TWI355946B - Proliposomal and liposomal compositions of poorly - Google Patents

Description

1355946 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或前 微脂體組成物，其包含在選自水互溶性溶劑或其混合物的 適當媒液中之一或更多種選自飽和及/或不飽和磷脂之膜 形成脂質；及一種選自固醇化合物之膜安定劑；且該組成 物可隨意含有一或更多種的經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷脂 ，且進一步可隨意含有醫藥上可接受的賦形劑例如抗氧化 劑、緩衝劑、酸化劑等等。 本發明進一步係有關該濃縮物或前微脂體組成物用於 在病患的床邊立即地製備小於1 0 0奈米之粒徑的水溶性差 之藥物和化合物的微脂體組成物之用途，該微脂體組成物 給藥至需要其之病患不僅簡單、方便、有成本效益和安全 且顯示改良的安定性和較高藥物滯留。 【先前技術】 發明背景 對藥物和化合物（特別是水溶性差之藥物和化合物）的 遞送系統有不斷增加的興趣和要求，該遞送系統不只安定 、具有最佳載藥、較佳於奈米粒子形式且其被簡單、方便 和安全給藥至需要其之病患。 在該等遞送系統當中，自從1 960年代早期以來在硏究 努力世界中，當第一次觀察到脂囊泡可封裝某些化學化合 物時，前微脂體和微脂體組成物已保持和繼續保持在重要 .m -5- I355946 位置。自從那時以後和特別是在最近幾年內，由於藥物和 化合物儲存在脂囊泡中之封裝壽命的目的以及由於透過該 等封裝藥物之脂囊泡的給藥不僅改良或增強該等藥物的治 療效力及它們的安全性、毒性、藥物動力學、藥效學、生 物利用率、目標作用、和其他相關性質或模式（profiles) 的目的，硏究努力己聚集很大的動力。此在一些技術的商 業化中已達到頂點且然後引進至一些微脂體遞送系統之市 場，其提供超越包含該等藥物和化合物之習知遞送系統的 極佳優點。

Sears在美國專利第4,426,3 3 0號和美國專利第 4,534,8 99號中第一個揭示一種合成磷脂和其於製備水溶 性差之藥物（例如太平洋紫杉醇（Paclitaxel)和六甲基三聚 氰胺）的微脂體組成物之用途，以及化妝品用途之水不溶 性芳香油。 然而，除了在美國專利第4,42 6,3 3 0號和美國專利第 4,534,899號中的Sears方法已達成技藝的進步之外，有關 該方法在水溶性差之藥物例如太平洋紫杉醇遞送至血流之 效能上只有非常少的知識。

Bally等人在美國專利第5,077,056號中揭示一種使用 跨膜電位將可離子化抗腫瘤劑封裝於微脂體中至高如99% 程度的方法以及揭示使用該跨膜電位減少可離子化藥物從 微脂體釋放之速率。該方法包括建立橫跨微脂體雙層的 pH梯度以使欲封裝在微脂體內之可離子化藥物在外部緩 衝劑中是不帶電的和在水性內部是帶電的，允許藥物以中

-6- 1355946 性形式快速越過微脂體雙層且由於帶電形式轉變而截留在 微脂體的水內部。 然而，Bally等人揭示於美國專利第5,077,056號中的 方法之主要缺點或限制爲在損失質子梯度之後，藥物從有 效塡充的微脂體洩漏。

Barenholz等人在美國專利第4,797,285號和美國專利 第4,898,73 5號中揭示一種蒽環糖苷類（多柔比星 (Doxorubicin)，以約2.5的莫耳百分比存在於組成物中）之 微脂體組成物’進一步包含20-50莫耳百分比的膽固醇； 10-40莫耳百分比的帶負電磷脂；於約50 μΜ濃度之水溶 性tihydroxamic螯合劑’即鐵草錶（ferri〇xamine);和於 至少0.2莫耳百分比濃度之α-生育酚，後二種成分當作自 由基捕獲劑。 然而，Barenholz等人在美國專利第4,797,285號和美 國專利第4,89 8,73 5號中所揭示之在微脂體中的截留藥物 ，最好不大於85-90 %，且留下很多需要。

Ogawa等人在美國專利第5,094,854號中揭示利用膜 磷脂類（其之醯基基團爲飽和的且具有40。(：和45 °C之相轉 變溫度）之微脂體組成物，其中具有高於溫血動物之體液 1.2至2.5倍的滲透壓力之含藥物的溶液被截留。 然而’從Ogawa等人在美國專利第5,094,854號中所 給予之授權實驗細節，關於抗癌藥物（順鈷（Cisplatin )(CDDP))之釋放速率，可知道藥物於39艺的釋放速率幾乎 沒有什麼改變，然而於42 °C釋放速率從30改變至95 %。 1355946

Woodle等人在美國專利第5,013,556號中揭示藥物之 微脂體組成物，其由1 -20之間的莫耳百分比的用聚烷基酸 衍生之兩親媒性脂質組成，其被報告在血流中具有顯著循 環時間。 似乎在所觀察的血流中增加之循環時間，可能是因爲 利用用聚乙二醇（PEG)衍生之磷脂類，一種在Woodle等 人在美國專利第5,0 1 3,5 56號中的揭示之前的已知現象。

Huang等人在 WO 92/02208中揭示一種蒽環糖苷類（ 多柔比星）之冷凍乾燥微脂體組成物，其被報告在長期儲 存時爲安定抗多柔比星分解。該微脂體組成物之特徵在於 存在天然磷脂類、膽固醇、帶負電之脂質、和增積劑 (bulking agent)，具有從5-10重量％之藥物：脂質比率和 小於10毫克/毫升之多柔比星濃度。 然而，發現多柔比星在Huang等人於WO 92/022 08中 所揭示之微脂體組成物中的效力二週內降低10-15%，諳示 冷凍乾燥組成物應該在其用給藥至病患的適當液體復原製 備之後很快地被利用。

Rahman等人在美國專利第5,424,073號和美國專利第 5,648,090號中揭示一種抗癌藥物（太平洋紫杉醇）或紫杉醇 (Taxol))之微脂體封裝組成物，其被報告具有超越其他太 平洋紫杉醇或紫杉醇的已知組成物之優點在於該微脂體遞 送系統幫助避免藥物的可溶性問題以及類過敏反應和心臟 毒性；導致改良之藥物的安定性和治療效力；以快速 (bolus)或短灌注而非延長（24時）灌注提供藥物之給藥；有 -8- 1355946 助於調節癌細胞之多藥抗藥性等等。

Rahman等人在美國專利第5,424,073號和美國專利第 5,648,090號中所揭示之微脂體組成物基本質上包含—種 ’其中紫杉醇封裝在由負、正和中性微脂體構成之脂質媒 液，具有紫杉醇之約9.5至10的莫耳百分比的濃度。該等 紫杉醇封裝之微脂體被報告爲藉由首先混合紫杉醇在適當 非極性或極性溶劑中的溶液與脂質形成材料在具有極性之 溶劑中的溶液，接著從混合物除去溶劑以產生一種脂質和 藥物之薄乾膜’將鹽水溶液加至其以形成微脂體。其中所 述之實例1至4宣稱紫杉醇在該微脂體中之封裝效率爲大於 95%。其進一步宣稱該微脂體之等分試樣在室溫和冷凍溫 下分別安定四天和一個月。 而且’ Rahman等人在美國專利第5,424,073號和美國 專利第5,648,090號中宣稱以上述方法（其唯—不同爲對於 微脂體之再懸浮液係用7 %海藻糖-鹽水溶液替換鹽水溶液 製備）之紫杉醇微脂體於-2〇°C和-80 °C分別安定一個月和 五個月，用微脂體的間歇融解，導致一種推論：用海藻糖 作爲賦形劑之紫杉醇微脂體可爲儲存冷凍微脂體的有效方 法，在該冷凍微脂體的融解之後，其可進一步有效地用於 臨床和治療的應用。

Rahman等人在美國專利第5,424,073號和美國專利第 5，6 4 8，0 9 0號中所揭示之微脂體組成物的最初限制在於其 製備方法已知爲微脂體通常在鹽水溶液中具有非常少的存 活率且非常快速地分解。此，事實上已被Fang等人發現 -9- 1355946 ，如 Chem.Pharm.Bull.， 1997,45(9),1504-1509 中所報告， 其陳述微脂體與膽固醇在用生理食鹽水培養之後進行水解 。第二，雖然該微脂體在海藻糖存在下顯示一些安定性， 然而，葡二糖（diglucose sugar)，不應該忘記所達成之安 定性不可能沒有將微脂體冷凍至從-2 0 °C和-8 0 °C之間的 溫度，更不必說，增加他們的製造成本和因此’限制他 的商業應用。

Staubinger等人在美國專利第5,4 1 5,869號中揭示紫杉 烷類（taxane，包括紫杉醇）之微脂體組成物，其包含將該 紫杉烷封裝於由一或更多種帶負電的磷脂類和一或更多種 兩性離子也就是不帶電的磷脂類之混合物所組成的脂質媒 液。Staubinger等人進一步將可使用之帶負電的磷脂類對 兩性離子磷脂類之比率界定在1 : 9至7 : 3範圍內，且紫杉 烷在微脂體組成物中之濃度係在1.5至8.0莫耳百分比之量 〇

Staubinger等人在美國專利第5,415,869號中進一步宣 稱如此所製得之紫杉烷類的微脂體組成物係於具有0.025 至1 0微米大小之粒子的形式和該組成物實質上沒有任何的 紫杉烷結晶形成。 而且，Staubinger等人在美國專利第5,415,869號中宣 稱由於利用於特定比率之帶負電和兩性離子磷脂類的組合 物不但幫助防止微脂體的聚集或融合且也防止結晶的形成 ，其提供組成物之安全靜脈內給藥以及提供較長時段之藥 物循環。 -10- 1355946 而，無疑地，313111?丨1^61'等人在美國專利第5,415,869 號中所揭示之微脂體組成物在與微脂體技術有關的技藝中 構成實質上的進步，然而，表面上，技術遭遭藥物也就是 紫杉烷（taxane)類在目標微脂體組成物中之負載僅在i.5至 8.0莫耳百分比的範圍內（其對任何的藥物是極低的）之固有 缺點或限制。此外，所使用之紫杉烷：脂質的莫耳比爲約 1: 33，再次指示差的載藥。其次，與該等宣稱相反，說 明書中沒有說明該微脂體已延長循環生命。最後，目標微 脂體組成物在其製備之後被冷凍乾燥，其要求特別的製造 設備，其爲昂貴且傾向於唯一選擇性製造商的當事人。簡 而言之，Staubinger等人所揭示之微脂體組成物不引起任 何的商業應用，因此致使該等方法和組成物只當作學術興 趣。

Durr等人在美國專利第5,670,53 6號中揭示一種抗癌 藥物（多西紫杉醇（Docetaxel)或衍生自多西紫杉醇之紫杉 院類（tax oid))的微脂體組成物，其包含至少一種不飽和磷 脂和至少一種帶負電的磷脂，其條件爲該不飽和及帶負電 的磷脂類彼此不同。

Durr等人在美國專利第5,670,536號中進一步敘述一 種多西紫杉醇或衍生自多西紫杉醇之紫杉烷類的目標微脂 體組成物之製備方法，該方法基本上包含將藥物和各個脂 質溶解在非毒性有機溶劑（較佳醇）中，接著在惰性蒙氣下 且在減壓下蒸發溶劑以產生無溶劑凝膠或糖漿狀膏’進一 步將水或〇. 9 %氯化鈉水溶液加至其中且均質化而獲得一種 -11 - 1355946 精細分散液。分散液中加入低溫保護劑’意欲用於防止於 有效藥物之結晶及/或用於調整溶液之滲性和最後，分散 '液進行無菌過濾和冷凍乾燥或冷凍而提供多西紫杉醇或衍 * 生自多西紫杉醇之紫杉烷類的目標微脂體組成物。

Durr等人在美國專利第5,670,536號中提及如此獲得 之微脂體組成物於20 °C下保持澄清八週以上且具有從47至 71奈米之粒徑。其進一步宣稱組成物具有合倂該等有效成 分或藥物而沒有任何結晶或沈澱發生之優點。 最好，Durr等人在美國專利第5,670,5 3 6號中之揭示 可視爲 Staubinger等人在美國專利第5,4 1 5,8 69號中所報 告之工作的延長，就考慮防止效成分或藥物的結晶或沈澱 而言，唯一的不同爲前者以不飽和磷脂代替兩性離子磷脂 。而，Durr等人之揭示談及較佳安定性和較高含量之有 效成分或藥物，然而，至少在第一計數上，所報告之安定 性似乎不如Staubinger等人所揭示者。此外，Durr等人 之揭示對於藥物封裝在脂質媒液中之量隻字不提。此外， Durr等人之方法’如同Staubinger等人，也包括微脂體 之冷凍乾燥或冷凍的步驟，如前所述，其要求特別的製造 設備，其爲昂貴且傾向於唯一選擇性製造商的當事人。最 後’ Durr等人之微脂體組成物在鹽水溶液中可具有非常 小的存活率和可非常快速地分解，如Fang等人的發現， 如報告於 Chem.Pharm.Bull.，1997,45(9)，1504-1509*。

Leigh等人在美國專利第5,0〇4,61 1號和美國專利第 5,141，674號中揭示一種生物有效化合物之前微脂體組成 -12- 1355946 物，其包含至少一種膜脂質；至少一種非毒性水互溶性有 機液體，其爲脂質之溶劑；和最多至40重量％之水，且脂 質對有機液體之重量比例爲從40: 1至1: 20。所揭示之適 當膜脂質爲天然卵磷脂，例如大豆卵磷脂和卵黃卵磷脂以 及合成卵磷脂，例如二-軟脂醯基磷酯醯膽鹼（chloline)或 其他例如醣脂類、長鏈二烷基二甲基銨化合物、二-牛脂 銨化合物等等。這些前微脂體組成物也被報告爲微脂體之 前身和因此Leigh等人也揭示該前微脂體組成物用於該生 物有效化合物的微脂體組成物之製備的應用性，該方法包 含混合前微脂體組成物與水。較進一步如此形成之陳述微 脂體具有在0.1至2.5微米範圍內之直徑和包含每克脂質至 少2毫升之截留水性液體且進一步特徵在於在水分散液中 存在可檢測量之水互溶性有機液體。而且，一般陳述如此 形成之微脂體組成物以包含在揮發性液體推進劑中之該微 脂體組成物的霧劑有利地提供。 而，Leigh等人在美國專利第5,004,611號和美國專利 第5,141，674號中敎示生物有效化合物的前微脂體組成物 在藉由混合前者與水製備該生物有效化合物之微脂體組成 物中的應用性，然而，從其中所述之表-I，非常顯然地該 方法導致相當差的該生物有效化合物之截留，且截留效率 在低如22%至只高如45%之範圍，按照任何的標準其爲極 低的且不値得任何的商業應用。

Hager等人在美國專利第號5,5 5 6,63 7和美國專利第 5,741,5 17號中以另一變體，提供一種醫藥上有效物質之 -13- 1355946 含水微脂體系統，其包含至少一種磷脂電荷載體，較佳帶 負電的磷脂，除了至少一種未帶電磷脂之外，而且其被宣 稱具有高安定性且不傾向於形成沈積物。 而，Hager等人在美國專利第5,556,637號和美國專利 第5，741，517號中所揭示之醫藥上有效物質包含多柔比星 鹽酸鹽、戊院脒（Pentamidine)、戊院脒鹽、迷迭香酸 (Rosemarinic acid)、迷迭香酸之鹽、喹啉黃（Quinoline Yellow)和右旋葡聚醣硫酸鹽，然而，從上述物質的微脂 體系統之授權描述，如從在其中所給予的例子顯示，顯然 該系統之封裝效率或能力不是相當滿意的，對於例如多柔 比星鹽酸鹽之封裝，報告只有7 8 %，而在唾啉黃之情形中 ，微脂體-結合之有效成分只組成1 .38毫克/毫升，而發現 非微脂體-結合之有效成分組成約3.2毫克/毫升。

Fisher等人在美國專利第6,132，763號中揭示用於遞送 藥物和用於磁共振（MR)造影之對比劑的微脂體組成物， 其中微脂體之外表面被共價連接到聚乙二醇（PEG)部分。 該具有共價鍵結至外表面上的磷脂類之PEG部分的微脂 體被報告延長微脂體的循環壽命而沒有瓦解脂質雙層。共 價鍵結之PEG-微脂體進一步藉由用PEG之反應衍生物（例 如2,2,2-三氟乙烷磺醯基（三氟乙烷磺醯基（t re syl))單甲氧 基PEG)處理微脂體而製得。

Fisher等人在美國專利第6,1 3 2,763號中所揭示之用於 製備PEG基化之微脂體的方法爲高敏感且爲了達成所要 的結果，其製備中需要優秀的技術和技巧。

J -14- 1355946 偏離上述方法，Mayhew等人在美國專利第5,939,567 號和美國專利第6,118,011號揭示紫杉院衍生物之製備， 其中疏水性部連接至紫杉烷骨之位置的2’-或7-位置或二 者’且結果發現該改質之紫杉院衍生物通常安定該衍生物 與脂質（包括微脂體脂質）之結合。也提供在其醫藥上可接 受的介質中的包含脂質載體之該改質紫杉烷的組成物。疏 水性有機部分包括飽和或不飽和的脂族或支鏈脂肪酸、多 元醇、神經脂質等等。 而，從Mayhew等人在美國專利第5,93 9,567號和美國 專利第6，118,011號中所提供之數據，顯然，疏水性部分 引進紫杉烷骨架中極大地改良封裝在微脂體之藥物的百分 比，例如7-己醯基太平洋紫杉醇之約90%截留，和2’-己醯 基太平洋紫杉醇之約70%截留，與太平洋紫杉醇之約20% 截留比較，然而，從商業的觀點來看即使90%之藥物截留 不是令人滿意的或適當的，因爲其他在2’-或7-位置沒有 任何疏水性部分之太平洋紫杉醇的微脂體組成物達成 > 9 5 %之藥物截留。

Kim等人在美國專利第5,720,976號中揭示熱敏性微脂 體組成物，其包含用N-異丙基丙烯醯胺、十八基丙烯酸 酯、或丙烯酸之共聚塗佈之藥物截留微脂體，其藉由控制 共聚物中的丙烯酸含量在可變溫度下釋放藥物。 使用Kim等人在美國專利第5,720,976號中所揭示之 微脂體組成物的缺點係有關以丙烯酸爲基質之共聚物的使 用，該共聚物在醫藥製劑中之安全性是可疑的。 -15- 1355946

Needham等人在美國專利第6,200,598號和美國專利 第6,726,925 B1號中揭示活性劑之熱敏性微脂體組成物， 其包含具有從39°C至45 °C之相轉變溫度的凝膠相脂質雙層 膜和一或更多種脫脂脂質（lysolipid)，其特徵在於具有醯 基團，其中該包含在凝膠相雙層膜中的界面活性劑之量在 雙層的相轉變溫度下係足以增加活性劑的百分比釋放，與 缺乏界面活性劑所發生者比較。此外，界面活性劑的存在 被報告爲安定並非去安定薄膜，特別地在脂質雙層的熔化 之前。

Needham等人在美國專利第6,200,598號和美國專利 第6,726,92 5 B1號中宣稱如此形成之微脂體具有從約50奈 米至5 00奈米之直徑的大小。此外，從其中所揭示之6-羧 基螢光素（CF)的釋藥模式（profile)可知合倂小如10莫耳％ 之作爲界面活性劑的脫脂脂質（lysolipid)，單軟脂醯基磷 脂醯膽（MPCC)導致CF釋放之幾乎四倍增加，與該等其中 缺乏MPCC者比較》然而，自活性劑之截留的觀點，在微 脂體內，需要更多，如果舉多柔比星的截留爲例，其中該 藥物之截留不大於8 0 %。 3^111>丨1^61*等人在美國專利第6,348,2 1 5 81號中提供 一種安定存在於微脂體系統中之紫杉烷（特別是紫杉醇）的 方法，其係藉由將該包含紫杉烷之微脂體曝露於一種改良 紫杉烷的物理安定性之分子。其中被報告安定紫杉烷之分 子爲一種甘油-水混合物，其中存在於混合物中之該甘油 作爲該分子或其他例如CH3、乙酸和乙酐。從槪述在其中 -16- 1355946 表1和2中之結果，可知當使用不同比例之甘油-水時，通 常太平洋紫杉醇顯示最多到6小時的安定性。 而，313111^1^61：等人在美國專利第6,34 8,2 1 5 81號中 之揭示通常關注在微脂體組成物中之截留紫杉烷的改良， 然而，隻字未提藥物截留在微脂體中之程度。

Webb等人在美國專利申請案第2005/0 1 1 8249 A1號中 揭示生物活性劑之微脂體組成物，其包含至少一種形成囊 泡之脂質和至少一種防止聚集成份，其特徵在於該組成物 包含小於20莫耳百分比的膽固醇和微脂體內水性介質具有 500 mOsm/kg或更小之滲透壓。

Fisher等人在美國專利第6, 1 3 2,763號中所揭示之方法 爲高敏感性和目標微脂體的成功製備大半視所獲得之正確 pH梯度而定，其製備要求優秀技術和技巧。

Tardi等人在美國申請案第2005/0 1 1 8250 A1號中揭示 生物活性劑之微脂體組成物，其由至少一種形成囊泡之脂 質；至少1莫耳百分比的包含兩性離子部分之帶負電脂質（ 其爲一種防止聚集劑且其也包含小於20莫耳百分比的膽固 醇）組成。

Tardi等人在美國申請案第2005/0118250 A1號中所揭 示之方法的限制爲所製備之微脂體係以冷凍乾燥粉末或冷 凍儲存且進一步需要低溫保護劑存在，其整體上增加該微 脂體的製造成本，因此使其在商業上不是特別地吸引人。

Boni等人在美國申請案第2003/0224039 A1號中揭示 一種將生物活性劑截留於微脂體或脂質複合物之方法，其 1355946 包含在低於至少一種脂質-乙醇溶液之脂質成份的相轉變 之溫度且較佳在溶液之表面上將脂質-乙醇溶液注入生物 活性劑之水或乙醇溶液。 然而，從Boni等人在美國申請案第2003/0224039 A1 號中之揭示不是很清楚依照其中所描述之方法，生物活性 劑截留在微脂體中之程度。

MacLachlan等人在美國申請案第2004/0 1 42025 A1號 中揭示用於製備隨意包含治療劑的脂囊泡之方法和裝置， 該方法典型地包含首先將一種水溶液提供於貯存器，其與 有機脂質溶液以流體溝通，隨意地在第二個貯存器中包含 治療劑和混合水溶液與有機脂質溶液，其中該有機脂質溶 液進行連續逐步驟稀釋而產生微脂體。

MacLachlan等人在美國申請案第2004/01 42025 A1號 中所揭示之方法爲敏感且複雜的並且爲了製備具有所要特 性之微脂體需要重要的監督。

Hoarau等人在美國申請案第2005/02 1 43 7 8 A1號中揭 示隱形（stealth)脂質奈米膠囊，其基本上由下列組成：脂 質核心’其爲液體或半液體；包含至少一種疏水性界面活 性劑和至少一種親脂性界面活性劑之外脂質殼層，其性質 上爲脂質；和至少一種聚乙二醇（PEG)之兩親衍生物，其 之PEG成分的莫耳質量大於或等於2〇〇〇克/莫耳，且該 PEG基化之兩親衍生物賦予奈米膠囊隱形觀點，依次允許 所運送之分子和有效成分以溶解或分散形式的合倂和運送 -18- 1355946 隱形脂質奈米膠囊的製備方法，如H〇arail等人在美 國申請案第2005/02 1 43 78 A1號中所揭示，顯示爲高度敏 感及冗長乏味的且因此也要求製造方法之重要的監督且其 製造中需要優秀的技術和技巧。

Kozubek等人在WO 2005/072776 A2中揭示抗腫瘤劑 之微脂體調配物，將烷基酚的半合成多羥基衍生物合倂在 調配物中，其導致至> 90%之一致（tune)的有效物質的高 封裝效率。 然而，Kozubek等人在WO 2005/072776 A2中所揭示 之製備目標微脂體調配物的方法包括二階段冷凍乾燥及/ 或冷凍方法，其不只增加產造成本且也需要安裝昂貴冷凍 乾燥器的資本投資，其爲選擇性製造商的當事人。

Bhamidlpati在美國申請案第號2006/003 4908 A1揭示 一種大規模製造微脂體組成物之方法，其包含將脂質部分 和在三級-丁醇中之有效成分加至水溶液中和於從2 0 °C至 40 °C之溫度下混合該混合物而形成大（bulk)微脂體製劑， 其可藉由大小分級或減少、溶劑的除去、藉由膜過濾的減 菌、冷涑乾燥或其他方法進一步處理。 與該等在該大微脂體製劑之技藝中已知且實用者比較 ’不清楚Bhamidipati在美國申請案第2006/0034908 A1號 中所揭示之方法的特質爲何。 £以61^-?111§等人在美國專利第6,5 96,3 05 81號中揭 、示一種製備具有所要平均粒徑之微脂體群的方法，其包含 形成一種形成囊泡之脂質在包含水互溶性有機溶劑和水之

i S -19- 1355946 單相溶劑系統中的混合物，微脂體之平均粒徑的控制係藉 由調整溶劑在該溶劑系統中之初濃度達成。 在此再次，與該等在該大微脂體製劑之技藝中已知且 實用者比較，不清楚Edgerly-Plug等人在美國專利第 6,596,305 B1號中所揭示之方法的特質何。 從前述可知’極顯然地雖然上述揭示已對微脂體技術 進行很大程度升級，然而，大部分（如果不是其全部）受到 一或更多種下列限制，該等限制使其成爲不具有製備生物 有效化合物且更特別地水溶性差之藥物和化合物之微脂體 藥物的遞送系統之一般應用。一些限制爲： i) 有效成分從微脂體組成物結晶或沈澱出來； ii) 不足的儲存安定性，因經過一段時間有效成分從微 脂體洩漏而加重； iii) 有效成分在脂質層中之差和不一致的截留或封裝 ，從低如20%改變至高如95% ; iv) 非常高的藥物：脂質比率，在很少的情形中高如1 ：33 ； v) 在多數例子中微脂體組成物之冷凍乾燥，其不但增 加製造成本而且而且需要冷凍乾燥器的安裝資本投資，其 爲唯一選擇性製造商的當事人； vi) 爲了儲存微脂體組成物在低如從_20t和-80。(：的溫 度下之冷凍’其也顯著增加製造成本以及該微脂體組成物 之運輸或裝運和儲存的成本； v i i)在組成物中可變比例的冷凍保護劑之利用，其也 -20- 1355946 增加製造成本； viii) 丙烯酸爲基質之共聚物的利用，該共聚物在許多 製劑（特別是醫藥製劑）中的安全性是可疑的； ix) 高敏感方法的利用，特別是用於PEG基化之微脂 體的製備，爲了達成所要結果，其需要優秀的技術和技巧 » X)非常重要和敏感的參數和控制（例如釋放有效成分 之微脂體內滲透壓、pH梯度、相轉變溫度、反應器和裝 置等等，以及微脂體組成物的安定性）之使用和依賴性， 在再次要求其製備中之重要的監督和優秀的技術； 用於復原微脂體之液體（特別是鹽水溶液）的使用，其傾向 於快速地降解微脂體，等等。 此外，大部分上述揭示主要地討論有效成分截留或封 裝在脂質層之程度以及其本身安定性，且所有揭示都隻字 未提及或沒有進行任何在給藥至病患時以有效成分之最大 效力提供有效成分給病患的嘗試。不需要過分強調已經報 告大部分（如果不是所有）的先前技藝微脂體組成物只具有 幾週的安定性，如果不幾天和該等組成物被製造、儲存、 裝運和給藥至病患之復原的時間、一些（如果不是顯著）的 截留或封裝有效成分之效力的損失，且結果病患沒得到接 受對於治療之更有效的藥物之最大利益。 對於本發明人，此爲同儕的硏究努力之重大省略和無 論任何已經進行用於製備微脂體之進步，應該已進行於復 原時間以其最佳效力提供有效成分和隨後給藥至在需要其

ί S -21 - 1355946 的病患之同樣重要性或進步。 因此，存在需要一種用於廣泛藥物（特別是水溶性差 之藥物和化合物）之主體的微脂體組成物，其沒有或實質 上沒有有關先前技藝組成物之限制，和而且，其可以成本 有效方式製造及而且，可非常方便地復原，較佳在病患的 床邊，藉此確定病患得到給藥藥物的最大效力之利益。 【發明內容】 本發明爲一種以此方向向前的步驟且提供一種水溶性 差之藥物和化合物的濃縮物或前微脂體組成物’其可以簡 單、方便和便宜的方式製造，而且，其具有高儲存安定性 。本發明進一步提供一種利用該水溶性差之藥物或化合物 的濃縮物或前微脂體組成物製備水溶性差之藥物和化合物 的微脂體組成物之方法，其爲簡單、方便的和最重要地’ 不像先前技藝方法，在病患的床邊用適當稀釋液復原而製 備和獲得，依次其可立刻以其最佳效力給藥至需要其之病 患。本發明的水溶性差之藥物和化合物的微脂體組成物之 特徵爲極大改良或優越之安定性和高如95%或>95%之載藥 發明目標 本發明一最大重要性和意義之目標爲提供高儲存安定 性的水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或前微脂體組成物 ’其依次可利用於在病患的床邊用適當稀釋液復原時立即 -22- 1355946 製備該水溶性差之藥物和化合物之微脂體組成物和其後可 以其最佳效力立即地給藥至需要水溶性差之藥物和化合物 的病患。 本發明之另一目標爲提供水溶性差之藥物和化合物的 濃縮物或前微脂體組成物，其無與先前技藝組成物有關之 限制。 本發明之另一目標爲提供水溶性差之藥物和化合物的 微脂體組成物，其無與先前技藝組成物有關之限制。 本發明之另一目標爲提供水溶性差之藥物和化合物的 微脂體組成物，其具有高安定性和高如95%或>95%之載藥 〇 本發明之另一目標爲提供一種製備水溶性差之藥物和 化合物的濃縮物或前微脂體.組成物之方法，其爲簡單、方 便和有成本效益的。 本發明之另一目標係提供一種製備水溶性差之藥物和 化合物的濃縮物或前微脂體組成物之方法，其不需要非常 重要和敏感的參數之使用和依賴性且再者其在其製備中不 要求重要的監督和優秀的技術及技藝。 本發明之另一目標係提供一種製備水溶性差之藥物和 化合物的微脂體組成物之方法，其爲簡單、方便和有成本 效益的。 本發明之另一目標係提供一種製備水溶性差之藥物和 化合物的微脂體組成物之方法，其不需要非常重要和敏感 的參數之使用和依賴性且再者其在其製備中不要求重要的 ΙΏ -23- 1355946 監督和優秀的技術及技藝。 本發明之另一目標係提供一種在病患的床邊用適當稀 釋液復原時立即地從包含該水溶性差之藥物和化合物的濃 縮物或前微脂體組成物製備水溶性差之藥物和化合物的微 脂體組成物之方法。 本發明之另一目標係提供一種製備水溶性差之藥物和 化合物的微脂體組成物之方法，其提供具有一致粒徑之微 脂體。 本發明之另一目標爲提供一種治療以水溶性差之藥物 和化合物能夠治療的病理狀況之方法，包含將該水溶性差 之藥物和化合物之微脂體組成物予以給藥，該組成物在需 要治療之病患的床邊用適當稀釋液復原該水溶性差之藥物 或化合物的濃縮物或前微脂體組成物時被立即地製備。 本發明之另一目標爲提供一種治療以水溶性差之藥物 和化合物能夠治療的病理狀況之方法，包含將該水溶性差 之藥物或化合物的微脂體組成物於其最適效力予以給藥， 該組成物在需要治療之病患的床邊用適當稀釋液復原該水 溶性差之藥物或化合物的濃縮物或前微脂體組成物時被立 即地製備。 本發明之另一目標爲以適當套組提供水溶性差之藥物 和化合物的濃縮物或前微脂體組成物，其方便用於在用適 當稀釋液復原時製備該水溶性差之藥物和化合物的微脂體 組成物。

-24- 1355946 發明槪述 在他們符合目標的努力中，首先，本發明人已發現可 以一種簡單、方便且有成本效益的方法製備水溶性差之藥 物的濃縮物或前微脂體組成物，其包含下列組成： a) —種作爲有效成分的水溶性差之藥物或化合物； b) —種膜形成脂質’其包含一或更多種之飽和磷脂或 不飽和磷脂或其混合物； c) —種膜安定劑，其選自固醇化合物； d) —種用於脂質之媒液，其選自水互溶性有機溶劑或 其混合物；及 e) 隨意包含一或更多種之經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷 脂；和進一步 f) 隨意包含醫藥賦形劑，例如抗氧化劑、緩衝劑、或 酸化劑； 且該有效成分以從9至14的莫耳百分比存在於濃縮物或組 成物中；該膜形成飽和磷脂以從40至50的莫耳百分比存在 於濃縮物或組成物中；該膜形成不飽和磷脂以從1 5至2 0的 莫耳百分比存在於濃縮物或組成物中；該膜安定固醇化合 物以從25至35的莫耳百分比存在於濃縮物或組成物中，和 隨意之抗氧化劑以從0.20至1.0的莫耳百分比存在於濃縮 物或組成物中；和進一步隨意經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷 脂以從2至5的莫耳百分比存在於濃縮物或組成物中，而且 ’其容易地進行大規模製造。濃縮物或組成物可一步隨意 地包含緩衝劑或酸化劑，於調整溶液之pH及/或組成物之 -25- 1355946 安定不可或缺的量。 如此獲得的水溶性差之藥物的濃縮物或前微脂體組成 物’不需要在冷凍乾燥或爲了儲存而冷凍於低溫溫度且同 «地’發現本發明之濃縮物或前微脂體組成物在周圍或冷 显度下具有增強之安定性。此具有顯著的優點在於其顯 著降低製造成本。 例如，發現一種抗癌藥物（多西紫杉醇於從9至1 1之莫 耳百分比）的濃縮物或前微脂體組成物，其包含於從43至 45之莫耳百分比的作爲飽和膜形成脂質之氫化大豆磷脂醯 膽鹼（HS PC)、於從16至18之莫耳百分比的作爲不飽和膜形 成脂質之雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)、和於從25至27之莫耳 百分比的作爲膜安定劑之膽固醇，在約1毫升作爲媒液之 乙醇中，在25±2°C和在60±5%RH安定至少6個月，且在多 西紫杉醇之分析中僅從初値9.5毫克/毫升降至9.1毫克/毫 升和進一步發現在2-8 °C同樣地安定至少6個月，且在多西 紫杉醇之分析中僅從初値9.5毫克/毫升降至9.1毫克/毫升 。觀察到六個月期間組成物保持澄清且沒有任何的看得見 的沈殿。 同樣地’發現一種抗癌藥物（多西紫杉醇於從9至1 1之 莫耳百分比）的濃縮物或前微脂體組成物，其包含於從4 3 至45之莫耳百分比的作爲飽和膜形成脂質之氫化大豆磷脂 醯膽鹼（HSPC)、於從16至18之莫耳百分比的作爲不飽和膜 形成脂質之雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)、和於從25至27之莫 耳百分比的作爲膜安'定劑之膽固醇、和於1.0之莫耳百分 -26- 1355946 比的作爲抗氧化劑之α-生育酚，於約1毫升作爲媒液之乙 醇中，在25±2°C和在60±5%RH安定至少6個月，且在多西 紫杉醇之分析中僅從初値9.2毫克/毫升降至8_7毫克/毫升 和進一步發現在2-8 °C同樣地安定至少6個月，且在多西紫 杉醇之分析中僅從初値9.2毫克/毫升降至8.8毫克/毫升。 觀察到六個月期間組成物保持澄清且沒有任何的看得見的 沈殿。 進一步地，發現一種抗癌藥物（多西紫杉醇於從9至1 1 之莫耳百分比）的濃縮物或前微脂體組成物，其包含於從 43至45之莫耳百分比的作爲飽和膜形成脂質之氫化大豆磷 脂醯膽鹼（HSPC)、於從16至18之莫耳百分比的作爲不飽和 膜形成脂質之雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)、和於從25至27之 莫耳百分比的作爲膜安定劑之膽固醇，在約1毫升作爲媒 液之包含乙醇和丙二醇於比率9 : 1的混合物中，在25±2°C 和在60±5%RH安定至少3個月，且在多西紫杉醇之分析中 從初値8.8毫克/毫升至8.9毫克/毫升而沒有降低且進一步 發現在2-8°C同樣地安定至少3個月，且在多西紫杉醇之分 析中從初値8.8毫克/毫升至8.8毫克/毫升而再度沒有降低 。觀察到三個月期間組成物保持澄清且沒有任何的看得見 的沈殿。 此外，發現一種抗癌藥物（多西紫杉醇於從9至11之莫 耳百分比）的濃縮物或前微脂體組成物，其包含於從43至 45之莫耳百分比的作爲飽和膜形成脂質之氫化大豆磷脂醯 膽鹼（HSPC)、於從16至18之莫耳百分比的作爲不飽和膜形 -27- 1355946 成脂質之雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)、和於從25至27之莫耳 百分比的作爲膜安定劑之膽固醇、於從2至3之莫耳百分比 的經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷脂（MPEG 2000-DSPE) ’在 約1毫升作爲媒液之乙醇中，在25±2°C和在60±5%RH安定 至少6個月，且在多西紫杉醇之分析中僅從初値9.1毫克/ 毫升降至8.7毫克/毫升和進一步發現同樣地在2-8 °C安定至 少6個月，且在多西紫杉醇之分析中僅從初値9.1毫克/毫 升降至8.7毫克/毫升。觀察到六個月期間組成物保持澄清 且沒有任何的看得見.的沈殿。 上述關於多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成物之安 定性的結果總結在給予於本說明書的後段部份之表-1中。 本發明濃縮物或前微脂體組成物提供之其他優點爲由 於它們的安定性（甚至在周圍或冷卻溫度下），該濃縮物或 組成物可儲存延長時段，而沒有顯著損失‘有效成分的效力 中且可在該儲存條件下以更方便的方式運輸，而且，其顯 著降低運輸以及儲存在倉庫中之成本。 水溶性差之藥物或化合物作爲有效成分的濃縮物或前 微脂體組成物，依次可藉由簡單和方便的方法製造，該方 法包含在媒液（其正常地爲一或更多種水互溶性有機溶劑） 中混合個別比例的有效成分、膜形成脂質、膜安定劑和隨 意經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷脂及/或醫藥上可接受的賦 形劑以獲得溶液，接著無菌過濾至用於儲存之容器中。顯 然地，該方法不要求按照任何的重要參數或操作和藉此廢 除任何重要的監督而且，不需要關於操作者的部份對於製

-28- 1355946 造目標濃縮物或前微脂體組成物之任何技術或技巧。 在爲了符合目的之其他努力中，本發明人已發現如前 所討論和獲得之水溶性差之藥物或化合物的濃縮物或前微 脂體組成物可在需要該水溶性差之藥物或化合物的治療或 給藥的病患之床邊透過將該濃縮物或前微脂體組成物注射 於用於給藥之適當稀釋液中的簡單操作立即地方便地利用 於水溶性差之藥物或化合物的微脂體組成物之形成、製備 、或製造，其可由開業醫生或其他合格醫療或輔助醫療主 管或人員安全地進行。 微脂體在濃縮物或前微脂體組成物注入稀釋液中時立 即地形成。而，在如此形成的微脂體之平均粒徑可有一些 變化，然而，本發明之一觀點爲藉由將濃縮物或前微脂體 組成物注射且透過具有1 8 G至3 0G之皮下注射針的注射器 ，以約0.10毫升/秒至約1.5毫升/秒的速率至用於復原之稀 釋液可獲得、製備、或製造小於100奈米之一致粒徑的微 脂體。此外，發現水溶性差之藥物或化合物在微脂體中之 截留或封裝的程度非常高且在最多數的例子中發現爲約 9 5 %或大於9 5 %。 在用於復原之稀釋液中的如此獲得、製備或製造之微 脂體，除了在大多數的例子中獲得、製備或製造小於100 奈米的一致粒徑之優點外，發現在復原介質中具有顯著較 高之物理安定性，例如不小於4小時之物理安定性，和在 許多例子中224小時，視截留或封裝在微脂體中的水溶性 差之藥物或化合物的性質而定。

-29- 1355946 例如’發現抗癌藥（多西紫杉醇）之微脂體組成物（其 藉由透過具有從18G至3 0G之皮下注射針的注射器以約 0.10毫升/秒至約1.5毫升/秒的速率將從9至11之莫耳百分 比之其濃縮物或前微脂體組成物注入作爲稀釋液之5 %葡 萄糖溶液而製得’該濃縮物或前微脂體組成物包含於從44 至46之莫耳百分比的作爲飽和膜形成脂質之氫化大豆磷酯 醯膽鹼（HSPC)、從16-18之莫耳百分比的作爲不飽和膜形 成脂質之雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)、和從26至27之莫耳百 分比的作爲膜安定劑之膽固醇）具有約95奈米之粒徑和具 有以上1 2小時之物理安定性，而沒有藥物從復原介質結晶 或沈澱。此外，發現藥物在微脂體之截留或封裝爲大於 95%。 此外，因爲，由於濃縮物或前微脂體組成物的儲存安 定性，也由於在病患的床邊立即製備或製造各個微脂體組 成物，在病患接受該微脂體組成物之給藥時賦予很大的利 益在於他們得到以最佳效力給藥之藥物、提高病患提早從 他們所罹患之病理失調（pathological disorder)恢復的機會 。而且，由於由於在病患的床邊立即製備或製造各個微脂 體組成物，所以不需要專用的製造設備，且特別強調無菌 製造，其變成本發明之有成本效益的特徵。 綜上所述，很明顯地，由下列之觀點’得自前述之濃 縮物或前微脂體組成物及微脂體組成物二者提供超越各個 先前技藝組成物之較佳優點： i)二種組成物之較高儲存和物理安定性； -30- 1355946 ii) 有效成分在微脂體中之大於95%截留或封裝； iii) 製造小於1〇〇奈米之一致地粒徑的有效成分之微脂 BM · W., iv) 用於製備二種組成物之簡單、方便、和有成本效 益的或便宜的方法； v) 製備或製造二種組成物而不需要人員製備或製造該 組成物之任何重要的監督以及任何優秀的技術或技巧； vi) 提供需要微脂體組成物的給藥之病患接受最佳效 力之有效成分的利益，藉此符合大部分（如果不是所述）之 全部目的。 在爲了符合目的之進一步努力中，本發明人已發現提 供在適當無菌容器的水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或 前微脂體組成物連同包含適當或適合的稀釋液容器一起作 爲套組，其中根據上述細節該前者可方便地注入後者以復 原和形成微脂體，和隨後將復原微脂體給藥至需要治療之 病患。 發現以套組提供在無菌玻璃管瓶或由其他非毒性材料 構成之管瓶中的水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或前微 脂體組成物，連同包含適當或適合之稀釋液的容器是有利 的’該容器的構成材料再次可爲玻璃或其他非毒性材料。 濃縮物或前微脂體組成物可藉由具有如前述針頭規格之注 射器從其容器抽出且然後以如前所指定之速率注入包含稀 釋液之容器中，而獲得水溶性差之藥物和化合物的微脂體 組成物，備用於給藥至需要其之病患。 -31 - 1355946 也發現以套組提供包含水溶性差之藥物和化合物的濃 縮物或前微脂體組成物之預充無菌注射器’連同具有18G 至30G之指定標準規格的適當皮下注射針，如前所述’進 —步連同包含適當或適合之稀釋液的容器是有利的，該容 器的構成材料可爲玻璃或其他非毒性材料。包含在預充注 射器中之濃縮物或前微脂體組成物然後可借助於所提供之 針頭以如前所述之速率直接注入包含稀釋液之容器中’而 獲得水溶性差之藥物和化合物的微脂體組成物’備用於給 藥至需要其之病患。 發明之詳細說明 詳細說明本發明如下： 本發明之水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或前微脂 體組成物 如上所提及，根據本發明之水溶性差之藥物的濃縮物 或前微脂體組成物包含： a) —種作爲有效成分的水溶性差之藥物或化合物； b) —種膜形成脂質，包含一或更多種之飽和磷脂或不 飽和磷脂或其混合物； c) 一種膜安定劑，選自固醇化合物； d) —種用於脂質之媒液，選自水互溶性有機溶劑或其 混合物；及 e) 隨意包含一或更多種之經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷 脂；和進一步 -32- 1355946 f)隨意包含醫藥賦形劑，例如抗氧化劑、緩衝劑、或 酸化劑。 水溶性差之藥物或化合物爲該等具有小於1 〇毫克/毫 之升水溶度者。該等水溶性差之藥物或化合物的例子包含 但不限制於抗癌劑、消炎劑、抗真菌劑、止吐藥、抗高血 壓劑、性激素、類固醇、抗生素類、免疫調節劑、麻醉藥 等等。可利用於本發明之濃縮物或前微脂體組成物中的抗 癌劑之典型例子包括太平洋紫杉醇、多西紫杉醇、和其他 相關紫杉垸衍生物；伊立替康（Irinotecan)、托撲替康 (Topotecan)、SN-38和其他相關喜樹鹼衍生物；多柔比星 、道諾黴素（Daunomycin)、和相關蒽環糖苷類；順鉑 (Cisplatin);奧沙利鉑（Oxaliplatin) ; 5-氟尿嘧啶

(Fluorouracil);絲裂黴素（Mitomycin);甲氨蝶呤 (Methotrexate);依托泊苷（Etoposide);樺酸及其衍生物；和 蟛蜞菊內脂（Wedelolactone)及其衍生物。可利用於本發明之濃 縮物或前微脂體組成物中的消炎劑之典型例子包括吲哚美 辛（Indomethacin)、布洛芬（Ibuprofen)、酮洛芬（Ketoprofen) 、氟比洛芬（Flubiprofen)、批羅昔康（Piroxicam)、替諾昔康 (Tenoxicam)、和萘普生（Naproxen)。可利用於本發明之濃 縮物或前微脂體組成物中的抗真菌劑之典型例子包括酮康 唑（Ketoconazole)、和兩性黴素（Amphotericin)B。可利用 於本發明之濃縮物或前微脂體組成物中的性激素之典型例子 包括睾酮（Testosterone)、雌激素、黃體酮（pr〇gesterone)、和雌 二醇（Estradiol)。可利用於本發明之濃縮物或前微脂體組 -33- 1355946 成物中的類固醇之典型例子包括地塞米松（D exam ethas one)、 潑尼松龍（Prednisolone) '氟維司群（Fulvestrant)、依西美坦 (Exemestane)和曲安西龍（Triamcinolone)。可利用於本發 明之濃縮物或前微脂體組成物中的抗高血壓劑之典型例子 包括卡托普利（Captopril)、雷米普利（Ramipril)、特拉哩 曉（Terazosin)、米諾地爾（Minoxidil)、和帕拉諾辛 (Parazosin)。可利用於本發明之濃縮物或前微脂體組成物 中的止吐藥之典型例子包括奧丹亞龍（Ondansetron)和格拉 司瓊（Granisetron)。可利用於本發明之濃縮物或前微脂體 組成物中的抗生素類之典型例子包括甲硝唑 (Metronidazole)、和夫西地酸（Fusidic Acid)。可利用於本 發明之濃縮物或前微脂體組成物中的免疫調節劑之典型例 子包括環孢靈（Cyclosporine);和聯苯基二甲基二羧酸。 可利用於本發明之濃縮物或前微脂體組成物中的麻醉藥之 典型例子包括丙泊酚（Propofol)、阿法沙龍（Alfaxalone)、 和海索比妥（Hexobarbital)。 關於抗癌劑，特別是各種不同的樺酸衍生物，例如該 等具有下列結構（I)、（II)和（III)之命名爲M J- 1098、DRF-4012和 DRF-4015者，其依次揭示於US 6,403,816和我們 的PCT申請案WO 2006/085334 A2中，也稱作水溶性差之 藥物和化合物且也可利用於本發明的濃縮物或前微脂體組 成物中。 水溶性差之藥物和化合物可以從9至1 4的莫耳百分比 使用於濃縮物或前微脂體組成物中，較佳地以從9至1 1的 -34- 1355946 莫耳百分比 〇2N_Qk-

1^〇-1098(1)，如揭示於1^ 6,403,816中

DRF-40 1 5(111)，如揭示於 W0 2006/085334 A2 中 可 飽醇 質 不乙 脂 的基 成 中醯 形 物醋 膜 成磷 的。組、 中一體 C 物之脂(P 成物微驗 組合前膽 體混或醯 脂其物脂 微或縮隣 前脂濃、 或磷之脂 物和明磷 縮飽發卵 濃、本自 於脂於選 用磷用係 使和使類 可飽可脂 不 磷 爲 和 胺（PE)、溶血卵磷脂、溶血磷酯醯基乙醇胺、二月桂基磷 酯醯膽鹼（DLPC) '二油醯基磷酯醯膽鹼（DOPC)、鞘磷脂 、腦鞘磷脂、腦苷脂類、雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)、大豆 磷酯醯基甘油（SPG)、磷酯醯基肌醇（PI)、磷脂酸（PA)、 磷酯醯基絲胺酸（PS)、二月桂醯基磷酯醯基甘油（DLPG)、 -35- 1355946 心脂類及其混合物。 不飽和磷脂類可使用於總濃縮物或前微脂體組成物之 從15至20莫耳百分比的範圍。不飽和磷脂類性質上可爲兩 性離子或陰離子。較佳不飽和磷脂爲雞蛋磷酯醯基甘油 (EPG)。 可使用於本發明之濃縮物或前微脂體組成物中的飽和 磷脂類係選自由氫化大豆磷脂醯膽鹼（HS PC)、氫化大豆卵 磷脂、二肉豆蔻醯基磷酯醯基乙醇胺（DMPE)、二軟脂醯 基磷酯醯基乙醇胺（DPPE)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼 (DMPC)、二軟月旨醯基磷月旨醯膽鹼（DPPC)、二硬脂醯基磷 酯醯膽鹼（DSPC)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼（DLPC)、1-肉 豆蔻醯基-2-軟脂醯基磷脂醯膽鹼、卜軟脂醢基-2-肉豆蔻 醯基磷脂醯膽鹼、1-軟脂醯基磷脂醯膽鹼、1-硬脂醯基-2-軟脂醯基磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯基鞘磷脂、二硬脂醯基鞘 磷脂、氫化磷酯醯基肌醇（HPI)、二肉豆蔻醯基磷酯醯基 甘油（DMPG)、二軟脂醯基磷酯醯基甘油（DPPG)、二硬脂 醯基磷酯醯基甘油（DSPG)、二肉豆蔻醯基磷脂酸（DMPA) 、二軟脂醯基磷脂酸（DPPA)、二肉豆蔻醯基磷酯醯基絲 胺酸（DMPS)、二軟脂醯基磷酯醯基絲胺酸（DPPS)、二磷 酯醯基甘油（DPG)、氫化大豆磷酯醯基甘油（SPG-3)、二油 醯基磷酯醯基甘油（DOPG)、二硬脂醯基磷脂酸（DSPA)及 其混合物組成之群組。 飽和磷脂類可使用於總濃縮物或前微脂體組成物之從 40至5 0的莫耳百分比的範圍。飽和磷脂類性質上可爲兩性 -36- 1355946 離子或陰離子。較佳飽和磷脂爲氫化大豆磷酯醯膽鹼 (HSPC)。 在本發明的濃縮物或前微脂體組成物中可用作膜安定 劑之固醇化合物可選自由膽固醇、膽固醇衍生物、維生素 D、膽固醇酯類、及其混合物組成之群組。發現（特別地） 爲血漿細胞膜的主要成份之膽固醇影響留在膜中之蛋白質 的功能。傾發現該類固醇存在於微脂體組成物中有助於藥 物之內化作用。一可以使用於組成物之較佳固醇爲膽固醇 〇 固醇化合物可使用於總濃縮物或前微脂體組成物之從 25至35的莫耳百分的範圍。一較佳固醇化合物爲膽固醇。 除此之外，如前所述，本發明之濃縮物或前微脂體組 成物可隨意包含經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質。而，不受 任何理論約束，該經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質作爲膜安 定劑或有助於有效成分在血流中之較長循環是可能的。 可以使用於本發明之濃縮物或前微脂體組成物中的經 聚乙二醇（PEG)·偶合之脂質係選自由羰基甲氧基聚乙二 醇-二硬脂醯基磷酯醯基乙醇胺（MPEG-750-DSPE、-MPEG-2000-DSPE 和 MPEG-5000-DSPE)、羰基甲氧基聚乙 二醇-二軟脂醯基磷酯醯基乙醇胺（MPEG-2000-DPPE和 MPEG-5000-DPPE)、羰基甲氧基聚乙二醇-二肉豆蔻醯基 磷酯醯基乙醇胺（MPEG-2000-DMPE 和 MPEG-5000-DMPE) 及其衍生物組成之群組。 經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質可使用於總濃縮物或前 I S3 -37- 1355946 微脂體組成物之從2至5的莫耳百分比的範圍。可 組成物中之較佳經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質 2000-DSPE 。 再次地，如前所述，本發明之濃縮物或前微 物可進一步隨意包含適當醫藥上可接受的賦形劑 可改變像提供組成物安定性、幫助最佳藥物載入 組成物的最佳pH等等。 該醫藥上可接受的賦形劑可包括抗氧化劑ί 育酚或其乙酸酯；維生素Ε;石-胡蘿蔔素；類 ，例如α -胡蘿蔔素、番茄紅素（在蕃茄中的紅名 黃體素、玉米黃素、等等；緩衝劑例如檸檬酸鹽 tris-緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑等等；或酸化劑、換 、有機和無機二者，例如檸檬酸、順丁烯二酸、 珀酸、酒石酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸等等。 抗氧化劑可使用於總濃縮物或前微脂體組 0.20至1.0的莫耳百分比的範圍。可以使用於組 較佳抗氧化劑爲α-生育酚或其乙酸酯。 用於本發明的濃縮物或前微脂體組成物之媒 溶性有機溶劑。可使用之適當水互溶性有機溶劑 族醇類，特別是乙醇；二烷醯胺類，特別是二甲 和二甲基乙醯胺；二烷亞颯類，特別是二甲亞颯 楓；各種分子量的聚乙二醇；丙二醇或其混合物 可典型地用作本發明之前微脂體組成物的媒 溶性有機溶劑爲乙醇、二甲基乙醯胺、乙醇-聚 以使用於 爲-MPEG- 脂體組成 1其角色 、及設定 河如α -生 胡蘿蔔素 包顏色）' 緩衝劑、 言之酸類 草酸、琥 成物之從 成物中之 液爲水互 係選自脂 基甲醯胺 和二乙亞 〇 液之水互 乙二醇混 -38- 1355946 合物、乙醇·丙二醇混合物等等。當乙醇·聚乙 醇·丙二醇之混合物作爲媒液使用時，典型地較 體積計爲1 : 1至1 : 0.05之比率使用。 商業上可獲得之水互溶性有機溶劑可如此使 物或前微脂體組成物中，或如果需要，他們可在 縮物或前微脂體組成物之前純化。該等溶劑可藉 中已知的方法純化。作爲一例子，乙醇和多元醇 之前藉由用酸或用離子交換樹脂預處理而純化。 水溶性差之藥物或化合物作爲有效成分的濃 微脂體組成物，依次可藉由一種簡單且方便的方 造，該方法包含在媒液（其正常地爲一或更多種 性有機溶劑）中混合個別比例的有效成分、膜脂 定劑和隨意經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷脂及/或 接受的賦形劑以獲得一種溶液，接著無菌過濾至 之容器中。 在一體系中，將在適當體積的媒液中之個別 形成脂質和膜安定化合物攪拌足夠時間而獲得澄 混合或攪拌可在室溫或在最多至7 0 °C之高溫進行 成脂質和膜安定劑完全溶解在媒液中之後，將澄 卻至室溫，將所需比例的有效成分以固體形式或 用之媒液中的濃縮物加至其中。徹底混合之後， 液稀釋使溶液至所要濃度和隨後經過微濾器過濾 存藉由該技藝中已知的方法塡充和密封於適當容 充於適當注射器中，和進一步使用於水溶性差之 二醇或乙 佳的是以 用於濃縮 使用於濃 由該技藝 可在使用 縮物或前 法製造製 之水互溶 質、膜安 醫藥上可 用於儲存 比例的膜 清溶液。 。在膜形 清溶液冷 以在所使 藉由用媒 且爲了儲 器中或塡 藥物和化 i S] -39- 1355946 合物的脂體組成物之製備。 在一隨意體系中，將在適當體積的媒液中之個別比例 的膜形成脂質、膜安定化合物和經聚乙二醇（PEG)-偶合之 脂質攪拌足夠時間而獲得澄清溶液。混合或攪拌可在室溫 或在最多至70 °C之高溫進行。在膜形成脂質、膜安定劑和 經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質完全溶解在媒液中之後，將 澄清溶液冷卻至室溫，將所需比例的有效成分以固體形式 或以在所使用之媒液中的濃縮物加至其中。徹底混合之後 ，藉由用媒液稀釋使溶液至所要濃度和隨後經過微濾器過 濾且爲了儲存藉由該技藝中已知的方法塡充和密封於適當 容器中或塡充於適當注射器中，和進一步使用於水溶性差 之藥物和化合物的脂體組成物之製備。 在另一隨意體系中，將在適當體積的媒液中之個別比 例的膜形成脂質和膜安定化合物攪拌足夠時間而獲得澄清 溶液。混合或攪拌可在室溫或在最多至70 °C之高溫進行。 在膜形成脂質和膜安定劑完全溶解在媒液中之後，將澄清 溶液冷卻至室溫，將所需比例的有效成分以固體形式或以 在所使用之媒液中的濃縮物加至其中。徹底混合之後，溶 液之p Η，如果需要可藉由加入緩衝劑或酸化劑調整到適 當範圍，接著藉由用媒液稀釋使溶液至所要濃度和隨後經 過微濾器過濾且爲了儲存藉由該技藝中已知的方法塡充和 密封於適當容器中或塡充於適當注射器中，和進一步使用 於水溶性差之藥物和化合物的脂體組成物之製備。 在另一隨意體系中，將在適當體積的媒液中之個別比 -40- 1355946 例的膜形成脂質、膜安定化合物和經聚乙二醇（PEG)-偶合 之脂質攪拌足夠時間而獲得澄清溶液。混合或攪拌可在室 溫或在最多至70°C之高溫進行。在膜形成脂質、膜安定劑 、和經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質完全溶解在媒液中之後 ，將澄清溶液冷卻至室溫，將所需比例的有效成分以固體 形式或以在所使用之媒液中的濃縮物加至其中。徹底混合 之後，溶液之pH，如果需要可藉由加入緩衝劑或酸化劑 調整到適當範圍，接著藉由用媒液稀釋使溶液至所要濃度 和隨後經過微濾器過濾且爲了儲存藉由該技藝中已知的方 法塡充和密封於適當容器中或塡充於適當注射器中，和進 一步使用於水溶性差之藥物和化合物的脂體組成物之製備 〇 顯然地，該（等）方法不要求按照任何的重要參數或操 作且藉此廢除任何重要的監督及而且，不需要關於操作者 的部份用於製造目標濃縮物或前微脂體組成物之任何技術 或技巧。 此外，如前所述，發現如此製備之水溶性差之藥物和 化合物的濃縮物或前微脂體組成物，於2 5 ± 2 °C和於6 0 士 5%RH及於2-8°C安定至少3至6個月，由於在有效成分的 分析中合理到沒有從初値下降。經觀察組成物三到六月的 期間，組成物保持澄清，而沒有任何看得見的沈降。 明確地，抗癌藥（多西紫杉醇）的濃縮物或前微脂體組 成物的3至6個月安定性模式（profile)總結於表-1中，其應 被認爲是只作爲例示體系且決不應被解釋爲限制本發明的 -41 - 1355946 範圍。 而且，如前所述，本發明濃縮物或前微脂體組成物 提供之其他優點爲由於它們的安定性（甚至在周圍或冷 溫度下），該濃縮物或組成物可儲存延長時段，而沒有 著損失有效成分的效力且可在該儲存條件下以更方便的 式運輸，而且，其顯著降低運輸以及儲存在倉庫中之成 本發明水溶性差之藥物和化合物的微脂體組成物 如前所述討論和獲得之水溶性差之藥物或化合物的 縮物或前微脂體組成物可立即地在需要該水溶性差之藥 或化合物的治療或給藥的病患之床邊透過將該濃縮物或 微脂體組成物注入用於給藥之適當稀釋液中的簡單操作 方便地利用於水溶性差之藥物或化合物的微脂體組成物 形成、製備、或製造，其可由開業醫生或其他合格醫療 癱 輔助醫療主管或人員安全地進行。 所 卻 顯 方 本 濃 物 人 刖 而 之 或 -42- 1355946 表-ι:根據本發明之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成 物的安定性

序號 單位組成物 Qty 條件 多西紫杉醇(毫克/¾升)之分析 (毫克） 起始 1M 2M 3M 6M 1 多西紫杉醇 9 25±2〇C/ HSPC 37.5 60±5%RH 9.5 9.4 9.3 9.3 9.1 膽固醇 11.25 EPG 15 2-8 °C 9.5 9.4 9.4 9.4 9.1 乙醇(q.s.) 1毫升 2 多西紫杉醇 9 25±2〇C/ HSPC 37.5 60±5%RH 9.2 8.9 8.9 8.6 8.7 膽固醇 11.25 EPG 15 2-8。。 8.8 α生育酚 0.5 9.2 9 9 8.9 乙醇(q.s.) 1毫升 3 多西紫杉醇 9 25±2〇C/ HSPC 37.5 60±5%RH 8.8 8.9 8.8 8.9 膽固醇 11.25 EPG 15 2-8〇C 8.8 α生育酚 0.5 8.8 8.9 8.9 乙醇+PG*(9:l,q.s.) 1毫升 4 多西紫杉醇 9 25+2〇C/ 8.8 8.7 HSPC 37.5 60±5%RH 9.1 8.9 9 膽固醇 11.25 EPG 15 α生育酚 0.5 2-8 °C 9.1 8.9 9 8.6 8.7 MPEG2000-DSPE 7.5 乙醇(q.s.) 1毫升 * PG =丙二醇 微脂體可在濃縮物或前微脂體組成物注入稀釋液時立 -43 - 1355946 即地形成。而，如此形成的微脂體之平均粒徑可以有一些 變化，然而，本發明之觀點爲藉由透過具有18G至30G之 皮下注射針的注射器以約〇.1〇毫升/秒至約K5毫升/秒的速 率注入濃縮物或前微脂體組成物可獲得、製備或製造在用 於復原之稀釋液中具有小於1〇〇奈米之一致粒徑的微脂體 。此外發現水溶性差之藥物或化合物截留或封裝在微脂體 中之程度爲非常局且在大多數的例子中發現爲295 %。 在用於復原之稀釋液中的如此獲得、製備或製造之微 脂體，除了在大多數的例子中具有獲得、製備或製造小於 100奈米的一致粒徑之優點外，發現在復原介質中具有顯 著較高之物理安定性，例如不小於4小時之物理安定性和 在許多例子中224小時，視截留或封裝在微脂體中的水溶 性差之藥物或化合物的性質而定。 發現抗癌藥（多西紫杉醇）之微脂體組成物，其藉由透 過具有從18G至30G之皮下注射針的注射器以約〇.1〇毫升/ 秒至約1.5毫升/秒的速率將從9至11的莫耳百分比之其濃 縮物或前微脂體組成物（其由從44至46之莫耳百分比的作 爲飽和膜形成脂質之氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC)、從16-18之莫耳百分比的作爲不飽和膜形成脂質之雞蛋磷酯醯基 甘油（EPG)、和從26至27之莫耳百分比的作爲膜安定劑之 膽固醇組成）注入作爲稀釋液之5 %葡萄糖溶液而製得，具 有約9 5奈米之粒徑和具有以上丨2小時之物理安定性，而沒 有藥物從復原介質結晶或沈澱。此外，發現藥物在微脂體 之截留或封裝爲大於95 %。此特殊體系應只被認爲是例示 1355946 體系且決不應被解釋爲限制本發明的範圍。 在本文中可能提到多西紫杉醇爲一種抗癌藥，首先揭 示於美國專利第4,81 4,47〇號中。而許多形式的多西紫杉 醇爲已知，像無水結晶、結晶半水合物、和結晶三水合物 且所有這些“晶型”可利用作爲製備本發明之濃縮物或前微 脂體組成物的水溶性差之藥物或化合物，然而，發現在本 發明中使用多西紫杉醇之“非晶型”是有利的。該多西紫杉 醇之“非晶型”和其製備揭示於我們的申請中印度申請號 25 3/Kol/2007中。 同樣地，使用相同的技術，其他水溶性差之藥物和化 合物的微脂體組成物可從對應濃縮物或前微脂體組成物製 備且可獲得於小於100奈米之粒徑。例如，抗癌藥（太平洋 紫杉醇）之微脂體組成物可被製備具有藥物在微脂體內之 約95%截留或封裝，於90奈米範圍內之粒徑和進一步具有 >5小時之物理安定性；樺酸衍生物（MJ- 1 098(I))之微脂體 組成物可被製備具有藥物在微脂體內之約95%截留或封裝 ，於90奈米範圍內之粒徑和進一步具有>6小時之物理安定 性；樺酸衍生物（DRF-4012(II))之微脂體組成物可被製備 具有藥物在微脂體內之約95%截留或封裝，於90奈米範圍 內之粒徑和進一步具有>6小時之物理安定性；樺酸衍生物 (DRF-4015(III))之微脂體組成物可被製備具有藥物在微脂 體內之約95 %截留或封裝，於95奈米範圍內之粒徑和進一 步具有>6小時之物理安定性；和免疫調節劑（環孢靈 (Cyclosporine))之微脂體組成物可被製備具有藥物在微脂 -45- 1355946 體內之約95%截留或封裝，於95奈米範圍內之粒徑和進一 步具有>24小時之物理安定性。在此再次，應了解該體系 爲只作爲例證體系且決不應被解釋爲限制本發明的範圍。 在一體系中，水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或前 微脂體組成物，包含在密封玻璃管瓶或由其他非毒性材料 構成之管瓶中，用18G至3 0G之皮下注射針抽進注射器， 然後以約0.10毫升/秒至約1.5毫升/秒的速率且針頭的尖端 延長在稀釋液的表面以下快速地注入包含稀釋液之容器中 。完全注入濃縮物或前微脂體組成物之後，輕輕地搖動混 合物幾分鐘以獲得一種水溶性差之藥物或化合物的微脂體 之均勻分散液，其然後備用於給藥至需要其的病患。 由除了玻璃之外的非毒性材料製成之適當管瓶包括由 材料像塑膠、聚丙烯、聚乙烯、聚酯類、聚醯胺類、聚碳 酸酯類、烴聚合物類等等所構成之管瓶。 在另一體系中，水溶性差之藥物和化合物的濃縮物或 前微脂體組成物，包含在安裝具有18G至30G之皮下注射 針的預充注射器中，然後以約〇.1〇毫升/秒至約1.5毫升/秒 的速率且針頭的尖端延長在稀釋液的表面以下快速地注入 包含稀釋液之容器中。完全注入濃縮物或前微脂體組成物 之後，輕輕地搖動混合物幾分鐘以獲得一種水溶性差之藥 物或化合物的微脂體之均勻分散液，其然後備用於給藥至 需要其的病患。 而，利用除了約〇 . 1 0毫升/秒至約1 · 5毫升/秒的指定比 率之外的濃縮物或前微脂體組成物注入稀釋液之速率或利 -46- 1355946 用與18G至30G不同的皮下注射針，將濃縮物或前微脂體 組成物注入稀釋液中，自獲得具有小於1 〇〇奈米之粒徑以 ' 及具有最佳物理安定性的微脂體之觀點不是很佳的，然而 - ，利用相同者也導致微脂體之形成，雖然在高於1〇〇奈米 之粒徑以及具有小於4小時之物理安定性，利用約〇. 1 〇毫 升/秒至約1.5毫升/秒的注射速率和18G至30G之皮下注射 針爲較佳之理由。 φ 可使用於復原濃縮物或前微脂體組成物及製備微脂體 組成物的適當稀釋液可選自但不限制於水、食鹽水、5% 和1 0%葡萄糖溶液、葡萄糖和氯化鈉溶液、乳酸鈉溶液、 乳酸化林格氏液（Ringer’s solution)、甘露醇溶液、具有 葡萄糖或氯化鈉溶液之甘露醇、林格氏液、注射用無菌水 和包含電解質、葡萄糖、果糖和轉化糖之變化組合物的多 重電解質溶液。然而，一較佳稀釋液爲包含一種葡萄糖和 水且更佳5%和10%葡萄糖溶液之液體。 對根據本發明方法製備之抗癌藥（多西紫杉醇）的微脂體組 成物之非臨床實驗 下述討論爲一些由本發明人對根據本發明方法製備的 抗癌藥（多西紫杉醇）之微脂體組成物進行之非臨床實驗， 其細節已經詳細地討論於上文。 如前所述，在所有的硏究中使用多西紫杉醇的“非晶 型”，揭示於我們的申請中印度申請號25 3/Κ〇1/2007中。 所進行之非臨床實驗包括藥效學（包括細胞毒性和微 -47- 1355946 管蛋白聚合作用活性 '效力、藥物動力學、和安全性）之 測定。 在所有的硏究中，無論什麼情況下需要上述硏究與習 知之經核准且在市場上銷售的多西紫杉醇的組成物的比較 ，使用一種由M/S Sanofi-Aventis以品牌勉癌易（Taxotere®) 在市場上銷售。 1.0 藥理學（Pharmacology) 1.1 主藥效試驗（Primary Pharmacodynamics) 1.1.1試管內細胞毒性 在人類癌症細胞株的板片中多西紫杉醇之微脂體組成 物（以下稱爲“LD”）試管內的細胞毒性，預期對多西紫杉醇 敏感和效果與習知、核准、市售多西紫杉醇（換言之剋癌 易）（以下稱爲“CD”）的組成物比較。取得大量的多西紫杉 醇在DMSO中之溶液作爲用於硏究之正控制組。 於72小時MIT分析中在人類的卵巢、前列腺和乳癌 細胞株中，二種調配物之生長抑制（IC5())係在低奈莫耳 (nanomolar)範圍內。總結在表-11中之數據表明LD之活 性範圍可比較於CD之活性範圍。 1.1.2活體內抗腫瘤作用 進行效力以硏究比較LD與CD之抗腫瘤括性，當藉 由靜脈內路徑給藥至具有小鼠黑色素瘤（B16F 10)腫瘤異體 移植之C57B1/6小鼠時。 -48- 1355946 ^ -II : LP和CD之試管內ic50 腫瘤類型 細胞株 ICsofg(nM) CD LD 在DMSO中之多 西紫杉醇溶液 乳房 MDA ΜΒ453 18.30±2.30 14.05±3.20 15.07 士 2.30 卵巢 ΡΑΙ <0.01 <0.01 <0.01 SKOV3 10.56±1.90 12.70±2.34 9_87±2.74 前列腺 DU145 2.93±1.39 5.28±2.69 5.13±1.28 該硏究使用6-8週大和秤重20-25克之雌性C57BL/6小 鼠。在各治療組中有7隻動物和在控制組中有6隻動物。在 治療開始之前使該等動物適應新環境一週時間。LD和CD 以24毫克/公斤之劑量給藥。控制組接受相同體積的對應 最高劑量之5%葡萄糖。在腫瘤細胞接種後第3、5、7和9 天使用無菌1毫升抛棄式注射器和30G針頭將試驗物質予 以給藥。觀察該等動物之毒性跡象、腫瘤減少、體重和死 亡率。在硏究結束時，犧牲所有存活動物，切除腫瘤和測 量它們的重量。 腫瘤由於治療之退化係根據治療組/控制組（T/C)%描 述。其定義如下： τ , c…_治療組腫瘤體積之改變、,ρΛ °控制組腫瘤體積之改變 LD對CD治療組之腫瘤體積給予於表-III。圖-1顯示 腫瘤退化之動力學而圖-2顯示動物經治療週之體重。 小鼠治療之LD顯示2.3%之T/C，如與用CD治療之 ί S3 -49- 1355946 小鼠比較，其顯示3.1%之Τ/C値。小於42%之Τ/C被認爲 是顯著的。在所有組別中於任何動物中沒有不正常的臨床 跡象。在第15天在切除腫瘤之後，根據腫瘤重量，觀察到 中間T/C値在LD治療組小鼠中爲0.6%和在CD治療組小 鼠中爲0 · 5 %。 - 因此，發現二種調配物引起可比較的腫瘤退化活性。 表-III : LD和CD當以靜脈內路徑給藥至具有小鼠黑色素 瘤之C57bl/6小鼠時的腫瘤體積之比較*_ 腫瘤體積 試驗物質 LD CD 控制組 天數 平均 SD 平均 SD 平均 SD 3 26.6 9.5 22.3 6.7 21.1 6.4 5 22.2 8.4 14.1 1.1 21.1 10.1 7 26.5 9.4 16.1 4.5 36.3 18.4 9 21.4 13 17.4 9.8 115 142.1 12 14.2 8.1 5.8 2.7 307.2 294.7 15 11.7 12.0 2.8 1.6 649.9 476.3 *接種後測量天數 小鼠治療組LD顯示2.3%之T/C ’如與用CD治療之 小鼠比較，其顯示3.1 %之T/C値。小於42%之T/C被認爲 是顯著的。在所有組別中於任何動物中沒有不正常的臨床 跡象。在第15天切除腫瘤之後，根據腫瘤重量’觀察中間 T/C値在LD治療之鼠中小爲0.6%和在CD治療之小鼠中 爲 0.5 %。

III -50- 1355946 因此，發現二種調配物引起可比較的腫瘤退化活性》 2.0次藥效試驗（Secondary Pharmacodynamics) 2.1微管蛋白聚合作用 LD之藥物動力學係藉由定量在卵巢癌細胞（P A 1細胞） 之微管蛋白聚合作用潛在性評估和效果係與CD之效果比 較。該等細胞係用〇.(H-l〇〇nM之LD或CD治療和培養17 小時之後收穫。爲了評估時間-動力學，該等細胞用1 uM 的LD或CD治療且於從15-120分鐘改變之特定時間間隔 收獲。在低滲透壓緩衝條件下溶解該等細胞。藉由離心分 離可溶性和聚合之微管蛋白。分開地處理顆粒狀物和上澄 液且藉由聚丙烯醯胺凝膠電泳分析，接著轉移在PVDF膜 上和最後使用初級（primary)抗-α -微管蛋白抗體來免疫轉 漬（immunoblotting)。可溶性和聚合之微管蛋白的表現係 藉由使用公用域NIH圖像程式之密度測定法定量和測量 聚合之微管蛋白的百分比及繪製劑量和時間反應曲線。 該硏究表明多西紫杉醇在微脂體封裝之後保有微管蛋 白結合性質和在卵巢癌細胞中微管蛋白聚合作用的程度可 比較於在習知組成物（CD)中所觀察到之微管蛋白聚合作用 。圖-3和圖-4分別描述在PA1細胞株中之微管蛋白聚合作 用的劑量和時間動力學數據。對微管蛋白聚合作用之劑量 和時間依賴性影響分別以圖表顯示於圖-5和6。 3.0藥物動力學 ·[ S 3 -51 - 1355946 在此硏究中比較LD和CD之藥物動力學。該藥物動 力學硏究係在6-8週大且稱重約150克之雌性威斯達大鼠 (Wistar rat)中進行。動物之照料和處理係根據機構性動物 倫理委員會（Institutional Animal Ethics Committee(IAEC))。 在給藥之前組成物的每一個也就是LD和CD用生理緩衝 劑適當地稀釋至所要濃度。各組成物以2.5、5.0和10.0毫克/ 公斤之劑量在尾靜脈分開地以快速注射（bolus injection)瓶 注入六隻動物組。 在各種時間點從眼窩後叢（retro-orbital plexus)取得 血樣品，藉由離心立刻分離血漿且在分析之前儲存於-2〇°C。 來自血漿之多西紫杉醇係經由液體-液體萃取來萃取且使 用液態層式分析質譜（LC-MS/MS)技術分析。使用 WinNonlin 軟體 5.2(Pharsight Corporation)決定藥物動力 學參數。使用非房室模型以擬合數據。以下列參數在曲線 下面的面積（AUCall)、總體清除率（CUbs)、分布之視體積 (Vd)和血漿半生期（T1/2)表示分布和除去。 如二個於各劑量之組成物的C〇、AUCall，、Τ1/2値是可 比較的，該二個組成物之藥物動力學可被斷定爲遍及劑量 是可比較的，其詳情總結於表-IV中。LD和CD顯示關於 在三種劑量之AUC的良好線性，與分別地>0.95和0.99之 r2値。其他藥物動力學參數像Vd、（：1。^和MRTlast也被發 現是可比較的’如從表_IV顯然可知的。 -52- 1355946 表- IV :對 LD和CD的劑量依賴性藥物動力學硏究 參數 單位 2.5毫克/公斤 5.0毫克/公斤 10毫克/公斤 LD CD LD CD LD CD Co pg/ml 0.904±0.14 0.917+0.12 1.939+0.41 3.6745+1.60 5.931±2.83 5.508±1.55 AUCal, hrWml 0.294±0.05 0.248+0.04 0.620710.11 0.8646±0.13 2.84±1.02 2.45±0.39 Τ,/2 Hr 3.33710.43 3.952+1.07 2.357+0.34 4.228+2.57 6.671+2.59 4.710±2.11 vd ml/kg 45.38±9.43 56.69±11.44 28.83±5.92 35.91 土 20.52 38.68±26.75 27.91112.40 Cl〇bs ml/hr/kg 9.421±1.45 10.115+0.99 8.446±0.85 6.016±0.91 3.704±1.17 4.214+0.72 4.0毒物學 臨床前毒性硏究爲藥物之安全評估的整體部份且提供 藥物之毒性模式（profile)的初步圖像。進行亞急性毒性硏 究以決定LD之可能毒性作用。 4.1亞急性毒性 進行亞急性硏究以比較LD與CD於老鼠中之毒性模 式。 該硏究使用雄性/雌性威斯達大鼠（Wistar rat)，7-10 週大和稱重1 3 0-2 75克（雄性）、1 40- 1 8 0克（雌性）和雄性/雌 性瑞士白鼠（Swiss Albino mice)，8-10週大和稱重23-35克 。每組每種性別有5隻動物。在治療開始之前使該等動物 適應新環境一週時間。LD和CD以1.0、2.5、和5.0毫克/ 公斤之劑量給藥至威斯達大鼠（Wistar rat)和6.25、12.5和 25毫克/公斤之劑量給藥至瑞士白鼠。控制組由媒液組所 組成，其包含對應最高劑量之使用於組成物中的賦形劑（ 組成物減藥物）。控制組接受相同體積的5%葡萄糖（對應最 -53- 1355946 高劑量）。使用無菌1毫升抛棄式注射器和3 0G針頭每天給 藥試驗物質一次連續5天。觀察包含死亡率、臨床跡象、 體重、食物和水消耗、臨床實驗室硏究、器官重量和宏觀 組織病理學。 在硏究期間用5.0毫克/公斤的二種組成物治療之雄性/ 雌性威斯達大鼠中皆觀察到1〇〇 %死亡率。所有死亡的威 斯達大鼠（Wistar rat)在藥物給藥5-7天後顯示終止於死亡 之嚴重水瀉和體重減輕。根據在這些動物中所觀察到的臨 床跡象，死亡被歸因於治療。在用2.5毫克/公斤治療之動 物中觀察到40 %死亡率。在用1毫克/公斤的媒液和葡萄糖 治療之動物中沒有可觀察到的臨床跡象和治療死亡率。用 2.5毫克/公斤和5.0毫克/公斤劑量治療之雄鼠和雌鼠皆存 在口腔炎、alopecia、手足症候群和臉部水腫的劑量依賴 性增加，其通常在用抗癌藥治療期間發現。在另一組的任 何動物中沒有其他不正常的臨床跡象。 在硏究期間用25.0毫克/公斤的二種組成物治療之雄 性和雌性瑞士白鼠皆觀察到1 00%死亡率。根據在這些動 物中觀察到的臨床跡象，死亡被歸因於治療。在用12.5毫 克/公斤治療之動物中觀察到40%死亡率。用25毫克/公斤 的二種組成物治療之組中觀察到Alopecia、臉部水腫和後 肢伸長之局部痲痺/損失。在另一組的任何動物中沒有其 他不正常的臨床跡象^ 除了該等動物（威斯達大鼠和瑞士白鼠）以外，在高和 中劑量組中，其中觀察死亡率，來自動物兩性別之所有組 -54- 1355946 別顯示在硏究期間體重逐渐增加。 注意到在硏究期間兩品種的食物和水消耗之劑量依賴 性增加。在兩品種任一性別中觀察到兩種組成物的嗜中性 白血球計數和總白血球計數之劑量依賴性減少。在用葡萄 糖和媒液治療之動物組中血液（hematological)參數是在常 態內。發現在威斯達大鼠中二種組成物之最高非毒性劑量 (HNTD)爲5毫克/公斤（1毫克/公斤χ5天）。發現在瑞士白鼠 中二種組成物之最高非毒性劑量（HNTD)爲3 1.25毫克/公斤 (6.25毫克/公斤χ5天）。 因此，可推斷証明二種組成物也就是LD和CD具有 相似的毒性模式（profiles)。 【實施方式】 進一步利用下列實例說明本發明，該等實例決不應該 被解釋爲限制本發明的範圍。 實例1 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1:濃縮物或前微脂體組成物之製備 將50毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45〇1莫耳 %)、15毫克膽固醇（26.61莫耳％)，20毫克雞蛋憐醋醯基甘 油（EPG，17.79旲耳％)、和0.15暈克的乙酸α-生育酹醋 (0.2 2莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇中，然後使用水浴於 70°C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液 降至室溫，將12毫克的非晶多西紫杉醇（10.37莫耳％)加至 i S：3 -55- 1355946 其中。使用磁攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫 杉醇的濃縮物或前微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之 溶液經過0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.16毫升/ 秒的速率將0.5毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入7.5毫升之5%葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 1 0小時的安定性。 實例2 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將50毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.01莫耳 %)、15毫克膽固醇（2 6.61莫耳％)、20毫克雞蛋磷酯醯基甘 油（EPG ’ 17.79莫耳％)、和0.15毫克的乙酸α_生育酚酯 (0.22莫耳％)溶解在中〗毫升之乙醇和丙二醇（9 : 1比率）的 混合物’然後使用水浴於70 °C將其加熱2分鐘以獲得一種 脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫，將丨2毫克的非晶多西 紫杉醇（10.37莫耳％)加至其中。使用磁攪拌器/渦旋振盪 器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成物 -56- 1355946 直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.2 2微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有2 9 G皮下注射針之注射器以〇 . 1 2毫升/ 秒的速率將0.5毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入7.5毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約95奈米的粒徑和大於 10小時的安定性。 實例3 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將50毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.19莫耳 %)，15毫克膽固醇（26.73莫耳％)和20毫克雞蛋磷酯醯基甘 油（EPG，17.84莫耳。/。）溶解在1毫升之絕對乙醇中，然後使 用水浴於70 °C將其加熱2分鐘以獲得—種脂質之澄清溶液 。使溶液降至室溫。然後將1 2毫克的非晶多西紫杉醇 (10.23莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振盪器混 合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成物直到 澄清。將如此獲得之溶液經過〇 . 2 2微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 [S1 -57- 1355946 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.1 0毫升/ 秒的速率將0.5毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入7.5毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約95奈米的粒徑和大於 1 2小時的安定性。 實例4 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將50毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.19莫耳 %)、15毫克膽固醇（26.73莫耳％)和20毫克雞蛋磷酯醯基甘 油（EPG，17.84莫耳％)溶解在1毫升之乙醇和丙二醇（9: 1) 的混合物中’然後使用水浴於7(TC將其加熱2分鐘以獲得 —種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將12毫克的 非晶多西紫杉醇（10.23莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌.器 /渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微 脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過 濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有2 8 G皮下注射針之注射器以〇 . 1 6毫升/ 秒的速率將0· 5毫升之如步驟_丨中所得之多西紫杉醇的濃 -58- 1355946 縮物或前微脂體組成物快速地注入7.5毫升之5%葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約98奈米的粒徑和大於 1 2小時的安定性。 實例5 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.16莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（26.71莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.89莫耳％)溶解在1毫升之乙醇和丙二醇（9 :1)的混合物中，然後使用水浴於70 °C將其加熱2分鐘以 獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將9毫 克的非晶多西紫杉醇（10.22莫耳％)加至此溶液。使用磁攬 拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或 前微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微 米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.25毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提

I -59- 1355946 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約85奈米的粒徑和大於 12小時的安定性。 實例6 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，44.71莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（26.44莫耳％)、15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.72莫耳％)和0.5毫克的α-生育酚（1.0莫耳 %)溶解在1毫升之絕對乙醇和丙二醇（9 : 1)的混合物中， 然後使用水浴於70°C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄 清溶液。使溶液降至室溫。然後將9毫克的非晶多西紫杉 醇（10· 12莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振盪器 混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成物直 到澄清。將如此獲得之溶液經過0.2 2微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有2 6 G皮下注射針之注射器注入以〇 . 2 〇 毫升/秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇 的濃縮物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5%葡萄 糖溶液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液 ，提供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的 微脂體組成物。 -60- 1355946 如此製備之微脂體組成物具有約1 Ο 0奈米的粒徑和大 於1 0小時的安定性。 實例7 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPc，45.16莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（26.71莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG’ 17.89莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇中，然 後使用水浴於7 0 °C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清 溶液。使溶液降至室溫。然後將9毫克的非晶多西紫杉醇 (10.22莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振盪器直 到澄清混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組 成物溶液。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有20G皮下注射針之注射器以0.5毫升/秒 的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃縮 物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶液 以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提供 於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂體 組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約95奈米的粒徑和大於 8小時的安定性。 1355946 實例-8 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1:濃縮物或前微脂體組成物之製備 將50毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HS PC，43· 8 9莫耳 %)、1 5毫克膽固醇（25.95莫耳％)、2〇毫克雞蛋磷酯醯基甘 油（EPG，17.35莫耳％)、1〇毫克的羰基甲氧基聚乙二醇 2000-二硬脂醯基磷酯醯基乙醇胺（2.48莫耳％)和0.15毫克 的乙酸α -生育酚酯（0.21莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇 中，然後使用水浴於70°C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質 之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將1 2毫克的非晶多西 紫杉醇（10.1 1莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振 盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成 物直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過濾 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.16毫升/ 秒的速率將0.5毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入7.5毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約85奈米的粒徑和大於 12小時的安定性。 -62- 1355946 實例9 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSpc，43.61莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（2 5.79莫耳％)、15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.28莫耳％)、7.5毫克的羰基甲氧基聚乙二 醇2000-二硬脂醯基磷酯醯基乙醇胺（246莫耳％)和〇.5毫克 的α-生育酚（0.975莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇中，然 後使用水浴於70°C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清 溶液。使溶液降至室溫。然後將9毫克的非晶多西紫杉醇 ’（9.874莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振盪器 混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成物直 到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有24G皮下注射針之注射器以0.20毫升/ 秒的速率將1. 〇毫升之如步驟中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約8 5奈米的粒徑和大於 5小時的安定性。 實例-1 0 :多西紫杉醇之微脂體組成物 { S1 -63- 1355946 步驟-ι :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將937_5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.165莫 耳％)、281.5毫克膽固醇（26.71莫耳％)、3 75毫克雞蛋磷酯 醯基甘油（EPG，17.90莫耳％)溶解在2.5毫升丙二醇和10毫 升乙醇的混合物中，然後使用水浴於40 t將其加熱4分鐘 以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將 225毫克的非晶多西紫杉醇（10.225莫耳％)在12毫升乙醇中 之溶液加至此溶液和藉由加入乙醇使積最多至25毫升。使 用磁攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過 0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用2毫升具有20G皮下注射針之注射器以0.40毫升/ 秒的速率將2.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入22毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於〇·75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約9 5奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例-1 1 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 -64- 1355946 將9S7.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（Hspc，Μ」。莫 耳％)、281.5毫克膽固醇（26.71莫耳％)、3 75毫克雞蛋磷酯 -醯基甘油（EPG，17.90莫耳％)，溶解在2.5毫升丙二醇和1〇 . 毫升乙醇的混合物中，然後使用水浴於4〇。(：將其加熱4分 鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將 225晕克的非晶多西紫杉gf(i〇_225莫耳％)在12毫升乙醇中 的溶液加至此溶液和藉由加入乙醇使積最多至25毫升。使 用磁攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過 0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用10毫升具有24G皮下注射針之注射器以〇.6毫升/ 秒的速率將22.7毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地二次注入2 5 0毫升之5 %葡萄 糖溶液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液 ，提供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的 微脂體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約98奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例-1 2 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1:濃縮物或前微脂體組成物之製備 將1.875毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.165莫 -65- 1355946 耳％)、563毫克膽固醇（26.71莫耳。/。）、75〇毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.90莫耳％)溶解在5毫升丙二醇和2〇毫升乙 醇的混合物中，然後使用水浴於“它將其加熱1〇分鐘以獲 得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將45〇毫 克的非晶多西紫杉醇（10.225莫耳％)在25毫升乙醇中之溶 液加至此溶液和藉由加入乙醇使積最多至5〇毫升。使用磁 攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物 或則微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過〇 . 2 2 微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用20毫升具有21G皮下注射針之注射器以〇.5〇毫升/ 秒的速率將45.4毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地三次注入500毫升之5%葡萄 糖溶液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液 ，提供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的 微脂體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 5小時的安定性。 實例1 3 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1:濃縮物或前微脂體組成物之製備 將112.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽驗（HSPC，45.48莫 耳％)、33.75毫克膽固醇（26.89莫耳％)、45毫克雞蛋磷酯 -66-

III 1355946 醯基甘油（EPG ’ 17.98莫耳％)溶解在乙醇和丙二醇的混合 物（3毫升’ 9 : 1比率）中，然後使用水浴於70°c將其加熱3 分鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後 將27毫克的多西紫杉醇三水合物（9.65莫耳％)加至此溶液 。使用磁攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇 的濃縮物或前微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液 經過0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用2毫升具有26G皮下注射針之注射器以〇.40毫升/ 秒的速率將2.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入2 2毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約85奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例1 4 :太平洋紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.74莫耳 %)、II·25毫克膽固醇（27.〇5莫耳％)和15毫克二硬脂醯基 磷酯醯基甘油（DSPG，17.41莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙 醇和丙二醇（9 : 1)的混合物中，然後使用水浴於70 °C將其 -67- 1355946 加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫 。然後將9毫克太平洋紫杉醇（9.80莫耳％)加至此溶液。使 用磁攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲得之太平洋紫杉醇的 濃縮物或前微脂體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經 過（K22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.20毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得的太平洋紫杉醇的 濃縮物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖 溶液以獲得一種包含太平洋紫杉醇塡充的微脂體之分散液 ’提供於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標太平洋紫杉醇 的微脂體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例15 :依托泊苷（Etoposide)之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，43.53莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（25.74莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG ’ 17.21莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇中，然 後使用水浴於70 t：將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清 溶液。使溶液降至室溫。·然後將9毫克依托泊苷（13.53莫 耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振盪器混合如此獲 -68- 1355946 得之依托泊苷的濃縮物或前微脂體組成物直到澄清。將如 此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過濾。 步驟-2:微脂體組成物之製備 使用1毫升具有26G皮下注射針之注射器以〇.4〇毫升/ 秒的速率將如步驟-1中所得的1 .〇毫升的依托泊苷的濃縮 物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶液 以獲得一種包含依托泊苷塡充的微脂體之分散液’提供於 0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標依托泊苷的微脂體組成 物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例16 :環孢靈（Cycl〇Sp〇rine)A之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，46.76莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（27.65莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，18.49莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇和丙二 醇（9 : 1)的混合物中，然後使用水浴於70 °C將其加熱2分 鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫》然後將 9毫克環孢靈Α(7·11莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦 旋振盪器直到澄清混合如此獲得之環孢靈Α的濃縮物或 前微脂體組成物。將如此獲得之溶液經過0.2 2微米過濾器 過據、。 -69- 1355946 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以〇.2〇毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得的環孢靈A的濃縮 物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶液 以獲得一種包含環孢靈A塡充的微脂體之分散液，提供 於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標環孢靈A的微脂體組 成物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 2 4小時的安定性。 實例1 7 :環孢靈A之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，46.76莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（27.65莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，1 8.49莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇和丙二 醇的混合物（9 : 1)中，然後使用水浴於7〇 °C將其加熱2分 鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將 9毫克環孢靈A(7.1 1莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦 旋振盪器直到澄清混合如此獲得之環孢靈A的濃縮物或 前微脂體組成物。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器 過滤。 步驟_2 :微脂體組成物之製備

IS.I -70- 1355946 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.14毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得的環孢靈A的濃縮 物或前微脂體組成物快速地注入11毫升之5 %葡萄糖溶液 以獲得一種包含環孢靈A塡充的微脂體之分散液，提供 於〇·75毫克/毫升的藥物濃度之目標環孢靈A的微脂體組 成物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 1 〇小時的安定性。 實例18 :樺酸衍生物（DRF-40 15 (III))之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，43.49莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（25.71莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.19莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇和丙二 醇（9 : 1)的混合物中’然後使用水浴於7〇 °C將其加熱2分 鐘以獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫》然後將 9毫克DRF-4〇15(13.60莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/ 渦旋振盪器混合如此獲得之DRF -4 0 1 5的濃縮物或前微脂 體組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾 器過濾。 步驟-2:微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.33毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得的DRF-401 5的濃縮 -71 - 1355946 物或前微脂體組成物快速地注入11毫升之5%葡萄糖溶液 以獲得一種包含DRF-4015塡充的微脂體之分散液，提供 於0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標DRF-40 15(111)的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約95奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例19 :樺酸衍生物（DRF-40 12(11))之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，43.25莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（25.58莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.10莫耳％)溶解在1毫升之乙醇和丙二醇的 混合物（9 : 1)中’然後使用水浴於70 °C將其加熱2分鐘以 獲得一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫。然後將9毫 克0尺？-40 1 2( 14.07莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器·/渦 旋振盪器混合如此獲得之DRF-40 12的濃縮物或前微脂體 組成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過〇.22微米過濾器 過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0·50毫升/ 秒的速率將1 .〇毫升之如步驟_〗中所得的DRF-401 2之濃縮 物或則微脂體組成物快速地注入i i毫升之5 %葡萄糖溶液 以獲得一種包含DRF-40 12塡充的微脂體之分散液，提供 -72- 1355946 於0.75毫克/毫升的藥物濃度之DRF-40 12 (II)之目標微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約90奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例20 :樺酸衍生物（MJ- 1 098(1))之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，43.25莫耳 %)、1 1.25毫克膽固醇（25.58莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.10莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇、丙二 醇、和N，N-二甲基乙醯胺（8 : 1 : 1)的混合物中，然後使 用水浴於70 °C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清溶液 。使溶液降至室溫。然後將9毫克 ^1- 1 098( 1 4.07莫耳％) 加至此溶液。混合如此獲得之MJ-1 09 8的濃縮物或前微脂 體組成物使用磁攪拌器/渦旋振盪器直到澄清。將如此獲 得之溶液經過0.2 2微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有30G皮下注射針之注射器以0.50毫升/ 秒的速率將1 .〇毫升之如步驟-1中所得的MJ- 1 098之濃縮物 或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶液以 獲得一種包含M〗-1 098塡充的微脂體之分散液，提供於 0.75毫克/毫升的藥物濃度之1 098之目標微脂體組成物 i S] -73- 1355946 如此製備之微脂體組成物具有約95奈米的粒徑和大於 6小時的安定性。 實例2 1 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，45.16莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（26.71莫耳％)和15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.89莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇中，然 後使用水浴於70 °C將其加熱2分鐘以獲得一種脂質之澄清 溶液。使溶液降至室溫。然後將9毫克的非晶多西紫杉醇 (10.22莫耳％)加至此溶液。使用磁攪拌器/渦旋振盪器混 合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組成物直到 澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有16G皮下注射針之注射器以0.20毫升/ 秒的速率將1. 〇毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物快速地注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶 液以獲得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提 供於0_75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂 體組成物。 如此製備之微脂體組成物具有約200奈米的粒徑和小 於3小時的安定性。 ί S3 -74- 1355946 實例22 :多西紫杉醇之微脂體組成物 步驟-1 :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，44.71莫耳 %)、11.25毫克膽固醇（26.44莫耳％)、15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17_72莫耳％)、和0.50毫克的乙酸α-生育酚 酯（1.0莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇和丙二醇（9: 1比率） 的混合物中，然後使用水浴於70。(：將其加熱2分鐘以獲得 一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫，將9毫克的非晶 多西紫杉醇（10.12莫耳％)加至其中。使用磁攪拌器/渦旋 振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組 成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過 濾。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用1毫升具有28G皮下注射針之注射器以0.05毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物注入1 1毫升之5 %葡萄糖溶液以獲 得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提供於 0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂體組 成物。 如此製備之微脂體組成物具有約1 9 5奈米的粒徑和小 於2小時的安定性。 實例2 3 :多西紫杉醇之微脂體組成物 ΐ S3 -75- 1355946 步·驟-ι :濃縮物或前微脂體組成物之製備 將37.5毫克的氫化大豆磷酯醯膽鹼（HSPC，44.71莫耳 %)、11·25毫克膽固醇（26.44莫耳％)、15毫克雞蛋磷酯醯 基甘油（EPG，17.72莫耳％)、和0.50毫克的乙酸α-生育酚 酯（1.0莫耳％)溶解在1毫升之絕對乙醇和丙二醇（9: 1比率） 的混合物中，然後使用水浴於70 X：將其加熱2分鐘以獲得 一種脂質之澄清溶液。使溶液降至室溫，將9毫克的非晶 多西紫杉醇（10.12莫耳％)加至其中。使用磁攪拌器/渦旋 振盪器混合如此獲得之多西紫杉醇的濃縮物或前微脂體組 成物直到澄清。將如此獲得之溶液經過0.22微米過濾器過 爐。 步驟-2 :微脂體組成物之製備 使用丨毫升具有16G皮下注射針之注射器以〇.〇5毫升/ 秒的速率將1.0毫升之如步驟-1中所得之多西紫杉醇的濃 縮物或前微脂體組成物注入1 1毫升之5%葡萄糖溶液以獲 得一種包含多西紫杉醇塡充的微脂體之分散液，提供於 0.75毫克/毫升的藥物濃度之目標多西紫杉醇的微脂體組 成物。 如此製備之微脂體組成物具有約2 7 0奈米的粒徑和小 於0.5小時的安定性。 【圖式簡單說明】 圖_1 :在B16.F10異體移植中根據本發明的多西紫杉 -76- 1355946 醇之微脂體組成物的活體內抗腫瘤活性和多西紫杉醇，剋 癌易之習知組成物的活體內抗腫瘤活性之比較》 圖-2 :用根據本發明之多西紫杉醇的微脂體組成物治 療的C5 7BL/6小鼠之體重和用多西紫杉醇，剋癌易®之習 知組成物治療的C57BL/6小鼠之體重的比較》 圖-3:在卵巢癌細胞中用根據本發明之多西紫杉醇的 微脂體組成物獲得之微管蛋白聚合作用的劑量-動力學和 用多西紫杉醇，剋癌易®之習知組成物獲得之微管蛋白聚 合作用的劑量-動力學之比較。 圖-4 :在PA1細胞株於用ΙμΜ根據本發明的多西紫杉 醇之微脂體組成物獲得之微管蛋白聚合作用之時間-動力 學和用多西紫杉醇，剋癌易®之習知組成物獲得之微管蛋 白聚合作用之時間-動力學的比較。 圖-5:在卵巢癌細胞中用根據本發明之多西紫杉醇的 微脂體組成物獲得之微管蛋白聚合作用的劑量-動力學和 用多西紫杉醇、剋癌易®之習知組成物獲得之微管蛋白聚 合作用的劑量-動力學。 圖-6:在卵巢癌細胞中用根據本發明之多西紫杉醇的 微脂體組成物獲得之微管蛋白聚合作用的時間-動力學和 用多西紫杉醇、剋癌易®之習知組成物獲得之微管蛋白聚 合作用的時間-動力學。 -77-

Claims (1)

1355946 年月日修(吏)正本 1fiO 10. 2 i_J I A 口 ♦ ; 附件3A :第097108323號申請專利範圍修正本 民國100年10月24日修正 « 十、申請專利範固 1. 一種水溶性差之藥物和化合物的前微脂體組成物， 該組成物包含： a)—種水溶性差之藥物或化合物作爲活性成分 φ b) —種膜形成脂質，包含飽和磷脂與不飽和磷脂之混 合物； 〇—種膜安定劑，選自固醇化合物；及 d) —種用於脂質之媒液，其係爲選自下列之水互溶性 有機溶劑：乙醇、各種分子量之聚乙二醇、丙二醇或其混 合物；其中 該水溶性差之藥物或化合物具有小於1 0毫克/毫升之 水溶解度， φ 該膜形成飽和磷脂係以40至50莫耳百分比存在於該組 成物中， 該膜形成不飽和磷脂係以15至20莫耳百分比存在於該 組成物中， 該膜安定固醇化合物係以25至35莫耳百分比存在於該 組成物中， 該組成物係裝在無菌玻璃管瓶、由非毒性材料構成之 無菌管瓶、或預充無菌注射器中，其在注入稀釋液內時， 立即形成該水溶性差之藥物和化合物的微脂體。 1355946 2. 根據申請專利範圍第1項之組成物，其包含—或更 多種的經聚乙二醇（PEG)-偶合之磷脂和醫藥上可接受的賦 形劑。 3. 根據申請專利範圍第1項之組成物’其中該水溶性 差之藥物和化合物屬於下列種類：抗癌劑，選自太平洋紫 杉醇（Paclitaxel)、多西紫杉醇（Docetaxel)、伊立替康 (Irinotecan)、托撲替康（Topotecan)、SN-38、多柔比星 (Doxorubicin)、道諾黴素（Daunomycin)、順鉑（Cisplatin) 、奧沙利銷（Oxaliplatin)、5-氟尿喃 Π定（Fluorouracil)、絲 裂黴素（Mitomycin)、甲氨蝶玲（Methotrexate)、依托泊苷 (Etoposide)、膨棋菊內脂（Wedelolactone)及其衍生物、樺 酸、樺酸衍生物，式（I)的MJ- 1 098 ;樺酸衍生物，式（II) 的DRF-4012 ;或樺酸衍生物，式（III)的DRF-4015 ;

-2- 1355946 (ΠΙ)

消炎劑，選自卩引除美辛（Indomethacin)、布洛芬（Ibuprofen) 、酮洛芬（Ketoprofen)、氟比洛芬（Flubiprofen)、吡羅昔康 (Piroxicam)、替諾昔康（Tenoxicam)、或萘普生（Naproxen) :抗真菌劑，選自酮康哩（Ketoconazole)、或兩性黴素 (Amphotericin)B;性激素，選自睾酮（Testosterone)、雌 激素、黃體酮（Progesterone)、或雌二醇（Estradiol);類固醇 ，選自地塞米松（Dexamethasone)、潑尼松龍（Prednisolone) 、氟！維司群（Fulvestrant)、依西美坦（Exemestane)、或曲 安西龍（Triamcinolone);抗高血壓劑，選自卡托普利 (Captopril)、雷米普利（Ramipril)、特拉哩曉（Terazosin)、米 諾地爾（Minoxidil)、或帕拉諾辛（Parazosin);止吐藥，選 自奧丹亞龍（Ondansetron)、或格拉司瓊（Granisetron);抗 生素類，選自甲硝哩（Metronidazole)、或夫西地酸（Fusidic Acid);免疫調節劑，選自環孢靈（Cyclosporine)、或聯苯 基二甲基二羧酸；和麻醉藥，選自丙泊酚（Propofol)、阿 法沙龍（Alfaxalone)、或海索比妥（Hexobarbital)。 4·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該水溶性 差之藥物和化合物係使用於總前微脂體組成物之從9至1 4 莫耳百分比的範圍。 -3- 1355946 5. 根據申請專利範圍第1至3項中任—項之組成物，其 中該水溶性差之藥物或化合物爲多西紫杉醇。 6. 根據申請專利範圍第5項之組成物，其中該多西紫 杉醇係選自無水結晶、結晶半水合物、結晶三水合物或非 晶多西紫杉醇^ 7. 根據申請專利範圍第6項之組成物，其中該多西紫 杉醇爲非晶多西紫杉醇，使用於總前微脂體組成物之從9 至11莫耳百分比的範圍。 8. 根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該膜形成 飽和磷脂係選自由氫化大豆磷脂醯膽鹼（HS PC)、氫化大豆 卵磷脂、二肉豆蔻醯基磷酯醯基乙醇胺（DMPE) '二軟脂 醯基磷酯醯基乙醇胺（DPPE)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼 (DMPC)、二軟脂醢基磷脂醯膽鹼（DPPC)、二硬脂醯基磷 脂醯膽鹼（DSPC)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼（DLPC)、1_肉 豆蔻醯基-2-軟脂醯基磷脂醯膽鹼、1-軟脂醯基_2_肉豆蔻 醯基磷脂醯膽鹼' 1-軟脂醯基磷脂醯膽鹼、1-硬脂醯基-2-軟脂醯基磷脂醯膽鹼、二軟脂醯基鞘磷脂、二硬脂醯基鞘 磷脂、氫化磷酯醯基肌醇（HP I)、二肉豆蔻醯基磷酯醯基 甘油（DMPG)、二軟脂醯基磷酯醯基甘油（DPPG)、二硬脂 醯基磷酯醯基甘油（DSPG)、二肉豆蔻醯基磷脂酸（DMPA) 、二軟脂醯基磷脂酸（DPPA)、二肉豆蔻醯基磷酯醯基絲 胺酸（DMPS)、二軟脂醯基磷酯醯基絲胺酸（DPPS)、二磷 酯醯基甘油（DPG)、氫化大豆磷酯醯基甘油（SPG-3)、二油 醯基磷酯醯基甘油（DOPG)、二硬脂醯基磷脂酸（DSPA)及 -4- 1355946 其混合物組成之群組。 9. 根據申請專利範圍第1和8項中任一項之組成物，其 中該膜形成飽和磷脂爲氫化大豆磷脂醯膽鹼（HSPC)，使用 於總前微脂體組成物之從44至46莫耳百分比的範圍。 10. 根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該膜形成 不飽和憐脂係選自由卵憐脂、隣脂醯膽驗（PC)、隣醋酿基 乙醇胺（PE)、溶血卵磷脂、溶血磷酯醯基乙醇胺、二月桂 基磷脂醯膽鹼（DLPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼（DOPC)、鞘 磷脂、腦鞘磷脂、腦苷脂類、雞蛋磷酯醯基甘油（EP.G)、 大豆磷酯醯基甘油（SPG)、磷酯醯基肌醇（PI)、磷脂酸 (PA)、磷酯醯基絲胺酸（PS)、二月桂醯基磷酯醯基甘油 (DLPG)、心月旨類及其混合物組成之群組。 1 1 .根據申請專利範圍第1和1 0項中任一項之組成物， 其中該膜形成不飽和磷脂爲雞蛋磷酯醯基甘油（EPG)，使 用於總前微脂體組成物之從16至18莫耳百分比的範圍。 12·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該膜安定 劑爲一種固醇化合物，選自由膽固醇、膽固醇衍生物、維 生素D、膽固醇酯類、及其混合物組成之群組。 13.根據申請專利範圍第1和12項中任一項之組成物， 其中該膜安定固醇化合物爲膽固醇，使用於總前微脂體組 成物之從25至2 7莫耳百分比的範圍。 1 4.根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該水互溶 性有機溶劑爲乙醇。 1 5·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該水互溶 -5- 1355946 性有機溶劑爲一種於1: 1至1: 0.05以體積計的比率之乙 醇和丙二醇的混合物，或乙醇與聚乙二醇的混合物。 16. 根據申請專利範圍第2項之組成物，其中該經聚乙 二醇（PEG)-偶合之脂質係選自由羰基甲氧基聚乙二醇-二 硬脂醯基磷酯醯基乙醇胺（MPEG-DSPE-750、MPEG-DSPE-2000和DSPE-MPEG-5000)、羰基甲氧基聚乙二醇-二軟脂 醯基磷酯醯基乙醇胺（DPPE-MPEG-2000和 DPPE-MPEG-5 000)、羰基甲氧基聚乙二醇_二肉豆蔻醯基磷酯醯基乙醇 胺（DMPE-MPEG-2000或 DMPE-MPEG-5000)及其衍生物組 成之群組。 17. 根據申請專利範圍第2項之組成物，其中該經聚乙 二醇（PEG)-偶合之脂質係使用於總前微脂體組成物之從2 至5莫耳百分比的範圍。 1 8 ·根據申請專利範圍第2、1 6和1 7項中任一項之組成 物’其中該經聚乙二醇（PEG)-偶合之脂質爲MPEG-DSPE-2 00 0，使用於總前微脂體組成物之從2至3莫耳百分比的範 圍。 19.根據申請專利範圍第2項之組成物，其中該醫藥上 可接受的賦形劑爲一種選自α-生育酚或其乙酸鹽、維生 素Ε、々-胡蘿蔔素、α -胡蘿蔔素、番茄紅素、黃體素、 或玉米黃素的抗氧化劑。 2 0.根據申請專利範圍第2項之組成物，其中該醫藥上 可接受的抗氧化劑係使用於前微脂體組成物之從0.20至 莫耳百分比的範圍。 -6- 1355946 21. 根據申請專利範圍第2、19和20項中任一項之組成 物’其中該抗氧化劑爲α-生育酚或其乙酸鹽，使用於前 微脂體組成物之從0.20至1.0莫耳百分比的範圍。 22. 根據申請專利範圍第2項之組成物，其中醫藥上可 接受的賦形劑爲一種選自檸檬酸鹽緩衝劑、tris-緩衝劑、 或磷酸鹽緩衝劑的緩衝劑。 23. 根據申請專利範圍第2項之組成物，其中該醫藥上 φ 可接受的賦形劑爲一種選自檸檬酸、順丁烯二酸、草酸、 琥珀酸、酒石酸、鹽酸、氫溴酸、或磷酸的酸化劑。 2 4 ·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該非毒性 容器係選自由材料像塑膠、聚丙烯、聚乙烯、聚酯類、聚 醯胺類、聚碳酸酯類、或烴聚合物類所製成之管瓶。 2 5.—種水溶性差之藥物和化合物之微脂體組成物， 其由下列組成： a) —種膜形成脂質，由一或更多種的飽和磷脂或不飽 φ 和磷脂或其混合物組成； b) —種膜安定劑，選自固醇化合物； c) 一種用於脂質之媒液，選自水互溶性有機溶劑或其 混合物；及 d) —種稀釋液， 其特徵在於不小於4小時之物理安定性、水溶性差之 藥物和化合物在微脂體中之295%封裝、具有小於100奈米 之粒徑，且用於直接給藥至需要該水溶性差之藥物和化合 物的治療之病患，其中該微脂體係藉由透過安裝有24G至 1355946 300皮下注射針的注射器，以約0.10毫升/秒至約1.5毫升/ 秒的速率，將申請專利範圍第1至24項中任一項之前微脂 體組成物注入稀釋液中而形成。 26.根據申請專利範圍第25項之組成物，其包含經聚 乙二醇（PEG)-偶合之磷脂和醫藥上可接受的賦形劑。 2 7.根據申請專利範圍第25項之組成物，其中： a) 該水溶性差之藥物和化合物與上述申請專利範圍第 3項中所述者相同； b) 該膜形成脂質與上述申請專利範圍第8、9、10或1 1 項中所述者相同； c) 該膜安定劑與上述申請專利範圍第12或13項中所述 者相同；及 d) 該媒液與上述申請專利範圍第14或15項中所述者相 同。 28. 根據申請專利範圍第25項之組成物，其中該稀釋 液係選自注射用無菌水；鹽水溶液；5%和1 0%葡萄糖溶液 :葡萄糖和氯化鈉溶液；乳酸鈉溶液；林格氏液（Ringer，s solution);乳酸化林格液：甘露醇溶液：具有葡萄糖或氯 化鈉溶液之甘露醇；或包含電解質、葡萄糖、果糖和轉化 糖之各種組合的多重電解質溶液。 29. 根據申請專利範圍第25項之組成物，其中： a)該水溶性差之藥物和化合物係以從9至14之莫耳百 分比存在’相對於上述申請專利範圍第1項之前微脂體組 成物； 1355946 b) 該膜形成飽和磷脂類係以從40至5 0之莫耳百分比存 在’相對於上述申請專利範圍第1項之前微脂體組成物； c) 該膜形成不飽和磷脂類係以從15至20之莫耳百分比 存在’相對於上述申請專利範圍第1項之前微脂體組成物 9 d) 該膜安定劑係以從25至55之莫耳百分比存在，相對 於上述申請專利範圍第1項之前微脂體組成物。 30.根據申請專利範圍第25和27項中任一項之組成物 ’其中該水溶性差之藥物或化合物爲多西紫杉醇》 3 1.根據申請專利範圍第30項之組成物，其中該多西 紫杉醇係選自無水結晶、結晶半水合物、結晶三水合物或 非晶多西紫杉醇。 32.根據申請專利範圍第31項之組成物，其中該多西 紫杉醇爲非晶多西紫杉醇，使用於從9至11之莫耳百分比 ’相對於上述申請專利範圍第1項之前微脂體組成物。 3 3.根據申請專利範圍第26項之組成物，其中： a) 該經（PEG)-偶合之磷脂類與上述申請專利範圍第16 或18項中所述者相同；及 b) 該醫藥上可接受的賦形劑與上述申請專利範圍第19 、21、22或23項中所述者相同。 34.根據申請專利範圍第26項之組成物，其中： a)該經（PEG)-偶合之磷脂類係以從2至5之莫耳百分比 存在，相對於上述申請專利範圍第2項之前微脂體組成物 :及 -9 - 1355946 b)該醫藥上可接受的抗氧化劑係以從0.20至1.0之莫耳 百分比存在，相對於上述申請專利範圍第2項之前微脂體 組成物。 35. —種製備申請專利範圍第1項之前微脂體組成物之 方法，其包含下列步驟： a) 於從3 0°C至70°C之溫度下，將適當比例的膜形成脂 質和膜安定劑混合於媒液中，而獲得澄清溶液； b) 將步驟a)之溶液冷卻至室溫； Ο將適當比例的水溶性差之藥物以固體或在媒液中之 混合物的形式加至步驟b)之溶液： d) 混合步驟c)之內容物而獲得澄清溶液； e) 用媒液進一步將步驟d)之混合物稀釋至所要體積； f) 透過無菌過濾器過濾步驟e)之溶液而獲得前微脂體 組成物的濃縮物；及 g) 將步驟f)的濃縮物塡充至玻璃管瓶、由非毒性材料 製成之管瓶、或注射器。 36. 根據申請專利範圍第35項之方法，其中該水溶性 差之藥物和化合物的適當比例係在從9至14莫耳百分比的 範圍內，相對於上述申請專利範圍第1項之總前微脂體組 成物；膜形成飽和磷脂類的適當比例係在從40至50莫耳百 分比的範圍內，相對於上述申請專利範圍第1項之總前微 脂體組成物：膜形成不飽和磷脂類的適當比例係在從1 5至 20莫耳百分比的範圍內，相對於上述申請專利範圍第1項 之總前微脂體組成物：且膜安定劑的適當比例係在從25至 1355946 30莫耳百分比的範圍內，相對於上述申請專利範圍第1項 之總前微脂體組成物。 37. —種製備申請專利範圍第2項之前微脂體組成物之 方法，其包含下列步驟： a) 於從30°C至70°C之溫度下，將適當比例的膜形成脂 質、膜安定劑、經（PEG)-偶合之磷脂類、和隨意之醫藥上 可接受的抗氧化劑及/或醫藥上可接受的酸化劑一起混合 於媒液中，而獲得澄清溶液； b) 將步驟a)之溶液冷卻至室溫； c) 將適當比例的水溶性差之藥物以固體或在媒液中之 混合物的形式加至步驟b)之溶液； d) 混合步驟c)之內容物而獲得澄清溶液； e) 隨意地用醫藥緩衝劑調節步驟d)的溶液之pH ; 0將步驟d)或e)的混合物用媒液進一步稀釋至所要的 體積； g) 透過無菌過濾器過濾步驟f)的溶液而獲得前微脂體 組成物的濃縮物；及 h) 將步驟g)之濃縮物塡充至玻璃管瓶、由非毒性材料 製成之管瓶、或注射器。 38. 根據申請專利範圍第37項之方法，其中該水溶性 差之藥物和化合物的適當比例係在從9至14莫耳百分比的 範圍內，相對於上述申請專利範圍第2項之總前微脂體組 成物；膜形成飽和磷脂類的適當比例係在從40至50莫耳百 分比的範圍內，相對於上述申請專利範圍第2項之總前微 -11 - 1355946 脂體組成物：膜形成不飽和磷脂類的適當比例係在從15至 2〇莫耳百分比的範圍內，相對於上述申請專利範圍第2項 之總前微脂體組成物；膜安定劑的適當比例係在從25至30 莫耳百分比的範圍內，相對於上述申請專利範圍第2項之 總前微脂體組成物；醫藥上可接受的抗氧化劑的適當比例 係在從0.20至1.0莫耳百分比的範圍內，相對於上述申請 專利範圍第2項之總前微脂體組成物。 3 9.—種製備申請專利範圍第25項之微脂體組成物之 方法，該微脂體組成物之特徵在於不小於4小時之物理安 定性，水溶性差之藥物和化合物在微脂體中之295%封裝 ，具有小於100奈米之粒徑，該方法包含透過安裝有18G 至3 0G皮下注射針的注射器，以約0.10毫升/秒至約1.5毫 升/秒的速率，將申請專利範圍第1項之前微脂體組成物的 濃縮物注入稀釋液中。 40.—種製備申請專利範圍第26項之微脂體組成物之 方法，該微脂體組成物之特徵在於不小於4小時之物理安 定性，水溶性差之藥物和化合物在微脂體中之295%封裝 ，具有小於100奈米之粒徑，該方法包含透過安裝有18G 至30G皮下注射針的注射器，以約0.10毫升/秒至約1.5毫 升/秒的速率，將申請專利範圍第2項之前微脂體組成物的 濃縮物注入稀釋液中。 4 1.根據申請專利範圍第39或40項之方法，其中該 稀釋液係選自注射用無菌水：鹽水溶液：5%和10%葡萄 糖溶液；葡萄糖和氯化鈉溶液；乳酸鈉溶液；林格氏液： -12- 1355946 乳酸化林格液；甘露醇溶液；具有葡萄糖或氯化鈉溶液之 甘露醇：或包含電解質、葡萄糖、果糖和轉化糖之各種組 合的多重電解質溶液。

-13- 1355946 附件4A ··第0 97 1 08323號專利申請案 中文圖式替換頁民國1〇〇年5月23曰修正 換頁 未治療對照組 CO 微管蛋白 聚合作用％ 35.36 66.76 61.72 養 微管蛋白 聚合作用％ 未治療對照組 CD LD 35.22 62.31 69.9 未治療對照組 CO LD 微管蛋白 聚合作用％ W_3S _p s 70.99 67.58 未治療對照組 CD LD 微管蛋白 S__P S_P 5___P 聚合作用％ 32·Μ. 69.21 «2-91

+對照組+c〇 LD 1355946 附件4A :第0 97 108 32 3號專利申請案 中文圖式替換頁民國1〇〇年5月23日修正 圖6

80706050如302010*^

時間(分） —-對照組+3 一山