TWI494115B - 龍眼籽之醇萃取物之用途 - Google Patents
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Description
本發明係關於龍眼籽之醇萃取物之用途；具體言之，係用以治療腎組織功能低下。
腎臟位於人體內的腹腔後壁的脊椎兩側，即為最後一根肋骨(第十二根)與脊椎相接之夾角地區。腎臟之基本組成單位為腎元，每個腎臟約包含一百萬個腎元，每個腎元則包含腎小球及腎小管。
腎元的功用過濾身體的廢物、水分、及電解質，成為尿液，例如排除過多之水分；排除尿酸、尿毒、肌酸酐、藥物等；及管制鈉、鉀、鈣、磷及酸鹼等電解質之穩定及平衡，維持體內環境之穩定。腎臟除了製造尿液機能外，另可分泌：(1)紅血球生成素，如腎損傷導致分泌不足，則產生貧血；(2)活化維他命之D3，係為維持血中鈣磷平衡之最重要成份，因此腎衰竭可能導致得骨病變；(3)腎素及血管張力素，其用以調節血壓，許多高血壓與腎臟病相關。
許多因素皆為造成腎組織功能低下之原因：(1)先天性腎臟病，如多囊性腎病、遺傳性的腎炎、尿道異常等；(2)腎絲球病變，如原發性腎絲球受損或繼發性腎絲球受損，例如糖尿病、高血壓、紅斑性狼瘡等；(3)腎小管間質腎病，如腎結石、腎腫瘤、尿道或輸尿管狹窄等；(4)血管性腎臟病，如血管炎、高血壓腎動脈硬化症；及(5)感染，如細菌感染而造成腎炎。另外，因老化、長期濫用藥物、家
族遺傳及高鹽飲食、肥胖、高血脂、酒精、抽煙等，亦皆為造成腎組織功能低下之原因。其臨床症狀包含尿液型態改變，如頻尿(尤其夜間)、尿液帶血、小便起泡(可能有蛋白尿)；包含身體不適，如眼瞼浮腫或臉、手腳水腫、血壓變高、貧血、皮膚搔癢、全身倦怠、心臟衰竭，肺水腫等。
然而，因導致腎組織功能低下之原因眾多，現今並無有效之藥物可有效治療腎組織功能低下，如治療繼發性之腎組織功能低下，通常需藉由治療其原發病灶而控制；治療因感染而導致之腎組織功能低下，則需採用抗生素；治療腎炎，不僅無法使用一般之抗發炎藥物，且可能因使用一般之抗發炎藥物使症狀更嚴重，一般使用類固醇或免疫抑制劑，然其副作用極大。因此，當腎組織功能低下病程持續發展，需藉由腹膜透析甚至移植腎臟等方式治療，影響病人之生活及性命甚巨。
龍眼為無患子科(Sapindaceae
)龍眼屬(Dimocarpus
)植物的果實，又名桂圓。龍眼能夠入藥。其肉甘溫，滋補強壯；其核澀平，收斂止血；其葉淡平，解表。有壯陽益氣、補血、補益心脾、養血安神、潤膚美容等多種功效，可治療貧血、心悸、失眠、健忘、神經衰弱及病後、產後身體虛弱等症。龍眼籽自古即被使用為外傷用藥，據古書「全國中草藥匯編」記載，龍眼核可用於治胃痛、燒燙傷、刀傷出血、疳氣痛、外傷出血、疥癬、濕瘡等。古人用於外傷，有好的止血定痛生肌之功，素有「金刀獨聖
散」之稱。近日與龍眼保健功效相關之研究已逐漸增加，特別是其抗氧化能力、有效成份及美白能力。多數研究均發現，龍眼之花、果實等，含有高量之抗氧化物質，如，沒食子酸(Gallic acid)、克里拉京(Corilagin)及鞣花酸(Ellagic acid)等。不過，對於龍眼籽之研究仍相對較少。一般多在取得龍眼果肉後即將龍眼籽拋棄。
龍眼之許多用途雖已經報導，但龍眼籽之萃取物之不同應用仍待開發。
本發明係提供一種龍眼籽之醇萃取物之用途，其係用以製造治療腎組織功能低下之藥物。
本發明又係提供一種治療腎組織功能低下之醫藥組合物，其包含治療有效量之龍眼籽之醇萃取物。
本發明再提供一種治療腎組織功能低下之方法，其於一個體中包含給予有效量之龍眼籽之醇萃取物及視需要之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明係提供一種龍眼籽之醇萃取物之用途，其係用以製造治療腎組織功能低下之藥物。包含龍眼籽之醇萃取物之醫藥組合物係可於一個體中治療腎組織功能低下，該醫藥組合物包含有效量之龍眼之醇萃取物及視需要之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
參考以下對本發明之各態樣、實例、及伴隨相關描述之化學圖式及表格的詳細描述，可更容易地瞭解本發明。在
揭示及描述本發明之用途及萃取物之前，應瞭解，除非由申請專利範圍另外特別地指出，否則本發明不受限於特定製備方法、載劑或調配物、或將本發明化合物調配成用於局部、經口或非經腸投予之產物或組合物的特定模式，此係由於熟習相關技術之通常知識者非常清楚此等事情是可以加以變化的。亦應瞭解，本文所用之術語僅用於描述特定態樣之目的而不意欲用於限制性本發明之範疇。
除非另外指出，否則如本發明所用之以下術語應解釋為具有以下含義。
範圍在本文中通常表述為「約」一個特定值及/或至「約」另一個特定值。當表述此類範圍時，一態樣為包括一個特定值及/或至另一個特定值之範圍。類似地，當值藉由使用字「約」表述為近似值時，應瞭解特定值可形成另一態樣。另外應瞭解，每一範圍之各端點皆有顯著性，一端點與另一端點既有相關性，亦彼此獨立。
「視情況」或「視情況地」意謂隨後所述之事件或狀況可能發生或可能不發生，且該描述包括該事件或狀況發生之情況及其未發生之情況。舉例而言，「視情況包含藥劑」意謂該藥劑可能存在或可能不存在。
必須指出，除非上下文另外清楚規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一」及「該」包括複數個所指標的物。因此，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
如本文所用之術語「個體」表示任何動物，較佳為哺乳
動物，且更佳為人類。個體之實例包括人類、非人類靈長類動物、齧齒動物、天竺鼠、兔、綿羊、豬、山羊、母牛、馬、狗及貓。
術語如本文所提供之化合物的「有效量」意謂該化合物之量足以提供對所需功能(諸如基因表現、蛋白質功能或誘導特定類型之反應)之所需調節。如下文所指出，確實的需要量將在個體之間有變化，此視個體之疾病病況、身體狀況、年齡、性別、物種及體重、組合物之特性及配方等而定。給藥方案可經調整以誘導最佳治療反應。舉例而言，可每日投予若干分次劑量，或可依治療情形之緊急程度按比例減少劑量。因此，很難指定確實的「有效量」。然而，本發明領域中具有通常知識者使用常規實驗即可確定適當的有效量。
如本文所用之術語「治療」表示逆轉、減輕或改善此術語所適用之病症或病狀、或該病症或病狀之一或多種症狀，或抑制其進展。
如本文所用之術語「載劑」或「賦形劑」係指自身並不為治療劑，而是用作用於將治療劑傳遞至個體之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑或媒劑，或添加至調配物中以改善調配物之處理或儲存性質或允許或有助於組合物之劑量單位形成適於經口投予之劑量單位(諸如膠囊或錠劑)的任何物質。適合之載劑或賦形劑為一般熟習製造醫藥調配物或食品之通常知識者所熟知。載劑或賦形劑可包括(舉例而言但不限於)緩衝劑、稀釋劑、崩解劑、黏合劑、黏著劑、
濕潤劑、聚合物、潤滑劑、滑動劑、為遮蔽或抵消不良味道或氣味而添加之物質、調味劑、染料、芳香劑及為改善組合物之外觀而添加之物質。可接受之載劑或賦形劑包括檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑、碳酸氫鹽緩衝劑、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉鹽及鈣鹽、碳酸鎂、滑石、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、果膠、糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、澱粉、明膠、纖維素物質(諸如烷酸之纖維素酯及纖維素烷基酯)、低熔點蠟、可可脂、胺基酸、尿素、醇類、抗壞血酸、磷脂、蛋白質(例如血清白蛋白)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二甲亞碸(DMSO)、氯化鈉或其他鹽、脂質體、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油或粉末、聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇及聚乙二醇)、及其他醫藥學上可接受之物質。載劑不應破壞治療劑之藥理學活性，且在以足以傳遞治療量之藥劑的劑量投予時應無毒性。
較佳地，該龍眼籽之醇萃取物係包含於一組合物中。根據本發明之組合物較佳為食品組合物或醫藥組合物。
該龍眼籽之醇萃取物可在食品製造過程中，添加於習用之食品組合物中(亦即可食用之食品或飲品或其前驅物)。幾乎所有之食品組合物皆可添加根據本發明之該龍眼籽之醇萃取物。可添加根據本發明之該龍眼籽之醇萃取物之食品組合物包含，但不限於糖果、烘焙食品、冰淇淋、乳製品、甜品及風味小點、小吃、肉類替代產品、快餐食品、湯類、麵食、麵條、罐頭食品、冷凍食品、乾製食品、冷
藏食品、油脂、嬰兒食品、軟食物、或麵包塗醬或其混合物。
本發明之醫藥組合物可藉由本發明領域中已知之任何方法局部或全身投予，包括但不限於藉由肌肉內、皮內、靜脈內、皮下、腹膜內、鼻內、經口、黏膜或外部途徑投予。適當的投藥途徑、調配方法及投藥時程可由本發明領域中具有通常知識者來決定。在本發明中，醫藥組合物可根據相應投藥途徑以多種方式調配，諸如液體溶液、懸浮液、乳液、糖漿、錠劑、丸劑、膠囊、持續釋放調配物、散劑、顆粒、安瓿、注射液、輸注液、套組、軟膏、洗劑、擦劑、乳膏或其組合。在必要時，其可經滅菌或與任何醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合，其中有許多醫藥學上可接受之載劑或賦形劑已為一般技術者所知，例如參見[實施方式]第10段。
本文中所言之「龍眼籽之醇萃取物」乙詞係指以醇溶液萃取龍眼籽所得之龍眼籽萃取物。以一溶液萃取種子之方式為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。於本發明之一較佳具體實施例中，該龍眼籽係浸於一醇溶液中以供萃取。
於本發明之一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係進行氣相層析/質譜儀(Gas Chromatography/Mass Spectrometer，GS/MS)分析。此氣相層析係以Trace GC Ultra，thermo進行；該質譜儀係為ITQ 900，thermo；該管柱為Varian® VF-5ms 30 m×0.25 mm(I.D.0.25 μm)。溫
度程式為150℃進行5分鐘；以5℃/分鐘之速率加熱至190℃，並進行20分鐘。如圖1所示，該圖譜於下列滯留時間包含峰：約5.56分鐘、約10.36分鐘、約14.90分鐘、約27.52分鐘、約28.16分鐘、約35.51分鐘、約35.93分鐘及約37.56分鐘。
本發明所言之龍眼籽並無特殊限定，較佳地，本發明所言之龍眼又稱桂圓、荔枝奴、亞荔枝、燕卵，為無患子科(Sapindaceae
)龍眼屬(Dimocarpus
)植物的果實。更佳地，龍眼之學名為Dimocarpus longan
、Dimocarpus longan Lour
.或Dimocarpus longan Fen Ke
。
該龍眼籽係為龍眼果實之果核部份，實質上不具有外殼及果肉之部份。自龍眼果實取得龍眼籽之方式為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。
於本發明之一較佳具體實施例中，該醇係選自由甲醇、乙醇、正丙醇(n-propanol)、異丙醇(isopropanol)、正丁醇、異丁醇(iso-butanol)、仲丁醇(sec-butanol)、叔丁醇(tert-butanol)及乙酸乙酯及其水溶液所組成之群。尤佳地，該醇係為乙醇、乙酸乙酯或正丁醇；最佳地，該醇為乙醇。該醇溶液較佳為約20%至約99.9%之醇溶液。
於本發明之一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係為龍眼籽之乙醇萃取物。
於本發明之一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係包含龍眼籽之醇萃取物之乙酸乙酯(ethyl acetate)分液(fraction)。
於本發明之另一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係包含龍眼籽之醇萃取物經乙酸乙酯萃取後之水分液。
於本發明之再一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係包含龍眼籽之醇萃取物經乙酸乙酯萃取後之水分液之正丁醇次分液。
於本發明之又一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係包含龍眼籽之醇萃取物經乙酸乙酯萃取後之水分液經正丁醇萃取後之水次分液。
於本發明之一更佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物包含以快速管柱層析法分離之分餾物，其中該快速管柱層析法之管柱係為40g Silica；流速為18 mL/min；沖提液A為乙酸乙酯；沖提液B為甲醇；沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%；約31分鐘至約45分鐘時A沖提液80%，B沖提液為20%；約46分鐘至約65分鐘時A沖提液50%，B沖提液為50%；約86分鐘至約105分鐘及約106分鐘至約120分鐘時A沖提液0%，B沖提液為100%；尤佳地，該龍眼籽之醇萃取物包含前述以快速管柱層析法分離之分餾物中，於沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%收集而得。
於本發明之一具體實施例中，經前述快速管柱層析法分離龍眼籽之醇萃取物之乙酸乙酯分液後，結果示於圖2，可得DL-P01-SI01：765.3 mg；DL-P01-SI02：100.4 mg；DL-P01-SI03：37.0 mg；DL-P01-SI04：21.7 mg；DL-P01-SI05：140.1 mg；DL-P01-SI06：57.3 mg；DL-P01-SI07：
28.4 mg；DL-P01-SI08：17.0 mg；DL-P01-SI09：6.4 mg；DL-P01-SI10：7.7 mg。
於本發明之一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物係由包含下列步驟之製備方法所製備：(a)提供龍眼籽；(b)將該龍眼籽碎成小塊；及(c)以醇萃取步驟(b)之小塊以提供該萃取物。
根據本發明之製備方法，於步驟(b)前該龍眼籽較佳係經乾燥。
於本發明之一較佳具體實施例中，步驟(b)進一步包含將該小塊攪碎為粉末。切塊及/或攪碎之方式為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。
該龍眼籽及醇溶液之比例(w/v)並無特殊限制，可為約1：1至約1：10；較佳地，約1：3至約1：8；尤佳地；約1：5。
於本發明之一較佳具體實施例中，該製備方法之步驟(c)以醇萃取步驟(b)之小塊以提供該萃取物係加熱萃取。較佳地，該步驟(c)係於約30℃至約90℃萃取。
於本發明之另一較佳具體實施例中，該製備方法之步驟(c)包含：(c1)以乙醇水溶液萃取步驟(b)之小塊，以獲得一粗萃取液；(c2)將步驟(c1)之粗萃取液冷凍乾燥；及(c3)以乙酸乙酯萃取步驟(c2)之冷凍乾燥產物，以獲得一乙酸乙酯分液及一水分液。
較佳地，該粗萃取液係先經過濾及濃縮後，再進行冷凍乾燥。
於本發明之另一更佳具體實施例中，該製備方法之步驟(c)進一步包含：(c4)以正丁醇萃取該水分液，以獲得一正丁醇次分液及一水次分液。
於本發明之一較佳具體實施例中，該龍眼籽之醇萃取物之乙酸乙酯分液、水分液、正丁醇次分液或水次分液之製備係為進一步萃取龍眼籽之醇萃取物。
於本發明之一較佳具體實施例中，該製備方法進一步包含以快速管柱層析法分離該乙酸乙酯分液，其中該快速管柱層析法之管柱係為40g Silica；流速為18 mL/min；沖提液A為乙酸乙酯；沖提液B為甲醇；沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%；約31分鐘至約45分鐘時A沖提液80%，B沖提液為20%；約46分鐘至約65分鐘時A沖提液50%，B沖提液為50%；約86分鐘至約105分鐘及約106分鐘至約120分鐘時A沖提液0%，B沖提液為100%。
較佳地，該製備方法進一步包含步驟(d)自該萃取物獲得一液體分液，並移除固體。移除固體部份已獲得該液體分液之方法係為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。
根據本發明之腎組織功能低下係指任何原因所引起之腎組織功能低下，較佳地，該腎組織功能低下係為腎組織壞
死、高血壓、免疫傷害、糖尿病、全身性紅斑性狼瘡、老化、長期濫用藥物、家族遺傳、高鹽飲食、肥胖、高血脂、酒精、抽煙或腎切除引起之腎組織功能低下。
檢測腎組織功能是否正常可藉由下述檢驗項目而診斷：(1)檢驗血中血液尿素氮(BUN)及血清肌酸酐(Cr)之數值，腎組織功能低下導致此二者之數值升高；(2)檢驗尿液中蛋白尿及血尿之指數，可計算腎絲球過濾率得知腎臟功能；(3)X-光檢查：經由X-光檢查檢視腎臟外觀，同時偵測有無腎結石和相對位置；及(4)超音波檢查：可得知腎臟大小、有否腎結石和腫瘤等問題。
於本發明一具體實施例中，腎組織功能低下係指經診斷檢查，證實腎臟結構(病理組織學或影像學檢查)或腎臟功能(血液或尿液檢查)有異常發現，或腎絲球過濾率(GFR)小於每分鐘60毫升(cc/min/1.73m2
)。
於本發明實例中之動物模式中，在5/6腎切除之大鼠中，經投與根據本發明之龍眼籽之醇萃取物可降低血清中及/或尿液中尿蛋白、降低血清中尿素氮、降低尿液中蛋白/尿素肌酸酐比例、降低血清中及/或尿液中肌酸激酶、降低血清中及/或尿液中乳酸脫氫酶及/或降低血清中及/或尿液中乳酸過高，並於組織切片中可觀察到腎絲球腫脹硬化之情形改善。
於本發明之較佳具體實施例中，該腎組織功能低下係選自由血清中及/或尿液中尿蛋白過高、血清中尿素氮過高、尿液中蛋白/尿素肌酸酐比例過高、血清中及/或尿液
中肌酸激酶過高、血清中及/或尿液中乳酸脫氫酶過高、血清中及/或尿液中乳酸過高及腎絲球腫脹硬化所組成之群。更佳地，該腎組織功能低下係為腎炎；尤佳地，該腎組織功能低下係為慢性腎炎。
以下之非限制性之實例有助於本發明所屬技術領域中具通常知識者實施本發明。該等實例不應視為過度地限制本發明。本發明所屬技術領域中具有通常知識者可在不背離本發明之精神或範疇的情況下對本文所討論之實施例進行修改及變化，而仍屬於本發明之範圍。
龍眼籽之醇萃取物
將龍眼果實去殼及去除果肉後，取得龍眼籽，再將龍眼籽打碎，以溫度為30℃至90℃之20%至95%之乙醇溶液浸泡打碎後之龍眼籽，並將溫度維持於30℃至90℃ 1至3小時。取萃取所得之溶液，經過濾、濃縮，再進行低溫低壓之冷凍乾燥，以取得一粗萃取物(DL)。
將該粗萃取物以如表1所示高效液相層析條件分析後，其所得之結果如圖3所示。
進一步以乙酸乙酯萃取粗萃物(DL)，以獲得一乙酸乙酯分液(DL-P01)及一水分液，再以正丁醇萃取該水分液，以獲得一正丁醇次分液(DL-P02)及一水次分液(DL-P03)。龍眼籽粗萃取物24.13g經分萃後，得DL-P01：1.44g(5.97%)；DL-P02：2.57g(10.65%)；DL-P03：19.11g(79.20%)。
進一步以快速管柱層析分離乙酸乙酯分液(DL-P01)。取DL-P01約1.1g用乙酸乙酯及甲醇溶解，用超音波洗淨機加速溶解，加入適量矽膠(silica gel)濃縮至乾後，倒入放樣品之空管中，另一方面將快速管柱層析用之正常相管柱(normal phase column，40g silica gel)裝於儀器上，以乙酸
乙酯洗至整支管柱完全充滿溶劑，並將樣品裝於儀器上，設定之條件如下：流速為18 mL/min；沖提液A為乙酸乙酯；沖提液B為甲醇；沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%；約31分鐘至約45分鐘時A沖提液80%，B沖提液為20%；約46分鐘至約65分鐘時A沖提液50%，B沖提液為50%；約86分鐘至約105分鐘及約106分鐘至約120分鐘時A沖提液0%，B沖提液為100%。
其結果示於圖2，可得DL-P01-SI01：765.3 mg；DL-P01-SI02：100.4 mg；DL-P01-SI03：37.0 mg；DL-P01-SI04：21.7 mg；DL-P01-SI05：140.1 mg；DL-P01-SI06：57.3 mg；DL-P01-SI07：28.4 mg；DL-P01-SI08：17.0 mg；DL-P01-SI09：6.4 mg；DL-P01-SI10：7.7 mg。其中DL-P01-SI01為主要產物(69.86%)，其係於沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%收集而得。
將前述之DL-P01-SI01取6mg，加入0.6mL之甲醇震盪溶解過濾後，進行氣相層析/質譜儀分析。此氣相層析係以Trace GC Ultra，thermo進行；該質譜儀係為ITQ 900，thermo；該管柱為Varian® VF-5ms 30 m×0.25 mm(I.D.0.25 μm)。溫度程式為150℃進行5分鐘；以5℃/分鐘之速率加熱至190℃，並進行20分鐘。如圖1所示，該圖譜於下列滯留時間包含峰：約5.56分鐘、約10.36分鐘、約14.90分鐘、約27.52分鐘、約28.16分鐘、約35.51分鐘、約35.93分鐘及約37.56分鐘。
龍眼籽之醇萃取物治療腎組織功能低下
本實例以5/6腎切除腎炎動物模式(5/6 nephrectomized rat model)進行腎組織功能低下之體內藥理活性測試與藥效試驗評估。
利用Sprague-Dawley大白鼠，手術切除其右腎及2/3的左腎，手術一周後檢測其尿液中之尿蛋白確認腎炎病徵後分組進行投藥試驗。將腎炎動物隨機分組，組別包含：偽手術組(偽手術動物+配藥溶劑)、控制組(腎炎動物+配藥溶劑)、實驗組(腎炎動物+DL-P01-SI01，簡稱J-TK)，每一組別之老鼠數量不少於三；於給藥前、以藥物處理後連續觀察八周，每周由尾靜脈採集血液樣本及以代謝籠收集尿液檢品乙次，以利進行生理指標數據及尿液、血液生化分析之追蹤調查，並於第九周犧牲前收集尿液，犧牲後收集血液、組織，進行生化分析。
主要生理、生化分析包含：尿蛋白、血尿素氮、肌酸酐、肌酸激酶、乳酸脫氫酶、乳酸濃度檢測、血球數計量等。
於此動物模式實驗中，可觀察到實驗動物體重皆有正常平緩之上升趨勢，如圖4所示。
檢測血清中血尿素氮、乳酸脫氫酶、乳酸、肌酸酐之生化指標，第二次手術後可發現手術動物血清中血尿素氮及肌酸酐均有明顯之上升趨勢，經給藥治療開始後則可在給藥一周後觀測到DL-P01-SI01(J-TK)具有明顯減緩血清血尿素氮及肌酸酐上升之趨勢，並在給藥四周時J-TK對於血液中血尿素氮上升趨勢達到27.2%之抑制率，此結果表示動
物模式中有明顯調節血尿素氮之效，如圖5及6所示。
由乳酸及乳酸脫氫酶之變化情形中可觀測到本實驗中動物生理狀況並未受到非預期性疾病所影響，圖未示。
尿液尿蛋白及肌酸酐之分析數據呈現法為單點尿蛋白濃度/尿液肌酸酐濃度之比值，結果顯示腎切除手術後動物尿液中尿蛋白濃度/尿液肌酸酐濃度比較偽手術組有明顯之上升趨勢，給藥第三周時出現減緩尿蛋白濃度/尿液肌酸酐濃度比值上升趨勢之效果，如圖7所示。
以H&E染色試驗動物之腎臟切片後可觀測到經5/6腎切除之腎臟腎絲球腫脹硬化情況極為嚴重；經DL-P01-SI01(J-TK)治療後有明顯改善之情形，如圖8所示。
由此5/6腎切除手術產生之動物模式結果可知，龍眼籽之醇萃取物確有改善血清中及/或尿液中尿蛋白過高、血清中尿素氮過高、尿液中蛋白/尿素肌酸酐比例過高、血清中及/或尿液中肌酸激酶過高、血清中及/或尿液中乳酸脫氫酶過高、血清中及/或尿液中乳酸過高及腎絲球腫脹硬化之療效。
上述實施例僅為說明本發明之原理及其功效，而非限制本發明。習於此技術之人士對上述實施例所做之修改及變化仍不違背本發明之精神。本發明之權利範圍應如後述之申請專利範圍所列。
圖1顯示根據本發明之龍眼籽之醇萃取物之GS/MS圖譜。
圖2顯示根據本發明之龍眼籽之醇萃取物之快速管柱層析分離圖譜。
圖3顯示根據本發明之龍眼籽之醇萃取物之高效液相層析層析圖譜。
圖4顯示經5/6腎切除動物模式之藥物測試中，實驗動物之體重-時間關係圖。實驗中所使用之配藥溶劑包含5%DMSO和10%的葉綠素，藥物給予為口服。數據表示為平均值(每組n=3)。
圖5顯示經5/6腎切除動物模式之藥物測試中，實驗動物血清中之血尿素之濃度-時間關係圖。數據表示為平均值(每組n=3)。
圖6顯示經5/6腎切除動物模式之藥物測試中，實驗動物血清中之肌酸酐之濃度-時間關係圖。數據表示為平均值(每組n=3)。
圖7顯示經5/6腎切除動物模式之藥物測試中，實驗動物血清中之尿蛋白濃度/尿液肌酸酐濃度比值-時間關係圖。數據表示為平均值(每組n=3)。
圖8顯示經5/6腎切除動物模式之藥物測試中，實驗動物腎組織以H & E染色切片之組織病理觀察結果。
Claims (10)
- 一種龍眼籽之乙醇萃取物之用途，其係用以製造治療腎組織功能低下之藥物，其中該乙醇萃取物係以乙醇萃取再經乙酸乙酯萃取，該腎組織功能低下係選自由血清中及/或尿液中尿蛋白過高、血清中尿素氮過高、尿液中蛋白/尿素肌酸酐比例過高、血清中及/或尿液中肌酸激酶過高、血清中及/或尿液中乳酸脫氫酶過高、血清中及/或尿液中乳酸過高、腎絲球腫脹硬化及腎炎所組成之群。
- 如請求項1之用途，其中該龍眼係為Dimocarpus longan Lour 、Dimocarpus longan 或Dimocarpus longan Fen Ke 。
- 如請求項1之用途，其中該龍眼籽之乙醇萃取物包含以快速管柱層析法分離之分餾物，其中該快速管柱層析法之管柱係為40g Silica；流速為18mL/min；沖提液A為乙酸乙酯；沖提液B為甲醇；沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%；約31分鐘至約45分鐘時A沖提液80%，B沖提液為20%；約46分鐘至約65分鐘時A沖提液50%，B沖提液為50%；約86分鐘至約105分鐘及約106分鐘至約120分鐘時A沖提液0%，B沖提液為100%。
- 如請求項3之用途，該龍眼籽之乙醇萃取物包含以快速管柱層析法分離之分餾物中，於沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%收集而得。
- 如請求項1之用途，其中該龍眼籽之乙醇萃取物係由包含下列步驟之製備方法所製備：(a)提供龍眼籽；(b)將該龍眼籽碎成小塊；及(c)以乙醇萃取步驟(b)之小塊再經乙酸乙酯萃取以提供該萃取物。
- 如請求項5之用途，其中步驟(c)係於溫度約30℃至約90℃萃取。
- 如請求項5之用途，其中該製備方法進一步包含步驟(d)自該萃取物獲得一液體分液。
- 如請求項5之用途，其中步驟(c)包含：(c1)以乙醇水溶液萃取步驟(b)之小塊，以獲得一粗萃取液；(c2)將步驟(c1)之粗萃取液冷凍乾燥；及(c3)以乙酸乙酯萃取步驟(c2)之冷凍乾燥產物，以獲得一乙酸乙酯分液及一水分液。
- 如請求項8之用途，其另包含以快速管柱層析法分離該乙酸乙酯分液，其中該快速管柱層析法之管柱係為40g Silica；流速為18mL/min；沖提液A為乙酸乙酯；沖提液B為甲醇；沖提程式為0分鐘至約30分鐘時A沖提液100%，B沖提液為0%；約31分鐘至約45分鐘時A沖提液80%，B沖提液為20%；約46分鐘至約65分鐘時A沖提液50%，B沖提液為50%；約86分鐘至約105分鐘及約106分鐘至約120分鐘時A沖提液0%，B沖提液為100%。
- 如請求項1之用途，其中該腎組織功能低下係為腎組織壞死、高血壓、免疫傷害、糖尿病、全身性紅斑性狼瘡、老化、長期濫用藥物、家族遺傳、高鹽飲食、肥胖、高血脂、酒精、抽煙或腎切除引起之腎組織功能低下。
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