TWI378098B

TWI378098B - Hydroxymethyl pyrrolidines as beta 3 adrenergic receptor agonists

Info

Publication number: TWI378098B
Application number: TW098111302A
Authority: TW
Inventors: Richard Berger; Lehua Chang; Scott D Edmondson; Stephen D Goble; Sookhee Nicole Ha; Nam Fung Kar; Ihor E Kopka; Bing Li; Gregori J Morriello; Chris R Moyes; Dong-Ming Shen; Liping Wang; Cheng Zhu
Original assignee: Merck Sharp & Dohme
Priority date: 2008-04-04
Filing date: 2009-04-03
Publication date: 2012-12-01
Also published as: US20090253705A1; CN102391255B; KR101331771B1; US8653260B2; WO2009124166A1; CA2719876A1; IL208215A0; CN102056917A; MX2010010929A; NZ588266A; MA32257B1; FIC20240046I1; CR11751A; HRP20120129T2; DOP2013000267A; IL208215A; BRPI0909768B1; EP2276756B1; KR101288798B1; JP2011201897A

Description

1378098 六、發明說明：【先前技術】下泌尿道之功能為儲尿及定期排尿。此舉需要涉及各種傳入及傳出神經路徑之儲尿及排尿反射進行協調，其引起中枢及周邊神經效應器機制之調節，且引起自主神經系統之交感神經及副交感神經成份以及體運動路徑之協同調控。此等成份及路徑近端調控膀胱（逼尿肌）及尿道平滑肌以及尿道括約肌橫紋肌之收縮狀態。 β腎上腺素受體（PAR)存在於各種物種之逼尿肌平滑肌中，該等物種包括人類、大鼠、觫鼠、兔、雪貂、狗、貓、豬及非人類靈長類。然而，藥理學研究指示在介導經分離逼尿肌之鬆弛之受體亞型中存在顯著物種差異； P1AR在貓及豚鼠中佔優勢，P2AR在兔中佔優勢，且P3AR 在狗、大鼠、雪貂、豬、獼猴及人類逼尿肌中起作用或佔優勢。PAR亞型在人類及大鼠逼尿肌中之表現已藉由各種技術檢驗，且P3AR之存在係使用原位雜交及/或反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR)而確認。對來自經受根治性膀胱切除術之患者之膀胱組織中的PIAR、P2AR及β3ΑΙΙ mRNA進行的即時定量PCR分析揭示β3ΑΙΙ mRNA之優勢（97%，相比之下 plAR mRNA 為 1.5% 且 β2ΑΙΙ mRNA 為 1.4%)。此外， β3 AR mRNA表現在對照及經阻塞之人類膀胱中為相等的。此等資料提示膀胱出口阻塞不導致P3AR下調，或 P3AR介導之逼尿肌鬆弛發生改變。亦已在膀胱切除術或腸道膀胱整形術期間自經判斷具有正常膀胱功能之患者獲 139023.doc 1378098 得之膀胱條帶及來自患有逼尿肌反射減退或反射亢進之患 - 者之膀胱條帶中比較P3AR反應性。p3AR激動劑介導之鬆 • · 他之程度或效能經觀察無差異’此情況與P3AR活化為鬆 ·· 他正常及發病狀態下之逼尿肌之有效方式的觀念一致。支持P3AR在尿儲存中之重要作用之功能性證據來源於 • 活體内研究。在靜脈内投與大鼠之後，齧齒動物選擇性 ' P3AR激動劑CL3 16243降低膀胱壓力且在膀胱測壓研究中 φ 增加膀胱容量，引起排尿間隔延長，而不增加殘餘尿體積。膀胱過動症（OAB)之特徵在於伴有或不伴有急迫性尿失禁之尿急症狀’通常與尿頻及夜尿症相關。〇Ab在美國及歐洲之發病率在1 8歲以上之女性及男性中已估計為丨6至 1 7 /〇。膀胱過動症表常歸類為自發性的，但亦可繼發於神經學病狀、膀胱出口阻塞及其他病因。自病理生理觀點而吕，膀胱過動症症候群（尤其當與急迫性失禁相關時）提示 • 逼尿肌過度活動。已展示伴有或不伴有失禁之尿急症對社會及醫療福利皆存在負面影響，且就每年直接及間接的醫 • 療保健支出而言係相當大之負擔。重要地，當前用於尿急症（伴有或不伴有失禁）之醫學療法為次最佳的因為許多 •.患、者對於當前治療不表現充分反應，且/或不能耐受當前 m療（例如，與抗膽鹼劑療法相關之口乾）。因此存在對於以單-療法形式或與可利用之療法組合而有效地治療尿頻尿急症及失禁之新穎、良好耐受之療法的需要。預期鬆他膀胱平滑肌之藥劑（諸如3遍激動劑）有效於治療該等 139023.doc 1378098 泌尿病症。【發明内容】本發明係關於新穎？3^^激動劑’含有該等激動劑之醫藥組合物，以及使用該等新穎化合物治療或預防經由 P3AR介導之病症之方法。【實施方式】本發明描述結構式la之化合物：

la A、 Η ^

(R3)r 其中 n為 0、1、2、3、4或 5 ; Υ係選自由以下各者組成之群： (1) Ci-C5烷二基、C2-C5烯二基及c2_c5炔二基，其中烷二基、烯二基及炔二基中之每一者視情況經一至三個獨立地選自i素、-ORa及-S(〇)p-C丨-C3烷基之基團取代，其中p · 為0、1或2， (2) -(CRaRa)j-Q-(CRaR、，其中』及^為獨立地選自〇、i 及2之整數， (3) —鍵，及 (4) 視情況經一至三個獨立地選自丨目R之基團取代之伸苯基； Z選自由以下各者組成之群： 139023.doc 1378098 (υ苯基，硫及氮之雜原子之5或6員雜 (2)具有1至4個選自氧壤， (3)與C5-CIQ碳環稠合之苯環，之5或6員雜之5或6員雜 ⑷與具有U4個選自1、硫及氮之雜原子環稠合之具有14個選自m氮之雜原子

• (5)與C5_C|°碳環稍合之具有1至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環； ” R1選自由以下各者組成之群： (1) 視情況經1至5個鹵素原子取代之Ci_c5烷基， (2) C3-C6環烷基， (3) 鹵素， (4) 硝基， (5) 氰基， (6) -C(0)Ra， (7) -C(0)2Ra， (8) -C(0)NRaRb，及 (9) -QRb ; R3選自由以下各者組成之群： ⑴視情況經1至5個獨立地選自！|素、-OR3、-C〇2Ra及 CONRaRb之基團取代之Cl_C6烷基， (2) _(CH2)t-苯基或 _(CH2)t-〇-笨基，其中 t為 0、1、2、 3、4或5，且其中每一者中之該苯基視情況經丨至3個獨立 139023.doc 1378098 地選自鹵素、視情況經1至5個卣素原子取代之Cl。烷美及-ORa之基團取代， & (3) 側氧基， (4) 硫基， (5) 鹵素， (6) -CN， (7) (：3-(：6環烷基， ⑻-(CH2)「雜環或_(CH2)t-〇-雜環，其中t為〇、卜2、 3、4或5 :且其中每一者中之該雜環為具有⑴個選爸 = =雜原子之5或6員環，且其中該雜環視情況$ …邊稠…視情況經⑴個獨立地選 :經1至5個…子取代之㈣基及—之基團: (9) -〇Ra， (10) -C(0)0Ra， (11) -C(0)Ra， (12) -C(0)NRaRb， (12) -NRaRb， (13) -NRaC(0)Rb， (14) -NRaC(0)ORb ,及 (15) -NRaC(0)NRaRb ; 至5個齒素原子取代之（^-〇6烷

Ra係選自由氫及視情況經基組成之群；

Rb選自由以下各者組成之群： I39023.doc 1378098 ⑴氫， (2) 視情況經1至5個選自由以下各者組成之群之基團取代之CVC6烷基： (a) 羥基， (b) 鹵素， (c) -C02Ra， (d) -8(0)ρ-(^-(：3烧基，其巾p為〇、工或之； (e) C3-C8環烷基， (f) 視情況經1至5個鹵素取代之Cl-c6烷氧基，及 (g) 視情況經1至5個獨立地選自由鹵素、硝基、 -NRaRa、三氟曱基 '三氟曱氧基、Ci_C5烷基及_〇Ra組成之群之基團取代之苯基， (3) C3-C8環烷基，及 (4) 視情況經1至5個選自由以下各者組成之群之基團取代之苯基： (a) 鹵素， (b) 硝基， (c) -NRaHa， (d) -OH， (e) 視情況經1至5個鹵素取代之烷氧基， (f) -SCC^p-Ci-C^院基，其中 p為〇、1或2;及 (g) 視情況經多達5個選自羥基、鹵素、三氟甲基、氰基、-C02Ra、C3-C8環烷基及-QRC之基團取代之c丨-C6烷基； 139023.doc 1378098

Rc選自由以下各者組成之群： (1) 視情況經多達5個選自卤素、三氟甲基、氰基、Ci_c5 烧基及C「C5烧氧基之基團取代之z，及 (2) (^-(：6烷基；且 Q選自由以下各者組成之群： (1) -N(Ra)-， (2) -Ο-，及 (3) -S(0)p-，其中 ρ為〇 ' 1 或 2 ; 或其醫藥學上可接受之鹽。在式la之一實施例令為η為〇、1、2或3之化合物。在此貫把例之一子集中，η為〇。在另一子集中，η為1。在另一實施例中，η為2。在式la之一實施例中為γ為亞甲基、_Cii(CH3)_或一鍵之化合物。在其一子集中，γ為亞甲基或_CH(CH3)_。在其另一子集中，Y為一鍵。在式la之另一實施例中為2係選自由以下各者組成之群的化合物： (1) 具有一個氮原子及〇至3個獨立地選自氮、氧及硫之其他雜原子之5員雜環， (2) 具有1、2或3個氮原子，或1個氮原子及一個氧或硫原子之6員雜環， (3) 與具有I至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環稍合之具有丨至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環，及 139023.doc -10- 1378098 (4)與C5-C10碳環稠合之具有1至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環。在式la之另一實施例中為Z係選自由以下各者組成之群之化合物：噻唑基、噁吐基、》比咬基、二氫-比咬基 '三唾基（包括1，2,4-三唑基及l，2,3-三唑基）、四唑基、嘧啶基、二氫略咬基、四氫嘴咬基、。比嗓基、二氫0比唤基、建嗓基、二氫健嗪基、°比"各咬基、咪唑基、。比唑基及噁二唑基 (包括1，2,4-噁二唑基及1，2,5-噁二唑基）。在此實施例之一子集中，Ζ係選自由噻唑基、吡啶基.、二氫吡啶基、1，2,4-三0坐基、嘴啶基、二氫。密咬基、噠嗓基、二氫嗔嗓基及吼。圭基組成之群。在式la之另一實施例中為Ζ係選自由以下各者組成之群之化合物：

其中r為1或2。該等及任何其他合適的稠環可經由任一環上之碳原子或氮原子附接至分子之其餘部分。在式la之另一實施例中為R3係選自由以下各者組成之群之化合物： (1) 視情況經鹵素或-ORa取代之(：丨-(：6烷基， (2) 側氧基， (3) 鹵素， 139023.doc -11 - 1378098 (4) -ORa， (5) -C(0)NRaRa，及 (6) -NRaRa ；其中113如以上所定義。在此實施例之一子集中，R3為曱基或乙基。在另一子集中，R3為側氧基。在另一子集中，R3為。在式la之另一實施例中為具有所指示之對掌性中心處之指定立體構型的化合物：

在式la之另一實施例中為具有所指示之對掌性中心處之指定立體構型之化合物，且以星號標記之對掌性中心為R 或S :

在一子集中，以星號標記之對掌性中心處之構型為s。如本文中所用，「烧基」意欲包括具有指定數目之碳原子之支鏈及直鏈飽和脂族烴基，例如曱基（Me)、乙基 (Et)正丙基（Pr)、正丁基（Bu)、正戍基、正己基及其異構體（諸如異丙基(i_P〇、異丁基（心）、第：丁基㈣小第丁基（t Bu)、異戊基、異己基及其類似物）。「環燒基」意謂具有指定數目之碳原子（例如3、4、5或6個碳原子）之單環飽和料。環職之實例包括環丙基 '環T基、環戊 139023.doc -12- 1378098 基及環己基。術語「烷二基」係指具有指定數目之碳原子的直鏈或支鏈二價烴基。「烯二基」及「炔二基」係指直鏈或支鏈、不飽和二價烴基。「烯二基」特徵在於碳-碳雙鍵且「快二基」特徵在於碳-碳參鍵。「烧二基」之實例包括（但不限於）亞甲基（-CH2-) '伸乙基（-CH2CH2-)、乙烧二基 (-CH(CH3)-)、1，2-丙烷二基（-CH(CH3)CH2-)、2-甲基-1,1-

丙烧一基（-CH[C(CH3)2]-) ’「烯二基j之實例包括（但不限於）1，1-乙浠二基（-C(=CH2)-)、1，2 -乙稀二基（_ch=CH-)及 2-丙烯-1，1-二基（-CH(CH=CH2)-广「炔二基」之實例包括 (但不限於）1，2-乙炔二基（《-)及3- 丁炔],丨_二基 (-CH(CH2C=CH)-)。經齒素取代之烷二基之實例為 -C(CH3)(F)·。術語「視情況經取代」意謂「未經取代或經取代」，且因此本文中描述之-般結構式涵蓋含有指^的視情況存在之取代基之化合物以及不含有視情況存在之取代基之化合物。每-變數每次在其出現於一般結構式定義内時經定義。除非另有說明，否則術語「函基」或「函素」意欲包乾基、氣基、漠基及碘基。敦基及氣基為較佳的。術語「碳環」係指僅具有環碳原子之飽和、部分不髮及方族環。實例包括（但不个限於）¾戍基、環己基、環基'裱辛基、環戊烯基、 a I^ 衣己烯基、衩己二烯基及苯；i 1 方基」係指芳族碳環。在2；t + Ιέ ηπ ^ 隹乙之疋義内，片語r 139023.doc -13 · 1378098 c1〇碳環稍合之苯環」包括(但不限於)萘基氫萘基、二氫節基、節基'笨并環庚烯、：：：及其類似物；較佳地，苯與C5 飞…庚稀 ,,„ 6奴環稠合。該稠環可經由任一壞上之碳原子附接至分子之其。，術語「雜環」係指具有至少—環雜原子及至少—環碳原之飽和、部分不飽和及芳族環；該雜環可經由環碳原子或環氮原子附接至分子之其餘部分。術語「雜芳基” 「雜芳族」係指芳族雜環。在z之以内，片語「且^至 4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環」包括:但不限於)吼洛基…塞吩基、咬喊基…米唾基…比唾基、。惡唑基、異°惡唾基、嗟嗤基、異嗟。坐基 '三。坐基、四唾基…惡二唑基、噻二唑基、吡咯啶基、四氳呋喃基、吡啶基、2 氫吡啶基、四氫吡啶基、嘧啶基、二氫嘧啶基、四氫嘧啶基"比。秦基、二氫他嗔基、四氫„比嗪基、建嘻基、二氯建嗪基' 四氫噠《、㈣基、㈣基、嗎#基、㈣基、二氫哌喃基、四氫哌喃基及其類似物。對於術語（RVx及任何其他類似符號，當時則r3 為氫；當η大於丨時，則每次出現之尺3獨立地選自所有合適或指示之R3基團。光學異構體·非對映異構體-幾何異構體-互變異構體本文中描述之化合物可含有不對稱中心且因此可以對映 '、構體形式存在。在本發明之化合物具有兩個或兩個以上不對稱中〜的情況下，其可另外以非對映異構體形式存在。當連至對掌，H叙鍵在本發明之式巾經描繪為直線 139023.doc • 14- 1378098

時，應瞭解在該耸& A 隹这荨式内包涵對掌性碳之（幻及因此包涵兩種對映里構 1，且上純之拆解對映里構=^處合物。本發明包括呈實質體混合物之形式的所有^ 混合物以及非對映異構經展示在某-位置右之立體異構體。以上式1a 卜之所有立μ 立體化學°本發明包括式所有立體異構體及其醫藥學上可接受之鹽。對映異構體之非對映里错μ # 7,, 、/、構體對可（例如）藉由自合適的溶劑分步結晶進行分離，且由此獲得之對映異構㈣合习白知方法分離成個別立體異構體，例如藉由使用光學活性酸或驗作騎解劑或經由對掌性HpLcf柱。此外， la之化„物之任何對映異構體或非對映異構體可使用具^ 已知構型之光學純起始物質或試劑藉由立體特里性人：獲得。 -。战术當本文中描述之化合物含有烯性雙鍵時，除非另有指定’否m亥等雙鍵意欲包括£及2幾何異構體兩者。

本文中描述之一些化合物可在具有不同氫附接點的情況下存在’其稱為互變異構體。例如’包括羰基-ch2c(0)_ 基團之化合物（酮型）可經歷互變異構現象而形成羥基 _CH=C(OH)-基團（稀醇型）。單獨以及呈其混合物形式之鲷及烯醇型兩者皆包括於本發明之範疇内。鹽術語「醫藥學上可接受之鹽」係指自醫藥學上可接受之非毒性驗或酸製備之鹽。當本發明之化合物呈酸性時，其相應鹽可便利地自醫藥學上可接受之非毒性鹼（包括無機 139023.doc -15- 1378098 鹼及有機鹼）製備。自該等無機鹼衍生之鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽及亞銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽及亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽及其類似鹽。較佳者為銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽及鈉鹽。自醫藥學上可接受之有機非毒性鹼製備之鹽包括得自天然發生及合成來源之一級、二級及三級胺之鹽。可自其形成鹽之醫藥學上可接受之有機非毒性鹼包括(例如)精胺酸、甜菜鹼、咖啡鹼、膽鹼、Ν，Ν·-二节基乙二胺、二乙胺、2_二乙胺基乙醇、孓二 f胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、Ν_乙基_嗎啉、ν_乙基哌咬、葡萄胺' 葡糖胺 '組胺酸、海卓胺（hydrabamine)、異丙胺、二環己基胺、離胺酸、甲基葡萄胺、嗎琳、哌嘻、哌啶、多元胺樹脂、普魯卡因（pr〇caine)、嘌呤 '可可驗一乙胺—曱胺、二丙胺、緩血酸胺及其類似物。當本發明之化合物呈鹼性時’其相應鹽可便利地自醫藥學上可接受之非毒性無機及有機酸製備。料酸包括（例如）乙酸、苯料、笨甲酸、樟腦魏、檸檬酸、乙錯酸、反丁婦二酸、葡萄糖酸、麩胺酸、氫演酸 '鹽酸、羥乙基續酸、乳酸、順丁樣- 貝】烯—酸、頻果酸、扁桃酸、曱磺酸”、雙經萘酸、泛酸、磷酸、琥拍酸、硫酸、酒錢、對甲笨績酸及其類似酸。較佳者為檸檬酸、氫漠酸、鹽酸、順丁缔二酸、磷酸、硫酸及酒石酸。溶劑合物本發明在其範疇内包括式1a之化合物之溶劑合物。如本文中所用，術語「溶劑合物」係指由溶質（亦即式1&之化合 139023.doc 物）或其醫单風&一樂予上可接文之鹽及不干擾溶質生物活性之溶 Μ屯成的可變^_丄曰限於）夂受化子计虿之錯合物。溶劑之實例包括（但不合物水、乙醇及乙酸。當溶劑為水時，溶劑合物稱為水 ° ，水合物包括（但不限於）半水合物、單水合物、倍半夂5物、二水合物及三水合物。前藥 Α本發明在其範疇内包括本發明化合物之前藥之使用。通吊°亥等則藥為可易於在活體内轉化為所需化合物之本發明化「合物之官能性衍生物。因&，在本發明之治療方法奴與」一词應涵蓋以式Ia化合物或以可不為式la化合物、但在投與患者之後在活體内轉化為式la化合物之化合物來治療所描述之各㈣狀。選擇及製備合適的前藥衍生物之習知程序描述於（例如）「Design 〇f Pr〇drugs」⑴

Bundgaard編，Elsevier，1985)—文中。效用 φ 本發明之化合物為β3腎上腺素受體之有效激動劑，且因此適用於治療或預防由β3腎上腺素受體之活化所介導之疾病、病症或病狀。因此本發明之一態樣提供治療、控制或預防哺乳動物之4寻疾病、病症或病狀之方法，其包含於與該哺乳動物治療有效量之式la化合物。術語「喷乳= 物」包括人類及非人類動物（諸如狗及貓及其類似物）。本發明之化合物適用於治療或預防之疾病、病症或病狀包括 (但不限於）（1)膀胱過動症，（2)尿失禁，（3)急迫性尿失禁，（4)展急症，（5)糖尿病’（6)高也糖症，（7)肥胖症，（8) 139023.doc 17 1378098 高脂質血症’（9)高甘油三酯血症，（丨〇)高膽固醇血症， (11) 冠狀動脈、腦血管動脈及周邊動脈之動脈粥樣硬化， (12) 胃腸病症，包括消化性潰瘍、食道炎、胃炎及十二指腸炎（包括幽門螺桿菌（H. pylori)誘發之十二指腸炎）、腸潰瘍（包括發炎性腸道疾病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病 (Crohn、disease)及直腸炎）及胃腸潰瘍，（13)氣管之神經性炎症，包括咳嗷、哮喘，（14)抑鬱，（15)前列腺疾病，諸如良性前列腺增生’（16)大腸急躁症及其他需要降低胃腸運動之病症，（17)糖尿病性視網膜病，（丨8)早產，及（19) 高眼内壓及青光眼。可使用任何合適之投與途徑向哺乳動物（尤其人類）提供有效劑量之本發明之化合物。例如，可使用經口途徑、經直腸途徑 '局部途徑、非經腸途徑、經眼途徑、經肺途授、經鼻途徑及其類似途徑》劑型包括錠劑、片劑、分散液、懸浮液、溶液、膠囊、乳膏、軟膏劑、氣霧劑及其類似劑型。較佳地，經口投與式la化合物。所用活性成份之有效劑量可視所用特定化合物、投與方式、所治療之病狀及所治療病狀之嚴重程度而變化。熟習此項技術者可易於確定該劑量。當結合其他抗膀胱過動症（0AB)藥劑或單獨治療〇AB 時，通常當以每公斤動物體重0.01毫克至約1〇〇毫克之曰劑量投與本發明之化合物時獲得令人滿意的結果，該曰劑量較佳地以單次給藥方式或每天兩至六次分次給藥方式給予，或以持續釋放形式給予。在70公斤成年人之情況下， 139023.doc 總曰劑量通常為約0.7毫克至約35〇〇毫克，或更特定言之約0.7毫克至約扇〇毫克。可調整此給藥方案以提供最佳治療反應。田與糖尿病及/或高血糖症_起或單獨治療肥胖症時，通苇田以每Α斤動物體重〇〇1毫克至約⑽毫克之日劑量才又與本發明之化合物時獲得令人滿意的結果，該日劑量較仏地以單_人給藥方式或每天兩至六次分次給藥方式給予，或=持續釋玫形式給予。在7〇公斤成年人之情況下，總曰幻里通；ϋ為約〇·7毫克至約35〇〇毫克。可調整此給藥方案以提供最佳治療反應。當治療糖尿病及/或高血糖症以及式Ia化合物適用之其他疾病或病症時，通常當以每公斤動物體重約〇〇〇1毫克至約100毫克之曰劑量投與本發明之化合物時獲得令人滿意的結果，該日劑量較佳地以單次給藥方式或每天兩至六次分次給藥方式給予，或以持續釋放形式給予。在公斤成年人之情況下，總曰劑量通常為約〇〇7毫克至約35〇毫克。可調整此給藥方案以提供最佳治療反應。在一實施例中，本發明之化合物用於製造供治療或預防由β3腎上腺素受體之活化所介導之疾病或病症的藥物。本發明之另一態樣提供包含式la化合物及醫藥學上可接丈之載劑之醫藥組合物。本發明之醫藥組合物包含式“化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為活性成份，且亦可含有醫藥學上可接受之載劑及視情況存在之其他治療性成份。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指自醫藥學上可接受之非 •i9- 139023.doc 1378098 毒性鹼或酸（包括無機鹼或酸及有機鹼或酸）製備之鹽。組合物包括適合於經口、膀胱内、經直腸、局部、非經腸（包括皮下、肌肉内及靜脈内）、經眼（眼用）、經肺（經鼻或經口腔吸入）或經鼻投與的組合物，雖然在任何給定情況下最合適的途徑係視所治療病狀之性質及嚴重程度及活性成份之性質而定》其可便利地以單位劑型呈現且藉由在製藥技術中熟知之任一方法製備。在實際使用中’可根據習知醫藥混配技術將式Ia化合物作為活性成份與醫藥載劑精細混合而組合。載劑可視投藥 (例如經口或非經腸（包括靜脈内））所需之製劑形式而採用多種形式。在用於經〇劑型之組合物製備中，可使用任一常用醫藥介質’例如在懸浮液、触劑及溶液等經口液體製劑的情況下使用水 '乙二醇類、油、醇、調味劑、防腐劑、著色劑及其類似物；或在散劑、硬及軟膠囊及錠劑等情況下使用諸如澱粉、糖、微晶纖維素等載劑、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑及其類似物，其中固體經口製劑優於液體製劑。由於錠劑及膠囊易於投藥，故其代表最有利之經口單位劑型，在該情況下很明顯使用固體醫藥載劑。若需要，則可由標準含水或不含水技術塗佈錠劑。該等組合物及製劑將含有至少0.1%之活性化合物。此等組合物中之活性化合物之百分比當然可變化且可便利地在該單位重量之約2% 至約60%之間。該等治療有用的組合物中之活性化合物的量使得獲得有效劑量。活性化合物亦可以(例如)液體滴劑 -20- 139023.doc

1378098 或喷霧劑形式經鼻内投與。該等旋劑、丸劑、膠囊及其類似物亦可含有下列各物：黏合劑’諸如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑，諸如鱗酸氫崩解劑，諸如玉米殿粉、馬铃菩殿粉、褐藻酸’·潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；及甜味劑，諸如嚴糖、礼糖或糖精。當單位劑型為膠囊時’其除上述類型之材料外可含有液體載劑，諸如脂肪油。

多種其他材料可以塗層形式存在或用以改良劑量單位之外觀。舉例而τ，錠劑可以蟲膠、糖或兩者塗佈。除活性成份之外，糖漿或酏劑可含有蔗糖作為甜味劑、對羥基苯甲酸甲醋及㈣基苯甲酸丙料為防腐劑、染料及㈣劑 (諸如櫻桃或橙子香料）。式la化合物亦可非經腸投與。此等活性化合物之溶液或懸浮液可在適當地混合界面活性劑（諸如經基丙基纖維素）之水中製備“分散液亦可在甘〉、由、液體聚乙二醇及其混合

物中而於油中製備。在-般儲存及使用條件下，該等製劑含有防腐劑以防止微生物生長。適合於可&射用途之醫藥形式包括無菌水溶液或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌散劑。在任何情況下，該形式必須為無菌的且必須為在一定程度上易於注射之流體。其必須在製造及儲存條件下為穩定的且必須免於微生物（諸如細菌及真菌）之污染作載劑可為含有（例如）水、乙醇、多元醇（例如及液體聚乙二醇）、其合適混合物及植物油用而保存。該甘油、丙二醇之溶劑或分散 139023.doc •21 · 1^/8098 介質。 ^化合物可與用於治療/預防/抑制或改善式h化合物 ^用之疾病或病狀的其他藥物組合使用。該等其他寧物 =由其通常所用之途徑且以其通常所用之量與式u化合匆同時或依序投與。當式1&化合物與一或多種其他藥物同時使用時’除式la化合物之外含有該等其他藥物之醫藥單位劑型為較佳的。因此’本發明之醫藥組合物包括除式U 化合物之外亦含有—或多種其他活性成份之彼等醫藥組合物。可與式la化合物組合而分別投與或纟同一冑藥組合物中才又與之其他活性成份之實例包括（但不限於）： (a)膀胱過動症藥物，其包括⑴簟毒鹼受體拮抗劑（例如托特羅足（tolterodine)、奥昔布寧（0Xybutynin)(包括S-奥昔布寧）、k宕驗、丙胺太林（propantheline)、丙π底維林 (propiverine)、曲司銨（trospium)(包括曲司氯錢（troSpium chloride))、素立芬新（s〇lifenacin)、達非那新 (darifenacin)、咪達那新（imidafenacin)、非索羅定 (fesoterodine)、替米維林（temiverine)、S.VT-40776、 202405(GlaxoSmithKline) 、 TD6301 、 RBX9841 、 DDP200、PLD179及其他抗膽鹼劑。參見（例如）US 5,382,600、US 3，176,019、US 3,480,626、US 4,564,621、 US 5,096,890 ' US 6,017,927、US 6,174,896、US 5,036,098、US 5,932,607、US 6,713,464、US 6,858,650及 DD 106643，亦參見US 6，103,747、US 6,630，162、US 6,770,295 ' US 6,911,217 ' US 5,164,190 ' US 5,601,839 ' • 22· 139023.doc 1378098 US 5,834,010、US 6,743,441、W0 20〇2〇〇〇652、w〇 200400414853。如熟習此項技術者所理解，此等藥物可以標準或延長釋放形式經口或局部投與，該等延長釋放形式諸如延長釋放型托特羅定、延長釋放型奥昔布甯及經皮奥昔布寧）’（ii)NK-l或NK-2拮抗劑（例如阿瑞吡坦 (aprepitant)、西佐利汀（cizoHrtine)、揭示於 w〇 2005/073191、WO 2005/032464中之化合物，及其他經報導之NK-1拮抗劑），（iii)a腎上腺素受體拮抗劑（例如阿夫唑嗪（alfuzosin)、多沙唾嗪（d〇xazosin)、哌唑嗪（praz〇sin)、他蘇洛辛（tamsulosin)、特拉唑嗪（teraz〇sin)及其他），（w) _通道開啟劑（例如色滿卡林（cr〇rnakalim)、》比那地爾 (pinacidil)及其他），（ν)香草精類（vanin〇ids)及其他傳入神，-調卽劑-激動劑及拮抗劑（例如辣椒驗（capsaicin)、樹脂大戟毒素（resiniferatoxin)及其他），（vi)多巴胺di受體激動劑（例如培高利特（pergolinde))，（νπ)血清素及/或去甲腎上腺素再吸收抑制劑（例如度洛西汀（dul〇xetine))，（viii)對神經肌肉接點處釋放乙醯膽鹼的抑制（例如肉毒桿菌毒素 (botulinum toxin))，（ix)鈣通道阻斷劑（例如地爾硫卓 (diltiazem)、硝笨地平（nifedipine)、維拉帕米（verapamil) 及其他）’（X)前列腺素合成之抑制劑（例如氟比洛芬 (nurbiprofen))，（Xi) γ胺基丁酸受體拮抗劑（例如巴氯芬 (baclofen)) ’（xii)陰道雌激素製劑，（xiii)選擇性去曱腎上腺素再吸收抑制劑’（Xiv) 5_HT2C激動劑，（xv)電壓門控鈉通道阻斷劑’（xvi) Ρ2χ嘌呤受體拮抗劑（例如P2X1或 139023.doc •23· 1378098 P2X3拮抗劑），（xvii)PAR2抑制劑，（xviii)磷酸二酯酶抑制劑（例如PDE1 ' PDE4及PDE5抑制劑），及（xix) ATP敏感性鉀通道開啟劑； (b)胰島素增敏劑’其包括（i) ρρΑΙΙγ激動劑，諸如格列酮（glitazone)(例如曲格列酮（troglitazone)、°比格列酮 (pioglitazone)、恩格列酮（engiitazone)、MCC-555 、 BRL49653及其類似物）及揭示於w〇 97/27857、97/28115、 97/28137及97/27847中之化合物，（ϋ)雙胍，諸如二曱雙胍 (metformin)及苯乙雙胍（phenfo rmin); (C)胰島素或胰島素模擬劑； (d) 確醯脲，諸如曱苯續丁脲（t〇ibutamide)及格列。比嘻 (glipizide)； (e) α -葡糖苦酶抑制劑（諸如阿卡波糖（acarb〇se)); (f) 降膽固醇藥劑，諸如（i)HMG-CoA還原酶抑制劑（洛伐他 /Γ (lovastatin)、辛伐他·;丁（simvastatin)及普伐他丁 (pravastatin)、默伐他·;丁（fiuvastatin)、阿托伐他丁 (atorvastatin)及其他斯達汀（statin))，(π)螯合劑（消膽胺 (cholestyramine)、考來替泊（c〇iestip〇i)及交聯葡聚糖之二烧基胺基烷基衍生物）’（Π)菸鹼醇菸鹼酸或其鹽，（Hi)增殖劑活化受體α激動劑，諸如非諾貝酸（fen〇fibric aCid)衍生物（吉非羅齊（gemfibrozil)、氯貝特（cl〇fibrat)、非諾貝特（fenofibrate)及笨紮貝特（benZafibrate))，（iv)膽固醇吸收之抑制劑（例如β-穀甾醇及依澤替米貝（ezetimibe))及（醯基輔酶A :膽固醇醯基轉移酶）抑制劑（例如甲亞油醯胺 139023.doc • 24- 1378098 (melinamide))，（v)普羅布考（probucol)，（vi)維生素E，及 (vii)擬曱狀腺素藥（thyromimetics); (g) ΡΡΑΙΙδ激動劑，諸如揭示於WO 97/28149中之彼等 ΡΡΑΙΙδ激動劑； (h) 減肥化合物，諸如芬說拉明（fenfluramine)、右芬氟拉明（dexfenfluramine)、芬特明（phentermine)、西布曲明 (sibutramine)、奥利司他（orlistat)及其他β3腎上腺素受體激動劑； (i) 攝食行為改良劑，諸如神經肽Υ拮抗劑（例如神經肽 Y5)，諸如彼等揭示於 WO 97/19682、WO 97/20820、WO 97/20821 ' WO 97/20822及 WO 97/20823 中之神經肽 Y拮抗劑； (j) PPARa激動劑，諸如Glaxo描述於WO 97/36579中之 PPARa激動劑； (k) 如描述於WO 97/10813中之ΡΡΑΙΙγ拮抗劑；及 (l) 血清素再吸收抑制劑，諸如氟西汀（fluoxetine)及舍曲林（sertraline)。在一實施例中，本發明之化合物及如上所述之第二活性劑用於製造供治療或預防由β3腎上腺素受體之活化所介導之疾病或病症的藥物。本發明之式la化合物可根據以下流程及實例之程序使用合適的物質製備，且進一步藉由以下特定實例例示說明。此外，藉由使用本文中所描述之程序，一般熟習此項技術者可易於製備本文中所主張之本發明之其他化合物。然 139023.doc •15· 1378098 而，在實例中所說明之化合物不應理解為形成視作本發明之僅有種類。實例進一步說明製備本發明之化合物之細即。熟習此項技術者將易於瞭解，以下製備程序之條件及過程之已知變化可用於製備此等化合物。本發明之化合物通常以其醫藥學上可接受之鹽（諸如先前在上文中所描述之彼等鹽）之形式分離。與所分離鹽對應之游離胺鹼可藉由以合適的鹼（諸如碳酸氫鈉水溶液、碳酸鈉、氫氧化鈉及氫氧化卸）中和，且將釋出的胺游離驗萃取至有機溶劑中’接著蒸發而產生。α此方式分離之胺游離驗可進一步藉由今解於有機溶劑_，接著添加合適的酸且隨後蒸發、沈澱或結晶而轉化為另一醫藥學上可接受之鹽。除非另有說月否則所有溫度為攝氏溫度。質譜（MS)係藉由電喷霧離子質譜分析量測。各種層析技術可用於化合物製備。此等技術包括(但不限於）：高效液相層析（HPLC)，其包括正相、逆相及對掌 I·生相HPLC ’ +等壓力液相層析（MPLC)，超臨界流體層析’製備性薄層層析（製備性TLC):料或逆相石夕勝急驟層析’離子交換層析，及徑向層析。除非另有說明否則所有溫度為攝氏溫度。片語「標準肽偶合反應條件」意謂在催化劑（諸如膽τ 及HOAT)存在下在惰性溶劑（諸如二氣甲烧）中使用酸活化月U諸如EDC、DCC及即卩）將缓酸與胺偶合。使用胺及叛酸官能基之保護基來促進所需反應及最小化不當反應係經充分證明的。移除保護基所需之條件見於標準教科書中， 139023.doc -26 · ^78098 諸如 Greene，T 及 Wuts，P. g· M., /Voieciz.ve Grow/?·? 2·«

Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1991。MOZ及BOC為有機合成中普遍使用之保護基，且其移除條件為熟習此項技術者所已知。例如，M〇z可藉由在貴金屬或其氡化物（諸如活性碳載鈀）存在下在質子性溶劑 (諸如甲醇或乙醇）中進行催化氫化而移除。在由於存在其他潛在反應性官能基而顯示不適合進行催化氫化的情況下，亦可藉由在溶劑（諸如二氯甲烷、甲醇或乙酸乙酯）中以一氟乙I、鹽酸或氣化氫氣體之溶液處理來達成基團之移除。保護基之移除係在溶劑（諸如二氣甲烧、曱醇或乙酸乙酉旨)中以強酸(諸如三氟乙酸、鹽酸或氯化氫氣體）進行。貝穿本申。月案’除非另有說明，否則以下術語具有所指示之含義：術語含義 Ac 醯基（CH3C(〇)-) Aq. 水溶液 Bn 苄基 BOC (Boc) 第三丁氧基羰基 BOP 六氟磷酸苯并三唑-丨·基氧基參（曱基胺基）鱗 °C 攝氏溫度 Calc.或 calc’d 計算值 Celite CeliteTM矽藻土 139023.doc •27- 1378098 DCC 二環己基碳化二亞胺 DCM 二氯曱烷 DIEA Ν,Ν-二異丙基-乙胺 DMAP 4-二甲胺基吡啶 DMF Ν,Ν-二曱基曱醯胺 EDC 1-乙基-3-(3-二曱基胺基丙基）碳化二亞胺 Eq.或 equiv. 當量 ES-MS及 ESI-MS 電喷霧離子質譜分析 Et 乙基 EtOAc 乙酸乙酯 g 公克 h或hr 小時 HATU 六氟磷酸0-(7-氮雜苯并三唑-1-基）-Ν,Ν,Ν',Ν’-四曱鋸 HOAc 乙酸 HOAT 1-羥基-7-氮雜苯并三唑 HOBT 1-羥基苯并三唑 HPLC 而效液相層析 LC/MS 或 LC-MASS 液相層析質譜 L 公升 M 莫耳濃度 Me 曱基 MeOH 曱醇 139023.doc -28- 1378098 MF 分子式 min 分鐘 mg 毫克 mL 毫升 mmol 毫莫耳 MOZ (Moz) 對曱氧基节氧基羰基 MP 熔點 MS 質譜 nM 奈莫耳濃度 OTf 三氟甲磺醯基 Ph 苯基 Prep. 製備性 Ref. 參考 r.t.或 rt 室溫 Sat. 飽和 SCF C02 S 超臨界流體二氧化碳 TBAF 氟化四丁銨 TBAI 碘化四丁銨 TBDPS 第三丁基二苯基矽烷基 TBS、TBDMS 第三丁基二甲基矽烷基 TEA 或 Et3N 三乙胺 Tf 三氟甲磺酸酯 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 -29- 139023.doc

TLC TMS 薄層層析三曱基矽烷基从下反應流程說明用於合成本發明之式化合物之方法除非另外指明’否則所有取代基如以上所定義。為本 I月之標的之新穎式ia化合物的合成可藉由若干相似途徑中之一或多者完成。在机程I中’在〇 c溫度下在無水THF或醚中將市售丨以乙烯基格林納（vinyl Grignard)uw M溶液處理且使其經丨時與4小時之間的時間溫至室溫。反應通常在諸如THF Φ 之U性有機溶劑中且在諸如氮氣之惰性氣氛下執行。產物為結構式Ι·2之稀丙基醇β 之轉化可藉由選擇所需之矽烷基保護劑（諸如第三丁基二甲基氣化物）及弱有機鹼 (諸如咪唑）且在室溫下混合4小時至“小時之間來達成。經由將臭氧氣體鼓泡一段時間直至藍色持續存在來氧化雙鍵且隨後藉由添加過量二曱硫來還原臭氧化物，從而獲得醛。隨後在亦充當乾燥劑之路易斯酸（諸如硫酸銅或四氣化鈦）存在下以R_(+).2_甲基_2•丙烧亞確醯胺或s㈠_2-甲% 基-2-丙烷亞磺醯胺處理1-4。反應通常在惰性有機溶劑（諸如二氣甲烷）中在室溫與4{rc之間執行6_36小時之時間，且 _ 產物為結構式1-5之亞磺醯胺。如同M一樣，15在相似條件及時間下以乙烯基格林納處理以獲得烯丙基亞磺醯胺 6為選擇性移除亞磺醯胺，1-6以4 M HC1於二噁烧中之無水冷液處理不超過丨5分鐘。隨後將反應以曱笨稀釋且濃縮至乾燥以獲得L7。最後，1-7經由在〇°C下在惰性有機溶 139023.doc 1378098 劑（諸如DCM)中在無水有機鹼（諸如三乙胺或二異丙基乙胺）存在下以氯甲酸苄酯處理，使其經1小時至3小時之間的時間溫至室溫而轉化為1-8。

流程I

R10 = TMS, TBS, TBDPS

鹼

DCM

R10-CI

Xh A〆H 1-1

Cl>

^^Mg(Br, Cl) THF 0°C - rt

臭氧繼之以DMS

4N HCI 二噁烷 0uS〇4 或 TiCI4 DCM 40°c Ar

NH2 DCM 0oC 至 ft

氯曱酸苄酯 XEA-^-Oi£A

或者，可如流程II中所示製備醛1-4。在N-甲基嗎啉N-氧化物存在下以四氧化锇處理1-3獲得二醇1-9。反應通常在水與丙酮之混合物中執行且謹慎地處理以在濃縮溶液之前移除毒性四氧化餓。隨後將殘餘物1-9溶解於丙酮/水（8:1) 中且在室溫下以過碘酸鈉處理8小時與24小時之間的一段時間以如同在流程I中一樣獲得醛1-4。隨後使用流程I中所描述之相同程序將此物引導至最終所需中間物1-8。

流程II

流程III描述使用流程I及II中描述之CBz保護之烯丙基醯胺1-8來合成吡咯啶核心。可使用適用於熟習此項技術者已

139023.doc -31 · 1378098 知之烯烴複分解之合適催化劑使乙烯基化合物1-8在烯烴交又複分解中與乙烯基酮中間物^⑺反應。合適的催化劑包括（但不限於）「古露比（Grubbs)」及「詹（Zhan)」催化劑且為稱為古露比π及詹1或^之類型以產生結構式Ιβ11之化合物。藉由在諸如乙酸乙酯或乙醇之溶劑中在氫氣氛下以 1〇°/。把/碳催化劑處理2·ι6小時進行此中間物之氫化，除經由游離胺與酮之間的分子内亞胺形成及亞胺還原達成閉環作用之外，亦達成烯烴之氫化以及任何（：|：)2保護基之移除，從而形成通式結構i 2之吡咯啶環。視溶劑之選擇而定’芳基上之齒素取代基此時可視最終中間物之偏好而保留或移除。吡咯啶之選擇性Boc保護可藉由在諸如三乙胺（TEA)之無水有機驗存在下添加一當量之二碳酸第三丁酯（Boce)至M2來完成。反應通常在惰性有機溶劑（諸如 THF)中’且在惰性氣氛（諸如氮氣）下執行，獲得結構式工_ 13之產物。視酿胺、橫酿胺或尿素之選擇而定，可藉由使用為熟習此項技術者已知用於形成彼等所需化合物之合適方法而將1-13轉化為每一者。對於確醯胺而言，us可在合適的驗（諸如吡啶）存在下以含有R6之所需磺醯氯處理。如本文中所用，R6係選自： ⑴氫， (2) 視情況經1至5個獨立地選自齒素、_〇Ra、_c〇2Ra及 •CONRaRb之基團取代之C丨_c丨〇烷基， (3) 視情況經1至3個獨立地選自齒素、視情況經1至5個鹵素原子取代之心-匸5烷基及-〇Ra之基團取代之苯基，及 139023.doc -32- 1378098 • (4)具有1至4個選自氡、硫及氮之雜原子的5或ό員雜，環，且其中該雜環視情況與笨環單邊稠合，且視情況經i ··.至3個獨立地選自齒素 '視情況經丨至5個齒素原子取代之 • C^-Cs烷基及-ORa之基團取代。反應通常在室溫與80 C之間在惰性有機溶劑（諸如DMF) • 中執行12_24小時之時間，且產物為結構式ϊ_14之磺醯胺。 • 對於醯胺而言，可在合適的有機鹼（諸如TEA或DIEA)存在 ❿ T以含有R之所需乙醯氯處理1-13。反應通常在室溫下在惰性有機溶劑（諸如DMF)中執行12_24小時之時間，且產物為6結構式1-15之醯胺。最後’尿素可藉由在室溫下在含有 R之胺存在下以CDI或ί反gf氣處理ι_13歷時丨小時與小時之間的時間以獲得結構式⑽之尿素而形成。經由、在室溫下在甲醇水溶液中以6 Μ Ηα處理12_24小時之時間來同時和除M4、M5&M62B〇c及矽烷基保護基獲得於一般、…構式丨:^〜：^^及^^中所展示之含有“之各種醯胺磺 % 醯胺及尿素之最終所需產物。右在R部分上存在熟習此項技術者已知為使得化學過程彳以便利方式進行所必需之適用保護基，則可包括其他的絲護步驟。此等保護基可包括三笨？基、胺基甲酸第三土團或為^習此項技術者所知適合於保護雜環化合物或附接至R6基團之官能基（諸如胺、羥基、羧酸）之复他團。八土 139023.doc 流程in

1378098 如流程IV中所示之替代途徑概述獲得順式及反式吡咯啶之合成，該等吡咯啶在製備最終化合物之前分離。首先在酸（諸如對曱苯磺酸）存在下使用於合適溶劑（諸如甲苯）中之丙酮將起始2-胺基-芳基丙烷-1，3-二醇（1-20)保護為半縮醛，且隨後藉由以二碳酸第三丁酯處理來保護該胺以得到中間物1-21。使用標準斯文（Swern)氧化條件，將游離一級羥基轉化為醛1-22。隨後與（三苯基亞磷烷基）乙醛進行維蒂希（Wittig)反應將醛延長兩個碳，且所得雙鍵經由以鈀/碳氫化而還原以獲得1-23。隨後此中間物與溴化 J39023.doc • 34* 1378098 (4-硝基苄基）三苯基-鎮進行第二維蒂希反應以得到中間物 1-24，其在保護基移除之後使得化合物可經由雙鍵上之邁克爾（Michael)加成而環化。以二碳酸第三丁酯保護胺基有助於純化及分離基質以分別獲得順及反異構體兩者（I-25a 及I-25b)。硝基氫化生成游離胺，產生所需中間物I-26a及 I-26b。當使用EDC時，中間物I-26a及I-26b可用於標準醯胺偶合，然而在以醯氣或磺醯氯處理之前或當轉化為尿素時以碳醯氣處理之前，羥基需要經選擇性保護。

流程IV

OH rX^Boc . 斯文氧化

Ar

OH 1-21

卜20 ,nh2 Όη 】）丙嗣/甲苯 2) Boc20 PhzP^^〇乂 O^NBoc DIEA 遒之以h2 10% Pd/c .· · 卜23 H H〇 °r°-p αγ _tL·-Pd/C \ 卜25a 32%順 U25b 50% 反 N〇2 DIEA Ph3+F Br- l-26a 乂 NBoc

卜22 I). HCI * 一2). T^NEt >^\ 3). Boc20 I-24

nh2 NO,

U26b nh2 流程V概述吡咯啶核心之合成，其將流程I、III及IV途徑互連以提供順2S,5R吡咯啶之非對映異構選擇性吡咯啶核心。利用維蒂希反應，經由以溴化甲基三苯基鎮處理而將來自流程IV之醛1-22轉化為乙烯基類似物1-27。在如經由中間物1-28所見之保護基操作之後，流程經由中間物1-8變得彙聚至流程III。使用如流程III中描述之相似程序，可隨後

139023.doc -35- 1378098 獲得中間物ι-ll。藉由引入鹽酸及0.15至0.30 Μ濃度之稀釋因數來最佳化氫化，主要獲得順2S，5R吡咯啶核心I-13a。

流程V

10% Pd/C EtOH, H2 1 eq HCI

1-13a NH2 98+0/〇 de B〇C2〇

THF

TEA 83% 流程VI概述經由醛醇化學過程來設定吡咯啶之羥基及左手部分之對掌性而合成乙炔中間物之方法。由此，此乙块中間物可用於合成順及反°比洛。定兩者。首先在-25°c下在諸如三乙胺之弱有機鹼存在下以三曱基乙醯氣處理市售1-29歷時2小時。依序添加無水氯化鋰及 (S)-(-)-4-苄基或（S)-(-)-4-苯基-2-噁唑啶酮至混合物，接著經12與24小時之間的時間逐漸温至室溫，獲得醯亞胺Ι-ΒΟ 。反應通常在諸如 THF之惰性有機溶劑中、在諸如氮氣之惰性氣氛下執行。根據公開程序（參見Evans 等人/.dm. C/zem. Soc. 2002, 124, 392-394)製備醇 1-32。例如，在室溫下經72小時之時間以無水氣化鎂、三乙胺、合適的醛I- 139023.doc -36- 1378098 31(諸如3-氯-苯甲醛或笨曱醛）及氣三甲基矽烷處理i3〇產生醛醇產物1-32之三甲基矽烷基醚。反應通常在諸如乙酸乙酯之有機溶劑中、在諸如氮氣之惰性氣氛下執行。以三氟乙酸及甲醇混合物處理三甲基矽烷基醚中間物獲得所需醇1-32。藉由在〇。〇下以過氧化鋰處理15_18小時之時間達成醯亞胺1-32之水解。過氧酸隨後以亞硫酸鈉之水溶液還原以獲得羧酸1-33。反應通常在諸如THF之惰性有機溶劑與水之混合物中、在諸如氮氣之惰性氣氛下執行。生成1-34之轉化可藉由選擇所需之矽烷基保護劑（諸如第三丁基二甲基矽烷基三氟甲磺酸酯）且使其在〇r下在弱有機鹼 (諸如DBU)存在下反應12小時至16小時之間的時間來達成。1-34可隨後在室溫下在諸如三乙胺之弱有機鹼存在下以二苯基磷醯基疊氮化物處理6小時之時間。添加合適的醇（諸如4-甲氡基苄醇）伴以加熱至1〇〇β(：歷時12小時與μ小時之間的時間產生相應胺基曱酸酯1-35。反應通常在如甲苯之惰性有機溶劑中、在諸如氮氣之惰性氣氛下執行。此物質形成可合成吡咯啶核心之基礎。 139023.doc -37· 1378098 流程νι

-25 °C HN八 >〇>； THF Ph

MgCI2, TEA. TMSCI. EtOAc 2) TFA/MeOH Λ 1-31

LiCI 25 eC - 1-29

THF 1) H2〇2. LiOH 2) Na2SQ3

R10-OTf 鹼

DCM

10O O

OH II 1-34

1) DPPA, TEA 甲苯 2) R11-OH rt-100 °C

1-35 流程VII概述使用1-35進行吡咯啶核心轉化。吡咯啶係藉由閉環劑經由分子内還原性胺化反應以形成順及反吡咯啶來形成。分離順及反吡咯啶，接著將硝基還原為胺，得到用於類似物合成之最終所需吡咯啉苯胺。炔1-35可在邵納蓋西拉（Sonagashira)型交叉偶合反應中使用為熟習此項技術者所知之合適反應條件與相應市售芳基鹵化物1-36反應以獲得1-37。反應條件可包括在有機溶劑（諸如乙腈或 DMF)中、在惰性氣氛（諸如氮氣）下使用催化劑，諸如在有機鹼（諸如三乙胺）存在下伴有或不伴有碘化銅（I)之肆（三苯膦）-鈀（0)，或伴有有機鹼（諸如乙酸四丁銨）之乙酸鈀（II)。可藉由在溶劑（諸如DMF)中在80°C溫度下使炔1-37與吡咯啶反應3-6小時之間的時間而製備酮1-38。隨後在室溫下以 10%乙酸水溶液處理15-60分鐘之間的時間產生酮1-38。I-3 8之胺基甲酸酯保護基可使用為熟習此項技術者所知之合 139023.doc -38- 1378098 * 適反應條件移除以獲得相應胺’其隨後經受與_之分子内 - 閉環作用以獲得亞胺1-39。反應條件可包括在諸如二氯甲 :. 烷之有機溶劑中之三氟乙酸，及在諸如醚之有機溶劑中之 .·鹽酸。亞胺1-39之還原可藉由在諸如氮氣之惰性氣氛下在〇°C溫度下在諸如曱醇之有機溶劑十以氰基硼氫化鈉處理 18-24小時之間的時間來達成。此舉獲得順吡咯啶（i-4〇a) 及反吡咯啶（I-40b)中間物，其可藉由矽膠層析法分離^工_ _ 40a為在反應中產生之主要非對映異構體且為自管柱溶離出來之第一非對映異構體。以3叫基團保護吡咯啶氮藉由在弱有機鹼（諸如三乙胺）存在下以二碳酸第三丁酯處理來達成。反應通常在有機溶劑（諸如二氯曱烷）中、在惰性氣氛（諸如氮氣）下執行，以獲得結構式或 I-41b之產物。在溶劑（諸如乙酸乙酯或乙醇）中在η與％ psi之間的氣氣氛下在氣化氫存在下以把/碳處理m小時來氣化中間物獲得視條件灸之選擇而定，鹵素取代基χ此時可視最終中間物之偏好而保留或移除。 139023.doc 39 1378098

流程VII :Η或卤素 R1〇0 〇<Y〇R' Δγ^ΝΗ

Pd(PPh,)4, Cul

DMF 60 *C 2)10% aq. AcOH

CH3CN I-35 R1〇〇〇丫0，xX〇rN。3 1-39

TFA CH2CI2 I-37

MOa

U40b

l*40a 或卜40b

B0C2O. TEA DCM

H2 (50 psi) Pd/C, HCI EtOH 或乙酸^乙酯 Ri。。〇丫^\ χ I*42b (反）nt洛咬 N〇2

U42a (順）nt路啶在某些情況下，可改變以上反應流程之進行順序以促進反應或避免不當的反應產物。提供以下實例以使得可更全面地理解本發明。此等實例僅為說明性的且不應視為以任何方式限制本發明。中間物1 [3-(2-側氧基丁-3-烯-1-基）苯基]胺基曱酸苄酯（i-Ι):

Η 步驟Α: (3-{[(苄氧基）羰基]胺基}苯基）乙酸乙酯 -40- I39023.doc 1378098

向（3-胺基苯基）乙酸曱醋（25 g，140 mmol)於250 mL無水DCM中之溶液中添加DIEA(28.5 mL，155 mmol)且所得溶液冷卻至o°c且設定於氮氣氛下。隨後向此冷卻溶液中添加氯曱酸苄酯（21.1 mL，148 mmol)且將所得混合物搜掉隔仪’使其溫至室溫。將反應以1 M HC1、水洗蘇，且隨後以鹽水洗蘇。有機層經硫酸納乾燥，過濾、且在真空下濃縮。不需要進一步純化且物質（44 g，99%)原樣用於下一步驟反應。LC-MS: m/z (ES) 3 14 (MH)+，336 (MNa)+。步驟B: (3-{[(苄氧基）羰基]胺基}苯基）乙酸

向44.0 g(l40 mmol)之（3-{[(苄氧基）羰基]胺基}笨基）乙酸乙酯（來自步驟A)於THF、乙醇及水（ι:1:1，15〇〇 mL)中之浴液中添加固體LiOH( 16.8 g，700 mmol)且所得溶液經由油浴加熱至60°C歷時3小時。將混合物冷卻至室溫隔夜且隨後保持溫度低於25 °C而緩慢添加4〇 mL濃HC1，直至溶液之pH值為約2-3。以乙酸乙酯（3x750 mL)萃取且隨後將有機物合併且以水及隨後鹽水洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥過;慮且在真空下/辰縮。標題化合物（24.7 g，87%)在未進一步純化之情況下用於下一步驟反應。lC_ms: m/z(ES) 286 (MH) +，308 (MNa)+。步驟C : (3-{2-[甲氧基（曱基）胺基]_2_側氧基乙基}苯基）胺 139023.doc 1378098 基曱酸苄輯

向24.7 g(87 mmol)(3-{[(苄氧基）羰基]胺基}苯基）乙酸於 200 mL二氯曱烷中之懸浮液（來自步驟B)中添加三乙胺 (30·2 mL，173 mmol)’其引起部分放熱（ + 5^)且懸浮液變成溶液。在10分鐘冷卻之後，將H〇Bt(13.2 g，87 mmol)、 N，0-二曱基羥胺HC1(8.5 g，87 mmol)添加至溶液，接著添加EDC(1 6.6 g，87 mmol)且將所得混合物在氮氣氛下在室溫下攪拌隔夜。將溶液轉移至分液漏斗且以1 M HC1洗滌，產生乳液。添加甲醇以散開乳液且分開水相。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。殘餘物自1〇〇〇 mL 於乙酸乙酯中之70%己烷再結晶（加熱至回流且隨後冷卻至室溫隔夜）得到呈白色固體狀之標題化合物（2 1 g，74%)。 LC-MS: m/z (ES) 329 (MH)+。步驟D ··【3-(2-側氧基丁 _3_烯基）苯基】胺基甲酸苄酯ο- ΐ) 15 g(45.7 mm〇l)(；H2·[甲氧基（甲基）胺基]2側氧基乙基}苯基）胺基甲酸苄酯（來自步驟c)於1000 mL無水thf中之溶液在氮氣氛下經由冰/水浴冷卻至，經由套管向其中逐滴添加溴化乙烯基鎂之〗〇 M溶液（THF中之出乙， 1〇〇 mmol)且在（TC下攪拌所得溶液丨小時。保持溫度低於 5°C，緩慢添加500 mL 1 M HC丨而淬火反應且攪拌3〇分鐘。隨後混合物以乙酸乙酯萃取且合併之有機物以水洗 I39023.doc •42- 滌，接著以鹽水洗滌。隨後有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真工下〉辰縮。殘餘物藉由Biotage 75 M Flash、以己统中之30%乙酸乙酯溶離純化以得到呈淡黃色固體狀之標題化合物（11 g，78%) » LC-MS: m/z (ES) 310 (MH)+，332 (MNa)+ 〇 *HNMR (500 MHz, CDC13) 5:7.44-7.36 (m, 7H), 7.18 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.70 (br s, 1H), 6.44 (dd, J=l〇.5} 17.6 Hz, 1H), 6.32 (dd} J=l.l5 17.6 Hz, 1H), 5.85 (dd, J=l.l，10.5 Hz, 1H)，5.22 (s, 2H)，3.86 (s，2H)。中間物2 ((lR)-l-[(R)-{【第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(3_氣苯基）曱基}丙-2 -稀- l-基}胺基甲酸輯（丨_2)

步驟A : 1-(3-氯苯基）丙-2-稀_1_醇

在惰性氮氣氛下經由注射器向3 -氯苯甲醛（22.5 g，160 mmol)於100 mL無水THF中之冷卻溶液中緩慢添加氣化乙烯基鎂於THF中之1.6 Μ溶液（1〇〇 mL，160 mmol)且攪拌溶液3小時’使其溫至室溫。將反應以氣化銨之飽和溶液淬火且分離有機層，以乙酸乙酯萃取（2x2〇〇 mL)，且合併有機層，經硫睃鎂乾燥’過濾且在真空下濃縮。藉由4〇M+ 矽膠管枉Horizon MPLC、使用己烷中之〇_4〇〇/0乙酸乙酯之 139023.doc • 43· 1378098 梯度溶離劑純化得到標題化合物（22.4 g，44%)。m/z (ES) 168，170 (M，M+2)+，190，192 (MNa，MNa+2)+。】HNMR (500 MHz, CDC13) δ: 7.38 (s, 1H), 7.35-7.22 (m, 3H), 5.90 (ddd, J=7.3, 10.0, 17.4 Hz, 1H), 5.38 (d, J=17.5 Hz, 1H), 5.18 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.15 (d, J=l〇.i Hz, 1H), 0.96 (s, 9H)，〇·18 (s，3H)，0.08 (s，3H)。步驟B :第三丁基{[1-(3-氣苯基）丙_2·烯基]氧基}二甲基矽烷

向 22.4 g(133 mmol)l-(3-氣笨基）丙-2-烯-1-醇於 90 mL 無水DMF中之溶液（來自步驟A)中添加第三丁基二曱基矽烷基氣化物（20.0 g ’ 133 mmol)及咪唑（18.1 g，266 mmol)且所得溶液在氮氣下在室溫下攪拌隔夜。以水洗滌且以乙酸乙酯萃取。分離有機物，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空下濃縮。殘餘物藉由急驟矽膠管柱以己烷中之〇_15〇/〇乙酸乙鲁醋之梯度溶離劑溶離純化以得到標題化合物（丨6.6 g， 46%)。m/z (ES) 282, 284 (M，M+2)+; 151，153 (M-OTBS， M-OTBS 十 2)+ 〇步驟C: {[第三丁基（二甲基）矽烷基]氡基}(3氯苯基）乙醛

139023.doc •44- ^/8098 4·〇 g(14.2 mmol)第三丁基{[1-(3_氯笨基）丙_2烯_丨基] 氧基}二曱基矽烷於二氯甲烷中之溶液（來自步驟B)經由乾冰/丙酮浴冷卻至_78°C，向其中鼓泡臭氧直至溶液維持淡藍色。隨後將氮氣鼓泡至溶液中直至其變澄清。將二甲硫添加至溶液i使所得混合物在室溫下攪拌隔夜。物質在真空下濃縮且殘餘物經由4〇m+矽膠管柱Horizon MPLC、以己烷中之0-50%乙酸乙酯之梯度溶離劑溶離純化以得到產物（3.57 g，89%) 〇步驟D : N-丨(1Ε)-2-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基} 2_(3_ 氯笨基）亞乙基]-2 -曱基丙烧-2-亞續酿胺

向3.0 g(10,6 mmol){[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(3· 氯苯基）乙醛（來自步驟(^及^ g(1〇6 mm〇1)(R或s)_2_甲基-2-丙烷亞磺醯胺於50 mL無水二氣甲烷中之溶液中添加硫酸銅（11)(3.4 g，21.2 mmol)且所得混合物在室溫下在氮氣氛下攪拌16小時。將反應以水洗滌且以二氯甲烷萃取。有機物以硫酸鎂乾燥，過濾且在真空下濃縮。殘餘物藉由 40M+矽膠管柱Horizon MPLC、以己烷中之〇_25°/0乙酸乙酯之梯度溶離劑系統溶離純化以得到標題化合物（3 26 g， 80〇/〇)。m/z (ES) 387, 390 (Μ, M+2)+。步驟E : [第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(3_氯苯基）甲基I-丙-2-烯-1-基}2-甲基丙烧-2-亞續醯胺 139023.doc •45- 1378098

2·4 g(6_20 mmol)N-[(lE)-2-{[第三丁基（二甲基）矽烷基] 氧基}-2-(3 -氯本基）亞乙基]_2_甲基丙烧_2_亞績酿胺於2〇 mL無水THF中之溶液（來自步驟D)在氮氣氛下冷卻至％，經由注射器向其中添加氣化乙烯基鎂於Thf中之丨6 Μ溶液 (3_90 mL，6.2 mmol)且所得混合物攪拌1小時。使混合物溫至室溫且再攪拌一小時。將反應以氣化銨之飽和溶液淬火且以乙酸乙酯萃取。合併有機物，經硫酸錤乾燥，過濾且在真空下濃縮。殘餘物藉由4M+矽膠管柱H〇rizon MPLC、以己烷中之〇·35%乙酸乙酯之梯度溶離劑系統溶離純化以得到呈單一異構體形式之所有四種非對映異構體。 NMR分析顯示’四種所獲產物彼此為非對映異構體。該等異構體在其自矽膠管柱溶離出來時已標記。溶離出之第一異構體命名為異構體1且隨後為異構體2、3及最後異構體4。

異構體 1 : m/z (ES) 416, 418 (Μ，Μ+2) + ’ 438，440 (MNa, MNa+2)+。WNMR (500 MHz, CDC13) δ:7·32 (s， 1H), 7.30 (br d, J=7.5, 1H), 7.26 (br d, J = 6.2 Hz, 2H), 7.22-7.18 (m, 1H), 5.60 (ddd, 1=7.3, 10.3, 17.4 Hz, 1H), 5.15 (d5 J=10.3 Hz, 1H), 5.00 (d, I39023.doc • 46 · 1378098 J=17.3 Hz, 1H), 4.57 (d, J=7.4 Hz, 1H), 3.98-3.94 (m, 2H), 1.64 (br s, 1H), 1.23 (s, 9H), 0.91 (s, 9H), 0.08 (s, 3H)，-0.18 (s，3H)。異構體 2 : m/z (ES) 416，418 (M, M+2) +，438，440 (MNa， ΜΝα+Ι^-'ΗΝΜΙΙΟΟΟΜΗζ,ΟΟαΟδ:?」〗-7.31 (m, 2H), 7.26 (br d, J=5.0 Hz, 2H), 7.20-7.16 (m, 1H), 5.44 (ddd, J=7.2 , 10.0, 17.4 Hz, 1H)，5.26 (重疊 d, J=7.3 Hz，1H)，5.25 (重疊 d， J=17.3 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.02 (dt, J=4.4, 7.8 Hz, 1H), 3.80 (d, J=4.4 Hz, 1H), 1.20 (s, 9H), 0.94 (s, 9H), 0.14 (s, 3H), -0.12 (s, 3H)。異構體 3 : m/z (ES) 416, 418 (M, M+2)+，438，440 (MNa， MNa+S^iNMRpOOMHz’CDCinaU〗-7.29 (m, 2H), 7.26-7.24 (m, 2H), 7.22-7.20 (m, 1H), 6.04 (ddd, J=7.1, 10.4, 17.4 Hz, 1H), 5.40 (d, J=10.2 Hz, 1H), 5.32 (d, J=17.3 Hz, 1H), 4.80 (d, J=4.0 Hz, 1H), 3.88-3.80 (m, 1H), 3.55 (d, J=9.4 Hz, 1H), 1.09 (s, 9H), 0.95 (s, 9H), 0.09 (s，3H), -0.10 (s，3H)。異構體 4 : m/z (ES) 416，418 (M, M+2)+，438, 440 (MNa， MNa+2)+。'HNMRGOO MHz，CDC13)8: 7.32 (s， 1H), 7.30 (br d, J = 7.5, 1H), 7.27-7.25 (ms 2H), 7.21-7.18 (m, 1H), 5.92 (ddd, J=7.1, 10.3, 17.4 139023.doc -47· 1378098

Hz, 1H), 5.23 (d, J=10.4 Hz, 1H), 5.18 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4.75 (d, J=4.2 Hz, 1H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.33 (d, J=9.4 Hz, 1H), 1.19 (S} 9H)，0.94 (s，9H)，0.09 (s，3H)，-0.14 (s，3H)。步驟F : ((lR)-l-[(R)-{[第三丁基（二甲基）發烷基]氧基）（3_ 氯苯基）甲基]丙烯-1-基}胺基甲酸酯（i_2) 向異構體 1(510 mg，2.22 mmol)N-{l-[{[第三丁基（二曱基）石夕烧基]氧基} (3-氯苯基）甲基]-丙-2-稀-1-基}2·甲基丙炫> -2-亞續酿胺（來自步驟E)中添加5 mL於二°惡烧中之無水4 M HC1且溶液在室溫下攪拌15分鐘。將反應濃縮至乾且與曱苯共沸（2 X 5 mL)以移除過量HC1。隨後將殘餘物溶解於無水二氯甲烷中’設定於氮氣氛下，以冰/水浴冷卻至〇t>c 且隨後經由注射器緩慢添加氯甲酸苄酯（0·32 mL，2.22 mmol)，接著添加二異丙基乙胺（1.19mL，6.66 mmol)且所得溶液在0°C下攪拌2小時。將溶液在真空下濃縮至乾且殘餘物經由製備型板（4 XI 〇〇〇 μΜ)、以己烷中之20%乙酸乙醋 ;谷離純化以得到標題化合物（703 mg ’ 71%)。m/z (ES)

446，448 (M，M+2)+，468，470 (MNa，MNa+2)+。WNMR (500 MHz, CDC13) δ: 7.32 (s, 1H), 7.30 (br d, J=7.5, 1H), 7.27-7.25 (m, 2H), 7.21-7.18 (m, 1H), 5.92 (ddd, J=7.1, 10.3, 17.4 Hz, 1H), 5.23 (d, 1=10.4 Hz, 1H), 5.18 (d, 1=17.4

Hz, 1H), 4.75 (d, J=4.2 Hz, 1H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.33 (d, J=9.4 Hz, 1H), 1.19 (s, 9H), 0-94 (s, 9H), 〇.〇9 (s, 3H), -0.14 (s, 3H)。 139023.doc •48· 1378098 之中間物可與如上所述中間物有關之具有不同立體化學使用如上所述之程序自合適的起始物質製備。

中間物3 φ (5R)-2-(4-胺基苄基）_5_{(【R)_丨丨第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(苯基）子基]0it洛咬-1-甲酸第三丁醋（u) 〇

步驟A : {4-[(3£，5只，6!〇-5-{[(苄氧基）羰基】胺基_6-{丨第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}-6-(3_氣苯基）_2-側氧基己-3-烯-1-基】笨基}胺基f酸苄酯

向[3-(2-侧氧基丁-3_烯-丨_基）苯基]胺基甲酸苄酯（il) (820 mg ’ 2.80 mm〇l)及（（1R)-1-[(R)_{[第三丁基（二曱基）矽炫基]氧基）（3-氯苯基）曱基]丙-2-烯-l-基}胺基曱酸酯（i_ 2)(500 mg，1.12 mmol)於7 mL無水二氣甲烧中之溶液中添加詹I催化劑（740 mg，1.12 mmol)且所得綠色溶液在氮氣 139023.doc • 49· 1378098 氣下加熱至4〇°c隔夜。將反應濃縮至乾且殘餘物經由製備型板（4X 1 〇〇〇 μΜ)、以己烷中之40%乙酸乙酯溶離純化以得到標題化合物（348 mg，50%) » m/z (ES) 713，715 (Μ， M+2)+，735, 737 (MNa，MNa+2)+。步帮B : 4-({(5R)-5-[(R)-([第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]吼咯啶-2-基}甲基）苯胺

向 328 mg(0.46 mmol){4-[(3E，5R，6R)-5-{[(苄氧基）羰基] 胺基-6-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基氣笨基）_2_ 側氧基己-3 -烯- l-基}笨基}胺基甲酸爷(來自步驟a)於25 mL乙醇中之溶液中添加1 〇〇/〇鈀/碳且將懸浮液經由氫氣球設定於氫氣氛下。將反應在氫氣下於室溫下攪拌i小時。 TLC證明反應完成。使用Gilmen 0.45 μΜ PTFE針筒過渡器渡出催化劑且以乙醇洗條（4 X 5 mL)。滤液在真空下濃縮至乾且殘餘物藉由製備型板（3x1000 μΜ)、以二氯甲烧中之 5%甲醇溶離純化以得到標題化合物（121 mg，66%)。m/z (ES) 397 (MH)+ » 步驟C : (5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{【第三丁基（二甲基）發烧基】氧基）（苯基）甲基]"Λ洛咬-1-甲酸第三丁 g旨 (i-3) 向 121 mg(0.315 mmol)4-({(5R)-5-[(R)-([第三丁基（二曱 I39023.doc •50· 1378098 基）石夕烷基]I基}(笨基）曱基]。比咯啶_2_基}曱基）苯胺於5 mL無水THF甲之溶液（來自步驟Β)中添加碳酸第三丁酯（69 mg ’ 0.315 mmol)，接著添加 TEA(44 pL，0.315 mmol)且所得溶液在室溫下在氮氣氛下攪拌隔夜。反應混合物直接放置於製備型板（1500 μΜ)上且以己烷中之30%乙酸乙酯溶離以得到標題化合物（100 mg，64%)。m/z (ES) 497 (ΜΗ) + , 397 (M-Boc)+。iNMR (500 MHz, CDC13) δ: 7.40-7.30 (m， 5H), 6.75-6.68 (m, 2H), 6.56-6.51 (m, 2H), 5.52-5.48 (m, 1H), 5.32-5.28 (m, 1H), 4.16-4.06 (m, 2H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.55-3.48 (m,2H), 2.74 (br d, J=11.8 Hz, 1H), 2.44 (br d, J=11.8 Hz, 1H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.60 (s,9H), 1.50-1.42 (m, 1H), 1-32-1.22 (m, 2H), 1.10-1.02 0.95 (s, 9H), 0.08 (s, 3H)，-0.15 (s，3H)。分離中間物4a及中間物4b(2S，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)- 第三丁棊（二曱基）矽院基】氧基}(苯基）甲基】吼哈啶-1-甲酸第三丁酯（i_4a); (2R，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(苯基）甲基]»比洛咬-1-甲酸第三丁酯（i_4b)

步驟A : (2S，5R)-2-(4-胺基苄基）-S-[(R)-{[第三丁基（二甲 139023.doc 51 1378098 基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]°比咯啶-i-甲酸第三丁酯（i-4a)及（2R，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{【第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]吼咯啶-1-甲酸第三丁酯（i-4b) 將中間物i-3 (5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]吡咯啶-1-曱酸第三丁酯（4:1 之順及反混合物）溶解於甲醇中且使用30%曱醇：60%二氧化碳之溶離劑經由Berger Multigram SFC(超臨界）純化以分離兩種非對映異構體。管柱之第一異構體標記為次要異構體1且第二異構體標記為主要異構體2。 i-4a ： m/z (ES) 497 (MH)+, 397 (M-Boc)+ 〇 'HNMR (500 MHz, CDC13)6: 7.40-7.30 (m, 5H), 6.75-6.68 (m, 2H), 6.56-6.51 (m, 2H), 5.52-5.48 (m, 1H), 5.32-5.28 (m, 1H), 4.16-4.06 (m, 2H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.76-3.70 (m5 1H), 3.55-3.48 (m,2H), 2.74 (br d, J=11.8 Hz, 1H), 2.44 (br d, J=11.8 Hz, 1H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.90-1.82 (m5 1H), 1.60 (s, 9H), 1.50-1.42 (m, 1H), 1.32-1.22 (m, 2H), 1.10-1.02 0.95 (s, 9H), 0.92 (d, J=11.8 Hz, 1H), 0.12 (br d, J=14.0 Hz, 3H), -0.04 (s, 3H)。在SFC上溶離8.70分鐘，異構體2 i-4b : m/z (ES) 497 (MH)+，397 (M-Boc)+。】HNMR (500 MHz, CDCI3) δ: 7.40-7.30 (m, 5H), 6.76-6.68 (m, 2H), 6.56-6.51 (m, 2H), 5.52-5.48 (m, 1H), 5.32-5.28 (m, 1H), 4.16-4.06 (m, 2H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.76- 139023.doc •52· 1378098 3.70 (m, 1H), 3.60-3.46 (m,2H), 2.72 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 2.44 (br d, J =12.2 Hz, 1H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.90-1-82 (m, 1H), 1.64 (s, 9H), 1.50-1.42 (m, 1H), 1.32-1.22 (m, 2H), 1.10-1.02 (m, 1H), 0.95 (s, 9H)，0.14 (br d，J=13.8 Hz, 3H)，0.09 (s，3H)。在 SFC上溶離7.78分鐘，異構體1。合成中間物4a及中間物4b (2S，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-([第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(苯基）甲基】ΠΛ>嘻咬-1-甲酸第三丁醋（i_4a); (2R，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R){[第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(苯基）甲基]吡洛咬-1-甲酸第三丁酯（i-4b)

步驟A : (4S)-3-己-5-炔醯基-4-苯基-i，3-噁唑啶-2-酮

在-25C下在氮氣氣下向69.0 g(615 mmol)5 -己快酸及214 mL( 1540 mmol)二乙胺於1.〇 L無水四氫吱咕中之溶液中經 20分鐘添加83.0 mL(677 mmol)三曱基乙醯氯。在添加後形成白色沈激且所得懸浮液授拌2小時。接著，依序添加 28.7 g(677 mmol)無水氣化鋰及 1〇〇〇 g(615 〇 mm〇1)(4S)_4_ 139023.doc •53- 1378098 苯基-1，3-噁唑啶_2-酮且使混合物經12小時逐步溫至環境溫度。所有揮發物在真空中移除且殘餘物以水（1 L)稀釋且以乙酸乙酯萃取（3x300 mL)。合併之有機層以鹽水（250 mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之5·5〇%乙酸乙酯梯度溶離純化以得到呈無色固體狀之標題化合物（丨35 g ’ 85 4%)。 H NMR (500 MHz，CDC13): δ 7.40-7.37 (m，2H), 7.36-7.32 (m, 1H), 7.31-7.28 (m, 2H), 5.42 (dd, J=8.9, 3.7 Hz, 1H), 4.69 (t5 J=8.9 Hz, 1H), 4.28 (dd, J=9.2, 3.7 Hz, 1H), 3.13-3-02 (m, 2H), 2.24-2.21 (m, 2H), 1.94 (t, J=2.6 Hz, 1H), 1.84 (五重峰 ’ j=71 Hz，2H)e LC_MS: m/z (ES) 258.2 (MH)+。步禅B : (4S)-3-{(2R)-2-[(S)-羥基（苯基）曱基]己_5·炔醯基}-4-苯基-1,3-嚼嗤咬-2-酮

在環境溫度在氮氣氛下向56.8 g(221 mmol)以上步驟A之 (4S)-3 -己-5-炔醯基-4-笨基-1,3-噁。坐啶-2·酮於265 mL無水乙I乙醋中之搜拌溶液中添加6.31 g(66.2 mmol)無水氣化鎂、61.5 mL(442 mmol)三乙胺、26.9 mL(265 mmol)苯曱搭及42.3 mL(331 mmol)氯三甲基矽烷，所得混合物攪拌72 小時。不均勻反應混合物經30〇 mL矽膠塞過濾，以另外1 L乙酸乙酯溶離。濾液在真空中蒸發至乾，殘餘物懸浮於 139023.doc •54· 1378098 265 mL曱醇及10 mL三氟乙酸中。所得混合物在環境溫度在氣氣下授拌5小時，在此期間反應混合物變成均質。隨後在真空中移除所有揮發物，殘餘物藉由石夕膠層析以己烧中之5 -1 5 %乙酸乙酯梯度溶離純化，得到呈白色固體狀之標題化合物（65.0 g，81.2%)。NMR (500 MHz，CDC13): δ 7.30-7.28 (m，8H)，7.09-7.07 (m，2H)，5.42 (dd，J=8.7, 3.7

Hz, 1H), 4.76-4.72 (m, 1H), 4.72-4.67 (m, 1H), 4.65 (t, J=8.7 Hz, 1H), 4.18 (dd, J=8.7, 3.7 Hz, 1H), 3.05 (d, J=7.8 Hz, 1H), 2.24 (td, J=7.1, 2.5 Hz, 2H), 2.00-1.93 (m, 2H), 1-67-1.61 (m, 1H)。LC-MS: m/z (ES) 346.1 (MH-H20)+， 386.0 (MNa)+。步驟C: (2R)_2-[(S)-經基（苯基）甲基】己-5-快酸 OH Ο

在〇C在氮氣氖下向65.0 g(179 mmol)以上步驟Β之（4S)_ 3-{(2R)-2-[(S)-羥基（笨基）曱基]己_5•炔醯基}_4_苯基u· 噁唑啶酮於無水四氫呋喃與水之20:1之1050 mL混合物中之攪拌洛液中添加77 〇 mL(894 mm〇l) 35%過氧化氫水 /令液添加速率足夠緩慢以保持内部溫度低於3 °c。接著以足夠緩慢以保持反應之内部溫度低於5艺之速率添加39\mL(395 mm〇l)之1.〇 Μ氫氧化鋰水溶液，所得混合物在0〇C攪拌3小時m緩慢以料混合物之内部溫度低於5 C之速率用755 mL(984随。1)之1.3 Μ亞硫酸鋼水溶 139023.doc •55· 1378098 液將反應淬火。所有揮發物在真空中移除，其餘水相以乙酸乙酯（3x200 mL)萃取。隨後將水相冷卻至且以6河氯化氫水溶液酸化直至達成pH 3。隨後水相以乙酸乙酯 (3x300 mL)萃取，合併之有機相以鹽水（1〇〇 mi)洗經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發。殘餘物藉由矽膠層析以己烷中之5-10%乙酸乙酯及3〇/。乙酸梯度溶離純化，得到呈無色膠狀之標題化合物（32.0 g，82.0%)。4 NMR (；500 MHz, CDC13): δ 7.39-7.28 (m, 5H), 4.85 (d, J=8.2, 1H), 3.03-2.97 (m, 1H), 2.29-2.15 (m, 2H), 1.97 (t, J=2.5 Hz, 1H), 1.93-1.82 (m, 1H), 1.62-1.55 (m, lH)〇 LC-MS: m/z (ES) 201.0 (MH-H20)+。步驟D _ (2R)-2-[(S)-{[第三丁基（二甲基）梦烷基】氧基}(苯基）甲基】己-5-炔酸 TBSO 〇

在環境溫度下在氮氣氛下向32.0 g(147 mmol)來自以上 · 步驟C之（2R)-2-[(S)-羥基（苯基）甲基]己_5_炔酸於5〇〇 mL無水乙腈中之攪拌溶液中添加77 〇 mL(513 mm〇1)18二氮雜 . 雙環[54.〇]十一_7-烯22 ，接著經10分鐘分3份添加66.3 g . (440 mm〇1)第三丁基二曱基矽烷基氯化物。將反應混合物攪拌4小時隨後在真空中蒸發以移除所有揮發物。殘餘物以300 mL二氣甲烷及1〇〇 mL水稀釋。將丨〇 M氣化氫水溶液添加至混合物直至在水層中達成pH值3。分離各相且水 139023.doc

-56- 1378098 相以二氯甲烧萃取（2xl〇〇 mL)。合併之有機物以水（5〇 mL)、鹽水（50 mL)洗滌’隨後經硫酸鎂乾燥。在真空中過濾及蒸發後’將殘餘物溶解於350 mL甲醇中且添加35〇 mL(280 mmol)之0.8 Μ碳酸鉀水溶液。將所得混合物攪拌 1.5小時隨後在真空中蒸發以移除所有揮發物。殘餘物以 300 mL二氣甲烷稀釋且水相以5.〇 Μ氯化氫水溶液酸化直至達成pH值3。分離各相且水相以二氣甲烷萃取（2χΐ〇〇 mL)。合併之有機物以水（50 mL)、鹽水（5〇 mL)洗滌，隨後經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發。殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之3-15%乙酸乙酯梯度溶離純化以得到呈無色固體狀之標題化合物（42.3 g，86.6%)。巾NMR_ (500 MHz, CDC13): δ 7.36-7.27 (m, 5H), 4.78 (d, J=8.7, 1H), 2.90-2.86 (ms 1H), 2.19-2.11 (m, iH), 2.10-2.03 (m, 1H), 1.90 (t, J=2.6 Hz, 1H), 1.75-1.67 (m, 1H), 1.41-1.34 (m, 1H)，0.83 (s，9H)，0.02 (s，3H), -0.27 (s, 3H)。LC-MS: m/z (ES) 333.2 (MH)+。步驟E . {(1R)-1-[(r)·丨[第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基仪苯基）甲基】戊-4-炔-l-基}胺基甲酸4_甲氧基苄酯

在裱境溫度下在氮氣氛下向40.0 g( 120 mmol)來自以上步驟D之（2R)_2_[⑻-{[第三丁基（二甲基）石夕烧基]氧基}(苯 139023.doc -57- 1378098 基）曱基]己-5-炔酸及33 5 m 無水曱苯中之溶液中添加37. .5 mL(241 mmol)三乙胺於 400 mL 加37.5 mL(132 mmol)二苯基填酿基 $氣化物°將混合物攪拌5小時且隨後添加37.5 mL(301 mm〇1)4_甲氧基苄醇。將所得混合物加熱至105。(：歷時16小時’冷卻至環境溫度且隨後以25〇 mL碳酸氫鹽飽和水溶液稀釋°分離各相且水相以乙酸乙酯萃取（2xl5〇 mL)。合併之有機物以水（100 mL)、鹽水（100 mL)洗滌，隨後經硫酸鎮乾燥’過濾且在真空中蒸發》粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烧中之3-1 0%乙酸乙酯溶離純化以得到呈無色油狀之標題化合物（50.9 g，90.5%)。】H NMR (500 MHz， CDC13): 7.28-7.21 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.4 Hz, 2H), 4.92 (s, 2H), 4.77-4.59 (m, 2H), 3.89-3.84 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.30-2.22 (m5 2H), 1.95 (m, 1H), 1.91-1.85 (m, 1H), 1.57-1.50(m，lH)，0.89(s，9H)，0.〇6(s,3H)，-0.15(s，3H)°LC-MS: m/z (ES) 468.1 (MH)+，490.0 (MNa)+。步驟F : [(lR)-l-[(R)-{【第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]-5-(4-硝基笨基）戊-4-炔-1-基]胺基甲酸4-甲氧基苄酯

向乙炔（來自步驟E，4〇 g，80 mmol)及4-碘硝基苯（21.8 g，88 mmol)於無水DMF(500 ml)中之溶液中添加三乙胺 139023.doc •58- 1378098 (111 mL，797 mmol)。添加 Pd(dppf)ci2(1.95 g，2.39 mmol)及碘化銅（1)(910 mg，4_78 mmol)且混合物以氮氣（鼓泡15分鐘）脫氣且所得溶液在室溫下攪拌5小時。將混合物傾入水（1200 m)中且以EtOAc(3x300 mL)萃取。合併之有機物隨後以水（2x500 mL)、飽和NaCl(200 mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空下蒸發。殘餘物藉由 MPLC(Horizon Biotage 2x Flash 65i)、以己烷中之 0-30% 乙酸乙酯梯度溶離純化以得到41 g(84°/〇)暗紅色油狀物。1Η NMR (500 MHz, CDC13): 8.11-8.04 (m, 2H), 7.94-8.01 (m, 1H), 7.38-7.21 (m, 8H), 6.87 (d, J=8.4 Hz, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.77-4.59 (m, 2H), 4.00-3.95 (m, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.56 (t, J=7.1 Hz, H=2H), 2.00-1.95 (m, 1H), 1.66-1.61 (m, 1H), 0.93 (s, 9H), 0.10 (s, 3H), -0.10 (Sj 3H) 〇 LC-MS: m/z (ES) 589.3 (MH)+，611.2 (MNa)+。步驟G : [(lR)-l-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基丨（苯基）甲基]-5-(4-硝基苯基）_4_側氧基戊基】胺基甲酸 4 -曱氧基苄醋

向确基苯基乙块（來自步驟F ’ 41 g，65 5酿〇1)於 196.5 mmol)

DMF(40 ml) _之 >谷液中添加η比洛咬（14 mL 且所得混合物在80 C下加熱3小時。將混合物冷卻至室溫且添加乙酸於水（110 ml)中之10%溶液，且所得溶液在室 139023.doc •59- 1378098 溫下再攪拌3小時。混合物傾入水（300 ml)中且以EtOAc萃取（3x250 ml);合併之EtOAc層以水（2x250 ml)、飽和 NaCl(100 ml)洗滌，經MgS04乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由Horizon Flash 75、以100 %己燒上升至己院中之50% EtOAc之梯度溶離純化以得到34 g(81。/。）暗橙色油狀物。 NMR (500 MHz, CDC13)： 8.17-8.14 (m, 2H), Ί.32-1.23 (m, 9H), 6.87 (d, J=8.4 Hz, 2H), 4.96 (d, J=12.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J=12.1 Hz, 1H), 4.72 (d, J=3Hz, 1H), 4.16-4.13 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.71-3.77 (m, 2H), 2.65-2.52 (m, 2H), 1.97- 1.92 (m, 1H), 1.72-1.60 (m, 1H), 0.93 (s, 9H), 〇.〇5 (s, 3H), -0.13 (s，3H)。步驟H: (2R，5S)-2-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]-5-(4-硝基苄基）"比洛咬（2R，5R)-2-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基】-5-(4-罐基苄基）》比洛咬

向MOZ保護之酮胺（來自步驟G，34 g，％爪则丨）於 DCM(350 ml)中之溶液添加TFA(256 ml)且所得混合物在室時。將溶液在真空下蒸發且殘餘物在dcm 之間分溶。有機層經MgS〇4乾燥，過濾且

溫下攪拌1.5小與飽和NaHCO 瘵發。將殘餘物溶解於Me〇H(75〇 ml)中且經由冰/水浴冷 139023.doc 1378098 卻至0°C。隨後添加氰基硼氫化鈉（u.2 g，μ? mm〇1)且將所得混合物攪拌隔夜以使其溫至室溫。藉由添加水淬熄混合物且在真空下移除有機物。隨後將水層以Et〇Ac(x2)萃取且合併之EtOAc層以飽和NaCl洗滌，經MgS04乾燥，過濾且在真空下蒸發。殘餘物藉由二氧化矽管柱層析法（溶離劑：100%己烷上升至己烷中之35% EtOAc之梯度）純化以得到 16.4 g(63.4%)第一異構體（2R，5S)-2-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烧基]氧基}(苯基）甲基]-5-(4-硝基节基比嘻啶及 3.1 g(12%)第二異構體（2R，5R)-2-[(R)-{[第三丁基（二甲基）石夕烧基]氧基}(苯基）甲基]-5-(4-硝基苄基）〇比咯σ定。異構體 1 : LC-MS: m/z (ES) 427.3 (ΜΗ) + 異構體2 : LC-MS: m/z (ES) 427.3 (ΜΗ)+。步驟I : (2R，5S)-2-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(苯基）甲基】-5-(4-確基节基）吼嘻咬_ι_甲酸第三丁酯

向（211，5 8)-2_[(尺)-{[(第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]-5-(4-硝基苄基）。比咯啶-1-甲酸第三丁酯（12 g， 42.5 mmol)於無水THF中之溶液添加Boc酸酐（9_3 g，42.5 mmol)，接著添加 TEA(17.76 mL，127.4 mmol)且所得溶液在室溫下在氮氣氛下攪拌2小時》將混合物以水（1 〇〇 139023.doc -61 - 1378098 洗滌且以乙酸乙酯（2x200 mL)萃取。有機物經硫酸鈉乾燥’過濾且在真空下濃縮。殘餘物經由H〇riz〇n Biotage MPLC(65K’膠管柱）、以己烷中之2〇 75%乙酸乙酯之梯度溶離純化以得到所需產物。LC-MS: m/z (ES) 527.3 (MH)+， 549.2 (MNa)+ 〇步雜J : (2R，5R)-2-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]-5-(4-硝基节基）啦洛咬_；1-甲酸第三丁酯

以與步驟I相同之方式製備，但以反異構體（2R，5R)-2-[(R)-{[第三丁基（二曱基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基]_5_(硝基苄基）吡咯啶替換順吡咯啶異構體。LC-MS: m/z (ES) 527.3 (MH)+，549.2 (MNa)+。步驟K : (2S，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-【(R)-{[第三丁基（二曱基）矽烷基]氧基Η苯基）甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁 8a (i - 4 a) · 乂丄

在500 mL parr震盪器燒瓶中裝入10% Pd/C(4.75 g)且向 139023.doc -62- 1378098 〃中添加100 mL甲醇以覆蓋催化劑。隨後將來自步驟工之硝基中間物（8.5 g’ 18.5 mmol)於甲醇（8〇 mL)中之溶液添加至懸浮液，接著添加15·4 mL於甲醇中之1.0 Μ氯化氫溶液。將反應容器設定於5〇 PSI氫氣下且攪動混合物隔夜。取等分試樣且經由LC-MS分析，展示完全反應。使用矽藻土濾出催化劑且以曱醇洗滌（2xl00 mL) »將濾液浪縮至乾且產物經由Horizon MPLC(65i二氧化石夕管柱）、以己烷中之〇〇/。乙酸乙酯上升至己烧中之3〇%乙酸乙西曰之梯度溶離純化以得到標題化合物（6.2 g，72%)。m/z (ES) 497 (MH)+，397 (M-Boc)+。iHNMR (500 MHz， CDC13)5: 7.38-7.29 (m, 5H), 6.76-6.68 (m, 2H), 6.55-6.50 (m, 2H), 5.52-5.49 (m, 1H), 5.30-5.27 (m, 1H), 4.15-4.05 (m,2H), 3.86-3.81 (m, 1H), 3.76-3.71 (m, 1H), 3.55-3.47 (m,2H), 2.74 (br d, J=11.7 Hz, 1H), 2.44 (br d, J=11.7 Hz, 1H), 2.05-1.93 (m, 1H), 1.90-1.83 (m, 1H), 1.60 (s, 9H), 1.50-1.42 (m, 1H), 1.31-1.21 (m, 2H), 1.10-1.02 (m,lH), 0.95 (s5 9H), 0.92 (d, J=11.8 Hz, 1H), 0.13 (br d, J=14.0 Hz，3H), -0_〇5 (s，3H)。步驟L : (2R，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基】氧基}(苯基）甲基】吼咯啶-1-甲酸第三丁醋（i-4b) 'S .β. % i 139023.doc -63· 1378098

以與步驟K相同之方式製備，但以反異構體（2R，5R)-2· [(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]-5-(4-硝基节基）。比°各咬-1 _甲酸第三丁醋替換順。比0各咬異構體。m/z (ES) 497 (MH)+，397 (M-Boc)+。iNMR (500 MHz， CDC13)6: 7.41-7.30 (m, 5H), 6.73-6.67 (m, 2H), 6.56-6.50 (m, 2H), 5.52-5.48 (m, 1H), 5.33-5.28 (m, 1H), 4.15-4.06 (m, 2H), 3.86-3.81 (m, 1H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.59-3.46 (m,2H), 2.72 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 2.44 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 2.05-1.93 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.64 (s, 9H), 1.49-1.42 (m, 1H)5 1.32-1.20 (m5 2H), 1.10-1.02 (m,lH), 0.95 (s，9H)，〇·ΐ4 (br d, J=13 7 Hz，3H)，〇 1〇 (s，3H)。以下中間物使用如上對於中間物i-4a所述之程序自合適的起始物質製備。 139023.doc 64- 1378098 表1

中間物 AR 計算質量 MS (E/Z) (MH)+ I-4C Fx> 514.30 515.30 I-4D 乃v 514.30 515.30 I-4E F 532.30 533.30 I-4F 532.30 533.30

以下中間物使用如上對於中間物i-4b所述之程序自合適的起始物質製備。表2

中間物 AR 計算質量 MS (E/Z) (MH)+ I-4G 514.30 515.30 I-4H 514.30 515.30 中間物5 (5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧 139023.doc -65- 1378098 基}(3-氣苯基）甲基】吡咯啶-i_甲酸第三丁酯（i_5)

Cl

步羯A : 4-({(5R)-5-[(R)-([第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(3-氯苯基）甲基]«Λ咯啶-2-基}曱基）苯胺

向 1〇〇 mg(0.15 mmol){4-[(3E，5R，6R)-5-{[(苄氧基）幾基] 胺基-6-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}_6·(3·氯苯基）_2_ 側氧基己-3 -稀-1-基]苯基}胺基曱酸苄酯（來自步驟a，丨_3) 於8 mL乙酸乙酯中之溶液中添加丨0〇/〇鈀/碳且懸浮液經由氫氣球設定於氫氣氛下。將反應在氫氣下於室溫下授拌8小時。使用Gilmen 0.45 μΜ PTFE針筒過濾器濾出催化劑且以乙酸乙酯洗滌（4x2 mL)。濾液在真空下濃縮至乾且殘餘物藉由製備型板（1000 μΜ)、以二氣甲烷中之5%曱醇溶離純化以得到標題化合物（33 mg，。m/z (ES) 43q 432 (M，M+2)+。步驟B MSR)-2-(4-胺基节基）_5•丨(R)_{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(3-氣苯基）甲基】吡咯啶甲酸第三丁酯（i-5) 139023.doc (S) -66 - 1378098 向 33 mg(0.07 mmol)4-({(5R)-5-[(R)-([第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基} (3-氯苯基）曱基]吼咯啶-2-基}甲基）苯胺於1 mL無水THF中之溶液（來自步驟A)添加碳酸第三丁酯（15.3 mg，0.07 mmol)，接著添加 ΤΕΑ(13 μ!>，0.07 mmol)且所得溶液在室溫下於氮氣氛下攪拌隔夜。將反應混合物直接放置在製備型板（500 μΜ)上且以己烧中之30%乙酸乙酯溶離以得到標題化合物（25 mg，78%)。m/z (ES) 530，532 (M，M+2)+，430, 432 (M-Boc, M-Boc+2)+。中間物6 4-{4-[4-(三氟甲基）苯基】-l，3-噻唑-2-基}苯磺醯氣（i-6)

中間物6可根據公開程序（例如Ikemoto等人，Tetrahedron 2003, 59, 1317-1325)製備。中間物7 2-甲基-5,6-二氫-4H-環戊[α][1，3]噻唑-4-甲酸（i-7)

步辑A : 2 -甲基- 5,6-二氫- 4H-環戊[α】丨1，3]嗔嗤-4-曱酸乙g旨

向2_側氧基環戊烧-2-曱酸乙S旨（56 g，3 59 mmol)於氣仿 139023.doc -67- 1378098 (500 mL)中之冷卻於0°C之溶液經約20分鐘添加溴（18.5 mL，359 mmol)。在完成添加之後，使混合物溫至室溫且攪拌隔夜。將氮氣鼓泡穿過混合物歷時90分鐘以移除大部分 HBr。以水（5 00 mL)、飽和 NaHCO3(2 5 0 mL)、飽和 NaCl (200 mL)洗滌，經MgS04乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物溶解於EtOH(500 mL)中且添加硫代乙醯胺（26.9 g，359 mmol)，混合物在室溫下攪拌1小時隨後在回流下授拌隔夜。將混合物冷卻且蒸發，且殘餘物在DCM與飽和 NaHC03之間分溶，有機層以飽和NaCl洗滌，經MgS04乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由MPLC(Biotage Horizon : 2xFLASH 65i)、使用溶離劑：100% 己烷（450 mL)、100% 己烷上升至己烷中之25% EtOAc(1400 mL)梯度、隨後己烷中之25% EtOAc純化以得到呈深色油狀之標題化合物（32 g，42%)。'HNMR (500 MHz，CDC13) δ: 4.22 (q, J = 7.0 Hz， 2H), 3.96 (m, 1H), 3.04 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.76 (m, 2H), 2.70 (s, 3H)，1.30 (t, J = 7.0.Hz，3H)。步驟B : 2-甲基-5,6-二氫-4H-環戊[α】[1，3]噻唑-4-甲酸（i·7) 向 31.5 g(149 mmol)2-曱基-5,6-二氫-4H-環戊[tx][l，3]°S 唑-4-甲酸乙酯於THF(450 mL)及曱醇（100 mL)中之溶液（來自步驟A)添加氫氧化裡之溶液（149 mL之1 Μ溶液，149 mmol)且所得混合物在室溫下授拌3小時。有機物藉由蒸發移除且含水殘餘物以Et20萃取（2x250 mL)且藉由添加1 Μ HC1(約170 mL)酸化至pH值3且以固體NaCl飽和。以DCM 萃取（3x250 mL)，合併之DCM層經MgS04乾燥，過濾且蒸 139023.doc • 68 · 1378098 發。以DCM萃取（3x250 mL)，合併之DCM層經MgS04乾燥，過濾且蒸發。殘餘物以乙腈濕磨，過濾且乾燥以得到呈奶白色固體狀之標題化合物（7·1 g，26%)。hNMR (500 MHz, CDC13) δ: 11.75 (brs, 1Η), 4.02 (m, 1H), 3.00 (m, 1H)，2.90-2.66 (m，6H)。中間物8 2-[(第三丁氧基羰基）胺基】_5,6-二氫-4H-環戊[α][ι，3]噻唑_ 4-甲酸（i-8)

i-8 步驟A : 2-胺基-5,6-二氫-4H-環戊[α][1，3】噻唑甲酸乙酯

EtO

NH2

以與中間物（i-7)相同之方式、以硫脲替換步驟A中之硫代乙醯胺來製備。iHNMR (500 MHz，CDC13)5: 5.30 (br s, 2H), 4.21 (q, J=7.0, 2H), 3.81 (m, 1H), 2.91 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.66 (m, 2H), 1.30 (t, J=7.〇, 3H) ° 步驟B: 2-[(第三丁氧基羰基）胺基】-5,6-二氫-4H-環戊 [α】[1，3]噻唑-4-甲酸乙酯

向 230 mg(l.〇8 mmol)2-胺基-5,6-二氫-4Η-環戊[α][1，3]°塞 -69· 139023.doc 1378098 唑-4-曱酸乙酯於二氯甲烷（5 mL)中之溶液（來自步驟A)添加二碳酸二第三丁酷（236 mg，1.08 mmol)、三乙胺（0.15 mL ’ 1.08 mmol)及 DMAP(13 mg，0.11 mmol)且所得混合物在室溫下攪拌2小時。混合物以IN HC1( 10 mL)、飽和 NaCl(5 mL)洗滌’經MgSCU乾燥，過濾及蒸發。殘餘物藉由MPLC(Biotage Horizon : FLASH 25 + S)、使用溶離劑： 100% 己烷（100 mL)、己烷中之0-15¼ EtOAc(900 mL)梯度、隨後己烷中之15% EtOAc(500 mL)純化以得到呈白色發泡體狀之標題化合物（160 mg，47%)。hNMR (500 MHz, CDC13) δ: 9.23 (br s, 1H), 4.17 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.95 (t, J=6.6 Hz, 1H), 3.04 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.76 (m, 2H)，1.55 (s, 9H), 1.23 (t, J=7.1 Hz, 3H)。步驟C: 2-[(第三丁氧基幾基）胺基]_5,6-二氫_4jj_環戊 [α】[1，3]噻唑-4-甲酸（i-8) 使用與見於中間物（i-7)步驟B中之程序相似之程序自2_ [(弟二丁乳基_厌基）胺基]-5,6 -二氮-4H-環戍[α][1，3]η塞。坐_4_ 甲酸乙酯（來自步驟B)製備。iHNMR (500 MHz，CDC13) δ: 3.96 (m，1Η)，3.06 (m，1Η)，2.88 (m，2Η)，2.71 (m，1Η)，155 (s, 9H) 〇中間物9 2-(4-氟苯基）-5,6-二氫-411-環戊【€1】【1，3]嗟哇-4_甲酸（丨_9)

139023.doc ·70· 1378098 使用與見於中間物7(i-7)中之程序相似之程序中以4·氟硫代苯甲酿胺替換硫代乙酿胺來製備JHN· (500 廳，DMs〇_d6) δ: 7.9〇 (m，2h)，7 29 】 3.81 (m, 1H), 2.99 (m, 1H), 2.86 (m 1H) 2 7 ， 2H)。 …，1H)，2.7〇-2.58 (m，中間物10 2-甲基-4,5,6,7-四氫-1，3-苯并嗟唾_4_甲酸（丨·1〇)

(MO) 步驟A · 2 -甲基_4,5,6,7-四氫·1，3·苯并嗟唾_4_甲酸乙醋

向2-側氧基環己烷甲酸乙酯（15 g，88 mmol)於無水乙謎 (40 mL)中之冷卻於〇°C之溶液經15分鐘逐滴添加溴（4 5 mL，88 mmol)。在完成添加之後，經90分鐘使混合物溫至室溫。混合物以EtOAc(100 mL)稀釋且以飽和NaHC03、飽和NaCl洗滌’經MgS〇4乾燥，過濾及蒸發。殘餘物溶解於乙醇（100 mL)中且添加硫代乙醯胺（6.6 g，88 mmol)。混合物在室溫下攪拌1小時隨後在回流下攪拌隔夜。將混合物蒸發且殘餘物在飽和NaHCCh與DCM之間分溶。有機層經 MgSCU乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由MPLC(Biotage Horizon : FLASH 65i)、使用溶離劑：100% 己烧（500 139023.doc .71 . 1378098 mL)、己烷中之〇〇/〇 EtOAc至己烷中之25% EtOAc(1200 mL) 梯度、隨後己烷中之25% EtOAc(1200 mL)純化以得到呈淡橙色油狀之標題化合物（6.14 g，31°/〇) » iHNMR (500 MHz， CDC13) δ: 4.22 (q, J=7.1, 2H), 3.84 (t, J=5.5, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.11-1.95 (m, 2H)，1.85 (m，1H)，1.29 (t，J = 7.1, 3H)。步驟B : 2-曱基-4,5,6,7·四氫-1，3-苯并噻唑-4-甲酸（i-l〇) 根據中間物（i-7)步驟B中概述之程序自2-曱基-4,5,6,7-四氫-1，3-苯并噻唑-4-曱酸乙酯（來自步驟A)製備》iHNMR (500 MHz，CDC13) δ: 9.26 (br s，1H)，3.81 (q，J=乂3及 5.9, 1H), 2.75 (m, 2H), 2.68 (s, 3H), 2.24 (m, 1H), 2.18-2.01 (m，2H), 1.82 (m，1H) » 中間物11 2-[(第三丁氧基羰基）胺基】-4,5,6,7-四氫-1，3-苯并噻唑-4-曱酸（i-11)

步驟A : 2-胺基-4,5,6,7-四氫-1，3-苯并噻唑-4-甲酸乙酯

根據中間物l〇(i-l〇)步驟A中概述之程序、以硫脲替換硫代乙醯胺來製備。1HNMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.28 (br 139023.doc ·72· 1378098 s, 2H), 4.11 (q, J=7.3, 2H), 3.71 (t, J=5.0, 1H), 2.57-2.39 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 1.78 (m, 1H), 1.59 (m, 1H), 1.17 (t, J=7.3, 3H)。步驟B : 2-[(第三丁氧基羰基）胺基]-4,5,6,7-四氫-1,3-苯并噻唑-4-甲酸（i-11) 根據中間物（i-8)步驟B及C中概述之程序自2-胺基-4,5,6,7-四氫-1，3-苯并噻唑-4-甲酸乙酯（來自步驟八）製備。 JHNMR (500 MHz, CDC13)5: 3.70 (t, J=5.2, 1H), 2.74 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.10-1.94 (m, 2H), 1.87 (m，1H)，1.55 (s，9H)。中間物12 二氫節-1-甲睃（i-12)

HO 根據文獻程序（Journal of Organic Chemistry (2000)， 65(4)，1 132-1 138)製備。中間物13a及中間物13b (2S，5R)-2-(4-胺基苄基）_5_[(R)_羥基（苯基）甲基】咕咯啶-1-甲酸第三丁酯（i-13a); (2R，5R)-2-(4胺基节基）_5-[(R)_羥基（苯基）甲基】"比咯啶小甲酸第三丁醋（i-13b)

139023.doc 1378098 步驟a . (4r，5r)_2,2_:甲基_4·[(1Ε)·3·側氧基丙·！烯小基]-5-苯基-i，3-嗔嗤咬_3-甲睃第三丁酷

〇七 0^H 向（4S，5R)-4-曱醯基-2,2_二曱基_5笨基_13·噁唑啶_3·曱酸第三丁酯（20.9 ’ 89_1 mmol)於 CH2C12(150 mL)中之溶液添加（二苯基亞磷烷基）乙醛（271 g，89i mm〇i)且所得混合物在環境溫度下攪拌40小時。在移除1/3溶劑之後，大量地添加己烷且濾出所得固體。在Bi〇tage Η〇Ηζ〇η⑧系統 (矽膠，己烷中之〇至20%乙酸乙酯梯度，隨後己烷中之 20〇/。乙酸乙酯）上進行急驟層析得到丨6 3 g(72%)呈黃色油狀之標通化合物。LC/MS 354.3 (M+23)。步驟B . (4R，5R)-2,2-二曱基-4-(3-側氧基丙基）_5_苯基_ 1，3-噁唑啶-3-甲酸第三丁酯

^rV

〇S 向（4R，5R)-2,2-二甲基-4-[(1Ε)-3-側氧基丙-1-烯· i •基]_5_ 苯基-1，3-噁唑啶-3-甲酸第三丁酯（19.6 g，59.丨mm〇1)(來自步驟A)於丙酮（150 mL)中之溶液添加19经之1〇0/〇 pd/c且所得懸浮液於氫氣球下在環境溫度下攪拌24小時。經矽藻土濾出固體且在真空下濃縮濾液。殘餘物藉由在Bi〇tage Horizon®系統（石夕膠，己烷中之〇至2〇0/〇乙酸乙酯梯度，隨後己院中之20%乙酸乙酯）上進行急驟層析純化以得到11 $ g J39023.doc 1378098 (58°/〇)呈無色油狀之標題化合物。LC/MS 356 3 (M+23)。步驟C : (4R，5R)-2,2-二甲基_4-[(3E)-4-(4-頌基苯基）丁 -3- 稀-1-基】-5-苯基_ι，3_噁唑啶_3_甲酸第三丁酯及 (4R，5R)-2,2-二曱基·4_[(3Ζ)·4_(4-確基苯基）丁 _3_ 烯-1-基】·5_苯基-I，3·噁唑啶_3_甲酸第三丁酯

向來自步驟Β之（4R，5R)-2,2_二甲基_4_(3_側氧基丙基）_5_ 苯基-1，3-噁唑啶-3-曱酸第三丁酯（1〇〇 g，3〇〇 mmol)於 CH2C12(200 mL)中之溶液添加溴化（4_硝基苄基）三苯基_鱗 (21.5 g ’ 45.0 mmol)，接著添加 Et3N(8.36 mL，60.0 mmol)。將紅色反應混合物在環境溫度下攪拌48小時。將己烧（200 mL)傾入反應混合物中且濾出固體。在Bi〇tage Horizon®系統（矽膠’己烷中之〇至1 〇〇/。乙酸乙酯梯度，隨後己烧中之1 〇%乙酸乙酯）上進行急驟層析得到1 〇 7 g(79%) 呈淺黃色發泡體狀之標題化合物（順反混合物）。LC/MS 475.4 (M+23)。步琢D : (2R，5S)-2-[(R)-經基（苯基）甲基】·5·(4·頌基苄基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯及（2r，5r)_2_[(r)_羥基（苯基）甲基卜5-(4-確基节基）〇比略咬甲酸第三丁醋 139023.doc •75-

1378098 向以上來自步驟c之順/反混合物（7_86 g’ 17·4 mmol)於乙酸乙酯（100 mL)中之溶液添加5〇 mL之2 N HC1溶液且所得混合物在環境溫度下攪拌2小時隨後加熱至45。(：歷時3小時。在減壓下移除揮發物。將所得白色固體溶解於N，N-二曱基甲醯胺（100 mL)中且添加 15.1 mL(86.7 mmoiyPr2Net。將反應混合物在環境溫度下攪拌7小時。隨後添加二碳酸二第三丁酯（4.55 g，20.8 mmol)且反應混合物在環境溫度下攪拌隔夜。添加水（200 mL)且將其以乙酸乙酯（2〇〇 mLx3)萃取。合併之有機層經NajO4乾燥，過濾且在減壓下/辰細。殘餘物藉由在Biotage Horizon®系統（發膠，己烧中之0至30%乙酸乙酯之梯度）上進行急驟層析純化以得到 1.61 g(22%)標題化合物（2R，5S)-2-[(R)-羥基（苯基）曱基]_5_ (4-硝基苄基）吡咯啶-丨_甲酸第三丁酯（順）及3 9 咯啶-1-甲酸第三丁酯（反）。LC/MS 435.4 (M+23)。步驟E : (2S，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-【(R)-羥基（苯基）曱基] 吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（i-13a) 向以上來自步驟D之（順）（2R，5S)-2-[(R)-羥基（笨基）曱基]_5-(4-硝基苄基）吡咯啶·ι_甲酸第三丁酯（丨51 g，3 66 mmol)於乙醇（20 mL)中之溶液添加〇_15 g之l〇〇/0 Pd/C且所得懸浮液於氫氣球下在環境溫度下攪拌5小時。經由石夕藻 139023.doc •76- 1378098 土過滤、及移除溶劑得到1 ·4〇 g( 1 〇〇❶/〇)呈白色發泡體狀之標 - 題化合物，其未進一步純化即使用。LC/MS 405.3 ·, . (M+23) » . 步驟F: (2R，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-【(R)-羥基（苯基）甲基] 咕咯啶-1_甲酸第三丁酯（i_13b) 向來自步驟D之（反）(2R，5R)-2-[(R)-羥基（苯基）曱基]_5_ (4-硝基苄基）吡咯啶甲酸第三丁酯（3 9〇 g，9.46 mmol) , 於乙醇（40 mL)中之溶液添加0.4 g之i〇% pd/c且所得懸浮液於風氣球下在ί哀境溫度下檀掉6小時。經由碎藻土遽、出固體。在移除溶劑之後’在Biotage Horizon®系統（石夕膠，己烧中之0至30。/。乙酸乙酯梯度，隨後己烷中之3〇%乙酸乙醋）上進行急驟層析得到2.30 g(64%)呈白色發泡體狀之標題化合物。LC/MS 405.3 (M+23)。中間物14 (2S)-1-(1，3-苯并嗟唾-2-基略咬-2-甲酸（i-14):

在環境溫度下向28 mg(0.24 mmol)L-脯胺酸於Ν,Ν-二甲基甲酿胺（3 mL)中之溶液添加51 mg(0.24 mmol)2-溴苯并噻唑、100 mg(0.72 mmol)碳酸鉀及 6 mg(0.O3 mmol)碘化亞鋼。於100°c下搜拌反應混合物隔夜。隨後將其過遽且藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之〇_1〇/0三氟乙酸/ 水中之0.1%三氟乙酸之0-60%梯度）純化。純溶離份冷；東乾燥隔夜得到35 mg(60%)呈淺棕色固體狀之標題化合物β ιΗ 139023.doc -77- 1378098 NMR (DMSO-d6)： δ 7.78 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.45 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.28 (t, J=7.8 Hz, 1 H), 7.08 (t, J=7.8 Hz, 1 H), 4.48 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 3.52-3.61 (ms 2 H), 2.37 (m, 1 H), 2.01-2.11 (m, 3 H)。LC/MS 249.3 (M+l) » 中間物15-22 以下N取代之L-脯胺酸中間物使用如上所述之程序及此項技術中已知之程序自合適的起始物質製備。表3 : 中間物結構計算質量 MS (e/z) (MH)+ 1-15 CI、 260.12 260.76(M) 262.66(M+2) 1-16 ο 0^°- ho^O> 221.25 222.40 1-17 。Φ 225.67 225.42 (M) 227.06 (M+2) 1-18 r HO 人^^ 270.12 269.98 (M) 271.92 (M+2) 1-19 。（^Τ' 317.12 317.92 1-20 。贫 ηο^Ο 248.30 249.30 1-21 o SQn 198.24 199.15 139023.doc • 78 ·

1378098 1-22 Br 〇 0 270.12 269.90 (Μ) _ ho^Xj> 271.96 (Μ+2) (6·側氧基噠嗪-1(6H)-基）乙酸（i-23) 中間物23

HO

向（3-氯-6-側氧基噠嗪-1(6H)-基）乙酸（1 g，5.30 mmol， ChemBridge)於40 mL曱醇中之溶液添加10〇 mg 10%鈀/碳且所得懸浮液設定於氫氣氛下且在室溫下劇烈搜拌4小時。經由Gilmen 0·45 μΜ PFTE針筒過濾器濾出催化劑且在真空下濃縮濾液。殘餘物在不進一步純化的情況下使用。ip! NMR (D2〇): δ 9.07 (dd, J=1.6, 3.9 Ηζ，1 Η), 7.59 (dd, J=4.1, 9.4 Hz, 1 H), 7.14 (dd, J=1.6, 9.3 Hz, 1 H), 4.97 (s, 2H)。LC/MS 155.09 (M+l)。中間物24

製備2-漠-5,6-二氫-4H-環戊[d】[l，3]每唾·4_甲酸（丨_24)

步驟A : 2-溴-5,6-二氫·4Η-環戊[d] [ι，3]嗟唑-4-甲酸乙酯

Br

EtO 向亞硝酸第二丁醋（4.2 mL ’ 35.3 mmol)及溴化銅（Π)(6·3 g，28.3 mmol)於乙腈（100 mL)中之溶液逐份添加2_胺基_ 139023.doc •79· 1378098 5,6-二氫-4H-環戊[α][1，3]噻唑-4-曱酸乙酯（5 g，23.6 mmol)。在添加完成後將混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物傾入2 M HC1(600 mL)中且以EtOAc(3x200 mL)萃取，合併之 EtOAc層以 1 M HC1(500 mL)、水（250 mL)、飽和 NaHC03(200 mL)、飽和 NaCl(150 mL)洗滌，經MgS04乾燥，過滤及蒸發。殘餘物藉由MPLC(Biotage Horizon : FLASH 40 Μ)、使用溶離劑：100% 己烷（1 00 mL)、100% 己烷上升至己烷中之25% EtOAc(750 mL)梯度、隨後己烷中之25% EtOAc(700 mL)純化以得到1.87 g(29%)淡橙色油狀物。1H NMR (500MHz CDC13)5: 4.22 (q, J = 7.1，2H)，4.00 (m, 1H), 3.04-3.11 (m, 1H), 2.88-2.94 (m, 1H), 2.77 (q, J=7.3, 2H), 1.31 (t，J = 7.1，3H)。步驟B : 2-溴-5,6-二氫-4H-環戊[d][l，3]噻唑-4-甲酸

將來自步驟A之產物（4.92 g，17·82 mmol)之溶液溶解於甲醇（20 mL)中且逐滴添加至5 N NaOH(4.25 mL，21.25 mmol)、水（1 6 mL)及曱醇（30 mL)之混合物。在添力口完成後將混合物攪拌2小時。藉由蒸發移除甲醇且其餘水溶液之pH值藉由濃HC1調整至約2.5。將混合物以固體NaCl飽和且以EtOAc(x3)萃取；合併之EtOAc層以飽和NaCl洗滌，經Na2S04乾燥且以活性炭處理隔夜。蒸發所過濾之混合物。殘餘物以EtOAc濕磨，且過濾固體得到1.94 g所需產物。蒸發母液且藉由MPLC、使用1 00%己烷上升至己烷中 139023.doc -80- 之100% EtOAc之梯度純化以進一步得到0.82 g呈奶白色固體狀之標題產物（總計2.76号，62%)。4 NMR (500MHz CDC13) δ: 4.04 (m, 1H), 3.02-3.08 (m, 1H), 2.88-2.94 (m, 1H)，2.78-2.83 (m，2H)。中間物25 製備[(第三丁氧基羰基）胺基]-1，3-噻唑-4-基}-4-氟丁酸（i-25)

〇步驟A : (2E)-2-[(第三丁氧基羰基）亞胺基]-4-(2-乙氧基_2_ 側氧基乙基）-1,3-噻唑-3(2Hh甲酸第三丁酯

向2-胺基嗔峻-4-乙酸乙醋（8 g，43 mmol)於DCM(75 mL) 中之溶液添加二碳酸二第三丁酯（20.63 g，95 mmol)、休尼格驗（Hunig's Base)(16.51 mL，95 mmol)及 DMAP(1_57 g ’ 12.89 mmol)且所得混合物於室溫下攪拌隔夜》將混合物以水、飽和NaCl洗滌，經MgS04乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由MPLC、採用1〇〇〇/。己烷上升至己烷中之50% EtOAc之梯度純化以得到12.5 g(75%)呈白色固體狀之標題化合物。1H NMR (500MHZ CDC13) δ: 7.02 (s, 1H)，4_17 (q， J = 7.3, 2H), 3.73 (s, 2H), 1.51 (s, 18H), 1.25 (t, J=7.3, 1378098 3H)。步驟B : 2-(2-[(第三丁氧基羰基）胺基】·1ϊ3噻唑_4_基）_4_氟丁酸乙酯

向來自步驟Α之產物（7.5 g，ΐ9_4 mmol)於無水THF(100 mL)中之冷卻於-78C之溶液添加丁基鋰（854 mL之25 ]y[溶液，21.3 5 mmol)，接著添加！·碘_2氟乙烷（6 75 g，38 8 鲁 mmol)且混合物在-78°C下攪拌}小時隨後使其溫至室溫。添加擰檬酸之1 〇°/。w/w溶液（21 mL)且所得混合物在室溫下攪拌隔夜。將混合物蒸發以移除THF且以水（1〇〇 mL)稀釋且以EtOAc萃取（χ3)。合併之Et〇Ac層以水、飽和NaCl洗條’經MgS〇4乾燥’過渡且蒸發。殘餘物藉由mplc使用溶離劑：100%己烷上升至己烷中之25% EtOAc之梯度純化。藉由C18管柱上之PREP-HPLC採用100%水上升至水 +0.05% TFA中之95%乙腈之梯度進一步純化得到標題化合籲物 500 mg(7%)〇 4 NMR (500MHz CDC13) δ: 8.22 (br s， 1Η), 6.75 (s, 1H), 4.32-4.57 (m, 2H), 4.12-4.25 (m, 2H), 3.95 (t, J=7.5, 1H), 2.40- 2.52 (m, 1H), 2.18-2.31 (m, 1H), 1.56 (s，9H)，1.25 (t, J=7.1，3H)。步驟C : 2-{2-【（第三丁氧基羰基）胺基]-1，3-噻唑-4-基}-4-氟丁酸 139023.doc -82-

1378098

向來自步驟B之產物（100 mg，0.3 mmol)於THF(1 mL)及曱醇（0.3 mL)之混合物中之溶液添加氫氧化鋰之溶液（〇 3 mL之1 Μ溶液，0_3 mmol)且所得混合物在室溫下攪拌9〇分鐘。添加IN HC1(0.3 mL ’ 〇_3 mmol)且混合物蒸發至乾。所得粗產物在不純化的情況下立即使用。中間物26 製備2 -鼠- 5,6-二氫-4H-環戊[d][l，3】-嗟嗤-4-甲酸（i-26)

步驟A: 2 -氟- 5,6-二氫- 4H-環戊[d]嗟唾-4-甲酸乙醋

2-胺基- 5,6·二氫-4H-環戊[α][ι，3]。塞唾_4-甲酸乙酯[來自步驟A ’中間物8](2 g ’ 9.4 mmol)溶解於氟棚酸（5.17 g， 28.3 mm〇l) _且混合物冷卻至恰好高於其凍結之點（約 s°c)。逐份添加四氟硼酸亞硝鏽（K1 g，9 4 mm〇1)且混合物在0 C下搜拌20分鐘。添加乙醚（60 mL)且混合物在-50°C 下授拌3 0分鐘。過滤且固體以乙醚洗條且風乾。將固體溶解於曱苯（70 mL)中且溫至90°C歷時30分鐘。將混合物冷卻且蒸發，且粗殘餘物藉由MPLC(溶離劑：1〇〇%己烷上升 139023.doc -83· 1378098 至己烷中之40% EtOAc之梯度）純化以得到390 mg(190/〇)呈黃色油狀之標題化合物。1H NMR (500MHz CDC13) δ: 4.22 (q，J=7.1，2Η)，3.93 (dd，J=7.0及 5.0，1Η)，3.08 (m，1Η)， 2.91 (m，1H)，2.71 (m，2H)，1.31 (t，J=7.1，3H)。步驟B : 2-氟-5,6·二氫-4H-環戊[d】[l，3】-噻唑-4-甲酸

向來自步驟A之產物（1〇〇 mg，0.456 mmol)於THF(1.5 mL)及曱醇（0.5 mL)之混合物中之溶液添加氫氧化鋰之溶液（0.55 8 mL之1 Μ溶液，0.588 mmol)且所得混合物在室溫下攪拌90分鐘。添加IN HC1(0.558 mL，0.5 5 8 mmol)且混合物蒸發至乾。所得粗產物在不純化的情況下立即使用。中間物27 製備6,7-二氫-5H-1·比咯并[l，2-d]四唾-5-曱酸（i-27)

步驟A: 5-甲氧基-3,4-二氫-2H-吡咯-2-甲酸曱醋

使用如參考文獻 Wick，A·，Bartlett, P.及 Dolphin，D;

Helvetica Chimica 第 54 卷 Fasc. 2(1971)中描述之方法製備 5_ 甲氧基-3,4-二氫-2H-吡咯-2·甲酸甲酯。步称B: 6,7-二氫-5Η-°Λ洛并【l，2-d】四也·5-甲酸曱_ 139023.doc • 84· 向起始5-甲氧基-3,4-二氫-2H-吡咯·2·甲酸甲酷（9〇〇 mg，6.04 mm〇l)於4 mL乙酸中之溶液添加疊氮化納（975 mg，12.08 mmol)且所得懸浮液加熱至60°c且劇烈搜掉48 小時。將溶液冷卻至室溫且以35 mL乙醚稀釋。添加固體碳酸卸至溶液，將其在室溫下攪拌20分鐘。經由燒結漏斗濾出固體’以冷乙醚洗滌且在真空下濃縮。固體在濃縮期間沈澱且在濃縮至五分之一體積之後濾出。將固體以冷醚 (3 mL)洗務一次且於高真空下乾燥隔夜以得到標題化合物 (308 mg，31%)。LC-MS: m/z (ES)=169 (MH)+。步驟C : 6,7-二1-5Η-®Λ洛并[l，2-d】四吐·5·甲酸

向6,7-二氳-5Η-吡咯并[l，2-d]四唑-5-甲酸曱酯（300 mg， 1.78 mmol)於 THF/水/MeOH中之溶液添加Li〇H(214 mg， 8.92 mmol)且所得溶液經由油浴加熱至6〇充歷時16小時。 (圓底裝備有冷凝器。）將溶液冷卻至室溫且濃縮以移除有機溶劑。隨後使用2 N HC1將水層酸化至PH值約5。在真空下濃縮混合物至乾’與曱苯共沸（2x20 mL)以確保移除所有水。該物質在未進一步純化之情況下與副產物氣化鋰一起使用。LC-MS: m/z (ES)=155 (MH)+。中間物28 製備3-甲基-6,7-二氫洛并[2，1-<;】[1，2,4】三唾-7-甲酸 139023.doc -85· 1378098 (i-28)

ο HO 步驟 A : 3-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2，1-(：][1，2,4]-三唑、7 甲酸乙酯

參考文獻：Lawson，Edward C等，Tet. Lett. 41 (2〇〇〇)第 4533-4536頁在50 mL圓底燒瓶中將市售2-側氧基吡咯啶·3_甲酸乙龍 (2.50 g，15.91 mmol)溶解於30 mL二氯曱烷中。向該溶液添加呈固體形式之四氟硼酸三甲基氧鑌（2 59 g，17 5 mmol)且以20 mL二氣甲烷沖洗。所得混合物在室溫下搜掉兩小時且LC/MS指示中間物5_曱氧基_3,4_二氫·2H_吡咯_心甲酉文甲自曰已形成。此時，向混合物引入呈固體形式之乙酿肼（1.18 g，15.91 mmol)且所得溶液在室溫下攪拌3小時。 Ik後將溶液在真空下濃縮以移除所有二氯曱烷且隨後將殘餘物溶解於100 mL正丁醇中，將其在設定於12〇它下之油浴中回流加熱隔夜。將溶液冷卻至室溫且在真空下濃縮。殘餘物經由十六個15〇〇 μΓη矽膠製備型板、以9〇:1〇二氯曱烷：曱醇溶劑系統溶離純化。使用85:15二氯甲烷：甲醇自矽膠萃取產物以得到標題化合物（454 mg，11%)。〗Η NMR (500MHz DMSO-d6) δ： 4.16-4.06 (m, 1H), 4.00-3-88 (-,1H), 2.85-2.78 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.55 (dt, J-6.7, 139023.doc 1378098 13.9 Hz, 2H), 1.32 (dt, J=6.7, 14.0 Hz, 2H), 0.88 (t, J=7.5

Hz, 3H)。LC-MS: w/z(ES)=196(MH)+。步驟B : 3-曱基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,l-cl[l,2,4】三唑-7-甲瞍

向6,7-二氬-511-吡咯并[2，1-(：][1,2,4]-三唑-7-曱酸乙酯 (400 mg，2.05 mm〇l)於 THF/水/MeOH 中之溶液添加 LiOH (250 mg，丨〇.25 mmol)且所得溶液經由油浴加熱至60°C歷時16小時° (圓底裝備有冷凝器。）將溶液冷卻至室溫且濃縮以移除有機溶劑。隨後使用2 N HC1將水層酸化至pH值約5 °混合物在真空下濃縮至乾，與甲苯共沸（2χ2〇 mL)以媒保移除所有水。該物質在未進一步純化之情況下與副產物氣化鋰一起使用。LC-MS: m/z (ES)=168 (MH)+。中間物29 製備3-甲基·5,6,7,8-四氫-[1，2,4]三嗤并[4,3-a】《nt唆·8_甲酸 (“29)

使用與見於以上中間物28(i-28)中之彼等程序相似之程序、以2·側氧基哌啶-3-甲酸乙酯替換2-側氧基吡„各咬_3_甲酸乙酯來製備。LC-MS: m/z (ES)=182 (MH)+。中間物30 製備3-曱基-6,7-二氫-5H_吡咯并[2，1-<:】[1，2,41三唾_5_甲酸 139023.doc -87· 1378098 (i-30)

使用與見於以上中間物28(i-28)中之彼等程序相似之程序 '以5-側氧基吡咯啶_2_曱酸甲酯替換2_側氧基吡咯啶_3_ 甲知·乙醋來製備。LC-MS: m/z (ES)=168 (MH)+。中間物31 製備丨6-側氧基噠嗪·1(6H)_基】乙酸（i_31) 〇向曱醇（40 mL)中之3-氣-6-側氧基噠嗪-1(6Η)-基]乙酸 (1·〇〇 g，5·30 mm〇i)添加 1〇〇 mg之 1〇% pd/c。在反應之後’將混合物於環境溫度下於H2氣球下攪拌1小時，pd經由石夕藻土濾出。將濾液在真空中濃縮且藉由逆相 HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.1 〇/〇三氟乙酸/水中之〇·1 %三氟乙酸之0-40%梯度）純化。在真空中移除揮發物得到呈白色結晶狀之標題化合物。NMR (D20): δ 8.06 (dd, J=3.9, 1.4 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=9.4, 3.9 Hz, 1H), 7.12 (dd, J=9.4, 1.5 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H)。LC/MS 155.2 (M+1) 〇中間物32 製備[2-侧氧基嘧啶·ι(2Η)-基]乙酸（i-32) n2n-Voh 〇 139023.doc -88 · 1378098 向2-羥基嘧啶鹽酸鹽（l.oo g，7 54 mmol)及氣代乙酸 (0.713 g，7.54 mmol)添加5 N氫氧化鈉溶液（4.5 mL)。將反應混合物在1 〇 5 °C下加熱2小時。在冷卻至環境溫度且以 2 Μ鹽酸（3‘8 mL)中和之後，藉由結晶及過濾收集呈淺黃色固體狀之標題化合物。1H NMR (DMSO-d6): δ 13.2 (s， 1Η), 8.59 (dd, J=3.9, 3.0 Hz, 1H), 8.16 (dd, J=6.4, 2.8 Hz,

1H), 6.46 (dd，J=6.4, 4.1 Hz, 1H)，4.58 (s，2H)。LC/MS 1 5 5 ·2 (M+1) 〇中間物33 製備2-[2-側氡基嘧啶-l(2H)-基]丙酸（i_33)

〇 I ναμ 人γΟΗ ^ ο 向2-羥基嘧啶鹽酸鹽（ι·27 g，9·54 mmol)添加5 Ν氫氧化鈉〉谷液（5·7 mL) ’接者添加（2S)-2->臭丙酸（0.95 mL，11 mmol)。將反應混合物在80°c下加熱4小時。在冷卻至環境溫度之後，將其以2 N鹽酸（4.8 mL)中和且隨後直接藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18;乙腈中之0.1%三氟乙酸/水中之0· 1 %二氟乙酸之〇_5〇%梯度）純化。在真空中移除揮發物得到呈白色固體狀之標題化合物。LC/MS 169.1 (M+1)。中間物34 製備[6-側氧基嘧啶·1(6Η)-基]己酸（i-34)

C^OH 向°密°定-4(3H)-酮（0.608 g，6.33 mmol)添加5 N氫氧化鋼 139023.doc -89- 1378098 溶液（2.5 mL)，接著添加氯代乙酸（0.598 g，6.33 mmol)。將反應混合物在105 °C下加熱2小時。在冷卻至環境溫度之後，將其以2 N鹽酸（3.2 mL)中和且隨後直接藉由逆相 HPLC(TMC Pro-Pac C18 ；乙腈中之〇. 1 %三氟乙酸/水中之 0.1 %三氟乙酸之0-40%梯度）純化。在真空中移除揮發物得到呈白色固體狀之標題化合物。1H NMR (DMSO-d6): δ 13.2 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.94 (d, J=6.7 Hz, 1H), 6.43 (d, J=6.6 Hz，1H)，4.63 (s，2H)。LC/MS 155.1 (M+l) 〇中間物35 製備2-[6-側氧基嘧啶-1(6H)-基]丙酸（i-35)

向喊》定_4(3H)_酮（0.908 g，9·45 mmol)添加5 N氫氧化納溶液（3.8 mL)，接著添加（2R)-2-溴丙酸（0.95 mL，11 mmol)。將反應混合物在85°C下力σ熱1小時。在冷卻至環境溫度之後，將其以2 Μ鹽酸（5.2 mL)中和且隨後直接藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.1%三氟乙酸/水中之0.1 %三氟乙酸之0-40%梯度）純化。在真空中移除揮發物得到呈白色固體狀之標題化合物。1H NMR (DMSO-d6): δ 8.48 (d, J=2.7 Hz, 1H), 7.88 (dd, J=7.8, 2.8 Hz, 1H), 6.12 (d, J=7.6 Hz, 1H), 5.04 (q, J=7.3 Hz, 1H), 1.64 (d, J=7.5 Hz，3H)。LC/MS 169.1 (M+l)。中間物36 製備丨5-側氧基-1，6·嗉啶-6(5H)-基】乙酸（i-36) 139023.doc -90-

1378098 向 1，6-喑啶-5(6H)-酮（0.625 g’ 4.28 mmol)添加 5 Μ 氫氧化鈉溶液（1_7 mL)，接著添加氯代乙酸（〇 404 g，4.28 mmol)。將反應混合物在1 〇〇°c下加熱2小時。在冷卻至環境溫度且以2 N鹽酸（2_ 1 mL)中和之後，藉由過滤收集呈黃色固體狀之標題化合物。1H NMR (DMSO-d6): δ 13.1 ^ 1Η), 8.94 (dd, J=4.6, 1.8 Hz, 1H), 8.51 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.72 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=8.0, 4.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J=7.6 Hz, 1H)，4.72 (s, 2H)。LC/MS 205.2 (M+1)° 中間物37 製備[4-甲基-6-側氧基噠嗪-1(6H)-基】乙酸（i-37) ο 步驟A : [4-甲基-6-側氧基噠嗪-1(6Η)-基]乙酸乙酯

At 將5-羥基-4-曱基呋喃-2(5H)-酮（1.19 g，10.4 mmol)及肼基乙酸乙酯鹽酸鹽（1.61 g，10.4 mmol)於95%乙醇（2〇 mL) 中回流2小時。在真空中移除溶劑，接著使用Biotage Horizon®系統（〇-5〇0/0乙酸乙酯/己烷混合物）純化得到呈黃色結晶狀之[4-曱基-6 -側氧基達唤基]乙酸乙醋。 LC/MS 219.2 (M+23)。 139023.doc -91 - 1378098 步驟Β: μ-甲基·6_側氡基噠嗪·•基]乙酸 Α-υοη ο - 向四氫呋喃（3 mL)、曱醇（2 mL)及水（2 mL)中之[4-甲基-. 6·側氧基噠嗪-1(6H)-基]乙酸乙酯（0.575 g，2.93 mmol)添加1 N氫氧化鋰溶液（2 9 mL)。將反應混合物在環境溫度下授掉1.5小時。在以三氟乙酸中和之後，反應混合物直接藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.1%三氟乙酸/水中之0.1%三氟乙酸之0-45%梯度）純化。將純溶離份冷康乾燥隔夜以產生標題化合物。LC/MS 169.2 (M+1)。中間物38 製備2·[4_甲基_6_側氧基噠嗪-1(6H)-基]丙酸（i_38)

丫 N Ο CH3 在-78°C下向四氫。夫喃（4 mL)中之[4-曱基-6-側氧基噠嗪-1(6H)-基]乙酸乙酯（0.132 g，0.673 mmol)添加1 Μ六甲基二矽氮烷鋰溶液（0.74 mL)。將反應混合物在-78°C下攪拌 15分鐘隨後添加峨代曱烧（0.046 mL，0.74 mmol)。在-78°C下攪拌2小時之後，使反應混合物經0.5小時溫至環境溫度。在真空中移除揮發物，接著使用Biotage Horizon® 系統（0-50%乙酸乙酯/己烷混合物）純化得到呈油狀之2<4-曱基-6-側氧基噠嗪-1(6H)-基]丙酸乙酯。向88 mg(0.42 mmol)於四氫0夫鳴（0.3 mL)、水（0_2 mL)及甲醇（0.2 mL)中 I39023.doc •92· 1378098

之上述油中添加5 N氫氧化鈉溶液（0.2 mL) ^將反應混八物在環境溫度下攪拌3小時隨後以2 N鹽酸中和且藉由逆相 HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之〇.1%三氟乙酸/水中之 0.1 %二氟乙酸之0-40%梯度）純化。在真空中移除揮發物得到呈白色固體狀之標題化合物。LC/MS 1 83 ·2 (M+1)。中間物39及40

製備2-[6-側氧基噠嗪-l(6H)-基]丙酸及2-(噠嗪-3-基氣基）丙酸（i-39及 i-40)

ζί! 丫 C02H i-39 ί-40

向3(2H)-建嗓_(1.19 g，12.3 mmol)添加5 N氫氧化鈉溶液（4.9 mL)，接著添加（2S)-2-溴丙酸（1.11 mL，12.3 mmol)。將反應混合物在90°C下加熱1小時。在冷卻至環境溫度之後，添加2 Μ鹽酸（6·2 mL)且反應混合物直接藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之〇· 1 %三氟乙酸/水中之0.1 %三氤乙酸之0-40%梯度）純化。快速溶離Ο-烷基化產物2-(噠嗪-3·基氧基）丙酸。收集純溶離份且在真空中移除溶劑得到兩種皆呈淺黃色固體狀之標題化合物。2-[6-側氧基噠嗪-1(6H)-基]丙酸（i-39): NMR (D2〇): δ 8.07 (dd，J=4.1，1.6 Ηζ，1Η)，7.53 (dd，J=9.3, 3.9 Ηζ，1Η)，7.09 (dd, J=9.4, 1.6 Hz, 1H), 5.46 (m, 1H), 1.64 (d, J=7.3 Hz, 3H)。2-(噠嗪-3_基氧基）丙酸（i-40) : 4 NMR (D2〇): δ 9.01 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.14 (dd, J=9.1, 5.2 Hz, 1H), 7.64 (d, 139023.doc -93- 1378098 J=9.1 Hz, 1H), 5.45 (q, J=7.2 Hz, 1H), 1.86 (d, J=7>1 Hz 3H)。中間物41 製備[2-側氧基吼嗪-l(2H)-基]乙酸（i-4i) 。比嗪-2(1H)-酮（0.333 g，3.47 mmol)添加5 N氫氧化鈉溶液（2.1 mL) ’接著添加氯代乙酸（0.524 g，5·54 mm〇1)。將反應混合物在10 0 °c下加熱2小時。在冷卻至環境溫度之後’添加2 N鹽酸（3.5 mL)且反應混合物直接藉由逆相 HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.1三氟乙酸/水中之〇」三氟乙酸之0-40%梯度）純化。將純溶離份冷凍乾燥隔夜以產生呈黃色固體狀之標題化合物。LC/MS 155.2 (M+l>。中間物42及43 製備2-[3-甲基-6-側氧基噠嗪-1(611)-基】丙酸及2-[(6-甲基噠嗪-3-基）氧基】丙酸（i-42及i-43)

向 6-甲基嚷嘻-3(2H)-嗣（0.510 g，4.63 mmol)添加 5 N氫氧化鈉溶液（1.85 mL)，接著添加2-溴丙酸（0·709 g，4.63 mmol)。將反應混合物在90°C下加熱1小時。在冷卻至環境溫度之後，添加2 Μ鹽酸（5.0 mL)且反應混合物直接藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.1%三氟乙酸/水 139023.doc • 94· 1378098 中之0.1%三氟乙酸之8-20%梯度）純化。快速溶離〇_院基化產物。收集純溶離份且冷凍乾燥隔夜以得到兩種標題化合物。LC/MS 183.2 (M+l)〇 2-[3-甲基-6-側氧基建嗪基]丙酸（i-42) : 4 NMR (DMS〇-d6): δ 7·34 (d, J=9.7 Hz， 1H), 6.88 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.30 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 2.26 (s，3H)，1.49 (d，J=7.3 Hz，3H)°2-[(6-曱基噠嗪 _3_基）氧基]丙酸（i-43) : 4 NMR (DMSO-d6): δ 8.36 (d，J=9.0 Hz， 1H), 7.90 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.00 (q, J=6.6 Hz, 1H), 2.90 (s，3H), 1.73 (d，J=6.6 Hz，3H)。中間物44 製備[(6S)-4-側氧基-4,6,7,8-四氫吡咯并[1,2-]嘧咬_6•甲陵 (i-44) H〇2h5 步驟A : [6(S)-4-側氧基-4,6,7,8-四氫吼洛并[ι，2_]嘴咬_6 甲酸甲酯

將（2S)-5-甲氧基-3,4-二氫-2H-吡咯-2-甲酸甲酯（4.19 g， 26.6 mmol)及 3-氮雜三環[4·2.1·02.5]壬-7_ 烯 _4_酮（24 g， 17·8 mmol)在ll〇°C下加熱隔夜。使用Biotage Horiz〇n⑧系統（0-100%乙酸乙酯/己烷混合物）純化得到標題化合物 [6(S)-4-側氧基-4,6,7,8-四氫吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-曱酸曱酯及中間物（7S)-9-側氧基_3,8-二氮雜四環[9.2.1·〇2，10·〇4,8]十 139023.doc •95- 1378098 四-3,12-二烯-7-曱酸曱酯。將中間物在i5〇〇c下加熱45分鐘以得到未進一步純化之標題化合物。LC/MS 195 2 (M+1) ° 步轉B : [(6S)-4·側氧基-4,6,7,8-四氫《•比洛并[ι，2_]嚷咬_6_ 甲酸

將四氫呋喃（60 mL)'甲醇（40 mL)及氫氧化鋰（3.32 g， 77 mmol)於水（40 mL)中之溶液中之6(S)-4-側氧基_4,6,7,8-四氫吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-甲酸甲酯（9.95 g，51.2 mmol)在環境溫度下攪拌1小時。添加2 N鹽酸（3 8.5 mL)以中和反應混合物，隨後將其直接藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.1%三氟乙酸/水中之〇.ι〇/0三氟乙酸之〇_ 40%梯度）純化。快速溶離〇-院基化產物。收集純溶離份且冷凍乾燥隔夜以得到呈淺黃色固體狀之標題化合物。1Η NMR (DMSO-d6): δ 7.89 (d, J=6.6 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.92 (dd, J=10.0, 3.1 Hz, 1H), 3.12-2.99 (m, 2H), 2.52 (m, 1H)，2.11 (m, 1H)。LC/MS 181.2 (M+l)。中間物45 5,6-二氫-4H-吡咯并[l，2-b】吡唑-6-甲酸（i-45)

步驟A: 7-(三甲基矽烷基）-5-側氧基庚-6-炔酸 139023.doc •96· 1378098 ο ho2c

TMS

此中間物根據見於 Nayyar, Ν· K.; Hutchison, D. R·; Martinelli，M. J. 乂 Og. 1997, 62，982 中之程序製備。步驟B : (5Z)-5-[(第三丁氧基羰基）亞肼基卜7-(三甲基矽烷基）庚-6-炔酸

tl,NHB〇c N H02C

TMS

在氮氣氛下向54.0 g(254 mmol)來自以上步驟A之7-(三曱基矽烷基）-5-側氧基庚-6-炔酸於750 mL IPA中之攪拌溶液添加33.6 g(254 mmol)肼基曱酸第三丁酯。將反應混合物在環境溫度下攪拌4小時隨後在真空中蒸發以移除所有揮發物。此舉得到呈黃色膠狀之標題化合物（77 g， 93%)，其未進一步純化即使用。LC-MS: m/z (ES) 327 (MH)+。步驟C : 4-[1·(第三丁氧基羰基）-1Η·啦唑-3-基]丁酸

Boc N-N. 向77·0 g(236 mmol)來自以上步驟Β之（5Ζ)-5-[(第三丁氧基羰基）亞肼基]-7-(三曱基矽烷基）庚-6-炔酸於500 mL THF 中之撥拌溶液經30分鐘添加350 mL(350 mmol)之氟化四丁銨於THF中之1.0 Μ溶液。將所得混合物在環境溫度下攪拌 139023.doc •97· 1378098 48小時且隨後在真空中蒸發至乾。殘餘物以i L之5%乙酸水溶液稀釋且水相以乙酸乙酯萃取（3x35〇 mL)。合併之有機層以水（2x100 mL)及鹽水（150 mL)洗滌，經硫酸鎖乾燥，過濾且在真空中蒸發至乾。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烧中之3 %乙睃及3 5 %乙酸乙醋溶離純化以得到呈黃色油狀之標題化合物（60 g ’定量產量）。LC-MS: m/z (ES) 255 (MH)+。步驟D : 3-[4-(苄氧基）-4-側氧基丁基】-1Η-«Λ唾-1-甲酸第三丁酯向60‘0 g(236 mmol)來自以上步驟C之4-[1-(第三丁氧基羰基）-1Η-°比唑-3-基]丁酸於400 mL DMF中之攪拌溶液添加48.9 g(354 mmol)碳酸鉀，接著逐滴添加40.0 mL(300 mmol)苄基溴。將所得混合物攪拌24小時，以水淬媳，且以乙酸乙酯萃取（3x3 00 mL)。合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發至乾。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷令之30%乙酸乙酯溶離純化以得到呈黃色油狀之標題化合物（55.6 g，68.4%)。LC-MS: m/z (ES) 345 (MH)+ 〇步驟Ε : 3-[4-(苄氧基）-3-溴-4-側氧基丁基】-1Η-啦唑-1-甲酸第三丁酯 139023.doc •98·

1378098 在-78°C下在氮氣氛下向27.5 g(80.0 mmol)來自以上步驟 D之3-[4_(苄氧基）_4·側氧基丁基]·1Η•吡唑_丨_甲酸第三丁酯於250 mL無水THF中之攪拌溶液添加88 mL(88 mmol)之雙 (二甲基石夕烧基）胺基鈉於無水THF中之1.0 Μ溶液。將所得暗黃色溶液在-78°C下攪拌1小時且隨後經5分鐘逐滴添加 12 mL(96 mmol)氯三甲基矽烷。將所得混合物攪拌25分鐘’在此時間期間反應變成淡黃色。接著，一次性添加i 6 g(88 mmol)固體N-溴代丁二醯亞胺且所得混合物在_78〇c下搜拌3小時’接著經1小時逐漸溫至〇〇c。將反應以氯化銨飽和水溶液淬火且水相以乙酸乙酯萃取（3 x2〇〇 mL) ^合併之有機物以鹽水洗滌’經硫酸鎂乾燥，過遽且在真空中蒸發至乾以得到呈黃色膠狀之標題化合物。NMR分析顯示，粗產物似乎為起始物質與所需產物之1 :丨混合物且其在未進一步純化之情況下用於下一步驟。LC_MS: m/z (ES) 424 (MH)+。步驟F : 5,6-二氫-4H-吡咯并[l，2-b]吡唑_6_甲酸苄酯

向16_9 g(4〇.0 mmol)來自以上步驟£之3_[4_(苄氧基）_3_ 溴-4·側氧基丁基]-1H-吡唑-1-曱酸第三丁酯於5〇 mL二氯甲烧中之攪拌溶液添加50 mL TFA。將所得混合物在環境溫度下攪拌2小時隨後在真空中蒸發所有揮發物。隨後殘 139023.doc -99· 1378098 餘物以50 mL甲苯稀釋且再次在真空中蒸發以移除所有殘餘TFA。隨後將粗物料溶解於125 mL無水丙酮中且經^分鐘緩慢添加14.0 g(l〇〇 mmol)固體碳酸鉀，接著添加丨2 g (8.0 mmol)碘化鈉。隨後將所得混合物在回流下加熱“小時，冷卻至室溫且在真空中蒸發至乾。殘餘物以丨〇〇氣化敍飽和水溶液稀釋且隨後以乙酸乙酯萃取（3 χ丨〇〇 mL)。合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之1〇 8〇%乙酸乙酯梯度溶離純化以得到呈透明膠狀之標題化合物62 g(64%產率）。LC-MS: m/z (ES) 243 (MH)+。步雜G: 5,6-二氫·4Η-吡洛并【l，2-b]吼嗤-6-甲酸

在氮氣氛下向100 mL圓底燒瓶中裝入0.600 mg(〇. 5 60 mmol)10重量％活性碳載鈀且以10 mL乙醇潤濕。接著，添加6.0 g(〇.〇25 mol)來自以上步驟F之5,6-二氫-4H-吡咯并 [l，2-b]。比唑-6-曱酸苄酯於40 mL乙醇中之溶液且將混合物置放在1個大氣壓之氫氣下。將反應搜拌3小時隨後經 Celite®墊過濾。將墊以20 mL乙醇洗滌且濾液在真空中蒸發以得到呈無色固體狀之標題化合物（3.7 g，定量產量）。 ’H NMR (500 MHz，DMSO-d6): δ 11.90 (br s，1H)，7.44 (s， 1H), 5.98 (s, 1H), 4.87 (dd, J=8.9, 3.7 Hz, 1H), 2.94-2.82 (m，3H)，2.58-2.52 (m，1H)。LC-MS: m/z (ES) 153 (MH)+。 139023.doc -100· 1378098 中間物46 (3S)-5-側氧基-1，2,3,5-四氫吲哚嗪-3-甲酸（丨-46)

步驟A : (3S，9S)-5-側氧基-1，2,3,5,6,83-六氫吲哚嗪-3-甲酸甲酯

此中間物根據見於Hanessian，S.; Sailes，H·; Munro，A.; Therrien，E. J. Org. Chem. 2003，68，7219及 Vaswani，R.

Chamberlin, R. J. 〇rg. Chem. 2008，73，1661 中之程序製備。步驟B : (3S)-5-側氧基-l，2,3,5_四氫吲哚嗪-3-甲酸甲酯 Φ 向0·850 g(4.06 mmol)來自以上步驟A之（3S，9S)-5-側氧基-l，2,3,5,6,8a-六氫吲哚嗪_3-甲酸曱酯於5〇 mL二氯曱烷中之擾拌溶液添加6.30 g(72.5 mmol)氧化锰（IV)且所得混合物在回流下攪拌丨2小時。將反應冷卻至環境溫度，經 Celite®墊過濾且隨後將固體以l〇〇 mL二氯曱烷洗滌。濾液在真空中条發至乾且殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之1 0-5 0°/。乙酸乙醋梯度溶離純化以得到呈透明膠狀之標題化。物（0.47 g ’ 55%產率）。LC_MS:油（ES) 194 (MH)+。步轉C . (3S)-5-側氡基.ms四氮⑸嗓嗓·3甲酸

iiS 139023.doc -101 - 1378098

向0.200 mg(1.00 mm〇i)來自以上步驟B之（3S)-5-側氧基_ 1，2,3,5-四氫吲哚嗪_3-曱酸甲酯於3 mL THF中之搜拌溶液添加1_5 mL(1.5 mmol)之1.0 M LiOH水溶液。將所得混合物在環境溫度下攪拌2小時隨後以2·〇 mL(2.0 mmol)之1.〇 Μ氣化氫水溶液淬熄。在真空十蒸發所有揮發物且水相以氣仿中之30% ΙΡΑ混合物萃取（3x5 mL)。合併之萃取物以鹽水洗條，經硫酸鎮乾燥，過濾'且在真空中蒸發以得到呈白色固體狀之標題化合物（〇·17 g，92%)。NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.53 (dd, J=8.9, 7.1 Hz, 1H), 6.38-6.35 (m, 2H), 5.11 (dd, J=9.7, 2.7 Hz, 1H), 3.23-3.12 (m, 2H), 2.62-2.53 (m, 1H)，2.35-2.30 (m，1H)。LC-MS: m/z (ES) 180 (MH)+。中間物47 2-(2-(节基胺基）-2-側氧基&基）_56二氫_4H•環戊丨d]噻唑_ 4-甲酸（i-47)

丙醯胺來代替硫代乙醯胺除使用3-胺基-Ν·苄基硫基

化合物。LC-MS: m/z (E/S) 317(MH)+。中間物48 139023.doc 1378098 4-氣-5-嘧啶基乙酸（i-48)

Cl α

步驟A: (4-氣-5-嘧啶基）乙酸乙酯 CI 〇.

此物質根據 Zymalkowski 及 Reimann 等人 Archiv· Der. Pharmazie 1966，299，362之程序合成。步驟B: 4-氯-5-嘧啶基乙酸

向〇·6 g(3麵〇1)來自以上步驟八之㈠·氣如密咬基）乙酸乙醋於0.5 mL水及M mL乙醇中之溶液添加215呵（51】水合氫氧化經。將反應混合物在環境溫度下搜糾、時隨後在真空中濃縮以移除所有揮發

2.0 Μ氯化氫水溶液稀釋且隨後在真：餘物以7灿之揮發物以產生標題化合物(〇 43 ’辰縮以移除所有 ΜΗ. cD3od) a： s,s (Ss 1H), 8,0 (Sj ；"；，H-NMR ^50C LC-MS: m/z (E/S) 1 73 (MH)+。 ’ 3_96 (s，2H)。中間物49 4_甲氧基-5-嘧啶基乙酸（丨_49)

3 步驟A: (4-甲氧基·5·嘧啶基）乙酸甲酯 139023.doc 1378098 ?ch3 在0.250 g(1.25 rnmol)(4-氯-5-嘧啶基）乙酸乙酯（參見i_ 48，步驟A)於1〇 mL無水甲醇中之溶液中溶解〇〇6〇 g(2 5〇 mmol)金屬鈉。將所得溶液在微波條件下*ΐ2〇τ：下加熱ι〇分鐘。在真空中移除所有揮發物且殘餘物以飽和碳酸氫鈉稀釋且以二氣甲烷萃取（3xl〇 mL)e合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發至乾以得到呈透明膠狀之標題化合物（0.21 g，93%)。ihnmr (5〇〇 MHz, CD3OD) δ: 8.72 (s, 1H), 8.35 (s5 1H), 3.96 (s5 2H), 4.01 (s，3H)，3.70 (s，3H)，3.57 (s，2H)。LC-MS: m/z (E/S) 183 (MH)+。步驟B: 4-甲氧基-5-嘧啶基乙酸

3 向〇_21 g(l_14 mmol)來自以上步驟A之（4_曱氧基_5嘧啶基）乙酸甲醋於0.5 mL水及1.5 mL乙醇中之攪拌溶液添加“ mg(l.9 mmol)水合氫氡化鋰。將反應混合物在環境溫度下授掉2小時隨後在真空中濃縮以移除所有揮發物^殘餘物以3 mL之2.0 Μ氯化氬水溶液稀釋且隨後在真空中濃縮以移除所有揮發物以產生呈奶白色固體狀之標題化合物（ΐ9ι mg，90。/。)。iH-NMR (500 MHz，CD3OD) δ: 8.72 (s 岡 8.35 (s, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.57 (s, 2H) 〇 LC-MS: m/J (Ε/δ^ 169 (MH)+ 〇 139023.doc -104· 1378098 中間物50 2·(4-甲氧基嘧啶-5-基）丙酸（i-50)

步驟A: 2-(4-氣嘧啶-5-基）丙酸乙酯 ^ 在氮氣氣下向5.8 g(29 mmol)(4-氯-5-咬咬基）乙酸乙醋 (參見i-48，步驟A)於75 mL無水THF中之授拌、冷卻 (-78C)溶液添加15.2 mL(30.4 mmol)之二異丙基胺基鋰於無水THF中之2.0 Μ溶液。將所得混合物授拌丨5分鐘，隨後經5分鐘添加2.26 mL(36.1 mmol)碘代甲烷❶將反應混合物攪拌1 5分鐘，經45分鐘溫至-20°C ’隨後溫至〇°c歷時1 5分在里。隨後將反應混合物以氯化銨飽和溶液淬熄且以5〇 mL 二氣曱烷萃取。有機層經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸 φ 發。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之200/。乙酸乙酯 /谷離純化以得到標題化合物（1.9 g，3 1 。(500 MHz, CD3OD) δ: 8.88 (s 1H), 8.74 (s, 1H), 4.17 (m, 2H), 1.58 (d, J=7 Hz，3H), 1.29 (t，j=7 Hz，3H)。LC-MS: m/z (E/S) 215 (MH)+ 〇步驟B: 2-(4-甲氧基嘧啶-5-基）丙酸甲醋

在0.250 g(1.17 mmol)來自以上步驟八之2(4·氯嘧啶_5_ 139023.doc 105· 1378098 基）丙酸乙S旨於5机無水甲醇令之溶液中溶解0.054 g(2.34 匪〇1)金屬鈉。將所得溶液在微波條件下在12。1下加幻0 分鐘。在真空中移除所有揮發物且殘餘物以飽和碳酸氮納稀釋且以二氯甲垸萃取（3xlGmL)。合併之有機層以鹽水洗條，經硫酸鎂乾燥，過遽且在真Μ蒸發至乾以得到呈透明膠狀之標題化合物（〇.21 g，93%)。,h nmr⑼〇 MHz, CD3OD) δ: 8.65 (s 1H), 8.36 (S} 1H), 4.0 (s, 3H), 3.9 (q3 J=7 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 1.58 (d, J=7 Hz, 3H) 〇 LC-MS: m/z (E/S) 197 (MH)+。步驟C: 2-(4-甲氧基嘧啶_5·基）丙酸

向0.21 g(1.06 mmol)來自以上步驟β22_(4_甲氧基嘧啶 5-基）丙酸曱酯於0.5 mL水及1·5 mL乙醇中之授拌溶液添加 81 mg(l.9 mmol)水合氫氧化鋰。將反應混合物在環境溫产下攪拌2小時隨後在真空中濃縮以移除所有揮發物。殘餘物以3 mL之2·0 N氣化氫水溶液稀釋且隨後在真空中濃縮以移除所有揮發物以產生呈奶白色固體狀之標題化人物 (70 mg，36%)。^-NMR (500 MHz，CD3〇D) δ: 8 67 (s 1H)，8.4 (s，1H)，4.07 (s，3H)，3.9 (q, J = 7 Hz，2H)，1 58 (d J=7 Hz，3H)。LC-MS: m/z (E/S) 183 (MH)+。中間物51 2·(2·側氧基吼啶-1(2H)-基）丙酸（i-51) 139023.doc -106· '/ό 步驟A: 2-(2-側氧基吡啶-1(2Η)-基）丙酸第三丁酯

向9.5 g(0_l〇 m〇i)2-羥基吡啶於250 mL DMF中之攪拌溶液添加16.6 g(〇.120 mol)碳酸鉀，接著添加25.0 g(〇.12〇 mol)之2-溴丙酸第三丁酯。所得混合物在環境溫度下攪拌 7小時’隨後以1 L水稀釋。水相以乙酸乙酯（3 x200 mL)萃取’合併之有機相以水（2xl〇〇 ml)、鹽水（100 mL)洗，經硫酸鎂乾燥’過濾且在真空中蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析以己烷中之25%乙酸乙酯溶離純化，得到呈透明膠狀之標題化合物 16 g(72%)。LC-MS: m/z (ES) 224 (MH)+。步鄉B: 2-(2-側氧基吡啶_ι(2Η)_基）丙酸

在氮氣氛下向16.6 g(74.4 mmol)以上步驟A之2-(2-側氧基°比啶-1(2H)-基）丙酸第三丁酯於1〇 mL無水1,4-二噁烷中之搜拌懸浮液添加150 mL於1，4-二噁烷中之4.0 Μ氯化氫溶液°所得溶液在環境溫度下攪拌隔夜，隨後在真空中蒸發至乾以得到至白色固體狀之標題化合物（12.4 g，定量產量）。LC-MS: m/z (ES) 168(MH)+。中間物52 2_(2·側氧基-1，3_噁唑啶·3_基）丙酸（丨_52) 139023.doc •107·

1378098 步称A: (2-側氧基-i，3-噁唑啶-3-基）乙酸苄酯

向1.0 g(6.9 mmol)(2-側氧基-1，3-D惡0坐咬-3-基）乙酸於10 mL無水DMF中之攪拌溶液添加1 ·〇 g(7.6 mmol)碳酸評，接著添加1.0 mL(8.3 mmol)苄基溴。將反應混合物攪拌3小時隨後以水淬熄。水相以乙酸乙酯萃取（3 x25 mL)且合併之有機物以水（2 X 1 〇 mL)、鹽水（1 〇 mL)洗條，經硫酸鎂乾燥’過濾且在真空中蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之50%乙酸乙酯溶離純化以得到呈白色固體狀之標題化合物 0.50 g(3I%)。LC-MS: m/z (ES) 236 (MH)+。步驟B : 2_(2-側氧基-1，3-噁唑啶-3-基）丙酸苄酯

在-78C下在氮氣氛下向0.50 g(2.1 mmol)來自以上步驟八之（2-側氧基-1，3-噁唑啶-3-基）乙酸苄酯於15 mL無水THF 中之攪拌溶液添加1.2 mL(2.4 mmol)之二異丙基胺基鋰於無水THF中之2.0 Μ溶液。所得黃色溶液在-78°C下攪拌15 分鐘且隨後添加0.03 60 g(2.55 mmol)蛾代曱烧。將所得混合物攪拌2小時’逐漸溫至環境溫度’隨後以氯化銨飽和水溶液淬媳》水相以乙酸乙酯萃取（3 X20 mL)且合併之有機物以鹽水洗滌，經琉酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發至 139023.doc •108· 乾。粗殘餘物藉由石夕膠居批，土砂層析法、以己烷中之4〇%乙酸乙酯溶離純化以得到呈透明脒夕之標題化合物0.37 g(700/〇)。 LC-MS: m/z (ES) 250 (MH)+ 〇步雜C :2-(2-側氧基]，3_嗔唾心·基）丙酸在氮氣氛下在25 mL圓底燒瓶中裝入0.030 g(0.028 # _〇1)10重量％活性碳載飽且以2 mL乙醇潤濕。接著，添加0.37 g(1.5 mmol)來自以上步驟r2_(2_側氧基·ΐ3_噪唾啶-3-基)丙酸苄醋於10 mL乙醇中之溶液且將混合物置放在 1個大氣壓之氫氣下。將反應攪拌3小時隨後經CeHte⑧墊過濾。將墊以20 mL乙醇洗滌且濾液在真空中蒸發以得到呈無色固體狀之標題化合物（0.24 g，定量產量）。iH nmr (500MHz, CD3OD) δ: 4.60-4.30 (m, 3H), 3.80-3.60 (m, 2H), 1.45 (d, J=3.5, 3H)。LC-MS: m/z (ES) 160 (MH)+。 φ 中間物53 2-(2Η·1，2,3-三唑-2-基）丙酸（i-53)

使用與用以製備i-51之彼程序相似之程序自2H-1,2,3-三唑-2-基乙酸製備中間物53。LC-MS: m/z (ES) 142.2 (MH)+。中間物54 6,7-二氫-5H-環戊[b】吡啶甲酸·，三氟乙酸鹽（i-54) 139023.doc 109· 1378098

向16 mL(25 mmol)之1.6 Μ正丁基經溶液於己炫中之冷卻（0 C )溶液添加 3.9 mL(25 mmol)N，N，N'，N'-四曱基乙二胺’接著添加3.0 mL(25 mmol)2,3-環戊稀并η比咬於5 mL無水四氫。夫喃中之溶液。使所得混合物經15分鐘溫至環境溫度且隨後使無水二氧化碳氣體鼓泡穿過反應混合物歷時1 小時。隨後過遽固體沈殿且將粗固體藉由逆相hplc(tmc Pro-Pac C18，乙腈中之0.01%三氟乙酸/水中之〇.〇ι%三氟乙酸之0-40%梯度）純化以得到呈黃色固體狀之標題化合物 (2-0 g，50%)。LC-MS: m/z (ES) 164.1 (MH)+。中間物55 2-側氧基- 2,5,6,7 -四氯-1H-環戍[b]〇ib咬-7-甲酸（ί_55)

HO

步驟A: 6,7-二氫-SH-環戊【b】吡啶-7-甲酸甲酯

在〇C下在氮氣氛下向1.〇 g(6.1 mm〇i)中間物54於1〇甲醇及10 mL乙醚之混合物中之溶液添加9 〇 mL(18 之（三甲基矽烷基）重氮甲烷於乙醚中之2 〇 M溶液。在攪拌 5分鐘之後，將反應以2 mL冰乙酸淬火。在真空中蒸發所有揮發物且殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之5〇%乙酸乙酯溶離純化以得到呈黃色膠狀之標題化合物（1〇 g， 139023‘doc •110·

1378098 92%) » LC-MS: m/z (ES) 177.1 (MH)+。步驟B : 6,7-二氫-5H-環戊[b]吡啶-7-甲酸甲酯1-氧化物

向1.53 g(8.47 mmol)來自以上步驟A之6,7-二氫-5H-環戊 [b]。比啶-7-曱酸曱酯於30 mL二氯甲烷中之冷卻（〇°C )溶液添加1.61 g(9.31 mmol)m-CPBA。使溶液攪拌1小時且隨後

以5 0 mL碳酸氫鈉飽和水溶液淬媳。分離各層且水相以二氣曱烷萃取（3x50 mL)。合併之有機萃取物以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥’過濾且在真空中蒸發以產生呈淺棕色固體狀之標題化合物，其不經純化即使用。LC-MS: m/z (E/S) 194.2 (MH)+。步驟C . 2 -氯- 6,7-一氫-5H-環戊[1)】啦咬_7-甲酸甲醋

向0,21 mL(2.28 mmol)氧氣化磷於〇2 mL無水DMF中之冷卻（〇°c)溶液經10分鐘逐滴添加丨」g(5 69 _〇丨）來自以上步驟B之6’7-二氫-5H_環戊[b] 〇比咬_7_曱酸甲醋丄氧化物於15 mL氣仿中之溶液。使所得溶液溫至環境溫度且隨後回流4 h。冑混合物冷卻且傾入3〇机冷水中。水溶液以乙键萃取（3x3〇mL)，接著以3〇机二氣曱烧萃取一次。合併之有機層經琉酸鎂乾烨，讲..南n _丄、死保過濾且在真空中蒸發。所得棕色殘餘物藉由矽膠層析法、 ^ ^ 以己烷中之50%乙酸乙酯溶離㈣化以得到呈淺標色固體狀之標題化合物(〇3〇 g 25%); 139023.doc •111- 1378098 LC-MS: m/z (E/S) 212.0 (MH)+。步驟D : 2-側氧基-2,5,6,7-四氫-111-環戊[1)]吡啶-7-甲酸

向3:1:1比率之四氫呋喃、甲醇&1〇n LiOH水溶液之15 mL混合物添加0.242 g(1.14 mmol)來自以上步驟C之2-氯_ 6,7-二氫-5H-環戊[b] °比咬-7-曱酸曱醋。所得混合物在環境溫度下攪拌1小時。將溶液在真空中蒸發且所得淺棕色殘

餘物藉由逆相 HPLC(YMC Pack Pro C18，100x20 mm I.D 管柱’乙腈中之0.01%三氟乙酸/水中之〇·〇1〇/0三氟乙酸之 0-60%梯度）純化以得到呈棕色油狀之標題化合物（丨84 mg，90%)。LC-MS: m/z (E/S) 180.0 (ΜΗ)+。中間物56 2·(3-甲基-1Η-1，2,4-三唑-1-基）丙酸（i-56)

步驟A : 2-(3-甲基-1H-1，2,4-三唑-1-基）丙酸第三丁酯

向 3-甲基-1H-1，2,4-三唑（7.3 g，88 mmol)於 DMF(75 mL) 中之溶液添加K2C〇3(60.7 g ’ 439 mmol)及2-、;臭丙酸第二·丁酯（14.6 mL ’ 88 mmol)。於室溫下授拌反應隔夜。將混合物以EtOAc(500 mL)稀釋，以水洗滌（χ3)隨後以鹽水洗 139023.doc •112- 滌。經MgS〇4乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析法、以EtOAc/異己烷（20至1〇0%)溶離純化以得到13 g呈3:ι之區位異構體混合物形式之粗產物。將混合物藉由Chiralcei OD、以4%至30% IPA/庚烷之梯度純化。隨後，前兩個峰藉由Chiracel 0D管柱以4% IPA/庚烷等度溶離而分離。將第二峰收集為所需單一立體異構體㊉或s)(2_(3_曱基_1Η· 1,2,4-三唑-1-基）丙酸第三丁酯）（358，19%)。11^1^11 (500 MHz, CDC13) δ 8.05 (s, 1H), 4.90 (q, J=7 Hz, 1 H), 2.35 (s, 3 H), 1.72 (d, J=7 Hz, 3 H), 1.40 (s, 9 H) ° C10Hi7N3O2之ESI-MS計算值：精確質量：211.13;實驗值 156.05(-tBu)。步驟B : 2-(3-甲基-1H-1，2,4-三唑-1-基）丙酸

將2-(3 -甲基-1H-1,2,4-三哇-1-基）丙酸第三丁 g旨（1.0 g， 4.7 mmol)溶解於二《惡院（100 mL)中之4 M HC1中且在室溫下攪拌隔夜。產物在減壓下濃縮且在高真空下乾燥以得到呈HC1鹽形式之（R或s)2-(3-甲基-1Η-1，2,4-三唑-1-基）丙酸第三丁酯（850 mg) » C6H9N3022ESI-MS計算值：精確質量：155.07 ;實驗值 156.05。中間物57 2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基）丙酸（i-57)

139023.doc -113- 1378098 步称A:丙快酸苄酯向17.0 g(233 mmol)丙快酸於600 mL 無水DMF中之溶液添加39.9 g(233 mmol)苄基溴，接著逐份添加76.0 g(233 mmol)Cs2C03。在室溫下撥拌24小時之後，將反應以氣化銨德和水溶液淬火且以EtOAc萃取 (3 x200 mL)。合併之萃取物以水隨後以鹽水洗滌且經無水硫酸納乾燥。隨後將混合物經石夕膠墊過濾、，以己烧洗蘇，且在減壓下蒸發濾液以得到粗產物。將粗產物藉由石夕膠層析法、以己烷中之0-20%乙酸乙酯梯度溶離純化以得到呈無色油狀之標題化合物（13·8 g，35%)。4 NMR (CDC13, 500 MHz) δ 7.41 (m，5H), 5.25 (s，2H)，2.92 (s，1H)。步驟B ·· 2-(三丁基錫烷基）丙烯酸苄酯向6.42 g(4〇.l mmol)來自以上步驟八之丙炔酸苄酯於25 ml無水THF中之溶液添加0.93 g(〇.80 mmol)肆（三苯膦）妃 (〇)，接著經15分鐘添加12.6 g(42.1 mmol)氫化三丁基錫於 25 mL無水THF中之溶液。在室溫下攪拌隔夜之後，在減壓下移除溶劑。殘餘物經Celite®墊過濾，隨後將墊以己烷洗蘇。在真空中濃縮濾液且粗產物藉由石夕膠層析法、以己烷中之0-1 5%乙酸乙酯梯度溶離純化以得到呈無色油狀之才示 4 化合物（13 g，73%)。NMR (CDC13，500 MHz) δ 7-39 (m, 5H), 6.99 (d5 J=2.7 Hz, 1H), 5.98 (d, J=2.7 Hz, 1H)’ 5.20 (s，2H)’ 1.47 (m，6H)，1.30 (m，6H)，0.96 (m，6H)， 0.89 (t，J=7.4 Hz，9H)。步驟C : 2-(1-甲基-1H-吡唑_3_基）丙烯酸苄酯

向 0.30 g(1.4 mm〇l)3-峨-1_ 曱基 _1Η·吼唑於 3 mL無水 THF I39023.doc -114· 1378098 中之溶液添加0.82 g(l.8 mmol)來自以上步驟β22_(三丁基錫烷基）丙烯酸苄酯於丨mL無水THF中之溶液、〇 18 g(〇 15 mmol)之肆（三苯膦）鈀（〇)及〇·14 g〇 4 mm〇i)氣化銅⑴。將反應混合物加熱55。(：歷時12小時，冷卻且在減壓下蒸發至乾。將殘餘物溶解於10 mL之己烷及EtOAc之1:1混合物中，隨後經Celite®塾過濾。將塾以15 mL·之己烧及£tOAc 之1:1混合物洗滌且將合併之濾液蒸發至乾。粗殘餘物藉由石夕膠層析法、以己烷中之0-80% ]^〇心梯度溶離純化以得到呈無色油狀之標題化合物（〇 23 g，66%)。LC-MS: m/z (ES) 265 (M+Na)+。步驟D : 2-(1-甲基-1H-咣唑-3-基）丙酸向 0.10 mg(〇.〇93 mmol)l〇% 鈀/碳添加（0.23 g，0.93 mmol)在以上步驟c中製備之2-(1-甲基-1Η-η比唑-3-基）丙烯酸苄酯於6 mL甲醇中之溶液。將所得懸浮液在氫氣氛（i個大氣壓）下攪拌隔夜。殘餘物經Celite®墊過濾，且將墊以冷甲醇洗滌。將合併之濾液在減壓下蒸發以產生呈奶白色膠狀之標題化合物（〇·11 g，76°/。）。LC-MS: m/z (ES) 155 (MH)+。中間物58 2-(l，3-噻唑-2-基）丙酸（i-58)

CV〇H 步驟A: 2·(1，3-噻唑-2-基）丙酸乙酯 2-(1,3- °塞。坐-2-基）丙酸乙g旨根據在Dondoni，Α.; 139023.doc -115- 1378098

Tetrahedron Letters’ 1984, 25, 3633_3636 中概述之程序製備。步驟B: 2-(1,3-嗟吐-2-基）丙酸向〇_26 g(1.5 mm〇l)來自以上步驟人之2(13噻唑_2基）丙酸乙酯於15 mL曱醇中之溶液添加3 〇 mL〇5 mm〇i)之$ 〇 Μ氫氧化鈉水溶液。於環境溫度下攪拌所得混合物隔夜。將反應混合物在真空中蒸發以移除甲醇且水相以2 ν鹽酸溶液酸化直至達成ρΗ值4。該水溶液藉由逆相HpLC(TMC Pro-Pac C18 ,乙腈中之o.p/os氟乙酸/水中之〇 ι%三氟乙酸之0-25%梯度）純化。將純溶離份冷凍乾燥隔夜以得到呈白色固體狀之標題化合物（017 g，71%)。Le_MS: (ES) 158 (MH)+。中間物59 2-(3-甲基-1Η-»Λ 唑-5-基）丙酸（i_59)

步驟A: 2-甲基-3,5-二側氧基己酸乙酯 2-曱基-3,5-二側氡基己酸乙酯根據在s〇Uadie，G ;

Gehrold, N.; Maignan, J. Eur. J. 〇rg. Chem.} 1999, 2309-2314中概述之程序製備。步琢B: 2-(3-甲基嗤-5-基）丙酸乙醋向18.6 g(100 mmol)來自以上步驟a之2_曱基_3,5-二侧氧基己酸乙醋於200 mL THF及5〇 mL水中之溶液添加345 139023.doc •116- 1378098 叫⑽咖。1)無水肼。將兩相反應混合物於環境溫度下搜拌隔仗隨後在真空中蒸發至乾。將粗黃色殘餘物溶解於乙酸乙醋及核合物中且沖洗穿⑽砂膠栓塞。隨後將遽液在真空h發至乾且殘餘物藉㈣膠層析法以己炫中之㈡嶋乙酸乙_度溶離純化以得到呈黃色油狀之標題化合物（1.89 g ’ 10%) β 〗H 賺（CDCl3, 5⑽贿ζ) δ 7 %

(s, 1Η), 5.98 (s, 1Η), 4.20-4.12 (m, 2H), 3.81 (q, j=7.3 Hz 1H), 2.28 (s, 3H), 1.51 (d, J=7.3 Hz, 3H), 1.25 (t, J=7.1 Hz, 3H)。LC-MS: m/z (ES) 183(MH)+。步驟C: 2-(3-甲基_1H•吡唑-s•基）丙酸向1.24 g(6_8 mmol)來自以上步驟8之2_(3曱基_1H_吡唑· 5-基）丙酸乙酯於20 mL甲醇及5 mL水中之溶液添加15 mL(7.5 mmol)i5.〇 M氫氧化鈉水溶液。將所得混合物在環境溫度下攪拌2.5小時且隨後在真空中蒸發以移除甲醇。水相以乙酸乙酯萃取（2x75 mL)隨後以2 N鹽酸溶液酸化直至達成pH值4。水溶液以乙酸乙酯萃取（5x5〇 mL)且合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發以產生呈黃色膠狀之標題化合物（0.80 g，76%)。NMR (CDC13，500 MHz) δ 10.23 (br s, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.97 (s, 1H), 3.87 (q, J=7.3HZ，lH)，2.26(S，3H)，1.59(d，J=7.3HZ，3H)〇LC-MS: m/z (ES) 155 (MH)+。中間物60 2-(1H_吨唑-5-基）丙酸（i-60) 139023.doc •117. i 1378098

中間物60使用與用以製備中間物59之彼程序相似〇之程序自市售曱酸乙酯及2-曱基-3-側氧基丁酸乙能製備。ι NMR (CDC13, 500 MHz) δ 7.50 (s, 1H), 7.13 (u (br s，1H) 6.22 (s，1H)，3.95 (q，J=7.3 Hz，1H)，1.63 (d，J=：7 3 ’ 3H)。LC-MS: m/z (ES) 141 (MH)+。 ’ 中間物61 (2-側氧基-1，3-氧氮雜環己烷·3·基）乙酸（i-6l)

步驟A: 1,3-氧氮雜環己烷-2-明向 4.75 g(29.3 mmol)l，l’-羰基二咪唑於 260 !^[無水-知甲院中之溶液添加4.6 mL(27 mmol)DIEA，接著添加2 〇〇 g(27 mmol)3-胺基丙-1-醇。將所得混合物在環境溫度下攪拌隔夜且隨後以氯化銨飽和水溶液淬熄。分離各層且有機相以二氣曱烷萃取（2x30 mL)。合併之有機層以鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以乙酸乙酯中之5_15%甲醇梯度溶離純化以得到呈透明膠狀之標題化合物（〇 20 g，7.6%)。 HNMR (5〇〇 MHz, CDC13) δ: 6.12 (br s, 1H), 4.29 (t, J=5 4

Hz，2H)，3.36 (td，J=6.2, 2.3 Hz，2H)，2.00-1.95 (m，2H)。步驟B : (2-側氧基q，、氧氮雜環己烷_3_基）乙酸曱酯在氮氣氛下將0.20 g(2.0 mmol)來自以上步驟3氧 139023.doc 1378098 氮雜環己烷-2-酮於2 mL無水DMF之溶液添加至含有〇 13 * ^ (3_2 mm〇l)於礦物油令之6〇%氫化鈉懸浮液之1〇 mL圓底燒瓶申。在攪拌10分鐘之後，一次性添加0.37 g(2.4 mmol)溴乙I甲g曰且使反應混合物授拌隔夜。隨後將反應混合物以 5 mL氯化銨飽和水溶液淬熄且隨後以2〇水稀釋。所得懸浮液以乙酸乙酯萃取（3xl0 mL)且合併之有機物以水 (2x3 mL)、鹽水（1x3 mL)洗滌且經硫酸鎂乾燥。將混合物過遽’蒸發且藉由石夕膠層析法、以乙酸乙酯中5 %甲醇之混合物溶離純化以得到呈透明油狀之標題化合物（〇〇68 g * 20%) 〇 •HNMR (500 MHz, CDC13) δ: 4.28 (t, J=5.4 Hz, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.36 (t5 J=6.2 Hz, 2H), 2.08-2.04 (m, 2H) 〇 LC-MS: m/z (ES) 174 (MH)+ 〇步驟C : (2-側氧基·1，3·氧氮雜環己烷乙酸向0.068 g(0.39 mmol)來自以上步驟3之（2_側氧基_丨，3氧氮雜環己烷-3-基）乙酸甲酯於6 mL THF及2 mL水及2 mL曱醇中之溶液添加0_60 mL(1.2 mmol)之2.0 Μ氫氧化鈉水溶液。將所得混合物在環境溫度下攪拌3小時且隨後在真空中蒸發以移除曱醇及THF。水相以2 Ν鹽酸溶液酸化直至達成pH值2且隨後以氯仿中3〇%異丙醇之混合物萃取（3χΐ()

mL)。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發以產生呈奶白色固體狀之標題化合物（〇〇6 g，99%)。lH NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 4.32 (t, 1=5.4 Hz, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.41 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.10-2.05 (m, 2H) 〇 LC-MS: m/z (ES) 160(MH)+。 139023.doc -119- 中間物f 2 Ο-甲基側氧基四氫嘧啶-jpjj)-基）乙酸（i-62)

〇 U 步驟A: 1-甲基四氫嘧啶·2(1Η)-酮向10.1 g(62.4 mmol)l，r_羰基二咪唑於113 mL無水二氣甲烷中之溶液添加10.0 mL(56.7 mmol)DIEA，接著添加 5.00 g(56.7 mmol)N-甲基丙烷-u-二胺。將所得混合物在環境溫度下攪拌隔夜且隨後以氣化銨飽和水溶液淬媳。分離各層且有機相以二氣曱烷萃取（2x50 mL)。合併之有機層以鹽水洗滌’經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以乙酸乙酯中之5 _丨5 0/〇甲醇梯度溶離純化以得到呈透明膠狀之標題化合物（〇 7〇〇 gJ 10.0%)- ]HNMR (500 MHz, CDC13)5: 4.69 (br s, 1H), 3.30-3.27 (m, 2H), 3.24 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 1.96-1.92 (m，2H)。步驟B : (3-曱基-2-側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基）乙酸第三丁酿在氮氣氛下將0.30 g(2_6 mmol)來自以上步驟A之1-曱基四虱喷咬- 2(1Η)-_於5 mL無水DMF之溶液添加至含有〇. 1 6 g(4.2 mmol)於礦物油中之60%氫化鈉懸浮液之1〇 mL圓底燒舰中。在攪拌10分鐘之後，一次性添加0.62 g(3.2 mmol：) 漠乙酸第三丁酯且使反應混合物攪拌隔夜。隨後將反應混合物以5 mL氣化錢飽和水溶液淬熄且隨後以20 mL水稀釋°所得懸浮液以乙酸乙酯萃取（3x10 mL)且合併之有機 139023.doc -120- 物以水（2x3 mL)、鹽水（1x3 mL)洗滌且經硫酸鎂乾燥β將混合物過濾，蒸發且藉由矽膠層析法 '以乙酸乙酯中之〇· 50/〇甲醇之梯度溶離純化以得到呈透明油狀之標題化合物 (0.090 g，15%)。iNMR (500 MHz，CDC13) δ: 3.88 (s， 2H), 3.23 (t, J=6 Hz, 2H), 3.20 (t, J=6 Hz, 2H), 2.84 (s, 3H)，1.94-1.89 (m，2H), 1.37 (s，9H)。LC-MS: m/z (ES) 229 (MH)+。步驟C : (3-甲基-2-側氧基四氫嘧啶_i(2H)·基）乙酸向0.090 g(0.39 mmol)來自以上步驟B之（3-甲基-2-側氧基四氫嘧啶-1(2H)_基）乙酸第三丁酯於4 mL無水二氯曱烷中之溶液添加1 mL TFA。將所得混合物在環境溫度下攪拌 6小時隨後在真空中蒸發至乾以得到呈奶白色膠狀之標題化合物（0.68 g ’ 99%)。LC-MS: m/z (ES) 173 (MH)+。中間物63 (3-曱基-2-側氧基咪唑啶_1_基）乙酸（卜63)

Y^NL_J 使用與用以製備中間物62之彼程序相似之程序自市售N-曱基乙烷-1，2-二胺製備（3-甲基-2-側氧基咪唑啶-1-基）乙酸。1HNMR (500 MHz，CDC13) δ 7.21 (br s，1H)，3.96 (s， 2H)，3.48-3.42 (m，2H)，3.39-3.59 (m，2H)，2.80 (s, 3H)。 LC-MS: m/z (ES) 159 (MH)+。中間物64 2·(3-甲基[1，2,4】三唑并[4,3-α]吡啶-8-基）丙酸（i-64) 139023.doc • 121 - 1378098

步驟A : Ν’-(3-濞吡啶_2-基）乙醯肼 -·· 向〇,800 g(3.38 mm〇i)23_ 二溴吡啶於 10 mL 無水 14_ 二噁.. 烷中之溶液添加0.325 g(i〇.i mm〇l)無水肼且所得混合物加熱至85 C歷時8小時。將反應混合物冷卻至環境溫度隨後在真空中洛發至乾。將粗殘餘物溶解於無水二氣甲烷中且在氮氣氛下在乾冰丙酮浴中冷卻至_78〇c。接著，添加丨〇 ^ mL(6.8 mmol)三乙胺，接著添加〇 21〇 g(2 72 mm〇1)乙醯氣。使所得混合物經20分鐘溫至環境溫度隨後在真空中移除所有揮發物。將殘餘物懸浮於20 mL水中且以乙酸乙醋萃取（3 X 10 mL)。合併之萃取物以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥’過渡且蒸發以得到標題化合物（〇188,23%)。1^_ MS: m/z (ES) 230, 232 (MH) +及 188, 190 (MH-COCH3)+。步驟B : 8-溴_3-甲基[I，2,4]三唑并丨4,3-a】吡啶向0.17 g(〇.74 mm〇l)來自以上步驟Α2Ν,_(3溴吡啶_2_ 鲁基）乙醯肼於40 mL無水曱苯中之溶液添加3 mL冰乙酸且採用迪安-斯達克收集器（Dean_Stark trap)將所得混合物加熱回心20小時。將反應混合物冷卻環境溫度隨後在真空中蒸發至乾以知到標題化合物（〇 13 g，84%p (ES) 212, 214 (MH)+ 〇步琢C · 2-(3-甲基【1,2,4】二唾并【4,3a】吼咬_8基）丙稀睃苄酯向〇_13 g(0_61 mmol)來自以上步驟B之8溴_3甲基 139023.doc -122. (S> 1378098 [1，2,4]三唾并[4,3-a]吡啶於4 mL無水THF中之溶液添加 0.36 g(〇.8〇 mm〇l)2-(三丁基錫烷基）丙烯酸苄酯（參見中間物62，步騾則於【mL無水THF中之溶液、o.u g(〇〇9 mmol)肆（三苯膦）鈀（0)及〇·〇67 g(〇67 mm〇1)氯化銅（1)。將反應混合物加熱至60°C歷時6小時，冷卻且經ceiite®整過濾。將墊以1 5 mL二氣甲烷洗滌且將合併之濾液蒸發至乾。粗殘餘物藉由妙膠層析法、以乙酸乙g旨中之〇_6%甲醇梯度溶離純化以得到標題化合物（0.13 g，73%)。lc：_ms: m/z (ES) 294 (MH)+ 〇步驟D : 2-(3-甲基[1，2,4]三唑并[4,3-a】吡啶-8-基）丙酸向 0.040 g(〇.〇38 mmol)l〇% 鈀/碳添加（0.080 g，〇 27 mmol)在以上步驟C中製備之2_(3·甲基π，2,4]三唑并[43a] 。比咬-8-基）丙烯酸苄酯於4 mL甲醇中之溶液。將所得懸浮液在氫氣氛（1個大氣壓）下攪拌6小時。殘餘物經CeHte®，過濾’且將墊以冷甲醇洗滌。將合併之濾液在減壓下蒸發以得到標題化合物（0.043 g，77%)。LC-MS: m/z (ES) 206 (MH)+。中間物65 4-甲氧基-2-(1Η-"比唑-1-基）丁酸（i_65)

步驟A: 4-曱氧基·2·(ιη-吡唑-1-基）丁酸甲酯在氮氣氛下向1.32 g(10.0 mmol)4-曱氧基丁酸曱酯於15 mL無水THF中之攪拌、冷卻（-78。〇溶液添加i〇_5 mL(10.5 139023.doc -123- 1378098 mmol)之LiHMDS於四氫呋喃中之i.o μ溶液。將所得混合物攪拌1小時，隨後添加1·〇9 g(l〇 mmol)氯三甲基砂炫。在搜摔20分鐘之後’添加ι·78 g(l〇.〇 mmol)固體N-漠代丁二醯亞胺且混合物在-78°C下攪拌2小時，隨後經40分鐘緩 f又 >姐至境度。將反應以亂化録飽和水溶液浮火且隨後水相以乙酸乙酯萃取（2x20 mL)。合併之有機層以鹽水洗蘇，經硫酸鈉乾燥’過濾且在真空中蒸發至乾。將粗殘餘物/谷解於15 mL DMF_且添加5.5 g(40 mmol)碳酸卸，接著添加3.4 g(50 mmol)lH-吡唑》將所得混合物加熱至8〇〇c 歷時40分鐘，隨後冷卻至環境溫度。將反應以75 mL水稀釋且以乙酸乙g旨萃取（3 X 50 mL)。合併之萃取物以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發至乾。粗殘餘物藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之01%三氟乙酸/水中之0.1%三氟乙酸之〇·75%梯度）純化以產生標題化合物（0.26 g，13%)。LC-MS: m/z (ES) 199 (ΜΗ)+。步驟Β : 4-甲氧基_2-(1Η-吡唑-1-基）丁酸向0_045 g(〇.23 mmol)來自以上步驟Α之4·曱氧基_2·(1Η_ 吡唑-1-基）丁酸甲酯於2 mL曱醇中之攪拌溶液添加〇〇32 g(〇.57 mmol)氫氧化鉀於〇5 mL水中之溶液。將混合物在裒兄’胤度下搜拌1 5小時隨後以2 N鹽酸溶液酸化直至達成 PH值4。將混合物蒸發以移除所有揮發物隨後以乙酸乙酯 j取。合併之萃取物以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且蒸發至乾以得到標題化合物（0.040 g，95〇/。卜m/z (ES) 185 (MH)+〇 139023.doc •124- 中間物66 (5S)-6,7-^. [l,2-b][l,2,4]^«^-5-f ^(i-66)

步驟A : (5S)-1-胺基·5_【（三苯甲基氧基）甲基】吼咯啶_2-酮

在氮氣氛下向0.550 g(l·54 mm〇l)(S)-三苯甲基羥基甲基。比洛咬酮於1〇曱氧基乙烷中之冷卻（〇〇溶液添加0.123 g(3.08 mmol)於礦物油中之60%氫化鈉懸浮液。在攪拌30分鐘之後，分小份經30分鐘添加〇828 g(3.85 mmoL)2-[(胺氧基）磺醯基]_ι，3,5-三曱苯於5 mL乙醚中之溶液。使反應混合物溫至環境溫度隔夜隨後過濾。濾出物以乙醚洗滌且濾液依次以碳酸氫鈉飽和水溶液及鹽水洗滌。隨後有機層經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發以得到呈無色固體狀之標題化合物。固體受礦物油形式氫化鈉污染且稱重 0.6 g(定量產量）。LC-MS: m/z (ES) 395 (M+Na)+。步驟B : (5S)-5-[(三苯甲基氧基）甲基】-6,7-二氫-5H-"比咯并 [1，2-1)]丨1，2,4】三唑

向0.540 g(1.45 mmol)來自以上步驟A之（5S)-1-胺基-5-[(三苯甲基氧基）甲基]吡咯啶-2-酮於5 mL無水DMF中之搜 139023.doc -125· 1378098 拌>谷液添加0.327 g(7.25 mmol)甲酿胺，接著添加0.050 g (0.36 mmol)氯化鋅（II)。將所得混合物加熱至160°C歷時48 小時’冷卻至環境溫度且以25 mL乙酸乙酯稀釋。將溶液依次以碳酸氫鈉水溶液、水及隨後鹽水洗滌且有機層經硫酸鎂乾燥。隨後將混合物過濾，在真空中蒸發至乾且藉由石夕膠層析法、以己烷中之0-100%乙酸乙酯之梯度溶離純化以得到標題化合物（0·27 g，49%)。LC-MS: m/z (ES) 382 (ΜΗ)、步驟 C : (5S)-6,7-二氫-5Η-吡咯并[l，2-b][l，2,4]三唑 _5-基甲醇

ΗΟ 將以上步驟Β形成之產物0.27 g(0.71 mmol)(5S)-5-[(三苯甲基氧基）甲基]-6,7-二氫-5H-。比咯并[1，2-1?][1，2,4]三唑溶解於35 mL之氣化氫於無水1，4-二噁烷中之4.0 Μ溶液中。將反應混合物攪拌10分鐘，以20 mL曱醇淬熄，隨後在真空中蒸發至乾。殘餘物藉由逆相HPLC(TMC Pro-Pac C18 ;乙腈中之0.10/。三氟乙酸/水中之〇.1〇/0三氟乙酸之〇_ 90%梯度）純化以產生標題化合物（0.050 g，50%)。LC-MS: m/z (ES) 140 (MH)+。步驟D:(5S)-6,7-二氫-5H-吡咯并[l，2_b】【l，2,4】三唑-5- 甲酸

139023.doc -126- 1378098 向 0_025 g(0.18 mmol)來自以上步驟 C 之（5S)-6,7-二氫- ' 511_。比°各并[1，2_13][1，2,4]三°坐-5-基曱醇於11111^911值6.7璃 ·- · 酸鹽緩衝水溶液及1 mL乙腈中之攪拌溶液添加0.0020 g - (0 013 mmol)2,2,6,6-四曱基哌啶 1-氧基、0 033 g(〇 36 mmol)亞氣酸鋼（33 mg’ 0.36 mmol)及 0.0044 mL(0.0036 mmol)次氯酸鈉。將所得混合物在35°c下攪拌72小時、隨後在真空中濃縮至乾。將殘餘物溶解於1 mL(4 mmol)之氣 I 化氫於無水1，4-二噁烧中之4.0 Μ溶液中且在真空中濃縮。粗殘餘物藉由逆相HPLC(TMC Pr0-pac C18 ;乙腈中之 0.1%三氟乙酸/水中之三氟乙酸之〇 7〇%梯度）純化以產生呈TFA鹽形式之標題化合物。隨後將產物溶解於1 mL(4 mmol)之氣化氫於無水ι，4_二噁院中之4 〇 M溶液中且在真空中濃縮以得到呈氣化氫鹽形式之標題化合物。匕(：- MS: m/z (ES) 154 (MH)+ 〇中間物67

2-(1,3-噻唑-4-基）丙酸（i_67)

步戰A: 2-(1,3-噻唾_4-基）丙暖乙酯向43.3 g(300 mm〇i)2-曱基乙醯乙酸乙酯於27() mL氣仿中之冷卻（0C)溶液經30分鐘逐滴添加155 mL(3〇〇 mm〇1) 溴於30 mL氯仿中之溶液。在完成添加之後，使混合物溫至至溫且攪拌隔夜。使空氣鼓泡穿過反應混合物歷時7〇分鐘，隨後溶液經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發以得到66 〇 g 139023.doc -127- ί 1378098 (99-0¾)淡橙·色油狀物。向40.0 g(180 mmol)此中間物及 10.7 mL(269 mmol)曱醯胺於400 mL無水1,4-二。惡烧中之冷卻（〇C)混合物添加15.0 g(67.2 mmol)五硫化填。將混合物溫至室溫且攪拌1.5小時，隨後加熱至93。(：歷時2.5小時。在冷卻至環境溫度隔夜之後，在真空中移除所有揮發物且殘餘物藉由添加碳酸氫鈉飽和水溶液鹼化。水相以二氣甲烧萃取（3x300 ml)且合併之有機層以碳酸氫鈉飽和水溶液 '水、鹽水洗滌且隨後經硫酸鎂乾燥。將混合物過濾，蒸發且殘餘物藉由 MPLC(Biotage Horizon 2xFLASH 65i)、使用溶離劑：100%己烷（450 ml)、隨後100%己烷上升至己烷中之25% EtOAc(2400 ml)梯度、隨後己烷中之25%

EtOAc(1200 ml)純化以產生呈橙色油狀之標題化合物（2〇〇 g，60.0%)。NMR (500 MHz, CDC13) δ: 1.24 (t，J = 7.1， 3H), 1.58 (d, J=7.3, 3H), 4.05 (q, J = 7.3, 1H), 4.17 (m, 2H), 7.18 (d, J=1.3, 1H)，8.76 (d，J=1.6, 1H)。步驟B: 2-(1,3-噻唑-4-基）丙酸將5.0 g(27 mmol)來自以上步驟A之2-(1,3-噻唑-4-基）丙酸乙酯於25 mL曱醇中之溶液逐滴添加至6.6 mL(33 mmol)5 N NaOH水溶液、水（16 ml)及曱醇（30 ml)之混合物。在添加完成後將混合物攪拌2小時。藉由蒸發移除甲醇且其餘水溶液之pH值藉由濃氯化氫溶液調整至約2,5。將混合物以固體氯化鈉飽和且以EtOAc萃取（3 X 100 mL) » 合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且以活性炭處理隔仪。將混合物過濾且蒸發以得到呈奶白色固體狀之標題 139023.doc -128· 1378098 化合物 4.0 g(95 %)。4 NMR (500 MHz，CDC13) δ: 1.63 (d， J=7.3，3H)，4.11 (q，J=7.3)，7_25 (d，J=1.8，1H)，8.88 (d， J=1.8，1H)，10.25 (br s，1H)。中間物68及69 (4R)-5,6-二氩-4H-環戊[<1】[1，3】噻唑-4-甲酸（1-68)及（48)-5,6-二氫-4H-環戊[d][l，3】噻唑-4-甲酸（i-69)

HO

中間物68及69使用與用以製備中間物47之彼程序相似之程序自2 -側氧基環戊烧曱酸乙酷製備。兩種對映異構體藉由 SCF C02 S使用 AD-H管柱在 1〇〇/0 Me〇H/90% C02、2 1 ml/min、100巴、4〇°C條件下分離。第一溶離對映異構體 (48)-5,6_二氫-411-環戊[(1][1，3]°塞。坐-4-甲酸命名為中間物 68(i-68)且第二溶離對映異構體（4r)_5 6_二氫_4H環戊 [d][l,3]噻嗤-4-甲酸命名為中間物69(i-69)。iH NMR (5⑼

MHz，CDC13) δ: 2.59-2.68 (m，1H)，2.71-2.79 (m 1H) 2.83-2.90 (m, 1H), 2.92-3.00 (m, 1H), 3.86 (s，1H)，12.45 (s，1H)。中間物70 (m，1H)，8.82 2·(1，3-噻唑-4-基）丁酸（i-70)

使用與用以製備中間物26之彼程序相如+ 4日似之程序自市隹 1，3-噻唑-4-基乙酸及碘代乙烷製備2_(1 ° 11，3-噻唑-4_基）丁 139023.doc -129· 1378098 酸。1H NMR (500 MHz，CDC13) δ: 0.95 (t，J = 7.3, 3H)，1.25 (t，J=7,3，3H)，1.95-2.05 (m，1H)，2.08-2.17 (m，1H)，3_88 (t，J=7.6, 1H)，4.15-4.23 (m，2H)，7.22 (d，J=l.8, ih)，8.77 (d，J = 1.8, 1H)。中間物71 4-甲基-1H-1，2,3-三唑-1-基乙酸（i-71)

HO 步驟A :【4-甲基-5-(三甲基矽烷基）-lH-l，2,3·三唑·；!_基j乙酸乙酯向2.0 g( 1 8 mmol)l-(三曱基石夕烧基）_ι_丙块於甲苯（2〇 mL)令之溶液添加2.3 g( 18 mmol)疊氮基乙酸.乙酯。將反應混合物在120°C下加熱隔夜隨後冷卻至環境溫度。在減壓下移除所有揮發物且殘餘物藉由矽膠管柱層析法、以己烷中之5-25。/。丙酮梯度溶離純化以產生呈無色油狀之標題化合物（0.77 g，18%)。hNMR (500 MHz，CDC13): δ 5·01 (s’ 2Η), 4.2 (m, 2Η), 2.25 (s, 3H), 1.22 (m, 3H), 0.295 (s, 9H)。步驟B: [4-甲基-1H-1，2,3-三唑-1-基]乙酸乙酯向0.77 g(3.2 mmol)來自以上步驟A之[4-曱基-5-(三甲基石夕院基）-1Η-1，2,3-三唑-1-基]乙酸乙酯於2 mL THF中之溶液添加1.3 mL(32 mmol)50%氫氟酸於水中之溶液。於室溫下授拌所得混合物3小時且隨後在真空中蒸發至乾。接著’添加5 mL之2.0 N氨於曱醇中之溶液且隨後再次將混 139023.doc -130· 1378098 合物在真Μ蒸發至乾。將混合物溶解於二氯甲烧中，過濾且隨後在真空中蒸發以得到呈透明膠狀之標題化合物 (0.51 g，93%)。iHNMR (5〇〇 MHz，CDCl3) s: 7 5 (s，1Η) 5.05 (s，2H)，4.23 (m，2H)，2.30 (s，3H)，1.30 (m，3H)。步驟C: [4-f基-1H-1，2,3-三唑-1-基】乙酸向0.51 g(3.0 mm〇l)來自以上步驟8之[4甲基_1Hi，n 三唑-1-基]乙酸乙酯於四氫呋喃（10 ml)、甲醇（6 ml)中之溶液添加6 mL(6 mmol)之1·〇 Μ氫氧化鋰水溶液。將所得混合物在環境溫度下攪拌1小時。將反應混合物以8 mLi2 Ν 鹽酸溶液中和，其隨後蒸發以移除所有揮發物。水相以乙酸乙醋萃取且合併之有機物以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過;慮且蒸發至乾以得到呈白色固體狀之標題化合物（0.40 g，95%) 〇 LC/MS 142 (Μ+1)。中間物72 : 2-[4-(曱氧基羰基）-lH-l，2,3-三唑-1-基】丙酸… 72) 中間物73 : 2-【5-(甲氧基羰基）-1Η-1，2,3-三唑-1-基】丙酸（i_ 73)

步驟A : 1_(2-第三丁氧基-1-甲基-2-側氧基乙基）-1Η-1，2,3-三唑-4-甲酸甲酯及1-(2-第三丁氧基-1-甲基-2-側氧基乙基）-1Η-1，2,3-三唑-5-甲酸甲酯》向1.87 g(22.3 mmol)丙-2-炔酸曱g旨於40 mL甲苯中之溶 139023.doc -131 - 1378098 液添加1.9 g(ll mm〇l)2-疊氮基丙酸第三丁酯。將反應混合物在lOOt下加熱3小時隨後冷卻至環境溫度。在減壓下移除所有揮發物且粗殘餘物藉由矽膠管柱層析法、以己烷中之5至25%丙酮梯度溶離純化以得到標題化合物。 1-(2-第二丁氧基·丨_曱基_2_側氧基乙基）·1η ι，2,3三唑·々· 甲酸曱酿（較低 Rf)(1.4 g，50〇/〇)。WnMR (500 ΜΗζ， CDC13) δ: 8.30 (S, 1Η), 5.46-5.41 (m, 1H), 4.11 (S} 3H), 1.83 (d’ 3H)，1.47 (s，9H)。LC-MS: m/z (ES) 256 (MH)+。 1-(2-第二丁氧基_丨_曱基_2_側氧基乙基）_1H_12 3三唑_5· 甲酸甲醋（較高 Rf)(〇.45 g，16%)。iNMR (500 ΜΗζ， CDCL3) δ: 8.15 (s, 1H), 5.77-5.72 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 1.95 (d，J=7.3 Hz, 3H)，1.41 (s，9H)。LC-MS: m/z (ES) 256 (MH)+。步驟B(卜72) : 2-[4_(甲氧基羰基）·1Η-1，2,3-三唑-1-基】丙酸向〇·5 5 g(2.2 mmol)來自以上步驟第三丁氧基_丄_ 曱基-2-側氧基乙基）_丨1|_1，2,3_三唑-4-曱酸甲酯於;311111無水1，4 一惡烧中之搜;拌溶液添加2.7 mL(ll mmol)於1，4 -二 °惡烧中之4.0 Μ氣化氫溶液。將所得混合物攪拌丨小時且隨後热發至乾以得到呈奶白色固體狀之標題化合物（〇 4〇 g， 93%) » *HNMR (500 MHz, CD3OD) δ: 8.67 (s, 1H), 5.60 (q, J=7.3Hz，lH)，3.90(s，3H)，1.88(d，J=7.3Hz，3H”LC-MS: m/z (ES) 200 (MH)+。步驟B(i-73) : 2_[5-(甲氧基羰基）qn-1,2,3-三唑-1-基]丙酸向〇_40 g(l_6 mmol)來自以上步驟a之1-(2-第三丁氧基-1- 139023.doc 1378098 -甲酸甲酯於3 mL無甲基-2-側氧基乙基）111123_三唑5 炱1，4 一心、烷中之搜拌溶液添加2.7 mL(l 1 mm〇i)s 14_ 噁烷中之4.0 Μ氯化氫溶液。將所得混合物攪拌丨小時且後络發至乾以得到呈奶白色固體狀之標題化合物（〇 27呂 87%)。LC-MS: m/z (ES) 200 (MH)+。中間物74 2-[4-(胺基羰基）-iH-l，2,3-三唑-1-基】丙酸（ί·74)

使用與用以製備中間物5 2之彼程序相似之程序自市售丙醯胺及2-疊氮基丙酸第三丁酯製備2-[4-(胺基羰基）-lH-1，2,3-三唑-1-基]丙酸。WNMR (500 MHz，CD3OD) δ: 8.48 (s，1Η)，5.50 (q，J=7.3 Ηζ，1Η)，1.85 (d，J=7.3 Ηζ，3Η)。 LC-MS: m/z (ES) 185 (MH)+。中間物75及76 2-(4-甲基-1H-1，2,3-三唑-1-基）丙酸（i-75)及 2-(5-甲基-1H-1，2,3-三吐-1-基）丙酸（卜76)

步驟A : 2-【4-甲基-5-(三甲基發烧基）-1Η-1，2,3-三嗤-1-基J 丙酸甲醋及甲基_4·(三甲基梦烧基三唑-1-基】丙酸甲酯 139023.doc -133· 1378098 向1.9 g(17 mmo丨）三f基（丙·卜炔」基）矽烷於2〇 n^甲苯中之溶液添加2.3 g(l8 mmol)2_疊氮基丙酸。將反應混合物在120°C下加熱3小時。將混合物冷卻且在減壓下蒸發浴劑。殘餘物藉由矽膠管柱層析法、以己烷中之5 25〇/〇丙晒之梯度溶離純化以產生呈2_卜f基_5 (三f基矽烷基）-1Η-1，2,3-三唑_丨·基]丙酸甲酯與2[5•甲基_4(三甲基矽烧基）-111-1，2,3-二<1坐-1_基]丙酸甲酯之約6:1混合物形式之払題化 5 物且為無色油（3.〇 g，8〇0/。）。m/z 242 (MH)+ 〇步驟B · 2-(4-甲基-ih-1,2,3-三唾-l·基）丙酸甲酯及2_(5_甲基-1Η-1，2,3-三峻-1-基）丙酸甲酯向1.3 g(5.4 mmol)來自以上步驟八之2_[4·甲基_5 (三甲基矽烷基）-1Η-1，2,3-三唑-1·基]丙酸曱酯及2_[5•曱基_4 (三曱基矽院基）-1Η-1，2,3-二唑-1-基]丙酸甲酯於2 mL THF中之溶液添加2.2 mL(54 mmol)之50%氫氟酸於水中之溶液。於至溫下攪拌所得混合物丨5分鐘且隨後在真空中蒸發至乾。接著，添加8 mL之2.〇 N氨於曱醇中之溶液且隨後再次將混合物在真空中蒸發至乾。將混合物溶解於二氣甲烷中，過濾且隨後在真空中蒸發以得到呈2_(4-甲基·ih i，2,3三唑小基）丙酸甲酯與2_(5_甲基·旧_12,3_三唑小基）丙酸曱酯之約8:1混合物形式之標題化合物。混合物為透明膠 (0.67 g，730/〇)。LC-MS: m/z (ES) 170 (MH)+。步驟C : 2-(4-甲基-mus·三唑基）丙酸及2(5甲基_ 1H-1，2,3-三唑-1·基）丙酸 139023.doc -134·

向0·76 g(4.5 mmol)來自以上步驟B之2-(4-曱基-1H-1，2,3-三唑-1-基）丙酸甲酯及2-(5-甲基-1H-1，2,3-三唑-1-基）丙酸曱酯於12 mL乙醇中之溶液添加13.5 mL(13.5 mmol) 1.0 Μ氫氧化經水溶液》將所得混合物在環境溫度下攪拌1小時。將反應混合物以2 Ν鹽酸溶液酸化直至達成pH 值4且隨後蒸發以移除所有揮發物。水相以乙酸乙酯萃取且合併之有機物以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且蒸發至乾以付到呈2-(4 -甲基-1H-1，2,3-三。坐-1-基）丙酸與2-(5 -曱基-1H-1，2,3-二嗤-1-基）丙酸之約8:1混合物形式之標題化合物。混合物為奶白色固體（〇·5〇 g，58%p LC-MS: m/z (ES) 156 (MH)+ 〇中間物77 (2S，5R)-2-(4-{【(2S)-2-胺基丙鏟基】胺基}苄基）_5_[(r)羥基 (苯基）甲基】吡洛咬-1-甲酸第三丁酯（i_77)

步驟A : 基}丙醯基）胺基】苄基卜S-【(R)-羥基（苯基）甲基】啦洛啶-1-甲酸第三丁酯向1.85 g(4.82 mm〇l)之中間物卜13&於2〇 mL二氯曱烷中之溶液添加1.0 mL(7.24 mmol)三乙胺，接著添加167 g (5.07 mmol)市售[(1S)_2_氣曱基_2_側氧基乙基]胺基甲酸9H-第-9-基酯。將所得混合物攪拌15小時隨後在真空中 139023.doc •135- 1378098 移除所有揮發物。殘餘物以水稀釋且隨後以乙酸乙酯萃取。合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且蒸發以得到粗標題化合物（3.2 g)，其未進一步純化即使用。 LC-MS: m/z (ES) 676 (MH)+。步驟B : (2S，SR)-2-(4-{[(2S)-2-胺基丙醯基】胺基}苄基）·5_ [(R)·羥基（苯基）甲基】哺咯啶小甲酸第三丁酯向 3.15 g(4_65 mmol)來自以上步驟Α之（2S，5R)-2-{4- [((2S)-2-{[(9H-苐-9-基氧基）幾基]胺基}丙醯基）胺基]节基}-5-[(1〇-羥基（苯基）甲基]D比咯啶j-曱酸第三丁酯於3 mL無水THF中之攪拌溶液添加〇 396 g(4 65 mmol)哌咬。在氮氣氛下將所得混合物加熱至35芄歷時2小時隨後在真空中移除所有揮發物以得到粗標題化合物，其未進一步純化即使用。LC-MS: m/z (ES) 454 (MH)+。中間物78 (2R，5S)-2-【(R)-羥基（笨基）甲基】-5-(4-{【（2S)-2-(甲基胺基）丙醢基]胺基}苄基）吼咯啶4 •甲酸第三丁酯（i_78) w kl *

步雜 A: (2S，5R)-2_[4.({(2S)-2-[[(9H-薙 _9•基氧基）羰基】（甲基）胺基】丙醯基}胺基）节基】-5-[(R)_羥基（苯基）甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在氮氣氛下向0.192 g(〇.5 mmol)中間物17於4 mL二氣甲烧中之授拌溶液添加〇 203 g(0.625 mmol)市售（2S)-2_ 139023.doc •136- 1378098 [[(9H-苐-9-基氧基）幾基](甲基）胺基]丙酸，接著添加〇〇14 g(0.10 mmol)l_羥基_7_氮雜苯并三唑及〇 144 g(〇 75〇 mmol)l-(3-二曱基胺基丙基）_3—乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。將所得懸浮液在環境溫度下攪拌24小時。將粗反應混合物以2 5 mL二氣曱烧稀釋’以水洗蘇隨後經硫酸鎂乾燥。將混合物過遽在真空中蒸發至乾以得到粗標題化合物，其未進一步純化即使用。LC-MS: m/z (ES) 690 (MH)+。步驟 B. (2R，5S)-2-[(R)-幾基（苯基）甲基]_5_(4_{[(2s)_2_ (曱基胺基）丙酿基】胺基}节基丨哺洛咬甲酸第三丁酯向 0.410 g(0.593 mmol)來自以上步驟 A 之（2S5R)_2_[4_ ({(2S)-2-[[(9H-第-9-基氧基）羰基](曱基）胺基]丙醯基）胺基）苄基]-5-[(R)-羥基（吡啶-3-基）曱基]。比咯啶_丨_曱酸第三丁酯於3 mL無水THF中之溶液添加0152 g(178 mm〇i)哌咬。將所得混•合物在環境溫度下攪拌24小時且隨後以25 mL二氯曱烧豨釋。將混合物以鹽水洗務隨後經硫酸鎂乾燥。將混合物過遽且在真空中蒸發至乾以得到粗標題化合物，其未進一步純化即使用。LC-MS: m/z (ES) 468 (MH)+。中間物79 (211，58)-2-[(11)-羥基（笨基）甲基]_5_(4_{[(21^)-2-(甲基胺基）丙酿基】胺基}苄基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（卜79) 139023.doc •137· 1378098

遵循對於合成中間物78所概述之程序自中間物M3a及市 ./ 售（2R)-2-[[(9H-第-9-基氧基）羰基](曱基）胺基]丙酸製備中，-間物 79 » LC-MS: m/z (ES) 468 (MH)+。中間物80a及80b (2S，5R)-2-(4-胺基-3-溴苄基）-5-[(R)-羥基（苯基）曱基]咕咯啶-1-曱酸第三丁酯（i-80a); (2R，SR)-2-(4-胺基-3-溴苄基）-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]咕咯 ^ 咬-1-甲酸第三丁醋（i-80b)

步驟A : (2S，5R)-2-(4-胺基-3-溴苄基）-5-[(R)-經基（苯基）甲基】吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（i-80a)

向（2S，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)·羥基（苯基）甲基]0比咯啶-1-甲酸第三丁酯（中間物 i-13a，214 mg，0.559 mmol)s DMF(2 mL)中之經由冰/水浴冷卻至〇。〇之溶液添加 NBS( 100 mg ’ 0.559 mmol)且所得溶液攪拌ι5小時，使其溫至室溫。將混合物在真空下蒸發且殘餘物經由Biotage 139023.doc •138· (S; 1378098

Horizon MPLC、使用己烧中之0-40%乙酸乙®旨之梯度純化以得到呈白色發泡體狀之產物（232 mg，90%)。LC-MS: m/z (ES) 483 (MNa) +及485 (MNa+2)+。步驟B : (2R，5R)-2-(4-胺基-3-溴苄基）-5-[(R)-羥基（苯基）甲基】吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（i-80b)

向（2R，5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-羥基（苯基）曱基]。比咯啶-1-曱酸第三丁酯（中間物i-13b，108 mg，0.282 mmol)於 DMF(1.5 mL)中之經由冰/水浴冷卻至〇°C之溶液添加 NBS(5 5.3 mg，0.311 mmol)且所得溶液攪拌3小時，使其溫至室溫。將混合物在真空下蒸發且殘餘物經由Biotage Horizon MPLC、使用己烧中之0-40%乙酸乙酯之梯度純化以得到呈白色發泡體狀之產物（83_9 mg，64%)。LC-MS: m/z (ES) 483 (MNa) +及 485 (MNa+2)+。生物檢定：以下活體外檢定適合於篩檢具有選擇性β3激動劑活性之化合物：功能檢定：響應於配位體之cAMP產生係根據Barton等人（1991，Agonist-induced desensitization of D2 dopamine receptors in human Y-79 retinoblastoma cells. Mol. Pharmacol. v3229:650-658)作如下改進來進行量測。使用均質時差式螢光共振能量傳遞免疫檢定（LANCETM，Perkin Elmer)根據製造商之說明來量測CAMP產生。在3天續代培 139023.doc •139- ί % } 1378098 養之後採集以經選殖之β-腎上腺素受體（βΐ、β2或β3)穩定轉染之申國倉鼠卵巢（CHO)細胞》細胞之採集以無酶分解培養基（Enzyme-free Dissociation Media)(Specialty Media) 進行。隨後計數細胞且將其再懸浮於含有磷酸二酯酶抑制劑（IBMX ’ 0,6 mM)之檢定緩衝液（補充有5 mM HEPES、 0.1% BSA之亨克氏平衡鹽溶液）中。藉由將6 μι之6,000個細胞與6 μί Alexa Fluo標記之cAMP抗體（LANCETM套組）混合、隨後將其添加至含有12 pL化合物（於檢定緩衝液中稀釋至2倍最終濃度）之檢定孔中來啟始反應。反應在室溫下進行3 0分鐘且藉由添加24 pL偵測緩衝液（LANCETM套組）終止。隨後將檢定板在室溫下培育1小時且在Perkin Elmer Envision讀取器或等效物上量測時差式螢光。藉由將螢光量與cAMP標準曲線比較來確定未知之cAMP量。對於所有三種受體使用非選擇性、完全激動劑β腎上腺素配位體異丙基腎上腺素（iSOproteren〇l)以測定最大刺激。人類β3腎上腺素受體（AR)選擇性配位體（s)-N-[4-[2-[[2-經基-3-(4-羥基苯氧基）丙基]胺基]乙基卜笨基]·4_碘苯磺醯胺在所有檢定中用作對照。異丙基腎上腺素在檢定中經滴定衣終>辰度為10-10 Ν1至10-5 Μ且選擇性配位體 [[2-經基-3-(4-羥基苯氡基）丙基]胺基]乙基]苯基]_4_碘笨續酿胺對於β3受體經滴定濃度為ι〇_10 μ至10-5 M。未知配位體在檢定中對於所有3種腎上腺素受體亞型經滴定最終濃度為1(Μ0 Μ至10-5 Μ以測定ECm。ECm定義為得到化合物自身最大活化50%之化合物濃度。資料使用Microsoft 139023.doc -140- 1378098

Excel及Graphpad Prism或内部開發之資料分析套裝軟體分 - 析。。檢定.亦對於β 1及β2受體來檢定化合物以測定選擇 ••性。所有結合檢枝用由重组表現β_2受體之CH〇細胞所製備之膜進行。使細胞在分裂後生長3 4天；附著之細胞以PBS洗滌且隨後胞溶於冰上1 值7 2)中歷時 _ 丨〇刀鐘。到擦燒瓶以移除細胞且隨後使用鐵氟龍/玻璃均 φ 化器來均化細胞。藉由在4它下在38,000xg下離心15分鐘收集膜。成團之膜以丨毫克蛋白質/毫升之濃度再懸浮於 TME 緩衝液（5G mM THs，pH值7 4，5 福 Μα，2 祕 EDTA)中。可製備大批量的膜，等分且儲存於_7〇它下長達一年而無效能損失。藉由在最終體積2〇〇叫之含有〇 ι% BSA之TME緩衝液中共同培育膜（2_5 μ蛋白質）、經放射性^標記之示縱物丨25Ι-氰基叫卜朵洛爾（丨ZYcyanopindoio”

(I-CYP，45 PM)、200 pg2WGA_pVT SpA 珠粒（GE • Healthcare)及最終濃度介於1〇_1〇河至⑺巧m之間的測試化合物來執行結合檢定。在室溫下伴以震盪培育檢定板】小時且隨後置於Perkin Elmer Trilux閃爍計數器中。在計數之則，使板在黑暗中靜置於Trilux計數器中約1〇小時。使用Graphpad Prism軟體或内部開發之資料分析套件、採用標準4參數非線性回歸分析來分析資料。iCm定義為能夠抑制經放射性標記之示蹤物（^Κγρ)之結合之5〇%的化合物濃度。化合物對於β3受體之選擇性可藉由計算比率（iC5〇 βΐ AR，β2 AR)/(EC5。β3 AR)來確定。 139023.doc • 141 · 1378098 實例1 2-(2-胺基-1，3-噻唑-4-基）-N-[4-({(5R)-[(R)-羥基（苯基）曱基]«Λ咯啶基}甲基）苯基]6醯胺

步驟A : (5R)-2-(4-{[(2-胺基-1，3-噻唑-4-基）乙醯基]胺基} 苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）甲基】吡咯啶甲酸第三丁酯

向 10 mg(5:l 順 / 反混合物，0.02 mmol)(5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]η比咯啶-1-曱酸第三丁酯（i-3)及（2-胺基-1，3-噻唑-4-基）乙酸 (3.1 8 mg，0.02 mmol)於0.5 mL無水DMF中之溶液添加 HO At 於 DMF 中之 0.5 Μ溶液（0.04 mL，0.02 mmol)，接著添加 EDC(5.8 mg，0.03 mmol)及 DIEA(3·5 μί > 0.02 mmol)。在氮氣氛下在室溫下授拌所得混合物16小時。將混合物以水洗滌且以二氣曱烷萃取（2x2 mL)。合併有機物’經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物藉由製備型TLC板（500 μΜ)、以二氣曱烷中之5% MeOH溶離純化以得到產物（10.3 mg，81%)。m/z (ES) 637 (MH)+, 659 (MNa)+。步驟 B : 2-(2-胺基-1,3-噻唑-4-基）-N-[4-({(5R)-[(R)羥基 139023.doc •142· 1378098 (苯基）甲基]吼咯啶基}甲基}苯基}乙醯胺

向 7 mg(0_01 mmol)(5R)-2-(4-{[(2-胺基-1,3-噻唑-4-基）乙酿基]胺基}苄基}-5-[(R)-{[第三丁基（二曱基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯於0.20 mL甲醇中之溶液（來自步驟A)添加0.20 mL濃HC1且反應混合物在室溫下授拌1小時。與曱笨共彿（2倍）以移除水。將殘餘物溶解於乙腈 /水/MeOH(9:l:l)中且經 Gilson HPLC、以 0-50%梯度之乙腈/水（含〇_〇5% TFA緩衝液）溶離純化。將含有產物之》谷離份合併’凉結且冷；東乾燥以得到白色發泡體（3 3

mg，71%)。m/z (ES) 423 (MH)+。（約 5:1 混合物 ^HNMR (500 MHz, CD3OD) δ: 7.56 (br d, J=8.2 Hz, 2H), 7.44 (d, 7.8 Hz, 2H), 7.39 (t, J=7.6 Hz, 2H) 7.35-7.32 (m, 0.8H) 7.32-7.29 (m，0.2H 次要異構體），7.26 (d，J=8_0 Hz，1.7H)， 7.14 (d，J=8.1 Hz，0.3H次要異構體）6.67及 6.66 (br s， 0-2/0.8H，總計 1H)，4.72 (d，J=8.5 Hz，1H)，3.80-3.70 (m, 4H) 3.14 (dd, J=6.1, 13.8 Hz, 1H), 2.95 (dd, J=9.1, 13.8 Hz, 1H)，2.08-2.00 (m，1H)，1.86-1.74 (m，3H) 〇使用如上所述之生物學檢定’實例1之人類p3功能活性經測定在1至1 0 nM之間。實例2 2-(2-胺基-1，3-噻唑-4-基）-1^-[4-({(28,51^)-[(11)-羥基（苯基） 139023.doc -143- 1378098 甲基1吼咯啶基}甲基）苯基】乙醯胺

步琢A : (2S，5R)-2-(4-{【（2-胺基-1，3-嗟唑-4·基）乙醯基]胺基}苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二甲基）發烷基]氧基}(苯基）甲基】吡咯啶-1-甲酸第三丁酯

根據實例1步驟A之程序自（2S,5R)-2-(4-胺基苄基）-5-[(R)-{[第三丁基（二曱基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]。比咯啶_ 1-曱酸第三丁酯（i-4a)及（2-胺基-1，3-噻唑-4-基）乙酸製備標題化合物。粗產物藉由製備型TLC板、以二氯曱烷中之5% MeOH溶離純化以得到產物（4.1 mg，21%)。m/z (ES) 637 (MH)+, 659 (MNa)+。步驟B : 2-(2-胺基-1,3-噻唑-4-基）-N-丨4-({(2S，5R)-[(R)羥基 (苯基）甲基]nt咯啶基}甲基）苯基]乙醯胺

根據實例1步驟B之程序自4 mg之（2 8,5尺)-2-(4-{[(2-胺基-1,3-噻唑-4-基）乙醯基]胺基}苄基}-5-[(R)-{[第三丁基 (二甲基）矽烷基]氧基}(苯基）曱基]"th咯啶-1-甲酸第三丁醋 (來自步驟A)製備標題化合物。粗產物經Gilson HPLC、以 139023.doc •144· 1378098 0-50%梯度之乙腈/水（含0.05% TFA緩衝液）溶離純化。將含有產物之溶離份合併，凍結且冷凍乾燥以得到白色發泡體（3.3 mg，71%)。m/z (ES) 423 (ΜΗ)+。^NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 7.55 (br d, J=8.2 Hz, 2H), 7.44 (d, 7.8 Hz, 2H)，7.39 (t，J=7.6 Hz，2H)，7.35-7.33 (m，1H)，7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.65 (br s,lH), 4.72 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.80-3.72 (m, 4H) 3.14 (dd, J=6.1, 13.8 Hz, 1H), 2.96 (dd, J=9.1, 13.8 Hz, 1H), 2.07-2.00 (m，1H), 1.85-1.73 (m，3H)。使用如上所述之生物學檢定，實例2之人類β3功能活性經測定在1至1 0 ηΜ之間。實例3 2-胺基-N-[4-([((2S，5R)-5-[(R)-羥基（苯基）甲基】》比咯啶-2-基）甲基）苯基】-5,6-二氫-4H-環戊[α ][1，3】噻唑-4-甲酿胺

步驟A :第三丁基-(2S,5R)-2-(4-[({2-[(第三丁氧基羰基）胺基]-5,6-二氫-4H-環戊【α】[1，3】噻唑-4-基}羰基）胺基】节基}-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]吼咯啶-1-甲酸酯

向 220 mg(0.58 mmol)(2S，5R)-2-(4-胺基 > 基）-5-[(R)-j^i 基（笨基）曱基]。比咯啶-1-甲酸第三丁酷（M3a)及164 mg 139023.doc -145 - 1378098 (0·5 8 mmol)2-[(第三丁氧基羰基）胺基]-5,6-二氫-4H-環戊 [α][1，3]噻唑-4-曱酸（i-8)於無水DMF(5 mL)中之溶液添加 EDC(165 mg，0.86 mmL)、HOBt(132 mg，0.86 mmol)及休尼格鹼（0.3 mL，1.7 mmol)且所得混合物在室溫下攪拌隔夜。傾入水（50 mL)中且以EtOAc萃取（3x30 mL)，合併之 EtOAc 層以水（2x50 mL)、飽和 NaCl(25 mL)洗滌，經 MgS04乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由MPLC(Biotage Horizon : FLASH 25+M)、使用溶離劑：100% 己烧（100 mL)、己烷中之0至35% EtOAc(750 mL)梯度、隨後己烷中之35% EtOAc(600 mL)純化。非對映異構體藉由AD管柱對掌性HPLC(溶離劑：庚烷中之25% IPA)分離，第一溶離異構體（134 mg，36%)及第二溶離異構體（126 mg，34%)皆呈白色發泡體形式。步驟B : 2-胺基-N-[4-{((2S，5R)-5-[(R)-羥基（苯基）曱基]"比咯啶-2-基）甲基）苯基]-5,6-二氫-4H-環戊[α ][1,3] 噻唑-4-曱醯胺

向 126 mg(0.19 mmol)第三丁基-(2S，5R)-2-(4[({2-[(第三丁氧基羰基）胺基]-5,6-二氫-4H-環戊[〇〇[1，3]噻唑-4-基}羰基）胺基]苄基）-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]。比咯啶-1-曱酸酯（來自步驟A，第二溶離異構體）於DCM(3 mL)中之溶液添加三氟乙酸（3.0 mL，38 mmol)且所得混合物在室溫下攪拌4小 1378098 時。混合物經蒸發且穿過SCX濾芯、以甲醇中之2 Μ NH3 溶離以釋放鹼。產物藉由PREP-TLC 2χ[2〇χ20 cmxlOOO微米]、使用溶離劑：DCM+1% NH4OH中之15% MeOH純化且產物冷凍乾燥以得到呈白色蓬鬆固體狀之標題化合物 (65 mg，75%)。m/z (ES) 449 (MH)+。^NMR (500 MHz， DMSO-d6) δ: 10.00 (S, 1H), 7.51 (d, J=8.2, 2H), 7.30 (m, 4H), 7.21 (t, J=6.9, 1H), 7.12 (d, J=8.2, 2H), 6.86 (s, 1H), 4.23 (d，J=7.3, 1H)，3.78 (m，1H)，3.21 (m，1H)，3.10 (m, 1H) 2.78 (m, 1H), 2.66 (m, 2H), 2.57 (m, 2H), 2.49 (m, 1H), 1.59 (m, 1H)，1.40 (m，1H)，1.39 (m，2H)。來自步驟A之產物[第一溶離異構體](134 mg，〇 2()7 mmol)以相似方式去保護以得到呈白色蓬鬆固體狀之標題化合物（44 mg ’ 48%)。m/z (ES) 449 (MH)+。使用如上所述之生物學檢定，實例3之人類β3功能活性經測定少於1 ηΜ。實例4-10 使用與如上所述之彼等程序相似之程序，自合適的起如物質製備實例4-10。 ° 使用如上所述之生物學檢定，測定每一化合物之人麵^ 功能活性且將其展示於下表中。 139023.doc -147- 表4

實例號 R MW MS (ES) (MH)+ 人類卩3結合 4 468.56 469.50 1-10 NM 5 νό 418.49 419.24 1-10 NM 6 432.53 433.50 1-10 NM 7 468.56 469.52 1-10NM 8 418.50 419.48 1-10NM 9 418.50 419.48 1-10 NM 10 417.51 418.50 1-10NM 1378098 實例11 N-(4-[((2S，5R)-5-((R)-羥基（苯基）甲基]啦咯啶-2-基）甲基）苯基）-2-(3-甲基-1H-1，2,4-三唑-1-基）丙醯胺

將 i-13a(2.00 g，5.23 mmol)、2-(3-甲基-11^-1,2,4-三唑-1-基）丙酸i-56(1.00 g，5.23 mmol)、HOAt(1.307 mL， 0.784 mmol)及 EDC(2.005 g，10.46 mmol)於 DMF.(20 mL)中 139023.doc -148- 1378098 之混合物在室溫下攪拌10分鐘。將反應混合物以碳酸氫鈉 ' 水溶液淬熄且以Et0Ac萃取。粗產物藉由管柱層析法、以 • · DCM中之〇·3% Me〇H(1〇% ΝΗ4〇η)純化。在蒸發之後，產 .·物進一步藉电對掌性HPLC(AD管柱，30% ΙΡΑ/庚烷）純化以付到純的b 〇 C保遵之中間物，將其溶解於最少體積之二噁烷中且添加二噁烷中之4 M HC1。在室溫下2小時之後，將反應混合物在減壓下濃縮以得到標題化合物之HCi鹽。 .驗性逆相HPLC(H2〇中之0.1% NH4OH、MeCN)產生標題化合物之所需游離鹼。^-NMR (500 MHz，CD3OD) δ 8.51 (s， 1 Η), 7.49 (d, J=13 Hz, 2 Η) 7.35-7.29 (m, 4 Η), 7.26-7.20 (m，4 H)，5.20 (q，J=7.5 Hz, 1 Η), 4.20 (d，J=7.5 Hz，1 Η), 3.27-3.22 (m, 2 H), 2.80-2.72 (m, 2 H), 2.34 (s, 3 H), 1.82 (d，J=7.5 Hz，3 H)，1.79-173 (m，1 H)，1.52-1.48 (m, 3 H)。 C24H29N502之ESI-MS計算值：精確質量：419.23，實驗值 420.35 ° I 使用如上所述之生物學檢定，實例11之人類β3功能活性經測定在1至1 0 ηΜ之間。實例12及13 (3S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]咐•咯啶-2-基} 甲基）苯基]-5-側氧基-1,2,3,5-四氫吲哚嗪-3-甲醯胺（實例 12)及（311)-1^-[4-({(28,51〇-5-[(1〇-羥基（苯基）曱基】》比咯啶-2-基}甲基]笨基]-5-側氧基-1，2,3,5-四氫吲哚嗪-3-甲酿胺 (實例13) 139023.doc •149· 1378098

步驟 A : (2R，SS)-2-[(R)-羥基（苯基）甲基]-5-[4-({([(3S)-5-側氧基-1，2,3,5-四氫吲哚嗪-3-基]羰基}胺基）苄基] 吡咯啶-1-曱酸第三丁酯（異構體1)及（2R，5S)-2-[(R)-羥基（苯基）甲基】-5-[4-({[(3R)-5-側氧基-1，2,3,5-四氫吲哚嗪-3-基】羰基}胺基）苄基】吡咯咬-1-甲酸第三丁酯（異構體2)

OH B〇C 異搆體在氮氣氛下向0.610 g( 1.60 mmol)中間物i_i3a及0.300 g (1.67 mm〇i)中間物i_46於3·2 mL無水N，N-二曱基甲醯胺中之溶液添加0.033 g(0.24 mmol)l-羥基-7-氮雜笨并三唑，接著添加0.336 g(1.75 mmol)l-(3-二曱基胺基丙基）_3·乙基石反化_亞胺鹽酸鹽。將所得懸浮液在環境溫度下授拌3 〇分鐘，以水淬熄，且以乙酸乙酯萃取（3 χ丨〇 mL)。合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析法、以己烷中之乙酸乙酯之Μ — 100%梯度溶離純化以得到呈97:3比率之非對映異構體混合物形式之標題化合物。兩種非對映異構體藉由對掌性 HPLC、採用Daicel CHIRALpAK@ ad@管柱（溶離劑：庚烷中之40% IPA)分離。第一，交雜乐，合離非對映異構體命名為異構體 2^^^H(〇.〇2〇g>23〇/〇)〇Lc.MS； ^ (es) M42 (MH)+。第二溶離非對映異構體命名為異構體!且為無色固 139023.doc

-150. 1378098 體（0.650 g ’ 75%)。LC-MS: m/z (ES) 544.2 (MH)+。杀驟 B(實例 12) : (3S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]咐•咯啶-2-基}甲基）苯基】·5_側氧基· 1，2,3,5-四氫吲哚嗪-3-甲醯胺

在氮氣氛下向來自以上步驟Α之0_500 g(〇.920 mmol)異構體1於2 mL異丙醇中之溶液添加4.0 mL之無水氣化氫於 1,4- 一 °惡烧中之4·0 Μ溶液。將反應混合物搜拌丨小時且隨後在真空中蒸發至乾。粗反應混合物藉由逆相Hplc(tmc Pro-Pac C18;乙腈中之0.01%三氟乙酸/水中之〇〇1%三氟乙酸之0-75%梯度）純化。將純溶離份冷凍乾燥隔夜隨後溶解於10 mL氣仿及4 mL碳酸氫鹽飽和水溶液之混合物中。將該兩相混合物劇烈授拌1 〇分鐘’隨後分離各層。水相以氯仿萃取（3x10 mL)且合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中蒸發以得到呈白色固體狀之標題化合物（貫例 12)(0.39 g，95%)。h-NMR (500 MHz， CD3OD) δ 7.89 (s, 1 Η), 7.54 (dd, J=8.8, 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d，J=8.2 Hz，2H)，7.34-7.29 (m，4H)，7.26-7.23 (m，1H), 7.20 (d5 J=8.2 Hz, 2H), 6.38-3.36 (m, 2H), 5.24 (dd, J = 9.4, 2.8 Hz, 1H), 4.20 (d5 J=7.8 Hz, 1H), 3.35-3.23 (m, 3H), 3.19-3.12 (m, 1H), 2.82-2.71 (m, 2H), 2.60-2.51 (m, 1H), 2.37-2.32 (m, 1H), 1.79-1.72 (m, 1H), 1.52-1.43 (m, 3H) 〇 139023.doc • 151 -

1378098 LC-MS: m/z (ES) 444.0 (MH)+ 〇步驟 B(實例 13) : 甲基】啦咯啶-2-基}甲基）苯基】-5-側氧基-1,2,3,5-四氫吲哚嗓-3-甲醯胺

相同程序用於將來自以上步驟A之異構體2去保護以得到呈單一非對映異構體形式之標題化合物（實例丨3)。LC-MS: m/z (ES) 444.0 (MH)+。使用如上所述之生物學檢定’實例丨2及丨3之人類β3功能活性經測定分別為在1至丨〇 ηΜ之間及少於1 ηΜ。實例14 (6S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]0比咯啶 _2_基} 甲基）苯基]_4_側氧基-4,6,7,8-四氫吼各并[ι，2-α]嘴咬·6-甲酿胺

步驟A : QRJSM-KR)-經基（苯基）甲基】_5.[4_({[(6S)_4_側氧基- 4,6,7,8-四氫吼嘻并[l，2-a]嘴咬-6-基]幾基）胺基】苄基}吡咯啶-1-甲酸第三丁酯

在〇 C 下向 i-13a(21.4 g ’ 55.9 mmol)於N，N-二曱基甲酿 139023.doc -152- 胺（100 ml)中之溶液添加[(6S)_4_側氧基_4,6,7,8_四氫吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-曱酸（i_44，u」g，61 5 mmol)，接著添加1-羥基苯并三唑（7.55 g, 55 9 mm〇1)、N (3_二曱基胺基丙基）N -乙基故化一亞胺鹽酸鹽（16.1 g，84.0 mmol)及队>^二異丙基乙胺（29.2011，168〇1111〇1)(>將反應混合物自〇C攪拌至環境溫度歷時2小時❶添加水（6〇〇 mL)且將其以二氣甲燒萃取（600 mlx2)。合併之有機層經Na2S04乾燥。在移除揮發物之後’殘餘物藉由使用Bi〇tage Horizon® system(0-5%隨後5%甲醇（含ι〇%氨）/二氯曱烷混合物）純化以得到含有8%次要非對映異構體之標題化合物。將其進一步藉由超臨界流體層析（對掌性AS管柱，40%曱醇）純化以得到呈淺黃色固體狀之標題化合物（22.0 g，72%)。 NMR (CDC13)： δ 9.61 (s, 1H), 7.93 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.35-7.28 (m, 5H), 7.13 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.40 (d, J=6.7 Hz, 1H), 5.36 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.12-4.04 (m, 2H), 3.46 (m,lH), 3.15-3.06 (m, 2H), 2.91 (dd, J=13.1, 9.0 Hz, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.38 (m, 1H)，1.71-1.49 (m，13H)。LC-MS 567.4 (M+23)。步驟B : (6S)-N-【4-({(2S，5R)-5-[(R)-羥基（苯基）甲基]。比咯咬-2-基}甲基）苯基]-4-側氧基-4,6,7,8-四氫0比洛并 [1，2-α】喊咬-6-甲醯胺

139023.doc -153 - ^來自步驟A之中間物（2 5〇知 g 4.59 mmol)於二氯甲烷 (40 ml)中之溶液添一鼠乙鲅（15 ml)。將反應混合物在環境溫度下攪拌〗5小時。在移除揮發物之後’添加飽和 NaHC〇3以使得pH值為8 9。隨後將混合物以二氯甲烧萃取。合併之有機層經Na2SQ4乾燥。在濃縮之後，自甲醇/ 乙腈，σ BB得到呈白色固體狀之標題化合物（m g，的％)。】HNMR(DMS〇_d6):5lG4Ms，iH) 79i(d j=67Hz， 1H), 7.49 (d, J=8.3 Hz, 2H)S 7.32-7.26 (m, 4H), 7.21 (m,

1H)，7.15 (d，J=8.4 Hz，2H)，6.23 (d，J=6.7 Hz, 1H)，5.11 (dd, J=9.6, 2.9 Hz, 1H), 5.10 (br, 1H), 4.21 (d, J=7.1 Hz, 1H), 3.20-3.00 (m) 4H)) 2.66-2.51 (m, 3H), 2.16 (m, 1H),

1.57 (m, 1H)，1.38 (m，1H)，1.29-1.23 (m，2H)。LC-MS 445.3 (M+l) 〇使用如上所述之生物學檢定，實例14之人類β3功能活性經測定在11至1〇〇 ηΜ之間。實例15-41 使用與如上所述之彼等程序相似之程序，自合適的起始物質製備以下實例。藉由對掌性HPLC使用如下所述之方法分離非對映異構體。方法A :藉由HPLC使用ChiralPAK AD管柱、以IpA、乙腈或乙醇於庚烷或己烷中之溶劑混合物溶離而分離之非對映異構體，第一溶離異構體標記為異構體 1且第二溶離標記為異構體2。方法B :藉由HPLC使用ChiralCEL OD管柱、以1PA、乙猜 139023.doc -154- 1378098 或乙醇於庚烷或己烷中之溶劑混合物溶離而分離之非對映異構體，第一溶離異構體標記為異構體 1且第二溶離標記為異構體2。方法C: 藉由HPLC使用Pirkle (R，R)-WHELK-0管柱、以 IPA、乙腈或乙醇於庚烷或己烷中之溶劑混合物溶離而分離之非對映異構體，第一溶離異構體標記為異構體1且第二溶離標記為異構體2。方法D:藉由 HPLC使用 Daicel CHIRALCEL® OJ® 管柱、以IPA或乙醇於庚烷或己烷中之溶劑混合物溶離而分離之非對映異構體，第一溶離異構體標記為異構體1且第二溶離標記為異構體2。方法E:藉由 HPLC使用 Daicel CHIRALPAK® AS® 管柱、以IPA或乙醇於庚烷或己烷中之溶劑混合物而分離之非對映異構體，第一溶離異構體標記為異構體1且第二溶離標記為異構體2。使用如上所述之生物學檢定，測定每一化合物之人類β 3 功能活性且展示於下表中。表5

實例號 R MW MS (ES) (MH)+ 對掌性管柱人類p3功能 15 νη2 0 Ν=\ SX JL/S 436.58 437.50 A 小於 1 NM 139023.doc 155- 1378098

16 nh2 Ο N=\ 436.58 437.80 A 小於1 NM 17 異搆體1 448.59 449.50 A 1-10NM 18 \fTNH2 異搆體2 448.59 449.50 A 小於 1 NM 19 異構體1 447.60 448.60 A 1-10 NM 20 \ytCH3 異構體2 447.60 448.60 A 小於 1 NM 21 433.39 434.40 由對掌性起始物質製得小於 1 NM 22 異構體1 432.53 433.50 A 1-10 NM 23 異構體2 432.53 433.50 A 1-10NM 24 異搆體1 432.53 433.50 B 1-10NM 25 ΛΪ3 異構體2 432.53 433.50 B 小於 1NM 26 -vb 異構體1 432.53 433.50 B 1-10NM 27 Λ-b 異構體2 432.53 433.50 B 1-10NM 139023.doc • 156- 1378098

28 異構體1 446.55 447.53 Ε 1-10 NM 29 異搆體2 446.55 447.53 Ε 1-10NM 30 異搆體1 482.53 483.50 D 1-10NM 31 從異構體2 482.53 483.50 D 小於1 NM 32 Ο HN^ 異構體1 405.50 406.46 C 1-10 NM 33 異構體2 405.50 406.46 C 1-10 NM 34 O HN-^s 異構體1 419.52 420.46 C 1-10 NM 35 O HN-^i 異構體2 419.52 420.46 C 1-10 NM 36 0 N^\ 異構體1 405.50 406.46 A 1-10NM 37 Ο Ν^Λ 異構體2 405.50 406.46 A 1-10 NM 38 Ο Ν=\ 異構體1 404.32 405.50 A 1-10NM 39 Ο 又異構體2 404.52 405.50 A 1-10 NM 40 異構體1 431.54 432.50 A 1-10 NM 139023.doc -157- 1378098

雖然本發明已參考其某些特定實施例來描述及說明但是热習此項技術者應理解在不背離本發明之精神及範脅的的情況下可進行各種變化、修改及替換。例如，由於接受任一適應症治療之哺乳動物對於用於本發明之如上所指示

之活性劑的反應存在變化，使得除本文中所闡明之特定劑量以外的有效劑量可能為適用的。同樣，所觀察到之特定藥理反應可根據且依賴於所選之特定活性化合物或是否存在當前醫藥載劑以及所使用之調配物類型而改變，且根據本發明之目標及實務而涵蓋在結果方面之該等預期變化或差異。因此希望本發明由下文之巾請專利範圍之範嘴界定且該等申請專利範圍在合理範圍内廣泛地解釋。

•158. 139023.doc (S)

Claims

1378098 第098111302號專利申請案中文申請專利範圍替換本(101 1°\年\月代曰修正本七、申請專利範圍：或其立體鹽：一種式la化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，異構體，或其立體異構體之醫藥學上可接受之

其中

η為0、1、2、3、4或 5; Υ係選自由以下組成之群： (1) Cl-C5烷二基、c2-c5烯二基及C2-C5炔二基，其中烷一基、烯一基及炔二基各經一至三個獨立地選自鹵素、-ORa及-S(0)p-Cl_C3烷基之基團未取代或取代，其中 P為 0 ' 1或2， ' ⑺_(CRaRa)j-Q-(CRaRa)k，其中如為獨立地選自〇、^ 及2之整數， _ (3) —鍵，及 (4)伸苯基’未經取代或經―至三個獨立地選自Ri之基團取代； Α Ζ係選自由以下組成之群： (1) 苯基， (2) 具有1至4個選自氣、护曰乳硫及氮之雜原子之5或6員雜 (3) 苯環稠合於C5-C10碳環， (4) 具有1至4個選自氧、访々他広， 9氧硫及氮之雜原子之5或ό員雜環 139023-1010119.doc IJ78U98 稠合於具有1至4個選環，及氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜硫及氮之雜原子之5或6員雜環 (5)具有1至4個選自氧祸合於C5-C1Q碳環； R1係選自由以下組成之群： (1) C丨-C5淀基，未嗤、·二取代或經1至5個鹵素原子取代， (2) C3-C6環烷基， (3) 鹵素， (4) 硝基， (5) 氰基， (6) -C(0)Ra， ⑺-C(0)2Ra， (8) -C(0)NRaRb，及 (9) -QRb ； R3係選自由以下組成之群： (1) c〗-c：6烷基，未經取代或經丨至5個獨立地選自齒素、-〇Ra、-C02Ra及-C0NRaRb之基團取代， (2) -(CH2)t-笨基或-(CHA-O-笨基，其中【為〇、丄、2、 3、4或5，且其中該笨基各未經取代或經丨至3個獨立地選自齒素' 未經取代或經個自素原子取代之Ci_C5烷基、及-ORa之基團取代， (3) 側氧基（οχο)， (4) 硫基（thioxo)， (5) 鹵素， 139023-1010119.doc 1378098 (6) -CN， (7) 〇3-(：6環烷基， (8) -(CH2)t-雜環或-(CH2)t-0-雜環，其中鸿〇、i ' 2、 3、4或5，且其中該雜環各為具有丨至4個選自氧硫及氮之雜原子之5或6員環，且其中該雜環未經取代或與苯環單邊稠合（ortho-fused)或不稠合，且未經取代或經 3個獨立地選自齒素、未經取代或經丨至5個南素原子取代之C!-C5烧基、及-〇Ra之基團取代， (9) -〇Ra， (10) -C(0)ORa， (11) -C(0)Ra， (12) -C(0)NRaRb， (12) -NRaRb， (13) -NRaC(0)Rb， (14) -NRaC(0)0Rb，及 (15) -NRaC(0)NRaRb ; ㈣選自由氫及未經取代或經⑴個自素原子取代之^ C6烧基組成之群； Rb係選自由以下組成之群： ⑴氫， (2) C丨-C 6烧基，經1至5遵ή cb IV 了 z l 主3個選自由以下組成之群之基團未取代或取代： (a) 經基， (b) 鹵素， 139023-1010H9.doc 1378098 (c) -C02Ra , (d) -S(〇)p-CVC3烷基，其中 P為〇、1或2 ; (e) 〇3-(：8環院基， (f) CrCe烷氧基，未經取代或經1至5個鹵素取代，及 (g) 苯基’未經取代或經1至5個獨立地選自由鹵素、确基、-NRaRa、三氟曱基、三氟曱氧基、c丨·C5烷基及-〇113組成之群之基團取代， (3) C3-C8環烷基，及 (4) 苯基，未經取代或經1至5個選自由以下組成之群之基團取代： (a) 鹵素， (b) 硝基， (c) -NRaRa， ⑷-OH， (e) C^-C：6烷氧基，未經取代或經1至5個鹵素取代， (f) -S^p-C^-Q燒基’其中p為〇、以之；及 (g) C〗-C6烷基，未經取代或經至多5個選自羥基、鹵素、三氟甲基、氰基、-CC^Ra、C3_C8環烷基及· 之基團取代； Re係選自由以下組成之群： (1) Z，未經取代或經多達5個選自鹵素、三氟甲基、氰基、C1-C5烷基及q-c：5烷氧基之基團取代及 (2) CVC6烷基；及 139023-10I0119.doc Q係選自由以下組成之群： (1) -N(Ra)., (2) -〇_，及 (3) ·8(0)ρ-，其中 p為〇、_。 -CH(CH3)-或一如。月求項1之化合物，其中Υ為亞曱基鍵。 3.如凊求項1之化合物’其中Z係選自由以下組成之群： (1) 具有一個氮原子及〇至3個獨立地選自氮、氧及硫之其他雜原子之5員雜環， (2) 具有1、2或3個氮原子，或丨個氮原子及一個氧或硫原子之6員雜環， (3) 具有1至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環揭合於具有1至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環，及 (4)具有1至4個選自氧、硫及氮之雜原子之5或6員雜環稠合於C5-C10碳環。 4.如請求項3之化合物，其中Z係選自由以下組成之群：噻唑基、噁唑基、吡啶基、二氫吡啶基、1，2,4-三唑基、 1，2,3-三唑基、四唑基、嘧啶基、二氫嘧啶基、四氫嘧啶基、吼嗪基、二氫β比嗪基、噠嗪基、二氫噠嗪基、"比咯啶基、咪唑基、吡唑基、丨，2,4-噁二唑基、丨，2,5-11 惡二

139023-1010H9.doc -5- 1378098 C〇、o〇、Hig〇及H00 ;其中r為 1 或 2 〇. 5. 如β求項1之化合物，其中R3係選自由以下組成之群： (1) ο!-。烷基，未經取代或經鹵素或_〇Ra取代， (2) 側氧基， (3) 鹵素， (4) -〇Ra » (5) -C(0)NRaRa，及 (6) -NRaRa ; 其中Ra如請求項1中所定義。

6. -種式la化合物’或其醫藥學上可接受之鹽，或其立異構體’或其立體異構體之醫藥學上可接受之鹽：11

其中 η為0、1或2 ; 亞曱基、-CH(CH3)-及〜缝；

Υ係選自由以下組成之群：嗟唾基、°比咬基、二氣沘戈、二氫嘧啶基、噠嗪基、—

Ζ係選自由以下組成之群：基、1，2,4-三唑基、嘧咬基氫噠嗪基、吡唑基、〇[、、〇〇;及 s、 R3係選自由以下組成之群· (1)曱基， 139023-1010119.doc • 6 · 1378098 (2) 側氧基，及 (3) -NH2。 7. —種化合物，其係選自由以下組成之群：

139023-1010119.doc 1378098 139023-1010119.doc

1378098

或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥學上可接受之立體異構體，或其立體異構體之醫藥學上可接受之鹽。 8.如請求項7之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：

139023-1010119.doc 1378098

或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥學上可接受之立體 9. 10. 11. 12. 13. 14. 異構體，或其立體異構體之醫藥學上可接受之鹽。 —種醫藥組合物，其包含如請求項1之化合物及醫藥學上可接受之载劑。種如凊求項1之化合物的用途，其係用於製造供治療或預防β3腎上腺素受體活化所介導疾病或病症的藥物。如明求項10之用途，其中該疾病或病症係選自由（1)膀胱過動症（overactive bladder)、（2)尿失禁、（3)急迫性尿失禁及（4)尿急症（urinary urgency)組成之群。一種如請求項1之化合物及蕈毒鹼受體拮抗劑的用途，其係用於製造供治療或預防β3腎上腺素受體活化所介導疾病或病症的藥物。一種如請求項1之化合物及第二活性劑用於製造供治療或預防β3腎上腺素受體活化所介導疾病或病症的藥物的用途。如請求項12或13之用途’其中該疾病或病症係選自由膀耽過動症、（2)尿失禁、（3)急迫性尿失禁及（4)尿急症組成之群。 339023-1010119.doc •10- 1,378098 ：15.如請求項8之化合物，其係下列化學式：

• 16.如請求項8之化合物，其係下列化學式：

139023-1010119.doc 11 -