TWI289065B

TWI289065B - Skin basement membrane formation promoting agent, as well as process for production of the skin basement membrane formation promoting agent and artificial skin

Info

Publication number: TWI289065B
Application number: TW090107239A
Authority: TW
Inventors: Satoshi Amano; Yukiko Matsunaga; Shinji Inomata
Original assignee: Shiseido Co Ltd
Priority date: 2000-03-27
Filing date: 2001-03-27
Publication date: 2007-11-01
Also published as: US20080248571A1; WO2001072347A1; EP2324863A1; US20020193875A1; KR20020019920A; EP2324863B1; CN1795922A; EP1180371A4; CN1365293A; KR100841667B1; US20060159782A1; US20040038859A1; US7645595B2; JP4074043B2; EP1180371A1; JP2001269398A

Description

1289065 A7 B7 五、發明說明（1 ) 發明之範疇本發明係關於皮膚基底膜安定化劑。再者，本發明係關於人工皮膚形成促進劑及人工皮膚之製造方法。背景技術在化妝及皮膚科學範疇中，已提出各式各樣之方法來減輕或治療從日光對皮膚照射之外界環境影響乃至於年齡增加所造成之損傷，並且正進行試驗。舉例而言，隨著年齡增長而來之皮膚變化，以皺紋之形成、硬化或彈性降低等-爲主要。此種變化之原因，主要朝皮膚眞皮中膠原、彈性素及胺基葡萄糖聚糖組成之膠原纖維及彈性纖維之機能降低關切。迄今爲止，防止或修復此種變化之手段有羥基叛酸類之使用（例如專利第2533339號公報）、溶血磷脂質之使用 (例如特開平8- 67621號公報）或日本油化學會諸第46卷第9 號{( 1997年）13-19頁}所提出者。在削者之公報中’暗示藉由膠原纖維減損之防止可根除角質及皺紋。另一方面，在後者之公報中，暗示溶血骑脂質由於能使人類纖維芽細胞中胺基葡萄聚糖（具體而言爲透明質酸）產生能力亢進而達到美白效果。上述外界環境對皮膚老化之影響，已知最強者爲太陽光所包含之紫外線，明確而言，其爲老化促進因子，會誘導以深皺紋爲特徵之所謂「光老化」之皮膚變化^吮以沿批卜

Kochanek，Advance in Pharmacology，1997，58，639- 655)。紫外線對皮膚之影響牵涉多方面，從基因DNA之傷害、乃至 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） f7!+-------m (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

tri J------線—I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（2 ) 謗導活性氧產生，再加上最近提出之謗導基質分解金屬酵素產生等（Fisher等，Nature，1996, 379, 335- 339)皆曾被報告。由於紫外線具有多方面作用，因此紫外線造成之光老化爲何種機構引起，迄今仍未有充分‘之解釋説明。以不致引起紅斑程度之能量之紫外線連續照射無毛鼠，在老鼠背部明顯地出現對應於人類光老化皮膚所形成之深皺紋，使用孩老鼠模型對影響皺紋物質進行評價（Moloney et al.，

Photochem· Photobiol·，1992, 56, 495-504)。但是，仍無關於皺紋形成機構之充分解釋，此種解釋仍在等待中。另一方面，Koivukangas等報導在照射紫外線之皮膚中，爲基底膜分解酵素之明膠酶升高（Acta Derm. Venereol. 1994, 74, 279-282)。再者，亦有報導在日光暴露部位皮膚中，顯示基底膜之構造變化，尤其頻繁地觀察到「多重化」（Lavker，J· Invest，Dermal，1979, 73, 59-66)。此暗示日光中所含之紫外線可能藉由提高皮膚中基底膜分解酵素之產生量’而影響基底膜構造。然而，有關促進皮膚‘基底膜構造形成之具體方法，仍未爲人所知。人工皮膚係做爲原生皮膚因某些原因受到損傷之代替 to ’或做爲試驗醫樂與化壯品對皮膚之作用及藥效之實驗材料，因此甚爲重要；在任一種用途中，皆期望具有模仿天然皮膚之構造之人工皮膚。天然的皮膚概略而言由表皮、眞皮及其間存在之基底膜 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------訂----------線 1289065 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（3 所構成。已知此種模仿天然皮膚之人工皮膚製造方法之一例，爲在具有與眞皮類似之構造且含有人類纖維芽細胞之收縮I型膠原凝膠上，培養人類正常表皮角質化細胞以形成表皮層之方法。然而，此種方法中，有所謂「模仿眞皮 <膠原凝膠與模仿表皮之表皮層間‘，未充分形成基底膜」之缺點存在。發明之揭示、因此，本發明之目的，係提供一種使皮膚基底膜安定化之新穎方法，以及一種在人工皮膚製造中達到充分形成基底膜之新穎方法。本發明人等爲解決上述課題，進行種種檢討之結果，發現藉由投與基質金屬蛋白酶之抑制劑，或基質金屬蛋白酶抑制劑與基質蛋白質產生尤進劑兩者，可促進皮膚基底膜之構造形成，因而完成本發明。因此本發明提供一種包含基質金屬蛋白酶抑制劑之皮膚基底膜形成促進劑。 2者：本發明提供一種包含基質金屬蛋白酶抑制劑及基貝白貝產生几進劑之‘皮膚基底膜形成促進劑。本發明人等爲解決上述課題，進行種種檢討之結果，發現在供製造人工皮膚之立立卷中 .M ^ “炙"蚕中，精由於培養基中添加基質至屬蛋白酶之抑制劑，成者美暂蛋白質產生二f 者土貧屬蛋酶抑制劑與基質本發:進劑兩者，可促進基底膜之形成，因而完成因此本發明提供-種包含基質金屬蛋白酶抑制劑之人工 --^---V----------------訂---,4------1^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -1 n a— n - n n Iff -

X 297公釐）

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 —·~-—------ 五、發明說明（4 ) 皮膚形成促進劑。再者，本發明提供一種包含基質金屬蛋白酶抑制劑及基質蛋白質產生亢進劑之人工皮膚形成促進劑。土再者，本發明提供一種人工皮膚之製造方法，其特徵爲於形成人工皮膚之培養基中，添如基質金屬蛋白酶抑$ 劑。再者’本發明提供一種人工皮膚之製造方法，其特徵爲於形成人工皮膚之培養基中，添加基質金屬蛋白酶抑制劑--與基質蛋白質產生亢進劑。圖式之簡單説明圖1係在以形成人工皮膚爲目的之培養中，於培養基中添加基質金屬蛋白酶CGS27〇23A (1〇βΜ)或MMP-抑制劑 (300 " Μ)之情況，與未添加任一者之對照組相比之人工皮膚斷面照片，其爲表示生物形態之圖面代用照片。圖2表示在以形成人工皮膚爲目的之培養中，於培養基中只添加基質金屬蛋白酶抑制劑CGS27023 A ( CGS所示），或除CGS之外另添加爲基質蛋白質產生尤進劑之轉形生長因子-從（CGS+TGFa)之情況、除CGS之外另添加爲基質蛋白質產生亢進劑之轉形生長因子1 (CGS+TGFbl)之情況、及除CGS之外另添加TGFa及TGFbl兩者之情況 (CGS+TGFa+TGFbl)，將所形成之人工皮膚進行蘇木紫曙紅染色（H&E)並且進行免疫染色[昆布胺酸5之檢出（LN5)] 之結果，其爲人工皮膚之斷面圖，係表示生物形態之圖面代用照片。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1289065

五、發明說明（5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製圖3表示與圖2相同之實驗中，進行免疫染色[ιν型膠原之 :出⑽)及VII型膠原之檢出(viic)]之結果，其爲人工皮㈢之斷面圖’係表示生物形態之圖面代用照片。、圖4係在以形成人工皮膚爲目的之培養中，於培養基中^基質金屬蛋白酶抑制劑CGS：27023A及爲基質蛋白質產，几進劑之大且_磷酯之情況（CGS+大豆彡卩磷酯），與其等均未添加 < 情況（對照組）中所形成人工皮膚之斷面，其爲表示生物形態之圖面代用照片。發明之實施形態基質金屬蛋白酶本發明所使用之基質金屬蛋白酶抑制劑，只要具有此種抑制活性之物質即可，並無特別限制。可做爲基質金屬蛋白酶抑制劑者，例如有明膠酶、膠原酶、司特羅美來辛、馬脱力來辛等。因此，基質金屬蛋白酶抑制劑可選擇例如明膠酶、膠原酶、司特羅美來辛、馬脱力來辛等抑制性物質。基質金屬蛋白酶抑制劑之具體例，例如有CGS27023 A物質（N-#基-2-[[(4-甲氧苯基）磺醯基]吡啶甲基胺基]_ 3-甲基丁醯胺鹽酸鹽）（j Med. Chem. 1997，Vol. 40，p. 2525-2532)、 NHOH)(FN-437)(BBRC，1994, Vol. 199, p，1442- 1446)等。再者’作爲本發明之基質金屬蛋白酶抑制劑之具體例者，可使用各種植物萃取物及從其所得到之精製物。此等植物例如有百里香（Thymus serpyllum L·)、小鹿草 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -1 ^---* V-----I--I--11--訂-------I----I---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 A7 _B7_ 五、發明說明（6 ) (Valeriana fauriei Briquet)或其之近緣植物（敗醬草科）、柿樹（Diospyros kaki Thunberg (柿科））、紫雲英草（Astragalus sinicus Linne(豆科））、山楂（Crataegus cuneata Siebold et Zuccarini (薔薇科））、牡丹（Paeonia suffruticosa Andrews (Poeonia montan Sims)(牡丹科））、紅茶（Thea sinensis L inne var. assamica Pierre,(茶科））、尤力口利樹（Eucalyptus globulus L abillardiere)或其近緣植物（桃金娘科）、洋翻白草（Potentilla tormentilla Schrk (薔薇科））、椴樹（Tilia cordaia Mill., Tilia platyphyllus Scop., Tilia europaea Linne (椴樹科））、白樺（Betula alba L inne (白樺科））、墨角倫草 (Origanummajorana L·)、兒茶鉤藤（Uncaria gambir Roxburgh (茜草科））、核桃殼（Juglans regia Linne Var. sinensis De Candolie)或其近緣植物（核桃科）、苦參（Sophora flavescens Aiton (豆科））、地榆（Sanguisorba officinalis L inne (薔薇科)）、貫葉金絲桃（Hypericum perforatum L inne 或 Hypericum erectum Thunberg (藤黃科））、茶（Thea sinensis Linne (茶科））、薑黃（Curcuma longa L (薑科））、爲薑黃萃取精製物之薑黃素、海濱簑衣草（珠仔樹（Symplocos racemosa)、莎草（Cyperus rotundus))、米勒芭蘭樹類（乾鱗莎草（Cyperus scariosus)、火炭果(Gaultheria fragrantissima)、金合歡 (Acacia fornensia)、討黎勒樹（Terminalia chebula))、孟加拉菩提榕（番屋榕）（Ficus bengalensis)、南番皂莢（（清瀉山扁豆）Cassia fistula L inn)、南燭木（L yonia ovalifolia)、紅厚殼類（胡桐、甘藍）（Calophyllum inophyllum)以及天竺菩 -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱"" I.---VI------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線—隊經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（7 ) 提樹（Ficusreligiosa)等。一此等植物之萃取物’草本植物者，可從根、冑、莖以及 =寺得到萃取物，木本植物者，可從根、芽、樹皮、果實、葉以及花等得到萃取物，來自此等植物之萃取物，先視需‘要將植物材料乾燥，繼而視需要切斷或粉碎後，藉由水性萃取劑或有機溶劑萃取即可仔到。作爲水性萃取劑者，可使用例如冷水、溫水、沸水或比其稍低溫之熱水；又有機溶劑者，可使用甲醇、-乙醇、1,3-二丁醇及乙醚等常溫或經加熱者。在本發明中作爲基質蛋白f者’例如有爲基底膜之構成分之昆布胺酸、…型膠原' VII型膠原、帕來肯（paiecan) 及奈多精（nidogen)。質蛋白質產生贪推逾丨本發明中所用之基質蛋白質產生亢進劑爲能使此等蛋白貝之產生允進者，舉例而1，有大豆溶血卵蹲酯、轉形生長因子-'(TGFa)、轉形生長因子_ w (TGFbl)、轉形生長因子-/? 2 ( TGFb2)、轉形生長因子·ρ3 ( TGFb3)及表皮增殖因子（EGF)等。曰本發明之人工皮膚形成促進劑或皮膚基底膜安定劑，在含有基質金屬蛋白酶抑制劑及基質蛋白質產生亢進劑兩者之情況’該基質金屬蛋白酶抑制劑及基質蛋白質產生尤進劑之比率，視彼等之種類及活性而異，但大體而言爲1 : 106〜106 : 1 〇人工皮膚 -10 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---- I* ★ --------^---«-------1^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 A7 ------- -B7____ 五、發明說明（8 ) 在本發明中作爲人工皮膚製造用之基礎培養基者，可使用以往人工皮膚製造中所使用之任何培養基，此等培養基 έ有10 /〇牛胎血清之杜白可改質氏伊格爾培養基；含有 10%^胎血清、轉鐵蛋白5微克/毫升、胰島素5微克/毫升、三碘化甲狀腺胺酸2 ηΜ、霍亂‘毒素〇1 ηΜ及氫化可的松〇·4微克7毫升之DMEM-Ham’s F12 (3 ·· 1);將角質化細胞增殖培養基（KGM)與含有10%牛胎血清之dMEM# 1 ·· 1 混合而成之培養基等。於此等基礎培養基中所添加之基質至屬蛋白酶抑制劑之量，依據其種類而異，但大體而言爲 1¾微莫耳/公升〜1〇_2莫耳/公升。再者，於基礎培養基中所添加之基質蛋白質產生亢進劑之量爲約1毫微克/公升〜1 公克/公升。於本發明之人工皮膚之製造中，首先將含有人類纖維芽細胞之收縮I型膠原凝膠靜置於金網上。含有人類纖維芽細胞之收縮I型膠原凝膠，舉例而言，可依照以下之方式調製。將纖維芽細胞懸浮膠原溶液於冰上而製造後，在佩曲（petri)培養皿内使膠原凝膠化而調製。其後，從佩曲培養皿壁面上將凝膠剝離，將膠原凝膠置於c〇2培育器内使其收縮。繼而，於上述膠原凝膠之上培養表皮細胞（例如人類正常表皮角質化細胞），以形成表皮。藉由皮膚細胞之培養以形成表皮層，可依照以下之方式進行。將收縮膠原凝膠置於金網上，再將玻璃環置於凝膠上。在該玻璃環内，以不使液體滲漏之方式加入從人類包皮而來之表皮角質化細 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —1丨丨>-------MW (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣訂----------線 IIP------.---; 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（9 ) 胞碌浮液。於C〇2培育器内使角質化細胞接著，解下環。將上述培養基佈滿表皮層之範圍，將表皮層暴露於空氣中，同時繼續培養使各層形成。若依照該方法，在從含有纖維芽細胞之收縮I型膠原凝膠所形成之眞皮層，與表皮層之間充‘分地形成基底層，而得到與天然皮膚接近之人工皮膚。 I·膚基底膜形成促谁劍著眼於從隨著老化而變化（其特徵爲隨著年齡增加，基-底膜被多重化）之構造變化之報告（L avker，J. Invest. Dermal. 1979, 73, 59- 66)，對於爲化妝主要對象之顏面皮膚之基底膜構造變化之檢討結果，發現此種基底膜之構造變化從2〇歲年代後半開始，隨著年齡增加而累積。此種基底膜之構造變化，爲比皺紋形成、硬化或彈性降低等隨年齡增加之皮膚變化先發生之皮膚變化。因此，將表皮基底膜細胞準確地結合在基底膜上，爲表現正常皮膚機能所必需，因而思及促進基底膜形成之重要性。使用以紫外線（假定爲曰常紫外線）照射而造成老化之老鼠模型進行關於皺纹形成抑制劑之檢討，結果發現可抑制基質分解金屬酵素之藥劑具有抑制皺紋形成之活性。因此，在皮膚之基底膜中使基底膜再生與修復之促進劑在防禦皮膚老化上具有效果。因此，右依照本發明，可提供新穎的皮膚賦活用組合物或促進基底膜形成之人工皮膚培養液，其含有上述基質分解金屬酵素抑制化合物中之丨種或其2種以上之混合物，或 -12 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） I;--------------------^----------線 —Φ------.---^---.----------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（10 ) 者含有該基質分解金屬酵素抑制化合物中之1種或其2種以上之混合物及可提高基質蛋白質產生活性之化合物中之1 種或其2種以上之混合物，該組合物或培養液在足夠濃度下顯示可以促進皮膚基底膜之再生修復及具有形成促進效果。術語「皮膚賦活」意指預防及 >文善例如因年齡增加使基底膜構造變化而造成之皮膚機能降低，具體而言，如皮膚之敏紋、硬化等。上述「顯示可促進皮膚基底膜之再生修復且形成促進效果之足夠濃度」，可隨者所用化合物之種類、爲調整該組合物所用之其他成分或劑型、甚至施用時間而變化。本發明之皮膚基底膜形成促進劑，其中爲活性成分之基質金屬蛋白酶抑制劑、或基質金屬蛋白酶抑制劑與基質蛋白質產生亢進劑可爲組合物之〇〇〇〇〇〇1〜6〇重量％，而以 0.00001〜60重量％爲較佳。本發明之皮膚基底膜安定劑，可採用水溶液、油液、其他溶液、乳膏、凝膠、懸浮液、微膠囊、粉末、顆粒、膠囊及固形等之形態，且除藉由本身已知之方法調製成此等形態外，尚可做成洗液製劑、乳液劑、霜劑、軟膏劑、硬霄劑、糊劑、氣化噴霧劑、注射劑、内服劑（錠劑、散劑、顆粒劑、丸劑、糖漿劑、糖錠劑等）、栓劑等，而^ 由塗敷1占附、噴霧、注射、飲用、插入等方式施用^ 體。此等製劑型中，洗液製劑、乳液劑、霜劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑及氣化噴霧劑等皮膚外用被認爲係本級合物適用之製劑型。此處所述之皮膚外用劑包含醫^品、、’、 -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） I— --------IT----------^ —Awl (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（Ή ) 醫藥部外品及化妝品等，以下所用之意義相同。在本發明之組合物中，除調製此等時常用之賦形劑及香料外’尚可適當地添加油脂類、界面活性劑、防腐劑、金屬離子封阻劑、水溶性高分子、增黏劑、粉末成分、紫外線防禦劑、保溼劑、藥效成分、氧i化防止劑、pH調整劑、洗淨劑、乾燥劑及乳化劑等。在將此等成分之各個添加於本發明之皮膚賦活用組合物中之情況，必須在不損傷本發明所期望之效果之範圍内進行。㈤述油脂類者，有液體油脂、固體油脂、蠟類、烴油、南級脂肪酸、高級醇、合成酯油及矽酮類。具體而舌’液體油脂例如有絡梨油（Avocado oil)、山茶油、月見草油、龜油、澳洲堅果油、玉米油、貂油、橄檀油、油菜籽油、卵黃油、芝麻油、杏仁油、小麥胚芽油、山舍花油、蓖麻子油、亞麻仁油、紅花油、棉實油、紫蘇子油大且油、落花生油、茶實油、椰子油、米樣油、中國梧桐油、日本梧桐油、希蒙德木（J〇j〇ba)油、胚芽油、二酸甘油脂、三辛酸甘油酯及三異棕櫚酸甘油酯等；固體油脂例如有可可脂、椰子脂、馬脂、硬化椰子油、棕搁油、牛脂、羊脂、硬化牛脂、棕櫚核油、豬油、牛骨脂、木蝶核油、硬化油、牛腳脂、木蠟及硬化蓖麻油等；蠟類者，如蜜蠟、小燭樹蠟、棉蠟、巴西棕櫚蠟、月桂子蠟、白蠟、鯨蠟、褐煤蠟、糠蠟、羊毛脂、木棉蠟、醋酸羊毛脂、液狀羊毛脂、甘蔗蠟、羊毛脂脂肪酸異丙酯、硬脂酸己醋、還原羊毛脂、希蒙德木蠟、硬質羊毛脂、蟲膠蠟、 -14 - 本驗尺㈣用甲國國家標準(CNS)A^r(21〇 X 297 .I♦---*-------I 1111111 ^ 'In I--11 . (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065

五、發明說明（12 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^羊毛脂醇醚、P0E羊毛脂醇乙醋、p〇E膽脂脂肪酸聚伸乙：醇請E加氫羊毛料料；煙油=，如流動石壤、地壞、角挲烯、挲磷念^ I甘油^、石^、精製地虫故、角鯊％、凡士林及微晶蠟等。高級脂肪酸者，例如有月桂酸、.肉苴蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、二十二烷酸（Behenicacid)、油酸' 12_羥基硬脂酸、十-碳晞酸、T苯酸、異硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、廿碳五烯酸（EPA)及廿六碳六晞酸（dHa)等。 - 高級醇者，如月桂醇、鯨蠟醇、硬脂醇、廿二烷醇、肉苴蔻醇、油醇、十八/十六烷混合醇等直鏈醇，單硬脂基甘油鲢（1肝醇）、2-癸基十四烷醇、羊毛脂醇、膽固醇、植物固醇、己基十二烷醇、異硬脂醇及辛基十二烷醇等之分枝醇等。合成酯油者，如肉莖蔻酸異丙酯、辛酸十六燒醋、肉蓋蔻版辛基十二坑酯、棕搁酸異丙g旨、硬脂酸丁 g旨、月桂酸己酯、肉莖蔻酸肉苴蔻酯、油酸癸酯、二甲基辛酸己基癸酯、乳酸十六烷酯、乳酸肉苴蔻酯、醋酸羊毛脂g旨、硬脂酸異十六燒醇、異硬脂酸異十六燒醇、12-幾基硬脂酸膽固醇、二-2-乙基己酸伸乙二酯、二異戊四醇之脂肪酸酯、單異硬脂酸N-烷二醇酯、二癸酸新戊二醇酯、蘋果酸二異硬脂@旨、二-2 -庚基^ 燒酸甘油醋、三-2 -乙基己酸三羥曱基丙烷酯、三異硬脂酸三羥甲基丙烷酯、四-2-乙基己酸異戊四醇醋、三-2 -乙基己酸甘油g旨、三異硬脂酸三輕甲基丙、烷酯、2-乙基己酸十六虎酯、棕櫚酸2-乙基己 15 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公愛） !-------§-------- 訂—--------^ IAWI (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 A7 ______ B7___ • 一 ------ 五、發明說明（13 ) 醋、二肉蓋寇酸甘油酯、三-2-庚十一烷酸甘油酯、萬麻子油脂肪酸甲酯、油酸油基酯、十八/十六烷混合醇、乙酉區甘油、标櫚酸2-庚十一院酯、己二酸二異丁酯、月桂醯基-L-榖胺酸-2-辛基十二坑酯、己二酸-2-庚十一俨醋、月桂酸乙酯、癸二酸二-2-乙基己酯、肉苴蔻酸孓己基癸酯、棕櫚酸2-己基癸酯、己二酸2-己基癸酯、癸二酸二異丙醋、琥珀酸2-乙基己酯、醋酸乙酯、醋酸丁酿、醋紅戊酉旨及择樣酸三乙醋等。矽酮類例如有二甲基聚矽氧烷、甲基苯基聚矽氧燒、甲基聚矽氧烷及甲基氫二烯聚矽氧烷等鏈狀聚矽氧烷；十甲基聚矽氧烷、十二甲基聚矽氧烷及四甲基四氫二烯聚硬氧燒等環狀聚矽氧燒；形成三次元網狀構造之矽酮樹脂、砂酮橡膠等。本發明之皮膚基底膜安定劑，可包含單獨之陰離子界面活性劑、陽離子界面活性劑、兩性界面活性劑、非離子界面活性劑等，或其之組合。因此’陰離子界面活性劑例如有肥包用材料、月桂酸鋼及棕橺酸鈉等脂肪酸肥包；硫酸月桂酯鈉、硫酸月桂酯钾等硫酸高級烷酯鹽；POE月桂基硫酸三乙醇胺及poe月桂基硫酸鈉等硫酸燒基醚酯鹽；月桂醯肌胺酸鈉等N-醯基肌胺酸；N-肉苴蔻醯基-N-甲基牛續酸鈉、椰子油脂肪酸甲基牛磺酸鈉及月桂基甲基牛磺酸鈉等高級脂肪酸醯基磺酸鹽；POE油烯基醚磷酸鈉及POE硬脂醯醚磷酸等嶙酸酯鹽；二-2-乙基己基磺基琥珀酸鈉、單月桂醯基單乙醇醯 -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） .1·----^--I----------丨丨丨訂·丨4---"丨·線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 1289065

五、發明說明（u ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製胺聚氧伸乙磺基琥珀酸鈉及月桂基聚伸丙二醇磺基琥珀酸鈉等磺基琥珀酸鹽；直鏈十二烷基苯磺酸鈉、直鏈十二烷基苯碍酸三乙醇胺及直鏈十二烷基苯磺酸等烷基苯磺酸鹽；N-月桂醯基榖胺酸單鈉、N_硬脂醯基榖胺酸二鈉及 N-肉豆蔻驗基-L -榖胺酸單鈉等基毅胺酸鹽；硬化椰子油脂肪酸甘油硫酸鈉等高級脂肪酸酯硫酸酯鹽；土耳其紅油等硫酸化油；以及POE烷基醚羧酸、POE烯丙基醚羧酸鹽、α -烯烴磺酸鹽、高級脂肪酸酯磺酸鹽、二級醇硫酸醋鹽、高級脂肪酸烷醯基醯胺硫酸酯鹽、月桂醯基單乙醇醯胺琥轴酸鈉、Ν-棕櫚醯基天門冬酸二三乙醇胺及絡蛋白納等。陽離子界面活性劑例如爲氯化硬脂基三甲基銨及氯化月桂基二甲基銨等烷基三甲基銨鹽；氯化二硬脂基二甲基銨、二烷基二甲基銨鹽、氣化聚（Ν，Ν、二甲基_3,5_亞甲基穴氫峨淀鏘）及氣化十六烷基吡啶鏘等烷基吡啶鑌鹽；以及烷基四級銨鹽、烷基二甲基苄基銨鹽、烷基異喹啉鏘鹽、二烷基嗎福啉鏘鹽、ρ〇Ε烷胺、烷胺鹽、聚胺脂肪酸衍生物、戊醇脂肪酸衍生物、氣化苄燒銨及氣化芊乙氧銨兩性界面活性劑例如爲2_十一烷基-Ν，Ν，Ν_(羥乙羧甲基）-2-咪唑啉鈉及2-可可基咪唑啉鑌氫氧化物_丨_羧乙羥基二鈉鹽等咪唑啉系兩性界面活性劑；2_十七烷基_ 羧甲基-N-羥乙咪唑啉鏘甜菜鹼、月桂基二甲胺醋酸甜菜鹼、烷基甜菜鹼、醯基甜菜鹼及磺基甜菜鹼等甜菜鹼系界 _ ·17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2ΐ〇 X 297公爱） 1·--------------------訂---*-------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製面活性劑。親油性非離子界面活性劑例. ,^ ^ 扪如馬山梨糖醇酐單油酸酯、山梨糖醇酐單異硬脂酸酯、山梨叫4糖知酐早月桂酸酯、山梨糖鮮奸單棕櫚酸自旨、山梨糖醇料硬脂酸醋、山梨糖醇肝倍+油酸酯、山梨糖醇酐三油酸酷、五_2_乙基己酸二甘 :“梨糖醇肝及四-2-乙基己酸二甘油山梨糖醇奸等山梨糖醇酐脂肪酸酯類；單棉實油脂肪酸甘油酯、單芥酸甘油酯:倍半油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、“一，_油酸焦榖. 胺酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯及蘋果酸甘油酯等脂肪酸甘油酉曰類，單硬脂酸伸丙二醇等伸丙二醇脂肪酸酯類；硬化蓖麻子油衍生物；甘油烷基醚；以及聚乙晞.聚甲基矽氧烷共聚合體等。親水性非離子界面活性劑例如爲p〇E山梨糖醇酐單油酸酉曰、POE山梨糖醇肝單硬脂酸g旨、poe山梨糖醇肝單油酸酿及POE山梨糖醇酐四油酸酯等1>(：^山梨糖醇酐脂肪酸酯類’ POE山梨糖醇單月桂酸醋、poe山梨糖醇單油酸g旨、 POE山梨糖醇五油酸酯及PQE山梨糖醇單硬脂酸酯等p〇E山梨糖醇脂肪酸酯類；Ρ·〇Ε甘油單硬脂酸酯、poe甘油單異硬脂酸醋及ΡΟΕ甘油三異硬脂酸醋等ΡΟΕ甘油脂肪酸酯類；ΡΟΕ單油酸g旨、ροε二硬脂酸酯、ΡΟΕ單二油酸醋及二硬脂酸伸乙二醇等POE脂肪酸酯類；POE月桂基醚、POE油基醚、POE硬脂基醚、POE廿二烷基醚及P0E2-辛基十二烷基醚等POE烷基醚類；POE辛基苯基醚、POE壬基苯基醚及 POE二壬基苯基醚等p0E烷基苯基醚類；普盧蘭尼克 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -1.---^----------------訂--I-------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 A7 _B7_ 五、發明說明（16 ) (Pluronic)等普盧蘭尼克型類；POE · POP鯨蠟基醚、 POE · POP 2-癸基十四烷基醚、POE · POP單丁基基醚、 POE · POP加水羊毛脂及POE · POP甘油醚等POE · POP烷基醚類；鐵特朗尼可等四POE ·四POP伸乙二胺縮合物類；POE蓖麻子油、POE硬化蓖麻乎油、POE硬化蓖麻子油單異硬脂酸酯、P0E硬化蓖麻子油三異硬脂酸酯、POE硬化蓖麻子油單焦榖胺酸單異硬脂酸二酯及POE硬化蓖麻子油馬來酸等Ρ Ο E萬麻子油硬化ϋ麻子油衍生物；Ρ Ο E山梨糖醇蜜蠟等ΡΟΕ蜜蠟·羊毛脂衍生物；椰子油脂肪酸二乙醇醯胺及月桂酸單乙醇醯胺、脂肪酸異丙醇醯胺等烷醇醯胺；ΡΟΕ伸丙二醇脂肪酸酯；Ρ0Ε烷基胺；Ρ0Ε脂肪酸醯胺；蔗糖脂肪酸酯；ΡΟΕ壬苯基甲醛縮合物；烷基乙氧二甲胺氧化物；以及磷酸三油酯等。上述防腐劑例如爲對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸乙酯及對羥苯甲酸丁酯等。

上述金屬離子封阻劑例如爲乙二胺四乙酸鈉鹽及EDTA 上述水溶性高分子例.如爲天然之高分子、半合成之高分子、合成之高分子及無機之高分子等。天然之水溶性高分子例如爲阿拉伯膠、西黃蓍膠、半乳聚糖、瓜爾豆膠、加洛普膠、刺梧桐樹膠、角叉菜膠、羅望子膠、黃原膠、果膠、瓊脂、喹因種子（溫棹）、海藻膠體（褐藻萃取物）、澱粉（米、玉米、馬鈐薯、小麥）及甘草酸等植物系高分子；黃原膠、葡聚糖、琥珀醯聚糖及出芽 -19 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） J---·----------------訂·！------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（17 ) 短梗孢糖（Pullulan)等微生物系高分子；以及膠原、酪蛋白、白蛋白及明膠等動物系高分子等。半合成之水落性南分子例如有糊精、羧甲基澱粉及甲基經丙基澱粉等澱粉系高分子；甲基纖維素、硝基纖維素、乙基纖維素、甲基羥丙基纖維素、‘羥乙基纖維素、硫酸纖維素二甲基二烷基（12〜20)銨化物、羥丙基纖維素、複甲基纖維素鈉（CMC)、結晶纖維素及纖維素粉末等纖維素系高分子；蕩酸鈉及藻酸伸丙二醇酯等藻酸系高分子等。合成之水溶性高分子例如有聚乙烯醇、聚乙缔基甲醚、聚乙烯基吡17各酮、叛乙晞基聚合物及燒基變性幾乙晞基聚合物等乙烯基系高分子；聚伸乙二醇2〇〇〇、4〇〇〇及6〇〇〇等聚環氧乙烷系高分子；聚環氧乙烷/聚環氧丙烷共聚合體系高分子；聚丙烯酸鈉、聚丙烯酸伸乙酯及聚丙烯醯胺等丙烯酸系高分子；以及聚伸乙基亞胺及陽離子聚合物等。無機之水溶性高分子例如有色土、矽酸鋁鎂、锆鋼石、鋰蒙脱石等。上述粉末成分例如有滑石、高嶺土、雲母、竭雲母 (Sedcite)、白雲母、金雲母、合成雲母、紅雲母、黑雲母、鋰雲母、蛭石、碳酸鎂、碳酸鈣、矽酸鋁、矽酸鋇、矽酸鈣、矽酸鎂、矽酸鳃、鎢酸金屬鹽、鎂、矽膠、浮石、硫酸鋇、燒成硫酸鈣（燒石膏）、磷酸鈣、氟磷灰石、羥嶙灰石、陶瓷粉末、金屬包（肉莖蔻酸鋅、棕櫚酸鈣、硬脂酸鋁）及氮化硼等無機粉末；聚醯胺樹脂粉末（尼龍粉末）、聚乙烯粉末、聚甲基丙晞酸甲酯粉末、聚苯乙締粉 -20 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ----^----------------訂—------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣、發明說明（18 取、!乙缔與丙缔酸之共聚合體粉末、苯胍胺樹脂粉末、 :四，乙㈣末、纖維素粉末等有機粉末；二氧化献及氧 /寺典機白色顏料；氧化鐵（紅氧化鐵）及鈇酸鐵等無機 $系顏料、r _ 一氧化鐵等無機褐色系顏料；黃氧化鐵，黃土等無機黃色系顏料；黑氧錢、碳黑及低氧化態欽寺無機黑色系顏料；錳紫及鈷紫等無機紫色系顏料；氧化鉻、氫氧化鉻及鈦酸鈷等無機綠色系顏料；群青及紺青無機青色系顏料；氧化鈦塗覆雲母、氧化鈦塗覆氧氣化鉍了 ^化鈦塗覆滑石、著色氧化鈦塗覆雲母、氧氣化鉍及魚鱗箔等珍珠顏料；鋁粉及銅粉等金屬粉末顏料；紅色2〇1 號、紅色202號、紅色204號、紅色205號、紅色220號、紅色226號、紅色228號、紅色405號、橙色203號、橙色204 號、黃色205號、黃色401號、黃色404號、紅色3號、紅色 104號、紅色1〇6號、紅色227號、紅色230號、紅色401號、紅色505號、橙色205號、黃色4號、黃色5號、黃色202號、黃色203號、綠色3號、青色1號等之锆、鋇或鋁沉澱染料等有機顏料；葉綠素及Θ -胡蘿蔔素等天然色素；鈦黃、洋紅（carmine)及紅花永等著色劑等。上述之紫外線防禦劑包含化學上吸收紫外線之物質之「紫外線吸收劑」及藉由物理作用使紫外線散射或反射之物質之「紫外線遮斷劑」兩者。亦即，長波長紫外線（UVA)吸收劑例如有鄰胺苯甲酸甲酯、高碳薄荷基-N-乙醯基鄰胺苯甲酸酯等鄰胺苯甲酸系紫外線吸收劑；2,4-二羥基二苯甲酮、2,2-二羥基-4-甲氧 -11ΙΙΓΙΙΙΙΙΙ— · I I I I I I I «ΙΙΙΙΙΙΙΙ — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 21 -

1289065

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（19 ) 基，苯甲酮、2,2，·二羥基-M，-二甲氧基二苯甲酮、，’4’4四每基二苯甲酮、2-經基· 4-甲氧基二苯甲酮、2· 罗工基4甲氧基-4’-甲基二苯甲酉同、2-經基_ 4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸鹽、心苯基二苯甲酮、2_乙己基·4，·苯基-二苯曱酮-2-焱酸酯、2-羥基-4-正辛氣基二苯甲酮及4-羥基_ 3-羧基二苯甲酮等二苯甲酮系紫外線吸收劑；2，入羥基-5_ 甲苯基苯并三唑、2-(21-羥基-5，·第三辛苯基）苯并三唑、 2 (2-¾基-5-甲苯基）苯幷三σ圭等苯幷三吐紫外線吸收劑；二苗香醯基甲烷；以及4-甲氧基_ 4，·第三丁二芊醯基甲烷等。此等長波長紫外線吸收劑中，4-甲氧基-4、第三丁二苄醯基甲烷、2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮以及2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮衍生物例如2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸鹽，爲安全及有效之優良長波長紫外線吸收劑，故較佳。再者，中波長紫外線（UVB)吸收劑例如爲對胺基安息香酸（以下稱爲ΡΑΒΑ)、ΡΑΒΑ單甘油酯、Ν，Ν-二丙氧基 ΡΑΒΑ乙酯、Ν，Ν-二乙氧基ΡΑΒΑ乙酯、Ν，Ν-二甲氧基 ΡΑΒΑ乙酯、Ν，Ν-二甲氧基ΡΑΒΑ 丁酯及Ν，Ν-二甲氧基 ΡΑΒΑ戊酯等安息香酸系紫外線吸收劑；二伸丙二醇之水楊酸酯、伸乙二醇之水楊酸酯、水楊酸肉苴蔻酯、水楊酸甲酉旨、水楊酸戊醋、水楊酸薄荷醋、水楊酸辛醋、水楊敗苯酯、水楊酸芊酯及水楊酸對異丙醇基苯酯等水楊酸系紫外線吸收劑；桂皮酸辛酯、4-異丙基桂皮酸乙酯、2,5-二異丙基桂皮酸甲酯、2,4-二異丙基桂皮酸乙酯、2,4-二異 -22 - 5¾尺度巾酬冢鮮（CNS)A4規格（21G χ 297^^ I.—*----------------^—-——^ ^wi (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7

1289065 五、發明說明（2〇 ) 丙基桂皮酸甲酯、對甲氧基桂皮酸丙酯、對甲氧基桂皮酸異丙酯、對甲氧基桂皮酸異戊酯、對甲氧基桂皮酸辛酯 (對甲氧基桂皮酸2-乙基己酯）、對甲氧基桂皮酸孓乙氧基乙酯、對甲氧基桂皮酸環己酯、α _氰基苯基對甲氧基桂皮酸乙酯、氰基-苯基封甲氧基桂皮酸2•乙基己酯、單-2-乙己醯基-二對甲氧基桂皮酸甘油酯、甲氧桂皮酸辛酯、3,4,5-三甲氧桂皮酸·3·甲基[甲基貳（三甲矽烷氧基）矽烷基]丁酯及對二甲氧桂皮酸單乙酯等桂皮酸矽紫外線吸收劑；3-(4’-甲亞苄基）_d，l-樟腦、3-亞芊基-d，l -樟腦及5 - ( 3，3 -二甲基-2-亞降冰片烯基卜3 -戊炔_ 2-酮等樟腦衍生物；及尿刊酸、尿刊酸乙酯、2_苯基-%甲基苯幷4 Π坐及爷連氮等。再者，紫外線遮斷劑例如有氧化鈦（Ti02)、滑石 (MgSi〇2)、洋紅（FeOd、皂土、高嶺土及氧化鋅（Zn〇) 等。上述保溼劑例如有聚伸乙二醇、伸丙二醇、甘油、i 3_ 伸丁一醇、伸己二醇、木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇、硫版軟骨素、透明質酸、‘硫酸黏液素、卡洛寧酸、氯化乙醯膠原、膽固醇-12-羥基硬脂酸酯、乳酸鈉、膽汁酸鹽、 dl-吡咯啶酮羧酸鹽、短鏈可溶性膠原、二甘油（£〇) po加成物、十六夜荆棘萃取物、西洋鋸草萃取物及草木樨萃取物等。上述藥效成分例如有熊果：y：、維生素c及其衍生物、硬脂酸胎盤萃取物、榖胱甘肽及虎耳草萃取物等美白劑；甘 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） J— j----------------訂—-------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（21 ) 草酸衍生物、甘草次酸衍生物、水楊酸衍生物、亥奥奇硫醇、氧化鋅及尿囊素等消炎劑；蜂王膠、感光素、膽固醇衍生物及幼牛血液萃取物等賦活劑；壬酸四經膽固醯胺、於驗酸苄酯、菸鹼酸卢·丁氧乙酯、辣椒素、薑油酮、斑繁素酊、魚石脂、咖啡因、單寧鹺、α -冰片醇、於驗酸生育酚、肌醇六菸鹼酸酯、環扁桃酯、桂皮利啶、咔唑淋、乙醯膽鹼、戊脈胺、頂花防己鹼及r -谷維醇等血行促進劑；硫黃及二甲基噻蒽等抗脂漏劑；因多種目的而得到之奥白萃取成分、黃蓮萃取成分、紫草根萃取成分、芍藥萃取成分、胡黃蓮萃取成分、軟麻萃取成分、鼠尾草萃取成分、枇杷萃取成分、胡蘿蔔萃取成分、蘆薈萃取成分、錢葵萃取成分、蝴蝶花萃取成分、葡萄萃取成分、薏泣仁萃取成分、絲瓜萃取成分、百合萃取成分、蕃紅花萃取成分、川芎萃取成分、生薑萃取成分、燕桐草萃取成刀、亡柄化萃取成分、迷迭香萃取成分、大蒜萃取成分、辣椒萃取成分、陳皮及當舞等；以及維生素類，例如松香油、醋酸松香油等維生素A類，核黃素、醋酸核黃素、黃素腺嘌吟核:¾:酸等維生素I類，峨哆醇及p比哆醇二辛酸醋等維生素B ^類’ L -抗壞血敗、L -抗壞血酸二棕櫚酸醋、 L -抗壞血酸-2-硫酸鈉、L -抗壞血酸磷酸酯及DL - “ ·生育酉分-L -抗壞血敗鱗敗一酷二神等維生素C類，泛酸舞、d _ 技泛酸、泛醯乙醚及乙醯基泛醯乙醚等泛酸類，麥角約化醇、膽骨化醇等維生素D類’於驗酸、於驗酸醯胺及於驗酸芊醋等之菸鹼酸類，生育酚、醋酸生育酚、於驗酸 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Jir-------f-------- tr·--------^ «Awl (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 A7 _____ B7 五、發明說明（22 ) DL “ -生月紛及琥珀酸DL - α -生育酚等維生素£類，維生素Ρ，及生物素等。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 再者，有關此等藥物成分，可在不因其之添加而損及本發明所期望效果之範圍内廣泛地使用。用此種方式所調製之本發明組合‘物，可防止伴隨基底膜構造變化而發生之機能降低，再者，可促進皮膚之賦活化。實例以下’藉由實例進一步具體地説明本發明。實蓋1 复J基質金屬蛋白酶抑制劑之人工虔膚之製造膠原凝膠，係於冰上製造從人類眞皮而來之纖維芽細胞 (0·3〜1 X 1〇5細胞/毫升）懸浮膠原溶液1〇毫升（該膠原係使用高研股份有限公司之製品1-AC)後，在60毫米之佩曲培養皿中，於37°C使膠原凝膠化；其後，從培養皿壁面上將凝膠剝離，然後將該膠原凝膠置於C02培育器内使其收縮而成。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製將相當於眞皮之膠原凝膠置於金網上，再將玻璃環（内徑12毫米）置於凝膠上·。在該玻璃環内，以不使液體滲漏之方式加入從人類包皮而來之表皮角質化細胞（1 X 1 〇6個/ 毫升）懸浮液{含有5%牛胎血清之KGM-DMEM (1 : 1)混合培養基} 0.4毫升。於C02培育器内使角質化細胞接著一夜，翌日將環解下。將上述培養基佈滿表皮層之範圍，將表皮層暴露於空氣中，同時繼續培養，以製造具有多層化 (顯示角層形成）表皮之皮膚模型。 -25 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2忉x 297公爱） 1289065 A7 B7 五、發明説明（23 ) 將表皮接種後，從第一星期開始，更換爲含有（1) 10 w Μ 之CGS23027A (基質金屬蛋白酶抑制劑）或（2) 300 /iM之 MMP-抑制劑（p-NH2-Bz-Gly-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH (FN-437)(BBRC，1994，199, ρ· 1442- 1446)(從 Cabbiochem. Novabiochem Corporation購得）（基質金屬蛋白酶抑制劑）之培養基，其後2〜3曰，以含有相同濃度之同種基質金屬蛋白酶抑制劑之培養基更換，並再培養2星期。另外，（3)同樣培養不添加基質金屬蛋白酶抑制劑者以做爲對照。結果如圖1所示。從此圖可明白，對照（3)中表皮基底細胞下方觀察不到基底膜般之構造，然而具有爲基質金屬蛋白酶抑制劑之（1)CGS27023A化合物或添加（2)MMM-抑制劑之情況下，可觀察到明顯的基底膜形成亢進。將上述之基質金屬蛋白酶抑制劑化合物，用以下之植物萃取物代替，進行同樣之實驗，確認具基底膜形成亢進。百里香（Thymus serpyllum L ·)、小鹿草（Valeriana fauriei Briquet)或其之近緣植物（敗醬草科）、柿樹（Diospyros kaki Thunberg (柿樹科））、紫雲英草（Astragalus sinicus Linne(豆科））、山楂（Crataegus cuneata Siebold et Zuccarini (薔薇科））、牡丹（Paeonia suffruticosa Andrews (Poeonia montan Sims)(牡丹科））、紅茶（Thea sinensis Linne var· assamica Pierre，（茶科））、尤加利樹（Eucalyptus globulus Labillardiere)或其近緣植物（桃金娘科）、洋翻白草 (PotentillatormentillaSchrk(薔薇科））、椴樹（Tiliacordaia Mill·，Tilia platyphyllus Scop·，Tilia europaea Linne (椴樹 -26 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐）

裝訂

線 1289065 A7 ___B7_ 五、發明說明（24 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 科)）、白樺（Betula alba L inne (白樺科））、墨角偷草（Origanum majorana L .)、兒茶鉤藤（Uncaria gambir Roxburgh (茜草科））、核才兆殼（Juglans regia L inne Var. sinensis De Candolie) 或其近緣植物（核桃科）、苦參（Sophora flavescens Aiton (豆科））、地榆（Sanguisorba officinalis L inne (薔薇科））、貫葉金絲命兆（Hypericum perforatum Linne 或 Hypericum erectum Thunberg (藤黃科））、茶（Thea sinensis L inne (茶科））、薑黃（Curcuma longa L (薑科））、爲薑黃萃取精製物之薑黃素、海濱簑衣草（珠仔樹（Symplocos racemosa)、莎草（Cyperus rotundus))、米勒芭蘭樹類（乾鱗莎草（Cyperus scariosus)、火炭果（Gaultheria fragrantissima)、金合歡 (Acacia fornensia)、詞·黎勒樹（Terminalia chebula))、孟加拉菩提稼（番屋榕）（Ficus bengalensis)、南番皂莢（（清瀉山扁豆）Cassia fistula Linn)、南燭木（Lyonia ovalifolia)、紅厚殼類（胡桐、甘藍）（Calophyllum inophyllum)以及天竺菩提樹（Ficus religiosa)等被確認有同樣效果。實例2 使用基質金屬蛋白酶抑制劑及基質蛋白質產生允劑兩者之人工皮膚之製造經濟部智慧財產局員工消費合作社印製重複實例1同樣之方法，但使用下列項目做爲被驗物質。 (1) 只有基質金屬蛋白酶抑制劑「CGS27023A」10 aM ; (2) 基質金屬蛋白酶抑制劑Γ CGS27023A」10 "Μ，及基質蛋白質產生亢進劑「轉形生長因子_ a」（TGFa) 10毫微克/毫升； -27 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 A7 ----- R7_____ 五、發明說明（25 ) (3) 基質金屬蛋白酶抑制劑「cGS27〇23a」10//M，及基貝蛋白質產生尤進劑「轉形生長因子-/?1」（TGFbl) 1〇毫微克/毫升； (4) 基質金屬蛋白酶抑制劑「CGS27023A」10 ，及基質蛋白質產生尤進劑「轉形生長因‘子-從」（TGFa) 1〇毫微克/耄升，及基質蛋白質產生亢進劑「轉形生長因子_ /? 1」 (TGFbl)lO毫微克/毫升； (5) 亦進行未添加上述成分之對照組之培養。將所形成之人工皮膚進行蘇木紫曙紅染色（H& E)，並且藉由免疫染色[使用抗昆布胺酸5 (LN5)抗體、抗VI型膠原 (IVC)抗體及第VII型膠原（VIIC)抗體]而染色。結果如圖2 及3以及表1所示。再者，h&e及LN5之結果被示於圖2, VIC及VIIC之結果被示於圖3。對照組中表皮與眞皮接合部分之接著微弱，表皮容易從眞皮剝離，從組織上可觀察到空隙。與此相對地，在以基質金屬蛋白酶抑制劑Γ CGS27023 A」處理之組群中，表皮與眞皮間之接著性很明確。再者，於基質金屬蛋白酶抑制劑「CGS27023 A」中加.上爲基質蛋白質產生亢進劑之轉形生長因子i(TGFa)、轉形生長因子-冷1 (TGFbi)、或添加此兩者（TGFa+TGFbl)之情況，VII型膠原染色性之亢進現象特別顯著，可確認表皮與眞皮之接著性更爲尤進。 -28 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I.---.---------------*tT---r------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（26 ) 表1 涉及皮膚樣本中基底膜形成之各種藥劑之效果基底膜成分之沉著處理條件昆布胺酸5 IV型膠原 VIII 型膠原基底膜形成未處理對照組 + + - - CGS27023A + + + + + + CGS27023A+大豆卵磷酯 + — + + + + + + CGS27023A+TGF α + + + + + + CGS27O23A+TGF0 1 + + + + + + CGS27023A+TGFa&/? 1 + + + + + + 將上述之基質金屬蛋白酶抑制劑CGS27023 A，用以下之植物萃取物代替，進行上述同樣之培養。百里香（Thymus serpyllum L ·)、小鹿草（Valeriana fauriei Briquet)或其之近緣植物（敗醬草科）、柿樹（Diospyros kaki Thunberg (柿樹科））、紫雲英草（Astragalus sinicus Linne (旦科））、山楂（Crataegus cuneata Siebold et Zuccarini (薔薇科)）、牡丹（Paeonia suffruticosa Andrews (Poeonia montan Sims)(牡丹科））、紅茶（Thea sinensis Linne var. assamica Pierre、（茶科)）、尤加利樹（Eucaiyptus globulus Labillardiere) 或其近緣植物（桃金娘科）、洋翻白草（p〇tentilla tormentilla Schrk (薔薇科)）、搬樹（Tilia cordaia Mill·，Tilia platyphyllus Scop·, Tilia europaea L inne (椴樹科））、白樺（Betula alba L inne (白樺科））、墨角倫草（Origanum majorana L ·)、兒茶 -29 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） ----,----------------訂---r------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 A7 __B7___ 五、發明說明（27 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 鉤藤（Uncaria gambir Roxburgh (茜草科））、核桃殼（Juglans regia Linne Var. sinensis De Candolie)或其近緣植物（核桃科）、苦參（Sophora flavescens Aiton (豆科)）、地榆（Sanguisorba officinalis L inne (薔薇科））、貫葉金絲桃（Hypericum perforatum L inne 或 Hypericum erectum Thunberg (藤黃科））、茶（Thea sinensis L inne (茶科））、薑黃（Curcuma longa L (薑科））、爲薑黃萃取精製物之薑黃素、海濱簑衣草(珠仔樹（Symplocos racemosa)、莎草（Cyperus rotundus))、米勒芭蘭樹類（乾鱗莎草（Cyperus scariosus)、火炭果 (Gaultheria fragrantissima)、金合歡（Acacia fornensia)、首可黎勒樹（Terminalia chebula))、孟加拉菩提榕（番屋榕）（Ficus bengalensis)、南番皂莢（（清瀉山扁豆）Cassia fistula Linn)、南燭木（Lyonia ovalifolia)、紅厚殼類（胡桐、甘藍） (Calophyllum inophyllum)以及天竺菩提樹（Ficus religi〇sa)。結果可得到與使用CGS27023A做爲基質金屬蛋白酶抑制劑時同樣之結果。再者，關於爲薑黃萃取精製物之薑黃素亦可得到同樣之結果。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製再者，將轉形生長因‘子以大豆卵磷酯3〇微克/毫升代替做爲基質蛋白質產生尤進劑之情況，對基底細胞下方基底膜樣之構造物連續地觀察。其結果如圖4所示。實例3 供人工皮膚培養用之培I其t 將一般培養表皮細胞培養時所使用之KGm (角質化細胞增殖培養基）與一般培養纖維芽細胞時使用之含有1〇%牛胎血清之杜白可氏改質伊格爾培養基以1 : 1之比率混合，以 • 30 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289065 A7 B7 五、發明説明（ 28 做爲基本培養基，然後添加做爲基質金屬蛋白酶抑制劑之 CGS27023A或MMP-抑制劑，並使其濃度爲1〇。再者， KGM係於MCDB153培養基（10.93公克/公升）中添加hepes (6.7公克/公升）、NaHC03(1.2公克/公升）、胰島素（5毫克/ 公升）、轉鐵蛋白（5毫克/公升）、鐵傳遞蛋白（1〇毫克/公升）、氫化可的松（0·5毫克/公升）、磷醯乙醇胺（14·ι亳克/ 公升），並調成pH 7·4。再者，添加牛下垂體萃取物（極東製藥）20公克並調製。 · f例4 人工皮膚培卷培養基之調製於實例3之供人工皮膚培養用之培養基中，添加做爲基質蛋白質產生亢進劑之轉形生長因子-α (TGFa)或轉形生長因子-/? 1 (TGFbl)中之至少一種，然後將濃度調成1〇毫微克/毫升。又，添加大豆卵鱗酯30微克/毫升，以代替上述之TGFa 或TGFb卜製劑例1 ··霜劑聚環氧乙烷（20莫耳）鯨蠟醇醚1.0 1.0 甲基苯基聚矽氧烷（20CS) 2.0 流動石蠟 3.0 2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮 5.0 活性成分 0.2 伸丙二醇 5.0 甘油 2.0 乙醇 15.0 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)

裝訂

線 1289065 A7

五、發明說明（29 ) 羧乙烯基聚合物羥丙基纖維素 2-胺甲基丙醇防腐劑香料離子交換水 (製造方法）二；子ΐ換水中添加伸丙二醇、甘油、乙醇、幾乙缔基木口 &丙基纖維素及胺甲基丙醇，於70°C加熱調製(水相）。知甲基笨基I矽氧坑、流動石壤、聚氧乙烯、鯨蠛醇醚、防腐劑、2-羥基_4_甲氧二苯酮、活性成份（利皮德由耳、CGS27023A等）及香料混合，於7(rc調製（油相）。將水相慢慢加於油相中，進行預備乳化，使用均質混合 0.30.10.1 適量適量適量經濟部智慧財產局員工消費合作社印製機將乳化粒子均勻化後，進行脱氣、冷卻，得到霜劑。製劑例2 :霜劑聚環氧乙烷（20莫耳）鯨樣醇醚 1.0 甲基苯基聚碎氧燒（2 Ocs) 2.0 流動石蠟 3.0 2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮 5.0 活性成分 0.2 伸丙二醇 5.0 甘油 2.0 -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公餐） -1---*-------------III · I ---------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289065 A7 _B7 五、發明說明（3〇 ) 乙醇 15.0 羧乙晞基聚合物 0.3 羥丙基纖維素 0.1 2-胺曱基丙醇 0.1 防腐劑適壹香料適量離子交換水適量 (製造方法）於離子交換水中添加伸丙二醇、甘油、乙醇、叛乙晞基聚合物、羥丙基纖維素及2-胺甲基丙醇，於70°C加熱調製 (水相）。將甲基苯基聚矽氧烷、流動石蠟、聚氧乙晞、鯨蠟醇醚、防腐劑、2-羥基-4-甲氧二苯酮、活性成份（利皮德由耳、CGS27023A等）及香料混合，於70°C調製（油相）。製造例3 :乳液重量％鯨蠟醇 1.0 蜜樣 . 0.5 凡士林 2.0 三十碳燒 6.0 二甲基聚矽氧烷 2.0 乙醇 5.0 甘油 4.0 1，3- 丁二醇 4.0 -33 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） J—.----------------訂 --------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1289065 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（31 ) 活性成份 0.1 妥拉涅基薩姆酸 1.0 聚氧乙晞（10)單油酸酯 1.0 甘油單硬脂酸酯 1.0 喳因種子萃取液（5%水溶液） 20.0 防腐劑適量香料適量離子X換水適量 (製法）將甘油及1，3- 丁二醇添加於離子交換水中並混合，於70°C 加熱調製（水相）。將鯨蠟醇、蜜蟠、凡士林、三十碳燒、二甲基聚麥氧燒、活性成份（利皮德由耳、CGS27023A 等）、妥拉涅基薩姆酸、聚氧乙烯（1 〇)單油酸酯、甘油單硬脂酸酯及防腐劑混合，於70°C加熱調製（油相）。將水相慢慢加於油相中，進行預備乳化，於其中添加喹因種子萃取液、乙醇並攪拌，使用均質混合機將乳化粒子均勻化後，進行脱氣、過濾、冷卻，仔到乳液。製造例4 :乳液 . 重量％鯨、蟻醇 1,0 蜜蠟 0.5 凡士林 2.0 三十碳貌 6.0 二甲基聚矽氧烷 2.0 ----'----------------訂-----------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -34 - 適度尺一張紙一本釐公 97 2 X 10 2 /(\ 格規 4 A S) N (C 準標家 1289065 A7 B7 五、發明說明（32 ) 乙醇 5.0 甘油 4.0 1，3- 丁二醇 4.0 活性成份 0.1 妥拉涅基薩姆酸 ί·0 環氧乙烷（10)單油酸酯 1.0 甘油單硬脂酸酯 1.0 喹因種子萃取液（5%水溶液） 20.0 防腐劑適量香料適量離子交換水適量 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (製法）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製於離子交換水中添加甘油及1，3- 丁二醇並混合，於70°C 加熱調製（水相）。將鯨蠟醇、蜜蠟、凡士林、三十碳烷、二甲基聚矽氧烷、活性成份（利皮德由耳、CGS27023A 等）、妥拉涅基薩姆酸、聚氧乙烯（10)單油酸酯、甘油單硬脂酸酯及防腐劑混合，於70°C加熱調製（油相）。將水相添加於油相中但不進行預備乳化，於其中添加p奎因種子萃取液及乙醇並攪拌，使用均質混合機將乳化粒子均勻化後，進行脱氣、過濾、冷卻，得到乳液。將水相慢慢添加於油相中，進行預備乳化，使用均質混合機將乳化粒子均句化後，進行脱氣、冷卻，得到霜劑。 -35 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims

I289〇撼^o723 9號專利申請案中文申請專利範圍替換本(93年7月) ABCD 正、无修補 § 月夂、申請專利範圍公告本 1· 一種皮膚基底膜形成促進劑，其包含物質 CGS2 7 0 23A (N-羥基-2-[[(4 -甲氧苯基）磺醯基]-3- 叶匕淀甲基胺基]-3 -甲基丁酸胺鹽酸鹽）。 2· —種皮膚基底膜形成促進劑’其包含物質 CGS27023A之與選自由大豆卵構酯、TGFa及TGF /3 1所組成之群之物質的組合。 3· —種人工皮膚形成促進劑，其包含物質 CGS 2 7 0 2 3 A。 4. 一種人工皮膚形成促進劑，其包含物質CGS27023A 與選自由大豆卵磷酯、T G F α及T G F 1所組成之群之物質的，組合。 5 · —種人工皮膚製造方法，其特徵為在人工皮膚形成培養基中添加物質CGS27023A。 6 · —種人·工皮膚製造方法，其特徵為在人工皮膚形成培養基中添加物質CGS27023A與選自由大豆印磷|旨、 T G F α及T G F /5 1所組成之群之物質的組合。