CN102579337A - 含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，是由包括以下重量份的组分制成的：水溶液0.5～50份，多西他赛0.5～50份，lipid-PEG 0.05～20份，磷脂50～90份；或：水溶液0.5～50份，多西他赛0.5～50份，lipid-PEG 0.05～20份，磷脂50～90份，具有肿瘤靶向功能的靶向因子0.01～10份；是通过以下制备方法制备得到的：(1)取磷脂和lipid-PEG，溶解于水溶液中，得溶液A；或：取磷脂、lipid-PEG和具有肿瘤靶向功能的靶向因子，溶解于水溶液中，得溶液A；(2)将多西他赛分散于步骤(1)所得的溶液A中，得混悬液B；(3)将混悬液B高速剪切1～3分钟，得初乳C；(4)将初乳C采用高压乳匀法进行乳匀，即得。本发明的制剂提高了多西他赛的含量，降低多西他赛的毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂、靶向脂质纳米混悬剂及其冻干制剂，以及其制备方法，属于医药技术领域。
背景技术
多西他赛(docetaxel)系从欧洲红豆杉(Taxusbaccata L)中提取的前体化合物10-脱乙酰基浆果赤霉素III经半合成得到的紫杉类化合物。多西他赛的作用机制与紫杉醇类似，抗肿瘤活性是紫杉醇的1.3～12倍，对乳腺癌、非小细胞肺癌和卵巢癌等常见肿瘤均有确切疗效。多西他赛结构式为：C43H53NO14，分子量为807.88，结构式如下：
多西他赛在水中的溶解度很低约为3μg/ml，口服生物利用度差，不足8％，为提高其生物利用度，目前临床上使用其注射剂，上市剂型为注射用多西他赛和多西他赛注射液，该类制剂在静脉滴注前以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液溶解、稀释才能使用。该类制剂中还有吐温80和乙醇等溶剂，易产生溶血和过敏性反应，需提前服用地塞米松等药物防治，临床用药不方便，用药安全性低。因多西他赛在溶液中长时间放置容易被氧化、水解，从而降低主药多西他赛的含量，所以注射剂的质量稳定性差。迄今，并无解决上述问题的方案。
纳米混悬剂是一种纯药物纳米颗粒的亚微细粒胶态分散体，以表面活性剂为增溶剂。与脂质系统相比，该技术可成功地将既难溶于水又难溶于油的药物制成制剂，克服了制备其它制剂需先溶解药物的缺点，通过简单的工艺和处方提高难溶性药物的生物利用度，同时避免大量附加成分对患者的毒副作用。制剂制备时保持了最佳结晶状态且具有足够小的药物粒度。另外此剂型的微粒特性可改变药物静脉注射的药代动力学特征，有高效低毒的效果；粒子变小促进溶出，能解决许多与口服生物利用度低相关的问题；药物呈固态可使其化学稳定；小粒子沉降慢，使其物理稳定。我们曾申请一项中国发明专利(201011486.0)，涉及一种含有多西他赛纳米结晶制剂及其冻干剂与制备方法。其特征在于本发明利用表面活性剂作为增溶剂，经过高压乳匀将多西他赛制备成纳米结晶溶液，最后经过滤除菌、冷冻干燥得到多西他赛纳米结晶冻干制剂。研究表明，此制剂可以增加多西他赛的溶解度，可以在一定程度上增加肿瘤内药物浓度，提高抗肿瘤效果，且对机体的毒性作用明显降低。
此给药系统属于被动靶向给药系统，载药微粒易被单核-巨噬细胞系统的巨噬细胞(尤其是肝的kupffer细胞)摄取，通过正常生理过程运送至肝、脾等器官，要达到其他的靶部位就有困难。若对载药微粒表面进行修饰既能避免巨噬细胞的摄取，防止在肝脾内浓集，改变了微粒在体内的分布而到达特定的靶部位实现主动靶向，从而通过被动蓄积与主动转运实现对肿瘤组织的靶向给药。
长循环纳米混悬剂(long circulation nano-suspensions)，也称隐形纳米混悬剂(stealthnano-suspensions)是一个重要研究方向。亲水性的聚乙二醇(PEG)修饰的长循环纳米混悬剂能够逃避网状内皮系统的捕获，显著延长了其在循环系统中的滞留时间，通过增强滞留和渗透作用(EPR)延长药物在体内的循环时间，增加被包载药物向肿瘤组织内的蓄积，从而提高了抗癌药物传递的靶向性。
长循环纳米混悬剂给药系统仍属于被动靶向给药系统。为进一步增强脂质纳米混悬剂对肿瘤组织的特异性靶向能力，以期显著提高抗肿瘤药物的疗效，研究主动靶向的隐形纳米混悬剂成为提高抗癌药物靶向性的重要手段。因此可用叶酸、转铁蛋白和单克隆抗体等来修饰隐形纳米混悬剂，以增加药物传递的靶向性。叶酸(folic acid，FA)是一种小分子维生素，它可被还原为四氢叶酸，后者是一碳单位转移酶的辅酶，参与一碳单位代谢和嘌呤、胸腺嘧啶的从头合成。与其它靶向分子如单克隆抗体相比，FA相对分子质量小、无免疫原性、价廉易得、稳定性好、与药物或载体之间的化学键合简单易行。因此以FA为靶向分子构建递药系统已成为主动靶向治疗肿瘤的研究热点之一。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂、靶向脂质纳米混悬剂及其冻干制剂，并提供了其制备方法，本发明的制剂，提高了多西他赛在制剂中的含量，降低多西他赛的毒副作用，有效增加制剂在体内的循环时间，起到长效与缓释的目的；另外，可实现药物的靶向传递，选择性地将药物释放于肿瘤部位或其细胞内部，提高靶区的药物浓度，进一步提高药物的治疗效果。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，是由包括以下重量份的组分制成的：水溶液0.5～50份，多西他赛0.5～50份，lipid-PEG0.05～20份，磷脂50～90份；
或：水溶液0.5～50份，多西他赛0.5～50份，lipid-PEG 0.05～20份，磷脂50～90份，具有肿瘤靶向功能的靶向因子0.01～10份；
是通过以下制备方法制备得到的：
(1)取磷脂和lipid-PEG(如，DSPE-PEG，DOPE-PEG，DPPC-PEG)，溶解于水溶液中，得溶液A；
或：取磷脂、lipid-PEG和连有肿瘤靶向因子的lipid-PEG-ligand(如，DSPE-PEG-FA，DSPE-PEG-NGR，DSPE-PEG-RGD)，溶解于水溶液中，得溶液A；
(2)将多西他赛分散于步骤(1)所得的溶液A中，得混悬液B；
(3)将混悬液B高速剪切1～3分钟，得初乳C；
(4)将初乳C采用高压乳匀法进行乳匀，即得长循环脂质多西他赛纳米混悬剂/靶向脂质纳米混悬剂。
所述含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂中还包括冻干保护剂，冻干保护剂在脂质纳米混悬剂中的浓度为0.005～0.2mg/ml，加入方式为：乳匀后加入。
优选的，所述聚乙二醇的分子量在200～5000之间，优选的为2000～3000之间。
所述磷脂选自：大豆卵磷脂(SPC)、聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、二月桂酰卵磷脂(DLPC)、二硬酯酰卵磷脂(DPPC)，二棕榈酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰卵磷脂(MPPC)、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂(PMPC)、1-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂(PSPC)、1-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂(SPPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化豆磷脂(HSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二棕榈脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二棕榈酰磷脂酰二丝氨酸(DPPS)、脑磷脂酰丝氨酸(PS)、脑神经鞘磷脂(BSP)、二棕榈酰神经鞘磷脂(DPSP)、二硬脂酰神经鞘磷脂(DSSP)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)中的任一种或任几种的混合，其中优选的为：大豆卵磷脂(SPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)或二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)。
所述具有肿瘤靶向功能的靶向因子选自：特定的血管生成因子受体抗体及其Fab片段，RGD肽及其类似物，NGR肽及其类似物，叶酸(folic acid，FA)，优选叶酸。
所述水溶液选自双蒸水、0.9％氯化钠水溶液、5％葡萄糖水溶液、含5％葡萄糖和0.9％氯化钠的注射用水、含5％葡萄糖的林格氏注射液或磷酸盐缓冲液中的任一种。
所述步骤(3)中，高速剪切的速度为20000r/min。
所述步骤(4)中，高压乳匀法的参数为：依次在200bar循环10次、500bar循环10次、1000bar循环20次。此为经大量实验摸索出的最佳工艺，若循环压力太小或循环次数不够将不能制成结晶制剂或达到所要求的粒径。
所述冻干保护剂选自：甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐或聚乙二醇。
所述含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂的制备方法，步骤如下：
(1)取磷脂和lipid-PEG(如，DSPE-PEG，DOPE-PEG，DPPC-PEG)，溶解于水溶液中，得溶液A；
或：取磷脂、lipid-PEG和连有肿瘤靶向因子的lipid-PEG-ligand(如，DSPE-PEG-FA，DSPE-PEG-NGR，DSPE-PEG-RGD)，溶解于水溶液中，得溶液A；
(2)将多西他赛分散于步骤(1)所得的溶液A中，得混悬液B；
(3)将混悬液B高速剪切1～3分钟，得初乳C；
(4)将初乳C采用高压乳匀法进行乳匀，即得长循环脂质多西他赛纳米混悬剂；或：乳匀后，加入冻干保护剂，过滤除菌，冷冻干燥去除水分，得干燥的长循环脂质多西他赛纳米混悬剂。
本发明中，lipid-PEG的合成方法为：将磷脂lipid(如DSPE)与PEG相连，形成PEG修饰的磷脂lipid-PEG(DSPE-PEG)。连有肿瘤靶向因子的lipid-PEG-ligand的合成方法为：得到lipid-PEG(DSPE-PEG)后，将PEG末端活化形成活化酯lipid-PEG-BTC或lipid-PEG-NHS(DSPE-PEG-BTC或DSPE-PEG-NHS)，再与具有肿瘤靶向功能的靶向因子(如末端含羧基的FA)连接，形成具有肿瘤靶向功能的靶向因子(如lipid-PEG-F，DSPE-PEG-F)(合成方法见参考文献：Targeting Folate Receptor with Folate Linked to Extremities Poly(ethyleneglycol)-Grafted Liposomes：In Vitro Studies)。
本发明设计了一种叶酸受体介导的长循环脂质纳米混悬制剂作为新型的多西他赛给药系统：将抗肿瘤药物包载于纳米混悬剂内，在纳米混悬剂表面用亲水性的聚乙二醇(PEG)修饰以获得长循环脂质纳米混悬剂；同时用PEG和具有肿瘤靶向功能的靶向因子FA进行修饰，获得靶向脂质纳米混悬剂，其意义存在于以下几个方面：(1)使用纳米混悬剂包载多西他赛，可有效降低多西他赛的毒副作用；(2)进行PEG化修饰可有效增加制剂在体内的循环时间，起到长效与缓释的目的；(3)利用叶酸修饰PEG的末端作为靶向介导方式，可以实现药物的靶向传递，选择性地将药物释放于肿瘤部位或其细胞内部，提高靶区的药物浓度，提高药物的生物利用度。
本发明的含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，以磷脂作为表面活性剂，毒性低，生物相容性好，具有安全性高、稳定性好、毒副作用低、疗效可靠等优点，制备工艺简单，可通过滤膜过滤除菌，可以实现工业化生产。
本发明的含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂用PEG修饰的纳米混悬剂作为载体，包载抗肿瘤药物多西他赛。通过以PEG修饰，必定可以提高药物长循环性能，提高药物的半衰期，从而提高肿瘤的治疗效果。
本发明的含有多西他赛的长循环靶向脂质纳米混悬剂用PEG与肿瘤部位靶向因子同时修饰的纳米混悬剂作为载体，包载抗肿瘤药物多西他赛。通过以PEG为桥梁，间接连接肿瘤部位靶向因子，必定可以提高药物靶向性，同时也能够提高药物的半衰期，从而提高肿瘤的治疗效果。
为了提高多西他赛的靶向性，同时也提高药物的半衰期，提高药物的生物利用度，从而提高肿瘤的治疗效果，并且降低药物的毒性作用，本发明制备过程中不加入有机溶剂或聚氧乙烯蓖麻油，而选择适当的表面活性剂及浓度，在适当的压力下循环数次即可形成含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂、靶向脂质纳米混悬剂及其冻干制剂。由于本发明工艺条件的严格筛选，所得到的纳米混悬剂粒径较小，经微孔滤膜过滤后结晶未被破坏。分别取多西他赛长循环脂质纳米混悬剂与靶向脂质纳米混悬剂适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，粒径在50～250nm之间。
附图说明
图1为实施例1制备的长循环脂质纳米混悬剂冻干剂的透射电镜照片(×14000).
图2为实施例7制备的长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干剂的透射电镜照片(×14000)。
图3为实施例1制备的长循环脂质纳米混悬剂冻干剂的粒径分布图(平均粒径204.2nm)。
图4为实施例7制备的长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干剂的粒径分布图(平均粒径220.6nm)。
图5为体外释放曲线。
图6为小鼠肿瘤直观图。
图7为小鼠体重变化图，注：*P＜0.05，**P＜0.01与多帕菲比较。
图8为小鼠肿瘤体积变化图，注：$P＜0.05，$$P＜0.01与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与多帕菲比较，#P＜0.05，##P＜0.01与长循环脂质纳米混悬剂比较。
图9为小鼠静脉注射各种制剂后血药浓度与时间变化的关系曲线(n＝5)。
图10为小鼠静脉注射多帕
多西他赛长循环脂质纳米混悬剂和多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂后各组织中的药物浓度，其中，(a)代表多帕
(b)代表多西他赛长循环脂质纳米混悬剂，(c)代表多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂。
图11为小鼠静脉注射多帕
多西他赛长循环脂质纳米混悬剂和多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂后各个时间瘤内药物分布(n＝5)，其中，每个直方图的左、中、右分别代表多帕
多西他赛长循环脂质纳米混悬剂和多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：
包载多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG(300∶6)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环脂质纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径204.2nm。
冻干前后粒径结果如表1所示：采用3000SH激光粒度仪(英国马尔文公司)，测定制备的三批纳米混悬剂制剂冻干前后的粒径变化，结果表明冻干后粒径有所增大，稳定性良好。
表1.长循环脂质纳米混悬剂冻干前后粒径结果
实施例2：
空白长循环脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG(300∶9)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得空白长循环脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状空白长循环脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
实施例3：
包载多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG(300∶9)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环脂质纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径220.1nm。
实施例4：
包载多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG(300∶15)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环脂质纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，如图1所示，由于本发明工艺条件的严格筛选，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径190.5nm，如图3所示。
实施例5：
包载多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG(300∶21)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环脂质纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径230.3nm。
实施例6：
包载多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG(300∶27)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环脂质纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径250.5nm。
实施例7：
包载多西他赛的叶酸修饰的长循环靶向脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG∶DSPE-PEG-F(300∶5∶1)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环靶向纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径220.6nm。
冻干前后粒径结果如表2所示：采用3000SH激光粒度仪(英国马尔文公司)，测定制备的三批纳米混悬剂制剂冻干前后的粒径变化，结果表明冻干后粒径有所增大，稳定性良好。
表2.长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干前后粒径结果
实施例8：
空白长循环靶向脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG∶DSPE-PEG-F(300∶5∶1)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得空白长循环靶向脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状空白长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
实施例9：
包载多西他赛的叶酸修饰的长循环靶向脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG∶DSPE-PEG-F(300∶15∶6)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环靶向纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，如图2所示，由于本发明工艺条件的严格筛选，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径200.5nm，如图4所示。
实施例10：
包载多西他赛的叶酸修饰的长循环靶向脂质纳米混悬剂
精密称取SPC∶DSPE-PEG∶DSPE-PEG-F(300∶15∶9)(单位：mg)，加至60ml蒸馏水中溶解构成分散介质(溶液A)。加入30mg多西他赛，超声分散均匀得混悬液B。继续采用高速剪切机20000r/min高速剪切1～3min，制得初乳C。然后将初乳C采用高压乳匀法，分别在200bar循环10次，500bar循环10次，1000bar循环20次，制得多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂。
以上制备的混悬液加入3.0g甘露醇后装入西林瓶中，置冰箱中-80℃预冻24h，然后放入冷冻干燥机中-40℃、0.5mbar48h，得白色疏松状多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂冻干制剂，该冻干制剂加入2mL蒸馏水经振摇可于1min内完全复溶。
取多西他赛长循环靶向纳米混悬液适量，滴加于铜网上，用2％磷钨酸进行负染，自然干燥后在透射电镜下(TEM)下观察，所得到的纳米粒子粒径较小，经微孔滤膜过滤后未被破坏。
制得纳米混悬剂制剂平均粒径230.8nm。
实施例11：多西他赛HPLC色谱条件与标准曲线的建立：
Hypersil ODS柱(4.6mm×250mm，5μm)
流动相：乙腈-蒸馏水(55∶45，V/V)；
进样量：20μL；
流速：1.0mL/min；
检测波长：230nm；
柱温：室温；
理论塔板数不低于6000。
标准溶液的配制
精密称取多西他赛标准品10mg，用10ml乙腈溶解，得到1mg/ml的标准溶液，置4℃冰箱保存备用。
多西他赛溶液标准曲线的建立：
取7个10ml容量瓶，配制浓度为5、10、20、30、40、50μg/ml的标准溶液，通过高效液相法，以峰面积(A)对浓度(C)作图，得到回归方程y＝12684x-722.76，r＝0.9999。
实施例12：多西他赛纳米混悬剂冻干制剂的体外释放：
分别取实施例1，实施例7制备的多西他赛长循环脂质纳米混悬剂、长循环靶向脂质纳米混悬剂与市售多西他赛注射液(多帕)溶液0.25mL(C＝1.0mg/ml)加至截流值为相对分子质量8-12kDa的预处理后的透析袋内，其中多帕菲注射液组为对照组，各平行3份，扎紧袋口，放入装有15ml释放介质(含有0.5％吐温80的PBS，pH＝7.4)的EP管中，然后置于恒温振荡器(温度为37±0.5℃，转速为100r/min)进行释放试验，分别于1、2、4、8、12、24h取样，每次取出1m L释放介质，并同时加入同体积的37℃新鲜释放介质。通过HPLC法测定释放介质中的药物含量，计算累计释放百分率(％)，绘制释放曲线，如图5所示。
由释放结果可看出长循环脂质纳米混悬剂、长循环靶向脂质纳米混悬剂与多帕菲注射液体外释放均符合一级动力学数学模型，长循环脂质纳米混悬剂释放拟合方程为ln(100-Q)＝-0.084t+4.588，回归系数r＝0.9985；长循环靶向脂质纳米混悬剂释放拟合方程为ln(100-Q)＝-0.066t+4.567，回归系数r＝0.9980；注射液多帕菲组释放拟合方程为ln(100-Q)＝-0.1859t+4.4038，回归系数r＝0.9991。
注意：**P＜0.01，与多帕菲组比较
实施例13：药效学实验
实验动物采用18-22g大小的雌性昆明鼠40只，经过7天环境适应后，接种小鼠黑色素瘤B16肿瘤细胞。首先将癌细胞用胰蛋白酶消化于PBS(pH 7.4)中，于小鼠右侧腋下接种，每只大约接种5×104个小鼠黑色素瘤B16细胞。当肿瘤大小约为100mm3(约10天)时，将小鼠分为六组，每组10只，分别为生理盐水组、空白长循环脂质纳米混悬剂组、空白长循环靶向脂质纳米混悬剂组、注射液多帕菲组、长循环脂质纳米混悬剂组(实施例1制备)、长循环靶向脂质纳米混悬剂制剂组(实施7制备)。其中注射液多帕菲组、长循环脂质纳米混悬剂组、长循环靶向脂质纳米混悬剂组分别通过尾静脉给药20mg/kg，生理盐水组、空白长循环脂质纳米混悬剂组、空白长循环靶向脂质纳米混悬剂组注射等体积溶液，每三天给药一次，连续给药三周。
实验过程中，每隔一天对小鼠体重进行称量，对肿瘤大小进行测量。三周后处死小鼠，取瘤，称重，计算抑瘤率，绘制小鼠体重变化图，瘤体积变化图。结果如下表3和图6、7、8：
抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-试验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％
表3
注：$P＜0.05，$$P＜0.01与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与多帕菲比较，#P＜0.05，##P＜0.01与长循环脂质纳米混悬剂比较。
结论：药效学实验中，由小鼠肿瘤直观图，小鼠瘤重图，瘤体积变化图可直观看出长循环脂质纳米混悬剂组与多帕菲溶液组相比具有明显的抑瘤效果，长循环靶向脂质纳米混悬剂组又有更好的治疗效果，说明本发明药物制剂具有很好的治疗肿瘤疾病方面的药效作用。多西他赛长循环脂质纳米混悬剂组与注射液多帕菲组比较，瘤体积减小明显(P＜0.01)，长循环靶向脂质纳米混悬剂组与长循环脂质纳米混悬剂组比较，瘤体积亦减小明显(P＜0.05)，表明制剂组与多帕菲注射液组相比疗效更好。然而，小鼠体重变化相差明显(p＜0.01)，生理盐水组、空白长循环脂质纳米混悬剂组、空白长循环靶向脂质纳米混悬剂组、长循环脂质纳米混悬剂组、长循环靶向脂质纳米混悬剂组小鼠体重均有增长，增长百分率分别为56.89％、44.40％、48.64％、18.89％、22.07％。然而，唯有注射液多帕菲组小鼠体重下降，下降为20.95％。由于体重变化是判断制剂毒性的一个重要因素，因此可以说多西他赛纳米混悬剂制剂的毒性作用远小于市售注射液多帕菲。
由以上结果可知，多西他赛长循环脂质纳米混悬剂组、长循环靶向脂质纳米混悬剂组制剂组与注射液多帕菲组比较抑瘤效果更好，但前者对机体毒性明显小于后者，且用药过程中无需提前服用地塞米松等药物以防治注射液中吐温80和乙醇等溶剂带来的溶血和过敏性反应，从而提高了临床用药的方便性及安全性等。
实施例14：药动学与组织分布实验
取已接种种瘤小鼠，瘤体积约100mm3，随机分为3组，每个时间点平行设定3只。尾静脉注射给药，给药剂量60mg/kg(均以多西他赛含量计算)，给药前禁食12-18h，自由饮水，第一组为注射液多帕菲组，第二组为多西他赛长循环纳米混悬剂制剂组(实施例1制备)，第三组为多西他赛靶向纳米混悬剂制剂组(实施7制备)。分别于给药前(0h)、给药后5min、15min、30min、45min、1、2、4、6、8、10、12h于眼底静脉丛取血，置于经肝素钠润洗过的离心管中，4000r/min离心10min，取上层血浆，-20℃冰箱保存待测。取血后处死小鼠，摘取肿瘤、心、肝、脾、肺、肾脏器置于生理盐水中清洗后，储存于-20℃冰箱中待测。
血浆样品处理：精密吸取待测小鼠血浆0.2mL，置于1.5mL离心管中，加入甲醇与乙腈溶液(50∶50，V/V)0.5mL，涡旋1min后，10000r/min离心10min，将上清液移至离心管中，40℃，-50℃水浴氮气流下吹干，溶于0.1mL流动相中，取20μL进样。
组织样品处理：取待测动物脏器，精密称重，加1mL生理盐水匀浆(肝组织加2mL)。取匀浆样品0.2mL，置1.5mL离心管中，加入乙腈与甲醇溶液(50∶50，V/V)0.5mL，涡旋1min后，10000r/min离心10min，将上清液移至离心管中，40℃，-50℃水浴氮气流下吹干，溶于0.1mL流动相中，取20μL进样。
1、体内药物动力学研究结果：如图9所示。
药物动力学参数的计算如表4：
表4
注：*P＜0.05，**P＜0.01与多帕菲比较。
2、小鼠多西他赛脂质纳米混悬剂体内组织分布研究
如图10、11所示；由图10和图11可知，小鼠尾静脉注射多帕
注射液后，多西他赛在各组织脏器均有分布，在心和肾组织分布居多；尾静脉注射多西他赛长循环脂质纳米混悬剂和多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬后，药物在肝、脾和肺组织分布增多，降低了心、肾组织中多西他赛的分布，心肾毒性降低。与多帕
注射液组相比，脂质纳米混悬剂组瘤组织内药物分布明显提高，具有明显的肿瘤靶向性。给药8h后，多西他赛长循环脂质纳米混悬剂组瘤内药物浓度是注射液组的3.19倍，多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬瘤内药物浓度是注射液组的3.48倍。
3、小鼠体内靶向性评价：如表5所示。
表5.静脉注射多帕
多西他赛长循环脂质纳米混悬剂和多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂小鼠体内的靶向性评价(n＝5)
此三种多西他赛制剂，多西他赛长循环脂质纳米混悬剂组瘤的总靶向效率Te由多帕
注射液组的5.22％提高到5.67％(1.09倍)，其相对摄取率re和瘤内峰浓度Ce分别为5.22和1.02；多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂组瘤的总靶向效率Te由多帕
注射液组5.22％提高到6.40％(1.23倍)，其相对摄取率re和瘤内峰浓度Ce分别为5.92和1.17。与多西他赛长循环脂质纳米混悬剂相比，多西他赛长循环靶向脂质纳米混悬剂有更好的肿瘤靶向效率。
Claims (10)
1.一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：是由包括以下重量份的组分制成的：水溶液0.5～50份，多西他赛0.5～50份，lipid-PEG 0.05～20份，磷脂50～90份；或：水溶液0.5～50份，多西他赛0.5～50份，lipid-PEG 0.05～20份，磷脂50～90份，具有肿瘤靶向功能的靶向因子0.01～10份；
是通过以下制备方法制备得到的：
(1)取磷脂和lipid-PEG，溶解于水溶液中，得溶液A；
或：取磷脂、lipid-PEG和具有肿瘤靶向功能的靶向因子lipid-PEG-ligand，溶解于水溶液中，得溶液A；
(2)将多西他赛分散于步骤(1)所得的溶液A中，得混悬液B；
(3)将混悬液B高速剪切1～3分钟，得初乳C；
(4)将初乳C采用高压乳匀法进行乳匀，即得长循环脂质多西他赛纳米混悬剂/靶向脂质纳米混悬剂。
2.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂中还包括冻干保护剂，冻干保护剂在脂质纳米混悬剂中的浓度为0.005～0.2mg/ml，加入方式为：乳匀后加入。
3.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述lipid-PEG选自DSPE-PEG，DOPE-PEG或DPPC-PEG。
4.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述lipid-PEG-ligand选自DSPE-PEG-FA，DSPE-PEG-NGR或DSPE-PEG-RGD。
5.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述磷脂选自：大豆卵磷脂、聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯、二肉豆蔻酰卵磷脂、二月桂酰卵磷脂、二硬酯酰卵磷脂、二棕榈酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰卵磷脂、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂、1-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂、1-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化豆磷脂、二油酰基卵磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰甘油、二棕榈脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰二丝氨酸、脑磷脂酰丝氨酸、脑神经鞘磷脂、二棕榈酰神经鞘磷脂、二硬脂酰神经鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的任一种或任几种的混合。
6.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述水溶液选自双蒸水、0.9％氯化钠水溶液、5％葡萄糖水溶液、含5％葡萄糖和0.9％氯化钠的注射用水、含5％葡萄糖的林格氏注射液或磷酸盐缓冲液中的任一种。
7.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述步骤(3)中，高速剪切的速度为20000r/min。
8.根据权利要求1所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述步骤(4)中，高压乳匀法的参数为：依次在200bar循环10次、500bar循环10次、1000bar循环20次。
9.根据权利要求2所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂，其特征在于：所述冻干保护剂选自：甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐或聚乙二醇。
10.权利要求1～9中任一项所述的一种含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂的制备方法，其特征在于：步骤如下：
(1)取磷脂和lipid-PEG，溶解于水溶液中，得溶液A；
或：取磷脂、lipid-PEG和具有肿瘤靶向功能的靶向因子lipid-PEG-ligand，溶解于水溶液中，得溶液A；
(2)将多西他赛分散于步骤(1)所得的溶液A中，得混悬液B；
(3)将混悬液B高速剪切1～3分钟，得初乳C；
(4)将初乳C采用高压乳匀法进行乳匀，即得长循环脂质多西他赛纳米混悬剂；或：乳匀后，加入冻干保护剂，过滤除菌，冷冻干燥去除水分，得干燥的长循环脂质多西他赛纳米混悬剂。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103340883A (zh) * | 2013-07-25 | 2013-10-09 | 山东大学 | 基于神经酰胺的用于治疗肿瘤的联合用药物 |
| CN103536930A (zh) * | 2013-09-24 | 2014-01-29 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种聚乳酸-聚乙二醇-肿瘤穿透肽复合物及制备和应用 |
| CN104208030A (zh) * | 2014-08-01 | 2014-12-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种白蛋白结合型紫杉醇长循环纳米粒冻干制剂 |
| CN104856955A (zh) * | 2015-05-06 | 2015-08-26 | 刘星言 | 一种负载多西他赛的脂囊泡给药系统及其制备方法 |
| CN107970447A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-05-01 | 徐州医科大学 | 具靶向和放疗增敏双重功能的脂质-聚缺氧放疗增敏剂 |
| CN105412950B (zh) * | 2015-12-08 | 2018-06-29 | 上海师范大学 | 具有mri/spect双模态影像肿瘤靶向多功能纳米探针及制备和应用 |
Families Citing this family (1)
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101317816A (zh) * | 2007-06-08 | 2008-12-10 | 中国科学院上海药物研究所 | 多西他赛长循环制剂 |
| JP2009078993A (ja) * | 2007-09-25 | 2009-04-16 | Japan Science & Technology Agency | カーボンナノホーン |
| CN101439182A (zh) * | 2008-12-18 | 2009-05-27 | 北京大学 | 一种生长抑素受体介导的肿瘤靶向药物组合物 |
| CN101653416A (zh) * | 2009-09-22 | 2010-02-24 | 北京大学 | 一种整合素介导的肿瘤双重靶向脂质体及其制备方法 |
| CN101653414A (zh) * | 2008-08-19 | 2010-02-24 | 中国科学院上海药物研究所 | 多西他赛长循环固体脂质纳米粒及其制备方法 |
| CN101773480A (zh) * | 2010-01-19 | 2010-07-14 | 山东大学 | 含有多西他赛的纳米结晶制剂及其冻干剂的制备方法 |
| CN101780042A (zh) * | 2010-03-26 | 2010-07-21 | 天津大学 | 一种紫杉醇纳米靶向缓释长循环脂质体及其制备方法 |
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101317816A (zh) * | 2007-06-08 | 2008-12-10 | 中国科学院上海药物研究所 | 多西他赛长循环制剂 |
| JP2009078993A (ja) * | 2007-09-25 | 2009-04-16 | Japan Science & Technology Agency | カーボンナノホーン |
| CN101653414A (zh) * | 2008-08-19 | 2010-02-24 | 中国科学院上海药物研究所 | 多西他赛长循环固体脂质纳米粒及其制备方法 |
| CN101439182A (zh) * | 2008-12-18 | 2009-05-27 | 北京大学 | 一种生长抑素受体介导的肿瘤靶向药物组合物 |
| CN101653416A (zh) * | 2009-09-22 | 2010-02-24 | 北京大学 | 一种整合素介导的肿瘤双重靶向脂质体及其制备方法 |
| CN101773480A (zh) * | 2010-01-19 | 2010-07-14 | 山东大学 | 含有多西他赛的纳米结晶制剂及其冻干剂的制备方法 |
| CN101780042A (zh) * | 2010-03-26 | 2010-07-21 | 天津大学 | 一种紫杉醇纳米靶向缓释长循环脂质体及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 苑振贵，等: "叶酸受体介导多西他赛长循环脂质体与肿瘤细胞结合机理的研究", 《沈阳药科大学学报》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103340883A (zh) * | 2013-07-25 | 2013-10-09 | 山东大学 | 基于神经酰胺的用于治疗肿瘤的联合用药物 |
| CN103536930A (zh) * | 2013-09-24 | 2014-01-29 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种聚乳酸-聚乙二醇-肿瘤穿透肽复合物及制备和应用 |
| CN103536930B (zh) * | 2013-09-24 | 2015-06-24 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种聚乳酸-聚乙二醇-肿瘤穿透肽复合物及制备和应用 |
| CN104208030A (zh) * | 2014-08-01 | 2014-12-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种白蛋白结合型紫杉醇长循环纳米粒冻干制剂 |
| CN104856955A (zh) * | 2015-05-06 | 2015-08-26 | 刘星言 | 一种负载多西他赛的脂囊泡给药系统及其制备方法 |
| CN105412950B (zh) * | 2015-12-08 | 2018-06-29 | 上海师范大学 | 具有mri/spect双模态影像肿瘤靶向多功能纳米探针及制备和应用 |
| CN107970447A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-05-01 | 徐州医科大学 | 具靶向和放疗增敏双重功能的脂质-聚缺氧放疗增敏剂 |
| CN107970447B (zh) * | 2017-11-29 | 2020-09-25 | 徐州医科大学 | 具靶向和放疗增敏双重功能的脂质-聚缺氧放疗增敏剂 |
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Legal Events
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
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Granted publication date: 20131106 |