SK138297A3

SK138297A3 - A pharmaceutical composition containing n-phosphonoglycine derivatives for inhibiting the growth of viruses and cancers

Info

Publication number: SK138297A3
Application number: SK1382-97A
Authority: SK
Inventors: James B Camden
Original assignee: Procter & Gamble
Priority date: 1995-04-12
Filing date: 1996-04-11
Publication date: 1998-05-06
Also published as: JPH11503458A; TW457088B; IL117873A0; PL322734A1; CA2217951A1; AR003120A1; EP0820291A1; KR19980703830A; NO974694L; WO1996032115A1; NO974694D0; US6090796A; IL117873A; CZ323897A3; US5665713A; AU714057B2; US5854231A; BR9604951A; TR199701148T1; AU5389696A

Description

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka farmaceutického prostriedku, ktorý inhibuje rast rakovín a nádorov u cicavcov, hlavne u ľudí a teplokrvných živočíchov. Prostriedok je taktiež účinný proti vírusom. Prostriedok obsahuje N-fosfonoglycínové deriváty, ktoré sú systémovými herbicídmi.

Doterajší stav techniky

Rakovina je jednou z hlavných príčin smrti zvierat a ľudí. Presná príčina vzniku rakoviny nie je známa, ale mnoho výskumníkov dáva do súvislosti výskyt niektorých typov rakovín a nádorov s určitými aktivitami, ako je fajčenie alebo kontakt s karcinogénmi.

Mnoho typov chemoterapeutík dokázalo svoju účinnosť proti rakovinám a nádorovým bunkám, ale nie všetky typy rakoví n a nádorov na tieto látky reagujú. Bohužiaľ, mnohé z týchto látok taktiež ničí normálne bunky. Presný mechanizmus pôsobenia týchto chematerapeutík nie je vždy známy.

Napriek pokrokom na poli liečby rakoviny zostávajú hlavnými terapeutickými postupmi operácie, ožarovania a chemoterapia. Chemoterapeutické prístupy sa používajú na boj s rakovinami v štádiu metastáz alebo s tými, ktoré sú najmä agresívne. Takéto cytocídne alebo cytostatické lieky pôsobia najlepšie na rakoviny s veľkými rastovými faktormi, t.j. na tie, ktorých bunky sa rýchlo delia. Do skupiny terapeutík, ktoré dnes majú onkologóvia k dispozícii, patria hormóny, hlavne estrogén, progesterón a testosterón, niektoré antibiotiká produkované rôznymi mikroorganizmami, alkyJačné činidlá a antimetabo1 i ty. Ideálne cytotoxické liečivo so špecifitou proti rakovinovým a nádorovým bunkám a zároveň neovplyvňujúce normálne bunky. by bolo mimoriadne žiaduce. Bohužiaľ žiadne také nebolo objavené a tak sa používajú prostriedky, ktoré prednostne napadajú rýchlo sa deliace bunky (ako nádorové, tak aj normálne).

Je jasné, že vyvinutie látok, ktoré by ničili nádorové bunky vďaka tomu, že by mali oproti ním prísnu špecificitu, by znamenalo prelom. Žiadúce by boli prípadne aj tie látky, ktoré by boli cytotoxické oproti tumorovým bunkám a pritom vykazovali iba mierne pôsobenie na normálne bunky.

Predmetom predkladaného vynálezu je teda farmaceutický prostriedok, ktorý u cicavcov účinne inhibibuje rast nádorov a rakovín a zároveň má mierny alebo nulový vplyv na normálne bunky.

Konkrétnejšie, predmetom predkladaného vynálezu je protirakovinový prostriedok, skladajúci sa' z farmaceutického nosiča a N-chlorofenylkarbamátového alebo N-chlorofenyltiokarbamátového derivátu v kombinácii s N-fosfonoglycínovým derivátom, ako je opísané nižšie, spolu so spôsobom liečby takýchto rakovín.

Tieto prostriedky sú účinné i proti vírusom. Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je tiež prostriedok a metóda na liečbu infekcií, spôsobovaných vírusmi oparov, HIV, vírusmi chrípky a rhinovírusmi.

Tieto a ďalšie predmety budú zrejmými z nasledujúceho podrobného opisu tohto vynálezu.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je prostriedok na liečbu cicavcov, hlavne teplokrvných zvierat a ľudí, obsahujúci farmaceutický nosič a účinné množstvo protirakovinovej zlúčeniny, vybranej zo skupiny, zahrňujúcej N-fosfonoglycínové deriváty všeobecného vzorca

O R Ο

X - C - CH₂ - N - CH₂ - P - OY oz kde X je vybrané zo skupiny substituentov, zahrňujúcej hydroxy, alkoxy alebo ehloroxy s najviac 12 uhlíkovými atómami, nižšie alkenoxy, cyklohexyloxy, morfolino, pyrolidinyl, piperidino, a -NH-R ; Y a Z sú nezávisle alebo vodík alebo nižší alkyl, R je vybrané zo skupiny, zahrňujúcej vodík, formyl, acetyl, benzoyl, nitrobenzoyl a chlórovaný benzoyl, R je vybrané zo skupiny zahrňujúcej vodík, nižší alkyl a nižší alkenyl, cyklohexyl, fenalkyl s najviac 8 uhlíkovými atómami, fenyl, chlórovaný fenyl a anizyl : a určitých solí týchto zlúčenín, ktorých soli sú vybrané zo skupiny, zahrňujúcej kovy I. a II. skupiny s atómovým číslom až 30, hydrochlorid, acetát, salicytát, pyridín, amónium, nižší alifatický amínouhľovodík, nižší alkanolamín a anilín.

Podstatou vynálezu je ďalej farmaceutický prostriedok na liečbu cicavcov, hlavne teplokrvných zvierat a ľudí, pozostávajúci z farmaceutického nosiča a účinného množstva chemoterapeutického činidla a protirakovinovej zlúčeniny, vybrané zo skupiny, tvorenej derivátmi N-fosfonoglycínu, ako je definované vyššie. V týchto prostriedkoch môžu byť použité aj potenciátory.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Tieto prostriedky môžu byť použité na inhibíeiu rastu rakovín a iných zhubných nádorov u ľudí alebo u zvierat podaním účinného množstva N-fosfonoglycínových derivátov a Nchlorofeny1karbamátov a N-chlorofenyltiokarbamátov, a to buď orálne alebo rektálne, topicky alebo parenterálne, intravenózne alebo priamou injekciou do nádoru či do jeho blízkosti. Tieto prostriedky sú účinné na likvidáciu nádorov alebo na spomaľovanie ich rastu. a pritom sú oproti normálnym, zdravým bunkám bezpečnejšie ako adriamycín.

A) Definícia

Tak ako je tu používaný výraz obsahujúci vyjadruje, že vo farmaceutickom prostriedku podľa tohto vynálezu môžu byť spoločne použité rôzne zložky. V súlade s tým sú výrazy skladajúci sa v podstate z a skladajúci sa z zahrnuté vo výraze obsahuj úc i.

Tak ako je tu používaný výraz farmaceutický prijateľná zložka zodpovedá tej zložke, ktorá je vhodná na použitie u ľudí a/alebo zvierat bez nadmerných nepriaznivých účinkov (ako je toxicita, dráždenie a alergické reakcie), porovnateľných s rozumným pomerom prospechu a rizika.

Tak ako je tu používaný výraz bezpečné a účinné množstvo, označuje také množstvo zložky, ktoré je dostačujúce na dosiahnutie žiaducej liečebnej odozvy bez nadmerných nepriaznivých vedľajších účinkov (ako je toxicita, dráždenie a alergické reakcie), porovnateľných - pri použití zložky spôsobom podľa vynálezu - s rozumným pomerom prospechu a rizika. Konkrétne bezpečné a účinné množstvo sa bude samozrejme meniť s takými faktormi, ako je typ liečenej choroby, telesný stav pacienta, druh cicavca, ktorý je liečený, trvanie liečby, typ súbežnej terapie (ak nejaká je), konkrétne použité prípravky a štruktúra zlúčenín alebo ich derivátov.

Tak ako je tu používaný výraz farmaceutické prídavné soli zahrňuje farmaceutický prijateľné soli protirakovinovej zlúčeniny s organickou alebo anorganickou kyselinou a amínové soli kyse1 i ny.

Tak ako je tu používaný výraz farmaceutický nosič označuje farmaceutický prijateľné rozpúšťadlo, suspenzné činidlo alebo prostriedok na vnesenie protirakovinového liečiva do organizmu zvieraťa alebo človeka. Nosičom môže byť kvapalina alebo pevná látka. Nosič je vyberaný s ohľadom na plánovaný spôsob aplikácie.

Tak ako je tu používaný výraz rakovina označuje všetky typy rakovín alebo novotvarov alebo nádorov u cicavcov, vrátane leukémie.

Tak ako je tu používaný výraz protirakovinové zlúčeniny označuje N-fosfonoglycíny a ich soli. Presne a detailne sú N-fosfonoglycíny opísané nižšie. Uprednostňovaným materiálom sú výrobky predávané pod názvom glyphosate^^ alebo Roundup^^ firmou Monsanto. Je to N-(fosfonemetyl)glycín.

Tak ako je tu používaný výraz vírusy zahrňuje vírusy, ktoré spôsobujú choroby u teplokrvných cicavcov, napr. HIV, vírus chrípky, rhinovírusy, vírus oparov a podobne.

Tak ako je tu používaný výraz chemoterapeutické prostriedky zahrňuje DNA-interaktívne činidlá, antimetabolity, tubulin-interaktívne činidlá, hormonálne prostriedky a ďalšie, ako je asparagináza alebo hydroxymočovina.

Tak ako je tu používaný výraz potenciátory označuje materiály ako je tripolidín a jeho cis-izomér alebo procodazol, ktoré sa používajú v kombinácii s chemoterapeutickými prostriedkami a fosfonoglycínmi.

B) Protirakovinové zlúčeniny

Protirakovinové zlúčeniny sú derivátmi N-fosfonoglycínov, ktoré sú známe pre svoje herbicidne účinky. Sú to systémové herbicídy, používané na zábranu rastu a ničenie istých rastlín alebo burín. Systémové herbicídy sa odlišujú od ostatných herbicídov svojou schopnosťou putovať rastlinou. Nie je požiadavkou tohoto vynálezu, aby protirakovinové zlúčeniny mali túto schopnosť.

Tieto zlúčeniny majú nasledujúcu štruktúru

R

CH₂ - N ch₂ - P - OY

OZ kde X je vybrané zo skupiny, zahrňujúcej hydroxy, thioyl, alkoxy alebo chloroxy s najviac 12 uhlíkovými atómami, nižšie alkenoxy, cyklohexyloxy, morfolino, pyrolidinyl, piperidino a -NHR ; Y A Z sú nezávisle alebo vodík alebo nižší alkyl, R je vybrané zo skupiny, zahrňujúcej vodík, formy], acetyl, benzoyl, nitrobenzoyl a chlórovaný benzoyl, R je vybrané zo skupiny, zahrňujúcej vodík, nižší alkyl a nižší alkenyl, fenalkyl s najviac 8 uhlíkovými atómami, fenyl, chlórovaný fenyl a anazyl, a určité soli týchto zlúčenín, ktorých soli sú vybrané zo skupiny, zahrňujúcej kovy I. a II. skupiny s atómovým číslom až 30, hydrochlori d, pyridín, amónium, nižší alifatický aminouhľovodík, nižší alkanolamín a anilín.

Najviac uprednostňovanými zlúčeninami sú tie, ktoré majú nasledujúcu štruktúru :

CH. 0

II I II

HO - C - CH₂ - N - CH₂ - P - (OH)₂

Prednosť majú nižšie alkyJ am í nové soli, hlavne soli izopropyJ am ínu. Tieto zlúčeniny sa pripravujú spôsobom opísaným v patente USA č.3,794.758, udelenom Franzovi dňti 10. decembra 1974.

C) Chemoterapeutické látky

Chemoterapeu t ické DNA-interaktívne látky, látky, hormonálne látky hydroxymočovina. Každá z látky sa obvykle členia na antimetabolity, tubulín-i nterak t í vne a iné, ako je asparagináza alebo týchto skupín chemoterapeutickych látok môže byť ďalej rozdelená podľa typu aktivity alebo zlúčeniny. Chemoterapeutické látky, používané v kombinácii s fosfonoglycínmi podľa tohoto vynálezu, zahrňujú členy všetkých týchto skupín. Detailný rozbor chemoterapeutických látok a metód ich podávania je možné nájsť v práci autorov Dorr a kol., Cancer Chemotherapy vydanie, str. 15-34, Appleton and Lange

USA, 1994), tu zahrnuté vo forme odkazu.

Handbook, 2.

(Connecticut,

DNA-interaktívne látky cisplatinu, cyklofosfamid, spôsobiť zlom DNA vlákna.

zahrňujú alkylačné činidlá,· napr.

’ I altretamin, ďalej látky schopné ako bleomycín, ďalej inhibítory interkalujúce topoizomerázu II, napr. daktinomycín a doxorubicín, ďalej inhibítory nevsúvajúce topoizomerázy II, ako je etoposide a teniposide, a konečne Pleamydin, ktorý sa viaže do menšieho žliabku DNA. Aktivačné činidlá tvoria kovalentné chemické adukty s bunkovou DNA, RNA a bielkovinovými molekulami, a s menšími aminokyselinami, glutatiónom a podobnými zlúčeninami. Všeobecne tieto alkylačné činidlá reagujú s nukleofilným atómom v bunkovej zložke, ktorej atóm je súčasťou napr. aminovej, karboxylovej, fosfátovej alebo sulfhydrylovej skupiny v nukleových kyselinách, bielkovinách, aminokyselinách alebo glutatióne. Mechanizmus pôsobenia a úloha týchto alkylačných činidiel pri liečbe rakoviny nie presne známy. Medi typické alkylačné činidlá počítame :

Dusíkaté mustardy, isofamid (asi chyba, mechloretamín, melfalan, uracilový mustard;

ako je chlorambucil, cyklofosfamid, má byť ifosfamid, pozn.prekl.),

Azi ľ i d í η. ako je Thi o tepu:

metánsu1fonátové estery, ako je Busulfan:

nitrózomočoviny, ako sú Carmustine, Lomuscine, S treptozocí n; komplexy platiny, ako sú cisplatina a karbop1 a t i na; bi ot'eduk t í vny alkylátor, ako je Mitomycin a procarbazine, dacarbazine a Altretaraine;

látky, spôsobujúce zlom DNA reťazca, zahrňujú bleomycín ; inhibítory DNA topoizomerázy II zahrňujú nasledujúce :

Interkalátory, ako sú amsacrine, dactinomyci ne (pravdepodobne D ak t inomycín, pozn. prekl.), daunorubicine, doxorubicine idarubicine a mitoxantrone;

Non i nterkalátory, ako sú etoposide a teniposide.

Látkou, ktorá sa viaže do menšieho žliabku DNA, je Pleamydin replikácii DNA. purínom alebo

Antimetabolity narušujú tvorbu nukleových kyselín jedným z dvoch hlavných mechanizmov. Niektoré z týchto liekov blokujú tvorbu dezoxyribonukleozidových trifosfátov, ktoré sú bezprostrednými prekurzormi pre syntézu DNA, a bránia tak

Niektoré z týchto zlúčenín sa natoľko podobajú »

pyramidínom, že sú schopné ich nahradiť v anabolických nukleotidových cestách. Tieto analógy môžu potom byť zabudované do DNA a RNA namiesto svojich normálnych opakov. Medzi tieto užitočné antimetabolity patria:

antagonisti folátov, akým je metotrexát a trimetrexát; antagonisti pyrimidínu, akým je fluorouraci1, f 1uorodeoxyridín, CB3717, azacytidín, cytarabín a floxuridín;

antagonisti purínu zahrňujú merkaptopurín, 6-tiogaunín, fludarabín, pentostatín;

modifikované analógy sacharidov zahrňujú cyctrabín a fludarabín;

inhibítory reduktázy ribonukleotidu zahrňujú hydroxymočovinu

Tubulín-interaktívne činidlá pôsobia tým, že sa viažu na špecifické miesta tubulínu, teda proteínu, ktorý polymerizuje za vzniku bunkových mikrotubúl. Mikrotubule štrukturálne jednotky. Keď sa ineraktívne sú kritické bunkové činidlá naviažu na prote í n, bunky nemôžu vytvárať mi k rotubu1 e.

Tubulín

- interaktívne činidlá zahrňujú vincristine a vinblastine (obidve sú alkaloidy) a paklitaxel. Pri liečbe rakoviny a nádorov sú užitočné aj hormonálne látky. Používajú sa pri nádoroch citlivých na hormóny a obyčajne sú odvodené z prírodných zdrojov. Patria medzi nich :

estrogény, konjugované estrogény a etinylestradiol a diety1 s t i 1besterol, chlortrianisen a idenestreol; progestíny, ako je kapronan hydroxyprogesterónu, medroxyprogesterón (asi metoxy-, pozn. prekl.) a megestrol; androgény, ako je testosterón, propionan testosteronu, fluoxymesterón, metyltestosterón;

Kortikosteroidy nadľadviniek sa odvodzujú od prírodného nadľadvinkového kortizolu a hydrokorti zónu. Používajú sa pre svoj protizápalový účinok a pre schopnosť inhibovať mitotické delenie a zastavovať syntézu DNA. Tieto zlúčeniny zahrňujú prednizon, dexametazón, metylprednisolón a prednisolón.

Hormonálne látky, uvoľňujúce leutinizačné hormóny, alebo hormonálni antagonisti, uvoľňujúci gonadotropín, sa používajú predovšetkým na liečbu rakoviny prostaty. Zahrňujú octan leuprolidu a gozerelínu. Blokujú biosyntézu steroidov v semenníkoch.

Medzi antihormonálne antigény patria :

antiestrogénne činidlá, ako je Tamosifen (asi Tamoxifen, pozn.prekl.), antiandrogénne činidlá, ako je Flutamid, a antiadrenálne činidlá, ako je Mitotane a aminoglutetimid.

Hydroxymočovina pravdopodobne primárne spôsobuje inhibíciu enzýmu ribonukleotidreduktázy.

Asparagináza je enzým, ktorý mení asparagín na nefunkčnú kyselinu asparagovú a blokuje tým syntézu bielkovín v nádore.

D. Polene i á tory

Polene iátorom môže byť akýkoľvek materiál, ktorý zlepšuje alebo zvyšuje účinnosť farmaceutického prostriedku alebo je imunosupresoroni. Jedným z takýchto potenciátorov je triprolidín a jeho cis-izomér, ktoré sa používajú v kombinácii s chemoterapeutickými látkami a derivátom N-fosfonoglycínu. Triprolidín je opísaný v patente US č. 5,114,951 (1992).

Ďalším potenciátorom je prokodazol, kyselina

1H-benzimidazol- 2-propiónová;

kyselina [beta-(2-benzimidazol)propiónová];

2-(2-karboxyetyl)benzimidazol, propazol. Prokodazol je nešpecifická aktívna imunoprotektívna látka proti vírusovým a bakteriálnym infekcim a môže byť použitá s prostriedkami, ktoré sú predmetom patentových nárokov predkladanej prihlášky. Pri liečbe rakovín, nádorov, leukémie a vírusových infekcií je účinná v kombinácii so samotnými N-fosfonoglycínmi alebo s N-fosfonoglycínovými derivátmi a chemoterapeutikami.

V kombinácii s nárokovanými farmaceutickými prostriedkami môže byť použitá i kyselina propiónová a jej soli a estery.

Do týchto prostriedkov môžu byť pridané aj antioxidantové vitamíny, ako je vitamín A, C a E a β-karotén.

E) Dávkovanie

Akékoľvek vhodné dávkovanie môže byť použité spôsobom podľa vynálezu. Typ zlúčeniny, nosič a množstvo sa budú meniť v závislosti od toho, či je liečené zviera alebo človek, od druhu liečeného teplokrvného zvieraťa, telesnej váhy a druhu liečeného nádoru. Pre chemoterapeutiká je prijateľná nižšia dávka od 0,5 mg do asi 400 mg na 1 kg telesnej hmotnosti. Všeobecne je vhodná dávka medzi asi 2 mg a asi 400 mg na 1 kg telesnej hmotnosti. S výhodou sa používa od 15 mg do asi 150 mg na 1 kg telesnej hmotnosti. Všeobecne je dávka pre človeka nižšia ako pre malé teplokrvné cicavce, ako je myš. Jednotka dávky môže obsahovať jedinú zlúčeninu alebo jej zmes s inými zlúčeninami alebo inými

Presný rozsah a porne r bude závisieť od typu rakoviny. Jednotka dávky rakovinu inhibujúcimi zlúčeninami, chemoterapeutika k N-fosfonog1ycinu chemoterapeutickej látky a liečenej taktiež môže obsahovať riedidlá, plnivá, nosiče a podobne. Jednotka môže mať pevnú alebo gélovitú formu typu piluliek, tabliet, kapsúl a podobne, alebo kvapalnú formu, vhodnú pre orálnu, rektálnu, topickú alebo parenterálnu aplikáciu, alebo intravenóznu aplikáciu, alebo pre injekcie do nádoru alebo do jeho okolia.

F) Formy podávania dávok

Protirakovinové zlúčeniny, prípadne chemoterapeutická látka a/alebo potenciátor sú v typickom prípade zmiešavané s farmaceutický prijateľným nosičom. Tento nosič môže byť pevná

I látka alebo kvapalina alebo lipozóm a jeho typ sa všeobecne vyberá na základe používaného spôsobu aplikácie. Aktívna látka môže byť spoluaplikovaná vo forme tablety alebo kapsule, ako vylisovaný prášok alebo v kvapalnej forme. Príkladmi pevných nosičov sú laktóza, sacharóza, želatína a agar. Kapsule alebo tablety sa dajú ľahko vytvarovať a môžu byť prispôsobené pre ľahké zhltnutie alebo žuvanie; iné pevné formy predstavujú granule a voľné sypané prášky. V tabletách môžu byť obsiahnuté vhodné pojivá, lubrikanty, riedidlá, dezintegrujúce činidlá, farbivá, ochuťovadlá, činidlá povzbudzujúce tvorbu šťiav a rozpúšťacie činidlá. Príklady vhodných kvapalných dávkovacích foriem zahrňujú vodné roztoky alebo vodné suspenzie, farmaceutický prijateľné tuky alebo oleje, alkoholy alebo iné organické rozpúšťadlá vrátane esterov, emulzie, sirupy, tinktúry, roztoky a/alebo suspenzie rekonštituované z nešumivých granúl a šumivé prípravky rekonštituované zo šumivých granúl. Takéto kvapalné dávkovacie formy môžu obsahovať napríklad vhodné rozpúšťadlá, konzervačné činidlá, emulziíikátory, suspenzné činidlá. riedidlá, sladidlá. zahusťovadlá ει rozpúšťaeie činidlá. ParenteráI ne a intravenózne formy môžu taktiež obsahovať minerály a iné materiály na dosiahnutie kompatibility so zvoleným typom injekcie alebo aplikačného systému. Konkrétne príklady farmaceutický prijateľných nosičov a excipientov (pojív), ktoré môžu byť použité na prípravu orálnych dávkových foriem podľa priloženého vynálezu, sú opísané v patente USA č.3,903,297, udelenom Róbertovi a vydanom 2. septembra 1975. Techniky a prostriedky na výrobu dávkových foriem, užitočné pre predložený vynález, sú opísané v nasledujúcich odkazoch 7 Modern

Pharmaceut i cs, kapitoly 9 a 10 (vydavatelia Banker

1979), Lieberman a kol., Pharmaceutical Dosage Forms (1981), Ansel, Introduction to PharmaceuticaL Dosage Forms, 2nd Edít i on (1976).

a Rhodes, Tablets

G) Spôsob liečby

Spôsob liečby môže predstavovať každý vhodný spôsob, ktorý je účinný pri liečbe konkrétneho typu vírusového, rakovinového či nádorového onemocnenia, ktoré má byť liečené. Liečba môže byť orálna, rektálna, topická, parenterálna, intravenózna alebo môže mať formu injekcie do nádoru alebo jeho okolia a podobne. Metóda aplikácie účinného množstva sa taktiež mení v závislosti od typu liečeného nádoru. Predpokladá sa, že parenterálna liečba, pri ktorej je intravenózne, subkutánne alebo intramuskulárne aplikovaný prostriedok obsahujúci taktiež vhodný nosič, prídavnú rakovinu inhibujúcu zlúčeninu alebo zlúčeniny či riedidlo na uľahčenie aplikácie, bude uprednostnenou metódou podávania zlúčenín teplokrvným živočíchom.

Predpokladá sa, že mnoho herbicídov, či už samostatne alebo v kombinácii s inými herbicídmi a/alebo fungicídmi, preukáže tento priaznivý protinádorový efekt. Preferovanými fungicídmi sú fungicídy benzimadazolové, ako je kabendazím, tiabendazol, benomyl. Medzi ďalšie látky, ktoré je možné použiť, patrí griseofu 1 v i n, flukonazol a propikonazol.

N-fosfonoglycínové deriváty sú taktiež účinné proti vírusom, vrátane rhi nov í rusov, HIV, vírusov oparu a chrípky. Kombinácie N-fosfonog1ycínov s potenciátormi sú obzvlášť účinné proti vírusom. Dávková forma a spôsob liečby sú tie isté, ako pre nádory alebo rakovinu. Nasledujúce príklady sú ilustratívne a nie sú myslené ako obmedzenia vynálezu.

Test s nádorovými bunkami čreva, pŕs a pľúc

Nasledujúce testy s bunkovými kultúrami boli urobené za účelom zistenia toxicity N-chlorofeny1karbamátov a N-chlorofenyltiokarbamátov pre ľudské nádorové bunky čreva, pŕs a pľúc. Životaschopnosť buniek bola testovaná podľa redukcie látky MTT (3-[4,5-dimety11iazol-2-yl])-2,5-difenyltetrazolium bromidu). MTT test je dobre známou mierou bunkovej životaschopnosti.

Nádorové bunky čreva (HT29 z -Amerického súboru typov kultúr, v origináli American Type Culture Collection, ATCC) a pŕs (MX1 z bunkových línií z ATCC) boli kultivované na živnom médiu Eagle s Minimal Essential Médium s 10 % fetálnym bovinným sérom. Nádorové bunky pľúc (A549 z bunkových línií z ATCC) boli kultivované na živnom médiu Ham s F12 Médium s 10 % fetálnym bovinným sérom.

Nádorové bunky boli pasážované a nariedené do kultivačných nádob na požadovaný bunkový počet. Živé médium bolo dekantované a bunkový povlak bol dvakrát premytý fosfátovým pufrom (PBS). Pred nasadením do nádob boli bunky ošetrené trypsínom a triturované. Pokiaľ nie je uvedené inak, boli kultúry inkubované pri 37 ±1 θθ vo zvlhčenej atmosfére obsahujúcej 5 ± 1 % oxidu uhličitého vo vzduchu. Kultúry boli inkubované do súvislej (konfluentnej) vrstvy zaberajúcej 50 až 80 % povrchu.

Bunky boli subkultivované, keď nádoby boli subkonf1uentné. Živné médium bolo z nádob vyliate a bunkové vrstvy dvakrát premyté PBS. Potom bol do každej nádoby pridaný roztok trvpsínu tak, aby pokryl bunkovú vrstvu. Roztok trvpsínu bol odstránený po 30 až 60 sek. a nádoby boli inkubované pri laboratórnej teplote po dobu dvoch až šiestich minút. Keď sa bunky rozrástli o 90 %, bolo pridané rastové médium. Bunky boli odstránené trituračným pufrom a preliate do sterilnej centrifugačnej kyvety. Bola stanovená koncentrácia buniek v suspenzii, a táto suspenzia potom bola vhodne zriedená tak, aby bola dosiahnutá hustota 5000 buniek v 1 ml. Bunky boli rozpipetované do označených jamiek v 96-jamkovej biotestovej doske (200 mikrolitrov bunkovej suspenzie na 1 jamku). Do zvyšných jamiek bol pridaný PBS na zachovanie vlhkosti. Dosky boli potom inkubované počas noci predtým, ako boli podrobené pôsobeniu testovacej látky.

Každá dávka testovanej látky bola testovaná vo štvorici jamiek, ktoré obsahovali 100 mikrolitrov testovanej látky v jednotlivých riedeniach. Do jamiek, označených ako kontrolné jamky s rozpúšťadlom, bolo naviac pridaných 100 mikrolitrov metanolickej kontroly: ,do negatívnych kontrolných jamiek bolo naviac pridaných 100 mikrolitrov pracovného média (média,v ktorom bolo uskutočnené testovanie látky). Do zvyšných jamiek, ktoré neobsahovali ani testovaciu látku, ani pracovné médium, bol pridaný PBS. Dosky boli potom inkubované počas asi 5 dní.

Na konci päťdennej inkubácie bola každá dávková skupina mikroskopicky preskúmaná na určenie toxicity. Bol pripravený zriedený roztok 0,5 mg MTT v 1 ml pracovného média a tento roztok bol prefiltrovaný cez filter s hustotou 0,45 mikrometrov, aby boli odstránené nerozpustené kryštály. Médium bolo dekantované z jamiek biotestovacej dosky. Bezprostredne potom bolo do každej testovacej jamky pridaných 2000 mikrolitrov filtrovaného roztoku MTT, s výnimkou dvoch nespracovaných jamiek pre slepý pokus. Do týchto dvoch jamiek bolo pridaných 200 mikrolitrov pracovného média. Dosky boli vrátené späť do inkubátora na asi dve hodiny. Po tejto inkubácii bolo médium, obsahujúce MTT, dekantované. Do každej jamky bol pridaný nadbytok média a dosky boli trepané pri laboratórnej teplote v priebehu asi dvoch hodín.

Pre každú jamku bola zmeraná absorbancie pri 550 nm (optická hustota θ°55_ο) ^na odčítavacom zariadení typu VMax plate reader firmy Molecular Devices (Menlo Park, CA).

Boli vypočítané priemery 0D<^_o v kontrolných jamkách s rozpúšťadlom, s jednotlivými riedeniami testovacích látok, so slepými kontrolami a s pozitívnymi kontrolami. Odpočítaním priemeru θ^55θ v jamkách so slepými pokusmi ako od priemerov v kontrolných jamkách s rozpúšťadlom, tak aj od priemerov v jamkách s testovanými látkami, boli získané príslušné korigované priemerné hodnoty 0Dgg_o kontroly = 100 M/N kde M je korigovaný priemer ^550 ^z jamiek s daným zriedením testovanej látky a N je korigovaný priemer z kontrolných jamiek obsahujúcich rozpúšťadlo.

Krivky dávkovej odozvy boli . konštruované ako semilogaritmické výnosy s % kontroly na lineárnej osi súradníc a koncetrácií testovanej látky na logaritmickej osi úsečiek. Pre každú testovanú látku bola interpoláciou v príslušnom výnose získaná hodnota EC^q

Pre testované látky podávané v metanole boli konštruované zvláštne dávkové odozvy na korekciu na metanolické údaje.

Ako pozitívna kontrola bol použitý Adriamycín. Vo všetkých prípadoch bol o jeden až dva rady toxickejší, ako ktorýkoľvek z testovacích materiálov. Adriamycín patrí k silnejším bežne užívaným látkam a má významné vedľajšie účinky. U ostatných, veľmi účinných chemoterapeutických prostriedkov môže byť ich maximálna plazmová koncetrácia desaťkrát až päťdesiatkrát vyššia ako u Adriamycínu. EC-50 je koncetrácia, pri ktorej je polovina buniek usmrtená.

Tabuľka 1

Testovaný materiál	Výsledok	EC - 50	(ppm)
HT29	HT29	MX1 MXl	A549	A549
Adriamycín	0,003	0,006	0,02 0.001	0,03	0,009
glyphosate	5,41	3,73	36,5 14,6	25,9	22,3
Pre normálne.	zdravé	bunky boli	získané nasle	duj úce	výsledky
		Tabuľka	2
Testovaný materiál			EC -	50
	bronchiál-	keroti noylové
	ne	bunky	bunky	f i broblasty
Glyphosate	1,59	3,54 3,09 3,21	86,1	35,8
Adriamycín	0,015	0,0020 0,0035 0,0093	0,065	0,10

Tieto experimenty ukazujú, že uvedené prostriedky účinne usmrcujú nádorové bunky bez toho, aby významne ovplyvňovali zdravé bunky. Sú bezpečnejšie ako adriamycín.

Claims

PATE NTOVÉNÁROKY

1. Farmaceutický prostriedok na liečenie rakovín, nádorov alebo vírusových infekcií, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje bezpečné a účinné množstvo N-fosfonoglycí nových derivátov všeobecného vzorca I

0 R O

II I II x - c - ch₂ - n - ch₂ - P - OY (I)

I

OZ kde X je vybrané zo skupiny substituentov, zahrňujúcej hydroxyl, alkoxy alebo chloroxyl s najviac 12 uhlíkovými atómami, nižšie alkenoxy, cyklohexyloxy, morfolino, pyrolidinyl, piperidino, a -NH-R ; Y a Z sú nezávisle alebo vodík alebo nižší alkyl, R je vybrané zo skupiny zahrňujúcej vodík, formyl, acetyl, benzoyl, nitrobenzoyl a chlórovaný benzoyl, R je vybrané zo skupiny zahrňujúcej vodík, nižší alkyl a nižší alkenyl, cyklohexyl, fenalkyl s najviac 8 uhlíkovými atómami, fenyl, chlórovaný fenyl a anizyl, a určité soli týchto zlúčenín, ktoré sú vybrané zo skupiny obsahujúcej kovy I. a II.s atómovým číslom až 30, hydrochlorid, acetát, salicylát, pyridín, amónium, nižší alifatický aminouhľovodík, nižší alkanolaín a anilín.
2. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje potenciátor.
3. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje chemoterapeutickú látku.
4. Farmaceutický prostriedok podľa nárokov 1, 2 alebo 3, vyznačujúci sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľný nosič ti bezpečné a účinné množstvo N-(fosfonomety 1)g 1ycínu a/alebo izopropyI am í novú soľ, pričom uvedené farmaceutický prijateľné adičné soli kyseliny sú vybrané zo skupiny, zahrňujúcej hydroch1 or i d, acetát, salicvlát, nižší alkylamín a ich zmesi.
5. Farmaceutický prostriedok podľa nárokov 1,2,3 alebo 4, vyznačujúci sa tým, že uvedená chemoterapeutická látka je vybraná zo skupiny zahrhňujúcej DNA-interaktívne látky, antimetaboli ty, tubulín-interaktívne látky, hormonálne látky, asparaginázu, hydroxymočovinu, cisplatinu, cyklofosfamid, altretamín, bleomycín, daktinomycín, doxorubicín, etoposid, teniposid a plicamycín, metotrexát, fluorouraci1, f1uorodesoxyuridín, CB3717, azacytidín, cytarabín, floxuridín, merkaptopurín,
6-tioguanín, fludarabín, pentostatín, cyctrabín a fludarabín.

6. Spôsob liečby rakoviny a vírusových infekcií u teplokrvných cicavcov, vyznačujúci sa tý.m, žeje podávané bezpečné a účinné množstvo farmaceutického prostriedku podľa nárokov 1,2,3,4 alebo 5.
7. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku na liečenie nádorov a vírusových infekcií, vyznačujúca sa tým, že obsahuje N-fosfonoglycínové deriváty všeobecného vzorca I :

OR 0

X - C - ch₂ - N - CH₂ - P - OY (I)

OZ kde X je vybrané zo skupiny substituentov, zahrňujúcich hydroxyl, alkoxy alebo chloroxyl s najviac 12 uhlíkovými atómami, nižší alkenoxy, cyklohexyloxy, morfolíno, pyrolidinyl, piperidino, a -NH-R ; Y a Z sú nezávisle vodík alebo nižší alkyl, R je vybrané zo skupiny, zahrňujúcej vodík, formyl, acetyl, benzoyl, nitrobenzoyl a chlórovaný benzoyl, R je vybrané zo skupiny, zahrňujúcej vodík, nižší alkyl ti nižší alkenyl, cyklohexyl, fenalkyl s najviac 8 uhlíkovými atómami, fenyl, chlórovaný fenyl a ani zy1;

a určité solí týchto zlúčenín, ktorých soli sú vybrané zo skupiny, zahrňujúcej kovy I. a II. skupiny s atómovým číslom až 30, hydrochlorid, pyridín, amónium, nižší alifatický aminouhľovodík, nižší alkonolamín a anilín.
8. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku podľa nároku 7 vyznačujúca sa tým, že uvedený N-fosfonoglycín je N-(fosfonometyl)glycín a jeho soli s nižšími alkylamínmi.
9. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku podľa nárokov

6,7 alebo 8, vyznačujúca sa tým, že farmaceutický prijateľné adičné solí kyseliny sú vybrané zo skupiny, zahrňujúcej hydrochloridy, acetáty, salicyláty a ich zmesí a že je podávané 2 až 400 mg uvedeného N-fosfonoglycínu na 1 kg telesnej hmotnosti.
10. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku podľa nároku 9 vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje bezpečné a účinné množstvo chemoterapeutickej látky.
11. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedený N-fosfonoglycín je N-(fosfonometyl)glycín a jeho soli s nižšími alkylamínmi, a že uvedené farmaceutický prijateľné adičné soli kyseliny sú vybrané zo skupiny zahrňujúcej hydrochloridy, acetáty, salicyláty a ich zmesí.
12. Spôsob inhĺbicie rastu nádorov, vyznačuj úci sa t ý m, že sa podáva bezpečné a účinné množstvo systémového herbicídu.
13. Jednotka dávky farmaceutického rastu nádorov. vyznačuj ú c a bezpečné a účinné množstvo systémového prostriedku na inhi biciu sa tým. že je podávané herbicídu.
14. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku rastu nádorov, vyznačujúca sa tým, bezpečné a účinné množstvo systémového herbicídu chemoterapeutickej látky.

na i nh i bi c i u že obsahuje , fungicídu a
15. Jednotka dávky farmaceutického prostriedku podľa nárokov 10,11,12,13 alebo 14, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje potenciátor.