TW457088B - Pharmaceutical composition comprising N-phosphonoglycine derivatives for treating a cancer or a tumor susceptible to treatment - Google Patents

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457088 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（ 技術範圍 本發明係醫藥组合物，其抑制在哺乳類，特別地在人和 溫血動物中癌症和腫瘤之生長。本組合物亦有效對抗病毒 。本组合物含N -膦酸基甘胺酸衍生物，其係系統性除草 劑。 ，' 發明背景 癌症在動物和人中爲領先之死因。癌症之正確致因係未 知，但某些活動如抽煙或暴露於誘癌劑與某些類型之癌症 和腫瘤之發生間之連結已由多數之研究者所示。 許多類型之化學治療劑已顯示有效對抗癌症和腫瘤細胞 ’但並非所有類型之癌症和腫瘤對此些劑反應。不幸地， 許多此些劑亦破壞正常之細胞。此些化學治療劑作用之正 確機制則常未知。 雖然在癌症治療領域上之進展，但目前前導之療法爲外 科手術、照射和化學療法。化學治療之途徑據説對抗轉移 之癌症或特別具攻擊性者。如此之殺細胞或制細胞劑與大 生長因子對癌症作用良好，即其細胞快速分裂者。目前， 激素特別地動情素、黃體素和睪固酮，及由多種微生物所 產生之一些抗生素、烷化劑和抗代謝劑形成癌學者可得之 大部分療法 '對癌症和腫瘤細胞具特異性，而不影響正常 細胞之理想細胞毒性劑應爲極必要的。不幸地，沒有一個 被發現，而是使用瞄準特別快速分裂細胞（腫瘤和正常兩 者）之替代劑。 清楚地，因其一些獨特之特異性而瞄準腫瘤細胞之物質 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） n — I— n I ϊ— n - I - 1— n - I T *T (靖先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 457088 A7 B7 五、發明説明（2 ) 之發展應爲一項突破。可替代地，對腫瘤細胞具細胞毒性 而對正常細胞引起溫和作用之物質應爲所要的。因此，本 發明之目標係在提供醫藥組合物，其有效於抑制在哺乳類 中腫瘤和癌症之生長，而對正常細胞具，溫和或無作用。 更特別地，本發明之目標係在提供抗癌组合物，包括醫 藥載體和如在此所界定之N -膦酸基甘胺酸衍生物，與治 療如此癌症之方法一起。 確信地’膦酸基甘胺酸衍生物與化學治療劑合併可壓抑 及減緩癌細胞之生長，包括白血病。因此，本發明之目標 係在提供醫藥組合物’其有效於哺乳類中壓抑和抑制腫瘤 和癌症之生長。 頃發現N-膦酸基甘胺酸係特別有效於壓抑癌症、腫瘤 、病毒或細菌之生長。此些N_膦酸基甘胺酸與有效於破 壞腫瘤之其他化學治療劑之使用係新穎之治療方法。 更特別地’本發明之目標係在提供抗癌紐合物，包括醫 藥載體及在此所界定之N-膦酸基甘胺酸和化學治療劑，與 治療如此癌症之方法一起。 經濟部中央標準局月工消費合作社印製 此些膦酸基甘胺酸组合物與増效劑一起亦有效對抗病毒 。膦酸基甘胺酸组合物可用以治療病毒感染。因此，本發 明之再一個目標在提供治療病毒感染之方法，如HIV、流 行性感冒和鼻病毒。 此些和其他目標將自本發明之以下詳細説明而變得明白 5- I I HI - I >n I -- - —^1» I -1 n I «n I. - Ty {請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙ft尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（ 457088 第85105605號專利申請案 中文說明書修正頁（90年5月） 五、發明説明（3 ) 發明之簡要_ 治療哺乳類，及特別地溫血動物和人之醫藥組合物，包 括醫藥載體和有效量之抗癌化合物，選自一群包括下式 之N -膦酸基甘胺酸衍生物： 0 R 0

II i II x-c-ch2-n-ch2-p-〇y

I oz 其中X係選自一群包括羥基、烷氧基或多至12個碳原子之 亂镜1乳基，低碳婦乳基、每己氧基 '嗎啦基、17比嘻症基 、六氫吡啶基及NHR，； Y和Z各獨立選自、氫和低碳烷基； 及R係選自一群包括氫、甲酿基、乙酿基、字驢基、確基 +酿基及氯化爷酷基；及R1係選自一群包括氫、低碳燒基 和低碳烯基、環己基、多至8個碳原子乙苯烷基、苯基、 氯化苯基及大茴香基；及此些化合物之某些鹽，其鹽係 選自一群包括具原子數多至3〇之第I和II屬金屬、氫氣鹽、 乙酸鹽、柳酸鹽、吡啶、銨、低碳脂族烴胺、低碳烷醇 胺和苯胺。 經濟部中央橾隼局貝工消费合作社印製 -------：----. /裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 治療哺乳類，及特別地溫血動物和人之醫藥组合物，包 括醫藥載體及有效量之化學治療劑和抗癌化合物，選自 —群包括如上所界定之N-膦酸基甘胺酸衍生物。增效劑 亦可用於此些組合物。 此些組合物可用以抑制在人或動物中癌症和其他腫瘤之 生長，由將有效量之N -磷酸基甘胺酸衍生物口服、直腸、 局部或腸外、靜脈内施藥，或由直接注射近或入腫瘤中 -6- 本纸張尺度適用t國國家標準（CNS )A4現格（210X297公釐） 5 4 經濟部中央橾準局員4消費合作社印裂 r 08 8 第85105605號專利申請案 A7 — 中文說明書修正頁（90年5月） B7 ____________ 五、發明説明（4 ) 。此些組合物係有效於殺死或延緩腫瘤之生長’其在正 常之健康細胞上較亞得里亞黴素更安全。 發明之詳細說明 A .定義： 如在此所用，”在醫藥上可接受之”成份為適於用於人和 /或動物者，而無不當之逆副作用（如毒性、刺激性和過敏 反應），相對應於合理之利益/冒險比值。 如在此所用，”安全和有效量"一詞係指成份之量，其係 足以產生所要之醫療反應，而無不當之逆副作用（如毒性 、刺激性或過敏反應），當以本方法之方式使用時，相對 應於合理之利益/冒險比值《特定之"安全和有效量”將明 顯地依一些因子如所要治療之特殊病症、病人之物理狀 況、所要治療之哺乳類型 '治療之持續期間、共同療法 之本質（若有時）及所採用之特定調配物和化合物或其折生 物之結構而變化。 如在此所用，"醫藥加成鹽，，包括抗癌化合物與有機或無 機酸和此酸之胺鹽之在醫藥上可接受之鹽。 如在此所用，"醫藥載體"為在醫藥上可接受之溶劑、懸 浮劑或媒劑，供傳送抗癌劑至動物或人中。載體可為液 或固體及係以心中所計劃之施藥方式選定。 如在此所用，"癌症"係指在哺乳類中所見之所有類型之 -7- 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0XW7公楚） 11 If .1— I 1 装 I -. - , : . I 訂 I — 11 =. , 冰 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 457 088 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 -8 - 五、發明説明（5 癌或贅癌或腫瘤’包括白血病。 如在此所用’"抗癌化合物”爲N-膦酸基甘胺酸及其鹽。 正確之N-膦酸基甘胺酸係詳述於下。較佳之物質爲在甘嶙 酸鹽（glyphosate®)或召集（Roundup®)之名下由 Monsanto 所 售之產品。其爲N-(膦酸基曱基）甘胺酸。 如在此所用，”病毒”包括在溫血動物中致病之病毒，包 括HIV、流行性感冒' 鼻病毒、疱疹及其類似物。 如在此所用，"化學治療劑"包括DNA-交互作用劑、抗代 謝劑、微管素交互作用劑、激素劑及其他，如天冬睡胺酸 酶或羥脲。 如在此所用，"增效劑爲如三诚里定（triprolidine)和其順 式異構物或甫可吐（procodazole)之物質，其係與化學治療 劑和膦酸基甘胺酸合併使用。 B .抗癌化合物 抗癌化合物爲N -膦酸基甘胺酸衍生物，其係已知其除 草活性。其係系統性除草劑，用以防止和根絕某些植物或 雜草。系統性除草劑與其他除草劑不同於其移經植物之能 力。抗癌化合物具此能力並不爲本發明之需求。 該等化合物具以下之結構 Ο R Ο II I if x-c-ch2-n-ch2-p-oy

I oz 其中X係選自一群包括羥基、氫硫基、烷氧基或多至12個 本紙張认適财_家標準（CNS)赠獻297公们

I _! n 0 - -I - - 1 ^^1 n I I . Τ» «3. ,1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本f J 绫濟部中央樣準局員工消費合作社印袈 457088 第85105605號專利申請案 中文說明書修正頁（90年5月） 五、發明説明（6 ) 碳原子之氣燒氧基、低碳烯氧基、環己氧基、嗎P林基、 吡咯啶基、六氫吡啶基及NHR'; Y和Z各獨立選自氫和低 碳烷基；及R係選自一群包括氫、甲醯基、乙醯基、苄醯 基、硝基苄醯基和氣化芊醯基；及R'係選自一群包括氫、 低碳烷基和低碳烯基、環己基、多至8個碳原子之苯烷基 、苯基、氯化苯基和大茴香基：及此些化合物之某些鹽 ，其鹽係選自一群包括具原子數多至30之第I和II屬金屬、 氫氣鹽、吡啶、銨、低碳脂族烴胺、低碳烷醇胺和苯胺 〇 最佳之化合物係該等具以下之結構者： Ο Η 0 II I .11 . HO-C-CH2-N-CH2-P-(OH)2 低碳烷基胺鹽，特別地異丙基胺鹽係較佳的。 此些化合物係根據在1974年12月10日發予Franz之美國專 利第3,794,758號中所述之方法製備。 C .化學治療劑 化學治療劑通常歸類為DNA-交互作用劑、抗代謝劑、 微管素交互作用劑、激素劑和其他，如天冬酿胺酸酶或 羥脲。各群之化學治療劑可進一步由活性或化合物之類 型區分。與本發明之膦酸基甘胺酸合併使用之化學治療 劑包括此些群之所有成員《為化學治療劑和其施藥方法 之詳細討論’見Dorr等人，癌化學療法手冊，第2版，15-34頁，Appleton和Lange(康乃狄克州，1994)，在此併入供 參考。 DNA-交互作用劑包括烷化劑，例如順鉑素（Cispiatin)、 環磷酿胺、格鏈孢胺（Altretamine) ; DNA股破裂劑如博菜 -9- 本紙張尺度遙用中國國家標準（CNS > A4規格（2丨0X297公釐> 11. — ~' ί I ~ ,^衣 L s I、tTJ I 1 . 1 ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 457088 第85105605號專利申請案 中文說明書修正頁（90年5月） 五、發明説明（7 ) 黴素；嵌入拓樸異構酶II抑制劑，例如放線菌素D和多索 紅菌素）；非嵌入拓樸異構酶π抑制劑如伊托婆：y： (Etoposide)和坦尼婆每（Teniposide)，及DNA次槽結合劑指 被皺黴素（Plicamycin)。 燒化劑與細胞DN A、RN A和蛋白質分子及與較少之胺基 酸、熬胱甘肽和相似之化學勒形成共價之化學加成物。 通常，此些烷化劑與在細胞成分中之親核性原子反應， 如胺基、羧基、磷酸根、在核酸、蛋白質、胺基酸或越 胱甘肽中之氫硫基。此些烷化劑在癌療法中之機制和角 色並不清楚。典型之烷化劑包括： 氮芬末，如氣胺布西（Chlorambucil)、環鱗醯胺、異弗酿 胺（Isofamide)、美氯乙胺（Mechlorethamine)、美法蘭 (Melphalan)、尿p密这芥末； 乙缔亞胺如三伸乙基硫磷醯胺 甲磺酸酯如二甲磺酸-1,4 · 丁二酯； 亞硝脉如亞硝脲氮芥、洛馬氮芥（Lomustine)、鏈糖巷素 * 銷錯合物如順舶素、羰銘素； 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 生物還原性燒化劑如絲裂徽素和甫卡肼（Procarbazine)、 達卡肼（Dacarbazine)和格鏈孢胺（Altretamine); DNA股破裂劑包括博菜黴素； DNA拓樸異構酶II抑制劑包括以下： 提入劑，如胺囊林（Amsacrine)、放線菌素D、道諾紅 菌素、多索紅菌素、艾達紅菌素和絲裂黃從 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0 X 297公釐） 457088 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __B7 五、發明説明（8 ) (Mitoxantrone)； 非嵌入劑，如伊托婆芸（Etoposide)和坦尼婆：y： (Teniposide)。 DNA次槽結合劑爲摺皺擻素。 抗代謝劑由兩種主要機制之一或另一干擾核酸之產生。 一些藥物抑制去氧核糖核苷三磷酸酯之產生，其信DNA合 成之中間先質，因此抑制DNA複製。一些化合物係足夠像 嘌呤或嘧啶，能在合成核苷酸途徑中將其取代。此些類似 物然後可取代入DNA和RNA，替代其正常之對應部分β在 此有用之抗代謝劑包括： 葉酸抗頡劑如甲胺蝶呤和三甲堞呤， 嘧啶抗頡劑如氟尿嘧啶、氟去氧尿苷、CB3717、氮胞# 、胸阿拉伯糖甞和氟氧尿苷 嘌呤抗頡劑包括氫硫嘌呤、6-硫鳥嘌呤、弗達阿拉伯糖 苷（Fludarabine)、戊制素（Pentostatin); 德修飾類似物包括胸阿拉伯糖：y：、弗達阿拉伯糖芬； 核糖核苷酸還原酶抑制劑包括羥脲a 微管素交互作用劑由與在微管素上之特定部位結合而作 用，其爲聚合以形成細胞微小管之蛋白質a微小管係決定 性細胞結構單元。當交互作用劑在蛋白質上作用時，細胞 不能形成微小管《微管素交互作用劑包括長春新鹼和長春 花驗’生物驗和紫杉酸兩者a 激素劑亦有用於治療癌症和腫瘤》其係用於激素敏感之 腫瘤及經常衍生自天然來源。其包括： -11 - 本紙張尺度適用中囷國家標隼（CNS ) A4规格（210X297公釐}

.^1 Ha n n^l 1^1 ^^1 - In ^^^1 Tm 、T (請先閱讀背面之注意事节再嗔贫本蒽J 457088 A7 經濟部中央橾準局員工消費合作杜印f. B7五、發明説明（9 ) 動情素、共軛動情素和乙炔基雌二醇和二乙基己烯雌酸 、氣三菌香素（Chlortrianisen)和艾登雌醇（Idenestrol); 黃體素如羥基黃體固酮己酸酯、甲朵黃體固嗣 (Medroxyprogesterone)和甲地孕酮; 雄激素如睪固酮、睪固酮丙酸酯、氟氧甲固酮 (fluoxymesterone)、甲基睪固 _ ; 腎上腺皮質類固醇係衍生自天然腎上腺皮質固醇或氫皮 質酮。其經使用，因爲其抗炎性期益處以及一些抑制有絲 分裂和停止DNA合成之能力。此些化合物包括脱氩皮質酮 、地塞米松、甲基脱氫皮質醇酮和脱氫皮質醇酮。 促黃體生成激素釋放激素劑或促性腺激素釋放激素抗頡 劑係主要地用於前列腺癌之治療。此些包括留甫化物 (leuprolide)乙酸醋和勾絲林（goserelin)乙酸醋。其防止類 固醇在睪丸中之生合成。 抗激素抗原包括： 抗動情素劑如塔莫西分（Tamosifen)， 抗雄激素劑如弗酿胺（Flutamide);及 抗腎上腺劑如絲裂坑素（Mitotane)和胺基鲍乙亞胺。 羥脲似乎主要地經抑制酵素核糖核站酸還原酶而作用。 天冬醯胺酸酶爲將天冬醯胺酸轉變成非功能性天冬胺酸 之酵素，及因此封阻在腫瘤中之蛋白質合成。 D .增效劑 "增效劑”可爲任何物質，其改進或增加醫藥組合物之效 力或爲免疫壓抑劑° 一個如此之增效劑爲三甫里定 I. -1 - _- n - — -I - - 士x/ — 1 -I — - I - .--11 (請先閣讀背面之注意事項再填寫本I) -12- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部-6-央標準局買工消費合作社印^ ^ 57 〇〇3 A7 ______ B7 五、發明説明（1〇 ) (triprolidine)及其順式異構物，其係與化學治療劑和仏膦 酸基甘胺酸衍生物合併使用。三甫里定係描述於美國專利 第 5,114,951 號（1992)。 另一個增效劑爲甫可唑（pr〇codaz〇le)，ljj—笨并咪唑_2-丙 酸；[/3 -(2-苯并咪唑]丙酸；2_(2_羧基乙基）苯幷咪唑；丙 若（propazol)]。甫可唑爲非特異之活性免疫保護劑，對抗 病毒和細菌感染及可與在此揭示之组合物使用。其有效於 與單獨N-膦酸基甘胺酸以治療癌症、腫瘤、白血病和病毒 感染，或在與N-膦酸基甘胺酸衍生物和化學治療劑合併時 0 丙酸及其鹽和酯亦可與在此揭示之醫藥組合物合併使用 抗氧化劑維生素如維生素A、c和E及々_故蘿蔔素可加 入此些組合物中。 E.劑量 任何合適之劑量可給定於本發明之方法中。化合物和載 體之類型和量將根據溫血動物之物種或人'體重及所治療 之腫瘤而廣泛地變化。爲化學治療劑，自〇5毫克/公斤體 重至約400毫克/公斤體重之較低劑量係可接受的。通常， 在每公斤體重2毫克至每公斤體重约4〇〇毫克間之劑量係合 適的《較佳地，使用自15毫克至约15〇毫克/公斤體重。^ 常，在人之劑量係低於小溫血哺乳類者，如小鼠。劑量單 位可包括單-化合物或其與其他化合物或其他癌抑制化合 物之混合物。化學治療劑與心膦酸基甘胺酸之正確範 ____ - 13- 本纸張X度適用中國國家標準（CNS ) /\4；%格（2丨0χ2?7公兹） -----：----裝-- (請先閱讀背面之注^^項再填寫本頁) 訂 Γ · I: I . I I- I · 457 088 A7 B7 五、發明説明（11 經濟邪中央標準局負工消費合作社印製 =比値將根據化學治療劑之類型和所治療之癌而定。劑量 單位亦可包括稀釋劑、延展劑、載體及其類似物。單位可 爲固體或膠型式如丸'錠、膠囊及其類似物或爲液體型式 ，適於口服、直腸、局部或腸_或靜脈内施藥或注入或 近腫瘤部位。 F ·劑量傳送型式 抗癌化合物和視情況化學治療劑和/或增效劑典型地與 在醫藥上可接受之載體混合。此載體可爲固體或液體或微 脂粒及型式通常根據所用之施藥型式而定。活性劑可以錠 或膠囊之型式，如結塊之粉末或以液體型式共同施藥。固 體載體之實例包括乳糖、蔗糖、明膠和瓊脂。膠囊或錠劑 可容易地調配及可製成易於吞食或咀嚼；其他固體型式包 括粒劑及容積粉末。錠劑可含合適之結合劑、潤滑劑、稀 釋劑、分解劑、調色劑、香味劑、流動謗生劑及熔化劑。 液體劑量型式包括溶液或懸浮液在水、在醫藥上可接受之 脂和油、醇或其他有機溶劑，包括酯、乳化液、糖漿、特 效藥、溶液和/或自非起泡粒劑復水之懸浮液和自起泡粒 劑復水之起泡製備物。如此液體劑量型式可含例如，合適 之溶劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、增 稠劑和熔化劑* 口服劑量型式應含香味劑和著色劑。腸外 和靜脈内型式亦應包括礦物質和其他物質，以使其相容於 注射之型式或所選之傳送系統D 在醫藥上可接受之載體和賦形劑之特定實例可用以調配 本發明之口服劑量型式，係描述於1975年9月2日發 —；—.----— (請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

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I I - I ____ -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )六4^格（2丨0X297公釐:f

I -I I- I I I 經濟部中央樣準局員工消費合作杜印製 A7 __B7 五、發明説明（12 )

Robert之美國專利第3,903,297號。製備有用於本發明之劑 量型式之技術和組合物係描述於以下之文獻· 7現代醫藥學 ，第 9和 10 章（Banker 和 Rhodes’ 編者，1979); Liebeman 等 人，醫藥劑量型式：錠劑（1981):及Ansel，醫藥齊]層· $式 之簡介，第2版Π976)。 G.治療之方法 治療之方法可爲任何合適之方法，其係有效於治療所要 治療之特殊病毒 '癌症或腫瘤類型。治療可爲口服、直腸 、局部 '腸外、靜脈内的或注入或近腫瘤部位及其類似之 方式。施用有效量之方法亦根據所要治療之腫瘤而變化。 確信地，由靜脈内、皮下或肌肉内施用與合適之載體、附 加之癌抑制化合物或化合物類或促進施藥之稀釋液調配之 标外治療將爲施用化合物至溫血動物之較佳方法。 確信地’許多除草劑單獨或與其他除草劑和/或殺眞菌 劑合併將顯示此有利之抗腫瘤作用。較佳之殺眞菌劑包括 苯并咪唑殺眞菌劑如羰苯達任（carbendazim)、，塞苯唑 (thiabendazole)、苯米爾（benomyl)。其他可使用之劑包括 格里塑夫文（griseofulvin)、弗那唑（fluconazole)和丙那唑 (propiconazole) ° N-膦酸基甘胺酸衍生物亦有效對抗病毒，包括鼻病毒、 HIV、痕療和流行性感冒。N-膦酸基甘胺酸與增效劑之合 併係特別有效對抗病毒。劑量型式和治療方法係相同於爲 腫瘤或癌症者。 以下之實施例係説明性的及不意於限制本發明。 ___ -15-____ 本紙張尺度適财關家縣（CNS ) Λ4· ( 210X297公釐） ""一 (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 088 088 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5 4 A7 ______B7 五 '發明説明（13 ) 生勝、乳房和肺腫瘤細胞詖舲 以下之細胞培養物試驗經進行以測試扭_膦酸基甘胺咚化 合物在結腸、乳房和肺腫瘤之人腫瘤細胞上之毒性。細胞 之生殖性由檢視MTT (3-[4,5-二甲基嘍唑基]-2,5-二笨基 四唑溴化物）還原反應而測試。MTT分析法爲熟知之細胞 生殖性測定。 結腸腫瘤細胞（自美國菌種培養收集中心（ATCC)之HT29) 和乳房細胞（自ATCC細胞系之MXI)在具10%牛胎兒血清之 伊哥氏（Eagle's)最小必需培養基中培養。肺腫瘤細胞（自 ATCC細胞系之A549)則在具1〇%牛胎兒血清之漢姆氏 (Ham_s) F12培養基中培養。 腫瘤細胞經流通及以所要之細胞密度接種至培養燒瓶。 培養基經傾倒及細胞層以磷酸鹽緩衝之鹽水（PBS)清洗2次 β細胞經胰蛋白酶處理及在接種燒瓶前粉碎化。除非另有 説明，培養物在37±1°C下在5±1%二氧化碳在空氣之加 濕氣壓中培養。培養物經培養直到其爲50-80%融合。 當燒瓶經次融合時，細胞經次培養。培養基自燒瓶抽氣 除去及細胞層以PBS潤洗2次β接著，胰蛋白酶溶液經加 入各燒瓶以覆蓋細胞層β胰蛋白酶溶液在30-60秒後除去 及燒瓶在室溫下培養2至6分《當90%細胞變成脱離時，加 入生長培養基β細胞由粉碎化除去及轉至無菌離心管。細 胞在懸浮液中之濃度經決定，及製備適當之稀釋，以得到 5000個細胞/毫升之密度。細胞經次培養至96井生物分析 盤之指定井中（每井200微升細胞懸浮液）。PBS經加入所有 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4说格（210X297公釐) ' n 0 - HI - -- 1^1 - n - n ί ^-iJ (請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁)

4 5 7 0 B S 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 _______B7 五、發明説明（14 ) 剩餘之井中，以維持濕度。盤然後在測試物體治療前培養 過夜。 各劑量之測試物由以每稀釋100微升處理四重覆之培養 井測試。指定爲溶劑控制組之該等丼接受附加之1〇〇微升 之甲醇控制組；負控制组井接受附加之i 00微升之處理培 養基。PBS經加入未以測試物體或培養基處理之剩餘井中 。盤然後經培養約5天。 在5天培養之末期，各劑量组經鏡檢以評估毒性。〇 5毫 克/毫升之MTT稀釋液在處理培養基中製成，及稀釋液自 0.45微米濾紙過滤’以除去不溶之結晶β培養基自生物分 析盤之井傾倒。其後立即將2000微升之過濾μττ溶液加入 所有測試井中，除了 2個未處理之空白試驗井β2個空白 井接丈200微升處理培，養基。盤回至培養箱約3小時。在培 養後，含ΜΤΤ之培養基經傾倒。過量培養基經加入各井及 盤在室溫下振盪约2小時。 各井在550毫微米下之吸光値係分子裝置（Menl〇公園， CA) VMax盤閲讀機測定。 溶劑控制組井之平均ODmo和各測試物體稀釋液者及各 空白井和正控制組者經計算。空白井之平均〇〇55〇分別自 溶劑控制组和測試物體井之平均扣除，以得到相對應之平 均 OD550 » 測試物體稀釋液之修正平均OD550 %控制組=................................X 100 溶劑控制組之修正平均〇〇550 劑量反應曲線經製備爲半對數圓，具％控制组在縱座標 _______- 17- 本紙張尺度適财關家標^CNS) A4^ (21()><297公 n n n n m. I— i 士h 1 —— n . I I. 丁 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Ο 8 8 - 第851〇56〇5號專利申請案 Α7 中文説明書修正頁(86年6月） Β7 五、發明説明（15 ) (線性）和測試物體濃度在橫座標（對數）。EC5Q係各自測試 物體之作圖導出。 爲在甲醇中施藥之測試物體，分開之反應經製備以修正 甲醇數據。 亞得里亞黴素係作爲正控制组。在所有例子中，其較任 何測試物質更毒1或2個對數値。亞得里亞黴素爲在目前使 用中有效之劑之一及具顯著副作用者。其他相當有效之化 學治療劑之尖峰血漿濃度可爲1〇至50倍高於亞得里亞黴素 者。EC-50爲其中一半之細胞經殺死之濃度。 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表2 經濟部中央標準局貝工消費合作社印策 測試物質 EC-50 支氣管細胞 角質細胞 纖維胚母細胞 甘磷酸鹽 1.59 3.54 3.09 3.21 86.1 35.8 亞得里亞黴素 0.015 0.0020 0.0035 0.0093 0.065 0.10 此些實驗顯示此些组合物係有_效於殺死腫瘤細胞，而不 顯著地影響健康細胞。其較亞得里亞黴素更安全。 -18- 表1 測試物質 EC-50結果（ppm) HT29 HT29 MX1 MX1 A549 A549 亞得里亞黴素 0.003 0.006 0.02 0.001 0.03 0.009 甘磷酸鹽 5.41 3.73 36.5 14.6 25.9 22.3 在正常之健康細胞中，得到以下之結果： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0x297公釐） 457 088 恥& J j 第八五一〇五六〇五號專利申請案 中文補充說明書修正百九十年五月） 對單純性疱疹之抗病毒評估 使用5至7週大（領受時）雌性CD大鼠（Chgiles幻似㈣ Laboratories，P〇rtage，MI^測試初始時期，大鼠約6至9週大且重约 2〇至28克。用於研究之所有老R的年齡上差異不超過1〇天。每個墊 草籠安置6隻大鼠。任意餵食大氣餐齒類食料5〇〇2 Missouri)。任意提供新鮮水給太鼠。 用單純性癌療病毒第2型MS種激發大鼠。野存融解病毒且投與大 鼠。在約_7〇C貯存生物體。感染激發前，融解一瓶冷凍貯料且以經 緩衝食鹽水溶液稀釋成適當濃度。用·齒烷麻醉'大鼠且鼻内投與％微 升病毒激活量。 甘磷酸酯（N _ (膦酸基曱基）甘胺酸異丙胺鹽）以15〇毫克/公斤體 重濃度投與。亦將75毫克/公斤體重之Acycl〇yir投與—組太鼠。i 至14天，每群中1〇隻老鼠以口餵食管技受组合物。食鹽水訝照纽動 物（10)如同比較之受試標的劑量大鼠接受可比擬量之食鹽水。約24 小時期間完成受試組合物之投藥。第0天，經受試標的或食鹽水之 二次投與後約4小時，用病毒之感染劑量鼻内激活所有大鼠’該劑 量經算出能產生约90%致死率。經致死或罹病感染激活2丨天後每日 觀察動物。投與第〇天後觀察受試動物三次，第一天後觀察受試動 物二次，隨後每日二次。 用甘磷酸酯及acyclovir處理大鼠有6〇%存活率。未處理對照組有 20%存活率》

Ui\TYPE\SU\MFY-226.DOC\l 在活體内HIV急性模式中，甘磷酸酯相較於12,500治療參數AZT 有2·5治療參數。藥物參數係藥物之毒性劑量對藥物有效劑量之比 例。 於人類腫瘤群落形成單位，甘磷酸酯用於連績曝露實驗。活足之 定義爲在所予濃度時小於等於50 %群落存活。數目愈高結果愈好。 例如I/3意指三分之一腫瘤群落試驗有小於等於50 %群落存活。 腫瘤類型 濃度—微克/毫升 __ 2.5 25 250 乳癌 1/4 2/4 3/4 直腸癌 0/2 0/2 1/2 頭及頸部癌 1/1 1/1 1/1 腎癌 0/1 0/1 1/1 肺（非小細胞）癌 0/1 1/1 1/1 肺（小細胞）癌 0/1 0/1 1/1 黑素瘤 0/1 1/1 1/1 間皮瘤 0/1 1/1 1/1 卵巢癌 0/13 2/13 11/13 胰臟癌 0/1 0/1 1/1 肉瘤 0/1 0/1 1/1 胃癌 0/1 0/1 1/1 子宮癌 0/1 0/1 0/1 總計 2/29 8/29 24/29 U;\type\MFY\mFY-226.D〇C\1 2 -

第85丨05605號專利申請案 中文補充說明書修正胃Γ90年7月） 測試物質 EC-50結果 (ppm) HT29 HT29 MX1 MX1 A549 A549 亞得里亞黴素 0.003 0.006 0.02 0.001 0.03 0.009 氣甫范 (chloropropham®) 13.3 11.4 91.8 108 12.6 92.5 甘鱗酸鹽 (glyphosate®) 5.41 3.73 36.5 14.6 25.9 22.3 1:1混合物* 1.96 1.61 9.70 8.78 10.8 10.1 *為氣甫范和甘磷酸鹽（glyphosate®)之混合物。甘磷酸鹽（glyph〇sate®)或 N-(膦酸基甲基）甘胺酸由孟山都公司製造，其單（異丙基胺）鹽係販售作 為廣效性之除草劑。氯甫范（chloropropham®)為（3-氯苯基）胺甲酸丨_甲 基乙酯或間-氯胺曱酸異丙酯，其販售作為除草劑或植物生長調節劑。 P：\WK〇.CH[NESE\4M6^SU^ D〇C l

Claims (1)

1. 457 457

   第85105605號專利申請案 中文申請專利範園修正本（90年7月） 六、申請專利範囷 [一種治療對治療敏感之癌症或腫瘤之醫藥组合%_ :_,包 括安全和有效量之下式之N_膦酸基甘胺酸衍生$Λ_ s;·/* - Ιϋ .. - -, - ·. 0 R 〇 !! I II X-C-CH2-N-CH2-P-〇y I 02 其中X係選自一群包括羥基、多至12個碳原子之規氧基 或氣燒氧基，低碳稀'氧基、環己氧基；γ和Z各獨立選 自氫和低碳虎基；及R係選自一群包括氫、甲睹基、乙 醯基、芊醯基、硝基芊醢基和氣化芊醯基；或其醫藥 上可接受鹽。 2·根據申請專利把圍弟1項之醫藥組合物，包括在醫藥上 可接受之載體及安全和有效量之N·(膦酸基甲基）甘胺 酸或其鹽》 3·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該里係選 自一群包括氫氣鹽' 乙酸鹽 '柳酸鹽、低碳烷基胺及 其混合物。 4. 根據申請專利範圍第1项之醫藥組合物，係為單位劑量 型式。 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該N_騰酸 基甘胺酸衍生物係N-(膦酸基甲基）甘胺酸或其鹽。 6. 根據申請專利範圍第4項之醫藥组合物，其中該鹽係選 本紙浪尺度逋用中國國家標率（CNS > A4規格（2丨0x297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標奉局負工消費合作社印« ab,cd 457088 六、申請專利範圍 自—群包括氫氣鹽、乙酸鹽和柳酸鹽及其混合物。 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 7. 根據申請專利範圍第5項之醫藥組合物’其包括2毫克 至400毫克之該N-膦酸基甘胺酸。 8. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為乳癌。 9. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物’其中該癌症或 腫瘤為結腸癌。 ， 10. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物’其中該癌症或 腫瘤為頭或頸部癌。 11. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物’其中該癌症或 腫瘤為非小細胞肺癌。 12. 根據申請專利範圍第I項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為卵巢癌。 13. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為胰臟癌。 14. 根據申請專利範園第丨項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為攝護腺癌。 15. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為黑色素瘤。 經濟部中央標率局身工消費合作社印製 16. 根據申請專利範圍第1項之醫藥纽合物，其中該癌症或 腫瘤為肉瘤。 π.報據申請專利範園第1項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為胃癌。 18.根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該癌症或 腫瘤為腎癌。 -2 - 本紙張尺度逋用中國囲家梯準（CNS )八4規及（210Χ297公着） 9α 5.U 申請曰期 85. 5. 13. 案 號 85105605 類 别 Α4 C4 ；Κ 中文說明書修正頁（9〇年5月） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 11專利説明書4570SS —、發明么艋 新型名^ 中 文 治療對治療敏感之癌症或腫瘤之含N-膦酸基甘胺酸衍生物之醫藥組合物 英 文 "PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING N-PHOSPHOGLYCINE DERIVATIVES FOR TREATING A CANCER OR A TUMOR SUSCEPTIBLE TO TREATMENT· 姓 名 詹姆士.伯格.卡登 二、發明人 創作 國 籍 美國 . 住、居所 美國俄玄俄州西契斯特市查特杯巷7339號 姓 名 (名稱） 美商寶鹼公司 國 籍 美國 三、申請人 住、居所 (事務所) 美國俄亥俄州辛辛那提市寶驗廣場1號 代表人 姓 名 傑可巴斯·西雷瑟 本紙張尺度適用 t1國國家標i -1 - (CNS) A4 (210 X 297 -7^7------- 裝 訂 線 457 088 恥& J j 第八五一〇五六〇五號專利申請案 中文補充說明書修正百九十年五月） 對單純性疱疹之抗病毒評估 使用5至7週大（領受時）雌性CD大鼠（Chgiles幻似㈣ Laboratories，P〇rtage，MI^測試初始時期，大鼠約6至9週大且重约 2〇至28克。用於研究之所有老R的年齡上差異不超過1〇天。每個墊 草籠安置6隻大鼠。任意餵食大氣餐齒類食料5〇〇2 Missouri)。任意提供新鮮水給太鼠。 用單純性癌療病毒第2型MS種激發大鼠。野存融解病毒且投與大 鼠。在約_7〇C貯存生物體。感染激發前，融解一瓶冷凍貯料且以經 緩衝食鹽水溶液稀釋成適當濃度。用·齒烷麻醉'大鼠且鼻内投與％微 升病毒激活量。 甘磷酸酯（N _ (膦酸基曱基）甘胺酸異丙胺鹽）以15〇毫克/公斤體 重濃度投與。亦將75毫克/公斤體重之Acycl〇yir投與—組太鼠。i 至14天，每群中1〇隻老鼠以口餵食管技受组合物。食鹽水訝照纽動 物（10)如同比較之受試標的劑量大鼠接受可比擬量之食鹽水。約24 小時期間完成受試組合物之投藥。第0天，經受試標的或食鹽水之 二次投與後約4小時，用病毒之感染劑量鼻内激活所有大鼠’該劑 量經算出能產生约90%致死率。經致死或罹病感染激活2丨天後每日 觀察動物。投與第〇天後觀察受試動物三次，第一天後觀察受試動 物二次，隨後每日二次。 用甘磷酸酯及acyclovir處理大鼠有6〇%存活率。未處理對照組有 20%存活率》 Ui\TYPE\SU\MFY-226.DOC\l

   第85丨05605號專利申請案 中文補充說明書修正胃Γ90年7月） 測試物質 EC-50結果 (ppm) HT29 HT29 MX1 MX1 A549 A549 亞得里亞黴素 0.003 0.006 0.02 0.001 0.03 0.009 氣甫范 (chloropropham®) 13.3 11.4 91.8 108 12.6 92.5 甘鱗酸鹽 (glyphosate®) 5.41 3.73 36.5 14.6 25.9 22.3 1:1混合物* 1.96 1.61 9.70 8.78 10.8 10.1 *為氣甫范和甘磷酸鹽（glyphosate®)之混合物。甘磷酸鹽（glyph〇sate®)或 N-(膦酸基甲基）甘胺酸由孟山都公司製造，其單（異丙基胺）鹽係販售作 為廣效性之除草劑。氯甫范（chloropropham®)為（3-氯苯基）胺甲酸丨_甲 基乙酯或間-氯胺曱酸異丙酯，其販售作為除草劑或植物生長調節劑。 P：\WK〇.CH[NESE\4M6^SU^ D〇C l 457 457

   第85105605號專利申請案 中文申請專利範園修正本（90年7月） 六、申請專利範囷 [一種治療對治療敏感之癌症或腫瘤之醫藥组合%_ :_,包 括安全和有效量之下式之N_膦酸基甘胺酸衍生$Λ_ s;·/* - Ιϋ .. - -, - ·. 0 R 〇 !! I II X-C-CH2-N-CH2-P-〇y I 02 其中X係選自一群包括羥基、多至12個碳原子之規氧基 或氣燒氧基，低碳稀'氧基、環己氧基；γ和Z各獨立選 自氫和低碳虎基；及R係選自一群包括氫、甲睹基、乙 醯基、芊醯基、硝基芊醢基和氣化芊醯基；或其醫藥 上可接受鹽。 2·根據申請專利把圍弟1項之醫藥組合物，包括在醫藥上 可接受之載體及安全和有效量之N·(膦酸基甲基）甘胺 酸或其鹽》 3·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該里係選 自一群包括氫氣鹽' 乙酸鹽 '柳酸鹽、低碳烷基胺及 其混合物。 4. 根據申請專利範圍第1项之醫藥組合物，係為單位劑量 型式。 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該N_騰酸 基甘胺酸衍生物係N-(膦酸基甲基）甘胺酸或其鹽。 6. 根據申請專利範圍第4項之醫藥组合物，其中該鹽係選 本紙浪尺度逋用中國國家標率（CNS > A4規格（2丨0x297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標奉局負工消費合作社印«