲氧基苯(4g)與乙腈(80mL)之混合物冰冷，添加N-氟-N'-(氯甲基)三伸乙二胺雙(四氟硼酸)(19.4g)，慢慢地昇溫同時於室溫攪拌12小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥，並過濾。將濾液減壓濃縮後，將所得到之殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)、接著以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/己烷)純化，得到3-乙炔基-2,4-二氟-1,5-二甲氧基苯(798mg、後述製造例編號PEx.4-1)及1-乙炔基-2-氟-3,5-二甲氧基苯(375mg、後述製造例編號PEx.4-2)。
製造例5
氬環境下，將1-乙炔基-2-氟-3,5-二甲氧基苯(800mg)與乙腈(8mL)之混合物冰冷，添加硫醯氯(378μL)，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中添加乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到2-氯-3-乙炔基-4-氟-1,5-二甲氧基苯(787mg)。
製造例6
氬環境下，在室溫下，於2,6-二氟-3-甲氧基苄醛(500mg)、碳酸鉀(803mg)及甲醇(10mL)之混合物中添加二甲基(1-重氮-2-側氧基丙基)膦酸酯(523μL)，攪拌5小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到2-乙炔基-1,3-二氟-4-甲氧基苯(452mg)。
製造例7
氬環境下，於2-胺基-5-碘嘧啶(1g)、3-乙炔基-2,4-二氟-1,5-二甲氧基苯(897mg)、肆三苯基膦鈀(261mg)、碘化銅(43mg)及N,N-二甲基甲醯胺(20mL)之混合物中添加N,N-二異丙基乙基胺(1.55mL)，於80℃攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，於殘渣添加氯仿及水後，以矽藻土過濾去除不溶物。 將濾液以氯仿萃取後，將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕嘧啶-2-胺(1.07g)。
製造例8
氬環境下，於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕嘧啶-2-胺(400mg)、甲醇(4mL)及四氫呋喃(4mL)之混合物中添加10%鈀-碳(73mg)。於氫環境下，60℃攪拌8小時後，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕嘧啶-2-胺(402mg)。
製造例9
氬環境下，於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕嘧啶-2-胺(100mg)與乙腈(2mL)之混合物中添加氯化銅(II)(68mg)及亞硝酸n-戊酯(69μL)，於60℃攪拌4小時。於反應混合物中添加乙酸乙酯，濾除不溶物。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到2-氯-5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕嘧啶(20mg)。
製造例10
將(2-氯嘧啶-5-基)甲醇(120mg)、3,5-二甲氧基酚(186mg)、三丁基膦(297μL)及四氫呋喃(2.4mL)之混合物冰冷，添加1,1'-(偶氮二羰基)二哌啶(305mg)後，於室溫攪拌12小時。將不溶物濾除，將 濾液減壓濃縮。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到2-氯-5-〔(3,5-二甲氧基苯氧基)甲基〕嘧啶(119mg)。
製造例13
將2-氯-5-羥基嘧啶(278mg)與碳酸鉀(453mg)及N,N-二甲基甲醯胺(3mL)之混合物冰冷，添加3,5-二甲氧基苄基溴化物(541mg)後，於室溫攪拌7小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到2-氯-5-〔(3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(360mg)。
製造例14
於2-氯-5-〔(3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(4.17g)與N,N-二甲基甲醯胺(40mL)之混合物中添加N-氯琥珀醯亞胺(4.05g)，於室溫攪拌2小時、60℃攪拌2小時。於反應混合物中加水，濾取所產生之固體，以水洗淨後，減壓乾燥。將固體懸濁於乙酸乙酯(40mL)後，加熱至80℃。濾取固體後，減壓乾燥，得到2-氯-5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(3.99g)。
製造例15
將2-氯-5-羥基嘧啶(487mg)與1-(3,5-二甲氧基苯基)乙醇(680mg)、三丁基膦(1.37mL)及四氫呋喃(14mL)之混合物冰冷，添加1,1'-(偶氮二羰基)二哌啶(1.4g)後，於室溫攪拌12小時、50℃攪拌3小時。將 不溶物濾除，將濾液減壓濃縮。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到2-氯-5-〔1-(3,5-二甲氧基苯基)乙氧基〕嘧啶(415mg)。
製造例16
將3,5-二甲氧基安息香酸甲酯(1g)與乙腈(20mL)之混合物冰冷，添加N-氟-N'-(氯甲基)三伸乙二胺雙(四氟硼酸)(4.09g)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨後，添加無水硫酸鈉及鹼性二氧化矽凝膠，攪拌30分鐘後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，分別得到2,6-二氟-3,5-二甲氧基安息香酸甲酯(292mg：製造例16-1)及2-氟-3,5-二甲氧基安息香酸甲酯(232mg：製造例16-2)。
製造例17
將2,6-二氟-3,5-二甲氧基安息香酸甲酯(10g)與四氫呋喃(50mL)之混合物冰冷，添加氫化硼鋰(3.0M四氫呋喃溶液，43mL)後，於室溫攪拌65小時。將反應混合物再度冰冷，進一步添加氫化硼鋰(3.0M四氫呋喃溶液，14mL)，於室溫攪拌22小時。將反應混合物冰冷，慢慢添加至冰水(300mL)中。進一步慢慢添加濃鹽酸(25mL)，於室溫攪拌1小時。以甲苯/乙酸乙酯(1：1)萃取，將有機層以飽和碳酸氫鈉水及飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥，過濾。將濾液減壓濃縮，得到 (2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)甲醇(8.67g)。
製造例18
將(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)甲醇(1.71g)、三乙基胺(2.57mL)及四氫呋喃(34mL)之混合物冰冷，添加甲烷磺醯基 氯化物(716μL)後，攪拌1小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基 甲烷磺酸酯(2.32g)。
製造例19
於2-氯-5-羥基嘧啶(4.38g)、碳酸鉀(9.27g)及N,N-二甲基甲醯胺(79mL)之混合物中添加2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基 甲烷磺酸酯(7.89g)後，於60℃攪拌1小時。於反應混合物中加水，濾取所產生之固體，以水洗淨後，減壓乾燥，得到2-氯-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(8.53g)。
製造例20
將2,3,5,6-四氟吡啶(1.5g)與甲醇(15mL)之混合物冰冷，添加甲氧化鈉(4.03g)後，於室溫攪拌2小時、50℃攪拌整夜。於反應混合物中加水，以二乙基醚萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到3,5-二氟-2,6-二甲氧基吡啶(1.47g)。
製造例21
將二異丙基胺(745μL)與四氫呋喃(5mL)之混合物冷卻至-78℃，添加n-丁基鋰(1.6M己烷溶液，3.02mL)後，於0℃攪拌30分鐘。將反應混合物冷卻至-78℃，滴入3,5-二氟-2,6-二甲氧基吡啶(770mg)與四氫呋喃(5mL)之混合物，攪拌1小時。添加N,N-二甲基甲醯胺(440μL)後，昇溫至室溫，攪拌1小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到3,5-二氟-2,6-二甲氧基異菸鹼酸醛(406mg)。
製造例22
將3,5-二氟-2,6-二甲氧基異菸鹼酸醛(400mg)與甲醇(4mL)之混合物冰冷，添加氫化硼鈉(82mg)，攪拌1小時。於反應混合物中添加1M鹽酸，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液濃縮，得到(3,5-二氟-2,6-二甲氧基吡啶-4-基)甲醇(403mg)。
製造例23
氬環境下，於2-氯-5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(235mg)、tert-丁基4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-羧酸酯(306mg)、1,1'-聯萘-2,2'-二基雙(二苯基膦)(138mg)、碳酸銫(660mg)及二噁烷(10mL)之混合物中，於室溫添加乙酸鈀(30mg)，於100℃攪拌3小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃 取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到tert-丁基4-〔4-({5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-3-甲氧基苯基〕哌啶-1-羧酸酯(298mg)。
製造例24
於2-氟-5-硝基甲苯(500mg)、碳酸鉀(2.0g)及N,N-二甲基甲醯胺(15mL)之混合物中添加4-哌啶-4-基硫代嗎啉1,1-二氧化雙三氟乙酸鹽(2.16g)，於80℃攪拌20小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到4-〔1-(2-甲基-4-硝基苯基)哌啶-4-基〕硫代嗎啉1,1-二氧化物(870mg)。
製造例25
氬環境下，於4-〔1-(2-甲基-4-硝基苯基)哌啶-4-基〕硫代嗎啉1,1-二氧化物(1.5g)與乙酸(30mL)之混合物中添加10%鈀-碳(452mg)。氫環境下攪拌13小時後，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮後，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水。濾取析出之固體，以水洗淨後，減壓乾燥，得到4-〔4-(1,1-二氧化硫代嗎啉-4-基)哌啶-1-基〕-3-甲基苯胺(1.26g)。
製造例26
於1-氯-2-(二氟甲氧基)-4-硝基苯(920mg)、碳 酸鉀(1.7g)及N,N-二甲基甲醯胺(10mL)之混合物中添加1-甲基-4-哌啶-4-基哌嗪(1.13g)，於100℃攪拌整夜。將反應混合物減壓濃縮，於殘渣中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化，得到1-{1-〔2-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基〕哌啶-4-基}-4-甲基哌嗪(1.38g)。
製造例27
氬環境下，於1-{1-〔2-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基〕哌啶-4-基}-4-甲基哌嗪(1.38g)與乙醇(54mL)之混合物中添加10%鈀-碳(397mg)。氫環境下、攪拌1小時後，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮，得到3-(二氟甲氧基)-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯胺(1.25g)。
製造例28
將苄基 哌嗪-1-羧酸酯(10g)、2,2,6,6-四甲基哌啶-4-酮(7.05g)及二氯甲烷(100mL)之混合物冰冷，添加三乙醯氧基氫化硼鈉(11.5g)後，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到苄基4-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(7.18g)。
製造例29
氬環境下，於苄基4-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(7.18g)與乙醇(60mL)之混合物，添加10%鈀-碳(2.0g)。於氫環境下攪拌7小時後，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮，得到1-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)哌嗪(4.35g)。
製造例30
氬環境下，於2-氯-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶(202mg)、tert-丁基9-(4-胺基-2-甲氧基苯基)-3,9-二氮雜螺〔5,5〕十一烷-3-羧酸酯(311mg)、2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基(30mg)、碳酸鉀(134mg)及tert-丁醇(10mL)之混合物中，於室溫添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(19mg)，於100℃攪拌4小時。將不溶物濾除，以乙酸乙酯洗淨。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到tert-丁基4-〔4-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-甲氧基苯基〕-3,9-二氮雜螺〔5,5〕十一烷-3-羧酸酯(259mg)。
製造例31
於N-〔3-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺〔4,5〕癸-8-基)苯基〕-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(596mg)、乙酸(9mL)及水(9mL)之混合物中添加濃鹽酸(0.5mL)，於80℃攪拌7小時。將反應混合物冰冷，添加1M氫氧化鈉水溶液(155mL)及飽和碳酸氫鈉水後，濾取生成之固體。添加氯仿，以無水硫酸鈉乾燥 後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到1-〔3-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-4-酮(512mg)。
製造例32
將2-〔3-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇(116mg)、三乙基胺(84μL)及四氫呋喃(4mL)之混合物冰冷，添加甲烷磺醯基 氯化物(47μL)後，攪拌3小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到2-〔3-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙基 甲烷磺酸酯(129mg)。
製造例33
將4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶(250mg)、1-甲基哌啶-4-酮(220μL)及二氯甲烷(5mL)之混合物冰冷，添加三乙醯氧基氫化硼鈉(810mg)後，於室溫攪拌4小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化，得到1'-甲基-4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)-1,4'-聯哌啶(342mg)。
製造例34
於1-(2-氯-4-硝基苯基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(3.7g)、氯化銨(352mg)、乙醇(94mL)、四氫呋 喃(47mL)及水(47mL)之混合物中添加鐵粉(3.06g)，於70℃攪拌4小時。將不溶物濾除後，將濾液減壓濃縮。於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到3-氯-4-〔4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基〕苯胺(1.03g)。
製造例35
於(3R,5S)-1-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3,5，-二甲基哌嗪(3.0g)、N,N-二異丙基乙基胺(2.32mL)、二-tert-丁基 二碳酸酯(2.71g)及二噁烷(20mL)之混合物中添加4-二甲基胺基吡啶(69mg)，於80℃攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到tert-丁基(2R,6S)-4-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(1.73g)。
製造例36
於2-(2-溴乙氧基)-1-氯-4-硝基苯(3.0g)、碳酸銫(5.23g)、N-甲基吡咯啶酮(30mL)之混合物中添加1H-吡唑(874mg)，於60℃攪拌6小時。於反應混合物中加水，濾取生成的固體。將固體以水洗淨，減壓乾燥，得到1-〔2-(2-氯-5-硝基苯氧基)乙基〕-1H-吡唑(2.57g)。
製造例37
於1-〔2-(2-氯-5-硝基苯氧基)乙基〕-1H-吡唑(1.3g)、碳酸銫(1.0g)、N-甲基吡咯啶酮(8mL)之混合物中添加順-2,6-二甲基哌嗪(832mg)，於130℃攪拌整夜。於反應混合物中加水，濾取生成的固體。將固體以水洗淨，減壓乾燥，得到(3R,5S)-3,5-二甲基-1-{4-硝基-2-〔2-(1H-吡唑-1-基)乙氧基〕苯基}哌嗪(1.15g)。
製造例38
將2-氯-5-〔(3,5-二甲氧基苄基)氧基〕吡啶(500mg)與乙腈(10mL)之混合物冰冷，添加硫醯氯(297μL)，於室溫攪拌3日。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水。濾取所產生之固體，以水洗淨後，減壓乾燥，得到2-氯-5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕吡啶(596mg)。
製造例39
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺(3.6g)及甲醇(20mL)之混合物中添加4M氯化氫/二噁烷溶液(40mL)，於室溫攪拌6小時。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水。濾取所產生之固體，以二乙基醚洗淨後，減壓乾燥，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(2.9g)。
製造例40
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(4.0g)、碳酸鉀(4.6g)及N,N-二甲基甲醯胺(80mL)之混合物中添加乙基 溴乙酸酯(2.4mL)，於80℃攪拌3小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將所得到之殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到乙基〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙酸酯(4.2g)。
製造例41
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(50mg)、碳酸鉀(57mg)及N,N-二甲基甲醯胺(1mL)之混合物中添加〔(4R)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基〕甲基4-甲基苯磺酸酯(98μL)，於60℃攪拌1小時、110℃攪拌4日。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將所得到之殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-(1-{〔(4S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基〕甲基}-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(45mg)。
製造例111
於4-硝基-1H-吡唑(500mg)、tert-丁基(3-內)-3-〔(甲基磺醯基)氧基〕-8-氮雜雙環〔3,2,1〕辛烷-8- 羧酸酯(1.35g)及N-甲基吡咯啶酮(6mL)之混合物中添加碳酸銫(2.16g)，於100℃攪拌6小時。於反應混合物中加水，濾取所產生之固體，以水洗淨後，減壓乾燥，得到tert-丁基(3-外)-3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)-8-氮雜雙環〔3,2,1〕辛烷-8-羧酸酯(1.07g)。
製造例118
將4-硝基-1H-吡唑(3g)、奎寧-3-醇(4.05g)、三苯基膦(9.05g)及四氫呋喃(60mL)之混合物冰冷，添加偶氮二羧酸二異丙酯(6.84mL)後，於室溫攪拌整夜。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加1M鹽酸(50mL)。將水層以乙酸乙酯洗淨後，添加1M氫氧化鈉水溶液(60mL)，使成為鹼性。以氯仿萃取，將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯)純化，得到3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)奎寧(5.15g)。
製造例133
將tert-丁基(4-胺基-2-甲氧基苯基)〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕胺基甲酸酯(1.21g)與四氫呋喃(24mL)之混合物冰冷，添加氫化鋰鋁(629mg)後，加熱回流下攪拌1小時。於反應混合物中依序添加水(0.63mL)、1M氫氧化鈉水溶液(0.63mL)及水(1.89mL)，藉由矽藻土過濾來濾除不溶物後，將濾液以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以鹼性二氧 化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到2-甲氧基-N1-甲基-N1-〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕苯-1,4-二胺(922mg)。
製造例138
於2-氯-5-硝基嘧啶(798mg)、碳酸鉀(1.04g)及N,N-二甲基甲醯胺(16mL)之混合物中添加1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪(1.1g)，於室溫攪拌3小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到2-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕-5-硝基嘧啶(542mg)。
製造例143
於tert-丁基4-(2-胺基-1,3-噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸酯(1.13g)與乙酸乙酯(8mL)之混合物中添加4M氯化氫/乙酸乙酯溶液(8mL)，於室溫攪拌3小時。將溶劑減壓濃縮，得到5-(哌啶-4-基)-1,3-噻唑-2-胺 鹽酸鹽(877mg)。
製造例144
於5-(哌啶-4-基)-1,3-噻唑-2-胺 鹽酸鹽(519mg)、二氯甲烷(5mL)及甲醇(5mL)之混合物中，依序添加1H-苯并三唑-1-基甲醇(423mg)、乙酸鈉(388mg)及三乙醯氧基氫化硼鈉(1.0g)，於室溫攪拌2小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水及鹼性二氧 化矽凝膠後，將溶劑減壓濃縮。將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-(1-甲基哌啶-4-基)-1,3-噻唑-2-胺(411mg)。
製造例145
將5-硝基吡啶-2(1H)-酮(700mg)、(R)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-甲醇(661mg)、三苯基膦(1.97g)及四氫呋喃(20mL)之混合物冰冷，添加偶氮二羧酸二異丙酯(1.49mL)後，於室溫攪拌5小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到(R)-2-〔(2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基)甲氧基〕-5-硝基吡啶(541mg)。
製造例152
於(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-甲醇(661mg)與N,N-二甲基甲醯胺(23mL)之混合物中添加氫化鈉(218mg)，於室溫攪拌10分鐘。於反應混合物中添加2-氯-5-硝基吡啶(793mg)，於室溫攪拌2小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到(S)-2-〔(2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基)甲氧基〕-5-硝基吡啶(810mg)。
製造例162
於2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙基 甲烷磺酸酯(320mg)與N-甲基吡咯啶酮(6mL)之混合物中添加tert-丁基 哌嗪-1-羧酸酯(1.31g)，於80℃攪拌整夜，進一步於120℃攪拌整夜。於反應混合物中添加水與飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到tert-丁基4-{2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙基}哌嗪-1-羧酸酯(202mg)。
製造例175
將5-甲基-1H-吡唑-3-胺(522mg)與N,N-二甲基甲醯胺(10mL)之混合物冰冷，添加氫化鈉(473mg)後，攪拌30分鐘。於反應混合物中添加2-(2-溴乙氧基)四氫-2H-吡喃(893μL)，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中添加飽和氯化銨水溶液，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到5-甲基-1-〔2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基〕-1H-吡唑-3-胺(427mg：製造例175-1)及3-甲基-1-〔2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基〕-1H-吡唑-5-胺(199mg：製造例175-2)。
製造例176
於5-〔2-(苄基氧基)乙基〕-3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1-甲基-1H-吡唑(640mg)與乙醇(9.7mL)之混合物中，依序添加羥胺(1.37mL)及p-甲苯磺酸一水合物(1.95g)，於95℃攪拌整夜。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中加水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-〔2-(苄基氧基)乙基〕-1-甲基-1H-吡唑-3-胺(470mg)。
製造例183
於(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇(398mg)、3,4-二氫-2H-吡喃(459μL)及乙酸乙酯(8mL)之混合物中，添加p-甲苯磺酸一水合物(96mg)，於室溫攪拌1.5小時。進一步添加3,4-二氫-2H-吡喃(459μL)及p-甲苯磺酸一水合物(96mg)，於室溫攪拌1.5小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到1-甲基-3-硝基-5-〔(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)甲基〕-1H-吡唑(487mg)。
製造例186
將4-硝基-1H-吡唑(300mg)、2-苯基-1,3-二噁烷-5-醇(717mg)、三苯基膦(1.11g)及四氫呋喃(4.5mL)之混合物冰冷，添加偶氮二羧酸二異丙酯(842μL)後， 於室溫攪拌12小時。將反應混合物減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到4-硝基-1-(2-苯基-1,3-二噁烷-5-基)-1H-吡唑(121mg)。
製造例189
於5-硝基吡啶-2-甲醛(761mg)、2-(哌嗪-1-基)乙醇(1.23mL)、乙酸(570μL)及二氯甲烷(20mL)之混合物中添加三乙醯氧基氫化硼鈉(2.23g)，於室溫攪拌16小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿/2-丙醇萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到2-{4-〔(5-硝基吡啶-2-基)甲基〕哌嗪-1-基}乙醇(726mg)。
製造例191
於甲基5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-羧酸酯(871mg)、乙醇(8.7mL)及四氫呋喃(8.7mL)之混合物中，添加1M氫氧化鈉水溶液(3.45mL)，於60℃攪拌2小時。於反應混合物中添加1M鹽酸，濾取所產生之固體，以水洗淨後，減壓乾燥，得到5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-羧酸(846mg)。
製造例193
將5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-羧酸(300mg)與二噁烷(8.5mL)之混合物冰冷，添加1,1'-羰基二咪唑(99mg)後，於室溫攪拌2小時、於60℃攪拌2小時。進一步添加1,1'-羰基二咪唑(99mg)，於60℃攪拌2小時。進一步添加1,1'-羰基二咪唑(297mg)，於室溫攪拌1小時。將反應混合物冰冷，添加氫化硼鈉(230mg)後，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基〕甲醇(126mg)。
製造例201
於1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-甲醛(850mg)與四氫呋喃(50mL)之混合物中添加(三苯基正膦亞基)乙酸甲酯(3.66g)，於60℃攪拌3小時。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中加水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以氯仿洗淨，濾取固體。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，與先前得到的固體合併，得到甲基(E)-3-(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)丙烯酸酯(1.15g)。
製造例202
氬環境下，於甲基(E)-3-(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)丙烯酸酯(1.15g)與乙醇(50mL)之混合物中添加10%鈀-碳(580mg)。氫環境下，於1大氣壓攪拌12小時、於2.7大氣壓攪拌4小時後，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮，得到甲基3-(3-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)丙酸酯(955mg)。
製造例204
於2-〔(tert-丁氧基羰基)胺基〕-1,3-噻唑-5-羧酸(500mg)、N-〔3-(二乙基胺基)丙基〕-N'-乙基碳二醯亞胺 鹽酸鹽(589mg)、1H-苯并三唑-1-醇(415mg)及N,N-二甲基甲醯胺(10mL)之混合物中添加1-甲基哌嗪(451μL)，於室溫攪拌3日。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到tert-丁基{5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)羰基〕-1,3-噻唑-2-基}胺基甲酸酯(560mg)。
製造例205
將4-胺基吡啶-2(1H)-酮(400mg)與N-甲基吡咯啶酮(15mL)之混合物冰冷，添加氫化鈉(218mg)後，於室溫攪拌30分鐘。於反應混合物中依序添加(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基甲基p-甲苯磺酸酯(1.14g)及碘化鈉(109mg)，於室溫攪拌4小時。於反 應混合物中添加氫化鈉(218mg)後，於80℃攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和氯化銨水溶液後，添加食鹽使其飽和，以甲醇/氯仿萃取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇)純化，得到(R)-4-胺基-1-〔(2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基)甲基〕吡啶-2(1H)-酮(136mg)。
製造例209
將〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基〕甲醇(126mg)、三乙基胺(147μL)、二氯甲烷(6mL)及四氫呋喃(6mL)之混合物冰冷，添加甲烷磺醯基 氯化物(82μL)後，於室溫攪拌3小時。於反應混合物中添加N,N-二甲基甲醯胺(6mL)，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中加水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到N-〔3-(氯甲基)-1H-吡唑-5-基〕-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(109mg)。
製造例210
於tert-丁基{5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)羰基〕-1,3-噻唑-2-基}胺基甲酸酯(560mg)與乙酸乙酯(8mL)之混合物中，添加4M氯化氫/乙酸乙酯溶液(8mL)，於室溫攪拌3小時。將反應混合物減壓濃縮後，將殘渣以鹼性 二氧化矽凝膠管柱層析(甲醇/氯仿)純化，得到(2-胺基-1,3-噻唑-5-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(357mg)。
製造例211
於(5-硝基-1H-吡唑-3-基)甲醇(1.86g)、3,4-二氫-2H-吡喃(4.7mL)及乙腈(28mL)之混合物中添加三氟乙酸(40μL)，於70℃攪拌3小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到5-硝基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3-〔(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)甲基〕-1H-吡唑(3.98g)。
製造例214
將〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-基〕甲醇(200mg)與1,2-二氯乙烷(12mL)之混合物冰冷，添加二氧化錳(442mg)，於室溫攪拌30分鐘後，於90℃攪拌2小時。將不溶物濾除後，將濾液減壓濃縮，得到5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-甲醛(142mg)。
製造例229
將2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基安息香酸甲酯(682mg)與四氫呋喃(25mL)之混合物冰冷，添加氫化鋁鋰(104mg)後，於室溫攪拌3小時。於反應混合物中，冰冷下，添加二乙基醚以稀釋後，添加飽和硫酸鈉水溶液。將 不溶物濾除，將濾液減壓濃縮。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到(2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯基)甲醇(363mg)。
製造例232
氬環境下，於2-溴-5-硝基苯甲醚(3.15g)與tert-丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛-2-烯-8-羧酸酯(5.00g)與二噁烷(40mL)之混合物中，依序添加〔1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵〕鈀二氯化物二氯甲烷錯合物(554mg)、碳酸鉀(2.81g)，於80℃攪拌21小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到tert-丁基3-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮雜雙環〔3.2.1〕辛-2-烯-8-羧酸酯(2.78g)。
製造例252
將tert-丁基4,4-雙(乙醯氧基甲基)-1,4'-聯哌啶-1'-羧酸酯(712mg)與二氯甲烷(6mL)之混合物冰冷，添加三氟乙酸(3mL)後，於室溫攪拌3小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以二氯甲烷萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到1,4'-聯哌啶-4,4-二基雙(亞甲基)二乙酸酯(529mg)。
製造例255
將tert-丁基4,4-雙(羥基甲基)哌啶-1-羧酸酯(1.01g)、三乙基胺(861μL)及二氯甲烷(10mL)之混合物冰冷，添加乙酸酐(950μL)後，攪拌2小時。於反應混合物中加水，以二氯甲烷萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到tert-丁基4,4-雙(乙醯氧基甲基)哌啶-1-羧酸酯(1.38g)。
製造例295
將2-〔3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基〕乙醇(630mg)、苄基溴化物(376μL)及四氫呋喃(8mL)之混合物冰冷後，添加氫化鈉(173mg)，於室溫攪拌6小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到5-〔2-(苄基氧基)乙基〕-3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1-甲基-1H-吡唑(640mg)。
製造例296
將3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1-甲基-1H-吡唑(2g)與四氫呋喃(60mL)之混合物冷卻至-78℃後，添加n-丁基鋰(1.6M己烷溶液，8.56mL)，攪拌2小時。於反應混合物中添加環氧乙烷(1.1M四氫呋喃溶液，15.6mL)及三氟化硼四氫呋喃錯合物(1.51mL)，攪拌 30分鐘後，昇溫至室溫，攪拌6小時。於反應混合物中添加飽和氯化銨水溶液，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化，得到2-〔3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基〕乙醇(630mg)。
以與上述所示製造例之製造方法同樣的方式，製造後述表7~表62所示化合物。又，各製造例化合物之製造法、構造及物理化學數據係如表7~表62所示。
實施例1
氬環境下，於5-溴-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(104mg)、1-乙炔基-3,5-二甲氧基苯(37mg)、肆三苯基膦鈀(13mg)、碘化銅(4mg)及N,N-二甲基甲醯胺(2mL)之混合物中，添加三乙基胺(157μL)，於120℃攪拌30分鐘。進一步添加1-乙炔基-3,5-二甲氧基苯(146mg)與N,N-二甲基甲醯胺(1mL)之混合物，於120℃攪拌2小時後，將反應混合物以乙酸乙酯稀釋，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)、接著以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇)純化後，以乙酸乙酯固化，得到5-〔(3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(23mg)。
實施例2
氬環境下，於5-〔(3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(72mg)、甲醇(2mL)及四氫呋喃(2mL)之混合物中添加10%鈀-碳(25mg)。在氫環境下(3大氣壓)攪拌4小時後，以矽藻土過濾去除不溶物。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以二乙基醚固化，得到5-〔2-(3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(17mg)。
實施例3
氬環境下，於5-碘-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(100mg)、2,4-二氯-3-乙炔基-1,5-二甲氧基苯(55mg)、肆三苯基膦鈀(23mg)、碘化銅(2mg)及N,N-二甲基甲醯胺(2mL)之混合物中添加N,N-二異丙基乙基胺(67μL)，於100℃攪拌4小時。將反應混合物以乙酸乙酯稀釋，以矽藻土過濾去除不溶物。於濾液中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)、接著以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇)純化後，以乙酸乙酯固化，得到5- 〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(56mg)。
實施例4
於5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(92mg)與乙酸乙酯(6mL)之混合物中添加4M氯化氫/乙酸乙酯溶液(1mL)，於室溫攪拌4小時。濾取固體，減壓乾燥，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺3鹽酸鹽(101mg)。
實施例5
將5-〔2-(3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(131mg)與乙腈(1.3mL)之混合物冰冷，添加硫醯氯(41μL)，於室溫攪拌12小時。將反應混合物減壓濃縮後，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以二異丙醚洗淨，得到N-{2-氯-5-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}-5-〔2-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕嘧啶-2-胺(29mg)。
實施例6
氬環境下，將5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(164mg)、4-甲基苯磺醯基醯肼(2.63g)及1,2-二甲氧基乙烷(3mL)之混合物於110℃攪拌，添加乙酸鈉(1.16g)及水(1mL)之混合物。2小時後，添加4-甲基苯磺醯基醯肼(1.32g)後，進一步添加乙酸鈉(581mg)與水(1mL)之混合物，於110℃攪拌2小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇/濃氨水)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(114mg)。
實施例7
將5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙炔基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺(100mg)、四氫呋喃(5mL)及甲醇(5mL)之混合物，使用H-Cube(註冊商標)(10%鈀-碳、0.5mL/min、50℃、1大氣壓)進行反應。將反應混合物減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基) 苯基〕嘧啶-2-胺(29mg)。
實施例8
於乙基〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙酸酯(292mg)、四氫呋喃(6mL)及乙醇(6mL)之混合物中，於室溫添加1M氫氧化鈉水溶液(1.3mL)，攪拌5小時。使用1M鹽酸使反應混合物成為中性，濾取生成的固體。以水洗淨後，減壓乾燥，得到〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙酸(267mg)。
實施例9
氬環境下，於2-氯-5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕嘧啶(56mg)、1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺(48mg)、1,1'-聯萘-2,2'-二基雙(二苯基膦)(33mg)、碳酸銫(174mg)及二噁烷(2.2mL)之混合物中，於室溫添加乙酸鈀(8mg)，於100℃攪拌4小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-〔1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺(43mg)。
實施例10
於1-(溴甲基)-2,6-二氟苯(14mg)、2-氯-5-羥基嘧啶(9.1mg)及N,N-二甲基甲醯胺(1mL)之混合物中添加碳酸鉀(16mg)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中加水，以氯仿萃取，將有機層減壓濃縮。於殘渣中添加3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯胺(30mg)、碳酸銫(65mg)、乙酸鈀-X-Phos(Pd：P=1：2)ChemDose(註冊商標)錠及tert-丁醇(0.5mL)之混合物，於氮環境下，120℃攪拌整夜。於反應混合物中加水，以氯仿萃取，將有機層減壓濃縮。將殘渣以HPLC(0.1%甲酸水溶液/甲醇)純化，得到5-〔(2,6-二氟苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(17mg)。
實施例11
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-(1-{〔(4S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基〕甲基}-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(45mg)及四氫呋喃(2mL)之混合物中添加1M鹽酸(1mL)，於50℃攪拌3小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯固化，得到(2S)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺 基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇(27mg)。
實施例12
將tert-丁基4-〔4-({5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-3-甲氧基苯基〕哌啶-1-羧酸酯(298mg)與氯仿(6mL)之混合物冰冷，添加三氟乙酸(1mL)後，於室溫攪拌4小時。將反應混合物冰冷，添加1M氫氧化鈉水溶液(10mL)及飽和碳酸氫鈉水，使成為鹼性，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到粗生成物(273mg)。進一步將粗生成物(60mg)以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基〕嘧啶-2-胺(23mg)。
實施例13
於5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基〕嘧啶-2-胺(63mg)、二氯甲烷(2mL)及甲醇(1mL)之混合物中添加1H-苯并三唑-1-基甲醇(20mg)，於室溫攪拌1小時後，添加三乙醯氧基氫化硼鈉(51mg)，於室溫攪拌2小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃 氨水)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基〕嘧啶-2-胺(28mg)。
實施例14
於5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺(200mg)、乙醇(3mL)及N,N-二甲基甲醯胺(3mL)之混合物中添加2,2-二甲基環氧乙烷(112μL)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯)純化後，以乙酸乙酯固化，得到1-{4-〔4-({5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕哌啶-1-基}-2-甲基丙烷-2-醇(93mg)。
實施例15
將5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺(150mg)、三乙基胺(131μL)及二氯甲烷(4mL)之混合物冰冷，添加環丙烷羰基 氯化物(29μL)後，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾 液減壓濃縮，將殘渣以乙酸乙酯固化，得到環丙基{4-〔4-({5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕哌啶-1-基}甲酮(159mg)。
實施例16
於5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺(150mg)、碳酸鉀(130mg)及N,N-二甲基甲醯胺(4mL)之混合物中，添加2-溴乙基 甲基 醚(32μL)後，於室溫攪拌整夜、於60℃攪拌3小時。進一步添加2-溴乙基 甲基 醚(12μL)，於60℃攪拌4小時。於反應混合物中添加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化後，以乙酸乙酯固化，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-〔1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基〕-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-胺(41mg)。
實施例17
於乙基1-甲基-5-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-羧酸酯(663mg)、乙醇(6.6mL)及四氫呋喃(6.6mL)之混合物中添加1M氫氧化鈉水溶液(3.2mL)，於室溫攪拌4小時。於反應混合物中添加1M鹽酸(3.2mL)，濾取所產生之固體，以 水洗淨後，減壓乾燥，得到1-甲基-5-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-羧酸(464mg)。
實施例18
於1-甲基-5-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-羧酸(100mg)、1-甲基哌嗪(83μL)、1H-苯并三唑-1-醇(68mg)及N,N-二甲基甲醯胺(2mL)之混合物中，添加N-〔3-(二乙基胺基)丙基〕-N'-乙基碳二醯亞胺 鹽酸鹽(97mg)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化，得到(4-甲基哌嗪-1-基)〔1-甲基-5-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-基〕甲酮(79mg)。
實施例19
將tert-丁基4-〔4-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-甲氧基苯基〕-3,9-二氮雜螺〔5,5〕十一烷-3-羧酸酯(232mg)與二氯甲烷(3mL)之混合物冰冷，添加三氟乙酸(0.5mL)後，於室溫攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加乙酸乙酯、飽和碳酸氫鈉水，濾取生成的固體。以乙酸乙酯洗淨 後，減壓乾燥，得到N-〔4-(3,9-二氮雜螺〔5,5〕十一烷-3-基)-3-甲氧基苯基〕-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(167mg)。
實施例20
於2-〔3-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙基 甲烷磺酸酯(160mg)與N-甲基吡咯啶酮(6mL)之混合物中，添加1-甲基哌嗪(382μL)，於80℃攪拌2小時。於反應混合物中添加水及飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到N-{1-〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕-1H-吡唑-3-基}-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(64mg)。
實施例21
將N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(100mg)與氯仿(4mL)之混合物冰冷，添加m-氯過安息香酸(43mg)，於4~10℃攪拌3小時、室溫攪拌2小時。於反應混合物中添加硫代硫酸鈉水溶液，於室溫攪拌1小時後、以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧 化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基-4-氧化哌嗪-1-基)苯基〕-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(16mg)。
實施例22
氬環境下，於2-氯-5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕吡啶(100mg)、3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯胺(87mg)、2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基(27mg)、tert-丁氧化鈉(41mg)及N-甲基吡咯啶酮(3mL)之混合物中，添加乙酸鈀(6.4mg)，微波照射下、於160℃攪拌2小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}吡啶-2-胺(27mg)。
實施例23
將5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(200mg)、碳酸銫(215mg)、(2S)-2-甲基環氧乙烷(128mg)及N-甲基吡咯啶酮(4mL)之混合物，在微波照射下，130℃攪拌 30分鐘。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚洗淨，得到(2S)-1-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-2-醇(171mg)。
實施例24
於〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙酸(50mg)、氯化銨(25mg)、三乙基胺(66μL)、1H-苯并三唑-1-醇(32mg)及N,N-二甲基甲醯胺(1mL)之混合物中，添加N-〔3-(二乙基胺基)丙基〕-N'-乙基碳二醯亞胺 鹽酸鹽(45mg)，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層減壓濃縮，將殘渣以二異丙醚固化，得到2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醯胺(48mg)。
實施例64
於5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基〕嘧啶-2-胺(62mg)、丙酮(118μL)及二氯甲烷(3mL)之混合物中，添加三乙醯 氧基氫化硼鈉(51mg)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4-(1-異丙基哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基〕嘧啶-2-胺(14mg)。
實施例106
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{4-(哌嗪-1-基)-3-〔2-(1H-吡唑-1-基)乙氧基〕苯基}嘧啶-2-胺(229mg)、甲醛液(37%,164μL)、乙酸(231μL)及二氯甲烷(6mL)之混合物中添加三乙醯氧基氫化硼鈉(257mg)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-〔2-(1H-吡唑-1-基)乙氧基〕苯基}嘧啶-2-胺(72mg)。
實施例120
於1-〔3-({5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2- 基}胺基)苯基〕哌啶-4-酮(209mg)、1-甲基哌嗪(103μL)及二氯甲烷(4mL)之混合物中，添加三乙醯氧基氫化硼鈉(298mg)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇/濃氨水)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到N-{3-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}-5-〔(2,3,5,6-四氟苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(98mg)。
實施例161
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4-(哌啶-4-基)苯基〕嘧啶-2-胺(52mg)、乙醇酸(26mg)、1H-苯并三唑-1-醇(31mg)及N,N-二甲基甲醯胺(1mL)之混合物中添加N-〔3-(二乙基胺基)丙基〕-N'-乙基碳二醯亞胺 鹽酸鹽(44mg)，於室溫攪拌2日。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到1-{4-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-1-基}-2-羥基乙酮(10mg)。
實施例162
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(123mg)與乙醇(3ml)之混合物中，添加富馬酸(26mg)後，加熱回流。於反應混合物中加水，於室溫攪拌整夜後、濾取生成的固體。以乙醇洗淨後，減壓乾燥，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺半富馬酸鹽(82mg)。
實施例166
於tert-丁基4-〔4-({5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕哌啶-1-羧酸酯(276mg)與乙酸乙酯(2mL)之混合物中，添加4M氯化氫/乙酸乙酯溶液(2mL)，於室溫攪拌3小時。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯/二異丙醚固化，得到5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺(119mg)。
實施例190
於tert-丁基{2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙基}胺基甲酸酯(101mg)與乙酸乙酯(2mL)之混合物中，添加4M氯化氫/乙酸乙酯溶液(2mL)，於室溫攪拌3小時。濾取生成的固體後，減壓乾燥，得到N-〔1-(2-胺基乙基)-1H-吡唑-4-基〕-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺3鹽酸鹽(100mg)。
實施例212
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-〔3-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基〕-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-胺(1.6g)、四氫呋喃(6.9mL)及水(3.4mL)之混合物中，添加乙酸(13.8mL)，於70℃攪拌2日。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣溶解於甲醇(30mL)。添加碳酸鉀(656mg)，於60℃攪拌5小時。於反應混合物中加水，以氯仿萃取。將有機層以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，得到3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1-醇(510mg)。
實施例213
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{6- 〔(2-苯基-1,3-二噁烷-5-基)氧基〕吡啶-3-基}嘧啶-2-胺(335mg)與乙酸(10mL)之混合物中添加水(2mL)，於60℃攪拌16小時。將溶劑減壓濃縮，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水後，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯固化，得到2-{〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)吡啶-2-基〕氧基}丙烷-1,3-二醇(92mg)。
實施例214
於5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{6-〔2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙氧基〕吡啶-3-基}嘧啶-2-胺(1.49g)與甲醇(5mL)之混合物中，添加4M氯化氫/二噁烷溶液(5mL)，於室溫攪拌2小時。將反應混合物減壓濃縮後，於殘渣中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以乙酸乙酯固化後，濾取固體，得到2-{〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)吡啶-2-基〕氧基}乙醇(452mg)。進一步將濾液以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到生成物(701mg)。
實施例217
於1-〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)吡啶-2-基〕哌啶-4-酮(256mg)、2-胺基乙醇(131μL)、乙酸(200μL)及二氯甲烷(9.3mL)之混合物中添加三乙醯氧基氫化硼鈉(243mg)，於室溫攪拌整夜。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿/2-丙醇萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙酸乙酯固化，得到2-({1-〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)吡啶-2-基〕哌啶-4-基}胺基)乙醇(137mg)。
實施例239
將N-{5-〔2-(苄基氧基)乙基〕-1-甲基-1H-吡唑-3-基}-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(283mg)與二氯甲烷(47mL)之混合物冷卻至-78℃，添加三溴化硼(1.0M二氯甲烷溶液、830μL)後，於-78℃攪拌1小時、於0℃攪拌1小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到2-〔3-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基〕乙醇(38mg)。
實施例246
將5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸(320mg)與二噁烷(6mL)之混合物冰冷，添加1,1'-羰基二咪唑(616mg)後，於室溫攪拌2小時。於反應混合物中添加氫化硼鈉(287mg)，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中添加水與氯仿，將不溶物以矽藻土過濾去除後，以氯仿萃取濾液。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(己烷/乙酸乙酯)純化，得到〔5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基〕甲醇(125mg)。
實施例253
於5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-(2-羥基乙基)吡啶-2(1H)-酮(90mg)、三乙基胺(50μL)及二氯甲烷(3mL)之混合物中添加甲烷磺醯基 氯化物(20μL)，於室溫攪拌1小時。於反應混合物中添加1-甲基哌嗪(50μL)及N,N-二甲基甲醯胺(3mL)後，於50℃攪拌20小時。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/氯仿)純化後，以二乙醚固化，得到5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧 基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1-〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕吡啶-2(1H)-酮(28mg)。
實施例254
氬環境下，於2-氯-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(270mg)、1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-咪唑-4-胺(231mg)、1,1'-聯萘-2,2'-二基雙(二苯基膦)(80mg)、碳酸銫(556mg)及二噁烷(5.4mL)之混合物中，添加乙酸鈀(19mg)，於微波照射下、150℃攪拌30分鐘。於反應混合物中加水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙醇/二乙醚固化，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-咪唑-4-基〕嘧啶-2-胺(241mg)。
實施例278
於氬環境下、2-氯-5-〔(2-氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(200mg)、2-(4-胺基-1H-吡唑-1-基)乙醇(170mg)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽(39mg)、碳酸銫(655mg)及二噁烷(4mL)之混合物中，添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(31mg)，於80℃攪拌整夜。於反應混合物中加水，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾 液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇)純化後，以乙醇固化，得到2-〔4-({5-〔(2-氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇(58mg)。
實施例282
於5-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-3-甲醛(100mg)、嗎啉(67μL)及N,N-二甲基甲醯胺(2mL)之混合物中，添加三乙醯氧基氫化硼鈉(243mg)，於室溫攪拌12小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水，以氯仿萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以鹼性二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)及二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化後，以乙醇/二異丙醚固化，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔3-(嗎啉-4-基甲基)-1H-吡唑-5-基〕嘧啶-2-胺(42mg)。
實施例286
氬環境下，於2-氯-5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(159mg)、3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺(100mg)及tert-丁醇(5mL)之混合物中，添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(13mg)、2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基(20mg)及碳酸鉀 (88mg)，於100℃攪拌8小時。將不溶物濾除，以乙酸乙酯洗淨後，將濾液減壓濃縮。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基〕嘧啶-2-胺(35mg)。
實施例302
於2-{4-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌嗪-1-基}乙基 甲烷磺酸酯(100mg)與甲醇(3mL)之混合物中，添加甲氧化鈉(25%甲醇溶液、3mL)，於微波照射下、90℃攪拌15分鐘。將反應混合物減壓濃縮，於殘渣中加水後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{4-〔4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺(46mg)。
實施例315
於{1'-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-甲氧基苯基〕-1,4'-聯哌啶-4,4-二基}雙(亞甲基)二乙酸酯(46mg)與甲醇(3mL)之混合物中，添加甲氧化鈉(25%甲醇溶液、0.2mL)，於室溫攪拌14小時。將反應混合物減壓濃縮，將殘渣以二 氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到{1'-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-甲氧基苯基〕-1,4'-聯哌啶-4,4-二基}二甲醇(34mg)。
實施例336
將乙基4-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-氟苯基〕丁酸酯(150mg)與四氫呋喃(3mL)之混合物冰冷，添加氫化鋁鋰(11mg)後，於室溫攪拌3小時。於冰冷下，在反應混合物中添加二乙醚而稀釋後，添加飽和硫酸鈉水溶液。將不溶物濾除，將濾液減壓濃縮。將殘渣以二氧化矽凝膠管柱層析(氯仿/甲醇)純化，得到4-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-氟苯基〕丁烷-1-醇(70mg)。
實施例349
將乙基4-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-氟苯基〕丁酸酯(150mg)與四氫呋喃(3mL)之混合物冰冷，添加甲基鎂溴化物(1.0M四氫呋喃溶液，1.2mL)後，攪拌3小時。於反應混合物中添加飽和氯化銨水溶液後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾。將濾液減壓濃縮，將殘渣以二氧化矽凝膠管柱 層析(氯仿/甲醇)純化，得到5-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-2-氟苯氧基〕-2-甲基戊烷-2-醇(104mg)。
實施例356
氮環境下，於2-(4-胺基苯氧基)-2-甲基丙酸(14.6mg)、碳酸銫(49mg)、2-氯-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(15.8mg)及tert-丁醇(0.5mL)之混合物中，添加乙酸鈀(II)-2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基(Pd：P 1：2)ChemDose(註冊商標)錠，於120℃攪拌整夜。於反應混合物中加水，以氯仿(2mL)萃取後，將溶劑減壓濃縮。將所得之殘渣以HPLC(0.1%甲酸水溶液/甲醇)純化，得到2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯氧基〕-2-甲基丙酸(0.7mg)。
實施例375
氮環境下，於4-胺基-1-(1-tert-丁氧基羰基-氮雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑(17.9mg)、碳酸銫(49mg)、2-氯-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶(15.8mg)、tert-丁醇(0.34mL)及N,N-二甲基甲醯胺(0.16mL)之混合物中，添加乙酸鈀(II)-2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基(Pd：P 1：2)ChemDose(註冊商標)錠，於120℃攪拌整夜。於反應混 合物中加水，以氯仿(2mL)萃取後，將溶劑減壓濃縮。於所得之殘渣中添加乙醇(1mL)及4M氯化氫/乙酸乙酯溶液(0.5mL)，於室溫攪拌整夜，將溶劑減壓濃縮。將所得之殘渣以HPLC(0.1%甲酸水溶液/甲醇)純化，得到N-〔1-(氮雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基〕-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺(1.7mg)。
以與上述所示實施例之製造方法同樣的方式，製造後述表63~表137所示化合物。又，各實施例化合物之構造如表63~表137所示、各實施例化合物之製造法及物理化學數據如表138~表156所示。
〔產業上之可利用性〕
本發明之式(I)化合物或其鹽，具有FGFR1、2及/或3抑制作用、特別是變異FGFR3抑制作用，可使用作為FGFR1、2及/或3所相關之各種癌，例如肺癌或激素療法抗性之乳癌、胃癌、三重陰性乳癌、子宮體癌及膀胱癌等之治療劑，特別是作為變異FGFR3陽性膀胱癌之治療劑。
【序列表】
以下序列表之數字標題<223>中，記載有「Artificial Sequence」之說明。具體而言，序列表之序列編號7、8、17、20及21所表示之各鹼基序列，係人工合成之引子序列。序列表之序列編號24所表示之鹼基序列，係人工合成之FLAG標籤的序列。
<110> Astellas Pharma Inc. Kotobuki Pharmaceutical Co.,Ltd.
<120> Nitrogen-containing Aromatic Heterocyclic Compound
<130> FA1535-12129
<150> JP 2012-42065
<151> 2012-02-28
<160> 24
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
<210> 7
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Description of Artificial Sequence：an artificially synthesized primer sequence
<400> 7
<210> 8
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Description of Artificial Sequence：an artificially synthesized primer sequence
<400> 8
<210> 9
<211> 2856
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2856)
<400> 9
<210> 10
<211> 951
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
<210> 11
<211> 2961
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2961)
<400> 11
<210> 12
<211> 986
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
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<211> 3003
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(3003)
<400> 13
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<211> 1000
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
<210> 15
<211> 4467
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(4467)
<400> 15
<210> 16
<211> 1488
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 16
<210> 17
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Description of Artificial Sequence：an artificially synthesized primer sequence
<400> 17
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 18
<210> 19
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 19
<210> 20
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Description of Artificial Sequence：an artificially synthesized primer sequence
<400> 20
<210> 21
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Description of Artificial Sequence：an artificially synthesized primer sequence
<400> 21
<210> 22
<211> 3765
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(3765)
<400> 22
<210> 23
<211> 1254
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
<210> 24
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Description of Artificial Sequence：an artificially synthesized FLAG tag sequence
<400> 24

Claims (19)

  1. 一種式(I)之化合物或其鹽， (式中，X為N，Y為CH，L1為伸乙基或-亞甲基-O-，Z為CH，R1係相同或互異地為可經鹵素取代之C1-4烷基、-O-(可經鹵素取代之C1-4烷基)、鹵素、氰基或-N(C1-4烷基)2，p為2至4之整數，環W為可經取代之芳香族碳環、可經取代之芳香族雜環、或可經取代之非芳香族雜環，Q為-L2-R2或R3，L2為可經取代之芳香族雜環或可經取代之非芳香族雜環，R2為可經C1-4烷基取代之非芳香族雜環基、可經取代之環烷基、可經由-OH及-O-C1-4烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基、-C(O)-R0、-C(O)- 可經取代之環烷基、-NH-R0、-N(C1-4烷基)-R0、-L3-可經取代之非芳香族雜環基或H，R0為可經-OH取代之C1-4烷基，R3為(1)可經由：-C(O)OH、-OH、-O-R0、可經1個或2個R0取代之胺基、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、可經取代之芳香族雜環基、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基、(2)-O-(可經由：-C(O)OH、-OH、-O-R0、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基)、(3)-NH-(可經由：-OH、可經C1-4烷基取代之非芳香族雜環基、及可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基)、(4)-N(C1-4烷基)-(可經由：-OH、可經C1-4烷基取代之非芳香族雜環基、及可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基)、(5)-C(O)OH、(6)-C(O)-可經取代之非芳香族雜環基、(7)-O-(可經C1-4烷基取代之非芳香族雜環基)、或 (8)可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基；以及L3為鍵結、-NH-、-N(C1-4烷基)-或C1-4伸烷基)。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其中R1係相同或互異地為-O-C1-4烷基或鹵素，p為2或4，環W為可經取代之芳香族碳環或可經取代之芳香族雜環。
  3. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其中p為4，環W為可經取代之苯環或可經取代之吡唑。
  4. 如申請專利範圍第2或3項之化合物或其鹽，其中Q為-L2-R2，L2為可經取代之非芳香族雜環，R2為可經由-OH及-O-C1-4烷基所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基、-NH-(可經-OH取代之C1-4烷基)、可經取代之非芳香族雜環基、-C1-4伸烷基-(可經取代之非芳香族雜環基)或H。
  5. 如申請專利範圍第4項之化合物或其鹽，其中p為4，L2為可經1個以上之甲基取代之哌嗪、可經1個以上之甲基取代之哌啶或3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一烷，R2為可經甲基取代之哌嗪、可經甲基取代之哌啶、2-羥基乙基胺基或H。
  6. 如申請專利範圍第5項之化合物或其鹽，其中R1係相同或互異地為-O-甲基或F，L1為-亞甲基-O-，環W為可經-O-甲基取代之苯環，L2為哌啶或4-甲基哌嗪，R2為4-甲基哌嗪、2-羥基乙基胺基或H。
  7. 如申請專利範圍第2或3項之化合物或其鹽，其中 環W為可經取代之吡唑，Q為R3，R3為可經由-C(O)OH、可經1個或2個R0取代之胺基甲醯基、-OH、可經取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之基取代之C1-4烷基。
  8. 如申請專利範圍第7項之化合物或其鹽，其中p為4，R3為可經由-OH、可經C1-4烷基取代之非芳香族雜環基及-C(O)-(可經-OH取代之非芳香族雜環基)所構成群組中選擇之1個以上之取代基取代之C1-4烷基。
  9. 如申請專利範圍第8項之化合物或其鹽，其中R1係相同或互異地為-O-甲基或F，L1為-亞甲基-O-，環W為可經甲基取代之吡唑，R3為2-羥基乙基、2,3-二羥基丙基或4-甲基哌嗪-1-基甲基。
  10. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其係由以下所構成群組中選擇：5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、(2S)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔2-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)乙基〕-N-{3- 氟-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基〕嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{4-〔(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基〕-3-甲氧基苯基}嘧啶-2-胺、N-〔4-(3,9-二氮雜螺〔5.5〕十一碳-3-基)-3-甲氧基苯基〕-5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕 嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-〔2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基〕-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-胺、2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕-1-(3-羥基氮雜環丁烷-1-基)乙酮、(2R)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇、2-({1-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-4-基}胺基)乙醇、5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-甲基-5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)甲基〕-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺、及5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺。
  11. 如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽，其係5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{3-甲氧基-4-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基〕苯基}嘧啶-2-胺或其鹽。
  12. 如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽，其係2-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕乙醇或其鹽。
  13. 如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽，其係(2R)-3-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)-1H-吡唑-1-基〕丙烷-1,2-二醇或其鹽。
  14. 如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽，其係2-({1-〔4-({5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕嘧啶-2-基}胺基)苯基〕哌啶-4-基}胺基)乙醇或其鹽。
  15. 如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽，其係5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-{1-甲基-5-〔(4-甲基哌嗪-1-基)甲基〕-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺或其鹽。
  16. 如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽，其係5-〔(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基〕-N-〔4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基〕嘧啶-2-胺或其鹽。
  17. 一種醫藥組成物，其係含有如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽、及製藥學上容許之賦形劑。
  18. 如申請專利範圍第17項之醫藥組成物，其係變異FGFR3陽性癌之治療用醫藥組成物。
  19. 一種如申請專利範圍第10項之化合物或其鹽之使用，其係用於製造變異FGFR3陽性癌之治療用醫藥組成物。
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