TWI223005B

TWI223005B - Measurement and control of sessile and planktonic microbiological activity in industrial water systems

Info

Publication number: TWI223005B
Application number: TW089127225A
Authority: TW
Inventors: Mita Chattoraj; Steven R Hatch; Michael J Fehr; Robert W Shiely
Original assignee: Nalco Chemical Co
Priority date: 1999-12-30
Filing date: 2000-12-19
Publication date: 2004-11-01
Also published as: BR0016810A; ATE277196T1; JP4703082B2; NO20023059L; RU2002117295A; CA2394069C; EP1242614A1; AU4514001A; DE60014164T2; NO329031B1; ZA200204867B; CN1195870C; EP1242614B1; PT1242614E; KR20030031880A; WO2001049876A1; EP1242614A4; KR100644885B1; AU782486B2; CN1425074A

Description

1223005 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（1) 發明之詳細説明於工業用水系統中的微生物生長對工業是一個永無止境的關切。微生物有機體的累積以及其產生之副產物經常會影響水處理及加工。在造紙工業中，在紙漿及紙廠用水中的微生物生長會因破壞造紙設備而不利於成紙產品，因而ie成〇口吳滴落以及產品缺陷諸如破洞或斑點。在冷卻水系統中，微生物的生長會造成細菌菌落在金屬零件上的沉積而導致其表面腐餘及凹陷。此外，由於微生物生長會對系統負面影響而降低其熱交換的效率以及污染，其會阻礙系統的功能性。傳統用來控制微生物生長的方法是使用殺菌劑。殺菌劑疋會破壞微生物細胞壁或細胞成分以阻礙微生物生長的化學物品。物理狀態諸如溫度，放射線，或與一系統中含有的處理化學物品同化，都會對殺菌劑的效果有負面影響。為了補償所降低的效果，殺菌劑可被連續地或在判斷下依其所需求的基準加入。殺菌劑的正確判斷使用是被鼓勵的，因為殺菌劑劑昂貴又具毒性。因此，為了避免浪費，持續監測以及測試該用水系統，對測量適當的殺菌劑量以控制微生物生長是必要的。使用於夏測於工業用水系統的微生物活性的技術已知的技術包括抓樣（grab sampiing)及平板技術⑻也叫 techniques)。抓樣是從系統中的水取一滴水並且在離線狀恶下測試該滴水。通常後續的測試是在離開現場（〇ff_site) 以及離線狀態（off-line)下進行。在用水系統中添加殺菌本紙張尺度適財目目家標準（CNS)A4規袼（210 X 297公釐)_ 4 ^ --------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^23〇〇5 A7 ~-------B7_________ 五、發明說明（2 ) 要隨著取樣的結果調整。抓樣方法包含拿取一份樣品，稀釋該樣品，經該樣品置於一營養洋菜基質表面。培養24至48小時候，檢查樣品是否有微生物存在，在適當的時候，昇物體以人工或用影像方式計算。此方法的一種變化包括拿取一份樣品，培養一段預定的時間，然後以濁度計nephel〇metry或濁度計 turbidimetry觀察培養基質。換言之，微生物的存在可表現在培養基質的不透明度。與抓樣有關的一個顯著的問題是在拿取樣品以及完成測定樣品中微生物活性的分析中間的時間差。此時間差會在當樣品需要被運輸到離開現場進行分析時更形惡化，會進一步延遲結果的獲得。除了抓樣以外，其他的現場取樣技術也可行，諸如沾玻片以及腺苷三磷酸ATP測試。不幸的是，該等測試並不益於立即現場判讀，因為沾玻片需要24至48小時以待測試結果的發展。ATP測試，雖然可在一短時間中（<2 min)產生結果，其藥劑需要冷凍而且測試儀器非常昂貴因此通常無法在現場使用。因此，沒有一個測試方法適合用於現場評估微生物污染。抓樣的另一個問題是其經常低估在工業用水系統中的整體微生物活性，因為抓樣僅足以提供浮游微生物活性的指示，而非固著的活性。浮游微生物族群生活且存在於用水系統的水中。下文中，“固著的，，一詞指的是活的，但是靜止不動的微生物族群。以抓樣取得浮游微生物的工業上卜------------^---------線Φ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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l· ----------------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1223〇〇5 A7 ^ ' -------- 五、發明說明（4) 業用水系統中浮游及固著微生物族群的狀態。本申請專利範圍的發明的第二方面是執行本中請專利範圍的發明的第一方面的方法’其進一步含有： f) 決定加人該工業用水系統中的殺㈣的最適量，其中該最適量是根據該比值或該比值的變化速度的程度；以及 g) 將該最適量的殺菌劑加入該用水系統中。本申請專利範圍的發明的第三方面是一種在一工業用水系統中監測浮游以及固著微生物族群的方法，其含有： a) 將一定量的不活性螢光追蹤材料與一定量的螢光產生性染料事先混合以形成一不活性的螢光追蹤材料-螢光產生性染料混合物； b) 將該不活性的螢光追蹤材料_螢光產生性染料混合物直接加入該工業用水系統中，使該螢光產生性染料與存在的任何浮游或固著微生物反應； c) 提供可測量在該工業用水系統中的該不活性螢光追縱劑以及螢光產生性染料的螢光訊號的測量方法 ’以第一次測量的螢光訊號作為該螢光產生性染料的數值’以苐二次測得的螢光訊號作為反應過的螢光產生性染料的數值，並以第三次螢光訊號作為該不活性螢光追蹤劑數值； d) 使用該方法測量該螢光產生性染料的該螢光訊號 ’以測量螢光產生性染料的螢光訊號，反應過的螢光產生性染料的螢光訊號，以及不活性螢光追蹤劑本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ------ B7 __ 五、發明說明（5 ) 的螢光訊號，並且捨去任何低於預先測得的噪音值的螢光訊號值； e) 計算所量測到的反應過螢光產生性染料螢光訊號與該螢光產生性染料螢光訊號比值；以及 f) 監測從步驟e)所計算出的比值的改變，以決定在工業用水系統中浮游及固著微生物族群的狀態； g) 使用該不活性螢光追蹤劑材料的螢光訊號以決定是否所需要的螢光產生性染料劑量存在於該工業用水系統中；以及 h) 依據所測得的該不活性螢光追蹤材料的螢光訊號调整加入该工業用水系統中的螢光追蹤材料-榮光產生性染料混合物之劑量。本申請專利範圍的發明的第四方面是第三方面的方法再進一步含有： 0決定加入該工業用水系統中的殺菌劑的最適量，其中該最適量是根據該比值或該比值的變化速度的程度；以及 j)將該最適量的殺菌劑加入該用水系統中。付圖的詳細就曰q 第1圖顯示一個在冷卻水塔中的水樣的相對強度與波長（單位nm，其表示毫微米）的圖形。相對強度是一種無單位的數值，其是將每一次測得的螢光訊號除以在一特定波長下測得的螢光訊號計算得出。圖i中，該特定波長為634 毫U米（下文為“nm”）。選擇634 nm是因為其是刃天青指示本紙張尺度適財國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公羞） ^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1223005 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ---~-------B7_____ 五、發明說明（6 ) 劑螢光放射的最大值。刃天青指示劑在時間為〇時加入水中與存在其中的微生物反應24小時。一螢光計被用來測量刀天青指示劑的螢光訊號以及反應過的刀天青指示劑的螢光訊號，（反應過的刃天青指示劑是一種稱為試_靈的化合物 )。刀天青指示劑及試鹵靈的構造也包含在圖中。毯具體例之坪如說明本申請專利範圍的發明第一方面是一種在工業用水系統中監測浮游以及固著微生物族群的方法，其含有： a) 在该工業用水系統中直接加入一螢光產生性染料並使該螢光產生性染料與存在的浮游或固著微生物反應； b) 提供在該工業用水系統中測量該螢光產生性染料之螢光訊號的方法，以第一個螢光訊號量測為該螢光產生性染料的數值，以第二個螢光訊號量測作為反應過的螢光產生性染料數值；勾使用該方法量測該螢光產生性染料的螢光訊號，以測量螢光產生性染料的螢光訊號以及反應過的螢光產生性染料的螢光訊號，任何低於預先測得的噪音值的測量螢光訊號值都要捨棄不用； d) 計算所量測到的反應過的螢光產生性染料之螢光訊號與未反應的螢光產生性染料之螢光訊號比值 ;以及 e) 監測從步驟d)所計算出的比值的改變，以決定在工業用水系統中浮游及固著微生物族群的狀態。丰紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------^-------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 線· 9 A7 A7 五、經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 發明說明（7) 在一工業用水系統中先加人—榮光產生性染料化合物以測試及監測。工業用水系統典型上含有某些微生物種類。«工制水系統包括，衫限於，冷卻水塔以及銷爐 ’開放及密閉循環系統’包括’但不限於，開放一貫系統 ;廢液流；生污水；處理過的污水；_地板水；化學處理用水；紙漿以及造紙過程液；以水為主的化學加工液，發酵液；以及其他非飲用水系統。攻些工業用水系統中的每一種都預期會在不同區域有微生物g落存在。在這些區域的每_處的微生物活性程度都由不同因素形成，包括最初微生物族群，通氣，溫度，水流，微生物營養素的存在以及微生物廢棄物的移除。即使在一生物膜的單一切片中，在通過或橫切面下面的固著微生物活性也會隨著其先前可得的因素而不同。所測得的螢光產生性染料反應將是在與含有螢光產生性染料的流動水接觸的整個系統中微生物反應的總和。因此，即使在一小段的熱交換管中的微生物活性程度不尋常的高，而其他地方都低，螢光產生性染料反應可能是低的。本申請專利範圍的發明的方法測量系統中的平均微生物活性。加入工業用水系統中的螢光產生性染料化合物應該是一種分子，當其與眾多微生物族群反應時，其螢光訊號會產生一連串改變。因此，適合用於本申請專利範圍的發明的螢光產生性染料應該在其與微生物反應前就具有一可測得的螢光訊號，而當他們與微生物反應後，也應具有不同的螢光訊號。

--------^--------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） _ 1〇 ^23〇〇5

五、發明說明（8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製適合的螢光產生性染料，包括，但不限於，芘3,6,8-三續酸之醋酸酯；羧酸螢光素二醋酸； 3-羧酸繳/3-D-半乳糖π比勺六； 3- 羧酸繳/S-D-葡糖酸； 9-Η-(1，3-二氣-9,0-二曱基,丫啶_2_酮_7)， D-葡糖醛； 9-Η-(1，3-—氯-9, 〇-二甲基叮咬_2_酮_乃，試鹵靈冷-D-半乳糖π比喃六；榮光二-/5-0-半乳糖吼喃六；螢光二-冷_D•葡糖醛；試鹵靈/5 -D-葡糖醛；螢光二磷酸； 7-羥基-3札吩噁嗉-3_g同1〇-氧化物（下文稱刃天青指示劑）； 7-羥基-3H-吩噁嗪-3-酮10·氧化物，鈉鹽（下文稱刃天青指示劑，納鹽）；曱基藍； 4- 甲基缴構酸鹽（下文稱4MUP); 4-曱基繳石-D-葡糖醛；口比喃填酸；芘3,6,8-三確酸1-碟酸鹽。較佳的螢光產生性染料為刃天青指示劑，4-甲基繳破本酸鹽（4MUP)以及吼喃磷酸。最佳的螢性染料為刃天本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐 11 Μ------------訂---------線"^· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1223005 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ________B7 _ 五、發明說明（9) 青指示劑。所有這些螢光產生性染料都是商業可得的（例如，刃天青指示劑可以刃天青指示劑，鈉鹽，從ALDRICH® P.O. Box 355, Milwaukee，WI 53201，USA，電話號碼（414) 273-3850 或（900)962-9591購得），或，如咄喃麟酸的例子，這些螢光產生性染料可以文獻中報導的步驟合成。螢光產生性染料以有效的量加入工業用水系統中以使其可以測定微生物活性。有效的螢光產生性染料劑量約介於0.005ppm以及l.〇ppm間，較佳為介於〇〇2ppm以及〇 5 ppm間’最佳為介於〇〇4ppm以及〇 1??111間，加入的螢光產生性染料最高度較佳的濃度為0 05 ρριη。當染料的鹽類 ’諸如刃天青指示劑，鈉鹽，加入工業用水系統中，計算 ppm要以存在的活性螢光產生性染料劑量計算。當然’螢光產生性染料的劑量可能大於這些較佳劑量。事實上，所加入的螢光產生性染料可高至約佔該水系統中液體量的10 %。一般相信，但並不一定要如此，大於j ·〇 ppm將會浪費螢光產生性染料且並未對系統提供同量的利凰。邊光產生性染料的價格也對於加入系統中的染料數量形成一實際的上限。影響染料添加入系統的其他因素包括染料種類，用水系統中連續流失以及補充的液體量，以及用水系統中所含的液體種類。螢光產生性染料可單獨或與一種不活性螢光追蹤材料合併，或與典型地用來加入冷卻水系統中的水處理劑，諸如’但不限於，防垢或防蝕劑混合加入。本紙張尺度適用中國_豕棵準（CNS)A4規格⑽x 297公髮） ^ --------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 12

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製不活生词在本文中的意義，是指一種不活性的螢光追縱劑其不會知覺地或顯著地被其他在系統中的化學藥口口影響’或者被其他系統參數諸如冶金組成物，微生物活性，殺菌劑濃度，熱交換或總熱含量影響。為了量化所謂的“不會知覺地或顯著地被影響，，，此陳述意指一種不活性螢光化合物，在其正常所遭遇的工業用水系統中，其螢光訊號不超過10%的改變。在正常工業用水系統中所遭遇的情況對熟悉工業用水系統之技術者是熟知的。適合與在本申請專利範圍的發明中使用的螢光產生性染料一起使用的不活性螢光追蹤材料必須具有其可測得之獨特的螢光訊號與螢光產生性染料之螢光訊號不同之特性。這表示螢光產生性染料的螢光訊號以及反應過的螢光產生性染料的螢光訊號兩者都必須不同於不活性螢光追蹤材料所測得者。適當的不活性螢光追蹤材料為單_，二-以及三·磺酸萘，包括其已知的水溶性鹽類；以及已知芘的磺酸衍生物，諸如1，3,6,8-芘四磺酸，以及所有這些材料的已知水溶性鹽類’以及酸黃7(Chemical Abstract Service Registry Number 2391·30_2，對1氫-苯（去）異喹啉·5-磺酸，6-硝酸-2,3_二氫 -1，3-二氧-2·恩 p-totyl-，單鈉鹽（8CI))。了解本技藝者會知道防垢以及防蝕劑的常用劑量。一般相信，但並非意圖受限於此，在水系統中的微生物所合成的酵素會與螢光產生性染料反應。此活性造成該染料螢光訊號的改變，經由監測該螢光訊號，在該水系統本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 13 --------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1223005 A7 五、發明說明（11) 中的微生物活性也可被監測。本申請專利範圍的發明的方法可以從浮游以及固著族群兩者中監測微生物活性，和已知的方法大不相同。一種測量螢光產生性染料的螢光訊號的方法，在該工業用水系統中的反應過的螢光產生性染料以及不活性螢光追蹤材料，包括商業可得的螢光計。必須使用足量的樣品以及螢光計，以在螢光產生性染料與任何微生物反應前，監測螢光產生性染料訊號的螢光訊號，以及在螢光產生性染料與任何微生物反應後所存在的螢光訊號，以及不活性螢光追蹤材料的螢光訊號如果有不活性螢光追蹤材料存在）。對於那些熟悉於螢光測量技術者而言，測量螢光產生性染料以及反應過後染料兩者之螢光訊號是已知的程序。例如，螢光產生性染料刃天青指示劑的螢光性質在其未反應狀態以及反應過後的“試_靈，，狀態下是已知的。高度較佳的是螢光計的取樣工具是位於工業用水系統中，因此可避免取用抓樣。當螢光計的取樣工具位於工業用水系統中時，取樣的類型一般使用線上測量。線上測量疋一種在不影響系統流程的情況下進行的測量。因為再進行線上去測量時，螢光計的取樣工具是位於線上，其所監測的樣品可正媒反應整個工業用水系統，因此，以進行此方法所收集到的資訊，可正確地反應浮游以及固著兩種微生物體族群。線上測量可克服有關抓樣所產生的問題以及避免從水流中取出一個樣品以作為後續測試本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2】0 X 297公釐

： l· --------訂---------線一 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製的而要。同時，染料的反應及未反應型態是在一種即時的基礎下被測量，其中兩種染料族群比值的一個幾乎立即的讀數可提供作為微生物活性的指標。因此，此比值所測得的改變速度是與系統中的微生物體活性成比例。儘管線上測量是進行本申請專利範圍的發明方法的一種高度較佳方法的事實，也可能使用適合於確保工業用水樣品的抓樣技術進行本申請專利範圍的發明的方法。如果使用抓樣技術，需要提供能將抓樣在一合理時間長度運送到螢光計的工具，以使從螢光計所得到的數據能正確反應工業用水系統的現況。螢光產生性染料的螢光訊號與反應過的螢光產生性染料的螢光訊號比值為：比值=矣應過的螢光染料的營光訊號螢光染料的螢光訊號此比值為一個無單位的數字。此比值可以人工或以計算機或以電腦程式計算。為了使用方便，較佳地是使用一適當的電腦程式計算，以可在設定時間間隔中連續計算該比值的紀錄。此比值的改變速率則可用於決定系統中微生物活性的程度。電腦程式可被設計來自動計算此比值。一個具有撰寫電腦程式一般程度者都會知道如何撰寫一個可以自動計算此比值的電腦程式。不管此比值是如何被計算出的，可使用可被程式化來計算此比值的商業可得的組成，來製造一操作系統。此

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐

^ -----------------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1223005 五、發明說明（η) 作系統可用此比值以操作以物理方式添加殺菌劑進入工業用水系統的控制。在此操作系統中的計算工具可為任何數位電腦諸如，但不限於，程式化邏輯控制器（pLc)，個人電腦或其他計算儀器。殺菌劑進料裝置可為一簡單的容器用以裝置殺菌劑以及唧筒。唧筒較佳為可以在水系統中注入一疋®殺菌劑，且可以人工啟動或從電腦設備中的訊號傳遞該定量。有關於比值的改變速率，已知在殺菌劑存在下，如果比值提兩，則微生物活性程度增加。在沒有殺菌劑的情況下如果比值降低，這表示需要添加額外的染料到工業用水系統中。當在殺菌劑存在時使用本申請專利範圍的發明的方法必須有某種程度的調整。對本技藝熟悉者知道在工業用水系統中使用何種殺菌劑。根據微生物活性的不可接受程度添加進入的殺菌劑包括氧化及非氧化殺菌劑。氧化殺菌劑包括，但不限於：經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 BCDMH(92.5%，93·5%，98% )，其也可是153_二氣_5,5_ 一甲基海因以及1->臭-3-氯·5,5-二甲基海因（CAS Registry # 16079-88-2)或其混合物；漂白劑，包括安定漂白劑； >臭’包括安定、/臭；次氯酸鈣（CAS Registry # 7778_54-3)“Cal Hypo，，(680/〇 ) 氣，包括安定氯（8.34% ); 16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1223005 A7 B7 五、發明說明（14) Η202/ΡΑΑ(21·7°/。/5.1% )其為過氧化氫（CAS Registry # 7722-84-1)/過醋酸（CAS Registry # 79-21-〇); 次溴酸鹽；次溴酸；碘；有機溴；

NaBr(42.8% ，43% ，46% )其為溴化納；

NaOCl(l〇°/〇，12.5% )其為次氯酸鈉（CAS Registry # 7681-52-9); 以及其混合物。非氧化殺菌劑包括，但不限於，ADBAC Quat (10% ， 40% (CAS Registry # 68391-0-5)，80% )…烷基二曱基苯基氯化銨，也就是已知的“quat” ； ADBACQuat(15〇/〇 )/TBTO(三丁基氧化錫 5% ); ADBAC (12·5% )/ΤΒΤΟ(2·5% )，（ADBACQuat/雙三丁基氧化錫）(CAS Registry # 56-35-9); 氨基甲酸酯（30% )，化學式為丁2>^0211，其中T2為 Cl-ClQ 烧基；硫酸銅（80% ); DBNPA(20°/〇，40% )其為 2,2-二溴-3-氮基丙醯胺（CAS Registry # 10222-01-2)； DDAC Quat(50% )其為（2-(2_ρ·(二異丁基）苯氧基）乙乳基）乙基一曱基，二甲基苯；戊二醛（15% ，45% )，CAS Registry # 111-30-8 ; 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 17 ' Γ------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丄223005 A7 —" ----—-------- 五、發明說明（l5) 戊二醛（14% )/ADBAC quat，（2.5% ); HHTHT—六氫-1，3,5-三（2-經乙基）一5-三嗉（78·5% ); 異σ塞峻酮（1.5% ，5.6% )—種5-氯-2-甲基-4-異嘍峻酮 -3-@同混合物（CAS Registry # 26172-55-4)以及2-甲基；-4_ 異口塞唾嗣-3-_(CAS Registry # 2682-20-4); MBT(10% )-甲基雙硫代氰酸鹽； polyquat(20%，60% )，一種聚合四級化合物；聚氨以及其鹽類一聚氨化合物；三丁基嗉（CAS Registry # 5915-41-3); TMTT(24% )—四甲基秋蘭姆二硫酸鹽；以及其混合物。上述任何殺菌劑的任何組合皆可使用。也可加入其它的殺菌劑。這些其他殺菌劑可包括那些殺菌劑技術所熟知者。再選擇殺菌劑時唯一的限制是如果殺菌劑與螢光產生性染料反應快於其與（破壞）微生物反應，則其不可被接受已經發現所有適用於本申請專利範圍的發明的螢光產生性染料易於在氧化殺菌劑存在下被不同程度的分解。當本申請專利範圍的發明的方法使用於這些氧化殺菌劑存在的工業用水系統中，很重要的要把加入在此工業用水系統中的螢光產生性染料劑量添加至其可以遠超過氧化殺菌劑加入工業用水系統中的劑量。即使當加入工業用水系統中的瑩光產生性染料以及氧化殺菌劑數量盡可能的超過，已知氧化殺菌劑仍可以淬滅螢光產生性染料以及反應過的螢本紙張尺錢时_國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂·--------線；經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 18 Α7 B7

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t產生性染料兩者之螢光訊號。被淬滅的螢光訊號無法正確反應工制水系統中的微生物活性現況。因此，在殺菌劑存在時，材請專利範圍的發明的方法必須將“泮滅現象列入考慮，除非其超過一特定最小“噪音，，值，否則不考慮任何螢光訊號。這個最小“噪音，，值可以在每_個水系，中被確認’在其中本中請專利範圍的發明的方法可以夢著熟悉螢光測定的人操作。曰使用足夠殺死存在的微生物體劑量的氧化殺菌劑，其殘留很少或沒有多餘的氧化殺菌劑存在，將不會顯著影響所測量的螢光訊號的存活。當然’一但額外的螢光產生性染料加入並且從該螢光產生性染料測量訊號時，這個方法重新獲得其有效性。典型的非氧化殺菌劑不會泮滅榮光產生性染料的榮光訊號以及與螢光產生性染料反應。因此，如果在一工業用水系統中僅有非氧化殺菌劑存在，一般相信其螢光訊號會經常正確地反應在統中的微生物活性現狀。^ 而，當在僅含有非氧化殺菌劑的工業用水系統中進行本申凊專利範圍的發明的方法時，本方法也必須在不考慮任何螢光訊號，除非其量高於一特定最低“噪音，，值的情況下進行。再一次，這個最小“噪音，，值可以在每一個水系統中被確認，在其中本申請專利範圍的發明的方法可以螢光測定的人操作。 ……" 較佳的加入方法是先將螢光產生性染料與防垢及/或防蝕劑事先混合，並將該混合物加入工業用水系統中。然

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑵Q x 297公髮）

-----—— — l·----% (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----訂---------線_! 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1223005 A7 ____ B7 五、發明說明（17) 後個別加入殺菌劑（不管是氧化或非氧化或其混合）。藉著計算螢光訊號的比值而非單純測量其絕對值所得的資訊（1)不受染料濃度影響以及（2)對於微生物活性更敏感。敏感度是因為微生物體轉化螢光劑染料為反應過的螢光劑染料，比值的提高是因為未反應螢光產生性染料的螢光訊號的降低以及已反應的螢光產生性染料的螢光訊號( 產物）增加兩者共同造成。在工業用水系統中目前已經被測得且對本申請專利範圍的發明的偵測方法有反應的常見的微生物體包括，但不限於，假單胞菌，桿菌，克列伯氏桿菌，腸細菌科，大腸桿菌’分枝絲菌屬，Haliscomenobacter。如前所述，本表尚有疏漏之處，需注意其他的細菌以及/或微生物體也可能會使用該設備偵測到。在本發明的任擇的一個最佳實施例中含有測量從不活性螢光追蹤材料以及未反應以及已反應的螢光產生性染料放射出的螢光訊號的方法。不活性螢光追蹤材料用來測量螢光產生性染料的濃度，藉著知道該濃度可以操作系統使得所需的螢光產生性染料濃度經常存在。有關使用不活性追蹤物以說明在工業用水系統中“水力流失，，的詳細討論，詳見美國專利第4,783,314號、第4,992,3 80號及第5,041，3 86 號，在此併入本案以為參考資料。使用不活性螢光追蹤材料的任擇的方法，需要不活性螢光追蹤材料以及染料兩者的濃度在被送入用水系統中的液體内彼此維持比例。此比例必須維持，使得一個參考數本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公餐） 20 ^ --------訂 --------線 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1223005 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（IS) 值可使用來決定從不活性物以及勞光產生性染料兩者所測得的螢光訊號的比值的改變。此比值即時的測；t使得微生物活性以及現有殺菌劑劑量的效率，以及任何需要的增加可有立即性的評估。微生物活性的即時測定使得依照需要量為基礎而添加殺菌劑成為可能。加人過量的殺菌劑’超過控制微生物活性所需使用的量可以避免，當此劑量可以即時數據為基礎測得時。因此，殺菌劑的使用可以藉著以預定的有效程度管理，其會使得正確的殺菌劑量被使用。此外，注入殺菌劑的有效性可以藉著即時基礎與以評估，且其劑量可依據即時數據而增減。以下的實例是為了說明本發明以及為了教導熟悉技藝者如何製造以及使用本發明。這些實例不是為了在任一方面限制本發明或其保護。實例實例1 一種螢光產生性染料以及當該螢光產生性染料與微生物體反應時的螢光訊號性質的檢驗 ϋ’Π a-刃天青指示劑的螢糸訊號研究刃天青指示劑鈉鹽可從ALDRICH®購得。該鹽在水系統中會溶解，留下刃天青指示劑成為一種一之的螢光產生性染料其可以與存在於許多維生物體的細胞膜中的呼吸酵素，脫氧酵素反應。因為與脫氧酵素反應，刃天青指示劑會還原成為3氫·吩噪嗉-3 -酿J - 7 -經基，也被稱為試_靈。刀本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 21 ----^----r------------訂---------線 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1223005 A7 ___ _ B7 五、發明說明（19) 天青指示劑與試鹵靈具有不同的螢光訊號。刃天青指示劑與試靈的化學構造式可見於第1圖。刃天青指示劑的已知螢光放射訊號最大波長為634 nm，而試鹵靈的已知螢光放射訊號最大波長為583 nm。含有0.2 ppm刃天青指示劑的冷卻水樣品其螢光放射光譜如圖1所示。這些光譜是使用從Jobin Yvon Spex，3880 Park Avenue，Edison NJ 08820所購得的SPEX螢光計得出。此榮光計的設定如下：波寬設定在2.5 nm以適用於激發以及發射’激發波長設定在5 5 0 nm，而發射擇範圍介於570至 650 nm以1 nm為步驟間隔，每一步驟有〇.2秒完整的時間。第1圖中，時間0的光譜是以具有三角形的線條所指示。24小時後所得的光譜是以圖！中的平滑線所示。時間〇的光譜在583nm及634nm都具有高峰，顯示在刃天青指示劑樣品中有少量的試鹵靈存在。所使用的刃天青指示劑樣品中有少量試_靈存在，其代表這個光譜是正確第反應在時間0的樣品組成。24小時的光譜也在583nm及634nm都具有高峰，但是這些高峰的相對強度是相當不同的。將苐1圖中的兩個光譜正常化至634 nm的強度。正常化是指將在每一個波長的螢光計數（也就是螢光強度）已經用除以一特定波長的計數。因此，該光譜的強度與在一特疋波長的光谱強度有關。此光譜在6 3 4 nm正常化，因為這個光譜被選擇用來顯示光譜形式的不同，而所選用的樣品主要成分為刃天青指示劑，其在634 nm有螢光放射高峰。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公愛） 22 I---r------------^--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) A7 '' '-----—-------___ 一厂 ............ 丨""......" - 五、發明說明（2〇) 也可以使用5 83 nm將這些光譜正常化，以達到本發明的目的。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在24小時時間間隔中所產生光譜的改變是由於刃天青指示劑與在冷卻水塔水中的微生物體反應所造成。微生物作用在刃天青指示劑上使刃天青指示劑轉化為試鹵靈。刃天青指示劑經由存在於微生物體細胞膜上連接的脫氧酵素還原。脫氧酵素是存在於所有微生物體内的一群電子轉移酵素。沒有和微生物體反應，刃天青指示劑不會在有還原劑存在時，自行即時轉化成為試_靈。持續的與微生物體反應使得583 nm的高峰強度與 634nm高峰相較而言提高。藉著計算在583 nm高峰的強度（反應過的螢光產生性染料高峰）與634 nm高峰的強度（螢光產生性染料高峰）比值，在系統中的微生物活性可以被測定出來。實例lb-比值限制的討論：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製反應過的螢光產生性染料的螢光訊號與未反應過的螢光產生性染料的螢光訊號之計算比值有其限值。在從冷卻水塔中來的典型的水中（pH約為9.0)，在583 nm以及634 nm 的兩個高峰強度對刃天青指示劑而言是近似的。當與微生物體反應過後’此比值會不斷地提南。此提高會持續與微生物活性成比例直到其值飽和。比值飽和之值與榮光度計的敏感度以及其4父正有關。這是因為並非所有的伯測器都在583 nm以及634 nm同樣敏感。對一個經過良好校正的系統而吕（Spex螢光计）’計算比值在5飽和。飽和音指豆為本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 23 ^223005 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 $、發明說明（21) 該比值的最高可測得值。其後微生物活性可能維持一段長時間不衰退，此值並不會改變。試_靈（純的）的光譜在其強度介於583 nm以及634 nm的比值為5。因此，如果刃天青指示劑的強度很低，試鹵靈的光譜就會佔優勢。這是因為一分子的試鹵靈比一分子的刃天青指示劑具有較強的量子產生的螢光。飽和的原因如下：試鹵靈在583 nm有最大放射，然而，其在634 nm時則輕微地放射。在634 nm的放射強度為在583 nm放射強度的五分之一。試鹵靈也是比刃天青指示劑強的螢光物質（也就是說，如果等莫爾數的刃天青指示劑以及試鹵靈在一特定波長放射時，在此情況是在55〇 nm 下’從試鹵靈產生的螢光強度要遠超過從刃天青指示劑產生者）。因此，當多數的刃天青指示劑已經被微生物體轉化成為試鹵靈時，螢光強度比值會在接近單獨只有試鹵靈的高峰時飽和。實例2 此實例顯示比值的改變與系統中的生物膜（固著物）生長成比例。所使用的螢光產生性染料為刃天青指示劑。使用

Cole-Parmer(625 E，Bunker Court, Vernon Hills，IL 60061， Phone (800) 323-4340)的變化流速齒輪抽水機模型 74011-10，將貯存在水池中的水經由1〇行長的管子（下文稱為“生物膜反應槽，，）連續循環。通過該管的壓力差使以一 -7354系列壓力感應器（〇_15 psi)測量（其也是從 ^ r------------訂---------線· (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 297公釐） 24 1223005 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（22)

Cole-Parmer購得）。含有稀釋量（低於lgram/L)的Tryptic Soy Broth黃豆所（了從Difco，1 Becton Drive，Franklin Lakes，New Jersey， 07417-1883購得）的水連續加入在此水池中，但將多餘的水分排出。在系統中停留的時間約為3〇分鐘。將生物膜反應槽接種微生物體，並藉著監測塑膠管兩端之間的壓力差，持續監測生物膜的生長，其為測定污染的一種標準方法。然後當染料加入後，在固定時間間隔中，間隔地將刃天青指示劑加入系統中並使用SPEX螢光計測量試鹵靈以及刃天青指示劑高峰的比值（波寬設定為2·5 nm以適用於激發及放射，激發波長設定在550 nm ,而發射擇範圍介於57〇至650 nm以1 nm為步驟間隔，每一步驟有〇 2秒完整的時間）。如實例II表（如下）的數據顯示隨著時間的比值的改變以及壓力差改變。在時間〇,系統以微生物接種，系統中被認為是沒有生物膜存在的。當微生物在固定供給養分及水分下隨著時間增殖時，其會吸附在管壁並形成生物膜質。隨著時間過去，此生物膜質厚度增加。此增厚的生質會提南在管中對水流的抗力，而產生所測得的壓力差。刃天青指示劑比值也隨著時間持續增加。從壓力差感應器以及刃天月ί曰示劑比值的結果間的相符性顯示，我們可以使用本申請專利範圍發明的方法監測生物膜活性。

l· --------訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線·

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） A7 r---------— —_B7 _ 五、發明說明（23) 實例2表 (小時··分鐘）比值改變壓力差 0: 00 0.3 0.33 3: 27 0.38 0.31 25: 07 2.10 1.72 53: 02 3.41 5.84 1223005 實例3 螢光產生性染料對浮游以及固著微生物體兩族群的反應固著微生物族群在一相當長的塑膠管中生長成為生物膜，經由其中含有稀釋量（低於0J gram/L)的Tryptic黃豆湯’從一水池中連續的抽送。水分在系統中停留的時間約為30分鐘。加入螢光產生性染料並與水混合，其後快速的萃取一份水/染料混合液的樣品。將一份最初的水樣品（下文稱最初樣品）從管中取出並且測量刃天青指示劑的最初螢光訊號以及試鹵靈的螢光訊號。使用來測量螢光訊號的螢光劑為SPEχ螢光計。然後將最初樣品保存並定期重測此樣品中的刃天青指示㈣以及試li靈的螢光訊號。在最初樣品中螢光的改變就指示系統中浮游微生物活性的改變，因為最初樣品是從管中取出的，且該管並未與固著微生物體有所接觸。對於最初萃取的最初樣品，其試鹵靈螢光訊號對刃天青指示劑榮光訊號比值隨著時間的改變，顯示了存在於冷卻塔水中的浮游性細菌的生長。 -----^----------------^---------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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五、發明說明（24 ) 疋期地將額外的樣品從管中取出，並且測量這些管中樣品的未反應染料以及反應過的染料的螢光訊號，以使得這些訊號的比值可被計算。這些訊號的比值指示固著以及浮游兩合併族群。為了決定系統中的固著微生物活性，額外樣品（樣品3〇，樣品60)從生物膜反應槽中取出，並測量在這些樣品中未反應染料以及反應過的染料兩者的螢光訊號。每一組螢光訊號的測量決定一個比值，以該比值指示微生物活性。每一個比值與浮游物（從最初樣品中來）活性或從取至生物膜反應槽中的液體中的固著以及浮游活性的總和相關聯。然而，在連續從生物膜反應槽中取出的液體中所觀察到的螢光比值大變化，與從最初樣品相較下，顯示生物膜活性的優勢強過浮游物活性。因此，此顯示出刃天青指示劑染料可以穿透進入生物膜中並反應。反應的程度可能肇因於生物膜中較大的活化微生物體族群。實例3表 r *·裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製顯示每一個實例的結果實例染料濃度 (ppm) 螢光產生性染料時間 (分鐘）在最初樣品的比值(僅有浮游性，不含固著族群）在生物膜反應槽的比值(浮游以及固著） 3A 0.2 刃天青指示劑 0 1.07 1.37 3A 0.2 刃天青指示劑 30 1.23 5.2 3B 0.2 吡喃磷酸鹽 0 0.146 0.146 3B 0.2 口比喃磷酸鹽 60 0.195 1.54 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1223〇〇5

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（25) 實例4 本實例顯示測量固著微生物體族群（也稱為“生物膜，，) 存在的線上即時方法的有效性並且測試使用殺菌劑的相對處理。實例1表顯示一種控制殺菌劑進入水塔的控制計劃，藉著使用以刃天青指示劑作為螢光產生性染料的測量比值方法。螢光產生性染料以一偵測閾值的濃度連續加入，以維持水中全部未反應染料以及已反應染料產物濃度穩定。所產生的螢光訊號比值每3分鐘被監測及計算。當比值增加超過一預設的比值閾值時，殺菌劑會藉著開啟殺菌劑唧筒被釋出在系統中。殺菌劑唧筒維持開啟直到計算所得的榮光訊號比值的增加停止為止。比值的增加是因為微生物活性 ’而其降低則是對殺菌劑進料的反應。 -----Γ丨l·—％------ C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線· 實例4表實驗的時間比值唧筒狀態備註 00:00:0 1.3838 關殺菌劑唧筒關閉 0:35:00 1.8815 關 1:10:00 1.52 關 1:38:00 1.75 關 2:13:00 2.009 開殺菌劑°即筒開 2:55:00 2.159 開 3:24:00 '2.22 開 3:52:00 2.166 「關殺菌劑唧筒關閉 4:27:00 2.054 關 4:55:00 2.027 關在此一測试中液體在一固定間隔被取出並以平板、去、、則

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 τ ---^___ 五、發明說明（26) ~ 定浮游微生物污染的真實數量。使用標準“平板，，試驗所測量得出的平均值為3.2x 形成單位（縮寫為、Μ”) 。這個值足夠低以顯示經過這個職整體微生物的控制是有效的。 f例5-電腦抬制在這個實例中所使用的螢光產生性染料是刀天青指示劑。這些規則是應用於建立電腦控制。在此時例中，所選用的工業用水糸統是冷卻塔。、用於設定電腦程式的參數如下： •微生物活性藉著與刃天青指示劑反應造成比值提高。非乳化杀又滅劑會殺死微生物體，但不會與染料反廣，而使得比值穩定。 •過量的氧化殺菌劑與試鹵靈反應會造成比值降低。 •塔放空會添加新染料到系統中而造成因為刃天青指示劑濃度的增加引起比值的降低。刃天青指示劑與微生物體反應的產物是試_靈。所測得的比值是試鹵靈的螢光訊號對刃天青指示劑的螢光訊號的比值。以下所述的控制程序成比例地控制一個唧筒責任循環，其是依據所測得的與使用者定義有關的比值，並考慮比值測量的歷史趨勢。在583 nm(試鹵靈）以及在634 nm(刃天青指示劑）的螢光訊號固定地依照一有限的使用者定義的測量間隔被測量。這些讀數被貯存在一個歷史數據構造中（FIF〇表）。如果本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 29

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^23〇〇5 A7 Γ^·-----------B7__ 五、發明說明（27 ) 對一個使用者定義的最低連續測量數目中，所測量到的試 _靈以及刃天青指示劑螢光訊號強度兩者都超過使用者定義的閾值，這些值的比值藉著放入一個二次多項式中可被使用來測定一種趨勢。如果兩者強度都未超過最低連續測 $數目的閾值，直到下次測量前都沒有控制操作。（這解決了因為在螢光產生性染料與任何存在的氧化殺菌劑反應而需要捨棄的螢光訊號。）配合的品質決定於標準卡方規範。 I 如果此配合無法通過卡方檢定，直到下一次測量前都不需要控制操作。如果目前測量的二級配合的斜率低於一個使用者疋義的最低值，直到下一次測量前都不需要控制操作如果二級配合的斜率符合或超過該使用定義最低值控制的建立是藉著將殺菌劑唧筒責任循環設定在一個測1 間隔的部分，其與使用者定義的較高及較低比例限值位j 有關的測量比值成比例。如果測量比值低於較低的比值^ 值維持_。如果測量比值高於較高比值㈣四杀又菌即筒責任循環要設定在其最高值。殺菌唧筒責任柄環在任何時間都不能超過測量間隔。 ▲本發明已經以說明的方式敘述。在上述說明的啟示下可能有許多修正及變化。因此，需要了解在檢附之申請專利粑圍中，本發明可能會以與特定描述的不同方式操作。本紙張尺錢财

Claims

1223005 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ._μ 六、申請專利範圍 1. 一種在工業用水系統中監測浮游及固著微生物族群的方法，其含有： a) 在泫工業用水系統中直接加入一螢光產生性染料並使該螢光產生性染料與存在的浮游或固著微生物反應； b) 提供在該工業用水系統中測量該螢光產生性染料之螢光訊號的方法，以第一個螢光訊號量測為該螢光產生性染料的數值，以第二個螢光訊號量測作為反應過的螢光產生性染料數值； 0使用該方法量測該螢光產生性染料的螢光訊號，以測1螢光產生性染料的螢光訊號以及反應過的螢光產生性染料的螢光訊號，任何低於預先測得的噪音值的測量螢光訊號值都要捨棄不用； d) 計算所量測到的反應過螢光產生性染料螢光訊號與該螢光產生性染料螢光訊號比值；以及 e) 監測從步驟d)所計算出的比值的改變，以決定在工業用水系統中浮游及固著微生物族群的狀態。 2·如申請專利範圍第1項之方法，其進一步含有： f) 決定加入該工業用水系統中的殺菌劑的最適量 ’其中該最適量是根據該比值或該比值的變化速度的私度，以及 g) 將該最適量的殺菌劑加入該用水系統中。 3·如申請專利範圍第1項之方法，其中該螢光產生性染料從含有刃天青指示劑，4-甲基繳磷酸鹽（4MUP)，以及 I X 297公釐 l· ί」务--------訂---------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1223005 __ g8s___ 六、申請專利範圍口比喃磷酸的基中選擇。 4· 一種在一工業用水系統中龄、、目丨丨、、〇 # 兄甲皿測子游以及固著微生物族群的方法，其含有： a) 將疋里的不活性螢光追蹤材料與一定量的螢光產生性染料事先混人以形士口开^成一不活性的螢光追縱材料-螢光產生性染料混合物； b) 將該不活性的螢光追縱材料_螢光產生性染料混 α物直接加入β亥工業用水系統中，使該螢光產生性染料與存在的任何浮游或固著微生物反應； Ο提仏可測里在該工業用水系統中的該不活性螢光追縱劑以及營光產生性染料的^光訊號的測量方法，以第一次測量的螢光訊號作為該發光產±性染料的數值，以第二次測得的螢光訊號作為反應過的螢光產生性染料的數值，並以第三次螢光訊號作為該不活性螢光追蹤劑數值； d) 使用该方法測量該螢光產生性染料的該螢光訊號，以測量螢光產生性染料的螢光訊號，反應過的螢光產生性染料的螢光訊號，以及不活性螢光追蹤劑的螢光讯號’並且捨去任何低於預先測得的噪音值的螢光訊號值； e) 計算所量測到的反應過螢光產生性染料螢光訊號與該螢光產生性染料螢光訊號比值；以及 f) 監測從步驟e)所計算出的比值的改變，以決定在工業用水系統中浮游及固著微生物族群的狀態；本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G χ 297公爱）：~32~~ • — — — —Nllum (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1223005 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製六、申請專利範圍 g) 使用該不活性螢光追蹤劑材料的螢光訊號以決定是否所需要的螢光產生性染料劑量存在於該工業用水系統中；以及 h) 依據所測得的該不活性螢光追蹤材料的螢光訊就’調整加入該工業用水系統中的螢光追蹤材料—螢光產生性染料混合物之劑量。 5’如申請專利範圍第4項的方法，進一步含有： 1)決定加入該工業用水系統中的殺菌劑的最適量，其中該最適量是根據該比值或該比值的變化速度的程度；以及 j)將該最適量的殺菌劑加入該用水系統中。 6·如申請專利範圍第2項的方法，其中該殺菌劑是一氧化殺菌劑。 7·如申請專利範圍第2項的方法氧化殺菌劑。 8·如申請專利範圍第2項的方法非氧化殺菌劑的混合物。 9·如申請專利範圍第1項的方法為刃天青指示劑。 10·如申請專利範圍第1項的方法計算。 11·如申請專利範圍第5項的方法菌劑。 12·如申請專利範圍第5項的方法其中該殺菌劑是一種非其中該殺菌劑為氧化及其中該螢光產生性染料其中該比值以電腦程式其中該殺菌劑為氧化殺其中該殺菌劑為非氧化 M ^ --------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 私紐尺錢财關家標準（CNS)k4規格（210 X 297公爱 1223005 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍殺菌劑。 13. 如申請專利範圍第5項的方法，其中該殺菌劑為氧化及非氧化殺菌劑的混合物。 14. 如申請專利範圍第1項的方法，其中該測量螢光訊號的方法是在線上裝置。 15. 如申請專利範圍第1項的方法，其中該測量螢光訊號的裝置是離線裝置。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）