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KR102032007B1 - 질소 함유 방향족 헤테로환 화합물 - Google Patents

질소 함유 방향족 헤테로환 화합물

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KR102032007B1
KR102032007B1 KR1020147024294A KR20147024294A KR102032007B1 KR 102032007 B1 KR102032007 B1 KR 102032007B1 KR 1020147024294 A KR1020147024294 A KR 1020147024294A KR 20147024294 A KR20147024294 A KR 20147024294A KR 102032007 B1 KR102032007 B1 KR 102032007B1
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KR
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pyrimidin
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dimethoxybenzyl
leu
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미노루 가메다
이쿠미 구리와키
가즈히코 이이쿠보
히로유키 히사미치
유이치로 가와모토
히로유키 모리토모
도모유키 스즈키
다카시 후타미
아츠시 스즈키
가즈히사 츠노야마
마코토 아사우미
히로시 도미야마
아츠시 노다
요시노리 이와이
가즈오 도쿠자키
하루키 오카다
고조 미야사카
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아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤
고토부키 세이야쿠 가부시키가이샤
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Publication date
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Abstract

본 발명은 방광암의 예방 및/또는 치료제로서 유용한 화합물을 제공한다. 본 발명자들은, FGFR 저해 작용을 갖는 화합물에 대하여 검토한 바, 본 발명의 질소 함유 방향족 헤테로환 화합물이 FGFR1, 2 및/또는 3 저해 작용, 특히 변이 FGFR3 저해 작용을 갖는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다. 본 발명의 질소 함유 방향족 헤테로환 화합물은 FGFR1, 2 및/또는 3이 관여하는 각종 암, 예를 들어 폐암이나 호르몬 요법 저항성의 유방암, 위암, 삼중 음성 유방암, 자궁체암, 방광암 및 교모세포종 등의 치료제로서, 특히 변이 FGFR3 양성의 방광암의 예방 및/또는 치료제로서 사용할 수 있다.

Description

질소 함유 방향족 헤테로환 화합물{NITROGEN-CONTAINING AROMATIC HETEROCYCLIC COMPOUND}
의약 조성물, 특히 변이 FGFR3 양성 방광암 치료용 의약 조성물의 유효 성분으로서 유용한 화합물에 관한 것이다.
섬유 아세포 증식 인자(FGF)와 그의 수용체인 섬유 아세포 증식 인자 수용체(FGFR)에 의한 시그널 경로는, 발생의 진전에 있어서 조기 배(胚) 형성부터 다양한 기관 형성까지 가장 중요한 기능을 갖는 시그널 경로 중 하나이다. FGF 리간드에는 18종류의 유전자가, FGFR에는 4종류(FGFR1 내지 4)의 유전자가 존재하고, 다양한 타입의 세포에서 발현하고 있으며, 세포 증식, 분화, 생존에 관여한다. 최근, 다양한 암 종류의 발병에 있어서의 FGF 시그널의 중요성이 보고되어 있으며, FGF 또는 FGFR 특이적인 약제의 개발이 진행되고 있다(Nature Reviews Cancer 2010; 10, 116-129, J. Med. Chem. 2011; 54, 7066-7083, AACR 2011, No.1643 AstraZeneca).
FGFR1에 대해서는, 폐암(특히 편평 상피암) 및 호르몬 요법 저항성의 유방암에 있어서 FGFR1 유전자의 증폭이 보고되어 있으며, 이들의 세포주에서는 FGFR1에 의존한 세포 증식을 나타낸다는 것도 보고되어 있다(Sci. Transl. Med. 2010; 2(62): 62ra93, Breast Cancer Res. 2007; 9(2): R23, Cancer Res. 2010, 70(5), 2085-2094).
FGFR2에 대해서는, 위암 및 삼중 음성 유방암에 있어서의 유전자 증폭, 자궁체암에 있어서는 활성화 변이가 보고되어 있으며(Laboratory Investigation 1998, 78(9); 1143-1153, Virchows Arch, 1997, 431; 383-389, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 1993, 119, 265-272, AACR 2011, No.1643 AstraZeneca, Oncogene 2010; 29, 2013-2023), 이들 암 세포에 있어서도 FGFR2에 의존한 증식이 관찰되고 있다.
또한, FGFR3은, 방광암에 있어서 약 50％의 증례에서 활성화 유전자 변이를 나타내고 있다. 방광암은 비침윤성, 침윤성 및 전이성의 크게 3개로 분류된다. 비침윤성 방광암의 5년 생존율은 70％ 이상으로 높지만 고빈도로 재발한다는 것, 일부 침윤성으로 진행된다는 것이, 한편, 침윤성 또는 전이성 방광암은 5년 생존율이 50％ 이하로 낮다는 것이 각각 문제가 되고 있다. FGFR3 변이의 비침윤성 방광암의 현행 요법으로서, 경요도적 방광 종양 절제술(TUR-BT) 및 수술 후 BCG 요법 또는 화학 요법제의 방광 내 주입이지만, 재발 예방 효과는 여전히 불충분하며 혈뇨, 방광 자극 증상 등의 부작용이 문제가 되고 있다. 한편, 침윤 또는 전이성 방광암은, 방광 전체 적출 및 화학 요법제의 전신 투여가 주로 행해지고 있지만 유효성이나 부작용에 문제가 있다. 방광암의 특징으로서 방광 조직으로부터 일부 요(尿) 중으로 암 세포가 떨어져 나가는 것이 알려져 있으며, 방광암의 진단으로서 요세포진이 행해지고 있다. 최근, 이 요 중의 침전물을 사용하여 FGFR3 변이를 검출할 수 있다는 것이 보고되었다(Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007 Nov 3; 362(4): 865-71). 이 FGFR3의 변이의 유무로 FGFR3 변이 양성 방광암 환자의 선택이 가능하며, FGFR3 선택적 조해제의 창출이 요망되고 있다.
또한, FGFR 유전자와 TACC(Transforming Acidic Coiled-coil) 유전자의 융합 유전자(FGFR3-TACC3 및 FGFR1-TACC1)가 일부의 교모세포종 환자의 종양에서 발현하고 있는 것이 보고되어 있다(Science, 2012 Sep 7; 337(6099): 1231-5). 이 보고에 따르면, FGFR3-TACC3 및 FGFR1-TACC1을 성상 세포(astrocyte)에 강제 발현시키면 형질 전환되기 때문에, 이들 융합 유전자는 암화능을 갖고, FGFR3-TACC3은 분열기의 방추체극에 국재하여, 키나아제 활성에 의존한 염색체 이수성을 유도하는 것이 나타났다. 또한, FGFR3-TACC3 발현 세포에 FGFR 조해제를 처치하면 염색체 이수성이 억제되어, 이 세포의 증식이 억제되었다. 따라서, FGFR-TACC 융합 유전자를 갖는 교모세포종 환자의 치료에 FGFR 조해제가 유효한 가능성이 시사되어 있다.
또한, 인간 방광암 세포주 RT112, RT4, LUCC2에 FGFR3-TACC3 융합 유전자가 발현하고 있는 것, 마찬가지로 인간 방광암 세포주 SW780에 FGFR3-BAIAP2L1 융합 유전자가 발현하고 있는 것이 보고되어 있다(Hum Mol Genet., 2013 Feb 15, 22(4), 795-803). 이 보고에 따르면, 이들 융합 유전자를 NIH3T3 세포에 도입한 결과, 부착 비의존성의 증식 항진 작용이 확인된다. 또한, 이들 FGFR3 융합 유전자를 발현하는 상기 방광암 세포주의 증식은 FGFR 조해제로 저해된다는 점에서, 본 융합 유전자의 존재 검출이 FGFR 조해제에 의한 치료에 유효한 환자의 선택에 유용한 가능성이 있다.
하기 화학식 (A)의 화합물은 각종 키나아제 저해를 나타내고, 암 및 심근경색 등의 혈관 장해 치료제로서 유용한 것이 보고되어 있다(특허문헌 1). 당해 문헌의 표 2에는 몇 가지의 화합물의 Yes, VEGFR, EphB4, PDGFRβ 및 FGFR1에 대한 키나아제 저해의 시험 결과가 개시되어 있으며, FGFR1 저해 활성의 IC50값은 1000nM보다 크고, 다른 키나아제 활성 저해에 비해서도 약한 것이 개시되어 있다. 또한, 당해 문헌에는 후술하는 본원 발명의 화학식 (I)의 화합물의 구체적인 개시는 없다.
(식 중, A는 각각, CH, N 등이고, B는 각각 CH 등이고, A1은 O, CR2 등이고, R0은 H 등이고, A2는 NR, O 등이고, L1은 결합, O 등이고, L2는 결합, C1-C6알킬 등이고, R1은 3 내지 6원 복소환 등이고, Re, Rf는 H, C1-C6알킬, 히드록시알킬 등이며, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (B)의 화합물은 Abl 저해 작용을 나타내고, 각종 암에 유용하다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 2). 그러나, 당해 문헌에는 FGFR 저해 작용에 관한 구체적인 기재는 없다. 또한, 후술하는 본원 발명의 화학식 (I)의 화합물은 그의 기 (R1)p에 있어서 화학식 (B)의 화합물과 구조를 달리한다.
(식 중, G는 CH 등이고, A는 3-히드록시페닐 등이고, Y는 비닐기 또는 에틸렌이며, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (C)의 화합물은 암, 혈관 장해 등의 치료를 위해, Src, VEGFR2, Yes, Fyn, Lck, Abl, PDGFR, EGFR 및 RET를 포함하는 각종 키나아제에 대하여 저해 작용을 갖는 것이 보고되어 있다(특허문헌 3). 그러나, 당해 문헌에는 FGFR에 대한 저해 작용의 개시는 없다. 또한, 당해 문헌에는 후술하는 본원 발명의 화학식 (I)의 화합물의 구체적인 개시는 없다.
(식 중, G1은 치환기를 가질 수도 있는 아릴, 치환기를 가질 수도 있는 헤테로아릴 등을, L1은 O, SO, SO2, 치환되어 있을 수도 있는 알킬 등을, L2는 치환되어 있을 수도 있는 알킬, 헤테로환 등을, A1은 결합, O, C(Ra)2 등을, A2는 NRa, O 등을 나타내며, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (D)는 TIE-2 및/또는 VEGFR-2 키나아제 저해 작용을 갖고, 암을 포함하는 혈관 신생에 관련된 질환의 치료에 유용하다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 4). 그러나, 당해 문헌에는 FGFR 저해에 관한 구체적인 기재는 없다. 또한, 후술하는 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 그의 기 L1이 아미노기를 갖지 않는 점, 및 X 및 Y를 포함하는 환의 2개의 결합손이 파라 위치에 위치한다는 점에 있어서 화학식 (D)의 화합물과 구조를 달리한다.
(식 중, W는 N 또는 CR이고, R은 H 등이며, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (E)의 화합물은 다수의 수용체 단백질 티로신 키나아제 활성, 특히 FGFR 활성의 저해 작용을 나타내고, 이들 효소의 이상 또는 과잉의 활성에 관련된 각종 질환의 처치에 사용할 수 있다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 5). 그러나, 후술하는 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 그의 기 L1에 N 원자가 치환되지 않는 점, X 및 Y를 포함하는 환의 2개의 결합손이 파라 위치에 위치한다는 점에 있어서, 화학식 (E)의 화합물과 구조를 달리한다.
(식 중, X, Y 및 Z의 2개는 N이고, 3개째는 CH 또는 N이며, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (F)는 각종 키나아제에 대하여 저해 작용을 나타내고, 염증이나 자기 면역 질환에 유용하다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 6). 한편, 후술하는 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 그의 기 L1이 아미드기가 아닌 점, 및 X 및 Y를 포함하는 환의 2개의 결합손이 파라 위치에 위치한다는 점에 있어서, 화학식 (F)의 화합물과 구조를 달리한다.
(식 중, A1, A2, A3 및 A4는 각각 CR4, CR5, CR6 및 CR7이거나 N이고, L은 -C(O)NR7-, -NR7C(O)- 등이고, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (G) 및 화학식 (H)의 화합물은, FGFR 저해 작용을 나타내며 각종 암의 치료에 사용할 수 있다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 7 및 특허문헌 8).
(화학식 (G) 중, B환은 경우에 따라 O, S 및 N으로부터 선택되는 적어도 1개의 헤테로 원자를 포함하고 있을 수도 있는 5 또는 6원 방향족기를 나타내며, 다른 기호는 당해 공보 참조)
하기 화학식 (J)의 화합물은, 글루코키나아제 활성화 작용을 나타내고 당뇨병 관련 질환의 치료에 사용할 수 있다는 것이 보고되어 있으며(특허문헌 9), 그의 구조상의 특징은 피리딘의 2위치에 아미노기가 치환되어 있는 점에 있다.
(식 중의 기호는 당해 공보 참조)
또한, 하기의 구조를 갖는 화합물이 각각 CAS 등록 번호 1371065-79-0, 1317903-92-6으로서 데이터 베이스상 알려져 있다.
국제 공개 제WO2006/101977호 팸플릿 국제 공개 제WO2007/056075호 팸플릿 국제 공개 제WO2008/008234호 팸플릿 국제 공개 제WO2003/066601호 팸플릿 국제 공개 제WO2007/071752호 팸플릿 국제 공개 제WO2007/022380호 팸플릿 국제 공개 제WO2008/075068호 팸플릿 국제 공개 제WO2009/153592호 팸플릿 국제 공개 제WO2009/046784호 팸플릿
의약 조성물, 특히 변이 FGFR3 양성의 방광암 치료용 의약 조성물의 유효 성분으로서 유용한 화합물을 제공한다.
본 발명자들은 FGFR 저해 작용을 갖는 화합물에 대하여 예의 검토한 결과, 본 발명의 질소 함유 방향족 헤테로환 화합물이 FGFR1, 2 및 3 저해 작용, 특히 양호한 변이 FGFR3 저해 작용을 갖는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염, 및 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염 및 제약학적으로 허용되는 부형제를 함유하는 의약 조성물에 관한 것이다.
(식 중,
X와 Y는 동일하거나 또는 서로 상이하며 CH 또는 N이되, 단 X와 Y가 동시에 N이 되지 않고,
L1은 -저급 알킬렌-, -저급 알킬렌-O-, -O-저급 알킬렌- 또는 -저급 알키닐렌-이고,
Z는 N 또는 CH이고,
R1은 동일하거나 또는 서로 상이하며, 할로겐으로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -O-(할로겐으로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), 할로겐, 시아노 또는 -N(저급 알킬)2이고,
p는 2 내지 4의 정수이고,
환 W는 치환되어 있을 수도 있는 방향족 탄소환, 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환, 또는 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환이고,
Q는 -L2-R2 또는 R3이고,
L2는 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환 또는 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환이고,
R2는 저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기, 치환되어 있을 수도 있는 시클로알킬, -OH 및 -O-저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -C(O)-R0, -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 시클로알킬, -NH-R0, -N(저급 알킬)-R0, -L3-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 또는 H이고,
R0은 -OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬이고,
R3은
(1) -C(O)OH, -OH, -O-R0, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 아미노, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일, 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기, 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬,
(2) -O-(-C(O)OH, -OH, -O-R0, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일, 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬),
(3) -NH-(-OH, 저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기, 및 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬),
(4) -N(저급 알킬)-(-OH, 저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기, 및 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬),
(5) -C(O)OH,
(6) -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기,
(7) -O-(저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기), 또는
(8) 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일이고,
L3은 결합, -NH-, -N(저급 알킬)- 또는 저급 알킬렌임)
또한, 특별히 기재가 없는 한, 본 명세서 중의 어느 화학식 중 기호가 다른 화학식에 있어서도 사용되는 경우, 동일한 기호는 동일한 의미를 나타낸다.
또한, 본 발명은, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염과 제약학적으로 허용되는 부형제를 함유하는 FGFR1, 2 및/또는 3이 관련된 각종 암, 예를 들어 FGFR1이 관련된 폐암이나 호르몬 요법 저항성의 유방암, FGFR2가 관련된 위암, 삼중 음성 유방암이나 자궁체암 및 FGFR3이 관련된 방광암 및 교모세포종의 치료용 의약 조성물에 관한 것이다. 또한, 당해 의약 조성물은, FGFR1, 2 및/또는 3이 관련된 각종 암의 치료제를 포함한다. 어느 형태로서는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염과 제약학적으로 허용되는 부형제를 함유하는, FGFR3이 관련된 방광암의 치료용 의약 조성물이다. 다른 형태로서는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염과 제약학적으로 허용되는 부형제를 함유하는, 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료용 의약 조성물이다. 또한, 본 명세서에 있어서 「변이」란, 점 변이, 융합 변이, 결실 변이, 삽입 변이를 포함하고, 어느 형태로서는 점 변이 및 융합 변이를 포함하는 개념이며, 다른 형태로서는 점 변이이고, 또 다른 형태로서는 융합 변이다.
또한, 본 발명은, FGFR1, 2 및/또는 3이 관련된 각종 암의 치료용 의약 조성물의 제조를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 사용, FGFR1, 2 및/또는 3에 관련된 각종 암의 치료를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 사용, 및 FGFR1, 2 및/또는 3에 관련된 각종 암의 치료를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염, 및 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 FGFR1, 2 및/또는 3에 관련된 각종 암의 치료 방법에도 관한 것이다. 또한, 본 발명은, 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료용 의약 조성물의 제조를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 사용, 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 사용, 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염, 및 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료 방법에도 관한 것이다. 또한, 상기 「대상」이란, 그의 치료를 필요로 하는 인간 또는 그 이외의 동물이며, 어느 형태로서는 그의 치료를 필요로 하는 인간이다.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은, FGFR1, 2 및/또는 3 저해 작용, 특히 변이 FGFR3 저해 작용을 갖고, FGFR1, 2 및/또는 3이 관련된 각종 암, 예를 들어 폐암이나 호르몬 요법 저항성의 유방암, 위암, 삼중 음성 유방암, 자궁체암, 방광암 및 교모세포종 등의 치료제로서, 특히 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료제로서 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 명세서에 있어서 「저급 알킬」이란, 직쇄 또는 분지상의 탄소수가 1 내지 8(이후, C1 -8로 약기함)인 알킬, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸 등이다. 다른 형태로서는 C1 - 4알킬이고, 또 다른 형태로서는 메틸이고, 또 다른 형태로서는 에틸이다.
「저급 알킬렌」이란, 직쇄 또는 분지상의 C1 -8의 알킬렌, 예를 들어 메틸렌, 에틸렌, 트리메틸렌, 테트라메틸렌, 펜타메틸렌, 헥사메틸렌, 헵타메틸렌, 옥타메틸렌, 프로필렌, 메틸메틸렌, 에틸에틸렌, 1,2-디메틸에틸렌, 1,1,2,2-테트라메틸에틸렌 등이다. 다른 형태로서는 C1 - 4알킬렌이고, 또 다른 형태로서는 메틸렌이고, 또 다른 형태로서는 에틸렌이다.
「저급 알키닐렌」이란, 직쇄 또는 분지상의 C2 -6의 알키닐렌, 예를 들어 에티닐렌, 프로피닐렌, 부티닐렌, 펜티닐렌, 헥시닐렌, 1,3-부타디이닐렌, 1,3-펜타디이닐렌 등이다. 다른 형태로서는 C2 - 4알키닐렌이고, 또 다른 형태로서는 에티닐렌이다.
「시클로알킬」이란, C3 -10의 포화 탄화수소환기이고, 가교를 가질 수도 있다. 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 아다만틸 등이다. 다른 형태로서는 C3 - 8시클로알킬이고, 또 다른 형태로서는 C3 - 6시클로알킬이고, 또 다른 형태로서는 시클로프로필이다.
「방향족 탄소환」이란, C6 -14의 단환 내지 3환식 방향족 탄화수소환이다. 예를 들어 벤젠, 나프탈렌, 안트라센이고, 다른 형태로서는 벤젠이다.
「방향족 헤테로환」이란, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로 원자를 1 내지 4개 갖는 환원수 5 내지 10의 방향족 헤테로환이고, 예를 들어 피리딘, 피롤, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이미다졸, 피라졸, 티아졸, 옥사졸, 이소옥사졸, 티오펜, 이소티아졸, 푸란, 옥사디아졸, 티아디아졸, 인돌, 이소인돌, 인다졸, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤조이미다졸, 벤조옥사졸, 벤조티아졸, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 신놀린, 프탈라진, 퀴나졸린, 퀴녹살린, 티에노피리딘, 티에노피리미딘, 티에노피라진 등이다. 다른 형태로서는, 피리딘, 피롤, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이미다졸, 피라졸, 티아졸, 옥사졸, 티오펜, 푸란, 옥사디아졸, 인다졸이다. 또 다른 형태로서는 피리딘, 피리미딘, 이미다졸, 피라졸, 티아졸, 인다졸이고, 또 다른 형태로서는 피리딘, 이미다졸, 피라졸이고, 또 다른 형태로서는 피리딘이고, 또 다른 형태로서는 피라졸이고, 또 다른 형태로서는 이미다졸이다.
「방향족 헤테로환기」란 상기 「방향족 헤테로환」의 1가기이고, 예를 들어 피리딜, 피롤릴, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 티에닐, 푸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴 등이고, 다른 형태로서는 질소 원자를 1 내지 2개 갖는 환원수 5 내지 6의 방향족 헤테로환기이고, 또 다른 형태로서는 피리딜이다.
「비방향족 헤테로환」이란, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 동일하거나 또는 상이한 헤테로 원자를 1 내지 4개 갖는 환원수 3 내지 10의, 어느 형태로서는 환원수 4 내지 8의 비방향족 헤테로환이며, 당해 비방향족 헤테로환은 벤젠환 또는 티오펜환과 축합되어 있을 수도 있고, 저급 알킬렌으로 가교되어 있을 수도 있고, 다른 하나의 비방향족 헤테로환과 스피로환을 형성하고 있을 수도 있고, 환의 일부에 불포화 결합을 갖고 있을 수도 있고, 환 구성 원자인 황 원자 또는 질소 원자는 산화되어 있을 수도 있다. 예를 들어, 아지리딘, 옥세탄, 아제티딘, 피롤리딘, 피페리딘, 아제판, 디아제판, 아조칸, 피페라진, 4-옥시드피페라진, 호모피페라진, 모르폴린, 옥사제판, 티오모르폴린, 1,1-디옥시드티오모르폴린, 1,1-디옥시드테트라히드로티오피란, 1,1-디옥시드티아졸리딘, 티아제판, 1-아자비시클로[2.2.2]옥탄, 7-옥사비시클로[2.2.1]헵탄, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄, 3-아자비시클로[3.2.1]옥탄, 8-아자비시클로[3.2.1]옥탄, 9-아자비시클로[3.3.1]노난, 3,9-디아자비시클로[3.3.1]노난, 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸, 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄, 2-옥사-7-아자스피로[3.5]노난, 테트라히드로피란, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디옥솔란, 테트라히드로티오펜, 테트라히드로티오피란, 테트라히드로티에노피리딘, 테트라히드로벤조아제핀, 테트라히드로벤조디아제핀, 디히드로벤조푸란, 디히드로벤조티오펜, 디히드로벤조피란, 디히드로벤조디옥산, 벤조디옥산, 디히드로피란, 디히드로피롤, 디히드로피리딘, 테트라히드로피리딘, 테트라히드로피라진 등이다. 다른 형태로서는, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 동일하거나 또는 상이한 헤테로 원자를 1 내지 2개 갖는 환원수 5 내지 7의 비방향족 헤테로환이고, 또 다른 형태로서는 적어도 1개의 질소 원자를 갖고, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로 원자를 1개 더 가질 수도 있는 질소 함유 5 내지 7원 비방향족 헤테로환이고, 또 다른 형태로서는 6원 질소 함유 비방향족 헤테로환이고, 예를 들어 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, 티오모르폴린, 1,1-디옥시드티오모르폴린 등이다. 또 다른 형태로서는, 옥세탄, 피페리딘, 피페라진, 모르폴린, 티오모르폴린, 4-옥시드피페라진, 1,1-디옥시드티오모르폴린, 테트라히드로피란, 테트라히드로푸란, 테트라히드로티오펜, 테트라히드로피리딘, 1-아자비시클로[2.2.2]옥탄, 8-아자비시클로[3.2.1]옥탄, 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸, 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄, 2-옥사-7-아자스피로[3.5]노난이고, 또 다른 형태로서는 모르폴린, 피페리딘, 피페라진, 4-옥시드피페라진, 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸, 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄이고, 또 다른 형태로서는 피페리딘이고, 또 다른 형태로서는 피페라진이다.
「비방향족 헤테로환기」란 비방향족 헤테로환의 1가기이며, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 동일하거나 또는 상이한 헤테로 원자를 1 내지 4개 갖는 환원수 3 내지 10의 비방향족 헤테로환기이며, 저급 알킬렌으로 가교되어 있을 수도 있고, 환의 일부에 불포화 결합을 가질 수도 있고, 다른 하나의 비방향족 헤테로환과 스피로 환을 형성하고 있을 수도 있다. 또한, 환 구성 원자인 황 원자 또는 질소 원자는 산화되어 있을 수도 있다. 예를 들어, 아지리디닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 아제파닐, 디아제파닐, 아조카닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 모르폴리닐, 옥사제파닐, 티오모르폴리닐, 1,1-디옥시드티오모르폴리닐, 티아제파닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸릴, 디옥사닐, 디옥솔라닐, 테트라히드로티에닐, 테트라히드로티오피라닐, 7-옥사비시클로[2.2.1]헵틸, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵틸, 3-아자비시클로[3.2.1]옥틸, 8-아자비시클로[3.2.1]옥틸, 9-아자비시클로[3.3.1]노닐, 3,9-디아자비시클로[3.3.1]노닐, 디히드로피라닐, 디히드로피롤릴, 디히드로피리딜, 테트라히드로피리딜, 테트라히드로피라질, 9-디아자스피로[5.5]운데크-3-일, 1,9-디아자스피로[5.5]운데크-9-일, 2,8-디아자스피로[4.5]데크-8-일, 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데크-8-일 등이다. 다른 형태로서는, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 동일하거나 또는 상이한 헤테로 원자를 1 내지 2개 갖는 환원수 5 내지 7의 비방향족 헤테로환기이고, 또 다른 형태로서는 적어도 1개의 질소 원자를 갖는 환원수 5 내지 7의 비방향족 헤테로환기이고, 또 다른 형태로서는 6원 질소 함유 비방향족 헤테로환기이고, 예를 들어 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 1,1-디옥시드티오모르폴리닐 등이다. 또 다른 형태로서는, 옥세타닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 4-옥시드피페라지닐, 1,1-디옥시드티오모르폴리닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸릴, 테트라히드로티에닐, 테트라히드로피리딜, 1-아자비시클로[2.2.2]옥틸, 8-아자비시클로[3.2.1]옥틸, 3,9-디아자스피로[5.5]운데크-3-일, 2,6-디아자스피로[3.3]헵토-2-일, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵토-6-일이고, 또 다른 형태로서는 피페리디닐, 피페라지닐이고, 또 다른 형태로서는 피페리디닐이고, 또 다른 형태로서는 피페라지닐이다.
「할로겐」이란, -F, -Cl, -Br 및 -I이다. 다른 형태로서는 -F이고, 또 다른 형태로서는 -Cl이다.
화학식 (I)에 있어서의 L1이 -저급 알킬렌-O-인 경우의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염이란, 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 염인 것을 의미한다.
(식 중, L4는 저급 알킬렌을 나타내며, 이하 동일함)
또한, (R1)p에 있어서, 2개 내지 4개의 R1은 각각 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다.
본 명세서 중에 있어서, 「치환되어 있을 수도 있는」이란 비치환, 또는 치환기를 1 내지 5개 갖고 있는 것을 의미한다. 또한, 복수개의 치환기를 갖는 경우, 그들의 치환기는 동일할 수도 서로 상이할 수도 있다. 또한, 예를 들어 「1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일」에 있어서의 질소상의 2개의 R0은 각각이 동일한 저급 알킬일 수도 있고, 각각이 상이한 저급 알킬일 수도 있다. 또한, R0은 각각 -OH로 치환되어 있을 수도, 한쪽이 치환되어 있을 수도, 양쪽이 비치환일 수도 있다.
본 명세서에 있어서, 화학식 (I)의 W에 있어서의 「치환되어 있을 수도 있는 방향족 탄소환」, 「치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환」 및 「치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환」에 있어서의 치환기로서는, 예를 들어 하기 D1군에 나타나는 기이다.
D1군이란,
(1) -OH기 및 저급 알킬기로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기,
(2) -OH기 및 저급 알킬기로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기,
(3) 할로겐,
(4) -O-저급 알킬, -S-저급 알킬, -OH 및 -SH,
(5) -CN 및 -NO2
(6) -CO2H 및 -CO2-저급 알킬, 및
(7) 상기 (1) 내지 (6)에 기재된 기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬 또는 -O-저급 알킬
을 포함하는 군이다.
D1군의 다른 형태로서는,
(1) -OH기로 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기,
(2) 할로겐,
(3) -OH,
(4) -CN,
(5) -CO2H, 및
(6) 상기 (1) 내지 (5)에 기재된 치환기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬 또는 -O-저급 알킬
을 들 수 있다.
또한, D1군의 다른 형태로서는,
(1) 할로겐으로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬,
(2) -OH기로 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기로 치환되어 있을 수도 있는 -O-저급 알킬,
(3) 할로겐 및
(4) -CN
을 들 수 있다.
또한, D1군의 다른 형태로서는, 할로겐으로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -O-(옥소로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기, -OH로 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), 할로겐, 시아노, 옥소를 들 수 있다.
화학식 (I)의 L2에 있어서의 「치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환」, 「치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환」, R2에 있어서의 「치환되어 있을 수도 있는 시클로알킬」, 「치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기」 및 R3에 있어서의 「치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기」, 「치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기」에 있어서 허용되는 치환기로서는, 예를 들어 D2군으로부터 선택되는 치환기를 들 수 있다.
D2군이란,
(1) 할로겐,
(2) -OH 및 -SH,
(3) -CN, 및
(4) 상기 (1) 내지 (3)에 기재된 치환기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬
을 포함하는 군이다.
D2군의 다른 형태로서는,
(1) -OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬 및
(2) -OH
를 들 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 어느 형태를 이하에 나타낸다.
(1) X가 N, Y가 CH인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는 X가 CH, Y가 N인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 X가 CH, Y가 CH인 화합물 또는 그의 염.
2) L1이 저급 알킬렌 또는 -저급 알킬렌-O-인 화합물 또는 그의 염. L1이 -저급 알킬렌-인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 L1이 -저급 알킬렌-O-인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 L1이 에틸렌 또는 -메틸렌-O-인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 L1이 에틸렌인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 L1이 -메틸렌-O-인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 L1이 에티닐렌인 화합물 또는 그의 염.
(3) Z가 CH인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는 Z가 N인 화합물 또는 그의 염.
(4-1) p가 2 또는 4인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는 p가 2인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 p가 4인 화합물 또는 그의 염.
(4-2) R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-저급 알킬 또는 할로겐인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는 R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-저급 알킬인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 할로겐인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-메틸 또는 F인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-메틸 또는 Cl인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는 R1이 모두 F인 화합물 또는 그의 염.
(5) 화학식 (I)에 있어서의 p개의 R1로 치환된 Z를 환 구성 원자로서 갖는 6원 방향환이 2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐 또는 2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서, 화학식 (I)에 있어서의 p개의 R1로 치환된, Z를 환 구성 원자로서 갖는 6원 방향환이 2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서, 화학식 (I)에 있어서의 p개의 R1로 치환된, Z를 환 구성 원자로서 갖는 6원 방향환이 2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐인 화합물 또는 그의 염.
(6) 환 W가 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 방향족 탄소환 또는 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는, 환 W가 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환된 벤젠환 또는 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 각각 치환되어 있을 수도 있는 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 티아졸, 인다졸 또는 이미다졸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환 또는 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 저급 알킬, -O-저급 알킬 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 메틸, -O-메틸 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 -O-메틸로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 D1군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 메틸로 치환된 피라졸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, 환 W가 피라졸인 화합물 또는 그의 염.
(7) Q가 -L2-R2인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는, Q가 R3인 화합물 또는 그의 염.
(8) L2가 D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는, L2가 D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 질소 함유 비방향족 헤테로환인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, L2가 D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 각각 치환되어 있을 수도 있는, 피페라진, 4-옥시드피페라진, 피페리딘, 모르폴린, 아제티딘, 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸, 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄, 2-옥사-7-아자스피로[3.5]노난, 8-아자비시클로[3.2.1]옥탄 또는 1-아자비시클로[2.2.2]옥탄인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, L2가 1개 이상의 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페라진, 1개 이상의 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페리딘 또는 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, L2가 피페리딘 또는 4-메틸피페라진인 화합물 또는 그의 염.
(9) R2가 -OH 및 -O-저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -NH-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기, -저급 알킬렌-(D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기) 또는 H인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는, R2가 -OH 및 -O-저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -NH-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), 저급 알킬(당해 저급 알킬은 -OH로 치환되어 있을 수도 있음)로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 또는 H인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R2가 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페라진, 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페리딘, 2-히드록시에틸아미노 또는 H인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R2가 4-메틸피페라진, 2-히드록시에틸아미노 또는 H인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R2가 4-메틸피페라진인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R2가 2-히드록시에틸아미노인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R2가 H인 화합물 또는 그의 염.
(10) R3이 -C(O)OH, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일, -OH, D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, 또는 -O-(-C(O)OH, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일, -OH, D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬)인 화합물 또는 그의 염. 다른 형태로서는, R3이 -C(O)OH, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일, -OH, D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(D2군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환된 저급 알킬인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R3이 -OH, -OH 및 저급 알킬로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(-OH 및 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환된 저급 알킬인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R3이 -OH, 저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환된 저급 알킬인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R3이 -OH, 메틸기로 치환되어 있을 수도 있는 피페라지닐 및 -C(O)-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 아제티디닐)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환된 저급 알킬인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서, R3이 2-히드록시에틸, 2,3-디히드록시프로필 또는 4-메틸피페라진-1-일메틸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R3이 4-메틸피페라진-1-일메틸인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R3이 1개 이상의 -OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬인 화합물 또는 그의 염. 또 다른 형태로서는, R3이 2-히드록시에틸 또는 2,3-디히드록시프로필인 화합물 또는 그의 염.
(11) 상기 (1) 내지 (10)에 기재된 형태 중 모순되지 않는 임의의 2개 이상의 조합인 화합물 또는 그의 염.
본 발명에는, 상기 (11)에 기재한 바와 같은 상기 (1) 내지 (10)에 기재된 형태 중 임의의 2개 이상의 조합인 화합물 또는 그의 염이 포함되지만, 그의 구체예로서 이하의 형태도 들 수 있다.
(12) X가 N, Y가 CH이고, L1이 저급 알킬렌 또는 -저급 알킬렌-O-인 화합물 또는 그의 염.
(13) Z가 CH이고, R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-저급 알킬 또는 할로겐이고, p가 2 또는 4이고, 환 W가 치환되어 있을 수도 있는 방향족 탄소환 또는 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환인 (12)에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(14) L1이 에틸렌 또는 -메틸렌-O-이고, p가 4이고, 환 W가 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환 또는 치환되어 있을 수도 있는 피라졸인 (13)에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(15) Q가 -L2-R2이고, L2가 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환이고, R2가 -OH 및 -O-저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -NH-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기, -저급 알킬렌-(치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기) 또는 H인 (12) 내지 (14) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(16) p가 4이고, L2가 1개 이상의 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페라진, 1개 이상의 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페리딘 또는 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸이고, R2가 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페라진, 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페리딘, 2-히드록시에틸아미노 또는 H인 (15)에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(17) R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-메틸 또는 F이고, L1이 -메틸렌-O-이고, 환 W가 -O-메틸로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환이고, L2가 피페리딘 또는 4-메틸피페라진이고, R2가 4-메틸피페라진, 2-히드록시에틸아미노 또는 H인 (16)에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(18) 환 W가 치환되어 있을 수도 있는 피라졸이고, Q가 R3이고, R3이 -C(O)OH, 1개 또는 2개의 R0으로 치환되어 있을 수도 있는 카르바모일, -OH, 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환된 저급 알킬인 (12) 내지 (14) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(19) p가 4이고, R3이 -OH, 저급 알킬로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환된 저급 알킬인 (18)에 기재된 화합물 또는 그의 염.
(20) R1이 동일하거나 또는 서로 상이하며 -O-메틸 또는 F이고, L1이 -메틸렌-O-이고, 환 W가 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸이고, R3이 2-히드록시에틸, 2,3-디히드록시프로필 또는 4-메틸피페라진-1-일메틸인 (19)에 기재된 화합물 또는 그의 염.
또한, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 다른 형태로서,
X와 Y는 동일하거나 또는 서로 상이하며 CH 또는 N이되, 단 X와 Y가 동시에 N이 되지 않고,
L1은 -저급 알킬렌-, -저급 알킬렌-O-, -O-저급 알킬렌- 또는 저급 알키닐렌이고,
Z는 N 또는 CH이고,
R1은 동일하거나 또는 서로 상이하며, 할로겐으로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -O-(할로겐으로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), 할로겐, 시아노 또는 -N(저급 알킬)2이고,
p는 2 내지 4의 정수이고,
환 W는 치환되어 있을 수도 있는 방향족 탄소환, 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환, 또는 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환이고,
Q는 -L2-R2 또는 R3이고,
L2는 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환 또는 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환이고,
R2는 -OH 및 -O-저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 시클로알킬, -NH-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), -L3-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 또는 H이고,
R3은 -C(O)OH, -OH, -NH-저급 알킬, -N(저급 알킬)2, -C(O)-NH-저급 알킬, -C(O)-N(저급 알킬)2, 치환되어 있을 수도 있는 방향족 헤테로환기, 치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기 및 -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬, -O-(-OH, -C(O)-NH-저급 알킬 및 -C(O)-N(저급 알킬)2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), -NH-(-OH, -C(O)-NH-저급 알킬 및 -C(O)-N(저급 알킬)2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), -N(저급 알킬)-(-OH, -C(O)-NH-저급 알킬 및 -C(O)-N(저급 알킬)2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 치환되어 있을 수도 있는 저급 알킬), -C(O)OH 또는 -C(O)-치환되어 있을 수도 있는 비방향족 헤테로환기이고,
L3은 결합 또는 저급 알킬렌인 화합물 또는 그의 염을 들 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염에 포함되는 구체적 화합물의 예로서, 이하의 화합물을 들 수 있다.
5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민,
(2S)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올,
5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-플루오로-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메틸-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{4-[(3R,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일]-3-메톡시페닐}피리미딘-2-아민,
N-[4-(3,9-디아자스피로[5.5]운데크-3-일)-3-메톡시페닐]-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민,
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-1H-피라졸-4-일}피리미딘-2-아민,
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]-1-(3-히드록시아제티딘-1-일)에타논,
(2R)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올,
2-({1-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-일}아미노)에탄올,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-메틸-5-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-1H-피라졸-3-일}피리미딘-2-아민 및
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민, 및 이들의 염.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염에 포함되는 구체적 화합물의 예의 다른 형태로서, 이하의 화합물을 들 수 있다.
5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민,
(2S)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올,
5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-플루오로-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메틸-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{4-[(3R,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일]-3-메톡시페닐}피리미딘-2-아민,
N-[4-(3,9-디아자스피로[5.5]운데크-3-일)-3-메톡시페닐]-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민,
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-1H-피라졸-4-일}피리미딘-2-아민,
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]-1-(3-히드록시아제티딘-1-일)에타논 및
(2R)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올, 및 이들의 염.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염에 포함되는 구체적 화합물의 예의 또 다른 형태로서, 이하의 화합물을 들 수 있다.
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올,
(2R)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올,
2-({1-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-일}아미노)에탄올,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-메틸-5-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-1H-피라졸-3-일}피리미딘-2-아민 및
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민, 및 이들의 염.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염에 포함되는 구체적 화합물의 예의 또 다른 형태로서, 이하의 화합물을 들 수 있다.
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올 및
(2R)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올, 및 이들의 염.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염에 포함되는 구체적 화합물의 예의 또 다른 형태로서, 이하의 화합물을 들 수 있다.
2-({1-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-일}아미노)에탄올,
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-메틸-5-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-1H-피라졸-3-일}피리미딘-2-아민 및
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민, 및 이들의 염.
화학식 (I)의 화합물에는, 치환기의 종류에 따라 호변 이성체나 기하 이성체가 존재할 수 있다. 본 명세서 중, 화학식 (I)의 화합물이 이성체의 한 형태만으로 기재되는 경우가 있지만, 본 발명은 그 이외의 이성체도 포함하고, 이성체가 분리된 것, 또는 그들의 혼합물도 포함한다.
또한, 화학식 (I)의 화합물에는, 비대칭 탄소 원자나 축 비대칭을 갖는 경우가 있으며, 이에 기초하는 광학 이성체가 존재할 수 있다. 본 발명은, 화학식 (I)의 화합물의 광학 이성체가 분리된 것, 또는 그들의 혼합물도 포함한다.
또한, 본 발명은, 화학식 (I)로 표시되는 화합물의 제약학적으로 허용되는 프로드러그도 포함한다. 제약학적으로 허용되는 프로드러그란, 가용매 분해에 의해 또는 생리학적 조건하에서 아미노기, 수산기, 카르복실기 등으로 변환될 수 있는 기를 갖는 화합물이다. 프로드러그를 형성하는 기로서는, 예를 들어 문헌 [Prog.Med., 5, 2157-2161(1985)이나, 「의약품의 개발」(히로카와 쇼텐, 1990년) 제7권 분자 설계 163-198]에 기재된 기를 들 수 있다.
또한, 화학식 (I)의 화합물의 염이란, 화학식 (I)의 화합물의 제약학적으로 허용되는 염이며, 치환기의 종류에 따라 산 부가염 또는 염기와의 염을 형성하는 경우가 있다. 구체적으로는, 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 무기산이나, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 말산, 만델산, 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰 산, 아스파라긴산, 글루탐산 등의 유기산과의 산 부가염, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 알루미늄 등의 무기염기, 메틸아민, 에틸아민, 에탄올아민, 리신, 오르니틴 등의 유기염기와의 염, 아세틸류신 등의 각종 아미노산 및 아미노산 유도체와의 염이나 암모늄염 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명은, 화학식 (I)의 화합물 및 그의 염의 각종 수화물이나 용매화물 및 결정다형의 물질도 포함한다. 또한, 본 발명은, 다양한 방사성 또는 비방사성 동위체로 라벨된 화합물도 포함한다.
(제조법)
화학식 (I)의 화합물 및 그의 염은, 그의 기본 구조 또는 치환기의 종류에 기초한 특징을 이용하여, 다양한 공지된 합성법을 적용하여 제조할 수 있다. 이 때, 관능기의 종류에 따라서는 당해 관능기를 원료로부터 중간체에 이르는 단계에서 적당한 보호기(용이하게 당해 관능기로 전화 가능한 기)로 치환해 두는 것이 제조 기술상 효과적인 경우가 있다. 이러한 보호기로서는, 예를 들어 P. G. M. Wuts 및 T. W. Greene 저, 「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis(제4판, 2006년)」에 기재된 보호기 등을 들 수 있으며, 이들의 반응 조건에 따라 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 이러한 방법에서는, 당해 보호기를 도입하여 반응을 행한 후, 필요에 따라 보호기를 제거함으로써 원하는 화합물을 얻을 수 있다.
또한, 화학식 (I)의 화합물의 프로드러그는, 상기 보호기와 마찬가지로 원료로부터 중간체에 이르는 단계에서 특정한 기를 도입, 또는 얻어진 화학식 (I)의 화합물을 사용하여 반응을 더 행함으로써 제조할 수 있다. 반응은 통상의 에스테르화, 아미드화, 탈수 등, 당업자에게 공지된 방법을 적용함으로써 행할 수 있다.
이하, 화학식 (I)의 화합물의 대표적인 제조법을 설명한다. 각 제조 방법은, 당해 설명에 첨부한 참고 문헌을 참조하여 행할 수도 있다. 또한, 본 발명의 제조법은 이하에 나타낸 예로는 한정되지 않는다.
(제1 제조 방법)
(식 중, L5는 할로겐, 메틸술피닐 또는 메틸술포닐을 나타내고, 이하 동일함)
본 발명 화합물 (I)은, 화합물 (1a)와 화합물 (2a)의 커플링 반응에 의해 얻을 수 있다.
본 반응은, 화합물 (1a)와 화합물 (2a)를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중, 또는 무용매하, 소정의 촉매의 존재하에 실온으로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 본 반응은 불활성 가스 분위기하에서 행하는 것이 바람직하다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, 벤젠, 톨루엔, 크실렌 등의 방향족 탄화수소류, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄 등의 에테르류, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 클로로포름 등의 할로겐화 탄화수소류, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 디메틸술폭시드, 아세트산에틸, 아세토니트릴, tert-부탄올 및 이들의 혼합물을 들 수 있다. 소정의 촉매로서는, 아세트산팔라듐, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 등을 들 수 있다. 또한, 팔라듐 촉매를 사용하는 경우에는, 그의 리간드로서 트리페닐포스핀, 1,1'-비나프탈렌-2,2'-디일비스(디페닐포스핀), 2-(디시클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐, 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐을 사용할 수도 있다. 또한, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민 또는 N-메틸모르폴린 등의 유기염기, 또는 tert-부톡시나트륨, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산세슘, 또는 수산화칼륨 등의 무기염기의 존재하에서 반응을 행하는 것이 반응을 원활하게 진행시킴에 있어서 유리한 경우가 있다. 반응 혼합물을 마이크로파 조사에 의해 가열하는 것이 반응을 원활하게 진행시킴에 있어서 유리한 경우가 있다.
〔문헌〕
S. R. Sandler 및 W. Karo 저, 「Organic Functional Group Preparations」, 제2판, 제1권, Academic Press Inc., 1991년
일본 화학회 편, 「제5판 실험 화학 강좌(제14권)」, 마루젠, 2005년
(제2 제조 방법)
(식 중, L6은 저급 알키닐렌을 나타내고, 이하 동일함)
(제1 공정)
본 공정은, 화합물 (1b)와 말단 알킨 유도체의 소노가시라 커플링 반응에 의해 본 발명 화합물 (I-1)을 얻는 공정이다.
본 공정은, 화합물 (1b)와 말단 알킨 유도체를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중, 염기, 팔라듐 촉매 및 요오드화구리의 존재하에 실온으로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 본 반응은 불활성 가스 분위기하에서 행하는 것이 바람직하다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, 벤젠, 톨루엔, 크실렌 등의 방향족 탄화수소류, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄 등의 에테르류, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄 또는 클로로포름 등의 할로겐화 탄화수소류, 메탄올, 에탄올, 2-프로판올, 부탄올 등의 알코올류, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드 및 이들의 혼합 용매를 들 수 있다. 염기로서는, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민 또는 N-메틸모르폴린 등의 유기염기, 또는 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산세슘, 또는 수산화칼륨 등의 무기염기가 바람직하다. 팔라듐 촉매로서는, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐, 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐, 염화팔라듐-1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센 등이 바람직하다. 또한, 반응 혼합물을 마이크로파 조사에 의해 가열하는 것이 반응을 원활하게 진행시킴에 있어서 유리한 경우가 있다.
〔문헌〕
A. d. Meijere 및 F. Diederich 편, 「Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions」, 제1판, VCH Publishers Inc., 1997년
일본 화학회 편 「실험 화학 강좌(제5판)」 13권 (2005년)(마루젠)
(제2 공정)
본 공정은, 본 발명 화합물 (I-1)의 알킨 부분을 수소 첨가 또는 디이미드 환원에 의해 알킬렌으로 환원하여 본 발명 화합물 (I-2)를 얻는 공정이다.
본 공정은, 본 발명 화합물 (I-1)과 팔라듐 탄소를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중 수소 분위기하에서, 실온으로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄 등의 에테르류, 메탄올, 에탄올, 2-프로판올, 부탄올 등의 알코올류 및 이들의 혼합 용매를 들 수 있다.
수소 첨가 반응 이외에 본 발명 화합물 (I-1)과 소정의 디이미드를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중, 실온으로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 상기와 마찬가지이다. 또한, 소정의 디이미드로서는, 예를 들어 4-메틸벤젠술포닐히드라지드를 들 수 있다.
화학식 (I)의 화합물에 있어서의 환 W 상의 치환기는, 화학식 (I)의 화합물을 원료로서 후술하는 실시예에 기재된 반응, 당업자에게 있어서 자명한 반응, 또는 이들의 변법을 사용함으로써, 다른 관능기로 용이하게 변환할 수 있다. 예를 들어, 환원, 할로겐화, 탈보호, 가수분해, 아미드화, 아미노화, 산화, 환원적 아미노화, 아실화, O-알킬화, N-알킬화, 환원적 알킬화, 에폭시화 등, 당업자가 통상 채용할 수 있는 공정을 임의로 조합하여 행할 수 있다.
(원료 화합물의 제조)
상기 제조법에 있어서의 원료 화합물은, 예를 들어 다음의 방법, 후술하는 제조예에 기재된 방법, 공지된 방법, 또는 그들의 변법을 사용하여 제조할 수 있다.
(원료 합성 1)
(식 중, R4는 -OH 또는 -저급 알킬렌-OH를, L7은 할로겐, -OH, -저급 알킬렌-OH, -저급 알킬렌-OMs, -저급 알킬렌-OTs, -저급 알킬렌-OTf 또는 -저급 알킬렌- 할로겐을, L8은 -저급 알킬렌-O- 또는 -O-저급 알킬렌-을 나타내고, 이하 동일함)
본 제조 방법은, 제1 제조 방법의 원료 화합물 (1a) 중 L1이 -O-저급 알킬렌 또는 -저급 알킬렌-O-인 화합물 (3c)를 제조하는 방법이다.
L7이 할로겐, -저급 알킬렌-OMs, -저급 알킬렌-OTs, -저급 알킬렌-OTf 또는 -저급 알킬렌-할로겐인 화합물 (3a)의 경우, 상기 화합물 (3a)와 화합물 (3b)를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중 염기의 존재하에, 실온으로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드 등을 들 수 있다. 또한, 염기로서는, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산세슘 또는 수산화칼륨 등의 무기염기가 바람직하다.
L7이 -OH 또는 -저급 알킬렌-OH인 화합물 (3a)의 경우, 상기 화합물 (3a)와 화합물 (3b)를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중 소정의 포스핀 시약 및 축합제 존재하에, 실온으로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄 등의 에테르류를 들 수 있다. 소정의 포스핀 시약으로서는, 트리부틸포스핀, 트리페닐포스핀 등을 들 수 있다. 소정의 축합제로서는, 아조디카르복실산디에틸, 1,1'-(아조디카르보닐)디피페리딘 등을 들 수 있다. 또한, 소정의 포스핀 및 소정의 축합제 대신에 (시아노메틸렌)트리메틸포스포란을 사용하면 반응을 원활하게 진행시킴에 있어서 유리한 경우가 있다.
(원료 합성 2)
(식 중, L9는 할로겐을 나타내고, 이하 동일함)
본 제조 방법은, 제1 제조 방법의 원료 화합물 (1a) 중 L1이 저급 알킬렌인 화합물 (4d)를 제조하는 방법이다.
(제1 공정)
본 공정은, 화합물 (4a)와 말단 알킨 유도체의 소노가시라 커플링 반응에 의해 화합물 (4b)를 얻는 공정이다.
반응 조건은 제2 제조 방법의 제1 공정과 마찬가지이다.
(제2 공정)
본 공정은, 화합물 (4b)의 알킨 부분을 수소 첨가에 의해 저급 알킬렌으로 환원하여 화합물 (4c)를 얻는 공정이다.
반응 조건은 제2 제조 방법의 제2 공정과 마찬가지이다.
(제3 공정)
본 공정은, 화합물 (4c)의 아미노기를 할로겐으로 변환하여 화합물 (4d)를 얻는 공정이다.
본 공정은, 화합물 (4c)와 염화구리(II) 및 아질산 n-펜틸을 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중, 빙냉하로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄 또는 클로로포름 등의 할로겐화 탄화수소류를 들 수 있다.
(원료 합성 3)
본 제조 방법은, 제2 제조 방법의 원료 화합물 (1b) 중 X가 N인 화합물 (5c)를 제조하는 방법이다.
본 반응은, 화합물 (5a)와 화합물 (5b)의 입소(ipso) 치환 반응에 의해 화합물 (5c)를 얻는 반응이다.
화합물 (5a)와 화합물 (5b)를 당량 또는 한쪽을 과잉량 사용하고, 이들의 혼합물을 반응에 불활성인 용매 중 수소 분위기하에서, 빙냉하로부터 가열 환류하에서 통상 0.1시간 내지 5일간 교반한다. 여기에서 사용되는 용매의 예로서는 특별히 제한은 되지 않지만, 메탄올, 에탄올, 2-프로판올, 부탄올 등의 알코올류, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드 및 이들의 혼합 용매를 들 수 있다. 또한, 메탄술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염화수소, 황산 등의 산을 사용하면 반응을 원활하게 진행시킴에 있어서 유리한 경우가 있다.
화학식 (I)의 화합물의 약리 활성은, 이하의 시험에 의해 확인하였다.
시험예 1 FGFR1, 2 및 3 효소 분석
효소 분석에는 인간 리콤비넌트 FGFR1, FGFR2, FGFR3(카르나바이오사, 카탈로그 번호 08-133, 08-134, 08-135)을 사용하고, 반응은 FGFR1과 FGFR2는 실온, FGFR3은 30℃에서 실시하였다. 측정법은 이하에 개략을 나타낸다.
화합물을 디메틸술폭시드(DMSO) 용액으로 희석하고(10배 공비, 4점), DMSO 농도가 2％가 되도록 반응 완충액(reaction buffer)(100 mM HEPES(pH 7.5), 0.003％ Brij-35, 0.004％ 트윈(Tween) 20, 0.5mM DTT, 10mM MgCl2)으로 희석하였다. 384 구멍 플레이트에서 화합물 용액 4μL에 반응 완충액으로 희석한 FGFR1 효소(2 또는 3ng/μL), FGFR2 효소(2ng/μL) 또는 FGFR3 효소(6ng/μL)를 2μL 첨가하고, 20분 후에 기질-ATP 용액(100 mM HEPES(pH 7.5), 0.003％ Brij-35, 0.004％ 트윈 20, 0.5mM DTT, 10mM MgCl2, 3.75μM 기질(substrate)-FL-펩티드(peptide) 22+500μM(FGFR1) ATP, 188μM(FGFR2) ATP 또는 250μM(FGFR3) ATP)을 4μL 첨가하여 30분간 반응시켰다. 반응 정지 후, LabChip EZ 리더(Reader)로 측정하였다. 얻어진 저해율을 기초로 비선형 회귀로부터 IC50값을 산출하였다. 몇 가지의 화합물의 결과를 표 1에 나타낸다. 표 중의 Ex는 후술하는 실시예 화합물 번호를 나타낸다.
시험예 2 변이 FGFR3 강제 발현 세포(FGFR3_S249C/NIH3T3)의 증식 분석
FGFR3_S249C/NIH3T3 세포를 3000셀/웰/90μL씩 96 구멍 스페로이드 플레이트(U 바닥)에 첨가하고, 익일에 화합물 용액(10μL)을 첨가하였다(DMSO의 최종 농도 0.1％). 화합물 용액은 최고 농도 10mM로부터 DMSO로 3배 공비(9점 및 DMSO만)로 단계 희석하고, 배양 메디움(DMEM, 10％ FBS)으로 100배 희석하여 제조하였다. 화합물 첨가 5일 후에 프로메가(Promega)(G7573) 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)(등록 상표) 형광 세포 생존성 검정(Luminescent Cell Viability Assay)으로 화합물의 증식 저해를 평가하였다. 또한, DMSO 첨가 웰을 컨트롤, 카운트 0을 100％ 저해로 하고, 비선형 회귀로부터 IC50값을 산출하였다. 몇 가지의 화합물의 결과를 표 2에 나타낸다.
시험예 3 UM-UC-14(FGFR3_S249C 양성 세포, 방광암) 항종양 시험
누드 마우스(CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu), 숫컷, 4-5주령) 우복부측의 피하에 3×106개셀/0.1mL(PBS+마트리겔(matrigel), 1:1)의 UM-UC-14 세포를 이식하고, 종양 사이즈가 약 250mm3가 된 시점에 약제 투여를 개시하였다(Day1). 1일 1회 또는 2회 투여하고, 2 내지 3일간마다 노기스로 종양 직경의 측정 및 체중을 측정하여, 최종적으로 11일째의 종양 부피mm3(단경mm×단경mm×장경mm/2)로 항종양 효과를 판정하였다(n=3-5). 또한, 컨트롤군에는 0.5％ MC(메틸셀룰로오스)를 투여하였다. 표 중의 ％ 억제는, 예를 들어 100％ 억제인 경우 컨트롤의 종양 성장을 Day1의 종양 부피까지 억제한 것을 나타내고, ％ 퇴축이란 Day1의 종양 부피보다도 몇％ 퇴축시켰는지를 나타낸다. 또한, Day1의 종양 부피란, 약물 투여 직전의 종양 부피를 나타낸다. 1mg/kg/일을 경구 투여했을 때(단, 실시예 95의 화합물은 3mg/kg/일)의 몇 가지의 화합물의 결과를 표 3에 나타낸다.
상기 시험에 의해, 본 발명의 화학식 (I)에 포함되는 복수의 실시예 화합물이 FGFR1, 2 및/또는 3 저해 작용을 갖는 것이 확인되었다. 또한, 화학식 (I)에 포함되는 복수의 실시예 화합물이 변이 FGFR3을 강제 발현시킨 세포의 증식을 억제하고, 나아가 변이 FGFR3 양성의 방광암을 담지시킨 동물 모델에 있어서, 방광암의 성장 억제 또는 방광암 자체를 퇴축하는 것이 확인되었다. 이상으로부터 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은 FGFR1, 2 및/또는 3이 관여하는 각종 암, 특히 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료제로서 사용할 수 있다.
시험예 4 FGFR3-TACC3_v1의 단리
폐암 임상 검체(미국 애스터랜드사) 200 검체에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트(SuperScript) III, 라이프 테크놀로지스사) 및 랜덤 프라이머(랜덤 프라이머즈, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여, 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 1로 표시되는 FGFR3_TACC3_RT_F 및 서열 번호 2로 표시되는 FGFR3_TACC3_RT_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여 DNA 폴리메라아제(TaKaRa Ex Taq; 다카라 바이오 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR (98℃ 10초, 55℃ 15초, 68℃ 1분 30초를 30 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 3으로 표시되는 FGFR3_TACC3_nested_F 및 서열 번호 4로 표시되는 FGFR3_TACC3_nested_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 1분을 30 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 바, 샘플 Lg344 검체만으로 약 500base의 PCR 산물을 얻은 것을 알 수 있었다.
그 후, PCR 산물을 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열 결정하였다(BigDye 터미네이터(Terminator) v3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, 약 500base의 PCR 산물은 NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 코딩 시퀀스(이하 CDS)의 엑손 18의 3' 말단이 TACC3(NM_006342.1)의 CDS의 엑손 11의 5' 말단과 융합되어 있는 서열인 것이 명백해졌다.
편평 상피 폐암 환자 폐암 조직 유래 RNA(미국 애스터랜드사) Lg344 검체 RNA에 대하여, 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 올리고(dT) 프라이머(올리고(dT) 20 프라이머, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 5로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_F 및 서열 번호 6으로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여 DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 60℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 7로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F 및 서열 번호 8로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 바, 약 2.9kbase의 PCR 산물을 얻은 것을 알 수 있었다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트(Cloning Kit); 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하였다. 인서트는 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열을 결정하였다(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, 약 2.9kbase의 PCR 산물에서는, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 5' 말단으로부터 엑손 18의 3' 말단까지가 TACC3(NM_006342.1)의 CDS의 엑손 11의 5' 말단으로부터 CDS의 3' 말단까지와 융합되어 있는 전사 산물(FGFR3-TACC3_V1)(서열 번호 9)이 존재하고 있는 것이 명백해졌다. 서열 번호 9에 의해 코드되는 폴리펩티드(FGFR3-TACC3_V1 융합 폴리펩티드)를 서열 번호 10에 나타낸다.
시험예 5 FGFR3-TACC3_V2의 단리
방광암(미국 애스터랜드사) 59 검체에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 랜덤 프라이머(랜덤 프라이머즈, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 1로 표시되는 FGFR3_TACC3_RT_F 및 서열 번호 2로 표시되는 FGFR3_TACC3_RT_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(TaKaRa Ex Taq; 다카라 바이오 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 10초, 55℃ 15초, 68℃ 1분 30초를 30 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 3으로 표시되는 FGFR3_TACC3_nested_F 및 서열 번호 4로 표시되는 FGFR3_TACC3_nested_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 1분을 30 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 바, 샘플 Bd106 검체에서 약 600base의 PCR 산물을 얻은 것을 알 수 있었다.
그 후, PCR 산물을 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열 결정하였다(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, 약 600base의 PCR 산물은 NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 엑손 18의 3' 말단이 TACC3(NM_006342.1)의 CDS의 엑손 10의 5' 말단과 융합되어 있는 서열인 것이 명백해졌다. 방광암 환자 방광암 조직 유래 RNA(미국 애스터랜드사) Bd106 검체 RNA에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 올리고(dT) 프라이머(올리고(dT) 20 프라이머, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 5로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_F 및 서열 번호 6으로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 60℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 7로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F 및 서열 번호 8로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 바, 약 3.0kbase의 PCR 산물을 얻은 것을 알 수 있었다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트; 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하였다. 인서트는 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열을 결정하였다(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, 약 3.0kbase의 PCR 산물에서는, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 5' 말단으로부터 엑손 18의 3' 말단까지가 TACC3(NM_006342.1)의 CDS의 엑손 10의 5' 말단으로부터 CDS의 3' 말단까지와 융합되어 있는 전사 산물(FGFR3-TACC3_V2)(서열 번호 11)이 존재하고 있는 것이 명백해졌다. 서열 번호 11에 의해 코드되는 폴리펩티드(FGFR3-TACC3_V2 융합 폴리펩티드)를 서열 번호 12에 나타낸다.
시험예 6 FGFR3-TACC3_V3의 단리
방광암(미국 애스터랜드사) 59 검체에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 랜덤 프라이머(랜덤 프라이머즈, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 1로 표시되는 FGFR3_TACC3_RT_F 및 서열 번호 2로 표시되는 FGFR3_TACC3_RT_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(TaKaRa Ex Taq; 다카라 바이오 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 10초, 55℃ 15초, 68℃ 1분 30초를 30 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 3으로 표시되는 FGFR3_TACC3_nested_F 및 서열 번호 4로 표시되는 FGFR3_TACC3_nested_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 1분을 30 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 바, 샘플 Bd021 검체에서 약 650base의 PCR 산물을 얻은 것을 알 수 있었다.
그 후, PCR 산물을 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열 결정하였다(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, 약 650base의 PCR 산물은, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 엑손 19의 도중 서열이 TACC3(NM_006342.1)의 인트론 10-11의 일부에 융합되고, 나아가 TACC3의 CDS의 엑손 11의 5' 말단과 융합되어 있는 서열인 것이 명백해졌다.
방광암 환자 방광암 조직 유래 RNA(미국 애스터랜드사) Bd021 검체 RNA에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 올리고(dT) 프라이머(올리고(dT) 20 프라이머, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 5로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_F 및 서열 번호 6으로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 60℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 7로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F 및 서열 번호 8로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 바, 약 3.0kbase의 PCR 산물을 얻은 것을 알 수 있었다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트; 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하였다. 인서트는 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열을 결정하였다(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, 약 3.0kbase의 PCR 산물에서는, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 5' 말단으로부터 엑손 19의 도중 서열이 TACC3(NM_006342.1)의 인트론 10-11의 일부에 융합되고, 나아가 TACC3의 CDS의 엑손 11의 5' 말단으로부터 CDS의 3' 말단까지와 융합되어 있는 전사 산물(FGFR3-TACC3_V3)(서열 번호 13)이 존재하고 있는 것이 명백해졌다. 서열 번호 13에 의해 코드되는 폴리펩티드(FGFR3-TACC3_V3 융합 폴리펩티드)를 서열 번호 14에 나타낸다.
시험예 7 방광암 환자 유래 세포주 RT-112로부터의 FGFR3-TACC3_V1의 단리
방광암 환자 유래 세포주 RT-112(라이프니츠-인스트투트 데에스엠체트-도이치 삼룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 젤쿨투렌 게엠베하(Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)로부터 구입)로부터 정제한 RNA에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 올리고(dT) 프라이머(올리고(dT) 20 프라이머, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 5로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_F 및 서열 번호 6으로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 60℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 7로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F 및 서열 번호 8로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 25 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 결과, 약 2.9kbase의 PCR 산물이 얻어졌다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트; 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하고, 인서트를 다이데옥시 시퀀스법(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스)에 의해 서열을 결정한 결과, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 N 말단으로부터 엑손 18의 3' 말단까지가 TACC3(NM_006342.1)의 CDS의 엑손 11의 5' 말단으로부터 CDS의 C 말단까지와 융합되어 있는 전사 산물(FGFR3-TACC3_V1)(서열 번호 9)과 동일한 것이 명백해졌다.
시험예 8 방광암 환자 유래 세포주 RT4로부터의 FGFR3-TACC3_V4의 단리
방광암 환자 유래 세포주 RT4(ECACC(유럽 콜렉션 오브 셀 컬쳐(European Collection of Cell Cultures))로부터 구입)로부터 정제한 RNA에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 올리고(dT) 프라이머(올리고(dT) 20 프라이머, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다. 이어서, 서열 번호 5로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_F 및 서열 번호 6으로 표시되는 FGFR3-TACC3_cloning_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 60℃ 15초, 68℃ 5분 30초를 30 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 7로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F 및 서열 번호 8로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 5분을 30 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 결과, 약 4.5kbase의 PCR 산물이 얻어졌다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트; 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하고, 인서트를 다이데옥시 시퀀스법(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스)에 의해 서열을 결정한 결과, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 5' 말단으로부터 엑손 18의 3' 말단에 FGFR3의 인트론 18-19 서열의 일부가 융합되고, 나아가 TACC3(NM_006342.1)의 엑손 4의 도중으로부터 융합되어 TACC3의 CDS의 3' 말단까지와 융합되어 있는 전사 산물(FGFR3-TACC3_V4)이 존재하고 있는 것이 명백해졌다. 확인된 서열은 882번째의 염기 서열이 T로부터 C로(SNPs 등록 번호; rs2234909), 2484번째의 염기 서열이 C로부터 T로, 2663번째의 염기 서열이 G로부터 A로 치환되어 있었다(서열 번호 15). 서열 번호 15에 의해 코드되는 폴리펩티드(FGFR3-TACC3_V4 융합 폴리펩티드)를 서열 번호 16에 나타낸다.
시험예 9 FGFR3-TACC3_V1, FGFR3-TACC3_V2, FGFR3-TACC3_V3 및 FGFR3-TACC3_V4의 레트로바이러스액의 제작
FGFR3-TACC3_V1, FGFR3-TACC3_V2, FGFR3-TACC3_V3 및 FGFR3-TACC3_V4의 ORF 전체 길이를 단백질로서 발현하기 위해, 시험예 4, 시험예 5, 시험예 6 및 시험예 8에서 제작한 클로닝 벡터로부터 제한 효소 BamHI로 37℃, 3시간의 효소 반응을 행하여 제한 효소 처리한 DNA 단편을 정제하고, 나아가 EcoRI로 37℃, 3시간의 효소 반응을 행하여 제한 효소 처리한 DNA 단편을 정제하였다. 이 ORF를 포함하는 DNA 단편을 발현 벡터(pMXs-puro; 코스모 바이오사)의 멀티 클로닝 사이트에 존재하는 BamHI 및 EcoRI 사이트에 클로닝하여 발현 플라스미드(FGFR3-TACC3_V1/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_V2/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_V3/pMXs-puro 및 FGFR3-TACC3_V4/pMXs-puro)를 구축하였다.
FGFR3-TACC3_V1/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_V2/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_V3/pMXs-puro 및 FGFR3-TACC3_V4/pMXs-puro를 각 9μg, 트랜스펙션 시약(푸겐(FUGENE)(등록 상표) HD, 로슈(Roche)사)을 사용하여, 플래티넘-E 세포에 트랜스펙션을 실시하였다. 트랜스펙션 24 시간 후에 10％ 소 혈청(니치레이 바이오사이언스사)을 포함하는 D-MEM 배지(둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지; 인비트로젠사)를 교환하고, 나아가 24 시간 후의 배지 상청을 채취하여 레트로바이러스 용액을 제작하였다.
시험예 10 FGFR3-TACC3_V1, FGFR3-TACC3_V2, FGFR3-TACC3_V3 및 FGFR3-TACC3_V4의 부착 비의존적 증식 항진 작용의 검토
시험예 9에 있어서, FGFR3-TACC3_V1/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_V2/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_V3/pMXs-puro 및 FGFR3-TACC3_V4/pMXs-puro를 사용하여 제작한 바이러스 용액에 폴리브렌(Polybrene; 시그마(Sigma)사)을 4μg/mL의 농도로 첨가한 후, NIH3T3 세포에 첨가하여 감염시켰다. 첨가 6 시간 후에 10％ 소 혈청(니치레이 바이오사이언스사)을 포함하는 D-MEM 배지로 교환하고, 감염 1일 후에 10％ 소 혈청(니치레이 바이오사이언스사) 및 1μg/mL의 퓨로마이신(시그마사)을 포함하는 D-MEM 배지(인비트로젠사)로 교환하고, 5％ CO2 존재하에 37℃에서 4주일 배양을 계속하여, FGFR3-TACC3_V1, FGFR3-TACC3_V2, FGFR3-TACC3_V3 및 FGFR3-TACC3_V4를 안정 발현하는 NIH3T3 세포를 취득하였다(각각 FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포 및 FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포로 명명하였음).
FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포 및 FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포의 부착 비의존적 증식 항진능을 검토하기 위해, 96웰 스페로이드 플레이트(스미론 셀타이트 스페로이드 96U; 스미토모 베이크라이트)에 FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포 및 공벡터인 pMXs-puro를 감염시킨 NIH3T3 세포(Mock/NIH3T3 세포)를 각각 1웰당 1×103개가 되도록 10％ 소 혈청(니치레이 바이오사이언스사)을 포함하는 D-MEM 배지(인비트로젠사)에서 파종하였다. 5％ CO2 존재하에 37℃에서 배양한 후, 익일(Day1) 및 4일 후(Day4)의 세포수를 세포수 측정 시약(셀타이터-글로(등록 상표) 형광 세포 생존성 검정; 프로메가사)을 매뉴얼의 방법에 따라 측정하였다. 검출에는 발광 측정 장치를 사용하였다. Mock/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 세포수의 카운트는 증가하지 않은 것에 비해 FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 약 3.1배의 세포수의 카운트의 증가, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 약 2.8배의 세포수의 카운트의 증가, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 약 2.3배의 세포수의 카운트의 증가, FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 약 2.5배의 세포수의 카운트의 증가가 확인되었다.
이상으로부터, FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포 및 FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포는 부착 비의존적 세포 증식을 나타내는 것이 명확해졌다.
시험예 11 FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포, 방광암 환자 유래 세포주 RT-112 및 방광암 환자 유래 세포주 RT4에 대한 화합물의 부착 비의존적 세포 증식 저해 작용
부착 비의존적인 세포 증식의 측정(콜로니법 등)은, 화합물의 항암 작용(약리 효과)을 검토하는 계로서 알려져 있다(임상 종양학 세컨드 에디션, 암과 화학 요법사). 콜로니법에 대신하는 세포 비접착성의 증식을 측정하는 방법으로서, 상술한 바와 같은 스페로이드 플레이트를 사용하는 방법이 있다.
96웰 스페로이드 플레이트(스미론 셀타이트 스페로이드 96U; 스미토모 베이크라이트)에 FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포를 1웰당 1×103개가 되도록 10％ 소 태아 혈청을 포함하는 D-MEM 배지에서 파종하였다. 마찬가지로 방광암 환자 유래 세포주 RT-112를 1웰당 1×103개가 되도록 10％ 소 태아 혈청 및 2mM L-글루타민(glutamine)을 포함하는 RPMI1640 배지, 방광암 환자 유래 세포주 RT4를 1웰당 1×103개가 되도록 10％ 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지에서 파종하였다. 또한, 포지티브 컨트롤용으로 배지만 첨가한 웰을 제조하였다. 5％ CO2 존재하에 37℃에서 밤새 배양한 후, 피검 화합물을 최종 농도 100nM, 10nM 및 1nM으로 첨가하였다. 네거티브 컨트롤로서 화합물의 용매인 DMSO를 화합물 첨가시와 동일한 농도(0.1％)가 되도록 첨가하였다. 그 후, 5％ CO2 존재하에 37℃에서 4일간 배양하고, 세포수 측정 시약(셀타이터-글로(등록 상표) 형광 세포 생존성 검정; 프로메가사)을 첨가하여 20분 교반한 후, 발광 측정 장치를 사용하여 측정하였다. 포지티브 컨트롤, 네거티브 컨트롤의 값을 각각 100％ 저해값, 0％ 저해값으로 하여 각 화합물의 증식 저해 ％를 산출하였다. 그 결과, 표 4에 나타내는 바와 같이 몇 가지의 본 발명 화합물이 FGFR3-TACC3_V1 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V2 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V3 발현/NIH3T3 세포, FGFR3-TACC3_V4 발현/NIH3T3 세포, 방광암 환자 유래 세포주 RT-112 및 방광암 환자 유래 세포주 RT4의 부착 비의존적 증식 항진 작용을 저해하는 것을 발견하였다.
이상의 결과에 의해, FGFR3-TACC3_V1, FGFR3-TACC3_V2, FGFR3-TACC3_V3 및 FGFR3-TACC3_V4를 발현하는 암 세포나 종양의 증식을 본 발명 화합물에 의해 저해할 수 있다는 것이 명확해졌다.
시험예 12 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드의 인비트로 키나아제 활성에 대한 화합물의 저해 작용
(1) FLAG 태그 융합 발현 플라스미드(FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+), FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+) 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+))의 구축
5' 말단에 FLAG 태그를 융합시킨 FGFR3-TACC3 융합 폴리뉴클레오티드를 취득하기 위해, 시험예 4, 시험예 5 및 시험예 6에서 클로닝한 벡터를 주형으로서 사용하여, 5' 말단에 FLAG 태그를 부가시키는 PCR을 실시하였다. 서열 번호 17로 표시되는 FGFR3_N_FLAG_BamHI 및 서열 번호 8로 표시되는 FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R의 프라이머 및 DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 3분 30초를 12 사이클)을 행하였다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트; 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하였다. 인서트는 다이데옥시 시퀀스법에 의해 서열을 결정하였다(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스). 그 결과, PCR 산물은 서열 번호 9, 서열 번호 11 및 서열 번호 13에 기재되어 있는 서열 중, 퍼스트 메티오닌을 코드하는 3 염기(ATG)가 삭제되고, 개시 코돈과 FLAG 태그를 코드하는 핵산 서열(서열 번호 24)이 5' 말단에 부가된 핵산 서열인 것을 확인하였다. 이들에 의해 코드되는 폴리펩티드를 각각 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드라고 칭하고, 이들을 총칭하여 FGFR3-TACC3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드라고 칭한다. 또한, 이들의 FLAG 서열을 부가한 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG), FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG)의 ORF 전체 길이를 단백질로서 발현하는 발현 벡터 구축을 위해, 상기 클로닝 벡터로부터 제한 효소 BamHI로 37℃, 3시간의 효소 반응을 행하여 제한 효소 처리한 DNA 단편을 정제하고, 나아가 EcoRI에서 37℃, 3시간의 효소 반응을 행하여 제한 효소 처리한 DNA 단편을 정제하였다. 이 ORF를 포함하는 DNA 단편을 발현 벡터(pcDNA 3.1/Zeo(+); 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)의 멀티 클로닝 사이트에 존재하는 BamHI 및 EcoRI 사이트에 클로닝하여 발현 플라스미드(FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+), FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+) 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+))를 구축하였다.
(2) FGFR3-TACC3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 취득
트랜스펙션 실시 전일에 콜라겐 코트된 15cm 디시 1장당 0.5×107개의 HEK293 세포를 10％ 송아지 태아 혈청을 포함하는 D-MEM 배지를 사용하여 10장 배양하였다. 트랜스펙션 당일에 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+), FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+) 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG)/pcDNA 3.1/Zeo(+) (시험예 12)를 각각 디시 1장당 27μg, 트랜스펙션 시약(후겐(등록 상표) HD, 로슈사)를 81μL 사용하여 HEK293 세포에 트랜스펙션을 실시하였다. 트랜스펙션 24시간 후에 배지를 제거하여 PBS로 3회 세정하고, 1mL의 PBS를 가하여 셀 스크레이퍼(코닝사)에 의해 세포를 박리한 후, 폴리프로필렌제 튜브에 회수하였다. 1200rpm으로 5분간 원심한 후, 상청을 제거하여 150μL의 세포 용해액(50mM Tris-HCl(pH 8.0), 150mM NaCl, 1％ NP-40, 1mM EDTA, 프로테아제 조해제 칵테일 컴플리트(complete))을 가하고 빙상에서 30분간 인큐베이션하여 세포를 용해시켰다. 원심 후 얻어진 상청 중에 존재하는 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드를 각각 M2 항체 어피니티 겔(ANTI-FLAG M2 Affinity Gel; 시그마-알드리치(SIGMA-ALDRICH)사)을 사용하여 제품 정보에 기재된 방법에 따라 정제하였다. 세정 및 용출은 세정액(50mM Tris-HCl(pH8.0), 150mM NaCl, 1％ NP-40, 1mM EDTA, 프로테아제 조해제 칵테일 컴플리트), 용출액(20mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM MgCl2, 10mM MnCl2, 0.5mg/mL FLAG 펩티드)을 각각 사용하여, 100μL의 용출액을 얻었다. FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드가 얻어진 것을 용출액에 대하여 항FGFR3 항체(셀 시그널링사) 및 항플래그 M2 항체(시그마-알드리치사)를 사용한 면연 블로팅 및 은 염색을 행하여 확인하였다.
(3) FGFR3-TACC3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 인비트로 키나아제 활성의 검출
상기에서 정제한 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 펩티드 기질에 대한 인산화 활성을 키나아제 활성 검출 키트(HTRF KinEASE-TK; 시스바이오(Cisbio)사)를 사용하여 검토하였다. 코닝사 384웰, 저-부피 블랙 플레이트(Low-volume Black plate)를 사용하고, 상기 용출액의 1배 희석 용액, 3배 희석 용액 또는 10배 희석 용액의 각 1μL를 효소원으로 하여, 키트 동봉의 5x 키나아제 완충액(Kinase buffer)에 DTT 및 Mg를 각각 최종 농도 1mM 및 5mM가 되도록 첨가하여 반응 용액으로 하였다. 키트 동봉의 TK Substrate를 기질로서 최종 농도가 2.0μM가 되도록 ATP 미첨가 및 ATP의 최종 농도가 100μM가 되도록 첨가하고, 최종 용량 5.0μL로 하여 각각 실온에서 1시간 반응시켰다. 반응 후, 키트 권장의 방법에 따라 Sa-XL665 및 TK 항체(Antibody)-Eu(K) 용액을 제조하고, 각각 2.5μL 첨가하고, 실온에서 1시간 반응한 후, HTRF의 카운트(즉 펩티드 기질의 인산화)를 검출하였다. 그 결과, ATP 미첨가에 대하여 ATP 첨가에서는 HTRF의 카운트가 상기 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 또는 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드를 포함하는 각 용출액 1배 희석 용액 1μL를 첨가했을 때에는 각각 약 38배, 약 40배 및 약 38배 증가, 상기 용출액 3배 희석 용액 1μL를 첨가했을 때에는 각각 약 27배, 34배, 31배, 상기 용출액 10배 희석 용액 1μL를 첨가했을 때에는 각각 5배, 18배, 11배로 증가하고 있는 것이 명확해졌다.
이상과 같이, 키나아제 활성 검출 키트를 사용함으로써, 각 융합 폴리펩티드의 인비트로 키나아제 활성을 검출하는 것이 가능하였다.
(4) FGFR3-TACC3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 인비트로 키나아제 활성에 대한 화합물의 저해 작용
FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 인비트로 키나아제 활성에 대한 피검 화합물의 저해 작용을 상기 키나아제 활성 검출 키트 및 동일한 384웰 플레이트를 사용하여 검토하였다. 각 화합물의 최종 농도 100nM, 10nM 및 1nM가 되도록 첨가하고, 컨트롤로서 DMSO를 0.1％가 되도록 첨가하여, FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드에 대해서는 상기 용출액 2배 희석 용액 1μL, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드에 대해서는 상기 용출액 3배 희석 용액 1μL 및FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드에 대해서는 상기 용출액 3배 희석 용액 1μL를 첨가하고, 이어서 키트 동봉의 TK 기질(Substrate)을 기질로 최종 농도가 2.0μM가 되도록 첨가하여, 실온에서 15분간 반응시켰다. 이어서, ATP를 최종 농도 100μM가 되도록 첨가 또는 첨가하지 않고, 최종 용량 5.0μL로 하여 실온에서 60분간 반응시켰다. 그 이외에는, 상술한 (3)의 방법과 마찬가지로 제조한 Sa-XL665 및 TK 항체-Eu(K) 용액을 각각 2.5μL 첨가하고, 실온에서 1시간 반응한 후, HTRF의 카운트를 검출하였다. 화합물 비존재하(DMSO를 화합물 첨가시와 동일한 농도인 0.1％)에서의 ATP 미첨가 및 첨가시의 인산화의 카운트를 각각 100％ 저해, 0％ 저해로 하여, 화합물에 의한 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 키나아제 활성의 저해％를 이하의 식으로부터 산출하였다.
[화합물에 의한 키나아제 활성 저해(％)]=(1-[화합물 첨가 ATP 첨가시의 인산화의 카운트-화합물 미첨가 ATP 미첨가시의 인산화의 카운트]/[화합물 미첨가 ATP 첨가시의 인산화의 카운트-화합물 미첨가 ATP 미첨가시의 인산화의 카운트])×100
그 결과, 표 5에 나타내는 바와 같이, 몇 가지의 본 발명 화합물이 정제 FGFR3-TACC3_V1(N-FLAG) 융합 폴리펩티드, FGFR3-TACC3_V2(N-FLAG) 융합 폴리펩티드 및 FGFR3-TACC3_V3(N-FLAG) 융합 폴리펩티드의 펩티드 기질에 대한 인산화 활성을 저해하는 것을 발견하였다.
시험예 13 방광암 환자 유래 세포주 SW780으로부터의 FGFR3-BAIAP2L1의 단리
방광암 환자 유래 세포주 SW780(ATCC로부터 구입)으로부터 정제한 RNA에 대하여 역전사 효소(수퍼스크립트 III, 라이프 테크놀로지스사) 및 올리고(dT) 프라이머(올리고(dT) 20 프라이머, 라이프 테크놀로지스사)를 사용하여 키트의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하고, cDNA를 합성하였다.
이어서, 서열 번호 18로 표시되는 FGFR3-BAIAP2L1_cloning_F 및 서열 번호 19로 표시되는 FGFR3-BAIAP2L1_cloning_R의 프라이머를 사용하여, 상기에서 얻은 cDNA를 주형으로 하여, DNA 폴리메라아제(KOD -plus- Ver.2; 도요 보세끼 가부시끼가이샤)를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 60℃ 15초, 68℃ 5분을 30 사이클)을 행하였다. 그 후, 10배 희석한 상술한 PCR 산물을 주형으로 하여, 서열 번호 20으로 표시되는 FGFR3_BAIAP2L1_cloning_BamHI_F 및 서열 번호 21로 표시되는 FGFR3_BAIAP2L1_cloning_NotI_R의 프라이머를 사용하고, 동일한 DNA 폴리메라아제를 사용하여 PCR(98℃ 15초, 55℃ 15초, 68℃ 4분을 30 사이클)을 행하였다. PCR 반응 후, 전기 영동한 결과, 약 3.8kbase의 PCR 산물이 얻어졌다. PCR 산물을 클로닝 벡터(TOPO XL PCR 클로닝 키트; 라이프 테크놀로지스 가부시끼가이샤)에 클로닝하고, 인서트를 다이데옥시 시퀀스법(BigDye 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트; 라이프 테크놀로지스)에 의해 서열을 결정한 결과, NCBI에 등록되어 있는 FGFR3(NM_001163213.1)의 CDS의 5' 말단으로부터 엑손 18의 3' 말단까지가 BAIAP2L1(NM_018842.4)의 CDS의 엑손 2의 5' 말단으로부터 CDS의 3' 말단까지와 융합되어 있는 전사 산물(FGFR3-BAIAP2L1)인 것이 명백해졌다. 확인된 서열은, 3558번째의 염기 서열이 G로부터 A로(SNPs 등록 번호; rs1045916), 3723번째의 염기 서열이 C로부터 T로, 3747번째의 염기 서열이 G로부터 A로 치환되어 있었다(서열 번호 22). 서열 번호 22에 의해 코드되는 폴리펩티드를 서열 번호 23에 나타낸다.
시험예 14 FGFR3-BAIAP2L1의 레트로바이러스액의 제작
FGFR3-BAIAP2L1의 ORF 전체 길이를 단백질로서 발현하는 발현 플라스미드를 구축하기 위해, 상기 클로닝 벡터로부터 제한 효소 BamHI로 37℃, 3시간의 효소 반응을 행하여 제한 효소 처리한 DNA 단편을 정제하고, 나아가 NotI로 37℃, 3시간의 효소 반응을 행하여 제한 효소 처리한 DNA 단편을 정제하였다. 이 ORF를 포함하는 DNA 단편을 발현 벡터(pMXs-puro; 코스모 바이오사)의 멀티 클로닝 사이트에 존재하는 BamHI 및 NotI 사이트에 클로닝하여 발현 플라스미드(FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro)를 구축하였다. 제작한 FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro를 사용하여, 시험예 9의 방법에 따라 레트로바이러스 용액을 제작하였다.
시험예 15 FGFR3-BAIAP2L1의 부착 비의존적 증식 항진 작용의 검토
시험예 14에 있어서 FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro를 사용하여 제작한 바이러스 용액을 사용하여, 시험예 10의 방법에 따라 FGFR3-BAIAP2L1을 안정 발현하는 NIH3T3 세포를 취득하였다(FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포라고 명명하였음).
FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포의 부착 비의존적 증식 항진능을 검토하기 위해, 시험예 10과 마찬가지의 방법으로 검토하였다. Mock/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 세포수의 카운트는 증가하지 않은 것에 비해, FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포는 Day1부터 Day4까지 약 2.5배의 세포수의 카운트의 증가가 확인되었다. 이상으로부터, FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포 및 부착 비의존적 세포 증식을 나타내는 것이 명확해졌다.
시험예 16 FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포에 대한 부착 비의존적 세포증식 저해 작용
96웰 스페로이드 플레이트(스미론 셀타이트 스페로이드 96U; 스미토모 베이크라이트)에 FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포를 1웰당 1×103개가 되도록 10％ 소 태아 혈청을 포함하는 D-MEM 배지에서 파종하였다. 또한, 포지티브 컨트롤용으로 배지만 첨가한 웰을 제조하였다. 5％ CO2 존재하에 37℃에서 밤새 배양한 후, 피검 화합물을 최종 농도 100nM, 10nM 및 1nM으로 첨가하였다. 네거티브 컨트롤로서 화합물의 용매인 DMSO를 화합물 첨가시와 동일한 농도(0.1％)가 되도록 첨가하였다. 그 후, 5％ CO2 존재하에 37℃에서 4일간 배양하고, 세포수 측정 시약(셀타이터-글로(등록 상표) Luminescent Cell Viability Assay; 프로메가사)을 첨가하여 20분 교반한 후, 발광 측정 장치를 사용하여 측정하였다. 포지티브 컨트롤, 네거티브 컨트롤의 값을 각각 100％ 저해값, 0％ 저해값으로 하여 각 화합물의 증식 저해 ％를 산출하였다. 그 결과, 표 6에 나타내는 바와 같이, 몇 가지의 본 발명 화합물이 FGFR3-BAIAP2L1 발현/NIH3T3 세포의 부착 비의존적 증식 항진 작용을 저해하는 것을 발견하였다.
이상의 결과에 의해, FGFR3-BAIAP2L1을 발현하는 암 세포나 종양의 증식을 본 발명 화합물에 의해 저해할 수 있다는 것이 명확해졌다.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 1종 또는 2종 이상을 유효 성분으로서 함유하는 의약 조성물은, 당 분야에 있어서 통상 사용되고 있는 부형제, 즉 약제용 부형제나 약제용 담체 등을 사용하여, 통상 사용되고 있는 방법에 의해 제조할 수 있다.
투여는 정제, 환약, 캡슐제, 과립제, 분재, 액제 등에 의한 경구 투여, 또는 관절내, 정맥내, 근육내 등의 주사제, 좌제, 점안제, 안연고, 경피용 액제, 연고제, 경피용 부착제, 경점막 액제, 경점막 부착제, 흡입제, 방광내 주입제 등에 의한 비경구 투여 중 어느 하나의 형태일 수도 있다.
경구 투여를 위한 고체 조성물로서는, 정제, 분제, 과립제 등이 사용된다. 이러한 고체 조성물에 있어서는, 1종 또는 2종 이상의 유효 성분을 적어도 1종의 불활성인 부형제와 혼합한다. 조성물은 통상법에 따라 불활성의 첨가제, 예를 들어 활택제나 붕괴제, 안정화제, 용해 보조제를 함유하고 있을 수도 있다. 정제 또는 환약은 필요에 따라 당의 또는 위용성 또는 장용성 물질의 필름으로 피막할 수도 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물은, 약제적으로 허용되는 유탁제, 용액제, 현탁제, 시럽제 또는 엘릭시르제 등을 포함하고, 일반적으로 사용되는 불활성의 희석제, 예를 들어 정제수 또는 에탄올을 포함한다. 당해 액체 조성물은 불활성의 희석제 이외에 가용화제, 습윤제, 현탁제와 같은 보조제, 감미제, 풍미제, 방향제, 방부제를 함유하고 있을 수도 있다.
비경구 투여를 위한 주사제는, 무균의 수성 또는 비수성의 용액제, 현탁제 또는 유탁제를 함유한다. 수성의 용제로서는, 예를 들어 주사용 증류수 또는 생리 식염액이 포함된다. 비수성의 용제로서는, 예를 들어 에탄올과 같은 알코올류가 있다. 이러한 조성물은, 등장화제, 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제, 또는 용해 보조제를 더 포함할 수도 있다. 이들은 예를 들어 박테리아 보류 필터를 통과하는 여과, 살균제의 배합 또는 조사에 의해 무균화된다. 또한, 이들은 무균의 고체 조성물을 제조하고, 사용 전에 무균수 또는 무균의 주사용 용매에 용해 또는 현탁하여 사용할 수도 있다.
외용제로서는, 연고제, 경고제, 크림제, 젤리제, 퍼프제, 분무제, 로션제, 점안제, 안연고 등을 포함한다. 일반적으로 사용되는 연고 기제, 로션 기제, 수성 또는 비수성의 액제, 현탁제, 유제 등을 함유한다.
흡입제나 경비제 등의 경점막제는 고체, 액체 또는 반고체상인 것이 사용되며, 종래 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다. 예를 들어 공지된 부형제나, pH 조정제, 방부제, 계면활성제, 활택제, 안정제나 증점제 등이 적절히 더 첨가되어 있을 수도 있다. 투여는, 적당한 흡입 또는 취송을 위한 디바이스를 사용할 수 있다. 예를 들어, 계량 투여 흡입 디바이스 등의 공지된 디바이스나 분무기를 사용하여, 화합물을 단독으로 또는 처방된 혼합물의 분말로서, 또는 의약적으로 허용할 수 있는 담체와 조합하여 용액 또는 현탁액으로서 투여할 수 있다. 건조 분말 흡입기 등은 단회 또는 다수회의 투여용인 것일 수도 있고, 건조 분말 또는 분말 함유 캡슐을 이용할 수 있다. 또는, 적당한 구출제, 예를 들어 클로로플루오로알칸 또는 이산화탄소 등의 적합한 기체를 사용한 가압 에어로졸 스프레이 등의 형태일 수도 있다.
통상 경구 투여의 경우, 1일의 투여량은 체중당 약 0.001 내지 100mg/kg, 바람직하게는 0.1 내지 30mg/kg, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 10mg/kg이 적당하고, 이것을 1회 또는 2회 내지 4회로 나누어서 투여한다. 정맥내 투여되는 경우에는, 1일의 투여량은 체중당 약 0.0001 내지 10mg/kg이 적당하고, 1일 1회 내지 복수회로 나누어서 투여한다. 또한, 경점막제로서는, 체중당 약 0.001 내지 100mg/kg을 1일 1회 내지 복수회로 나누어서 투여한다. 투여량은 증상, 연령, 성별 등을 고려하여 개개의 경우에 따라 적절히 결정된다.
투여 경로, 제형, 투여 부위, 부형제나 첨가제의 종류에 따라 상이하지만, 본 발명의 의약 조성물은 0.01 내지 100중량％, 어느 형태로서는 0.01 내지 50중량％의 유효 성분인 1종 또는 그 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 함유한다.
화학식 (I)의 화합물은, 상술한 화학식 (I)의 화합물이 유효성을 나타낸다고 생각되는 질환의 다양한 치료제 또는 예방제와 병용할 수 있다. 당해 병용은, 동시 투여 또는 개별적으로 연속하여, 또는 원하는 시간 간격을 두고 투여할 수도 있다. 동시 투여 제제는, 배합제일 수도 개별적으로 제제화되어 있을 수도 있다.
실시예
이하, 실시예에 기초하여, 화학식 (I)의 화합물의 제조법을 더욱 상세하게 설명한다. 또한, 본 발명은, 하기 실시예에 기재된 화합물로 한정되는 것은 아니다. 또한, 원료 화합물의 제조 방법을 제조예에 나타낸다. 또한, 화학식 (I)의 화합물의 제조법은, 이하에 나타나는 구체적 실시예의 제조법만으로 한정되는 것은 아니며, 화학식 (I)의 화합물은 이들의 제조법의 조합, 또는 당업자에게 자명한 방법에 의해서도 제조될 수 있다.
또한, 실시예, 제조예 및 후술하는 표 중에 있어서, 이하의 약호를 사용하는 경우가 있다.
PEx: 제조예 번호, Ex: 실시예 번호, PSyn: 동일한 방법으로 제조한 제조예 번호, Syn: 동일한 방법으로 제조한 실시예 번호, Str: 화학 구조식(Me: 메틸, Et: 에틸, iPr: 이소프로필, tBu: tert-부틸, Boc: tert-부톡시카르보닐, Bn: 벤질, THP: 테트라히드로피라닐), DAT: 물리 화학적 데이터, ESI+: 질량 분석에 있어서의 m/z값(이온화법 ESI, 언급이 없는 경우(M+H)+), ESI-: m/z값(이온화법 ESI, 언급이 없는 경우(M-H)-), EI: 질량 분석에 있어서의 m/z값(이온화법 EI, 언급이 없는 경우(M)+), APCI/ESI+: 질량 분석에 있어서의 m/z값(이온화법 APCI와 ESI의 동시 측정, 언급이 없는 경우(M+H)+), NMR1: 디메틸술폭시드 -d6 중의 1H-NMR에 있어서의 δ(ppm), NMR2: CDCl3 중의 1H-NMR에 있어서의 δ(ppm), NMR3: CD3OD 중의 1H-NMR에 있어서의 δ(ppm), 제조예 및 실시예 중의 「M」: mol/L를 나타낸다. 또한, 화학식 중의 HCl은 염산염인 것을 나타내고, HCl 앞의 숫자는 몰비를 나타낸다. 예를 들어 2HCl은 이염산염인 것을 의미한다. 또한, 제조예표 및 실시예표 중에 「*」가 붙은 화합물은, 그의 화합물이 광학 활성체인 것을 나타냄)
제조예 1
아르곤 분위기하, 3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]아닐린(300mg)과 에탄올(6mL)의 혼합물에 메탄술폰산(128μL)을 가하고, 30분간 실온에서 교반한 후, 5-브로모-2-클로로피리미딘(229mg)을 가하고, 100℃에서 4시간 교반하였다. 5-브로모-2-클로로피리미딘(95mg)을 추가하고, 100℃에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올)로 정제하여, 5-브로모-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(352mg)을 얻었다.
제조예 2
3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]아닐린(253mg)과 이소프로판올(6mL)의 혼합물에 메탄술폰산(162μL)을 가하고, 30분간 실온에서 교반한 후, 2-클로로-5-요오도피리미딘(200mg)을 가하고, 90℃에서 12시간, 나아가 마이크로웨이브 조사하에 130℃에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-요오도-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(282mg)을 얻었다.
제조예 3
아르곤 분위기하, 1-에티닐-3,5-디메톡시벤젠(3g)과 아세토니트릴(30mL)의 혼합물을 빙냉하고, 염화술푸릴(3.15mL)을 가하고, 실온에서 4시간 교반하였다. 염화술푸릴(449μL)을 더 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 아세트산에틸과 포화 중조수를 가하고, 실온에서 30분 교반하였다. 발생한 고체를 여과 취출하고, 아세트산에틸로 세정한 후, 감압 건조하여, 2,4-디클로로-3-에티닐-1,5-디메톡시벤젠(1.99g)을 얻었다.
제조예 4
1-에티닐-3,5-디메톡시벤젠(4g)과 아세토니트릴(80mL)의 혼합물을 빙냉하고, N-플루오로-N'-(클로로메틸)트리에틸렌디아민비스(테트라플루오로보레이트) (19.4g)를 가하고, 서서히 승온시키면서 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산), 이어서 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/헥산)로 정제하여, 3-에티닐-2,4-디플루오로-1,5-디메톡시벤젠(798mg, 후술하는 제조예 번호 PEx.4-1) 및 1-에티닐-2-플루오로-3,5-디메톡시벤젠(375mg, 후술하는 제조예 번호 PEx.4-2)을 얻었다.
제조예 5
아르곤 분위기하, 1-에티닐-2-플루오로-3,5-디메톡시벤젠(800mg)과 아세토니트릴(8mL)의 혼합물을 빙냉하고, 염화술푸릴(378μL)을 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 아세트산에틸과 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 2-클로로-3-에티닐-4-플루오로-1,5-디메톡시벤젠(787mg)을 얻었다.
제조예 6
아르곤 분위기하, 2,6-디플루오로-3-메톡시벤즈알데히드(500mg), 탄산칼륨(803mg) 및 메탄올(10mL)의 혼합물에 디메틸(1-디아조-2-옥소프로필)포스포네이트(523μL)를 실온에서 가하고, 5시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2-에티닐-1,3-디플루오로-4-메톡시벤젠(452mg)을 얻었다.
제조예 7
아르곤 분위기하, 2-아미노-5-요오도피리미딘(1g), 3-에티닐-2,4-디플루오로-1,5-디메톡시벤젠(897mg), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(261mg), 요오드화구리(43mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(20mL)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민(1.55mL)을 가하여, 80℃에서 1시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고, 잔사에 클로로포름 및 물을 가한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 클로로포름으로 추출한 후, 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]피리미딘-2-아민(1.07g)을 얻었다.
제조예 8
아르곤 분위기하, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]피리미딘-2-아민(400mg), 메탄올(4mL) 및 테트라히드로푸란(4mL)의 혼합물에 10％ 팔라듐-탄소(73mg)를 가하였다. 수소 분위기하에서 60℃에서 8시간 교반한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]피리미딘-2-아민(402mg)을 얻었다.
제조예 9
아르곤 분위기하, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]피리미딘-2-아민(100mg)과 아세토니트릴(2mL)의 혼합물에 염화구리(II)(68mg) 및 아질산 n-펜틸(69μL)을 가하고, 60℃에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물에 아세트산에틸을 가하고, 불용물을 여과 분별하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2-클로로-5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]피리미딘(20mg)을 얻었다.
제조예 10
(2-클로로피리미딘-5-일)메탄올(120mg), 3,5-디메톡시페놀(186mg), 트리부틸포스핀(297μL) 및 테트라히드로푸란(2.4mL)의 혼합물을 빙냉하고, 1,1'-(아조디카르보닐)디피페리딘(305mg)을 가한 후, 실온에서 12시간 교반하였다. 불용물을 여과 분별하고, 여과액을 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2-클로로-5-[(3,5-디메톡시페녹시)메틸]피리미딘(119mg)을 얻었다.
제조예 13
2-클로로-5-히드록시피리미딘(278mg)과 탄산칼륨(453mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(3mL)의 혼합물을 빙냉하고, 3,5-디메톡시벤질브로마이드(541mg)를 가한 후, 실온에서 7시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2-클로로-5-[(3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(360mg)을 얻었다.
제조예 14
2-클로로-5-[(3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(4.17g)과 N,N-디메틸포름아미드(40mL)의 혼합물에 N-클로로숙신이미드(4.05g)를 가하고, 실온에서 2시간, 60℃에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하였다. 고체를 아세트산에틸(40mL)에 현탁한 후, 80℃로 가열하였다. 고체를 여과 취출한 후, 감압 건조하여, 2-클로로-5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(3.99g)을 얻었다.
제조예 15
2-클로로-5-히드록시피리미딘(487mg)과 1-(3,5-디메톡시페닐)에탄올(680mg), 트리부틸포스핀(1.37mL) 및 테트라히드로푸란(14mL)의 혼합물을 빙냉하고, 1,1'-(아조디카르보닐)디피페리딘(1.4g)을 가한 후, 실온에서 12시간, 50℃에서 3시간 교반하였다. 불용물을 여과 분별하고, 여과액을 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2-클로로-5-[1-(3,5-디메톡시페닐)에톡시]피리미딘(415mg)을 얻었다.
제조예 16
3,5-디메톡시벤조산메틸(1g)과 아세토니트릴(20mL)의 혼합물을 빙냉하고, N-플루오로-N'-(클로로메틸)트리에틸렌디아민비스(테트라플루오로보레이트)(4.09g)를 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨 및 염기성 실리카 겔을 가하고, 30분간 교반한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤조산메틸(292mg: 제조예 16-1) 및 2-플루오로-3,5-디메톡시벤조산메틸(232mg: 제조예 16-2)을 각각 얻었다.
제조예 17
2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤조산메틸(10g)과 테트라히드로푸란(50mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화붕소리튬(3.0M 테트라히드로푸란 용액, 43mL)을 가한 후, 실온에서 65시간 교반하였다. 반응 혼합물을 다시 빙냉하고, 수소화붕소리튬(3.0M 테트라히드로푸란 용액, 14mL)을 더 가하여, 실온에서 22시간 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉하고, 빙수(300mL) 중에 천천히 가하였다. 농염산(25mL)을 천천히 더 가하여, 실온에서 1시간 교반하였다. 톨루엔/아세트산에틸(1:1)로 추출하고, 유기층을 포화 중조수 및 포화 식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, (2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)메탄올(8.67g)을 얻었다.
제조예 18
(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)메탄올(1.71g), 트리에틸아민(2.57mL) 및 테트라히드로푸란(34mL)의 혼합물을 빙냉하고, 메탄술포닐클로라이드(716μL)를 가한 후, 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질메탄술포네이트(2.32g)를 얻었다.
제조예 19
2-클로로-5-히드록시피리미딘(4.38g), 탄산칼륨(9.27g) 및 N,N-디메틸포름아미드(79mL)의 혼합물에 2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질메탄술포네이트(7.89g)를 가한 후, 60℃에서 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하여, 2-클로로-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(8.53g)을 얻었다.
제조예 20
2,3,5,6-테트라플루오로피리딘(1.5g)과 메탄올(15mL)의 혼합물을 빙냉하고, 나트륨메톡시드(4.03g)를 가한 후, 실온에서 2시간, 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 디에틸에테르로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 3,5-디플루오로-2,6-디메톡시피리딘(1.47g)을 얻었다.
제조예 21
디이소프로필아민(745μL)과 테트라히드로푸란(5mL)의 혼합물을 -78℃로 냉각하고, n-부틸리튬(1.6M 헥산 용액, 3.02mL)을 가한 후, 0℃에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각하고, 3,5-디플루오로-2,6-디메톡시피리딘(770mg)과 테트라히드로푸란(5mL)의 혼합물을 적하하여, 1시간 교반하였다. N,N-디메틸포름아미드(440μL)를 가한 후, 실온으로 승온시켜 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 3,5-디플루오로-2,6-디메톡시이소니코틴알데히드(406mg)를 얻었다.
제조예 22
3,5-디플루오로-2,6-디메톡시이소니코틴알데히드(400mg)와 메탄올(4mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화붕소나트륨(82mg)을 가하고, 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 1M 염산을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 농축하여, (3,5-디플루오로-2,6-디메톡시피리딘-4-일)메탄올(403mg)을 얻었다.
제조예 23
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(235mg), tert-부틸 4-(4-아미노-3-메톡시페닐)피페리딘-1-카르복실레이트(306mg), 1,1'-비나프탈렌-2,2'-디일비스(디페닐포스핀)(138mg), 탄산세슘(660mg) 및 디옥산(10mL)의 혼합물에 아세트산팔라듐(30mg)을 실온에서 가하고, 100℃에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, tert-부틸4-[4-({5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-3-메톡시페닐]피페리딘-1-카르복실레이트(298mg)를 얻었다.
제조예 24
2-플루오로-5-니트로톨루엔(500mg), 탄산칼륨(2.0g) 및 N,N-디메틸포름아미드(15mL)의 혼합물에 4-피페리딘-4-일티오모르폴린 1,1-디옥시드비스트리플루오로아세트산염(2.16g)을 가하고, 80℃에서 20시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 4-[1-(2-메틸-4-니트로페닐)피페리딘-4-일]티오모르폴린 1,1-디옥시드(870mg)를 얻었다.
제조예 25
아르곤 분위기하, 4-[1-(2-메틸-4-니트로페닐)피페리딘-4-일]티오모르폴린 1,1-디옥시드(1.5g)와 아세트산(30mL)의 혼합물에 10％ 팔라듐-탄소(452mg)를 가하였다. 수소 분위기하에서 13시간 교반한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사에 포화 중조수를 가하였다. 석출된 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하여 4-[4-(1,1-디옥시드티오모르폴린-4-일)피페리딘-1-일]-3-메틸아닐린(1.26g)을 얻었다.
제조예 26
1-클로로-2-(디플루오로메톡시)-4-니트로벤젠(920mg), 탄산칼륨(1.7g) 및 N,N-디메틸포름아미드(10mL)의 혼합물에 1-메틸-4-피페리딘-4-일피페라진(1.13g)을 가하고, 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고, 잔사에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제하여, 1-{1-[2-(디플루오로메톡시)-4-니트로페닐]피페리딘-4-일}-4-메틸피페라진(1.38g)을 얻었다.
제조예 27
아르곤 분위기하, 1-{1-[2-(디플루오로메톡시)-4-니트로페닐]피페리딘-4-일}-4-메틸피페라진(1.38g)과 에탄올(54mL)의 혼합물에 10％ 팔라듐-탄소(397mg)를 가하였다. 수소 분위기하, 1시간 교반한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축하여, 3-(디플루오로메톡시)-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]아닐린(1.25g)을 얻었다.
제조예 28
벤질피페라진-1-카르복실레이트(10g), 2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-4-온(7.05g) 및 디클로로메탄(100mL)의 혼합물을 빙냉하고, 트리아세톡시수소화붕소나트륨(11.5g)을 가한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 벤질 4-(2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(7.18g)를 얻었다.
제조예 29
아르곤 분위기하, 벤질 4-(2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(7.18g)와 에탄올(60mL)의 혼합물에 10％ 팔라듐-탄소(2.0g)를 가하였다. 수소 분위기하에서 7시간 교반한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축하여, 1-(2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-4-일)피페라진(4.35g)을 얻었다.
제조예 30
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘(202mg), tert-부틸 9-(4-아미노-2-메톡시페닐)-3,9-디아자스피로[5,5]운데칸-3-카르복실레이트(311mg), 2-(디시클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐(30mg), 탄산칼륨(134mg) 및 tert-부탄올(10mL)의 혼합물에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(19mg)을 실온에서 가하고, 100℃에서 4시간 교반하였다. 불용물을 여과 분별하고, 아세트산에틸로 세정하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, tert-부틸 4-[4-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-메톡시페닐]-3,9-디아자스피로[5,5]운데칸-3-카르복실레이트(259mg)를 얻었다.
제조예 31
N-[3-(1,4-디옥사-8-아자스피로[4,5]데시-8-일)페닐]-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-아민(596mg), 아세트산(9mL) 및 물(9mL)의 혼합물에 농염산(0.5mL)을 가하고, 80℃에서 7시간 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉하고, 1M 수산화나트륨 수용액(155mL) 및 포화 중조수를 가한 후, 발생한 고체를 여과 취출하였다. 클로로포름을 가하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 1-[3-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-온(512mg)을 얻었다.
제조예 32
2-[3-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올(116mg), 트리에틸아민(84μL) 및 테트라히드로푸란(4mL)의 혼합물을 빙냉하고, 메탄술포닐클로라이드(47μL)를 가한 후, 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 2-[3-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에틸메탄술포네이트(129mg)를 얻었다.
제조예 33
4-(4-니트로-1H-피라졸-1-일)피페리딘(250mg), 1-메틸피페리딘-4-온(220μL) 및 디클로로메탄(5mL)의 혼합물을 빙냉하고, 트리아세톡시수소화붕소나트륨(810mg)을 가한 후, 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제하여, 1'-메틸-4-(4-니트로-1H-피라졸-1-일)-1,4'-비피페리딘(342mg)을 얻었다.
제조예 34
1-(2-클로로-4-니트로페닐)-4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진(3.7g), 염화암모늄(352mg), 에탄올(94mL), 테트라히드로푸란(47mL) 및 물(47mL)의 혼합물에 철분(3.06g)을 가하고, 70℃에서 4시간 교반하였다. 불용물을 여과 분별한 후, 여과액을 감압 농축하였다. 잔사에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 3-클로로-4-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]아닐린(1.03g)을 얻었다.
제조예 35
(3R,5S)-1-(2-메톡시-4-니트로페닐)-3,5,-디메틸피페라진(3.0g), N,N-디이소프로필에틸아민(2.32mL), 디-tert-부틸디카르보네이트(2.71g) 및 디옥산(20mL)의 혼합물에 4-디메틸아미노피리딘(69mg)을 가하고, 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, tert-부틸(2R,6S)-4-(2-메톡시-4-니트로페닐)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(1.73g)를 얻었다.
제조예 36
2-(2-브로모에톡시)-1-클로로-4-니트로벤젠(3.0g), 탄산세슘(5.23g), N-메틸피롤리돈(30mL)의 혼합물에 1H-피라졸(874mg)을 가하고, 60℃에서 6시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하였다. 고체를 물로 세정하고, 감압 건조하여, 1-[2-(2-클로로-5-니트로페녹시)에틸]-1H-피라졸(2.57g)을 얻었다.
제조예 37
1-[2-(2-클로로-5-니트로페녹시)에틸]-1H-피라졸(1.3g), 탄산세슘(1.0g), N-메틸피롤리돈(8mL)의 혼합물에 시스-2,6-디메틸피페라진(832mg)을 가하고, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하였다. 고체를 물로 세정하고, 감압 건조하여, (3R,5S)-3,5-디메틸-1-{4-니트로-2-[2-(1H-피라졸-1-일)에톡시]페닐}피페라진(1.15g)을 얻었다.
제조예 38
2-클로로-5-[(3,5-디메톡시벤질)옥시]피리딘(500mg)과 아세토니트릴(10mL)의 혼합물을 빙냉하고, 염화술푸릴(297μL)을 가하고, 실온에서 3일간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 포화 중조수를 가하였다. 발생한 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하여, 2-클로로-5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리딘(596mg)을 얻었다.
제조예 39
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민(3.6g) 및 메탄올(20mL)의 혼합물에 4M 염화수소/디옥산 용액(40mL)을 가하고, 실온에서 6시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 포화 중조수를 가하였다. 발생한 고체를 여과 취출하고, 디에틸에테르로 세정한 후, 감압 건조하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-(1H-피라졸-4-일)피리미딘-2-아민(2.9g)을 얻었다.
제조예 40
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-(1H-피라졸-4-일)피리미딘-2-아민(4.0g), 탄산칼륨(4.6g) 및 N,N-디메틸포름아미드(80mL)의 혼합물에 에틸브로모아세테이트(2.4mL)를 가하고, 80℃에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 에틸 [4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]아세테이트(4.2g)를 얻었다.
제조예 41
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-(1H-피라졸-4-일)피리미딘-2-아민(50mg), 탄산칼륨(57mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(1mL)의 혼합물에 [(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]메틸 4-메틸벤젠술포네이트(98μL)를 가하고, 60℃에서 1시간, 110℃에서 4일간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-(1-{[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]메틸}-1H-피라졸-4-일)피리미딘-2-아민(45mg)을 얻었다.
제조예 111
4-니트로-1H-피라졸(500mg), tert-부틸(3-엔드)-3-[(메틸술포닐)옥시]-8-아자비시클로[3,2,1]옥탄-8-카르복실레이트(1.35g) 및 N-메틸피롤리돈(6mL)의 혼합물에 탄산세슘(2.16g)을 가하고, 100℃에서 6시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하여, tert-부틸(3-엑소)-3-(4-니트로-1H-피라졸-1-일)-8-아자비시클로[3,2,1]옥탄-8-카르복실레이트(1.07g)를 얻었다.
제조예 118
4-니트로-1H-피라졸(3g), 퀴누클리딘-3-올(4.05g), 트리페닐포스핀(9.05g) 및 테트라히드로푸란(60mL)의 혼합물을 빙냉하고, 아조디카르복실산디이소프로필(6.84mL)을 가한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 1M 염산(50 mL)을 가하였다. 수층을 아세트산에틸로 세정한 후, 1M 수산화나트륨 수용액(60mL)을 가하여, 염기성으로 하였다. 클로로포름으로 추출하고, 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸)로 정제하여, 3-(4-니트로-1H-피라졸-1-일)퀴누클리딘(5.15g)을 얻었다.
제조예 133
tert-부틸(4-아미노-2-메톡시페닐)[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]카르바메이트(1.21g)와 테트라히드로푸란(24mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화리튬알루미늄(629mg)을 가한 후, 가열 환류하에 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(0.63mL), 1M 수산화나트륨 수용액(0.63mL) 및 물(1.89mL)을 순서대로 가하고, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 여과 분별한 후, 여과액을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 2-메톡시-N1-메틸-N1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]벤젠-1,4-디아민(922mg)을 얻었다.
제조예 138
2-클로로-5-니트로피리미딘(798mg), 탄산칼륨(1.04g) 및 N,N-디메틸포름아미드(16mL)의 혼합물에 1-메틸-4-(피페리딘-4-일)피페라진(1.1g)을 가하고, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 2-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]-5-니트로피리미딘(542mg)을 얻었다.
제조예 143
tert-부틸 4-(2-아미노-1,3-티아졸-5-일)피페리딘-1-카르복실레이트(1.13g)와 아세트산에틸(8mL)의 혼합물에 4M 염화수소/아세트산에틸 용액(8mL)을 가하고, 실온에서 3시간 교반하였다. 용매를 감압 농축하여, 5-(피페리딘-4-일)-1,3-티아졸-2-아민염산염(877mg)을 얻었다.
제조예 144
5-(피페리딘-4-일)-1,3-티아졸-2-아민염산염(519mg), 디클로로메탄(5mL) 및 메탄올(5mL)의 혼합물에 1H-벤조트리아졸-1-일메탄올(423mg), 아세트산나트륨(388mg) 및 트리아세톡시수소화붕소나트륨(1.0g)을 순서대로 가하고, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수 및 염기성 실리카 겔을 가한 후, 용매를 감압 농축하였다. 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-(1-메틸피페리딘-4-일)-1,3-티아졸-2-아민(411mg)을 얻었다.
제조예 145
5-니트로피리딘-2(1H)-온(700mg), (R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올(661mg), 트리페닐포스핀(1.97g) 및 테트라히드로푸란(20mL)의 혼합물을 빙냉하고, 아조디카르복실산디이소프로필(1.49mL)을 가한 후, 실온에서 5시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, (R)-2-[(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시]-5-니트로피리딘(541mg)을 얻었다.
제조예 152
(S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올(661mg)과 N,N-디메틸포름아미드(23mL)의 혼합물에 수소화나트륨(218mg)을 가하고, 실온에서 10분 교반하였다. 반응 혼합물에 2-클로로-5-니트로피리딘(793mg)을 가하고, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, (S)-2-[(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시]-5-니트로피리딘(810mg)을 얻었다.
제조예 162
2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에틸메탄술포네이트(320mg)와 N-메틸피롤리돈(6mL)의 혼합물에 tert-부틸피페라진-1-카르복실레이트(1.31g)를 가하고, 80℃에서 밤새 교반, 나아가 120℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물과 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, tert-부틸4-{2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에틸}피페라진-1-카르복실레이트(202mg)를 얻었다.
제조예 175
5-메틸-1H-피라졸-3-아민(522mg)과 N,N-디메틸포름아미드(10mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화나트륨(473mg)을 가한 후, 30분간 교반하였다. 반응 혼합물에 2-(2-브로모에톡시)테트라히드로-2H-피란(893μL)을 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, 5-메틸-1-[2-(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)에틸]-1H-피라졸-3-아민(427mg: 제조예 175-1) 및 3-메틸-1-[2-(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)에틸]-1H-피라졸-5-아민(199mg: 제조예 175-2)을 얻었다.
제조예 176
5-[2-(벤질옥시)에틸]-3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-1-메틸-1H-피라졸(640mg)과 에탄올(9.7mL)의 혼합물에 히드록실아민(1.37mL) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물(1.95g)을 순서대로 가하고, 95℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-[2-(벤질옥시)에틸]-1-메틸-1H-피라졸-3-아민(470mg)을 얻었다.
제조예 183
(1-메틸-3-니트로-1H-피라졸-5-일)메탄올(398mg), 3,4-디히드로-2H-피란(459μL) 및 아세트산에틸(8mL)의 혼합물에 p-톨루엔술폰산 일수화물(96mg)을 가하고, 실온에서 1.5시간 교반하였다. 3,4-디히드로-2H-피란(459μL) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물(96mg)을 더 가하고, 실온에서 1.5시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, 1-메틸-3-니트로-5-[(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)메틸]-1H-피라졸(487mg)을 얻었다.
제조예 186
4-니트로-1H-피라졸(300mg), 2-페닐-1,3-디옥산-5-올(717mg), 트리페닐포스핀(1.11g) 및 테트라히드로푸란(4.5mL)의 혼합물을 빙냉하고, 아조디카르복실산디이소프로필(842μL)을 가한 후, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 4-니트로-1-(2-페닐-1,3-디옥산-5-일)-1H-피라졸(121mg)을 얻었다.
제조예 189
5-니트로피리딘-2-카르발데히드(761mg), 2-(피페라진-1-일)에탄올(1.23mL), 아세트산(570μL) 및 디클로로메탄(20mL)의 혼합물에 트리아세톡시수소화붕소나트륨(2.23g)을 가하고, 실온에서 16시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름/2-프로판올로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 2-{4-[(5-니트로피리딘-2-일)메틸]피페라진-1-일}에탄올(726mg)을 얻었다.
제조예 191
메틸 5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(871mg), 에탄올(8.7mL) 및 테트라히드로푸란(8.7mL)의 혼합물에 1M 수산화나트륨 수용액(3.45mL)을 가하고, 60℃에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 1M 염산을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하여, 5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실산(846mg)을 얻었다.
제조예 193
5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실산(300mg)과 디옥산(8.5mL)의 혼합물을 빙냉하고, 1,1'-카르보닐디이미다졸(99mg)을 가한 후, 실온에서 2시간 교반하고, 60℃에서 2시간 교반하였다. 1,1'-카르보닐디이미다졸(99mg)을 더 가하고, 60℃에서 2시간 교반하였다. 1,1'-카르보닐디이미다졸(297mg)을 더 가하고, 실온에서 1시간 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉하고, 수소화붕소나트륨(230mg)을 가한 후, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, [5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일]메탄올(126mg)을 얻었다.
제조예 201
1-메틸-3-니트로-1H-피라졸-5-카르발데히드(850mg)와 테트라히드로푸란(50mL)의 혼합물에 (트리페닐포스포르아닐리덴)아세트산메틸(3.66g)을 가하고, 60℃에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 클로로포름으로 세정하고, 고체를 여과 취출하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 앞서 얻어진 고체와 합하여, 메틸(E)-3-(1-메틸-3-니트로-1H-피라졸-5-일)아크릴레이트(1.15g)를 얻었다.
제조예 202
아르곤 분위기하, 메틸(E)-3-(1-메틸-3-니트로-1H-피라졸-5-일)아크릴레이트(1.15g)와 에탄올(50mL)의 혼합물에 10％ 팔라듐-탄소(580mg)를 가하였다. 수소 분위기하, 1 기압으로 12시간, 2.7 기압으로 4시간 교반한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축하여, 메틸 3-(3-아미노-1-메틸-1H-피라졸-5-일)프로파노에이트(955mg)를 얻었다.
제조예 204
2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-1,3-티아졸-5-카르복실산(500mg), N-[3-(디에틸아미노)프로필]-N'-에틸카르보디이미드염산염(589mg), 1H-벤조트리아졸-1-올(415mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(10mL)의 혼합물에 1-메틸피페라진(451μL)을 가하고, 실온에서 3일간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, tert-부틸{5-[(4-메틸피페라진-1-일)카르보닐]-1,3-티아졸-2-일}카르바메이트(560mg)를 얻었다.
제조예 205
4-아미노피리딘-2(1H)-온(400mg)과 N-메틸피롤리돈(15mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화나트륨(218mg)을 가한 후, 실온에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물에 (S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일메틸 p-톨루엔술포네이트(1.14g) 및 요오드화나트륨(109mg)을 순서대로 가하고, 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물에 수소화나트륨(218mg)을 가한 후, 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액을 가한 후, 식염을 가하여 포화시키고, 메탄올/클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올)로 정제하여, (R)-4-아미노-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸]피리딘-2(1H)-온(136mg)을 얻었다.
제조예 209
[5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일]메탄올(126mg), 트리에틸아민(147μL), 디클로로메탄(6mL) 및 테트라히드로푸란(6mL)의 혼합물을 빙냉하고, 메탄술포닐클로라이드(82μL)를 가한 후, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드(6mL)를 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, N-[3-(클로로메틸)-1H-피라졸-5-일]-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민(109mg)을 얻었다.
제조예 210
tert-부틸{5-[(4-메틸피페라진-1-일)카르보닐]-1,3-티아졸-2-일}카르바메이트(560mg)와 아세트산에틸(8mL)의 혼합물에 4M 염화수소/아세트산에틸 용액(8mL)을 가하고, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올/클로로포름)로 정제하여, (2-아미노-1,3-티아졸-5-일)(4-메틸피페라진-1-일)메타논(357mg)을 얻었다.
제조예 211
(5-니트로-1H-피라졸-3-일)메탄올(1.86g), 3,4-디히드로-2H-피란(4.7mL) 및 아세토니트릴(28mL)의 혼합물에 트리플루오로아세트산(40μL)을 가하고, 70℃에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, 5-니트로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-3-[(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)메틸]-1H-피라졸(3.98g)을 얻었다.
제조예 214
[5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-일]메탄올(200mg)과 1,2-디클로로에탄(12mL)의 혼합물을 빙냉하고, 이산화망간(442mg)을 가하고, 실온에서 30분 교반한 후, 90℃에서 2시간 교반하였다. 불용물을 여과 분별한 후, 여과액을 감압 농축하여, 5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-카르발데히드(142mg)를 얻었다.
제조예 229
2-클로로-6-플루오로-3,5-디메톡시벤조산메틸(682mg)과 테트라히드로푸란(25 mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화알루미늄리튬(104mg)을 가한 후, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 빙냉하, 디에틸에테르를 가하여 희석한 후, 포화 황산나트륨 수용액을 가하였다. 불용물을 여과 분별하고, 여과액을 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, (2-클로로-6-플루오로-3,5-디메톡시페닐)메탄올(363mg)을 얻었다.
제조예 232
아르곤 분위기하, 2-브로모-5-니트로아니솔(3.15g)과 tert-부틸 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)-8-아자비시클로[3.2.1]옥트-2-엔-8-카르복실레이트(5.00g)와 디옥산(40mL)의 혼합물에 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐디클로라이드디클로로메탄 착체(554mg), 탄산칼륨(2.81g)을 순서대로 가하고, 80℃에서 21시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, tert-부틸 3-(2-메톡시-4-니트로페닐)-8-아자비시클로[3.2.1]옥트-2-엔-8-카르복실레이트(2.78g)를 얻었다.
제조예 252
tert-부틸 4,4-비스(아세톡시메틸)-1,4'-비피페리딘-1'-카르복실레이트(712mg)와 디클로로메탄(6mL)의 혼합물을 빙냉하고, 트리플루오로아세트산(3mL)을 가한 후, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 1,4'-비피페리딘-4,4-디일비스(메틸렌)디아세테이트(529mg)를 얻었다.
제조예 255
tert-부틸 4,4-비스(히드록시메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(1.01g), 트리에틸아민(861μL) 및 디클로로메탄(10mL)의 혼합물을 빙냉하고, 무수 아세트산(950μL)을 가한 후, 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, tert-부틸 4,4-비스(아세톡시메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(1.38g)를 얻었다.
제조예 295
2-[3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-1-메틸-1H-피라졸-5-일]에탄올(630mg), 벤질브로마이드(376μL) 및 테트라히드로푸란(8mL)의 혼합물을 빙냉한 후, 수소화나트륨(173mg)을 가하고, 실온에서 6시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 5-[2-(벤질옥시)에틸]-3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-1-메틸-1H-피라졸(640mg)을 얻었다.
제조예 296
3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-1-메틸-1H-피라졸(2g)과 테트라히드로푸란(60mL)의 혼합물을 -78℃로 냉각한 후, n-부틸리튬(1.6M 헥산 용액, 8.56mL)을 가하고, 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 옥시란(1.1M 테트라히드로푸란 용액, 15.6mL) 및 삼불화붕소 테트라히드로푸란 착체(1.51mL)를 가하고, 30분간 교반한 후, 실온까지 승온시켜 6시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제하여, 2-[3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-1-메틸-1H-피라졸-5-일]에탄올(630mg)을 얻었다.
상기에 나타낸 제조예의 제조 방법과 마찬가지로 하여, 후술하는 표 7 내지 표 62에 나타내는 화합물을 제조하였다. 또한, 각 제조예 화합물의 제조법, 구조 및 물리 화학적 데이터를 표 7 내지 표 62에 나타낸다.
실시예 1
아르곤 분위기하, 5-브로모-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(104mg), 1-에티닐-3,5-디메톡시벤젠(37mg), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(13mg), 요오드화구리(4mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(2mL)의 혼합물에 트리에틸아민(157μL)을 가하여, 120℃에서 30분간 교반하였다. 1-에티닐-3,5-디메톡시벤젠(146mg)과 N,N-디메틸포름아미드(1mL)의 혼합물을 더 가하고, 120℃에서 2시간 교반한 후, 반응 혼합물을 아세트산에틸로 희석하고, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올), 이어서 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, 5-[(3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(23mg)을 얻었다.
실시예 2
아르곤 분위기하, 5-[(3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(72mg), 메탄올(2mL) 및 테트라히드로푸란(2mL)의 혼합물에 10％ 팔라듐-탄소(25mg)를 가하였다. 수소 분위기 하(3 기압)에 4시간 교반한 후, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 디에틸에테르로 고화하여, 5-[2-(3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(17mg)을 얻었다.
실시예 3
아르곤 분위기하, 5-요오도-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(100mg), 2,4-디클로로-3-에티닐-1,5-디메톡시벤젠(55mg), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(23mg), 요오드화구리(2mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(2mL)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민(67μL)을 가하여, 100℃에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물을 아세트산에틸로 희석하고, 셀라이트 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 여과액에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올), 이어서 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(56mg)을 얻었다.
실시예 4
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(92mg)과 아세트산에틸(6mL)의 혼합물에 4M 염화수소/아세트산에틸 용액(1mL)을 가하고, 실온에서 4시간 교반하였다. 고체를 여과 취출하고, 감압 건조하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민 3염산염(101mg)을 얻었다.
실시예 5
5-[2-(3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(131mg)과 아세토니트릴(1.3mL)의 혼합물을 빙냉하고, 염화술푸릴(41μL)을 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 디이소프로필에테르로 세정하여, N-{2-클로로-5-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}-5-[2-(2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐)에틸]피리미딘-2-아민(29mg)을 얻었다.
실시예 6
아르곤 분위기하, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-{3-메톡시-4-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(164mg), 4-메틸벤젠술포닐히드라지드(2.63g) 및 1,2-디메톡시에탄(3mL)의 혼합물을 110℃에서 교반하고, 아세트산나트륨(1.16g) 및 물(1mL)의 혼합물을 가하였다. 2시간 후, 4-메틸벤젠술포닐히드라지드(1.32g)를 가한 후, 아세트산나트륨(581mg)과 물(1mL)의 혼합물을 더 가하고, 110℃에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올/농암모니아수)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-메톡시-4-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(114mg)을 얻었다.
실시예 7
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에티닐]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민(100mg), 테트라히드로푸란(5mL) 및 메탄올(5mL)의 혼합물을 H-Cube(등록 상표)(10％ 팔라듐-탄소, 0.5mL/분, 50℃, 1 기압)를 사용하여 반응을 행하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민(29mg)을 얻었다.
실시예 8
에틸[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]아세테이트(292mg), 테트라히드로푸란(6mL) 및 에탄올(6mL)의 혼합물에 1M 수산화나트륨 수용액(1.3mL)을 실온에서 가하고, 5시간 교반하였다. 반응 혼합물을 1M 염산을 사용하여 중성으로 하고, 발생한 고체를 여과 취출하였다.물로 세정한 후, 감압 건조하여, [4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]아세트산(267mg)을 얻었다.
실시예 9
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]피리미딘(56mg), 1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-아민(48mg), 1,1'-비나프탈렌-2,2'-디일비스(디페닐포스핀)(33mg), 탄산세슘(174mg) 및 디옥산(2.2mL)의 혼합물에 아세트산팔라듐(8mg)을 실온에서 가하고, 100℃에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-[1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민(43mg)을 얻었다.
실시예 10
1-(브로모메틸)-2,6-디플루오로벤젠(14mg), 2-클로로-5-히드록시피리미딘(9.1mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(1mL)의 혼합물에 탄산칼륨(16mg)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하고, 유기층을 감압 농축하였다. 잔사에 3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]아닐린(30mg), 탄산세슘(65mg), 아세트산팔라듐-X-Phos(Pd:P=1:2)ChemDose(등록 상표) 태블릿 및 tert-부틸알코올(0.5mL)의 혼합물을 가하고, 질소 분위기하 120℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하고, 유기층을 감압 농축하였다. 잔사를 HPLC(0.1％ 포름산 수용액/메탄올)로 정제하여, 5-[(2,6-디플루오로벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(17mg)을 얻었다.
실시예 11
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-(1-{[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]메틸}-1H-피라졸-4-일)피리미딘-2-아민(45mg) 및 테트라히드로푸란(2mL)의 혼합물에 1M 염산(1mL)을 가하고, 50℃에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, (2S)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올(27mg)을 얻었다.
실시예 12
tert-부틸 4-[4-({5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-3-메톡시페닐]피페리딘-1-카르복실레이트(298mg)와 클로로포름(6mL)의 혼합물을 빙냉하고, 트리플루오로아세트산(1mL)을 가한 후, 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉하고, 1M 수산화나트륨 수용액(10mL) 및 포화 중조수를 가하여 염기성으로 하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 조생성물(273mg)을 얻었다. 나아가 조생성물(60mg)을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[2-메톡시-4-(피페리딘-4-일)페닐]피리미딘-2-아민(23mg)을 얻었다.
실시예 13
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[2-메톡시-4-(피페리딘-4-일)페닐]피리미딘-2-아민(63mg), 디클로로메탄(2mL) 및 메탄올(1mL)의 혼합물에 1H-벤조트리아졸-1-일 메탄올(20mg)을 가하여 실온에서 1시간 교반한 후, 트리아세톡시수소화붕소나트륨(51mg)을 가하고, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[2-메톡시-4-(1-메틸피페리딘-4-일)페닐]피리미딘-2-아민(28mg)을 얻었다.
실시예 14
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민(200mg), 에탄올(3mL) 및 N,N-디메틸포름아미드(3mL)의 혼합물에 2,2-디메틸옥시란(112μL)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하여 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, 1-{4-[4-({5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]피페리딘-1-일}-2-메틸프로판-2-올(93mg)을 얻었다.
실시예 15
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민(150mg), 트리에틸아민(131μL) 및 디클로로메탄(4mL)의 혼합물을 빙냉하고, 시클로프로판카르보닐클로라이드(29μL)를 가한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 아세트산에틸로 고화하여, 시클로프로필{4-[4-({5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]피페리딘-1-일}메타논(159mg)을 얻었다.
실시예 16
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민(150mg), 탄산칼륨(130mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(4mL)의 혼합물에 2-브로모에틸메틸에테르(32μL)를 가한 후, 실온에서 밤새, 60℃에서 3시간 교반하였다. 2-브로모에틸메틸에테르(12μL)를 더 가하고, 60℃에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하여 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-[1-(2-메톡시에틸)피페리딘-4-일]-1H-피라졸-4-일}피리미딘-2-아민(41mg)을 얻었다.
실시예 17
에틸 1-메틸-5-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(663mg), 에탄올(6.6mL) 및 테트라히드로푸란(6.6mL)의 혼합물에 1M 수산화나트륨 수용액(3.2mL)을 가하고, 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물에 1M 염산(3.2mL)을 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하고, 물로 세정한 후, 감압 건조하여, 1-메틸-5-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-카르복실산(464mg)을 얻었다.
실시예 18
1-메틸-5-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-카르복실산(100mg), 1-메틸피페라진(83μL), 1H-벤조트리아졸-1-올(68mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(2mL)의 혼합물에 N-[3-(디에틸아미노)프로필]-N'-에틸카르보디이미드염산염(97mg)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제하여, (4-메틸피페라진-1-일)[1-메틸-5-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-일]메타논(79mg)을 얻었다.
실시예 19
tert-부틸 4-[4-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-메톡시페닐]-3,9-디아자스피로[5,5]운데칸-3-카르복실레이트(232mg)와 디클로로메탄(3mL)의 혼합물을 빙냉하고, 트리플루오로아세트산(0.5mL)을 가한 후, 실온에서 1시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 아세트산에틸, 포화 중조수를 가하고, 발생한 고체를 여과 취출하였다. 아세트산에틸로 세정한 후, 감압 건조하여, N-[4-(3,9-디아자스피로[5,5]운데시-3-일)-3-메톡시페닐]-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-아민(167mg)을 얻었다.
실시예 20
2-[3-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에틸메탄술포네이트(160mg)와 N-메틸피롤리돈(6mL)의 혼합물에 1-메틸피페라진(382μL)을 가하고, 80℃에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물 및 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, N-{1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-1H-피라졸-3-일}-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-아민(64mg)을 얻었다.
실시예 21
N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-아민(100mg)과 클로로포름(4mL)의 혼합물을 빙냉하고, m-클로로과벤조산(43mg)을 가하여, 4 내지 10℃에서 3시간, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 티오황산나트륨 수용액을 가하고, 실온에서 1시간 교반한 후, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, N-[3-메톡시-4-(4-메틸-4-옥시드피페라진-1-일)페닐]-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-아민(16mg)을 얻었다.
실시예 22
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리딘(100mg), 3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]아닐린(87mg), 2-(디시클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐(27mg), 나트륨 tert-부톡시드(41mg) 및 N-메틸피롤리돈(3mL)의 혼합물에 아세트산팔라듐(6.4mg)을 가하고, 마이크로웨이브 조사하에 160℃에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리딘-2-아민(27mg)을 얻었다.
실시예 23
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-(1H-피라졸-4-일)피리미딘-2-아민(200mg), 탄산세슘(215mg), (2S)-2-메틸옥시란(128mg) 및 N-메틸피롤리돈(4mL)의 혼합물을 마이크로웨이브 조사하에 130℃에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/헥산)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 세정하여, (2S)-1-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-2-올(171mg)을 얻었다.
실시예 24
[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]아세트산(50mg), 염화암모늄(25mg), 트리에틸아민(66μL), 1H-벤조트리아졸-1-올(32mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(1mL)의 혼합물에 N-[3-(디에틸아미노)프로필]-N'-에틸카르보디이미드염산염(45mg)을 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 감압 농축하고, 잔사를 디이소프로필에테르로 고화하여, 2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]아세트아미드(48mg)를 얻었다.
실시예 64
5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[2-메톡시-4-(피페리딘-4-일)페닐]피리미딘-2-아민(62mg), 아세톤(118μL) 및 디클로로메탄(3mL)의 혼합물에 트리아세톡시수소화붕소나트륨(51mg)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(1-이소프로필피페리딘-4-일)-2-메톡시페닐]피리미딘-2-아민(14mg)을 얻었다.
실시예 106
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{4-(피페라진-1-일)-3-[2-(1H-피라졸-1-일)에톡시]페닐}피리미딘-2-아민(229mg), 포름알데히드액(37％, 164μL), 아세트산(231μL) 및 디클로로메탄(6mL)의 혼합물에 트리아세톡시수소화붕소나트륨(257mg)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{4-(4-메틸피페라진-1-일)-3-[2-(1H-피라졸-1-일)에톡시]페닐}피리미딘-2-아민(72mg)을 얻었다.
실시예 120
1-[3-({5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-온(209mg), 1-메틸피페라진(103μL) 및 디클로로메탄(4mL)의 혼합물에 트리아세톡시수소화붕소나트륨(298mg)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올/농암모니아수)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, N-{3-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}-5-[(2,3,5,6-테트라플루오로벤질)옥시]피리미딘-2-아민(98mg)을 얻었다.
실시예 161
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(피페리딘-4-일)페닐]피리미딘-2-아민(52mg), 글리콜산(26mg), 1H-벤조트리아졸-1-올(31mg) 및 N,N-디메틸포름아미드(1mL)의 혼합물에 N-[3-(디에틸아미노)프로필]-N'-에틸카르보디이미드염산염(44mg)을 가하고, 실온에서 2일간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 1-{4-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-1-일}-2-히드록시에타논(10mg)을 얻었다.
실시예 162
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(123mg)과 에탄올(3ml)의 혼합물에 푸마르산(26mg)을 가한 후, 가열 환류하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 실온에서 밤새 교반한 후, 발생한 고체를 여과 취출하였다. 에탄올로 세정한 후, 감압 건조하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민헤미푸마르산염(82mg)을 얻었다.
실시예 166
tert-부틸4-[4-({5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]피페리딘-1-카르복실레이트(276mg)와 아세트산에틸(2mL)의 혼합물에 4M 염화수소/아세트산에틸 용액(2mL)을 가하고, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 포화 중조수를 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민(119mg)을 얻었다.
실시예 190
tert-부틸{2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에틸}카르바메이트(101mg)와 아세트산에틸(2mL)의 혼합물에 4M 염화수소/아세트산에틸 용액(2mL)을 가하고, 실온에서 3시간 교반하였다.발생한 고체를 여과 취출한 후, 감압 건조하여, N-[1-(2-아미노에틸)-1H-피라졸-4-일]-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민 3염산염(100mg)을 얻었다.
실시예 212
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-[3-(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)프로필]-1H-피라졸-4-일}피리미딘-2-아민(1.6g), 테트라히드로푸란(6.9mL) 및 물(3.4mL)의 혼합물에 아세트산(13.8mL)을 가하고, 70℃에서 2일간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 메탄올(30mL)에 용해하였다. 탄산칼륨(656mg)을 가하고, 60℃에서 5시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하여, 3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올(510mg)을 얻었다.
실시예 213
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{6-[(2-페닐-1,3-디옥산-5-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-2-아민(335mg)과 아세트산(10mL)의 혼합물에 물(2mL)을 가하고, 60℃에서 16시간 교반하였다. 용매를 감압 농축하고, 잔사에 포화 중조수를 가한 후, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, 2-{[5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)피리딘-2-일]옥시}프로판-1,3-디올(92mg)을 얻었다.
실시예 214
5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{6-[2-(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)에톡시]피리딘-3-일}피리미딘-2-아민(1.49g)과 메탄올(5mL)의 혼합물에 4M 염화수소/디옥산 용액(5mL)을 가하고, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 잔사에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 아세트산에틸로 고화한 후, 고체를 여과 취출하여, 2-{[5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)피리딘-2-일]옥시}에탄올(452mg)을 얻었다. 여과액을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 더 정제하여, 생성물(701mg)을 얻었다.
실시예 217
1-[5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)피리딘-2-일]피페리딘-4-온(256mg), 2-아미노에탄올(131μL), 아세트산(200μL) 및 디클로로메탄(9.3mL)의 혼합물에 트리아세톡시수소화붕소나트륨(243mg)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름/2-프로판올로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 아세트산에틸로 고화하여, 2-({1-[5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)피리딘-2-일]피페리딘-4-일}아미노)에탄올(137mg)을 얻었다.
실시예 239
N-{5-[2-(벤질옥시)에틸]-1-메틸-1H-피라졸-3-일}-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민(283mg)과 디클로로메탄(47mL)의 혼합물을 -78℃로 냉각하고, 삼브롬화붕소(1.0M 디클로로메탄 용액, 830μL)를 가한 후, -78℃에서 1시간 교반하고, 0℃에서 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 2-[3-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-메틸-1H-피라졸-5-일]에탄올(38mg)을 얻었다.
실시예 246
5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-메틸-1H-피라졸-3-카르복실산(320mg)과 디옥산(6mL)의 혼합물을 빙냉하고, 1,1'-카르보닐디이미다졸(616mg)을 가한 후, 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 혼합물에 수소화붕소나트륨(287mg)을 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물과 클로로포름을 가하고, 불용물을 셀라이트 여과로 제거한 후, 여과액을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/아세트산에틸)로 정제하여, [5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-메틸-1H-피라졸-3-일]메탄올(125mg)을 얻었다.
실시예 253
5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-(2-히드록시에틸)피리딘-2(1H)-온(90mg), 트리에틸아민(50μL) 및 디클로로메탄(3mL)의 혼합물에 메탄술포닐클로라이드(20μL)를 가하고, 실온에서 1시간 교반하였다. 반응 혼합물에 1-메틸피페라진(50μL) 및 N,N-디메틸포름아미드(3mL)를 가한 후, 50℃에서 20시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/클로로포름)로 정제한 후, 디에틸에테르로 고화하여, 5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]피리딘-2(1H)-온(28mg)을 얻었다.
실시예 254
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(270mg), 1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-이미다졸-4-아민(231mg), 1,1'-비나프탈렌-2,2'-디일비스(디페닐포스핀)(80mg), 탄산세슘(556mg) 및 디옥산(5.4mL)의 혼합물에 아세트산팔라듐(19mg)을 가하고, 마이크로웨이브 조사하에 150℃에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 에탄올/디에틸에테르로 고화하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-이미다졸-4-일]피리미딘-2-아민(241mg)을 얻었다.
실시예 278
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[(2-플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(200mg), 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올(170mg), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐(39mg), 탄산세슘(655mg) 및 디옥산(4mL)의 혼합물에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(31mg)을 가하고, 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산에틸/메탄올)로 정제한 후, 에탄올로 고화하여, 2-[4-({5-[(2-플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올(58mg)을 얻었다.
실시예 282
5-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-3-카르발데히드(100mg), 모르폴린(67μL) 및 N,N-디메틸포름아미드(2mL)의 혼합물에 트리아세톡시수소화붕소나트륨(243mg)을 가하고, 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 중조수를 가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올) 및 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제한 후, 에탄올/디이소프로필에테르로 고화하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[3-(모르폴린-4-일 메틸)-1H-피라졸-5-일]피리미딘-2-아민(42mg)을 얻었다.
실시예 286
아르곤 분위기하, 2-클로로-5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(159mg), 3-메톡시-4-(1-메틸피페리딘-4-일)아닐린(100mg) 및 tert-부탄올(5mL)의 혼합물에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(13mg), 2-(디시클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐(20mg) 및 탄산칼륨(88mg)을 가하고, 100℃에서 8시간 교반하였다. 불용물을 여과 분별하고, 아세트산에틸로 세정한 후, 여과액을 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[3-메톡시-4-(1-메틸피페리딘-4-일)페닐]피리미딘-2-아민(35mg)을 얻었다.
실시예 302
2-{4-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페라진-1-일}에틸메탄술포네이트(100mg)와 메탄올(3mL)의 혼합물에 나트륨메톡시드(25％ 메탄올 용액, 3mL)를 가하고, 마이크로웨이브 조사하에 90℃에서 15분간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고, 잔사에 물을 가한 후, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{4-[4-(2-메톡시에틸)피페라진-1-일]페닐}피리미딘-2-아민(46mg)을 얻었다.
실시예 315
{1'-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-메톡시페닐]-1,4'-비피페리딘-4,4-디일}비스(메틸렌)디아세테이트(46mg)와 메탄올(3mL)의 혼합물에 나트륨메톡시드(25％ 메탄올 용액, 0.2mL)를 가하고, 실온에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, {1'-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-메톡시페닐]-1,4'-비피페리딘-4,4-디일}디메탄올(34mg)을 얻었다.
실시예 336
에틸 4-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-플루오로페닐]부타노에이트(150mg)와 테트라히드로푸란(3mL)의 혼합물을 빙냉하고, 수소화알루미늄리튬(11mg)을 가한 후, 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 빙냉하에 디에틸에테르를 가하여 희석한 후, 포화 황산나트륨 수용액을 가하였다. 불용물을 여과 분별하고, 여과액을 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 4-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-플루오로페닐]부탄-1-올(70mg)을 얻었다.
실시예 349
에틸 4-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-플루오로페닐]부타노에이트(150mg)와 테트라히드로푸란(3mL)의 혼합물을 빙냉하고, 메틸마그네슘브로마이드(1.0M 테트라히드로푸란 용액, 1.2mL)를 가한 후, 3시간 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액을 가한 후, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올)로 정제하여, 5-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-2-플루오로페녹시]-2-메틸펜탄-2-올(104mg)을 얻었다.
실시예 356
질소 분위기하, 2-(4-아미노페녹시)-2-메틸프로피온산(14.6mg), 탄산세슘(49mg), 2-클로로-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(15.8mg) 및 tert-부탄올(0.5mL)의 혼합물에 아세트산팔라듐(II)-2-(디시클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐(Pd:P 1:2)ChemDose(등록 상표) 태블릿을 가하고, 120℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름(2mL)으로 추출한 후, 용매를 감압 농축하였다. 얻어진 잔사를 HPLC(0.1％ 포름산 수용액/메탄올)로 정제하여, 2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페녹시]-2-메틸프로피온산(0.7mg)을 얻었다.
실시예 375
질소 분위기하, 4-아미노-1-(1-tert-부톡시카르보닐-아제티딘-3-일)-1H-피라졸(17.9mg), 탄산세슘(49mg), 2-클로로-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘(15.8mg), tert-부탄올(0.34mL) 및 N,N-디메틸포름아미드(0.16mL)의 혼합물에 아세트산팔라듐(II)-2-(디시클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐(Pd:P 1:2)ChemDose(등록 상표) 태블릿을 가하고, 120℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 물을 가하고, 클로로포름(2mL)으로 추출한 후, 용매를 감압 농축하였다. 얻어진 잔사에 에탄올(1mL) 및 4M 염화수소/아세트산에틸 용액(0.5mL)을 가하고, 실온에서 밤새 교반하고, 용매를 감압 농축하였다. 얻어진 잔사를 HPLC(0.1％ 포름산 수용액/메탄올)로 정제하여, N-[1-(아제티딘-3-일)-1H-피라졸-4-일]-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민(1.7mg)을 얻었다.
상기에 나타낸 실시예의 제조 방법과 마찬가지로 하여, 후술하는 표 63 내지 표 137에 나타내는 화합물을 제조하였다. 또한, 각 실시예 화합물의 구조를 표 63 내지 표 137에, 각 실시예 화합물의 제조법 및 물리 화학적 데이터를 표 138 내지 표 156에 나타낸다.
본 발명의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은, FGFR1, 2 및/또는 3 저해 작용, 특히 변이 FGFR3 저해 작용을 갖고, FGFR1, 2 및/또는 3이 관여하는 각종 암, 예를 들어 폐암이나 호르몬 요법 저항성의 유방암, 위암, 삼중 음성 유방암, 자궁체암 및 방광암 등의 치료제로서, 특히 변이 FGFR3 양성의 방광암의 치료제로서 사용할 수 있다.
서열표 프리 텍스트
이하의 서열표의 숫자 표제 <223>에는, 「인공 서열(Artificial Sequence)」의 설명을 기재한다. 구체적으로는, 서열표의 서열 번호 7, 8, 17, 20 및 21로 표시되는 각 염기 서열은 인공적으로 합성한 프라이머 서열이다. 서열표의 서열 번호 24로 표시되는 염기 서열은, 인공적으로 합성한 FLAG 태그의 서열이다.
SEQUENCE LISTING <110> Astellas Pharma Inc. Kotobuki Pharmaceutical Co., Ltd. <120> Nitrogen-containing Aromatic Heterocyclic Compound <130> FA1535-12129 <150> JP 2012-42065 <151> 2012-02-28 <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 cctggactac tccttcgaca 20 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 tcttctccat cttggagatg agg 23 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 tgtttgaccg agtctacact cac 23 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 ttctccatgg agttcagatc tgtg 24 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 tcctgctctg ccggtcgcac 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 cagcggctcc gtggaggtca 20 <210> 7 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Description of Artificial Sequence: an artificially synthesized primer sequence <400> 7 ggatccgcca ccatgggcgc ccctgcc 27 <210> 8 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Description of Artificial Sequence: an artificially synthesized primer sequence <400> 8 gaattctcag atcttctcca tcttgg 26 <210> 9 <211> 2856 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(2856) <400> 9 atg ggc gcc cct gcc tgc gcc ctc gcg ctc tgc gtg gcc gtg gcc atc 48 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 gtg gcc ggc gcc tcc tcg gag tcc ttg ggg acg gag cag cgc gtc gtg 96 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 ggg cga gcg gca gaa gtc ccg ggc cca gag ccc ggc cag cag gag cag 144 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 ttg gtc ttc ggc agc ggg gat gct gtg gag ctg agc tgt ccc ccg ccc 192 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 ggg ggt ggt ccc atg ggg ccc act gtc tgg gtc aag gat ggc aca ggg 240 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 ctg gtg ccc tcg gag cgt gtc ctg gtg ggg ccc cag cgg ctg cag gtg 288 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 ctg aat gcc tcc cac gag gac tcc ggg gcc tac agc tgc cgg cag cgg 336 Leu Asn Ala Ser His Glu Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg 100 105 110 ctc acg cag cgc gta ctg tgc cac ttc agt gtg cgg gtg aca gac gct 384 Leu Thr Gln Arg Val Leu Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala 115 120 125 cca tcc tcg gga gat gac gaa gac ggg gag gac gag gct gag gac aca 432 Pro Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr 130 135 140 ggt gtg gac aca ggg gcc cct tac tgg aca cgg ccc gag cgg atg gac 480 Gly Val Asp Thr Gly Ala Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp 145 150 155 160 aag aag ctg ctg gcc gtg ccg gcc gcc aac acc gtc cgc ttc cgc tgc 528 Lys Lys Leu Leu Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys 165 170 175 cca gcc gct ggc aac ccc act ccc tcc atc tcc tgg ctg aag aac ggc 576 Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 agg gag ttc cgc ggc gag cac cgc att gga ggc atc aag ctg cgg cat 624 Arg Glu Phe Arg Gly Glu His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His 195 200 205 cag cag tgg agc ctg gtc atg gaa agc gtg gtg ccc tcg gac cgc ggc 672 Gln Gln Trp Ser Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly 210 215 220 aac tac acc tgc gtc gtg gag aac aag ttt ggc agc atc cgg cag acg 720 Asn Tyr Thr Cys Val Val Glu Asn Lys Phe Gly Ser Ile Arg Gln Thr 225 230 235 240 tac acg ctg gac gtg ctg gag cgc tcc ccg cac cgg ccc atc ctg cag 768 Tyr Thr Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 gcg ggg ctg ccg gcc aac cag acg gcg gtg ctg ggc agc gac gtg gag 816 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Gln Thr Ala Val Leu Gly Ser Asp Val Glu 260 265 270 ttc cac tgc aag gtg tac agt gac gca cag ccc cac atc cag tgg ctc 864 Phe His Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 aag cac gtg gag gtg aat ggc agc aag gtg ggc ccg gac ggc aca ccc 912 Lys His Val Glu Val Asn Gly Ser Lys Val Gly Pro Asp Gly Thr Pro 290 295 300 tac gtt acc gtg ctc aag tcc tgg atc agt gag agt gtg gag gcc gac 960 Tyr Val Thr Val Leu Lys Ser Trp Ile Ser Glu Ser Val Glu Ala Asp 305 310 315 320 gtg cgc ctc cgc ctg gcc aat gtg tcg gag cgg gac ggg ggc gag tac 1008 Val Arg Leu Arg Leu Ala Asn Val Ser Glu Arg Asp Gly Gly Glu Tyr 325 330 335 ctc tgt cga gcc acc aat ttc ata ggc gtg gcc gag aag gcc ttt tgg 1056 Leu Cys Arg Ala Thr Asn Phe Ile Gly Val Ala Glu Lys Ala Phe Trp 340 345 350 ctg agc gtt cac ggg ccc cga gca gcc gag gag gag ctg gtg gag gct 1104 Leu Ser Val His Gly Pro Arg Ala Ala Glu Glu Glu Leu Val Glu Ala 355 360 365 gac gag gcg ggc agt gtg tat gca ggc atc ctc agc tac ggg gtg ggc 1152 Asp Glu Ala Gly Ser Val Tyr Ala Gly Ile Leu Ser Tyr Gly Val Gly 370 375 380 ttc ttc ctg ttc atc ctg gtg gtg gcg gct gtg acg ctc tgc cgc ctg 1200 Phe Phe Leu Phe Ile Leu Val Val Ala Ala Val Thr Leu Cys Arg Leu 385 390 395 400 cgc agc ccc ccc aag aaa ggc ctg ggc tcc ccc acc gtg cac aag atc 1248 Arg Ser Pro Pro Lys Lys Gly Leu Gly Ser Pro Thr Val His Lys Ile 405 410 415 tcc cgc ttc ccg ctc aag cga cag gtg tcc ctg gag tcc aac gcg tcc 1296 Ser Arg Phe Pro Leu Lys Arg Gln Val Ser Leu Glu Ser Asn 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Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu 530 535 540 ggc gcc tgc acg cag ggc ggg ccc ctg tac gtg ctg gtg gag tac gcg 1680 Gly Ala Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala 545 550 555 560 gcc aag ggt aac ctg cgg gag ttt ctg cgg gcg cgg cgg ccc ccg ggc 1728 Ala Lys Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly 565 570 575 ctg gac tac tcc ttc gac acc tgc aag ccg ccc gag gag cag ctc acc 1776 Leu Asp Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr 580 585 590 ttc aag gac ctg gtg tcc tgt gcc tac cag gtg gcc cgg ggc atg gag 1824 Phe Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu 595 600 605 tac ttg gcc tcc cag aag tgc atc cac agg gac ctg gct gcc cgc aat 1872 Tyr Leu Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn 610 615 620 gtg ctg gtg acc gag gac aac gtg atg aag atc gca gac ttc ggg ctg 1920 Val Leu Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu 625 630 635 640 gcc cgg gac gtg cac aac ctc gac tac tac aag aag aca acc aac ggc 1968 Ala Arg Asp 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gtg gac ctg ctc cag tac agc cag aag gac 3879 Ser Thr Gly Pro Ile Val Asp Leu Leu Gln Tyr Ser Gln Lys Asp 1280 1285 1290 ctg gat gca gtg gta aag gcg aca cag gag gag aac cgg gag ctg 3924 Leu Asp Ala Val Val Lys Ala Thr Gln Glu Glu Asn Arg Glu Leu 1295 1300 1305 agg agc agg tgt gag gag ctc cac ggg aag aac ctg gaa ctg ggg 3969 Arg Ser Arg Cys Glu Glu Leu His Gly Lys Asn Leu Glu Leu Gly 1310 1315 1320 aag atc atg gac agg ttc gaa gag gtt gtg tac cag gcc atg gag 4014 Lys Ile Met Asp Arg Phe Glu Glu Val Val Tyr Gln Ala Met Glu 1325 1330 1335 gaa gtt cag aag cag aag gaa ctt tcc aaa gct gaa atc cag aaa 4059 Glu Val Gln Lys Gln Lys Glu Leu Ser Lys Ala Glu Ile Gln Lys 1340 1345 1350 gtt cta aaa gaa aaa gac caa ctt acc aca gat ctg aac tcc atg 4104 Val Leu Lys Glu Lys Asp Gln Leu Thr Thr Asp Leu Asn Ser Met 1355 1360 1365 gag aag tcc ttc tcc gac ctc ttc aag cgt ttt gag aaa cag aaa 4149 Glu Lys Ser Phe Ser Asp Leu Phe Lys Arg Phe Glu Lys Gln Lys 1370 1375 1380 gag gtg atc gag ggc tac cgc aag aac gaa 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<213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(3765) <400> 22 atg ggc gcc cct gcc tgc gcc ctc gcg ctc tgc gtg gcc gtg gcc atc 48 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 gtg gcc ggc gcc tcc tcg gag tcc ttg ggg acg gag cag cgc gtc gtg 96 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 ggg cga gcg gca gaa gtc ccg ggc cca gag ccc ggc cag cag gag cag 144 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 ttg gtc ttc ggc agc ggg gat gct gtg gag ctg agc tgt ccc ccg ccc 192 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 ggg ggt ggt ccc atg ggg ccc act gtc tgg gtc aag gat ggc aca ggg 240 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 ctg gtg ccc tcg gag cgt gtc ctg gtg ggg ccc cag cgg ctg cag gtg 288 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 ctg aat gcc tcc cac gag gac tcc ggg gcc tac agc tgc cgg cag cgg 336 Leu Asn Ala Ser His 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ggc ggg ccc ctg tac gtg ctg gtg gag tac gcg 1680 Gly Ala Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala 545 550 555 560 gcc aag ggt aac ctg cgg gag ttt ctg cgg gcg cgg cgg ccc ccg ggc 1728 Ala Lys Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly 565 570 575 ctg gac tac tcc ttc gac acc tgc aag ccg ccc gag gag cag ctc acc 1776 Leu Asp Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr 580 585 590 ttc aag gac ctg gtg tcc tgt gcc tac cag gtg gcc cgg ggc atg gag 1824 Phe Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu 595 600 605 tac ttg gcc tcc cag aag tgc atc cac agg gac ctg gct gcc cgc aat 1872 Tyr Leu Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn 610 615 620 gtg ctg gtg acc gag gac aac gtg atg aag atc gca gac ttc ggg ctg 1920 Val Leu Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu 625 630 635 640 gcc cgg gac gtg cac aac ctc gac tac tac aag aag aca acc aac ggc 1968 Ala Arg Asp Val His Asn Leu Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly 645 650 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Thr Ile Phe Pro His Thr Ala Gly Ser Asn 1085 1090 1095 aag acc tta ctc agc ttt gca cag gga gat gtc atc acg ctg ctc 3339 Lys Thr Leu Leu Ser Phe Ala Gln Gly Asp Val Ile Thr Leu Leu 1100 1105 1110 atc ccc gag gag aag gat ggc tgg ctc tat gga gaa cac gac gtg 3384 Ile Pro Glu Glu Lys Asp Gly Trp Leu Tyr Gly Glu His Asp Val 1115 1120 1125 tcc aag gcg agg ggt tgg ttc ccg tcg tcg tac acg aag ttg ctg 3429 Ser Lys Ala Arg Gly Trp Phe Pro Ser Ser Tyr Thr Lys Leu Leu 1130 1135 1140 gaa gaa aat gag aca gaa gca gtg acc gtg ccc acg cca agc ccc 3474 Glu Glu Asn Glu Thr Glu Ala Val Thr Val Pro Thr Pro Ser Pro 1145 1150 1155 aca cca gtg aga agc atc agc acc gtg aac ttg tct gag aat agc 3519 Thr Pro Val Arg Ser Ile Ser Thr Val Asn Leu Ser Glu Asn Ser 1160 1165 1170 agt gtt gtc atc ccc cca ccc gac tac ttg gaa tgc tta tcc atg 3564 Ser Val Val Ile Pro Pro Pro Asp Tyr Leu Glu Cys Leu Ser Met 1175 1180 1185 ggg gca gct gcc gac agg aga gca gat tcg gcc agg acg aca tcc 3609 Gly Ala Ala Ala Asp Arg Arg Ala Asp Ser Ala Arg Thr Thr Ser 1190 1195 1200 acc ttt aag gcc cca gcg tcc aag ccc gag acc gcg gct cct aac 3654 Thr Phe Lys Ala Pro Ala Ser Lys Pro Glu Thr Ala Ala Pro Asn 1205 1210 1215 gat gcc aac ggg act gca aag ccg cct ttt ctc agc gga gaa aac 3699 Asp Ala Asn Gly Thr Ala Lys Pro Pro Phe Leu Ser Gly Glu Asn 1220 1225 1230 ccc ttt gcc act gtg aaa ctc cgt ccg act gtg acg aat gat cgc 3744 Pro Phe Ala Thr Val Lys Leu Arg Pro Thr Val Thr Asn Asp Arg 1235 1240 1245 tca gca ccc atc att cga tga 3765 Ser Ala Pro Ile Ile Arg 1250 <210> 23 <211> 1254 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 Leu Asn Ala Ser His Glu Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg 100 105 110 Leu Thr Gln Arg Val Leu Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr 130 135 140 Gly Val Asp Thr Gly Ala Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp 145 150 155 160 Lys Lys Leu Leu Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys 165 170 175 Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Arg Glu Phe Arg Gly Glu His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His 195 200 205 Gln Gln Trp Ser Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly 210 215 220 Asn Tyr Thr Cys Val Val Glu Asn Lys Phe Gly Ser Ile Arg Gln Thr 225 230 235 240 Tyr Thr Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Gln Thr Ala Val Leu Gly Ser Asp Val Glu 260 265 270 Phe His Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 Lys His Val Glu Val Asn Gly Ser Lys Val Gly Pro Asp Gly Thr Pro 290 295 300 Tyr Val Thr Val Leu Lys Ser Trp Ile Ser Glu Ser Val Glu Ala Asp 305 310 315 320 Val Arg Leu Arg Leu Ala Asn Val Ser Glu Arg Asp Gly Gly Glu Tyr 325 330 335 Leu Cys Arg Ala Thr Asn Phe Ile Gly Val Ala Glu Lys Ala Phe Trp 340 345 350 Leu Ser Val His Gly Pro Arg Ala Ala Glu Glu Glu Leu Val Glu Ala 355 360 365 Asp Glu Ala Gly Ser Val Tyr Ala Gly Ile Leu Ser Tyr Gly Val Gly 370 375 380 Phe Phe Leu Phe Ile Leu Val Val Ala Ala Val Thr Leu Cys Arg Leu 385 390 395 400 Arg Ser Pro Pro Lys Lys Gly Leu Gly Ser Pro Thr Val His Lys Ile 405 410 415 Ser Arg Phe Pro Leu Lys Arg Gln Val Ser Leu Glu Ser Asn Ala Ser 420 425 430 Met Ser Ser Asn Thr Pro Leu Val Arg Ile Ala Arg Leu Ser Ser Gly 435 440 445 Glu Gly Pro Thr Leu Ala Asn Val Ser Glu Leu Glu Leu Pro Ala Asp 450 455 460 Pro Lys Trp Glu Leu Ser Arg Ala Arg Leu Thr Leu Gly Lys Pro Leu 465 470 475 480 Gly Glu Gly Cys Phe Gly Gln Val Val Met Ala Glu Ala Ile Gly Ile 485 490 495 Asp Lys Asp Arg Ala Ala Lys Pro Val Thr Val Ala Val Lys Met Leu 500 505 510 Lys Asp Asp Ala Thr Asp Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val Ser Glu Met 515 520 525 Glu Met Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu 530 535 540 Gly Ala Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala 545 550 555 560 Ala Lys Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly 565 570 575 Leu Asp Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr 580 585 590 Phe Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu 595 600 605 Tyr Leu Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn 610 615 620 Val Leu Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu 625 630 635 640 Ala Arg Asp Val His Asn Leu Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly 645 650 655 Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val 660 665 670 Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu 675 680 685 Ile Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu 690 695 700 Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp Lys Pro Ala Asn 705 710 715 720 Cys Thr His Asp Leu Tyr Met Ile Met Arg Glu Cys Trp His Ala Ala 725 730 735 Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg 740 745 750 Val Leu Thr Val Thr Ser Thr Asp Asn Val Met Glu Gln Phe Asn Pro 755 760 765 Gly Leu Arg Asn Leu Ile Asn Leu Gly Lys Asn Tyr Glu Lys Ala Val 770 775 780 Asn Ala Met Ile Leu Ala Gly Lys Ala Tyr Tyr Asp Gly Val Ala Lys 785 790 795 800 Ile Gly Glu Ile Ala Thr Gly Ser Pro Val Ser Thr Glu Leu Gly His 805 810 815 Val Leu Ile Glu Ile Ser Ser Thr His Lys Lys Leu Asn Glu Ser Leu 820 825 830 Asp Glu Asn Phe Lys Lys Phe His Lys Glu Ile Ile His Glu Leu Glu 835 840 845 Lys Lys Ile Glu Leu Asp Val Lys Tyr Met Asn Ala Thr Leu Lys Arg 850 855 860 Tyr Gln Thr Glu His Lys Asn Lys Leu Glu Ser Leu Glu Lys Ser Gln 865 870 875 880 Ala Glu Leu Lys Lys Ile Arg Arg Lys Ser Gln Gly Ser Arg Asn Ala 885 890 895 Leu Lys Tyr Glu His Lys Glu Ile Glu Tyr Val Glu Thr Val Thr Ser 900 905 910 Arg Gln Ser Glu Ile Gln Lys Phe Ile Ala Asp Gly Cys Lys Glu Ala 915 920 925 Leu Leu Glu Glu Lys Arg Arg Phe Cys Phe Leu Val Asp Lys His Cys 930 935 940 Gly Phe Ala Asn His Ile His Tyr Tyr His Leu Gln Ser Ala Glu Leu 945 950 955 960 Leu Asn Ser Lys Leu Pro Arg Trp Gln Glu Thr Cys Val Asp Ala Ile 965 970 975 Lys Val Pro Glu Lys Ile Met Asn Met Ile Glu Glu Ile Lys Thr Pro 980 985 990 Ala Ser Thr Pro Val Ser Gly Thr Pro Gln Ala Ser Pro Met Ile Glu 995 1000 1005 Arg Ser Asn Val Val Arg Lys Asp Tyr Asp Thr Leu Ser Lys Cys 1010 1015 1020 Ser Pro Lys Met Pro Pro Ala Pro Ser Gly Arg Ala Tyr Thr Ser 1025 1030 1035 Pro Leu Ile Asp Met Phe Asn Asn Pro Ala Thr Ala Ala Pro Asn 1040 1045 1050 Ser Gln Arg Val Asn Asn Ser Thr Gly Thr Ser Glu Asp Pro Ser 1055 1060 1065 Leu Gln Arg Ser Val Ser Val Ala Thr Gly Leu Asn Met Met Lys 1070 1075 1080 Lys Gln Lys Val Lys Thr Ile Phe Pro His Thr Ala Gly Ser Asn 1085 1090 1095 Lys Thr Leu Leu Ser Phe Ala Gln Gly Asp Val Ile Thr Leu Leu 1100 1105 1110 Ile Pro Glu Glu Lys Asp Gly Trp Leu Tyr Gly Glu His Asp Val 1115 1120 1125 Ser Lys Ala Arg Gly Trp Phe Pro Ser Ser Tyr Thr Lys Leu Leu 1130 1135 1140 Glu Glu Asn Glu Thr Glu Ala Val Thr Val Pro Thr Pro Ser Pro 1145 1150 1155 Thr Pro Val Arg Ser Ile Ser Thr Val Asn Leu Ser Glu Asn Ser 1160 1165 1170 Ser Val Val Ile Pro Pro Pro Asp Tyr Leu Glu Cys Leu Ser Met 1175 1180 1185 Gly Ala Ala Ala Asp Arg Arg Ala Asp Ser Ala Arg Thr Thr Ser 1190 1195 1200 Thr Phe Lys Ala Pro Ala Ser Lys Pro Glu Thr Ala Ala Pro Asn 1205 1210 1215 Asp Ala Asn Gly Thr Ala Lys Pro Pro Phe Leu Ser Gly Glu Asn 1220 1225 1230 Pro Phe Ala Thr Val Lys Leu Arg Pro Thr Val Thr Asn Asp Arg 1235 1240 1245 Ser Ala Pro Ile Ile Arg 1250 <210> 24 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Description of Artificial Sequence: an artificially synthesized FLAG tag sequence <400> 24 atggactaca aggacgacga tgacaag 27

Claims (19)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염.

    (식 중,
    X는 N이고,
    Y는 CH이고,
    L1은 에틸렌 또는 메틸렌-O-이고,
    Z는 CH이고,
    R1은 각각 독립적으로 -O-C1-8알킬 또는 할로겐이고,
    p는 2 또는 4이고,
    환 W는 메틸, -O-메틸 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환 또는 C1-8알킬로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸이고,
    Q는 -L2-R2 또는 R3이고,
    L2는 1개 이상의 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페라진, 1개 이상의 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페리딘 또는 3,9-디아자스피로[5.5]운데칸이고,
    R2는 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페라진, 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피페리딘, 2-히드록시에틸아미노 또는 H이고,
    R3은 -OH, C1-8알킬로 치환되어 있을 수도 있는, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로 원자를 1 내지 4개 갖는 환원수 4 내지 8의 비방향족 헤테로환의 1가기, 및 -C(O)-(-OH로 치환되어 있을 수도 있는, 질소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로 원자를 1 내지 4개 갖는 환원수 4 내지 8의 비방향족 헤테로환의 1가기)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상으로 치환된 C1-8알킬임)
  2. 제1항에 있어서, p는 4이고, R1은 각각 독립적으로 -O-메틸 또는 F이고, L1이 -메틸렌-O-이고, 환 W가 -O-메틸로 치환되어 있을 수도 있는 벤젠환이고, L2가 피페리딘 또는 4-메틸피페라진이고, R2가 4-메틸피페라진, 2-히드록시에틸아미노 또는 H인, 화합물 또는 그의 염.
  3. 제1항에 있어서, p는 4이고, R1은 각각 독립적으로 -O-메틸 또는 F이고, L1이 -메틸렌-O-이고, 환 W가 메틸로 치환되어 있을 수도 있는 피라졸이고, R3이 2-히드록시에틸, 2,3-디히드록시프로필 또는 4-메틸피페라진-1-일메틸인, 화합물 또는 그의 염.
  4. 제1항에 있어서, 5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민,
    (2S)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올,
    5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
    5-[2-(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시페닐)에틸]-N-{3-플루오로-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[3-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디클로로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일]피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메틸-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{4-[(3R,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일]-3-메톡시페닐}피리미딘-2-아민,
    N-[4-(3,9-디아자스피로[5.5]운데크-3-일)-3-메톡시페닐]-5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-아민,
    2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-1H-피라졸-4-일}피리미딘-2-아민,
    2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]-1-(3-히드록시아제티딘-1-일)에타논,
    (2R)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올,
    2-({1-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-일}아미노)에탄올,
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-메틸-5-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-1H-피라졸-3-일}피리미딘-2-아민 및
    5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민
    으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 염.
  5. 제4항에 있어서, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{3-메톡시-4-[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]페닐}피리미딘-2-아민인 화합물 또는 그의 염.
  6. 제4항에 있어서, 2-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]에탄올인 화합물 또는 그의 염.
  7. 제4항에 있어서, (2R)-3-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)-1H-피라졸-1-일]프로판-1,2-디올인 화합물 또는 그의 염.
  8. 제4항에 있어서, 2-({1-[4-({5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]피리미딘-2-일}아미노)페닐]피페리딘-4-일}아미노)에탄올인 화합물 또는 그의 염.
  9. 제4항에 있어서, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-{1-메틸-5-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-1H-피라졸-3-일}피리미딘-2-아민인 화합물 또는 그의 염.
  10. 제4항에 있어서, 5-[(2,6-디플루오로-3,5-디메톡시벤질)옥시]-N-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]피리미딘-2-아민인 화합물 또는 그의 염.
  11. 제4항에 기재된 화합물 또는 그의 염 및 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 변이 FGFR3 양성암을 치료하기 위한 의약 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 화합물이 변이 FGFR3 양성암의 치료용인 의약 조성물.
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